KR20220118500A

KR20220118500A - 치환 직쇄 스피로 유도체

Info

Publication number: KR20220118500A
Application number: KR1020227024649A
Authority: KR
Inventors: 웨이 카이; 슈에동 다이; 올리비에 알렉시스 조지스 퀘롤; 요하네스 빌헬무스 욘 에프. 튜링겐; 잉타오 리우; 리안주 리우; 얀핑 슈; 리퀴앙 푸; 밍 리; 리차오 팡; 시앙준 덩; 치우 자오; 캉잉 리; 알리시아 티 푸에이 엔쥐; 니콜라스 프레디 제이 다빌; 에드워드 클리터; 그레고르 토마스 어바니에츠; 윌리엄 마크 메이튼; 비네트 판데
Original assignee: 얀센 파마슈티카 엔.브이.
Priority date: 2019-12-19
Filing date: 2020-12-17
Publication date: 2022-08-25
Also published as: MX2022007652A; CR20220346A; EP4077312A4; CA3161045A1; CN114867721A; US20230142285A1; JOP20220154A1; EP4077312A1; CL2023001531A1; IL293965A; CO2022009085A2; TW202138367A; AU2020404305A1; ECSP22054700A; WO2021121327A1; UY38988A; JP2023506530A; PE20230162A1; CL2023001530A1; DOP2022000125A

Abstract

포유류에서 치료 및/또는 예방에 유용한 의약품(pharmaceutical agent), 이러한 화합물을 포함하는 제약 조성물, 및 메닌(menin)/MLL 단백질/단백질 상호작용 억제제로서의 이의 용도(백혈병, 골수형성이상 증후군(MDS), 및 골수증식성 신생물(MPN)을 포함하지만 이에 한정되지 않는 암; 및 당뇨병과 같은 질환의 치료에 유용함)가 본원에 제공된다.

Description

치환 직쇄 스피로 유도체

본 발명은 포유류에서 치료 및/또는 예방에 유용한 의약품(pharmaceutical agent), 이러한 화합물을 포함하는 제약 조성물, 및 메닌(menin)/MLL 단백질/단백질 상호작용 억제제로서의 이의 용도(백혈병, 골수형성이상 증후군(MDS), 및 골수증식성 신생물(MPN)을 포함하지만 이에 한정되지 않는 암; 및 당뇨병과 같은 질환의 치료에 유용함)에 관한 것이다.

혼합 직계성 백혈병 유전자(MLL; MLL1; KMT2A)에 영향을 미치는 염색체 재배열은 모든 연령군에 걸쳐 공격적 급성 백혈병을 초래하고, 여전히 대부분 불치병을 나타내며, 이는 신규한 치료적 접근법에 대한 시급한 필요성을 강조하게 된다. 이들 MLL의 염색체 전좌를 보유하는 급성 백혈병은 림프성, 골수성 또는 이중표현형 질환으로서 나타나고, 성인에서 급성 백혈병의 5 내지 10% 및 유아에서 대략 70%를 구성한다(문헌[Marschalek, Br J Haematol 2011. 152(2), 141-54]; 문헌[Tomizawa et al., Pediatr Blood Cancer 2007. 49(2), 127-32]).

MLL은 히스톤 H3, 라이신 4(H3K4)를 메틸화하고 다중단백질 복합체에서 기능하는 히스톤 메틸트랜스퍼라아제이다. Mll1의 유도가능한 기능 손실 대립유전자의 사용에 의해, Mll1이 조혈 줄기 세포(HSC)의 유지 및 B 세포의 발달에 필수적인 역할을 하지만 Mll1의 히스톤 메틸트랜스퍼라아제 활성은 조혈에 불필요함을 입증하였다(문헌[Mishra et al., Cell Rep 2014. 7(4), 1239-47]).

지금까지 MLL과 60개 초과의 상이한 파트너와의 융합이 보고되었고, 상기 융합은 백혈병 형성/진행과 연관되어 있었다(문헌[Meyer et al., Leukemia 2013. 27,　2165-2176]). 흥미롭게도, MLL의 SET(Su(var)3-9, 트리토락스, 및 zeste의 인핸서) 도메인은 키메라 단백질에서 보유되는 것이 아니라 융합 파트너로 대체된다(문헌[Thiel et al., Bioessays 2012. 34, 771-80]). 융합 파트너에 의한 Dot1L 및/또는 pTEFb 복합체와 같은 염색질 변경 효소의 모집은 가장 유망한 것으로서 HOXA 유전자(예를 들어, HOXA9) 및 HOX 보조인자 MEIS1을 포함하는 MLL 표적 유전자의 증강된 전사 및 전사 신장을 초래한다. 이들 유전자의 이상 발현은 결과적으로 조혈 분화를 차단하고 증식을 향상시킨다.

다발성 내분비 종양 1형(Multiple Endocrine Neoplasia type 1, MEN1) 유전자에 의해 암호화되는 메닌은 보편적으로 발현되고 주로 핵에 편재되어 있다. 이것은 많은 단백질과 상호작용하는 것으로 밝혀졌고, 따라서 다양한 세포 과정에 관여된다. 메닌의 가장 잘 파악된 기능은 MLL 융합 단백질의 종양형성 보조인자로서의 역할이다. 메닌은 모든 융합 단백질에 보유된 MLL의 N-말단 단편 내의 2개의 모티프인 MBM1(메닌-결합 모티프 1) 및 MBM2와 상호작용한다(문헌[Thiel et al., Bioessays 2012. 34, 771-80]). 메닌/MLL 상호작용은 수정체 상피-유래 성장 인자(LEDGF)를 위한 새로운 상호작용 표면의 형성을 초래한다. MLL은 LEDGF에 직접 결합하지만, 메닌은 MLL과 LEDGF 사이의 안정적인 상호작용 및 LEDGF의 PWWP 도메인을 통한 MLL 복합체의 유전자 특이적 염색질 모집을 위해 필수적이다(문헌[Cermakova et al., Cancer Res 2014. 15, 5139-51]; 문헌[Yokoyama & Cleary, Cancer Cell 2008. 8, 36-46]). 더욱이, 많은 유전자 연구에서 메닌이 MLL 융합 단백질에 의한 종양형성 형질전환에 절대적으로 요구됨이 밝혀졌으며, 이는 매력적인 치료 표적으로서의 메닌/MLL 상호작용을 시사한다. 예를 들어, Men1의 조건부 결실은 MLL 융합물을 이소 발현하는 골수 전구 세포에서 백혈병 유발을 방지한다(문헌[Chen et al., Proc Natl Acad Sci 2006. 103, 1018-23]). 이와 유사하게, 기능 손실 돌연변이에 의한 메닌/MLL 융합 상호작용의 유전자 파괴는 MLL 융합 단백질의 종양형성 특성을 무효화하고, 생체 내에서 백혈병의 발생을 차단하고 MLL-형질전환 백혈병 모세포의 분화 블록을 방출한다. 이들 연구에서는 또한, 메닌이 MLL 융합 단백질에 의한 HOX 유전자 발현의 유지에 요구됨을 보여주었다(문헌[Yokoyama et al., Cell 2005. 123, 207-18]). 게다가, 메닌/MLL 상호작용의 소분자 억제제가 개발되어 이 단백질/단백질 상호작용의 약물가능성(druggability)을 제시하였고, 상기 소분자 억제제는 또한 AML의 전임상 모델에서 효능을 보여주었다(문헌[Borkin et al., Cancer Cell 2015. 27, 589-602]; 문헌[Cierpicki and Grembecka, Future Med Chem 2014. 6, 447-462]). 메닌은 정상 조혈 중에 MLL1의 필수 보조인자가 아니라는 관찰과 함께(문헌[Li et al., Blood 2013. 122, 2039-2046]), 이들 데이터는 MLL 재배열 백혈병 및 활성 HOX/MEIS1 유전자 서명을 갖는 다른 암의 치료를 위한 유망한 새로운 치료적 접근법으로서 메닌/MLL 상호작용의 파괴를 입증한다. 예를 들어, MLL 유전자의 5' 영역 내에서 내부의 부분적 탠덤 복제(partial tandem duplication, PTD)는 신생 및 이차 AML뿐만 아니라 골수 이형성 증후군에서 주로 발견되는 또 다른 주요 이상을 나타낸다. 비록 MLL-PTD의 생물학적 기능 및 분자적 기전은 잘 이해되어 있지 않다 하더라도, 메닌/MLL 상호작용에 영향을 미치는 새로운 치료적 표적화 전략이 MLL-PTD-관련 백혈병의 치료에 효과적임을 또한 입증할 수 있을 것이다. 더욱이, 거세-저항성 전립선암은 메닌/MLL 상호작용에 의존성인 것으로 밝혀졌다(문헌[Malik et al., Nat Med 2015. 21, 344-52]).

MLL 단백질은 과학 분야에서 히스톤-라이신 N-메틸트랜스퍼라아제 2A(KMT2A) 단백질로도 알려져 있다(UniProt 등록 번호 Q03164).

다음과 같이 몇몇 참고문헌에는 메닌-MLL 상호작용을 표적으로 하는 억제제가 기술되어 있다: 국제 공개 제2011029054호, 문헌[J Med Chem 2016, 59, 892-913]에는 티에노피리미딘 및 벤조디아제핀 유도체의 제조가 기술되어 있으며; 국제 공개 제2014164543호에는 티에노피리미딘 및 티에노피리딘 유도체가 기술되어 있으며; 문헌[Nature Chemical Biology March 2012, 8, 277-284] 및 문헌[Ren, J.; et al. Bioorg Med Chem Lett (2016), 26(18), 4472-4476]에는 티에노피리미딘 유도체가 기술되어 있으며; 문헌[J Med Chem 2014, 57, 1543-1556]에는 히드록시- 및 아미노메틸피페리딘 유도체가 기술되어 있으며; 문헌[Future Med Chem 2014, 6, 447-462]에는 소분자 및 펩티드 모방 화합물이 개관되어 있으며; 국제 공개 제2016195776호에는 푸로[2,3-d]피리미딘, 9H-퓨린, [1,3]옥사졸로[5,4-d]피리미딘, [1,3]옥사졸로[4,5-d]피리미딘, [1,3]티아졸로[5,4-d]피리미딘, 티에노[2,3-b]피리딘 및 티에노[2,3-d]피리미딘 유도체가 기술되어 있으며; 국제 공개 제2016197027호에는 5,6,7,8-테트라히드로피리도[3,4-d]피리미딘, 5,6,7,8-테트라히드로피리도]4,3-d]피리미딘, 피리도[2,3-d]피리미딘 및 퀴놀린 유도체가 기술되어 있으며; 국제 공개 제2016040330호에는 티에노피리미딘 및 티에노피리딘 화합물이 기술되어 있다. 국제 공개 제2017192543호에는 메닌 억제제로서의 피페리딘이 기술되어 있다. 국제 공개 제2017112768호, 국제 공개 제2017207387호, 국제 공개 제2017214367호, 국제 공개 제2018053267호 및 국제 공개 제2018024602호에는 메닌-MLL 상호작용의 억제제가 기술되어 있다. 국제 공개 제2017161002호 및 국제 공개 제2017161028호에는 메닌-MLL의 억제제가 기술되어 있다. 국제 공개 제2018050686호, 국제 공개 제2018050684호 및 국제 공개 제2018109088호에는 메닌-MLL 상호작용의 억제제가 기술되어 있다. 국제 공개 제2018226976호에 메닌과 MLL 단백질의 상호작용을 억제하기 위한 방법 및 조성물이 기술되어 있다. 국제 공개 제2018175746호에는 혈액 악성종양 및 유잉(Ewing) 육종의 치료 방법이 제공되어 있다. 국제 공개 제2018106818호 및 국제 공개 제2018106820호에는 췌장 세포의 증식을 촉진하는 방법이 제공되어 있다. 국제 공개 제2018153312호는 의약 화학 분야와 관련된 아자스피로 화합물이 개시되어 있다. 국제 공개 제2017132398호에는 NPM1 돌연변이를 나타내는 백혈병 세포를 MLL과 메닌 사이의 상호작용의 약리학적 억제제와 접촉시키는 것을 포함하는 방법이 개시되어 있다. 국제 공개 제2019060365호에는 메닌-MLL의 치환된 억제제가 기술되어 있다. 국제 공개 제2020069027호에는 메닌 억제제에 의한 혈액 악성종양의 치료가 기술되어 있다. 문헌[Krivtsov et al., Cancer Cell 2019. No.6 Vol.36, 660-673]에는 메틴-MLL 억제제가 기술되어 있다.

도 1: Molm-14 피하(sc) 모델에서의 효능 연구.
도 2: 파종형 OCI-AML3 모델에서의 효능 연구.

본 발명은 하기 화학식 I의 신규 화합물, 및 이의 호변이성질체 및 입체이성질체 형태와, 이들의 제약상 허용가능한 염, 및 용매화물에 관한 것이다:

[화학식 I]

여기서,

R^1a는 -C(=O)-NR^xaR^xb; Het; 또는

를 나타내며;

Het는 1, 2 또는 3개의 질소 원자 및 선택적으로 카르보닐 모이어티를 함유하는 5원 또는 6원 단환식 방향족 고리를 나타내며;

상기 5원 또는 6원 단환식 방향족 고리는 C_3- ₆시클로알킬 및

C_1-4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 또는 2개의 치환체로 선택적으로 치환되며;

R^xa 및 R^xb는 각각 독립적으로 수소, C_1- ₄알킬 및 C_3- ₆시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;

R^1b는 F 또는 Cl을 나타내며;

Y¹은 -CR^5aR^5b-, -O- 또는 -NR^5c-를 나타내며;

R²는 수소, 할로, C_1- ₄알킬, -O-C_1- ₄알킬, 및 -NR^7aR^7b로 이루어진 군으로부터 선택되며;

U는 N 또는 CH를 나타내며;

n1, n2, n3 및 n4는 각각 독립적으로 1 및 2로부터 선택되며;

X¹은 CH를 나타내고, X²는 N을 나타내며;

R⁴는 이소프로필을 나타내며;

R^5a, R^5b, R^5c, R^7a, 및 R^7b는 각각 독립적으로 수소, C_1- ₄알킬 및 C_3- ₆시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;

R³은 -C_1- ₆알킬-NR^8aR^8b, -C_1- ₆알킬-C(=O)-NR^9aR^9b, -C_1- ₆알킬-OH, 또는

-C_1-6알킬-NR¹¹-C(=O)-O-C_1-4알킬-O-C(=O)-C_1-4알킬을 나타내는 것으로서,

여기서, R³ 정의에서의 각각의 상기 C_1- ₄알킬 또는 C_1- ₆알킬 모이어티는 서로 독립적으로, 시아노, 할로, -OH, 및 -O-C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환될 수 있으며;

R^8a 및 R^8b는 수소; C_1- ₆알킬; -C(=O)-C_1- ₄알킬; -C(=O)-O-C_1- ₄알킬; -C(=O)-NR^12aR^12b; 및 -OH, 시아노, 할로, -S(=O)₂-C_1- ₄알킬, -O-C_1- ₄알킬, -C(=O)-NR^10aR^10b, 및 -NR^10c-C(=O)-C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환된 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되며;

R^9a, R^9b, R^10a, R^10b, R^10c, R¹¹, R^12a, 및 R^12b는 각각 독립적으로 수소 및 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다.

본 발명은 또한 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물, 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 용매화물, 및 제약상 허용가능한 담체 또는 부형제를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.

추가로, 본 발명은 약제로 사용하기 위한 화학식 I의 화합물, 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 용매화물, 및 백혈병, 골수형성이상 증후군(MDS) 및 골수증식성 신생물(MPN)을 포함하지만 이에 한정되지 않는 암; 및 당뇨병의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물, 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 용매화물에 관한 것이다.

특정 실시 형태에서, 본 발명은 암의 치료 또는 예방에 사용하기 위한 화학식 I의 화합물, 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 용매화물에 관한 것이다.

특정 실시 형태에서, 상기 암은 백혈병, 림프종, 골수종 또는 고형 종양 암(예컨대, 전립선암, 폐암, 유방암, 췌장암, 결장암, 간암, 흑색종 및 교모세포종 등)으로부터 선택된다. 일부 실시 형태에서, 백혈병은 급성 백혈병, 만성 백혈병, 골수양(myeloid) 백혈병, 골수성(myelogeneous) 백혈병, 림프아구 백혈병, 림프구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 림프아구 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), T 세포 전림프구성 백혈병(T-PLL), 대형 과립 림프구성 백혈병, 모양 세포성 백혈병(HCL), MLL-재배열 백혈병(MLL-rearranged leukemia), MLL-PTD 백혈병, MLL 증폭 백혈병, MLL-양성 백혈병, HOX/MEIS1 유전자 발현 서명을 나타내는 백혈병 등을 포함한다.

특히, 본 발명에 따른 화합물 및 이의 제약 조성물은 백혈병, 구체적으로 뉴클레오포스민(NPM1)-돌연변이 백혈병, 예를 들어 NPM1c의 치료 또는 예방에 유용할 수 있다.

일 실시 형태에서, 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염, 및 용매화물은 개선된 대사 안정성 특성을 가질 수 있다.

일 실시 형태에서, 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염, 및 용매화물은 연장된 생체 내 반감기(T1/2)를 가질 수 있다.

일 실시 형태에서, 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염, 및 용매화물은 향상된 경구 생체이용률을 가질 수 있다.

일 실시 형태에서, 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염, 및 용매화물은 종양 성장, 예를 들어 MLL(KMT2A) 유전자 재배열/변경 및/또는 NPM1 돌연변이를 보유하는 종양을 감소시킬 수 있다.

일 실시 형태에서, 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염, 및 용매화물은 연장된 기간 동안 생체 내에서 개선된 PD 특성(예를 들어 MEIS1과 같은 표적 유전자 발현의 억제 및 16시간 이상의 기간에 걸친 분화 마커의 상향조절)을 가질 수 있다.

일 실시 형태에서, 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염, 및 용매화물은 개선된 안전성 프로파일(예를 들어, 감소된 hERG 억제; 개선된 심혈관 안전성)을 가질 수 있다.

일 실시 형태에서, 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염, 및 용매화물은 Q.D. 투여(일일 1회)에 적합할 수 있다.

본 발명은 또한 백혈병, 골수형성이상 증후군(MDS), 및 골수증식성 신생물(MPN)을 포함하지만 이에 한정되지 않는 암; 및 당뇨병의 치료 또는 예방에 사용하기 위한, 추가 의약품과 조합된 화학식 I의 화합물, 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 용매화물의 용도에 관한 것이다.

더욱이, 본 발명은 제약상 허용가능한 담체를 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물, 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 용매화물과 친밀하게 혼합하는 것을 특징으로 하는, 본 발명에 따른 제약 조성물의 제조 방법에 관한 것이다.

본 발명은 또한 백혈병, 골수형성이상 증후군(MDS), 및 골수증식성 신생물(MPN)을 포함하지만 이에 한정되지 않는 암; 및 당뇨병의 치료 또는 예방에서의 동시적 사용, 별개 사용 또는 순차적 사용을 위한 병용 제제로서의, 화학식 I의 화합물, 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 용매화물, 및 추가 의약품을 포함하는 생성물에 관한 것이다.

추가로 본 발명은, 본원에 정의된 바와 같은 유효량의 화학식 I의 화합물, 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 용매화물, 또는 본원에 정의된 바와 같은 제약 조성물 또는 조합물을 온혈 동물에 투여하는 단계를 포함하는, 상기 동물에서 세포 증식성 질환을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 ‘할로’ 또는 ‘할로겐’은 플루오로, 클로로, 브로모 및 요오도를 나타낸다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 접두어 'C_x _-y'(여기서, x 및 y는 정수임)는, 주어진 기에서의 탄소 원자의 수를 나타낸다. 따라서, C_1- ₆알킬 기는 1 내지 6개의 탄소 원자를 포함하는 등의 식이다.

본원에서 기 또는 기의 일부로서 사용되는 용어 'C_1- ₄알킬'은 1 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 완전 포화 탄화수소 라디칼, 예컨대 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, s-부틸, t-부틸 등을 나타낸다.

이와 유사하게, 본원에서 기 또는 기의 일부로서 사용되는 용어 'C_1- ₆알킬'은 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 포화 탄화수소 라디칼, 예컨대 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, s-부틸, t-부틸, n-펜틸, n-헥실 등을 나타낸다.

기 또는 기의 일부로서 본원에서 사용되는 용어 'C_3-6 시클로알킬'은 3개 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 포화, 환형 탄화수소 라디칼, 예컨대 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸 및 시클로헥실로 정의된다.

S(=O)₂ 또는 SO₂는 술포닐 모이어티를 나타냄이 당업자에게 명백할 것이다.

CO 또는 C(=O)는 카르보닐 모이어티를 나타냄이 당업자에게 명백할 것이다.

-CRR-과 같은 기가

를 나타냄이 당업자에게 명백할 것이다. 이러한 기의 예로는 -CR^5aR^5b-가 있다.

-NR-과 같은 기가

를 나타냄이 당업자에게 명백할 것이다. 이러한 기의 예로는 -NR^5c-가 있다.

'1, 2 또는 3개의 질소 원자 및 선택적으로 카르보닐 모이어티를 함유하는 단환식 5원 또는 6원 방향족 고리'의 비제한적 예는 피라졸릴, 이미다졸릴, 피리디닐, 피리다지닐, 피리미디닐, 피라지닐, 트리아지닐 또는 1,2-디히드로-2-옥소-4-피리디닐을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.

당업자는 1, 2 또는 3개의 질소 원자 및 카르보닐 모이어티를 함유하는 5원 또는 6원 단환식 방향족 고리가 다음을 포함하지만 이에 한정되지 않음을 이해할 것이다:

.

임의의 변수가 임의의 구성 요소에 1회 초과로 나타날 때, 각각의 정의는 독립적이다.

임의의 변수가 임의의 화학식(예를 들어, 화학식 I)에 1회 초과로 나타날 때, 각각의 정의는 독립적이다.

일반적으로 용어 "치환된"이 본 발명에 사용되는 경우에는 항상, 달리 명시되지 않거나 문맥으로부터 명확하지 않은 경우, 이는 ‘치환된’을 사용한 표현으로 나타내는 원자 또는 라디칼 상에 있는 1개 이상의 수소, 특히 1 내지 4개의 수소, 더욱 특히는 1 내지 3개의 수소, 바람직하게는 1 또는 2개의 수소, 더 바람직하게는 1개의 수소가 나타낸 기들로부터 선택되는 기로 치환되되, 단, 정상 원자가는 초과되지 않고, 이 치환은 화학적으로 안정한 화합물, 즉 반응 혼합물로부터 유용한 정도의 순도까지 단리되는 것(반응 후 단리, 예를 들어 실리카 겔 크로마토그래피에 의한 정제)을 견디기에 충분히 견고한 화합물로 이어지는 것을 나타냄을 의미한다. 특정 실시 형태에서, 치환체의 수가 명시적으로 특정되지 않은 경우, 치환체의 수는 1이다.

치환체들 및/또는 변수들의 조합은 이러한 조합이 화학적으로 안정한 화합물을 생성할 경우에만 허용가능하다. 이와 관련하여 "안정한 화합물"이란, 반응 혼합물로부터 유용한 정도의 순도까지 단리하는 것(반응 후 단리, 예를 들어 실리카 겔 크로마토그래피에 의한 정제)을 견디기에 충분히 강한 화합물을 나타냄을 의미한다.

당업자는 '선택적으로 치환된'이라는 용어가 '선택적으로 치환된'을 사용한 표현에서 지시된 원자 또는 라디칼이 치환될 수 있거나 치환되지 않을 수 있다는 것을 의미함(이는 각각 치환되거나 비치환된 것을 의미함)을 이해할 것이다.

둘 이상의 치환체가 모이어티 상에 존재할 때, 가능한 경우, 그리고 달리 명시되지 않거나 문맥으로부터 명백하지 않은 한, 이들은 동일한 원자 상의 수소를 대체할 수 있거나 모이어티 내에서 상이한 원자 상의 수소를 대체할 수 있다.

본 발명의 문맥 내에서 '포화된'은 달리 명시되지 않는다면 '완전 포화된'을 의미한다.

문맥상 달리 명시되지 않거나 명확하지 않은 한, 방향족 고리 기는 임의의 이용가능한 고리 탄소 원자(C-연결됨) 또는 질소 원자(N-연결됨)를 통해 화학식 I의 분자의 나머지 부분에 부착될 수 있다.

문맥상 달리 명시되지 않거나 명확하지 않은 한, 방향족 고리 기는 가능한 경우 실시 형태에 따라 탄소 및/또는 질소 원자에서 선택적으로 치환될 수 있다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "대상체"는 동물, 바람직하게는 포유류(예를 들어, 고양이, 개, 영장류 또는 인간), 더 바람직하게는 치료, 관찰 또는 실험의 대상이거나 대상이었던 인간을 지칭한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치료적 유효량"은 치료 중인 질환 또는 장애의 증상을 완화 또는 역전시키는 것을 비롯하여, 연구자, 수의사, 의사 또는 다른 임상의의 연구 대상이 되고 있는 조직계, 동물 또는 인간 내에서 생물학적 또는 의학적 반응을 유도하는 활성 화합물 또는 약제의 양을 의미한다.

용어 "조성물"은 특정된 성분을 특정된 양으로 포함하는 생성물 및 특정된 성분들을 특정된 양으로 조합함으로써 직접적으로 또는 간접적으로 생성되는 임의의 생성물을 포함하는 것으로 의도된다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "치료"는 질환의 진행을 늦추거나, 방해하거나, 중지시키거나, 중단시킬 수 있지만 반드시 모든 증상을 완전히 제거하는 것을 나타내는 것은 아닌 모든 과정을 지칭하고자 한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "(본) 발명의 화합물(들)" 또는 "(본) 발명에 따른 화합물(들)"은, 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염, 및 용매화물을 포함하는 것을 의미한다.

본원에서 사용되는 바와 같이, 실선으로만 표시되고 실선 쐐기 또는 빗금 쐐기 결합으로 표시되지 않거나, 달리 1개 이상의 원자 주위에 특정 배열(예를 들어, R, S)을 갖는 것으로 나타내지 않은 결합을 갖는 임의의 화학식은 각각의 가능한 입체이성질체, 또는 2가지 이상의 입체이성질체의 혼합물을 고려한다.

이상 및 이하에서, 용어 "화학식 I의 화합물(들)"은 이의 호변이성질체와 이의 입체이성질체 형태를 포함하는 것을 의미한다.

이상 또는 이하에서 용어 "입체이성질체", "입체이성질체 형태" 또는 "입체화학적 이성질체 형태"는 상호교환가능하게 사용된다.

본 발명은 순수한 입체이성질체로서 또는 2가지 이상의 입체이성질체의 혼합물로서의 본 발명의 화합물의 모든 입체이성질체를 포함한다.

거울상 이성질체는 서로 겹쳐지지 않는(non-superimposable) 거울상인 입체이성질체이다. 한 쌍의 거울상 이성질체의 1:1 혼합물은 라세미체 또는 라세미 혼합물이다.

회전장애 이성질체(atropisomer 또는 atropoisomer)는 큰 입체 장애로 인해 단일 결합 주위의 제한된 회전으로부터 생기는 특정한 공간 배열을 갖는 입체이성질체이다. 화학식 I의 화합물의 모든 회전장애 이성질체 형태는 본 발명의 범주 내에 포함되는 것으로 의도된다.

부분입체 이성질체(diastereomer 또는 diastereoisomer)는 거울상 이성질체가 아닌 입체이성질체로, 즉, 이들은 거울상으로서 관련되지 않는다. 화합물이 이중 결합을 포함하는 경우, 치환체는 E 또는 Z 배열일 수 있다.

2가 환형 포화 또는 부분 포화 라디칼 상의 치환체는 시스(cis)- 또는 트랜스(trans)-배열을 가질 수 있으며; 예를 들어 화합물이 이치환된 시클로알킬 기를 포함하는 경우, 치환체는 시스 또는 트랜스 배열일 수 있다.

따라서, 본 발명은 화학적으로 가능한 경우에는 언제나, 거울상 이성질체, 회전장애 이성질체, 부분입체 이성질체, 라세미체, E 이성질체, Z 이성질체, 시스 이성질체, 트랜스 이성질체 및 이의 혼합물을 포함한다.

모든 이들 용어, 즉 거울상 이성질체, 회전장애 이성질체, 부분입체 이성질체, 라세미체, E 이성질체, Z 이성질체, 시스 이성질체, 트랜스 이성질체 및 이의 혼합물의 의미는 당업자에게 알려져 있다.

절대 배열은 칸-인골드-프렐로그(Cahn-Ingold-Prelog) 시스템에 따라 특정된다. 비대칭 원자에서의 배열은 R 또는 S 중 어느 하나로 특정된다. 절대 배열이 알려지지 않은 분해 입체이성질체는, 이들이 평면 편광을 회전시키는 방향에 따라 (+) 또는 (-)로 지정될 수 있다. 예를 들어, 절대 배열이 알려지지 않은 분해 거울상 이성질체는, 이들이 평면 편광을 회전시키는 방향에 따라 (+) 또는 (-)로 지정될 수 있다.

특정 입체이성질체가 확인될 때, 이는 상기 입체이성질체에 다른 입체이성질체가 실질적으로 없음을 의미하며, 즉, 상기 입체이성질체가 50% 미만, 바람직하게는 20% 미만, 더 바람직하게는 10% 미만, 더욱 더 바람직하게는 5% 미만, 특히 2% 미만, 그리고 가장 바람직하게는 1% 미만의 다른 입체이성질체와 결부됨을 의미한다. 따라서, 화학식 I의 화합물이, 예를 들어 (R)로서 명시될 때, 이는 해당 화합물에 (S) 이성질체가 실질적으로 없음을 의미하고; 화학식 I의 화합물이, 예를 들어 E로서 명시될 때, 이는 해당 화합물에 Z 이성질체가 실질적으로 없음을 의미하며; 화학식 I의 화합물이, 예를 들어 시스로서 명시될 때, 이는 해당 화합물에 트랜스 이성질체가 실질적으로 없음을 의미한다.

화학식 I에 따른 화합물 중 일부는 또한 그의 호변이성질체 형태로 존재할 수 있다. 이러한 형태는, 위의 화학식 I에 명시적으로 나타내지 않는다 하더라도 이들이 존재할 수 있는 한, 본 발명의 범주 내에 포함되는 것으로 의도된다. 결과적으로 단일 화합물이 입체이성질체 및 호변이성질체 형태 둘 다로 존재할 수 있다는 것이 된다.

제약상 허용가능한 염에는 산 부가염 및 염기 부가염이 포함된다. 이러한 염은 통상적인 수단에 의해, 예를 들어, 유리 산 또는 유리 염기 형태를 선택적으로 용매 중에, 또는 염이 불용성인 매질 중에, 1 당량 이상의 적절한 염기 또는 산과 반응시키고, 이어서 표준 기술을 사용하여(예를 들어, 진공에서, 동결 건조에 의해, 또는 여과에 의해) 상기 용매 또는 상기 매질을 제거함으로써 형성될 수 있다. 또한, 염은 염 형태의 본 발명의 화합물의 반대 이온을, 예를 들어 적합한 이온 교환 수지를 사용하여 또 다른 반대 이온으로 교환시킴으로써 제조될 수 있다.

이상 또는 이하에 언급된 바와 같은 제약상 허용가능한 염은 화학식 I의 화합물 및 이의 용매화물이 형성할 수 있는 치료적으로 활성인 비독성 산 및 염기 염 형태를 포함함을 의미한다.

적절한 산은, 예를 들어 무기 산, 예를 들어 할로겐화수소산, 예를 들어 염화수소산 또는 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 등의 산; 또는 유기 산, 예를 들어 아세트산, 프로판산, 히드록시아세트산, 락트산, 피루브산, 옥살산(즉, 에탄디오익산), 말론산, 숙신산(즉, 부탄디오익산), 말레산, 푸마르산, 말산, 타르타르산, 시트르산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, 벤젠술폰산, p-톨루엔술폰산, 시클람산, 살리실산, p-아미노살리실산, 파모익산 등의 산을 포함한다. 역으로, 상기 염 형태는 적절한 염기로 처리함으로써 유리 염기 형태로 전환될 수 있다.

화학식 I의 화합물 및 산성 양성자를 포함하는 이의 용매화물은 또한, 적절한 유기 및 무기 염기로 처리함으로써 이의 비독성 금속 또는 아민 염 형태로 전환될 수 있다.

적절한 염기 염 형태는, 예를 들어 암모늄 염, 알칼리 및 알칼리토금속 염, 예를 들어 리튬, 나트륨, 칼륨, 세슘, 마그네슘, 칼슘 염 등, 유기 염기와의 염, 예를 들어 1차, 2차 및 3차 지방족 및 방향족 아민, 예를 들어 메틸아민, 에틸아민, 프로필아민, 이소프로필아민, 4가지의 부틸아민 이성질체, 디메틸아민, 디에틸아민, 디에탄올아민, 디프로필아민, 디이소프로필아민, 디-n-부틸아민, 피롤리딘, 피페리딘, 모르폴린, 트리메틸아민, 트리에틸아민, 트리프로필아민, 퀴누클리딘, 피리딘, 퀴놀린 및 이소퀴놀린과의 염; 벤자틴, N-메틸-D-글루카민, 히드라바민 염, 및 예를 들어 아르기닌, 리신 등과 같은 아미노산과의 염을 포함한다. 역으로, 이 염 형태는 산으로 처리함으로써 유리 산 형태로 전환될 수 있다.

용어 "전구약물"은 경구 또는 비경구 투여, 특히 경구 투여 후, 생체 내에서 (더 큰) 활성의 형태로 실험적으로 검출가능한 양으로, 그리고 소정의 시간 내에(예를 들어 0.5 내지 24시간의 투약 간격 내에, 또는 예를 들어 6 내지 24시간의 투약 간격 내에(즉, 일일 1 내지 4회)) 대사되는 임의의 화합물을 포함한다. 의심을 피하기 위하여, 용어 "비경구" 투여는 경구 투여 이외의 모든 형태의 투여, 특히 정맥내(IV), 근육내(IM), 및 피하(SC) 주사를 포함한다.

전구약물은 이러한 전구약물이 포유류 대상체에 투여될 때 생체 내에서 개질된 부분이 절단되는 방식으로 화합물 상에 존재하는 작용기를 개질함으로써 제조될 수 있다. 개질은 전형적으로 전구약물 치환체를 갖는 모 화합물을 합성함으로써 달성된다. 일반적으로 전구약물은, 히드록실, 아미노, 술프히드릴, 카르복시 또는 카르보닐 기가 각각 유리 히드록실, 아미노, 술프히드릴, 카르복시 또는 카르보닐 기를 재형성하도록 생체 내에서 절단될 수 있는 임의의 기에 결합된 화합물을 포함한다.

전구약물의 예에는 히드록시 작용기의 에스테르 및 카르바메이트, 카르복실 작용기의 에스테르 기, N-아실 유도체 및 N-만니히(Mannich) 염기가 포함되지만 이에 한정되지 않는다. 전구약물에 대한 전반적인 정보는, 예를 들어 문헌[Bundegaard, H. "Design of Prodrugs" p. l-92, Elesevier, New York-Oxford (1985)]에서 찾을 수 있다.

용매화물이라는 용어는, 화학식 I의 화합물이 형성할 수 있는 용매 부가 형태와 이의 염을 포함한다. 이러한 용매 부가 형태의 예로는 예를 들어 수화물, 알코올레이트 등이 있다.

후술하는 공정에서 제조되는 본 발명의 화합물은 당해 분야에 알려진 분할 절차에 따라 서로로부터 분리될 수 있는 거울상 이성질체의 혼합물, 특히 거울상 이성질체의 라세미 혼합물의 형태로 합성될 수 있다. 화학식 I의 화합물, 및 이의 제약상 허용가능한 염, 및 용매화물의 거울상 이성질체 형태를 분리하는 방식에는 키랄 고정상을 사용하는 액체 크로마토그래피가 포함된다. 상기 순수한 입체화학적 이성질체 형태는 또한, 반응이 입체특이적으로 일어난다면, 적절한 출발 재료의 상응하는 순수한 입체화학적 이성질체 형태로부터 유도될 수 있다. 바람직하게는, 특정 입체이성질체가 요구되는 경우, 상기 화합물은 입체특이적 제조 방법에 의해 합성될 것이다. 이들 방법은 유리하게는 거울상 이성질체로서 순수한 출발 물질을 이용할 것이다.

본원에서 사용되는 바와 같이, "거울상 이성질체로서 순수한"이라는 용어는 생성물이 적어도 80 중량%의 하나의 거울상 이성질체 및 20 중량% 이하의 다른 거울상 이성질체를 함유하는 것을 의미한다. 바람직하게는, 생성물은 적어도 90 중량%의 하나의 거울상 이성질체 및 10 중량% 이하의 다른 거울상 이성질체를 함유한다. 가장 바람직한 실시 형태에서, "거울상 이성질체로서 순수한"이라는 용어는 조성물이 적어도 99 중량%의 하나의 거울상 이성질체 및 1 중량% 이하의 다른 거울상 이성질체를 함유하는 것을 의미한다.

본 발명은 또한, 하나 이상의 원자가 자연에서 통상 발견되는 원자 질량 또는 질량수(또는 자연에서 발견되는 가장 풍부한 것)와 상이한 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자에 의해 대체된다는 사실을 제외하고는, 본원에서 언급된 것들과 동일한 본 발명의 동위원소-표지 화합물을 포함한다.

천연적으로 존재하거나 합성에 의해 생성되는, 천연적으로 풍부하거나 동위원소가 풍부한 형태의, 본원에 명시된 바와 같은 임의의 특정 원자 또는 원소의 모든 동위원소 및 동위원소 혼합물이 본 발명의 화합물의 범주 내에 있는 것으로 고려된다. 본 발명의 화합물 내에 혼입될 수 있는 예시적인 동위원소는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 황, 불소, 염소 및 요오드의 동위원소, 예컨대 ²H, ³H, ¹¹C, ¹³C, ¹⁴C , ¹³N, ¹⁵O, ¹⁷O, ¹⁸O, ³²P, ³³P, ³⁵S, ¹⁸F, ³⁶Cl, ¹²²I, ¹²³I, ¹²⁵I, ¹³¹I, ⁷⁵Br, ⁷⁶Br, ⁷⁷Br 및 ⁸²Br을 포함한다 바람직하게는 동위원소는 ²H,³H, ¹¹C, ¹³C 및 ¹⁸F의 군으로부터 선택된다. 바람직하게는 동위원소는 ²H, ³H, ¹¹C 및 ¹⁸F의 군으로부터 선택된다. 더 바람직하게는, 동위원소는 ²H, ³H 또는 ¹³C이다. 더 바람직하게는, 동위원소는 ²H 또는 ¹³C이다. 더 바람직하게는, 동위원소는 ²H이다. 특히, 중수소화 화합물 및 ¹³C-풍부 화합물은 본 발명의 범주 내에 포함되는 것으로 의도된다. 특히, 중수소 화합물은 본 발명의 범주 내에 포함되는 것으로 의도된다.

특정 동위원소-표지된 본 발명의 화합물(예를 들어, ³H 및 ¹⁴C로 표지된 것들)은, 예를 들어 기질 조직 분포 분석에 유용할 수 있다. 3중 수소(³H) 및 탄소-l4(¹⁴C) 동위원소는 이들의 검출 가능성 및 제조의 용이성으로 유용하다. 추가로, 중수소(즉, ²H)와 같은 더 무거운 동위원소에 의한 치환은 더 큰 대사 안정성으로부터 기인하는 특정한 치료적 장점(예를 들어, 증가된 생체 내 반감기 또는 감소된 투여량 요건)을 제공할 수 있으며, 따라서 일부 상황에서 바람직할 수 있다. ¹⁵O, ¹³N, ¹¹C 및 ¹⁸F와 같은 양전자 방출 동위원소는 양전자 방출 단층촬영(PET) 연구에 유용하다. 암에서 PET 이미징은 종양의 위치를 찾아내고 확인하고, 질환의 병기를 결정하고 적합한 처치를 결정하는 것을 돕는 데 있어서 유용성이 발견된다. 인간 암 세포는 잠재적 질환-특이적 분자 표적인 많은 수용체 또는 단백질을 과발현한다. 종양 세포 상의 이러한 수용체 또는 단백질에 대하여 높은 친화성 및 특이성을 갖고 결합하는 방사성동위원소 표지된 추적자는 진단적 이미징 및 표적화된 방사성 핵종 요법에서 큰 가능성을 갖는다(문헌[Charron, Carlie L. et al. Tetrahedron Lett. 2016, 57(37), 4119-4127]). 추가적으로, 표적-특이적 PET 방사성 추적자는, 예를 들어 표적 발현 및 치료 반응을 측정함으로써, 병상을 검사 및 평가하기 위한 바이오마커로서 사용될 수 있다(문헌[Austin R. et al. Cancer Letters (2016), doi: 10.1016/j.canlet.2016.05.008].

본 발명은 구체적으로, 본원에서 정의된 바와 같은 화학식 I의 화합물, 및 이의 호변이성질체 및 입체이성질체 형태, 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물에 관한 것으로, 여기서,

R^1a는 -C(=O)-NR^xaR^xb; Het; 또는

를 나타내며;

R^1b는 F 또는 Cl을 나타내며;

Y¹은 -CR^5aR^5b-, -O- 또는 -NR^5c-를 나타내며;

U는 N 또는 CH를 나타내며;

n1, n2, n3 및 n4는 각각 독립적으로 1 및 2로부터 선택되며;

X¹은 CH를 나타내고, X²는 N을 나타내며;

R⁴는 이소프로필을 나타내며;

여기서, R³ 정의에서의 각각의 상기 C_1- ₄알킬 또는 C_1- ₆알킬 모이어티는 서로 독립적으로, 시아노, 할로 또는 -O-C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환될 수 있으며;

R^8a 및 R^8b는 수소; C_1- ₆알킬; -C(=O)-C_1- ₄알킬; -C(=O)-O-C_1- ₄알킬; -C(=O)-NR^12aR^12b; 및 시아노, 할로, -S(=O)₂-C_1- ₄알킬, -O-C_1- ₄알킬 및 -C(=O)-NR^10aR^10b로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환된 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되며;

R^9a, R^9b, R^10a, R^10b, R¹¹, R^12a, 및 R^12b는 각각 독립적으로 수소 및 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다.

R^1a는 -C(=O)-NR^xaR^xb; Het; 또는

를 나타내며;

R^1b는 F 또는 Cl을 나타내며;

Y¹은 -CR^5aR^5b-, -O- 또는 -NR^5c-를 나타내며;

U는 N 또는 CH를 나타내며;

n1, n2, n3 및 n4는 각각 독립적으로 1 및 2로부터 선택되며;

X¹은 CH를 나타내고, X²는 N을 나타내며;

R⁴는 이소프로필을 나타내며;

R³은 -C_1- ₆알킬-NR^8aR^8b를 나타내는 것으로서, 여기서, R³ 정의에서의 C_1- ₆알킬 모이어티는 시아노, 할로, OH 및 -O-C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환될 수 있으며;

R^8a 및 R^8b는 수소; C_1- ₆알킬; 및 -OH, 시아노, 할로, -S(=O)₂-C_1- ₄알킬, -O-C_1- ₄알킬, -C(=O)-NR^10aR^10b, 및 -NR^10c-C(=O)-C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환된 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되며;

R^10a, R^10b, R^10c는 각각 독립적으로 수소 및 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다.

R^1a는 -C(=O)-NR^xaR^xb; Het; 또는

를 나타내며;

R^1b는 F 또는 Cl을 나타내며;

Y¹은 -CR^5aR^5b-, -O- 또는 -NR^5c-를 나타내며;

U는 N 또는 CH를 나타내며;

n1, n2, n3 및 n4는 각각 독립적으로 1 및 2로부터 선택되며;

X¹은 CH를 나타내고, X²는 N을 나타내며;

R⁴는 이소프로필을 나타내며;

R³은 -C_1- ₆알킬-NR^8aR^8b를 나타내는 것으로서, 여기서, R³ 정의에서의 C_1- ₆알킬 모이어티는 시아노, 할로 및 -O-C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환될 수 있으며;

R^8a 및 R^8b는 수소; C_1- ₆알킬; 및 시아노, 할로, -S(=O)₂-C_1- ₄알킬, -O-C_1- ₄알킬, 및 -C(=O)-NR^10aR^10b로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환된 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되며;

R^10a 및 R^10b는 각각 독립적으로 수소 및 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다.

R^1a는 -C(=O)-NR^xaR^xb 또는 Het를 나타내며;

Het는 2개의 질소 원자를 함유하는 6원 단환식 방향족 고리를 나타내는 것으로서,

여기서, 상기 6원 단환식 방향족 고리는 1개의 C_3- ₆시클로알킬로 치환되며;

R^xa 및 R^xb는 C_1- ₄알킬을 나타내며;

R^1b는 F를 나타내며;

Y¹은 -O-를 나타내며;

R²는 수소를 나타내며;

U는 N 또는 CH를 나타내며;

n1, n2, n3 및 n4는 각각 독립적으로 1 및 2로부터 선택되며;

X¹은 CH를 나타내고, X²는 N을 나타내며;

R⁴는 이소프로필을 나타내며;

여기서, R³ 정의에서의 각각의 상기 C_1- ₄알킬 또는 C_1- ₆알킬 모이어티는 서로 독립적으로, -OH 및 -O-C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환될 수 있으며;

R^8a 및 R^8b는 수소; C_1- ₆알킬; -C(=O)-C_1- ₄알킬; -C(=O)-O-C_1- ₄알킬; -C(=O)-NR^12aR^12b; 및 -OH, 시아노, 할로, -S(=O)₂-C_1- ₄알킬, -O-C_1- ₄알킬, -C(=O)-NR^10aR^10b, 및 -NR^10c-C(=O)-C_1-4알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환된 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되며;

R^1a는 -C(=O)-NR^xaR^xb 또는 Het를 나타내며;

R^xa 및 R^xb는 C_1- ₄알킬을 나타내며;

R^1b는 F를 나타내며;

Y¹은 -O-를 나타내며;

R²는 수소를 나타내며;

U는 N 또는 CH를 나타내며;

n1, n2, n3 및 n4는 각각 독립적으로 1 및 2로부터 선택되며;

X¹은 CH를 나타내고, X²는 N을 나타내며;

R⁴는 이소프로필을 나타내며;

R³은 -C_1- ₆알킬-NR^8aR^8b를 나타내는 것으로서, 여기서, R³ 정의에서의 C_1- ₆알킬 모이어티는 -OH 및 -O-C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환될 수 있으며;

R^10a _, R^10b, 및 R^10c는 각각 독립적으로, 수소 및 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다.

R^1a는 -C(=O)-NR^xaR^xb를 나타내며;

R^xa 및 R^xb는 C_1- ₄알킬을 나타내며;

R^1b는 F를 나타내며;

Y¹은 -O-를 나타내며;

R²는 수소를 나타내며;

U는 N 또는 CH를 나타내며;

n1, n2, n3 및 n4는 각각 독립적으로 1 및 2로부터 선택되며;

X¹은 CH를 나타내고, X²는 N을 나타내며;

R⁴는 이소프로필을 나타내며;

R^10a, R^10b, 및 R^10c는 각각 독립적으로, 수소 및 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다.

R^1a는 -C(=O)-NR^xaR^xb 또는 Het를 나타내며;

Het는 1개의 C_3- ₆시클로알킬로 치환된 피리미디닐을 나타내며;

R^xa 및 R^xb는 C_1- ₄알킬을 나타내며;

R^1b는 F를 나타내며;

Y¹은 -O-를 나타내며;

R²는 수소를 나타내며;

U는 N을 나타내며;

n1, n2, n3 및 n4는 각각 독립적으로 1 및 2로부터 선택되며;

X¹은 CH를 나타내고, X²는 N을 나타내며;

R⁴는 이소프로필을 나타내며;

R³은 -C_1- ₆알킬-NR^8aR^8b를 나타내는 것으로서, 여기서, R³ 정의에서의 상기 C_1- ₆알킬 모이어티는 1개의 -OH로 치환될 수 있으며;

R^8a 및 R^8b는 수소; C_1- ₆알킬; 및 할로, -O-C_1- ₄알킬, 및 -NR^10c-C(=O)-C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1 또는 2개의 치환체로 치환된 C_1-6알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되며;

R^1a는 -C(=O)-NR^xaR^xb 또는 Het를 나타내며;

R^xa 및 R^xb는 C_1- ₄알킬을 나타내며;

R^1b는 F를 나타내며;

Y¹은 -O-를 나타내며;

R²는 수소를 나타내며;

U는 N을 나타내며;

n2는 2이며;

n1, n3 및 n4는 1이며;

X¹은 CH를 나타내고, X²는 N을 나타내며;

R⁴는 이소프로필을 나타내며;

R^1a는 -C(=O)-NR^xaR^xb를 나타내며;

R^xa 및 R^xb는 C_1- ₄알킬을 나타내며;

R^1b는 F를 나타내며;

Y¹은 -O-를 나타내며;

R²는 수소를 나타내며;

U는 N을 나타내며;

n2는 2이며;

n1, n3 및 n4는 1이며;

X¹은 CH를 나타내고, X²는 N을 나타내며;

R⁴는 이소프로필을 나타내며;

R³은 -C_1- ₆알킬-NR^8aR^8b를 나타내며;

R^1a는 -C(=O)-NR^xaR^xb를 나타내며;

R^xa 및 R^xb는 C_1- ₄알킬을 나타내며;

R^1b는 F를 나타내며;

Y¹은 -O-를 나타내며;

R²는 수소를 나타내며;

U는 N을 나타내며;

n2는 2이며;

n1, n3 및 n4는 1이며;

X¹은 CH를 나타내고, X²는 N을 나타내며;

R⁴는 이소프로필을 나타내며;

R³은 -CH₂-CH₂-CH₂-NR^8aR^8b를 나타내며;

R^1a는 -C(=O)-NR^xaR^xb를 나타내며;

R^xa 및 R^xb는 C_1- ₄알킬을 나타내며;

R^1b는 F를 나타내며;

Y¹은 -O-를 나타내며;

R²는 수소를 나타내며;

U는 N을 나타내며;

n1, n2, n3 및 n4는 각각 독립적으로 1 및 2로부터 선택되며;

X¹은 CH를 나타내고, X²는 N을 나타내며;

R⁴는 이소프로필을 나타내며;

R³은 -C_1- ₆알킬-NR^8aR^8b를 나타내며;

R^8a 및 R^8b는 수소; C_1- ₆알킬; 및 -OH, 시아노, 할로, -S(=O)₂-C_1- ₄알킬, -O-C_1- ₄알킬, 및 -C(=O)-NR^10aR^10b로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환된 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되며;

R^1a는 -C(=O)-NR^xaR^xb를 나타내며;

R^xa 및 R^xb는 C_1- ₄알킬을 나타내며;

R^1b는 F를 나타내며;

Y¹은 -O-를 나타내며;

R²는 수소를 나타내며;

U는 N을 나타내며;

n1, n2, n3 및 n4는 각각 독립적으로 1 및 2로부터 선택되며;

X¹은 CH를 나타내고, X²는 N을 나타내며;

R⁴는 이소프로필을 나타내며;

R³은 -CH₂-CH₂-CH₂-NR^8aR^8b를 나타내며;

R^1a는 -C(=O)-NR^xaR^xb를 나타내며;

R^xa 및 R^xb는 수소 또는 C_1- ₄알킬을 나타내며;

R^1b는 F를 나타내며;

Y¹은 -O-를 나타내며;

R²는 수소를 나타내며;

U는 N을 나타내며;

n1, n2, n3 및 n4는 각각 독립적으로 1 및 2로부터 선택되며;

X¹은 CH를 나타내고, X²는 N을 나타내며;

R⁴는 이소프로필을 나타내며;

R³은 -CH₂-CH₂-CH₂-NR^8aR^8b를 나타내며;

R^1a는 -C(=O)-NR^xaR^xb를 나타내며;

R^xa 및 R^xb는 수소 또는 C_1- ₄알킬을 나타내며;

R^1b는 F를 나타내며;

Y¹은 -O-를 나타내며;

R²는 수소를 나타내며;

U는 N을 나타내며;

n1, n2, n3 및 n4는 각각 독립적으로 1 및 2로부터 선택되며;

X¹은 CH를 나타내고, X²는 N을 나타내며;

R⁴는 이소프로필을 나타내며;

R³은 -CH₂-CH₂-CH₂-NR^8aR^8b를 나타내며;

R^8a 및 R^8b는 수소; C_1- ₆알킬; 및 -OH 및 -O-C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개개의 치환체로 치환된 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택된다.

R^1a는 -C(=O)-NR^xaR^xb를 나타내며;

R^xa 및 R^xb는 C_1- ₄알킬을 나타내며;

R^1b는 F를 나타내며;

Y¹은 -O-를 나타내며;

R²는 수소를 나타내며;

U는 N을 나타내며;

n1, n2, n3 및 n4는 각각 독립적으로 1 및 2로부터 선택되며;

X¹은 CH를 나타내고, X²는 N을 나타내며;

R⁴는 이소프로필을 나타내며;

R³은 -C_1- ₆알킬-NR^8aR^8b를 나타내며;

R^8a 및 R^8b는 C_1- ₆알킬; 및 1개의 -O-C_1- ₄알킬로 치환된 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택된다.

R^1a는 -C(=O)-NR^xaR^xb를 나타내며;

R^xa 및 R^xb는 C_1- ₄알킬을 나타내며;

R^1b는 F를 나타내며;

Y¹은 -O-를 나타내며;

R²는 수소를 나타내며;

U는 N을 나타내며;

n1, n2, n3 및 n4는 각각 독립적으로 1 및 2로부터 선택되며;

X¹은 CH를 나타내고, X²는 N을 나타내며;

R⁴는 이소프로필을 나타내며;

R³은 -CH₂-CH₂-CH₂-NR^8aR^8b를 나타내며;

R^1a는 -C(=O)-NR^xaR^xb; 또는 Het를 나타내며;

여기서, 상기 6원 단환식 방향족 고리는 1개의 C_3- ₆시클로알킬로 선택적으로 치환되며;

R^xa 및 R^xb는 C_1- ₄알킬을 나타내며;

R^1b는 F를 나타내며;

Y¹은 -O-를 나타내며;

R²는 수소이며;

U는 N을 나타내며;

n1, n2, n3 및 n4는 각각 독립적으로 1 및 2로부터 선택되며;

X¹은 CH를 나타내고, X²는 N을 나타내며;

R⁴는 이소프로필을 나타내며;

-C_1-6알킬-NR¹¹-C(=O)-O-C_1-4알킬-O-C(=O)-C_1-4알킬을 나타내며;

R^8a 및 R^8b는 수소; C_1- ₆알킬; -C(=O)-C_1- ₄알킬; -C(=O)-O-C_1- ₄알킬; -C(=O)-NR^12aR^12b; 및 시아노, 할로, -S(=O)₂-C_1- ₄알킬, 및 -O-C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환된 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되며;

R^9a, R^9b, R^12a, 및 R^12b는 각각 독립적으로 수소 및 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다.

R^1a는 -C(=O)-NR^xaR^xb를 나타내며;

R^xa 및 R^xb는 C_1- ₄알킬을 나타내며;

R^1b는 F를 나타내며;

Y¹은 -O-를 나타내며;

R²는 수소이며;

U는 N을 나타내며;

n1, n2, n3 및 n4는 각각 독립적으로 1 및 2로부터 선택되며;

X¹은 CH를 나타내고, X²는 N을 나타내며;

R⁴는 이소프로필을 나타내며;

R³은 -C_1- ₆알킬-NR^8aR^8b, -C_1- ₆알킬-C(=O)-NR^9aR^9b, 또는 -C_1- ₆알킬-OH를 나타내며;

일 실시 형태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물, 또는 임의의 다른 실시 형태에서 언급된 이의 임의의 하위군에 관한 것으로, 여기서,

R^1b는 F를 나타낸다

R²는 수소를 나타낸다.

일 실시 형태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물, 또는 임의의 다른 실시 형태에서 언급된 이의 임의의 하위군에 관한 것으로, 여기서, n1은 1이고, n2는 2이고, n3은 1이고, n4는 1이다.

Y¹은 -O-를 나타낸다.

Y¹은 -O-를 나타내고;

U는 N을 나타낸다.

Y¹은 -O-를 나타내고;

U는 N을 나타내고;

R^1b는 F를 나타내고;

R²는 수소를 나타낸다.

일 실시 형태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물, 또는 임의의 다른 실시 형태에서 언급된 이의 임의의 하위군에 관한 것으로, 여기서, Het는

를 나타낸다.

일 실시 형태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물, 또는 임의의 다른 실시 형태에서 언급된 이의 임의의 하위군에 관한 것으로, 여기서, Het는 1 또는 2개의 질소 원자를 함유하는 단환식 5원 또는 6원 방향족 고리를 나타내고; 상기 단환식 5원 또는 6원 방향족 고리는 1개의 C_3- ₆시클로알킬로 치환된다.

일 실시 형태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물, 또는 임의의 다른 실시 형태에서 언급된 이의 임의의 하위군에 관한 것으로, 여기서, Het는 1 또는 2개의 질소 원자를 함유하는 단환식 5원 또는 6원 방향족 고리를 나타내는 것으로서, 상기 단환식 5원 또는 6원 방향족 고리는 1개의 C_3- ₆시클로알킬로 치환되고;

R^1b는 F를 나타낸다.

일 실시 형태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물, 또는 임의의 다른 실시 형태에서 언급된 이의 임의의 하위군에 관한 것으로, 여기서, Het는 1 또는 2개의 질소 원자를 함유하는 단환식 6원 방향족 고리를 나타내고; 상기 단환식 6원 방향족 고리는 1개의 C_3- ₆시클로알킬로 치환된다.

일 실시 형태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물, 또는 임의의 다른 실시 형태에서 언급된 이의 임의의 하위군에 관한 것으로, 여기서, Het는 1 또는 2개의 질소 원자를 함유하는 단환식 6원 방향족 고리를 나타내는 것으로서, 상기 단환식 6원 방향족 고리는 1개의 C_3- ₆시클로알킬로 치환되고;

R^1b는 F를 나타낸다.

R³은 -C_1- ₆알킬-NR^8aR^8b를 나타내는 것으로서, R³ 정의에서의 C_1- ₆알킬 모이어티는 시아노, 할로 및 -O-C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환될 수 있다.

R³은 -C_1- ₆알킬-NR^8aR^8b를 나타내는 것으로서, R³ 정의에서의 C_1- ₆알킬 모이어티는 시아노, 할로, -OH, 및 -O-C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환될 수 있다.

R³은 -C_1- ₆알킬-NR^8aR^8b를 나타낸다.

R³은 -C_1- ₆알킬-NR^8aR^8b를 나타내는 것으로서, R³ 정의에서의 C_1- ₆알킬 모이어티는 시아노, 할로 및 -O-C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환될 수 있고;

R^8a 및 R^8b는 수소; C_1- ₆알킬; 및 -OH, 시아노, 할로, -S(=O)₂-C_1- ₄알킬, -O-C_1- ₄알킬, -C(=O)-NR^10aR^10b, 및 -NR^10c-C(=O)-C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환된 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택된다.

R³은 -C_1- ₆알킬-NR^8aR^8b를 나타내는 것으로서, R³ 정의에서의 C_1- ₆알킬 모이어티는 시아노, 할로, -OH, 및 -O-C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환될 수 있고;

R^8a 및 R^8b는 수소; C_1- ₆알킬; 및 시아노, 할로, -S(=O)₂-C_1- ₄알킬, -O-C_1- ₄알킬, 및 -C(=O)-NR^10aR^10b로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환된 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택된다.

R^8a 및 R^8b는 수소; C_1- ₆알킬; 및 시아노, 할로, -S(=O)₂-C_1- ₄알킬, -O-C_1- ₄알킬, -C(=O)-NR^10aR^10b, 및 -NR^10c-C(=O)-C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환된 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택된다.

R³은 -C_2- ₆알킬-NR^8aR^8b를 나타내는 것으로서, R³ 정의에서의 C_2- ₆알킬 모이어티는 시아노, 할로 및 -O-C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환될 수 있다.

R³은 -C_2- ₆알킬-NR^8aR^8b를 나타내는 것으로서, R³ 정의에서의 C_2- ₆알킬 모이어티는 시아노, 할로, -OH, 및 -O-C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환될 수 있다.

R³은 -C_2- ₆알킬-NR^8aR^8b를 나타내는 것으로서, R³ 정의에서의 C_2- ₆알킬 모이어티는 시아노, 할로 및 -O-C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환될 수 있고;

R³은 -C_2- ₆알킬-NR^8aR^8b를 나타내는 것으로서, R³ 정의에서의 C_2- ₆알킬 모이어티는 시아노, 할로, -OH, 및 -O-C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환될 수 있고;

R³은 -C_1- ₆알킬-NR^8aR^8b를 나타내고;

R^8a 및 R^8b는 C_1- ₆알킬; 및 -OH, 시아노, 할로, -S(=O)₂-C_1- ₄알킬, -O-C_1- ₄알킬, 및 -C(=O)-NR^10aR^10b로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환된 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택된다.

R³은 -C_1- ₆알킬-NR^8aR^8b를 나타내고;

R^8a 및 R^8b는 C_1- ₆알킬; 및 -OH, 시아노, 할로, -S(=O)₂-C_1- ₄알킬, -O-C_1- ₄알킬, -C(=O)-NR^10aR^10b, 및 -NR^10c-C(=O)-C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환된 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택된다.

R³은 -C_1- ₆알킬-NR^8aR^8b를 나타내고;

R^8a는 C_1- ₆알킬을 나타내고;

R^8b는 1개의 -O-C_1- ₄알킬로 치환된 C_1- ₆알킬을 나타낸다.

R³은 -C_1- ₆알킬-NR^8aR^8b, -C_1- ₆알킬-C(=O)-NR^9aR^9b, -C_1- ₆알킬-OH, 또는 -C_1- ₆알킬-NR¹¹-C(=O)-O-C_1-4알킬-O-C(=O)-C_1-4알킬을 나타내는 것으로서,

여기서, R³ 정의에서의 각각의 상기 C_1- ₄알킬 또는 C_1- ₆알킬 모이어티는 서로 독립적으로, 시아노, 할로 또는 -O-C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환될 수 있다.

R³은 -C_1- ₆알킬-NR^8aR^8b, -C_1- ₆알킬-C(=O)-NR^9aR^9b, 또는

-C_1- ₆알킬-NR¹¹-C(=O)-O-C_1- ₄알킬-O-C(=O)-C_1- ₄알킬을 나타내는 것으로서,

여기서, R³ 정의에서의 각각의 상기 C_1- ₄알킬 또는 C_1- ₆알킬 모이어티는 서로 독립적으로, 시아노, 할로, -OH, 및 -O-C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환될 수 있다.

R³은 -CH₂-CH₂-CH₂-NR^8aR^8b를 나타낸다.

R³은 -CH₂-CH₂-CH₂-NR^8aR^8b를 나타내고;

R^8a는 메틸을 나타내고;

R^8b는 -CH₂-CH₂-OCH₃을 나타낸다.

일 실시 형태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물, 또는 임의의 다른 실시 형태에서 언급된 이의 임의의 하위군에 관한 것으로, 여기서, R³ 정의 -C_1- ₆알킬-NR^8aR^8b에서의 C_1- ₆알킬은 -CH₂-CH₂-CH₂-에 한정되지 않는다.

일 실시 형태에서, 본 발명은 화학식 I의 화합물 및 이의 제약상 허용가능한 염 및 용매화물, 또는 임의의 다른 실시 형태에서 언급된 이의 임의의 하위군에 관한 것으로, 여기서, 화학식 I의 화합물은 하기 화학식 I-y의 화합물로 한정된다:

[화학식 I-y]

여기서, R³은 화학식 I의 화합물 또는 임의의 다른 실시 형태에서 언급된 이의 임의의 하위군에 대해 정의된 바와 같다.

화학식 I-y에서 n1은 1이고, n2는 2이고, n3은 1이고, n4는 1이다.

일 실시 형태에서, 화학식 I의 화합물은

및 이의 제약상 허용가능한 부가염, 및 용매화물이다.

일 실시 형태에서, 화학식 I의 화합물은

이다.

일 실시 형태에서, 화학식 I의 화합물은

이다.

일 실시 형태에서, 화학식 I의 화합물은

이다.

일 실시 형태에서, 본 발명은 일반 반응식에 정의된 바와 같은 화학식 I의 하위군에 관한 것이다.

일 실시 형태에서, 화학식 I의 화합물은 임의의 예시된 화합물,

이의 호변이성질체 및 입체이성질체 형태, 및 이들의 유리 염기, 임의의 제약상 허용가능한 염, 및 용매화물로 이루어진 군으로부터 선택된다.

위에 나타낸 실시 형태의 모든 가능한 조합은 본 발명의 범주 내에 포함되는 것으로 간주된다.

또 다른 실시 형태에서, 본 발명은 중간체

이의 호변이성질체 및 입체이성질체 형태, 및 이의 임의의 제약상 허용가능한 염, 및 용매화물에 관한 것이다.

또 다른 실시 형태에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 중간체의 제조 방법에 관한 것이다:

(여기서, PG는 적합한 보호기, 예컨대 벤질이며;

n1 및 n2는 화학식 I에 대해 정의된 바와 같음)

단계 23: 적합한 온도, 예를 들어 -78℃~-25℃에서, 적합한 염기, 예를 들어 DIEA 및 n-BuLi의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 THF에서;

단계 24: 적합한 온도, 예를 들어 -55℃~-65℃에서, 적합한 환원제, 예를 들어 DIBAL-H의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 톨루엔에서, 적합한 유동 화학 시스템에서 수행.

적합한 온도, 예를 들어 -78℃~-25℃에서, 적합한 염기, 예를 들어 DIEA 및 n-BuLi의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 THF에서 첫 번째 반응;

그 후, 적합한 온도, 예를 들어 -55℃~-65℃에서, 적합한 환원제, 예를 들어 DIBAL-H의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 톨루엔에서, 적합한 유동 화학 시스템에서 수행되는 반응.

PG는 적합한 보호기, 예컨대 벤질이며;

다른 변수는 화학식 I에 대해 정의된 바와 같다.

(PG는 적합한 보호기, 예컨대 벤질이며;

다른 변수는 화학식 I에 대해 정의된 바와 같음);

단계 30: 적합한 온도, 예를 들어 5℃~30℃에서, 적합한 염기, 예를 들어 TEA의 존재 하에, 적합한 환원제, 예를 들어 NaBH(OAc)₃의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 톨루엔에서;

단계 31: 적합한 온도, 예를 들어 50℃~55℃에서, 적합한 염기, 예를 들어 K₂HPO₄의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 H₂O에서;

단계 32: 적합한 온도, 예를 들어 -5℃~45℃에서, 수소 분위기 하에 적합한 압력 범위 내에서, 예를 들어 0.27~0.40 MPa에서, 탄소상 수산화팔라듐의 존재 하에, MSA의 존재 하에 적합한 용매, 예컨대 EtOH에서;

단계 33: 적합한 온도, 예를 들어 -50℃~-40℃에서, 적합한 염기, 예를 들어 TEA의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 2-메틸테트라히드로푸란에서;

단계 34: 적합한 온도, 예를 들어 20℃~30℃에서, 적합한 염기, 예를 들어 TMG의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 2-메틸테트라히드로푸란에서;

단계 35: 적합한 온도, 예를 들어 20℃~30℃에서, 수소 분위기 하에 적합한 압력 범위 내에서, 예를 들어 0.20~0.30 MPa에서, 적합한 촉매, 예를 들어 탄소상 팔라듐의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 MeOH에서.

또 다른 실시 형태에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하는 화합물의 제조 방법에 관한 것이다:

첫 번째 단계에서, 적합한 온도, 예를 들어 -5℃~45℃에서, 수소 분위기 하에 적합한 압력 범위 내에서, 예를 들어 0.27~0.40 MPa에서, 탄소상 수산화팔라듐의 존재 하에, MSA의 존재 하에 적합한 용매, 예컨대 EtOH에서;

다음 단계에서, 적합한 온도, 예를 들어 -50℃~-40℃에서, 적합한 염기, 예를 들어 TEA의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 2-메틸테트라히드로푸란에서;

다음 단계에서, 적합한 온도, 예를 들어 20℃~30℃에서, 적합한 염기, 예를 들어 TMG의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 2-메틸테트라히드로푸란에서;

다음 단계에서, 적합한 온도, 예를 들어 20℃~30℃에서, 수소 분위기 하에 적합한 압력 범위 내에서, 예를 들어 0.20~0.30 MPa에서, 적합한 촉매, 예를 들어 탄소상 팔라듐의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 MeOH에서.

첫 번째 단계에서, 먼저 적합한 온도, 예를 들어 5℃~30℃에서, 적합한 염기, 예를 들어 TEA의 존재 하에, 적합한 환원제, 예를 들어 NaBH(OAc)₃의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 톨루엔에서; 및 그 후 적합한 온도, 예를 들어 50℃~55℃에서, 적합한 염기, 예를 들어 K₂HPO₄의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 H₂O에서;

다음 단계에서, 적합한 온도, 예를 들어 -5℃~45℃에서, 수소 분위기 하에 적합한 압력 범위 내에서, 예를 들어 0.27~0.40 MPa에서, 탄소상 수산화팔라듐의 존재 하에, MSA의 존재 하에 적합한 용매, 예컨대 EtOH에서;

화학식 I의 화합물의 제조 방법

이 섹션에서, 문맥상 달리 나타내지 않는 한 모든 다른 섹션에서처럼, 화학식 I에 대한 언급은 본원에 정의된 이의 모든 다른 하위군 및 예도 포함한다.

화학식 I의 화합물의 일부 전형적인 예의 일반적인 제조는 하기에 그리고 특정 실시예에서 기술되고, 일반적으로, 구매가능하거나 유기 화학 분야의 숙련자가 일반적으로 사용하는 표준 합성 공정에 의해 제조되는 출발 물질로부터 제조된다. 하기 반응식은 본 발명의 예를 나타내기 위한 것일 뿐이며 결코 본 발명을 제한하고자 하는 것은 아니다.

대안적으로, 본 발명의 화합물은 또한 당업자가 통상적으로 사용하는 표준 합성 공정과 조합하여 하기 일반 반응식에 기술된 것과 유사한 반응 프로토콜에 의해 제조될 수 있다.

당업자는 반응식에 기술된 반응에서, 최종 생성물에 요구되는 반응성 작용기(예를 들어, 히드록시, 아미노, 또는 카르복시 기)가 반응에 원치 않게 참여하는 것을 피하기 위해 이들을 보호하는 것이 필요할 수 있다는 것을 인식할 것이지만, 이것은 항상 명백하게 예시되는 것은 아니다. 일반적으로, 통상적인 보호기(PG)는 표준 관행에 따라 사용될 수 있다. 보호기는 당업계에 알려진 방법을 사용하여 편리한 후속 단계에서 제거될 수 있다.

당업자는 반응식에 기술된 반응에서, 예를 들어 N₂ 가스 분위기와 같은 불활성 분위기 하에서 반응을 수행하는 것이 바람직하거나 필요할 수 있다는 것을 인식할 것이다.

반응 후처리(work-up)(화학 반응의 생성물(들)의 단리 및 정제에 필요한 일련의 조작, 예를 들어, 켄칭, 컬럼 크로마토그래피, 추출을 지칭함) 전에 반응 혼합물을 냉각시키는 것이 필요할 수 있다는 것은 당업자에게 자명할 것이다http://en.wikipedia.org/wiki/Chemical_reaction.

당업자라면 교반 하에 반응 혼합물을 가열하는 것이 반응 결과를 향상시킬 수 있다는 것을 인식할 것이다. 일부 반응에서, 전체 반응 시간을 단축하기 위해 종래의 가열 대신에 마이크로웨이브 가열을 사용할 수 있다.

당업자는 하기 반응식에 도시된 화학 반응의 또 다른 시퀀스(sequence)가 원하는 화학식 I의 화합물을 또한 생성할 수 있다는 것을 인식할 것이다.

당업자라면 하기 반응식에 도시된 중간체 및 최종 화합물이 당업자에게 잘 알려진 방법에 따라 더 작용화될 수 있다는 것을 인식할 것이다. 본원에 기술된 중간체 및 화합물은 유리 형태 또는 염 또는 이의 용매화물로 단리될 수 있다. 본원에 기술된 중간체 및 화합물은 당업계에 공지된 분해 절차에 따라 서로 분리될 수 있는 호변이성질체들 및 입체이성질체 형태들의 혼합물 형태로 합성될 수 있다.

일반적인 합성 반응식

일반 반응식에 사용된 모든 약어는 실시예 파트의 표에 정의된 바와 같다. 변수는 이 범주 내에서 정의된 바와 같거나 일반 반응식에서 구체적으로 정의된 바와 같다.

파트 A) 반응식 1a, 1b, 1c, 2a, 2b 및 3

[반응식 1a]

[반응식 1b]

[반응식 1c]

반응식 1a, 1b 및 1c에서, 하기 반응 조건이 적용된다:

단계 1: 적합한 온도, 예를 들어 -70℃에서, 적합한 염기, 예를 들어 TMEDA 및 적합한 유기금속 시약, 예를 들어 이소프로필마그네슘 브로마이드의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 THF에서;

단계 2: 적합한 온도, 예를 들어 0℃~실온에서, 적합한 산화 시약, 예를 들어 DMP의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 DCM에서;

단계 3: 적합한 온도, 예를 들어 -20℃~실온에서, 적합한 유기금속 시약, 예를 들어 이소프로필마그네슘 브로마이드의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 THF에서;

단계 4: 적합한 온도, 예를 들어 80℃에서, 적합한 염기, 예를 들어 NaOH의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 THF 및 H₂O에서;

단계 5: 적합한 온도, 예를 들어 실온에서, 적합한 아미드 축합 시약, 예를 들어 EDCI 및 HOBt의 존재 하에, 적합한 염기, 예를 들어 NMM의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 DCM에서;

단계 6: 적합한 온도, 예를 들어 -70℃에서, 적합한 유기금속 시약, 예를 들어 이소프로필리튬의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 THF에서;

단계 7: 적합한 온도, 예를 들어 90℃에서, 적합한 유기금속 촉매, 예를 들어 Pd(dppf)Cl₂의 존재 하에,적합한 염기, 예를 들어 Na₂CO₃의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 1,4-디옥산 및 H₂O에서;

단계 8: 적합한 온도, 예를 들어 0℃~실온에서, 적합한 루이스산, 예를 들어 BBr₃의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 DCM에서;

단계 9: 적합한 온도, 예를 들어 -78℃~40℃, 구체적으로 0℃~실온에서, 적합한 염기, 예를 들어 TEA, DBU 또는 K₂CO₃의 존재 하에,적합한 용매, 예를 들어 DCM, THF 또는 DMF에서;

[반응식 2a]

[반응식 2b]

반응식 2a 및 2b에서, 하기 반응 조건이 적용된다:

단계 9: 반응식 1의 단계 9 참조;

단계 10: 적합한 온도, 예를 들어 실온에서, 적합한 촉매, 예를 들어 Pd/C의 존재 하에, 적합한 환원 시약, 예를 들어 H₂의 존재 하에, 선택적으로 적합한 염기, 예를 들어 TEA의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 THF에서;

대안적으로, 적합한 온도, 예컨대 실온에서, 적합한 촉매, 예를 들어 Pd(dppf)Cl₂*DCM 착물, 적합한 환원제, 예컨대 NaBH₄, 적합한 염기, 예를 들어 TMEDA의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 THF에서.

단계 11: N 탈보호의 경우, 적합한 온도, 예를 들어 실온에서, 적합한 산의 존재 하에, 예를 들어 TFA, 적합한 용매, 예를 들어 DCM에서; O 탈보호의 경우, 적합한 온도, 예를 들어 실온에서, 적합한 산, 예를 들어 4-메틸벤젠술폰산의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 MeOH에서;

단계 12: 적합한 온도, 예를 들어 80℃에서, 선택적으로 적합한 루이스산, 예를 들어 ZnCl₂의 존재 하에, 적합한 환원 시약, 예를 들어 NaBH₃CN의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 MeOH에서;

단계 13: 적합한 온도, 예를 들어 실온에서, 적합한 유기금속 촉매, 예를 들어 Ag(Phen)₂OTf의 존재 하에, 적합한 브롬화 시약, 예를 들어 1,3-디브로모-1,3,5-트리아지난-2,4,6-트리온의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 DCE에서;

단계 14: 적합한 온도, 예를 들어 실온에서, 적합한 염소화 시약, 예를 들어 옥살릴 클로라이드의 존재 하에, DMF의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 DCM에서.

[반응식 3]

반응식 3에서, 하기 반응 조건이 적용된다:

단계 11~12: 반응식 2의 단계 11~12 참조;

단계 15: 적합한 온도, 예를 들어 80℃에서, 적합한 염기, 예를 들어 Cs₂CO₃의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 DMF에서;

단계 16: 적합한 온도, 예를 들어 40℃에서, 적합한 염기, 예를 들어 암모니아의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 1,4-디옥산에서.

파트 B) 반응식 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 및 12

[반응식 4]

반응식 4에서, 하기 반응 조건이 적용된다:

단계 1: 적합한 온도, 예를 들어 90℃에서, 적합한 유기금속 촉매, 예를 들어 Pd(dppf)Cl₂의 존재 하에,적합한 염기, 예를 들어 Na₂CO₃의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 1,4-디옥산 및 H₂O에서;

단계 2: 적합한 온도, 예를 들어 실온에서, 적합한 아미드 축합 시약, 예를 들어 HATU의 존재 하에, 적합한 염기, 예를 들어 DIEA의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 DCM에서;

단계 3: 적합한 온도, 예를 들어 -78℃~실온에서, 적합한 루이스산, 예를 들어 BBr₃의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 DCM에서;

단계 4: 적합한 온도, 예를 들어 -78℃~40℃, 구체적으로 0℃~실온에서, 적합한 염기, 예를 들어 TEA, DBU 또는 K₂CO₃의 존재 하에,적합한 용매, 예를 들어 DCM, THF 또는 DMF에서;

단계 5: 적합한 온도, 예를 들어 실온에서, 적합한 염기, 예를 들어 LiOH*H₂O의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 THF 및 H₂O에서;

단계 6: 적합한 온도, 예를 들어 실온에서, 적합한 유기금속 촉매, 예를 들어 Ag(Phen)₂OTf의 존재 하에, 적합한 브롬화 시약, 예를 들어 1,3-디브로모-1,3,5-트리아지난-2,4,6-트리온의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 DCE에서;

단계 7: 적합한 온도, 예를 들어 실온에서, 적합한 브롬화 시약, 예컨대 1,3-디브로모-1,3,5-트리아지난-2,4,6-트리온의 존재 하에, 용매로서 2,2,2-트리플루오로에탄-1-올의 존재 하에.

[반응식 5]

반응식 5에서, 하기 반응 조건이 적용된다:

단계 8: 적합한 온도, 예를 들어 -78℃~40℃, 구체적으로 0℃~실온에서, 적합한 염기, 예를 들어 TEA, DBU 또는 K₂CO₃의 존재 하에,적합한 용매, 예를 들어 DCM, THF 또는 DMF에서;

단계 10: 적합한 온도, 예를 들어 실온에서, 적합한 유기금속 촉매, 예를 들어 Pd/C 및 적합한 염기, 예를 들어 TEA의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 MeOH에서 H₂ 분위기 하에;

단계 11: PG가 Boc인 경우, 적합한 온도, 예를 들어 실온에서, 적합한 산, 예를 들어 TFA의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 DCM에서.

[반응식 6]

반응식 6에서, 하기 반응 조건이 적용된다:

단계 12: 환원성 아민화 조건, 적합한 온도, 예를 들어 실온~80℃에서, 적합한 루이스산, 예를 들어 ZnCl₂ 또는 산, 예를 들어 AcOH의 존재 또는 부재 하에, 적합한 환원제, 예를 들어 NaBH₃CN의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 MeOH에서;

단계 13: 적합한 온도, 예를 들어 0℃에서, 적합한 친핵체, 예를 들어 MsCl의 존재 하에, 적합한 염기, 예를 들어 TEA의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 DCM에서;

단계 14: 적합한 온도, 예를 들어 0℃~실온에서, 적합한 산화제, 예를 들어 DMP의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 DCM에서;

단계 15: 적합한 온도, 예를 들어 50℃에서, 적합한 산, 예를 들어 HCl의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 ACN에서;

단계 16: 적합한 온도, 예를 들어 실온에서, 적합한 염기, 예를 들어 TEA의 존재 또는 부재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 THF에서.

[반응식 7]

반응식 7에서, 하기 반응 조건이 적용된다:

단계 11: PG가 Boc인 경우, 적합한 온도, 예를 들어 실온에서, 적합한 산, 예를 들어 TFA의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 DCM에서;

단계 17: 적합한 온도, 예를 들어 실온~80℃에서, 적합한 염기, 예를 들어 DIEA 또는 Cs₂CO₃의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 DCM 또는 DMF에서;

단계 18: 적합한 온도, 예를 들어 40℃에서, 적합한 염기, 예를 들어 암모니아의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 1,4-디옥산에서.

[반응식 8]

반응식 8에서, 하기 반응 조건이 적용된다:

단계 10: 적합한 온도, 예를 들어 실온에서, 적합한 유기금속 촉매, 예를 들어 Pd/C의 존재 하에, 선택적으로 적합한 염기, 예를 들어 TEA의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 MeOH에서, H₂ 분위기 하에;

단계 19: 적합한 온도, 예를 들어 실온에서, 적합한 염소화 시약, 예를 들어 옥살릴 클로라이드의 존재 하에, DMF의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 DCM에서;

단계 20: 적합한 온도, 예를 들어 90℃에서, 적합한 친핵성 아민의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 EtOH에서;

단계 21: 적합한 온도, 예를 들어 실온에서, 예를 들어 디옥산 중 HCl과 같은 적합한 산의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 MeOH에서;

단계 22: 적합한 온도, 예를 들어 110℃에서, 적합한 붕소 시약, 예를 들어 트리메틸보록신의 존재 하에, 적합한 유기금속 촉매, 예를 들어 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0)의 존재 하에,적합한 염기, 예를 들어 K₂CO₃의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 1,4-디옥산에서;

[반응식 9]

반응식 9에서, 하기 반응 조건이 적용된다:

단계 23: 적합한 온도, 예를 들어 -78℃~-25℃에서, 적합한 염기, 예를 들어 DIEA 및 n-BuLi의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 THF에서;s

단계 24: 적합한 온도, 예를 들어 -65℃~- 55℃에서, 적합한 환원제, 예를 들어 DIBAL-H의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 톨루엔에서, 바람직하게는 적합한 유동 화학 시스템에서 수행;

단계 25: 먼저 적합한 온도, 예를 들어 -10℃~10℃에서, 적합한 염기, 예를 들어 DMAP의 존재 하에, 적합한 축합제, 예를 들어 DCC의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 DCM에서; 그 후 적합한 온도, 예를 들어 -10℃~0℃에서, 적합한 산, 예를 들어 AcOH의 존재 하에, 적합한 환원제, 예를 들어 NaBH₄의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 DCM에서;

단계 26: 적합한 용매, 예를 들어 톨루엔에서 가열 환류;

단계 27: 적합한 온도, 예를 들어 -5℃~5℃에서, 적합한 환원제, 예를 들어 LiBH₄의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 2-메틸테트라히드로푸란에서;

단계 28: 적합한 온도, 예를 들어 15℃~25℃에서, 적합한 환원제, 예를 들어 NaBH(OAc)₃의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 DCM에서;

단계 29: 적합한 온도, 예를 들어 15℃~25℃에서, 적합한 산, 예컨대 HCl의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 IPA에서;

단계 32: PG가 Bn인 경우, 적합한 온도, 예를 들어 -5℃~45℃에서, 수소 분위기 하에 적합한 압력 범위 내에서, 예를 들어 0.27~0.40 MPa에서, 적합한 촉매, 예를 들어 탄소상 수산화팔라듐의 존재 하에, 적합한 산, 예를 들어 MSA의 존재 하에 적합한 용매, 예컨대 EtOH에서;

단계 35: 적합한 온도, 예를 들어 20℃~30℃에서, 수소 분위기 하에 적합한 압력 범위 내에서, 예를 들어 0.20~0.30 Mpa에서, 적합한 촉매, 예를 들어 탄소상 팔라듐의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 MeOH에서;

대안적으로, 적합한 온도, 예컨대 실온에서, 적합한 촉매, 예를 들어 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센-팔라듐(II)디클로라이드 디클로로메탄 착물, 적합한 환원제, 예컨대 소듐 보로히드라이드, 적합한 염기, 예를 들어 N,N,N ',N'-테트라메틸에틸렌디아민의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 테트라히드로푸란에서.

반응식 10

일반적으로, Y¹이 -CH₂-에 한정되고, R²가 W¹에 한정된 화학식 I의 화합물(본원에서 화학식 Ia의 화합물로 명명됨)은 하기 반응식 10에 따라 제조될 수 있다. 반응식 10에서, W¹은 클로로, 브로모 또는 요오도를 나타내며; 다른 모든 변수는 본 발명의 범주에 따라 정의된다.

[반응식 10]

반응식 10에서, 하기 반응 조건이 적용된다:

단계 36: 60℃ 내지 100℃의 범위의 적합한 온도에서, 적합한 촉매, 예컨대 아세트산팔라듐(Pd(OAc)₂) 또는 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (Pd₂(dba)₃) 또는 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0)의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 테트라히드로푸란 또는 디옥산에서.

당업자는 화합물 (Ia)로부터 출발하여 반응식 5의 단계 10 및 반응식 8의 단계 20, 21 및 22에서 보고된 것과 유사한 화학반응이 수행될 수 있음을 인식할 것이다.

반응식 11

일반적으로, Y¹이 -CR^5aR^5b-에 한정되고, R²가 W¹에 한정된 화학식 I의 화합물(본원에서 화학식 Ib의 화합물로 명명됨)은 하기 반응식 11에 따라 제조될 수 있다. 반응식 11에서 R^5a 및 R^5b 중 적어도 하나는 수소 이외의 것이다. 모든 다른 변수는 본 발명의 범주에 따라 정의된다.

[반응식 11]

반응식 11에서, 하기 반응 조건이 적용된다:

단계 37: 80℃ 내지 200℃의 범위의 적합한 온도에서, 적합한 촉매, 예컨대 아세트산팔라듐(Pd(OAc)₂)의 존재 하에, 적합한 리간드, 예를 들어 트리페닐포스핀 또는 트리시클로헥실포스핀의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 디옥산에서, 바람직하게는 밀봉 조건에서, 선택적으로 마이크로웨이브 조사 하에.

당업자는 화합물 (Ib)로부터 출발하여 반응식 5의 단계 10 및 반응식 8의 단계 20, 21 및 22에서 보고된 것과 유사한 화학반응이 수행될 수 있음을 인식할 것이다.

[반응식 12]

반응식 12에서, 하기 반응 조건이 적용된다:

단계 38: 적합한 온도, 예를 들어 실온~80℃에서, 적합한 염기, 예를 들어 DIEA, Cs₂CO₃ 또는 DBU의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 DCM, THF 또는 DMF에서;

대안적으로, 적합한 온도, 예를 들어 실온~100℃에서, 적합한 촉매, 예를 들어 Pd₂dba₃의 존재 하에, 적합한 리간드, 예를 들어 Xantphos의 존재 하에, 적합한 염기, 예컨대 Cs₂CO₃ 또는 Na₂CO₃의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 디옥산 또는 디옥산과 물의 혼합물에서.

당업자는 중간체 A로부터 출발하여 Y¹이 O를 나타내는 경우에 보고된 것과 유사한 화학반응이 수행될 수 있음을 인식할 것이다.

적절한 작용기가 존재할 경우, 다양한 화학식의 화합물 또는 이의 제조에 사용된 임의의 중간체는 축합, 치환, 산화, 환원, 또는 절단 반응을 이용하는 하나 이상의 표준 합성 방법에 의해 추가로 유도체화될 수 있음을 알 것이다. 특정 치환 접근법에는 통상의 알킬화, 아릴화, 헤테로아릴화, 아실화, 술포닐화, 할로겐화, 질화, 포르밀화 및 커플링 절차가 포함된다.

화학식 I의 화합물은 당업계에 공지된 분할 절차에 따라 서로 분리될 수 있는 거울상 이성질체의 라세미 혼합물의 형태로 합성될 수 있다. 염기성 질소 원자를 포함하는 화학식 I의 라세미 화합물은 적합한 키랄 산과의 반응에 의해 상응하는 부분입체 이성질체 염 형태들로 전환될 수 있다. 상기 부분입체 이성질체 염 형태는 후속적으로, 예를 들어 선택적 또는 분별 결정화에 의해 분리되고, 거울상 이성질체는 알칼리에 의해 이로부터 유리된다. 화학식 I의 화합물의 거울상 이성질체 형태를 분리하는 대안적인 방식은 키랄 고정상을 사용하는 액체 크로마토그래피를 포함한다. 상기 순수한 입체화학적 이성질체 형태는 또한, 반응이 입체특이적으로 일어난다면, 적절한 출발 물질의 상응하는 순수한 입체화학적 이성질체 형태로부터 유도될 수 있다.

본 발명의 화합물의 제조에 있어서, 중간체의 원위 작용체(예를 들어, 1차 또는 2차 아민)의 보호가 필요할 수 있다. 이와 같은 보호의 필요성은 원위 작용체의 성질과 제조 방법의 조건에 따라서 달라질 것이다. 적합한 아미노-보호기 (NH-Pg)는 아세틸, 트리플루오로아세틸, t-부톡시카르보닐(Boc), 벤질옥시카르보닐(CBz) 및 9-플루오레닐메틸렌옥시카르보닐(Fmoc)을 포함한다. 이러한 보호의 필요성은 당업자에 의해 쉽게 결정된다. 보호기 및 이들의 사용에 대한 일반적인 설명에 대해서는 문헌[T. W. Greene and P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 4th ed., Wiley, Hoboken, New Jersey, 2007]을 참조한다.

약리학적 특성

본 발명의 화합물은 메닌과 MLL 단백질 및 발암성 MLL 융합 단백질 그 자체의 상호작용을 차단하거나, 또는 생체 내에서 (더 큰) 활성의 형태로의 대사를 겪을 수 있음(전구약물)이 밝혀졌다. 따라서, 본 발명에 따른 화합물 및 이러한 화합물을 포함하는 제약 조성물은 백혈병, 골수형성이상 증후군(MDS), 및 골수증식성 신생물(MPN)을 포함하지만 이에 한정되지 않는 암; 및 당뇨병과 같은 질환의 치료 또는 예방, 특히 치료에 유용할 수 있다.

특히, 본 발명에 따른 화합물 및 이의 제약 조성물은 암의 치료 또는 예방에 유용할 수 있다. 일 실시 형태에 따르면, 본 발명의 메닌/MLL 억제제로 치료하는 것으로부터 혜택을 얻을 수 있는 암은 백혈병, 림프종, 골수종 또는 고형 종양 암(예를 들어, 전립선암, 폐암, 유방암, 췌장암, 결장암, 간암, 흑색종 및 교아종 등)을 포함한다. 일부 실시 형태에서, 백혈병은 급성 백혈병, 만성 백혈병, 골수양(myeloid) 백혈병, 골수성(myelogeneous) 백혈병, 림프아구 백혈병, 림프구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 림프아구 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), T 세포 전림프구성 백혈병(T-PLL), 대형 과립 림프구성 백혈병, 모양 세포성 백혈병(HCL), MLL-재배열 백혈병(MLL-rearranged leukemia), MLL-PTD 백혈병, MLL 증폭 백혈병, MLL-양성 백혈병, HOX/MEIS1 유전자 발현 서명을 나타내는 백혈병 등을 포함한다.

특히, 본 발명에 따른 화합물 및 이의 제약 조성물은 골수형성이상 증후군(MDS) 또는 골수증식성 신생물(MPN)의 치료 또는 예방에 유용할 수 있다.

특히, 본 발명에 따른 화합물 및 이의 제약 조성물은 AML, 구체적으로 뉴클레오포스민(NPM1)-돌연변이 AML(즉, NPM1^mut AML), 더 구체적으로 추상 NPM1 돌연변이 AML의 치료 또는 예방에 유용할 수 있다.

특히, 본 발명에 따른 화합물 및 이의 제약 조성물은 MLL-재배열 백혈병, 구체적으로 MLL-재배열 AML 또는 ALL의 치료 또는 예방에 유용할 수 있다.

특히, 본 발명에 따른 화합물 및 이의 제약 조성물은 MLL　유전자　변경을 갖는 백혈병, 구체적으로 MLL　유전자 변경을 갖는 AML 또는 ALL의 치료 또는 예방에 유용할 수 있다.

특히, 본 발명에 따른 화합물 및 DL의 제약 조성물은 Q.D. 투약(일일 1회)에 적합할 수 있다.

특히, 본 발명에 따른 화합물 및 이의 제약 조성물은 NPM1 유전자 돌연변이 및/또는 혼합 직계성 백혈병 유전자(MLL; MLL1; KMT2A) 변경을 나타내는 대상체에서 혈액 암, 혼합 직계성 백혈병(MLL), MLL-관련 백혈병, MLL-연관 백혈병, MLL-양성 백혈병, MLL-유도 백혈병, 재배열 혼합 직계성 백혈병, MLL, 재배열/변경 또는 MLL 유전자의 재배열/변경과 연관된 백혈병, 급성 백혈병, 만성 백혈병, 골수형성이상 증후군(MDS), 골수증식성 신생물(MPN), 인슐린 저항성, 당뇨병 전증, 당뇨병 또는 당뇨병 위험, 고혈당, 염색체 11q23의 염색체 재배열, 제1형 당뇨병, 제2형 당뇨병의 치료 또는 예방; 췌장 세포의 증식 촉진(여기서, 췌장 세포는 췌도 세포, 베타 세포이고, 베타 세포 증식은 베타 세포 생산 또는 인슐린 생산의 증가에 의해 입증됨); 및 메닌-MLL 상호작용의 억제(여기서, MLL 융합 단백질 표적 유전자는 인간에서 HOX 또는 MEIS1임)에 유용할 수 있다(인간에서).

그러므로, 본 발명은 약제로서 사용하기 위한 화학식 I의 화합물, 이의 호변이성질체 및 입체이성질체 형태, 및 이의 제약상 허용가능한 염, 및 용매화물에 관한 것이다.

본 발명은 또한 약제의 제조를 위한, 본 발명에 따른 화학식 I의 화합물, 이의 호변이성질체 또는 입체이성질체 형태, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 용매화물, 또는 제약 조성물의 용도에 관한 것이다.

본 발명은 또한 인간을 포유하는 포유류에서 메닌과 MLL 단백질 및 종양형성 MLL 융합 단백질의 상호작용과 연관된 질환의 치료, 예방, 완화, 제어 또는 위험 감소에서 사용하기 위한 화학식 I의 화합물, 이의 호변이성질체 또는 입체이성질체 형태, 또는 제약상 허용가능한 염, 또는 이의 용매화물, 또는 본 발명에 따른 제약 조성물에 관한 것이며, 그 치료 또는 예방은 메닌과 MLL 단백질 및 종양형성 MLL 융합 단백질의 상호작용 차단에 의해 영향받거나 촉진된다.

또한, 본 발명은 인간을 포유하는 포유류에서 메닌과 MLL 단백질 및 종양형성 MLL 융합 단백질의 상호작용과 연관된 질환의 치료, 예방, 완화, 제어 또는 위험 감소용 약제의 제조를 위한 화학식 I의 화합물, 이의 호변이성질체 또는 입체이성질체 형태, 또는 제약상 허용가능한 염, 또는 이의 용매화물, 또는 본 발명에 따른 제약 조성물에 관한 것이며, 그 치료 또는 예방은 메닌과 MLL 단백질 및 종양형성 MLL 융합 단백질의 상호작용 차단에 의해 영향받거나 촉진된다.

본 발명은 또한 상기 예시된 바와 같은 질병들 중 임의의 하나의 치료 또는 예방에 사용되기 위한 화학식 I의 화합물, 이의 호변이성질체, 입체이성질체 형태, 제약상 허용가능한 염 또는 용매화물에 관한 것이기도 하다.

본 발명은 또한 상기 예시된 바와 같은 병태들 중 임의의 하나의 치료 또는 예방을 위한 약물을 제조함에 있어서 화학식 I의 화합물, 이의 호변이성질체, 입체이성질체 형태, 제약상 허용가능한 염 또는 용매화물에 관한 것이기도 하다.

본 발명의 화합물은 위에 언급된 질환들 중 어느 하나의 치료 또는 예방을 위하여 포유류, 바람직하게는 인간에게 투여될 수 있다.

화학식 I의 화합물, 이의 호변이성질체, 입체이성질체 형태, 제약상 허용가능한 염 또는 용매화물의 유용성의 관점에서, 상기 언급된 임의의 하나의 질병을 앓고 있는 인간을 포함하는 온혈 동물을 치료하는 방법이 제공된다.

상기 방법은 화학식 I의 화합물, 이의 호변이성질체, 입체이성질체 형태, 제약상 허용가능한 염 또는 용매화물을 치료적 유효량으로 온혈 동물, 예를 들어 인간에 투여, 즉 전신 투여 또는 국소 투여하는 단계를 포함한다.

그러므로 본 발명은 또한, 이상에 언급된 질환들 중 어느 하나의 치료 또는 예방 방법에 관한 것으로, 본 방법은 이를 필요로 하는 환자에게 본 발명에 따른 화합물의 치료적 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.

당업자는, 본 발명의 화합물의 치료적 유효량이 치료 활성을 갖기에 충분한 양이고, 이 양은 특히, 질환의 유형, 치료용 제형 중 화합물의 농도, 및 환자의 상태에 따라 달라지는 것임을 인식할 것이다. 치료적 일일 유효량은 약 0.005 mg/kg 내지 100 mg/kg이다. 본원에서 활성 성분이라고도 언급되는 본 발명에 따른 화합물의, 치료 효과를 달성하기 위해 필요한 양은 사례별로 달라질 수 있는데, 예를 들어 특정 화합물, 투여 경로, 수용자의 연령과 병태, 그리고 치료 중인 특정 장애 또는 질환에 따라서 달라질 수 있다. 치료 방법은 또한, 일일 1회 내지 4회 섭취의 요법으로 활성 성분을 투여하는 것을 포함할 수 있다. 이들 치료 방법에서, 본 발명에 따른 화합물은 바람직하게는 투여 전에 제형화된다.

본 발명은 또한 본원에 언급된 장애를 예방 또는 치료하기 위한 조성물을 제공한다. 상기 조성물은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물, 이의 호변이성질체 또는 입체이성질체 형태, 또는 이의 제약상 허용가능한 염, 또는 용매화물, 및 제약상 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함한다.

활성 성분을 단독으로 투여하는 것이 가능하지만, 이를 제약 조성물로서 제공하는 것이 바람직하다. 따라서, 본 발명은 추가로, 본 발명에 따른 화합물을 제약상 허용가능한 담체 또는 희석제와 함께 포함하는 제약 조성물을 제공한다. 담체 또는 희석제는 조성물의 다른 성분과 상용성이고 이의 수용자에게 유해하지 않다는 의미에서 "허용가능"하여야 한다.

제약 조성물들은 제약업계에 널리 알려진 임의의 방법들에 의해, 예를 들어 문헌[Gennaro et al. Remington’s Pharmaceutical Sciences (18^th ed., Mack Publishing Company, 1990, 특히 Part 8 : Pharmaceutical preparations and their Manufacture 참조)]에 기술된 것과 같은 방법들을 사용하여 제조될 수 있다.

본 발명의 화합물은 단독으로, 또는 하나 이상의 추가 치료제와 조합되어 투여될 수 있다. 병용 요법은 본 발명에 따른 화합물 및 하나 이상의 추가의 치료제를 포함하는 단일한 약학적 투여 형태를 투여하는 것뿐만 아니라, 본 발명에 따른 화합물 및 그 자체가 별개의 약학적 투여 제형으로 된 각각의 추가의 치료제를 투여하는 것도 포함한다.

그러므로, 본 발명의 실시 형태는 암 환자의 치료에 동시, 별개 또는 순차적 사용을 위한 병용 제제로서, 본 발명에 따른 화합물을 제1 활성 성분으로서, 그리고 하나 이상의 항암제를 추가의 활성 성분으로서 포함하는 생성물에 관한 것이다.

상기 하나 이상의 기타 의약제 및 본 발명에 따른 화합물은 동시에(예를 들어, 개별 또는 일원화 조성물에서) 또는 어느 순서든 순차적으로 투여될 수 있다. 후자의 경우, 유리한 효과 또는 상승 효과 달성을 보장하기에 충분한 양 및 방식으로 상기 보장에 충분한 기간 내에 상기 둘 이상의 화합물이 투여될 것이다. 조합물의 바람직한 투여의 방법 및 순서, 및 각각의 성분에 대한 각각의 투여량 및 섭생법은 투여되는 특정한 다른 의약제 및 본 발명의 화합물, 그 투여 경로, 치료될 특정 병태, 구체적으로 종양, 및 치료받는 특정 숙주에 의존할 것임이 이해될 것이다.

다음의 실시예는 본 발명을 추가로 예시한다.

실시예

본 발명의 화합물을 제조하기 위한 몇 가지 방법이 하기 실시예에 예시되어 있다. 달리 언급되지 않는 한, 모든 출발 물질은 상업적 공급처로부터 입수하여 추가 정제 없이 사용하거나, 또는 대안적으로, 잘 알려진 방법을 사용하여 당업자에 의해 합성될 수있다

당업자에 의해 이해되는 바와 같이, 나타낸 프로토콜을 사용하여 합성된 화합물은 용매화물, 예를 들어 수화물로서 존재할 수 있고/있거나 잔존 용매 또는 소량의 불순물을 함유할 수 있다. 염 형태로 단리된 화합물 또는 중간체는 정수 화학량론적, 즉 일 또는 이-염이거나 중간 화학량론적일 수 있다.　 아래의 실험 파트에서 중간체 또는 화합물이 HCl의 당량수가 명시되지 않고 'HCl 염'으로 명시될 때, 이것은 HCl의 당량수가 결정되지 않았음을 의미한다. 동일한 원칙이 실험 파트에서 언급된 다른 모든 염 형태, 예를 들어 '옥살레이트 염', '포르메이트 염' 또는

에도 적용된다.

일부 화합물에서 중심에 대한 입체화학적 배열은 혼합물(들)이 분리되고 절대 입체화학이 알려진 경우, 또는 단지 하나의 거울상 이성질체가 수득되고 절대 입체화학이 알려진 경우 "R" 또는 "S"로 지정될 수 있으며; 일부 화합물에 있어서, 표시된 중심에서의 입체화학적 배열은, 비록 화합물 자체가 단일 입체이성질체로서 단리되었고 거울상 이성질체로서 순수하다 하더라도 절대 입체화학이 미정일 때(비록 결합이 입체특이적으로 그려진다 하더라도), "*R"(분리의 컬럼 조건이 합성 프로토콜에 기술되는 경우 및 단지 하나의 입체중심이 존재하거나 표시될 때 컬럼으로부터 첫 번째로 용출됨) 또는 "*S"(분리의 컬럼 조건이 합성 프로토콜에 기술되는 경우 및 단지 하나의 입체중심이 존재하거나 표시될 때 컬럼으로부터 두 번째로 용출됨)로서 지정되었다. "*R"로 지정된 화합물이 또 다른 화합물로 전환되는 경우, 생성된 화합물의 "*R" 표시는 그의 출발 물질로부터 유래된다.

예를 들어, 화합물 25

는

임이 명백할 것이다.

"*R" 또는 "*S"가 동일한 분자에서 "R" 또는 "S"로 지정된 두 번째 입체중심과 함께 나타나는 경우(두 번째 입체중심에 대해서는 절대 입체화학이 알려져 있음), 비록 화합물 자체가 단일 입체이성질체로서 단리되었고 거울상 이성질체로서 순수하다 하더라도 "*R" 또는 "*S"로 지정된 입체중심의 절대 입체화학은 미정이다(비록 결합이 입체특이적으로 그려진다 하더라도). "*R" 또는 "*S"는 이러한 분자에 대해 무작위로 할당된다. 예를 들어, 화합물 340

는

임이 명백할 것이다.

2개의 입체중심의 입체화학적 배열이 *(예를 들어, *R 또는 *S)로 지정된 화합물에 있어서, 비록 화합물 자체가 단일 입체이성질체로서 단리되었고 거울상 이성질체로서 순수하다 하더라도, 입체중심의 절대 입체화학은 미정이다(비록 결합이 입체특이적으로 그려진다 하더라도). 이 경우, 동일 화합물에서 제1 입체중심의 배열은 제2 입체중심의 배열과는 무관하다. "*R" 또는 "*S"는 이러한 분자에 대해 무작위로 할당된다.

예를 들어, 화합물 306

에 있어서, 이는 화합물이 다음의 것임을 의미한다:

당업자는 입체화학적 배열에 대한 위의 단락이 중간체에도 적용된다는 것을 인식할 것이다.

당업자는 아래 실험 프로토콜에서 명시적으로 언급되지 않았다 하더라도, 전형적으로 컬럼 크로마토그래피 정제 이후 원하는 분획을 수집하고 용매를 증발시켰음을 인식할 것이다.

입체화학이 명시되지 않은 경우, 이것은 달리 명시되지 않거나 문맥으로부터 명백하지 않은 한, 이것이 입체이성질체의 혼합물임을 의미한다.

달리 명시되지 않는 한, 입체중심이 'RS'로 지정될 때 이것은 라세미 혼합물이 지정된 중심에서 얻어졌음을 의미한다.

중간체의 제조

다음 반응 단계에서 조 물질로서 또는 부분적으로 정제된 중간체로서 사용한 중간체의 경우, 일부 경우에 다음 반응 단계에서 이러한 중간체에 대한 몰량을 언급하지 않거나 또는 대안적으로 다음 반응 단계에서 이러한 중간체에 대한 추정된 몰량 또는 이론적 몰량을 나타낸다(아래에 설명된 반응 프로토콜에서).

중간체 27의 제조

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2- 메톡시벤즈아미드

0℃에서 냉각시킨 건조 DCM (150 mL) 중 5-플루오로-2-메톡시벤조산 (8.00 g, 47.0 mmol) 및 N-에틸프로판-2-아민 (8.19 g, 94.0 mmol)의 혼합물에 HATU (21.5 g, 56.5 mmol) 및 DIEA (9.10 g, 70.4 mmol)를 일부씩 서서히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온까지 서서히 가온하고, 8시간 동안 교반시켰다. 유기 층을 물 (20 mL x 3)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄로 건조시켰다. 여과 후, 용매를 감압 하에 제거하고, 조 생성물을 FCC (EtOAc/PE = 0%~20%)로 정제하여 표제 중간체 (12.0 g, 96%의 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.

중간체 67, 235, 246의 제조

5- 플루오로 - N , N - 디이소프로필 -2- 메톡시벤즈아미드

5- 플루오로 -2- 메톡시 - N -(프로판-2-일- ¹³ C ₃ )벤즈아미드

5- 플루오로 - N -이소프로필-2- 메톡시 - N - 메틸벤즈아미드

중간체 27에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 중간체를 합성하였다.

중간체 28의 제조

N -에틸-5- 플루오로 -2-히드록시- N - 이소프로필벤즈아미드

-78℃에서 냉각시킨 건조 DCM (100 mL) 중 N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필-2-메톡시벤즈아미드 (중간체 27) (12.0 g, 50.1 mmol)의 용액에 BBr₃ (14.4 mL, 152 mmol)을 서서히 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온까지 서서히 가온하고, 8시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 다시 -78℃까지 냉각시키고, MeOH (5 mL)를 적가하여 반응물을 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 실온까지 서서히 가온하고, pH 값을 포화 NaHCO₃ 수용액의 첨가에 의해 약 8로 조정하였다. 수성 층을 DCM (50 mL x 3)으로 추출하고, 합한 유기 층을 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 제공하고, 이를 FCC (EtOAc/PE = 0%~20%)로 정제하여 표제 중간체 (9.0 g, 78%의 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.

중간체 68, 237, 247의 제조

5- 플루오로 -2-히드록시- N , N - 디이소프로필벤즈아미드

N -(에틸- ¹³ C ₂ )-5- 플루오로 -2-히드록시- N -(프로판-2-일- ¹³ C ₃ )벤즈아미드

5- 플루오로 -2-히드록시- N -이소프로필- N - 메틸벤즈아미드

중간체 28에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 중간체를 합성하였다.

중간체 60의 제조

5- 브로모 -4- 시클로프로필피리미딘

THF (1000 mL) 중 5-브로모피리미딘 (30 g, 189 mmol)의 용액에 시클로프로필마그네슘 브로마이드 (396 mL, 198 mmol, THF 중 0.5 M)를 N₂ 분위기 하에 0℃에서 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반시키고, 그 후 THF (500 mL) 중 DDQ (42.8 g, 189 mmol)의 용액을 0℃에서 반응 혼합물에 적가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고, 잔사를 EtOAc (200 mL)와 물 (200 mL) 사이에 분배하고, 수성 층을 EtOAc (200 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 1 N NaOH (200 mL x 2), 염수 (200 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 진공에서 농축시키고, 잔사를 FCC (EtOAc/PE = 0%~15%)로 정제하여 표제 중간체 (21.4 g, 55%의 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.

중간체 61의 제조

2-(4- 시클로프로필피리미딘 -5-일)-4- 플루오로페놀

1,4-디옥산 (350 mL) 중 5-브로모-4-시클로프로필피리미딘 (중간체 60) (20.0 g, 100 mmol), (5-플루오로-2-히드록시페닐)보론산 (18.7 g, 120 mmol), Pd(dppf)Cl₂ (3.68 g, 5.03 mmol) 및 Na₂CO₃ (H₂O 중 2 M, 101 mL, 202 mmol)의 혼합물을 N₂ 분위기 하에 90℃에서 12시간 동안 가열하였다. 실온까지 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과시키고, 여과액을 물 (400 mL)에 현탁시키고, 추가로 EtOAc (200 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 제공하고, 이를 실리카 겔에서 FCC (PE/EtOAc = 1:0~3:1)로 정제하여 표제 중간체 (24.0 g, 95%의 순도, 98.6%의 수율)를 갈색 고체로서 수득하였다.

중간체 13의 제조

tert -부틸 6-(3,6- 디클로로 -1,2,4-트리아진-5-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -2-카르복실레이트

0℃에서 냉각시킨 DCM (100 mL) 중 3,5,6-트리클로로-1,2,4-트리아진 (10.0 g, 54.2 mmol) 및 TEA (15.2 mL, 109 mmol)의 용액에 tert-부틸 2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르복실레이트 (9.21 g, 43.4 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 실온까지 가온하고, 1시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (20 mL)로 희석시키고, DCM (30 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 제공하고, 이를 실리카 겔에서 FCC (PE/EtOAc = 1:0~3:1)로 정제하여 표제 중간체 (12.0 g, 58%의 수율)를 황색 고체로서 수득하였다.

중간체 69의 제조

tert -부틸 6-(3- 클로로피리다진 -4-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -2- 카르복실레이트

중간체 13에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 중간체를 합성하였다.

중간체 14의 제조

tert -부틸 6-(3- 클로로 -6-(2-( 에틸(이소프로필)카르바모일 )-4- 플루오로페녹시 )-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르복실레이트

THF (120 mL) 중 tert-부틸 6-(3,6-디클로로-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르복실레이트 (중간체 13) (12.0 g, 33.3 mmol), N-에틸-5-플루오로-2-히드록시-N-이소프로필벤즈아미드 (중간체 28) (7.5 g, 33.3 mmol) 및 DBU (6.1 g, 40.1 mmol)의 혼합물을 25℃에서 8시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (30 mL)로 희석시키고, DCM (30 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 제공하고, 이를 FCC (PE/EtOAc = 1:0~3:1)로 정제하여 표제 중간체 (14.0 g, 73%의 수율)를 녹색 고체로서 수득하였다.

중간체 57, 74, 70, 및 83의 제조

tert -부틸 6-(3- 클로로 -6-(2-(4- 시클로프로필피리미딘 -5-일)-4- 플루오로페녹시 )-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르복실레이트

tert -부틸 6-(3-(2-( 에틸(이소프로필)카르바모일 )-4- 플루오로페녹시 ) 피리다진 -4-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르복실레이트

tert -부틸 6-(3-(2-( 디이소프로필카르바모일 )-4- 플루오로페녹시 ) 피리다진 -4-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르복실레이트

tert -부틸 6-(3- 클로로 -6-(2-( 디이소프로필카르바모일 )-4- 플루오로페녹시 )-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르복실레이트

중간체 14에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 중간체를 합성하였다.

중간체 2의 제조

tert -부틸 6-(6-(2-( 에틸(이소프로필)카르바모일 )-4- 플루오로페녹시 )-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르복실레이트

방법 A:

N₂ 분위기 하에 THF (500 mL) 중 tert-부틸 6-(3-클로로-6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르복실레이트 (중간체 14) (20 g, 36.4 mmol), NaBH₄ (2.48 g, 65.7 mmol) 및 TMEDA (8.54 g, 73.5 mmol)의 혼합물에 Pd(dppf)Cl₂*?*DCM (1.70 g, 2.08 mmol)을 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 25℃에서 14시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 여과시키고, 여과액을 농축시키고, 잔사를 실리카 겔에서 FCC (EtOAc)로 정제하여 표제 중간체 (15 g, 93%의 순도, 74%의 수율)를 갈색 고체로서 수득하였다.

방법 B:

MeOH (100 mL) 중 tert-부틸 6-(3-클로로-6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르복실레이트 (중간체 14) (22.0 g, 40.1 mmol), TEA (15 mL)의 용액에 Pd/C (습윤, 5.0 g, 10%)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 H₂ 분위기 (30 psi) 하에 25℃에서 8시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과시키고, 여과액을 진공에서 농축시켜 표제 중간체 (25.0 g, 조 물질)를 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다.

중간체 58, 84의 제조

tert -부틸 6-(6-(2-(4- 시클로프로필피리미딘 -5-일)-4- 플루오로페녹시 )-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르복실레이트

tert -부틸 6-(6-(2-( 디이소프로필카르바모일 )-4- 플루오로페녹시 )-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르복실레이트

중간체 2에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 중간체를 합성하였다.

중간체 3의 제조

2-((5-(2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일) 옥시 )- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

DCM (5 mL) 중 tert-부틸 6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르복실레이트 (중간체 2) (300 mg, 0.583 mmol)의 용액에 TFA (0.5 mL, 6.4 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반시켰다. 그 후 10% NaOH (5 mL) 용액을 서서히 상기 혼합물에 첨가하여 pH 값을 약 12로 조정하고, 생성된 혼합물을 DCM (10 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켜 표제 중간체 (220 mg, 90%의 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.

중간체 59, 75, 85의 제조

6-(6-(2-(4- 시클로프로필피리미딘 -5-일)-4- 플루오로페녹시 )-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄

2-((4-(2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일) 피리다진 -3-일) 옥시 )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일) 옥시 )-5- 플루오로 - N , N -디이소프로필벤즈아미드

중간체 3에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 중간체를 합성하였다.

중간체 160의 제조

N - 메톡시 - N - 메틸 -4-( 메틸아미노 ) 부탄아미드 히드로클로라이드

DCM (200 mL) 중 tert-부틸 (4-(메톡시(메틸)아미노)-4-옥소부틸)(메틸)카르바메이트 (중간체 8) (220 g, 조 물질)의 용액에 HCl/1,4-디옥산 (750 mL, 3 mol)을 0℃에서 서서히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온까지 서서히 가온하고, 이 온도에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 진공에서 농축시켜 표제 중간체 (197 g, 조 물질)를 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다.

중간체 164, 238, 243, 244

N -(2- 메톡시에틸 )- N ,5 -디메틸-4-(2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일) 헥산 -1-아민 히드로클로라이드

2-((3- 클로로 -5-(2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 히드로클로라이드

2-((5-(2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일) 옥시 )-5- 플루오로 - N , N -디이소프로필벤즈아미드 히드로클로라이드

2-((5-(2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일) 옥시 )- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 히드로클로라이드

중간체 160에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 중간체를 합성하였다.

중간체 71의 제조

2-((4-(2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일) 피리다진 -3-일) 옥시 )-5- 플루오로 - N , N -디이소프로필벤즈아미드

0℃에서 냉각시킨 1,4-디옥산 (30 mL) 중 tert-부틸 6-(3-(2-(디이소프로필카르바모일)-4-플루오로페녹시)피리다진-4-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-카르복실레이트 (중간체 70) (5.0 g, 9.4 mmol)의 용액에 1.4-디옥산 중 HCl (20 mL, 4 M, 80 mmol)을 서서히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 그 후, 상기 혼합물을 농축시키고, 잔사를 DCM (50 mL)에 재용해시키고, 여기에 1 M NaOH (20 mL)를 서서히 첨가하고, pH 값을 12로 조정하고, 생성된 혼합물을 DCM (30 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켜 표제 중간체 (4 g, 조 물질)를 황색 고체로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

중간체 29의 제조

tert -부틸 2,2-디메틸-5- 옥소피롤리딘 -1- 카르복실레이트

DCM (30 mL) 중 5,5-디메틸피롤리딘-2-온 (3.00 g, 26.5 mmol)의 용액에 TEA (8.10 g, 80.0 mmol) 및 DMAP (325 mg, 2.66 mmol)를 첨가하고, 이어서 디-tert-부틸 디카르보네이트 (8.70 g, 39.8 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 40℃에서 하룻밤 교반시켰다. 실온까지 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 염수 (30 mL x 2)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 제공하였다. 조 생성물을 추가로 실리카 겔에서 FCC (PE/EtOAc = 100:0~3:1)로 정제하여 표제 중간체 (2.8 g, 50%의 수율)를 황색 분말로서 수득하였다.

중간체 1의 제조

tert -부틸 (5- 메틸 -4- 옥소헥실 ) 카르바메이트

-70℃에서 냉각시킨 THF (60 mL) 중 tert-부틸 2-옥소피롤리딘-1-카르복실레이트 (5.0 g, 27 mmol) 및 TMEDA (5.0 mL, 33 mmol)의 용액에 이소프로필마그네슘 브로마이드 용액 (19 mL, 55 mmol, 2-메틸테트라히드로푸란 중 2.9 M)을 서서히 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온까지 서서히 가온하고, 12시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 포화 NH₄Cl (50 mL) 수용액에 붓고, EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 제공하고, 이를 추가로 FCC (PE/EtOAc = 1:0~100:1)로 정제하여 표제 중간체 (3.7 g, 60%의 수율)를 황색 오일로서 수득하였다.

중간체 30, 110, 141의 제조

tert -부틸 (2,6-디메틸-5- 옥소헵탄 -2-일) 카르바메이트

tert -부틸 (6- 메틸 -5- 옥소헵틸 ) 카르바메이트

6-히드록시-2,4- 디메틸헥산 -3-온

중간체 1에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 중간체를 합성하였다.

중간체 34의 제조

벤질 2,2-디메틸-5- 옥소피롤리딘 -1- 카르복실레이트

0℃에서 냉각시킨 THF (150 mL) 중 5,5-디메틸피롤리딘-2-온 (5.00 g, 44.2 mmol)의 용액에 NaH (1.94 g, 48.5 mmol, 60%)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 이 온도에서 30분 동안 교반시켰다. 후속적으로 N-(벤질옥시카르보닐옥시)숙신이미드 (12.1 g, 48.6 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 서서히 실온까지 가온하고, 추가 16시간 동안 교반시켰다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 포화 NH₄Cl 수용액 (30 mL)을 첨가하고, EtOAc (2 x 30 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (40 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 추가로 FCC (PE/EtOAc = 1:0~3:1)로 정제하여 표제 중간체 (5.16 g, 39%의 수율)를 무색 오일로서 수득하였다.

중간체 35의 제조

4-((( 벤질옥시 )카르보닐)아미노)-4- 메틸펜탄산

NaOH (4.18 g, 16.9 mmol)를 THF (60 mL) 및 H₂O (15 mL) 중 벤질 2,2-디메틸-5-옥소피롤리딘-1-카르복실레이트 (중간체 34) (5.16 g, 20.9 mmol)의 용액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 25℃까지 냉각시키고, 1 M HCl로 산성화하여 pH 값을 약 3으로 조정하고, 그 후 상기 혼합물을 EtOAc (20 x 2 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (20 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켜 표제 중간체 (4.48 g, 조 물질)를 무색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다.

중간체 7의 제조

4-(( tert - 부톡시카르보닐 )( 메틸 )아미노)부탄산

MeOH (30 mL) 중 4-(메틸아미노)부탄산 히드로클로라이드 (3.0 g, 19.5 mmol) 및 TEA (7.78 mL, 58.6 mmol)의 용액에 Boc₂O (4.69 g, 21.5 mmol)를 적가하였다. 상기 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔사를 EtOAc (100 mL)로 희석시키고, 냉각 0.1 N HCl (70 mL x 2), H₂O (50 mL x 2) 및 염수 (50 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜 표제 중간체 (1.80 g, 조 물질)를 무색 오일로서 수득하였다.

중간체 8의 제조

tert -부틸 (4-( 메톡시(메틸)아미노 )-4- 옥소부틸 )( 메틸 ) 카르바메이트

CHCl₃ (30 mL) 중 4-((tert-부톡시카르보닐)(메틸)아미노)부탄산 (중간체 7) (1.80 g, 조 물질)의 용액에 N,O-디메틸히드록실아민 히드로클로라이드 (960 mg, 9.84 mmol), HOBt (1.24 g, 9.18 mmol) 및 NMM (2.80 mL, 25.1 mmol)을 첨가하였다. 그리고, 그 후 EDCI (2.23 g, 11.6 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 DCM (100 mL)으로 희석시키고, 1 N HCl (30 mL x 3), 포화 수성 NaHCO₃ (30 mL x 3) 및 염수 (30 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 진공 하에 농축시켜 표제 중간체 (1.70 g, 조 물질)를 무색 오일로서 수득하였다.

중간체 19, 36, 189, 190, 203, 204의 제조

tert -부틸 (3-( 메톡시(메틸)아미노 )-3- 옥소프로필 ) 카르바메이트

벤질 (5-( 메톡시(메틸)아미노 )-2- 메틸 -5- 옥소펜탄 -2-일) 카르바메이트

( S )-3-(( tert - 부틸디페닐실릴 ) 옥시 )-4-( 에틸(메틸)아미노 )- N - 메톡시 - N - 메틸부탄아미드

( R )-3-(( tert - 부틸디페닐실릴 ) 옥시 )-4-( 에틸(메틸)아미노 )- N - 메톡시 - N - 메틸부탄아미드

( S )-3-(( tert - 부틸디페닐실릴 ) 옥시 )- N - 메톡시 -4-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)- N -메틸부탄아미드

( R )-3-(( tert - 부틸디페닐실릴 ) 옥시 )- N - 메톡시 -4-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)- N -메틸부탄아미드

중간체 8에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 중간체를 합성하였다.

중간체 37의 제조

벤질 (5-( 메톡시(메틸)아미노 )-2- 메틸 -5- 옥소펜탄 -2-일)( 메틸 ) 카르바메이트

N₂ 분위기 하에 0℃에서 냉각시킨 DMF (30 mL) 중 벤질 (5-(메톡시(메틸)아미노)-2-메틸-5-옥소펜탄-2-일)카르바메이트 (중간체 36) (2.30 g, 7.46 mmol)의 용액에 NaH (358 mg, 8.95 mmol, 60%)를 첨가하였다. 그 후, MeI (8.87 g, 62.5 mmol)를 첨가하고, 상기 혼합물을 25℃에서 12시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 포화 수성 NH₄Cl (30 mL)로 켄칭하고, EtOAc (30 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (40 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켜 조 생성물을 제공하고, 이를 추가로 실리카 겔에서 FCC (PE/EtOAc = 1:0~3:1)로 정제하여 표제 중간체 (2.15 g, 76%의 수율)를 황색 오일로서 수득하였다.

중간체 236의 제조

N -(에틸- ¹³ C ₂ )-5- 플루오로 -2- 메톡시 - N -(프로판-2-일- ¹³ C ₃ )벤즈아미드

중간체 37에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 중간체를 합성하였다.

중간체 9의 제조

tert -부틸 메틸(5-메틸-4-옥소헥실)카르바메이트

N₂ 분위기 하에 -70℃에서 냉각시킨 THF (5 mL) 중 tert-부틸 (4-(메톡시(메틸)아미노)-4-옥소부틸)(메틸)카르바메이트 (중간체 8) (200 mg, 조 물질)의 용액에 이소프로필리튬 (3.2 mL, 2.24 mmol, 펜탄 중 0.7 M)을 적가하였다. 생성된 혼합물을 -70℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 포화 수성 NH₄Cl (15 mL)로 켄칭하고, EtOAc (30 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 제공하였다. 조 생성물을 추가로 FCC (PE/EtOAc = 10 : 1)로 정제하여 표제 중간체 (60 mg)를 무색 오일로서 수득하였다.

중간체 20, 38, 162, 191, 192, 205, 206의 제조

tert -부틸 (4- 메틸 -3- 옥소펜틸 ) 카르바메이트

벤질 (2,6-디메틸-5- 옥소헵탄 -2-일)( 메틸 ) 카르바메이트

6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-온

( S )-5-(( tert - 부틸디페닐실릴 ) 옥시 )-6-( 에틸(메틸)아미노 )-2- 메틸헥스 -1-엔-3-온

( R )-5-(( tert - 부틸디페닐실릴 ) 옥시 )-6-( 에틸(메틸)아미노 )-2- 메틸헥스 -1-엔-3-온

( S )-5-(( tert - 부틸디페닐실릴 ) 옥시 )-6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥스 -1-엔-3-온

( R )-5-(( tert - 부틸디페닐실릴 ) 옥시 )-6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥스 -1-엔-3-온

중간체 9에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 중간체를 합성하였다.

중간체 15의 제조

2-(3- 메틸 -2- 옥소부틸 ) 이소인돌린 -1,3- 디온

DMF (4 mL) 중 1-브로모-3-메틸부탄-2-온 (200 mg, 1.21 mmol)의 용액에 포타슘 프탈이미드 (1.12 g, 6.05 mmol)를 첨가하고, 상기 혼합물을 80℃에서 12시간 동안 교반시켰다. 실온까지 냉각시킨 후, 물 (15 mL)을 첨가하고, 상기 혼합물을 EtOAc (40 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 추가로 분취용 TLC (PE/EtOAc = 3:1)로 정제하여 표제 중간체 (200 mg, 69%의 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.

중간체 46의 제조

메틸 5- 메틸 -4- 옥소헥사노에이트

N₂ 하에 0℃에서 DCM (150 mL) 중 ZnEt₂ (104 mL, 104 mmol)의 용액에 TFA (11.9 g, 104 mmol)를 시린지를 통해 서서히 적가하고, 혼합물을 0℃에서 30분 동안 교반시켰다. 그 후, 메틸렌 요오다이드 (27.9 g, 104 mmol)를 교반하면서 적가하고, 현탁액을 추가 30분 동안 교반시켰다. 그리고, 그 후 메틸 4-메틸-3-옥소펜타노에이트 (5.00 g, 34.7 mmol)를 시린지로 신속하게 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시키고, 50℃에서 20시간 동안 환류시켰다. 실온까지 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 포화 수성 NH₄Cl (50 mL)로 켄칭하고, EtOAc (30 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고, 감압 하에 오일 잔사로 농축시키고, 이를 FCC (PE/EtOAc = 1:0~20:1)로 정제하여 표제 중간체 (300 mg, 5%의 수율)를 황색 오일로서 수득하였다.

중간체 22의 제조

tert -부틸 (4- 메틸 -3-(2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -2-일) 펜틸 ) 카르바메이트 히드로클로라이드

MeOH (50 mL) 중 벤질 2-(1-((tert-부톡시카르보닐)아미노)-4-메틸펜탄-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-카르복실레이트 (중간체 21) (0.580 g, 1.30 mmol)의 용액에 1,1,2-트리클로로에탄 (0.260 g, 1.95 mmol) 및 Pd/C (0.05 g, 10%)를 Ar 하에 첨가하고, 반응물을 H₂ (15 psi) 분위기 하에 35℃에서 8시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 여과시켰다. 여과액을 진공에서 농축시켜 표제 중간체 (280 mg, 조 물질)를 무색 오일로서 수득하였다.

중간체 23의 제조

에틸 6-(2-( 에틸(이소프로필)카르바모일 )-4- 플루오로페녹시 )-1,2,4-트리아진-5-카르복실레이트

DMF (150 mL) 중 에틸 6-클로로-1,2,4-트리아진-5-카르복실레이트 (13 g, 69 mmol) 및 N-에틸-5-플루오로-2-히드록시-N-이소프로필벤즈아미드 (중간체 28) (15.6 g, 69.3 mmol)의 혼합물에 K₂CO₃ (28.6 g, 204 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 조 잔사를 제공하고, 이를 물 (100 mL)로 희석시키고, EtOAc (100 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 제공하고, 이를 추가로 FCC (PE/EtOAc = 1:0~1:1)로 정제하여 표제 중간체 (30 g, 81%의 순도, 92%의 수율)를 황색 고체로서 수득하였다.

중간체 24의 제조

6-(2-( 에틸(이소프로필)카르바모일 )-4- 플루오로페녹시 )-1,2,4-트리아진-5-카르복실산

THF (100 mL) 및 H₂O (25 mL) 중 에틸 6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-카르복실레이트 (중간체 23) (8.6 g, 23 mmol)의 혼합물에 LiOH*H₂O (2.0 g, 48 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 0.5 M HCl로 산성화하여 pH 값을 5~6으로 조정하고, 추가로 EtOAc (150 mL)로 추출하였다. 수성 상을 Boston Prime에서 분취용 HPLC (컬럼: C18 150x30 mm 5 um; 용출제: ACN/H₂O (0.225% FA) 19%~49%, v/v)로 정제하여 표제 중간체 (5.0 g, 62%의 수율)를 수득하였다.

중간체 187, 188, 201, 202의 제조

( S )-3-(( tert - 부틸디페닐실릴 ) 옥시 )-4-( 에틸(메틸)아미노 )부탄산

( R )-3-(( tert - 부틸디페닐실릴 ) 옥시 )-4-( 에틸(메틸)아미노 )부탄산

( S )-3-(( tert - 부틸디페닐실릴 ) 옥시 )-4-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)부탄산

( R )-3-(( tert - 부틸디페닐실릴 ) 옥시 )-4-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)부탄산

중간체 24에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 중간체를 합성하였다.

중간체 25의 제조

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-히드록시-1,2,4-트리아진-6-일) 옥시 )- N - 이소프로필벤즈아미드

DCE (1 mL) 중 6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-카르복실산 (중간체 24) (50 mg, 0.14 mmol) 및 1,3-디브로모-1,3,5-트리아지난-2,4,6-트리온 (50 mg, 0.17 mmol)의 용액에 Ag(Phen)₂OTf (30 mg, 0.049 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과시키고, ACN (10 mL)으로 세척하였다. 여과액을 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 추가로, Xtimate를 사용하여 분취용 HPLC (컬럼: C18 150x40 mm 10 μm; 용출제: ACN/H₂O (0.2% FA) 20%~50% v/v)로 정제하여 표제 중간체 (20 mg, 41%)를 백색 고체로서 수득하였다.

중간체 159의 제조

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2,2,2- 트리플루오로에톡시 )-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

4 Å 분자 체 (8 g)를 2,2,2-트리플루오로에탄-1-올 (100 mL) 중 6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-카르복실산 (중간체 24) (8.0 g, 23.0 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N₂ 분위기 하에 70℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 그 후 실온까지 냉각시키고, 1,3-디브로모-1,3,5-트리아지난-2,4,6-트리온 (13.1 g, 45.7 mmol)을 상기 혼합물에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N₂ 분위기 하에 실온에서 하룻밤 추가로 교반시켰다. 반응 혼합물을 셀라이트 패드에서 여과시켰다. 여과액을 감압 하에 농축시키고, 조 잔사를 FCC (PE : EtOAc 1:0~2:1)로 정제하여 표제 중간체 (3.1 g, 순도 84%, 수율 28%)를 황색 고체로서 수득하였다.

중간체 51의 제조

4-(( tert - 부틸디메틸실릴 ) 옥시 )부탄-1-올

0℃에서 냉각시킨 THF (100 mL) 중 부탄-1,4-디올 (5.00 g, 55.5 mmol)의 용액에 NaH (1.55 g, 38.8 mmol, 60%)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 0℃에서 20분 동안 교반시켰다. 그 후 TBDMSCl (5.85 g, 38.8 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하고, 반응물을 0℃에서 추가 1시간 동안 추가로 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (80 mL)로 켄칭하고, EtOAc (80 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 추가로 FCC (PE/EtOAc = 1:0~10:1)로 정제하여 표제 중간체 (7.2 g, 63%)를 무색 액체로서 수득하였다.

중간체 183, 184의 제조

에틸 ( S )-3-(( tert - 부틸디페닐실릴 ) 옥시 )-4- 요오도부타노에이트

에틸 ( R )-3-(( tert - 부틸디페닐실릴 ) 옥시 )-4- 요오도부타노에이트

중간체 51에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 중간체를 합성하였다.

중간체 52의 제조

4-(( tert - 부틸디메틸실릴 ) 옥시 ) 부타날

0℃에서 냉각시킨 DCM (200 mL) 중 4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)부탄-1-올 (중간체 51) (7.20 g, 35.2 mmol)의 용액에 DMP (22.4 g, 52.8 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 서서히 실온까지 가온하고, 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 DCM (100 mL)으로 희석시키고, 포화 수성 (NaHCO₃/Na₂SO₃ = 1/1, 100 mL)을 이용하여 2분 동안 교반시키고, 분리된 유기 층을 염수 (100 mL x 3)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 제공하고, 이를 추가로 FCC (PE/EtOAc = 1:0~12:1)로 정제하여 표제 중간체 (2.95 g, 41%)를 무색 액체로서 수득하였다.

중간체 54, 145, 146, 158의 제조

6-(( tert - 부틸디메틸실릴 ) 옥시 )-2- 메틸헥산 -3-온

2-((5-(2-(2,4-디메틸-6- 옥소헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 ( R , S 와 S , R 의 혼합물; 또는 R , R 과 S , S 의 혼합물)

2-((5-(2-(2,4-디메틸-6- 옥소헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 ( R , R 과 S , S 의 혼합물; 또는 R , S 와 S , R 의 혼합물)

( R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(2- 메틸 -6- 옥소헵탄 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

중간체 52에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 중간체를 합성하였다.

중간체 53의 제조

6-(( tert - 부틸디메틸실릴 ) 옥시 )-2- 메틸헥산 -3-올

N₂ 분위기 하에 -20℃에서 냉각시킨 THF (4.9 mL) 중 4-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)부타날 (중간체 52) (1.00 g, 4.94 mmol)의 용액에 이소프로필마그네슘 브로마이드 (4.94 mL, 14.8 mmol, THF 중 3 M)를 적가하고, 반응 혼합물을 서서히 실온까지 가온하고, 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 포화 수성 NH₄Cl (20 mL)로 켄칭하고, EtOAc (50 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켜 조 생성물을 제공하고 이를 추가로 FCC (PE/EtOAc = 1:0~20:1)로 정제하여 표제 중간체 (580 mg, 48%)를 백색 오일로서 수득하였다.

중간체 16, 21, 39, 47, 55, 94, 98, 161, 163의 제조

2-((5-(2-(1-(1,3- 디옥소이소인돌린 -2-일)-3- 메틸부탄 -2-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

벤질 2-(1-(( tert - 부톡시카르보닐 )아미노)-4- 메틸펜탄 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-카르복실레이트

벤질 (5-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-2,6-디메틸헵탄-2-일)(메틸)카르바메이트

메틸 4-(6-(6-(2-(4- 시클로프로필피리미딘 -5-일)-4- 플루오로페녹시 )-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥사노에이트

2-((5-(2-(6-(( tert - 부틸디메틸실릴 ) 옥시 )-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-(1-(1,3- 디옥솔란 -2-일)-4- 메틸펜탄 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-(1-(1,3- 디옥솔란 -2-일)-4- 메틸펜탄 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드

N - 메톡시 -4-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)- N - 메틸부탄아미드

tert -부틸 6-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -2-카르복실레이트

화합물 60 및 화합물 61에 대해 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 중간체를 합성하였다.

중간체 17 및 18의 제조

( *R )-2-((5-(2-(1-(1,3- 디옥소이소인돌린 -2-일)-3- 메틸부탄 -2-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

( *S )-2-((5-(2-(1-(1,3- 디옥소이소인돌린 -2-일)-3- 메틸부탄 -2-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-(1-(1,3-디옥소이소인돌린-2-일)-3-메틸부탄-2-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필벤즈아미드 (중간체 16) (200 mg, 0.254 mmol)를 DAICEL CHIRALCEL OD에서 SFC (컬럼: 250x50 mm 10μm; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: IPA (0.1% 암모니아), A:B =65:35 (70 mL/분); 컬럼 온도: 38℃; 노즐 압력: 100 Bar; 노즐 온도: 60℃; 증발기 온도: 20℃; 트리머 온도: 25℃; 파장: 220 nm)로 정제하여 표제 중간체인 중간체 17 (100 mg, 95%의 순도, 42%의 수율) 및 중간체 18 (100 mg, 99%의 순도, 44%의 수율) 둘 다를 무색 오일로서 수득하였다.

중간체 40 및 41의 제조

벤질 ( *R )-(5-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-2,6-디메틸헵탄-2-일)(메틸)카르바메이트

벤질 ( *S )-(5-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-2,6-디메틸헵탄-2-일)(메틸)카르바메이트

벤질 (5-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-2,6-디메틸헵탄-2-일)(메틸)카르바메이트 (중간체 39) (650 mg, 0.923 mmol)를 DAICEL CHIRALPAK AD-H에서 SFC (컬럼: 250x30 mm 5 μm; 용출제: EtOH (0.1% 암모니아) 중 30% (v/v) 초임계 CO₂, 유량: 60 mL/분)로 분리하여 표제 중간체인 중간체 40 (250 mg, 96%의 순도, 37%의 수율) 및 중간체 41 (220 mg, 99.9%의 순도, 34%의 수율) 둘 다를 무색 오일로서 수득하였다.

중간체 48 및 49의 제조

메틸 ( *R )-4-(6-(6-(2-(4- 시클로프로필피리미딘 -5-일)-4- 플루오로페녹시 )-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥사노에이트

메틸 ( *S )-4-(6-(6-(2-(4- 시클로프로필피리미딘 -5-일)-4- 플루오로페녹시 )-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥사노에이트

메틸 4-(6-(6-(2-(4-시클로프로필피리미딘-5-일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥사노에이트 (중간체 47) (360 mg, 0.513 mmol)를 Phenomenex-Cellulose-2에서 SFC (컬럼: 250x30 mm, 10 μm; 용출제: 0.1% 암모니아를 함유하는 MeOH 중 35% (v/v) 초임계 CO₂)로 정제하여 표제 중간체인 중간체 48 (110 mg, 35%의 수율) 및 중간체 49 (90 mg, 31%의 수율) 둘 다를 백색 고체로서 수득하였다.

중간체 93의 제조

1-(1,3- 디옥솔란 -2-일)-4- 메틸펜탄 -3-온

25℃의 THF (70 mL) 중 마그네슘 (6.0 g, 247 mmol) 및 요오드 (100 mg, 0.394 mmol)의 혼합물에 THF (30 mL) 중 2-(2-브로모에틸)-1,3-디옥솔란 (20.0 g, 110 mmol)의 용액을 서서히 첨가하고, 생성된 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 그 후, 상기 혼합물을 0℃에서 냉각시킨 THF (100 mL) 중 N-메톡시-N-메틸이소부티르아미드 (10 g, 76.2 mmol)의 용액에 서서히 첨가하였다. 반응 혼합물을 서서히 25℃까지 가온하고, 이 온도에서 8시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 포화 수성 NH₄Cl (300 mL)로 켄칭하고, MTBE (200 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 제공하고, 이를 FCC (PE:EtOAc = 1:0~20:1)로 정제하여 표제 중간체 (13 g, 조 물질)를 무색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다.

중간체 95 및 96의 제조

( R )-2-((5-(2-(1-(1,3- 디옥솔란 -2-일)-4- 메틸펜탄 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

( S )-2-((5-(2-(1-(1,3- 디옥솔란 -2-일)-4- 메틸펜탄 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-(1-(1,3-디옥솔란-2-일)-4-메틸펜탄-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필벤즈아미드 (중간체 94) (4.00 g, 7.01 mmol)를 DAICEL CHIRALCEL OD에서 SFC (컬럼: 250x50 mm 10 um; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: MeOH (0.1% 암모니아), A:B = 75:25 (200 mL/분); 컬럼 온도: 38℃; 노즐 압력: 100 Bar; 노즐 온도: 60℃; 증발기 온도: 20℃; 트리머 온도: 25℃; 파장: 220 nm)로 분리하여 표제 중간체인 중간체 95 (1.72 g, 98.76%의 순도, 42.5%의 수율) 및 중간체 96 (1.57 g, 98.09%의 순도, 38.5%의 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.

중간체 99 및 100의 제조

( *R )-2-((5-(2-(1-(1,3- 디옥솔란 -2-일)-4- 메틸펜탄 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드

( *S )-2-((5-(2-(1-(1,3- 디옥솔란 -2-일)-4- 메틸펜탄 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-(1-(1,3-디옥솔란-2-일)-4-메틸펜탄-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로-N,N-디이소프로필벤즈아미드 (중간체 98) (6.5 g)를 DAICEL CHIRALPAK IG에서 SFC (컬럼: 250x50 mm 10 um; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: MeOH (0.1% 암모니아), A:B = 65:35 (200 mL/분); 컬럼 온도: 38 ; 노즐 압력: 100 Bar; 노즐 온도: 60℃; 증발기 온도: 20℃; 트리머 온도: 25℃; 파장: 220 nm)로 분리하여 표제 중간체인 중간체 99 (2.7 g) 및 중간체 100 (2.8 g)을 수득하였다.

중간체 97의 제조

( R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(2- 메틸 -6- 옥소헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

ACN (10 mL) 중 (R)-2-((5-(2-(1-(1,3-디옥솔란-2-일)-4-메틸펜탄-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필벤즈아미드 (중간체 95) (1.00 g, 1.75 mmol)의 용액에 1 M HCl (10.0 mL, 10.0 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 실온까지 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 잔사를 DCM (50 mL)으로 희석시키고, 10% 수성 NaOH로 pH = 14까지 염기성화하였다. 상기 혼합물을 추가로 DCM (30 mL x 3)으로 추출하고, 합한 유기 층을 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켜 표제 중간체 (900 mg, 87%의 순도, 85%의 수율)를 백색 고체로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다.

중간체 101, 102, 103의 제조

( *R )-5- 플루오로 - N , N - 디이소프로필 -2-((5-(2-(2- 메틸 -6- 옥소헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

( *S )-5- 플루오로 - N , N - 디이소프로필 -2-((5-(2-(2- 메틸 -6- 옥소헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(2- 메틸 -6- 옥소헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

중간체 97에 대해 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 중간체를 합성하였다.

중간체 114의 제조

메틸 2-(2-이소프로필-1,3- 디옥솔란 -2-일)아세테이트

딘-스타크(Dean-Stark) 장치가 갖추어진 1000 mL 플라스크에서, 메틸 4-메틸-3-옥소펜타노에이트 (50 g, 347 mmol)를 에탄-1,2-디올 (43 g, 693 mmol), p-톨루엔술폰산 일수화물 (597 mg, 3.47 mmol) 및 톨루엔 (500 mL)으로 이루어진 용액에 첨가하였다. 상기 혼합물을 135℃에서 18시간 동안 교반시켰다. 실온까지 냉각시킨 후, 1 M Na₂CO₃ (300 mL) 수용액을 반응 혼합물에 첨가하였다. 유기 층을 분리하고, H₂O (100 mL)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켜 표제 중간체 (41 g, 조 물질)를 황색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다.

중간체 115의 제조

2-(2-이소프로필-1,3- 디옥솔란 -2-일)에탄-1-올

LiAlH₄ (2.5 g, 66 mmol)를 N₂ 분위기 하에 0℃에서 냉각시킨 THF (250 mL)에 일부씩 첨가하였다. THF (20 mL) 중 메틸 2-(2-이소프로필-1,3-디옥솔란-2-일)아세테이트 (중간체 114) (10 g, 조 물질)의 용액을 N₂ 분위기 하에 0℃에서 상기 혼합물에 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온까지 서서히 가온하고, 이 온도에서 18시간 동안 교반시켰다 (N₂ 분위기 하에). 그 후 2.5 mL의 H₂O를 상기 혼합물에 서서히 첨가하고, 이어서 NaOH 수용액 (15%, 7.5 mL)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반시켰다. 그 후 무수 MgSO₄를 상기 혼합물에 첨가하였다. 상기 현탁액을 셀라이트 패드를 통해 여과시키고, THF (200 mL)로 세척하였다. 여과액을 진공에서 농축시켜 표제 중간체 (6.8 g, 조 물질)를 황색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다.

중간체 116의 제조

1-히드록시-4- 메틸펜탄 -3-온

옥살산 (4.2 mL, 물 중 10%, 4.7 mmol)을 DCM (230 mL) 중 실리카 겔 (27 g, 449 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 일단 수성 층이 사라지면, DCM (7 mL) 중 2-(2-이소프로필-1,3-디옥솔란-2-일)에탄-1-올 (중간체 115) (3.7 g, 조 물질)의 용액을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반시켰다. 그 후 NaHCO₃ (800 mg)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 여과시키고, DCM (50 mL x 3)으로 세척하였다. 여과액을 진공에서 농축시켜 표제 중간체 (2.4 g, 조 물질)를 무색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다.

중간체 124의 제조

( *R )-3-(6-(6-(2-( 에틸(이소프로필)카르바모일 )-4- 플루오로페녹시 )-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-4-메틸펜틸 메탄술포네이트

MsCl (250 mg, 2.18 mmol)을 N₂ 분위기 하에 0℃에서 냉각시킨 DCM (10 mL) 중 N-에틸-5-플루오로-2-((5-(2-(1-히드록시-4-메틸펜탄-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-N-이소프로필벤즈아미드 (화합물 213) (500 mg, 0.972 mmol) 및 TEA (0.27 mL, 1.9 mmol)의 용액에 적가하였다. 생성된 혼합물을 N₂ 하에 0℃에서 45분 동안 교반시켰다. 그 후 반응 혼합물을 H₂O (5 mL)로 켄칭하고, DCM (10 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (5 mL)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 진공에서 농축시켜 표제 중간체 (400 mg, 조 물질)를 황색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다.

중간체 130, 139의 제조

메틸 3- 메틸 -4-( 토실옥시 ) 부타노에이트

2- 메톡시프로필 4- 메틸벤젠술포네이트

중간체 124에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 중간체를 합성하였다.

중간체 125의 제조

N - 벤질 -2- 메톡시 - N - 메틸아세트아미드

0℃에서 냉각시킨 DCM (60 mL) 중 N-메틸-1-페닐메탄아민 (5.5 g, 45.4 mmol) 및 TEA (14g, 138.4 mmol)의 용액에 2-메톡시아세틸 클로라이드 (5 g, 46.073 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 서서히 25℃까지 가온하고, 이 온도에서 1시간 동안 교반시켰다. 그 후, 포화 NaHCO₃ 수용액 (50 mL)을 상기 혼합물에 첨가하고, DCM (50 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (100 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켜 조 잔사를 제공하고, 이를 FCC (EA:PE = 0~80%)로 정제하여 표제 중간체 (3.4 g, 34%의 수율)를 무색 오일로서 수득하였다.

중간체 126의 제조

N - 벤질 -2- 메톡시 - N - 메틸에탄 -1- 아민 -1,1- d ₂

N₂ 분위기 하에 0℃에서 냉각시킨THF (25 mL) 중 LiAlD₄ (1.5 g, 35.732 mmol)의 혼합물에 THF (25 mL) 중 N-벤질-2-메톡시-N-메틸아세트아미드 (중간체 125) (3.4 g, 17.6 mmol)의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 먼저 25℃에서 1시간 동안 교반시키고 50℃에서 추가 2시간 동안 교반시켰다. 그 후 반응 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 수성 NaOH (1 M, 10 mL)를 적가하여 켄칭하였다. 생성된 혼합물을 여과시키고, 필터 케이크를 EtOAc (100 mL)로 세척하였다. 여과액을 H₂O (50 mL) 및 염수 (50 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시켰다. 용매를 감압 하에 농축시켜 잔사를 수득하고, 이를 FCC (EtOAc:PE = 0~100%)로 정제하여 표제 중간체 (2.0 g, 60%의 수율)를 무색 오일로서 수득하였다.

중간체 127의 제조

2- 메톡시 - N - 메틸에탄 -1,1- d ₂ -1- 아민 , 히드로클로라이드

MeOH (20 mL) 및 THF (60 mL) 중 N-벤질-2-메톡시-N-메틸에탄-1-아민-1,1-d ₂(800 mg, 4.413 mmol)의 용액에 1,1,2-트리클로로에탄 (1.2 g, 9.0 mmol) 및 Pd/C (습윤, 10%, 0.5 g)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 H₂ 분위기 (50 psi) 하에 50℃에서 18시간 동안 교반시켰다. 실온까지 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 셀라이트로 여과시키고, 여과액을 진공에서 농축시켜 표제 중간체 (600 mg, 조 물질)를 황색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다.

중간체 128의 제조

메틸 4-히드록시-3- 메틸부트 -2- 에노에이트

t-BuOK (16.0 g, 143 mmol)를 THF (220 mL) 중 (2-메톡시-2-옥소에틸)트리페닐포스포늄 브로마이드 (59.0 g, 142 mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 그 후 THF (30 mL) 중 1-히드록시프로판-2-온 (7.2 g, 97 mmol)을 상기 혼합물에 첨가하고, 반응 혼합물을 50℃에서 추가 16시간 동안 교반시켰다. 실온까지 냉각시킨 후, H₂O (200 mL)를 첨가하고, 상기 혼합물을 EtOAc (200 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 H₂O (300 mL)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 진공에서 농축시켜 조 화합물을 수득하고, 이를 FCC (PE: EtOAc = 1:0~1:1)로 정제하여 표제 중간체 (3.4 g, 27%의 수율)를 연한 황색 오일로서 수득하였다.

중간체 129의 제조

메틸 4-히드록시-3- 메틸부타노에이트

MeOH (100 mL) 중 메틸 4-히드록시-3-메틸부트-2-에노에이트 (중간체 128) (3.4 g, 26 mmol)의 용액에 건조 Pd/C (500 mg, 10%)를 첨가하고, 현탁액을 H₂ (15 psi) 분위기 하에 실온에서 4시간 동안 교반시켰다. 그 후 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과시키고, MeOH (200 mL)로 세척하였다. 여과액을 진공에서 농축시켜 표제 중간체 (2.3 g, 67%의 수율)를 황색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다.

중간체 193, 194, 207, 208의 제조

( S )-5-(( tert - 부틸디페닐실릴 ) 옥시 )-6-( 에틸(메틸)아미노 )-2- 메틸헥산 -3-온

( R )-5-(( tert - 부틸디페닐실릴 ) 옥시 )-6-( 에틸(메틸)아미노 )-2- 메틸헥산 -3-온

( S )-5-(( tert - 부틸디페닐실릴 ) 옥시 )-6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-온

( R )-5-(( tert - 부틸디페닐실릴 ) 옥시 )-6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-온

중간체 129에 대해 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 중간체를 합성하였다.

중간체 131 및 132의 제조

메틸 ( *R )-3- 메틸 -4-( 토실옥시 ) 부타노에이트

메틸 ( *S )-3- 메틸 -4-( 토실옥시 ) 부타노에이트

메틸 3-메틸-4-(토실옥시)부타노에이트 (중간체 130) (3.3 g)를 DAICEL CHIRALPAK AY-H에서 SFC (컬럼: 250x30 mm 5 um; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: EtOH (0.1% 암모니아), A:B = 90:10 (60 mL/분))로 정제하여 표제 중간체인 (중간체 131) (1.28 g, 97%의 순도, 36 %의 수율) 및 (중간체 132) (1.27 g, 85%의 순도, 33 %의 수율) 둘 다를 백색 고체로서 수득하였다.

중간체 134의 제조

메틸 ( *S )-4-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-3- 메틸부타노에이트

ACN (5 mL) 중 메틸 (*S)-3-메틸-4-(토실옥시)부타노에이트 (중간체 132) (1.27 g, 4.44 mmol), 2-메톡시-N-메틸에탄-1-아민 (593 mg, 6.65 mmol), 및 K₂CO₃ (1.23 mg, 8.87 mmol)의 혼합물을 90℃에서 하룻밤 교반시켰다. 실온까지 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 여과시키고, 여과액을 진공에서 농축시켜 표제 중간체 (670 mg, 조 물질)를 갈색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다.

중간체 133, 185, 186, 199, 200, 219의 제조

메틸 ( *R )-4-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-3- 메틸부타노에이트

에틸 ( S )-3-(( tert - 부틸디페닐실릴 ) 옥시 )-4-( 에틸(메틸)아미노 ) 부타노에이트

에틸 ( R )-3-(( tert - 부틸디페닐실릴 ) 옥시 )-4-( 에틸(메틸)아미노 ) 부타노에이트

에틸 ( S )-3-(( tert - 부틸디페닐실릴 ) 옥시 )-4-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)부타노에이트

에틸 ( R )-3-(( tert - 부틸디페닐실릴 ) 옥시 )-4-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)부타노에이트

N -(2- 메톡시에틸 )- N ,2 - 디메틸프로프 -2-엔-1- 아민

중간체 134에 대해 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 중간체를 합성하였다.

중간체 136의 제조

( *S )-6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2,5- 디메틸헥산 -3-온

N₂ 하에 0℃에서 냉각시킨 THF (5 mL) 중 메틸 (*S)-4-((2-메톡시에틸)(메틸)아미노)-3-메틸부타노에이트 (중간체 134) (670 mg, 조 물질)의 용액에 이소프로필마그네슘 클로라이드 (4.94 mL, 9.88 mmol, 2 M, THF 중)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 N₂ 하에 50℃에서 5시간 동안 교반시켰다. 실온까지 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 포화 NH₄Cl 수용액 (1.5 mL)으로 켄칭하고, 여과시켰다. 여과액을 진공에서 농축시켜 표제 중간체 (507.1 mg, 조 물질)를 황색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다.

중간체 135의 제조

( *R )-6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2,5- 디메틸헥산 -3-온

중간체 136에 대해 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 중간체를 합성하였다.

중간체 165의 제조

tert -부틸 (2-히드록시-5- 메틸 -4- 옥소헥실 )( 메틸 ) 카르바메이트

N₂ 분위기 하에 -40℃에서 냉각시킨 THF (150 mL) 중 3-메틸부탄-2-온 (6.0 g, 70.0 mmol)의 용액에 LDA (40 mL, THF 중 2 M, 80.0 mmol)를 적가하였다. 생성된 혼합물을 -40℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 그 후 THF (50 mL) 중 tert-부틸 메틸(2-옥소에틸)카르바메이트 (8.0 g, 46.2 mmol)의 용액을 상기 혼합물에 적가하고, 반응물을 -40℃에서 2시간 동안 추가로 교반시켰다. 반응물을 -40℃에서 H₂O (20 mL)를 적가하여 켄칭하였다. 그 후 혼합물을 실온까지 가온하고, 감압 하에 농축시켰다. 조 잔사를 H₂O (200 mL)로 희석시키고, EtOAc (200 mL * 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (200 mL)로 세척하고, 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 조 생성물을 FCC (PE/EtOAc = 20/1~3/1)로 정제하여 표제 중간체 (8.8 g, 85%의 순도, 62%의 수율)를 무색 오일로서 수득하였다.

중간체 165에 대해 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 중간체를 합성하였다.

중간체 166의 제조

tert -부틸 (2- 메톡시 -5- 메틸 -4- 옥소헥실 )( 메틸 ) 카르바메이트

DCM (200 mL) 중 tert-부틸 (2-히드록시-5-메틸-4-옥소헥실)(메틸)카르바메이트 (중간체 165) (4.00 g, 15.4 mmol)의 용액에 4 Å 분자 체 (4 g)를 N₂ 분위기 하에 첨가하고, 혼합물을 25℃에서 10분 동안 교반시켰다. 그 후 1,8-비스(디메틸아미노)나프탈렌 (8.26 g, 38.6 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 0℃까지 냉각시키고, 이어서 트리메틸옥소늄 테트라플루오로보레이트 (5.93 g, 40.1 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 먼저 0℃에서 2시간 동안 교반시키고, 그 후 25℃까지 가온하고, 이 온도에서 추가 16시간 동안 교반시켰다. 상기 현탁액을 여과시키고, DCM (40 mL x 2)로 세척하였다. 여과액을 진공에서 농축시키고, 잔사를 FCC (PE/EtOAc = 5/1~4/1)로 정제하여 표제 중간체 (2.00 g, 44%의 수율)를 무색 오일로서 수득하였다.

중간체 181의 제조

에틸 ( S )-3-히드록시-4- 요오도부타노에이트

N₂ 분위기 하에 DCM (20 mL) 중 EtOH (8.6 mL) 중 (S)-4-히드록시디히드로푸란-2(3H)-온 (5 g, 50.0 mmol)의 용액에 TMSI (14.8 g, 74.0 mmol)를 서서히 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 포화 Na₂SO₃ (40 mL) 용액을 첨가하였다. 유기 층을 분리하고, 진공에서 농축시켜 표제 중간체 (8.8 g, 조 물질)를 황색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다.

중간체 182의 제조

에틸 ( R )-3-히드록시-4- 요오도부타노에이트

중간체 181에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 중간체를 합성하였다.

중간체 195의 제조

( S )-6-( 에틸(메틸)아미노 )-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-온

N₂ 분위기 하에 THF (3 mL) 중 (S)-5-((tert-부틸디페닐실릴)옥시)-6-(에틸(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-온 (중간체 193) (2.33 g, 5.04 mmol)의 용액에 TBAF (0.65 mL, THF 중 1.0 M, 0.65 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 조 잔사를 H₂O (25 mL)로 희석시키고, DCM (60 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (40 mL x 2)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 진공에서 농축시켜 표제 중간체 (2.2 g, 조 물질)를 황색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다.

중간체 196, 209, 210의 제조

( R )-6-( 에틸(메틸)아미노 )-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-온

( S )-5-히드록시-6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-온

( R )-5-히드록시-6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-온

중간체 195에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 중간체를 합성하였다.

중간체 220의 제조

N -((3-이소프로필-5- 메틸 -4,5- 디히드로이속사졸 -5-일) 메틸 )-2- 메톡시 - N - 메틸에탄 -1-아민

0℃에서 냉각시킨 DMF (50 mL) 중 N-(2-메톡시에틸)-N,2-디메틸프로프-2-엔-1-아민 (중간체 219) (2.90 g, 20.2 mmol)의 용액에 NaHCO₃ (6.82 g, 81.2 mmol) 및 (Z)-N-히드록시이소부티르이미도일 클로라이드 (2.47 g, 20.3 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안 및 그 후 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 H₂O (50 mL)로 켄칭하고, EtOAc (30 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 포화 LiCl 수용액 (50 mL)으로 세척하고, 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 진공에서 농축시켜 조 생성물을 제공하고, 이를 FCC (MeOH: DCM = 1:10)로 정제하여 표제 중간체 (1.20 g, 89.9%의 순도, 25.9%의 수율)를 갈색 오일로서 수득하였다.

중간체 221의 제조

5-히드록시-6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2,5- 디메틸헥산 -3-온

MeOH 및 THF (40 mL, MeOH/THF = 1/2) 중 N-((3-이소프로필-5-메틸-4,5-디히드로이속사졸-5-일)메틸)-2-메톡시-N-메틸에탄-1-아민 (중간체 220) (1.20 g, 5.26 mmol)의 용액에 AcOH (3.15 g, 52.5 mmol) 및 H₂O (9.50 mL, 572.3 mmol)를 첨가하였다. 라니(Raney)-Ni (750 mg)을 N₂ 분위기 하에 0℃에서 상기 용액에 첨가하였다. 상기 현탁액을 탈기시키고, H₂로 3회 퍼지하고, 상기 혼합물을 H₂ 분위기 (30 Psi) 하에 25℃에서 하룻밤 교반시켰다.

반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과시키고, 여과액을 DCM으로 추출하였다. 합한 유기 층을 NaHCO₃ (20 mL x 2) 및 염수 (20 mL x 2)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 진공에서 농축시켜 표제 중간체 (1.10 g, 조 물질)를 갈색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다.

중간체 227의 제조

tert -부틸 ( R )-(1-(2,2-디메틸-4,6- 디옥소 -1,3-디옥산-5-일)-3- 메틸부탄 -2-일)카르바메이트

-10~0℃에서 예냉한 DCM (607 kg) 중 Boc-L-발린 (44.9 kg), 2,2-디메틸-1,3-디옥산-4,6-디온 (32.9 kg) 및 DMAP (35.5 kg)를 DCM (613 kg) 중 DCC (55.5 kg)의 용액에 3시간에 걸쳐 첨가하고, -10~0℃에서 16시간 동안 에이징하였다. 온도를 10℃ 미만으로 유지하면서 10% 시트르산 수용액 (449 kg)을 첨가하였다. 생성된 슬러리를 0~10℃에서 2시간 동안 에이징하고, 그 후 여과시켰다. 필터 케이크를 DCM (91 kg)으로 세척하였다. 여과액을 분리하고, 유기 층을 10% 시트르산 수용액 (2회 450 kg) 및 10% NaCl 수용액 (449 kg)으로 세척하였다. 온도를 -10~0℃로 유지하면서 유기 상 (1200 kg)에 아세트산 (75.0 kg)을 첨가하였다. 온도를 -10~0℃의 범위에서 유지하면서 소듐 보로히드라이드 (18.0 kg)를 5시간에 걸쳐 일부씩 첨가하고, 그 후, 생성된 혼합물을 -10~0℃에서 추가 16시간 동안 에이징하였다. 상기 혼합물을 15~25℃까지 가온하고, 2시간 동안 에이징하였다. 그 후 상기 혼합물을 14% NaCl 수용액 (450 kg)으로 세척하고, 이어서 14% NaCl 수용액 (432 kg)으로 두 번째 세척을 하고, 최종적으로 물로 세척하였다 (444 kg). 유기 상을 감압 하에 2~4 부피까지 농축시켰다. 이소프로판올 (143 kg)을 잔사에 첨가하고, 감압 하에 4~5 부피까지 농축시켰다. -10~0℃까지 냉각시키고 8시간 동안 에이징한 후, 생성된 슬러리를 여과시키고, IPA (38 kg)로 세척하고, 건조시켜 표제 중간체 (46.7 kg, 69%의 수율)를 백색 고체로서 수득하였다.

중간체 228의 제조

tert -부틸 ( R )-2-이소프로필-5- 옥소피롤리딘 -1- 카르복실레이트

톨루엔 (333 kg) 중 tert-부틸 (R)-(1-(2,2-디메틸-4,6-디옥소-1,3-디옥산-5-일)-3-메틸부탄-2-일)카르바메이트 (중간체 227) (46.7 kg)를 가열 환류시키고, 4시간 동안 에이징하였다. 상기 혼합물을 주위 온도까지 냉각시키고, 여과시키고, 톨루엔 (20 kg)으로 세척하였다. 합한 여과액을 감압 하에 건조상태까지 농축시켜 원하는 화합물 (31.05 kg, 96%의 수율)을 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 직접적으로 사용하였다.

중간체 229의 제조

tert -부틸 (5 R )-2-히드록시-5- 이소프로필피롤리딘 -1- 카르복실레이트

2-MeTHF (26.7 kg) 중 tert-부틸 (R)-2-이소프로필-5-옥소피롤리딘-1-카르복실레이트 (중간체 228) (30.9 kg)를 -5~5℃까지 냉각시켰다. 2-MeTHF 중 LiBH₄의 용액 (1 M, 45.2 kg, 54.4 mol)을 3시간에 걸쳐 첨가하고, 혼합물을 4시간 동안 에이징하였다. 5% NaHCO₃의 저온 수용액 (163 kg)을 -5~5℃에서 3시간에 걸쳐 첨가하고, 추가 2시간 동안 에이징하였다. 상기 혼합물을 주위 온도까지 가온하고, 추가 2시간 동안 에이징하였다. 수성 층을 분리하고, 유기 층을 10% NaCl 수용액 (170 kg) 및 물 (155 kg)로 세척하였다. 물 세척 동안, 형성된 에멀젼 및 고체 NaCl (3.1 kg)을 첨가하여 분리에 영향을 주었다. 수성 층의 제거 후, 유기 층을 감압 하에 건조상태까지 농축시켜 원하는 화합물 (28.5 kg, 91%의 수율)을 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 직접적으로 사용하였다.

중간체 230의 제조

tert -부틸 ( R )-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일) 카르바메이트

15~25℃의 DCM (344 kg) 중 tert-부틸 (5R)-2-히드록시-5-이소프로필피롤리딘-1-카르복실레이트 (중간체 229) (28.55 kg)를 2-메톡시-N-메틸에탄-1-아민 (12.3 kg, 138.0 mol)으로 처리하고, 생성된 혼합물을 1시간 동안 에이징하였다. 소듐 트리아세톡시보로히드라이드 (40.12 kg)를 5시간에 걸쳐 일부씩 첨가하고 (온도를 15~25℃로 유지하면서), 생성된 혼합물을 48시간 동안 에이징하였다. 반응 혼합물을 2시간에 걸쳐 8% NaOH 수용액 (184 kg)의 첨가에 의해 켄칭하고 (온도를 15~25℃로 유지하면서), 혼합물을 추가 2시간 동안 에이징하였다. 수층을 분리하고, 유기 층을 물 (169 kg)로 세척하였다. 유기 층을 그 후 감압 하에 건조상태까지 농축시켜 표제 중간체 (33.26 kg, 88%의 수율)를 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 직접적으로 사용하였다.

중간체 231의 제조

( R )- N ¹ -(2- 메톡시에틸 )- N ¹ ,5- 디메틸헥산 -1,4- 디아민 , 디히드로클로라이드

주위 온도의 이소프로판올 중 4 몰 HCl 용액 (84.80 kg)에 이소프로판올 (25.6 kg) 중 tert-부틸 (R)-(6-((2-메톡시에틸)(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)카르바메이트 (중간체 230) (32.38 kg)의 용액을 3시간에 걸쳐 첨가하고, 혼합물을 주위 온도에서 추가 19시간 동안 에이징하였다. 그 후 메틸 tert-부틸 에테르 (95.25 kg)를 1시간에 걸쳐 첨가하고, 혼합물을 2.5시간 동안 에이징하였다. 생성된 슬러리를 여과시키고, MTBE (53 kg)로 세척하였다. 필터 케이크를 건조시켜 표제 화합물 (23.92 kg, 81%의 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.

중간체 232의 제조

에틸 1- 벤질 -3-( 클로로메틸 ) 피롤리딘 -3- 카르복실레이트

-35~-25℃까지 냉각시킨 THF (6 L) 중 DIPEA (952 g, 1.1 당량)의 용액에 n-BuLi (2.33 kg, 헥산 중 2.5 M, 1.0 당량)를 첨가하였다 (온도를 -25℃ 미만으로 유지하면서). 생성된 혼합물을 -35~-25℃에서 추가 30분 동안 에이징하고, 그 후 -78~-60℃까지 냉각시켰다. -78~-60℃의 THF (2 L) 중 에틸 1-벤질피롤리딘-3-카르복실레이트 (2 kg, 1.0 당량)의 용액을 첨가하고, 추가 30분 동안 교반시켰다. 그 후 클로로요오도메탄 (1.81 kg, 1.2 당량)을 -78~-60℃에서 충전시켰다. 반응 혼합물을 -60~-40℃에서 2시간 동안 에이징하였다. 반응 혼합물에 0~10℃의 온도의 시트르산 수용액 (6 L H₂O 중 660 g)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 20~30℃에서 추가 20분 동안 에이징하였다. 층들을 분리한 후, 수성 층을 EtOAc (6 L)로 추출하고, 합한 유기 층을 염수 (6 L)로 세척하고, 그 후 50~60℃까지 가온하였다. 옥살산 (2.22 kg)을 50~60℃에서 충전시켰다. 생성된 혼합물을 50~60℃에서 3시간 동안 교반시키고, 그 후 20~30℃까지 냉각시키고, 하룻밤 에이징하였다. 생성된 고체를 여과시키고, 케이크를 에틸 아세테이트 (2 L)로 세척하였다. 습윤 케이크를 톨루엔 (4 L), H₂O (8 L) 및 K₃PO₄ (1.5 당량)에 첨가하고, 생성된 혼합물을 20~30℃에서 20분 동안 에이징하였다. 층들을 분리한 후, 수성 층을 톨루엔 (2 L)으로 추출하였다. 유기 층을 합하고, 물 (2 L )로 2회 세척하였다. 유기 상을 감압 하에 농축시켜 4.2 kg의 원하는 화합물을 톨루엔 용액으로서 수득하였다 (분석에 의하면 46 중량%이며, 이는 80%의 분석 수율을 제공함).

중간체 233의 제조

1- 벤질 -3-( 클로로메틸 ) 피롤리딘 -3- 카르브알데히드

유동 화학 시스템에서 수행한 반응: 톨루엔 (26 L) 중 에틸 1-벤질-3-(클로로메틸)피롤리딘-3-카르복실레이트 (중간체 232) (4.4 kg)의 용액을 26.7 mL/분에서 펌핑하고, -60℃까지 냉각시켰다. 냉각 후, 이것을 그 후 32.1 mL/분의 펌핑 속도로 -60℃의 톨루엔 중 DIBAL-H (28.1 mol)의 냉각 용액 (28 L)과 혼합하였다. 상기 혼합물을 -60℃에서 퍼플루오로알콕시 (PFA) 코일 튜브 반응기에 통과시켰다 (체류 시간을 5초로 하여 58.8 mL/분의 총 유량). 생성된 혼합물을 15.2 mL/분의 속도로 펌핑된 냉각된 MeOH (-60℃)와 혼합하였다. 이 혼합 용액을 -60℃의 또 다른 PFA 코일 튜브 반응기로 펌핑하였다 (체류 시간을 5초로 하여 74 mL/분의 총 유량). 생성된 혼합물을 20 중량%의 로셸 염 수용액 (20 V)을 함유하는 리시버 내에 수집하였다. 층들을 분리하고, 유기 상을 물 (2 x 44 L)로 2회 세척하였다. 유기 상을 유사한 방식으로 제조한 또 다른 3.0 kg 배치와 합하고, 감압 하에 농축시켜 원하는 화합물 (HPLC에 의하면 25.5 중량% 분석, 85%의 분석 수율 제공)의 톨루엔 용액 20.8 kg을 수득하고, 이를 추가 정제 없이 직접적으로 사용하였다.

¹ H NMR ( 300 MHz , 클로로포름-d): δ 9.62 (s, 1H), 7.39 - 7.20 (m, 5H), 3.83 - 3.57 (m, 4H), 2.96 (d, J = 10.2 Hz, 1H), 2.80 - 2.55 (m, 3H), 2.17 (ddd, J = 13.9, 7.9, 6.1 Hz, 1H), 1.83 (ddd, J = 13.4, 7.8, 5.5 Hz, 1H).

중간체 234의 제조

( R )-4-(6- 벤질 -2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -2-일)- N -(2- 메톡시에틸 )- N ,5 - 디메틸헥산 -1-아민

톨루엔 중 1-벤질-3-(클로로메틸)피롤리딘-3-카르브알데히드 (중간체 233) (3.0 kg, 10 중량%)의 용액 (톨루엔 (30 L)으로 희석시킴) 및 (R)-N ¹-(2-메톡시에틸)-N ¹,5-디메틸헥산-1,4-디아민, 디히드로클로라이드 (중간체 231) (3.47 kg)에 트리에틸아민 (2.55 kg, 25.2 mol)을 20~30℃에서 첨가하였다. 생성된 혼합물을 20~30℃에서 2시간 동안 에이징하였다. 그 후 소듐 트리아세톡시보로히드라이드 (9.0 kg)를 20~30℃에서 충전시키고, 혼합물을 12시간 동안 에이징하였다. 반응 혼합물을 5~15℃까지 냉각시키고, 온도를 35℃ 미만으로 유지하면서 25 중량%의 NaOH 수용액 (25 L, 대략 16.75 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 20~30℃에서 25분 동안 에이징하고, 층들을 분리하였다. 유기 층을 15 중량% 수성 NaCl (10 L)로 세척하고, 층들을 다시 분리하고, 물 (18 L)을 유기 상에 충전시켰다. 수성 상의 pH를 4 M 수성 HCl로 6~7로 조정하였다 (내부 온도를 35℃ 미만으로 유지하면서). 그 후 유기 상을 버리고, 수성 상을 분리하고, K₂HPO₄로 pH 8~9까지 염기성화하였다.

생성된 혼합물을 50~55℃까지 가온하고, 3시간 동안 에이징하였다. 그 후 반응 혼합물을 주위 온도까지 냉각시키고, 다른 두 배치 (2.4 kg + 3.0 kg)와 합하였다. 합한 스트림을 메틸 tert-부틸 에테르로 3회 세척하였다 (3 x 40 L). 생성된 수성 층에 추가의 메틸 tert-부틸 에테르 (83 L)를 첨가하고, 수성 상을 8 중량% 수성 NaOH를 사용하여 pH 9~10까지 염기성화하였다 (온도를 15~35℃로 유지하면서). 수성 층을 분리하고, 유기 층을 물로 3회 세척하였다 (3 x 30 L). 그 후 유기 층을 감압 하에 대략 3 부피까지 농축시키고, 그 후 메탄올로 3회 플러싱하고 (3 x 30 L), 건조상태까지 농축시켜 원하는 화합물 (12.4 kg, 90%의 단리 수율)을 연한 황색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 직접적으로 사용하였다.

중간체 224의 제조

( R )- N -(2- 메톡시에틸 )- N ,5 -디메틸-4-(2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -2-일) 헥산 -1-아민

-5~5℃까지 냉각시킨 EtOH (1.47 kg) 중 탄소상 수산화팔라듐 (1.2 kg)에 메탄술폰산 (MSA) (11kg), (R)-4-(6-벤질-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일- N-(2-메톡시에틸)-N,5-디메틸헥산-1-아민 (중간체 234) (10 kg) 및 EtOH (250 L)를 첨가하였다. 상기 혼합물을 35~45℃까지 가온하고, 수소 분위기 (0.27~0.40 MPa) 하에 16~20시간 동안 교반시켰다. 혼합물을 규조토 (20 kg)로 여과시키고, 패드를 EtOH (24 L)로 세척하였다. 여과액을 감압 (<40℃) 하에 2~3 부피까지 농축시키고, 그 후 2-MeTHF로 2회 플러싱 (73 kg 및 47 kg)하여 2~3 부피의 용액을 제공하였다. 2-MeTHF (65 kg)로 희석시킨 후, 10% 수성 황산나트륨 (30 kg)을 첨가하고, 혼합물을 0~10℃까지 냉각시키고, 이어서 16% 수성 NaOH (50 kg)를 첨가하여 pH를 13~14로 조정하였다. 온도를 15~25℃로 조정하고, 30~60분 동안 교반시켰다. 수성 층을 분리하고, 2-MeTHF로 2회 추출하였다 (47 kg x 2). 합한 유기 층을 감압 (<40℃) 하에 3~4 부피까지 농축시키고, 2-MeTHF (950 g)를 첨가하였다. 감압 (<40℃) 하에 3~4 부피까지 농축시킨 후, 생성된 용액을 2-MeTHF (30 kg)로 희석시키고, 4A 분자 체 (25 kg)에 통과시켜 건조시키고, 2-MeTHF (30 kg)로 세척하였다. 최종 용액을 농축시켜 원하는 화합물 (6.7 kg)을 79% 보정 수율로 90.1% 분석 순도를 갖는 오일로서 수득하였다.

중간체 225의 제조

( R )-4-(6-(3,6- 디클로로 -1,2,4-트리아진-5-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -2-일)- N -(2-메톡시에틸)- N ,5-디메틸헥산-1-아민

(R)-N-(2-메톡시에틸)-N,5-디메틸-4-(2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)헥산-1-아민 (중간체 224) (100 g)에 2-MeTHF (430 g) 및 TEA (68 g)를 첨가하고, 혼합물을 -50~-40℃까지 냉각시켰다. 2-MeTHF (172 g) 중 3,5,6-트리클로로-1,2,4-트리아진 (62 g)을 첨가하고, 혼합물을 1~3시간 동안 교반시켰다. 생성된 혼합물을 -20~-10℃까지 가온하고, 7% NaHCO₃ 수용액을 첨가하고, 혼합물을 20~30℃까지 가온하고, 30~60분 동안 교반시켰다. 수성 층을 제거하고, 유기 층을 10% Na₂SO₄ (500 g)로 세척하였다. 유기 층을 4 Å 분자 체 (220 g)에 통과시킴으로써 건조시키고, 2-MeTHF (180 g)로 세척하였다. 표제 중간체를 2-MeTHF 중 14.8 중량% 용액으로서 90% 분석 수율로 수득하였다.

중간체 245의 제조

( R )-2-((5-(2-(6-((2-(( tert - 부틸디메틸실릴 ) 옥시 )에틸)( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

NaBH₃CN (23.2 mg, 0.37 mmol)을 MeOH (2 mL) 중 (R)-N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필-2-((5-(2-(2-메틸-6-(메틸아미노)헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 히드로클로라이드 (화합물 19) (100 mg, 0.18 mmol), 2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)아세트알데히드 (71 μL, 0.37 mmol) 및 AcOH (11 μL, 0.18 mmol)의 용액에 첨가하였다. 그 후, 반응 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 물에 붓고, K₂CO₃ 수용액으로 염기성화하고, DCM을 첨가하였다. 유기 층을 분리하고, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 건조상태가 될 때까지 증발시켜 조 물질 (152 mg)을 제공하고, 이를 실리카 겔 크로마토그래피 (고정상: 불규칙 베어(bare) 실리카 4 g, 이동상: 0.5% NH4OH, 95% DCM, 5% MeOH)로 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획들을 혼합하고, 농축시켜 표제 중간체 (46 mg, 36%의 수율)를 수득하였다.

화합물의 제조

화합물 61의 제조

tert -부틸 (4-(6-(6-(2-( 에틸(이소프로필)카르바모일 )-4- 플루오로페녹시 )-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥실)카르바메이트

MeOH (15 mL) 중 2-((5-(2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필벤즈아미드 (중간체 3) (1.0 g, 2.4 mmol), tert-부틸 (5-메틸-4-옥소헥실)카르바메이트 (중간체 1) (830 mg, 3.62 mmol) 및 ZnCl₂ (660 mg, 4.84 mmol)의 혼합물을 80℃에서 0.5시간 동안 교반시켰다. 그 후 NaBH₃CN (310 mg, 4.93 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 80℃에서 6시간 동안 교반시켰다. 실온까지 냉각시킨 후, 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 제공하고, 이를 추가로 Waters Xbridge Prep OBD를 사용하여 분취용 HPLC (컬럼: C18 150x40 mm 10 um; 용출제: ACN/H₂O (0.05% 암모니아) 45%~75% v/v)로 정제하여 표제 화합물 (700 mg, 46%의 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.

화합물 62 및 63의 제조

tert -부틸 ( R )-(4-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥실)카르바메이트

tert -부틸 ( S )-(4-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥실)카르바메이트

tert-부틸 (4-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥실)카르바메이트 (화합물 61) (200 mg, 0.319 mmol)를 DAICEL CHIRALPAK IG에서 SFC (컬럼: 250x30 mm 10 um; 등용매 용출: EtOH (0.1%의 25% 암모니아 함유): 초임계 CO₂, 40% : 60% (v/v))로 정제하여 표제 화합물인 (화합물 62) (85 mg, 42%의 수율) 및 (화합물 63) (80 mg, 40%의 수율) 둘 다를 연한 황색 오일로서 수득하였다.

화합물 207 및 208

tert -부틸 ( *R )-(5-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-6-메틸헵틸)카르바메이트

tert -부틸 ( *S )-(5-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-6-메틸헵틸)카르바메이트

Tert-부틸 (5-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-6-메틸헵틸)카르바메이트 (화합물 206) (1.4 g)를 DAICEL CHIRALPAK IG에서 SFC (컬럼: 250x30 mm, 10 μm; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: MeOH (0.1% 암모니아), A:B = 55:45 (200 mL/분))로 정제하여 표제 화합물인 (화합물 207) (700 mg) 및 (화합물 208) (700 mg) 둘 다를 백색 고체로서 수득하였다.

화합물 304 및 305

tert -부틸 ((4 *R )-4-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-2-메톡시-5-메틸헥실)(메틸)카르바메이트

tert -부틸 ((4 *S )-4-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-2-메톡시-5-메틸헥실)(메틸)카르바메이트

tert-부틸 (4-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-2-메톡시-5-메틸헥실)(메틸)카르바메이트 (화합물 303) (250 mg)를 DAICEL CHIRALPAK IG에서 SFC (컬럼: 250x30 mm, 10 μm; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: MeOH (0.1% 암모니아), A:B = 60:40; 유량: 80 mL/분)로 분리하여 표제 화합물인 (화합물 304) (124 mg) 및 (화합물 305) (124 mg) 둘 다를 무색 점착성 오일로서 수득하였다.

화합물 306 및 307

tert -부틸 ((2 *R ,4 *R )-4-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-2-메톡시-5-메틸헥실)(메틸)카르바메이트

tert -부틸 ((2 *S ,4 *R )-4-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-2-메톡시-5-메틸헥실)(메틸)카르바메이트

Tert-부틸 ((4*R)-4-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-2-메톡시-5-메틸헥실)(메틸)카르바메이트 (화합물 304) (120 mg)를 DAICEL CHIRALPAK IG에서 SFC (컬럼: 250x30 mm,10 um; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: MeOH (0.1% 암모니아), A:B = 70:30 (80 mL/분))로 분리하여 표제 화합물인 (화합물 306) (45 mg) 및 (화합물 307) (46 mg) 둘 다를 무색 점착성 오일로서 수득하였다.

화합물 371 및 372

tert -부틸 ((2 *S ,4 *S )-4-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-2-메톡시-5-메틸헥실)(메틸)카르바메이트

tert -부틸 ((2 *R ,4 *S )-4-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-2-메톡시-5-메틸헥실)(메틸)카르바메이트

Tert-부틸 ((4*S)-4-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-2-메톡시-5-메틸헥실)(메틸)카르바메이트 (화합물 305) (120 mg)를 DAICEL CHIRALPAK IG에서 SFC (컬럼: 250x30 mm, 10 μm; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: IPA (0.1% 암모니아), A:B = 60:40; 유량: 80 mL/분)로 분리하여 표제 화합물인 (화합물 371) (45 mg) 및 (화합물 372) (46 mg) 둘 다를 무색 점착성 오일로서 수득하였다.

화합물 404 및 405

tert -부틸 ( R )-(4-(6-(3-클로로-6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥실)카르바메이트

tert -부틸 ( S )-(4-(6-(3-클로로-6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥실)카르바메이트

Tert-부틸 (4-(6-(3-클로로-6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥실)카르바메이트 (화합물 403) (19.5 g)를 DAICEL CHIRALPAK IG에서 SFC (컬럼: 250x30 mm, 10 um; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: MeOH (0.1% 암모니아), A:B =55:45 (80 mL/분); 컬럼 온도: 38℃; 노즐 압력: 100 Bar; 노즐 온도: 60℃; 증발기 온도: 20℃; 트리머 온도: 25℃; 파장: 220 nm)로 분리하여 표제 화합물인 (화합물 404) (8.00 g) 및 (화합물 405) (7.00 g) 둘 다를 점착성 오일로서 수득하였다.

화합물 1

( R )-2-((5-(2-(6-아미노-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 포르메이트

HCl/1,4-디옥산 (0.5 mL, 2.0 mmol)을 1,4-디옥산 (2 mL) 중 tert-부틸 (R)-(4-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥실)카르바메이트 (화합물 62) (85 mg, 0.14 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔사를 처음에 암모니아 (5 mL)로 중화시키고, 추가로, Welch Xtimate C18을 사용하여 분취용 HPLC (컬럼: 150x25 mm 5 μm; 용출제: ACN/H₂O (0.225%FA) 1%~31% (v/v))로 정제하여 표제 화합물 (32 mg, 41%의 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.

¹ H NMR ( 400 MHz , 메탄올- d ₄ ): δ = 8.45-8.41 (m, 3H), 7.48-7.13 (m, 3H), 4.50-4.01 (m, 6H), 3.98-3.66 (m, 3H), 3.56-3.38 (m, 1H), 3.25-3.12 (m, 1H), 3.10-3.01 (m, 1H), 2.99-2.87 (m, 2H), 2.43-2.18 (m, 2H), 2.13-1.96 (m, 1H), 1.84-1.44 (m, 4H), 1.25-0.92 (m, 13H), 0.87-0.69 (m, 2H).

LC-MS ( ESI ) (방법 1): R_t = 2.957분, m/z 실측치 528.3 [M+H]⁺.

SFC (방법 12): R_t = 1.151분.

화합물 60의 제조

tert -부틸 (4-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥실)(메틸)카르바메이트

MeOH (50 mL) 중 2-((5-(2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필벤즈아미드 (중간체 3) (600 mg, 1.45 mmol) 및 tert-부틸 메틸(5-메틸-4-옥소헥실)카르바메이트 (중간체 9) (330 mg, 1.37 mmol)의 용액에 ZnCl₂ (789 mg, 5.79 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 그 후 NaBH₃CN (729 mg, 11.6 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃에서 하룻밤 교반시켰다. 실온까지 냉각시킨 후, 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켜 조 잔사를 제공하고, 이를 DCM (50 mL)으로 희석시키고, 포화 수성 NH₄Cl (50 mL)로 켄칭하고, DCM (50 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (50 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 제공하고, 이를 추가로 FCC (DCM/MeOH = 10:1)로 정제하여 표제 화합물 (400 mg, 42%의 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.

화합물 56 및 57

tert -부틸 ( R )-(4-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥실)(메틸)카르바메이트

tert -부틸 ( S )-(4-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥실)(메틸)카르바메이트

Tert-부틸 (4-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥실)(메틸)카르바메이트 (화합물 60) (419 mg, 0.653 mmol)를 DAICEL CHIRALPAK AD에서 SFC (컬럼: 250x30 mm 10 μm; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: IPA (0.1% 암모니아), A:B = 80:20 (60 mL/분); 컬럼 온도: 38℃; 노즐 압력: 100 Bar; 노즐 온도: 60℃; 증발기 온도: 20℃; 트리머 온도: 25℃; 파장: 220 nm)로 정제하여 표제 화합물인 (화합물 56) (146 mg, 34%의 수율) 및 (화합물 57) (149 mg, 36%의 수율) 둘 다를 백색 고체로서 수득하였다.

화합물 19

( R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(2- 메틸 -6-( 메틸아미노 ) 헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 히드로클로라이드

1,4-디옥산 (3 mL) 중 tert-부틸 (R)-(4-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥실)(메틸)카르바메이트 (화합물 56) (130 mg, 0.203 mmol)의 용액에 HCl/1,4-디옥산 (5 mL, 20.0 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고, 잔사를 Phenomenex Gemini-NX에서 분취용 HPLC (컬럼: 150x30 mm 5 um, 이동상 A: 물 (0.05% HCl), 이동상 B: ACN, 유량: 25 mL/분, 구배 조건 B/A 0% B로부터 26%까지 (0% B~26% B))로 정제하여 표제 화합물 (105 mg, 84%의 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.

LC-MS ( ESI ) (방법 1): R_t = 2.939분, m/z 실측치 542.4 [M+H]⁺.

SFC (방법 1): R_t = 1.201분.

화합물 398

( R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(2- 메틸 -6-( 메틸아미노 ) 헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

5℃에서, TFA (0.51 mL, 6.7 mmol)를 DCM (7.5 mL) 중 tert-부틸 (R)-(4-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥실)(메틸)카르바메이트 (화합물 56) (287 mg, 0.45 mmol)의 용액에 적가하고, 반응 혼합물을 하룻밤 교반시켰다. 반응 혼합물을 건조상태까지 증발시켜 조 혼합물 (540 mg)을 제공하고, 이를 실리카 겔 크로마토그래피 (고정상: 불규칙 베어 실리카 12 g, 이동상: 구배: 95% DCM, 5% MeOH (+10% NH₄OH)로부터 90% DCM, 10% MeOH (+10% NH₄OH)까지)로 정제하였다. 순수 분획들을 혼합하고, 농축시켜 173 mg의 중간체 분획을 수득하고, 이를 ACN/H₂O (20/80, v/v)를 이용하여 동결 건조시켜 표제 화합물 (170 mg, 70%의 수율)을 수득하였다.

LC-MS ( ESI ) (방법 4): R_t = 2.08분, m/z 실측치 542.6 [M+H]⁺.

화합물 51

tert -부틸 (3-(6-(6-(2-( 에틸(이소프로필)카르바모일 )-4- 플루오로페녹시 )-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-4-메틸펜틸)카르바메이트

DCM (12 mL) 중 N-에틸-5-플루오로-2-((5-히드록시-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-N-이소프로필벤즈아미드 (중간체 25) (0.100 g, 0.312 mmol)의 용액에 옥살릴 클로라이드 (0.079 g, 0.624 mmol), 이어서 DMF (0.046 g, 0.624 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 상기 혼합물을 이 온도에서 1시간 동안 교반시켰다. 그 후 상기 혼합물을 DCM (3 mL) 중 tert-부틸 (4-메틸-3-(2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)펜틸)카르바메이트 히드로클로라이드 (중간체 22) (0.272 g, 조 물질) 및 TEA (0.158 g, 1.56 mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 0.5시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔사를 DCM (35 mL)과 H₂O (35 mL) 사이에 분배하고, DCM (35 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켰다. 잔사를 FCC (PE/EtOAc (0.5% 암모니아) = 1/1)로 정제하여 표제 화합물 (100 mg, 89%의 순도, 46%의 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.

화합물 52 및 53

tert -부틸 ( *R )-(5-(6-(6-(2-(4-시클로프로필피리미딘-5-일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-2,6-디메틸헵탄-2-일)카르바메이트

tert -부틸 ( *S )-(5-(6-(6-(2-(4-시클로프로필피리미딘-5-일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-2,6-디메틸헵탄-2-일)카르바메이트

tert-부틸 (5-(6-(6-(2-(4-시클로프로필피리미딘-5-일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-2,6-디메틸헵탄-2-일)카르바메이트 (화합물 58) (150 mg, 0.227 mmol)를 DAICEL CHIRALPAK AD-H에서 SFC (컬럼: 250x30 mm 5 μm; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: IPA (0.1% 암모니아), A: B = 4:1 (60 mL/분))로 정제하여 표제 화합물인 화합물 52 (47 mg, 96.3%의 순도, 30.2%의 수율) 및 화합물 53 (56 mg, 97.7%의 순도, 36.5%의 수율) 둘 다를 백색 고체로서 수득하였다.

화합물 54 및 55

tert -부틸 ( *R )-(5-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-2,6-디메틸헵탄-2-일)카르바메이트

tert -부틸 ( *S )-(5-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-2,6-디메틸헵탄-2-일)카르바메이트

tert-부틸 (5-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-2,6-디메틸헵탄-2-일)카르바메이트 (화합물 59) (1.70 g, 2.59 mmol)를 DAICEL CHIRALPAK IG에서 SFC (컬럼: 250x50 mm 10 μm)); 이동상: A: 초임계 CO₂, B: EtOH (0.1% 암모니아), A: B = 3:2 (150 mL/분))로 분리하여 표제 화합물인 화합물 54 (700 mg, 90%의 순도, 37%의 수율) 및 화합물 55 (700 mg, 순도: 96%의 순도, 40%의 수율) 둘 다를 백색 고체로서 수득하였다.

화합물 408

tert -부틸 ( R )-(4-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-3-(메틸아미노)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥실)카르바메이트

화합물 395에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 화합물을 합성하였다.

화합물 412

tert -부틸 ( R )-(4-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-3-메틸-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥실)카르바메이트

무수 디옥산 (1 mL) 중 tert-부틸 (R)-(4-(6-(3-클로로-6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥실)카르바메이트 (화합물 404) (50.0 mg, 0.076 mmol), 2,4,6-트리메틸-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리보리난 (76.0 mg, 0.303 mmol, THF 중 50%) 및 K₂CO₃ (21.0 mg, 0.152 mmol)의 혼합물에 Pd(PPh₃)₄ (8.7 mg, 0.008 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 110℃에서 8시간 동안 교반시켰다 (N₂ 분위기 하에). 실온까지 냉각시킨 후, 상기 혼합물을 H₂O (40 mL)로 희석시키고, EtOAc (20 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시켰다. 여과액을 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 제공하고, 이를 분취용 TLC (DCM/MeOH = 10/1)로 정제하여 표제 화합물 (30.0 mg, 59.7%의 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.

화합물 2, 3, 20, 30, 31, 37, 38, 26, 80, 209, 210, 218, 220, 221, 308, 309, 317, 328, 359, 373, 374, 409, 413

( S )-2-((5-(2-(6-아미노-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 포르메이트

2-((5-(2-(6-아미노-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 포르메이트

( S )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(2- 메틸 -6-( 메틸아미노 ) 헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 히드로클로라이드

( *R )-2-((5-(2-(6-아미노-2,6-디메틸헵탄-3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

( *S )-2-((5-(2-(6-아미노-2,6-디메틸헵탄-3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

( *R )-5-(6-(6-(2-(4- 시클로프로필피리미딘 -5-일)-4- 플루오로페녹시 )-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-2,6-디메틸헵탄-2-아민

( *S )-5-(6-(6-(2-(4- 시클로프로필피리미딘 -5-일)-4- 플루오로페녹시 )-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-2,6-디메틸헵탄-2-아민

2-((5-(2-(1-아미노-4- 메틸펜탄 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((4-(2-(2- 메틸 -6-( 메틸아미노 ) 헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)피리다진-3-일)옥시)벤즈아미드

( *R )-2-((5-(2-(7-아미노-2- 메틸헵탄 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 포르메이트

( *S )-2-((5-(2-(7-아미노-2- 메틸헵탄 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

( *R )-2-((5-(2-(1-아미노-4- 메틸펜탄 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

( *R )-2-((5-(2-(1-아미노-4- 메틸펜탄 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 히드로클로라이드

( *S )-2-((5-(2-(1-아미노-4- 메틸펜탄 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 히드로클로라이드

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-((3 * R ,5 *R )-5- 메톡시 -2- 메틸 -6-(메틸아미노)헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 히드로클로라이드

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-((3 * R ,5 *S )-5- 메톡시 -2- 메틸 -6-(메틸아미노)헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 히드로클로라이드

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(5-히드록시-2- 메틸 -6-( 메틸아미노 ) 헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드 히드로클로라이드

N -에틸-2-((5-(2-(6-( 에틸아미노 )-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 히드로클로라이드

5- 플루오로 -2-((5-(2-(5-히드록시-2- 메틸 -6-( 메틸아미노 ) 헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N , N -디이소프로필벤즈아미드 히드로클로라이드

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-((3 * S ,5 *S )-5- 메톡시 -2- 메틸 -6-(메틸아미노)헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 히드로클로라이드

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-((3 * S ,5 *R )-5- 메톡시 -2- 메틸 -6-(메틸아미노)헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 히드로클로라이드

( R )-2-((5-(2-(6-아미노-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-3-(메틸아미노)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 히드로클로라이드

( R )-2-((5-(2-(6-아미노-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-3-메틸-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 포르메이트

화합물 1 및 19에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 화합물을 합성하였다.

화합물 4

( R )-2-((5-(2-(6-(디메틸아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

MeOH (10 mL) 중 (R)-2-((5-(2-(6-아미노-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필벤즈아미드 히드로클로라이드 (화합물 65) (180 mg, 조 물질), 포름알데히드 (0.085 mL, 1.1 mmol) 및 AcOH (0.043 mL, 0.76 mmol)의 혼합물에 NaBH₃CN (72.0 mg, 1.14 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 여과시키고, 여과액을 Welch Xtimate에서 분취용 HPLC (컬럼: C18 150x30 mm 5 um; 용출제: ACN/H₂O (0.225% FA) 5%~25%, v/v)로 정제하고, 원하는 분획을 수집하고, 동결 건조시켰다. 생성된 고체를 추가로 25% 암모니아 (15 mL)로 중화시키고, DCM (20 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 추가로 ACN/물에 용해시키고, 동결 건조시켜 표제 화합물 (37.65 mg)을 황색 고체로서 수득하였다.

LC-MS ( ESI ) (방법 1): R_t = 2.95분, m/z 실측치 556.3 [M+H]⁺.

SFC (방법 4): R_t = 1.772분.

화합물 5, 32, 33, 74, 81, 101, 211, 212, 222, 224, 231, 410

( S )-2-((5-(2-(6-(디메틸아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 포르메이트

( *R )-2-((5-(2-(6-(디메틸아미노)-2,6-디메틸헵탄-3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

( *S )-2-((5-(2-(6-(디메틸아미노)-2,6-디메틸헵탄-3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

2-((4-(2-(6-(디메틸아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)피리다진-3-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드

2-((4-(2-(6-(디메틸아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)피리다진-3-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-(6-(디메틸아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드

( *R )-2-((5-(2-(7-(디메틸아미노)-2- 메틸헵탄 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

( *S )-2-((5-(2-(7-(디메틸아미노)-2- 메틸헵탄 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

( *R )-2-((5-(2-(1-(디메틸아미노)-4- 메틸펜탄 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

( *S )-2-((5-(2-(1-(디메틸아미노)-4- 메틸펜탄 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

( *R )-2-((5-(2-(1-((2-아미노-2- 옥소에틸 )( 메틸 )아미노)-4- 메틸펜탄 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

( R )-2-((5-(2-(6-(디메틸아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-3-메톡시-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 포르메이트

화합물 4에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 화합물을 합성하였다.

화합물 75, 76

( *R )-2-((4-(2-(6-(디메틸아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)피리다진-3-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드

( *S )-2-((4-(2-(6-(디메틸아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)피리다진-3-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드

2-((4-(2-(6-(디메틸아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)피리다진-3-일)옥시)-5-플루오로-N,N-디이소프로필벤즈아미드 (화합물 74) (600 mg)를 DAICEL CHIRALPAK IG에서 키랄 HPLC (컬럼: 250x30 mm 10 um; 이동상: A: 헵탄, B: EtOH, A:B 20%~70% (v/v); 유량: 25 mL/분)로 분리하여 표제 화합물인 화합물 75 (92 mg, 15%) 및 화합물 76 (84 mg)을 백색 고체로서 수득하였다.

화합물 75

LC-MS ( ESI ) (방법 2): R_t = 1.915분, m/z 실측치 569.3 [M+H]⁺.

키랄 HPLC (방법 4): R_t = 4.842분.

화합물 76

LC-MS ( ESI ) (방법 2): R_t = 1.924분, m/z 실측치 569.3 [M+H]⁺.

키랄 HPLC (방법 4): R_t = 6.200분.

화합물 77, 78

( *R )-2-((4-(2-(6-(디메틸아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)피리다진-3-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

( *S )-2-((4-(2-(6-(디메틸아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)피리다진-3-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

2-((4-(2-(6-(디메틸아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)피리다진-3-일)옥시)-N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필벤즈아미드 (화합물 81) (31.0 mg)를 DAICEL CHIRALPAK IE에서 SFC (컬럼: 250x30 mm 10um; 용출제: 100% MeOH (0.1% 암모니아); 유량: 25 mL/분)로 분리하여 표제 화합물인 화합물 77 (4.2 mg) 및 화합물 78 (1.3 mg)을 백색 고체로서 수득하였다.

화합물 77

LC-MS ( ESI ) (방법 3): R_t = 5.039분, m/z 실측치 555.3 [M+H]⁺.

키랄 HPLC (방법 2): R_t = 7.719분.

화합물 78

LC-MS ( ESI ) (방법 3): R_t = 4.870분, m/z 실측치 555.3 [M+H]⁺.

키랄 HPLC (방법 2): R_t = 8.754분.

화합물 105, 106

( *R )-2-((5-(2-(6-(디메틸아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드

( *S )-2-((5-(2-(6-(디메틸아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-(6-(디메틸아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로-N,N-디이소프로필벤즈아미드 (화합물 101) (1.5 g)를 DAICEL CHIRALPAK IG에서 SFC (컬럼: 250x50 mm 10 um; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: MeOH (0.1% 암모니아), A:B = 55:45 (200 mL/분); 컬럼 온도: 38 ; 노즐 압력: 100 Bar; 노즐 온도: 60 ; 증발기 온도: 20 ; 트리머 온도: 25 ; 파장: 220 nm)로 얻어서 표제 화합물인 화합물 105 (600 mg, 40.0 %의 수율) 및 화합물 106 (600 mg, 40.0 %의 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.

화합물 102

( *R )-2-((5-(2-(6-(디메틸아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

ACN (12 mL) 및 물 (4 mL) 중 (*R)-2-((5-(2-(6-(디메틸아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로-N,N-디이소프로필벤즈아미드 (화합물 105) (300 mg, 0.527 mmol)의 용액에 푸마르산 (123 mg, 1.06 mmol)을 첨가하였다. 투명 용액이 형성된 후, 상기 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔사를 ACN (3 mL)과 물 (10 mL)의 혼합물에 첨가하였다. 상기 혼합물을 건조상태까지 동결건조시켜 표제 화합물 (422 mg)을 백색 고체로서 수득하였다.

¹ H NMR ( 400 MHz , 메탄올- d ₄ ): δ = 8.50 (s, 1H), 7.50-7.15 (m, 3H), 6.72 (s, 4H), 4.51-3.89 (m, 7H), 3.86-3.69 (m, 2H), 3.61-3.49 (m, 1H), 3.25-3.07 (m, 3H), 2.88 (s, 6H), 2.50-2.20 (m, 2H), 2.19-2.06 (m, 1H), 1.97-1.77 (m, 2H), 1.75-1.57 (m, 2H), 1.51 (d, J=6.8 Hz, 3H), 1.37-1.14 (m, 6H), 1.11-0.97 (m, 6H), 0.78 (d, J=6.0 Hz, 3H).

LC-MS ( ESI ) (방법 2): R_t = 2.08분, m/z 실측치 570.3 [M+H]⁺.

SFC (방법 4): Rt = 1.284분.

화합물 103, 112, 114, 122, 123, 127, 128, 132, 133, 135, 137, 140, 142, 145, 146, 148, 150, 152, 154, 157, 159, 161, 165, 167, 170, 172, 176, 177, 179, 181, 184, 185, 188, 189, 191, 193, 195, 197, 199, 201, 203, 205, 219, 223, 225, 227, 233, 240, 241, 242, 243, 245, 256, 265, 266, 268, 270, 278, 280, 283, 259, 104, 229, 300, 302, 314, 315, 323, 324, 325, 326, 334, 335, 336, 337, 342, 343, 346, 352, 353, 356, 357, 365, 366, 369, 370, 377, 378, 382, 386, 387, 391, 392, 394, 397

( *S )-2-((5-(2-(6-(디메틸아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(( R )-6-((( R )-1- 메톡시프로판 -2-일)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 푸마레이트

( R )-2-((5-(2-(6-((3,3- 디플루오로프로필 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

( *R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(6-( 이소프로필(메틸)아미노 )-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 푸마레이트

( *S )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(6-( 이소프로필(메틸)아미노 )-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 푸마레이트

( *R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(2- 메틸 -6-( 메틸(프로필)아미노 )헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 푸마레이트

( *S )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(2- 메틸 -6-( 메틸(프로필)아미노 )헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 푸마레이트

( *R )- N -에틸-2-((5-(2-(6-( 에틸(메틸)아미노 )-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

( *S )- N -에틸-2-((5-(2-(6-( 에틸(메틸)아미노 )-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

( R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(6-((2- 메톡시 -2- 메틸프로필 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 푸마레이트

( R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(6-((2- 메톡시 -2- 메틸프로필 )(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 푸마레이트

( R )- N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(6-((2-히드록시-2- 메틸프로필 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

( R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(6-((3- 메톡시프로필 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 푸마레이트

( *R )-2-((5-(2-(6-((3-(디메틸아미노)-3- 옥소프로필 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

( *S )-2-((5-(2-(6-((3-(디메틸아미노)-3- 옥소프로필 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

( R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(2- 메틸 -6-( 메틸(2-( N -메틸아세트아미도)에틸)아미노 )헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 푸마레이트

( R )-2-((5-(2-(6-((2,2- 디메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

( R )-2-((5-(2-(6-((4-(디메틸아미노)-4- 옥소부틸 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥 산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(( R )-6-((( R )-1- 메톡시프로판 -2-일)(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 푸마레이트

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(( R )-6-((( S )-1- 메톡시프로판 -2-일)(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 푸마레이트

( R )-2-((5-(2-(6-((1,3- 디메톡시프로판 -2-일)아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

( R )-2-((5-(2-(6-((1,3- 디메톡시프로판 -2-일)( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(( R )-6-((( R )-1-히드록시-3- 메톡시프로판 -2-일)(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(( R )-6-((( S )-1-히드록시-3- 메톡시프로판 -2-일)(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-((3 R )-6-((3-히드록시-2- 메톡시프로필 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

2-((5-(2-((3 R )-6-((2,3- 디메톡시프로필 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

2-((5-(2-(( R )-6-(((* R )-2,3- 디메톡시프로필 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

2-((5-(2-(( R )-6-(((* S )-2,3- 디메톡시프로필 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

2-((5-(2-((3 R )-6-((4-(디메틸아미노)-4- 옥소부탄 -2-일)( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

2-((5-(2-((3 R )-6-((3-(디메틸아미노)-2- 메틸 -3- 옥소프로필 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

2-((5-(2-(( R )-6-((( *R )-4-(디메틸아미노)-4- 옥소부탄 -2-일)( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

2-((5-(2-(( R )-6-((( *S )-4-(디메틸아미노)-4- 옥소부탄 -2-일)( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

2-((5-(2-(( R )-6-((( *R )-3-(디메틸아미노)-2- 메틸 -3- 옥소프로필 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

2-((5-(2-(( R )-6-((( *S )-3-(디메틸아미노)-2- 메틸 -3- 옥소프로필 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(( R )-2- 메틸 -6-( 메틸(( R )-4-(메틸아미노) -4-옥소부탄-2-일)아미노)헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 푸마레이트

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(( R )-2- 메틸 -6-( 메틸(( S )-4-(메틸아미노) -4-옥소부탄-2-일)아미노)헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 푸마레이트

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(( R )-2- 메틸 -6-( 메틸(( R )-2-메틸-3-(메틸아미노) -3-옥소프로필)아미노)헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 푸마레이트

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(( R )-2- 메틸 -6-( 메틸(( S )-2-메틸-3-(메틸아미노) -3-옥소프로필)아미노)헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 푸마레이트

2-((5-(2-(( *R )-6-((( R )-4-아미노-4- 옥소부탄 -2-일)( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

2-((5-(2-(( *R )-6-(((S)-4-아미노-4- 옥소부탄 -2-일)( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

2-((5-(2-(( *R )-6-((( R )-3-아미노-2- 메틸 -3- 옥소프로필 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

2-((5-(2-(( *R )-6-(((S)-3-아미노-2- 메틸 -3- 옥소프로필 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

( *R )-2-((5-(2-(1-아미노-4- 메틸펜탄 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

( *R )-2-((5-(2-(1-(디메틸아미노)-4- 메틸펜탄 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

( *S )-2-((5-(2-(1-(디메틸아미노)-4- 메틸펜탄 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

( *R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(1-((2- 메톡시에틸 )아미노)-4-메틸펜탄-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 푸마레이트

( R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(6-((2- 메톡시에틸 -1,1- d ₂ )(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 푸마레이트

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-((3 * R ,5 *R )-6-((2- 메톡시에틸 )(메틸)아미노)-2,5-디메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 푸마레이트

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-((3 * S ,5 *R )-6-((2- 메톡시에틸 )(메틸)아미노)-2,5-디메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 푸마레이트

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-((3 * R ,5 *S )-6-((2- 메톡시에틸 )(메틸)아미노)-2,5-디메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 푸마레이트

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-((3 * S ,5 *S )-6-((2- 메톡시에틸 )(메틸)아미노)-2,5-디메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 푸마레이트

( R )-2-((5-(2-(6-((2- 아세트아미도에틸 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

( R )-2-((5-(2-(6-((1,3-디히드록시프로판-2-일)( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2,4-디메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 ( R , S 와 S , R 의 혼합물; 또는 R , R 과 S , S 의 혼합물) 푸마레이트

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2,4-디메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 ( R , R 과 S , S 의 혼합물; 또는 R , S 와 S , R 의 혼합물) 푸마레이트

( *R )- N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(1-((2- 히드록시에틸 )아미노)-4- 메틸펜탄 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

( *R )- N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(1-((2- 히드록시에틸 )( 메틸 )아미노)-4-메틸펜탄-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

( *R )-2-((5-(2-(1-((3-아미노-3- 옥소프로필 )아미노)-4- 메틸펜탄 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

( *R )-2-((5-(2-(1-((3-아미노-3- 옥소프로필 )( 메틸 )아미노)-4- 메틸펜탄 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(( R )-6-((( R )-2-히드록시-3- 메톡시프로필 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

( R )- N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(6-((2- 히드록시에틸 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

( R )-2-((5-(2-(6-((2,2- 디메톡시에틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

( *R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(1-( 이소프로필아미노 )-4-메틸펜탄-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 푸마레이트

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-((3 R )-6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헵탄-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 푸마레이트

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(6-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 푸마레이트

2-((5-(2-((3 * R ,5 *R )-6-(디메틸아미노)-5- 메톡시 -2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

2-((5-(2-((3 * R ,5 *S )-6-(디메틸아미노)-5- 메톡시 -2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-((3 * R ,5 *R )-5-히드록시-6-( 이소프로필(메틸)아미노 )-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-((3 * S ,5 *S )-5-히드록시-6-( 이소프로필(메틸)아미노 )-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-((3 * R ,5 *S )-5-히드록시-6-( 이소프로필(메틸)아미노 )-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-((3 * S ,5 *R )-5-히드록시-6-( 이소프로필(메틸)아미노 )-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

2-((5-(2-((3 * R ,5 *R )-6-( 디에틸아미노 )-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

2-((5-(2-((3 * S ,5 *S )-6-( 디에틸아미노 )-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

2-((5-(2-((3 * S ,5 *R )-6-( 디에틸아미노 )-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

2-((5-(2-((3 * R ,5 *S )-6-( 디에틸아미노 )-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

N -에틸-2-((5-(2-((3 * R ,5 S )-6-( 에틸(메틸)아미노 )-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

N -에틸-2-((5-(2-((3 * S ,5 S )-6-( 에틸(메틸)아미노 )-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

N -에틸-2-((5-(2-((3 * R ,5 R )-6-( 에틸(메틸)아미노 )-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-((3 * R ,5 S )-5-히드록시-6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-((3 * S ,5 S )-5-히드록시-6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-((3 * R ,5 R )-5-히드록시-6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-((3 * S ,5 R )-5-히드록시-6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

2-((5-(2-((3 * R ,5 *R )-6-(디메틸아미노)-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

2-((5-(2-((3 * R ,5 *S )-6-(디메틸아미노)-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

2-((5-(2-((3 * S ,5 *S )-6-(디메틸아미노)-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

2-((5-(2-((3 * S ,5 *R )-6-(디메틸아미노)-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

2-((5-(2-((3 * S ,5 *S )-6-(디메틸아미노)-5- 메톡시 -2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

2-((5-(2-((3 * S ,5 *R )-6-(디메틸아미노)-5- 메톡시 -2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(5-히드록시-6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2,5-디메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-((3 * R ,5 *R )-5-히드록시-2- 메틸 -6-( 메틸(프로필)아미노 )헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-((3 * S ,5 *S )-5-히드록시-2- 메틸 -6-( 메틸(프로필)아미노 )헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

2-((5-(2-((3 * R ,5 *S )-6-( 에틸(메틸)아미노 )-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

2-((5-(2-((3* S ,5 * S )-6-( 에틸(메틸)아미노 )-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

( R )-2-((3- 클로로 -5-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 푸마레이트

( R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 푸마레이트

화합물 102에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 화합물을 합성하였다.

화합물 6

( R )-2-((5-(2-(6- 아세트아미도 -2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥 탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 포르메이트

0℃에서 냉각시킨 DCM (1 mL) 중 (R)-2-((5-(2-(6-아미노-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필벤즈아미드 포르메이트 (화합물 1) (30 mg, 0.057 mmol) 및 TEA (60 uL, 0.43 mmol)의 용액에 Ac₂O (20 uL, 0.21 mmol)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 N₂ 분위기 하에 실온에서 0.5시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔사를 Welch Xtimate를 사용하여 분취용 HPLC (컬럼: C18 150x25 mm 5 um; 용출제: ACN/H₂O (0.225% FA) 30%~50% (v/v))로 정제하여 표제 화합물 (3.31 mg, 9%의 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.

LC-MS ( ESI ) (방법 5): R_t = 0.633분, m/z 실측치 570.4 [M+H]⁺.

SFC (방법 5): R_t = 1.191분.

화합물 7, 29, 34

( S )-2-((5-(2-(6- 아세트아미도 -2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-(1- 아세트아미도 -4- 메틸펜탄 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

( *R )-2-((5-(2-(6- 아세트아미도 -2,6-디메틸헵탄-3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

화합물 6에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 화합물을 합성하였다.

화합물 8

( R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(2- 메틸 -6-(3- 메틸우레이도 )헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

0℃에서 냉각시킨 DCM (10 mL) 중 (R)-2-((5-(2-(6-아미노-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필벤즈아미드 포르메이트 (화합물 1) (70 mg, 0.12 mmol) 및 TEA (0.35 mL, 2.5 mmol)의 용액에 메틸카르바믹 클로라이드 (18 mg, 0.19 mmo)를 첨가하고, 생성된 혼합물을 0℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔사를 Phenomenex Gemini-NX에서 분취용 HPLC (컬럼: 150x30 mm 5 um; 용출제: ACN/H₂O (0.04% 암모니아+10 mM NH₄HCO₃) 35%~65%, v/v)로 정제하여 표제 화합물 (50 mg, 70%의 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.

LC-MS ( ESI ) (방법 1): R_t = 3.34분, m/z 실측치 585.3 [M+H]⁺.

SFC (방법 6): R_t = 2.222분.

화합물 9

( S )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(2- 메틸 -6-(3- 메틸우레이도 )헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

화합물 8에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 화합물을 합성하였다.

화합물 10

메틸 ( R )-(4-(6-(6-(2-( 에틸(이소프로필)카르바모일 )-4- 플루오로페녹시 )-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥실)카르바메이트

0℃에서 냉각시킨 THF/H₂O (2 mL/2 mL) 중 (R)-2-((5-(2-(6-아미노-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필벤즈아미드 히드로클로라이드 (화합물 65) (0.100 g, 조 물질)의 혼합물에 2 M NaOH (0.15 mL, 0.30 mmol) 및 메틸 카르보노클로리데이트 (0.030 g, 0.317 mmol, 0.1 mL DCM 중)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 0℃에서 0.5시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 물 (10 mL) 및 포화 수성 NaHCO₃ (15 mL)으로 희석시키고, 추가로 EtOAc (15 mL x 3)로 추출하였다. 합한 유기 층을 건조시키고 (Na₂SO₄), 여과시키고, 진공에서 증발시켜 조 생성물을 제공하고, 이를 추가로, Phenomenex Gemini NX를 사용하여 분취용 HPLC (컬럼: C18 75x30 mm 3 um; 용출제: ACN/H₂O (0.05% 암모니아+10 mM NH₄HCO₃) 35%~65% (v/v))로 정제하여 표제 화합물 (11.53 mg)을 점착성 오일로서 수득하였다.

LC-MS ( ESI ) (방법 1): R_t = 3.283분, m/z 실측치 586.3 [M+H]⁺.

화합물 22

메틸 ( R )-(4-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥실)(메틸)카르바메이트

화합물 10에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 화합물을 합성하였다.

화합물 11

( R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

DMF (1 mL) 중 (R)-2-((5-(2-(6-아미노-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필벤즈아미드 (화합물 64) (120 mg, 조 물질), 1-브로모-2-메톡시에탄 (32 mg, 0.23 mmol), Cs₂CO₃ (222 mg, 0.681 mmol), NaI (102 mg, 0.680 mmol)의 혼합물을 1시간 동안 마이크로웨이브 조사를 통해 80℃에서 교반시켰다. 실온까지 냉각시킨 후, 상기 혼합물을 H₂O (10 mL)로 희석시키고, EtOAc (3 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 H₂O (10 mL)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 추가로, Phenomenex Gemini-NX에서 HPLC (컬럼: 150x30 mm 5 μm; 용출제: ACN/H₂O (10 mM NH₄HCO₃) 51%~71% (v/v))로 정제하고, 추가로, DAICEL CHIRALCEL OD-H에서 SFC (컬럼: 250x30 mm 5 um; 용출제: EtOH (0.1% v/v 암모니아) 중 초임계 CO₂ 25/25, v/v)로 정제하여 표제 화합물 (5.13 mg, 96%의 순도)을 황색 고체로서 수득하였다.

LC-MS ( ESI ) (방법 1): R_t = 2.997분, m/z 실측치 586.3 [M+H]⁺.

화합물 28, 90, 93, 287, 149, 226, 257, 228

( S )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

( R )-2-((5-(2-(6-( 비스(2-메톡시에틸)아미노 )-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 포르메이트

5- 플루오로 - N , N - 디이소프로필 -2-((5-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 포르메이트

( R )-2-((5-(2-(6-((2,2- 디메톡시에틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

( R )-2-((5-(2-(6-((2,2- 디메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

( *R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(1-((2- 메톡시에틸 )아미노)-4-메틸펜탄-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

( R )-2-((5-(2-(6-((2- 에톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

( *R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(1-( 이소프로필아미노 )-4-메틸펜탄-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

화합물 11에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 화합물을 합성하였다.

화합물 12

( R )-2-((5-(2-(6-((2- 시아노에틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

MeOH (15 mL) 중 (R)-2-((5-(2-(6-아미노-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필벤즈아미드 히드로클로라이드 (화합물 65) (260 mg, 조 물질) 및 DIEA (200 mg, 1.98 mmol)의 용액에 아크릴로니트릴 (580 mg, 10.9 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고, 잔사를 Boston Prime에서 분취용 HPLC (컬럼: C18 150x30 mm 5 um, 이동상 A: 물 (0.04% 암모니아+10 mM NH₄HCO₃), 이동상 B: ACN, 유량: 25 mL/분, 구배 조건 B/A 40%~70%)로 정제하여 표제 화합물 (120 mg)을 무색 오일로서 수득하였다.

LC-MS ( ESI ) (방법 1): R_t = 2.938분, m/z 실측치 581.3 [M+H]⁺.

화합물 18, 246

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(2- 메틸 -6-((2-( 메틸술포닐 )에틸)아미노)헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

( R )-2-((5-(2-(6-((3-(디메틸아미노)-3- 옥소프로필 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 포르메이트

화합물 12에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 화합물을 합성하였다.

화합물 27

( R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

제조 방법 A:

무수 MeOH (2 mL) 중 (R)-N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필-2-((5-(2-(6-((2-메톡시에틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 (화합물 11) (40.0 mg, 0.068 mmol), 포름알데히드 (55.4 mg, 0.683 mol, 물 중 37%) 및 AcOH (8.2 mg, 0.137 mmol)의 혼합물을 45℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 그 후, NaBH₃CN (8.6 mg, 0.137 mmol)을 상기 혼합물에 첨가하고, 생성된 혼합물을 45℃에서 추가 1시간 동안 교반시켰다. 실온까지 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 포화 수성 NaHCO₃ (40 mL)으로 처리하여 pH 값을 약 8로 조정하고, 추가로 DCM (20 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 조 물질을 제공하고, 이를 Boston Prime에서 분취용 HPLC (컬럼: C18 150x30 mm 5 um, 이동상 A: H₂O (0.04% 암모니아+10 mM NH₄HCO₃), 이동상 B: ACN, 유량: 25 mL/분, 구배 조건 B/A 50%~80% (50% B~80% B))로 정제하여 표제 화합물 (9.62 mg, 99.10%의 순도, 23.3%의 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.

제조 방법 B:

DMF (5 mL) 중 N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필-2-((5-(2-(2-메틸-6-(메틸아미노)헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 히드로클로라이드 (화합물 67) (480 mg, 조 물질), K₂CO₃ (700 mg, 5.07 mmol) 및 NaI (400 mg, 2.67 mmol)의 혼합물에 1-브로모-2-메톡시에탄 (230 mg, 1.65 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 하룻밤 교반시켰다. 실온까지 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 H₂O (30 mL)로 켄칭하고, DCM (30 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (30 mL x 3)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜 조 잔사를 제공하였다. 잔사를 FCC (DCM/MeOH = 10:1)로 정제하여 N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필-2-((5-(2-(6-((2-메톡시에틸)(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 (화합물 68) (250 mg, 48%의 수율)를 황색 오일로서 수득하였다.

N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필-2-((5-(2-(6-((2-메톡시에틸)(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 (화합물 68) (960 mg, 방법 B에 의해 수득된 여러 배치로부터 합해짐)를 먼저, DAICEL CHIRALPAK IG를 사용하여 SFC (컬럼: 250x30 mm 10 um; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: EtOH (0.1% 암모니아), A:B=40:60 (60 mL/분))로 분리하고, 추가로, Boston Prime을 사용하여 분취용 HPLC (컬럼: 150x30 mm 5 um, 이동상 A: H₂O (10 mM NH₄HCO₃), 이동상 B: ACN, 유량: 25 mL/분, 구배 조건 B/A 55%~85%)로 정제하여 표제 화합물 (270 mg)을 무색 오일로서 수득하였다.

¹ H NMR ( 400 MHz , 메탄올- d ₄ ): δ = 8.40 (s, 1H), 7.47-7.32 (m, 1H), 7.30-7.10 (m, 2H), 4.24-4.01 (m, 2H), 3.89-3.60 (m, 3H), 3.48 (br s, 3H), 2.63-2.51 (m, 2H), 2.43-2.32 (m, 2H), 2.29-2.07 (m, 6H), 1.86-1.72 (m, 1H), 1.62-1.44 (m, 2H), 1.39-1.02 (m, 10H), 0.99-0.66 (m, 9H). 일부 양성자는 용매 피크에 의해 숨겨졌으며, 보고되지 않는다.

LCMS ( ESI ) (방법 2): R_t = 1.965분, m/z 실측치 600.3 [M+H]⁺.

SFC (방법 11): R_t = 4.904분.

제조 방법 C:

(R)-2-((3-클로로-5-(2-(6-((2-메톡시에틸)(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시-N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필벤즈아미드 (화합물 393) (MeOH 중 60.1 중량% 용액 163.93 g, 보정된 100 g의 화합물 393), 탄소상 팔라듐 (10 g) 및 MeOH (316 g)의 메탄올 용액을 수소 분위기 (0.20~0.30 Mpa) 하에 20~30℃에서 18시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 규조토 (75 g)에서 여과시키고, 케이크를 MeOH (158 g)로 세척하였다. 여과액을 감압 (≤ 40℃) 하에 대략 3 부피까지 농축시키고, 그 후 이소프로필 아세테이트 (IPAc, 870 g)로 플러싱하여 대략 3 부피까지 농축시켰다. 그 후 상기 혼합물을 IPAc (696 g)로 희석시키고, 20% Na₂CO₃ 수용액을 첨가하였다 (500 g). 상기 혼합물을 30~60분 동안 교반시켰다. 수성 층을 제거하였다. 유기 층을 물 (500 g)로 세척하고, 그 후 감압 하에 <45℃에서 대략 3 부피까지 농축시켰다. 표제 중간체를 IPAc 중 48.1 중량% 용액으로서 대략 90% 분석 수율로 수득하였다.

화합물 70

( R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 옥살레이트

20 mL의 ACN (20 mL) 중 (R)-N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필-2-((5-(2-(6-((2-메톡시에틸)(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 (화합물 27) (270 mg, 0.450 mmol)의 용액에 옥살산 (81.0 mg, 0.900 mmol)을 첨가하였다. 첨가 후, 반응 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 그 후 반응 혼합물을 농축시키고, 잔사를 ACN 및 탈이온수에 재용해시키고, 동결건조시켜 표제 화합물 (350 mg)을 백색 고체로서 수득하였다.

¹ H NMR ( 400 MHz , 메탄올- d ₄ ): δ = 8.48 (s, 1H), 7.52-7.11 (m, 3H), 4.54-3.64 (m, 12H), 3.40-3.34 (m, 5H), 3.23-3.13 (m, 2H), 2.90 (s, 3H), 2.54-2.27 (m, 2H), 2.19-2.03 (m, 1H), 1.97-1.77 (m, 2H), 1.75-1.50 (m, 2H), 1.35-0.65 (m, 17H).

¹ H NMR ( 400 MHz , DMSO - d ₆ ): δ = 8.51 (s, 1H), 7.51-7.29 (m, 3H), 4.29-3.34 (m, 12H), 3.23-2.84 (m, 7H), 2.70 (s, 3H), 2.35-2.09 (m, 2H), 2.05-1.85 (m, 1H), 1.81-1.58 (m, 2H), 1.56-1.33 (m, 2H), 1.18-0.60 (m, 17H).

LCMS ( ESI ) (방법 2): R_t = 1.969분, m/z 실측치 600.4 [M+H]⁺.

IPAc (360 g) 중 화합물 27 (IPAc 중 48 중량% 용액 207.90 g, 활성 화합물 27 100 g)의 용액에 EtOH (63 g)를 20~25℃에서 첨가하였다. 그 후 상기 용액을 대략 15분에 걸쳐 EtOH (49.5 g) 중 진한 HCl (32.9 g)로 처리하였다. 상기 혼합물에 결정질 화합물 70a 종정 (2 g, 2% 종정 로드)을 시딩하고, 이를 그 후 18시간 동안 에이징하였다. IPAc (870 g)를 4시간에 걸쳐 20~25℃에서 서서히 첨가하고, 슬러리를 추가 18시간 동안 교반시켰다. 대략 5℃까지 냉각시킨 후, 생성물을 여과시키고, IPAc (522 g)로 세척하고, 진공 하에 20~30℃에서 건조시켜 약한 결정질 화합물 70a를 백색 고체로서 수득하였다 (91.0%의 수율, 115.4 g). (주: 반응에 사용된 소량의 종정 물질을 소규모의 유사한 반응 프로토콜을 통해 수득하였다.)

재결정화: 약한 결정질 화합물 70a (100 g), EtOH (166 g), 정제수 (21.5 g) 및 IPAc (178 g)의 용액을 20~30℃에서 0.5~2시간 동안 교반시켜 투명 용액을 얻었다. 추가 IPAc (522 g)를 1~2시간에 걸쳐 적가하고, 그 후 혼합물에 결정질 화합물 70a 종정(2 g, 2% 종정 로드)을 시딩하였다. 그후 상기 혼합물을 18~20시간 동안 에이징하고, IPAc (348 g)를 20~30℃에서 12시간에 걸쳐 서서히 첨가하고, 슬러리를 추가 55~60시간 동안 교반시켰다. 생성물을 여과시키고, IPAc (158 g)로 세척하고, 20~30℃에서 진공에서 건조시켜 화합물 70a를 백색 고체로서 수득하였다 (85%의 수율, 85.0 g, 순).

¹ HNMR ( DMSO - d ₆ , 400MHz): δ = 11.60 (1H, brs), 10.8 (1H, brs), 8.52 (1H, s), 7.36 (3H, m), 3.97-4.20 (7H, m), 3.64-3.71 (4H, m), 3.47 (7H, m), 3.25 (2H, m), 3.05 (3H, m), 2.73 (3H, s), 2.10-2.45 (1H, m), 1.99 (1H, m), 1.78 (2H, m), 1.55 (2H, m), 0.83-1.12 (12H, m), 0.70 (2H, m).

LCMS (방법 7): R_t = 0.669분, m/z 실측치 600.5 [M+H]⁺.

화합물 83, 84, 94, 95, 88, 89, 99, 100, 250, 251, 252, 254, 258, 396, 402

( *R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((4-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)피리다진-3-일)옥시)벤즈아미드 옥살레이트

( *S )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((4-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)피리다진-3-일)옥시)벤즈아미드 옥살레이트

( *R )-5- 플루오로 - N , N - 디이소프로필 -2-((5-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 옥살레이트

( *S )-5- 플루오로 - N , N - 디이소프로필 -2-((5-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 옥살레이트

( *R )-5- 플루오로 - N , N - 디이소프로필 -2-((4-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)피리다진-3-일)옥시)벤즈아미드 옥살레이트

( *S )-5- 플루오로 - N , N - 디이소프로필 -2-((4-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)피리다진-3-일)옥시)벤즈아미드 옥살레이트

( *R )-5- 플루오로 - N , N - 디이소프로필 -2-((5-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 옥살레이트

( *S )-5- 플루오로 - N , N - 디이소프로필 -2-((5-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 옥살레이트

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(( R )-6-((( *R )-2- 메톡시프로필 )(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 옥살레이트

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(( R )-6-((( *S )-2- 메톡시프로필 )(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 옥살레이트

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-((3 R )-6-((2- 메톡시프로필 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 옥살레이트

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-((3 S )-6-((2- 메톡시프로필 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 옥살레이트

( R )-2-((5-(2-(6-((2- 에톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 옥살레이트

( *R )-2-((5-(2-(6-(디메틸아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드 옥살레이트

( R )- N -(에틸- ¹³ C ₂ )-5- 플루오로 -2-((5-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -(프로판-2-일- ¹³ C ₃ )벤즈아미드 옥살레이트

화합물 70에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 화합물을 합성하였다.

화합물 13, 16, 71, 136, 139, 153, 156, 160, 164, 166, 169, 173, 274, 275, 276, 279, 282, 285, 178, 180, 190, 192, 194, 196, 198, 200, 202, 204, 310, 311, 312, 313, 318, 329, 360, 375, 376, 379, 380, 383, 388, 411

( R )-2-((5-(2-(6-((2- 시아노에틸 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

( R )-2-((5-(2-(6-((2,2- 디플루오로에틸 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

( R )- N -에틸-2-((5-(2-(6-( 에틸(2-메톡시에틸)아미노 )-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

( R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(6-((2- 메톡시 -2- 메틸프로필 )(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

( R )- N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(6-((2-히드록시-2- 메틸프로필 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(( R )-6-((( R )-1- 메톡시프로판 -2-일)(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(( R )-6-((( S )-1- 메톡시프로판 -2-일)(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

( R )-2-((5-(2-(6-((1,3- 디메톡시프로판 -2-일)( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(( R )-6-((( R )-1-히드록시-3- 메톡시프로판 -2-일)(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(( R )-6-((( S )-1-히드록시-3- 메톡시프로판 -2-일)(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-((3 R )-6-((3-히드록시-2- 메톡시프로필 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-((3 R )-6-((2,3- 디메톡시프로필 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

( *R )- N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(1-((3-히드록시프로필)( 메틸 )아미노)-4-메틸펜탄-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

( *R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(1-((3- 메톡시프로필 )( 메틸 )아미노)-4-메틸펜탄-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

( *R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(1-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-4-메틸펜탄-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

( *R )-2-((5-(2-(1-((3-아미노-3- 옥소프로필 )( 메틸 )아미노)-4- 메틸펜탄 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(( R )-6-((( R )-2-히드록시-3- 메톡시프로필 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(( R )-6-((( S )-2-히드록시-3- 메톡시프로필 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드 포르메이트

2-((5-(2-((3 R )-6-((4-(디메틸아미노)-4- 옥소부탄 -2-일)( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-((3 R )-6-((3-(디메틸아미노)-2- 메틸 -3- 옥소프로필 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(( R )-2- 메틸 -6-( 메틸(( R )-4-(메틸아미노) -4-옥소부탄-2-일)아미노)헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(( R )-2- 메틸 -6-( 메틸(( S )-4-(메틸아미노) -4-옥소부탄-2-일)아미노)헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(( R )-2- 메틸 -6-( 메틸(( R )-2-메틸-3-(메틸아미노) -3-옥소프로필)아미노)헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(( R )-2- 메틸 -6-( 메틸(( S )-2-메틸-3-(메틸아미노) -3-옥소프로필)아미노)헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

2-((5-(2-(( *R )-6-((( R )-4-아미노-4- 옥소부탄 -2-일)( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-(( *R )-6-((( S )-4-아미노-4- 옥소부탄 -2-일)( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-(( *R )-6-((( R )-3-아미노-2- 메틸 -3- 옥소프로필 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-(( *R )-6-((( S )-3-아미노-2- 메틸 -3- 옥소프로필 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-((3 * R ,5 *R )-6-(디메틸아미노)-5- 메톡시 -2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-2-((5-(2-((3 * R ,5 *R )-6-( 에틸(메틸)아미노 )-5- 메톡시 -2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-((3 * R ,5 *S )-6-(디메틸아미노)-5- 메톡시 -2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-2-((5-(2-((3 * R ,5 *S )-6-( 에틸(메틸)아미노 )-5- 메톡시 -2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(5-히드록시-6-( 이소프로필(메틸)아미노 )-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-(6-( 디에틸아미노 )-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-(6-(디메틸아미노)-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-((3 * S ,5 *S )-6-(디메틸아미노)-5- 메톡시 -2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-((3 * S ,5 *R )-6-(디메틸아미노)-5- 메톡시 -2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-2-((5-(2-((3 * S ,5 *S )-6-( 에틸(메틸)아미노 )-5- 메톡시 -2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-2-((5-(2-((3 * S ,5 *R )-6-( 에틸(메틸)아미노 )-5- 메톡시 -2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(5-히드록시-2- 메틸 -6-( 메틸(프로필)아미노 )헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-(6-( 에틸(메틸)아미노 )-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드

( R )-2-((3- 클로로 -5-(2-(6-(디메틸아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 포르메이트

방법 A에 의해 화합물 27에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 화합물을 합성하였다.

화합물 401, 415

( R )- N -(에틸- ¹³ C ₂ )-5-플루오로-2-((5-(2-(6-((2-메톡시에틸)(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -(프로판-2-일- ¹³ C ₃ )벤즈아미드

( R )-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -메틸벤즈아미드

방법 C에 의해 화합물 27에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 화합물을 합성하였다.

화합물 107, 108

( *R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((4-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)피리다진-3-일)옥시)벤즈아미드

( *S )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((4-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)피리다진-3-일)옥시)벤즈아미드

N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필-2-((4-(2-(6-((2-메톡시에틸)(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)피리다진-3-일)옥시)벤즈아미드 (화합물 82) (47.0 mg)를 DAICEL CHIRALPAK IE에서 SFC (컬럼: 250x30 mm 10um; 용출제: 100% MeOH (0.1% 암모니아); 유량: 25 ml/분)로 정제하여 표제 화합물인 화합물 107 (19.0 mg, 40%) 및 화합물 108 (21.2 mg, 45%)을 백색 고체로서 수득하였다.

화합물 117, 118

( *R )-5- 플루오로 - N , N - 디이소프로필 -2-((4-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)피리다진-3-일)옥시)벤즈아미드

( *S )-5- 플루오로 - N , N - 디이소프로필 -2-((4-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)피리다진-3-일)옥시)벤즈아미드

5-플루오로-N,N-디이소프로필-2-((4-(2-(6-((2-메톡시에틸)(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)피리다진-3-일)옥시)벤즈아미드 (화합물 87) (300 mg)를 CHIRALPAK AD-H에서 키랄 HPLC (컬럼: 5x25 cm, 10 um; 등용매 용출: n-헥산/EtOH/DEA =90/10/0.1 (v/v/v); 유량: 60 mL/분, 온도: 35℃)로 정제하여 표제 화합물인 화합물 117 (122.8 mg) 및 화합물 118 (137.0 mg) 둘 다를 백색 고체로서 수득하였다.

화합물 109, 110

( *R )-5- 플루오로 - N , N - 디이소프로필 -2-((5-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

( *S )-5- 플루오로 - N , N - 디이소프로필 -2-((5-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

5-플루오로-N,N-디이소프로필-2-((5-(2-(6-((2-메톡시에틸)(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 (화합물 93) (110 mg)를 먼저, DAICEL CHIRALPAK AD에서 분취용 키랄 HPLC (컬럼: 5x25 cm 10 um; 이동상: A: n-헥산, B: 에탄올/DEA=10/0.1(v/v), A:B=90:10 (60 mL/분); 컬럼 온도: 38℃)로 분리하고, 추가로, Phenomenex Gemini NX를 사용하여 분취용 HPLC (컬럼: 75x30 mm 3um; 이동상 A: 물 (0.05% NH₃H₂O+10 mM NH₄HCO₃), B: ACN, 구배: 50% B~80% B; 유량: 25 mL/분)로 정제하여 표제 화합물인 화합물 109 (27 mg) 및 화합물 110 (27 mg)을 수득하였다.

화합물 69

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(6-((2- 메톡시 -2- 메틸프로필 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

NaBH₃CN (42 mg, 0.666 mmol)을 MeOH (5 mL) 중 2-((5-(2-(6-아미노-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필벤즈아미드 (화합물 3) (200 mg, 0.333 mmol) 및 2-메톡시-2-메틸프로파날 (72 mg, 0.333 mmol)의 혼합물에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 반응 혼합물을 DCM으로 희석시키고, 10% K₂CO₃ 수용액으로 염기성화하였다. 유기 층을 경사시키고, Chromabond®를 통해 여과시키고, 건조상태까지 증발시켰다. 잔사를 실리카 겔에서 크로마토그래피로 2회 정제하였다 (불규칙 SiOH, 24 g; 이동상: 구배: 0.3% NH4OH, 3% MeOH, 97% DCM으로부터 1% NH4OH, 10% MeOH, 90% DCM까지). 순수한 분획을 수집하고, 건조상태까지 증발시켜 표제 화합물 (68 mg, 33%의 수율)을 수득하였다.

LC-MS ( ESI ) (방법 4): R_t = 2.39분, m/z 실측치 614.8 [M+H]⁺.

화합물 14, 17, 255, 82, 87

( R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(2- 메틸 -6-((3,3,3- 트리플루오로프로필 )아미노)헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

( R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(2- 메틸 -6-((2,2,2- 트리플루오로에틸 )아미노)헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

( R )-2-((5-(2-(6-((1,3-디히드록시프로판-2-일)( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((4-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)피리다진-3-일)옥시)벤즈아미드

5- 플루오로 - N , N - 디이소프로필 -2-((4-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)피리다진-3-일)옥시)벤즈아미드

화합물 69에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 화합물을 합성하였다.

화합물 21

( R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(2- 메틸 -6-( 메틸(2,2,2-트리플루오로에틸)아미노 )헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

ACN (1 mL) 중 (R)-N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필-2-((5-(2-(2-메틸-6-(메틸아미노)헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 히드로클로라이드 (화합물 19) (50 mg, 0.086 mmol), 2,2,2-트리플루오로에틸 트리플루오로메탄술포네이트 (60.2 mg, 0.259 mmol) 및 K₂CO₃ (112 mg, 0.865 mmol)의 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 여과시키고, 여과액을 Phenomenex Gemini-NX에서 분취용 HPLC (컬럼: 80x40 mm 3 um, 이동상 A: 물 (0.05% 암모니아 + 10 mM NH₄HCO₃), 이동상 B: ACN, 유량: 25 mL/분, 구배 조건 B/A 52% B~82%)로 정제하여 표제 화합물 (12.06 mg, 97%의 순도, 22%의 수율)을 갈색 오일로서 수득하였다.

LC-MS ( ESI ) (방법 2): R_t = 2.345분, m/z 실측치 624.3 [M+H]⁺.

화합물 15, 23, 247, 253

( R )-2-((5-(2-(6-((2,2- 디플루오로에틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

( R )-2-((5-(2-(6-((2-(디메틸아미노)-2- 옥소에틸 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-((3 R )-6-((2- 메톡시프로필 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-((3 S )-6-((2- 메톡시프로필 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

화합물 21에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 화합물을 합성하였다.

화합물 24

( *S )-2-((5-(2-(1-아미노-3- 메틸부탄 -2-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

EtOH (2 mL) 중 (*S)-2-((5-(2-(1-(1,3-디옥소이소인돌린-2-일)-3-메틸부탄-2-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필벤즈아미드 (중간체 18) (0.05 g, 0.079 mmol)의 용액에 수산화히드라지늄 (0.127 g, 3.97 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 8시간 동안 교반시켰다. 반응물을 감압 하에 농축시키고, 잔사를 Boston Prime에서 분취용 HPLC (컬럼: C18 150x30 mm 5 um, 이동상 A: 물 (0.04% 암모니아+10 mM NH₄HCO₃), 이동상 B: ACN, 유량: 30 mL/분, 구배 조건 B/A 25%~55%)로 정제하여 표제 화합물 (5.74 mg, 99.5%의 순도, 14.4%의 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.

LC-MS ( ESI ) (방법 1): R_t = 2.94분, m/z 실측치 500.4 [M+H]⁺.

SFC (방법 7): R_t = 5.183분.

화합물 25

( *R )-2-((5-(2-(1-아미노-3- 메틸부탄 -2-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

화합물 24에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 화합물을 합성하였다.

화합물 35

( *R )-2-((5-(2-(2,6-디메틸-6-( 메틸아미노 )헵탄-3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 히드로클로라이드

Ar 하에 i-PrOH (5 mL) 중 벤질 (*R)-(5-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-2,6-디메틸헵탄-2-일)(메틸)카르바메이트 (중간체 40) (210 mg, 0.298 mmol) 및 HCl (18 μL, 0.22 mmol )의 혼합물에 Pd/C (20 mg, 10%)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 H₂ (15 PSI) 분위기 하에 25℃에서 12시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 여과시키고, 여과액을 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 제공하고, 이를 추가로, Phenomenex Gemini-NX에서 분취용 HPLC (컬럼: 150x30 mm 5 um, 이동상 A: H₂O (0.05% HCl), 이동상 B: ACN, 유량: 35 mL/분, 구배 조건 B/A 3%~29%)로 정제하여 표제 화합물 (170 mg, 98%의 순도, 92%의 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.

LC-MS ( ESI ) (방법 2): R_t = 2.040분, m/z 실측치 570.3 [M+H]⁺.

SFC (방법 8): R_t = 2.145분.

화합물 36

( *S )-2-((5-(2-(2,6-디메틸-6-( 메틸아미노 )헵탄-3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 히드로클로라이드

화합물 35에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 화합물을 합성하였다.

화합물 39

1-(((( R )-4-(6-(6-(2-( 에틸(이소프로필)카르바모일 )-4- 플루오로페녹시 )-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥실)카르바모일)옥시)에틸 이소부티레이트

무수 DMF (5 mL) 중 (R)-2-((5-(2-(6-아미노-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필벤즈아미드 (화합물 64) (150 mg, 조 물질), 1-(((4-nitro페녹시)카르보닐)옥시)에틸 이소부티레이트 (102 mg, 0.343 mmol) 및 TEA (144 mg, 1.42 mmol)의 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 제공하고, 이를 추가로, Boston Prime에서 분취용 HPLC (컬럼: C18 150x30 mm 5 um, 이동상 A: H₂O (0.04% 암모니아+10 mM NH₄HCO₃), 이동상 B: ACN, 유량: 25 mL/분, 구배 조건 B/A 55%~85%)로 정제하여 표제 화합물 (82.20 mg)을 황색 고체로서 수득하였다.

LC-MS ( ESI ) (방법 1): R_t = 3.901분, m/z 실측치 686.3 [M+H]⁺.

화합물 40, 41, 42

1-(((( R )-4-(6-(6-(2-( 에틸(이소프로필)카르바모일 )-4- 플루오로페녹시 )-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥실)(메틸)카르바모일)옥시)에틸 이소부티레이트

1-(((( *R )-5-(6-(6-(2-( 에틸(이소프로필)카르바모일 )-4- 플루오로페녹시 )-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-2,6-디메틸헵탄-2-일)카르바모일)옥시)에틸 이소부티레이트 포르메이트

1-(((( *S )-5-(6-(6-(2-( 에틸(이소프로필)카르바모일 )-4- 플루오로페녹시 )-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-2,6-디메틸헵탄-2-일)카르바모일)옥시)에틸 이소부티레이트

화합물 39에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 화합물을 합성하였다.

화합물 43

(* R )-4-(6-(6-(2-(4- 시클로프로필피리미딘 -5-일)-4- 플루오로페녹시 )-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥산아미드

NH₄OH (10 mL) 및 1,4-디옥산 (5 mL) 중 메틸 (*R)-4-(6-(6-(2-(4-시클로프로필피리미딘-5-일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥사노에이트 (중간체 48) (110 mg, 0.178 mmol)의 혼합물에 NH₄Cl (95 mg, 1.78 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 40℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 실온까지 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 진공에서 농축시키고, 잔사를 Boston Prime을 사용하여 분취용 HPLC (컬럼: C18 150x30 mm 5 um; 용출제: ACN/H₂O (0.04% 암모니아+10 mM NH₄HCO₃) 30%~60% (v/v))로 정제하여 표제 화합물 (34 mg, 34%)을 백색 고체로서 수득하였다.

LC-MS ( ESI ) (방법 1): R_t = 3.287분, m/z 실측치 547.2 [M+H]⁺.

SFC (방법 9): R_t = 6.275분.

화합물 44

화합물 43에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 화합물을 합성하였다.

화합물 50

4-(6-(6-(2-(4- 시클로프로필피리미딘 -5-일)-4- 플루오로페녹시 )-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)- N ,5-디메틸헥산아미드

메탄아민 히드로클로라이드 (600 mg, 8.89 mmol)를 MeNH₂/EtOH (33%, 20 mL) 중 메틸 4-(6-(6-(2-(4-시클로프로필피리미딘-5-일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥사노에이트 (중간체 47) (500 mg, 0.890 mmol)로 이루어진 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 5시간 동안 교반시켰다. 실온까지 냉각시킨 후, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 추가로 FCC (DCM/MeOH = 10:1)로 정제하여 표제 화합물 (100 mg, 18%의 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.

화합물 45 및 46

( *S )-4-(6-(6-(2-(4- 시클로프로필피리미딘 -5-일)-4- 플루오로페녹시 )-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)- N ,5-디메틸헥산아미드

( *R )-4-(6-(6-(2-(4- 시클로프로필피리미딘 -5-일)-4- 플루오로페녹시 )-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)- N ,5-디메틸헥산아미드

4-(6-(6-(2-(4-시클로프로필피리미딘-5-일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-N,5-디메틸헥산아미드 (화합물 50) (250 mg, 0.446 mmol)를 DAICEL CHIRALPAK AS에서 SFC (250x30 mm 10 um) (용출제: EtOH (0.1% v/v 암모니아) 중 초임계 CO₂ 20/20, v/v)로 정제하여 표제 화합물인 화합물 45 (81.10 mg, 98%의 순도, 32%의 수율) 및 화합물 46 (72.53 mg, 98%의 순도, 28%의 수율) 둘 다를 백색 고체로서 수득하였다.

화합물 45

LC-MS ( ESI ) (방법 1): R_t = 3.323분, m/z 실측치 561.2 [M+H]⁺.

SFC (방법 10): R_t = 3.880분.

화합물 46

LC-MS ( ESI ) (방법 1): R_t = 3.353분, m/z 실측치 561.2 [M+H]⁺.

SFC (방법 10): R_t = 3.707분.

화합물 49

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(6-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

MeOH (2 mL) 중 2-((5-(2-(6-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필벤즈아미드 (중간체 55) (217 mg, 0.338 mmol)의 용액에 4-메틸벤젠술폰산 (203 mg, 1.18 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 제공하고, 이를 추가로, Phenomenex Gemini NX-C18을 사용하여 분취용 HPLC (컬럼: 75x30 mm 3 μm; 용출제: ACN/H₂O (0.04% 암모니아+10 mM NH₄HCO₃) 35%~60% (v/v))로 정제하여 표제 화합물 (45 mg, 25%의 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.

화합물 47 및 48

( *R )- N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(6-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

( *S )- N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(6-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

N-에틸-5-플루오로-2-((5-(2-(6-히드록시-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-N-이소프로필벤즈아미드 (화합물 49) (45.0 mg, 0.0850 mmol )를 추가로, DAICEL CHIRALPAK IG에서 SFC (250x30 mm 10 um) (용출제: 40%~40% (v/v)의, 0.1% 암모니아를 함유하는 EtOH 중 초임계 CO₂)로 정제하여 표제 화합물인 화합물 47 (17.38 mg, 39%의 수율) 및 화합물 48 (15.79 mg, 35%의 수율) 둘 다를 백색 고체로서 수득하였다.

화합물 47

LCMS ( ESI ) (방법 1): R_t = 3.240분, m/z 실측치 529.2 [M+H]⁺.

SFC (방법 11): R_t = 4.778분

화합물 48

LCMS ( ESI ) (방법 1): R_t = 3.212분, m/z 실측치 529.3 [M+H]⁺.

SFC (방법 11): R_t= 5.161분.

화합물 64

( R )-2-((5-(2-(6-아미노-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

DCM (4 mL) 중 tert-부틸 (R)-(4-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥실)카르바메이트 (화합물 62) (550 mg, 0.876 mmol)의 용액에 TFA (4 mL)를 서서히 첨가하고, 생성된 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 잔사를 제공하였다. 잔사를 DCM (40 mL)에 희석시키고, pH 값을 NaOH (2 M, 16 mL) 수용액으로 대략 12로 조정하였다. 수성 층을 DCM (10 mL x 2)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켜 표제 화합물 (460 mg, 조 물질)을 황색 고체로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다.

화합물 97

2-((5-(2-(6-아미노-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드

화합물 64에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 화합물을 합성하였다.

화합물 65

( R )-2-((5-(2-(6-아미노-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 히드로클로라이드

1,4-디옥산 (5 mL) 중 tert-부틸 (R)-(4-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥실)카르바메이트 (화합물 62) (250 mg, 0.398 mmol)의 용액에 디옥산 중 4 M HCl의 용액 (10 mL, 40 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시켜 표제 화합물 (220 mg, 조 물질, HCl 염)을 황색 오일로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다.

화합물 67

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(2- 메틸 -6-( 메틸아미노 ) 헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 히드로클로라이드

DCM (10 mL) 중 tert-부틸 (4-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥실)(메틸)카르바메이트 (화합물 60) (1 g, 1.56 mmol)의 용액에 디옥산 중 4 M HCl (5 mL, 20 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시켜 표제 화합물 (960 mg, 조 물질, HCl 염)을 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다.

화합물 66, 73, 92

( S )-2-((5-(2-(6-아미노-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 히드로클로라이드

2-((4-(2-(6-아미노-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일) 피리다진 -3-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드 히드로클로라이드

5- 플루오로 - N , N - 디이소프로필 -2-((5-(2-(2- 메틸 -6-( 메틸아미노 ) 헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 히드로클로라이드

화합물 65 및 화합물 67에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 화합물을 합성하였다.

화합물 86

5- 플루오로 - N , N - 디이소프로필 -2-((4-(2-(2- 메틸 -6-( 메틸아미노 ) 헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)피리다진-3-일)옥시)벤즈아미드

0℃에서 냉각시킨 1,4-디옥산 (10 mL) 중 tert-부틸 (4-(6-(3-(2-(디이소프로필카르바모일)-4-플루오로페녹시)피리다진-4-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥실)(메틸)카르바메이트 (화합물 85) (1.0 g, 1.5 mmol)의 용액에 1,4-디옥산 중 4 M HCl의 용액 (5 mL, 20 mmol)을 일부씩 첨가하였다. 생성된 혼합물을 서서히 25℃까지 가온하고, 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 DCM (30 mL)에 재용해시켰다. 그 후, 1 M NaOH (20 mL)를 첨가하여 pH 값을 약 12로 조정하였다. 생성된 혼합물을 추가로 DCM (30 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켜 표제 화합물 (1.26 g, 조 물질)을 황색 고체로서 수득하고, 이를 추가 정제 없이 다음 단계에서 직접적으로 사용하였다.

화합물 58, 59, 213, 234, 235, 260, 303, 79, 85, 91, 72, 96, 206, 316, 327, 338, 339, 348, 349, 358, 381, 399, 403

tert -부틸 (5-(6-(6-(2-(4-시클로프로필피리미딘-5-일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-2,6-디메틸헵탄-2-일)카르바메이트

tert -부틸 (5-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-2,6-디메틸헵탄-2-일)카르바메이트

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(1-히드록시-4- 메틸펜탄 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-((5 *R )-6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2,5-디메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-((5 *S )-6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2,5-디메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(6-히드록시-2,4- 디메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

tert -부틸 (4-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-2-메톡시-5-메틸헥실)(메틸)카르바메이트

tert -부틸 (4-(6-(3-(2-( 에틸(이소프로필)카르바모일 )-4- 플루오로페녹시 )피리다진-4-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥실)(메틸)카르바메이트

tert -부틸 (4-(6-(3-(2-( 디이소프로필카르바모일 )-4- 플루오로페녹시 ) 피리다진 -4-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥실)(메틸)카르바메이트

tert -부틸 (4-(6-(6-(2-( 디이소프로필카르바모일 )-4- 플루오로페녹시 )-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥실)(메틸)카르바메이트

tert -부틸 (4-(6-(3-(2-( 디이소프로필카르바모일 )-4- 플루오로페녹시 ) 피리다진 -4-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥실)카르바메이트

tert -부틸 (4-(6-(6-(2-( 디이소프로필카르바모일 )-4- 플루오로페녹시 )-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥실)카르바메이트

tert -부틸 (5-(6-(6-(2-( 에틸(이소프로필)카르바모일 )-4- 플루오로페녹시 )-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-6-메틸헵틸)카르바메이트

tert -부틸 (4-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-2-히드록시-5-메틸헥실)(메틸)카르바메이트

tert -부틸 에틸(4-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-2-히드록시-5-메틸헥실)카르바메이트

N -에틸-2-((5-(2-((5 S )-6-( 에틸(메틸)아미노 )-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-2-((5-(2-((5 R )-6-( 에틸(메틸)아미노 )-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-((5 S )-5-히드록시-6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-((5 R )-5-히드록시-6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

tert -부틸 (4-(6-(6-(2-(디이소프로필카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-2-히드록시-5-메틸헥실)(메틸)카르바메이트

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(5-히드록시-6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2,5-디메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일-3- d )-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

tert -부틸 (4-(6-(3-클로로-6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥실)카르바메이트

화합물 60 및 화합물 61에 대해 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 화합물을 합성하였다.

화합물 번호 399의 경우: LC-MS ( ESI ) (방법 8): Rt = 1.21분, m/z 실측치 601.6 [M+H]⁺

화합물 111

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(( R )-6-((( R )-1- 메톡시프로판 -2-일)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

DCM (2 mL) 중 (R)-N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필-2-((5-(2-(2-메틸-6-옥소헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 (중간체 97) (150 mg, 0.285 mmol) 및 (R)-1-메톡시프로판-2-아민 히드로클로라이드 (71.5 mg, 0.569 mmol) 및 TEA (288 mg, 2.85 mmol)의 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반시켰다. 그 후 NaBH(OAc)₃ (181 mg, 0.854 mmol)을 상기 혼합물에 첨가하고, 반응물을 추가로 25℃에서 추가 8시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 H₂O (20 mL)로 켄칭하고, DCM (30 mL*3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 분취용 HPLC (컬럼: Boston Green ODS 150x30 mm 5 um; 이동상: A: H₂O (0.05% 암모니아)), B: ACN, 유량: 30 mL/분, 구배 조건: 45% B~85% B)로 정제하여 표제 화합물 화합물 111 (63 mg, 98.5%의 순도, 36.3%의 수율)을 무색 점착성 오일로서 수득하였다.

화합물 113

( R )-2-((5-(2-(6-((3,3- 디플루오로프로필 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

MeOH (5 ml) 중 (R)-N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필-2-((5-(2-(2-메틸-6-옥소헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 (중간체 97) (160 mg, 0.304 mmol), 3,3-디플루오로프로판-1-아민 히드로클로라이드 (160 mg, 1.22 mmol) 및 TEA (128 mg, 1.27 mmol)의 혼합물을 먼저 실온에서 10분 동안 교반시켰다. 그 후 AcOH (39 mg, 0.649 mmol) 및 NaBH₃CN (77 mg, 1.26 mmol)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 추가 16시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켜 MeOH를 제거하였다. 생성된 잔사를 H₂O (30 mL)로 희석시키고, DCM (20 mL x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (10 mL x 2)로 세척하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 분취용 HPLC (컬럼: Boston Prime C18 150x30 mm 5 μm; 이동상: A: 물 (0.05% 암모니아), B: ACN; 구배 조건: 46% B~76% B (v/v))로 정제하여 표제 화합물인 화합물 113 (32 mg, 17%의 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.

화합물 115, 116, 119, 124, 129, 134, 138, 141, 143, 144, 147, 151, 155, 158, 162, 163, 168, 171, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 232, 244, 263, 264, 281, 284, 299

( *R )-5- 플루오로 - N , N - 디이소프로필 -2-((5-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

( *S )-5- 플루오로 - N , N - 디이소프로필 -2-((5-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(6-( 이소프로필(메틸)아미노 )-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(2- 메틸 -6-( 메틸(프로필)아미노 )헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

N -에틸-2-((5-(2-(6-( 에틸(메틸)아미노 )-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

( R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(6-((2- 메톡시 -2- 메틸프로필 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

( R )- N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(6-((2-히드록시-2- 메틸프로필 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

( R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(6-((3- 메톡시프로필 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

( *R )-2-((5-(2-(6-((3-(디메틸아미노)-3- 옥소프로필 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드

( *S )-2-((5-(2-(6-((3-(디메틸아미노)-3- 옥소프로필 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드

( R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(2- 메틸 -6-( 메틸(2-( N -메틸아세트아미도)에틸)아미노 )헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

( R )-2-((5-(2-(6-((4-(디메틸아미노)-4- 옥소부틸 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(( R )-6-((( S )-1- 메톡시프로판 -2-일)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

( R )-2-((5-(2-(6-((1,3- 디메톡시프로판 -2-일)아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(( R )-6-((( R )-1-히드록시-3- 메톡시프로판 -2-일)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(( R )-6-((( S )-1-히드록시-3- 메톡시프로판 -2-일)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-((3 R )-6-((3-히드록시-2- 메톡시프로필 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-((3 R )-6-((2,3- 디메톡시프로필 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-((3 R )-6-((4-(디메틸아미노)-4- 옥소부탄 -2-일)아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-((3 R )-6-((3-(디메틸아미노)-2- 메틸 -3- 옥소프로필 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(( R )-2- 메틸 -6-((( R )-4-( 메틸아미노 )-4-옥소부탄-2-일)아미노)헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(( R )-2- 메틸 -6-((( S )-4-( 메틸아미노 )-4-옥소부탄-2-일)아미노)헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(( R )-2- 메틸 -6-((( R )-2- 메틸 -3-(메틸아미노)-3-옥소프로필)아미노)헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(( R )-2- 메틸 -6-((( S )-2- 메틸 -3-(메틸아미노)-3-옥소프로필)아미노)헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

2-((5-(2-(( *R )-6-((( R )-4-아미노-4- 옥소부탄 -2-일)아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-(( *R )-6-((( S )-4-아미노-4- 옥소부탄 -2-일)아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-(( *R )-6-((( R )-3-아미노-2- 메틸 -3- 옥소프로필 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-(( *R )-6-((( S )-3-아미노-2- 메틸 -3- 옥소프로필 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드

( R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(6-((2- 메톡시에틸 -1,1- d ₂ )(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

( R )-2-((5-(2-(6-((2- 아세트아미도에틸 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2,4-디메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 ( R , S 와 S , R 의 혼합물; 또는 R , R 과 S , S 의 혼합물)

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2,4-디메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 ( R , R 과 S , S 의 혼합물; 또는 R , S 와 S , R 의 혼합물)

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(( R )-6-((( R )-2-히드록시-3- 메톡시프로필 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드 포르메이트

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(( R )-6-((( S )-2-히드록시-3- 메톡시프로필 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드 포르메이트

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-((3 R )-6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헵탄-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

화합물 111 및 화합물 113에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 화합물을 합성하였다.

화합물 120 및 121

( *R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(6-( 이소프로필(메틸)아미노 )-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

( *S )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(6-( 이소프로필(메틸)아미 노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필-2-((5-(2-(6-(이소프로필(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 (화합물 119) (100 mg)를 DAICEL CHIRALPAK IG에서 SFC (컬럼: 250x30 mm 10 um; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: MeOH (0.1% 암모니아), A:B = 55:45 (70 mL/분); 컬럼 온도: 38℃; 노즐 압력: 100 Bar; 노즐 온도: 60℃; 증발기 온도: 20℃; 트리머 온도: 25℃; 파장: 220 nm)로 분리하여 표제 화합물인 (화합물 120) (22.1 mg) 및 (화합물 121) (32.5 mg) 둘 다를 연한 황색 고체로서 수득하였다.

화합물 125 및 126

( *R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(2- 메틸 -6-( 메틸(프로필)아미노 )헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

( *S )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(2- 메틸 -6-( 메틸(프로필) 아미노)헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필-2-((5-(2-(2-메틸-6-(메틸(프로필)아미노)헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 (화합물 124) (150 mg)를 DAICEL CHIRALPAK IG에서 키랄 HPLC (컬럼: 250x30 mm 10 um; 이동상 A: 헥산; 이동상 B: EtOH; 유량: 20 mL/분; 구배 조건 20% B~100% B)로 분리하여 표제 화합물인 (화합물 125) (38.0 mg) 및 (화합물 126) (27.2 mg) 둘 다를 연한 황색 고체로서 수득하였다.

화합물 130 및 131

( *R )- N -에틸-2-((5-(2-(6-( 에틸(메틸)아미노 )-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

( *S )- N -에틸-2-((5-(2-(6-( 에틸(메틸)아미노 )-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

N-에틸-2-((5-(2-(6-(에틸(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로-N-이소프로필벤즈아미드 (화합물 129) (300 mg)를 DAICEL CHIRALPAK IG에서 키랄 HPLC (컬럼: 250x30 mm 10 um; 이동상 A: 헥산; 이동상 B: EtOH; 유량: 20 mL/분; 구배 조건 20% B~100% B)로 분리하여 표제 화합물인 (화합물 130) (68.4 mg) 및 (화합물 131) (54.8 mg) 둘 다를 연한 황색 고체로서 수득하였다.

화합물 174 및 175

2-((5-(2-(( R )-6-(((* R )-2,3- 디메톡시프로필 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-(( R )-6-(((* S )-2,3- 디메톡시프로필 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-((3R)-6-((2,3-디메톡시프로필)(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필벤즈아미드 (화합물 173) (60 mg)를 DAICEL CHIRALPAK AD에서 SFC (컬럼: 250x30 mm 10 um; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: IPA (0.1% 암모니아), A: B=70%:30% 등용매 (v/v) (70 mL/분))로 정제하여 표제 화합물인 (화합물 174) (10 mg) 및 (화합물 175) (10 mg) 둘 다를 무색 점착성 오일로서 수득하였다.

화합물 182 및 183

2-((5-(2-(( R )-6-((( *R )-4-(디메틸아미노)-4- 옥소부탄 -2-일)( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-(( R )-6-((( *S )-4-(디메틸아미노)-4- 옥소부탄 -2-일)( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-((3R)-6-((4-(디메틸아미노)-4-옥소부탄-2-일)(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필벤즈아미드 푸마레이트 (화합물 179) (58.0 mg)를 DAICEL CHIRALPAK IG에서 SFC (컬럼: 250x30 mm 10 um; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: EtOH (0.1% 암모니아), A:B = 45:55 (80 mL/분); 컬럼 온도: 38℃; 노즐 압력: 100 Bar; 노즐 온도: 60℃; 증발기 온도: 20℃; 트리머 온도: 25℃; 파장: 220 nm)로 분리하여 표제 화합물인 (화합물 182) (12.0 mg) 및 (화합물 183) (16.0 mg) 둘 다를 무색 점착성 오일로서 수득하였다.

화합물 186 및 187

2-((5-(2-(( R )-6-((( *R )-3-(디메틸아미노)-2- 메틸 -3- 옥소프로필 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-(( R )-6-((( *S )-3-(디메틸아미노)-2- 메틸 -3- 옥소프로필 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-((3R)-6-((3-(디메틸아미노)-2-메틸-3-옥소프로필)(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필벤즈아미드 (화합물 180) (42.0 mg)를 DAICEL CHIRALPAK AD-H에서 SFC (컬럼: 250x30 mm 5 um; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: IPA (0.1% 암모니아), A:B =70:30 (60 mL/분); 컬럼 온도: 38℃; 노즐 압력: 100 Bar; 노즐 온도: 60℃; 증발기 온도: 20℃; 트리머 온도: 25℃; 파장: 220 nm)로 분리하여 표제 화합물인 (화합물 186) (20.0 mg) 및 (화합물 187) (20.0 mg) 둘 다를 연한 황색 점착성 오일로서 수득하였다.

화합물 214 및 215

( *R )- N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(1-히드록시-4- 메틸펜탄 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

( *S )- N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(1-히드록시-4- 메틸펜탄 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

N-에틸-5-플루오로-2-((5-(2-(1-히드록시-4-메틸펜탄-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-N-이소프로필벤즈아미드 (화합물 213) (300 mg, 조 물질)를 먼저, Phenomenex Gemini-NX에서 분취용 HPLC (컬럼: C18 75x30 mm 3 um; 용출제: ACN/H₂O (0.05% 암모니아+10 mM NH₄HCO₃) 30%~60%, v/v)로 정제하여 순수한 생성물 (100 mg)을 수득하였다. 이 순수한 생성물을 추가로, DAICEL CHIRALPAK IG에서 SFC (컬럼: 250x30 mm 10 μm; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: MeOH (0.1% 암모니아 함유), A:B = 45%:55% 등용매 용출)로 정제하여 표제 화합물인 (화합물 214) (38.8 mg) 및 (화합물 215) (40.7 mg) 둘 다를 백색 고체로서 수득하였다.

화합물 214

LC-MS ( ESI ) (방법 1): R_t = 3.000분, m/z 실측치 515.2 [M+H]⁺.

SFC (방법 22): R_t = 4.406분.

화합물 215

LC-MS ( ESI ) (방법 1): R_t = 3.145분, m/z 실측치 515.2 [M+H]⁺.

SFC (방법 22): R_t = 4.925분.

화합물 216 및 217

tert -부틸 ( *R )-(3-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-4-메틸펜틸)카르바메이트

tert -부틸 ( *S )-(3-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-4-메틸펜틸)카르바메이트

Tert-부틸 (3-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-4-메틸펜틸)카르바메이트 (화합물 51) (1.00 g)를 DAICEL CHIRALPAK IG에서 SFC (컬럼: 250x30 mm 10 um; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: MeOH (0.1% 암모니아), A:B = 60:40 (v/v))로 정제하여 표제 화합물인 (화합물 216) (400 mg) 및 (화합물 217) (450 mg) 둘 다를 백색 고체로서 수득하였다.

화합물 230

( *R )-2-((5-(2-(1-((2-아미노-2- 옥소에틸 )아미노)-4- 메틸펜탄 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

THF (2 mL) 중 (*R)-3-(6-(6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-4-메틸펜틸 메탄술포네이트 (중간체 124) (160 mg, 조 물질)의 용액을 THF (5 mL) 중 2-아미노아세트아미드 (150 mg, 2.03 mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 여과시키고, THF (20 mL)로 세척하였다. 여과액을 진공에서 농축시켜 조 생성물을 수득하고, 이를 Xtimate에서 분취용 HPLC (컬럼: C18 150x40 mm 5 um; 용출제: ACN/H₂O (0.05% 암모니아) 25%~55%, v/v)로 정제하여 표제 화합물 (22.1 mg)을 백색 고체로서 수득하였다.

LC-MS ( ESI ) (방법 1): R_t = 2.849분, m/z 실측치 571.2 [M+H]⁺.

SFC (방법 6): R_t = 1.598분.

화합물 267, 269, 271, 272, 273, 277

( *R )- N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(1-((2- 히드록시에틸 )아미노)-4- 메틸펜탄 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

( *R )- N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(1-((2- 히드록시에틸 )( 메틸 )아미노)-4-메틸펜탄-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

( *R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(1-((3- 메톡시프로필 )아미노)-4-메틸펜탄-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

( *R )- N -에틸-2-((5-(2-(1-( 에틸아미노 )-4- 메틸펜탄 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 포르메이트

( *R )- N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(1-((3-히드록시프로필)아미노)-4- 메틸펜탄 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

( *R )-2-((5-(2-(1-((3-아미노-3- 옥소프로필 )아미노)-4- 메틸펜탄 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

화합물 230에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 화합물을 합성하였다.

화합물 236 및 237

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-((3 * R ,5 *R )-6-((2- 메톡시에틸 )(메틸)아미노)-2,5-디메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-((3 * S ,5 *R )-6-((2- 메톡시에틸 )(메틸)아미노)-2,5-디메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필-2-((5-(2-((5*R)-6-((2-메톡시에틸)(메틸)아미노)-2,5-디메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 (화합물 234) (89.0 mg)를 DAICEL CHIRALPAK AD에서 SFC (컬럼: 250x30 mm 10um; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: IPA (0.1% 암모니아), A:B = 80:20 (60 mL/분))로 정제하여 표제 화합물인 (화합물 236) (31.0 mg, 34%의 수율) 및 (화합물 237) (24.7 mg, 27%의 수율) 둘 다를 황색 점착성 고체로서 수득하였다.

화합물 238 및 239

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-((3 * R ,5 *S )-6-((2- 메톡시에틸 )(메틸)아미노)-2,5-디메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-((3 * S ,5 *S )-6-((2- 메톡시에틸 )(메틸)아미노)-2,5-디메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필-2-((5-(2-((5*S)-6-((2-메톡시에틸)(메틸)아미노)-2,5-디메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 (화합물 235) (51 mg)를 DAICEL CHIRALCEL OD에서 SFC-H (컬럼: 250x30 mm 5 um; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: EtOH (0.1% 암모니아), A:B = 85:15 (60 mL/분))로 정제하여 표제 화합물인 (화합물 238) (17.9 mg, 35%) 및 (화합물 239) (14.3 mg, 28%) 둘 다를 백색 고체로서 수득하였다.

화합물 248 및 249

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(( R )-6-((( *R )-2- 메톡시프로필 )(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(( R )-6-((( *S )-2- 메톡시프로필 )(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필-2-((5-(2-((3R)-6-((2-메톡시프로필)(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 (화합물 247) (70 mg)를 DAICEL CHIRALPAK AD-H에서 SFC (컬럼: 250x30 mm 5 μm; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: IPA (0.1% 암모니아), A:B = 75%:25% (60 mL/분))로 정제하여 표제 화합물인 (화합물 248) (10 mg) 및 (화합물 249) (30 mg) 둘 다를 연한 황색 점착성 오일로서 수득하였다.

화합물 261 및 262

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(6-히드록시-2,4- 디메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드 ( R , S 와 S , R 의 혼합물; 또는 R , R 과 S , S 의 혼합물)

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(6-히드록시-2,4- 디메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드 ( R , R 과 S , S 의 혼합물; 또는 R , S 와 S , R 의 혼합물)

N-에틸-5-플루오로-2-((5-(2-(6-히드록시-2,4-디메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-N-이소프로필벤즈아미드 (화합물 260) (5.0 g, 조 물질)를 HPLC (컬럼: Xtimate C18 150x40 mm 5 μm; 이동상: A: H₂O (0.05% 암모니아), B: ACN, 유량: 60 mL/분, 구배: 40% B~60% B)로 정제하여 표제 화합물인 (화합물 261) (220 mg) 및 (화합물 262) (300 mg) 둘 다를 백색 고체로서 수득하였다.

화합물 298

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-((3 R )-6-히드록시-2- 메틸헵탄 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

중간체 53에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 화합물을 합성하였다.

화합물 301

N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(6-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드

N₂ 분위기 하에 ACN (40 mL) 중 N-(2-메톡시에틸)-N,5-디메틸-4-(2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)헥산-1-아민 히드로클로라이드 (중간체 164) (2.10 g, 조 물질) 및 DBU (1.80 g, 11.8 mmol)의 용액에 N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필-2-((5-(2,2,2-트리플루오로에톡시)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 (중간체 159) (600 mg, 88%의 순도, 1.31 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 26℃에서 16시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 잔사를 Phenomenex Gemini-NX에서 분취용 HPLC (컬럼: 80x40 mm 3 μm, 이동상: A: H₂O (0.05% 암모니아), B: ACN, 유량: 30 mL/분, 구배 조건: 29% B~99% B)로 정제하여 표제 화합물 (130 mg)을 무색 오일로서 수득하였다.

화합물 319, 320, 321 및 322

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-((3 * R ,5 *R )-5-히드록시-6-( 이소프로필(메틸)아미노 )-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-((3 * S ,5 *S )-5-히드록시-6-( 이소프로필(메틸)아미노 )-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-((3 * R ,5 *S )-5-히드록시-6-( 이소프로필(메틸)아미노 )-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-((3 * S ,5 *R )-5-히드록시-6-( 이소프로필(메틸)아미노 )-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

N-에틸-5-플루오로-2-((5-(2-(5-히드록시-6-(이소프로필(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-N-이소프로필벤즈아미드 (화합물 318) (235 mg, 91.5%의 순도)를 먼저, Welch Xtimate에서 분취용 HPLC (컬럼: 150x25 mm 5 μm, 이동상 A: H₂O (0.2% FA), 이동상 B: ACN, 유량: 25 mL/분, 구배 조건: 2% B~32%)로 분리하여 (화합물 319 및 화합물 320)의 혼합물 (95 mg, LCMS에 의하면 88%의 순도) 및 (화합물 321 및 화합물 322)의 혼합물 (97 mg, LCMS에 의하면 81%의 순도)을 수득하였다.

(화합물 319 및 화합물 320)의 혼합물 (95 mg, LCMS에 의하면 88%의 순도) 및 (화합물 321 및 화합물 322)의 혼합물 (97 mg, LCMS에 의하면 81%의 순도)을 추가로 별개로, Welch Xtimate에서 분취용 HPLC (컬럼: C18 100x40 mm 3 μm, 이동상 A: H₂O (0.075% TFA), 이동상 B: ACN, 유량: 30 mL/분, 구배 조건: 10% B~40% B)로 정제하여 (화합물 319 및 화합물 320)의 혼합물 (73 mg, LCMS에 의하면 98.9%의 순도) 및 (화합물 321 및 화합물 322)의 혼합물 (70 mg, LCMS에 의하면 100%의 순도) 둘 다를 TFA 염으로서 수득하였다.

(화합물 319 및 화합물 320)의 혼합물 (70 mg, LCMS에 의하면 98.9%의 순도, TFA 염으로서)을 추가로, DAICEL CHIRALPAK IG에서 SFC (컬럼: 250x30 mm, 10 um); 이동상: A: 초임계 CO₂, B: MeOH (0.1% 암모니아), A:B = 40:60 (80 mL/분))로 분리하여 화합물 319 (15.5 mg) 및 화합물 320 (16.2 mg) 둘 다를 무색 점착성 오일로서 수득하였다.

(화합물 321 및 화합물 322)의 혼합물 (65 mg, LCMS에 의하면 100%의 순도, TFA 염으로서)을 추가로, DAICEL CHIRALPAK IG에서 SFC (컬럼: 250x30 mm, 10 um; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: MeOH (0.1% 암모니아), A:B = 65:35 (80 mL/분))로 분리하여 화합물 322 (24 mg) 및 또 다른 분획 (22 mg)을 수득하고, 상기 또 다른 분획을 추가로, DAICEL CHIRALPAK AD에서 SFC (컬럼: 250x30 mm, 10 um; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: EtOH (0.1% 암모니아), A:B = 75:25 (60 mL/분))로 분리하여 화합물 321 (16 mg)을 수득하였다.

화합물 330, 331, 332, 333

2-((5-(2-((3 * R ,5 *R )-6-( 디에틸아미노 )-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-((3 * S ,5 *S )-6-( 디에틸아미노 )-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-((3 * S ,5 *R )-6-( 디에틸아미노 )-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-((3 * R ,5 *S )-6-( 디에틸아미노 )-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-(6-(디에틸아미노)-5-히드록시-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필벤즈아미드 (화합물 329) (450 mg)를 먼저, Daicel CHIRALPAK AD에서 SFC (컬럼: 250x30 mm, 10 μm, 이동상: A: 초임계 CO₂, B: EtOH (0.1% 암모니아), A:B = 80:20 (60 mL/분))로 분리하여 (화합물 330 및 화합물 331)의 혼합물 (200 mg), 화합물 332 (70 mg, LCMS에 의하면 100%의 순도) 및 화합물 333 (170 mg, LCMS에 의하면 88.9%의 순도)을 수득하였다.

화합물 333 (170 mg, LCMS에 의하면 88.9%의 순도)을 추가로, Phenomenex Gemini-NX에서 분취용 HPLC (컬럼: 75x30 mm, 3 um, 이동상: A: H₂O (0.05% 암모니아 + 10 mM NH₄HCO₃), B: ACN, 구배 조건: 33% B~63%, 유량: 25 mL/분)로 정제하여 화합물 333 (69 mg, LCMS에 의하면 97.5%의 순도)을 수득하였다.

(화합물 330 및 화합물 331)의 혼합물 (200 mg)을 추가로, DAICEL CHIRALPAK IG에서 키랄 HPLC (컬럼: 250x30 mm, 10 μm, 이동상: A: 헵탄, B: EtOH (0.1% 암모니아), 구배 30% B~50%, 유량: 25 mL/분)로 분리하여 화합물 330 (60 mg, LCMS에 의하면 75%의 순도) 및 화합물 331 (60 mg, LCMS에 의하면 92%의 순도)을 수득하였다.

화합물 330 (60 mg, LCMS에 의하면 75%의 순도) 및 화합물 331 (60 mg, LCMS에 의하면 92%의 순도)을 추가로 별개로, Welch Xtimate에서 분취용 HPLC (컬럼: 150x25 mm, 5 μm; 이동상: A: H₂O (0.2% FA), B: ACN, 유량: 25 mL/분, 구배 조건: 2% B~32% B)로 정제하고, 암모니아로 염기성화하여 화합물 330 (29 mg, LCMS에 의하면 100%의 순도) 및 화합물 331 (23 mg, LCMS에 의하면 100%의 순도)을 수득하였다.

화합물 340 및 341

N -에틸-2-((5-(2-((3 * R ,5 S )-6-( 에틸(메틸)아미노 )-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-2-((5-(2-((3 * S ,5 S )-6-( 에틸(메틸)아미노 )-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

N-에틸-2-((5-(2-((5S)-6-(에틸(메틸)아미노)-5-히드록시-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로-N-이소프로필벤즈아미드 (화합물 338) (160 mg)를 DAICEL CHIRALPAK IG에서 SFC (컬럼: 250x30 mm, 10 μm; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: IPA (0.1% 암모니아), A: B = 55:45 (80 mL/분))로 분리하여 표제 화합물인 (화합물 340) (30 mg) 및 (화합물 341) (66 mg) 둘 다를 무색 오일로서 수득하였다.

화합물 344 및 345

N -에틸-2-((5-(2-((3 * R ,5 R )-6-( 에틸(메틸)아미노 )-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-2-((5-(2-((3 * S ,5 R )-6-( 에틸(메틸)아미노 )-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

N-에틸-2-((5-(2-((5R)-6-(에틸(메틸)아미노)-5-히드록시-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로-N-이소프로필벤즈아미드 (화합물 339) (200 mg)를 DAICEL CHIRALPAK IG에서 SFC (컬럼: 250x30 mm, 10 μm; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: EtOH (0.1% 암모니아), A:B = 45:55 (80 mL/분))로 분리하여 화합물 344 (100 mg, LCMS에 의하면 98.4%의 순도) 및 화합물 345 (70 mg, LCMS에 의하면 76%의 순도) 둘 다를 무색 점착성 고체로서 수득하였다.

화합물 347

N -에틸-2-((5-(2-((3 * S ,5 R )-6-( 에틸(메틸)아미노 )-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 포르메이트

N-에틸-2-((5-(2-((3* S,5R)-6-(에틸(메틸)아미노)-5-히드록시-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로-N-이소프로필벤즈아미드 (화합물 345) (70 mg, LCMS에 의하면 76%의 순도)를 추가로, Phenomenex Gemini-NX에서 분취용 HPLC (컬럼: 150x30 mm, 5 um; 이동상 A: H₂O (0.225% FA), 이동상 B: ACN, 유량: 35 mL/분, 구배 조건: 15% B~45% B)로 정제하여 표제 화합물 (40.0 mg, LCMS에 의하면 99.6%의 순도)을 백색 고체로서 수득하였다.

LC-MS ( ESI ) (방법 1): R_t = 2.891분, m/z 실측치 586.4 [M+H]⁺.

SFC (방법 8): R_t = 2.652분.

화합물 350 및 351

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-((3 * R ,5 S )-5-히드록시-6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-((3 * S ,5 S )-5-히드록시-6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

N-에틸-5-플루오로-2-((5-(2-((5S)-5-히드록시-6-((2-메톡시에틸)(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-N-이소프로필벤즈아미드 (화합물 348) (60 mg)를 DAICEL CHIRALPAK IG에서 SFC (컬럼: 250x30 mm, 10 um; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: EtOH (0.1% 암모니아), A:B = 55:45 (80 mL/분))로 분리하여 표제 화합물인 (화합물 350) (22 mg) 및 (화합물 351) (27.7 mg)을 수득하였다.

화합물 354 및 355

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-((3 * R ,5 R )-5-히드록시-6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-((3 * S ,5 R )-5-히드록시-6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

N-에틸-5-플루오로-2-((5-(2-((5R)-5-히드록시-6-((2-메톡시에틸)(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-N-이소프로필벤즈아미드 (화합물 349) (200 mg)를 DAICEL CHIRALPAK IG에서 SFC (컬럼: 250x30 mm, 10 um; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: EtOH (0.1% 암모니아), A:B = 50:50 (80 mL/분))로 분리하여 표제 화합물인 (화합물 354) (100 mg) 및 (화합물 355) (70 mg) 둘 다를 무색 점착성 고체로서 수득하였다.

화합물 361 및 362

2-((5-(2-((3 *R )-6-(디메틸아미노)-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-((3 *S )-6-(디메틸아미노)-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-(6-(디메틸아미노)-5-히드록시-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로-N,N-디이소프로필벤즈아미드 (화합물 360) (250 mg)를 DAICEL CHIRALPAK IG에서 SFC (컬럼: 250x30 mm, 10 um; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: IPA (0.1% 암모니아), A:B = 40:40 (80 mL/분))로 분리하여 표제 화합물인 (화합물 361) (105 mg) 및 (화합물 362) (120 mg) 둘 다를 백색 고체로서 수득하였다.

화합물 363 및 364

2-((5-(2-((3 * R ,5 *R )-6-(디메틸아미노)-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-((3 * R ,5 *S )-6-(디메틸아미노)-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-((3*R)-6-(디메틸아미노)-5-히드록시-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로-N,N-디이소프로필벤즈아미드 (화합물 361) (105 mg)를 Phenomenex-Cellulose-2에서 SFC (컬럼: 250x30 mm,10 um; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: 0.1%NH₃H₂O EtOH (0.1% 암모니아), A:B = 65:35 (80 mL/분))로 분리하여 표제 화합물인 (화합물 363) (45 mg) 및 (화합물 364) (35 mg) 둘 다를 무색 점착성 고체로서 수득하였다.

화합물 367 및 368

2-((5-(2-((3 * S ,5 *S )-6-(디메틸아미노)-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-((3 * S ,5 *R )-6-(디메틸아미노)-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-((3*S)-6-(디메틸아미노)-5-히드록시-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로-N,N-디이소프로필벤즈아미드 (화합물 362) (120 mg)를 DAICEL CHIRALPAK AS에서 SFC (컬럼: 250x30 mm,10um; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: EtOH (0.1% 암모니아), A:B = 75:25 (60 mL/분))로 분리하여 표제 화합물인 (화합물 367) (48 mg) 및 (화합물 368) (34 mg) 둘 다를 무색 오일로서 수득하였다.

화합물 384 및 385

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-((3 * R ,5 *R )-5-히드록시-2- 메틸 -6-( 메틸(프로필)아미노 )헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-((3 * S ,5 *S )-5-히드록시-2- 메틸 -6-( 메틸(프로필)아미노 )헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

N-에틸-5-플루오로-2-((5-(2-(5-히드록시-2-메틸-6-(메틸(프로필)아미노)헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-N-이소프로필벤즈아미드 (화합물 383) (432 mg)를 Welch Xtimate에서 분취용 HPLC (컬럼: C18 100x40 mm 3 μm, 이동상 A: H₂O (0.075%TFA), 이동상 B: ACN, 유량: 30 mL/분, 구배 조건: 10% B~40% B)로 정제하여 화합물 384와 화합물 385의 혼합물 (166 mg, TFA 염으로서)을 수득하였다.

화합물 384와 화합물 385의 혼합물 (166 mg, TFA 염)을 추가로, Daicel CHIRALPAK IG에서 키랄 HPLC (컬럼: 250x30 mm, 10 μm; 이동상: A: 헵탄, B: EtOH (0.1% 암모니아), 유량: 25 mL/분, 구배 조건: 20% B~50% B)로 분리하여 표제 화합물인 (화합물 384) (30.7 mg) 및 (화합물 385) (14.4 mg) 둘 다를 무색 점착성 오일로서 수득하였다.

화합물 389 및 390

2-((5-(2-((3 * R ,5 *S )-6-( 에틸(메틸)아미노 )-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-((3* S,5 *S)-6-( 에틸(메틸)아미노 )-5-히드록시-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N , N -디이소프로필벤즈아미드

2-((5-(2-(6-(에틸(메틸)아미노)-5-히드록시-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로-N,N-디이소프로필벤즈아미드 (화합물 388) (190 mg)를 먼저, Daicel CHIRALPAK IG에서 SFC (컬럼: 250x30 mm, 10 μm; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: EtOH (0.1% 암모니아), A:B = 60:40; 유량: 80 mL/분)로 분리하여 화합물 390 (45 mg) 및 3가지 부분입체 이성질체들의 혼합물 (120 mg)을 수득하였다.

상기 3가지 부분입체 이성질체들의 혼합물 (120 mg)을 추가로, Daicel Daicel CHIRALPAK IG에서 키랄 HPLC (컬럼: 250x30 mm, 10 μm), 이동상: A: 헵탄, B: EtOH (0.1% 암모니아), A:B = 70:30~50:50, 유량: 25 mL/분)로 분리하여 화합물 389 (22.0 mg, LCMS에 의하면 86.6%의 순도)를 수득하였다.

화합물 389 (22.0 mg, LCMS에 의하면 86.6%의 순도)를 추가로, Welch Xtimate에서 분취용 HPLC (컬럼: C18 150x25 mm 5 μm, 이동상: A: H₂O (0.2% FA), B: ACN, 구배 조건: 2% B~32%, 유량: 25 mL/분)로 정제하고, 암모니아로 염기성화하여 화합물 389 (15.0 mg, LCMS에 의하면 100%의 순도)를 수득하였다.

화합물 393

( R )-2-((3- 클로로 -5-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드

제조 방법 A:

무수 THF (15 mL) 중 N-에틸-5-플루오로-2-히드록시-N-이소프로필벤즈아미드 (중간체 28) (1.10 g, 4.88 mmol), (R)-4-(6-(3,6-디클로로-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-N-(2-메톡시에틸)-N,5-디메틸헥산-1-아민 (중간체 225) (1.70 g, 3.82 mmol) 및 DBU (750 mg, 4.93 mmol)의 혼합물을 40℃에서 8시간 동안 교반시켰다. 실온까지 냉각시킨 후, 상기 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 생성된 잔사를 DCM (60 mL)으로 희석시키고, H₂O (20 mL x 3)로 세척하였다. 유기 층을 무수 Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 제공하고, 이를 FCC (MeOH/DCM = 0%~10%)로 정제하여 황색 오일 (1.40 g)을 수득하고, 이를 추가로, DAICEL CHIRALPAK AD에서 SFC (컬럼: 250x50 mm,10 um; 이동상: A: 초임계 CO₂, B: EtOH (0.1% 암모니아), A:B = 50:50 (70 mL/분); 컬럼 온도: 38℃; 노즐 압력: 100 Bar; 노즐 온도: 60℃; 증발기 온도: 20℃; 트리머 온도: 25℃; 파장: 220nm)로 분리하여 표제 화합물 (1.0 g)을 수득하였다.

제조 방법 B:

(R)-4-(6-(3,6-디클로로-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아조스피로[3.4]옥탄-2-일)-N-(2-메톡시에틸)-N,5-디메틸헥산-1-아민 (중간체 225)의 2-MeTHF 용액 (2-MeTHF의 14.8 중량% 용액 676 g, 보정된 100 g의 중간체 225) 및 2-MeTHF (40 g) 중 N-에틸-5-플루오로-2-히드록시-N-이소프로필벤즈아미드 (중간체 28) (50.6 g) (20~30℃)에 테트라메틸구아니딘 (31 g)을 첨가하고, 혼합물을 40~48시간 동안 교반시켰다. 7% NaHCO₃ 수용액 (500 g)을 첨가하고, 혼합물을 30~60분 동안 교반시켰다. 수성 층을 제거하고, 유기 층을 4% NaOH 수용액 (2 x 500 g)으로 2회 및 10% Na₂SO₄ 수용액 (500 g)으로 1회 세척하였다. 유기 층을 감압 (<40℃)하에 2.2~3.0 부피까지 농축시키고, 2-MeTHF 및 물 둘 다의 함량이 ≤1.0%가 될 때까지 MeOH로 3회 플러싱 (1 x 790 g 및 2 x 395 g)하여 원하는 화합물을 메탄올 중 60.1 중량% 용액으로서 86% 분석 수율로 수득하였다.

화합물 400, 414

( R )-2-((3- 클로로 -5-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -(에틸- ¹³ C ₂ )-5-플루오로- N -(프로판-2-일- ¹³ C ₃ )벤즈아미드

( R )-2-((3- 클로로 -5-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-5-플루오로- N -이소프로필- N -메틸벤즈아미드

방법 A에 의해 화합물 393에 대해 위에서 설명한 것과 유사한 방법으로 하기 화합물을 합성하였다.

화합물 395

( R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((5-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )( 메틸 )아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-3-(메틸아미노)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 포르메이트

(R)-2-((3-클로로-5-(2-(6-((2-메톡시에틸)(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필벤즈아미드 (화합물 393) (100 mg, 0.158 mmol) 및 메탄아민 (1 mL, EtOH 중 33%)의 혼합물을 90℃에서 1시간 동안 교반시켰다. 실온까지 냉각시킨 후, 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 제공하고, 이를 분취용 HPLC (컬럼: Welch Xtimate C18 150x25 mm 5 um, 이동상 A: H₂O (0.2% FA), 이동상 B: ACN, 유량: 25 mL/분, 구배 조건: 5% B~35%)로 정제하여 표제 화합물 (49.8 mg, 43.6%의 수율)을 점착성 고체로서 수득하였다.

LC-MS ( ESI ) (방법 2): R_t = 1.997분, m/z 실측치 629.4 [M+H]⁺.

SFC (방법 6): R_t = 1.228분.

화합물 406 및 407

( R )-2-((5-(2-(6-아미노-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-3-클로로-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 포르메이트

( R )-2-((5-(2-(6-아미노-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6- 디아자스피로[3.4]옥탄 -6-일)-3-메톡시-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -에틸-5-플루오로- N -이소프로필벤즈아미드 포르메이트

MeOH (15.0 mL) 중 tert-부틸 (R)-(4-(6-(3-클로로-6-(2-(에틸(이소프로필)카르바모일)-4-플루오로페녹시)-1,2,4-트리아진-5-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-2-일)-5-메틸헥실)카르바메이트 (화합물 404) (1.10 g, 1.66 mmol)의 용액에 HCl/디옥산 (15.0 mL, 60.0 mmol, 4 M)을 첨가하고, 생성된 혼합물을 20℃에서 12시간 동안 교반시켰다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 Welch Xtimate에서 분취용 HPLC (컬럼: C18 150x25 mm, 5um, 이동상 A: H₂O (0.2%FA), 이동상 B: ACN, 유량: 25 mL/분, 구배 조건 3% B~33% B)로 정제하여 표제 화합물인 (화합물 406) (360 mg) 및 (화합물 407) (160 mg) 둘 다를 점착성 오일로서 수득하였다.

(화합물 406) (60 mg)을 추가로, Boston Green ODS에서 분취용 HPLC (컬럼: 150x30 mm, 5 um; 이동상 A: H₂O (0.225%FA), 이동상 B: ACN, 유량: 35 mL/분, 구배 조건 5% B~35% B)로 정제하여 표제 화합물 (화합물 406) (40 mg)을 수득하였다.

화합물 406

LC-MS ( ESI ) (방법 1): R_t = 3.400분, m/z 실측치 562.3 [M+H]⁺.

SFC (방법 32): R_t = 2.093분.

화합물 407

LC-MS ( ESI ) (방법 1): R_t = 2.028분, m/z 실측치 558.3 [M+H]⁺.

SFC (방법 6): R_t = 1.42분.

화합물 416

( R )- N -에틸-5- 플루오로 - N -이소프로필-2-((3- 메톡시 -5-(2-(6-((2- 메톡시에틸 )(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)벤즈아미드 포르메이트

무수 MeOH (2 mL) 중 (R)-2-((3-클로로-5-(2-(6-((2-메톡시에틸)(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필벤즈아미드 (화합물 393) (100 mg, 0.158 mmol)의 용액에 HCl (1.6 mL, 6.40 mmol, 디옥산 중 4 M)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 60시간 동안 교반시켰다. 상기 혼합물을 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 제공하고, 이를 분취용 HPLC (컬럼: Boston Green ODS 150x30 mm 5 um, 이동상 A: H₂O (0.225% FA), 이동상 B: ACN, 유량: 35 mL/분, 구배 조건 12% B~42% B)로 정제하여 표제 화합물 (70.6 mg, 65.2%의 수율)을 황색 점착성 고체로서 수득하였다.

LC-MS ( ESI ) (방법 2): Rt = 2.096분, m/z 실측치 630.4 [M+H]⁺.

SFC (방법 33): Rt = 2.587분.

화합물 286

( R )- N -에틸-5- 플루오로 -2-((5-(2-(6-((2- 히드록시에틸 )( 메틸 )아미노)-2- 메틸헥산 -3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)- N -이소프로필벤즈아미드

TBAF (79 μL; 0.079 mmol)를 실온의 THF (2 mL) 중 (R)-2-((5-(2-(6-((2-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)에틸)(메틸)아미노)-2-메틸헥산-3-일)-2,6-디아자스피로[3.4]옥탄-6-일)-1,2,4-트리아진-6-일)옥시)-N-에틸-5-플루오로-N-이소프로필벤즈아미드 (중간체 245) (46 mg, 0.066 mmol)의 용액에 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 20시간 동안 교반시키고, 그 후 얼음물에 붓고, EtOAc를 첨가하였다. 상기 혼합물을 10% K₂CO₃ 수용액으로 염기성화하고, 유기 층을 분리하고, 염수로 세척하고, MgSO₄로 건조시키고 여과시켰다. 용매를 건조상태까지 증발시켜 조 물질 (45 mg)을 제공하고, 이를 실리카 겔 크로마토그래피 (고정상: 불규칙 베어 실리카 4g, 이동상: 0.7% NH₄OH, 93% DCM, 7% MeOH)로 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획들을 혼합하고, 농축시켰다. 생성된 생성물을 ACN/H₂O 20/80으로 동결 건조시켜 표제 화합물 (30 mg, 78%의 수율)을 제공하였다.

LC-MS ( ESI ) (방법 4): R_t = 3.048분, m/z 실측치 586.6 [M+H]⁺; 644.6 [M+CH3COO]^-

분석 방법

하기 표에 있어서의 또는 상기 화합물에 있어서의 분석 정보는 아래에 설명된 분석 방법을 사용하여 생성되었다.

NMR-방법

일부 NMR 실험은 내부 중수소 잠금장치를 사용하고 z 경도의 BBO 400MHz S1 5 mm 프로브 헤드가 장착되고 양성자는 400 MHz, 탄소는 100 MHz에서 작동하는 Bruker Avance III 400 분광계를 사용하여 주위 온도(298.6K)에서 실시하였다. 화학적 이동(δ)은 백만분율(ppm) 단위로 기록된다. J 값은 Hz 단위로 표현된다.

일부 NMR 실험은 내부 중수소 잠금장치를 사용하고 z 경도의 Varian 400 4NUC PFG 프로브 헤드가 장착되고 양성자는 400 MHz, 탄소는 100 MHz에서 작동하는 Varian 400-MR 분광계를 사용하여 주위 온도(298.6K)에서 실시하였다. 화학적 이동(δ)은 백만분율(ppm) 단위로 기록된다. J 값은 Hz 단위로 표현된다.

일부 NMR 실험은 내부 중수소 잠금장치를 사용하고 z 경도의 Varian 400 ASW PFG 프로브 헤드가 장착되고 양성자는 400 MHz, 탄소는 100 MHz에서 작동하는 Varian 400-VNMRS 분광계를 사용하여 주위 온도(298.6K)에서 실시하였다. 화학적 이동(δ)은 백만분율(ppm) 단위로 기록된다. J 값은 Hz 단위로 표현된다.

일부 NMR 실험은 내부 중수소 잠금장치를 사용하고 z 경도의 PA BBO 300S1 BBF-H-D-05 Z 5 mm 프로브 헤드가 장착되고 양성자는 300 MHz, 탄소는 75 MHz에서 작동하는 Bruker AVANCE III HD 300 분광계를 사용하여 주위 온도(298.6K)에서 실시하였다. 화학적 이동(d)은 백만분율(ppm) 단위로 기록된다. J 값은 Hz 단위로 표현된다.

LCMS (액체 크로마토그래피/질량 분광법)

일반 절차

고성능 액체 크로마토그래피(HPLC) 측정을 LC 펌프, 다이오드-어레이(DAD) 또는 UV 검출기, 및 각각의 방법에 명시된 바와 같은 컬럼을 사용하여 수행하였다. 필요한 경우, 추가의 검출기를 포함시켰다(하기의 방법에 대한 표를 참조).

컬럼으로부터의 유동물을 대기압 이온 공급원과 함께 구성된 질량분석기(MS)로 가져왔다. 화합물의 공칭 단일동위원소 분자량(MW)의 확인을 가능하게 하는 이온을 얻기 위해 조정 파라미터(예를 들어, 스캐닝 범위, 드웰 시간...)를 설정하는 것은 당업자의 지식 내에 있다. 적절한 소프트웨어를 사용하여 데이터를 획득하였다.

화합물은 이의 실험적 체류 시간(R_t) 및 이온에 의해 기술된다. 데이터의 표에 상이하게 명시되어 있지 않다면, 보고된 분자 이온은 [M+H]⁺(양성자화된 분자) 및/또는 [M-H]^-(탈양성자화된 분자)에 상응한다. 화합물이 직접 이온화될 수 없었을 경우, 부가물의 유형이 특정되어 있다(즉, [M+NH₄]⁺, [M+HCOO]^- 등). 다수의 동위 원소 패턴을 갖는 분자(Br, Cl..)에 있어서, 보고된 값은 최저 동위원소 질량에 대하여 얻어진 것이다. 모든 결과는 사용된 방법과 일반적으로 연관되는 실험적 불확실성을 가지고서 얻어졌다.

이하에서, "SQD"는 단일 사중극자 검출기(Single Quadrupole Detector)를 의미하며, "RT"는 실온을 의미하며, "BEH"는 가교된 에틸실록산/실리카 하이브리드(bridged ethylsiloxane/silica hybrid)를 의미하며, "DAD"는 다이오드 어레이 검출기를 의미한다.

[표 1a]

분석적 SFC

SFC 방법의 일반 절차

이산화탄소(CO₂) 전달용의 이원 펌프 및 모디파이어(modifier), 오토샘플러(autosampler), 컬럼 오븐, 400 bar까지 견디는 고압 유동 셀을 갖춘 다이오드 어레이 검출기로 구성된 분석용 초임계 유체 크로마토그래피(SFC)를 사용하여 SFC 측정을 수행하였다. 질량 분광계(MS)와 함께 구성되는 경우, 컬럼으로부터의 유동물을 (MS)로 보냈다. 화합물의 공칭 단일동위원소 분자량(MW)의 확인을 가능하게 하는 이온을 얻기 위해 조정 파라미터(예를 들어, 스캐닝 범위, 드웰 시간...)를 설정하는 것은 당업자의 지식 내에 있다. 적절한 소프트웨어를 사용하여 데이터를 획득하였다.

[표 2a]

분석적 키랄 HPLC

일반적인 방법

LC 펌프, 다이오드-어레이(diode-array)(DAD) 또는 UV 검출기 및 키랄 컬럼(각각의 방법에서 특정된 바와 같음)으로 구성된 키랄 고성능 액체 크로마토그래피(키랄 HPLC)를 이용하여 키랄 HPLC 측정을 수행하였다. 적절한 소프트웨어를 사용하여 데이터를 획득하였다.

[표 2b]

약리학 파트

1) 메닌/MLL 균일 시간-분해 형광(homogenous time-resolved fluorescence, HTRF) 분석

비처리된 백색 384웰 마이크로타이터 플레이트에 DMSO 중 200X 테스트 화합물 40 nL 및 분석 완충액(40 mM 트리스·HCl, pH 7.5, 50 mM NaCl, 1 mM DTT(디티오트레이톨) 및 0.05% 플루로닉(Pluronic) F-127) 중 2X 테르븀 킬레이트-표지 메닌(제조에 대해서는 아래 참조) 4 μL를 첨가하였다. 테스트 화합물 및 테르븀 킬레이트-표지 메닌을 30분 동안 주위 온도에서 인큐베이션한 후, 분석 완충액 중 2X FITC-MBM1 펩티드(FITC-β-알라닌--SARWRFPARPGT-NH₂)(“FITC”는 플루오레세인 이소티오시아네이트를 의미함) 4 μL를 첨가하고, 마이크로타이터 플레이트를 1000 rpm에서 1분 동안 원심분리하고, 분석 혼합물을 15분 동안 주위 온도에서 인큐베이션하였다. 분석 혼합물에 존재하는 메닌·FITC-MBM1 복합체의 상대적인 양은 테르븀/ FITC 공여체/수용체 형광발색단 쌍의 균일 시간-분해 형광(HTRF)을 주위 온도에서 EnVision 마이크로플레이트 판독기(ex. 337 nm/테르븀 em. 490 nm/FITC em. 520 nm)를 사용하여 측정함으로써 결정한다. 형광 공명 에너지 전달 정도(HTRF 값)를 FITC 및 테르븀 형광단의 형광 방출 강도의 비(F ^em 520 nm/F ^em 490 nm)로서 표현한다. 결합 분석에서 시약의 최종 농도는 분석 완충액 중 200 pM 테르븀 킬레이트-표지 메닌, 75 nM FITC-MBM1 펩티드 및 0.5% DMSO이다. 테스트 화합물의 용량-반응 적정은 전형적으로 10 μM에서 시작하여 11 포인트, 4배 연속 희석 계획을 사용하여 수행한다.

화합물 효력은 다음 등식 1에 따라 각 화합물 농도에서의 억제율 %를 먼저 계산하여 결정하였다:

억제율 % = ((HC - LC) - (HTRF^화합물 - LC)) / (HC - LC)) *100(등식 1)

식 중, LC 및 HC는 메닌에의 결합에 대하여 FITC-MBM1과 경쟁하는 화합물의 포화 농도의 존재 또는 부재 하에서의 분석의 HTRF 값이고, HTRF^화합물은 테스트 화합물의 존재 하에서의 측정된 HTRF 값이다. HC 및 LC HTRF 값은 플레이트당 적어도 10회 반복의 평균을 나타낸다. 각각의 테스트 화합물에 있어서, 억제율 % 값을 테스트 화합물 농도의 로그값, 및 다음 등식 2에 이들 데이터를 피팅하여 유도된 IC ₅₀ 값에 대하여 도시하였다:

억제율 % = Bottom + (Top-Bottom)/(1+10^((logIC ₅₀-log[cmpd])*h))(등식 2)

식 중, Bottom 및 Top은 각각 용량-반응 곡선의 하한 점근선 및 상한 점근선이며, IC ₅₀은 50% 신호 억제를 제공하는 화합물 농도이고, h는 힐 계수이다.

메닌의 테르븀 크립테이트 표지의 제조: 메닌(20 mM Hepes(2-[4-(2-히드록시에틸)-1-피페라지닐]에탄 술폰산), 80 mM NaCl, 5 mM DTT(디티오트레이톨), pH 7.5 중 아미노산 1~610-6xhis 태그 2.3 mg/mL)을 다음과 같이 테르븀 크립테이트로 표지하였다. 200 μg의 메닌을 1x Hepes 완충액으로 완충액 교환하였다. 6.67 μM 메닌을 실온에서 40분 동안 8배 몰 과량의 NHS(N-히드록시숙신이미드)-테르븀 크립테이트와 함께 인큐베이션하였다. 표지된 단백질의 절반을, 용출 완충액(0.1 M Hepes, pH 7 + 0.1% BSA(소 혈청 알부민))을 사용하여 NAP5 컬럼에서 반응물을 러닝시켜 유리 표지로부터 정제하였다. 나머지 절반을 0.1 M 인산염 완충 염수(PBS), pH 7로 용출시켰다. 각각에 대해 400 μl의 용출액을 수집하고 분취하여 -80℃에서 동결하였다. 테르븀 표지 메닌 단백질의 최종 농도는 각각 Hepes 완충액에서 115 μg/mL, 및 PBS 완충액에서 85 μg/mL였다.

MENIN 단백질 서열 (서열 번호 1):

2a) 증식 분석

메닌/MLL 단백질/단백질 상호작용 억제제 테스트 화합물의 항-증식 효과를 인간 백혈병 세포주에서 평가하였다.　 세포주 MOLM14는 MLL 전좌를 보유하고 각각 MLL 융합 단백질 MLL-AF9뿐만 아니라 제2 대립유전자로부터의 야생형 단백질도 발현한다. NPM1c 유전자 돌연변이를 가지고 있는 OCI-AML3 세포도 테스트하였다. MLL 재배열 세포주(예를 들어 MOLM14) 및 NPM1c 돌연변이 세포주는 줄기 세포와 유사한 HOXA/MEIS1 유전자 발현 서명을 나타낸다. 일반적 세포독성 효과를 나타내는 화합물을 제외하기 위해 2개의 MLL(KMT2A) 야생형 대립유전자를 포함하는 대조 세포주로서 KO-52를 사용하였다.

MOLM14 세포를 10% 열 불활성화 소 태아 혈청(HyClone), 2 mM L-글루타민(Sigma Aldrich) 및 50 μg/ml 겐타마이신(Gibco)이 보충된 RPMI-1640(Sigma Aldrich)에서 배양하였다.　 KO-52 및 OCI-AML3 세포주를 20% 열 불활성화 소 태아 혈청(HyClone), 2 mM L-글루타민(Sigma Aldrich) 및 50 μg/ml 겐타마이신(Gibco)이 보충된 알파-MEM(Sigma Aldrich)에서 증식시켰다. 세포를 배양하는 동안 ml 당 30만 내지 250만개의 세포로 유지하고 계대수는 20을 초과하지 않았다.

항-증식 효과를 평가하기 위해, 200개의 MOLM14 세포, 200개의 OCI-AML3 세포, 또는 300개의 KO-52 세포를 96웰 둥근 바닥 초-저부착 플레이트(Costar, 카탈로그 번호 7007)에서 웰 당 200 μL의 배지에 접종하였다. 세포 접종 수는 실험 내내 선형 성장을 보장하도록 성장 곡선을 기반으로 하여 선택하였다. 테스트 화합물을 상이한 농도로 첨가하고 DMSO 함량을 0.3%로 정규화하였다. 세포를 37℃ 및 5% CO₂에서 8일 동안 인큐베이션하였다. 스페로이드 유사 성장을 생세포 이미징(IncuCyteZOOM, Essenbio, 4x 대물렌즈)에 의해 실시간으로 측정하였다. 스페로이드 크기의 척도로서 융합성(%)을 통합 분석 도구를 사용하여 결정하였다.

시간 경과에 따른 테스트 화합물의 효과를 결정하기 위해, 스페로이드 크기의 척도로서 각각의 웰에서의 융합성을 계산하였다. 기준 화합물의 최고 용량의 융합성을 LC(저 대조군)에 대한 기준선으로 사용하고, DMSO 처리된 세포의 융합성을 0% 세포독성(고 대조군, HC)으로 사용하였다.

절대 IC₅₀ 값을 하기와 같이 융합성 변화 퍼센트로서 계산하였다:

LC = 저 대조군: 예를 들어 1 μM의 세포독성제 스타우로스포린으로 처리된 세포, 또는 예를 들어 고농도의 대안적인 기준 화합물로 처리된 세포

HC = 고 대조군: 평균 융합성 (%) (DMSO 처리 세포)

% 효과 = 100 - (100*(샘플-LC)/(HC-LC))

GraphPad Prism(버전 7.00)을 사용하여 IC₅₀을 계산하였다. 가변 기울기를 사용하고 최대값을 100%로 고정하고 최소값을 0%로 고정하여 % 효과 대 Log10 화합물 농도의 플롯에 용량-반응 식을 사용하였다.

2b) MEIS1 mRNA 발현 분석

화합물 처리 시 MEIS1 mRNA 발현은 Quantigene Singleplex assay(Thermo Fisher Scientific)에 의해 조사하였다. 이 기술로, 정의된 관심 표적 서열에 혼성화하는 프로브를 사용하여 mRNA 표적을 직접 정량화할 수 있으며 신호는 다중모드 플레이트 판독기 Envision(PerkinElmer)을 사용하여 검출한다. 이 실험에는 MOLM14 세포주를 사용하였다. 세포를 증가하는 농도의 화합물의 존재 하에 3,750개 세포/웰로 96웰 플레이트에 플레이팅하였다. 화합물과 함께 48시간 동안 인큐베이션한 후, 세포를 용해 완충액에서 용해시키고 55℃에서 45분 동안 인큐베이션하였다. 세포 용해물을 정규화 대조군 및 차단 프로브로서 인간 MEIS1 특이적 포획 프로브 또는 인간 RPL28(리보솜 단백질 L28) 특이적 프로브와 혼합하였다. 그 후, 세포 용해물을 맞춤형 분석 혼성화 플레이트(Thermo Fisher Scientific)로 옮기고 55℃에서 18 내지 22시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 플레이트를 세척하여 결합되지 않은 물질을 제거한 후 전치 증폭기, 증폭기 및 표지 프로브를 순차적으로 추가하였다. 신호(= 유전자 수)는 다중모드 플레이트 판독기 Envision으로 측정하였다. IC₅₀은 적절한 소프트웨어를 사용하여 용량-반응 모델링에 의해 계산하였다. 모든 비-항존 유전자 반응에 대해 배경 및 상대 발현에 대해 동일한 카운트로 보정하였다. 각 샘플에 대해, 각 테스트 유전자 신호(배경 차감)를 정규화 유전자 신호(RPL28: 배경 차감)로 나누었다. 처리된 샘플에 대한 정규화된 값을 DMSO 처리된 샘플에 대한 정규화된 값으로 나누어 변화 배수를 계산하였다. 각 표적 유전자의 변화 배수를 IC₅₀의 계산에 사용하였다.

[표 3]

3) 마우스 PK(생체 내 T1/2 및 경구 생체이용률)

금식한 수컷 CD-1 마우스(6~8주령)에서 20%(w:vol) HP-β-CD 용액 또는 발열원 무함유 물에 제형화된 테스트 물품의 단회 정맥내(IV, 0.5 또는 1.0 mg/kg을 2.5 ml/kg으로 투여) 또는 경구(PO, 5 mg/kg을 10 ml 용액/kg으로 투여) 용량 후에 생체 내 약동학(PK)을 평가하였다.

혈장 및/또는 전혈 샘플은 항응고제로서 EDTA를 사용하여 연속 모세관 마이크로샘플링(약 0.03 mL)을 통해 원하는 시점에 배측 중족 정맥으로부터 수집하였다. 혈장 및 혈액 샘플 중 화합물 농도는 적격한 LC-MS/MS 방법을 사용하여 분석하였다. 주요 약동학적 파라미터의 인 실리코 분석은 WinNonlin(PhoenixTM, 버전 6.1) 또는 유사한 소프트웨어를 사용하여 수행하였다. (결과는 표 4를 참조한다.)

　4) 인간/마우스 간 마이크로솜의 대사 안정성

실험 절차

이 연구의 목적은 인간 및 마우스 간 마이크로솜에서 테스트 화합물(들)의 시험관 내 대사 안정성을 측정하고 대사 회전율에 대한 정량적 정보(즉, 테스트의 겉보기 고유 제거율의 결정)를 제공하는 것이다.

테스트 물품을 DMSO에서 10 mM의 스톡 농도로 준비하였다. 대사 전환율을 측정하기 위해, 테스트 화합물 또는 양성 대조군 화합물에 대한 10 mM DMSO 스톡 용액 2 μl를 아세토니트릴 198 μl(최종 농도 100 μM)에 첨가하여 최종 작업 용액을 준비하였다.

인큐베이션을 다음과 같이 수행하였다: 먼저, 간 마이크로솜을 얼음 위에서 해동하고 pH 7.4의 100 mM PBS(인산염 완충 염수)에 간 마이크로솜을 포함하는 마스터 용액을 제조한다. 다음으로, 간 마이크로솜 용액을 인큐베이션 플레이트에 첨가하고 10 mM NADPH(니코틴아미드-아데닌 디뉴클레오티드 포스페이트)를 첨가하였다(MW: 833.4g/mol; Roche Diagnostics GmbH, Germany, 인산염 완충액(100 mmol/L, pH 7.4)에 용해됨). 혼합물을 10초 동안 혼합하고 인큐베이션 플레이트에서 37℃에서 10분 동안 예열하였다. 테스트 화합물 또는 양성 대조군 화합물에 대한 100 μM 작업 용액 5 μl를 인큐베이션 플레이트에 첨가하여 대사 반응을 시작하였다(최종 테스트 물품 농도 = 1 μM). 반응 최종 혼합물은 pH 7.4의 100 mM PBS에 1 mM NADPH, 0.5 mg/mL 마이크로솜 단백질 및 1 μM 테스트 화합물 또는 양성 대조군 화합물을 포함해야 한다. 인큐베이션 혼합물에서 유기 용매의 백분율은 1%이며, 이때 DMSO ≤ 0.02%이다.

선택된 시점에서 인큐베이션된 혼합물 50 μL를 냉각 메탄올 200 μL를 포함하는 켄칭 플레이트로 옮겨 반응물을 켄칭하였다. 모든 시점의 샘플링 후 켄칭 플레이트를 4000 rpm에서 40분 동안 원심분리하여 단백질을 침전시켰다. LC/MS/MS 분석을 위해 총 90 μL의 상청액을 분석 플레이트로 옮기고 초순수 H₂O 물을 각 웰에 첨가한다. 모든 인큐베이션 및 분석을 이중으로 수행하였다.

데이터 분석

모든 계산은 Microsoft Excel을 사용하여 실시하였다. 기울기 값 k를 모 약물의 잔존 백분율 대 인큐베이션 시간의 곡선의 자연 로그의 선형 회귀에 의해 결정하였다.

시험관 내 반감기(시험관 내 t_1/2)를 기울기 값으로부터 결정하였다.

시험관 내 t_1/2 = - (0.693 / k)

시험관 내 t_1/2(분)을 시험관 내 고유 제거율(시험관 내 CL_int, μL/분/mg의 단백질)로 변환하는 것은 다음 방정식을 사용하여 수행되었다:

결과는 표 4를 참조한다.

[표 4]

5) MOLM-14 또는 OCI-AML3 세포의 피하(sc 또는 SC) 이종이식편에서 약력학(PD) 활성에 대한 프로토콜

테스트 약제 및 대조군　

화합물 70을 20% 히드록시프로필-베타-시클로덱스트린(HP-β-CD)에 제형화하고 20 g 동물에 대해 용량당 0.2 mL(10 mL/kg)의 총 부피에 도달하도록 제조하였다. 용량을 매일 개별 체중에 따라 조정하였다. 화합물 70의 작업 스톡을 각 연구에 대해 주당 1회 제조하고 실온에서 보관하였다. 　화합물 70을 매일 경구(PO) 투여하였다.

분석

화합물의 생체 내 약력학(PD) 활성을 MOLM14 세포 또는 OCI-AML3의 피하(SC) 이종이식편에서 평가하였다. MOLM14 또는 OCI-AML3 종양을 보유하는 누드 NMRI 마우스(Crl:NMRI-Foxn1nu/-)를 비히클 또는 화합물의 3회의 일일 용량으로 처리하였다. 혈장 샘플은 제2일 용량 후 23시간에, 최종 용량 후 0.5시간에, 및 최종 용량 후 16시간에 수집하였고 종양 샘플은 최종 용량 후 16시간에 수집하였다. 여러 메닌-MLL 표적 유전자(예를 들어, MEIS1, MEF2C, FLT3)의 발현에 대한 화합물의 효과를 조사하기 위해 QuantiGene Plex 기술(Thermo Fisher Scientific)을 사용하였다. 동결된 종양을 균질화하고 용해 완충액의 개별 용해 매트릭스 튜브로 옮기고 55℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 세포 용해물을 표적 특이적 포획 프로브, Luminex 비드 및 차단 프로브와 혼합하고 맞춤형 분석 혼성화 플레이트(Thermo Fisher Scientific)로 옮기고 54℃에서 18 내지 22시간 동안 인큐베이션하였다. 그 후, 플레이트를 자기 분리 플레이트로 옮기고 세척하여 비드로부터 결합되지 않은 물질을 제거한 후 전치 증폭기, 증폭기, 및 표지 프로브의 순차적 혼성화 및 후속 스트렙타비딘 피코에리트린 결합을 수행하였다. 비드로부터의 신호는 Luminex FlexMap 3차원 기기로 측정하였다. 모든 비-항존 유전자 반응에 대해 배경 및 상대 발현에 대해 동일한 카운트로 보정하였다. 각 샘플에 대해, 각 테스트 유전자 신호(배경 차감)를 정규화 유전자 신호(RPL19, RPL28, ATP6V1A: 배경 차감)로 나누었다. 처리된 샘플에 대한 정규화된 값을 DMSO 처리된 샘플에 대한 정규화된 값으로 나누어 변화 배수를 계산하였다.

[표 5]

[표 6]

6) MOLM-14 피하 모델에서의 효능 연구

테스트 약제 및 대조군　

화합물 70을 20% 히드록시프로필-베타-시클로덱스트린(HP-β-CD)에 제형화하고 20 g 동물에 대해 용량당 0.2 mL(10 mL/kg)의 총 부피에 도달하도록 제조하였다. 용량을 매일 개별 체중에 따라 조정하였다. 화합물 70의 작업 스톡을 각 연구에 대해 주당 1회 제조하고 25℃에서 보관하였다.　

동물　

암컷 NMRI 누드 마우스(MOLM-14 SC)는 대략 6 내지 8주령이고 대략 25 g의 체중일 때 사용하였다. 모든 동물은 실험 사용 전 최소 7일 동안 임의의 운송 관련 스트레스에 적응하고 이로부터 회복할 수 있다. 오토클레이브된 물과 방사선 조사된 음식을 임의로 제공하였으며, 동물을 12시간의 명암 주기로 유지시켰다. 케이지, 침구, 및 물병을 사용 전에 오토클레이브하고 매주 교체하였다.

종양 모델 및 세포 배양 방법　

인간 AML 세포 MOLM-14를 표시된 완전 배양 배지(RPMI 1640 + 10% HI-FBS + 2 mM L-글루타민 + 50 ug/ml 겐타마이신)에서 37℃, 5% CO₂에서 배양하였다. 세포를 대수 성장 중에 수확하고 무혈청 배지의 냉각(4℃) Roswell Park Memorial Institute(RPMI) 1640에 재현탁하였다.　　

각 마우스는 1 cc 주사기와 27 게이지 바늘을 사용하여 우측 옆구리에 50% Matrigel 중 5x10⁶개의 MOLM-14 세포를 0.2 mL의 총 부피로 받았다.

연구 설계　

화합물 70을 매일 경구(PO) 투여하였다.

제0일은 종양 세포 이식 및 연구 개시일이다.　

SC MOLM-14 종양을 보유하는 마우스를 종양 이식 후 제16일에 무작위화하고 종양 부피에 따라 처리군에 할당하였다(평균 대략 130 mm³; n=10마리/군). 비히클 또는 화합물 70(30 및 100 mg/kg)을 이용한 처리는 같은 날에 시작하였으며, 이때 21일 동안 매일 경구 투여하였다. PK(약동학) 분석을 위해 마지막 용량(n=4~5마리/군/시점) 후 1, 2, 4, 8 및 23시간에 혈장을 수집하였다.　

동물 모니터링　

SC 종양 부피는 연구 전반에 걸쳐 주당 2 내지 3회 이상 각 동물에 대해 측정하였다.

계산　

종양 부피는 다음 식을 사용하여 계산하였다:

종양 부피(mm³)=(D×d²/2); 여기서 'D'는 캘리퍼스 측정에 의해 결정된 종양의 더 큰 직경을 나타내고 'd'는 더 작은 직경을 나타낸다. 종양 부피 데이터는 평균 종양 부피 ± SEM으로 그래프로 표시하였다.　

%△TGI는 %ΔTGI = ([(TV_cTVc₀)(TV_tTV_t0)]/(TV_cTVc₀))×100으로 계산된 처리군과 대조군의 평균 종양 부담 간의 차이로 정의하였으며, 여기서 'TV_c'는 주어진 대조군의 평균 종양 부담이고, 'TVc₀'은 주어진 대조군의 평균 초기 종양 부담이고, 'TV_t'는 처리군의 평균 종양 부담이고, 'TV_t0'은 처리군의 평균 초기 종양 부담이다. %TGI는

처리군 및 대조군의 평균 종양 부피 간 차이로서 정의되며, 다음과 같이 계산된다:

% TGI = ((TV_cTV_t)/TV_c)×100, 여기서 'TV_c'는 대조군의 평균 종양 부피이고 'TV_t'는 처리군의 평균 종양 부피이다. 미국 국립 암 연구소 기준에서 정의한 바와 같이, ≥60% TGI는 생물학적으로 유의한 것으로 간주한다.

대조군과 무관한 기준선과 비교하여 종양 부피의 처리-관련 감소를 반영하도록 정량화된 % 종양 퇴행(TR)은 %Tr=(1-평균 (TV_ti/TV_t0i)) x 100으로 계산하였으며, 여기서 'TV_ti'는 처리군의 개별 동물의 종양 부담이고, 'TV_t0i'는 동물의 초기 종양 부담이다.　

데이터 분석　

종양 부피는 Prism 소프트웨어(GraphPad 버전 7 또는 8)를 사용하여 그래프로 표시하였다. 대부분의 연구에 대한 통계적 유의성은 2/3 이상의 마우스가 각 군에 남아 있을 때 연구 마지막 날에 HPβCD 비히클 처리 대조군과 비교하여 화합물 70 처리군에 대해 평가하였다. 군 간의 차이는 p≤0.05일 때 유의한 것으로 간주하였다.　

동물 종양 부피에 대한 통계적 유의성은 R 소프트웨어 버전 3.4.2(Janssen에서 내부적으로 개발한 Shiny 애플리케이션 버전 4.0 사용)에서 선형 혼합 효과(LME) 분석을 사용하여 계산하였으며, 처리 및 시간은 고정 효과로, 동물은 무작위 효과로 사용하였다. 개별 종단 응답 궤적이 선형이 아닌 경우 대수 변환을 수행하였다.

이 모델에서 파생된 정보를 사용하여 대조군의 종양 부피 또는 모든 처리군 간의 종양 부피의 쌍별 처리 비교를 수행하였다.

결과는 도 1에 있다.

7) Ca²⁺-형광 분석법(CTCM 인간)을 사용한 인간 다능성 줄기 세포 유래 심근세포(hSC-CM)의 동시적 박동 유발(beating)에서의 테스트 화합물의 심장 전기 생리학적 효과

프로토콜

화합물을 96웰 플레이트에서 테스트하였다.

화합물을 Cor.4U ®-Cardiomyocytes 또는 iCell® Cardiomyocytes2에서 0.1 μM, 0.2 μM, 0.5 μM, 1 μM, 2.5 μM 및 5 μM(용량당 n= 4)로 테스트하였다.

대안적으로, 화합물은 대부분 iCell® Cardiomyocytes2에서 0.1 μM, 0.3 μM; 1 μM, 3 μM,10 μM 및 30 μM(용량당 n = 4)로 테스트하였다.

양성 및 음성 대조군

도페틸리드 3　nM

이소프로테레놀 100　nM

니모디핀 100~300　nM

세티리진 3 μM

비히클 대조군:

디메틸술폭시드(DMSO). DMSO 또는 그 용매 중 화합물의 용액(0.1% DMSO의 최종 농도, n = 8)

테스트 물품 및 대조군의 준비

테스트된 화합물을 의도된 농도의 1000배에서 DMSO에 용해시켰다. 최종 농도의 1000배에서 테스트 화합물과 양성 및 음성 대조군을 포함하는 화합물 "마더 플레이트"를 만들었다. 실험 당일, 이러한 스톡 용액을 10 mM HEPES(Gibco)가 보충된 Tyrode(Sigma)로 희석하여 의도된 농도(둥근 바닥 화합물 플레이트에서)의 2배가 되도록 하였다. 테스트 용액 및 비히클 대조군에서 최종 DMSO 농도는 0.1%였다.

세포

hSC-CM(Cor.4U^®　Cardiomyocytes)을 CDI(Ncardia, Germany)에서 입수하였다. 세포를 미리 플레이팅하고 단층을 형성하기에 적합한 밀도로 피브로넥틴-코팅 96웰 플레이트에 접종하고 세포 공급사의 지침에 따라 스테이지 인큐베이터(37℃, 5% CO₂)에서 배양 상태를 유지하였다.

iCell® Cardiomyocytes2라고 하는 2차 라인 hSC 유래 심근세포를 FUJIFILM Cellular Dynamics(USA)에서 구매하였다. 테스트 약물을 이용한 실험은 세포를 플레이트에 플레이팅한지 5 내지 7일 후에 수행하여 hiPSC 유래 심근세포의 살아있는 박동 단층을 갖게 된다. 96웰 플레이트의 박동 단층은 일반적으로 동결된 iCell® Cardiomyocytes2의 바이알 2개(약 5백만 개 세포/바이알)에서 취하며, 이들은 3개의 96웰 플레이트(약 50K/웰)에 플레이팅될 것이다.

실험 시작 전

실험 시작 최소 1시간 전에 정상 세포 배지를 칼슘 염료가 포함된 Tyrode 용액으로 교체하였다(아래 참조).

Cal 520 염료(AAT Bioquest)를 10 mM HEPES가 보충된 11 ml의 Tyrode에 용해시키고 세포에 첨가하기 전에 37℃까지 가온하였다.

35 μl 세포 배양 배지를 각 웰에서 제거하고 미리 가온한 Cal 520 염료 용액 35 μl로 교체하고 세포 플레이트를 37℃/5% CO₂에서 45분 동안 인큐베이션하였다. 세포를 37℃에서 5분 동안 인큐베이션하였다.

실험

Cal520™(AAT Bioquest) 칼슘 형광 염료 신호를 사용하여 자발적인 전기 활동을 기록한다. 이 염료는 전체 웰에 걸쳐 총 세포내 칼슘 활동을 통합한다. Cal520 염료(50 μg, MW: 1103/mol) 한 병을 0.9 mM의 스톡 용액으로서 50 μl DMSO에 용해시킨다. 50 μL의 염료 스톡 용액을 10 ml Tryodes 용액에 첨가하여 염료 농도가 4.5 μM이 되도록 하였다. 이어서, 이 염료 용액 35 μl를 각 웰에 첨가하여 최종 염료 농도가 1.58 μM이 되도록 하였다. 이 CTCM 인간 분석에 대한 현재 염료 프로토콜은 최근에 확립되었다(문헌[Ivan Kopljar et al, Journal of Pharmacological and toxicological methods 2018. 91: 80-86]; 문헌[Lu et al., Tox Sci 2019. 170 (2): 345-356]).

형광 신호(Ca²⁺ 과도(transient) 형태)는 Functional Drug Screen System(FDSS/μCell; Hamamatsu, Japan)을 사용하여 측정하였으며 기록은 이후 적절한 소프트웨어, 예를 들어 Notocord를 사용하여 오프라인으로 분석하였다.

테스트 실행을 위해 세포 플레이트를 FDSS/μCell에 로딩하였다. 각 웰에서 심근세포의 동시적 박동을 확인하기 위해 Ca²⁺ 과도 상태를 4분 동안 측정하였다. 모든 96개 웰을 동시에 측정하였다(샘플링 간격: 0.06초, 짧은 노출 시간: 10 ms, 여기 파장 480 nm, 방출 파장 540 nm, FDSS/μCell을 37℃까지 가온함). 모두 동기적 박동을 보였을 때, 96웰 플레이트를 3회 반복 측정하였다(기준선에서 모든 96웰에서의 동시적 박동을 확인하기 위해, 사전 설정된 기준을 충족하지 않는 웰을 연구에서 제외하고 화합물로 처리하지 않음).

T = 0: 제어 기간(-5 내지 -1분) + 화합물 첨가 후, 3분 동안.

T = 30: 화합물 첨가 후 29 내지 34분에 측정

화합물 첨가 단계 동안, 100 μl의 각각의 이중 농축 테스트 용액을 각 웰에 동시에 피펫팅하였다.

데이터는 적절한 소프트웨어, 예를 들어 Notocord-Hem(버전 4.3)을 사용하여 오프라인으로 분석하였다.

Ca²⁺ 과도 형태의 다음 파라미터를 측정하였다:

- 심박동수(BR)

- Ca²⁺ 과도 진폭(Amp),

- CTD₉₀: 90%에서 Ca²⁺ 과도 지속 시간(초기 기본 값의 90%까지의 시간).

다양한 '부정맥 유사' 활동의 존재도 실험 기간 동안 관찰하였다. 여기에는 다음이 포함되었다:

· '조기 후탈분극 유사'(EAD 유사) 사건("과도의 초기 피크 이후의 과도 파형의 초소형 피크"로 정의됨),

· '심실성 빈맥 유사'(VT 유사) 사건(매우 빠른 심박동수로 정의됨) 또는

· '심실 세동 유사'(VF 유사) 사건("불규칙하고 측정할 수 없는 과도 전위가 있는 작은 진폭, 빠른 속도의 Ca²⁺ 파형으로 정의됨)

· 세포의 '박동 중단'(Ca²⁺ 과도 현상이 관찰되지 않음).

칼슘 과도 신호에 대한 화합물 유발 변화를 소프트웨어로 분석할 수 없는 경우 이러한 신호는 BQL(품질 분석 수준 미만)으로 식별하였다.

데이터 분석

오프라인 분석을 위해 FDSS-μCell에서 측정된 데이터를 복사하였으며 추가 분석을 위해 SPEC-II(당사의 운영 관리 시스템)에 업로드하였다. 화합물 투여 전후의 변수 값을 수집하여 Excel 워크북으로 옮겼다.

모든 값(실제 단위 및 기준선 값으로부터의 변화 백분율)을 중앙값(최소 및 최대)으로 표시한다. 화합물 군에서 관찰된 해당 기준선 값(실제 단위)에 대한 변화를 Wilcoxon-Mann-Whitney 검정을 사용하여 용매 대조군의 변화와 비교하였다. 다중도 조정을 위한 Bonferroni 보정을 사용한 양측 검정을 수행하였다. 용매 군에 비해 각각 10개의 처리군이 있으므로 0.05/10(0.005)의 알파 수준은 용매 군과의 통계적으로 유의한 차이를 반영하는 것으로 간주하였다. 모든 통계 분석은 적절한 소프트웨어, 예를 들어 R 소프트웨어 버전 3.5.2를 사용하여 수행하였다.

플레이트에서 hiPSC-CM의 품질 관리:

플레이트는 다음 기준을 충족하지 않으면 거절하였다:

- 안정적인 규칙적인 박동

- 진폭 > 500 상대 단위

- 분당 25 내지 80회 심박동수

- 300 내지 800 ms의 CTD₉₀

본 연구에서, 플레이트의 hiPSC-CM은 위의 기준을 충족하였다.

부정맥 또는 박동 중단의 발생률과 조합된 이러한 파라미터를 사용하여 가중 채점 방법을 사용하여 잠재적 유해성 수준을 계산하였다(문헌[Kopljar et al., Stem Cell Reports 2018. 11, 1365-1377]에 근거함). 이 유해성 점수는 CTD₉₀, 심박동수 및 진폭(△△%), 및 박동 정지 및 조기 후탈분극(EAD) 발생률의 변화에 대한 허용 간격(TI)을 기반으로 가중치를 추가하여 농도별로 계산한다. 결과적으로, 각 농도에 대해 네 가지 상이한 유해성 수준 중 하나를 생성할 것이다. 이것은 화합물과 함께 인큐베이션한지 30분 후에 수행한다. 유해성 수준은 다음과 같다:

유해성 없음: 비히클 영향 수준 내에 있거나 관련 없는 작은 변화.

낮은 유해성: 관련 효과가 있지만 잠재적으로 심장 질병에 대한 낮은 위험.

높은 유해성: 심장 질병에 대한 상대적으로 높은 위험.

매우 높은 유해성: 부정맥 유사 사건(EAD)으로 인한 매우 높은 위험.

'유해성 점수' 결과는 유리 약물 당량에서 잠재적인 급성 심장 약물-유도 효과에 대한 식별을 제공한다(혈장 단백질이 웰에 첨가되지 않기 때문에). 유해성 식별 평가는 CTCM_Scoring_version 1(문헌[Kopljar et al., Stem Cell Reports 2018. 11: 1365-1377])로 칭해지는 '채점 참고서'를 사용하여 수행하며 다음의 색 스킴에 따라 수준을 표시한다:

다양한 색상과 관련 표에서 상기에 나열된 바와 같이 HiPSc-CM에서 측정된 Ca²⁺ 과도 분석에 대한 유해성 점수 중증도에 따른 테스트 화합물의 순위.

결과

iCell® Cardiomyocytes2를 세포주로 사용

양성 및 음성 대조군:

양성 및 음성 대조군은 모두 이 분석에서 예상되는 약리학적 효과를 나타냈다.

화합물:

화합물 70a의 경우: 30 mpk(mg/kg)의 마우스 이종이식 모델에서의 유효 용량으로, CTCM 인간 농도 대 유리 Cmax는 다음과 같이 추정된다:

마진 CTCM 인간 10 μM 대 유리 Cmax >16(마우스, 인간)

마진 CTCM 인간 30 μM 대 유리 Cmax >45(마우스, 인간)

Cor.4U®-Cardiomyocytes를 세포주로 사용

8) hERG 형질감염된 세포주에서 막 칼륨 전류 I_Kr에 대한 효과

프로토콜 1:

약어 목록

약어

CHO 차이니즈 햄스터 난소 세포주

DMSO 디메틸술폭시드

hERG 인간

Claims

하기 화학식 I의 화합물, 또는 이의 호변이성질체 또는 입체이성질체 형태, 또는 이의 제약상 허용가능한 염 또는 용매화물:
[화학식 I]

(여기서,
R^1a는 -C(=O)-NR^xaR^xb; Het; 또는
를 나타내며;
Het는 1, 2 또는 3개의 질소 원자 및 선택적으로 카르보닐 모이어티를 함유하는 5원 또는 6원 단환식 방향족 고리를 나타내며;
상기 5원 또는 6원 단환식 방향족 고리는 C_3- ₆시클로알킬 및
C_1-4알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 1 또는 2개의 치환체로 선택적으로 치환되며;
R^xa 및 R^xb는 각각 독립적으로 수소, C_1- ₄알킬 및 C_3- ₆시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R^1b는 F 또는 Cl을 나타내며;
Y¹은 -CR^5aR^5b-, -O- 또는 -NR^5c-를 나타내며;
R²는 수소, 할로, C_1- ₄알킬, -O-C_1- ₄알킬, 및 -NR^7aR^7b로 이루어진 군으로부터 선택되며;
U는 N 또는 CH를 나타내며;
n1, n2, n3 및 n4는 각각 독립적으로 1 및 2로부터 선택되며;
X¹은 CH를 나타내고, X²는 N을 나타내며;
R⁴는 이소프로필을 나타내며;
R^5a, R^5b, R^5c, R^7a, 및 R^7b는 각각 독립적으로 수소, C_1- ₄알킬 및 C_3- ₆시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되며;
R³은 -C_1- ₆알킬-NR^8aR^8b, -C_1- ₆알킬-C(=O)-NR^9aR^9b, -C_1- ₆알킬-OH, 또는
-C_1-6알킬-NR¹¹-C(=O)-O-C_1-4알킬-O-C(=O)-C_1-4알킬을 나타내는 것으로서,
여기서, R³ 정의에서의 각각의 상기 C_1- ₄알킬 또는 C_1- ₆알킬 모이어티는 서로 독립적으로, 시아노, 할로, -OH, 및 -O-C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환될 수 있으며;
R^8a 및 R^8b는 수소; C_1- ₆알킬; -C(=O)-C_1- ₄알킬; -C(=O)-O-C_1- ₄알킬; -C(=O)-NR^12aR^12b; 및 -OH, 시아노, 할로, -S(=O)₂-C_1- ₄알킬, -O-C_1- ₄알킬, -C(=O)-NR^10aR^10b, 및 -NR^10c-C(=O)-C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환된 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되며;
R^9a, R^9b, R^10a, R^10b, R^10c, R¹¹, R^12a, 및 R^12b는 각각 독립적으로 수소 및 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 선택됨).
제1항에 있어서,
R³은 -C_1- ₆알킬-NR^8aR^8b, -C_1- ₆알킬-C(=O)-NR^9aR^9b, -C_1- ₆알킬-OH, 또는
-C_1-6알킬-NR¹¹-C(=O)-O-C_1-4알킬-O-C(=O)-C_1-4알킬을 나타내는 것으로서,
여기서, R³ 정의에서의 각각의 상기 C_1- ₄알킬 또는 C_1- ₆알킬 모이어티는 서로 독립적으로, 시아노, 할로 또는 -O-C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환될 수 있으며;
R^8a 및 R^8b는 수소; C_1- ₆알킬; -C(=O)-C_1- ₄알킬; -C(=O)-O-C_1- ₄알킬; -C(=O)-NR^12aR^12b; 및 시아노, 할로, -S(=O)₂-C_1- ₄알킬, -O-C_1- ₄알킬 및 -C(=O)-NR^10aR^10b로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환된 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되며;
R^9a, R^9b, R^10a, R^10b, R¹¹, R^12a, 및 R^12b는 각각 독립적으로 수소 및 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물.
제2항에 있어서,
R^1a는 -C(=O)-NR^xaR^xb; 또는 Het를 나타내며;
Het는 2개의 질소 원자를 함유하는 6원 단환식 방향족 고리를 나타내는 것으로서,
여기서, 상기 6원 단환식 방향족 고리는 1개의 C_3- ₆시클로알킬로 선택적으로 치환되며;
R^xa 및 R^xb는 C_1- ₄알킬을 나타내며;
R^1b는 F를 나타내며;
Y¹은 -O-를 나타내며;
R²는 수소이며;
U는 N을 나타내며;
R³은 -C_1- ₆알킬-NR^8aR^8b, -C_1- ₆알킬-C(=O)-NR^9aR^9b, -C_1- ₆알킬-OH, 또는
-C_1-6알킬-NR¹¹-C(=O)-O-C_1-4알킬-O-C(=O)-C_1-4알킬을 나타내며;
R^8a 및 R^8b는 수소; C_1- ₆알킬; -C(=O)-C_1- ₄알킬; -C(=O)-O-C_1- ₄알킬; -C(=O)-NR^12aR^12b; 및 시아노, 할로, -S(=O)₂-C_1- ₄알킬, 및 -O-C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환된 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 화합물.
제2항에 있어서,
R^1a는 -C(=O)-NR^xaR^xb를 나타내며;
R^xa 및 R^xb는 C_1- ₄알킬을 나타내며;
R^1b는 F를 나타내며;
Y¹은 -O-를 나타내며;
R²는 수소이며;
U는 N을 나타내며;
R³은 -C_1- ₆알킬-NR^8aR^8b, -C_1- ₆알킬-C(=O)-NR^9aR^9b, 또는 -C_1- ₆알킬-OH를 나타내며;
R^8a 및 R^8b는 수소; C_1- ₆알킬; -C(=O)-C_1- ₄알킬; -C(=O)-O-C_1- ₄알킬; -C(=O)-NR^12aR^12b; 및 시아노, 할로, -S(=O)₂-C_1- ₄알킬, 및 -O-C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환된 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 화합물.
제1항에 있어서,
R^1a는 -C(=O)-NR^xaR^xb 또는 Het를 나타내며;
Het는 2개의 질소 원자를 함유하는 6원 단환식 방향족 고리를 나타내는 것으로서,
여기서, 상기 6원 단환식 방향족 고리는 1개의 C_3- ₆시클로알킬로 치환되며;
R^xa 및 R^xb는 C_1- ₄알킬을 나타내며;
R^1b는 F를 나타내며;
Y¹은 -O-를 나타내며;
R²는 수소를 나타내며;
U는 N 또는 CH를 나타내며;
n1, n2, n3 및 n4는 각각 독립적으로 1 및 2로부터 선택되며;
X¹은 CH를 나타내고, X²는 N을 나타내며;
R⁴는 이소프로필을 나타내며;
R³은 -C_1- ₆알킬-NR^8aR^8b, -C_1- ₆알킬-C(=O)-NR^9aR^9b, -C_1- ₆알킬-OH, 또는
-C_1-6알킬-NR¹¹-C(=O)-O-C_1-4알킬-O-C(=O)-C_1-4알킬을 나타내는 것으로서,
여기서, R³ 정의에서의 각각의 상기 C_1- ₄알킬 또는 C_1- ₆알킬 모이어티는 서로 독립적으로, -OH 및 -O-C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환될 수 있으며;
R^8a 및 R^8b는 수소; C_1- ₆알킬; -C(=O)-C_1- ₄알킬; -C(=O)-O-C_1- ₄알킬; -C(=O)-NR^12aR^12b; 및 -OH, 시아노, 할로, -S(=O)₂-C_1- ₄알킬, -O-C_1- ₄알킬, -C(=O)-NR^10aR^10b, 및 -NR^10c-C(=O)-C_1-4알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환된 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되며;
R^9a, R^9b, R^10a, R^10b, R^10c, R¹¹, R^12a, 및 R^12b는 각각 독립적으로 수소 및 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물.
제1항에 있어서,
R^1a는 -C(=O)-NR^xaR^xb 또는 Het를 나타내며;
Het는 2개의 질소 원자를 함유하는 6원 단환식 방향족 고리를 나타내는 것으로서,
여기서, 상기 6원 단환식 방향족 고리는 1개의 C_3- ₆시클로알킬로 치환되며;
R^xa 및 R^xb는 C_1- ₄알킬을 나타내며;
R^1b는 F를 나타내며;
Y¹은 -O-를 나타내며;
R²는 수소를 나타내며;
U는 N 또는 CH를 나타내며;
n1, n2, n3 및 n4는 각각 독립적으로 1 및 2로부터 선택되며;
X¹은 CH를 나타내고, X²는 N을 나타내며;
R⁴는 이소프로필을 나타내며;
R³은 -C_1- ₆알킬-NR^8aR^8b를 나타내는 것으로서, 여기서, R³ 정의에서의 C_1- ₆알킬 모이어티는 -OH 및 -O-C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환될 수 있으며;
R^8a 및 R^8b는 수소; C_1- ₆알킬; 및 -OH, 시아노, 할로, -S(=O)₂-C_1- ₄알킬, -O-C_1- ₄알킬, -C(=O)-NR^10aR^10b, 및 -NR^10c-C(=O)-C_1- ₄알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환된 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되며;
R^10a, R^10b, 및 R^10c는 각각 독립적으로, 수소 및 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물.
제1항에 있어서,
R^1a는 -C(=O)-NR^xaR^xb를 나타내며;
R^xa 및 R^xb는 C_1- ₄알킬을 나타내며;
R^1b는 F를 나타내며;
Y¹은 -O-를 나타내며;
R²는 수소를 나타내며;
U는 N을 나타내며;
n1, n2, n3 및 n4는 각각 독립적으로 1 및 2로부터 선택되며;
X¹은 CH를 나타내고, X²는 N을 나타내며;
R⁴는 이소프로필을 나타내며;
R³은 -C_1- ₆알킬-NR^8aR^8b를 나타내며;
R^8a 및 R^8b는 수소; C_1- ₆알킬; 및 -OH, 시아노, 할로, -S(=O)₂-C_1- ₄알킬, -O-C_1- ₄알킬, 및 -C(=O)-NR^10aR^10b로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되는 1, 2 또는 3개의 치환체로 치환된 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 각각 독립적으로 선택되며;
R^10a 및 R^10b는 각각 독립적으로 수소 및 C_1- ₆알킬로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물.
제1항에 있어서,
Y¹은 -O-를 나타내는 화합물.
제1항에 있어서,
R^1b는 F를 나타내는 화합물.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 화합물 및 제약상 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 제약 조성물.
제약상 허용가능한 담체를 치료적 유효량의 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 따른 화합물과 혼합하는 단계를 포함하는, 제10항에서 정의된 제약 조성물의 제조 방법.
약제로서 사용하기 위한, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제10항의 제약 조성물.
암의 예방 또는 치료에 사용하기 위한, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제10항의 제약 조성물.
백혈병, 골수형성이상 증후군(MDS), 및 골수증식성 신생물(MPN)의 예방 또는 치료에서 사용하기 위한 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제10항의 제약 조성물.
제14항에 있어서, 백혈병이 (NPM1)-돌연변이 백혈병인 백혈병의 예방 또는 치료에서 사용하기 위한 화합물 또는 제약 조성물.
제13항에 있어서, 암이 백혈병, 림프종, 골수종 또는 고형 종양 암, 예컨대 전립선암, 폐암, 유방암, 췌장암, 결장암, 간암, 흑색종 및 교모세포종으로부터 선택되는 화합물 또는 제약 조성물.
제14항에 있어서, 백혈병이 급성 백혈병, 만성 백혈병, 골수양(myeloid) 백혈병, 골수성(myelogeneous) 백혈병, 림프아구 백혈병, 림프구성 백혈병, 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 림프아구 백혈병(ALL), 만성 림프구성 백혈병(CLL), T 세포 전림프구성 백혈병(T-PLL), 대형 과립 림프구성 백혈병, 모양 세포성 백혈병(HCL), MLL-재배열 백혈병(MLL-rearranged leukemia), MLL-PTD 백혈병, MLL 증폭 백혈병, MLL-양성 백혈병, 및 HOX/MEIS1 유전자 발현 서명을 나타내는 백혈병으로부터 선택되는, 백혈병의 예방 또는 치료에서 사용하기 위한 화합물 또는 제약 조성물.
암으로부터 선택되는 장애의 치료 또는 예방 방법으로서, 이를 필요로 하는 대상체에게 치료적 유효량의 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항의 화합물 또는 제10항의 제약 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
하기 구조를 갖는 중간체, 또는 이의 호변이성질체 또는 입체이성질체 형태;
또는 이의 제약상 허용가능한 부가염 또는 용매화물:
하기 단계를 포함하는 중간체의 제조 방법:

(여기서, PG는 적합한 보호기, 예컨대 벤질이며;
n1 및 n2는 화학식 I에 대해 정의된 바와 같음)
단계 23: 적합한 온도, 예를 들어 -78℃~-25℃에서, 적합한 염기, 예를 들어 DIEA 및 n-BuLi의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 THF에서;
단계 24: 적합한 온도, 예를 들어 -55℃~-65℃에서, 적합한 환원제, 예를 들어 DIBAL-H의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 톨루엔에서, 적합한 유동 화학 시스템에서 수행.
하기 단계를 포함하는 중간체의 제조 방법:

(PG는 적합한 보호기, 예컨대 벤질이며;
다른 변수는 화학식 I에 대해 정의된 바와 같음);
단계 30: 적합한 온도, 예를 들어 5℃~30℃에서, 적합한 염기, 예를 들어 TEA의 존재 하에, 적합한 환원제, 예를 들어 NaBH(OAc)₃의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 톨루엔에서;
단계 31: 적합한 온도, 예를 들어 50℃~55℃에서, 적합한 염기, 예를 들어 K₂HPO₄의 존재 하에, 적합한 용매, 예를 들어 H₂O에서;
단계 32: 적합한 온도, 예를 들어 -5℃~45℃에서, 수소 분위기 하에 적합한 압력 범위 내에서, 예를 들어 0.27~0.40 MPa에서, 탄소상 수산화팔라듐의 존재 하에, MSA의 존재 하에 적합한 용매, 예컨대 EtOH에서;
단계 33: 적합한 온도, 예를 들어 -50℃~-40℃에서, 적합한 염기, 예를 들어 TEA의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 2-메틸테트라히드로푸란에서;
단계 34: 적합한 온도, 예를 들어 20℃~30℃에서, 적합한 염기, 예를 들어 TMG의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 2-메틸테트라히드로푸란에서;
단계 35: 적합한 온도, 예를 들어 20℃~30℃에서, 수소 분위기 하에 적합한 압력 범위 내에서, 예를 들어 0.20~0.30 MPa에서, 적합한 촉매, 예를 들어 탄소상 팔라듐의 존재 하에, 적합한 용매, 예컨대 MeOH에서.