KR20220111413A

KR20220111413A - 신규한 류코노스톡 메젠테로이드 mkjw 균주 및 이의 용도

Info

Publication number: KR20220111413A
Application number: KR1020210014624A
Authority: KR
Inventors: 김미숙; 윤지원; 성희영; 정윤화
Original assignee: 단국대학교 천안캠퍼스 산학협력단
Priority date: 2021-02-02
Filing date: 2021-02-02
Publication date: 2022-08-09
Also published as: KR102572025B1

Abstract

본 발명은 신규한 류코노스톡 메젠테로이드(Leconostoc mesemteroides) MKJW 균주 밍 이의 용도에 관한 것으로, 목적은 알파 글루코시데이즈(α-glucosidase) 억제 활성을 나타내어 혈당 상승을 억제하는 효과를 갖고, 알파 아밀레이즈(α-amylase) 억제 활성을 나타내지 않아 섭취 시 복부팽만감 및 소화 불량의 부작용을 나타내지 않는 류코노스톡 메젠테로이드(Leconostoc mesemteroides) MKJW를 기능성 프로바이오틱스 균주로 제공하고, 상기 균주, 이의 배양액 또는 이들의 혼합물을 포함하는 조성물을 당뇨병 예방, 치료 또는 개선용으로 제공한다. 또한, AChE(Acetyl cholinesterase) 및 BChE(Butyrylcholinesterase)에 대한 억제 활성을 갖는 류코노스톡 메젠테로이드(Leconostoc mesemteroides) MKJW 균주를 기능성 프로바이오틱스 균주로 제공하고, 상기 균주, 이의 배양액 또는 이들의 혼합물을 포함하는 조성물을 치매 예방, 치료 또는 개선용으로 제공한다.

Description

신규한 류코노스톡 메젠테로이드 MKJW 균주 및 이의 용도{Novel Leconostoc mesemteroides MKJW, and uses thereof}

본 발명은 신규한 류코노스톡 메젠테로이드(Leconostoc mesemteroides) MKJW 균주 밍 이의 용도에 관한 것이다.

최근 영양상태가 좋아지고 성인병이 늘어감에 따라 전세계적으로 비만, 당뇨, 고지혈증 등의 대사성증후군을 갖는 환자가 늘어나는 추세에 있으며, 질병부담감도 높아지고 있는 실정이다. 이중 당뇨병이란 고혈당을 특징으로 하는 일련의 대사질환을 통칭하며, 특히 제2형 당뇨병은 인슐린 저항성과 인슐린 분비 감소를 특징으로 한다고 알려져 있다. 섭취한 음식물에 포함된 탄수화물은 알파아밀라아제, 글루코아밀라아제, 슈크라제, 알파글루코시다제 등과 같은 여러 탄수화물 분해효소에 의해 포도당과 같은 단당류로 분해되며, 혈액내로 흡수되어 혈당을 높인다.

당뇨병의 약물적 치료로는 환자에게 인슐린을 투여하는 방법(제1형 당뇨병)과 경구혈당강하제(제2형 당뇨병)를 복용하여 혈당을 조절하는 방법이 있으며, 구체적으로 경구혈당강하제에는 설폰요소제, 비구아니드, 알파글루코시다제 저해제를 주로 사용하고 있다. 이 외에도 당뇨병을 치료하기 위한 다양한 약물이 개발되고 있으며, 최근에는 당뇨병 개선 및 콜레스테롤 저하에 유익한 프로바이오틱스 균주 발굴을 위한 연구가 계속해서 진행되고 있는 실정이다.

한편, 노화 질병 중 하나인 치매는 뇌의 만성적인 혹은 진행성 질환으로 인해 발생하며, 뇌조직의 퇴행, 변성 및 노화 중추신경계 감염(신경매독, 결핵성 뇌막염, 바이러스성 뇌염 등), 뇌경색, 뇌손상, 독성대사장애, 신경계질환 (파킨슨병) 등이 치매를 일으키는 주요 원인으로 알려져 있다. 치매에는 알츠하이머형 치매(Alzheimer's disease), 혈관성 치매, 및 기타 혼합형이 있으며, 우리나라 65세 이상의 노인 치매 환자중 50~60%가 알츠하이머형 치매이고 15~30%가 혈관성 치매이며 나머지 10~15%가 이 두 가지 질환의 혼합형이다. 뇌속 노폐물인 베타 아밀로이드(Aß)가 알츠하이머형 치매의 주요 발병 원인으로 알려져 있으며, 알츠하이머형 치매의 치료를 위해 많은 약물들이 치료제로 시도되었으나 아직까지 뚜렷한 효과가 입증된 약물은 없다.

알츠하이머형 치매 환자들에게 부족한 뇌속 중요 신경전달물질 중 하나인 아세틸콜린(acetylcholine)에 작용하는 아세틸콜린에스테라아제(acetylcholinesterease) 제해제가 치료제로서 유일하게 사용되고 있으나, 이 약물은 부분적으로 인지기능의 호전은 보이지만 알츠하이머병의 진행에는 전혀 작용을 하지 못하는 것으로 알려져 있으며, 효과적인 치매 예방 또는 치료제의 개발이 요구되고 있다. 유산균은 오랫동안 이용되어 왔으며 유산균의 정장 작용, 항암 효과, 면역증강 효과 등의 유익한 효과가 보고되었으며, 최근에는 이러한 유산균을 통한 치매 예방 또는 치료제를 개발하는 연구가 계속해서 진행되고 있는 실정이다.

한국등록특허 제10-2191774호 (2020. 12. 16. 공고) 한국등록특허 제10-1476236호 (2014. 12. 24. 공고)

상기와 같은 문제점을 해결하기 위해, 본 발명의 목적은 알파 글루코시데이즈(α-glucosidase) 억제 활성을 나타내어 혈당 상승을 억제하는 효과를 갖고, 알파 아밀레이즈(α-amylase) 억제 활성을 나타내지 않아 섭취 시 복부팽만감 및 소화 불량의 부작용을 나타내지 않는 기능성 프로바이오틱스 균주 및 이를 포함하는 당뇨병 예방, 치료 또는 개선용 조성물을 제공하는 것이다.

또한, 본 발명의 다른 목적은 AChE(Acetyl cholinesterase) 및 BChE(Butyrylcholinesterase)에 대한 억제 활성을 나타내어 섭취 시 치매 예방 효과를 나타내는 기능성 프로바이오틱스 균주 및 이를 포함하는 치매 예방, 치료 또는 개선용 조성물을 제공하는 것이다.

본 발명은 기탁번호 KCTC 14459BP로 기탁된 류코노스톡 메젠테로이드(Leconostoc mesemteroides) MKJW 균주를 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 균주, 이의 배양액 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 당뇨병 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 균주, 이의 배양액 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 당뇨병 예방 또는 개선용 건강기능 식품 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 균주, 이의 배양액 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 치매 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 상기 균주, 이의 배양액 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 치매 예방 또는 개선용 건강기능 식품 조성물을 제공한다.

본 발명에 따르면, 알파 글루코시데이즈(α-glucosidase) 억제 활성을 갖고, 알파 아밀레이즈(α-amylase) 억제 활성을 나타내지 않아 혈당 상승을 억제하고, 소화 불량의 부작용을 나타내지 않는 류코노스톡 메젠테로이드(Leconostoc mesemteroides) MKJW 균주를 기능성 프로바이오틱스 균주로 제공하고, 상기 균주, 이의 배양액 또는 이들의 혼합물을 포함하는 조성물을 당뇨병 예방, 치료 또는 개선용으로 제공할 수 있다. 또한, AChE(Acetyl cholinesterase) 및 BChE(Butyrylcholinesterase)에 대한 억제 활성을 갖는 류코노스톡 메젠테로이드(Leconostoc mesemteroides) MKJW 균주를 기능성 프로바이오틱스 균주로 제공하고, 상기 균주, 이의 배양액 또는 이들의 혼합물을 포함하는 조성물을 치매 예방, 치료 또는 개선용으로 제공할 수 있다.

도 1은 프로바이오틱스 균주인 류코노스톡 메젠테로이드(Leconostoc mesemteroides) MKJW를 동정한 결과를 참고하여 작성한 계통도이다.
도 2는 프로바이오틱스 균주인 류코노스톡 메젠테로이드(Leconostoc mesemteroides) MKJW의 모양, 콜로니 형태, 그람 특성 및 카탈라아제 활성 등을 평가한 결과이다.
도 3은 프로바이오틱스 균주인 류코노스톡 메젠테로이드(Leconostoc mesemteroides) MKJW의 용혈성을 평가한 결과이다.
도 4는 프로바이오틱스 균주인 류코노스톡 메젠테로이드(Leconostoc mesemteroides) MKJW 배양액의 탄수화물 패턴을 평가한 결과이다.
도 5는 프로바이오틱스 균주인 류코노스톡 메젠테로이드(Leconostoc mesemteroides) MKJW와 류코노스톡 메센테로이드(Leconostoc mesemteroides) MKSR의 발효능을 평가한 결과이다.

본 명세서에서 사용되는 용어는 본 발명에서의 기능을 고려하면서 가능한 현재 널리 사용되는 일반적인 용어들을 선택하였으나, 이는 당 분야에 종사하는 기술자의 의도 또는 판례, 새로운 기술의 출현 등에 따라 달라질 수 있다. 또한, 특정한 경우는 출원인이 임의로 선정한 용어도 있으며, 이 경우 해당되는 발명의 설명 부분에서 상세히 그 의미를 기재할 것이다. 따라서 본 발명에서 사용되는 용어는 단순한 용어의 명칭이 아닌, 그 용어가 가지는 의미와 본 발명의 전반에 걸친 내용을 토대로 정의되어야 한다.

다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가지고 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥상 가지는 의미와 일치하는 의미를 가지는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.

수치 범위는 상기 범위에 정의된 수치를 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최대의 수치 제한은 낮은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼 모든 더 낮은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 최소의 수치 제한은 더 높은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼 모든 더 높은 수치 제한을 포함한다. 본 명세서에 걸쳐 주어진 모든 수치 제한은 더 좁은 수치 제한이 명확히 쓰여져 있는 것처럼, 더 넓은 수치 범위 내의 더 좋은 모든 수치 범위를 포함할 것이다.

이하, 본 발명을 보다 상세하게 설명한다.

상기 균주는 내산성 및 내담즙성을 갖고 있으며, 알파 글루코시데이즈(α-glucosidase) 억제 활성을 갖고, 알파 아밀레이즈(α-amylase) 억제 활성을 나타내지 않아 당뇨병 예방 또는 개선 효능을 갖는다.

탄수화물이 포도당으로 소화될 때 사용되는 소화효소 2가지가 알파 아밀레이즈(α-amylase)와 알파 글루코시데이즈(α-glucosidase)인데, 상기 알파 글루코시데이즈(α-glucosidase) 활성을 억제함으로써 알파 글루코시데이즈(α-glucosidase)의 작용을 억제해서 장에서 다당류가 포도당으로 분해되는 속도를 늦춰주어 당분이 몸 속으로 천천히 흡수되도록 도와준다.

또한, 상기 균주는 항균 활성을 갖고, 구체적으로 상기 항균 활성은 에스케리치아 콜리(Escherichia coli), 슈도모나스 에루지노사(Pseudomonas aeruginosa), 쉬젤라 플렉스네리(Shigella flexneri), 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 엔테로코커스 페칼리스(Enterococcus faecalis) 및 프로테우스 불가리스(Proteus vulgaris)로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 식중독균에 대한 항균 활성을 나타내는 것이다.

또한, 상기 균주는 항산화 활성을 갖고, 적혈구를 파괴하는 용혈 활성을 나타내지 않으며, β-글루쿠로니다제 활성을 나타내지 않는다.

또한, 상기 균주는 AChE(Acetyl cholinesterase) 및 BChE(Butyrylcholinesterase)에 대한 억제 활성을 갖기 때문에, 치매 예방 또는 개선 효능을 갖는다.

또한, 본 발명은 상기 균주, 이의 배양액 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 당뇨병 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 상기 균주, 이의 배양액 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 치매 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다

상기 배양액은 액체 배지에 균주를 접종하여 배양한 것을 의미하며 액체상의 배양액으로부터 균주를 제거한 상등액을 일컫는 "배양여액"을 포함하는 개념이다.

본 발명의 약학적 조성물은 당해 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자가 용이하게 실시할 수 있는 방법에 따라, 약제학적으로 허용되는 담체를 이용하여 제제화함으로써 단위 용량 형태로 제조되거나 또는 다용량 용기 내에 내입시켜 제조될 수 있다.

상기 약제학적으로 허용되는 담체는 제제시에 통상적으로 이용되는 것으로서, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아카시아 고무, 인산 칼슘, 알기네이트, 젤라틴, 규산 칼슘, 미세결정성 셀룰로스, 폴리비닐피롤리돈, 셀룰로스, 물, 시럽, 메틸 셀룰로스, 메틸 히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 활석, 스테아르산 마그네슘 및 미네랄 오일 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현탁제, 보존제 등을 추가로 포함할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 약학적 조성물에 포함되는 첨가제의 함량은 특별히 한정되는 것은 아니며 통상의 제제화에 사용되는 함량 범위 내에서 적절하게 조절될 수 있다.

상기 약학적 조성물은 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립, 정제, 크림, 젤, 패취, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 및 카타플라스마제로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 외용제 형태로 제형화될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 제형화를 위해 추가로 있는 약학적으로 허용가능한 담체 및 희석제를 포함할 수 있다. 상기 약학적으로 허용가능한 담체 및 희석제는 전분, 당, 및 만니톨과 같은 부형제, 칼슘 포스페이트 등과 같은 충전제 및 증량제, 카르복시메틸셀룰로오스, 히드록시프로필셀룰로오스 등과 같은 셀룰로오스 유도체, 젤라틴, 알긴산염, 및 폴리비닐 피롤리돈 등과 같은 결합제, 활석, 스테아린산 칼슘, 수소화 피마자유 및 폴리에틸렌 글리콜과 같은 윤활제, 포비돈, 크로스포비돈과 같은 붕해제, 폴리소르베이트, 세틸알코올, 및 글리세롤 등과 같은 계면활성제를 포함하나, 이에 한정되지 않는다. 상기 약학적으로 허용가능한 담체 및 희석제는 대상체에게 생물학적 및 생리학적으로 친화적인 것일 수 있다. 희석제의 예로는 염수, 수용성 완충액, 용매 및/또는 분산제(dispersion media)를 들 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 약학적 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여하거나 비경구 투여(예를 들어, 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소에 적용)할 수 있다. 경구 투여일 경우, 정제, 트로키제 (troches), 로젠지 (lozenge), 수용성 현탁액, 유성 현탁액, 조제 분말, 과립, 에멀젼, 하드 캡슐, 소프트 캡슐, 시럽 또는 엘릭시르제 등으로 제형화될 수 있다. 비경구 투여일 경우, 주사액, 좌제, 호흡기 흡입용 분말, 스프레이용 에어로졸제, 연고, 도포용 파우더, 오일, 크림 등으로 제형화 될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물의 투여량은 환자의 상태 및 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이 체질 특이성, 제제의 성질, 질병의 정도, 조성물의 투여시간, 투여방법, 투여기간 또는 간격, 배설율, 및 약물 형태에 따라 그 범위가 다양할 수 있으며, 이 분야 통상의 기술자에 의해 적절하게 선택될 수 있다. 예컨대, 약 0.1 내지 10,000 mg/kg의 범위일 수 있으나 이제 제한되지 않으며, 하루 일회 내지 수회에 나누어 투여될 수 있다.

상기 약학적 조성물은 목적하는 방법에 따라 경구 투여되거나 비경구 투여(예를 들면, 정맥 내, 피하 내, 복강 내 또는 국소에 적용)될 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물의 약학적 유효량, 유효 투여량은 약학적 조성물의 제제화 방법, 투여 방식, 투여 시간 및/또는 투여 경로 등에 의해 다양해질 수 있으며, 당해 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자는 목적하는 치료에 효과적인 투여량을 용이하게 결정하고 처방할 수 있다. 본 발명의 약학적 조성물의 투여는 하루에 1회 투여될 수 있고, 수회에 나누어 투여될 수도 있다.

또한, 본 발명은 상기 균주, 이의 배양액 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 당뇨병 예방 또는 개선용 건강기능 식품 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은 상기 균주, 이의 배양액 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 치매 예방 또는 개선용 건강기능 식품 조성물을 제공한다.

본 발명은 통상적으로 이용되는 식품으로써 일반적으로 사용될 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 건강기능식품으로서 사용될 수 있다. 상기 "건강기능 식품"이라 함은 건강기능 식품에 관한 법률에 따른 인체에 유용한 기능성을 가진 원료나 성분을 사용하여 제조 및 가공한 식품을 의미하며, "기능성"이라 함은 인체의 구조 및 기능에 대하여 영양소를 조절하거나 생리학적 작용 등과 같은 보건 용도에 유용한 효과를 얻을 목적으로 섭취하는 것을 의미한다.

본 발명의 식품 조성물은 통상의 식품 첨가물을 포함할 수 있으며, 상기 "식품 첨가물"로서의 적합 여부는 다른 규정이 없는 한, 식품의약품안전처에 승인된 식품 첨가물 공전의 총칙 및 일반시험법 등에 따라 해당 품목에 관한 규격 및 기준에 의하여 판정한다.

상기 "식품 첨가물 공전"에 수재된 품목으로는 예를 들어, 케톤류, 글리신, 구연산칼륨, 니코틴산, 계피산 등의 화학적 합성물, 감색소, 감초추출물, 결정셀룰로오스, 고량색소, 구아검 등의 천연첨가물, L-글루타민산나트륨 제제, 면류첨가알칼리제, 보존료제제, 타르색소제제 등의 혼합제제류들을 들 수 있다.

본 발명의 식품 조성물은 정제, 캡슐, 분말, 과립, 액상, 환 등의 형태로 제조 및 가공할 수 있다.

예를 들어, 캡슐 형태의 건강기능 식품 중 경질캡슐제는 통상의 경질캡슐에 본 발명에 따른 조성물을 부형제 등의 첨가제와 혼합 및 충진하여 제조할 수 있으며, 연질캡슐제는 본 발명에 따른 조성물으 부형제 등의 첨가제와 혼합하고 젤라틴 등 캡슐기제에 충진하여 제조할 수 있다. 상기 연질캡슐제는 필요에 따라 글리세린 또는 소르비톨 등의 가소제, 착색제, 보존제 등을 함유할 수 있다.

상기 부형제, 결합제, 붕해제, 활택제, 교미제, 착향제 등에 대한 용어 정의는 당업계에 공지된 문헌에 기재된 것으로 그 기능 등이 동일 내지 유사한 것들을 포함한다. 상기 식품의 종류에는 특별한 제한이 없으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.

본 발명에서 용어 “예방”이란 본 발명에 따른 조성물의 투여로 질환의 억제 또는 지연시키는 모든 행위를 말한다. 본 발명에서 용어 “치료”는 본 발명에 따른 조성물의 투여로 질환의 증세가 호전되거나 이롭게 변경하는 모든 행위를 말한다. 본 발명에서 "개선"이란 본 발명의 조성물을 개체에 투여하거나 섭취시켜 질환의 나쁜 상태를 좋게 하는 모든 행위를 의미한다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.

실시예 1. 균주 분리 및 동정

본 발명의 프로바이오틱스 균주를 김치로부터 분리하기 위해, 김치 제품에 0.1% 펩신(Sigma Aldrich, StLouis, USA)을 포함하는 0.85% 멸균 saline 용액에 첨가하여 37℃에서 2 시간 배양하였다. 0.1 M NaHCO₃를 이용하여 pH를 7.0으로 조정하여 중성화시킨 후, 0.3% 담즙산염(Sigma Aldrich, StLouis, USA)을 포함하는 용액(12.4 g/L K₂HPO₄, 11.37 g/L Trisodium citrate dehydrate,7.6 g/L of KH₂PO₄ 및 6 g/L (NH₄)₂SO₄로 구성되고 pH 8.0인 용액)에서 37℃에서 2 시간 배양하였다. 배양액을 희석하여 MRS agar(10 g/L proteose peptone No. 3, 10 g/L beef extract, 5 g/L yeast extract , 20 g/L dextrose , 1 g/L polysorbate, 2 g/L ammonium citrate, 5 g/L sodium acetate , 0.1 g/L magnesium sulfate, 0.05 g/L manganese sulfate , 2 g/L dipotassium phosphate, 및 15 g/L agar로 구성되는 배지) 플레이트에 도말한 후 37℃에서 24 시간 배양하였으며 내산성과 내담즙성이 있는 균주를 1차적으로 선별하였다.

선별 균주의 동정은 16S rRNA의 염기서열을 분석하고, 상동성 검색하였다. 염기서열의 분석은 (주)솔젠트에 (Solgent, Daejeon, Korea) 의뢰하였으며, 분석결과를 Ezbiocloud(https://www.ezbiocloud.net) Blast를 이용하여 Database에 등록된 염기서열과 상동성을 비교하였다. 확보된 염기서열은 MEGA X: Molecular Evolutionary Genetics Analysis across Computing Platforms를 이용하여 Neighbor-joining method로 계통도를 작성하였다.

선별 균주의 16S rRNA 유전자의 염기서열을 분석한 결과, 서열번호 1과 같이 분석되었으며, 이를 바탕으로 Ezbiocloud에서 동정한 결과, 선별된 균주는 류코노스톡 메젠테로이드(Leuconostoc mesenteroides) ATCC 8293 및 류코노스톡 메젠테로이드(Leuconostoc mesenteroides) DSM 20484와 99.79%의 상동성을 나타냈으며, 상기의 동정 결과를 참고하여 선별 균주를 류코노스톡 메젠테로이드(Leconostoc mesemteroides) MKJW로 명명하였다. 동정 결과를 참고하여 MEGA-X Program으로 선별 균주인 류코노스톡 메젠테로이드(Leconostoc mesemteroides) MKJW의 계통도로 나타냈다(도 1).

선별 균주인 류코노스톡 메젠테로이드(Leconostoc mesemteroides) MKJW(이하, MKJW 균주)의 미생물학적 특성을 위하여 현미경 관찰, 그람 염색, 내생포자 및 점액 형성 여부, 카탈레이즈 활성을 측정하였다.

실시예 2. 생화학적 특성

상기 MKJW 균주의 생화학적 특성을 분석하기 위해 API 50 CHL kit(BioMerieux, Lyon, France)를 사용하여 49개의 탄소원에 대한 이용성을 확인하였다. MRS agar 배지에서 배양된 균주의 콜로니를 API 50 CHL 배지에 접종하고, API 50CH 스트립에 분주하였다. 그 후 미네랄 오일(mineral oil)를 튜브에 첨가하여 공기가 닿지 않게 하고, 30℃에서 24 시간 및 48 시간 동안 배양하여 당 발효패턴을 확인하였다.

MKJW 균주는 하기 표 1과 같은 탄소원을 이용하는 것으로 나타났으며, Leconostoc mesemteroides ssp mesenteriodes/dextranicum 2와 75%의 동정율을 나타냈다.

API 50 CHL
0	control	-	25	esculin ferric citrate	+
1	Glycerol	-	26	salicin	+
2	Erythritol	-	27	D-celiobiose	-
3	D-arabinose	-	28	D-maltose	+
4	L-arabinose	+	29	D-lactose(bobine origin)	-
5	D-ribose	+	30	D-melibiose	+
6	D-xylose	+	31	D-saccharose(sucrose)	+
7	L-xylose	-	32	D-trehalose	+
8	D-adonitol	-	33	inulin	-
9	Methyl-p D-xylopyranoside	-	34	d-melezitose	-
10	D-galactose	+	35	D-rafinose	+
11	D-glucose	+	36	amidon(starch)	-
12	D-fructose	+	37	glycogen	-
13	D-mannose	+	38	xylitol	-
14	L-sorbose	-	39	gentiobiose	-
15	L-rhamnose	-	40	D-turanose	+
16	dulcitol	-	41	D-lyxose	-
17	inositol	-	42	D-tagatose	-
18	D-mannitol	-	43	D-fucose	-
19	D-sorbitol	-	44	l-fucose	-
20	methyl-a d-mannopyranoside	-	45	D-arabitol	-
21	methyl-a D-glucopyranoside	+	46	l-arabitol	-
22	n-acetylglucosamine	+	47	potassium gluconate	+
23	amygdalin	-	48	potassium 2-ketogluconate	+
24	arbutin	+	49	potassium 5-ketogluconate	-
동정결과	Leconostoc mesemteroides ssp mesenteriodes/dextranicum 2 75.0%
차순위 동정결과	Lactobacillus pentosus 0.1%

실시예 3. 내산성 및 내담즙성 측정

MRS 액체배지에서 30℃ 조건으로 24 시간 배양하여 균주의 내산성 및 내담즙성을 측정하였다. 내산성을 측정하기 위해, 0.1% 펩신을 포함하는 0.85% 멸균 NaCl 용액(pH 2.5)에 균 배양액을 접종하여 37℃에서 1, 2, 및 3시간 동안 배양하였다. 내담즙성을 측정하기 위해, 0.3% 담즙산염(SigmaAldrich, StLouis, USA)를 함유한 용액(12.4 g/L K₂HPO₄, 11.37 g/L Trisodium citrate dehydrate, 7.6 g/L KH₂PO₄ 및 6 g/L (NH₄)₂SO₄로 구성되고 pH 6.9인 용액)에 균 배양액을 접종하여 37℃에서 1, 2, 및 3시간 동안 배양하였다. 그 후 배양액을 희석하여 MRS agar 플레이트에 도말하고, 30℃에서 24 시간 동안 배양하였다. 펩신 또는 담즙산염 용액에 첨가하기 전의 생균수(반응 전 Log CFU/mL)를 대조군으로 사용하여 하기의 식으로 생존율을 계산하였다.

생존율(Relative survival rate, %)=(Log CFU/ml 반응 후 / Log CFU/mL 반응 전) * 100

프로바이오틱 균으로 잘 알려진 Lactobacillus rhamnosus GG 균주(이하, LGG 균주)를 양성 대조군으로 사용하였다. 하기 표 2에 나타난 바와 같이, LGG 균주와 MKJW 균주를 0.1% 펩신 용액에 3 시간 배양하여 내산성을 측정한 결과, LGG 균주는 89.8%의 생존율을 보여주고, MKJW 균주는 47.15%의 생존율을 보여주었으며, 0.3%의 Bile salt 용액에서 3시간 배양하여 내담즙성을 측정한 결과, LGG 균주는 50.1%의 생존율을 보여주고, MKJW 균주는 31.86%의 생존율을 보여주었다.

Treatment		MKJW		*L.rhamnosus GG*
		균수(logCFU/ml)	생존력 (%)	균수(logCFU/ml)	생존력 (%)
초기 접종		9.36	-	9.20	-
0.1% pepsin	1h	6.50±0.52	69.46±5.52	9.04±0.02	98.27±0.21
	2h	4.94±0.57	52.73±6.09	8.86±0.01	96.23±0.13
	3h	4.41±0.31	47.15±3.35	8.27±0.27	89.80±2.89
0.3% bile salt	1h	4.03±0.01	43.00±0.09	5.13±0.19	55.70±2.08
	2h	3.65±0.42	39.04±4.46	5.01±0.35	54.39±3.78
	3h	2.98±0.15	31.86±1.61	4.61±0.23	50.1±2.51

실시예 4. 소화 효소 저해 활성

MKJW 균주의 소화 효소 억제 활성을 평가하기 위해, 균주의 배양액을 1 mL의 MRS에 1%로 접종하고, 24 시간 동안 30℃에서 배양하였다. 배양 상등액을 조효소 샘플로 사용하였다.

MKJW 균주의 알파 아밀레이즈(α-amylase) 억제 활성을 측정하기 위해, 0.02 M sodium phosphate buffer(pH 7.0) 50㎕, 1% starch solution 100 ㎕, 및 porcine α-amylase enzyme solution(SigmaAldrich, StLouis, USA) 50 ㎕를 포함하는 용액에 선별 균주의 상등액 50 ㎕을 첨가하여 37℃에서 20분 동안 반응시키고, 2 mL의 DNS (3,5-dinitrosalicylic acid)용액을 첨가하여 95℃에서 5분 동안 반응시켰다. 그 후, 2 mL의 증류수를 넣고, 540 nm에서 흡광도를 측정하여 하기 식으로 억제 활성(%)을 측정하였다. 당뇨병 치료제로써 소화 효소 억제능이 있는 아카보스(Acarbose)를 양성 대조군으로 사용하였다.

억제 활성(Inhibition, %)={1 - (ABS _sample - ABS _blank ) / ABS _control )} * 100

하기 표 3에 나타난 바와 같이, 아카보즈는 48.41%의 억제 활성을 나타내고, MKJW 균주는 3.01%의 억제 활성을 나타냈다. 이는 아카보즈의 알파 아밀레이즈 저해활성으로 인한 부작용인 소화불량 현상이 MKJW 균주를 프로바이오틱스로 섭취하였을 때에 나타나지 않을 것임을 입증한다.

α-amylase inhibition(%)
MKJW	Acarbose
3.01± 3.26	48.41 ± 0.23

또한, MKJW 균주의 알파 글루코시데이즈(α-glucosidase) 억제 활성을 측정하기 위해, 0.02 M sodium phosphate buffer(pH 6.8) 50 ㎕, 및 2mM pNPG(4-Nitrophenyl α-D-glucopyranoside)를 포함하는 용액에 α-glucosidase 효소 50 ㎕과 선별 균주의 상등액 50 ㎕를 첨가하고, 37℃에서 40분 동안 반응시켰다. 그 후, 0.1 M Na₂CO₃ 1.5mL를 첨가하여 405 nm에서 흡광도를 측정하고, 하기의 식으로 억제 활성(%)을 측정하였다. 아카보스(Acarbose)를 양성 대조군으로 사용하였다.

억제 활성(Inhibition, %)={1 - (ABS _sample - ABS _{sample blank} ) / (ABS _control - ABS _blank )} * 100

하기 표 4에 나타난 바와 같이, 아카보즈는 100.80%의 억제 활성을 나타내고, MKJW 균주는 98.98%의 억제 활성을 나타냈다. 이는 MKJW 균주를 프로바이오틱스로 섭취하였을 때에 아카보즈와 유사한 활성의 혈당 상승 억제 효과가 있음을 입증한다.

α-glucosidase inhibition(%)
MKJW	Acarbose
98.38± 0.08	100.80

실시예 5. 항균 활성

MKJW 균주의 항균 활성을 평가하기 위해, 에스케리치아 콜리(Escherichia coli) KCTC 1682, 에스케리치아 콜리 O157:H7 (Escherichia coli O:157) KCTC 1682, 슈도모나스 에루지노사(Pseudomonas aeruginosa) NCCP14781 , 쉬젤라 플렉스네리(Shigella flexneri) KCTC 22192, 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) KCTC 3881, 엔테로코커스 페칼리스(Enterococcus faecalis) NCCP 15611, 프로테우스 불가리스(Proteus vulgaris) NCCP 14765를 지시균주로 사용하였다. 지시균주를 2.5-4 log가 되게 접종한 뒤, 상기 선별된 균주의 24 시간 배양액 10㎕를 지시균주가 접종된 배지에 접적하고 24 시간 후, 생육 저해를 나타내는 증식 억제대의 직경(mm)를 측정하였다.

하기 표 5에 나타난 바와 같이, MKJW 균주는 에스케리치아 콜리(Escherichia coli) KCTC 1682, 에스케리치아 콜리 O157:H7 (Escherichia coli O:157) KCTC 1682, 슈도모나스 에루지노사(Pseudomonas aeruginosa) NCCP14781, 쉬젤라 플렉스네리(Shigella flexneri) KCTC 22192, 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus) KCTC 3881, 엔테로코커스 페칼리스(Enterococcus faecalis) NCCP 15611, 및 프로테우스 불가리스(Proteus vulgaris) NCCP 14765에 대하여 항균활성을 나타냈다.

Strain	clear zone (mm)
	MKJW
Staphylococcus aureus	9.0 ± 0.81
Escherichia coli O157:H7	7.70 ± 0.47
Escherichia coli	7.20 ± 0.23
Enterococcus faecalis	8.80 ± 0.14
Shigella flexneri	8.40 ± 0.14
Proteus vulgaris	11.83 ± 0.85
Pseudomonas aeruginosa	7.92 ± 0.19

실시예 6. 항산화 활성

선별 균주의 항산화 활성을 평가하기 위해, 균주 배양액을 1 mL MRS에 1%로 접종하고 24 시간 동안 30℃에서 배양하였다. 배양 상등액을 샘플로서 사용하고 아스코르브산(Ascorbic acid)을 양성 대조군으로 사용하였다.

선별 균주의 DPPH 라디칼 소거능을 측정하기 위해, 100 ㎕ 균 상등액과 0.2mM DPPH (2,2-Diphenyl-1-picrylhydrazyl: SigmaAldrich, StLouis, USA) 1.2ml를 혼합하여 암실에서 30분간 반응시키고, 517 nm에서 흡광도 측정하여 하기의 식으로 DPPH 라디칼 소거능을 측정하였다.

DPPH 라디칼 소거능(DPPH radical scavenging activity, %)={1 - (ABS _sample - ABS _{sample blank} ) / ABS _control )} * 100

선별 균주의 SOD(Superoxide dismutase) 유사 활성을 측정하기 위해, 0.05 M Tris-HCl buffer 1.5 mL, 7.2 mM Pyrogallol (SigmaAldrich, StLouis, USA) 100 ㎕와 균 상등액 100 ㎕를 혼합하고, 10분 동안 상온에서 반응시키고, 1N HCl 200 ㎕를 첨가하여 반응을 정지시킨 다음, 450 nm에서 흡광도를 하기의 식에 대입하여 SOD 유사 활성을 측정하였다.

SOD 유사 활성(SOD like activity, %)=100-{(ABS _sample - ABS _{sample blank} ) / ABS _control } * 100}

선별 균주의 환원력(reducing power)을　측정하기　위해， 균 상등액 250 ㎕와 0.2 M SPB(pH 6.6) 250 ㎕, 1% potassium ferricyanide 250 ㎕를 첨가하여 50℃에서 20분　동안 반응시킨　후，10% trichloracetic acid 250 ㎕를 첨가하여 10,000　rpm에서 5분　동안 원심분리하였다．　상등액과 증류수에 0.1% ferric chloride를 혼합하여 700　nm에서 흡광도를 측정하였다．

하기 표 6에 나타난 바와 같이, 아스코르브산과 MKJW 균주의 DPPH 라디칼 소거능은 각각 97.3%, 46.47%로 나타났으며, SOD 유사활성은 아스코르브산 76.65%, MKJW 52.69%, 환원력은 아스코르브산 3.08, MKJW 2.47의 환원력을 나타냈다.

DPPH radical scavenging activity (%)		SOD-like activity (%)		Reducing power (Abs@700)
MKJW	Ascorbic acid (mg/ml)	MKJW	Ascorbic acid (mg/ml)	MKJW	Ascorbic acid (mg/ml)
46.47± 2.08	97.30 ± 0.65	52.69 ± 2.29	76.65 ±1.50	2.47 ± 0.10	3.08 ± 0.19

실시예 7. 용혈성

MKJW 균주의 용혈성을 확인하기 위해, 5% sheep blood를 함유하는 TSA(Tryptic soy agar) 배지를 제조하였다. 균주를 획선으로 도말하고, 30℃에서 24 시간 동안 배양하였다. 균체 주위에 형성되는 환의 크기로 α, β 및 γ 용혈성을 확인하였다. 바실러스 세레우스(Bacillus cereus) KCTC 1012는 용혈의 양성 대조군으로 사용하였다.

도 3 및 표 7에 나타난 바와 같이, 바실러스 세레우스는 균 주변부에 적혈구가 파괴되어 용혈 활성(β-헤몰리시스)을 나타낸 반면, MKJW 균주는 아무런 변화도 나타나지 않아, γ-헤몰리시스를 갖는 것으로 확인되었다.

Haemolysis activity
MKJW	Bacillus cereus
- (음성, γ-hemolysis)	+ (양성,β-hemolysis)

실시예 8. β-글루쿠로니다제 활성

β-글루쿠로니다제 활성은 균주의 배양액을 1 mL MRS에 1%로 접종하고, 24 시간 동안 30℃에서 배양하고, 배양 상등액을 조효소 샘플로서 사용하였다. 0.8 mL의 2 mM ρ-니트로페닐-β-D-글루쿠로나이드(Tokyo Chemical Industry CO., LTD, Tokyo, Japan), 0.2 mL의 phosphate buffer(pH 7.0) 또는 0.2 mL 배양 상등액을 넣고, 37 ℃에서 30분 동안 배양하였다. 1 mL의 0.5 N NaOH를 첨가하여 반응을 중지시키고, Cary 60 UV/Vis 분광 광도계(Agilent Technologies Inc., CA, USA)를 사용하여 405 nm에서 흡광도를 측정하여 상등액의 β-글루쿠로니다제 활성을 측정하였다.

37℃에서 분석 조건 하에서 표준물질 ρ-니트로페놀의 표준 곡선(standard curve)을 이용하여 1 β-글루쿠로니다아제의 1 unit이 분당 1 μmol/L의 ρ-니트로페놀을 방출할 수 있는 효소의 양으로 측정하였다. 또한 β-글루쿠로니다제를 생성하는 에스케리치아 콜리(Escherichia coli) KCTC 1682를 양성 대조군으로 사용하였다. β-글루쿠로니다아제 활성을 나타내는 균은 탄수화물로부터 독성이 있는 발암물질을 생산하기 때문에, 프로바이오틱스 균주로 적합하지 않다.

하기 표 8에 나타난 바와 같이, 에스케리치아 콜리 KCTC 1682는 β-글루쿠로니다아제 활성을 0.80 U/ml로 나타내는 반면, MKJW 균주는 - 0.29U/ml 로 음의 값을 나타내어 프로바이오틱스 균주로서 적합한 것으로 나타났다.

β-glucuronidase activity (U/mL)
MKJW	Escherichia coli
- 0.29 ± 0.09	0.80 ± 0.06

실시예 9. 콜린 분해 효소 억제 활성

AChE(Acetyl cholinesterase) 효소는 뇌의 주된 콜린가수분해 효소로 신경 전달 물질인 아세틸콜린을 분해함으로써 일련의 반응을 통해 신경세포의 손상을 초래하여 기억력 결핍을 유발한다. 따라서 AChE 억제 활성은 아세틸콜린의 분해를 억제하여 신경세포의 손상을 억제해줌으로 치매 예방 효과가 있다. MKJW 균주의 AChE 억제 활성을 측정하기 위해, 설탕과 맥아당을 함유한 LM 배지에 균주 배양액 1%를 접종하고, 48 시간 동안 30℃에서 배양하였다. 배양 상등액을 조효소 샘플로서 사용하였다. 균 상등액 125 ㎕와 DTNB(dithionitrobenzoic acid) 40 ㎕, AChE(SigmaAldrich, StLouis, USA) 5 ㎕를 혼합하여 5분 동안 방치하고, acetylthiocholine iodide 7.5㎕를 첨가하여 5분 반응 후, 412 nm에서 흡광도를 측정하여 하기 식에 대입하여 억제 활성(%)을 측정하였다. Galantamin 0.001 mg/ml를 양성 대조군으로 사용하였다.

억제 활성(Inhibition, %)= {ABS _control - (ABS _sample - ABS _{sample blank} )} / ABS _control ) * 100

알츠하이머형 치매(Alzheimer’ disease)의 주요한 특징 중의 하나인 AChE의 활성 증가와 마찬가지로 BChE(Butyrylcholinesterase) 효소 활성의 증가는 주요한 특징 중 하나이다. MKJW 균주의 BChE 효소 억제 활성을 측정하기 위해, 설탕과 맥아당을 함유한 LM 배지에 균을 48 시간 배양하였다. 배양 상등액을 조효소 샘플로서 사용하였다. 균 상등액 125 ㎕와 dithionitrobenzoic acid (DTNB) 40 ㎕, Acetyl cholinesterase (AChE) 효소 5 ㎕를 혼합하여 5분 방치 후, butyrylcholine iodide 7.5 ㎕를 첨가하였다. 5분 반응 후, 412 nm에서 흡광도를 측정하여 하기 식에 대입하여 억제 활성(%)을 측정하였다. Galantamin 0.001 mg/ml를 양성 대조군으로 사용하였다.

표 9에 나타난 바와 같이, MKJW 균주의 AChE 억제 활성을 측정한 결과, Galantamin는 63.85%의 억제 활성을 나타냈고, MKJW 균주는 설탕 함유 배양액에서 36.91%의 억제 활성을, 설탕 및 맥아당 함유 배양액에서 48.06%의 억제 활성을 나타냈다. 또한, MKJW 균주의 BChE 효소 억제 활성을 측정한 결과, Galantamin는 36.80%의 억제 활성을 나타냈고, MKJW 균주는 설탕 함유 배양액에서 50.54%의 억제 활성을, 설탕 및 맥아당 함유 배양액에서 52.05%의 억제 활성을 나타냈다.

	Galantamin	MKJW
		2% sucrose	2% sucrose + 100mM Maltose
AChE inhibition(%)	63.85 ± 0.74	36.91 ± 0.40	48.06 ± 2.72
BChE inhibition(%)	36.80 ± 3.30	50.54 ± 2.67	52.05 ± 3.32

실시예 10. 균 배양액의 탄수화물 패턴 분석

MKJW 균주 배양액의 탄수화물 패턴 분석은 얇은층 크로마토그래피(Thin-layer chromatography,TLC)를 이용하였다. 1%로 용해된 맥아당, 과당, 자당, 올리고당을 standard로 사용하고, TLC 판(Silica gel 60 F254,Merck)에 standard와 균 배양액을 1 ㎕ 점적하여 전개 용액(nitromethane :1-propanol : water (2 : 5 : 1.5 - v/v/v))으로 전개하고, 발색 용액(0.3% (w/v) N-(1-naphthyl)-1-ethylenediamine과 5% (v/v) 황산을 포함 메탄올 용액) 뿌려서 각 탄수화물의 패턴을 분석하였다.

도 4에 나타난 바와 같이, MKJW 균주는 설탕과 맥아당을 동시에 배지로 사용하였을 경우, 감미성은 있으나, 열량이 낮은 올리고당을 생성하는 것으로 나타났다.

실시예 11. AchE 활성 비교

류코노스톡 메젠테로이드(Leconostoc mesemteroides) 종 내에서 MKJW 균주의 AChE 억제 활성을 평가하기 위해, 상용 균주인 류코노스톡 메젠테로이드(Leconostoc mesemteroides) KCTC3719와 AChE 억제 활성을 비교하였다. AChE의 활성은 실시예 9와 동일한 방법으로 측정하였으며, 사용한 배지는 글루코오스를 함유한 배지를 사용하였다.

표 10에 나타난 바와 같이, MKJW 균주는 다른 류코노스톡 메젠테로이드(Leconostoc mesemteroides) 균주에 비해 우수한 AChE 억제 활성을 나타냈다.

	LMG
Leuconostoc mesenteroides KCTC3719	42.92±2.35
Leuconostoc mesenteroides MKJW	51.29±2.57

실시예 12. 발효능 평가

MKJW 균주의 프로바이오틱스로서 발효능을 평가하기 위해, MKJW 균주와 류코노스톡 메센테로이드(Leconostoc mesemteroides) MKSR 균주(이하, MKSR 균주)를 발효 종균으로 사용하여 발효능을 평가하였다. 도 1에 나타난 바와 같이 MKJW 균주와 MKSR 균주는 같은 종이라도 종간 서로 다른 그룹에 위치해 있다. 발효 대상은 5% 인진쑥(산림글로벌㈜,용인시) 및 2% 쌍별귀뚜라미(㈜크리켓팜,화성시)를 혼합물을 사용하였다. 인진쑥에 부족한 배지 영양분은 글루코오스 (덕산약품,안산시), 쌍별귀뚜라미로 보충하였다.

MKJW 균주와 MKSR 균주의 발효능을 비교하기 위해, 구체적으로 인진쑥 5 g, 쌍별귀뚜라미 2 g, 글루코오스 2.5 g 을 혼합한 액상 혼합물 100 ml에 MKJW 균주 또는 MKSR 균주를 초기 생균수가 6.8 Log CFU/ml 가 되도록 혼합물의 5%(v/v)으로 접종하고, 30℃에서 발효하였다. 발효 24시간 후 생균수를 평판 배양법으로 측정하고, Log CFU/ml 값으로 환산하여 측정하였다.

도 5에 나타난 바와 같이, MKSR 균주는 발효 후 생균수가 증가하지 않는 반면, MKJW 균주는 발효 25시간 후에 생균수가 9.21 log CFU/ml로 증가하는 것으로 나타났다. 이는 MKJW 균주의 발효능이 우수하다는 것을 입증한다.

이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 즉, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다.

한국생명공학연구원

KCTC14459BP

20210121

<110> Dankook University Cheonan Campus Industry Academic Cooperation Foundation <120> Novel Leconostoc mesemteroides MKJW, and uses thereof <130> ADP-2020-0664 <160> 1 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 1415 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MKJW-16s rRNA <400> 1 tgcagtcgaa cgcacagcga aaggtgcttg cacctttcaa gtgagtggcg aacgggtgag 60 taacacgtgg acaacctgcc tcaaggctgg ggataacatt tggaaacaga tgctaatacc 120 gaataaaact tagtgtcgca tgacacaaag ttaaaaggcg cttcggcgtc acctagagat 180 ggatccgcgg tgcattagtt agttggtggg gtaaaggcct accaagacaa tgatgcatag 240 ccgagttgag agactgatcg gccacattgg gactgagaca cggcccaaac tcctacggga 300 ggctgcagta gggaatcttc cacaatgggc gaaagcctga tggagcaacg ccgcgtgtgt 360 gatgaaggct ttcgggtcgt aaagcactgt tgtatgggaa gaacagctag aataggaaat 420 gattttagtt tgacggtacc ataccagaaa gggacggcta aatacgtgcc agcagccgcg 480 gtaatacgta tgtcccgagc gttatccgga tttattgggc gtaaagcgag cgcagacggt 540 ttattaagtc tgatgtgaaa gcccggagct caactccgga atggcattgg aaactggtta 600 acttgagtgc agtagaggta agtggaactc catgtgtagc ggtggaatgc gtagatatat 660 ggaagaacac cagtggcgaa ggcggcttac tggactgcaa ctgacgttga ggctcgaaag 720 tgtgggtagc aaacaggatt agataccctg gtagtccaca ccgtaaacga tgaacactag 780 gtgttaggag gtttccgcct cttagtgccg aagctaacgc attaagtgtt ccgcctgggg 840 agtacgaccg caaggttgaa actcaaagga attgacgggg acccgcacaa gcggtggagc 900 atgtggttta attcgaagca acgcgaagaa ccttaccagg tcttgacatc ctttgaagct 960 tttagagata gaagtgttct cttcggagac aaagtgacag gtggtgcatg gtcgtcgtca 1020 gctcgtgtcg tgagatgttg ggttaagtcc cgcaacgagc gcaaccctta ttgttagttg 1080 ccagcattca gatgggcact ctagcgagac tgccggtgac aaaccggagg aaggcgggga 1140 cgacgtcaga tcatcatgcc ccttatgacc tgggctacac acgtgctaca atggcgtata 1200 caacgagttg ccaacccgcg agggtgagct aatctcttaa agtacgtctc agttcggatt 1260 gtagtctgca actcgactac atgaagtcgg aatcgctagt aatcgcggat cagcacgccg 1320 cggtgaatac gttcccgggt cttgtacaca ccgcccgtca caccatggga gtttgtaatg 1380 cccaaagccg gtggcctaac cttttaggaa ggagc 1415

Claims

기탁번호 KCTC 14459BP로 기탁된 류코노스톡 메젠테로이드(Leconostoc mesemteroides) MKJW 균주.
제1항에 있어서, 상기 균주는 내산성 및 내담즙성을 갖는 것을 특징으로 하는 균주.
제1항에 있어서, 상기 균주는 알파 글루코시데이즈(α-glucosidase) 억제 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 균주.
제1항에 있어서, 상기 균주는 알파 아밀레이즈(α-amylase) 억제 활성을 나타내지 않는 것을 특징으로 하는 균주.
제1항에 있어서, 상기 균주는 당뇨병 예방 또는 개선 효능을 갖는 것을 특징으로 하는 균주.
제1항에 있어서, 상기 균주는 항균 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 균주.
제6항에 있어서, 상기 항균 활성은 에스케리치아 콜리(Escherichia coli), 슈도모나스 에루지노사(Pseudomonas aeruginosa), 쉬젤라 플렉스네리(Shigella flexneri), 스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus), 엔테로코커스 페칼리스(Enterococcus faecalis) 및 프로테우스 불가리스(Proteus vulgaris)로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나의 식중독균에 대한 항균 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 균주
제1항에 있어서, 상기 균주는 항산화 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 균주.
제1항에 있어서, 상기 균주는 적혈구를 파괴하는 용혈 활성을 나타내지 않는 것을 특징으로 하는 균주.
제1항에 있어서, 상기 균주는 β-글루쿠로니다제 활성을 나타내지 않는 것을 특징으로 하는 균주.
제1항에 있어서, 상기 균주는 AChE(Acetyl cholinesterase) 및 BChE(Butyrylcholinesterase)에 대한 억제 활성을 갖는 것을 특징으로 하는 균주.
제1항에 있어서, 상기 균주는 치매 예방 또는 개선 효능을 갖는 것을 특징으로 하는 균주.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 균주, 이의 배양액 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 당뇨병 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 균주, 이의 배양액 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 당뇨병 예방 또는 개선용 건강기능 식품 조성물.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 균주, 이의 배양액 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 치매 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
제1항 내지 제12항 중 어느 한 항의 균주, 이의 배양액 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 치매 예방 또는 개선용 건강기능 식품 조성물.