KR20220110244A - Glp2 수용체 작용제 및 사용 방법 - Google Patents

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웨이준 션
피터 지 슐츠
자이드 앰소
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Abstract

GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드를 포함하는 펩타이드 접합체가 제공된다. 펩타이드 접합체는 GLP-2 수용체의 조절에 반응하는 병태를 치료하는데 사용될 수 있다. 스테이플된 GLP-2 펩타이드 접합체가 추가로 제공된다.

Description

GLP2 수용체 작용제 및 사용 방법
상호 참조
본 출원은 2019년 12월 4일에 출원된 미국 가출원 일련 번호 62/943,667 및 2020년 3월 25일에 출원된 미국 가출원 일련 번호 62/994,791을 우선권 주장하며 이들은 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.
치료제의 개발은 종종 짧은 반감기에 의해 방해를 받는다. 제제의 생물학적 반감기는 이의 약리학적, 생리학적 또는 방사선학적 활성의 절반을 잃는 데 걸리는 시간이다. 그 결과, 환자들은 종종 더 높은 용량의 치료제를 더 자주 투여받고, 이는 감소된 순응도, 더 높은 비용 및 부작용의 더 큰 위험을 야기할 수 있다. 따라서, 반감기가 연장된 치료제의 개발이 필요하다.
발명의 요약
하기를 포함하는 펩타이드 접합체가 본원에 개시되어 있다:
a) GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드; 및
b) 제1 아미노산 및 제2 아미노산에서 펩타이드에 부착된 스테이플.
일부 구현예에서, 스테이플은 하기 화학식 (I)이다:
Figure pct00001
상기 식에서,
A는 임의로 치환된 알킬렌, 임의로 치환된 아릴렌, 임의로 치환된 헤테로아릴렌, 임의로 치환된 -NR3-알킬렌-NR3-, 또는 -N-이고;
X1 및 X2는 독립적으로 결합, -C(=O)-, -알킬렌-C(=O)-, -C(=O)-알킬렌, 또는 -알킬렌-C(=O)NR3-, -알킬렌-C(=O)NR3-알킬렌-이고;
여기서, X1은 펩타이드의 제1 아미노산에 부착되고, X2는 펩타이드의 제2 아미노산에 부착되고;
R은 수소 또는 -(L)s-Y이고;
각각의 L은 독립적으로 -(CR1R2)v-, -알킬렌-O-, -O-알킬렌-, -C(=O)-알킬렌-, -알킬렌-C(=O)-, -NR3-알킬렌-, -알킬렌-NR3-, -S-알킬렌-, -알킬렌-S-, -S(=O)-알킬렌-, -알킬렌-S(=O)-, -S(=O)2-알킬렌, -알킬렌-S(=O)2-, -C(=O)-, -C(=O)NR3-, -NR3C(=O)-, -NR3C(=O)NR3-, -NR3C(=O)NR3-알킬렌-, -NR3C(=O)-알킬렌-NR3-, -알킬렌-C(=O)NR3-, -C(=O)NR3-알킬렌-, -알킬렌-NR3C(=O)-, 또는 -NR3C(=O)-알킬렌-이고;
v는 2-20이고;
각각의 R1 또는 R2는 독립적으로 수소, 할로겐, -CN, -ORa, -SRa, -S(=O)Rb, -NO2, -NRcRd, -S(=O)2Rd, -NRaS(=O)2Rd, -S(=O)2NRcRd, -C(=O)Rb, -OC(=O)Rb, -CO2Ra, -OCO2Ra, -C(=O)NRcRd, -OC(=O)NRcRd, -NRaC(=O)NRcRd, -NRaC(=O)Rb, -NRaC(=O)ORa, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C6 헤테로알킬, C3-C8 사이클로알킬, C2-C8 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고; 여기서, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 헤테로알킬은 할로겐, -ORa, 또는 -NRcRd 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고; 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -ORa, -NRcRd 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되거나,
R1 및 R2는 함께 취하여 C1-C6 사이클로알킬 또는 C1-C6 헤테로사이클로알킬을 형성하고;
각각의 R3은 독립적으로 수소, -S(=O)Rb, -S(=O)2Ra, -S(=O)2NRcRd, -C(=O)Rb, -CO2Ra, -C(=O)NRcRd, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C6 헤테로알킬, C3-C8 사이클로알킬, C2-C8 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고; 여기서, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 헤테로알킬은 할로겐, -ORa, 또는 -NRcRd 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고; 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -ORa, 또는 -NRcRd 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고;
Y는 수소, C1-C6 알킬, -CO2H, -CO2(C1-C6 알킬), -CO2NH2, -CO2N(알킬)2, 또는 -CO2NH(알킬)이고;
s는 0-20이고;
Ra는 수소, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C6 헤테로알킬, C3-C8 사이클로알킬, C2-C8 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고; 여기서, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 헤테로알킬은 할로겐, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고; 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고;
Rb는 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C6 헤테로알킬, C3-C8 사이클로알킬, C2-C8 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고; 여기서, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 헤테로알킬은 할로겐, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고; 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고;
각각의 Rc 및 Rd는 독립적으로 수소, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C6 헤테로알킬, C3-C8 사이클로알킬, C2-C8 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고; 여기서, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 헤테로알킬은 할로겐, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고; 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되거나;
Rc 및 Rd는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 헤테로사이클로알킬 또는 헤테로아릴을 형성하고; 여기서, 헤테로사이클로알킬 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환된다.
또한, 본원에 기재된 펩타이드 접합체 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학 조성물이 본원에 개시되어 있다.
또한, 치료학적 유효량의 본원에 기재된 펩타이드 접합체를 포함하는 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하는 방법이 본원에 개시되어 있다.
또한, 하기 화학식의 스테이플이 본원에 기재되어 있다:
Figure pct00002
상기 식에서,
A는 임의로 치환된 알킬렌, 임의로 치환된 아릴렌, 임의로 치환된 헤테로아릴렌, 임의로 치환된 -NR3-알킬렌-NR3-, 또는 -N-이고;
X1 및 X2는 독립적으로 결합, -C(=O)-, -알킬렌-C(=O)-, -C(=O)-알킬렌, -알킬렌-C(=O)NR3-, 또는 -알킬렌-C(=O)NR3-알킬렌-이고;
Y1 및 Y2는 독립적으로 할로겐, -COOH,
Figure pct00003
이거나, 독립적으로 설프히드릴-함유 아미노산의 -S- 또는 -CONH-이고, 여기서, -NH-는 GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드 내의 아민-함유 아미노산의 일부이고;
R은 수소 또는 -(L)s-Y이고;
각각의 L은 독립적으로 -(CR1R2)v-, -알킬렌-O-, -O-알킬렌-, -C(=O)-알킬렌-, -알킬렌-C(=O)-, -NR3-알킬렌-, -알킬렌-NR3-, -S-알킬렌-, -알킬렌-S-, -S(=O)-알킬렌-, -알킬렌-S(=O)-, -S(=O)2-알킬렌, -알킬렌-S(=O)2-, -C(=O)-, -C(=O)NR3-, -NR3C(=O)-, -NR3C(=O)NR3-, -NR3C(=O)NR3-알킬렌-, -NR3C(=O)-알킬렌-NR3-, -알킬렌-C(=O)NR3-, -C(=O)NR3-알킬렌-, -알킬렌-NR3C(=O)-, 또는 -NR3C(=O)-알킬렌-이고;
v는 2-20이고;
각각의 R1 또는 R2는 독립적으로 수소, 할로겐, -CN, -ORa, -SRa, -S(=O)Rb, -NO2, -NRcRd, -S(=O)2Rd, -NRaS(=O)2Rd, -S(=O)2NRcRd, -C(=O)Rb, -OC(=O)Rb, -CO2Ra, -OCO2Ra, -C(=O)NRcRd, -OC(=O)NRcRd, -NRaC(=O)NRcRd, -NRaC(=O)Rb, -NRaC(=O)ORa, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C6 헤테로알킬, C3-C8 사이클로알킬, C2-C8 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고; 여기서, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 헤테로알킬은 할로겐, -ORa, 또는 -NRcRd 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고; 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -ORa, -NRcRd 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되거나,
R1 및 R2는 함께 취하여 C1-C6 사이클로알킬 또는 C1-C6 헤테로사이클로알킬을 형성하고;
각각의 R3은 독립적으로 수소, -S(=O)Rb, -S(=O)2Ra, -S(=O)2NRcRd, -C(=O)Rb, -CO2Ra, -C(=O)NRcRd, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C6 헤테로알킬, C3-C8 사이클로알킬, C2-C8 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고; 여기서, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 헤테로알킬은 할로겐, -ORa, 또는 -NRcRd 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고; 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -ORa, 또는 -NRcRd 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고;
Y는 수소, C1-C6 알킬, -CO2H, -CO2(C1-C6 알킬), -CO2NH2, -CO2N(알킬)2, 또는 -CO2NH(알킬)이고;
s는 0-20이고;
Ra는 수소, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C6 헤테로알킬, C3-C8 사이클로알킬, C2-C8 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고; 여기서, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 헤테로알킬은 할로겐, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고; 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고;
Rb는 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C6 헤테로알킬, C3-C8 사이클로알킬, C2-C8 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고; 여기서, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 헤테로알킬은 할로겐, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고; 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고;
각각의 Rc 및 Rd는 독립적으로 수소, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C6 헤테로알킬, C3-C8 사이클로알킬, C2-C8 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고; 여기서, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 헤테로알킬은 할로겐, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고; 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되거나;
Rc 및 Rd는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 헤테로사이클로알킬 또는 헤테로아릴을 형성하고; 여기서, 헤테로사이클로알킬 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환된다.
일부 구현예에서, A는 임의로 치환된 알킬렌이다. 일부 구현예에서, A는 -(CH2)t-이고, 여기서, t는 1-12이다. 일부 구현예에서, A는 임의로 치환된 아릴렌이다. 일부 구현예에서, A는 -NR3-알킬렌-NR3-이다. 일부 구현예에서, A는 -N-이다.
일부 구현예에서, X1 및 X2는 -C(=O)-이다. 일부 구현예에서, X1 및 X2는 -알킬렌-C(=O)-이다. 일부 구현예에서, X1 및 X2는 -CH2-C(=O)-이다. 일부 구현예에서, X1 및 X2는 독립적으로 -알킬렌-C(=O)NR3-이다. 일부 구현예에서, X1 및 X2는 독립적으로 -CH2-C(=O)NR3-이다. 일부 구현예에서, X1 및 X2는 독립적으로 -알킬렌-C(=O)NR3-알킬렌-이다. 일부 구현예에서, X1 및 X2는 독립적으로 -CH2-C(=O)NR3-CH2CH2-이다.
일부 구현예에서, >A-R은 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00004
상기 식에서, r1 및 r2는 각각 독립적으로 0-4이다.
일부 구현예에서, >A-R은 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00005
일부 구현예에서, >A-R은 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00006
상기 식에서, p1은 1-5이다.
일부 구현예에서, >A-R은 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00007
일부 구현예에서, >A-R은 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00008
일부 구현예에서, s는 1-15이다. 일부 구현예에서, s는 1-10이다. 일부 구현예에서, s는 5-15이다. 일부 구현예에서, s는 5-10이다.
일부 구현예에서, Y는 수소 또는 -CO2H이다.
일부 구현예에서, 각각의 L은 독립적으로 -(CR1R2)v-, -알킬렌-O-, -C(=O)-, -C(=O)NR3-, -NR3C(=O)-, -알킬렌-C(=O)NR3-, 또는 -알킬렌-NR3C(=O)-이고; v는 2-20이다.
일부 구현예에서, Y1 및 Y2는 할로겐이다. 일부 구현예에서, Y1 및 Y2는 -COOH이다. 일부 구현예에서, Y1 및 Y2는 GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드 내의 2개의 설프히드릴-함유 아미노산의 -S-이다.
일부 구현예에서, Y1 및 Y2는 펩타이드 내의 2개의 설프히드릴-함유 아미노산의 -S-이다.
일부 구현예에서, Y1 및 Y2는 -CONH-이고, 여기서, -NH-는 GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드 내의 2개의 아민-함유 아미노산의 일부이다.
일부 구현예에서, Y1 및 Y2는 -CONH-이고, 여기서, -NH-는 7개의 아미노산이 떨어져 있는 GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드 내의 2개의 아민-함유 아미노산의 일부이다.
도 1a는 혈청이 첨가되지 않은 인간 GLP2R에 대한 테두글루타이드 및 지속성 GLP2R 작용제의 농도-반응 곡선을 도시한다.
도 1b는 혈청이 첨가된 인간 GLP2R에 대한 테두글루타이드 및 지속성 GLP2R 작용제의 농도-반응 곡선을 도시한다.
도 2는 마우스 GLP2R에 대한 테두글루타이드, 지속성 GLP2R 작용제, 및 아프라글루타이드의 농도-반응 곡선을 도시한다.
도 3은 사이노 원숭이(cyno monkey) GLP2R에 대한 테두글루타이드 및 지속성 GLP2R 작용제의 농도-반응 곡선을 도시한다.
도 4a는 GLP1R에 대한 테두글루타이드 및 지속성 GLP2R 작용제의 농도-반응 곡선을 도시한다.
도 4b는 GCGR에 대한 테두글루타이드 및 지속성 GLP2R 작용제의 농도-반응 곡선을 도시한다.
도 4c는 GIPR에 대한 테두글루타이드 및 지속성 GLP2R 작용제의 농도-반응 곡선을 도시한다
도 5a는 4℃에서 4일에 걸친 GLP2-2G-10Nle-1K-Ex4-K5 (GLP2-K5) 및 GLP2-2G-1-EX4-L5A (GLP2-L5A)의 열 안정성을 도시한다.
도 5b는 25℃에서 4일에 걸친 GLP2-2G-10Nle-1K-Ex4-K5 (GLP2-K5) 및 GLP2-2G-1-EX4-L5A (GLP2-L5A)의 열 안정성을 도시한다.
도 5c는 37℃에서 4일에 걸친 GLP2-2G-10Nle-1K-Ex4-K5 (GLP2-K5) 및 GLP2-2G-1-EX4-L5A (GLP2-L5A)의 열 안정성을 도시한다.
도 5d는 70℃에서 4일에 걸친 GLP2-2G-10Nle-1K-Ex4-K5 (GLP2-K5) 및 GLP2-2G-1-EX4-L5A (GLP2-L5A)의 열 안정성을 도시한다.
도 6a는 3.3의 pH 및 4℃의 온도에서 4일에 걸친 GLP2-2G-10Nle-1K-Ex4-K5 (GLP2-K5) 및 GLP2-2G-1-EX4-L5A (GLP2-L5A)의 안정성을 도시한다.
도 6b는 3.3의 pH 및 실온에서 4일에 걸친 GLP2-2G-10Nle-1K-Ex4-K5 (GLP2-K5) 및 GLP2-2G-1-EX4-L5A (GLP2-L5A)의 안정성을 도시한다.
도 6c는 37.5의 pH 및 4℃의 온도에서 4일에 걸친 GLP2-2G-10Nle-1K-Ex4-K5 (GLP2-K5) 및 GLP2-2G-1-EX4-L5A (GLP2-L5A)의 안정성을 도시한다.
도 6d는 37.5의 pH 및 실온에서 4일에 걸친 GLP2-2G-10Nle-1K-Ex4-K5 (GLP2-K5) 및 GLP2-2G-1-EX4-L5A (GLP2-L5A)의 안정성을 도시한다.
도 6e는 8.9의 pH 및 4℃의 온도에서 4일에 걸친 GLP2-2G-10Nle-1K-Ex4-K5 (GLP2-K5) 및 GLP2-2G-1-EX4-L5A (GLP2-L5A)의 안정성을 도시한다.
도 6f는 8.9의 pH 및 실온에서 4일에 걸친 GLP2-2G-10Nle-1K-Ex4-K5 (GLP2-K5) 및 GLP2-2G-1-EX4-L5A (GLP2-L5A)의 안정성을 도시한다.
도 7a는 120분에 걸친 지속성 GLP2-2G-1-EX4-L5A의 간 안정성을 도시한다.
도 7b는 120분에 걸친 지속성 GLP2-2G-10Nle-1-EX4-L5A의 간 안정성을 도시한다.
도 7c는 120분에 걸친 지속성 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5의 간 안정성을 도시한다.
도 8은 마우스에서 96시간에 걸친 GLP2-2G-1-EX4-L5A의 평균 혈장 농도를 도시한다.
도 9는 사이노 원숭이에서 504시간에 걸친 GLP2-2G-1-EX4-L5A의 평균 혈장 농도를 도시한다.
도 10은 마우스에서 96시간에 걸친 GLP2-2G-10Nle-1-EX4-L5A의 평균 혈장 농도를 도시한다.
도 11은 사이노 원숭이에서 504시간에 걸친 GLP2-2G-10Nle-1-EX4-L5A의 평균 혈장 농도를 도시한다.
도 12는 마우스에서 96시간에 걸친 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5의 평균 혈장 농도를 도시한다.
도 13은 사이노 원숭이에서 504시간에 걸친 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5의 평균 혈장 농도를 도시한다.
도 14a는 처리를 받지 않은, GLP2-2G-1-L5A (GLP2-2G-1-EX4-L5A) 및 GLP2-2G-5-L5A (GLP2-2G-10Nle-1-EX4-L5A)로 처리된 야생형 마우스에서 소장의 정규화된 길이를 도시한다.
도 14b는 처리를 받지 않은, GLP2-2G-1-L5A (GLP2-2G-1-EX4-L5A) 및 GLP2-2G-5-L5A (GLP2-2G-10Nle-1-EX4-L5A)로 처리된 야생형 마우스에서 소장의 정규화된 길이를 도시한다.
도 14c는 처리를 받지 않은, GLP2-2G-1-L5A (GLP2-2G-1-EX4) 및 GLP2-2G-5-L5A (GLP2-2G-10Nle-1-EX4)로 처리된 야생형 마우스에서 11일에 걸친 체중을 도시한다.
도 15a는 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5로 처리된 야생형 마우스 및 처리를 받지 않은 야생형 마우스에서 소장의 길이를 도시한다.
도 15b는 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5로 처리된 야생형 마우스 및 처리를 받지 않은 야생형 마우스에서 소장의 중량을 도시한다.
도 15c는 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5로 처리된 야생형 마우스 및 처리를 받지 않은 야생형 마우스에서 결장의 길이를 도시한다.
도 15d는 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5로 처리된 야생형 마우스 및 처리를 받지 않은 야생형 마우스에서 결장의 중량을 도시한다.
도 16a는 처리를 받지 않은 그리고 GLP2-2G-1-L5A (GLP2-2G-1-EX4-L5) 및 사이클로스포린 A로 처리된, 유발된 급성 대장염을 가진 마우스의 12일에 걸친 체중을 도시한다.
도 16b는 처리를 받지 않은 그리고 GLP2-2G-1-L5A (GLP2-2G-1-EX4-L5) 및 사이클로스포린 A로 처리된, 유발된 급성 대장염을 가진 마우스의 정규화된 결장 중량을 도시한다.
도 16c는 처리를 받지 않은 그리고 GLP2-2G-1-L5A (GLP2-2G-1-EX4-L5) 및 사이클로스포린 A로 처리된, 유발된 급성 대장염을 가진 마우스의 정규화된 소장 중량을 도시한다.
도 16d는 처리를 받지 않은 그리고 GLP2-2G-1-L5A (GLP2-2G-1-EX4-L5)로 처리된 유발된 급성 대장염을 가진 야생형 마우스 및 마우스의 결장에서 음와(crypt) 깊이를 도시한다.
도 16e는 처리를 받지 않은 그리고 GLP2-2G-1-L5A (GLP2-2G-1-EX4-L5)로 처리된 유발된 급성 대장염을 가진 야생형 마우스 및 마우스의 공장 융모 길이를 도시한다.
도 17a는 처리를 받지 않은, GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5, 테두글루타이드, 및 사이클로스포린 A로 처리된 유발된 급성 대장염을 가진 마우스의 10일에 걸친 체중을 도시한다.
도 17b는 처리를 받지 않은, GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5, 테두글루타이드, 및 사이클로스포린 A로 처리된 유발된 급성 대장염을 가진 마우스의 결장 길이를 도시한다.
도 17c는 처리를 받지 않은, GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5, 테두글루타이드, 및 사이클로스포린 A로 처리된 유발된 급성 대장염을 가진 마우스의 소장 길이를 도시한다.
도 17d는 처리를 받지 않은, GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5, 테두글루타이드, 및 사이클로스포린 A로 처리된 유발된 급성 대장염을 가진 마우스의 소장 중량을 도시한다.
도 17e는 처리를 받지 않은, GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5, 테두글루타이드, 및 사이클로스포린 A로 처리된 유발된 급성 대장염을 가진 마우스의 공장 융모의 높이를 도시한다.
도 17f는 처리를 받지 않은, GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5, 테두글루타이드, 및 사이클로스포린 A로 처리된 유발된 급성 대장염을 가진 마우스의 공장에서 증식 지수를 도시한다.
도 17g는 마우스에서 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5 및 테두글루타이드의 약동학을 도시한다.
도 18a는 처리를 받지 않은, GLP2-2G-10Nle-L5A, 및 사이클로스포린 A로 처리된, 유발된 급성 대장염을 가진 마우스의 8일에 걸친 체중의 변화 퍼센트를 도시한다.
도 18b는 처리를 받지 않은, GLP2-2G-1-EX4-L5A, 및 사이클로스포린 A로 처리된, 유발된 급성 대장염을 가진 마우스의 8일에 걸친 체중의 변화 퍼센트를 도시한다.
도 18c는 처리를 받지 않은, GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5, 사이클로스포린 A로 처리된, 유발된 급성 대장염을 가진 마우스의 8일에 걸친 체중의 퍼센트 변화를 도시한다.
도 18d는 처리를 받지 않은, 지속성 GLP2R 작용제, 및 사이클로스포린 A로 처리된, 유발된 급성 대장염을 가진 마우스의 결장 길이를 도시한다.
도 18e는 처리를 받지 않은, 지속성 GLP2R 작용제, 및 사이클로스포린 A로 처리된, 유발된 급성 대장염을 가진 마우스의 결장 중량을 도시한다.
도 18f는 처리를 받지 않은, 상이한 지속성 GLP2R 작용제, 사이클로스포린 A로 처리된, 유발된 급성 대장염을 가진 마우스의 소장 길이를 도시한다.
도 18g는 처리를 받지 않은, 상이한 지속성 GLP2R 작용제, 및 사이클로스포린 A로 처리된, 유발된 급성 대장염을 가진 마우스의 소장 중량을 도시한다.
도 18h는 처리를 받지 않은, 상이한 지속성 GLP2R 작용제, 사이클로스포린 A로 처리된, 유발된 급성 대장염을 가진 마우스의 담낭 비대를 도시한다.
도 18i는 처리를 받지 않은, 상이한 지속성 GLP2R 작용제, 사이클로스포린 A로 처리된, 유발된 급성 대장염을 가진 마우스의 대변에서 잠혈의 양을 도시한다.
도 18j는 0.03 mg/kg 용량에서 지속성 GLP2R 작용제의 약동학을 도시한다.
도 18k는 0.1 mg/kg 용량에서 지속성 GLP2R 작용제의 약동학을 도시한다.
도 18l은 급성 대장염 마우스 모델에서 두 용량 모두에서 GLP2-2G-10Nle-L5A의 약동학을 도시한다.
도 18m은 급성 대장염 마우스 모델에서 두 용량 모두에서 GLP2-2G-1-EX4-L5A의 약동학을 도시한다.
도 18n은 급성 대장염 마우스 모델에서 두 용량 모두에서 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5의 약동학을 도시한다.
도 19a는 처리를 받지 않은, GLP2-2G-1-EX4-L5A로 처리된, 사이클로스포린으로 처리된 그리고 테두글루타이드로 처리된, 유도된 만성 대장염을 가진 마우스의 체중의 절대 변화를 도시한다.
도 19b는 처리를 받지 않은, GLP2-2G-1-EX4-L5A, 사이클로스포린, 및 테두글루타이드로 처리된, 유도된 만성 대장염을 가진 마우스의 결장 길이를 도시한다.
도 19c는 처리를 받지 않은, GLP2-2G-1-EX4-L5A, 사이클로스포린, 및 테두글루타이드로 처리된, 유도된 만성 대장염을 가진 마우스의 결장 중량을 도시한다.
도 19d는 처리를 받지 않은, GLP2-2G-1-EX4-L5A, 사이클로스포린, 및 테두글루타이드로 처리된, 유도된 만성 대장염을 가진 마우스의 소장 중량을 도시한다.
도 20a는 처리를 받지 않은, GLP2-2G-10Nle-1-EX4-L5A, 사이클로스포린, 및 테두글루타이드로 처리된, 유도된 만성 대장염을 가진 마우스의 결장 길이를 도시한다.
도 20b는 처리를 받지 않은, GLP2-2G-10Nle-1-EX4-L5A, 사이클로스포린, 및 테두글루타이드로 처리된, 유도된 만성 대장염을 가진 마우스의 결장 중량을 도시한다.
도 20c는 처리를 받지 않은, GLP2-2G-10Nle-1-EX4-L5A, 사이클로스포린, 및 테두글루타이드로 처리된, 유도된 만성 대장염을 가진 마우스의 소장 길이를 도시한다.
도 21a는 처리를 받지 않은 그리고 GLP2-2G-5-EX4-L5A 처리를 받은 콜린 결핍 마우스 및 정상 식이를 공급받은 마우스에서 ALT의 혈청 수준을 도시한다.
도 21b는 처리를 받지 않은 그리고 GLP2-2G-5-EX4-L5A 처리를 받은 콜린 결핍 마우스 및 정상 식이를 공급받은 마우스에서 AST의 혈청 수준을 도시한다.
도 21c는 처리를 받지 않은 그리고 GLP2-2G-5-EX4-L5A 처리를 받은 콜린 결핍 마우스 및 정상 식이를 공급받은 마우스에서 섬유증 점수를 도시한다.
도 21d는 처리를 받지 않은 그리고 GLP2-2G-5-EX4-L5A 처리를 받은 콜린 결핍 마우스 및 정상 식이를 공급받은 마우스에서 지방증을 도시한다.
도 21e는 처리를 받지 않은 그리고 GLP2-2G-5-EX4-L5A 처리를 받은 콜린 결핍 마우스 및 정상 식이를 공급받은 마우스에서 소엽 염증을 도시한다.
도 22a는 처리를 받지 않은, 테두글루타이드, 또는 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5로 처리된, 통상적인 식이로 이유된(weaned) 수컷 마우스의 체중을 도시한다.
도 22b는 처리를 받지 않은, 테두글루타이드, 또는 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5로 처리된, 통상적인 식이로 이유된 암컷 마우스의 체중을 도시한다.
도 22c는 처리를 받지 않은, 테두글루타이드, 또는 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5로 처리된, 결핍 식이로 이유된 수컷 마우스의 체중을 도시한다.
도 22d는 처리를 받지 않은, 테두글루타이드, 또는 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5로 처리된, 결핍 식이로 이유된 암컷 마우스의 체중을 도시한다.
도 22e는 처리를 받지 않은, 테두글루타이드, 또는 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5로 처리된, 통상적인 식이로 이유된 수컷 마우스의 정규화된 소장 중량을 도시한다.
도 22f는 처리를 받지 않은, 테두글루타이드, 또는 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5로 처리된, 통상적인 식이로 이유된 암컷 마우스의 정규화된 소장 중량을 도시한다.
글루카곤-유사 펩타이드 2(GLP-2)는 장내분비 세포로부터 분비되는 호르몬이다. GLP-2는 장 성장을 자극하고 영양소 흡수와 혈류를 증가시키고 장 투과성과 운동성을 감소시키고 상피 세포의 아폽토시스와 염증을 감소시킨다. GLP-2의 장영양 효과(intestinotrophic effect)로 인해, GLP-2 및 관련 유사체는 GI 장애의 치료에 유용할 수 있다. 인간에서, 천연 GLP-2의 짧은 혈장 반감기는 임상 효능을 달성하기 위해 더 높은 용량과 빈번한 주사 또는 주입을 필요로 하며, 이는 환자 순응도에 부정적인 영향을 미칠 수 있다. 분자량 및 유체역학적 반경을 증가시키고 신장 여과를 통한 제거율을 감소시키기 위한 폴리펩타이드에 대한 PEG화 및 융합을 포함하여 GLP-2의 반감기를 연장하기 위한 접근법이 활용되었다. 그러나, 생성된 유사체는 시험관내 효능이 감소하여 그 결과로 생체내에서 효과적이기 위해서는 더 높은 용량이 필요하다.
펩타이드 접합체
한 양태에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드를 포함하는 펩타이드 접합체가 본원에 개시되어 있다. 예시적인 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 스테이플에 의해 연결된 2개의 아미노산을 포함한다. 접합에 사용하기 위한 아미노산의 비제한적인 예는 시스테인, 호모시스테인, 2-아미노-5-머캅토펜탄산, 2-아미노-6-머캅토헥산산, 라이신, 오르니틴, 디아미노부티르산, 디아미노프로피온산, 호모라이신, 다른 설프히드릴 함유 아미노산, 또는 다른 아민 함유 아미노산을 포함한다. 스테이플에 의해 연결된 2개의 아미노산을 포함하는 GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드의 경우, 2개의 아미노산은 약 또는 적어도 약 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14개 또는 그 이상의 아미노산이 떨어져 있다. 예를 들어, 제1 아미노산은 위치 i를 갖고, 제2 아미노산은 위치 i + 7, i + 11, i + 13, i + 15, 또는 i + 16을 갖는다. 예를 들어, 제1 아미노산은 펩타이드에서 위치 i를 갖고, 제2 아미노산은 펩타이드에서 위치 i + n을 가지며, 여기서, n은 4-16이다. 예를 들어, 제1 아미노산은 펩타이드에서 위치 i를 갖고, 제2 아미노산은 펩타이드에서 위치 i + 7을 갖는다. 예를 들어, 제1 아미노산은 펩타이드에서 위치 i를 갖고, 제2 아미노산은 펩타이드에서 위치 i + 11을 갖는다. 예를 들어, 제1 아미노산은 펩타이드에서 위치 i를 갖고, 제2 아미노산은 펩타이드에서 위치 i + 15를 갖는다. 예를 들어, 제1 아미노산은 펩타이드에서 위치 i를 갖고, 제2 아미노산은 펩타이드에서 위치 i + 16을 갖는다.
GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드
한 양태에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드를 포함하는 펩타이드 접합체가 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 GLP-2 수용체 작용제이다.
본원에 기재된 바와 같은 펩타이드 접합체의 결합 친화도는 GLP-2 펩타이드(예를 들어, 비접합된 GLP-2 펩타이드)의 비변형된 형태의 결합 친화도의 약 5% 이내일 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 펩타이드 접합체의 결합 친화도는 GLP-2 펩타이드의 비변형된 형태의 결합 친화도의 약 10% 이내일 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 펩타이드 접합체의 결합 친화도는 GLP-2 펩타이드의 비변형된 형태의 결합 친화도의 약 15% 이내일 수 있다. 본원에 기재된 바와 같은 펩타이드 접합체의 결합 친화도는 GLP-2 펩타이드의 비변형된 형태의 결합 친화도의 약 20% 이내일 수 있다.
GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 야생형 GLP-2 펩타이드의 적어도 일부를 포함할 수 있고 하나 이상의 아미노산 돌연변이를 포함할 수 있다. 하나 이상의 아미노산 돌연변이는 결실, 치환, 부가 또는 이들의 조합을 포함할 수 있다. 하나 이상의 아미노산 돌연변이는 야생형 GLP-2 펩타이드에 하나 이상의 아미노산 잔기를 부가하는 것을 포함할 수 있다. 하나 이상의 아미노산 돌연변이는 야생형 GLP-2 펩타이드의 하나 이상의 아미노산 잔기의 결실을 포함할 수 있다. 하나 이상의 아미노산 돌연변이는 야생형 GLP-2 펩타이드의 하나 이상의 아미노산 잔기의 치환을 포함할 수 있다. 하나 이상의 아미노산 돌연변이는 야생형 GLP-2 펩타이드의 하나 이상의 아미노산 잔기를 하나 이상의 시스테인, 라이신 또는 다른 설프히드릴 또는 아민 함유 잔기로 치환하는 것을 포함할 수 있다. 하나 이상의 아미노산 돌연변이는 야생형 GLP-2 펩타이드의 하나 이상의 아미노산 잔기를 하나 이상의 D-아미노산 잔기로 치환하는 것을 포함할 수 있다. GLP-2 야생형 펩타이드의 하나 이상의 아미노산 잔기는 하나 이상의 알라닌, 메티오닌, 아르기닌, 세린, 트레오닌, 및 티로신을 포함할 수 있다.
GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는, 예를 들어, 아세틸화, 인산화 및 메틸화로 변형될 수 있다. 펩타이드 변형은 화학적 변형을 포함할 수 있다. 펩타이드 변형은 펩타이드의 N-말단에서 발생할 수 있다. 펩타이드 변형은 펩타이드의 N-말단에서 아미노 기를 아세틸화하는 것을 포함할 수 있다. 대안적으로 또는 추가적으로, 펩타이드 변형은 펩타이드의 C-말단에서 발생할 수 있다. 펩타이드 변형은 펩타이드의 하나 이상의 내부 아미노산에서 발생할 수 있다. 펩타이드 변형은 펩타이드의 C-말단에서 카복실 기를 대체하는 것을 포함할 수 있다. 펩타이드 변형은 펩타이드의 C-말단에서 카복실 기를 변형하는 것을 포함할 수 있다. 펩타이드의 C-말단에서 카복실 기는 아미드 기를 생성하도록 변형될 수 있다. 펩타이드의 C-말단에서 카복실 기는 아민 기를 생성하도록 변형될 수 있다.
GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드의 비제한적인 예는 표 1에 나타낸다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 1-40 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 1-40 중 어느 하나와 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 1-40 중 어느 하나와 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 1-9 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 1-9 중 어느 하나와 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 1-9 중 어느 하나와 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 1과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 1과 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 2와 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 2와 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 3의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 3과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 3과 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 4와 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 4와 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 5와 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 5와 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 6의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 6과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 6과 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 7과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 7과 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 8과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 8과 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 9의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 9와 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 9와 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 10-20 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 10-20 중 어느 하나와 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 10-20 중 어느 하나와 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 10의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 10과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 10과 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 11의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 11과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 11과 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 12의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 12와 비교하여 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 12와 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 13의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 13과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 13과 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 14의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 14와 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 14와 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 15의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 15와 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 15와 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 16의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 16과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 16과 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 17의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 17과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 17과 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 18의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 18과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 18과 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 19의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 19와 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 19와 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 20의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 20과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 20과 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 21-29 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 21-29 중 어느 하나와 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 21-29 중 어느 하나와 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 21의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 21과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 21과 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 2의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 22와 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 22와 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 23의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 23과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 23과 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 24의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 24와 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 24와 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 25의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 25와 비교하여 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 25와 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 26의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 26과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 26과 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 27의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 27과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 27과 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 28의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 28과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 28과 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 29의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 29와 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 29과 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 30-40 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 30-40 중 어느 하나와 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 30-40 중 어느 하나와 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 30의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 30과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 30과 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 31의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 31과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 31과 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 32의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 32와 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 32와 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 33과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 33과 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 34와 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 34와 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 35와 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 35와 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 36과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 36과 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 37과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 37과 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 38과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 38과 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 39와 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 39와 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 40의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 경우에, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 40과 적어도 약 80%, 약 81%, 약 82%, 약 83%, 약 84%, 약 85%, 약 86%, 약 87%, 약 88%, 약 89%, 90%, 약 91%, 약 92%, 약 93%, 약 94%, 약 95%, 약 96%, 약 97%, 약 98%, 또는 약 99% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드는 서열 번호 40과 비교하여 약 1, 2, 3, 4, 또는 5개 이하의 아미노산 삽입, 결실, 변형, 또는 치환을 갖는 아미노산 서열을 포함한다.
[표 1] 서열 표
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
스테이플
스테이플을 포함하는 펩타이드 접합체가 본원에 개시되어 있다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은 하기 화학식 (I)이다:
Figure pct00013
상기 식에서,
A는 임의로 치환된 알킬렌, 임의로 치환된 아릴렌, 임의로 치환된 헤테로아릴렌, 임의로 치환된 -NR3-알킬렌-NR3-, 또는 -N-이고;
X1 및 X2는 독립적으로 결합, -C(=O)-, -알킬렌-C(=O)-, -C(=O)-알킬렌-, -알킬렌-C(=O)NR3-, -알킬렌-NR3C(=O)-, -C(=O)NR3-알킬렌-, -NR3C(=O)-알킬렌-, -알킬렌-C(=O)NR3-알킬렌-, 또는 -알킬렌-NR3C(=O)-알킬렌-이고;
여기서, X1은 펩타이드의 제1 아미노산에 부착되고, X2는 펩타이드의 제2 아미노산에 부착되고;
R은 수소 또는 -X3-(L)s-Y이고;
X3은 결합, -C(=O)-, -알킬렌-C(=O)-, -C(=O)-알킬렌, -알킬렌-C(=O)NR3-, 또는 -알킬렌-C(=O)NR3-알킬렌-이고;
각각의 L은 독립적으로 -(CR1R2)v-, -알킬렌-O-, -O-알킬렌-, -C(=O)-알킬렌-, -알킬렌-C(=O)-, -NR3-알킬렌-, -알킬렌-NR3-, -S-알킬렌-, -알킬렌-S-, -S(=O)-알킬렌-, -알킬렌-S(=O)-, -S(=O)2-알킬렌, -알킬렌-S(=O)2-, -C(=O)-, -C(=O)NR3-, -NR3C(=O)-, -NR3C(=O)NR3-, -NR3C(=O)NR3-알킬렌-, -NR3C(=O)-알킬렌-NR3-, -알킬렌-C(=O)NR3-, -C(=O)NR3-알킬렌-, -알킬렌-NR3C(=O)-, 또는 -NR3C(=O)-알킬렌-이고;
v는 2-20이고;
각각의 R1 또는 R2는 독립적으로 수소, 할로겐, -CN, -ORa, -SRa, -S(=O)Rb, -NO2, -NRcRd, -S(=O)2Rd, -NRaS(=O)2Rd, -S(=O)2NRcRd, -C(=O)Rb, -OC(=O)Rb, -CO2Ra, -OCO2Ra, -C(=O)NRcRd, -OC(=O)NRcRd, -NRaC(=O)NRcRd, -NRaC(=O)Rb, -NRaC(=O)ORa, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C6 헤테로알킬, C3-C8 사이클로알킬, C2-C8 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고; 여기서, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 헤테로알킬은 할로겐, -ORa, 또는 -NRcRd 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고; 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -ORa, -NRcRd 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되거나;
R1 및 R2는 함께 취하여 C1-C6 사이클로알킬 또는 C1-C6 헤테로사이클로알킬을 형성하고;
각각의 R3은 독립적으로 수소, -S(=O)Rb, -S(=O)2Ra, -S(=O)2NRcRd, -C(=O)Rb, -CO2Ra, -C(=O)NRcRd, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C6 헤테로알킬, C3-C8 사이클로알킬, C2-C8 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고; 여기서, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 헤테로알킬은 할로겐, -ORa, 또는 -NRcRd 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고; 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -ORa, 또는 -NRcRd 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고;
Y는 수소, C1-C6 알킬, -CO2H, -CO2(C1-C6 알킬), -CO2NH2, -CO2N(알킬)2, 또는 -CO2NH(알킬)이고;
s는 0-20이고;
Ra는 수소, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C6 헤테로알킬, C3-C8 사이클로알킬, C2-C8 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고; 여기서, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 헤테로알킬은 할로겐, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고; 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고;
Rb는 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C6 헤테로알킬, C3-C8 사이클로알킬, C2-C8 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고; 여기서, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 헤테로알킬은 할로겐, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고; 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고;
각각의 Rc 및 Rd는 독립적으로 수소, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C6 헤테로알킬, C3-C8 사이클로알킬, C2-C8 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고; 여기서, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 헤테로알킬은 할로겐, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고; 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되거나;
Rc 및 Rd는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 헤테로사이클로알킬 또는 헤테로아릴을 형성하고; 여기서, 헤테로사이클로알킬 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환된다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은 하기 화학식 (I)이다:
Figure pct00014
상기 식에서,
A는 임의로 치환된 알킬렌, 임의로 치환된 아릴렌, 임의로 치환된 헤테로아릴렌, 임의로 치환된 -NR3-알킬렌-NR3-, 또는 -N-이고;
X1 및 X2는 독립적으로 결합, -C(=O)-, -알킬렌-C(=O)-, -C(=O)-알킬렌, -알킬렌-C(=O)NR3-, 또는 -알킬렌-C(=O)NR3-알킬렌-이고;
여기서, X1은 펩타이드의 제1 아미노산에 부착되고, X2는 펩타이드의 제2 아미노산에 부착되고;
R은 수소 또는 -X3-(L)s-Y이고;
X3은 결합, -C(=O)-, -알킬렌-C(=O)-, -C(=O)-알킬렌, -알킬렌-C(=O)NR3-, 또는 -알킬렌-C(=O)NR3-알킬렌-이고;
각각의 L은 독립적으로 -(CR1R2)v-, -알킬렌-O-, -O-알킬렌-, -C(=O)-알킬렌-, -알킬렌-C(=O)-, -NR3-알킬렌-, -알킬렌-NR3-, -S-알킬렌-, -알킬렌-S-, -S(=O)-알킬렌-, -알킬렌-S(=O)-, -S(=O)2-알킬렌, -알킬렌-S(=O)2-, -C(=O)-, -C(=O)NR3-, -NR3C(=O)-, -NR3C(=O)NR3-, -NR3C(=O)NR3-알킬렌-, -NR3C(=O)-알킬렌-NR3-, -알킬렌-C(=O)NR3-, -C(=O)NR3-알킬렌-, -알킬렌-NR3C(=O)-, 또는 -NR3C(=O)-알킬렌-이고;
v는 2-20이고;
각각의 R1 또는 R2는 독립적으로 수소, 할로겐, -CN, -ORa, -SRa, -S(=O)Rb, -NO2, -NRcRd, -S(=O)2Rd, -NRaS(=O)2Rd, -S(=O)2NRcRd, -C(=O)Rb, -OC(=O)Rb, -CO2Ra, -OCO2Ra, -C(=O)NRcRd, -OC(=O)NRcRd, -NRaC(=O)NRcRd, -NRaC(=O)Rb, -NRaC(=O)ORa, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C6 헤테로알킬, C3-C8 사이클로알킬, C2-C8 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고; 여기서, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 헤테로알킬은 할로겐, -ORa, 또는 -NRcRd 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고; 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -ORa, -NRcRd 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되거나;
R1 및 R2는 함께 취하여 C1-C6 사이클로알킬 또는 C1-C6 헤테로사이클로알킬을 형성하고;
각각의 R3은 독립적으로 수소, -S(=O)Rb, -S(=O)2Ra, -S(=O)2NRcRd, -C(=O)Rb, -CO2Ra, -C(=O)NRcRd, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C6 헤테로알킬, C3-C8 사이클로알킬, C2-C8 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고; 여기서, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 헤테로알킬은 할로겐, -ORa, 또는 -NRcRd 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고; 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -ORa, 또는 -NRcRd 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고;
Y는 수소, C1-C6 알킬, -CO2H, -CO2(C1-C6 알킬), -CO2NH2, -CO2N(알킬)2, 또는 -CO2NH(알킬)이고;
s는 0-20이고;
Ra는 수소, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C6 헤테로알킬, C3-C8 사이클로알킬, C2-C8 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고; 여기서, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 헤테로알킬은 할로겐, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고; 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고;
Rb는 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C6 헤테로알킬, C3-C8 사이클로알킬, C2-C8 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고; 여기서, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 헤테로알킬은 할로겐, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고; 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고;
각각의 Rc 및 Rd는 독립적으로 수소, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C6 헤테로알킬, C3-C8 사이클로알킬, C2-C8 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고; 여기서, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 헤테로알킬은 할로겐, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고; 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되거나;
Rc 및 Rd는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 헤테로사이클로알킬 또는 헤테로아릴을 형성하고; 여기서, 헤테로사이클로알킬 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환된다.
일부 구현예에서, A는 임의로 치환된 알킬렌이다. 일부 구현예에서, A는 -(CH2)t-이고, 여기서, t는 1-12이다. 일부 구현예에서, A는 -(CH2)t-이고, 여기서, t는 1-10이다. 일부 구현예에서, A는 -(CH2)t-이고, 여기서, t는 1-8이다. 일부 구현예에서, A는 -(CH2)t-이고, 여기서, t는 1-6이다. 일부 구현예에서, A는 -(CH2)t-이고, 여기서, t는 1-4이다.
일부 구현예에서, A는 임의로 치환된 아릴렌이다. 일부 구현예에서, A는 할로겐, 알킬, 또는 할로알킬로 임의로 치환된 아릴렌이다. 일부 구현예에서, A는 아릴렌이다.
일부 구현예에서, A는 -NR3-알킬렌-NR3-이다.
일부 구현예에서, A는 -N-이다.
일부 구현예에서, X1 및 X2는 동일하다. 일부 구현예에서, X1 및 X2는 상이하다.
일부 구현예에서, X1 및 X2는 -C(=O)-이다. 일부 구현예에서, X1 및 X2는 독립적으로 -알킬렌-C(=O)- 또는 -C(=O)알킬렌-이다. 일부 구현예에서, X1 및 X2는 독립적으로 -CH2-C(=O)- 또는 -C(=O)-CH2-이다. 일부 구현예에서, X1 및 X2는 독립적으로 -알킬렌-C(=O)NR3- 또는 -C(=O)NR3-알킬렌-이다. 일부 구현예에서, X1 및 X2는 독립적으로 -CH2-C(=O)NR3- 또는 -C(=O)NR3-CH2-이다. 일부 구현예에서, X1 및 X2는 독립적으로 -알킬렌-C(=O)NR3-알킬렌- 또는 -알킬렌-NR3C(=O)-알킬렌-이다. 일부 구현예에서, X1 및 X2는 독립적으로 -CH2-C(=O)NR3-CH2CH2- 또는 -CH2-NR3C(=O)-CH2CH2-이다. 일부 구현예에서, X1 및 X2는 독립적으로 -CH2-C(=O)NH-CH2CH2- 또는 -CH2-NHC(=O)-CH2CH2-이다.
일부 구현예에서, 각각의 R3은 독립적으로 수소 또는 C1-C6 알킬이다. 일부 구현예에서, 각각의 R3은 수소이다.
일부 구현예에서, >A-R은 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00015
상기 식에서, r1 및 r2는 각각 독립적으로 0-4이다.
일부 구현예에서, r1 및 r2는 각각 독립적으로 0-2이다. 일부 구현예에서, r1 및 r2는 각각 0이다. 일부 구현예에서, r1 및 r2는 각각 1이다. 일부 구현예에서, r1 및 r2는 각각 3이다.
일부 구현예에서, >A-R은 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00016
일부 구현예에서, >A-R은 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00017
상기 식에서, p1은 1-5이다.
일부 구현예에서, p1은 1-3이다. 일부 구현예에서, p1은 1-2이다. 일부 구현예에서, p1은 1이다. 일부 구현예에서, p1은 2이다. 일부 구현예에서, p1은 3이다. 일부 구현예에서, p1은 4이다. 일부 구현예에서, p1은 5이다.
일부 구현예에서, >A-R은 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00018
일부 구현예에서, >A-R은 하기 구조를 갖는다:
Figure pct00019
일부 구현예에서, s는 1-15이다. 일부 구현예에서, s는 1-10이다. 일부 구현예에서, s는 5-15이다. 일부 구현예에서, s는 5-10이다. 일부 구현예에서, s는 5-20이다.
일부 구현예에서, Y는 수소 또는 -CO2H이다. 일부 구현예에서, Y는 수소이다. 일부 구현예에서, Y는 -CO2H이다.
일부 구현예에서, 각각의 L은 독립적으로 -(CR1R2)v-, -알킬렌-O-, -C(=O)-, -C(=O)NR3-, -NR3C(=O)-, -알킬렌-C(=O)NR3-, 또는 -알킬렌-NR3C(=O)-이고; v는 2-20이다.
일부 구현예에서, 각각의 L은 독립적으로 -(CR1R2)v-, -알킬렌-O-, -C(=O)-, -C(=O)NR3-, -NR3C(=O)-, -알킬렌-C(=O)NR3-, 또는 -알킬렌-NR3C(=O)-이고; v는 2-16이다.
일부 구현예에서, v는 2-16이다. 일부 구현예에서, v는 2-5이다. 일부 구현예에서, v는 5-16이다. 일부 구현예에서, v는 5 또는 16이다. 일부 구현예에서, v는 2 또는 16이다.
일부 구현예에서, 각각의 R1 또는 R2는 독립적으로 수소, 할로겐, -CN, -ORa, -NRcRd, -C(=O)Rb, -CO2Ra, -C(=O)NRcRd, 또는 C1-C6 알킬이다.
일부 구현예에서, 각각의 R1 또는 R2는 독립적으로 수소, 할로겐, -CO2Ra, -C(=O)NRcRd, 또는 C1-C6 알킬이다. 일부 구현예에서, 각각의 R1 또는 R2는 독립적으로 수소, -CO2Ra, 또는 -C(=O)NRcRd이다. 일부 구현예에서, 각각의 R1 또는 R2는 독립적으로 수소 또는 -CO2Ra이다.
일부 구현예에서, 스테이플은
Figure pct00020
이다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은
Figure pct00021
이고, 여기서, 각각의 L1은 독립적으로 -(CR1R2)v-, -알킬렌-O-, -O-알킬렌-, -C(=O)NR3-, -NR3C(=O)-, -알킬렌-C(=O)NR3-, 또는 -알킬렌-NR3C(=O)-이고; v는 2-20이고; s1은 1-15이다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은
Figure pct00022
이고, 여기서, 각각의 L2는 독립적으로 -(CR1R2)v-, -알킬렌-O-, -O-알킬렌-, -C(=O)NR3-, -NR3C(=O)-, -알킬렌-C(=O)NR3-, 또는 -알킬렌-NR3C(=O)-이고; v는 2-20이고; s2는 1-15이다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은
Figure pct00023
이고, 여기서, 각각의 L3은 독립적으로 -(CR1R2)v-, -알킬렌-O-, -O-알킬렌-, -C(=O)NR3-, -NR3C(=O)-, -알킬렌-C(=O)NR3-, 또는 -알킬렌-NR3C(=O)-이고; v는 2-20이고; s3은 1-15이다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은
Figure pct00024
이고, 여기서, 각각의 L4는 독립적으로 -(CR1R2)v-, -알킬렌-O-, -O-알킬렌-, -C(=O)NR3-, -NR3C(=O)-, -알킬렌-C(=O)NR3-, 또는 -알킬렌-NR3C(=O)-이고; v는 2-20이고; s4는 1-15이다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은
Figure pct00025
이고, 여기서, 각각의 L5는 독립적으로 -(CR1R2)v-, -C(=O)NR3-, -NR3C(=O)-, -알킬렌-C(=O)NR3-, 또는 -알킬렌-NR3C(=O)-이고; v는 2-20이고; s5는 1-10이다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은
Figure pct00026
이고, 여기서, 각각의 L6은 독립적으로 -(CR1R2)v-, -C(=O)NR3-, -NR3C(=O)-, -알킬렌-C(=O)NR3-, 또는 -알킬렌-NR3C(=O)-이고; v는 2-20이고; s6은 1-5이다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은
Figure pct00027
이고, 여기서, 각각의 L7은 독립적으로 -(CR1R2)v-, -C(=O)NR3-, 또는 -NR3C(=O)-이고; v는 2-20이고; s7은 1-5이다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은
Figure pct00028
이고, 여기서, L8은 -(CR1R2)v-이고, v는 10-20이다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은
Figure pct00029
이고, 여기서, 각각의 L9는 독립적으로 -(CR1R2)v-, -C(=O)NR3-, -NR3C(=O)-, -알킬렌-C(=O)NR3-, 또는 -알킬렌-NR3C(=O)-이고; v는 2-20이고; s9는 1-5이다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은
Figure pct00030
이고, 여기서, L10은 -(CR1R2)v-이고, v는 10-20이다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은
Figure pct00031
이다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은
Figure pct00032
이고, 여기서, 각각의 L11은 독립적으로 -(CR1R2)v-, -알킬렌-O-, -O-알킬렌-, -C(=O)NR3-, -NR3C(=O)-, -알킬렌-C(=O)NR3-, 또는 -알킬렌-NR3C(=O)-이고; v는 2-20이고; s11은 1-15이다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은
Figure pct00033
이고, 여기서, 각각의 L12는 독립적으로 -(CR1R2)v-, -알킬렌-O-, -O-알킬렌-, -C(=O)NR3-, -NR3C(=O)-, -알킬렌-C(=O)NR3-, 또는 -알킬렌-NR3C(=O)-이고; v는 2-20이고; s12는 1-15이다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은
Figure pct00034
이고, 여기서, 각각의 L13은 독립적으로 -(CR1R2)v-, -알킬렌-O-, -O-알킬렌-, -C(=O)NR3-, -NR3C(=O)-, -알킬렌-C(=O)NR3-, 또는 -알킬렌-NR3C(=O)-이고; v는 2-20이고; s13은 1-15이다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은
Figure pct00035
이고, 여기서, 각각의 L14는 독립적으로 -(CR1R2)v-, -알킬렌-O-, -O-알킬렌-, -C(=O)NR3-, -NR3C(=O)-, -알킬렌-C(=O)NR3-, 또는 -알킬렌-NR3C(=O)-이고; v는 2-20이고; s14는 1-15이다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은
Figure pct00036
이고, 여기서, 각각의 L15는 독립적으로 -(CR1R2)v-, -C(=O)NR3-, -NR3C(=O)-, -알킬렌-C(=O)NR3-, 또는 -알킬렌-NR3C(=O)-이고; v는 2-20이고; s15는 1-10이다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은
Figure pct00037
이고, 여기서, 각각의 L16은 독립적으로 -(CR1R2)v-, -C(=O)NR3-, 또는 -NR3C(=O)-이고; v는 2-20이고; s16은 1-5이다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은
Figure pct00038
이고, 여기서, 각각의 L17은 독립적으로 -(CR1R2)v-, -C(=O)NR3-, 또는 -NR3C(=O)-이고; v는 2-20이고; s17은 1-5이다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은
Figure pct00039
이고, 여기서, L18은 -(CR1R2)v-이고, v는 10-20이다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은
Figure pct00040
이고, 여기서, 각각의 L19는 독립적으로 -(CR1R2)v-, -C(=O)NR3-, -NR3C(=O)-, -알킬렌-C(=O)NR3-, 또는 -알킬렌-NR3C(=O)-이고; v는 2-20이고; s19는 1-5이다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은
Figure pct00041
이고, 여기서, L20은 -(CR1R2)v-이고, v는 10-20이다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은 다음과 같고:
Figure pct00042
Figure pct00043
Figure pct00044
; "
Figure pct00045
"는 시스테인, 호모시스테인, 2-아미노-5-머캅토펜탄산, 또는 2-아미노-6-머캅토헥산산 잔기의 일부이고, "
Figure pct00046
"는 라이신, 오르니틴, 디아미노부티르산, 디아미노프로피온산, 또는 호모라이신 잔기의 일부이다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은
Figure pct00047
Figure pct00048
Figure pct00049
이고; 여기서, n은 1-4이고, m은 6-20이고; "
Figure pct00050
"는 시스테인, 호모시스테인, 2-아미노-5-머캅토펜탄산, 또는 2-아미노-6-머캅토헥산산 잔기의 일부이고, "
Figure pct00051
"는 라이신, 오르니틴, 디아미노부티르산, 디아미노프로피온산, 또는 호모라이신 잔기의 일부이다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은
Figure pct00052
Figure pct00053
이고; "
Figure pct00054
"는 시스테인, 호모시스테인, 2-아미노-5-머캅토펜탄산, 또는 2-아미노-6-머캅토헥산산 잔기의 일부이고, "
Figure pct00055
"는 라이신, 오르니틴, 디아미노부티르산, 디아미노프로피온산, 또는 호모라이신 잔기의 일부이다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은
Figure pct00056
이고: "
Figure pct00057
"는 시스테인, 호모시스테인, 2-아미노-5-머캅토펜탄산, 또는 2-아미노-6-머캅토헥산산 잔기의 일부이다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은
Figure pct00058
Figure pct00059
이고; "
Figure pct00060
"는 라이신, 오르니틴, 디아미노부티르산, 디아미노프로피온산, 또는 호모라이신 잔기의 일부이다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은
Figure pct00061
이고; "
Figure pct00062
"는 라이신, 오르니틴, 디아미노부티르산, 디아미노프로피온산, 또는 호모라이신 잔기의 일부이다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은
Figure pct00063
이고; "
Figure pct00064
"는 시스테인, 호모시스테인, 2-아미노-5-머캅토펜탄산, 또는 2-아미노-6-머캅토헥산산 잔기의 일부이다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은
Figure pct00065
이고; "
Figure pct00066
"는 시스테인, 호모시스테인, 2-아미노-5-머캅토펜탄산, 또는 2-아미노-6-머캅토헥산산 잔기의 일부이다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은
Figure pct00067
이고; "
Figure pct00068
"는 라이신, 오르니틴, 디아미노부티르산, 디아미노프로피온산, 또는 호모라이신 잔기의 일부이다.
일부 구현예에서, 펩타이드에 부착된 스테이플은
Figure pct00069
이고; "
Figure pct00070
"는 라이신, 오르니틴, 디아미노부티르산, 디아미노프로피온산, 또는 호모라이신 잔기이다.
일부 구현예에서, 펩타이드 접합체는
a) 서열 번호 1-9 중 어느 하나인 서열을 포함하는 GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드; 및
b) 하기 구조("S"는 시스테인 잔기의 일부임)를 갖는 제1 시스테인 및 제2 시스테인에서 펩타이드에 부착된 스테이플
을 포함한다:
Figure pct00071
또는
Figure pct00072
일부 구현예에서, 펩타이드 접합체는
a) 서열 번호 1인 서열을 포함하는 GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드; 및
b) 하기 구조("S"는 시스테인 잔기의 일부임)를 갖는 제1 시스테인 및 제2 시스테인에서 펩타이드에 부착된 스테이플
을 포함한다:
Figure pct00073
일부 구현예에서, 펩타이드 접합체는
a) 서열 번호 2인 서열을 포함하는 GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드; 및
b) 하기 구조("S"는 시스테인 잔기의 일부임)를 갖는 제1 시스테인 및 제2 시스테인에서 펩타이드에 부착된 스테이플
을 포함한다:
Figure pct00074
일부 구현예에서, 펩타이드 접합체는
a) 서열 번호 10-20 중 어느 하나인 서열을 포함하는 GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드; 및
b) 하기 구조("NH"는 라이신 잔기의 일부임)를 갖는 제1 라이신 및 제2 라이신에서 펩타이드에 부착된 스테이플
을 포함한다:
Figure pct00075
일부 구현예에서, 펩타이드 접합체는
a) 서열 번호 10인 서열을 포함하는 GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드; 및
b) 하기 구조("NH"는 라이신 잔기의 일부임)를 갖는 제1 라이신 및 제2 라이신에서 펩타이드에 부착된 스테이플
을 포함한다:
Figure pct00076
일부 구현예에서, 펩타이드 접합체는
a) 서열 번호 21-29 중 어느 하나인 서열을 포함하는 GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드; 및
b) 하기 구조("S"는 시스테인 잔기의 일부임)를 갖는 제1 시스테인 및 제2 시스테인에서 펩타이드에 부착된 스테이플
을 포함한다:
Figure pct00077
일부 구현예에서, 펩타이드 접합체는
a) 서열 번호 21인 서열을 포함하는 GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드; 및
b) 하기 구조("S"는 시스테인 잔기의 일부임)를 갖는 제1 시스테인 및 제2 시스테인에서 펩타이드에 부착된 스테이플
을 포함한다:
Figure pct00078
일부 구현예에서, 펩타이드 접합체는
a) 서열 번호 22인 서열을 포함하는 GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드; 및
b) 하기 구조("S"는 시스테인 잔기의 일부임)를 갖는 제1 시스테인 및 제2 시스테인에서 펩타이드에 부착된 스테이플
을 포함한다:
Figure pct00079
일부 구현예에서, 펩타이드 접합체는
a) 서열 번호 30-40 중 어느 하나인 서열을 포함하는 GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드; 및
b) 하기 구조("NH"는 라이신 잔기의 일부임)를 갖는 제1 라이신 및 제2 라이신에서 펩타이드에 부착된 스테이플
을 포함한다:
Figure pct00080
일부 구현예에서, 펩타이드 접합체는
a) 서열 번호 30인 서열을 포함하는 GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드; 및
b) 하기 구조("NH"는 라이신 잔기의 일부임)를 갖는 제1 라이신 및 제2 라이신에서 펩타이드에 부착된 스테이플
을 포함한다:
Figure pct00081
약동학
펩타이드 접합체가 약동학적 또는 약력학적 거동에 긍정적인 영향을 미치는 기전은 (i) GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드의 생체내 단백질 분해 또는 기타 활성 감소 화학적 변형을 예방 또는 완화하고; (ii) 신장 여과 감소, 수용체 매개된 제거 감소 또는 생체이용률 증가에 의한 반감기 또는 기타 약동학적 성질을 개선하고; (iii) 독성을 감소시키고; (iv) 용해도를 개선하고/하거나; (v) 펩타이드 또는 비변형된 펩타이드의 생물학적 활성 및/또는 표적 선택성을 증가시키는 것을 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
펩타이드 접합체는 펩타이드에 부착될 때 GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드의 하나 이상의 약동학적 성질을 향상시킬 수 있다. 본원에 개시된 펩타이드 접합체는 펩타이드 또는 비변형된 펩타이드 단독과 비교할 때 약력학으로 측정시 GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드의 하나 이상의 약동학적 성질을 적어도 약 200% 향상시킬 수 있다. 본원에 개시된 펩타이드 접합체는 펩타이드 또는 비변형된 펩타이드 단독과 비교할 때 약력학으로 측정시 치료제의 하나 이상의 약동학적 성질을 적어도 약 300%, 400%, 500%, 600%, 700%, 800%, 900%, 1000% 향상시킬 수 있다.
약동학적 성질은 반감기를 포함할 수 있다. 펩타이드 접합체의 반감기는 비변형된 펩타이드 단독의 반감기에 비해 적어도 약 2배 더 길 수 있다. 본원에 개시된 펩타이드 접합체의 반감기는 치료제 또는 비변형된 치료 펩타이드 단독의 반감기에 비해 적어도 약 3배, 4배, 5배, 또는 10배 더 길 수 있다. 본원에 개시된 펩타이드 접합체의 반감기는 비변형된 펩타이드 단독의 반감기에 비해 적어도 약 6배, 7배, 8배, 9배, 10배, 15배, 20배, 25배, 30배, 35배, 40배, 45배, 또는 50배 더 길 수 있다.
일부 구현예에서, 펩타이드 접합체의 반감기는 펩타이드의 비변형된 형태의 반감기보다 적어도 약 2배 더 길다. 일부 구현예에서, 펩타이드 접합체의 반감기는 펩타이드의 비변형된 형태의 반감기보다 적어도 약 5배 더 길다. 일부 구현예에서, 펩타이드 접합체의 반감기는 펩타이드의 비변형된 형태의 반감기보다 적어도 약 10배 더 길다.
또한, 본원에 기재된 펩타이드 접합체는 비접합된 형태의 비변형된 치료 펩타이드에 비해 펩타이드의 제조가능성을 증가시키고/시키거나 면역원성을 감소시키는 면에서 긍정적인 효과를 가질 수 있다.
치료적 용도
한 양태에서, 본원에 개시된 펩타이드 접합체는 하나 이상의 질환 및/또는 병태를 치료, 완화, 억제 및/또는 예방하는 데 유용하다. 질환 및/또는 병태는 만성 질환 또는 병태일 수 있다. 대안적으로, 질환 및/또는 병태는 급성 질환 또는 병태이다. 질환 또는 병태는 재발성, 불응성, 가속성 또는 관해 상태일 수 있다. 질환 또는 병태는 하나 이상의 세포 유형에 영향을 미칠 수 있다. 하나 이상의 질환 및/또는 병태는 자가면역 질환, 염증성 질환, 또는 대사성 질환일 수 있다.
본원에 기재된 펩타이드 접합체를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하는 방법이 본원에 개시되어 있다. 질환 또는 병태는 당뇨병 또는 비만, 또는 당뇨병 또는 비만과 관련된 의학적 병태일 수 있다. 질환 또는 병태는 비알코올성 지방간 질환(NAFLD), 비알코올성 지방간염(NASH), 또는 심혈관 질환일 수 있다. 질환 또는 병태는 자가면역 장애일 수 있다. 질환 또는 병태는 크론병 또는 궤양성 대장염일 수 있다. 질환 또는 병태는 단장 증후군(SBS)일 수 있다. 질환 또는 병태는 염증성 장 질환(IBD), 염증성 장 증후군(IBS), 또는 건선일 수 있다. 질환 또는 병태는 알츠하이머병, 파킨슨병 또는 헌팅턴병일 수 있다. PLC는 하나 이상의 추가 치료제와 함께 투여될 수 있다. 하나 이상의 펩타이드 접합체를 포함하는 본원에 개시된 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하는 방법이 본원에 개시되어 있다.
본원에 기재된 펩타이드 접합체를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 대사성 질환 또는 병태를 예방 또는 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 대사성 질환 또는 병태는 당뇨병일 수 있다. 대사성 질환 또는 병태는 비만일 수 있다. 대사성 질환 또는 병태는 글리코겐 축적 질환, 페닐케톤뇨증, 단풍단밀뇨증(maple syrup urine disease), 글루타르산혈증 1형, 카보모일 포스페이트 합성효소 I 결핍증, 알캅톤뇨증, 중쇄 아실-코엔자임 A 탈수소효소 결핍증(MCADD), 급성 간헐적 포르피린증, 레쉬-니한 증후군(Lesch-Nyhan syndrome), 지방질 선천성 부신 과형성, 선천성 부신 증식증, POMPC 결핍증, LEPR 결핍증, 바르데 비들 증후군(Bardet Biedl syndrome), 알스트롬 증후군(Alstrome syndrome), 프라더-윌리 증후군(Prader-Willi Syndrome), 컨스-세이어 증후군(Kearns-Sayre syndrome), 젤위거 증후군(Zellweger syndrome), 고셔병(Gaucher's disease), 또는 니만 픽병(Niemann Pick disease)일 수 있다.
본원에 기재된 펩타이드 접합체를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 NAFLD, NASH, 또는 심혈관 질환을 예방 또는 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
본원에 기재된 펩타이드 접합체를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 단장 증후군(SBS)을 예방 또는 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
본원에 기재된 펩타이드 접합체를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 염증성 장 질환(IBD), 염증성 장 증후군(IBS), 또는 건선을 예방 또는 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
본원에 기재된 펩타이드 접합체를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 크론병 또는 궤양성 대장염을 예방 또는 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
수면 장애를 예방 또는 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
결신 발작(absence seizure)을 예방 또는 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 만성 콩팥 질환(예를 들어, 당뇨병의 합병증)을 예방 또는 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 당뇨병성 심장 질환을 예방 또는 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 심혈관 사건을 예방 또는 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
본원에 기재된 펩타이드 접합체를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 알츠하이머병, 파킨슨병 또는 헌팅턴병을 예방 또는 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
장 기능이 손상된 신생아, 골다공증, 및 DPP-IV(디펩티딜펩티다제-IV) 매개된 병태를 치료하는 것과 같은 위 및 장 관련 장애를 예방 또는 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 예를 들어, 위 및 장 관련 장애는 궤양, 위염, 소화 장애, 흡수장애 증후군, 단장 증후군, 맹낭 증후군(cul-de-sac syndrome), 염증성 장 질환, 셀리악 스프루(celiac sprue) (예를 들어, 글루텐 유발 장병증 또는 셀리악병으로부터 발생), 열대 스프루, 저감마글로불린혈증 스프루, 장염, 국소 장염(크론병), 궤양성 대장염, 설사와 관련된 과민성 장 증후군, 소장 손상 및 단장 증후군을 포함한다.
방사선 장염, 감염성 또는 감염 후 장염, 및 독성 또는 기타 화학요법제로 인한 소장 손상을 예방 또는 치료하는 방법이 본원에 제공된다. 이것은 설사, 복부 경련 및 구토와 같은 화학요법의 부작용을 감소시키고 화학요법 또는 방사선 요법으로부터 초래되는 장 상피의 구조적 및 기능적 손상을 감소시키기 위해 화학요법 또는 방사선 요법의 과정 전, 이와 동시에 또는 후에 펩타이드 접합체의 투여를 요구할 수 있다.
영양실조, 예를 들어, 소모성 증후군 악액질 및 거식증과 같은 병태를 예방 또는 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
본원에 기재된 펩타이드 접합체를 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 GLP-2 수용체의 조절인자로부터 이익을 얻는 질환 또는 병태를 예방 또는 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
조합
본원에 기재된 펩타이드 접합체 및 하나 이상의 추가 치료제를 포함하는 약학 조성물이 본원에 개시되어 있다.
추가 치료제는 하나 이상의 기타 당뇨병 약물, DPP4 억제제, SGLT2 억제제, 혈당강하 약물 및 비구아니딘 약물, 인슐린 분비촉진제 및 설포닐 요소 약물, TZD 약물, 인슐린 및 인슐린 유사체, FGF21 및 유사체, 렙틴 또는 렙틴 유사체, 아밀린 및 아밀린 유사체, 항염증 약물, 사이클로스포린 A 또는 FK506, 5-ASA, 또는 스타틴, 또는 이들의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 추가 치료제는 아스피린일 수 있다.
추가 치료제는 치료학적 인크레틴 또는 이의 유도체를 포함할 수 있다. 인크레틴 또는 이의 유도체의 비제한적인 예는 GLP-1, 글루카곤, 옥신토모듈린, 엑센딘-4, GLP-2, GIP, 및 이들의 조합을 포함한다.
조성물
본원에 기재된 펩타이드 접합체 및 약학적으로 허용되는 부형제 또는 비히클을 포함하는 약학 조성물이 본원에 개시되어 있다. 약학적으로 허용되는 부형제 또는 비히클은 담체, 부형제, 희석제, 항산화제, 방부제, 착색제, 향미제 및 희석제, 유화제, 현탁제, 용매, 충전제, 증량제, 완충액, 전달 비히클, 등장화제, 공용매, 습윤제, 착화제, 완충제, 항균제, 및 계면활성제를 포함할 수 있다.
중성 완충 식염수 또는 혈청 알부민과 혼합된 식염수가 적절한 담체의 예이다. 약학 조성물은 항산화제, 예컨대 아스코르브산; 저분자량 폴리펩타이드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 아르기닌 또는 라이신; 당단류, 이당류, 및 글루코스, 만노오스, 또는 덱스트린을 포함한 기타 탄수화물; 킬레이트제, 예컨대 EDTA; 당 알코올, 예컨대 만니톨 또는 소르비톨; 염 형성 반대이온, 예컨대 나트륨; 및/또는 비이온성 계면활성제, 예컨대 Tween, 플루로닉(pluronic), 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함할 수 있다. 또한 예로서, 적합한 장성 향상제는 알칼리 금속 할로겐화물(바람직하게는 염화나트륨 또는 염화칼륨), 만니톨, 소르비톨 등을 포함한다. 적합한 방부제는 염화벤잘코늄, 티메로살, 페네틸 알코올, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 클로르헥시딘, 소르브산 등을 포함한다. 과산화수소는 또한 방부제로서 사용될 수 있다. 적합한 공용매는 글리세린, 프로필렌 글리콜, 및 PEG를 포함한다. 적합한 착화제는 카페인, 폴리비닐피롤리돈, 베타-사이클로덱스트린 또는 하이드록시-프로필-베타-사이클로덱스트린을 포함한다. 적합한 계면활성제 또는 습윤제는 소르비탄 에스테르, 폴리소르베이트, 예컨대 폴리소르베이트 80, 트로메타민, 레시틴, 콜레스테롤, 틸록사팔 등을 포함한다. 완충액은 통상적인 완충액, 예컨대 아세테이트, 보레이트, 시트레이트, 포스페이트, 바이카보네이트, 또는 Tris-HCl일 수 있다. 아세테이트 완충액은 약 pH 4-5.5일 수 있고, Tris 완충액은 약 pH 7-8.5일 수 있다. 추가 약학 제제는 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition, A. R. Gennaro, ed., Mack Publishing Company, 1990]에 기재되어 있다.
조성물은 액체 형태 또는 동결건조된(lyophilized) 또는 동결-건조된(freeze-dried) 형태일 수 있고, 하나 이상의 동결건조보호제(lyoprotectant), 부형제, 계면활성제, 고분자량 구조 첨가제 및/또는 증량제를 포함할 수 있다. 한 구현예에서, 비환원 당, 예컨대 수크로스, 락토스 또는 트레할로스인 동결건조보호제가 포함된다. 일반적으로 포함되는 동결건조보호제의 양은 재구성 시 생성된 제형이 등장성이도록 하는 양이지만 고장성 또는 약간 저장성 제형도 적합할 수 있다. 또한, 동결건조보호제의 양은 동결건조 시 단백질의 허용할 수 없는 양의 분해 및/또는 응집을 방지하기에 충분해야 한다. 사전 동결건조된 제형에서 당(예를 들어, 수크로스, 락토스, 트레할로스)에 대한 예시적인 동결건조보호제 농도는 약 10 mM 내지 약 400 mM이다. 또 다른 구현예에서, 예를 들어, 비이온성 계면활성제 및 이온성 계면활성제, 예컨대 폴리소르베이트(예를 들어, 폴리소르베이트 20, 폴리소르베이트 80); 폴록사머(예를 들어, 폴록사머 188); 폴리(에틸렌 글리콜) 페닐 에테르(예를 들어, Triton); 나트륨 도데실 설페이트(SDS); 나트륨 라우렐 설페이트; 나트륨 옥틸 글리코시드; 라우릴-, 미리스틸-, 리노레일-, 또는 스테아릴-설포베타인; 라우릴-, 미리스틸-, 리노레일- 또는 스테아릴-사르코신; 리노레일, 미리스틸-, 또는 세틸-베타인; 라우로아미도프로필-, 코카미도프로필-, 리놀레아미도프로필-, 미리스타미도프로필-, 팔미도프로필-, 또는 이소스테아라미도프로필-베타인(예를 들어, 라우로아미도프로필); 미리스타미도프로필-, 팔미도프로필-, 또는 이소스테아르아미도프로필-디메틸아민; 나트륨 메틸 코코일-, 또는 이나트륨 메틸 오페일-타우레이트; 및 MONAQUATTM 시리즈(Mona Industries, Inc., Paterson, N.J.), 폴리에틸 글리콜, 폴리프로필 글리콜, 및 에틸렌과 프로필렌 글리콜의 공중합체(예를 들어, Pluronics, PF68 등)와 같은 계면활성제가 포함된다. 사전 동결건조된 제형에 존재할 수 있는 계면활성제의 예시적인 양은 약 0.001-0.5%이다. 고분자량 구조 첨가제(예를 들어, 충전제, 결합제)는, 예를 들어, 아카시아, 알부민, 알긴산, 인산칼슘(이염기성), 셀룰로오스, 카복시메틸셀룰로오스, 카복시메틸셀룰로오스 나트륨, 하이드록시에틸셀룰로오스, 하이드록시프로필셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스, 미세결정질 셀룰로오스, 덱스트란, 덱스트린, 덱스트레이트, 수크로스, 틸로스, 전호화 전분, 황산칼슘, 아밀로오스, 글리신, 벤토나이트, 말토오스, 소르비톨, 에틸셀룰로오스, 인산수소이나트륨, 인산이나트륨, 피로아황산이나트륨, 폴리비닐 알코올, 젤라틴, 글루코스, 구아 검, 액체 글루코스, 압축성 당, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 말토덱스트린, 폴리에틸렌 옥사이드, 폴리메타크릴레이트, 포비돈, 알긴산나트륨, 트라가칸트 미세결정질 셀룰로오스, 전분, 및 제인(zein)을 포함할 수 있다. 고분자량 구조 첨가제의 예시적인 농도는 0.1 중량% 내지 10 중량%이다. 다른 구현예에서, 증량제(예를 들어, 만니톨, 글리신)가 포함될 수 있다.
조성물은 비경구 투여에 적합할 수 있다. 예시적인 조성물은 관절내, 피하, 정맥내, 근육내, 복강내, 뇌내(실질내), 뇌실내, 근육내, 안구내, 동맥내 또는 병변내 경로와 같은 숙련된 작업자에게 이용 가능한 임의의 경로에 의해 동물에 주사 또는 주입하기에 적합하다. 비경구 제형은 전형적으로 임의로 약학적으로 허용되는 방부제를 함유하는 무균의 발열원이 없는 등장성 수용액일 수 있다.
비수성 용매의 예는 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 식물성 오일, 예컨대 올리브 오일, 및 주사 가능한 유기 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트이다. 수성 담체는 물, 알코올성/수성 용액, 식염수 및 완충 매질을 포함한 에멀젼 또는 현탁액을 포함한다. 비경구 비히클은 염화나트륨 용액, 링거 덱스트로스, 덱스트로스 및 염화나트륨, 락테이트화된 링거, 또는 고정 오일을 포함한다. 정맥내 비히클은 유체 및 영양 보충제, 전해질 보충제, 예컨대 링거 덱스트로스를 기반으로 하는 것 등을 포함한다. 예를 들어, 항미생물제, 항산화제, 킬레이트제, 불활성 가스 등과 같은 방부제 및 기타 첨가제가 존재할 수도 있다. 일반적으로, 문헌[Remington's Pharmaceutical Science, 16th Ed., Mack Eds., 1980]을 참조한다.
본원에 기재된 약학 조성물은 제품의 국소 농도를 제공하는 방식으로 제어 또는 지속 전달(예를 들어, 볼루스, 데포 효과) 및/또는 특정 국소 환경에서 증가된 안정성 또는 반감기를 위해 제형화될 수 있다. 조성물은 폴리락트산, 폴리글리콜산 등과 같은 중합체성 화합물의 미립자 제제와 함께 본원에 개시된 펩타이드 접합체의 제형뿐만 아니라 제제, 예컨대 생분해성 매트릭스, 주사 가능한 마이크로스피어, 마이크로캡슐 입자, 마이크로캡슐, 생분해성 입자 비드, 리포솜, 및 데포 주사로서 이어서 전달될 수 있는 활성제의 제어 또는 지속 방출을 제공하는 이식 가능한 전달 기기를 포함할 수 있다. 이러한 지속 또는 제어 전달 수단을 고안하는 기술이 알려져 있고 다양한 중합체가 개발되어 약물의 제어 방출 및 전달을 위해 사용되었다. 그러한 중합체는 전형적으로 생분해성 및 생체적합성이다. 거울상이성질체 중합체 또는 폴리펩타이드 단편의 복합체화에 의해 형성된 것들을 포함하는 중합체 하이드로겔, 및 온도 또는 pH 민감성 성질을 갖는 하이드로겔은 생체활성 단백질 제제(예를 들어, 초장기 CDR3을 포함하는 항체)를 포획하는 것과 관련된 온화한 수성 조건 때문에 약물 데포 효과를 제공하는 데 바람직할 수 있다.
적합한 및/또는 바람직한 약학적 제형은 의도된 투여 경로, 전달 형식 및 원하는 투여량에 따라 본 개시내용 및 제형 기술의 일반적인 지식을 고려하여 결정될 수 있다. 투여 방식에 관계없이, 환자의 체중, 체표면적, 또는 장기 크기에 따라 유효 용량이 계산될 수 있다. 본원에 기재된 각각의 제형을 포함하는 치료를 위한 적절한 투여량을 결정하기 위한 계산의 추가 개선은 당업계에서 일상적으로 이루어지며 당업계에서 일상적으로 수행되는 작업의 범위 내에 있다. 적절한 용량-반응 데이터를 사용하여 적절한 투여량을 확인할 수 있다.
정의
본원 및 첨부된 청구범위에서 사용된 바와 같이, 단수 형태 "a", "an" 및 "the"는 문맥이 명백하게 달리 지시하지 않는 한 복수 지시대상을 포함한다. 따라서, 예를 들어, "제제"에 대한 언급은 복수의 그러한 제제를 포함하고, "세포"에 대한 언급은 당업자에게 알려진 하나 이상의 세포 (또는 복수의 세포) 및 이의 등가물 등에 대한 언급을 포함한다. 범위가 분자량과 같은 물리적 성질, 또는 화학식과 같은 화학적 성질에 대해 본원에서 사용되는 경우, 범위 및 그 안의 특정 구현예의 모든 조합 및 하위조합이 포함되는 것으로 의도된다. 수치 또는 수치 범위를 언급할 때 용어 "약"은 언급된 수치 또는 수치 범위가 실험적 가변성 이내 (또는 통계적 실험 오차 이내)의 근사치이고 따라서 일부 경우에 수치 또는 수치 범위가 명시된 수치 또는 수치 범위의 1%와 15% 사이에서 변할 것임을 의미한다. 용어 "포함하는(comprising)" (및 "포함하다(comprise)" 또는 "포함하다(comprises)" 또는 "갖는(having)" 또는 "포함하는(including)"과 같은 관련 용어)은 기타 특정 구현예에서, 예를 들어, 본원에 기재된 물질, 조성, 방법 또는 공정 등의 임의의 조성의 구현예가 기재된 특징들로 "이루어진다" 또는 "본질적으로 이루어진다"는 것을 배제하려는 의도가 아니다.
명세서 및 첨부된 청구범위에 사용된 바와 같이, 달리 명시되지 않는 한, 하기 용어들은 하기에 지시된 의미를 갖는다.
"알킬"은 1 내지 약 10개의 탄소 원자, 또는 1 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 완전 포화 또는 불포화일 수 있는 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 모노라디칼을 지칭하고, 여기서, 알킬 잔기의 sp3-혼성화된 탄소는 단일 결합에 의해 분자의 나머지에 부착된다. 포화 탄화수소 모노라디칼의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, 2-메틸-1-프로필, 2-메틸-2-프로필, 2-메틸-1-부틸, 3-메틸-1-부틸, 2-메틸-3-부틸, 2,2-디메틸-1-프로필, 2-메틸-1-펜틸, 3-메틸-1-펜틸, 4-메틸-1-펜틸, 2-메틸-2-펜틸, 3-메틸-2-펜틸, 4-메틸-2-펜틸, 2,2-디메틸-1-부틸, 3,3-디메틸-1-부틸, 2-에틸-1-부틸, n-부틸, 이소부틸, sec-부틸, t-부틸, n-펜틸, 이소펜틸, 네오펜틸, tert-아밀 및 헥실, 더 긴 알킬 기, 예컨대 헵틸, 옥틸 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 본원에 나타날 때마다, "C1-C6 알킬"과 같은 수치 범위는 본원의 정의가 수치 범위가 지정되지 않은 용어 "알킬"의 발생도 포함할지라도, 알킬 기가 1개의 탄소 원자, 2개의 탄소 원자, 3개의 탄소 원자, 4개의 탄소 원자, 5개의 탄소 원자 또는 6개의 탄소 원자로 이루어진다는 것을 의미한다. 일부 구현예에서, 알킬은 C1-C10 알킬, C1-C9 알킬, C1-C8 알킬, C1-C7 알킬, C1-C6 알킬, C1-C5 알킬, C1-C4 알킬, C1-C3 알킬, C1-C2 알킬, 또는 C1 알킬이다. 알킬이 불포화 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 모노라디칼을 지칭하는 경우, "알케닐" 또는 "알키닐"로 알려져 있다. 알케닐은 이중 결합(들)에 대해 시스 또는 트랜스 형태일 수 있으며 두 이성질체를 모두 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 알케닐의 예는 에테닐(-CH=CH2), 1-프로페닐(-CH2CH=CH2), 이소프로페닐[-C(CH3)=CH2], 부테닐, 1,3-부타디에닐 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 본원에 나타날 때마다, "C2-C6 알케닐"과 같은 수치 범위는 본원의 정의가 수치 범위가 지정되지 않은 용어 "알케닐"의 발생도 포함할지라도, 알케닐 기가 2개의 탄소 원자, 3개의 탄소 원자, 4개의 탄소 원자, 5개의 탄소 원자 또는 6개의 탄소 원자로 이루어질 수 있다는 것을 의미한다. 일부 구현예에서, 알케닐은 C2-C10 알케닐, C2-C9 알케닐, C2-C8 알케닐, C2-C7 알케닐, C2-C6 알케닐, C2-C5 알케닐, C2-C4 알케닐, C2-C3 알케닐 또는 C2 알케닐이다. 알키닐의 예는 에티닐, 2-프로피닐, 2- 등을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 본원에 나타날 때마다, "C2-C6 알키닐"과 같은 수치 범위는 본원의 정의가 수치 범위가 지정되지 않은 용어 "알키닐"의 발생도 포함할지라도, 알키닐 기가 2개의 탄소 원자, 3개의 탄소 원자, 4개의 탄소 원자, 5개의 탄소 원자 또는 6개의 탄소 원자로 이루어질 수 있다는 것을 의미한다. 일부 구현예에서, 알키닐은 C2-C10 알키닐, C2-C9 알키닐, C2-C8 알키닐, C2-C7 알키닐, C2-C6 알키닐, C2-C5 알키닐, C2-C4 알키닐, C2-C3 알키닐, 또는 C2 알키닐이다. 명세서에 구체적으로 달리 명시되지 않는 한, 알킬 기는 하기 기재된 바와 같이, 예를 들어, 옥소, 할로겐, 아미노, 니트릴, 니트로, 하이드록실, 할로알킬, 알콕시, 아릴, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아릴 등으로 임의로 치환된다. 일부 구현예에서, 알킬은 옥소, 할로겐, -CN, -CF3, -OH, -OMe, -NH2, 또는 -NO2로 임의로 치환된다. 일부 구현예에서, 알킬은 옥소, 할로겐, -CN, -CF3, -OH, 또는 -OMe로 임의로 치환된다. 일부 구현예에서, 알킬은 할로겐으로 임의로 치환된다.
"알킬렌"은 직쇄 또는 분지쇄 2가 탄화수소 사슬을 지칭한다. 본원에 나타날 때마다, "C1-C6 알킬렌"과 같은 수치 범위는 본원의 정의가 수치 범위가 지정되지 않은 용어 "알킬렌"의 발생도 포함할지라도, 알킬렌이 1개의 탄소 원자, 2개의 탄소 원자, 3개의 탄소 원자, 4개의 탄소 원자, 5개의 탄소 원자 또는 6개의 탄소 원자로 이루어진다는 것을 의미한다. 일부 구현예에서, 알킬렌은 C1-C10 알킬렌, C1-C9 알킬렌, C1-C8 알킬렌, C1-C7 알킬렌, C1-C6 알킬렌, C1-C5 알킬렌, C1-C4 알킬렌, C1-C3 알킬렌, C1-C2 알킬렌, 또는 C1 알킬렌이다. 명세서에 구체적으로 달리 명시되지 않는 한, 알킬렌 기는, 예를 들어, 옥소, 할로겐, 아미노, 니트릴, 니트로, 하이드록실, 할로알킬, 알콕시, 아릴, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아릴 등으로 임의로 치환될 수 있다. 일부 구현예에서, 알킬렌은 옥소, 할로겐, -CN, -CF3, -OH, -OMe, -NH2, 또는 -NO2로 임의로 치환된다. 일부 구현예에서, 알킬렌은 옥소, 할로겐, -CN, -CF3, -OH, 또는 -OMe로 임의로 치환된다. 일부 구현예에서, 알킬렌은 할로겐으로 임의로 치환된다.
"알콕시"는 화학식 -ORa의 라디칼을 지칭하고, 여기서, Ra는 정의된 바와 같은 알킬 라디칼이다. 명세서에 구체적으로 달리 명시되지 않는 한, 알콕시 기는, 예를 들어, 옥소, 할로겐, 아미노, 니트릴, 니트로, 하이드록실, 할로알킬, 알콕시, 아릴, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아릴 등으로 임의로 치환될 수 있다. 일부 구현예에서, 알콕시는 옥소, 할로겐, -CN, -CF3, -OH, -OMe, -NH2, 또는 -NO2로 임의로 치환된다. 일부 구현예에서, 알콕시는 옥소, 할로겐, -CN, -CF3, -OH, 또는 -OMe로 임의로 치환된다. 일부 구현예에서, 알콕시는 할로겐으로 임의로 치환된다.
"아릴"은 수소, 6 내지 30개의 탄소 원자 및 적어도 하나의 방향족 고리를 포함하는 탄화수소 고리계로부터 유도된 라디칼을 지칭한다. 아릴 라디칼은 융합된 (사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬 고리와 함께 융합될 때, 아릴은 방향족 고리 원자를 통해 결합됨) 또는 가교된 고리계를 포함할 수 있는 모노사이클릭, 바이사이클릭, 트리사이클릭 또는 테트라사이클릭 고리계일 수 있다. 일부 구현예에서, 아릴은 6 내지 10원 아릴이다. 일부 구현예에서, 아릴은 6원 아릴이다. 아릴 라디칼은 안트릴렌, 나프틸렌, 페난트릴렌, 안트라센, 아줄렌, 벤젠, 크리센, 플루오란텐, 플루오렌, as-인다센, s-인다센, 인단, 인덴, 나프탈렌, 페날렌, 페난트렌, 플레이아덴, 피렌 및 트리페닐렌의 탄화수소 고리계로부터 유도된 아릴 라디칼을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 아릴은 페닐이다. 명세서에 구체적으로 달리 명시되지 않는 한, 아릴은, 예를 들어, 할로겐, 아미노, 니트릴, 니트로, 하이드록실, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 알콕시, 아릴, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아릴 등으로 임의로 치환될 수 있다. 일부 구현예에서, 아릴은 할로겐, 메틸, 에틸, -CN, -CF3, -OH, -OMe, -NH2, 또는 -NO2로 임의로 치환된다. 일부 구현예에서, 아릴은 할로겐, 메틸, 에틸, -CN, -CF3, -OH, 또는 -OMe로 임의로 치환된다. 일부 구현예에서, 아릴은 할로겐으로 임의로 치환된다.
"사이클로알킬"은 융합된 (아릴 또는 헤테로아릴 고리와 융합될 때, 사이클로알킬은 비방향족 고리 원자를 통해 결합됨) 또는 가교된 고리계를 포함할 수 있는 안정한, 부분적으로 또는 완전히 포화된 모노사이클릭 또는 폴리사이클릭 카보사이클릭 고리를 지칭한다. 대표적인 사이클로알킬은 3 내지 15개의 탄소 원자를 갖는 사이클로알킬(C3-C15 사이클로알킬), 3 내지 10개의 탄소 원자를 갖는 사이클로알킬(C3-C10 사이클로알킬), 3 내지 8개의 탄소 원자를 갖는 사이클로알킬(C3-C8 사이클로알킬), 3 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 사이클로알킬(C3-C6 사이클로알킬), 3 내지 5개의 탄소 원자를 갖는 사이클로알킬(C3-C5 사이클로알킬) 또는 3 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 사이클로알킬(C3-C4 사이클로알킬)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 사이클로알킬은 3 내지 6원 사이클로알킬이다. 일부 구현예에서, 사이클로알킬은 5 내지 6원 사이클로알킬이다. 모노사이클릭 사이클로알킬은, 예를 들어, 사이클로프로필, 사이클로부틸, 사이클로펜틸, 사이클로헥실, 사이클로헵틸 및 사이클로옥틸을 포함한다. 폴리사이클릭 사이클로알킬 또는 카보사이클은, 예를 들어, 아다만틸, 노르보르닐, 데칼리닐, 바이사이클로[3.3.0]옥탄, 바이사이클로[4.3.0]노난, 시스-데칼린, 트랜스-데칼린, 바이사이클로[2.1.1]헥산, 바이사이클로[2.2.1]헵탄, 바이사이클로[2.2.2]옥탄, 바이사이클로[3.2.2]노난 및 바이사이클로[3.3.2]데칸 및 7,7-디메틸-바이사이클로[2.2.1]헵타닐을 포함한다. 부분적으로 포화된 사이클로알킬은, 예를 들어, 사이클로펜테닐, 사이클로헥세닐, 사이클로헵테닐 및 사이클로옥테닐을 포함한다. 본 명세서에서 달리 구체적으로 명시하지 않는 한, 사이클로알킬은, 예를 들어, 옥소, 할로겐, 아미노, 니트릴, 니트로, 하이드록실, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 알콕시, 아릴, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아릴 등으로 임의로 치환된다. 일부 구현예에서, 사이클로알킬은 옥소, 할로겐, 메틸, 에틸, -CN, -CF3, -OH, -OMe, -NH2 또는 -NO2로 임의로 치환된다. 일부 구현예에서, 사이클로알킬은 옥소, 할로겐, 메틸, 에틸, -CN, -CF3, -OH 또는 -OMe로 임의로 치환된다. 일부 구현예에서, 사이클로알킬은 할로겐으로 임의로 치환된다.
"할로" 또는 "할로겐"은 브로모, 클로로, 플루오로 또는 요오도를 지칭한다. 일부 구현예에서, 할로겐은 플루오로 또는 클로로이다. 일부 구현예에서, 할로겐은 플루오로이다.
"할로알킬"은 상기 정의된 바와 같은 하나 이상의 할로 라디칼에 의해 치환된 상기 정의된 바와 같은 알킬 라디칼을 지칭하며, 예를 들어, 트리플루오로메틸, 디플루오로메틸, 플루오로메틸, 트리클로로메틸, 2,2,2-트리플루오로에틸, 1,2-디플루오로에틸, 3-브로모-2-플루오로프로필, 1,2-디브로모에틸 등이다.
"헤테로사이클로알킬"은 2 내지 23개의 탄소 원자 및 질소, 산소, 인 및 황으로부터 선택된 1 내지 8개의 헤테로원자를 포함하는 부분적으로 또는 완전히 포화된 안정한 3 내지 24원 고리 라디칼을 지칭한다. 대표적인 헤테로사이클로알킬은 2 내지 15개의 탄소 원자를 갖는 헤테로사이클로알킬(C2-C15 헤테로사이클로알킬), 2 내지 10개의 탄소 원자를 갖는 헤테로사이클로알킬(C2-C10 헤테로사이클로알킬), 2 내지 8개의 탄소 원자를 갖는 헤테로사이클로알킬(C2-C8 헤테로사이클로알킬), 2 내지 6개의 탄소 원자를 갖는 헤테로사이클로알킬(C2-C6 헤테로사이클로알킬), 2 내지 5개의 탄소 원자를 갖는 헤테로사이클로알킬(C2-C5 헤테로사이클로알킬), 또는 2 내지 4개의 탄소 원자를 갖는 헤테로사이클로알킬(C2-C4 헤테로사이클로알킬)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클로알킬은 3 내지 6원 헤테로사이클로알킬이다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클로알킬은 5 내지 6원 헤테로사이클로알킬이다. 명세서에 구체적으로 달리 명시되지 않는 한, 헤테로사이클로알킬 라디칼은 융합된 (아릴 또는 헤테로아릴 고리와 융합될 때, 헤테로사이클로알킬은 비방향족 고리 원자를 통해 결합됨) 또는 가교된 고리계를 포함할 수 있는 모노사이클릭, 바이사이클릭, 트리사이클릭 또는 테트라사이클릭 고리계일 수 있고; 헤테로사이클로알킬 라디칼에서 질소, 탄소 또는 황 원자는 임의로 산화될 수 있고; 질소 원자는 임의로 4차화될 수 있다. 그러한 헤테로사이클로알킬 라디칼의 예는 아지리디닐, 아제티디닐, 디옥솔라닐, 티에닐[1,3]디티아닐, 데카하이드로이소퀴놀릴, 이미다졸리닐, 이미다졸리디닐, 이소티아졸리디닐, 이속사졸리디닐, 모르폴리닐, 옥타하이드로인돌릴, 옥타하이드로이소인돌릴, 2-옥소피페라지닐, 2-옥소피페리디닐, 2-옥소피롤리디닐, 옥사졸리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 4-피페리도닐, 피롤리디닐, 피라졸리디닐, 퀴누클리디닐, 티아졸리디닐, 테트라하이드로푸릴, 트리티아닐, 테트라하이드로피라닐, 티오모르폴리닐, 티아모르폴리닐, 1-옥소-티오모르폴리닐, 1,1-디옥소-티오모르폴리닐, 1,3-디하이드로이소벤조푸란-1-일, 3-옥소-1,3-디하이드로이소벤조푸란-1-일, 메틸-2-옥소-1,3-디옥솔-4-일 및 2-옥소-1,3-디옥솔-4-일을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 용어 헤테로사이클로알킬은 또한 단당류, 이당류 및 올리고당류를 포함하지만 이에 제한되지 않는 탄수화물의 모든 고리 형태를 포함한다. 달리 나타내지 않는 한, 헤테로사이클로알킬은 고리에 2 내지 10개의 탄소를 갖는다. 헤테로사이클로알킬에서 탄소 원자의 수를 지칭할 때 헤테로사이클로알킬에서 탄소 원자의 수는 헤테로사이클로알킬을 구성하는 원자(헤테로원자 포함) (즉, 헤테로사이클로알킬 고리의 골격 원자)의 총수와 동일하지 않은 것으로 이해된다. 부분적으로 포화된 헤테로사이클로알킬은, 예를 들어, 디하이드로피롤릴 또는 테트라하이드로피리딘을 포함한다. 명세서에 구체적으로 달리 명시되지 않는 한, 헤테로사이클로알킬은, 예를 들어, 옥소, 할로겐, 아미노, 니트릴, 니트로, 하이드록실, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 알콕시, 아릴, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아릴 등으로 임의로 치환된다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클로알킬은 옥소, 할로겐, 메틸, 에틸, -CN, -CF3, -OH, -OMe, -NH2, 또는 -NO2로 임의로 치환된다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클로알킬은 옥소, 할로겐, 메틸, 에틸, -CN, -CF3, -OH, 또는 -OMe로 임의로 치환된다. 일부 구현예에서, 헤테로사이클로알킬은 할로겐으로 임의로 치환된다.
"헤테로알킬"은 알킬의 하나 이상의 골격 원자가 탄소를 제외한 원자, 예를 들어, 산소, 질소(예를 들어, -NH-, -N(알킬)-), 황 또는 이들의 조합으로부터 선택된 알킬 기를 지칭한다. 헤테로알킬은 헤테로알킬의 탄소 원자에서 분자의 나머지에 부착된다. 한 양태에서, 헤테로알킬은 C1-C6 헤테로알킬이며, 여기서, 헤테로알킬은 1 내지 6개의 탄소 원자, 및 탄소를 제외한 하나 이상의 원자, 예를 들어, 산소, 질소(예를 들어, -NH-, -N(알킬)-), 황 또는 이들의 조합으로 이루어지고, 여기서, 헤테로알킬은 헤테로알킬의 탄소 원자에서 분자의 나머지에 부착된다. 명세서에 구체적으로 달리 명시되지 않는 한, 헤테로알킬은, 예를 들어, 옥소, 할로겐, 아미노, 니트릴, 니트로, 하이드록실, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 알콕시, 아릴, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아릴 등으로 임의로 치환된다. 일부 구현예에서, 헤테로알킬은 옥소, 할로겐, 메틸, 에틸, -CN, -CF3, -OH, -OMe, -NH2, 또는 -NO2로 임의로 치환된다. 일부 구현예에서, 헤테로알킬은 옥소, 할로겐, 메틸, 에틸, -CN, -CF3, -OH, 또는 -OMe로 임의로 치환된다. 일부 구현예에서, 헤테로알킬은 할로겐으로 임의로 치환된다.
"헤테로아릴"은 수소 원자, 1 내지 13개의 탄소 원자, 질소, 산소, 인 및 황으로부터 선택된 1 내지 6개의 헤테로원자 및 적어도 1개의 방향족 고리를 포함하는 5 내지 14원 고리계 라디칼을 지칭한다. 헤테로아릴 라디칼은 융합된 (사이클로알킬 또는 헤테로사이클로알킬 고리와 융합될 때, 헤테로아릴은 방향족 고리 원자를 통해 결합됨) 또는 가교된 고리계를 포함할 수 있는 모노사이클릭, 바이사이클릭, 트리사이클릭 또는 테트라사이클릭 고리계일 수 있고; 헤테로아릴 라디칼에서 질소, 탄소 또는 황 원자는 임의로 산화될 수 있고; 질소 원자는 임의로 4차화될 수 있다. 일부 구현예에서, 헤테로아릴은 5 내지 10원 헤테로아릴이다. 일부 구현예에서, 헤테로아릴은 5 내지 6원 헤테로아릴이다. 일부 구현예에서, 헤테로아릴은 5원 헤테로아릴이다. 일부 구현예에서, 헤테로아릴은 6원 헤테로아릴이다. 예로는 아제피닐, 아크리디닐, 벤즈이미다졸릴, 벤조티아졸릴, 벤즈인돌릴, 벤조디옥솔릴, 벤조푸라닐, 벤조옥사졸릴, 벤조티아졸릴, 벤조티아디아졸릴, 벤조[b][1,4]디옥세피닐, 1,4-벤조디옥사닐, 벤조나프토푸라닐, 벤즈옥사졸릴, 벤조디옥솔릴, 벤조디옥시닐, 벤조피라닐, 벤조피라노닐, 벤조푸라닐, 벤조푸라노닐, 벤조티에닐(벤조티오페닐), 벤조트리아졸릴, 벤조[4,6]이미다조[1,2-a]피리디닐, 카바졸릴, 신놀리닐, 디벤조푸라닐, 디벤조티오페닐, 푸라닐, 푸라노닐, 이소티아졸릴, 이미다졸릴, 인다졸릴, 인돌릴, 인다졸릴, 이소인돌릴, 인돌리닐, 이소인돌리닐, 이소퀴놀릴, 인돌리지닐, 이속사졸릴, 나프티리디닐, 옥사디아졸릴, 2-옥소아제피닐, 옥사졸릴, 옥시라닐, 1-옥시도피리디닐, 1-옥시도피리미디닐, 1-옥시도피라지닐, 1-옥시도피리다지닐, 1-페닐-1H-피롤릴, 페나지닐, 페노티아지닐, 페녹사지닐, 프탈라지닐, 프테리디닐, 푸리닐, 피롤릴, 피라졸릴, 피리디닐, 피라지닐, 피리미디닐, 피리다지닐, 퀴나졸리닐, 퀴녹살리닐, 퀴놀리닐, 퀴누클리디닐, 이소퀴놀리닐, 테트라하이드로퀴놀리닐, 티아졸릴, 티아디아졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 트리아지닐 및 티오페닐(즉, 티에닐)을 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 명세서에 구체적으로 달리 명시되지 않는 한, 헤테로아릴은, 예를 들어, 할로겐, 아미노, 니트릴, 니트로, 하이드록실, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 알콕시, 아릴, 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 헤테로아릴 등으로 임의로 치환된다. 일부 구현예에서, 헤테로아릴은 할로겐, 메틸, 에틸, -CN, -CF3, -OH, -OMe, -NH2, 또는 -NO2로 임의로 치환된다. 일부 구현예에서, 헤테로아릴은 할로겐, 메틸, 에틸, -CN, -CF3, -OH, 또는 -OMe로 임의로 치환된다. 일부 구현예에서, 헤테로아릴은 할로겐으로 임의로 치환된다.
용어 "동일성 %"는 2개의 핵산 또는 아미노산 서열 간의 비교를 지칭한다. 그러한 비교는 전체(예를 들어, Needleman-Wunsch 알고리즘) 또는 국부 정렬(예를 들어, Smith-Waterman, Sellers, 또는 기타 알고리즘)을 포함하지만 이에 제한되지 않는 당업계에 알려진 임의의 수의 정렬 방법을 사용하여 측정된다. 동일성 %는 종종 위치의 인접한 섹션에 대해 2개의 서열이 일치하는 위치의 백분율을 지칭하며, 여기서, 2개의 서열은 일치하는 위치를 최대화하고 일치하지 않는 위치의 갭을 최소화하는 방식으로 정렬된다. 일부 경우에, 정렬은 2개의 서열 사이에 갭이 없는 정렬이 수행된다. 일부 경우에, 정렬 결과 5% 미만의 갭, 3% 미만의 갭 또는 1% 미만의 갭이 생성된다. 서열 비교 또는 정렬의 추가 방법 또한 본 개시내용과 일치한다.
본원에 사용된 용어 "상동성"은 최적의 비교 목적을 위해 서열을 정렬함으로써 결정될 수 있는 2개 이상의 아미노산 서열 사이의 "상동성" 또는 "상동성 %"의 계산에 대한 것일 수 있다(예를 들어, 갭은 제1 서열의 서열에 도입될 수 있음), 이어서, 상응하는 위치에서 아미노산은 비교될 수 있으며, 두 서열 간의 동일성 %는 서열에 의해 공유되는 동일한 위치의 수의 함수일 수 있다(즉, 상동성 % = 동일한 위치의 #/위치의 총 # x 100). 예를 들어, 제1 서열에서의 위치는 제2 서열에서 상응하는 위치와 동일한 아미노산에 의해 점유될 수 있으며, 그 위치에서 분자는 동일하다. 두 서열 간의 상동성 %는, 두 서열의 최적 정렬을 위해 도입될 필요가 있는 갭의 수 및 각 갭의 길이를 고려하여 서열에 의해 공유되는 동일한 위치의 수의 함수일 수 있다. 일부 구현예에서, 비교 목적을 위해 정렬된 서열의 길이는 참조 서열 길이의 적어도 약 30%, 40%, 50%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 95%일 수 있다. BLAST® 검색은 두 서열 간의 상동성을 결정할 수 있다. 상동성은 두 서열의 전체 길이 사이에 또는 두 서열의 전체 길이의 분획 사이에 있을 수 있다. 2개의 서열은 펩타이드 서열, 아미노산 서열, 이들의 단편일 수 있다. 두 서열의 실제 비교는 잘 알려진 방법에 의해, 예를 들어, 수학적 알고리즘을 사용하여 달성될 수 있다. 그러한 수학적 알고리즘의 비제한적인 예는 문헌[Karlin, S. and Altschul, S., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90- 5873-5877 (1993)]에 설명될 수 있다. 그러한 알고리즘은 문헌[Altschul, S. et al., Nucleic Acids Res., 25:3389-3402 (1997)]에 설명된 바와 같이 NBLAST 및 XBLAST 프로그램(버전 2.0)에 통합될 수 있다. BLAST 및 Gapped BLAST 프로그램을 사용할 때, 각 프로그램의 임의의 관련 파라미터(예를 들어, NBLAST)가 사용될 수 있다. 예를 들어, 서열 비교를 위한 파라미터는 점수=100, 워드 길이=12로 설정되거나 변경될 수 있다(예를 들어, W=5 또는 W=20). 다른 예로 Myers 및 Miller, CABIOS (1989), ADVANCE, ADAM, BLAT, 및 FASTA의 알고리즘이 포함된다. 또 다른 구현예에서, 아미노산 서열 간의 동일성 %는, 예를 들어, GCG 소프트웨어 패키지(Accelrys, Cambridge, UK)의 GAP 프로그램을 사용하여 달성될 수 있다.
"약학적으로 허용되는"은 연방 또는 주 정부의 규제 기관에 의해 승인되거나 승인될 수 있거나 인간을 포함한 동물에 사용하기 위해 미국 약전 또는 기타 일반적으로 인정되는 약전에 나열된 것을 지칭한다.
"약학적으로 허용되는 염"은 약학적으로 허용되고 모 화합물의 원하는 약리학적 활성을 보유한 화합물의 염을 지칭한다.
"약학적으로 허용되는 부형제, 담체 또는 애쥬번트"는 본 개시내용의 적어도 하나의 항체와 함께 대상체에게 투여될 수 있고 이의 약리학적 활성을 파괴하지 않고 화합물의 치료량을 전달하기에 충분한 용량으로 투여될 때 무독성인 부형제, 담체 또는 애쥬번트를 지칭한다.
"약학적으로 허용되는 비히클"은 본 개시내용의 적어도 하나의 항체가 투여되는 희석제, 애쥬번트, 부형제 또는 담체를 지칭한다.
"치료하는(treating)" 또는 "치료" 또는 "치료하기 위해" 또는 "완화하는" 또는 "완화하기 위해"와 같은 용어들은 다음을 지칭할 수 있다: 1) 진단된 병리학적 병태 또는 장애를 치료하고 늦추고 증상을 완화하고/하거나 진행을 중단하는 치료학적 조치; 및/또는 2) 표적화된 병리학적 병태 또는 장애의 발병을 예방 및/또는 늦추는 예방적(prophylactic) 또는 예방(preventative) 조치. "치료"는 치료되는 개체 또는 세포의 자연적 경과를 변경하려는 시도의 임상 개입을 지칭하며, 예방을 위해 또는 임상 병리학 과정 동안 수행될 수 있다. 치료의 바람직한 효과는 질환의 발생 또는 재발 방지, 증상의 완화, 및 질환의 임의의 직간접적인 병리학적 결과의 감소, 전이 방지, 질환 진행 속도 감소, 질환 상태의 개선 또는 일시적 억제(palliation), 및 관해 또는 개선된 예후를 포함한다. 따라서, 치료가 필요한 사람에는 이미 장애가 있는 사람, 장애가 있는 경향이 있는 사람, 그리고 장애를 예방해야 하는 사람이 포함될 수 있다.
"아미노산"은 자연 발생 및 합성 아미노산 뿐만 아니라 자연 발생 아미노산과 유사하게 기능하는 아미노산 유사체 및 아미노산 모방체를 지칭한다. 자연 발생 아미노산은 유전 암호에 의해 코딩된 아미노산뿐만 아니라 나중에 변형되는 아미노산, 예를 들어, 하이드록시프롤린, 감마-카복시글루타메이트 및 O-포스포세린이다. 아미노산 유사체는 자연 발생 아미노산과 동일한 기본 화학 구조를 갖는 화합물, 예를 들어, 수소, 카복실 기, 아미노 기 및 R 기에 결합된 알파 탄소, 예를 들어, 호모세린, 노르류신, 메티오닌 설폭사이드, 메티오닌 메틸 설포늄을 지칭한다. 그러한 유사체는 변형된 R 기(예를 들어, 노르류신) 또는 변형된 펩타이드 골격을 가질 수 있지만, 자연 발생 아미노산과 동일한 기본 화학 구조를 유지할 수 있다. 아미노산 모방체는 아미노산의 일반적인 화학 구조와 상이한 구조를 갖지만 자연 발생 아미노산과 유사한 기능을 하는 화합물을 지칭한다.
"장애" 또는 "질환"은 물질/분자(예를 들어, 본원에 개시된 바와 같은 펩타이드 접합체) 또는 본원에 개시된 방법을 사용한 치료로부터 이익을 얻을 병태를 지칭한다. 이에는 포유동물이 해당 장애에 걸리기 쉬운 병리학적 병태를 포함한 만성 및 급성 장애 또는 질환이 포함된다.
치료 목적을 위한 "포유동물"은 인간, 설치류(예를 들어, 마우스 및 래트), 원숭이; 가축 및 농장 동물; 및 동물원, 스포츠, 실험실 또는 애완 동물, 예컨대 개, 고양이, 소, 말, 양, 돼지, 염소, 토끼 등을 포함하는 포유동물로 분류되는 임의의 동물을 지칭한다. 일부 구현예에서, 포유동물은 인간, 설치류, 또는 원숭이로부터 선택된다.
"비변형된 펩타이드"는 비변형된 서열(야생형 펩타이드) 또는 스테이플이 없는 변형된 서열을 지칭한다.
실시예
펩타이드는 표준 고체상 펩타이드 합성(SPPS) 기술에 의해 합성되고 HPLC를 통해 정제되었다(설명된 바와 같음).
달리 나타내지 않는 한, 모든 시약은 상업적 공급업체(Sigma Aldrich, Fisher, Oakwood)로부터 구입하여 추가 정제 없이 사용하였다. 펩타이드는 Cellmano Biotech Limited(Hefei), InnoPep(San Diego), Shanghai Apeptide Co.(Shanghai) 또는 Shanghai Dechi Biosciences Co.(Shanghai)로부터 구입하였다. 공기 또는 수분에 민감한 시약 또는 중간체와 관련된 모든 반응은 질소 또는 아르곤의 불활성 분위기 하에 수행되었다. 사용된 모든 용매는 HPLC 등급이었다. 반응은 LC-MS에 의해 또는 KMnO4 수용액을 사용하여 염색된 Merck 50 × 100 mm 실리카 겔 60 알루미늄 시트에서 박층 크로마토그래피(TLC)에 의해 모니터링하였다.
플래시 크로마토그래피 정제는 CombiFlash® Rf(Teledyne Isco) 상의 실리카 겔 사전 패킹된 컬럼(40 μm, Teledyne Isco로부터의 RediSep® Rf)에서 수행되었다. 정제된 최종 화합물은 단일 및 대칭 피크로 용출되었다(이로써 ≥95%의 순도를 확인함).
반-분취 크로마토그래피는 Phenomenex Luna 컬럼(C18, 100Å 기공 크기, 10 μm 입자 크기, 250　×　10.0　mm, 유량: 4　mL/min)을 사용하여 Shimadzu HPLC에서 또는 Phenomenex Luna 컬럼(C18, 100Å 기공 크기, 5 μm 입자 크기, 150　×　21.2 mm, 유량: 20　mL/min)을 사용하여 Agilent 1200 HPLC에서 수행하였다.
1H 및 13C NMR 스펙트럼은 d6-DMSO, CDCl3 또는 CD3OD 중에서 Bruker 400 시스템에 기록되었다. 화학적 이동은 테트라메틸실란을 내부 표준으로 사용하여 백만분율(ppm) 단위로 주어진다. 약어는 다음과 같이 사용된다: s = 단일선, d = 이중선, t = 삼중선, q = 사중선, p = 오중선, m = 다중선, dd = 이중선의 이중선, br = 넓은. 커플링 상수(J 값)는 헤르츠(Hz)로 제시된다. 저해상도 질량 스펙트럼은 Phemomenex Luna Omega C18 컬럼(C18, 100Å 기공 크기, 1.6 μm 입자 크기, 50　×　2.1 mm, 유량: 0.4　mL/min)을 사용하여 Waters Acquity UPLC에 기록되었다. 용매: A - H2O + 0.1% 포름산, B - MeCN + 0.1% 포름산, 구배: 0-1분 10-90% B, 1-1.6분 90% B, 1.6-1.7분 90-10% B, 1.7-2분 10% B.
고해상도 질량 스펙트럼(HRMS)은 Aeris Widepore 컬럼(XB-C8, 3.6 μm 입자 크기, 150　×　2.1 mm, 유량: 0.5 mL/min)을 사용하여 Agilent 1200 시리즈 정확한 질량 비행 시간(Mass Time-of-Flight: TOF)에 기록되었다. 용매: A - H2O + 0.1% 포름산, B - MeCN + 0.1% 포름산, 구배: 0-2분 5% B, 2-12분 5-60% B, 12-13분 60-80% B, 13-14분 80-20% B, 14-15분 20-80% B, 15-16분 80-20% B, 16-17분 20-95% B, 17-20분 95% B, 20-21분 95-5% B.
클로로트리틸 클로라이드 수지 로딩을 위한 일반 프로토콜 A
Fmoc-Lys(ivDde)-OH(60　mg, 100　μmol)를 5 mL의 DMF에 아미노산, 수지 및 DIEA(70 μL, 400 μmol)를 혼합하고 30분 동안 교반하여 2-클로로트리틸 클로라이드 수지(Novabiochem) (100　mg, 80　μmol)에 결합하였다. 이어서, 수지를 DMF(3x), DCM(3x)으로 세척하고, CH3OH/DCM/DIEA(8:1:1)로 10분 동안 처리하여 미반응 염화트리틸 부위를 덮고 진공 하에 건조시키고 데시케이터에 보관하였다.
Fmoc 보호기의 탈보호를 위한 일반 프로토콜 B
수지에 DMF 중 피페리딘(20%)을 첨가하였다. 혼합물을 5분 동안 진탕하고 배수시켰다. 신선한 20% 피페리딘을 첨가하고 이번에는 혼합물을 15분 동안 진탕하였다. 양성 닌히드린 및/또는 TNBS 시험이 관찰되었다. 이어서, 수지를 DMF(3x), DCM(3x)으로 세척하였다.
ivDde 보호기의 탈보호를 위한 일반 프로토콜 C
DMF 및 DCM으로 세척한 후, 수지를 DMF 중 2% 히드라진으로 처리하였다(5 mL, 2×15분). 양성 닌히드린 및/또는 TNBS 시험이 관찰되었다. 이어서, 수지를 DMF(3x), DCM(3x)으로 세척하였다.
펩타이드 커플링을 위한 일반 프로토콜 D
수지를 DMF(5 mL) 중 커플링 시약 HATU(3.3 당량) 및 DIEA(3.3 당량)를 사용하여 지정된 카복실산 유도체(3 당량)로 2시간 동안 처리하거나 음성 닌히드린 및/또는 TNBS 시험이 관찰될 때까지 반복하였다. 이어서, 수지를 DMF(3x), DCM(3x)으로 세척하였다.
수지상 브로모아세틸화를 위한 일반 프로토콜 E
이어서, 수지를 200 mL의 DCM 중 브로모아세트산 무수물(2.4 당량) 및 DIEA(2.6 당량)로 30분 동안 처리하였다.
클로로트리틸 수지로부터 펩타이드 절단을 위한 일반 프로토콜 F
수지를 DCM으로 세척하고(3회), 10% H2O 및 10% 트리이소프로필실란을 함유하는 DCM 중 5 mL의 10% TFA를 사용하여 1시간 동안 생성물을 수지로부터 절단하였다.
실시예 1: L1의 합성
Figure pct00082
0℃에서 DCM(10 mL) 중 1,4-디아미노부탄(80 μL, 0.795 mmol, 1 당량)의 용액에 DIEA(276 μL, 1.59 mmol, 2 당량)를 첨가한 다음, 1　mL의 DCM에 용해된 브로모아세트산 무수물(413 g, 1.59 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안, 실온에서 1.5시간 동안 교반하고, 용매를 제거하였다. 실리카 겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 L1을 백색 고체(162　mg, 0.49　mmol, 61%)로서 수득하였다.
Figure pct00083
실시예 2: L1B의 합성
Figure pct00084
0℃에서 DCM(5　mL) 중 1,2-에틸렌디아민(30 μL, 0.448　mmol, 1 당량)의 용액에 DIEA(172 μL, 0.985　mmol, 2.2 당량)를 첨가한 다음, 1　mL의 DCM에 용해된 브로모아세트산 무수물(233　mg, 0.897　mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안, 실온에서 1.5시간 동안 교반하고, 용매를 제거하였다. 실리카 겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 L1B를 백색 고체(43.9　mg, 0.145　mmol, 32%)로서 제공하였다.
Figure pct00085
실시예 3: L1C의 합성
Figure pct00086
0℃에서 DCM(5　mL) 중 1,3-디아미노프로판(30 μL, 0.359　mmol, 1 당량)의 용액에 DIEA(138 μL, 0.789　mmol, 2.2 당량)를 첨가한 다음, 1　mL의 DCM에 용해된 브로모아세트산 무수물(186　mg, 0.718　mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안, 실온에서 1.5시간 동안 교반하고, 용매를 제거하였다. 실리카 겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 L1C를 백색 고체(60.8　mg, 0.19　mmol, 53%)로서 수득하였다.
Figure pct00087
실시예 4: L1D의 합성
Figure pct00088
0℃에서 DCM(15　mL) 중 1,7-디아미노헥산(65　mg, 0.499　mmol, 1 당량)의 용액에 DIEA(208 μL, 1.197　mmol, 2.4 당량)를 첨가한 다음, 1　mL의 DCM에 용해된 브로모아세트산 무수물(259　mg, 0.998　mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안, 실온에서 1.5시간 동안 교반하고, 용매를 제거하였다. 실리카 겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 L1D를 백색 고체(120　mg, 0.322　mmol, 64%)로서 수득하였다.
Figure pct00089
실시예 5: L1E의 합성
Figure pct00090
0℃에서 DCM(10　mL) 중 1,11-디아미노운데칸(48　mg, 0.257　mmol, 1 당량)의 용액에 DIEA(108 μL, 0.616　mmol, 2.4 당량)를 첨가한 다음, 1　mL의 DCM에 용해된 브로모아세트산 무수물(134　mg, 0.515　mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안, 실온에서 1.5시간 동안 교반하고, 용매를 제거하였다. 실리카 겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 L1E를 백색 고체(62.3　mg, 0.145　mmol, 56%)로서 수득하였다.
Figure pct00091
실시예 6: L1F의 합성
Figure pct00092
0℃에서 DCM(20　mL) 중 카다베린(48　mg, 0.257　mmol, 1 당량)의 용액에 DIEA(284 μL, 1.63　mmol, 2.4 당량)를 첨가한 다음, 1　mL의 DCM에 용해된 브로모아세트산 무수물(353　mg, 1.36　mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안, 실온에서 1.5시간 동안 교반하고, 용매를 제거하였다. 실리카 겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 L1F를 백색 고체(156 mg, 0.453　mmol, 66%)로서 수득하였다.
Figure pct00093
실시예 7: L1G의 합성
Figure pct00094
중간체 L1Ga
0℃에서 DCM(20　mL) 중 tert-부틸 비스(2-아미노에틸)카바메이트(167　mg, 0.82　mmol, 1 당량)의 용액에 DIEA(342 μL, 11.96　mmol, 2.4 당량)를 첨가한 다음, 1　mL의 DCM에 용해된 브로모아세트산 무수물(426　mg, 1.64　mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안, 실온에서 1.5시간 동안 교반하고, 용매를 제거하였다. 실리카 겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 L1Ga를 백색 고체(289　mg, 0.65　mmol, 79%)로서 수득하였다.
Figure pct00095
L1G
화합물 L1Ga(20　mg)를 TFA/DCM(1:1, v/v, 2　mL)에 용해시키고, 실온에서 30분 동안 교반하고 증발시켜(헥산과 함께 동시증발시킴) 화합물 L1G를 오일로서 수득하였다. 생성물은 추가 단계에서 직접 사용하였다. MS (ES+) m/z 345.2 ([M+H]+).
실시예 8: L3의 합성
Figure pct00096
중간체 L3a
미리스트산(184　mg, 0.805　mmol, 1 당량)을 4　mL의 DMF에 용해시켰다. HATU(321　mg, 0.845　mmol, 1.1 당량) 및 DIEA(154 μL, 0.885　mmol, 1.1 당량)를 첨가한 다음, Boc-NH-PEG2-COOH(200　mg, 0.805　mmol, 1 당량)를 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 1.5시간 동안 교반하고, 용매를 제거하였다. 생성물을 EtOAc에 용해시켰다. 유기층을 1 M HCl, 포화 NaHCO3, 및 염수로 연속적으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 화합물 L3a를 백색 고체(254　mg, 0.55　mmol, 69%)로서 제공하였다.
Figure pct00097
중간체 L3b
DCM(2　mL) 중 화합물 L3a(242　mg, 0.527　mmol, 1 당량)의 용액을 30분 동안 TFA(2　mL)로 처리하였다. 혼합물을 농축시키고, 헥산과 함께 동시증발시켰다. DMF(5　mL)에 용해된 BocNH-PEG2-CO2H(146　mg, 0.527mol, 1 당량)의 용액에 HATU(224　mg, 0.59　mmol, 1.1 당량)를 첨가하였다. DMF 중 탈보호된 화합물 L3a 및 DIEA(183 μL, 1.05　mmol, 2 당량)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 생성물을 EtOAc로 희석하였다. 유기층을 1 M HCl, 포화 NaHCO3, 및 염수로 연속적으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 화합물 L3b를 오일(129　mg, 0.209　mmol, 40%)로서 제공하였다.
Figure pct00098
중간체 L3c
DCM(2　mL) 중 화합물 L3b(129　mg, 0.209　mmol, 1 당량)의 용액을 30분 동안 TFA(2　mL)로 처리하였다. 혼합물을 농축시키고, 헥산과 함께 동시증발시켰다. DMF(5　mL)에 용해된 Boc-Orn(Boc)-OH(69　mg, 0.209　mmol, 1 당량)의 용액에 HATU(88　mg, 0.23　mmol, 1.1 당량)를 첨가하였다. DMF 중 탈보호된 화합물 L3b 및 DIEA(73 μL, 0.419　mmol, 2 당량)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 생성물을 EtOAc로 희석하였다. 유기층을 1 M HCl, 포화 NaHCO3, 및 염수로 연속적으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 화합물 L3c를 오일(137　mg, 0.164　mmol, 78%)로서 제공하였다. t R = 4.07분(Agilent).
Figure pct00099
L3
DCM(2　mL) 중 화합물 L3c(137　mg, 0.165　mmol, 1 당량)의 용액을 30분 동안 TFA(2　mL)로 처리하였다. 혼합물을 농축시키고, 헥산과 함께 동시증발시키고, 10 mL의 DCM에 용해시키고, 0℃에서 냉각시켰다. DIEA(115 μL, 0.66　mmol, 4 당량)를 첨가한 다음, 1　mL의 DCM에 용해된 브로모아세트산 무수물(85.8 g, 0.33　mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안, 실온에서 1.5시간 동안 교반하고, 용매를 제거하였다. 실리카 겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 L3을 백색 고체(56　mg, 0.064　mmol, 39%)로서 수득하였다. t R = 3.4분(Agilent). MS (ES+) m/z 872.4 ([M+H]+), 874.3 ([M+H]+).
실시예 9: L4의 합성
Figure pct00100
중간체 L4a
DMF(5　mL)에 용해된 Boc-Orn(Boc)-OH(595　mg, 1.79　mmol, 1 당량)의 용액에 HATU(750　mg, 1.79　mmol, 1.1 당량), DIEA(343 μL, 1.97　mmol, 1.1 당량) 및 1　mL의 DMF에 용해된 아민-PEG3-N3(391　mg, 1.79　mmol, 1 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 생성물을 EtOAc로 희석하였다. 유기층을 1 M HCl, 포화 NaHCO3, 염수로 연속적으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 화합물 L4a를 오일(558　mg, 1.05　mmol, 58%)로서 제공하였다.
Figure pct00101
중간체 L4b
무수 MeOH(10　mL) 중 아르곤 하에 화합물 L4a(548　mg, 1.02　mmol, 1 당량)의 용액에 Pd/C(10.9　mg, 0.102　mmol, 0.1 당량)를 첨가하고, 아르곤을 H2로 대체하였다. 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하고, 셀라이트 상에서 여과하고, 증발시켜 화합물 L4b를 오일(516　mg, 1.02　mmol, 정량)로서 수득하였다. 생성물을 임의의 추가 정제 없이 사용하였다.
중간체 L4c
DMF(5　mL)에 용해된 옥타데칸디오산 모노 tert-부틸 에스테르(370　mg, 1.02　mmol, 1 당량)의 용액에 HATU(387　mg, 1.02　mmol 1.1 당량), DIEA(186 μL, 1.07　mmol, 2 당량) 및 1　mL의 DMF에 용해된 화합물 L4b(516　mg, 1.02　mmol, 1 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 생성물을 EtOAc로 희석하였다. 유기층을 1 M HCl, 포화 NaHCO3, 염수로 연속적으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 화합물 L4c를 오일(697　mg, 0.81　mmol, 79%)로서 제공하였다.
Figure pct00102
L4
DCM(2　mL) 중 L4c(422　mg, 0.49　mmol, 1 당량)의 용액을 30분 동안 TFA(2　mL)로 처리하였다. 혼합물을 농축시키고, 헥산과 함께 동시증발시키고, 20　mL의 DCM에 용해시키고, 0℃에서 냉각시켰다. DIEA(327 μL, 1.96　mmol, 4 당량)를 첨가한 다음, 1　mL의 DCM에 용해된 브로모아세트산 무수물(254　mg, 0.98　mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안, 실온에서 1.5시간 동안 교반하고, 용매를 제거하였다. 실리카 겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 L4를 백색 고체(53　mg, 0.063　mmol, 12%)로서 수득하였다.
Figure pct00103
실시예 10: L4A의 합성
Figure pct00104
중간체 L4Aa
0℃에서 DCM(20 mL) 중 tert-부틸 비스(2-아미노에틸)카바메이트(500 mg, 2.45 mmol, 1 당량) 및 DIEA(1.02　mL, 5.88 mmol, 2 당량)의 용액에 브로모아세트산 무수물(1.31 g, 5.04 mmol, 1 mL DCM 중 2.05 당량)을 적가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안, 실온에서 2시간 동안 교반하고, 진공에서 증발시켰다. 플래시 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 오일(883 mg, 81%))로서 수득하였다.
Figure pct00105
중간체 L4Ab
DCM/TFA(1:1, v/v) 중 화합물 L4Aa(1 당량)의 용액을 실온에서 30분 동안 교반하고, 진공에서 농축시켰다(헵탄과 함께 동시증발시킴). 화합물 L4Ab는 정제 없이 추가 단계에서 직접 사용하였다. t R = 0.58분. MS (ES+) m/z 345.65/347.67 ([M+H]+).
중간체 L4Ac
DMF 중 모노-tert-부틸 석시네이트(1.05 당량)의 용액에 HATU(1.05 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반하였다. 화합물 L4Ab 및 DIEA(4 당량)를 DMF(1 mL)에 용해시키고, 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응을 실온에서 밤새 교반하고, AcOEt로 희석하였다. 유기상을 1 N HCl, 포화 NaHCO3 용액으로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 증발시켰다. 플래시 크로마토그래피로 정제하여 생성물을 오일로서 수득하였다. t R = 1.07분. MS (ES+) m/z 501.52/503.80 ([M+H]+).
중간체 L4Ad
DCM/TFA(1:1, v/v) 중 화합물 L4Ac(1 당량)의 용액을 실온에서 30분 동안 교반하고, 진공에서 농축시켰다(헵탄과 함께 동시증발시킴). 화합물 L4Ad는 정제 없이 추가 단계에서 직접 사용하였다. t R = 0.57분. MS (ES+) m/z 445.71/447.73 ([M+H]+).
중간체 L4Ae
옥타데칸디오산 모노-tert-부틸 에스테르산(200 mg, 0.54 mmol, 1 당량)을 5 mL의 DMF에 용해시켰다. HATU(225 mg, 0.59 mmol, 1.1 당량) 및 DIEA(103 μL, 0.59 mmol, 1.1 당량)를 첨가한 다음, Boc-NH-PEG3-NH2(157.8 g, 0.54 mmol, 1 당량)를 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 3시간 동안 교반하고, 용매를 제거하였다. 생성물을 EtOAc에 용해시켰다. 유기층을 포화 NaHCO3, 1 M HCl, 염수로 연속적으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 생성물 L4Ae를 백색 고체(281 mg, 0.43 mmol, 81%)로서 제공하였다.
Figure pct00106
L4A
DCM 중 화합물 L4Ae의 용액을 30분 동안 TFA로 처리하였다. 혼합물을 농축시키고, 헵탄과 함께 동시증발시키고, DMF에 용해시키고, DMF 중 화합물 L4Ad, HATU 및 DIEA의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 3시간 동안 교반하고, 반-분취 HPLC로 정제하여 원하는 생성물 L4A를 제공하였다.
실시예 11: L5의 합성
Figure pct00107
일반 프로토콜 A , B , D (옥타데칸디오산 모노-tert 부틸 에스테르), C , D (Fmoc-PEG 2 -프로피온산), B , D (Fmoc-PEG 2 -프로피온산), B , D (Fmoc-Orn(Fmoc)-OH), B , E , F .
조 물질을 질량 검출과 함께 반-분취 HPLC로 정제하여 생성물 L5를 백색 고체(73　mg, 0.065　mmol, 11%)로서 수득하였다.
Figure pct00108
실시예 12: L5A의 합성
Figure pct00109
중간체 L5Aa
DCM(200 mL) 중 Fmoc-OSu(131 g, 388 mmol)의 용액을 N2 하에 -40℃에서 DCM(200 mL) 중 디에틸렌트리아민(20 g, 194 mmol)의 용액에 적가하고, 2시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 용액 중 조 생성물은 정제되지 않고 다음 단계에 직접 사용하였다.
Figure pct00110
중간체 L5Ab
DCM(400 mL) 중 화합물 L5Aa(106 g, 194 mmol)의 용액에 DMAP(4.74 g, 38.8 mmol) 및 테트라하이드로푸란-2,5-디온(67.9 g, 678 mmol)을 첨가하고, 25℃에서 14시간 동안 교반하였다. LCMS는 반응이 완료되었음을 나타내었다. 반응 혼합물에 pH = 5-6이 될 때까지 1 N HCl을 첨가하고, 15분 동안 교반하고, 유기상을 분리한 다음, 유기상을 물 및 포화 NaCl(500 mL)로 세척하고, 수성상을 DCM(500 mL)으로 2회 추출하였다. 합한 DCM을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 용리액으로서 DCM/MeOH(80:0-5:1)를 사용하여 실리카 겔 상에서 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 L5Ab(57.6 g, 45% 수율)를 백색 고체 분말로서 수득하였다.
Figure pct00111
L5A
일반 프로토콜 A , B , D (옥타데칸디오산 모노-tert 부틸 에스테르), C , D (Fmoc-PEG 2 -프로피온산), B , D (Fmoc-PEG 2 -프로피온산), B , D (화합물 L5Ab ), B , E , F .
조 물질을 HPLC로 정제하여 생성물 L5A를 백색 고체(5.2 g, 11% 수율)로서 수득하였다. MS (ES+) m/z 1188.5 ([M+H]+).
실시예 13: L6의 합성
Figure pct00112
중간체 L6a
팔미트산(235　mg, 0.919　mmol, 1.05 당량)을 4　mL의 DMF에 용해시켰다. HATU(349　mg, 0.919　mmol, 1.05 당량) 및 DIEA(167 μL, 0.963　mmol, 1.1 당량)를 첨가한 다음, Boc-NH-PEG2-NH2(200　mg, 0.875　mmol, 1 당량)를 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하고, 용매를 제거하였다. 생성물을 EtOAc에 용해시켰다. 유기층을 1 M HCl, 포화 NaHCO3, HCl 및 염수로 연속적으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 원하는 화합물 L6a를 백색 고체(412　mg, 0.84　mmol, 97%)로서 제공하였다.
Figure pct00113
중간체 L6b
DCM(2　mL) 중 화합물 L6a(412　mg, 0.84　mmol, 1 당량)의 용액을 30분 동안 TFA(2　mL)로 처리하였다. 혼합물을 농축시키고, 핵산과 함께 동시증발시켰다. DMF(5　mL)에 용해된 BocNH-PEG2-CO2H(258　mg, 0.931　mmol, 1.1 당량)의 용액에 HATU(353　mg, 0.931　mmol, 1.1 당량)를 첨가하였다. DMF 중 탈보호된 화합물 L6a 및 DIEA(294 μL, 1.69　mmol, 2 당량)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 생성물을 EtOAc로 희석하였다. 유기층을 1 M HCl, 포화 NaHCO3, HCl 및 염수로 연속적으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 화합물 L6b를 오일(329　mg, 0.51　mmol, 60%)로서 제공하였다.
Figure pct00114
중간체 L6c
DCM(2　mL) 중 화합물 L6b(329　mg, 0.51　mmol, 1 당량)의 용액을 30분 동안 TFA(2　mL)로 처리하였다. 혼합물을 농축시키고, 핵산과 함께 동시증발시켰다. DMF(5　mL)에 용해된 Boc-Orn(Boc)-OH(186　mg, 0.56　mmol, 1.1 당량)의 용액에 HATU(213　mg, 0.56　mmol 1.1 당량)를 첨가하였다. DMF 중 탈보호된 화합물 L6b 및 DIEA(177 μL, 1.02　mmol, 2 당량)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 생성물을 EtOAc로 희석하였다. 유기층을 포화 NaHCO3, 1 M HCl 및 염수로 연속적으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 화합물 L6c를 오일(326　mg, 0.37　mmol, 94%)로서 제공하였다.
Figure pct00115
L6
DCM(2　mL) 중 화합물 L6c(100　mg, 0.116　mmol, 1 당량)의 용액을 30분 동안 TFA(2　mL)로 처리하였다. 혼합물을 농축시키고, 헥산과 함께 동시증발시키고, 10　mL의 DCM에 용해시키고, 0℃로 냉각시켰다. DIEA(80.8 μL, 0.46　mmol, 4 당량)를 첨가한 다음, 1　mL의 DCM에 용해된 브로모아세트산 무수물(61.9　mg, 0.238　mmol, 2.05 당량)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안, 실온에서 1.5시간 동안 교반하고, 용매를 제거하였다. 실리카 겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 L6을 백색 고체(50.1　mg, 0.055　mmol, 40%)로서 수득하였다.
Figure pct00116
실시예 14: L7의 합성
Figure pct00117
중간체 L7a
스테아르산(261　mg, 0.919　mmol, 1.05 당량)을 4　mL의 DMF에 용해시켰다. HATU(349　mg, 0.919　mmol, 1.05 당량) 및 DIEA(167 μL, 0.963　mmol, 1.1 당량)를 첨가한 다음, Boc-NH-PEG2-NH2(200　mg, 0.875　mmol, 1 당량)를 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 2시간 동안 교반하고, 용매를 제거하였다. 생성물을 EtOAc에 용해시켰다. 유기층을 1 M HCl, 포화 NaHCO3, 및 염수로 연속적으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 원하는 화합물 L7a를 백색 고체(430　mg, 0.83　mmol, 95%)로서 제공하였다.
Figure pct00118
중간체 L7b
DCM(2　mL) 중 화합물 L7a(426　mg, 0.87　mmol, 1 당량)의 용액을 30분 동안 TFA(2　mL)로 처리하였다. 혼합물을 농축시키고, 헥산과 함께 동시증발시켰다. DMF(5　mL)에 용해된 BocNH-PEG2-CO2H(266　mg, 0.96　mmol, 1.1 당량)의 용액에 HATU(366　mg, 0.96　mmol, 1.1 당량)를 첨가하였다. DMF 중 탈보호된 화합물 L7a 및 DIEA(304 μL, 1.75　mmol, 2 당량)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 생성물을 EtOAc로 희석하였다. 유기층을 1 M HCl, 포화 NaHCO3, 및 염수로 연속적으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 화합물 L7b를 오일(360　mg, 0.53　mmol, 61%)로서 제공하였다.
Figure pct00119
중간체 L7c
DCM(2　mL) 중 화합물 L7b(360　mg, 0.53　mmol, 1 당량)의 용액을 30분 동안 TFA(2　mL)로 처리하였다. 혼합물을 농축시키고, 헥산과 함께 동시증발시켰다. DMF(5　mL)에 용해된 Boc-Orn(Boc)-OH(195　mg, 0.58　mmol, 1.1 당량)의 용액에 HATU(223　mg, 0.58　mmol 1.1 당량)를 첨가하였다. DMF 중 탈보호된 화합물 L7b 및 DIEA(186 μL, 1.07　mmol, 2 당량)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 생성물을 EtOAc로 희석하였다. 유기층을 1 M HCl, 포화 NaHCO3, 및 염수로 연속적으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 화합물 L7c를 오일(373　mg, 0.42　mmol, 78%)로서 제공하였다.
Figure pct00120
L7
DCM(2　mL) 중 화합물 L7c(100　mg, 0.112　mmol, 1 당량)의 용액을 30분 동안 TFA(2　mL)로 처리하였다. 혼합물을 농축시키고, 헥산과 함께 동시증발시키고, 10　mL의 DCM에 용해시키고, 0℃에서 냉각시켰다. DIEA(78 μL, 0.44　mmol, 4 당량)를 첨가한 다음, 1　mL의 DCM에 용해된 브로모아세트산 무수물(62　mg, 0.24　mmol, 2.05 당량)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안, 실온에서 1.5시간 동안 교반하고, 용매를 제거하였다. 생성물을 EtOAc에 용해시켰다. 유기층을 1 M HCl, 포화 NaHCO3, 및 염수로 연속적으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 L7을 백색 고체(95　mg, 0.10　mmol, 91%)로서 수득하였다.
Figure pct00121
실시예 15: L8의 합성
Figure pct00122
일반 프로토콜 A , B , D (헥사데칸디오산 모노-tert 부틸 에스테르), C , D (Fmoc-PEG 2 -프로피온산), B , D (Fmoc-PEG 2 -프로피온산), B , D (Fmoc-Orn(Fmoc)-OH), B , E , F .
조 물질을 질량 검출과 함께 반-분취 HPLC로 정제하여 생성물 L8을 백색 고체(42.6　mg, 0.038　mmol, 22%)로서 수득하였다.
Figure pct00123
실시예 16: L9의 합성
Figure pct00124
일반 프로토콜 A , B , D (헵타데칸디오산 모노-tert 부틸 에스테르), C , D (Fmoc-PEG 2 -프로피온산), B , D (Fmoc-PEG 2 -프로피온산), B , D (Fmoc-Orn(Fmoc)-OH), B , E , F .
조 물질을 질량 검출과 함께 반-분취 HPLC로 정제하여 생성물 L9를 백색 고체(49　mg, 0.089　mmol, 9%)로서 수득하였다.
Figure pct00125
실시예 17: L12의 합성
Figure pct00126
일반 프로토콜 A , B , D (옥타데칸디오산), C , D (Fmoc-PEG 2 -프로피온산), B , D (Fmoc-Orn(Fmoc)-OH), B , E , F .
조 물질을 질량 검출과 함께 반-분취 HPLC로 정제하여 생성물 L12를 백색 고체(51.7　mg, 0.054　mmol, 3%)로서 수득하였다.
Figure pct00127
실시예 18: L14의 합성
Figure pct00128
중간체 L14a
DMF(5　mL)에 용해된 헥사데칸디오산 모노 tert-부틸 에스테르(102　mg, 0.30　mmol, 1 당량)의 용액에 HATU(125　mg, 0.33　mmol 1.1 당량), DIEA(51 μL, 0.33　mmol, 1.1 당량) 및 1　mL의 DMF에 용해된 화합물 L4b(151.9　mg, 0.3　mmol, 1 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 생성물을 EtOAc로 희석하였다. 유기층을 1 M HCl, 포화 NaHCO3, 염수로 연속적으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 화합물 L14a를 오일(147　mg, 0.176　mmol, 59%)로서 제공하였다.
Figure pct00129
L14
DCM(2　mL) 중 화합물 L14a(40　mg, 0.048　mmol, 1 당량)의 용액을 30분 동안 TFA(2　mL)로 처리하였다. 혼합물을 농축시키고, 헥산과 함께 동시증발시키고, 20　mL의 DCM에 용해시키고, 0℃로 냉각시켰다. DIEA(34 μL, 0.1924　mmol, 4 당량)를 첨가한 다음, 1　mL의 DCM에 용해된 브로모아세트산 무수물(23.63　mg, 0.098　mmol, 2.05 당량)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안, 실온에서 1.5시간 동안 교반하고, 용매를 제거하였다. 실리카 겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 L14를 백색 고체(18.3　mg, 0.022　mmol, 46%)로서 수득하였다.
Figure pct00130
실시예 19: L15의 합성
Figure pct00131
중간체 L15a
DMF(5　mL)에 용해된 20-(tert-부톡시)-20-옥소이코사노산(360　mg, 0.90　mmol, 1.05 당량)의 용액에 HATU(343　mg, 0.90　mmol 1.05 당량), DIEA(300 μL, 1.71　mmol, 2 당량) 및 1　mL의 DMF에 용해된 화합물 L4b(435　mg, 0.858　mmol, 1 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 생성물을 EtOAc로 희석하였다. 유기층을 1 M HCl, 포화 NaHCO3, 염수로 연속적으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 화합물 L15a를 오일(555　mg, 0.625　mmol, 72%)로서 제공하였다.
Figure pct00132
L15
DCM(2　mL) 중 화합물 L15a(100　mg, 0.112　mmol, 1 당량)를 30분 동안 TFA(2　mL)로 처리하였다. 혼합물을 농축시키고, 헥산과 함께 동시증발시키고, 20　mL의 DCM에 용해시키고, 0℃로 냉각시켰다. DIEA(79 μL, 0.45　mmol, 4 당량)를 첨가한 다음, 1　mL의 DCM에 용해된 브로모아세트산 무수물(60　mg, 0.231　mmol, 2.05 당량)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안, 실온에서 1.5시간 동안 교반하고, 용매를 제거하였다. 실리카 겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 L15를 백색 고체(17.5　mg, 0.02　mmol, 18%)로서 수득하였다.
Figure pct00133
실시예 20: L16의 합성
Figure pct00134
중간체 L16a
DMF(10　mL)에 용해된 Boc-Orn(Boc)-OH(400　mg, 1.2　mmol, 1 당량)의 용액에 HATU(504　mg, 1.32　mmol 1.1 당량), DIEA(230 μL, 1.32　mmol, 1.1 당량) 및 1　mL의 DMF에 용해된 아민-PEG2-N3(210　mg, 1.20　mmol, 1 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 생성물을 EtOAc로 희석하였다. 유기층을 1 M HCl, 포화 NaHCO3, 염수로 연속적으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 화합물 L16a를 오일(471　mg, 0.96　mmol, 80%)로서 제공하였다.
Figure pct00135
중간체 L16b
아르곤 하에 무수 MeOH(10　mL) 중 화합물 L16a(471　mg, 0.9　mmol, 1 당량)의 용액에 Pd/C(10.2　mg, 0.09　mmol, 0.1 당량)를 첨가하고, 아르곤을 H2로 대체하였다. 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하고, 셀라이트 상에서 여과하고, 증발시켜 화합물 L16b를 오일(295.5　mg, 0.64　mmol, 71%)로서 수득하였다. 생성물을 임의의 추가 정제 없이 사용하였다. MS (ES+) m/z 462.51 ([M+H]+).
중간체 L16c
DMF(5　mL)에 용해된 옥타데칸디오산 모노 tert-부틸 에스테르(281　mg, 0.76　mmol, 1 당량)의 용액에 HATU(288　mg, 0.76mmol, 1 당량), DIEA(132 μL, 0.76　mmol, 1 당량) 및 1　mL의 DMF에 용해된 화합물 L16b(351　mg, 0.76　mmol, 1 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 생성물을 EtOAc로 희석하였다. 유기층을 1 M HCl, 포화 NaHCO3, 염수로 연속적으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 화합물 L16c를 오일(351　mg, 0.43　mmol, 57%)로서 제공하였다.
Figure pct00136
L16
DCM(2　mL) 중 화합물 L16c(31　mg, 0.038　mmol, 1 당량)의 용액을 30분 동안 TFA(2　mL)로 처리하였다. 혼합물을 농축시키고, 헥산과 함께 동시증발시키고, 20　mL의 DCM에 용해시키고, 0℃에서 냉각시켰다. DIEA(27 μL, 0.152　mmol, 4 당량)를 첨가하고, 1　mL의 DCM에 용해된 브로모아세트산 무수물(21　mg, 0.078　mmol, 2.05 당량)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안, 실온에서 1.5시간 동안 교반하고, 용매를 제거하였다. 실리카 겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 L16을 백색 고체(12.6　mg, 0.015　mmol, 41%)로서 수득하였다.
Figure pct00137
실시예 21: L17의 합성
Figure pct00138
중간체 L17a
DMF(10　mL)에 용해된 Boc-Orn(Boc)-OH(400　mg, 1.2　mmol, 1 당량)의 용액에 HATU(504　mg, 1.32　mmol 1.1 당량), DIEA(230 μL, 1.32　mmol, 1.1 당량) 및 1　mL의 DMF에 용해된 아민-PEG2-N3(316　mg, 1.20　mmol, 1 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 생성물을 EtOAc로 희석하였다. 유기층을 1 M HCl, 포화 NaHCO3, 염수로 연속적으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 화합물 L17a를 오일(454　mg, 0.78　mmol, 66%)로서 제공하였다.
Figure pct00139
중간체 L17b
아르곤 하에 무수 MeOH(10　mL) 중 화합물 L17a(454　mg, 0.9　mmol, 1 당량)의 용액에 Pd/C(8.3　mg, 0.078　mmol, 0.1 당량)를 첨가하고, 아르곤을 H2로 대체하였다. 반응 혼합물을 실온에서 6시간 동안 교반하고, 셀라이트 상에서 여과하고, 증발시켜 화합물 L17b를 오일(192　mg, 0.35　mmol, 45%)로서 수득하였다. 생성물을 임의의 추가 정제 없이 사용하였다.
중간체 L17c
DMF(5　mL)에 용해된 옥타데칸디오산 모노 tert-부틸 에스테르 (225　mg, 0.61　mmol, 1 당량)의 용액에 HATU(231　mg, 0.61　mmol, 1 당량), DIEA(106 μL, 0.61　mmol, 1 당량) 및 1　mL의 DMF에 용해된 화합물 L17b(335mg, 0.61　mmol, 1 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 생성물을 EtOAc로 희석하였다. 유기층을 1 M HCl, 포화 NaHCO3, 염수로 연속적으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 실리카 겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 원하는 화합물 L17c를 오일(178　mg, 0.20　mmol, 32%)로서 제공하였다.
Figure pct00140
L17
DCM(2　mL) 중 화합물 L17c(45.6　mg, 0.05　mmol, 1 당량)의 용액을 30분 동안 TFA(2　mL)로 처리하였다. 혼합물을 농축시키고, 헥산과 함께 동시증발시키고, 20　mL의 DCM에 용해시키고, 0℃에서 냉각시켰다. DIEA(36 μL, 0.202　mmol, 4 당량)를 첨가한 다음, 1　mL의 DCM에 용해된 브로모아세트산 무수물(27　mg, 0.103　mmol, 2.05 당량)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 0℃에서 30분 동안, 실온에서 1.5시간 동안 교반하고, 용매를 제거하였다. 실리카 겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 L17을 백색 고체(14.9　mg, 0.017　mmol, 33%)로서 수득하였다.
Figure pct00141
실시예 22: L18의 합성
Figure pct00142
일반 프로토콜 A , B , D (옥타데칸디오산), C , D (Fmoc-PEG 2 -프로피온산), B ,(Fmoc-PEG 2 -프로피온산), B ,(Fmoc-PEG 2 -프로피온산), B , D (Fmoc-Orn(Fmoc)-OH), B , E , F .
조 물질을 질량 검출과 함께 반-분취 HPLC로 정제하여 생성물 L18을 백색 고체(47　mg, 0.036　mmol, 10%)로서 수득하였다. MS (ES+) m/z 1276.39 ([M+H]+), 1278.37 ([M+H]+).
브로모아세틸 펩타이드 스테이플링/접합을 위한 일반 절차
펩타이드를 1:3(v/v) MeCN/30　mM NH4HCO3 완충액(pH 8.5)에서 1.5 당량의 브로모아세틸 스테이플과 함께 2　mM의 농도로 용해시켰다. 반응 혼합물의 pH를 수산화암모늄으로 재조정하여 펩타이드 TFA 반대이온에 의해 야기된 pH 강하를 보정하였다. 특히 불용성 펩타이드에 대해 더 많은 MeCN을 첨가하였다. 반응을 실온에서 2-4시간 동안 교반한 후, 아세트산을 적가하여 pH 5로 산성화시켰다. 생성된 용액을 동결건조시키고 역상 HPLC로 정제하였다.
락탐 스테이플링을 위한 일반 고체상 프로토콜
각 스테이플링 위치에서 아민 측쇄 직교 보호를 갖는 펩타이드-수지(Dde/Mmt)를 DMF에서 1시간 동안 팽윤시켰다. DMF 내 2% 히드라진 용액으로 처리(2×15분)하여 제1 측쇄로부터 Dde 보호기를 제거하였다. 양성 TNBS 시험이 관찰되었다. 하기 명시된 링커 빌딩 블록은 설명된 바와 같이 커플링되었고 음성 TNBS 시험이 관찰되었다. 용매는 DCM으로 교환하고, Mmt 기는 5% TIPS를 함유하는 DCM 중 1% TFA로의 처리(5×2분)를 통해 제2 측쇄로부터 제거하였다. 수지를 DCM, DMF 중 10% DIEA, DMF로 세척하고, 양성 TNBS 시험이 관찰되었다. 링커를 고리화하고, 스테이플 (적절한 경우)의 PEG-지방산 부분을 하기 기재된 바와 같이 신장시켰다. 95% TFA, 2.5% TIPS, 2.5% H2O를 사용하여 3시간 동안 완전한 스테이플링된 펩타이드를 수지로부터 절단하였다. 펩타이드 절단 혼합물을 오일로 증발시키고, 연화처리하고, 디에틸 에테르로 세척하고, 역상 HPLC를 통해 정제하였다. Dde/Alloc 보호 스킴은 Alloc 알릴 모이어티의 동시 감소를 방지하기 위해 스캐빈저로서 Dde 탈보호 칵테일에 알릴 알코올의 추가를 필요로 하는 이러한 접근법에도 사용할 수 있다.
K(Fmoc) 링커의 합성
Figure pct00143
중간체 Ka
Fmoc-β-Ala-OH(1.00 g, 3.21 mmol) 및 디-tert-부틸 이미노디아세테이트(0.461 g, 2.68　mmol)를 100 mL DCM에 현탁시켰다. HATU(1.02 g, 2.68 mmol) 및 DIEA(3.32　mL, 12.8　mmol)를 첨가하고, 반응을 실온에서 3.5시간 동안 교반하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 MeOH에 용해시키고, 실리카 겔 상에서 플래시 컬럼 크로마토그래피(헥산/EtOAc)를 통해 정제하여 생성물을 백색 고체(0.802 g, 56%)로서 수득하였다.
Figure pct00144
K(Fmoc) 링커
화합물 Ka를 20 mL 1:1 TFA/DCM으로 2시간 동안 처리하였다. 용매를 증발시키고, 잔류물을 연화처리하고, 디에틸 에테르로 세척하여 K(Fmoc) 링커를 백색 고체(0.371 g, 58%)로서 수득하였다. MS (ES+) m/z 427.15 ([M+H]+).
A(Fmoc) 링커의 합성
Figure pct00145
10 mL 디옥산 중 5-아미노이소프탈산(1.00 g, 5.5 mmol)의 용액을 15 mL 물 중 Na2CO3(1.46　g, 5.5　mmol)의 탈기 용액에 첨가하였다. 용액을 얼음 위에서 냉각시키고, 10 mL 디옥산 중 Fmoc 클로라이드(1.42 g, 5.5 mmol)의 용액을 15분에 걸쳐 교반하면서 적가하였다. 이어서, 반응을 1시간 동안 교반한 다음, 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 디옥산을 진공 하에 제거하고, 남아 있는 수용액을 1M HCl로 산성화시켰다. 이어서, 생성된 고체 침전물을 디에틸 에테르(4×10 mL)로 세척하고, EtOAc에 재용해시키고, 여과하고, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 A(Fmoc) 링커를 백색 고체(119 mg, 5%)로서 수득하였다.
Figure pct00146
'A1' 및 'K1' 시리즈 단순 락탐 스테이플에 대한 일반 프로토콜 G
링커 커플링을 위해, 적절한 이산 빌딩 블록(2 당량)은 DMF 중 HATU(4 당량) 및 DIEA(4 당량)를 사용하여 1×2시간 동안 부착하였다. 고리화 단계는 DMF 중 HATU(1 당량) 및 DIEA(2 당량)를 사용하여 1×2시간 동안 달성되었다.
'K' PEG-지방산 삼작용성 락탐 스테이플에 대한 일반 프로토콜 H
링커 커플링을 위해, 빌딩 블록 K(Fmoc) 링커(2 당량)의 분자내 대칭 무수물을 실온에서 10분 동안 무수 DCM 중 DIC(2당량) 및 촉매 DMAP를 사용하여 수행하였다. 펩타이드-수지 용매를 DCM으로 교환한 다음, 무수물을 첨가하고 밤새 교반하였다. 수지를 배수시키고 DCM과 DMF로 세척하였다. 링커는 DMF 중 DIC(1당량) 및 HOBt 또는 HOAt(1당량)로 처리하여 밤새 고리화되었으며 음성 TNBS가 관찰되었다. 남아 있는 고리화되지 않은 링커는 DMF 중 10% 아세트산 무수물로 처리(30분)하여 캡핑되었다. 링커 Fmoc 기는 DMF 중 20% 피페리딘으로 처리(2×10분)하여 탈보호되었다. 양성 TNBS가 관찰되었다. 후속 스테이플 PEG 및 지방산 빌딩 블록은 표준 커플링 화학을 통해 링커 유리 아민에 순차적으로 부착되었다: DMF 중 빌딩 블록(3 당량), HATU(3 당량) 및 DIEA(6 당량), 실온에서 1시간, 탈보호 주기를 위해 DMF 중 20% 피페리딘 사용(5 + 10분, 실온).
'A' PEG-지방산 삼작용성 락탐 스테이플에 대한 일반 프로토콜 I
링커 커플링을 위해, 빌딩 블록 A(Fmoc) 링커(2 당량)는 DMF 중 HATU(4 당량) 및 DIEA(4 당량)를 사용하여 1 x 2시간 동안 부착하였다. 고리화 단계는 DMF 중 HATU(1 당량) 및 DIEA(2 당량)를 사용하여 1×2시간 동안 달성되었다. 남아 있는 고리화되지 않은 링커는 DMF 중 10% 아세트산 무수물로 처리(30분)하여 캡핑되었다. 링커 Fmoc 기는 DMF 중 20% 피페리딘으로 처리(2×10분)하여 탈보호되었다. 아닐린 질소에 대한 양성 TNBS 시험을 관찰하는 것은 불가능했다. Fmoc-β-Ala-OH(3 당량)는 DMF 중 HATU(3 당량) 및 DIEA(6 당량)를 실온에서 4×1시간 동안 또는 DCM 중 DIC/DMAP를 사용하여(2시간, 실온) 대칭 무수물로서 결합되었다. 후속 스테이플 PEG 및 지방산 빌딩 블록은 표준 커플링 화학을 통해 링커 유리 아민에 순차적으로 부착되었다: DMF 중 빌딩 블록(3 당량), HATU(3 당량) 및 DIEA(6 당량), 실온에서 1시간, 탈보호 주기를 위해 DMF 중 20% 피페리딘 사용(5 + 10분, 실온).
일부 구현예에서, 본원에 기재된 펩타이드 접합체는 표 2의 스테이플을 포함한다.
[표 2]
Figure pct00147
Figure pct00148
Figure pct00149
Figure pct00150
"
Figure pct00151
"는 시스테인, 호모시스테인, 2-아미노-5-머캅토펜탄산, 또는 2-아미노-6-머캅토헥산산 잔기의 일부이고, "
Figure pct00152
"는 라이신, 오르니틴, 디아미노부티르산, 디아미노프로피온산, 또는 호모라이신 잔기의 일부이다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 펩타이드 접합체는 표 3에 나타낸 바와 같다.
[표 3] 펩타이드 접합체
Figure pct00153
Figure pct00154
Figure pct00155
실시예 A: 시험관내 GLP-2 수용체 활성화 리포터 검정(수용체-매개 cAMP 합성)　
GLP-2R 활성화에 대한 펩타이드 활성 및 효능은 10% FBS의 존재 하에 cAMP 반응 요소(CRE) 구동 루시퍼라제 리포터 및 인간 GLP-2R을 과발현하는 안정한 HEK293 세포주를 사용하여 결정하였다. GLP2-2G(테두글루타이드)를 양성 대조군으로서 사용하였다.
HEK293-GLP-2R-CRE 세포를 웰당 5000개 세포의 밀도로 384웰 플레이트에 씨딩하고 37℃ 및 5% CO2에서 10% FBS와 함께 DMEM에서 18시간 동안 배양하였다. 세포를 16시간 동안 용량 의존적 방식으로 펩타이드로 처리하고, 제조업체의 지침에 따라 One-Glo(Promega, WI) 루시페라제 시약을 사용하여 수용체 활성화를 발광 강도로 보고하였다. 각 펩타이드의 EC50은 GraphPad Prism 6 소프트웨어(GraphPad, San Diego, CA)를 사용하여 결정하였다. 검정을 3회 수행하였으며, 결과는 3회의 독립적인 실험으로 얻어졌다. 그 결과를 하기 표 4에 나타낸다.
[표 4]
Figure pct00156
실시예 B: 마우스에서 펩타이드의 약동학(반감기)
GLP-2 작용제의 생체내 반감기를 결정하기 위해, 약동학적(PK) 연구는 CD1 암컷 마우스(군당 n = 4)에서 10 nmol/kg의 펩타이드를 iv 또는 sc 주사하여 수행하였다. 다양한 시점(5분, 30분, 1시간, 3시간, 7시간, 및 24시간)에서 펩타이드의 혈장 수준을 시험관내 GLP-2R 매개 세포 기반 리포터 검정을 사용하여 결정하였다. iv 또는 sc 투여 후 추정된 최종 반감기를 아래 표 5에 나타낸다.
간단히 말해, Charles River Laboratory로부터의 암컷 CD-1 마우스(군당 n = 4)를 밤새 금식시키고 정맥(iv) 또는 피하(sc) 경로로 인산 완충 식염수에 각 펩타이드를 100 μL 투여하였다. 30분에 출혈 직후 마우스에게 음식을 제공하였다. 혈액을 헤파린 튜브로 추출하고 3000 g에서 15분 동안 원심분리하였다. 이어서, 생성된 상층액 혈장을 펩타이드 농도 결정을 위해 -80℃에서 보관하였다. 각 시점에서 혈장 내 펩타이드 농도는 시험관내 세포 기반 활성 검정에 의해 결정되었다. HEK293-GLP-2R-CRE 세포를 상이한 시점에서 혈장 샘플로 처리하고(5점 용량 반응, 각 혈장 샘플을 1:10에서 시작하여 1:100으로 희석) 5% CO2로 37℃에서 10% FBS와 함께 DMEM에서 16시간 동안 인큐베이션한 다음, 반딧불이 루시페라제 활성을 측정하였다. 동시에, 동일한 펩타이드를 사용하여 하단, 상단, EC50, 및 Hill 기울기에 대한 표준 곡선 및 파라미터를 얻었다. 표준 곡선(RLU = 하단 + (상단 - 하단)/(1 + 10((logEC50-Conc)Hill 기울기))으로부터 유도된 파라미터를 사용하여 각 혈장 샘플에 대한 상대 광 단위(relative light unit: RLU)를 사용하여 혈장 내 펩타이드 농도(nmol/L)를 계산하였다. WinNonLin Phoenix 소프트웨어(Pharsight Corp, St. Louis, MO)를 사용하여 혈장 내 펩타이드 농도를 얻고 각 펩타이드의 생체내 반감기를 얻기 위해 시점에 대해 플롯팅하였다.
[표 5]
Figure pct00157
실시예 C: 인간 GLP2R에 대한 지속성 GLP2R 작용제의 시험관내 효능
본 실시예는 GLP2R에 대한 지속성 GLP2의 효능을 평가하였다. 665/615 비율의 감소는 증가된 GLP2R 활성으로 인한 유리 cAMP의 증가를 나타냈다.
GLP2-2G(테두글루타이드)를 양성 대조군으로서 사용하였다. 테두글루타이드의 농도가 증가함에 따라, 665/615의 비율은 감소하였고, 이는 도 1a에 도시된 바와 같이 GLP2R의 증가된 활성을 나타낸다. GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5, GLP2-2G-1-EX4-L5A 및 GLP2-2G-10Nle-1-EX4-L5A의 농도를 변화시키면 테두글루타이드와 비교할 때 유사한 활성 수준이 생성되었다. 이 데이터로부터, IC50 값은 표 6에서와 같이 계산되었다. 10% 소 태아 혈청이 검정에 첨가되었을 때, 테두글루타이드 곡선은 도 1b에 도시된 바와 같이 지속성 GP2R 작용제의 곡선보다 더 가파르게 되었다. 결과적인 IC50 값은 표 6에 나열된 바와 같이 3개의 지속성 GLP2R 작용제 모두에서 더 높았다.
[표 6] 지속성 GLP2R 작용제의 IC 50 값
Figure pct00158
실시예 D: 마우스 GLP2R에 대한 지속성 GLP2R 작용제의 시험관내 효능
마우스 GLP2R에 대한 지속성 GLP2R 작용제의 효능을 결정하기 위해, 665/615 비율의 감소는 증가된 GLP2R 활성으로 인한 유리 cAMP의 증가를 나타냈다.
665 형광 대 615 형광의 비율은 도 2에 도시된 바와 같이 분자의 농도에 대해 플롯팅하였고, 이 데이터를 사용하여 표 7에 나열된 IC50 값을 계산하였다. 테두글루타이드(GLP2-2G) 및 아프라글루타이드(합성 GLP-2 유사체)를 양성 대조군으로서 사용하였다. 지속성 GLP2R 작용제의 IC50 값은 테두글루타이드와 아프라글루타이드 둘 모두의 값과 유사한 범위에 있는 것으로 밝혀졌으며, 이는 지속성 GLP2R 작용제가 마우스 GLP2R에 대해 상대적으로 강력한 작용제임을 나타낸다.
[표 7] 마우스 GLP2R에 대한 지속성 GLP2R 작용제의 IC 50 값
Figure pct00159
실시예 E: 사이노 원숭이 GLP2R에 대한 지속성 GLP2R 작용제의 시험관내 효능
사이노 원숭이 GLP2R에 대한 지속성 GLP2R 작용제의 효능을 결정하기 위해. 사이노 원숭이 GLP2R에 대한 지속성 GLP2R 작용제의 효능을 결정하기 위해 도 3에 도시된 바와 같이 nM 단위의 농도에 대해 665 대 615의 비율을 플롯팅하였다. EC50은 도 3의 데이터를 사용하여 계산되었으며 값은 표 8에 나열되어 있다. 지속성 GLP2R 작용제에 대한 EC50 값은 0.119 nM 내지 0.156 nM 범위 내에 있었으며, 이는 지속성 GLP2R 작용제가 사이노 GLP2R에 대해 상대적으로 강력한 작용제임을 나타낸다.
[표 8] 사이노 원숭이의 EC 50 값
Figure pct00160
실시예 F: 지속성 GLP2R 작용제는 다른 G-단백질 결합 수용체에 비해 GLP2R에 대해 고도로 선택적이었다
본 실시예는 다른 G-단백질 결합 수용체(GPCR)에 대한 안정화된 GLP2R 작용제의 효과를 평가하였다.
665/615 비율의 감소는 증가된 GLP2R 활성으로 인한 유리 cAMP의 증가를 나타내었다.
도 4a에 도시된 바와 같이, GLP2와 시험된 안정화 분자(GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5 또는 GLP2-2G-10Nle-1-L5A) 모두 GLP-1R 작용제인 다양한 농도의 세마글루타이드에 의해 생성된 변화와 비교할 때 GLP-1R의 활성 수준에서 어떠한 유의한 변화도 보이지 않았다. IC50 값을 계산하였을 때, 표 9에 나열된 바와 같이, 양성 대조군인 세마글루타이드와 비교했을 때 값이 극도로 높았다. 이는 GLP-1R이 활성화되기 전에 극도로 높은 농도의 GLP2 및 지속성 GLP2R 작용제가 필요하다는 것을 나타냈다.
[표 9] 다른 GPCR에 대한 안정화된 GLP2R 작용제의 IC 50
Figure pct00161
지속성 GLP2R 작용제는 도 4b에 도시된 바와 같이 10-2 nm와 102 nm 사이의 농도 범위에 걸쳐 GCGR 활성 수준의 변화를 초래하지 않았다. 그러나, 증가하는 농도의 글루카곤은 GCGR의 활성 수준에 영향을 미쳤다. 글루카곤은 더 낮은 농도에서 GCGR의 활성 수준에 영향을 미쳤음을 나타내는 0.04의 IC50을 가졌지만, 표 9에 나열된 바와 같이 GLP2 및 지속성 GLP2R 작용제에 대한 IC50 값은 500 초과였다.
지속성 GLP2R 작용제는 또한 도 4c에 도시된 바와 같이 10-2 nm과 102 nm 사이의 농도 범위에 걸쳐 GIPR 활성 수준의 변화를 초래하지 않았다. 그러나, 증가하는 농도의 GIP는 GCGR의 활성 수준에 영향을 미쳤다. IC50 값은 표 9에 나열된 바와 같이 계산되었다. GIP의 IC50은 0.04로, 이는 GIPR의 활성 수준에 영향을 미치는 데 상대적으로 효과적이라는 것을 나타낸다; 그러나, GLP2 및 지속성 GLP2R 작용제의 IC50 값은 500 초과였다.
또한, GLP2-2G-1-EX4-L5A 및 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5는 DiscoverRx에 의해 gpcrMAX 패널에 대해 프로파일링하였다. 168개의 GPCR 표적을 작용제 및 길항제 1차 스크린으로 시험하였다. PathHunter 베타-아레스틴 효소 단편 보완(enzyme fragment complementation: EFC) 기술을 활용하여 검정을 수행하였다. 작용제 모드에서는 GLP2를 제외하고 30% 초과 활성으로 표적이 확인되지 않았다. 길항제 모드에서는 35% 초과 억제로 표적이 확인되지 않았다.
실시예 G: 상이한 온도에서 지속성 GLP2R 작용제의 안정성
본 실시예는 연장된 기간에 걸쳐 상이한 온도에서 안정화된 GLP2R 작용제의 안정성을 평가하였다.
GLP2-2G-1-EX4-L5A (GLP2-L5A) 및 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-L5A (GLP2-K5)는 도 5a에 도시된 바와 같이 4℃에서 4일 동안 안정하다. 25℃에서 3% 산화가 GLP2-2G-1-EX4-L5A에 대해 관찰된 반면, GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5는 도 5b에 도시된 바와 같이 4일 동안 상당히 온전하게 유지되었다. 37℃에서 11% 산화가 GLP2-2G-1-EX4-L5A에 대해 관찰되었으며 2일에서 +12 Da 불순물이 4% 증가했다. GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5는 도 5c에 도시된 바와 같이 GLP2-2G-1-EX4-L5A보다 4일에서 온전한 펩타이드의 더 높은 백분율을 가졌다. 70℃(강제 분해)에서 두 펩타이드에 대한 많은 라세미화된 생성물이 존재했다. 70℃에서 4일까지, 온전한 펩타이드의 %는 도 5d에 도시된 바와 같이 GLP2-2G-1-EX4-L5A 및 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5 둘 모두에 대해 50% 미만이었다.
실시예 H: 상이한 용액에서 지속성 GLP2R 작용제의 안정성
표 10에 나열된 바와 같이 0시간에 상이한 용액에서 화합물의 안정성을 측정하였다. GLP2-2G-1-EX4-L5A와 GLP2-2G-10Nle-1-EX4-L5A 둘 모두의 경우, 24시간에서 표적 화합물의 검출이 없었다. GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5의 경우, 24시간에서 글루타티온 기에서 우수한 보호가 있었다. 전반적으로, 이것은 가장 안정한 펩타이드가 GLP2-2G-10Nle-1-EX4-L5A이고 가장 안정하지 않은 펩타이드가 GLP2-2G-1-EX4-L5A라는 것을 나타내었다.
[표 10] 0시간에서 상이한 용액에서 화합물의 안정성
Figure pct00162
실시예 E: 액체 및 고체 형태의 티오에테르 펩타이드의 장기 안정성
티오에테르 펩타이드의 장기 안정성을 본 실시예에서 시험하였다.
티오에테르 펩타이드의 안정성은 습식 공기 산화에 대해 측정하였다. 10일 후 GLP2-2G-1-EX4-L5A에 대해 Met 산화가 관찰되었으며 16% 분해가 관찰되었다. GLP2-2G-10Nle-1-EX4-L5A는 습한 공기 산화에 대해 더 안정하였다. 이것은 티오에테르 브릿지가 적어도 10일 동안 산화에 대해 안정한다는 것을 나타내었다.
분말을 HCl 염으로서 4℃에서 보관하였다. 4개월 후 GLP2-2G-1-EX4-L5A(GLP2-L5A)에 대한 Met 산화의 징후가 없었다. 마찬가지로, 7개월 후 GLP2-2G-1-EX4-L5A(GLP2-L5A)에 대한 Met 산화의 징후가 없었다.
실시예 F: 상이한 pH 값에서 지속성 GLP2R 작용제의 안정성
펩타이드의 안정성을 pH 값 및 온도 범위에 걸쳐 측정하였다.
pH 3.3에서 실온에서, GLP2-2G-1-EX4-L5A (GLP2-L5A)는 4일에 걸쳐 100% 안정하였다. GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5는 또한 도 6a에 도시된 바와 같이 펩타이드의 95%가 5일까지 온전하게 남아 있을 정도로 안정하였다. GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5 및 GLP2-2G-1-EX4-L5A (GLP2-L5A)는 도 6b에 도시된 바와 같이 실온에서보다 3.3의 pH 및 37℃의 온도에서 덜 안정하였다. 37℃에서 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5 및 GLP2-2G-1-EX4-L5A (GLP2-L5A)는 pH 3.4(-18 Da 및 -775 Da)에서 주요 가수분해를 거쳤다. 또한, GLP2-2G-1-EX4-L5A (GLP2-L5A)는 pH 4.6에서 용해되지 않았다.
GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5와 GLP2-2G-1-EX4-L5A (GLP2-L5A) 둘 모두는 도 6c에 도시된 바와 같이 실온에서 pH 7.5에서 4일 동안 100% 안정하였다. 도 6d에 도시된 바와 같이 37℃에서 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5는 1% 분해를 거쳤고 L5A는 1% 분해를 거쳤다. GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5와 GLP2-2G-1-EX4-L5A (GLP2-L5A) 둘 모두는 도 6e에 도시된 바와 같이 실온에서 pH 8.9에서 4일 동안 100% 안정하였다. 도 6f에 도시된 바와 같이 37℃ 및 8.9의 pH에서 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5는 1% 분해를 거쳤고 GLP2-2G-1-EX4-L5A (GLP2-L5A)는 1% 분해를 거쳤다.
실시예 G: 간세포에서 지속성 GLP2R 작용제의 안정성
지속성 GLP2R 작용제의 간세포 안정성을 시간 경과에 따라 측정하였다. GLP2-2G-1-EX4-L5A의 경우, 도 7a에 도시된 바와 같이 마우스 및 MC 값 모두 120분 후에 100%를 약간 초과했다. 그러나, 도 7b-7c에 도시된 바와 같이 GLP2-2G-10Nle-1-EX4-L5A와 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5 둘 모두의 경우, 마우스 값이 100%를 약간 초과하도록 증가한 반면 MC 값은 120분 후에 대략 60%로 감소하였다.
생물학적 반감기(T1/2) 및 고유 제거율(CLint) 값은 표 11에 나열된 바와 같이 데이터로부터 각 펩타이드에 대해 계산되었다. GLP2-2G-1-EX4-L5A는 간세포와 간 둘 모두에서 가장 높은 반감기와 가장 낮은 CLint를 가졌다. GLP2-2G-10Nle-1-EX4-L5A는 가장 낮은 반감기를 갖고 GLP2-2G-10Nle-1-EX4-L5A는 간세포와 간 둘 모두에서 가장 높은 CLint 값을 가졌다.
[표 11] 간세포에서 반감기 및 CLint 값
Figure pct00163
실시예 H: GLP2-2G-1-EX4-L5A는 마우스에서 연장된 생체내 반감기를 나타내었다
도 8에 도시된 바와 같이 수컷 C57BL/6 마우스에게 PBS(pH 7.5, 투명 용액) 중 1.5 mg/kg으로 GLP2-2G-1-EX4-L5A를 투여하고 작용제의 혈장 농도를 96시간 동안 추적하였다. 혈장 농도는 20 ng/mL의 하한 정량화로 LC-MS 검정을 사용하여 분석하였다. 이들 값은 또한 표 12에 도시된 바와 같이 정맥내 주사 및 피하 주사를 통한 약물의 투여 둘 모두에 대해 마우스에서 이 화합물의 다른 약동학적 성질을 계산하는 데 사용되었다. 설치류에서 세마글루타이드의 8시간 반감기와 유사한 약 8.4시간의 긴 생체내 반감기가 관찰되었다.
[표 12] 마우스에서 GLP2-Met-L5A의 약동학
Figure pct00164
실시예 I: GLP2-2G-1-EX4-L5A는 사이노 원숭이에서 연장된 생체내 반감기를 나타내었다
도 9에 도시된 바와 같이 수컷 사이노 원숭이에게 PBS(pH 7.5, 투명 용액) 중 1.0 mg/kg으로 GLP2-2G-1-EX4-L5A를 투여하고 작용제의 혈장 농도를 504시간 동안 추적하였다. GLP2-2G-1-EX4-L5A의 약동학적 성질은 표 13에 나열된 바와 같이 IV 및 피하 주사를 통한 약물 전달에 대해 분석하였다. 혈장 농도는 10 ng/mL의 하한 정량화로 LC-MS 검정을 사용하여 분석하였다. 원숭이에서 세마글루타이드의 대략 50시간 반감기보다 더 긴 대략 70시간의 긴 생체내 반감기가 관찰되었다. 이 긴 생체 내 반감기는 1주일에 1회 인간 투여로의 잠재적 해석이 가능할 수 있음을 나타냈다.
[표 13] 사이노 원숭이에서 GLP2-2G-1-EX4-L5A의 약동학적 성질
Figure pct00165
실시예 J: GLP2-2G-10Nle-1-EX4-L5A는 마우스에서 긴 생체내 반감기를 나타내었다
수컷 C57BL/6 마우스에 PBS(pH 7.5) 중 1.5 mg/kg 농도의 GLP2-2G-10Nle-1-EX4-L5A를 피하(SC) 또는 정맥내(IV) 투여하였다. 작용제의 혈장 농도는 도 10에 도시된 바와 같이 약물 투여 후 96시간 동안 추적하였다. 혈장 농도는 5 ng/mL의 하한 정량화로 LC-MS 검정을 사용하여 분석하였다. 반감기를 포함하여 마우스에서 약물의 약동학적 성질은 이 데이터로부터 계산되었으며 값은 표 14에 나열되어 있다. 마우스에서 이 약물에 대해 대략 8시간의 긴 생체내 반감기가 관찰되었다.
[표 14] 마우스에서 GLP2-2G-10Nle-1-EX4-L5A의 약동학적 성질
Figure pct00166
실시예 K: GLP2-2G-10Nle-1-EX4-L5A는 사이노 원숭이에서 연장된 반감기를 나타내었다
수컷 사이노 원숭이에게 PBS(pH 7.5) 중 1.0 mg/kg 농도의 GLP2-2G-10Nle-1-EX4-L5A를 피하(SC) 또는 정맥내(IV) 투여하였다. 작용제의 혈장 농도는 도 11에 도시된 바와 같이 약물 투여 후 504시간 동안 추적하였다. 혈장 농도는 5 ng/mL의 하한 정량화로 LC-MS 검정을 사용하여 분석하였다. 반감기를 포함하여 원숭이에서 약물의 약동학적 성질은 이 데이터로부터 계산되었으며 값은 표 15에 나열되어 있다. 원숭이에서 이 약물에 대해 대략 57시간의 긴 생체내 반감기가 관찰되었다.
[표 15] 사이노 원숭이에서 GLP2-2G-10Nle-1-EX4-L5A의 약동학적 성질
Figure pct00167
실시예 L: GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5는 마우스에서 긴 생체내 반감기를 나타내었다
수컷 C57BL/6 마우스에게 PBS(pH 7.5) 중 1.5 mg/kg 농도의 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5를 피하(SC) 또는 정맥내(IV) 투여하였다. 작용제의 혈장 농도는 도 12에 도시된 바와 같이 약물 투여 후 72시간 동안 추적하였다. 혈장 농도는 5 ng/mL의 하한 정량화로 LC-MS 검정을 사용하여 분석하였다. 반감기를 포함하여 마우스에서 약물의 약동학적 성질은 이 데이터로부터 계산되었으며 값은 표 16에 나열되어 있다. 마우스에서 이 약물에 대해 대략 7시간의 긴 생체내 반감기가 관찰되었다.
[표 16] 마우스에서 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5의 약동학적 성질
Figure pct00168
실시예 M: GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5는 사이노 원숭이에서 연장된 반감기를 나타내었다
수컷 사이노 원숭이에게 PBS(pH 7.5) 중 1.0 mg/kg 농도의 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5를 피하(SC) 또는 정맥내(IV) 투여하였다. 작용제의 혈장 농도는 도 13에 도시된 바와 같이 약물 투여 후 504시간 동안 추적하였다. 혈장 농도는 5 ng/mL의 하한 정량화로 LC-MS 검정을 사용하여 분석하였다. 반감기를 포함하여 원숭이에서 약물의 약동학적 성질은 이 데이터로부터 계산되었으며 값은 표 17에 나열되어 있다. 원숭이에서 이 약물에 대해 대략 36시간의 긴 생체내 반감기가 관찰되었다.
[표 17] 사이노 원숭이에서 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5의 약동학적 성질
Figure pct00169
실시예 N: GLP2-L5A가 마우스에서 장영양 효과를 생성하였다
13주령 암컷 CD1 마우스를 나열된 바와 같이 5개의 처리군으로 나누었다: A(비히클 PBS, SC, QD), B(GLP-C14, 0.05 mg/kg, BID), C(GLP2-2G-1-EX4-L5A, 0.1 mg/kg, QD), D(GLP2-2G-1-EX4-L5A, 1 mg/kg, QD), E(GLP2-2G-10Nle-1-EX4-L5A, 0.1 mg/kg, QD), 및 F(GLP2-2G-10Nle-1-EX4-L5A, 1 mg/kg, QD). 각 군에는 5마리 마우스가 있었다. 마우스에 5 mL/kg의 부피로 DPBS를 비히클로서 사용하여 매일(QD) 또는 1일 2회(BID) 관련 용량을 피하 투여한 다음, 체중을 매일 모니터링하였다.
용량 투여 후 10일째에, GI관 측정치를 수집하였다. 이러한 측정에는 말단 출혈(terminal bleed)을 수집하고; 소장을 해부하고; 소장의 길이와 중량을 측정하고; 빈 대장의 길이와 중량을 기록하는 것을 포함한다.
도 14a에 도시된 바와 같이 미처리된 마우스(군 A)와 비교할 때 적어도 0.1 mg/kg 용량의 지속성 GLP2R 작용제(군 C-F)를 투여받은 처리된 마우스에서 소장 중량이 유의하게 증가했다. 도 14b에 도시된 바와 같이 소장의 길이는 미처리된 마우스(군 A)와 비교할 때 지속성 GLP2R 작용제 처리를 받은 모든 마우스에서 증가했으며, 0.1 mg/kg의 GLP2-2G-5-L5A 처리를 받은 마우스(군 E)에서 유의하게 증가했다. 도 14c에 도시된 바와 같이 10일에 걸친 체중의 유의한 변화가 처리군에서는 발생하지 않았다.
실시예 O: GLP2-2G-10Nle-1-EX4-L5A는 급성 대장염의 마우스 모델을 치료하는 데 효과적이었다
본 실시예는 마우스에서 GLP2-2G-10Nle-1-Ex4-L5A의 장영양 효과를 평가하였다.
7-8주령 수컷 C57B6 마우스를 6개의 실험 군으로 분류하였다: A(비히클 PBS, QD); B(테두글루타이드, 0.5 mg/kg, BID); C(GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5, 0.03 mg/kg, QD); D(GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5, 0.1 mg/kg, QD); E(GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5, 0.3 mg/kg, QD); 및 F(GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5, 1 mg/kg, QD). 각 처리군에는 4마리가 포함된 군 A를 제외하고 6마리의 마우스가 포함되었다. 5 mL/kg의 투여 부피를 갖는 비히클로서 FPBS를 사용하여 마우스에게 1일 1회(QD) 또는 1일 2회(BID) 치료를 피하 투여하였다. 체중을 매일 모니터링하고 투여 10일 후, GI관 측정치를 수집하였다. 이러한 측정에는 말단 출혈을 수집하고; 소장을 해부하고; 소장의 길이와 중량을 측정하고; 빈 대장의 길이와 중량을 기록하는 것을 포함한다.
도 15c-15d에 도시된 바와 같이, 모든 처리군(B-F)은 대조군과 비교할 때 소장 길이와 중량이 유의하게 증가했다. 0.03 mg/kg(군 C)의 가장 낮은 용량의 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5에서도 작은 집약적 측정 모두에 유의한 영향을 미쳤다. 또한, 0.1 mg/kg 용량의 GLP2-2G-10Nle-1-EX4-K5(군 D)는 0.5 mg/kg(군 B)의 테두글루타이드 처리와 유사한 효과를 나타내었다.
고용량의 GLP2-2G-10Nle-1-EX4-K5를 투여받은 마우스(군 E-F)는 미처리 대조군(군 A)과 비교할 때 결장의 길이에서 유의한 증가를 나타내었다. 모든 처리군은 미처리된 대조군과 비교할 때 결장 중량에서 유의한 증가를 나타내었다. 그러나, 최고 용량의 GLP2-2G-10Nle-1-EX4-K5로 처리된 군 E 및 F의 마우스가 가장 큰 증가를 나타내었다.
실시예 P: GLP2-2G-1-EX4-L5A는 급성 대장염의 마우스 모델을 치료하는 데 효과적이었다
급성 대장염은 3% 덱스트란 황산나트륨(DSS)을 사용한 단일 5일 치료 과정에 의해 마우스에서 유도되었다. 마우스를 나열된 바와 같이 4개의 처리군으로 나누었다: A(DSS를 투여받지 않은 대조군), B(DSS를 투여받고 PBS가 피하 주사된 마우스), C(DSS를 투여받고 1 mg/kg의 GLP2-2G-1-EX4-L5로 피하 치료를 받은 마우스), 및 D(DSS를 투여받고 20 mg/kg의 사이클로스포린으로 복강 내 치료를 받은 마우스).
체중은 도 16a에 도시된 바와 같이 12일에 걸쳐 측정되었다. 급성 대장염에 대한 치료를 받은 마우스(군 C 및 D)는 유도된 대장염을 가진 미처리된 마우스(군 B)와 비교할 때 체중 감소가 크지 않았다. 또한, GLP2-2G-1-EX4-L5A로 처리된 군 C의 마우스는 유발된 급성 대장염을 가진 미처리된 마우스(군 B)와 비교하여 도 16b-16c에 도시된 바와 같이 결장과 소장 중량 둘 모두에서 유의한 증가를 나타내었다. GLP2-2G-1-EX4-L5A로 처리된 마우스는 또한 유발된 급성 대장염을 가진 미처리된 대조군과 비교할 때 결장과 소장 둘 모두의 길이에서 유의한 증가를 나타내었다(도면에는 나타내지 않음). GLP2-2G-1-EX4-L5A를 사용한 처리는 또한 DSS 유발된 대장염 모델에서 결장 및 소장 조직병리학을 개선했다. DSS와 L5A 둘 모두를 투여받은 마우스의 조직병리학은 도 16d에 도시된 바와 같이 DSS 처리를 받지 않은 마우스와 유사한 결장 내 음와 깊이를 나타내는 반면, DSS만 투여받은 마우스는 음와 길이가 유의하게 감소하였다. 공장 소장에서, 공장 융모의 길이는 도 16e에 도시된 바와 같이 군 A 또는 군 B 마우스보다 군 C 마우스에서 더 길었다. GLP2-2G-1-EX4-L5A로 처리된 마우스를 미처리된 마우스와 비교할 때 공장 융모의 길이가 유의하게 증가했다. 또한, 군 C 마우스는 군 B 마우스가 나타내는 융모 왜곡 및 농양을 나타내지 않았다.
실시예 Q: GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5는 급성 대장염의 마우스 모델을 치료하는 데 효과적이었다
8주령 수컷 C57BL/6 마우스를 나열된 바와 같이 7개의 처리군으로 나누었다: A(DSS를 투여받지 않은 대조군 마우스), B(DSS를 투여받고 PBS가 피하 주사된 마우스), C(DSS를 투여받고 0.1 mg/kg의 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5로 피하 치료를 받은 마우스), D(DSS를 투여받고 0.3 mg/kg의 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5로 피하 치료를 받은 마우스), E(DSS를 투여받고 1 mg/kg의 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5로 피하 치료를 받은 마우스), F(DSS를 투여받고 0.5 mg/kg의 테두글루타이드로 피하 치료를 받은 마우스), 및 G(DSS를 투여받고 20 mg/kg의 사이클로스포린으로 IP 치료를 받은 마우스). 4마리가 포함된 군 A를 제외하고는 각 군에는 6마리의 마우스가 포함되었다.
급성 대장염은 도 17a에 도시된 바와 같이 3% 덱스트란 황산나트륨(DSS)을 사용한 단일 5일 치료 과정에 의해 마우스에서 유도되었다. 동물을 처리군당 적절한 용량으로 11일 동안 매일 처리하였다. 체중을 매일 모니터링하였다. 동물이 체중의 20% 초과 감소하면 이들을 안락사시켰다. 10-11일차에, 용량을 투여한 후 0, 1, 3, 7 및 24시간째에 약동학적 분석을 위해 샘플 수집하였다. 11일차에, 동물을 안락사시키고 부검을 수행하였다. 말단 출혈을 헤파린 처리된 수집 튜브에 수집하고 혈장으로 처리하였다. 소장과 결장을 수집하여 중량과 길이를 측정하였다. GI 조직은 조직학을 위해 수집되었다.
시간 경과에 따른 체중을 조사할 때, 도 17a에 도시된 바와 같이, 사이클로스포린으로 처리한 군 G에서의 마우스는 임의의 다른 처리군에서의 마우스보다 DSS 처리 동안 체중의 더 큰 감소 퍼센트를 보였지만 DSS 처리를 마친 후 체중이 증가했다. DSS를 투여받고 처리를 받지 않은 마우스(군 B)는 다른 모든 처리군과 비교할 때 DSS 처리를 마친 후 체중의 가장 큰 감소 퍼센트를 보였다. DSS를 투여받지 않은 마우스(군 A)와 함께 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5로 처리된 마우스(군 C-E) 또는 테두글루타이드로 처리된 마우스(군 F)는 이 시간 동안 체중에서의 유의한 변화를 나타내지 않았다.
GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5를 사용한 처리는 마우스를 체중 감소로부터 보호하고 결장 단축을 회복시켰다. 도 17b에 나타낸 바와 같이 결장 길이는 미처리군(군 B)과 비교하여 고용량의 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5 또는 테두글루타이드(군 D-F)를 투여받은 마우스에서 유의하게 증가했다. 결장 중량에는 변화가 없었다. 소장에서, 길이와 중량 둘 모두는 도 17c-17d에 도시된 바와 같이, 미처리 마우스와 비교하여 테두글루타이드 또는 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5(군 C-F)를 투여받은 군에서 유의하게 증가되었다. 0.1 mg/ml에서 LP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5의 최저 용량(군 C)은 0.5 mg/kg BID에서 테두글루타이드와 유사한 효과를 나타내었다.
GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5를 사용한 처리는 또한 장의 조직학적 특징에 영향을 미쳤다. 모든 테두글루타이드 및 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5 처리군(군 C-F)은 도 17e에서 보는 바와 같이 미처리된 마우스(군 A-B)와 비교하여 융모 높이의 유의한 증가를 나타내었다. 1일 1회 투여된 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5의 최저 용량인 0.1 mg/kg은 1일 2회 투여된 0.5 mg/kg에서 테두글루타이드와 유사한 장영양 효과를 나타내었다.
또한, Ki67 염색은 도 17f에 도시된 바와 같이 임의의 처리군에서 증가된 증식이 없음을 나타내었다. 이는 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5 처리와 관련된 비정상적인 증식의 증거가 없음을 나타내었다.
처리군 C-F의 약동학적 성질은 도 17g에 플롯팅된다. 테두글루타이드는 처리 후 3시간 후에 검출되지 않았다. 그러나, GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5의 모든 용량은 처리 후 최대 24시간에 검출 가능하였다.
실시예 R: 지속성 GLP2R 작용제는 급성 대장염 치료에 효과적이었다
마우스를 나열된 바와 같이 9개의 처리군으로 나누었다: A(비-DSS: 비히클), B(DSS: 비히클(PBS)), C(DSS: GLP2-2G-1-EX4-L5A, 0.03 mg/kg), D(DSS: GLP2-2G-1-EX4-L5A, 0.1 mg/kg), E(DSS: GLP2-2G-10Nle-1-EX4-L5A, 0.03 mg/kg), F(DSS: GLP2-2G-10Nle-1-EX4-L5A, 0.1 mg/kg), G(DSS: GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5, 0.03 mg/kg), H(DSS: GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5, 0.1 mg/kg), 및 I(DSS: 사이클로스포린 A, 20 mg/kg, IP). 각 군은 8주령의 C57BL/6 수컷 마우스 6마리를 포함한다. 마우스에게 7일 동안 3% DSS를 투여하고 급성 대장염을 유도하기 위해 8일 동안 적절한 치료를 동시에 투여하였다. 비히클이 올리브 오일인 군 I을 제외하고는 동물에게 모두 5 ml/kg의 부피와 DPBS의 비히클을 사용하여 피하 투여하였다. 6-7일째에, 투약 후 0, 1, 3, 7 및 24시간째에 약동학적 샘플을 군 C-H로부터 수집하였다. 측정은 9일째에 이루어졌다. 이러한 측정에는 말단 출혈을 수집하고; 소장을 해부하고; 소장의 길이와 중량을 측정하고; 빈 대장의 길이와 중량을 기록하는 것을 포함한다.
모든 지속성 GLP-2 작용제는 미처리 동물과 비교하여 체중 감소로부터 용량-관련 보호를 나타내었고, 이러한 보호는 0.1 mg/kg의 용량에서 유의하였다. 도 18a에 도시된 바와 같이 GLP2-2G-10Nle-1-Ex4-L5A의 두 용량으로 처리된 동물(군 C, D)은 처리를 받지 않은 동물(군 B)보다 더 큰 전체 체중을 가졌다. 도 18b에 도시된 바와 같이 GLP2-2G-1-EX4-L5A의 두 용량으로 처리된 동물(군 E, F)은 처리를 받지 않은 동물(군 B)보다 더 큰 전체 체중을 가졌다. 도 18c에 도시된 바와 같이 GLP2-2G-10Nle-1K-Ex4-K5A의 두 용량으로 처리된 동물(군 G, H)은 처리를 받지 않은 동물(군 B)보다 더 큰 전체 체중을 가졌다. 또한, 0.03 mg/kg의 용량에서 GLP2-2G-10Nle-1-Ex4-L5A 및 GLP2-2G-10Nle-1K-Ex4-K5는 GLP2-2G-1-EX4-L5A보다 체중 감소로부터 보호하는 데 더 효과적이었다.
3개의 지속성 GLP-2 작용제 모두는 도 18d에 도시된 바와 같이 0.1 mg/kg에서 급성 DSS 유발된 대장염 모델에서 결장 길이를 유의하게 증가시켰다. 또한, 도 18e에 도시된 바와 같이, 지속성 GLP2 작용제로 처리된 동물을 미처리된 DSS 동물과 비교할 때 결장 중량에 대한 유의하지 않은 증가 경향이 있었다, 또한, 3개의 지속성 GLP2 작용제 모두는 도 18f-18g에 도시된 바와 같이 소장의 중량과 길이 둘 모두에 대해 용량-관련 영양 효과를 나타내었다.
GLP2R 작용제를 사용하는 처리는 또한 도 18h에 도시된 바와 같이 담낭의 크기를 증가시켰다. 또한, 분변 잠혈의 양은 도 18i에 도시된 바와 같이 잠혈 II 시험을 이용하여 측정하였다. 1L5A의 두 용량과 같은 여러 치료 파라미터는 미처리된 DSS 모델 마우스와 비교하여 잠혈 수준을 감소시켰다.
지속성 GLP2 작용제의 수준은 시간 경과에 따라 측정하였다. 0.03 mg/kg의 용량에서, 도 18j에 도시된 바와 같이 농도는 투여 후 7시간까지 증가했지만 투여 후 24시간에서 여전히 검출 가능하였다. 0.1 mg/kg의 용량에서, 도 18k에 도시된 바와 같이 농도는 투여 후 7시간까지 증가하였고 투여 후 24시간에 여전히 검출 가능하였다. 두 용량 모두에서, GLP2-2G-1-EX4-L5A가 가장 높은 수준을 보였고, GLP2-2G-10Nle-1-Ex4-L5A에 이어 GLP2-2G-10Nle-1K-Ex4-K5가 뒤따랐다. 시험된 3개 약물 모두에 대해, 도 18l-18n에 도시된 바와 같이, 더 높은 용량은 모든 시험된 시점에 존재하는 약물의 더 높은 농도를 초래하였다.
염증성 사이토카인에 대한 mRNA 수준의 유의한 감소가 결장 조직에서 관찰되었다.
실시예 S: GLP2-2G-1-EX4-L5A는 만성 대장염 치료에 효과적이었다
연속 5일 동안 2.5% DSS를 음용수에 투여한 후 7일 회복하는 3주기로 C57BL/6 마우스(수컷, 10-12주령)에서 만성 DSS 유발된 대장염이 유발되었다. 동물은 마지막 DSS 유발된 사이클 동안 7일 동안 매일 처리되었다. 처리는 1일 1회(QD) 또는 1일 2회(BID) 피하(S) 또는 복강 내(IP)로 투여되었다. 마우스는 나열된 바와 같이 처리군에 따라 처리되었다: A(비-DSS: 비히클, SC, QD(n = 6)), B(DSS: 비히클(PBS), SC, QD(n = 8)), C(DSS: GLP2-2G-1-EX4-L5A, 0.1 mg/kg, SC, QD(n = 8)), D(DSS: GLP2-2G-1-EX4-L5A, 0.3 mg/kg, SC, QD(n = 8)), E(DSS: 사이클로스포린, 20 mg/kg, IP(n = 6)), 및 F(DSS: 테두글루타이드, 0.3 mg/kg, SC, QD(n = 6).
체중은 일주일에 3번 모니터링하였다. 약동학적 수집은 부검 3일 및 4일 전에 발생했다. 33일째에, 부검을 수행하고 측정을 수행했다. 이러한 측정에는 말단 출혈을 수집하고; 소장을 해부하고; 소장의 길이와 중량을 측정하고; 빈 대장의 길이와 중량을 기록하는 것을 포함한다.
GLP2-2G-1-EX4-L5A는 만성 대장염의 마우스 모델에서 체중 감소를 치료하는데 효과적이었다. GLP2-2G-1-EX4-L5A 또는 테두글루타이드로 처리된 마우스(군 C, D 및 F)는 도 19a에 도시된 바와 같이 미처리된 마우스(그룹 B)에서 보는 바와 같이 체중 % 또는 전체 체중에서 동일한 감소를 나타내지 않았다. 체중 감소에 대한 보호는 용량 의존적이었고 용량이 높을수록 보호가 증가하였다. 또한, 이러한 효과는 0.3 mg/kg, QD에서 테두글루타이드 처리와 동등했다.
GLP2-2G-1-EX4-L5A는 도 19b에 도시된 바와 같이 처리를 받지 않은 마우스와 비교할 때 결장 길이의 용량-관련 회복을 나타내었다. 또한, 0.3 mg/kg GLP2-2G-1-EX4-L5A 처리와 등가 용량의 테두글루타이드를 비교할 때 GLP2-2G-1-EX4-L5A의 효과는 테두글루타이드 처리의 효과보다 덜 가변적이었다. 결장 중량은 또한 도 19c에서 보는 바와 같이 GLP2-2G-1-EX4-L5A 및 테두글루타이드 처리에 의해 영향을 받았다. 저용량의 GLP2-2G-1-EX4-L5A로 처리된 마우스는 테두글루타이드로 처리된 마우스와 유사한 결장 중량을 갖는다.
더 높은 용량의 GLP2-2G-1-EX4-L5A는 도 19d에 도시된 바와 같이, 처리를 받지 않은 마우스와 비교하여 소장 중량의 유의한 증가를 나타내었다. 이 효과는 테두글루타이드에 의해 생성된 효과와 동등하였다.
실시예 T: GLP2-2G-10Nle-1-Ex4-L5A는 만성 대장염에서 마우스 모델을 치료하는 데 효과적이었다
연속 5일 동안 2.5% DSS를 음용수에 투여한 후 7일 회복하는 3주기로 C57BL/6 마우스(수컷, 10-12주령)에서 만성 DSS 유발된 대장염을 유발하였다. 동물은 마지막 DSS 유발된 사이클 동안 7일 동안 매일 처리되었다. 처리는 1일 1회(QD) 또는 1일 2회(BID) 피하(S) 또는 복강 내(IP)로 투여되었다. 마우스는 나열된 바와 같이 처리군에 따라 처리되었다: A(비-DSS: 비히클, SC, QD (n = 4)), B(DSS: 비히클(PBS), SC, QD(n = 6)), C(DSS: GLP2-2G-10Nle-1-L5A, 0.03 mg/kg, SC, QD(n = 6)), D(DSS: GLP2-2G-10Nle-1-L5A, 0.1 mg/kg, SC, QD(n = 6)), E(DSS: GLP2-2G-10Nle-1-L5A, 0.3 mg/kg, SC, QD(n = 6)), F(DSS: GLP2-2G-10Nle-1-L5A, 1 mg/kg, SC, QD(n = 6)), 및 G(DSS: 테두글루타이드, 0.5 mg/kg, SC, BID(n = 6)).
체중은 일주일에 3번 모니터링하였다. 약동학적 수집은 부검 3일 및 4일 전에 발생했다. 33일째에, 부검을 수행하고 측정을 수행했다. 이러한 측정에는 말단 출혈을 수집하고; 소장을 해부하고; 소장의 길이와 중량을 측정하고; 빈 대장의 길이와 중량을 기록하는 것을 포함한다.
저용량의 GLP2-2G-10Nle-1-Ex4-L5A는 체중 감소에 대한 적당한 효과를 나타내었다. 0.03 mg/kg 및 0.3 mg/kg의 용량으로 처리한 것은 처리를 받지 않은 마우스와 비교할 때 체중 감소에 대해 보호적이었다(도면에는 나타내지 않음).
GLP2-2G-10Nle-1-Ex4-L5A는 도 20a-20b에 도시된 바와 같이 만성 DSS 유발된 대장염 모델에서 결장 길이와 중량 모두를 증가시켰다. 결장 길이는 0.1 mg/kg 이상의 용량에서 GLP2-2G-10Nle-1-Ex4-L5A로 처리한 동물과 테두글루타이드로 처리된 동물(군 D-G)에서 미처리 동물(군 B)과 비교할 때 유의하게 증가했다. 결장 중량은 0.3 mg/kg 이상의 용량에서 GLP2-2G-10Nle-1-Ex4-L5A로 처리한 동물과 테두글루타이드를 처리한 동물에서 미처리된 동물과 비교하여 증가하였다.
GLP2-2G-10Nle-1-Ex4-L5A는 또한 소장 중량과 길이에 유의한 영향을 미쳤다. 0.1 mg/kg 이상의 용량에서 GLP2-2G-10Nle-1-Ex4-L5A를 사용한 처리 및 테두글루타이드를 사용한 처리는 도 20c에 도시된 바와 같이 미처리된 마우스 모델과 비교하여 소장 길이의 유의한 증가를 초래하였다. 0.3 mg/kg 이상의 용량에서 GLP2-2G-10Nle-1-Ex4-L5A를 사용한 처리는 미처리된 마우스와 비교하여 소장 중량에서 유의한 증가를 초래하였다(도시되지 않음).
실시예 U: NASH 모델에서 GLP-2-2G-5-L5A 처리
5주령 C57BL/6 마우스는 총 19주 동안 콜린-결핍 식이(CDAA, Dyets #518753) 또는 AA 보충 대조군 식이(CSAA, Dyets # 518754)를 수행하였다. 마우스를 나열된 바와 같이 군당 8마리의 마우스로 3개의 처리군으로 나누었다: 비히클만으로 처리된 CSAA 대조군 식이; 비히클로 처리된 CDAA 식이(MCT, PO; 식염수, SC); 및 1 mg/kg의 GLP2-2G-5-EX4-L5A로 피하 처리된 CDAA 식이. 15주 후, 마우스를 4주 동안 비히클 또는 화합물로 처리하였다. 체중은 식이 유도 단계 동안 매주, 치료 단계 동안 주 3회 모니터링하였다. 19주 후, 동물을 안락사시키고, 혈청 패널, 조직학 및 유전자 발현을 위해 말기 혈액 및 간 샘플을 수확하였다.
GLP2-2G-5-EX4-L5A를 사용한 만성 치료는 간 기능의 마커를 개선시켰다. 콜린-결핍 식이를 공급받은 마우스에서, 도 21a-21b에 도시된 바와 같이, 동일한 식이에서 미처리된 마우스와 비교하여 혈청 ALT와 혈청 AST 둘 모두에서 유의한 감소가 있었다. 총 혈청 빌리루빈은 GLP2-2G-5-EX4-L5A 처리를 받은 마우스에서도 동일한 식이로 처리되지 않은 마우스와 비교하여 감소하였다. 담낭은 GLP-2 처리된 마우스의 7/8에서 확대되었다.
GLP2-2G-5-EX4-L5A를 사용한 처리는 도 21c에 도시된 바와 같이 간 섬유증 점수에서 20% 감소를 초래하였다. 콜라겐 침착/섬유증은 피크로시리우스 레드로 관찰되었으며 다음 척도를 사용하여 중증도에 대해 등급을 매겼다: 0 = 없음; 1 = 최소; 2 = 약한; 3 = 보통; 4 = 표시됨; 및 5 = 심각함. 이 치료로 체중에 대한 유의한 영향은 없었고, 이는 치료가 내약성임을 나타낸다.
간 지방증 및 염증에 대한 이러한 처리 효과도 분석하였다. 지방증은 선명하고 둥글며 비염색된 지질 액포에 의해 결정된 간세포 액포화 퍼센트로 분석하고 나열된 척도에 기반하여 등급을 부여하였다: 0은 5% 미만을 나타내고; 1은 5-33%를 나타내고; 2는 33 - 66%를 나타내고; 3은 66% 초과를 나타낸다. GLP2-2G-5-EX4-L5A를 사용한 처리는 도 21d에 도시된 바와 같이 간에서 지방증 등급에 유의한 영향을 미치지 않았다. 소엽 염증은 호중구, 림프구 및 대식세포의 침윤에 대한 염증 병소의 평가에 의해 분석되었다. 소엽 염증은 하기 척도를 사용하여 점수를 매겼다: 0은 병소가 없음을 나타내고; 1은 2개 병소/200x 필드를 나타내고; 2는 2-4개 병소/200x 필드를 나타내고; 3은 4개 초과의 병소/200x 필드를 나타낸다. GLP-2-2G-5-L5A를 사용한 처리는 도 21e에 도시된 바와 같이 CDAA 식이에서 처리되지 않은 동물과 비교하여 소엽 염증의 수준을 감소시켰다.
본 실시예는 GLP2-2G-5-EX4-L5A를 사용한 처리가 CDAA-NASH 모델에서 간 손상의 마커를 개선하고 간 섬유증의 악화를 예방했음을 보여주었다.
실시예 V: 지속성 GLP2 작용제는 환경 장 기능 장애(EED)의 마우스 모델을 치료한다
이유 영양실조 모델을 사용하여 환경 장 기능장애(EED)를 치료하는 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5의 능력을 평가하였다. 모든 어미(dam)는 새끼가 10일이 되었을 때 단백질, 지방 및 미네랄이 적당히 결핍된 등칼로리의 노쓰웨스트 브라질(isocaloric Northeast Brazil) (지역 기본 식단-RBD)을 수행하였다. 이유(3주령)시 새끼를 표준 대조군 식이(CD)를 수행하거나 RBD를 계속 수행하였다. 4주령에, 이유에는 2-3주 동안 1일 1회 약물 또는 위약(PBS(비히클)에 제형화된 0.1 mg/kg)을 제공하였다. 체중과 음식 섭취량은 매주 2회 측정하였다. 대변은 이유시, 6주령 및 8주령에 열량측정 및 미생물군집을 위해 수집되었다. 경구 FITC-덱스트란은 장벽 함수의 측정치로서 사용되었다. 6주령에 마우스를 안락사시키고, 형태학, 면역조직화학, 및 경점막 저항성 및 투과성의 챔버 분석을 위해 공장 조직을 수집하였다. 도 22a-22b에 도시된 바와 같이 CD로 이유된 그리고 테두글루타이드 또는 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5로 처리한 수컷 및 암컷 RBD 마우스 둘 다에서 더 큰 체중 증가에 대한 경향이 있었다. 그러나, RBD로 이유된 수컷 및 암컷 마우스는 도 22c-22d에 도시된 바와 같이 테두글루타이드 또는 지속형 GLP2 작용제를 투여할 때 체중이 악화되는 경향을 나타냈다.
테두글루타이드와 지속성 GLP2 작용제 둘 모두를 사용한 처리는 장의 습윤 중량 및 길이에 중대한 영향을 미쳤다. 테두글루타이드 또는 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5로 처리된 CD 수컷은 도 22e에 도시된 바와 같이 미처리된 수컷과 비교하여 소장 습윤 체중/체중에서 유의한 증가를 나타냈다. 테두글루타이드 또는 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5로 처리된 CD 암컷은 도 22f에 도시된 바와 같이 미처리 암컷과 비교하여 소장 습윤 체중/체중에서 유의한 증가를 나타냈다. 또한, GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5를 사용한 처리는 또한 테두글루타이드를 사용한 처리와 비교할 때 유의한 증가를 초래하였다. 테두글루타이드 또는 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5로 처리된 RBD 수컷은 미처리된 수컷과 비교하여 소장 습윤 체중/체중에서 유의한 증가를 나타내었다. RBD 암컷에서, GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5로 처리된 동물만이 미처리된 동물과 비교하여 소장 습윤 중량/체중에서 유의한 증가를 나타내었다.
CD 식이로 이유된 동물과 RBD 식이로 이유된 동물 둘 모두에서 GLP2 또는 테두글루타이드로 처리하여 미처리된 동물과 비교할 때 소장 길이의 유의한 증가를 초래하였다.
GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5를 사용한 처리는 또한 동물에게 장영양 영향을 미쳤다. 테두글루타이드 또는 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5로 처리된 CD 수컷은 미처리된 수컷보다 융모 높이가 유의하게 더 길었다. GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5로 처리된 CD 암컷은 또한 미처리된 암컷보다 융모 길이가 유의하게 더 길었다. 처리 및 미처리된 CD 동물의 음와 깊이. 테두글루타이드 또는 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5로 처리된 수컷은 미처리된 수컷보다 음와 깊이가 더 길었다.
장 투과성을 또한 이들 마우스에서 측정하였으며, 여기서, FITC-덱스트란 상대 형광이 클수록 장 투과도가 더 커졌다. 테두글루타이드 또는 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5로 처리된 CD 수컷은 미처리된 마우스와 비교하여 처리된 마우스에서 투과성이 감소하는 경향을 나타냈다. 테두글루타이드 또는 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5로 처리된 CD 암컷은 미처리된 CD 암컷 마우스와 비교할 때 투과성의 유의한 감소를 나타냈다. 테두글루타이드 또는 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5를 사용한 처리는 미처리된 마우스와 비교할 때 RBD 암컷 또는 RBD 수컷의 투과성에 유의한 영향을 미치지 않았다.
미처리된 CD 마우스는 미처리된 RBD 마우스보다 더 높은 수준의 장 투과성을 나타냈다. CD와 RBD 마우스는 테두글루타이드로 처리했을 때 유사한 전체 수준의 투과성을 가졌다. 동일한 식이에 대해 수컷 마우스와 비교할 때 암컷은 GLP2-2G-10Nle-1K-EX4-K5로 처리될 때 약간 높은 수준의 투과성을 가졌다.
SEQUENCE LISTING <110> THE SCRIPPS RESEARCH INSTITUTE <120> GLP2 RECEPTOR AGONISTS AND METHODS OF USE <130> 36271-706.601 <140> PCT/US2020/063130 <141> 2020-12-03 <150> 62/994,791 <151> 2020-03-25 <150> 62/943,667 <151> 2019-12-04 <160> 40 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 42 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 1 His Gly Asp Gly Ser Phe Ser Asp Glu Met Asn Thr Ile Leu Asp Asn 1 5 10 15 Cys Ala Ala Arg Asp Phe Ile Cys Trp Leu Ile Gln Thr Lys Ile Thr 20 25 30 Asp Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 40 <210> 2 <211> 42 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Norleucine <400> 2 His Gly Asp Gly Ser Phe Ser Asp Glu Leu Asn Thr Ile Leu Asp Asn 1 5 10 15 Cys Ala Ala Arg Asp Phe Ile Cys Trp Leu Ile Gln Thr Lys Ile Thr 20 25 30 Asp Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 40 <210> 3 <211> 42 <212> PRT 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Sequence: Synthetic polypeptide <400> 16 His Gly Asp Gly Ser Phe Ser Asp Glu Met Asn Thr Ile Leu Asp Asn 1 5 10 15 Lys Ala Ala Arg Asp Phe Ile Lys Trp Leu Ile Gln Thr Lys Ile Thr 20 25 30 Asp Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 40 <210> 17 <211> 42 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (11)..(11) <223> D-Phe <400> 17 His Gly Asp Gly Ser Phe Ser Asp Glu Met Phe Thr Ile Leu Asp Asn 1 5 10 15 Lys Ala Ala Arg Asp Phe Ile Lys Trp Leu Ile Gln Thr Lys Ile Thr 20 25 30 Asp Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 40 <210> 18 <211> 42 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 18 His Gly Asp Gly Ser Phe Ser Asp Lys Met Asn Thr Ile Leu Asp Lys 1 5 10 15 Leu Ala Ala Arg Asp Phe Ile Asn Trp Leu Ile Gln Thr Lys Ile Thr 20 25 30 Asp Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 40 <210> 19 <211> 42 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Norleucine <400> 19 His Gly Asp Gly Ser Phe Ser Asp Lys Leu Asn Thr Ile Leu Asp Lys 1 5 10 15 Leu Ala Ala Arg Asp Phe Ile Asn Trp Leu Ile Gln Thr Lys Ile Thr 20 25 30 Asp Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 40 <210> 20 <211> 42 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (17)..(17) <223> Ornithine <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Ornithine <400> 20 His Gly Asp Gly Ser Phe Ser Asp Glu Met Asn Thr Ile Leu Asp Asn 1 5 10 15 Xaa Ala Ala Arg Asp Phe Ile Xaa Trp Leu Ile Gln Thr Lys Ile Thr 20 25 30 Asp Pro Ser Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser 35 40 <210> 21 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 21 His Gly Asp Gly Ser Phe Ser Asp Glu Met Asn Thr Ile Leu Asp Asn 1 5 10 15 Cys Ala Ala Arg Asp Phe Ile Cys Trp Leu Ile Gln Thr Lys Ile Thr 20 25 30 Asp <210> 22 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Norleucine <400> 22 His Gly Asp Gly Ser Phe Ser Asp Glu Leu Asn Thr Ile Leu Asp Asn 1 5 10 15 Cys Ala Ala Arg Asp Phe Ile Cys Trp Leu Ile Gln Thr Lys Ile Thr 20 25 30 Asp <210> 23 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 23 His Gly Asp Gly Ser Phe Ser Asp Glu Leu Asn Thr Ile Leu Asp Asn 1 5 10 15 Cys Ala Ala Arg Asp Phe Ile Cys Trp Leu Ile Gln Thr Lys Ile Thr 20 25 30 Asp <210> 24 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 24 His Gly Asp Gly Ser Phe Ser Asp Glu Ile Asn Thr Ile Leu Asp Asn 1 5 10 15 Cys Ala Ala Arg Asp Phe Ile Cys Trp Leu Ile Gln Thr Lys Ile Thr 20 25 30 Asp <210> 25 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> 2-Aminoisobutyric acid <400> 25 His Gly Asp Gly Ser Phe Ser Asp Glu Xaa Asn Thr Ile Leu Asp Asn 1 5 10 15 Cys Ala Ala Arg Asp Phe Ile Cys Trp Leu Ile Gln Thr Lys Ile Thr 20 25 30 Asp <210> 26 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Norvaline <400> 26 His Gly Asp Gly Ser Phe Ser Asp Glu Val Asn Thr Ile Leu Asp Asn 1 5 10 15 Cys Ala Ala Arg Asp Phe Ile Cys Trp Leu Ile Gln Thr Lys Ile Thr 20 25 30 Asp <210> 27 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 27 His Gly Asp Gly Ser Phe Ser Asp Glu Val Asn Thr Ile Leu Asp Asn 1 5 10 15 Cys Ala Ala Arg Asp Phe Ile Cys Trp Leu Ile Gln Thr Lys Ile Thr 20 25 30 Asp <210> 28 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 28 His Gly Asp Gly Ser Phe Ser Asp Cys Met Asn Thr Ile Leu Asp Cys 1 5 10 15 Leu Ala Ala Arg Asp Phe Ile Asn Trp Leu Ile Gln Thr Lys Ile Thr 20 25 30 Asp <210> 29 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 29 His Gly Asp Gly Ser Phe Ser Asp Glu Met Cys Thr Ile Leu Asp Asn 1 5 10 15 Leu Cys Ala Arg Asp Phe Ile Asn Trp Leu Ile Gln Thr Lys Ile Thr 20 25 30 Asp <210> 30 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Norleucine <400> 30 His Gly Asp Gly Ser Phe Ser Asp Glu Leu Asn Thr Ile Leu Asp Asn 1 5 10 15 Lys Ala Ala Arg Asp Phe Ile Lys Trp Leu Ile Gln Thr Lys Ile Thr 20 25 30 Asp <210> 31 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (10)..(10) <223> Norleucine <220> 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20 25 30 Asp <210> 40 <211> 33 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <220> <221> MOD_RES <222> (17)..(17) <223> Ornithine <220> <221> MOD_RES <222> (24)..(24) <223> Ornithine <400> 40 His Gly Asp Gly Ser Phe Ser Asp Glu Met Asn Thr Ile Leu Asp Asn 1 5 10 15 Xaa Ala Ala Arg Asp Phe Ile Xaa Trp Leu Ile Gln Thr Lys Ile Thr 20 25 30 Asp

Claims (150)

  1. 펩타이드 접합체로서,
    a) GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드; 및
    b) 제1 아미노산 및 제2 아미노산에서 펩타이드에 부착된 스테이플
    을 포함하는 펩타이드 접합체.
  2. 제1항에 있어서, 제1 아미노산 및 제2 아미노산은 독립적으로 아민-함유 아미노산 또는 설프히드릴-함유 아미노산인 펩타이드 접합체.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 제1 아미노산 및 제2 아미노산은 독립적으로 시스테인, 호모시스테인, 2-아미노-5-머캅토펜탄산, 또는 2-아미노-6-머캅토헥산산인 펩타이드 접합체.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 아미노산 및 제2 아미노산은 시스테인인 펩타이드 접합체.
  5. 제1항 또는 제2항에 있어서, 제1 아미노산 및 제2 아미노산은 독립적으로 라이신, 오르니틴, 디아미노부티르산, 디아미노프로피온산, 또는 호모라이신인 펩타이드 접합체.
  6. 제1항, 제2항 또는 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 아미노산 및 제2 아미노산은 라이신인 펩타이드 접합체.
  7. 제1항, 제2항 또는 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 아미노산 및 제2 아미노산은 오르니틴인 펩타이드 접합체.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 아미노산은 펩타이드에서 위치 i를 갖고 제2 아미노산은 펩타이드에서 위치 i + n을 가지며, 여기서, n은 4-16인 펩타이드 접합체.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 아미노산은 펩타이드에서 위치 i를 갖고 제2 아미노산은 펩타이드에서 위치 i + n을 가지며, 여기서, n은 4-10인 펩타이드 접합체.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 아미노산은 펩타이드에서 위치 i를 갖고 제2 아미노산은 펩타이드에서 위치 i + n을 가지며, 여기서, n은 6-8인 펩타이드 접합체.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 아미노산은 펩타이드에서 위치 i를 갖고 제2 아미노산은 펩타이드에서 위치 i + 7을 갖는 것인 펩타이드 접합체.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드는 서열 번호 1-9, 21-29 중 어느 하나와 적어도 약 80% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 것인 펩타이드 접합체.
  13. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드는 서열 번호 1-9, 21-29 중 어느 하나와 적어도 약 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 것인 펩타이드 접합체.
  14. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드는 서열 번호 1-9, 21-29 중 어느 하나와 적어도 약 95% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 것인 펩타이드 접합체.
  15. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드는 서열 번호 1-9, 21-29 중 어느 하나와 적어도 약 99% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 것인 펩타이드 접합체.
  16. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드는 서열 번호 1-9, 21-29 중 어느 하나인 서열을 포함하는 것인 펩타이드 접합체.
  17. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드는 서열 번호 1 또는 21과 적어도 약 80% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 것인 펩타이드 접합체.
  18. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드는 서열 번호 1 또는 21과 적어도 약 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 것인 펩타이드 접합체.
  19. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드는 서열 번호 1 또는 21과 적어도 약 95% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 것인 펩타이드 접합체.
  20. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드는 서열 번호 1 또는 21과 적어도 약 99% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 것인 펩타이드 접합체.
  21. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드는 서열 번호 1 또는 21인 서열을 포함하는 것인 펩타이드 접합체.
  22. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드는 서열 번호 2 또는 22와 적어도 약 80% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 것인 펩타이드 접합체.
  23. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드는 서열 번호 2 또는 22와 적어도 약 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 것인 펩타이드 접합체.
  24. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드는 서열 번호 2 또는 22와 적어도 약 95% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 것인 펩타이드 접합체.
  25. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드는 서열 번호 2 또는 22와 적어도 약 99% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 것인 펩타이드 접합체.
  26. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드는 서열 번호 2 또는 22인 서열을 포함하는 것인 펩타이드 접합체.
  27. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드는 서열 번호 10-20, 30-40 중 어느 하나와 적어도 약 80% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 것인 펩타이드 접합체.
  28. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드는 서열 번호 10-20, 30-40 중 어느 하나와 적어도 약 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 것인 펩타이드 접합체.
  29. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드는 서열 번호 10-20, 30-40 중 어느 하나와 적어도 약 95% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 것인 펩타이드 접합체.
  30. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드는 서열 번호 10-20, 30-40 중 어느 하나와 적어도 약 99% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 것인 펩타이드 접합체.
  31. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드는 서열 번호 10-20, 30-40 중 어느 하나인 서열을 포함하는 것인 펩타이드 접합체.
  32. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드는 서열 번호 10 또는 30과 적어도 약 80% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 것인 펩타이드 접합체.
  33. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드는 서열 번호 10 또는 30과 적어도 약 90% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 것인 펩타이드 접합체.
  34. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드는 서열 번호 10 또는 30과 적어도 약 95% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 것인 펩타이드 접합체.
  35. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드는 서열 번호 10 또는 30과 적어도 약 99% 동일성을 갖는 서열을 포함하는 것인 펩타이드 접합체.
  36. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드는 서열 번호 10 또는 30인 서열을 포함하는 것인 펩타이드 접합체.
  37. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드 접합체의 반감기가 펩타이드의 비변형된 형태의 반감기보다 적어도 약 2배 더 긴 것인 펩타이드 접합체.
  38. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드 접합체의 반감기가 펩타이드의 비변형된 형태의 반감기보다 적어도 약 5배 더 긴 것인 펩타이드 접합체.
  39. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드 접합체의 반감기가 펩타이드의 비변형된 형태의 반감기보다 적어도 약 10배 더 긴 것인 펩타이드 접합체.
  40. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드 접합체의 결합 친화도가 펩타이드의 비변형된 형태의 결합 친화도의 약 5% 이내인 펩타이드 접합체.
  41. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드 접합체의 결합 친화도가 펩타이드의 비변형된 형태의 결합 친화도의 약 10% 이내인 펩타이드 접합체.
  42. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드 접합체의 결합 친화도가 펩타이드의 비변형된 형태의 결합 친화도의 약 15% 이내인 펩타이드 접합체.
  43. 제1항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 펩타이드 접합체의 결합 친화도가 펩타이드의 비변형된 형태의 결합 친화도의 약 20% 이내인 펩타이드 접합체.
  44. 제1항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 스테이플은 하기 화학식 (I)인 펩타이드 접합체:
    Figure pct00170

    상기 식에서,
    A는 임의로 치환된 알킬렌, 임의로 치환된 아릴렌, 임의로 치환된 헤테로아릴렌, 임의로 치환된 -NR3-알킬렌-NR3-, 또는 -N-이고;
    X1 및 X2는 독립적으로 결합, -C(=O)-, -알킬렌-C(=O)-, -C(=O)-알킬렌-, -알킬렌-C(=O)NR3-, -알킬렌-NR3C(=O)-, -C(=O)NR3-알킬렌-, -NR3C(=O)-알킬렌-, -알킬렌-C(=O)NR3-알킬렌-, 또는 -알킬렌-NR3C(=O)-알킬렌-이고;
    여기서, X1은 펩타이드의 제1 아미노산에 부착되고, X2는 펩타이드의 제2 아미노산에 부착되고;
    R은 수소 또는 -(L)s-Y이고;
    각각의 L은 독립적으로 -(CR1R2)v-, -알킬렌-O-, -O-알킬렌-, -C(=O)-알킬렌-, -알킬렌-C(=O)-, -NR3-알킬렌-, -알킬렌-NR3-, -S-알킬렌-, -알킬렌-S-, -S(=O)-알킬렌-, -알킬렌-S(=O)-, -S(=O)2-알킬렌, -알킬렌-S(=O)2-, -C(=O)-, -C(=O)NR3-, -NR3C(=O)-, -NR3C(=O)NR3-, -NR3C(=O)NR3-알킬렌-, -NR3C(=O)-알킬렌-NR3-, -알킬렌-C(=O)NR3-, -C(=O)NR3-알킬렌-, -알킬렌-NR3C(=O)-, 또는 -NR3C(=O)-알킬렌-이고;
    v는 2-20이고;
    각각의 R1 또는 R2는 독립적으로 수소, 할로겐, -CN, -ORa, -SRa, -S(=O)Rb, -NO2, -NRcRd, -S(=O)2Rd, -NRaS(=O)2Rd, -S(=O)2NRcRd, -C(=O)Rb, -OC(=O)Rb, -CO2Ra, -OCO2Ra, -C(=O)NRcRd, -OC(=O)NRcRd, -NRaC(=O)NRcRd, -NRaC(=O)Rb, -NRaC(=O)ORa, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C6 헤테로알킬, C3-C8 사이클로알킬, C2-C8 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고; 여기서, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 헤테로알킬은 할로겐, -ORa, 또는 -NRcRd 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고; 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -ORa, -NRcRd 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되거나,
    R1 및 R2는 함께 취하여 C1-C6 사이클로알킬 또는 C1-C6 헤테로사이클로알킬을 형성하고;
    각각의 R3은 독립적으로 수소, -S(=O)Rb, -S(=O)2Ra, -S(=O)2NRcRd, -C(=O)Rb, -CO2Ra, -C(=O)NRcRd, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C6 헤테로알킬, C3-C8 사이클로알킬, C2-C8 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고; 여기서, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 헤테로알킬은 할로겐, -ORa, 또는 -NRcRd 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고; 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -ORa, 또는 -NRcRd 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고;
    Y는 수소, C1-C6 알킬, -CO2H, -CO2(C1-C6 알킬), -CO2NH2, -CO2N(알킬)2, 또는 -CO2NH(알킬)이고;
    s는 0-20이고;
    Ra는 수소, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C6 헤테로알킬, C3-C8 사이클로알킬, C2-C8 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고; 여기서, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 헤테로알킬은 할로겐, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고; 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고;
    Rb는 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C6 헤테로알킬, C3-C8 사이클로알킬, C2-C8 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고; 여기서, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 헤테로알킬은 할로겐, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고; 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고;
    각각의 Rc 및 Rd는 독립적으로 수소, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C6 헤테로알킬, C3-C8 사이클로알킬, C2-C8 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고; 여기서, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 헤테로알킬은 할로겐, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고; 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되거나;
    Rc 및 Rd는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 헤테로사이클로알킬 또는 헤테로아릴을 형성하고; 여기서, 헤테로사이클로알킬 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환된다.
  45. 제44항에 있어서, A는 임의로 치환된 알킬렌인 펩타이드 접합체.
  46. 제44항 또는 제45항에 있어서, A는 -(CH2)t-이고, 여기서, t는 1-12인 펩타이드 접합체.
  47. 제44항에 있어서, A는 임의로 치환된 아릴렌인 펩타이드 접합체.
  48. 제44항에 있어서, A는 -NR3-알킬렌-NR3-인 펩타이드 접합체.
  49. 제44항에 있어서, A는 -N-인 펩타이드 접합체.
  50. 제44항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, X1 및 X2는 -C(=O)-인 펩타이드 접합체.
  51. 제44항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, X1 및 X2는 -알킬렌-C(=O)-인 펩타이드 접합체.
  52. 제44항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, X1 및 X2는 -CH2-C(=O)-인 펩타이드 접합체.
  53. 제44항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, X1 및 X2는 독립적으로 -알킬렌-C(=O)NR3-인 펩타이드 접합체.
  54. 제44항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, X1 및 X2는 독립적으로 -CH2-C(=O)NR3-인 펩타이드 접합체.
  55. 제44항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, X1 및 X2는 독립적으로 -알킬렌-C(=O)NR3-알킬렌-인 펩타이드 접합체.
  56. 제44항 내지 제49항 중 어느 한 항에 있어서, X1 및 X2는 독립적으로 -CH2-C(=O)NR3-CH2CH2-인 펩타이드 접합체.
  57. 제44항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, >A-R은 하기 구조를 갖는 것인 펩타이드 접합체:
    Figure pct00171

    상기 식에서, r1 및 r2는 각각 독립적으로 0-4이다.
  58. 제44항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, >A-R은 하기 구조를 갖는 것인 펩타이드 접합체:
    Figure pct00172
  59. 제44항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, >A-R은 하기 구조를 갖는 것인 펩타이드 접합체:
    Figure pct00173

    상기 식에서, p1은 1-5이다.
  60. 제44항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, >A-R은 하기 구조를 갖는 것인 펩타이드 접합체:
    Figure pct00174
  61. 제44항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, >A-R은 하기 구조를 갖는 것인 펩타이드 접합체:
    Figure pct00175
  62. 제44항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, s는 1-15인 펩타이드 접합체.
  63. 제44항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, s는 1-10인 펩타이드 접합체.
  64. 제44항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, s는 5-15인 펩타이드 접합체.
  65. 제44항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, s는 5-10인 펩타이드 접합체.
  66. 제44항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, Y는 수소 또는 -CO2H인 펩타이드 접합체.
  67. 제44항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 L은 독립적으로 -(CR1R2)v-, -알킬렌-O-, -C(=O)-, -C(=O)NR3-, -NR3C(=O)-, -알킬렌-C(=O)NR3-, 또는 -알킬렌-NR3C(=O)-이고; v는 2-20인 펩타이드 접합체.
  68. 제1항에 있어서, 하기 구조를 포함하는 펩타이드 접합체:
    Figure pct00176

    Figure pct00177

    Figure pct00178
  69. 제1항에 있어서, 하기 구조를 포함하는 펩타이드 접합체:
    Figure pct00179

    Figure pct00180
    , 또는
    Figure pct00181
    ; 여기서, n은 1-4이고, m은 6-20이다.
  70. 제1항에 있어서, 하기 구조를 포함하는 펩타이드 접합체:
    Figure pct00182
  71. 제1항에 있어서, 하기 구조를 포함하는 펩타이드 접합체:
    Figure pct00183
  72. 제1항에 있어서, 하기 구조를 포함하는 펩타이드 접합체:
    Figure pct00184
  73. 제1항에 있어서, 하기 구조를 포함하는 펩타이드 접합체:
    Figure pct00185
  74. 제1항에 있어서, 하기 구조를 포함하는 펩타이드 접합체:
    Figure pct00186
  75. 제1항에 있어서, 하기 구조를 포함하는 펩타이드 접합체:
    Figure pct00187
  76. 제1항에 있어서,
    a) 서열 번호 1-9, 21-29 중 어느 하나인 서열을 포함하는 GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드; 및
    b) 하기 구조("S"는 시스테인 잔기의 일부임)를 갖는 제1 시스테인 및 제2 시스테인에서 펩타이드에 부착된 스테이플
    을 포함하는 펩타이드 접합체:
    Figure pct00188
  77. 제1항에 있어서,
    a) 서열 번호 1 또는 21인 서열을 포함하는 GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드; 및
    b) 하기 구조("S"는 시스테인 잔기의 일부임)를 갖는 제1 시스테인 및 제2 시스테인에서 펩타이드에 부착된 스테이플
    을 포함하는 펩타이드 접합체:
    Figure pct00189
  78. 제1항에 있어서,
    a) 서열 번호 2 또는 22인 서열을 포함하는 GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드; 및
    b) 하기 구조("S"는 시스테인 잔기의 일부임)를 갖는 제1 시스테인 및 제2 시스테인에서 펩타이드에 부착된 스테이플
    을 포함하는 펩타이드 접합체:
    Figure pct00190
  79. 제1항에 있어서,
    a) 서열 번호 10-20, 30-40 중 어느 하나인 서열을 포함하는 GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드; 및
    b) 하기 구조("NH"는 라이신 잔기의 일부임)를 갖는 제1 라이신 및 제2 라이신에서 펩타이드에 부착된 스테이플
    을 포함하는 펩타이드 접합체:
    Figure pct00191
  80. 제1항에 있어서,
    a) 서열 번호 10 또는 30인 서열을 포함하는 GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드; 및
    b) 하기 구조("NH"는 라이신 잔기의 일부임)를 갖는 제1 라이신 및 제2 라이신에서 펩타이드에 부착된 스테이플
    을 포함하는 펩타이드 접합체:
    Figure pct00192
  81. 제1항 내지 제80항 중 어느 한 항의 펩타이드 접합체 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약학 조성물.
  82. 치료학적 유효량의 제1항 내지 제80항 중 어느 한 항의 펩타이드 접합체를 포함하는 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 질환 또는 병태를 치료하는 방법.
  83. 제81항에 있어서, 질환 또는 병태는 당뇨병 또는 비만, 또는 당뇨병 또는 비만과 관련된 의학적 병태인 방법.
  84. 제82항에 있어서, 질환 또는 병태는 비알코올성 지방간 질환(NAFLD), 비알코올성 지방간염(NASH), 또는 심혈관 질환인 방법.
  85. 제82항에 있어서, 질환 또는 병태는 위장(GI) 장애인 방법.
  86. 제85항에 있어서, 위장(GI) 장애는 단장 증후군(SBS), 염증성 장 증후군(IBS), 또는 염증성 장 질환(IBD)인 방법.
  87. 제86항에 있어서, 염증성 장 질환(IBD)은 크론병인 방법.
  88. 제86항에 있어서, 염증성 장 질환(IBD)은 궤양성 대장염인 방법.
  89. 제82항에 있어서, 질환 또는 병태는 건선인 방법.
  90. 제82항에 있어서, 질환 또는 병태는 알츠하이머병, 파킨슨병, 또는 헌팅턴병인 방법.
  91. 제82항에 있어서, 이를 필요로 하는 대상체는 화학요법을 받고 있는 것인 방법.
  92. 제82항에 있어서, 이를 필요로 하는 대상체는 방사선 유발된 GI 점막염을 갖고 있는 것인 방법.
  93. 제82항에 있어서, 이를 필요로 하는 대상체는 화학요법 유발된 설사(CID)를 갖는 것인 방법.
  94. 제82항에 있어서, 이를 필요로 하는 대상체는 전체 비경구 영양(TPN) 유발된 장 위축을 갖는 것인 방법.
  95. 하기 화학식의 스테이플:
    Figure pct00193

    상기 식에서,
    A는 임의로 치환된 알킬렌, 임의로 치환된 아릴렌, 임의로 치환된 헤테로아릴렌, 임의로 치환된 -NR3-알킬렌-NR3-, 또는 -N-이고;
    X1 및 X2는 독립적으로 결합, -C(=O)-, -알킬렌-C(=O)-, -C(=O)-알킬렌, -알킬렌-C(=O)NR3-, 또는 -알킬렌-C(=O)NR3-알킬렌-이고;
    Y1 및 Y2는 독립적으로 할로겐, -COOH,
    Figure pct00194
    이거나, 독립적으로 설프히드릴-함유 아미노산의 -S- 또는 -CONH-이고, 여기서, -NH-는 GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드 내의 아민-함유 아미노산의 일부이고;
    R은 수소 또는 -(L)s-Y이고;
    각각의 L은 독립적으로 -(CR1R2)v-, -알킬렌-O-, -O-알킬렌-, -C(=O)-알킬렌-, -알킬렌-C(=O)-, -NR3-알킬렌-, -알킬렌-NR3-, -S-알킬렌-, -알킬렌-S-, -S(=O)-알킬렌-, -알킬렌-S(=O)-, -S(=O)2-알킬렌, -알킬렌-S(=O)2-, -C(=O)-, -C(=O)NR3-, -NR3C(=O)-, -NR3C(=O)NR3-, -NR3C(=O)NR3-알킬렌-, -NR3C(=O)-알킬렌-NR3-, -알킬렌-C(=O)NR3-, -C(=O)NR3-알킬렌-, -알킬렌-NR3C(=O)-, 또는 -NR3C(=O)-알킬렌-이고;
    v는 2-20이고;
    각각의 R1 또는 R2는 독립적으로 수소, 할로겐, -CN, -ORa, -SRa, -S(=O)Rb, -NO2, -NRcRd, -S(=O)2Rd, -NRaS(=O)2Rd, -S(=O)2NRcRd, -C(=O)Rb, -OC(=O)Rb, -CO2Ra, -OCO2Ra, -C(=O)NRcRd, -OC(=O)NRcRd, -NRaC(=O)NRcRd, -NRaC(=O)Rb, -NRaC(=O)ORa, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C6 헤테로알킬, C3-C8 사이클로알킬, C2-C8 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고; 여기서, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 헤테로알킬은 할로겐, -ORa, 또는 -NRcRd 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고; 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -ORa, -NRcRd 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되거나,
    R1 및 R2는 함께 취하여 C1-C6 사이클로알킬 또는 C1-C6 헤테로사이클로알킬을 형성하고;
    각각의 R3은 독립적으로 수소, -S(=O)Rb, -S(=O)2Ra, -S(=O)2NRcRd, -C(=O)Rb, -CO2Ra, -C(=O)NRcRd, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C6 헤테로알킬, C3-C8 사이클로알킬, C2-C8 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고; 여기서, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 헤테로알킬은 할로겐, -ORa, 또는 -NRcRd 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고; 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -ORa, 또는 -NRcRd 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고;
    Y는 수소, C1-C6 알킬, -CO2H, -CO2(C1-C6 알킬), -CO2NH2, -CO2N(알킬)2, 또는 -CO2NH(알킬)이고;
    s는 0-20이고;
    Ra는 수소, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C6 헤테로알킬, C3-C8 사이클로알킬, C2-C8 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고; 여기서, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 헤테로알킬은 할로겐, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고; 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고;
    Rb는 C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C6 헤테로알킬, C3-C8 사이클로알킬, C2-C8 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고; 여기서, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 헤테로알킬은 할로겐, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고; 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고;
    각각의 Rc 및 Rd는 독립적으로 수소, C1-C6 알킬, C2-C6 알케닐, C2-C6 알키닐, C1-C6 헤테로알킬, C3-C8 사이클로알킬, C2-C8 헤테로사이클로알킬, 아릴, 또는 헤테로아릴이고; 여기서, 알킬, 알케닐, 알키닐, 및 헤테로알킬은 할로겐, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되고; 사이클로알킬, 헤테로사이클로알킬, 아릴, 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환되거나;
    Rc 및 Rd는 이들이 부착된 질소 원자와 함께 헤테로사이클로알킬 또는 헤테로아릴을 형성하고; 여기서, 헤테로사이클로알킬 및 헤테로아릴은 할로겐, C1-C6 알킬, C1-C6 할로알킬, -OH, -OMe, 또는 -NH2 중 1개, 2개 또는 3개로 임의로 치환된다.
  96. 제95항에 있어서, A는 임의로 치환된 알킬렌인 스테이플.
  97. 제95항 또는 제96항에 있어서, A는 -(CH2)t-이고, 여기서, t는 1-12인 스테이플.
  98. 제95항에 있어서, A는 임의로 치환된 아릴렌인 스테이플.
  99. 제95항에 있어서, A는 -NR3-알킬렌-NR3-인 스테이플.
  100. 제95항에 있어서, A는 -N-인 스테이플.
  101. 제95항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, X1 및 X2는 -C(=O)-인 스테이플.
  102. 제95항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, X1 및 X2는 -알킬렌-C(=O)-인 스테이플.
  103. 제95항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, X1 및 X2는 -CH2-C(=O)-인 스테이플.
  104. 제95항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, X1 및 X2는 독립적으로 -알킬렌-C(=O)NR3-인 스테이플.
  105. 제95항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, X1 및 X2는 독립적으로 -CH2-C(=O)NR3-인 스테이플.
  106. 제95항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, X1 및 X2는 독립적으로 -알킬렌-C(=O)NR3-알킬렌-인 스테이플.
  107. 제95항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, X1 및 X2는 독립적으로 -CH2-C(=O)NR3-CH2CH2-인 스테이플.
  108. 제95항 내지 제107항 중 어느 한 항에 있어서, >A-R은 하기 구조를 갖는 것인 스테이플:
    Figure pct00195

    상기 식에서, r1 및 r2는 각각 독립적으로 0-4이다.
  109. 제95항 내지 제107항 중 어느 한 항에 있어서, >A-R은 하기 구조를 갖는 것인 스테이플:
    Figure pct00196
  110. 제95항 내지 제107항 중 어느 한 항에 있어서, >A-R은 하기 구조를 갖는 것인 스테이플:
    Figure pct00197

    상기 식에서, p1은 1-5이다.
  111. 제95항 내지 제107항 중 어느 한 항에 있어서, >A-R은 하기 구조를 갖는 것인 스테이플:
    Figure pct00198
  112. 제95항 내지 제107항 중 어느 한 항에 있어서, >A-R은 하기 구조를 갖는 것인 스테이플:
    Figure pct00199
  113. 제95항 내지 제112항 중 어느 한 항에 있어서, s는 1-15인 스테이플.
  114. 제95항 내지 제113항 중 어느 한 항에 있어서, s는 1-10인 스테이플.
  115. 제95항 내지 제113항 중 어느 한 항에 있어서, s는 5-15인 스테이플.
  116. 제95항 내지 제113항 중 어느 한 항에 있어서, s는 5-10인 스테이플.
  117. 제95항 내지 제116항 중 어느 한 항에 있어서, Y는 수소 또는 -CO2H인 스테이플.
  118. 제95항 내지 제117항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 L은 독립적으로 -(CR1R2)v-, -알킬렌-O-, -C(=O)-, -C(=O)NR3-, -NR3C(=O)-, -알킬렌-C(=O)NR3-, 또는 -알킬렌-NR3C(=O)-이고; v는 2-20인 스테이플.
  119. 제94항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서, Y1 및 Y2는 할로겐인 스테이플.
  120. 제94항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서, Y1 및 Y2는 -COOH인 스테이플.
  121. 제95항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서, Y1 및 Y2는
    Figure pct00200
    인 스테이플.
  122. 제95항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서, Y1 및 Y2는 GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드 내의 2개의 설프히드릴-함유 아미노산의 -S-인 스테이플.
  123. 제95항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서, Y1 및 Y2는 7개의 아미노산이 떨어져 있는 GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드 내의 2개의 설프히드릴-함유 아미노산의 -S-인 스테이플.
  124. 제95항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서, Y1 및 Y2는 -CONH-이고, 여기서, -NH-는 GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드 내의 2개의 아민-함유 아미노산의 일부인 스테이플.
  125. 제95항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서, Y1 및 Y2는 -CONH-이고, 여기서, -NH-는 7개의 아미노산이 떨어져 있는 GLP-2 수용체를 조절하는 펩타이드 내의 2개의 아민-함유 아미노산의 일부인 스테이플.
  126. 제95항에 있어서, 하기 구조를 갖는 스테이플:
    Figure pct00201
  127. 제95항에 있어서, 하기 구조를 갖는 스테이플:
    Figure pct00202
  128. 제95항에 있어서, 하기 구조를 갖는 스테이플:
    Figure pct00203
  129. 제95항에 있어서, 하기 구조를 갖는 스테이플:
    Figure pct00204
  130. 제95항에 있어서, 하기 구조를 갖는 스테이플:
    Figure pct00205
  131. 서열 번호 1인 펩타이드 서열.
  132. 서열 번호 2인 펩타이드 서열.
  133. 서열 번호 3인 펩타이드 서열.
  134. 서열 번호 4인 펩타이드 서열.
  135. 서열 번호 5인 펩타이드 서열.
  136. 서열 번호 6인 펩타이드 서열.
  137. 서열 번호 7인 펩타이드 서열.
  138. 서열 번호 8인 펩타이드 서열.
  139. 서열 번호 9인 펩타이드 서열.
  140. 서열 번호 10인 펩타이드 서열.
  141. 서열 번호 11인 펩타이드 서열.
  142. 서열 번호 12인 펩타이드 서열.
  143. 서열 번호 13인 펩타이드 서열.
  144. 서열 번호 14인 펩타이드 서열.
  145. 서열 번호 15인 펩타이드 서열.
  146. 서열 번호 16인 펩타이드 서열.
  147. 서열 번호 17인 펩타이드 서열.
  148. 서열 번호 18인 펩타이드 서열.
  149. 서열 번호 19인 펩타이드 서열.
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