KR20220087967A - 리토콜릭산을 포함하는 국소지방 감소용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 2차 담즙산의 일종인 리토콜릭산 (lithocholic acid)을 사용하여 국소 지방을 감소시키는데 유용한 조성물에 관한 것으로 기존의 국소지방 감소용 주사제에 비하여 통증이나 부종과 같은 부작용을 감소시킨 조성물에 관한 것이다. 보다 상세하게는 (i) 리토콜릭산 (lithocholic acid) 또는 그의 염 및 (ii) 사이클로덱스트린 (cyclodextrin) 또는 그의 유도체를 포함하며, pH 8 이하의 pH를 가지는 것을 특징으로 하는 국소지방 감소용 조성물에 관한 것이다.
본 발명에 따르면, 가용화제인 사이클로덱스트린의 추가에 의해 불용성인 리토콜릭산을 pH 8 이하의 낮은 pH 조건에서도 잘 가용화시킬 수 있으며, 상기 리토콜릭산과 사이클로덱스트린의 조합에 의해 종래 데옥시콜산(DCA)와 동등한 국소지방 감소 효과를 가짐에도 종래 데옥시콜산(DCA)에 비해 통증이나 부종과 같은 부작용이 감소되고 염증반응이 완화되는 것을 확인하였다.

Description

리토콜릭산을 포함하는 국소지방 감소용 조성물{Composition for localized fat reduction comprising lithocholic acid}

본 발명은 2차 담즙산의 일종인 리토콜릭산 (lithocholic acid)을 사용하여 국소 지방을 감소시키는데 유용한 조성물에 관한 것으로 기존의 국소지방 감소용 주사제에 비하여 통증이나 부종과 같은 부작용을 감소시킨 조성물에 관한 것이다. 보다 상세하게는 (i) 리토콜릭산 (lithocholic acid) 또는 그의 염 및 (ii) 사이클로덱스트린 (cyclodextrin) 또는 그의 유도체를 포함하며, pH 8 이하의 pH를 가지는 것을 특징으로 하는 국소지방 감소용 조성물에 관한 것이다.

국소적으로 침착된 지방을 제거하기 위해 지방흡입술 (liposuction), 지방성형술 (lipoplasty)과 같은 미용 외과 수술과 함께 비수술적으로 국소지방을 감소시킬 수 있는 주사 지방용해술 (injection lipolysis)이 있다. 외과적인 수술 방법은 전신마취와 함께 과도한 출혈, 내부 장기 손상, 세균 감염, 흉터 등 같은 부작용과 잠재적인 합병증 같은 위험성이 있다. 주사 지방용해술은 국소 지방감소용 주사제(injectable drugs for localized fat reduction)를 사용하며 약물을 피하지방층에 주사하여 지방세포를 파괴하기 때문에 전신마취 없이 간단한 시술로 국소적인 지방을 감소시킬 수 있는 방법이다. 대표적으로는 PPC주사가 있으며 포스파티딜콜린 (phosphatidylcholine, PPC)을 주성분으로 가용화제인 데옥시콜산 (deoxycholic acid, DCA)을 포함하는 주사제이다. 간경변에 의한 간성혼수 보조치료제로 사용되었지만 국소 지방 감소를 위해 허가범위 외 사용(off-label use) 되어왔다.

포스파티딜콜린과 데옥시콜산이 배합된 PPC주사의 경우 고통, 혈종, 홍반, 작열감, 부종 경화와 같은 이상반응이 보고되었으며, 국내에서는 상기와 같은 부작용 및 허가범위 외 사용 문제로 품목허가가 취소된 바 있다. 최근에는 미국의 사유기업인 Kythera Biopharmaceuticals가 PPC주사에서 데옥시콜산 성분의 계면활성제 효과로 세포를 용해하여 지방세포를 괴사 시키는 것을 확인하였고 데옥시콜산 단독성분으로 지방을 용해시키는 국소 지방 주사제를 개발하였다 (대한민국 특허 등록번호: 10-1751585). 그러나 데옥시콜산을 단독으로 사용하는 경우에도 고통과 부종 등의 이상반응이 보고되었다. 이는 데옥시콜산을 가용화 하기 위하여 주사제의 pH를 8.0이상으로 유지해야 하는 점과 함께 데옥시콜산의 지방세포를 괴사 (necrosis)시키는 작용기전으로 인해 과도한 염증반응이 유도되기 때문이다.

따라서 종래 기술들 및 조성물들은 소정의 한계를 가지고 있어 본 발명 연구진은 이러한 문제를 해결하기 위한 연구를 진행하였다. 그 결과 데옥시콜산과 같은 2차 담즙산 염 중 하나인 리토콜릭산을 이용하여 pH를 8.0이하의 국소 지방 제제를 완성하였고, 데옥시콜산과 같은 국소지방 감소 효과를 확인하였으며, 데옥시콜산과 비교하여 통증이나 부종과 같은 부작용이 감소되고 염증반응이 완화된 조성물을 발명하였다.

KR 10-1887586 B KR 10-2017-0003992 A

따라서, 본 발명의 목적은 pH 8 이하의 낮은 pH 조건에서도 가용화되고 종래 데옥시콜산(DCA)에 비해 통증이나 부종과 같은 부작용이 감소되고 염증반응이 완화된 국소지방 감소용 조성물을 제공하는 데 있다.

본 발명의 한 양태에 따르면, 본 발명은 (i) 리토콜릭산 (lithocholic acid) 또는 그의 염 및 (ii) 사이클로덱스트린 (cyclodextrin) 또는 그의 유도체를 포함하며, pH 8 이하의 pH를 가지는 것을 특징으로 하는 국소지방 감소용 조성물을 제공한다.

본 발명에서, 상기 (ii) 사이클로덱스트린 (cyclodextrin) 또는 그의 유도체는 불용성인 (i) 리토콜릭산 (lithocholic acid) 또는 그의 염을 가용화시키는 가용화제로 사용되었다. 본 발명의 실시예에서는, (i) 및 (ii)의 조합이 pH를 pH 8 이하, 바람직하게는 pH 7 내지 8, 가장 바람직하게는 pH 7.5까지 낮추고도 사이클로덱스트린 (cyclodextrin)을 잘 가용화시키는 것을 확인하였다.

본 발명에 있어서, 바람직하게는 상기 (i) 및 (ii)의 조합이 종래 국소지방 감소용으로 사용되던 데옥시콜산(DCA)에 비해 통증이나 부종과 같은 부작용이 감소되고 염증반응이 완화되는 것을 특징으로 하는 국소지방 감소용 조성물을 제공한다.

본 발명의 실시예에서는 상기 (i) 및 (ii)의 조합이 데옥시콜산(DCA)만큼 우수한 지방조직 감소효과가 있으며, 데옥시콜산(DCA)에 비해 통증이나 부종과 같은 부작용이 감소되고 염증반응이 완화되는 것을 확인하였다.

본 발명에 있어서, 바람직하게는 상기 (i) 리토콜릭산 또는 그의 염을 0.5 % 내지 2.0 % (w/w) 중량으로 함유하는 것을 특징으로 하는 국소지방 감소용 조성물을 제공한다.

본 발명에 있어서, 바람직하게는 상기 (ii) 사이클로덱스트린 또는 그의 유도체를 1.0 % 내지 10.0 %의 (w/w) 중량으로 함유하는 것을 특징으로 하는 국소지방 감소용 조성물을 제공한다.

본 발명에 있어서, 상기 (i) 리토콜릭산 또는 그의 염은 리토콜릭산의 약제학적으로 허용되는 어떤 염도 포함될 수 있으나, 바람직하게는 나트륨염, 칼륨염 또는 암모늄염인 것을 특징으로 하는 국소지방 감소용 조성물을 제공한다. 일반적으로 리토콜릭산은 난용성 물질이므로 난용성 담즙산을 수용성에 녹이기 위해 염을 붙여 사용하지만, 본 발명의 실시예에서는 사이클로덱스트린이 녹아 있는 수용액에는 염이 붙지 않은 리토콜릭산으도 잘 녹을 수 있다

본 발명에서, 리토콜릭산(lithocholic acid)은 답즙산의 일종인 케노데옥시콜산이 장내세균에 의해 7번 위치의 하이드록시기가 제거되어 생성되는 2차 담즙산으로서, 알칼리, 알코올, 에테르에는 녹지만, 물에는 용해가 거의 되지 않는 매우 난용성이다.

본 발명에서, 시클로덱스트린(cyclodextrin)은 D-글루코오스가 (1→4) α-글루코시드 결합으로 여러 개 결합하여 고리 모양 구조를 형성한 올리고당으로서. 글루코오스 6분자, 7분자, 8분자로 구성된 것을 각각 α-, β-, γ-시클로덱스트린이라 한다.

본 발명에 있어서, 상기 (ii) 사이클로덱스트린 또는 그의 유도체는 바람직하게는 β-시클로덱스트린(βCyD), 더욱 바람직하게는 D-글루코오스의 2, 3, 및 6 하이드록실 부위가 하이드록시프로필로 치환된 베타사이클로덱스트린(HPβCyD)인 것을 특징으로 하는 국소지방 감소용 조성물을 제공한다.

본 발명의 실시예에서는, α-시클로덱스트린(αCyD)보다 β-시클로덱스트린(βCyD)의 가용화 효과가 우수하며, 하이드록시프로필베타사이클로덱스트린의 LCA가용화 효과가 가장 우수한 것을 확인하였다.

본 발명에 있어서, (iii) 용매, 완충제, 등장화제, pH 조절제, 보존제, 동결건조 보조제 또는 그의 조합으로부터 선택된 부형제를 포함하는 것을 특징으로 하는 국소지방 감소용 조성물을 제공한다. 상기 용매는 물, 바람직하게는 멸균수 또는 증류수인 것을 특징으로 한다.

본 발명에 있어서, 바람직하게는 항염증제, 진통제, 형혈전제, 마취제, 스테로이드, 진정제로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가적인 활성 성분을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 국소지방 감소용 조성물을 제공한다.

본 발명에 있어서, 바람직하게는 국소화된 지방 침적을 비수술적으로 제거하기 위한 제제인 것을 특징으로 하는 국소지방 감소용 조성물을 제공한다. 상기 국소화된 지방 침적은 예컨대 눈 밑, 턱 밑, 팔 밑, 엉덩이, 종아리, 등, 넓적다리, 발목, 위 및 그 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 대상의 부위에 국소화된 지방 침적일 수 있으며, 구체적으로 하안검 지방 헤르니아 (lower eyelid fat herniation), 지방종(lipomas), 지방이상증 (lipodystrophy), 셀룰라이트 관련성 지방 축적 (fat deposits associated with cellulite), 및 그 조합으로 이루어진 군으로부터 선택될 수 있다.

본 발명에 있어서, 바람직하게는 피하주사가 가능한 주사제제, 더욱 바람직하게는 지방용해 주사 제제인 것인 것을 특징으로 하는 국소지방 감소용 조성물을 제공한다.

이하, 본 발명을 구체적으로 설명한다.

데옥시콜산과 리토콜릭산은 담즙산 성분 중 하나로 담즙산 성분은 음식물의 소화 단계에서 지방을 유화시켜 지방의 분해를 돕는 물질이다. 따라서 담즙산 성분의 유화작용으로 인해 지방세포를 파괴할 수 있는 효과를 지니고 있으며, 리토콜릭산 역시 데옥시콜산과 동일한 지방세포 파괴의 효과를 확인하였다. 다만 담즙산의 경우 유화작용 외에도 세포 신호전달의 리간드로도 작용을 하는데, 리토콜릭산의 경우 데옥시콜산과 달리 염증반응을 낮출 수 있는 세포 신호전달의 리간드로 작용하기 ‹š문에 이상반응을 낮출 수 있다. 또한 리토콜릭산의 경우 데옥시콜산과 달리 소수성으로 강염기에서도 물에 잘 녹지 않는 성질을 갖고 있다. 이에 따라 본 발명자는 리토콜릭산을 가용화 하기위해 사이클로덱스트린을 사용하였으며, 사이클로덱스트린으로 가용화한 리토콜릭산 제제는 pH 8.0 이하로 낮출 수 있어 데옥시콜산 제제와 비교하여 통증과 같은 이상반응의 감소 효과가 우수한 국소 지방 감소 제제를 발명하였다.

본 발명에 따른 리토콜릭산 (LCA)는 리터당 0.38 mg으로 매우 난용성이다. 또한 국소 지방 감소용 제제로 사용하기 위해서는 담즙산 성분이 적어도 0.5% (w/w)이상으로 고농도가 요구된다. 리토콜릭산의 경우 데옥시콜산과 비교하여 인터페론 감마 및 종양괴사인자 알파등 면역반응에 관계되는 인자들의 발현을 억제하는 역할을 한다. 따라서 세포괴사 (necrosis)에 따른 지방세포파괴를 일으킴에도 불구하고 데옥시콜산보다 더 낮은 염증반응을 나타낸다.

난용성인 리토콜릭산을 가용화하기 위해 본 발명 연구진은 다양한 용매 및 물질을 사용하였으며, 0.5% (w/w)이상이면서도 pH가 8.0 이하인 수용액상의 제제를 연구한 결과 사이클로덱스트린을 이용하여 리토콜릭산을 가용화 할 수 있었다. 바람직하게는 하이드록시프로필베타사이클로덱스트린(HPβCyD)를 사용하였을 때 가장 안정적으로 리토콜릭산을 가용화 할 수 있었고, 본 조성물에 대한 국소지방 감소효과를 확인하였다.

본 발명은 지방 침적을 감소시키기 위한 비수술적 방법을 제공함으로써 인간을 포함한 동물들에서 국소화된 지방 축적의 문제점을 해결한다. 일 구현예에서, 본 발명은 약제학적으로 허용가능한 제제 중 (i) 리토콜릭산 (lithocholic acid) 또는 그의 염 및 (ii) 사이클로덱스트린 (cyclodextrin) 또는 그의 유도체를 포함한 조성물을 지방-용해 농도의 치료학적 유효량으로 투여하는 단계를 포함한다. 일 구현예에서, 상기 제제는 지방용해 주사의 형태이다.

다른 구현예에서, 본 발명은 제제의 pH를 조절하여 리토콜릭산 (lithocholic acid)의 가용화시킬 뿐만 아니라 지방 감소 활성을 유지하면서도 통증이나 부종과 같은 부작용을 감소시키는 조성물을 제공한다. 일 구현예에서, (i) 리토콜릭산 (lithocholic acid) 또는 그의 염 및 (ii) 사이클로덱스트린 (cyclodextrin) 또는 그의 유도체를 포함하는 상기 조성물은 약 8 미만, 바람직하게는 7 내지 8의, 가잘 바람직하게는 7.5의 pH를 갖도록 제제화될 수 있다.

구체적으로 본 발명의 국소지방 감소용 조성물은 (i) 리토콜릭산 (lithocholic acid) 또는 그의 염 및 (ii) 사이클로덱스트린 (cyclodextrin) 또는 그의 유도체를 조성물 내에 특정 배합비, 바람직하게는 상기 (i) 및 (ii)는 (ii)/(i)의 중량비가 2.0 내지 8.0 인 조성물을 제공하는 것을 특징으로 한다. 상기 리토콜릭산은 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용될 수 있다. 상기에서'약학적으로 허용 가능한'이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때 통상적으로 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 것을 말하며, 이에 한정되지 않으나 예를 들어 나트륨염, 칼륨염 또는 암모늄염일 수 있다.

본 발명은 국소지방 감소용 조성물은 (i) 리토콜릭산 (lithocholic acid) 또는 그의 염 및 (ii) 사이클로덱스트린 (cyclodextrin) 또는 그의 유도체외에 (iii) 용매, 완충제, 등장화제, pH 조절제, 보존제, 동결건조 보조제 또는 그의 조합으로부터 선택된 부형제를 더 포함할 수 있다. 상기 용매는 물, 바람직하게는 멸균수 또는 증류수인 것을 특징으로 한다.

상기 완충제는 약학 제제의 pH를 안정화시키는 약학적으로 허용되는 부형제를 의미한다. 적합한 완충제는 당해 분야에 공지되어 있으며 문헌에서 찾을 수 있다. 바람직한 약학적으로 허용되는 완충제는 히스티딘-완충제, 시트레이트-완충제, 숙시네이트-완충제, 아세테이트-완충제 및 포스페이트-완충제를 포함하나 이로 한정되지는 않는다.

상기 등장화제는 리토콜릭산과 사이클로덱스트린을 포함하는 본 발명의 조성물을 체내에 투여할 때에 삼투압을 적절하게 유지(조절)하는 역할을 하며, 리토콜릭산과 사이클로덱스트린을 용액상에서 더욱 안정화시키는 부수적인 효과도 나타낸다. 등장화제는 약학적으로 허용되는 당, 염 또는 이의 임의의 조합 또는 혼합물 일 수 있으며, 그 예로는 당으로 글루코오스, 또는 수용성 무기염으로 염화나트륨, 염화칼슘, 황산나트륨, 글리세린, 프로필렌글리콜, 분자량 1000 이하의 폴리에틸렌글리콜 등 일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 염화나트륨일수 있다. 이들은 하나 또는 둘 이상의 조합 형태로 사용될 수 있다.

본 발명의 pH 조절제는 주사제의 pH를 조절하는 역할을 하며, 산성 물질, 염기성 물질을 모두 포함한다. 상기 산성 물질에는 염산, 초산, 아디프산, 아스코르빈산, 아스코르빈산 나트륨, 에테르산 나트륨, 사과산, 숙신산, 주석산, 푸마르산, 구연산(시트르산) 등이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 상기 염기성 물질에는 무기 염기(예를 들어, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 탄산나트륨, 탄산수소나트륨, 탄산마그네슘, 탄산칼슘, 산화마그네슘, 암모니아, 합성 히드로탈사이트), 유기 염기 (예를 들어, 염기성 아미노산, 예컨대, 리신, 아르기닌 등, 메글루민 등) 등이 포함되나 이에 제한되지 않는다. 본원 발명에서 상기 pH 조절제는 산성 물질과 염기성 물질이 조성물내에 각각 단독으로 포함될 수 있고, 또는 각각의 물질이 2개 이상 조합되어 사용될 수 있다. 더욱 바람직하게는 본 발명의 pH 조절제는 수산화나트륨 또는/및 염산일 수 있다.

상기 보존제는 약학적으로 허용되는 어떤 보존제 또는 방부제도 사용될 수 있으며, 예컨대, 벤질알코올(benzyl alcohol), 리도카인(lidocaine), 프로카인(procaine) 및 클로로부탄올(chlorobutanol)로 이루어진 군에서 선택될 수 있다. 더욱 바람직하게는 벤질알코올일 수 있다.

본 발명의 조성물은 적절한 양의 물을 첨가함으로써 재구성될 준비가 된 안정한 조성물을 제공하기 위해 동결건조될 수 있다. 따라서, 본 발명은 임의로 약학적으로 허용되는 동결건조 보조제를 추가로 함유할 수 있다. 이렇게 동결건조된 조성물은 적절한 양의 증류수의 첨가로 본 발명의 조성물이 재구성될 수 있다.

본 명세서에 서술된 상기 약제학적 조성물의 제제는 약리학 분야에서 알려진 또는 이후 개발된 임의의 방법에 의해서 제조될 수 있다. 본 발명의 조성물은 경구적으로 또는 비경구적으로 투여될 수 있으나, 바람직하게는 비 경구적으로 투여될 수 있으며, 더욱 바람직하게는 주사 제제로 제조되어 피하 주사될 수 있다.

본 발명의 약리학적 조성물 중 활성 성분, 약제학적으로 허용가능한 부형제, 및 임의의 추가적 성분의 상대적 양은, 치료되는 대상의 정체 (identity), 크기, 및 상태에 따라서, 또한 상기 조성물이 투여되는 경로에 따라서 변할 것이다. 예를 들어, 상기 조성물은 0.1% 내지 100% (w/w)의 활성 성분을 포함할 수 있다.

본 발명에서 "치료학적으로 유효한 양 (therapeutically effective amount)"은 환자에게 투여되는 경우, 질병의 증상을 개선하는 본 발명의 화합물의 양이다. "치료학적으로 유효한 양"을 구성하는 본 발명의 화합물의 양은 상기 화합물, 질병 상태 및 그 심각성, 치료되는 환자의 연령 등에 따라서 변화될 수 있다. 치료학적으로 유효한 양은 자신의 지식 및 본 개시를 고려하여 당 분야에서 통상의 기술을 지닌 자에 의하여 통상적으로 결정될 수 있다.

본 발명에 따르면, 가용화제인 사이클로덱스트린의 추가에 의해 불용성인 리토콜릭산을 pH 8 이하의 낮은 pH 조건에서도 잘 가용화시킬 수 있으며, 상기 리토콜릭산과 사이클로덱스트린의 조합에 의해 종래 데옥시콜산(DCA)와 동등한 국소지방 감소 효과를 가짐에도 종래 데옥시콜산(DCA)에 비해 통증이나 부종과 같은 부작용이 감소되고 염증반응이 완화되는 것을 확인하였다.

도 1 및 도 2는 국소지방 감소용 주사제 또는 용매를 마우스의 좌우 서혜부 지방조직에 국소 주사한 뒤 마이크로CT를 이용하여 지방의 면적을 측정하는 방법을 도식화한 것이다. 도 1은 마우스의 서혜부 지방조직에 시험물질을 국소 주사하기 위한 방법으로서, 마우스 서혜부 부위를 약 2 cm 절개한 뒤, 0.5 cm 간격으로 3부위에 각각 0.2 mL씩 시험물질을 주사하고 봉합하였다. 왼쪽 서혜부 지방조직에는 시험물질을 주사하고, 오른쪽 서혜부 지방조직에는 용매를 주사하여 왼쪽과 오른쪽 지방면적을 백분율로 산출하였다. 주사 전, 후의 지방면적 백분율을 비교하여 지방조직의 감소를 평가하였다. 도 2는 지방조직의 면적을 측정하기위한 micro CT측정의 과정으로 서혜부 지방조직의 면적만을 측정하였다. 빨간색은 왼쪽 서혜부 지방조직을 나타내고 녹색은 오른쪽 서혜부 지방조직을 나타내어 각 서혜부 지방조직의 면적을 micro CT를 이용하여 측정하였다.
도 3은 마이크로CT를 촬영하여 측정한 서혜부 지방 조직의 면적과 감소한 지방 면적을 비교한 그래프이다.
도 4a 내지 4d 는 DCA 1% 와 용매 및 LCA 1%의 용매인 하이드록시프로필베타사이클로덱스트린 (HPβCyD) 5%의 주사된 영역의 조직학적 검사를 나타낸 일련의 이미지들이다.
도 5a 내지 5b는 사람 T 림프구 세포주인 Jurkat 세포를 사용한 것으로 도 5a는 리토콜릭산 (LCA), 데옥시콜산 (DCA), 케노데옥시콜산 (CDCA), 콜릭산 (CA)를 농도별로 처리한 뒤, Jurkat 세포의 생존율 그래프이다. 유속세포분석기 (FACS)를 이용하여 죽은 세포를 측정하였다. 도 5b는 실시간 중합효소 연쇄반응 (RT-PCR)을 이용하여 리토콜릭산 (LCA), 데옥시콜산 (DCA), 케노데옥시콜산 (CDCA), 콜릭산 (CA)을 처리했을 때 인터페론 감마 (IFN-γ)의 발현양을 비교한 그래프이다.

이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하기로 한다. 이들 실시예는 단지 본 발명을 예시하기 위한 것이므로, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.

실시예 1. 리토콜릭산(LCA)의 가용화

1 % (w/w)농도의 리토콜린산(LCA) 를 가용화 하기 위하여 다양한 농도와 종류의 사이클로덱스트린을 테스트하였다. 구체적으로 200 mL의 볼륨플라스크에 증류수를 적당량 채우고 각각 2%, 8% w/w 농도의 α-시클로덱스트린(αCyD), β-시클로덱스트린(βCyD), 하이드록시프로필베타사이클로덱스트린(HPβCyD)을 녹였다. 2%는 각각의 사이클로덱스트린을 4 g, 8%는 16g이 되도록 첨가 뒤 교반 하였다. 사이클로덱스트린을 전부 녹인 후에 리토콜릭산을 2 g 첨가하고 교반하여 1 %의 w/w농도가 되도록 녹인 뒤, 염산을 사용하여 pH를 7.5까지 낮춘 후 볼륨플라스크의 표선을 증류수로 맞추었다. 상기와 같이 리토콜릭산을 가용화 후, 2주일 후 성상을 확인하였다. 하기 표 1에서, αCyD은 α-시클로덱스트린, βCyD는 β-시클로덱스트린, HPβCyD는 베타사이클로덱스트린을 의미한다.

성분명	αCyD		βCyD		HPβCyD
농도	2%	8%	2%	8%	2%	8%
성상(제조 후)	약간혼탁	약간혼탁	투명	투명	투명	투명
성상(제조 2주 후)	약간혼탁	침전	투명	침전	투명	투명

그 결과, α-시클로덱스트린(αCyD)보다 β-시클로덱스트린(βCyD)의 가용화 효과가 우수하였고, 하이드록시프로필베타사이클로덱스트린(HPβCyD)의 LCA가용화 효과가 가장 우수하였다. 따라서, 이후 실험에서는 하이드록시프로필베타사이클로덱스트린을 사용하였다.

실시예 2. 대조약과 본 발명의 조성물의 제조

국소지방감소효과를 확인하기 위해 하기와 같은 조성으로 대조약과 본 발명의 조성물을 제조한 후 국소지방감소효과를 확인하였다. 하기와 같은 비율의 조성물을 제조하기 위해 실시예 1과 같이, 볼륨플라스크를 이용하여 버퍼 역활을 하는 이염기 소듐 포스페이트, 등장화제인 염화나트륨을 먼저 녹였다. 조성예 1인 대조약의 경우 상기 성분에서 데옥시콜린산을 첨가한 뒤에 소량의 염산으로 pH를 8.2로 적정한 후 표선을 맞추었다. 조성예 2 내지 4의 경우 이염기 소듐 포스페이트와 염화나트륨을 녹인 후 사이클로덱스트린 성분을 각각 첨가하였다. 용해를 확인한 후, 리토콜릭산을 넣어 가용화 하였으며 소량의 염산으로 pH를 7.5로 적정한 후 표선을 맞추었다.

(조성예 1) 대조약 DCA 1%

성분명	% (w/w)
데옥시콜린산(Deoxycholic acid)	1
이염기 소듐 포스페이트(Dibasic sodium phosphate)	0.142
염화나트룸(sodium choliride)	0.9
증류수 (DW)	97.958

pH: 8.2

(조성예 2) LCA 1%, HPβCyD 5%

성분명	% (w/w)
리토콜릭산(Lithocholic acid)	1
하이드록시프로필베타사이클로덱스트린 (HPβCyD)	5
이염기 소듐 포스페이트(Dibasic sodium phosphate)	0.142
염화나트룸(sodium choliride)	0.9
증류수 (DW)	92.958

pH: 7.5

(조성예 3) LCA 1%, HPβCyD 10%

성분명	% (w/w)
리토콜릭산(Lithocholic acid)	1
하이드록시프로필베타사이클로덱스트린 (HPβCyD)	10
이염기 소듐 포스페이트(Dibasic sodium phosphate)	0.142
염화나트룸(sodium choliride)	0.9
증류수 (DW)	87.958

pH: 7.5

(조성예 4) LCA 1%, βCyD 5%

성분명	% (w/w)
리토콜릭산(Lithocholic acid)	1
베타사이클로덱스트린 (βCyD)	5
이염기 소듐 포스페이트(Dibasic sodium phosphate)	0.142
염화나트룸(sodium choliride)	0.9
증류수 (DW)	92.958

pH: 7.5

실시예 3. 생체내(in-vivo) 에서 국소 지방 감소 평가

10주령의 SD랫드를 입수하여 무작위로 4군당 5수씩 배치한다. 투여 전, 각 개체의 서혜부 지방 조직의 지방면적을 측정한다. 물질을 투여하기 위해, 서혜부 피부를 절개하고 지방조직을 노출한 뒤 좌측의 지방조직에는 각 조성예에 따른 조성물을 우측에는 주성분인 데옥시콜린산 혹은 리토콜릭산을 제외하고 용매 성분만을 투여한다. 각각 0.2 mL씩 3군데 투여하고 피부를 봉합한다. 투여하고 30일 후 각 개체의 서혜부 지방조직의 지방면적을 다시 측정하여 지방면적의 변화를 평가한다.

마이크로 CT장비는 Quantum FX micro CT (Perkinelmer)를 사용하였으며 좌/우 측의 지방조직 면적을 따로 평가하였다.

각 개체별로 좌측과 우측의 지방조직의 크기가 다르기 때문에 하기와 같은 수식으로 지방면적을 비교할 수 있다.

(좌측의 지방면적) / (우측의 지방면적) X 100 (%)

도 1 및 도 2는 국소지방 감소용 주사제 또는 용매를 마우스의 좌우 서혜부 지방조직에 국소 주사한 뒤 마이크로CT를 이용하여 지방의 면적을 측정하는 방법을 도식화한 것이다.

하기 표 6과 도 3에서 보여지듯이, 데옥시콜산 및 리토콜릭산 모두 투여 전 보다 투여 후에 좌(Left)/우측(Right)의 지방면적 퍼센트가 감소하였다. 이는 좌측에 투여한 데옥시콜산 혹은 리토콜릭산에 의해 지방조직이 감소되었음을 의미한다.

실시예 4. 조직학적 검사

실험약물을 주사한 뒤, 염증의 정도 및 지방조직 파괴의 메커니즘을 확인하고자 시험을 마친 랫드를 희생하여 조직을 검사하였다. 주사 된 영역의 조직을 절개하고 포르말린으로 고정 후 H&E염색을 진행하였다.

염증반응의 정도를 비교하고자 땀샘, 혈관, 지방조직의 형태가 온전하게 유지되고 있는지와 함께 염증세포의 유무로 판단하였다. 경증은 조직의 형태가 온전하고 염증세포가 드물게 나타나는 경우, 중등증은 조직에 손상이 관찰되며 염증세포가 나타나는 경우, 중증은 기능조직의 형태가 손상되며 염증세포가 크게 증가한 경우와 함께 염증세포가 조직으로 이동하는 것이 관찰되었을 때, 극심은 중증과 같은 소견사항과 함께 부종이 관찰되었을 때로 분류하였다.

도 4에서 보이듯, 리토콜릭산과 데옥시콜산을 투여한 조직 모두 지방조직의 세포가 파괴된 것을 확인하였으며, 리토콜릭산의 염증반응의 경우 중등증으로 평가되었으나 데옥시콜산의 경우 극심하게 파괴되어 부종 또한 발견할 수 있었다. 도 4a 및 4c의 경우, 흰색의 구형으로 나타나는 지방세포가 서로 세포벽을 맞닿아 치밀하게 조직을 형성하고 있으나, 도 4b 및 4d와 같이 지방세포가 파괴된 경우 지방세포사이의 공간이 크게 증가하고 지방세포벽이 무너져 있는 형태를 현미경으로 관찰할 수 있다. 또한 도 4b 및 4d의 현미경 사진에서 염증세포를 화살표로 표시하였고, 리토콜릭산을 주사한 도 4d의 염증세포가 데옥시콜산을 주사한 도 4b의 염증세포보다 적음을 관찰하였다. 이는 실시예 5에서 나타나는 면역세포가 분비하여 면역반응을 유발하는 인자인 인터페론 감마의 발현양 감소 와도 일치한 결과이다.

실시예 5. 인터페론 감마 발현 양 비교

리토콜릭산과 데옥시콜산, 케노데옥시콜산 그리고 콜산에 대하여 면역반응을 유발하는 인자를 비교하고자 하였다. 사람 T 림프구 세포종인 Jurkat T 세포를 사용하여 각 성분을 농도별로 24시간 처리한 뒤 세포의 생존율 결과는 도 5a와 같다. Jurkat T 세포에 대하여 담즙산 성분의 세포독성 효과를 확인할 수 있었다. 세포 독성 결과를 참고하여 0.005%의 농도에서 각 성분의 인터페론 감마 mRNA의 발현양을 RT-PCR로 비교하였다. 도 5b의 그래프에서 보여지듯이, 리토콜릭산을 처리하였을 때 인터페론 감마의 mRNA 발현양의 가장 낮았다. 이는 리토콜릭산에 의해 염증반응의 매개체인 인터페론 감마의 양이 감소됨을 의미하며 따라서, 국소지방 감소제로 사용하였을 때 더 낮은 염증반응을 나타냄을 의미한다.

본 발명에 대해 상기 실시예를 참조하고 설명하였으나, 이는 예시적인 것에 불과하며, 본 발명에 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자라면 이로부터 다양한 변형 및 균등한 타 실시예가 가능하다는 점을 이해할 것이다. 따라서 본 발명의 진정한 기술적 보호범위는 첨부된 특허 청구 범위의 기술적 사항에 의해 정해져야 할 것이다.

Claims (10)

1. (i) 리토콜릭산 (lithocholic acid) 또는 그의 염 및 (ii) 사이클로덱스트린 (cyclodextrin) 또는 그의 유도체를 포함하며, pH 8 이하의 pH를 가지는 것을 특징으로 하는 국소지방 감소용 조성물.
2. 제 1항에 있어서, 데옥시콜산(DCA)에 비해 통증이나 부종과 같은 부작용이 감소되고 염증반응이 완화되는 것을 특징으로 하는 국소지방 감소용 조성물.
3. 제 1항에 있어서, 상기 (i) 리토콜릭산 또는 그의 염을 0.5 % 내지 2.0 % (w/w) 중량으로 함유하는 것을 특징으로 하는 국소지방 감소용 조성물.
4. 제 1항에 있어서, 상기 (ii) 사이클로덱스트린 또는 그의 유도체를 1.0 % 내지 10.0 %의 (w/w) 중량으로 함유하는 것을 특징으로 하는 국소지방 감소용 조성물.
5. 제 1항에 있어서, 상기 (i) 리토콜릭산 또는 그의 염은 나트륨염, 칼륨염 또는 암모늄염인 것을 특징으로 하는 국소지방 감소용 조성물.
6. 제 1항에 있어서, 상기 (ii) 사이클로덱스트린 또는 그의 유도체는 하이드록시프로필베타사이클로덱스트린(HPβCyD)인 것을 특징으로 하는 국소지방 감소용 조성물.
7. 제 1항에 있어서, (iii) 용매, 완충제, 등장화제, pH 조절제, 보존제, 동결건조 보조제 또는 그의 조합으로부터 선택된 부형제를 포함하는 것을 특징으로 하는 국소지방 감소용 조성물.
8. 제 1항에 있어서, 항염증제, 진통제, 형혈전제, 마취제, 스테로이드, 진정제로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 추가적인 활성 성분을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 국소지방 감소용 조성물.
9. 제 1항에 있어서, 국소화된 지방 침적을 비수술적으로 제거하기 위한 제제인 것을 특징으로 하는 국소지방 감소용 조성물.
10. 제 1항에 있어서, 지방용해 주사 제제인 것인 것을 특징으로 하는 국소지방 감소용 조성물.

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