KR20220081365A - 아데노-연관 바이러스 벡터 약제학적 조성물 및 방법 - Google Patents

아데노-연관 바이러스 벡터 약제학적 조성물 및 방법 Download PDF

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KR20220081365A
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크리스틴 오베리
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리젠엑스바이오 인크.
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Abstract

본원에는 재조합 아데노-연관 바이러스(AAV), 염 부형제 또는 완충제, 당 및 계면활성제를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다. 본원에는 또한 치료 유효량의 상기 약제학적 조성물을 이를 필요로 하는 대상체에게 투여함으로써 대상체의 질환을 치료 또는 예방하는 방법이 제공된다.

Description

아데노-연관 바이러스 벡터 약제학적 조성물 및 방법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2019년 10월 7일 출원된 미국 가출원 번호 제62/911,968호의 이익을 주장하며, 이의 내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
전자적으로 제출된 서열 목록에 대한 참조
본 출원은 2020년 9월 28일 생성되고 크기가 97,652 바이트인 "Sequence_Listing_12656-124-228.TXT"라는 명칭의 텍스트 파일로서 본 출원과 함께 제출된 서열 목록을 참조로 포함한다.
데펜도바이러스(Dependovirus)로 지정된 파르보바이러스(Parvoviridae) 과의 구성원인 아데노-연관 바이러스(AAV)는 대략 4.7 킬로베이스(kb) 내지 6 kb의 단일 가닥 선형 DNA 게놈을 갖는 외피가 없는 작은 20면체 바이러스이다. 비-병원성, 분열 및 비분열 세포를 둘 다 포함한 광범위한 숙주 및 세포 유형 향성 범위의 감염성, 및 장기간 이식유전자 발현을 확립하는 능력의 특성은 AAV를 유전자 요법을 위한 매력적인 도구로 만든다(예를 들어,
Figure pct00001
, 2005, Virology Journal, 2:43).
AAV 제품은 종종 제조, 수송, 보관, 및 투여 동안 제품을 안정화하기 위해 다양한 부형제로 구성된 완충액에서 보관된다. 그러나 AAV 생물치료제는 특정 지역으로의 운송이 이러한 온도에서 적절한 냉장 보관을 제공할 수 없을지라도, 재료의 분해 및 잠재적인 해동에 대한 부정적인 효과에 대하여 안전성을 위해 -80℃에서 분포된다. 냉동고 온도를 ≤-60℃ 이하에서 유지하는 것은 어렵고 최대 -20℃와 같은 더 높은 동결 온도에 강력하고, 다중 동결-해동 이탈에 안정한 제형을 제공하는 것은 물류 관점에서 바람직하다. 모든 임상 현장에 -80℃ 냉동고가 있는 것은 아니며 이 요건은 제품을 광범위한 임상 현장에 분배하는 능력에 부정적으로 영향을 미친다. 따라서, 임상 현장에서 해동하고 제품을 환자에게 투약하기 위한 예정일까지 냉장고에서 유지할 수 있도록 냉장 조건에서 짧은 기간(최대 12 개월) 동안 안정한 제형을 갖는 것이 바람직하다.
제품 안정성을 보장하기 위한 목표 사양 범위 내에서 다양한 완충액 특성을 유지하는 것은 중요하지만, -80℃에서 보관은 공급망 및 분배에 영향을 미친다. 저속 동결 동안 물의 결정화는 생물제제의 안정성에 영향을 미칠 수 있는 부형제의 농도를 초래할 수 있다. 생물제제의 안정성에 영향을 미칠 수 있는 상 분리 또는 pH 이동이 또한 발생할 수 있다. 임의의 제약품의 상업화를 위해, 장기간 동안 안정성을 제공하는 제형을 식별하는 것이 유리할 것이다. -20℃에서 냉동 보관시 냉동고 온도 이탈, 변동성, 또는 -20℃ 냉동고에서 임시 보관(최대 18 개월)을 고려하거나, 투약 전 클리닉에서 단기간 보관(2-8℃에서 최대 12 개월)을 허용하는 냉장 조건, 제조 및 라벨링을 허용하는 실온에서, 또는 충전 및 라벨링 작업을 위한 원료의약품 및 의약품의 해동을 허용하는 다중 자유-해동 주기 하에 안정한 제형을 식별하는 것이 추가로 유리할 것이다.
본 개시내용은 재조합 아데노-연관 바이러스(AAV), 완충제, 이온 염, 수크로스, 및 계면활성제 예컨대 폴록사머 188을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 수크로스는 조성물의 결정화를 방지하고 동결 및 액체 상태 동안 pH 6 내지 9를 유지하는 농도로 제공된다.
일부 구현예에서, AAV는 AAV1, AAV2, AAV2tYF, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, 및 AAVrh10, AAV.rh20, AAV.rh39, AAV.Rh74, AAV.RHM4-1, AAV.hu37, AAV.Anc80, AAV.Anc80L65, rAAV.7m8, AAV.PHP.B, AAV.PHP.eB, AAV2.5, AAV2tYF, AAV3B, AAV.LK03, AAV.HSC1, AAV.HSC2, AAV.HSC3, AAV.HSC4, AAV.HSC5, AAV.HSC6, AAV.HSC7, AAV.HSC8, AAV.HSC9, AAV.HSC10 , AAV.HSC11, AAV.HSC12, AAV.HSC13, AAV.HSC14, AAV.HSC15, 또는 AAV.HSC16으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아데노-연관 바이러스 혈청형의 구성요소를 포함한다. 일부 구현예에서, rAAV는 AAV8 또는 AAV9 혈청형의 캡시드 단백질을 포함한다.
일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 아미노산을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용은 재조합 아데노-연관 바이러스(AAV), 이온 염 부형제 또는 완충제, 수크로스, 및 폴록사머 188을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 일부 구현예에서, 이온 염 부형제 또는 완충제는 일염기성 인산 칼륨, 인산 칼륨, 염화 나트륨, 인산 나트륨 이염기성 무수물, 인산 나트륨 육수화물, 인산 나트륨 일염기성 일수화물, 트로메타민, 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄 하이드로클로라이드(Tris-HCl), 아미노산, 히스티딘, 히스티딘 하이드로클로라이드(히스티딘-HCl), 숙신산 나트륨, 시트르산 나트륨, 아세트산 나트륨, 및 (4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄술폰산)(HEPES), 황산 나트륨, 황산 마그네슘, 염화 마그네슘 6-수화물, 황산 칼슘, 염화 칼륨, 염화 칼슘, 시트르산 칼슘으로 이루어진 군으로부터의 하나 이상의 구성요소일 수 있다.
일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 150 mM, 약 145 mM, 약 140 mM, 약 135 mM, 약 130 mM, 약 125 mM, 약 120 mM, 약 115 mM, 또는 약 110 mM 이하의 이온 강도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 150 mM, 약 145 mM, 약 140 mM, 약 135 mM, 약 130 mM, 약 125 mM, 약 120 mM, 약 115 mM, 또는 약 110 mM 이하의 완충제 이온 강도를 갖는다.
일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 150 mM, 145 mM, 140 mM, 135 mM, 130 mM, 125 mM, 120 mM, 115 mM, 또는 110 mM 이하의 이온 강도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 150 mM, 145 mM, 140 mM, 135 mM, 130 mM, 125 mM, 120 mM, 115 mM, 또는 110 mM 이하의 완충제 이온 강도를 갖는다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 60 mM 내지 115 mM의 이온 강도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 60 mM 내지 100 mM의 이온 강도를 갖는다. 구체적 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 60 mM의 이온 강도를 갖는다. 구체적 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 65 mM의 이온 강도를 갖는다. 구체적 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 70 mM의 이온 강도를 갖는다. 구체적 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 75 mM의 이온 강도를 갖는다. 구체적 구현예에서, 약제학적 약 80 mM의 이온 강도를 갖는다. 구체적 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 85 mM의 이온 강도를 갖는다. 구체적 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 90 mM의 이온 강도를 갖는다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 30 mM 내지 100 mM의 이온 강도를 갖는다. 구체적 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 30 mM의 이온 강도를 갖는다. 구체적 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 35 mM의 이온 강도를 갖는다. 구체적 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 40 mM의 이온 강도를 갖는다. 구체적 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 45 mM의 이온 강도를 갖는다. 구체적 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 50 mM의 이온 강도를 갖는다. 구체적 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 55 mM의 이온 강도를 갖는다. 구체적 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 60 mM의 이온 강도를 갖는다. 구체적 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 65 mM의 이온 강도를 갖는다. 구체적 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 70 mM의 이온 강도를 갖는다. 구체적 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 75 mM의 이온 강도를 갖는다. 구체적 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 80 mM의 이온 강도를 갖는다. 구체적 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 85 mM의 이온 강도를 갖는다. 구체적 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 90 mM의 이온 강도를 갖는다. 구체적 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 95 mM의 이온 강도를 갖는다. 구체적 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 100 mM의 이온 강도를 갖는다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 60 mM 내지 115 mM의 이온 강도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 65 mM 내지 95 mM의 이온 강도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 70 mM 내지 90 mM의 이온 강도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 75 mM 내지 85 mM의 이온 강도를 갖는다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 30 mM 내지 100 mM의 이온 강도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 35 mM 내지 95 mM의 이온 강도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 40 mM 내지 90 mM의 이온 강도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 45 mM 내지 85 mM의 이온 강도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 50 mM 내지 80 mM의 이온 강도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 55 mM 내지 75 mM의 이온 강도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 60 mM 내지 70 mM의 이온 강도를 갖는다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.2 g/L의 농도로 염화 칼륨을 포함한다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.2 g/L의 농도로 일염기성 인산 칼륨을 포함한다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 5.84 g/L의 농도로 염화 나트륨을 포함한다, 및
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 1.15 g/L의 농도로 인산 나트륨 이염기성 무수물을 포함한다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 3%(중량/부피, 30 g/L) 내지 18%(중량/부피, 180 g/L)의 농도로 수크로스를 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 4%(중량/부피, 30 g/L) 내지 6%(중량/부피, 180 g/L)의 농도로 수크로스를 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 3%(중량/부피, 30 g/L)의 농도로 수크로스를 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 3%(중량/부피, 30 g/L)의 농도로 수크로스를 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 4%(중량/부피, 40 g/L)의 농도로 수크로스를 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 5%(중량/부피, 50 g/L)의 농도로 수크로스를 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 6%(중량/부피, 60 g/L)의 농도로 수크로스를 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 7%(중량/부피, 70 g/L)의 농도로 수크로스를 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 8%(중량/부피, 80 g/L)의 농도로 수크로스를 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 9%(중량/부피, 90 g/L)의 농도로 수크로스를 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 10%(중량/부피, 100 g/L)의 농도로 수크로스를 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 11%(중량/부피, 110 g/L)의 농도로 수크로스를 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 12%(중량/부피, 120 g/L)의 농도로 수크로스를 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 13%(중량/부피, 130 g/L)의 농도로 수크로스를 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 14%(중량/부피, 140 g/L)의 농도로 수크로스를 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 15%(중량/부피, 150 g/L)의 농도로 수크로스를 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 16%(중량/부피, 160 g/L)의 농도로 수크로스를 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 17%(중량/부피, 170 g/L)의 농도로 수크로스를 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 18%(중량/부피, 180 g/L)의 농도로 수크로스를 포함한다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.001%(중량/부피, 0.01 g/L)의 농도로 폴록사머 188을 포함한다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.0005%(중량/부피, 0.005 g/L) 내지 0.05%(중량/부피, 0.5 g/L의 농도로 폴록사머 188을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.0001%(중량/부피, 0.001 g/L) 내지 0.01%(중량/부피, 0.1 g/L)의 농도로 폴록사머 188을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.0005%(중량/부피, 0.005 g/L) 내지 0.001%(중량/부피, 0.01 g/L)의 농도로 폴록사머 188을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.001%(중량/부피, 0.01 g/L) 내지 0.05%(중량/부피, 0.5 g/L)의 농도로 폴록사머 188을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.0005%(중량/부피, 0.005 g/L)의 농도로 폴록사머 188을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.0006%(중량/부피, 0.006 g/L)의 농도로 폴록사머 188을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.0007%(중량/부피, 0.007 g/L)의 농도로 폴록사머 188을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.0008%(중량/부피, 0.008 g/L)의 농도로 폴록사머 188을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.0009%(중량/부피, 0.009 g/L)의 농도로 폴록사머 188을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.001%(중량/부피, 0.01 g/L)의 농도로 폴록사머 188을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.002%(중량/부피, 0.02 g/L)의 농도로 폴록사머 188을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.003%(중량/부피, 0.03 g/L)의 농도로 폴록사머 188을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.004%(중량/부피, 0.04 g/L)의 농도로 폴록사머 188을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.005%(중량/부피, 0.05 g/L)의 농도로 폴록사머 188을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.01%(중량/부피, 0.1 g/L)의 농도로 폴록사머 188을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.05%(중량/부피, 0.5 g/L)의 농도로 폴록사머 188을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용은 재조합 아데노-연관 바이러스(AAV), 이온 염 부형제 또는 완충제, 수크로스, 및 계면활성제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 일부 구현예에서, 이온 염 부형제 또는 완충제는 일염기성 인산 칼륨, 인산 칼륨, 염화 나트륨, 인산 나트륨 이염기성 무수물, 인산 나트륨 육수화물, 인산 나트륨 일염기성 일수화물, 트로메타민, 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄 하이드로클로라이드(Tris-HCl), 아미노산, 히스티딘, 히스티딘 하이드로클로라이드(히스티딘-HCl), 숙신산 나트륨, 시트르산 나트륨, 아세트산 나트륨, 및 (4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄술폰산)(HEPES), 황산 나트륨, 황산 마그네슘, 염화 마그네슘 6-수화물, 황산 칼슘, 염화 칼륨, 염화 칼슘, 시트르산 칼슘으로 이루어진 군으로부터의 하나 이상의 구성요소일 수 있다. 일부 구현예에서, 계면활성제는 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 및 폴리소르베이트 80으로 이루어진 군으로부터의 하나 이상의 구성요소일 수 있다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.0005%(중량/부피, 0.005 g/L) 내지 0.05%(중량/부피, 0.5 g/L의 농도로 폴리소르베이트 20을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.0001%(중량/부피, 0.001 g/L) 내지 0.01%(중량/부피, 0.1 g/L)의 농도로 폴리소르베이트 20을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.0005%(중량/부피, 0.005 g/L) 내지 0.001%(중량/부피, 0.01 g/L)의 농도로 폴리소르베이트 20을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.001%(중량/부피, 0.01 g/L) 내지 0.05%(중량/부피, 0.5 g/L)의 농도로 폴리소르베이트 20을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.0005%(중량/부피, 0.005 g/L)의 농도로 폴리소르베이트 20을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.0006%(중량/부피, 0.006 g/L)의 농도로 폴리소르베이트 20을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.0007%(중량/부피, 0.007 g/L)의 농도로 폴리소르베이트 20을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.0008%(중량/부피, 0.008 g/L)의 농도로 폴리소르베이트 20을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.0009%(중량/부피, 0.009 g/L)의 농도로 폴리소르베이트 20을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.001%(중량/부피, 0.01 g/L)의 농도로 폴리소르베이트 20을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.002%(중량/부피, 0.02 g/L)의 농도로 폴리소르베이트 20을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.003%(중량/부피, 0.03 g/L)의 농도로 폴리소르베이트 20을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.004%(중량/부피, 0.04 g/L)의 농도로 폴리소르베이트 20을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.005%(중량/부피, 0.05 g/L)의 농도로 폴리소르베이트 20을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.01%(중량/부피, 0.1 g/L)의 농도로 폴리소르베이트 20을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.05%(중량/부피, 0.5 g/L)의 농도로 폴리소르베이트 20을 포함한다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.0005%(중량/부피, 0.005 g/L) 내지 0.05%(중량/부피, 0.5 g/L의 농도로 폴리소르베이트 80을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.0001%(중량/부피, 0.001 g/L) 내지 0.01%(중량/부피, 0.1 g/L)의 농도로 폴리소르베이트 80을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.0005%(중량/부피, 0.005 g/L) 내지 0.001%(중량/부피, 0.01 g/L)의 농도로 폴리소르베이트 80을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.001%(중량/부피, 0.01 g/L) 내지 0.05%(중량/부피, 0.5 g/L)의 농도로 폴리소르베이트 80을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.0005%(중량/부피, 0.005 g/L)의 농도로 폴리소르베이트 80을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.0006%(중량/부피, 0.006 g/L)의 농도로 폴리소르베이트 80을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.0007%(중량/부피, 0.007 g/L)의 농도로 폴리소르베이트 80을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.0008%(중량/부피, 0.008 g/L)의 농도로 폴리소르베이트 80을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.0009%(중량/부피, 0.009 g/L)의 농도로 폴리소르베이트 80을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.001%(중량/부피, 0.01 g/L)의 농도로 폴리소르베이트 80을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.002%(중량/부피, 0.02 g/L)의 농도로 폴리소르베이트 80을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.003%(중량/부피, 0.03 g/L)의 농도로 폴리소르베이트 80을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.004%(중량/부피, 0.04 g/L)의 농도로 폴리소르베이트 80을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.005%(중량/부피, 0.05 g/L)의 농도로 폴리소르베이트 80을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.01%(중량/부피, 0.1 g/L)의 농도로 폴리소르베이트 80을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.05%(중량/부피, 0.5 g/L)의 농도로 폴리소르베이트 80을 포함한다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 7.4이다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 6.0 내지 8.8이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 6.0 내지 9.0이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 6.0이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 6.1이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 6.2이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 6.3이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 6.4이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 6.5이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 6.6이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 6.7이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 6.8이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 6.9이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 7.0이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 7.1이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 7.2이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 7.3이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 7.4이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 7.5이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 7.6이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 7.7이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 7.8이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 7.9이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 8.0이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 8.1이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 8.2이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 8.3이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 8.4이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 8.5이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 8.6이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 8.7이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 8.8이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 8.9이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 9.0이다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 7.4이다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 6.0 내지 8.8이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 6.0 내지 9.0이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 6.0이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 6.1이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 6.2이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 6.3이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 6.4이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 6.5이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 6.6이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 6.7이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 6.8이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 6.9이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 7.0이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 7.1이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 7.2이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 7.3이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 7.4이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 7.5이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 7.6이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 7.7이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 7.8이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 7.9이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 8.0이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 8.1이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 8.2이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 8.3이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 8.4이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 8.5이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 8.6이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 8.7이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 8.8이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 8.9이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 9.0이다.
본원에 사용된 바와 같고 달리 명시되지 않는 한, 용어 "약"은 주어진 값 또는 범위의 플러스 또는 마이너스 10% 이내를 의미한다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 소수성으로-코팅된 유리 바이알 내에 있다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 사이클로 올레핀 중합체(COP) 바이알 내에 있다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 Daikyo Crystal Zenith®(CZ) 바이알 내에 있다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 TopLyo 코팅된 바이알 내에 있다.
특정 구현예에서, 본원에는 (a) 재조합 AAV, (b) 0.2 g/L 농도의 염화 칼륨, (c) 0.2 g/L 농도의 일염기성 인산 칼륨, (d) 5.84 g/L 농도의 염화 나트륨, (e) 1.15 g/L 농도의 인산 나트륨 이염기성 무수물, (f) 4% 중량/부피(40 g/L) 농도의 수크로스, (g) 0.001% 중량/부피(0.01 g/L) 농도의 폴록사머 188, 및 (h) 물로 이루어진 약제학적 조성물이 개시되어 있으며, 여기서 재조합 AAV는 AAV8이다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 벡터 게놈 농도(VGC)는 3 x 109 GC/mL, 1 x 1010 GC/mL, 1.2 x 1010 GC/mL, 1.6 x 1010 GC/mL, 4 x 1010 GC/mL, 6 x 1010 GC/mL, 2 x 1011 GC/mL, 2.4 x 1011 GC/mL, 2.5 x 1011 GC/mL, 3 x 1011 GC/mL, 3.2 x 1011 GC/mL, 6.2 x 1011 GC/mL, 6.5 x 1011 GC/mL, 1 x 1012 GC/mL, 3 x 1012 GC/mL, 2 x 1013 GC/mL, 또는 3 x 1013 GC/mL이다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 벡터 게놈 농도(VGC)는 3 x 109 GC/mL, 4 x 109 GC/mL, 5 x 109 GC/mL, 6 x 109 GC/mL, 7 x 109 GC/mL, 8 x 109 GC/mL, 9 x 109 GC/mL, 1 x 1010 GC/mL, 2 x 1010 GC/mL, 3 x 1010 GC/mL, 4 x 1010 GC/mL, 5 x 1010 GC/mL, 6 x 1010 GC/mL, 7 x 1010 GC/mL, 8 x 1010 GC/mL, 9 x 1010 GC/mL, 1 x 1011 GC/mL, 2 x 1011 GC/mL, 3 x 1011 GC/mL, 4 x 1011 GC/mL, 5 x 1011 GC/mL, , 6 x 1011 GC/mL, 7 x 1011 GC/mL, 8 x 1011 GC/mL, 9 x 1011 GC/mL, 1 x 1012 GC/mL, 2 x 1012 GC/mL, 3 x 1012 GC/mL, 4 x 1012 GC/mL, 5 x 1012 GC/mL, 6 x 1012 GC/mL, 7 x 1012 GC/mL, 8 x 1012 GC/mL, 9 x 1012 GC/mL, 1 x 1013 GC/mL, 1 x 1013 GC/mL, 2 x 1013 GC/mL, 또는 3 x 1013 GC/mL이다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 벡터 게놈 농도(VGC)는 약 3 x 109 GC/mL, 약 1 x 1010 GC/mL, 약 1.2 x 1010 GC/mL, 약 1.6 x 1010 GC/mL, 약 4 x 1010 GC/mL, 약 6 x 1010 GC/mL, 약 2 x 1011 GC/mL, 약 2.4 x 1011 GC/mL, 약 2.5 x 1011 GC/mL, 약 3 x 1011 GC/mL, 약 3.2 x 1011 GC/mL, 약 6.2 x 1011 GC/mL, 약 6.5 x 1011 GC/mL, 약 1 x 1012 GC/mL, 약 3 x 1012 GC/mL, 약 2 x 1013 GC/mL 또는 약 3 x 1013 GC/mL이다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 벡터 게놈 농도(VGC)는 약 3 x 109 GC/mL, 4 x 109 GC/mL, 5 x 109 GC/mL, 6 x 109 GC/mL, 7 x 109 GC/mL, 8 x 109 GC/mL, 9 x 109 GC/mL, 약 1 x 1010 GC/mL, 약 2 x 1010 GC/mL, 약 3 x 1010 GC/mL, 약 4 x 1010 GC/mL, 약 5 x 1010 GC/mL, 약 6 x 1010 GC/mL, 약 7 x 1010 GC/mL, 약 8 x 1010 GC/mL, 약 9 x 1010 GC/mL, 약 1 x 1011 GC/mL, 약 2 x 1011 GC/mL, 약 3 x 1011 GC/mL, 약 4 x 1011 GC/mL, 약 5 x 1011 GC/mL, , 약 6 x 1011 GC/mL, 약 7 x 1011 GC/mL, 약 8 x 1011 GC/mL, 약 9 x 1011 GC/mL, 약 1 x 1012 GC/mL, 약 2 x 1012 GC/mL, 약 3 x 1012 GC/mL, 약 4 x 1012 GC/mL, 약 5 x 1012 GC/mL, 약 6 x 1012 GC/mL, 약 7 x 1012 GC/mL, 약 8 x 1012 GC/mL, 약 9 x 1012 GC/mL, 약 1 x 1013 GC/mL, 약 1 x 1013 GC/mL, 약 2 x 1013 GC/mL, 약 3 x 1013 GC/mL이다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 동결/해동 주기에 대해 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정하다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 안정성은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 감염성이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 높다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 바이러스 감염성은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다. 특정 구현예에서, 감염성은 동결/해동 주기 전 또는 후에 측정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 응집이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 적다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 응집은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다. 특정 구현예에서, 응집은 동결/해동 주기 전 또는 후에 측정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 일정 기간, 예를 들어, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 약 4 년에 걸쳐 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정하다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 일정 기간에 걸친 안정성은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 일정 기간, 적어도 예를 들어, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 약 4 년에 걸쳐 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정하다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 일정 기간에 걸친 안정성은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 시험관내 상대적 효능(IVRP)이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 높다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 시험관내 상대적 효능(IVRP)은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다. 특정 구현예에서, 시험관내 상대적 효능(IVRP)은 동결/해동 주기 전 또는 후에 측정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 유리 DNA가 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 적다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 유리 DNA는 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다. 특정 구현예에서, 응집은 동결/해동 주기 전 또는 후에 측정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 일정 기간, 예를 들어, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년에 걸쳐 최대 20%, 15%, 10%, 8%, 5%, 4%, 3%, 2%, 또는 1% 크기 변화를 갖는다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 크기는 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다. 특정 구현예에서, 크기는 동결/해동 주기 전 또는 후에 측정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 일정 기간, 예를 들어, 적어도 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년에 걸쳐 최대 20%, 15%, 10%, 8%, 5%, 4%, 3%, 2%, 또는 1% 크기 변화를 갖는다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 크기는 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다. 특정 구현예에서, 크기는 동결/해동 주기 전 또는 후에 측정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 -20℃에서 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정하다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 안정성은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 감염성이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 -20℃에서 일정 기간, 예를 들어, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 높다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 바이러스 감염성은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 감염성이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 -20℃에서 일정 기간, 예를 들어, 적어도 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 높다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 바이러스 감염성은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 응집이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 -20℃에서 일정 기간, 예를 들어, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 적다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 응집은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 응집이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 -20℃에서 일정 기간, 적어도 예를 들어, 적어도 약 1 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 적다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 응집은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 -20℃에서 일정 기간, 예를 들어, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정하다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 일정 기간에 걸친 안정성은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 -20℃에서 일정 기간, 예를 들어, 적어도 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정하다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 일정 기간에 걸친 안정성은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 (i) -80℃에서 제1 기간 동안 보관되고; (ii) 후속적으로 해동되고; (iii) 해동 후, 4℃에서 제2 기간 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정하다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 일정 기간에 걸친 안정성은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다. 특정 구현예에서, 제1 기간은 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월이다. 28. 일부 구현예에서, 제2 기간은 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월이다.
특정 구현예에서, 재조합 AAV는 (i) -80℃에서 제1 기간 동안 보관되고; (ii) 후속적으로 해동되고; (iii) 해동 후, 4℃에서 제2 기간 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정하다. 일부 구현예에서, 제1 기간은 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월이다. 일부 구현예에서, 제2 기간은 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월이다.
일부 구현예에서, -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도는 -80℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%이다. 일부 구현예에서, -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도는 -20℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%이다. 일부 구현예에서, 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도는 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%이다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 시험관내 상대적 효능(IVRP)이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 -20℃에서 일정 기간, 예를 들어, 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 시험관내 상대적 효능(IVRP)이 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 높다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 시험관내 상대적 효능(IVRP)은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 시험관내 상대적 효능(IVRP)이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 -20℃에서 일정 기간, 예를 들어, 적어도 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 높다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 시험관내 상대적 효능(IVRP)은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 시험관내 상대적 효능(IVRP)이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 -20℃에서 일정 기간, 예를 들어, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 높다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 시험관내 상대적 효능(IVRP)은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 시험관내 상대적 효능(IVRP)이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 -20℃에서 일정 기간, 예를 들어, 적어도 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 높다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 시험관내 상대적 효능(IVRP)은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 유리 DNA가 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 -20℃에서 일정 기간, 예를 들어, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 적다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 유리 DNA는 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 유리 DNA가 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 -20℃에서 일정 기간, 예를 들어, 적어도 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 적다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 유리 DNA는 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 -20℃에서 일정 기간, 예를 들어, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년에 걸쳐 보관된 경우 최대 20%, 15%, 10%, 8%, 5%, 4%, 3%, 2%, 또는 1% 크기 변화를 갖는다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 크기는 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 -20℃에서 일정 기간, 예를 들어, 적어도 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년에 걸쳐 보관된 경우 최대 20%, 15%, 10%, 8%, 5%, 4%, 3%, 2%, 또는 1% 크기 변화를 갖는다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 크기는 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 37℃에서 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정하다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 안정성은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 감염성이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 37℃에서 일정 기간, 예를 들어, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 많다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 바이러스 감염성은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 감염성이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 37℃에서 일정 기간, 예를 들어, 적어도 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 높다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 바이러스 감염성은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 응집이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 37℃에서 일정 기간, 예를 들어, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 적다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 응집은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 응집이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 37℃에서 일정 기간, 예를 들어, 적어도 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 적다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 응집은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 37℃에서 일정 기간, 예를 들어, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정하다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 일정 기간에 걸친 안정성은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 37℃에서 일정 기간, 예를 들어, 적어도 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정하다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 일정 기간에 걸친 안정성은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다. 일부 구현예에서, -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도는 -80℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%이다. 일부 구현예에서, -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도는 -20℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%이다. 일부 구현예에서, 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도는 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%이다. 일부 구현예에서, -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 시험관내 효능은 -80℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%이다. 일부 구현예에서, -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 시험관내 효능은 -20℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%이다. 일부 구현예에서, -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 시험관내 효능은 -20℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%이다. 일부 구현예에서, -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 크기 분포는 -80℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 크기 분포와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일하다. 일부 구현예에서, -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 크기 분포는 -20℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 크기 분포와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일하다. 일부 구현예에서, 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 크기 분포는 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 크기 분포와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일하다. 일부 구현예에서, 일정 기간은 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월이다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 시험관내 상대적 효능(IVRP)이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 37℃에서 일정 기간, 예를 들어, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 높다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 시험관내 상대적 효능(IVRP)은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 시험관내 상대적 효능(IVRP)이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 37℃에서 일정 기간, 예를 들어, 적어도 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 높다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 시험관내 상대적 효능(IVRP)은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 유리 DNA가 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 37℃에서 일정 기간, 예를 들어, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 적다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 유리 DNA는 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 유리 DNA가 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 37℃에서 일정 기간, 적어도 예를 들어, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 적다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 유리 DNA는 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 37℃에서 일정 기간, 예를 들어, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년에 걸쳐 보관된 경우 최대 20%, 15%, 10%, 8%, 5%, 4%, 3%, 2%, 또는 1% 크기 변화를 갖는다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 크기는 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 37℃에서 일정 기간, 예를 들어, 적어도 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년에 걸쳐 보관된 경우 최대 20%, 15%, 10%, 8%, 5%, 4%, 3%, 2%, 또는 1% 크기 변화를 갖는다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 크기는 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
또 다른 측면에서, 본원에는 nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 또는 당뇨병성 망막증(DR)으로 진단된 대상체를 치료하는 방법이 제공되며, 방법은 본원에 제공된 약제학적 조성물을 제조하는 단계, -80℃에서 제1 기간 동안 약제학적 조성물을 보관하는 단계; (ii) 약제학적 조성물을 해동하는 단계; 및 (iii) 해동 후, 4℃에서 제2 기간 동안 약제학적 조성물을 보관하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 기간은 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월이다. 61. 일부 구현예에서, 제2 기간은 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월이다.
특정 구현예에서, 본 개시내용은 재조합 아데노-연관 바이러스(AAV), 일염기성 인산 칼륨, 염화 나트륨, 인산 나트륨 이염기성 무수물, 수크로스, 및 폴록사머 188을 포함하는 약제학적 조성물 또는 제형을 제공한다. 일부 구현예에서, AAV는 AAV8의 구성요소를 포함한다. 일부 구현예에서, AAV는 다음 요소를 다음 순서로 포함하는 본원에 제공된 AAV 바이러스 벡터이다: a) 구성적 또는 저산소증-유도성 프로모터 서열, 및 b) 이식유전자(예를 들어, 항-VEGF 항원-결합 단편 모이어티)를 암호화하는 서열. 일부 구현예에서, 이식유전자는 VEGF에 대한 완전 인간 번역후 변형된(HuPTM) 항체이다. 항체는 단클론 항체, 다클론 항체, 재조합적으로 생성된 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 합성 항체, 2 개의 중쇄 및 2 개의 경쇄 분자를 포함하는 사량체성 항체, 항체 경쇄 단량체, 항체 중쇄 단량체, 항체 경쇄 이량체, 항체 중쇄 이량체, 항체 경쇄-중쇄 쌍, 인트라바디(intrabody), 이형접합 항체, 1가 항체, 전장 항체의 항원-결합 단편, 및 상기의 융합 단백질을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 이러한 항원-결합 단편은 단일-도메인 항체(중쇄 항체(VHH) 또는 나노바디(nanobody)의 가변 도메인), Fab, F(ab')2, 및 전장 항-VEGF 항체(바람직하게는, 전장 항-VEGF 단클론 항체(mAb))의 scFv(단일쇄 가변 단편)를 포함하나 이제 제한되지 않는다(집합적으로 본원에서 "항원-결합 단편"으로 지칭됨). 바람직한 구현예에서, VEGF에 대한 완전 인간 번역후 변형된 항체는 VEGF에 대한 단클론 항체(mAb)의 완전 인간 번역후 변형된 항원-결합 단편("HuPTMFabVEGFi")이다. 추가의 바람직한 구현예에서, HuPTMFabVEGFi는 항-VEGF mAb의 완전 인간 글리코실화 항원-결합 단편("HuGlyFabVEGFi")이다. 대안적인 구현예에서, 전장 mAb가 사용될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 이식유전자를 전달하기 위해 사용되는 AAV는 인간 망막 세포 또는 광수용체 세포에 대한 향성을 가져야 한다. 이러한 AAV는 비-복제 재조합 아데노-연관 바이러스 벡터("rAAV")를 포함할 수 있으며, 특히 AAV8 캡시드를 보유하는 것들이 바람직하다. 구체적 구현예에서, 본원에 기재된 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 작제물은 작제물 I이며, 여기서 작제물 I은 다음 구성요소를 포함한다: (1) 발현 카세트 측면에 있는 AAV8 도립된 말단 반복부; (2) 다음을 포함하는 제어 요소: a) CMV 인핸서/닭 β-액틴 프로모터를 포함하는 CB7 프로모터, b) 닭 β-액틴 인트론 및 c) 토끼 β-글로빈 poly　A 신호; 및 (3) 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드의 동일한 양의 발현을 보장하는 자가-절단 퓨린(F)/F2A 링커에 의해 분리된 항-VEGF 항원-결합 단편의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 핵산 서열. 또 다른 구체적 구현예에서, 본원에 기재된 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 작제물은 작제물 II이며, 여기서 작제물 II는 다음 구성요소를 포함한다: (1) 발현 카세트 측면에 있는 AAV2 도립된 말단 반복부; (2) 다음을 포함하는 제어 요소: a) CMV 인핸서/닭 □-액틴 프로모터를 포함하는 CB7 프로모터, b) 닭 □-액틴 인트론 및 c) 토끼 β-글로빈 poly　A 신호; 및 (3) 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드의 동일한 양의 발현을 보장하는 자가-절단 퓨린(F)/F2A 링커에 의해 분리된 항-VEGF 항원-결합 단편의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 핵산 서열. 구체적 구현예에서, 본원에 기재된 작제물은 도 4에 예시되어 있다. 일부 구현예에서, 항-hVEGF 항체는 서열번호: 2 또는 서열번호:4의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호:1 또는 서열번호:3의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 (a) 항-인간 혈관 내피 성장 인자(hVEGF) 항체를 암호화하는 작제물 II, (b) 0.2 g/L 농도의 염화 칼륨, (c) 0.2 g/L 농도의 일염기성 인산 칼륨, (d) 5.84 g/L 농도의 염화 나트륨, (e) 1.15 g/L 농도의 인산 나트륨 이염기성 무수물, (f) 4% 중량/부피(40 g/L) 농도의 수크로스, (g) 0.001% 중량/부피(0.01 g/L) 농도의 폴록사머 188, 및 (h) 물로 이루어지며, 여기서 항-hVEGF 항체는 서열번호:2 또는 서열번호:4의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호:1 또는 서열번호:3의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 액체 조성물이다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 동결된 조성물이다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 본원에 개시된 액체 조성물로부터의 동결건조된 조성물이다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 재구축된 동결건조된 제형이다.
일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 1% 내지 약 7%의 잔류 수분 함량을 포함하는 동결건조된 조성물이다.
특정 측면에서, 본원에는 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 질환을 치료 또는 예방하는 방법이 개시된다.
특정 측면에서, 본원에는 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사(예를 들어, 미세바늘이 있는 미세주사기와 같은 맥락막상 약물 전달 장치를 통해), 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사(외과적 처치), 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여(예를 들어, 작은 바늘을 망막하 공간으로 주사하는 후방극을 향하여 맥락막상 공간을 통해 삽입 및 터널링될 수 있는 카테터를 포함하는 망막하 약물 전달 장치를 통한 외과적 처치), 및/또는 후방 공막옆 데포 절차(예를 들어, 끝 부분이 공막 표면에 직접 병렬로 삽입 및 유지될 수 있는 캐뉼라를 포함하는 공막옆 약물 전달 장치를 통해))에 의해 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 질환을 치료 또는 예방하는 방법이 개시된다.
특정 측면에서, 약제학적 조성물은 눈에 투여하기에 적합하다. 특정 측면에서, 약제학적 조성물은 맥락막상 주사, 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사, 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여, 또는 후방 공막옆 데포 절차에 적합하다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사(예를 들어, 미세바늘이 있는 미세주사기와 같은 맥락막상 약물 전달 장치를 통해), 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사(외과적 처치), 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여(예를 들어, 작은 바늘을 망막하 공간으로 주사하는 후방극을 향하여 맥락막상 공간을 통해 삽입 및 터널링될 수 있는 카테터를 포함하는 망막하 약물 전달 장치를 통한 외과적 처치), 및/또는 후방 공막옆 데포 절차(예를 들어, 끝 부분이 공막 표면에 직접 병렬로 삽입 및 유지될 수 있는 캐뉼라를 포함하는 공막옆 약물 전달 장치를 통해))에 적합하다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사(예를 들어, 미세바늘이 있는 미세주사기와 같은 맥락막상 약물 전달 장치를 통해), 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사(외과적 처치), 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여(예를 들어, 작은 바늘을 망막하 공간으로 주사하는 후방극을 향하여 맥락막상 공간을 통해 삽입 및 터널링될 수 있는 카테터를 포함하는 망막하 약물 전달 장치를 통한 외과적 처치), 및/또는 후방 공막옆 데포 절차(예를 들어, 끝 부분이 공막 표면에 직접 병렬로 삽입 및 유지될 수 있는 캐뉼라를 포함하는 공막옆 약물 전달 장치를 통해))에 적합한 바람직한 밀도를 갖는다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사(예를 들어, 미세바늘이 있는 미세주사기와 같은 맥락막상 약물 전달 장치를 통해), 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사(외과적 처치), 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여(예를 들어, 작은 바늘을 망막하 공간으로 주사하는 후방극을 향하여 맥락막상 공간을 통해 삽입 및 터널링될 수 있는 카테터를 포함하는 망막하 약물 전달 장치를 통한 외과적 처치), 및/또는 후방 공막옆 데포 절차(예를 들어, 끝 부분이 공막 표면에 직접 병렬로 삽입 및 유지될 수 있는 캐뉼라를 포함하는 공막옆 약물 전달 장치를 통해))에 적합한 바람직한 삼투압 농도를 갖는다. 구체적 구현예에서, 망막하 투여를 위한 바람직한 삼투압 농도는 160 - 430　mOsm/kg H2O이다. 다른 구체적 구현예에서, 맥락막상 투여의 바람직한 삼투압 농도는 600 mOsm/kg H2O 미만이다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사(예를 들어, 미세바늘이 있는 미세주사기와 같은 맥락막상 약물 전달 장치를 통해), 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사(외과적 처치), 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여(예를 들어, 작은 바늘을 망막하 공간으로 주사하는 후방극을 향하여 맥락막상 공간을 통해 삽입 및 터널링될 수 있는 카테터를 포함하는 망막하 약물 전달 장치를 통한 외과적 처치), 및/또는 후방 공막옆 데포 절차(예를 들어, 끝 부분이 공막 표면에 직접 병렬로 삽입 및 유지될 수 있는 캐뉼라를 포함하는 공막옆 약물 전달 장치를 통해))에 적합한 바람직한 점도를 갖는다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 200 mOsm/L 내지 660 mOsm/L의 삼투압 농도 범위를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 200 mOsm/L 내지 660 mOsm/L의 삼투압 농도 범위를 갖는다. 일부 구현예에서, 삼투압 농도는 600 mOsm/kg H2O 미만이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 200 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 250 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 300 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 350 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 400 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 450 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 500 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 550 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 600 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 650 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 660 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 측면에서, 본원에는 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 점액다당류증 유형 IVA(MPS IVA), 점액다당류증 유형 I(MPS I), 또는 점액다당류증 유형 II(MPS II)로 진단된 대상체를 치료하는 방법이 개시된다.
일부 구현예에서, -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 벡터 게놈 농도는 -80℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%이다. 일부 구현예에서, -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 벡터 게놈 농도는 -20℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%이다. 일부 구현예에서, 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 벡터 게놈 농도는 작제물의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%이다. 일부 구현예에서, 일정 기간은 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월이다.
일부 구현예에서, -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 시험관내 효능은 -80℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%이다. 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전의 II. 일부 구현예에서, -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 시험관내 효능은 -20℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%이다. 일부 구현예에서, 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 시험관내 효능은 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%이다. 일부 구현예에서, 일정 기간은 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월이다.
일부 구현예에서, -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 크기 분포는 -80℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 크기 분포와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일하다. 일부 구현예에서, -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 크기 분포는 -20℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 크기 분포와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일하다. 일부 구현예에서, 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 크기 분포는 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 크기 분포와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일하다. 일부 구현예에서, 일정 기간은 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월이다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 이전에 -80℃에서 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월 동안 보관된 후 4℃에서 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월 동안 보관될 수 있다.
특정 측면에서, 본원에는 치료 유효량의 약제학적 조성물을 정맥내 투여, 피하 투여, 또는 근육내 주사에 의해 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 점액다당류증 유형 IVA(MPS IVA), 점액다당류증 유형 I(MPS I), 또는 점액다당류증 유형 II(MPS II)로 진단된 대상체를 치료하는 방법이 개시된다.
특정 측면에서, 본원에는 치료 유효량의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하여 nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 또는 당뇨병성 망막증(DR)으로 진단된 대상체를 치료하는 단계를 포함하는, 대상체에서 질환을 치료 또는 예방하는 방법이 개시된다.
특정 측면에서, 본원에는 치료 유효량의 약제학적 조성물을 맥락막상 주사(예를 들어, 미세바늘이 있는 미세주사기와 같은 맥락막상 약물 전달 장치를 통해), 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사(외과적 처치), 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여(예를 들어, 작은 바늘을 망막하 공간으로 주사하는 후방극을 향하여 맥락막상 공간을 통해 삽입 및 터널링될 수 있는 카테터를 포함하는 망막하 약물 전달 장치를 통한 외과적 처치), 또는 후방 공막옆 데포 절차(예를 들어, 끝 부분이 공막 표면에 직접 병렬로 삽입 및 유지될 수 있는 캐뉼라를 포함하는 공막옆 약물 전달 장치를 통해))에 의해 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 또는 당뇨병성 망막증(DR)으로 진단된 대상체를 치료하는 방법이 개시된다.
특정 측면에서, 본원에는 약제학적 조성물을 상기 인간 대상체의 눈에 있는 맥락막상 공간, 망막하 공간, 또는 공막의 외부 표면에 투여함으로써(예를 들어, 맥락막상 주사(예를 들어, 미세바늘이 있는 미세주사기와 같은 맥락막상 약물 전달 장치를 통해), 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사(외과적 처치), 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여(예를 들어, 작은 바늘을 망막하 공간으로 주사하는 후방극을 향하여 맥락막상 공간을 통해 삽입 및 터널링될 수 있는 카테터를 포함하는 망막하 약물 전달 장치를 통한 외과적 처치), 또는 후방 공막옆 데포 절차(예를 들어, 끝 부분이 공막 표면에 직접 병렬로 삽입 및 유지될 수 있는 캐뉼라를 포함하는 공막옆 약물 전달 장치를 통해)에 의해), 치료 유효량의 인간 망막 세포에 의해 생성된 항-hVEGF 항원-결합 단편을 상기 인간 대상체의 망막에 전달하는 단계를 포함하는 nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 또는 당뇨병성 망막증(DR)으로 진단된 인간 대상체를 치료하는 방법이 기재된다.
특정 측면에서, 본원에는 nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 또는 당뇨병성 망막증(DR)으로 진단된 대상체를 치료하는 방법이 제공되며, 방법은 본원에 제공된 약제학적 조성물을 제조하는 단계, -80℃에서 제1 기간 동안 약제학적 조성물을 보관하는 단계; (ii) 약제학적 조성물을 해동하는 단계; 및 (iii) 해동 후, 4℃에서 제2 기간 동안 약제학적 조성물을 보관하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 기간은 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월이다. 일부 구현예에서, 제2 기간은 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월이다.
본원에는 인간 망막 세포에 의해 생성된 항-인간 혈관 내피 성장 인자(hVEGF) 항체, 예를 들어, 항-hVEGF 항원-결합 단편이 기재된다. 인간 VEGF(hVEGF)는 VEGF(VEGFA, VEGFB, VEGFC, 또는 VEGFD) 유전자에 의해 암호화된 인간 단백질이다. hVEGF의 예시적인 아미노산 서열은 GenBank 수탁 번호 AAA35789.1에서 찾을 수 있다. hVEGF의 예시적인 핵산 서열은 GenBank 수탁 번호 M32977.1에서 찾을 수 있다.
본원에 기재된 방법의 특정 측면에서, 항원-결합 단편은 서열번호. 2 또는 서열번호. 4의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호. 1 또는 서열번호. 3의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
본원에 기재된 방법의 특정 측면에서, 항원-결합 단편은 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호:17-19 또는 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함한다.
본원에 기재된 방법의 구체적 구현예에서, 항원-결합 단편은 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하며, 여기서 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열번호. 16)에서 2번째 Q)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu). 구체적 구현예에서, 항원-결합 단편은 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하며, 여기서 경쇄 CDR1의 8번째 및 11번째 아미노산 잔기(즉, SASQDISNYLN(서열번호. 14)에서 2 개의 N은 각각 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열번호. 16)에서 2번째 Q)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu). 구체적 구현예에서, 항원-결합 단편은 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하며, 여기서 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열번호. 16)에서 2번째 Q)는 아세틸화되지 않는다. 구체적 구현예에서, 항원-결합 단편은 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하며, 여기서 경쇄 CDR1의 8번째 및 11번째 아미노산 잔기(즉, SASQDISNYLN(서열번호. 14)에서 2 개의 N은 각각 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열번호. 16)에서 2번째 Q)는 아세틸화되지 않는다. 바람직한 구현예에서, 본원에 기재된 화학적 변형(들) 또는 화학적 변형(들)의 결여(경우에 따라)는 질량 분석법에 의해 결정된다.
본원에 기재된 방법의 구체적 구현예에서, 항원-결합 단편은 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 N)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu). 구체적 구현예에서, 항원-결합 단편은 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1의 9번째 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 M)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 중쇄 CDR2의 3번째 아미노산 잔기(즉, WINTYTGEPTYAADFKR(서열번호. 18)에서 N은 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 N)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu). 구체적 구현예에서, 항원-결합 단편은 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 N)는 아세틸화되지 않는다. 구체적 구현예에서, 항원-결합 단편은 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1의 9번째 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 M)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 중쇄 CDR2의 3번째 아미노산 잔기(즉, WINTYTGEPTYAADFKR(서열번호. 18)에서 N은 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 N)는 아세틸화되지 않는다. 바람직한 구현예에서, 본원에 기재된 화학적 변형(들) 또는 화학적 변형(들)의 결여(경우에 따라)는 질량 분석법에 의해 결정된다.
본원에 기재된 방법의 구체적 구현예에서, 항원-결합 단편은 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 N)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하지 않고: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열번호. 16)에서 2번째 Q)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu). 구체적 구현예에서, 항원-결합 단편은 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하며, 여기서: (1) 중쇄 CDR1의 9번째 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 M)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 중쇄 CDR2의 3번째 아미노산 잔기(즉, WINTYTGEPTYAADFKR(서열번호. 18)에서 N은 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 N)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하지 않으며: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu); (2) 경쇄 CDR1의 8번째 및 11번째 아미노산 잔기(즉, SASQDISNYLN(서열번호. 14)에서 2 개의 N은 각각 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열번호. 16)에서 2번째 Q)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu). 구체적 구현예에서, 항원-결합 단편은 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 N)는 아세틸화되지 않고, 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열번호. 16)에서 2번째 Q)는 아세틸화되지 않는다. 구체적 구현예에서, 항원-결합 단편은 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하며, 여기서: (1) 중쇄 CDR1의 9번째 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 M)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 중쇄 CDR2의 3번째 아미노산 잔기(즉, WINTYTGEPTYAADFKR(서열번호. 18)에서 N은 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 N)는 아세틸화되지 않으며; (2) 경쇄 CDR1의 8번째 및 11번째 아미노산 잔기(즉, SASQDISNYLN(서열번호. 14)에서 2 개의 N은 각각 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열번호. 16)에서 2번째 Q)는 아세틸화되지 않는다. 바람직한 구현예에서, 본원에 기재된 화학적 변형(들) 또는 화학적 변형(들)의 결여(경우에 따라)는 질량 분석법에 의해 결정된다.
특정 측면에서, 본원에는 치료 유효량의 hVEGF에 대한 mAb의 항원-결합 단편을 상기 인간 대상체의 눈에 전달하며, 상기 항원-결합 단편이 α2,6-시알화 글리칸을 함유하는 것인 단계를 포함하는, nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 또는 당뇨병성 망막증(DR)으로 진단된 인간 대상체를 치료하는 방법이 기재된다. 구체적 측면에서, 본원에는 hVEGF에 대한 mAb의 항원-결합 단편을 암호화하는 발현 벡터를 포함하는 약제학적 조성물을 상기 인간 대상체의 눈에 있는 맥락막상 공간, 망막하 공간, 또는 공막의 외부 표면에 투여함으로써(예를 들어, 맥락막상 주사(예를 들어, 미세바늘이 있는 미세주사기와 같은 맥락막상 약물 전달 장치를 통해), 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사(외과적 처치), 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여(예를 들어, 작은 바늘을 망막하 공간으로 주사하는 후방극을 향하여 맥락막상 공간을 통해 삽입 및 터널링될 수 있는 카테터를 포함하는 망막하 약물 전달 장치를 통한 외과적 처치), 또는 후방 공막옆 데포 절차(예를 들어, 끝 부분이 공막 표면에 직접 병렬로 삽입 및 유지될 수 있는 캐뉼라를 포함하는 공막옆 약물 전달 장치를 통해)에 의해), 치료 유효량의 hVEGF에 대한 mAb의 항원-결합 단편을 상기 인간 대상체의 눈에 전달하며, 상기 항원-결합 단편이 α2,6-시알화 글리칸을 함유하는 것인 단계를 포함하는, nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 또는 당뇨병성 망막증(DR)으로 진단된 인간 대상체를 치료하는 방법이 기재된다.
특정 측면에서, 본원에는 치료 유효량의 hVEGF에 대한 mAb의 글리코실화된 항원-결합 단편을 상기 인간 대상체의 눈에 전달하는 단계를 포함하는, nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 또는 당뇨병성 망막증(DR)으로 진단된 인간 대상체를 치료하는 방법이 기재되며, 여기서 상기 항원-결합 단편은 검출가능한 NeuGc 및/또는 α-Gal 항원을 함유하지 않는다(즉, 본원에 사용된 바와 같이, "검출가능한"은 하기 기재된 표준 검정에 의해 검출가능한 수준을 의미한다). 구체적 구현예에서, 본원에는 hVEGF에 대한 mAb의 글리코실화된 항원-결합 단편을 암호화하는 발현 벡터를 포함하는 약제학적 조성물을 상기 인간 대상체의 눈에 있는 맥락막상 공간, 망막하 공간, 또는 공막의 외부 표면에 투여함으로써(예를 들어, 맥락막상 주사(예를 들어, 미세바늘이 있는 미세주사기와 같은 맥락막상 약물 전달 장치를 통해), 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사(외과적 처치), 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여(예를 들어, 작은 바늘을 망막하 공간으로 주사하는 후방극을 향하여 맥락막상 공간을 통해 삽입 및 터널링될 수 있는 카테터를 포함하는 망막하 약물 전달 장치를 통한 외과적 처치), 또는 후방 공막옆 데포 절차(예를 들어, 끝 부분이 공막 표면에 직접 병렬로 삽입 및 유지될 수 있는 캐뉼라를 포함하는 공막옆 약물 전달 장치를 통해)에 의해), 치료 유효량의 hVEGF에 대한 mAb의 글리코실화된 항원-결합 단편을 상기 인간 대상체의 눈에 전달하는 단계를 포함하는, nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 또는 당뇨병성 망막증(DR)으로 진단된 인간 대상체를 치료하는 방법이 기재되며, 여기서 상기 항원-결합 단편은 검출가능한 NeuGc 및/또는 α-Gal 항원을 함유하지 않는다.
항-hVEGF 항체 또는 hVEGF에 대한 mAb의 항원-결합 단편에 대한 보다 상세한 내용은 국제 공개 번호: WO2019/067540에 제공되어 있다(그 전문이 본원에 참조로 포함됨).
구체적 측면에서, 항-hVEGF 항체는 서열번호. 2 또는 서열번호. 4의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호. 1 또는 서열번호. 3의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 구체적 측면에서, 발현 벡터는 AAV8 벡터이다.
본원에 기재된 방법의 특정 측면에서, 항원-결합 단편 이식유전자는 리더 펩티드를 암호화한다. 리더 펩티드는 또한 본원에서 신호 펩티드 또는 리더 서열로 지칭될 수 있다.
본원에 기재된 방법의 특정 측면에서, 눈에 전달하는 것은 눈의 망막, 맥락막, 및/또는 유리체액에 전달하는 것을 포함한다. 본원에 기재된 방법의 특정 측면에서, 항원-결합 단편은 C-말단에 1, 2, 3, 또는 4 개의 추가 아미노산을 포함하는 중쇄를 포함한다.
특정 구현예에서, 방법은 nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 또는 당뇨병성 망막증(DR)으로 진단되고, 항-VEGF 항체를 사용한 치료에 반응성인 것으로 식별된 환자를 치료하는 단계를 포함한다. 보다 구체적인 구현예에서, 환자는 항-VEGF 항원-결합 단편을 사용한 치료에 반응성이다. 특정 구현예에서, 환자는 유전자 요법을 사용한 치료 전에 유리체강내로 주사된 항-VEGF 항원-결합 단편을 사용한 치료에 반응성인 것으로 나타났다. 구체적 구현예에서, 환자는 이전에 LUCENTIS ®(라니비주맙(ranibizumab)), EYLEA®(아플리베르셉트(aflibercept)), 및/또는 AVASTIN®(베바시주맙(bevacizumab7))으로 치료 받았고, 상기 LUCENTIS ®(라니비주맙), EYLEA®(아플리베르셉트), 및/또는 AVASTIN®(베바시주맙) 중 하나 이상에 반응성인 것으로 밝혀졌다.
이러한 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 작제물이 전달되는 대상체는 바이러스 벡터 또는 발현 작제물에서 이식유전자에 의해 암호화된 항-hVEGF 항원-결합 단편에 반응성이어야 한다. 반응성을 결정하기 위해, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자 산물(예를 들어, 세포 배양, 생물반응기 등에서 생성됨)은 유리체내 주사에 의해서와 같이, 대상체에게 직접 투여될 수 있다.
본원에 기재된 방법의 특정 측면에서, 항원-결합 단편은 C-말단에 추가 아미노산을 포함하지 않는 중쇄를 포함한다.
본원에 기재된 방법의 특정 측면에서 항원-결합 단편 분자 집단을 생성하며, 여기서 항원-결합 단편 분자는 중쇄를 포함하고, 여기서 항원-결합 단편 분자 집단의 0.5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 또는 20%, 또는 그 미만은 중쇄의 C-말단에 1, 2, 3, 또는 4 개의 추가 아미노산을 포함한다. 본원에 기재된 방법의 특정 측면에서 항원-결합 단편 분자 집단을 생성하며, 여기서 항원-결합 단편 분자는 중쇄를 포함하고, 여기서 항원-결합 단편 분자 집단의 0.5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 또는 20%, 또는 그 미만이지만 0% 초과는 중쇄의 C-말단에 1, 2, 3, 또는 4 개의 추가 아미노산을 포함한다.
본원에 기재된 방법의 특정 측면에서 항원-결합 단편 분자 집단을 생성하며, 여기서 항원-결합 단편 분자는 중쇄를 포함하고, 여기서 항원-결합 단편 분자 집단의 0.5-1%, 0.5%-2%, 0.5%-3%, 0.5%-4%, 0.5%-5%, 0.5%-10%, 0.5%-20%, 1%-2%, 1%-3%, 1%-4%, 1%-5%, 1%-10%, 1%-20%, 2%-3%, 2%-4%, 2%-5%, 2%-10%, 2%-20%, 3%-4%, 3%-5%, 3%-10%, 3%-20%, 4%-5%, 4%-10%, 4%-20%, 5%-10%, 5%-20%, 또는 10%-20%는 중쇄의 C-말단에 1, 2, 3, 또는 4 개의 추가 아미노산을 포함한다.
이식유전자에 의해 암호화된 HuPTMFabVEGFi, 예를 들어, HuGlyFabVEGFi는 hVEGF에 결합하는 항체의 항원-결합 단편, 예컨대 베바시주맙; 항-hVEGF Fab 모이어티 예컨대 라니비주맙; 또는 Fab 도메인에 추가 글리코실화 부위를 함유하도록 조작된 이러한 베바시주맙 또는 라니비주맙 Fab 모이어티를 포함할 수 있으나 이에 제한되지 않는다 (예를 들어, Courtois 등, 2016, mAbs 8: 99-112를 참조하며 이는 전장 항체의 Fab 도메인에 과글리코실화되는 베바시주맙의 유도체의 설명을 위해 그 전문이 본원에 참조로 포함된다).
이식유전자를 전달하기 위해 사용되는 재조합 벡터는 인간 망막 세포 또는 광수용체 세포에 대한 향성을 가져야 한다. 이러한 벡터는 비-복제 재조합 아데노-연관 바이러스 벡터("rAAV")를 포함할 수 있으며, 특히 AAV8 캡시드를 보유하는 것들이 바람직하다. 그러나, 렌티바이러스 벡터, 백시니아 바이러스 벡터, 또는 "네이키드 DNA" 작제물로 지칭되는 비-바이러스 발현 벡터를 포함하나 이에 제한되지 않는 다른 바이러스 벡터가 사용될 수 있다. 바람직하게는, HuPTMFabVEGFi, 예를 들어, HuGlyFabVEGFi, 이식유전자는 적절한 발현 제어 요소, 예를 들어, 몇 가지 예를 들면 CB7 프로모터(닭 β-액틴 프로모터 및 CMV 인핸서), RPE65 프로모터, 또는 옵신 프로모터에 의해 제어되어야 하고, 벡터에 의해 구동된 이식유전자의 발현을 향상시키는 다른 발현 제어 요소(예를 들어, 인트론 예컨대 닭 β-액틴 인트론, 미세 생쥐 바이러스(MVM) 인트론, 인간 인자 IX 인트론(예를 들어, FIX 절두된 인트론 1), β-글로빈 스플라이스 공여자/면역글로불린 중쇄 스파이스 수용자 인트론, 아데노바이러스 스플라이스 공여자 /면역글로불린 스플라이스 수용자 인트론, SV40 후기 스플라이스 공여자 /스플라이스 수용자(19S/16S) 인트론, 및 하이브리드 아데노바이러스 스플라이스 공여자/IgG 스플라이스 수용자 인트론 및 polyA 신호 예컨대 토끼 β-글로빈 polyA 신호, 인간 성장 호르몬(hGH) polyA 신호, SV40 후기 polyA 신호, 합성 polyA(SPA) 신호, 및 소 성장 호르몬(bGH) polyA 신호)를 포함할 수 있다. 예를 들어, Powell and Rivera-Soto, 2015, Discov. Med., 19(102):49-57를 참조한다.
유전자 요법 작제물은 중쇄 및 경쇄가 둘 다 발현되도록 설계된다. 보다 구체적으로, 중쇄 및 경쇄는 거의 동일한 양으로 발현되어야 하며, 즉, 중쇄 및 경쇄는 중쇄 대 경쇄의 대략 1:1 비로 발현된다. 중쇄 및 경쇄에 대한 코딩 서열은 단일 작제물에서 조작될 수 있으며 여기서 중쇄 및 경쇄는 절단가능한 링커 또는 IRES에 의해 분리되어 분리된 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드가 발현되도록 한다. 예를 들어, 특정 리더 서열에 대해 섹션 5.2.4 및 특정 IRES, 2A, 및 본원에 제공된 방법 및 조성물과 함께 사용될 수 있는 다른 링커 서열에 대해 섹션 5.2.5를 참조한다.
특정 구현예에서, 유전자 요법 작제물은 제형 완충액 중 AAV 벡터 활성 성분의 동결된 멸균 1회용 용액으로 공급된다. 구체적 구현예에서, 망막하 투여에 적합한 약제학적 조성물은 생리학적으로 양립할 수 있는 수성 완충액, 계면활성제 및 임의적인 부형제를 포함하는 제형 완충액 중 재조합(예를 들어, rHuGlyFabVEGFi) 벡터의 현탁액을 포함한다.
특정 구현예에서, 유전자 요법 작제물은 제형 완충액 중 AAV 벡터 활성 성분의 동결된 멸균 1회용 용액으로 공급된다. 구체적 구현예에서, 맥락막상, 망막하, 공막옆 및/또는 망막내 투여에 적합한 약제학적 조성물은 생리학적으로 양립할 수 있는 수성 완충액, 계면활성제 및 임의적인 부형제를 포함하는 제형 완충액 중 재조합(예를 들어, rHuGlyFabVEGFi) 벡터의 현탁액을 포함한다.
재조합 벡터의 치료 유효 용량은 ≥0.1 mL 내지 ≤0.5 mL 범위의 부피, 바람직하게는 0.1 내지 0.30 mL(100 - 300 μl), 가장 바람직하게는, 0.25 mL(250 μl)의 부피로 망막하로 및/또는 망막내로(예를 들어, 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사(외과적 처치), 또는 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여에 의해) 투여되어야 한다. 재조합 벡터의 치료 유효 용량은 동일한 방문 동안 1 회 이상의 주사로 투여될 수 있다.
재조합 벡터의 치료 유효 용량은 100 μl 이하의 부피, 예를 들어, 50-100 μl의 부피로 맥락막상으로(예를 들어, 맥락막상 주사에 의해) 투여되어야 한다. 재조합 벡터의 치료 유효 용량은 500 μl 이하의 부피, 예를 들어, 10-20 μl, 20-50 μl, 50-100 μl, 100-200 μl, 200-300 μl, 300-400 μl, 또는 400-500 μl의 부피로 공막의 외부 표면(예를 들어, 후방 공막옆 데포 절차에 의해)에 투여되어야 한다. 망막하 주사는 국소 마취 하에 대상체의 유리체 절제술, 및 망막에 유전자 요법의 망막하 주사를 수반하는 훈련받은 망막 외과의에 의해 수행되는 외과적 처치이다(예를 들어, Campochiaro 등, 2017, Hum Gen Ther 28(1):99-111을 참조하며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다). 구체적 구현예에서, 망막하 투여는 작은 바늘을 망막하 공간으로 주사하는 후방극에 맥락막상 공간을 통해 삽입 및 터널닝될 수 있는 카테터를 포함하는 망막하 약물 전달 장치와 같은 망막하 공간으로 약물을 주사하는 맥락막상 카테터를 사용하여 맥락막상 공간을 통해 수행된다(예를 들어, Baldassarre 등, 2017, Subretinal Delivery of Cells via the Suprachoroidal Space: Janssen Trial. In: Schwartz 등(eds) Cellular Therapies for Retinal Disease, Springer, Cham; 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2016/040635 A1을 참조하며; 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다). 맥락막상 투여 절차는 눈의 맥락막상 공간에 약물의 투여를 수반하고, 미세바늘이 있는 미세주사기와 같은 맥락막상 약물 전달 장치를 사용하여 정상적으로 수행된다(예를 들어, Hariprasad, 2016, Retinal Physician 13: 20-23; Goldstein, 2014, Retina Today 9(5): 82-87을 참조하며; 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다). 본원에 기재된 본 발명에 따른 맥락막상 공간에 발현 벡터를 침작하기 위해 사용될 수 있는 맥락막상 약물 전달 장치는 Clearside® Biomedical, Inc.에 의해 제조된 맥락막상 약물 전달 장치(예를 들어, Hariprasad, 2016, Retinal Physician 13: 20-23 참조) 및 MedOne 맥락막상 카테터를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 본원에 기재된 본 발명에 따른 맥락막상 공간을 통해 망막하 공간에 발현 벡터를 침착시키는 데 사용될 수 있는 망막하 약물 전달 장치는 Janssen Pharmaceuticals, Inc.에 의해 제조된 망막하 약물 전달 장치를 포함하나 이에 제한되지 않는다(예를 들어, 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2016/040635 A1 참조). 구체적 구현예에서, 공막의 외부 표면에 투여는 끝 부분이 공막 표면에 직접 병렬로 삽입 및 유지될 수 있는 캐뉼라를 포함하는 공막옆 약물 전달 장치에 의해 수행된다. 상이한 투여 모드의 보다 상세한 내용에 대해 섹션 5.3.2를 참조한다. 맥락막상, 망막하, 공막옆 및/또는 망막내 투여는 망막, 유리체액, 및/또는 수양액에 가용성 이식유전자 산물의 전달을 초래하여야 한다. 망막 세포, 예를 들어, 간상 세포, 추상 세포, 망막 색소 상피 세포, 수평 세포, 양극 세포, 무축삭 세포, 신경절 세포, 및/또는 뮐러(Muller) 세포에 의한 이식유전자 산물(예를 들어, 암호화된 항-VEGF 항체)의 발현은 망막, 유리체액, 및/또는 수양액에서 이식유전자 산물의 전달 및 유지를 초래한다. 구체적 구현예에서, 3 개월 동안 유리체액에서 적어도 0.330 μg/mL, 또는 수양액(눈의 전방)에서 0.110 μg/mL의 Cmin에서 이식유전자 산물의 농도를 유지하는 용량이 바람직하며; 이후에, 1.70 내지 6.60 μg/mL 범위의 이식유전자 산물의 유리체 Cmin 농도, 및/또는 0.567 내지 2.20 μg/mL 범위의 수양액 Cmin 농도가 유지되어야 한다. 그러나, 이식유전자 산물은 지속적으로 생성되기 때문에, 더 낮은 농도를 유지하는 것이 효과적일 수 있다. 이식유전자 산물의 농도는 치료된 눈의 전방으로부터 유리체액 및/또는 수양액의 환자 샘플에서 측정될 수 있다. 대안적으로, 유리체액 농도는 환자의 이식유전자 산물의 혈청 농도를 측정함으로써 추정 및/또는 모니터링될 수 있으며, 이식유전자 산물에 대한 전신 대 유리체내 노출의 비는 약 1:90,000이다. (예를 들어, Xu L, 등, 2013, Invest. Opthal. Vis. Sci. 54: 1616-1624의 p. 1621 및 p. 1623의 표 5에 보고된 라니비주맙의 유리체액 및 혈청 농도를 참조하며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다).
특정 구현예에서, 투여량은 ml 당 게놈 카피 또는 환자의 눈에 투여된 게놈 카피의 수에 의해(예를 들어, 맥락막상 주사(예를 들어, 미세바늘이 있는 미세주사기와 같은 맥락막상 약물 전달 장치를 통해), 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사(외과적 처치), 또는 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여에 의해) 측정된다. 특정 구현예에서, ml 당 2.4 x 1011 게놈 카피 내지 ml 당 1 x 1013 게놈 카피가 투여된다. 구체적 구현예에서, ml 당 2.4 x 1011 게놈 카피 내지 ml 당 5 x 1011 게놈 카피가 투여된다. 또 다른 구체적 구현예에서, ml 당 5 x 1011 게놈 카피 내지 ml 당 1 x 1012 게놈 카피가 투여된다. 또 다른 구체적 구현예에서, ml 당 1 x 1012 게놈 카피 내지 ml 당 5 x 1012 게놈 카피가 투여된다. 또 다른 구체적 구현예에서, ml 당 5 x 1012 게놈 카피 내지 ml 당 1 x 1013 게놈 카피가 투여된다. 또 다른 구체적 구현예에서, ml 당 약 2.4 x 1011 게놈 카피가 투여된다. 또 다른 구체적 구현예에서, ml 당 약 5 x 1011 게놈 카피가 투여된다. 또 다른 구체적 구현예에서, ml 당 약 1 x 1012 게놈 카피가 투여된다. 또 다른 구체적 구현예에서, ml 당 약 5 x 1012 게놈 카피가 투여된다. 또 다른 구체적 구현예에서, ml 당 약 1 x 1013 게놈 카피가 투여된다. 특정 구현예에서, 1 x 109 내지 1 x 1012 게놈 카피가 투여된다. 구체적 구현예에서, 3 x 109 내지 2.5 x 1011 게놈 카피가 투여된다. 구체적 구현예에서, 1 x 109 내지 2.5 x 1011 게놈 카피가 투여된다. 구체적 구현예에서, 1 x 109 내지 1 x 1011 게놈 카피가 투여된다. 구체적 구현예에서, 1 x 109 내지 5 x 109 게놈 카피가 투여된다. 구체적 구현예에서, 6 x 109 내지 3 x 1010 게놈 카피가 투여된다. 구체적 구현예에서, 4 x 1010 내지 1 x 1011 게놈 카피가 투여된다. 구체적 구현예에서, 2 x 1011 내지 1 x 1012 게놈 카피가 투여된다. 구체적 구현예에서, 약 3 x 109 게놈 카피가 투여된다(이는 250 □l의 부피에서 ml 당 약 1.2 x 1010 게놈 카피에 상응함). 또 다른 구체적 구현예에서, 약 1 x 1010 게놈 카피가 투여된다(이는 250 □l의 부피에서 ml 당 약 4 x 1010 게놈 카피에 상응함). 또 다른 구체적 구현예에서, 약 6 x 1010 게놈 카피가 투여된다(이는 250 □l의 부피에서 ml 당 약 2.4 x 1011 게놈 카피에 상응함). 또 다른 구체적 구현예에서, 약 1.6 x 1011 게놈 카피가 투여된다(이는 250 □l의 부피에서 ml 당 약 6.2 x 1011 게놈 카피에 상응함). 또 다른 구체적 구현예에서, 약 1.6 x 1011 게놈 카피가 투여된다(이는 250 □l의 부피에서 ml 당 약 6.4 x 1011 게놈 카피에 상응함). 또 다른 구체적 구현예에서, 약 1.55 x 1011 게놈 카피가 투여된다(이는 250 □l의 부피에서 ml 당 약 6.2 x 1011 게놈 카피에 상응함). 또 다른 구체적 구현예에서, 약 2.5 x 1011 게놈 카피(이는 250 □l의 부피에서 약 1.0 x 1012에 상응함)가 투여된다.
본원에 사용된 바와 같고 달리 명시되지 않는 한, 용어 "약"은 주어진 값 또는 범위의 플러스 또는 마이너스 10%를 의미한다.
본 발명은 시간 경과에 따라 소멸되어 최고치 및 최저치를 초래하는 VEGF 억제제의 고용량 볼루스의 반복된 안구 주사를 수반하는 관리 치료 기준에 대해 여러 이점을 갖는다. 항체를 반복적으로 주사하는 것과 대조적으로, 이식유전자 산물 항체의 지속된 발현은 보다 일관된 수준의 항체가 작용 부위에 존재하도록 하고, 환자에게 덜 위험하고 더 편리하게 되어 더 적은 주사가 필요하게 되므로, 의사 방문이 줄어들게 된다. 일관된 단백질 생산은 망막에서 부종 반동이 발생할 가능성이 적기 때문에 더 나은 임상 결과로 이어질 수 있다. 또한, 이식유전자로부터 발현된 항체는 번역 동안 및 후에 존재하는 상이한 미세환경으로 인해 직접 주사되는 것과 상이한 방식으로 번역후 변형된다. 임의의 특정 이론에 얽매이지 않고, 이는 상이한 확산, 생물활성, 분포, 친화도, 약동학, 및 면역원성 특성을 갖는 항체를 초래하여, 작용 부위로 전달되는 항체가 직접 주사된 항체와 비교하여 "바이오베터(biobetter)"가 되도록 한다.
게다가, 생체내에서 이식유전자로부터 발현된 항체는 단백질 응집 및 단백질 산화와 같은 재조합 기술에 의해 생성되는 항체와 연관된 분해 산물을 함유할 가능성이 없다. 응집은 높은 단백질 농도, 제조 장비 및 용기와의 표면 상호작용, 및 특정 완충 시스템을 사용한 정제로 인한 단백질 생산 및 보관과 연관된 문제이다. 응집을 촉진시키는 이러한 조건은 유전자 요법에서 이식유전자 발현에 존재하지 않는다. 메티오닌, 트립토판, 및 히스티딘 산화와 같은 산화는 또한 단백질 생산 및 보관과 연관되어 있고, 스트레스 받는 세포 배양 조건, 금속 및 공기 접촉, 및 완충제 및 부형제의 불순물에 의해 야기된다. 생체내에서 이식유전자로부터 발현되는 단백질은 또한 스트레스 받는 조건에서 산화될 수 있다. 그러나, 인간, 및 많은 다른 유기체는 산화 스트레스를 감소시킬 뿐만 아니라, 때때로 산화를 복구 및/또는 역전시키는 항산화 방어 시스템을 장착하고 있다. 따라서, 생체내에서 생성되는 단백질은 산화된 형태가 될 가능성이 없다. 응집 및 산화는 둘 다 효능, 약동학(정리), 및 면역원성에 영향을 미칠 수 있다.
이론에 얽매이지 않고, 본원에 제공된 방법 및 조성물은 부분적으로 하기 원칙에 기반한다:
(i) 인간 망막 세포는 망막 세포에서 강력한 과정인 글리코실화 및 티로신-O-황산화를 포함한 분비된 단백질의 번역후 처리를 위한 세포 기계를 보유하는 분비 세포이다. (예를 들어, 망막 세포에 의한 글리코실화의 생산을 보고하는 Wang 등, 2013, Analytical Biochem. 427: 20-28 및 Adamis 등, 1993, BBRC 193: 631-638; 및 망막 세포에 의해 분비된 티로신-황산화 당단백질의 생산을 보고하는 Kanan 등, 2009, Exp. Eye Res. 89: 559-567 및 Kanan & Al-Ubaidi, 2015, Exp. Eye Res. 133: 126-131을 참조하며, 각각은 인간 망막 세포에 의해 만들어진 번역후 변형에 대해 그 전문이 참조로 포함된다).
(ii) 최신 기술 이해와 달리, 라니비주맙과 같은 항-VEGF 항원-결합 단편(및 베바시주맙과 같은 전장 항-VEGF mAb의 Fab 도메인)은 실제로 N-연결된 글리코실화 부위를 보유한다. 예를 들어, CH 도메인(TVSWN165SGAL) 및 CL 도메인(QSGN158SQE)에서 비-공통 아스파라기날("N") 글리코실화 부위, 뿐만 아니라 라니비주맙의 VH 도메인(Q115GT) 및 VL 도메인(TFQ100GT)에서 글리코실화 부위(및 베바시주맙의 Fab에서 상응하는 부위)인 글루타민("Q") 잔기를 식별하는 도 1 참조. (예를 들어, Valliere-Douglass 등, 2009, J. Biol. Chem. 284: 32493-32506, 및 Valliere-Douglass 등, 2010, J. Biol. Chem. 285: 16012-16022를 참조하며, 각각은 항체에서 N-글리코실화 부위의 식별을 위해 그 전문이 참조로 포함된다).
(iii) 이러한 비-정규 부위는 일반적으로 항체 집단의 낮은 수준의 글리코실화(예를 들어, 약 1-5%)를 초래하지만, 기능적 이익은 눈과 같은 면역 특권이 있는 기관에서 유의할 수 있다(예를 들어, van de Bovenkamp 등, 2016, J. Immunol. 196:1435-1441 참조). 예를 들어, Fab 글리코실화는 항체의 안정성, 반감기, 및 결합 특성에 영향을 미칠 수 있다. 표적에 대한 항체의 친화도에 대한 Fab 글리코실화의 효과를 결정하기 위해, 당업자에게 알려진 임의의 기술, 예를 들어, 효소 결합 면역흡착 검정(ELISA), 또는 표면 플라즈몬 공명(SPR)이 사용될 수 있다. 항체의 반감기에 대한 Fab 글리코실화의 효과를 결정하기 위해, 예를 들어, 방사선표지된 항체가 투여된 대상체에서 혈액 또는 기관(예를 들어, 눈)에서의 방사능 수준을 측정함으로써 당업자에게 알려진 임의의 기술이 사용될 수 있다. 항체의 안정성, 예를 들어, 응집 또는 단백질 접힘 수준에 대한 Fab 글리코실화의 효과를 결정하기 위해, 당업자에게 알려진 임의의 기술, 예를 들어, 시차 주사 열량측정(DSC), 고성능 액체 크로마토그래피(HPLC), 예를 들어, 크기 배제 고성능 액체 크로마토그래피(SEC-HPLC), 모세관 전기영동, 질량 분석법, 또는 혼탁도 측정이 사용될 수 있다. 본원에 제공된 HuPTMFabVEGFi, 예를 들어, HuGlyFabVEGFi, 이식유전자는 비-정규 부위에서 0.5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 또는 10% 또는 그 이상 글리코실화된 Fab의 생산을 초래한다. 특정 구현예에서, Fab 집단으로부터 0.5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 또는 10% 또는 그 이상의 Fab가 비-정규 부위에서 글리코실화된다. 특정 구현예에서, 0.5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 또는 10% 또는 그 이상의 비-정규 부위가 글리코실화된다. 특정 구현예에서, 이러한 비-정규 부위에서 Fab의 글리코실화는 HEK293 세포에서 생성된 Fab에서 이러한 비-정규 부위의 글리코실화 양보다 25%, 50%, 100%, 200%, 300%, 400%, 500%, 또는 그 이상 더 크다.
(iv) 글리코실화 부위 이외에, 라니비주맙과 같은 항-VEGF Fab(및 베바시주맙의 Fab)는 CDR 내 또는 근처에 티로신("Y") 황산화 부위를 함유하며; 라니비주맙의 VH(EDTAVY94Y95) 및 VL(EDFATY86) 도메인에서 티로신-O-황산화 부위(및 베바시주맙의 Fab에서 상응하는 부위)를 식별하는 도 1을 참조한다. (예를 들어, Yang 등, 2015, Molecules 20:2138-2164, 특히 p. 2154를 참조하며 단백질 티로신 황산화에 적용된 티로신 잔기를 둘러싼 아미노산의 분석을 위해 그 전문이 참조로 포함된다. "규칙"은 다음과 같이 요약될 수 있다: Y의 +5 내지 -5 위치 이내에 E 또는 D가 있는 T 잔기, 여기서 Y의 위치 -1은 중성 또는 산성 하전된 아미노산이지만, 황산화를 폐지하는 염기성 아미노산, 예를 들어, R, K, 또는 H는 아니다). 인간 IgG 항체는 N-말단 변형, C-말단 변형, 아미노산 잔기의 분해 또는 산화, 시스테인 관련된 변이체, 및 당화와 같은 다수의 다른 번역 후 변형을 나타낼 수 있다(예를 들어, Liu 등, 2014, mAbs 6(5):1145-1154 참조).
(v) 인간 망막 세포에 의한 라니비주맙 또는 베바시주맙의 Fab 단편과 같은 항-VEGF Fab의 글리코실화는 안정성, 반감기를 개선하고 이식유전자 산물의 원치않은 응집 및/또는 면역원성을 감소시킬 수 있는 글리칸의 첨가를 초래할 것이다. (예를 들어, Fab 글리코실화의 최근 생겨난 중요성의 검토를 위해 Bovenkamp 등, 2016, J. Immunol. 196: 1435-1441 참조). 중요하게는, 본원에 제공된 HuPTMFabVEGFi, 예를 들어, HuGlyFabVEGFi에 첨가될 수 있는 글리칸은 2,6-시알산을 함유하는 고도로 처리된 복합형 바이안테나리 N-글리칸(예를 들어, HuPTMFabVEGFi, 예를 들어, HuGlyFabVEGFi에 혼입될 수 있는 글리칸을 도시하는 도 2 참조) 및 이등분 GlcNAc이지만, NGNA(N-글리콜릴뉴라민산, Neu5Gc)는 아니다. 이러한 글리칸은 라니비주맙(이. 콜라이(E. coli)에서 만들어지고 전혀 글리코실화되지 않음) 또는 베바시주맙(번역 후 변형을 만드는 데 필요한 2,6-시알릴트랜스퍼라제가 없는 CHO 세포에서 만들어지며, Neu5Ac(NANA) 대신에 인간에게 전형적(그리고 잠재적으로 면역원성)이 아닌 시알산으로서 Neu5Gc(NGNA)를 첨가하지만, GlcNAc를 이등분하는 CHO 세포 생성물도 아님)에 존재하지 않는다. 예를 들어, Dumont 등, 2015, Crit. Rev. Biotechnol.(Early Online, published online September 18, 2015, pp. 1-13 at p. 5)을 참조한다. 더욱이, CHO 세포는 또한 α-Gal 항원인 면역원성 글리칸을 생성할 수 있으며, 이는 대부분의 개인에 존재하는 항-α-Gal 항체와 반응하며, 고농도에서 아낙필라시스를 촉발할 수 있다. 예를 들어, Bosques, 2010, Nat Biotech 28: 1153-1156을 참조한다. 본원에 제공된 HuPTMFabVEGFi, 예를 들어, HuGlyFabVEGFi의 인간 글리코실화 패턴은 이식유전자 산물의 면역원성을 감소시키고 효능을 개선해야 한다.
(vi) 인간 망막 세포에서 강력한 번역후 과정인 라니비주맙 또는 베바시주맙의 Fab 단편과 같은 항-VEGF Fab의 티로신-황산화는 VEGF에 대한 결합력이 증가된 이식유전자 산물을 초래할 수 있다. 실제로, 다른 표적에 대한 치료 항체의 Fab의 티로신-황산화는 항원에 대한 결합력 및 활성을 극적으로 증가시키는 것으로 나타났다. (예를 들어, Loos 등, 2015, PNAS 112: 12675-12680, 및 Choe 등, 2003, Cell 114: 161-170 참조). 이러한 번역 후 변형은 라니비주맙(티로신-황산화에 필요한 효소를 보유하지 않는 숙주인 이. 콜라이에서 만들어짐)에 존재하지 않고, 기껏해야 CHO 세포 생성물인 베바시주맙에서 과소 평가된다. 인간 망막 세포와 달리, CHO 세포는 분비 세포가 아니며 번역 후 티로신-황산화에 대한 제한된 용량을 갖는다. (예를 들어, Mikkelsen & Ezban, 1991, Biochemistry 30: 1533-1537, 특히 p. 1537의 논의 참조).
전술한 이유로, HuPTMFabVEGFi, 예를 들어, HuGlyFabVEGFi의 생산은 유전자 요법을 통해, 예를 들어, HuPTMFabVEGFi, 예를 들어, HuGlyFabVEGFi를 암호화하는 바이러스 또는 다른 DNA 발현 작제물을 nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 또는 당뇨병성 망막증(DR)으로 진단된 환자(인간 대상체)의 눈(들)에 있는 맥락막상 공간, 망막하 공간, 또는 공막의 외부 표면에 투여하여(예를 들어, 맥락막상 주사(예를 들어, 미세바늘이 있는 미세주사기와 같은 맥락막상 약물 전달 장치를 통해), 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사(외과적 처치), 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여, 또는 후방 공막옆 데포 절차에 의해), 형질도입된 망막 세포에 의해 생성된 완전-인간 번역 후 변형된, 예를 들어, 인간-글리코실화, 황산화된 이식유전자 산물을 지속적으로 공급하는 영구적인 데포를 눈에 생성함으로써 달성된 nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 또는 당뇨병성 망막증(DR)의 치료를 위한 "바이오베터" 분자를 초래하여야 한다. FabVEGFi에 대한 cDNA 작제물은 절두된 망막 세포에 의해 적절한 동시 번역 및 번역 후 처리(글리코실화 및 단백질 황산화)를 보장하는 신호 펩티드를 포함하여야 한다. 망막 세포에 의해 사용되는 이러한 신호 서열은 다음을 포함할 수 있으나 이에 제한되지 않는다:
ㆍ MNFLLSWVHW SLALLLYLHH AKWSQA(VEGF-A 신호 펩티드)(서열번호: 5)
ㆍ MERAAPSRRV PLPLLLLGGL ALLAAGVDA(피불린-1 신호 펩티드)(서열번호: 6)
ㆍ MAPLRPLLIL ALLAWVALA(비트로넥틴 신호 펩티드)(서열번호: 7)
ㆍ MRLLAKIICLMLWAICVA(보체 인자 H 신호 펩티드)(서열번호: 8)
ㆍ MRLLAFLSLL ALVLQETGT(옵티로신 신호 펩티드)(서열번호: 9)
ㆍ MKWVTFISLLFLFSSAYS(알부민 신호 펩티드)(서열번호: 22)
ㆍ MAFLWLLSCWALLGTTFG(키모트립시노겐 신호 펩티드)(서열번호: 23)
ㆍ MYRMQLLSCIALILALVTNS (인터류킨-2 신호 펩티드)(서열번호: 24)
ㆍ MNLLLILTFVAAAVA(트립시노겐-2 신호 펩티드)(서열번호: 25)
ㆍ MYRMQLLLLIALSLALVTNS(돌연변이체 인터류킨-2 신호 펩티드)(서열번호: 52).
ㆍ 예를 들어, Stern 등, 2007, Trends Cell. Mol. Biol., 2:1-17 및 Dalton & Barton, 2014, Protein Sci, 23: 517-525를 참조하며, 각각은 사용될 수 있는 신호 펩티드에 대해 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
유전자 요법에 대한 대안적, 또는 부가적 치료로서, HuPTMFabVEGFi 생성물, 예를 들어, HuGlyFabVEGFi 당단백질은 재조합 DNA 기술에 의해 인간 세포주에서 생성되고, 유리체내 또는 망막하 주사에 의해 nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 또는 당뇨병성 망막증(DR)으로 진단된 환자에게 투여될 수 있다. HuPTMFabVEGFi 생성물, 예를 들어, 당단백질은 또한 nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 또는 당뇨병성 망막증(DR)이 있는 환자에게 투여될 수 있다. 이러한 재조합 당단백질 생산에 사용될 수 있는 인간 세포주는 몇 개만 예를 들면 인간 배아 신장 293 세포(HEK293), 섬유육종 HT-1080, HKB-11, CAP, HuH-7, 및 망막 세포주, PER.C6, 또는 RPE를 포함하나 이에 제한되지 않는다(예를 들어, Dumont 등, 2015, Crit. Rev. Biotechnol. (Early Online, published online September 18, 2015, pp. 1-13) "Human cell lines for biopharmaceutical manufacturing: history, status, and future perspectives"를 참조하며 HuPTMFabVEGFi 생성물, 예를 들어, HuGlyFabVEGFi 당단백질의 재조합 생산에 사용될 수 있는 인간 세포주의 검토를 위해 그 전문이 참조로 포함된다). 완전한 글리코실화, 특히 시알릴화, 및 티로신-황산화를 보장하기 위해, 생산에 사용되는 세포주는 α-2,6-시알릴트랜스퍼라제(또는 α-2,3- 및 α-2,6-시알릴트랜스퍼라제 둘 다) 및/또는 망막 세포에서 티로신-O-황산화를 담당하는 TPST-1 및 TPST-2 효소를 공동 발현하도록 숙주 세포를 조작함으로써 향상될 수 있다.
다른 이용가능한 치료의 전달에 의해 달성된 HuPTMFabVEGFi, 예를 들어, HuGlyFabVEGFi의 눈/망막으로의 전달의 조합은 본원에 제공된 방법에 의해 포함된다. 추가 치료는 유전자 요법 치료 전에, 동시에, 또는 후에 투여될 수 있다. 본원에 제공된 유전자 요법과 조합될 수 있는 nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 또는 당뇨병성 망막증(DR)에 이용가능한 치료는 레이저 광응고술, 베르테포르핀을 사용한 광역학 요법, 및 페갑타닙(pegaptanib), 라니비주맙, 아플리베르셉트, 또는 베바시주맙을 포함하나 이에 제한되지 않는 항-VEGF 제제를 사용한 유리체내(IVT) 주사를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 생물제제와 같은 항-VEGF 제제를 사용한 추가 치료는 "구조" 요법으로 지칭될 수 있다.
소분자 약물과 달리, 생물제제는 일반적으로 상이한 효능, 약동학, 및 안전성 프로파일이 있는 상이한 변형 또는 형태를 갖는 많은 변이체의 혼합물을 포함한다. 유전자 요법 또는 단백질 요법 접근법으로 생성된 모든 분자가 완전히 글리코실화되고 황산화되는 것은 필수적이지 않다. 오히려, 생성된 당단백질 집단은 효능을 입증하기 위해 2,6-시알릴화, 및 황산화를 포함한 충분한 글리코실화(집단의 약 1% 내지 약 10%)를 가져야 한다. 본원에 제공된 유전자 요법 치료의 목표는 망막 변성의 진행을 늦추거나 저지하고, 최소의 개입/침습 절차로 시력 상실을 늦추거나 예방하는 것이다. 효능은 BCVA(최대 교정 시력), 안내압, 틈새등 생체현미경검사, 간접 안저검사법, SD-OCT(SD-광간접 단층촬영), 망막전위도검사(ERG)를 측정함으로써 모니터링될 수 있다. 시력 상실, 감염, 염증 및 망막 박리를 포함한 다른 안전성 이벤트의 징후가 또한 모니터링될 수 있다. 망막 두께는 본원에 제공된 치료의 효능을 결정하기 위해 모니터링될 수 있다. 임의의 특정 이론에 얽매이지 않고, 망막의 두께는 임상 판독으로 사용될 수 있으며, 여기서 망막 두께의 감소가 크거나 또는 망막이 두꺼워지기 전의 기간이 길수록, 치료는 더 효과적이다. 망막 두께는 예를 들어, SD-OCT에 의해 결정될 수 있다. SD-OCT는 저밀착성 간섭계를 사용하여 관심 대상에서 반사된 후방산란 광의 에코 시간 지연 및 규모를 결정하는 3차원 이미징 기술이다. OCT를 사용하여 3 내지 15 μm 축 해상도로 조직 샘플의 층(예를 들어, 망막)을 스캔할 수 있고, SD-OCT는 이전 기술 형태에 비해 축 해상도 및 스캔 속도를 개선시킨다(Schuman, 2008, Trans. Am. Opthamol. Soc. 106:426-458). 망막 기능은 예를 들어, ERG에 의해 결정될 수 있다. ERG는 인간에서 사용하기 위해 FDA 승인을 받은 망막 기능의 비-침습적 전기생리학적 검사이며, 눈의 빛 민감성 세포(간상 및 원추), 및 이의 연결 신경절 세포, 특히 섬광 자극에 대한 반응을 조사한다.
바람직한 구현예에서, 항원-결합 단편은 검출가능한 NeuGc 및/또는 α-Gal을 함유하지 않는다. 본원에 사용된 어구 "검출가능한 NeuGc 및/또는 α-Gal"은 당업계에 알려진 표준 검정 방법에 의해 검출가능한 NeuGc 및/또는 α-Gal 모이어티를 의미한다. 예를 들어, NeuGc는 Hara 등, 1989, "Highly Sensitive Determination of N-Acetyl-and N- Glycolylneuraminic Acids in Human Serum and Urine and Rat Serum by Reversed-Phase Liquid Chromatography with Fluorescence Detection." J. Chromatogr., B: Biomed. 377: 111-119에 따른 HPLC에 의해 검출될 수 있으며, 이는 NeuGc 검출 방법에 대해 본원에 참조로 포함된다. 대안적으로, NeuGc는 질량 분석법에 의해 검출될 수 있다. α-Gal은 ELISA를 사용하여 검출될 수 있으며, 예를 들어, Galili 등, 1998, "A sensitive assay for measuring alpha-Gal epitope expression on cells by a monoclonal anti-Gal antibody." Transplantation. 65(8):1129-32를 참조하거나, 또는 질량 분석법에 의해 검출될 수 있으며, 예를 들어, Ayoub 등, 2013, "Correct primary structure assessment and extensive glyco-profiling of cetuximab by a combination of intact, middle-up, middle-down and bottom-up ESI and MALDI mass spectrometrytechniques." Landes Bioscience. 5(5): 699-710을 참조한다. 또한 Platts-Mills 등, 2015, "Anaphylaxis to the Carbohydrate Side-Chain Alpha-gal" Immunol Allergy Clin North Am. 35(2): 247-260에 인용된 참고문헌을 참조한다.
특정 측면에서, 본원에는 또한 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하는 항-VEGF 항원-결합 단편(즉, VEGF에 면역특이적으로 결합하는 항원-결합 단편)이 제공되며, 여기서 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열번호. 16)의 두번째 Q)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu). 구체적 구현예에서, 항원-결합 단편은 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하며, 여기서 경쇄 CDR1의 8번째 및 11번째 아미노산 잔기(즉, SASQDISNYLN(서열번호. 14)에서 2 개의 N은 각각 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열번호. 16)에서 2번째 Q)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu). 구체적 구현예에서, 항원-결합 단편은 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하며, 여기서 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열번호. 16)에서 2번째 Q)는 아세틸화되지 않는다. 구체적 구현예에서, 항원-결합 단편은 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하며, 여기서 경쇄 CDR1의 8번째 및 11번째 아미노산 잔기(즉, SASQDISNYLN(서열번호. 14)에서 2 개의 N은 각각 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열번호. 16)에서 2번째 Q)는 아세틸화되지 않는다. 본원에 제공된 항-VEGF 항원-결합 단편은 본원에 기재된 본 발명에 따른 임의의 방법에 사용될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 본원에 기재된 화학적 변형(들) 또는 화학적 변형(들)의 결여(경우에 따라)는 질량 분석법에 의해 결정된다.
특정 측면에서, 본원에는 또한 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하는 항-VEGF 항원-결합 단편이 제공되며, 여기서 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 N)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu). 구체적 구현예에서, 항원-결합 단편은 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1의 9번째 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 M)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 중쇄 CDR2의 3번째 아미노산 잔기(즉, WINTYTGEPTYAADFKR(서열번호. 18)에서 N은 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 N)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu). 구체적 구현예에서, 항원-결합 단편은 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 N)는 아세틸화되지 않는다. 구체적 구현예에서, 항원-결합 단편은 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1의 9번째 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 M)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 중쇄 CDR2의 3번째 아미노산 잔기(즉, WINTYTGEPTYAADFKR(서열번호. 18)에서 N은 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 N)는 아세틸화되지 않는다. 본원에 제공된 항-VEGF 항원-결합 단편은 본원에 기재된 본 발명에 따른 임의의 방법에 사용될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 본원에 기재된 화학적 변형(들) 또는 화학적 변형(들)의 결여(경우에 따라)는 질량 분석법에 의해 결정된다.
특정 측면에서, 본원에는 또한 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하는 항-VEGF 항원-결합 단편이 제공되며, 여기서 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 N)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하지 않고: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열번호. 16)에서 2번째 Q)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu). 구체적 구현예에서, 항원-결합 단편은 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하며, 여기서: (1) 중쇄 CDR1의 9번째 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 M)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 중쇄 CDR2의 3번째 아미노산 잔기(즉, WINTYTGEPTYAADFKR(서열번호. 18)에서 N은 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 N)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하지 않으며: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu); (2) 경쇄 CDR1의 8번째 및 11번째 아미노산 잔기(즉, SASQDISNYLN(서열번호. 14)에서 2 개의 N은 각각 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열번호. 16)에서 2번째 Q)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu). 구체적 구현예에서, 항원-결합 단편은 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 N)는 아세틸화되지 않고, 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열번호. 16)에서 2번째 Q)는 아세틸화되지 않는다. 구체적 구현예에서, 항원-결합 단편은 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하며, 여기서: (1) 중쇄 CDR1의 9번째 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 M)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 중쇄 CDR2의 3번째 아미노산 잔기(즉, WINTYTGEPTYAADFKR(서열번호. 18)에서 N은 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 N)는 아세틸화되지 않으며; (2) 경쇄 CDR1의 8번째 및 11번째 아미노산 잔기(즉, SASQDISNYLN(서열번호. 14)에서 2 개의 N은 각각 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열번호. 16)에서 2번째 Q)는 아세틸화되지 않는다. 본원에 제공된 항-VEGF 항원-결합 단편은 본원에 기재된 본 발명에 따른 임의의 방법에 사용될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 본원에 기재된 화학적 변형(들) 또는 화학적 변형(들)의 결여(경우에 따라)는 질량 분석법에 의해 결정된다.
또 다른 고려되는 투여 경로는 작은 바늘을 망막하 공간으로 주사하는 후방극을 향하여 망막하 공간으로 주사하기 위해 맥락막상 공간을 통해 삽입 및 터널링된 카테터를 갖는 망막하 약물 전달 장치를 사용한 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여이다. 이 투여 경로는 유리체가 온전하게 유지되게 하며 따라서, 합병증 위험이 적고(유전자 요법 이탈, 및 망막 박리 및 및 황반 원공과 같은 합병증 위험이 적음), 유리체 절제 없이, 생성된 수포는 더 널리 퍼져서 망막의 더 많은 표면적이 더 작은 부피로 형질도입 되도록 할 수 있다. 이 절차 후 백내장 유도 위험은 최소화되며, 젊은 환자에게 바람직하다. 더욱이, 이 절차는 표준 유리체 통과 접근법보다 더 안전하게 안와중심 아래에 수포를 전달할 수 있으며, 형질도입을 위한 표적 세포가 황반 내에 있는 중심 시력에 영향을 미치는 유전성 망막 질환 환자에게 바람직하다. 이 절차는 또한 다른 전달 경로에 영향을 미칠 수 있는 전신 순환에 존재하는 AAV에 대한 중화 항체(Nab)가 있는 환자에게 유리하다. 추가적으로, 이 방법은 표준 유리체 통과 접근법보다 망막절개 부위 밖으로 덜 이탈하는 수포를 생성하는 것으로 나타났다.
공막옆 투여는 눈에 직접 치료제를 주사하는 것과 통상적으로 연관된 부작용인 안내 감염 및 망막 박리의 위험을 피하는 추가 투여 경로를 제공한다.
특정 구현예에서, 여기에는 하나 이상의 용기 및 사용 지침을 포함하는 키트가 기재되며, 여기서 하나 이상의 용기는 약제학적 조성물을 포함한다. 특정 구현예에서, 하나 이상의 용기 중 적어도 하나는 소수성으로-코팅된 유리 바이알로부터 제조된다. 특정 구현예에서, 하나 이상의 용기 중 적어도 하나는 Daikyo Crystal Zenith®(CZ) 바이알로부터 제조된다. 특정 구현예에서, 하나 이상의 용기 중 적어도 하나는 TopLyo 코팅된 바이알로부터 제조된다. 특정 구현예에서, 하나 이상의 용기 중 적어도 하나는 사이클로 올레핀 중합체(COP)로부터 제조된다.
또 다른 측면에서 본원에는 사이클로 올레핀 중합체(COP) 바이알에 적어도 약 0.5mL, 적어도 약 0.8 mL, 약 0.6 mL, 약 0.95 mL의 부피로 3.2 x 1011 GC/mL, 6.5 x 1011GC/mL, 2.5 x 1012GC/mL, 3 x 1013 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태가 제공된다. 일부 구현예에서, 단일 단위 투여 형태는 4℃에서 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월 동안 보관될 수 있다. 일부 구현예에서, 단일 단위 투여 형태는 -80℃에서 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월 동안 보관될 수 있다. 일부 구현예에서, 단일 단위 투여 형태는 이전에 -80℃에서 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월 동안 보관된 후 4℃에서 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월 동안 보관될 수 있다. 일부 구현예에서, -80℃, -20℃ 또는 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 벡터 게놈 농도는 -80℃, -20℃ 또는 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%이다. 일부 구현예에서, -80℃, -20℃ 또는 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 시험관내 효능은 -80℃, -20℃ 또는 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%이다. 일부 구현예에서, -80℃, -20℃ 또는 4℃ 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 크기 분포는 -80℃, -20℃ 또는 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 크기 분포와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일하다. 일부 구현예에서, 일정 기간은 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월이다.
또 다른 측면에서 본원에는 COP 바이알에 적어도 약 0.5 mL, 적어도 약 0.8 mL, 약 0.6 mL, 약 0.95 mL의 부피로 3.2 x 1011 GC/mL, 6.5 x 1011 GC/mL, 2.5 x 1012 GC/mL, 3 x 1013 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4, 4% 수크로스 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태가 제공된다. 일부 구현예에서, 단일 단위 투여 형태는 4℃에서 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월 동안 보관될 수 있다. 일부 구현예에서, 단일 단위 투여 형태는 -80℃에서 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월 동안 보관될 수 있다. 일부 구현예에서, 단일 단위 투여 형태는 이전에 -80℃에서 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월 동안 보관된 후 4℃에서 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월 동안 보관될 수 있다. 일부 구현예에서, -80℃, -20℃ 또는 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 벡터 게놈 농도는 -80℃, -20℃ 또는 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%이다. 일부 구현예에서, -80℃, -20℃ 또는 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 시험관내 효능은 -80℃, -20℃ 또는 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%이다. 일부 구현예에서, -80℃, -20℃ 또는 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 크기 분포는 -80℃, -20℃ 또는 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 크기 분포와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일하다. 일부 구현예에서, 일정 기간은 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월이다.
또 다른 측면에서, 본원에는 본원에 제공된 단일 단위 투여 형태를 함유하는 미리 충전된 주사기가 제공된다. 또 다른 측면에서, 본원에는 본원에 제공된 단일 단위 투여 형태를 함유하는 미리 충전된 주사기를 포함하는 키트가 제공된다.
2.1 예시적인 구현
1. 약제학적 조성물로서,
(a) 재조합 아데노-연관 바이러스(AAV),
(b) 염화 칼륨,
(c) 일염기성 인산 칼륨,
(d) 염화 나트륨,
(e) 인산 나트륨 이염기성 무수물,
(f) 수크로스, 및
(e) 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80을 포함하는, 약제학적 조성물.
2. 단락 1에 있어서, 상기 재조합 AAV가 AAV1, AAV2, AAV2tYF, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAVrh10, AAV.rh20, AAV.rh39, AAV.Rh74, AAV.RHM4-1, AAV.hu37, AAV.Anc80, AAV.Anc80L65, rAAV.7m8, AAV.PHP.B, AAV.PHP.eB, AAV2.5, AAV2tYF, AAV3B, AAV.LK03, AAV.HSC1, AAV.HSC2, AAV.HSC3, AAV.HSC4, AAV.HSC5, AAV.HSC6, AAV.HSC7, AAV.HSC8, AAV.HSC9, AAV.HSC10 , AAV.HSC11, AAV.HSC12, AAV.HSC13, AAV.HSC14, AAV.HSC15, 및 AAV.HSC16으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아데노-연관 바이러스 혈청형의 구성요소를 포함하는 것인, 약제학적 조성물.
3. 단락 1 내지 2 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 재조합 AAV가 AAV8인, 약제학적 조성물.
4. 단락 1 내지 2 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 재조합 AAV가 AAV9인, 약제학적 조성물.
5. 단락 1 내지 4 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 하나 이상의 아미노산을 추가로 포함하는 것인, 약제학적 조성물.
6. 단락 1 내지 5 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 이온 강도가 약 60 mM 내지 약 115 mM 범위 내에 있는 것인, 약제학적 조성물.
7. 단락 4에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 이온 강도가 약 30 mM 내지 약 100 mM 범위 내에 있는 것인, 약제학적 조성물.
8. 단락 1 내지 3 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이
(a) 0.2 g/L 농도의 염화 칼륨,
(b) 0.2 g/L 농도의 일염기성 인산 칼륨,
(c) 5.84 g/L 농도의 염화 나트륨, 및
(d) 1.15 g/L 농도의 인산 나트륨 이염기성 무수물을 포함하는 것인, 약제학적 조성물.
9. 단락 1 내지 8 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 3%(중량/부피, 30 g/L) 내지 18%(중량/부피, 180 g/L) 범위의 농도로 수크로스를 포함하는 것인, 약제학적 조성물.
10. 단락 1 내지 8 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 4%(중량/부피, 40 g/L)의 농도로 수크로스를 포함하는 것인, 약제학적 조성물.
11. 단락 1 내지 10 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80을 포함하되; 상기 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80은 0.0005%(중량/부피, 0.005 g/L) 내지 0.05%(중량/부피, 0.5 g/L) 범위의 농도인, 약제학적 조성물.
12. 단락 1 내지 10 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80을 포함하되; 상기 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80은 0.001%(중량/부피, 0.01 g/L)의 농도인, 약제학적 조성물.
13. 단락 48 내지 54 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 pH가 약 6.0 내지 약 9.0 범위인, 약제학적 조성물.
14. 단락 1 내지 12 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 pH가 약 7.4인, 약제학적 조성물.
15. 단락 1 내지 14 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 삼투압 농도가 약 200 mOsm/L 내지 약 660 mOsm/L 범위인, 약제학적 조성물.
16. 단락 1 내지 15 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 소수성으로-코팅된 유리 바이알에 있는 것인, 약제학적 조성물.
17. 단락 1 내지 15 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 사이클로 올레핀 중합체(COP) 바이알 내에 있는 것인, 약제학적 조성물.
18. 단락 1 내지 15 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 Daikyo Crystal Zenith®(CZ) 바이알 내에 있는 것인, 약제학적 조성물.
19. 단락 1 내지 15 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 TopLyo 코팅된 바이알 내에 있는 것인, 약제학적 조성물.
20. 단락 1 내지 19 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이
(a) 재조합 AAV,
(b) 0.2 g/L 농도의 염화 칼륨,
(c) 0.2 g/L 농도의 일염기성 인산 칼륨,
(d) 5.84 g/L 농도의 염화 나트륨,
(e) 1.15 g/L 농도의 인산 나트륨 이염기성 무수물,
(f) 4% 중량/부피(40 g/L) 농도의 수크로스,
(g) 0.001% 중량/부피(0.01 g/L) 농도의 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80, 및
(h) 물로 이루어지되,
상기 재조합 AAV는 AAV8인, 약제학적 조성물.
21. 단락 1 내지 20 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 벡터 게놈 농도(VGC)가 약 3 x 109 GC/mL, 약 1 x 1010 GC/mL, 약 1.2 x 1010 GC/mL, 약 1.6 x 1010 GC/mL, 약 4 x 1010 GC/mL, 약 6 x 1010 GC/mL, 약 2 x 1011 GC/mL, 약 2.4 x 1011 GC/mL, 약 2.5 x 1011 GC/mL, 약 3 x 1011 GC/mL, 약 3.2 x 1011 GC/mL, 약 6.2 x 1011 GC/mL, 약 6.5 x 1011 GC/mL, 약 1 x 1012 GC/mL, 약 3 x 1012 GC/mL, 약 2 x 1013 GC/mL 또는 약 3 x 1013 GC/mL인, 약제학적 조성물
22. 단락 1 내지 21 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 재조합 AAV가 동결/해동 주기에 대해 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정한 것인, 약제학적 조성물.
23. 단락 1 내지 22 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 재조합 AAV가 -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정하되, 상기 일정 기간은 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월인, 약제학적 조성물.
24. 단락 1 내지 23 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 재조합 AAV가 -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정하되, 상기 일정 기간은 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월인, 약제학적 조성물.
25. 단락 1 내지 24 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 재조합 AAV가 실온에서 일정 기간 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정하되, 상기 일정 기간은 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월인, 약제학적 조성물.
26. 단락 1 내지 25 중 어느 한 단락에 있어서, 상기, 재조합 AAV가 (i) -80℃에서 제1 기간 동안 보관되고; (ii) 후속적으로 해동되고; (iii) 해동 후, 4℃에서 제2 기간 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정한 것인, 약제학적 조성물.
27. 단락 26에 있어서, 상기 제1 기간이 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월인, 약제학적 조성물.
28. 단락 26에 있어서, 상기 제2 기간이 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월인, 약제학적 조성물.
29. 단락 1 내지 22 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도가 -80℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
30. 단락 1 내지 22 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도가 -20℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
31. 단락 1 내지 22 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도가 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
32. 단락 1 내지 22 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 시험관내 효능이 -80℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
33. 단락 1 내지 22 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 시험관내 효능이 -20℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
34. 단락 1 내지 22 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 시험관내 효능이 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
35. 단락 1 내지 22 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 크기 분포가 -80℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 크기 분포와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일한 것인, 약제학적 조성물.
36. 단락 1 내지 22 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 크기 분포가 -20℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 크기 분포와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일한 것인, 약제학적 조성물.
37. 단락 1 내지 22 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 크기 분포가 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 크기 분포와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일한 것인, 약제학적 조성물.
38. 단락 29 내지 37 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 일정 기간이 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월인, 약제학적 조성물.
39. 단락 1 내지 21 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 재조합 AAV의 안정성이 재조합 AAV의 감염성에 의해 결정되는 것인, 약제학적 조성물.
40. 단락 1 내지 21 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 재조합 AAV의 안정성이 재조합 AAV의 응집 수준에 의해 결정되는 것인, 약제학적 조성물.
41. 단락 1 내지 21 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 재조합 AAV의 안정성이 재조합 AAV 입자에 의해 방출된 유리 DNA 수준에 의해 결정되는 것인, 약제학적 조성물.
42. 단락 1 내지 41 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 액체 조성물인, 약제학적 조성물.
43. 단락 1 내지 41 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 동결된 조성물인, 약제학적 조성물.
44. 단락 1 내지 41 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 동결건조된 조성물 또는 재구축된 동결건조된 조성물인, 약제학적 조성물.
45. 단락 1 내지 44 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사, 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사, 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여, 또는 후방 공막옆 데포 절차에 적합한 특성을 갖는 것인, 약제학적 조성물.
46. 단락 1 내지 44 중 어느한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사, 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사, 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여, 또는 후방 공막옆 데포 절차에 적합한 바람직한 밀도를 갖는 것인, 약제학적 조성물.
47. 단락 1 내지 44 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사, 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사, 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여, 또는 후방 공막옆 데포 절차에 적합한 바람직한 삼투압 농도를 갖는 것인, 약제학적 조성물.
48. 단락 47에 있어서, 상기 삼투압 농도가 160-230 mOsm/kg H2O인, 약제학적 조성물.
49. 단락 47에 있어서, 상기 삼투압 농도가 600 mOsm/kg H2O 미만인, 약제학적 조성물.
50. 단락 1 내지 44 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사, 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사, 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여, 또는 후방 공막옆 데포 절차에 적합한 바람직한 점도를 갖는 것인, 약제학적 조성물.
51. 단락 1 내지 44 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 눈에 투여하기에 적합한 것인, 약제학적 조성물.
52. 단락 45에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 맥락막상 주사, 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사, 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여, 또는 후방 공막옆 데포 절차에 적합한 것인, 약제학적 조성물.
53. 단락 1 내지 52 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 이전에 -80℃에서 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월 동안 보관된 후 4℃에서 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월 동안 보관될 수 있는 것인, 약제학적 조성물.
54. 단락 1 내지 53 중 어느 한 단락의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 질환을 치료 또는 예방하는 방법.
55. 단락 1 내지 53 중 어느 한 단락 중 어느 한 단락의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 또는 당뇨병성 망막증(DR)으로 진단된 대상체를 치료하는 방법.
56. 단락 1 내지 53 중 어느 한 단락의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 점액다당류증 유형 IVA(MPS IVA), 점액다당류증 유형 I(MPS I), 점액다당류증 유형 II(MPS II), 가족성 고콜레스테롤혈증(FH), 동형접합 가족성 고콜레스테롤혈증(HoFH), 관상 동맥 질환, 뇌혈관 질환, 듀켄씨 근이영양증, 팔다리이음 근이영양증, 베커형 근이영양증 및 산발성 봉입체 근염, 또는 칼리크레인 관련 질환으로 진단된 대상체를 치료하는 방법.
57. 단락 54 내지 56 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사, 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사, 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여, 또는 후방 공막옆 데포 절차에 의해 투여되는 것인, 방법.
58. 단락 54 내지 57 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 대상체가 인간 대상체인, 방법.
59. nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 또는 당뇨병성 망막증(DR)으로 진단된 대상체를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 단락 1 내지 53 중 어느 한 단락의 약제학적 조성물을 제조하는 단계, -80℃에서 제1 기간 동안 약제학적 조성물을 보관하는 단계; (ii) 약제학적 조성물을 해동하는 단계; 및 (iii) 해동 후, 4℃에서 제2 기간 동안 약제학적 조성물을 보관하는 단계를 포함하는 것인, 방법.
60. 단락 59에 있어서, 상기 제1 기간이 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월인, 방법.
61. 단락 59에 있어서, 상기 제2 기간이 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월인, 방법.
62. 하나 이상의 용기 및 사용 지침을 포함하는 키트로서, 상기 하나 이상의 용기는 단락 1 내지 53 중 어느 한 단락의 약제학적 조성물을 포함하는 것인, 키트.
63. 단락 62에 있어서, 상기 하나 이상의 용기 중 적어도 하나가 소수성으로-코팅된 유리 바이알로부터 제조되는 것인, 키트.
64. 단락 62에 있어서, 상기 하나 이상의 용기 중 적어도 하나가 Daikyo Crystal Zenith®(CZ) 바이알로부터 제조되는 것인, 키트.
65. 단락 62에 있어서, 상기 하나 이상의 용기 중 적어도 하나가 TopLyo 코팅된 바이알로부터 제조되는 것인, 키트.
66. 단락 62에 있어서, 상기 하나 이상의 용기 중 적어도 하나가 사이클로 올레핀 중합체(COP)로부터 제조되는 것인, 키트.
67. 약제학적 조성물로서,
(a) 항-인간 혈관 내피 성장 인자(hVEGF) 항체를 암호화하는 작제물 II,
(b) 염화 칼륨,
(c) 일염기성 인산 칼륨,
(d) 염화 나트륨,
(e) 인산 나트륨 이염기성 무수물,
(f) 수크로스, 및
(e) 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80를 포함하되,
상기 항-hVEGF 항체는 서열번호:2 또는 서열번호:4의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호:1 또는 서열번호:3의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인, 약제학적 조성물.
68. 단락 67에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 이온 강도가 약 60 mM 내지 약 100 mM 범위 내에 있는 것인, 약제학적 조성물.
69. 단락 67 내지 68 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이
(a) 0.2 g/L 농도의 염화 칼륨,
(b) 0.2 g/L 농도의 일염기성 인산 칼륨,
(c) 5.84 g/L 농도의 염화 나트륨, 및
(d) 1.15 g/L 농도의 인산 나트륨 이염기성 무수물을 포함하는 것인, 약제학적 조성물.
70. 단락 67 내지 69 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 3%(중량/부피, 30 g/L) 내지 18%(중량/부피, 180 g/L) 범위의 농도로 수크로스를 포함하는 것인, 약제학적 조성물.
71. 단락 67 내지 69 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 4%(중량/부피, 40 g/L)의 농도로 수크로스를 포함하는 것인, 약제학적 조성물.
72. 단락 67 내지 71 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80을 포함하되; 상기 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80은 0.0005%(중량/부피, 0.005 g/L) 내지 0.05%(중량/부피, 0.5 g/L) 범위의 농도인, 약제학적 조성물.
73. 단락 67 내지 71 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 0.001%(중량/부피, 0.01 g/L)의 농도로 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80을 포함하는 것인, 약제학적 조성물.
74. 단락 67 내지 73 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 pH가 약 6.0 내지 약 9.0 범위 내에 있는 것인, 약제학적 조성물.
75. 단락 67 내지 73 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 pH가 약 7.4인, 약제학적 조성물.
76. 단락 67 내지 75 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 삼투압 농도가 약 200 mOsm/L 내지 약 660 mOsm/L 범위 내에 있는 것인, 약제학적 조성물.
77. 단락 67 내지 76 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 작제물 II가 AAV8로부터의 캡시드를 포함하는 것인, 약제학적 조성물.
78. 단락 67 내지 77 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 작제물 II가 동결/해동 주기에 대해 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 작제물 II보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정한 것인, 약제학적 조성물.
78. 단락 67 내지 77 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 작제물 II가 -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 작제물 II보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정하되, 상기 일정 기간은 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월인, 약제학적 조성물.
79. 단락 67 내지 77 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 작제물 II가 -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 작제물 II보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정하되, 상기 일정 기간은 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월인, 약제학적 조성물.
80. 단락 67 내지 77 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 작제물 II가 실온에서 일정 기간 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 작제물 II보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정하되, 상기 일정 기간은 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월인, 약제학적 조성물.
81. 단락 67 내지 77 중 어느 한 단락에 있어서, 상기, 재조합 AAV가 (i) -80℃에서 제1 기간 동안 보관되고; (ii) 후속적으로 해동되고; (iii) 해동 후, 4℃에서 제2 기간 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 작제물 II보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정한 것인, 약제학적 조성물.
82. 단락 81에 있어서, 상기 제1 기간이 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월인, 약제학적 조성물.
83. 단락 81에 있어서, 상기 제2 기간이 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월인 약제학적 조성물.
84. 단락 67 내지 79 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 벡터 게놈 농도가 -80℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
85. 단락 67 내지 79 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 벡터 게놈 농도가 -20℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
86. 단락 67 내지 79 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 벡터 게놈 농도가 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
87. 단락 67 내지 79 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 시험관내 효능이 -80℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
88. 단락 67 내지 79 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 시험관내 효능이 -20℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
89. 단락 67 내지 79 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 시험관내 효능이 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
90. 단락 67 내지 79 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 크기 분포가 -80℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 크기 분포와 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일한 것인, 약제학적 조성물.
91. 단락 67 내지 79 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 크기 분포가 -20℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 크기 분포와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일한 것인, 약제학적 조성물.
92. 단락 67 내지 79 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 크기 분포가 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 크기 분포와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일한 것인, 약제학적 조성물.
93. 단락 84 내지 92 중 어느 한 항에 있어서, 상기 일정 기간이 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월인, 약제학적 조성물.
94. 단락 77 내지 83 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 작제물 II의 안정성이 재조합 AAV의 감염성에 의해 결정되는 것인, 약제학적 조성물.
95. 단락 77 내지 83 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 작제물 II의 안정성이 재조합 AAV의 응집 수준에 의해 결정되는 것인, 약제학적 조성물.
96. 단락 77 내지 83 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 작제물 II의 안정성이 재조합 AAV 입자에 의해 방출된 유리 DNA 수준에 의해 결정되는 것인, 약제학적 조성물.
97. 단락 67 내지 96 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 소수성으로-코팅된 유리 바이알 내에 있는 것인, 약제학적 조성물.
98. 단락 67 내지 96 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 사이클로 올레핀 중합체(COP) 바이알 내에 있는 것인, 약제학적 조성물.
99. 단락 67 내지 96 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 Daikyo Crystal Zenith®(CZ) 바이알 내에 있는 것인, 약제학적 조성물.
100. 단락 67 내지 96 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 TopLyo 코팅된 바이알 내에 있는 것인, 약제학적 조성물.
101. 단락 67 내지 100 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이
(a) 항-인간 혈관 내피 성장 인자(hVEGF) 항체를 암호화하는 작제물 II,
(b) 0.2 g/L 농도의 염화 칼륨,
(c) 0.2 g/L 농도의 일염기성 인산 칼륨,
(d) 5.84 g/L 농도의 염화 나트륨,
(e) 1.15 g/L 농도의 인산 나트륨 이염기성 무수물,
(f) 4% 중량/부피(40 g/L) 농도의 수크로스,
(g) 0.001% 중량/부피(0.01 g/L) 농도의 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80, 및
(h) 물로 이루어지되,
상기 항-hVEGF 항체는 서열번호:2 또는 서열번호:4의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호:1 또는 서열번호:3의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인, 약제학적 조성물.
102. 단락 101에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 벡터 게놈 농도(VGC)가 약 3 x 109 GC/mL, 약 1 x 1010 GC/mL, 약 1.2 x 1010 GC/mL, 약 1.6 x 1010 GC/mL, 약 4 x 1010 GC/mL, 약 6 x 1010 GC/mL, 약 2 x 1011 GC/mL, 약 2.4 x 1011 GC/mL, 약 2.5 x 1011 GC/mL, 약 3 x 1011 GC/mL, 약 3.2 x 1011 GC/mL, 약 6.2 x 1011 GC/mL, 약 6.5 x 1011 GC/mL, 약 1 x 1012 GC/mL, 약 3 x 1012 GC/mL, 약 2 x 1013 GC/mL 또는 약 3 x 1013 GC/mL인, 약제학적 조성물.
103. 단락 67 내지 102 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사, 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사, 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여, 또는 후방 공막옆 데포 절차에 적합한 특성을 갖는 것인, 약제학적 조성물.
104. 단락 67 내지 102 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사, 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사, 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여, 또는 후방 공막옆 데포 절차에 적합한 바람직한 밀도를 갖는 것인, 약제학적 조성물.
105. 단락 67 내지 102 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사, 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사, 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여, 또는 후방 공막옆 데포 절차에 적합한 바람직한 삼투압 농도를 갖는 것인, 약제학적 조성물.
106. 단락 105에 있어서, 상기 삼투압 농도가 160-230 mOsm/kg H2O인, 약제학적 조성물.
107. 단락 105에 있어서, 상기 삼투압 농도가 600 mOsm/kg H2O 미만인, 약제학적 조성물.
108. 단락 67 내지 102 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사, 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사, 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여, 또는 후방 공막옆 데포 절차에 적합한 바람직한 점도를 갖는 것인, 약제학적 조성물.
109. 단락 67 내지 108 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 액체 조성물인, 약제학적 조성물.
110. 단락 67 내지 108 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 동결된 조성물인, 약제학적 조성물.
111. 단락 67 내지 108 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 동결건조된 조성물 또는 재구축된 동결건조된 조성물인, 약제학적 조성물.
112. 단락 67 내지 111 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 이전에 -80℃에서 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월 동안 보관된 후 4℃에서 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월 동안 보관될 수 있는 것인, 약제학적 조성물.
113. 단락 67 내지 111 중 어느 한 단락의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 또는 당뇨병성 망막증(DR)으로 진단된 대상체를 치료하는 방법.
114. 단락 113에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 맥락막상 주사, 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사, 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여, 또는 후방 공막옆 데포 절차에 의해 투여되는 것인, 방법.
115. 단락 113 또는 114 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 대상체가 인간 대상체인, 방법.
116. nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 또는 당뇨병성 망막증(DR)으로 진단된 대상체를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 단락 67 내지 108 중 어느 한 단락의 약제학적 조성물을 제조하는 단계, -80℃에서 제1 기간 동안 약제학적 조성물을 보관하는 단계; (ii) 약제학적 조성물을 해동하는 단계; 및 (iii) 해동 후, 4℃에서 제2 기간 동안 약제학적 조성물을 보관하는 단계를 포함하는 것인, 방법.
117. 단락 119에 있어서, 상기 제1 기간이 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월인, 방법.
118. 단락 119에 있어서, 상기 제2 기간이 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월인, 방법.
119. 하나 이상의 용기 및 사용 지침을 포함하는 키트로서, 상기 하나 이상의 용기는 단락 67 내지 102 중 어느 한 단락의 약제학적 조성물을 포함하는 것인, 키트.
120. 단락 119에 있어서, 상기 하나 이상의 용기 중 적어도 하나가 사이클로 올레핀 중합체(COP)로부터 제조되는 것인, 키트.
121. 안정한 액체 약제학적 조성물로서,
(a) 재조합 아데노-연관 바이러스(rAAV),
(b) 이온 염을 포함하고 60 mM 내지 150 mM의 이온 강도를 갖는 완충제,
(d) 수크로스, 및
(e) 계면활성제를 포함하는, 조성물.
122. 단락 121에 있어서, 상기 rAAV가 AAV1, AAV2, AAV2tYF, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAVrh10, AAV.rh20, AAV.rh39, AAV.Rh74, AAV.RHM4-1, AAV.hu37, AAV.Anc80, AAV.Anc80L65, rAAV.7m8, AAV.PHP.B, AAV.PHP.eB, AAV2.5, AAV2tYF, AAV3B, AAV.LK03, AAV.HSC1, AAV.HSC2, AAV.HSC3, AAV.HSC4, AAV.HSC5, AAV.HSC6, AAV.HSC7, AAV.HSC8, AAV.HSC9, AAV.HSC10 , AAV.HSC11, AAV.HSC12, AAV.HSC13, AAV.HSC14, AAV.HSC15, 또는 AAV.HSC16을 포함하는 것인, 조성물.
123. 단락 121 또는 122에 있어서, 상기 조성물이 3-16% 수크로스를 포함하는 것인, 조성물.
124. 단락 121 내지 123 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 완충제가 -20℃ 내지 실온의 온도 범위에 걸쳐 약 pH 6 내지 약 pH 9의 pH를 유지하는 것인, 조성물.
125. 단락 121 내지 124 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 조성물이 4-6% 수크로스를 포함하는 것인, 조성물.
126. 단락 121 내지 125 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 완충제가 약 150 mM, 약 145 mM, 약 140 mM, 약 135 mM, 약 130 mM, 약 125 mM, 약 120 mM, 약 115 mM, 또는 약 110 mM 이하의 이온 강도를 갖는 것인, 조성물.
127. 단락 121 내지 126 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 완충제가 약 60 mM 내지 약 115 mM의 이온 강도를 갖는 것인, 조성물.
128. 단락 121 내지 127 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 완충제가 약 60 mM 내지 약 110 mM의 이온 강도를 갖는 것인, 조성물.
129. 단락 121 내지 128 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 조성물이 60 mM 내지 100 mM NaCl을 포함하는 것인, 조성물.
130. 단락 121 내지 129 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 조성물이 4-6% 수크로스를 포함하는 것인, 조성물.
131. 단락 121 내지 130 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 조성물이 약 -20℃의 온도로 동결되는 것인, 조성물.
132. 단락 121 내지 131 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 동결된 조성물이 약 pH 6 내지 약 pH 9의 pH를 유지하는 것인, 조성물.
133. 단락 121 내지 132 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 완충제가 일염기성 인산 칼륨, 인산 칼륨, 염화 나트륨, 인산 나트륨 이염기성 무수물, 인산 나트륨 육수화물, 인산 나트륨 일염기성 일수화물, 인산 나트륨 육수화물, 인산 나트륨 일염기성 일수화물, 트로메타민, 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄 하이드로클로라이드(Tris-HCl), 아미노산, 히스티딘, 히스티딘 하이드로클로라이드(히스티딘-HCl), 숙신산 나트륨, 시트르산 나트륨, 아세트산 나트륨, 및 (4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄술폰산)(HEPES), 황산 나트륨, 황산 마그네슘, 염화 마그네슘 6-수화물, 황산 칼슘, 염화 칼륨, 염화 칼슘, 및 시트르산 칼슘으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 구성요소를 포함하는 것인, 조성물.
134. 단락 121 내지 132 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 완충제가 염화 칼륨, 일염기성 인산 칼륨, 염화 나트륨, 인산 나트륨 이염기성 무수물을 포함하는 것인, 조성물.
135. 단락 121 내지 132 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 완충제가 염화 나트륨, 및 Tris 하이드로클로라이드를 포함하는 것인, 조성물.
136. 단락 121 내지 133 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 계면활성제가 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80인, 조성물.
137. 단락 121 내지 133 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 계면활성제가 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80이되, 상기 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80은 0.005%(중량/부피, 0.005 g/L) 내지 0.05%(중량/부피, 0.5 g/L) 범위의 농도인, 조성물.
138. 단락 121 내지 133 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 계면활성제가 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80이되, 상기 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80은 0.001%(중량/부피, 0.01 g/L)의 농도인, 조성물.
139. 단락 121 내지 138 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 액체 약제학적 조성물이 추가로 동결건조되는 것인, 조성물.
140. 단락 121 내지 138 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 액체 약제학적 조성물이 재구축된 동결건조된 분말인, 조성물.
141. 단락 121 내지 140 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도가 -80℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
142. 단락 121 내지 140 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도가 -20℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
143. 단락 121 내지 140 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도가 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
144. 단락 121 내지 140 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 시험관내 효능이 -80℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
145. 단락 121 내지 140 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 시험관내 효능이 -20℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
146. 단락 121 내지 140 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 시험관내 효능이 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
147. 단락 121 내지 140 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 크기 분포가 -80℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 크기 분포와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일한 것인, 약제학적 조성물.
148. 단락 121 내지 140 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 크기 분포가 -20℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 크기 분포와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일한 것인, 약제학적 조성물.
149. 단락 121 내지 140 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 크기 분포가 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 크기 분포와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일한 것인, 약제학적 조성물.
150. 단락 141 내지 149 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 일정 기간이 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월인, 약제학적 조성물.
151. 단락 121 내지 140 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 이전에 -80℃에서 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월 동안 보관된 후 4℃에서 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월 동안 보관될 수 있는 것인, 약제학적 조성물.
152. 단락 121 내지 140 중 어느 한 단락의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 관심 질환을 치료하는 방법으로서, 상기 rAAV는가 관심 질환의 진행을 치료하거나, 또는 달리 개선하거나, 예방하거나 또는 늦추는 이식유전자를 암호화하는 것인, 방법.
153. nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 또는 당뇨병성 망막증(DR)으로 진단된 대상체를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 단락 121 내지 140 중 어느 한 단락의 약제학적 조성물을 제조하는 단계, -80℃에서 제1 기간 동안 약제학적 조성물을 보관하는 단계; (ii) 약제학적 조성물을 해동하는 단계; 및 (iii) 해동 후, 4℃에서 제2 기간 동안 약제학적 조성물을 보관하는 단계를 포함하는 것인, 방법.
154. 단락 153에 있어서, 상기 제1 기간이 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월인, 방법 조성물.
155. 단락 153에 있어서, 상기 제2 기간이 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월인, 방법.
156. 하나 이상의 용기 및 사용 지침을 포함하는 키트로서, 상기 하나 이상의 용기는 단락 121 내지 140 중 어느 한 단락의 약제학적 조성물을 포함하는 것인, 키트.
157. 단락 1 내지 53, 67 내지 111 및 121 내지 140 중 어느 한 단락의 약제학적 조성물을 포함하는 안정한 액체 제형.
158. 사이클로 올레핀 중합체(COP) 바이알에 약 0.95 mL의 부피로 3.2 x 1011 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태.
159. COP 바이알에 적어도 0.8 mL의 부피로 3.2 x 1011 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태.
160. COP 바이알에 약 0.95 mL의 부피로 3.2 x 1011 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4, 4% 수크로스 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태.
161. COP 바이알에 적어도 0.8 mL의 부피로 3.2 x 1011 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4, 4% 수크로스 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태.
162. COP 바이알에 약 0.95 mL의 부피로 6.5 x 1011 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태.
163. COP 바이알에 적어도 0.8 mL의 부피로 6.5 x 1011 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4, 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태.
164. COP 바이알에 약 0.95 mL의 부피로 6.5 x 1011 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4, 4% 수크로스 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태.
165. COP 바이알에 적어도 0.8 mL의 부피로 6.5 x 1011 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4, 4% 수크로스 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태.
166. COP 바이알에 약 0.6 mL의 부피로 2.5 x 1012 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4, 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태.
167. COP 바이알에 적어도 0.5 mL의 부피로 2.5 x 1012 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4, 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태.
168. COP 바이알에 약 0.6 mL의 부피로 3 x 1013 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4, 4% 수크로스 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태.
169. COP 바이알에 적어도 0.5 mL의 부피로 3 x 1013 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4, 4% 수크로스 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태.
170. 단락 158 내지 169 중 어느 한 단락에 있어서, 4℃에서 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월 동안 보관될 수 있는, 단일 단위 투여 형태.
171. 단락 158 내지 169 중 어느 한 단락에 있어서, -80℃에서 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월 동안 보관될 수 있는, 단일 단위 투여 형태.
172. 단락 158 내지 169 중 어느 한 단락에 있어서, 이전에 -80℃에서 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월 동안 보관된 후 4℃에서 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월 동안 보관될 수 있는, 단일 단위 투여 형태.
173. 단락 158 내지 169 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 벡터 게놈 농도가 -80℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 단일 단위 투여 형태.
174. 단락 158 내지 169 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 벡터 게놈 농도가 -20℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 단일 단위 투여 형태.
175. 단락 158 내지 169 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 벡터 게놈 농도가 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 단일 단위 투여 형태.
176. 단락 158 내지 169 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 시험관내 효능이 -80℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 단일 단위 투여 형태.
177. 단락 158 내지 169 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 시험관내 효능이 -20℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 단일 단위 투여 형태.
178. 단락 158 내지 169 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 시험관내 효능이 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 단일 단위 투여 형태.
179. 단락 158 내지 169 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 크기 분포가 -80℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 크기 분포와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일한 것인, 단일 단위 투여 형태.
180. 단락 158 내지 169 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 크기 분포가 -20℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 크기 분포와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일한 것인, 단일 단위 투여 형태.
181. 단락 158 내지 169 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 크기 분포가 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 크기 분포와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일한 것인, 단일 단위 투여 형태.
182. 단락 173 내지 181 중 어느 한 단락에 있어서, 상기 일정 기간이 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월인, 단일 단위 투여 형태.
183. 단락 158 내지 183 중 어느 한 단락의 단일 단위 투여 형태를 함유하는 미리 충전된 주사기.
184. 단락 183의 미리 충전된 주사기를 포함하는 키트.
2.2 규정 및 약어
Figure pct00002
도 1. 베바시주맙 Fab(하단)에서 5 개의 상이한 잔기를 나타내는 라니비주맙(상단)의 아미노산 서열. 가변 및 불변 중쇄(VH 및 CH) 및 경쇄(VL 및 CL)의 시작은 화살표(→)로 표시되고, CDR은 밑줄이 그어져 있다. 비-공통 글리코실화 부위("G부위") 티로신-O-황산화 부위("Y부위")가 표시된다.
도 2. HuGlyFabVEGFi에 부착될 수 있는 글리칸. (Bondt 등, 2014, Mol & Cell Proteomics 13.1: 3029-3039로부터 변경됨).
도 3. 라니비주맙(위) 및 베바시주맙 Fab(아래)의 과글리코실화된 변이체의 아미노산 서열. 가변 및 불변 중쇄(VH 및 CH) 및 경쇄(VL 및 CL)의 시작은 화살표(→)로 표시되고, CDR은 밑줄이 그어져 있다. 비-공통 글리코실화 부위("G부위") 및 티로신-O-황산화 부위("Y부위")가 표시된다. 4 개의 과글리코실화된 변이체는 별표(*)로 표시된다.
도 4. AAV8-항VEGFfab 게놈의 개략도.
도 5. Clearside® Biomedical, Inc에 의해 제조된 맥락막상 약물 전달 장치.
도 6. Janssen Pharmaceuticals, Inc에 의해 제조된, 작은 바늘을 망막하 공간으로 주사하는 후방극을 향하여 맥락막상 공간을 통해 삽입 및 터널링될 수 있는 카테터를 포함하는 망막하 약물 전달 장치.
도 7a-7d. 후방 공막옆 데포 절차의 예시.
도 8. AAV 캡시드 1 - 9(서열번호: 41-51)의 클러스터 다중 서열 정렬. 아미노산 치환(하단 행에 굵게 나타냄)은 다른 정렬된 AAV 캡시드의 상응하는 위치로부터 아미노산 잔기를 "모집"함으로써 AAV9 및 AAV8 캡시드로 만들어질 수 있다. "HVR"로 지정된 서열 영역 = 초가변 영역.
도9. 고속 동결/저속 해동(FF/ST) 온도 프로파일.
도 10. DPBS 제형 A에서 작제물 II에 대한 SEC 결과 프로파일의 확대 보기. 프리-피크(pre-peak)는 유리 DNA 및 응집체이다. 포스트-피크(Post-peak)는 완충제 및 부형제 종을 함유한다.
도 11. 제형 B에서 작제물 II에 대한 SEC 결과 프로파일의 확대 보기. 포스트-피크는 완충제 및 부형제 종을 함유한다. 수크로스로 인한 포스트-피크는 제형 B에서 더 컸다.
도 12. 제형 A(진회색) 및 제형 B(연회색) 대조군 및 5 회의 빠른 및 저속 동결/해동 주기의 순열에 노출 후 작제물 II에 대한 동적 광 산란 누적률 결과이다.
도 13. 작제물 II DPBS 제형 A 완충액에 대한 저온 DSC 써모그램.
도 14. '4% 수크로스 및 0.001% 폴록사머 188이 있는 변형된 DPBS, pH 7.4' 제형 B 완충액에서 작제물 II에 대한 저온 DSC 써모그램.
도 15. 37℃에서 1.0 x 1012 GC/mL의 제형 A(진회색 원) 및 제형 B(연회색 사각형)에서 작제물 II 효능에 대한 안정성 경향.
도 16. 37℃에서 1.0 x 1012 GC/mL의 제형 A(진회색 원) 및 제형 B(연회색 사각형)에서 염료 형광성에 의한 작제물 II 유리 DNA에 대한 안정성 경향.
도 17. -80℃ 및 -20℃에서 1.0 x 1012 GC/mL의 제형 B에서 작제물 II 효능에 대한 안정성 경향.
도 18. -80℃ 및 -20℃에서 2.1 x 1011 GC/mL의 제형 B에서 작제물 II 효능에 대한 안정성 경향.
도 19a. Nalgene HDPE BDS 병에서 2 가지 상이한 충전 부피에 대해 측정된 온도 프로파일.
도 19b. -80℃ 및 실온 또는 -20℃ 사이에서 순환된 2 mL 저온 바이알에서 0.6 mL 충전에 대해 기록된 온도 프로파일.
도 20a. 고속 동결/고속 해동(FF/FT) 온도 프로파일.
도 20b. 고속 동결/고속 해동(FF/FT) 온도 프로파일(왼쪽 축) 및 선반 및 프로브에 대한 속도(오른쪽 축).
도 21. 고속 동결/저속 해동(FF/ST) 온도 프로파일.
도 22. 저속 동결/고속 해동(SF/FT) 온도 프로파일.
도 23. 저속 동결/저속 해동(SF/ST) 온도 프로파일.
도 24. 저속 동결/저속 해동(SF/ST) 온도 프로파일(왼쪽 축) 및 선반 및 프로브에 대한 속도(오른쪽 축).
도 25. 대조군 제형 완충액에 대한 SEC 결과 프로파일의 확대 보기.
도 26. dPBS 제형 완충액에서 작제물 II에 대한 SEC 결과 프로파일의 확대 보기.
도 27. 수크로스 완충제가 있는 변형된 dPBS에서 작제물 II에 대한 SEC 결과 프로파일의 확대 보기.
도 28. dPBS 동결-해동 샘플에서 작제물 II에 대한 DLS 직경 결과.
도 29. 수크로스 동결-해동 샘플이 있는 변형된 dPBS에서 작제물 II에 대한 DLS 직경 결과
도 30. 수크로스 동결-해동 샘플이 있는 변형된 dPBS에서와 비교하여 dPBS에서 작제물 II에 대한 DLS 누적률 직경 결과의 비교.
도 31. 수크로스 동결-해동 샘플이 있는 변형된 dPBS에서와 비교하여 dPBS에서 작제물 II에 대한 DLS 정규화 직경 결과의 비교.
도 32. 작제물 II dPBS 제형 완충액에 대한 저온 DSC 써모그램.
도 33. 작제물 II '수크로스가 있는 변형된 dPBS' 제형 완충액에 대한 저온 DSC 써모그램.
도 34. 제형 B는 결정화/공융 전이를 억제하여 동결/해동 스트레스에 대한 완건성(robustness)을 개선하는 비정질 부형제를 함유한다.
도 35. 유리 DNA는 제형 A에 대해 각 동결/해동 주기마다 증가한다.
도 36. 제형 a의 효능은 >5x 동결/해동 주기에 따라 감소하고 효능은 30x 동결/해동 주기 동안 제형 b에서 유지된다. '4% 수크로스가 있는 변형된 dPBS' 제형 B(진회색 막대)는 30 회 동결-해동 주기 후 효능을 유지하였다. 대조적으로 참조 제형(dPBS, 연회색 막대) 효능은 15 내지 30 회 동결-해동 주기 후 66% 내지 72%로 감소하였다. 예는 녹색 형광 단백질에 대한 유전자가 있는 AAV8에 대한 것이다. 동결-해동 주기는 수송 및 보관 물류 온도 변화를 자극하는 데 사용되고 또한 제형 최적화 작업을 위해 AAV의 분해를 강제하기 위한 '가속화된' 스트레스로 사용된다.
도 37. 흡착 손실은 유리 바이알에서 발생하지만 COP 바이알에 대해서는 검출되지 않는다.
도 38. 제형 A 및 B는 -80℃에서 유사한 장기간 동결 안정성을 가졌으며; 제형 B는 또한 -20℃에서 안정하였다. '4% 수크로스가 있는 변형된 dPBS' 제형은 -20℃(원) 및 -80℃(사각형)에서 12 개월 동안 효능을 유지하였다. 참조 제형(dPBS)은 -80℃ 보관에 대한 비교기로서 제시된다.
도 39. 제형의 동결시 대략 3 pH 단위 산성화를 나타내는 -20 AD 냉동고에서 4% 수크로스가 있는 변형된 dPBS인 제형 #2에서 제형의 pH 및 온도의 실시간 모니터링(상단 기록, 왼쪽 축). 온도 기록(하단 기록, 오른쪽 축)은 냉동고의 자동-성에 제거 주기가 발생할 때 온도의 변동을 나타낸다. 동결된 pH 전극으로 직접 측정된 동결된 용액의 pH는 동결된 경우 동결된 제형의 온도와 상관관계가 있는 약 4.3 내지 5.5 사이의 변동을 나타낸다.
도 40. 다중 성에 제거 주기에 의해 스트레스 받은 후 상이한 완충액의 pH 비교. DPBS 제형은 동결된 경우 7.4에서 약 4.3으로 이동하였다. 수크로스가 있는 제형은 동결시 7.4에서 6.2로 더 낮은 pH 이동을 가졌다. TRIS 제형은 초기에 실온에 대해 상대적으로 이동한 다음 동결된 경우 안정하다.
도 41. 온도가 0에서 -20℃로 감소한 경우 완충액의 pH 비교. 포스페이트-기반 제형 #1은 동결시 큰 pH 이동을 가졌다. 제형 2-7은 동결시 훨씬 더 낮은 산성화 이동을 나타내었으며, 이는 생성물 안정성에 대해 바람직하다. 제형 8은 제형 안정성에 대해 허용가능한 제한 내에서 약간 더 염기성으로 이동하였다.
도 42. 안정화 후 상이한 완충액 pH의 규모.
도 43. 제형#1: dPBS 제형 완충액에 대한 저온 DSC 써모그램.
도 44. 제형#2: 4% 수크로스가 있는 변형된 dPBS 제형 완충액에 대한 저온 DSC 써모그램.
도 45. 상이한 제형의 상 전이 거동의 저온 DSC 써모그램 비교. 제형 1(dPBS)은 유리 전이를 나타내지 않는다(기록은 문자로 표시됨). 제형 2(제형 B) 및 변이(제형 #3-7) 및 TRIS 완충액이 있는 것(제형 8)은 -40 내지 -45℃의 유리 전이에 따라 제형 #2와 유사한 상 전이 거동을 나타내었다.
도 46. 바이러스 입자 응집은 이온 강도에 의해 영향을 받는다.
도 47. 응집을 방지하기 위한 최소 이온 강도. 1.8 x 1013 GC/mL에서 AAV8 입자의 유효 직경을 상이한 NaCl 농도에서 제조하였다. 입자의 직경에 의해 표시되는 바와 같은 입자 응집을 방지하기 위해 ≥90 mM의 이온 강도가 필요한 것으로 보인다.
도 48. 최소 이온 강도는 혈청형에 의존한다. AAV8(열린 사각형) 및 AAV9(열린 삼각형)의 유효 직경을 상이한 NaCl 농도에서 제조하였다. 벡터의 농도는 6 x 1011 GC/mL였다.
도 49. 제형 C는 60 mM NaCl 및 6% 수크로스를 함유하는 '수크로스가 있는 변형된 dPBS'의 변이체(연회색 삼각형)이며 -20℃에서 2 년 동안 안정하였다. 참조 제형(dPBS)은 -20℃ 보관에 대한 비교기(진회색 사각형)로 제시되고 -20℃에서 안정하지 않았다. 제형 B 및 C는 -20℃에서 필적할만하고 우수한 장기간 안정성을 갖는 것으로 나타났다.
도 50. 2-8℃에서 제형 B에서 작제물 II에 대한 효능 경향.
도 51. 제어된 실온에서 3.0 x 1013 GC/mL의 작제물 II FDP Lot 200320-314-DL7에 대한 효능 경향.
도 52. -80℃ 및 -20℃에서 1.0 x 1012 GC/mL의 제형 B에서 작제물 II 효능에 대한 안정성 경향.
도 53. -80℃ 및 -20℃에서 2.1 x 1011 GC/mL의 제형 B에서 작제물 II 효능에 대한 안정성 경향.
도 54. 제형 A 및 B는 -80℃에서 유사한 장기간 동결 안정성을 가졌으며; 제형 B는 또한 -20℃에서 안정하였다. '4% 수크로스가 있는 변형된 dPBS' 제형은 -20℃(원) 및 -80℃(사각형)에서 12 개월 동안 효능을 유지하였다. 참조 제형(dPBS)은 -80℃ 보관에 대한 비교기로 제시된다.
본원에는 약제학적 조성물, 약제학적 조성물과 관련된 치료 방법 및 약제학적 조성물과 관련된 키트가 제공된다. 일부 구현예에서, 섹션 4.1에 제공된 조성물은 섹션 4.2에 기재된 하나 이상의 특성을 갖도록 제형화된다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물은 다양한 이점, 예를 들어, 유리/해동 주기 후 개선된 안정성, 및 다양한 조건 하에 개선된 장기간 안정성을 갖는다. 본원에는 또한 관련 연구에 사용될 수 있는 검정이 제공된다(섹션 4.5).
4.1 약제학적 조성물의 제형
본 개시내용은 재조합 아데노-연관 바이러스(AAV), 일염기성 인산 칼륨, 염화 나트륨, 인산 나트륨 이염기성 무수물, 수크로스, 및 계면활성제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 아미노산을 추가로 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용은 재조합 아데노-연관 바이러스(AAV), 이온 염 부형제 또는 완충제, 수크로스, 및 폴록사머 188을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 일부 구현예에서, 이온 염 부형제 또는 완충제는 일염기성 인산 칼륨, 인산 칼륨, 염화 나트륨, 인산 나트륨 이염기성 무수물, 인산 나트륨 육수화물, 인산 나트륨 일염기성 일수화물, 트로메타민, 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄 하이드로클로라이드(Tris-HCl), 아미노산, 히스티딘, 히스티딘 하이드로클로라이드(히스티딘-HCl), 숙신산 나트륨, 시트르산 나트륨, 아세트산 나트륨, 및 (4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄술폰산)(HEPES), 황산 나트륨, 황산 마그네슘, 염화 마그네슘 6-수화물, 황산 칼슘, 염화 칼륨, 염화 칼슘, 시트르산 칼슘으로 이루어진 군으로부터의 하나 이상의 구성요소일 수 있다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 60 mM 내지 115 mM의 이온 강도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 60 mM 내지 100 mM의 이온 강도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 65 mM 내지 95 mM의 이온 강도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 70 mM 내지 90 mM의 이온 강도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 75 mM 내지 85 mM의 이온 강도를 갖는다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 30 mM 내지 100 mM의 이온 강도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 35 mM 내지 95 mM의 이온 강도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 40 mM 내지 90 mM의 이온 강도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 45 mM 내지 85 mM의 이온 강도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 50 mM 내지 80 mM의 이온 강도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 55 mM 내지 75 mM의 이온 강도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 60 mM 내지 70 mM의 이온 강도를 갖는다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 60 mM 내지 115 mM 범위의 이온 강도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 60 mM 내지 100 mM 범위의 이온 강도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 65 mM 내지 95 mM 범위의 이온 강도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 70 mM 내지 90 mM 범위의 이온 강도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 75 mM 내지 85 mM 범위의 이온 강도를 갖는다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 30 mM 내지 100 mM 범위의 이온 강도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 35 mM 내지 95 mM 범위의 이온 강도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 40 mM 내지 90 mM 범위의 이온 강도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 45 mM 내지 85 mM 범위의 이온 강도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 50 mM 내지 80 mM 범위의 이온 강도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 55 mM 내지 75 mM 범위의 이온 강도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 60 mM 내지 70 mM 범위의 이온 강도를 갖는다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.2 g/L 농도의 염화 칼륨을 포함한다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.2 g/L 농도의 일염기성 인산 칼륨을 포함한다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 5.84 g/L 농도의 염화 나트륨을 포함한다, 및
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 1.15 g/L 농도의 인산 나트륨 이염기성 무수물을 포함한다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 3%(중량/부피, 30 g/L) 내지 18%(중량/부피, 180 g/L)의 농도로 수크로스를 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 4%(중량/부피, 40 g/L)의 농도로 수크로스를 포함한다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.001%(중량/부피, 0.01 g/L)의 농도로 폴록사머 188을 포함한다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.0005%(중량/부피, 0.005 g/L) 내지 0.05%(중량/부피, 0.5 g/L)의 농도로 폴록사머 188을 포함한다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.001%(중량/부피, 0.01 g/L)의 농도로 폴록사머 188을 포함한다.
일부 구현예에서, 본 개시내용은 재조합 아데노-연관 바이러스(AAV), 이온 염 부형제 또는 완충제, 수크로스, 및 계면활성제를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 일부 구현예에서, 이온 염 부형제 또는 완충제는 일염기성 인산 칼륨, 인산 칼륨, 염화 나트륨, 인산 나트륨 이염기성 무수물, 인산 나트륨 육수화물, 인산 나트륨 일염기성 일수화물, 트로메타민, 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄 하이드로클로라이드(Tris-HCl), 아미노산, 히스티딘, 히스티딘 하이드로클로라이드(히스티딘-HCl), 숙신산 나트륨, 시트르산 나트륨, 아세트산 나트륨, 및 (4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄술폰산)(HEPES), 황산 나트륨, 황산 마그네슘, 염화 마그네슘 6-수화물, 황산 칼슘, 염화 칼륨, 염화 칼슘, 시트르산 칼슘으로 이루어진 군으로부터의 하나 이상의 구성요소일 수 있다. 일부 구현예에서, 계면활성제는 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 및 폴리소르베이트 80으로 이루어진 군으로부터의 하나 이상의 구성요소일 수 있다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.0005%(중량/부피, 0.05 g/L) 내지 0.05%(중량/부피, 0.5 g/L)의 농도로 폴리소르베이트 20을 포함한다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 0.0005%(중량/부피, 0.05 g/L) 내지 0.05%(중량/부피, 0.5 g/L)의 농도로 폴리소르베이트 80을 포함한다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 7.4이다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 약 6.0 내지 9.0이다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 7.4이다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 pH는 6.0 내지 9.0이다.
본원에 사용된 바와 같고 달리 명시되지 않는 한, 용어 "약"은 주어진 값 또는 범위의 플러스 또는 마이너스 10% 이내를 의미한다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 소수성으로-코팅된 유리 바이알 내에 있다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 사이클로 올레핀 중합체(COP) 바이알 내에 있다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 Daikyo Crystal Zenith®(CZ) 바이알 내에 있다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 TopLyo 코팅된 바이알 내에 있다.
특정 구현예에서, 본원에는 (a) 재조합 AAV, (b) 0.2 g/L 농도의 염화 칼륨, (c) 0.2 g/L 농도의 일염기성 인산 칼륨, (d) 5.84 g/L 농도의 염화 나트륨, (e) 1.15 g/L 농도의 인산 나트륨 이염기성 무수물, (f) 4% 중량/부피(40 g/L) 농도의 수크로스, (g) 0.001% 중량/부피(0.01 g/L) 농도의 폴록사머 188, 및 (h) 물로 이루어진 약제학적 조성물이 개시되며, 여기서 재조합 AAV는 AAV8이다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 벡터 게놈 농도(VGC)는 약 3 x 109 GC/mL, 약 1 x 1010 GC/mL, 약 1.2 x 1010 GC/mL, 약 1.6 x 1010 GC/mL, 약 4 x 1010 GC/mL, 약 6 x 1010 GC/mL, 약 2 x 1011 GC/mL, 약 2.4 x 1011 GC/mL, 약 2.5 x 1011 GC/mL, 약 3 x 1011 GC/mL, 약 6.2 x 1011 GC/mL, 약 1 x 1012 GC/mL, 약 3 x 1012 GC/mL, 약 2 x 1013 GC/mL 또는 약 3 x 1013 GC/mL이다
특정 구현예에서, 본 개시내용은 재조합 아데노-연관 바이러스(AAV), 일염기성 인산 칼륨, 염화 나트륨, 인산 나트륨 이염기성 무수물, 수크로스, 및 폴록사머 188을 포함하는 약제학적 조성물 또는 제형을 제공한다. 일부 구현예에서, AAV는 AAV8로부터의 구성요소를 포함한다. 일부 구현예에서, AAV는 다음 요소를 다음 순서로 포함하는 본원에 제공된 AAV 바이러스 벡터이다: a) 구성적 또는 저산소증-유도성 프로모터 서열, 및 b) 이식유전자(예를 들어, 항-VEGF 항원-결합 단편 모이어티)를 암호화하는 서열. 일부 구현예에서, 이식유전자는 VEGF에 대한 완전 인간 번역후 변형된(HuPTM) 항체이다. 항체는 단클론 항체, 다클론 항체, 재조합적으로 생성된 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 합성 항체, 2 개의 중쇄 및 2 개의 경쇄 분자를 포함하는 사량체성 항체, 항체 경쇄 단량체, 항체 중쇄 단량체, 항체 경쇄 이량체, 항체 중쇄 이량체, 항체 경쇄-중쇄 쌍, 인트라바디, 이형접합 항체, 1가 항체, 전장 항체의 항원-결합 단편, 및 상기의 융합 단백질을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 이러한 항원-결합 단편은 단일-도메인 항체(중쇄 항체(VHH) 또는 나노바디의 가변 도메인), Fab, F(ab')2, 및 전장 항-VEGF 항체(바람직하게는, 전장 항-VEGF 단클론 항체(mAb))의 scFv(단일쇄 가변 단편)를 포함하나 이에 제한되지 않는다(집합적으로 본원에서 "항원-결합 단편"으로 지칭됨). 바람직한 구현예에서, VEGF에 대한 완전 인간 번역후 변형된 항체는 VEGF에 대한 단클론 항체(mAb)의 완전 인간 번역후 변형된 항원-결합 단편("HuPTMFabVEGFi")이다. 추가의 바람직한 구현예에서, HuPTMFabVEGFi는 항-VEGF mAb의 완전 인간 글리코실화 항원-결합 단편("HuGlyFabVEGFi")이다. 대안적인 구현예에서, 전장 mAb가 사용될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 이식유전자를 전달하기 위해 사용되는 AAV는 인간 망막 세포 또는 광수용체 세포에 대한 향성을 가져야 한다. 이러한 AAV는 비-복제 재조합 아데노-연관 바이러스 벡터("rAAV")를 포함할 수 있으며, 특히 AAV8 캡시드를 보유하는 것들이 바람직하다. 구체적 구현예에서, 본원에 기재된 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 작제물은 작제물 I이며, 여기서 작제물 I은 다음 구성요소를 포함한다: (1) 발현 카세트 측면에 있는 AAV8 도립된 말단 반복부; (2) 다음을 포함하는 제어 요소: a) CMV 인핸서/닭 β-액틴 프로모터를 포함하는 CB7 프로모터, b) 닭 β-액틴 인트론 및 c) 토끼 β-글로빈 poly　A 신호; 및 (3) 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드의 동일한 양의 발현을 보장하는 자가-절단 퓨린(F)/F2A 링커에 의해 분리된 항-VEGF 항원-결합 단편의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 핵산 서열. 또 다른 구체적 구현예에서, 본원에 기재된 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 작제물은 작제물 II이며, 여기서 작제물 II는 다음 구성요소를 포함한다: (1) 발현 카세트 측면에 있는 AAV2 도립된 말단 반복부; (2) 다음을 포함하는 제어 요소: a) CMV 인핸서/닭 β-액틴 프로모터를 포함하는 CB7 프로모터, b) 닭 β-액틴 인트론 및 c) 토끼 β-글로빈 poly　A 신호; 및 (3) 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드의 동일한 양의 발현을 보장하는 자가-절단 퓨린(F)/F2A 링커에 의해 분리된 항-VEGF 항원-결합 단편의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 핵산 서열. 일부 구현예에서, 항-hVEGF 항체는 서열번호:2 또는 서열번호:4의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호:1 또는 서열번호:3의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
또 다른 구현예에서, AAV 캡시드에 패키징하기에 적합한 바이러스 벡터 또는 다른 발현 작제물은 (1) 발현 카세트 측면에 있는 AAV 도립된 말단 반복부(ITR); (2) 하나 이상의 인핸서 및/또는 프로모터, d) poly A 신호, 및 e) 임의적으로 인트론으로 본질적으로 이루어진 조절 제어 요소; 및 (3) 하나 이상의 관심 RNA 또는 단백질 생성물을 제공하는(예를 들어, 코딩하는) 이식유전자를 포함한다.
일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 (a) 항-인간 혈관 내피 성장 인자(hVEGF) 항체를 암호화하는 작제물 II, (b) 0.2 g/L 농도의 염화 칼륨, (c) 0.2 g/L 농도의 일염기성 인산 칼륨, (d) 5.84 g/L 농도의 염화 나트륨, (e) 1.15 g/L 농도의 인산 나트륨 이염기성 무수물, (f) 4% 중량/부피(40 g/L) 농도의 수크로스, (g) 0.001% 중량/부피(0.01 g/L) 농도의 폴록사머 188, 및 (h) 물로 이루어지며, 여기서 항-hVEGF 항체는 서열번호:2 또는 서열번호:4의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호:1 또는 서열번호:3의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 (a) 관심 이식유전자를 암호화하는 AAV 캡시트 패키징 벡터, (b) 0.2 g/L 농도의 염화 칼륨, (c) 0.2 g/L 농도의 일염기성 인산 칼륨, (d) 5.84 g/L 농도의 염화 나트륨, (e) 1.15 g/L 농도의 인산 나트륨 이염기성 무수물, (f) 4% 중량/부피(40 g/L) 농도의 수크로스, (g) 0.001% 중량/부피(0.01 g/L) 농도의 폴록사머 188, 및 (h) 물로 이루어지며, 여기서 관심 이식유전자는 관심 RNA 또는 관심 단백질, 예를 들어 항체 또는 효소를 암호화한다.
일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 (a) 항-인간 혈관 내피 성장 인자(hVEGF) 항체를 암호화하는 작제물 II, (b) 0.2 g/L 농도의 염화 칼륨, (c) 0.2 g/L 농도의 일염기성 인산 칼륨, (d) 5.84 g/L 농도의 염화 나트륨, (e) 1.15 g/L 농도의 인산 나트륨 이염기성 무수물, (f) 4% 중량/부피(40 g/L) 농도의 수크로스, (g) 0.001% 중량/부피(0.01 g/L) 농도의 폴록사머 188, 및 (h) 물로 이루어지며, 여기서 항-hVEGF 항체는 서열번호:2 또는 서열번호:4의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호:1 또는 서열번호:3의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서 약제학적 조성물은 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사(예를 들어, 미세바늘이 있는 미세주사기와 같은 맥락막상 약물 전달 장치를 통해), 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사(외과적 처치), 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여(예를 들어, 작은 바늘을 망막하 공간으로 주사하는 후방극을 향하여 맥락막상 공간을 통해 삽입 및 터널링될 수 있는 카테터를 포함하는 망막하 약물 전달 장치를 통한 외과적 처치), 및/또는 후방 공막옆 데포 절차(예를 들어, 끝 부분이 공막 표면에 직접 병렬로 삽입 및 유지될 수 있는 캐뉼라를 포함하는 공막옆 약물 전달 장치를 통해))에 적합한 바람직한 점도, 밀도, 및/또는 삼투압 농도를 갖는다.
일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 (a) 항-인간 혈관 내피 성장 인자(hVEGF) 항체를 암호화하는 작제물 II, (b) 0.2 g/L 농도의 염화 칼륨, (c) 0.2 g/L 농도의 일염기성 인산 칼륨, (d) 5.84 g/L 농도의 염화 나트륨, (e) 1.15 g/L 농도의 인산 나트륨 이염기성 무수물, (f) 4% 중량/부피(40 g/L) 농도의 수크로스, (g) 0.001% 중량/부피(0.01 g/L) 농도의 폴록사머 188, 및 (h) 물로 이루어지며, 여기서 항-hVEGF 항체는 서열번호:2 또는 서열번호:4의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호:1 또는 서열번호:3의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서 약제학적 조성물은 약 60 mM 내지 100 mM의 이온 강도를 갖는다.
일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 (a) 항-인간 혈관 내피 성장 인자(hVEGF) 항체를 암호화하는 작제물 II, (b) 0.2 g/L 농도의 염화 칼륨, (c) 0.2 g/L 농도의 일염기성 인산 칼륨, (d) 5.84 g/L 농도의 염화 나트륨, (e) 1.15 g/L 농도의 인산 나트륨 이염기성 무수물, (f) 4% 중량/부피(40 g/L) 농도의 수크로스, (g) 0.001% 중량/부피(0.01 g/L) 농도의 폴록사머 188, 및 (h) 물로 이루어지며, 여기서 항-hVEGF 항체는 서열번호:2 또는 서열번호:4의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호:1 또는 서열번호:3의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하고, 여기서 약제학적 조성물은 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사(예를 들어, 미세바늘이 있는 미세주사기와 같은 맥락막상 약물 전달 장치를 통해), 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사(외과적 처치), 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여(예를 들어, 작은 바늘을 망막하 공간으로 주사하는 후방극을 향하여 맥락막상 공간을 통해 삽입 및 터널링될 수 있는 카테터를 포함하는 망막하 약물 전달 장치를 통한 외과적 처치), 및/또는 후방 공막옆 데포 절차(예를 들어, 끝 부분이 공막 표면에 직접 병렬로 삽입 및 유지될 수 있는 캐뉼라를 포함하는 공막옆 약물 전달 장치를 통해))에 적합한 바람직한 점도, 밀도, 및/또는 삼투압 농도를 갖는다.
일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 액체 조성물이다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 동결된 조성물이다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 본원에 개시된 액체 조성물로부터의 동결건조된 조성물이다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 재구축된 동결건조된 제형이다.
일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 1% 내지 약 7%의 잔류 수분 함량을 포함하는 동결건조된 조성물이다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 2% 내지 약 6%의 잔류 수분 함량을 포함하는 동결건조된 조성물이다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 3% 내지 약 4%의 잔류 수분 함량을 포함하는 동결건조된 조성물이다. 일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 5%의 잔류 수분 함량을 포함하는 동결건조된 조성물이다.
특정 측면에서, 본원에는 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 질환을 치료 또는 예방하는 방법이 개시된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물은 1, 2 개 또는 그 이상의 투여 경로에 의한 투여에 적합하다(예를 들어, 맥락막상 및 망막하 투여에 적합함).
제공된 방법은 이식유전자를 암호화하는 재조합 AAV를 포함하는 약제학적 조성물의 생산에 사용하기에 적합하다. 일부 구현예에서, 본원에는 항-VEGF Fab 또는 항-VEGF 항체를 암호화하는 rAAV 바이러스 벡터가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에는 항-VEGF Fab 또는 항-VEGF 항체를 암호화하는 rAAV8-기반 바이러스 벡터가 제공된다. 더 많은 구현예에서, 본원에는 라니비주맙을 암호화하는 rAAV8-기반 바이러스 벡터가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에는 아이두로니다제(IDUA)를 암호화하는 rAAV 바이러스 벡터가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에는 IDUA를 암호화하는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에는 아이두로네이트 2-술파타제(IDS)를 암호화하는 rAAV 바이러스 벡터가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에는 IDS를 암호화하는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에는 저밀도 지단백질 수용체(LDLR)를 암호화하는 rAAV 바이러스 벡터가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에는 LDLR을 암호화하는 rAAV8-기반 바이러스 벡터가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에는 트리펩티딜 펩티다제 1(TPP1) 단백질을 암호화하는 rAAV 바이러스 벡터가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에는 TPP1을 암호화하는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에는 마이크로디스트로핀 단백질을 암호화하는 rAAV 바이러스 벡터가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에는 마이크로디스트로핀을 암호화하는 rAAV8-기반 바이러스 벡터가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에는 마이크로디스트로핀을 암호화하는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에는 항-칼리크레인(항-pKal) 단백질을 암호화하는 rAAV 바이러스 벡터가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에는 라나델루맙(lanadelumab) Fab 또는 전장 항체를 암호화하는 rAAV8-기반 또는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에는 인간-알파-사르코글리칸-감마-사르코글리칸을 암호화하는 rAAV 바이러스 벡터가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에는 hu폴리스타틴344를 암호화하는 rAAV 바이러스 벡터가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에는 인간-알파-사르코글리칸-감마-사르코글리칸을 암호화하는 rAAV 바이러스 벡터가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에는 CLN2를 암호화하는 rAAV 바이러스 벡터가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에는 CLN3을 암호화하는 rAAV 바이러스 벡터가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에는 CLN6을 암호화하는 rAAV 바이러스 벡터가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에는 인간-알파-사르코글리칸-감마-사르코글리칸을 암호화하는 rAAV8-기반 또는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에는 hu폴리스타틴344를 암호화하는 rAAV8-기반 또는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에는 인간-알파-사르코글리칸-감마-사르코글리칸을 암호화하는 rAAV8-기반 또는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에는 CLN2를 암호화하는 rAAV8-기반 또는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에는 CLN3을 암호화하는 rAAV8-기반 또는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에는 CLN6을 암호화하는 rAAV8-기반 또는 rAAV9-기반 바이러스 벡터가 제공된다.
특정 측면에서, 본원에는 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사(예를 들어, 미세바늘이 있는 미세주사기와 같은 맥락막상 약물 전달 장치를 통해), 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사(외과적 처치), 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여(예를 들어, 작은 바늘을 망막하 공간으로 주사하는 후방극을 향하여 맥락막상 공간을 통해 삽입 및 터널링될 수 있는 카테터를 포함하는 망막하 약물 전달 장치를 통한 외과적 처치), 및/또는 후방 공막옆 데포 절차(예를 들어, 끝 부분이 공막 표면에 직접 병렬로 삽입 및 유지될 수 있는 캐뉼라를 포함하는 공막옆 약물 전달 장치를 통해))에 의해 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 질환을 치료 또는 예방하는 방법이 개시된다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물은 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사(예를 들어, 미세바늘이 있는 미세주사기와 같은 맥락막상 약물 전달 장치를 통해), 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사(외과적 처치), 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여(예를 들어, 작은 바늘을 망막하 공간으로 주사하는 후방극을 향하여 맥락막상 공간을 통해 삽입 및 터널링될 수 있는 카테터를 포함하는 망막하 약물 전달 장치를 통한 외과적 처치), 및/또는 후방 공막옆 데포 절차(예를 들어, 끝 부분이 공막 표면에 직접 병렬로 삽입 및 유지될 수 있는 캐뉼라를 포함하는 공막옆 약물 전달 장치를 통해))에 적합하다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사(예를 들어, 미세바늘이 있는 미세주사기와 같은 맥락막상 약물 전달 장치를 통해), 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사(외과적 처치), 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여(예를 들어, 작은 바늘을 망막하 공간으로 주사하는 후방극을 향하여 맥락막상 공간을 통해 삽입 및 터널링될 수 있는 카테터를 포함하는 망막하 약물 전달 장치를 통한 외과적 처치), 및/또는 후방 공막옆 데포 절차(예를 들어, 끝 부분이 공막 표면에 직접 병렬로 삽입 및 유지될 수 있는 캐뉼라를 포함하는 공막옆 약물 전달 장치를 통해))에 적합한 바람직한 점도를 갖는다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사(예를 들어, 미세바늘이 있는 미세주사기와 같은 맥락막상 약물 전달 장치를 통해), 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사(외과적 처치), 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여(예를 들어, 작은 바늘을 망막하 공간으로 주사하는 후방극을 향하여 맥락막상 공간을 통해 삽입 및 터널링될 수 있는 카테터를 포함하는 망막하 약물 전달 장치를 통한 외과적 처치), 및/또는 후방 공막옆 데포 절차(예를 들어, 끝 부분이 공막 표면에 직접 병렬로 삽입 및 유지될 수 있는 캐뉼라를 포함하는 공막옆 약물 전달 장치를 통해))에 적합한 바람직한 밀도를 갖는다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사(예를 들어, 미세바늘이 있는 미세주사기와 같은 맥락막상 약물 전달 장치를 통해), 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사(외과적 처치), 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여(예를 들어, 작은 바늘을 망막하 공간으로 주사하는 후방극을 향하여 맥락막상 공간을 통해 삽입 및 터널링될 수 있는 카테터를 포함하는 망막하 약물 전달 장치를 통한 외과적 처치), 및/또는 후방 공막옆 데포 절차(예를 들어, 끝 부분이 공막 표면에 직접 병렬로 삽입 및 유지될 수 있는 캐뉼라를 포함하는 공막옆 약물 전달 장치를 통해))에 적합한 바람직한 삼투압 농도를 갖는다. 구체적 구현예에서, 망막하 투여에 대해 바람직한 삼투압 농도는 160 - 430　mOsm/kg H2O이다. 다른 구체적 구현예에서, 맥락막상 투여에 대해 바람직한 삼투압 농도는 600 mOsm/kg H2O 미만이다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 100 내지 500 mOsm/ kg H2O의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 130 내지 470 mOsm/ kg H2O의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 160 내지 430 mOsm/ kg H2O의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 200 내지 400 mOsm/ kg H2O의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 240 내지 340 mOsm/kg H2O의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 280 내지 300 mOsm/ kg H2O의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 295 내지 395 mOsm/ kg H2O의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 600 mOsm/ kg H2O 미만의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 200 mOsm/L 내지 660 mOsm/L의 삼투압 농도 범위를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 200 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 250 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 300 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 350 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 400 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 450 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 500 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 550 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 600 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 650 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 660 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 측면에서, 본원에는 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 점액다당류증 유형 IVA(MPS IVA), 점액다당류증 유형 I(MPS I), 점액다당류증 유형 II(MPS II), 가족성 고콜레스테롤혈증(FH), 동형접합 가족성 고콜레스테롤혈증(HoFH), 관상 동맥 질환, 뇌혈관 질환, 듀켄씨 근이영양증, 팔다리이음 근이영양증, 베커형 근이영양증 및 산발성 봉입체 근염, 또는 칼리크레인 관련 질환으로 진단된 대상체를 치료하는 방법이 개시된다.
특정 측면에서, 본원에는 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 점액다당류증 유형 IVA(MPS IVA), 점액다당류증 유형 I(MPS I), 점액다당류증 유형 II(MPS II), 가족성 고콜레스테롤혈증(FH), 동형접합 가족성 고콜레스테롤혈증(HoFH), 관상 동맥 질환, 뇌혈관 질환, 듀켄씨 근이영양증, 팔다리이음 근이영양증, 베커형 근이영양증 및 산발성 봉입체 근염, 또는 칼리크레인 관련 질환으로 진단된 대상체를 치료하는 방법이 개시된다.
특정 측면에서, 본원에는 정맥내 투여, 피하 투여, 또는 근육내 주사에 의해 치료 유효량의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 점액다당류증 유형 IVA(MPS IVA), 점액다당류증 유형 I(MPS I), 점액다당류증 유형 II(MPS II), 가족성 고콜레스테롤혈증(FH), 동형접합 가족성 고콜레스테롤혈증(HoFH), 관상 동맥 질환, 뇌혈관 질환, 듀켄씨 근이영양증, 팔다리이음 근이영양증, 베커형 근이영양증 및 산발성 봉입체 근염, 또는 칼리크레인 관련 질환으로 진단된 대상체를 치료하는 방법이 개시된다.
특정 측면에서, 본원에는 치료 유효량의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 당뇨병성 망막증(DR), 또는 바텐병으로 진단된 대상체를 치료하는 것을 포함하는, 대상체에서 질환을 치료 또는 예방하는 방법이 개시된다.
특정 측면에서, 본원에는 맥락막상 주사(예를 들어, 미세바늘이 있는 미세주사기와 같은 맥락막상 약물 전달 장치를 통해), 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사(외과적 처치), 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여(예를 들어, 작은 바늘을 망막하 공간으로 주사하는 후방극을 향하여 맥락막상 공간을 통해 삽입 및 터널링될 수 있는 카테터를 포함하는 망막하 약물 전달 장치를 통한 외과적 처치), 또는 후방 공막옆 데포 절차(예를 들어, 끝 부분이 공막 표면에 직접 병렬로 삽입 및 유지될 수 있는 캐뉼라를 포함하는 공막옆 약물 전달 장치를 통해))에 의해 치료 유효량의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 당뇨병성 망막증(DR), 또는 바텐으로 진단된 대상체를 치료하는 방법이 개시된다.
특정 구현예에서, nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 또는 당뇨병성 망막증(DR)으로 진단된 환자(인간 대상체)의 눈(들)에 있는 망막/유리체액에 VEGF에 대한 완전 인간 번역후 변형된(HuPTM) 항체를 포함하는 약제학적 조성물의 전달을 위한 조성물 및 방법이 기재된다. 항체는 단클론 항체, 다클론 항체, 재조합적으로 생성된 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 합성 항체, 2 개의 중쇄 및 2 개의 경쇄 분자를 포함하는 사량체성 항체, 항체 경쇄 단량체, 항체 중쇄 단량체, 항체 경쇄 이량체, 항체 중쇄 이량체, 항체 경쇄-중쇄 쌍, 인트라바디, 이형접합 항체, 1가 항체, 및 전장 항체의 항원-결합 단편, 및 상기의 융합 단백질을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 이러한 항원-결합 단편은 단일-도메인 항체(중쇄 항체(VHH) 또는 나노바디의 가변 도메인), Fab, F(ab')2, 및 전장 항-VEGF 항체(바람직하게는, 전장 항-VEGF 단클론 항체(mAb))의 scFv(단일쇄 가변 단편)를 포함하나 이에 제한되지 않는다(집합적으로 본원에서 "항원-결합 단편"으로 지칭됨). 바람직한 구현예에서, VEGF에 대한 완전 인간 번역후 변형된 항체는 VEGF에 대한 단클론 항체(mAb)의 완전 인간 번역후 변형된 항원-결합 단편("HuPTMFabVEGFi")이다. 추가의 바람직한 구현예에서, HuPTMFabVEGFi는 항-VEGF mAb의 완전 인간 글리코실화 항원-결합 단편("HuGlyFabVEGFi")이다. 또한, 국제 특허 출원 공개 번호 WO/2017/180936(2017년 4월 14일 출원된 국제 특허 출원 번호 PCT/US2017/027529), 국제 특허 출원 공개 번호 WO/2017/181021(2017년 4월 14일 출원된 국제 특허 출원 번호 PCT/US2017/027650), 및 국제 특허 출원 공개 번호 WO2019/067540(2018년 9월 26일 출원된 국제 특허 출원 번호 PCT/US2018/052855)을 참조하며, 각각은 본원에 기재된 본 발명에 따라 사용될 수 있는 조성물 및 방법에 대해 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 대안적인 구현예에서, 전장 mAb가 사용될 수 있다. 전달은 유전자 요법을 통해,　예를 들어, 항-VEGF 항원-결합 단편 또는 mAb를 암호화하는 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 작제물(또는 과글리코실화된 유도체)를 nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 또는 당뇨병성 망막증(DR)으로 진단된 환자(인간 대상체)의 눈(들)에 있는 맥락막상 공간, 망막하 공간(유리체 통과 접근법으로 또는 카테터 맥락막상 공간을 통해), 망막내 공간, 및/또는 공막의 외부 표면(즉, 공막옆 투여)에 투여하여, 인간 PTM,　예를 들어, 인간-글리코실화된 이식유전자 산물을 지속적으로 공급하는 영구적인 데포를 눈에 생성함으로써 성취될 수 있다.　 예를 들어, 섹션 5.3.2에 기재된 투여 모드를 참조한다.
특정 구현예에서, 환자는 유전자 요법으로 치료 전에 유리체강내로 주사된 항-VEGF 항원-결합 단편을 사용한 치료에 반응성인 것으로 나타났다. 구체적 구현예에서, 환자는 이전에 LUCENTIS ®(라니비주맙), EYLEA®(아플리베르셉트), 및/또는 AVASTIN®(베바시주맙)으로 치료받았고, 상기 LUCENTIS ®(라니비주맙), EYLEA®(아플리베르셉트), 및/또는 AVASTIN®(베바시주맙) 중 하나 이상에 반응성인 것으로 밝혀졌다.
이러한 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 작제물이 전달된 대상체는 바이러스 벡터 또는 발현 작제물에서 이식유전자에 의해 암호화된 항-VEGF 항원-결합 단편에 반응성이어야 한다. 반응성을 결정하기 위해, 항-hVEGF 항원-결합 단편 이식유전자 산물(예를 들어, 세포 배양, 생물반응기 등에서 생성됨)은 유리체내 주사에 의해서와 같이, 대상체에게 직접 투여될 수 있다.
이식유전자에 의해 암호화된 HuPTMFabVEGFi, 예를 들어, HuGlyFabVEGFi는 hVEGF에 결합하는 항체의 항원-결합 단편, 예컨대 베바시주맙; 항-hVEGF Fab 모이어티 예컨대 라니비주맙; 또는 Fab 도메인에 추가 글리코시화 부위를 함유하도록 조작된 이러한 베바시주맙 또는 라니비주맙 Fab 모이어티를 포함할 수 있으나 이에 제한되지 않는다(예를 들어, Courtois 등, 2016, mAbs 8: 99-112를 참조하며 전장 항체의 Fab 도메인에서 과글리코실화된 베바시주맙의 유도체를 설명하기 위해 그 전문이 본원에 참조로 포함된다).
이식유전자를 전달하기 위해 사용되는 재조합 벡터는 인간 망막 세포 또는 광수용체 세포에 대한 향성을 가져야 한다. 이러한 벡터는 비-복제 재조합 아데노-연관 바이러스 벡터("rAAV")를 포함할 수 있으며, 특히 AAV8 캡시드를 보유하는 것들이 바람직하다. 그러나, 렌티바이러스 벡터, 백시니아 바이러스 벡터, 또는 "네이키드 DNA" 작제물로 지칭되는 비-바이러스 발현 벡터를 포함하나 이에 제한되지 않는 다른 바이러스 벡터가 사용될 수 있다. 바람직하게는, HuPTMFabVEGFi, 예를 들어, HuGlyFabVEGFi, 이식유전자는 적절한 발현 제어 요소, 예를 들어, 몇 개만 예를 들면 CB7 프로모터(닭 β-액틴 프로모터 및 CMV 인핸서), RPE65 프로모터, 또는 옵신 프로모터에 의해 제어되어야 하고, 벡터에 의해 구동된 이식유전자의 발현을 향상시키는 다른 발현 제어 요소(예를 들어, 인트론 예컨대 닭 β-액틴 인트론, 미세 생쥐 바이러스(MVM) 인트론, 인간 인자 IX 인트론(예를 들어, FIX 절두된 인트론 1), β-글로빈 스플라이스 공여자/면역글로불린 중쇄 스파이스 수용자 인트론, 아데노바이러스 스플라이스 공여자 /면역글로불린 스플라이스 수용자 인트론, SV40 후기 스플라이스 공여자 /스플라이스 수용자(19S/16S) 인트론, 및 하이브리드 아데노바이러스 스플라이스 공여자/IgG 스플라이스 수용자 인트론 및 polyA 신호 예컨대 토끼 β-글로빈 polyA 신호, 인간 성장 호르몬(hGH) polyA 신호, SV40 후기 polyA 신호, 합성 polyA(SPA) 신호, 및 소 성장 호르몬(bGH) polyA 신호)를 포함할 수 있다. 예를 들어, Powell and Rivera-Soto, 2015, Discov. Med., 19(102):49-57을 참조한다.
바람직한 구현예에서, 유전자 요법 작제물은 중쇄 및 경쇄가 둘 다 발현되도록 설계된다. 보다 구체적으로, 중쇄 및 경쇄는 거의 동일한 양으로 발현되어야 하며, 즉, 중쇄 및 경쇄는 중쇄 대 경쇄의 대략 1:1 비로 발현된다. 중쇄 및 경쇄에 대한 코딩 서열은 중쇄 및 경쇄가 절단가능한 링커 또는 IRES에 의해 분리되어 분리된 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드가 발현되는 단일 작제물에서 조작될 수 있다. 예를 들어, 특정 리더 서열에 대해 섹션 5.2.4 및 특정 IRES, 2A, 및 본원에 제공된 방법 및 조성물과 함께 사용될 수 있는 다른 링커 서열에 대해 섹션 5.2.5를 참조한다.
특정 구현예에서, 유전자 요법 작제물은 제형 완충액에서 AAV 벡터 활성 성분의 동결된 멸균 1회용 용액으로 공급된다. 구체적 구현예에서, 망막하 투여에 적합한 약제학적 조성물은 생리학적으로 양립할 수 있는 수성 완충액, 계면활성제 및 임의적인 부형제를 포함하는 제형 완충액에 재조합(예를 들어, rHuGlyFabVEGFi) 벡터의 현탁액을 포함한다. 구체적 구현예에서, 작제물은 듀벨코의 포스페이트 완충 염수 및 0.001% 폴록사머 188, pH = 7.4에서 제형화된다.
4.2 기능적 특성
특정 구현예에서, 본원에 기재된 약제학적 조성물은 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사(예를 들어, 미세바늘이 있는 미세주사기와 같은 맥락막상 약물 전달 장치를 통해), 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사(외과적 처치), 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여(예를 들어, 작은 바늘을 망막하 공간으로 주사하는 후방극을 향하여 맥락막상 공간을 통해 삽입 및 터널링될 수 있는 카테터를 포함하는 망막하 약물 전달 장치를 통한 외과적 처치), 및/또는 후방 공막옆 데포 절차(예를 들어, 끝 부분이 공막 표면에 직접 병렬로 삽입 및 유지될 수 있는 캐뉼라를 포함하는 공막옆 약물 전달 장치를 통해))에 적합하다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사(예를 들어, 미세바늘이 있는 미세주사기와 같은 맥락막상 약물 전달 장치를 통해), 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사(외과적 처치), 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여(예를 들어, 작은 바늘을 망막하 공간으로 주사하는 후방극을 향하여 맥락막상 공간을 통해 삽입 및 터널링될 수 있는 카테터를 포함하는 망막하 약물 전달 장치를 통한 외과적 처치), 및/또는 후방 공막옆 데포 절차(예를 들어, 끝 부분이 공막 표면에 직접 병렬로 삽입 및 유지될 수 있는 캐뉼라를 포함하는 공막옆 약물 전달 장치를 통해))에 적합한 바람직한 밀도를 갖는다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사(예를 들어, 미세바늘이 있는 미세주사기와 같은 맥락막상 약물 전달 장치를 통해), 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사(외과적 처치), 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여(예를 들어, 작은 바늘을 망막하 공간으로 주사하는 후방극을 향하여 맥락막상 공간을 통해 삽입 및 터널링될 수 있는 카테터를 포함하는 망막하 약물 전달 장치를 통한 외과적 처치), 및/또는 후방 공막옆 데포 절차(예를 들어, 끝 부분이 공막 표면에 직접 병렬로 삽입 및 유지될 수 있는 캐뉼라를 포함하는 공막옆 약물 전달 장치를 통해))에 적합한 바람직한 삼투압 농도를 갖는다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사(예를 들어, 미세바늘이 있는 미세주사기와 같은 맥락막상 약물 전달 장치를 통해), 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사(외과적 처치), 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여(예를 들어, 작은 바늘을 망막하 공간으로 주사하는 후방극을 향하여 맥락막상 공간을 통해 삽입 및 터널링될 수 있는 카테터를 포함하는 망막하 약물 전달 장치를 통한 외과적 처치), 및/또는 후방 공막옆 데포 절차(예를 들어, 끝 부분이 공막 표면에 직접 병렬로 삽입 및 유지될 수 있는 캐뉼라를 포함하는 공막옆 약물 전달 장치를 통해))에 적합한 바람직한 점도를 갖는다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 100 내지 500 mOsm/kg H2O의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 130 내지 470 mOsm/ kg H2O의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 160 내지 430 mOsm/ kg H2O의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 200 내지 400 mOsm/ kg H2O의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 280 내지 300 mOsm/ kg H2O의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 240 내지 340 mOsm/ kg H2O의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 295 내지 395 mOsm/ kg H2O의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 600 mOsm/ kg H2O 미만의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 200 mOsm/L 내지 660 mOsm/L의 삼투압 농도 범위를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 200 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 250 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 300 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 350 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 400 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 450 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 500 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 550 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 600 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 650 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 약 660 mOsm/L의 삼투압 농도를 갖는다. 특정 측면에서, 본원에는 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 점액다당류증 유형 IVA(MPS IVA), 점액다당류증 유형 I(MPS I), 점액다당류증 유형 II(MPS II), 가족성 고콜레스테롤혈증(FH), 동형접합 가족성 고콜레스테롤혈증(HoFH), 관상 동맥 질환, 뇌혈관 질환, 듀켄씨 근이영양증, 팔다리이음 근이영양증, 베커형 근이영양증 및 산발성 봉입체 근염, 또는 칼리크레인 관련 질환으로 진단된 대상체를 치료하는 방법이 개시된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 200 mOsm/L 내지 660 mOsm/L의 삼투압 농도 범위를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 250 mOsm/L 내지 600 mOsm/L의 삼투압 농도 범위를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 300 mOsm/L 내지 550 mOsm/L의 삼투압 농도 범위를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 350 mOsm/L 내지 500 mOsm/L의 삼투압 농도 범위를 갖는다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물은 400 mOsm/L 내지 500 mOsm/L의 삼투압 농도 범위를 갖는다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 동결/해동 주기에 대해 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정하다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 안정성은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 감염성이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 높다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 바이러스 감염성은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다. 특정 구현예에서, 감염성은 동결/해동 주기 전 또는 후에 측정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 응집이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 적다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 응집은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다. 특정 구현예에서, 응집은 동결/해동 주기 전 또는 후에 측정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 일정 기간, 예를 들어, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 약 4 년에 걸쳐 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정하다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 일정 기간에 걸친 안정성은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 일정 기간, 적어도 예를 들어, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 약 4 년에 걸쳐 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정하다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 일정 기간에 걸친 안정성은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 시험관내 상대적 효능(IVRP)이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 높다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 시험관내 상대적 효능(IVRP)은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다. 특정 구현예에서, 시험관내 상대적 효능(IVRP)은 동결/해동 주기 전 또는 후에 측정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 유리 DNA가 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 적다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 유리 DNA는 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다. 특정 구현예에서, 응집은 동결/해동 주기 전 또는 후에 측정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 일정 기간, 예를 들어, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년에 걸쳐 최대 20%, 15%, 10%, 8%, 5%, 4%, 3%, 2%, 또는 1% 크기 변화를 갖는다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 크기는 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다. 특정 구현예에서, 크기는 동결/해동 주기 전 또는 후에 측정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 일정 기간, 예를 들어, 적어도 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년에 걸쳐 최대 20%, 15%, 10%, 8%, 5%, 4%, 3%, 2%, 또는 1% 크기 변화를 갖는다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 크기는 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다. 특정 구현예에서, 크기는 동결/해동 주기 전 또는 후에 측정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 -20℃에서 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정하다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 안정성은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 감염성이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 -20℃에서 일정 기간, 예를 들어, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 높다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 바이러스 감염성은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 감염성이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 -20℃에서 일정 기간, 예를 들어, 적어도 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 높다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 바이러스 감염성은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 응집이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 -20℃에서 일정 기간, 예를 들어, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 적다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 응집은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 응집이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 -20℃에서 일정 기간, 적어도 예를 들어, 적어도 약 1 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 적다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 응집은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 -20℃에서 일정 기간, 예를 들어, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정하다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 일정 기간에 걸친 안정성은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 -20℃에서 일정 기간, 예를 들어, 적어도 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정하다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 일정 기간에 걸친 안정성은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 시험관내 상대적 효능(IVRP)이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 -20℃에서 일정 기간, 예를 들어, 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 높다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 시험관내 상대적 효능(IVRP)은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 시험관내 상대적 효능(IVRP)이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 -20℃에서 일정 기간, 예를 들어, 적어도 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 높다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 시험관내 상대적 효능(IVRP)은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 시험관내 상대적 효능(IVRP)이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 -20℃에서 일정 기간, 예를 들어, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 높다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 시험관내 상대적 효능(IVRP)은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 시험관내 상대적 효능(IVRP)이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 -20℃에서 일정 기간, 예를 들어, 적어도 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 높다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 시험관내 상대적 효능(IVRP)은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 유리 DNA가 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 -20℃에서 일정 기간, 예를 들어, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 적다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 유리 DNA는 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 유리 DNA가 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 -20℃에서 일정 기간, 예를 들어, 적어도 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 적다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 유리 DNA는 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 -20℃에서 일정 기간, 예를 들어, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년에 걸쳐 보관된 경우 최대 20%, 15%, 10%, 8%, 5%, 4%, 3%, 2%, 또는 1% 크기 변화를 갖는다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 크기는 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 -20℃에서 일정 기간, 예를 들어, 적어도 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년에 걸쳐 보관된 경우 최대 20%, 15%, 10%, 8%, 5%, 4%, 3%, 2%, 또는 1% 크기 변화를 갖는다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 크기는 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 37℃에서 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정하다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 안정성은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 감염성이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 37℃에서 일정 기간, 예를 들어, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 높다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 바이러스 감염성은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 감염성이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 37℃에서 일정 기간, 예를 들어, 적어도 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 높다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 바이러스 감염성은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 응집이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 37℃에서 일정 기간, 예를 들어, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 적다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 응집은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 응집이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 37℃에서 일정 기간, 예를 들어, 적어도 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 적다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 응집은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 37℃에서 일정 기간, 예를 들어, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정하다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 일정 기간에 걸친 안정성은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 37℃에서 일정 기간, 예를 들어, 적어도 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정하다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 일정 기간에 걸친 안정성은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 시험관내 상대적 효능(IVRP)이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 37℃에서 일정 기간, 예를 들어, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 높다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 시험관내 상대적 효능(IVRP)은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 시험관내 상대적 효능(IVRP)이 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 37℃에서 일정 기간, 예를 들어, 적어도 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 높다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 시험관내 상대적 효능(IVRP)은 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 유리 DNA가 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 37℃에서 일정 기간, 예를 들어, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 적다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 유리 DNA는 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 유리 DNA가 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 37℃에서 일정 기간, 적어도 예를 들어, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 적다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 유리 DNA는 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 37℃에서 일정 기간, 예를 들어, 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년에 걸쳐 보관된 경우 최대 20%, 15%, 10%, 8%, 5%, 4%, 3%, 2%, 또는 1% 크기 변화를 갖는다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 크기는 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 약제학적 조성물 내의 재조합 AAV는 37℃에서 일정 기간, 예를 들어, 적어도 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 2 년, 약 3 년, 및 약 4 년에 걸쳐 보관된 경우 최대 20%, 15%, 10%, 8%, 5%, 4%, 3%, 2%, 또는 1% 크기 변화를 갖는다. 특정 구현예에서, 재조합 AAV의 크기는 섹션 4.5 및 섹션 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물은 예를 들어, 섹션 4.5 또는 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된 바와 같이 안정성 손실 없이 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 또는 48 개월 동안 보관될 수 있다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물은 안정성 손실 없이 4℃에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24 개월 동안 보관될 수 있다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물은 안정성 손실 없이 ≤60℃에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 또는 48 개월 동안 보관될 수 있다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물은 안정성 손실 없이 -80℃에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 또는 48 개월 동안 보관될 수 있다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물은 안정성 손실 없이 -20℃에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 또는 12 개월 동안 보관된 후 4℃에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 또는 24 개월 동안 보관될 수 있다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물은 예를 들어, 섹션 4.5 또는 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된 바와 같이 안정성 손실 없이 먼저 -80℃에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 또는 48 개월 동안 보관된 다음, 해동되고, 해동 후, 2-10℃, 4-8℃, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9℃에서 추가 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 또는 12 개월 동안 보관될 수 있다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물은 예를 들어, 섹션 4.5 또는 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된 바와 같이 안정성 손실 없이 먼저 -80℃에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 또는 48 개월 동안 보관된 다음, 해동되고, 해동 후, 약 4℃에서 추가 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 또는 12 개월 동안 보관될 수 있다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 약제학적 조성물은 예를 들어, 섹션 4.5 또는 5에 개시된 검정 또는 검정들에 의해 결정된 바와 같이 안정성 손실 없이 먼저 ≤60℃에서 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 또는 48 개월 동안 보관된 다음, 해동되고, 해동 후, 약 4℃에서 추가 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 또는 12 개월 동안 보관될 수 있다.
또 다른 측면에서, 본원에는 본원에 제공된 재조합 AAV(예를 들어, 작제물 II)를 포함하는 단일 단위 투여 형태가 제공된다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "단일 단위 투여 형태"는 1 회 방문에서 1 명의 환자에게 필요한 재조합 AAV(예를 들어, 작제물 II)의 양을 포함하는 투여 형태를 지칭한다. 일부 구현예에서, 환자는 재조합 AAV(예를 들어, 작제물 II)를 한쪽 눈에 투여받을 수 있다. 다른 구현예에서, 환자는 재조합 AAV(예를 들어, 작제물 II)를 양쪽 눈에 투여받을 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에는 바이알에 약 0.95 mL의 부피로 3.2 x 1011 게놈 카피(GC)/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에는 바이알에 적어도 0.8 mL의 부피로 3.2 x 1011 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태가 제공된다.
일부 구현예에서, 본원에는 바이알에 약 0.95 mL의 부피로 3.2 x 1011 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4, 4% 수크로스 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태가 제공된다. 일부 구현예에서, 바이알에 적어도 0.8 mL의 부피로 3.2 x 1011 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4, 4% 수크로스 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태가 제공된다.
일부 구현예에서, 본원에는 바이알에 약 0.95 mL의 부피로 6.5 x 1011 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에는 바이알에 적어도 0.8 mL의 부피로 6.5 x 1011 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4, 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태가 제공된다.
일부 구현예에서, 본원에는 바이알에 약 0.95 mL의 부피로 6.5 x 1011 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4, 4% 수크로스 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에는 바이알에 적어도 0.8 mL의 부피로 6.5 x 1011 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4, 4% 수크로스 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태가 제공된다.
일부 구현예에서, 본원에는 바이알에 약 0.6 mL의 부피로 2.5 x 1012 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4, 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에는 바이알에 적어도 0.5 mL의 부피로 2.5 x 1012 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4, 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태가 제공된다.
일부 구현예에서, 본원에는 바이알에 약 0.6 mL의 부피로 3 x 1013 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4, 4% 수크로스 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에는 바이알에 적어도 0.5 mL의 부피로 3 x 1013 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4, 4% 수크로스 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태가 제공된다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 단일 단위 투여 형태는 소수성으로-코팅된 유리 바이알에 함유된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 단일 단위 투여 형태는 사이클로 올레핀 중합체(COP) 바이알에 함유된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 단일 단위 투여 형태는 Daikyo Crystal Zenith®(CZ) 바이알에 함유된다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 단일 단위 투여 형태는 망막하 투여를 통해 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 단일 단위 투여 형태는 맥락막상 투여를 통해 대상체에게 투여된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 단일 단위 투여 형태는 망막하 및 맥락막상 투여 둘 다에 적합할 수 있다. 본원에는 또한 본원에 제공된 단일 단위 투여 형태를 함유하는 미리 충전된 주사기가 제공된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 단일 단위 투여 형태는 4℃에서 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월 동안 보관될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 단일 단위 투여 형태는 -80℃에서 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월 동안 보관될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 단일 단위 투여 형태는 이전에 -80℃에서 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월 동안 보관된 후 4℃에서 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월 동안 보관될 수 있다.
4.3 투여량 및 투여 모드
특정 측면에서, 본원에는 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사(예를 들어, 미세바늘이 있는 미세주사기와 같은 맥락막상 약물 전달 장치를 통해), 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사(외과적 처치), 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여(예를 들어, 작은 바늘을 망막하 공간으로 주사하는 후방극을 향하여 맥락막상 공간을 통해 삽입 및 터널링될 수 있는 카테터를 포함하는 망막하 약물 전달 장치를 통한 외과적 처치), 및/또는 후방 공막옆 데포 절차(예를 들어, 끝 부분이 공막 표면에 직접 병렬로 삽입 및 유지될 수 있는 캐뉼라를 포함하는 공막옆 약물 전달 장치를 통해))에 의해 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 질환을 치료 또는 예방하는 방법이 개시된다. 특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 벡터 게놈 농도(VGC)는 약 3 x 109 GC/mL, 약 1 x 1010 GC/mL, 약 1.2 x 1010 GC/mL, 약 1.6 x 1010 GC/mL, 약 4 x 1010 GC/mL, 약 6 x 1010 GC/mL, 약 2 x 1011 GC/mL, 약 2.4 x 1011 GC/mL, 약 2.5 x 1011 GC/mL, 약 3 x 1011 GC/mL, 약 6.2 x 1011 GC/mL, 약 1 x 1012 GC/mL, 약 3 x 1012 GC/mL, 약 2 x 1013 GC/mL 또는 약 3 x 1013 GC/mL이다
특정 구현예에서, 약제학적 조성물의 벡터 게놈 농도(VGC)는 약 3 x 109 GC/mL, 4 x 109 GC/mL, 5 x 109 GC/mL, 6 x 109 GC/mL, 7 x 109 GC/mL, 8 x 109 GC/mL, 9 x 109 GC/mL, 약 1 x 1010 GC/mL, 약 2 x 1010 GC/mL, 약 3 x 1010 GC/mL, 약 4 x 1010 GC/mL, 약 5 x 1010 GC/mL, 약 6 x 1010 GC/mL, 약 7 x 1010 GC/mL, 약 8 x 1010 GC/mL, 약 9 x 1010 GC/mL, 약 1 x 1011 GC/mL, 약 2 x 1011 GC/mL, 약 3 x 1011 GC/mL, 약 4 x 1011 GC/mL, 약 5 x 1011 GC/mL, , 약 6 x 1011 GC/mL, 약 7 x 1011 GC/mL, 약 8 x 1011 GC/mL, 약 9 x 1011 GC/mL, 약 1 x 1012 GC/mL, 약 2 x 1012 GC/mL, 약 3 x 1012 GC/mL, 약 4 x 1012 GC/mL, 약 5 x 1012 GC/mL, 약 6 x 1012 GC/mL, 약 7 x 1012 GC/mL, 약 8 x 1012 GC/mL, 약 9 x 1012 GC/mL, 약 1 x 1013 GC/mL, 약 1 x 1013 GC/mL, 약 2 x 1013 GC/mL, 약 3 x 1013 GC/mL이다.
재조합 벡터의 치료 유효 용량은 ≥ 0.1 mL 내지 ≤ 0.5 mL, 바람직하게는 0.1 내지 0.30 mL(100 - 300 μl) 범위의 부피, 가장 바람직하게는, 0.25 mL(250 μl)의 부피로 망막하로 및/또는 망막내로(예를 들어, 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사(외과적 처치)에 의해, 또는 맥락막상 공간을 통해) 투여되어야 한다. 재조합 벡터의 치료 유효 용량은 동일한 방문 동안 1 회 이상의 주사로 투여될 수 있다. 재조합 벡터의 치료 유효 용량은 100 μl 이하의 부피, 예를 들어, 50-100 μl의 부피로 맥락막상으로(예를 들어, 맥락막상 주사에 의해) 투여되어야 한다. 재조합 벡터의 치료 유효 용량은 500 μl 이하의 부피, 예를 들어, 500 μl 이하의 부피, 예를 들어, 10-20 μl, 20-50 μl, 50-100 μl, 100-200 μl, 200-300 μl, 300-400 μl, 또는 400-500 μl의 부피로 공막의 외부 표면에 투여되어야 한다.
특정 구현예에서, 재조합 벡터는 맥락막상으로(예를 들어, 맥락막상 주사에 의해) 투여된다. 구체적 구현예에서, 맥락막상 투여(예를 들어, 맥락막상 공간으로 주사)는 맥락막상 약물 전달 장치를 사용하여 수행된다. 맥락막상 약물 전달 장치는 종종 맥락막상 투여 절차에 사용되며, 눈의 맥락막상 공간에 약물의 투여를 수반한다(예를 들어, Hariprasad, 2016, Retinal Physician 13: 20-23; Goldstein, 2014, Retina Today 9(5): 82-87; Baldassarre 등, 2017을 참조하며; 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다). 본원에 기재된 본 발명에 따른 망막하 공간에서 발현 벡터를 침착시키는 데 사용될 수 있는 맥락막상 약물 전달 장치는 Clearside® Biomedical, Inc.에 의해 제조된 맥락막상 약물 전달 장치(예를 들어, Hariprasad, 2016, Retinal Physician 13: 20-23 참조) 및 MedOne 맥락막상 카테터를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
구체적 구현예에서, 맥락막상 약물 전달 장치는 1 밀리미터 30 게이지 바늘이 있는 주사기이다(도 5 참조). 이 장치를 사용한 주사 동안, 바늘은 공막의 기저를 뚫고 약물을 함유하는 유체가 맥락막상 공간으로 들어가게 하여, 맥락막상 공간의 확장으로 이어진다. 결과적으로, 주사 동안 촉각 및 시각 피드백이 있다. 주사 후, 유체는 후방으로 흐르고 맥락막 및 망막에서 주로 흡수된다. 이는 모든 망막 세포 층 및 맥락막 세포로부터 이식유전자 단백질의 생산을 초래한다. 이 유형의 장치 및 절차를 사용하는 것은 합병증 위험이 낮은 빠르고 쉬운 사무실내 절차를 허용한다. 100 μl의 최대 부피를 맥락막상 공간으로 주사할 수 있다.
특정 구현예에서, 재조합 벡터는 망막하 약물 전달 장치의 사용에 의해 맥락막상 공간을 통해 망막하로 투여된다. 특정 구현예에서, 망막하 약물 전달 장치는 약물을 망막하 공간에 전달하기 위한 외과적 처치 동안 눈 뒤쪽 주위에 맥락막상 공간을 통해 삽입 및 터널링되는 카테터이다(도 6 참조). 이 절차는 유리체가 온전하게 유지되게 하며 따라서, 합병증 위험이 적고(유전자 요법 이탈, 및 망막 박리 및 황반 원공과 같은 합병증 위험이 적음), 유리체 절제 없이, 생성된 수포는 더 널리 퍼져서 망막의 더 많은 표면적이 더 작은 부피로 형질도입 되도록 할 수 있다. 이 절차 후 백내장 유도 위험은 최소화되며, 젊은 환자에게 바람직하다. 더욱이, 이 절차는 표준 유리체 통과 접근법보다 더 안전하게 안와중심 아래에 수포를 전달할 수 있으며, 이는 형질도입을 위한 표적 세포가 황반 내에 있는 중심 시력에 영향을 미치는 유전성 망막 질환 환자에게 바람직하다. 이 절차는 또한 다른 전달 경로(예컨대 맥락막상 및 유리체내)에 영향을 미칠 수 있는 전신 순환에 존재하는 AAV에 대한 중화 항체(Nab)가 있는 환자에게 유리하다. 추가적으로, 이 방법은 표준 유리체 통과 접근법보다 망막절개 부위 밖으로 덜 이탈하는 수포를 생성하는 것으로 나타났다. 원래 Janssen Pharmaceuticals, Inc.에 의해 제조되었으며 현재 Orbit Biomedical Inc.에 의해 제조되는 망막하 약물 전달 장치(예를 들어, Subretinal Delivery of Cells via the Suprachoroidal Space: Janssen Trial. In: Schwartz 등 (eds) Cellular Therapies for Retinal Disease, Springer, Cham; 국제 특허 출원 공개 번호 WO 2016/040635 A1 참조)가 이러한 목적을 위해 사용될 수 있다.
특정 구현예에서, 재조합 벡터는 공막의 외부 표면에 투여된다(예를 들어, 끝 부분이 공막 표면에 직접 병렬로 삽입 및 유지될 수 있는 캐뉼라를 포함하는 공막옆 약물 전달 장치의 사용에 의해). 구체적 구현예에서, 공막의 외부 표면에 투여는 후방 공막옆 데포 절차를 사용하여 수행되며, 이는 뭉툭한 끝이 구부러진 캐뉼라로 약물을 끌어들인 다음 안구에 구멍을 내지 않고 공막의 외부 표면과 직접 접촉하여 전달되는 것을 수반한다. 특히, 노출 공막에 작은 절개를 생성한 후, 캐뉼라 끝 부분이 삽입된다(도 7a 참조). 캐뉼라 손잡이의 구부러진 부분이 삽입되어, 캐뉼라 끝 부분을 공막 표면에 직접 병렬로 유지한다(도 7b-7d 참조). 캐뉼라가 완전히 삽입된 후(도 7d), 멸균 면봉으로 캐뉼라 손잡이의 상단 및 측면을 따라 부드러운 압력을 유지하면서 약물을 서서히 주사한다. 이 전달 방법은 치료제를 눈에 직접 주사하는 것과 통상적으로 연관된 부작용인 안내 감염 및 망막 방리의 위험을 피한다.
3 개월 동안 유리체액에서 적어도 0.330 μg/mL, 또는 수양액(눈의 전방)에서 0.110 μg/mL의 Cmin으로 이식유전자 산물의 농도를 유지하는 용량이 바람직하며; 이후에, 1.70 내지 6.60 μg/mL 범위의 이식유전자 산물의 유리체액 Cmin 농도, 및/또는 0.567 내지 2.20 μg/mL 범위의 수양액 Cmin 농도가 유지되어야 한다. 그러나, 이식유전자 산물은 지속적으로 생성되기 때문에(구성적 프로모터의 제어 하에 또는 저산소증-유도성 프로모터를 사용하는 경우 저산소 조건에 의해 유도됨), 더 낮은 농도를 유지하는 것이 효과적일 수 있다. 유리체액 농도는 유리체액 또는 전방으로부터 수집된 체액의 환자 샘플에서 직접 측정되거나, 또는 환자의 이식유전자 산물의 혈청 농도를 측정함으로써 추정 및/또는 모니터링될 수 있으며, 이식유전자 산물에 대한 전신 대 유리체 노출의 비는 약 1:90,000이다. (예를 들어, Xu L, 등, 2013, Invest. Opthal. Vis. Sci. 54: 1616-1624의 p. 1621 및 p. 1623의 표 5에 보고된 라니비주맙의 유리체액 및 혈청 농도를 참조하며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다).
특정 구현예에서, 투여량은 환자의 눈에 투여되는 ml 당 게놈 카피 또는 게놈 카피의 수에 의해 측정된다(예를 들어, 맥락막상으로, 망막하로, 공막옆으로 및/또는 망막내로 투여됨(예를 들어, 맥락막상 주사에 의해, 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사(외과적 처치), 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여, 또는 후방 공막옆 데포 절차). 특정 구현예에서, ml 당 2.4 x 1011 게놈 카피 내지 ml 당 1 x 1013 게놈 카피가 투여된다. 구체적 구현예에서, ml 당 2.4 x 1011 게놈 카피 내지 ml 당 5 x 1011 게놈 카피가 투여된다. 또 다른 구체적 구현예에서, ml 당 5 x 1011 게놈 카피 내지 ml 당 1 x 1012 게놈 카피가 투여된다. 또 다른 구체적 구현예에서, ml 당 1 x 1012 게놈 카피 내지 ml 당 5 x 1012 게놈 카피가 투여된다. 또 다른 구체적 구현예에서, ml 당 5 x 1012 게놈 카피 내지 ml 당 1 x 1013 게놈 카피가 투여된다. 또 다른 구체적 구현예에서, ml 당 약 2.4 x 1011 게놈 카피가 투여된다. 또 다른 구체적 구현예에서, ml 당 약 5 x 1011 게놈 카피가 투여된다. 또 다른 구체적 구현예에서, ml 당 약 1 x 1012 게놈 카피가 투여된다. 또 다른 구체적 구현예에서, ml 당 약 5 x 1012 게놈 카피가 투여된다. 또 다른 구체적 구현예에서, ml 당 약 1 x 1013 게놈 카피가 투여된다. 특정 구현예에서, 1 x 109 내지 1 x 1012 게놈 카피가 투여된다. 구체적 구현예에서, 3 x 109 내지 2.5 x 1011 게놈 카피가 투여된다. 구체적 구현예에서, 1 x 109 내지 2.5 x 1011 게놈 카피가 투여된다. 구체적 구현예에서, 1 x 109 내지 1 x 1011 게놈 카피가 투여된다. 구체적 구현예에서, 1 x 109 내지 5 x 109 게놈 카피가 투여된다. 구체적 구현예에서, 6 x 109 내지 3 x 1010 게놈 카피가 투여된다. 구체적 구현예에서, 4 x 1010 내지 1 x 1011 게놈 카피가 투여된다. 구체적 구현예에서, 2 x 1011 내지 1 x 1012 게놈 카피가 투여된다. 구체적 구현예에서, 약 3 x 109 게놈 카피가 투여된다(이는 250 μl의 부피에서 ml 당 약 1.2 x 1010 게놈 카피에 상응함). 또 다른 구체적 구현예에서, 약 1 x 1010 게놈 카피가 투여된다(이는 250 μl의 부피에서 ml 당 약 4 x 1010 게놈 카피에 상응함). 또 다른 구체적 구현예에서, 약 6 x 1010 게놈 카피가 투여된다(이는 250 μl의 부피에서 ml 당 약 2.4 x 1011 게놈 카피에 상응함). 또 다른 구체적 구현예에서, 약 1.6 x 1011 게놈 카피가 투여된다(이는 250 μl의 부피에서 ml 당 약 6.2 x 1011 게놈 카피에 상응함). 또 다른 구체적 구현예에서, 약 1.55 x 1011 게놈 카피가 투여된다(이는 250 μl의 부피에서 ml 당 약 6.2 x 1011 게놈 카피에 상응함). 또 다른 구체적 구현예에서, 약 1.6 x 1011 게놈 카피가 투여된다(이는 250 μl의 부피에서 ml 당 약 6.4 x 1011 게놈 카피에 상응함). 또 다른 구체적 구현예에서, 약 2.5 x 1011 게놈 카피(이는 250 μl의 부피에서 ml 당 약 1.0 x 1012 게놈 카피에 상응함)가 투여된다. 또 다른 구체적 구현예에서, 약 6.4 x 1010 게놈 카피(이는 200 μl의 부피에서 ml 당 약 3.2 x 1011 게놈 카피에 상응함)가 투여된다. 또 다른 구체적 구현예에서, 약 1.3 x 1011 게놈 카피(이는 200 μl의 부피에서 ml 당 약 6.5 x 1011 게놈 카피에 상응함)가 투여된다.
본원에 사용된 바와 같고 달리 명시되지 않는 한, 용어 "약"은 주어진 값 또는 범위의 플러스 또는 마이너스 10% 이내를 의미한다.
또 다른 측면에서, 본원에는 nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 또는 당뇨병성 망막증(DR)으로 진단된 대상체를 치료하는 방법이 제공되며, 방법은 본원에 제공된 약제학적 조성물을 제조하는 단계, -80℃에서 제1 기간 동안 약제학적 조성물을 보관하는 단계, 약제학적 조성물을 해동하는 단계 및, 해동 후, 4℃에서 제2 기간 동안 약제학적 조성물을 보관하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 제1 기간은 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월, 약 25 개월, 약 26 개월, 약 27 개월, 약 28 개월, 약 28 개월, 약 30 개월, 약 31 개월, 약 32 개월, 약 33 개월, 약 34 개월, 약 35 개월, 약 36 개월, 약 37 개월, 약 38 개월, 약 39 개월, 약 40 개월, 약 41 개월, 약 42 개월, 약 43 개월, 약 44 개월, 약 45 개월, 약 46 개월, 약 47 개월, 또는 약 48 개월이다. 일부 구현예에서, 제2 기간은 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 또는 약 6 개월이다..
4.4. 작제물 I, 작제물 II 및 다른 작제물
일부 구현예에서, AAV는 다음 요소를 다음 순서로 포함하는 본원에 제공된 AAV 바이러스 벡터이다: a) 구성적 또는 저산소증-유도성 프로모터 서열, 및 b) 이식유전자(예를 들어, 항-VEGF 항원-결합 단편 모이어티)를 암호화하는 서열. 일부 구현예에서, 이식유전자는 VEGF에 대한 완전 인간 번역후 변형된(HuPTM) 항체이다. 항체는 단클론 항체, 다클론 항체, 재조합적으로 생성된 항체, 인간 항체, 인간화 항체, 키메라 항체, 합성 항체, 2 개의 중쇄 및 2 개의 경쇄 분자를 포함하는 사량체성 항체, 항체 경쇄 단량체, 항체 중쇄 단량체, 항체 경쇄 이량체, 항체 중쇄 이량체, 항체 경쇄-중쇄 쌍, 인트라바디, 이형접합 항체, 1가 항체, 전장 항체의 항원-결합 단편, 및 상기의 융합 단백질을 포함하나 이에 제한되지 않는다. 이러한 항원-결합 단편은 단일-도메인 항체(중쇄 항체(VHH) 또는 나노바디의 가변 도메인), Fab, F(ab')2, 및 전장 항-VEGF 항체(바람직하게는, 전장 항-VEGF 단클론 항체(mAb))의 scFv(단일쇄 가변 단편)를 포함하나 이에 제한되지 않는다(집합적으로 "항원-결합 단편"으로 지칭됨). 바람직한 구현예에서, VEGF에 대한 완전 인간 번역후 변형된 항체는 VEGF에 대한 단클론 항체(mAb)의 완전 인간 번역후 변형된 항원-결합 단편("HuPTMFabVEGFi")이다. 추가의 바람직한 구현예에서, HuPTMFabVEGFi는 항-VEGF mAb의 완전 인간 글리코실화 항원-결합 단편("HuGlyFabVEGFi")이다. 대안적인 구현예에서, 전장 mAb가 사용될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 이식유전자를 전달하기 위해 사용되는 AAV는 인간 망막 세포 또는 광수용체 세포에 대한 향성을 가져야 한다. 이러한 AAV는 비-복제 재조합 아데노-연관 바이러스 벡터("rAAV")를 포함할 수 있으며, 특히 AAV8 캡시드를 보유하는 것들이 바람직하다. 구체적 구현예에서, 본원에 기재된 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 작제물은 작제물 I이며, 여기서 작제물 I은 다음 구성요소를 포함한다: (1) 발현 카세트 측면에 있는 AAV8 도립된 말단 반복부; (2) 다음을 포함하는 제어 요소: a) CMV 인핸서/닭 β-액틴 프로모터를 포함하는 CB7 프로모터, b) 닭 β-액틴 인트론 및 c) 토끼 β-글로빈 poly　A 신호; 및 (3) 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드의 동일한 양의 발현을 보장하는 자가-절단 퓨린(F)/F2A 링커에 의해 분리된 항-VEGF 항원-결합 단편의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 핵산 서열. 또 다른 구체적 구현예에서, 본원에 기재된 바이러스 벡터 또는 다른 DNA 발현 작제물은 작제물 II이며, 여기서 작제물 II는 다음 구성요소를 포함한다: (1) 발현 카세트 측면에 있는 AAV2 도립된 말단 반복부; (2) 다음을 포함하는 제어 요소: a) CMV 인핸서/닭 β-액틴 프로모터를 포함하는 CB7 프로모터, b) 닭 β-액틴 인트론 및 c) 토끼 β-글로빈 poly　A 신호; 및 (3) 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드의 동일한 양의 발현을 보장하는 자가-절단 퓨린(F)/F2A 링커에 의해 분리된 항-VEGF 항원-결합 단편의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 핵산 서열. 일부 구현예에서, 항-hVEGF 항체는 서열번호:2 또는 서열번호:4의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호:1 또는 서열번호:3의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 구현예에서, 약제학적 조성물은 (a) 항-인간 혈관 내피 성장 인자(hVEGF) 항체를 암호화하는 작제물 II, (b) 0.2 g/L 농도의 염화 칼륨, (c) 0.2 g/L 농도의 일염기성 인산 칼륨, (d) 5.84 g/L 농도의 염화 나트륨, (e) 1.15 g/L 농도의 인산 나트륨 이염기성 무수물, (f) 4% 중량/부피(40 g/L) 농도의 수크로스, (g) 0.001% 중량/부피(0.01 g/L) 농도의 폴록사머 188, 및 (h) 물로 이루어지며, 여기서 항-hVEGF 항체는 서열번호:2 또는 서열번호:4의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호:1 또는 서열번호:3의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다.
일부 측면에서, 본원에는 항-VEGF 항원-결합 단편 또는 항-VEGF 항원-결합 단편의 과글리코실화된 유도체를 암호화하는 AAV 바이러스 벡터가 제공된다. 본원에 제공된 바이러스 벡터 및 다른 DNA 발현 작제물은 표적 세포(예를 들어, 망막 색소 상피 세포)에 이식유전자의 전달을 위한 임의의 적합한 방법을 포함한다. 이식유전자의 전달 수단은 바이러스 벡터, 리포솜, 다른 지질-함유 복합체, 다른 거대분자 복합체, 합성 변형된 mRNA, 비변형된 mRNA, 소분자, 비-생물학적으로 활성 분자(예를 들어, 금 입자), 중합체화된 분자(예를 들어, 덴드리머), 네이키드 DNA, 플라스미드, 파지, 트랜스포존, 코스미드, 또는 에피솜을 포함한다. 일부 구현예에서, 벡터는 표적화된 벡터, 예를 들어, 망막 색소 상피 세포에 표적화된 벡터이다.
일부 측면에서, 본 개시내용은 사용하기 위한 핵산을 제공하며, 여기서 핵산은 CB7 프로모터(닭 β-액틴 프로모터 및 CMV 인핸서), 사이토메갈로바이러스(CMV) 프로모터, 라우스 육종 바이러스(RSV) 프로모터, MMT 프로모터, EF-1 알파 프로모터, UB6 프로모터, 닭 베타-액틴 프로모터, CAG 프로모터, RPE65 프로모터 및 옵신 프로모터로 이루어진 군으로부터 선택된 프로모터에 작동가능하게 연결된 HuPTMFabVEGFi, 예를 들어, HuGlyFabVEGFi를 암호화한다. 구체적 구현예에서, HuPTMFabVEGFi는 CB7 프로모터에 작동가능하게 연결된다.
특정 구현예에서, 본원에는 하나 이상의 핵산(예를 들어 폴리뉴클레오티드)을 포함하는 재조합 벡터가 제공된다. 핵산은 DNA, RNA, 또는 DNA 및 RNA의 조합을 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, DNA는 프로모터 서열, 관심 유전자(이식유전자, 예를 들어, 항-VEGF 항원-결합 단편)의 서열, 비번역 영역, 및 종결 서열로 이루어진 군으로부터 선택된 서열 중 하나 이상을 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 바이러스 벡터는 관심 유전자에 작동가능하게 연결된 프로모터를 포함한다.
특정 구현예에서, 본원에 개시된 핵산(예를 들어, 폴리뉴클레오티드) 및 핵산 서열은 예를 들어, 당업자에게 알려진 임의의 코돈-최적화 기술을 통해 코돈-최적화될 수 있다(예를 들어, Quax 등, 2015, Mol Cell 59:149-161에 의한 검토 참조).
4.4.1 mRNA
특정 구현예에서, 본원에 제공된 벡터는 관심 유전자(예를 들어, 이식유전자, 예를 들어, 항-VEGF 항원-결합 단편 모이어티)를 암호화하는 변형된 mRNA이다. 이식유전자를 망막 색소 상피 세포에 전달하기 위한 변형 및 비변형된 mRNA의 합성은 예를 들어, Hansson 등, J. Biol. Chem., 2015, 290(9):5661-5672에 교시되어 있으며, 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 특정 구현예에서, 본원에는 항-VEGF 항원-결합 단편 모이어티를 암호화하는 변형된 mRNA가 제공된다.
4.4.2 바이러스 벡터
특정 구현예에서, 본원에 제공된 바이러스 벡터는 AAV 기반 바이러스 벡터이다. 바람직한 구현예에서, 본원에 제공된 바이러스 벡터는 AAV8 기반 바이러스 벡터이다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 AAV8 기반 바이러스 벡터는 망막 세포에 대한 향성을 유지한다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 AAV-기반 벡터는 AAV rep 유전자(복제에 필요) 및/또는 AAV cap 유전자(캡시드 단백질의 합성에 필요)를 암호화한다. 다중 AAV 혈청형이 식별되었다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 AAV-기반 벡터는 AAV의 하나 이상의 혈청형의 구성요소를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 AAV 기반 벡터는 AAV1, AAV2, AAV2tYF, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAVrh10, AAV.rh20, AAV.rh39, AAV.Rh74, AAV.RHM4-1, AAV.hu37, AAV.Anc80, AAV.Anc80L65, rAAV.7m8, AAV.PHP.B, AAV.PHP.eB, AAV2.5, AAV2tYF, AAV3B, AAV.LK03, AAV.HSC1, AAV.HSC2, AAV.HSC3, AAV.HSC4, AAV.HSC5, AAV.HSC6, AAV.HSC7, AAV.HSC8, AAV.HSC9, AAV.HSC10, AAV.HSC11, AAV.HSC12, AAV.HSC13, AAV.HSC14, AAV.HSC15, 및 AAV.HSC16 중 하나 이상으로부터의 캡시드 구성요소를 포함한다. 바람직한 구현예에서, 본원에 제공된 AAV 기반 벡터는 AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, 또는 AAVrh10 혈청형 중 하나 이상으로부터의 구성요소를 포함한다.
특정 구현예에서 조절 요소의 제어 하에 ITR 측면에 있는 이식유전자의 발현을 위한 발현 카세트를 포함하는 바이러스 게놈 및 AAV8 캡시드 단백질의 아미노산 서열을 갖거나 또는 AAV8 캡시드의 생물학적 기능을 유지하면서 AAV8 캡시드 단백질(서열번호: 48)의 아미노산 서열과 적어도 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 99.9% 동일한 바이러스 캡시드를 포함하는 AAV8 벡터가 제공된다. 특정 구현예에서, 암호화된 AAV8 캡시드는 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30 개의 아미노산 치환이 있는 서열번호: 48의 서열을 가지며 AAV8 캡시드의 생물학적 기능을 유지한다. 도 8은 SUBS로 표지된 행에서의 비교에 기반하여 정렬된 서열의 특정 위치에서 치환될 수 있는 잠재적인 아미노산과 상이한 AAV 혈청형의 캡시드 단백질의 아미노산 서열의 비교 정렬을 제공한다. 따라서, 구체적 구현예에서, AAV8 벡터는 천연 AAV8 서열의 해당 위치에 존재하지 않는 도 8의 SUBS 열에서 식별된 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 또는 30 개의 아미노산 치환을 갖는 AAV8 캡시드 변이체를 포함한다.
특정 구현예에서, 본원에 기재된 방법에 사용되는 AAV는 Zinn 등, 2015, Cell Rep. 12(6): 1056-1068에 기재된 바와 같은 Anc80 또는 Anc80L65이며, 이는 그 전문이 참조로 포함된다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 방법에 사용되는 AAV는 다음 아미노산 삽입 중 하나를 포함한다: 미국 특허 번호 제9,193,956호; 제9458517호; 및 제9,587,282호 및 미국 특허 출원 공개 번호 제2016/0376323호에 기재된 바와 같은 LGETTRP 또는 LALGETTRP, 각각의 문헌은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 방법에 사용되는 AAV는 미국 특허 번호 제9,193,956호; 제9,458,517호; 및 제9,587,282호 및 미국 특허 출원 공개 번호 제2016/0376323호에 기재된 바와 같은 AAV.7m8이며, 각각의 문헌은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 방법에 사용되는 AAV는 미국 특허 번호 제9,585,971호에 개시된 임의의 AAV, 예컨대 AAV.PHP.B이다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 방법에 사용되는 AAV는 다음 특허 및 특허 출원 중 임의의 것에 개시된 AAV이며, 각각의 문헌은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다: 미국 특허 번호 제7,906,111호; 제8,524,446호; 제8,999,678호; 제8,628,966호; 제8,927,514호; 제8,734,809호; US 제9,284,357호; 제9,409,953호; 제9,169,299호; 제9,193,956호; 제9458517호; 및 제9,587,282호 미국 특허 출원 공개 번호 제2015/0374803호; 제2015/0126588호; 제2017/0067908호; 제2013/0224836호; 제2016/0215024호; 제2017/0051257호; 및 국제 특허 출원 번호 PCT/US2015/034799; PCT/EP2015/053335.
AAV8-기반 바이러스 벡터는 본원에 기재된 특정 방법에 사용된다. AAV 기반 바이러스 벡터의 핵산 서열 및 재조합 AAV 및 AAV 캡시드를 제조하는 방법은 예를 들어, 미국 특허 번호 제7,282,199 B2호, 미국 특허 번호 제7,790,449 B2호, 미국 특허 번호 제8,318,480 B2호, 미국 특허 번호 제8,962,332 B2호 및 국제 특허 출원 번호 PCT/EP2014/076466에 교시되어 있으며, 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 일 측면에서, 본원에는 이식유전자(예를 들어, 항-VEGF 항원-결합 단편)를 암호화하는 AAV(예를 들어, AAV8)-기반 바이러스 벡터가 제공된다. 구체적 구현예에서, 본원에는 항-VEGF 항원-결합 단편을 암호화하는 AAV8-기반 바이러스 벡터가 제공된다. 보다 구체적인 구현예에서, 본원에는 라니비주맙을 암호화하는 AAV8-기반 바이러스 벡터가 제공된다.
특정 구현예에서, 단일 가닥 AAV(ssAAV)가 상기에서 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 자기-상보적 벡터, 예를 들어, scAAV가 사용될 수 있다(예를 들어, Wu, 2007, Human Gene Therapy, 18(2):171-82, McCarty 등, 2001, Gene Therapy, Vol 8, Number 16, Pages 1248-1254; 및 미국 특허 번호 제6,596,535; 7,125,717호; 및 제7,456,683호를 참조하며, 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다).
특정 구현예에서, 본원에 기재된 방법에 사용되는 바이러스 벡터는 아데노바이러스 기반 바이러스 벡터이다. 재조합 아데노바이러스 벡터는 항-VEGF 항원-결합 단편에서 전달하기 위해 사용될 수 있다. 재조합 아데노바이러스는 E1 결실이 있고, E3 결실이 있거나 없고, 발현 카세트가 결실된 영역에 삽입된 1세대 벡터일 수 있다. 재조합 아데노바이러스는 E2 및 E4 영역의 전체 또는 부분 결실을 함유하는 2세대 벡터일 수 있다. 헬퍼-의존적 아데노바이러스는 아데노바이러스 도립된 말단 반복부 및 패키징 신호(phi)만을 보유한다. 이식유전자는 패키징 신호 및 3'ITR 사이에 삽입되며, 스터퍼 서열이 있거나 없이 게놈을 대략 36 kb의 야생형 크기에 가깝게 유지한다. 아데노바이러스 벡터의 생산을 위한 예시적인 프로토콜은 Alba 등, 2005, "Gutless adenovirus: last generation adenovirus for gene therapy," Gene Therapy 12:S18-S27에서 찾을 수 있으며, 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
구체적 구현예에서, 본원에 기재된 방법에 사용하기 위한 벡터는 관련 세포(예를 들어, 생체내 또는 시험관내 망막 세포)에 벡터의 도입 시, 항-VEGF 항원-결합 단편의 글리코실화 및 또는 티로신 황산화된 변이체가 세포에 의해 발현되도록 항-VEGF 항원-결합 단편(예를 들어, 라니비주맙)을 암호화하는 것이다. 구체적 구현예에서, 발현된 항-VEGF 항원-결합 단편은 상기 섹션 4.1에 기재된 바와 같은 글리코실화 및/또는 티로신 황산화 패턴을 포함한다.
4.4.3 유전자 발현의 프로모터 및 변형자
특정 구현예에서, 본원에 제공된 벡터는 유전자 전달 또는 유전자 발현을 조절하는 구성요소(예를 들어, "발현 제어 요소")를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 벡터는 유전자 발현을 조절하는 구성요소를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 벡터는 세포에 대한 결합 또는 표적화에 영향을 미치는 구성요소를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 벡터는 흡수 후 세포 내에서 폴리뉴클레오티드(예를 들어, 이식유전자)의 국재화에 영향을 미치는 구성요소를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 벡터는 예를 들어, 폴리뉴클레오티드를 취한 세포를 검출 또는 선택하기 위해 검출가능하거나 또는 선택가능한 마커로서 사용될 수 있는 구성요소를 포함한다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 바이러스 벡터는 하나 이상의 프로모터를 포함한다. 특정 구현예에서, 프로모터는 구성적 프로모터이다. 특정 구현예에서, 프로모터는 유도성 프로모터이다. 치료 효능에 바람직한 경우 이식유전자 발현을 켜고 끌 수 있도록 유도성 프로모터가 바람직할 수 있다. 이러한 프로모터는 예를 들어, 저산소증-유도된 프로모터 및 약물 유도성 프로모터, 예컨대 라파마이신(rapamycin) 및 관련 제제에 의해 유도된 프로모터를 포함한다. 저산소증-유도성 프로모터는 HIF 결합 부위가 있는 프로모터를 포함하며, 예를 들어, Schodel, 등, 2011, Blood 117(23):e207-e217 및 Kenneth and Rocha, 2008, Biochem J. 414:19-29를 참조하며, 각각의 문헌은 저산소증-유도성 프로모터의 교시를 위해 참조로 포함된다. 게다가, 작제물에 사용될 수 있는 저산소증-유도성 프로모터는 에리트로포이에틴 프로모터 및 N-WASP 프로모터를 포함한다(에리트로포이에틴 프로모터의 개시내용에 대해 Tsuchiya, 1993, J. Biochem. 113:395 및 N-WASP 프로모터의 개시내용에 대해 Salvi, 2017, Biochemistry and Biophysics Reports 9:13-21을 참조하며, 둘 다 저산소증-유도된 프로모터의 교시를 위해 참조로 포함된다). 대안적으로, 작제물은 약물 유도성 프로모터, 예를 들어 라파마이신 및 관련 유사체의 투여에 의해 유도가능한 프로모터를 함유할 수 있다(예를 들어, 국제 특허 출원 공개 번호 WO94/18317, WO 96/20951, WO 96/41865, WO 99/10508, WO 99/10510, WO 99/36553, 및 WO 99/41258, 및 미국 특허 번호 US 7,067,526(라파마이신 유사체 개시)을 참조하며, 약물 유도성 프로모터의 개시내용을 위해 본원에 참조로 포함된다). 특정 구현예에서 프로모터는 저산소증-유도성 프로모터이다. 특정 구현예에서, 프로모터는 저산소증-유도성 인자(HIF) 결합 부위를 포함한다. 특정 구현예에서, 프로모터는 HIF-1α 결합 부위를 포함한다. 특정 구현예에서, 프로모터는 HIF-2α 결합 부위를 포함한다. 특정 구현예에서, HIF 결합 부위는 RCGTG 모티프를 포함한다. HIF 결합 부위의 위치 및 서열에 관한 상세한 내용을 위해, 예를 들어, Schodel, 등, Blood, 2011, 117(23):e207-e217을 참조하며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 특정 구현예에서, 프로모터는 HIF 전사 인자 이외에 저산소증 유도된 전사 인자에 대한 결합 부위를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 바이러스 벡터는 저산소증에서 우선적으로 번역되는 하나 이상의 IRES 부위를 포함한다. 저산소증-유도성 유전자 발현 및 그 안에 수반되는 인자에 관한 교시를 위해, 예를 들어, Kenneth and Rocha, Biochem J., 2008, 414:19-29를 참조하며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
특정 구현예에서, 프로모터는 CB7 프로모터이다(Dinculescu 등, 2005, Hum Gene Ther 16: 649-663을 참조하며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다). 일부 구현예에서, CB7 프로모터는 벡터에 의해 구동된 이식유전자의 발현을 향상시키는 다른 발현 제어 요소를 포함한다. 특정 구현예에서, 다른 발현 제어 요소는 닭 β-액틴 인트론 및/또는 토끼 β-글로빈 polA 신호를 포함한다. 특정 구현예에서, 프로모터는 TATA 박스를 포함한다. 특정 구현예에서, 프로모터는 하나 이상의 요소를 포함한다. 특정 구현예에서, 하나 이상의 프로모터 요소는 서로에 대해 도립 또는 이동될 수 있다. 특정 구현예에서, 프로모터의 요소는 협력적으로 기능하도록 위치된다. 특정 구현예에서, 프로모터의 요소는 독립적으로 기능하도록 위치된다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 바이러스 벡터는 인간 CMV 급초기 유전자 프로모터, SV40 초기 프로모터, 라우스 육종 바이러스(RS) 긴 말단 반복부, 및 래트 인슐린 프로모터로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 프로모터를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 벡터는 AAV, MLV, MMTV, SV40, RSV, HIV-1, 및 HIV-2 LTR로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 긴 말단 반복부(LTR) 프로모터를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 벡터는 하나 이상의 조직 특이적 프로모터(예를 들어, 망막 색소 상피 세포-특이적 프로모터)를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 바이러스 벡터는 RPE65 프로모터를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 벡터는 VMD2 프로모터를 포함한다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 바이러스 벡터는 프로모터 이외에 하나 이상의 조절 요소를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 바이러스 벡터는 인핸서를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 바이러스 벡터는 억제자를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 바이러스 벡터는 인트론 또는 키메라 인트론을 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 바이러스 벡터는 폴리아데닐화 서열을 포함한다.
4.4.4 신호 펩티드
특정 구현예에서, 본원에 제공된 벡터는 단백질 전달을 조절하는 구성요소를 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 바이러스 벡터는 하나 이상의 신호 펩티드를 포함한다. 신호 펩티드는 또한 본원에서 "리더 서열" 또는 "리더 펩티드"로 지칭될 수 있다. 특정 구현예에서, 신호 펩티드는 이식유전자 산물(예를 들어, 항-VEGF 항원-결합 단편 모이어티)이 세포에서 적절한 패키징(예를 들어 글리코실화)을 달성하도록 한다. 특정 구현예에서, 신호 펩티드는 이식유전자 산물(예를 들어, 항-VEGF 항원-결합 단편 모이어티)이 세포에서 적절한 국재화를 달성하도록 한다. 특정 구현예에서, 신호 펩티드는 이식유전자 산물(예를 들어, 항-VEGF 항원-결합 단편 모이어티)이 세포로부터의 분비를 달성하도록 한다. 본원에 제공된 벡터 및 이식유전자와 관련하여 사용될 신호 펩티드의 예는 표 1에서 찾을 수 있다.
표 1: 본원에 제공된 벡터와 함께 사용하기 위한 신호 펩티드.
Figure pct00003
4.4.5 폴리시스트론성 메시지 - IRES 및 F2A 링커
내부 리보솜 진입 부위. 단일 작제물은 절단가능한 링커 또는 IRES에 의해 분리된 중쇄 및 경쇄 둘 다를 암호화여 분리된 중쇄 및 경쇄 폴리펩티드가 절두된 세포에 의해 발현되도록 조작될 수 있다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 바이러스 벡터는 폴리시스트론성(예를 들어, 비시스트론성) 메시지를 제공한다. 예를 들어, 바이러스 작제물은 내부 리보솜 진입 부위(IRES) 요소에 의해 분리된 중쇄 및 경쇄를 암호화할 수 있다(비시스트론성 벡터을 생성하기 위한 IRES 요소의 사용의 예에 대해, 예를 들어, Gurtu 등, 1996, Biochem. Biophys. Res. Comm. 229(1):295-8을 참조하며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다). IRES 요소는 리보솜 스캐닝 모델을 우회하고 내부 부위에서 번역을 시작한다. AAV에서 IRES의 사용은 예를 들어, Furling 등, 2001, Gene Ther 8(11): 854-73에 기재되어 있으며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 특정 구현예에서, 비시스트론성 메시지는 그 안의 폴리뉴클레오티드(들)의 크기에 대한 제한이 있는 바이러스 벡터 내에 함유된다. 특정 구현예에서, 비시스트론성 메시지는 AAV 바이러스-기반 벡터(예를 들어, AAV8-기반 벡터) 내에 함유된다.
퓨린-F2A 링커. 다른 구현예에서, 본원에 제공된 바이러스 벡터는 자가-절단 퓨린/F2A(F/F2A) 링커와 같은 절단가능한 링커에 의해 분리된 중쇄 및 경쇄를 암호화한다(Fang 등, 2005, Nature Biotechnology 23: 584-590, 및 Fang, 2007, Mol Ther 15: 1153-9, 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다).
예를 들어, 퓨린-F2A 링커는 발현 카세트에 혼입되어 중쇄 및 경쇄 코딩 서열을 분리하여, 하기 구조를 갖는 작제물을 생성할 수 있다:
리더 - 중쇄 - 퓨린 부위 - F2A 부위 - 리더 - 경쇄 - PolyA.
아미노산 서열 LLNFDLLKLAGDVESNPGP(서열번호: 26)를 갖는 F2A 부위는 자가-처리되어, 최종 G 및 P 아미노산 잔기 사이에 "절단"을 초래한다. 사용될 수 있는 추가 링커는 다음을 포함하나 이에 제한되지 않는다:
ㆍ T2A: (GSG) E G R G S L T C G D V E N P G P(서열번호: 27);
ㆍ P2A: (GSG) A T N F S L K Q A G D V E E N P G P(서열번호: 28);
ㆍ E2A: (GSG) Q C T N Y A L L K L A G D V E S N P G P(서열번호: 29);
ㆍ F2A: (GSG) V K Q T L N F D L L K L A G D V E S N P G P(서열번호: 30).
펩티드 결합은 리보솜이 오픈 리딩 프레임에서 F2A 서열을 접할 때 생략되어, 번역의 종결을 초래하거나, 또는 하류 서열(경쇄)의 번역이 계속된다. 이 자가-처리 서열은 중쇄의 C-말단의 단부에 일련의 추가 아미노산을 초래한다. 그러나, 이러한 추가 아미노산은 그 다음에 F2A 부위의 바로 앞 및 중쇄 서열 뒤에 위치한 퓨린 부위에서 숙주 세포 퓨린에 의해 절단되고, 카르복시펩티다제에 의해 추가로 절단된다. 생성된 중쇄는 사용된 퓨린 링커 및 생체내에서 링커를 절단하는 카르복시펩티다제의 서열에 따라, C-말단에 포함된 1, 2, 3 개, 또는 그 이상의 추가 아미노산을 가질 수 있거나, 또는 이러한 추가 아미노산을 갖지 않을 수 있다(예를 들어, Fang 등, 17 April 2005, Nature Biotechnol. Advance Online Publication; Fang 등, 2007, Molecular Therapy 15(6):1153-1159; Luke, 2012, Innovations in Biotechnology, Ch. 8, 161-186 참조). 사용될 수 있는 퓨린 링커는 일련의 4 개의 염기성 아미노산, 예를 들어, RKRR, RRRR, RRKR, 또는 RKKR을 포함한다. 이 링커가 카르복시펩티다제에 의해 절단되면, 추가 아미노산이 남아있을 수 있으며, 추가 0, 1, 2, 3 또는 4 개의 아미노산, 예를 들어, R, RR, RK, RKR, RRR, RRK, RKK, RKRR, RRRR, RRKR, 또는 RKKR이 중쇄의 C-말단에 남아있을 수 있도록 한다. 특정 구현예에서, 하나의 링커는 카르복펩티다제에 의해 절단되며, 추가 아미노산은 남아있지 않는다. 특정 구현예에서 본원에 기재된 방법에 사용하기 위한 작제물에 의해 생성된 집단인 항체, 예를 들어, 항원-결합 단편의 0.5%, 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 또는 20%, 또는 그 미만이지만 0% 초과는 절단 후 중쇄의 C-말단에 남아있는 1, 2, 3, 또는 4 개의 아미노산을 갖는다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 방법에 사용하기 위한 작제물에 의해 생성된 집단인 항체, 예를 들어, 항원-결합 단편의 0.5-1%, 0.5%-2%, 0.5%-3%, 0.5%-4%, 0.5%-5%, 0.5%-10%, 0.5%-20%, 1%-2%, 1%-3%, 1%-4%, 1%-5%, 1%-10%, 1%-20%, 2%-3%, 2%-4%, 2%-5%, 2%-10%, 2%-20%, 3%-4%, 3%-5%, 3%-10%, 3%-20%, 4%-5%, 4%-10%, 4%-20%, 5%-10%, 5%-20%, 또는 10%-20%는 절단 후 중쇄의 C-말단에 남아있는 1, 2, 3, 또는 4 개의 아미노산을 갖는다. 특정 구현예에서, 퓨린 링커는 서열 R-X-K/R-R을 가지며, 중쇄의 C-말단에서 추가 아미노산이 R, RX, RXK, RXR, RXKR, 또는 RXRR이도록 하며, 여기서 X는 임의의 아미노산, 예를 들어, 알라닌(A)이다. 특정 구현예에서, 추가 아미노산이 중쇄의 C-말단에 남아있지 않을 수 있다.
특정 구현예에서, 본원에 기재된 발현 카세트는 그 안에 폴리뉴클레오티드(들)의 크기에 대한 제한이 있는 바이러스 벡터 내에 함유된다. 특정 구현예에서, 발현 카세트는 AAV 바이러스-기반 벡터(예를 들어, AAV8-기반 벡터) 내에 함유된다.
4.4.6 비번역 영역
특정 구현예에서, 본원에 제공된 바이러스 벡터는 하나 이상의 비번역 영역(UTR), 예를 들어, 3' 및/또는 5' UTR을 포함한다. 특정 구현예에서, UTR은 원하는 단백질 발현 수준에 대해 최적화된다. 특정 구현예에서, UTR은 이식유전자의 mRNA 반감기에 대해 최적화된다. 특정 구현예에서, UTR은 이식유전자의 mRNA의 안정성에 대해 최적화된다. 특정 구현예에서, UTR은 이식유전자의 mRNA의 2차 구조에 대해 최적화된다.
4.4.7 도립된 말단 반복부
특정 구현예에서, 본원에 제공된 바이러스 벡터는 하나 이상의 도립된 말단 반복부(ITR) 서열을 포함한다. ITR 서열은 바이러스 벡터의 비리온에 재조합 유전자 발현 카세트를 패키징하기 위해 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, ITR은 AAV, 예를 들어, AAV8 또는 AAV2로부터 유래된다(예를 들어, Yan 등, 2005, J. Virol., 79(1):364-379; 미국 특허 번호 제7,282,199 B2호, 미국 특허 번호 제7,790,449 B2호, 미국 특허 번호 제8,318,480 B2호, 미국 특허 번호 제8,962,332 B2호 및 국제 특허 출원 번호 PCT/EP2014/076466을 참조하며, 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다).
4.4.8 이식유전자
이식유전자에 의해 암호화된 HuPTMFabVEGFi, 예를 들어, HuGlyFabVEGFi는 VEGF에 결합하는 항체의 항원-결합 단편, 예컨대 베바시주맙; 항-VEGF Fab 모이어티 예컨대 라니비주맙; 또는 Fab 도메인에 추가 글리코실화 부위를 함유하도록 조작된 이러한 베바시주맙 또는 라니비주맙 Fab 모이어티를 포함할 수 있으나 이에 제한되지 않는다(예를 들어, Courtois 등, 2016, mAbs 8: 99-112를 참조하며 이는 전장 항체의 Fab 도메인에서 과글리코실화된 베바시주맙의 유도체를 설명하기 위해 그 전문이 본원에 참조로 포함된다).
특정 구현예에서, 본원에 제공된 벡터는 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자를 암호화한다. 구체적 구현예에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자는 망막 세포에서의 발현에 적절한 발현 제어 요소에 의해 제어된다: 특정 구현예에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자는 경쇄 및 중쇄 cDNA 서열(각각 서열번호. 10 및 11)의 베바시주맙 Fab 부분을 포함한다. 특정 구현예에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자는 라니비주맙 경쇄 및 중쇄 cDNA 서열(각각 서열번호. 12 및 13)을 포함한다. 특정 구현예에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자는 각각 서열번호: 3 및 4의 경쇄 및 중쇄를 포함하는 베바시주맙 Fab를 암호화한다. 특정 구현예에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자는 서열번호: 3에 제시된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 암호화한다. 특정 구현예에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자는 서열번호: 4에 제시된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 암호화한다. 특정 구현예에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자는 서열번호: 3에 제시된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호: 4에 제시된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 암호화한다. 특정 구현예에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자는 각각 서열번호: 1 및 2의 경쇄 및 중쇄를 포함하는 과글리코실화된 라니비주맙을 암호화한다. 특정 구현예에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자는 서열번호: 1에 제시된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 암호화한다. 특정 구현예에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자는 서열번호: 2에 제시된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 암호화한다. 특정 구현예에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자는 서열번호: 1에 제시된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호: 2에 제시된 서열과 적어도 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는 항원-결합 단편을 암호화한다.
특정 구현예에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자는 다음 돌연변이 중 하나 이상을 갖는 서열번호: 3 및 4의 경쇄 및 중쇄를 포함하는 과글리코실화된 베바시주맙 Fab를 암호화한다: L118N(중쇄), E195N(경쇄), 또는 Q160N 또는 Q160S(경쇄). 특정 구현예에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자는 다음 돌연변이 중 하나 이상을 갖는 서열번호: 1 및 2의 경쇄 및 중쇄를 포함하는 과글리코실화된 라니비주맙을 암호화한다: L118N(중쇄), E195N(경쇄), 또는 Q160N 또는 Q160S(경쇄). 항원-결합 단편 이식유전자 cDNA의 서열은 예를 들어, 표 2에서 찾을 수 있다. 특정 구현예에서, 항원-결합 단편 이식유전자 cDNA의 서열은 서열번호: 10 및 11 또는 서열번호: 12 및 13의 신호 서열을 표 1에 나열된 하나 이상의 신호 서열로 대체함으로써 수득된다.
특정 구현예에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자는 항원-결합 단편을 암호화하고 6 개의 베바시주맙 CDR의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자는 항원-결합 단편을 암호화하고 6 개의 라니비주맙 CDR의 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 특정 구현예에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자는 라니비주맙의 중쇄 CDR 1-3(서열번호: 20, 18, 및 21)을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 암호화한다. 특정 구현예에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자는 라니비주맙의 경쇄 CDR 1-3(서열번호: 14-16)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 암호화한다. 특정 구현예에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자는 베바시주맙의 중쇄 CDR 1-3(서열번호: 17-19)을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 암호화한다. 특정 구현예에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자는 베바시주맙의 경쇄 CDR 1-3(서열번호: 14-16)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 암호화한다. 특정 구현예에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자는 라니비주맙의 중쇄 CDR 1-3(서열번호: 20, 18, 및 21)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 라니비주맙의 경쇄 CDR 1-3(서열번호: 14-16)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 암호화한다. 특정 구현예에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자는 베바시주맙의 중쇄 CDR 1-3(서열번호: 17-19)을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 베바시주맙의 경쇄 CDR 1-3(서열번호: 14-16)을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 암호화한다.
특정 구현예에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자는 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 암호화하며, 여기서 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열번호. 16)에서 2번째 Q)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu). 구체적 구현예에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자는 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 영역을 암호화하며, 여기서 경쇄 CDR1의 8번째 및 11번째 아미노산 잔기(즉, SASQDISNYLN(서열번호. 14)에서 2 개의 N은 각각 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열번호. 16)에서 2번째 Q)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu). 구체적 구현예에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자는 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 암호화하며, 여기서 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열번호. 16)에서 2번째 Q)는 아세틸화되지 않는다. 구체적 구현예에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자는 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 암호화하며, 여기서 경쇄 CDR1의 8번째 및 11번째 아미노산 잔기(즉, SASQDISNYLN(서열번호. 14)에서 2 개의 N은 각각 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열번호. 16)에서 2번째 Q)는 아세틸화되지 않는다. 바람직한 구현예에서, 본원에 기재된 화학적 변형(들) 또는 화학적 변형(들)의 결여(경우에 따라)는 질량 분석법에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자는 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 암호화하며, 여기서 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 N)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu). 구체적 구현예에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자는 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 암호화하며, 여기서 중쇄 CDR1의 9번째 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 M)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 중쇄 CDR2의 3번째 아미노산 잔기(즉, WINTYTGEPTYAADFKR(서열번호. 18)에서 N은 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 N)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu). 구체적 구현예에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자는 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 암호화하며, 여기서 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 N)는 아세틸화되지 않는다. 구체적 구현예에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자는 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 암호화하며, 여기서 중쇄 CDR1의 9번째 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 M)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 중쇄 CDR2의 3번째 아미노산 잔기(즉, WINTYTGEPTYAADFKR(서열번호. 18)에서 N은 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 N)는 아세틸화되지 않는다. 바람직한 구현예에서, 본원에 기재된 화학적 변형(들) 또는 화학적 변형(들)의 결여(경우에 따라)는 질량 분석법에 의해 결정된다.
특정 구현예에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자는 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 암호화하며, 여기서 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열번호. 16)에서 2번째 Q)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하지 않고: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 여기서 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 N)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu). 구체적 구현예에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자는 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 암호화하며, 여기서: (1) 중쇄 CDR1의 9번째 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 M)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 중쇄 CDR2의 3번째 아미노산 잔기(즉, WINTYTGEPTYAADFKR(서열번호. 18)에서 N은 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 N)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하지 않으며: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu); (2) 경쇄 CDR1의 8번째 및 11번째 아미노산 잔기(즉, SASQDISNYLN(서열번호. 14)에서 2 개의 N은 각각 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열번호. 16)에서 2번째 Q)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu). 구체적 구현예에서, 항-VEGF 항원-결합 단편 이식유전자는 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는 항원-결합 단편을 암호화하며, 여기서 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열번호. 16)에서 2번째 Q)는 아세틸화되지 않고, 여기서 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 N)는 아세틸화되지 않는다. 구체적 구현예에서, 항원-결합 단편은 서열번호. 20의 중쇄 CDR1을 포함하며, 여기서: (1) 중쇄 CDR1의 9번째 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 M)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 중쇄 CDR2의 3번째 아미노산 잔기(즉, WINTYTGEPTYAADFKR(서열번호. 18)에서 N은 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 N)는 아세틸화되지 않으며; (2) 경쇄 CDR1의 8번째 및 11번째 아미노산 잔기(즉, SASQDISNYLN(서열번호. 14)에서 2 개의 N은 각각 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열번호. 16)에서 2번째 Q)는 아세틸화되지 않는다. 바람직한 구현예에서, 본원에 기재된 화학적 변형(들) 또는 화학적 변형(들)의 결여(경우에 따라)는 질량 분석법에 의해 결정된다.
특정 측면에서, 본원에는 또한 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하는 항-VEGF 항원-결합 단편, 및 이러한 항원-VEGF 항원-결합 단편을 암호화하는 이식유전자가 제공되며, 여기서 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열번호. 16)에서 2번째 Q)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu). 구체적 구현예에서, 항원-결합 단편은 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하며, 여기서 경쇄 CDR1의 8번째 및 11번째 아미노산 잔기(즉, SASQDISNYLN(서열번호. 14)에서 2 개의 N은 각각 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열번호. 16)에서 2번째 Q)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu). 구체적 구현예에서, 항원-결합 단편은 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하며, 여기서 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열번호. 16)에서 2번째 Q)는 아세틸화되지 않는다. 구체적 구현예에서, 항원-결합 단편은 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하며, 여기서 경쇄 CDR1의 8번째 및 11번째 아미노산 잔기(즉, SASQDISNYLN(서열번호. 14)에서 2 개의 N은 각각 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열번호. 16)에서 2번째 Q)는 아세틸화되지 않는다. 본원에 제공된 항-VEGF 항원-결합 단편 및 이식유전자는 본원에 기재된 본 발명에 따른 임의의 방법에 사용될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 본원에 기재된 화학적 변형(들) 또는 화학적 변형(들)의 결여(경우에 따라)는 질량 분석법에 의해 결정된다.
특정 측면에서, 본원에는 또한 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하는 항-VEGF 항원-결합 단편, 및 이러한 항원-VEGF 항원-결합 단편을 암호화하는 이식유전자가 제공되며, 여기서 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 N)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu). 구체적 구현예에서, 항원-결합 단편은 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1의 9번째 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 M)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 중쇄 CDR2의 3번째 아미노산 잔기(즉, WINTYTGEPTYAADFKR(서열번호. 18)에서 N은 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 N)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu). 구체적 구현예에서, 항원-결합 단편은 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 N)는 아세틸화되지 않는다. 구체적 구현예에서, 항원-결합 단편은 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1의 9번째 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 M)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 중쇄 CDR2의 3번째 아미노산 잔기(즉, WINTYTGEPTYAADFKR(서열번호. 18)에서 N은 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 N)는 아세틸화되지 않는다. 본원에 제공된 항-VEGF 항원-결합 단편 및 이식유전자는 본원에 기재된 본 발명에 따른 임의의 방법에 사용될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 본원에 기재된 화학적 변형(들) 또는 화학적 변형(들)의 결여(경우에 따라)는 질량 분석법에 의해 결정된다.
특정 측면에서, 본원에는 또한 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하는 항-VEGF 항원-결합 단편, 및 이러한 항원-VEGF 항원-결합 단편을 암호화하는 이식유전자가 제공되며, 여기서 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 N)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하지 않고: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열번호. 16)에서 2번째 Q)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu). 구체적 구현예에서, 항원-결합 단편은 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하며, 여기서: (1) 중쇄 CDR1의 9번째 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 M)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 중쇄 CDR2의 3번째 아미노산 잔기(즉, WINTYTGEPTYAADFKR(서열번호. 18)에서 N은 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 N)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하지 않으며: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu); (2) 경쇄 CDR1의 8번째 및 11번째 아미노산 잔기(즉, SASQDISNYLN(서열번호. 14)에서 2 개의 N은 각각 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열번호. 16)에서 2번째 Q)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하지 않는다: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu). 구체적 구현예에서, 항원-결합 단편은 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 N)는 아세틸화되지 않고, 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열번호. 16)에서 2번째 Q)는 아세틸화되지 않는다. 구체적 구현예에서, 항원-결합 단편은 서열번호: 14-16의 경쇄 CDR 1-3 및 서열번호: 20, 18, 및 21의 중쇄 CDR 1-3을 포함하며, 여기서: (1) 중쇄 CDR1의 9번째 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 M)는 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 중쇄 CDR2의 3번째 아미노산 잔기(즉, WINTYTGEPTYAADFKR(서열번호. 18)에서 N은 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 중쇄 CDR1의 마지막 아미노산 잔기(즉, GYDFTHYGMN(서열번호. 20)에서 N)는 아세틸화되지 않으며; (2) 경쇄 CDR1의 8번째 및 11번째 아미노산 잔기(즉, SASQDISNYLN(서열번호. 14)에서 2 개의 N은 각각 다음 화학적 변형 중 하나 이상을 수행하고: 산화, 아세틸화, 탈아미드화, 및 피로글루탐화(피로 Glu), 경쇄 CDR3의 2번째 아미노산 잔기(즉, QQYSTVPWTF(서열번호. 16)에서 2번째 Q)는 아세틸화되지 않는다. 본원에 제공된 항-VEGF 항원-결합 단편 및 이식유전자는 본원에 기재된 본 발명에 따른 임의의 방법에 사용될 수 있다. 바람직한 구현예에서, 본원에 기재된 화학적 변형(들) 또는 화학적 변형(들)의 결여(경우에 따라)는 질량 분석법에 의해 결정된다.
표 2: 예시적인 이식유전자 서열
Figure pct00004
Figure pct00005
Figure pct00006
Figure pct00007
4.4.9 벡터의 제조 및 테스트
본원에 제공된 바이러스 벡터는 숙주 세포를 사용하여 제조될 수 있다. 본원에 제공된 바이러스 벡터는 포유류 숙주 세포, 예를 들어, A549 , WEHI, 10T1/2, BHK, MDCK, COS1, COS7, BSC 1, BSC 40, BMT 10, VERO, W138, HeLa, 293, Saos, C2C12, L, HT1080, HepG2, 1차 섬유모세포, 간세포, 및 근육모 세포를 사용하여 제조될 수 있다. 본원에 제공된 바이러스 벡터는 인간, 원숭이, 마우스, 래트, 토끼, 또는 햄스터로부터의 숙주 세포를 사용하여 제조될 수 있다.
숙주 세포는 이식유전자 및 연관된 요소(즉, 벡터 게놈)를 암호화하는 서열, 및 숙주 세포에서 바이러스를 생성하는 수단, 예를 들어, 복제 및 캡시드 유전자(예를 들어, AAV의 rep 및 cap 유전자)로 안정하게 형질전환된다. AAV8 캡시드가 있는 재조합 AAV 벡터를 생성하는 방법에 대해, 미국 특허 번호 제7,282,199 B2호의 상세한 설명의 섹션 IV를 참조하며, 이는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 상기 벡터의 게놈 카피 역가는 예를 들어, TAQMAN® 분석에 의해 결정될 수 있다. 비리온은 예를 들어, CsCl2 침강에 의해 회수될 수 있다.
시험관내 검정, 예를 들어, 세포 배양 검정은 본원에 기재된 벡터로부터 이식유전자 발현을 측정하기 위해 사용될 수 있으며, 따라서 예를 들어, 벡터의 효능을 나타낸다. 예를 들어, 인간 배아 망막 세포로부터 유래된 세포주인 PER.C6® Cell Line(Lonza), 또는 망막 색소 상피 세포, 예를 들어, 망막 색소 상피 세포주 hTERT RPE-1(ATCC®에서 입수가능)은 이식유전자 발현을 평가하는 데 사용될 수 있다. 일단 발현되면, HuGlyFabVEGFi과 연관된 글리코실화 및 티로신 황산화 패턴의 결정을 포함하여 발현된 생성물(즉, HuGlyFabVEGFi)의 특성이 결정될 수 있다. 글리코실화 패턴 및 이를 결정하는 방법은 섹션 5.1.1에서 논의되는 반면, 티로신 황산화 패턴 및 이를 결정하는 방법은 섹션 5.1.2에서 논의된다. 게다가, 세포-발현된 HuGlyFabVEGFi의 글리코실화/황산화로 인한 이익은 당업계에 알려진 검정, 예를 들어, 섹션 5.1.1 및 5.1.2에 기재된 방법을 사용하여 결정될 수 있다.
4.4.10 표적 환자 집단
본원에 기재된 방법에 따라 치료되는 대상체는 임의의 포유동물 예컨대 설치류, 가축 예컨대 개 또는 고양이, 또는 영장류, 예를 들어 비인간 영장류일 수 있다. 바람직한 구현예에서, 대상체는 인간이다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 방법은 안구 질환, 특히 증가된 혈관신생에 의해 야기된 안구 질환으로 진단된 환자에게 투여하기 위한 것이다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 방법은 nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 또는 당뇨병성 망막증(DR)으로 진단된 환자에게 투여하기 위한 것이다.
4.4.11 샘플링 및 효능 모니터링
시각 결손에 대한 본원에 제공된 치료 방법의 효과는 BCVA(최대 교정 시력), 안내압, 틈새등 생체현미경검사, 및/또는 간접 안저검사법에 의해 측정될 수 있다. BCVA는 초기 치료 당뇨병성 망막증 연구(ETDRS) 점수를 사용하여 모니터링될 수 있다.
눈/망막의 물리적 변화에 대한 본원에 제공된 치료 방법의 효과는 SD-OCT(SD-광간접 단층촬영)에 의해 측정될 수 있다.
효능은 망막전위도검사(ERG)에 의해 측정된 바와 같이 모니터링될 수 있다.
본원에 제공된 치료 방법의 효과는 시력 상실, 감염, 염증 및 망막 박리를 포함한 다른 안전성 이벤트의 징후를 측정함으로써 모니터링될 수 있다.
망막 두께(예를 들어, 중심 망막 두께) 또는 중심와 두께를 모니터링하여 본원에 제공된 치료 효능을 결정할 수 있다. 임의의 특정 이론에 얽매이지 않고, 망막의 두께는 임상 판독으로 사용될 수 있으며, 여기서 망막 두께의 감소가 더 크거나 또는 망막이 두꺼워지기 전에 일정 기간이 더 길수록, 치료는 더 효과적이다. 망막 기능은 예를 들어, ERG에 의해 결정될 수 있다. ERG는 인간에서 사용하기 위해 FDA 승인을 받은 망막 기능의 비-침습적 전기생리학적 검사이며, 눈의 빛 민감성 세포(간창 및 원추), 및 이의 연결 신경절 세포, 특히 섬광 자극에 대한 반응을 조사한다. 망막 두께 및/또는 중심와 두께는 예를 들어, SD-OCT에 의해 결정될 수 있다. SD-OCT는 저밀착성 간섭계를 사용하여 관심 대상에서 반사된 후방산란 광의 에코 시간 지연 및 규모를 결정하는 3차원 이미징 기술이다. OCT를 사용하여 3 내지 15 μm 축 해상도로 조직 샘플의 층(예를 들어, 망막)을 스캔할 수 있고, SD-OCT는 이전 기술 형태에 비해 축 해상도 및 스캔 속도를 개선시킨다(Schuman, 2008, Trans. Am. Opthamol. Soc. 106:426-458).
이식유전자 산물 농도는 당업계에 알려진 임의의 적합한 방법, 예를 들어 ELISA 또는 웨스턴 블롯(Western Blot)에 의해 수양액에서 측정될 수 있다.
발산(표적 세포를 감염시키기 않고 배설물 또는 체액을 통해 신체로부터 제거된 벡터의 방출), 동원(표적 세포 밖으로 이식유전자 복제 및 전달), 또는 생식선 전달(정액을 통해 자손에게 유전적 전달)로부터 의도하지 않은 수용자에게 퍼지는 벡터 이식유전자에 대한 잠재력은 당업계에 알려진 임의의 적합한 방법에 의해 평가될 수 있다. 예를 들어, 생물학적 체액(예를 들어, 소변, 눈물 또는 혈청)에서 벡터 발산은 벡터 DNA를 측정하는 정량적 중합효소 연쇄 반응에 의해 검정될 수 있다. 일부 구현예에서, 벡터 유전자 카피는 벡터의 투여 후 임의의 시점에 생물학적 유체(예를 들어, 소변, 눈물 또는 혈청)에서 검출가능하지 않다. 일부 구현예에서, 210 개 미만의 유전자 카피/5 μL가 벡터 투여 후 14 주에 혈청에서 검출가능하다.
항-VEGF 주사(예를 들어, 라니비주맙 주사 또는 아플리베르셉트 주사)의 횟수를 모니터링하여 본원에 제공된 치료의 효능 및 기간을 결정할 수 있다. 일부 구현예에서, 특정 기간(예를 들어, 1 개월)에 걸쳐 본원에 기재된 방법에 따라 치료되는 대상체에 의해 요구되는 항-VEGF 주사의 양은 관리 기준과 비교하여 10-20%, 20-30%, 30-40%, 40-50%, 50-60%, 60-70%, 70-80%, 80-90% 또는 90% 초과만큼 감소된다. 일부 구현예에서, 본원에 기재된 방법에 따라 치료되는 특정 기간(예를 들어, 1 개월)에 걸쳐 대상체에 의해 요구되는 항-VEGF 주사의 양은 본원에 기재된 방법에 따른 치료를 시작하기 전에 동일한 대상체에 의해 요구된 것과 비교하여 10-20%, 20-30%, 30-40%, 40-50%, 50-60%, 60-70%, 70-80%, 80-90% 또는 90% 초과만큼 감소된다. 신규 망막 색소침착의 발생률 및 신규 지도모양 위축의 발생률을 모니터링하여 본원에 기재된 치료의 안전성을 평가할 수 있다.
표 3: 서열 표
Figure pct00008
Figure pct00009
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
4.5 검정
당업자는 본원에 기재된 조성물 및 방법을 연구하기 위해, 예를 들어 본원에 제공된 제형을 테스트하기 위해 본원에 기재된 바와 같은 검정 및/또는 당업계에 알려진 기술을 사용할 수 있다. 섹션 5에 제공된 실시예는 또한 이러한 검정을 사용하여 본원에 제공된 제형을 테스트할 수 있는 방법을 보다 상세하게 입증한다.
Li 등, 2019 Cell & Gene Therapy Insights, 5(4):537-547(그 전문이 본원에 참조로 포함됨)에 기재된 바와 같이, 예시적인 검정은 다음을 포함하나 이에 제한되지 않는다: (1) 게놈 카피 결정을 위한 디지털 액적 PCR(ddPCR); (2) 분광광도법에 의한 AAV의 게놈 함량 및 % 전체 캡시드 분석; (3) 캡시드 내 DNA 분포 및 순도를 결정하기 위한 크기 배제 크로마토그래피; (4) 모세관 전기영동을 사용하여 캡시드 바이러스 단백질 순도 평가; (5) 시험관내 효능 방법 - 시험관내에서 AAV 벡터의 감염성의 차이를 정량화하기 위한 신뢰할 수 있는 방법으로서 상대적 감염성; 및 (6) 캡시드 빈/전체 비 및 크기 분포를 결정하기 위한 분석용 초원심분리(AUC).
게다가, 관련된 종래 방법은 2019년에 공개된 미국 약전(USP) 및 이의 이전 버전(전체가 본원에 참조로 포함됨), 예를 들어 pH 측정에 대해 USP<791>, 삼투압 농도 측정에 대해 USP<785>, 특정 물질(불순물) 측정에 대해 USP<787>, 및 내독소(안전성) 측정에 대해 USP<785>, 및 멸균성 측정에 대해 USP<71>에 제공된 방법을 포함한다.
섹션 5에 상세히 기재된 바와 같이, 하기 검정이 또한 본원에 제공된다.
4.5.1 동결/해동 주기 검정
제어된 동결/해동 주기는 표 12에 따라 동결건조기에서 실행될 수 있다. 바이알은 선반에서 잘 이격될 수 있고 완충액의 4 개의 바이알은 열전대될 수 있다.
4.5.2 온도 스트레스 검정
온도 스트레스 발생 안정성 연구를 37℃에서 4 일에 걸쳐 1.0 x 1012 GC/mL에서 수행하여 본원에 제공된 제형의 상대적 안정성을 평가할 수 있다.
검정을 사용하여 시험관내 상대적 효능(IVRP), 벡터 게놈 농도(ddPCR에 의한 VGC), 염료 형광성에 의한 유리 DNA, 동적 광 산란, 외관, 및 pH를 포함하나 이에 제한되지 않는 안정성을 평가할 수 있다.
4.5.3 장기간 안정성 검정
장기간 발생 안정성 연구를 12 개월 동안 수행하여 본원에 제공된 제형에서 -80℃(≤-60℃) 및 -20℃(-25℃ 내지 -15℃)에서 시험관내 상대적 효능 및 다른 품질의 유지를 입증할 수 있다.
4.5.4 시험관내 상대적 효능(IVRP) 검정
다양한 구현예에서, 본원에 제공된 조성물은 하기 검정에 의해 결정된 바와 같이 참조 약제학적 조성물보다 더 안정하다.　 안정성의 백분율 또는 배수 차이는 이 검정에 의해 결정된 바와 같은 시험관내 상대적 효능을 지칭한다.
ddPCR GC 역가를 유전자 발현에 관련시키기 위해, HEK293 세포를 형질도입하고 항-VEGF Fab 단백질 수준에 대해 세포 배양 상청액을 검정함으로써 시험관내 생물검정을 수행할 수 있다. HEK293 세포를 3 개의 폴리-D-리신-코팅된 96-웰 조직 배양 플레이트 위에 밤새 플레이팅한다. 그런 다음 세포를 야생형 인간 Ad5 바이러스로 미리 감염시킨 후 작제물 II 참조 표준 및 테스트 물품의 독립적으로 제조된 연속 희석액으로 형질도입하며, 각각의 제제를 상이한 위치에서 별도의 플레이트 위에 플레이팅한다. 형질도입 후 3 일째에, 세포 배양 배지를 플레이트로부터 수집하고 ELISA를 통해 VEGF-결합 Fab 단백질 수준에 대해 측정한다. ELISA를 위해, VEGF로 코팅된 96-웰 ELISA 플레이트를 차단한 다음 수집된 세포 배양 배지와 함께 인큐베이션하여 HEK293 세포에 의해 생성된 항-VEGF Fab를 포획한다. Fab-특이적 항-인간 IgG 항체를 사용하여 VEGF-포획된 Fab 단백질을 검출한다. 세척 후, 서양고추냉이 퍼옥시다제(HRP) 기질 용액을 첨가하고, 발색시키고, 정지 완충액으로 정지시키고, 플레이트를 플레이트 판독기에서 판독한다. HRP 생성물의 흡광도 또는 OD를 로그 희석에 대해 플롯팅하고, 각 테스트 물품의 상대적 효능을 다음 식을 사용하여, 병렬 유사성 테스트를 통과한 후 4-매개변수 로지스틱 회귀 모델에 적합한 동일한 플레이트에서 참조 표준 대비 계산한다: EC50 참조 ÷ EC50 테스트 물품. 테스트 물품의 효능은 3개 플레이트의 계량된 평균으로부터 계산된 참조 표준 효능의 백분율로서 보고된다.
ddPCR GC 역가를 기능적 유전자 발현에 관련시키기 위해, HEK293 세포를 형질도입하고 이식유전자(예를 들어 효소) 활성에 대해 검정함으로써 시험관내 생물검정을 수행할 수 있다. HEK293 세포를 3 개의 96-웰 조직 배양 플레이트 위에서 밤새 플레이팅한다. 그런 다음 세포를 야생형 인간 아데노바이러스 혈청형 5 바이러스로 미리 감염시킨 후 효소 참조 표준 및 테스트 물품의 3 개의 독립적으로 제조된 연속 희석액으로 형질도입하며, 각각의 제제를 상이한 위치에서 별도의 플레이트 위에 플레이팅한다. 형질도입 후 2 일째에, 세포를 용해시키고, 낮은 pH로 처리하여 효소를 활성화시키고, 이식유전자(효소)에 의한 절단시 증가된 형광 신호를 산출하는 펩티드 기질을 사용하여 효소 활성에 대해 검정한다. 형광 또는 RFU를 로그 희석에 대해 플롯팅하고, 각 테스트 물품의 상대적 효능을 다음 식을 사용하여, 병렬 유사성 테스트를 통과한 후 4-매개변수 로지스틱 회귀 모델에 적합한 동일한 플레이트에서 참조 표준 대비 계산한다: EC50 참조 ÷ EC50 테스트 물품. 테스트 물품의 효능은 3 개 플레이트의 계량된 평균으로부터 계산된 참조 표준 효능의 백분율로서 보고된다.
일부 구현예에서, ≤-60℃(예를 들어, 약 -80℃), -30℃ 내지 -15℃(예를 들어, 약 -20℃), 또는 2℃ 내지 10℃(예를 들어, 약 4℃)에서 일정 기간 동안 보관된 후 본원에 재공된 재조합 AAV의 시험관내 효능은 ≤-60℃(예를 들어, 약 -80℃), -30℃ 내지 -15℃(예를 들어, 약 -20℃), 또는 2℃ 내지 10℃(예를 들어, 약 4℃)에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%이다. 일부 구현예에서, 일정 기간은 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월이다.
4.5.5 벡터 게놈 농도 검정
다양한 구현예에서, 본원에 제공된 조성물은 하기 검정에 의해 결정된 바와 같이 참조 약제학적 조성물보다 더 안정하다.　 안정성의 백분율 또는 배수 차이는 이 검정에 의해 결정된 바와 같은 벡터 게놈 농도를 지칭한다. 벡터 게놈 농도 GC는 또한 ddPCR을 사용하여 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, ≤-60℃(예를 들어, 약 -80℃), -30℃ 내지 -15℃(예를 들어, 약 -20℃), 또는 2℃ 내지 10℃(예를 들어, 약 4℃)에서 일정 기간 동안 보관된 후 본원에 제공된 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도는 ≤-60℃(예를 들어, 약 -80℃), -30℃ 내지 -15℃(예를 들어, 약 -20℃), 또는 2℃ 내지 10℃(예를 들어, 약 4℃)에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%이다. 일부 구현예에서, 일정 기간은 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월이다.
4.5.6 염료 형광성 검정을 사용한 유리 DNA 분석
다양한 구현예에서, 본원에 제공된 조성물은 하기 검정에 의해 결정된 바와 같이 참조 약제학적 조성물보다 더 안정하다.　 안정성의 백분율 및 배수 차이는 이 검정에 의해 결정된 바와 같은 유리 DNA의 양을 지칭한다.
유리 DNA는 DNA에 결합되는 SYBR® Gold 핵산 겔 염색('SYBR Gold 염료')의 형광에 의해 결정될 수 있다. 형광은 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 측정되고 DNA 표준으로 정량화될 수 있다. 결과는 ng/μL 단위로 보고될 수 있다.
ng/ μL 단위의 측정된 유리 DNA를 유리 DNA의 백분율로 변환하기 위해 2 가지 접근법을 사용하여 총 DNA를 추정할 수 있다. 첫번째 접근법에서 UV-가시선 분광광도에 의해 결정된 GC/mL(OD)를 사용하여 샘플 내 총 DNA를 추정하였으며, 여기서 M은 DNA의 분자량이고 1x106은 단위 변환 계수이다:
추정된 총 DNA(ng/μL) = 1x106 x GC/mL(OD) x M(g/mol)/6.02x1023
두번째 접근법에서, 샘플은 0.05% 폴록사머 188과 함께 85℃에서 20 분 동안 가열될 수 있고 SYBR Gold 염료 검정에 의해 가열된 샘플에서 측정된 실제 DNA가 전체로서 사용될 수 있다. 따라서 이는 모든 DNA가 회수되고 정량화되었다고 가정하였다. 예를 들어, SYBR gold 염료에 의한 총 DNA의 결정(UV 판독 대비)은 작제물 II dPBS 제형의 경우 131% 및 수크로스 제형이 있는 작제물 II 변형된 dPBS의 경우 152%인 것으로 밝혀질 수 있다(이 편차는 유리 DNA의 ng/μL를 백분율로 변환시 보고된 결과의 범위로서 포획될 수 있다). 경향을 위해, 원시 ng/μL가 사용될 수 있거나 또는 일치하는 방법에 의해 결정된 백분율이 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, ≤-60℃(예를 들어, 약 -80℃), -30℃ 내지 -15℃(예를 들어, 약 -20℃), 또는 2℃ 내지 10℃(예를 들어, 약 4℃)에서 일정 기간 동안 보관된 후 본원에 제공된 조성물 내의 유리 DNA의 양은 ≤-60℃(예를 들어, 약 -80℃), -30℃ 내지 -15℃(예를 들어, 약 -20℃), 또는 2℃ 내지 10℃(예를 들어, 약 4℃)에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 상기 조성물 내의 유리 DNA의 양과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일하다. 일부 구현예에서, 일정 기간은 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월이다.
4.5.7 크기 배제 크로마토그래피(SEC)
다양한 구현예에서, 본원에 제공된 조성물은 하기 검정에 의해 결정된 바와 같이 참조 약제학적 조성물보다 더 안정하다.　 안정성의 백분율 또는 배수 차이는 이 검정에 의해 결정된 바와 같은 크기 분포를 지칭한다.
SEC는 25 mm 경로 길이 플로우셀이 있는 Waters Acquity Arc Equipment ID 0447(C3PO)의 Sepax SRT SEC-1000 Peek 칼럼(PN 215950P-4630, SN: 8A11982, LN: BT090, 5 μm 1000A, 4.6x300mm)을 사용하여 수행될 수 있다. 이동 상은 예를 들어, 20 mM 인산 나트륨, 300 mM NaCl, 0.005% 폴록사머 188, pH 6.5일 수 있으며, 유속은 20 분 동안 0.35 mL/분이며, 칼럼은 주위 온도에 있다. 데이터 수집은 2 포인트/초 샘플링 속도 및 214, 260, 및 280 nm에서 25 포인트 평균 평활화에 따른 1.2 nm 해상도로 수행될 수 있다. 이상적인 목표 로드는 1.511 GC일 수 있다. 샘플은 이상적인 목표의 약 1/3인 50 μL로 주사되거나, 또는 5 μL로 주사될 수 있다.
일부 구현예에서, ≤-60℃(예를 들어, 약 -80℃), -30℃ 내지 -15℃(예를 들어, 약 -20℃), 또는 2℃ 내지 10℃(예를 들어, 약 4℃)에서 일정 기간 동안 보관된 후 SEC에 의해 결정된 바와 같은 본원에 제공된 재조합 AAV의 크기 분포는 ≤-60℃(예를 들어, 약 -80℃), -30℃ 내지 -15℃(예를 들어, 약 -20℃), 또는 2℃ 내지 10℃(예를 들어, 약 4℃)에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 SEC에 의해 결정된 바와 같은 크기 분포와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일하다. 일부 구현예에서, 일정 기간은 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월이다.
4.5.8 동적 광 산란(DLS) 검정
다양한 구현예에서, 본원에 제공된 조성물은 하기 검정에 의해 결정된 바와 같이 참조 약제학적 조성물보다 더 안정하다.　 안정성의 백분율 또는 배수 차이는 이 검정에 의해 결정된 바와 같은 크기 분포를 지칭한다.
동적 광 산란(DLS)은 30 μL 샘플 부피로 Corning 3540 384 웰 플레이트를 사용하여 Wyatt DynaProIII에서 수행될 수 있다. 10 초 동안 각각 10 개의 획득이 반복마다 수집될 수 있으며 샘플 당 3 회 반복 측정이 있었다. 용매는 샘플에서 사용되는 용매에 따라, 예를 들어 dPBS에서 작제물 II에 대해 'PBS' 및 수크로스 샘플이 있는 변형된 dPBS에서 작제물 II에 대해 '4% 수크로스'로 설정될 수 있다. 데이터 품질 기준(기준선, SOS, 노이즈, 적합성)을 충족하지 않는 결과가 '표시'되고 분석에서 제외될 수 있다. 낮은 지연 시간 컷오프는 인위적으로 낮은 누적률 분석 직경 결과를 야기할 때 약 1 nm에서 수크로스 부형제 피크의 영향을 제거하기 위해 수크로스 샘플이 있는 변형된 dPBS에 대해 1.4 μs에서 10 μs까지 변화될 수 있다.
일부 구현예에서, ≤-60℃(예를 들어, 약 -80℃), -30℃ 내지 -15℃(예를 들어, 약 -20℃), 또는 2℃ 내지 10℃(예를 들어, 약 4℃)에서 일정 기간 동안 보관된 후 DLS에 의해 결정된 바와 같은 본원에 제공된 재조합 AAV의 크기 분포는 ≤-60℃(예를 들어, 약 -80℃), -30℃ 내지 -15℃(예를 들어, 약 -20℃), 또는 2℃ 내지 10℃(예를 들어, 약 4℃)에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 DLS에 의해 결정된 바와 같은 크기 분포와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일하다. 일부 구현예에서, 일정 기간은 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월이다.
4.5.9 시차 주사 열량측정
저온 시차 주사 열량측정(저온 DSC)은 TA Instruments DSC250을 사용하여 실행될 수 있다. 약 20 μL의 샘플을 Tzero 팬에 로딩하고 Tzero Hermetic 뚜껑으로 압착(crimp)할 수 있다. 샘플을 25℃에서 2 분 동안 평형화한 다음, 5℃/분으로 -60℃까지 냉각하고, 2 분 동안 평형화한 다음, 5℃/분으로 25℃까지 가열할 수 있다. 열 흐름 데이터는 종래 모드에서 수집될 수 있다.
4.5.10 실시간 완충액 pH 추적
상이한 제형 완충액의 pH는 -30℃에 이르기까지 pH를 검출할 수 있는 INLAB COOL PRO-ISM 저온 pH 프로브로 모니터링하였다. 1 밀리리터 완충액을 15 mL Falcon 튜브에 넣은 다음 pH 프로브를 완충액에 담궜다. 파라필름 조각을 사용하여 Falcon 튜브 및 pH 프로브 사이의 간격을 밀봉하여 오염 및 증발을 방지하였다. Falcon 튜브와 함께 프로브를 -20 AD 냉동고에 넣었다. 완충액의 pH 및 온도를 약 20 시간 동안 2.5 분마다 또는 pH 대 온도 거동이 반복 패턴을 달성할 때까지 기록하였다. 자동 성에 제거 과정에 의해 야기된 온도 변화는 완충액 pH 안정성에 대한 스트레스 조건을 생성하였다.
4.5.11 삼투압 농도
다양한 구현예에서, 본원에 제공된 조성물은 하기 검정에 의해 결정된 바와 같이 참조 조성물보다 더 안정하다.　 안정성의 백분율 또는 배수 차이는 이 검정에 의해 결정된 바와 같은 삼투압 농도를 지칭한다.
삼투압계는 삼투압 농도를 측정하기 위해 어는점 내림 기술을 사용한다. 기기 보정은 50 mOsm/kg, 850 mOsm/kg, 및 2000 mOsm/kg NIST 추적가능한 표준을 사용하여 수행될 수 있다. 290 mOsm/kg의 참조 용액을 사용하여 삼투압계의 시스템 안정성을 결정할 수 있다.
일부 구현예에서, ≤-60℃(예를 들어, 약 -80℃), -30℃ 내지 -15℃(예를 들어, 약 -20℃), 또는 2℃ 내지 10℃(예를 들어, 약 4℃)에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 삼투압 농도는 ≤-60℃(예를 들어, 약 -80℃), -30℃ 내지 -15℃(예를 들어, 약 -20℃), 또는 2℃ 내지 10℃(예를 들어, 약 4℃)에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 삼투압 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%이다. 일부 구현예에서, 일정 기간은 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월이다.
4.5.12 밀도 측정
다양한 구현예에서, 본원에 제공된 조성물은 하기 검정에 의해 결정된 바와 같이 참조 약제학적 조성물보다 더 안정하다.　 안정성의 백분율 또는 배수 차이는 이 검정에 의해 결정된 바와 같은 밀도를 지칭한다.
밀도는 참조로서 물을 사용하여 Anton Paar DMA500 밀도계로 측정될 수 있다. 밀도계를 물로 세척한 다음 메탄올로 세척한 후 샘플 사이에서 공기 건조할 수 있다.
일부 구현예에서, ≤-60℃(예를 들어, 약 -80℃), -30℃ 내지 -15℃(예를 들어, 약 -20℃), 또는 2℃ 내지 10℃(예를 들어, 약 4℃)에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 밀도는 ≤-60℃(예를 들어, 약 -80℃), -30℃ 내지 -15℃(예를 들어, 약 -20℃), 또는 2℃ 내지 10℃(예를 들어, 약 4℃)에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AVV의 밀도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%이다. 일부 구현예에서, 일정 기간은 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월이다.
4.5.13 점도 측정
다양한 구현예에서, 본원에 제공된 조성물은 하기 검정에 의해 결정된 바와 같이 참조 약제학적 조성물보다 더 안정하다.　 안정성의 백분율 또는 배수 차이는 이 검정에 의해 결정된 바와 같은 점도를 지칭한다.
점도는 당업계에 알려진 방법, 예를 들어 2019년 공개된 미국 약전(USP) 및 이의 이전 버전에 제공된 방법(전문이 본원에 참조로 포함됨)을 사용하여 측정될 수 있다.
일부 구현예에서, ≤-60℃(예를 들어, 약 -80℃), -30℃ 내지 -15℃(예를 들어, 약 -20℃), 또는 2℃ 내지 10℃(예를 들어, 약 4℃)에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 점도는 ≤-60℃(예를 들어, 약 -80℃), -30℃ 내지 -15℃(예를 들어, 약 -20℃), 또는 2℃ 내지 10℃(예를 들어, 약 4℃)에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 점도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%이다. 일부 구현예에서, 일정 기간은 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월이다.
4.5.14 바이러스 감염성 검정
다양한 구현예에서, 본원에 제공된 조성물은 하기 검정에 의해 결정된 바와 같이 참조 약제학적 조성물보다 더 안정하다.　 안정성의 백분율 또는 배수 차이는 이 검정에 의해 결정된 바와 같은 바이러스 감염성을 지칭한다.
Francois, 등 Molecular Therapy Methods & Clinical Development(2018) Vol. 10, pp. 223-236(전문이 본원에 참조로 포함됨)에 기재된 바와 같은 TCID50 감염성 역가 검정이 사용될 수 있다. 2018년 10월 15일 출원된 가출원 제62/745859호)에 기재된 바와 같은 상대적 감염성 검정이 사용될 수 있다.
일부 구현예에서, ≤-60℃(예를 들어, 약 -80℃), -30℃ 내지 -15℃(예를 들어, 약 -20℃), 또는 2℃ 내지 10℃(예를 들어, 약 4℃)에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 바이러스 감염성은 ≤-60℃(예를 들어, 약 -80℃), -30℃ 내지 -15℃(예를 들어, 약 -20℃), 또는 2℃ 내지 10℃(예를 들어, 약 4℃)에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 바이러스 감염성의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%이다. 일부 구현예에서, 일정 기간은 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월이다.
4.5.15 결정화 및 유리 전이 온도
예시적인 방법은 Croyle 등, 2001, Gene Ther. 8(17):1281-90(전문이 본원에 참조로 포함됨)에 기재되어 있다.
4.5.16 참조 조성물
본원에 제공된 조성물의 안정성은 조성물을 참조 약제학적 조성물과 비교함으로써 평가될 수 있다. 일부 구현예에서, 참조 약제학적 조성물은 포스페이트 완충 염수에서 평가되는 조성물과 동일한 농도로 동일한 재조합 AAV를 포함하는 약제학적 조성물이다. 일부 구현예에서, 참조 약제학적 조성물은 평가되는 조성물과 동일한 농도로 동일한 재조합 AAV를 포함하지만, 수크로스를 포함하지 않는 약제학적 조성물이다. 일부 구현예에서, 참조 약제학적 조성물은 조성물이 ≤-60°(예를 들어, 약 -80℃)에서 6-12 개월 동안 보관되기 전에 평가되는 조성물과 동일하다. 일부 구현예에서, 참조 약제학적 조성물은 조성물이 2℃ 내지 10℃(예를 들어, 약 4℃)에서 1-6 개월 동안 보관되기 전에 평가되는 조성물과 동일하다. 일부 구현예에서, 참조 약제학적 조성물은 조성물이 약 ≤-60°(예를 들어, 약 -80℃)에서 6-12 개월 동안 보관되고 후속적으로 2℃ 내지 10℃(예를 들어, 약 4℃)에서 1-6 개월 동안 보관되기 전에 평가되는 조성물과 동일하다.
일부 구현예에서, ≤-60℃(예를 들어, 약 -80℃), -30℃ 내지 -15℃(예를 들어, 약 -20℃), 또는 2℃ 내지 10℃(예를 들어, 약 4℃)에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 주어진 특성(예를 들어, 이 섹션, 즉, 섹션 4.5에 기재된 검정에 의해 결정된 특성)은 ≤-60℃(예를 들어, 약 -80℃), -30℃ 내지 -15℃(예를 들어, 약 -20℃), 또는 2℃ 내지 10℃(예를 들어, 약 4℃)에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전에 동일한 검정에 의해 결정된 바와 같은 재조합 AAV의 특성과 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일하다. 일부 구현예에서, 일정 기간은 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월이다.
5. 실시예
이 섹션(즉, 섹션 5)의 실시예는 예시로 제공되고, 제한하려는 것은 아니다.
5.1 실시예 1: 제형 A 및 제형 B의 구성요소
이 실시예는 ≤-60℃에서 보관된 제형 A(0.001% 폴록사머 188이 있는 듀벨코의 포스페이트 완충 염수, pH 7.4), 및 -15℃ 내지 -25℃에서 보관된 제형 B('4% 수크로스 및 0.001% 폴록사머 188이 있는 변형된 듀벨코의 포스페이트 완충 염수, pH 7.4')의 구성요소를 나타낸다. 2 개 제형에 대한 비교 및 영향 분석은 표 4에 제공되어 있다. 제형 B는 보관 1 년 후, 현재까지 관찰된 AAV 생성물에 대한 영향 없이 개선된 보관 가능성을 갖는다.
표 4: 제형 A 및 B.
Figure pct00017
제형 B(수크로스가 있는 변형된 DPBS)는 0.2 mg/mL 염화 칼륨, 0.2 mg/mL 일염기성 인산 칼륨, 5.84 mg/mL 염화 나트륨, 1.15 mg/mL 인산 나트륨 이염기성 무수물, 40.0 mg/mL(4% w/v) 수크로스, 0.001%(0.01 mg/mL) 폴록사머 188, pH 7.4를 포함한다(표 5). 몰 단위로, 제형 B는 2.70 mM 염화 칼륨, 1.47 mM 일염기성 인산 칼륨, 100 mM 염화 나트륨, 8.1 mM 인산 나트륨 이염기성 무수물, 117 mM 수크로스, 0.001%(0.01 mg/mL) 폴록사머 188, pH 7.4를 포함한다. 제형 B의 밀도는 1.0188 g/mL일 수 있으며; 제형 B의 삼투압 농도는 대략 345(331 - 354)일 수 있다.
표 5: 활성 약제학적 성분(API)으로서 작제물 II가 있는 제형 B.
Figure pct00018
5.2 실시예 2: 제형 A 및 제형 B의 방출 특성화 비교
이 실시예는 제형 A 및 제형 B의 방출 특성화 비교를 나타낸다.
5.2.1 방출 및 특성화 분석 방법 및 사양
이 섹션은 제형 A에서 최종 의약품(FDP)의 1 개 로트 및 신규 '4% 수크로스 및 0.001% 폴록사머 188이 있는 변형된 DPBS, pH 7.4'(제형 B)에서 FDP의 1 개 로트에 대한 분석 증명서의 로트 방출 결과의 비교를 나타낸다. 방출 테스트 이외에 동적 광 산란(DLS)에 대한 일상적 특성화 테스트 결과가 비교될 수 있다. 비교가능성을 뒷받침하기 위해 제안된 테스트 및 허용 기준의 패널은 표 6에 제시되어 있다.
표 6: FDP의 분석적 비교가능성을 수행하는 데 사용될 수 있는 방출 및 특성화 방법에 대한 허용 기준
Figure pct00019
5.2.2 FDP 제형 변화에 대한 배경
동결/해동 주기에 대한 FDP 안정성의 장기간 동결 보관 안정성 및 완건성을 개선하기 위해 '4% 수크로스 및 0.001% 폴록사머 188이 있는 변형된 DPBS, pH 7.4'(제형 B)를 개발하였다. 제형 변화는 4% w/v의 동결보호 부형제 수크로스의 첨가 및 적절한 긴장성을 유지하기 위해 137 mM에서 100 mM로 염화 나트륨 수준 감소를 수반하였다. 다른 제형 부형제 및 수준은 동일하였다. '4% 수크로스 및 0.001% 폴록사머 188이 있는 변형된 DPBS, pH 7.4' FDP 제형에서 FSP의 생성은 더 농축된 수크로스 스파이크 용액을 DPBS(제형 A) 중 BDS에 첨가하여 조성을 최종 조성으로 조절함으로써 달성되었다.
5.2.3 FDP 제형 과정에 대한 변화 평가
스파이크, 혼합, 및 여과 단계는 유사한 과정 단계, 취급, 및 두 과정에 대한 접촉 표면을 수반하였다. 스파이크 과정은 1.37-배 희석을 초래하였다. 그런 다음 목표 농도까지 후속 희석이 있었다.
5.2.4 임상 안전성 및 효능에 대한 FSP 제형 변화의 영향 평가
FDP 제형 B는 DPBS 제형 A와 비교할 때 안정성 또는 효능에서 차이가 없을 수 있다. 생성품 품질 프로파일 및 방출 사양은 일반적인 속성인 삼투압 농도를 제외하고는 동일하였다.
DPBS 제형 A에 대한 삼투압 농도는 240 - 340 mOsm/kg이었고 제형 B에 대한 삼투압 농도는 295 - 395 mOsm/kg이었다. 이는 제형 B에서 수크로스 및 염화 나트륨 수준의 조정 때문이었다. 문헌에 기반하여 이러한 약간 더 높은 삼투압 농도 값을 갖는 수포에 대한 흡수 시간에 대한 영향은 없을 수 있다(예를 들어, Negi and Marmour, 1984 Invest Ophthalmol Vis Sci. 25(5):616-20 참조).
5.2.5 분석적 방출 방법으로 제형 A에서 제형 B로의 변화의 영향 평가
분석 방법의 평가는 이들이 목적에 적합함을 나타내었다. 절차에 대한 약간의 변형은 신규 FDP를 수용할 수 있다(표 7.
표 7: 분석적 방출 방법에 영향을 미치는 신규 FDP 조성 평가
Figure pct00020
Figure pct00021
5.3 실시예 3: 제형 A 및 제형 B의 안정성 비교
이 실시예는 제형 A 및 제형 B의 안정성 비교를 나타낸다.
신규 제형 B는 동결/해동 주기 및 온도 스트레스시 캡시드 파괴 및 소량의 유리 DNA 방출로부터 보호한다. 현재 12 개월의 장기간 안정성 연구는 시험관내 상대적 효능 및 다른 품질 속성이 FDP 제형 B에서 -80℃(≤ -60℃) 및 -20℃(-25℃ 내지 -15℃)에서 유지됨을 입증하였다.
이용가능한 동결/해동 데이터, 온도 스트레스 데이터, 및 장기간 안정성 데이터는 신규 제형에서 유사하거나 또는 개선된 안정성을 나타내었다.
신규 FDP 제형 B의 FDP 로트는 -80℃(≤-60℃) 및 -20℃(-25℃ 내지 -15℃)에서 장기간 안정성에 대해 설정될 수 있고 안정성 경향 데이터는 신규 FDP에 대한 만료 기간이 규정을 준수하는지를 보장하기 위해 안정성 프로그램의 일부로서 모니터링될 수 있다.
5.3.1 DPBS 및 신규 FDP 제형 B에서 작제물 II에 대한 동결/해동 연구
DPBS 및 신규 FDP 제형 B에서 작제물 II에 대한 동결/해동 주기의 영향을 평가하기 위한 연구를 수행하였다. 동결/해동 속도는 BDS 병의 제조 동안 또는 DP의 바이알에 대한 공급망 또는 클리닉에서 발생할 수 있는 예상된 속도를 괄호로 묶기 위해 선택하였다. 클리닉에서 발생할 수 있는 것 이상으로 샘플에 스트레스를 가하기 위해 다중 주기를 적용하였다.
연구 결과는 느리게(0.12℃/분 또는 약 11 시간 초과) 및/또는 빠르게(1℃/분 또는 약 1 시간 초과) < -60℃에서 25℃까지 최대 5 회 동결/해동 주기로 노출될 때 제형 B가 제형 A보다 더 강력함을 입증하였다. 저속 및 고속의 모든 순열을 각각 동결 및 해동에 대해 평가하였다(즉 FF/FT 고속 동결/고속 해동; FF/ST = 고속 동결/저속 해동; SF/FT = 저속 동결/고속 해동; SF/ST = 저속 동결/저속 해동).
동결 및 해동 속도는 생물제제의 안정성에 영향을 미칠 수 있다(Cao 등, 2003, Biotechnol. Bioeng. 82(6):684-90)). 동결 동안 물의 결정화는 생물제제의 안정성에 영향을 미칠 수 있는 부형제의 농도를 초래할 수 있다. 또한 생물제제의 안정성에 영향을 미치는 상 분리 또는 pH 이동이 발생할 수 있다. 고속 동결은 더 작은 얼음 결정 및 계면 응력을 제공할 수 있는 더 큰 얼음-물 계면 면적을 유발할 수 있다. 고속 동결은 또한 얼음에서 기포를 포획하여 해동 동안 공기-물 계면 응력을 유발할 수있다. 저속 해동은 계면 응력로 인해 용액에서 생물제제의 안정성에 영향을 미칠 수 있는 얼음의 재결정화를 초래할 수 있다.
이 연구에서, 샘플은 시험관내 상대적 효능, 크기 배제 크로마토그래피 순도(SEC), 형광 염료에 의한 유리 DNA 수준, 및 동적 광 산란에 의한 크기 분포에 의해 분석될 수 있다. 동결 및 해동시 제형의 상 변화는 열량측정계로 평가하였다.
이 연구에서 동결 및 해동의 고속 및 저속의 상이한 속도에 대한 결과는 차이가 거의 없었다. 동결-해동 연구 결과의 전체 요약은 표 8에 제공되어 있다. 이 연구에 적용되는 온도 프로파일(고속 동결/저속 해동)의 대표적인 예는 도 9에 제시되어 있다(프로파일의 다른 순열은 제시되지 않음). 효능 결과는 동결 및 해동의 고속 및 저속의 모든 순열에 대하여 대조군과 유사하였다. 제형 A 또는 제형 B의 동결/해동 주기시 방법 변동성 내에서 크기 분포를 변화가 없었다(도 12 참조). 제형 B에서 약 28 nm의 누적률 DLS 직경은 27 nm의 DPBS 제형 A에서보다 약간 더 높았다. 이 매우 약간의 겉보기 크기 증가는 수화에 대한 수크로스의 영향 및 이에 따른 AAV 캡시드의 수력학적 거동과 관련된다. DPBS 제형 A에서 작제물 II의 경우, 모든 동결-해동 스트레스 조건에 대해 염료 형광성에 의한 유리 DNA의 증가가 있었다(1.7%에서 최대 6.9%). SEC에 의한 유리 DNA 정량화는 일반적으로 염료 형광성과 일치하였다. SEC에 의해 첫번째 프리-피크는 유리 DNA를 함유하고, 두번째 작은 프리-피크는 응집체를 함유하고, 포스트-피크는 완충 종을 함유한다(도 10 및 도 11 참조). SEC에 의한 약간 더 낮은 유리 DNA는 주요 피크 또는 완충액과 동시-용리되거나, 또는 칼럼에 들어가지 않는 매우 작거나 또는 매우 큰 DNA 단편 때문일 수 있다. 증가는 유사한 규모였으며 빠르거나 또는 매우 저속 동결-해동 속도의 상이한 순열에 대해 명확하게 구별되지 않았다. 제형 B에 대해 유리 DNA 또는 응집체의 증가는 관찰되지 않았다.
냉각 동안 완전히 결정화되지 않은 비정질 염화 나트륨의 결정화로 인해 약 -41℃에서 제형 A에서 작은 발열성이 관찰되었다(도 13). 미분해 저온 숄더가 있는 공융 용융물이 또한 제형 A의 경우 -22.1℃에서 피크로 관찰되었다. 동일한 공융 및 재결정화 이벤트가 염화 나트륨에 대한 문헌에 보고되었다(Milton 등, 2007, Journal of Pharmaceutical Sciences, 96(7)). 제형 B에 대한 공융 용융물의 결여(도 14)는 결정화의 억제와 일치하였다. 제형 B에서 동결보호 수크로스 부형제에 의한 비정질 점성 상태의 유지는 동결/해동 주기시 캡시드 파괴 및 유리 DNA 방출로부터 보호를 제공할 수 있다. 따라서, 제형 B로의 변화는 제형 A와 비교하여 유사하거나 또는 개선된 안정성을 초래하였다.
표 8: DPBS 및 신규 FDP 제형 B에서 작제물 II에 대한 동결-해동 속도의 영향
Figure pct00022
5.3.2 제형 A 및 신규 FDP 제형 B에서 작제물 II의 온도 스트레스 안정성
37℃에서 4 일에 걸쳐 1.0 x 1012 GC/mL에서 수행된 온도 스트레스 발생 안정성 연구는 제형 A 및 제형 B의 상대적 안정성을 평가하였다. 안정성을 평가하는 데 사용되는 검정은 시험관내 상대적 효능(IVRP), 벡터 게놈 농도(ddPCR에 의한 VGC), 염료 형광성에 의한 유리 DNA, 동적 광 산란, 외관, 및 pH를 포함하였다. 제형 A에 대한 결과는 표 9에 제시되어 있고 제형 B에 대한 결과는 표 10에 제시되어 있다. 두 제형에 대해 하루에 약 14 내지 16%의 검정 변동성 내에서 효능의 필적할만한 감소가 관찰되었다(도 15 참조). 또한 제형 A 및 제형 B 둘 다에 대해 필적할만한 벡터 게놈 카피의 작은 감소가 있었다. 제형 B에서 약 29-34 nm의 누적률 DLS 직경은 28-30 nm의 DPBS 제형 A에서보다 약간 더 높았다. 이 매우 약간(1 내지 3 nm) 겉보기 크기 증가는 수화에 대한 수크로스의 영향 및 이에 따른 AAV 캡시드의 수력학적 거동과 관련되었다. 스트레스 연구 동안 제형 A 또는 제형 B에 대한 방법 변동성 내에서 DLS 직경의 경향은 없었다. 제형 B는 캡시드 파괴와 관련하여 약간 더 안정하였고 더 낮은 수준의 유리 DNA를 가졌다. 유리 DNA는 제형 A에 대해 약 1에서 3%로 증가하였고 제형 B에 대해 1% 미만을 유지하였다(도 16 참조). 제형 A 및 제형 B의 전체 온도 스트레스 안정성은 유사하였으며, 제형 B는 캡시드 파괴 및 유리 DNA 방출과 관련하여 약간 더 안정하다. 따라서 제형 B로의 변화는 제형 A와 비교하여 유사하거나 또는 개선된 안정성을 초래할 수 있다.
표 9: 37℃에서 유지된 1.0 x 10 12 GC/mL의 제형 A에서 작제물 II의 온도 스트레스 안정성
Figure pct00023
표 10: 37℃에서 유지된 1.0 x 10 12 GC/mL의 제형 B에서 작제물 II의 온도 스트레스 안정성
Figure pct00024
5.3.3 신규 FDP 제형 B에서 작제물 II의 장기간 안정성
12 개월에서의 장기간 발생 안정성 연구는 시험관내 상대적 효능 및 다른 품질 속성이 -80℃(≤-60℃) 및 -20℃(-25℃ 내지 -15℃)에서 FDP 제형 B에서 유지되었음을 입증하였다. 1.0 x 1012 GC/mL 및 2.1Х1011 GC/mL 둘 다에서 연구를 수행하였다. 안정성을 평가하는 데 사용되는 검정은 시험관내 상대적 효능(IVRP), 벡터 게놈 농도(ddPCR에 의한 VGC), 염료 형광성에 의한 유리 DNA(9 개월까지의 시점의 경우 -80℃에 상대적, 12 개월에서의 절대 백분율), 1.0 x 1012 GC/mL에 대해서만 크기 배제 크로마토그래피(SEC), 동적 광 산란(DLS), pH, 및 외관을 포함하였다.
12 개월에 걸쳐 두 농도에 대해 -80℃ 및 -20℃ 둘 다에서 모든 결과에 대한 안정성에 대한 경향은 없었다. 모든 결과는 방법 변동성 내에서 -80℃ 및 -20℃에 대해 유사하고 초기 시점 결과와 유사하다. -80℃(표 11) 및 -20℃(표 12)에서 유지된 1.0 x 1012 GC/mL 및 -80℃(표 13) 및 -20℃(표 14)에서 유지된 2.1 x 1011 GC/mL에 대한 장기간 안정성 데이터는 작제물 II가 적어도 12 개월 동안 제형 B에서 안정함을 입증한다. IVRP 효능 경향 그래프는 도 17 및 도 18에 제시되어 있다. IVRP 효능은 12 개월의 장기간 안정성 데이터에 비해 방법 변동성과 비교하여 일치하는 경향이 없음을 나타낸다.
표 11: -80℃에서 1.0 x 10 12 GC/mL의 제형 B에서 작제물 II의 장기간 안정성
Figure pct00025
표 12: -20℃에서 1.0 x 10 12 GC/mL의 제형 B에서 작제물 II의 장기간 안정성
Figure pct00026
표 13: -80℃에서 2.1 x 10 11 GC/mL의 제형 B에서 작제물 II의 장기간 안정성
Figure pct00027
표 14: -20℃에서 2.1 x 10 11 GC/mL의 제형 B에서 작제물 II의 장기간 안정성
Figure pct00028
5.4 실시예 4: 제형 A 및 제형 B의 동결 및 해동 주기에 대한 안정성 비교
5.4.1 도입
동결 및 해동 속도는 생물제제의 안정성에 영향을 미칠 수 있다(Cao 등, 2003, Biotechnol. Bioeng. 82(6):684-90). 저속 동결 동안 물의 결정화는 생물제제의 안정성에 영향을 미칠 수 있는 부형제의 농도를 초래할 수 있다. 또한 생물제제의 안정성에 영향을 미치는 상 분리 또는 pH 이동이 발생할 수 있다. 고속 동결은 더 작은 얼음 결정 및 계면 응력을 제공할 수 있는 더 큰 얼음-물 계면 면적을 유발할 수 있다. 고속 동결은 또한 얼음에서 기포를 포획하여 해동 동안 공기-물 계면 응력을 유발할 수 있다. 저속 해동은 계면 응력로 인해 용액에서 생물제제의 안정성에 영향을 미칠 수 있는 얼음의 재결정화를 초래할 수 있다.
동결-해동 스트레스는 AAV 캡시드를 잠재적으로 파괴하여 소량의 유리 DNA 방출을 초래할 수 있다. 임상 시험 동안, FDP는 충전 마감, 보관, 임상 패키징 및 라벨링에 사용되는 다중 공급업체 간에 수송될 수 있고, 궁극적으로 임상 현장에 전달될 수 있다. 수송 또는 제품 취급 동안 직면하는 계획되지 않은 온도 이탈은 제품의 가온 또는 심지어 해동 및 재동결을 유발할 수 있다. 동결 및 해동 속도의 상대적 영향은 CMO 및 클리닉에서 이탈을 평가할 뿐만 아니라 동결 및 해동 지침을 안내하는 데 사용될 수 있다. 동결 및 해동의 영향은 또한 AAV 유형 및 이의 제형에 따라 달라질 수 있다. 이러한 인자를 이 실시예에서 평가하였다.
BDS 병(bottle)의 더 큰 부피(60 - 110 mL)는 각각 60 및 110 mL의 물에 대해 약 0.5℃/분 및 0.3℃/분의 전체 평균 속도로 동결되는 것으로 밝혀졌다. CZ 바이알에서 더 작은 0.6 mL 충전은 실온 또는 -20℃에서 동결되는 데 약 30 - 40 분이 걸린 반면(약 2.0℃ /분의 속도) 해동은 실온에서 30 분 및 -20℃에서 10 분이 걸렸다(각각 약 2.4℃/분 및 4.5℃ /분의 속도). 이전 연구에서, 60 및 110 mL의 물로 충전된 250 mL Nalgene HDPE(BDS) 병은 -65℃ 미만에서 동결되는 데 각각 163 및 266 분이 걸린 것으로 나타났다. 이들 부피에 대한 상응하는 동결 속도는 각각 60 및 110 mL의 물에 대해 0.53℃ /분 및 0.33℃ /분이었다. 해동 동안, 용융점이 달성될 때까지 온도의 급속한 상승이 관찰되었으며, 이 지점에서 온도는 서서히 실온으로 증가하였다. 해동은 각각 60 및 110 mL 병에 대해 273 및 337 분이 걸렸다(0.32℃ 내지 0.25℃/분의 전체 평균 속도와 동등함). 병에서 동결 및 해동에 대한 온도 프로파일은 도 19a에 제시되어 있다.
별도의 이전 연구에서, 2 mL Nalgene 저온 바이알에 채워진 0.6 mL 물의 동결/해동 온도 프로파일을 탐구하였다. 온도 순환은 -80℃ 냉동고 및 -20℃ 냉동고 또는 벤치탑(실온) 사이에서 발생하였다. 데이터는 도 19b에 제시되어 있다. 평균적으로, 실온에서 -60℃까지 동결하는 데 약 40 분이 걸린 반면 -20℃에서 -60℃까지 동결하는 데 약 30 분이 걸렸다. 이는 두 연구의 경우 약 2.0℃ /분의 속도에 상응한다. -60℃에서 -20℃까지 해동은 비교적 신속하게 발생하였고 약 10 분이 걸린 반면 실온까지 해동은 약 30 분이 걸렸다. 이는 -20℃ 연구의 경우 약 4.5℃/분 및 실온 연구의 경우 2.4℃/분의 속도에 상응한다.
이 실시예에서, 저속 및 고속 동결 및 해동 속도로 동결/해동 다중 주기의 영향을 평가하였다. 대표적인 AAV8(작제물 II)의 생성물 품질에 대한 약 0.13℃/분(11 시간 동결 또는 해동) 및 1.5℃/분(1 시간 동결 또는 해동)의 동결/해동 속도의 영향을 평가하였다. 이는 AAV8의 품질에 대한 온도의 실제 이탈에서 변동성에 대한 가능성을 추가로 특성화하기 위해 수행하였다. 저속은 BDS 저속 동결 및 해동에 대해 예상된 것보다 더 느린 것으로 선택되었다. 고속의 경우, 약 1℃/분의 최대 도달가능한 속도(저속보다 약 10X 더 빠름)를 대표적인 고속 해동 및 동결로서 연구하였다. 클리닉에서 발생할 수 있는 것 이상으로 샘플에 스트레스를 가하기 위해 다중 주기를 적용하였다. 샘플을 시험관내 상대적 효능, 크기 배제 크로마토그래피 순도, 유리 DNA 수준(동결-해동 스트레스에 민감한 것으로 밝혀진 신규 SYBR Gold 염료-기반 검정 사용), 및 동적 광 산란에 의한 크기 분포에 의해 분석하였다.
5.4.2 동결-해동 연구 결과 요약
전반적으로, 데이터는 0.12℃/분(또는 약 11 시간 초과)만큼 저속에서 1℃/분(또는 약 1 시간 초과)만큼 고속까지의 범위로 5 회 동결/해동 주기 동안 dPBS 및 '수크로스가 있는 변형된 dPBS'에서 작제물 II의 품질 속성에 최소한의 영향이 있었음을 나타내었다.
동결/해동 속도는 BDS의 병 또는 DP의 바이알에 대해 클리닉에서 발생할 수 있는 예상된 속도를 괄호로 묶기 위해 선택되었다. 클릭닉에서 발생할 수 있는 것 이상으로 샘플에 스트레스를 가하기 위해 다중 주기를 적용하였다.
동결-해동 연구 결과의 전체 요약은 표 15에 제공되어 있다.
표 15: 결과물 요약
Figure pct00029
5.4.3 재료
바이알: CZ 2 mL 바이알, 13 mm, 19550057(West, Daikyo)
스토퍼: 13 mm Serum NovaPure RP S2-F451 4432/50 Gray(West)
작제물 II: 0.001% 폴록사머 188이 있는 듀벨코의 포스페이트 완충 염수(dPBS) 완충액(0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4)에서 약 1 x 1012 GC/mL로 제형화하고 CZ 바이알에 0.5 mL로 넣었다(이 실시예에서, dPBS가 언급된 경우 이는 암시적으로 0.001% 폴록사머 188을 또한 함유하는 dPBS 완충액을 설명한다).
작제물 II: '수크로스가 있는 변형된 dPBS'(0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 5.84 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, 4% 수크로스, 0.001% 폴록사머 188, pH 7.4)에서 약 1 x 1012 GC/mL로 제형화하고 CZ 바이알에 0.5 mL로 넣었다.
5.4.4 장비
온도 프로브 열전대가 있는 Genesis 25EL 동결건조기(SP Scientific) Asset Tag 0941(FFF).
Cytation 5 플레이트 판독기(BioTek, 버몬트주 위누스키 소재), Asset Tag 0867(FFF 기기)
Cary 60 UV-가시선 분광광도계(Agilent, 캘리포니아주 산타클라라 소재), Asset Tag 0999(FFF)
Thermal 혼합기/힛 블록(Heat bock)(Thermo Scientific), S/N: 01014318110768
Waters Acquity Arc Equipment ID 0447(C3PO) 및 Sepax SRT SEC-1000 Peek 칼럼(PN 215950P-4630, SN: 8A11982, LN: BT090, 5 μm 1000A, 4.6x300mm)
TA Instruments 시차 주사 열량계, DSC250/RCS90, 일련 번호 DSC2A-00980, Asset Tag 0866.
5.4.5 방법
(a) 동결건조기에서 제어된 동결-해동 주기
제어된 동결/해동 주기를 표 16에 따라 동결건조기에서 실행하였다. 바이알은 선반에 잘 이격되어 있고 완충액의 4 개 바이알은 열전대되었다.
표 16: 제어된 동결 및 해동 속도 설정
Figure pct00030
(b) 시험관내 상대적 효능
작제물 II의 IVRP를 수행하였다:
ddPCR GC 역가를 유전자 발현에 관련시키기 위해, HEK293 세포를 형질도입하고 항-VEGF Fab 단백질 수준에 대해 세포 배양 상청액을 검정함으로써 시험관내 생물검정을 수행하였다. HEK293 세포를 3 개의 폴리-D-리신-코팅된 96-웰 조직 배양 플레이트 위에 밤새 플레이팅하였다. 그런 다음 세포를 야생형 인간 Ad5 바이러스로 미리 감염시킨 후 작제물 II 참조 표준 및 테스트 물품의 3 개의 독립적으로 제조된 연속 희석으로 형질도입하였으며, 각각의 제제를 상이한 위치에서 별도의 플레이트 위에 플레이팅하였다. 형질도입 후 3 일째에, 세포 배양 배지를 플레이트로부터 수집하고 ELISA를 통해 VEGF-결합 Fab 단백질 수준에 대해 측정하였다. ELISA를 위해, VEGF로 코팅된 96-웰 ELISA 플레이트를 차단한 다음 수집된 세포 배양 배지와 함께 인큐베이션하여 HEK293 세포에 의해 생성된 항-VEGF Fab를 포획하였다. Fab-특이적 항-인간 IgG 항체를 사용하여 VEGF-포획된 Fab 단백질을 검출하였다. 세척 후, 서양고추냉이 퍼옥시다제(HRP) 기질 용액을 첨가하고, 발색시키고, 정지 완충액으로 정지시키고, 플레이트를 플레이트 판독기에서 판독하였다. HRP 생성물의 흡광도 및 OD를 로그 희석에 대해 플롯팅하고, 각 테스트 물품의 상대적 효능을 다음 식을 사용하여, 병렬 유사성 테스트를 통과한 후 4-매개변수 로지스틱 회귀 모델에 적합한 동일한 플레이트에서 참조 표준 대비 계산하였다: EC50 참조 ÷ EC50 테스트 물품. 테스트 물품의 효능은 3 개 플레이트의 계량된 평균으로부터 계산된 참조 표준 효능의 백분율로서 보고되었다.
(c) 유리-DNA 분석
유리 DNA를 DNA에 결합되는 SYBR® Gold 핵산 겔 염색('SYBR Gold 염료')의 형광에 의해 결정하였다. 형광을 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 측정하고 DNA 표준으로 정량화하였다. 결과는 ng/μL 단위로 기록하였다.
ng/ μL 단위의 측정된 유리 DNA를 유리 DNA의 백분율로 변환하기 위해 2 가지 접근법을 사용하여 총 DNA를 추정하였다. 첫번째 접근법에서 UV-가시선 분광광도에 의해 결정된 GC/mL(OD)를 사용하여 샘플 내 총 DNA를 추정하였으며, 여기서 M은 DNA의 분자량이고 1E6은 단위 변환 계수이다:
추정된 총 DNA(ng/μL) = 1E6 x GC/mL(OD) x M(g/mol)/6.02x1023
두번째 접근법에서, 샘플은 0.05% 폴록사머 188과 함께 85℃에서 20 분 동안 가열될 수 있고 SYBR Gold 염료 검정에 의해 가열된 샘플에서 측정된 실제 DNA가 전체로서 사용될 수 있다. 따라서 이는 모든 DNA가 회수되고 정량화되었다고 가정하였다. 예를 들어, SYBR gold 염료에 의한 총 DNA의 결정(UV 판독 대비)은 작제물 II dPBS 제형의 경우 131% 및 수크로스 제형이 있는 작제물 II 변형된 dPBS의 경우 더 높은 것(152%)으로 밝혀졌다. 이 편차는 유리 DNA의 ng/μL를 백분율로 변환시 보고된 결과의 범위로서 포획되었다. 경향을 위해, 원시 ng/μL가 사용될 수 있거나 또는 일치하는 방법에 의해 결정된 백분율이 사용될 수 있다.
(d) 크기 배제 HPLC 분석
SEC를 25 mm 경로 길이 플로우셀이 있는 Waters Acquity Arc Equipment ID 0447(C3PO)의 Sepax SRT SEC-1000 Peek 칼럼(PN 215950P-4630, SN: 8A11982, LN: BT090, 5 μm 1000A, 4.6x300mm)을 사용하여 수행하였다. 이동 상은 (20 mM 인산 나트륨, 300 mM NaCl, 0.005% 폴록사머 188, pH 6.5- VA 15Apr19)였으며, 유속은 20 분 동안 0.35 mL/분이며, 칼럼은 주위 온도에 있다. 데이터 수집은 2 포인트/초 샘플링 속도 및 214, 260, 및 280 nm에서 25 포인트 평균 평활화에 따라 1.2 nm 해상도로 수행하였다. 이상적인 목표 로드는 1.5 x 1011 GC였다. 작제물 II 샘플을 이상적인 목표의 약 1/3인 50 μL로 주사하였고 작제물 II를 5 μL로 주사하였다.
(e) 동적 광 산란
동적 광 산란(DLS)을 30 μL 샘플 부피로 Corning 3540 384 웰 플레이트를 사용하여 Wyatt DynaProIII에서 수행하였다. 10 초 동안 각각 10 개의 획득을 반복마다 수집하였으며 샘플 당 3 회 반복 측정하였다. 용매를 dPBS에서 'PBS' 작제물 II로 설정하였고 수크로스 샘플이 있는 변형된 dPBS에서 작제물 II에 대해 '4% 수크로스'로 설정하였다. 데이터 품질 기준(기준선, SOS, 노이즈, 적합성)을 충족하지 않는 결과를 '표시'하고 분석에서 제외하였다. 낮은 지연 시간 컷오프는 인위적으로 낮은 누적률 분석 직경 결과를 야기할 때 약 1 nm에서 수크로스 부형제 피크의 영향을 제거하기 위해 수크로스 샘플이 있는 변형된 dPBS에 대해 1.4 μs에서 10 μs까지 변화될 수 있었다.
(f) 시차 주사 열량측정
저온 시차 주사 열량측정(저온 DSC)을 TA Instruments DSC250을 사용하여 실행하였다. 약 20 μL의 샘플을 Tzero 팬에 로딩하고 Tzero Hermetic 뚜껑으로 압착하였다. 샘플을 25℃에서 2 분 동안 평형화한 다음, 5℃/분으로 -60℃까지 냉각하고, 2 분 동안 평형화한 다음, 5℃/분으로 25℃까지 가열하였다. 열 흐름 데이터를 종래 모드에서 수집하였다.
5.4.6 결과
(a) 동결-해동 연구 온도 프로파일
생성물 온도는 동결 및 용융 동안 완충액의 열 전달 제한 및 상 전이로 인해 정확히 선반과 일치하지 않았다. 전체 평균 속도를 계산하기 위해 주기의 대표적인 부분에 대해 생성물이 거의 25℃ 및 -60℃였을 때 사이의 기간을 사용하여 결정된 평균 속도는 표 17에 요약되어 있다.
예상된 바와 같이, 에너지가 동결 동안 방출됨에 따라 생성물이 대략 -10℃에서 선반 온도보다 약간 더 따뜻한 온도에서 특징적 상향 스파이크가 있다. 유사하게, 생성물은 약 0℃에서 얼음의 용융 동안 선반에 비해 약간 더 낮은 온도로 있었다. 하기 섹션은 프로브 온도 데이터를 나타낸다. 게다가, 선반 및 프로브에 대한 속도(즉 온도 및 시간의 5 점 기울기)는 저속 및 고속에 대해 달성된 실제 속도를 나타내는 FT/FT 및 SF/SF에 대해 제시된다.
고속 동결 평균 속도는 약 1℃/분으로 제한되었고 고속 해동 평균 속도는 약 0.8 내지 1℃/분으로 제한되었다.
실제 생성물 온도의 '빠른' 속도는 동결 약 1 시간 및 해동 1.5 시간이었다. '느린' 속도는 약 0.12℃/분으로 동결 및 해동 둘 다 약 11 시간이 걸렸다.
표 17: 동결 및 해동 주기 동안 실제 생성물 온도 및 속도
Figure pct00031
(b) 고속 동결/고속 해동(FF/FT)
도 20a는 FF/FT에 대한 선반 및 프로브 온도 프로파일을 나타낸다. 시험실 일정 목적을 위해 일부 주기 동안 더 긴 동결 유지가 있었다.
고속 동결 평균 속도는 약 1℃/분으로 제한하였고 고속 해동 평균 속도는 약 0.8 내지 1℃/분으로 제한하였다.
첫번째 주기의 동결된 부분 동안의 온도 스파이크는 기기 스파이크인 것으로 보인다. 3번째 주기에서 실온 가까이의 스파이크는 주기를 계속하기 위한 시스템의 수동 재설정 때문이었으며 10℃에 가까운 디폴트로 선반 온도 설정시 일시적(몇 분 동안) 감소와 연관되었다.
도 20b는 선반 및 생성물 온도 및 이들의 속도(평균 25 분 초과) 둘 다의 확대보기를 나타낸다. 실제 속도는 생성물 및 선반의 평균 온도가 매우 신속한 동결 및 용융에 의해 영향을 받고 프로그램화된 빠른 속도로 이들 과정 동안 열 전달의 제한과 관련되었음을 나타낸다. 생성물의 용융은 선반에서 열을 추출하고 용융 온도 범위 동안 선반 온도 속도의 감소를 초래하였다.
(c) 고속 동결/저속 해동(FF/ST)
도 21은 FF/ST에 대한 선반 및 프로브 온도 프로파일을 나타낸다. FF/ST의 첫번째 주기를 콘덴서의 부하를 감소시키기 위한 시도로 25℃에서 -55℃로 그리고 다시 25℃로 실행하였다. 이후 4 회 주기를 -60℃로 설정하였다. 동결 및 해동에 대한 시간을 업데이트하지 않았으며 목표 속도를 1.6℃/분(1.5℃/분)에서 0.13℃/분(0.125℃/분)까지 증가시켰다. 이 차이는 원래 목표 속도에서 10% 미만으로 무시할 수 있다. 3번째 주기에서 실온 근처의 스파이크는 주기를 계속하기 위한 시스템의 수동 재설정 때문이었으며 10℃에 가까운 디폴트로 선반 온도 설정시 일시적(몇 분 동안) 감소와 연관되었다.
(d) 저속 동결/고속 해동(SF/FT)
도 22는 SF/FT에 대한 선반 및 프로브 온도 프로파일을 나타낸다. 시험실 일정 목적을 위해 마지막 주기 동안 더 긴 동결 유지가 있었다.
(e) 저속 동결/저속 해동(SF/ST)
도 23은 FF/FT에 대한 선반 및 프로브 온도 프로파일을 나타낸다. 시험실 일정 목적을 위해 3번째 주기 동안 더 긴 동결 유지가 있었다. 3번째 주기에서 실온 가까이의 스파이크는 주기를 계속하기 위한 시스템의 수동 재설정 때문이었으며 10℃에 가까운 디폴트로 선반 온도 설정시 일시적(몇 분 동안) 감소와 연관되었다.
도 24는 선반 및 생성물 온도 및 이들의 속도(평균 25 분 이상) 둘 다의 확대보기를 나타낸다. 속도는 평균 생성물 온도가 동결 및 용융 과정에 의해 영향을 받았지만 선반 온도 속도가 (FT/FT와 비교하여) 이러한 저속에서 안정하게 유지되었음을 나타낸다.
5.4.7 시험관내 상대적 효능
시험관내 상대적 효능(IVRP) 결과는 대조 dPBS 및 수크로스 제형이 있는 변형된 dPBS 둘 다에서 작제물 II에 대한 동결 및 해동의 고속 및 저속의 모든 순열에 대해 대조군 및 방법 변동성 내에서 유사하였다(표 18).
표 18: IVRP 결과
Figure pct00032
5.4.8 SYBR 염료 결합 및 SEC에 의한 유리-DNA 결과
유리 DNA에 대한 전체 결과 요약은 표 19에 제공되어 있다. 범위는 100%에 대한 GC/mL(OD) 값 또는 100% 기준에 대한 열-스트레스 결과에 기반한 백분율을 나타내는 SYBR Gold 결합에 따라 유리 DNA에 대해 제공된다.
표 19: SYBR Gold에 의한 유리 DNA 및 SEC 결과에 의한 프리-피크
Figure pct00033
SEC 결과 프로파일의 확대 보기는 도 25, 도 26, 및 도 27에 제시되어 있다. 260 nm UV 채널을 사용하여 유리 DNA(이전 피크) 및 일부 단백질(닫힌 프리-피크)을 나타내는 퍼센트 프리-피크를 결정하였다. 피크 및 이들의 용출 위치의 스펙트럼 분석은 프리-피크가 주로 유리 DNA임을 나타낸다. 주요 피크 뒤의 피크는 부형제와 관련된다.
5.4.9 동적 광 산란 결과
DLS 결과는 도 28에 dPBS에서 작제물 II, 및 도 29에 수크로스가 있는 변형된 dPBS에서 작제물 II에 대해 제시되어 있다. 누적률 적합에 대한 직경 결과 및 정규화 적합에 의한 주요 피크는 표 20에 제시되어 있다.
누적률 직경은 27.1 내지 27.5 nm(대조군 = 27.5) 범위였고 정규화 적합 결과는 28.2 내지 28.7 nm(대조군 = 28.4) 범위였다. 누적률 데이터의 범위는 0.4 nm였고 정규화 데이터의 범위는 0.5 nm였다. 반복 측정에 대한 평균 직경의 표준 편차는 누적률 적합의 경우 약 0.2였고 정규화 적합의 경우 최대 0.8 nm였다.
임의의 동결-해동 조건 후 dPBS에서 작제물 II에 대한 방법 변동성 내에서 크기 분포의 변화는 없었다. 누적률 직경은 26.7 내지 28.4 nm(대조군 = 26.8) 범위였고 정규화는 26.2 내지 27.6 nm(대조군 = 27.1) 범위였다. 누적률 데이터의 범위는 1.7 nm였고 정규화 데이터의 범위는 1.4 nm였다. 반복 측정에 대한 평균 직경의 표준 편차는 누적률 적합의 경우 약 0.1이었고 정규화 적합의 경우 최대 0.4 nm였다.
임의의 동결-해동 조건 후 수크로스가 있는 변형된 dPBS에서 작제물 II에 대한 방법 변동성 내에서 크기 분포의 변화는 없었다. 누적률 직경은 27.7 내지 28.5 nm(대조군 = 28.0) 범위였고 정규화는 28.2 내지 31.3 nm(대조군 = 30.3) 범위였다. 누적률 데이터의 범위는 0.8 nm였고 정규화 데이터의 범위는 3.1 nm였다. 수크로스가 있는 변형된 dPBS에서 반복 측정에 대한 평균 직경의 표준 편차는 누적률 적합의 경우 약 0.2 nm였고 정규화 적합의 경우 최대 1.3 nm였다.
약 28 nm의 수크로스의 누적률 직경은 27 nm의 dPBS보다 약간 더 높았다(도 30). 30 nm의 정규화 적합 직경은 또한 도 31에 제시된 바와 같이 약 27 nm의 dPBS에서보다 약간 더 높았다. 이 매우 약간 겉보기 크기 증가는 수화에 대한 수크로스의 영향 및 이에 따른 캡시드의 수력학적 거동과 관련될 수 있다.
표 20: DLS 직경 결과
Figure pct00034
5.4.10 제형의 열적 특성
도 32에 제시된 dPBS 제형 완충액에 대한 저온 DSC 써모그램은 냉각 동안 완전히 결정화되지 않은 비정질 염화 나트륨의 결정화로 인해 약 -41℃에서 작은 발열성을 갖는다. 부형제의 재결정화는 유리 바이알 파손에 연루되었다. 이는 CZ 바이알(COP 재료)의 경우 문제가 되는 것으로 예상되지 않는다. 게다가, 이 시나리오에 대한 문헌 참조는 바이알 파손이 유리 바이알의 경우에도 우려가 되지 않을 수 있음을 나타낸다(Milton 등, 2007, Journal of Pharmaceutical Sciences, 96(7)). 미분해 저온 숄더가 있는 공융 용융물은 -22.1℃에서 피크 이어서 얼음의 용융으로 인한 큰 흡열성 피크로 관찰되었다. 공융 용융물은 염화 나트륨 및 물 공융과 일치한다. 동일한 공융 및 재결정화 이벤트는 염화 나트륨에 대한 문헌에 보고되었다(Milton 등, 2007, Journal of Pharmaceutical Sciences, 96(7)).
'수크로스가 있는 변형된 dPBS' 완충액에 대한 저온 DSC 써모그램은 도 33에 제시되어 있으며 -45.1℃에서 유리 전이 이어서 얼음의 용융으로 인한 큰 흡열성 피크를 가졌다. 다른 전이는 관찰되지 않았다. 유리 전이는 유리-형성 부형제인 수크로스의 존재와 일치한다. 공융 용융물의 결여는 수크로스 부형제에 의한 결정화의 억제 및 비정질 점성 상태의 유지와 일치한다. 이러한 결과는 더 낮은(3%) 수크로스와 더 높은(0.25 M) 염화 나트륨 함량에 대해 보고된 결정화의 억제 및 공융 용융물의 결여와 일치한다(Milton 등, 2007, Journal of Pharmaceutical Sciences, 96(7)).
5.4.11 결론
이 연구의 이러한 결과는 저속(0.12℃/분 또는 약 11 시간 초과) 및/또는 고속(1℃/분 또는 약 1 시간 초과)로 최대 5 회 동결/해동 주기가 dPBS 및 '수크로스가 있는 변형된 dPBS' 제형에서 작제물 II에 대한 수용할 수 있는 허용가능한 이탈이었음을 입증하였다.
동결/해동 속도는 BDS의 병 또는 DP의 바이알에 대해 발생할 수 있는 예상된 속도를 괄호로 묶기 위해 선택되었다. 다중 이탈을 뒷받침하기 위해 클리닉에서 발생할 수 있는 것 이상으로 샘플에 스트레스를 가하기 위해 다중 주기를 적용하였다.
효능 결과는 dPBS 및 수크로스가 있는 변형된 dPBS 제형 둘 다에서 작제물 II에 대한 동결 및 해동의 고속 및 저속의 모든 순열에 대하여 대조군 및 방법 변동성 내에서 유사하였다.
임의의 동결-해동 조건 후 dPBS에서 작제물 II, 또는 수크로스가 있는 변형된 dPBS 제형에서 작제물 II에 대한 방법 변동성 내에서 크기 분포의 변화는 없었다.
동결-해동 스트레스는 동결보호 부형제 없이 제형화될 때 작제물 II(AAB8)의 소량의 캡시드를 파괴하여 소량의 유리 DNA의 방출을 초래하는 것으로 제시되었다.
dPBS 제형에서 작제물 II의 경우, 모든 동결-해동 스트레스 조건에 대해 유리 DNA의 증가가 있었다(1.7%에서 최대 6.9%까지). 증가는 유사한 규모였으며 빠르거나 또는 매우 저속 동결-해동 속도의 상이한 순열에 대해 명확하게 구분되지 않았다.
가장 안정한 제형은 유리 DNA의 증가가 관찰되지 않은 수크로스가 있는 변형된 dPBS 제형이었다. 이 제형에 대한 공융 용융물의 결여는 동결보호 수크로스 부형제에 의한 결정화의 억제 및 비정질 점성 상태의 유지와 일치한다.
5.5 실시예 5: 제형 A 및 제형 B의 주사 열량측정 프로파일 비교
이 실시예는 제형 A 및 제형 B의 열량측정 프로파일 비교를 나타낸다.
연구는 섹션 4.5.9, 섹션 5.4.5(f) 및/또는 본원에 제공된 다른 관련 섹션에 제시된 방법과 동일하거나 또는 유사한 절차에 의해 수행하였다. 도 34에 제시된 바와 같이, 제형 B는 결정화/공융 전이를 억제하여 동결/해동 스트레스에 대한 완건성을 개선하는 비정질 부형제를 함유하였다.
5.6 실시예 6: 제형 A에 대한 각 동결/해동 주기에 따른 유리 DNA증가
이 실시예는 제형 A에 대한 각 동결/해동 주기에 따른 유리 DNA 증가를 나타낸다.
연구는 섹션 4.5.1, 섹션 5.4.5(c) 및/또는 본원에 제공된 다른 관련 섹션에 제시된 방법과 동일하거나 또는 유사한 절차에 의해 수행하였다. 도 35에 제시된 바와 같이, 제형 A에 대한 각 동결/해동 주기 동안 유리 DNA의 작고 일치하는 증가가 검출되었다.
5.7 실시예 7: 30 회 동결 및 해동 주기 후 제형 A 및 제형 B의 효능 비교
이 실시예는 30 회 동결 및 해동 주기 후 제형 A 및 제형 B의 효능 비교를 나타낸다.
연구는 섹션 4.5.1, 섹션 5.4.5(c) 및/또는 본원에 제공된 다른 관련 섹션에 제시된 절차와 유사한 절차에 의해 수행하였다.
실시예는 녹색 형광 단백질에 대한 유전자가 있는 AAV8에 대해 수행하였다. 동결-해동 주기를 사용하여 수송 및 보관 물류 온도 변화를 시뮬레이션하고 또한 '가속된' 스트레스로 사용하여 제형 최적화 작업을 위한 AAV의 분해를 강제하였다. 도 36에 제시된 바와 같이, '4% 수크로스가 있는 변형된 dPBS' 제형 B(진회색 막대)는 30 회 동결-해동 주기 후 효능을 유지하였다. 대조적으로 참조 제형(dPBS, 연회색 막대) 효능은 15 내지 30 회 동결-해동 주기 후 66% 내지 72%로 감소하였다.
화학적 및 물리적 분해, 염의 결정화(표면에 노출되어 효능 손실 초래), 및 낮은 점도(더 낮은 점도는 더 높은 분자 이동성 및 반응 속도를 초래함)를 초래하는 산성 pH로의 이동은 참조 DPBS 제형에 대한 효능 손실의 원인일 수 있다. 이러한 분해 경로는 '4% 수크로스가 있는 변형된 dPBS' 제형에서 완화될 수 있다.
5.8 실시예 8: 제형 A 및 제형 B의 흡착 손실 비교
이 실시예는 제형 A 및 제형 B의 흡착 손실을 비교하는 방법을 나타낸다.
AAV 의약품 설계 및 투여 구성요소에 대해 접촉 물질이 고려되어야 한다. 도 37에 제시된 바와 같이, 제형 B에서 비정질 부형제는 AAV의 유리 바이알에 대한 흡착 손실을 변화시키지 않는다. 흡착 손실은 유리 바이알에서 발생하였지만 COP 바이알에 대해서는 검출되지 않았다.
5.9 실시예 9: 제형 A 및 제형 B의 장기간 안정성 비교
이 실시예는 제형 A 및 제형 B의 장기간 안정성 비교를 나타낸다.
연구는 섹션 4.5.3 및/또는 본원에 제공된 다른 관련 섹션에 제시된 절차와 동일하거나 또는 유사한 절차에 의해 수행하였다. 도 38 및 54에 제시된 바와 같이, 제형 A 및 B는 -80℃에서 유사한 장기간 동결 안정성을 가졌으며, 제형 B는 또한 -20℃에서 안정하였다. '4% 수크로스가 있는 변형된 dPBS' 제형 B는 -20℃ 및 -80℃에서 12 개월 동안 효능을 유지하였다. 참조 제형 A(dPBS)는 -80℃ 보관에 대한 비교기로서 제시된다.
5.10 실시예 10: 제형의 물리화학적 특성 비교
이 실시예는 상이한 작제물 II 제형 완충액 후보의 pH, 유리 전이 온도(Tg'물리화학적 특성의 특성화를 나타낸다. 작제물 II는 현재 동결된 제형에 보관되도록 설계되어 있다. 완충액 pH에 대한 동결 및 냉동고 온도 변동의 영향은 -20℃ 자동 성에 제거(-20℃ AD) 냉동고에서 저온 pH 프로브를 사용하여 pH 및 온도를 실시간 추적함으로써 조사하였다. 동결 및 해동시 제형의 상 변화는 열량측정으로 평가하였다. 이 연구의 결과는 상이한 규모의 pH 이동이 제형 완충액 조성에 따라 발생하였으며, 이는 의약품 장기간 보관을 위한 안정한 pH의 임계를 고려해 볼 때 간주해야 할 주요 인자임을 나타낸다. 게다가, 상이한 제형 완충액의 유리 전이 온도는 또한 제형 완충액 조성에 따라 달라졌다. 낮은 Tg'는 잠재적인 물리적 및/또는 화학적 분해를 위한 분자 이동성을 최소화하도록 용액을 완전히 고형화하기 위해 더 낮은 보관 온도를 필요로 한다. 모든 완충액의 삼투압 농도 및 밀도는 작제물 II 지시에 대해 수용할 수 있는 범위 내에 있었다. 이 특성화 연구는 물리화학적 특성에 기반하여 작제물 II 제형 완충액 스크리닝에 대한 정보를 제공한다.
5.10.1 도입
생물제제는 종종 보관 동안 의약품을 안정화하기 위해 다양한 부형제로 이루어진 완충액에 보관된다. 생성물 안정성을 보장하기 위해 목표 사양 범위 내에서 완충액 pH 및 삼투압 농도를 유지하는 것이 중요하다. 작제물 II 의약품은 -80 내지 -20℃의 동결 상태에서 보관하는 것이 목표이다. 저속 동결 동안 물의 결정화는 생물제제의 안정성에 영향을 미칠 수 있는 부형제의 농도를 초래할 수 있다. 생물제제의 안정성에 영향을 미칠 수 있는 상 분리 또는 pH 이동이 또한 발생할 수 있다.
이 연구에서, 제형 완충액 pH 안정성에 대한 동결 및 온도 이탈의 영향을 조사하였다. 작제물 II는 현재 dPBS 및'수크로스가 있는 변형된 dPBS 제형에 보관되어 있다. 동결 스트레스에 대한 pH를 안정화하는 데 있어서 완충액 구성요소 및 농도의 영향을 예시하였다. 게다가, Tris 완충 염수(TBS) 기반 제형을 또한 AAV에 대한 잠재적인 대체 제형으로 평가하였다.
5.10.2 동결-해동 연구 결과 요약
전반적으로, 데이터는 PBS-기반 제형 완충액이 동결 및 온도 변동에 반응하여 수용할 수 있는 pH 이동을 나타내었음을 제시하였다. 4% 및 6% 수크로스를 첨가하면 최대 150 mM의 이온 강도를 갖는 PBS-기반 완충액에 대한 pH 이동 규모를 완화할 수 있다. Tris-기반 제형 완충액은 동결시 하나의 pH 단위 이동을 나타내었다. 동결 스트레스에 대한 pH를 안정화하는 데 있어서 완충액 구성요소 및 농도의 영향을 조사하였다. 테스트된 모든 제형은 표 21에 나열되어 있다.
표 21: 상이한 제형 완충액 조성 요약
Figure pct00035
5.10.3 정의 및 약어
dPBS: 듀벨코의 포스페이트 완충 염수(포스페이트 수준이 정규 PBS보다 약간 더 낮음). dPBS가 언급된 이 보고서에서 이는 0.001% 폴록사머 188을 또한 함유하는 dPBS 완충액을 암시적으로 설명한다는 것에 주목한다.
유리 전이 온도(Tg')
-20℃ 자동 성에 제거 냉동고: -20℃ AD. 냉동고는 온도를 -20에서 -6℃로 올린 다음 4 시간마다 다시 -20으로 낮춤으로써 성에가 발생하는 것을 방지한다. 1 회 성에 제거 주기(-20℃ → -6℃ → -20℃)는 약 1 시간이 걸린다.
5.10.4 재료
표 22: 부형제 정보 요약
Figure pct00036
5.10.5 장비
pH 미터: Mettler Toledo SevenExcellence, Asset Tag 1000
저온 pH 프로브: INLAB COOL PRO-ISM. 이 pH 프로브는 -30℃에 이르기까지 pH를 검출할 수 있다.
저울: Mettler Toledo, XSR4002S, Asset Tag 0971(더 큰 질량 계량용)
저울: Mettler Toledo, XSR105, Asset Tag 1020(더 작은 질량 계량용)
-20℃ AD 냉동고: VWR 10819-664, Asset Tag 1213
TA Instruments 시차 주사 열량계, DSC250/RCS90, 일련 번호 DSC2A-00980, Asset Tag 0866.
밀도계: Anton Paar DMA500 밀도계, Asset Tag 1087
삼투압계: Advanced Instruments, Asset Tag 0472
5.10.6 방법
(a) 실시간 완충액 pH 추적
상이한 제형 완충액의 pH를 -30℃에 이르기까지 pH를 검출할 수 있는 INLAB COOL PRO-ISM 저온 pH 프로브로 모니터링하였다. 1 밀리리터 완충액을 15 mL Falcon 튜브에 넣은 다음 pH 프로브를 완충액에 담궜다. 파라필름 소각을 사용하여 Falcon 튜브 및 pH 프로브 사이의 간격을 밀봉하여 오염 및 증발을 방지하였다. Falcon 튜브와 함께 프로브를 -20 AD 냉동고에 넣었다. 완충액의 pH 및 온도를 약 20 시간 동안 또는 pH 대 온도 거동이 반복 패턴을 달성할 때까지 2.5 분마다 기록하였다. 자동 성에 제거 과정에 의해 야기한 온도 변화는 완충액 pH 안정성에 대한 스트레스 조건을 생성하였다.
(b) 시차 주사 열량측정
저온 시차 주사 열량측정(저온 DSC)은 TA Instruments DSC250을 사용하여 시행하였다. 약 20 μL의 샘플을 Tzero 팬에 로딩하고 Tzero Hermetic 뚜껑으로 압착하였다. 샘플을 25℃에서 2 분 동안 평형화한 다음, 5℃/분으로 -60℃까지 냉각시키고, 2 분 동안 평형화한 다음, 5℃/분으로 25℃까지 가열하였다. 열 흐름 데이터를 종래 모드에서 수집하였다.
(c) 삼투압 농도
삼투압계는 삼투압 농도를 측정하기 위해 어는점 내림 기술을 사용한다. 기기 보정은 50 mOsm/kg, 850 mOsm/kg, 및 2000 mOsm/kg NIST 추적가능한 표준을 사용하여 수행하였다. 290 mOsm/kg의 참조 용액을 사용하여 삼투압계의 시스템 적합성을 결정하였다.
(d) 밀도
밀도는 참조로서 물을 사용하여 Anton Paar DMA500 밀도계로 측정하였다. 밀도계를 물로 세척한 다음 메탄올로 세척한 후 샘플 사이에서 공기 건조시켰다.
5.10.7 결과
(a) 실시간 완충액 pH 추적
제형 완충액의 pH는 장기간 보관 동안 생물학적 의약품 안정성을 유지하는 데 중요하다. 일부 부형제 구성요소는 온도가 공융점 미만으로 감소할 때 침전되어, 완충액 pH 이동을 야기하고 잠재적으로 의약품 안정성에 영향을 미칠 수 있다. 저온 pH 프로브를 사용하여, 8 개 제형 완충액의 온도에 따라 pH 변화를 모니터링하였다. 4% 수크로스가 있는 변형된 dPBS인 제형 #2의 pH 및 온도를 모니터링하는 예가 도 39에 제시되어 있다. 안정화에 도달한 후 모든 제형의 pH는 도 40에 있다.
PBS-기반 제형 #1-7은 온도가 0에서 -18℃까지 감소함에 따라 pH가 감소하는 경향을 나타내었다(도 41). 제형 #1(dPBS)은 PBS-기반 제형 #1-7 중에서 가장 큰 규모의 pH 이동인 7.4에서 4.2로의 3 pH 단위 감소를 나타내었다(도 42). 포스페이트-기반 제형에서 이염기성 인산 나트륨은 용액 동결시 침전되며, 3 pH 단위 변화는 이전 보고서와 일치한다(Zbacnik, 2017, Journal of Pharmaceutical Sciences, 106(3):713 - 733). 그러나, 제형 #2-7의 pH는 4% 내지 6% 수크로스가 용액에 첨가된 경우 1 pH 단위만을 감소시켰다. 이전 연구는 트레할로스 및 만니톨이 특정 조건 하에 완충 염 결정화를 억제하고, 동결 용액을 비정질 상태로 만들고, 공융 용융물을 억제함으로써 pH 이동 규모를 약화시킬 수 있음을 나타내었다(Thorat and Suryanarayanan, 2019, Pharmaceutical Research 26(7):98) PBS-기반 제형의 pH 이동을 약화시키는 수크로스의 메커니즘을 예시하기 위해, 모든 제형의 상 전이 거동을 DSC에 의해 특성화하였다.
Tris-기반 제형 #8의 pH는 7.6에서 8.7로 증가하였으며, 이는 온도 감소에 반응하여 Tris 변화의 pKa(-0.03/℃)와 일치한다(Zbacnik, 2017, Journal of Pharmaceutical Sciences, 106(3):713 - 733). Tris 염은 용액일 동결될 때 결정화되지 않으므로 수크로스는 이 제형에서 동결보호제로서 기능을 한다.
(b) 열적 분석
도 43에 제시된 제형 #1(dPBS)에 대한 저온 DSC 써모그램은 -22.1℃에서 피크 이어서 얼음의 용융으로 인한 큰 흡열성 피크가 있는 공융 용융물을 갖는다. 다른 전이는 관찰되지 않았다. 공융 용융물은 염화 나트륨 및 물 공융과 일치한다. 도 43에 제시된 제형 #1에 대한 저온 DSC 써모그램은 냉각 동안 완전히 결정화되지 않은 비정질 염화 나트륨의 결정화로 인해 약 -43℃에서 작은 발열성을 갖는다.
도 44에 제시된 제형 #2(수크로스가 있는 변형된 dPBS)에 대한 저온 DSC 써모그램은 -44.83℃에서 유리 전이 이어서 얼음의 용융으로 인한 큰 흡열성 피크를 갖는다. 다른 전이는 관찰되지 않았다. 유리 전이는 유리-형성 부형제인 수크로스의 존재와 일치한다. 공융 용융물의 결여는 수크로스 부형제에 의한 결정화의 억제 및 비정질 점성 상태의 유지와 일치한다. 이러한 결과는 더 낮은(3%) 수크로스와 더 높은(0.25 M) 염화 나트륨 함량에 대해 보고된 결정화의 억제 및 공융 용융물의 결여와 일치한다(Milton 등, 2007, Journal of Pharmaceutical Sciences, 96(7)).
제형 #2-7은 인산 나트륨 이염기성 무수물, 일염기성 인산 칼륨, 또는 수크로스에 대한 구성요소는 동일하지만 농도는 상이하다. 따라서 제형 #3-7은 제형 #2와 유사한 상 전이 거동을 나타내었으며, -40 내지 -45℃의 유리 전이 이어서 얼음의 용융으로 인한 큰 흡열성 피크를 나타내었다(도 45). 모든 8 개 제형의 상 전이 온도는 표 21에 나열되어 있다. -41 내지 -42℃에서 더 높은 유리 전이 온도가 6% 수크로스를 함유하는 제형에서 관찰되었으며, 완충 염 결정화를 억제하는 데 있어서 수크로스의 효과를 추가로 제공한다.
(c) 삼투압 농도 및 밀도
삼투압 농도는 주사시 제형 내약성을 결정하는 주요 요인 중 하나이다. 과긴장성은 국소 불편감, 자극, 열 및 통증의 감각 등을 유발할 수 있다. 근육내 또는 피하 주사용으로 의도된 의약품의 경우 삼투압 농도 상한치는 일반적으로 600 mOsm/kg 미만으로 제어되어야 하는 것으로 권고된다(Wang, 2015, Int J Pharm, 490(1-2):308-15). 표 23에서 8 개 제형의 삼투압 농도는 276 내지 404 mOsm/kg 범위이며, 모두 근육내 또는 피하 주사에 대한 안전 한계 내에 있다. 인간 눈물의 삼투압 농도는 약 318 mOsm/Kg이다(Hill 등, 1983, Investigative Ophthalmology & Visual Science, Vol. 24:1624-1626). '안과용 제제 배합 가이드'에 보고된 대부분의 환자는 200 내지 600 mOsm/L의 삼투압 농도 범위의 용액에서 견딜 수 있다(McElhiney, 2013, Compounding Guide for Ophthalmic Preparations, 1 ed.). 모든 8 개 제형의 밀도는 표 23에 있다. 제형 2-8과 비교하여 제형 1의 밀도가 서로 유의하게 상이한 것으로 보이지 않을 수 있지만, 밀도는 수크로스 제제의 계산에 영향을 미칠 수 있다.
표 23: 열적 분석 및 생리화학적 매개변수의 요약
Figure pct00037
5.10.8 결론
이 연구의 이러한 결과는 dPBS 제형이 동결 용액에서 3 pH 단위 이동을 겪었음을 입증한다. '4 내지 6% 수크로스가 있는 변형된 dPBS 제형은 DSC를 사용한 열적 분석에 의해 입증된 바와 같이, 동결보호 수크로스 부형제에 의해 염 결정화 및 비정질 점성 상태의 유지를 억제함으로써 pH 이동을 1 pH 단위로만 약화시킬 수 있다. 이는 '수크로스가 있는 변형된 dPBS 제형'이 동결된 제형에서 용액 pH를 유지하는 데 있어서 dPBS 제형보다 우수함을 시사한다. TBS-기반 제형은 동결시 큰 pH 안정성을 입증하였으며 AAV 동결된 제형에 대한 대체 제형 완충액으로서 사용하기 위해 추가로 탐구할 가치가 있을 수 있다. 모든 8 개 제형의 삼투압 농도는 안과 및/또는 비경구 사용을 위해 수용할 수 있는 범위 내에 있다.
5.11 실시예 11: AAV의 응집은 제형 문제이다
AAV 입자 응집은 이 응집을 방지하기 위해 필요한 것으로 보고된 적어도 200 mM의 용액 이온 강도와 함께 기재되었다. 미국 특허 제9,051,542호. 그러나, 더 높은 이온 강도는 결정화 방지를 방해한다(예를 들어, Bhatangar 등, 2007, Blood, 110(9):3233-44).
AAV 입자의 응집 또는 자기-회합을 방지하기 위해 최소 이온 강도가 필요하다. (도 46). 입자 응집 또는 자기-회합을 방지하는 데 필요한 최소 이온 강도는 AAV 혈청형 의존적인 것으로 밝혀졌다. AAV8 응집은 200 mM 미만의 이온 강도에서 방지될 수 있고(도 47), AAV8과 비교하여 AAV9에 대해 더 낮은 이온 강도가 필요하다(도 48). 적은 염으로 제형화하는 능력은 동결 및 건조 제형에 유리하다. 그러나, 입자 응집의 혈청형 특이적 차이는 적어도 이온 강도의 수준과 관련하여 상이한 혈청형에 대해 상이한 제형이 필요할 수 있음을 나타낸다.
5.12 실시예 12: 제형 A 및 제형 C의 시험관내 효능 비교
이 실시예는 제형 A 및 제형 C의 장기간 안정성 비교를 나타낸다.
연구는 섹션 4.5.3 및/또는 본원에 제공된 다른 관련 섹션에 제시된 동일하거나 또는 유사한 절차에 의해 수행하였다. 제형 C는 60 mM NaCl 및 6% 수크로스를 함유하는 '수크로스가 있는 변형된 dPBS'의 변이체이다. 제형 C는 0.2 mg/mL 염화 칼륨, 0.2 mg/mL 일염기성 인산 칼륨, 3.50 mg/mL 염화 나트륨, 1.15 mg/mL 인산 나트륨 이염기성 무수물, 60.0 mg/mL(6% w/v) 수크로스, 0.001%(0.01 mg/mL) 폴록사머 188, pH 7.4를 포함한다.
도 49에 제시된 바와 같이, 제형 C는 -20℃에서 2 년 동안 안정하였다. 참조 제형 A(dPBS)는 -20℃ 보관을 위한 비교기로서 제시되고 -20℃에서 안정하지 않았다. 제형 B 및 C는 -20℃에서 필적할만하고 우수한 장기간 안정성을 가질 수 있다.
5.13 실시예 13: 작제물 II의 치료 용도
이 실시예는 작제물 II의 치료 용도를 나타낸다.
5.13.1 비임상 연구
제형 A에서 작제물 II의 치료 용도를 뒷받침하는 약리학 및 독성학 연구의 표로 작성된 요약은 표 24에 제공되어 있다.
표 22: 비임상 연구.
표 24: 비임상 연구.
Figure pct00038
Figure pct00039
Figure pct00040
Figure pct00041
신규 제조 과정을 사용하여 제조된 작제물 II의 약력학(항-VEGF Fab), 면역원성, 생체분포 및 독성은 시노몰구스 원숭이에서 3 개월 독성 연구로 평가될 수 있다. 잠재적인 대체 투여 경로(맥락막상)를 뒷받침하기 위해 이 GLP 연구를 개시하였으며 망막하 주사에 의해 작제물 II가 투여된 그룹을 포함한다. 연구는 각 눈에서 변형된 BDS 제조 과정으로 제조된 테스트 물품이 주어진 동물의 4 개 그룹 및 각 눈에서 비히클 대조군이 주어진 동물의 1 개 코호트(총 9 마리 수컷 및 7 마리 암컷)를 포함할 수 있다. 연구는 각 눈에서 2 회 50 μL 맥락막상 주사를 통해 투여된 테스트 물품의 3 개 용량[3 x 1010 GC/눈(3 x 1011 GC/mL); 3 x 1011 GC/눈(3 x 1012 GC/mL); 3 x 1012 GC/눈(3 x 1013 GC/mL)] 및 각 눈에서 단일 100　μL 망막하 전달을 통해 투여된 테스트 물품의 1 개 용량[3 x 1011 GC/눈(3 x 1012 GC/mL)]을 평가할 수 있다. 투여 3 개월 후, 동물은 완전한 최종 평가를 위해 안락사될 수 있다
이 연구는 안과 검사, 안내압 측정, 광간접 단층촬영, 안저 촬영 및 전시야 망막전위도검사를 사용하여 안구 독성에 대해 평가할 수 있다. 연구는 또한 수양액 및 혈청 내 이식유전자 산물 농도, 생체분포, 면역원성, 임상 병리, 기관 중량 및 조직병리학을 평가할 수 있다. 결과는 안전성 및 이식유전자 산물 발현의 평가를 통해 변형된 BDS 제조 과정으로 제조된 FDP의 임상 용도를 뒷받침할 수 있다.
5.13.2 임상 연구
제형 A에서 작제물 II는 현재 2 년에 걸쳐 평가되는 nAMD가 있는 성인 대상체에서 5 개 용량 코호트를 사용한 1/2a 상 인간 최초 공개 라벨 단일 상승 용량 연구에서 평가되고 있다. 1차 목적은 단일 용량 투여 후 24 주 동안 치료된 대상체에서 작제물 II의 안전성 및 내약성을 평가하는 것이다.
대상체를 5 개 용량 코호트에 걸쳐 치료하였으며, 대상체는 코호트 당 6 명(코호트 1-3) 또는 12 명(코호트 4 및 5)이다: 3　x　109 GC/눈(코호트 1), 1　x　1010 GC/눈(코호트 2), 6 x　1010 GC/눈(코호트 3), 1.6　x　1011 GC/눈(코호트 4), 및 2.5 x 1011 GC/눈(코호트 5).
안전성은 작제물 II 투여 후 초기 24 주 동안(1차 연구 기간) 주된 관심사이다. 작제물 II의 안전성 및 내약성 및 임상 효과는 안구 및 비-안구 AE 및 심각한 이상 반응(SAE), 임상 실험실 테스트(화학, 혈액학, 응고, 소변 검사), 면역원성, 안구 검사 및 영상화(BCVA, IOP, 틈새등 생체현미경검사, 간접 안저검사법, SD-OCT, 형광안저혈관조영술, 자가형광안저촬영, 및 컬러안저촬영), 및 생명 징후의 평가를 통해 모니터링될 수 있다.
1차 연구 기간의 완료 후, 대상체는 작제물 II로 치료 후 104 주(106 주)까지 안정성에 대해 계속 평가될 수 있다. 연구 종료 시, 대상체는 1/2a 상 연구 및 작제물 II 투여 후 장기간 추적(LTFU) 연구에서 5 년의 누적 기간 동안 안전성 추적을 위해 LTFU에 참여하도록 초대될 수 있다.
42 명의 대상체를 nAMD의 1/2a 상 시험에서 작제물 II에 노출시켰고, 중간 데이터를 평가하였다(코호트 5에서 마지막 등록된 대상체로부터 작제물 II 투여 후 적어도 4 주의 안전성 추적을 통해). 작제물 II 망막하 투여는 테스트된 모든 용량 수준에서 잘 견디는 것으로 보이며, 작제물 II 관련된 AE 또는 SAE는 보고되지 않았다. 망막의 얇아짐은 관찰되지 않았고, 작제물 II-관련된 AE로 간주되는 주변 시력 상실, 시력 감소 또는 광시증과 같은 안구 징후의 임의의 조짐도 없었다.
변형된 BDS 제조 과정으로 제조된 FDP의 비교가능성을 뒷받침하기 위해, 분석적 비교가능성 및 비임상 내약성의 평가 후, 신규 과정 물질(예를 들어, 제형 B)을 진행중인 1/2a 상 연구에서 추가 별도의 코호트에 도입할 수 있다. 코호트는 3 개월의 최소 노출에 의해 결정된 바와 같이 안전성의 허용여유도에 따라 테스트된 가장 높은 용량의 단일 망막하 투여가 주어진 6 명의 대상체로 구성될 수 있다(현재 코호트 5로 예상됨(2.5 x 1011 GC/눈; 1 x 1012 GC/mL). 신규 제조 과정 물질의 안전성, 내약성 및 임상 효과는 이전 1/2a 상 코호트에 대해 기재된 바와 같이 평가될 수 있고, 유익성:위험성 프로파일이 이전 임상 물질과 필적할만한 경우, 신규 FDP 물질은 확증적 3 상 연구에서의 사용을 위해 고려될 수 있다.
5.14 실시예 14: 냉장 단기간 안정성
환자가 투약을 받기로 예정될 때까지 동결 의약품을 클리식의 임상 현장 및 임시 보관소로 수송하는 물류는 지역 클리닉(비-병원 클리닉)의 문제일 수 있다. 많은 임상 현장은 의약품의 임시 보관을 위한 -80℃(≤-60℃) 냉동고가 없다. 일부 임상 현장은 -20℃ 냉동고가 있을 수 있고 앞선 실시예(예를 들어 실시예 1, 3, 및 9)는 제형 B가 실시간 안정성 데이터에 기반하여 -20℃에서 18 개월 및 외삽될 때 30 개월 동안 안정함을 나타낸다. 다른 클리닉은 신뢰할만한 냉동고가 없지만 2-8℃ 냉장고가 있을 수 있다. 따라서, 냉장고에서 의약품을 해동시킨 후, 냉장고에서 단기간(최대 9 내지 12 개월) 보관시키는 것은 물류적으로 바람직하다.
2 - 8℃ 데이터에서 수크로스가 있는 변형된 DPBS의 냉장 단기간 발생 안정성은 시험관내 효능 및 다른 품질 속성이 3.0 x 1013 GC/mL, 1.0 x 1012 GC/mL, 및 2.1 x 1011 GC/mL에서의 연구에 기반하여 적어도 9 개월 동안 유지됨을 나타낸다. 데이터는 표 25, 표 26, 및 표 27에 제시되어 있다.
2 - 8℃에서 벡터 게놈 농도, 외관, SDS-CGE에 의한 순도, DLS에 의한 크기 분포, HIAC에 의한 현미경 가시성 입자, SYBR gold에 의한 유리 DNA, pH 또는 삼투압 농도에서는 경향이 없었다. 2 - 8℃에서 장시간 후 효능에서는 감소하는 경향이 있었다. 경향 분석은 Prism 8 소프트웨어(GraphPad LLC, 캘리포니아주 샌디에이고 소재)의 단순 선형 회귀 적합을 사용하여 수행하였다. 효능 데이터 경향은 도 50에 제시되어 있다. 검은색 실선은 데이터에 대한 회귀 적합을 나타낸다: 3.0 x 1013 GC/mL(원), 1.0 x 1012 GC/mL(사각형), 및 2.1 x 1011 GC/mL(삼각형).
2 - 8℃에서 효능 손실 속도는 3 가지 연구와 유사하였으며, 두 자릿수 농도를 포괄한다. 분석은 기울기 차이가 유의하지 않았고 데이터가 개월 당 약 -2.0%의 풀링된 기울기로 적합할 수 있음을 나타내었다. 데이터는 효능이 2 - 8℃에서 9 개월 내지 12 개월 동안 수용할 수 있는 범위(>75%) 내에서 남아있을 것임을 나타낸다.
표 25: 3.0 x 10 13 GC/mL에서 수크로스가 있는 변형된 DPBS에서 작제물 II에 대한 2 - 8℃에서의 단기간 안정성(도립된 바이알)
Figure pct00042
표 26: 1.0 x 10 12 GC/mL에서 수크로스가 있는 변형된 DPBS에서 작제물 II FDP에 대한 2 - 8℃에서의 단기간 안정성
Figure pct00043
표 27: 2.1 x 10 11 GC/mL에서 수크로스가 있는 변형된 DPBS에서 작제물 II FDP에 대한 2 - 8℃에서의 단기간 안정성
Figure pct00044
5.15 실시예 15: 실온 단기간 안정성
의약품이 제조, 라벨링, 용량 준비 및 전달 동안 실온에 노출될 수 있는 기간을 짧다.
약 22℃(20.7 - 23.7℃)에서 수크로스가 있는 변형된 dPBS에서 3.0 x 1013 GC/mL로 작제물 II의 제어된 실온 단기간 발생 안정성 데이터는 표 28에 제시되어 있다. 벡터 게놈 농도, 외관, SDS-CGE에 의한 순도, DLS에 의한 크기 분포, HIAC에 의한 현미경 가시성 입자, SYBR gold에 의한 유리 DNA, pH 또는 삼투압 농도에서의 경향은 없었다. 제어된 실온에서 효능이 감소하는 경향이 있었다. 통계 분석은 Prism 8 소프트웨어(GraphPad LLC, 캘리포니아주 샌디에이고 소재)에서 비선형 회귀 함수를 사용하여 수행하였다. 효능 데이터는 선형 회귀 모델에 가장 적합하였다. 가장 적합한 기울기는 제어된 실온에서 하루에 -0.8958%였다. 실온에서 효능 경향은 도 51에 제시되어 있다. 검은색 실선은 데이터에 대한 회귀 적합을 나타내고 점선은 95% CI를 나타낸다. 전형적으로, 의약품의 제조 및 전달을 위해 최대 3 일 총 누적 노출이 필요하였다. 이 노출은 효능에서 예상된 평균 2.7% 감소에 상응하며, 이는 생성물 안정성 관점에서 수용할 수 있다.
표 28: 3.0 x 10 13 GC/mL에서 수크로스가 있는 변형된 DPBS에서 작제물 II FDP Lot 200320-314-DL7에 대한 제어된 실온에서의 단기간 안정성
Figure pct00045
5.16 실시예 16: 가속된 높은 동결 온도 이탈 조건(-15℃, -7℃, 및 -20℃ '자동-성에 제거' 냉동고)에서 평가된 제형 조성 완건성
≤-20℃의 의도된 보관 온도 이탈 범위보다 더 높은 온도에서 유지될 때 제형 B에 대한 상대 안정성을 결정하기 위해 여러 제형 변경의 효능을 연구하였다.
표 29의 첫번째 행은 대조군으로서 제형 B에 대한 결과를 나타낸다. 결과는 -15℃, -7℃ 및 -20℃ '자동-성에 제거' 냉동고(4 시간마다 -20℃에서 최대 약 -6℃까지 변경)에서 6 개월의 이탈을 나타낸다. 효능은 6 개월 후 모든 조건에 대해 수용할 수 있는 수준에서 유지되었으며, 이는 제형 B가 강력한 안정성을 가짐을 입증한다.
제형 D는 유의하게 더 높은 수크로스 및 더 낮은 염을 갖는 제형 B의 변형이다. 제형 E는 적당히 더 높은 수크로스 및 더 낮은 염을 갖는 제형 B의 변형이다. 이러한 제형은 둘 다 -15℃에서 6 개월 후 제형 B와 유사한 효능을 가졌으며, 이는 제형 B가 강력한 안정성 설계-공간을 가짐을 입증한다. 이미 제형 B에서보다 더 높은 수크로스 및 더 낮은 염은 제형 B의 안정성을 개선하지 않았으며, 이는 이 광범위한 범위 내의 조성이 안정성을 위해 수용할 수 있음을 나타낸다.
제형 F는 pH 변동을 최소화하거나 또는 상쇄하기 위한 시도로 5 mM로 첨가된 TRIS 완충액으로 변형된 제형 B이다. 이 제형은 동결시 포스페이트의 pH가 감소하고 TRIS의 pH가 증가하므로 둘의 조합이 더 안정할 수 있다는 가설에 기반하여 연구하였다. 이 제형은 또한 -15℃에서 6 개월 후 제형 B와 유사한 효능을 가졌다.
제형 G는 포스페이트 완충액 대신에 TRIS 완충액, 낮은 수준에서 NaCl을 대체한 황산 나트륨, 더 높은 수준의 수크로스, 및 더 높은 폴록사머 188을 함유하는 신규 제형이다. 이 제형은 -7℃에서 6 개월 후 제형 B와 유사한 안정성을 갖는다.
이러한 데이터는 제형 B에 첨가된 수크로스의 수준(≥4%)이 주요 동결보호 부형제임을 입증한다. 이 수준의 수크로스는 효능 손실을 최소화하기 위해 pH 이동 및 염 결정화를 완화하기에 충분하다. 수크로스는 염화 나트륨 또는 황산 나트륨-기반 염 제형으로 동결보호되고 염은 제형에 적합하다. 염화 나트륨을 황산 나트륨으로 대체함으로써 더 낮은 염을 갖는 제형은 안정성이 개선되지 않았다. 더 낮은 염 또는 더 높은 수크로스를 사용한 추가의 안정성 개선은 관찰되지 않았으며 이는 4%가 100 mM 염화 나트륨으로 동결보호 특성을 제공하는 수크로스의 강력한 수준임을 입증한다. 포스페이트를 TRIS 완충액으로 치환하는 것은 안정성을 개선시키지 않았고 완충액은 안정된 수크로스 및 염-기반 제형에 사용될 수 있었다. 더 높은 수준의 폴록사머 188도 안정성을 개선시키지 않았다.
표 29: 가속된 높은 동결 온도 이탈 조건(-15℃, -7℃, 및 -20℃ '자동-성에 제거' 냉동고)에서 평가된 제형 조성 완건성
Figure pct00046
5.17 실시예 17: 제형 A 및 제형 B의 방출 특성화 비교
이 실시예는 상기 실시예 2의 업데이트된 버전이다.
이 실시예는 제형 A 및 제형 B의 방출 특성화 비교를 나타낸다.
5.17.1 방출 및 특성화 분석 방법 및 사양
이 섹션은 제형 A에서 최조 의약품(FDP)의 하나의 로트 및 신규 '4% 수크로스 및 0.001% 폴록사머 188이 있는 변형된 DPBS, pH 7.4'(제형 B)에서 FDP의 하나의 로트에 대한 분석 증명서의 로트 방출 결과의 비교를 나타낸다. 방출 테스트 이외에 동적 광 산란(DLS)에 대한 일상적 특성화 테스트 결과를 비교할 수 있다. 비교가능성을 뒷받침하기 위한 제안된 테스트 및 허용 기준의 패널은 표 30에 제시되어 있다.
표 30: FDP의 분석적 비교가능성을 수행하기 위해 사용될 수 있는 방출 및 특성화 방법에 대한 허용 기준
Figure pct00047
5.17.2 FDP 제형 변화에 대한 배경
동결/해동 주기에 대한 FDP 안정성의 장기간 동결 보관 안정성 및 완건성을 개선하기 위해 '4% 수크로스 및 0.001% 폴록사머 188이 있는 변형된 DPBS, pH 7.4'(제형 B)를 개발하였다. 제형 변화는 4% w/v의 동결보호 부형제 수크로스의 첨가 및 적절한 긴장성을 유지하기 위해 137 mM에서 100 mM까지 염화 나트륨 수준의 감소를 수반하였다. 다른 제형 부형제 및 수준은 동일하였다. '4% 수크로스 및 0.001% 폴록사머 188이 있는 변형된 DPBS, pH 7.4' FDP 제형에서 FDP의 생성은 DPBS(제형 A) 중 BDS에 더 농축된 수크로스 스파이크 용액을 첨가하여 조성을 최종 조성으로 조절함으로써 달성되었다. 조성은 또한 접선 유동 여과 완충액 교환을 사용하여 달성될 수 있다.
5.17.3 FDP 제형 과정에 대한 변화 평가
스파이크, 혼합, 및 여과 단계는 유사한 과정 단계, 취급, 및 두 과정에 대한 접촉 표면을 수반하였다. 스파이크 과정은 1.37-배 희석을 초래하였다. 그런 다음 목표 농도에 대한 후속 희석이 있었다.
5.17.4 임상 안전성 및 효능에 대한 FDP 제형 변화의 영향 평가
FDP 제형 B는 DPBS 제형 A와 비교할 때 안전성 또는 효능에서 차이가 없을 수 있다. 생성물 품질 프로파일 및 방출 사양은 일반적인 속성인 삼투압 농도를 제외하고 동일하였다.
DPBS 제형 A에 대한 삼투압 농도는 240 - 340 mOsm/kg이었고 제형 B에 대한 삼투압 농도는 295 - 395 mOsm/kg이었다. 이는 제형 B에서 수크로스 및 염화 나트륨 수준의 조정 때문이었다. 문헌에 기반하여 이러한 약간 더 높은 삼투압 농도 값을 갖는 수포에 대한 재흡수 시간의 영향은 없을 수 있다(예를 들어, Negi and Marmour, 1984 Invest Ophthalmol Vis Sci. 25(5):616-20 참조).
5.17.5 분석적 방출 방법으로 제형 A에서 제형 B로의 변화에 대한 영향 평가
분석 방법의 평가는 이들이 목적에 적합한 것임을 나타내었다. 절차에 대한 약간의 변형은 신규 FDP를 수용할 수 있다(표 31).
표 31: 분석적 방출 방법에 영향을 미치는 신규 FDP 조성 평가
Figure pct00048
5.18 실시예 18: 제형 A 및 제형 B의 안정성 비교
이 실시예는 제형 A 및 제형 B의 안정성 비교를 나타낸다. 이 실시예는 상기 실시예 3의 업데이트된 버전이다.
신규 제형 B는 동결/해동 주기 및 온도 스트레스시 캡시드의 파괴 및 소량의 유리 DNA의 방출로부터 보호한다. 현재 24 개월의 장기간 안정성 연구는 시험관내 상대적 효능 및 다른 품질 속성이 FDP 제형 B에서 -80℃(≤-60℃) 및 ≤-20℃에서 유지됨을 입증하였다.
이용가능한 동결/해동 데이터, 온도 스트레스 데이터, 및 장기간 안정성 데이터는 신규 제형에서 유사하거나 또는 개선된 안정성을 나타내었다.
신규 FDP 제형 B에서 FDP 로트는 -80℃(≤-60℃) 및 ≤-20℃에서 장기간 안정성에 대해 설정될 수 있고 안정성 경향 데이터는 신규 FDP에 대한 만료 기간이 규정을 준수하는지를 보장하기 위해 안정성 프로그램의 일부로서 모니터링될 수 있다.
5.18.1 DPBS 및 신규 FDP 제형 B에서 작제물 II에 대한 동결/해동 연구
DPBS 및 신규 FDP 제형 B에서 작제물 II에 대한 동결/해동 주기의 영향을 평가하기 위해 연구를 수행하였다. 동결/해동 속도는 BDS의 병에 대한 제조 동안 또는 DP의 바이알에 대한 공급망 또는 클리닉에서 발생할 수 있는 예상된 속도를 괄호로 묶기 위해 선택되었다. 클리닉에서 발생할 수 있는 것 이상으로 샘플에 스트레스를 가하기 위해 다중 주기를 적용하였다.
연구 결과는 제형 B가 느리게(0.12℃/분 또는 약 11 시간 초과) 및/또는 빠르게(1℃/분 또는 약 1 시간 초과) < -60℃에서 25℃까지 최대 5 회 동결/해동 주기에 노출될 때 제형 A보다 더 강력하였음을 입증하였다. 저속 및 고속의 모든 순열을 각각 동결 및 해동에 대해 평가하였다(즉 FF/FT = 고속 동결/고속 해동; FF/ST = 고속 동결/저속 해동; SF/FT = 저속 동결/고속 해동; SF/ST = 저속 동결/저속 해동).
동결 및 해동 속도는 생물제제의 안정성에 영향을 미칠 수 있다(Cao 등, 2003, Biotechnol. Bioeng. 82(6):684-90)). 동결 동안 물의 결정화는 생물제제의 안정성에 영향을 미칠 수 있는 부형제의 농도를 초래하였다. 또한 생물제제의 안정성에 영향을 미치는 상 분리 또는 pH 이동이 발생할 수 있다. 고속 동결은 더 작은 얼음 결정 및 계면 응력을 제공할 수 있는 더 큰 얼음-물 계면 면적을 유발할 수 있다. 고속 동결은 또한 얼음에 기포를 포획하여 해동 동안 공기-물 계면 응력을 야기할 수 있다. 저속 해동은 계면 응력로 인해 용액에서 생물제제의 안정성에 영향을 미칠 수 있는 얼음의 재결정화를 초래할 수 있다.
이 연구에서, 샘플을 시험관내 상대적 효능, 크기 배제 크로마토그래피 순도(SEC), 형광 염료에 의한 유리 DNA 수준, 및 동적 광 산란에 의한 크기 분포에 의해 분석하였다. 동결 및 해동시 제형의 상 변화를 열량측정으로 평가하였다.
이 연구에서 동결 및 해동의 고속 및 저속의 상이한 속도에 대한 결과 차이는 거의 없었다. 동결-해동 연구 결과의 전체 요약은 표 32에 제공되어 있다. 이 연구에 적용되는 온도 프로파일(고속 동결/저속 해동)의 대표적인 예는 도 9에 제시되어 있다(프로파일의 다른 순열은 제시되지 않음). 효능 결과는 동결 및 해동의 고속 및 저속의 모든 순열에 대한 대조군과 유사하였다. 제형 A 또는 제형 B의 동결/해동 순환시 방법 변동성 내에서 크기 분포의 변화는 없었다(도 12 참조). 제형 B에서 약 28 nm의 누적률 DLS 직경은 27 nm의 DPBS 제형 A에서보다 약간 더 높았다. 이 매우 약간 겉보기 크기 증가는 수화에 대한 수크로스의 영향 및 이에 따른 AAV 캡시드의 수력학적 거동과 관련되어 있다. DPBS 제형 A에서 작제물 II의 경우, 모든 동결-해동 스트레스 조건에 대해 염료 형광성에 의한 유리 DNA가 증가하였다(1.7%에서 최대 6.9%까지). SEC에 의한 유리 DNA 정량화는 일반적으로 염료 형광성과 일치하였다. SEC에 의해 첫번째 프리-피크는 유리 DNA를 함유하고, 두번째 작은 프리-피크는 응집체를 함유하고, 포스트-피크는 완충 종을 함유한다(도 10 및 도 11 참조). SEC에 의해 약간 더 낮은 유리 DNA는 주요 피크 또는 완충액으로 공동 용리하거나, 또는 칼럼에 들어가지 않는 매우 작거나 또는 매우 큰 DNA 단편 때문일 수 있다. 증가는 유사한 규모였으며 빠르거나 또는 매우 저속 동결-해동 속도의 상이한 순열에 대해 명확하게 구별되지 않았다. 제형 B에 대해 유리 DNA 또는 응집체의 증가는 관찰되지 않았다.
냉각 동안 완전히 결정화되지 않은 비정질 염화 나트륨의 결정화로 인해 약 -41℃에서 제형 A에서 작은 발열성이 관찰되었다(도 13). 미분해 저온 숄더가 있는 공융 용융물이 또한 제형 A의 경우 -22.1℃에서 피크로 관찰되었다. 동일한 공융 및 재결정화 이벤트가 염화 나트륨에 대한 문헌에 보고되었다(Milton 등, 2007, Journal of Pharmaceutical Sciences, 96(7)). 제형 B에 대한 공융 용융물의 결여(도 14)는 결정화의 억제와 일치하였다. 제형 B에서 동결보호 수크로스 부형제에 의한 비정질 점성 상태의 유지는 동결/해동 주기시 캡시드 파괴 및 유리 DNA 방출로부터 보호를 제공할 수 있다. 따라서, 제형 B로의 변화는 제형 A와 비교하여 유사하거나 또는 개선된 안정성을 초래하였다.
표 32: DPBS 및 신규 FDP 제형 B에서 작제물 II에 대한 동결-해동 속도의 영향
Figure pct00049
5.18.2 제형 A 및 신규 FDP 제형 B에서 작제물 II의 온도 스트레스 안정성
37℃에서 4 일에 걸쳐 1.0 x 1012 GC/mL에서 수행된 온도 스트레스 발생 안정성 연구를 사용하여 제형 A 및 제형 B의 상대적 안정성을 평가하였다. 안정성을 평가하는 데 사용되는 검정은 시험관내 상대적 효능(IVRP), 벡터 게놈 농도(ddPCR에 의한 VGC), 염료 형광성에 의한 유리 DNA, 동적 광 산란, 외관, 및 pH를 포함하였다. 제형 A에 대한 결과는 표 33에 제시되어 있고 제형 B에 대한 결과는 표 34에 제시되어 있다. 두 제형에 대해 하루에 약 14 내지 16%의 검정 가능성 내에서 효능의 필적할만한 감소가 관찰되었다(도 15 참조). 또한 제형 A 및 제형 B 둘 다에 필적할만한 벡터 게놈 카피의 작은 감소가 있었다. 제형 B에서 약 29-34 nm의누적률 DLS 직경은 28-30 nm에서 DPBS 제형 A에서보다 약간 더 높았다. 이 매우 약간(1 내지 3 nm) 겉보기 크기 증가는 수화에 대한 수크로스의 영향 및 이에 따른 AAV 캡시드의 수력학적 거동과 관련되었다. 스트레스 연구 동안 제형 A 또는 제형 B에 대한 방법 변동성 내에서 DLS 직경의 경향은 없었다. 제형 B는 캡시드 파괴와 관련하여 약간 더 안정하였고 더 낮은 수준의 유리 DNA를 가졌다. 유리 DNA는 제형 A에 대해 약 1에서 3%로 증가하였고 제형 B에 대해 1% 미만을 유지하였다(도 16 참조). 제형 A 및 제형 B의 전체 온도 스트레스 안정성은 유사하였으며, 제형 B는 캡시드 파괴 및 유리 DNA 방출과 관련하여 약간 더 안정하다. 따라서 제형 B로의 변화는 제형 A와 비교하여 유사하거나 또는 개선된 안정성을 초래할 수 있다.
표 33: 37℃에서 유지된 1.0 x 10 12 GC/mL의 제형 A에서 작제물 II의 온도 스트레스 안정성
Figure pct00050
표 34: 37℃에서 유지된 1.0 x 10 12 GC/mL의 제형 B에서 작제물 II의 온도 스트레스 안정성
Figure pct00051
5.18.3 신규 FDP 제형 B에서 작제물 II의 장기간 안정성
장기간 발생 안정성 연구는 시험관내 상대적 효능 및 다른 품질 속성이 FDP 제형 B에서 24 개월 동안 -80℃(≤-60℃) 및 18 개월 동안 -20℃에서 유지되었음을 입증하였다. -20℃에서의 연구는 이 온도에서 상당한 기간을 나타내고 이 더 높은(더 따뜻한) 동결 안정성 온도에서 장기간 안정성에 대한 제형 B의 완건성을 입증하기에 충분하므로 18 개월에 중단되었다. 안정성 데이터 평가인 ICH Q1E 가이드라인에 요약된 원칙에 기반한 데이터의 외삽은 12 개월 외삽이 정당하고 제형이 -80℃(≤-60℃)에서 적어도 36 개월 동안 안정할 것이고 -20℃의 더 높은 보관 온도에서 30 개월 동안 안정함을 나타낸다. 연구를 1.0 x 1012 GC/mL 및 2.1 x 1011 GC/mL 둘 다에서 수행하였다. 안정성을 평가하는 데 사용되는 검정은 시험관내 상대적 효능(IVRP), 벡터 게놈 농도(ddPCR에 의한 VGC), 염료 형광성에 의한 유리 DNA(9 개월까지의 시점의 경우 -80℃에 상대적, 12 개월에서의 절대 백분율), 1.0 x 1012 GC/mL에 대해서만 크기 배제 크로마토그래피(SEC), 동적 광 산란(DLS), pH, 및 외관을 포함하였다.
24 개월 동안 -80℃에서 모든 결과의 안정성에 대한 경향이 없었고 18 개월 동안 -20℃에서 경향은 없었다. 모든 결과는 방법 변동성 내에서 -80℃ 및 -20℃에 대해 유사하고 초기 시점 결과와 유사하다. -80℃(표 35) 및 -20℃(표 36에서 유지된 1.0 x 1012 GC/mL 및 -80℃(표 37) 및 -20℃(표 38)에서 유지된 2.1 x 1011 GC/mL에 대한 장기간 안정성 데이터는 작제물 II가 실시간 데이터에 기반하여 적어도 24 개월 동안 제형 B에서 안정하고, 외합에 따라 적어도 36 개월 동안 안정한 것으로 예상됨을 입증한다. IVRP 효능 경향 그래프는 도 52 및 도 53에 제시되어 있다. IVRP 효능은 24 개월의 장기간 안정성 데이터에 비해 방법 변동성과 비교하여 일치하는 경향이 없음을 나타낸다.
표 35: -80℃에서 1.0 x 10 12 GC/mL의 제형 B에서 작제물 II의 장기간 안정성
Figure pct00052
표 36: -20℃에서 1.0 x 10 12 GC/mL의 제형 B에서 작제물 II의 장기간 안정성
Figure pct00053
표 37: -80℃에서 2.1 x 10 11 GC/mL의 제형 B에서 작제물 II의 장기간 안정성
Figure pct00054
표 38: -20℃에서 2.1 x 10 11 GC/mL의 제형 B에서 작제물 II의 장기간 안정성
Figure pct00055
5.19 실시예 19: 작제물 II의 비인간 영장류 연구
이 연구의 목적은 시노몰구스 원숭이에게 맥락막상 또는 망막하 주사를 통해 단일 용량으로 투여될 때, 작제물 II의 약력학, 생체분포, 면역원성, 및 독성을 평가하는 것이었다. 투약 후, 동물을 투여 후 적어도 13 주 동안 관찰하였다(투약 단계의 92 일째; 최종 희생). 수컷 및 암컷 시노몰구스 원숭이를 5 개 그룹으로 할당하였고, 표 39에 나타낸 바와 같은이 용량을 투여하였다. 그룹 1의 동물은 투약 단계의 1 일째에 50 μL/주사/왼쪽 눈의 부피로 왼쪽 눈에 2 회 맥락막상 주사(총 100 μL/왼쪽 눈) 및 투약 단계의 1 일째에 100 μL/오른쪽 눈의 부피로 오른쪽 눈에 1 회 망막하 주사(단일 100 μL 수포/오른쪽 눈으로 투여)를 투여받았다. 그룹 2, 3, 및 4의 동물은 투약 단계의 1 일째에 50 μL/주사/눈의 부피로 각 눈에 2 회 맥락막상 주사(총 100 μL/눈)를 투여받았다. 그룹 5의 동물은 투약 단계의 1 일째에 100 μL/눈의 부피로 각 눈에 1 회 망막하 주사(단일 100 μL 수포/눈으로 투여)를 통해 투여받았다. 비히클 대조군 물품은 위약이었다.
항 VEGF Fab 농도에 의해 평가된 바와 같은 이식유전자 산물 발현을 연구 과정 동안 수양액 및 혈청에서 평가하고 전기화학발광(ECL) 검정을 사용하여 유리체액의 말단 샘플에서 평가하였다. 검정을 설계하여 발현된 유전자 산물인 임의의 작제물 II를 측정한다. Meso Scale Discovery(MSD) 플랫폼을 사용하여 구현된 ECL 면역검정을 설계하여 가교 방법에 기반한 원숭이 수양액 샘플 또는 유리체액에서 작제물 II TP를 정량화하였다. 간단히 말해서, 검정을 VEGF-비오틴 및 토끼 항-작제물 II TP 항체 둘 다와 함께 보정기, QC, 및 샘플을 밤새 인큐베이션하여 시작한다. 이는 작제물 II TP가 VEGF-비오틴 및 토끼 항-작제물 II TP를 가교하도록 한다. 다음 날, 혼합물을 가교 복합체가 VEGF-비오틴을 통해 스트렙타비딘에 결합할 수 있는 차단된 MSD 스트렙타비딘 플레이트로 옮긴다. 인큐베이션 후, 플레이트를 세척하고 SULFO-TAG 염소 항토끼 2차 항체를 첨가한다. 인큐베이션 후, 플레이트를 세척하고 트리프로필아민(TPA) 함유 MSD 판독 완충액을 첨가한다. TPA 및 전류의 존재 하에, SULFO-TAG는 수양액에 존재하는 작제물 II TP의 양에 비례하는 화학발광 신호를 생성한다.
맥락막상 주사에 의해 작제물 II가 주어진 동물의 경우, 3 x 1010에서 3 x 1012 GC/눈까지 수양액 및 혈청(평균 Cmax, AUC0-56d, 및 AUC0-92d) 및 유리체(농도)에 대해 이식유전자 산물에서 용량 비례 증가가 관찰되었다. 수양액에서, 42 일 후 항-VEGF Fab 수준의 일반적인 감소가 항-이식유전자 산물 항체와 연관될 수 있는 맥락막상으로 처리된 용량 그룹에서만 ≥3 x 1011 GC/눈의 용량으로 관찰되었다. 수양액 및 유리체액 둘 다의 경우, 항-VEGF Fab의 농도(평균 Cmax, AUC0-56d, 및 AUC0- 92d)는 맥락막상으로 전달된 동일한 용량과 비교할 때 망막하 그룹에서 유의하게 더 높았다. 그러나, 망막하로 3 x 1011 GC/눈으로 투여된 동물에 대한 혈청에서 항-VEGF Fab의 농도는 맥락막상으로 3 x 1011 GC/눈으로 투여된 동물보다 더 컸다.
표 39: 연구 설계
Figure pct00056
5.19.1 결과
비히클 대조군 그룹에서 항-VEGF Fab의 모든 농도 값은 정량의 하한치 미만(< 0.100 ng/mL)이었다.
항-VEGF Fab 평균 Cmax, AUC0-56d, 및 AUC0-92d 값에 의해 평가된 바와 같은 이식유전자 산물 발현은 맥락막상으로 투여된 경우 작제물 II 용량 수준이 3 x 1010에서 3 x 1012 GC/눈까지 증가함에 따라 증가하였다. 맥락막상으로 투여된 경우 평균 Cmax, AUC0-56d, 및 AUC0-92d 값의 증가는 일반적으로 용량에 비례하였다. 망막하로 3 x 1011 GC/눈으로 투여된 항-VEGF Fab 농도는 두 투여 경로가 연구 전반에 걸쳐 Cmax 수준 근처에 도달하고 유지하면서 맥락막상으로 3 x 1011 GC/눈으로 투여된 동물보다 더 컸다. 42 일 후 항-VEGF Fab 수준의 일반적인 감소는 맥락막상으로 더 많이 투여된 그룹에서 관찰된다.
유리체액에서 항-VEGF Fab의 평균 수준은 일반적으로 작제물 II 용량 수준의 증가에 따라 증가하였다. 망막하 투약은 맥락막상으로 전달된 동일한 용량과 비교하여 유의하게 증가된 항-VEGF Fab 수준을 나타내었다. 92 일에 평균 수양액 대 유리체액 항-VEGF Fab 농도 비는 맥락막상으로 투여된 경우 0.114 내지 0.348, 망막하로 투여된 경우 0.201 범위였다.
5.20 실시예 20: 신생혈관 연령-관련 황반 변성이 있는 참가자에서 망막하 전달을 통해 투여된 작제물 II 유전자 요법의 2 개 제형에서 2 가지 용량의 약력학을 탐구하기 위한 2 상 공개 라벨 연구
2 상 공개 라벨 다중 코호트 연구에서, 포함/제외 기준을 충족하는 대략 60 명의 참가자(코호트 당 15 명)가 4 개의 순차적 용량 코호트에 등록될 것이다. 용량 코호트는 수양액 TP 농도에 기반하여 작제물 II의 약력학을 탐구하기 위해 2 개 제형 중 하나에서 작제물 II의 2 가지 용량 중 하나로 구성될 것이다. 평가변수는 하기 표 40에 제시되어 있다.
표 40: 목표 및 평가변수
Figure pct00057
5.20.1 포함 기준
참가자는 하기 기준이 모두 적용되는 경우에만 연구에 포함될 자격이 있다:
1. ≥50 세 및 ≤89 세의 남성 또는 여성.
2. 스크리닝 방문　1에 연구 눈에서 ≤78 내지 ≥40의 ETDRS BCVA-문자 점수.
양쪽 눈이 적격한 경우, 정규화 전에 조사자에 의해 결정된 바와 같이, 연구 눈은 참가자의 시력이 더 나쁜 눈이어야 한다.
3. CRC에 의해 평가된 바와 같이, 스크리닝 방문 1에 부중심와(ETDRS 격자를 기준으로 황반의 3-mm 중심) 내의 체액과 함께 연구 눈에서 연령 관련 황반 변성(AMD)에 이차적인 중심와하 CNV로 진단을 받아야 한다.
CNV 병변 특성화: 병변 크기는 10-디스크 면적 미만이어야 한다(전형적인 디스크 면적 2.54 mm2).
4. 연구 눈에서 인공수정체(백내장 수술 후 적어도 12 주)여야 한다.
5. 모든 연구 절차를 준수할 의지 및 능력이 있어야 하며 연구 기간 동안 이용가능하여야 한다.
6. 여성은 폐경 후(적어도 연속 12 개월 생리가 없는 것으로 정의됨) 또는 외과적으로 불임이어야 한다(즉, 양측 난관 결찰술/양측 난관 절제술, 양측 난관 폐색 처치, 자궁절제술, 또는 양측 난소적출을 받은 경우). 그렇지 않으면, 여성은 스크리닝 방문　1에 소변 및 혈청 임신 테스트결과가 음성이어야 하며 연구 동안 추가 임신 테스트를 할 의지가 있어야 한다.
7. 가임 여성(WOCBP)(및 남성 파트너)은 매우 효과적인 피임법을 사용할 의지가 있어야 하며 WOCBP와 성관계를 맺은 남성 참가자는 스크리닝 방문 1부터 작제물 II 투여 후 24 주까지 콘돔을 사용할 의지가 있어야 한다.
8. 서면으로 취득한 동의서를 제공할 의지 및 능력이 있어야 한다.
9. 스크리닝 방문 2 SD-OCT에 기반하여, 참가자는 CRC에 의해 결정된 바와 같이 > 50 μm 또는 > 50%(하기 반응 기준 참조)의 체액 개선이 있어야 하고 CRT < 400 μm를 가져야 한다. 참가자가 CRT에서의 증가에 기여하는 체액 이외의 질환이 있는 경우(즉, 색소 상피 박리 [PED] 또는 망막하 과반사 물질[SHRM]), 참가자는 CRC에 의해 결정된 바와 같이 < 50 μm의 체액(망막내 또는 망막하)을 갖는 경우 등록할 것이라는 점에 주목한다.
반응 기준: 참가자는 스크리닝 방문 1에 비해 > 50 μm 또는 50%의 내부 망막(부중심와 3mm) 체액 개선이 있어야 한다.
5.20.2 제외 기준
참가자는 하기 기준 중 임의의 것이 적용되는 경우 연구로부터 제외된다:
10. AMD 이외의 임의의 원인에 이차적인 연구 눈에서 CNV 또는 황반 부종이 있는 경우.
11. CRC에 의해 결정된 바와 같은 중심와하 섬유증 또는 위축증이 있는 경우.
12. 스크리닝 방문 1 전 12 개월에 9 회 항-VEGF 주사가 필요한 참가자의 경우.
13. 눈 연구에서 VA 개선을 제한할 수 있는 조사자의 의견에 따른 임의의 상태로 있는 경우.
14. 연구 눈에서 망막 박리 또는 망막 파열의 활성 또는 이력이 있는 경우.
15. 2 가지　IOP-저하 약물에 의해 제어되지 않은 IOP > 23 mmHg으로 정의된 연구 눈에서의 진행성 녹내장 또는 녹내장을 치료하기 위한 임의의 침습 절차의 경우(예를 들어, 션트(shunt), 튜브, 또는 최소 침습 녹내장 수술[MIGS] 장치; 선택적 레이저 섬유주절제술, 아르곤 레이저 섬유주성형술, 및 MIGS 장치가 허용됨).
16. 스크리닝 방문 1 전 > 4 년에 nAMD 진단된 임의의 참가자의 경우.
17. 조사자의 의견에 따라, 참가자의 위험을 증가시킬 수 있거나, 시력 상실을 예방 또는 치료하기 위해 연구 과정 동안 의학적 또는 외과적 개입이 필요할 수 있거나, 또는 연구 절차 또는 평가를 방해할 수 있는 연구 눈의 임의의 상태에 있는 경우.
18. 스크리닝 방문 1 전 12 주 이내에 연구 눈에서 안내 수술의 이력이 있는 경우. 이트륨 알루미늄 가넷(YAG) 피막절제술은 스크리닝 방문 1 전 > 10 주에 수행된 경우 허용된다.
19. 스크리닝 방문 1 전 6 개월 내에 유리체내 스테로이드 주사 또는 항-VEGF 요법 이외의 조사용 제품과 같이 연구 눈에서 유리체내 요법의 이력이 있는 경우.
20. 스크리닝 방문 1에 연구 눈에서 임의의 이식물이 존재하는 경우(안내 렌즈 또는 MIGS 장치 제외).
21. 스크리닝 방문 1 전 5 년 내에 화학요법 및/또는 방사선을 필요로 하는 면역계를 손상시킬 수 있는 악성종양 또는 혈액학적 악성종양의 이력이 있는 경우. 국부적 기저 세포 암종이 허용될 것이다.
22. 등록 30 일 또는 조사용 제품의 5 개 반감기 중 더 긴 기간 내에 임의의 조사용 제품을 수령한 경우.
23. 유전자 요법을 받은 경우.
24. VA에 영향을 미칠 수 있거나 또는 망막 독성이 알려진 임의의 약물, 예를 들어, 클로로퀸 또는 하이드록시클로로퀸을 사용한 요법, 또는 병용 요법에 의해 유발된 망막 독성의 이력이 있는 경우.
25. 외과적 처치를 방해할 수 있는 연구 눈에서의 안구 또는 안구 주변 감염이 있는 경우.
26. 과거 6 개월 이내에 심근경색, 뇌혈관 사고, 또는 일과성 허혈 발작이 있는 경우.
27. 최대 의학적 치료에도 불구하고 고혈압(수축기 혈압 [BP] > 180 mmHg, 확장기 BP >　100 mmHg)이 제어되지 않는 경우.
28. 스크리닝 방문 1에 하기 실험실 값을 갖는 임의의 참가자가 연구에서 철회될 것이다:
ㆍ 아스파르테이트 아미노트랜스퍼라제(AST)/알라닌 아미노트랜스퍼라제(ALT) > 2.5 x 정상 상한치(ULN).
ㆍ 참가자가 길버트 증후군의 이전에 알려진 이력 및 접합된 빌리루빈이 총 빌리루빈의 <35%를 나타내는 분획화된 빌리루빈이 없는한, 총 빌리루빈 > 1.5 x ULN인 경우.
ㆍ 참가자가 항응고제를 받지 않는 한, 프로트롬빈 시간 > 1.5 x ULN인 경우.
ㆍ 항응고제를 받은 참가자는 연구 절차를 위한 항응고 요법을 보유하거나 또는 가교하기 위해 지역 실험실에 의해 모니터링되고 지역 진료마다 관리될 것이며; 의료 모니터와의 상담이 또한 필요하다.
ㆍ 헤모글로빈이 남성 참가자의 경우 < 10 g/dL 및 여성 참가자의 경우 < 9 g/dL인 경우.
ㆍ 혈소판이 < 100 x 103/μL인 경우.
ㆍ 추정된 사구체 여과율이 < 30 mL/분/1.73 m2인 경우.
ㆍ 현재 당뇨병으로 인슐린을 받고 있는 경우.
29. 치료 조사자(즉, 망막 외과의), 뿐만 아니라 참가자에게 항응고제를 처방하는 의사의 의견에 따라 작제물 II 투여를 위한 항응고 요법의 유지가 지시되지 않거나 또는 안전하지 않는 것으로 간주되는 항응고 요법을 현재 취하고 있는 경우
30. 조사자의 의견에 따라, 안구 외과적 처치 또는 치유 과정을 방해할 수 있는 임의의 병용 치료가 있는 경우.
31. 라니비주맙 또는 이의 구성요소 중 임의의 것에 대한 과민증이 알려진 경우.
32. 조사자 또는 후원자의 의견에 따라, 참가자의 안전성, 결과 해석, 또는 연구의 모든 평가 및 추적을 완료하는 능력을 손상시킬 수 있는 심각하거나, 만성이거나, 또는 불안정한 의학적 또는 심리적 상태인 경우.
5.20.3 시행된 연구 중재(들)
적격한 참가자는 코호트에 의해 하기 표 41에 제시된 바와 같은 작제물 II의 2 개 용량 중 하나 및 2 개 제형 중 하나에 할당될 것이다. 참가자에게는 수술실에서 망막하 전달을 통해 1 일째에 작제물 II가 주어질 것이다. 연구 동안, 참가자는 스크리닝 방문 1에, 2 주째에, 이어서 필요에 따라 4 주째에 시작하여 ~28 일마다 유리체내 주사에 의해 투여된 라니비주맙 0.5 mg을 받을 것이다.
표 41: 시행된 연구 중재(들)
Figure pct00058
등가물
본 발명이 이의 구체적 구현예를 참조하여 상세하게 기재되었지만, 기능적으로 동등한 변경이 본 발명의 범위 내에 있음이 이해될 것이다. 실제로, 본원에 제시되고 기재된 것들 이외에 본 발명이 다양한 변형이 전술한 설명 및 첨부 도면으로부터 당업자에게 명백하게 될 것이다. 이러한 변형은 첨부된 청구범위의 범위 내에 속하는 것으로 의도된다. 당업자는 단지 일상적인 실험을 사용하여 본원에 기재된 본 발명의 구체적 구현예에 대한 많은 등가물을 인식하거나, 또는 확인할 수 있을 것이다. 이러한 등가물은 하기 청구범위에 의해 포함되는 것으로 의도된다.
본 명세서에 언급된 모든 간행물, 특허 및 특허 출원은 각각의 개별 간행물, 특허 또는 특허 출원의 전문이 본원에 참조로 포함되도록 구체적이고 개별적으로 지시된 것처럼 동일한 정도로 본원의 명세서에 참조로 포함된다.
SEQUENCE LISTING <110> REGENXBIO Inc. <120> ADENO-ASSOCIATED VIRUS VECTOR PHARMACEUTICAL COMPOSITION AND METHODS <130> 12656-124-228 <140> TBA <141> On even date herewith <150> US 62/911,968 <151> 2019-10-07 <160> 52 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ranibizumab Fab Amino Acid Sequence - light chain <400> 1 Asp Ile Gln Leu Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Val Leu Ile 35 40 45 Tyr Phe Thr Ser Ser Leu His Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn 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Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe 50 55 60 Lys Arg Arg Phe Thr Phe Ser Leu Asp Thr Ser Lys Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 100 105 110 Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly 115 120 125 Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly 130 135 140 Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val 145 150 155 160 Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe 165 170 175 Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val 180 185 190 Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val 195 200 205 Asn His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys 210 215 220 Ser Cys Asp Lys Thr His Leu 225 230 <210> 5 <211> 26 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> VEGF-A signal peptide <400> 5 Met Asn Phe Leu Leu Ser Trp Val His Trp Ser Leu Ala Leu Leu Leu 1 5 10 15 Tyr Leu His His Ala Lys Trp Ser Gln Ala 20 25 <210> 6 <211> 29 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Fibulin-1 signal peptide <400> 6 Met Glu Arg Ala Ala Pro Ser Arg Arg Val Pro Leu Pro Leu Leu Leu 1 5 10 15 Leu Gly Gly Leu Ala Leu Leu Ala Ala Gly Val Asp Ala 20 25 <210> 7 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Vitronectin signal peptide <400> 7 Met Ala Pro Leu Arg Pro Leu Leu Ile Leu Ala Leu Leu Ala Trp Val 1 5 10 15 Ala Leu Ala <210> 8 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Complement Factor H signal peptide <400> 8 Met Arg Leu Leu Ala Lys Ile Ile Cys Leu Met Leu Trp Ala Ile Cys 1 5 10 15 Val Ala <210> 9 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Opticin signal peptide <400> 9 Met Arg Leu Leu Ala Phe Leu Ser Leu Leu Ala Leu Val Leu Gln Glu 1 5 10 15 Thr Gly Thr <210> 10 <211> 728 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Bevacizumab cDNA - Light chain <400> 10 gctagcgcca ccatgggctg gtcctgcatc atcctgttcc tggtggccac cgccaccggc 60 gtgcactccg acatccagat gacccagtcc ccctcctccc tgtccgcctc cgtgggcgac 120 cgggtgacca tcacctgctc cgcctcccag gacatctcca actacctgaa ctggtaccag 180 cagaagcccg gcaaggcccc caaggtgctg atctacttca cctcctccct gcactccggc 240 gtgccctccc ggttctccgg ctccggctcc ggcaccgact tcaccctgac catctcctcc 300 ctgcagcccg aggacttcgc cacctactac tgccagcagt actccaccgt gccctggacc 360 ttcggccagg gcaccaaggt ggagatcaag cggaccgtgg ccgccccctc cgtgttcatc 420 ttccccccct ccgacgagca gctgaagtcc ggcaccgcct ccgtggtgtg cctgctgaac 480 aacttctacc cccgggaggc caaggtgcag tggaaggtgg acaacgccct gcagtccggc 540 aactcccagg agtccgtgac cgagcaggac tccaaggact ccacctactc cctgtcctcc 600 accctgaccc tgtccaaggc cgactacgag aagcacaagg tgtacgcctg cgaggtgacc 660 caccagggcc tgtcctcccc cgtgaccaag tccttcaacc ggggcgagtg ctgagcggcc 720 gcctcgag 728 <210> 11 <211> 1440 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Bevacizumab cDNA - heavy chain <400> 11 gctagcgcca ccatgggctg gtcctgcatc atcctgttcc tggtggccac cgccaccggc 60 gtgcactccg aggtgcagct ggtggagtcc ggcggcggcc tggtgcagcc cggcggctcc 120 ctgcggctgt cctgcgccgc ctccggctac accttcacca actacggcat gaactgggtg 180 cggcaggccc ccggcaaggg cctggagtgg gtgggctgga tcaacaccta caccggcgag 240 cccacctacg ccgccgactt caagcggcgg ttcaccttct ccctggacac ctccaagtcc 300 accgcctacc tgcagatgaa ctccctgcgg gccgaggaca ccgccgtgta ctactgcgcc 360 aagtaccccc actactacgg ctcctcccac tggtacttcg acgtgtgggg ccagggcacc 420 ctggtgaccg tgtcctccgc ctccaccaag ggcccctccg tgttccccct ggccccctcc 480 tccaagtcca cctccggcgg caccgccgcc ctgggctgcc tggtgaagga ctacttcccc 540 gagcccgtga ccgtgtcctg gaactccggc gccctgacct ccggcgtgca caccttcccc 600 gccgtgctgc agtcctccgg cctgtactcc ctgtcctccg tggtgaccgt gccctcctcc 660 tccctgggca cccagaccta catctgcaac gtgaaccaca agccctccaa caccaaggtg 720 gacaagaagg tggagcccaa gtcctgcgac aagacccaca cctgcccccc ctgccccgcc 780 cccgagctgc tgggcggccc ctccgtgttc ctgttccccc ccaagcccaa ggacaccctg 840 atgatctccc 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gtagcgcaag ccaggatatt agcaattatc tgaattggta 180 tcagcagaaa ccgggtaaag caccgaaagt tctgatttat tttaccagca gcctgcatag 240 cggtgttccg agccgtttta gcggtagcgg tagtggcacc gattttaccc tgaccattag 300 cagcctgcag ccggaagatt ttgcaaccta ttattgtcag cagtatagca ccgttccgtg 360 gacctttggt cagggcacca aagttgaaat taaacgtacc gttgcagcac cgagcgtttt 420 tatttttccg cctagtgatg aacagctgaa aagcggcacc gcaagcgttg tttgtctgct 480 gaataatttt tatccgcgtg aagcaaaagt gcagtggaaa gttgataatg cactgcagag 540 cggtaatagc caagaaagcg ttaccgaaca ggatagcaaa gatagcacct atagcctgag 600 cagcaccctg accctgagca aagcagatta tgaaaaacac aaagtgtatg cctgcgaagt 660 tacccatcag ggtctgagca gtccggttac caaaagtttt aatcgtggcg aatgctaata 720 gaagcttggt acc 733 <210> 13 <211> 779 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Ranibizumab cDNA (Heavy chain comprising a signal sequence) <400> 13 gagctcatat gaaatacctg ctgccgaccg ctgctgctgg tctgctgctc ctcgctgccc 60 agccggcgat ggccgaagtt cagctggttg aaagcggtgg tggtctggtt cagcctggtg 120 gtagcctgcg tctgagctgt gcagcaagcg gttatgattt tacccattat ggtatgaatt 180 gggttcgtca ggcaccgggt aaaggtctgg aatgggttgg ttggattaat acctataccg 240 gtgaaccgac ctatgcagca gattttaaac gtcgttttac ctttagcctg gataccagca 300 aaagcaccgc atatctgcag atgaatagcc tgcgtgcaga agataccgca gtttattatt 360 gtgccaaata tccgtattac tatggcacca gccactggta tttcgatgtt tggggtcagg 420 gcaccctggt taccgttagc agcgcaagca ccaaaggtcc gagcgttttt ccgctggcac 480 cgagcagcaa aagtaccagc ggtggcacag cagcactggg ttgtctggtt aaagattatt 540 ttccggaacc ggttaccgtg agctggaata gcggtgcact gaccagcggt gttcatacct 600 ttccggcagt tctgcagagc agcggtctgt atagcctgag cagcgttgtt accgttccga 660 gcagcagcct gggcacccag acctatattt gtaatgttaa tcataaaccg agcaatacca 720 aagtggataa aaaagttgag ccgaaaagct gcgataaaac ccatctgtaa tagggtacc 779 <210> 14 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Bevacizumab and Ranibizumab Light Chain CDR1 <400> 14 Ser Ala Ser Gln Asp Ile Ser Asn Tyr Leu Asn 1 5 10 <210> 15 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Bevacizumab and Ranibizumab Light Chain CDR2 <400> 15 Phe Thr Ser Ser Leu His Ser 1 5 <210> 16 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Bevacizumab and Ranibizumab Light Chain CDR3 <400> 16 Gln Gln Tyr Ser Thr Val Pro Trp Thr 1 5 <210> 17 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Bevacizumab Heavy Chain CDR1 <400> 17 Gly Tyr Thr Phe Thr Asn Tyr Gly Met Asn 1 5 10 <210> 18 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Bevacizumab Heavy Chain CDR2 <400> 18 Trp Ile Asn Thr Tyr Thr Gly Glu Pro Thr Tyr Ala Ala Asp Phe Lys 1 5 10 15 Arg <210> 19 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Bevacizumab Heavy Chain CDR3 <400> 19 Tyr Pro His Tyr Tyr Gly Ser Ser His Trp Tyr Phe Asp Val 1 5 10 <210> 20 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ranibizumab Heavy Chain CDR1 <400> 20 Gly Tyr Asp Phe Thr His Tyr Gly Met Asn 1 5 10 <210> 21 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ranibizumab Heavy Chain CDR3 <400> 21 Tyr Pro Tyr Tyr 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Thr Thr Asn Pro Val Ala Thr Glu Ser 565 570 575 Tyr Gly Gln Val Ala Thr Asn His Gln Ser Ala Gln Ala Gln Ala Gln 580 585 590 Thr Gly Trp Val Gln Asn Gln Gly Ile Leu Pro Gly Met Val Trp Gln 595 600 605 Asp Arg Asp Val Tyr Leu Gln Gly Pro Ile Trp Ala Lys Ile Pro His 610 615 620 Thr Asp Gly Asn Phe His Pro Ser Pro Leu Met Gly Gly Phe Gly Met 625 630 635 640 Lys His Pro Pro Pro Gln Ile Leu Ile Lys Asn Thr Pro Val Pro Ala 645 650 655 Asp Pro Pro Thr Ala Phe Asn Lys Asp Lys Leu Asn Ser Phe Ile Thr 660 665 670 Gln Tyr Ser Thr Gly Gln Val Ser Val Glu Ile Glu Trp Glu Leu Gln 675 680 685 Lys Glu Asn Ser Lys Arg Trp Asn Pro Glu Ile Gln Tyr Thr Ser Asn 690 695 700 Tyr Tyr Lys Ser Asn Asn Val Glu Phe Ala Val Asn Thr Glu Gly Val 705 710 715 720 Tyr Ser Glu Pro Arg Pro Ile Gly Thr Arg Tyr Leu Thr Arg Asn Leu 725 730 735 <210> 52 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Mutant Interleukin-2 signal peptide <400> 52 Met Tyr Arg Met Gln Leu Leu Leu Leu Ile Ala Leu Ser Leu Ala Leu 1 5 10 15 Val Thr Asn Ser 20

Claims (184)

  1. 약제학적 조성물로서,
    (a) 재조합 아데노-연관 바이러스(AAV),
    (b) 염화 칼륨,
    (c) 일염기성 인산 칼륨,
    (d) 염화 나트륨,
    (e) 인산 나트륨 이염기성 무수물,
    (f) 수크로스, 및
    (e) 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80을 포함하는, 약제학적 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 재조합 AAV가 AAV1, AAV2, AAV2tYF, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAVrh10, AAV.rh20, AAV.rh39, AAV.Rh74, AAV.RHM4-1, AAV.hu37, AAV.Anc80, AAV.Anc80L65, rAAV.7m8, AAV.PHP.B, AAV.PHP.eB, AAV2.5, AAV2tYF, AAV3B, AAV.LK03, AAV.HSC1, AAV.HSC2, AAV.HSC3, AAV.HSC4, AAV.HSC5, AAV.HSC6, AAV.HSC7, AAV.HSC8, AAV.HSC9, AAV.HSC10, AAV.HSC11, AAV.HSC12, AAV.HSC13, AAV.HSC14, AAV.HSC15, 및 AAV.HSC16으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 아데노-연관 바이러스 혈청형의 구성요소를 포함하는 것인, 약제학적 조성물.
  3. 제1항 내지 제2항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 AAV가 AAV8인, 약제학적 조성물.
  4. 제1항 내지 제2항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 AAV가 AAV9인, 약제학적 조성물.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 하나 이상의 아미노산을 추가로 포함하는 것인, 약제학적 조성물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 이온 강도가 약 60 mM 내지 약 115 mM 범위 내에 있는 것인, 약제학적 조성물.
  7. 제4항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 이온 강도가 약 30 mM 내지 약 100 mM 범위 내에 있는 것인, 약제학적 조성물
  8. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이
    (a) 0.2 g/L 농도의 염화 칼륨,
    (b) 0.2 g/L 농도의 일염기성 인산 칼륨,
    (c) 5.84 g/L 농도의 염화 나트륨, 및
    (d) 1.15 g/L 농도의 인산 나트륨 이염기성 무수물을 포함하는 것인, 약제학적 조성물.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 3%(중량/부피, 30 g/L) 내지 18%(중량/부피, 180 g/L) 범위의 농도로 수크로스를 포함하는 것인, 약제학적 조성물.
  10. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 4%(중량/부피, 40 g/L)의 농도로 수크로스를 포함하는 것인, 약제학적 조성물.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80을 포함하되; 상기 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80은 0.0005%(중량/부피, 0.005 g/L) 내지 0.05%(중량/부피, 0.5 g/L) 범위의 농도인, 약제학적 조성물.
  12. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80을 포함하되; 상기 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80은 0.001%(중량/부피, 0.01 g/L)의 농도인, 약제학적 조성물.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 pH가 약 6.0 내지 약 9.0 범위인, 약제학적 조성물.
  14. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 pH가 약 7.4인, 약제학적 조성물.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 삼투압 농도가 약 200 mOsm/L 내지 약 660 mOsm/L 범위인, 약제학적 조성물.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 소수성으로-코팅된 유리 바이알 내에 있는 것인, 약제학적 조성물.
  17. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 사이클로 올레핀 중합체(COP) 바이알 내에 있는 것인, 약제학적 조성물.
  18. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 Daikyo Crystal Zenith®(CZ) 바이알 내에 있는 것인, 약제학적 조성물.
  19. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 TopLyo 코팅된 바이알 내에 있는 것인, 약제학적 조성물.
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이
    (a) 재조합 AAV,
    (b) 0.2 g/L 농도의 염화 칼륨,
    (c) 0.2 g/L 농도의 일염기성 인산 칼륨,
    (d) 5.84 g/L 농도의 염화 나트륨,
    (e) 1.15 g/L 농도의 인산 나트륨 이염기성 무수물,
    (f) 4% 중량/부피(40 g/L) 농도의 수크로스,
    (g) 0.001% 중량/부피(0.01 g/L) 농도의 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80, 및
    (h) 물로 이루어지되,
    상기 재조합 AAV는 AAV8인, 약제학적 조성물.
  21. 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 벡터 게놈 농도(VGC)가 약 3 x 109 GC/mL, 약 1 x 1010 GC/mL, 약 1.2 x 1010 GC/mL, 약 1.6 x 1010 GC/mL, 약 4 x 1010 GC/mL, 약 6 x 1010 GC/mL, 약 2 x 1011 GC/mL, 약 2.4 x 1011 GC/mL, 약 2.5 x 1011 GC/mL, 약 3 x 1011 GC/mL, 약 3.2 x 1011 GC/mL, 약 6.2 x 1011 GC/mL, 약 6.5 x 1011 GC/mL, 약 1 x 1012 GC/mL, 약 3 x 1012 GC/mL, 약 2 x 1013 GC/mL 또는 약 3 x 1013 GC/mL인, 약제학적 조성물.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 AAV가 동결/해동 주기에 대해 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정한 것인, 약제학적 조성물.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 AAV가 -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정하되, 상기 일정 기간은 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월인, 약제학적 조성물.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 AAV가 -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정하되, 상기 일정 기간은 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월인, 약제학적 조성물.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 AAV가 실온에서 일정 기간 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정하되, 상기 일정 기간은 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월인, 약제학적 조성물.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 상기, 재조합 AAV가 (i) -80℃에서 제1 기간 동안 보관되고; (ii) 후속적으로 해동되고; (iii) 해동 후, 4℃에서 제2 기간 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 재조합 AAV보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정한 것인, 약제학적 조성물.
  27. 제26항에 있어서, 상기 제1 기간이 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월인, 약제학적 조성물.
  28. 제26항에 있어서, 상기 제2 기간이 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월인, 약제학적 조성물.
  29. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도가 -80℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
  30. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도가 -20℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
  31. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도가 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
  32. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 시험관내 효능이 -80℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
  33. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 시험관내 효능이 -20℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
  34. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 시험관내 효능이 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
  35. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 크기 분포가 -80℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 크기 분포와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일한 것인, 약제학적 조성물.
  36. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 크기 분포가 -20℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 크기 분포와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일한 것인, 약제학적 조성물.
  37. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 크기 분포가 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 크기 분포와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일한 것인, 약제학적 조성물.
  38. 제29항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 일정 기간이 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월인, 약제학적 조성물.
  39. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 AAV의 안정성이 재조합 AAV의 감염성에 의해 결정되는 것인, 약제학적 조성물.
  40. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 AAV의 안정성이 재조합 AAV의 응집 수준에 의해 결정되는 것인, 약제학적 조성물.
  41. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 AAV의 안정성이 재조합 AAV 입자에 의해 방출된 유리 DNA 수준에 의해 결정되는 것인, 약제학적 조성물.
  42. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 액체 조성물인, 약제학적 조성물.
  43. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 동결된 조성물인, 약제학적 조성물.
  44. 제1항 내지 제41항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 동결건조된 조성물 또는 재구축된 동결건조된 조성물인, 약제학적 조성물.
  45. 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사, 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사, 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여, 또는 후방 공막옆 데포 절차에 적합한 특성을 갖는 것인, 약제학적 조성물.
  46. 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사, 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사, 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여, 또는 후방 공막옆 데포 절차에 적합한 바람직한 밀도를 갖는 것인, 약제학적 조성물.
  47. 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사, 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사, 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여, 또는 후방 공막옆 데포 절차에 적합한 바람직한 삼투압 농도를 갖는 것인, 약제학적 조성물.
  48. 제47항에 있어서, 상기 삼투압 농도가 160-230 mOsm/kg H2O인, 약제학적 조성물.
  49. 제47항에 있어서, 상기 삼투압 농도가 600 mOsm/kg H2O 미만인, 약제학적 조성물.
  50. 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사, 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사, 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여, 또는 후방 공막옆 데포 절차에 적합한 바람직한 점도를 갖는 것인, 약제학적 조성물.
  51. 제1항 내지 제44항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 눈에 투여하기에 적합한 것인, 약제학적 조성물.
  52. 제45항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 맥락막상 주사, 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사, 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여, 또는 후방 공막옆 데포 절차에 적합한 것인, 약제학적 조성물.
  53. 제1항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 이전에 -80℃에서 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월 동안 보관된 후 4℃에서 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월 동안 보관될 수 있는 것인, 약제학적 조성물.
  54. 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 질환을 치료 또는 예방하는 방법.
  55. 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 또는 당뇨병성 망막증(DR)으로 진단된 대상체를 치료하는 방법.
  56. 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 점액다당류증 유형 IVA(MPS IVA), 점액다당류증 유형 I(MPS I), 점액다당류증 유형 II(MPS II), 가족성 고콜레스테롤혈증(FH), 동형접합 가족성 고콜레스테롤혈증(HoFH), 관상 동맥 질환, 뇌혈관 질환, 듀켄씨 근이영양증, 팔다리이음 근이영양증, 베커형 근이영양증 및 산발성 봉입체 근염, 또는 칼리크레인 관련 질환으로 진단된 대상체를 치료하는 방법.
  57. 제54항 내지 제56항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사, 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사, 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여, 또는 후방 공막옆 데포 절차에 의해 투여되는 것인, 방법.
  58. 제54항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체가 인간 대상체인, 방법.
  59. nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 또는 당뇨병성 망막증(DR)으로 진단된 대상체를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 제조하는 단계, -80℃에서 제1 기간 동안 약제학적 조성물을 보관하는 단계; (ii) 약제학적 조성물을 해동하는 단계; 및 (iii) 해동 후, 4℃에서 제2 기간 동안 약제학적 조성물을 보관하는 단계를 포함하는 것인, 방법.
  60. 제59항에 있어서, 상기 제1 기간이 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월인, 방법.
  61. 제59항에 있어서, 상기 제2 기간이 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월인, 방법.
  62. 하나 이상의 용기 및 사용 지침을 포함하는 키트로서, 상기 하나 이상의 용기는 제1항 내지 제53항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 포함하는 것인, 키트.
  63. 제62항에 있어서, 상기 하나 이상의 용기 중 적어도 하나가 소수성으로-코팅된 유리 바이알로부터 제조되는 것인, 키트.
  64. 제62항에 있어서, 상기 하나 이상의 용기 중 적어도 하나가 Daikyo Crystal Zenith®(CZ) 바이알로부터 제조되는 것인, 키트.
  65. 제62항에 있어서, 상기 하나 이상의 용기 중 적어도 하나가 TopLyo 코팅된 바이알로부터 제조되는 것인, 키트.
  66. 제62항에 있어서, 상기 하나 이상의 용기 중 적어도 하나가 사이클로 올레핀 중합체(COP)로부터 제조되는 것인, 키트.
  67. 약제학적 조성물로서,
    (a) 항-인간 혈관 내피 성장 인자(hVEGF) 항체를 암호화하는 작제물 II,
    (b) 염화 칼륨,
    (c) 일염기성 인산 칼륨,
    (d) 염화 나트륨,
    (e) 인산 나트륨 이염기성 무수물,
    (f) 수크로스, 및
    (e) 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80를 포함하되,
    상기 항-hVEGF 항체는 서열번호:2 또는 서열번호:4의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호:1 또는 서열번호:3의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인, 약제학적 조성물.
  68. 제67항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 이온 강도가 약 60 mM 내지 약 100 mM 범위 내에 있는 것인, 약제학적 조성물.
  69. 제67항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이
    (a) 0.2 g/L 농도의 염화 칼륨,
    (b) 0.2 g/L 농도의 일염기성 인산 칼륨,
    (c) 5.84 g/L 농도의 염화 나트륨, 및
    (d) 1.15 g/L 농도의 인산 나트륨 이염기성 무수물을 포함하는 것인, 약제학적 조성물.
  70. 제67항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 3%(중량/부피, 30 g/L) 내지 18%(중량/부피, 180 g/L) 범위의 농도로 수크로스를 포함하는 것인, 약제학적 조성물.
  71. 제67항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 4%(중량/부피, 40 g/L)의 농도로 수크로스를 포함하는 것인, 약제학적 조성물.
  72. 제67항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80을 포함하되; 상기 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80은 0.0005%(중량/부피, 0.005 g/L) 내지 0.05%(중량/부피, 0.5 g/L) 범위의 농도인, 약제학적 조성물.
  73. 제67항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 0.001%(중량/부피, 0.01 g/L)의 농도로 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80을 포함하는 것인, 약제학적 조성물.
  74. 제67항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 pH가 약 6.0 내지 약 9.0 범위 내에 있는 것인, 약제학적 조성물.
  75. 제67항 내지 제73항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 pH가 약 7.4인, 약제학적 조성물.
  76. 제67항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 삼투압 농도가 약 200 mOsm/L 내지 약 660 mOsm/L 범위 내에 있는 것인, 약제학적 조성물. 제67항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 작제물 II가 AAV8로부터의 캡시드를 포함하는 것인, 약제학적 조성물.
  77. 제67항 내지 제76항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 작제물 II가 동결/해동 주기에 대해 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 작제물 II보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정한 것인, 약제학적 조성물.
  78. 제67항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 작제물 II가 -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 작제물 II보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정하되, 상기 일정 기간은 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월인, 약제학적 조성물.
  79. 제67항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 작제물 II가 -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 작제물 II보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정하되, 상기 일정 기간은 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월인, 약제학적 조성물.
  80. 제67항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 작제물 II가 실온에서 일정 기간 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 작제물 II보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정하되, 상기 일정 기간은 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월인, 약제학적 조성물.
  81. 제67항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 재조합 AAV가 (i) -80℃에서 제1 기간 동안 보관되고; (ii) 후속적으로 해동되고; (iii) 해동 후, 4℃에서 제2 기간 동안 보관된 경우 참조 약제학적 조성물 내의 동일한 작제물 II보다 적어도 2%, 5%, 7%, 10%, 12%, 15%, 17%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 100%, 2 배, 3 배, 5 배, 10 배, 100 배, 또는 1000 더 안정한 것인, 약제학적 조성물.
  82. 제81항에 있어서, 상기 제1 기간이 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월인, 약제학적 조성물.
  83. 제81항에 있어서, 상기 제2 기간이 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월인, 약제학적 조성물.
  84. 제67항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 벡터 게놈 농도가 -80℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
  85. 제67항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 벡터 게놈 농도가 -20℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
  86. 제67항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 벡터 게놈 농도가 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
  87. 제67항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 시험관내 효능이 -80℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
  88. 제67항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 시험관내 효능이 -20℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
  89. 제67항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 시험관내 효능이 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
  90. 제67항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 크기 분포가 -80℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 크기 분포와 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일한 것인, 약제학적 조성물.
  91. 제67항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 크기 분포가 -20℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 크기 분포와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일한 것인, 약제학적 조성물.
  92. 제67항 내지 제79항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 크기 분포가 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 크기 분포와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일한 것인, 약제학적 조성물.
  93. 제84항 내지 제92항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 일정 기간이 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월인, 약제학적 조성물.
  94. 제77항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 작제물 II의 안정성이 재조합 AAV의 감염성에 의해 결정되는 것인, 약제학적 조성물.
  95. 제77항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 작제물 II의 안정성이 재조합 AAV의 응집 수준에 의해 결정되는 것인, 약제학적 조성물.
  96. 제77항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 작제물 II의 안정성이 재조합 AAV 입자에 의해 방출된 유리 DNA 수준에 의해 결정되는 것인, 약제학적 조성물.
  97. 제67항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 소수성으로-코팅된 유리 바이알 내에 있는 것인, 약제학적 조성물.
  98. 제67항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 사이클로 올레핀 중합체(COP) 바이알 내에 있는 것인, 약제학적 조성물.
  99. 제67항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 Daikyo Crystal Zenith®(CZ) 바이알 내에 있는 것인, 약제학적 조성물.
  100. 제67항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 TopLyo 코팅된 바이알 내에 있는 것인, 약제학적 조성물.
  101. 제67항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이
    (a) 항-인간 혈관 내피 성장 인자(hVEGF) 항체를 암호화하는 작제물 II,
    (b) 0.2 g/L 농도의 염화 칼륨,
    (c) 0.2 g/L 농도의 일염기성 인산 칼륨,
    (d) 5.84 g/L 농도의 염화 나트륨,
    (e) 1.15 g/L 농도의 인산 나트륨 이염기성 무수물,
    (f) 4% 중량/부피(40 g/L) 농도의 수크로스,
    (g) 0.001% 중량/부피(0.01 g/L) 농도의 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80, 및
    (h) 물로 이루어지되,
    상기 항-hVEGF 항체는 서열번호:2 또는 서열번호:4의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄, 및 서열번호:1 또는 서열번호:3의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하는 것인, 약제학적 조성물.
  102. 제101항에 있어서, 상기 약제학적 조성물의 벡터 게놈 농도(VGC)가 약 3 x 109 GC/mL, 약 1 x 1010 GC/mL, 약 1.2 x 1010 GC/mL, 약 1.6 x 1010 GC/mL, 약 4 x 1010 GC/mL, 약 6 x 1010 GC/mL, 약 2 x 1011 GC/mL, 약 2.4 x 1011 GC/mL, 약 2.5 x 1011 GC/mL, 약 3 x 1011 GC/mL, 약 3.2 x 1011 GC/mL, 약 6.2 x 1011 GC/mL, 약 6.5 x 1011 GC/mL, 약 1 x 1012 GC/mL, 약 3 x 1012 GC/mL, 약 2 x 1013 GC/mL 또는 약 3 x 1013 GC/mL인, 약제학적 조성물.
  103. 제67항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사, 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사, 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여, 또는 후방 공막옆 데포 절차에 적합한 특성을 갖는 것인, 약제학적 조성물.
  104. 제67항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사, 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사, 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여, 또는 후방 공막옆 데포 절차에 적합한 바람직한 밀도를 갖는 것인, 약제학적 조성물.
  105. 제67항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사, 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사, 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여, 또는 후방 공막옆 데포 절차에 적합한 바람직한 삼투압 농도를 갖는 것인, 약제학적 조성물.
  106. 제105항에 있어서, 상기 삼투압 농도가 160-230 mOsm/kg H2O인, 약제학적 조성물.
  107. 제105항에 있어서, 상기 삼투압 농도가 600 mOsm/kg H2O 미만인, 약제학적 조성물.
  108. 제67항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 정맥내 투여, 피하 투여, 근육내 주사, 맥락막상 주사, 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사, 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여, 또는 후방 공막옆 데포 절차에 적합한 바람직한 점도를 갖는 것인, 약제학적 조성물.
  109. 제67항 내지 제108항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 액체 조성물인, 약제학적 조성물.
  110. 제67항 내지 제108항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 동결된 조성물인, 약제학적 조성물.
  111. 제67항 내지 제108항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 동결건조된 조성물 또는 재구축된 동결건조된 조성물인, 약제학적 조성물.
  112. 제67항 내지 제111항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 이전에 -80℃에서 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월 동안 보관된 후 4℃에서 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월 동안 보관될 수 있는 것인, 약제학적 조성물.
  113. 제67항 내지 제111항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 또는 당뇨병성 망막증(DR)으로 진단된 대상체를 치료하는 방법.
  114. 제113항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 맥락막상 주사, 유리체 통과 접근법을 통한 망막하 주사, 맥락막상 공간을 통한 망막하 투여, 또는 후방 공막옆 데포 절차에 의해 투여되는 것인, 방법.
  115. 제113항 또는 제114항에 있어서, 상기 대상체가 인간 대상체인, 방법.
  116. nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 또는 당뇨병성 망막증(DR)으로 진단된 대상체를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 제67항 내지 제108항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 제조하는 단계, -80℃에서 제1 기간 동안 약제학적 조성물을 보관하는 단계; (ii) 약제학적 조성물을 해동하는 단계; 및 (iii) 해동 후, 4℃에서 제2 기간 동안 약제학적 조성물을 보관하는 단계를 포함하는 것인, 방법.
  117. 제119항에 있어서, 상기 제1 기간이 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월인, 방법.
  118. 제119항에 있어서, 상기 제2 기간이 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월인, 방법.
  119. 하나 이상의 용기 및 사용 지침을 포함하는 키트로서, 상기 하나 이상의 용기는 제67항 내지 제102항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 포함하는 것인, 키트.
  120. 제119항에 있어서, 상기 하나 이상의 용기 중 적어도 하나가 사이클로 올레핀 중합체(COP)로부터 제조되는 것인, 키트.
  121. 안정한 액체 약제학적 조성물로서,
    (a) 재조합 아데노-연관 바이러스(rAAV),
    (b) 이온 염을 포함하고 60 mM 내지 150 mM의 이온 강도를 갖는 완충제,
    (d) 수크로스, 및
    (e) 계면활성제를 포함하는, 조성물.
  122. 제121항에 있어서, 상기 rAAV가 AAV1, AAV2, AAV2tYF, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAVrh10, AAV.rh20, AAV.rh39, AAV.Rh74, AAV.RHM4-1, AAV.hu37, AAV.Anc80, AAV.Anc80L65, rAAV.7m8, AAV.PHP.B, AAV.PHP.eB, AAV2.5, AAV2tYF, AAV3B, AAV.LK03, AAV.HSC1, AAV.HSC2, AAV.HSC3, AAV.HSC4, AAV.HSC5, AAV.HSC6, AAV.HSC7, AAV.HSC8, AAV.HSC9, AAV.HSC10 , AAV.HSC11, AAV.HSC12, AAV.HSC13, AAV.HSC14, AAV.HSC15, 또는 AAV.HSC16을 포함하는 것인, 조성물.
  123. 제121항 또는 제122항에 있어서, 상기 조성물이 3-16% 수크로스를 포함하는 것인, 조성물.
  124. 제121항 내지 제123항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 완충제가 -20℃ 내지 실온의 온도 범위에 걸쳐 약 pH 6 내지 약 pH 9의 pH를 유지하는 것인, 조성물.
  125. 제121항 내지 제124항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 4-6% 수크로스를 포함하는 것인, 조성물.
  126. 제121항 내지 제125항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 완충제가 약 150 mM, 약 145 mM, 약 140 mM, 약 135 mM, 약 130 mM, 약 125 mM, 약 120 mM, 약 115 mM, 또는 약 110 mM 이하의 이온 강도를 갖는 것인, 조성물.
  127. 제121항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 완충제가 약 60 mM 내지 약 115 mM의 이온 강도를 갖는 것인, 조성물.
  128. 제121항 내지 제127항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 완충제가 약 60 mM 내지 약 110 mM의 이온 강도를 갖는 것인, 조성물.
  129. 제121항 내지 제128항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 60 mM 내지 100 mM NaCl을 포함하는 것인, 조성물.
  130. 제121항 내지 제129항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 4-6% 수크로스를 포함하는 것인, 조성물.
  131. 제121항 내지 제130항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물이 약 -20℃의 온도로 동결되는 것인, 조성물.
  132. 제121항 내지 제131항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 동결된 조성물이 약 pH 6 내지 약 pH 9의 pH를 유지하는 것인, 조성물.
  133. 제121항 내지 제132항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 완충제가 일염기성 인산 칼륨, 인산 칼륨, 염화 나트륨, 인산 나트륨 이염기성 무수물, 인산 나트륨 육수화물, 인산 나트륨 일염기성 일수화물, 인산 나트륨 육수화물, 인산 나트륨 일염기성 일수화물, 트로메타민, 트리스(하이드록시메틸)아미노메탄 하이드로클로라이드(Tris-HCl), 아미노산, 히스티딘, 히스티딘 하이드로클로라이드(히스티딘-HCl), 숙신산 나트륨, 시트르산 나트륨, 아세트산 나트륨, 및 (4-(2-하이드록시에틸)-1-피페라진에탄술폰산)(HEPES), 황산 나트륨, 황산 마그네슘, 염화 마그네슘 6-수화물, 황산 칼슘, 염화 칼륨, 염화 칼슘, 및 시트르산 칼슘으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 구성요소를 포함하는 것인, 조성물.
  134. 제121항 내지 제132항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 완충제가 염화 칼륨, 일염기성 인산 칼륨, 염화 나트륨, 인산 나트륨 이염기성 무수물을 포함하는 것인, 조성물.
  135. 제121항 내지 제132항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 완충제가 염화 나트륨, 및 Tris 하이드로클로라이드를 포함하는 것인, 조성물.
  136. 제121항 내지 제133항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 계면활성제가 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80인, 조성물.
  137. 제121항 내지 제133항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 계면활성제가 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80이되, 상기 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80은 0.0005%(중량/부피, 0.005 g/L) 내지 0.05%(중량/부피, 0.5 g/L) 범위의 농도인, 조성물.
  138. 제121항 내지 제133항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 계면활성제가 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80이되, 상기 폴록사머 188, 폴리소르베이트 20, 또는 폴리소르베이트 80은 0.001%(중량/부피, 0.01 g/L)의 농도인, 조성물.
  139. 제121항 내지 제138항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 액체 약제학적 조성물이 추가로 동결건조되는 것인, 조성물.
  140. 제121항 내지 제138항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 액체 약제학적 조성물이 재구축된 동결건조된 분말인, 조성물.
  141. 제121항 내지 제140항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도가 -80℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
  142. 제121항 내지 제140항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도가 -20℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
  143. 제121항 내지 제140항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도가 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
  144. 제121항 내지 제140항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 시험관내 효능이 -80℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
  145. 제121항 내지 제140항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 시험관내 효능이 -20℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
  146. 제121항 내지 제140항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 시험관내 효능이 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 약제학적 조성물.
  147. 제121항 내지 제140항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 크기 분포가 -80℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 크기 분포와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일한 것인, 약제학적 조성물.
  148. 제121항 내지 제140항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 크기 분포가 -20℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 크기 분포와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일한 것인, 약제학적 조성물.
  149. 제121항 내지 제140항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 재조합 AAV의 크기 분포가 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 재조합 AAV의 크기 분포와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일한 것인, 약제학적 조성물.
  150. 제141항 내지 제149항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 일정 기간이 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월인, 약제학적 조성물.
  151. 제121항 내지 제140항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약제학적 조성물이 이전에 -80℃에서 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월 동안 보관된 후 4℃에서 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월 동안 보관될 수 있는 것인, 약제학적 조성물.
  152. 제121항 내지 제140항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는 관심 질환을 치료하는 방법으로서, 상기 rAAV는 관심 질환의 진행을 치료하거나, 또는 달리 개선하거나, 예방하거나 또는 늦추는 이식유전자를 암호화하는 것인, 방법.
  153. nAMD(습성 AMD), 건성 AMD, 망막 정맥 폐색(RVO), 당뇨병성 황반 부종(DME), 또는 당뇨병성 망막증(DR)으로 진단된 대상체를 치료하는 방법으로서, 상기 방법은 제121항 내지 제140항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 제조하는 단계, -80℃에서 제1 기간 동안 약제학적 조성물을 보관하는 단계; (ii) 약제학적 조성물을 해동하는 단계; 및 (iii) 해동 후, 4℃에서 제2 기간 동안 약제학적 조성물을 보관하는 단계를 포함하는 것인, 방법.
  154. 제153항에 있어서, 상기 제1 기간이 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월인, 방법 조성물.
  155. 제153항에 있어서, 상기 제2 기간이 약 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월인, 방법.
  156. 하나 이상의 용기 및 사용 지침을 포함하는 키트로서, 상기 하나 이상의 용기는 제121항 내지 제140항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 포함하는 것인, 키트.
  157. 제1항 내지 제53항, 제67항 내지 제111항 및 제121항 내지 제140항 중 어느 한 항의 약제학적 조성물을 포함하는 안정한 액체 제형.
  158. 사이클로 올레핀 중합체(COP) 바이알에 약 0.95 mL의 부피로 3.2 x1011 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태.
  159. COP 바이알에 적어도 0.8 mL의 부피로 3.2 x1011 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태.
  160. COP 바이알에 약 0.95 mL의 부피로 3.2 x 1011 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4, 4% 수크로스 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태.
  161. COP 바이알에 적어도 0.8 mL의 부피로 3.2 x 1011 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4, 4% 수크로스 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태.
  162. COP 바이알에 약 0.95 mL의 부피로 6.5 x 1011 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태.
  163. COP 바이알에 적어도 0.8 mL의 부피로 6.5 x 1011 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4, 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태.
  164. COP 바이알에 약 0.95 mL의 부피로 6.5 x 1011 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4, 4% 수크로스 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태.
  165. COP 바이알에 적어도 0.8 mL의 부피로 6.5 x 1011 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4, 4% 수크로스 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태.
  166. COP 바이알에 약 0.6 mL의 부피로 2.5 x 1012 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4, 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태.
  167. COP 바이알에 적어도 0.5 mL의 부피로 2.5 x 1012 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4, 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태.
  168. COP 바이알에 약 0.6 mL의 부피로 3 x 1013 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4, 4% 수크로스 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태.
  169. COP 바이알에 적어도 0.5 mL의 부피로 3 x 1013 GC/mL의 작제물 II, 0.2 g/L 염화 칼륨, 0.2 g/L 일염기성 인산 칼륨, 8.01 g/L 염화 나트륨, 1.15 g/L 인산 나트륨 이염기성 무수물, pH 7.4, 4% 수크로스 및 0.001% P188을 포함하는 단일 단위 투여 형태.
  170. 제158항 내지 제169항 중 어느 한 항에 있어서, 4℃에서 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월 동안 보관될 수 있는, 단일 단위 투여 형태.
  171. 제158항 내지 제169항 중 어느 한 항에 있어서, -80℃에서 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월 동안 보관될 수 있는, 단일 단위 투여 형태.
  172. 제158항 내지 제169항 중 어느 한 항에 있어서, 이전에 -80℃에서 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 약 24 개월 동안 보관된 후 4℃에서 1 주, 약 2 주, 약 3 주, 약 4 주, 약 1 개월, 약 2 개월 동안 보관될 수 있는, 단일 단위 투여 형태.
  173. 제158항 내지 제169항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 벡터 게놈 농도가 -80℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 단일 단위 투여 형태.
  174. 제158항 내지 제169항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 벡터 게놈 농도가 -20℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 단일 단위 투여 형태.
  175. 제158항 내지 제169항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 벡터 게놈 농도가 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 벡터 게놈 농도의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 단일 단위 투여 형태.
  176. 제158항 내지 제169항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 시험관내 효능이 -80℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 단일 단위 투여 형태.
  177. 제158항 내지 제169항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 시험관내 효능이 -20℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 단일 단위 투여 형태.
  178. 제158항 내지 제169항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 시험관내 효능이 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 시험관내 효능의 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99%인, 단일 단위 투여 형태.
  179. 제158항 내지 제169항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 -80℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 크기 분포가 -80℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 크기 분포와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일한 것인, 단일 단위 투여 형태.
  180. 제158항 내지 제169항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 -20℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 크기 분포가 -20℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 크기 분포와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일한 것인, 단일 단위 투여 형태.
  181. 제158항 내지 제169항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 4℃에서 일정 기간 동안 보관된 후 작제물 II의 크기 분포가 4℃에서 상기 일정 기간 동안 보관되기 전 작제물 II의 크기 분포와 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일한 것인, 단일 단위 투여 형태.
  182. 제173항 내지 제181항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 일정 기간이 약 1 개월, 약 2 개월, 약 3 개월, 약 4 개월, 약 5 개월, 약 6 개월, 약 7 개월, 약 8 개월, 약 9 개월, 약 10 개월, 약 11 개월, 약 12 개월, 약 15 개월, 약 18 개월, 또는 약 24 개월인, 단일 단위 투여 형태.
  183. 제158항 내지 제183항 중 어느 한 항의 단일 단위 투여 형태를 함유하는 미리 충전된 주사기.
  184. 제183항의 미리 충전된 주사기를 포함하는 키트.
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