TW202235618A

TW202235618A - 治療眼內壓相關疾患

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Publication number: TW202235618A
Application number: TW111100463A
Authority: TW
Inventors: 麥可Ｐ福馳; 蓋文Ｗ羅迪; 勞倫Ａ達爾文
Original assignee: 美國馬友醫藥教育研究基金會
Priority date: 2021-01-05
Filing date: 2022-01-05
Publication date: 2022-09-16
Also published as: WO2022150409A1; US20230381343A1

Abstract

本文提供用於降低罹患IOP相關眼部疾患或對IOP降低有反應之眼部疾患的患者之IOP的組合物及方法，該組合物包含編碼激素肽人類錫鈣素-1(stanniocalcin-1)(STC-1)之核酸。在本文所提供之態樣中，該STC-1編碼核酸含於包含AAV衣殼之重組腺相關病毒(rAAV)載體中，該AAV衣殼包含已封裝於其中之核酸，其中該核酸包含AAV 5'反向末端重複序列(ITR)、啟動子及編碼STC-1多肽之編碼序列及AAV 3' ITR (rAAV-STC-1)。本文所提供之rAAV-STC-1組合物及方法允許STC-1之長時間可重複、擴散及持續表現，導致最需要之患者長時間降低IOP。

Description

治療眼內壓相關疾患

本發明係關於用於治療患有與眼內壓(IOP)相關之眼部疾患，諸如正常眼壓青光眼(NTG)、青光眼視神經病變(GON)或輻射性視神經盤病變(papillopathy)之患者的方法及組合物。

與青光眼(青光眼視神經病變(GON))相關的神經病變仍為全球不可逆失明之主要原因，經估計在世界範圍內影響8000萬人，且為指代自然界中壓力敏感性進行性視網膜神經節細胞損失之特定型態之診斷(Quigley等人, Br. J. Ophthalmol., 90(3):262-267 (2006))。GON為概括地各自具有原發性及繼發性病因之分角型及閉角型青光眼。對於所有青光眼，唯一可靠的治療目標為降低IOP，該IOP為GON之最普遍的風險因素。在不存在GON之情況下，高眼壓或IOP升高亦可用降低IOP之藥物治療。

神經病變亦在正常眼壓青光眼(NTG) (亦已知為低眼壓或正常壓力青光眼)中發生，其為在眼部壓力未超過正常範圍之情況下視神經發生損傷之一種形式之青光眼。一般而言，「正常」壓力範圍在約12-21 mm Hg之間。儘管NTG之病因仍未知，但即使在正常量之眼部壓力下，視神經仍易受損傷。在治療NTG過程中，需要使患者之IOP儘可能降低，包括經由投與降低IOP之藥物、雷射治療及習知手術。

IOP隨眼部眼房液產生及排出而變。眼房液排出經由兩個主要路徑進行(Costagliola等人Surv Ophthalmol 65, 144-170 (2020))。習知或小樑路徑為經由小樑網狀結構使大部分水溶液排入鞏膜外靜脈系統(其具有已知為鞏膜外靜脈壓力(EVP)之基礎壓力)中之靜脈神經叢中之顯著路徑。第二主要路徑已知為葡萄膜鞏膜外流路徑且主要經由睫狀肌排出流體。用於IOP降低之治療策略包括嘗試減少房水產生或增加房水排出之藥理學或雷射療法。若此等模態不充分，則可能需要手術干預以產生新的排出通道。歸因於與雷射或手術干預相關的風險，使用含有眼部降血壓治療劑之局部滴眼劑經常為初始治療(Linden, C.等人Acta Ophthalmol 96, 567-572 (2018))。

一般而言，局部前列腺素F2α (PGF2α)類似物滴眼劑單一療法(例如拉坦前列素(latanoprost)、比馬前列素(bimatoprost))為患有GON或高眼壓之患者所選之初始治療(Linden等人, Acta Ophthalmol., 96(6):567-572 (2018))，且為患有NTG之彼等者之治療選項。PGF2α類似物為藉由經由前列腺素F (FP)受體傳導信號間接降低IOP之促炎性分子(Doucette等人,Ophthalmic Genet., 38(2):108-16(2017))。

然而，PGF2α滴眼劑存在若干成問題的特徵，其涉及施用方法、副作用及整體順應性。舉例而言，拉坦前列素滴眼劑(Xalatan®，NDA 20-597/S-044)必須每天施用一次且任何劑量偏差可能不僅減少IOP降低作用，而且自相矛盾地導致IOP升高。依循每日方案，要求每日投與有助於實質不順應性，其中不順應患者之估計值在所有青光眼患者之23-60%之間的範圍內(Richardson等人, Patient Preference and Adherence, 7:1025-1039(2013)；Gooch等人, Pharmaceutics, 4:197-211(2012)；Mansberger等人, Trans Am Ophthalmol Soc. 111:1-16(2013)；Budenz等人, Ophthalmology 116:S43-7(2009)；Sleath等人, Ophthalmology 118:2398-2402(2011))。

亦導致不佳方案依從性之另一因素為與拉坦前列素及其他PGF2α類似物滴眼劑相關之副作用集合。然而，一般良好耐受的拉坦前列素及其他PGF2α類似物具有顯著的發炎相關副作用，包括結膜皮膚充血、點狀上皮角膜病變及眼表面及眼內刺激(Toris等人, Surv Ophthalmol., 53 Suppl1:S107-120(2008)；Smith等人, Acta Ophthalmol Scand., 77(6):668-72；Warwar等人, Ophthalmology, 105(2):263-8；Razeghinejad等人, Ocul Immunol Inflamm. 2017:1-8(2017))。歸因於陰性副作用之不佳順應性或每日投與困難令人遺憾地導致疾病進展提高(Rajurkar等人, J Curr Ophthalmol, 30:125-9(2018)；Newman-Casey等人, Ophthalmology, 122:1308-16(2015)；Nordstrom等人, Am J Ophthalmol, 140:598-606(2005)；Hwang等人, JAMA Ophthalmol, 132:1446-52(2014)；Feehan等人, J Clin Med, 5(2016))。

儘管廣泛施用PGF2α類似物，但相當一部分(約20%)患有高眼壓、GON及NTG之患者對諸如拉坦前列素之PGF2α類似物滴眼劑之響應減弱或不存在(Doucette等人, Ophthalmic Genet., 38(2):108-116 (2017)；King等人, BMJ, 346:f3518 (2013)；Tanna等人, Curr. Opin. Ophthalmol., 26:116-120 (2015)；Winkler等人, J. Ocul. Pharmacol. Therap., 30(2-3):102-109 (2014)；Cui等人, J. Clin. Pharm. Ther., 42(1):87-92(2017)；Zhang等人, Curr. Eye Res., 41(12):1561-1565 (2016)；Ussa等人, Ophthalmology, 122(5):1040-1048 e1044 (2015)；Sakurai等人, Br. J. Ophthalmol., 98(4):469-473 (2014)；Sakurai等人, Ophthalmology, 114(6):1039-1045 (2007)；Peng等人, Kobe J. Med. Sci., 53(1-2): 49-52 (2007))。此對PGF2α類似物滴眼劑之不夠標準的響應與FP受體基因(PTGFR)中之遺傳多態性相關(Cui等人, J Clin Pharm Ther., 42(1):87-92(2017)；Zhang等人, Curr Eye Res., 41(12):1561-5(2016)；Ussa等人, Ophthalmology, 122(5):1040-8(2015)；Sakurai等人, Br J Ophthalmol, 98(4):469-73(2014)；Sakurai等人, Ophthalmology, 114(6):1039-45(2007)；Peng等人, Kobe J Med Sci., 53(1-2):49-52(2007))。

為了對抗此等問題，在治療目的之後不斷尋求持續IOP降低以便使患者不順應性、眼表面副作用及IOP波動降至最低。已利用多種遞送可用藥物之途徑，包括隱形眼鏡遞送及結膜穹窿、淚點、眼周空間或前房之植入物(參見Kompella等人Prog Retin Eye Res, 100901 (2020)之最近綜述)。然而，可用途徑需要使用架構來溶離藥物，此在眼外使用時可能導致患者不適或在眼內使用時可能導致包括角膜內皮細胞損失之併發症。

除了上文所描述之眼部神經病變之外，額外神經病變與例如基於輻射之眼部療法相關，該等療法包括用於例如葡萄膜黑色素瘤之眼部腫瘤之敷貼、質子束及γ刀治療(Jampol等人,Ophthalmol 109:2197-2206(2002)；Papakostas等人, JAMA Ophthalmol. 135:1191-6(2017)；Lane等人, JAMA Ophthalmol. 133:792-796(2015)；Gragoudas等人, Trans Am Ophthalmol Soc. 100:43-9(2002)；Gorovets等人, Brachytherapy 16:433-43(2017)；Reynolds等人, Int J Retin Vitreous 3:17(2017))。在某些患者中，輻射副作用限制長期視力，導致輻射性視神經盤病變(參見例如Kim等人Natural history of radiation papillopathy after proton beam irradiation of parapapillary melanoma, Ophthalmology 2010;117;1617-1622)。對視神經盤之輻射劑量為輻射後視神經萎縮之公認風險因素且與不佳視力後果相關。在若干年療程中，輻射後視神經萎縮之一些情況呈現視神經盤蒼白作為顯著特徵，而其他發展伴隨視神經環盤薄化(neuroretinal rim thinning，NRT)。預防及治療此等輻射性視神經盤病變仍具挑戰性。

因此，對適用於在無與當前模態相關之必需問題之情況下治療對其有需要之患者之眼部神經病變之組合物及方法存在未滿足的需求。

本文提供使用此類組合物來降低罹患IOP相關眼部疾患或對IOP降低有反應之眼部疾患的患者之IOP的組合物及方法，該組合物包含編碼激素肽人類錫鈣素-1(stanniocalcin-1) (STC-1)之核酸。在本文所提供之態樣中，該STC-1編碼核酸含於包含AAV衣殼之重組腺相關病毒(rAAV)載體中，該AAV衣殼包含已封裝於其中之核酸，其中該核酸包含AAV 5'反向末端重複序列(ITR)、啟動子及編碼STC-1多肽之編碼序列及AAV 3' ITR (rAAV-STC-1)。本文所提供之rAAV-STC-1組合物及方法允許STC-1之長時間可重複、擴散及持續表現，導致最需要之患者長時間降低IOP。

本文所提供之方法及組合物可用於治療或預防與IOP提高或升高相關之患者的眼部疾患，例如GON。另外，本文所提供之方法及組合物可用於治療或預防患者之眼部疾患，其中該疾患對IOP降低有反應，例如NTG。此外，本文所提供之方法及組合物可用於治療處於罹患輻射性視神經盤病變風險下之彼等者，例如在接受輻射以治療眼部腫瘤時基線IOP升高之個體。在一些實施例中，本文所提供之rAAV-STC-1組合物及方法可用於在患者一或多個眼睛中重複降低IOP及/或預防IOP升高，而無需將藥物溶離裝置植入患者之淚點、眼表面或前房中。在一些實施例中，患者之IOP對拉坦前列素或其他PGF2α類似物沒有反應。

人類STC-1 (UniProtKB - P52823 (STC1_HUMAN))為具有11個配對半胱胺酸殘基之50 kDa二硫鍵連接的二聚體，其已展示在礦物質代謝中起作用且含有抗炎性(Huang等人Am J Pathol 174, 1368-1378 (2009))、抗氧化應力(Sheikh-Hamad, D. Am J Physiol Renal Physiol 298, F248-254 (2010))及神經保護性(Roddy等人Mol Ther 20, 788-797 (2012))特性。STC-1充當在生理學體內恆定期間以相對較低水準產生，但在細胞應力時間內上調之應力-響應蛋白(Dalvin等人Curr Eye Res, 1-6 (2019))，該等應力包括發炎(Tang等人Free Radic Biol Med 71, 321-331 (2014)、氧化(Nguyen等人, Oncogene 28, 1982-1992 (2009))及低氧(Ito等人Biochemical and biophysical research communications 452, 1091-1097 (2014)；Shi等人, J Cardiovasc Pharmacol 64, 522-529 (2014)；Durukan Tolvanen等人, Neuroscience 229, 49-54, (2013))。

有利地，本文所提供之rAAV-STC-1組合物可按需要重複投與。舉例而言，rAAV-STC-1組合物可在不誘導不利且進一步複激的發炎反應之情況下經由前房內注射或經由結膜下遞送或其他適合的遞送區域而重複投與至例如眼睛之前房。出人意料地，歸因於其抗炎性特性，可能地經由抑制巨噬細胞趨化性、調節白血球之經內皮遷移及減少T細胞浸潤，咸信STC-1自身表現可造成本發明組合物之重複注射劑之耐受性。因此，STC-1出乎意料地用於雙重目的：i)誘導IOP降低以治療眼部疾患，及ii)出乎意料地輔助重複病毒載體投與之宿主耐受性的抗炎性輔助療法。重複投與包含如本文所描述之編碼STC-1之核酸之AAV載體的能力咸信表示AAV病毒載體至前房或結膜下空間中之第一次成功重複遞送以實現用於降低IOP之治療反應。舉例而言且如下文進一步描述(參見例如實例2及圖6A-C、7A-B)，經由持續性活化之啟動子(雞β-肌動蛋白) (ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG)，將包含編碼STC-1之核酸之單股(ss)AAV2前房內重複注射至前房中導致相關青光眼動物模型中之IOP降低重建。同樣地，將ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG重複注射至結膜下空間亦導致相關青光眼動物模型中之IOP降低之重建(參見例如實例2、圖11)。

重複投與本發明之重組病毒載體之能力表示IOP降低治療之顯著進展，因為包括AAV之病毒構築體用於重複遞送治療劑之醫療用途的主要問題為用可限制治療之宿主耐受性之初始或重複注射劑誘導發炎反應的可能性(Riviere等人, Gene Ther, 13:1300-08(2006))；Mingozzi等人, Blood, 122:23-36(2013)；Perez等人, Brain Sci., 10, (2020))。舉例而言，單次玻璃體內注射至經工程改造以表現綠色螢光蛋白之AAV之玻璃狀液中展示產生以玻璃體中之CD45+發炎性滲透為特徵之眼內發炎(Goel等人, Open Ophthalmol, 4:52-59(2010))。

在一個態樣中，經由將rAAV-STC-1組合物遞送至一個或兩個眼睛之前房來衍生此等有利效應。前房含有眼房液，其為自補充眼前組織且經由若干排出路徑移除之睫狀上皮組織產生及分泌之水樣物質。眼房液之此連續產生及移除使得眼房液每90-120分鐘轉換(參見例如Bakri等人, Ophthalmology 114, 855-859 (2007))，使病毒曝露最小化，同時允許擴散表現及遞送至眼部之天然外流路徑中，允許STC-1遞送至例如虹膜角膜角。在將ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG投與至前房中之後，在睫狀體、角膜、虹膜及晶狀體中觀測到STC-1-FLAG表現(參見例如圖5A-B、9、10A-B)。出乎意料地，前房遞送亦導致STC-1-FLAG表現及/或遞送至視網膜(參見例如圖5A-B、9、10A-B)，證明投與後超過4個月觀測到之穩健原位視網膜表現。在視網膜中表現/遞送STC-1之能力對視網膜神經節細胞之直接神經保護性作用具有重要影響。因為GON及NTG根據定義主要為視神經病變，在眼睛之前房中使用AAV遞送能夠組成性表現STC-1之核酸提供獨特第一類雙重機制治療劑，該治療劑提供IOP降低及神經保護兩者。此外，STC-1在FP受體下游起作用，且不同於諸如拉坦前列素之PGF2α類似物，STC-1之作用不視FP受體活性而定(Roddy等人, Invest Ophthalmol Vis Sci. 58(5):2715-24(2017)；Roddy等人, PLoS One 15(5):1-12(2020))。因此，使用包含能夠表現STC-1之核酸之rAAV為相當一部分(約20%)歸因於FP受體異源性對PGF2α類似物之響應不佳或不存在之青光眼患者提供更佳治療效益。

在替代態樣中，經由將本文所描述之rAAV-STC-1組合物遞送至一個或兩個眼睛之結膜下空間來衍生此等有利效應。如實例2中所示，本文所描述之組合物之重複結膜下注射劑在第一次投與之初始效應開始衰減之後重建IOP降低(圖11)。重要地，將多次劑量之本發明之組合物投與至結膜下空間之能力提供顯著更少侵襲性投與途徑，消除與眼內遞送相關之許多風險，包括例如眼內出血(眼前房出血)及/或感染(眼內炎)，同時允許將STC-1遞送至前房中，該等益處描述於上文。

在額外替代態樣中，本文所描述之rAAV-STC-1組合物可經由例如但不限於玻璃體內、基質內、前房內、球筋膜囊下、視網膜下、眼球後、眼球周、脈絡膜上、脈絡膜、脈絡膜下、結膜、鞏膜外、近鞏膜後、角膜周或淚管注射重複遞送至眼睛。

在一些實施例中，在投與本文所提供之rAAV-STC-1組合物之後，患者經治療之眼睛之IOP相對於基線投與前水準降低至少5%、10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%或大於55%。在一些實施例中，在投與本文所提供之rAAV-STC-1組合物之後，患者經治療之眼睛之IOP相對於投與前水準降低約10%至75%、約10%至65%、約10%至50%或約10%至40%。在一些實施例中，在投與本文所描述之rAAV-STC-1組合物之後，IOP標準化為約10 mmHg與21 mmHg之間持續至少30天、至少60天、至少90天、至少180天、至少1年、至少2年或更長時間。在一些實施例中，在投與本文所提供之rAAV-STC-1組合物之後，患者經治療之眼睛之IOP相對於基線投與前水準降低至少1 mmHg、至少2 mmHg、至少3 mmHg、至少4 mmHg、至少5 mmHg、至少6 mmHg、至少7 mmHg、至少8 mmHg、至少9 mmHg、至少10 mmHg或大於10 mmHg。在一些實施例中，使用戈爾德曼(Goldmann)壓平式眼壓量測術(GAT)測定IOP。

在一個態樣中，本文提供一種用於降低罹患IOP相關眼部疾患或對IOP降低有反應之眼部疾患的患者之IOP的方法，其中該方法包含向該患者之至少一隻眼睛投與治療有效量之腺相關病毒(rAAV)，其包含編碼可操作地連接於啟動子之錫鈣素-1 (STC-1)多肽之核酸。在一些實施例中，STC-1已經密碼子最佳化以自AAV載體表現。在一些實施例中，STC-1已經密碼子最佳化以在人類眼細胞中表現。此類STC-1序列可與野生型或天然人類STC-1編碼序列(SEQ ID NO: 1) (NCBI CCDS 6043.1)共有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性。在一些實施例中，核酸編碼具有SEQ ID NO: 2之胺基酸序列或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之胺基酸的STC-1多肽。在一些實施例中，核酸編碼具有SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 8、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 27或SEQ ID NO: 29之胺基酸序列或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之胺基酸的STC-1多肽。在一些實施例中，編碼STC-1之核酸為SEQ ID NO: 1或與其具有至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致性之核酸。在一些實施例中，編碼STC-1之核酸選自SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 26或SEQ ID NO: 28或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸。

在一些實施例中，可操作地連接於編碼STC-1之核酸的啟動子為持續性活化之啟動子。在一些實施例中，持續性活化之啟動子衍生自例如但不限於巨細胞病毒(CMV)啟動子、β肌動蛋白啟動子，例如但不限於雞β肌動蛋白(CBA)啟動子或人類β肌動蛋白(hACTB)啟動子、巨細胞病毒(CMV)立即早期強化子及雞β-肌動蛋白(CAG)啟動子、人類延長因子-1α (hEF-1α)啟動子、磷酸甘油酸激酶(PGK)啟動子、泛素C (UbiC)啟動子或本文所描述之其他持續性活化之啟動子。在一些實施例中，啟動子為衍生自SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 34或SEQ ID NO: 35之核酸序列或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸序列的CBA啟動子。在一些實施例中，CBA啟動子為SEQ ID NO: 34或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸。在一些實施例中，CBA啟動子為SEQ ID NO: 35或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸。

在一些實施例中，啟動子為眼細胞特異性啟動子。在一些實施例中，眼細胞特異性啟動子衍生自例如但不限於人類突觸蛋白1基因(hSYN1)啟動子、浦金埃氏細胞(Purkinje cell)蛋白2 (PCP2)啟動子、G蛋白次單元γ轉導蛋白2 (GNGT2)啟動子、磷酸二酯酶6H (PDE6H)啟動子、類成對同源域3 (PITX3)啟動子、密連蛋白5 (CLDN5)啟動子、核受體第二亞族E組成員1(NR2E1)啟動子、配對盒蛋白6 (PAX6)啟動子或本文所描述之其他眼細胞特異性啟動子。在一些實施例中，啟動子為衍生自SEQ ID NO:42之核酸序列或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸序列的hSYN1啟動子。在一些實施例中，啟動子為衍生自SEQ ID NO: 54之核酸序列或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸序列的hRK1啟動子。

在一些實施例中，啟動子為內皮細胞特異性啟動子。在一些實施例中，啟動子為上皮細胞特異性啟動子。在一些實施例中，啟動子為纖維母細胞特異性啟動子。在一些實施例中，內皮細胞特異性啟動子衍生自例如但不限於纖維母細胞特異性蛋白1 (FSP1/S100A4)啟動子、血管生成素受體(TEK/TIE2)啟動子、血管內皮鈣黏素5 (CDH5)啟動子、血管內皮生長因子受體2 (VEGFR2/KDR/FLK1)啟動子、血小板衍生生長因子B (PDGFB)啟動子、SRY-Box轉錄因子17 (SOX17)啟動子、BMX非受體酪胺酸激酶(BMX)啟動子、內皮細胞特定分子1 (ESM1)啟動子、愛帕琳肽(apelin) (APLN)啟動子、愛帕琳肽受體(APLNR/APJ)啟動子、脂肪酸結合蛋白4 (FABP4/AP2)啟動子、鈣/鈣調神經磷酸酶依賴性轉錄因子(NFATC1)啟動子、利尿鈉肽受體3 (NPR3)啟動子或本文所描述之其他內皮細胞特異性啟動子。

當STC-1編碼核酸已封裝用於在AAV載體中遞送時，啟動子及STC-1編碼核酸藉由AAV反向末端重複序列(ITR)側接。在一些實施例中，ITR衍生自與AAV衣殼相同的AAV血清型。在一些實施例中，ITR衍生自與AAV衣殼不同的AAV血清型。在一些實施例中，ITR衍生自AAV2 ITR。在一些實施例中，ITR衍生自SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 45、SEQ ID NO: 46、SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 49之核酸或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸。在一些實施例中，5' ITR衍生自SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 45或SEQ ID NO: 46之核酸或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸。在一些實施例中，3' ITR衍生自SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 48或SEQ ID NO: 49之核酸或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸。

在一些實施例中，AAV載體為ssAAV載體。在一些實施例中，AAV載體為自補(sc) AAV。

在某些實施例中，核酸進一步包含一或多種調節元件、強化子元件、順式-調控模組(CRM)、內含子、外顯子、聚腺苷酸化信號及/或轉錄後元件，諸如土拔鼠肝炎病毒(WHP)轉錄後調節元件(WPRE)。

在一些實施例中，AAV衣殼衍生自AAV1、AAV2、AAV4、AAV5、AAV6、AAV8或AAV9血清型。在一些實施例中，AAV衣殼衍生自AAV2。在一些實施例中，AAV2為AAV2 (三重Y-F)。在一些實施例中，AAV衣殼衍生自AAV8。在一些實施例中，AAV衣殼衍生自AAV9。在一些實施例中，AAV衣殼為AAV之雜交體，諸如AAV8/AAV9衣殼，例如AAV8G9。

在一些實施例中，rAAV包含SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 52或SEQ ID NO: 53之核酸序列或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸。在一些實施例中，rAAV包含SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 52或SEQ ID NO: 53之核酸序列或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸，且該AAV為AAV2血清型。在一些實施例中，rAAV包含SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 52或SEQ ID NO: 53之核酸序列或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸，且該AAV為在其如下衣殼蛋白中具有酪胺酸成為苯丙胺酸突變之AAV2 (三重Y-F)血清型：Y444F、Y500F及Y730F。在一些實施例中，rAAV包含SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 52或SEQ ID NO: 53之核酸序列或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸，且該AAV為AAV8血清型。在一些實施例中，rAAV包含SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 52或SEQ ID NO: 53之核酸序列或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸，且該AAV為AAV9血清型。在一些實施例中，rAAV包含SEQ ID NO: 50、SEQ ID NO: 51、SEQ ID NO: 52或SEQ ID NO: 53之核酸序列或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸，且該AAV為AAV8G9血清型。

在一些實施例中，經由替代載體遞送編碼STC-1之核酸，該替代載體例如但不限於腺病毒載體、慢病毒載體，例如但不限於人類免疫缺乏病毒衍生之慢病毒載體或具有VSV-G包膜蛋白載體或DNA質體之馬類感染性貧血病毒(EIAV)衍生之慢病毒假型或作為mRNA載體。

本文所描述之方法及組合物尤其適用於降低包括有需要之人類之患者之IOP。在一些實施例中，患者遭受IOP提高，且IOP提高為潛在眼部疾病或疾患之結果。在一些實施例中，患者具有正常IOP，但具有對IOP降低有反應之眼部疾患，包括(但不限於)正常眼壓青光眼。在一些實施例中，潛在眼部疾病或疾患為青光眼視神經病變(GON)。在一些實施例中，潛在眼部疾患為青光眼。在一些實施例中，青光眼為原發性青光眼，例如但不限於開角型青光眼、正常眼壓青光眼、閉角型青光眼或先天性青光眼。在一些實施例中，青光眼為繼發性青光眼，例如但不限於新生血管性青光眼、色素性青光眼、剝脫性青光眼或葡萄膜炎性青光眼。

在替代態樣中，本文所描述之方法及組合物用於預防或降低輻射性視神經盤病變發展，其為例如視神經盤旁區域中眼內腫瘤之輻射之併發症。如實例5及圖15-21中所描述，已發現，在用於眼部腫瘤之輻射治療之前或期間經歷IOP提高之個體處於罹患輻射性視神經盤病變之相當大風險下。因此，在一些實施例中，本文所描述之組合物及方法用於治療或預防接受用於治療眼部腫瘤之輻射之患者的輻射性視神經盤病變。在一些實施例中，在開始輻射之前向患者投與本文所描述之組合物。在一些實施例中，在輻射治療療程期間向患者投與本文所描述之組合物兩次或超過兩次，例如在治療期間2次、3次、4次、5次、6次、7次、8次、9次、10次、11次、12次、13次、14次、15次或超過15次。在一些實施例中，患者在投與輻射之前具有升高的IOP，例如大於21 mmHg之IOP。在一些實施例中，眼內腫瘤為例如但不限於黑素瘤，例如脈絡膜黑素瘤或葡萄膜黑色素瘤、脈絡膜血管瘤、脈絡膜斑痣、虹膜腫瘤、視網膜母細胞瘤、淚腺腫瘤或眼內淋巴瘤。在一些實施例中，患者在接受用於眼部腫瘤之輻射治療之後罹患輻射性視神經盤病變，且在輻射性視神經盤病變發作之後投與本文所描述之組合物兩次或超過兩次，例如2次、3次、4次、5次、6次、7次、8次、9次、10次、11次、12次、13次、14次、15次或超過15次投與。

本文所描述之組合物尤其適用於多次投與，例如2次、3次、4次、5次、6次、7次、8次、9次、10次、11次、12次、13次、14次、15次或超過15次投與，例如隨時間推移間隔之無限投與，例如相隔1週、相隔2週、相隔1個月、相隔2個月、相隔3個月、相隔4個月、相隔5個月、相隔6個月、相隔7個月、相隔8個月、相隔9個月、相隔10個月、相隔11個月、相隔12個月、相隔16個月、相隔18個月、相隔24個月、相隔30個月、相隔36個月、相隔48個月、相隔60個月或更長。在一些實施例中，本文所描述之組合物一週一次、每兩週一次、每個月一次、每2個月一次、每3個月一次、每4個月一次、每5個月一次、每6個月一次、每7個月一次、每8個月一次、每9個月一次、每10個月一次、每12個月一次、每16個月一次、每18個月一次、每24個月一次、每30個月一次、每36個月一次、每48個月一次、每60個月一次或每10年一次投與。在一些實施例中，經由前房內注射將組合物投與至前房中兩次或超過兩次。在一些實施例中，將組合物投與至結膜下空間中兩次或超過兩次。在一些實施例中，經由前房內注射將組合物投與至前房中之每一者中一次或多次及結膜下空間中。在一些實施例中，經由注射將組合物投與至玻璃體內、基質內、前房內、球筋膜囊下、視網膜下、眼球後、眼球周、脈絡膜上、脈絡膜、脈絡膜下、結膜、鞏膜外、近鞏膜後、角膜周或淚管或其組合兩次或多於兩次。

在一個態樣中，提供攜有編碼STC-1之核酸之重組腺相關病毒(rAAV)載體以用於降低患者之IOP。在一些實施例中，rAAV載體包含SEQ ID NO: 52或53之核酸或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸。在一些實施例中，SEQ ID NO: 52或SEQ ID NO: 53已封裝至AAV2血清型衣殼中。在一些實施例中，AAV2為AAV2 (三重Y-F)突變體或其修飾。在某些替代實施例中，rAAV載體包含SEQ ID NO: 50或SEQ ID NO: 51之核酸或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸。在一些實施例中，SEQ ID NO: 50或SEQ ID NO: 53已封裝至AAV2血清型衣殼中。在一些實施例中，AAV2為AAV2 (三重Y-F)突變體或其修飾。

在一個態樣中，本文提供用於降低患者眼睛中之IOP之rAAV，該rAAV包含AAV2血清型衣殼及編碼可操作地連接於持續性活化之啟動子序列之STC-1多肽之核酸。在一些實施例中，rAAV包含編碼STC-1多肽之核酸，該STC-1多肽包含SEQ ID NO: 2之胺基酸序列或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，STC-1多肽包含SEQ ID NO: 4之胺基酸序列或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，STC-1多肽包含SEQ ID NO: 6之胺基酸序列或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，STC-1多肽包含SEQ ID NO: 14之胺基酸序列或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之胺基酸序列。在一些實施例中，STC-1多肽包含選自SEQ ID NO:16、18、20、21、22、23、25、27或29之胺基酸序列或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之胺基酸序列。

在替代態樣中，STC-1多肽進一步包含胺基酸標記序列。在一些實施例中，胺基酸標記為選自SEQ ID NO: 30、SEQ ID NO: 31或SEQ ID NO: 32之胺基酸序列或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之胺基酸序列的FLAG標記。

在額外替代態樣中，包含編碼STC-1之核酸之rAAV包含SEQ ID NO: 1或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸序列。在一些實施例中，編碼STC-1之核酸包含SEQ ID NO: 3或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸序列。在一些實施例中，編碼STC-1之核酸包含SEQ ID NO: 5或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸序列。在一些實施例中，編碼STC-1之核酸包含SEQ ID NO: 13或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸序列。在一些實施例中，編碼STC-1之核酸包含選自SEQ ID NO: 7、9、11、15、17、19、24、26或28之核酸或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸序列。

在額外替代態樣中，包含編碼可操作地連接於啟動子之STC-1之核酸的rAAV包含雞β-肌動蛋白啟動子。在一些實施例中，雞β-肌動蛋白啟動子衍生自SEQ ID NO: 33、34或35之核酸序列或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸序列。在一些實施例中，雞β-肌動蛋白啟動子衍生自SEQ ID NO: 33之核酸序列或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸序列。在一些實施例中，雞β-肌動蛋白啟動子衍生自SEQ ID NO: 34之核酸序列或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸序列。在一些實施例中，雞β-肌動蛋白啟動子衍生自SEQ ID NO: 35之核酸序列或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸序列。在額外替代實施例中，啟動子選自巨細胞病毒(CMV)啟動子、SV40啟動子、人類β-肌動蛋白啟動子、人類延長因子-1-α (hEF-1α)啟動子、磷酸甘油酸激酶(PGK)啟動子或泛素C (UbiC)啟動子。

在額外替代態樣中，包含編碼STC-1之核酸的rAAV包含核酸SEQ ID NO: 52或SEQ ID NO: 53或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸序列。

在額外替代態樣中，AAV2衣殼包含衣殼蛋白之表面上一或多個酪胺酸(Y)成為苯丙胺酸(F)突變。在一些實施例中，衣殼蛋白之表面上一或多個酪胺酸成為苯丙胺酸突變選自其衣殼蛋白中之Y444F突變、Y730F突變、Y500F、Y272F、Y447F突變、Y733F突變或Y733F突變。在一些實施例中，AAV2衣殼在以下胺基酸處包含衣殼蛋白之表面上之酪胺酸(Y)成為苯丙胺酸(F)突變：Y444F、Y500F及Y730F。

本發明之一或多個實施例的詳情闡述於附圖及以下實施方式中。本發明之其他特徵、目標及優點將自實施方式及圖式及自申請專利範圍顯而易知。

相關申請案之交叉參考本申請案主張2021年1月5日申請之美國臨時申請案第63/133,947號及2021年6月24日申請之美國臨時申請案第63/214,666號之優先權。此等申請案中之每一者之全部內容出於所有目的特此以引用之方式併入。

引用併入 2022年1月4日建立且72.8 KB大小之命名為「19081-013WO1_SequenceListing」之文本文件的內容以全文引用的方式併入本文中。

本發明提供用於治療患有高眼壓及/或一或多種與升高的IOP相關(例如青光眼)或對IOP降低有反應(例如NTG)之疾病或疾患之患者(例如人類)的方法及組合物。本發明亦提供用於治療或預防輻射性視神經盤病變之方法及組合物。舉例而言，一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸可遞送至患有高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關或對IOP降低有反應之疾病或疾患之患者(例如人類)的一個或兩個眼睛(例如一個或兩個眼睛內之細胞)以治療患者。在一些實施例中，經設計以表現STC-1多肽之核酸可以病毒載體(例如腺相關病毒(AAV)載體)形式遞送至患有高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關或對IOP降低有反應之疾病或疾患之患者(例如人類)的眼睛內之細胞。

除非另外定義，否則本文所使用之所有技術及科學術語皆具有與一般熟習此項技術者通常所理解相同的含義。儘管與本文所描述之方法及材料類似或等效之方法及材料可用於實踐本發明，但下文描述適合的方法及材料。所有公開案、專利申請案、專利及本文所提及之其他參考案均以全文引用的方式併入。在有衝突之情況下，將以本說明書(包括定義)為準。另外，材料、方法及實例僅為說明性的，且不意欲為限制性的。

術語「AAV」或「腺相關病毒」係指病毒之細小病毒科(Parvoviridae)屬內的依賴細小病毒(Dependoparvovirus)。AAV可為衍生自天然存在之「野生型」病毒之AAV、衍生自已封裝至包含由天然存在之cap基因編碼之衣殼蛋白之衣殼中之rAAV基因體之AAV及/或已封裝至包含由非天然存在之衣殼cap基因編碼之衣殼蛋白之衣殼中之rAAV基因體。後者之一個實例包括具有衣殼蛋白之rAAV，該衣殼蛋白包含插入天然存在之衣殼之胺基酸序列中之肽。

術語「rAAV」係指「重組AAV」。在一些實施例中，重組AAV具有AAV基因體，其中部分或全部rep及cap基因已經異源序列，例如編碼STC-1蛋白之核酸序列置換。

如本文所使用，術語「受試者」、「宿主」及「患者」可互換使用。如本文所使用，受試者為受試者、宿主，且患者為哺乳動物，諸如非靈長類動物(例如牛、豬、馬、貓、狗、大鼠等)或靈長類動物(例如猴及人類)，或在某些實施例中，人類。在特定實施例中，患者為人類。

如本文所使用，「可操作地連接」係指以准許或促進經編碼之多肽之表現的方式，相對於編碼多肽之核酸將調節元件安置於載體中。

如本文所使用，就IOP而言，術語「升高」係指大於健康患者眼睛中典型地觀測到之IOP的任何IOP(例如患有高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患，諸如青光眼的患者)。在一些實施例中，升高的IOP可為大於約21毫米汞柱(mmHg)之任何IOP。舉例而言，具有高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患的人類可具有約22 mmHg至約75 mmHg (例如約22至約65、約22至約55、約22至約45、約22至約35、約22至約25、約25至約75、約30至約75、約35至約75、約40至約75、約45至約75、約50至約75、約55至約75、約60至約75、約25至約60、約30至約50、約25至約35、約30至約40、約35至約45、約40至約50、約45至約55、約50至約60或約55至約65 mmHg)之IOP。量測IOP之方法為此項技術中所熟知，且包括例如使用壓力量測術，例如戈爾德曼壓平式眼壓量測術(GAT)、佩金斯(Perkins)壓力量測術、非接觸式壓力量測術、眼壓計(Tono-pen)、回彈式壓力量測術、肺壓力量測術、ICare及其他適用方法。在一些實施例中，可使用GAT進行用於測定IOP之適合技術。

降低 IOP 之方法出於降低有需要之患者之IOP之目的，任何適當的方法可用於將一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸遞送至患者一個或兩個眼睛(例如一個或兩個眼睛內之細胞)。在一些實施例中，可藉由直接注射裸核酸分子(例如以使得STC-1多肽在一個或兩個眼睛內表現)來向患者一個或兩個眼睛(例如一個或兩個眼睛內之細胞)投與編碼STC-1多肽之核酸。在一些實施例中，可使用一或多種載體(例如以使得STC-1多肽在一個或兩個眼睛內表現)向患者一個或兩個眼睛(例如一個或兩個眼睛內之細胞)投與編碼STC-1多肽之核酸。在一些實施例中，可使用一或多種載體分子(例如肽載體及奈米粒子，諸如脂質體)向患者一個或兩個眼睛(例如一個或兩個眼睛內之細胞)投與編碼STC-1多肽之核酸。在一些實施例中，可使用一或多種靶向分子向患者一個或兩個眼睛(例如一個或兩個眼睛內之細胞)投與編碼STC-1多肽之核酸。

在一些實施例中，可向患者(例如人類)投與一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸至患者一個或兩個眼睛(例如一個或兩個眼睛內之細胞)之單次投與(例如單次注射)。

在一些實施例中，可向患者(例如人類)投與一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸至患者一個或兩個眼睛(例如一個或兩個眼睛內之細胞)之兩次或超過兩次(例如兩次、三次、四次或超過四次)投與(例如注射)。在一些實施例中，當向患者投與一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸至患者一個或兩個眼睛之兩次或超過兩次投與時，投與為約一週一次。在一些實施例中，當向患者投與一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸至患者一個或兩個眼睛之兩次或超過兩次投與時，投與頻率不高於約2週一次。在一些實施例中，一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸至患者一個或兩個眼睛之兩次或超過兩次投與可相隔約一週、相隔至少2週、相隔至少30天、相隔至少180天、相隔至少1年、相隔至少3年、相隔至少5年、相隔至少8年或相隔至少10年投與。舉例而言，一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸至患者一個或兩個眼睛之兩次或超過兩次投與可與投與相隔至少1週、2週、至少30天、至少180天、至少1年、至少3年、至少5年、至少8年或至少10年投與。在一些實施例中，一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸至患者一個或兩個眼睛之兩次或超過兩次投與可與投與相隔約2週至10年(例如相隔約2週至約9年、約2週至約8年、約2週至約7年、約2週至約6年、約2週至約5年、約2週至約4年、約2週至約3年、約2週至約2年、約2週至約1年、約2週至約6個月、約2週至約180天或約2週至約1個月、約30天至約10年、約30天至約9年、約30天至約8年、約30天至約7年、約30天至約6年、約30天至約5年、約30天至約4年、約30天至約3年、約30天至約2年、約6個月至約10年、約1年至約10年、約2年至約10年、約3年至約10年、約4年至約10年、約5年至約10年、約6年至約10年、約7年至約10年、約8年至約10年、約9年至約10年、約6個月至約9年、約1年至約8年、約2年至約7年、約3年至約6年、約4年至約5年、約1年至約3年、約2年至約4年、約3年至約5年、約4年至約6年、約5年至約7年、約6年至約8年或約7年至約9年)投與。舉例而言，一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸至患者一個或兩個眼睛之兩次或超過兩次投與可與投與相隔約2週至10年(例如相隔約2週至約9年、約2週至約8年、約2週至約7年、約2週至約6年、約2週至約5年、約2週至約4年、約2週至約3年、約2週至約2年、約2週至約1年、約2週至約6個月、約2週至約180天或約2週至約1個月、約30天至約10年、約30天至約9年、約30天至約8年、約30天至約7年、約30天至約6年、約30天至約5年、約30天至約4年、約30天至約3年、約30天至約2年、約6個月至約10年、約1年至約10年、約2年至約10年、約3年至約10年、約4年至約10年、約5年至約10年、約6年至約10年、約7年至約10年、約8年至約10年、約9年至約10年、約6個月至約9年、約1年至約8年、約2年至約7年、約3年至約6年、約4年至約5年、約1年至約3年、約2年至約4年、約3年至約5年、約4年至約6年、約5年至約7年、約6年至約8年或約7年至約9年)。在一些實施例中，一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸至患者一個或兩個眼睛之兩次或超過兩次投與可一週投與一次。在一些實施例中，一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸至患者一個或兩個眼睛之兩次或超過兩次投與可頻率不高於約2週一次投與。在一些實施例中，一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸至患者一個或兩個眼睛之兩次或超過兩次投與可頻率不高於約30天一次投與。在一些實施例中，一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸至患者一個或兩個眼睛之兩次或超過兩次投與可頻率不高於約90天一次投與。在一些實施例中，一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸至患者一個或兩個眼睛之兩次或超過兩次投與可頻率不高於約120天一次投與。在一些實施例中，一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸至患者一個或兩個眼睛之兩次或超過兩次投與可頻率不高於約180天一次投與。

一般而言，本發明之一個態樣具有用於治療患有高眼壓或對IOP降低有反應之疾患之患者(例如人類)的方法。該等方法可包括將編碼STC-1多肽之核酸或STC-1多肽之變異體投與至患者眼睛內之細胞或基本上由該步驟組成，其中該STC-1多肽或變異體由細胞表現，且其中眼睛IOP降低。患者可患有與IOP升高相關之疾病或疾患。患者可患有對IOP降低有反應或其症狀或病源學因IOP降低改善之疾病或疾患。患者可為人類。核酸可編碼STC-1多肽。核酸可編碼STC-1多肽之變異體。可將核酸以病毒載體形式投與至細胞。病毒載體可為AAV載體，例如但不限於AAV2、AAV8及AAV9。在一些實施例中，AAV載體為AAV2載體。在一替代實施例中，將核酸以非病毒載體形式投與至細胞。非病毒載體可為表現質體。在一些實施例中，核酸可使用載體分子投與至細胞。載體分子可為奈米粒子。核酸可可操作地連接於啟動子序列。啟動子序列可為普遍存在的啟動子(例如雞β-肌動蛋白(CBA)啟動子)。啟動子可為細胞特異性啟動子(例如突觸蛋白1 (SYN1)啟動子)。投與可為前房內注射。投與可為結膜下注射。方法可有效地使IOP相對於治療前獲取之基線量測結果降低約10%至約50%或大於50%，例如10%、15%、20%、25%、30%、40%、45%、50%、55%、60%或大於60%。方法可有效地使IOP降低至10 mmHg至約21 mmHg之間。方法可有效地使IOP相對於治療前獲取之基線量測結果降低約1 mmHg、2 mmHg、3 mmHg、4 mmHg、5 mmHg、6 mmHg、7 mmHg、8 mmHg、9 mmHg、10 mmHg或大於10 mmHg。方法可有效地使IOP降低持續約1天至約2年。該方法可包括單次投與編碼STC-1多肽之核酸或STC-1多肽之變異體。單次投與可對使細胞表現STC-1多肽或STC-1多肽之變異體持續約2週至約10年有效。該方法可包括兩次或超過兩次投與，例如2次、3次、4次、5次、6次、7次、8次、9次、10次、11次、12次、13次、14次、15次或超過15次投與編碼STC-1多肽之核酸或STC-1多肽之變異體。投與可投與相隔約1週至約10年。該方法可包括三次投與編碼STC-1多肽之核酸或STC-1多肽之變異體。

在另一態樣中，本文提供用於治療患有與IOP升高相關之疾病或疾患之患者的方法。該等方法可包括將編碼STC-1多肽之核酸或STC-1多肽之變異體投與至患者眼睛內之細胞或基本上由該步驟組成，其中該STC-1多肽或變異體由細胞表現，且其中眼睛IOP降低。與IOP升高相關之疾病或疾患可為青光眼或輻射性視神經盤病變。患者可為人類。核酸可編碼STC-1多肽。核酸可編碼STC-1多肽之變異體。可將核酸以病毒載體形式投與至細胞。病毒載體可為AAV載體。AAV載體可為AAV2載體。核酸可以非病毒載體形式投與至細胞。非病毒載體可為表現質體。核酸可使用載體分子投與至細胞。載體分子可為奈米粒子。核酸可可操作地連接於啟動子序列。啟動子序列可為普遍存在的啟動子(例如CBA啟動子)。啟動子可為細胞特異性啟動子(例如SYN1啟動子)。投與可為前房內注射。投與可為前房內注射。投與可為結膜下注射。方法可有效地使IOP相對於治療前獲取之基線量測結果降低約10%至約50%或大於50%，例如10%、15%、20%、25%、30%、40%、45%、50%、55%、60%或大於60%。方法可有效地使IOP降低至10 mmHg至約21 mmHg之間。方法可有效地使IOP相對於治療前獲取之基線量測結果降低約1 mmHg、2 mmHg、3 mmHg、4 mmHg、5 mmHg、6 mmHg、7 mmHg、8 mmHg、9 mmHg、10 mmHg或大於10 mmHg。方法可有效地使IOP降低持續約1天至約2年。該方法可包括單次投與編碼STC-1多肽之核酸或STC-1多肽之變異體。單次投與可對使細胞表現STC-1多肽或STC-1多肽之變異體持續約2週至約10年有效。該方法可包括兩次或超過兩次投與，例如2次、3次、4次、5次、6次、7次、8次、9次、10次、11次、12次、13次、14次、15次或超過15次投與編碼STC-1多肽之核酸或STC-1多肽之變異體。投與可投與相隔約1週至約10年。該方法可包括三次投與編碼STC-1多肽之核酸或STC-1多肽之變異體。

在另一態樣中，本文提供用於治療患有青光眼視神經病變之患者之方法。該等方法可包括將編碼STC-1多肽之核酸或STC-1多肽之變異體投與至患者眼睛內之細胞或基本上由該步驟組成，其中該STC-1多肽或變異體由細胞表現，且其中眼睛IOP降低。患者可為人類。核酸可編碼STC-1多肽。核酸可編碼STC-1多肽之變異體。可將核酸以病毒載體形式投與至細胞。病毒載體可為AAV載體。AAV載體可為AAV2載體。核酸可以非病毒載體形式投與至細胞。非病毒載體可為表現質體。核酸可使用載體分子投與至細胞。載體分子可為奈米粒子。核酸可可操作地連接於啟動子序列。啟動子序列可為普遍存在的啟動子(例如CBA啟動子)。啟動子可為細胞特異性啟動子(例如SYN1啟動子)。投與可為前房內注射。投與可為結膜下注射。方法可有效地使IOP相對於治療前獲取之基線量測結果降低約10%至約50%或大於50%，例如10%、15%、20%、25%、30%、40%、45%、50%、55%、60%或大於60%。方法可有效地使IOP降低至10 mmHg至約21 mmHg之間。方法可有效地使IOP相對於治療前獲取之基線量測結果降低約1 mmHg、2 mmHg、3 mmHg、4 mmHg、5 mmHg、6 mmHg、7 mmHg、8 mmHg、9 mmHg、10 mmHg或大於10 mmHg。方法可有效地使IOP降低持續約1天至約2年。該方法可包括單次投與編碼STC-1多肽之核酸或STC-1多肽之變異體。單次投與可對使細胞表現STC-1多肽或STC-1多肽之變異體持續約2週至約10年有效。該方法可包括兩次或超過兩次投與，例如2次、3次、4次、5次、6次、7次、8次、9次、10次、11次、12次、13次、14次、15次或超過15次投與編碼STC-1多肽之核酸或STC-1多肽之變異體。投與可投與相隔約1週至約10年。該方法可包括三次投與編碼STC-1多肽之核酸或STC-1多肽之變異體。

在另一態樣中，本文提供用於減輕患者之眼部發炎之方法。該等方法可包括將編碼STC-1多肽之核酸或該STC-1多肽之變異體投與至患者眼睛內之細胞或基本上由該步驟組成，其中該STC-1多肽或變異體由細胞表現。患者可為人類。核酸可編碼STC-1多肽。核酸可編碼STC-1多肽之變異體。可將核酸以病毒載體形式投與至細胞。病毒載體可為AAV載體。AAV載體可為AAV2載體。核酸可以非病毒載體形式投與至細胞。非病毒載體可為表現質體。核酸可使用載體分子投與至細胞。載體分子可為奈米粒子。核酸可可操作地連接於啟動子序列。啟動子序列可為普遍存在的啟動子(例如CBA啟動子)。啟動子可為細胞特異性啟動子(例如SYN1啟動子)。投與可為前房內注射。投與可為玻璃體內注射。投與可為結膜下注射。

在另一態樣中，本文提供用於提供患者中之眼部神經元之神經保護之方法。該等方法可包括將編碼STC-1多肽之核酸或該STC-1多肽之變異體投與至患者眼睛內之細胞或基本上由該步驟組成，其中該STC-1多肽或變異體由細胞表現。患者可為人類。核酸可編碼STC-1多肽。核酸可編碼STC-1多肽之變異體。可將核酸以病毒載體形式投與至細胞。病毒載體可為AAV載體。AAV載體可為AAV2載體。核酸可以非病毒載體形式投與至細胞。非病毒載體可為表現質體。核酸可使用載體分子投與至細胞。載體分子可為奈米粒子。核酸可可操作地連接於啟動子序列。啟動子序列可為普遍存在的啟動子(例如CBA啟動子)。啟動子可為細胞特異性啟動子(例如SYN1啟動子)。投與可為前房內注射。投與可為玻璃體內注射。投與可為結膜下注射。

在一些實施例中，本文所描述之方法及材料可用於治療與高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患相關之神經病變(例如可用於治療GON)。舉例而言，一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸可遞送至有需要之患者(例如人類) (例如患有高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患，諸如青光眼之人類)之一個或兩個眼睛(例如一個或兩個眼睛內之細胞)以減緩、延緩或預防與高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患相關之神經病變進展(例如減緩、延緩或預防GON發展)。

在一些情況下，本文所描述之方法及材料可用於治療高眼壓。舉例而言，一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸可遞送至有需要之患者(例如人類) (例如患有高眼壓之人類)之一個或兩個眼睛(例如一個或兩個眼睛內之細胞)以減緩、延緩或預防高眼壓進展(例如減緩、延緩或預防高眼壓發展)。

在一些實施例中，本文所描述之方法及材料可用於減輕或消除高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患(例如青光眼)之一或多種症狀。舉例而言，一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸可遞送至有需要之患者(例如人類) (例如患有高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患之人類)之一個或兩個眼睛(例如一個或兩個眼睛內之細胞)以減輕或消除高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患(例如青光眼)之一或多種症狀。高眼壓及一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患(諸如青光眼)之症狀之實例包括(但不限於)一個或兩個眼睛中之邊緣及/或中心視覺、管狀視覺(例如在晚期青光眼中)中之盲點、頭痛、疼痛(例如眼睛疼痛)、噁心、嘔吐、視力模糊、光周暈圈及眼睛發紅。在一些實施例中，本文所描述之材料及方法可用於使患者(例如人類)之高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患(例如青光眼)之一或多種症狀的嚴重程度降低例如10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或大於95%。在其中青光眼為無症狀青光眼之實施例中，本文所描述之方法及材料可用於延緩或預防青光眼之一或多種症狀之發展。舉例而言，一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸可遞送至有需要之患者(例如人類) (例如患有青光眼之人類)之一個或兩個眼睛(例如一個或兩個眼睛內之細胞)以延緩或預防青光眼之一或多種症狀之發展。

在一些實施例中，本文所描述之方法及材料可用於降低IOP。舉例而言，一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸可遞送至有需要之患者(例如人類) (例如患有高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患之人類)之一個或兩個眼睛(例如一個或兩個眼睛內之細胞)以降低患者一個或兩個眼睛中之IOP或對IOP降低有反應之疾患(例如NTG)。在一些實施例中，本文所描述之方法及材料可用於達到有效降低患者發展出進行性神經損傷風險的IOP。在一些實施例中，本文所描述之方法及材料可用於實現約21 mmHg至約10 mmHg (例如約20 mmHg至約10 mmHg、約18 mmHg至約10 mmHg、約15 mmHg至約10 mmHg、約12 mmHg至約10 mmHg、約21 mmHg至約13 mmHg、約21 mmHg至約15 mmHg、約21 mmHg至約17 mmHg、約21 mmHg至約19 mmHg、約20 mmHg至約12 mmHg、約18 mmHg至約14 mmHg、約15 mmHg至約12 mmHg、約18 mmHg至約15 mmHg或約20 mmHg至約18 mmHg)之IOP。在一些實施例中，本文所描述之方法及材料可用於使患者(例如人類)之一個或兩個眼睛中之IOP降低例如10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或大於95%。在一些實施例中，一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸可遞送至患者(例如人類)之一個或兩個眼睛(例如一個或兩個眼睛內之細胞)以使患者眼睛中之IOP降低至少約10%。舉例而言，一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸可遞送至患者(例如人類)之一個或兩個眼睛(例如一個或兩個眼睛內之細胞)以使患者眼睛中之IOP降低約10%至約40% (例如約10%至約40%、約15%至約40%、約20%至約40%、約25%至約40%、約30%至約40%、約35%至約40%、約10%至約35%、約15%至約35%、約10%至約30%、約15%至約30%、約20%至約30%、約10%至約25%、約15%至約25%、約10%至約20%、約20%至約30%或約25%至約35%)。

在其中本文所描述之方法及材料用於降低IOP之實施例中，IOP降低可為持續降低。舉例而言，一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸可遞送至有需要之患者(例如人類) (例如患有高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患之人類)之一個或兩個眼睛(例如一個或兩個眼睛內之細胞)以使患者一個或兩個眼睛之IOP降低約1天至約2年(例如約1天至約1.5年、約1天至約1年、約1天至約9個月、約1天至約6個月、約1天至約3個月、約1天至約1個月、約1天至約2週、約2週至約2年、約1個月至約2年、約3個月至約2年、約6個月至約2年、約1年至約2年、約1週至約1年、約2週至約9個月、約1個月至約6個月、約1週至約1個月、約1個月至約3個月、約3個月至約6個月、約6個月至約9個月、約9個月至約1年或約1年至約1.5年)。

在一些實施例中，本文所描述之方法及材料可用於減輕或消除患者(例如人類)之一個或兩個眼睛中之葡萄膜炎(眼部發炎)。舉例而言，一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸可遞送至有需要之患者(例如人類) (例如患有高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患之人類)之一個或兩個眼睛(例如一個或兩個眼睛內之細胞)以減輕或消除一個或兩個眼睛中之發炎。在一些實施例中，本文所描述之材料及方法可用於使患者(例如人類)之一個或兩個眼睛中之發炎減輕例如10%、20%、30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%、95%或大於95%。

在一些實施例中，本文所描述之方法及材料可用於患者(例如人類)內之一或多種神經元之神經保護。舉例而言，一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸可遞送至有需要之患者(例如人類) (例如患有高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患，諸如青光眼之人類)之一個或兩個眼睛(例如一個或兩個眼睛內之細胞)以減緩、延緩或預防患者(例如人類)之一個或兩個眼睛內之一或多種神經元之功能的損傷、退化及/或障礙。舉例而言，一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸可遞送至有需要之患者(例如人類)之一個或兩個眼睛(例如一個或兩個眼睛內之細胞) (例如患有高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患之人類)以減緩、延緩或預防患者(例如人類)之一個或兩個眼睛內之視網膜厚度降低。舉例而言，一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸可遞送至有需要之患者(例如人類) (例如患有高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患之人類)之一個或兩個眼睛(例如一個或兩個眼睛內之細胞)以在患者(例如人類)之一個或兩個眼睛內保持視網膜厚度。在一些實施例中，STC-1多肽表現可導致與IOP降低無關之神經保護。

在一些實施例中，當向患有高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患(例如青光眼)或對IOP降低有反應之疾病或疾患的患者(例如人類)投與一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸時，患者可良好耐受一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸。舉例而言，當一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸遞送至有需要之患者(例如人類) (例如患有高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患之人類)之一個或兩個眼睛(例如一個或兩個眼睛內之細胞)時，患者可經歷最小、減少的副作用或無副作用(例如結膜皮膚充血、表面刺激、虹膜及眼周皮膚之色素沉著、眼眶脂肪萎縮、多毛症、眼內發炎、單純疱疹病毒性角膜炎再活化及黃斑部水腫)。

任何適當的患者可如本文中所描述經治療(例如藉由將一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸遞送至患者一個或兩個眼睛)。在一些實施例中，患者可患有高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患。在一些實施例中，患者可患有對IOP降低有反應之疾病或疾患，例如NTG。在一些實施例中，患者可對PGF2α類似物(例如拉坦前列素) 沒有反應。在一些實施例中，患者可對β阻斷劑沒有反應。在一些實施例中，患者可對碳酸酐酶抑制劑沒有反應。在一些實施例中，患者可對Rho激酶抑制劑沒有反應。在一些實施例中，患者可為約60歲或更大的人類。在一些實施例中，患者可使用類固醇藥物治療(例如皮質類固醇滴眼劑)或可具有使用類固醇藥物治療(例如皮質類固醇滴眼劑)之歷史。在一些實施例中，患者可患有一或多種醫學病況(例如糖尿病、心臟病、高血壓及/或鐮狀細胞貧血)。在一些實施例中，患者可具有一或多個中心較薄之角膜。在一些實施例中，患者可具有一或多個中心較厚之角膜。在一些實施例中，患者可已具有眼睛損傷。在一些實施例中，患者可已進行眼睛手術。可如本文所描述經治療之患者之實例包括(但不限於)人類、非人類靈長類動物，諸如猴、狗、貓、馬、牛、豬、綿羊、駱馬、小鼠、大鼠、天竺鼠及兔。

當如本文所描述(例如藉由將一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸遞送至患者一個或兩個眼睛)治療患有高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患(例如青光眼)之患者(例如人類)時，與IOP升高相關之疾病或疾患可為任何類型的與IOP升高相關之疾病或疾患。與IOP升高相關之疾病或疾患之一個實例包括(但不限於)青光眼。當治療患有如本文所描述之青光眼之患者(例如人類)時，青光眼可為任何類型的青光眼。在一些實施例中，青光眼可包括GON。在一些實施例中，青光眼可為高壓青光眼。青光眼之類型之實例包括(但不限於)原發性開角型青光眼(POAG；亦已知為慢性開角型青光眼、慢性單純性青光眼及單純青光眼)、原發性閉角型青光眼、小兒青光眼、假剝脫性青光眼、色素性青光眼、創傷性青光眼、新生血管性青光眼及虹膜角膜內皮青光眼及閉角型青光眼(例如窄角青光眼及急性充血性青光眼)。

當如本文所描述(例如藉由將一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸遞送至患者一個或兩個眼睛)治療患有響應於患病眼睛IOP降低或下降之疾病或疾患的患者(例如人類)時，對IOP降低有反應或下降之疾病或疾患可為對IOP降低有反應或下降之任何疾病或疾患。對IOP降低有反應或下降之此類疾病或疾患之一個實例為正常眼壓青光眼(NTG)。

在一些實施例中，使用任何適當的診斷技術，患者(例如人類)可鑑別為患有高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患(例如青光眼)或對IOP降低有反應或下降。舉例而言，擴張眼睛檢驗(例如以尋找視神經損傷)、眼部壓力量測術(以量測IOP)、視場測試、角膜測厚(例如以量測角膜厚度)、前房角鏡檢查(例如以量測引流角)、光學同調斷層掃描及/或眼動電波圖分析可用於診斷人類為患有高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患。

在替代態樣中，本文所描述之方法及組合物用於預防或降低輻射性視神經盤病變發展，其為例如視神經盤旁區域中眼內腫瘤之輻射之併發症。如以下實例5及圖15-21中所描述，已發現，在用於眼部腫瘤之輻射治療之前或期間經歷IOP提高之個體處於罹患輻射性視神經盤病變之相當大風險下。因此，在一些實施例中，本文所描述之組合物及方法用於治療或預防患者，例如接受用於治療眼部腫瘤之輻射之人類中之輻射性視神經盤病變。在一些實施例中，在開始輻射之前向患者投與本文所描述之組合物。在一些實施例中，在輻射治療療程期間向投與患者本文所描述之組合物兩次或超過兩次。在一些實施例中，患者在投與輻射之前具有升高的IOP，例如大於22 mmHg之IOP。在一些實施例中，患者在接受輻射療法之前具有大於18 mmHg之IOP。在一些實施例中，眼內腫瘤為例如但不限於黑素瘤，例如脈絡膜黑素瘤或葡萄膜黑色素瘤、脈絡膜血管瘤、脈絡膜斑痣、虹膜腫瘤、視網膜母細胞瘤、淚腺腫瘤或眼內淋巴瘤。

編碼錫鈣素 -1 之 核酸序列經設計以表現任何適當的STC-1多肽之核酸可遞送至如本文所描述之患者(例如人類)之一個或兩個眼睛(例如一個或兩個眼睛內之細胞)。編碼STC-I多肽之STC-1多肽及核酸之實例包括(但不限於)表1中所闡述之彼等者。在一些實施例中，編碼STC-1多肽之核酸可含有編碼可偵測標記之核酸序列。舉例而言，載體可包括編碼STC-1多肽之核酸及編碼可偵測標記之核酸，其經定位而使得經編碼之多肽為包括融合至可偵測多肽之STC-1多肽之融合多肽。在一些實施例中，可偵測標記可為肽標記。本文所描述之可用作可偵測標記之實例包括(但不限於) HA標記、Myc標記、FLAG標記及螢光多肽(例如綠色螢光多肽(GFP))。

在一些實施例中，STC-1核酸衍生自野生型、共同或天然人類STC-1 mRNA序列。在一些實施例中，核酸衍生自野生型或天然人類STC-1編碼序列(SEQ ID NO: 1) (NCBI CCDS 6043.1)或與SEQ ID NO: 1至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸序列。在一些實施例中，核酸為SEQ ID NO: 1。在一些實施例中，STC-1已經密碼子最佳化以自AAV載體表現。在一些實施例中，STC-1已經密碼子最佳化以在人類眼細胞中表現。在一些實施例中，SEQ ID NO: 1之核酸進一步包含編碼多肽標記之核酸序列。

在一些實施例中，核酸編碼具有SEQ ID NO: 2之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 2至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之胺基酸序列的STC-1多肽。在一些實施例中，核酸編碼具有SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的STC-1多肽。在一些實施例中，SEQ ID NO: 2之胺基酸進一步包含胺基酸序列標記。在一些實施例中，胺基酸序列標記選自DYKDDDDK (SEQ ID NO:30)、SDYKDDDDK (SEQ ID NO:31)或ASDYKDDDDK (SEQ ID NO:32)。

在一些實施例中，核酸衍生自野生型或天然人類STC-1前肽編碼序列(SEQ ID NO: 3)或與SEQ ID NO: 3至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸序列。在一些實施例中，核酸為SEQ ID NO: 3。在一些實施例中，STC-1已經密碼子最佳化以自AAV載體表現。在一些實施例中，STC-1已經密碼子最佳化以在人類眼細胞中表現。在一些實施例中，SEQ ID NO: 3之核酸進一步包含編碼多肽標記之核酸序列。

在一些實施例中，核酸編碼具有SEQ ID NO: 4之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 4至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之胺基酸序列的STC前肽。在一些實施例中，核酸編碼具有SEQ ID NO: 4之胺基酸序列的STC-1前肽。在一些實施例中，SEQ ID NO: 4之胺基酸進一步包含胺基酸序列標記。在一些實施例中，胺基酸序列標記選自DYKDDDDK (SEQ ID NO:30)、SDYKDDDDK (SEQ ID NO:31)或ASDYKDDDDK (SEQ ID NO:32)。

在一些實施例中，核酸衍生自野生型或天然人類STC-1鏈多肽編碼序列(SEQ ID NO: 5)或與SEQ ID NO: 5至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸序列。在一些實施例中，核酸為SEQ ID NO: 5。在一些實施例中，STC-1已經密碼子最佳化以自AAV載體表現。在一些實施例中，STC-1已經密碼子最佳化以在人類眼細胞中表現。在一些實施例中，SEQ ID NO: 5之核酸進一步包含編碼多肽標記之核酸序列。

在一些實施例中，核酸編碼具有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 6至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之胺基酸序列的STC鏈多肽。在一些實施例中，核酸編碼具有SEQ ID NO: 6之胺基酸序列的STC-1鏈多肽。在一些實施例中，SEQ ID NO: 6之胺基酸進一步包含胺基酸序列標記。在一些實施例中，胺基酸序列標記選自DYKDDDDK (SEQ ID NO:30)、SDYKDDDDK (SEQ ID NO:31)或ASDYKDDDDK (SEQ ID NO:32)。

在一些實施例中，編碼STC-1之核酸衍生自SEQ ID NO: 7或與SEQ ID NO: 7至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸序列。在一些實施例中，核酸為SEQ ID NO: 7。在一些實施例中，STC-1已經密碼子最佳化以自AAV載體表現。在一些實施例中，STC-1已經密碼子最佳化以在人類眼細胞中表現。

在一些實施例中，核酸編碼具有SEQ ID NO: 8之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 8至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之胺基酸序列的STC-1多肽。在一些實施例中，核酸編碼具有SEQ ID NO: 8之胺基酸序列的STC-1多肽。

在一些實施例中，核酸衍生自SEQ ID NO: 9之核酸序列或與SEQ ID NO: 9至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸序列。在一些實施例中，核酸為SEQ ID NO: 9。在一些實施例中，STC-1已經密碼子最佳化以自AAV載體表現。在一些實施例中，STC-1已經密碼子最佳化以在人類眼細胞中表現。

在一些實施例中，核酸編碼具有SEQ ID NO: 10之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 10至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之胺基酸序列的STC-1前肽。在一些實施例中，核酸編碼具有SEQ ID NO: 10之胺基酸序列的STC-1前肽。

在一些實施例中，核酸衍生自SEQ ID NO:11之核酸序列或與SEQ ID NO:11至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸序列。在一些實施例中，核酸為SEQ ID NO:11。在一些實施例中，STC-1已經密碼子最佳化以自AAV載體表現。在一些實施例中，STC-1已經密碼子最佳化以在人類眼細胞中表現。

在一些實施例中，核酸編碼具有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 12至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之胺基酸序列的STC鏈多肽。在一些實施例中，核酸編碼具有SEQ ID NO: 12之胺基酸序列的STC-1鏈多肽。

在一些實施例中，核酸衍生自編碼STC-1同功異型物2 (SEQ ID NO: 13)或與SEQ ID NO: 13至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸序列的核酸。在一些實施例中，核酸為SEQ ID NO: 13。在一些實施例中，STC-1已經密碼子最佳化以自AAV載體表現。在一些實施例中，STC-1已經密碼子最佳化以在人類眼細胞中表現。在一些實施例中，SEQ ID NO: 13之核酸進一步包含編碼胺基酸標記之核酸序列。

在一些實施例中，核酸編碼具有SEQ ID NO: 14之胺基酸序列或與SEQ ID NO: 14至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之胺基酸序列的STC-1同功異型物2多肽。在一些實施例中，核酸編碼具有SEQ ID NO: 14之胺基酸序列的STC-1鏈多肽。在一些實施例中，核酸編碼具有SEQ ID NO: 14之胺基酸序列的STC-1鏈多肽，在一些實施例中，SEQ ID NO: 14之胺基酸進一步包含胺基酸序列標記。在一些實施例中，胺基酸序列標記選自DYKDDDDK (SEQ ID NO:30)、SDYKDDDDK (SEQ ID NO:31)或ASDYKDDDDK (SEQ ID NO:32)。

在一些實施例中，STC-1核酸衍生自哺乳動物，例如小家鼠、大家鼠或非人類靈長類動物之野生型、共同或天然STC-1 mRNA序列。在一些實施例中，核酸衍生自選自SEQ ID NO:15、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 26或SEQ ID NO: 28或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸序列的非人類序列之STC-1編碼序列。在一些實施例中，核酸為SEQ ID NO:15。在一些實施例中，核酸為SEQ ID NO: 17。在一些實施例中，核酸為SEQ ID NO:19。在一些實施例中，核酸為SEQ ID NO: 24。在一些實施例中，核酸為SEQ ID NO: 26。在一些實施例中，核酸為SEQ ID NO: 28，在一些實施例中，STC-1已經密碼子最佳化以自AAV載體表現。在一些實施例中，STC-1已經密碼子最佳化以在人類眼細胞中表現。在一些實施例中，選自SEQ ID NO:15、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 26或SEQ ID NO: 28之核酸進一步包含編碼多肽標記之核酸序列。

在一些實施例中，核酸編碼具有SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 27或SEQ ID NO: 29之胺基酸序列或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之胺基酸序列的STC-1多肽。在一些實施例中，核酸編碼具有SEQ ID NO:16之胺基酸序列的STC-1多肽。在一些實施例中，核酸編碼具有SEQ ID NO: 2之胺基酸序列的STC-1多肽。在一些實施例中，核酸編碼具有SEQ ID NO:18之胺基酸序列的STC-1多肽。在一些實施例中，核酸編碼具有SEQ ID NO: 20之胺基酸序列的STC-1多肽。在一些實施例中，核酸編碼具有SEQ ID NO: 21之胺基酸序列的STC-1多肽。在一些實施例中，核酸編碼具有SEQ ID NO: 22之胺基酸序列的STC-1多肽。在一些實施例中，核酸編碼具有SEQ ID NO: 23之胺基酸序列的STC-1多肽。在一些實施例中，核酸編碼具有SEQ ID NO: 25之胺基酸序列的STC-1多肽。在一些實施例中，核酸編碼具有SEQ ID NO: 27之胺基酸序列的STC-1多肽。在一些實施例中，核酸編碼具有SEQ ID NO: 29之胺基酸序列的STC-1多肽。在一些實施例中，選自SEQ ID NO:16、SEQ ID NO:18、SEQ ID NO: 20、SEQ ID NO: 21、SEQ ID NO: 22、SEQ ID NO: 23、SEQ ID NO: 25、SEQ ID NO: 27或SEQ ID NO: 29之胺基酸進一步包含多肽標記。在一些實施例中，胺基酸序列標記選自DYKDDDDK (SEQ ID NO:30)、SDYKDDDDK (SEQ ID NO:31)或ASDYKDDDDK (SEQ ID NO:32)。表1：STC-1核酸及胺基酸序列.

SEQ ID NO:	序列
1 核酸序列-野生型人類STC-1	ATGCTCCAAAACTCAGCAGTGCTTCTGGTGCTGGTGATCAGTGCTTCTGCAACCCATGAGGCGGAGCAGAATGACTCTGTGAGCCCCAGGAAATCCCGAGTGGCGGCTCAAAACTCAGCTGAAGTGGTTCGTTGCCTCAACAGTGCTCTACAGGTCGGCTGCGGGGCTTTTGCATGCCTGGAAAACTCCACCTGTGACACAGATGGGATGTATGACATCTGTAAATCCTTCTTGTACAGCGCTGCTAAATTTGACACTCAGGGAAAAGCATTCGTCAAAGAGAGCTTAAAATGCATCGCCAACGGGGTCACCTCCAAGGTCTTCCTCGCCATTCGGAGGTGCTCCACTTTCCAAAGGATGATTGCTGAGGTGCAGGAAGAGTGCTACAGCAAGCTGAATGTGTGCAGCATCGCCAAGCGGAACCCTGAAGCCATCACTGAGGTCGTCCAGCTGCCCAATCACTTCTCCAACAGATACTATAACAGACTTGTCCGAAGCCTGCTGGAATGTGATGAAGACACAGTCAGCACAATCAGAGACAGCCTGATGGAGAAAATTGGGCCTAACATGGCCAGCCTCTTCCACATCCTGCAGACAGACCACTGTGCCCAAACACACCCACGAGCTGACTTCAACAGGAGACGCACCAATGAGCCGCAGAAGCTGAAAGTCCTCCTCAGGAACCTCCGAGGTGAGGAGGACTCTCCCTCCCACATCAAACGCACATCCCATGAGAGTGCATAA
2 - wt hSTC-1胺基酸序列	MLQNSAVLLVLVISASATHEAEQNDSVSPRKSRVAAQNSAEVVRCLNSALQVGCGAFACLENSTCDTDGMYDICKSFLYSAAKFDTQGKAFVKESLKCIANGVTSKVFLAIRRCSTFQRMIAEVQEECYSKLNVCSIAKRNPEAITEVVQLPNHFSNRYYNRLVRSLLECDEDTVSTIRDSLMEKIGPNMASLFHILQTDHCAQTHPRADFNRRRTNEPQKLKVLLRNLRGEEDSPSHIKRTSHESA
3 - hSTC-1前肽核酸序列	ATGCATGAGGCGGAGCAGAATGACTCTGTGAGCCCCAGGAAATCCCGAGTGGCGGCTCAAAACTCAGCTGAAGTGGTTCGTTGCCTCAACAGTGCTCTACAGGTCGGCTGCGGGGCTTTTGCATGCCTGGAAAACTCCACCTGTGACACAGATGGGATGTATGACATCTGTAAATCCTTCTTGTACAGCGCTGCTAAATTTGACACTCAGGGAAAAGCATTCGTCAAAGAGAGCTTAAAATGCATCGCCAACGGGGTCACCTCCAAGGTCTTCCTCGCCATTCGGAGGTGCTCCACTTTCCAAAGGATGATTGCTGAGGTGCAGGAAGAGTGCTACAGCAAGCTGAATGTGTGCAGCATCGCCAAGCGGAACCCTGAAGCCATCACTGAGGTCGTCCAGCTGCCCAATCACTTCTCCAACAGATACTATAACAGACTTGTCCGAAGCCTGCTGGAATGTGATGAAGACACAGTCAGCACAATCAGAGACAGCCTGATGGAGAAAATTGGGCCTAACATGGCCAGCCTCTTCCACATCCTGCAGACAGACCACTGTGCCCAAACACACCCACGAGCTGACTTCAACAGGAGACGCACCAATGAGCCGCAGAAGCTGAAAGTCCTCCTCAGGAACCTCCGAGGTGAGGAGGACTCTCCCTCCCACATCAAACGCACATCCCATGAGAGTGCATAA
4- hSTC-1前肽胺基酸序列	MHEAEQNDSVSPRKSRVAAQNSAEVVRCLNSALQVGCGAFACLENSTCDTDGMYDICKSFLYSAAKFDTQGKAFVKESLKCIANGVTSKVFLAIRRCSTFQRMIAEVQEECYSKLNVCSIAKRNPEAITEVVQLPNHFSNRYYNRLVRSLLECDEDTVSTIRDSLMEKIGPNMASLFHILQTDHCAQTHPRADFNRRRTNEPQKLKVLLRNLRGEEDSPSHIKRTSHESA
5 -hSTC-1鏈核酸序列	ATGGTGGCGGCTCAAAACTCAGCTGAAGTGGTTCGTTGCCTCAACAGTGCTCTACAGGTCGGCTGCGGGGCTTTTGCATGCCTGGAAAACTCCACCTGTGACACAGATGGGATGTATGACATCTGTAAATCCTTCTTGTACAGCGCTGCTAAATTTGACACTCAGGGAAAAGCATTCGTCAAAGAGAGCTTAAAATGCATCGCCAACGGGGTCACCTCCAAGGTCTTCCTCGCCATTCGGAGGTGCTCCACTTTCCAAAGGATGATTGCTGAGGTGCAGGAAGAGTGCTACAGCAAGCTGAATGTGTGCAGCATCGCCAAGCGGAACCCTGAAGCCATCACTGAGGTCGTCCAGCTGCCCAATCACTTCTCCAACAGATACTATAACAGACTTGTCCGAAGCCTGCTGGAATGTGATGAAGACACAGTCAGCACAATCAGAGACAGCCTGATGGAGAAAATTGGGCCTAACATGGCCAGCCTCTTCCACATCCTGCAGACAGACCACTGTGCCCAAACACACCCACGAGCTGACTTCAACAGGAGACGCACCAATGAGCCGCAGAAGCTGAAAGTCCTCCTCAGGAACCTCCGAGGTGAGGAGGACTCTCCCTCCCACATCAAACGCACATCCCATGAGAGTGCATAA
6-hSTC-1鏈胺基酸序列	MVAAQNSAEVVRCLNSALQVGCGAFACLENSTCDTDGMYDICKSFLYSAAKFDTQGKAFVKESLKCIANGVTSKVFLAIRRCSTFQRMIAEVQEECYSKLNVCSIAKRNPEAITEVVQLPNHFSNRYYNRLVRSLLECDEDTVSTIRDSLMEKIGPNMASLFHILQTDHCAQTHPRADFNRRRTNEPQKLKVLLRNLRGEEDSPSHIKRTSHESA
7 - hSTC-1 具有FLAG標記核酸序列之hSTC-1	ATGCTCCAAAACTCAGCAGTGCTTCTGGTGCTGGTGATCAGTGCTTCTGCAACCCATGAGGCGGAGCAGAATGACTCTGTGAGCCCCAGGAAATCCCGAGTGGCGGCTCAAAACTCAGCTGAAGTGGTTCGTTGCCTCAACAGTGCTCTACAGGTCGGCTGCGGGGCTTTTGCATGCCTGGAAAACTCCACCTGTGACACAGATGGGATGTATGACATCTGTAAATCCTTCTTGTACAGCGCTGCTAAATTTGACACTCAGGGAAAAGCATTCGTCAAAGAGAGCTTAAAATGCATCGCCAACGGGGTCACCTCCAAGGTCTTCCTCGCCATTCGGAGGTGCTCCACTTTCCAAAGGATGATTGCTGAGGTGCAGGAAGAGTGCTACAGCAAGCTGAATGTGTGCAGCATCGCCAAGCGGAACCCTGAAGCCATCACTGAGGTCGTCCAGCTGCCCAATCACTTCTCCAACAGATACTATAACAGACTTGTCCGAAGCCTGCTGGAATGTGATGAAGACACAGTCAGCACAATCAGAGACAGCCTGATGGAGAAAATTGGGCCTAACATGGCCAGCCTCTTCCACATCCTGCAGACAGACCACTGTGCCCAAACACACCCACGAGCTGACTTCAACAGGAGACGCACCAATGAGCCGCAGAAGCTGAAAGTCCTCCTCAGGAACCTCCGAGGTGAGGAGGACTCTCCCTCCCACATCAAACGCACATCCCATGAGAGTGCAAGCGACTACAAGGACGACGATGACAAGTAA
8 - 具有FLAG標記胺基酸序列之hSTC-1	MLQNSAVLLVLVISASATHEAEQNDSVSPRKSRVAAQNSAEVVRCLNSALQVGCGAFACLENSTCDTDGMYDICKSFLYSAAKFDTQGKAFVKESLKCIANGVTSKVFLAIRRCSTFQRMIAEVQEECYSKLNVCSIAKRNPEAITEVVQLPNHFSNRYYNRLVRSLLECDEDTVSTIRDSLMEKIGPNMASLFHILQTDHCAQTHPRADFNRRRTNEPQKLKVLLRNLRGEEDSPSHIKRTSHESASDYKDDDDK
9 - 具有FLAG標記核酸序列之hSTC-1前肽	ATGGTGGCGGCTCAAAACTCAGCTGAAGTGGTTCGTTGCCTCAACAGTGCTCTACAGGTCGGCTGCGGGGCTTTTGCATGCCTGGAAAACTCCACCTGTGACACAGATGGGATGTATGACATCTGTAAATCCTTCTTGTACAGCGCTGCTAAATTTGACACTCAGGGAAAAGCATTCGTCAAAGAGAGCTTAAAATGCATCGCCAACGGGGTCACCTCCAAGGTCTTCCTCGCCATTCGGAGGTGCTCCACTTTCCAAAGGATGATTGCTGAGGTGCAGGAAGAGTGCTACAGCAAGCTGAATGTGTGCAGCATCGCCAAGCGGAACCCTGAAGCCATCACTGAGGTCGTCCAGCTGCCCAATCACTTCTCCAACAGATACTATAACAGACTTGTCCGAAGCCTGCTGGAATGTGATGAAGACACAGTCAGCACAATCAGAGACAGCCTGATGGAGAAAATTGGGCCTAACATGGCCAGCCTCTTCCACATCCTGCAGACAGACCACTGTGCCCAAACACACCCACGAGCTGACTTCAACAGGAGACGCACCAATGAGCCGCAGAAGCTGAAAGTCCTCCTCAGGAACCTCCGAGGTGAGGAGGACTCTCCCTCCCACATCAAACGCACATCCCATGAGAGTGCAGCAAGCGACTACAAGGACGACGATGACAAGTAA
10 - 具有FLAG標記胺基酸序列之hSTC-1前肽	MTHEAEQNDSVSPRKSRVAAQNSAEVVRCLNSALQVGCGAFACLENSTCDTDGMYDICKSFLYSAAKFDTQGKAFVKESLKCIANGVTSKVFLAIRRCSTFQRMIAEVQEECYSKLNVCSIAKRNPEAITEVVQLPNHFSNRYYNRLVRSLLECDEDTVSTIRDSLMEKIGPNMASLFHILQTDHCAQTHPRADFNRRRTNEPQKLKVLLRNLRGEEDSPSHIKRTSHESAASDYKDDDDK
11 -具有FLAG標記核酸序列之hSTC-1鏈	ATGGTGGCGGCTCAAAACTCAGCTGAAGTGGTTCGTTGCCTCAACAGTGCTCTACAGGTCGGCTGCGGGGCTTTTGCATGCCTGGAAAACTCCACCTGTGACACAGATGGGATGTATGACATCTGTAAATCCTTCTTGTACAGCGCTGCTAAATTTGACACTCAGGGAAAAGCATTCGTCAAAGAGAGCTTAAAATGCATCGCCAACGGGGTCACCTCCAAGGTCTTCCTCGCCATTCGGAGGTGCTCCACTTTCCAAAGGATGATTGCTGAGGTGCAGGAAGAGTGCTACAGCAAGCTGAATGTGTGCAGCATCGCCAAGCGGAACCCTGAAGCCATCACTGAGGTCGTCCAGCTGCCCAATCACTTCTCCAACAGATACTATAACAGACTTGTCCGAAGCCTGCTGGAATGTGATGAAGACACAGTCAGCACAATCAGAGACAGCCTGATGGAGAAAATTGGGCCTAACATGGCCAGCCTCTTCCACATCCTGCAGACAGACCACTGTGCCCAAACACACCCACGAGCTGACTTCAACAGGAGACGCACCAATGAGCCGCAGAAGCTGAAAGTCCTCCTCAGGAACCTCCGAGGTGAGGAGGACTCTCCCTCCCACATCAAACGCACATCCCATGAGAGTGCAAGCGACTACAAGGACGACGATGACAAGTAA
12 - 具有FLAG標記胺基酸序列之hSTC-1鏈	MVAAQNSAEVVRCLNSALQVGCGAFACLENSTCDTDGMYDICKSFLYSAAKFDTQGKAFVKESLKCIANGVTSKVFLAIRRCSTFQRMIAEVQEECYSKLNVCSIAKRNPEAITEVVQLPNHFSNRYYNRLVRSLLECDEDTVSTIRDSLMEKIGPNMASLFHILQTDHCAQTHPRADFNRRRTNEPQKLKVLLRNLRGEEDSPSHIKRTSHESASDYKDDDDK
13 - hSTC-1同功異型物2核酸序列	ATGTATGACATCTGTAAATCCTTCTTGTACAGCGCTGCTAAATTTGACACTCAGGGAAAAGCATTCGTCAAAGAGAGCTTAAAATGCATCGCCAACGGGGTCACCTCCAAGGTCTTCCTCGCCATTCGGAGGTGCTCCACTTTCCAAAGGATGATTGCTGAGGTGCAGGAAGAGTGCTACAGCAAGCTGAATGTGTGCAGCATCGCCAAGCGGAACCCTGAAGCCATCACTGAGGTCGTCCAGCTGCCCAATCACTTCTCCAACAGATACTATAACAGACTTGTCCGAAGCCTGCTGGAATGTGATGAAGACACAGTCAGCACAATCAGAGACAGCCTGATGGAGAAAATTGGGCCTAACATGGCCAGCCTCTTCCACATCCTGCAGACAGACCACTGTGCCCAAACACACCCACGAGCTGACTTCAACAGGAGACGCACCAATGAGCCGCAGAAGCTGAAAGTCCTCCTCAGGAACCTCCGAGGTGAGGAGGACTCTCCCTCCCACATCAAACGCACATCCCATGAGAGTGCATAA
14 - hSTC-1同功異型物2胺基酸序列	MYDICKSFLYSAAKFDTQGKAFVKESLKCIANGVTSKVFLAIRRCSTFQRMIAEVQEECYSKLNVCSIAKRNPEAITEVVQLPNHFSNRYYNRLVRSLLECDEDTVSTIRDSLMEKIGPNMASLFHILQTDHCAQTHPRADFNRRRTNEPQKLKVLLRNLRGEEDSPSHIKRTSHESA
15 - 小家鼠STC-1核酸序列	ATGCTCCAAAACTCAGCAGTGATTCTGGCGCTGGTCATCAGTGCAGCTGCAGCGCACGAGGCGGAACAAAATGATTCTGTGAGCCCCAGAAAATCCCGGGTGGCGGCTCAAAATTCAGCTGAAGTGGTTCGCTGCCTCAACAGTGCCCTGCAGGTTGGCTGCGGGGCTTTTGCATGCCTGGAAAACTCCACATGTGACACAGATGGGATGTACGACATTTGTAAATCCTTCTTGTACAGTGCTGCTAAATTTGACACTCAGGGAAAAGCATTTGTCAAAGAGAGCTTAAAGTGCATCGCCAATGGGATCACCTCCAAGGTATTCCTTGCCATTCGGAGGTGTTCGACTTTCCAGAGGATGATCGCCGAGGTGCAGGAGGACTGCTACAGCAAGCTTAACGTTTGCAGCATCGCCAAGCGCAACCCGGAAGCCATCACTGAAGTCATACAGCTGCCCAATCACTTCTCCAACAGATACTACAACAGACTTGTCCGAAGCCTTCTGGAATGTGATGAAGACACGGTCAGTACAATCAGAGACAGCCTGATGGAGAAGATCGGGCCCAACATGGCCAGCCTCTTCCACATCCTGCAGACAGACCACTGTGCCCAGACACACCCCAGAGCTGACTTCAATAGGAGGCGCACAAATGAGCCACAGAAGCTGAAAGTCCTCCTCAGGAACCTCCGAGGTGAGGGGGACTCTCCCTCACACATCAAACGCACCTCCCAAGAGAGTGCGTAA
16 - 小家鼠STC-1胺基酸序列	MLQNSAVILALVISAAAAHEAEQNDSVSPRKSRVAAQNSAEVVRCLNSALQVGCGAFACLENSTCDTDGMYDICKSFLYSAAKFDTQGKAFVKESLKCIANGITSKVFLAIRRCSTFQRMIAEVQEDCYSKLNVCSIAKRNPEAITEVIQLPNHFSNRYYNRLVRSLLECDEDTVSTIRDSLMEKIGPNMASLFHILQTDHCAQTHPRADFNRRRTNEPQKLKVLLRNLRGEGDSPSHIKRTSQESA
17 -小家鼠STC-1前肽核酸序列	ATGCACGAGGCGGAACAAAATGATTCTGTGAGCCCCAGAAAATCCCGGGTGGCGGCTCAAAATTCAGCTGAAGTGGTTCGCTGCCTCAACAGTGCCCTGCAGGTTGGCTGCGGGGCTTTTGCATGCCTGGAAAACTCCACATGTGACACAGATGGGATGTACGACATTTGTAAATCCTTCTTGTACAGTGCTGCTAAATTTGACACTCAGGGAAAAGCATTTGTCAAAGAGAGCTTAAAGTGCATCGCCAATGGGATCACCTCCAAGGTATTCCTTGCCATTCGGAGGTGTTCGACTTTCCAGAGGATGATCGCCGAGGTGCAGGAGGACTGCTACAGCAAGCTTAACGTTTGCAGCATCGCCAAGCGCAACCCGGAAGCCATCACTGAAGTCATACAGCTGCCCAATCACTTCTCCAACAGATACTACAACAGACTTGTCCGAAGCCTTCTGGAATGTGATGAAGACACGGTCAGTACAATCAGAGACAGCCTGATGGAGAAGATCGGGCCCAACATGGCCAGCCTCTTCCACATCCTGCAGACAGACCACTGTGCCCAGACACACCCCAGAGCTGACTTCAATAGGAGGCGCACAAATGAGCCACAGAAGCTGAAAGTCCTCCTCAGGAACCTCCGAGGTGAGGGGGACTCTCCCTCACACATCAAACGCACCTCCCAAGAGAGTGCGTAA
18 -小家鼠STC-1前肽胺基酸序列	MHEAEQNDSVSPRKSRVAAQNSAEVVRCLNSALQVGCGAFACLENSTCDTDGMYDICKSFLYSAAKFDTQGKAFVKESLKCIANGITSKVFLAIRRCSTFQRMIAEVQEDCYSKLNVCSIAKRNPEAITEVIQLPNHFSNRYYNRLVRSLLECDEDTVSTIRDSLMEKIGPNMASLFHILQTDHCAQTHPRADFNRRRTNEPQKLKVLLRNLRGEGDSPSHIKRTSQESA
19 - 小家鼠STC-1鏈核酸序列	ATGGTGGCGGCTCAAAATTCAGCTGAAGTGGTTCGCTGCCTCAACAGTGCCCTGCAGGTTGGCTGCGGGGCTTTTGCATGCCTGGAAAACTCCACATGTGACACAGATGGGATGTACGACATTTGTAAATCCTTCTTGTACAGTGCTGCTAAATTTGACACTCAGGGAAAAGCATTTGTCAAAGAGAGCTTAAAGTGCATCGCCAATGGGATCACCTCCAAGGTATTCCTTGCCATTCGGAGGTGTTCGACTTTCCAGAGGATGATCGCCGAGGTGCAGGAGGACTGCTACAGCAAGCTTAACGTTTGCAGCATCGCCAAGCGCAACCCGGAAGCCATCACTGAAGTCATACAGCTGCCCAATCACTTCTCCAACAGATACTACAACAGACTTGTCCGAAGCCTTCTGGAATGTGATGAAGACACGGTCAGTACAATCAGAGACAGCCTGATGGAGAAGATCGGGCCCAACATGGCCAGCCTCTTCCACATCCTGCAGACAGACCACTGTGCCCAGACACACCCCAGAGCTGACTTCAATAGGAGGCGCACAAATGAGCCACAGAAGCTGAAAGTCCTCCTCAGGAACCTCCGAGGTGAGGGGGACTCTCCCTCACACATCAAACGCACCTCCCAAGAGAGTGCGTAA
20 - 小家鼠STC-1鏈胺基酸序列	MVAAQNSAEVVRCLNSALQVGCGAFACLENSTCDTDGMYDICKSFLYSAAKFDTQGKAFVKESLKCIANGITSKVFLAIRRCSTFQRMIAEVQEDCYSKLNVCSIAKRNPEAITEVIQLPNHFSNRYYNRLVRSLLECDEDTVSTIRDSLMEKIGPNMASLFHILQTDHCAQTHPRADFNRRRTNEPQKLKVLLRNLRGEGDSPSHIKRTSQESA
21 - 小家鼠STC-1胺基酸序列	MLQNSAVILALVISAAAAHEAEQNDSVSPRKSRVAAQNSAEVVRCLNSACRLAAGFACLENSTCDTDGMYDICKSFLYSAAKFDTQGKAFVKESLKCIANGITSKVFLAIRRCSTFQRMIAEVQEDCYSKLNVCSIAKRNPEAITEVIQLPNHFSNRYYNRLVRSLLECDEDTVSTIRDSLMEKIGPNMASLFHILQTDHCAQTHPRADFNRRRTNEPQKLKVLLRNLRGEGDSPSHIKRTSQESA
22 - 小家鼠STC-1前肽胺基酸序列	MHEAEQNDSVSPRKSRVAAQNSAEVVRCLNSACRLAAGFACLENSTCDTDGMYDICKSFLYSAAKFDTQGKAFVKESLKCIANGITSKVFLAIRRCSTFQRMIAEVQEDCYSKLNVCSIAKRNPEAITEVIQLPNHFSNRYYNRLVRSLLECDEDTVSTIRDSLMEKIGPNMASLFHILQTDHCAQTHPRADFNRRRTNEPQKLKVLLRNLRGEGDSPSHIKRTSQESA
23 - 小家鼠STC-1鏈胺基酸序列	MVAAQNSAEVVRCLNSACRLAAGFACLENSTCDTDGMYDICKSFLYSAAKFDTQGKAFVKESLKCIANGITSKVFLAIRRCSTFQRMIAEVQEDCYSKLNVCSIAKRNPEAITEVIQLPNHFSNRYYNRLVRSLLECDEDTVSTIRDSLMEKIGPNMASLFHILQTDHCAQTHPRADFNRRRTNEPQKLKVLLRNLRGEGDSPSHIKRTSQESA
24 - 褐家鼠STC-1核酸序列	ATGCTCCAAAACTCAGCAGTGATTCTGGCGCTGGTCATCAGTGCTGCTGCAGCTCACGAGGCGGAACAGAATGATTCTGTGAGCCCCAGAAAATCCCGGGTGGCGGCTCAAAATTCAGCTGAAGTGGTCCGCTGCCTCAACAGTGCCCTACAGGTTGGCTGTGGGGCTTTTGCATGCCTGGAAAACTCCACATGTGACACAGATGGGATGTACGACATTTGTAAATCCTTCTTGTACAGTGCTGCTAAATTTGACACTCAGGGAAAAGCATTTGTCAAAGAGAGCTTAAAGTGCATCGCCAATGGGATCACCTCCAAGGTCTTCCTTGCCATTCGGAGGTGTTCTACTTTCCAGAGGATGATCGCCGAGGTGCAGGAGGACTGCTACAGCAAGCTCAATGTTTGCAGCATTGCCAAGCGCAACCCGGAAGCCATCACTGAAGTCATACAGCTGCCCAATCACTTCTCCAACAGATACTACAACAGACTTGTCCGAAGCCTTCTGGAATGTGATGAAGATACGGTCAGCACAATCAGAGACAGCCTGATGGAGAAGATCGGGCCCAACATGGCCAGCCTCTTCCATATCCTGCAGACAGACCACTGTGCCCAGACACACCCCAGAGCTGACTTCAATAGGAGGCGCACAAATGAGCCACAGAAGCTGAAAGTCCTCCTCAGGAACCTCCGAGGTGAGGGGGATTCTCCCTCACACATCAAACGCACCTCCCAAGAGAATGCGTAA
25 - 褐家鼠STC-1胺基酸序列	MLQNSAVILALVISAAAAHEAEQNDSVSPRKSRVAAQNSAEVVRCLNSALQVGCGAFACLENSTCDTDGMYDICKSFLYSAAKFDTQGKAFVKESLKCIANGITSKVFLAIRRCSTFQRMIAEVQEDCYSKLNVCSIAKRNPEAITEVIQLPNHFSNRYYNRLVRSLLECDEDTVSTIRDSLMEKIGPNMASLFHILQTDHCAQTHPRADFNRRRTNEPQKLKVLLRNLRGEGDSPSHIKRTSQENA
26 - 褐家鼠STC-1前肽核酸序列	ATGCACGAGGCGGAACAGAATGATTCTGTGAGCCCCAGAAAATCCCGGGTGGCGGCTCAAAATTCAGCTGAAGTGGTCCGCTGCCTCAACAGTGCCCTACAGGTTGGCTGTGGGGCTTTTGCATGCCTGGAAAACTCCACATGTGACACAGATGGGATGTACGACATTTGTAAATCCTTCTTGTACAGTGCTGCTAAATTTGACACTCAGGGAAAAGCATTTGTCAAAGAGAGCTTAAAGTGCATCGCCAATGGGATCACCTCCAAGGTCTTCCTTGCCATTCGGAGGTGTTCTACTTTCCAGAGGATGATCGCCGAGGTGCAGGAGGACTGCTACAGCAAGCTCAATGTTTGCAGCATTGCCAAGCGCAACCCGGAAGCCATCACTGAAGTCATACAGCTGCCCAATCACTTCTCCAACAGATACTACAACAGACTTGTCCGAAGCCTTCTGGAATGTGATGAAGATACGGTCAGCACAATCAGAGACAGCCTGATGGAGAAGATCGGGCCCAACATGGCCAGCCTCTTCCATATCCTGCAGACAGACCACTGTGCCCAGACACACCCCAGAGCTGACTTCAATAGGAGGCGCACAAATGAGCCACAGAAGCTGAAAGTCCTCCTCAGGAACCTCCGAGGTGAGGGGGATTCTCCCTCACACATCAAACGCACCTCCCAAGAGAATGCGTAA
27 - 褐家鼠STC-1前肽胺基酸序列	MHEAEQNDSVSPRKSRVAAQNSAEVVRCLNSALQVGCGAFACLENSTCDTDGMYDICKSFLYSAAKFDTQGKAFVKESLKCIANGITSKVFLAIRRCSTFQRMIAEVQEDCYSKLNVCSIAKRNPEAITEVIQLPNHFSNRYYNRLVRSLLECDEDTVSTIRDSLMEKIGPNMASLFHILQTDHCAQTHPRADFNRRRTNEPQKLKVLLRNLRGEGDSPSHIKRTSQENA
28 - 褐家鼠STC-1鏈核酸序列	ATGGTGGCGGCTCAAAATTCAGCTGAAGTGGTCCGCTGCCTCAACAGTGCCCTACAGGTTGGCTGTGGGGCTTTTGCATGCCTGGAAAACTCCACATGTGACACAGATGGGATGTACGACATTTGTAAATCCTTCTTGTACAGTGCTGCTAAATTTGACACTCAGGGAAAAGCATTTGTCAAAGAGAGCTTAAAGTGCATCGCCAATGGGATCACCTCCAAGGTCTTCCTTGCCATTCGGAGGTGTTCTACTTTCCAGAGGATGATCGCCGAGGTGCAGGAGGACTGCTACAGCAAGCTCAATGTTTGCAGCATTGCCAAGCGCAACCCGGAAGCCATCACTGAAGTCATACAGCTGCCCAATCACTTCTCCAACAGATACTACAACAGACTTGTCCGAAGCCTTCTGGAATGTGATGAAGATACGGTCAGCACAATCAGAGACAGCCTGATGGAGAAGATCGGGCCCAACATGGCCAGCCTCTTCCATATCCTGCAGACAGACCACTGTGCCCAGACACACCCCAGAGCTGACTTCAATAGGAGGCGCACAAATGAGCCACAGAAGCTGAAAGTCCTCCTCAGGAACCTCCGAGGTGAGGGGGATTCTCCCTCACACATCAAACGCACCTCCCAAGAGAATGCGTAA
29 - 褐家鼠STC-1鏈胺基酸序列	MVAAQNSAEVVRCLNSALQVGCGAFACLENSTCDTDGMYDICKSFLYSAAKFDTQGKAFVKESLKCIANGITSKVFLAIRRCSTFQRMIAEVQEDCYSKLNVCSIAKRNPEAITEVIQLPNHFSNRYYNRLVRSLLECDEDTVSTIRDSLMEKIGPNMASLFHILQTDHCAQTHPRADFNRRRTNEPQKLKVLLRNLRGEGDSPSHIKRTSQENA

在一些實施例中，STC-1多肽及編碼STC-I多肽之核酸如其他地方所描述(參見例如以引用之方式併入本文中之US 9,498,517)。

在一些實施例中，替代STC-1多肽或除STC-1多肽之外，核酸可編碼STC-1多肽之變異體。STC-1多肽之變異體可具有天然存在之STC-1多肽之胺基酸序列，其具有一或多個(例如一個、兩個、三個、四個、五個、六個、七個、八個、九個、十個或超過十個)胺基酸缺失、添加、取代或其組合，限制條件為變異體保留天然存在之STC-1多肽之功能(例如減輕發炎)。

表1之胺基酸序列中所闡述之任何適當的胺基酸殘基可缺失，且任何適當的胺基酸殘基(例如20個習知胺基酸殘基中之任一者或任何其他類型的胺基酸，諸如鳥胺酸或瓜胺酸)可添加至表1中所闡述之序列中或在其內經取代。大部分天然存在之胺基酸為L-胺基酸，且天然存在之多肽主要由L-胺基酸構成。D-胺基酸為L-胺基酸之對映異構物。在一些實施例中，本文所提供之多肽可含有一或多個D-胺基酸。在一些實施例中，多肽可含有化學結構，諸如ε-胺基己酸；羥化胺基酸，諸如3-羥脯胺酸、4-羥脯胺酸、(5R)-5-羥基-L-離胺酸、異羥基離胺酸及5-羥基-L-正纈胺酸；或糖基化胺基酸，諸如含有單醣(例如D-葡萄糖、D-半乳糖、D-甘露糖、D-葡糖胺及D-半乳胺糖)或單醣組合之胺基酸。

可在一些情況下藉由選擇其在維持(a)取代區域中肽主鏈之結構、(b)特定位點處分子之電荷或疏水性或(c)大部分側鏈之作用方面不會顯著不同之取代來進行胺基酸取代。舉例而言，天然存在之殘基可基於側鏈特性分組：(1)疏水性胺基酸(正白胺酸、甲硫胺酸、丙胺酸、纈胺酸、白胺酸及異白胺酸)；(2)中性親水性胺基酸(半胱胺酸、絲胺酸及蘇胺酸)；(3)酸性胺基酸(天冬胺酸及麩胺酸)；(4)鹼性胺基酸(天冬醯胺、麩醯胺酸、組胺酸、離胺酸及精胺酸)；(5)影響鏈定向之胺基酸(甘胺酸及脯胺酸)；及(6)芳族胺基酸(色胺酸、酪胺酸及苯丙胺酸)。此等組內進行之取代可視為保守性取代。針對表1之胺基酸本文中可使用之取代之非限制性實例包括(但不限於)纈胺酸對丙胺酸、離胺酸對精胺酸、麩醯胺酸對天冬醯胺、麩胺酸對天冬胺酸、絲胺酸對半胱胺酸、天冬醯胺對麩醯胺酸、天冬胺酸對麩胺酸、脯胺酸對甘胺酸、精胺酸對組胺酸、白胺酸對異白胺酸、異白胺酸對白胺酸、精胺酸對離胺酸、白胺酸對甲硫胺酸、白胺酸對苯丙胺酸、甘胺酸對脯胺酸、蘇胺酸對絲胺酸、絲胺酸對蘇胺酸、酪胺酸對色胺酸、苯丙胺酸對酪胺酸及/或白胺酸對纈胺酸之取代。可在表1之胺基酸內任何適當的位置進行之保守性取代之其他實例闡述於以下表2中。表2.保守性胺基酸取代之實例.

初始殘基	例示性取代	較佳取代
Ala	Val、Leu、Ile	Val
Arg	Lys、Gln、Asn	Lys
Asn	Gln、His、Lys、Arg	Gln
Asp	Glu	Glu
Cys	Ser	Ser
Gln	Asn	Asn
Glu	Asp	Asp
Gly	Pro	Pro
His	Asn、Gln、Lys、Arg	Arg
Ile	Leu、Val、Met、Ala、Phe、正白胺酸	Leu
Leu	正白胺酸、Ile、Val、Met、Ala、Phe	Ile
Lys	Arg、Gln、Asn	Arg
Met	Leu、Phe、Ile	Leu
Phe	Leu、Val、Ile、Ala	Leu
Pro	Gly	Gly
Ser	Thr	Thr
Thr	Ser	Ser
Trp	Tyr	Tyr
Tyr	Trp、Phe、Thr、Ser	Phe
Val	Ile、Leu、Met、Phe、Ala、正白胺酸	Leu

在一些實施例中，STC-1多肽之變異體可經設計以包括表1中所闡述之胺基酸序列，限制條件為其包括一或多個非保守取代。非保守取代典型地需要上文所描述之類別中之一者之成員交換另一類別之成員。無論胺基酸改變是否產生功能性多肽可藉由使用例如本文所描述之方法分析多肽之比活性來測定。

在一些實施例中，可使用具有與表1中所闡述之核酸或胺基酸序列至少70%(例如70%、75%、80%、85%、86%、87%、88%、89%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%或99.0%)序列一致性之胺基酸或核酸序列之STC-1多肽之變異體，限制條件為其相對於表1之核酸或胺基酸序列包括至少一個差異(例如至少一個胺基酸添加、缺失或取代)。藉由測定比對序列中之匹配位置數，將匹配位置數除以比對序列長度且乘以100來計算序列一致性百分比。匹配位置係指比對序列中相同位置處存在一致胺基酸或核酸之位置。

特定核酸或胺基酸序列與特定序列識別編號(例如SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4等)所提及之序列之間的序列一致性百分比測定如下。首先，使用來自含有BLASTN版本2.0.14及BLASTP版本2.0.14之BLASTZ之獨立版本的BLAST 2序列(Bl2seq)程式，將核酸或胺基酸序列與特定序列識別編號中所闡述之序列進行比較。此BLASTZ獨立版本可在fr.com/blast or at ncbi.nlm.nih.gov.線上獲得。解釋如何使用Bl2seq程式之說明書可見於BLASTZ隨附之讀我檔案。Bl2seq使用BLASTN或BLASTP算法進行兩個序列之間的比較。BLASTN用於比較核酸序列，而BLASTP用於比較胺基酸序列。為了比較兩個核酸序列，如下設定選項：-i設定為含有第一待比較核酸序列之檔案(例如C:\seq1.txt)；-j設定為含有第二待比較核酸序列之檔案(例如C:\seq2.txt)；-p設定為blastn；-o設定為任何所需檔案名稱(例如C:\output.txt)；-q設定為-1；-r設定為2；且所有其他選項保持其默認設置。舉例而言，以下指令可用於產生含有兩個序列之間的比較之輸出檔案：C:\Bl2seq -i c:\seq1.txt -j c:\seq2.txt -p blastn -o c:\output.txt -q -1 -r 2。為了比較兩個胺基酸序列，如下設定Bl2seq之選項：-i設定為含有第一待比較胺基酸序列之檔案(例如C:\seq1.txt)；-j設定為含有第二待比較胺基酸序列之檔案(例如C:\seq2.txt)；-p設定為blastp；-o設定為任何所需檔案名稱(例如C:\output.txt)；且所有其他選項保持其默認設置。舉例而言，以下指令可用於產生含有兩個胺基酸序列之間的比較之輸出檔案：C:\Bl2seq -i c:\seq1.txt -j c:\seq2.txt -p blastp -o c:\output.txt。若兩個比較序列共有同源性，則指定的輸出檔案將存在與比對序列同源之彼等區域。若兩個比較序列不共有同源性，則指定輸出檔案將不存在比對序列。

一旦比對，匹配數目藉由對兩個序列中存在一致的核苷酸或胺基酸殘基之位置數目進行計數來確定。藉由將匹配數目除以所鑑別之序列(例如SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 4等)中所闡述之序列之長度，繼而將所得值乘以100來測定序列一致性百分比。舉例而言，當與SEQ ID NO: 2中所闡述之序列比對時，具有247個匹配之胺基酸序列與SEQ ID NO: 8中所闡述之序列96.5%一致(亦即，247÷256×100=96.5%)。應注意，序列一致性百分比值四捨五入至小數點後一位。舉例而言，75.11、75.12、75.13及75.14四捨五入至75.1，而75.15、75.16、75.17、75.18及75.19四捨五入至75.2。亦應注意，長度值將始終為整數。

可藉由包括(但不限於)共同分子選殖、聚合酶鏈反應(PCR)、化學核酸合成技術及此類技術組合之技術來產生編碼STC-1多肽之核酸。舉例而言，PCR或RT-PCR可與經設計以增強編碼STC-1多肽之核酸(例如基因體DNA或RNA)之寡核苷酸引子一起使用。

如本文所提供，編碼本文所描述之STC-1之核酸序列可操作地連接於啟動子，如下文進一步描述。

包含編碼 STC-1 之核酸之載體可將編碼STC-1多肽之核酸遞送至患者一個或兩個眼睛(例如一個或兩個眼睛內之細胞)以用於短暫表現STC-1多肽或穩定表現STC-1多肽。在其中編碼STC-1多肽之核酸用於穩定表現STC-1多肽之實施例中，編碼STC-1多肽之核酸可經工程改造以整合至細胞之基因體中。使用任何適當的方法，核酸可經工程改造以整合至細胞之基因體中。舉例而言，基因編輯技術(例如CRISPR或TALEN基因編輯)可用於將經設計以表現STC-1多肽之核酸整合至細胞之基因體中。

當將編碼STC-1多肽之核酸遞送至患者一個或兩個眼睛(例如一個或兩個眼睛內之細胞)以用於穩定表現STC-1多肽時，STC-1多肽表現可持續任何適當的時間量(例如在單次遞送，諸如單次注射之後)。在一些實施例中，可在患者一個或兩個眼睛內在單次遞送(例如單次注射)編碼STC-1多肽之核酸之後超過約2週偵測到STC-1多肽表現。舉例而言，可在患者一個或兩個眼睛內在單次遞送(例如單次注射)編碼STC-1多肽之核酸之後至少2週、至少30天、至少180天、至少1年、至少3年、至少5年、至少8年或至少10年偵測到STC-1多肽表現。舉例而言，可在患者一個或兩個眼睛內在單次遞送(例如單次注射)編碼STC-1多肽之核酸之後約2週至約10年(例如約2週至約9年、約2週至約8年、約2週至約7年、約2週至約6年、約2週至約5年、約2週至約4年、約2週至約3年、約2週至約2年、約2週至約1年、約2週至約180天、約2週至約30天、約30天至約9年、約30天至約8年、約30天至約7年、約30天至約6年、約30天至約5年、約30天至約4年、約30天至約3年、約30天至約2年、約6個月至約10年、約1年至約10年、約2年至約10年、約3年至約10年、約4年至約10年、約5年至約10年、約6年至約10年、約7年至約10年、約8年至約10年、約9年至約10年、約6個月至約9年、約1年至約8年、約2年至約7年、約3年至約6年、約4年至約5年、約1年至約3年、約2年至約4年、約3年至約5年、約4年至約6年、約5年至約7年、約6年至約8年或約7年至約9年)偵測到STC-1多肽表現。在一些實施例中，可在患者一個或兩個眼睛內在單次注射編碼STC-1多肽之核酸之後偵測到STC-1多肽之穩定表現持續約2週。在一些實施例中，可在患者一個或兩個眼睛內在單次注射編碼STC-1多肽之核酸之後偵測到STC-1多肽之穩定表現持續約30天。在一些實施例中，可在患者一個或兩個眼睛內在單次注射編碼STC-1多肽之核酸之後偵測到STC-1多肽之穩定表現持續約90天。在一些實施例中，可在患者一個或兩個眼睛內在單次注射編碼STC-1多肽之核酸之後偵測到STC-1多肽之穩定表現持續約120天。在一些實施例中，可在患者一個或兩個眼睛內在單次注射編碼STC-1多肽之核酸之後偵測到STC-1多肽之穩定表現持續約180天。

當用於將編碼STC-1多肽之核酸遞送至患者眼睛(例如眼睛內細胞)之載體為病毒載體時，可使用任何適當的病毒載體。病毒載體可衍生自正股病毒或負股病毒。病毒載體可衍生自具有單股基因體之病毒或具有雙股基因體之病毒。病毒載體可衍生自具有DNA基因體或RNA基因體之病毒。在一些實施例中，病毒載體可為嵌合病毒載體。在一些實施例中，病毒載體可感染分裂細胞。在一些實施例中，病毒載體可感染非分裂細胞。可用於將編碼STC-1多肽之核酸遞送至患者一個或兩個眼睛(例如一個或兩個眼睛內之細胞)之基於病毒之載體之實例包括(但不限於)基於病毒之載體，基於腺病毒、AAV、仙台(Sendai)病毒、反轉錄病毒及慢病毒之載體。當使用AAV載體將用於遞送編碼STC-1多肽之核酸之載體遞送至一或多個眼睛時，AAV載體可包括三個酪胺酸成為苯丙胺酸突變(例如可為AAV2 (三重Y-F)載體)以增強轉導。當使用AAV載體將用於遞送編碼STC-1多肽之核酸之載體遞送至一或多個眼睛時，AAV載體可為任何血清型(例如AAV2)。在一些實施例中，使用如其他地方所描述之病毒載體，可將編碼STC-1多肽之核酸遞送至一個或兩個眼睛(例如一個或兩個眼睛內之細胞) (參見例如以引用之方式併入本文中之Roddy等人, Exp. Eye Res., 165:175-181 (2017)；及Ryals等人, Mol. Vis., 17:1090-102 (2011))。

當用於將編碼STC-1多肽之核酸遞送至患者(例如人類)之一個或兩個眼睛(例如一個或兩個眼睛內之細胞)之載體為非病毒載體時，可使用任何適當的非病毒載體。在一些實施例中，非病毒載體可為表現質體(例如cDNA表現載體)。

除了編碼STC-1多肽之核酸之外，載體(例如病毒載體或非病毒載體)可含有一或多個可操作地連接於編碼STC-1多肽之核酸之調節元件。此類調節元件可包括啟動子序列、強化子序列、反應元件、信號肽、內部核糖體入口序列、聚腺苷酸化信號、終止子及調節核酸之表現(例如轉錄或轉譯)之誘導型元件。可包括於載體中之調節元件之選擇視若干因素而定，包括(但不限於)可誘導性、定向及所需表現水準。舉例而言，啟動子可包括於載體中以便於轉錄編碼STC-1多肽之核酸。啟動子可為天然存在之啟動子或重組啟動子。啟動子可為組成型或誘導型(例如在四環素存在下)，且可以通用或細胞/組織特異性方式影響編碼多肽之核酸的表現(例如SYN1啟動子序列，諸如人類SYN1 (hSYN1)啟動子序列)。

在一些實施例中，STC-1編碼核酸可操作地連接於持續性活化之啟動子。可用於驅動細胞中之STC-1多肽之表現的啟動子之實例包括(但不限於)巨細胞病毒(CMV)啟動子、β-肌動蛋白啟動子，例如但不限於雞β-肌動蛋白(CBA)啟動子或人類β-肌動蛋白(hACTB)啟動子、巨細胞病毒(CMV)立即早期強化子及雞β-肌動蛋白(CAG)啟動子、人類延長因子-1α (hEF-1α)啟動子、磷酸甘油酸激酶(PGK)啟動子及泛素C (UbiC)啟動子。在一些實施例中，啟動子可包括額外調節性核酸序列，其提高或調節表現，例如天然外顯子或嵌合內含子。用於在本文所描述之組合物及方法中表現STC-1之適合的持續性活化之啟動子可衍生自例如以下表3中所描述之核酸。表3：例示性持續性活化之啟動子

SEQ ID NO:	序列	參考文獻
33 - 雞β-肌動蛋白啟動子	ACTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGGAGTCGCTGCGACGCTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTTGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTGAGGGGCTCCGGGAGGGCCCTTTGTGCGGGGGGAGCGGCTCGGGGGGTGCGTGCGTGTGTGTGTGCGTGGGGAGCGCCGCGTGCGGCTCCGCGCTGCCCGGCGGCTGTGAGCGCTGCGGGCGCGGCGCGGGGCTTTGTGCGCTCCGCAGTGTGCGCGAGGGGAGCGCGGCCGGGGGCGGTGCCCCGCGGTGCGGGGGGGGCTGCGAGGGGAACAAAGGCTGCGTGCGGGGTGTGTGCGTGGGGGGGTGAGCAGGGGGTGTGGGCGCGTCGGTCGGGCTGCAACCCCCCCTGCACCCCCCTCCCCGAGTTGCTGAGCACGGCCCGGCTTCGGGTGCGGGGCTCCGTACGGGGCGTGGCGCGGGGCTCGCCGTGCCGGGCGGGGGGTGGCGGCAGGTGGGGGTGCCGGGCGGGGCGGGGCCGCCTCGGGCCGGGGAGGGCTCGGGGGAGGGGCGCGGCGGCCCCCGGAGCGCCGGCGGCTGTCGAGGCGCGGCGAGCCGCAGCCATTGCCTTTTATGGTAATCGTGCGAGAGGGCGCAGGGACTTCCTTTGTCCCAAATCTGTGCGGAGCCGAAATCTGGGAGGCGCCGCCGCACCCCCTCTAGCGGGCGCGGGGCGAAGCGGTGCGGCGCCGGCAGGAAGGAAATGGGCGGGGAGGGCCTTCGTGCGTCGCCGCGCCGCCGTCCCCTTCTCCCTCTCCAGCCTCGGGGCTGTCCGCGGGGGGACGGCTGCCTTCGGGGGGGACGGGGCAGGGCGGGGTTCGGCTTCTGGCGTGTGACCGGCGGCTCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGCTGTCTCATCATTTTGGCAAAGAATTC	Acland等人Nat Genet 28:92-95(2001)；Cideciyan等人Proc Natl Acad Sci 105(39):15112-7(2008)
34 -雞β-肌動蛋白啟動子	CTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGACGCTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTTGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTGAGGGGCTCCGGGAGCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGCTGTCTCATCATTTTGGCAAAGAATTCCTCGAAGATCTAGGCCTGCAGGCGGCCGC
35 -小型雞β-肌動蛋白啟動子	CATGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCG
36 - 巨細胞病毒(CMV)啟動子	TAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGAGTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTGATGCGGTTTTGGCAGTACATCAATGGGCGTGGATAGCGGTTTGACTCACGGGGATTTCCAAGTCTCCACCCCATTGACGTCAATGGGAGTTTGTTTTGGCACCAAAATCAACGGGACTTTCCAAAATGTCGTAACAACTCCGCCCCATTGACGCAAATGGGCGGTAGGCGTGTACGGTGGGAGGTCTATATAAGCAGAGCTGGTTTAGTGAACCGTCAGATC	Boshart等人Cell 41(2):521-30(1985)；Zolotukhin等人J Virol. 70(7):4646-54(1996)；Zolotukhin等人Gene Ther 6:973-85(1999)
37 - SV40啟動子	CTGTGGAATGTGTGTCAGTTAGGGTGTGGAAAGTCCCCAGGCTCCCCAGCAGGCAGAAGTATGCAAAGCATGCATCTCAATTAGTCAGCAACCAGGTGTGGAAAGTCCCCAGGCTCCCCAGCAGGCAGAAGTATGCAAAGCATGCATCTCAATTAGTCAGCAACCATAGTCCCGCCCCTAACTCCGCCCATCCCGCCCCTAACTCCGCCCAGTTCCGCCCATTCTCCGCCCCATGGCTGACTAATTTTTTTTATTTATGCAGAGGCCGAGGCCGCCTCTGCCTCTGAGCTATTCCAGAAGTAGTGAGGAGGCTTTTTTGGAGGCCTAGGCTTTTGCAAAAAGCT
38 - 人類β-肌動蛋白啟動子	GTTCCATGTCCTTATATGGACTCATCTTTGCCTATTGCGACACACACTCAATGAACACCTACTACGCGCTGCAAAGAGCCCCGCAGGCCTGAGGTGCCCCCACCTCACCACTCTTCCTATTTTTGTGTAAAAATCCAGCTTCTTGTCACCACCTCCAAGGAGGGGGAGGAGGAGGAAGGCAGGTTCCTCTAGGCTGAGCCGAATGCCCCTCTGTGGTCCCACGCCACTGATCGCTGCATGCCCACCACCTGGGTACACACAGTCTGTGATTCCCGGAGCAGAACGGACCCTGCCCACCCGGTCTTGTGTGCTACTCAGTGGACAGACCCAAGGCAAGAAAGGGTGACAAGGACAGGGTCTTCCCAGGCTGGCTTTGAGTTCCTAGCACCGCCCCGCCCCCAATCCTCTGTGGCACATGGAGTCTTGGTCCCCAGAGTCCCCCAGCGGCCTCCAGATGGTCTGGGAGGGCAGTTCAGCTGTGGCTGCGCATAGCAGACATACAACGGACGGTGGGCCCAGACCCAGGCTGTGTAGACCCAGCCCCCCCGCCCCGCAGTGCCTAGGTCACCCACTAACGCCCCAGGCCTGGTCTTGGCTGGGCGTGACTGTTACCCTCAAAAGCAGGCAGCTCCAGGGTAAAAGGTGCCCTGCCCTGTAGAGCCCACCTTCCTTCCCAGGGCTGCGGCTGGGTAGGTTTGTAGCCTTCATCACGGGCCACCTCCAGCCACTGGACCGCTGGCCCCTGCCCTGTCCTGGGGAGTGTGGTCCTGCGACTTCTAAGTGGCCGCAAGCCACCTGACTCCCCCAACACCACACTCTACCTCTCAAGCCCAGGTCTCTCCCTAGTGACCCACCCAGCACATTTAGCTAGCTGAGCCCCACAGCCAGAGGTCCTCAGGCCCTGCTTTCAGGGCAGTTGCTCTGAAGTCGGCAAGGGGGAGTGACTGCCTGGCCACTCCATGCCCTCCAAGAGCTCCTTCTGCAGGAGCGTACAGAACCCAGGGCCCTGGCACCCGTGCAGACCCTGGCCCACCCCACCTGGGCGCTCAGTGCCCAAGAGATGTCCACACCTAGGATGTCCCGCGGTGGGTGGGGGGCCCGAGAGACGGGCAGGCCGGGGGCAGGCCTGGCCATGCGGGGCCGAACCGGGCACTGCCCAGCGTGGGGCGCGGGGGCCACGGCGCGCGCCCCCAGCCCCCGGGCCCAGCACCCCAAGGCGGCCAACGCCAAAACTCTCCCTCCTCCTCTTCCT
39 - 人類延長因子-1-α (hEF-1α)啟動子	CAATCTCGCTCTCGCTCTTTTTTTTTTTCGCAAAAGGAGGGGAGAGGGGGTAAAAAAATGCTGCACTGTGCGGCGAAGCCGGTGAGTGAGCGGCGCGGGGCCAATCAGCGTGCGCCGTTCCGAAAGTTGCCTTTTATGGCTCGAGCGGCCGCGGCGGCGCCCTATAAAACCCAGCGGCGCGACGCGCCACCACCGCCGAGACCGCGTCCGCCCCGCGAGCACAGAGCCTCGCCTTTGCCGATCCGCCGCCCGTCCACACCCGCCGCCAG
40 - 磷酸甘油酸激酶(PGK)啟動子	TTCTACCGGGTAGGGGAGGCGCTTTTCCCAAGGCAGTCTGGAGCATGCGCTTTAGCAGCCCCGCTGGGCACTTGGCGCTACACAAGTGGCCTCTGGCCTCGCACACATTCCACATCCACCGGTAGGCGCCAACCGGCTCCGTTCTTTGGTGGCCCCTTCGCGCCACCTTCTACTCCTCCCCTAGTCAGGAAGTTCCCCCCCGCCCCGCAGCTCGCGTCGTGCAGGACGTGACAAATGGAAGTAGCACGTCTCACTAGTCTCGTGCAGATGGACAGCACCGCTGAGCAATGGAAGCGGGTAGGCCTTTGGGGCAGCGGCCAATAGCAGCTTTGCTCCTTCGCTTTCTGGGCTCAGAGGCTGGGAAGGGGTGGGTCCGGGGGCGGGCTCAGGGGCGGGCTCAGGGGCGGGGCGGGCGCCCGAAGGTCCTCCGGAGGCCCGGCATTCTGCACGCTTCAAAAGCGCACGTCTGCCGCGCTGTTCTCCTCTTCCTCATCTCCGGGCCTTTCGACCT
41 - 泛素C (UbiC)啟動子	GGTGCAGCGGCCTCCGCGCCGGGTTTTGGCGCCTCCCGCGGGCGCCCCCCTCCTCACGGCGAGCGCTGCCACGTCAGACGAAGGGCGCAGGAGCGTTCCTGATCCTTCCGCCCGGACGCTCAGGACAGCGGCCCGCTGCTCATAAGACTCGGCCTTAGAACCCCAGTATCAGCAGAAGGACATTTTAGGACGGGACTTGGGTGACTCTAGGGCACTGGTTTTCTTTCCAGAGAGCGGAACAGGCGAGGAAAAGTAGTCCCTTCTCGGCGATTCTGCGGAGGGATCTCCGTGGGGCGGTGAACGCCGATGATTATATAAGGACGCGCCGGGTGTGGCACAGCTAGTTCCGTCGCAGCCGGGATTTGGGTCGCGGTTCTTGTTTGTGGATCGCTGTGATCGTCACTTGGTGAGTTGCGGGCTGCTGGGCTGGCCGGGGCTTTCGTGGCCGCCGGGCCGCTCGGTGGGACGGAAGCGTGTGGAGAGACCGCCAAGGGCTGTAGTCTGGGTCCGCGAGCAAGGTTGCCCTGAACTGGGGGTTGGGGGGAGCGCACAAAATGGCGGCTGTTCCCGAGTCTTGAATGGAAGACGCTTGTAAGGCGGGCTGTGAGGTCGTTGAAACAAGGTGGGGGGCATGGTGGGCGGCAAGAACCCAAGGTCTTGAGGCCTTCGCTAATGCGGGAAAGCTCTTATTCGGGTGAGATGGGCTGGGGCACCATCTGGGGACCCTGACGTGAAGTTTGTCACTGACTGGAGAACTCGGGTTTGTCGTCTGGTTGCGGGGGCGGCAGTTATGCGGTGCCGTTGGGCAGTGCACCCGTACCTTTGGGAGCGCGCGCCTCGTCGTGTCGTGACGTCACCCGTTCTGTTGGCTTATAATGCAGGGTGGGGCCACCTGCCGGTAGGTGTGCGGTAGGCTTTTCTCCGTCGCAGGACGCAGGGTTCGGGCCTAGGGTAGGCTCTCCTGAATCGACAGGCGCCGGACCTCTGGTGAGGGGAGGGATAAGTGAGGCGTCAGTTTCTTTGGTCGGTTTTATGTACCTATCTTCTTAAGTAGCTGAAGCTCCGGTTTTGAACTATGCGCTCGGGGTTGGCGAGTGTGTTTTGTGAAGTTTTTTAGGCACCTTTTGAAATGTAATCATTTGGGTCAATATGTAATTTTCAGTGTTAGACTAGTAAA	Schorpp等人Nucleic Acids Res. 24(9):1787-8(1996)；Lois等人Science 295(5556):868-72(2002)

在一些實施例中，編碼STC-1多肽之核酸可操作地連接於衍生自雞β-肌動蛋白啟動子之啟動子。在一些實施例中，雞β-肌動蛋白啟動子衍生自SEQ ID NO: 33之核酸序列或與SEQ ID NO: 33至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸序列。在一些實施例中，雞β-肌動蛋白啟動子衍生自SEQ ID NO: 33之核酸序列。在一些實施例中，雞β-肌動蛋白啟動子衍生自SEQ ID NO: 34之核酸序列或與SEQ ID NO: 34至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸序列。在一些實施例中，雞β-肌動蛋白啟動子衍生自SEQ ID NO: 34之核酸序列。在一些實施例中，雞β-肌動蛋白啟動子衍生自SEQ ID NO: 35之核酸序列或與SEQ ID NO: 35至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸序列。在一些實施例中，雞β-肌動蛋白啟動子衍生自SEQ ID NO: 35之核酸序列。

在一些實施例中，編碼STC-1多肽之核酸可操作地連接於衍生自巨細胞病毒(CMV)啟動子之啟動子。在一些實施例中，CMV啟動子衍生自SEQ ID NO: 36之核酸序列或與SEQ ID NO: 36至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸序列。在一些實施例中，CMV啟動子衍生自SEQ ID NO: 36之核酸序列。

在一些實施例中，編碼STC-1多肽之核酸可操作地連接於衍生自SV40啟動子之啟動子。在一些實施例中，SV40啟動子衍生自SEQ ID NO: 37之核酸序列或與SEQ ID NO: 37至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸序列。在一些實施例中，SV40啟動子衍生自SEQ ID NO: 37之核酸序列。

在一些實施例中，編碼STC-1多肽之核酸可操作地連接於衍生自人類β-肌動蛋白啟動子之啟動子。在一些實施例中，人類β-肌動蛋白啟動子衍生自SEQ ID NO: 38之核酸序列或與SEQ ID NO: 38至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸序列。在一些實施例中，人類β-肌動蛋白啟動子衍生自SEQ ID NO: 38之核酸序列。

在一些實施例中，編碼STC-1多肽之核酸可操作地連接於衍生自人類延長因子1-α (hEF-1α)啟動子之啟動子。在一些實施例中，hEF-1α啟動子衍生自SEQ ID NO: 39之核酸序列或與SEQ ID NO: 39至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸序列。在一些實施例中，hEF-1α啟動子衍生自SEQ ID NO: 39之核酸序列。

在一些實施例中，編碼STC-1多肽之核酸可操作地連接於衍生自磷酸甘油酸激酶(PGK)啟動子之啟動子。在一些實施例中，PGK啟動子衍生自SEQ ID NO: 40之核酸序列或與SEQ ID NO: 40至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸序列。在一些實施例中，PGK啟動子衍生自SEQ ID NO: 40之核酸序列。

在一些實施例中，編碼STC-1多肽之核酸可操作地連接於衍生自泛素C (UbiC)啟動子之啟動子。在一些實施例中，UbiC啟動子衍生自SEQ ID NO: 41之核酸序列或與SEQ ID NO: 41至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸序列。在一些實施例中，UbiC啟動子衍生自SEQ ID NO: 41之核酸序列。

在一些實施例中，STC-1編碼核酸可操作地連接於眼細胞特異性啟動子。可用於驅動細胞中STC-1多肽表現之啟動子之實例包括(但不限於)衍生自以下之啟動子：人類突觸蛋白1基因(hSYN1)啟動子、人類視紫質(Rho)啟動子(參見例如Allocca等人J Virol. 81(20):11372-80(2007)；Busskamp等人Science. 329(5990):413-7(2010))、人類視紫質激酶1 (hRK1)啟動子(參見例如Khani等人Invest Ophthalmol Vis Sci. 48(9):3954-61(2007)；Boye等人PLoS One. 5(6):e11306(2010)；Boye等人Hum Gene Ther. 23(10):1101-1115(2012))、人類光受器間類視黃素結合蛋白/視黃醇結合蛋白3 (IRBP/hIRBP241)啟動子(參見例如Beltran等人Proc Natl Acad Sci 109(6):2132-7(2012))、人類紅視蛋白(PR2.1/CHOPS2053)啟動子(參見例如Alexander等人Nat Med. 13:685-7(2007)；Mancuso等人Nature 461(7265):784-7(2009)；Komaromy等人Hum Mol Genet. 19(13):2581-93(2010))、融合至視錐轉導蛋白α啟動子之hIRBP強化子(IRBP/GNAT2)啟動子、人類卵黃狀黃斑變性/斑萎蛋白1 (VMD2/BEST1)啟動子(參見例如Esumi等人J Biol Chem. 279(18):19064-73(2004)；Deng等人Invest Ophthalmol Vis Sci. 53(4):1895-904(2012))、VE-鈣黏素/鈣黏素5 (CDH5)/CD144啟動子(參見例如Cai等人2011；Qi等人2012)、Thy1啟動子(參見例如Alic等人Neurosci Lett. 634:62-41(2016))、神經纖毛重鏈(NEFH)啟動子(參見例如Hanlon等人Front Neurosci. 11:521(2017))、視網膜色素上皮組織65 (RPE65)啟動子、浦金埃氏細胞蛋白2 (PCP2)啟動子(參見例如Korecki等人Gene Ther. 28(6):351-72(2021))、G蛋白次單元γ轉導蛋白2 (GNGT2)啟動子、磷酸二酯酶6H (PDE6H)啟動子(參見例如Korecki等人Gene Ther. 28(6):351-72(2021))、類成對同源域3 (PITX3)啟動子(參見例如Korecki等人Gene Ther. 28(6):351-72(2021))、密連蛋白5 (CLDN5)啟動子、核受體第二亞族E組成員1(NR2E1)啟動子(參見例如Korecki等人Gene Ther. 28(6):351-72(2021))、配對盒蛋白6 (PAX6)啟動子(參見例如Korecki等人Gene Ther. 28(6):351-72(2021))、770En_454P(hGRM6)啟動子(參見例如Hulliger等人Mol Ther Methods Clin Dev. 17:505-19(2020))或本文所描述之其他眼細胞特異性啟動子。在一些實施例中，眼細胞特異性啟動子可包括額外調節性核酸序列，其提高或調節表現，例如天然外顯子、內含子或嵌合內含子。

在一些實施例中，編碼STC-1多肽之核酸可操作地連接於衍生自人類SYN1 (hSYN1)啟動子之啟動子。在一些實施例中，hSYN1啟動子衍生自SEQ ID NO:42之核酸序列或與SEQ ID NO:42至少70%、75%、80%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核酸序列。在一些實施例中，hSYN1啟動子衍生自SEQ ID NO:42之核酸序列。SEQ ID NO:42提供於以下表4中。

在一些實施例中，編碼STC-1多肽之核酸可操作地連接於衍生自人類視紫質激酶1 (hRK1)啟動子之啟動子。在一些實施例中，hRK1啟動子衍生自SEQ ID NO: 55之核酸序列或與SEQ ID NO: 55至少70%、75%、80%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核酸序列。在一些實施例中，hRK1啟動子衍生自SEQ ID NO: 55之核酸序列。SEQ ID NO: 55提供於以下表4中。

在一些實施例中，編碼STC-1多肽之核酸可操作地連接於衍生自纖維母細胞特異性蛋白1 (FSP1/S100A4)啟動子之啟動子。在一些實施例中，FSP1/S100A4啟動子衍生自SEQ ID NO: 56之核酸序列或與SEQ ID NO: 56至少70%、75%、80%、90%、95%、96%、97%、98%或99%一致之核酸序列。在一些實施例中，FSP1/S100A4啟動子衍生自SEQ ID NO: 55之核酸序列。SEQ ID NO: 55提供於以下表4中。表4：例示性細胞特異性啟動子序列

SEQ ID NO:	序列
42 - hSYN1啟動子	GATCTAGGCCTACTAGTCTGCAGAGGGCCCTGCGTATGAGTGCAAGTGGGTTTTAGGACCAGGATGAGGCGGGGTGGGGGTGCCTACCTGACGACCGACCCCGACCCACTGGACAAGCACCCAACCCCCATTCCCCAAATTGCGCATCCCCTATCAGAGAGGGGGAGGGGAAACAGGATGCGGCGAGGCGCGTGCGCACTGCCAGCTTCAGCACCGCGGACAGTGCCTTCGCCCCCGCCTGGCGGCGCGCGCCACCGCCGCCTCAGCACTGAAGGCGCGCTGACGTCACTCGCCGGTCCCCCGCAAACTCCCCTTCCCGGCCACCTTGGTCGCGTCCGCGCCGCCGCCGGCCCAGCCGGACCGCACCACGCGAGGCGCGAGATAGGGGGGCACGGGCGCGACCATCTGCGCTGCGGCGCCGGCGACTCAGCGCTGCCTCAGTCTGCGGTGGGCAGCGGAGGAGTCGTGTCGTGCCTGAGAGCGCAGTCGA
54 - 人類視紫質激酶1 (hRK1)啟動子	GGGCCCCAGAAGCCTGGTGGTTGTTTGTCCTTCTCAGGGGAAAAGTGAGGCGGCCCCTTGGAGGAAGGGGCCGGGCAGAATGATCTAATCGGATTCCAAGCAGCTCAGGGGATTGTCTTTTTCTAGCACCTTCTTGCCACTCCTAAGCGTCCTCCGTGACCCCGGCTGGGATTTAGCCTGGTGCTGTGTCAGCCCCGGTCTCCCAGGGGCTTCCCAGTGGTCCCCAGGAACCCTCGACAGGGCCCGGTCTCTCTCGTCCAGCAAGGGCAGGGACGGGCCACAGGCCAAGGGC
55 - 纖維母細胞特異性蛋白1 (FSP1/S100A4)啟動子	CTACTTCTAACCCTCACTGGGTTTGTAGCCCACCCTGAGAGGTTGACCCGAATTATAACTCCCCTATTTCATGCCATTTCACCTCTAACTCTCCACCCCAACCTGGATTCTTCATTCCTGACACTCATCCCAACTTTAAATGGCCCCTCCTGATACCCTCTCCGAACCTGAGATCTATCCGTGAGCCCCCACGCCTCACTGCCACTCCACTCCATCACTACCTCACCCAGGACCTTTCCCACTGACGTTCCTGAGGTGGTCCCAGAGCCTCCTTTGGGTGTGAGCCTGTTCCCCTCCAGATCCCCCCGCCCCGACCCTGAGCCTTACTTGGCATGGCAGACAGTACCGGGCATGGGGATCCCCACCCCAGTTTTTGTTTCTGAATCTTTATTTTTTTAAGAGACAAGGTCCTCTGTGTTGCTCAGGCTGGAGAGCAGTGGCTTGAGCATAGCCAACTGCAGTCTCGAACTCCTGGGCTCAAATGATCCTCCTGTCTCAGCTTCCTGACTAGCTGGGACTACAGGCTACAGCCATGCTGCCCAGCTAATTAAAAAAAAAAATTGTTTTTCCTTTTTATAGAGACAGAAGTCTCTCTATGTTGCCTAGGCTGGTCTTGAACTCCTGGCCTCAGGCGATCCTCCCATCTCCCCCCTAGCTTTTGTGTCACCACATTTCCAGGGCAATCTCCCACCTGTCACCCACCACCCCCTGCATCTCCTTTCCTAGGTCCCCATGGGACTACTCCCTGTCCCCCATGCTCCAGGCACAGGCTGCCCCTTCCTCCACCTCTCTAAAACTCAGGCTGAGCTATGTACACTGGGTGGTGCCCATCTCATCCAGTCCCCTGCTAGTAACCGCTAGGGCTTACCCGTTACCCACGGGTGCCCACCTGGGAACAGGAGGCTTGGTTCCACGGCTGGGCTGGTGGAGGGTGCTGTGGCACTTACCGCATCAGCCCACAGCAGGAAGGCAGTATCCGCTCTCCCCTGTCCCCTGCTATGGGCAGGGCCTGGCTGGGGTATAAATAGGTCAGACCTCTGGGCCGTCCCCATTCTTCCCCTCTCTACAACCCTCTCTCCTCAGCGCTTCTTCTTTCTTGGTTTGGTGAGTTGTGTTGGCCTGACTGGCATGCAAGGGGTGTCAGAGGCCAGGGCTGGGGAAGGAGAAGGGGAGGCTGGTGGGGGCCAGATGTGCTAAAGAGATCCAGATGTGAGATTCTGATGTGGAACTCTGGGTGGATTGTGTGCGTGGGTGTGCATGGCACACACACACATGCACGTAAGACGGAGGAAAAAACAAACAGAAAAGTGAGCAAGT

編碼STC-1之核酸序列亦可包括額外調節序列，例如轉錄終止信號、有效RNA處理信號(諸如剪接及聚腺苷酸化信號(聚腺苷酸))、使細胞質mRNA穩定化之序列，例如土拔鼠肝炎病毒(WHP)轉錄後調節元件(WPRE)、增強轉譯效率之序列(亦即，Kozak共同序列)及/或增強蛋白質穩定性之序列。

在一些實施例中，編碼STC-1之核酸序列可操作地連接於適合聚腺苷酸序列。適合聚腺苷酸序列之實例包括(但不限於) SV40、牛生長激素(bGH)及TK聚腺苷酸。在某些實施例中，聚腺苷酸為bGH聚腺苷酸序列。在一些實施例中，bGH聚腺苷酸序列衍生自SEQ ID NO:43之核酸序列或與SEQ ID NO:43至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之核酸序列。在一些實施例中，bGH聚腺苷酸序列衍生自SEQ ID NO:43之核酸序列。SEQ ID NO:43提供於以下表5中。表5：例示性bGH聚腺苷酸序列

SEQ ID NO:43

TCGACTAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGA

在一些實施例中，編碼STC-1之核酸序列可操作地連接於適合強化子。適合強化子之實例包括(但不限於)α-胎蛋白強化子、TTR最小啟動子/強化子、LSP (TH結合球蛋白啟動子/α1-微球蛋白/比庫寧(bikunin)強化子)。

AAV 病毒載體在特定態樣中，本文提供含有編碼本文所描述之STC-1多肽之核酸的重組腺相關病毒(rAAV)，其用於本文所描述之治療方法中。rAAV包括AAV衣殼及已封裝於AAV衣殼中之編碼STC-1之核酸，其中編碼STC-1之核酸可操作地連接於用於將核酸填充至衣殼中所需之如本文所描述之啟動子及AAV反向末端重複序列(ITR)。待封裝至AAV衣殼中之核酸含有STC-1編碼序列、啟動子序列，且可包括本文所描述之其他調節序列，其藉由AAV基因體之封裝信號側接，允許核酸有效封裝至AAV衣殼中以用於遞送及表現於眼睛中。

STC-1編碼核酸之組分藉由AAV反向末端重複序列側接於5'端及3'端。舉例而言，5' AAV ITR (編碼STC-1多肽且可操作地連接於啟動子及其他調節序列之核酸序列)及3' AAV ITR形成已封裝至AAV衣殼中之核酸。

ITR為在載體產生期間負責核酸之複製及封裝之基因元件且為生成rAAV所需之唯一病毒順式元件。在一些實施例中，ITR來自不同於供應衣殼之AAV。在一些實施例中，ITR序列衍生自AAV2或其缺失版本(ΔITR)。在ITR來源來自AAV2且AAV衣殼來自另一AAV來源之情況下，所得載體可稱為假型化。典型地，AAV載體基因體包含AAV 5' ITR、編碼STC-1及任何調節序列之核酸序列及AAV 3' ITR。然而，此等元件之其他組態可為適合的。在一些實施例中，提供自補AAV。已描述5' ITR之縮短版本(稱為ΔITR)，其中D-序列及末端分解位點(TR)缺失。在某些實施例中，用於封裝之核酸包括130個鹼基對之縮短AAV2 ITR，其中外部「一」元件缺失。在載體DNA擴增期間，使用內部A元件作為模板使縮短ITR恢復回野生型長度。在其他實施例中，使用全長AAV 5'及3' ITR。在其他實施例中，可選擇全長或經工程改造之ITR。

適用於封裝STC-1編碼核酸之例示性ITR提供於以下表6中。在一些實施例中，5' ITR衍生自SEQ ID NO: 44、SEQ ID NO: 45、SEQ ID NO: 46或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之序列。在一些實施例中，3' ITR衍生自SEQ ID NO: 47、SEQ ID NO: 48、SEQ ID NO: 49或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之序列。表6：例示性ITR

SEQ ID NO:	序列
44 - 5' ITR	TTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTCAGATCTGAATTCGGT
45 - 5' ITR	GGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGT
46 - 5' ITR	CTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTTGTAGTTAATGATTAACCCGCCATGCTACTTATCTACG
47 - 3' ITR	AACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAA
48 - 3' ITR	AACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACC
49 - 3' ITR	GTAGATAAGTAGCATGGCGGGTTAATCATTAACTACAAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGC TCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAG CGCGCAG

在一些實施例中，用於封裝至AAV衣殼中之核酸展示於SEQ ID NO: 50-53中之任一者(表7)中。在一些實施例中，用於封裝至AAV衣殼中之核酸為SEQ ID NO: 50或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之序列。在一些實施例中，用於封裝至AAV衣殼中之核酸為SEQ ID NO: 50。在一些實施例中，SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 26或SEQ ID NO: 28之核酸序列取代SEQ ID NO: 50之核酸866-1606。

在一些實施例中，用於封裝至AAV衣殼中之核酸為SEQ ID NO: 51或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之序列。在一些實施例中，用於封裝至AAV衣殼中之核酸為SEQ ID NO: 51。在一些實施例中，SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 26或SEQ ID NO: 28之核酸序列取代SEQ ID NO: 51之核酸866-1606。

在一些實施例中，用於封裝至AAV衣殼中之核酸為SEQ ID NO: 52或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之序列。在一些實施例中，用於封裝至AAV衣殼中之核酸為SEQ ID NO: 52。在一些實施例中，SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 26或SEQ ID NO: 28之核酸序列取代SEQ ID NO: 52之核酸1143-1883。

在一些實施例中，用於封裝至AAV衣殼中之核酸為SEQ ID NO: 53或與其至少70%、至少75%、至少80%、至少90%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之序列。在一些實施例中，用於封裝至AAV衣殼中之核酸為SEQ ID NO: 53。在一些實施例中，SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 7、SEQ ID NO: 9、SEQ ID NO:11、SEQ ID NO: 13、SEQ ID NO:15、SEQ ID NO: 17、SEQ ID NO:19、SEQ ID NO: 24、SEQ ID NO: 26或SEQ ID NO: 28之核酸序列取代SEQ ID NO: 53之核酸1143-1883。表7：用於封裝至AAV中之例示性核酸

SEQ ID NO:	序列	評述
50 - hSYN-hSTC1-FLAG核酸封裝插入序列	GGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTAGATCTGAATTCGGTACCGATCTAGGCCTACTAGTCTGCAGAGGGCCCTGCGTATGAGTGCAAGTGGGTTTTAGGACCAGGATGAGGCGGGGTGGGGGTGCCTACCTGACGACCGACCCCGACCCACTGGACAAGCACCCAACCCCCATTCCCCAAATTGCGCATCCCCTATCAGAGAGGGGGAGGGGAAACAGGATGCGGCGAGGCGCGTGCGCACTGCCAGCTTCAGCACCGCGGACAGTGCCTTCGCCCCCGCCTGGCGGCGCGCGCCACCGCCGCCTCAGCACTGAAGGCGCGCTGACGTCACTCGCCGGTCCCCCGCAAACTCCCCTTCCCGGCCACCTTGGTCGCGTCCGCGCCGCCGCCGGCCCAGCCGGACCGCACCACGCGAGGCGCGAGATAGGGGGGCACGGGCGCGACCATCTGCGCTGCGGCGCCGGCGACTCAGCGCTGCCTCAGTCTGCGGTGGGCAGCGGAGGAGTCGTGTCGTGCCTGAGAGCGCAGTCGAGAATTCACTCTAGAGGATCCGGTACTCGAGGAACTGAAAAACCAGAAAGTTAACTGGTAAGTTTAGTCTTTTTGTCTTTTATTTCAGGTCCCGGATCCGGTGGTGGTGCAAATCAAAGAACTGCTCCTCAGTGGATGTTGCCTTTACTTCTAGGCCTGTACGGAAGTGTTACTTCTGCTCTAAAAGCTGCGGAATTGTACCCGCGGCCGCATGCTCCAAAACTCAGCAGTGCTTCTGGTGCTGGTGATCAGTGCTTCTGCAACCCATGAGGCGGAGCAGAATGACTCTGTGAGCCCCAGGAAATCCCGAGTGGCGGCTCAAAACTCAGCTGAAGTGGTTCGTTGCCTCAACAGTGCTCTACAGGTCGGCTGCGGGGCTTTTGCATGCCTGGAAAACTCCACCTGTGACACAGATGGGATGTATGACATCTGTAAATCCTTCTTGTACAGCGCTGCTAAATTTGACACTCAGGGAAAAGCATTCGTCAAAGAGAGCTTAAAATGCATCGCCAACGGGGTCACCTCCAAGGTCTTCCTCGCCATTCGGAGGTGCTCCACTTTCCAAAGGATGATTGCTGAGGTGCAGGAAGAGTGCTACAGCAAGCTGAATGTGTGCAGCATCGCCAAGCGGAACCCTGAAGCCATCACTGAGGTCGTCCAGCTGCCCAATCACTTCTCCAACAGATACTATAACAGACTTGTCCGAAGCCTGCTGGAATGTGATGAAGACACAGTCAGCACAATCAGAGACAGCCTGATGGAGAAAATTGGGCCTAACATGGCCAGCCTCTTCCACATCCTGCAGACAGACCACTGTGCCCAAACACACCCACGAGCTGACTTCAACAGGAGACGCACCAATGAGCCGCAGAAGCTGAAAGTCCTCCTCAGGAACCTCCGAGGTGAGGAGGACTCTCCCTCCCACATCAAACGCACATCCCATGAGAGTGCAGACTACAAGGACGACGATGATAAGTAAGTCGACTAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGAGAGATCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACC	5' ITR 1-143 hSyn1 166-655 SV40 SD/SA 686-827 hSTC1 866-1606 FLAG 1607-1630 bGH聚腺苷酸 1635-1870 3' ITR 1882-2024
51 - hSYN-hSTC1核酸封裝插入序列	GGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTAGATCTGAATTCGGTACCGATCTAGGCCTACTAGTCTGCAGAGGGCCCTGCGTATGAGTGCAAGTGGGTTTTAGGACCAGGATGAGGCGGGGTGGGGGTGCCTACCTGACGACCGACCCCGACCCACTGGACAAGCACCCAACCCCCATTCCCCAAATTGCGCATCCCCTATCAGAGAGGGGGAGGGGAAACAGGATGCGGCGAGGCGCGTGCGCACTGCCAGCTTCAGCACCGCGGACAGTGCCTTCGCCCCCGCCTGGCGGCGCGCGCCACCGCCGCCTCAGCACTGAAGGCGCGCTGACGTCACTCGCCGGTCCCCCGCAAACTCCCCTTCCCGGCCACCTTGGTCGCGTCCGCGCCGCCGCCGGCCCAGCCGGACCGCACCACGCGAGGCGCGAGATAGGGGGGCACGGGCGCGACCATCTGCGCTGCGGCGCCGGCGACTCAGCGCTGCCTCAGTCTGCGGTGGGCAGCGGAGGAGTCGTGTCGTGCCTGAGAGCGCAGTCGAGAATTCACTCTAGAGGATCCGGTACTCGAGGAACTGAAAAACCAGAAAGTTAACTGGTAAGTTTAGTCTTTTTGTCTTTTATTTCAGGTCCCGGATCCGGTGGTGGTGCAAATCAAAGAACTGCTCCTCAGTGGATGTTGCCTTTACTTCTAGGCCTGTACGGAAGTGTTACTTCTGCTCTAAAAGCTGCGGAATTGTACCCGCGGCCGCATGCTCCAAAACTCAGCAGTGCTTCTGGTGCTGGTGATCAGTGCTTCTGCAACCCATGAGGCGGAGCAGAATGACTCTGTGAGCCCCAGGAAATCCCGAGTGGCGGCTCAAAACTCAGCTGAAGTGGTTCGTTGCCTCAACAGTGCTCTACAGGTCGGCTGCGGGGCTTTTGCATGCCTGGAAAACTCCACCTGTGACACAGATGGGATGTATGACATCTGTAAATCCTTCTTGTACAGCGCTGCTAAATTTGACACTCAGGGAAAAGCATTCGTCAAAGAGAGCTTAAAATGCATCGCCAACGGGGTCACCTCCAAGGTCTTCCTCGCCATTCGGAGGTGCTCCACTTTCCAAAGGATGATTGCTGAGGTGCAGGAAGAGTGCTACAGCAAGCTGAATGTGTGCAGCATCGCCAAGCGGAACCCTGAAGCCATCACTGAGGTCGTCCAGCTGCCCAATCACTTCTCCAACAGATACTATAACAGACTTGTCCGAAGCCTGCTGGAATGTGATGAAGACACAGTCAGCACAATCAGAGACAGCCTGATGGAGAAAATTGGGCCTAACATGGCCAGCCTCTTCCACATCCTGCAGACAGACCACTGTGCCCAAACACACCCACGAGCTGACTTCAACAGGAGACGCACCAATGAGCCGCAGAAGCTGAAAGTCCTCCTCAGGAACCTCCGAGGTGAGGAGGACTCTCCCTCCCACATCAAACGCACATCCCATGAGAGTGCATAAGTCGACTAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGAGAGATCTAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACC	5' ITR 1-143 hSyn1 166-655 SV40 SD/SA 686-827 hSTC1 866-1606 bGH聚腺苷酸 1611-1847 3' ITR 1858-2000
52 - CBA-hSTC1-FLAG核酸封裝插入序列	GGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTCAGATCTGAATTCGGTACCCTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGACGCTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTTGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTGAGGGGCTCCGGGAGCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGCTGTCTCATCATTTTGGCAAAGAATTCCTCGAAGATCTAGGCCTGCAGGCGGCCGCATGCTCCAAAACTCAGCAGTGCTTCTGGTGCTGGTGATCAGTGCTTCTGCAACCCATGAGGCGGAGCAGAATGACTCTGTGAGCCCCAGGAAATCCCGAGTGGCGGCTCAAAACTCAGCTGAAGTGGTTCGTTGCCTCAACAGTGCTCTACAGGTCGGCTGCGGGGCTTTTGCATGCCTGGAAAACTCCACCTGTGACACAGATGGGATGTATGACATCTGTAAATCCTTCTTGTACAGCGCTGCTAAATTTGACACTCAGGGAAAAGCATTCGTCAAAGAGAGCTTAAAATGCATCGCCAACGGGGTCACCTCCAAGGTCTTCCTCGCCATTCGGAGGTGCTCCACTTTCCAAAGGATGATTGCTGAGGTGCAGGAAGAGTGCTACAGCAAGCTGAATGTGTGCAGCATCGCCAAGCGGAACCCTGAAGCCATCACTGAGGTCGTCCAGCTGCCCAATCACTTCTCCAACAGATACTATAACAGACTTGTCCGAAGCCTGCTGGAATGTGATGAAGACACAGTCAGCACAATCAGAGACAGCCTGATGGAGAAAATTGGGCCTAACATGGCCAGCCTCTTCCACATCCTGCAGACAGACCACTGTGCCCAAACACACCCACGAGCTGACTTCAACAGGAGACGCACCAATGAGCCGCAGAAGCTGAAAGTCCTCCTCAGGAACCTCCGAGGTGAGGAGGACTCTCCCTCCCACATCAAACGCACATCCCATGAGAGTGCAGACTACAAGGACGACGATGATAAGTAAGTCGACTAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGAGAGATCTGAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAA	5' ITR 1-143 CBA啟動子 526-808 外顯子1 809-901 嵌合內含子 902-1103 hSTC1 1143-1883 FLAG-1 1884-1907 bGH聚腺苷酸 1933-2147 3' ITR 2159-2300
53 - CBA-hSTC1核酸封裝插入序列	GGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGGGCGACCAAAGGTCGCCCGACGCCCGGGCTTTGCCCGGGCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAACTCCATCACTAGGGGTTCCTCAGATCTGAATTCGGTACCCTAGTTATTAATAGTAATCAATTACGGGGTCATTAGTTCATAGCCCATATATGGAGTTCCGCGTTACATAACTTACGGTAAATGGCCCGCCTGGCTGACCGCCCAACGACCCCCGCCCATTGACGTCAATAATGACGTATGTTCCCATAGTAACGCCAATAGGGACTTTCCATTGACGTCAATGGGTGGACTATTTACGGTAAACTGCCCACTTGGCAGTACATCAAGTGTATCATATGCCAAGTACGCCCCCTATTGACGTCAATGACGGTAAATGGCCCGCCTGGCATTATGCCCAGTACATGACCTTATGGGACTTTCCTACTTGGCAGTACATCTACGTATTAGTCATCGCTATTACCATGGTCGAGGTGAGCCCCACGTTCTGCTTCACTCTCCCCATCTCCCCCCCCTCCCCACCCCCAATTTTGTATTTATTTATTTTTTAATTATTTTGTGCAGCGATGGGGGCGGGGGGGGGGGGGGGGCGCGCGCCAGGCGGGGCGGGGCGGGGCGAGGGGCGGGGCGGGGCGAGGCGGAGAGGTGCGGCGGCAGCCAATCAGAGCGGCGCGCTCCGAAAGTTTCCTTTTATGGCGAGGCGGCGGCGGCGGCGGCCCTATAAAAAGCGAAGCGCGCGGCGGGCGGGAGTCGCTGCGACGCTGCCTTCGCCCCGTGCCCCGCTCCGCCGCCGCCTCGCGCCGCCCGCCCCGGCTCTGACTGACCGCGTTACTCCCACAGGTGAGCGGGCGGGACGGCCCTTCTCCTCCGGGCTGTAATTAGCGCTTGGTTTAATGACGGCTTGTTTCTTTTCTGTGGCTGCGTGAAAGCCTTGAGGGGCTCCGGGAGCTAGAGCCTCTGCTAACCATGTTCATGCCTTCTTCTTTTTCCTACAGCTCCTGGGCAACGTGCTGGTTATTGTGCTGTCTCATCATTTTGGCAAAGAATTCCTCGAAGATCTAGGCCTGCAGGCGGCCGCATGCTCCAAAACTCAGCAGTGCTTCTGGTGCTGGTGATCAGTGCTTCTGCAACCCATGAGGCGGAGCAGAATGACTCTGTGAGCCCCAGGAAATCCCGAGTGGCGGCTCAAAACTCAGCTGAAGTGGTTCGTTGCCTCAACAGTGCTCTACAGGTCGGCTGCGGGGCTTTTGCATGCCTGGAAAACTCCACCTGTGACACAGATGGGATGTATGACATCTGTAAATCCTTCTTGTACAGCGCTGCTAAATTTGACACTCAGGGAAAAGCATTCGTCAAAGAGAGCTTAAAATGCATCGCCAACGGGGTCACCTCCAAGGTCTTCCTCGCCATTCGGAGGTGCTCCACTTTCCAAAGGATGATTGCTGAGGTGCAGGAAGAGTGCTACAGCAAGCTGAATGTGTGCAGCATCGCCAAGCGGAACCCTGAAGCCATCACTGAGGTCGTCCAGCTGCCCAATCACTTCTCCAACAGATACTATAACAGACTTGTCCGAAGCCTGCTGGAATGTGATGAAGACACAGTCAGCACAATCAGAGACAGCCTGATGGAGAAAATTGGGCCTAACATGGCCAGCCTCTTCCACATCCTGCAGACAGACCACTGTGCCCAAACACACCCACGAGCTGACTTCAACAGGAGACGCACCAATGAGCCGCAGAAGCTGAAAGTCCTCCTCAGGAACCTCCGAGGTGAGGAGGACTCTCCCTCCCACATCAAACGCACATCCCATGAGAGTGCATAAGTCGACTAGAGCTCGCTGATCAGCCTCGACTGTGCCTTCTAGTTGCCAGCCATCTGTTGTTTGCCCCTCCCCCGTGCCTTCCTTGACCCTGGAAGGTGCCACTCCCACTGTCCTTTCCTAATAAAATGAGGAAATTGCATCGCATTGTCTGAGTAGGTGTCATTCTATTCTGGGGGGTGGGGTGGGGCAGGACAGCAAGGGGGAGGATTGGGAAGACAATAGCAGGCATGCTGGGGAGAGATCTGAGGAACCCCTAGTGATGGAGTTGGCCACTCCCTCTCTGCGCGCTCGCTCGCTCACTGAGGCCGCCCGGGCAAAGCCCGGGCGTCGGGCGACCTTTGGTCGCCCGGCCTCAGTGAGCGAGCGAGCGCGCAGAGAGGGAGTGGCCAA	5' ITR 1-143 CBA啟動子 526-808 外顯子1 809-901 嵌合內含子 902-1103 hSTC1 1143-1883 bGH聚腺苷酸 1892-2122 3' ITR 2135-2276

AAV衣殼來源可為天然存在或經工程改造之AAV衣殼。腺相關病毒(AAV)病毒載體為AAV DNA酶耐性粒子，其具有已封裝用於遞送至靶細胞之核酸序列的AAV蛋白質衣殼。AAV衣殼由60個以大致1:1:10至1:1:20之比率之二十面體對稱性配置之衣殼(cap)蛋白質次單元VP1、VP2及VP3構成，視所選AAV而定。可選擇各種AAV作為如上文所鑑別之AAV病毒載體之衣殼的來源。參見例如美國公開專利申請案第2007-0036760-A1號；美國公開專利申請案第2009-0197338-A1號；EP 1310571。亦參見WO 2003/042397 (AAV7及其他猿猴AAV)、美國專利7790449及美國專利7282199 (AAV8)、WO 2005/033321及US 7,906,111 (AAV9)及WO 2006/110689、WO 2003/042397 (rh.10)及WO 2018/160582 (AAVhu68)，上述參考文獻中之每一者以引用之方式併入本文中。此等文獻亦描述可經選擇用於產生AAV之其他AAV，且以引用的方式併入。

除非另外說明，否則本文所描述之AAV衣殼、ITR及其他所選AAV組分很容易選自任何AAV，包括(但不限於)共同鑑別為AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV8bp、AAV7M8、AAVAnc80、AAVrh10及AAVPHP.B及已知或提及AAV中之任一者之變異體或尚待發現之AAV或其變異體或混合物的AAV。參見例如WO 2005/033321，其以引用的方式併入本文中。在一個實施例中，AAV衣殼為AAV1衣殼或其變異體、AAV8衣殼或其變異體、AAV9衣殼或其變異體。

在一些實施例中，AAV包含輔助遞送之衣殼突變。在一些實施例中，AAV包含於衣殼蛋白之表面上具有胺基酸酪胺酸(Y)成為苯丙胺酸(F)之一或多個突變的衣殼。在一些實施例中，AAV衣殼為包含於衣殼蛋白之表面上之胺基酸酪胺酸(Y)成為苯丙胺酸(F)之一或多個突變的AAV2衣殼。在一些實施例中，AAV2選自具有其衣殼蛋白中之Y444F突變、其衣殼蛋白中之Y444F及Y730F突變、其衣殼蛋白中之Y444F及Y500F及Y730F突變、其衣殼蛋白中之Y272F及Y444F及Y500F及Y730F突變、其衣殼蛋白中之Y272F及Y444F及Y500F及Y730F及T491V突變及其衣殼蛋白中之Y444F及Y500F及Y730F及T491V突變的AAV2。在一些實施例中，AAV衣殼為具有其衣殼蛋白中之Y444F及Y500F及Y730F突變的AAV2衣殼。在一些實施例中，AAV衣殼為具有Y447F突變、Y733F突變、Y447F及Y733F突變或Y447F及Y733F及T494V突變之AAV8衣殼。具有酪胺酸成為苯丙胺酸突變之AAV衣殼為此項技術中已知的，如例如US 8445267、US 8802440、US 9157098、US 9611302、US 9775918、US 9920097、US 10011640、US 10294281、US 10723768、US 10815279及US 10934327所描述，其中之每一者以引用之方式併入。

為用於產生AAV病毒載體(例如重組(r)AAV)，待封裝核酸可在任何適合的載體，例如遞送至封裝宿主細胞之質體上進行。適用於本發明中之質體可經工程改造以使得其適用於在尤其原核細胞、昆蟲細胞、哺乳動物細胞中活體外複製及封裝。適合的轉染技術及封裝宿主細胞為已知的及/或可容易由熟習此項技術者設計得到。例示性質體描述於圖1A及圖1B中。

用於產生及分離適用作載體之AAV之方法為此項技術中已知的。一般參見例如Grieger & Samulski, 2005, 「Adeno-associated virus as a gene therapy vector: Vector development, production and clinical applications」, Adv. Biochem. Engin/Biotechnol.99: 119-145；Buning等人, 2008, 「Recent developments in adeno-associated virus vector technology」, J. Gene Med.10:717-733；及以下列舉之參考文獻，其中之每一者以全文引用之方式併入本文中。為將轉基因封裝至病毒粒子中，ITR為與含有STC-1之編碼序列之核酸分子相同的構築體中以順式所需之唯一AAV組分。cap及rep基因可以反式供應。

本文所描述之重組腺相關病毒(AAV)可使用已知技術產生。參見例如WO 2003/042397、WO 2005/033321、WO 2006/110689、US 7588772 B2。此類方法涉及培養宿主細胞，其含有編碼AAV衣殼蛋白之核酸序列；功能性rep基因；在最低限度下，由AAV反向末端重複序列(ITR)及編碼STC-1之核酸序列構成之表現卡匣；及含有作用於准許表現卡匣封裝至AAV衣殼蛋白中之足夠的輔助細胞。已描述產生衣殼、其對應的編碼序列之方法及用於產生rAAV病毒載體之方法。參見例如Gao等人，Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.100 (10), 6081-6086 (2003)及US 2013/0045186A1。

在一個實施例中，提供適用於產生重組AAV之生產細胞培養物。此類細胞培養物含有在宿主細胞中表現AAV衣殼蛋白之核酸；適用於封裝至AAV衣殼中之核酸分子，例如載體基因體，該載體基因體含有AAV ITR及編碼可操作地連接於引導宿主細胞中產物表現之序列之STC-1的非AAV核酸序列；及作用於准許核酸分子封裝至重組AAV衣殼中之足夠的AAV rep官能基及腺病毒輔助細胞。在一個實施例中，細胞培養物由哺乳動物細胞(尤其例如人類胚胎腎293細胞)或昆蟲細胞(例如桿狀病毒)構成。

視情況，rep官能基藉由除提供衣殼之AAV外之AAV提供。舉例而言，rep可為(但不限於) AAV1 rep蛋白、AAV2rep蛋白、AAV3 rep蛋白、AAV4 rep蛋白、AAV5 rep蛋白、AAV6 rep蛋白、AAV7 rep蛋白、AAV8 rep蛋白；或rep 78、rep 68、rep 52、rep 40、rep68/78及rep40/52；或其片段；或另一來源。視情況，rep及cap序列在細胞培養物中之相同遺傳元件上。rep序列與cap基因之間可能存在間隔子。此等AAV或突變體AAV衣殼序列中之任一者可處於引導其在宿主細胞中之表現之外源性調節性控制序列控制下。

在一個實施例中，在適合細胞培養物(例如HEK 293細胞)中製造細胞。用於製造本文所描述之rAAV載體之方法包括此項技術中熟知之方法，諸如生成用於產生基因療法載體之質體DNA、生成載體及純化載體。在一些實施例中，基因療法載體為AAV載體且所產生之質體為編碼AAV基因體之AAV順式質體及STC-1核酸編碼序列、含有AAV rep及cap基因之AAV反式質體及腺病毒輔助質體。載體產生方法可包括諸如以下之方法步驟：開始細胞培養、細胞繼代、細胞接種、用質體DNA轉染細胞、轉染後培養基更換成無血清培養基及採集含有載體之細胞及培養基。所採集之含有載體之細胞及培養基在本文中稱作粗物質細胞採集物。在又一系統中，藉由用基於桿狀病毒之載體感染而將基因療法載體引入至昆蟲細胞中。關於此等產生系統之綜述，一般參見例如Zhang等人,2009,「Adenovirus-adeno-associated virus hybrid for large-scale recombinant adeno-associated virus production」, Human Gene Therapy 20:922-929，其中之每一者之內容以全文引用之方式併入本文中。製得及使用此等及其他AAV產生系統之方法亦描述於以下美國專利中，其中之每一者之內容以全文引用之方式併入本文中：5,139,941、5,741,683、6,057,152、6,204,059、6,268,213、6,491,907、6,660,514、6,951,753、7,094,604、7,172,893、7,201,898、7,229,823及7,439,065。

粗物質細胞採集物其後可進行諸如以下之方法步驟：載體採集物之濃縮、載體採集物之透濾、載體採集物之微流體化、載體採集物之核酸酶消化、微流化中間物之過濾、藉由層析之粗物質純化、藉由超速離心之粗物質純化、藉由切向流式過濾之緩衝劑交換及/或用以製備整體載體之調配及過濾。

在一些實施例中，在較高鹽濃度下之兩步驟親和性層析純化，繼而陰離子交換樹脂層析用於純化載體藥物產品及移除空衣殼。此等方法更詳細地描述於國際專利公開案第WO 2017/160360號中，其以引用之方式併入本文中。

為了計算空及完整粒子含量，針對裝載之GC粒子繪製所選樣品(例如在本文中之實例中，碘克沙醇(iodixanol)梯度純化製劑，其中GC數量=粒子數量)之VP3譜帶體積。所得線性方程(y=mx+c)用於計算測試物品峰之譜帶體積中之粒子數量。每裝載20 µL之粒子(pt)數量隨後乘以50以得到粒子(pt)/mL。Pt/mL除以GC/mL得到粒子與基因體複本之比率(pt/GC)。Pt/mL-GC/mL得到空pt/mL。空pt/mL除以pt/mL且×100得到空粒子百分比。

一般而言，此項技術中已知用於分析空衣殼及具有已封裝基因體之AAV載體粒子之方法。參見例如Grimm等人,Gene Therapy (1999) 6:1322-1330；Sommer等人,Molec. Ther. (2003) 7:122-128。為了測試變性衣殼，方法包括使經處理之AAV儲備液經受SDS聚丙烯醯胺凝膠電泳，其由能夠分離三種衣殼蛋白之任何凝膠組成，例如在緩衝劑中含有3-8% Tris-乙酸酯之梯度凝膠，隨後運行凝膠直至樣品材料分離，且將凝膠印漬至耐綸或硝化纖維素膜，較佳耐綸上。抗AAV衣殼抗體隨後用作結合至變性衣殼蛋白之初級抗體，較佳抗AAV衣殼單株抗體，最佳B1抗AAV-2單株抗體(Wobus等人,J. Virol. (2000) 74:9281-9293)。A 隨後使用二級抗體，一者結合至初級抗體且含有用於偵測與初級抗體之結合的構件，更佳地含有與其共價鍵結之偵測分子之抗IgG抗體，最佳共價連接至辣根過氧化酶之綿羊抗小鼠IgG抗體。一種用於偵測結合之方法用於半定量地測定初級抗體與二級抗體之間的結合，較佳能夠偵測放射性同位素發射、電磁輻射或比色變化之偵測方法，最佳化學螢光偵測套組。舉例而言，對於SDS-PAGE，可獲取來自管柱溶離份之樣品且在含有還原劑(例如DTT)之SDS-PAGE裝載緩衝液中加熱，且在預鑄造梯度聚丙烯醯胺凝膠(例如Novex)上解析衣殼蛋白。可使用SilverXpress (Invitrogen, CA)，根據製造商說明書或其他適合的染色方法，亦即，SYPRO紅寶石或庫馬斯(coomassie)染色劑來進行銀染色。在一個實施例中，可藉由定量即時PCR (Q-PCR)量測管柱溶離份中之AAV載體基因體(vg)之濃度。樣品經稀釋且用DNA酶I (或另一適合的核酸酶)消化以移除外源DNA。在核酸酶失活之後，進一步稀釋樣品且使用對引子之間的DNA序列具有特異性的引子及TaqMan™螢光探針擴增。在Applied Biosystems Prism 7700序列偵測系統上量測各樣品達到所限定之螢光水準所需之循環次數(閾值循環，Ct)。含有與AAV載體中所含有之序列一致的序列之質體DNA用以產生Q-PCR反應中之標準曲線。獲自樣品之循環閾值(Ct)用於藉由使其標準化至質體標準曲線之Ct值來測定載體基因體效價。亦可使用基於數位PCR之端點分析。

在一個態樣中，使用經最佳化之q-PCR方法，其利用廣譜絲胺酸蛋白酶，例如蛋白酶K (諸如可購自Qiagen)。更特定言之，經最佳化之qPCR基因體效價分析與標準分析類似，不同之處在於在DNA酶I消化之後，樣品經蛋白酶K緩衝劑稀釋且經蛋白酶K處理，繼而加熱失活。適當地，樣品經等於樣品大小之量之蛋白酶K緩衝劑稀釋。蛋白酶K緩衝劑可濃縮至2倍或高於2倍。典型地，蛋白酶K處理為約0.2 mg/mL，但可在0.1 mg/mL至約1 mg/mL之間變化。處理步驟一般在約55℃下進行約15分鐘，但可在更低溫度(例如約37℃至約50℃)下進行更長時間段(例如約20分鐘至約30分鐘)或在更高溫度(例如高達約60℃)下進行更短時間段(例如約5至10分鐘)。類似地，加熱失活一般在約95℃下持續約15分鐘，但溫度可降低(例如約70至約90℃)且時間延長(例如約20分鐘至約30分鐘)。隨後稀釋(例如1000倍)樣品且如標準分析中所描述經受塔克曼(TaqMan)分析。

或者或另外，可使用液滴式數位PCR (ddPCR)。舉例而言，已描述藉由ddPCR測定單股及自補AAV載體基因體效價之方法。參見例如M. Lock等人，Hu Gene Therapy Methods, Hum Gene Ther Methods.2014年4月;25(2):115-25. doi:10.1089/hgtb.2013.131. Epub 2014年2月14日。

簡言之，用於自基因體缺乏AAV中間物分離具有已封裝基因體序列之rAAV粒子之方法涉及使包含重組AAV病毒粒子及AAV衣殼中間物之懸浮液經受快速效能液相層析，其中AAV病毒粒子及AAV中間物結合至在較高pH下平衡之較強陰離子交換樹脂，且經受鹽梯度，同時監測溶離液在約260及約280下之紫外輻射吸光度。可視所選AAV而調節pH。在此方法中，AAV完整衣殼自A260/A280之比率達到拐點時溶離之溶離份收集。在一個實例中，對於親和性層析步驟，可將透濾產物施加至有效捕獲AAV2血清型之Capture SelectTM Poros-AAV2/9親和力樹脂(Life Technologies)。在此等離子性條件下，相當大百分比之殘餘細胞DNA及蛋白質流過管柱，同時有效捕獲AAV粒子。

醫藥組合物在一些實施例中，一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸可調配至向患者(例如人類)投與之組合物(例如醫藥組合物)中。舉例而言，一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸可調配至向患有青光眼之患者(例如人類)投與之醫藥學上可接受之組合物中。在一些實施例中，一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸可與一或多種醫藥學上可接受之載劑(添加劑)、賦形劑及/或稀釋劑一起調配。可用於本文所描述之組合物中之醫藥學上可接受之載劑、賦形劑及稀釋劑之實例包括(但不限於)蔗糖、乳糖、澱粉(例如羥乙酸澱粉)、纖維素、纖維素衍生物(例如經改質之纖維素，諸如微晶纖維素及纖維素醚類羥丙基纖維素(HPC)及纖維素醚羥丙基甲基纖維素(HPMC))、木糖醇、山梨糖醇、甘露糖醇、明膠、聚合物(例如聚乙烯吡咯啶酮(PVP)、聚乙二醇(PEG)、交聯聚乙烯吡咯啶酮(交聯聚維酮)、羧甲基纖維素、聚乙烯-聚氧化丙烯-嵌段聚合物及交聯羧甲基纖維素鈉(交聯羧甲基纖維素鈉))、氧化鈦、偶氮染料、矽膠、煙霧狀二氧化矽、滑石、碳酸鎂、植物硬脂酸、硬脂酸鎂、硬脂酸鋁、硬脂酸、抗氧化劑(例如維生素A、維生素E、維生素C、棕櫚酸視黃酯及硒)、檸檬酸、檸檬酸鈉、對羥苯甲酸酯(例如對羥基苯甲酸甲酯及對羥基苯甲酸丙酯)、石蠟脂、二甲亞碸、礦物油、血清蛋白(例如人類血清白蛋白)、甘胺酸、山梨酸、山梨酸鉀、水、鹽或電解液(例如生理鹽水、硫酸魚精蛋白、磷酸氫二鈉、磷酸氫鉀、氯化鈉及鋅鹽)、膠態二氧化矽、三矽酸鎂、聚丙烯酸酯、蠟、羊毛脂及卵磷脂。

含有一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸之組合物(例如醫藥組合物)可調配成任何適當的劑量形式。劑量形式之實例包括固體或液體形式，包括(但不限於)凝膠、液體、懸浮液、溶液(例如無菌溶液)、持續釋放型調配物及延遲釋放型調配物。

含有一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸之組合物(例如醫藥組合物)可經設計用於非經腸(例如局部、眼周及眼內(例如結膜下、球筋膜囊下、前房內、玻璃體內及視網膜下)投與。適用於非經腸投與之組合物包括水性及非水性無菌注射溶液，其可含有賦予與預期接受者血液等張之調配物之抗氧化劑、緩衝劑、抑菌劑及溶解物；及水性及非水性無菌懸浮液，其可包括懸浮劑及增稠劑。調配物可提供於單位劑量或多劑量容器(例如密封的安瓿及小瓶)中，且可在冷凍乾燥(凍乾)條件下儲存，僅需要在即將使用之前添加無菌液體載劑(例如注射用水)。可自無菌散劑、粒劑及錠劑製備即用型注射溶液及懸浮液。在一些實施例中，經設計用於局部投與之組合物可製備為滴眼劑(例如液體滴眼劑及凝膠滴眼劑)。

可局部或全身性投與含有一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸之組合物(例如醫藥組合物)。舉例而言，可藉由局部投與至患者(例如人類)之一個或兩個眼睛來局部投與含有一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸之組合物。舉例而言，可藉由前房內或結膜下注射至患者(例如人類)之一個或兩個眼睛來局部投與含有一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸之組合物。在替代實施例中，可藉由結膜下注射至患者(例如人類)之一個或兩個眼睛來局部投與含有一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸之組合物。

一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸之有效量(例如有效劑量)可視疾病或疾患之嚴重程度、投與途徑、受試者之年齡及一般健康狀況、賦形劑用途、與其他治療性治療共同使用，諸如使用其他試劑之可能性及/或治療醫師之判斷而變化。

有效量之含有一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸之組合物(例如醫藥組合物)可為可在不對患者產生顯著毒性之情況下治療患者之任何量。一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸之有效量可為任何適當的量。在其中病毒載體(例如AAV載體)用於投與經設計以表現STC-1多肽之核酸的實施例中，經設計以表現STC-1多肽之核酸之有效量可為每劑量每mL約1×10 ³個病毒基因體(VG/mL)至每劑量約1×10 ¹⁴個VG/mL(例如每劑量約1 × 10 ³個VG/mL至約1 × 10 ¹³個VG/mL、約1 × 10 ³個VG/mL至約1 × 10 ¹²個VG/mL、約1 × 10 ³個VG/mL至約1 × 10 ¹¹個VG/mL、約1 × 10 ³個VG/mL至約1 × 10 ¹⁰個VG/mL、約1 × 10 ³個VG/mL至約1 × 10 ⁹個VG/mL、約1 × 10 ³個VG/mL至約1 × 10 ⁸個VG/mL、約1 × 10 ³個VG/mL至約1 × 10 ⁶個VG/mL、約1 × 10 ⁴個VG/mL至約1 × 10 ¹⁴個VG/mL、約1 × 10 ⁵個VG/mL至約1 × 10 ¹⁴個VG/mL、約1 × 10 ⁶個VG/mL至約1 × 10 ¹⁴個VG/mL、約1 × 10 ⁷個VG/mL至約1 × 10 ¹⁴個VG/mL、約1 × 10 ⁸個VG/mL至約1 × 10 ¹⁴個VG/mL、約1 × 10 ⁹個VG/mL至約1 × 10 ¹⁴個VG/mL、約1 × 10 ¹⁰個VG/mL至約1 × 10 ¹⁴個VG/mL、約1 × 10 ¹¹個VG/mL至約1 × 10 ¹⁴個VG/mL、約1 × 10 ⁵個VG/mL至約1 × 10 ¹⁰個VG/mL、約1 × 10 ⁴個VG/mL至約1 × 10 ⁸個VG/mL或約1 × 10 ⁸個VG/mL至約1 × 10 ¹²個VG/mL)。舉例而言，經設計以表現STC-1多肽之核酸之有效量可為約1 × 10 ¹²個VG/mL至約1 × 10 ¹³個VG/mL(例如約3.28 × 10 ¹²個VG/mL)。有效量可保持不變或可調節為視患者對處理之響應而定之滑尺或可變劑量。各種因素可影響用於特定應用之實際有效量。舉例而言，投與頻率、處理持續時間、多種治療劑之使用、投與途徑及病況(例如與IOP升高相關之疾病或疾患，諸如青光眼)之嚴重程度可能需要增加或減少實際投與有效量。

含有一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸之組合物(例如醫藥組合物)的投與頻率可為可在不對患者產生顯著毒性之情況下治療青光眼之任何頻率。舉例而言，投與頻率可為約一週一次至約每月一次、約每兩週一次至每隔一個月一次或約一月一次至約一年一次。投與頻率可保持不變或可在治療持續時間期間為可變的。含有一或多種編碼本文所提供之STC-1之核酸的組合物之治療過程可包括停藥期。舉例而言，含有一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸之組合物可歷經六週時間段每日投與。正如有效量的情況，各種因素可影響用於特定應用之實際投與頻率。舉例而言，有效量、處理持續時間、多種治療劑之使用、投與途徑及病況(例如與IOP升高相關之疾病或疾患，諸如青光眼)之嚴重程度可能需要提高或降低投與頻率。

用於投與含有一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸之組合物(例如醫藥組合物)的有效持續時間可為在不對患者產生顯著毒性之情況下治療與IOP升高相關之疾病或疾患(例如青光眼)的任何持續時間。舉例而言，有效持續時間可在若干週至若干月或年之範圍內變化。在一些實施例中，用於治療高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患(例如青光眼)之有效持續時間可在約一個月至約生存期之持續時間範圍內。多種因素可影響用於特定治療之實際有效持續時間。舉例而言，有效持續時間可隨投與頻率、有效量、多種治療劑之使用、投與途徑及所治療之病況(例如與IOP升高相關之疾病或疾患，諸如青光眼)之嚴重程度變化。

組合療法在一些實施例中，一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸可用作唯一活性劑，其用於治療患有高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患(例如青光眼)或對IOP降低有反應之疾病或疾患(例如NTG)的患者。

在一些實施例中，本文所描述之方法及材料可包括一或多種(例如一種、兩種、三種、四種、五種或多於五種)用於治療患有高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患(例如青光眼)之患者(例如人類)的額外治療劑。在一些實施例中，用於治療高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患之治療劑可為前列腺素。在一些實施例中，用於治療高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患之治療劑可為α-腎上腺素促效劑。在一些實施例中，用於治療高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患之治療劑可為β阻斷劑。在一些實施例中，用於治療高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患之治療劑可為碳酸酐酶抑制劑。在一些實施例中，用於治療高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患之治療劑可為rho激酶抑制劑。在一些實施例中，用於治療高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患之治療劑可為縮瞳劑或膽鹼激導劑。可與經設計以表現STC-1多肽之核酸一起向患有高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患(諸如青光眼)患者投與之用於治療與IOP升高相關之疾病及病症之治療劑之實例包括(但不限於)拉坦前列素(XALATAN ^®)、曲伏前列素(travoprost) (TRAVATAN Z ^®)、他氟前列素(tafluprost) (ZIOPTAN ^®)、比馬前列素(LUMIGAN ^®)、拉坦前列烯布諾德(latanoprostene bunod) (VYZULTA ^®)、噻嗎洛爾(timolol) (BETIMOL ^®、ISTALOL ^®及TIMOPTIC ^®)、倍他洛爾(betaxolol) (BETOPTIC ^®)、阿拉可樂定(apraclonidine) (IOPIDINE ^®)、溴莫尼定(brimonidine) (ALPHAGAN ^®P及QOLIANA ^®)、多佐胺(dorzolamide) (TRUSOPT ^®)及布林佐胺(brinzolamide) (AZOPT ^®)、奈他地爾(netarsudil) (RHOPRESSA ^®)、匹魯卡品(pilocarpine) (例如ISOPTO ^®CARPINE)、噻嗎洛爾-多佐胺(timolol-dorzolamide) (COSOPT ^®)、酒石酸布林佐胺/溴莫尼定(brimonidine) (SIMBRINZA ^®)、溴莫尼定(COMBIGAN ^®)、奈他地爾/拉坦前列素(ROCKLATAN ^®)、醋甲唑胺、乙醯偶氮胺(DIAMOX ^®)及藥用大麻。在一些實施例中，一或多種額外治療劑可與一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸一起(例如在相同組合物中)投與。在一些實施例中，一或多種額外治療劑可獨立於一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸投與。當一或多種額外治療劑獨立於一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸投與時，一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸可首先投與，且其次投與一或多種額外治療劑，或反之亦然。

在一些實施例中，本文所描述之方法及材料可包括使患有高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患(例如青光眼)之患者經受一或多種(例如一種、兩種、三種、四種、五種或多於五種)有效地治療青光眼之額外治療(例如治療干預)。可如本文所描述治療高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患(諸如青光眼)之所使用之額外治療之實例包括(但不限於)雷射治療(例如雷射小樑成形術及雷射虹膜周邊切除術)、手術(例如小樑切除術、植入引流試管及最低侵襲性青光眼手術)、生活方式改變(例如身體活動增加及睡覺頭部抬高)及/或膳食改變(例如減少咖啡鹼攝入、增加水合作用、維持健康鋅、銅、硒、維生素C、維生素E及維生素A水準)。在一些實施例中，有效地治療高眼壓及/或一或多種與IOP升高相關之疾病或疾患(例如青光眼)之一或多種額外治療可與一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸之投與同時進行。在一些實施例中，一或多種有效地治療青光眼之額外治療可在一或多種經設計以表現STC-1多肽之核酸投與之前及/或之後進行。

本發明將進一步描述於以下實例中，其不限制申請專利範圍中所描述之本發明的範疇。

實例實例 1 ： STC-1 之持續眼部遞送

此實例展現使用病毒載體遞送能夠表現STC-1多肽之核酸提供靶向及長效IOP降低。

方法使用廣泛活性雞β-肌動蛋白(CBA)啟動子(SEQ ID NO:34) (ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG：封裝插入序列SEQ ID NO: 50) (圖1A)或視網膜神經節細胞(RGC)特異性啟動子人類突觸蛋白1 (hSyn1，SEQ ID NO:42) (ssAAV2-hSYN1-STC-1-FLAG：藥品說明書SEQ ID NO: 52)，產生單鏈(ss) AAV2 (三重Y-F)構築體以遞送編碼具有信號肽及C端FLAG標記(SEQ ID NO:30)之STC-1多肽(SEQ ID NO: 2)之人類STC-1編碼區(SEQ ID NO: 1)。為了驅動若干組織中之表現，具有CBA啟動子之ssAAV2-STC-1-FLAG構築體用於藉由前房內注射投與至眼睛之前房(圖2)。向野生型小鼠注射1 μL AAV2-STC-1 (3.28E+12個VG/mL)之單次前房內注射劑且使用32g Hamilton針頭及注射器在對側眼注射相同體積之PBS。每週兩次在注射之後用手持回彈式眼壓計量測IOP。

結果在基線IOP量測之後，在一隻眼睛中注射ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG且將PBS注射至野生型3月齡小鼠之對側眼中(n=12，1 µL，前房內注射)。每週兩次檢查IOP持續14週(在應用提交時實驗仍持續)。持續IOP降低16.5±2.3%連續可見98天(圖3)。

此等結果展現，STC-1投與可減輕高眼壓中之IOP。

實例 2 ：藉由 AAV 表現錫鈣素 -1 之眼內壓之靶向及持續減輕此實例展現，在小鼠眼睛之前房中單次或多次投與轉殖基因STC-1經由提高外流流暢度來提供可持續的IOP降低。

方法 小鼠實驗

所有動物研究及治療方案經梅歐(Mayo)臨床(Rochester, MN)機構動物護理及使用委員會預批准且遵守眼科與視力研究中動物使用之ARVO表述。所有小鼠病毒株對食品及水未受限且用交變燈及黑暗12小時循環圈養。使用二氧化碳窒息，繼而頸椎脫位術將小鼠人道地安樂死。

腺相關病毒載體表現具有FLAG標記之STC-1之AAV2 (ssAAV2-STC-1-FLAG)如先前所描述產生(Jacobson等人,Mol Ther. 13:1074-84(2006)) (實例1)。基於使用對視網膜神經節細胞具有特異性的含有hSYN1啟動子(SEQ ID NO:42)之ssAAV2-STC-1-FLAG進行之先前神經保護研究，設計構築體(Roddy等人, Exp Eye Res. 165:175-81(2017)) (圖1B)。對於當前研究，hSYN1啟動子經CBA啟動子(ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG，SEQ ID NO: 34，圖1A)置換以允許在前房內注射之後普遍存在的眼部表現。載體已封裝在含有3個表面曝露酪胺酸成為苯丙胺酸突變(三重Y-F)之經衣殼修飾之AAV2載體中。對於對照，產生包含編碼綠色螢光蛋白(GFP；ssAAV2-smCBA-GFP)之核酸而非STC-1-FLAG轉基因之相同載體。

前房內注射所產生之三月齡C57B/6J野生型或FP受體基因剔除小鼠(Roddy等人,PLoS One. 15(2020))用氯胺酮/甲苯噻𠯤/乙醯丙𠯤之腹膜內注射劑(80/6/1毫克/公斤體重)麻醉以便於前房內注射。隨後將小鼠置放於解剖顯微鏡上以觀察前房。將含有AAV2構築體(1 µL；3 × 1012個VG/mL)或1 µL磷酸鹽緩衝鹽水(PBS)之32G傾斜針頭(Hamilton Company, Reno, NV)與角膜平行置放且前部插入至角膜緣進入前房。小心避免虹膜外傷以及避開角膜內皮及晶狀體前囊。歷經2秒將注射體積投與至前房中。隨後緩慢移除針頭以使回流降至最低。

眼內壓量測在清醒小鼠中使用手持回彈式眼壓計(Icare TonoLab；Colonial Medical Supply, Franconia, NH)量測IOP。為量測IOP，將清醒小鼠輕輕地受限於保定袋(Braintree, MA)中且垂直且距小鼠角膜大致3 mm安置Tonolab眼壓計之探針。在開始後，探針伸出且回彈離開角膜六次，每次進行量測。內部軟體丟棄最高及最低值且展示剩餘四個值之平均值為單一量測結果。對於各IOP量測結果，獲得三個連續但獨立的讀數，求平均值且記錄。單名實驗室技術員量測且記錄所有IOP，同時第二名對處理組未知之實驗室成員在整個實驗中多個時間點檢查IOP以確保準確資料收集。

對於所有實驗方案，小鼠在治療之前經受3-4天每日兩次Tonolab量測以獲得基線IOP。此等量測結果求平均值且視為單一基線值。在處理之後，每日兩次量測IOP直至每週四次持續各實驗之持續時間。對於彙總圖表及統計分析，IOP求平均值，視為單一值，且呈現為每週值、每兩月值或每月值。

藉由 ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG 評估 RNA 表現為了在基因水準下測定ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG之表現，將安樂死小鼠且藉由外科切除術去除眼睛且立即置放於RNA分離試劑(RNA Bee；Tel-Test, Friendswood, TX)中且冷凍在-80℃下。在RNA分離之前，自冷凍器移出樣品且在冰上解凍且均質化。在移除水相之後，分離且純化總RNA (RNeasy微型套組；Qiagen, Valencia, CA)。藉由逆轉錄，使用1 µg 總RNA (iScript cDNA合成套組，Biorad, Hercules, CA)產生cDNA。寡核苷酸經設計以增強STC-1-FLAG，藉由設計STC-1序列中之正向引子及FLAG標記序列中之反向引子避免內源性STC-1轉錄物之擴增(正向引子：5'-GTGCTTCTGCAACCCATGAGG-3'；反向引子：5'-CTTGTCATCGTCGTCCTTGTAGTCG-3')。製備PCR反應物且使用以下PCR條件：95℃，6分鐘，1次循環；95℃，1分鐘，60℃，1分鐘，68℃，2.5分鐘，40次循環；68℃，7分鐘，1次循環；4℃直至回收，1次循環。在1%瓊脂糖凝膠上分離各PCR反應物之等分試樣(15 µL)。

評定 STC-1-FLAG 蛋白質表現為了確認在蛋白質水準下之STC-1-FLAG表現，進行免疫組織化學(IHC)。將小鼠安樂死，去除完整球體，固定在含4%多聚甲醛之0.1M磷酸鹽緩衝劑中，且包埋於石蠟中。以5 µm將石蠟塊切片且安裝於聚-L-離胺酸塗覆載片上。在去石蠟化之後，藉由在95℃下將載片置放於1 mM EDTA溶液(pH 8.0)中進行抗原檢索30分鐘。在室溫下各自在PBS中沖洗載片兩次五分鐘。將載片置放於潮濕腔室中且在室溫下用含10%山羊血清及3%白蛋白之PBS阻斷切片30分鐘。在培育之後，在室溫下用PBS沖洗載片兩次持續2分鐘。將切片與抗FLAG初級抗體(1:100；Sigma, St. Lois, MO)一起在1%卵白蛋白中在4℃下培育隔夜。在PBS中在室溫下沖洗載片兩次持續5分鐘，且隨後與Alexa Fluor 488抗體(1:200；Abcam)一起在室溫下培育一小時。將含有DAPI之抗螢光衰減劑(Vectashield) (載體實驗室(Vector Laboratories), Burlingame, CA)添加至載片中，繼而置放蓋玻片，且在Zeiss LSM780共焦顯微鏡(Zeiss, Dublin, CA)上成像。

藉由恆定流體輸注評定房水外流參數為了測定ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG對房水外流參數之作用，單獨地用以下處理3月齡C57BL/6J小鼠：1)前房內ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG (n=5)，2)前房內ssAAV2-smCBA-GFP (n=5)，3)局部重組人類STC-1 (n=4；Biovender Research and Diagnostic Products, Czech Republic) (Roddy等人,Invest Ophthalmol Vis Sci. 58:2715-24(2017)；Roddy等人,PLoS ONE. 15(2020))，4)局部拉坦前列素游離酸(LFA；n=5；Cayman Chemical, Ann Arbor, MI)，或5)未經處理之小鼠(n=4)。在房水外流實驗之前用每日一次局部劑量之STC-1 (5 µl 0.5 µg/µl)或LFA (10-4 M)處理接受局部處理之小鼠持續5天。接受前房內注射之小鼠在房水外流量測之前6週經處理。使用事先建立之方案評定房水外流(Millar等人, Invest Ophthalmol Vis Sci. 52:685-94(2011)；Roy Chowdhury等人, Invest Ophthalmol Vis Sci. 58:5731-42(2017))。簡言之，33 g針頭用於插入麻醉小鼠之前房。針頭與流過物壓力轉換器(World Precision Instruments, Sarasota, FL)連接，該壓力轉換器亦與SP101i微量透析輸注泵(World Precision Instruments)及開放式高度可變升高儲集型壓力計連接。藉由隨著儲集器下降直接檢眼鏡觀察血液回流至鞏膜靜脈竇中來獲得鞏膜外靜脈壓力。藉由用輸注泵緩慢提高流動速率及記錄壓力來測定外流流暢度。當緊接在動物處死之後內流推測為零時，計算葡萄膜鞏膜外流。隨後藉由使用改變之戈爾德曼等式，亦即，房水形成率=[外流流暢度×(IOP-鞏膜外靜脈壓力)]+葡萄膜鞏膜外流來估算眼房液形成，如先前所描述(Millar等人, Invest Ophthalmol Vis Sci. 52:685-94(2011))。為了基於戈德曼等式驗證計算得到之IOP值，亦用手持回彈式眼壓計評定IOP。記錄所有資料且使用LabScribe軟體(World Precision Instruments)分析。

結果 ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG 注射後的眼內壓降低響應

為了判定STC-1-FLAG是否由AAV降低IOP表現，經設計以表現STC-1多肽之AAV載體藉由前房內注射局部投與至如實例1中所描述之小鼠。對側眼之間的基線IOP無差異之C57BL/6J小鼠(16.5 ± 0.8 mmHg對比16.6 ± 0.8 mmHg，P=0.4，n=26，圖4)接受一隻眼睛中ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG (3 × 10 ⁹個VG)及對側眼中ssAAV2-smCBA-GFP (3 × 10 ⁹個VG)之單次前房內注射。每日評定IOP且在第1天、第2天及第4天收集組織以用於表現分析。在注射後第1天，ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG及ssAAV2-smCBA-GFP注射動物之間IOP無顯著差異(13.5 ± 0.9對比14.0 ± 2.0 mmHg，P=0.5，n=26，圖4)，但兩隻眼睛均展示相對於基線之IOP降低。在第2天，注射有ssAAV2-smCBA-GFP之眼睛中之IOP已返回至基線水準(16.6 ± 1.3 mmHg)，但注射有ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG之眼睛保持較低(13.4 ± 1.4 mmHg)，展示顯著變化(P＜0.01，n=16，圖4)。免疫螢光揭示在第1天開始在睫狀體中具有最高表現水準之虹膜角膜角中、在角膜、虹膜及晶狀體囊中具有表現之前段中及視網膜中之GFP螢光(紅色螢光染料)以及STC-1-FLAG表現(綠色螢光染料) (圖5A)。此等組織中之表現保持明顯的直至第4天實驗結束(圖5B)。

以持續方式 ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG 降低眼內壓為了判定前房中之STC-1表現是否以持續方式導致IOP降低，對側眼之間的基線IOP無差異之C57BL/6J小鼠(16.4 ± 0.5對比16.6 ± 0.4 mmHg，P=0.2，n=12，圖6A-C)接受一隻眼睛中ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG (3 × 10 ⁹個VG)之單次前房內注射及對側眼中PBS之前房內注射。平均每週IOP量測結果展示，在單次前房內注射之後第1週至第28週，與注射PBS之對側眼相比，注射ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG之眼睛IOP降低(圖6A)。此實驗為描述於實例1中之相同初始實驗之觀測結果的延長時刻表(參見例如圖3、4)。對於前4個月，與側眼相比，注射ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG之眼睛中之IOP降低13.1-16.3% (＞2.1 mmHg)。在第5個月及第6個月中，IOP降低略微較少，百分比變化為8.4-9.7% (＞1.3 mmHg)。在統計學上，IOP降低自第1個月(降低16.2%) (16.8 ± 0.8對比14.1 ± 1.4 mmHg，P＜0.001，n=12，圖6C)至第7個月(降低6.2%) (16.1 ± 0.6對比15.1 ± 0.9 mmHg，P = 0.01，n=8，圖6C)保持顯著。然而，第7個月平均IOP降低小於第1個月可見之IOP降低之50%，差值不為統計顯著的(14.1對比15.0 mmHg，P=0.2)。

為了判定第二次注射是否將恢復前4個月內觀測到之IOP降低，在第7.5個月根據原始處理方案向八隻動物對側眼中再注射第二劑量之ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG或PBS (圖6B)。兩隻動物死於重複麻醉。在第二次注射之後一週，與對側PBS再注射之對照眼睛相比，再注射有ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG之眼睛中IOP降低20.9% (13.1 ± 1.5對比16.5 ± 0.9 mmHg，P=0.0002，n=6，圖6C)，且當實驗停止採集用於表現分析之組織時，保持降低持續額外2個月(參見下文)。與第7個月(單次注射)相比，在第8個月(第二次注射)評定IOP動物展示，在第二次注射ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG之後，眼睛具有顯著降低的IOP (15.1 ± 0.9對比12.8 ± 1.0 mmHg，P＜0.05)。為了判定兩個注射後初始IOP降低是否優於一次注射，將第8個月兩次注射ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG之眼睛與第1個月一次注射ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG之眼睛進行比較且未見顯著差異(13.1 ± 1.5對比14.1 ± 1.4 mmHg，P=0.5)。圖7A含有單獨曲線圖，展示六隻再注射動物為原始群體之代表樣品。

為了評定STC-1-FLAG及GFP表現，自實驗完成時(第38週)處死之剩餘動物收集眼部問題。接受兩次ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG前房內注射之小鼠展示預期尺寸728個鹼基對之STC-1-FLAG轉基因之RNA表現(圖8)。

與 ssAAV2-smCBA-GFP 相比 ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG 以持續方式降低眼內壓為了使組織表現與ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG之重複注射相關聯，對側眼之間基線IOP無差異之C57BL/6J小鼠(16.6 ± 0.4對比16.5 ±0.4 mmHg，P=0.4，n=12，圖7A-7B)接受一隻眼睛中ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG (3 × 10 ⁹個VG)之前房內注射及對側眼中ssAAV2-smCBA-GFP (3 × 10 ⁹個VG)之前房內注射。接受ssAAV2-smCBA-GFP之眼睛在整個實驗過程中在注射之後未展示重要改變(圖7A-7B)。相比之下，接受ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG之眼睛在整個實驗過程中展示IOP降低。在注射後第2週，與對側ssAAV2-smCBA-GFP注射眼睛相比，注射ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG之眼睛中IOP降低14.6%之平均值(14.2 ± 2.1對比16.7 ± 0.8 mmHg，n=12，P＜0.001，圖7B)。在第8週將四隻動物安樂死以用於表現分析。為了確定額外IOP降低是否可用重複注射獲得，在第9週將剩餘8隻動物中之一半隨機分組至第二次注射(n=4)。在實驗方案之第10週(在第二次注射之後一週)，兩次注射ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG之眼睛與兩次注射ssAAV2-smCBA-GFP之眼睛相比IOP降低22.6% (12.7 ± 1.6對比16.4 ± 1.6 mmHg，P＜0.001，圖7B)。此趨勢繼續直至第18週(當將動物安樂死用於組織分離時)實驗完成。

當將在第10週已接受ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG之單次注射之眼睛與接受第二次注射之眼睛進行比較時，值不為統計學上不同的(14.2 ± 0.5對比12.7 ± 1.6 mmHg，n=4，P=0.1，圖7B)。為了判定與第一次注射後1個月相比第二次注射後一個月IOP是否降低，將第14週兩次注射ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG眼睛與第4週一次注射ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG眼睛進行比較。然而，存在IOP降低趨勢(12.6 ± 0.8對比14.3 ± 1.4 mmHg，P=0.1，圖7B)，結果不為統計顯著的。

接受ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG之前房內注射之眼睛在第8週展示睫狀體、角膜內皮、晶狀體上皮組織、虹膜及視網膜中之擴散STC-1-FLAG表現(綠色螢光染料) (圖9)。在單次前房內注射之後第18週及在第10週第二次注射之後第18週可見類似表現模式(圖10A-10B)。注射有ssAAV2-smCBA-GFP (紅色螢光染料)之眼睛展示與ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG類似的表現模式，其中該表現可在睫狀體、角膜內皮、晶狀體上皮組織、虹膜及視網膜中偵測到(圖10A-10B)。

重複結膜下注射可持續性降低 IOP在基線IOP量測之後以結膜下方式(圖2)注射ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG (3 × 1012個VG/mL；2 µL；6 × 10 ⁹個VG)。在對側眼中提供相同體積及效價之ssAAV2-smCBA-GFP。與對照物相比，注射有ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG之眼睛中可見大於15% IOP降低持續第一個月(圖11)。此後，IOP降低效應開始衰減且最終損失統計顯著性。在實驗第13週結束時，當IOP已返回至基線時，向動物再注射相同體積及效價之初始AAV構築體。在第二次注射之後2週IOP降低再建立(實驗仍在進展中) (圖11)。

ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG 藉由提高 外流流暢度 降低眼內壓為了測定藉由ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG降低IOP之作用機制，進行房水外流量測。將三月齡C57BL/6J小鼠(n=14)隨機分組至前房內ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG之單次注射處理(n=5)、前房內ssAAV2-smCBA-GFP之單次注射處理(n=5)或無處理對照(n=4)。另外，將年齡匹配C57BL/6J小鼠之單獨群體(n=9)隨機分組至每日局部投與LFA (n=5)或STC-1 (n=4)之處理。在最大IOP降低(對於前房內注射，注射後6週，且對於局部處理，處理第5天)下，藉由灌注進行眼房液動態研究。當與未經處理之對照物或ssAAV2-smCBA-GFP注射之眼睛進行比較時，用ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG注射之眼睛展示統計顯著的IOP降低以及外流流暢度提高。同樣地，局部投與STC-1亦展示IOP降低及外流流暢度提高。此與局部LFA獲得之結果類似，其展示IOP降低及外流流暢度提高，表明與STC-1類似的作用機制。在處理組中之任一者中可見葡萄膜鞏膜外流、鞏膜外靜脈壓力或房水內流無變化。

實例 3 ： 病毒表現錫鈣素 -1 為抗炎性及神經保護性的此實例展現STC-1之抗炎性及神經保護性特性。

方法使用雞β-肌動蛋白(CBA)普遍存在的啟動子(圖1A)，AAV2 (三重Y-F)用於遞送具有信號肽及C端FLAG標記之人類STC-1編碼區(SEQ ID NO: 3)。向野生型小鼠投與1 μL ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG之單次前房內注射至眼睛之前房(圖2) (3.28E + 12個VG/mL)，且使用32g Hamilton針頭及注射器在對側眼中注射相同體積之PBS。每週兩次在注射之後用手持回彈式眼壓計量測IOP。

DBA/2J小鼠在2月齡時藉由玻璃體內注射在一隻眼睛中注射有ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG且在對側眼中注射有ssAAV2-smCBA-GFP。每週記錄IOP持續9個月。

在C57B/6小鼠中用其他地方所描述之方案誘導實驗性自體免疫葡萄膜炎(EAU) (參見例如Avichezer等人, Invest. Ophthalmol. Vis. Sci., 41(1):127-31 (2004))。簡言之，皮下注射含人類光受器間類視黃素結合蛋白(IRBP)之完全弗氏佐劑(complete Freund's adjuvant)，且腹膜內注射百日咳毒素作為額外免疫刺激物。

結果 STC-1 為神經保護性的

在一隻眼睛中ssAAV2-hSyn1-STC-1-FLAG及對側眼中ssAAV2-hSyn1-GFP之玻璃體內注射投與之2月齡DBA/2J小鼠中，在整個實驗時間段中未觀測到IOP差異(圖12A)。在實驗時間段結束時，收集完整眼睛，染色，且進行視網膜神經節細胞計數。在實驗時間段結束時，在注射ssAAV2-hSyn1-GFP之眼睛中觀測到GFP表現且在注射ssAAV2-hSyn1-STC-1-FLAG之眼睛中觀測到STC-1-FLAG表現(圖12B)。注射有ssAAV2-hSyn1-GFP之眼睛中之視網膜展示具有完整下降區域之年齡預期之稀疏視網膜神經節細胞(RGC)層，而注射有ssAAV2-hSyn1-STC-1-FLAG之眼睛展示保留RGC層(圖12C)。儘管初始群體包含限制樣品大小，在9個月之後注射有ssAAV2-hSyn1-STC-1-FLAG之眼睛具有比對側ssAAV2-hSyn1-GFP注射對照眼睛多50%的視網膜神經節細胞(RGC) (圖12D)。RGC損失為光學神經病變，包括青光眼之標誌(Smith等人, Eye, 31:209-17(2017))。資料表明玻璃體內投與之ssAAV2-hSyn1-STC-1-FLAG提供與IOP降低無關之神經保護。

STC-1 為抗炎性的在經實驗性自體免疫葡萄膜炎(EAU)誘導之C57B/6小鼠中，在經STC-1處理之小鼠之玻璃體中觀測到更少發炎細胞之趨勢(n=5；圖13A)。相比於媒劑對照，在經STC-1處理之小鼠中保留視網膜厚度(n=5，p=0.02；圖13B)。藉由OCT之視網膜薄化為EAU中視網膜損傷之標記物。

綜合而言，此等結果展現，STC-1可減輕眼內發炎，且藉由AAV持續表現STC-1可提供神經保護(例如與IOP降低無關之神經保護)。

實例 4 ： ssAAV-STC-1 降低與 FP 受體無關之 IOP此實例展現，ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG之IOP降低特性不視FP受體而定。

方法使用CRISPR/Cas9產生FP受體基因剔除小鼠(Roddy等人, PLoS One 15(5):1-12(2020))。Schier停止卡匣引入在Ptfr基因之外顯子2內，產生非功能性截短FP受體蛋白產物。

在4個連續日之基線IOP量測之後，3月齡FP受體基因剔除小鼠(n=7)在一隻眼睛中接受1 μL ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG (3E+12個VG/mL)之單次前房內注射，且將相同體積及複本數之ssAAV2-smCBA-GFP注射至對側眼中。注射後第四天開始用手持回彈式眼壓計每週兩次量測IOP。

結果為了判定在ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG注射之後持續IOP降低是否藉由FP受體調節，在事先產生之FP受體基因剔除小鼠之一隻眼睛中投與ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG之前房內注射且在其對側眼中投與ssAAV2-smCBA-GFP (Roddy等人,Mol Ther. 20:788-97(2012))。對側眼之間的基線IOP量測結果無差異(16.3 ± 0.8對比16.3 ± 0.9 mmHg，n=6，P=0.8，圖14A-B)。相比於對側對照眼睛，注射有ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG之FP受體基因剔除小鼠之IOP在第1個月降低15.5% (16.3 ± 1.1對比14.0 ± 0.7 mmHg，n=6，P＜0.001，圖14C)且在第2個月降低19.4% (16.2 ± 0.4對比13.5 ± 1.1 mmHg，n=6 P＜0.001，圖14C)。圖14C為圖14B中所說明之相同初始實驗之觀測結果的延長時刻表。此表明持續IOP降低與STC-1-FLAG表現不視FP受體而定。

此等結果展現，AAV-STC-1可用於提供第一線局部青光眼藥品拉坦前列素下游及FP受體下游之持續IOP降低。AAV-STC-1可為可徹底改變青光眼患者護理及順應性比率之治療劑，因為STC-1之時間間隔給藥方案、抗炎性、神經保護性及IOP降低益處相對於當前標準護理局部前列腺素治療明顯改良。表8：前列腺素與AAV-STC-1處理模態之間的比較.

	局部前列腺素( 標準護理)	AAV-STC-1
每日給藥	X
活化促炎性路徑	X
眼表面副作用	X
避開FP受體		X
IOP波動之最小化		X
每月/每季/每年給藥?		X
不自主順應性問題之最小化		X
自發順應性問題之最小化		X
神經保護、抗炎性/抗氧化作用		X

實例 5 ： 在用於葡萄膜黑色素瘤之敷貼放射線療法之後輻射性視神經盤病變之風險因素輻射性視神經盤病變之一些情況呈現視神經盤蒼白作為顯著特徵，而其他發展伴隨視神經環盤薄化(NRT)。此實例展現，更高視神經盤輻射劑量及更高基線IOP為輻射性視神經盤病變之風險因素。

方法對入選前瞻性眼部腫瘤研究(POTS)之患者子組進行回溯性圖表綜述。包括在內之患者經診斷患有涉及脈絡膜及/或睫狀體之葡萄膜黑色素瘤且經敷貼放射線療法治療。患者需要敷貼後最少三年隨訪及至少兩次含有透明無阻礙視神經盤檢視之眼底照片，一次在敷貼之前且一次在治療之後≥3年。排除患有經分離之虹膜黑素瘤、＜3年隨訪或缺乏視神經盤透明照片之患者。

所有患者經受眼部腫瘤學家(LAD、TWO)之完整眼睛檢驗，其具有彩色眼底繪圖、眼底攝影、自發螢光、A及B掃描超音波檢查術、螢光素血管造影(FA)及如所指示之光學同調斷層掃描(OCT)。在麻醉下使用I-125協同眼部黑素瘤研究(Collaborative Ocular Melanoma Study，COMS)斑塊，在使用透照及/或間接檢眼鏡定位腫瘤之情況下進行敷貼放射線療法。手術中超音波檢查術用於確認恰當敷貼位置。計劃治療持續時間為大致94小時。檢閱記錄之患者人口統計資料、臨床腫瘤特徵、治療參數及結果，注意IOP及視神經盤特徵。

輻射性視神經盤病變定義為視神經盤水腫或彌漫性視神經盤蒼白之第一外觀。與視網膜靜脈栓塞或TTT相關之扇形視盤蒼白不視為輻射性視神經盤病變。隨時間推移在各匹配時間點將視盤顏色與經治療之眼睛之基線視神經盤顏色及對側眼之視盤顏色進行比較。應注意，藉由考慮相對於基線之眼底顏色之整體改變，若經治療之眼睛賦予有人工晶狀體，則不過度估計視神經盤蒼白。當在第6個月、第12個月、第24個月、第36個月、第48個月、第60個月及第120個月可用時在治療前及治療後自照相綜述收集詳細視神經盤資料，包括IOP、杯盤比(C/D)、較差及優良的視神經環盤(表示為總視盤豎直高度百分比)、德朗斯出血、視盤水腫、彌漫性蒼白、視盤新血管生成(NVD)及IOP降低療法治療。藉由對所有臨床資料均未知之單名觀測者(LAD)給所有影像分級。視神經環盤使用測徑規在12:00及6:00位置量測。分級者(LAD)任何猶豫不決由青光眼專家(GWR)之共同綜述解決。

使用EyeDose計算腫瘤、中央窩及視神經盤之輻射劑量。程式利用蒙地卡羅(Monte Carlo)法來計算I-125 COMS斑塊之三維異源性校正劑量分佈，且已針對公佈之蒙地卡羅結果驗證八個不同腫瘤位置。

使用SPSS統計數據軟體版本22 (IBM, Armonk, New York)進行統計分析。比較不具有輻射性視神經盤病變、僅蒼白視神經盤病變及蒼白加NRT視神經盤病變之眼睛的人口統計資料、臨床特徵、治療特徵及結果。使用費雪精確檢驗(Fisher's exact test)比較分類變量，且使用克拉斯卡-瓦立斯(Kruskal-Wallis) H檢驗比較連續變量。進行亞分析以比較輻射性視神經盤病變患病眼睛，表現為僅蒼白對比蒼白加NRT。使用費雪精確檢驗比較分類變量，且使用曼-惠特尼U檢驗(Mann-Whitney U test)比較連續變量。藉由使用分步方法之單變量及多變量分析，使用邏輯回歸分析來測定輻射性視神經盤病變之風險因素。本傑明-霍赫貝格程序用於對照使用0.10之q值之多重比較的假發現率。 P值＜0.05考慮為統計顯著的。

結果87名患者之87隻眼睛包括於研究中。其中，40隻(46%)未發展出輻射性視神經盤病變且47隻(54%)發展出輻射性視神經盤病變，其中31隻(36%)為僅蒼白或16隻(18%)為蒼白及NRT (圖15)。患者人口統計資料描述於圖16中，且比較(無視神經盤病變對比蒼白對比蒼白及NRT)揭示群組間無差異。

臨床特徵詳述於圖17A-C中。比較(無視神經盤病變對比蒼白對比蒼白及NRT)揭示呈現有較差LogMAR視力( P＜0.001)、距離視神經盤較短腫瘤距離( P＜0.001)及小窩( P＜0.001)及更頻繁中央窩下流體( P＜0.001)之任何類型視神經盤病變之眼睛。

治療特徵描述於圖18中。比較(無視神經盤病變對比蒼白對比蒼白及NRT)揭示任何類型視神經盤病變之眼睛用更大處方深度( P=0.03)、更大中央窩輻射劑量(點劑量) ( P＜0.001)、更大視神經盤平均輻射劑量( P＜0.001)及更大視神經盤最大輻射劑量( P＜0.001)治療。輻射性視神經盤病變未建議特異性治療，但對於輻射性視網膜病變及/或黃斑病變，所有研究眼睛中72%在一些點接受玻璃體內抗VEGF。

臨床結果描述於圖19A-B中。比較(無視神經盤病變對比蒼白對比蒼白及NRT)揭示具有蒼白及NRT之眼睛具有更長隨訪時間( P=0.02)。任何類型輻射性視神經盤病變之眼睛具有較差最終LogMAR視力( P＜0.001)、更大輻射性黃斑病變發生率( P=0.04)、非增殖輻射性視網膜病變( P=0.002)、視網膜分支靜脈栓塞( P＜0.001)及增殖輻射性視網膜病變( P＜0.001)。不存在新生血管性青光眼病例。輻射性視神經盤病變與視神經盤病變亞型(僅蒼白對比蒼白及NRT)在時間上無差異(27 [23]對比29 [20]個月, P=0.76)。

隨時間推移之詳細視神經盤特徵列於圖20A-20H中。無眼睛具有基線青光眼、德朗斯出血、視盤水腫、蒼白或NVD，且無眼睛正用IOP降低療法治療。具有任何類型的輻射性視神經盤病變之眼睛具有更大德朗斯出血發生率( P＜0.001)。僅蒼白之眼睛具有最大視盤水腫發生率( P＜0.001)，且具有蒼白及NRT之眼睛在敷貼之後具有最大最高IOP ( P=0.04)及最頻繁的局部IOP降低療法需求( P=0.002)。蒼白及NRT組中一隻眼睛在敷貼之後12個月時具有IOP單一時間點峰值至33 mmHg，其響應於局部鹽酸多佐胺-順丁烯二酸噻嗎洛爾。不存在IOP高於25 mmHg之其他情況。無對側眼在研究時間段期間發展出高眼壓、NRT、青光眼或其他光學神經病變。在比較單獨蒼白對比蒼白及NRT之輻射性視神經盤病變眼睛之亞分析上，具有蒼白及NRT之眼睛在敷貼之後具有更大最高IOP ( P=0.02)及更頻繁的局部IOP降低療法需求( P=0.04)，但德朗斯出血或視神經盤水腫之整體頻率無差異。

單變量及多變量邏輯回歸分析上與輻射性視神經盤病變相關之因素列於圖21中。對具有任何類型的輻射性視神經盤病變(蒼白伴隨或不伴隨NRT)之患者進行主要分析，且使用單變量分析上顯著之客觀因素，針對多變量分析構築模型，該等因素包括呈現時IOP、中央窩下視網膜下流體、輻射處方深度、中央窩輻射劑量及視神經盤平均輻射劑量。多變量分析上所有類型視神經盤病變之顯著預測因子為更大視神經盤平均輻射劑量( P=0.03)及更高基線IOP ( P=0.03)。進行亞分析以檢驗特定針對於伴隨NRT及視神經盤蒼白發展之風險因素。使用單變量分析上顯著之客觀因素，針對多變量分析構築模型，該等因素包括敷貼後更高最高IOP、呈現時中央窩下視網膜下流體及視神經盤平均輻射劑量。多變量分析上具有NRT之視神經盤病變之顯著預測因子為更高最高IOP ( P=0.003)及中央窩下視網膜下流體( P=0.004)。在控制假發現率之後所有顯著變量保持顯著。

實例 6 ： 在高眼壓之兩個模型中錫鈣素 -1 降低眼內壓出於能夠維持拉坦前列素之IOP降低特性，避免副作用及為PGF2α無反應者提供新穎療法之目的，錫鈣素-1 (STC-1)鑑別為拉坦前列素介導之IOP降低中之下游效應分子(Roddy等人, Invest Ophthalmol Vis Sci. 58:2715-24(2017))。STC-1鑑別為非依賴型眼部降壓劑，因為其在人類前段灌注培養模型中且在野生型C57BL/6J小鼠中降低眼壓。雖然信號傳導重疊及發散點尚未確定，但當前資料表明拉坦前列素在負責IOP降低之路徑中誘導FP受體下游STC-1表現。

此實例展現，投與STC-1在兩個不同嚙齒動物模型中降低眼內壓。

方法所有研究經梅歐臨床(Rochester, MN) IACUC批准且遵守ARVO指南。為了產生類固醇誘導之高眼壓模型，在野生型C57BL/6J小鼠(n=7，6-8月齡)之兩隻眼睛中每日兩次用iCare回彈式眼壓計量測IOP且求平均值持續3個連續日以獲得基線壓力，如先前所描述(Roddy等人, Invest Ophthalmol Vis Sci. 58:2715-24(2017))。此時，以緩慢釋放調配物(氯化鈉[0.667 g/100 mL]、依地酸二鈉USP脫水物[0.05 g/100 mL]、硫酸氫鈉[0.1 g/100 mL]及肌酐[0/5 g/100 mL]，pH 7)形式將醋酸地塞米松懸浮液(200 μg，20 μl體積) 每週注射至一隻眼睛之結膜下穹中，如先前所描述(Patel等人, Am J Pathol. 187:713-23(2017)。對側眼接受不具有地塞米松之緩慢釋放調配物(媒劑)之每週注射。注射後48及72小時獲得IOP，求平均值，且記錄為每週IOP。在地塞米松注射組中觀測到持續且升高的IOP響應之後(實驗週1-3)，將小鼠隨機分為兩組且每週繼續地塞米松注射持續實驗期間：在第1組中，兩隻眼睛每日一次經局部PBS (5 μL，n=8；實驗週4-6，治療週1-3)治療，且在第2組中，兩隻眼睛每日一次經局部STC-1治療(Biovender, Asheville, NC, 5 μL；0.5 μg/μL，n = 10；實驗週4-6，治療週1-3)。在實驗最終階段(實驗週7-9，治療週4-6)中，第2組中注射地塞米松之動物繼續接受局部STC-1，而在注射媒劑之對側眼中停止治療以便藥品清除期(圖22)。出於統計目的，針對分析選擇各條件之最終週(亦即，第3週、第6週及第9週)。為了判定在第6週及第9週群組中是否存在IOP差異，進行克拉斯卡-瓦立斯檢驗。不成對的t-檢驗用於直接比較兩組。所有統計檢驗值在P＜.05下考慮為顯著的。

對於高眼壓及GON之慢性模型中之STC-1治療檢驗，選擇14月齡DBA/2J小鼠(n=10)。因為眼睛之間及小鼠中IOP變化性較高(Turner等人, Clin Exp Ophthalmol. 45:911-22(2017)，針對縱向方式之數據表示，將IOP標準化至基線IOP平均值表示。利用不具有角膜鈣化之小鼠(Turner等人,Clin Exp Ophthalmol. 45:911-22(2017)，獲得基線IOP量測結果，且隨後一隻眼睛每日一次經局部STC-1 (5 μL；0.5 μg/μL)治療5天且對側眼接受局部PBS (5 μL)。出於統計目的，在完整治療反應下，實驗天6-8 (治療天3-5)求平均值且視為單一IOP值。進行成對T-檢驗，且值在P＜.05下考慮為顯著的。對於兩種模型，不熟悉實驗設計之第二名實驗室成員在實驗期間多個時間點獨立地驗證IOP量測結果。

對於兩個模型，進行組織學分析。在各實驗結束時，剜出完整眼睛，固定，處理，切片，經甲苯胺藍染色且在光學顯微鏡下檢驗，如先前所描述(Roddy等人, Invest Ophthalmol Vis Sci. 58:2715-24(2017))。

結果對於類固醇誘導之高眼壓模型，在注射地塞米松之前，評定基線IOP量測結果且發現左眼與右眼類似(16.1 ± 1.1對比16.2 ± 1.2 mmHg，P ＞ .8，n = 18，圖23A-23D)。在3次每週注射地塞米松之後，與注射媒劑之眼睛相比，注射地塞米松之眼睛中出現IOP顯著提高(18%，16.6 ± 1.0對比19.7 ± 1.8 mmHg，P ＜ .05，n = 18，圖23A-23C)。將經PBS處理之媒劑注射小鼠(n=8，15.6 ± 1.1 mmHg)與經PBS處理之地塞米松注射小鼠(n = 8，19.5 ± 1.7 mmHg，P ＜ .001，25%改變，圖23A)進行比較，此用每週地塞米松注射維持額外3週。在建立類固醇誘導之高眼壓模型之情況下，當與PBS處理地塞米松注射眼睛進行比較時，局部STC-1處理導致25% IOP降低(19.5 ± 1.7，n = 8，對比14.6 ± 1.2 mmHg，n = 10，P ＜ .001，圖23B，第6週)。此經由額外3週地塞米松注射及局部STC-1處理維持(26%，19.7 ± 1.3，n = 8，對比14.6 ± 0.9 mmHg，n = 10，P ＜ .001，圖23B，第9週)。當將STC-1處理之地塞米松注射眼睛(n=10，圖23B)與PBS處理之媒劑注射眼睛(n=8，圖23A)進行比較時，IOP無顯著差異(6%，14.6 ± 1.0對比15.6 ± 1.2 mm Hg，P = .08，圖23C)，指示STC-1處理使類固醇誘導之高眼壓眼睛中之IOP降低至眼壓正常小鼠中所見之水準。

STC-1除了降低在類固醇誘導之高眼壓眼睛中之IOP之外，STC-1亦降低眼壓正常眼睛中之壓力，如先前所報導(Roddy等人, Invest Ophthalmol Vis Sci. 58:2715-24(2017)；Roddy等人,PLoS ONE. (2020))。媒劑注射眼睛之STC-1處理(n=8)使IOP自15.6 ± 1.1 mmHg降低至13.4 ± 1.2 mmHg (下降14%，P ＜ .005，圖23B)。一旦自媒劑注射眼睛洗出STC-1，IOP返回至基線水準(16.2 ± 0.7，n = 10，對比16.1 ± 1.7 mmHg，n = 8，P ＞ .1，圖23B)。引起關注地，當與未經處理之媒劑注射眼睛進行比較時，經STC-1處理之地塞米松注射眼睛中之IOP甚至更低(10%，16.2 ± 0.7對比14.6 ± 1.0 mmHg，P ＜ .001，圖23C)。在用PBS及STC-1處理後檢驗類固醇誘導之高眼壓小鼠之代表性甲苯胺藍染色眼睛切片(圖23D)。在兩個處理組中，觀測到正常呈現開角(星號)、虹膜(箭頭)及睫狀體(人字形)。

對於DBA/2J小鼠，經STC-1處理之眼睛展示IOP穩定降低直至在處理第3天至第5天處理達到平穩(圖24A)。在經PBS處理之眼睛中未觀測到可偵測的IOP改變。使用相比於基線之處理第3天至第5天之合併平均IOP，STC-1相比於媒劑對照降低IOP (37%，20.7 ± 2.6 mmHg對比13.1 ± 1.7 mm Hg，P ＜ .001，圖24B)。一隻眼睛中經PBS處理且對側眼中經STC-1處理之14月齡DBA/2J小鼠之代表性甲苯胺藍染色切片在此模型中展示年齡適當的角度解剖學(John等人, Invest Ophthalmol Vis Sci. 39:951-62(1998))，其包括閉角伴虹膜黏連形成(星號)、虹膜萎縮(箭頭)及裝載色素之巨噬細胞(人字形) (圖24C)。然而在此慢性模型中觀測到疾病表型之元素之微妙偏差，當將經PBS處理之眼睛與經STC-1處理之眼睛進行比較時，未觀測到角度形態之顯著差異。

此等結果展現，在正常眼壓及高眼壓之兩種條件下，投與STC-1均可成功地降低IOP。

其他實施例應理解，儘管本發明已結合其實施方式加以描述，但前述描述意欲說明且不限制由所附申請專利範圍之範疇定義的本發明之範疇。其他態樣、優勢及修改屬於以下申請專利範圍之範疇內。

圖1A展示在人類STC-1 (hSTC-1)多肽之C端併入FLAG且維持STC-1信號肽之例示性構築體，其可在啟動子，例如雞β-肌蛋白持續性活化之啟動子的控制下表現hSTC-1多肽。將hSTC-1編碼序列插入含有5'及3'反向末端重複序列(TR)之質體中以便後續封裝至AAV衣殼中。其他構築體元件可包括：牛類生長激素聚腺苷酸化(bGH聚腺苷酸)信號序列及猿猴病毒40剪接供體/剪接受體(SV40 SD/SA)位點。圖1B展示在hSTC-1多肽之C端併入FLAG標記且維持STC-1信號肽之例示性構築體，其可在眼細胞特異性啟動子，例如視網膜神經節細胞(RGC)特異性人類突觸蛋白1 (hSYN1)啟動子的控制下表現hSTC-1多肽。將hSTC-1編碼序列插入含有5'及3'反向末端重複序列(TR)之質體中以便後續封裝至AAV衣殼中。其他構築體元件可包括：牛類生長激素聚腺苷酸化(bGH聚腺苷酸)信號序列及猿猴病毒40剪接供體/剪接受體(SV40 SD/SA)位點。圖2為展示ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG投與(箭頭)至眼睛之例示性途徑的圖式。投與途徑包括(但不限於)：(1)前房內注射至前房(AC)中，(2)在視網膜與視網膜色素上皮組織之間視網膜下注射，(3)玻璃體內至玻璃體流體，及(4)眼瞼內結膜下方之結膜下注射。圖3為展示在小鼠中前房內注射之後ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG降低眼內壓(IOP)的線圖。x軸表示三個階段中實驗縱向時間長度：基線(注射前)及注射後週數。各階段中量測之小鼠數目如下所指示(n=12；n=9)。y軸表示以毫米汞柱(mmHg)單位表示之IOP值。箭頭指示實驗中第一次及第二次注射之投與點。在基線IOP量測之後，向眼壓正常3月齡小鼠投與一隻眼睛中ssAAV-smCBA-STC-1-FLAG(■)及另一隻眼睛中PBS模擬對照物(●)之前房內注射。每週兩次縱向收集IOP量測結果持續注射後14週。在整個研究時間段期間IOP平均降低16.5%。圖4為展示在注射有ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG之後IOP降低響應的柱狀圖。在接受一隻眼睛中ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG (■)及對側眼中ssAAV2-smCBA-GFP (□)之單次前房內注射的三月齡C57BL/6J小鼠(n=26)中縱向收集IOP量測結果持續4天。x軸表示自基線(注射前)至注射後天數之實驗縱向時間長度。各階段中量測之小鼠數目如下所指示。在各時間點，針對各處理組列出平均IOP值、百分比變化及顯著性(P值)。y軸表示以mmHg單位計之IOP值。在第2天開始之ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG處理後觀測到顯著IOP降低，且持續直至第4天實驗結束。圖5A-圖5B為IF染色切片之顯微照片的集合，展示在前房內投與之後AAV2-smCBA-STC-1-FLAG在局部以及在注射部位遠側表現。GFP經紅色螢光染料標記，而FLAG標記經綠色螢光染料標記。相比於二級僅對照物，GFP及FLAG染色展現穩健蛋白質表現。圖5A：在三月齡C57BL/6J小鼠(n=26)中投與ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG之後僅一天，睫狀體(*)中穩健STC-1-FLAG表現，且在許多組織中顯而易見，該等組織包括前段(#)、虹膜(^)、晶狀體囊(＞)及視網膜。圖5B：觀測到延長的AAV2轉基因表現直至注射後第4天實驗結束。圖6A-圖6C展示ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG以持續方式降低IOP。圖6A為展示在前房內注射有ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG之後持續IOP降低的線圖。此實驗為描述於圖3-4中之相同初始實驗之觀測結果之延長時刻表。x軸表示三個階段中實驗縱向時間長度：基線(注射前)、注射後週數及再注射。各階段中量測之小鼠數目如下所指示。y軸表示以mmHg單位計之IOP值。箭頭指示實驗中第一次及第二次注射之投與點。在單次前房內注射有ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG (■)或PBS (♦)之後在注射後時間0週，IOP降低且保持低於基線壓力及對側對照眼睛持續28週。在第28週，進行第二次前房內注射ssAAV-smCBA-STC-1-FLAG。IOP降低至第一次注射水準或低於第一次注射水準。圖6B為展示在前房內注射有ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG之後持續IOP降低的線圖。在C57BL/6J中縱向收集IOP量測結果持續39週，其中接受一隻眼睛中ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG (x)及對側眼中PBS對照之單次前房內注射的對側眼之間的基線IOP無差異(一隻眼睛中ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG(●)及對側眼中PBS對照(∆)之前房內注射)。兩組六隻動物各自注射有一隻眼睛中ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG(●)及對側眼中PBS對照(■)之第二次前房內注射。x軸表示自基線(注射前)至第一次注射後39週之實驗縱向時間長度。各階段中量測之小鼠數目如下所指示。y軸表示以mmHg單位計之IOP值。箭頭指示實驗中第一次及第二次注射之投與點。圖6C為展示當相比於側眼時，注射ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG之眼睛中每週平均IOP量測結果之柱狀圖。x軸表示在實驗過程中不同月注射PBS (■)及注射ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG(□)之小鼠之平均IOP量測結果。列出各時間點之IOP百分比變化及條件之間的統計顯著性(P值)。y軸表示以mmHg單位計之IOP值。圖7A-圖7B展示ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG相比於ssAAV2-smCBA-GFP降低IOP。圖7A為展示僅投與一次ssAAV2-smCBA-GFP注射之小鼠(●)、僅投與一次ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG注射之三月齡小鼠(n=22) (○)、投與兩次ssAAV2-smCBA-GFP注射之小鼠(水平條紋圈)及投與兩次ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG注射之小鼠(對角條紋圈)中之平均IOP量測結果的線圖。x軸表示自基線(注射前)至第一次注射後18週之實驗縱向時間長度。實驗各階段中量測之小鼠數目如下所指示。y軸表示以mmHg單位計之IOP值。箭頭指示第一次及第二次注射之投與點。圖7B為展示投與一次或兩次ssAAV2-smCBA-GFP或ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG注射之小鼠中之平均IOP量測結果的柱狀圖。x軸表示包括僅投與一次ssAAV2-smCBA-GFP注射之小鼠(左側黑色條柱)、僅投與一次ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG注射之小鼠(左側白色條柱)、投與兩次ssAAV2-smCBA-GFP注射之小鼠(右側黑色條柱)及投與兩次ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG注射之小鼠(右側白色條柱)的處理組。列出各時間點之IOP百分比變化及條件之間的統計顯著性(P值)。y軸表示以mmHg單位計之IOP值。圖8為展示藉由PCR之STC-1-FLAG轉基因表現之瓊脂糖凝膠。與STC-1 FLAG轉錄物一致之728個鹼基對產物之PCR擴增僅在投與前房內ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG注射之小鼠(n=6)中發現。圖9為IF染色切片之顯微照片的集合，展示注射後8週ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG以持續方式表現。GFP經紅色螢光染料標記，而FLAG標記經綠色螢光染料標記。當相比於二級僅對照物時，GFP及FLAG染色信號反映穩健蛋白質表現。在注射後8週，在包括睫狀體之虹膜角膜角(*)、包括角膜(#)、虹膜(^)、晶狀體囊(＞)之前段及視網膜中觀測到擴散眼內STC-1-FLAG表現。圖10A-圖10B展示在投與單次或二次ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG前房內注射之小鼠中在第18週仍保持STC-1-FLAG表現。GFP經紅色螢光染料標記，而FLAG標記經綠色螢光染料標記。當相比於二級僅對照物時，GFP及FLAG染色信號反映穩健蛋白質表現。圖10A為投與單次ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG或ssAAV2-smCBA-GFP構築體注射之小鼠的IF染色切片之顯微照片的集合。在第18週在多個組織中觀測到持續STC-1-FLAG表現。GFP染色呈現與STC-1-FLAG類似的表現模式，證明在AAV2構築體之CBA啟動子下普遍存在的表現。圖10B為投與兩次ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG或ssAAV2-smCBA-GFP構築體注射(第0週及第9週)之小鼠在第18週的IF染色切片之顯微照片的集合。圖11為展示在結膜下注射有ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG之後持續IOP降低的線圖。x軸表示包含基線(注射前)及注射後週數之實驗縱向時間長度。y軸表示以mmHg單位計之IOP值。箭頭指示實驗中第一次及第二次注射之投與點。在單次結膜下注射有ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG (●，n=8)或ssAAV2-smCBA-GFP (■，n=8)之後，在注射後時間0週，ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG顯著降低IOP持續若干週。在第13週之後，進行各AAV條件之第二次前房內注射。IOP降低至第一次注射有ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG之後獲得的水準。圖12A-圖12D展示在色素分散性青光眼之DBA/2J小鼠模型中玻璃體內ssAAV2-hSyn1-STC-1-FLAG不提供IOP降低，但為神經保護性的。圖12A為展示投與一隻眼睛中ssAAV2-hSyn1-STC-1-FLAG (■)及對側眼中ssAAV2-hSyn1-GFP (●)之玻璃體內注射的2月齡DBA/2J小鼠中之類似IOP量測結果的線圖。每週量測IOP，持續9個月。x軸表示三個階段中實驗縱向時間長度：基線(注射前)及注射後週數及月數。各階段中量測之小鼠數目如下所指示。y軸表示以mmHg單位計之IOP值。相比於接受玻璃體內ssAAV2-hSyn1-GFP之彼等者，接受ssAAV2-hSyn1-STC-1玻璃體內注射之眼睛之間無IOP差異。圖12B為展示免疫螢光(IF)染色之顯微照片，揭示注射ssAAV2-hSyn1-GFP之眼睛中之GFP表現(上圖，紅色螢光染料)及注射ssAAV2-hSyn1-STC-1-FLAG之眼睛中之STC-1-FLAG表現(下圖，綠色螢光染料)。DAPI染色(藍色)展示視網膜細胞核。圖12C為DAPI染色視網膜切片之IF顯微照片之綜合圖，揭示注射有ssAAV2-hSyn1-GFP之眼睛中(上圖)相比於注射有ssAAV2-hSyn1-STC-1-FLAG之彼等者(下圖)較少的視網膜神經節細胞(RGC，白色箭頭)。圖12D為展示注射ssAAV2-hSyn1-GFP及AAV2-hSyn1-STC-1-FLAG之小鼠中之RGC數目的柱狀圖。x軸表示處理組。y軸表示每個視網膜平均RGC計數。圖13A-圖13B展示局部STC-1而非拉坦前列素減輕實驗性自體免疫葡萄膜炎之小鼠模型中之發炎。在誘導實驗性自體免疫葡萄膜炎(EAU)之後，小鼠一隻眼睛每日經局部拉坦前列素游離酸(LFA；100 µM)或STC-1 (0.5 µg/mL)處理且另一隻眼睛經媒劑處理。在第18天，進行OCT且以經遮蔽之方式量測視網膜厚度。在第21天，剜出眼睛且經處理以便蘇木精及伊紅(H&E)染色。圖13A為藉由H&E染色之各處理組之組織切片之顯微照片的集合。所有經LFA處理之動物中對比對照存在更多玻璃體細胞之趨勢(如箭頭所表示)。圖13B為展示STC-1眼睛展現相比於媒劑對照眼睛(P=0.02)之視網膜厚度之顯著保存，而LFA與對側對照眼睛之間的視網膜厚度無顯著差異的柱狀圖。圖14A-圖14C展示病毒遞送之STC-1降低與FP受體無關之IOP。在4個連續日之基線IOP量測之後，3月齡FP受體基因剔除小鼠(n=6)在一隻眼睛中接受ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG之單次前房內注射且將ssAAV2-smCBA-GFP注射至對側眼中。圖14A為展示FP受體基因剔除小鼠(n=6)中之IOP降低的線圖，其中注射ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG (○)之眼睛與注射ssAAV2-smCBA-GFP (●)對照物之眼睛之間的基線IOP無差異。x軸表示第0週(基線)開始至第14週之量測時間點。y軸表示以mmHg單位計之IOP值。圖14B為展示ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG降低FP受體基因剔除小鼠中之IOP的柱狀圖。x軸表示基線及第1週時間點中之不同處理組。針對以下各處理組/時間點詳述平均IOP量測結果，包括各時間點群組之間的變化%。y軸表示以mmHg單位計之IOP值。在4個連續日之基線IOP量測之後，3月齡FP受體基因剔除小鼠(n=7)在一隻眼睛中接受1 µL ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG (3E+12個VG/mL)之單次前房內注射，且將相同體積及複本數之ssAAV2-smCBA-GFP注射至對側眼中。圖14C為展示接受一隻眼睛中ssAAV2-smCBA-STC-1-FLAG (□)及對側眼中ssAAV2-smCBA-GFP對照物(■)之單次前房內注射的 Ptgfr-/-基因剔除小鼠中之平均IOP差異的柱狀圖。x軸表示第0週(基線)、第1週、第4週、第8週及第14週不同處理組所收集之量測結果。針對以下各處理組/時間點詳述平均IOP量測結果，包括各時間點群組之間的變化%。y軸表示以mmHg單位計之IOP值。此實驗為描述於圖14B中之相同初始實驗之觀測結果之延長時刻表。圖15A-圖15I展示不具有輻射性視神經盤病變、僅具有蒼白之視神經盤病變及具有蒼白及視神經環盤薄化之視神經盤病變的經敷貼放射線療法治療之患有葡萄膜黑色素瘤之患者之視網膜眼底照片。治療73歲齡女性在赤道或鋸齒緣之顳側周邊區之脈絡膜黑素瘤。在敷貼放射線療法之前(圖15A)、在放射線療法之後36個月(圖15B)或在放射線療法之後60個月(圖15C)不存在視神經病變。治療65歲齡女性涉及黃斑之脈絡膜黑素瘤。在敷貼放射線療法之前不存在視神經病變(圖15D)。在治療之後24個月注意到視神經盤水腫(圖15E)，在36個月之後進展至視神經盤蒼白(圖15F)。治療54歲齡女性在黃斑至赤道之鼻側中間周邊區之脈絡膜黑素瘤。在敷貼放射線療法之前不存在視神經病變(圖15G)。在治療之後12個月注意到視神經盤水腫及德朗斯出血(Drance hemorrhage) (圖15H)，在36個月之後進展至視神經盤蒼白伴視神經環盤薄化(圖15I)。圖16為展示在用於葡萄膜黑色素瘤之敷貼放射線療法之後輻射性視神經盤病變之風險因素及人口統計資料之數值的表格。縮寫：NA=不適用。粗體值指示顯著P值。初始P值比較所有3組。*第二P值直接比較特徵在於僅蒼白或蒼白伴額外視神經環盤薄化之視神經病變的後兩組。圖17A-17C為展示在用於葡萄膜黑色素瘤之敷貼放射線療法之後輻射性視神經盤病變之風險因素及臨床特徵之數值的表格。縮寫：NA=不適用，OCT=光學同調斷層掃描。粗體值指示顯著P值。初始P值比較所有3組。*第二P值直接比較特徵在於僅蒼白或蒼白伴額外視神經環盤薄化之視神經病變的後兩組。圖18為展示在用於葡萄膜黑色素瘤之敷貼放射線療法之後輻射性視神經盤病變之風險因素及治療特徵之數值的表格。縮寫：NA=不適用，Gy=灰色，hr=小時，VEGF=血管內皮生長因子。粗體值指示顯著P值。初始P值比較所有3組。*第二P值直接比較特徵在於僅蒼白或蒼白伴額外視神經環盤薄化之視神經病變的後兩組。圖19A-19B為展示在用於葡萄膜黑色素瘤之敷貼放射線療法之後輻射性視神經盤病變之風險因素及結果之數值的表格。縮寫：NA=不適用，CF=計數手指，HM=手動，LP=光感。粗體值指示顯著P值。初始P值比較所有3組。*第二P值直接比較特徵在於僅蒼白或蒼白伴額外視神經環盤薄化之視神經病變的後兩組。圖20A-20H為展示在用於葡萄膜黑色素瘤之敷貼放射線療法之後輻射性視神經盤病變之風險因素及視神經盤特徵之數值的表格，包含敷貼前(圖20A)、敷貼後6個月(圖20B)、敷貼後12個月(圖20C)、敷貼後24個月(圖20D)、敷貼後36個月(圖20E)、敷貼後60個月(圖20F)、敷貼後120個月(圖20G)及敷貼後任何時間(圖20H)。縮寫：NA=不適用，IOP=眼內壓，C/D=杯盤率。粗體值指示顯著P值。初始P值比較所有3組。*第二P值直接比較特徵在於僅蒼白或蒼白伴額外視神經環盤薄化之視神經病變的後兩組。**針對存在對比不存在蒼白給出P值。圖21為展示在用於葡萄膜黑色素瘤之敷貼放射線療法之後輻射性視神經盤病變之風險因素及藉由邏輯回歸分析之視神經盤病變之預測因子之數值的表格。縮寫：IOP=眼內壓，Gy=灰色，OR=幾率比，CI=置信區間。粗體值指示顯著P值。使用本傑明-霍赫貝格(Benjamini-Hochberg procedure)程序以0.10之假發現率計算臨限值。對於任何類型的視神經盤病變，多變量分析之模型包括視神經盤平均輻射劑量、呈現時IOP、中央窩下視網膜下流體、處方深度及小窩輻射劑量。對於具有視神經環盤薄化之視神經盤病變，多變量分析之模型包括視神經盤平均輻射劑量、IOP最高值及中央窩下視網膜下流體。圖22為展示高眼壓小鼠模型之處理組條件的表格。在實驗週1-3之間，地塞米松注射組中觀測到持續及升高的IOP響應。在此之後，將小鼠隨機分配成兩組：在實驗週4-6期間，一組經局部PBS處理(第1組)，而另一組小鼠經局部STC-1處理(第2組)。在實驗週7-9期間，在第2組中注射地塞米松之動物繼續接受局部STC-1，而處理為注射媒劑之對側眼經受藥品清除期。選擇各處理階段之最終週(亦即，第3週、第6週及第9週)以便分析。圖23A-23D展示局部STC-1降低注射地塞米松之高眼壓小鼠模型中之IOP。圖23A為展示經地塞米松處理之小鼠中IOP提高的線圖。x軸表示實驗縱向時間長度。y軸表示以mmHg單位計之IOP值。在實驗第一週進行向左眼注射PBS (■)且向右眼注射地塞米松(♦)。圖10B)為展示用STC-1投與之眼壓正常及高眼壓小鼠之IOP均降低的線圖。x軸表示實驗縱向時間長度。y軸表示以mmHg單位計之IOP值。在實驗第一週進行向左眼注射PBS (■)且向右眼注射地塞米松(♦)。STC-1局部治療在第4週開始且在右眼中持續直至第6週結束，而STC-1投與在左眼中自第4週直至研究結束進行。圖10C)為展示在STC-1投與下注射媒劑之右眼(黑色條柱)及注射地塞米松之左眼(白色條柱)之IOP降低的柱狀圖。x軸表示不同時間點(第0週、第3週、第6週、第9週)之不同處理組。y軸表示以mmHg單位計之IOP值。圖10D)展示在投與PBS (左側圖)對比STC-1 (右側圖)之後地塞米松誘導之高眼壓小鼠之甲苯胺藍染色切片的代表性顯微照片。在兩個處理組中，觀測到正常呈現開角(星號)、虹膜(箭頭)及睫狀體(人字形)。圖24A-24C展示局部STC-1降低慢性高眼壓及青光眼眼部神經病變(GON)之DBA/2J小鼠模型中之IOP。圖24A為展示與PBS (♦)相比，局部投與STC-1 (■)之DBA/2J小鼠中之眼內壓降低的線圖。x軸表示實驗縱向時間長度。y軸表示各處理組相對於基線量測結果之IOP倍數變化。圖24B為展示實驗天6-8之間經STC-1處理之小鼠相比於PBS之眼內壓(IOP)顯著降低的柱狀圖(***P＜0.001)。x軸表示PBS及STC-1處理組。y軸表示以mmHg單位計之IOP值。圖24C展示在一隻眼睛中投與PBS (左側圖)且在對側眼中投與STC-1 (右側圖)之後14月齡小鼠之甲苯胺藍染色切片的代表性顯微照片。展示閉角伴虹膜黏連形成(星號)、虹膜萎縮(箭頭)及裝載色素之巨噬細胞(人字形)。


          <![CDATA[<110>  福馳, 麥可(Fautsch, Michael)]]>
          <![CDATA[<120>  治療眼內壓相關疾患]]>
          <![CDATA[<130>  19081-013WO1]]>
          <![CDATA[<150>  US 63/133,947]]>
          <![CDATA[<151>  2021-01-05]]>
          <![CDATA[<150>  US 63/214,666]]>
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          <![CDATA[<160>  55    ]]>
          <![CDATA[<170>  PatentIn version 3.5]]>
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          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  1]]>
          atgctccaaa actcagcagt gcttctggtg ctggtgatca gtgcttctgc aacccatgag       60
          gcggagcaga atgactctgt gagccccagg aaatcccgag tggcggctca aaactcagct      120
          gaagtggttc gttgcctcaa cagtgctcta caggtcggct gcggggcttt tgcatgcctg      180
          gaaaactcca cctgtgacac agatgggatg tatgacatct gtaaatcctt cttgtacagc      240
          gctgctaaat ttgacactca gggaaaagca ttcgtcaaag agagcttaaa atgcatcgcc      300
          aacggggtca cctccaaggt cttcctcgcc attcggaggt gctccacttt ccaaaggatg      360
          attgctgagg tgcaggaaga gtgctacagc aagctgaatg tgtgcagcat cgccaagcgg      420
          aaccctgaag ccatcactga ggtcgtccag ctgcccaatc acttctccaa cagatactat      480
          aacagacttg tccgaagcct gctggaatgt gatgaagaca cagtcagcac aatcagagac      540
          agcctgatgg agaaaattgg gcctaacatg gccagcctct tccacatcct gcagacagac      600
          cactgtgccc aaacacaccc acgagctgac ttcaacagga gacgcaccaa tgagccgcag      660
          aagctgaaag tcctcctcag gaacctccga ggtgaggagg actctccctc ccacatcaaa      720
          cgcacatccc atgagagtgc ataa                                             744
          <![CDATA[<210>  2]]>
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          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  2]]>
          Met Leu Gln Asn Ser Ala Val Leu Leu Val Leu Val Ile Ser Ala Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ala Thr His Glu Ala Glu Gln Asn Asp Ser Val Ser Pro Arg Lys Ser 
                      20                  25                  30          
          Arg Val Ala Ala Gln Asn Ser Ala Glu Val Val Arg Cys Leu Asn Ser 
                  35                  40                  45              
          Ala Leu Gln Val Gly Cys Gly Ala Phe Ala Cys Leu Glu Asn Ser Thr 
              50                  55                  60                  
          Cys Asp Thr Asp Gly Met Tyr Asp Ile Cys Lys Ser Phe Leu Tyr Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Ala Ala Lys Phe Asp Thr Gln Gly Lys Ala Phe Val Lys Glu Ser Leu 
                          85                  90                  95      
          Lys Cys Ile Ala Asn Gly Val Thr Ser Lys Val Phe Leu Ala Ile Arg 
                      100                 105                 110         
          Arg Cys Ser Thr Phe Gln Arg Met Ile Ala Glu Val Gln Glu Glu Cys 
                  115                 120                 125             
          Tyr Ser Lys Leu Asn Val Cys Ser Ile Ala Lys Arg Asn Pro Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Ile Thr Glu Val Val Gln Leu Pro Asn His Phe Ser Asn Arg Tyr Tyr 
          145                 150                 155                 160 
          Asn Arg Leu Val Arg Ser Leu Leu Glu Cys Asp Glu Asp Thr Val Ser 
                          165                 170                 175     
          Thr Ile Arg Asp Ser Leu Met Glu Lys Ile Gly Pro Asn Met Ala Ser 
                      180                 185                 190         
          Leu Phe His Ile Leu Gln Thr Asp His Cys Ala Gln Thr His Pro Arg 
                  195                 200                 205             
          Ala Asp Phe Asn Arg Arg Arg Thr Asn Glu Pro Gln Lys Leu Lys Val 
              210                 215                 220                 
          Leu Leu Arg Asn Leu Arg Gly Glu Glu Asp Ser Pro Ser His Ile Lys 
          225                 230                 235                 240 
          Arg Thr Ser His Glu Ser Ala 
                          245         
          <![CDATA[<210>  3]]>
          <![CDATA[<211>  693]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  3]]>
          atgcatgagg cggagcagaa tgactctgtg agccccagga aatcccgagt ggcggctcaa       60
          aactcagctg aagtggttcg ttgcctcaac agtgctctac aggtcggctg cggggctttt      120
          gcatgcctgg aaaactccac ctgtgacaca gatgggatgt atgacatctg taaatccttc      180
          ttgtacagcg ctgctaaatt tgacactcag ggaaaagcat tcgtcaaaga gagcttaaaa      240
          tgcatcgcca acggggtcac ctccaaggtc ttcctcgcca ttcggaggtg ctccactttc      300
          caaaggatga ttgctgaggt gcaggaagag tgctacagca agctgaatgt gtgcagcatc      360
          gccaagcgga accctgaagc catcactgag gtcgtccagc tgcccaatca cttctccaac      420
          agatactata acagacttgt ccgaagcctg ctggaatgtg atgaagacac agtcagcaca      480
          atcagagaca gcctgatgga gaaaattggg cctaacatgg ccagcctctt ccacatcctg      540
          cagacagacc actgtgccca aacacaccca cgagctgact tcaacaggag acgcaccaat      600
          gagccgcaga agctgaaagt cctcctcagg aacctccgag gtgaggagga ctctccctcc      660
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          <![CDATA[<210>  4]]>
          <![CDATA[<211>  230]]>
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          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  4]]>
          Met His Glu Ala Glu Gln Asn Asp Ser Val Ser Pro Arg Lys Ser Arg 
          1               5                   10                  15      
          Val Ala Ala Gln Asn Ser Ala Glu Val Val Arg Cys Leu Asn Ser Ala 
                      20                  25                  30          
          Leu Gln Val Gly Cys Gly Ala Phe Ala Cys Leu Glu Asn Ser Thr Cys 
                  35                  40                  45              
          Asp Thr Asp Gly Met Tyr Asp Ile Cys Lys Ser Phe Leu Tyr Ser Ala 
              50                  55                  60                  
          Ala Lys Phe Asp Thr Gln Gly Lys Ala Phe Val Lys Glu Ser Leu Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Cys Ile Ala Asn Gly Val Thr Ser Lys Val Phe Leu Ala Ile Arg Arg 
                          85                  90                  95      
          Cys Ser Thr Phe Gln Arg Met Ile Ala Glu Val Gln Glu Glu Cys Tyr 
                      100                 105                 110         
          Ser Lys Leu Asn Val Cys Ser Ile Ala Lys Arg Asn Pro Glu Ala Ile 
                  115                 120                 125             
          Thr Glu Val Val Gln Leu Pro Asn His Phe Ser Asn Arg Tyr Tyr Asn 
              130                 135                 140                 
          Arg Leu Val Arg Ser Leu Leu Glu Cys Asp Glu Asp Thr Val Ser Thr 
          145                 150                 155                 160 
          Ile Arg Asp Ser Leu Met Glu Lys Ile Gly Pro Asn Met Ala Ser Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe His Ile Leu Gln Thr Asp His Cys Ala Gln Thr His Pro Arg Ala 
                      180                 185                 190         
          Asp Phe Asn Arg Arg Arg Thr Asn Glu Pro Gln Lys Leu Lys Val Leu 
                  195                 200                 205             
          Leu Arg Asn Leu Arg Gly Glu Glu Asp Ser Pro Ser His Ile Lys Arg 
              210                 215                 220                 
          Thr Ser His Glu Ser Ala 
          225                 230 
          <![CDATA[<210>  5]]>
          <![CDATA[<211>  648]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  5]]>
          atggtggcgg ctcaaaactc agctgaagtg gttcgttgcc tcaacagtgc tctacaggtc       60
          ggctgcgggg cttttgcatg cctggaaaac tccacctgtg acacagatgg gatgtatgac      120
          atctgtaaat ccttcttgta cagcgctgct aaatttgaca ctcagggaaa agcattcgtc      180
          aaagagagct taaaatgcat cgccaacggg gtcacctcca aggtcttcct cgccattcgg      240
          aggtgctcca ctttccaaag gatgattgct gaggtgcagg aagagtgcta cagcaagctg      300
          aatgtgtgca gcatcgccaa gcggaaccct gaagccatca ctgaggtcgt ccagctgccc      360
          aatcacttct ccaacagata ctataacaga cttgtccgaa gcctgctgga atgtgatgaa      420
          gacacagtca gcacaatcag agacagcctg atggagaaaa ttgggcctaa catggccagc      480
          ctcttccaca tcctgcagac agaccactgt gcccaaacac acccacgagc tgacttcaac      540
          aggagacgca ccaatgagcc gcagaagctg aaagtcctcc tcaggaacct ccgaggtgag      600
          gaggactctc cctcccacat caaacgcaca tcccatgaga gtgcataa                   648
          <![CDATA[<210>  6]]>
          <![CDATA[<211>  215]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  6]]>
          Met Val Ala Ala Gln Asn Ser Ala Glu Val Val Arg Cys Leu Asn Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ala Leu Gln Val Gly Cys Gly Ala Phe Ala Cys Leu Glu Asn Ser Thr 
                      20                  25                  30          
          Cys Asp Thr Asp Gly Met Tyr Asp Ile Cys Lys Ser Phe Leu Tyr Ser 
                  35                  40                  45              
          Ala Ala Lys Phe Asp Thr Gln Gly Lys Ala Phe Val Lys Glu Ser Leu 
              50                  55                  60                  
          Lys Cys Ile Ala Asn Gly Val Thr Ser Lys Val Phe Leu Ala Ile Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Cys Ser Thr Phe Gln Arg Met Ile Ala Glu Val Gln Glu Glu Cys 
                          85                  90                  95      
          Tyr Ser Lys Leu Asn Val Cys Ser Ile Ala Lys Arg Asn Pro Glu Ala 
                      100                 105                 110         
          Ile Thr Glu Val Val Gln Leu Pro Asn His Phe Ser Asn Arg Tyr Tyr 
                  115                 120                 125             
          Asn Arg Leu Val Arg Ser Leu Leu Glu Cys Asp Glu Asp Thr Val Ser 
              130                 135                 140                 
          Thr Ile Arg Asp Ser Leu Met Glu Lys Ile Gly Pro Asn Met Ala Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Phe His Ile Leu Gln Thr Asp His Cys Ala Gln Thr His Pro Arg 
                          165                 170                 175     
          Ala Asp Phe Asn Arg Arg Arg Thr Asn Glu Pro Gln Lys Leu Lys Val 
                      180                 185                 190         
          Leu Leu Arg Asn Leu Arg Gly Glu Glu Asp Ser Pro Ser His Ile Lys 
                  195                 200                 205             
          Arg Thr Ser His Glu Ser Ala 
              210                 215 
          <![CDATA[<210>  7]]>
          <![CDATA[<211>  771]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人造序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  具有FLAG標記之hSTC-1]]>
          <![CDATA[<400>  7]]>
          atgctccaaa actcagcagt gcttctggtg ctggtgatca gtgcttctgc aacccatgag       60
          gcggagcaga atgactctgt gagccccagg aaatcccgag tggcggctca aaactcagct      120
          gaagtggttc gttgcctcaa cagtgctcta caggtcggct gcggggcttt tgcatgcctg      180
          gaaaactcca cctgtgacac agatgggatg tatgacatct gtaaatcctt cttgtacagc      240
          gctgctaaat ttgacactca gggaaaagca ttcgtcaaag agagcttaaa atgcatcgcc      300
          aacggggtca cctccaaggt cttcctcgcc attcggaggt gctccacttt ccaaaggatg      360
          attgctgagg tgcaggaaga gtgctacagc aagctgaatg tgtgcagcat cgccaagcgg      420
          aaccctgaag ccatcactga ggtcgtccag ctgcccaatc acttctccaa cagatactat      480
          aacagacttg tccgaagcct gctggaatgt gatgaagaca cagtcagcac aatcagagac      540
          agcctgatgg agaaaattgg gcctaacatg gccagcctct tccacatcct gcagacagac      600
          cactgtgccc aaacacaccc acgagctgac ttcaacagga gacgcaccaa tgagccgcag      660
          aagctgaaag tcctcctcag gaacctccga ggtgaggagg actctccctc ccacatcaaa      720
          cgcacatccc atgagagtgc aagcgactac aaggacgacg atgacaagta a               771
          <![CDATA[<210>  8]]>
          <![CDATA[<211>  256]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人造序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  具有FLAG標記之hSTC-1]]>
          <![CDATA[<400>  8]]>
          Met Leu Gln Asn Ser Ala Val Leu Leu Val Leu Val Ile Ser Ala Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ala Thr His Glu Ala Glu Gln Asn Asp Ser Val Ser Pro Arg Lys Ser 
                      20                  25                  30          
          Arg Val Ala Ala Gln Asn Ser Ala Glu Val Val Arg Cys Leu Asn Ser 
                  35                  40                  45              
          Ala Leu Gln Val Gly Cys Gly Ala Phe Ala Cys Leu Glu Asn Ser Thr 
              50                  55                  60                  
          Cys Asp Thr Asp Gly Met Tyr Asp Ile Cys Lys Ser Phe Leu Tyr Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Ala Ala Lys Phe Asp Thr Gln Gly Lys Ala Phe Val Lys Glu Ser Leu 
                          85                  90                  95      
          Lys Cys Ile Ala Asn Gly Val Thr Ser Lys Val Phe Leu Ala Ile Arg 
                      100                 105                 110         
          Arg Cys Ser Thr Phe Gln Arg Met Ile Ala Glu Val Gln Glu Glu Cys 
                  115                 120                 125             
          Tyr Ser Lys Leu Asn Val Cys Ser Ile Ala Lys Arg Asn Pro Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Ile Thr Glu Val Val Gln Leu Pro Asn His Phe Ser Asn Arg Tyr Tyr 
          145                 150                 155                 160 
          Asn Arg Leu Val Arg Ser Leu Leu Glu Cys Asp Glu Asp Thr Val Ser 
                          165                 170                 175     
          Thr Ile Arg Asp Ser Leu Met Glu Lys Ile Gly Pro Asn Met Ala Ser 
                      180                 185                 190         
          Leu Phe His Ile Leu Gln Thr Asp His Cys Ala Gln Thr His Pro Arg 
                  195                 200                 205             
          Ala Asp Phe Asn Arg Arg Arg Thr Asn Glu Pro Gln Lys Leu Lys Val 
              210                 215                 220                 
          Leu Leu Arg Asn Leu Arg Gly Glu Glu Asp Ser Pro Ser His Ile Lys 
          225                 230                 235                 240 
          Arg Thr Ser His Glu Ser Ala Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys 
                          245                 250                 255     
          <![CDATA[<210>  9]]>
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  具有FLAG標記之hSTC-1前肽]]>
          <![CDATA[<400>  9]]>
          atggtggcgg ctcaaaactc agctgaagtg gttcgttgcc tcaacagtgc tctacaggtc       60
          ggctgcgggg cttttgcatg cctggaaaac tccacctgtg acacagatgg gatgtatgac      120
          atctgtaaat ccttcttgta cagcgctgct aaatttgaca ctcagggaaa agcattcgtc      180
          aaagagagct taaaatgcat cgccaacggg gtcacctcca aggtcttcct cgccattcgg      240
          aggtgctcca ctttccaaag gatgattgct gaggtgcagg aagagtgcta cagcaagctg      300
          aatgtgtgca gcatcgccaa gcggaaccct gaagccatca ctgaggtcgt ccagctgccc      360
          aatcacttct ccaacagata ctataacaga cttgtccgaa gcctgctgga atgtgatgaa      420
          gacacagtca gcacaatcag agacagcctg atggagaaaa ttgggcctaa catggccagc      480
          ctcttccaca tcctgcagac agaccactgt gcccaaacac acccacgagc tgacttcaac      540
          aggagacgca ccaatgagcc gcagaagctg aaagtcctcc tcaggaacct ccgaggtgag      600
          gaggactctc cctcccacat caaacgcaca tcccatgaga gtgcagcaag cgactacaag      660
          gacgacgatg acaagtaa                                                    678
          <![CDATA[<210>  10]]>
          <![CDATA[<211>  241]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人造序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  具有FLAG標記之hSTC-1前肽]]>
          <![CDATA[<400>  10]]>
          Met Thr His Glu Ala Glu Gln Asn Asp Ser Val Ser Pro Arg Lys Ser 
          1               5                   10                  15      
          Arg Val Ala Ala Gln Asn Ser Ala Glu Val Val Arg Cys Leu Asn Ser 
                      20                  25                  30          
          Ala Leu Gln Val Gly Cys Gly Ala Phe Ala Cys Leu Glu Asn Ser Thr 
                  35                  40                  45              
          Cys Asp Thr Asp Gly Met Tyr Asp Ile Cys Lys Ser Phe Leu Tyr Ser 
              50                  55                  60                  
          Ala Ala Lys Phe Asp Thr Gln Gly Lys Ala Phe Val Lys Glu Ser Leu 
          65                  70                  75                  80  
          Lys Cys Ile Ala Asn Gly Val Thr Ser Lys Val Phe Leu Ala Ile Arg 
                          85                  90                  95      
          Arg Cys Ser Thr Phe Gln Arg Met Ile Ala Glu Val Gln Glu Glu Cys 
                      100                 105                 110         
          Tyr Ser Lys Leu Asn Val Cys Ser Ile Ala Lys Arg Asn Pro Glu Ala 
                  115                 120                 125             
          Ile Thr Glu Val Val Gln Leu Pro Asn His Phe Ser Asn Arg Tyr Tyr 
              130                 135                 140                 
          Asn Arg Leu Val Arg Ser Leu Leu Glu Cys Asp Glu Asp Thr Val Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Thr Ile Arg Asp Ser Leu Met Glu Lys Ile Gly Pro Asn Met Ala Ser 
                          165                 170                 175     
          Leu Phe His Ile Leu Gln Thr Asp His Cys Ala Gln Thr His Pro Arg 
                      180                 185                 190         
          Ala Asp Phe Asn Arg Arg Arg Thr Asn Glu Pro Gln Lys Leu Lys Val 
                  195                 200                 205             
          Leu Leu Arg Asn Leu Arg Gly Glu Glu Asp Ser Pro Ser His Ile Lys 
              210                 215                 220                 
          Arg Thr Ser His Glu Ser Ala Ala Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp 
          225                 230                 235                 240 
          Lys 
          <![CDATA[<210>  11]]>
          <![CDATA[<211>  675]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人造序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  具有FLAG標記之hSTC-1鏈]]>
          <![CDATA[<400>  11]]>
          atggtggcgg ctcaaaactc agctgaagtg gttcgttgcc tcaacagtgc tctacaggtc       60
          ggctgcgggg cttttgcatg cctggaaaac tccacctgtg acacagatgg gatgtatgac      120
          atctgtaaat ccttcttgta cagcgctgct aaatttgaca ctcagggaaa agcattcgtc      180
          aaagagagct taaaatgcat cgccaacggg gtcacctcca aggtcttcct cgccattcgg      240
          aggtgctcca ctttccaaag gatgattgct gaggtgcagg aagagtgcta cagcaagctg      300
          aatgtgtgca gcatcgccaa gcggaaccct gaagccatca ctgaggtcgt ccagctgccc      360
          aatcacttct ccaacagata ctataacaga cttgtccgaa gcctgctgga atgtgatgaa      420
          gacacagtca gcacaatcag agacagcctg atggagaaaa ttgggcctaa catggccagc      480
          ctcttccaca tcctgcagac agaccactgt gcccaaacac acccacgagc tgacttcaac      540
          aggagacgca ccaatgagcc gcagaagctg aaagtcctcc tcaggaacct ccgaggtgag      600
          gaggactctc cctcccacat caaacgcaca tcccatgaga gtgcaagcga ctacaaggac      660
          gacgatgaca agtaa                                                       675
          <![CDATA[<210>  12]]>
          <![CDATA[<211>  224]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人造序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  具有FLAG標記之hSTC-1鏈]]>
          <![CDATA[<400>  12]]>
          Met Val Ala Ala Gln Asn Ser Ala Glu Val Val Arg Cys Leu Asn Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ala Leu Gln Val Gly Cys Gly Ala Phe Ala Cys Leu Glu Asn Ser Thr 
                      20                  25                  30          
          Cys Asp Thr Asp Gly Met Tyr Asp Ile Cys Lys Ser Phe Leu Tyr Ser 
                  35                  40                  45              
          Ala Ala Lys Phe Asp Thr Gln Gly Lys Ala Phe Val Lys Glu Ser Leu 
              50                  55                  60                  
          Lys Cys Ile Ala Asn Gly Val Thr Ser Lys Val Phe Leu Ala Ile Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Cys Ser Thr Phe Gln Arg Met Ile Ala Glu Val Gln Glu Glu Cys 
                          85                  90                  95      
          Tyr Ser Lys Leu Asn Val Cys Ser Ile Ala Lys Arg Asn Pro Glu Ala 
                      100                 105                 110         
          Ile Thr Glu Val Val Gln Leu Pro Asn His Phe Ser Asn Arg Tyr Tyr 
                  115                 120                 125             
          Asn Arg Leu Val Arg Ser Leu Leu Glu Cys Asp Glu Asp Thr Val Ser 
              130                 135                 140                 
          Thr Ile Arg Asp Ser Leu Met Glu Lys Ile Gly Pro Asn Met Ala Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Phe His Ile Leu Gln Thr Asp His Cys Ala Gln Thr His Pro Arg 
                          165                 170                 175     
          Ala Asp Phe Asn Arg Arg Arg Thr Asn Glu Pro Gln Lys Leu Lys Val 
                      180                 185                 190         
          Leu Leu Arg Asn Leu Arg Gly Glu Glu Asp Ser Pro Ser His Ile Lys 
                  195                 200                 205             
          Arg Thr Ser His Glu Ser Ala Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys 
              210                 215                 220                 
          <![CDATA[<210>  13]]>
          <![CDATA[<211>  537]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  13]]>
          atgtatgaca tctgtaaatc cttcttgtac agcgctgcta aatttgacac tcagggaaaa       60
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          gccattcgga ggtgctccac tttccaaagg atgattgctg aggtgcagga agagtgctac      180
          agcaagctga atgtgtgcag catcgccaag cggaaccctg aagccatcac tgaggtcgtc      240
          cagctgccca atcacttctc caacagatac tataacagac ttgtccgaag cctgctggaa      300
          tgtgatgaag acacagtcag cacaatcaga gacagcctga tggagaaaat tgggcctaac      360
          atggccagcc tcttccacat cctgcagaca gaccactgtg cccaaacaca cccacgagct      420
          gacttcaaca ggagacgcac caatgagccg cagaagctga aagtcctcct caggaacctc      480
          cgaggtgagg aggactctcc ctcccacatc aaacgcacat cccatgagag tgcataa         537
          <![CDATA[<210>  14]]>
          <![CDATA[<211>  178]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  智人]]>
          <![CDATA[<400>  14]]>
          Met Tyr Asp Ile Cys Lys Ser Phe Leu Tyr Ser Ala Ala Lys Phe Asp 
          1               5                   10                  15      
          Thr Gln Gly Lys Ala Phe Val Lys Glu Ser Leu Lys Cys Ile Ala Asn 
                      20                  25                  30          
          Gly Val Thr Ser Lys Val Phe Leu Ala Ile Arg Arg Cys Ser Thr Phe 
                  35                  40                  45              
          Gln Arg Met Ile Ala Glu Val Gln Glu Glu Cys Tyr Ser Lys Leu Asn 
              50                  55                  60                  
          Val Cys Ser Ile Ala Lys Arg Asn Pro Glu Ala Ile Thr Glu Val Val 
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          Ser Leu Leu Glu Cys Asp Glu Asp Thr Val Ser Thr Ile Arg Asp Ser 
                      100                 105                 110         
          Leu Met Glu Lys Ile Gly Pro Asn Met Ala Ser Leu Phe His Ile Leu 
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          Gln Thr Asp His Cys Ala Gln Thr His Pro Arg Ala Asp Phe Asn Arg 
              130                 135                 140                 
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          Arg Gly Glu Glu Asp Ser Pro Ser His Ile Lys Arg Thr Ser His Glu 
                          165                 170                 175     
          Ser Ala 
          <![CDATA[<210>  15]]>
          <![CDATA[<211>  744]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  15]]>
          atgctccaaa actcagcagt gattctggcg ctggtcatca gtgcagctgc agcgcacgag       60
          gcggaacaaa atgattctgt gagccccaga aaatcccggg tggcggctca aaattcagct      120
          gaagtggttc gctgcctcaa cagtgccctg caggttggct gcggggcttt tgcatgcctg      180
          gaaaactcca catgtgacac agatgggatg tacgacattt gtaaatcctt cttgtacagt      240
          gctgctaaat ttgacactca gggaaaagca tttgtcaaag agagcttaaa gtgcatcgcc      300
          aatgggatca cctccaaggt attccttgcc attcggaggt gttcgacttt ccagaggatg      360
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          agcctgatgg agaagatcgg gcccaacatg gccagcctct tccacatcct gcagacagac      600
          cactgtgccc agacacaccc cagagctgac ttcaatagga ggcgcacaaa tgagccacag      660
          aagctgaaag tcctcctcag gaacctccga ggtgaggggg actctccctc acacatcaaa      720
          cgcacctccc aagagagtgc gtaa                                             744
          <![CDATA[<210>  16]]>
          <![CDATA[<211>  247]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  16]]>
          Met Leu Gln Asn Ser Ala Val Ile Leu Ala Leu Val Ile Ser Ala Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ala Ala His Glu Ala Glu Gln Asn Asp Ser Val Ser Pro Arg Lys Ser 
                      20                  25                  30          
          Arg Val Ala Ala Gln Asn Ser Ala Glu Val Val Arg Cys Leu Asn Ser 
                  35                  40                  45              
          Ala Leu Gln Val Gly Cys Gly Ala Phe Ala Cys Leu Glu Asn Ser Thr 
              50                  55                  60                  
          Cys Asp Thr Asp Gly Met Tyr Asp Ile Cys Lys Ser Phe Leu Tyr Ser 
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          Ala Ala Lys Phe Asp Thr Gln Gly Lys Ala Phe Val Lys Glu Ser Leu 
                          85                  90                  95      
          Lys Cys Ile Ala Asn Gly Ile Thr Ser Lys Val Phe Leu Ala Ile Arg 
                      100                 105                 110         
          Arg Cys Ser Thr Phe Gln Arg Met Ile Ala Glu Val Gln Glu Asp Cys 
                  115                 120                 125             
          Tyr Ser Lys Leu Asn Val Cys Ser Ile Ala Lys Arg Asn Pro Glu Ala 
              130                 135                 140                 
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          145                 150                 155                 160 
          Asn Arg Leu Val Arg Ser Leu Leu Glu Cys Asp Glu Asp Thr Val Ser 
                          165                 170                 175     
          Thr Ile Arg Asp Ser Leu Met Glu Lys Ile Gly Pro Asn Met Ala Ser 
                      180                 185                 190         
          Leu Phe His Ile Leu Gln Thr Asp His Cys Ala Gln Thr His Pro Arg 
                  195                 200                 205             
          Ala Asp Phe Asn Arg Arg Arg Thr Asn Glu Pro Gln Lys Leu Lys Val 
              210                 215                 220                 
          Leu Leu Arg Asn Leu Arg Gly Glu Gly Asp Ser Pro Ser His Ile Lys 
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          Arg Thr Ser Gln Glu Ser Ala 
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          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  17]]>
          atgcacgagg cggaacaaaa tgattctgtg agccccagaa aatcccgggt ggcggctcaa       60
          aattcagctg aagtggttcg ctgcctcaac agtgccctgc aggttggctg cggggctttt      120
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          tgcatcgcca atgggatcac ctccaaggta ttccttgcca ttcggaggtg ttcgactttc      300
          cagaggatga tcgccgaggt gcaggaggac tgctacagca agcttaacgt ttgcagcatc      360
          gccaagcgca acccggaagc catcactgaa gtcatacagc tgcccaatca cttctccaac      420
          agatactaca acagacttgt ccgaagcctt ctggaatgtg atgaagacac ggtcagtaca      480
          atcagagaca gcctgatgga gaagatcggg cccaacatgg ccagcctctt ccacatcctg      540
          cagacagacc actgtgccca gacacacccc agagctgact tcaataggag gcgcacaaat      600
          gagccacaga agctgaaagt cctcctcagg aacctccgag gtgaggggga ctctccctca      660
          cacatcaaac gcacctccca agagagtgcg taa                                   693
          <![CDATA[<210>  18]]>
          <![CDATA[<211>  230]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  18]]>
          Met His Glu Ala Glu Gln Asn Asp Ser Val Ser Pro Arg Lys Ser Arg 
          1               5                   10                  15      
          Val Ala Ala Gln Asn Ser Ala Glu Val Val Arg Cys Leu Asn Ser Ala 
                      20                  25                  30          
          Leu Gln Val Gly Cys Gly Ala Phe Ala Cys Leu Glu Asn Ser Thr Cys 
                  35                  40                  45              
          Asp Thr Asp Gly Met Tyr Asp Ile Cys Lys Ser Phe Leu Tyr Ser Ala 
              50                  55                  60                  
          Ala Lys Phe Asp Thr Gln Gly Lys Ala Phe Val Lys Glu Ser Leu Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Cys Ile Ala Asn Gly Ile Thr Ser Lys Val Phe Leu Ala Ile Arg Arg 
                          85                  90                  95      
          Cys Ser Thr Phe Gln Arg Met Ile Ala Glu Val Gln Glu Asp Cys Tyr 
                      100                 105                 110         
          Ser Lys Leu Asn Val Cys Ser Ile Ala Lys Arg Asn Pro Glu Ala Ile 
                  115                 120                 125             
          Thr Glu Val Ile Gln Leu Pro Asn His Phe Ser Asn Arg Tyr Tyr Asn 
              130                 135                 140                 
          Arg Leu Val Arg Ser Leu Leu Glu Cys Asp Glu Asp Thr Val Ser Thr 
          145                 150                 155                 160 
          Ile Arg Asp Ser Leu Met Glu Lys Ile Gly Pro Asn Met Ala Ser Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe His Ile Leu Gln Thr Asp His Cys Ala Gln Thr His Pro Arg Ala 
                      180                 185                 190         
          Asp Phe Asn Arg Arg Arg Thr Asn Glu Pro Gln Lys Leu Lys Val Leu 
                  195                 200                 205             
          Leu Arg Asn Leu Arg Gly Glu Gly Asp Ser Pro Ser His Ile Lys Arg 
              210                 215                 220                 
          Thr Ser Gln Glu Ser Ala 
          225                 230 
          <![CDATA[<210>  19]]>
          <![CDATA[<211>  648]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  19]]>
          atggtggcgg ctcaaaattc agctgaagtg gttcgctgcc tcaacagtgc cctgcaggtt       60
          ggctgcgggg cttttgcatg cctggaaaac tccacatgtg acacagatgg gatgtacgac      120
          atttgtaaat ccttcttgta cagtgctgct aaatttgaca ctcagggaaa agcatttgtc      180
          aaagagagct taaagtgcat cgccaatggg atcacctcca aggtattcct tgccattcgg      240
          aggtgttcga ctttccagag gatgatcgcc gaggtgcagg aggactgcta cagcaagctt      300
          aacgtttgca gcatcgccaa gcgcaacccg gaagccatca ctgaagtcat acagctgccc      360
          aatcacttct ccaacagata ctacaacaga cttgtccgaa gccttctgga atgtgatgaa      420
          gacacggtca gtacaatcag agacagcctg atggagaaga tcgggcccaa catggccagc      480
          ctcttccaca tcctgcagac agaccactgt gcccagacac accccagagc tgacttcaat      540
          aggaggcgca caaatgagcc acagaagctg aaagtcctcc tcaggaacct ccgaggtgag      600
          ggggactctc cctcacacat caaacgcacc tcccaagaga gtgcgtaa                   648
          <![CDATA[<210>  20]]>
          <![CDATA[<211>  215]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  20]]>
          Met Val Ala Ala Gln Asn Ser Ala Glu Val Val Arg Cys Leu Asn Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ala Leu Gln Val Gly Cys Gly Ala Phe Ala Cys Leu Glu Asn Ser Thr 
                      20                  25                  30          
          Cys Asp Thr Asp Gly Met Tyr Asp Ile Cys Lys Ser Phe Leu Tyr Ser 
                  35                  40                  45              
          Ala Ala Lys Phe Asp Thr Gln Gly Lys Ala Phe Val Lys Glu Ser Leu 
              50                  55                  60                  
          Lys Cys Ile Ala Asn Gly Ile Thr Ser Lys Val Phe Leu Ala Ile Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Cys Ser Thr Phe Gln Arg Met Ile Ala Glu Val Gln Glu Asp Cys 
                          85                  90                  95      
          Tyr Ser Lys Leu Asn Val Cys Ser Ile Ala Lys Arg Asn Pro Glu Ala 
                      100                 105                 110         
          Ile Thr Glu Val Ile Gln Leu Pro Asn His Phe Ser Asn Arg Tyr Tyr 
                  115                 120                 125             
          Asn Arg Leu Val Arg Ser Leu Leu Glu Cys Asp Glu Asp Thr Val Ser 
              130                 135                 140                 
          Thr Ile Arg Asp Ser Leu Met Glu Lys Ile Gly Pro Asn Met Ala Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Phe His Ile Leu Gln Thr Asp His Cys Ala Gln Thr His Pro Arg 
                          165                 170                 175     
          Ala Asp Phe Asn Arg Arg Arg Thr Asn Glu Pro Gln Lys Leu Lys Val 
                      180                 185                 190         
          Leu Leu Arg Asn Leu Arg Gly Glu Gly Asp Ser Pro Ser His Ile Lys 
                  195                 200                 205             
          Arg Thr Ser Gln Glu Ser Ala 
              210                 215 
          <![CDATA[<210>  21]]>
          <![CDATA[<211>  246]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  21]]>
          Met Leu Gln Asn Ser Ala Val Ile Leu Ala Leu Val Ile Ser Ala Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ala Ala His Glu Ala Glu Gln Asn Asp Ser Val Ser Pro Arg Lys Ser 
                      20                  25                  30          
          Arg Val Ala Ala Gln Asn Ser Ala Glu Val Val Arg Cys Leu Asn Ser 
                  35                  40                  45              
          Ala Cys Arg Leu Ala Ala Gly Phe Ala Cys Leu Glu Asn Ser Thr Cys 
              50                  55                  60                  
          Asp Thr Asp Gly Met Tyr Asp Ile Cys Lys Ser Phe Leu Tyr Ser Ala 
          65                  70                  75                  80  
          Ala Lys Phe Asp Thr Gln Gly Lys Ala Phe Val Lys Glu Ser Leu Lys 
                          85                  90                  95      
          Cys Ile Ala Asn Gly Ile Thr Ser Lys Val Phe Leu Ala Ile Arg Arg 
                      100                 105                 110         
          Cys Ser Thr Phe Gln Arg Met Ile Ala Glu Val Gln Glu Asp Cys Tyr 
                  115                 120                 125             
          Ser Lys Leu Asn Val Cys Ser Ile Ala Lys Arg Asn Pro Glu Ala Ile 
              130                 135                 140                 
          Thr Glu Val Ile Gln Leu Pro Asn His Phe Ser Asn Arg Tyr Tyr Asn 
          145                 150                 155                 160 
          Arg Leu Val Arg Ser Leu Leu Glu Cys Asp Glu Asp Thr Val Ser Thr 
                          165                 170                 175     
          Ile Arg Asp Ser Leu Met Glu Lys Ile Gly Pro Asn Met Ala Ser Leu 
                      180                 185                 190         
          Phe His Ile Leu Gln Thr Asp His Cys Ala Gln Thr His Pro Arg Ala 
                  195                 200                 205             
          Asp Phe Asn Arg Arg Arg Thr Asn Glu Pro Gln Lys Leu Lys Val Leu 
              210                 215                 220                 
          Leu Arg Asn Leu Arg Gly Glu Gly Asp Ser Pro Ser His Ile Lys Arg 
          225                 230                 235                 240 
          Thr Ser Gln Glu Ser Ala 
                          245     
          <![CDATA[<210>  22]]>
          <![CDATA[<211>  229]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  22]]>
          Met His Glu Ala Glu Gln Asn Asp Ser Val Ser Pro Arg Lys Ser Arg 
          1               5                   10                  15      
          Val Ala Ala Gln Asn Ser Ala Glu Val Val Arg Cys Leu Asn Ser Ala 
                      20                  25                  30          
          Cys Arg Leu Ala Ala Gly Phe Ala Cys Leu Glu Asn Ser Thr Cys Asp 
                  35                  40                  45              
          Thr Asp Gly Met Tyr Asp Ile Cys Lys Ser Phe Leu Tyr Ser Ala Ala 
              50                  55                  60                  
          Lys Phe Asp Thr Gln Gly Lys Ala Phe Val Lys Glu Ser Leu Lys Cys 
          65                  70                  75                  80  
          Ile Ala Asn Gly Ile Thr Ser Lys Val Phe Leu Ala Ile Arg Arg Cys 
                          85                  90                  95      
          Ser Thr Phe Gln Arg Met Ile Ala Glu Val Gln Glu Asp Cys Tyr Ser 
                      100                 105                 110         
          Lys Leu Asn Val Cys Ser Ile Ala Lys Arg Asn Pro Glu Ala Ile Thr 
                  115                 120                 125             
          Glu Val Ile Gln Leu Pro Asn His Phe Ser Asn Arg Tyr Tyr Asn Arg 
              130                 135                 140                 
          Leu Val Arg Ser Leu Leu Glu Cys Asp Glu Asp Thr Val Ser Thr Ile 
          145                 150                 155                 160 
          Arg Asp Ser Leu Met Glu Lys Ile Gly Pro Asn Met Ala Ser Leu Phe 
                          165                 170                 175     
          His Ile Leu Gln Thr Asp His Cys Ala Gln Thr His Pro Arg Ala Asp 
                      180                 185                 190         
          Phe Asn Arg Arg Arg Thr Asn Glu Pro Gln Lys Leu Lys Val Leu Leu 
                  195                 200                 205             
          Arg Asn Leu Arg Gly Glu Gly Asp Ser Pro Ser His Ile Lys Arg Thr 
              210                 215                 220                 
          Ser Gln Glu Ser Ala 
          225                 
          <![CDATA[<210>  23]]>
          <![CDATA[<211>  214]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  小家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  23]]>
          Met Val Ala Ala Gln Asn Ser Ala Glu Val Val Arg Cys Leu Asn Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ala Cys Arg Leu Ala Ala Gly Phe Ala Cys Leu Glu Asn Ser Thr Cys 
                      20                  25                  30          
          Asp Thr Asp Gly Met Tyr Asp Ile Cys Lys Ser Phe Leu Tyr Ser Ala 
                  35                  40                  45              
          Ala Lys Phe Asp Thr Gln Gly Lys Ala Phe Val Lys Glu Ser Leu Lys 
              50                  55                  60                  
          Cys Ile Ala Asn Gly Ile Thr Ser Lys Val Phe Leu Ala Ile Arg Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Cys Ser Thr Phe Gln Arg Met Ile Ala Glu Val Gln Glu Asp Cys Tyr 
                          85                  90                  95      
          Ser Lys Leu Asn Val Cys Ser Ile Ala Lys Arg Asn Pro Glu Ala Ile 
                      100                 105                 110         
          Thr Glu Val Ile Gln Leu Pro Asn His Phe Ser Asn Arg Tyr Tyr Asn 
                  115                 120                 125             
          Arg Leu Val Arg Ser Leu Leu Glu Cys Asp Glu Asp Thr Val Ser Thr 
              130                 135                 140                 
          Ile Arg Asp Ser Leu Met Glu Lys Ile Gly Pro Asn Met Ala Ser Leu 
          145                 150                 155                 160 
          Phe His Ile Leu Gln Thr Asp His Cys Ala Gln Thr His Pro Arg Ala 
                          165                 170                 175     
          Asp Phe Asn Arg Arg Arg Thr Asn Glu Pro Gln Lys Leu Lys Val Leu 
                      180                 185                 190         
          Leu Arg Asn Leu Arg Gly Glu Gly Asp Ser Pro Ser His Ile Lys Arg 
                  195                 200                 205             
          Thr Ser Gln Glu Ser Ala 
              210                 
          <![CDATA[<210>  24]]>
          <![CDATA[<211>  744]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  褐家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  24]]>
          atgctccaaa actcagcagt gattctggcg ctggtcatca gtgctgctgc agctcacgag       60
          gcggaacaga atgattctgt gagccccaga aaatcccggg tggcggctca aaattcagct      120
          gaagtggtcc gctgcctcaa cagtgcccta caggttggct gtggggcttt tgcatgcctg      180
          gaaaactcca catgtgacac agatgggatg tacgacattt gtaaatcctt cttgtacagt      240
          gctgctaaat ttgacactca gggaaaagca tttgtcaaag agagcttaaa gtgcatcgcc      300
          aatgggatca cctccaaggt cttccttgcc attcggaggt gttctacttt ccagaggatg      360
          atcgccgagg tgcaggagga ctgctacagc aagctcaatg tttgcagcat tgccaagcgc      420
          aacccggaag ccatcactga agtcatacag ctgcccaatc acttctccaa cagatactac      480
          aacagacttg tccgaagcct tctggaatgt gatgaagata cggtcagcac aatcagagac      540
          agcctgatgg agaagatcgg gcccaacatg gccagcctct tccatatcct gcagacagac      600
          cactgtgccc agacacaccc cagagctgac ttcaatagga ggcgcacaaa tgagccacag      660
          aagctgaaag tcctcctcag gaacctccga ggtgaggggg attctccctc acacatcaaa      720
          cgcacctccc aagagaatgc gtaa                                             744
          <![CDATA[<210>  25]]>
          <![CDATA[<211>  247]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  褐家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  25]]>
          Met Leu Gln Asn Ser Ala Val Ile Leu Ala Leu Val Ile Ser Ala Ala 
          1               5                   10                  15      
          Ala Ala His Glu Ala Glu Gln Asn Asp Ser Val Ser Pro Arg Lys Ser 
                      20                  25                  30          
          Arg Val Ala Ala Gln Asn Ser Ala Glu Val Val Arg Cys Leu Asn Ser 
                  35                  40                  45              
          Ala Leu Gln Val Gly Cys Gly Ala Phe Ala Cys Leu Glu Asn Ser Thr 
              50                  55                  60                  
          Cys Asp Thr Asp Gly Met Tyr Asp Ile Cys Lys Ser Phe Leu Tyr Ser 
          65                  70                  75                  80  
          Ala Ala Lys Phe Asp Thr Gln Gly Lys Ala Phe Val Lys Glu Ser Leu 
                          85                  90                  95      
          Lys Cys Ile Ala Asn Gly Ile Thr Ser Lys Val Phe Leu Ala Ile Arg 
                      100                 105                 110         
          Arg Cys Ser Thr Phe Gln Arg Met Ile Ala Glu Val Gln Glu Asp Cys 
                  115                 120                 125             
          Tyr Ser Lys Leu Asn Val Cys Ser Ile Ala Lys Arg Asn Pro Glu Ala 
              130                 135                 140                 
          Ile Thr Glu Val Ile Gln Leu Pro Asn His Phe Ser Asn Arg Tyr Tyr 
          145                 150                 155                 160 
          Asn Arg Leu Val Arg Ser Leu Leu Glu Cys Asp Glu Asp Thr Val Ser 
                          165                 170                 175     
          Thr Ile Arg Asp Ser Leu Met Glu Lys Ile Gly Pro Asn Met Ala Ser 
                      180                 185                 190         
          Leu Phe His Ile Leu Gln Thr Asp His Cys Ala Gln Thr His Pro Arg 
                  195                 200                 205             
          Ala Asp Phe Asn Arg Arg Arg Thr Asn Glu Pro Gln Lys Leu Lys Val 
              210                 215                 220                 
          Leu Leu Arg Asn Leu Arg Gly Glu Gly Asp Ser Pro Ser His Ile Lys 
          225                 230                 235                 240 
          Arg Thr Ser Gln Glu Asn Ala 
                          245         
          <![CDATA[<210>  26]]>
          <![CDATA[<211>  693]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  褐家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  26]]>
          atgcacgagg cggaacagaa tgattctgtg agccccagaa aatcccgggt ggcggctcaa       60
          aattcagctg aagtggtccg ctgcctcaac agtgccctac aggttggctg tggggctttt      120
          gcatgcctgg aaaactccac atgtgacaca gatgggatgt acgacatttg taaatccttc      180
          ttgtacagtg ctgctaaatt tgacactcag ggaaaagcat ttgtcaaaga gagcttaaag      240
          tgcatcgcca atgggatcac ctccaaggtc ttccttgcca ttcggaggtg ttctactttc      300
          cagaggatga tcgccgaggt gcaggaggac tgctacagca agctcaatgt ttgcagcatt      360
          gccaagcgca acccggaagc catcactgaa gtcatacagc tgcccaatca cttctccaac      420
          agatactaca acagacttgt ccgaagcctt ctggaatgtg atgaagatac ggtcagcaca      480
          atcagagaca gcctgatgga gaagatcggg cccaacatgg ccagcctctt ccatatcctg      540
          cagacagacc actgtgccca gacacacccc agagctgact tcaataggag gcgcacaaat      600
          gagccacaga agctgaaagt cctcctcagg aacctccgag gtgaggggga ttctccctca      660
          cacatcaaac gcacctccca agagaatgcg taa                                   693
          <![CDATA[<210>  27]]>
          <![CDATA[<211>  230]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  褐家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  27]]>
          Met His Glu Ala Glu Gln Asn Asp Ser Val Ser Pro Arg Lys Ser Arg 
          1               5                   10                  15      
          Val Ala Ala Gln Asn Ser Ala Glu Val Val Arg Cys Leu Asn Ser Ala 
                      20                  25                  30          
          Leu Gln Val Gly Cys Gly Ala Phe Ala Cys Leu Glu Asn Ser Thr Cys 
                  35                  40                  45              
          Asp Thr Asp Gly Met Tyr Asp Ile Cys Lys Ser Phe Leu Tyr Ser Ala 
              50                  55                  60                  
          Ala Lys Phe Asp Thr Gln Gly Lys Ala Phe Val Lys Glu Ser Leu Lys 
          65                  70                  75                  80  
          Cys Ile Ala Asn Gly Ile Thr Ser Lys Val Phe Leu Ala Ile Arg Arg 
                          85                  90                  95      
          Cys Ser Thr Phe Gln Arg Met Ile Ala Glu Val Gln Glu Asp Cys Tyr 
                      100                 105                 110         
          Ser Lys Leu Asn Val Cys Ser Ile Ala Lys Arg Asn Pro Glu Ala Ile 
                  115                 120                 125             
          Thr Glu Val Ile Gln Leu Pro Asn His Phe Ser Asn Arg Tyr Tyr Asn 
              130                 135                 140                 
          Arg Leu Val Arg Ser Leu Leu Glu Cys Asp Glu Asp Thr Val Ser Thr 
          145                 150                 155                 160 
          Ile Arg Asp Ser Leu Met Glu Lys Ile Gly Pro Asn Met Ala Ser Leu 
                          165                 170                 175     
          Phe His Ile Leu Gln Thr Asp His Cys Ala Gln Thr His Pro Arg Ala 
                      180                 185                 190         
          Asp Phe Asn Arg Arg Arg Thr Asn Glu Pro Gln Lys Leu Lys Val Leu 
                  195                 200                 205             
          Leu Arg Asn Leu Arg Gly Glu Gly Asp Ser Pro Ser His Ile Lys Arg 
              210                 215                 220                 
          Thr Ser Gln Glu Asn Ala 
          225                 230 
          <![CDATA[<210>  28]]>
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          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  褐家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  28]]>
          atggtggcgg ctcaaaattc agctgaagtg gtccgctgcc tcaacagtgc cctacaggtt       60
          ggctgtgggg cttttgcatg cctggaaaac tccacatgtg acacagatgg gatgtacgac      120
          atttgtaaat ccttcttgta cagtgctgct aaatttgaca ctcagggaaa agcatttgtc      180
          aaagagagct taaagtgcat cgccaatggg atcacctcca aggtcttcct tgccattcgg      240
          aggtgttcta ctttccagag gatgatcgcc gaggtgcagg aggactgcta cagcaagctc      300
          aatgtttgca gcattgccaa gcgcaacccg gaagccatca ctgaagtcat acagctgccc      360
          aatcacttct ccaacagata ctacaacaga cttgtccgaa gccttctgga atgtgatgaa      420
          gatacggtca gcacaatcag agacagcctg atggagaaga tcgggcccaa catggccagc      480
          ctcttccata tcctgcagac agaccactgt gcccagacac accccagagc tgacttcaat      540
          aggaggcgca caaatgagcc acagaagctg aaagtcctcc tcaggaacct ccgaggtgag      600
          ggggattctc cctcacacat caaacgcacc tcccaagaga atgcgtaa                   648
          <![CDATA[<210>  29]]>
          <![CDATA[<211>  215]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  褐家鼠]]>
          <![CDATA[<400>  29]]>
          Met Val Ala Ala Gln Asn Ser Ala Glu Val Val Arg Cys Leu Asn Ser 
          1               5                   10                  15      
          Ala Leu Gln Val Gly Cys Gly Ala Phe Ala Cys Leu Glu Asn Ser Thr 
                      20                  25                  30          
          Cys Asp Thr Asp Gly Met Tyr Asp Ile Cys Lys Ser Phe Leu Tyr Ser 
                  35                  40                  45              
          Ala Ala Lys Phe Asp Thr Gln Gly Lys Ala Phe Val Lys Glu Ser Leu 
              50                  55                  60                  
          Lys Cys Ile Ala Asn Gly Ile Thr Ser Lys Val Phe Leu Ala Ile Arg 
          65                  70                  75                  80  
          Arg Cys Ser Thr Phe Gln Arg Met Ile Ala Glu Val Gln Glu Asp Cys 
                          85                  90                  95      
          Tyr Ser Lys Leu Asn Val Cys Ser Ile Ala Lys Arg Asn Pro Glu Ala 
                      100                 105                 110         
          Ile Thr Glu Val Ile Gln Leu Pro Asn His Phe Ser Asn Arg Tyr Tyr 
                  115                 120                 125             
          Asn Arg Leu Val Arg Ser Leu Leu Glu Cys Asp Glu Asp Thr Val Ser 
              130                 135                 140                 
          Thr Ile Arg Asp Ser Leu Met Glu Lys Ile Gly Pro Asn Met Ala Ser 
          145                 150                 155                 160 
          Leu Phe His Ile Leu Gln Thr Asp His Cys Ala Gln Thr His Pro Arg 
                          165                 170                 175     
          Ala Asp Phe Asn Arg Arg Arg Thr Asn Glu Pro Gln Lys Leu Lys Val 
                      180                 185                 190         
          Leu Leu Arg Asn Leu Arg Gly Glu Gly Asp Ser Pro Ser His Ile Lys 
                  195                 200                 205             
          Arg Thr Ser Gln Glu Asn Ala 
              210                 215 
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          <![CDATA[<211>  8]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人造序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  FLAG標記]]>
          <![CDATA[<400>  30]]>
          Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys 
          1               5               
          <![CDATA[<210>  31]]>
          <![CDATA[<211>  9]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人造序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  FLAG標記]]>
          <![CDATA[<400>  31]]>
          Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys 
          1               5                   
          <![CDATA[<210>  32]]>
          <![CDATA[<211>  10]]>
          <![CDATA[<212>  PRT]]>
          <![CDATA[<213>  人造序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  FLAG標記]]>
          <![CDATA[<400>  32]]>
          Ala Ser Asp Tyr Lys Asp Asp Asp Asp Lys 
          1               5                   10  
          <![CDATA[<210>  33]]>
          <![CDATA[<211>  1718]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人造序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  雞β-肌動蛋白啟動子]]>
          <![CDATA[<400>  33]]>
          actagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc atagcccata tatggagttc       60
          cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac cgcccaacga cccccgccca      120
          ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa tagggacttt ccattgacgt      180
          caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag tacatcaagt gtatcatatg      240
          ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc ccgcctggca ttatgcccag      300
          tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct acgtattagt catcgctatt      360
          accatggtcg aggtgagccc cacgttctgc ttcactctcc ccatctcccc cccctcccca      420
          cccccaattt tgtatttatt tattttttaa ttattttgtg cagcgatggg ggcggggggg      480
          gggggggggc gcgcgccagg cggggcgggg cggggcgagg ggcggggcgg ggcgaggcgg      540
          agaggtgcgg cggcagccaa tcagagcggc gcgctccgaa agtttccttt tatggcgagg      600
          cggcggcggc ggcggcccta taaaaagcga agcgcgcggc gggcggggag tcgctgcgac      660
          gctgccttcg ccccgtgccc cgctccgccg ccgcctcgcg ccgcccgccc cggctctgac      720
          tgaccgcgtt actcccacag gtgagcgggc gggacggccc ttctcctccg ggctgtaatt      780
          agcgcttggt ttaatgacgg cttgtttctt ttctgtggct gcgtgaaagc cttgaggggc      840
          tccgggaggg ccctttgtgc ggggggagcg gctcgggggg tgcgtgcgtg tgtgtgtgcg      900
          tggggagcgc cgcgtgcggc tccgcgctgc ccggcggctg tgagcgctgc gggcgcggcg      960
          cggggctttg tgcgctccgc agtgtgcgcg aggggagcgc ggccgggggc ggtgccccgc     1020
          ggtgcggggg gggctgcgag gggaacaaag gctgcgtgcg gggtgtgtgc gtgggggggt     1080
          gagcaggggg tgtgggcgcg tcggtcgggc tgcaaccccc cctgcacccc cctccccgag     1140
          ttgctgagca cggcccggct tcgggtgcgg ggctccgtac ggggcgtggc gcggggctcg     1200
          ccgtgccggg cggggggtgg cggcaggtgg gggtgccggg cggggcgggg ccgcctcggg     1260
          ccggggaggg ctcgggggag gggcgcggcg gcccccggag cgccggcggc tgtcgaggcg     1320
          cggcgagccg cagccattgc cttttatggt aatcgtgcga gagggcgcag ggacttcctt     1380
          tgtcccaaat ctgtgcggag ccgaaatctg ggaggcgccg ccgcaccccc tctagcgggc     1440
          gcggggcgaa gcggtgcggc gccggcagga aggaaatggg cggggagggc cttcgtgcgt     1500
          cgccgcgccg ccgtcccctt ctccctctcc agcctcgggg ctgtccgcgg ggggacggct     1560
          gccttcgggg gggacggggc agggcggggt tcggcttctg gcgtgtgacc ggcggctcta     1620
          gagcctctgc taaccatgtt catgccttct tctttttcct acagctcctg ggcaacgtgc     1680
          tggttattgt gctgtctcat cattttggca aagaattc                             1718
          <![CDATA[<210>  34]]>
          <![CDATA[<211>  976]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人造序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  雞β-肌動蛋白啟動子]]>
          <![CDATA[<400>  34]]>
          ctagttatta atagtaatca attacggggt cattagttca tagcccatat atggagttcc       60
          gcgttacata acttacggta aatggcccgc ctggctgacc gcccaacgac ccccgcccat      120
          tgacgtcaat aatgacgtat gttcccatag taacgccaat agggactttc cattgacgtc      180
          aatgggtgga ctatttacgg taaactgccc acttggcagt acatcaagtg tatcatatgc      240
          caagtacgcc ccctattgac gtcaatgacg gtaaatggcc cgcctggcat tatgcccagt      300
          acatgacctt atgggacttt cctacttggc agtacatcta cgtattagtc atcgctatta      360
          ccatggtcga ggtgagcccc acgttctgct tcactctccc catctccccc ccctccccac      420
          ccccaatttt gtatttattt attttttaat tattttgtgc agcgatgggg gcgggggggg      480
          ggggggggcg cgcgccaggc ggggcggggc ggggcgaggg gcggggcggg gcgaggcgga      540
          gaggtgcggc ggcagccaat cagagcggcg cgctccgaaa gtttcctttt atggcgaggc      600
          ggcggcggcg gcggccctat aaaaagcgaa gcgcgcggcg ggcgggagtc gctgcgacgc      660
          tgccttcgcc ccgtgccccg ctccgccgcc gcctcgcgcc gcccgccccg gctctgactg      720
          accgcgttac tcccacaggt gagcgggcgg gacggccctt ctcctccggg ctgtaattag      780
          cgcttggttt aatgacggct tgtttctttt ctgtggctgc gtgaaagcct tgaggggctc      840
          cgggagctag agcctctgct aaccatgttc atgccttctt ctttttccta cagctcctgg      900
          gcaacgtgct ggttattgtg ctgtctcatc attttggcaa agaattcctc gaagatctag      960
          gcctgcaggc ggccgc                                                      976
          <![CDATA[<210>  35]]>
          <![CDATA[<211>  283]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人造序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  小型雞β-肌動蛋白啟動子]]>
          <![CDATA[<400>  35]]>
          catggtcgag gtgagcccca cgttctgctt cactctcccc atctcccccc cctccccacc       60
          cccaattttg tatttattta ttttttaatt attttgtgca gcgatggggg cggggggggg      120
          gggggggcgc gcgccaggcg gggcggggcg gggcgagggg cggggcgggg cgaggcggag      180
          aggtgcggcg gcagccaatc agagcggcgc gctccgaaag tttcctttta tggcgaggcg      240
          gcggcggcgg cggccctata aaaagcgaag cgcgcggcgg gcg                        283
          <![CDATA[<210>  36]]>
          <![CDATA[<211>  589]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人造序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  巨細胞病毒(CMV)啟動子]]>
          <![CDATA[<400>  36]]>
          tagttattaa tagtaatcaa ttacggggtc attagttcat agcccatata tggagttccg       60
          cgttacataa cttacggtaa atggcccgcc tggctgaccg cccaacgacc cccgcccatt      120
          gacgtcaata atgacgtatg ttcccatagt aacgccaata gggactttcc attgacgtca      180
          atgggtggag tatttacggt aaactgccca cttggcagta catcaagtgt atcatatgcc      240
          aagtacgccc cctattgacg tcaatgacgg taaatggccc gcctggcatt atgcccagta      300
          catgacctta tgggactttc ctacttggca gtacatctac gtattagtca tcgctattac      360
          catggtgatg cggttttggc agtacatcaa tgggcgtgga tagcggtttg actcacgggg      420
          atttccaagt ctccacccca ttgacgtcaa tgggagtttg ttttggcacc aaaatcaacg      480
          ggactttcca aaatgtcgta acaactccgc cccattgacg caaatgggcg gtaggcgtgt      540
          acggtgggag gtctatataa gcagagctgg tttagtgaac cgtcagatc                  589
          <![CDATA[<210>  37]]>
          <![CDATA[<211>  344]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人造序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  SV40啟動子]]>
          <![CDATA[<400>  37]]>
          ctgtggaatg tgtgtcagtt agggtgtgga aagtccccag gctccccagc aggcagaagt       60
          atgcaaagca tgcatctcaa ttagtcagca accaggtgtg gaaagtcccc aggctcccca      120
          gcaggcagaa gtatgcaaag catgcatctc aattagtcag caaccatagt cccgccccta      180
          actccgccca tcccgcccct aactccgccc agttccgccc attctccgcc ccatggctga      240
          ctaatttttt ttatttatgc agaggccgag gccgcctctg cctctgagct attccagaag      300
          tagtgaggag gcttttttgg aggcctaggc ttttgcaaaa agct                       344
          <![CDATA[<210>  38]]>
          <![CDATA[<211>  1252]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人造序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  人類β-肌動蛋白啟動子]]>
          <![CDATA[<400>  38]]>
          gttccatgtc cttatatgga ctcatctttg cctattgcga cacacactca atgaacacct       60
          actacgcgct gcaaagagcc ccgcaggcct gaggtgcccc cacctcacca ctcttcctat      120
          ttttgtgtaa aaatccagct tcttgtcacc acctccaagg agggggagga ggaggaaggc      180
          aggttcctct aggctgagcc gaatgcccct ctgtggtccc acgccactga tcgctgcatg      240
          cccaccacct gggtacacac agtctgtgat tcccggagca gaacggaccc tgcccacccg      300
          gtcttgtgtg ctactcagtg gacagaccca aggcaagaaa gggtgacaag gacagggtct      360
          tcccaggctg gctttgagtt cctagcaccg ccccgccccc aatcctctgt ggcacatgga      420
          gtcttggtcc ccagagtccc ccagcggcct ccagatggtc tgggagggca gttcagctgt      480
          ggctgcgcat agcagacata caacggacgg tgggcccaga cccaggctgt gtagacccag      540
          cccccccgcc ccgcagtgcc taggtcaccc actaacgccc caggcctggt cttggctggg      600
          cgtgactgtt accctcaaaa gcaggcagct ccagggtaaa aggtgccctg ccctgtagag      660
          cccaccttcc ttcccagggc tgcggctggg taggtttgta gccttcatca cgggccacct      720
          ccagccactg gaccgctggc ccctgccctg tcctggggag tgtggtcctg cgacttctaa      780
          gtggccgcaa gccacctgac tcccccaaca ccacactcta cctctcaagc ccaggtctct      840
          ccctagtgac ccacccagca catttagcta gctgagcccc acagccagag gtcctcaggc      900
          cctgctttca gggcagttgc tctgaagtcg gcaaggggga gtgactgcct ggccactcca      960
          tgccctccaa gagctccttc tgcaggagcg tacagaaccc agggccctgg cacccgtgca     1020
          gaccctggcc caccccacct gggcgctcag tgcccaagag atgtccacac ctaggatgtc     1080
          ccgcggtggg tggggggccc gagagacggg caggccgggg gcaggcctgg ccatgcgggg     1140
          ccgaaccggg cactgcccag cgtggggcgc gggggccacg gcgcgcgccc ccagcccccg     1200
          ggcccagcac cccaaggcgg ccaacgccaa aactctccct cctcctcttc ct             1252
          <![CDATA[<210>  39]]>
          <![CDATA[<211>  269]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人造序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  人類延長因子-1-α啟動子]]>
          <![CDATA[<400>  39]]>
          caatctcgct ctcgctcttt ttttttttcg caaaaggagg ggagaggggg taaaaaaatg       60
          ctgcactgtg cggcgaagcc ggtgagtgag cggcgcgggg ccaatcagcg tgcgccgttc      120
          cgaaagttgc cttttatggc tcgagcggcc gcggcggcgc cctataaaac ccagcggcgc      180
          gacgcgccac caccgccgag accgcgtccg ccccgcgagc acagagcctc gcctttgccg      240
          atccgccgcc cgtccacacc cgccgccag                                        269
          <![CDATA[<210>  40]]>
          <![CDATA[<211>  511]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人造序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  磷酸甘油酸激酶(PGK)啟動子]]>
          <![CDATA[<400>  40]]>
          ttctaccggg taggggaggc gcttttccca aggcagtctg gagcatgcgc tttagcagcc       60
          ccgctgggca cttggcgcta cacaagtggc ctctggcctc gcacacattc cacatccacc      120
          ggtaggcgcc aaccggctcc gttctttggt ggccccttcg cgccaccttc tactcctccc      180
          ctagtcagga agttcccccc cgccccgcag ctcgcgtcgt gcaggacgtg acaaatggaa      240
          gtagcacgtc tcactagtct cgtgcagatg gacagcaccg ctgagcaatg gaagcgggta      300
          ggcctttggg gcagcggcca atagcagctt tgctccttcg ctttctgggc tcagaggctg      360
          ggaaggggtg ggtccggggg cgggctcagg ggcgggctca ggggcggggc gggcgcccga      420
          aggtcctccg gaggcccggc attctgcacg cttcaaaagc gcacgtctgc cgcgctgttc      480
          tcctcttcct catctccggg cctttcgacc t                                     511
          <![CDATA[<210>  41]]>
          <![CDATA[<211>  1177]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人造序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  泛素C (UbiC)啟動子]]>
          <![CDATA[<400>  41]]>
          ggtgcagcgg cctccgcgcc gggttttggc gcctcccgcg ggcgcccccc tcctcacggc       60
          gagcgctgcc acgtcagacg aagggcgcag gagcgttcct gatccttccg cccggacgct      120
          caggacagcg gcccgctgct cataagactc ggccttagaa ccccagtatc agcagaagga      180
          cattttagga cgggacttgg gtgactctag ggcactggtt ttctttccag agagcggaac      240
          aggcgaggaa aagtagtccc ttctcggcga ttctgcggag ggatctccgt ggggcggtga      300
          acgccgatga ttatataagg acgcgccggg tgtggcacag ctagttccgt cgcagccggg      360
          atttgggtcg cggttcttgt ttgtggatcg ctgtgatcgt cacttggtga gttgcgggct      420
          gctgggctgg ccggggcttt cgtggccgcc gggccgctcg gtgggacgga agcgtgtgga      480
          gagaccgcca agggctgtag tctgggtccg cgagcaaggt tgccctgaac tgggggttgg      540
          ggggagcgca caaaatggcg gctgttcccg agtcttgaat ggaagacgct tgtaaggcgg      600
          gctgtgaggt cgttgaaaca aggtgggggg catggtgggc ggcaagaacc caaggtcttg      660
          aggccttcgc taatgcggga aagctcttat tcgggtgaga tgggctgggg caccatctgg      720
          ggaccctgac gtgaagtttg tcactgactg gagaactcgg gtttgtcgtc tggttgcggg      780
          ggcggcagtt atgcggtgcc gttgggcagt gcacccgtac ctttgggagc gcgcgcctcg      840
          tcgtgtcgtg acgtcacccg ttctgttggc ttataatgca gggtggggcc acctgccggt      900
          aggtgtgcgg taggcttttc tccgtcgcag gacgcagggt tcgggcctag ggtaggctct      960
          cctgaatcga caggcgccgg acctctggtg aggggaggga taagtgaggc gtcagtttct     1020
          ttggtcggtt ttatgtacct atcttcttaa gtagctgaag ctccggtttt gaactatgcg     1080
          ctcggggttg gcgagtgtgt tttgtgaagt tttttaggca ccttttgaaa tgtaatcatt     1140
          tgggtcaata tgtaattttc agtgttagac tagtaaa                              1177
          <![CDATA[<210>  42]]>
          <![CDATA[<211>  490]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人造序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  人類突觸蛋白1 (hSyn1)啟動子]]>
          <![CDATA[<400>  42]]>
          gatctaggcc tactagtctg cagagggccc tgcgtatgag tgcaagtggg ttttaggacc       60
          aggatgaggc ggggtggggg tgcctacctg acgaccgacc ccgacccact ggacaagcac      120
          ccaaccccca ttccccaaat tgcgcatccc ctatcagaga gggggagggg aaacaggatg      180
          cggcgaggcg cgtgcgcact gccagcttca gcaccgcgga cagtgccttc gcccccgcct      240
          ggcggcgcgc gccaccgccg cctcagcact gaaggcgcgc tgacgtcact cgccggtccc      300
          ccgcaaactc cccttcccgg ccaccttggt cgcgtccgcg ccgccgccgg cccagccgga      360
          ccgcaccacg cgaggcgcga gatagggggg cacgggcgcg accatctgcg ctgcggcgcc      420
          ggcgactcag cgctgcctca gtctgcggtg ggcagcggag gagtcgtgtc gtgcctgaga      480
          gcgcagtcga                                                             490
          <![CDATA[<210>  43]]>
          <![CDATA[<211>  236]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人造序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  例示性bGH聚腺苷酸序列]]>
          <![CDATA[<400>  43]]>
          tcgactagag ctcgctgatc agcctcgact gtgccttcta gttgccagcc atctgttgtt       60
          tgcccctccc ccgtgccttc cttgaccctg gaaggtgcca ctcccactgt cctttcctaa      120
          taaaatgagg aaattgcatc gcattgtctg agtaggtgtc attctattct ggggggtggg      180
          gtggggcagg acagcaaggg ggaggattgg gaagacaata gcaggcatgc tgggga          236
          <![CDATA[<210>  44]]>
          <![CDATA[<211>  161]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
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          acggtaaatg gcccgcctgg ctgaccgccc aacgaccccc gcccattgac gtcaataatg      300
          acgtatgttc ccatagtaac gccaataggg actttccatt gacgtcaatg ggtggactat      360
          ttacggtaaa ctgcccactt ggcagtacat caagtgtatc atatgccaag tacgccccct      420
          attgacgtca atgacggtaa atggcccgcc tggcattatg cccagtacat gaccttatgg      480
          gactttccta cttggcagta catctacgta ttagtcatcg ctattaccat ggtcgaggtg      540
          agccccacgt tctgcttcac tctccccatc tcccccccct ccccaccccc aattttgtat      600
          ttatttattt tttaattatt ttgtgcagcg atgggggcgg gggggggggg ggggcgcgcg      660
          ccaggcgggg cggggcgggg cgaggggcgg ggcggggcga ggcggagagg tgcggcggca      720
          gccaatcaga gcggcgcgct ccgaaagttt ccttttatgg cgaggcggcg gcggcggcgg      780
          ccctataaaa agcgaagcgc gcggcgggcg ggagtcgctg cgacgctgcc ttcgccccgt      840
          gccccgctcc gccgccgcct cgcgccgccc gccccggctc tgactgaccg cgttactccc      900
          acaggtgagc gggcgggacg gcccttctcc tccgggctgt aattagcgct tggtttaatg      960
          acggcttgtt tcttttctgt ggctgcgtga aagccttgag gggctccggg agctagagcc     1020
          tctgctaacc atgttcatgc cttcttcttt ttcctacagc tcctgggcaa cgtgctggtt     1080
          attgtgctgt ctcatcattt tggcaaagaa ttcctcgaag atctaggcct gcaggcggcc     1140
          gcatgctcca aaactcagca gtgcttctgg tgctggtgat cagtgcttct gcaacccatg     1200
          aggcggagca gaatgactct gtgagcccca ggaaatcccg agtggcggct caaaactcag     1260
          ctgaagtggt tcgttgcctc aacagtgctc tacaggtcgg ctgcggggct tttgcatgcc     1320
          tggaaaactc cacctgtgac acagatggga tgtatgacat ctgtaaatcc ttcttgtaca     1380
          gcgctgctaa atttgacact cagggaaaag cattcgtcaa agagagctta aaatgcatcg     1440
          ccaacggggt cacctccaag gtcttcctcg ccattcggag gtgctccact ttccaaagga     1500
          tgattgctga ggtgcaggaa gagtgctaca gcaagctgaa tgtgtgcagc atcgccaagc     1560
          ggaaccctga agccatcact gaggtcgtcc agctgcccaa tcacttctcc aacagatact     1620
          ataacagact tgtccgaagc ctgctggaat gtgatgaaga cacagtcagc acaatcagag     1680
          acagcctgat ggagaaaatt gggcctaaca tggccagcct cttccacatc ctgcagacag     1740
          accactgtgc ccaaacacac ccacgagctg acttcaacag gagacgcacc aatgagccgc     1800
          agaagctgaa agtcctcctc aggaacctcc gaggtgagga ggactctccc tcccacatca     1860
          aacgcacatc ccatgagagt gcataagtcg actagagctc gctgatcagc ctcgactgtg     1920
          ccttctagtt gccagccatc tgttgtttgc ccctcccccg tgccttcctt gaccctggaa     1980
          ggtgccactc ccactgtcct ttcctaataa aatgaggaaa ttgcatcgca ttgtctgagt     2040
          aggtgtcatt ctattctggg gggtggggtg gggcaggaca gcaaggggga ggattgggaa     2100
          gacaatagca ggcatgctgg ggagagatct gaggaacccc tagtgatgga gttggccact     2160
          ccctctctgc gcgctcgctc gctcactgag gccgcccggg caaagcccgg gcgtcgggcg     2220
          acctttggtc gcccggcctc agtgagcgag cgagcgcgca gagagggagt ggccaa         2276
          <![CDATA[<210>  54]]>
          <![CDATA[<211>  292]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人造序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  人類視紫質激酶1 (hRK1)啟動子]]>
          <![CDATA[<400>  54]]>
          gggccccaga agcctggtgg ttgtttgtcc ttctcagggg aaaagtgagg cggccccttg       60
          gaggaagggg ccgggcagaa tgatctaatc ggattccaag cagctcaggg gattgtcttt      120
          ttctagcacc ttcttgccac tcctaagcgt cctccgtgac cccggctggg atttagcctg      180
          gtgctgtgtc agccccggtc tcccaggggc ttcccagtgg tccccaggaa ccctcgacag      240
          ggcccggtct ctctcgtcca gcaagggcag ggacgggcca caggccaagg gc              292
          <![CDATA[<210>  55]]>
          <![CDATA[<211>  1317]]>
          <![CDATA[<212>  DNA]]>
          <![CDATA[<213>  人造序列]]>
          <![CDATA[<220>]]>
          <![CDATA[<223>  纖維母細胞特異性蛋白1 (FSP1/S100A4)啟動子]]>
          <![CDATA[<400>  55]]>
          ctacttctaa ccctcactgg gtttgtagcc caccctgaga ggttgacccg aattataact       60
          cccctatttc atgccatttc acctctaact ctccacccca acctggattc ttcattcctg      120
          acactcatcc caactttaaa tggcccctcc tgataccctc tccgaacctg agatctatcc      180
          gtgagccccc acgcctcact gccactccac tccatcacta cctcacccag gacctttccc      240
          actgacgttc ctgaggtggt cccagagcct cctttgggtg tgagcctgtt cccctccaga      300
          tccccccgcc ccgaccctga gccttacttg gcatggcaga cagtaccggg catggggatc      360
          cccaccccag tttttgtttc tgaatcttta tttttttaag agacaaggtc ctctgtgttg      420
          ctcaggctgg agagcagtgg cttgagcata gccaactgca gtctcgaact cctgggctca      480
          aatgatcctc ctgtctcagc ttcctgacta gctgggacta caggctacag ccatgctgcc      540
          cagctaatta aaaaaaaaaa ttgtttttcc tttttataga gacagaagtc tctctatgtt      600
          gcctaggctg gtcttgaact cctggcctca ggcgatcctc ccatctcccc cctagctttt      660
          gtgtcaccac atttccaggg caatctccca cctgtcaccc accaccccct gcatctcctt      720
          tcctaggtcc ccatgggact actccctgtc ccccatgctc caggcacagg ctgccccttc      780
          ctccacctct ctaaaactca ggctgagcta tgtacactgg gtggtgccca tctcatccag      840
          tcccctgcta gtaaccgcta gggcttaccc gttacccacg ggtgcccacc tgggaacagg      900
          aggcttggtt ccacggctgg gctggtggag ggtgctgtgg cacttaccgc atcagcccac      960
          agcaggaagg cagtatccgc tctcccctgt cccctgctat gggcagggcc tggctggggt     1020
          ataaataggt cagacctctg ggccgtcccc attcttcccc tctctacaac cctctctcct     1080
          cagcgcttct tctttcttgg tttggtgagt tgtgttggcc tgactggcat gcaaggggtg     1140
          tcagaggcca gggctgggga aggagaaggg gaggctggtg ggggccagat gtgctaaaga     1200
          gatccagatg tgagattctg atgtggaact ctgggtggat tgtgtgcgtg ggtgtgcatg     1260
          gcacacacac acatgcacgt aagacggagg aaaaaacaaa cagaaaagtg agcaagt        1317

Claims

一種包含AAV衣殼及編碼可操作地連接於啟動子之錫鈣素-1(stanniocalcin-1) (STC-1)多肽之核酸的重組腺相關病毒(rAAV)之用途，其用於製造供降低其患者眼睛中之眼內壓(IOP)之治療用之藥物，其中該治療包含向該患者眼睛之前房投與治療有效量之該rAAV。
如請求項1之用途，其中該rAAV係前房內投與。
如請求項1至2中任一項之用途，其中該STC-1多肽包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 14之胺基酸序列或與其至少80%一致之胺基酸序列。
如請求項1至2中任一項之用途，其中該編碼STC-1之核酸包含選自由以下組成之群的核酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 13之核酸序列或與其至少80%一致之核酸序列。
如請求項1至4中任一項之用途，其中該啟動子為持續性活化之啟動子。
如請求項5之用途，其中該啟動子為衍生自選自由以下組成之群的核酸序列之雞β-肌動蛋白啟動子：SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 34或SEQ ID NO: 35之核酸序列或與其至少80%一致之核酸序列。
如請求項5之用途，其中該啟動子選自巨細胞病毒(CMV)啟動子、SV40啟動子、人類β-肌動蛋白啟動子、人類延長因子-1-α (hEF-1α)啟動子、磷酸甘油酸激酶(PGK)啟動子或泛素C (UbiC)啟動子。
如請求項1至4中任一項之用途，其中該啟動子為細胞特異性啟動子。
如請求項8之用途，其中該細胞特異性啟動子為人類突觸蛋白1 (hSYN1)啟動子。
如請求項9之用途，其中該hSYN1啟動子衍生自SEQ ID NO:42之核酸序列或與其至少80%一致之核酸。
如請求項8之用途，其中該細胞特異性啟動子選自人類視紫質(Rho)啟動子、人類視紫質激酶1 (hRK1)啟動子、人類光受器間類視黃素結合蛋白/視黃醇結合蛋白3 (IRBP/hIRBP241)啟動子、人類紅視蛋白(PR2.1/CHOPS2053)啟動子、融合至視錐轉導蛋白α啟動子之hIRBP強化子(IRBP/GNAT2)啟動子、人類卵黃狀黃斑變性/斑萎蛋白1(human vitelliform macular dystrophy/bestrophin 1)(VMD2/BEST1)啟動子、VE-鈣黏素/鈣黏素5(Cadherin 5) (CDH5)/CD144啟動子、Thy1啟動子、神經纖毛重鏈(NEFH)啟動子、視網膜色素上皮組織65 (RPE65)啟動子、浦金埃氏細胞(Purkinje cell)蛋白2 (PCP2)啟動子、G蛋白次單元γ轉導蛋白2 (GNGT2)啟動子、磷酸二酯酶6H (PDE6H)啟動子、類成對同源域3(Paired Like Homeodomain 3) (PITX3)啟動子、密連蛋白5(claudin 5)(CLDN5)啟動子、核受體第二亞族E組成員1(NR2E1)啟動子、配對盒蛋白6 (PAX6)啟動子、770En_454P (hGRM6)或纖維母細胞特異性蛋白1 (FLP1/S100A4)啟動子。
如請求項1至2中任一項之用途，其中該核酸選自SEQ ID NO: 51或SEQ ID NO: 53或與其至少80%一致之核酸序列。
如請求項1至12中任一項之用途，其中該AAV衣殼衍生自AAV2衣殼。
如請求項13之用途，其中該AAV2衣殼包含該衣殼蛋白之表面上一或多個酪胺酸(Y)成為苯丙胺酸(F)突變。
如請求項14之用途，其中該衣殼蛋白之表面上一或多個酪胺酸成為苯丙胺酸突變選自其衣殼蛋白中之Y444F突變、Y730F突變、Y500F、Y272F、Y447F突變、Y733F突變或Y733F突變。
如請求項13之用途，其中該AAV2衣殼在以下胺基酸處包含該衣殼蛋白之表面上之酪胺酸(Y)成為苯丙胺酸(F)突變：Y444F、Y500F及Y730F。
如請求項1至15中任一項之用途，其中該rAAV係投與兩次或超過兩次。
如請求項16之用途，其中該rAAV係一週投與一次。
如請求項1至18中任一項之用途，其中該眼部疾患為青光眼視神經病變(GON)或青光眼。
如請求項19之用途，其中該青光眼為原發性青光眼。
如請求項20之用途，其中該原發性青光眼為開角型青光眼、閉角型青光眼或先天性青光眼。
如請求項19之用途，其中該青光眼為正常眼壓青光眼(NTG)。
如請求項19之用途，其中該青光眼為繼發性青光眼。
如請求項23之用途，其中該繼發性青光眼為新生血管性青光眼、色素性青光眼、剝脫性青光眼或葡萄膜炎性青光眼。
如請求項1至18中任一項之用途，其中該眼部疾患為輻射性視神經盤病變。
一種包含AAV衣殼及編碼可操作地連接於啟動子之錫鈣素-1 (STC-1)多肽之核酸的重組腺相關病毒(rAAV)之用途，其用於製造供降低其患者眼睛中之眼內壓(IOP)之治療用之藥物，其中該治療包含向該患者眼睛之結膜下空間投與治療有效量之該rAAV。
如請求項26之用途，其中該STC-1多肽包含選自由以下組成之群的胺基酸序列：SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 14之胺基酸序列或與其至少80%一致之胺基酸序列。
如請求項26之用途，其中該編碼STC-1之核酸包含選自由以下組成之群的核酸序列：SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 13之核酸序列或與其至少80%一致之核酸序列。
如請求項26至28中任一項之用途，其中該啟動子為持續性活化之啟動子。
如請求項29之用途，其中該持續性活化之啟動子為雞β-肌動蛋白啟動子。
如請求項30之用途，其中該雞β-肌動蛋白啟動子衍生自選自由以下組成之群的核酸序列：SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 34或SEQ ID NO: 35之核酸序列或與其至少80%一致之核酸序列。
如請求項26至28中任一項之用途，其中該啟動子選自巨細胞病毒(CMV)啟動子、SV40啟動子、人類β-肌動蛋白啟動子、人類延長因子-1-α (hEF-1α)啟動子、磷酸甘油酸激酶(PGK)啟動子或泛素C (UbiC)啟動子。
如請求項26至28中任一項之用途，其中該啟動子為細胞特異性啟動子。
如請求項33之用途，其中該細胞特異性啟動子為人類突觸蛋白1 (hSYN1)啟動子。
如請求項34之用途，其中該hSYN1啟動子衍生自SEQ ID NO:42之核酸序列或與其至少80%一致之核酸。
如請求項33之用途，其中該細胞特異性啟動子選自人類視紫質(Rho)啟動子、人類視紫質激酶1 (hRK1)啟動子、人類光受器間類視黃素結合蛋白/視黃醇結合蛋白3 (IRBP/hIRBP241)啟動子、人類紅視蛋白(PR2.1/CHOPS2053)啟動子、融合至視錐轉導蛋白α啟動子之hIRBP強化子(IRBP/GNAT2)啟動子、人類卵黃狀黃斑變性/斑萎蛋白1 (VMD2/BEST1)啟動子、VE-鈣黏素/鈣黏素5 (CDH5)/CD144啟動子、Thy1啟動子、神經纖毛重鏈(NEFH)啟動子、視網膜色素上皮組織65 (RPE65)啟動子、浦金埃氏細胞蛋白2 (PCP2)啟動子、G蛋白次單元γ轉導蛋白2 (GNGT2)啟動子、磷酸二酯酶6H (PDE6H)啟動子、類成對同源域3 (PITX3)啟動子、密連蛋白5 (CLDN5)啟動子、核受體第二亞族E組成員1(NR2E1)啟動子、配對盒蛋白6 (PAX6)啟動子、770En_454P (hGRM6)或纖維母細胞特異性蛋白1 (FLP1/S100A4)啟動子。
如請求項26之用途，其中該核酸選自SEQ ID NO: 51或SEQ ID NO: 53或與其至少90%一致之核酸序列。
如請求項26至37中任一項之用途，其中該AAV衣殼衍生自AAV2衣殼。
如請求項38之用途，其中該AAV2衣殼包含該衣殼蛋白之表面上一或多個酪胺酸(Y)成為苯丙胺酸(F)突變。
如請求項39之用途，其中該衣殼蛋白之表面上一或多個酪胺酸成為苯丙胺酸突變選自其衣殼蛋白中之Y444F突變、Y730F突變、Y500F、Y272F、Y447F突變、Y733F突變或Y733F突變。
如請求項39之用途，其中該AAV2衣殼在以下胺基酸處包含該衣殼蛋白之表面上之酪胺酸(Y)成為苯丙胺酸(F)突變：Y444F、Y500F及Y730F。
如請求項26至41中任一項之用途，其中該rAAV係投與兩次或超過兩次。
如請求項26至41之用途，其中該rAAV係一週投與一次。
如請求項26至41之用途，其中該rAAV係相隔至少30天投與。
如請求項26至44中任一項之用途，其中該眼部疾患為青光眼視神經病變(GON)或青光眼。
如請求項45之用途，其中該青光眼為原發性青光眼。
如請求項46之用途，其中該原發性青光眼為開角型青光眼、正常眼壓青光眼、閉角型青光眼或先天性青光眼。
如請求項45之用途，其中該青光眼為正常眼壓青光眼(NTG)。
如請求項45之用途，其中該青光眼為繼發性青光眼。
如請求項49之用途，其中該繼發性青光眼為新生血管性青光眼、色素性青光眼、剝脫性青光眼或葡萄膜炎性青光眼。
一種包含AAV衣殼及編碼可操作地連接於啟動子之錫鈣素-1 (STC-1)多肽之核酸的重組腺相關病毒(rAAV)之用途，其用於製造供降低其患者眼睛中之眼內壓(IOP)之治療用之藥物，其中該治療包含向該患者眼睛投與治療有效量之該rAAV至少兩次或超過兩次。
如請求項51之用途，其中向該眼睛投與該rAAV2包含視網膜下注射。
如請求項51之用途，其中向該眼睛投與該rAAV2包含結膜下注射。
如請求項51之用途，其中向該眼睛投與該rAAV2包含前房內注射。
如請求項51之用途，其中向該眼睛投與該rAAV2包含玻璃體內注射。
如請求項51至55中任一項之用途，其中該STC-1多肽包含SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 14之胺基酸序列或與其至少80%一致之胺基酸序列。
如請求項51至55中任一項之用途，其中該編碼STC-1之核酸包含SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 13或與其至少80%一致之核酸序列。
如請求項51至57中任一項之用途，其中該啟動子為持續性活化之啟動子。
如請求項58之用途，其中該啟動子為雞β-肌動蛋白啟動子。
如請求項59之用途，其中該雞β-肌動蛋白啟動子衍生自SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 34或SEQ ID NO: 35之核酸序列或與其至少90%一致之核酸序列。
如請求項58之用途，其中該啟動子選自巨細胞病毒(CMV)啟動子、SV40啟動子、人類β-肌動蛋白啟動子、人類延長因子-1-α (hEF-1α)啟動子、磷酸甘油酸激酶(PGK)啟動子或泛素C (UbiC)啟動子。
如請求項51至57中任一項之用途，其中該啟動子為細胞特異性啟動子。
如請求項62之用途，其中該細胞特異性啟動子為人類突觸蛋白1 (hSYN1)啟動子。
如請求項63之用途，其中該hSYN1啟動子衍生自SEQ ID NO:42之核酸序列或與其至少90%一致之核酸。
如請求項62之用途，其中該細胞特異性啟動子選自人類視紫質(Rho)啟動子、人類視紫質激酶1 (hRK1)啟動子、人類光受器間類視黃素結合蛋白/視黃醇結合蛋白3 (IRBP/hIRBP241)啟動子、人類紅視蛋白(PR2.1/CHOPS2053)啟動子、融合至視錐轉導蛋白α啟動子之hIRBP強化子(IRBP/GNAT2)啟動子、人類卵黃狀黃斑變性/斑萎蛋白1 (VMD2/BEST1)啟動子、VE-鈣黏素/鈣黏素5 (CDH5)/CD144啟動子、Thy1啟動子、神經纖毛重鏈(NEFH)啟動子、視網膜色素上皮組織65 (RPE65)啟動子、浦金埃氏細胞蛋白2 (PCP2)啟動子、G蛋白次單元γ轉導蛋白2 (GNGT2)啟動子、磷酸二酯酶6H (PDE6H)啟動子、類成對同源域3 (PITX3)啟動子、密連蛋白5 (CLDN5)啟動子、核受體第二亞族E組成員1(NR2E1)啟動子、配對盒蛋白6 (PAX6)啟動子、770En_454P (hGRM6)或纖維母細胞特異性蛋白1 (FLP1/S100A4)啟動子。
如請求項51之用途，其中該核酸選自SEQ ID NO: 51或SEQ ID NO: 53或與其至少90%一致之核酸序列。
如請求項51至66中任一項之用途，其中該AAV2衣殼包含該衣殼蛋白之表面上一或多個酪胺酸(Y)成為苯丙胺酸(F)突變。
如請求項67之用途，其中該衣殼蛋白之表面上一或多個酪胺酸成為苯丙胺酸突變選自其衣殼蛋白中之Y444F突變、Y730F突變、Y500F、Y272F、Y447F突變、Y733F突變或Y733F突變。
如請求項67之用途，其中該AAV2衣殼在以下胺基酸處包含該衣殼蛋白之表面上之酪胺酸(Y)成為苯丙胺酸(F)突變：Y444F、Y500F及Y730F。
如請求項51至69中任一項之用途，其中該rAAV係投與三次或超過三次。
如請求項51至69中任一項之用途，其中該rAAV係投與四次或超過四次。
如請求項51至69中任一項之用途，其中該rAAV係一週投與一次。
如請求項51至69中任一項之用途，其中該rAAV係相隔至少30天投與。
如請求項51至69中任一項之用途，其中該眼部疾患為青光眼視神經病變(GON)或青光眼。
如請求項74之用途，其中該青光眼為原發性青光眼。
如請求項75之用途，其中該原發性青光眼為開角型青光眼、正常眼壓青光眼、閉角型青光眼或先天性青光眼。
如請求項74之用途，其中該青光眼為正常眼壓青光眼(NTG)。
如請求項74之用途，其中該青光眼為繼發性青光眼。
如請求項78之用途，其中該繼發性青光眼為新生血管性青光眼、色素性青光眼、剝脫性青光眼或葡萄膜炎性青光眼。
如請求項51至69中任一項之用途，其中該眼部疾患為輻射性視神經盤病變。
一種用於治療特徵在於患者眼睛中眼內壓提高之眼部疾患之rAAV，該rAAV包含AAV2血清型衣殼及編碼可操作地連接於持續性活化之啟動子序列之STC-1多肽之核酸。
如請求項81之rAAV，其中該STC-1多肽包含SEQ ID NO: 2、SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO: 6、SEQ ID NO: 14之胺基酸序列或與其至少80%一致之胺基酸序列。
如請求項81之rAAV，其中該編碼STC-1之核酸包含SEQ ID NO: 1、SEQ ID NO: 3、SEQ ID NO: 5、SEQ ID NO: 13或與其至少80%一致之核酸序列。
如請求項81至83中任一項之用途，其中該啟動子為持續性活化之啟動子。
如請求項84之rAAV，其中該啟動子為雞β-肌動蛋白啟動子。
如請求項85之rAAV，其中該雞β-肌動蛋白啟動子衍生自SEQ ID NO: 33、SEQ ID NO: 34或SEQ ID NO: 35之核酸序列或與其至少80%一致之核酸序列。
如請求項81之rAAV，其中該啟動子選自巨細胞病毒(CMV)啟動子、SV40啟動子、人類β-肌動蛋白啟動子、人類延長因子-1-α (hEF-1α)啟動子、磷酸甘油酸激酶(PGK)啟動子或泛素C (UbiC)啟動子。
如請求項81之rAAV，其中該核酸為SEQ ID NO: 52或SEQ ID NO: 53或與其至少80%一致之核酸序列。
如請求項81至88之rAAV，其中該AAV2衣殼包含該衣殼蛋白之表面上一或多個酪胺酸(Y)成為苯丙胺酸(F)突變。
如請求項89之rAAV，其中該衣殼蛋白之表面上一或多個酪胺酸成為苯丙胺酸突變選自其衣殼蛋白中之Y444F突變、Y730F突變、Y500F、Y272F、Y447F突變、Y733F突變或Y733F突變。
如請求項89之rAAV，其中該AAV2衣殼在以下胺基酸處包含該衣殼蛋白之表面上之酪胺酸(Y)成為苯丙胺酸(F)突變：Y444F、Y500F及Y730F。
如請求項1至80中任一項之用途，其中該患者對拉坦前列素(latanoprost)沒有反應。
如請求項1至80及92中任一項之用途，其中該患者為人類。