KR20220070254A - Sting (인터페론 유전자의 자극인자)의 폴리헤테로시클릭 조정제 - Google Patents

Sting (인터페론 유전자의 자극인자)의 폴리헤테로시클릭 조정제 Download PDF

Info

Publication number
KR20220070254A
KR20220070254A KR1020227013541A KR20227013541A KR20220070254A KR 20220070254 A KR20220070254 A KR 20220070254A KR 1020227013541 A KR1020227013541 A KR 1020227013541A KR 20227013541 A KR20227013541 A KR 20227013541A KR 20220070254 A KR20220070254 A KR 20220070254A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
methyl
pharmaceutically acceptable
compound
cancer
acceptable salt
Prior art date
Application number
KR1020227013541A
Other languages
English (en)
Inventor
앤드루 펜섬
이썬 로런스 피셔
케탄 에스. 가지왈라
찬 우 허
메흐란 잘라이
인드라완 제임스 매캘핀
라이언 팻맨
유진 위안진 루이
투안 퐁 트란
마틴 제임스 위시즈
레이 장
다후이 저우
Original Assignee
화이자 인코포레이티드
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 화이자 인코포레이티드 filed Critical 화이자 인코포레이티드
Publication of KR20220070254A publication Critical patent/KR20220070254A/ko

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing three or more hetero rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4196—1,2,4-Triazoles
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/42—Oxazoles
    • A61K31/424—Oxazoles condensed with heterocyclic ring systems, e.g. clavulanic acid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A61K31/427—Thiazoles not condensed and containing further heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/4353—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems
    • A61K31/437—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom ortho- or peri-condensed with heterocyclic ring systems the heterocyclic ring system containing a five-membered ring having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. indolizine, beta-carboline
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/435—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom
    • A61K31/44—Non condensed pyridines; Hydrogenated derivatives thereof
    • A61K31/445—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine
    • A61K31/4523—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems
    • A61K31/454—Non condensed piperidines, e.g. piperocaine containing further heterocyclic ring systems containing a five-membered ring with nitrogen as a ring hetero atom, e.g. pimozide, domperidone
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5377—1,4-Oxazines, e.g. morpholine not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. timolol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A61K31/5386—1,4-Oxazines, e.g. morpholine spiro-condensed or forming part of bridged ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
    • A61K38/21—Interferons [IFN]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/3955—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against proteinaceous materials, e.g. enzymes, hormones, lymphokines
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/14—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D413/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D413/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D451/00—Heterocyclic compounds containing 8-azabicyclo [3.2.1] octane, 9-azabicyclo [3.3.1] nonane, or 3-oxa-9-azatricyclo [3.3.1.0<2,4>] nonane ring systems, e.g. tropane or granatane alkaloids, scopolamine; Cyclic acetals thereof
    • C07D451/02—Heterocyclic compounds containing 8-azabicyclo [3.2.1] octane, 9-azabicyclo [3.3.1] nonane, or 3-oxa-9-azatricyclo [3.3.1.0<2,4>] nonane ring systems, e.g. tropane or granatane alkaloids, scopolamine; Cyclic acetals thereof containing not further condensed 8-azabicyclo [3.2.1] octane or 3-oxa-9-azatricyclo [3.3.1.0<2,4>] nonane ring systems, e.g. tropane; Cyclic acetals thereof
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D455/00—Heterocyclic compounds containing quinolizine ring systems, e.g. emetine alkaloids, protoberberine; Alkylenedioxy derivatives of dibenzo [a, g] quinolizines, e.g. berberine
    • C07D455/02—Heterocyclic compounds containing quinolizine ring systems, e.g. emetine alkaloids, protoberberine; Alkylenedioxy derivatives of dibenzo [a, g] quinolizines, e.g. berberine containing not further condensed quinolizine ring systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/06—Peri-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/08—Bridged systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D491/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00
    • C07D491/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed ring system both one or more rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms and one or more rings having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by groups C07D451/00 - C07D459/00, C07D463/00, C07D477/00 or C07D489/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D491/10—Spiro-condensed systems
    • C07D491/107—Spiro-condensed systems with only one oxygen atom as ring hetero atom in the oxygen-containing ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D498/04—Ortho-condensed systems
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D498/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D498/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and oxygen atoms as the only ring hetero atoms in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D498/08—Bridged systems

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
  • Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Plural Heterocyclic Compounds (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Abstract

하기 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 이들 화합물의 제조 방법, 이들 화합물을 함유하는 조성물, 및 이들 화합물의 용도:

Description

STING (인터페론 유전자의 자극인자)의 폴리헤테로시클릭 조정제
본 발명은 포유동물에서의 질환 및 상태, 예컨대 염증성 질환, 알레르기성 및 자가면역 질환, 감염성 질환, 및 비정상적 세포 성장, 예컨대 암의 치료에서 및 백신 보조제로서 유용한 STING (Stimulator of Interferon Genes: 인터페론 유전자의 자극인자)의 추가의 신규 활성화제에 관한 것이다. 본 발명은 또한 포유동물, 특히 인간에서의 비정상적 세포 성장의 치료에서 이러한 화합물을 사용하는 방법, 및 이러한 화합물의 제약 조성물에 관한 것이다.
선천성 면역계는 병원체로부터의 리간드 뿐만 아니라 손상 연관된 분자 패턴의 검출 시 패턴 인식 수용체 (PRR)에 의해 개시되는 제1 방어선이다. 이중 가닥 DNA 및 시클릭 디뉴클레오티드 (CDN)로 불리는 특유한 핵산의 센서를 포함하는, 점점 더 많은 수의 이들 수용체가 확인되었다. PRR의 활성화는, 병원체 복제를 억제하고 적응 면역을 촉진하는 제1형 인터페론 (IFN 및 INF), 염증유발 시토카인 및 케모카인을 포함한 염증 반응에 수반되는 유전자의 상향 조절을 유발한다.
TMEM 173으로도 공지된 어댑터 단백질 STING는 시토졸 핵산에 반응하는 선천성 면역 센싱 경로에서의 중심 신호전달 분자로서 확인되었다. STING의 활성화는 인터페론 베타 (INF-β) 및 다른 시토카인의 유도로 이어지는 IRF3 및 NFκB 경로의 상향-조절을 유발한다. STING는 병원체 또는 숙주 기원의 시토졸 DNA에 대한 반응, 및 때때로 제2 메신저로 지칭되는 CDN에 대한 반응에 중요하다. [G.N. Barber, "Sting: infection, inflammation and cancer," Nat. Rev. Immun., 2015, 15, pp760].
CDN은 원핵 세포에서 수많은 반응을 제어하는 것을 담당하는 박테리아 메신저로서 최초로 확인되었다. 박테리아 CDN, 예컨대 c-di-GMP는 2개의 3',5' 포스포디에스테르 연결을 특징으로 하는 대칭 분자이다. 박테리아 CDN에 의한 STING의 직접 활성화는 최근에 X선 결정학을 통해 확인되었다 (Burdette D. L. and Vance R. E., Nature Immunology, 2013: 14 19-26). 박테리아 CDN은 결과적으로 잠재적 백신 보조제로서 관심을 끌었다 (Libanova R. et al., Microbial Biotechnology 2012: 5, 168-176). 보다 최근에, 시토졸 DNA에 대한 반응은 시클릭 구아닌 아데닌 신타제 (cGAS)로 불리는 효소에 의한 내인성 CDN의 생성을 수반하며, STING에 결합하고 이를 활성화시키는 시클릭 구아닌 아데닌 모노포스페이트 (cGAMP)로서 확인된 신규 포유동물 CDN 신호전달 분자를 생산하는 것으로 밝혀졌다. cGAMP와 STING의 상호작용은 또한 X선 결정학에 의해 입증되었다. 박테리아 CDN과 달리, cGAMP는 그의 혼합된 2',5' 및 3',5' 포스포디에스테르 연결을 특징으로 하는 비대칭 분자이다. 박테리아 CDN과 같이, cGAMP는 STING를 활성화시켜 제1형 인터페론 (제1형 INF)을 유도한다. 침입 병원체에 반응하는 제1형 INF의 역할은 널리 확립되어 있다. 재조합 인터페론 알파 (IFNα)는 최초로 승인된 생물학적 치료제였으며, 바이러스 감염 및 암에서 중요한 요법이 되었다. INF는 또한 면역계의 세포에 작용하는 면역 반응의 강력한 조절제인 것으로 알려져 있다.
CDN을 제조하는데 사용되는 합성 캠페인과 달리, 하기에 예시된 화합물은 일반적인 의미에서 합성적으로 보다 더 접근가능하다. 추가적으로, 이러한 유형의 화합물은 STING 활성화제의 CDN 부류와 비교하여 세포 투과성에 유의한 개선을 가져온다.
다양한 생물학적 과정을 조절하는데 있어서의 그의 역할을 고려하면, STING는 소분자를 이용한 조정을 위한 지속적으로 매력적인 표적이다. 그럼에도 불구하고, 지금까지, 효과적인 STING 활성화제가 개발되거나 임상에 도입된 경우는 거의 없었다. STING에 결합하는 추가의 화합물을 찾아야 할 필요가 남아있다. STING를 활성화시키는 추가의 화합물을 찾아야 할 필요가 남아있다. 추가로, STING에 결합하고/거나 그를 활성화시키고 치료제로서 유용할 수 있는 화합물에 대한 필요가 남아있다.
제1형 INF 및 다른 시토카인의 활성화를 포함한 선천성 면역 반응을 자극할 수 있는 소분자 화합물의 투여는 바이러스 감염 및 암을 비롯한 인간 질환의 치료 및 예방을 위한 중요한 전략이 될 수 있다. 이러한 유형의 면역조절 전략은 포유동물에서의 질환 및 상태, 예컨대 염증성 질환, 알레르기성 및 자가면역 질환, 감염성 질환, 및 비정상적 세포 성장, 예컨대 암의 치료에서 및 백신 보조제로서 유용할 수 있는 화합물을 확인할 수 있는 잠재력을 갖는다.
본 발명의 특정 화합물은 STING에 결합하고/거나, STING를 활성화시키고/거나, 인간 수지상 세포 (DC) 및/또는 말초 혈액 단핵구 (PBMC)와의 인큐베이션 시 제1형 INF 및/또는 다른 시토카인 및/또는 공동-자극 인자를 유도하는 것으로 밝혀졌다. 인간 INF를 유도하는 화합물은 다양한 장애의 치료, 예를 들어 알레르기성 질환 및 다른 염증성 상태의 치료에 유용할 수 있다. 본 발명의 특정 화합물은 STING에 결합할 수 있지만 길항제로서 작용할 수 있고, 이들은 다양한 자가면역 질환의 치료에 유용할 수 있다.
STING를 활성화제 또는 억제제에 의해 표적화하는 것은, 제1형 INF 경로의 조정이 유익한 질환 및 상태, 예컨대 염증성 질환, 알레르기성 및 자가면역 질환, 감염성 질환, 암의 치료에서 및 백신 보조제로서 유망한 접근법으로 고려될 수 있다.
하기 기재된 본 발명의 소분자 화합물의 각각의 실시양태는 그것이 조합되는 실시양태와 모순되지 않는 본원에 기재된 본 발명의 화합물의 임의의 다른 실시양태와 조합될 수 있다. 또한, 하기 본 발명을 기재하는 실시양태 각각은 본 발명의 화합물의 제약상 허용되는 염을 그의 범주 내에 고려한다. 따라서, 어구 "또는 그의 제약상 허용되는 염"은 본원에 기재된 모든 화합물의 기재에 내포되어 있다.
본 발명은 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공되는 실시양태를 포함한다:
Figure pct00001
여기서
고리 내의 각각의
Figure pct00002
은 독립적으로 5-원 헤테로방향족 고리 내의 2개의 공액 이중 결합 및 6-원 방향족 또는 헤테로방향족 고리 내의 3개의 공액 이중 결합을 나타내고;
W1은 CR11 및 N으로부터 선택되고;
X1은 CR1, C(R1)2, N, NR1, O 및 S로부터 선택되고;
X2는 CR2, C(R2)2, N, NR2, O 및 S로부터 선택되고;
X3은 CR3, C(R3)2, N, NR3, O 및 S로부터 선택되고;
여기서 X1, X2 및 X3 중 2 또는 3개는 독립적으로 N, NR1, NR2, NR3, O 및 S로부터 선택되고;
여기서 X1, X2 및 X3 중 적어도 1개는 N, NR1, NR2 및 NR3으로부터 선택되고;
Y1은 N, NR4, O, S, CR4 및 C(R4)2로부터 선택되고;
Y2는 N, NR5, O, S, CR5 및 C(R5)2로부터 선택되고;
Y3은 N, NR6, O, S, CR6 및 C(R6)2로부터 선택되고;
Y4는 C 및 N으로부터 선택되고;
Y5는 C 및 N으로부터 선택되고;
여기서 Y1, Y2 및 Y3 중 적어도 1개 및 최대 2개는 독립적으로 N, NR4, NR5 및 NR6으로부터 선택되고;
Y4 또는 Y5 중 1개가 N인 경우에, Y4 또는 Y5 중 다른 1개는 C이고;
Z1은 C 및 N으로부터 선택되고;
Z2는 N, NR8 및 CR8로부터 선택되고;
Z3은 N, NR9 및 CR9로부터 선택되고;
Z4는 N, NR10 및 CR10으로부터 선택되고;
Z5는 N, NR7 및 CR7로부터 선택되고;
여기서 Z1, Z2, Z3, Z4 및 Z5 중 2 또는 3개는 독립적으로 N, NR7, NR8, NR9, 및 NR10으로부터 선택되고;
각각의 R1은 독립적으로 H, C1-C8 알킬, C1-C8 알킬렌-NRR 및 C1-C8 알킬렌-C(O)OR로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 R2는 독립적으로 H, C1-C8 알킬, C1-C8 알킬렌-NRR, C1-C8 알킬렌-C(O)OR, C1-C8 알킬렌-OR 및 C1-C8 알킬렌-O-P(O)(OH)2로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 R3은 독립적으로 H, C1-C8 알킬, C1-C8 알킬렌-NRR, C1-C8 알킬렌-C(O)OR 및 C1-C8 알킬렌-O-P(O)(OH)2로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 R4는 독립적으로 H, -OR, -NRR, 1 또는 2개의 -OR로 임의로 치환된 C1-C8 알킬, C1-C8 알킬렌-NRR, -C(O)OR, C1-C8 알킬렌-C(O)OR, 3-10원 헤테로사이클, 1개의 3-10원 헤테로사이클로 임의로 치환된 C1-C8 알킬렌-3-10원 헤테로사이클, (C3-C10)-시클로알킬, 및 C1-C8 알킬렌-(C3-C10)-시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 R5는 독립적으로 H, OR, C1-C8 알킬, -NRR, C1-C8 알킬렌-NRR, -C(O)OR, C1-C8 알킬렌-C(O)OR, 3-10원 헤테로사이클, 1개의 3-10원 헤테로사이클로 임의로 치환된 C1-C8 알킬렌-3-10원 헤테로사이클, 및 C1-C8 알킬렌-OR로 이루어진 군으로부터 선택되고;
각각의 R6은 H이고;
R7은 H, 할로, 히드록시 또는 NH2로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R8은 H, 1 또는 2개의 -NRR 또는 -OR로 임의로 치환된 C1-C8 알킬, C1-C8 알킬렌-C(O)OR 및 C1-C8 알킬렌-SO2R로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R9는 H이고;
R10은 H, 1 또는 2개의 -OR로 임의로 치환된 C1-C8 알킬, 및 할로로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R11은 H, C1-C8 알킬, -OR 및 할로로 이루어진 군으로부터 선택되고;
R12는 -C(O)N(R)2 또는 -C(O)NHR이고;
R13은 H이고;
각각의 R은 독립적으로 H 또는 C1-C8 알킬, 또는 C1-C8 할로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 2개의 R은 연결되어 이들이 결합되어 있는 원자 또는 원자들과 함께 -(C3-C10) 시클로알킬 또는 3-10원 헤테로사이클을 형성하고, 여기서 상기 3-10원 헤테로사이클은 N, O 및 S로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 원자를 함유하고;
여기서, 2개의 R이 연결되어 이들이 결합되어 있는 원자 또는 원자들과 함께 -(C3-C10) 시클로알킬 또는 3-10원 헤테로사이클을 형성하는 경우에, 상기 -(C3-C10) 시클로알킬 또는 3-10원 헤테로사이클은 C1-C8 알킬, 히드록시, C1-C8 알콕시, -(C3-C10) 시클로알킬, 3-10원 헤테로사이클, 할로 및 시아노로부터 각각 독립적으로 선택된 1개 이상의 치환기로 임의로 치환된다.
본 발명은 하기 화학식 (II)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공되는 실시양태를 포함한다:
Figure pct00003
여기서
고리 내의 각각의
Figure pct00004
은 독립적으로 5-원 헤테로방향족 고리 내의 2개의 공액 이중 결합 및 6-원 방향족 또는 헤테로방향족 고리 내의 3개의 공액 이중 결합을 나타내고;
여기서 W1; X1; X2; X3; Y1; Y2; Y3; Y4; Y5; R1; R2; R3; R4; R5; R6; R7; R8; R10; R11; R12; R13 및 R은 화학식 (I)에 대해 정의된 바와 같다.
본 발명은 하기 화학식 (III)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공되는 실시양태를 포함한다:
Figure pct00005
여기서
고리 내의 각각의
Figure pct00006
은 독립적으로 5-원 헤테로방향족 고리 내의 2개의 공액 이중 결합 및 6-원 방향족 또는 헤테로방향족 고리 내의 3개의 공액 이중 결합을 나타내고;
여기서 X1; X2; X3; R1; R2; R3; R4; R7; R8; R10; R11; R12; R13 및 R은 화학식 (I)에 대해 정의된 바와 같다.
본 발명은 하기 화학식 (IIIA)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공되는 실시양태를 포함한다:
Figure pct00007
여기서 R2; R4; R7; R8; R10; R11; R12; R13 및 R은 화학식 (I)에 대해 정의된 바와 같다.
본 발명은 하기 화학식 (IIIB)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공되는 실시양태를 포함한다:
Figure pct00008
여기서 R3; R4; R7; R8; R10; R11; R12; R13 및 R은 화학식 (I)에 대해 정의된 바와 같다.
본 발명은 하기 화학식 (IIIC)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공되는 실시양태를 포함한다:
Figure pct00009
여기서 R2; R3; R4; R7; R8; R10; R11; R12; R13 및 R은 화학식 (I)에 대해 정의된 바와 같다.
본 발명은 하기 화학식 (IIID)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공되는 실시양태를 포함한다:
Figure pct00010
여기서 R3; R4; R7; R8; R10; R11; R12; R13 및 R은 화학식 (I)에 대해 정의된 바와 같다.
본 발명은 하기 화학식 (IV)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공되는 실시양태를 포함한다:
Figure pct00011
여기서
고리 내의 각각의
Figure pct00012
은 독립적으로 5-원 헤테로방향족 고리 내의 2개의 공액 이중 결합 및 6-원 방향족 또는 헤테로방향족 고리 내의 3개의 공액 이중 결합을 나타내고;
여기서 X1; X2; X3; R1; R2; R3; R4; R5; R7; R8; R10; R11; R12; R13 및 R은 화학식 (I)에 대해 정의된 바와 같다.
본 발명은 하기 화학식 (IVA)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공되는 실시양태를 포함한다:
Figure pct00013
여기서 R2; R4; R5; R7; R8; R10; R11; R12; R13 및 R은 화학식 (I)에 대해 정의된 바와 같다.
본 발명은 하기 화학식 (IVB)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공되는 실시양태를 포함한다:
Figure pct00014
여기서 R3; R4; R5; R7; R8; R10; R11; R12; R13 및 R은 화학식 (I)에 대해 정의된 바와 같다.
본 발명은 하기 화학식 (V)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공되는 실시양태를 포함한다:
Figure pct00015
여기서
고리 내의 각각의
Figure pct00016
은 독립적으로 5-원 헤테로방향족 고리 내의 2개의 공액 이중 결합 및 6-원 방향족 또는 헤테로방향족 고리 내의 3개의 공액 이중 결합을 나타내고;
여기서 X1; X2; X3; R1; R2; R3; R4; R7; R8; R10; R11; R12; R13 및 R은 화학식 (I)에 대해 정의된 바와 같다.
본 발명은 하기 화학식 (VA)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공되는 실시양태를 포함한다:
Figure pct00017
여기서 R2; R4; R7; R8; R10; R11; R12; R13 및 R은 화학식 (I)에 대해 정의된 바와 같다.
본 발명은 하기 화학식 (VB)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공되는 실시양태를 포함한다:
Figure pct00018
여기서 R3; R4; R7; R8; R10; R11; R12; R13 및 R은 화학식 (I)에 대해 정의된 바와 같다.
본 발명은 하기 화학식 (VI)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공되는 실시양태를 포함한다:
Figure pct00019
여기서
고리 내의 각각의
Figure pct00020
은 독립적으로 5-원 헤테로방향족 고리 내의 2개의 공액 이중 결합 및 6-원 방향족 또는 헤테로방향족 고리 내의 3개의 공액 이중 결합을 나타내고;
여기서 X1; X2; X3; R1; R2; R3; R4; R7; R8; R10; R11; R12; R13 및 R은 화학식 (I)에 대해 정의된 바와 같다.
본 발명은 하기 화학식 (VIA)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공되는 실시양태를 포함한다:
Figure pct00021
여기서 R2; R4; R7; R8; R10; R11; R12; R13 및 R은 화학식 (I)에 대해 정의된 바와 같다.
본 발명은 하기 화학식 (VIB)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공되는 실시양태를 포함한다:
Figure pct00022
여기서 R3; R4; R7; R8; R10; R11; R12; R13 및 R은 화학식 (I)에 대해 정의된 바와 같다.
본 발명은 하기 화학식 (VII)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공되는 실시양태를 포함한다:
Figure pct00023
여기서
고리 내의 각각의
Figure pct00024
은 독립적으로 5-원 헤테로방향족 고리 내의 2개의 공액 이중 결합 및 6-원 방향족 또는 헤테로방향족 고리 내의 3개의 공액 이중 결합을 나타내고;
여기서 X1; X2; X3; R1; R2; R3; R4; R7; R8; R10; R12; R13 및 R은 화학식 (I)에 대해 정의된 바와 같다.
본 발명은 하기 화학식 (VIIA)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공되는 실시양태를 포함한다:
Figure pct00025
여기서 R2; R4; R7; R8; R10; R12; R13; 및 R은 화학식 (I)에 대해 정의된 바와 같다.
본 발명은 하기 화학식 (VIIB)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공되는 실시양태를 포함한다:
Figure pct00026
여기서 R3; R4; R7; R8; R10; R12; R13 및 R은 화학식 (I)에 대해 정의된 바와 같다.
본 발명은 하기 화학식 (VIIC)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공되는 실시양태를 포함한다:
Figure pct00027
여기서 R2; R4; R7; R8; R10; R12; R13; 및 R은 화학식 (I)에 대해 정의된 바와 같다.
본 발명은 하기 화학식 (VIID)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공되는 실시양태를 포함한다:
Figure pct00028
여기서 R2; R4; R7; R8; R10; R12; R13; 및 R은 화학식 (I)에 대해 정의된 바와 같다.
화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, 각각의 R1은 독립적으로 H이다.
화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, 각각의 R2는 독립적으로 H; C1-C8 알킬, 예를 들어 CH3; 및 C1-C8 알킬렌-NRR로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, 각각의 R2는 독립적으로 C1-C8 알킬렌-NRR이고, 여기서 R은 H 및 C1-C8 알킬, 예를 들어 CH3으로 이루어진 군으로부터 선택되어, 예를 들어 CH2NH2, CH(NH2)CH3 및 CH2NH(CH3)를 형성한다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, 각각의 R2는 독립적으로 H, CH3, CH2NH2, CH(NH2)CH3 및 CH2NH(CH3)으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, 각각의 R2는 독립적으로 CH2NH2이다.
화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, 각각의 R3은 독립적으로 H; 및 C1-C8 알킬렌-O-P(O)(OH)2, 예를 들어 CH2OPO(OH)2로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, 각각의 R3은 독립적으로 H 및 CH2OPO(OH)2로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, 각각의 R3은 독립적으로 H이다.
화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, 각각의 R4는 독립적으로 C1-C8 알킬, 예를 들어 CH3, CH2CH3 또는 CH2CH(CH3)2 (상기 C1-C8 알킬은 1 또는 2개의 -OR로 임의로 치환됨); C1-C8 알킬렌-NRR, 예를 들어 (CH2)2NRR, (CH2)3-NRR 및 CH(CH3)CH2-NRR; C1-C8 알킬렌-C(O)OR, 예를 들어 CH2C(O)OR; 및 C1-C8 알킬렌-3-10원 헤테로사이클, 예를 들어 CH2-3-10원 헤테로사이클로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, 각각의 R4는 독립적으로 1 또는 2개의 -OR로 임의로 치환된 C1-C8 알킬이다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, 각각의 R4는 독립적으로 C1-C8 알킬렌-NRR, 예를 들어 (CH2)2NRR이고, 여기서 R은 C1-C8 알킬 및 C1-C8 할로알킬로부터 선택된다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, 각각의 R4는 독립적으로 C1-C8 알킬렌-NRR이고, 여기서 2개의 R은 연결되어 이들이 결합되어 있는 원자와 함께 3-10원 헤테로사이클을 형성하고, 상기 3-10원 헤테로사이클은 모르폴리닐이어서 예를 들어 (CH2)2-(N-모르폴리닐), (CH2)3-(N-모르폴리닐) 및 CH(CH3)CH2-(N-모르폴리닐)을 형성하고, 상기 모르폴리닐 고리는 임의로 1 또는 2개의 C1-C8 알킬로 추가로 치환될 수 있다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, 각각의 R4는 독립적으로 C1-C8 알킬렌-NRR, 예를 들어 (CH2)2NRR이고, 여기서 2개의 R은 연결되어 이들이 결합되어 있는 원자와 함께 3-10원 헤테로사이클을 형성하고, 상기 3-10원 헤테로사이클은 8-옥사-3-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일이어서 예를 들어 (CH2)2-(N-8-옥사-3-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일)을 형성한다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, 각각의 R4는 독립적으로 C1-C8 알킬렌-NRR, 예를 들어 (CH2)2NRR이고, 여기서 2개의 R은 연결되어 이들이 결합되어 있는 원자와 함께 3-10원 헤테로사이클을 형성하고, 상기 3-10원 헤테로사이클은 피페리디닐이어서 예를 들어 (CH2)2-(N-피페리디닐)을 형성하고, 상기 피페리디닐 고리는 임의로 시아노 및 할로로 이루어진 군으로부터 선택된 1 또는 2개의 치환기로 추가로 치환될 수 있다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, 각각의 R4는 독립적으로 C1-C8 알킬렌-3-10원 헤테로사이클, 예를 들어 CH2-3-10원 헤테로사이클이고, 상기 3-10원 헤테로사이클은 아제티디닐이어서 예를 들어 CH2-아제티디닐을 형성하고, 상기 아제티디닐은 임의로 3-10원 헤테로사이클, 예를 들어 테트라히드로피라닐로 추가로 치환될 수 있다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, 각각의 R4는 독립적으로 C1-C8 알킬렌-C(O)OR, 예를 들어 CH2C(O)OR이고, 여기서 R은 H이어서 예를 들어 CH2C(O)OH를 형성한다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, 각각의 R4는 독립적으로 CH3, CH2CH3, (CH2)3OH, CH2CH(CH2OH)2, (CH2)2N(CH3)CH2CF3, (CH2)2-(N-모르폴리닐), (CH2)3-(N-모르폴리닐), CH(CH3)CH2-(N-모르폴리닐), (CH2)2-(N-2,6-디메틸 모르폴리닐), (CH2)2-(N-2,5-디메틸-모르폴리닐), (CH2)2-(N-8-옥사-3-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일), (CH2)2-(N-4-시아노 피페리디닐), (CH2)2-(N-4,4-디플루오로-피페리디닐), (CH2)2-(N-2-플루오로 아제티디닐), CH2-(2-아제티디닐-N-테트라히드로피라닐) 및 CH2C(O)OH로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, 각각의 R4는 독립적으로 CH3이다.
화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, 각각의 R5는 독립적으로 H; C1-C8 알킬, 예를 들어 CH3 또는 CH2CH3; C1-C8 알킬렌-NRR, 예를 들어 (CH2)2NRR 및 (CH2)3-NRR; 및 C1-C8 알킬렌-3-10원 헤테로사이클, 예를 들어 CH2-3-10원 헤테로사이클로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, 각각의 R5는 독립적으로 C1-C8 알킬, 예를 들어 CH3 또는 CH2CH3이다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, 각각의 R5는 독립적으로 C1-C8 알킬렌-NRR, 예를 들어 (CH2)2NRR이고, 여기서 R은 C1-C8 알킬 및 C1-C8 할로알킬로부터 선택되어, 예를 들어 (CH2)2N(CH3)(CH2CF3)을 형성한다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, 각각의 R5는 독립적으로 C1-C8 알킬렌-NRR이고, 여기서 2개의 R은 연결되어 이들이 결합되어 있는 원자와 함께 3-10원 헤테로사이클을 형성하고, 상기 3-10원 헤테로사이클은 모르폴리닐이어서 예를 들어 (CH2)2-(N-모르폴리닐) 및 (CH2)3-(N-모르폴리닐)을 형성하고, 상기 모르폴리닐 고리는 임의로 1 또는 2개의 C1-C8 알킬, 예를 들어 CH3으로 추가로 치환될 수 있다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, 각각의 R5는 독립적으로 C1-C8 알킬렌-3-10원 헤테로사이클, 예를 들어 CH2-3-10원 헤테로사이클이고, 상기 3-10원 헤테로사이클은 아제티디닐이어서 예를 들어 CH2-아제티디닐을 형성하고, 상기 아제티디닐은 임의로 3-10원 헤테로사이클, 예를 들어 테트라히드로피라닐로 추가로 치환될 수 있다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, 각각의 R5는 독립적으로 H, CH3, CH2CH3, (CH2)2N(CH3)(CH2CF3), (CH2)2-(N-모르폴리닐), (CH2)3-(N-모르폴리닐), (CH2)2-(N-2,6-디메틸 모르폴리닐) 및 CH2-(2-아제티디닐-N-테트라히드로피라닐)로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, R7은 할로, 예를 들어 플루오로 또는 클로로이다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, R7은 H, 플루오로, 클로로, 히드록시 및 NH2로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, R7은 히드록시이다.
화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, R8은 1 또는 2개의 -NRR 또는 -OR로 임의로 치환된 C1-C8 알킬, 예를 들어 CH3 또는 CH2CH3이다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, R8은 C1-C8 알킬렌-C(O)OR이다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, R8은 CH3, CH2CH3, (CH2)3NH2, (CH2)2OH, (CH2)3OH 및 (CH2)2COOH로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, R8은 CH2CH3이다.
화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, R10은 C1-C8 알킬, 예를 들어 CH3이고, 상기 C1-C8 알킬은 1 또는 2개의 -OR로 임의로 치환된다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, R10은 CH3 및 CH2OH로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, R10은 CH3이다.
화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, R11은 H 및 할로, 예를 들어 플루오로로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, R11은 H 및 플루오로로 이루어진 군으로부터 선택된다.
화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, R12는 -CONH2이다.
화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, 각각의 R은 독립적으로 H, C1-C8 알킬 및 C1-C8 할로알킬로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, 2개의 R은 연결되어 이들이 결합되어 있는 원자 또는 원자들과 함께 3-10원 헤테로사이클을 형성하고, 여기서 상기 3-10원 헤테로사이클은 N, O 및 S로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 원자를 함유하고, 예를 들어 모르폴리닐, 피페리디닐, 아제티디닐 또는 N-8-옥사-3-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일이다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, 2개의 R은 연결되어 이들이 결합되어 있는 원자 또는 원자들과 함께 모르폴리닐을 형성하고, 상기 모르폴리닐은 1 또는 2개의 C1-C8 알킬, 예를 들어 CH3으로 임의로 치환된다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, 2개의 R은 연결되어 이들이 결합되어 있는 원자 또는 원자들과 함께 피페리디닐을 형성하고, 상기 피페리디닐은 시아노 및 할로, 예를 들어 플루오로로부터 독립적으로 선택된 1 또는 2개의 치환기로 임의로 치환된다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, 2개의 R은 연결되어 이들이 결합되어 있는 원자 또는 원자들과 함께 아제티디닐을 형성하고, 상기 아제티디닐은 할로, 예를 들어 플루오로로부터 선택된 1개의 치환기로 임의로 치환된다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, 2개의 R은 연결되어 이들이 결합되어 있는 원자 또는 원자들과 함께 N-8-옥사-3-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일을 형성한다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, 각각의 R은 독립적으로 H, CH3, CH2FCF3으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염의 한 실시양태에서, 각각의 R은 독립적으로 H이다.
본 발명은 또한 하기 화학식 (IA)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공되는 실시양태를 포함한다:
Figure pct00029
여기서
고리 내의 각각의
Figure pct00030
은 독립적으로 5-원 헤테로방향족 고리 내의 2개의 공액 이중 결합 및 6-원 방향족 또는 헤테로방향족 고리 내의 3개의 공액 이중 결합을 나타내고;
W1은 CR11 및 N으로부터 선택되고;
X1은 CR1, C(R1)2, N, NR1, O 및 S로부터 선택되고;
X2는 CR2, C(R2)2, N, NR2, O 및 S로부터 선택되고;
X3은 CR3, C(R3)2, N, NR3, O 및 S로부터 선택되고;
여기서 X1, X2, 및 X3 중 2 또는 3개는 독립적으로 NR1, NR2, NR3, O 및 S로부터 선택되고;
X1, X2 및 X3 중 적어도 1개는 NR1, NR2 및 NR3으로부터 선택되고;
Y1은 N, NR4, O, S, CR4 및 C(R4)2로부터 선택되고;
Y2는 N, NR5, O, S, CR5 및 C(R5)2로부터 선택되고;
Y3은 N, NR6, O, S, CR6 및 C(R6)2로부터 선택되고;
Y4는 C 및 N으로부터 선택되고;
Y5는 C 및 N으로부터 선택되고;
여기서 Y1, Y2 및 Y3 중 단지 1개 또는 단지 2개는 독립적으로 N, NR4, NR5 및 NR6으로부터 선택되고;
Y4 및 Y5 중 1개가 N인 경우에, Y4 및 Y5 중 다른 1개는 C이고;
Z1은 C 및 N으로부터 선택되고;
Z2는 N, NR8 및 CR8로부터 선택되고;
Z3은 N, NR9 및 CR9로부터 선택되고;
Z4는 N, NR10 및 CR10으로부터 선택되고;
Z5는 N, NR7 및 CR7로부터 선택되고;
여기서 Z1, Z2, Z3, Z4 및 Z5 중 2 또는 3개는 독립적으로 N, NR7, NR8, NR9, 및 NR10으로부터 선택되고;
R1은 H, C1-C8 알킬, C1-C8 알킬렌-NRR 및 C1-C8 알킬렌-C(O)OR로부터 선택되고;
R2는 H, C1-C8 알킬, C1-C8 알킬렌-NRR, C1-C8 알킬렌-C(O)OR, C1-C8 알킬렌-OR 및 C1-C8 알킬렌-O-P(O)(OH)2로부터 선택되고;
R3은 H, C1-C8 알킬, C1-C8 알킬렌-NRR, C1-C8 알킬렌-C(O)OR 및 C1-C8 알킬렌-O-P(O)(OH)2로부터 선택되고;
R4는 H, OR, 1 또는 2개의 -OR로 임의로 치환된 C1-C8 알킬, C0-C8 알킬렌-NRR, C0-C8 알킬렌-C(O)OR, C0-C8 알킬렌-3-10원 헤테로사이클, 및 C0-C8 알킬렌-(C3-C10)-시클로알킬로부터 선택되고;
R5는 H, OR, C1-C8 알킬, C0-C8 알킬렌-NRR, C0-C8 알킬렌-C(O)OR, C0-C8 알킬렌-3-10원 헤테로사이클 및 C0-C8 알킬렌-OR로부터 선택되고;
R6은 H이고;
R7은 H 또는 할로이고;
R8은 H, 1 또는 2개의 -OR로 임의로 치환된 C1-C8 알킬, C1-C8 알킬렌-C(O)OR 및 C1-C8 알킬렌-SO2R로부터 선택되고;
R9는 H이고;
R10은 H, 1 또는 2개의 -OR로 임의로 치환된 C1-C8 알킬, 및 할로로부터 선택되고;
R11은 H, C1-C8 알킬, -OR 및 할로로부터 선택되고;
R12는 -C(O)N(R)2 또는 -C(O)NHR이고;
R13은 H이고;
각각의 R은 독립적으로 H 또는 C1-C8 알킬이거나, 또는 2개의 R은 연결되어 이들이 결합되어 있는 원자 또는 원자들과 함께 -(C3-C10) 시클로알킬 또는 3-10원 헤테로사이클을 형성하고, 여기서 상기 3-10원 헤테로사이클은 N, O 및 S로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 원자를 함유하고;
여기서 -(C3-C10) 시클로알킬 또는 3-10원 헤테로사이클은 C1-C8 알킬, 히드록시, C1-C8 알콕시, -(C3-C10) 시클로알킬, 3-10원 헤테로사이클, 할로 및 시아노로부터 각각 독립적으로 선택된 1개 이상의 치환기로 임의로 치환된다.
본 발명은 또한 Y1, Y2, Y3, Y4 및 Y5 중 최대 2개가 독립적으로 N, NR4, NR5 및 NR6으로부터 선택되는 것인 화학식 IA의 화합물 또는 염이 제공되는 화학식 IA의 실시양태를 포함한다.
본 발명은 또한 Y1, Y2 및 Y3 중 적어도 1개가 C인, 예를 들어 Y1, Y2 및 Y3 중 적어도 1개가 CR4, C(R4)2, CR5, C(R5)2, CR6 및 C(R6)2로부터 선택되는 것인 화학식 IA의 화합물 또는 염이 제공되는 화학식 IA의 실시양태를 포함한다.
본 발명은 또한 Y4 및 Y5 중 적어도 1개가 C인 화학식 IA의 화합물 또는 염이 제공되는 화학식 IA의 실시양태를 포함한다.
본 발명은 또한 Y1-R4가 C-OH가 아닌, 예를 들어 Y1이 CR4 또는 C(R4)2로부터 선택되는 경우에 R4가 OH가 아닌 화학식 IA의 화합물 또는 염이 제공되는 화학식 IA의 실시양태를 포함한다.
본 발명은 또한 Y2가 N 또는 NR5인 경우에 Y1-R4가 C-OH가 아닌, 예를 들어 Y2가 N 또는 NR5로부터 선택되고 Y1이 CR4 또는 C(R4)2로부터 선택되는 경우에, R4가 OH가 아닌 화학식 IA의 화합물 또는 염이 제공되는 화학식 IA의 실시양태를 포함한다. 본 발명은 또한 Y2-R5가 C-OH가 아닌, 예를 들어 Y2가 CR5 또는 C(R5)2로부터 선택되는 경우에, R5가 OH가 아닌 화학식 IA의 화합물 또는 염이 제공되는 화학식 IA의 실시양태를 포함한다.
본 발명은 또한 Y1이 N 또는 NR4인 경우에 또는 Y3이 N 또는 NR6인 경우에 Y2-R2가 C-OH가 아닌, 예를 들어 Y1이 N 또는 NR4로부터 선택되고 Y2가 CR5 또는 C(R5)2로부터 선택되는 경우에 R5가 OH가 아닌, 또는 예를 들어 Y3이 N 또는 NR6으로부터 선택되고 Y2가 CR5 또는 C(R5)2로부터 선택되는 경우에 R5가 OH가 아닌 화학식 IA의 화합물 또는 염이 제공되는 화학식 IA의 실시양태를 포함한다. 본 발명은 X1이 N 및 NR1로부터 선택되고; X2가 N, NR2 및 S로부터 선택되고; X3이 CR3, NR3 및 S로부터 선택되고; Y1이 N 및 NR4로부터 선택되고; Y2가 N 및 NR5로부터 선택되고; Y3이 NR6 및 CR6으로부터 선택되고; Y4가 C로부터 선택되고; Z1이 C로부터 선택되고; Z2가 NR8로부터 선택되고; Z3이 N으로부터 선택되고; Z4가 CR10으로부터 선택되고; Z5가 CR7로부터 선택되고; R2가 H, C1-C8 알킬, C1-C8 알킬렌-NRR 및 C1-C8 알킬렌-O-P(O)(OH)2로부터 선택되고; R3이 H로부터 선택되고; R4가 H, C1-C8 알킬 및 C0-C8 알킬렌-NRR로부터 선택되고; R5가 H 및 C1-C8 알킬로부터 선택되고; R10이 H 및 C1-C8 알킬로부터 선택되고; R11이 H 및 할로로부터 선택되는 것인 화학식 IA의 화합물 또는 염이 제공되는 화학식 IA의 실시양태를 추가로 포함한다.
본 발명은 하기 화학식 (IB)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이 제공되는 실시양태를 포함한다:
Figure pct00031
여기서
고리 내의 각각의
Figure pct00032
은 독립적으로 5-원 헤테로방향족 고리 내의 2개의 공액 이중 결합 및 6-원 방향족 또는 헤테로방향족 고리 내의 3개의 공액 이중 결합을 나타내고;
W1은 CR11 및 N으로부터 선택되고;
X1은 CR1, C(R1)2, N, NR1, O 및 S로부터 선택되고;
X2는 CR2, C(R2)2, N, NR2, O 및 S로부터 선택되고;
X3은 CR3, C(R3)2, N, NR3, O 및 S로부터 선택되고;
여기서 X1, X2, 및 X3 중 2 또는 3개는 독립적으로 NR1, NR2, NR3, O 및 S로부터 선택되고;
X1, X2 및 X3 중 적어도 1개는 NR1, NR2 및 NR3으로부터 선택되고;
Y1은 N, NR4, O, S, CR4 및 C(R4)2로부터 선택되고;
Y2는 N, NR5, O, S, CR5 및 C(R5)2로부터 선택되고;
Y3은 N, NR6, O, S, CR6 및 C(R6)2로부터 선택되고;
Y4는 C 및 N으로부터 선택되고;
Y5는 C 및 N으로부터 선택되고;
여기서 Y1, Y2 및 Y3 중 단지 1개 또는 단지 2개는 독립적으로 N, NR4, NR5 및 NR6으로부터 선택되고;
Y4 및 Y5 중 1개가 N인 경우에, Y4 및 Y5 중 다른 1개는 C이고;
Z1은 C 및 N으로부터 선택되고;
Z2는 N, NR8 및 CR8로부터 선택되고;
Z3은 N, NR9 및 CR9로부터 선택되고;
Z4는 N, NR10 및 CR10으로부터 선택되고;
Z5는 N, NR7 및 CR7로부터 선택되고;
여기서 Z1, Z2, Z3, Z4 및 Z5 중 2 또는 3개는 독립적으로 N, NR7, NR8, NR9, 및 NR10으로부터 선택되고;
R1은 H, C1-C8 알킬, C1-C8 알킬렌-NRR 및 C1-C8 알킬렌-C(O)OR로부터 선택되고;
R2는 H, C1-C8 알킬, C1-C8 알킬렌-NRR, C1-C8 알킬렌-C(O)OR, C1-C8 알킬렌-OR 및 C1-C8 알킬렌-O-P(O)(OH)2로부터 선택되고;
R3은 H, C1-C8 알킬, C1-C8 알킬렌-NRR, C1-C8 알킬렌-C(O)OR 및 C1-C8 알킬렌-O-P(O)(OH)2로부터 선택되고;
R4는 H, OR, C1-C8 알킬, C0-C8 알킬렌-NRR, C0-C8 알킬렌-C(O)OR, C0-C8 알킬렌-3-10원 헤테로사이클, C0-C8 알킬렌-(C3-C10) 시클로알킬 및 C0-C8 알킬렌-OR로부터 선택되고;
R5는 H, OR, C1-C8 알킬, C0-C8 알킬렌-NRR, C0-C8 알킬렌-C(O)OR, C0-C8 알킬렌-3-10원 헤테로사이클 및 C0-C8 알킬렌-OR로부터 선택되고;
R6은 H이고;
R7은 H 또는 할로이고;
R8은 H, 1 또는 2개의 -OR로 임의로 치환된 C1-C8 알킬, C1-C8 알킬렌-C(O)OR 및 C1-C8 알킬렌-SO2R로부터 선택되고;
R9는 H이고;
R10은 H, C1-C8 알킬 및 할로로부터 선택되고;
R11은 H, C1-C8 알킬, -OR 및 할로로부터 선택되고;
R12는 -C(O)N(R)2 또는 -C(O)NHR이고;
R13은 H이고;
각각의 R은 독립적으로 H 또는 C1-C8 알킬이거나, 또는 2개의 R은 연결되어 이들이 결합되어 있는 원자 또는 원자들과 함께 -(C3-C10) 시클로알킬 또는 3-10원 헤테로사이클을 형성하고, 여기서 상기 3-10원 헤테로사이클은 N, O 및 S로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 원자를 함유하고, 여기서 상기 -(C3-C10) 시클로알킬 또는 3-10원 헤테로사이클은 임의로 C1-C8 알킬, 히드록시, C1-C8 알콕시, -(C3-C10) 시클로알킬, 3-10원 헤테로사이클, 할로 및 시아노로부터 각각 독립적으로 선택된 1개 이상의 치환기로 치환된다.
본 발명은 또한 Y1, Y2, Y3, Y4 및 Y5 중 최대 2개가 독립적으로 N, NR4, NR5 및 NR6으로부터 선택되는 것인 화학식 IB의 화합물 또는 염이 제공된 화학식 IB의 실시양태를 포함한다.
본 발명은 또한 Y1, Y2 및 Y3 중 적어도 1개가 C인, 예를 들어 Y1, Y2 및 Y3 중 적어도 1개가 CR4, C(R4)2, CR5, C(R5)2, CR6 및 C(R6)2로부터 선택되는 것인 화학식 IB의 화합물 또는 염이 제공되는 화학식 IB의 실시양태를 포함한다.
본 발명은 또한 Y4 및 Y5 중 적어도 1개가 C인 화학식 IB의 화합물 또는 염이 제공되는 화학식 IB의 실시양태를 포함한다.
본 발명은 또한 Y1-R4가 C-OH가 아닌, 예를 들어 Y1이 CR4 또는 C(R4)2로부터 선택되는 경우에 R4가 OH가 아닌 화학식 IB의 화합물 또는 염이 제공되는 화학식 IB의 실시양태를 포함한다.
본 발명은 또한 Y2가 N 또는 NR5인 경우에 Y1-R4가 C-OH가 아닌, 예를 들어 Y2가 N 또는 NR5로부터 선택되고 Y1이 CR4 또는 C(R4)2로부터 선택되는 경우에 R4가 OH가 아닌 화학식 IB의 화합물 또는 염이 제공되는 화학식 IB의 실시양태를 포함한다.
본 발명은 또한 Y2-R5가 C-OH가 아닌, 예를 들어 Y2가 CR5 또는 C(R5)2로부터 선택되는 경우에 R5가 OH가 아닌 화학식 IB의 화합물 또는 염이 제공되는 화학식 IB의 실시양태를 포함한다.
본 발명은 또한 Y1이 N 또는 NR4인 경우에 또는 Y3이 N 또는 NR6인 경우에 Y2-R2가 C-OH가 아닌, 예를 들어 Y1이 N 또는 NR4로부터 선택되고 Y2가 CR5 또는 C(R5)2로부터 선택되는 경우에 R5가 OH가 아니거나, 또는 예를 들어 Y3이 N 또는 NR6으로부터 선택되고 Y2가 CR5 또는 C(R5)2로부터 선택되는 경우에 R5가 OH가 아닌 화학식 IB의 화합물 또는 염이 제공되는 화학식 IB의 실시양태를 포함한다.
본 발명은 X1이 N 및 NR1로부터 선택되고; X2가 N, NR2 및 S로부터 선택되고; X3이 CR3, NR3 및 S로부터 선택되고; Y1이 N 및 NR4로부터 선택되고; Y2가 N 및 NR5로부터 선택되고; Y3이 NR6 및 CR6으로부터 선택되고; Y4가 C로부터 선택되고; Z1이 C로부터 선택되고; Z2가 NR8로부터 선택되고; Z3이 N으로부터 선택되고; Z4가 CR10으로부터 선택되고; Z5가 CR7로부터 선택되고; R2가 H, C1-C8 알킬, C1-C8 알킬렌-NRR 및 C1-C8 알킬렌-O-P(O)(OH)2로부터 선택되고; R3이 H로부터 선택되고; R4가 H, C1-C8 알킬 및 C0-C8 알킬렌-NRR로부터 선택되고; R5가 H 및 C1-C8 알킬로부터 선택되고; R10이 H 및 C1-C8 알킬로부터 선택되고; R11이 H 및 할로로부터 선택되는 것인 화학식 IB의 화합물 또는 염이 제공되는 화학식 IB의 실시양태를 추가로 포함한다.
본 발명의 추가 실시양태는 하기로부터 선택된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함한다:
Figure pct00033
Figure pct00034
Figure pct00035
Figure pct00036
Figure pct00037
Figure pct00038
Figure pct00039
.
한 실시양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 본 발명의 화합물은 STING에 결합한다. 한 실시양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 본 발명의 화합물은 STING에 경쟁적으로 결합한다. 한 실시양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 본 발명의 화합물은 천연 리간드와 비교 시 STING에 경쟁적으로 결합한다. 한 실시양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 본 발명의 화합물은 0.750 μM 미만, 바람직하게는 약 0.500 μM 미만, 보다 바람직하게는 약 0.250 μM 미만, 보다 더 바람직하게는 약 0.100 μM 미만의 시험관내 Ki로 STING에 경쟁적으로 결합한다. 한 실시양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 본 발명의 화합물은 0.750 μM 미만, 바람직하게는 약 0.500 μM 미만, 보다 바람직하게는 약 0.250 μM 미만, 보다 더 바람직하게는 약 0.100 μM 미만의 시험관내 Ki로 STING에 경쟁적으로 결합하며, 상기 시험관내 Ki는 방사성리간드 결합 검정, 예컨대 섬광 근접 검정에 의해 결정된다. 한 실시양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 본 발명의 화합물은 0.750 μM 미만, 바람직하게는 약 0.500 μM 미만, 보다 바람직하게는 약 0.250 μM 미만, 보다 더 바람직하게는 약 0.100 μM 미만의 시험관내 Ki로 STING에 경쟁적으로 결합하며, 상기 시험관내 Ki는 섬광 근접 검정에 의해 결정되고, 상기 검정은 하기 단계를 포함하고:
(i) 150 mM NaCl, 25 mM Hepes (pH 7.5), 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.005% (v/v) 트윈(Tween)-20, 및 1% (v/v) DMSO를 임의로 포함하는 적합한 완충제 중에서, 100 nM STING 단백질을 적합한 담체, 예를 들어 20 μg 스트렙타비딘 폴리비닐 톨루엔 (SA-PVT) 비드 상에 고정화시키는 단계;
(ii) 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 100 μM 출발 농도로부터 3배 희석 시리즈로 첨가하고, 이를 실온에서 예를 들어 20분 동안 평형이 되도록 하는 단계;
(iii) 3H-cGAMP를 100 nM 농도로 첨가하는 단계;
(iv) 3H-cGAMP 결합을 완전히 차단하는 양성 대조군 화합물 및 음성 대조군 DMSO에 대해 정규화하는 단계; 및
(v) 쳉-프루소프(Cheng-Prusoff) 방정식을 사용하여 IC50로부터 경쟁적 결합에 대한 KI를 결정하는 단계;
여기서 상기 STING 단백질은, N-말단 막횡단 도메인 (1-154) 뿐만 아니라 C-말단 꼬리 (342-379)가 제거된 N- 및 C-말단 말단절단 둘 다를 갖는 잔기 155-341로 구성되며, 이는 고친화도 비오티닐화 펩티드, 예를 들어 아비태그(AviTag)TM를 포함하고, 예를 들어 이. 콜라이 비오틴 리가제 (BirA)에 의해 효소적으로 고도로 특이적으로 N-말단 비오티닐화된 STING 구축물이다.
한 실시양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함하는 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 STING를 활성화시킨다. 한 실시양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함하는 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 STING 경로 구성원 예컨대 IRF3을 포함한 STING 경로를 활성화시킨다. 한 실시양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함하는 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 선천성 면역 반응을 자극한다. 한 실시양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함하는 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 제1형 IFN, 예를 들어 IFNβ를 유도한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 제1형 IFN 이외의 시토카인을 유도한다. 한 실시양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함하는 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 공동-자극 인자를 활성화시킨다. 한 실시양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함하는 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 제1형 IFN 및 다른 시토카인을 유도하고, 공동-자극 인자를 활성화시킨다.
한 실시양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함하는 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 약 100 μM 이하, 바람직하게는 약 50 μM 이하, 보다 바람직하게는 약 20 μM 이하, 가장 바람직하게는 약 10 μM 이하의 시험관내 EC50로 STING를 활성화시키며, 이러한 시험관내 EC50은 IRF3의 인산화를 모니터링하는 검정, 예컨대 THP-1 세포 ELISA 검정에 의해 결정된다. 한 실시양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함하는 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 약 100 μM 이하, 바람직하게는 약 50 μM 이하, 보다 바람직하게는 약 20 μM 이하, 가장 바람직하게는 약 10 μM 이하의 시험관내 EC50으로 STING를 활성화시키며, 상기 시험관내 EC50은 THP-1 세포 ELISA 검정을 사용하여 IRF3의 인산화를 모니터링함으로써 결정되고, 상기 검정은 하기 단계를 포함한다:
(i) THP-1 세포를 RPMI 배지 + 2 mM L-글루타민, 10% 태아 소 혈청, 및 0.5% Pen-Strep에서 성장시키고, 예를 들어 37℃, 5% CO2에서 밤새 인큐베이션하는 단계;
(ii) RPMI 배지 중에 희석된 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 첨가하고, 예를 들어 3시간 동안 인큐베이션하는 단계;
(iii) 세포를 RIPA 완충제에 용해시키고, 용해물의 분취물을 마우스 항-인간 IRF-3 포획 항체로 코팅된 플레이트로 옮기고, 예를 들어 4℃에서 16시간 동안 인큐베이션하는 단계;
(iv) 토끼 항-포스포-IRF3 검출 항체를 첨가하고, 예를 들어 1.5시간 동안 추가로 인큐베이션하는 단계;
(v) HRP-연결된 2차 항체를 첨가하고, 예를 들어 30분 동안 추가로 인큐베이션하는 단계;
(vi) 발광 시약으로 발광 신호를 생성하는 단계; 및
(vii) 인산화 IRF3 신호를 최대화하는 것으로 공지된 양성 대조군 STING 효능제 및 음성 대조군 DMSO를 사용하여 신호를 "% 효과"로 정규화하는 단계.
한 실시양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 약 100 μM 이하, 바람직하게는 약 50 μM 이하, 보다 바람직하게는 약 20 μM 이하, 가장 바람직하게는 약 10 μM 이하의 시험관내 EC50으로 STING를 활성화시키며, 상기 시험관내 EC50은 인터페론-β 유도를 모니터링하는 검정, 예컨대 THP-1 SG 리포터 세포주 검정에 의해 결정된다. 한 실시양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 약 100 μM 이하, 바람직하게는 약 50 μM 이하, 보다 바람직하게는 약 20 μM 이하, 가장 바람직하게는 약 10 μM 이하의 시험관내 EC50으로 STING를 활성화시키며, 상기 시험관내 EC50는 THP-1 SG 리포터 세포주 검정을 사용하여 인터페론-β 유도를 모니터링함으로써 결정되고, 상기 검정은 하기 단계를 포함한다:
(i) THP-1 ISG 세포를 RPMI 배지 + 2 mM L-글루타민, 10% 태아 소 혈청 및 0.5% Pen-Strep 중에서 히그로마이신 B 및 제오신의 존재 하에 성장시키는 단계;
(ii) RPMI 배지 중에 희석된 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 첨가하고, 예를 들어 24시간 동안 인큐베이션하는 단계;
(iii) 원심분리된 세포의 상청액의 분취물에 발광 시약을 첨가하는 단계; 및
(iv) 발광 신호를 측정하고, 이를 루시페라제 신호를 최대화하는 것으로 공지된 양성 대조군 STING 효능제 및 음성 대조군 DMSO를 사용하여 "% 효과"로 정규화하는 단계.
한 실시양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함하는 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 약 15 μM 이하, 바람직하게는 약 1 μM 이하, 보다 바람직하게는 약 0.5 μM 이하, 가장 바람직하게는 약 0.1 μM 이하의 시험관내 EC50으로 STING를 활성화시키며, 이러한 시험관내 EC50은 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)에서의 인터페론-β 유도를 모니터링하는 검정, 예컨대 HTRF IFNβ 검정에 의해 결정된다. 한 실시양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함하는 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 약 15 μM 이하, 바람직하게는 약 1 μM 이하, 보다 바람직하게는 약 0.5 μM 이하, 가장 바람직하게는 약 0.1 μM 이하의 시험관내 EC50으로 STING를 활성화시키며, 상기 시험관내 EC50는 HTRF IFNβ 검정을 사용하여 PBMC에서의 인터페론-β 유도를 모니터링함으로써 결정되고, 상기 검정은 하기 단계를 포함하고:
(i) PBMC를 RPMI 배지에 시딩하고, 예를 들어 37℃에서 밤새 인큐베이션하는 단계;
(ii) RPMI 배지 중에 희석된 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 첨가하고, 예를 들어 추가로 4시간 동안 인큐베이션하는 단계;
(iii) 원심분리 후, 예를 들어 1500 x g에서 5분 동안 배지를 수집하는 단계;
(iv) 배지의 분취물을 HTRF IFNβ 검정으로부터의 항체 반응 시약과 혼합하고, 연관된 검정 항체와 예를 들어 2:1 비로 합하는 단계;
(v) 예를 들어 BMG 페라스타(Pherastar) 마이크로플레이트 판독기 (비 665 nm / 620 nm)를 사용하여 FRET 신호를 측정하는 단계; 및
(vi) 루시페라제 신호를 최대화하는 것으로 공지된 양성 대조군 STING 효능제 및 음성 대조군 DMSO를 사용하여 신호를 "% 효과"로 정규화하는 단계;
여기서 PBMC는 동일 부피의 포스페이트 완충 염수 및 2% 태아 소 혈청, 밀도 구배 배지, 예를 들어 림포프렙(Lymphoprep)TM, 및 원심분리를 사용하여 신선한 인간 전혈의 류코팩(leukopak) 제제로부터 단리되었고;
PBMC는 STING에 대해 야생형인 것으로 검증된 단일 인간 공여자로부터의 것이었다.
한 실시양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함하는 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 약 5 μM 이하, 바람직하게는 약 1 μM 이하, 보다 바람직하게는 약 0.5 μM 이하, 가장 바람직하게는 약 0.1 μM 이하의 시험관내 EC50으로 STING를 활성화시키며, 이러한 시험관내 EC50은 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)에서 IRF3의 인산화를 모니터링하는 검정, 예컨대 포스포-IRF3 검정에 의해 결정된다. 한 실시양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함하는 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 STING를 약 5 μM 이하, 바람직하게는 약 1 μM 이하, 보다 바람직하게는 약 0.5 μM 이하, 가장 바람직하게는 약 0.1 μM 이하의 시험관내 EC50으로 활성화시키며, 상기 시험관내 EC50은 포스포-IRF3 검정을 사용하여 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)에서의 IRF3의 인산화를 모니터링함으로써 결정되고, 상기 검정은 하기 단계를 포함한다:
(i) PBMC를 RPMI 배지에 시딩하고, 예를 들어 37℃에서 밤새 5% CO2 하에 인큐베이션하는 단계;
(ii) RPMI 배지 중에 희석된 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 첨가하고, 예를 들어 추가로 4시간 동안 인큐베이션하는 단계;
(iii) 세포를 RIPA 완충제에 용해시키고, 용해물의 분취물을 마우스 항-인간 IRF-3 포획 항체로 코팅된 플레이트로 옮기고, 예를 들어 4℃에서 16시간 동안 인큐베이션하는 단계;
(iv) 토끼 항-포스포-IRF3 검출 항체를 첨가하고, 예를 들어 1.5시간 동안 추가로 인큐베이션하는 단계;
(v) HRP-연결된 2차 항체를 첨가하고, 예를 들어 30분 동안 추가로 인큐베이션하는 단계;
(viii) 발광 시약으로 발광 신호를 생성하는 단계; 및
(vii) 루시페라제 신호를 최대화하는 것으로 공지된 양성 대조군 STING 효능제 및 음성 대조군 DMSO를 사용하여 신호를 "% 효과"로 정규화하는 단계;
여기서 PBMC는 동일 부피의 포스페이트 완충 염수 및 2% 태아 소 혈청, 밀도 구배 배지, 예를 들어 림포프렙(Lymphoprep)TM, 및 원심분리를 사용하여 신선한 인간 전혈의 류코팩(leukopak) 제제로부터 단리되었고;
PBMC는 STING에 대해 야생형인 것으로 검증된 단일 인간 공여자로부터의 것이었다.
한 실시양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 0.750 μM 미만, 바람직하게는 약 0.500 μM 미만, 보다 바람직하게는 약 0.250 μM 미만, 보다 더 바람직하게는 약 0.100 μM 미만의 시험관내 Ki로 STING에 경쟁적으로 결합하고, 약 100 μM 이하, 바람직하게는 약 50 μM 이하, 보다 바람직하게는 약 20 μM 이하, 가장 바람직하게는 약 10 μM 이하의 시험관내 EC50으로 STING를 활성화시키며, 상기 시험관내 EC50은 IRF3의 인산화를 모니터링하는 검정에 의해 결정된다.
한 실시양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 0.750 μM 미만, 바람직하게는 약 0.500 μM 미만, 보다 바람직하게는 약 0.250 μM 미만, 보다 더 바람직하게는 약 0.100 μM 미만의 시험관내 Ki로 STING에 경쟁적으로 결합하고, 약 100 μM 이하, 바람직하게는 약 50 μM 이하, 보다 바람직하게는 약 20 μM 이하, 가장 바람직하게는 약 10 μM 이하의 시험관내 EC50으로 STING를 활성화시키며, 상기 시험관내 EC50은 인터페론-β 유도를 모니터링하는 검정에 의해 결정된다.
한 실시양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 0.750 μM 미만, 바람직하게는 약 0.500 μM 미만, 보다 바람직하게는 약 0.250 μM 미만, 보다 더 바람직하게는 약 0.100 μM 미만의 시험관내 Ki로 STING에 경쟁적으로 결합하고, 약 15 μM 이하, 바람직하게는 약 1 μM 이하, 보다 바람직하게는 약 0.5 μM 이하, 가장 바람직하게는 약 0.1 μM 이하의 시험관내 EC50으로 STING를 활성화시키며, 상기 시험관내 EC50은 말초 혈액 단핵 세포에서의 인터페론-β 유도를 모니터링하는 검정에 의해 결정된다.
한 실시양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함한 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 0.750 μM 미만, 바람직하게는 약 0.500 μM 미만, 보다 바람직하게는 약 0.250 μM 미만, 보다 더 바람직하게는 약 0.100 μM 미만의 시험관내 Ki로 STING에 경쟁적으로 결합하고, 약 5 μM 이하, 바람직하게는 약 1 μM 이하, 보다 바람직하게는 약 0.5 μM 이하, 가장 바람직하게는 약 0.1 μM 이하의 시험관내 EC50으로 STING를 활성화시키며, 상기 시험관내 EC50은 말초 혈액 단핵 세포에서의 IRF3의 인산화를 모니터링하는 검정에 의해 결정된다.
본 발명의 추가 실시양태는 본원에 기재된 바와 같은 화합물 또는 염, 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물을 포함한다. 임의로, 이러한 조성물은 항체-약물 접합체의 성분인 본원에 기재된 바와 같은 화합물 또는 염을 포함할 수 있고/거나; 입자-기반 전달 시스템의 성분인 본원에 기재된 바와 같은 화합물을 포함할 수 있다.
포유동물에게 치료 유효량의 본원에 기재된 바와 같은 화합물 또는 염을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 비정상적 세포 성장을 치료하는 방법이 또한 본 발명에서 구현된다. 이 방법은 임의로 본원에 기재된 바와 같은 화합물 또는 염을 항체-약물 접합체의 성분으로서, 또는 입자-기반 전달 시스템의 성분으로서 사용할 수 있다. 이러한 실시양태에서, 비정상적 세포 성장은 암일 수 있다. 비정상적 세포 성장이 암인 경우에, 치료할 암은 폐암, 골암, 췌장암, 피부암, 두경부암, 피부 또는 안내 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문부암, 위암, 결장암, 유방암, 자궁암, 난관의 암종, 자궁내막의 암종, 자궁경부의 암종, 질의 암종, 외음부의 암종, 호지킨병, 식도암, 소장암, 내분비계암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연부 조직 육종, 요도암, 음경암, 전립선암, 만성 또는 급성 백혈병, 림프구성 림프종, 방광암, 신장암 또는 요관암, 신세포 암종, 신우의 암종, 중추 신경계 (CNS)의 신생물, 원발성 CNS 림프종, 척수축 종양, 뇌간 신경교종 또는 뇌하수체 선종일 수 있다. 한 실시양태에서, 암은 방광암이다. 한 실시양태에서, 방광암은 요로상피 암종이다. 한 실시양태에서, 방광암은 비-근육 침습성 방광암 (NMIBC)이다. 한 실시양태에서, 방광암은 근육 침습성 방광암 (MIBC)이다. 한 실시양태에서, 방광암은 비-전이성 요로상피 암종이다. 한 실시양태에서, 방광암은 전이성 요로상피 암종이다. 한 실시양태에서, 방광암은 비-요로상피 암종이다. 한 실시양태에서, 포유동물은 인간이다.
또한, 포유동물에게 치료 유효량의 본원에 기재된 바와 같은 화합물 또는 염을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 염증성 질환, 알레르기성 질환, 자가면역 질환 및 감염성 질환을 치료하는 방법이 본 발명에서 구현된다. 이 방법은 임의로 본원에 기재된 바와 같은 화합물 또는 염을 항체-약물 접합체의 성분으로서, 또는 입자-기반 전달 시스템의 성분으로서 사용할 수 있다. 본 발명의 한 실시양태는 포유동물에서 염증성 질환을 치료하는 방법이다. 본 발명의 한 실시양태는 알레르기성 질환을 치료하는 방법이다. 본 발명의 한 실시양태는 자가면역 질환을 치료하는 방법이다. 본 발명의 한 실시양태는 감염성 질환을 치료하는 방법이다. 한 실시양태에서, 포유동물은 인간이다.
포유동물에서의 비정상적 세포 성장의 치료에 유용한 의약의 제조를 위한 본원에 기재된 바와 같은 화합물 또는 염의 용도가 또한 본 발명에서 구현된다. 이러한 실시양태에서, 비정상적 세포 성장은 암일 수 있다. 비정상적 세포 성장이 암인 경우에, 치료할 암은 폐암, 골암, 췌장암, 피부암, 두경부암, 피부 또는 안내 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문부암, 위암, 결장암, 유방암, 자궁암, 난관의 암종, 자궁내막의 암종, 자궁경부의 암종, 질의 암종, 외음부의 암종, 호지킨병, 식도암, 소장암, 내분비계암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연부 조직 육종, 요도암, 음경암, 전립선암, 만성 또는 급성 백혈병, 림프구성 림프종, 방광암, 신장암 또는 요관암, 신세포 암종, 신우의 암종, 중추 신경계 (CNS)의 신생물, 원발성 CNS 림프종, 척수축 종양, 뇌간 신경교종 또는 뇌하수체 선종일 수 있다. 한 실시양태에서, 암은 방광암이다. 한 실시양태에서, 방광암은 요로상피 암종이다. 한 실시양태에서, 방광암은 비-근육 침습성 방광암 (NMIBC)이다. 한 실시양태에서, 방광암은 근육 침습성 방광암 (MIBC)이다. 한 실시양태에서, 방광암은 비-전이성 요로상피 암종이다. 한 실시양태에서, 방광암은 전이성 요로상피 암종이다. 한 실시양태에서, 방광암은 비-요로상피 암종이다. 한 실시양태에서, 포유동물은 인간이다.
추가로, 본 발명의 실시양태는 포유동물에게 유효량의 본원에 기재된 바와 같은 화합물 또는 염을 투여하는 단계를 포함하는, 상기 포유동물에서 STING의 활성을 상향조절하는 방법; 및/또는 포유동물에게 유효량의 본원에 기재된 바와 같은 화합물 또는 염을 투여하는 단계를 포함하는, 상기 포유동물에서 인터페론-베타 수준을 증가시키는 방법이 제공되는 실시양태를 포함한다. 한 실시양태에서, 포유동물은 인간이다.
본 발명의 추가 실시양태는 포유동물에게 유효량의 본원에 기재된 화합물 또는 염을 투여하는 단계를 포함하는, 상기 포유동물에서 STING를 활성화시키는 방법이 제공되는 실시양태를 포함한다. 포유동물에게 유효량의 본원에 기재된 화합물 또는 염을 투여하는 단계를 포함하는, 상기 포유동물에서 선천성 면역 반응을 자극하는 방법이 또한 제공된다. 한 실시양태에서, 포유동물은 인간이다.
정의
달리 언급되지 않는 한, 본 명세서 및 청구항에서 사용되는 다음의 용어는 이하에서 논의되는 의미를 갖는다. 본 섹션에서 정의된 가변기, 예컨대 R, X, n 등은 단지 본 섹션 내에서 참조를 위한 것이고, 본 정의 섹션 밖에서 사용될 경우에 동일한 의미를 갖는 것으로 의도되지 않는다. 또한, 본원에 정의된 많은 기는 임의로 치환될 수 있다. 본 정의 섹션에서 전형적인 치환기의 목록은 예시적인 것이고, 본 명세서 및 청구 범위 내의 다른 곳에 정의된 치환기를 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
"알케닐"은, 적어도 2개의 탄소 원자 및 적어도 1개의 탄소-탄소 이중 결합으로 이루어진, 본원에 정의된 바와 같은 알킬 기를 지칭한다. 대표적인 예는 에테닐, 1-프로페닐, 2-프로페닐, 1-, 2-, 또는 3-부테닐 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. "알케닐렌"은 알케닐의 2가 형태를 지칭한다.
"알콕시"는 -O-알킬을 지칭하며, 여기서 알킬은 바람직하게는 C1-C8, C1-C7, C1-C6, C1-C5, C1-C4, C1-C3, C1-C2 또는 C1 알킬이다.
"알킬"은 1 내지 20개의 탄소 원자 ("(C1-C20)알킬"), 바람직하게는 1 내지 12개의 탄소 원자 ("(C1-C12)알킬"), 보다 바람직하게는 1 내지 8개의 탄소 원자 ("(C1-C8)알킬"), 또는 1 내지 6개의 탄소 원자 ("(C1-C6)알킬"), 또는 1 내지 4개의 탄소 원자 ("(C1-C4)알킬")의 직쇄 및 분지쇄 기를 포함하는 포화 지방족 탄화수소 라디칼을 지칭한다. 알킬 기의 예는 메틸, 에틸, 프로필, 2-프로필, n-부틸, 이소-부틸, tert-부틸, 펜틸, 네오펜틸 등을 포함한다. 알킬은 치환되거나 또는 비치환될 수 있다. 전형적인 치환기는 시클로알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로지환족, 히드록시, 알콕시, 아릴옥시, 메르캅토, 알킬티오, 아릴티오, 시아노, 할로겐, 카르보닐, 티오카르보닐, O-카르바밀, N-카르바밀, O-티오카르바밀, N-티오카르바밀, C-아미도, N-아미도, C-카르복시, O-카르복시, 니트로, 실릴, 아미노 및 -NRxRy (여기서 Rx 및 Ry는 예를 들어 수소, 알킬, 시클로알킬, 아릴, 카르보닐, 아세틸, 술포닐, 트리플루오로메탄술포닐임), 및 조합된 5- 또는 6-원 헤테로지환족 고리를 포함한다. "할로알킬", 예를 들어 (C1-C8)할로알킬은 1개 이상, 바람직하게는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 할로 치환기를 갖는 알킬을 지칭한다. "알킬렌"은 알킬의 2가 형태를 지칭한다.
"알키닐"은, 적어도 2개의 탄소 원자 및 적어도 1개의 탄소-탄소 삼중 결합으로 이루어진, 본원에 정의된 바와 같은 알킬 기를 지칭한다. 대표적인 예는 에티닐, 1-프로피닐, 2-프로피닐, 1-, 2-, 또는 3-부티닐 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. "알키닐렌"은 알키닐의 2가 형태를 지칭한다.
"아미노"는 -NRxRy 기를 지칭하며, 여기서 Rx 및 Ry는 둘 다 수소, 즉 -NH2이다.
"시아노"는 -C≡N 기를 지칭한다. 시아노는 CN으로 표현될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "시클로알킬"은, 특정 실시양태에서, 3 내지 10개의 탄소 원자를 함유하는 비방향족, 모노시클릭, 융합 또는 가교된 비시클릭 또는 트리시클릭 카르보시클릭 고리 기를 지칭한다. 본원에 사용된 시클로알킬 기는 임의로 1 또는 2개의 이중 결합을 함유할 수 있다. 용어 "시클로알킬"은 또한 단일 원자에 의해 연결된 다중-고리계를 포함하는 스피로시클릭 카르보시클릭 기를 포함한다. 용어 "C3-C10 시클로알킬", "C3-C7 시클로알킬", "C3-C6 시클로알킬", "C3-C5 시클로알킬", "C3-C4 시클로알킬", 및 "C5-C7 시클로알킬"은 각각 3 내지 10개, 3 내지 7개, 3 내지 6개, 3 내지 5개, 3 내지 4개, 및 5 내지 7개의 탄소 원자를 함유한다. 시클로알킬 기는 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로헵틸, 시클로펜테닐, 시클로헥세닐, 옥타히드로펜탈레닐, 옥타히드로-1H-인데닐, 비시클로[2.2.1]헵타닐, 비시클로[3.2.1]옥타닐, 비시클로[5.2.0]노나닐, 아다만타닐, 시클로헥사디에닐, 아다만타닐, 시클로헵타닐, 시클로헵타트리에닐 등을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 시클로알킬 기는 치환 또는 비치환될 수 있다. 전형적인 치환기는 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로지환족, 히드록시, 알콕시, 아릴옥시, 메르캅토, 알킬티오, 아릴티오, 시아노, 할로, 카르보닐, 티오카르보닐, C-카르복시, O-카르복시, O-카르바밀, N-카르바밀, C-아미도, N-아미도, 니트로 및 아미노를 포함한다.
"할로겐" 또는 접두어 "할로"는 플루오로, 클로로, 브로모 및 아이오도를 지칭한다. 바람직하게는 할로겐 또는 할로는 플루오로 또는 클로로를 지칭한다.
"헤테로원자"는 O, N, Si, S 및 P로 이루어진 군으로부터 선택된 원자를 지칭하며, 여기서 질소 및 황 원자는 임의로 산화될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "헤테로사이클"은 특정 실시양태에서 총 3 내지 10개의 고리 원자, 3 내지 7개의 고리 원자, 또는 4 내지 6개의 고리 원자를 함유하며, 여기서 1, 1 내지 2, 1 내지 3, 또는 1 내지 4개의 고리 원자가 헤테로원자인 비-방향족, 모노시클릭, 융합 또는 가교된 비시클릭 또는 트리시클릭, 또는 스피로시클릭 고리 기를 지칭한다. 상기 헤테로원자는 독립적으로 질소, 산소 및 황으로부터 선택되고, 여기서 황 원자는 1 또는 2개의 산소 원자로 임의로 산화될 수 있고, 나머지 고리 원자는 탄소이며, 단 이러한 고리계는 2개의 인접한 산소 원자 또는 2개의 인접한 황 원자를 함유하지 않을 수 있다. 헤테로사이클 고리는 또한 임의의 이용가능한 탄소 원자에서 옥소 (=O) 기에 의해 치환될 수 있다. 고리는 또한 1개 이상의 이중 결합을 가질 수 있다. 또한, 가능하다면 이러한 기는 탄소 원자 또는 헤테로원자를 통해 본원에 개시된 실시양태의 화합물의 나머지에 결합될 수 있다. 헤테로사이클 기의 예는 하기를 포함하나 이에 제한되지는 않는다:
Figure pct00040
헤테로사이클 기는 임의로 치환된다. 전형적인 치환기는 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로지환족, 히드록시, 알콕시, 아릴옥시, 메르캅토, 알킬티오, 아릴티오, 시아노, 할로, 카르보닐, 티오카르보닐, C-카르복시, O-카르복시, O-카르바밀, N-카르바밀, C-아미도, N-아미도, 니트로 및 아미노를 포함한다.
"히드록시" 또는 "히드록실"은 -OH 기를 지칭한다.
"아릴" 또는 "방향족"은 방향족성의 널리 공지된 특징을 갖는 임의로 치환된 모노시클릭, 비아릴 또는 융합된 비시클릭 또는 폴리시클릭 고리계를 지칭하며, 여기서 적어도 1개의 고리는 완전 공액 파이-전자계를 함유한다. 전형적으로 아릴 기는 고리원으로서 6 내지 20개의 탄소 원자 ("C6-C20 아릴"), 바람직하게는 6 내지 14개의 탄소 원자 ("C6-C14 아릴") 또는 보다 바람직하게는 6 내지 12개의 탄소 원자 ("C6-C12 아릴")를 함유한다. 융합된 아릴 기는 또 다른 아릴 고리에 융합되거나, 또는 포화 또는 부분 불포화 카르보시클릭 또는 헤테로시클릭 고리에 융합된 아릴 고리 (예를 들어, 페닐 고리)를 포함할 수 있다. 이러한 융합된 아릴 고리계 상의 염기 분자에 대한 부착 지점은 방향족 부분의 C 원자 또는 고리계의 비-방향족 부분의 C 또는 N 원자일 수 있다. 아릴 기의 예는 비제한적으로 페닐, 비페닐, 나프틸, 안트라세닐, 페난트레닐, 인다닐, 인데닐 및 테트라히드로나프틸을 포함한다. 아릴 기는 비치환되거나 또는 본원에 추가로 기재된 바와 같이 치환될 수 있다.
유사하게, "헤테로아릴" 또는 "헤테로방향족"은, 명시된 개수의 고리 원자를 함유하고 방향족 고리 내의 고리원으로서 N, O 및 S로부터 선택된 1개 이상의 헤테로원자를 포함하는, 방향족성의 널리 공지된 특징을 갖는 모노시클릭, 헤테로비아릴 또는 융합된 비시클릭 또는 폴리시클릭 고리계를 지칭한다. 헤테로원자의 포함은 5-원 고리 뿐만 아니라 6-원 고리에서 방향족성을 허용한다. 전형적으로, 헤테로아릴 기는 5 내지 20개의 고리 원자 ("5-20원 헤테로아릴"), 바람직하게는 5 내지 14개의 고리 원자 ("5-14원 헤테로아릴"), 보다 바람직하게는 5 내지 12개의 고리 원자 ("5-12원 헤테로아릴")를 함유한다. 헤테로아릴 고리는 방향족성이 유지되도록 헤테로방향족 고리의 고리 원자를 통해 염기 분자에 부착된다. 따라서, 6-원 헤테로아릴 고리는 고리 C 원자를 통해 염기 분자에 부착될 수 있는 반면, 5-원 헤테로아릴 고리는 고리 C 또는 N 원자를 통해 염기 분자에 부착될 수 있다. 비치환된 헤테로아릴 기의 예는 종종 피롤, 푸란, 티오펜, 피라졸, 이미다졸, 이속사졸, 옥사졸, 이소티아졸, 티아졸, 트리아졸, 옥사디아졸, 티아디아졸, 테트라졸, 피리딘, 피리다진, 피리미딘, 피라진, 벤조푸란, 벤조티오펜, 인돌, 벤즈이미다졸, 인다졸, 퀴놀린, 이소퀴놀린, 퓨린, 트리아진, 나프티리딘 및 카르바졸을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 빈번한 바람직한 실시양태에서, 5- 또는 6-원 헤테로아릴 기는 피롤릴, 푸라닐, 티오페닐, 피라졸릴, 이미다졸릴, 이속사졸릴, 옥사졸릴, 이소티아졸릴, 티아졸릴, 트리아졸릴, 피리디닐, 피리미디닐, 피라지닐 및 피리다지닐 고리로 이루어진 군으로부터 선택된다. 헤테로아릴 기는 비치환되거나 또는 본원에 추가로 기재된 바와 같이 치환될 수 있다.
모노시클릭 헤테로아릴 기의 예시적인 예는 하기를 포함하나 이에 제한되지는 않는다:
Figure pct00041
융합된 고리 헤테로아릴 기의 예시적인 예는 하기를 포함하나 이에 제한되지는 않는다:
Figure pct00042
Figure pct00043
임의로 치환된 바와 같은 본원에 기재된 아릴 및 헤테로아릴 모이어티는 달리 나타내지 않는 한 독립적으로 선택된 1개 이상의 치환기에 의해 치환될 수 있다. 치환기의 총수는, 치환이 화학적으로 타당하고 아릴 및 헤테로아릴 고리의 경우에 방향족성이 유지되는 정도로, 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로시클릴 모이어티 상의 수소 원자의 총수와 동일할 수 있다. 임의로 치환된 아릴, 헤테로아릴 또는 헤테로시클릴 기는 전형적으로 1 내지 5개의 임의적인 치환기, 때때로 1 내지 4개의 임의적인 치환기, 바람직하게는 1 내지 3개의 임의적인 치환기, 또는 보다 바람직하게는 1-2개의 임의적인 치환기를 함유한다. 전형적인 치환기는 알킬, 아릴, 헤테로아릴, 헤테로지환족, 히드록시, 알콕시, 아릴옥시, 메르캅토, 알킬티오, 아릴티오, 시아노, 할로, 카르보닐, 티오카르보닐, C-카르복시, O-카르복시, O-카르바밀, N-카르바밀, C-아미도, N-아미도, 니트로 및 아미노를 포함한다.
"시험관내"는 인공 환경에서, 예컨대 예를 들어 비제한적으로 시험 튜브 또는 배양 배지에서 수행되는 절차를 지칭한다.
"생체내"는 살아있는 유기체, 예컨대 비제한적으로 마우스, 래트, 토끼 및/또는 인간 내에서 수행되는 절차를 지칭한다.
"임의적인" 또는 "임의로"는 이어서 기재된 사건 또는 상황이 발생할 수 있으나 반드시 발생할 필요는 없다는 것을 의미하며, 상기 기재는 사건 또는 상황이 발생하는 경우 및 발생하지 않는 경우를 포함한다. 예를 들어, "알킬기로 임의로 치환된 헤테로사이클 기"는 알킬이 존재할 수 있으나 반드시 존재할 필요는 없으며, 상기 기재는 헤테로사이클 기가 알킬 기로 치환되는 상황 및 헤테로시클로 기가 알킬 기로 치환되지 않는 상황을 포함함을 의미한다.
"유기체"는 적어도 하나의 세포로 구성되는 임의의 살아있는 실체를 지칭한다. 살아있는 유기체는 예를 들어, 단일의 진핵 세포만큼 단순하거나 인간을 포함하는 포유동물만큼 복잡할 수 있다.
"제약상 허용되는 부형제"는 화합물의 투여를 더욱 용이하게 하기 위해 제약 조성물에 첨가되는 불활성 물질을 지칭한다. 부형제의 예는 제한 없이 탄산칼슘, 인산칼슘, 다양한 당류 및 전분의 유형, 셀룰로스 유도체, 젤라틴, 식물성 기름 및 폴리에틸렌 글리콜을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "제약상 허용되는 염"은 모 화합물의 생물학적 유효성 및 특성을 보유하는 그러한 염을 지칭한다. 이러한 염은 다음을 포함한다:
(i) 모 화합물의 유리 염기와 무기 산 예컨대 염산, 브로민화수소산, 질산, 인산, 황산 및 과염소산 등, 또는 유기 산 예컨대 아세트산, 옥살산, (D) 또는 (L) 말산, 말레산, 메탄술폰산, 에탄술폰산, p-톨루엔술폰산, 살리실산, 타르타르산, 시트르산, 숙신산 또는 말론산 등의 반응에 의해 수득될 수 있는 산 부가염; 또는
(ii) 모 화합물에 존재하는 산성 양성자가 금속 이온, 예를 들어 알칼리 금속 이온, 알칼리 토금속 이온, 또는 알루미늄 이온에 의해 대체되거나; 또는 유기 염기, 예컨대 에탄올아민, 디에탄올아민, 트리에탄올아민, 트로메타민, N-메틸글루카민, 트리알킬암모늄 등과 배위 화합물을 형성하는 경우에 형성된 염.
"제약 조성물"은 본원에 기재된 화합물 또는 그의 생리학상/제약상 허용되는 염, 용매화물, 수화물 또는 전구약물 중 1종 이상과, 다른 화학적 성분, 예컨대 생리학상/제약상 허용되는 담체 및 부형제의 혼합물을 지칭한다. 제약 조성물의 목적은 유기체로의 화합물의 투여를 용이하게 하는 것이다.
본원에 사용된 "생리학상/제약상 허용되는 담체"는 유기체에 상당한 자극을 일으키지 않고 투여된 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 해치지 않는 담체 또는 희석제를 지칭한다.
"치료 유효량"은 치료되는 장애의 증상 중 1종 이상을 어느 정도까지 경감시킬, 투여되는 화합물의 양을 지칭한다. 암의 치료에 관하여, 치료 유효량은 하기 효과 중 적어도 하나를 갖는 양을 지칭한다:
(1) 종양의 크기 축소;
(2) 종양 전이의 억제 (즉, 어느 정도까지 늦추거나 바람직하게는 멈추게 함);
(3) 종양 성장의 어느 정도까지의 억제 (즉, 어느 정도까지 늦추거나 바람직하게는 멈추게 함), 및
(4) 암과 연관된 1종 이상의 증상의 어느 정도까지의 완화 (또는 바람직하게는 제거).
"치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 세포 질환 및/또는 이의 수반되는 증상을 경감시키거나 없애는 방법을 지칭한다. 특히 암과 관련하여, 이들 용어는 단순히 암에 걸린 개체의 기대 수명이 증가되거나 또는 질환의 증상 중 1종 이상이 감소될 것임을 의미한다.
인터페론 유전자의 자극인자 (STING) 단백질은 제1형 인터페론 신호전달에서 시토졸 DNA 센서 및 어댑터 단백질 둘 다로서 기능한다. 용어 "STING" 및 "인터페론 유전자의 자극인자"는 STING 단백질의 임의의 형태, 뿐만 아니라 STING의 활성의 적어도 일부를 보유하는 변이체, 이소형 및 종 상동체를 지칭한다. 예컨대 인간 STING에 대한 구체적 언급에 의해 달리 나타내지 않는 한, STING는 모든 포유동물 종, 예를 들어 인간, 원숭이 및 마우스의 천연 서열 STING를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "STING 활성화제" 또는 "STING 효능제"는 결합 시, (1) STING를 자극 또는 활성화시키고, STING 기능과 연관된 분자의 활성화를 특징으로 하는 하류 신호 전달을 유도하거나; (2) STING의 활성, 기능 또는 존재를 증진, 증가, 촉진, 유도 또는 연장시키거나, 또는 (3) STING의 발현을 증진, 증가, 촉진 또는 유도하는 화합물을 지칭한다. 이러한 작용은 STING, IRF3 및/또는 NF-κB의 직접 인산화를 포함하나 이에 제한되지는 않으며, 또한 STAT6을 포함할 수 있다. STING 경로 활성화는, 예를 들어 제1형 인터페론 (주로 IFN-α 및 IFN-β)의 증가된 생산 및 인터페론-자극된 유전자의 발현을 유발한다 (Chen H, et al. "Activation of STAT6 by STING is Critical for Antiviral Innate Immunity". Cell, 2011, vol 14: 433-446; and Liu S-Y., et al. "Systematic identification of type I and type II interferon-induced antiviral factors". Proc. Natl. Acad. Sci. 2012: vol 109 4239-4244).
본원에 사용된 용어 "STING-조정된"은 염증성 질환, 알레르기성 및 자가면역 질환, 감염성 질환, 암을 포함하나 이에 제한되지는 않는 STING에 의해 직접적으로 또는 STING 경로를 통해 및 백신 보조제로서 영향을 받는 상태를 지칭한다.
본 발명의 화합물을 합성하는 일반 반응식은 본원의 실시예 섹션에서 찾을 수 있다.
달리 나타내지 않는 한, 본원에서 본 발명의 화합물에 대한 모든 언급은, 그의 염, 용매화물, 수화물 및 복합체, 및 그의 염의 용매화물, 수화물 및 복합체, 예컨대 그의 호변이성질체, 다형체, 입체이성질체 및 동위원소 표지된 버전에 대한 언급을 포함한다.
제약상 허용되는 염은 산 부가염 및 염기 염 (2염을 포함)을 포함한다.
적합한 산 부가염은 비-독성 염을 형성하는 산으로부터 형성된다. 예는 아세테이트, 아스파르테이트, 벤조에이트, 베실레이트, 비카르보네이트/카르보네이트, 비술페이트/술페이트, 보레이트, 캄실레이트, 시트레이트, 에디실레이트, 에실레이트, 포르메이트, 푸마레이트, 글루셉테이트, 글루코네이트, 글루쿠로네이트, 헥사플루오로포스페이트, 히벤제이트, 히드로클로라이드/클로라이드, 히드로브로마이드/브로마이드, 히드로아이오다이드/아이오다이드, 이세티오네이트, 락테이트, 말레이트, 말레에이트, 말로네이트, 메실레이트, 메틸술페이트, 나프틸레이트, 2-나프실레이트, 니코티네이트, 니트레이트, 오로테이트, 옥살레이트, 팔미테이트, 파모에이트, 포스페이트/히드로겐 포스페이트/디히드로겐 포스페이트, 사카레이트, 스테아레이트, 숙시네이트, 타르트레이트, 토실레이트 및 트리플루오로아세테이트 염을 포함한다.
적합한 염기 염은 비-독성 염을 형성하는 염기로부터 형성된다. 예는 알루미늄, 아르기닌, 벤자틴, 칼슘, 콜린, 디에틸아민, 디올아민, 글리신, 리신, 마그네슘, 메글루민, 올라민, 칼륨, 나트륨, 트로메타민 및 아연 염을 포함한다. 적합한 염에 대한 검토를 위해, 문헌 ["Handbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use" by Stahl and Wermuth (Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2002)]를 참조하며, 그의 개시내용은 그 전문이 참조로 본원에 포함된다.
본 발명 화합물의 제약상 허용되는 염은 화합물의 용액과 목적하는 산 또는 염기를 적절하게 서로 혼합하는 것에 의해 용이하게 제조될 수 있다. 염은 용액으로부터 침전시켜 여과에 의해 수집할 수 있거나, 또는 용매의 증발에 의해 회수할 수 있다. 염의 이온화 정도는 완전히 이온화된 것에서부터 거의 이온화되지 않은 것까지 다양할 수 있다.
본 발명의 화합물은 용매화되지 않은 형태 및 용매화된 형태 둘 다로 존재할 수 있다. 용어 '용매화물'은 본 발명의 화합물과 1개 이상의 제약상 허용되는 용매 분자, 예를 들어, 에탄올을 포함하는 분자 복합체를 기재하기 위해 본원에 사용된다. 용어 '수화물'은 용매가 물인 경우에 사용된다. 본 발명에 따른 제약상 허용되는 용매화물은 결정화의 용매가 동위원소 치환될 수 있는 수화물 및 용매화물, 예를 들어 D2O, d6-아세톤, d6-DMSO를 포함한다.
또한 상기 언급된 용매화물과 달리 약물 및 호스트가 화학량론적 또는 비-화학량론적 양으로 존재하는 약물-호스트 포접 복합체인 클라트레이트와 같은 복합체가 본 발명의 범주에 포함된다. 화학량론적 또는 비-화학량론적 양으로 존재할 수 있는 2종 이상의 유기 및/또는 무기 성분을 함유하는 약물의 복합체가 또한 포함된다. 생성된 복합체는 이온화, 부분 이온화, 또는 비-이온화될 수 있다. 이러한 복합체의 검토를 위해, 문헌 [J Pharm Sci, 64 (8), 1269-1288 by Haleblian (August 1975)]을 참조하며, 그 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
또한 본 발명의 화합물의 다형체, 전구약물 및 이성질체 (광학 이성질체, 기하 이성질체 및 호변이성질체 포함)가 본 발명의 범주 내에 있다.
본 발명의 화합물의 유도체는 그 자체로는 약리학적 활성을 거의 또는 전혀 갖지 않지만, 환자에게 투여되는 경우에 예를 들어 가수분해성 절단에 의해 본 발명의 화합물로 전환될 수 있다. 이러한 유도체는 '전구약물'로 지칭된다. 전구약물의 사용에 대한 추가의 정보는 문헌 ['Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14, ACS Symposium Series (T Higuchi and W Stella) and 'Bioreversible Carriers in Drug Design', Pergamon Press, 1987 (ed. E B Roche, American Pharmaceutical Association), the disclosures of which are incorporated herein by reference in their entireties]에서 찾을 수 있다.
본 발명에 따른 전구약물은, 예를 들어 본 발명의 화합물에 존재하는 적절한 관능기를, 예를 들어 문헌 ["Design of Prodrugs" by H Bundgaard (Elsevier, 1985)]에 기재된 바와 같은 '전구-모이어티'로서 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 특정 모이어티로 대체함으로써 생성될 수 있으며, 상기 문헌의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
본 발명에 따른 전구약물의 일부 예는 다음을 포함한다:
(i) 화합물이 카르복실산 관능기 -(COOH)를 함유하는 경우에, 그의 에스테르, 예를 들어 수소의 (C1-C8)알킬로의 대체;
(ii) 화합물이 알콜 관능기 (-OH)를 함유하는 경우에, 그의 에테르, 예를 들어 수소의 (C1-C6)알카노일옥시메틸로의 대체; 및
(iii) 화합물이 1급 또는 2급 아미노 관능기 (-NH2 또는 -NHR, 여기서 R ≠ H)를 함유하는 경우에, 그의 아미드, 예를 들어 1개 또는 2개의 수소의 (C1-C10)알카노일로의 대체.
상기 예에 따른 대체 기의 추가의 예 및 다른 전구약물 유형의 예는 상기 언급된 참고문헌에서 찾을 수 있다.
마지막으로, 본 발명의 특정 화합물은 그 자체로 본 발명의 화합물 중 다른 화합물의 전구약물로서의 역할을 할 수 있다.
1개 이상의 비대칭 탄소 및/또는 인 원자를 함유하는 본 발명의 화합물은 2종 이상의 입체이성질체로서 존재할 수 있다. 본 발명에 따른 화합물이 적어도 1개의 키랄 중심을 갖는 경우, 그들은 따라서 거울상이성질체로서 존재할 수 있다. 화합물이 2개 이상의 키랄 중심을 보유하는 경우, 이들은 추가적으로 부분입체이성질체로서 존재할 수 있다. 유사하게, 본 발명의 화합물이 시클로프로필 기 또는 다른 시클릭 기 (키랄성이 존재하는 경우) 및 알케닐 또는 알케닐렌 기를 함유하는 경우에, 기하학적 시스/트랜스 (또는 Z/E) 이성질체가 가능하다. 화합물이, 예를 들어 케토 또는 옥심 기 또는 방향족 모이어티를 함유하는 경우에, 호변이성질체 이성질현상 ('호변이성질현상')이 발생할 수 있다. 단일 화합물은 1종 초과의 이성질현상 유형을 나타낼 수 있다.
1종 초과의 유형의 이성질현상을 나타내는 화합물을 포함한 본 발명 화합물의 모든 입체이성질체, 기하 이성질체 및 호변이성질체 형태, 및 그의 1종 이상의 혼합물이 본 발명의 범주 내에 포함된다. 또한 반대이온이 광학 활성인 산 부가염 또는 염기 염, 예를 들어 D-락테이트 또는 L-리신, 또는 라세미, 예를 들어 DL-타르트레이트 또는 DL-아르기닌이 포함된다.
시스/트랜스 이성질체는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 통상적인 기술, 예를 들어 크로마토그래피 및 분별 결정화에 의해 분리할 수 있다.
개개의 거울상이성질체의 제조/단리에 대한 통상적인 기술은 적합한 광학적으로 순수한 전구체로부터의 키랄 합성 또는 예를 들어 키랄 고압 액체 크로마토그래피 (HPLC) 또는 초임계 유체 크로마토그래피 (SFC)를 사용한 라세미체 (또는 염 또는 유도체의 라세미체)의 분해를 포함한다.
대안적으로, 라세미체 (또는 라세미 전구체)는 적합한 광학 활성 화합물, 예를 들어 알콜, 또는 화합물이 산성 또는 염기성 모이어티를 함유하는 경우에, 산 또는 염기, 예컨대 타르타르산 또는 1-페닐에틸아민과 반응시킬 수 있다. 생성된 부분입체이성질체 혼합물을 크로마토그래피 및/또는 분별 결정화할 수 있고, 부분입체이성질체 중 1종 또는 둘 다를 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지된 방법에 의해 상응하는 순수한 거울상이성질체(들)로 전환시킬 수 있다.
입체이성질체 집성체는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 통상적인 기술로 분리될 수 있고; 예를 들어, 문헌 ["Stereochemistry of Organic Compounds" by E L Eliel (Wiley, New York, 1994)]을 참조하며, 그 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
본 발명은 또한 1개 이상의 원자가 동일한 원자 번호를 갖지만 자연에서 통상적으로 발견되는 원자 질량 또는 질량수와 상이한 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자에 의해 대체된 본 발명의 동위원소-표지된 화합물을 포함한다. 본 발명의 화합물에 포함되기에 적합한 동위원소의 예는 수소의 동위원소, 예컨대 2H 및 3H, 탄소의 동위원소, 예컨대 11C, 13C 및 14C, 염소의 동위원소, 예컨대 36Cl, 플루오린의 동위원소, 예컨대 18F, 아이오딘의 동위원소, 예컨대 123I 및 125I, 질소의 동위원소, 예컨대 13N 및 15N, 산소의 동위원소, 예컨대 15O, 17O 및 18O, 인의 동위원소, 예컨대 32P, 및 황의 동위원소, 예컨대 35S를 포함한다. 본 발명의 특정 동위원소-표지된 화합물, 예를 들어 방사성 동위원소를 혼입시킨 화합물은 약물 및/또는 기질 조직 분포 연구에 유용하다. 방사성 동위원소 삼중수소, 3H, 및 탄소-14, 14C는 혼입의 용이성 및 용이한 검출 수단의 관점에서 이러한 목적에 특히 유용하다. 보다 무거운 동위원소, 예컨대 중수소, 2H로의 치환은 보다 큰 대사 안정성, 예를 들어 증가된 생체내 반감기 또는 감소된 투여량 요건으로 인한 특정의 치료 이점을 제공할 수 있고, 따라서 일부 상황에서 바람직할 수 있다. 양전자 방출 동위원소, 예컨대 11C, 18F, 15O 및 13N으로의 치환은 기질 수용체 점유율을 조사하기 위한 양전자 방출 단층촬영 (PET) 연구에 유용할 수 있다.
동위원소-표지된 본 발명의 화합물은 일반적으로 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 통상적인 기술에 의해 또는 본원에 기재된 것과 유사한 방법에 의해, 달리 사용되는 비-표지된 시약 대신 적절한 동위원소-표지된 시약을 사용하여 제조될 수 있다.
제약 용도를 위해 의도된 본 발명의 화합물은 결정질 또는 무정형 생성물 또는 그의 혼합물로서 투여될 수 있다. 이들은 침전, 결정화, 동결 건조, 분무 건조, 또는 증발 건조와 같은 방법에 의해, 예를 들어 고체 플러그, 분말, 또는 필름으로서 수득될 수 있다. 마이크로웨이브 또는 고주파가 이 목적을 위해 사용될 수 있다.
화합물은 단독으로 또는 1종 이상의 본 발명의 다른 화합물과 조합하여 투여될 수 있다. 일반적으로, 이들은 1종 이상의 제약상 허용되는 부형제와 회합된 제제로서 투여될 것이다. 용어 "부형제"는 본원에서 본 발명의 화합물(들) 이외의 임의의 성분을 기재하기 위해 사용된다. 부형제의 선택은 특정한 투여 방식, 용해도 및 안정성에 대한 부형제의 효과, 및 투여 형태의 성질과 같은 인자에 따라 크게 달라질 것이다.
본원에 기재된 조성물은 적절한 면역 반응을 유도, 변형 또는 자극하기에 충분한 양으로 단독으로 또는 제약상 허용되는 부형제와 조합되어 숙주에게 투여될 수 있다. 면역 반응은 비제한적으로, 특이적 면역 반응, 비-특이적 면역 반응, 특이적 및 비-특이적 반응 둘 다, 선천성 반응, 1차 면역 반응, 적응 면역, 2차 면역 반응, 기억 면역 반응, 면역 세포 활성화, 면역 세포 증식, 면역 세포 분화, 및 시토카인 발현을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 조성물은 1종 이상의 미리 결정된 항원에 대한 면역 반응을 자극하도록 의도된 백신; 아주반트; CTLA-4 및 PD-1 경로 길항제, 지질, 리포솜, 화학요법제, 면역조정 세포주 등을 포함한 1종 이상의 추가의 조성물과 함께 투여된다.
본 발명의 일부 측면에서, 본원에 기재된 방법은 대상체를 추가 형태의 요법으로 치료하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 측면에서, 추가 형태의 요법은 화학요법, 방사선, 수술, 호르몬 요법, 및/또는 부가의 면역요법을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 추가의 항암 요법이다.
개시된 STING 조절 화합물은 초기 치료로서, 또는 통상적인 요법에 비반응성인 암의 치료를 위해 투여될 수 있다. 또한, 개시된 STING 조절 화합물은 다른 요법 (예를 들어, 외과적 절제, 방사선, 추가의 항암 약물 등)과 조합되어 사용되어 상가적 또는 강화된 치료 효과를 도출하고/거나 일부 항암제의 세포독성을 감소시킬 수 있다. 본 발명의 STING 조절 화합물은 추가의 작용제와 공-투여 또는 공-제제화될 수 있거나, 또는 추가의 작용제와 임의의 순서로 연속 투여를 위해 제제화될 수 있다.
본 발명의 STING 조정 화합물은 치료 항체, ADC, 면역조정제, 세포독성제 및 세포증식억제제를 포함하나 이에 제한되지는 않는 다른 치료제와 조합되어 사용될 수 있다. 세포독성 효과는 표적 세포 (즉, 종양 세포)의 고갈, 제거 및/또는 사멸을 지칭한다. 세포독성제는 세포에 대하여 세포독성 및/또는 세포증식억제 효과를 갖는 작용제를 지칭한다. 세포증식 억제 효과는 세포 증식의 억제를 지칭한다. 세포증식억제제는 세포에 대해 세포증식억제성 효과를 가짐으로써, 세포의 특정 하위세트 (즉, 종양 세포)의 성장 및/또는 확장을 억제하는 작용제를 지칭한다. 면역조정제는 시토카인 및/또는 항체의 생산 및/또는 T 세포 기능의 조정을 통해 면역 반응을 자극함으로써, 직접적으로 또는 간접적으로 또 다른 작용제가 더 효과적이게 하여 세포의 하위세트 (즉, 종양 세포)의 성장을 억제 또는 감소시키는 작용제를 지칭한다. 본 발명의 화합물 및 1종 이상의 다른 치료제는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 표준 제약 실시에 따라 동일하거나 상이한 투여 경로를 통해 동일하거나 상이한 투여 스케줄로, 동일하거나 개별적인 투여 형태의 일부로서 투여될 수 있다.
한 실시양태에서, 다른 치료제는 인터페론이다. 각각 상호교환가능하게 사용될 수 있는 용어 "인터페론" 또는 "IFN" 또는 "INF"는 바이러스 복제 및 세포 증식을 억제하고 면역 반응을 조정하는 고도로 상동성인 종-종 단백질의 패밀리의 임의의 구성원을 지칭한다. 예를 들어, 인간 인터페론은 다음 3가지 부류로 이루어진 군이다: 인터페론-알파, 인터페론-베타 및 인터페론-오메가를 포함하는 유형 I; 인터페론-감마를 포함하는 유형 II, 및 인터페론-람다를 포함하는 유형 III. 상업적으로 입수가능한 개발된 인터페론의 재조합 형태는 본원에 사용된 용어 "인터페론"을 포괄한다. 인터페론의 하위유형, 예컨대 화학적으로 변형된 또는 돌연변이된 인터페론이 또한 본원에 사용된 용어 "인터페론"에 포괄된다. 화학적으로 변형된 인터페론은 PEG화 인터페론 및 글리코실화 인터페론을 포함할 수 있다. 인터페론의 예는 또한 인터페론-알파-2a, 인터페론-알파-2b, 인터페론-알파-n1, 인터페론-베타-1a, 인터페론-베타-1b, 인터페론-람다-1, 인터페론-람다-2 및 인터페론-람다-3을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. PEG화 인터페론의 예는 PEG화 인터페론-알파-2a 및 PEG화 인터페론-알파-2b를 포함한다.
한 실시양태에서, 다른 치료제는 CTLA-4 경로 길항제이다. 한 실시양태에서, 다른 치료제는 항-4-1BB 항체이다.
본원에 사용된 용어 "4-1BB 항체"는 인간 4-1BB 수용체에 결합할 수 있는, 본원에 정의된 바와 같은 항체 (본원에서 "항-4-1BB 항체"로도 지칭됨)를 의미한다. 용어 "4-1BB" 및 "4-1BB 수용체"는 본 출원에서 상호교환가능하게 사용되고, 임의의 형태의 4-1BB 수용체, 뿐만 아니라 4-1BB 수용체의 활성의 적어도 일부를 보유하는 그의 변이체, 이소형 및 종 상동체를 지칭한다. 따라서, 본원에서 정의되고 개시된 바와 같은 결합 분자는 또한 인간 이외의 종으로부터 유래된 4-1BB에도 결합할 수 있다. 다른 경우에서, 결합 분자는 인간 4-1BB에 대하여 완전하게 특이적일 수 있고, 종 또는 다른 유형의 교차 반응성을 보이지 않을 수도 있다. 인간 4-1BB에 대한 구체적인 언급에 의해 달리 나타내지 않는 한, 4-1BB는 모든 포유동물 종, 예를 들어 인간, 개, 고양이, 말 및 소의 천연 서열 4-1BB를 포함한다. 한 예시적인 인간 4-1BB는 255개의 아미노산 단백질 (수탁 번호 NM_001561; NP_001552)이다. 4-1BB는 신호 서열 (아미노산 잔기 1-17), 이어서 세포외 도메인 (169개의 아미노산), 막횡단 영역 (27개의 아미노산), 및 세포내 도메인 (42개의 아미노산)을 포함한다 (Cheuk ATC et al. 2004 Cancer Gene Therapy 11: 215-226). 수용체는 단량체 및 이량체 형태로 세포 표면에서 발현되고, 4-1BB 리간드와 삼량체를 형성하여 신호전달할 가능성이 있다. 본원에 사용된 "4-1BB 효능제"는 4-1BB에 결합시, (1) 4-1BB를 자극 또는 활성화시키거나, (2) 4-1BB의 활성, 기능 또는 존재를 증진, 증가, 촉진, 유도 또는 연장하거나, 또는 (3) 4-1BB의 발현을 증진, 증가, 촉진 또는 유도하는, 본원에 정의된 바와 같은 임의의 화학적 화합물 또는 생물학적 분자를 의미한다. 본 발명의 임의의 치료 방법, 의약 및 용도에 유용한 4-1BB 효능제는 4-1BB에 특이적으로 결합하는 모노클로날 항체 (mAb) 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다. 4-1BB에 대한 대체 명칭 또는 동의어는 CD137 및 TNFRSF9를 포함한다. 인간 개체를 치료하는 본 발명의 치료 방법, 의약 및 용도 중 임의의 것에서, 4-1BB 효능제는 4-1BB 매개 반응을 증가시킨다. 본 발명의 치료 방법, 의약 및 용도의 일부 실시양태에서, 4-1BB 효능제는 여러 모델에서 세포독성 T 세포 반응을 현저히 증강시킴으로써 항종양 활성을 일으킨다. 인간 4-1BB는 신호 서열 (아미노산 잔기 1-17), 이어서 세포외 도메인 (169개의 아미노산), 막횡단 영역 (27개의 아미노산), 및 세포내 도메인 (42개의 아미노산)을 포함한다 (Cheuk ATC et al. 2004 Cancer Gene Therapy 11: 215-226). 수용체는 단량체 및 이량체 형태로 세포 표면에서 발현되고, 4-1BB 리간드와 삼량체를 형성하여 신호전달할 가능성이 있다. 인간 4-1BB에 결합하고, 본 발명의 치료 방법, 의약 및 용도에서 유용한 mAb의 예는 US 8,337,850 및 US20130078240에 기술되어 있다. 일부 실시양태에서, 항-4-1BB 항체는 WO2017/130076의 서열식별번호: 17에 제시된 VH 및 서열식별번호: 18에 제시된 VL을 갖는다.
한 실시양태에서, 다른 치료제는 PD-1 경로 길항제이다. 한 실시양태에서, 다른 치료제는 항-PD-1 항체이다. 한 실시양태에서, 다른 치료제는 항-PD-L1 항체이다.
프로그램화된 사멸 1 (PD-1) 수용체 및 PD-1 리간드 1 및 2 (각각 PD-L1 및 PD-L2)는 면역 조절에서 필수적인 역할을 한다. 활성화된 T 세포 상에서 발현되면, PD-1은 PD-L1 (B7-H1로도 공지됨)에 의해 활성화되고, PD-L2는 기질 세포, 종양 세포, 또는 둘 다에 의해 발현되어, T-세포 사멸 및 국재화된 면역 억제를 개시하고 (Dong et al., Nat Med 1999; 5:1365-69; Freeman et al. J Exp Med 2000; 192:1027-34), 잠재적으로 종양 발생 및 성장을 위한 면역-내성 환경을 제공한다. 반대로, 이러한 상호작용의 억제는 비임상 동물 모델에서 국부 T-세포 반응을 증진시키고 항종양 활성을 매개할 수 있다 (Iwai Y, et al. Proc Natl Acad Sci USA 2002; 99:12293-97). 본 발명의 치료 방법, 의약 및 용도에 유용한 항-PD-1 항체의 예는 BCD-100, 캄렐리주맙, 세미플리맙, 게놀림주맙 (CBT-501), MEDI0680, 니볼루맙, 펨브롤리주맙, RN888 (WO2016/092419 참조), 신틸리맙, 스파르탈리주맙, STI-A1110, 티셀리주맙 및 TSR-042를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항-PD-1 항체는 US10155037의 서열식별번호: 4에 제시된 바와 같은 VH 및 서열식별번호: 8에 제시된 바와 같은 VL을 갖는다. 본 발명의 치료 방법, 의약 및 용도에 유용한 항-PD-L1 항체의 예는 아테졸리주맙, 두르발루맙, BMS-936559 (MDX-1105) 및 LY3300054를 포함한다.
조합 요법의 경우, STING 조정 화합물은 의도된 요법의 수행에 적합한 임의의 시간 프레임 내에 투여된다. 따라서, 단일 작용제는 실질적으로 동시에 (즉, 단일 제제로서 또는 수 분 또는 수 시간 내에) 투여될 수 있거나 또는 어떠한 순서로든 연속적으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 단일 작용제 치료는 서로 약 1년 이내, 예컨대 약 10, 8, 6, 4, 또는 2개월 이내, 또는 4, 3, 2 또는 1주 이내, 또는 약 5, 4, 3, 2 또는 1일 이내에 투여할 수 있다.
개시된 조합 요법은 상승적 치료 효과, 즉 그들 개개의 효과 또는 치료 성과의 합보다 더 큰 효과를 유발시킬 수 있다. 예를 들어, 상승작용적 치료 효과는 단일 작용제에 의해 유발된 치료 효과 또는 소정의 조합물의 단일 작용제에 의해 유발된 치료 효과의 합보다 적어도 약 2배 더 크거나, 또는 적어도 약 5배 더 크거나, 또는 적어도 약 10배 더 크거나, 또는 적어도 약 20배 더 크거나, 또는 적어도 약 50배 더 크거나, 또는 적어도 약 100배 더 큰 효과일 수 있다. 상승작용적 치료 효과는 또한, 단일 작용제에 의해 유발된 치료 효과 또는 소정의 조합물의 단일 작용제에 의해 유발된 치료 효과의 합과 비교해서 적어도 10%, 적어도 20%, 또는 적어도 30%, 또는 적어도 40%, 또는 적어도 50%, 또는 적어도 60%, 또는 적어도 70%, 또는 적어도 80%, 또는 적어도 90%, 또는 적어도 100% 이상 치료 효과가 증가된 것으로서 관찰될 수 있다. 상승작용적 효과는 또한, 이들을 조합하여 사용하는 경우에, 치료제의 투여량을 감소시켜 줄 수 있는 효과이다.
조성물은 추가의 치료 또는 예방 조성물 또는 양식 전에, 후에 및/또는 그와 함께 투여될 수 있다. 이들은 비제한적으로, B7 공동자극 분자, 인터류킨-2, 인터페론-7, GM-CSF, CTLA-4 길항제, OX-40/OX-40 리간드, CD40/CD40 리간드, 사르그라모스팀, 레바미솔, 백시니아 바이러스, 바실레 칼메트-게랭 (BCG), 리포솜, 명반, 프로인트 완전 또는 불완전 아주반트, 해독된 내독소, 미네랄 오일, 표면 활성 물질, 예컨대 리포레시틴, 플루로닉 폴리올, 다가음이온, 펩티드, 및 오일 또는 탄화수소 에멀젼을 포함한다. 항체 반응에 비해 세포용해 T 세포 반응을 우선적으로 자극하는 T 세포 면역 반응을 유도하기 위한 담체가 바람직하며, 두 유형의 반응을 자극할 수 있는 것도 또한 사용될 수 있다. 작용제가 폴리펩티드인 경우, 폴리펩티드 자체 또는 폴리펩티드를 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 투여될 수 있다. 담체는 세포, 예컨대 항원 제시 세포 (APC) 또는 수지상 세포일 수 있다. 항원 제시 세포는 대식세포, 수지상 세포 및 B 세포와 같은 세포 유형을 포함한다. 다른 전문 항원-제시 세포는 단핵구, 변연부 쿠퍼 세포, 소교세포, 랑게르한스 세포, 지상감입 수지상 세포, 여포성 수지상 세포, 및 T 세포를 포함한다. 통성 항원-제시 세포가 또한 사용될 수 있다. 통성 항원 제시 세포의 예는 성상세포, 여포 세포, 내피 및 섬유모세포를 포함한다. 담체는 폴리펩티드를 발현하도록 또는 백신접종된 개체의 세포에서 후속적으로 발현되는 폴리뉴클레오티드를 전달하도록 형질전환된 박테리아 세포일 수 있다. 면역 반응을 촉발, 증진, 또는 지속시키는 백신의 능력을 증가시키기 위해 아주반트, 예컨대 수산화알루미늄 또는 인산알루미늄이 첨가될 수 있다. 기재된 조성물과 개별적으로 또는 조합되어 사용되는 추가의 물질, 예컨대 시토카인, 케모카인, 및 박테리아 핵산 서열, 예컨대 CpG, 톨-유사 수용체 (TLR) 9 효능제 뿐만 아니라 TLR 2, TLR 4, TLR 5, TLR 7, TLR 8, TLR9에 대한 추가의 효능제, 예컨대 지단백질, LPS, 모노포스포릴리피드 A, 리포테이코산, 이미퀴모드, 레시퀴모드, 및 추가로 레티노산-유도성 유전자 I (RIG-I) 효능제, 예컨대 폴리 I:C도 또한 잠재적 아주반트이다. 아주반트의 다른 대표적인 예는 퀼라야 사포나리아(Quillaja saponaria) 및 코리네박테리움 파르붐(CoIynebacterium parvum)의 목피로부터 정제된 균질 사포닌을 포함하는 합성 아주반트 QS-21을 포함한다 (McCune et al., Cancer, 1979; 43:1619). 아주반트는 최적화에 적용된다는 것이 이해될 것이다. 다시 말해서, 통상의 기술자는 사용하기 위한 최고 아주반트를 결정하기 위해 상용 실험에 관여할 수 있다.
본 발명의 화합물의 전달에 적합한 제약 조성물 및 그의 제조 방법은 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 용이하게 명백할 것이다. 이러한 조성물 및 그의 제조 방법은 예를 들어, 문헌 ['Remington's Pharmaceutical Sciences', 19th Edition (Mack Publishing Company, 1995)]에서 찾을 수 있으며, 그의 개시내용은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
한 실시양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함하는 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 경구로 투여될 수 있다.
본 발명의 화합물은 혈류 내로, 근육 내로, 또는 내부 기관 내로 직접 투여될 수 있다. 비경구 투여에 적합한 수단은 정맥내, 동맥내, 복강내, 척수강내, 뇌실내, 요도내, 흉골내, 두개내, 근육내, 방광내 (예를 들어, 방광), 피하 및 종양내를 포함한다. 비경구 투여를 위한 적합한 장치에는 바늘 (미세 바늘 포함) 시린지, 무-바늘 시린지 및 주입 기술이 포함된다. 한 실시양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함하는 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 정맥내로 투여된다. 한 실시양태에서, 화학식 (I), (IA), (IB), (II), (III), (IIIA), (IIIB), (IIIC), (IIID), (IV), (IVA), (IVB), (V), (VA), (VB), (VI), (VIA), (VIB), (VII), (VIIA), (VIIB), (VIIC) 또는 (VIID)의 화합물을 포함하는 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염은 방광내로 투여된다.
비경구 제제는 전형적으로 부형제, 예컨대 염, 탄수화물 및 완충제 (바람직하게는 pH 3 내지 9)를 함유할 수 있는 수용액이지만, 일부 적용을 위해서는 멸균 비-수성 용액으로 제제화하거나, 또는 적합한 비히클, 예컨대 발열원 무함유 멸균수와 함께 사용되는 건조된 형태로 제제화하는 것이 보다 적합할 수 있다.
예를 들어, 동결건조에 의한 멸균 조건 하에서의 비경구 제제의 제조는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 익히 공지된 표준의 제약 기술을 사용하여 쉽게 수행될 수 있다.
비경구 용액의 제조로 사용된 본 발명의 화합물의 용해도는 적절한 제제화 기술, 예컨대 용해도-증진제의 혼입을 사용하여 증가될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제는 즉시 방출 및/또는 변형 방출되도록 제제화될 수 있다. 변형 방출 제제는 지연, 지속, 펄스, 제어, 표적 및 프로그램화된 방출을 포함한다. 따라서, 본 발명의 화합물은 활성 화합물의 변형 방출을 제공하는 이식 데포로서 투여하기 위해 고체, 반고체, 또는 요변성 액체로서 제제화될 수 있다. 이러한 제제의 예는 약물-코팅된 스텐트 및 PLGA 마이크로구체를 포함한다.
나노입자는 또한 대부분의 투여 경로에 적합한 약물 전달 시스템을 나타낸다. 수년에 걸쳐, 다양한 천연 및 합성 중합체가 나노입자의 제조를 위해 탐구되었으며, 이 중 폴리(락트산) (PLA), 폴리(글리콜산) (PGA) 및 그의 공중합체 (PLGA)가 그의 생체적합성 및 생분해성으로 인해 광범위하게 조사되었다. 나노입자 및 다른 나노담체는 여러 부류의 약물, 예컨대 항암제, 항고혈압제, 면역조정제 및 호르몬; 및 거대분자, 예컨대 핵산, 단백질, 펩티드 및 항체에 대한 잠재적인 담체로서 작용한다. 예를 들어, 문헌 [Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. 21:387-422, 2004; Nanomedicine: Nanotechnology, Biology and Medicine I:22-30, 2005]을 참조한다.
본 발명의 조성물은 1종 이상의 추가의 제약 활성 성분, 예컨대 아주반트, 지질, 이중층간 가교된 다층 소포, 생분해성 폴리(D, L-락트산-코-글리콜산) [PLGA]-기반 또는 폴리 무수물-기반 나노입자 또는 마이크로입자, 및 나노다공성 입자-지지된 지질 이중층, 예컨대 리포솜, CTLA-4 및 PD-1 경로 길항제, PD-1 경로 차단제, 선천성 면역을 유도하는 불활성화 박테리아 (예를 들어, 불활성화 또는 약독화 리스테리아 모노시토게네스), 톨-유사 수용체 (TLR), (NOD)-유사 수용체 (NLR), 레티노산 유도성 유전자-기반 (RIG)-I-유사 수용체 (RLR), C-유형 렉틴 수용체 (CLR), 병원체연관 분자 패턴 ("PAMP"), 화학요법제 등을 통해 선천성 면역 활성화를 매개하는 조성물을 포함할 수 있거나 또는 그와 함께 투여될 수 있다.
본 발명의 화합물 및 조성물은 항체-약물 접합체 또는 다른 표적화된 전달 양식의 성분으로서 투여될 수 있다.
국소 투여
본 발명의 화합물은 상기 언급된 투여 방식들 중 임의의 것에서의 사용을 위해 그의 용해도, 용해 속도, 맛-차단, 생체이용률 및/또는 안정성을 증진시키기 위하여, 가용성 거대분자, 예컨대 시클로덱스트린 및 그의 적합한 유도체 또는 폴리에틸렌 글리콜-함유 중합체와 조합될 수 있다.
약물-시클로덱스트린 복합체는, 예를 들어 일반적으로 대부분의 투여 형태 및 투여 경로에 유용한 것으로 밝혀졌다. 포접 및 비-포접 복합체 둘 다가 사용될 수 있다. 약물과의 직접 복합체화에 대한 대안으로서, 시클로덱스트린이 보조 첨가제로서, 즉 담체, 희석제, 또는 가용화제로서 사용될 수 있다. 이러한 목적으로 가장 통상적으로 사용되는 것은 알파-, 베타- 및 감마-시클로덱스트린이며, 그 예는 그의 개시내용이 전체적으로 본원에 참조로써 개재되는 PCT 공개 번호 WO 91/11172, WO 94/02518 및 WO 98/55148에서 찾아볼 수 있다.
투여량: 활성 화합물이 투여되는 양은 치료받을 대상체, 장애 또는 상태의 중증도, 투여율, 화합물의 성질, 및 처방 의사의 판단에 따라 달라질 것이다. 한 가능한 투여량은 매일, 격일, 3일마다, 4일마다, 5일마다, 6일마다, 매주, 격주, 3주마다, 매월, 또는 다른 투여 스케줄로 투여되는, kg 체중당 약 0.001 내지 약 100 mg의 범위이다. 일부 경우에는 상기 언급된 범위의 하한치 미만인 투여량 수준이 더 적정할 수 있는 반면, 다른 경우에서는 어떠한 유해 부작용도 야기하지 않으면서 더 많은 용량이 사용될 수 있는데, 이러한 더 많은 용량은 전형적으로 하루에 걸친 투여를 위하여 수회의 더 적은 용량으로 분할된다.
부분들의 키트: 예를 들어 특정한 질환 또는 상태의 치료 목적을 위해 활성 화합물의 조합을 투여하는 것이 바람직할 수 있으므로, 2종 이상의 제약 조성물 (이중 적어도 1종은 본 발명에 따른 화합물을 함유함)이 조성물의 공투여에 적합한 키트의 형태로 편리하게 조합될 수 있으며, 이는 본 발명의 범주에 속한다. 따라서, 본 발명의 키트는 2종 이상의 개별 제약 조성물 (이중 적어도 1종은 본 발명의 화합물을 함유함), 및 상기 조성물들을 개별적으로 유지하기 위한 수단, 예컨대 용기, 분할된 병 또는 분할된 호일 패킷을 포함한다. 이러한 키트의 예는 정제, 캡슐 등의 포장에 사용되는 익숙한 블리스터 팩이다.
본 발명의 키트는 상이한 투여 형태, 예를 들어 경구 및 비경구 투여 형태를 투여하거나, 개별 조성물을 상이한 투여 간격으로 투여하거나, 개별 조성물을 서로에 대하여 적정하기에 특히 적합하다. 순응도를 보조하기 위해, 키트는 전형적으로 투여 지침서를 포함하고, 기억 보조물이 제공될 수도 있다.
실시예
일반적 방법
합성 실험 절차:
실험은 특히 산소- 또는 수분-감수성 시약 또는 중간체를 사용하는 경우에, 일반적으로 불활성 분위기 (질소 또는 아르곤) 하에 수행하였다. 상업적 용매 및 시약을 일반적으로 추가 정제 없이 사용하고, 분자체 (일반적으로 알드리치 케미칼 캄파니(Aldrich Chemical Company, 위스콘신주 밀워키)로부터의 슈어-실(Sure-Seal)TM 제품) 상에서 건조시켰다. 질량 분광측정법 데이터는 액체 크로마토그래피-질량 분광측정법 (LC-MS), 대기압 화학적 이온화 (APCI), 전기분무 이온화 (ESI) 또는 액체 크로마토그래피-비행 시간 (LC-TOF) 방법으로부터 보고된다. 핵 자기 공명 (NMR) 데이터에 대한 화학적 이동은 사용된 중수소화 용매로부터 잔류 피크를 참고하여 백만분율 (ppm)로 표현된다.
다른 실시예 또는 방법에서의 절차를 참고하는 합성의 경우에, 반응 프로토콜 (반응 시간 및 온도)이 달라질 수 있다. 일반적으로, 반응에 이어서 박층 크로마토그래피 LC-MS 또는 HPLC를 수행하고, 적절한 경우에는 후처리에 적용시켰다. 정제는 실험에 따라 달라질 수 있다: 일반적으로, 용리액/구배에 사용된 용매 및 용매 비는 적절한 체류 시간을 제공하도록 선택하였다. 달리 명시되지 않는 한, 역상 HPLC 분획을 냉동건조/동결-건조를 통해 농축시켰다. 중간체 및 최종 화합물을 (0℃) 또는 실온에서 질소 하에 밀폐된 바이알 또는 플라스크 내에 저장하였다. 화합물 명칭은 켐드로우(Chemdraw) 또는 ACD 랩스(ACD Labs) 소프트웨어를 사용하여 생성하였다.
용매 및/또는 시약의 약어는 미국 화학 협회 가이드라인에 기초하며, 하기에 표기된다:
Ac = 아세틸; AcOH = 아세트산; Ad = 아다만틸; B2Pin2 = 비스(피나콜레이토)디보론; Bn = 벤질; Boc = N-tert-부톡시카르보닐; 카탁시움(cataCXium) A = 디-(1-아다만틸)-n-부틸포스핀; CDI = N,N'-카르보닐디이미다졸; CF3 = 트리플루오로메틸; CMBP = (시아노메틸렌)트리부틸포스포란 = (트리부틸포스포라닐리덴)아세토니트릴 = 츠노다(Tsunoda) 시약; CO= 일산화탄소; 18-크라운-6 = 1,4,7,10,13,16-헥사옥사시클로옥타데칸; DCC = 1,3-디시클로헥실카르보디이미드; DCE = 디클로로에탄; DCM = 디클로로메탄; 데스-마르틴 퍼아이오디난 = DMP = 1,1,1-트리스(아세틸옥시)-1,1-디히드로-1,2-벤즈아이오독솔-3-(1H)-온; DIAD = 디이소프로필 아조디카르복실레이트; DIPEA = N,N-디이소프로필에틸아민; DIBAL = 디이소부틸알루미늄 히드라이드; DMA = 디메틸아세트아미드; DMAP = 4-디메틸아미노피리딘; DMB = 2,4-디메톡시벤질; DME = 디메톡시에탄; DMF = N,N-디메틸포름아미드; DMF·DMA = N,N-디메틸포름아미드 디메틸 아세탈; DMSO = 디메틸 술폭시드; dppf = 1,1'-페로센디일-비스(디페닐포스핀); dtbpf = 1,1'-비스(디-tert-부틸포스피노)페로센; EDCI = 1-에틸-3-(3-디메틸아미노프로필)카르보디이미드; Et = 에틸; EtOAc = 에틸 아세테이트; h = 시간; HATU = o-(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로늄 헥사플루오로포스페이트; HBTU = N,N,N',N'-테트라메틸-O-(1H-벤조트리아졸-1-일)우로늄 헥사플루오로포스페이트; HFIP = 1,1,1,3,3,3-헥사플루오로-2-프로판올; HOAc = 아세트산; HOAt = 1-히드록시-7-아자벤조트리아졸; HOBt = 1-히드록시벤조트리아졸 수화물; HPLC = 고성능 액체 크로마토그래피; 라웨슨(Lawesson) 시약 = 2,4-비스(4-메톡시페닐)-2,4-디티옥소-1,3,2,4-디티아디포스페탄; LC = 액체 크로마토그래피; LCMS = 액체 크로마토그래피 질량 분광측정법; LDA = 리튬 디이소프로필아미드; LAH = LiAlH4 = 리튬 알루미늄 히드라이드; mCPBA = 3-클로로퍼벤조산; Me = 메틸; MEK = 메틸 에틸 케톤 = 2-부타논; MeOH = 메탄올; MeCN = 아세토니트릴; Ms = 메탄술포닐; MSA 또는 MsOH = 메탄술폰산; MTBE = 메틸 tert-부틸 에테르; NaHMDS = 소듐 비스(트리메틸실릴)아미드; Boc = tert-부톡시 카르보닐; n-Bu = n-부틸; n-BuLi = n-부틸리튬; n-BuOH = 1-부탄올; NBS = N-브로모숙신이미드; NCS = N-클로로숙신이미드; NMI = N-메틸이미다졸; NMM = N-메틸 모르폴린; NMO = N-메틸 모르폴린 N-옥시드; NMP = 1-메틸-2-피롤리디논; P(fur)3 = 트리(2-푸릴)포스핀; Pd(OAc)2 = 팔라듐 (II) 아세테이트; Pd-G3 = 제3 세대 (G3) 부흐발트 팔라다사이클 예비촉매; Pd-G4 = 제4 세대 (G4) 부흐발트 팔라다사이클 예비촉매; PE = Pet. 에테르 = 석유 에테르; Pd(dppf)Cl2 = [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]-디클로로팔라듐 (II); Ph = 페닐; PhMe = 톨루엔 ; PivOH = 피발산; PivCl = 피발로일 클로라이드; PMB = p-메톡시벤질; PPTS = 피리디늄 p-톨루엔술포네이트; p-TsOH = p-톨루엔술폰산; PyBOP = 벤조트리아졸-1-일-옥시-트리스-피롤리디노-포스포늄 헥사플루오로포스페이트; rt = 실온; 셀렉트플루오르 = 1-클로로메틸-4-플루오로-1,4-디아조니아비시클로[2.2.2]옥탄 비스(테트라플루오로보레이트); SFC = 초임계 유체 크로마토그래피; T3P = 2,4,6-트리프로필-1,3,5,2,4,6-트리옥사트리포스포리난-2,4,6-트리옥시드; TEAB = 테트라에틸암모늄 브로마이드; TBAI = 테트라부틸암모늄 아이오다이드; t-아밀 알콜 = 2-메틸-2-부탄올; t-Bu = tert-부틸; TBS = tert-부틸디메틸실릴; TBSCl = tert-부틸디메틸실릴 클로라이드; TCFH = 클로로-N,N,N',N'-테트라메틸포름아미디늄 헥사플루오로포스페이트; TEA = 트리에틸아민; Tf = 트리플루오로메탄술포네이트; TFA = 트리플루오로아세트산; TFE = 2,2,2-트리플루오로에탄올; THF = 테트라히드로푸란; THP = 테트라히드로피라닐; TMP = 2,2,6,6-테트라메틸피페리디닐; TMS = 트리메틸실릴; TPTU = O-(2-옥소-1(2H)피리딜)-N,N,N,'N'-테트라메틸우로늄 테트라플루오로보레이트; Tr = 트리페닐메틸; XPhos-Pd-G2 = 클로로(2-디시클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필-1,1'-비페닐)[2-(2'-아미노-1,1'-비페닐)]팔라듐(II); Xantphos = 4,5-비스(디페닐포스피노)-9,9-디메틸크산텐.
일반 반응식
반응식 I:
Figure pct00044
반응식 I에 예시된 바와 같이, 유형 Ia의 화합물을, 산성 조건 하에 적절한 아실 히드라지드를 DMF·DMA 및 p-메톡시벤질 아민으로 처리함으로써 제조된 (Org. Lett. 2004, 6, 2969-2971) 유형 Ib의 화합물에, 적합한 촉매 시스템 (예컨대 Pd(dppf)Cl2 또는 Pd(OAc)2 + 카탁시움 A)과 함께 적합한 염기 (예컨대 CsOPiv, CsOAc, K2CO3 + PivOH, TMPMgCl·LiCl, 또는 TMPZnCl·LiCl)의 존재 하에 적절한 용매 (예컨대 PhMe, 디옥산, MeCN, TFE, t-아밀 알콜 또는 유사한 용매) 중에서 실온 내지 150℃ 범위의 온도에서 C-H 활성화 (J. Org. Chem. 2013, 78, 738-743)를 통해 교차-커플링시켜 화합물 예컨대 Ic를 수득할 수 있다. 화합물 예컨대 Ic를 적합한 용매 (예컨대 THF, MeOH, 물 또는 유사한 용매) 중에서 적절한 염기 (MOH, 여기서 M = Li, Na, K, 또는 Cs)를 사용하여 알칼리성 조건 하에 가수분해하여 화합물 예컨대 Id를 제공할 수 있다. 화합물 예컨대 Id를 적절한 용매 (예컨대 DMF, MeCN, 또는 유사한 용매) 중에서 적합한 염기 (예컨대 TEA, DIPEA, NMI, 피리딘, 또는 DMAP)와 함께 적합한 활성화 시약 (예컨대 HATU, TPTU, EDCI + HOAt, PyBOP, TCFH, T3P 또는 유사한 시약)을 사용하는 아미드 커플링 조건 하에 적절한 아민 또는 그의 염 (예컨대 NH4Cl 또는 DMBNH2)으로 처리하여 화합물 예컨대 Ie를 수득할 수 있다. 대안적으로, 화합물 예컨대 Ic를 적합한 용매 (예컨대 MeOH, n-BuOH, t-아밀OH 또는 유사한 용매) 중 적절한 아민 (예컨대 NH3 또는 DMBNH2)을 사용하고 일부 경우에 루이스 산 (Tet. Lett. 2010, 51, 3879-3882) (예컨대 CaCl2, CeCl3, Mg(OMe)2, 또는 MgCl2)을 사용하여 전형적으로 50-120℃ 범위의 승온 하에 직접 가아민분해하여 화합물 예컨대 Ie를 또한 수득할 수 있다. 화합물 예컨대 Ie는 산 불안정성 보호기를 함유할 수 있고, 이는 관련 기술분야에 공지된 조건 (예컨대 TFA/DCM 또는 MsOH/HFIP) (Protective Groups in Organic Synthesis, A. Wiley-Interscience Publication, 1981 or Protecting Groups, 10 Georg Thieme Verlag, 1994)을 사용하여 이 단계에서 제거되어 화합물 예컨대 If 또는 그의 호변이성질체를 수득할 수 있다. 모든 단계에서 화합물들은 표준 기술, 예컨대 칼럼 크로마토그래피, 결정화, 또는 역상 SFC 또는 HPLC에 의해 정제될 수 있다. 필요한 경우에, 합성 순서 중 임의의 생성물의 위치이성질체 또는 입체이성질체의 분리를 관련 기술분야에 공지된 표준 방법, 예컨대 키랄 SFC 또는 HPLC 하에 수행하여 단일 위치- 또는 입체이성질체를 수득할 수 있다. 가변기, 예컨대 X, A 및 Ra-Rd는 본원에 개시된 실시양태, 반응식, 실시예 및 청구범위의 화학식 및 화합물 내의 유사한 위치에 정의 및/또는 도시된 바와 같다.
반응식 II:
Figure pct00045
반응식 II에 예시된 바와 같이, 유형 IIa의 화합물을 적합한 촉매 시스템 (예컨대 Pd(dppf)Cl2 또는 Pd(OAc)2 + 카탁시움 A)의 존재 하에 적합한 염기 (예컨대 CsOPiv, CsOAc, K2CO3 + PivOH, TMPMgCl·LiCl, 또는 TMPZnCl·LiCl)와 함께 적절한 용매 (예컨대 PhMe, 디옥산, MeCN, TFE, t-아밀 알콜 또는 유사한 용매) 중에서 실온 내지 150℃ 범위의 온도에서 C-H 활성화 (J. Org. Chem. 2013, 78, 738-743)를 통해 유형 IIb의 화합물에 교차-커플링시켜 화합물 예컨대 IIc를 수득할 수 있다. 화합물 예컨대 IIc를 MeOH 용매 중 적합한 염기 (예컨대 TEA 또는 DIPEA)와 함께 적합한 촉매 시스템 (예컨대 Pd(dppf)Cl2, G3-Pd-Xanthphos, G4-Pd-Xanthphos 또는 유사한 촉매)의 존재 하에 일산화탄소 또는 다른 적합한 일산화탄소 전구체 (예컨대 N-포르밀 사카린, Mo(CO)6, Ph2MeSiCO2H 또는 유사한 시약)로 카르보닐화시켜 화합물 예컨대 IId를 수득할 수 있다. 화합물 예컨대 IId를 적합한 용매 (예컨대 THF, MeOH, 물 또는 유사한 용매) 중에서 적절한 염기 (MOH, 여기서 M = Li, Na, K, 또는 Cs)를 사용하여 알칼리성 조건 하에 가수분해한 다음, 적합한 용매 (예컨대 DMF, MeCN, 또는 유사한 용매) 중에서 적합한 염기 (예컨대 TEA, DIPEA, NMI, 피리딘, 또는 DMAP)와 함께 적합한 활성화 시약 (예컨대 HATU, TPTU, EDCI + HOAt, PyBOP, TCFH, T3P 또는 유사한 시약)을 사용하는 아미드 커플링 조건 하에 적절한 아민 또는 그의 염 (예컨대 NH4Cl 또는 DMBNH2)으로 처리하여 화합물 예컨대 IIe를 수득할 수 있다. 대안적으로, 화합물 예컨대 IId를 적합한 용매 (예컨대 MeOH, n-BuOH, t-아밀OH 또는 유사한 용매) 중에서 적절한 아민 (예컨대 NH3 또는 DMBNH2)을 사용하고 일부 경우에 루이스 산 (Tet. Lett. 2010, 51, 3879-3882) (예컨대 CaCl2, CeCl3, Mg(OMe)2, 또는 MgCl2)을 사용하여 전형적으로 50-120℃ 범위의 승온 하에 직접 가아민분해하여 화합물 예컨대 IIe를 수득할 수 있다. 추가로, 화합물 예컨대 IIc의 팔라듐 촉매된 카르보닐화를 전형적으로 50-120℃ 범위의 승온 하에 적합한 용매 (예컨대 DMF, DMA, MeOH, n-BuOH, t-아밀OH 또는 유사한 용매) 중 적절한 아민 (예컨대 NH3또는 DMBNH2)을 사용하여 수행하여 화합물 예컨대 IIe를 또한 수득한다. 화합물 예컨대 IIe는 산 불안정성 보호기를 함유할 수 있고, 이는 관련 기술분야에 공지된 조건 (예컨대 TFA/DCM 또는 MsOH/HFIP) (Protective Groups in Organic Synthesis, A. Wiley-Interscience Publication, 1981 or Protecting Groups, 10 Georg Thieme Verlag, 1994)을 사용하여 이 단계에서 제거되어 화합물 예컨대 IIf 또는 그의 호변이성질체를 수득할 수 있다. 모든 단계에서 화합물들은 표준 기술, 예컨대 칼럼 크로마토그래피, 결정화, 또는 역상 SFC 또는 HPLC에 의해 정제될 수 있다. 필요한 경우에, 합성 순서 중 임의의 생성물의 위치이성질체 또는 입체이성질체의 분리를 관련 기술분야에 공지된 표준 방법, 예컨대 키랄 SFC 또는 HPLC 하에 수행하여 단일 위치- 또는 입체이성질체를 수득할 수 있다. 가변기, 예컨대 X, A 및 Ra-Re는 본원에 개시된 실시양태, 반응식, 실시예 및 청구범위의 화학식 및 화합물 내의 유사한 위치에 정의 및/또는 도시된 바와 같다.
꼬리기 (TG) 중간체의 제조
3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-01)의 반응식 TG-1에 따른 제조.
Figure pct00046
반응식 TG-1:
Figure pct00047
단계 1
에틸 1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복실레이트 (TG-1b)의 합성.
무수 DCM (620 mL) 및 DMF (0.18 mL) 중 1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복실산 (TG-1a) (32.6 g, 212 mmol)의 현탁액에 옥살릴 클로라이드 (80.5 g, 634 mmol) 반응 온도를 16-21℃ (내부 온도)에서 유지하면서 적가하였다. 생성된 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하여 투명한 반응 용액을 수득하였다. MeOH로 켄칭한 반응 분취물의 TLC 분석 (1:20 MeOH/DCM)은 출발 물질의 완전한 소모를 나타내었다. 혼합물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 DCM (2x200 mL)로부터 공증발시켰다. 잔류물을 무수 DCM (465 mL)에 녹이고, EtOH (155 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반하였다. TLC 분석 (1:20 MeOH/DCM)은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 용매를 감압 하에 제거하였다. 잔류물을 포화 수성 NaHCO3을 첨가하여 pH ~7-8로 조정하였다. 혼합물을 EtOAc (2x300 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 에틸 1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복실레이트 (TG-1b) (38.2 g, 99% 수율)을 연황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.58 (s, 1H), 4.51 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.30 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.25 (s, 3H), 1.39 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.35 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
단계 2
1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-카르보히드라지드 (TG-1c)의 합성.
EtOH (500 mL) 중 에틸 1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복실레이트 (TG-1b) (38.2 g, 209 mmol)의 용액에 히드라진 1수화물 (107 g, 2.09 mol)을 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모와 함께 목적 생성물 물질의 형성을 나타내었다. 혼합물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 EtOH (3x200 mL) 및 톨루엔 (2x300 mL)과 공증발시켜 1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-카르보히드라지드 (TG-1c) (35.1 g, >99% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.70 (br s, 1H), 6.58 (s, 1H), 4.52 (br s, 2H), 4.45 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.19 (s, 3H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C7H12N4O), 168.9 (M+H)+.
단계 3
3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-01)의 합성.
MeCN (152 mL) 중 1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-카르보히드라지드 (TG-1c) (28.5 g, 170 mmol)의 현탁액에 N,N-디메틸디메톡시메틸아민 (DMF·DMA) (20.8 g, 174 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 60℃ (내부 온도)에서 40분 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 반응물을 22℃ (내부 온도)로 냉각시키고, MeCN (66 mL) 중 4-메톡시벤질아민 (21.8 g, 159 mmol)의 용액을 첨가하였다. 아세트산 (218 mL)을 ~24-30℃ (내부 온도)에서 반응 온도를 유지하면서 적가하였다. 반응물을 90℃ (내부 온도)에서 4시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 중간체의 소모와 함께 목적 생성물 물질의 형성을 나타내었다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-카르보히드라지드 (TG-1c) 5.0 g을 사용하여 동일한 방식으로 실행한 병행 반응과 합하였다. 혼합물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 H2O (200 mL)로 희석하고, 포화 수성 Na2CO3을 사용하여 pH ~7-8로 염기성화시켰다. 혼합물을 EtOAc (2x300 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 3개의 병렬 배치로 플래쉬 크로마토그래피 (330 g SiO2, 0-1% MeOH/DCM)에 의해 정제하였다. 혼합된 분획을 플래쉬 크로마토그래피 (120 g SiO2, 0-1% MeOH/DCM)에 의해 다시 정제하였다. 생성물 함유-분획을 합하여 3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-01) (22.0 g, 37% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.21 (s, 1H), 7.00 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.90 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.19 (s, 1H), 5.14 (s, 2H), 4.32 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.82 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 1.38 (t, J = 7.2 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C16H19N5O), 298.1 (M+H)+.
3-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-02)의 반응식 TG-2에 따른 제조.
Figure pct00048
반응식 TG-2:
Figure pct00049
MeCN (250 mL) 중 3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-01) (15.0 g, 50.5 mmol)의 용액에 셀렉트플루오르 (44.7 g, 126 mmol)를 조금씩 첨가하였다. 혼합물을 45℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 일부 잔류 출발 물질과 함께 목적 생성물 물질의 형성을 나타내었다. 황색 현탁액을 실온으로 냉각시키고, 여과하였다. 여과물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 EtOAc (27℃, 10분)로 슬러리화하고, 여과하였다. 여과물을 농축 건조시켰다. 물질을 DCM (200 mL) 중에 용해시키고, 포화 수성 Na2CO3 (80 mL)와 함께 실온에서 10분 동안 교반하였다. 혼합물을 분리하였다. 수성 층을 DCM (2x100 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 물질을 정제용 HPLC에 의해 YMC 트리아트(Triart) C-18 칼럼 (250x50 mm, 7 μm 입자 크기)을 사용하여 정제하고, 이것을 20-50% MeCN/H2O (+0.04% NH4OH, +10 mM NH4HCO3)로 120 mL/분의 유량으로 용리시켜 3-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-02) (5.41 g, 34% 수율)을 황색 검으로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.18 (s, 1H), 6.99 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.82 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 5.06 (s, 2H), 4.10 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.76 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 1.21 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 19F NMR (377 MHz, CDCl3) δ -133.00; m/z (ESI+) - (C16H18FN5O), 316.0 (M+H)+.
3-(4-클로로-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-03)의 반응식 TG-3에 따른 제조.
Figure pct00050
반응식 TG-3:
Figure pct00051
0℃에서 무수 DMF (3.0 mL) 중 3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-01) (1.02 g, 3.43 mmol)의 교반 용액에 N-클로로숙신이미드 (609 mg, 4.56 mmol)를 조금씩 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 잔류 출발 물질과 함께 목적 생성물 물질의 형성을 나타내었다. 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, H2O (20 mL)로 희석하고, EtOAc (2x20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (3x15 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (40 g SiO2, 0-5% MeOH/EtOAc)에 의해 정제하였다. 생성물-함유 분획을 플래쉬 크로마토그래피 (40 g SiO2, 0-3% MeOH/EtOAc)로 다시 정제하여 3-(4-클로로-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-03) (330 mg, 29% 수율)을 황색 검으로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.26 (s, 1H), 6.94 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.82 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 5.06 (s, 2H), 3.92 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 3.77 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 1.19 (t, J = 7.2 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C16H18ClN5O), 331.8 (M+H)+.
3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-04)의 반응식 TG-4에 따른 제조.
Figure pct00052
반응식 TG-4:
Figure pct00053
단계 1
3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4H-1,2,4-트리아졸 아세트산 염 (TG-4a)의 합성.
TFA (4.5 mL) 중 3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-01) (505 mg, 1.70 mmol)의 용액을 25℃에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모와 함께 목적 생성물 물질의 형성을 나타내었다. 반응물을 농축 건조시켰다. 조 잔류물을 DCM (5x10 mL)으로부터 공증발시켰다. 물질을 NH3의 용액 (MeOH 중 7 N, 10 ml)에 녹이고, 농축 건조시켜 3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4H-1,2,4-트리아졸 아세트산 염 (TG-4a) (301 mg, >99% 수율)을 수득하였으며, 이를 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C8H11N5), 177.8 (M+H)+.
단계 2
3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-04)의 합성.
THF (3.0 mL) 및 DMF (3.0 ML) 중 3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4H-1,2,4-트리아졸 아세트산 염 (TG-4a) (301 mg, 1.70 mmol)의 용액에 NaH (미네랄 오일 중 60% 분산액, 89.6 mg, 2.2 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 20분 동안 교반하여 담황색 현탁액을 수득하였다. 아이오도메탄 (128 μL, 2.06 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모와 함께 목적 생성물 물질의 형성을 나타내었다. 반응물을 H2O (0.04 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물을 H2O로 희석하고, 혼합물을 셀라이트를 통해 다시 여과하였다. 여과물을 EtOAc (4x10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. NMR 분석은 위치이성질체의 2.5:1 혼합물을 나타내었다. 잔류물을 정제용 TLC (1:20 MeOH/DCM)에 의해 정제하여 3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸 (55.6 mg, 21% 수율)을 주요 및 제2-용리 위치이성질체로서 연황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.15 (s, 1H), 6.67 (s, 1H), 4.36 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.98 (s, 3H), 2.29 (s, 3H), 1.34 (t, J = 7.2 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C9H13N5), 191.8 (M+H)+.
중간체 Int-TG-05를 3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-04)의 합성에 사용된 방법에 따라, 관련 기술분야의 통상의 기술자가 실현할 수 있을 예시된 절차에 대한 비결정적 변형 또는 치환으로 제조하였다.
Figure pct00054
1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복실산 (Int-TG-06)의 반응식 TG-5에 따른 제조.
Figure pct00055
반응식 TG-5:
Figure pct00056
단계 1
에틸 1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복실레이트 (TG-5a)의 합성.
MeCN (15 mL) 중 에틸 1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복실레이트 (TG-1b) (1.16 g, 6.36 mmol)의 현탁액에 셀렉트플루오르 (6.77 g, 19.1 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 90℃에서 14시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 일부 잔류 출발 물질을 포함하는 목적 질량의 형성을 나타내었다. 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (0-5% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제하여 에틸 1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복실레이트 (TG-5a) (250 mg, 20% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.44 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.37 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.23 (s, 3H), 1.44 - 1.34 (m, 6H); m/z (ESI+) - (C9H13FN2O2), 200.8 (M+H)+.
단계 2
1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복실산 (Int-TG-06)의 합성.
MeOH/THF (1:5, 1.2 mL) 중 에틸 1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복실레이트 (TG-5a) (198 mg, 0.989 mmol)의 용액에 수성 LiOH의 용액 (1.0 N, 0.95 mL, 0.95 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 반응물을 에틸 1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복실레이트 92 mg으로 동일한 방식으로 실행된 병행 반응물과 합하였다. 혼합물을 1 N HCl을 사용하여 pH~3으로 산성화시키고, EtOAc (3x10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복실산 (Int-TG-06) (129 mg, 60% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 4.40 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 2.16 (d, J = 0.8 Hz, 3H), 1.31 (t, J = 7.1 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C7H9FN2O2), 172.7 (M+H)+.
2-브로모-1-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)에탄-1-온 (Int-TG-07)의 반응식 TG-6에 따른 제조.
Figure pct00057
반응식 TG-6:
Figure pct00058
DCM (6.0 mL) 중 1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복실산 (TG-1a, 300 mg, 1.95 mmol)의 용액에 DMF (2.0 μL) 및 COCl2 (272 mg, 2.14 mmol)을 첨가하였다. 기체 발생이 관찰되었다. 혼합물을 12℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 농축 건조시켰다. 잔류물을 DCM (2x5 mL)으로부터 공증발시켰다. 조 물질을 MeCN (8.0 mL) 중에 용해시키고, TMSCHN2 (2.14 mL, 489 mg, 4.28mmol, n-헥산 중 2M 용액)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 남아있음을 나타내었다. 추가 분취량의 TMSCHN2 (1.07 mL, 244 mg, 2.14 mmol, n-헥산 중 2M 용액)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이 단계에서, HBr (704 μL, 1.05 g, 4.28 mmol)을 적가하였다. 기체 발생이 관찰되었다. 혼합물을 12℃에서 16시간 동안 교반하여 황색 현탁액을 수득하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모와 함께 목적 물질의 형성을 나타내었다. 혼합물을 EtOAc (10 mL)로 희석하고, H2O로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (20 g SiO2, 90-100% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제하여 2-브로모-1-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)에탄-1-온 (Int-TG-07) (301 mg, 67% 수율)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.67 (d, J = 0.7 Hz, 1H), 4.51 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.28 (s, 2H), 2.31 (d, J = 0.5 Hz, 3H), 1.38 (t, J = 7.2 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C8H11BrN2O), 232.6 (M+H)+.
하기 표의 중간체 Int-TG-08을 2-브로모-1-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)에탄-1-온 (Int-TG-07)의 합성에 사용된 방법에 따라, 관련 기술분야의 통상의 기술자가 실현할 수 있을 예시된 절차에 대한 비결정적 변형 또는 치환으로 제조하였다.
Figure pct00059
에틸 2-(메톡시이미노)-4-옥소펜타노에이트 (Int-TG-09)의 반응식 TG-7에 따른 제조.
Figure pct00060
반응식 TG-7:
Figure pct00061
EtOH (150 mL) 및 H2O (75 mL) 중 에틸 2,4-디옥소펜타노에이트 (TG-7a) (15.0 g, 94.9 mmol)의 용액에 H2O (75 mL) 중 O-메틸히드록실아민 히드로클로라이드 (7.92 g, 94.8 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. TLC 분석 (1:3 EtOAc/석유 에테르)은 출발 물질의 완전한 소모를 나타내었다. 반응물을 농축 건조시켜 에틸 2-(메톡시이미노)-4-옥소펜타노에이트 (Int-TG-09) (15.8 g, 89% 수율)을 황색 오일로서 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.32 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.05 (s, 3H), 3.70 (s, 2H), 2.20 (s, 3H), 1.34 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
tert-부틸 3-(5-{4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸-1H-피라졸-1-일)프로파노에이트 (Int-TG-10)의 반응식 TG-8에 따른 제조.
Figure pct00062
반응식 TG-8:
Figure pct00063
단계 1
tert-부틸 3-히드라지닐프로파노에이트 (TG-8b)의 합성
EtOH (150 mL) 중 히드라진 1수화물 (12.1 g, 236 mmol)의 용액을 환류로 가열하고, tert-부틸 아크릴레이트 (15.0 g, 117 mmol)을 적가하였다. 혼합물을 환류 하에 10분 동안 교반하였다. TLC 분석 (1:5 EtOAc/석유 에테르)은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 반응물을 농축 건조시켜 tert-부틸 3-히드라지닐프로파노에이트 (TG-8b) (17.7 g, 94% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.11 (br s, 3H), 2.93 (t, J = 6.5 Hz, 2H), 2.38 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.38 (s, 9H).
단계 2
에틸 1-(3-tert-부톡시-3-옥소프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복실레이트 (TG-8c)의 합성
EtOH (200 mL) 중 에틸 2-(메톡시이미노)-4-옥소펜타노에이트 (Int-TG-09) (13.8 g, 73.7 mmol) 및 tert-부틸 3-히드라지닐프로파노에이트 (TG-8b) (17.7 g, 110 mmol)의 용액을 환류 하에 4시간 동안 교반하였다. TLC 분석은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 혼합물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (330 g SiO2, 0-25% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제하여 에틸 1-(3-tert-부톡시-3-옥소프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복실레이트 (TG-8c) (14.9 g, 72% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.59 (s, 1H), 4.73 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 4.32 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 2.76 (t, J = 7.4 Hz, 2H), 2.25 (s, 3H), 1.41 (s, 9H), 1.36 (t, J = 7.1 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C14H22N2O4), 283.2 (M+H)+.
단계 3
tert-부틸 3-[5-(히드라진카르보닐)-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로파노에이트 (TG-8d)의 합성
EtOH (150 mL) 중 에틸 1-(3-tert-부톡시-3-옥소프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복실레이트 (TG-8c) (14.9 g, 52.8 mmol)의 용액에 히드라진 1수화물 (27.0 g, 528 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모와 함께 목적 생성물 물질의 형성을 나타내었다. 반응물을 농축 건조시켜 tert-부틸 3-[5-(히드라진카르보닐)-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로파노에이트 (TG-8d) (14.2 g, >99% 수율)을 무색 오일로서 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.75 (br s, 1H), 6.61 (s, 1H), 4.64 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 4.51 (br s, 2H), 2.71 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 2.17 (s, 3H), 1.40 (s, 9H); m/z (ESI+) - (C12H20N4O3), 212.9 (M-tBu+H)+.
단계 4
tert-부틸 3-(5-{4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸-1H-피라졸-1-일)프로파노에이트 (Int-TG-10)의 합성
MeCN (90 mL) 중 tert-부틸 3-[5-(히드라진카르보닐)-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로파노에이트 (TG-8d) (14.2 g, 52.8 mmol)의 용액에 N,N-디메틸디메톡시메틸아민 (DMF·DMA) (6.59 g, 55.3 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 50℃에서 40분 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모를 나타내었다. MeCN (10 mL) 중 4-메톡시벤질아민 (6.90 g, 50.3 mmol)의 용액 및 아세트산 (100 mL)을 순차적으로 첨가하였다. 혼합물을 120℃에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 목적 생성물 물질의 형성을 나타내었다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 농축 건조시켰다. 잔류물을 H2O (250 mL) 중에 용해시키고, EtOAc (250 mL)로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (220 g SiO2, 0-5% MeOH/DCM)에 의해 정제하여 tert-부틸 3-(5-{4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸-1H-피라졸-1-일)프로파노에이트 (Int-TG-10) (1.08 g, 5% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.14 (s, 1H), 7.06 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.90 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.13 (s, 1H), 5.10 (s, 2H), 4.51 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 3.81 (s, 3H), 2.79 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 2.28 (s, 3H), 1.39 (s, 9H); m/z (ESI+) - (C21H27N5O3), 398.3 (M+H)+.
3-(4-플루오로-5-{4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸-1H-피라졸-1-일)프로필 아세테이트 (Int-TG-11)의 반응식 TG-9에 따른 제조.
Figure pct00064
반응식 TG-9:
Figure pct00065
단계 1
3-히드라지닐프로판-1-올 (TG-9b)의 합성
N2H4·H2O (46.7 g, 793 mmol) 중 NaOH (6.35 g, 159 mmol)의 용액에 N2 하에 98℃에서 3-클로로프로판-1-올 TG-9a (15.0 g 158.66 mmol)를 적가하였다. 혼합물을 98℃에서 1시간 동안 교반하였다. TLC (PE/EA=1:1, KMnO4) 분석은 TG-9a의 소모를 나타내었다. 혼합물을 농축시키고, 여과하고, EtOH로 세척하였다. 여과물을 농축시켜 무색 오일을 수득하였다. 오일을 고진공 하에 추가로 농축시켜 백색 검 (24 g)을 수득하였다. 백색 검을 DCM/MeOH (100 mL)으로 연화처리하고, 여과하고 농축시켜 3-히드라지닐프로판-1-올 (TG-9b) (15 g, >99% 수율)을 무색 검으로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 4.49 - 4.23 (m, 4H), 3.45 - 3.42 (m, 2H), 2.74 - 2.63 (m, 2H), 1.59 - 1.50 (m, 2H).
단계 2
에틸 1-(3-히드록시프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복실레이트 (TG-9c)의 합성
3-히드라지닐프로판-1-올 (TG-9b) (1.33 g, 14.7 mmol) 중 에틸 2-(메톡시이미노)-4-옥소펜타노에이트 (Int-TG-09) (2.30 g, 12.29 mmol)의 용액에 EtOH (13 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. TLC (PE/EA=1:1, UV) 분석은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 혼합물을 보다 작은 배치와 합하고, 병행하여 수행하고, 진공 하에 농축시키고, 이어서 플래쉬 크로마토그래피 (석유 에테르 중 EtOAc 0%에서 50%까지)에 의해 농축시켜 표제 화합물 에틸 1-(3-히드록시프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복실레이트 (TG-9c) (1.64 g, 51% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C10H16N2O3), 213.1 (M+H)+.
단계 3
1-(3-히드록시프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-카르보히드라지드 (TG-9d)의 합성
EtOH (7 mL) 중 1-(3-히드록시프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복실레이트 (TG-9c) (1.44 g, 6.785 mmol)의 용액에 N2H4·H2O (1.20 g, 20.4 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 혼합물을 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 1-(3-히드록시프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-카르보히드라지드 (TG-9d) (1.34 g, >99% 수율)을 백색 고체로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C8H14N4O2), 199.1 (M+H)+.
단계 4
3-(5-{4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올 (TG-9e)의 합성
MeCN (30 mL) 중 1-(3-히드록시프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-카르보히드라지드 (TG-9d) (1.245 g, 6.281 mmol)의 용액에 실온에서 DMF·DMA (816 mg, 6.85 mmol)를 첨가하였다. 첨가한 후, 반응 혼합물을 50℃에서 40분 동안 교반하였다. LC-MS 분석은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 이 단계에서, 4-메톡시벤질아민 (2.58 g, 18.8 mmol)에 이어서 AcOH (10mL) 및 AcONa (1.55 g, 18.8 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 95℃에서 추가로 16시간 동안 교반하였다. 용액을 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 포화 NaHCO3으로 중화시키고, EtOAc (2x10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조 (Na2SO4)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (4 g SiO2, DCM 중 MeOH, 0%에서 10%)에 의해 정제하여 표제 화합물 3-(5-{4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올 (TG-9e) (1.02 g, 49% 수율)을 황색 검으로서 수득하였다.
1H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 8.77 (s, 1H), 7.03 - 6.97 (m, 2H), 6.92 - 6.86 (m, 2H), 6.39 (s, 1H), 5.23 (s, 2H), 4.60 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 4.17 - 4.08 (m, 2H), 3.72 (s, 3H), 3.28 - 3.23 (m, 2H), 2.21 (s, 3H), 1.72 (quin, J = 6.6 Hz, 2H); m/z (ESI+) - (C17H21N5O2), 328.1 (M+H)+.
단계 5
3-(5-{4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸-1H-피라졸-1-일)프로필 아세테이트 (TG-9f)의 합성
DCM (10 mL) 중 3-(5-{4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올 (TG-9e) (1.02 g, 3.116 mmol)의 용액에 실온에서 피리딘 (1.48 g, 18.7 mmol) 및 아세트산 무수물 (1.27 g, 12.5 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 거의 완전한 소모를 나타내었다. 용액을 물 (15 mL)로 희석하고, DCM (2x20 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 플래쉬 크로마토그래피 (DCM 중 MeOH 0%에서 10%)에 의해 정제하여 표제 화합물 3-(5-{4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸-1H-피라졸-1-일)프로필 아세테이트 (TG-9f) (1.00 g, 86% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C19H23N5O3), 370.2 (M+H)+.
단계 6
3-(4-플루오로-5-{4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸-1H-피라졸-1-일)프로필 아세테이트 (Int-TG-11)의 합성
MeCN (5 mL) 중 3-(5-{4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸-1H-피라졸-1-일)프로필 아세테이트 (TG-9f) (500 mg, 1.35 mmol)의 용액에 셀렉트플루오르 (959 mg, 2.71 mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 40℃로 가열하고, 14시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 상당한 출발 물질이 남아있음을 나타내었다. 반응물을 이 단계에서 물로 켄칭하고, EtOAc (3x10 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조 (Na2SO4)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (DCM 중 MeOH 0%에서 6%까지)에 의해 정제하여 표제 화합물 (146 mg, 27% 수율)을 황색 검으로서 수득하였다.
1H NMR (400MHz, 클로로포름-d) δ 8.13 (s, 1H), 7.07 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.90 - 6.84 (m, 2H), 5.08 (s, 2H), 4.32 - 4.23 (m, 2H), 3.90 (d, J = 6.8 Hz, 2H), 3.80 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 2.02 - 1.99 (m, 1H), 2.01 - 1.95 (m, 5H); m/z (ESI+) - (C19H22FN5O3), 388.2 (M+H)+.
3-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-12)의 반응식 TG-10에 따른 제조.
반응식 TG-10:
Figure pct00066
단계 1
1-에틸-3-메틸-5-(1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1H-피라졸-4-카르브알데히드 (TG-10a)의 합성.
DMF (9.11 mL, 118 mmol)가 들은 플라스크를 빙조에서 0℃로 냉각시키고, 이어서 옥시염화인 (V) (0.877 mL, 9.41 mmol)을 적가하였다. 반응물을 실온으로 15분에 걸쳐 가온되도록 하고, 추가로 45분 동안 교반하였다. 이 단계에서, 3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-04) (300 mg, 1.57 mmol)을 DMF 중 용액 (2.25 mL)로서 첨가하였다. 반응물을 100℃에서 40분 동안 가열하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 완전한 소모를 나타내었다. 용액을 얼음에 붓고, 3 부분 DCM으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피 (12 g SiO2, 이스코, Hept. 중 EtOAc 0-100%)에 의해 정제하여 표제 화합물 1-에틸-3-메틸-5-(1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1H-피라졸-4-카르브알데히드 (TG-10a) (57 mg, 90% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 10.27 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 4.49 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 4.00 (s, 3H), 2.39 (s, 3H), 1.36 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
단계 2
1-에틸-3-메틸-5-(1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1H-피라졸-4-올 (TG-10b)의 합성.
CHCl3 (2 mL) 중 1-에틸-3-메틸-5-(1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1H-피라졸-4-카르브알데히드 (TG-10a) (274 mg, 1.30 mmol)의 용액에 mCPBA (678 mg, 2.75 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 6.5시간 동안 교반하였다. 용액을 진공 하에 농축시켰다. 조 물질을 MeOH (8 mL) 중에 용해시키고, Na2CO3 (437 mg, 4.13 mmol)을 H2O 중 용액 (2 mL)로서 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용액을 분리 깔때기로 옮기고, 3 부분 DCM으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (40 g SiO2, 이스코, Hept. 중 EtOAc 0-100%)에 의해 정제하여 표제 화합물 1-에틸-3-메틸-5-(1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1H-피라졸-4-올 (TG-10b) (150 mg, 56% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.65 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 4.32 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.94 (s, 3H), 2.08 (s, 3H), 1.25 (t, J = 7.2 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C9H13N5O), 208.5 (M+H)+ 관찰치.
단계 3
3-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-12)의 합성.
DMF (1.5 mL) 중 1-에틸-3-메틸-5-(1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1H-피라졸-4-올 (TG-10b) (150 mg, 0.724 mmol) 및 K2CO3 (400 mg, 2.90 mmol)의 차가운 용액에 DMF 중 용액 (0.5 mL)로서의 벤질 브로마이드 (248 mg, 1.45 mmol, 172 μL)을 적가 방식으로 첨가하였다. 반응물을 0-10℃에서 2시간 동안 교반하고, 50℃에서 밤새 교반하였다. 용액을 H2O (20 mL)로 희석하고, 3 부분 DCM으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (12 g SiO2, 이스코, Hept. 중 EtOAc 0-100%)에 의해 정제하여 표제 화합물 3-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-12) (187 mg, 87% 수율)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.65 (s, 1H), 7.47 - 7.40 (m, 2H), 7.39 - 7.27 (m, 3H), 4.93 (s, 2H), 4.33 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 3.97 (s, 3H), 2.01 (s, 3H), 1.26 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-카르보티오아미드 (Int-TG-13)의 반응식 TG-11에 따른 제조.
반응식 TG-11:
Figure pct00067
단계 1
1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복스아미드 (TG-11a)의 합성.
1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복실산 (TG-1a) (258 mg, 1.69 mmol)이 들은 플라스크에 SOCl2 (1 mL)를 첨가하였다. 반응물을 65℃에서 2.5시간 동안 가열하였다. 용액을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 PhMe (3 mL)와 공비혼합하였다. 조 잔류물을 디옥산 (2 mL) 중에 용해시키고, 빙조에서 0℃까지 냉각시켰다. 용액에 MeOH (2.41 mL, 7M) 중 용액으로서 포화 NH3을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하여 백색 고체를 침전시켰다. 고체를 여과에 의해 수집하고, EtOAc로 세척하고, 고진공 하에 밤새 건조시켜 표제 화합물 1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복스아미드 (TG-11a) (300 mg, >95% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.80 (br s, 1H), 7.39 (br s, 1H), 6.60 (s, 1H), 4.42 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 2.15 (s, 3H), 1.26 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
단계 2
1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-카르보티오아미드 (Int-TG-13)의 합성.
THF 중 1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복스아미드 (TG-11a) (30.0 mg, 0.20 mmol)의 용액에 라웨슨 시약 (79.2 mg, 0.196 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 70℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 H2O (10 mL)로 켄칭하고, EtOAc를 사용하여 분리 깔때기로 옮겼다. 상을 분리하고, 수성 상을 3 부분 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조 (Na2SO4)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (12 g SiO2, 이스코, Hept. 중 EtOAc 0-100%)에 의해 정제하여 표제 화합물 1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-카르보티오아미드 (Int-TG-13) (20 mg, 61% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.86 (br s, 1H), 9.40 (br s, 1H), 6.30 (s, 1H), 4.48 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 2.14 (s, 3H), 1.28 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
메틸-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-옥사졸-5-카르복실레이트 (Int-TG-14)의 반응식 TG-12에 따른 제조
반응식 TG-12
Figure pct00068
THF (12 mL) 중 1-에틸-3-메틸-1h-피라졸 (300.0 mg, 2.72 mmol)의 용액에 -30℃에서 n-BuLi (436 mg, 6.81 mmol, 2.72 mL, 2.5 M)을 적가하고, 반응물을 -30℃에서 10분 동안 교반하였다. 이어서, 염화아연 (928 mg, 6.81 mmol, 3.58 mL, 1.9 M)을 -30℃에서 도입하고, -30℃에서 30분 동안 교반하고, 이어서 실온으로 가온하고, 1시간 동안 교반하였다. 아연산염 용액 (c = 0.148 M)을 후속 단계에 사용하였다. 바이알에 디옥산 (5 mL) 중 메틸 2-브로모-1,3-옥사졸-5-카르복실레이트 (250 mg, 1.21 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (178 mg, 0.243 mmol)을 충전하고, 5분 동안 탈기하였다. 아연산염 용액 (12.3 mL, 1.82 mmol, 0.148 M)을 실온에서 도입하고, 80℃에서 가열하고, LCMS에 의해 모니터링하였다. 반응물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 이스코 (실리카, 40 g, 헵탄 중 0-40% EtOAc)에 의해 정제하여 메틸 2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-옥사졸-5-카르복실레이트 (Int-TG-14) (62 mg, 22% 수율)을 광-오렌지색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.20 (s, 1H), 6.79 (s, 1H), 4.57 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.33 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 1.36 (t, J = 7.0 Hz, 3H). m/z (ESI+) - (C11H13N3O3), 236.2 (M+H)+ 관찰치.
에틸 2-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1,3-옥사졸-5-카르복실레이트 (Int-TG-15)의 반응식 TG-13에 따른 제조
반응식 TG-13
Figure pct00069
단계 1
4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸 (TG-13a)의 합성
1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-4-카르브알데히드 (1.0 g, 7.24 mmol)가 들은 100 mL 플라스크에 DCM 및 m-클로로퍼옥시벤조산 (mCPBA) (3.24 g, 77% 순도, 14.5 mmol)을 첨가하였다. 용액을 40℃에서 1시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, DCM로 희석하고, 포화 Na2SO3 및 포화 Na2CO3 x 2의 혼합물에 이어서 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-4-일 포르메이트 1 g을 수득하였고, 이는 추가 정제 없이 사용하였다. 1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-4-일 포르메이트 (1 g, 6.49 mmol)이 들은 100 mL 플라스크에 MeOH 및 Et3N (0.9 mL, 6.48 mmol)을 첨가하였다. 용액을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 용액을 진공 하에 농축시켜 조 1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-4-올을 분홍색 오일로서 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다. CH3CN (32.4 mL) 중 1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-4-올 (848 mg, 6.48 mmol)이 들은 100 mL 플라스크에 Cs2CO3 (4.23 g, 13 mmol) 및 벤질 브로마이드 (1.16 mL, 9.73 mmol)를 첨가하였다. 용액을 실온에서 40분 동안 교반하였다. 반응물을 셀라이트를 통해 EtOAc로 여과한 다음, 농축시켰다. 조 생성물을 셀라이트 상에 흡착시키고, 이스코 (헵탄 중 0-35% EtOAc)에 의해 정제하여 4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸 (TG-13a) (1.1 g, 78% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.55 - 7.26 (m, 5H), 4.87 (s, 2H), 3.92 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 2.03 (s, 3H), 1.29 (t, J = 7.2 Hz, 3H). m/z (ESI+) - (C13H16N2O), 217.2 (M+H)+ 관찰치.
단계 2
에틸 2-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1,3-옥사졸-5-카르복실레이트 (Int-TG-15)의 합성
THF (9.0 mL) 중 4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸 (TG-13a) (308.0 mg, 1.42 mmol)의 용액에 -63℃에서 n-BuLi (0.490 mL, 1.22 mmol, 2.5 M)을 적가하고, 반응물을 -63 내지 -60℃에서 10분 동안 교반하였다. 이어서, ZnCl2 (0.645 mL, 1.22 mmol, 1.9 M)를 -60℃에서 도입하고, -60 내지 -55℃에서 30분 동안 교반하고, 이어서 실온으로 가온하고, 1시간 동안 교반하였다. 아연산염 용액 (c = 0.13 M)을 후속 단계에 사용하였다. 바이알에 에틸 2-브로모옥사졸-5-카르복실레이트 (200 mg, 0.909 mmol)를 채우고, 디옥산 (10 mL) 중 XPhos-Pd-G2 (64.4 mg, 0.0818 mmol)를 5분 동안 탈기하였다. 아연산염의 용액 (10.5 mL, 1.36 mmol, 0.13M)을 실온에서 도입하고, 반응물을 80℃에서 90분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 1.25 mL 1M HCl을 함유하는 켄칭한 빙수로 역켄칭하였다. 혼합물을 EtOAc x 3으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 이스코 (실리카, 24 g, 헵탄 중 0-30% EtOAc)에 의해 정제하여 에틸 2-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1,3-옥사졸-5-카르복실레이트 (Int-TG-15) (141 mg, 58% 수율)을 투명한 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.20 (s, 1H), 7.50 (dd, J = 1.8, 7.6 Hz, 2H), 7.36 (d, J = 7.0 Hz, 3H), 4.99 (s, 2H), 4.54 - 4.44 (m, 2H), 4.38 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 2.12 (s, 3H), 1.32 (t, J = 7.2 Hz, 6H). m/z (ESI+) - (C19H21N3O4), 356.3 (M+H)+ 관찰치.
2-[4-(벤질옥시)-5-브로모-3-메틸-1H-피라졸-1-일]에틸 아세테이트 (Int-TG-16)의 반응식 TG-14에 따른 제조
반응식 TG-14
Figure pct00070
단계 1
2-(3-메틸-1H-피라졸-1-일)에틸 아세테이트 (TG-14a)의 합성
50 mL 플라스크에 DCM (20.0 mL) 중 2-(3-메틸-1h-피라졸-1-일)에탄-1-올 (239 mg, 1.47 mmol), 아세틸 아세테이트 (180 mg, 1.76 mmol, 167 μL), 트리에틸아민 (446 mg, 4.41 mmol, 0.615 mL) 및 DMAP (35.9 mg, 0.294 mmol)를 실온에서 2.5시간 동안 첨가하였다. 반응 혼합물은 현탁액으로 유지되었다. 고체를 여과하고, 여과물을 DCM으로 희석하고, 물로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 조 물질을 이스코 (실리카, 12 g 석유 에테르 중 0-40% EtOAc)에 의해 정제하여 2-(3-메틸-1H-피라졸-1-일)에틸 아세테이트 (TG-14a) (278, 86% 수율)을 투명한 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.59 (d, J = 1.95 Hz, 1H), 6.00 (d, J = 1.95 Hz, 1H), 4.28 - 4.33 (m, 2H), 4.21 - 4.27 (m, 2H), 2.15 (s, 3 H), 1.98 (s, 3 H).
단계 2
2-(4-포르밀-3-메틸-1H-피라졸-1-일)에틸 아세테이트 (TG-14b)의 합성
DMF (993 mg, 13.6 mmol, 1.05 mL) 중 2-(3-메틸-1H-피라졸-1-일)에틸 아세테이트 (TG-14a) (254 mg, 1.51 mmol)의 혼합물에 옥시염화인 (695 mg, 4.53 mmol, 0.422 mL)을 실온에서 첨가하고, 발열 반응, 2분 후, 반응물을 100℃에서 2.5시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, DCM으로 희석하고 얼음에 붓고, 5분 동안 교반하고, 수성 층을 포화 Na2CO3을 사용하여 pH 8로 조심스럽게 중화시켰다. 반응 생성물을 DCM x 3으로 추출하였다. 유기 층을 물 x 1로 세척하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 이스코 (실리카, 12 g, 석유 에테르 중 0-100% EtOAc)에 의해 정제하여 2-(4-포르밀-3-메틸-1H-피라졸-1-일)에틸 아세테이트 (TG-14b)을 담황색 오일 348 mg으로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.82 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 4.48 - 4.22 (m, 4H), 2.36 (s, 3H), 1.98 (s, 3H).
단계 3
2-[4-(벤질옥시)-3-메틸-1H-피라졸-1-일]에틸 아세테이트 (TG-14c)의 합성
2-(4-포르밀-3-메틸-1H-피라졸-1-일)에틸 아세테이트 (TG-14b) (220 mg, 1.31 mmol)이 들은 25 mL 플라스크에 클로로포름 및 m-CPBA (526 mg, 77% 순도, 2.35 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 40℃에서 35분 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 디클로로메탄으로 희석하고, 포화 Na2SO3 및 포화 Na2CO3 x 1의 혼합물로 세척하고, pH = 8로 조정하고, DCM x 3으로 추출하고, 이어서 유기 층을 물로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 조 2-[4-(포르밀옥시)-3-메틸-1H-피라졸-1-일]에틸 아세테이트를 수득하였으며, 이를 후속 단계에 정제 없이 사용하였다. 2-[4-(포르밀옥시)-3-메틸-1H-피라졸-1-일]에틸 아세테이트 (260 mg, 1.23 mmol)이 들은 50 mL 플라스크에 MeOH 및 트리에틸아민 (161 mg, 1.59 mmol, 0.222 mL)을 첨가하였다. 용액을 실온에서 35분 동안 교반하였다. 용액을 진공 하에 농축시켜 2-(4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-1-일)-에틸 아세테이트를 황색 오일로서 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다. 2-(4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-1-일)에틸 아세테이트 (226 mg, 1.23 mmol)가 들은 50 mL 플라스크에 실온에서 MeCN (8 mL), 탄산세슘 (480 mg, 1.47 mmol), 및 벤질 브로마이드 (0.219 mL, 1.84 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응물을 셀라이트를 통해 여과하고, 고체를 EtOAc로 세척하고, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 상에 흡착시키고, 이스코 (12 g, 헵탄 중 0-50% EtOAc)에 의해 정제하여 표제 화합물 2-[4-(벤질옥시)-3-메틸-1H-피라졸-1-일]에틸 아세테이트 (TG-14c) (205 mg, 3 단계에 걸쳐 58%)을 투명한 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 7.50 - 7.24 (m, 6H), 4.88 (s, 2H), 4.28 - 4.23 (m, 2H), 4.14 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 2.04 (s, 3H), 1.97 (s, 3H).
단계 4
2-[4-(벤질옥시)-5-브로모-3-메틸-1H-피라졸-1-일]에틸 아세테이트 (Int-TG-16)의 합성
-9℃에서 디클로로메탄 (2.0 mL) 중 2-[4-(벤질옥시)-3-메틸-1H-피라졸-1-일]에틸 아세테이트 (TG-14c) (156.0 mg, 0.569 mmol) 및 탄산나트륨 (181 mg, 1.71 mmol)의 교반 용액에 브로민 (273 mg, 1.71 mmol, 87.4 uL)을 첨가하였다. 반응물을 -10℃에서 3.5시간 동안 교반하였다. 반응물을 0℃에서 포화 Na2S2O3의 첨가에 의해 켄칭하고, DCM x 2으로 추출하고, 진공 하에 용매를 제거하였다. 조 생성물을 이스코 (실리카, 12 g, 헵트 중 0-70% EtOAc)에 의해 정제하여 표제 화합물 2-[4-(벤질옥시)-5-브로모-3-메틸-1H-피라졸-1-일]에틸 아세테이트 (Int-TG-16) (180 mg, 90%)을 투명한 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.31 - 7.45 (m, 5H), 4.90 (s, 2H), 4.29 (t, J = 4.88 Hz, 2H), 4.22 (t, J = 4.88 Hz, 2H), 2.00 (s, 3H), 1.97 (s, 3H). m/z (ESI+) - (C15H17BrN2O3), 355.3 (M+H)+ 관찰치.
3-[1-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-17)의 반응식 TG-15에 따른 제조
반응식 TG-15
Figure pct00071
단계 1
3-[1-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-17)의 합성.
DMF (6.0 mL) 중 3-(5-{4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸-1H-피라졸-1-일)프로판-1-올 (TG-9e) (600.0 mg, 1.44 mmol )의 용액에 이미다졸 (490 mg, 7.20 mmol) 및 TBSCl (651 mg, 4.32 mmol)을 첨가하였다. 생성된 담황색 반응 용액을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 H2O (20 mL)로 켄칭하여 담갈색 용액을 수득하였으며, 이것을 EtOAc (50 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (50 mL)로 세척하고, 건조 (무수 Na2SO4)시키고, 여과하고, 농축시켜 담황색 오일을 수득하였다. 조 잔류물을 추가로 콤비 플래쉬 (12 g 실리카 겔, DCM 중 MeOH 0에서 10%까지)에 의해 정제하여 표제 화합물 3-[1-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-17) (550 mg, 86.5%)을 담황색 오일로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C23H36N5O2Si), 442.3 (M+H)+ 관찰치.
tert-부틸-3-[3-메틸-5-(1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1H-피라졸-1-일]-프로파노에이트 (Int-TG-18)의 반응식 TG-16에 따른 제조
반응식 TG-16
Figure pct00072
단계 1
tert-부틸-3-[3-메틸-5-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1H-피라졸-1-일]-프로파노에이트 (TG-16a)의 합성.
MeCN (10 mL) 중 tert-부틸 3-(5-{4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸-1H-피라졸-1-일)프로파노에이트 (Int-TG-10) (448.2 mg, 1.128 mmol)의 용액에 H2O (3 mL) 중 질산세륨암모늄 (CAN) (1830 mg, 3.34 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 2.5시간 동안 교반하였다. 이 반응물은 황색 용액이었다. 반응물을 물 (40 mL)로 켄칭하고, 분리 깔때기로 옮겼다. 용액을 EtOAc (50 mL *3)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조 (Na2SO4)시키고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 유사한 조건 하에 제조된 배치의 조 잔류물과 합하였다. 합한 배치를 합한 배치를 정제용-TLC (DCM: MeOH= 10: 1)에 의해 정제하여 표제 화합물 tert-부틸-3-[3-메틸-5-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1H-피라졸-1-일]-프로파노에이트 (TG-16a) (263 mg, 54%)을 황색 고체로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C13H20N5O2), 278.1 (M+H)+ 관찰치.
단계 2
tert-부틸-3-[3-메틸-5-(1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1H-피라졸-1-일]-프로파노에이트 (Int-TG-18)의 합성.
DMF (5.0 mL, 0.2 M) 중 tert-부틸-3-[3-메틸-5-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1H-피라졸-1-일]-프로파노에이트 (TG-16a) (263 mg, 0.95 mmol) 및 Cs2CO3 (775 mg, 2.38 mmol, 2.4 당량)의 용액에 MeI (1.0 mmol, 63 μL, 1.05 당량)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 25℃에서 20시간 동안 교반하였으며, 그 시간 동안 이는 황색 현탁액이 되었다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되었음을 나타내었고, TLC (석유 에테르: EtOAc= 1: 1, UV) 은 3개의 신규한 반점을 나타내었다. 이어서, 반응물을 물로 켄칭하고, 3 부분 (각각 5 mL) EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 정제용-TLC (석유 에테르: EtOAc, 2:1.5)에 의해 정제하여 표제 화합물 tert-부틸-3-[3-메틸-5-(1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1H-피라졸-1-일]-프로파노에이트 (Int-TG-18) (170 mg, 61%)을 무색 검으로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.04 (s, 1H), 6.55 (s, 1H), 4.84 - 4.78 (m, 2H), 3.96 (s, 3H), 2.86 - 2.74 (m, 2H), 2.28 (s, 3H), 1.57 (s, 9H). m/z (ESI+) - (C14H22N5O2), 292.0 (M+H)+ 관찰치.
에틸 2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-5-카르복실레이트 (Int-TG-19)의 반응식 TG-17에 따른 제조
반응식 TG-17
Figure pct00073
단계 1
에틸 2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-5-카르복실레이트 (Int-TG-19)의 합성
질소 기체의 불활성 분위기 하에 건조된 200 mL 플라스크에 1-에틸-3-메틸피라졸 (1g, 9.1 mmol, 1.8 당량) 및 THF (45 mL, 0.2 M)를 첨가하였다. 이 혼합물을 -30℃로 냉각시키고, 이어서 n-BuLi (헥산 중 2.5 M, 4 mL, 10 mmol, 2.2 당량)을 첨가하여 소량의 침전물이 함께 있는 황색 용액을 수득하였다. 20분 후, 분취물을 제거하고, CD3OD로 켄칭하였다. 이 분취물의 GCMS 분석은 단지 30% 중수소화를 나타내었으며, 따라서 반응 혼합물에 추가의 1 mL n-BuLi을 첨가하였다. 추가로 45분 후, 이전에 기재된 방식의 GCMS 분석은 완전 리튬화를 나타내었다. 이 단계에서, ZnCl2 (THF 중 1.9 M, 7 mL, 13.2 mmol, 2.8 당량)을 -30℃의 온도를 유지하면서 반응 혼합물에 첨가하였다. 첨가가 완결된 후, 플라스크를 냉각 조로부터 제거하고, 1시간에 걸쳐 실온으로 가온되도록 하였다. 이어서, 플라스크에 새로이-탈기된 디옥산 (22.7 mL)을 충전하여 추가의 침전물을 형성하였으며, 이어서 에틸 2-브로모-1,3-티아졸-5-카르복실레이트 (1.19g, 5.05 mmol, 1 당량) 및 Pd(dppf)Cl2 (555 mg, 0.15 당량)를 충전하였다. 모든 시약을 첨가한 후, 반응 혼합물을 80℃로 가열하였다. 1시간 후, LCMS 분석은 생성물 물질의 존재를 나타내었으며, 이에 플라스크를 실온으로 냉각시킨 다음, 포화 수성 NH4Cl로 켄칭하였다. 2상 용액을 진공 하에 농축시켜 휘발성 유기부를 제거하고, 나머지 수성 층을 분리 깔때기로 옮겼다. 용액을 2 부분 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 1 부분 염수로 세척하고, 건조 (Na2SO4)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 셀라이트 상에 흡착시키고, 칼럼 크로마토그래피 (이스코 자동화 칼럼, 0-100% EtOAc/헵탄; 0-5% MeOH/DCM)에 의해 정제하였다. TLC 분석은 2종의 화합물이 용리되었음을 나타내었으며, 그 중 첫번째는 nBuLi의 티아졸과의 커플링 생성물인 것으로 입증되었고 (Rf = 0.5, 4:1 헵탄/EtOAc, UV 활성), 그 중 두번째는 생성물로서 확인되었다 (Rf = 0.4, 4:1 헵탄/EtOAc). TLC에 의해 결정 시 순수한 생성물을 함유하는 분획을 수집하여 표제 에틸 2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-5-카르복실레이트 (Int-TG-19) (660 mg, 23%)를 적색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.38 (s, 1H), 6.50 (s, 1H), 4.63 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.39 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.30 (s, 3H), 1.43 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.40 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
3-{3-[(벤질옥시)메틸]-1-에틸-1H-피라졸-5-일}-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-20)의 반응식 TG-18에 따른 제조
반응식 TG-18
Figure pct00074
단계 1
디메틸 1-에틸-1H-피라졸-3,5-디카르복실레이트 (TG-18a)의 합성
부탄-2-온 (MEK) (75 mL) 중 디메틸 1H-피라졸-3,5-디카르복실레이트 (3.0 g, 16 mmol) 및 탄산칼륨 (4.5 g, 33 mmol)의 혼합물에 에틸 아이오다이드 (1.6 mL, 20 mL)를 첨가하였다. 75℃에서 1시간 동안 가열한 후, 반응물을 냉각시킨 다음, 에틸 아세테이트로 희석하였다. 유기부를 물 및 염수로 세척하고, 건조 (Na2SO4)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (80 g SiO2, 이스코, 0-50% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 표제 화합물 디메틸 1-에틸-1H-피라졸-3,5-디카르복실레이트 (TG-18a) (3.4 g, 98%)을 투명한 검으로서 수득하였으며, 이를 밤새 응고시켰다.
LCMS [M+H] = 213 관찰치;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 7.26 (s, 1 H) 4.57 (q, J = 7.17 Hz, 2 H) 3.86 (s, 3 H) 3.82 (s, 3 H) 1.37 (t, J = 7.21 Hz, 3 H).
단계 2
메틸 1-에틸-3-(히드록시메틸)-1H-피라졸-5-카르복실레이트 (TG-18b)의 합성
디메틸 1-에틸-1H-피라졸-3,5-디카르복실레이트 (TG-18a) (3.7 g, 17 mmol)의 냉각된 (빙조) 용액에 디이소부틸알루미늄 히드라이드 (DIBAL) (DCM 중 1 M, 38 mL, 38 mmol)을 시린지 펌프을 통해 30분에 걸쳐 적가하였다. 반응물을 실온으로 가온하고, 1시간 후에 포화 타르타르산칼륨나트륨으로 켄칭하였다. 용액을 분리 깔때기로 옮기고, 상을 분리하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 건조 (Na2SO4)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (80 g SiO2, 이스코, 0-60% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 표제 화합물 메틸 1-에틸-3-(히드록시메틸)-1H-피라졸-5-카르복실레이트 (TG-18b) (2.7 g, 85%)을 투명한 검으로서 수득하였으며, 이를 밤새 응고시켰다.
LCMS [M+H] = 185 관찰치;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 6.77 (s, 1 H) 5.10 (t, J = 5.81 Hz, 1 H) 4.45 (q, J = 7.17 Hz, 2 H) 4.41 (d, J = 5.75 Hz, 2 H) 3.83 (s, 3 H) 1.32 (t, J = 7.21 Hz, 3 H).
단계 3
1-에틸-3-(히드록시메틸)-1H-피라졸-5-카르보히드라지드 (TG-18c)의 합성
에탄올 (50 mL) 중 메틸 1-에틸-3-(히드록시메틸)-1H-피라졸-5-카르복실레이트 (TG-18b) (2.7 g, 15 mmol)의 용액에 히드라진 수화물 (7.2 mL, 150 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 2시간 동안 가열한 다음, 실온으로 냉각시켰다. 용액을 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 1-에틸-3-(히드록시메틸)-1H-피라졸-5-카르보히드라지드 (TG-18c) (2.7 g, >95%)을 백색 고체로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 9.71 (br s, 1 H) 6.72 (s, 1 H) 5.06 (t, J = 5.69 Hz, 1 H) 4.45 (q, J = 7.05 Hz, 4 H) 4.39 (d, J = 5.62 Hz, 2 H) 1.29 (t, J = 7.09 Hz, 3 H).
단계 4
(1-에틸-5-{4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1H-피라졸-3-일)메탄올 (TG-18d)의 합성
아세토니트릴 (50 mL) 중 혼합물 1-에틸-3-(히드록시메틸)-1H-피라졸-5-카르보히드라지드 (TG-18c) (2.7 g, 15 mmol)에 N,N-디메틸포름아미드 디메틸아세탈 (DMF-DMA) (2.2 mL, 16 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 50℃에서 가열하여 황색 용액을 생성하였다. 30분 후, 4-메톡시벤질아민 (PMB-NH2) (1.5 mL, 16 mmol)을 첨가하고, 이어서 아세트산 (50 mL)을 첨가하였다. 반응물을 120℃에서 1.5시간 동안 가열한 다음 (MeCN 증발됨), 냉각시켰다. 용액을 농축시키고, 플래쉬 크로마토그래피 (80 g SiO2, 이스코, 0-10% MeOH/DCM)에 의해 정제하여 표제 화합물 (1-에틸-5-{4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1H-피라졸-3-일)메탄올 (TG-18d) (880 mg, 19%)을 검으로서 수득하였다.
LCMS [M+H] = 185 관찰치;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.79 (s, 1 H) 6.94 - 7.01 (m, 2 H) 6.85 - 6.90 (m, 2 H) 6.56 (s, 1 H) 5.23 (s, 2 H) 5.03 - 5.14 (m, 1 H) 4.44 (s, 2 H) 4.11 (q, J = 7.17 Hz, 2 H) 3.71 (s, 3 H) 1.14 (t, J = 7.15 Hz, 3 H).
단계 5
3-{3-[(벤질옥시)메틸]-1-에틸-1H-피라졸-5-일}-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸 (TG-18e)의 합성
N,N-디메틸포름아미드 (17 mL) 중 (1-에틸-5-{4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1H-피라졸-3-일)메탄올 (TG-18d) (805 mg, 2.6 mmol)의 용액에 수소화나트륨 (미네랄 오일, 308 mg 중 60% 분산액, 7.7 mmol)을 첨가하였다. 10분 후, 벤질 브로마이드 (915 μL, 7.7 mmol)을 첨가하였다. 2시간 후, 반응물을 물로 켄칭하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 에틸 아세테이트 중에 용해시키고, 분리 깔때기로 옮겼다. 유기 상을 1 부분 물, 1 부분 염수로 세척하고, 건조 (Na2SO4)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 3-{3-[(벤질옥시)메틸]-1-에틸-1H-피라졸-5-일}-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸 (TG-18e)을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
LCMS [M+H] = 404 관찰치.
단계 6
3-{3-[(벤질옥시)메틸]-1-에틸-1H-피라졸-5-일}-1H-1,2,4-트리아졸 (TG-18f)의 합성
헥사플루오로이소프로판올 (17 mL) 중 3-{3-[(벤질옥시)메틸]-1-에틸-1H-피라졸-5-일}-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸 (TG-18e) (이전 단계로부터의 조물질)의 용액에 트리플루오로아세트산 (1.9 mL, 25 mmol)을 첨가하였다. 생성된 오렌지색 용액을 50℃에서 3시간 동안 가열한 다음, 실온으로 서서히 냉각시켰다. 용액을 진공 하에 농축시키고, 조 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (24 g SiO2, 이스코, 0-10% MeOH/DCM)에 의해 정제하여 표제 화합물 3-{3-[(벤질옥시)메틸]-1-에틸-1H-피라졸-5-일}-1H-1,2,4-트리아졸 (TG-18f) (0.880 g)을 부차 불순물로 오염된 호박색 검으로서 수득하였다.
LCMS [M+H] = 284 관찰치;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.58 (br s, 1 H) 7.33 - 7.38 (m, 5 H) 6.74 (s, 1 H) 4.55 - 4.62 (m, 2 H) 4.53 (s, 2 H) 4.49 (s, 2 H) 1.34 (t, J = 7.15 Hz, 3 H).
단계 7
3-{3-[(벤질옥시)메틸]-1-에틸-1H-피라졸-5-일}-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-20)의 합성
DMF (17 mL) 중 3-{3-[(벤질옥시)메틸]-1-에틸-1H-피라졸-5-일}-1H-1,2,4-트리아졸 (TG-18f) (702 mg, 2.5 mmol) 및 탄산칼륨 (1.0 g, 7.4 mmol)의 혼합물에 메틸 아이오다이드 (460 μL, 7.4 mmol)을 첨가하였다. 1시간 후, 반응물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 디클로로메탄으로 슬러리로 만들고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물을 농축시키고, 플래쉬 크로마토그래피 (24 g SiO2, 이스코, 0-10% MeOH/DCM)에 의해 정제하여 표제 화합물 3-{3-[(벤질옥시)메틸]-1-에틸-1H-피라졸-5-일}-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-20) (314 mg, 43%)을 수득하였다.
LCMS [M+H] = 298 관찰치;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.60 (s, 1 H) 7.33 - 7.37 (m, 4 H) 7.25 - 7.31 (m, 1 H) 6.67 (s, 1 H) 4.53 - 4.59 (m, 2 H) 4.53 (s, 2 H) 4.48 (s, 2 H) 3.94 (s, 3 H) 1.34 (t, J = 7.15 Hz, 3 H).
3-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-21)의 반응식 TG-19에 따른 제조
Figure pct00075
단계 1
4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복실산 (TG-19a)의 합성
무수 THF (39 mL) 중 4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸 (TG-13a) (2600 mg, 12.02 mmol)의 담황색 용액을 드라이 조로 냉각시킨 다음, n-BuLi (7.26 mL, 18.2 mmol)을 -65℃에서 내부 온도를 >-60℃로 유지하는 속도로 첨가하였다. 첨가가 완결된 후, 생성된 황색 용액을 -65℃에서 1시간 동안 교반하였다. 황색 녹색 현탁액이 형성되었다. 혼합물의 분취물을 MeOH-d4로 켄칭하고, NMR 분석은 성공적인 리튬화가 일어났음을 확인하였다. 이어서, 과량의 고체 이산화탄소 (드라이 아이스)을 한 번에 첨가하였다. 혼합물을 -65℃에서 15분 동안 교반한 다음, 냉각 조로부터 제거하고, 45분에 걸쳐 교반하면서 실온으로 서서히 가온되도록 하였다. 용액을 진한 HCl을 사용하여 pH ~1로 산성화시키고, 진공 하에 농축시켜 THF을 제거하였다. 잔류물을 톨루엔 (100 mL*2)와 공비혼합하고, 건조시켜 표제 화합물 4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복실산 (TG-19a) (4700 mg)을 회백색 고체로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 13.23 (br s, 1H), 7.66 - 6.98 (m, 5H), 4.91 (s, 2H), 4.34 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.96 (s, 3H), 1.25 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
단계 2
4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-카르보닐 2-메틸프로필 카르보네이트 (TG-19b)의 합성
DCM (90 mL) 중 4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복실산 (TG-19a) (4700 mg, 18.06mmol)의 백색 현탁액에 DIPEA (9.44 mL, 54.2 mmol) 및 i-BuOCOCl (4.68 mL, 36.1 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온 (20℃)에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모 및 목적 생성물 물질을 포함하는 신규한 피크의 형성을 나타내었다. 황색 용액을 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-카르보닐 2-메틸프로필 카르보네이트 (TG-19b) (12.5 g)을 황색 고체로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C19H25N2O5), 361.1 (M+H)+ 관찰치.
단계 3
4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-카르보히드라지드 (TG-19c)의 합성
THF (30 mL) 중 히드라진 수화물 (3.45 mL, 69.4mmol)의 무색 용액에 THF (60 mL) 중 4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-카르보닐 2-메틸프로필 카르보네이트 (TG-19b) (12.5 g, 45.60 mmol)의 현탁액을 0℃에서 적가하였다. 첨가한 후, 빙수조를 제거하고, 혼합물을 추가로 15분 동안 교반하면서 실온 (20℃)으로 서서히 가온되도록 하였다. TLC (석유 에테르: EtOAc= 2:1, UV 및 I2)은 출발 물질의 소모 및 신규한 생성물의 형성을 나타내었다. 황색 현탁액을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 물 (50 mL) 중에 용해시키고, 분리 깔때기로 옮겼다. 수성 상을 EtOAc (50 mLx2)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 포화 NH4Cl (20 mLx3), 포화 NaHCO3 (20 mLx3)으로 세척하고, 건조 (Na2SO4)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 물질 (4.2 g) 및 병렬 배치로부터의 조 물질 (9.3 g)을 합한 이 단계에서 합하였다. 합한 배치를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (80 g SiO2, 15% EtOAc/석유 에테르에서 100% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제하였다. 분획을 함유하는 생성물을 수집하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-카르보히드라지드 (TG-19c) (7.2 g)을 불순물을 함유하는 황색 오일로서 수득하였다. 수득된 물질을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C14H19N4O2), 275.0 (M+H)+ 관찰치.
단계 4
2-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-카르보닐]-N-[(4-메톡시페닐)메틸]히드라진-1-카르보티오아미드 (TG-19d)의 합성
무수 THF (44 mL) 중 4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-카르보히드라지드 (TG-19c) (6.1 g 22.24 mmol)의 황색 용액에 DIPEA (5750 mg, 44.5 mmol)를 첨가하고, 이어서 무수 THF (11 mL) 중 1-(이소티오시아나토메틸)-4-메톡시벤젠 (PMBNCS) (5.98 g, 33.4 mmol)을 적가하였다. 황색 용액을 실온 (15℃)에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모 및 목적 생성물 물질을 포함하는 신규한 피크의 형성을 나타내었다. 이 배치를 추가의 가공을 위해 보다 작은 병렬 배치와 합하였다. 합한 배치를 진공 하에 농축시키고, EtOAc로 분리 깔때기로 옮기고, 물 (100 mL)로 희석하였다. 상을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (100mLx5)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 NH4Cl (50 mLx3)로 세척하고, 건조 (Na2SO4)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 EtOAc (150 mL)으로 30분 동안 연화처리하고, 여과하여 표제 화합물 2-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-카르보닐]-N-[(4-메톡시페닐)메틸]히드라진-1-카르보티오아미드 (TG-19d) (6.0 g)을 백색 고체로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C23H28N5O3S), 454.1 (M+H)+ 관찰치;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.46 (br s, 2H), 8.52 (br s, 1H), 7.52 - 7.32 (m, 5H), 7.24 (br d, J = 8.1 Hz, 2H), 6.85 (br d, J = 8.1 Hz, 2H), 5.03 (br s, 2H), 4.64 (br d, J = 5.0 Hz, 2H), 4.42 - 4.15 (m, 2H), 3.72 (s, 3H), 2.11 (s, 3H), 1.26 (br t, J = 7.0 Hz, 3H).
단계 5
5-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-티올 (TG-19e)의 합성
H2O (26.4 mL) 중 2-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-카르보닐]-N-[(4-메톡시페닐)메틸]히드라진-1-카르보티오아미드 (TG-19d) (6.0 g, 13.23 mmol)의 현탁액에 NaOH (13.2 mL, 39.7 mmol, H2O 중 3M)을 첨가하였다. 반응물을 18시간 동안 교반하면서 100℃에서 가열하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모 및 목적 생성물 물질을 포함하는 신규한 피크의 형성을 나타내었다. 용액을 1N HCl로 중화시키고, EtOAc를 사용하여 분리 깔때기로 옮겼다. 상을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (50 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조 (Na2SO4)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 5-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-티올 (TG-19e) (5.74 g)을 백색 고체로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 11.66 (br s, 1H), 7.38 - 7.29 (m, 3H), 7.20 (br d, J = 1.7 Hz, 2H), 6.99 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.69 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 5.27 (s, 2H), 4.81 (s, 2H), 3.71 (s, 3H), 3.70 - 3.62 (m, 2H), 2.27 (s, 3H), 0.88 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
단계 6
3-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-21)의 합성
AcOH (26.4mL) 중 5-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-티올 (TG-19e) (5.74 g, 13.18 mmol)의 황색 용액에 H2O2 (52.8 mL, 520 mmol)를 10℃에서 적가하였다. 반응물은 발열성인 것으로 관찰되었으므로, 반응 플라스크를 첨가의 완결 직전에 빙수조로 옮겼다. 첨가가 완결된 후, 혼합물을 실온 (20℃)으로 서서히 가온하고, 추가로 1시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모 및 목적 생성물 물질을 포함하는 신규한 피크의 형성을 나타내었다. 용액을 물 (200 mL)로 희석하고, EtOAc를 사용하여 분리 깔때기로 옮겼다. 상을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (100 mLx4)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 포화 Na2CO3 (100 mLx4), 포화 Na2SO3 (100 mLx3)으로 세척하고, 건조 (Na2SO4)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (120g SiO2, 1.5% MeOH/EtOAc에서 7.5% MeOH/EtOAc)에 의해 정제하여 표제 화합물 3-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-21) (4.1 g, 77%)을 백색 고체로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C23H25N5O2), 404.3 (M+H)+ 관찰치;
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.12 (s, 1H), 7.38 - 7.29 (m, 3H), 7.20 (dd, J = 2.9, 6.4 Hz, 2H), 6.89 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.76 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 5.01 (s, 2H), 4.76 (s, 2H), 4.04 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.76 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 1.16 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
3-[3-메틸-5-(1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1H-피라졸-1-일]프로필 아세테이트 (Int-TG-22)의 반응식 TG-20에 따른 제조.
반응식 TG-20
Figure pct00076
단계 1
3-[3-메틸-5-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1H-피라졸-1-일]프로필 아세테이트 (TG-20a)의 합성
3-(5-{4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸-1H-피라졸-1-일)프로필 아세테이트 (1.0 g, 2.7 mmol)가 들은 둥근 바닥 플라스크에 실온에서 TFA (10 mL, 0.3 M)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반하였으며, 그 시점에 반응 용액은 투명에서 적색으로 변화하였다. TLC 분석 (DCM/MeOH=10/1, UV 가시화)은 출발 물질이 소모되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켜 생성물을 적색 검으로서 수득하였다. 이 조 생성물을 MeOH (10 mL)로 희석하고, 실온에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 여과하고, 여과물을 후속적으로 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 3-[3-메틸-5-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1H-피라졸-1-일]프로필 아세테이트 (TG-20a) (1.057 g, >99%)을 황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.57 (s, 1H), 6.52 (s, 1H), 4.60 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.94 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.18 (s, 3H), 2.06 (p, J = 6.6 Hz, 2H), 1.93 (s, 3H).
단계 2
3-[3-메틸-5-(1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1H-피라졸-1-일]프로필 아세테이트 (Int-TG-22)의 합성.
DMF (8mL) 중 3-[3-메틸-5-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1H-피라졸-1-일]프로필 아세테이트 (TG-20a) (757 mg, 1.94 mmol)의 용액에 K2CO3 (803 mg, 실온 (20℃에서 5.81 mmol))을 첨가하였다. 첨가한 후, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, DMF (2mL) 중 MeI (358mg, 2.52 mmol)의 용액을 2분에 걸쳐 천천히 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 22℃에서 16시간 동안 교반하였다. 연황색 현탁액이 형성되었다. LCMS 분석은 출발 물질이 완전히 소모되고, 목적 생성물이 형성되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 물 (5 mL)로 희석하고, 2 10mL 부분의 EtOAc/석유 에테르 (V/V=2/1)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조 (Na2SO4)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (25 g SiO2, 이스코, 0-3% MeOH/EtOAc)에 의해 정제하여 표제 화합물 3-[3-메틸-5-(1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1H-피라졸-1-일]프로필 아세테이트 (Int-TG-22) (341.8 mg, 67%)을 미량의 잔류 DMF를 함유하는 황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.05 (s, 1H), 6.57 (s, 1H), 4.67 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 4.11 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.97 (s, 3H), 2.29 (s, 3H), 2.20 (quin, J = 6.7 Hz, 2H), 2.01 (s, 3H).
5-브로모-1-에틸-4-[(4-메톡시페닐)메톡시]-3-메틸-1H-피라졸 (Int-TG-23)의 반응식 TG-21에 따른 제조.
반응식 TG-21
Figure pct00077
단계 1
1-에틸-2-(프로판-2-일리덴)히드라진 (TG-21b)의 합성
DCM (3 L) 중 에틸히드라진 히드로클로라이드 염 (TG-21a) (200 g, 1.50 mol)의 혼합물에 25℃에서 아세톤 (127.12 mL, 1.73 mol) 및 K2CO3 (519.51 g, 3.76 mol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 반응이 완결되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 DCM (500 mL x 3)으로 세척하고, 여과물을 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 1-에틸-2-(프로판-2-일리덴)히드라진 (TG-21b) (280 g, 2.66 mol, 88% 수율)을 무색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 4.26 (br s, 1H), 3.11 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 1.85 (s, 3H), 1.67 (s, 3H), 1.08 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
단계 2
1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-4-카르브알데히드 (TG-21c)의 합성
POCl3 (317.52 mL, 3.42 mol)을 DMF (800 mL)에 0℃에서 적가하고, 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 -20℃로 냉각시키고, DMF (400 mL) 중 1-에틸-2-(프로판-2-일리덴)-히드라진 (TG-21b) (140 g, 1.40 mol)의 용액을 -20℃에서 적가하였다. 혼합물을 -20℃에서 3시간 동안 교반하였으며, 그 시점에 빙조를 제거하고, 반응물을 25℃로 서서히 가온되도록 하였다. 다음에, 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 반응이 완결되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 주위 온도로 냉각시키고, 얼음 (3 kg)에 천천히 부었다. 혼합물을 30% 수성 NaOH (pH = 9-10)을 사용하여 알카리성으로 만든 다음, 이어서 DCM (2 L x 3)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조 (Na2SO4)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 0 - 50% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제하여 표제 화합물 1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-4-카르브알데히드 (TG-21c) (130 g, 940.89 mmol, 67% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.79 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 4.10 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 2.34 (s, 3H), 1.36 (t, J = 7.3 Hz, 3H).
단계 3
1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-4-일 포르메이트 (TG-21d)의 합성
반응물을 3개의 병렬 배치에서 수행하였다. CHCl3 (1 L) 중 1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-4-카르브알데히드 (TG-21c) (50 g, 361.88 mmol)의 혼합물에 15℃에서 30분 동안 조금씩 mCPBA (94.04 g, 463.21 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 15℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 DCM (200 mL x 2)으로 세척하였다. 여과물에 15℃에서 K2CO3 (250.07 g, 1.81 mol)을 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되고 목적 생성물이 형성되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 DCM (200 mL x 2)으로 세척하였다. 여과물을 진공 하에 농축시켜 조 잔류물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 0-10% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제하여 표제 화합물 1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-4-일 포르메이트 (TG-21d) (~140g)을 흑색 오일로서 수득하였다. 이 물질을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
LCMS [M+H] = 155 관찰치.
단계 4
1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-4-올 (TG-21e)의 합성
MeOH (50 mL) 중 1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-4-일 포르메이트 (TG-21d) (140 g, 조 생성물)의 혼합물에 10℃에서 수성 NaHCO3 (150 mL)를 첨가하고, 혼합물을 10℃에서 1시간 동안 교반하였다. TLC (석유 에테르: EtOAc = 1: 1, UV 가시화, 출발 물질: Rf = 0.55)은 출발 물질이 소모되었음을 나타내었다. 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 MeOH (50 mL x 3)로 세척하였다. 여과물을 진공 하에 농축시켜 조 잔류물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 30-85% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제하여 표제 화합물 1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-4-올 (TG-21e) (90 g, 713.40 mmol, 78% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C6H11N2O), 127.0 (M+H)+ 관찰치.
단계 5
1-에틸-4-[(4-메톡시페닐)메톡시]-3-메틸-1H-피라졸 (TG-21f)의 합성
반응 용기에서, PMBCl (12.9 mL, 95.1 mmol)을 DMF (130 mL ) 중 1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-4-올 (TG-21e) (10.0 g 79.3 mmol) 및 K2CO3 (16.4 g, 119 mmol)의 담갈색 현탁액에 17℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 17℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 거의 소모되고 목적 생성물 물질을 포함하는 신규한 피크가 형성되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 물 (200 mL)로 희석하고, EtOAc/석유 에테르 (V/V=2/1, 300 mLx2)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (100 mL)로 세척하고, 건조 (Na2SO4)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (120 g SiO2, 이스코, 0-25% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제하여 표제 화합물 1-에틸-4-[(4-메톡시페닐)메톡시]-3-메틸-1H-피라졸 (TG-21f) (17.5 g, 89%)을 황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.39 - 7.28 (m, 2H), 6.96 (s, 1H), 6.94 - 6.87 (m, 2H), 4.81 (s, 2H), 3.99 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 3.83 (s, 3H), 2.19 (s, 3H), 1.41 (t, J = 7.3 Hz, 3H). m/z (ESI+) - (C14H19N2O2), 247.0 (M+H)+ 관찰치.
단계 6
5-브로모-1-에틸-4-[(4-메톡시페닐)메톡시]-3-메틸-1H-피라졸 (Int-TG-23)의 합성
CHCl3 (500 mL) 중 1-에틸-4-[(4-메톡시페닐)메톡시]-3-메틸-1H-피라졸 (TG-21f) (18.1 g, 73.6 mmol)의 황색 용액에 NBS (15.7 g, 88.4 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 25℃에서 3시간 동안 교반하였다. TLC (50% EtOAc/석유 에테르, UV에 의해 가시화됨)은 출발 물질이 소모되고 신규한 생성물이 형성되었음을 나타내었다. 반응 혼합물을 2개의 보다 작은 배치로부터의 조 반응 혼합물과 합하였다. 합한 용액을 물 (100 mL)로 희석하고, DCM (200 mL*2)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (100 mL)로 세척하고, 건조 (Na2SO4)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (120 g SiO2, 이스코, 13-25% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제하여 표제 화합물 5-브로모-1-에틸-4-[(4-메톡시페닐)메톡시]-3-메틸-1H-피라졸 (Int-TG-23) (17.43 g, 70%)을 황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.31 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 6.89 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 4.85 (s, 2H), 4.08 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.82 (s, 3H), 2.07 (s, 3H), 1.37 (t, J = 7.3 Hz, 3H).
3-메틸-1-{3-[(옥산-2-일)옥시]프로필}-1H-피라졸 (Int-TG-24) 반응식 TG-22에 따른 의 제조.
반응식 TG-22
Figure pct00078
단계 1
3-메틸-1-{3-[(옥산-2-일)옥시]프로필}-1H-피라졸 (Int-TG-24)의 합성
밀봉된 튜브에서 2-부타논 (MEK) (49 mL) 중 5-메틸-1H-피라졸 (TG-22a) (980 μL, 12 mmol), 2-(3-브로모프로폭시)테트라히드로-2H-피란 (TG-22b) (4.1 mL, 24 mmol), 탄산칼륨 (3.4 g, 24 mmol) 및 아이오딘화칼륨 (4.0 g, 24 mmol)의 혼합물을 70℃에서 밤새 가열하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 고체를 여과하였다. 여과물을 농축시키고, 플래쉬 크로마토그래피 (80 g SiO2, 이스코, 0-50% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 표제 화합물 (Int-TG-24) (704 mg, 26%)을 오일, 위치이성질체의 3:1 혼합물로서 수득하였다.
LCMS [M+H]+ = 225 관찰치;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm (주요 위치이성질체) 7.53 (d, J=2.08 Hz, 1 H) 5.97 (dd, J=2.08, 0.37 Hz, 1 H) 4.50 - 4.52 (m, 1 H) 4.06 (t, J=6.91 Hz, 2 H) 3.72 (ddd, J=11.07, 7.82, 3.12 Hz, 1 H) 3.55 - 3.62 (m, 1 H) 3.37 - 3.44 (m, 1 H) 3.24 - 3.29 (m, 1 H) 2.14 (s, 3 H) 1.93 - 2.01 (m, 2 H) 1.66 - 1.77 (m, 1H) 1.57 - 1.66 (m, 1 H) 1.40 - 1.52 (m, 4 H).
5-브로모-1-에틸-4-[(4-메톡시페닐)메톡시]-1H-피라졸 (Int-TG-25)의 반응식 TG-23에 따른 제조.
반응식 TG-23
Figure pct00079
단계 1
1-에틸-4-[(4-메톡시페닐)메톡시]-1H-피라졸 (TG-23b)의 합성
무수 DMF (4.5mL) 중 1-에틸-1H-피라졸-4-올 (TG-23a) (300 mg, 2.68 mmol)의 용액에 K2CO3 (407 mg, 2.94 mmol) 및 PMBCl (461 mg, 2.94 mmol)을 첨가하였다. 생성된 담적색 반응 현탁액을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. TLC (석유 에테르: EtOAc=2:1, UV) 분석은 출발 물질이 소모되었음을 나타내었다. 생성된 백색 현탁액을 물 (20 mL)로 희석하고, EtOAc (3x30 mL)로 추출하였다. 유기 상을 염수 (3x30 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (12g SiO2, 콤비-플래쉬, EtOAc/석유 에테르 = 12.5%에서 75%)에 의해 정제하여 표제 화합물 1-에틸-4-[(4-메톡시페닐)메톡시]-1H-피라졸 (TG-23b) (520 mg, 83%)을 무색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.33 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.25 (s, 1H), 7.08 (s, 1H), 6.95 - 6.88 (m, 2H), 4.86 (s, 2H), 4.07 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 3.82 (s, 3H), 1.65 (s, 1H), 1.44 (t, J = 7.4 Hz, 3H).
단계 2
5-브로모-1-에틸-4-[(4-메톡시페닐)메톡시]-1H-피라졸 (Int-TG-25)의 합성
CHCl3 (16 mL) 중 1-에틸-4-[(4-메톡시페닐)메톡시]-1H-피라졸 (TG-23b) (520 mg, 2.24 mmol)의 무색 용액에 실온 (25℃)에서 조금씩 NBS (598 mg, 3.36 mmol)를 첨가하였다. 생성된 담적색 혼합물을 온도에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 반응이 완결되었음을 나타내었다. 생성된 혼합물을 물 (10 mL)로 희석하였다. 상을 분리하고, 수성 층을 DCM (2x20 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (40g SiO2, 콤비-플래쉬, EtOAc/석유 에테르 = 5%에서 30%)에 의해 정제하여 표제 화합물 5-브로모-1-에틸-4-[(4-메톡시페닐)메톡시]-1H-피라졸 (Int-TG-25) (410 mg, 58.9%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.34 (d, J = 8.5 Hz, 2H), 7.24 (s, 1H), 6.95 - 6.86 (m, 2H), 4.93 (s, 2H), 4.14 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 3.82 (s, 3H), 1.40 (t, J = 7.3 Hz, 3H). m/z (ESI+) - (C13H16BrN2O2), 311.8 (M+H)+ 관찰치.
3-[4-(벤질옥시)-1-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-26)의 반응식 TG-24에 따른 제조
반응식 TG-24
Figure pct00080
단계 1
메틸 (2E)-2-[2-(2-에톡시-2-옥소에틸)히드라지닐리덴]프로파노에이트 (TG-24c)의 합성
MeOH (100mL) 중 메틸 피루베이트 (4000 mg, 39.18 mmol)의 용액에 아세트산나트륨 (3210 mg, 39.18 mmol) 및 에틸 히드라지닐아세테이트 (6060 mg, 39.2 mmol)을 첨가하였다. 생성된 담황색 반응 용액을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모 및 목적 생성물 물질을 포함하는 신규한 피크의 생성을 나타내었다. 반응물을 H2O (100 mL)로 켄칭하고, 이를 담황색 용액에 첨가하였다. 용액을 EtOAc (3x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (200 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 표제 화합물 메틸 (2E)-2-[2-(2-에톡시-2-옥소에틸)히드라지닐리덴]프로파노에이트 (TG-24c) (7000 mg, 88%)을 담황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 5.97 (br s, 1H), 4.28 - 4.16 (m, 4H), 3.82 (s, 3H), 2.02 (s, 3H), 1.28 (t, J = 7.2 Hz, 3H). m/z (ESI+) - (C8H15N2O4), 202.9 (M+H)+ 관찰치.
단계 2
메틸 4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복실레이트 (TG-24d)의 합성
MeOH (50.0 mL) 중 메틸 (2E)-2-[2-(2-에톡시-2-옥소에틸)히드라지닐리덴]프로파노에이트 (TG-24c) (5200 mg, 25.72 mmol)의 용액에 NaOAc (4170 mg, 77.1 mmol, 5M, 15.4 mL)를 첨가하였다. 생성된 연황색 반응 용액을 70℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모 및 목적 생성물 물질을 포함하는 신규한 피크의 생성을 나타내었다. 반응물을 5% HCl로 0℃에서 켄칭하고, EtOAc (3x100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (150 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 황색 고체를 수득하였다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (40g SiO2, 콤비 플래쉬, 0으로부터 50%까지의 석유 에테르 중 EtOAc)에 의해 정제하여 표제 화합물 메틸 4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복실레이트 (TG-24d) (2900 mg, 72%)을 담황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 12.76 (br s, 1H), 8.40 (br s, 1H), 3.76 (s, 3H), 2.08 (s, 3H). m/z (ESI+) - (C6H9N2O3), 156.8 (M+H)+ 관찰치.
단계 3
메틸 4-(벤질옥시)-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복실레이트 (TG-24e)의 합성
MeCN (30.0mL) 및 물 (30.0 mL) 중 메틸 4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복실레이트 (TG-24d) (2700mg, 17.29mmol)의 용액에 벤질 브로마이드 (3250mg, 19.0mmol) 및 Na2CO3 (2200 mg, 20.8 mmol)을 첨가하였다. 생성된 황색 현탁액을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (120 mL)로 켄칭하고, 이것을 담갈색 반응 용액에 첨가하였다. 이어서, 수성 상을 EtOAc (3 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (40g SiO2, 콤비플래쉬, 석유 에테르 중 EtOAc)에 의해 정제하여 표제 화합물 메틸 4-(벤질옥시)-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복실레이트 (TG-24e) (3640 mg, 85%)을 담황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 10.59 (br s, 1H), 7.48 - 7.30 (m, 5H), 5.14 - 5.01 (m, 2H), 4.00 - 3.89 (m, 3H), 2.08 (s, 3H). m/z (ESI+) - (C13H15N2O3), 246.9 (M+H)+ 관찰치.
단계 4
메틸 4-(벤질옥시)-1-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복실레이트 (TG-24g)의 합성
DMF (40.0mL) 중 메틸 4-(벤질옥시)-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복실레이트 (TG-24e) (3640 mg, 14.78 mmol) 및 탄산칼륨 (4090 mg, 29.6mmol)의 용액에 (3-브로모프로폭시)-tert-부틸디메틸실란 (TG-24f) (4490 mg, 17.7 mmol)을 첨가하였다. 생성된 황색 현탁액을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (150 mL)로 켄칭하고, 이것을 황색 반응 현탁액에 첨가하였다. 수성 상을 EtOAc (4x100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (2x150 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (80g SiO2, 콤비플래쉬, 석유 에테르 중 EtOAc 0에서 25%)에 의해 정제하여 표제 화합물 메틸 4-(벤질옥시)-1-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복실레이트 (TG-24g) (3500 mg, 56%)을 담황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.46 - 7.30 (m, 5H), 4.94 (s, 2H), 4.54 - 4.44 (m, 2H), 3.88 (s, 3H), 3.64 (t, J = 6.2 Hz, 2H), 2.09 (s, 3H), 2.05 - 1.95 (m, 2H), 0.96 - 0.86 (m, 9H), 0.09 - 0.01 (m, 6H). m/z (ESI+) - (C22H35N2O4Si), 419.2 (M+H)+ 관찰치.
단계 5
4-(벤질옥시)-1-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-카르보히드라지드 (TG-24h)의 합성
EtOH (40.0mL) 중 메틸 4-(벤질옥시)-1-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-카르복실레이트 (TG-24g) (3500mg, 8.361mmol)의 용액에 히드라진 1수화물 (4270mg, 83.6mmol)을 첨가하였다. 생성된 담황색 반응 용액을 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. 담황색 반응 용액을 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 4-(벤질옥시)-1-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-카르보히드라지드 (TG-24h) (3500 mg, 100%)을 담황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.13 (br s, 1H), 7.48 - 7.31 (m, 5H), 4.97 (s, 2H), 4.54 (t, J = 7.2 Hz, 2H), 3.83 (br s, 2H), 3.64 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.25 (s, 3H), 2.00 (quin, J = 6.8 Hz, 2H), 0.89 (s, 9H), 0.04 (s, 6H).
단계 6
2-[4-(벤질옥시)-1-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-카르보닐]-N-[(4-메톡시페닐)메틸]히드라진-1-카르보티오아미드 (TG-24j)의 합성
THF (40.0mL) 중 4-(벤질옥시)-1-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-카르보히드라지드 (TG-24h) (3500mg, 8.361mmol)의 용액에 DIEPA (1620mg, 12.5mmol) 및 1-(이소티오시아나토메틸)-4-메톡시벤젠 (TG-24i) (2100mg, 11.7mmol)을 첨가하였다. 생성된 담황색 반응 용액을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 황색 용액을 농축시켜 표제 화합물 2-[4-(벤질옥시)-1-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-카르보닐]-N-[(4-메톡시페닐)메틸]히드라진-1-카르보티오아미드 (TG-24j) (5000mg)을 수득하였다. 조 물질을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C30H44N5O4SSi), 598.1 (M+H)+ 관찰치.
단계 7
3-[4-(벤질옥시)-5-{4-[(4-메톡시페닐)메틸]-5-술파닐-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로판-1-올 (TG-24k)의 합성
물 (65mL) 중 조 2-[4-(벤질옥시)-1-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-카르보닐]-N-[(4-메톡시페닐)메틸]히드라진-1-카르보티오아미드 (TG-24j) (5000 mg, 8.363mmol)의 용액에 NaOH (1050 mg, 26.25mmol)를 첨가하였다. 생성된 황색 반응 용액을 115℃ (오일 조)에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물에 DCM (100 mL)을 첨가하고, 용액을 1 M HCl을 사용하여 pH~ 6으로 산성화시키고, 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM (1x50 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (80g SiO2, 콤비플래쉬, DCM: MeOH = 100%에서 95%까지)에 의해 정제하여 표제 화합물 3-[4-(벤질옥시)-5-{4-[(4-메톡시페닐)메틸]-5-술파닐-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로판-1-올 (TG-24k) (2900 mg, 74%)을 담황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 12.18 (br s, 1H), 7.35 - 7.27 (m, 3H), 7.18 - 7.11 (m, 2H), 6.96 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.68 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.31 (s, 2H), 4.83 (s, 2H), 3.87 - 3.77 (m, 1H), 3.76 - 3.69 (m, 5H), 3.39 - 3.27 (m, 2H), 2.27 (s, 3H), 1.77 (td, J = 5.7, 11.4 Hz, 2H).
단계 8
3-[4-(벤질옥시)-5-{4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로판-1-올 (TG-24l)의 합성
아세트산 (12mL) 중 3-[4-(벤질옥시)-5-{4-[(4-메톡시페닐)메틸]-5-술파닐-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로판-1-올 (TG-24k) (2.9g, 6.2mmol)의 용액에. 반응물을 빙수조에서 냉각시키고,이어서 H2O2 (24mL)을 천천히 첨가하였다. 빙조를 제거하고, 생성된 담황색 반응 용액을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 빙수 (100 mL) 및 Na2SO3으로 켄칭하였다. 용액을 분리 깔때기로 옮기고, 상을 분리하였다. 수성 상을 EtOAc (3x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (80g SiO2, 콤비플래쉬, EtOAc:MeOH = 100%에서 95%)에 의해 정제하여 표제 화합물 3-[4-(벤질옥시)-5-{4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로판-1-올 (TG-24l) (2160 mg, 80%)을 담황색 검으로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.03 (s, 1H), 7.37 - 7.28 (m, 3H), 7.13 (d, J = 6.6 Hz, 2H), 6.92 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.80 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 5.06 (s, 2H), 4.78 (s, 2H), 4.09 - 4.00 (m, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.48 - 3.39 (m, 2H), 2.25 (s, 3H), 2.00 (td, J = 5.4, 10.6 Hz, 2H). m/z (ESI+) - (C24H28N5O3), 434.3 (M+H)+ 관찰치.
단계 9
3-[4-(벤질옥시)-1-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-26)의 합성
DMF (12mL) 중 3-[4-(벤질옥시)-5-{4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로판-1-올 (TG-24l) (499mg, 1.15mmol)의 용액에 이미다졸 (414mg, 6.08mmol) 및 TBSCl (520mg, 3.45mmol)을 첨가하였다. 생성된 담황색 반응 용액을 50℃ (오일 조)에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc (3x30 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 수성 NaCl로 세척하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (20g SiO2, 콤비플래쉬, DCM: MeOH= 100%에서 95%)에 의해 정제하여 표제 화합물 3-[4-(벤질옥시)-1-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-26) (526.5 mg, 83%)을 무색 검으로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.08 (s, 1H), 7.35 - 7.29 (m, 3H), 7.19 (dd, J = 2.9, 6.7 Hz, 2H), 6.91 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.82 - 6.71 (m, 2H), 4.99 (s, 2H), 4.75 (s, 2H), 4.15 - 4.04 (m, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.50 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 2.22 (s, 3H), 1.84 - 1.70 (m, 2H), 0.85 (s, 10H), 0.04 - -0.04 (m, 6H). m/z (ESI+) - (C30H42N5O3Si), 548.4 (M+H)+ 관찰치.
3-[4-(벤질옥시)-3-메틸-5-(1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1H-피라졸-1-일]프로필 아세테이트 (Int-TG-27)의 반응식 TG-25에 따른 제조.
반응식 TG-25
Figure pct00081
단계 1
3-[4-(벤질옥시)-5-{4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로필 아세테이트 (TG-25a)의 합성.
Ac2O (0.22 mL, 2.3 mmol)를 DCM (5.0 mL) 중 3-[4-(벤질옥시)-5-{4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로판-1-올 (TG-24l) (498.9 mg, 1.151 mmol) 및 DMAP (141.5 mg, 1.158 mmol)의 용액에 첨가하였다. 생성된 무색 용액을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (10 mL)로 켄칭하고, DCM(10 mL)으로 추출하였다. 유기 추출물을 염수 (25 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 3-[4-(벤질옥시)-5-{4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로필 아세테이트 (TG-25a) (535.9 mg, 97% 수율)을 무색 오일로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.09 (s, 1H), 7.38 - 7.31 (m, 3H), 7.25 - 7.16 (m, 2H), 6.99 - 6.89 (m, 2H), 6.83 - 6.75 (m, 2H), 5.04 (s, 2H), 4.78 (s, 2H), 4.16 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 3.88 (t, J = 6.1 Hz, 2H), 3.79 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 2.00 (s, 3H), 1.90 (quin, J = 6.5 Hz, 2H). m/z (ESI+) - (C26H30N5O4), 476.2 (M+H)+ 관찰치.
단계 2
3-[4-(벤질옥시)-3-메틸-5-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1H-피라졸-1-일]프로필 아세테이트 (TG-25b)의 합성.
TFA (3.0 mL) 중 3-[4-(벤질옥시)-5-{4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로필 아세테이트 (TG-25a) (535.9 mg, 1.127 mmol)의 무색 용액을 25℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 진공 하에 농축시키고, 이어서 잔류 TFA를 DCM (3x5 mL)과 공비 제거하여 표제 화합물 3-[4-(벤질옥시)-3-메틸-5-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1H-피라졸-1-일]프로필 아세테이트 (TG-25b) (729.5 mg)을 분홍색 검으로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C18H21N5O3), 356.0 (M+H)+ 관찰치.
단계 3
3-[4-(벤질옥시)-3-메틸-5-(1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1H-피라졸-1-일]프로필 아세테이트 (Int-TG-27)의 합성.
MeI (192 mg, 84.2 uL, 1.35 mmol)를 DMF (6.0 mL) 중 3-[4-(벤질옥시)-3-메틸-5-(1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1H-피라졸-1-일]프로필 아세테이트 (TG-25b) (729.5 mg, 1.13 mmol) 및 Cs2CO3 (1100 mg, 3.38 mmol)의 백색 현탁액에 첨가하였다. 생성된 회백색 슬러리를 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (30 mL) 및 EtOAc (25 mL)로 희석하고, 분리 깔때기로 옮겼다. 상을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (3x25 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (12g SiO2, 이스코, EtOAc/석유 에테르: 0에서 66%)에 의해 정제하여 표제 화합물 3-[4-(벤질옥시)-3-메틸-5-(1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1H-피라졸-1-일]프로필 아세테이트 (Int-TG-27) (233.6 mg, 56% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.10 (s, 1H), 7.46 - 7.40 (m, 2H), 7.38 - 7.29 (m, 3H), 4.99 (s, 2H), 4.55 (t, J = 7.1 Hz, 2H), 4.08 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.99 (s, 3H), 2.20 - 2.11 (m, 2H), 2.09 (s, 3H), 2.02 (s, 3H). m/z (ESI+) - (C19H24N5O3), 370.0 (M+H)+ 관찰치.
4-(벤질옥시)-1-[3-(벤질옥시)프로필]-3-메틸-1H-피라졸 (Int-TG-28)의 반응식 TG-26에 따른 제조.
반응식 TG-26
Figure pct00082
단계 1
1-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-3-메틸-1H-피라졸-4-카르브알데히드 (TG-26c)의 합성.
DMF (100mL) 중 3-메틸-1H-피라졸-4-카르브알데히드 (TG-26a) (6800mg, 61.75mmol)의 용액에 Cs2CO3 (22100mg, 67.9mmol)을 첨가하였다. 10분 동안 교반한 후, (3-브로모프로폭시)-tert-부틸디메틸실란 (TG-26b) (16400mg, 64.8mmol)을 첨가하였다. 생성된 황색 현탁액을 40℃에서 16시간 동안 교반하였다. 이 반응물을 여과하고, EtOAc (250 mL)로 희석하였다. 유기 용액을 물 (350 mL)로 세척하였다. 유기 상을 진공 하에 농축시키고, 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (120g SiO2, 콤비-플래쉬, 100% 석유 에테르에서 15% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제하여 표제 화합물 1-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-3-메틸-1H-피라졸-4-카르브알데히드 (TG-26c) (16405 mg, 94.1%, TG-26c가 주요한 위치이성질체의 ~1.5:1 혼합물)을 담황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 9.88 (s, 1H), 7.89 (s, 1H, 부차 위치이성질체), 7.83 (s, 1H, 주요 위치이성질체), 4.20 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 3.58 (dt, J = 1.9, 5.7 Hz, 2H), 2.58 (s, 3H, 부차 위치이성질체), 2.49 (s, 3H, 주요 위치이성질체), 2.11 - 2.00 (m, 2H), 0.95 - 0.88 (m, 9H), 0.09 - 0.03 (m, 6H).
단계 2
1-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-3-메틸-1H-피라졸-4-일 포르메이트 (TG-26d)의 합성.
CHCl3 (150mL) 중 1-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-3-메틸-1H-피라졸-4-카르브알데히드 (TG-26c) (12.2g, 43.2mmol)의 용액에 m-CPBA (14.9g, 86.4mmol)를 첨가하였다. 생성된 백색 반응 현탁액을 25℃ (오일 조)에서 18시간 동안 교반하였다. TLC 분석은 출발 물질이 소모되었음을 나타내었다. 표제 화합물 1-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-3-메틸-1H-피라졸-4-일 포르메이트 (TG-26d)을 함유하는 이 용액을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C14H27N2O3Si), 299.0 (M+H)+ 관찰치.
단계 3
1-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-3-메틸-1H-피라졸-4-올 (TG-26e)의 합성.
MeOH (100 mL)로 희석시킨 1-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-3-메틸-1H-피라졸-4-일 포르메이트 (TG-26d) (12900mg, 150 mL의 CHCl3 중 43.223mmol)의 용액에 Et3N (38 mL, 300mmol)을 내부 온도가 25℃를 초과하지 않도록 하는 속도로 첨가하였다. 생성된 담황색 반응 용액을 25℃ (오일 조)에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (350 mL)로 켄칭하고, 분리 깔때기로 옮겼다. 수성 혼합물을 DCM (100 mL)으로 추출하고, 상을 분리하였다. 합한 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 동일한 물질의 또 다른 조 배치와 합하고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 100% 석유 에테르에서 20% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제하여 표제 화합물 1-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-3-메틸-1H-피라졸-4-올 (TG-26e) (5410 mg, 42%, 단일 위치이성질체)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.03 (s, 1H), 4.23 (br s, 1H), 4.04 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 3.58 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 2.19 (s, 3H), 1.98 (quin, J = 6.4 Hz, 2H), 0.90 (s, 9H), 0.05 (s, 6H). m/z (ESI+) - (C13H27N2O2Si), 271.0 (M+H)+ 관찰치.
단계 4
4-(벤질옥시)-1-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-3-메틸-1H-피라졸 (TG-26f)의 합성.
DMF (120mL) 중 1-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-3-메틸-1H-피라졸-4-올 (TG-26e) (7400mg, 27.36mmol)의 용액에 K2CO3 (5810mg, 42.0mmol) 및 벤질 브로마이드 (4 mL, 6000mg, 30mmol)를 첨가하였다. 생성된 황색 현탁액을 15℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 물 (250 mL)로 켄칭하고, EtOAc (2x250 mL)로 추출하였다. 유기 상을 염수로 세척하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (80g SiO2, 콤비-플래쉬, 100% 석유 에테르에서 15% EtOAc/석유)에 의해 정제하여 표제 화합물 4-(벤질옥시)-1-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-3-메틸-1H-피라졸 (TG-26f) (9370 mg, 80%)을 황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.45 - 7.29 (m, 5H), 6.96 (s, 1H), 4.88 (s, 2H), 4.04 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.56 (t, J = 5.9 Hz, 2H), 2.20 (s, 3H), 1.98 (quin, J = 6.4 Hz, 2H), 0.90 (s, 9H), 0.04 (s, 6H). m/z (ESI+) - (C20H33N2O2Si), 261.4 (M+H)+ 관찰치.
단계 5
3-[4-(벤질옥시)-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로판-1-올 (TG-26g)의 합성.
THF (15mL) 중 4-(벤질옥시)-1-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-3-메틸-1H-피라졸 (TG-26f) (1500mg, 4.160mmol)의 용액에 TBAF (1000mg, 4mmol ,1 M THF 4.2 mL)를 첨가하였다. 생성된 황색 용액을 25℃에서 4시간 동안 교반하였다. TLC 분석은 출발 물질이 소모되었음을 나타내었다. 이 반응 용액을 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (20g SiO2, 콤비-플래쉬, EtOAc:DCM=10:1/MeOH=100%에서 95%)에 의해 정제하여 표제 화합물 3-[4-(벤질옥시)-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로판-1-올 (TG-26g) (1010 mg, 98%)을 무색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.46 - 7.30 (m, 5H), 6.96 (s, 1H), 4.89 (s, 2H), 4.10 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 3.60 (q, J = 5.6 Hz, 2H), 2.88 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 2.19 (s, 3H), 1.97 (quin, J = 5.9 Hz, 2H).
단계 6
4-(벤질옥시)-1-[3-(벤질옥시)프로필]-3-메틸-1H-피라졸 (Int-TG-28)의 합성.
무수 THF (10mL) 중 3-[4-(벤질옥시)-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로판-1-올 (TG-26g) (1010mg, 4.101mmol)의 용액에 빙수조에서 NaH (197mg, 4.92mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 15분 동안 교반한 다음, 무수 THF (5mL) 중 벤질 브로마이드 (536 μL, 771mg, 4.51mmol)의 용액을 적가하였다. 첨가가 완결된 후, 빙조를 제거하고, 반응물을 실온으로 서서히 가온되도록 하고, 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc (3x30 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (20g SiO2, 콤비-플래쉬, 100% 석유 에테르에서 80% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제하여 표제 화합물 4-(벤질옥시)-1-[3-(벤질옥시)프로필]-3-메틸-1H-피라졸 (Int-TG-28) (1210 mg, 87%)을 무색 검으로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.47 - 7.28 (m, 10H), 6.88 (s, 1H), 4.85 (s, 2H), 4.45 (s, 2H), 4.06 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.40 (t, J = 5.8 Hz, 2H), 2.20 (s, 3H), 2.07 (quin, J = 6.3 Hz, 2H). m/z (ESI+) - (C21H25N2O2), 337.2 (M+H)+ 관찰치.
4-(벤질옥시)-1-[3-(벤질옥시)프로필]-5-브로모-3-메틸-1H-피라졸 (Int-TG-29)의 반응식 TG-27에 따른 제조.
반응식 TG-27
Figure pct00083
단계 1
4-(벤질옥시)-1-[3-(벤질옥시)프로필]-5-브로모-3-메틸-1H-피라졸 (Int-TG-29)의 합성
빙조에서 -10℃로 냉각시킨 DCM (15mL) 중 4-(벤질옥시)-1-[3-(벤질옥시)프로필]-3-메틸-1H-피라졸 (Int-TG-28) (350mg 1.04mmol)의 교반 용액에 Na2CO3 (386mg, 3.64mmol)을 첨가하고, 이어서 Br2 (600 μL, 250mg, 1.56mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 -10℃ 내지 -20℃에서 1.5시간 동안 교반하였다. 이 반응을 포화 수성 Na2S2O3 수성으로 켄칭하고, DCM (2x45 mL)추출하였다. 합한 유기 추출물을 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (40g SiO2, 콤비플래쉬, 100% 석유 에테르에서 20% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제하여 표제 화합물 4-(벤질옥시)-1-[3-(벤질옥시)프로필]-5-브로모-3-메틸-1H-피라졸 (Int-TG-29) (384 mg, 88%)을 담황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.45 - 7.28 (m, 9H), 4.92 (s, 2H), 4.50 (s, 2H), 4.17 (t, J = 6.9 Hz, 2H), 3.45 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.15 - 2.06 (m, 5H). m/z (ESI+) - (C21H24BrN2O2), 415.1 (M+H)+ 관찰치.
1-[3-(벤질옥시)프로필]-5-브로모-3-메틸-1H-피라졸 (Int-TG-30)의 반응식 TG-28에 따른 제조.
Figure pct00084
단계 1
5-브로모-3-메틸-1H-피라졸 (TG-28b)의 합성
HBr.AcOH (150mL) 중 3-메틸-1H-피라졸-5-아민 (TG-28a) (10g, 100mmol)에 CuBr (14.8g, 103mmol)을 첨가하였다. 암색 용액을 70℃로 가열하였다. H2O (40.0mL) 중 NaNO2 (7.81g 113mmol)를 일정한 압력 첨가 깔때기를 사용하여 용액에 천천히 첨가하였다. 첨가가 완결된 후, 반응물을 70℃에서 추가로 30분 동안 교반하였다. 반응물을 가열로부터 제거하고, 실온으로 냉각되도록 하였다. 반응물을 100mL THF로 희석하고, 100mL 물로 켄칭하였다. 용액을 분리 깔때기로 옮기고, EtOAc로 추출하였다. 유기 추출물을 Na2S2O3으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 물로 희석하고, DCM으로 추출하였다. 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 5-브로모-3-메틸-1H-피라졸 (TG-28b) (1900 mg, 11%)을 갈색 오일로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C4H6BrN2), 161.8 (M+H)+ 관찰치.
단계 2
1-[3-(벤질옥시)프로필]-5-브로모-3-메틸-1H-피라졸 (Int-TG-30)의 합성
DMF (45mL) 중 [(3-브로모프로폭시)메틸]벤젠 (TG-28c) (1500mg, 4.7mmol)의 연황색 용액에 실온에서 5-브로모-3-메틸-1H-피라졸 (TG-28b) (470mg, 2.05mmol) 및 K2CO3 (3100mg, 22.4mmol)을 첨가하였다. 첨가한 후, 이어서 반응 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 동일한 물질의 또 다른 조 배치와 합하고, 물로 켄칭하였다. 용액을 분리 깔때기로 옮기고, EtOAc (3x100mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (80g SiO2, 콤비-플래쉬, 100% 석유 에테르에서 20% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제하여 표제 화합물 (Int-TG-30) (1800 mg)을 위치이성질체의 혼합물로서 수득하였다. 이 물질을 추가로 정제용 HPLC (보스턴 프라임(Boston Prime) C18 150x25mmx5um 칼럼, 물/MeCN, 0.05% NH4OH 함유, 30mL/분 유량, 25회 주입)에 의해 정제하였다. 분획을 함유하는 생성물을 수집하고, 동결건조시켜 표제 화합물 1-[3-(벤질옥시)프로필]-5-브로모-3-메틸-1H-피라졸 (Int-TG-30) (399 mg, 20%, 부차 위치이성질체)을 무색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.40 - 7.28 (m, 4H), 6.05 (s, 1H), 4.51 (s, 2H), 4.23 (t, J = 7.0 Hz, 2H), 3.48 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.25 (s, 3H), 2.13 (quin, J = 6.5 Hz, 2H).
tert-부틸 {3-[4-(벤질옥시)-5-브로모-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로필}카르바메이트 (Int-TG-31)의 반응식 29에 따른 제조.
Figure pct00085
단계 1
2-{3-[4-(벤질옥시)-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로필}-1H-이소인돌-1,3(2H)-디온 (TG-29b)의 합성.
THF (3.5mL) 중 3-[4-(벤질옥시)-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로판-1-올 (TG-26g) (255mg, 1.04mmol) 및 DIAD (230mg, 1.14mmol)의 용액을 캐뉼라를 통해 THF (3mL) 중 프탈이미드 (TG-29a) (168mg, 1.14mmol) 및 PPh3 (285mg, 1.09mmol)의 용액에 천천히 첨가하였다. 플라스크 및 캐뉼라를 헹구고, 추가 부분의 건조 THF와 함께 반응 혼합물로 옮겨 완전한 첨가를 보장하였다. 반응물을 25℃에서 20시간 동안 교반하였다. 반응물을 진공 하에 농축시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (25g SiO2, 콤비플래쉬, 100% 석유 에테르에서 30% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제하여 표제 화합물 2-{3-[4-(벤질옥시)-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로필}-1H-이소인돌-1,3(2H)-디온 (TG-29b) (330 mg, 84%)을 황색 검으로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.91 - 7.80 (m, 2H), 7.73 (dd, J = 3.1, 5.4 Hz, 2H), 7.48 - 7.29 (m, 5H), 7.09 (s, 1H), 4.88 (s, 2H), 4.00 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.72 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.21 (quin, J = 6.7 Hz, 2H), 2.12 (s, 3H). m/z (ESI+) - (C22H22N3O3), 376.1 (M+H)+ 관찰치.
단계 2
3-[4-(벤질옥시)-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로판-1-아민 (TG-29c)의 합성.
EtOH (5mL) 중 2-{3-[4-(벤질옥시)-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로필}-1H-이소인돌-1,3(2H)-디온 (TG-29b) (330mg, 0.879mmol)의 혼합물에 히드라진 수화물 (426 μL, 440mg, 8.79mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 2.5시간 동안 교반하였다. 반응물을 빙수조에서 냉각시키고, 침전물을 여과하였다. 여과물을 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 3-[4-(벤질옥시)-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로판-1-아민 (TG-29c) (210 mg, 97%)을 황색 검으로서 수득하였다. 이 물질을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C14H20N3O), 246.1 (M+H)+ 관찰치.
단계 3
tert-부틸 {3-[4-(벤질옥시)-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로필}카르바메이트 (TG-29d)의 합성.
THF (6.0mL) 및 H2O (2mL) 중 3-[4-(벤질옥시)-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로판-1-아민 (TG-29c) (210mg, 0.856mmol)의 용액에 (Boc)2O (280mg, 1.28mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 15℃에서 20시간 동안 교반하였다. 반응물을 물로 희석하고, EtOAc (2x20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (10g SiO2, 콤비-플래쉬, 100% 석유 에테르에서 40% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제하여 표제 화합물 tert-부틸 {3-[4-(벤질옥시)-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로필}카르바메이트 (TG-29d) (220 mg, 74%)을 무색 검으로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.46 - 7.30 (m, 5H), 6.96 (s, 1H), 4.89 (s, 2H), 4.76 (br s, 1H), 3.99 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.08 (q, J = 5.9 Hz, 2H), 2.20 (s, 3H), 1.94 (quin, J = 6.6 Hz, 2H), 1.45 (s, 9H). m/z (ESI+) - (C19H28N3O3), 346.1 (M+H)+ 관찰치.
단계 4
tert-부틸 {3-[4-(벤질옥시)-5-브로모-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로필}카르바메이트 (Int-TG-31)의 합성.
DCM (15.0mL) 중 tert-부틸 {3-[4-(벤질옥시)-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로필}카르바메이트 (TG-29d) (220.0mg, 0.637mmol)의 교반 용액을 빙조에서 -20℃까지 냉각시켰다. 용액에 Na2CO3 (236mg, 2.23mmol)을 첨가하고, 이어서 Br2 (68 μL, 1.3mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 -15℃에서 2.5시간 동안 교반하였다. 반응물을 내부 온도를 10℃ 미만으로 유지하는 속도로 포화 Na2S2O3으로 켄칭하였다. 용액을 분리 깔때기로 옮기고, DCM (2x45 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (10g SiO2, 콤비-플래쉬, 100% 석유 에테르에서 50% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제하여 표제 화합물 tert-부틸 {3-[4-(벤질옥시)-5-브로모-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로필}카르바메이트 (Int-TG-31) (262.5 mg, 97%)을 무색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.46 - 7.31 (m, 5H), 4.93 (s, 2H), 4.80 (br s, 1H), 4.10 (t, J = 6.7 Hz, 2H), 3.14 - 2.98 (m, 2H), 2.08 (s, 3H), 1.95 (quin, J = 6.5 Hz, 2H), 1.45 (s, 9H).
머리기 (HG) 중간체의 제조:
메틸 4-브로모-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (Int-HG-01)의 반응식 HG-1에 따른 제조.
Figure pct00086
메틸 4-브로모-2-메틸-2H-인다졸-6-카르복실레이트 (Int-HG-02)의 반응식 HG-1에 따른 제조.
Figure pct00087
반응식 HG-1:
Figure pct00088
DMF (20.0 mL) 중 메틸 4-브로모-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (HG-1a) (2.00 g, 7.84 mmol) 및 Cs2CO3 (5.11 g, 15.7 mmol)의 혼합물에 아이오도메탄 (1.42 g, 10.0 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 16℃에서 16시간 동안 교반하여 갈색 현탁액을 수득하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모와 함께 생성물 물질의 형성을 나타내었다. 혼합물을 여과하였다. 여과물을 포화 수성 NH4Cl (30 mL)로 희석하였다. 혼합물을 EtOAc (2x30 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (20 g SiO2, 0-100% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제하여 메틸 4-브로모-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (Int-HG-01) (1.36 g, 64% 수율)을 제1-용리 위치이성질체로서 연황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.12 (s, 1H), 8.03 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 7.97 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 4.14 (s, 3H), 3.98 (s, 3H).
메틸 4-브로모-2-메틸-2H-인다졸-6-카르복실레이트 (Int-HG-02) (751 mg, 36% 수율)을 제2-용리 위치이성질체로서 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.42 (t, J = 1.0 Hz, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.89 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 4.27 (s, 3H), 3.95 (s, 3H).
중간체 Int-HG-03, Int-HG-04 및 Int-HG-05를 메틸 4-브로모-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (Int-HG-01) 및 메틸 4-브로모-2-메틸-2H-인다졸-6-카르복실레이트 (Int-HG-02)의 합성에 사용된 방법에 따라, 관련 기술분야의 통상의 기술자가 실현할 수 있을 예시된 절차에 대한 비결정적 변형 또는 치환으로 제조하였다. 필요한 경우에, 위치이성질체 혼합물의 분리를 관련 기술분야에 공지된 표준 방법 하에 수행하였다.
Figure pct00089
메틸 4-브로모-1-[3-(모르폴린-4-일)프로필]-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (Int-HG-06)의 반응식 HG-2에 따른 제조.
Figure pct00090
반응식 HG-2:
Figure pct00091
THF (10 mL) 중 메틸 4-브로모-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (HG-1a) (502 mg, 1.97 mmol)의 용액에 4-(3-클로로프로필)모르폴린 염화수소 (409 mg, 2.5 mmol), 18-크라운-6 (51.8 mg, 0.196 mmol), 및 NaHMDS의 용액 (THF 중 1.0 M, 2.2 mL, 2.2 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 환류 하에 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모와 함께 목적 생성물 물질의 형성을 나타내었다. 반응물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (SiO2, 80% EtOAc/석유 에테르에 이어서 10% MeOH/EtOAc)에 의해 정제하여 메틸 4-브로모-1-[3-(모르폴린-4-일)프로필]-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (327 mg, 43% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.22 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 8.05 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 7.95 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 4.53 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 3.97 (s, 3H), 3.71 (t, J = 4.6 Hz, 4H), 2.35 (t, J = 4.7 Hz, 4H), 2.23 (t, J = 6.6 Hz, 2H), 2.11 (p, J = 6.4 Hz, 2H); m/z (ESI+) - (C16H20BrN3O3), 383.9 (M+H)+.
메틸 4,6-디클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 (Int-HG-08)의 반응식 HG-3에 따른 제조.
Figure pct00092
반응식 HG-3:
Figure pct00093
단계 1
2,4,6-트리클로로피리딘-3-카르브알데히드 (HG-3b)의 합성.
무수 THF 중 2,4,6-트리클로로피리딘 (HG-3a) (9.00 g, 49.3 mmol)의 용액을 N2의 분위기 하에 -68℃ (내부 온도)로 냉각시키고, 반응 온도를 -63℃ (내부 온도) 미만으로 유지하면서 n-BuLi (헥산 중 2.5 M, 20.7 mL, 51.8 mmol)을 적가하였다. 혼합물을 -68℃ (내부 온도)에서 30분 동안 교반하였다. 반응 온도를 -63℃ (내부 온도) 미만으로 유지하면서 에틸 포르메이트 (4.75 g, 64.1 mmol)를 적가하였다. 혼합물을 -68℃ (내부 온도)에서 1시간 동안 교반하였다. TLC 분석은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 혼합물을 얼음 및 포화 수성 NH4Cl (100 mL)의 1:1 혼합물에 부었다. 혼합물을 10분 동안 교반한 다음, EtOAc (2x200 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (2x100 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (80 g SiO2, 0-5% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제하였다. 혼합된 분획을 플래쉬 크로마토그래피 (20 g SiO2, 0-5% EtOAc/석유 에테르)로 다시 정제하였다. 생성물 배치를 합하여 2,4,6-트리클로로피리딘-3-카르브알데히드 (HG-3b) (8.62 g, 83% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.42 (s, 1H), 7.46 (s, 1H).
단계 2
4,6-디클로로-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 (HG-3c)의 합성.
EtOH (100 mL) 중 2,4,6-트리클로로피리딘-3-카르브알데히드 (HG-3b) (4.00 g, 19.0 mmol) 및 DIPEA (7.62 g, 58.9 mmol)의 용액을 N2의 분위기 하에 -20℃로 냉각시키고, 히드라진 1수화물 (3.81 g, 76.0 mmol)을 적가하였다. 혼합물을 -20℃에서 24시간 동안 교반한 다음, 30℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 목적 생성물 물질의 형성을 나타내었다. 용액을 농축 건조시켰다. 생성된 고체를 1:2 EtOAc/석유 에테르 (300 mL)으로 30분 동안 슬러리로 만들었다. 고체를 여과에 의해 수집하였다. 필터 케이크를 플래쉬 크로마토그래피 (40 g SiO2, 8-50% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제하여 4,6-디클로로-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 (HG-3c) (1.6 g, 45% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 14.06 (br s, 1H), 8.41 (s, 1H), 7.78 (d, J = 1.0 Hz, 1H).
단계 3
4,6-디클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 (Int-HG-08)의 합성.
0℃에서 무수 THF 중 4,6-디클로로-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 (HG-3c) (1.25 g, 6.65 mmol)의 용액에 NaH (미네랄 오일 중 60% 분산액, 500 mg, 12.5 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 10분 동안 교반한 다음, 아이오도메탄 (1.89 g, 13.3 mmol)을 동일한 온도에서 적가하였다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. TLC 분석 (2:1 EtOAc/석유 에테르)은 출발 물질의 완전한 소모를 나타내었다. 반응물을 포화 수성 NH4Cl (20 mL)의 첨가에 의해 켄칭한 다음, 농축시켜 THF을 제거하였다. 수성 혼합물을 EtOAc (3x20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (40 g SiO2, 5-30% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제하여 4,6-디클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 (Int-HG-08) (510 mg, 38% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.42 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 8.05 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 4.12 (s, 3H).
1-[2-(4,6-디클로로-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)에틸]피페리딘-4-카르보니트릴 (Int-HG-09)의 반응식 HG-4에 따른 제조.
Figure pct00094
반응식 HG-4:
Figure pct00095
단계 1
1-(2-히드록시에틸)피페리딘-4-카르복스아미드 (HG-4b)의 합성.
EtOH (15.0 mL) 중 피페리딘-4-카르복스아미드 (HG-4a) (1.00 g, 7.80 mmol)의 용액에 2-브로모에탄올 (1.17 g, 9.36 mmol), K2CO3 (2.32 g, 16.8 mmol), 및 NaI (117 mg, 0.780 mmol)를 연속적으로 첨가하였다. 혼합물을 환류 하에 20시간 동안 교반하였다. TLC 분석 (1:15 MeOH/DCM)은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 농축 건조시켜 1-(2-히드록시에틸)피페리딘-4-카르복스아미드 (HG-4b) (1.25 g, 93% 수율)을 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.24 (br s, 1H), 6.74 (br s, 1H), 4.82 - 4.28 (m, 1H), 3.51 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.89 (d, J = 11.7 Hz, 2H), 2.38 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.05 (tt, J = 11.6, 4.0 Hz, 1H), 1.94 (td, J = 11.7, 2.6 Hz, 2H), 1.71 - 1.62 (m, 2H), 1.62 - 1.50 (m, 2H).
단계 2
1-(2-클로로에틸)피페리딘-4-카르보니트릴 히드로클로라이드 (HG-4c)의 합성.
MeCN (15.0 mL) 중 1-(2-히드록시에틸)피페리딘-4-카르복스아미드 (HG-4b) (1.25 g, 7.26 mmol)의 현탁액에 SOCl2 (4.32 g, 36.3 mmol를 첨가하고, 반응 온도를 5℃ (내부 온도) 미만으로 유지하였다. 혼합물을 환류 하에 4시간 동안 교반한 다음, 농축 건조시켜 1-(2-클로로에틸)피페리딘-4-카르보니트릴 히드로클로라이드 (HG-4c) (1.45 g, 95% 수율)을 갈색 고체로서 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.51 (br s, 1H), 4.10 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 3.70 - 3.35 (m, 4H), 3.21 - 2.92 (m, 3H), 2.38 - 1.98 (m, 4H).
단계 3
1-[2-(4,6-디클로로-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)에틸]피페리딘-4-카르보니트릴 (Int-HG-09)의 합성.
MeCN (10.0 mL) 중 4,6-디클로로-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 (HG-3c) (500 mg, 2.66 mmol) 및 1-(2-클로로에틸)피페리딘-4-카르보니트릴 히드로클로라이드 (HG-4c) (834 mg, 3.99 mmol)의 용액에 K2CO3 (1.10 g, 7.98 mmol) 및 KI (44.1 mg, 0.266 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반하였다. TLC 분석 (1:1 EtOAc/석유 에테르)은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (12 g SiO2, 0-50% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제하여 1-[2-(4,6-디클로로-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-1-일)에틸]피페리딘-4-카르보니트릴 (Int-HG-09) (750 mg, 87% 수율)을 갈색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.11 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 7.29 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 4.40 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.85 (t, J = 6.3 Hz, 2H), 2.73 - 2.54 (m, 3H), 2.45 - 2.27 (m, 2H), 1.90 - 1.68 (m, 4H).
5-브로모-3-메틸-1H-인다졸-7-카르보니트릴 (Int-HG-10)의 반응식 HG-5에 따른 제조.
Figure pct00096
반응식 HG-5:
Figure pct00097
단계 1
4-브로모-2-에틸-6-아이오도아닐린 (HG-5b)의 합성.
EtOH (20.0 mL) 중 4-브로모-2-에틸아닐린 (HG-5a) (1.00 g, 5.00 mmol)의 용액에 I2 (1.27 g, 5.00 mmol) 및 Ag2SO4 (1.56 g, 5.00 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. TLC 분석 (1:3 EtOAc/석유 에테르)은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 EtOAc (100 mL) 중에 용해시키고, 포화 수성 Na2S2O3 (100 mL)으로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (20 g SiO2, 0-5% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제하여 4-브로모-2-에틸-6-아이오도아닐린 (HG-5b) (1.32 g, 81% 수율)을 암적색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.63 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.14 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 4.12 (br s, 2H), 2.51 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 1.24 (t, J = 7.5 Hz, 3H).
단계 2
5-브로모-7-아이오도-3-메틸-1H-인다졸 (HG-5c)의 합성.
HOAc (20.0 mL) 중 4-브로모-2-에틸-6-아이오도아닐린 (HG-5b) (1.32 g, 4.05 mmol)의 용액에 실온에서 NaNO2 (279 mg, 4.05 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. TLC 분석 (1:10 EtOAc/석유 에테르)은 출발 물질의 소모와 함께 목적 생성물 물질의 형성을 나타내었다. 혼합물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (20 g SiO2, 0-50% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제하여 5-브로모-7-아이오도-3-메틸-1H-인다졸 (HG-5c) (810 mg, 59% 수율)을 분홍색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.86 (s, 1H), 7.85 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 2.57 (s, 3H); m/z (ESI+) - (C8H6BrIN2), 338.8 (M+H)+.
단계 3
5-브로모-3-메틸-1H-인다졸-7-카르보니트릴 (Int-HG-10)의 합성.
N2의 분위기 하에 NMP (5.0 mL) 중 5-브로모-7-아이오도-3-메틸-1H-인다졸 (HG-5c) (500 mg, 1.48 mmol)의 용액에 Zn(CN)2 (105 mg, 0.890 mmol) 및 Pd(PPh3)4 (171 mg, 0.148 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 100℃에서 4시간 동안 교반하였다. TLC 분석 (1:1 EtOAc/석유 에테르)은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 혼합물을 EtOAc (50 mL)로 희석하고, 포화 수성 NH4Cl (3x50 mL)로 세척하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (4 g SiO2, 0-25% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제하여 5-브로모-3-메틸-1H-인다졸-7-카르보니트릴 (Int-HG-10) (260 mg, 74% 수율)을 담황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.07 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.81 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 2.60 (s, 3H).
4-브로모-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-5-플루오로-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (Int-HG-11)의 반응식 HG-6에 따른 제조.
Figure pct00098
반응식 HG-6:
Figure pct00099
단계 1
4-브로모-5-플루오로-1-메틸-1H-인다졸 (HG-6b)의 합성.
2-브로모-3,6-디플루오로벤즈알데히드 (HG-6a) (900 mg, 4.18 mmol) 및 메틸히드라진 (1.35 g, 29.3 mmol)의 혼합물을 100℃에서 24시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모와 함께 목적 생성물 물질의 형성을 나타내었다. 혼합물을 농축시켰다. 잔류물을 H2O로 희석하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (24 g SiO2, 20% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 4-브로모-5-플루오로-1-메틸-1H-인다졸 (HG-6b) (532 mg, 56% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.99 (d, J = 0.61 Hz, 1H), 7.28 - 7.33 (m, 1H), 7.18 - 7.24 (m, 1H), 4.09 (s, 3H); 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -120.6 (br s, 1F); m/z (ESI+) - (C8H6BrFN2), 229.0 (M+H)+.
단계 2
4-브로모-5-플루오로-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복실산 (HG-6c)의 합성.
THF (4.37 mL) 중 4-브로모-5-플루오로-1-메틸-1H-인다졸 (HG-6b) (100 mg, 0.437 mmol)의 용액을 N2 의 분위기 하에 -70℃로 냉각시켰다. LDA의 용액 (THF 중 1.0 M, 0.611 mL, 0.611 mmol)을 적가하였다. 혼합물을 반응 온도를 -60℃ 미만으로 유지하면서 1시간 동안 교반하여 오렌지색 반응 혼합물을 수득하였다. CO2(g)을 반응물을 통해 10분 동안 버블링하여 투명한 반응 용액을 수득하였다. 혼합물을 실온으로 가온하고, H2O로 희석하고, 포화 수성 NaHCO3 (5 mL)로 염기성화시켰다. 혼합물을 헵탄 (2x)으로 세척하였다. 수성 층을 1 N HCl을 사용하여 pH ~2로 산성화시킨 다음, EtOAc (3x)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 4-브로모-5-플루오로-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복실산 (HG-6c) (48 mg, 40% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 13.57 (br s, 1H), 8.25 (dd, J = 5.32, 0.79 Hz, 1H), 8.13 (d, J = 0.86 Hz, 1H), 4.14 (s, 3H); 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -119.85 (s, 1F); m/z (ESI+) - (C9H6BrFN2O2), 273.0 (M+H)+.
단계 3
4-브로모-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-5-플루오로-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (Int-HG-11)의 합성.
DMF (1.72 mL) 중 4-브로모-5-플루오로-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복실산 (HG-6c) (47 mg, 0.170 mmol)의 용액에 1-(2,4-디메톡시페닐)메탄아민 (34.5 mg, 0.207 mmol), TEA (34.8 mg, 0.344 mmol), 및 HATU (98.2 mg, 0.258 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 5분 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모와 함께 목적 생성물 물질의 형성을 나타내었다. 반응물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 H2O 중에 용해시키고, EtOAc ( 3x)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (4 g SiO2, 60% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 4-브로모-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-5-플루오로-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (Int-HG-11) (49 mg, 67% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.21 (dd, J = 5.38, 0.86 Hz, 1H), 8.00 (d, J = 0.86 Hz, 1H), 7.33 - 7.46 (m, 1H), 6.51 (d, J = 2.32 Hz, 1H), 6.47 (dd, J = 8.19, 2.32 Hz, 1H), 4.61 - 4.67 (m, 2H), 4.12 (s, 3H), 3.90 (s, 3H), 3.82 (s, 3H); 19F NMR (376 MHz, CDCl3) δ -121.51 (s, 1F); m/z (ESI+) - (C18H17BrFN3O3), 422.0 (M+H)+.
메틸 8-브로모-3-메틸이미다조[1,5-a]피리딘-6-카르복실레이트 (Int-HG-12)의 반응식 HG-7에 따른 제조.
Figure pct00100
반응식 HG-7:
Figure pct00101
단계 1
메틸 6-(아세트아미도메틸)-5-브로모피리딘-3-카르복실레이트 (HG-7b)의 합성.
둥근 바닥 플라스크에 메틸 5-브로모피리딘-3-카르복실레이트 (HG-7a) (1.00 g, 4.63 mmol), N-아세틸글리신 (916 mg, 7.82 mmol), 및 AgNO3 (78.6 mg, 0.463 mmol)을 채웠다. 플라스크를 Ar로 퍼징하고, 이어서 H2O (8.25 mL) 및 TFA (106 mg, 0.926 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 70℃로 가열하고, H2O (2.75 ml) 중 (NH4)2S2O8 (1.90 g, 8.33 mmol)의 용액을 30분에 걸쳐 적가하였다. 반응물을 70℃에서 30분 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모와 함께 목적 생성물 물질의 형성을 나타내었다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc로 추출하였다. 수성 층을 NH4OH의 첨가에 의해 pH ~9로 염기성화시킨 다음, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 수성 NaHCO3 (1 M, 10 mL)으로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (40 g SiO2, 100% 헵탄 이어서 100% EtOAc에 이어서 10% MeOH/EtOAc)에 의해 정제하여 메틸 6-(아세트아미도메틸)-5-브로모피리딘-3-카르복실레이트 (HG-7b) (619 mg, 47% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.07 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 8.46 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.08 (br s, 1H), 4.68 (d, J = 4.3 Hz, 2H), 3.98 (s, 3H), 2.14 (s, 3H).
단계 2
메틸 8-브로모-3-메틸이미다조[1,5-a]피리딘-6-카르복실레이트 (Int-HG-12)의 합성.
메틸 6-(아세트아미도메틸)-5-브로모피리딘-3-카르복실레이트 (HG-7b) (300 mg, 1.04 mmol) 및 POCl3 (7.05 g, 46.0 mmol)의 혼합물을 90℃에서 교반하였다. 1시간 후, LCMS 분석은 출발 물질의 소모와 함께 목적 생성물 물질의 형성을 나타내었다. 혼합물을 H2O로 희석하고, 수성 K2CO3 (1 M, 50 mL)을 사용하여 염기성화시키고, DCM (3x)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (12 g SiO2, 100% 헵탄에 이어서 10% MeOH/EtOAc)에 의해 정제하여 메틸 8-브로모-3-메틸이미다조[1,5-a]피리딘-6-카르복실레이트 (Int-HG-12) (200 mg, 71% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.76 (br s, 1H), 7.82 (s, 1H), 7.77 (br s, 1H), 4.02 (s, 3H), 3.13 (br s, 3H).
6-브로모-1-메틸-1H-인다졸-4-카르복실산 (Int-HG-13)의 반응식 HG-8에 따른 제조.
Figure pct00102
반응식 HG-8:
Figure pct00103
단계 1
에틸 6-브로모-1-메틸-1H-인다졸-4-카르복실레이트 (HG-8b)의 합성.
DMF (20.0 mL) 중 에틸 6-브로모-1H-인다졸-4-카르복실레이트 (HG-8a) (1.05 g, 4.12 mmol) 및 Cs2CO3 (2.68 g, 8.23 mmol)의 용액에 아이오도메탄 (744 mg, 5.24 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. TLC 분석 (1:4 EtOAc/석유 에테르)은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 반응물을 H2O (30 mL)로 켄칭하고, EtOAc (2x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (12 g SiO2, 0-50% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제하여 에틸 6-브로모-1-메틸-1H-인다졸-4-카르복실레이트 (HG-8b) (680 mg, 65% 수율)을 분홍색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.43 (s, 1H), 8.01 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 4.08 (s, 3H), 4.02 (s, 3H).
단계 2
6-브로모-1-메틸-1H-인다졸-4-카르복실산 (Int-HG-13)의 합성.
THF (10.0 mL) 중 6-브로모-1-메틸-1H-인다졸-4-카르복실레이트 (HG-8b) (680 mg, 2.53 mmol)의 용액에 LiOH·H2O (848 mg, 20.2 mmol) 및 H2O (4.0 mL)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. TLC 분석 (1:4 EtOAc/석유 에테르)은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 혼합물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 1 N HCl을 사용하여 pH ~3으로 산성화시켰다. 혼합물을 EtOAc (3x25 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 6-브로모-1-메틸-1H-인다졸-4-카르복실산 (Int-HG-13) (580 mg, 90% 수율)을 연황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.39 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.94 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 4.08 (s, 3H).
6-브로모-1-메틸-1H-인다졸-4-카르보티오아미드 (Int-HG-14)의 반응식 HG-9에 따른 제조.
Figure pct00104
반응식 HG-9:
Figure pct00105
단계 1
6-브로모-1-메틸-1H-인다졸-4-카르복스아미드 (HG-9a)의 합성.
메탄올성 NH3 (MeOH 중 7 N, 2.5 mL) 중 에틸 6-브로모-1-메틸-1H-인다졸-4-카르복실레이트 (HG-8b) (148 mg, 0.550 mmol)의 현탁액을 80℃에서 36시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 혼합물을 농축 건조시켜 6-브로모-1-메틸-1H-인다졸-4-카르복스아미드 (HG-9a) (138 mg, 99% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.40 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.18 (br s, 1H), 7.82 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.64 (br s, 1H), 4.11 (s, 3H); m/z (ESI+) - (C9H8BrN3O), 253.7 (M+H)+.
단계 2
6-브로모-1-메틸-1H-인다졸-4-카르보티오아미드 (Int-HG-14)의 합성.
무수 PhMe (3.0 mL) 중 6-브로모-1-메틸-1H-인다졸-4-카르복스아미드 (HG-9a) (135 mg, 0.531 mmol)의 현탁액에 라웨슨 시약 (215 mg, 0.531 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 혼합물을 H2O (5 mL)로 희석하고, EtOAc (5x15 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 포화 수성 NaHCO3 (2x5 mL)으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 DCM으로 연화처리하여 6-브로모-1-메틸-1H-인다졸-4-카르보티오아미드 (Int-HG-14) (93.5 mg, 65% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.20 (br s, 1H), 9.73 (br s, 1H), 8.33 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 8.18 (t, J = 1.2 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 4.11 (s, 3H); m/z (ESI+) - (C9H8BrN3O), 269.6 (M+H)+.
메틸 4-브로모-1-(트리페닐메틸)-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (Int-HG-15)의 반응식 HG-10에 따른 제조.
반응식 HG-10:
Figure pct00106
THF (200 mL) 중 메틸 4-브로모-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (HG-1a) (10.0 g, 39.2 mmol)의 용액을 0℃로 냉각시키고, NaH (미네랄 오일, 1.88 g 중 60% 분산액, 47.0 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 15℃에서 교반한 다음, 트리페닐메틸 클로라이드 (13.1 g, 47.0 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 15℃에서 2시간 동안 교반하였다. TLC 분석은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 혼합물을 H2O (200 mL)로 희석하고, EtOAc (2x200 mL)로 추출하였다. 합한 유기부를 염수 (100 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (120 g SiO2, 0-15% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제하여 메틸 4-브로모-1-(트리페닐메틸)-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (Int-HG-15) (19.1 g, 98% 수율)을 N-1 및 N-2 위치이성질체의 3: 1 혼합물로서 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.67 - 8.12 (m, 1H), 8.06 - 7.80 (m, 1H), 7.51 - 7.03 (m, 16H), 4.21 - 3.45 (m, 3H).
메틸 2-브로모-3-(6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-3-옥소프로파노에이트 (Int-HG-16)의 반응식 HG-11에 따른 제조.
반응식 HG-11:
Figure pct00107
단계 1
메틸 6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-카르복실레이트 (HG-11a)의 합성
MeOH (20 mL) 중 4,6-디클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 (Int-HG-08) (50.0 mg, 0.25 mmol)의 용액에 Pd(dppf)Cl2 (36.2 mg, 0.0495 mmol) 및 TEA (0.103 mL, 0.742 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 CO 기체 (45 psi) 하에 45℃에서 6시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 서서히 냉각되도록 한 다음, 셀라이트의 패드를 통해 여과하였다. 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (12 g SiO2, Hept. 중 0-30% EtOAc)에 의해 정제하여 표제 화합물 메틸 6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-카르복실레이트 (HG-11a) (34 mg, 61% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.55 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 4.11 (s, 3H), 3.99 (s, 3H).
단계 2
6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-카르복실산 (HG-11b)의 합성
THF (4 mL) 및 MeOH (4 mL) 중 메틸 6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-카르복실레이트 (HG-11a) (345 mg, 1.53 mmol)의 현탁액에 1M NaOH (3.32 mL)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 용액을 농축시켜 백색 고체를 수득하였으며, 이를 추가로 고진공 하에 건조시켰다. 고체를 1N HCl (2 mL) 중에 용해시키고, H2O로 추가로 희석하였다. 교반 시, 고체 침전물이 형성되었으며, 이를 여과에 의해 수집하였다. 이어서, 여과된 고체를 고진공 하에 건조시켜 표제 화합물 6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-카르복실산 (HG-11b) (132 mg, 41% 수율)을 담황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 13.88 (br s, 1H), 8.50 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 8.18 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 4.10 (s, 3H).
단계 3
메틸 3-(6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-3-옥소프로파노에이트 (HG-11c)의 합성
플라스크 (플라스크 A)에 THF (5 mL) 중 메틸 칼륨 말로네이트 (104 mg, 0.665 mmol), 염화마그네슘 수화물 (54.9 mg, 0.576 mmol) 및 DIPEA (0.193 mL, 1.11 mmol)를 채웠다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다.
별도 플라스크 (플라스크 B)에 6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-카르복실산 (HG-11b) (100 mg, 0.443 mmol) 및 티오닐 클로라이드 (3.0 mL)를 첨가하였다. 반응물을 65℃에서 2시간 동안 가열하였다. 용액을 농축시켜 과량의 티오닐 클로라이드를 제거하였다. 잔류물을 빙조에서 0℃로 냉각시켰다. 이 단계에서, 플라스크 A로부터의 혼합물을 플라스크 B에 첨가하고, 혼합물을 0℃에서 2분 동안 교반하였다. 이어서, 반응물을 70℃로 2시간 동안 가열하였다. 용액을 가열로부터 제거하고, 실온으로 냉각되도록 하였다. 용액에 1N HCl을 첨가하고, 혼합물을 분리 깔때기로 옮겼다. 용액을 3 부분 DCM으로 추출하고, 합한 추출물을 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (24 g SiO2, 이스코, 0-100% EtOAc)에 의해 정제하여 표제 화합물 메틸 3-(6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-3-옥소프로파노에이트 (HG-11c) (120 mg, 53% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.61 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 4.25 (s, 2H), 4.12 (s, 3H), 3.65 (s, 3H).
단계 4
메틸 2-브로모-3-(6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-3-옥소프로파노에이트 (Int-HG-16)의 합성
THF 중 메틸 3-(6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-3-옥소프로파노에이트 (HG-11c) (118 mg, 0.441 mmol)의 용액에 트리메틸페닐암모늄 트리브로마이드 (182 mg, 0.485 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하였고, 그 동안 침전이 발생하였다. 고체를 여과하고, 여과물을 분리 깔때기에 DCM으로 옮기고, 이어서 10% Na2S2O8로 희석하였다. 상을 분리하고, 수성 상을 3 부분 DCM으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (24 g SiO2, 이스코, DCM 중 0-30% EtOAc)에 의해 정제하여 상당한 불순물을 포함하는 목적 생성물을 수득하였다. 물질을 플래쉬 크로마토그래피 (24 g SiO2, 이스코, DCM 중 100% DCM에서 50% EtOAc까지)에 의해 다시 정제하여 표제 화합물 메틸 2-브로모-3-(6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-3-옥소프로파노에이트 (Int-HG-16) (55 mg, 36% 수율)을 투명한 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.65 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 8.33 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 6.44 (s, 1H), 4.13 (s, 3H), 3.73 (s, 3H); m/z (APCI+) - (C11H9BrN3O3), 346.0 (M+H)+ 관찰치.
메틸 2-브로모-3-(6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-3-옥소프로파노에이트 (Int-HG-17)의 반응식 HG-12에 따른 제조.
반응식 HG-12
Figure pct00108
단계 1
에틸 1-메틸-5-{[(4Z)-2-메틸-5-옥소-1,3-옥사졸-4-일리덴]메틸}피라졸-4-카르복실레이트 (HG-12a)의 합성
실온에서 아세트산 무수물 (15 mL, 4 M) 중 에틸 5-포르밀-1-메틸-1H-피라졸-4-카르복실레이트 (10.7 g, 58.6 mmol) 및 N-아세틸글리신 (10.3 g, 88.0 mmol, 1.5 당량)의 용액에 아세트산칼륨 (9.09 g, 88.0 mmol, 1.5 당량)을 첨가하고, 이 슬러리에 추가의 5 mL Ac2O를 첨가하여 교반을 재유도하였다. 이어서, 이것을 핀덴서(Findenser)로 토핑하고, 100℃로 가열하였다. 가열 동안, 백색의 혼탁한 현탁액은 투명한 황색 용액이 되었고, 10분 후에 갈색 용액이 되었다. 1시간 후, 반응물을 실온으로 냉각시켰다. TLC 분석 (2:1 헵탄/EtOAc, KMnO4 염색)은 출발 물질의 소모 (Rf = 0.61)와 함께 생성물의 형성 (Rf = 0.29)을 나타내었다. 이어서, 반응물을 100 mL 비커로 옮기고, 반응 바이알을 DCM으로 헹구고, 포화 수성 중탄산나트륨을 발포가 중지될 때까지 자기 교반하면서 적가하였다. 그 후, 이 비커의 내용물을 분리 깔때기로 옮기고, 여기서 유기 층을 분리하였다. 후속적으로, 수성 층을 100mL 3:1 DCM/iPrOH 및 2x 150 mL DCM으로 4회 추출하였다. 합한 유기부를 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하였다. 생성된 암갈색 잔류물을 약 5 mL DCM 중에 용해시켰다. 여기에 MTBE (약 5 mL)를 적가하고, 이 혼합물을 후속적으로 200 mL 헵탄을 함유하는 플라스크에 부었다. 초음파처리 시, 황색 고체가 용액으로부터 침전되었고, 이를 감압 하에 여과하였다. 이어서, 모액을 0℃에서 2시간 동안 정치되도록 두고, 생성물의 또 다른 수확물을 분쇄하고, 다시 감압 하에 여과하였다. 이들 두 배치를 합하여 표제 화합물 에틸 1-메틸-5-{[(4Z)-2-메틸-5-옥소-1,3-옥사졸-4-일리덴]메틸}피라졸-4-카르복실레이트 (HG-12a) (15.2 g, 98%)을 무정형, 담황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 7.93 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 4.29 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.98 (s, 3H), 1.34 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
단계 2
1-메틸-4-옥소-4,5-디히드로-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실산 (HG-12b)의 합성
메탄올 (57.8 mL, 1 M) 중 에틸 1-메틸-5-{[(4Z)-2-메틸-5-옥소-1,3-옥사졸-4-일리덴]메틸}피라졸-4-카르복실레이트 (HG-12a) (15.2 g, 57.8 mmol)에 탄산칼륨 (16.8 g, 116 mmol, 2 당량)을 첨가하고, 이어서 후속적으로 마개를 막고, 70℃로 가열하였다. 16시간 동안 교반한 후, 이전에 짙은 갈색의 혼탁한 용액이 황갈색-갈색으로 연해졌다. LCMS에 기초하여, 모든 출발 물질이 소모되어, 냉각된 혼합물을 감압 하에 여과하고, 필터 케이크를 MeOH 및 MTBE로 세척하였다. 생성된 여과물에 MTBE를 첨가하여 추가의 고체를 침전시켰으며, 이를 동일한 장치를 사용하여 재여과하였다. 이어서, 고체 필터 케이크를 H2O 중에 현탁시키고, 진한 HCl을 첨가하여 pH 1로 산성화시켰다. 황갈색 고체가 침전하였으며, 이를 감압 하에 여과한 후, 여과물을 1:1 MeOH/MTBE로 희석하고, 감압 하에 다시 여과하였다. 이들 두 배치를 합하여 표제 화합물 1-메틸-4-옥소-4,5-디히드로-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실산 (HG-12b) (10.46 g, 94% 수율)을 황갈색의 무정형 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.56 (s, 1H), 8.11 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 4.03 (s, 3H).
단계 3
메틸 1-메틸-4-옥소-4,5-디히드로-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실레이트 (HG-12c)의 합성
메탄올 (40 mL, 1.4 M) 중 1-메틸-4-옥소-4,5-디히드로-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실산 (HG-12b) (10.46 g, 54.17 mmol)에 진한 황산 (90 mmol, 5 mL, 2 당량)을 적가하였다. 이는 각각의 방울의 첨가시 발열을 유발하였다. 생성된 황색 슬러리를 70℃로 가열하였다. 17시간 후, 반응물을 실온으로 냉각시켰으며, 이 시점에 출발 물질이 소모된 것으로 보였고, 백색의 미세결정질 고체가 용액으로부터 침전되기 시작하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 여과하고, 필터 케이크를 물로 세척하였다. 이 제1 배치를 수집하고, 이후 여과물을 5 mL ACN, 5 mL MTBE 및 10 mL EtOH로 희석한 후, 0℃에서 정치하였다. 2시간 후, 용액으로부터 침전된 백색 미세결정을 진공 여과를 통해 수집하고, 이전 배치와 합하여 표제 화합물 메틸 1-메틸-4-옥소-4,5-디히드로-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실레이트 (HG-12c) (11.1 g, 99.0%)을 백색 결정질 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ 8.20 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 4.12 (s, 3H), 4.04 (s, 3H).
단계 4
메틸 4-브로모-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실레이트 (HG-12d)의 합성
아세토니트릴 (53.9 mL, 1.0 M) 중 메틸 1-메틸-4-옥소-4,5-디히드로-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실레이트 (HG-12c) (11.1 g)에 피리딘 (6.51 mL, 80.8 mmol, 1.5 당량)을 1 부분으로 첨가하고, 이어서 대략 1 mL 부분으로 트리플산 무수물 (13.6 mL, 80.8 mmol, 1.5 당량)을 조금씩 첨가하였다. 6 mL를 첨가한 후, 용액은 황색에서 적색으로 변하였고 (잔류하는 혼탁함에도 불구하고), 잔류 트리플산 무수물의 첨가 후, 반응물은 다시 황색으로 변하였고 투명해지기 시작하였다. 45분 후, LCMS은 트리플레이트의 깨끗한 형성과 함께 출발 물질의 소모를 나타내었다. 이어서, 이 반응 혼합물에 브로민화리튬 (23.4 g, 269 mmol, 5 당량) 및 트리플루오로아세트산 (5.23 mL, 59.3 mmol, 1.1 당량)을 첨가하여 오렌지색 현탁액을 수득하였다. 이 시점으로부터 1시간 후, LCM 분석은 트리플레이트의 소멸 및 브로마이드로의 전환을 나타내었다. 이어서, 반응 혼합물을 자기 교반하면서 200 mL 포화 NaHCO3 을 함유하는 삼각 플라스크에 천천히 붓고, 2상 혼합물의 중단 후에 800 mL EtOAc를 함유하는 분리 깔때기로 옮기고, 진탕시키고, 수성 층을 버렸다. 이어서, 유기 층을 티오황산나트륨으로 1회 세척하여 탈색시키고, 2개의 층을 분리하였다. 유기부를 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 용매를 감압 하에 제거하였다. 생성된 갈색 오일을 10 mL DCM 중에 용해시키고, 여기에 10 mL MeCN 및 10 mL 아세톤을 첨가하였다. 이 탁한 용액을 0℃에서 밤새 방치한 후, 생성물을 침전시키고, 진공 여과를 통해 수집하여 표제 화합물 메틸 4-브로모-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실레이트 (HG-12d) (11.77 g, 81%)을 황갈색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.23 (1H, d, J = 1 Hz), 8.14 (1H, d, J = 1.0 Hz), 4.16 (3H, s), 4.05 (3H, s).
단계 5
4-브로모-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실산 (HG-12e)의 합성
4-브로모-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실레이트 (HG-12d) (1333 mg, 4.935 mmol)을 5 mL 테트라히드로푸란 및 2 mL H2O가 들은 플라스크에 첨가하였다. 이 용액에 수산화리튬 (177 mg, 7.40 mmol, 1.5 당량)을 실온에서 첨가하고, 교반되도록 하였다. 2시간 후, LCMS 분석은 생성물 형성과 동시에 출발 물질의 소모를 나타내었다. 반응 혼합물을 진한 HCl을 사용하여 pH 1로 산성화시켰으며, 이 시점에 이는 탁해졌다. 생성된 산성 현탁액을 0℃에서 1시간 동안 방치한 후, 생성물이 침전된 것으로 관찰되었다. 이 고체를 진공 여과를 사용하여 수집하여 표제 화합물 4-브로모-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실산 (HG-12e)을 백색 반결정질 고체 (1.15 g, 90%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.43 (1H, br s), 8.49 (1H, d, J = 0.8 Hz), 8.32 (1H, d, J = 0.8 Hz), 4.18 (3H, s)
단계 6
4-브로모-N-(2,4-디메톡시벤질)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Int-HG-17)의 합성
DMF (2 mL) 중 4-브로모-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실산 (HG-12e) (1.90 g, 9.79 mmol)의 현탁액에 먼저 트리에틸아민 (4.13 mL, 29.4 mmol)에 이어서 디메톡시벤질아민 (1.64 g, 9.79 mmol)을 첨가하고, 후자는 투명한 용액을 생성하였다. 용액에 T3P (8.60 mL, EtOAc 중 50%, 14.7 mmol)를 첨가한 후, 용액은 황색으로 변하였고, 유의하게 가온하였다. 30분 후, 혼탁한 황색 현탁액의 LCMS 분석은 생성물의 출발 물질 및 형성의 소모를 나타내었다. 이를 자기 교반하면서 5 mL EtOAc로 희석한 다음, 감압 하에 여과하였다. 고체를 EtOAc로 세척하고, 건조시켜 표제 화합물 4-브로모-N-(2,4-디메톡시벤질)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Int-HG-17)을 백색 결정질 고체 (3.18 g, 81%)로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.53-8.38 (1H, m), 8.26 (1H, d, J = 1 Hz), 8.09 (1H, d, J = 1.0 Hz), 7.28 (1H, s), 6.50 (2H, dd, J = 8.2, 2.4 Hz), 6.45 (2H, dd, J = 8.2, 2.4 Hz), 4.63 (2H, d, J = 6.1 Hz), 4.13 (3H, s), 3.90 (3H, s), 3.80 (3H, s).
N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-{4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Int-HG-18)의 반응식 HG-13에 따른 제조
Figure pct00109
반응식 HG-13:
Figure pct00110
단계 1
메틸 6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-카르복실레이트 (HG-13a)의 합성
20 mL MeOH 및 5 mL DMA 중 4-브로모-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Int-HG-17) (1.5 g, 3.7 mmol), Pd(dppf)Cl2 (0.406 g, 0.555 mmol) 및 트리에틸아민 (1.12 g, 11.1 mmol, 1.55 mL)의 현탁액을 75 psi의 CO 하에 50℃에서 2일 동안 카르보닐화시켰다. 반응물을 가열로부터 제거하고, 실온으로 서서히 냉각되도록 하였다. 현탁액을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 고체를 DCM으로 세척하였다. 여과물을 농축시키고, 조 잔류물을 이스코 (실리카, 40 g, 헵탄 중 0-60% 에틸 아세테이트에 이어서 EtOAc 중 10% DCM/10% MeOH)에 의해 정제하여 표제 화합물 메틸 6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-카르복실레이트 (HG-13a) (1074 mg, 77%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.84 (t, J=6.05 Hz, 1H), 8.61 (s, 2H), 7.16 (d, J=8.20 Hz, 1H), 6.62 (d, J=2.34 Hz, 1H), 6.49 (dd, J=8.59, 2.34 Hz, 1H), 4.51 (d, J=6.24 Hz, 2H), 4.22 (s, 3H), 4.03 (s, 3H), 3.88 (s, 3H), 3.75 (s, 3H). m/z (ESI+) - (C19H20N4O5), 385.2 (M+H)+ 관찰치.
단계 2
N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-(히드라진카르보닐)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (HG-13b)의 합성
20 mL 이소프로판올 중 메틸 6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-카르복실레이트 (HG-13a) (286 mg, 0.744 mmol) 및 히드라진, 2수화물 (119 mg, 3.72 mmol, 117 μL)의 현탁액을 80℃에서 2.5일 동안 가열하였다. 고체를 수집하고, MeOH로 세척하고, 건조시켜 표제 화합물 메틸 6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-카르복실레이트 (HG-13b) (267 mg, 93% 수율)을 회색 고체로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C18H20N6O4), 383.2 (M+H)+ 관찰치.
단계 3
N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-{4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Int-HG-18)
15 mL 아세토니트릴 중 메틸 6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-카르복실레이트 (HG-13b) (267 mg, 0.695 mmol) 및 DMF-DMA (91.0 mg, 0.764 mmol, 0.102 mL)의 현탁액을 50℃에서 70분 동안 가열하였다. 휘발성 물질을 제거하고, 조 생성물을 톨루엔 x 3으로 연화처리하여 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-{(2E)-2-[(디메틸아미노)메틸리덴]히드라진카르보닐}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 325 mg을 회색 고체로서 수득하였다. 5분 동안 탈기된 톨루엔 중 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-{(2E)-2-[(디메틸아미노)메틸리덴]히드라진카르보닐}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (283 mg, 0.644 mmol)의 현탁액에 p-메톡시벤질아민 (PMB-NH2) (0.168 mL, 1.29 mmol) 및 아세트산 (92.1 μL, 1.61 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 99℃에서 밤새 가열하였다. 반응 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 이스코 (실리카, 24 g, 헵탄 중 0-100% EtOAc에 이어서 1:1:8= DCM:MeOH:EtOAc)에 의해 정제하여 표제 화합물 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-{4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Int-HG-18) (227 mg, 68% 수율)을 회백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.90 (s, 1H), 8.71 (d, J = 1.17 Hz, 1H) 8.37 - 8.47 (m, 2H), 6.94 - 7.03 (m, 3H), 6.68 - 6.76 (m, 2H), 6.55 (d, J = 2.34 Hz, 1H), 6.40 (dd, J = 8.20, 2.34 Hz, 1H), 5.90 (s, 2H), 4.42 (d, J = 6.24 Hz, 2H), 4.20 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.73 (s, 3H), 3.60 (s, 3H). m/z (ESI+) - (C27H27N7O4), 514.4 (M-H).
4,6-디클로로-1-[(2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)메틸]-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 (Int-HG-19)의 반응식 HG-14에 따른 제조
반응식 HG-14
Figure pct00111
DMF (14 mL) 중 4,6-디클로로-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 (1.40 g, 7.45 mmol)의 용액에 (2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)메틸 메탄술포네이트 (1.75 g, 7.82mmol, 1.05 당량) 및 Cs2CO3 (4.85 g, 14.9 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 생성된 황색 반응 용액을 50℃에서 16시간 동안 교반하였다. 이 때, LCMS 분석은 출발 물질이 완전히 소모되었음을 나타내었고, 목적 생성물이 검출되었다. 이어서, 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 50 mL EtOAc로 세척하였다. 여과물을 50 mL 염수로 2회 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 황색 오일을 수득하였으며, 이를 정제용-TLC (석유 에테르:EtOAc=2:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 4,6-디클로로-1-[(2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)메틸]-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 (Int-HG-19) (650 mg, 27.6%)을 황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.14 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 4.60 (d, J = 7.8 Hz, 2H), 4.08 (dd, J = 12.6, 3.0 Hz, 1H), 3.50 (ddd, J = 11.3, 2.8, 1.5 Hz, 2H), 2.20 (tq, J = 7.7, 2.9 Hz, 1H), 2.04 (s, 1H), 1.50 (s, 3H), 1.48 (s, 3H).
4-클로로-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Int-HG-20)의 반응식 HG-15에 따른 제조
Figure pct00112
반응식 HG-15
Figure pct00113
단계 1
4-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르보닐 클로라이드 (HG-15a)의 합성
무수 톨루엔 (32 mL) 중 4-히드록시-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실산 (HG-12b) (1.25 g, 6.471 mmol)의 황색 현탁액에 POCl3 (3.97 g, 25.9mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 100℃에서 가열하고, 41시간 동안 교반하였다. 생성된 황색 현탁액을 진공 하에 농축시켜 황색 고체 (1.90 g)를 수득하였다. NMR 분석은 유의한 출발 물질이 남아있음을 나타내었다. 고체를 POCl3 (5.0 mL) 중에 재용해시키고, 120℃로 가열하였다. 혼합물을 추가로 18시간 동안 교반하였다. 생성된 갈색 혼합물을 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 4-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르보닐 클로라이드 (HG-15a)을 암갈색 검으로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C9H9ClN3O2), 225.9 (M-HCl+MeOH)+ 관찰치.
단계 2
4-클로로-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Int-HG-20)의 합성
DCM (10 mL) 중 4-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르보닐 클로라이드 (HG-15a) (1.94 g, 3.23 mmol)의 암갈색 현탁액에 트리에틸아민 (1.96 g, 19.4 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 실온 (20℃)에서 5분 동안 교반한 다음, 1-(2,4-디메톡시페닐)-메탄아민 (DMB-NH2) (648 mg, 3.88 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (20 mL) 및 DCM (20 mL)으로 희석하였다. 생성된 현탁액을 여과하여 고체 침전물을 제거하였다. 상을 분리하고, 수성 상을 DCM (15 mLx2)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조 (Na2SO4)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (35 g SiO2, 12.5% EtOAc/석유 에테르에서 75% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제하여 표제 화합물 4-클로로-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Int-HG-20) (586 mg, 50%)을 담황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.42 (br t, J = 5.3 Hz, 1H), 8.25 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 8.16 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.50 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.46 (dd, J = 2.4, 8.3 Hz, 1H), 4.63 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.15 (s, 3H), 3.90 (s, 3H), 3.81 (s, 3H)
에틸 4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-1,3-옥사졸-5-카르복실레이트 (Int-HG-21)의 반응식 HG-16에 따른 제조
반응식 HG-16
Figure pct00114
단계 1
에틸 4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-1,3-옥사졸-5-카르복실레이트 (Int-HG-21)의 합성
톨루엔 (380 mL) 및 H2O (95 mL) 중 화합물 4-브로모-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Int-HG-17) (19 g, 46.89 mmol, 1 당량)의 교반 혼합물에 20℃에서 화합물 에틸 4-브로모-1,3-옥사졸-5-카르복실레이트 (HG-16a) (11.35 g, 51.57 mmol, 1.1 당량), B2Pin2 (23.81 g, 93.77 mmol, 2 당량) 및 K3PO4 (29.86 g, 140.66 mmol, 3 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 탈기하고, N2로 3회 퍼징하였다. PdCl2(dtbpf) (3.06 g, 4.69 mmol, 0.1 당량)을 20℃에서 첨가하였다. 혼합물을 탈기하고, N2로 추가로 3회 퍼징하였다. 반응 혼합물을 72℃ (내부 온도)로 가열하고, 72℃ (내부 온도)에서 4시간 동안 교반하였다.
LCMS 분석은 출발 물질 (Int-HG-17)이 소모되었음을 나타내었고, 목적 생성물 물질을 갖는 새로운 피크가 검출되었다. 반응 혼합물을 가열로부터 제거하고, 20℃로 냉각되도록 하였다. 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하였다. 여과물의 유기 층을 분리하였다. 필터 케이크를 DCM (300 mL x 3)으로 헹구었다. 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여과물을 진공 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (석유 에테르 중 THF 0% ~ 80%로 용리시킴)을 사용하여 정제하여 표제 화합물 에틸 4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-1,3-옥사졸-5-카르복실레이트 (Int-HG-21) (8 g, 17.19 mmol 36% 수율)을 갈색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 9.01 (br t, J = 5.4 Hz, 1H), 8.68 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 8.33 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.33 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.48 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 6.45 (dd, J = 2.3, 8.4 Hz, 1H), 4.67 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 4.26 - 4.16 (m, 5H), 3.85 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 1.24 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
메틸 4-브로모-1-메틸-1H-인돌-6-카르복실레이트 (Int-HG-07)의 반응식 HG-17에 따른 제조.
Figure pct00115
반응식 HG-17:
Figure pct00116
0℃에서 무수 THF (2.0 mL) 중 메틸 4-브로모-1H-인돌-6-카르복실레이트 (HG-17a) (200 mg, 0.787 mmol)의 용액에 NaH (미네랄 오일, 63 mg 중 60% 분산액, 1.57 mmol)을 조금씩 첨가하였다. 혼합물을 15분 동안 교반한 다음, 아이오도메탄 (223 mg, 1.57 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. TLC 분석 (1:5 EtOAc/석유 에테르)은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 생성된 현탁액을 포화 수성 NH4Cl (2 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, H2O (3 mL)로 희석하였다. 혼합물을 EtOAc (3x10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 메틸 4-브로모-1-메틸-1H-인돌-6-카르복실레이트 (Int-HG-07) (217 mg, >99% 수율)을 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.05 (s, 1H), 7.98 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.28 - 7.21 (m, 1H), 6.57 (dd, J = 3.1, 0.9 Hz, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.87 (s, 3H).
실시예의 제조:
4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (실시예 A01)의 반응식 A에 따른 제조.
Figure pct00117
반응식 A:
Figure pct00118
단계 1
메틸 4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (A-1)의 합성.
PhMe (9.0 mL) 중 3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-01) (1.40 g, 4.71 mmol)의 현탁액에 K2CO3 (1.95 g, 14.1 mmol), Pd(OAc)2 (106 mg, 0.471 mmol), 메틸 4-브로모-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (1.88 g, 6.98 mmol) (Int-HG-01), PivOH (144 mg, 1.41 mmol), 및 카탁시움 A (338 mg, 0.942 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2로 2분 동안 폭기한 다음, 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모와 함께 목적 생성물 물질의 형성을 나타내었다. 혼합물을 여과하고, 여과물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (40 g SiO2, 100% EtOAc)에 의해 정제하여 메틸 4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (A-1) (1.59 g, 65% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.46 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.91 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 6.81 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 6.77 (d, J = 8.9 Hz, 2H), 6.20 (s, 1H), 5.35 (s, 2H), 4.39 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.22 (s, 3H), 3.91 (s, 3H), 3.78 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 1.46 (t, J = 7.2 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C26H27N7O3), 486.2 (M+H)+.
단계 2
4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복실산 (A-2)의 합성.
MeOH (30 mL) 중 메틸 4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (A-1) (1.59 g, 3.27)의 현탁액에 수성 NaOH (2.0 N, 16.3 mL, 32.7 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 45℃에서에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS는 출발 물질의 소모와 함께 목적 생성물 물질의 형성을 나타내었다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, HCl (1.0 N)을 첨가하여 pH ~3-4로 산성화시켰다. 혼합물을 EtOAc (2x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복실산 (A-2) (1.57 g, >99% 수율)을 황색 고체로서 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.35 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 6.68 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.63 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.15 (s, 1H), 5.27 (s, 2H), 4.28 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.15 (s, 3H), 3.66 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 1.35 (t, J = 7.1 Hz, 3H). m/z (ESI+) - (C25H25N7O3), 472.2 (M+H)+.
단계 3
4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (A-3)의 합성.
DMF (30.0 mL) 중 4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복실산 (A-2) (1.57 g, 3.33 mmol) 및 HATU (4.42 g, 11.6 mmol)의 용액을 30분 동안 교반하였다. 고체 NH4Cl (1.78 g, 33.3 mmol) 및 DIPEA (4.30 g, 33.3 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 추가로 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모와 함께 목적 생성물 물질의 형성을 나타내었다. 반응물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 H2O (100 mL)로 희석하고, EtOAc/석유 에테르 (2:1 v/v, 4x20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (A-3) (1.57 g, >99% 수율)을 황색 검으로서 수득하였고, 이는 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C25H26N8O2), 471.2 (M+H)+.
단계 4
4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (실시예 A01)의 합성.
TFA (30 mL) 중 4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (A-3) (1.57 g, 3.34 mmol)의 용액을 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모와 함께 생성물 물질의 형성을 나타내었다. 반응물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 MeOH (50 mL)로 1시간 동안 슬러리화하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고, 진공 하에 건조시켰다. 물질을 MeOH/DMF (20:1 v/v, 20 mL)로 1시간 동안 슬러리화하고, 고체를 여과에 의해 수집하였다. 필터-케이크를 MeOH/DMF (10:1 v/v, 20 ml)로 1시간 동안 슬러리화하고, 고체를 여과에 의해 수집하였다. 필터 케이크를 MeOH (1x10 mL)로 세척한 다음, 진공 하에 건조시켜 4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (실시예 A01) (801 mg, 69% 수율, 3 단계에 걸침)을 연황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.71 (s, 1H), 8.46 - 8.45 (m, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.24 (br s, 1H), 7.63 (br s, 1H), 6.74 (s, 1H), 4.74 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.21 (s, 3H), 2.29 (s, 3H), 1.48 (t, J = 7.1 Hz, 3H). m/z (ESI+) - (C17H18N8O), 351.1 (M+H)+.
실시예 A02를 4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (실시예 A01)의 합성에 사용된 방법에 따라 관련 기술분야의 통상의 기술자가 실현할 수 있을 예시된 절차에 대한 비결정적 변형 또는 치환으로 제조하였다.
Figure pct00119
실시예 B01 및 B02를 4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (실시예 A01)의 합성에 사용된 방법에 따라 관련 기술분야의 통상의 기술자가 실현할 수 있을 예시된 절차에 대한 비결정적 변형 또는 치환을 갖는 고처리량 방식으로 제조하였다.
Figure pct00120
4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-2-메틸-2H-인다졸-6-카르복스아미드 (실시예 C01)의 반응식 C에 따른 제조.
Figure pct00121
반응식 C:
Figure pct00122
단계 1
메틸 4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-2-메틸-2H-인다졸-6-카르복실레이트 (C-1)의 합성.
PhMe (2.0 mL) 중 3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸 (Int-HG-02) (133 mg, 0.446 mmol)의 현탁액에 K2CO3 (185 mg, 1.34 mmol), Pd(OAc)2 (23.0 mg, 0.100 mmol), 메틸 4-브로모-2-메틸-2H-인다졸-6-카르복실레이트 (Int-TG-01) (180 mg, 0.669 mmol), PivOH (13.7 mg, 0.134 mmol), 및 카탁시움 A (19.2 mg, 0.0535 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2로 2분 동안 폭기한 다음, 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모와 함께 목적 생성물 물질의 형성을 나타내었다. 반응물을 70 mg 3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸 (Int-HG-02)과 동일한 방식으로 실행된 병행 반응물과 합하였다. 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 MeOH (2x5 mL)로 세척하였다. 합한 여과물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (12 g SiO2, 100% EtOAc)에 의해 정제하여 메틸 4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-2-메틸-2H-인다졸-6-카르복실레이트 (C-1) (160 mg, 48% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.59 (s, 1H), 8.56 (s, 1H), 7.83 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 6.91 - 6.73 (m, 4H), 6.15 (s, 1H), 5.41 (s, 2H), 4.39 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.29 (s, 3H), 3.85 (s, 3H), 3.78 (s, 3H), 2.29 (s, 3H), 1.45 (t, J = 7.2 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C26H27N7O3), 486.2 (M+H)+.
단계 2
4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-2-메틸-2H-인다졸-6-카르복스아미드 (C-2)의 합성.
메틸 4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-2-메틸-2H-인다졸-6-카르복실레이트 (C-1) (160 mg, 0.330 mmol)에 MeOH 중 NH3의 용액 (7 N, 5.0 mL, 새로이 제조됨)을 첨가하고, 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 ~50% 소모를 나타내었다. MeOH (7 N, 3.0 mL) 중 NH3의 추가 분취물을 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 24시간 동안 교반한 다음, 농축 건조시켰다. MeOH 중 NH3의 용액 (7 N, 5.0 mL, 새로이 제조됨)을 첨가하고, 혼합물을 80℃에서 48시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축 건조시켜 4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-2-메틸-2H-인다졸-6-카르복스아미드 (C-2) (155 mg, >99% 수율)을 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C25H26N8O2), 471.2 (M+H)+.
단계 3
4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-2-메틸-2H-인다졸-6-카르복스아미드 (실시예 C01)의 합성.
TFA (3.0 mL) 중 4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-2-메틸-2H-인다졸-6-카르복스아미드 (C-2) (155 mg, 0.329 mmol)의 용액을 25℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모와 함께 목적 생성물 물질의 형성을 나타내었다. 반응물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 H2O (10 mL)로 희석하고, 수성 NaOH (2 N)의 첨가에 의해 중화시킨 다음, 농축 건조시켰다. 잔류물을 보스톤 프라임 C18 칼럼 (150x30 mm, 5μm 입자 크기)을 사용하는 정제용 HPLC에 의해 정제하고, 이것을 15-40% MeCN/H2O (+0.05% NH4OH)로 25 mL/분의 유량으로 용리시켜 4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-2-메틸-2H-인다졸-6-카르복스아미드 (실시예 C01) (20.6 mg, 18% 수율)을 연황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.85 (s, 1H), 8.35 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.17 (br s, 1H), 7.47 (br s, 1H), 6.69 (s, 1H), 4.67 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.30 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 1.42 (t, J = 7.1 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C17H18N8O), 351.1 (M+H)+.
실시예 C02-C09를 4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-2-메틸-2H-인다졸-6-카르복스아미드 (실시예 C01)의 합성에 사용된 방법에 따라, 관련 기술분야의 통상의 기술자가 실현할 수 있을 예시된 절차에 대한 비결정적 변형 또는 치환으로 제조하였다.
Figure pct00123
Figure pct00124
Figure pct00125
4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-[3-(모르폴린-4-일)프로필]-1H-인다졸-6-카르복스아미드 포름산 염 (실시예 D01)의 반응식 D에 따른 제조.
Figure pct00126
단계 1
메틸 4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-(트리페닐메틸)-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (D-1)의 합성.
교반용 자석 막대가 구비된 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 PivOH (1.03 g, 10.1 mmol), K2CO3 (13.9 g, 101 mmol), 3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-01) (10.0 g, 33.6 mmol), 메틸 4-브로모-1-(트리페닐메틸)-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (Int-HG-15) (25.0 g, 50.3 mmol, N-1 및 N-2 위치이성질체의 3:1 혼합물), 및 PhMe (100 mL)를 순차적으로 첨가하였다. 플라스크를 N2로 퍼징하고, 이어서 Pd(OAc)2 (755 mg, 3.36 mmol), 카탁시움 A (2.41 mg, 6.73 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모와 함께 목적 생성물 물질의 형성을 나타내었다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 2개의 병렬 배치의 플래쉬 크로마토그래피 (220 g SiO2, 0-0.5% MeOH/DCM)에 의해 정제하여 메틸 4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-(트리페닐메틸)-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (D-1) (17.7 g, 74% 수율, N-1 및 N-2 이성질체의 3.5:1 혼합물)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.74 - 8.20 (m, 1H), 7.80 (dd, J = 20.4, 1.2 Hz, 1H), 7.37 - 7.30 (m, 9H), 7.27 - 7.13 (m, 7H), 6.84 - 6.55 (m, 4H), 6.28 - 6.03 (m, 1H), 5.30 (d, J = 18.3 Hz, 2H), 4.49 - 4.16 (m, 2H), 3.95 - 3.56 (m, 6H), 2.36 - 2.24 (m, 3H), 1.50 - 1.37 (m, 3H); m/z (ESI+) - (C44H39N7O3), 714.2 (M+H)+.
단계 2
메틸 4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (D-2)의 합성.
DCM (1.5 L) 중 메틸 4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-(트리페닐메틸)-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (D-1) (15.3 g, 21.4 mmol, N-1 및 N-2 이성질체의 3.5:1 혼합물)의 용액에 TFA (15.3 mL, 200 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 주위 온도에서 1시간 동안 교반한 다음, 포화 수성 NaHCO3 (1 L)을 첨가하여 켄칭하였다. 혼합물을 DCM (2x1 L)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (220 g SiO2, 0-2% MeOH/DCM)에 의해 정제하여 메틸 4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (D-2) (3.7 g, 37% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 11.03 (br s, 1H), 8.52 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 8.35 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 1.1 Hz, 1H), 6.96 - 6.56 (m, 4H), 6.19 (s, 1H), 5.33 (s, 2H), 4.38 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.87 (s, 3H), 3.75 (s, 3H), 2.30 (s, 3H), 1.44 (t, J = 7.2 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C25H25N7O3), 472.2 (M+H)+.
단계 3
4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-[3-(모르폴린-4-일)프로필]-1H-인다졸-6-카르복스아미드 포름산 염 (실시예 D01) 및 4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-2-[3-(모르폴린-4-일)프로필]-2H-인다졸-6-카르복스아미드 포름산 염 (실시예 D01')의 고처리량 라이브러리 프로토콜을 사용한 합성.
바이알에 PhMe (625 μL) 중 3-(모르폴린-4-일)프로판-1-올 (26.1 mg, 180 μmol)의 용액, PhMe (750 μL) 중 메틸 4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (D-2) (70.7 mg, 180 μmol)의 용액 및 PhMe (750 μL) 중 시아노메틸렌트리부틸포스포란 (CMBP) (36.2 mg,180 μmol)의 용액을 분배하였다. 바이알을 마개를 막고, 혼합물을 진탕시키면서 110℃에서 16시간 동안 유지하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 용매를 스피드백 농축기로 제거하고, 잔류물을 정제용 TLC에 의해 정제하였다. 바이알 내의 단리된 중간체에 MeOH 중 NH3 (7.0 M, 2.0 mL)을 첨가하였다. 바이알을 마개를 막고, 혼합물을 48시간 동안 진탕시키면서 80℃에서 유지하고, 추가 분취량의 MeOH 중 NH3 (7.0 M, 2.0 mL)을 각각 16 및 32시간에 첨가하였다. LCMS 분석은 중간체의 소모를 나타내었다. 용매를 스피드백 농축기로 제거하였다. 잔류물이 들은 바이알에 4:1 DCM/TFA (1.0 mL)를 첨가하였다. 바이알을 마개를 막고, 혼합물을 진탕시키면서 30℃에서 16시간 동안 유지하였다. LCMS 분석은 중간체의 소모를 나타내었다. 용매를 스피드백 농축기로 제거하였다. 잔류물을 YMC-악투스 트리아트(Actus Triart) C18 칼럼 (150x30 mm, 5 μm 입자 크기)을 사용하는 정제용 HPLC에 의해 정제하고, 이를 13-53% MeCN/H2O (+0.225% 포름산)로 35 mL/분의 유량으로 용리시켜 4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-[3-(모르폴린-4-일)프로필]-1H-인다졸-6-카르복스아미드 포름산 염 (실시예 D01) 및 4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-2-[3-(모르폴린-4-일)프로필]-2H-인다졸-6-카르복스아미드 포름산 염 (실시예 D01') (8.4 mg, 12% 수율)을 위치이성질체 (위치이성질체는 할당되지 않음)의 2.5: 1 혼합물로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C23H29N9O2), 474 (M+H)+.
실시예 D02-D05, D02'-D05' 및 D06을 실시예 D01의 합성에 사용된 방법에 따라, 관련 기술분야의 통상의 기술자가 실현할 수 있을 예시된 절차에 대한 비결정적 변형 또는 치환과 함께 제조하였다.
Figure pct00127
Figure pct00128
Figure pct00129
4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-5-플루오로-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (실시예 E01)의 반응식 E에 따른 제조.
Figure pct00130
반응식 E:
Figure pct00131
단계 1
N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-5-플루오로-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (E-1)의 합성.
PhMe (2.3 mL) 중 4-브로모-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-5-플루오로-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (Int-HG-11) (49.0 mg, 0.120 mmol), 3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-01) (52.6 mg, 0.174 mmol), PivOH (3.56 mg, 0.0348 mmol), K2CO3 (48.1 mg, 0.348 mmol), 카탁시움 A (8.32 mg, 0.232 mmol), 및 Pd(OAc)2 (2.61 mg, 0.0116 mmol)의 혼합물을 N2로 폭기한 다음, 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. 추가의 Pd(OAc)2 (2.61 mg, 0.0116 mmol) 및 카탁시움 A (8.32 mg, 0.232 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 N2로 폭기한 다음, 120℃에서 24시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모와 함께 목적 생성물 물질의 형성을 나타내었다. 반응물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (4 g SiO2, 5-10% MeOH/EtOAc)에 의해 정제하여 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-5-플루오로-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (E-1) (30 mg, 40% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.34 (d, J = 5.14 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 0.61 Hz, 1H), 7.25 - 7.29 (m, 1H), 6.52 - 6.57 (m, 2H), 6.43 - 6.50 (m, 4H), 6.25 (s, 1H), 5.08 (s, 2H), 4.62 (d, J = 5.38 Hz, 2H), 4.24 - 4.33 (m, 2H), 4.14 (s, 3H), 3.84 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.64 (s, 3H), 2.33 (s, 3H), 1.37 (q, J = 7.13 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C34H35FN8O4), 639.3 (M+H)+.
단계 2
4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-5-플루오로-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (실시예 E01)의 합성.
TFA (3.0 mL) 중 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-5-플루오로-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (E-1) (30 mg, 0.047 mmol)의 용액을 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모와 함께 목적 생성물 물질의 형성을 나타내었다. 반응물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 페네모넥스 제미니(Phenemonex Gemini) NX C18 칼럼 (150x21.2 mmol, 5 μmol 입자 크기)을 사용하여 정제하고, 이것을 25-35% MeCN/H2O (+10 mM NH4OAc)로 40mL/분의 유량으로 용리시켜 4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-5-플루오로-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (실시예 E01) (2.61 mg, 15% 수율)을 고체로서 수득하였다.
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 8.70 (s, 1H), 7.80 (br s, 1H), 7.70 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 7.59 (br s, 1H), 6.87 (br s, 1H), 6.34 (s, 1H), 4.71 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.08 (s, 3H), 2.17 (s, 3H), 1.37 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 19F NMR (565 MHz, DMSO-d6) δ -125.44; m/z (ESI+) - (C17H17FN8O), 369.0 (M+H)+.
8-[5-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-3-일]-3-메틸이미다조[1,5-a]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 F01)의 반응식 F에 따른 제조.
Figure pct00132
반응식 F:
Figure pct00133
단계 1
메틸 8-{5-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸이미다조[1,5-a]피리딘-6-카르복실레이트 (F-1)의 합성.
교반용 자석 막대가 구비된 바이알에 메틸 8-브로모-3-메틸이미다조[1,5-a]피리딘-6-카르복실레이트 (Int-HG-12), K2CO3 (281 mg, 2.04 mml), Pd(OAc)2 (15.2 mg, 0.0679 mmol), 카탁시움 A (48.7 mg, 0.136 mmol), 및 PivOH (20.8 mg, 0.204 mmol)를 채웠다. 바이알을 Ar로 퍼징한 다음, PhMe (3.4 mL) 중 3-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-02) (214 mg, 0.679 mmol)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 110℃에서에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS는 나머지 출발 물질을 나타내었다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, Pd(OAc)2 (15.2 mg, 0.678), 카탁시움 A (48.7, 0.136 mmol), 및 CsOPiv (47.6 mg, 0.204 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 Ar로 퍼징한 다음, 110℃에서 24시간 동안 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 필터 케이크를 DCM, MeOH, 및 EtOAc로 연속적으로 세척하였다. 합한 여과물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 페노메넥스 루나 오메가 폴라(Phenomenex Luna Omega Polar) C18 칼럼 (250x30 mm, 5 μm 입자 크기)을 사용하여 정제하고, 이를 25-65% MeCN/H2O (+0.1% AcOH)로 35 mL/분의 유량으로 용리시켜 메틸 8-{5-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸이미다조[1,5-a]피리딘-6-카르복실레이트 (F-1) (61.6 mg, 18% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.63 (s, 1H), 7.64 (br s, 1H), 7.46 (s, 1H), 6.66 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.60 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 5.24 (d, J = 2.9 Hz, 2H), 4.11 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.99 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 2.80 (s, 3H), 2.34 (s, 3H), 1.22 (t, J = 7.2 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C26H26FN7O3), 504.2 (M+H)+.
단계 2
8-{5-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸이미다조[1,5-a]피리딘-6-카르복스아미드 (F-2)의 합성.
포화 수성 NH4OH (~28%, 3.0 mL) 중 메틸 8-{5-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸이미다조[1,5-a]피리딘-6-카르복실레이트 (F-1) (59.9 mg, 0.119 mmol)의 용액을 50℃에서 7시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모와 함께 목적 생성물 물질의 형성을 나타내었다. 반응물을 MeOH로 희석한 다음, 농축 건조시켰다. 고체를 MeOH (2 mL) 및 H2O (5 mL)의 혼합물로부터 동결건조로 건조시켜 8-{5-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸이미다조[1,5-a]피리딘-6-카르복스아미드 (F-2) (51.3 mg, 88% 수율)를 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.81 (s, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.51 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.32 (s, 1H), 6.65 (s, 4H), 5.27 (s, 2H), 3.98 (q, J = 7.5 Hz, 2H), 3.66 (s, 3H), 2.76 (s, 3H), 2.29 (s, 3H), 1.24 - 1.20 (m, 3H); 19F NMR (376 MHz, CD3OD) δ -173.38; m/z (ESI+) - (C25H25FN8O2), 490.2 (M+H)+.
단계 3
8-[5-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-3-일]-3-메틸이미다조[1,5-a]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 F01)의 합성.
DCM (2.0 mL) 중 8-{5-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸이미다조[1,5-a]피리딘-6-카르복스아미드 (F-2) (50.4 mg, 0.103 mmol)의 용액에 TFA (1.0 mL)를 첨가하였다. 혼합물을 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모와 함께 목적 생성물 물질의 형성을 나타내었다. 반응물을 MeOH로 희석하고, 농축 건조시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 페네모넥스 제미니 NX C18 칼럼 (21.2x150 mm, 5 μm 입자 크기)을 사용하여 정제하고, 이것을 18-60% MeCN/H2O (+10 mM NH4OAc)로 40 mL/분의 유량으로 용리시켜 8-[5-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-3-일]-3-메틸이미다조[1,5-a]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 F01) (3.97 mg, 10% 수율)을 고체로서 수득하였다.
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ 8.70 (s, 1H), 8.10 (br s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 7.44 (br s, 1H), 6.52 (br s, 1H), 4.54 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 2.69 (s, 3H), 2.20 (s, 3H), 1.36 (t, J = 7.1 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C17H17FN8O), 369.0 (M+H)+.
실시예 G01: 4-[4-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-이미다졸-2-일]-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복스아미드의 반응식 G에 따른 제조.
반응식 G:
Figure pct00134
단계 1
2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-2-옥소에틸 6-브로모-1-메틸-1H-인다졸-4-카르복실레이트 (G-1)의 합성.
질소 하에 6-브로모-1-메틸-1H-인다졸-4-카르복실산 (Int-HG-13) (280 mg, 1.10 mmol) 및 2-브로모-1-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)에탄-1-온 (Int-TG-07) (279 mg, 1.21 mmol)의 현탁액에 DIPEA (0.50 mL, 3.00 mmol)를 첨가하였다. 황색 용액을 25℃에서 17시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 완전한 소모를 나타내었다. 용액을 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (G-1)을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ = 8.48 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.05 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 6.98 (s, 1H), 5.57 (s, 2H), 4.50 (q, J = 6.9 Hz, 2H), 4.11 (s, 3H), 2.31 (s, 3H), 1.35 - 1.33 (m, 3H).
단계 2
6-브로모-4-[4-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-이미다졸-2-일]-1-메틸-1H-인다졸 (G-2)의 합성.
2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-2-옥소에틸 6-브로모-1-메틸-1H-인다졸-4-카르복실레이트 (G-1)의 황색 현탁액에 톨루엔 (10 mL) 및 아세트산암모늄 (1.69 g, 22.0 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 환류 하에 가열하고, 95℃에서 16시간 동안 교반하였다. 암녹색 용액의 LCMS 분석은 출발 물질의 완전한 소모를 나타내었다. 반응물을 물로 켄칭하고, EtOAc를 사용하여 분리 깔때기로 옮겼다. 상을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (3x15 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 정제용 박층 크로마토그래피 (DCM/MeOH 15:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (G-2) (130 mg, 30% 수율)을 녹색 검으로서 수득하였다. 이 물질의 LCMS 분석은 상당한 불순물이 여전히 존재함을 나타내었다. 단리된 물질을 정제용 박층 크로마토그래피 (DCM/MeOH 17:1)에 의해 4회 추가로 정제하여 표제 화합물 (G-2) (41 mg, 9% 수율)을 녹색 고체로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C17H17BrN6), 385.1 (M+H)+ 관찰치.
단계 3
메틸 4-[4-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-이미다졸-2-일]-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (G-3)의 합성.
MeOH (6.0 mL) 중 6-브로모-4-[4-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-이미다졸-2-일]-1-메틸-1H-인다졸 (G-2) (41 mg, 0.11 mmol)의 용액에 PdCl2(dppf)2 (23.4 mg, 0.032 mmol) 및 Et3N (0.1 mL, 0.700 mmol)을 첨가하였다. 오렌지색 용액을 오토클레이브에서 일산화탄소 분위기 (50 psi) 하에 80℃에서 30시간 동안 교반하였다. 갈색 불균질 혼합물을 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (G-3) (110 mg)을 오렌지색 검으로서 수득하였다. 조 물질을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C19H20N6O2), 364.8 (M+H)+ 관찰치.
단계 4
4-[4-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-이미다졸-2-일]-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (실시예 G01)의 합성.
메틸 4-[4-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-이미다졸-2-일]-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (G-3) (110 mg, 0.210 mmol)이 들은 플라스크에 암모니아 (MeOH 중 0.14M, 1.5 mL)을 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 반응이 완결에 도달하였음을 나타내었다. 반응물을 진공 하에 농축시키고, DMF (2.5 mL)로 희석하고, 정제용 HPLC에 의해 보스턴 프라임 C18 칼럼 (150x30 mm, 5 μm 입자 크기)을 사용하여 정제하였다. 25-50% MeCN/H2O (0.05% NH4OH)으로 25 mL/분의 유량으로 용리시켜 표제 화합물 (실시예 G01) (16.5 mg, 29% 수율)을 담황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 13.10 (br s, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.22 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 8.05 (br s, 1H), 7.67 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.57 (br s, 1H), 6.31 (s, 1H), 4.59 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.14 (s, 3H), 2.17 (s, 3H), 1.41 (t, J = 7.1 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C18H19N7O), 350.1 (M+H)+ 관찰치.
실시예 G02를 4-[4-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-이미다졸-2-일]-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (실시예 G01)의 합성에 사용된 방법 (반응식 G)에 따라 관련 기술분야의 통상의 기술자가 실현할 수 있을 예시된 절차에 대한 비결정적 변형 또는 치환으로 합성하였다.
Figure pct00135
실시예 H01: 4-[4-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-2-일]-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복스아미드의 반응식 H에 따른 제조
반응식 H:
Figure pct00136
단계 1
6-브로모-4-[4-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-2-일]-1-메틸-1H-인다졸 (H-1)의 합성.
MeOH (3.0 mL) 중 6-브로모-1-메틸-1H-인다졸-4-카르보티오아미드 (Int-HG-14) (93.5 mg, 0.346 mmol)의 현탁액에 2-브로모-1-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)에탄-1-온 (Int-TG-07) (105 mg, 0.454 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 14시간 동안 가열하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모 및 생성물 물질의 형성을 나타내었다. 반응물을 진공 하에 농축시켜 백색 고체를 수득하였다. 고체를 DCM (5.0 mL)으로 연화처리한 다음, 진공 하에 건조시켜 표제 화합물 (H-1) (65 mg, 47% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.57 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.87 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 6.55 (s, 1H), 4.53 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.12 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 1.39 (t, J = 7.2 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C17H16BrN5S), 401.7 (M+H)+ 관찰치.
단계 2
메틸 4-[4-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-2-일]-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (H-2)의 합성.
MeOH (6.0 mL) 중 6-브로모-4-[4-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-2-일]-1-메틸-1H-인다졸 (H-1) (65 mg, 0.160 mmol)의 현탁액에 Pd(dppf)Cl2 및 Et3N (0.10 mL, 0.700 mmol)을 첨가하였다. 오렌지색 용액을 오토클레이브에서 일산화탄소 분위기 (50 psi) 하에 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. LMCS 분석은 출발 물질이 소모되었음을 나타내었다. 용액을 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (H-2)을 조 오렌지색 검으로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C19H19N5O2S), 381.7 (M+H)+ 관찰치.
단계 3
4-[4-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-2-일]-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (실시예 H01)의 합성.
메틸 4-[4-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-2-일]-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (H-2) (135 mg, 0.119 mmol)이 들은 플라스크에 암모니아 (MeOH 중 0.08M, 1.5 mL)을 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 36시간 동안 교반하였다. 반응물을 진공 하에 농축시키고, 정제용 HPLC에 의해 YMC-트리아트 정제용 C18 칼럼 (250x50 mm, 10 μm 입자 크기)을 사용하여 정제하였다. 31-61% MeCN/H2O (0.05% NH4OH)로 30 mL/분의 유량으로 용리시켜 표제 화합물 4-[4-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-2-일]-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (실시예 H01) (21.5 mg, 36% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.62 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.23 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.65 (s, 1H), 6.55 (s, 1H), 4.55 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.17 (s, 3H), 2.21 (s, 3H), 1.40 (t, J = 7.2 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C18H18N6OS), 367.0 (M+H)+ 관찰치.
실시예 J01: 4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드의 반응식 J에 따른 제조.
반응식 J:
Figure pct00137
단계 1
6-클로로-4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 (J-1)의 합성
톨루엔 중 3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-04) (55.6 mg, 0.291 mmol)의 현탁액 (1.5 mL)에 4,6-디클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 (Int-HG-08) (88.7 mg, 0.439 mmol), Pd(OAc)2 (6.5 mg, 0.029 mmol), P(n-Bu)Ad2 (21.8 mg, 0.061 mmol), PivOH (8.9 mg, 0.087 mmol), 및 K2CO3 (129.8 mg, 0.939 mmol)을 첨가하였다. 용액을 질소 기체로 2분 동안 폭기한 다음 밀봉하였다. 반응물을 120℃에서 16시간 동안 가열하였다. LCMS 분석은 대부분의 출발 물질 트리아졸이 소모되었고, 목적 질량의 형성이 검출될 수 있었음을 나타내었다. 용액을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 정제용 박층 크로마토그래피 (DCM/MeOH 20:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 (J-1) (89.5 mg, 86%)을 황색 오일로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C16H17ClN8), 356.7 (M+H)+ 관찰치.
단계 2
메틸 4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실레이트 (J-2)의 합성
MeOH (10 mL) 중 6-클로로-4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 (J-1) (89.5 mg, 86% 수율)의 현탁액에 Pd(dppf)Cl2 (64.8 mg, 0.089 mmol) 및 Et3N (0.20 mL, 1.40 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 오토클레이브에서 일산화탄소 분위기 (50 psi) 하에 80℃에서 47시간 동안 교반하였다. 용액을 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 정제용 박층 크로마토그래피 (EtOAc)에 의해 정제하여 표제 화합물 (J-2) (23.2 mg, 35% 수율)을 담갈색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.78 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 6.66 (s, 1H), 4.62 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 4.53 (s, 3H), 4.22 (s, 3H), 3.98 (s, 3H), 2.22 (s, 3H), 1.42 (br t, J = 7.0 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C18H20N8O2), 381.0 (M+H)+ 관찰치.
단계 3: 4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 J01)의 합성
메틸 4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실레이트 (J-2) (23.2 mg, 0.061 mmol)이 들은 플라스크에 암모니아 (MeOH 중 용액, 3.0 mL)을 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 15시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 용액을 진공 하에 농축시킨 다음, DMF (2 mL) 및 DMSO (0.5 mL) 중에 용해시켰다. 현탁액을 여과하고, 여과물을 정제용 HPLC에 의해 보스턴 프라임 C18 칼럼 (150x30 mm, 5 μm 입자 크기)을 사용하여 정제하였다. 35-55% MeCN/H2O (0.225% HCO2H)로 유량 25 mL/분으로 용리시켜 표제 화합물 (실시예 J01) (10.1 mg, 45% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.75 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.04 (br s, 1H), 7.94 (br s, 1H), 6.67 (s, 1H), 4.62 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.46 (s, 3H), 4.23 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 1.41 (t, J = 7.1 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C17H19N9O), 366.1 (M+H)+ 관찰치.
실시예 J02 및 J03을 4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-메틸-1H-피라졸로 [4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 J01)의 합성에 사용된 방법 (반응식 J)에 따라 관련 기술분야의 통상의 기술자가 실현할 수 있을 예시된 절차에 대한 비결정적 변형 또는 치환으로 합성하였다.
Figure pct00138
Figure pct00139
실시예 K01: 4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드의 반응식 K에 따른 제조.
반응식 K:
Figure pct00140
단계 1
4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 K01)의 합성.
Int-HG-08 및 Int-TG-01로 출발하여 반응식 J의 단계 1-3에 대해 예시된 절차에 따라 실시예 J01과 유사하게 제조한 4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (K-1) (58 mg, 0.120 mmol)가 들은 플라스크에 TFA (1.0 mL)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모 및 목적 생성물 물질을 나타내었다. 용액을 농축시키고, 조 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 YMC-악투스 트리아트 C18 칼럼 (150x30, 5 μm 입자 크기)을 사용하여 정제하였다. 17-57% MeCN/H2O (0.1% TFA)로 유량 30 mL/분으로 용리시켜 표제 화합물 (실시예 K01) (25 mg, 58%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 15.34 (br s, 1H), 8.84 (br s, 1H), 8.80 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.88 (br s, 1H), 6.71 (s, 1H), 4.65 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.22 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 1.43 (t, J = 7.1 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C16H17N9O), 351.8 (M+H)+ 관찰치.
실시예 K02를 (실시예 J01)의 합성에 사용된 단계 1-3에 예시된 절차 (반응식 J)에 이어서 (실시예 K01)의 합성에 대한 단계 1의 절차 (반응식 K)에 따라, 관련 기술분야의 통상의 기술자가 실현할 수 있을 예시된 절차에 대한 비결정적 변형 또는 치환으로 합성하였다.
Figure pct00141
실시예 L01: 7-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-3-메틸-1H-인다졸-5-카르복스아미드의 반응식 L에 따른 제조.
반응식 L:
Figure pct00142
단계 1
5-브로모-7-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-3-메틸-1H-인다졸 (L-1)의 합성
마이크로웨이브 바이알에 5-브로모-3-메틸-1H-인다졸-7-카르보니트릴 (Int-HG-10) (260 mg, 1.10 mmol), 1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-카르보히드라지드 (TG-1c) (185 mg, 1.10 mmol), K2CO3 (457 mg, 3.30 mmol), 및 n-BuOH (5.0 mL)를 첨가하였다. 반응물을 마이크로웨이브 반응기에서 150℃에서 1.5시간 동안 가열하였다. LCMS 분석은 목적 생성물의 질량을 주성분으로서 나타내었다. 용액을 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (L-1) (900 mg)을 조 황색 고체로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C16H16BrN7), 386.1 (M+H)+ 관찰치.
단계 2
(L-2)의 합성
5-브로모-7-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-3-메틸-1H-인다졸 (L-1)이 들은 플라스크에 K2CO3 (227 mg, 1.64 mmol), DMF (5.0 mL), 및 4-메톡시벤질 클로라이드 (206 mg, 1.31 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 1시간 동안 가열하였다. LCMS 분석은 목적 생성물 물질을 주성분으로서 나타내었다. 용액을 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 (L-2) (550 mg)을 조 잔류물로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C24H24BrN7O), 505.9 (M+H)+ 관찰치.
단계 3
(L-3)의 합성
(L-2) (550 mg, 1.09 mmol)이 들은 플라스크에 MeOH (10.0 mL), Pd(dppf)Cl2 (238 mg, 0.326 mmol), 및 Et3N (0.45 mL, 3.26 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 오토클레이브에서 일산화탄소 분위기 (50 psi) 하에 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 목적 생성물 물질을 포함하는 피크를 주성분으로서 나타내었다. 용액을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (12 g SiO2 칼럼, 0-2% MeOH/DCM)에 의해 정제하여 표제 화합물 (500 mg, 94% 수율)을 갈색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 11.33 (s, 1H), 8.88 (s, 1H), 8.54 (s, 1H), 7.14 (br d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.88 (br d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.28 (s, 1H), 5.46 (s, 2H), 4.36 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.99 (s, 3H), 3.79 (s, 3H), 2.67 (s, 3H), 2.35 (s, 3H), 1.40 (t, J = 7.2 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C26H27N7O3), 486.2 (M+H)+ 관찰치.
단계 4
(L-4)의 합성
(L-3) (250 mg, 0.410 mmol)이 들은 플라스크에 MeOH 중 암모니아의 용액 (10 mL)을 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 16시간 동안 가열하였다. LCMS 분석은 목적 생성물 물질 및 상당한 출발 물질이 남아있음을 나타내었다. 용액을 진공 하에 농축시키고, 조 잔류물을 MeOH 중 암모니아의 용액 (10 mL) 중에 용해시켰다. 반응물을 80℃에서 16시간 동안 가열하였다. LCMS 분석은 목적 생성물 물질로의 증가된 전환을 나타내었다. 불균질 혼합물을 여과하여 표제 화합물 (L-4) (80 mg, 41% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.61 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 8.47 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 8.12 (br s, 1H), 7.35 (br s, 1H), 7.19 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.90 (d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.57 (s, 1H), 6.03 (br s, 1H), 5.57 (s, 2H), 4.31 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 3.71 (s, 3H), 2.60 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 1.18 (t, J = 7.1 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C25H26N8O2), 471.2 (M+H)+ 관찰치.
단계 5
7-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-3-메틸-1H-인다졸-5-카르복스아미드 (실시예 L01)의 합성
(L-4) (80 mg, 0.170 mmol)이 들은 플라스크에 TFA (2.0 mL)를 첨가하였다. 반응물을 15℃에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 상당한 출발 물질이 남아있음을 나타내었다. 반응물을 60℃에서 16시간 동안 가열하였다. LCMS 분석은 목적 생성물 물질을 포함하는 피크를 주성분으로서 나타내었다. 용액을 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 YMC-악투스 트리아트 C18 칼럼 (150x30, 7 μm 입자 크기)을 사용하여 정제하였다. 15-35% MeCN/H2O (0.05% NH4OH)로 유량 35 mL/분으로 용리시켜 표제 화합물 (실시예 L01) (24 mg, 41% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 14.65 (br s, 1H), 12.29 (br s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.46 (br s, 1H), 7.49 (br s, 1H), 6.82 (br s, 1H), 4.79 - 4.54 (m, 2H), 2.61 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 1.41 (t, J = 7.2 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C17H18N8O), 351.1 (M+H)+ 관찰치.
실시예 M01: 4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-[2-(3-플루오로아제티딘-1-일)에틸]-1H-인다졸-6-카르복스아미드 트리플루오로아세트산 염의 반응식 M에 따른 제조.
반응식 M:
Figure pct00143
단계 1
메틸 4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-(트리페닐메틸)-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (M-1)의 합성
자기 교반 막대가 구비된 250 mL 둥근 바닥 플라스크에 메틸 4-브로모-1-(트리페닐메틸)-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (Int-HG-15) (4.0 g, 8.00 mmol), 3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-01) (2.63 g, 8.85 mmol), Pd(OAc)2 (361 mg, 1.61 mmol), 카탁시움 A (1.15 g, 3.22 mmol), 피발산 (246 mg, 2.41 mmol), 및 K2CO3 (3.33 g, 24.1 mmol)을 첨가하였다. 플라스크를 진공 하에 배기시키고 N2 기체로 재충전하였다. 플라스크에 무수 톨루엔 (사용 전에 N2 로 폭기됨)을 채우고, 반응물을 N2 분위기 하에 18시간 동안 환류하였다. 용액을 실온으로 서서히 냉각되도록 하고, 아세토니트릴로 희석하고, 셀라이트의 패드 상에서 여과하였다. 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (SiO2 플러그, 30-100% EtOAc/Hept., 500 mL 분획)에 의해 정제하였다. 목적 생성물을 함유하는 합한 분획을 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 메틸 4-{5-(N-1 및 N-2 위치이성질체의 1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-(트리페닐메틸)-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (M-1) (4.65 g, 81% 수율, 혼합물)을 갈색 고체로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C44H39N7O3), 714.5 (M+H)+ 관찰치.
단계 2
메틸 4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (M-2)의 합성
메틸 4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-(트리페닐메틸)-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (M-1) (4.65 g, 6.51 mmol)이 들은 플라스크에 DCM (465 mL) 및 TFA (4.65 mL)를 첨가하였다. 반응물을 1시간 동안 교반한 다음, 포화 수성 NaHCO3으로 켄칭하고, 분리 깔때기에 DCM으로 옮겼다. 상을 분리하고, 수성 상을 1 부분 DCM으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조 (MgSO4)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (80 g SiO2, 이스코, 100% EtOAc에서 5% MeOH/EtOAc)에 의해 정제하여 표제 화합물 메틸 4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (M-2) (1.5 g, 49% 수율)을 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.42 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.85 (s, 1H), 6.79 - 6.64 (m, 4H), 6.22 (s, 1H), 5.31 (s, 2H), 4.33 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.69 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 1.37 (t, J = 7.2 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C25H25N7O3), 472.4 (M+H)+ 관찰치.
단계 3
메틸 4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-(프로프-2-엔-1-일)-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (M-3)의 합성
100 mL 둥근 바닥 플라스크에 메틸 4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (M-2) (870 mg, 1.85 mmol), K2CO3 (382 mg, 2.77 mmol), 및 무수 DMF (18.5 mL)을 첨가하였다. 용액에 알릴 브로마이드 (239 μL, 2.77 mmol)을 첨가하고, 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 완전한 소모 및 목적 생성물 물질을 포함하는 신규한 피크를 나타내었다. 용액을 H2O로 켄칭하고, 추가로 DCM으로 희석하였다. 상을 분리하고, 유기 상을 1 부분 포화 염수 수성으로 세척하고, 건조 (MgSO4)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 크로마토그래피 (OZ 칼럼)에 의해 정제하여 표제 화합물 메틸 4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-(프로프-2-엔-1-일)-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (M-3) (478 mg, 50% 수율)을 점성 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.41 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 8.23 - 8.20 (m, 1H), 7.84 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 6.78 - 6.73 (m, 2H), 6.73 - 6.68 (m, 2H), 6.16 (s, 1H), 6.08 - 5.95 (m, 1H), 5.29 (s, 2H), 5.25 - 5.18 (m, 1H), 5.14 - 5.04 (m, 3H), 4.33 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 3.83 (s, 3H), 3.71 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 1.39 (t, J = 7.2 Hz, 3H); 13C NMR (101 MHz, 클로로포름-d) δ = 166.30, 159.39, 153.19, 147.93, 147.91, 139.43, 133.95, 132.17, 128.27, 127.91, 127.24, 127.13, 125.56, 121.18, 119.81, 118.29, 114.48, 113.63, 106.69, 55.27, 52.44, 52.06, 48.36, 45.69, 15.94, 13.50; m/z (API+) - (C28H29N7O3), 512.3 (M+H)+ 관찰치.
단계 4
N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-(프로프-2-엔-1-일)-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (M-4)의 합성
둥근 바닥 플라스크에 메틸 4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-(프로프-2-엔-1-일)-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (M-3) (390 mg, 0.762 mmol), 1-(2,4-디메톡시페닐)메탄아민 (1.15 mL, 7.62 mmol), CaCl2 (84.6 mg, 0.762 mmol) 및 MeOH (7.6 mL)를 첨가하였다. 반응물을 58℃에서 밤새 가열한 다음, 반응물을 실온으로 서서히 냉각되도록 하였다. 용액을 EtOAc (200 mL)로 희석하고, 1 부분 묽은 NaHCO3으로 세척하고, 건조 (MgSO4)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (50 g SiO2, 바이오타지, 100% EtOAc)에 의해 정제하여 표제 화합물 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-(프로프-2-엔-1-일)-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (M-4) (258 mg, 52% 수율)을 검으로서 수득하였으며, 이는 시간 경과에 따라 응고하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.31 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.70 (s, 1H), 7.46 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 6.73 - 6.68 (m, 2H), 6.68 - 6.63 (m, 2H), 6.48 - 6.38 (m, 3H), 6.20 (s, 1H), 6.05 - 5.92 (m, 1H), 5.32 (s, 2H), 5.19 (dd, J = 0.8, 10.1 Hz, 1H), 5.06 (dd, J = 1.2, 17.2 Hz, 1H), 5.01 (br d, J = 5.5 Hz, 2H), 4.52 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 4.31 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 3.78 (s, 3H), 3.77 (s, 3H), 3.68 (s, 3H), 2.31 (s, 3H), 1.39 (t, J = 7.0 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C36H38N8O4), 647.5 (M+H)+ 관찰치.
단계 5
N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-(2-옥소에틸)-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (M-5)의 합성
N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-(프로프-2-엔-1-일)-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (M-4) (258 mg, 0.399 mmol)이 들은 플라스크에 NaIO4 (259 mg, 1.21 mmol), OsO4 (250 μL, t-BuOH 중 2.5 wt% 용액으로서, 0.02 mmol), THF (1.4 mL), 및 H2O (270 μL)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 용액을 H2O로 켄칭하고, 추가로 DCM으로 희석하였다. 상을 분리하고, 유기 추출물을 건조 (MgSO4)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (40g SiO2, 이스코, 5-10% MeOH/EtOAc)에 의해 정제하여 무색 검을 수득하였다. 이 물질을 60% MeCN/H2O (10 mL) 중에 용해시키고, 이어서 NaIO4 (47 mg, 0.220 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 반응물을 묽은 수성 NaS2O3로 켄칭하고, EtOAc로 추가로 희석하였다. 상을 분리하고, 유기 추출물을 건조 (MgSO4)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-(2-옥소에틸)-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (M-5) (136 mg, 52% 수율)을 황갈색 고체로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C35H38N8O6), 667.5 (M+H+H2O)+ 관찰치.
단계 6
N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-[2-(3-플루오로아제티딘-1-일)에틸]-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (M-6)의 합성
N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-(2-옥소에틸)-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (M-5) (25 mg, 0.039 mmol)이 들은 바이알에 무수 MeOH (1.0 mL) 및 3-플루오로아제티딘 (19.1 mg, 0.077 mmol)을 첨가하였다. 용액을 5분 동안 교반하고, 이어서 소듐 시아노보로히드라이드 NaBH3CN (4.84 mg, 0.077 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. LCMS 분석은 목적 생성물 물질을 포함하는 신규한 피크를 나타내었다. 반응물을 묽은 수성 NaHCO3 (0.5 mL)로 켄칭하고, 추가로 DCM으로 희석하였다. 상을 분리하고, 수성 상을 DCM의 1 부분으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조 (MgSO4)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-[2-(3-플루오로아제티딘-1-일)에틸]-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (M-6) (28 mg, >95% 수율)을 조 검으로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C38H42FN9O4), 708.7 (M+H)+ 관찰치.
단계 7
4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-[2-(3-플루오로아제티딘-1-일)에틸]-1H-인다졸-6-카르복스아미드 트리플루오로아세트산 염 (실시예 M01)의 합성
N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-[2-(3-플루오로아제티딘-1-일)에틸]-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (M-6) (27 mg, 0.038 mmol)이 들은 바이알에 HFIP (20 mL) 및 MsOH (12.4 μL, 0.191 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 몇 방울의 포화 수성 NaHCO3으로 켄칭하고, H2O (1.0 mL) 및 DCM (10 mL)으로 추가로 희석하였다. 상을 피펫으로 분리하고, 유기 추출물을 건조 (MgSO4)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-[2-(3-플루오로아제티딘-1-일)에틸]-1H-인다졸-6-카르복스아미드 트리플루오로아세트산 염 (실시예 M01) (8.1 mg, 47% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C21H24FN9O), 438.4 (M+H)+ 관찰치.
실시예 M02, M03 및 M04를 (실시예 M01) (반응식 M)의 합성을 위한 단계 1-7에 예시된 절차에 따라 단계 6 (반응식 M)을 위한 적절한 아민 중간체로 관련 기술분야의 통상의 기술자가 실현할 수 있는 예시된 절차에 대한 비-결정적 변화 또는 치환을 치환함으로써 합성하였다.
Figure pct00144
Figure pct00145
실시예 N01: [3-(6-카르바모일-1-메틸-1H-인다졸-4-일)-5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-1-일]메틸 디히드로겐 포스페이트의 반응식 N에 따른 제조.
반응식 N:
Figure pct00146
단계 1
메틸 4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (N-1)의 합성
메틸 4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (A-1) (540 mg, 1.11 mmol)이 들은 플라스크에 TFA (4.0 mL)를 첨가하였다. 반응물을 28℃에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모 및 목적 생성물 물질을 포함하는 신규한 피크를 나타내었다. 용액을 진공 하에 농축시키고, 이어서 동결건조시켜 표제 화합물 4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (N-1) (690mg)을 조 황색 고체로서 수득하였다. 물질을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.70 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 6.70 (s, 1H), 4.67 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 4.19 (s, 3H), 3.96 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 1.43 (t, J = 7.1 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C18H19N7O2), 366.2 (M+H)+ 관찰치.
단계 2
메틸 4-[1-{[(디-tert-부톡시포스포릴)옥시]메틸}-5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-3-일]-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (N-2)의 합성
4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (N-1) (690 mg, 1.10 mmol)이 들은 플라스크에 NMP (5.0 mL), 디-tert-부틸-(클로로메틸)-포스페이트 (586 mg, 2.27 mmol), Cs2CO3 (1.48 g, 4.53 mmol), 및 아이오딘화칼륨 (376 mg, 2.27 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 용액을 물 (25 mL)로 켄칭하고, EtOAc를 사용하여 분리 깔때기로 옮겼다. 상을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (3x25 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (50 mL)로 세척하고, 건조 (Na2SO4)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (SiO2, 0%-75%-100% 석유 에테르/EtOAc)에 의해 정제하여 상당한 잔류 NMP 용매를 포함하는 표제 화합물 메틸 4-[1-{[(디-tert-부톡시포스포릴)옥시]메틸}-5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-3-일]-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (N-2) (1000 mg)을 수득하였다. 이 물질을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 8.80 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.26 (s, 1H), 6.71 (s, 1H), 6.08 - 6.01 (m, 2H), 4.60 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.20 (s, 3H), 4.01 (s, 3H), 1.56 - 1.50 (m, 21H); m/z (ESI+) - (C27H38N7O6P), 588.2 (M+H)+ 관찰치.
단계 3
4-[1-{[(디-tert-부톡시포스포릴)옥시]메틸}-5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-3-일]-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복실산 (N-3)의 합성
메틸 4-[1-{[(디-tert-부톡시포스포릴)옥시]메틸}-5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-3-일]-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (N-2) (1000 mg, 1.10 mmol)이 들은 플라스크에 THF (10 mL), H2O (5.0 mL), 및 LiOH (71.8 mg, 1.71 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 용액을 진공 하에 농축시키고, 동결건조시켜 표제 화합물 4-[1-{[(디-tert-부톡시포스포릴)옥시]메틸}-5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-3-일]-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복실산 (N-3) (1100 mg)을 조 황색 고체로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C26H36N7O6P), 574.2 (M+H)+ 관찰치.
단계 4
디-tert-부틸 [3-(6-카르바모일-1-메틸-1H-인다졸-4-일)-5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-1-일]메틸 포스페이트 (N-4)의 합성
4-[1-{[(디-tert-부톡시포스포릴)옥시]메틸}-5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-3-일]-1-메틸-1H-인다졸-6-카르복실산 (N-3) (1100 mg, 1.10 mmol)이 들은 플라스크에 DMF (5.0 mL), HATU (508 mg, 1.33 mmol), NH4Cl (178 mg, 3.34 mmol), 및 DIPEA (863 mg, 6.67 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 목적 생성물 물질을 포함하는 신규한 피크를 나타내었다. 반응물을 물 (25 mL)로 켄칭하고, EtOAc를 사용하여 분리 깔때기로 옮겼다. 상을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (2x25 mL)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 건조 (Na2SO4)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 디-tert-부틸 [3-(6-카르바모일-1-메틸-1H-인다졸-4-일)-5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-1-일]메틸 포스페이트 (N-4) (550 mg, 86% 수율)을 황색 오일로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C26H37N8O5P), 461.1 (M+H-2xt-Bu)+ 관찰치.
단계 5
[3-(6-카르바모일-1-메틸-1H-인다졸-4-일)-5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-1-일]메틸 디히드로겐 포스페이트 (실시예 N01)의 합성
디-tert-부틸 [3-(6-카르바모일-1-메틸-1H-인다졸-4-일)-5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-1-일]메틸 포스페이트 (N-4) (550 mg, 0.961 mmol)이 들은 플라스크에 TFA (5.0 mL)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 목적 생성물 물질을 포함하는 신규한 피크를 나타내었다. 용액을 진공 하에 농축시키고, 조 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 YMC-악투스 트리아트 C18 칼럼 (150x30, 5 μm 입자 크기)을 사용하여 정제하였다. 10-25% MeCN/H2O (0.05% NH4OH)로 유량 35 mL/분으로 용리시켜 표제 화합물 [3-(6-카르바모일-1-메틸-1H-인다졸-4-일)-5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-1-일]메틸 디히드로겐 포스페이트 (실시예 N01) (61 mg, 13% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.60 (s, 1H), 8.38 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 7.53 (s, 1H), 7.23 (br s, 2H), 5.88 - 5.77 (m, 2H), 4.49 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.13 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 1.41 (t, J = 7.0 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C18H21N8O5P), 461.1 (M+H)+ 관찰치.
실시예 P01: {6-카르바모일-4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1H-인다졸-1-일}아세트산의 반응식 P에 따른 제조.
반응식 P:
Figure pct00147
단계 1
4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (P-1)의 합성
포화 NH3/MeOH (15 mL) 중 메틸 4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1H-인다졸-6-카르복실레이트 (M-2) (301.0 mg, 0.638 mmol)의 황색 용액을 85℃ (오일 조)에서 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 유의한 출발 물질이 남아있음을 나타내었다. 반응물을 진공 하에 농축시키고, 포화 NH3/MeOH (15 mL)를 첨가하였다. 반응물을 85℃에서 추가로 4시간 동안 가열하였다. 반응물을 이 단계에서 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (P-1) (350 mg, >100%)을 조 황색 검으로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C24H24N8O2), 456.9 (M+H)+ 관찰치.
단계 2
tert-부틸 (6-카르바모일-4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1H-인다졸-1-일)아세테이트 (P-2)의 합성
DMF (3.0 mL) 중 4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1H-인다졸-6-카르복스아미드 (P-1) (175 mg, 0.383 mmol) 및 Cs2CO3 (250 mg, 0.767 mmol)의 용액에 tert-부틸 브로모아세테이트 (82.3 mg, 0.422mmol)를 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 14시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 완전한 소모를 나타내었다. 반응물을 EtOAc (10 mL) 및 물 (3 mL)로 희석하였다. 상을 분리하고, 유기 추출물을 진공 하에 농축시켰다. 이 조 잔류물을 정제용-TLC (DCM:MeOH = 15:1)에 의해 2회 정제하여 표제 화합물 tert-부틸 (6-카르바모일-4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1H-인다졸-1-일)아세테이트 (P-2) (88 mg, 50% 수율)을 무색 검으로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ = 8.33 (s, 1H), 8.24 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.94 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 6.72 - 6.64 (m, 2H), 6.58 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.54 (s, 1H), 5.49 (s, 2H), 5.38 - 5.28 (m, 4H), 4.11 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 3.67 (s, 3H), 2.32 (s, 3H), 1.45 (s, 9H), 1.28 (t, J = 7.2 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C30H34N8O4), 571.0 (M+H)+ 관찰치.
단계 3
{6-카르바모일-4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1H-인다졸-1-일}아세트산 (실시예 P01)의 합성
TFA (2.0 mL) 중 tert-부틸 (6-카르바모일-4-{5-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1H-인다졸-1-일)아세테이트 (P-2) (88 mg, 0.15 mmol)의 황색 용액을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 완전한 소모를 나타내었다. 반응물을 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 DMF (2 mL) 중에 용해시키고, 정제용 HPLC에 의해 YMC-트리아트 C18 칼럼 (150x40, 7 μm 입자 크기)을 사용하여 정제하였다. 15-55% MeCN/H2O (0.1% TFA)로 유량 30 mL/분으로 용리시켜 표제 화합물 {6-카르바모일-4-[3-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1H-인다졸-1-일}아세트산 (실시예 P01) (22.87 mg, 29% 수율, 1 당량 mol TFA 염)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 14.62 (br s, 1H), 8.70 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.31 (br s, 1H), 7.60 (br s, 2H), 6.68 (br s, 1H), 5.32 (s, 2H), 4.68 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 2.25 (s, 3H), 1.45 (t, J = 7.2 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C18H18N8O3), 395.1 (M+H)+ 관찰치.
실시예 Q01: 4-[3-(1-에틸-4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드의 반응식 Q에 따른 제조.
반응식 Q:
Figure pct00148
단계 1
4-{3-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일}-6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 (Q-1)의 합성
바이알에 톨루엔 (1 mL) 중 3-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-12) (187 mg, 0.629 mmol), 4,6-디클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 (Int-HG-08) (191 mg, 0.943 mmol), Pd(OAc)2 (28.2 mg, 0.126 mmol), 카탁시움 A (90.2 mg, 0.252 mmol), 피발산 (19.3 mg, 0.189 mmol) 및 탄산칼륨 (261 mg, 1.89 mmol을 채우고, 실온에서 5분 동안 탈기한 다음, 120℃에서 밤새 가열하였다. 반응 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피 (12 g SiO2, 이스코, Hept. 중 EtOAc 0-100%)에 의해 정제하여 표제 화합물 4-{3-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일}-6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 (Q-1) (63 mg, 22% 수율)을 황색 오일로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C23H23ClN8O), 463.3 (M+H)+ 관찰치.
단계 2
메틸 4-{3-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실레이트 (Q-2)의 합성
MeOH (20 mL) 및 DMA (3 mL) 중 4-{3-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일}-6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 (Q-1) (63 mg, 0.099 mmol)의 용액에 실온에서 Pd(dppf)Cl2 (29.9 mg, 0.0408 mmol) 및 TEA (142 μL, 1.02 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 CO (100 psi) 하에 80℃에서 22시간 동안 가열하였다. LCMS 분석은 목적 생성물 물질을 포함하는 피크를 나타내었다. 반응물을 실온으로 서서히 냉각되도록 하고, 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과한 다음, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 조 물질을 분리 깔때기에 DCM으로 옮기고, 3 부분의 물로 세척하였다. 유기 상을 진공 하에 농축시키고, 조 생성물을 플래쉬 크로마토그래피 (40 g SiO2, 이스코, 헵트 중 0-100% EtOAc)에 의해 정제하여 표제 화합물을 불순한 혼합물로서 수득하였다. 이 물질을 플래쉬 크로마토그래피 (12 g SiO2 , 이스코, Hept. 중 0-100% EtOAc)를 통해 다시 정제하여 표제 화합물 4-{3-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일}-1-메틸-1H-피라졸로 [4,3-c]피리딘-6-카르복실레이트 (Q-2) (34.1 mg, 52% 수율)를 회백색 고체로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C25H26N8O3), 487.6 (M+H)+ 관찰치.
단계 3
4-{3-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실산 (Q-3)의 합성
MeOH (4 mL) 중 4-{3-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실레이트 (Q-2) (34.1 mg, 0.0701 mmol)의 용액에 물 (1 mL) 중 용액으로서의 LiOH·H2O (10.1 mg, 0.421 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 상당한 출발 물질이 남아있음을 나타내었다. 추가 분취량의 LiOH·H2O (9.99 mg, 0.417 mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 1N HCl 수성의 첨가에 의해~pH 6으로 중화시켰다. 용액을 진공 하에 농축시키고, 추가로 4 부분 PhMe와 공비혼합하여 잔류 물을 제거하여 표제 화합물 4-{3-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실산 (Q-3)을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C24H24N8O3), 473.4 (M+H)+ 관찰치.
단계 4
4-{3-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일}-N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Q-4)의 합성
DMF (1 mL) 중 4-{3-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실산 (Q-3) (33 mg, 0.070 mmol)의 용액에 HATU (37.2 mg, 0.0978 mmol), DIPEA (31.1 μL, 0.175 mmol) 및 2,4-디메톡시벤질아민 (21.0 μL, 0.140 mmol)을 DMF 중 용액으로서 첨가하였다. 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물에 붓고, 3 부분 DCM으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 3 부분의 물로 세척한 다음, 진공 하에 농축시켰다. 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피 (4 g SiO2, 이스코, Hept. 중 EtOAc 0-100%)에 의해 정제하여 표제 화합물 4-{3-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일}-N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Q-4) (60.4 mg)을 황색 오일로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C33H35N9O4), 622.5 (M+H)+ 관찰치.
단계 5
N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-4-[3-(1-에틸-4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Q-5)의 합성
EtOAc (8 mL) 중 용액으로서의 4-{3-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일}-N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Q-4) (43 mg, 0.069 mmol), Pd-C 10wt% (15 mg)의 현탁액 및 MeOH (2 mL)을 수소 기체 (75 psi) 하에 실온에서 2.5시간 동안 수소화시켰다. 반응 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 조 물질을 플래쉬 크로마토그래피 (4 g SiO2, 이스코, Hept 중 0-100% EtOAc)에 의해 정제하여 표제 화합물 N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-4-[3-(1-에틸-4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Q-5) (15 mg, 41% 수율, 3 단계)을 백색 고체로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C26H29N9O4), 532.3 (M+H)+ 관찰치.
단계 6
4-[3-(1-에틸-4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 Q01)의 합성
HFIP (3 mL) 중 N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-4-[3-(1-에틸-4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Q-5) (15 mg, 0.028 mmol)의 용액에 MsOH (9.16 μL, 0.141 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용액을 진공 하에 농축시키고, 조 잔류물을 크로마토그래피에 의해 정제하여 표제 화합물 4-[3-(1-에틸-4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 Q01) (10 mg, 93% 수율)을 고체로서 수득하였다.
1H NMR (600 MHz, DMSO-d6) δ = 8.76 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 8.53 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 8.08 (br s, 1H), 8.04 (br s, 1H), 7.97 (br s, 1H), 4.47 (s, 3H), 4.44 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 4.23 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 1.34 (t, J = 7.2 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C17H19N9O2), 382.5 (M+H)+ 관찰치.
실시예 R01: 4-[5-(아미노메틸)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드의 반응식 R에 따른 제조.
반응식 R:
Figure pct00149
단계 1
메틸-4-(6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-5-카르복실레이트 (R-1)의 합성
이 단계를 이중으로 수행하고, 배치를 최종 정제 전에 합하였다. 메틸 2-브로모-3-(6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-3-옥소프로파노에이트 (Int-HG-16) (238 mg, 0.340 mmol) 및 1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-카르보티오아미드 (Int-TG-13) (44.7 mg, 0.264 mmol)이 들은 플라스크에 DMA (4 mL)를 첨가하였다. 반응물을 90℃에서 3시간 동안 가열하였다. 반응 용액을 진공 하에 농축시켰다. 조 반응 혼합물을 정제용-HPLC에 의해 페노메넥스 C18 칼럼 (100x30 mm, 5 μm 입자 크기)을 사용하여 정제하였다. 2-90% MeCN/H2O (0.1% TFA)로 유량 20 mL/분으로 용리시켜 표제 화합물 메틸-4-(6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-5-카르복실레이트 (R-1) (237 mg, 58% 수율)을 담황색 발포체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.40 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 6.87 (s, 1H), 4.59 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 4.11 (s, 3H), 3.81 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 1.37 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
단계 2
[4-(6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-5-일]메탄올 (R-2)의 합성
바이알에 메틸-4-(6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-5-카르복실레이트 (R-1) (165 mg, 0.379 mmol), THF (10 mL), 및 수소화붕소리튬 (16.5 mg, 0.759 mmol)을 채웠다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. LCMS 분석은 유의한 출발 물질이 남아있음을 나타내었다. 반응물을 0℃로 냉각시키고, 플라스크에 추가 분취량의 수소화붕소리튬 (33 mg, 1.52 mmol)을 채웠다. 플라스크를 빙조로부터 제거하고, 실온으로 서서히 가온되도록 하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 용액을 포화 수성 NH4Cl (2 mL)으로 켄칭하고, H2O (10 mL)로 희석하고, 분리 깔때기에 DCM으로 옮겼다. 상을 분리하고, 수성 상을 3 부분 DCM에 이어서 2 부분 EtOAc으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 진공 하에 농축시키고, MeOH를 첨가하여 고체를 침전시키고, 이를 여과에 의해 수집하여 표제 화합물 [4-(6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-5-일]메탄올 (R-2) (108 mg, 70% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.64 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 6.70 (s, 1H), 6.24 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 5.23 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 4.66 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 4.09 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 1.43 (t, J = 7.0 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C17H17ClN6OS), 389.3 (M+H)+ 관찰치.
단계 3
4-(6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-5-카르브알데히드 (R-3)의 합성
DCM (10 mL) 중 [4-(6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-5-일]메탄올 (R-2) (117 mg, 0.301 mmol)의 현탁액에 데스-마르틴 퍼아이오디난 (255 mg, 0.602 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 용액을 DCM (50 mL)으로 희석하고, 포화 NaHCO3에 붓고, 분리 깔때기로 옮겼다. 상을 분리하고, 수성 상을 3 부분 DCM으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (12 g SiO2, 이스코, Hept. 중 EtOAc 0-100%)에 의해 정제하여 표제 화합물 4-(6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-5-카르브알데히드 (R-3) (125 mg, >95% 수율)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 10.81 (s, 1H), 8.63 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 8.12 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 6.96 (s, 1H), 4.69 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.13 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 1.43 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
단계 4
tert-부틸 {[4-(6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-5-일]메틸}[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바메이트 (R-4)의 합성
DCE 중 4-(6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-5-카르브알데히드 (R-3) (80 mg, 0.21 mmol)의 용액에 2,4-디메톡시벤질아민 (77.7 μL, 0.517 mmol) 및 AcOH (35.5 μL, 0.620 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 25분 동안 교반하였으며, 이 시점에 반응 혼합물의 색이 담갈색으로 변화하였다. 플라스크를 가열로부터 제거하고, 밤새 교반하면서 실온으로 서서히 냉각되도록 하였다. 용액을 진공 하에 농축시키고, 조 혼합물을 MeOH (5 mL) 중에 용해시켰다. 용액을 빙수조에서 0℃까지 냉각시키고, 수소화붕소나트륨 (23.5 mg, 0.620 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 5분 동안 교반한 다음, 빙조를 제거하여 반응물을 실온으로 서서히 가온되도록 하고, 이것을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 침전이 발생하였고, 고체를 여과에 의해 수집하였다. 고체를 MeCN (5 mL) 중에 현탁시키고, 이어서 디-tert-부틸 디카르보네이트 (113 mg, 0.517 mmol) 및 트리에틸아민 (86.5 μL, 0.620 mmol)을 첨가하였다. 현탁액을 실온에서 10분 동안 교반하고, 이어서 DCM (5 mL)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 추가의 20분 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 소모되었음을 나타내었다. 용액을 진공 하에 농축시키고, 조 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (12 g SiO2, 이스코, 헵트 중 0-100% EtOAc)에 의해 정제하여 표제 화합물 tert-부틸 {[4-(6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-5-일]메틸}[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바메이트 (R-4) (112 mg, >95%)을 광 오렌지색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.51 (s, 1H), 7.89 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 6.87 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.67 (br d, J = 4.7 Hz, 1H), 6.36 - 6.14 (m, 2H), 5.18 (br s, 2H), 4.61 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 4.33 (br d, J = 10.5 Hz, 2H), 4.09 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 3.53 - 3.39 (m, 3H), 2.22 (s, 3H), 1.60 - 1.29 (m, 12H).
단계 5
메틸 4-[5-({(tert-부톡시카르보닐)[(2,4-디메톡시페닐)메틸]아미노}메틸)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실레이트 (R-5)의 합성
MeOH (20 mL) 및 DMA (5 mL) 중 tert-부틸 {[4-(6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-5-일]메틸}[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바메이트 (R-4) (122 mg, 0.191 mmol)의 용액에 Pd(dppf)Cl2 (42.0 mg, 0.0573 mmol) 및 트리에틸아민 (200 μL, 1.43 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 CO 기체 (100 psi) 하에 80℃에서 22시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 DCM 중에 재용해시키고, 분리 깔때기로 옮기고, 3 부분 물로 세척하였다. 유기 상을 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (40 g SiO2, 이스코, Hept. 중 EtOAc 0-100%)에 의해 정제하여 목적 생성물을 상당한 불순물이 존재하는 혼합물로서 수득하였다. 단리된 물질을 플래쉬 크로마토그래피 (40 g SiO2 , 이스코, DCM 중 0-10% MeOH)에 의해 정제하여 표제 화합물 메틸 4-[5-({(tert-부톡시카르보닐)[(2,4-디메톡시페닐)메틸]아미노}메틸)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실레이트 (R-5) (92 mg, 72% 수율)를 담갈색 오일로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C33H39N7O6S), 662.9 (M+H)+ 관찰치.
단계 6
4-[5-({(tert-부톡시카르보닐)[(2,4-디메톡시페닐)메틸]아미노}메틸)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실산 (R-6)의 합성
MeOH (5 mL) 중 메틸 4-[5-({(tert-부톡시카르보닐)[(2,4-디메톡시페닐)메틸]아미노}메틸)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실레이트 (R-5) (92.0 mg, 0.14 mmol)에 물 중 용액으로서의 LiOH·H2O (9.99 mg, 0.417 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이 단계에서 추가 분취량의 LiOH·H2O (9.99 mg, 0.417 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 용액을 수성 1N HCl을 사용하여 ~pH 6으로 중화시켰다. 용액을 진공 하에 농축시키고, 추가로 4 부분 PhMe와 공비혼합하여 잔류 물을 제거하여 표제 화합물 4-[5-({(tert-부톡시카르보닐)[(2,4-디메톡시페닐)메틸]아미노}메틸)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실산 (R-6)을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (APCI+) - (C32H37N7O6S), 648.5 (M+H)+ 관찰치.
단계 7
tert-부틸 [(2,4-디메톡시페닐)메틸]{[4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-5-일]메틸}카르바메이트 (R-7)의 합성
DMF 중 4-[5-({(tert-부톡시카르보닐)[(2,4-디메톡시페닐)메틸]아미노}메틸)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실산 (R-6) (90 mg, 0.14 mmol)의 용액에 HATU (74.0 mg, 0.195 mmol), DIPEA (61.8 μL, 0.347 mmol) 및 2,4-디메톡시벤질아민 (41.7 μL, 0.278 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 4.5시간 동안 교반하였다. 용액을 H2O에 붓고, 분리 깔때기로 옮기고, 3 부분 DCM으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 3 부분 H2O로 세척한 다음, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (40 g SiO2, 이스코, DCM 중 0-10% MeOH)에 의해 정제하여 표제 화합물 tert-부틸 [(2,4-디메톡시페닐)메틸]{[4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-5-일]메틸}카르바메이트 (R-7)을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C41H48N8O7S), 797.6 (M+H)+ 관찰치.
단계 8
4-[5-(아미노메틸)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 R01)의 합성
HFIP (3 mL) 중 tert-부틸 [(2,4-디메톡시페닐)메틸]{[4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-5-일]메틸}카르바메이트 (R-7) (150 mg, 0.188 mmol)의 용액에 MsOH (611 μL, 9.41 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 이 단계에서, MsOH의 첨가 분취액 (611μL, 9.41 mmol)을 첨가하고, LCMS 분석으로 반응이 반응 진행이 멈추었음을 나타낼 때까지 반응물을 50℃에서 가열하였다. 이어서, 용액을 진공 하에 농축시키고, 분리 깔때기에 DCM으로 옮기고, 포화 수성 Na2CO3으로 ~pH 9로 희석하였다. 상을 분리하고, LCMS 분석은 모든 목적 생성물이 수성 상에 존재함을 나타내었다. 수성 상을 밤새 동결건조시켜 백색 분말을 수득하였다. 유기 상은 LCMS에 의해 결정된 바와 같이 1개의 나머지 DMB 보호기를 갖는 생성물을 함유하였다. 따라서, 유기 상을 건조 (Na2SO4)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 PhMe (~3 mL)에 녹이고, 진공 하에 농축시켜 잔류수를 제거하였다. 조 잔류물을 DCM (0.7 mL) 중에 용해시키고, 이어서 TFA (0.7 mL)를 첨가하였다. 반응물을 LCMS에 의해 모니터링 시 완결될 때까지 35℃에서 가열하였다. 용액을 진공 하에 농축시키고, 합한 조 생성물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물 4-[5-(아미노메틸)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 R01) (10 mg, 10% 수율, 3 단계에 걸침)을 TFA 염으로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C18H20N8OS), 397.4 (M+H)+ 관찰치;
1H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ = 8.73 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 6.65 (s, 1H), 4.75 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 4.58 (br s, 2H), 4.21 (s, 3H), 2.31 (s, 3H), 1.51 (t, J = 7.2 Hz, 3H)
실시예 S01: 4-[5-(아미노메틸)-2-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드의 반응식 S에 따른 제조.
반응식 S:
Figure pct00150
단계 1
메틸 4-(6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-5-카르복실레이트 (S-1)의 합성
무수 아세토니트릴 2 mL 중 메틸-4-(6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-5-카르복실레이트 (R-1) (358.0 mg, 0.859 mmol)의 용액에 실온에서 셀렉트플루오로 (26.2 mg, 0.0732 mmol)를 첨가하였다. 탁한 반응물은 5분 후에 투명해졌고, 45℃에서 20시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하고, 조 생성물을 이스코 (실리카, 40 g, 헵탄 중 0-100% EtOAc)에 의해 정제하여 메틸 4-(6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-5-카르복실레이트 (S-1) (225 mg, 60% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C17H16ClFN6OS), 435.3 (M+H)+ 관찰치.
단계 2
[4-(6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-5-일]메탄올 (S-2)의 합성
THF (5 mL) 중 메틸 4-(6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-5-카르복실레이트 (S-1) (285 mg, 0.655 mmol)의 용액에 수소화붕소리튬 (28.6 mg, 1.31 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 40 - 45℃에서 7시간 동안 교반되도록 하였다. 고체를 여과에 의해 수집하고, EtOAc로 세척하고, 진공 하에 밤새 건조시켜 [4-(6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-5-일]메탄올 (S-2) (271 mg, >95% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.65 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 6.30 (t, J = 5.3 Hz, 1H), 5.27 (d, J = 5.2 Hz, 2H), 4.66 (p, J = 8.3, 7.7 Hz, 2H), 4.10 (s, 3H), 2.25 (s, 3H), 1.43 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
단계 3
메틸 4-[2-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-(히드록시메틸)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실레이트 (S-3)의 합성
20 mL MeOH 및 2 mL DMA 중 [4-(6-클로로-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-5-일]메탄올 (S-2) (120 mg, 0.295 mmol)의 현탁액에 실온에서 Pd(dppf)Cl2 (42.0 mg, 0.0573 mmol) 및 TEA (200 μL, 1.43 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 CO (100 psi) 하에 80℃에서 5일 동안 가열하였다. 반응물을 35℃로 냉각되도록 하고, 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 이스코 (실리카 12 g, CH2Cl2 중 0-10% MeOH)에 의해 정제하여 메틸 4-[2-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-(히드록시메틸)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실레이트 (S-3) (81 mg, 64% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.73 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 8.46 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 6.32 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 5.33 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 4.69 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 4.23 (s, 3H), 3.99 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 1.44 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
단계 4
N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-[2-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-(히드록시메틸)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (S-4)의 합성
10 mL THF 중 메틸 4-[2-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-(히드록시메틸)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실레이트 (S-3) (75 mg, 0.17 mmol)의 현탁액에 1.5 mL 물 중에 용해시킨 수산화리튬 1수화물 (22.9 mg, 0.958 mmol)을 첨가하고, 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 1N HCl을 첨가하여 pH 5로 중화시켰다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 톨루엔 x 3으로 처리하여 미량의 물을 제거하였다. 조 산 4-[2-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-(히드록시메틸)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실산을 진공 오븐에서 밤새 건조시키고, 직접 후속 단계에 사용하였다. DMF (8 mL) 중 4-[2-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-(히드록시메틸)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실산 (73.0 mg, 0.18 mmol)의 용액에 HATU (133 mg, 0.351 mmol), N-에틸디이소프로필아민 (93.6 uL, 0.526 mmol) 및 2,4-디메톡시벤질-아민 (39.5 μL, 0.263 mmol)을 실온에서 첨가하고, 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 조 생성물을 이스코 (실리카, 12 g, 헵탄 중 0-100% EtOAc)에 의해 정제하여 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-[2-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-(히드록시메틸)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (S-4) (75 mg, 76% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C27H28FN7O4S), 566.3 (M+H)+ 관찰치.
단계 5
N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-[2-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-(히드록시메틸)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (S-5)의 합성
디클로로메탄 (10 mL) 중 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-[2-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-(히드록시메틸)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (S-4) (78 mg, 0.14 mmol)의 현탁액에 실온에서 데스-마르틴 퍼아이오디난 (119 mg, 0.276 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 디클로로메탄으로 희석하고, 포화 NaHCO3에 붓고, 디클로로메탄 x 3, EtOAc x 2로 추출하고, 용액을 진공 하에 농축시키고, 조 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-[2-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-(히드록시메틸)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (S-5)를 직접 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C27H26FN7O4S), 564.3 (M+H)+ 관찰치.
단계 6
tert-부틸 [(2,4-디메톡시페닐)메틸]{[4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-5-일]메틸}카르바메이트 (S-6)의 합성
1,2-디클로로에탄 (5 mL) 중 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-[2-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-(히드록시메틸)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (S-5) (72.0 mg, 0.13 mmol)의 용액에 실온에서 2,4-디메톡시벤질아민 (38.4 uL, 0.255 mmol) 및 아세트산 (7.31 μL, 0.128 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 55℃에서 20분 동안 가열한 다음, 밤새 교반하면서 실온으로 서서히 냉각시켰다. 용액을 진공 하에 농축시키고, 조 혼합물을 MeOH (5 mL) 중에 용해시켰다. 용액을 빙수조에서 0℃로 냉각시키고, 수소화붕소나트륨 (9.67 mg, 0.255 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 5분 동안 교반한 다음, 빙조를 제거하여 반응물을 실온으로 서서히 가온되도록 하고, 이것을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 모든 휘발물을 진공 하에 제거하였다. 조 고체를 DCM/THF (1:1, 6 mL) 중에 현탁시키고, 이어서 디-tert-부틸 디카르보네이트 (83.6 mg, 0.383 mmol) 및 N-에틸디이소프로필아민 (0.0668 mL, 0.383 mmol)을 첨가하였다. 현탁액을 실온에서 10분 동안 교반하고, 이어서 디클로로메탄 (5 mL)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 추가로 1시간 동안 교반하였다. 용액을 진공 하에 농축시키고, 조 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (12 g SiO2, 이스코, 헵탄 중 0-100% EtOAc)에 의해 정제하여 표제 화합물 tert-부틸 [(2,4-디메톡시페닐)메틸]{[4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-5-일]메틸}카르바메이트 (S-6) (45 mg, 45% 수율, 3 단계)을 수득하였다. m/z (ESI+) - (C41H47FN8O7S), 815.6 (M+H)+ 관찰치.
단계 7
4-[5-(아미노메틸)-2-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드, 트리플루오로아세트산 염 (실시예 S01)의 합성
tert-b=부틸 [(2,4-디메톡시페닐)메틸]{[4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-5-일]메틸}카르바메이트 (S-6) (45 mg, 0.055 mmol)을 2개의 바이알로 동등하게 분할하였다. 제1 바이알 내의 물질을 TFA (1 mL)로 처리하였다. 반응물을 55℃에서 5일 동안 가열하였다. 제2 바이알 내의 물질을 TFA (1 mL) 및 메르캅탄 C12 (112 mg, 0.552 mmol, 0.132 mL)로 처리하였다. 반응물을 55℃에서 5일 동안 가열하였다. 2개의 조 반응 혼합물을 합하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물 4-[3-(1-에틸-4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 S01) (10 mg, 83% 수율)을 TFA 염으로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C18H19FN8OS), 415.4 (M+H)+ 관찰치.
실시예 T01: 4-[5-(아미노메틸)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-옥사졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드의 반응식 T에 따른 제조.
반응식 T
Figure pct00151
단계 1
메틸 4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-옥사졸-5-카르복실레이트 (T-1)의 합성
바이알에 메틸 2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-옥사졸-5-카르복실레이트 (int-TG-14) (87.7 mg, 0.216 mmol), 톨루엔 (10 mL) 중 4-브로모-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Int-HG-17) (50.8 mg, 0.216 mmol), Pd(OAc)2 (9.69 mg, 0.0432 mmol), 카탁시움 A (31.0 mg, 0.0864 mmol), 칼륨 피발레이트 (45.4 mg, 0.324 mmol) 및 피발산 (11.0 mg, 0.108 mmol을 채우고, 실온에서 5분 동안 탈기한 다음, 환류 하에 밤새 가열하였다. 반응 혼합물을 동일한 규모의 이전 실행과 합하고, 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 혼합물을 이스코 (실리카, 24 g, 헵탄 중 0-100% EtOAc)에 의해 정제하여 표제 화합물 메틸 4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸-카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-옥사졸-5-카르복실레이트 (T-1) (68.2 mg, 28% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.04 (s, 1H), 8.64 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 8.47 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 7.23 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 6.92 (s, 1H), 6.60 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 6.54 - 6.46 (m, 1H), 4.69 (d, J = 7.2 Hz, 2H), 4.52 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 4.23 (s, 3H), 3.82 (s, 3H), 3.78 (d, J = 3.8 Hz, 3H), 3.75 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 1.46 (t, J = 7.2 Hz, 3H). m/z (ESI+) - (C28H29N7O6), 560.4 (M+H)+ 관찰치.
단계 2
N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-[2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-(히드록시메틸)-1,3-옥사졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (T-2)의 합성
플라스크에 10 mL THF 중 메틸 4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-옥사졸-5-카르복실레이트 (T-1) (68 mg, 0.11 mmol) 및 수소화붕소리튬 (5.98 mg, 0.274 mmol)을 채웠다. 반응물을 0℃ 내지 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 진공 하에 농축시키고, 조 혼합물을 이스코 (실리카, 12 g, 헵탄 중 0-100% EtOAc)에 의해 정제하여 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-[2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-(히드록시메틸)-1,3-옥사졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (T-2) (77.4 mg)을 백색 고체로서 수득하였으며, 이는 불순물을 함유하였다. m/z (ESI+) - (C27H29N7O5), 532.3 (M+H)+ 관찰치.
단계 3
N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-[2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-포르밀-1,3-옥사졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (T-3)의 합성
디클로로메탄 (10 mL) 중 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-[2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-(히드록시메틸)-1,3-옥사졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드(T-2) (77.4 mg, 0.146 mmol)의 현탁액에 데스-마르틴 퍼아이오디난 (126 mg, 0.291 mmol)을 실온에서 첨가하고, 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 20 mL 디클로로메탄으로 희석하고, 포화 NaHCO3 (수성)으로 세척하고, 진공 하에 농축시켜 조 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-[2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-포르밀-1,3-옥사졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (T-3)을 수득하였으며, 이를 직접 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C27H27N7O5), 530.3 (M+H)+ 관찰치.
단계 4
tert-부틸 [(2,4-디메톡시페닐)메틸]{[4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-옥사졸-5-일]메틸}카르바메이트 (T-4)의 합성
1,2-디클로로에탄 (8 mL) 중 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-[2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-포르밀-1,3-옥사졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (T-3) (43 mg, 0.81 mmol)의 용액에 실온에서 2,4-디메톡시벤질아민 (20.4 mg, 0.122 mmol, 18.3 μL) 및 아세트산 (4.88 mg, 0.0812 mmol, 4.64 μL)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, 56℃에서 밤새 가열하였다. 용액을 진공 하에 농축시키고, 조 혼합물을 MeOH (5 mL) 중에 용해시켰다. 용액을 빙수조에서 0℃에서 냉각시키고, 수소화붕소나트륨 (23.5 mg, 0.62 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 5분 동안 교반한 다음, 빙조를 제거하여 반응물을 실온으로 서서히 가온되도록 하고, 이것을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 모든 휘발물을 진공 하에 제거하였다. 조 고체를 CH2Cl2-MeCN (5 mL) 중에 현탁시키고, 이어서 디-tert-부틸 디카르보네이트 (53.2 mg, 0.244 mmol) 및 N-에틸디이소프로필아민 (0.042 mL, 0.244 mmol)을 첨가하였다. 현탁액을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용액을 진공 하에 농축시키고, 조 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 이스코 (실리카, 12 g, 헵트 중 0-100% EtOAc)에 의해 정제하여 표제 화합물 tert-부틸 [(2,4-디메톡시페닐)메틸]{[4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]- 카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-옥사졸-5-일]메틸}카르바메이트 (T-4) (25.0 mg, 29% 수율, 5 단계)을 황색 고체로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C41H48N8O8), 781.7 (M+H)+ 관찰치.
단계 5
4-[5-(아미노메틸)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-옥사졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 T01)
HFIP (0.1 mL) 중 tert-부틸 [(2,4-디메톡시페닐)메틸]{[4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-옥사졸-5-일]메틸}카르바메이트 (T-4) (25 mg, 0.032 mmol)의 용액에 MsOH (0.4 mL) 및 TFA (1.5 mL)를 첨가하였다. 반응물을 50℃에서 4시간 동안 교반하였다. 이어서, 용액을 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물 4-[5-(아미노메틸)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-옥사졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 T01) (3.1 mg, 26% 수율)을 TFA 염으로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C18H20N8O2), 381.3 (M+H)+ 관찰치;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.77 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 8.58 - 8.22 (m, 3H), 8.09 (s, 1H), 8.01 (br s, 1H), 6.82 (s, 1H), 4.79 (s, 2H), 4.72 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.20 (s, 3H), 2.28 (s, 3H), 1.48 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
실시예 U01: 4-[5-(아미노메틸)-2-(1-에틸-4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-옥사졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드의 반응식 U에 따른 제조
반응식 U
Figure pct00152
단계 1
에틸 2-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-1,3-옥사졸-5-카르복실레이트 (U-1)의 합성
바이알에 톨루엔 (1 mL) 중 에틸 2-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1,3-옥사졸-5-카르복실레이트 (Int-TG-15) (128 mg, 0.360 mmol), 카탁시움-A-Pd-G3 (105 mg, 0.144 mmol), 4-브로모-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Int-HG-17) (146 mg, 0.360 mmol), 칼륨 피발레이트 (75.8 mg, 0.540 mmol) 및 피발산 (18.4 mg, 0.180 mmol을 채우고, 실온에서 5분 동안 탈기한 다음, 115℃에서 밤새 가열하였다. 반응 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 조 생성물을 이스코 (실리카, 40 g, 헵탄 중 0-100% EtOAc)에 의해 정제하여 표제 에틸 2-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-1,3-옥사졸-5-카르복실레이트 (U-1) 45 mg (13% 수율)을 담갈색 오일로서 수득하였다. 113 mg의 덜 순수한 생성물 에틸 2-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1,3-옥사졸-5-카르복실레이트의 또 다른 배치를 또한 회수하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1.08 - 1.15 (m, 3H), 1.42 (t, J = 7.22 Hz, 3H), 2.14 (s, 3H), 3.73 - 3.77 (m, 4H), 3.82 (s, 3H), 4.16 - 4.27 (m, 6H) 4.51 (d, J = 5.85 Hz, 2 H), 4.59 (d, J = 7.02 Hz, 2H), 5.07 (s, 2H), 6.50 (dd, J = 8.39, 2.54 Hz, 1H), 6.61 (d, J = 2.34 Hz, 1H) 7.23 (d, J=8.59 Hz, 1H), 7.30 - 7.42 (m, 3H), 7.50 (dd, J = 7.61, 1.37 Hz, 2H), 8.47 (s, 1H), 8.59 (d, J = 0.78 Hz, 1H), 9.03 (t, J = 5.88 Hz, 1H).
단계 2
4-{2-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-5-(히드록시메틸)-1,3-옥사졸-4-일}-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (U-2)의 합성
바이알에 -45℃에서 1.8 mL 무수 THF 중 2-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-1,3-옥사졸-5-카르복실레이트 (U-1) (13.8 mg, 0.0203 mmol)을 채웠다. 이어서, 수소화알루미늄리튬 (1.54 mg, 0.0406 mmol, 40.6 uL, 1.0 M)을 -45℃에서 도입하고, 반응물의 색이 즉시 담황색에서 청색으로 변화된 다음, 서서히 다시 황색으로 변화되었다. 반응물을 -45℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 물을 첨가하여 켄칭하였다. 반응 혼합물을 디클로로메탄으로 희석하고, 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 상기 반응을 13.5 mg 내지 19 mg의 규모로 총 5회 반복하였다. 각각의 실행으로부터의 조 생성물을 합하고, 이스코 (실리카 24 g, 헵탄 중 0-100% EtOAc)에 의해 정제하여 4-{2-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-5-(히드록시메틸)-1,3-옥사졸-4-일}-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (U-2) 및 4-{2-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-5-포르밀-1,3-옥사졸-4-일}-N-[(2,4-디메톡시-페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (U-3)의 1:1 비율 혼합물 58.9 mg (73% 수율)을 담황색 고체로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C34H35N7O6), 638.5 (M+H)+ 관찰치 및 m/z (ESI+) - (C34H33N7O6), 636.5 (M+H)+ 관찰치.
단계 3
4-{2-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-5-포르밀-1,3-옥사졸-4-일}-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (U-3)의 합성
디클로로메탄 (3 mL) 중 4-{2-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-5-(히드록시메틸)-1,3-옥사졸-4-일}-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (U-2) 및 4-{2-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-5-포르밀-1,3-옥사졸-4-일}-N-[(2,4-디메톡시-페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (U-3) (58.0 mg, 0.091 mmol)의 혼합물의 현탁액에 실온에서 데스-마르틴 퍼아이오디난 (126 mg, 0.291 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 20 mL 디클로로메탄으로 희석하고, 포화 NaHCO3 (수성)으로 세척하고, 진공 하에 농축시켜 조 4-{2-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-5-포르밀-1,3-옥사졸-4-일}-N-[(2,4-디메톡시-페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (U-3) 58 mg을 수득하였으며, 이를 직접 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C34H33N7O6), 636.4 (M+H)+ 관찰치.
단계 4
tert-부틸 ({2-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-1,3-옥사졸-5-일}메틸)[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바메이트 (U-4)의 합성
3 mL 1,2-디클로로에탄 중 4-{2-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-5-포르밀-1,3-옥사졸-4-일}-N-[(2,4-디메톡시-페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (U-3) (58 mg, 0.091 mmol)의 현탁액에 실온에서 2,4-디메톡시벤질아민 (22.9 mg, 0.137 mmol, 20.6 μL) 및 아세트산 (5.48 mg, 0.0912 mmol, 5.22 μL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 56℃에서 90분 동안 교반하였다. 1,2-디클로로에탄을 진공 하에 제거하고, 조 물질을 0℃로 냉각시키고, 5 mL 메탄올에 이어서 수소화붕소나트륨 (8.63 mg, 0.228 mmol)을 첨가하고, 반응물을 0℃에서 5분 동안 교반한 다음, 실온에서 30분 동안 교반하였다. 용매를 제거하고, 조 생성물을 디클로로메탄 중에 재용해시키고, Boc2O (59.7 mg, 0.274 mmol), N-에틸디이소프로필아민 (35.4 mg, 0.274 mmol, 47.7 uL)을 실온에서 도입하고, 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 용매를 제거하고, 조 물질을 이스코 (실리카, 12 g, 헵탄 중 0-100% EtOAc)에 의해 정제하여 표제 화합물 tert-부틸 ({2-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-1,3-옥사졸-5-일}메틸)[(2,4-디메톡시-페닐)메틸]카르바메이트 (U-4) (81 mg)을 수득하였으며, 이는 불순물을 함유하였다. m/z (ESI+) - (C48H54N8O9), 887.8 (M+H)+ 관찰치.
단계 5
tert-부틸 [(2,4-디메톡시페닐)메틸]{[4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-옥사졸-5-일]메틸}카르바메이트 (U-5)의 합성
8 mL EtOAc 및 2 mL 메탄올 중 tert-부틸 ({2-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-1,3-옥사졸-5-일}메틸)[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바메이트 (U-4) (81.0 mg, 0.10 mmol) 및 Pd-C10% (120 mg0.11 mmol)의 현탁액을 H2 (75 Psi) 하에 90분 동안 수소화시켰다. 반응 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 조 생성물을 이스코 (실리카, 12 g, 헵트 중 0-100% EtOAc)에 의해 정제하여 표제 화합물 tert-부틸 [(2,4-디메톡시페닐)메틸]{[4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-옥사졸-5-일]메틸}카르바메이트 (U-5) (30 mg, 41%, 5-단계에 걸침)을 백색 고체로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C41H48N8O9), 797.5 (M+H)+ 관찰치.
단계 6
4-[5-(아미노메틸)-2-(1-에틸-4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-옥사졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 U01)의 합성
순수한 TFA (1.5 mL) 중 tert-부틸 [(2,4-디메톡시페닐)메틸]{[4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-옥사졸-5-일]메틸}카르바메이트 (U-5) (30.0 mg, 0.038 mmol)의 혼합물을 55℃에서 2일 동안 가열하였다. 과량의 TFA을 제거하고, 조 생성물을 정제용-HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물 4-[5-(아미노메틸)-2-(1-에틸-4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-옥사졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 U01) (10.2 mg, 53% 수율)을 TFA 염으로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C18H20N8O3), 397.4 (M+H)+ 관찰치.
실시예 U01: 4-[5-(아미노메틸)-2-(1-에틸-4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-옥사졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드의 반응식 U'에 따른 대안적 제조.
반응식 U'
Figure pct00153
단계 1
에틸 4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-{1-에틸-4-[(4-메톡시페닐)메톡시]-3-메틸-1H-피라졸-5-일}-1,3-옥사졸-5-카르복실레이트 (U'-1)의 합성.
톨루엔 (160 mL) 중 에틸 4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-1,3-옥사졸-5-카르복실레이트 (Int-HG-21) (7.8 g, 16.76 mmol, 1 당량)의 교반 용액에 20℃에서 5-브로모-1-에틸-4-[(4-메톡시페닐)메톡시]-3-메틸-1H-피라졸 (Int-TG-23) (7.4 g, 22.76 mmol, 1.36 당량), 카탁시움A (2.40 g, 6.70 mmol, 0.4 당량), PivOH (684.60 mg, 6.70 mmol, 770.08 μL, 0.4 당량) 및 K2CO3 (6.95 g, 50.27 mmol, 3 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 진공 하에 탈기하고, N2로 3회 퍼징하였다. Pd(OAc)2 (752.45 mg, 3.35 mmol, 0.2 당량)를 20℃에서 첨가하였다. 혼합물을 다시 진공 하에 탈기하고, N2 로 추가로 3회 퍼징하였다. 반응 혼합물을 106℃ (내부 온도, 125℃ 외부 오일 조)로 가열하고, 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모 및 목적 생성물 물질을 포함하는 신규한 피크를 나타내었다. 반응물을 오일 조로부터 제거하고, 20℃로 냉각되도록 하였다. 반응물을 진공 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 상에서 칼럼 크로마토그래피 (0-100% EtOAc/석유 에테르로 용리)을 사용하여 정제하여 표제 화합물 에틸 4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-{1-에틸-4-[(4-메톡시페닐)메톡시]-3-메틸-1H-피라졸-5-일}-1,3-옥사졸-5-카르복실레이트 (U'-1) (5.6 g, 7.89 mmol, 47% 수율)을 갈색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.16 - 8.94 (m, 1H), 8.53 (br s, 1H), 8.41 (br s, 1H), 7.48 - 7.28 (m, 2H), 7.27 - 7.15 (m, 1H), 6.97 - 6.77 (m, 2H), 6.68 - 6.54 (m, 1H), 6.52 - 6.40 (m, 1H), 4.95 (br s, 2H), 4.68 - 4.40 (m, 4H), 4.33 - 4.06 (m, 5H), 3.81 (br s, 3H), 3.74 (br s, 3H), 3.67 (br s, 3H), 2.08 (br s, 3H), 1.48 - 1.26 (m, 3H), 1.21 - 1.08 (m, 3H).
단계 2
N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-(2-{1-에틸-4-[(4-메톡시페닐)메톡시]-3-메틸-1H-피라졸-5-일}-5-포르밀-1,3-옥사졸-4-일)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (U'-2)의 합성.
1 L 3구 둥근 바닥 플라스크에 20℃에서 THF (560 mL) 중 에틸 4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-{1-에틸-4-[(4-메톡시페닐)메톡시]-3-메틸-1H-피라졸-5-일}-1,3-옥사졸-5-카르복실레이트 (U'-1) (5.6 g, 7.89 mmol, 1 당량)을 채웠다. 반응물을 탈기하고, N2로 3회 동안 퍼징하였다. 반응물을 -55℃ (아세톤 건조-빙조)로 냉각시켰다. LiAlH4 (THF 중 1 M, 37.33 mL, 4.73 당량)을 -55℃ (아세톤 건조-빙조)에서 적가하였다. 갈색 용액이 형성되었다. 이 반응물을 -55℃ 내지 -50℃ (아세톤 드라이-아이스 조)의 온도에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모, 목적 알데히드 생성물 물질을 갖는 새로운 피크, 및 과환원된 알콜 생성물의 물질에 대한 피크를 나타내었다. 반응물을 Na2SO4·10H2O (25 g) 및 MeOH/H2O (50 mL, 1:1)로 -50℃ 미만에서 켄칭하고, -50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 DCM (300 mL)으로 희석하였다. 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하였다. 필터 케이크를 DCM (6x50 mL)으로 헹구었다. 합한 여과물의 유기 상을 분리하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켜 담황색 고체로서의 알데히드 및 알콜 생성물의 혼화성 조 혼합물을 수득하였다. 이 혼합물을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. DCM (220 mL) 중 혼화성 조 알데히드/알콜 생성물 (5.5 g, 8.24 mmol, 1 당량)의 현탁액에 20℃에서 데스-마르틴 퍼아이오디난 (5.24 g, 12.36 mmol, 3.83 mL, 1.5 당량)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 H2O (100 mL)로 희석하였다. 현탁액은 용액으로 변화하였다. 유기 상을 분리하였다. 수성 상을 DCM (3x50 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여과물을 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-(2-{1-에틸-4-[(4-메톡시페닐)메톡시]-3-메틸-1H-피라졸-5-일}-5-포르밀-1,3-옥사졸-4-일)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (U'-2) (6 g, 조 물질)을 담황색 고체로서 수득하였다. 이 물질을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C35H36N7O7), 666.1 (M+H)+ 관찰치.
단계 3
4-[5-(아미노메틸)-2-{1-에틸-4-[(4-메톡시페닐)메톡시]-3-메틸-1H-피라졸-5-일}-1,3-옥사졸-4-일]-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (U'-3)의 합성.
EtOH (50 mL) 및 H2O (20 mL) 중 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-(2-{1-에틸-4-[(4-메톡시페닐)메톡시]-3-메틸-1H-피라졸-5-일}-5-포르밀-1,3-옥사졸-4-일)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (U'-2) (5.9 g, 8.86 mmol, 1 당량)의 현탁액에 20℃에서 NH2OH.HCl (1.85 g, 26.59 mmol, 3 당량) 및 AcONH4 (3.42 g, 44.31 mmol, 5 당량)를 첨가하였다. 이어서, THF (200 mL)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 담황색 현탁액이 형성되었다. 혼합물을 20℃에서 2시간 동안 교반하였다. 담황색 현탁액은 담황색 용액으로 변하였다. LCMS 분석은 목적 생성물 물질을 포함하는 신규한 피크를 나타내었다. 이 단계에서, NH3 (H2O 중 28% 용액) (22.19 g, 177.26 mmol, 24.38 mL, 28% 순도, 20 당량) 및 Zn (13.91 g, 212.71 mmol, 24 당량)을 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 50℃로 가열하고, 2시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모 및 목적 생성물 물질을 포함하는 신규한 피크를 나타내었다. 반응물을 가열로부터 제거하고, 20℃로 냉각되도록 하였다. 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하였다. 필터 케이크를 DCM (3x100 mL)으로 헹구었다. 합한 여과물을 H2O (20 mL)로 희석하였다. 유기 층을 분리하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여과물을 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 4-[5-(아미노메틸)-2-{1-에틸-4-[(4-메톡시페닐)메톡시]-3-메틸-1H-피라졸-5-일}-1,3-옥사졸-4-일]-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (U'-3) (6 g, 조 물질)을 담황색 고체로서 수득하였다. 이 물질을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C35H39N8O6), 667.1 (M+H)+ 관찰치.
단계 4
4-[5-(아미노메틸)-2-(1-에틸-4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-옥사졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 U01)의 합성.
HFIP (50 mL) 중 4-[5-(아미노메틸)-2-{1-에틸-4-[(4-메톡시페닐)메톡시]-3-메틸-1H-피라졸-5-일}-1,3-옥사졸-4-일]-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (U'-3) (6 g, 조 물질)의 용액에 메탄술폰산 (3.19 g, 33.24 mmol, 2.37 mL, 11 당량)을 첨가하였다. 생성된 적색 용액을 50℃로 가열하고, 2시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 목적 생성물 물질을 포함하는 신규한 피크를 나타내었다. 이 반응물을 중성 pH~7이 달성될 때까지 포화 수성 NaHCO3의 첨가에 의해 켄칭하였다. 용액을 분리 깔때기로 옮기고, 상을 분리하였다. 유기 상을 진공 하에 50℃에서 농축시켰다. 조 잔류물을 또 다른 배치로부터의 조 물질과 합하고, 정제용 HPLC (페노메넥스 제미니-NX 150x30mmx5μm 칼럼, 5-45% MeCN/H2O (0.05% HCl 함유), 25mL/분 유량, 54회 주입)에 의해 정제하여 조 황색 고체 (440 mg)를 수득하였다. 고체를 MeOH (5 mL) 및 DCM (15 mL) 중에 현탁시켰다. 현탁액을 20℃에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 DCM (10 mL)으로 세척하였다. 고체를 단리시키고, 진공 하에 건조시켜 표제 화합물 4-[5-(아미노메틸)-2-(1-에틸-4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-옥사졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 U01) (365.19 mg, 30%)을 고체 황색 히드로클로라이드 염으로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C18H20N8O3), 397.1 (M+H)+ 관찰치;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.90 (br s, 1H), 8.77 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 8.73 (br s, 2H), 8.41 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 8.13 (br s, 1H), 7.98 (s, 1H), 4.79 (q, J = 5.3 Hz, 2H), 4.56 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.20 (s, 3H), 2.17 (s, 3H), 1.40 (t, J = 7.1 Hz, 3H)
실시예 U02, U03 및 U04를 4-[5-(아미노메틸)-2-(1-에틸-4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-옥사졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로 [4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 U01)의 합성에 사용된 방법 (반응식 U')에 따라 관련 기술분야의 통상의 기술자가 실현할 수 있을 예시된 절차에 대한 비결정적 변형 또는 치환으로 합성하였다.
Figure pct00154
Figure pct00155
실시예 V01: 4-{5-[4-히드록시-1-(2-히드록시에틸)-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드의 반응식 V에 따른 제조.
반응식 V
Figure pct00156
단계 1
2-[4-(벤질옥시)-5-{5-(6-{[(3,5-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸-1H-피라졸-1-일]에틸 아세테이트 (V-1)의 합성
바이알에 톨루엔 (3 mL) 중 2-[4-(벤질옥시)-5-브로모-3-메틸-1H-피라졸-1-일]에틸 아세테이트 (Int-TG-16) (73 mg, 0.21 mmol) 및 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-{4-[(4-메톡시페닐)-메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Int-HG-18) (106 mg, 0.207 mmol), Pd(OAc)2 (4.64 mg, 0.0207 mmol), Ph3P (10.8 mg, 0.0413 mmol), 탄산칼륨 (85.7 mg, 0.620 mmol) 및 아이오도[4,5-비스(디페닐포스피노)-9,9-디메틸크산텐]구리(I) (63.6 mg, 0.0827 mmol)를 채우고, 실온에서 5분 동안 탈기한 다음, 110℃에서 밤새 가열하였다. 반응 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 이스코 (실리카, 12 g, 헵탄 중 0-100% EtOAc)에 의해 정제하여 표제 화합물 2-[4-(벤질옥시)-5-{5-(6-{[(3,5-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-4-[(4-메톡시-페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸-1H-피라졸-1-일]에틸 아세테이트 (V-1) (126 mg, 78% 수율)을 백색 발포체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.82 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 8.48 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 8.13 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 7.23 - 7.15 (m, 5H), 6.95 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.72 - 6.65 (m, J = 9.0 Hz, 2H), 6.59 - 6.54 (m, 2H), 6.52 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 6.36 (dd, J = 2.3, 8.2 Hz, 1H), 5.81 (s, 2H), 4.76 (s, 2H), 4.38 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 4.23 (s, 3H), 4.18 - 4.12 (m, 2H), 4.11 - 4.06 (m, 2H), 3.76 (s, 3H), 3.74 - 3.70 (m, 3H), 3.52 (s, 3H), 2.14 (s, 3H), 1.89 (s, 3H). m/z (ESI+) - (C42H43N9O7), 786.5 (M+H)+ 관찰치.
단계 2
4-{5-[4-(벤질옥시)-1-(2-히드록시에틸)-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-N-[(3,5-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (V-2)의 합성
바이알에 실온에서 2-[4-(벤질옥시)-5-{5-(6-{[(3,5-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-4-[(4-메톡시-페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸-1H-피라졸-1-일]에틸 아세테이트 (V-1) (132 mg, 0.168 mmol), 수산화리튬 (8.04 mg, 0.336 mmol, 0.336 mL, 1.0 M), 물 (3.03 mg, 0.168 mmol) 및 THF (9 mL)를 채웠다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 추가의 1M LiOH (0.1 mL)를 실온에서 첨가하고, 반응을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 조 생성물을 메탄올 및 톨루엔 x 3으로 처리하여 미량의 물을 제거하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 4-{5-[4-(벤질옥시)-1-(2-히드록시에틸)-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-N-[(3,5-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (V-2) 105 mg을 조 생성물로서 수득하였으며, 이를 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C40H41N9O6), 744.3 (M+H)+ 관찰치.
단계 3
4-{5-[4-히드록시-1-(2-히드록시에틸)-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 V01)의 합성
바이알을 TFA (1.5 mL) 중 4-{5-[4-(벤질옥시)-1-(2-히드록시에틸)-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-N-[(3,5-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (V-2) (100 mg, 0.134 mmol)을 채우고, 55℃에서 밤새 교반하였다. 과량의 TFA을 진공 하에 제거하고, 조 반응 혼합물을 메탄올 x 3 및 톨루엔 x 3으로 처리하고, 진공 하에 농축시켜 조 2-{5-[5-(6-카르바모일-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-4H-1,2,4-트리아졸-3-일]-4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-1-일}에틸 트리플루오로아세테이트를 수득하였으며, 이어서 이를 수 방울의 디클로로메탄과 함께 메탄올 (1 mL) 중 탄산칼륨 (37.2 mg, 0.269 mmol)으로 처리하여 실온에서 30분 동안 용해도를 증가시켰다. 고체를 여과하고, 여과물을 농축시키고, 조 생성물을 정제용-HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물 4-{5-[4-히드록시-1-(2-히드록시에틸)-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 V01) (32 mg, 68% 수율)을 백색 고체로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C16H17N9O3), 384.2 (M+H)+ 관찰치.
실시예 W01: 4-[5-(1-아미노에틸)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드의 반응식 W에 따른 제조.
반응식 W
Figure pct00157
단계 1
4-브로모-5-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)티아졸 (W-1)의 합성.
-30℃에서 THF (30 mL) 중 1-에틸-3-메틸-1H-피라졸 (776 mg, 7.04 mmol)의 용액에 n-BuLi (헥산, 3.10 mL 중 2.5 M, 7.75 mmol)을 적가하고, 혼합물을 20분 동안 교반하였다. 이어서, ZnCl2의 용액 (2-MeTHF 중 1.9 M, 4.45 mL, 8.45 mmol)을 적가하고, 반응물을 실온으로 가온하였다. 2시간 후, LCMS 분석은 출발 물질의 소모를 나타내었다. THF (9 mL) 중 2,4-디브로모-5-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)티아졸 (2010년 11월 25일에 WO 2010/132999 A1로서 공개된 국제 특허 출원 PCT/CA2010/000779에 따라 3 단계로 제조됨) (3.00 g, 7.75 mmol)의 용액을 첨가하고, 이어서 Pd(PPh3)4 (814 mg, 0.704 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2.5시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모를 나타냈고, 이어서 반응물을 포화 수성 NH4Cl (10 mL)로 켄칭하였다. 층을 분리하고, 수성 상을 EtOAc로 3회 추출하였다. 합한 유기 추출물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (80 g SiO2, 0-10% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 4-브로모-5-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)티아졸 (W-1) (2.03 g, 63%)을 무색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.42 (s, 1H), 4.83 (s, 2H), 4.58 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 2.29 (s, 3H), 1.44 (t, J = 7.4 Hz, 3H) 0.94 (s, 9H), 0.15 (s, 6H); m/z (ESI+) - (C16H27BrN3OSSi), 416.0 (M+H)+ 관찰치.
단계 2
(4-브로모-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)티아졸-5-일)메탄올 (W-2)의 합성
THF (6.44 mL) 중 4-브로모-5-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)티아졸 (W-1) (1.34 g, 3.22 mmol)의 용액에 TBAF (THF 중 1.0 M, 6.44 mL, 6.44 mmol)을 첨가하고, 실온에서 30분 동안 교반하였다. TLC 분석 (4:1 헵탄:EtOAc)은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 이어서, 혼합물을 H2O로 희석하고, EtOAc로 3회 추출하였다. 합한 유기 추출물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (40 g SiO2, 40-80% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 (4-브로모-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)티아졸-5-일)메탄올 (W-2) (896 mg, 92%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.42 (s, 1H), 4.86 (s, 2H), 4.58 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 2.29 (s, 3H), 1.44 (t, J = 7.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C10H13BrN3OS), 302.0 (M+H)+ 관찰치.
단계 3
4-브로모-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)티아졸-5-카르브알데히드 (W-3)의 합성
0℃에서 CH2Cl2 (14.8 mL) 중 (4-브로모-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)티아졸-5-일)메탄올 (W-2) (896 mg, 2.96 mmol)의 용액에 데스-마르틴 퍼아이오디난 (1.92 g, 4.45 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 실온으로 가온하고, 1시간 동안 교반하고, LCMS 분석은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 반응물을 H2O로 켄칭하고, EtOAc로 3회 추출하였다. 합한 유기 추출물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (24 g SiO2, 10-60% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 4-브로모-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)티아졸-5-카르브알데히드 (W-3) (678 mg, 76%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.01 (s, 1H), 6.58 (s, 1H), 4.64 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 2.30 (s, 3H), 1.46 (t, J = 7.2 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C10H11BrN3OS), 300.0 (M+H)+ 관찰치.
단계 4
(E)-N-((4-브로모-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)티아졸-5-일)메틸렌)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (W-4)의 합성
4-브로모-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)티아졸-5-카르브알데히드 (W-3) (678 mg, 2.26 mmol), Cs2CO3 (1.47 g, 4.51 mmol), 2-메틸프로판-2-술핀아미드 (547 mg, 4.51 mmol), 및 CH2Cl2의 혼합물 (7.5 mL)을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 이어서, 혼합물을 EtOAc를 사용하여 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (24 g SiO2, 10-40% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 (E)-N-((4-브로모-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)티아졸-5-일)메틸렌)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (W-4) (836 mg, 92%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.72 (s, 1H), 6.54 (s, 1H), 4.64 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 2.31 (s, 3H), 1.46 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.27 (s, 9H); m/z (ESI+) - (C14H20BrN4OS2), 403.0 (M+H)+ 관찰치.
단계 5
N-(1-(4-브로모-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)티아졸-5-일)에틸)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (W-5)의 합성
-78℃에서 CH2Cl2 (21 mL) 중 (E)-N-((4-브로모-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)티아졸-5-일)메틸렌)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (W-4) (835 mg, 2.07 mmol)의 용액에 메틸마그네슘 브로마이드의 용액 (THF:톨루엔 1:3 중 1.4 M, 4.44 mL, 6.21 mmol)을 첨가하였다. 5분 동안 교반한 후, 반응물을 0℃로 가온하고, 1시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 이어서, 반응물을 H2O로 켄칭하고, EtOAc로 3회 추출하였다. 합한 유기 추출물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (24 g SiO2, 50-100% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 N-(1-(4-브로모-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)티아졸-5-일)에틸)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (W-5) (785 mg, 90%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.38 (s, 1H), 4.97 (m, 1H), 4.57 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.47 (s, 1H), 2.27 (s, 3H), 1.62 (d, J = 6.6 Hz, 3H), 1.44 (t, J = 7.0 Hz, 3H), 1.23 (s, 9H); m/z (ESI+) - (C15H24BrN4OS2), 419.1 (M+H)+ 관찰치.
단계 6
4-(5-(1-((tert-부틸술피닐)아미노)에틸)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)티아졸-4-일)-N-(3,4-디메틸벤질)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (W-6)의 합성
N-(1-(4-브로모-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)티아졸-5-일)에틸)-2-메틸프로판-2-술핀아미드 (W-5) (785 mg, 1.87 mmol), 4-브로모-N-(2,4-디메톡시벤질)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Int-HG-17) (758 mg, 1.87 mmol), K3PO4 (1.19 g, 5.61 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-비(1,3,2-디옥사보롤란) (951 mg, 3.74 mmol), Pd(dtbpf) Cl2 (122 mg, 0.187 mmol), H2O (3.70 mL, N2로 폭기함), 및 톨루엔 (18.7 mL)의 혼합물을 80℃에서 17시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc을 포함하는 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 분리 깔때기에 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 H2O로 희석하고, EtOAc로 3회 추출하고, 합한 유기 추출물을 MgSO4 상에서 건조시켰다. 이어서, 용액을 여과하고, 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (40 g SiO2, EtOAc)에 의해 정제하여 4-(5-(1-((tert-부틸술피닐)아미노)에틸)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)티아졸-4-일)-N-(3,4-디메틸벤질)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (W-6)와 다른 미지의 불순물의 혼합물 (597 mg)을 수득하였다. 이 물질을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C32H41N8O4S2), 665.3 (M+H)+ 관찰치.
단계 7
1-(4-(6-카르바모일-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)티아졸-5-일)에탄-1-아미늄 트리플루오로아세테이트 (W-7)의 합성
MeOH (4.59 mL) 및 CH2Cl2 (4.59 mL) 중 4-(5-(1-((tert-부틸술피닐)아미노)에틸)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)티아졸-4-일)-N-(3,4-디메틸벤질)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (W-6) (597 mg, 0.898 mmol)의 용액에 HCl (디옥산, 2.29 mL 중 4 M, 9.17 mmol)을 첨가하고, 실온에서 교반하였다. 30분 후, LCMS 분석은 반응 진행을 나타내었고, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, TFA (7.00 mL, 91.7 mmol) 중에 용해시키고, 55℃에서 70분 동안 가열하였다. 이어서, 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하고, 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 EtOAc로 슬러리로 만들고, 16시간 동안 교반하였다. 고체를 N2 하에 여과하여 1-(4-(6-카르바모일-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)티아졸-5-일)에탄-1-아미늄 트리플루오로아세테이트 (W-7) (228 mg, 2단계에 걸쳐 19%)을 분홍색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.63 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.97 (br s, 1H), 7.82 (br s, 1H), 6.68 (s, 1H), 5.28 (m, 1H), 4.65 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.20 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 1.49 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 1.42 (t, J = 7.0 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C19H23N8OS), 411.2 (M+H)+ 관찰치.
단계 8
(R)-4-(5-(1-아미노에틸)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)티아졸-4-일)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 및 (S)-4-(5-(1-아미노에틸)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)티아졸-4-일)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 W01 및 W02)의 정제
1-(4-(6-카르바모일-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)티아졸-5-일)에탄-1-아미늄 트리플루오로아세테이트 (W-7)을 정제용 HPLC에 의해 키랄 테크 OX-H 칼럼 (250x30.0 mm, 5 μm 입자 크기)을 사용하여 정제하고, 이것을 20-70% 메탄올 (2% 암모니아):CO2로 유량 80 mL/분으로 용리시켜 거울상이성질체 (R)-4-(5-(1-아미노에틸)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)티아졸-4-일)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 및 (S)-4-(5-(1-아미노에틸)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)티아졸-4-일)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드를 갈색 고체로서 수득하였다 (실시예 W01, 39 mg, 11% 및 실시예 W02, 48 mg, 13% - 거울상이성질체는 할당되지 않음). W01 - LCMS [M+H] = 411.4 관찰치; W02 - LCMS [M+H] = 411.3 관찰치;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.62 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 8.35 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.97 (br d, J = 2.3 Hz, 1H), 7.81 (br d, J = 2.3 Hz, 1H), 6.67 (s, 1H), 5.38 - 5.17 (m, 1H), 4.65 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.19 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 1.48 (d, J = 6.2 Hz, 3H), 1.41 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 X01: (4-(6-카르바모일-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-일)티아졸-5-일)메탄아미늄 포르메이트의 반응식 X에 따른 제조.
반응식 X
Figure pct00158
단계 1
4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸 (X-1)의 합성
1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-4-올 (15.0 g, 119 mmol), 벤질 브로마이드 (30.5 g, 178 mmol), Cs2CO3 (46.5 g, 143 mmol), 및 MeCN의 혼합물 (1.19 L)을 실온에서 19시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 이어서, 반응물을 진공 하에 농축시키고, H2O를 첨가하고, 혼합물을 EtOAc로 3회 추출하였다. 합한 유기 추출물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (SiO2 플러그, CH2Cl2 [1.5 L]에 이어서 EtOAc [3.0 L], 500 mL 분획)에 의해 정제하여 4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸 (X-1) (25.4 g, 99%)을 황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.44-7.30 (m, 5H), 6.96 (s, 1H), 4.89 (s, 2H), 4.00 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 2.22 (s, 3H), 1.41 (t, J = 7.2 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C13H17N2O), 217.1 (M+H)+ 관찰치.
단계 2
2-(4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-브로모-5-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)티아졸 (X-2)의 합성
-78℃에서 THF (20 mL) 중 4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸 (X-1) (1.03 g, 4.76 mmol)의 용액에 n-BuLi (헥산 중 2.5 M, 1.90 mL, 4.76 mmol)을 적가하고, 혼합물을 10분 동안 교반하였다. 이어서 ZnCl2의 용액 (2-MeTHF 중 1.9 M, 3.01 mL, 5.71 mmol)을 적가하고, 반응물을 실온으로 가온하였다. 1.5시간 후, THF (3.8 mL mL) 중 2,4-디브로모-5-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)티아졸 (WO 2010132999 A1에 따라 3 단계로 제조됨) (2.03 g, 5.24 mmol)의 용액을 첨가한 후에 이어서 Pd(PPh3)4 (550 mg, 0.476 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반하고, LCMS 분석은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 이어서, 반응물을 포화 수성 NH4Cl로 켄칭하고, 층을 분리하고, 수성 상을 EtOAc로 3회 추출하였다. 합한 유기 추출물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (40 g SiO2, 0-20% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 2-(4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-브로모-5-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)티아졸 (X-2) (951 mg, 38%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.36-7.22 (m, 5H), 4.84 (s, 2H), 4.73 (s, 2H), 4.50 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 2.11 (s, 3H), 1.31 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 0.82 (s, 9H), 0.02 (s, 6H); m/z (ESI+) - (C23H33BrN3O2SSi), 522.1 (M+H)+ 관찰치.
단계 3
4-(2-(4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)티아졸-4-일)-N-(2,4-디메톡시벤질)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (X-3)의 합성
2-(4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-4-브로모-5-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)티아졸 (X-2) (944 mg, 1.81 mmol), 4-브로모-N-(2,4-디메톡시벤질)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Int-HG-17) (732 mg, 1.81 mmol), K3PO4 (1.15 g, 5.42 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-비(1,3,2-디옥사보롤란) (917 mg, 3.61 mmol), (t-Bu)3P-Pd-G3 (103 mg, 0.181 mmol), H2O (3.62 mL, N2로 폭기함), 및 톨루엔 (18.1 mL, N2로 폭기함)의 혼합물을 80℃에서 23시간 동안 교반하였다. TLC 분석 (4:1 헵탄:EtOAc)은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 이어서, 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc를 사용하여 셀라이트 패드를 통해 여과하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (40 g SiO2, 60-80% EtOAc:헵탄)에 의해 정제하여 목적 생성물 4-(2-(4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)티아졸-4-일)-N-(2,4-디메톡시벤질)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (X-3) (825 mg) 및 부산물 N-(2,4-디메톡시벤질)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 혼합물 (1H NMR 분석에 의해 1:1.4)을 수득하였다. 이 혼합물을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C40H50N7O5SSi), 768.4 (M+H)+ 관찰치.
단계 4
4-(2-(4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-(히드록시메틸)티아졸-4-일)-N-(2,4-디메톡시벤질)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (X-4)의 합성
THF (2.15 mL) 중 4-(2-(4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)티아졸-4-일)-N-(2,4-디메톡시벤질)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (X-3) 및 부산물 N-(2,4-디메톡시벤질)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드의 1:1.4 혼합물 (825 mg)의 용액에 TBAF (THF 중 1 M, 3.22 mL, 3.22 mmol)을 첨가하고, 실온에서 교반하였다. 2시간 후, 분취물을 CDCl3 중 1H NMR에 의해 분석하였고, 출발 물질의 소모를 나타내었다. 이어서, 반응물을 CH2Cl2로 희석하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (24 g SiO2, 40-100% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 4-(2-(4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-(히드록시메틸)티아졸-4-일)-N-(2,4-디메톡시벤질)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (X-4) (363 mg, 2 단계에 걸쳐 31%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.75 (s, 1H), 8.74 (m, 1H), 8.25 (s, 1H), 7.49-7.29 (m, 6H), 6.50-6.41 (m, 2H), 5.17 (s, 2H), 5.00 (s, 2H), 4.74 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 4.65 (m, 2H), 4.17-4.11 (m, 4H), 3.90 (s, 3H), 3.78 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 1.50 (t, J = 7.0 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C34H36N7O5S), 654.3 (M+H)+ 관찰치.
단계 5
4-(2-(4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-포르밀티아졸-4-일)-N-(2,4-디메톡시벤질)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (X-5)의 합성
0℃에서 CH2Cl2 (2.39 mL) 중 4-(2-(4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-(히드록시메틸)티아졸-4-일)-N-(2,4-디메톡시벤질)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (X-4) (313 mg, 0.479 mmol)의 용액에 데스-마르틴 퍼아이오디난 (305 mg, 0.718 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 실온으로 가온하고, 1시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 이어서, 반응물을 CH2Cl2로 희석하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (12 g SiO2, 50-100% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 4-(2-(4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-포르밀티아졸-4-일)-N-(2,4-디메톡시벤질)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (X-5) (302 mg, 2개의 합한 배치 사이에 84%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 10.78 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.50-7.25 (m, 6H), 6.52 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 6.45 (dd, J = 8.2, 2.3 Hz, 1H), 5.09 (s, 2H), 4.77 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 4.66 (d, J = 5.9 Hz, 2H), 4.21 (s, 3H), 3.91 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 2.26 (s, 3H), 1.48 (t, J = 7.4 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C34H34N7O5S), 652.3 (M+H)+ 관찰치.
단계 6
(E)-4-(2-(4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-(((tert-부틸술피닐)이미노)메틸)티아졸-4-일)-N-(2,4-디메톡시벤질)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (X-6)의 합성
4-(2-(4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-포르밀티아졸-4-일)-N-(2,4-디메톡시벤질)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (X-5) (302 mg, 0.463 mmol), Cs2CO3 (302 mg, 0.927 mmol), 2-메틸프로판-2-술핀아미드 (168 mg, 1.39 mmol), 및 CH2Cl2의 혼합물 (2.32 mL)을 실온에서 19시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 이어서, 혼합물을 EtOAc을 포함하는 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 진공 하에 농축시켜 (E)-4-(2-(4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-(((tert-부틸술피닐)이미노)메틸)티아졸-4-일)-N-(2,4-디메톡시벤질)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (X-6) (558 mg)을 황색 고체로서 수득하였다. 이 물질을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C38H43N8O5S2), 755.3 (M+H)+ 관찰치.
단계 7
4-(2-(4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-(((tert-부틸술피닐)아미노)메틸)티아졸-4-일)-N-(2,4-디메톡시벤질)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (X-7)의 합성
0℃에서 메탄올 (1.38 mL) 및 THF (1.38 mL) 중 (E)-4-(2-(4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-(((tert-부틸술피닐)이미노)메틸)티아졸-4-일)-N-(2,4-디메톡시벤질)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (X-6) (208 mg, 0.276 mmol)의 용액에 NaBH4 (31.3 mg, 0.827 mmol)를 첨가하였다. 3시간 후, LCMS 분석은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 반응물을 포화 수성 NH4Cl로 켄칭하고, EtOAc로 3회 추출하였다. 이어서, 합한 유기 추출물을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (24 g SiO2, 50-100% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 4-(2-(4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-(((tert-부틸술피닐)아미노)메틸)티아졸-4-일)-N-(2,4-디메톡시벤질)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (X-7) (193 mg, 92%)을 황색 오일로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.68 (s, 1H), 8.44 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.49-7.25 (m, 6H), 6.48-6.42 (m, 2H), 5.05-4.95 (m, 4H), 4.74 (q, J = 7.3 Hz, 2H), 4.68 (d, J = 6.2 Hz, 2H), 4.21 (t, J = 5.6 Hz, 1H), 4.15 (s, 3H), 3.87 (s, 3H), 3.77 (s, 3H), 2.24 (s, 3H), 1.49 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.13 (s, 9H); m/z (ESI+) - (C38H45N8O5S2), 757.3 (M+H)+ 관찰치.
단계 8
(4-(6-카르바모일-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-일)티아졸-5-일)메탄아미늄 포르메이트 (실시예 X01)의 합성
MeOH (2.08 mL) 및 CH2Cl2 (2.08 mL) 중 4-(2-(4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-(((tert-부틸술피닐)아미노)메틸)티아졸-4-일)-N-(2,4-디메톡시벤질)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (X-7) (315 mg, 0.416 mmol)의 용액에 HCl (디옥산, 1.04 mL 중 4 M, 4.16 mmol)을 첨가하고, 실온에서 교반하였다. 45분 후, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시키고, TFA (3.20 mL, 41.6 mmol) 중에 용해시키고, 55℃에서 27시간 동안 가열하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 이어서, 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하고, 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 EtOAc로 16시간 동안 슬러리로 만들었다. 이어서, 고체를 N2 하에 여과하였다. 고체를 정제용 HPLC에 의해 프린스턴 STX C18 칼럼 (250x21.2 mm, 5 μm 입자 크기)을 사용하여 정제하고, 이것을 5-100% 아세토니트릴:H2O (1% 포름산)로 유량 27 mL/분으로 용리시켜 (4-(6-카르바모일-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-일)티아졸-5-일)메탄아미늄 포르메이트 (실시예 X01) (86 mg, 45%)을 백색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.63 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.93 (s, 1H), 4.68 (q, J = 7.4 Hz, 2H), 4.56 (s, 2H), 4.19 (s, 3H), 2.17 (s, 3H), 1.36 (t, J = 7.0 Hz, 3H); m/z (ESI+) - (C18H21N8O2S), 413.2 (M+H)+ 관찰치.
실시예 Y01: 4-[3-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-[3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필]-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드의 반응식 Y에 따른 제조.
반응식 Y
Figure pct00159
단계 1
6-클로로-1-[(2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)메틸]-4-[3-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 (Y-1)의 합성
무수 톨루엔 (10 mL, 0.2 M) 중 3-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-05) (430 mg 2.06 mmol, 1 당량) 및 4,6-디클로로-1-[(2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)메틸]-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 (Int-HG-19) (650 mg 2.06 mmol, 1 당량)의 용액에 실온에서 K2CO3 (852 mg, 6.17 mmol, 3 당량), PivOH (126 mg, 1.23 mmol, 0.6 당량), P(n-Bu)Ad2 (295 mg, 0.822 mmol, 0.4 당량) 및 Pd(OAc)2 (92.3 mg, 0.411 mmol, 0.2 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 N2 하에 80℃에서 60시간 동안 교반하였다. 이 때 TLC (석유 에테르: EtOAc=1:2)는 출발 물질이 소모되었음을 나타내었고, 2개의 새로운 스팟이 검출되었으며, 2개 중 덜 극성인 것은 목적 생성물인 것으로 입증되었다. 갈색 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 여과한 다음, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 생성된 흑색 잔류물을 정제용-TLC (석유 에테르: EtOAc 1:2)에 의해 정제하여 표제 화합물 6-클로로-1-[(2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)메틸]-4-[3-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 (Y-1) (200 mg, 19.9%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.88 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 4.66 (d, J = 7.7 Hz, 2H), 4.61 (t, J = 7.2 Hz, 1H), 4.54 (s, 3H), 4.09 (q, 2H, J = 7.1 Hz), 3.53 (dd, J = 12.6, 2.5 Hz, 2H), 2.31 (d, J = 0.7 Hz, 3H), 2.25 (dq, J = 6.6, 3.3 Hz, 1H), 1.58 (s, 3H), 1.52 (s, 3H), 1.50 (t, J = 7.1 Hz, 1H).
단계 2
1-[(2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)메틸]-4-[3-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르보니트릴 (Y-2)의 합성
디옥산 (5.0 mL, 0.03 M) 중 6-클로로-1-[(2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)메틸]-4-[3-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘 (Y-1) (70 mg, 0.14 mmol)의 황색 용액에 실온에서 Zn(CN)2 (87.4 mg, 0.744 mmol, 5 당량), dppf (139 mg, 0.251 mmol, 1.7 당량) 및 Pd2(dba)3 (50.1 mg, 0.055 mmol, 0.4 당량)을 첨가하였다. 생성된 황색 반응 혼합물을 N2 하에 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 이 때 LCMS는 출발 물질이 거의 소모되었고, 목적 생성물이 존재함을 나타내었다. 이어서, 담갈색 용액을 20 mL 물로 희석한 다음, 50 mL EtOAc을 사용하여 3회를 추출하였다. 합한 유기부를 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 생성된 황색 오일을 정제용 TLC (15:1 DCM/MeOH)에 의해 정제하여 표제 화합물 1-[(2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)메틸]-4-[3-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르보니트릴 (Y-2) (45 mg, 92%)을 담황색 고체로서 수득하였다.
단계 3
1-[(2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)메틸]-4-[3-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Y-3)의 합성
MeOH (2 mL) 및 THF (1 mL, 기재 전체 중 0.04 M) 중 1-[(2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)메틸]-4-[3-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르보니트릴 (Y-2) (90 mg, 0.12 mmol)의 황색 용액에 H2O2 (136 mg, 1.20 mmol, 10 당량) 및 NaOH (24.0 mg, 0.6 mmol, 5 당량)를 첨가하고, 생성된 황색 현탁액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 이 시점에서의 LCMS 분석은 목적 생성물을 검출하는 것에 더하여 출발 물질이 소모되었음을 나타내었다. TLC (DCM: MeOH=10:1)는 또한 출발 물질이 소모되었음을 나타내었고, 하나는 출발 물질보다 더 극성이고 하나는 덜 극성인 2개의 새로운 스팟이 주목되었다. 이어서, 백색 현탁액을 포화 수성 Na2SO3 (2 mL)으로 켄칭하고, 20 mL EtOAc로 4회 추출하였다. 합한 유기 상을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 이 여과물을 진공 하에 농축시켜 목적 조 1-[(2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)메틸]-4-[3-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Y-3)을 백색 고체로서 수득하였으며, 이를 직접 후속 단계에 사용하였다.
단계 4
4-[3-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-[3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필]-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 Y01)의 합성
HFIP (1 mL, 0.12 M) 중 1-[(2,2-디메틸-1,3-디옥산-5-일)메틸]-4-[3-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Y-3) 아세탈 (60 mg, 0.12 mmol)의 용액에 MsOH (58 mg, 0.6 mmol, 5 당량)를 첨가하였다. 혼합물을 45℃에서 2시간 동안 가열하였다. 이 때 LCMS는 생성물 형성과 함께 출발 물질의 소모를 나타내었다. 이에 따라 혼합물을 농축시켜 갈색 오일을 수득하였으며, 이를 정제용 HPLC에 의해 정제하여 목적 생성물 4-[3-(1-에틸-4-플루오로-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-[3-히드록시-2-(히드록시메틸)프로필]-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 Y01) (9.7 mg, 18%)을 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.72 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 8.48 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 8.00 (d, J = 47.6 Hz, 2H), 4.69 (t, J = 5.0 Hz, 2H), 4.58 (d, J = 7.0 Hz, 2H), 4.53 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.47 (s, 3H), 3.38 (m, 6H), 2.21 (s, 3H), 1.39 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
실시예 Z01: 4-{3-[1-(3-히드록시프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1H-1,2,4-트리아졸-5-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드의 반응식 Z에 따른 제조.
반응식 Z
Figure pct00160
단계 1
4-{5-[1-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Z-1)의 합성
무수 톨루엔 (4.0mL) 중 3-[1-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-17) (275.0 mg, 0.623 mmol) 및 4-브로모-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Int-HG-17) (303 mg, 0.747 mmol)의 용액에 20℃에서 K2CO3 (258 mg, 1.87 mmol), PivOH (38.2 mg, 0.374mmol), P(n-Bu)Ad2 (89.3 mg, 0.249 mmol) 및 Pd(OAc)2 (28.0 mg, 0.125 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 N2 중에서 16시간 동안 교반하였다. 교반을 80℃에서 추가로 48시간 동안 계속하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 여전히 소모되지 않았음을 나타내었으나, 목적 생성물이 검출되었다. 이 반응물을 유사한 조건 하에 동일한 규모로 수행된 또 다른 배치와 합하고, 이들을 함께 추가로 가공하였다. 합한 반응물을 H2O (50 mL)로 켄칭하여 담황색 용액을 수득하였다. 용액을 분리 깔때기로 옮기고, EtOAc (50 mL*3)로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수 (50 mL)로 세척하고, 건조 (Na2SO4)시키고, 진공 하에 농축시켜 담황색 고체를 수득하였다. 조 고체를 추가로 플래쉬 크로마토그래피 (40 g 실리카 겔, 석유 에테르 중 EtOAc 0에서 80%까지)에 의해 정제하여 표제 화합물 4-{5-[1-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Z-1) (250 mg, 52%)을 담황색 고체로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C40H52N9O5Si), 766.2 (M+H)+ 관찰치.
단계 2
4-{3-[1-(3-히드록시프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1H-1,2,4-트리아졸-5-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 Z01)의 합성
HFIP (4.0 mL) 중 4-{5-[1-(3-{[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Z-1) (250 mg, 0.326 mmol)의 황색 용액에 MeSO3H (314 mg, 3.26 mmol)를 첨가하였다. 첨가한 후, 생성된 담적색 반응 용액을 50℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 농축시켜 적색 오일을 수득하였으며, 이를 정제용 HPLC (보스턴 프라임 C18 150*25mm*5um, 물 (0.05% 암모니아 히드록시드 v/v)-MeCN (11%-35% 구배), 25 mL/분)에 의해 정제하였다. 분획을 함유하는 생성물을 수집하여 표제 화합물 4-{3-[1-(3-히드록시프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1H-1,2,4-트리아졸-5-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 Z01) (86.4 mg, 69%)을 백색 고체로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C17H20N9O2), 382.0 (M+H)+ 관찰치.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 15.33 (s, 1H), 8.86 (s, 1H), 8.84 (br s, 1H), 8.45 (s, 1H), 7.85 (br s, 1H), 6.70 (s, 1H), 4.70 (br t, J = 7.3 Hz, 2H), 4.58 (br t, J = 4.9 Hz, 1H), 4.22 (s, 3H), 3.53 - 3.45 (m, 2H), 2.23 (s, 3H), 2.05 - 1.95 (m, 2H).
실시예 AA01: 4-{2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-[(메틸아미노)메틸]-1,3-티아졸-4-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드의 반응식 AA에 따른 제조.
반응식 AA
Figure pct00161
단계 1
에틸 4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-5-카르복실레이트 (AA-1)의 합성
건조된 25-mL 플라스크에 먼저 THF (0.94 mL, 0.1 M) 중 에틸 2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-5-카르복실레이트 (Int-TG-19) (250 mg, 0.942 mmol)의 용액을 채우고, 여기에 Zn(TMP)2 (THF 중 0.35 M, 3.23 mL, 1.13 mmol, 1.2 당량)를 첨가하여 적색 용액을 수득하였다. 실온에서 6시간 후, 4-클로로-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Int-HG-20) (340 mg, 0.942 mmol, 1 당량)을 첨가하고, 이어서 Pd2(dba)3 (43 mg, 0.05 mmol, 0.05 당량) 및 P(2-fur)3 (22 mg, 0.094 mmol, 0.1 당량)을 첨가하였다. 용액을 70℃로 가열하고, 20분 후, LCMS 분석은 단지 출발 물질만이 존재함을 나타내었다. 이어서, 이 반응물을 80℃로 대신 가열하고, 이 온도에서 밤새 교반되도록 하였다. 18시간 후, LCMS 분석은 목적 생성물 물질이 형성된 새로운 피크를 나타내었고, 용매를 대부분 증발시켜 타르-유사 잔류물을 남겼다. 이 잔류물을 EtOAc 중에 용해시키고, 모든 고체가 용해될 때까지 포화 수성 NH4Cl과 함께 교반하였다. 이어서, 2상 혼합물을 분리 깔때기로 옮기고, 상을 분리하였다. 유기 상을 1 부분 염수로 세척하고, 건조 (Na2SO4)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 칼럼 크로마토그래피 (SiO2, 95% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 표제 화합물 에틸 4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-5-카르복실레이트 (AA-1) (120 mg, 0.204 mmol, 22%)을 오렌지색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ 8.47 (t, J = 6.0 Hz, 1H), 8.42 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 8.34 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 7.28 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 6.55 (s, 1H), 6.47 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 6.43 (dd, J = 8.2, 2.4 Hz, 1H), 4.68 (q, J = 7.2 Hz, 2H), 4.64 (d, J = 6.1 Hz, 2H), 4.17 (s, 3H), 4.00 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.84 (s, 3H), 3.78 (s, 3H), 2.31 (s, 3H), 1.46 (t, J = 7.2 Hz, 3H), 1.03 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
단계 2
N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-[2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-(히드록시메틸)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AA-2)의 합성
THF (0.85 mL, 0.2 M) 중 에틸 4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-5-카르복실레이트 (AA-1) (100 mg, 0.17 mmol)이 들은 2-드램 바이알에 LiBH4 (7.4 mg, 0.34 mmol, 2 당량)를 첨가하였다. 생성된 백색 현탁액을 40℃로 가열하여 암색 균질 용액을 형성하였다. 2시간 후, LCMS 분석은 출발 물질의 소멸 및 목적 생성물 물질을 갖는 새로운 피크를 나타내었다. 반응물을 가열로부터 제거하고, 실온으로 서서히 냉각되도록 하였다. 반응물을 MeOH (1 mL)로 켄칭하였다. 이어서, 반응 혼합물은 담황색에 이어서 오렌지색으로 변하였고, 이어서 침전물이 형성되었다. 4시간 동안 교반한 후, 백색 고체를 여과하고, 건조시켜 표제 화합물 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-[2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-(히드록시메틸)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AA-2) (60 mg, 0.11 mmol, 65%)을 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.69 (t, J = 6.2 Hz, 1H), 8.68 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 8.32 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.71 (s, 1H), 6.60 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 6.49 (dd, J = 8.3, 2.4 Hz, 1H), 6.28 (t, J = 5.8 Hz, 1H), 5.28 (d, J = 5.7 Hz, 2H), 4.67 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 4.52 (d, J = 6.2 Hz, 2H), 4.19 (s, 3H), 3.89 (s, 3H), 3.74 (s, 3H), 2.23 (s, 3H), 1.42 (t, J = 7.1 Hz, 3H).
단계 3
N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-[2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-포르밀-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AA-3)의 합성
N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-[2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-(히드록시메틸)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AA-2) (30 mg, 0.055 mmol)이 들은 2-드램 바이알에 DCM (0.274 mL, 0.2 M)에 이어서 데스-마르틴 퍼아이오디난 (47 mg, 0.11 mmol, 2 당량)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 목적 생성물 물질을 갖는 새로운 피크로의 완전한 전환을 나타내었다. 이어서, 반응 혼합물을 DCM으로 희석하고, 분리 깔때기로 옮겼다. 유기 상을 1 부분 포화 수성 NaHCO3으로 세척하고, 건조 (Na2SO4)시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-[2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-포르밀-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AA-3)을 백색 고체로서 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
단계 4
N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-{2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-[(메틸아미노)메틸]-1,3-티아졸-4-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AA-4)의 합성
DCE (0.275 mL, 0.2 M) 중에 용해시킨 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-[2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-포르밀-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AA-3) (30 mg, 0.055 mmol)을 함유하는 2-드램 바이알에 MeNH2 (17 mg, 0.55 mmol, 10 당량) 및 AcOH (9.91 mg, 0.165 mmol, 3 당량)을 THF 중 합한 용액 (0.275 mL)으로서 첨가하였다. 이 반응물을 40℃에서 20분 동안 가열하였으며, 그 동안 백색 침전물이 형성되었다. 바이알에 300μL DCE를 채우고, 50℃로 가열하고, 1.5시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 이민의 목적 질량을 포함하는 신규한 피크의 형성을 나타내었다. 이 단계에서, 반응물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 MeOH (0.275 mL, 0.2 mL) 중에 현탁시켰다. 용액에 NaBH4 (3.12 mg, 0.0825 mmol, 1.5 당량)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 이어서, 용액을 농축시켜 표제 화합물 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-{2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-[(메틸아미노)메틸]-1,3-티아졸-4-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AA-4)을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
단계 5
4-{2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-[(메틸아미노)메틸]-1,3-티아졸-4-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 AA01)의 합성
N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-{2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-[(메틸아미노)메틸]-1,3-티아졸-4-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AA-4)이 들은 2-드램 바이알에 TFA (0.55 mL, 0.1 M)를 첨가하여 담황색 균질 용액을 수득하였다. 반응물을 30분 동안 교반하였으며, 이 시점에 LCMS 분석은 목적 생성물 물질을 갖는 피크를 나타내지 않았다. 이어서, 반응물을 50℃로 가열하고, 밤새 교반하였다. LCMS 분석은 목적 생성물 물질을 갖는 피크를 나타내지 않았고, 상당한 출발 물질이 남아있었다. 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켜 백색 고체를 수득하였다. 고체를 HFIP (200 μL) 중에 용해시키고, MsOH (20 μL)을 첨가하였다. 반응물을 50℃에서 4시간 동안 가열하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모 및 목적 생성물 물질을 포함하는 신규한 피크의 형성을 나타내었다. 반응물을 진공 하에 농축시키고, 조 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 표제 화합물 4-{2-(1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-5-[(메틸아미노)메틸]-1,3-티아졸-4-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 AA01) (4.4 mg, 19%)을 수득하였다.
LCMS [M+H] = 411.4 관찰치.
실시예 AB01: 4-{3-[1-에틸-3-(히드록시메틸)-1H-피라졸-5-일]-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드의 반응식 AB에 따른 제조.
반응식 AB
Figure pct00162
단계 1
메틸 4-(3-{3-[(벤질옥시)메틸]-1-에틸-1H-피라졸-5-일}-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실레이트 (AB-1)의 합성
3-{3-[(벤질옥시)메틸]-1-에틸-1H-피라졸-5-일}-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-20) (55 mg, 0.19 mmol), 메틸 4-브로모-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실레이트 (HG-12d) (50 mg, 0.19 mmol), Pd(OAc)2 (4.2 mg, 0.019 mmol), 디(1-아다만틸)-n-부틸포스핀 (13 mg, 0.037 mmol), 피발산 (5.7 mg, 0.056 mmol) 및 탄산칼륨 (77 mg, 0.56 mmol)을 함유하는 밀봉된 바이알을 N2로 퍼징하였다. 톨루엔 (1.9 mL)을 첨가하고, 혼합물을 N2 로 버블링하였다. 반응물을 120℃에서 가열하고, 밤새 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물을 진공 하에 농축시키고, 플래쉬 크로마토그래피 (12 g SiO2, 이스코, 0-10% MeOH/DCM)에 의해 정제하여 표제 화합물 메틸 4-(3-{3-[(벤질옥시)메틸]-1-에틸-1H-피라졸-5-일}-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실레이트 (AB-1) (60 mg, 66%)을 수득하였다.
LCMS [M+H] = 487 관찰치;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.83 (d, J = 0.98 Hz, 1 H) 8.61 (d, J=0.86 Hz, 1 H) 7.37 (d, J = 4.52 Hz, 4 H) 7.26 - 7.33 (m, 1 H) 6.91 (s, 1 H) 4.69 (q, J = 7.17 Hz, 2 H) 4.56 - 4.58 (m, 5 H) 4.53 (s, 2 H) 4.25 (s, 3 H) 3.99 (s, 3 H) 1.45 (t, J = 7.15 Hz, 3 H).
단계 2
메틸 4-{3-[1-에틸-3-(히드록시메틸)-1H-피라졸-5-일]-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실레이트 (AB-2)의 합성
메탄올 (3 mL) 및 HCl (디옥산 중 4 N, 300 μL, 1.2 mmol) 중 메틸 4-(3-{3-[(벤질옥시)메틸]-1-에틸-1H-피라졸-5-일}-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실레이트 (AB-1) (60 mg, 0.12 mmol)의 용액에, 10% Pd/C (15 mg)를 첨가하였다. 플라스크를 배기시키고 N2 기체 (3x)에 이어서 H2 기체로 재충전하였다 (3x). 반응물을 1 atm H2 기체 하에 50℃에서 가열하고, 밤새 교반하였다. 용액을 유리 섬유 필터를 통해 여과하였다. 여과물을 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 메틸 4-{3-[1-에틸-3-(히드록시메틸)-1H-피라졸-5-일]-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실레이트 (AB-2)을 수득하였으며, 이를 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다.
LCMS [M+H] = 397 관찰치.
단계 3
메틸 4-{3-[1-에틸-3-(히드록시메틸)-1H-피라졸-5-일]-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실레이트 (실시예 AB01)의 합성
메틸 4-{3-[1-에틸-3-(히드록시메틸)-1H-피라졸-5-일]-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실레이트 (AB-2) (24 mg, 0.06 mmol)이 들은 바이알에 7 N 메탄올 중 NH3 (1 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 0.5시간 동안 가열하였다. 바이알을 가열로부터 제거하고, 실온으로 서서히 냉각되도록 하였다. 용액을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 MeOH로 슬러리로 만들고, 고체를 여과에 의해 수집하여 표제 화합물 메틸 4-{3-[1-에틸-3-(히드록시메틸)-1H-피라졸-5-일]-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복실레이트 (실시예 AB01) (10 mg, 43%)을 백색 고체로서 수득하였다.
LCMS [M+H] = 382 관찰치;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.75 (s, 1 H) 8.51 (s, 1 H) 8.03 (br s, 1 H) 7.91 (br s, 1 H) 6.82 (s, 1 H) 5.07 (t, J = 5.87 Hz, 1 H) 4.66 (q, J = 7.09 Hz, 2 H) 4.43 - 4.52 (m, 5 H) 4.23 (s, 3 H) 1.44 (t, J = 7.09 Hz, 3 H).
실시예 AC01: 4-[3-(1-에틸-4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드의 반응식 AC에 따른 제조.
Figure pct00163
단계 1
4-{5-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AC-1)의 합성
압력 플라스크에 3-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸 (Int-TG-21) (4.80 g, 11.90 mmol), 4-브로모-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Int-HG-17) (5.79 g, 14.3 mmol), K2CO3 (4.93 g, 35.7 mmol), Pd(OAc)2 (801 mg, 3.57 mmol), 카탁시움 A (2.56 g, 7.14 mmol), CuI (906 mg, 4.76 mmol), PivOH (729 mg, 7.14 mmol) 및 톨루엔 (80 mL)을 채웠다. 생성된 암적색 혼합물을 N2로 5회 탈기하고, 120℃로 가열하였다. 혼합물을 120℃에서 18시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모 및 목적 생성물 물질을 포함하는 신규한 피크의 형성을 나타내었다. 생성된 황색 현탁액을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 EtOAc (50 mL)로 30분 동안 슬러리화하고, 고체를 여과하였다. 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (120g SiO2, 15% EtOAc/석유 에테르에서 100% EtOAc)에 의해 정제하여 표제 화합물 4-{5-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AC-1) (4.47 g, 51%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 9.04 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.83 (br t, J = 5.9 Hz, 1H), 7.19 - 7.12 (m, 5H), 7.09 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 6.65 (d, J = 8.7 Hz, 2H), 6.53 - 6.45 (m, 2H), 6.37 (dd, J = 2.4, 8.4 Hz, 1H), 6.40 - 6.33 (m, 1H), 6.30 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 5.80 (s, 2H), 4.78 (s, 2H), 4.50 (d, J = 6.0 Hz, 2H), 4.22 (s, 3H), 3.92 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.64 (s, 3H), 3.60 (s, 3H), 2.27 (s, 3H), 1.08 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
단계 2
4-[3-(1-에틸-4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 AC01)의 합성
TFA (84mL) 중 4-{5-[4-(벤질옥시)-1-에틸-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AC-1) (4.51 g, 6.197 mmol)의 용액을 80℃로 가열하고, 4시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모 및 목적 생성물 물질을 포함하는 신규한 피크의 형성을 나타내었다. 자주색 용액을 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 EtOAc (100 mL) 중에서 1.5시간 동안 슬러리화하고, 여과하였다. 고체를 EtOAc (20 mLx5)로 세척하였다. 필터 케이크를 수집하고, MeOH (50 mL)로 0.5시간 동안 슬러리화하였다. 현탁액을 여과하고, 고체를 수집한 다음, 고진공 하에 건조시켜 백색 고체 (1.72 g)를 수득하였다. NMR 분석은 불순물이 여전히 존재함을 나타내었다. 백색 고체를 DCM/MeOH (1:5, 50 mL)로 0.5시간 동안 슬러리화하고, 여과하였다. 필터 케이크를 수집하고, 고진공 하에 건조시켜 표제 화합물 4-[3-(1-에틸-4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 AC01) (1.59 g)을 백색 고체로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C16H18N9O2), 368.0 (M+H)+ 관찰치;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 15.35 (s, 1H), 8.87 (br s, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.47 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.90 (br s, 1H), 4.46 (q, J = 6.8 Hz, 2H), 4.23 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 1.36 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 AC02를 4-[3-(1-에틸-4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1H-1,2,4-트리아졸-5-일]-1-메틸-1H-피라졸로 [4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 AC01) (반응식 AC-1)의 합성에 사용된 방법에 따라 관련 기술분야의 통상의 기술자가 실현할 수 있을 예시된 절차에 대한 비결정적 변형 또는 치환으로 합성하였다.
Figure pct00164
실시예 AD01: 4-{3-[1-(3-히드록시프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드의 반응식 AD에 따른 제조.
반응식 AD
Figure pct00165
단계 1
3-{5-[5-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-3-일]-3-메틸-1H-피라졸-1-일}프로필 아세테이트 (AD-1)의 합성.
톨루엔 (10 mL, 0.15 M) 중 3-[3-메틸-5-(1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-1H-피라졸-1-일]프로필 아세테이트 (Int-TG-22) (666 mg, 1.64 mmol, 1.1 당량), 4-브로모-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Int-HG-17) (404.5 mg, 1.536 mmol), K2CO3 (667 mg, 4.82 mmol, 3 당량), Pd(OAc)2 ( 69.0 mg, 0.307 mmol, 0.2 당량), PivOH (62.8 mg, 0.615 mmol, 0.3 당량), 및 P(n-Bu)Ad2 (165 mg, 0.461 mmol, 0.4 당량)의 암적색 현탁액을 N2로 2분 동안 폭기한 다음, 밀봉한 후, 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 조 물질의 또 다른 배치와 합하고, 고체를 여과하였다. 필터 케이크를 10:1 DCM/MeOH (10 mL)로 세척하였다. 여과물을 진공 하에 농축시키고, 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (이스코, 실리카 겔: 20 g, MeOH, 에틸 아세테이트 중 0%에서 5%까지)에 의해 정제하여 표제 화합물 3-{5-[5-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-3-일]-3-메틸-1H-피라졸-1-일}프로필 아세테이트 (AD-1) (538 mg, 55%)을 황색 고체로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C29H34N9O5), 588.1 (M+H)+ 관찰치.
단계 2
N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-{3-[1-(3-히드록시프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AD-2)의 합성.
MeOH (15 mL, 0.06 M) 중 3-{5-[5-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-3-일]-3-메틸-1H-피라졸-1-일}프로필 아세테이트 (AD-1) (538.7 mg, 0.92 mmol)의 용액에 실온에서 K2CO3 (380 mg, 2.75 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 MeOH 중 4.0 N HCl로 중화시켰다. 혼합물을 진공 하에 농축시키고, 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (이스코, 실리카 겔: 25 g, DCM 중 MeOH 0%에서 5%까지)에 의해 정제하여 표제 화합물 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-{3-[1-(3-히드록시프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AD-2) (397.7 mg, 79%)을 황색 고체로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C27H32N9O4), 546.1 (M+H)+ 관찰치.
단계 3
4-{3-[1-(3-히드록시프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 AD01)의 합성.
HFIP (1 mL, 0.1 M) 중 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-{3-[1-(3-히드록시프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AD-2) (97.7 mg, 0.11 mmol)의 담황색 용액에 MsOH (155 mg, 1.61 mmol, 1.5 당량)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 NH4OH로 중화시키고, 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 정제용 HPLC (보스턴 프라임 C18 150x25mmx5μM 칼럼, 25mL/분, 20%-43% MeCN/H2O, 0.225% 포름산 함유, 5회 주입)에 의해 정제하여 표제 화합물을 수득하였다. 이 물질을 SFC에 의한 추가 정제에 적용하여 표제 화합물 4-{3-[1-(3-히드록시프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 AD01) (14 mg, 34%)을 백색 고체로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C18H22N9O2), 396.1 (M+H)+ 관찰치;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 8.80 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.05 (br s, 1H), 7.94 (br s, 1H), 6.66 (s, 1H), 4.67 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 4.56 (t, J = 5.1 Hz, 1H), 4.45 (s, 3H), 4.23 (s, 3H), 3.50 - 3.43 (m, 2H), 2.22 (s, 3H), 1.98 (quin, J = 6.7 Hz, 2H).
실시예 AD02를 4-{3-[1-(3-히드록시프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-5-일}-1-메틸-1H-피라졸로 [4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 AD01)의 합성에 사용된 방법 (반응식 AD)에 따라 관련 기술분야의 통상의 기술자가 실현할 수 있을 예시된 절차에 대한 비결정적 변형 또는 치환으로 합성하였다.
Figure pct00166
실시예 AE01: 4-[2-(1-에틸-4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-옥사졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드의 반응식 AE에 따른 제조.
반응식 AE
Figure pct00167
단계 1
4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-{1-에틸-4-[(4-메톡시페닐)메톡시]-3-메틸-1H-피라졸-5-일}-1,3-옥사졸-5-카르복실산 (AE-1)의 합성.
EtOH (5mL) 및 H2O (0.5mL) 중 에틸 4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-{1-에틸-4-[(4-메톡시페닐)메톡시]-3-메틸-1H-피라졸-5-일}-1,3-옥사졸-5-카르복실레이트 (U'-1) (190mg, 0.268mmol)의 황색 현탁액에 LiOH·H2O (22.5mg, 0.535mmol)를 첨가하였다. 생성된 담황색 현탁액을 40℃로 가열하고, 16시간 동안 교반하였다. 생성된 담황색 현탁액을 농축 건조시켰다. 조 잔류물을 물 (10 mL) 중에 용해시키고, EtOAc를 사용하여 분리 깔때기로 옮겼다. 상을 분리하고, 수성 상을 EtOAc (3x10 mL)로 추출하였다. 수성 층을 12N HCl을 사용하여 산성화시켜 pH 5~6을 달성하였으며, 이는 황색 침전물의 형성을 유발하였다. 현탁액을 여과하고, 고체를 단리시키고, 진공 하에 추가로 건조시켜 표제 화합물 4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로 [4,3-c]피리딘-4-일)-2-{1-에틸-4-[(4-메톡시페닐)메톡시]-3-메틸-1H-피라졸-5-일}-1,3-옥사졸-5-카르복실산 (AE-1) (120 mg, 65%)을 황색 고체로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C35H35N7O8), 682.1 (M+H)+ 관찰치.
단계 2
N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-(2-{1-에틸-4-[(4-메톡시페닐)메톡시]-3-메틸-1H-피라졸-5-일}-1,3-옥사졸-4-일)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AE-2)의 합성.
DMSO (1.00 mL) 중 4-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-2-{1-에틸-4-[(4-메톡시페닐)메톡시]-3-메틸-1H-피라졸-5-일}-1,3-옥사졸-5-카르복실산 (AE-1) (115.3mg, 0.1691mmol)의 황색 현탁액에 Ag2CO3 (5.2mg, 0.019mmol) 및 AcOH (1.8mg, 0.030mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 60℃로 가열하고, 16시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 완전히 소모되지 않았음을 나타내었으나, 목적 생성물을 갖는 새로운 피크가 관찰되었다. 이 단계에서, 추가 분취량의 Ag2CO3 (22.3mg, 0.0809mmol) 및 AcOH (7.6mg, 0.13mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 가열로부터 제거하고, 실온으로 냉각되도록 하였다. 용액을 DCM (5 mL)으로 희석하고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물을 분리 깔때기로 옮기고, 포화 NaHCO3 (5 mL) 및 물 (3x5 mL)로 세척하였다. 합한 수성 세척물을 DCM (2x10 mL)으로 역추출하였다. 합한 유기 추출물을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-(2-{1-에틸-4-[(4-메톡시페닐)메톡시]-3-메틸-1H-피라졸-5-일}-1,3-옥사졸-4-일)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AE-2) (85 mg)을 황색 고체로서 수득하였다. 이 물질을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C34H35N7O6), 638.2 (M+H)+ 관찰치.
단계 3
4-[2-(1-에틸-4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-옥사졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 AE01)의 합성.
HFIP (1.50mL) 중 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-(2-{1-에틸-4-[(4-메톡시페닐)메톡시]-3-메틸-1H-피라졸-5-일}-1,3-옥사졸-4-일)-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AE-2) (85mg, 0.13mmol)의 황색 현탁액에 MsOH (128mg, 1.33mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃로 가열하고, 온도에서 2시간 동안 교반하였다. 자주색 용액이 형성되었고, LCMS 분석은 출발 물질이 소모되었음을 나타내었다. 생성된 혼합물을 농축 건조시켜 조 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 DCM (10 mL) 중에 용해시키고, NH3/MeOH로 염기성화시켜 pH 7~8을 달성하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (12g SiO2, 콤비-플래쉬, 0-5% MeOH/EtOAc)에 의해 정제하여 소량의 불순물이 여전히 존재하는 생성물 (39 mg)을 수득하였다. 물질을 추가로 정제용-TLC (DCM/MeOH=10:1)에 의해 정제하여 표제 화합물 4-[2-(1-에틸-4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-일)-1,3-옥사졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로 [4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 AE01) (22mg, 22%, 3 단계에 걸침)를 백색 고체로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C17H17N7O3), 368.3 (M+H)+ 관찰치;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.34 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.75 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 8.54 (br d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.83 (br d, J = 2.3 Hz, 1H), 4.56 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 4.18 (s, 3H), 2.15 (s, 3H), 1.41 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
실시예 AF01: 4-{5-(아미노메틸)-2-[1-(3-히드록시프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1,3-티아졸-4-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드의 반응식 AF-1에 따른 제조.
반응식 AF-1
Figure pct00168
단계 1
2,4-디브로모-5-({[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}메틸)-1,3-티아졸 (AF-2)의 합성.
둥근 바닥 플라스크에 (2,4-디브로모-1,3-티아졸-5-일)메탄올 (AF-1) (1.3 g, 4.8 mmol), tert-부틸디메틸실릴 클로라이드 (1.1 g, 7.3 mmol), 이미다졸 (660 mg, 7.3 mmol), 및 DMF (16 mL)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이 단계에서, 반응을 농축시키고, 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (40 g SiO2, 이스코, 0-10% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 표제 화합물 2,4-디브로모-5-({[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}메틸)-1,3-티아졸 (AF-2) (1.7 g, 90%)을 미황색 오일로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C10H17Br2NOSSi), 230 (M-2Br+H)+ 관찰치;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 4.78 (s, 2 H) 0.88 (s, 9 H) 0.10 (s, 6 H).
단계 2
4-브로모-5-({[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}메틸)-2-(3-메틸-1-{3-[(옥산-2-일)옥시]프로필}-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸 (AF-3)의 합성.
THF (3.0 mL) 중 3-메틸-1-{3-[(옥산-2-일)옥시]프로필}-1H-피라졸 (Int-TG-24) (100 mg, 0.45 mmol)의 냉각된 (-25 내지 -30℃ 아세톤/온도를 제어하기에 충분한 드라이 아이스) 용액에 n-부틸 리튬 (헥산 중 2.3 M, 210 μL, 0.49 mmol)을 적가하였다. 20분 후, 염화아연 (MeTHF 중 1.9 M, 280 μL, 0.54 mmol)을 첨가하고, 빙조를 제거하였다. 30분 후, THF (0.50 mL) 중 2,4-디브로모-5-({[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}메틸)-1,3-티아졸 (AF-2) (190 mg, 0.49 mmol)의 용액을 첨가하고, 이어서 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐(0) (52 mg, 0.045 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반한 다음, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (12 g SiO2, 이스코, 0-15% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 표제 화합물 4-브로모-5-({[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}메틸)-2-(3-메틸-1-{3-[(옥산-2-일)옥시]프로필}-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸 (AF-3) (69 mg, 29%)을 수득하였다. m/z (ESI+) - (C22H36BrN3O3SSi), 530 (M+H)+ 관찰치;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 6.64 (s, 1 H) 4.84 (s, 2 H) 4.48 - 4.61 (m, 2 H) 4.42 - 4.48 (m, 1 H) 3.49 - 3.67 (m, 2 H) 3.32 - 3.40 (m, 1 H) 3.21 - 3.27 (m, 1 H) 2.18 (s, 3 H) 2.00 (quin, J=6.60 Hz, 2 H) 1.62 - 1.73 (m, 1 H) 1.48 - 1.58 (m, 1 H) 1.34 - 1.47 (m, 4 H) 0.90 (s, 9 H) 0.12 (s, 6 H).
단계 3
4-[5-({[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}메틸)-2-(3-메틸-1-{3-[(옥산-2-일)옥시]프로필}-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-4-일]-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AF-4)의 합성.
둥근 바닥 플라스크에 4-브로모-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Int-HG-17) (56 mg, 0.14 mmol), B2Pin2 (67 mg, 0.27 mmol), 탄산칼륨 (84 mg, 0.40 mmol) 및 (t-Bu3P)-Pd-G4 (6.8 mg, 0.013 mmol)를 채우고, 질소로 퍼징하였다. 플라스크에 톨루엔 (1.3 mL) 중 용액로서의 4-브로모-5-({[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}메틸)-2-(3-메틸-1-{3-[(옥산-2-일)옥시]프로필}-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸 (AF-3) (70 mg, 0.13 mmol)에 이어서 물 (0.26 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소로 폭기하고, 80℃에서 밤새 가열하였다. 플라스크를 가열로부터 제거하고, 실온으로 냉각되도록 하였다. 용액을 EtOAc로 희석하고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (4 g SiO2, 이스코, 0-50% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 표제 화합물 4-[5-({[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}메틸)-2-(3-메틸-1-{3-[(옥산-2-일)옥시]프로필}-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-4-일]-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AF-4) (28 mg, 27%)을 수득하였다. m/z (ESI+) - (C39H53N7O6SSi), 776 (M+H)+ 관찰치;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.72 (d, J=0.98 Hz, 1 H) 8.61 (t, J=6.24 Hz, 1 H) 8.34 (d, J=0.86 Hz, 1 H) 7.15 (d, J=8.44 Hz, 1 H) 6.71 (s, 1 H) 6.59 (d, J=2.32 Hz, 1 H) 6.46 (dd, J=8.38, 2.38 Hz, 1 H) 5.51 (s, 2 H) 4.77 (t, J=6.97 Hz, 2 H) 4.52 (d, J=6.24 Hz, 2 H) 4.19 (s, 3 H) 3.84 (s, 4 H) 3.73 (s, 3 H) 3.54 - 3.60 (m, 2 H) 3.21 - 3.26 (m, 2 H) 2.23 (s, 3 H) 2.04 - 2.12 (m, 2 H) 1.29 - 1.44 (m, 4 H) 1.14 - 1.20 (m, 2 H) 0.88 (s, 9 H) 0.02 (s, 6 H).
단계 4
N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-[5-(히드록시메틸)-2-(3-메틸-1-{3-[(옥산-2-일)옥시]프로필}-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AF-5)의 합성.
THF (650 μL) 중 4-[5-({[tert-부틸(디메틸)실릴]옥시}메틸)-2-(3-메틸-1-{3-[(옥산-2-일)옥시]프로필}-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-4-일]-N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AF-4) (50 mg, 0.64 mmol)의 용액에 테트라부틸암모늄 플루오라이드 (THF 중 1 N, 97 μL, 0.097 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 진공 하에 농축시키고, 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (4 g SiO2, 이스코, 0-200% EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 표제 화합물 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-[5-(히드록시메틸)-2-(3-메틸-1-{3-[(옥산-2-일)옥시]프로필}-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AF-5) (31 mg, 73%)을 수득하였다. m/z (ESI+) - (C33H39N7O6S), 662 (M+H)+ 관찰치.
단계 5
N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-[5-포르밀-2-(3-메틸-1-{3-[(옥산-2-일)옥시]프로필}-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AF-6)의 합성.
디클로로메탄 (1.0 mL) 중 N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-4-[5-(히드록시메틸)-2-(3-메틸-1-{3-[(옥산-2-일)옥시]프로필}-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AF-5) (31 mg, 0.047)의 냉각된 (빙수조) 용액에 데스-마르틴 퍼아이오디난 (30 mg, 0.070 mmol)을 첨가하고, 빙조를 제거하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이 단계에서, 반응을 EtOAc로 희석하고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-[5-포르밀-2-(3-메틸-1-{3-[(옥산-2-일)옥시]프로필}-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AF-6)을 수득하였다. 이 물질을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C33H37N7O6S), 660 (M+H)+ 관찰치.
단계 6
N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-4-[2-(3-메틸-1-{3-[(옥산-2-일)옥시]프로필}-1H-피라졸-5-일)-5-{(E)-[(2-메틸프로판-2-술피닐)이미노]메틸}-1,3-티아졸-4-일]-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AF-7)의 합성.
조 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-[5-포르밀-2-(3-메틸-1-{3-[(옥산-2-일)옥시]프로필}-1H-피라졸-5-일)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AF-6)이 들은 플라스크에 tert-부틸술핀아미드 (11 mg, 0.094 mmol), 탄산세슘 (301 mg, 0.094 mmol), 및 디클로로메탄 (1.0 mL)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 6시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 목적 생성물 물질을 갖는 미량의 피크가 형성되었음을 나타내었다. 이 단계에서, THF (1.0 mL)를 첨가하고, 반응물을 50℃로 밤새 가열하였다. 이 단계에서, 추가의 2 당량의 tert-부틸술핀아미드 및 탄산세슘을 첨가하였다. 3시간 후, 반응물을 셀라이트를 통해 여과하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-4-[2-(3-메틸-1-{3-[(옥산-2-일)옥시]프로필}-1H-피라졸-5-일)-5-{(E)-[(2-메틸프로판-2-술피닐)이미노]메틸}-1,3-티아졸-4-일]-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AF-7)을 수득하였다. 이 물질을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C37H46N8O6S2), 763 (M+H)+ 관찰치.
단계 7
N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-4-[2-(3-메틸-1-{3-[(옥산-2-일)옥시]프로필}-1H-피라졸-5-일)-5-{[(2-메틸프로판-2-술피닐)아미노]메틸}-1,3-티아졸-4-일]-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AF-8)의 합성.
조 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-4-[2-(3-메틸-1-{3-[(옥산-2-일)옥시]프로필}-1H-피라졸-5-일)-5-{(E)-[(2-메틸프로판-2-술피닐)이미노]메틸}-1,3-티아졸-4-일]-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AF-7)이 들은 플라스크에 THF (1.0 mL) 및 수소화붕소나트륨 (5.3 mg, 0.14 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 이 단계에서, 반응을 메탄올로 켄칭하고, 진공 하에 농축시켜 표제 화합물 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-4-[2-(3-메틸-1-{3-[(옥산-2-일)옥시]프로필}-1H-피라졸-5-일)-5-{[(2-메틸프로판-2-술피닐)아미노]메틸}-1,3-티아졸-4-일]-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AF-8)을 수득하였다. 이 물질을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C37H48N8O6S2), 765 (M+H)+ 관찰치.
단계 8
4-{5-(아미노메틸)-2-[1-(3-히드록시프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1,3-티아졸-4-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 AF01)의 합성.
조 N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-4-[2-(3-메틸-1-{3-[(옥산-2-일)옥시]프로필}-1H-피라졸-5-일)-5-{[(2-메틸프로판-2-술피닐)아미노]메틸}-1,3-티아졸-4-일]-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AF-8)이 들은 플라스크에 MeOH (0.5 mL) 및 TFA (0.5 mL)를 첨가하였다. 반응물을 50℃에서 가열하고, 밤새 교반하였다. 이 단계에서, 반응을 진공 하에 농축시키고, 조 잔류물을 순수한 트리플루오로아세트산 중에 용해시키고, 60℃로 20분 동안 가열하였다. 이어서, 용액을 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 MeOH 중에 용해시키고, 1 N NaOH (100 μL)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 15분 동안 교반한 다음, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 (페노메넥스 제미니 C18 5μmx150x21.2 mm 칼럼, 주위 온도에서, 10-100% MeCN/물 0.1% 수산화암모늄, 40 mL/분 유량)을 사용하여 정제하여 표제 화합물 4-{5-(아미노메틸)-2-[1-(3-히드록시프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1,3-티아졸-4-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 AF01) (6 mg, 4 단계에 걸쳐 30%)을 수득하였다. m/z (ESI+) - (C19H22N8O2S), 427 (M+H)+ 관찰치;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 1H NMR (600 MHz, 용매) δ ppm 8.70 (s, 1 H) 8.32 (s, 1 H) 6.66 (s, 1 H) 4.68 - 4.73 (m, 2 H) 4.46 - 4.55 (m, 2 H) 4.19 (s, 3 H) 3.40 - 3.43 (m, 2 H) 2.23 (s, 3 H) 1.91 - 2.07 (m, 2 H).
실시예 AF02를 4-{5-(아미노메틸)-2-[1-(3-히드록시프로필)-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1,3-티아졸-4-일}-1-메틸-1H-피라졸로 [4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 AF01)의 합성에 사용된 방법 (반응식 AF-1)에 따라 관련 기술분야의 통상의 기술자가 실현할 수 있을 예시된 절차에 대한 비결정적 변형 또는 치환으로 합성하였다.
Figure pct00169
실시예 AG01: 4-[2-(1-에틸-3-히드록시-4-메틸-1H-피롤-2-일)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드의 반응식 AG에 따른 제조
반응식 AG
Figure pct00170
단계 1
2-[3-(벤질옥시)-1-에틸-4-메틸-1H-피롤-2-일]-4-브로모-1,3-티아졸 (AG-2)의 합성.
무수 THF (5mL) 중 3-(벤질옥시)-1-에틸-4-메틸-1H-피롤 (TG-13a) (200mg, 0.925mmol)의 무색 용액을 드라이 아이스-EtOH 조를 사용하여 -65℃로 냉각시켰다. 용액에 n-BuLi (90mg, 0.56 mL, 1.4mmol)를 적가하여 내부 온도를 -60℃ 미만으로 유지하였다. 생성된 황색 용액을 30분 동안 교반하였다. 이어서, ZnCl2 (190mg, 0.70 mL, 1.4mmol, 2-Me THF 중 2.5 M)을 적가하여 내부 온도를 -60℃ 미만으로 유지하였다. 담황색 슬러리가 형성되었다. 반응물을 온도에서 10분 동안 교반한 다음, 빙조를 제거하고, 반응물을 30분 동안 교반하면서 실온으로 서서히 가온되도록 하였다. 무색 용액이 형성되었다. 이어서, 2,4-디브로모-1,3-티아졸 (AG-1) (247mg, 1.02mmol) 및 Pd(PPh3)4 (107mg, 0.0925mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 N2로 2분 동안 플러싱하고, 밀봉하고, 80℃에서 16시간 동안 가열하였다. 생성된 황색 용액을 진공 하에 농축시키고, 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (12g SiO2, 콤비-플래쉬, 5%-20% EtOAc/석유 에테르)에 의해 정제하여 표제 화합물 2-[3-(벤질옥시)-1-에틸-4-메틸-1H-피롤-2-일]-4-브로모-1,3-티아졸 (AG-2) (174 mg, 49%)을 황색 고체로서 수득하였다.
1H NMR (400 MHz, 클로로포름-d) δ = 7.50 - 7.33 (m, 5H), 7.23 (s, 1H), 4.97 (s, 2H), 4.63 (q, J = 7.1 Hz, 2H), 2.23 (s, 3H), 1.43 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
단계 2
4-{2-[3-(벤질옥시)-1-에틸-4-메틸-1H-피롤-2-일]-1,3-티아졸-4-일}-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AG-3)의 합성.
플라스크에 2-[3-(벤질옥시)-1-에틸-4-메틸-1H-피롤-2-일]-4-브로모-1,3-티아졸 (AG-2) (170mg, 0.449mmol), 4-브로모-N-[(3,4-디메틸페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Int-HG-17) (182mg, 0.449mmol), K3PO4 (286mg, 1.35mmol), B2Pin2 (228mg, 0.899mmol), (카탁시움 A)-Pd-G3 (32.7mg, 0.0449mmol) 및 톨루엔 (2.50mL), H2O (0.50mL)를 채웠다. 생성된 혼합물을 N2로 2분 동안 플러싱하고, 밀봉하고, 80℃에서 16시간 동안 가열하였다. 생성된 혼합물을 EtOAc (10 mL)로 희석하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 셀라이트를 통해 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (20g SiO2, 콤비-플래쉬, 15%-100% EtOAc/ 석유 에테르)에 의해 정제하여 표제 화합물 4-{2-[3-(벤질옥시)-1-에틸-4-메틸-1H-피롤-2-일]-1,3-티아졸-4-일}-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AG-3) (126 mg, 45%)을 황색 검으로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C34H34N6O4S), 624.1 (M+H)+ 관찰치.
단계 3
4-[2-(1-에틸-3-히드록시-4-메틸-1H-피롤-2-일)-1,3-티아졸-4-일]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 AG01)의 합성.
HFIP (2.00mL) 중 4-{2-[3-(벤질옥시)-1-에틸-4-메틸-1H-피롤-2-일]-1,3-티아졸-4-일}-N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (AG-3) (126mg, 0.202mmol)의 혼합물에 MsOH (194mg, 2.02mmol)를 첨가하였다. 생성된 혼합물을 50℃에서 2.5시간 동안 가열하였다. 생성된 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 DMF (2 mL)로 희석하고, NH4OH (H2O 중 28% 용액)로 중화시키고, 정제용 HPLC (YMC 트리아트 C18 250x50mmx7μm 칼럼, 8%-48% MeCN/H2O, 0.05% NH4OH 함유, 60 mL/분 유량, 2회 주입)에 의해 정제하였다. 분획을 함유하는 생성물을 동결건조시켜 표제 화합물 (18.46 mg, 23%)을 백색 고체로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C18H18N6O2S), 384.1 (M+H)+ 관찰치;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 9.24 (s, 1H), 8.74 (d, J = 1.0 Hz, 1H), 8.63 (br s, 1H), 8.32 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.79 (br d, J = 2.0 Hz, 1H), 4.75 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 4.19 (s, 3H), 2.18 (s, 3H), 1.42 (t, J = 7.2 Hz, 3H).
실시예 AH01: 4-{3-[1-(3-아미노프로필)-4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1H-1,2,4-트리아졸-5-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드의 반응식 AH에 따른 제조.
반응식 AH
Figure pct00171
단계 1
tert-부틸 {3-[4-(벤질옥시)-5-{5-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로필}카르바메이트 (AH-1)의 합성.
바이알에 tert-부틸 {3-[4-(벤질옥시)-5-브로모-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로필}카르바메이트 (Int-TG-31) (121mg, 0.285mmol), N-[(2,4-디메톡시페닐)메틸]-4-{4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (Int-HG-17) (176mg, 0.342mmol), Pd(OAc)2 (7.1mg, 0.032mmol), PPh3 (15.0mg, 0.0570mmol), K2CO3 (117.0mg, 0.847mmol), CuI(Xantphos) (67mg, 0.0.087mmol) 및 톨루엔 (5mL)을 채웠다. 반응 혼합물을 실온에서 ~1분 동안 탈기한 다음, 120℃에서 16시간 동안 가열하였다. LCMS 분석은 출발 물질이 여전히 남아있음을 나타내었고, 따라서 반응물을 질소 분위기 하에 120℃에서 추가로 48시간 동안 교반하였다. 이 단계에서, 반응물을 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 조 잔류물을 정제용-TLC (100% EtOAc)에 의해 정제하여 표제 화합물 tert-부틸 {3-[4-(벤질옥시)-5-{5-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로필}카르바메이트 (AH-1) (85 mg, 35%)을 무색 검으로서 수득하였다. 이 물질을 후속 단계에 추가 정제 없이 사용하였다. m/z (ESI+) - (C46H52N10O7), 857.4 (M+H)+ 관찰치.
단계 2
4-{3-[1-(3-아미노프로필)-4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1H-1,2,4-트리아졸-5-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 AH01)의 합성.
TFA (2mL) 중 tert-부틸 {3-[4-(벤질옥시)-5-{5-(6-{[(2,4-디메톡시페닐)메틸]카르바모일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-4-일)-4-[(4-메톡시페닐)메틸]-4H-1,2,4-트리아졸-3-일}-3-메틸-1H-피라졸-1-일]프로필}카르바메이트 (AH-1) (85mg, 0.099mmol)의 담황색 용액을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. LCMS 분석은 출발 물질의 소모를 나타내었다. 반응물을 진공 하에 농축시키고, 조 잔류물을 정제용 HPLC (워터스 엑스브리지 BEH C18 100x30mmx10μm 칼럼 (0%-37% MeCN/H2O, 0.05% NH4OH 함유, 25 mL/분, 4회 주입)에 의해 정제하였다. 분획을 함유하는 생성물을 수집하고, 동결건조시켜 표제 화합물 4-{3-[1-(3-아미노프로필)-4-히드록시-3-메틸-1H-피라졸-5-일]-1H-1,2,4-트리아졸-5-일}-1-메틸-1H-피라졸로[4,3-c]피리딘-6-카르복스아미드 (실시예 AH01) (22.34 mg, 57%)을 백색 TFA 염으로서 수득하였다. m/z (ESI+) - (C17H20N10O2), 397.3 (M+H)+ 관찰치;
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ = 15.38 (s, 1H), 8.86 (br d, J = 1.7 Hz, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.49 (s, 1H), 8.11 (s, 1H), 7.89 (br s, 1H), 7.65 (br s, 3H), 4.53 (br t, J = 6.4 Hz, 2H), 4.23 (s, 3H), 2.86 - 2.71 (m, 2H), 2.15 (s, 3H), 2.12 - 2.03 (m, 2H); 19F NMR (377 MHz, DMSO-d6) δ = -73.45 (s, 1F).
실시예 YY01-YY35를 본원에 기재된 것과 유사한 합성 경로 및 합성 방법에 따라, 관련 기술분야의 통상의 기술자가 실현할 수 있을 예시된 절차에 대한 비-결정적 변형 또는 치환을 사용하여 제조하였다.
Figure pct00172
Figure pct00173
Figure pct00174
Figure pct00175
Figure pct00176
Figure pct00177
Figure pct00178
Figure pct00179
Figure pct00180
실시예 ZZZ001-ZZZ132를 본원에 기재된 것과 유사한 합성 경로 및 합성 방법 방법에 따라, 관련 기술분야의 통상의 기술자가 실현할 수 있을 예시된 절차에 대한 비-결정적 변형 또는 치환으로 제조하였다.
Figure pct00181
Figure pct00182
Figure pct00183
Figure pct00184
Figure pct00185
Figure pct00186
Figure pct00187
Figure pct00188
Figure pct00189
Figure pct00190
Figure pct00191
Figure pct00192
Figure pct00193
Figure pct00194
Figure pct00195
Figure pct00196
Figure pct00197
Figure pct00198
Figure pct00199
Figure pct00200
Figure pct00201
Figure pct00202
Figure pct00203
Figure pct00204
Figure pct00205
Figure pct00206
Figure pct00207
Figure pct00208
Figure pct00209
생물학적 실시예
생화학적 검정 방법
섬광 근접 검정 (SPA) 경쟁적 결합
화합물 상호작용이 삼중수소-표지된 버전의 천연 STING 리간드, 3H-시클릭 구아닌 (2',5') 모노포스페이트 아데닌 (3',5') 모노포스페이트 (3H-cGAMP)와 경쟁하는지 여부를 결정하기 위해 방사성리간드 결합 검정을 개발하였다. STING 구축물 (WT 및 H232R)은, N-말단 막횡단 도메인 (1-154) 뿐만 아니라 C-말단 꼬리 (342-379)가 제거된, N- 및 C-말단 말단절단 둘 다를 갖는 잔기 155-341로 구성되었다. 고도로 특이적인 N-말단 비오티닐화는 이. 콜라이 비오틴 리가제 (BirA)에 의해 효소적으로 달성되고 고친화도 비오티닐화 펩티드 아비태그TM를 포함하였다. 150 mM NaCl, 25 mM Hepes (pH 7.5), 0.1 mM EDTA, 1 mM DTT, 0.005% (v/v) 트윈-20, 1% (v/v) DMSO 중에서, 100 nM STING 단백질을 20 μg 스트렙타비딘 폴리비닐 톨루엔 (SA-PVT) 비드 상에 고정화시켰다. 100 nM 3H-cGAMP 및 화합물을 첨가하고, 실온에서 평형이 되도록 하였다 (20분). 화합물을 100 μM 출발 농도로부터 3배 희석 시리즈로 시험하고, 3H-cGAMP 결합을 완전히 차단하는 양성 대조군 화합물 및 음성 대조군 DMSO에 대해 정규화하였다. 쳉-프루소프 방정식 (Cheng & Prusoff, Biochemical Pharmacology, 22 (1973), pp. 3099-3108)을 사용하여 IC50으로부터 경쟁적 결합에 대한 KI를 결정하였다. 쳉-프루소프 방정식에 사용된 3H-cGAMP에 대한 KD 값은 WT STING에 대해 1 nM, 및 R232H STING에 대해 750 nM인 것으로 실험적으로 결정되었다. SPA 경쟁적 결합 데이터는 표 1, 표 1A 및 표 1B에 제공된다.
표 1:
Figure pct00210
Figure pct00211
Figure pct00212
* 이와 같이 나타낸 화합물을 상기 실시예 섹션에 나타낸 바와 같이 위치이성질체의 혼합물로서 제조하고, 그대로 시험관내 생물학적 검정에서 시험하였다.
표 1A:
Figure pct00213
표 1B:
Figure pct00214
IRF3의 인산화: THP-1 세포 ELISA
STING 활성화는 제I형 인터페론의 유도 전에 TBK1의 동원 및 IRF3 전사 인자의 인산화를 유발한다. THP-1 세포 (인비보젠(InvivoGen))를 RPMI 배지 + 2 mM L-글루타민, 10% 태아 소 혈청 및 0.5% Pen-Strep에서 성장시켰다. 104개의 세포를 96-웰 플레이트에 시딩하고, 37℃, 5% CO2에서 밤새 인큐베이션하였다. 배지 중 연속 희석된 화합물 (최종 0.5% DMSO)을 세포에 첨가하고, 추가로 3시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후에, 플레이트를 2000 rpm에서 5분 동안 원심분리하였다. 이어서 세포를 100 μl RIPA 완충제 중에 용해시키고, 실온에서 30분 동안 볼텍싱하였다. 이어서 25 μl의 용해물을 사전에 마우스 항-인간 IRF-3 포획 항체 (BD 파미젠(BD Pharmigen))로 코팅된 투명한 폴리스티렌 하이 바인드(High Bind) 플레이트로 옮기고, 4℃에서 16시간 동안 인큐베이션되도록 하였다. 이어서 플레이트를 세척하고, 토끼 항-포스포-IRF3 검출 항체 (셀 시그널링 테크놀로지스(Cell Signaling Technologies))와 함께 실온에서 1.5시간 동안 인큐베이션하였다. 최종적으로, HRP-연결된 2차 항체 (셀 시그널링 테크놀로지스)를 30분 동안 첨가한 후, 글로 기질 시약 (알앤디 시스템즈)을 사용하여 발광 신호를 생성하였다. 신호를 퍼킨-엘머(Perkin-Elmer) 엔비전(Envision) 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 측정하였다. 데이터를 인산화 IRF3 신호를 최대화하는 것으로 공지된 양성 대조군 STING 효능제 및 음성 대조군은 DMSO를 사용하여 "% 효과"로 정규화하였다. IRF3 인산화 데이터는 표 2 및 표 2A에 제공된다.
표 2:
Figure pct00215
Figure pct00216
* 이와 같이 나타낸 화합물을 상기 실시예 섹션에 나타낸 바와 같이 위치이성질체의 혼합물로서 제조하고, 그대로 시험관내 생물학적 검정에서 시험하였다.
표 2A:
Figure pct00217
인터페론-β 유도: THP-1 ISG 리포터 세포주
THP-1 루시아(Lucia)TM ISG 세포 (인비보젠)는 5개의 인터페론 반응 요소로 구성된 IRF-유도성 복합 프로모터의 제어 하에 분비되는 루시페라제 "루시아" 리포터 유전자를 발현한다. THP-1 루시아TM ISG 세포를 RPMI 배지 + 2 mM L-글루타민, 10% 태아 소 혈청 및 0.5% Pen-Strep에서 성장시켰다. 히그로마이신 B 및 제오신은 안정한 형질감염을 유지하기 위해 존재하였다. 104개의 세포를 96-웰 플레이트에 시딩하고, 37℃, 5% CO2에서 밤새 인큐베이션하였다. 배지 (최종 0.5% DMSO) 중 연속 희석된 화합물 50 μL을 추가로 24시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 플레이트를 2000 rpm에서 10분 동안 원심분리하였다. 각각의 웰의 세포 배양물 상청액 50 μl을 백색, 불투명 96-웰 플레이트로 옮겼다. 퀀티-루크(QUANTI-Luc)TM (인비보젠 (InvivoGen)) 분말의 1개의 파우치를 25 mL의 내독소-무함유 물에서 제조하고, 100 μL의 제조된 따뜻한 퀀티-루크 용액을 상청액을 함유하는 각각의 웰에 첨가하였다. 발광 신호를 퍼킨-엘머 엔비전 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 측정하였다. 데이터를 루시페라제 신호를 최대화하는 것으로 공지된 양성 대조군 STING 효능제 및 음성 대조군 DMSO를 사용하여 "% 효과"로 정규화하였다. 인터페론-β 유도 데이터는 표 3 및 표 3A에 제공된다.
표 3:
Figure pct00218
Figure pct00219
Figure pct00220
* 이와 같이 나타낸 화합물을 상기 실시예 섹션에 나타낸 바와 같이 위치이성질체의 혼합물로서 제조하고, 그대로 시험관내 생물학적 검정에서 시험하였다.
표 3A:
Figure pct00221
PBMC 포스포-IRF3 및 IFNβ 검정
말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)를 신선한 인간 전혈의 류코팩 제제 (스템셀 테크놀로지스(StemCell Technologies), 미국 매사추세츠주 캠브리지)로부터 단리하였다. 혈액을 2% 태아 소 혈청 (FBS)을 함유하는 동등 부피의 포스페이트 완충 염수 (PBS) (PBS + 2% FBS)와 혼합하고, 림포프렙TM 밀도 구배 배지의 상부에 적층하고, 원심분리하여 PBMC를 분리하였다. PBMC를 표준 세포 동결보존 배지에서 동결시키고, 해동시킨 후, 실험에 필요에 따라 사용하였다. STING에 대해 야생형인 것으로 검증된 단일 인간 공여자를 본원에 기재된 모든 연구에 사용하였다.
균질 시간 분해 형광 (HTRF) IFNβ 검정을 위해, 400k PBMC/웰을 RPMI 배지에 시딩하고, 37℃, 5% CO2에서 밤새 인큐베이션하였다. 화합물을 배지 (최종 0.5% DMSO) 중에 연속 희석하고, PMBC와 함께 추가로 4시간 동안 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후에, 플레이트를 1500 x g에서 5분 동안 원심분리하고, 배지를 IFNβ HTRF 검정 (제품 참조 62HIFNBPEG, 시스바이오 유에스(Cisbio US), 미국 매사추세츠주 베드포드)을 위해 수집하였다. 배지 14 μL을 항체-반응 시약 (시스바이오 유에스, 미국 매사추세츠주 베드포드) 6 μL과 혼합한 다음, 검정의 항체와 2:1 비로 합하였다. 항체를 배지와 함께 4℃에서 밤새 인큐베이션하고, FRET 신호를 BMG 페라스타(Pherastar) 마이크로플레이트 판독기 (비 665nm/620nm) 상에서 측정하였다. 데이터를 IFNβ 신호를 최대화하는 것으로 공지된 양성 대조군 STING 효능제 및 DMSO의 음성 대조군을 사용하여 "% 효과"로 정규화하였다. 결과를 하기 표 4에 제시한다.
포스포-IRF3 검정을 위해, 400k PBMC/웰을 RPMI 배지에 시딩하고, 37℃, 5% CO2에서 밤새 인큐베이션하였다. 화합물을 배지 (최종 0.5% DMSO) 중에 연속 희석하고, PMBC와 함께 추가로 4시간 동안 인큐베이션하였다. 이어서 세포를 50 μl RIPA 완충제 중에 용해시키고, 4℃에서 30분 동안 볼텍싱하였다. 이어서 25 μl의 용해물을 마우스 항-인간 IRF-3 포획 항체 (BD 파르미겐)로 사전에 코팅된 투명한 폴리스티렌 하이 바인드 플레이트로 옮기고, 4℃에서 16시간 동안 인큐베이션되도록 하였다. 이어서 플레이트를 세척하고, 토끼 항-포스포-IRF3 검출 항체 (셀 시그널링 테크놀로지스)와 함께 실온에서 1.5시간 동안 인큐베이션하였다. 최종적으로, HRP-연결된 2차 항체 (셀 시그널링 테크놀로지스)를 30분 동안 첨가한 후, 글로 기질 시약 (알앤디 시스템즈)을 사용하여 발광 신호를 생성하였다. 신호를 퍼킨-엘머 엔비전 마이크로플레이트 판독기를 사용하여 측정하였다. 데이터를 인산화 IRF3 신호를 최대화하는 것으로 공지된 양성 대조군 STING 효능제 및 DMSO의 음성 대조군을 사용하여 "% 효과"로 정규화하였다. 결과를 하기 표 4에 제시한다.
표 4:
Figure pct00222

Claims (31)

  1. 하기 화학식 (I)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:
    Figure pct00223

    여기서
    고리 내의 각각의
    Figure pct00224
    은 독립적으로 5-원 헤테로방향족 고리 내의 2개의 공액 이중 결합 및 6-원 방향족 또는 헤테로방향족 고리 내의 3개의 공액 이중 결합을 나타내고;
    W1은 CR11 및 N으로부터 선택되고;
    X1은 CR1, C(R1)2, N, NR1, O 및 S로부터 선택되고;
    X2는 CR2, C(R2)2, N, NR2, O 및 S로부터 선택되고;
    X3은 CR3, C(R3)2, N, NR3, O 및 S로부터 선택되고;
    여기서 X1, X2 및 X3 중 2 또는 3개는 독립적으로 N, NR1, NR2, NR3, O 및 S로부터 선택되고;
    여기서 X1, X2 및 X3 중 적어도 1개는 N, NR1, NR2 및 NR3으로부터 선택되고;
    Y1은 N, NR4, O, S, CR4 및 C(R4)2로부터 선택되고;
    Y2는 N, NR5, O, S, CR5 및 C(R5)2로부터 선택되고;
    Y3은 N, NR6, O, S, CR6 및 C(R6)2로부터 선택되고;
    Y4는 C 및 N으로부터 선택되고;
    Y5는 C 및 N으로부터 선택되고;
    여기서 Y1, Y2 및 Y3 중 적어도 1개 및 최대 2개는 독립적으로 N, NR4, NR5 및 NR6으로부터 선택되고;
    여기서 Y4 또는 Y5 중 1개가 N인 경우에, Y4 또는 Y5 중 다른 1개는 C이고;
    Z1은 C 및 N으로부터 선택되고;
    Z2는 N, NR8 및 CR8로부터 선택되고;
    Z3은 N, NR9 및 CR9로부터 선택되고;
    Z4는 N, NR10 및 CR10으로부터 선택되고;
    Z5는 N, NR7 및 CR7로부터 선택되고;
    여기서 Z1, Z2, Z3, Z4 및 Z5 중 2 또는 3개는 독립적으로 N, NR7, NR8, NR9, 및 NR10으로부터 선택되고;
    각각의 R1은 독립적으로 H, C1-C8 알킬, C1-C8 알킬렌-NRR 및 C1-C8 알킬렌-C(O)OR로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    각각의 R2는 독립적으로 H, C1-C8 알킬, C1-C8 알킬렌-NRR, C1-C8 알킬렌-C(O)OR, C1-C8 알킬렌-OR 및 C1-C8 알킬렌-O-P(O)(OH)2로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    각각의 R3은 독립적으로 H, C1-C8 알킬, C1-C8 알킬렌-NRR, C1-C8 알킬렌-C(O)OR 및 C1-C8 알킬렌-O-P(O)(OH)2로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    각각의 R4는 독립적으로 H, -OR, -NRR, 1 또는 2개의 -OR로 임의로 치환된 C1-C8 알킬, C1-C8 알킬렌-NRR, -C(O)OR, C1-C8 알킬렌-C(O)OR, 3-10원 헤테로사이클, 1개의 3-10원 헤테로사이클로 임의로 치환된 C1-C8 알킬렌-3-10원 헤테로사이클, (C3-C10)-시클로알킬, 및 C1-C8 알킬렌-(C3-C10)-시클로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    각각의 R5는 독립적으로 H, OR, C1-C8 알킬, -NRR, C1-C8 알킬렌-NRR, -C(O)OR, C1-C8 알킬렌-C(O)OR, 3-10원 헤테로사이클, 1개의 3-10원 헤테로사이클로 임의로 치환된 C1-C8 알킬렌-3-10원 헤테로사이클, 및 C1-C8 알킬렌-OR로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    각각의 R6은 H이고;
    R7은 H, 할로, 히드록시 또는 NH2로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R8은 H, 1 또는 2개의 -NRR 또는 -OR로 임의로 치환된 C1-C8 알킬, C1-C8 알킬렌-C(O)OR 및 C1-C8 알킬렌-SO2R로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R9는 H이고;
    R10은 H, 1 또는 2개의 -OR로 임의로 치환된 C1-C8 알킬, 및 할로로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R11은 H, C1-C8 알킬, -OR 및 할로로 이루어진 군으로부터 선택되고;
    R12는 -C(O)N(R)2 또는 -C(O)NHR이고;
    R13은 H이고;
    각각의 R은 독립적으로 H 또는 C1-C8 알킬, 또는 C1-C8 할로알킬로 이루어진 군으로부터 선택되거나, 또는 2개의 R은 연결되어 이들이 결합되어 있는 원자 또는 원자들과 함께 -(C3-C10) 시클로알킬 또는 3-10원 헤테로사이클을 형성하고, 여기서 상기 3-10원 헤테로사이클은 N, O 및 S로부터 선택된 1, 2 또는 3개의 원자를 함유하고;
    여기서, 2개의 R이 연결되어 이들이 결합되어 있는 원자 또는 원자들과 함께 -(C3-C10) 시클로알킬 또는 3-10원 헤테로사이클을 형성하는 경우에, 상기 -(C3-C10) 시클로알킬 또는 3-10원 헤테로사이클은 C1-C8 알킬, 히드록시, C1-C8 알콕시, -(C3-C10) 시클로알킬, 3-10원 헤테로사이클, 할로 및 시아노로부터 각각 독립적으로 선택된 1개 이상의 치환기로 임의로 치환된다.
  2. 제1항에 있어서, 각각의 R1이 독립적으로 H인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 각각의 R2가 독립적으로 H, CH3, CH2NH2, CH(NH2)CH3 및 CH2NH(CH3)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 R3이 독립적으로 H 및 CH2OPO(OH)2로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 R4가 독립적으로 CH3, CH2CH3, (CH2)3OH, CH2CH(CH2OH)2, (CH2)2N(CH3)CH2CF3, (CH2)2-(N-모르폴리닐), (CH2)3-(N-모르폴리닐), CH(CH3)CH2-(N-모르폴리닐), (CH2)2-(N-2,6-디메틸 모르폴리닐), (CH2)2-(N-2,5-디메틸-모르폴리닐), (CH2)2-(N-8-옥사-3-아자비시클로[3.2.1]옥탄-3-일), (CH2)2-(N-4-시아노 피페리디닐), (CH2)2-(N-4,4-디플루오로-피페리디닐), (CH2)2-(N-2-플루오로 아제티디닐), CH2-(2-아제티디닐-N-테트라히드로피라닐) 및 CH2C(O)OH로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 R5가 독립적으로 H, CH3, CH2CH3, (CH2)2N(CH3)(CH2CF3), (CH2)2-(N-모르폴리닐), (CH2)3-(N-모르폴리닐), (CH2)2-(N-2,6-디메틸 모르폴리닐) 및 CH2-(2-아제티디닐-N-테트라히드로피라닐)로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, R7이 H, 플루오로, 클로로, OH 및 NH2로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, R8이 CH3, CH2CH3, (CH2)3NH2, (CH2)2OH, (CH2)3OH 및 (CH2)2COOH로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, R10이 CH3 및 CH2OH로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, R11이 H 및 플루오로로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, R12가 -CONH2인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 R이 독립적으로 H, CH3, CH2FCF3으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 화학식 (II)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:
    Figure pct00225
    .
  14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 화학식 (VII)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:
    Figure pct00226
    .
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 화학식 (VIID)의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:
    Figure pct00227
    .
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 0.750 μM 미만, 바람직하게는 약 0.500 μM 미만, 보다 바람직하게는 약 0.250 μM 미만, 보다 더 바람직하게는 약 0.100 μM 미만의 시험관내 Ki로 STING에 경쟁적으로 결합하는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, IRF3의 인산화를 모니터링하는 것에 의해 측정 시 약 100 μM 이하, 바람직하게는 약 50 μM 이하, 보다 바람직하게는 약 20 μM 이하, 가장 바람직하게는 약 10 μM 이하의 시험관내 EC50로 STING를 활성화시키는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 인터페론-β 유도를 모니터링하는 것에 의해 측정 시 약 100 μM 이하, 바람직하게는 약 50 μM 이하, 보다 바람직하게는 약 20 μM 이하, 가장 바람직하게는 약 10 μM 이하의 시험관내 EC50로 STING를 활성화시키는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
  19. 하기로부터 선택되는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염:
    Figure pct00228

    Figure pct00229

    Figure pct00230

    Figure pct00231

    Figure pct00232

    Figure pct00233
    .
  20. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
  21. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하며, 여기서 상기 화합물은 항체-약물 접합체의 성분인 제약 조성물.
  22. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하며, 여기서 상기 화합물은 입자-기반 전달 시스템의 성분인 제약 조성물.
  23. 포유동물에게 치료 유효량의 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물에서 비정상적 세포 성장을 치료하는 방법.
  24. 제23항에 있어서, 비정상적 세포 성장이 암인 방법.
  25. 제24항에 있어서, 암이 폐암, 골암, 췌장암, 피부암, 두경부암, 피부 또는 안내 흑색종, 자궁암, 난소암, 직장암, 항문부암, 위암, 결장암, 유방암, 자궁암, 난관의 암종, 자궁내막의 암종, 자궁경부의 암종, 질의 암종, 외음부의 암종, 호지킨병, 식도암, 소장암, 내분비계암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 연부 조직 육종, 요도암, 음경암, 전립선암, 만성 또는 급성 백혈병, 림프구성 림프종, 방광암, 신장암 또는 요관암, 신세포 암종, 신우의 암종, 중추 신경계 (CNS)의 신생물, 원발성 CNS 림프종, 척수축 종양, 뇌간 신경교종 또는 뇌하수체 선종인 방법.
  26. 제25항에 있어서, 암이 방광암인 방법.
  27. 제23항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 포유동물이 인간인 방법.
  28. 제23항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 추가의 치료제를 투여하는 것을 포함하는 방법.
  29. 제28항에 있어서, 추가의 치료제가 인터페론, CTLA-4 경로 길항제, 항-4-1BB 항체, 항-PD-1 항체 및 항-PD-L1 항체로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 방법.
  30. 포유동물에게 유효량의 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 단계를 포함하는, 상기 포유동물에서 STING의 활성을 상향조절하는 방법.
  31. 포유동물에게 유효량의 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 단계를 포함하는, 상기 포유동물에서 인터페론-베타 수준을 증가시키는 방법.
KR1020227013541A 2019-09-25 2020-09-22 Sting (인터페론 유전자의 자극인자)의 폴리헤테로시클릭 조정제 KR20220070254A (ko)

Applications Claiming Priority (7)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201962905532P 2019-09-25 2019-09-25
US62/905,532 2019-09-25
US202063021216P 2020-05-07 2020-05-07
US63/021,216 2020-05-07
US202063069831P 2020-08-25 2020-08-25
US63/069,831 2020-08-25
PCT/IB2020/058854 WO2021059136A1 (en) 2019-09-25 2020-09-22 Polyheterocyclic modulators of sting (stimulator of interferon genes)

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20220070254A true KR20220070254A (ko) 2022-05-30

Family

ID=72744805

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020227013541A KR20220070254A (ko) 2019-09-25 2020-09-22 Sting (인터페론 유전자의 자극인자)의 폴리헤테로시클릭 조정제

Country Status (19)

Country Link
US (1) US20210087180A1 (ko)
EP (1) EP4034534A1 (ko)
JP (1) JP2022550297A (ko)
KR (1) KR20220070254A (ko)
CN (1) CN114728946A (ko)
AU (1) AU2020355343B2 (ko)
BR (1) BR112022005463A2 (ko)
CA (1) CA3155569A1 (ko)
CL (1) CL2022000736A1 (ko)
CO (1) CO2022003321A2 (ko)
CR (1) CR20220126A (ko)
EC (1) ECSP22022958A (ko)
GE (1) GEP20237572B (ko)
IL (1) IL291650A (ko)
MX (1) MX2022003633A (ko)
PE (1) PE20221784A1 (ko)
TW (2) TWI757889B (ko)
UY (1) UY38892A (ko)
WO (1) WO2021059136A1 (ko)

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2022063205A1 (zh) * 2020-09-24 2022-03-31 中国医药研究开发中心有限公司 芳基甲酰胺类化合物及其制备方法和医药用途
US11964978B2 (en) 2021-03-18 2024-04-23 Pfizer Inc. Modulators of STING (stimulator of interferon genes)
US20220388986A1 (en) * 2021-04-29 2022-12-08 Boehringer Ingelheim International Gmbh Heterocyclic compounds capable of activating sting
WO2023222644A1 (en) * 2022-05-18 2023-11-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Pyrazole derivatives as sting agonists

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5376645A (en) 1990-01-23 1994-12-27 University Of Kansas Derivatives of cyclodextrins exhibiting enhanced aqueous solubility and the use thereof
KR0166088B1 (ko) 1990-01-23 1999-01-15 . 수용해도가 증가된 시클로덱스트린 유도체 및 이의 용도
GB9711643D0 (en) 1997-06-05 1997-07-30 Janssen Pharmaceutica Nv Glass thermoplastic systems
EP2432776B1 (en) 2009-05-21 2019-09-11 Universite Laval Methyl sulfanyl pyrimidines useful as antiinflammatories, analgesics, and antiepileptics
MY177065A (en) 2010-09-09 2020-09-03 Pfizer 4-1bb binding molecules
TWI595006B (zh) 2014-12-09 2017-08-11 禮納特神經系統科學公司 抗ｐｄ－１抗體類和使用彼等之方法
US20190031765A1 (en) 2016-01-25 2019-01-31 Pfizer Inc. Combination of an ox40 agonist and a 4-1bb agonist monoclonal antibody for treating cancer
BR112018070602A2 (pt) * 2016-04-07 2019-02-05 Glaxosmithkline Ip Dev Ltd composto, composição farmacêutica, uso do composto, e, método para tratar uma doença ou distúrbio
EP3642198B1 (en) * 2017-06-22 2022-03-16 Curadev Pharma Limited Small molecule modulators of human sting
RU2020129785A (ru) * 2018-02-16 2022-03-16 Юсб Байофарма Срл Фармацевтические производные 6,5-гетеробициклического кольца
US10538542B2 (en) * 2018-03-15 2020-01-21 Pfizer Inc. Cyclopentane-based modulators of STING (stimulator of interferon genes)

Also Published As

Publication number Publication date
EP4034534A1 (en) 2022-08-03
US20210087180A1 (en) 2021-03-25
TW202126650A (zh) 2021-07-16
CL2022000736A1 (es) 2023-01-06
BR112022005463A2 (pt) 2022-06-14
AU2020355343B2 (en) 2023-11-30
CO2022003321A2 (es) 2022-04-19
JP2022550297A (ja) 2022-12-01
AU2020355343A1 (en) 2022-04-14
GEP20237572B (en) 2023-11-27
MX2022003633A (es) 2022-04-19
PE20221784A1 (es) 2022-11-22
TWI757889B (zh) 2022-03-11
TW202244043A (zh) 2022-11-16
IL291650A (en) 2022-05-01
UY38892A (es) 2021-04-30
CA3155569A1 (en) 2021-04-01
WO2021059136A1 (en) 2021-04-01
ECSP22022958A (es) 2023-03-31
CR20220126A (es) 2022-06-07
CN114728946A (zh) 2022-07-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
TWI820081B (zh) Ｃｂｌ-ｂ抑制劑及其使用方法
AU2020355343B2 (en) Polyheterocyclic modulators of STING (stimulator of interferon genes)
KR102352022B1 (ko) Pge2 수용체 조절제로서의 n-치환된 인돌 유도체
KR102071095B1 (ko) 지질 합성의 헤테로사이클릭 조절인자
JP2019194250A (ja) Ａｔｒキナーゼのインヒビターとして有用なピラジン誘導体
KR102612649B1 (ko) Pge2 수용체 조절제로서의 벤조푸란 및 벤조티오페논 유도체
KR102632028B1 (ko) Pge2 수용체 조절제로서의 페닐 유도체
KR20140103286A (ko) 인자 ＸＩａ 억제제로서 피리디논 및 피리미디논 유도체
JP2018520201A (ja) Ｔｇｆベーター受容体アンタゴニスト
JP2020520354A (ja) ピリミジン誘導体
CA2981055A1 (en) Spirocyclic compounds
US11964978B2 (en) Modulators of STING (stimulator of interferon genes)
EA046412B1 (ru) Полигетероциклические модуляторы sting (стимулятор генов интерферона)
KR20240038624A (ko) Sting (인터페론 유전자의 자극인자)의 조정제
WO2016202898A1 (en) Glucose transport inhibitors
JP2024041730A (ja) Ｓｔｉｎｇ（インターフェロン遺伝子刺激因子）のモジュレーター
CN117321055A (zh) Sting(干扰素基因刺激剂)的调节剂

Legal Events

Date Code Title Description
E902 Notification of reason for refusal