KR20220066176A

KR20220066176A - 구아니딘 유도체

Info

Publication number: KR20220066176A
Application number: KR1020227015271A
Authority: KR
Inventors: 구이민 장; 징춘 야오; 위산 런
Original assignee: 루난 파마슈티컬 그룹 코퍼레이션
Priority date: 2017-04-27
Filing date: 2018-04-27
Publication date: 2022-05-23
Also published as: RU2019138156A3; RU2019138156A; US20200325109A1; ES2963054T3; CN114920710A; EP3617198C0; CN108794423B; EP3617198A4; EP3617198A1; EP3617198B1; JP2020517585A; CN108794423A; JP7256130B2; KR102542904B1; WO2018196861A1; KR20190135038A

Abstract

본 발명은 약물 분야에 관한 것으로서, 특히 퓨란 구조를 함유한 구아니딘 유도체 및 그의 조성물에 관한 것이며, 상기 유도체 및 그의 조성물은 인돌아민 2,3-이산소화효소에 의해 매개되는 트립토판 대사 경로를 갖는 병리학적 특징 질환을 치료하기 위한 약물 제조에 응용될 수 있다. 본 발명은 또한 상기 유도체 및 그 중간체를 제조하기 위한 방법에 관한 것이다.

Description

구아니딘 유도체{GUANIDINE DERIVATIVE}

본 발명은 약물 분야에 관한 것으로서, 특히 구아니딘 유도체 및 그의 제조방법과 용도에 관한 것이다.

인돌아민 2,3-이산소화효소는 헴철(heme)을 포함하는 일종의 모노머 효소로서, L-트립토판의 인돌 고리의 산화 분해를 촉매하여 키뉴레닌(Kynurenine)을 생성한다. 인돌아민 2,3-이산소화효소의 고 발현은 트립토판 세포의 국부적인 고갈을 초래하고, T 세포가 G1기에 정체되도록 유도함으로써, T 세포의 증식을 억제한다. 다른 한편으로, 인돌아민 2,3-이산소화효소 의존적인 트립토판의 분해는 키뉴레닌 수준의 상승을 초래하고, 산소 래디컬이 매개하는 T 세포의 사멸도 유도한다. 세 번째로, 수지상 세포의 인돌아민 2,3-이산소화효소가 상향조절된 발현은 국부적인 트립토판 분해를 통해 국부적인 조절성 T세포(Treg)가 매개하는 면역 억제를 강화시켜, 유기체의 종양 특이성 항원에 대한 말초성 면역 내성(peripheral tolerance)을 촉진한다. 인돌아민 2,3-이산소화효소는 이미 항종양 면역 요법의 가장 중요한 소분자 제어 표적이 되었다.

연구를 통해, 인돌아민 2,3-이산소화효소가 인체의 수많은 생리 과정과 관련이 있음이 발견되었다. 1998년, Munn 등은 연구에서, 태아가 유전자형이 상이한 모체에 거부당하지 않고 안전하게 임신기간을 지날 수 있는 이유가 태반의 합포체 영양배엽세포(syncytial trophoblast)에 인돌아민 2,3-이산소화효소가 합성되기 때문이며, 후자는 혈류를 통해 모체의 T 세포가 태아를 배척하는 반응을 억제한다고 공개하였다. 이들은 더 나아가 임신한 마우스의 피하에 인돌아민 2,3-이산소화효소 억제물을 함유한 1-메틸 트립토판 서방성 캡슐을 이식한 후, 배아가 거부를 당하여 유산되었다고 공개하였다(Munn DH，Zhou M， Attwood JT，et al. Prevention of allogeneic fetal rejection by tryptophan catabolism, Science，1998，281(5380):1191-3). 이밖에, 비정상적인 면역 응답으로 인한 질병, 예를 들어 이식 거부 반응, 자가 면역성 질환 역시 인돌아민 2,3-이산소화효소와 관련이 있다.

비록 최근 들어 종양의 치료 수단이 이미 큰 발전을 이루었으나, 임상치료 효과는 여전히 만족스럽지 못하다. 면역 도피는 종양의 발생과 전이의 주요 생물학적 기전 중의 하나로서, 이미 종양 치료 효과에 영향을 미치는 중요 요소가 되었다. 인돌아민 2,3-이산소화효소는 일종의 면역 조절 효소로서, 효과적으로 T 세포 기능을 억제하고, Treg 세포 기능을 강화시키며, NK 세포 기능의 장애를 유도할 수 있는 반면, 종양 세포는 이러한 유기체가 갖는 고유의 면역 조절 기전을 이용하여 면역 시스템의 식별과 살상을 피할 수 있다(쟈윈롱(賈云瀧), 왕위(王郁). 중국 종양 생물 치료 잡지, 2004, 21(6):693-7). 종양 환자가 치료를 통해 최적의 이익을 얻을 수 있도록 하기 위하여, 종양의 면역 도피에 대해 치료 전략을 합리적으로 조절하는 것이 이미 필수가 되었다. 본 발명 중의 인돌아민 2,3-이산소화효소 억제제는 환자의 면역 시스템을 효과적으로 조절하여, 종양 세포의 면역 도피를 차단할 수 있어, 대부분의 자발성 종양에 대해 모두 양호한 치료 효과가 있다. 면역 시스템에 대한 조절 작용을 바탕으로, 본 발명 중의 인돌아민 2,3-이산소화효소 억제제는 종양에 대한 치료 이외에, 면역과 관련된 기타 질환, 예를 들어 만성 감염 및 에이즈에 대해서도 치료가 가능하다.

인돌아민 2,3-이산소화효소는 신경계 질환과도 밀접한 관련이 있으며, 이는 5-하이드록시트립타민(세로토닌)의 수준을 저하시켜 우울, 초조 등 정신 질환을 초래할 수 있고, 퀴놀린산 등 신경 독성을 지닌 대사산물의 뇌내 누적을 초래할 수도 있으며, 이는 알츠하이머증과 같은 신경 퇴행성 질환의 발생과 밀접한 관련이 있다. 인돌아민 2,3-이산소화효소는 적어도 두 가지 기전을 통해 뇌의 기능에 영향을 줄 수 있다: 1) 염증 반응 시 트립토판 대사를 통해, 순환되는 트립토판의 농도를 감소시킴으로써, 5-하이드록시트립타민의 수준을 저하시켜 우울을 유발한다: 2) 트립토판의 키뉴레닌 경로를 따른 대사를 촉매하여 키뉴레닌과 신경 독성 퀴놀린의 축적을 유발한다(콩링레이(孔令雷), 쾅춘샹(匡春香), 양칭(楊靑). 중국 약학 화학 잡지, 2009, 19(2): 147-154).

본 발명은 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 상기 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 함유한 조성물, 상기 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 사용하여 인돌아민 2,3-이산소화효소(IDO)의 활성을 억제하는 방법 또는 인돌아민 2,3-이산소화효소에 의해 매개된 트립토판 대사 경로를 갖는 병리학적 특징 질환을 치료하기 위한 방법, 및 상기 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염의 인돌아민 2,3-이산소화효소 활성을 억제하기 위한 약물 제조 또는 인돌아민 2,3-이산소화효소에 의해 매개되는 트립토판 대사 경로를 갖는 병리학적 특징 질환을 치료하기 위한 약물 제조에의 용도를 제공한다.

상기 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염은 탁월한 인돌아민 2,3-이산소화효소 억제 활성을 지니며, 또한, 상기 활성은 기타 IDO 억제제보다 현저하게 우수할 뿐만 아니라, 상기 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 투여하기 전후 마우스의 체중 측정을 통해, 기타 IDO 억제제와 비교하여, 본 발명의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 종양 치료에 응용 시 마우스의 생존 품질이 현저하게 향상되고, 약물 부작용이 현저하게 감소하는 것을 발견하였으며, 임상적인 표현 면에서 환자의 생존 품질이 향상될 수 있을 뿐만 아니라, 환자의 약물 순응도(drug compliance) 및 약물의 유효성이 현저히 향상될 수 있다. 본 발명의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염은 동물의 학습 기억력 손상을 현저히 개선하고, 학습 습득 능력과 공간 기억 능력을 향상시킬 수 있어, 알츠하이머 증후군 등 신경퇴행성 질환에 대해 적극적인 치료 의미가 있으며, 또한 기타 IDO 억제제보다 우수하다. 본 발명의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염은 DC에 의해 자극되는 T 세포 증식을 촉진하는 작용이 있어, 종양 질환, 자가 면역성 질환, 이식 거부 반응 및 감염성 질환의 치료에 응용될 수 있을 뿐만 아니라, 기타 IDO 억제제보다 우수하다.

일 실시예에서, 본 발명은 식 I₀의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:

그 중, R₁, R₂는 각각 독립적으로 이하 치환기: H, 치환 또는 미치환된 C_1-10 알킬기, 알데하이드기, 치환 또는 미치환된 카르보닐기, 시아노기, CF₃, 치환 또는 미치환된 C_1-10 알콕시기, 치환 또는 미치환된 설폰기, 치환 또는 미치환된 C_3-10 시클로알킬기, 치환 또는 미치환된 C_2-10 알케닐기, 치환 또는 미치환된 C_6-20 아릴기, 치환 또는 미치환된 C_3-14 헤테로아릴기로부터 선택되고;

R₃, R₄는 각각 독립적으로 이하 치환기: H, 치환 또는 미치환된 C_1-10 알킬기, 알데하이드기, 치환 또는 미치환된 C_3-10 시클로알킬기, 시아노기, 치환 또는 미치환된 C1-10 알콕시기, 치환 또는 미치환된 설폰기, 치환 또는 미치환된 C_6-20 아릴기, 치환 또는 미치환된 C_3-14 헤테로아릴기로부터 선택되거나;

또는 R₃, R₄는 각각 독립적으로 이중치환기로부터 선택되어, 이에 따라 a 또는 b 위치의 C 원자와 함께

,

또는

기단을 형성하며, 그 중의 C는 즉 a 또는 b 위치의 C 원자이고, m은 0-6인 정수, 예를 들어 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6으로부터 선택되며; 또한, R₃, R₄가 a 또는 b 위치의 C 원자와 함께 형성하는 기단은 C=CH₂,

이다.

n은 0-6인 정수, 예를 들어 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고; n은 0, 1, 2 또는 3인 것이 바람직하다.

일 실시예에서, 본 발명은 상기 I₀ 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하며, 그 중 R₁, R₂는 각각 독립적으로 이하 치환기: 임의로 하나 또는 다수의 할로겐, 하이드록시기, 카르복시기, 카르보닐기, 알데하이드기, 시아노기, 아미노기, 아릴기, 헤테로아릴기, C_1-6 알킬기, C_3-12 시클로알킬기, C_2-6 알케닐기, C_3-12 시클로알케닐기에 의해 치환된 C_1-6 알킬기, 카르보닐기, C_1-6 알콕시기, 설폰기, 아미딘기 또는 설폭사이드기로부터 선택되며; 그 중, C_1-6 알킬기, 카르보닐기, C_1-6 알콕시기, 설폰기, 아미딘기 또는 설폭사이드기의 치환기로서의 카르복시기, 카르보닐기, 알데하이드기, 시아노기, 아미노기, 아릴기, 헤테로아릴기, C_3-12 시클로알킬기, C_2-6 알케닐기, C_3-12 시클로알케닐기는 임의로 하나 또는 다수의 H, 할로겐, C_1-6 알킬기, 카르보닐기, C_1-6 알콕시기 또는 설폭사이드기 또는 설폰기에 의해 치환되고; 상기 할로겐은 F, Cl, Br 또는 I로부터 선택된다.

일 실시예에서, 본 발명은 상기 I₀ 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하며, 그 중 R₁, R₂는 각각 독립적으로 이하 치환기: H, 메틸기, 에틸기, 프로필기, 이소프로필기, R₅C(O)-, R₅S(O)x-로부터 선택되고; R₅는 C_1-10인 알킬기, C_3-12인 시클로알킬기와, 하이드록시기, 시아노기, C_1-6 알킬기, C_3-12 시클로알킬기, C_1-6 알콕시기, 아릴기 또는 헤테로아릴기에 의해 치환된 C_1-10인 알킬기 또는 C_3-12인 시클로알킬기로부터 선택되며, x는 1 또는 2로부터 선택되고;

R₃, R₄는 각각 독립적으로 이하 단일 치환기: H, 치환 또는 미치환된 C_1-10 알킬기, 치환 또는 미치환된 C_3-10 시클로알킬기, 시아노기, 치환 또는 미치환된 C_1-10 알콕시기, 치환 또는 미치환된 설폰기, 치환 또는 미치환된 C_6-20 아릴기, 치환 또는 미치환된 C_3-14 헤테로아릴기로부터 선택되거나;

R₃, R₄는 각각 독립적으로 이중 치환기로부터 선택되어, a 또는 b 위치의 C 원자와 함께 C=O, C=NH, C=CH₂,

,

또는 기단을 형성한다.

일 실시예에서, 본 발명은 상기 I₀ 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하며, 그 중 R₁, R₂는 각각 독립적으로 이하 치환기: H, 메틸기, 에틸기, 프로필기, 이소프로필기, R₅C(O)-, R₅S(O)_x-로부터 선택되고; R₅는 C_1-10 알킬기, C_3-12 시클로알킬기와, 하이드록시기, 시아노기, C_1-6 알킬기, C_3-12 시클로알킬기, C_1-6 알콕시기, 아릴기 또는 헤테로아릴기에 의해 치환된 C_1-6 알킬기 또는 C_3-8 시클로알킬기로부터 선택되고, x는 2이며; R₃, R₄는 모두 H이다.

일 실시예에서, 본 발명은 상기 I₀ 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하며, 그 중 식 I₀중의 R₂, R₃, R₄가 각각 H인 경우, 즉 식 I의 화합물이 수득된다:

그 중, R₁은 이하 치환기: H, 아미노기, 설폰기, 니트로기, 카르보닐기, 아미딘기, C_1-6 알킬기와, 할로겐, 하이드록시기, 카르복시기, 카르보닐기, 알데하이드기, 시아노기, 아미노기, 아릴기, 헤테로아릴기, C_3-12 시클로알킬기, C_2-6 알케닐기, C_3-12 시클로알케닐기에 의해 치환된 아미딘기 또는 C_1-6 알킬기 또는 C_1-6 알콕시기 또는 카르보닐기 또는 설폰기 또는 설폭사이드기로부터 선택되고; n은 0-6인 정수, 예를 들어 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이며; n은 1 또는 2인 것이 바람직하다.

일 실시예에서, 본 발명은 상기 I₀ 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하며, 그 중 식 I 중의 R₁이 H인 경우, 구조식 Ⅱ

이 수득되며, 그 중 n은 0-6인 정수, 예를 들어 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이다.

일 실시예에서, 본 발명은 상기 I₀ 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하며, 그 중 식 I 중의 R₁이 R₀에 의해 치환된 카르보닐기인 경우, 구조식 Ⅲ이 수득된다:

그 중 R₀은 H, C_1-6 알킬과, 할로겐, 하이드록시기, 카르복시기, 카르보닐기, 알데하이드기, 시아노기, 아미노기, 아릴기, 헤테로아릴기, C_3-12 시클로알킬기, C_2-6 알케닐기, C_3-12 시클로알케닐기에 의해 치환된 C_1-6 알킬기 또는 C_1-6 알콕시기로부터 선택되며, 그 중 n은 0-6인 정수, 예를 들어 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이다.

또한, R₀은 C_1-6 알킬과, 할로겐, 하이드록시기, 카르복시기, 카르보닐기, 알데하이드기, 시아노기, 아미노기, 아릴기, 헤테로아릴기, C_3-12 시클로알킬기, C_2-6 알케닐기, C_3-12 시클로알케닐기에 의해 치환된 C_1-6 알킬기 또는 C_1-6 알콕시기로부터 선택된다.

일 실시예에서, 본 발명은 상기 I₀ 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하며, 그 중 식 I₀중의 R₁이 H인 경우, 즉 Ⅳ의 화합물이 수득된다:

상기 R₂는 이하 치환기: H, 메틸기, 에틸기, 프로필기, 이소프로필기, R₅C(O)-, R₅S(O)_m-로부터 선택되고; R₅는 H, C_1-10인 알킬기, C_3-12인 시클로알킬기와, 하이드록시기, 시아노기, CF₃, C_1-6 알킬기, C_3-10 시클로알킬기, 알콕시기, 아릴기 또는 헤테로아릴기에 의해 치환된 C_1-10인 알킬기 또는 C_3-12인 시클로알킬기로부터 선택되며; m은 1 또는 2로부터 선택되고;

R₃, R₄는 각각 독립적으로 이하 치환기: H, C_1-10인 알킬기, C_3-12인 시클로알킬기와, 하이드록시기, 시아노기, 할로겐, C_1-6 알킬기, C_3-10 시클로알킬기, 알콕시기, 아릴기 또는 헤테로아릴기에 의해 치환된 C_1-10 알킬기 또는 C_3-12 시클로알킬기 또는 C_1-10 알콕시기 또는 설폰기 또는 C_3-14 헤테로아릴기로부터 선택되며;

그 중 n은 0-6인 정수, 예를 들어 0, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이고;

또한, R₂는 이하 치환기: H, R₅C(O)-, R₅S(O)_m-로부터 선택되고; R₅는 H, C_1-10 알킬기, C_3-12 시클로알킬기와, 하이드록시기, 시아노기, CF₃, C_1-6 알킬기, C_3-10 시클로알킬기, 알콕시기, 아릴기 또는 헤테로아릴기에 의해 치환된 C_1-10인 알킬기 또는 C_3-12인 시클로알킬기로부터 선택되며; m은 1 또는 2로부터 선택되고;

또한, R₂는 이하 치환기: R₅C(O)-, R₅S(O)_X-로부터 선택되고; R₅는 C_1-6 알킬기, C_3-8 시클로알킬기와, 하이드록시기, 시아노기, C_1-6 알킬기, C_3-8시클로알킬기, C_1-6 알콕시기, 아릴기 또는 헤테로아릴기에 의해 치환된 C_1-6 알킬기 또는 C_3-8 시클로알킬기로부터 선택되며; x는 2이고; R₃, R₄는 모두 H이다.

일 실시예에서, 본 발명은 하기 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공한다:

,

，

，

，

，

，

，

，

，

,

，

，

，

，

，

，

，

，

，

，

，

，

，

,

，

，

，

，

，

，

，

，

，

，

，

，

，

，

，

，

，

，

，

，

，

，

，

，

，

，

，

，

，및

.

본 발명의 일반식 및 일반식의 합성방법은 이러한 구체적인 화합물에 국한되지 않고 도출될 수 있으며, 또한 본 발명의 일반식과 일반식의 합성방법 하에, 본 분야의 기술자가 창조적인 노력 없이 획득 가능한 구체적인 화합물은 모두 본 발명의 범위 내에 속한다.

일 실시예에서, 본 발명은 상기 화합물

(식 I₀)의 합성방법, 즉 일반 합성방법 1을 제공하며, 단계는 다음과 같다:

1) 1a의 산화에 의해 2a를 획득하는 단계;

, 상기 산화제는 과산화수소, 오존 또는 과산화아세트산 중의 적어도 일종을 포함하되 단 이에 한정되지 않으며;

2) 1과 2a를 알칼리성 조건하에 반응시켜 2를 획득하는 단계;

; 상기 알칼리는 알칼리금속의 수산화물을 포함하되 단 이에 한정되지 않고, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화바륨인 것이 바람직하며;

3) 2와 3a를 반응시켜 I₀를 획득하는 단계:

R₃, R₄는 각각 독립적으로 이하 치환기: H, 치환 또는 미치환된 C_1-10 알킬기, 치환 또는 미치환된 C_3-10 시클로알킬기, 시아노기, 치환 또는 미치환된 C_1-10 알콕시기, 치환 또는 미치환된 설폰기, 치환 또는 미치환된 C_6-20 아릴기, 치환 또는 미치환된 C_3-14 헤테로아릴기로부터 선택되거나;

또는 R₃, R₄는 각각 독립적으로 이중치환기로부터 선택되어, a 또는 b 위치의 C 원자와 함께

,

또는

기단을 형성하며, 그 중의 C는 즉 a 또는 b 위치의 C 원자이고, m은 0-6인 정수이며;

n은 0-6인 정수이다.

일 실시예에서, 본 발명은 상기 화합물

(식 I)의 l합성방법, 즉 일반 합성방법 1A를 제공하며, 단계는 다음과 같다:

1) 1a 산화에 의해 2a를 획득하는 단계;

2) 1과 2a를 알칼리성 조건하에 반응시켜 2를 획득하는 단계;

3) 2와 3a를 반응시켜 I를 획득하는 단계;

그 중, R₁은 이하 치환기: H, 아미노기, 설폰기, 니트로기, 카르보닐기, 아미딘기, C_1-6 알킬기와, 할로겐, 하이드록시기, 카르복시기, 카르보닐기, 알데하이드기, 시아노기, 아미노기, 아릴기, 헤테로아릴기, C_3-12 시클로알킬기, C_2-6 알케닐기, C_3-12 시클로알케닐기에 의해 치환된 아미딘기 또는 C_1-6 알킬기 또는 C_1-6 알콕시기 또는 카르보닐기 또는 설폰기 또는 설폭사이드기로부터 선택되고; n은 0-6인 정수이다.

상기 산화제는 과산화수소, 오존 또는 과산화아세트산 중의 적어도 일종으로부터 선택되는 것이 바람직하나, 단 이에 한정되지 않으며;

상기 알칼리는 알칼리금속의 수산화물을 포함하되 단 이에 한정되지 않고, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화바륨인 것이 바람직하다.

일 실시예에서, 본 발명은 상기 화합물

(식 Ⅱ)의 합성방법, 즉 일반 합성방법 2를 제공하며, 단계는 다음과 같다:

1) 2와 3a'를 반응시켜 Ⅱa를 획득하는 단계;

;

2) Ⅱa를 산성 조건하에 탈보호한 후, 알칼리성 조건하에 반응시켜 Ⅱ를 획득하는 단계;

,

그 중 n은 0, 1, 2, 3 또는 4로부터 선택되고,

일 실시예에서, 본 발명은 화합물

(식Ⅱ')의 합성방법, 즉 일반 합성방법 3을 제공하며, 단계는 다음과 같다:

상기 n은 0, 1, 2, 3 또는 4로부터 선택되고,

식 Ⅱa를 산성 조건하에 반응시켜 식 Ⅱ'를 획득한다.

일 실시예에서, 본 발명은 상기 화합물

(식 Ⅲ)의 합성방법, 즉 일반 합성방법 4를 제공하며, 단계는 다음과 같다:

1) Ⅱ를 4a와 반응시켜 Ⅲa를 생성하는 단계;

그 중 R₃은 H，OH，CN，CH_3-mX_m, 니트로기, C_1-9 알킬기, C_1-9 알콕시기, C_3-9 시클로알콕시기, C_3-12 시클로알킬기, C_1-6 헤테로알킬기, 원자가 3-12개인 헤테로시클로알킬기, 아릴기, 헤테로아릴기와, 할로겐, 하이드록시기, 카르복시기, 카르보닐기, 알데하이드기, 시아노기, 아미노기, 설폰기, 아릴기, 헤테로아릴기, C_3-12 시클로알킬기, C_3-12 시클로알케닐기에 의해 치환된 C_1-6 알킬기 또는 C_1-9 알콕시기 또는 아릴기 또는 헤테로아릴기 또는 카르보닐기로부터 선택되며, m은 1, 2, 3이고; m은 2 또는 3인 것이 바람직하며;

2) 실행 조건하에 Ⅲa로 Ⅲ을 생성하는 단계;

.

구체적으로, 상기 R₃은 H，OH，CN，CH_3-mX_m, 니트로기, C_1-9 알킬기, C_3-9 시클로알콕시기, C_3-12 시클로알킬기, C_1-6 헤테로알킬기, 원자가 3-12개인 헤테로시클로알킬기, 아릴기, 헤테로아릴기와, 할로겐, 하이드록시기, 카르복시기, 카르보닐기, 알데하이드기, 시아노기, 아미노기, 설폰기, 아릴기, 헤테로아릴기, C_3-12 시클로알킬기, C_3-12 시클로알케닐기에 의해 치환된 C_1-6 알킬기 또는 C_1-9 알콕시기 또는 아릴기 또는 헤테로아릴기로부터 선택된다. 또한, 상기 R₃은 H，OH，CN，CF₃，CHCl₂，CH₂Cl, 니트로기, 메틸기, 에틸기, 프로필기, 이소프로필기, 부틸기, 이소부틸기, sec-부틸기, tert-부틸기, 펜틸기, 1-메틸부틸, 2-메틸부틸, 3-메틸부틸, 1,1-디메틸프로필, 2,2-디메틸프로필, 1,2-디메틸프로필, 1-에틸프로필, 헥실기, 펜틸메틸, 펜틸에틸, 펜틸프로필, 헥실메틸, 헥실에틸, 헥실프로필, 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로프로필메틸, 시클로프로필에틸, 시클로프로필프로필, 시클로부틸메틸, 시클로부틸에틸, 시클로부틸프로필, 시클로펜틸메틸, 시클로펜틸에틸, 시클로펜틸프로필, 시클로헥실메틸, 시클로헥실에틸, 시클로헥실프로필, p-메톡시벤질기(PMB), 벤질기(Bn)로부터 선택되거나; 또는

R₃은 치환된 퓨란, 피롤, 티오펜, 피라졸, 이미다졸, 옥사졸, 티오펜, 이소옥사졸, 이소티아졸, 피리딘, 피란, 티오피란, 피리다진, 피리딘, 피라진, 피페라진 중의 어느 하나로부터 선택되고, 벤젠 고리와 두 자리 치환을 이루며, 즉 벤조퓨란, 벤조피롤, 벤조 피페라진을 형성하거나; 또는

상기 식 4a 중의 또는

기단은 카바졸, 아크리딘, 페나진 또는 페노티아진으로부터 선택된다.

본 발명이 제공하는 합성방법은 단지 각 합성 목표 화합물 및 그 중간체를 합성하는 일종의 경로를 구현하기 위한 것으로서, 그 중 상기 각 단계 및 번호, 예를 들어 1a, 2a, 3a, 4a, 1, 2, 3 등은 모두 독립적이며, 본 발명의 방법에 한정되지 않고 제조될 수 있다.

특별한 설명이 없는 한, 본 발명의 상기 또는 하기의 각 단계의 반응에 사용되는 용매는 본 분야의 일반 용매로서, 그 사용 원칙은 반응물은 용해시키되 반응에는 참여하지 않는 것이며, 생성물을 추출하거나 또는 상응하는 생성물을 사용하여 그 중의 결정체를 불순물과 분리시킨다. 예를 들어 물, 할로겐화 알칸, 알킬아민, 지방족 탄화수소류, 에스테르류, 알코올류, 방향족 탄화수소류, 헤테로시클릭 용매가 있으며; 구체적으로는, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 이소프로판올, 에테르, 에틸 아세테이트, 아세트산, 시클로헥산, 디클로로메탄, 트리클로로메탄, 테트라하이드로퓨란, 피리딘, 디에틸아민, 트리에틸아민, 디메틸포름아미드, 톨루엔 및 그 중의 적어도 두 종류의 용매의 혼합으로부터 선택되나, 단 이에 한정되지 않는다.

특별한 설명이 없는 한, 본 발명의 상기 또는 하기의 각 반응에서, 반응물이 과량인 경우, 반응을 종료하고 과량의 반응물과 반응할 수 있는 물질을 첨가하는 방식을 채택하여 ??칭(quenching) 반응을 진행할 수 있다.

특별한 설명이 없는 한, 본 발명의 상기 또는 하기의 각 반응에서, 각 단계의 반응 중의 생성물의 정제 방식은 추출, 결정화, 용매 제거, 컬럼 크로마토그래피로부터 선택되며; 그 조작은 모두 본 분야의 통상적인 기술이므로, 본 분야의 기술자가 구체적인 상황에 따라 처리할 수 있다.

본 발명의 일반식에 사용된 각 번호는 상기 일반식의 설명의 편의를 위해 사용한 번호이고, 이들은 구체적인 실시예에서 기타 번호로 변형될 수 있으며, 예를 들어 1, 2, 3 등은 모두 서술의 편의를 위한 것이고, 구조식 및 그 반응 방정식에 영향을 주지 않기 위한 실질은 일반식 및 일반식의 반응 방정식의 표현에 속한다.

일반식 I-Ⅲ에 포함된 화합물 및 그 구체적인 물질의 대표 중의 키랄 이성질체 또는 시스-트랜스 이성질체 및 이성질체 사이 역시 임의의 비율의 혼합물로써 일반식 I-Ⅲ에 포함된 화합물 및 그 구체적인 물질의 대표 범위 내에 포함된다.

일 실시예에서, 본 발명은 상기 화합물, 즉 일반식 I-Ⅲ에 포함된 화합물 및 상기 구체적인 화합물을 포함하는 약물 조성물, 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 및 일종 또는 다종의 약학적으로 허용 가능한 약용 보조제(adjuvant)를 제공한다.

본 발명의 상기 "약학적으로 허용 가능한 염"이란 약학적으로 허용 가능한 산과 알칼리가 첨가된 염 및 용매화물을 말한다. 이러한 약학적으로 허용 가능한 염은 산의 염을 포함하며, 산은 염산, 황산, 질산, 인산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 포름산, 아세트산, p-톨루엔설폰산, 설핀산, 메탄설폰산, 벤조산, 푸마르산, 시트르산, 주석산, 말레산, 지방산을 포함한다. 무독성 약물 알칼리가 첨가된 염은 알칼리의 염을 포함하며, 이러한 알칼리는 나트륨, 칼륨, 칼슘, 마그네슘, 알루미늄, 암모늄을 포함한다.

일 실시예에서, 본 발명은 인돌아민 2,3-이산소화효소에 의해 매개되는 트립토판 대사 경로를 갖는 병리학적 특징 질환을 치료하기 위한 약물 제조에 응용될 수 있는 상기 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염을 제공하며; 상기 약물은 암, 감염성 질병, 신경 퇴행성 병변, 우울증, 초려증 또는 연령과 관계가 있는 백내장을 치료하는데 사용된다.

그 중 상기 암은 폐암, 간암, 결장암, 췌장암, 유선암, 전립선암, 뇌암, 난소암, 자궁경부암, 고환암, 신장암, 두경부암, 림프암, 흑색종 또는 백혈병으로부터 선택되고;

상기 신경 퇴행성 질환이란 알츠하이머증이며;

상기 감염성 질병이란 세균, 진균, 바이러스 또는 기생충에 의해 야기되는 감염을 말한다.

일 실시예에서, 본 발명은 상기 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염으로 인돌아민 2,3-이산소화효소의 활성을 억제하는 방법 또는 인돌아민 2,3-이산소화효소에 의해 매개되는 트립토판 대사 경로를 갖는 병리학적 특징 질환을 치료하기 위한 방법을 제공하며, 상기 방법은 치료 유효량의 상기 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염의 사용을 포함한다. 상기 질병은 암, 감염성 질병, 신경 퇴행성 병변, 우울증, 초려증 또는 연령과 관계가 있는 백내장으로부터 선택되고; 그 중 상기 암은 폐암, 간암, 결장암, 췌장암, 유선암, 전립선암, 뇌암, 난소암, 자궁경부암, 고환암, 신장암, 두경부암, 림프암, 흑색종 또는 백혈병으로부터 선택되며; 상기 신경 퇴행성 질환이란 알츠하이머증이고; 상기 감염성 질병이란 세균, 진균, 바이러스 또는 기생충에 의해 야기되는 감염을 말한다.

본 발명의 실시예 중 활성 테스트 결과에 따르면, 본 발명으로 획득되는 화합물은 탁월한 인돌아민 2,3-이산소화효소 억제 활성을 지닐 뿐만 아니라, 억제 효과가 화합물 INCB024360보다 뛰어난 것으로 나타났다. 체내 시험 결과, 본 발명 중의 화합물은 종양에 대해 비교적 높은 억제율을 나타내었으며, 종양에 대한 치료 효과가 화합물 INCB024360 및 기타 IDO 억제제보다 현저하게 우수하였다. 또한 약물 투여 전후 마우스의 체중 측정을 통해, 기타 IDO 억제제와 비교하여, 본 발명 중의 인돌아민 2,3-이산소화효소 억제제는 종양 치료에 응용 시 약물 부작용을 현저하게 감소시킬 수 있어, 마우스의 생존 품질이 현저히 향상된다는 것을 발견하였으며, 임상적인 표현 면에서 환자의 생존 품질을 향상시킬 수 있을 뿐만 아니라, 환자의 약물 순응도 및 약물의 유효성을 현저히 향상시킬 수 있다.

본 발명 중의 화합물은 동물의 학습 기억 손상을 현저히 개선하여, 학습 습득 능력과 공간 기억 능력을 향상시킬 수 있으며, 알츠하이머 증후군 등 신경퇴행성 질환에 대해 적극적인 치료 의미가 있을 뿐만 아니라, 효과가 기타 IDO 억제제보다 우수하다.

T 세포 증식 반응 실험을 통해, 본 발명 중의 화합물은 DC로 자극된 T 세포의 증식을 촉진하는 작용이 있어, 종양 질환, 자가 면역성 질환, 이식 거부 반응 및 감염성 질환의 치료에 응용될 수 있고, 또한 기타 IDO 억제제와 비교하여 뚜렷한 경쟁력을 갖는다.

본 발명 중의 인돌아민 2,3-이산소화효소 억제제는 인돌아민 2,3-이산소화효소에 의해 매개되는 트립토판 대사 경로를 갖는 병리학적 특징 질환을 치료하기 위한 약물 제조에 응용 시 다음과 같은 기술적인 장점이 있다:

(1) 항종양 작용이 뛰어나다. 본 발명 중의 화합물은 뚜렷한 인돌아민 2,3-이산소화효소 억제 활성을 가질 뿐만 아니라, 체내 시험에서 본 발명 중의 화합물의 종양 억제율이 양성 대조약인 시클로포스파미드 및 화합물 INCB024360보다 현저히 높은 것으로 나타났다.

(2) 부작용이 감소된다. 본 발명의 화합물은 인돌아민 2,3-이산소화효소 억제제로서, 인돌아민 2,3-이산소화효소의 활성 억제를 통해 T 세포의 증식 억제로 역전시켜 유기체의 면역 기능을 조절함으로써, 인체의 면역계의 종양 세포에 대한 감시 및 살상 작용을 완수한다. 이러한 특수한 작용 기전을 바탕으로, 이러한 화합물은 종양 세포의 생장을 억제함과 동시에 인체의 정상 세포의 생장에는 부정적인 영향을 주지 않으며, 따라서 약물 부작용이 현저히 감소된다. 또한 T 세포 증식과 관련된 자가 면역성 질환, 이식 거부 반응 및 감염성 질환에 대해 현저한 치료 효과가 있다.

(3) 알츠하이머 등 신경퇴행성 질환을 치료 시 효과가 뚜렷하며, 동물의 학습 기억 손상을 현저히 개선하고, 학습 습득 능력과 공간 기억 능력을 현저히 향상시킬 수 있다.

이하 구체적인 실시방식을 결합하여 본 발명에 대해 좀 더 상세히 설명할 것이나, 단 본 발명은 이로 한정되지 않는다. 또한 본 발명의 일반식, 일반식의 합성방법(일반 합성 방법 1, 일반 합성방법 1A, 일반 합성방법 2, 일반 합성방법 3, 일반 합성방법 4) 및 구체적인 실시방식의 지도하에, 본 분야의 기술자가 창조적인 노력 없이 즉시 획득 가능한 구체적인 화합물은 모두 본 발명의 범위 내에 속한다.

실시예 1

반응 1

화합물 1(903mg, 10mmol)을 아세톤(10ml)에 용해시킨 다음, 실온에서 탄산칼륨(2.76g, 20mmol)을 투입하여, 실온에서 0.5시간 동안 교반하고, 염화벤젠설포닐을 적가한다. 실온에서 하룻밤 동안 교반한 후, 물을 첨가하여 ??칭하고, 에틸아세테이트로 추출하여, 무수황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 백색 분말 900mg을 수득한다.

반응 2

화합물 2(230mg, 1mmol)를 아세토니트릴(5mL)에 용해시키고, 실온에서 0.5시간 동안 교반한 후, 2a(320mg, 2mmol)를 투입한다. 60℃에서 24시간 동안 가열한 후, 직접 스핀 건조시키고, pre-HPLC로 제조하여 목표 생성물 210mg을 수득한다.

반응 3

화합물 3(171mg, 0.5mmol)을 디클로로메탄(10mL)에 용해시키고, 실온에서 5분 동안 교반한 후, 트리플루오로아세트산(5mL)을 투입한다. 실온에서 2시간 동안 반응시킨 후, 직접 스핀 건조시켜 목표 생성물 4를 수득하며, 조생성물(crude product)을 다음 단계에 직접 사용한다.

반응 4

화합물 4(120mg, 0.5mmol)를 테트라하이드로퓨란에 용해시키고, 화합물 4a(120mg, 0.5mmol)를 투입한다. 실온에서 10분 동안 교반하고, 1N의 수산화나트륨(1mL)을 적가하여, 실온에서 10분 동안 반응시키고, 반응액을 농축시킨 후 pre-HPLC로 제조하여 목표 생성물 5mg을 수득한다.

¹H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ(ppm) : 11.45(s, 1H), 8.89(s, 1H), 7.76-7.77(m, 2H), 7.48-7.52(m, 3H), 7.10-7.20(m, 3H), 6.75-6.77(m, 2H), 6.27(s, 1H)，3.73-3.77(m，2H), 2.52-2.69(m，2H).

HPLC purity: @214nm 99.5%, @254nm 100%.

LC-MS: m/z 541 [M+1].

합성방법 1 및 실시예 1을 참조하여, 이하 합성물을 합성한다.

실시예 10

반응 1

화합물 1a(682mg, 2mmol)를 트리플루오로아세트산(13mL)에 용해시킨 다음, 실온에서 30%의 H₂O₂를 적가하고, 50℃에서 하룻밤 동안 반응시킨다. 반응액이 혼탁 상태로부터 맑은 황색 용액으로 변하면, 반응 완료 후 포화 아황산나트륨 용액으로 ??칭하여, KI 녹말 시험지에 무색이 나타난 후, 에틸아세테이트(50mL*2)로 추출하고, 유기상을 무수황산나트륨으로 건조시킨 다음, 농축 후 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르→석유 에테르: 에틸아세테이트=1 에테르: 에틸: 1)로 담황색 고체 2a(500mg, 수율 67%)를 수득한다.

반응 2

에틸렌디아민 1(30mg, 0.5mmol)을 화합물 2a(170mg, 0.5mmol)의 테트라하이드로퓨란(10mL) 용액에 투입한 다음, 1N의 NaOH(0.4mL)를 투입하고, 반응액을 실온에서 0.5시간 동안 교반한 후, 반응액을 직접 제조하여 화합물 2(120mg)를 수득한다.

반응 3

화합물 2(120mg, 0.33mmol)와 화합물 3a(100mg, 0.33mmol)의 메탄올(10mL) 용액을 실온에서 하룻밤 동안 교반하고, 반응액을 농축 후 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르→석유 에테르: 에틸아세테이트=1 에테르: 에틸: 1)로 화합물 3(42mg, 23%)을 수득한다.

반응 4

트리플루오로아세트산(0.6mL)을 화합물 3(31mg, 0.05mmol)의 디클로로메탄(3mL) 용액에 투입하여, 실온에서 하룻밤 동안 교반하고, 반응액을 농축 후 pre-HPLC로 제조하여 XSD3-047(9mg, 수율 68%)을 수득한다. 목표 화합물의 ¹H-NMR (400MHz，DMSO-d6): δ(ppm) : 11.4(s, 1H)， 8.88(s, 1H)，7.22-7.11(m, 2H), 6.71-6.5(m，3H)，6.38-6.21(m，2H)，3.37(m，3H)，3.01(m，2H). MS: m/z 401.2 [M+1].

실시예 11

반응 1

프로판디아민(35mg, 0.5mmol)을 화합물 1(170mg, 0.5mmol, 자세한 합성방법은 XSD3-047의 Final report 중 화합물 2a의 합성을 참조한다)의 테트라하이드로퓨란(10mL) 용액에 투입하고, 반응액을 실온에서 0.5시간 동안 교반한 후, 반응액으로 직접 목표 생성물 130mg을 제조한다.

반응 2

화합물 2(130mg, 0.33mmol)와 화합물 1a(100mg, 0.33mmol)의 메탄올(10mL) 용액을 실온에서 하룻밤 동안 교반하고, 반응액을 농축 후 컬럼 크로마토그래피(석유 에테르→석유 에테르: 에틸아세테이트=1 에테르: 에틸: 1)로 목표 생성물 3(78mg, 45%)을 수득한다.

반응 3

트리플루오로아세트산(0.6mL)을 화합물 3(31mg, 0.05mmol)의 디클로로메탄(3mL) 용액에 투입하여, 실온에서 하룻밤 동안 교반하고, 다시 1N의 NaOH 용액을 사용하여 pH=12로 조절한 후, 20분 동안 계속 교반한다. LCMS로 반응을 모니터링하여, 반응 완료 후 0.5N의 HCl을 사용하여 반응액을 중성으로 조절하고, 반응액을 농축 후 pre-HPLC로 제조하여 목표 생성물(9mg, 수율 68%)을 수득한다. 목표 화합물의 ¹H-NMR(400MHz，DMSO-d6): δ(ppm) : 11.4(s，0.6 H)，8.88(s，1H)，7.6(s，1H)，7.4-6.7(m，6H)，6.7(s，1H)，6.24(s，1H)，3.19-3.14(m，4H)，1.75(m，2H). MS: m/z 415.2 [M+1].

실시예 12

반응 1

화합물 1(384mg, 1mmol, 상세한 제조방법은 3047의 실시예 중의 제조방법을 참조한다)과 화합물 1a(100mg, 1.1mmol)의 테트라하이드로퓨란(10mL) 용액을 실온에서 48시간 동안 교반하고, 반응액으로 직접 목표 생성물 2(89mg, 수율 20%)를 제조한다.

반응 2

화합물(89mg, 0.2mmol)을 THF(10mL)에 용해시킨 다음, 1N의 NaOH 용액을 사용하여 pH=12로 조절한다. 20분 동안 교반하고, LCMS로 반응을 모니터링하여, 반응 완료 후 0.5N의 HCl을 사용하여 반응액을 중성으로 조절하고, 반응액을 농축 후 pre-HPLC로 목표 생성물(13mg, 수율 15%)을 제조한다. 목표 화합물의 ¹H-NMR(400MHz，DMSO-d6): δ(ppm) : 11.47(s，0.6 H)，8.92(s，1H)，7.50-7.09(m，5H)，6.70(s，1H)，6.28(s，1H)， 2.72-2.50(m，4H)，2.50(m，3H). MS: m/z 416.2 [M+1].

실시예 13

반응 1

화합물 1(102mg, 0.016mmol, 합성방법은 XSD3-047 Final Report를 참조한다)을 THF(10mL)에 용해시킨 다음, 실온 하에 1N의 NaOH 용액(0.1mL)을 투입하고, 실온에서 0.2시간 동안 교반한다. LCMS로 반응을 모니터링하여, 반응 완료 후 0.5N의 HCl을 사용하여 반응액을 중성으로 조절하고, 목표 화합물 52mg을 제조한다. 목표 화합물의 ¹H-NMR(400MHz，DMSO-d6):δ(ppm) : 11.45(s，1H)，8.89(s，1H)，8.24(m, 1H)，7.76-7.77(m，2H)，7.14-7.20(m，2H)，7.18(s，1H)，6.31(s，1H)，3.33-3.67(m，4H)，1.44-1.48(m，18H). MS: m/z 601.2 [M+1].

실시예 14

화합물 1(52mg, 0.1mmol, 합성방법은 XSD3-048 Final Report를 참조한다)을 THF(10mL)에 용해시킨 다음, 실온 하에 TFA(0.5mL)를 투입하고, 실온에서 12시간 동안 교반한다. LCMS로 반응을 모니터링하여, pre-HPLC로 목표 화합물 15mg을 수득한다. 목표 화합물의 ¹H-NMR(400MHz，DMSO-d6):δ(ppm) : 11.44(s，1H)，10.85(s，1H)，8.91(s，1H)，8.49(s，1H)，7.18-7.09(m，3H)，6.78-6.75(m，1H)，6.28-6.25(m，1H)，3.33-3.19（m，4H)，1.85-1.78(m，2H)，1.5(s，3H). LC-MS 특성분석 결과: m/z 515 [M+1].

실시예 15

반응 1

화합물 1(100mg, 0.23mmol)을 아세톤(10mL)에 용해시킨 다음, 실온 하에 탄산칼륨(0.276g, 2.0mmol)을 투입하고, 실온에서 0.5시간 동안 교반한 후, 염화벤젠설포닐을 적가하고, 실온에서 하룻밤 동안 교반한다. 물을 첨가하여 ??칭하고, 에틸아세테이트로 추출하며, 무수황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 조생성물을 직접 다음 단계에 사용한다.

반응 2

화합물 2(120mg, 0.5mmol)를 테트라하이드로퓨란/물에 용해시키고, 1N의 수산화나트륨(1mL)을 적가하여, 실온에서 10분 동안 교반하고, 반응액을 농축 후 pre-HPLC로 제조하여 목표 생성물 20mg을 수득한다.

¹H-NMR(400MHz, DMSO-d6):δ(ppm) : 11.45(s, 1H), 8.90(s, 1H), 7.75-7.77(m, 2H), 7.46-7.52(m, 3H), 7.12-7.20(m, 1H), 7.10-7.11(m, 1H), 6.75-6.78(m, 2H), 6.19 (s, 1H)，4.25(m, 2H), 3.11-3.19(m, 4H),1.67-1.70(m，2H).

HPLC purity: @214nm 99.2%, @254nm 99.3%.

LC-MS: m/z 555 [M+1].

실시예 16

반응 1

화합물 1(106mg, 0.25mmol)을 아세톤(10mL)에 용해시킨 다음, 탄산칼륨(138mg, 1mmol)을 투입하고, 화합물 1a(49mg, 0.25mmol)를 적가한 후, 실온에서 하룻밤 동안 교반한다. 물을 첨가하여 ??칭하고, 에틸아세테이트로 추출하며, 무수황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 조생성물 100mg을 수득한다.

반응 2

화합물 2(100mg)를 메탄올에 용해시키고, 실온에서 10분 동안 교반한 후, 1N의 수산화나트륨(1mL)을 적가하여, 실온에서 10분 동안 교반하고, 반응액을 농축 후 pre-HPLC로 제조하여 목표 생성물 12mg을 수득한다.

¹H-NMR(400MHz, DMSO-d6): δ(ppm) : 11.45(s, 1H),8.90(s, 1H), 7.10-7.21 (m, 2H), 6.76-7.17(m, 4H), 6.28(m, 1H), 3.33-3.40(m, 4H)，2.76(m，2H), 0.98-1.86(m，11H).

HPLC purity: @214nm 93.7%, @254nm 97.6%.

LC-MS: m/z 563 [M+1].

실시예 17

반응 1

화합물 1(110mg, 0.25mmol)을 아세톤(10mL)에 용해시킨 다음, 탄산칼륨(138mg, 1mmol)을 투입하고, 화합물 1a(47.5mg, 0.25mmol)를 적가한 후, 실온에서 하룻밤 동안 교반한다. 물을 첨가하여 ??칭하고, 에틸아세테이트로 추출하며, 무수황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 조생성물 100mg을 수득한다.

반응 2

화합물 2(100mg)를 메탄올에 용해시키고, 실온에서 10분 동안 교반한 후, 1N의 수산화나트륨(1mL)을 적가하여, 실온에서 10분 동안 교반하고, 반응액을 농축 후 pre-HPLC로 제조하여 목표 생성물 15mg을 수득한다.

¹H-NMR(400MHz, CDCl3): δ(ppm) : 9.96(s, 1H), 7.77-7.79(m, 2H), 6.18-7.32(m, 9H), 3.31-3.42(m, 4H),2.40(s, 3H), 1.76(m，2H).

HPLC purity: @214nm98.6%, @254nm 98.9%.

LC-MS: m/z 571 [M+1].

실시예 18

반응 1

화합물 1(96mg, 10mmol)과 화합물 1a(48mg, 0.25mmol)를 아세토니트릴(10mL)에 용해시키고, 실온에서 하룻밤 동안 교반한다. 물을 첨가하여 ??칭하고, 에틸아세테이트로 추출하며, 무수황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 조생성물 100mg을 수득한다.

반응 2

¹H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ(ppm) : 11.76(s, 1H), 11.45(s, 1H), 8.68-9.04(m, 3H), 7.09-7.20(m, 2H), 6.73-6.77(m, 1H), 6.33-6.36(m, 1H), 3.53-3.54(m, 2H)，3.44-3.46(m，2H), 1.18(m，1H)，

1.00-1.02(m，2H)，0.90-0.92(m，2H).

HPLC purity: @214nm 98.8%, @254nm 99.8%.

LC-MS: m/z 471 [M+1].

실시예 19

반응 1

화합물 1(96mg, 0.25mmol)과 화합물 1a(48mg, 0.25mmol)를 아세토니트릴(10mL)에 용해시키고, 실온에서 하룻밤 동안 교반한다. 물을 첨가하여 ??칭하고, 에틸아세테이트로 추출하며, 무수황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 조생성물 100mg을 수득한다.

반응 2

¹H-NMR(400MHz, DMSO-d6): δ(ppm) : 11.48(s, 1H), 11.28(s, 1H), 8.75-8.92(m, 3H), 7.09-7.20(m, 2H), 6.73-6.77(m, 1H), 6.35-6.38(m, 1H), 3.53-3.54(m, 2H)，3.44-3.46(m，2H), 3.24-3.28(m，2H), 2.13-2.20(m，3H), 1.77-1.98(m，2H).

HPLC purity: @214nm 97.9%, @254nm 98.6%.

LC-MS: m/z 485 [M+1].

실시예 20

반응 1

화합물 1(500mg, 5.5mmol)을 3mL의 디클로로메탄에 용해시키고, 순차적으로 O-(7-벤조트리아졸)-N,N,N',N'-테트라메틸유로늄 헥사플루오로포스페이트(128mg, 0.336mmol), 시클로헥실 카르복실레이트(800mg, 6.25mmol) 및 디이소프로필 에틸아민(1.16g, 896mmol)을 투입하고, 질소가스 보호하에 실온에서 하룻밤 동안 반응시킨다. 물을 첨가하여 ??칭하고, 에틸아세테이트(50mLx5)로 추출하여, 추출액을 합명하고 포화식염수로 세척한 후, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 감압 스핀 건조시켜 제품 40mg을 수득하며, 다음 단계의 반응에 직접 사용한다.

반응 2

화합물 2(530mg, 2.65mmol)를 아세토니트릴(5mL)에 용해시키고, 2a(850mg, 5.3mmol)를 투입하여, 실온에서 24시간 동안 교반한 후, 직접 스핀 건조시켜 제품 300mg을 수득하며, 다음 단계의 반응에 직접 사용한다.

반응 3

화합물 3(300mg, 0.99mmol)을 디클로로메탄(10mL)에 용해시키고, 실온에서 5min 동안 교반한 후, 트리플루오로아세트산(5mL)을 투입하고, 실온에서 2시간 동안 반응시킨 다음, 직접 스핀 건조시켜 200mg의 목표 생성물 4를 수득하며, 조생성물을 직접 다음 단계에 사용한다.

반응 4

화합물 4(200mg, 0.99mmol)를 테트라하이드로퓨란에 용해시키고, 화합물 4a(250mg, 1.0mmol)를 투입하여, 실온에서 10분 동안 교반하고, 1N의 수산화나트륨(1mL)을 적가하여, 실온에서 10분 동안 교반하고, 반응액을 농축 후 pre-HPLC로 제조하여 목표 생성물 3mg을 수득한다.

¹H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ(ppm) : 11.90(s, 1H), 11.55(s, 1H), 8.67-9.12(m, 3H), 7.10-7.20(m, 2H), 6.73-6.77(m, 1H), 6.37(s, 1H)，3.33-3.54(m，4H), 2.16-2.21(m，1H), 1.56-1.81(m, 6H), 1.15- 1.36(m, 1H).

HPLC purity: @214nm 97.7%, @254nm 98.0%.

LC-MS: m/z511 [M+1].

실시예 21

반응 1

화합물 1(35mg, 0.2mmol)과 화합물 2(90mg, 0.22mmol)를 10mL의 아세토니트릴에 용해시키고, 90℃에서 16시간 동안 교반한 후, 반응액을 직접 스핀 건조시켜 화합물 3을 수득하며, 조생성물을 직접 다음 단계에 사용한다(100mg).

반응 2:

화합물 3(100mg, 0.1mmol)을 1.5N의 NaOH(2mL) 테트라하이드로퓨란(5mL) 용액에 용해시키고, 실온에서 0.5시간 동안 교반한 후, pre-HPLC로 제조하여 목표 화합물(30mg, 수율: 30%)을 수득한다.

HNMR（DMSO，400M）：11.40s，1H)，11.33(s，1H)，9.09(s，1H)，8.93(s，1H)，8.7(s，1H), 7.09-7.20(m，2H), 6.73-6.77(m，1H), 6.36(s，1H), 3.45-3.55(m, 4H), 2.31-2.33(m, 2H), 0.95-0.99(m,1H), 0.47-0.51(m, 2H), 0.16-0.20(m, 2H).

HPLC purity: @214nm 98.8%, @254nm 98.9%。

LC-MS: m/z 483.1 [M+1].

실시예 22

반응 1:

화합물 1(44mg, 0.2mmol)과 화합물 2(90mg, 0.22mmol)를 10mL의 아세토니트릴에 용해시키고, 90℃에서 16시간 동안 교반한 후, 반응액을 직접 스핀 건조시켜 화합물 3을 수득하며, 조생성물을 직접 다음 단계에 사용한다(100mg).

반응 2:

화합물 3(100mg, 0.1mmol)을 1.5N의 NaOH(4mL) 테트라하이드로퓨란(5mL) 용액에 용해시키고, 실온에서 1시간 동안 교반한 후, pre-HPLC로 제조하여 목표 화합물(35mg, 수율: 35%)을 수득한다.

HNMR(DMSO，400M）：11.40(s，1H)，11.33(s，1H)，9.18(s，1H)，9.02(s，1H)，8.78(s，1H), 7.10-7.17(m，2H), 6.73-6.76(m，1H), 6.35-6.38(m，1H), 3.46-3.65(m, 4H), 2.26-2.38(m, 2H), 1.47-1.69(m,5H), 0.80-1.22(m,6H).

HPLC purity: @214nm 96.5%, @254nm 96.5%.

LC-MS: m/z527.2 [M+1].

실시예 23

반응 1:

화합물 1(35mg, 0.26mmol)과 화합물 2(90mg, 0.22mmol)를 10mL의 아세토니트릴에 용해시키고, 90℃에서 20시간 동안 교반한 후, 반응액을 직접 스핀 건조시켜 화합물 4를 수득하며, 조생성물을 직접 다음 단계에 사용한다(110mg).

반응 2:

화합물 3(100mg, 0.2mmol)을 1N의 NaOH(1.5mL) 테트라하이드로퓨란(5mL) 용액에 용해시키고, 실온에서 0.5시간 동안 교반한 후, pre-HPLC로 제조하여 목표 화합물(15mg, 수율: 15%)을 수득한다.

HNMR(DMSO，400M)：12.50(s，1H)，11.50(br，1H)，9.19(s，1H)，8.65-8.91(m，2H), 7.12-7.21(m，2H), 6.73-6.77(m，1H), 6.36(s，1H), 3.24-3.36(m, 4H), 1.77-1.84(m, 3H), 0.90-1.02(m, 4H).

HPLC purity: @214nm 98.6%, @254nm 98.3%.

LC-MS: m/z481.1 [M+1].

실시예 24

반응 1:

화합물 1(42mg, 0.2mmol)과 화합물 2(90mg, 0.22mmol)를 10mL의 아세토니트릴에 용해시키고, 90℃에서 20시간 동안 교반한 후, 반응액을 직접 스핀 건조시켜 화합물 4를 수득하며, 조생성물을 직접 다음 단계에 사용한다(120mg).

반응 2:

화합물 3(110mg, 0.2mmol)을 1N의 NaOH(1.5mL) 테트라하이드로퓨란(5mL) 용액에 용해시키고, 실온에서 1시간 동안 교반한 후, pre-HPLC로 제조하여 목표 화합물(35mg, 수율: 35%)을 수득한다.

HNMR(DMSO，400M)：11.44(s，1H)，11.35(s，1H)，9.06(s，1H)，8.92(s，1H)，8.64(s，3H), 7.16-7.21(t，1H), 7.09-7.11(q，1H), 6.74-6.78(m，1H), 6.26-6.29(m，1H), 3.23-3.34(m, 4H), 2.49-2.50(m, 1H), 1.61-1.81(m, 7H), 1.17-1.32(m, 5H).

HPLC purity: @214nm 99.4%, @254nm 99.8%.

LC-MS: m/z527.2 [M+1].

실시예 25

반응 1

평행한 두 반응기에서서 화합물 1(500mg, 8.77mmol)을 DCM에 용해시키고, 1a(3.3g, 21.93mmol), HATU(4.01g, 5.52mmol), DIEA(3.71g, 56.5mmol)를 투입하여, 실온에서 하룻밤 동안 교반한다. 물을 첨가하여 ??칭한 후, 에틸아세테이트로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 컬럼 크로마토그래피로 제품 128mg을 수득한다.

반응 2

화합물 2(128mg, 0.743mmol)를 ACN에 용해시키고, 2a(300mg, 0.752mmol)를 투입하여, 90℃에서 하룻밤 동안 교반한 후, 에틸아세테이트로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 조생성물 300mg을 수득한다.

반응 3

화합물 3(300mg)을 THF/H₂O에 용해시키고, 실온에서 10분 동안 교반한 후, 1N의 수산화나트륨(1mL)을 적가하고, 실온에서 10분 동안 교반한다. LCMS로 완전히 가수분해되었음이 검출된 후, 1M의 HCl을 적가하여 중성으로 중화시킨 다음 EA로 추출액을 농축하고 pre-HPLC(산법(acid method))로 제조하여 목표 생성물 25mg을 수득한다.

¹H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ(ppm) : 11.341(s, 2H), 8.649-8.923(m, 4H), 6.274-7.188(m, 4H), 3.255-3.324 (m, 4H), 1.694-2.067(m,9H).

HPLC purity: @214nm99.05%, @254nm 98.1%.

LC-MS: m/z497[M+1].

실시예 26

반응 1:

화합물 1(1.0g, 10mmol)과 화합물 2(2.7mg, 30mmol)를 20mL의 DMF에 용해시키고 실온 하에 HATU(3.8g, 10mmol), DIEA(6.5g, 50mmol)를 투입한 후 10시간 동안 교반한다. 반응액을 물 60mL에 투입하여, 에틸아세테이트로 추출하고 스핀 건조시킨 다음 컬럼 크로마토그래피하여 화합물 3(0.4g, 수율: 24%)을 수득한다.

반응 2:

화합물 3(35mg, 0.2mmol)과 화합물 4(90mg, 0.22mmol)를 10mL의 아세토니트릴에 용해시키고, 90℃에서 20시간 동안 교반한 후, 반응액을 직접 스핀 건조시켜 화합물 5를 수득하며, 조생성물을 직접 다음 단계에 사용한다(120mg).

반응 3:

화합물 3(110mg, 0.2mmol)을 1N의 NaOH(4mL) 테트라하이드로퓨란(5mL) 용액에 용해시키고, 실온에서 1시간 동안 교반한 후, pre-HPLC로 제조하여 목표 화합물(15mg, 수율: 15%)을 수득한다.

HNMR(DMSO，400M)：11.43(s，1H)，11.27(s，1H)，9.06(s，1H)，8.92(s，1H)，8.64(s，3H), 7.16-7.21(t，1H), 7.09-7.11(q，1H), 6.74-6.78(m，1H), 6.26-6.29(m，1H), 3.23-3.35(m, 4H), 2.32-2.34(m, 2H), 1.80-1.84(m, 2H), 0.95-1.01(m, 1H), 0.49-0.51(m, 5H), 0.18-0.19(m, 2H).

HPLC purity: @214nm 96.5%, @254nm 97.9%.

LC-MS: m/z497.2 [M+1].

실시예 27

반응 1:

화합물 1(45mg, 0.2mmol)과 화합물 2(90mg, 0.22mmol)를 10mL의 아세토니트릴에 용해시키고, 90℃에서 20시간 동안 교반한 후, 반응액을 직접 스핀 건조시켜 화합물 4를 수득하며, 조생성물을 직접 다음 단계에 사용한다(120mg crude, y>99%).

반응 2:

화합물 3(110mg, 0.2mmol)을 1N의 NaOH(4mL) 테트라하이드로퓨란(5mL) 용액에 용해시키고, 실온에서 1시간 동안 교반한 후, pre-HPLC로 제조하여 목표 화합물(55mg, y=15%)을 제조한다.

HNMR(DMSO，400M)： 11.53(s，1H)，11.44(s，1H)，9.13(s，1H)，8.92(s，1H)，8.67(s，1H), 7.16-7.21(t，1H), 7.09-7.11(q，1H), 6.74-6.78(m，1H), 6.26-6.29(m，1H), 3.23-3.34(m, 4H), 2.27-2.28(m, 2H), 1.66-1.84(m, 8H), 0.91-1.17(m, 5H).

LC-MS: m/z 583.2 [M+1].

실시예 28

반응 1

화합물 1(106mg, 0.25mmol)을 아세톤(10mL)에 용해시키고, 탄산칼륨(138mg, 1mmol)을 투입한 후, 화합물 1a(43.5mg, 0.25mmol)을 적가하여, 실온에서 하룻밤 동안 교반한다. 물을 첨가하여 ??칭한 후, 에틸아세테이트로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 조생성물 100mg을 수득한다.

반응 2

화합물 2(100mg)를 메탄올에 용해시키고, 실온에서 10분 동안 교반한 후, 1N의 수산화나트륨(1mL)을 적가하고, 실온에서 10분 동안 교반하여, 반응액을 농축 후 pre-HPLC로 제조하여 목표 생성물 9mg을 수득한다.

¹H-NMR(400MHz, DMSO-d6): δ(ppm) : 11.48(s, 1H), 11.44(s, 1H), 8.92-8.95(m, 3H), 7.27-7.34(m, 5H), 7.09-7.17(m, 2H), 6.74-6.76 (m, 1H), 6.32-6.35 (m, 1H)，3.75-3.77(m，2H), 3.50-3.56(m，2H), 3.44-3.46(m，2H).

HPLC purity: @214nm 97.9%, @254nm 99.2%.

LC-MS: m/z 521 [M+1].

실시예 29

반응 1

화합물 1(110mg, 0.25mmol)을 아세톤(10mL)에 용해시키고, 탄산칼륨(138mg, 1mmol)을 투입한 후, 화합물 1a(43.5mg, 0.25mmol)을 적가하여, 실온에서 하룻밤 동안 교반한다. 물을 첨가하여 ??칭한 후, 에틸아세테이트로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 조생성물 100mg을 수득한다.

반응 2

¹H-NMR(400MHz, DMSO-d6): δ(ppm) : 11.64(s, 1H), 11.42(s, 1H), 9.03-9.07(m, 3H), 7.27-7.34(m, 5H), 7.09-7.17(m, 2H), 6.74-6.76(m, 1H), 6.32-6.35(m, 1H)，3.75-3.77(m，2H), 3.14-3.34(m，4H), 1.80-1.84(m，2H).

HPLC purity: @214nm 96.0%, @254nm 96.0%.

LC-MS: m/z 535 [M+1].

실시예 30

반응 1

화합물 1(330mg, 0.75mmol)을 아세톤(30mL)에 용해시키고, 탄산칼륨(414mg, 3mmol)을 투입한 후, 화합물 1a(130.5mg, 0.75mmol)을 적가하여, 실온에서 하룻밤 동안 교반한다. 물을 첨가하여 ??칭한 후, 에틸아세테이트로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 조생성물 300mg을 수득한다.

반응 2

화합물 2(300mg)를 메탄올에 용해시키고, 실온에서 10분 동안 교반한 후, 1N의 수산화나트륨(1mL)을 적가하고, 실온에서 10분 동안 교반하여, 반응액을 농축 후 pre-HPLC로 제조하여 목표 생성물 59mg을 수득한다.

¹H-NMR(400MHz, DMSO-d6): δ(ppm) : 11.64(s, 1H), 11.42(s, 1H), 9.03-9.07(m, 4H), 7.32-7.35(m, 2H), 7.15-7.32(m, 3H), 7.08-7.11(m, 1H) 6.74-6.77 (m, 1H), 6.25-6.28(m, 1H)，3.75-3.77(m，2H), 3.14-3.34(m，4H), 1.80-1.84（m，2H).

HPLC purity: @214nm 99.90%, @254nm 99.70%.

LC-MS: m/z569[M+1].

실시예 31

반응 1

화합물 1(330mg, 0.75mmol)을 아세톤(30mL)에 용해시키고, 탄산칼륨(414mg, 3mmol)을 투입한 후, 화합물 1a(130.5mg, 0.75mmol)을 적가하여, 실온에서 하룻밤 동안 교반하고, 물을 첨가하여 ??칭한 후, 에틸아세테이트로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 조생성물 300mg을 수득한다.

반응 2

화합물 2(300mg)를 메탄올에 용해시키고, 실온에서 10분 동안 교반한 후, 1N의 수산화나트륨(1mL)을 적가하고, 실온에서 10분 동안 교반하여, 반응액을 농축 후 pre-HPLC로 제조하여 목표 생성물 35mg을 수득한다.

¹H-NMR(400MHz, DMSO-d6): δ(ppm) : 11.64(s, 1H), 11.42(s, 1H), 9.03-9.07(m, 4H), 7.32-7.35(m, 2H), 7.15-7.32(m, 3H), 7.08-7.11(m, 1H), 6.74-6.77(m, 1H), 6.25-6.28(m, 1H)，3.75-3.77(m，2H), 3.14-3.34(m，4H), 1.80-1.84(m，2H).

HPLC purity: @214nm 99.40%, @254nm 99.25%.

LC-MS: m/z553[M+1].

실시예 32

반응 1

화합물 1(330mg, 0.75mmol)을 테트라하이드로퓨란(10mL)에 용해시키고, 탄산칼륨(414mg, 3mmol)을 투입한 후, 실온에서 20분 동안 교반하고, 화합물 1a(184mg, 1mmol)의 테트라하이드로퓨란 용액(1mL)을 적가하여, 실온에서 2시간 동안 교반한다. 물을 첨가하여 ??칭한 후, 에틸아세테이트로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 조생성물 500mg을 수득한다.

반응 2

화합물 2(500mg)를 테트라하이드로퓨란(20mL)에 용해시키고, 실온에서 5분 동안 교반한 후, 1N의 수산화나트륨(5mL)을 적가하고, 실온에서 30분 동안 교반한다. 반응액에 물과 에틸아세테이트를 첨가하여 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시켜, 농축 후 조생성물을 아세토니트릴로 용해시키고, pre-HPLC로 제조하여 목표 생성물 29mg을 수득한다.

¹H-NMR(400MHz, DMSO-d6): δ(ppm) : 11.91(s, 1H), 11.43(s, 1H), 9.04(s, 1H), 8.90 (s, 1H), 8.70(s, 2H), 7.25-7.23(m, 2H), 7.20-7.16(m, 1H), 7.11-7.09 (m, 1H), 6.91-6.88(m, 2H), 6.78-6.75(m,1H), 6.25(m,1H), 3.73(s, 3H), 3.68(s,2H), 3.28-3.23(m,4H), 1.83-1.80(m,2H).

HPLC purity: @214nm 99.2%, @254nm 99.7%.

LC-MS: m/z563.2[M+1].

실시예 33

반응 1

화합물 1(150mg, 0.47mmol)을 DCM에 용해시키고, Et₃N을 투입하여, 실온에서 1시간 동안 교반한다. 물을 첨가하여 ??칭한 후, 에틸아세테이트로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 조생성물 100mg을 수득한다.

반응 2

화합물 2(100mg, 1.08mmol)을 ACN에 용해시키고, 2a(120mg，1.06mmol)을 투입하여, 90℃에서 하룻밤 교반한다. 에틸아세테이트로 추출하여, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 조생성물 100mg을 수득한다.

반응 3

화합물 3(100mg)를 THF/H₂O에 용해시키고, 실온에서 10분 동안 교반한 후, 1N의 수산화나트륨(1mL)을 적가하고, 실온에서 10분 동안 교반하여, 반응액을 농축 후 pre-HPLC로 제조하여 목표 생성물 8mg을 수득한다.

¹H-NMR(400MHz, DMSO-d6): δ(ppm) : 11.579(s, 1H), 11.480(s, 1H), 8.718-8.917(m, 3H), 6.286-7.187(m, 4H), 3.255-3.324(m, 4H), 2.499-2.507(m, 1H), 1.570-1.843(m,8H).

HPLC purity: @214nm97.3%, @254nm 98.1%.

LC-MS: m/z497[M+1].

실시예 34

반응 1

화합물 1(500mg, 8.77mmol)을 DCM에 용해시키고, 1a(3.3g，21.93mmol), HATU(4.01g，5.52mmol), DIEA(3.71g，56.5 mmol)를 투입하여, 실온에서 하룻밤 동안 교반한다. 물을 첨가하여 ??칭한 후, 에틸아세테이트로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 컬럼 크로마토그래피로 분리하여 생성물 120mg을 수득한다.

반응 2

화합물 2(120mg, 1.08mmol)을 ACN에 용해시키고, 2a(100mg，1.06mmol)을 투입하여, 90℃에서 하룻밤 교반하고, 에틸아세테이트로 추출하여, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 조생성물 100mg을 수득한다.

반응 3

화합물 3(100mg)를 THF/H₂O에 용해시키고, 실온에서 10분 동안 교반한 후, 1N의 수산화나트륨(1mL)을 적가하고, 실온에서 10분 동안 교반하여, 반응액을 농축 후 pre-HPLC로 제조하여 목표 생성물 12mg을 수득한다.

¹H-NMR(400MHz, DMSO-d6): δ(ppm) : 12.041(s, 1H), 8.649-8.923(m, 3H), 6.274-7.188(m, 4H), 3.255-3.324(m, 4H), 2.509-2.683(m, 2H), 1.594-2.067(m,6H).

HPLC purity: @214nm95.9%, @254nm 95.4%.

LC-MS: m/z497[M+1].

실시예 35

반응 1

화합물 1(1g, 8.77mmol)을 DCM에 용해시키고, 1a(6.3g，21.93mmol), HATU(4.01g，10.52mmol), DIEA(5.71g，56.5 mmol)를 투입하여, 실온에서 하룻밤 동안 교반한다. 물을 첨가하여 ??칭한 후, 에틸아세테이트로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 컬럼 크로마토그래피로 분리하여 생성물 200mg을 수득한다.

반응 2

화합물 2(200mg, 1.08mmol)을 ACN에 용해시키고, 2a(420mg，1.06mmol)을 투입하여, 90℃에서 하룻밤 교반하고, 에틸아세테이트로 추출하여, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 조생성물 100mg을 수득한다.

반응 3

¹H-NMR(400MHz, DMSO-d6): δ(ppm) : 11.579(s, 1H), 11.480(s, 1H), 8.718-8.917(m, 3H), 6.286-7.187(m, 4H), 3.255-3.324(m, 4H), 2.499-2.507(m, 1H), 1.570-1.843(m,10H).

HPLC purity: @214nm91.2%, @254nm 96.8%.

LC-MS: m/z511[M+1].

실시예 36

반응 1

화합물 1(500mg, 8.77mmol)을 DCM에 용해시키고, 1a(3.3g，21.93mmol), HATU(4.01g，10.52mmol), DIEA(5.71g，56.5 mmol)를 투입하여, 실온에서 하룻밤 동안 교반한다. 물을 첨가하여 ??칭한 후, 에틸아세테이트로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 컬럼 크로마토그래피로 분리하여 생성물 120mg을 수득한다.

반응 2

반응 3

¹H-NMR(400MHz, DMSO-d6): δ(ppm) : 11.441(s, 2H), 8.649-8.923(m, 3H), 6.274-7.188(m, 4H), 3.255-3.324(m, 4H), 1.694-2.067(m,11H).

HPLC purity: @214nm99.1%, @254nm 99.3%.

LC-MS: m/z511[M+1].

실시예 37

반응 1

화합물 1(110mg, 0.25mmol)을 아세톤(10mL)에 용해시키고, 탄산칼륨(138mg, 1mmol)을 투입한 후, 화합물 1a(113mg, 1mmol)을 적가하여, 실온에서 하룻밤 동안 교반한다. 물을 첨가하여 ??칭한 후, 에틸아세테이트로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 조생성물 100mg을 수득한다.

반응 2

화합물 2와 2a(100mg)를 메탄올에 용해시키고, 실온에서 10분 동안 교반한 후, 1N의 수산화나트륨(1mL)을 적가하고, 실온에서 10분 동안 교반하여, 반응액을 농축 후 pre-HPLC로 제조하여 목표 생성물 XSD3-087(15 mg), XSD3-087-01(17 mg)을 수득한다.

XSD3-087 ¹H-NMR(400MHz,DMSO): δ(ppm) : 11.41(s, 1H), 8.90(m, 1H), 6.18-7.32(s, 1H), 7.10-7.21(m, 2H), 7.10-7.12(m, 2H), 6.76-6.79(m，1H)，6.23(m，1H)，3.12-3.23(m，4H)，6.76-6.79(m，1H)，2.67(s，3H), 1.72-1.75(m，2H).

HPLC purity: @214nm 93.5%, @254nm 94.6%.

LC-MS: m/z492 [M+1].

XSD3-087-01 ¹H-NMR(400MHz,DMSO): δ(ppm) : 11.43(s, 1H), 8.90(m, 1H), 8.01(m, 2H), 7.10-7.20(s, 2H), 6.85(m, 1H), 6.23(m, 1H), 3.72-3.76(m, 2H), 3.40(s，3H)，3.24-3.26(m，2H)，2.93(s，3H)，1.87-1.91(m，2H).

HPLC purity: @214nm98%, @254nm 98.6%.

LC-MS: m/z570 [M+3].

실시예 38

반응 1

화합물 1(100mg, 0.21mmol)을 아세톤(10mL)에 용해시키고, 탄산칼륨(78mg, 0.55mmol)을 투입한 후, 화합물 1a(41mg, 0.23mmol)을 적가하여, 실온에서 하룻밤 동안 교반한다. 물을 첨가하여 ??칭한 후, 에틸아세테이트로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 조생성물 100mg을 수득한다.

반응 2

화합물 2(100mg)를 THF/H₂O에 용해시키고, 실온에서 10분 동안 교반한 후, 1N의 수산화나트륨(1mL)을 적가하고, 실온에서 10분 동안 교반하여, 반응액을 농축 후 pre-HPLC로 제조하여 목표 생성물 5mg을 수득한다.

¹H-NMR(400MHz, DMSO-d6): δ(ppm) : 11.421(s, 1H), 8.897(s, 1H), 7.153-7.197(m, 2H), 7.105-7.120(m, 1H), 6.746-7.098(m, 1H), 6.220(s, 1H), 4.078(s, 2H), 3.104-3.129(m, 4H)，2.735-2.761(m, 2H), 1.535-1.853(m, 7H), 0.976-1.202(m, 6H).

HPLC purity: @214nm99.8%, @254nm 99.3%;

LC-MS: m/z575[M+1].

실시예 39

반응 1

화합물 1(1.0g, 3.6mmol)을 아세톤(16mL)에 용해시키고, 탄산칼륨(993mg, 7.2mmol)을 투입한 후, 화합물 1a(254mg, 2.7mmol)을 적가하여, 실온에서 하룻밤 동안 교반한다. 물을 첨가하여 ??칭한 후, 에틸아세테이트로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 조생성물 300mg을 수득한다.

반응 2

화합물 2a(100mg)를 아세토니트릴에 용해시키고, 화합물 2(40mg，0.27mmol)를 투입하여, 90℃에서 12시간 동안 교반한다. 물을 첨가하여 ??칭한 후, 에틸아세테이트로 추출하여, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 조생성물 80mg을 수득한다.

반응 3

화합물 3(80mg)을 DMF에 용해시키고, 실온에서 10분 동안 교반한 후, 탄산칼륨(132mg, 0.96mmol)을 투입하여, 실온에서 12시간 동안 교반하고, 물을 첨가하여 ??칭한 후, 에틸아세테이트로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 조생성물 60mg을 수득하며, pre-HPLC로 제조하여 목표 생성물 14.2mg을 수득한다.

¹H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ(ppm) : 11.53(s, 1H), 8.91(s, 1H), 8.58-8.27(m, 3H), 7.38-7.12(m, 2H), 6.78(s, 1H), 6.28(s, 1H), 3.65(s, 3H)，3.28-3.24(m, 4H), 1.79(s, 2H).

HPLC purity: @214nm 94.5%, @254nm 95.4%.

LC-MS: m/z 473 [M+1].

실시예 40

반응 1

화합물 1(1.0g, 3.6mmol)을 아세톤(16mL)에 용해시키고, 탄산칼륨(993mg, 7.2mmol)을 투입한 후, 화합물 1a(254mg, 2.7mmol)을 적가하여, 실온에서 하룻밤 동안 교반한다. 물을 첨가하여 ??칭한 후, 에틸아세테이트로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 조생성물 400mg을 수득한다.

반응 2

화합물 2a(100mg)를 아세토니트릴에 용해시키고, 화합물 2(42mg，0.27mmol)를 투입하여, 90℃에서 12h 동안 교반하고, 물을 첨가하여 ??칭한 후, 에틸아세테이트로 추출하여, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 조생성물 66mg을 수득한다.

반응 3

화합물 3(66mg)을 DMF에 용해시키고, 실온에서 10min 동안 교반한 후, 탄산칼륨(108mg, 0.78mmol)을 투입하여, 실온에서 12h 동안 교반한다. 물을 첨가하여 ??칭한 후, 에틸아세테이트로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 조생성물 50mg을 수득하며, pre-HPLC로 제조하여 목표 생성물 26.5mg을 수득한다.

¹H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ(ppm) : 11.47(s, 1H), 11.24(s, 1H), 8.92(s, 1H), 8.62(s, 2H), 7.21-7.09 (m, 2H), 6.79-6.75(m, 1H), 6.29-6.25(m, 1H), 4.25-4.20(m, 2H), 3.32-3.24(m, 4H), 1.85-1.80(m, 2H), 1.28-1.24(m, 3H).

HPLC purity: @214nm 97.8%, @254nm 98.6%.

LC-MS: m/z 487 [M+1].

실시예 41

반응 1

화합물 1(1.0g, 3.6mmol)을 아세톤(16mL)에 용해시키고, 탄산칼륨(993mg, 7.2mmol)을 투입한 후, 화합물 1a(732mg, 6.0mmol)을 적가하여, 실온에서 하룻밤 동안 교반한다. 물을 첨가하여 ??칭한 후, 에틸아세테이트로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 조생성물 360mg을 수득한다.

반응 2

화합물 2a(100mg)를 아세토니트릴에 용해시키고, 화합물 2(45mg，0.27mmol)를 투입하여, 90℃에서 12시간 동안 교반하고, 물을 첨가하여 ??칭한 후, 에틸아세테이트로 추출하여, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 조생성물 51mg을 수득한다.

반응 3

화합물 3(51mg)을 DMF에 용해시키고, 실온에서 10분 동안 교반한 후, 탄산칼륨(108mg, 0.78mmol)을 투입하여, 실온에서 12시간 동안 교반한다. 물을 첨가하여 ??칭한 후, 에틸아세테이트로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 조생성물 50mg을 수득하며, pre-HPLC로 제조하여 목표 생성물 10.6mg을 수득한다.

¹H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ(ppm) : 11.48(s, 1H), 11.18(s, 1H), 8.92(s, 1H), 8.60(s, 2H), 7.21-7.09(m, 2H), 6.79-6.75(m, 1H), 6.30-6.25(m, 1H), 4.98-4.91(m, 1H), 3.32-3.24(m, 4H), 1.83-1.78(m, 2H), 1.28-1.27(m, 6H).

HPLC purity: @214nm 95.2%, @254nm 98.0%.

LC-MS: m/z 501 [M+1].

실시예 42

반응 1

화합물 1(1.0g, 3.6mmol)을 아세톤(16mL)에 용해시키고, 탄산칼륨(993mg, 7.2mmol)을 투입한 후, 화합물 1a(540mg, 3.6mmol)을 적가하여, 실온에서 하룻밤 동안 교반한다. 물을 첨가하여 ??칭한 후, 에틸아세테이트로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 조생성물 330mg을 수득한다.

반응 2

화합물 2a(100mg)를 아세토니트릴에 용해시키고, 화합물 2(50mg，0.27mmol)를 투입하여, 90℃에서 12시간 동안 교반하고, 물을 첨가하여 ??칭한 후, 에틸아세테이트로 추출하여, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 조생성물 90mg을 수득한다.

반응 3

화합물 3(90mg)을 DMF에 용해시키고, 실온에서 10분 동안 교반한 후, 탄산칼륨(132mg, 0.96mmol)을 투입하여, 실온에서 12시간 동안 교반한다. 물을 첨가하여 ??칭한 후, 에틸아세테이트로 추출하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 농축하여 조생성물 70mg을 수득하며, pre-HPLC로 제조하여 목표 생성물 32.5mg을 수득한다.

¹H-NMR (400MHz, DMSO-d6): δ(ppm) : 11.51(s, 1H), 11.24(s, 1H), 8.91(s, 1H), 8.55-8.27(m, 3H), 7.21-7.09(m, 2H), 6.79-6.75(m, 1H), 6.29-6.25(m, 1H), 4.25-4.20(m, 2H), 3.32-3.24(m, 4H), 1.80(s, 2H), 1.57(s, 2H), 1.28(s, 4H), 0.88-0.85(m, 3H).

¹H-NMR (400MHz, CDCl3): δ(ppm) : 7.23-7.20(m, 1H), 7.10(s, 1H), 7.04-7.00(m, 1H), 6.92-6.88(m, 1H), 5.85(s, 1H), 4.09-4.06(m, 2H), 3.58-3.53(m, 2H), 3.38-3.35(m, 2H), 1.98-1.97(m, 2H), 1.70-1.63(m, 2H), 1.38-1.35(m, 4H), 0.91-0.88(m, 3H).

HPLC purity: @214nm 98.1%, @254nm 97.8%.

LC-MS: m/z 529[M+1].

합성방법 1 및 상기 실시예를 참조하여, 이하 화합물을 합성한다.

실시예 55 인돌아민 2,3-이산소화효소 억제 활성 검출 및 IC ₅₀ 의 측정

인간 인돌아민 2,3-이산소화효소 유전자를 함유한 플라즈마의 구축, 대장간균 중의 발현, 추출 및 정제는 모두 Littlejohn 등이 보고한 방법대로 실시하였다(Takikawa O，Kuroiwa T，Yamazaki F，et al.J.Biol.Chem. 1988，263, 2041-2048). 96웰 플레이트에서 50mN의 인산칼륨 버퍼액(pH6.5), 20mM의 아스코르브산염, 20μM의 메틸렌 블루 및 정제된 인간 인돌아민 2,3-이산소화효소 단백질을 혼합하고, 혼합물에 200μML-트립토판과 억제제를 투입하였다. 37℃하에 60분 동안 반응을 실시하고, 30%의 트리클로로아세트산을 첨가하여 반응을 종료하고, 65℃에서 15분 동안 인큐베이팅하여 N-포르밀 키뉴레닌을 키뉴레닌으로 가수분해시킨 후, 3400g에서 5min 동안 원심분리하여 침전된 단백질을 제거하고, 상청액을 새로운 96웰 플레이트 내로 옮겨 담은 후, 2%(w/v)의 p-디메틸아미노벤즈알데히드가 투입된 아세트산 용액 중에서 반응시키고, 25℃에서 반응시켜 10분 동안 인큐베이팅하고, 분광광도계 상의 480nm의 위치에서 수치를 판독하였다. 인돌아민 2,3-이산소화효소 억제가 없거나 또는 인돌아민 2,3-이산소화효소가 없는 것을 대조 웰로 삼아, 각종 화합물의 IC₅₀를 측정하는데 필수적인 비선형 회귀 파라미터로 사용하였다. 비선형 회귀와 IC₅₀값의 측정은 GraphPad PRism 4 소프트웨어로 실시하였다. IC₅₀가 10μM 미만인 화합물은 상기 검사에서 유효 억제제로 인정된다. 본 발명의 실시예의 화합물은 인돌아민 2,3-이산소화효소의 활성 억제 방면에 탁월한 억제 활성을 갖는다.

[표 1] 각 화합물의 IC ₅₀

주: INCB024360는 인돌아민 2,3-이산소화효소 억제제이며, 그 구조는

이다.

실시예 55 중에 묘사된 방법으로 하기 화합물의 IC ₅₀ 를 측정하였으며, 구체적인 결과는 표 2와 같다:

[표 2] 각 화합물의 IC ₅₀

실시예 56 인돌아민 2,3-이산소화효소 억제제의 체내 항종양 활성 시험

1. 동물 그룹 분류 및 시험 방법

대수생장기의 LLC 세포를 취하여, 트리판 블루 염색법으로 세포 활력을 검출하고, 생세포 농도를 1Х10⁷개/ml로 조절하여, 0.2ml/마리로 동원(homologous) C57BL6 마우스의 체내에 피하주사하였다. 일단 종양이 구축된 후, 마우스를 종양의 중량과 체중에 따라, 각 그룹당 10마리씩 무작위로 모델군, 시클로포스파미드(CTX)군, 화합물 INCB024360군, 화합물 3047군으로 분류하여, CTX군은 150mg·kg^-1로 약물을 복강 주사 투여하고, 화합물 INCB024360군과 화합물 3047군은 위내 투여하며, 모델군은 동일한 시간에 동부피의 생리식염수를 투여하였고, 각 그룹의 약물 투여 횟수는 모두 매일 1회였다. 약물을 투여한지 21일 후 시험을 종료하였다.

마지막 회 약물을 투여한지 24시간 후 체중을 재고 동물을 사망시켜, 종양의 무게를 재어, 평균 종양억제율(inhibition rate, I)을 계산하였으며, 공식은 다음과 같다: I=(1-약물 투여군의 평균 중양 중량/모델군의 평균 종양 중량)×100%

2. 데이터 통계 및 처리 방법

실험 데이터는 spss16.0을 사용하여, 일원변량 one way ANOVA로 분석하였으며, p<0.05의 차이에 통계학적인 의미가 있다.

3. 시험 결과 및 토론

[표 3] 화합물의 마우스 체내 LLC 종양에 대한 억제 결과

모델군과 비교하여, ^＃＃P＜0.01이고;

CTX군 및 INCB024360군과 비교하여, ^※P＜0.05이다.

표 3을 통해, 각 약물투여군의 종양중량이 모델군과 비교하여 모두 현저한 차이가 있고(P<0.01); 화합물 3047군은 시클로포스파미드군 및 INCB024360군과 비교하여 현저한 차이(P<0.05)가 있음을 알 수 있다. 이러한 결과는 본 발명 중의 화합물의 종양에 대한 치료 효과가 종래의 화학치료 약물인 시클로포스파미드 및 화합물 INCB024360의 종양에 대한 치료 효과보다 현저하게 우수하다는 것을 설명한다.

[표 4] 화합물의 마우스 체중에 대한 영향

시클로포스파미드군과 비교하여, ^＃＃P＜0.01이다.

표 4를 통해, 화합물 3047군은 모델군과 비교하여, 마우스의 체중에 뚜렷한 차이가 없고, CTX군과 비교하여 현저한 차이가 있음을 알 수 있으며, 이러한 결과는 본 발명 중의 화합물이 종양의 생장을 제어하는 동시에 마우스의 체중을 증가시킬 수 있어, 약물 부작용이 감소되고, 마우스의 생존 품질이 현저히 향상된다는 것을 설명하며, 임상적으로 환자의 생존 품질을 향상시킴과 아울러 환자의 약물 순응도 및 약물의 유효성이 대폭 향상될 수 있다.

또한, 마우스의 결장암 Colon26, 마우스의 간암 Hepa 1-6, 마우스의 유선암 4T1 등 세포주로 시험을 더 진행한 결과, 본 발명 중의 화합물이 이러한 종양에 대해 모두 현저한 억제 작용을 지니는 것으로 나타났다.

실시예 56 중의 방법으로 하기 화합물의 체내 항종양 활성을 측정한 구체적 결과는 하기 표와 같다:

[표 5] 화합물의 마우스 체내 LLC 종양에 대한 억제 결과

모델군과 비교하여, ^＃＃P＜0.01이다.

표 5를 통해, 각 약물 투여군의 종양중량이 모델군과 비교하여 모두 현저한 차이가 있음을 알 수 있으며(P<0.01), 이러한 결과는 본 발명 중의 화합물이 종양에 대해 뚜렷한 치료 효과가 있다는 것을 나타낸다.

각 화합물의 마우스 체중에 미치는 영향에 대한 고찰을 통해, 화합물 XSD3-058군 및 화합물 XSD3-079군은 모델군과 비교하여 마우스의 체중에 뚜렷한 차이가 없음을 발견하였으며, 이러한 결과는 본 발명 중의 화합물이 종양의 생장을 제어하는 동시에 마우스의 체중을 증가시킬 수 있어, 약물의 부작용이 감소하고, 마우스의 생존 품질이 현저히 향상될 수 있음 설명하며, 임상적으로 환자의 생존 품질을 향상시킬 수 있고 환자의 약물 순응 및 약물의 유효성이 대폭 향상될 수 있다.

실시예 57 Morris 수중 미로를 통한 알츠하이머 마우스의 행위 변화 검출

1. 동물 그룹 분류 및 시험 방법

본 발명은 9개월령의 마우스를 선별하여 Richardson 등이 실시한 래트의 양측 해마 CA3 영역에 응집된 αβ1-42를 1회 주사하는 방법에 따라 AD 모델을 제작하였으며, 즉 무작위로 그룹당 10마리씩, 암수 각 절반으로 하여, 모델군, 화합물 INCB024360군, 화합물 3047군으로 분류하고, Morris 수중 미로를 이용하여 마우스의 행위 분석을 실시하였다(네덜란드 Noldus사의 Ethovision XT 검출 분석 소프트웨어, Morris 수중 미로 시스템). 수중 미로 시험 과정은 5일 연속 숨은 도피대를 찾는 시험과 6일째의 공간 탐색 시험 두 부분으로 나누어, 매 회 시험 전, 시험 분류 그룹과 설계 용량에 따라 약물을 투여하였다. 매일 4회 훈련하고, 매 회 마우스를 다른 구역에서 입수시켰으며, 수중 미로는 동서남북을 1, 2, 3, 4구역으로 구분하고, 도피대는 즉 제5구역으로서, 제4구역 내에 위치시켰다. 매 회 수영 시간은 60초이고, 매 회 훈련 간격은 1h 정도였으며, 마우스가 도피대를 찾지 못하는 60초당 잠복기를 계산하였다. 숨은 도피대를 찾는 시험으로 마우스의 학습 능력을 검출하고, 공간 탐색 시험으로 마우스의 공간 기억력을 검출하였다.

2. 데이터 통계 및 처리 방법

SPSS16.0 소프트웨어 통계 분석을 이용하여, 숨은 도피대 찾기 시험 중의 도피 잠복기는 학습 시험의 유효 여부를 분석하는 다변량 분산 분석을 채택하고; 공간 탐색 시험 중의 각 사분면의 수영 시간과 목표 초과 횟수는 일원 분산 분석을 채택하였다. 데이터는 평균수±표준차를 적용하였으며, 유의차 수준은 양측 P=0.05로 설정하였다.

3. 시험 결과 및 토론

[표 6] 각 그룹의 동물의 숨은 도피대 시험 중 도피대 탐색 잠복기(s)

모델군과 비교하여, ^＃P＜0.05，^＃＃P＜0.01이고,

INCB024360군과 비교하여, ^※P＜0.05，^※※P＜0.01이다.

[표 7] 각 그룹의 동물의 도피대 영역 체류 시간 및 횟수

모델군과 비교하여, ^＃P＜0.05，^＃＃P＜0.01이고,

INCB024360군과 비교하여, ^※P＜0.05이다.

표 6과 표 7을 통해, 화합물 3047이 동물의 학습 기억 손상을 현저히 개선할 수 있어, 학습 습득 능력과 공간 기억 능력이 현저히 향상되고, 또한 화합물 INCB024360보다 우수하다는 것을 알 수 있으며, 이러한 결과는 본 발명 중의 화합물이 알츠하이머 증후군에 대한 치료 방면에 막대한 개발 가치가 있다는 것을 설명한다.

실시예 57 중의 방법으로 하기 화합물이 알츠하이머 마우스의 행위에 미치는 영향을 측정한 구체적인 결과는 하기 표와 같다:

[표 8] 각 그룹의 동물의 숨은 도피대 시험 중 도피대 탐색 잠복기(s)

모델군과 비교하여, ^＃P＜0.05，^＃＃P＜0.01이다.

[표 9] 각 그룹의 동물의 도피대 구역 체류 시간 및 횟수

모델군과 비교하여, ^＃＃P＜0.01이다.

표 8과 표 9를 통해, 본 발명의 각 화합물이 동물의 학습 기억 손상을 현저히 개선할 수 있어, 학습 습득 능력과 공간 기억 능력이 현저히 향상되는 것을 알 수 있으며, 이러한 결과는 본 발명 중의 화합물이 알츠하이머 증후군에 대한 치료 방면에 막대한 개발 가치가 있음을 설명한다.

실시예 58 약물 처리 후 DC 자극의 T 세포 증식 반응

수지상 세포(Dendritic cell, DC)는 기능이 가장 강력한 항원제공세포(APC)로서, DC와 기타 APC의 가장 중요한 차이점인 초기 미접촉 T 세포(naive T cell)의 증식을 효과적으로 활성화시킬 수 있다. DC는 면역 응답의 개시자이며, CD4⁺，CD8⁺T 세포 면역 응답 반응에서 핵심적인 역할을 하기 때문에, DC는 이미 현재 면역학 연구의 주요 연구 쟁점 중의 하나가 되었고, 현재는 주로 DC의 종양 질환, 자가 면역성 질환, 이식 거부 반응 및 항감염에 있어서의 예방과 치료 작용에 대한 연구에 집중되어 있다.

1. 인간 말초혈액 수지상 세포의 분리 배양

인간 말초혈액 백혈구 세포층을 취하여, 0.01mol/L의 PBS로 등비 희석하고, 림프 세포층 분리액으로 PBMC를 통상적으로 분리하여, 완전한 RPMI1640 배양액으로 세포 농도가 3Х10⁶ml^-1에 이르도록 조절하고, 6-웰 플레이트에 3ml의 P웰로 하여 투입하였다. 5%의 CO2, 37℃의 인큐베이터에서 2시간 동안 배양한 후, PBS로 비부착 세포를 총 3회 제거하고, IL-4(100U/ml), GM-CSF(150ng/ml) 및 TNF-α(500U/ml)를 함유한 배양액을 투입하여 통상적으로 배양하였으며, 격일로 절반량의 용액을 교체하고 8일 동안 배양한 후 감정 및 실험용으로 제공하였다.

2. T 세포의 제조

단계 1 중의 방법으로 인간 PBMC층을 분리하고, 벽 부착법으로 대식 세포를 제거한 후, 나일론 시린지법으로 B 세포를 제거하여 획득된 T 세포를 세포 농도가 1Х10⁶개/ml에 이르도록 조절하였다.

3. DC의 제조

순도가 99%인 성숙한 DC를 원심분리하고, RPMI1640을 투입하여 세포 농도를 1Х10⁵，4Х10⁴，2Х10⁴개/ml로 조절한 후, 96웰 플레이트에 투입하였다. 각 농도마다 2개의 웰을 100μl/ 웰을 설치하여, 각각 화합물 INCB024360과 화합물 3047을 투입하고 공동으로 2일 동안 배양하였다.

4. T 세포 증식 실험(MLR)

상기 각 약물 투여 그룹의 DC에 T 세포를 100μl/ 웰로 투입하고, 5%의 CO2, 37℃의 인큐베이터에서 72시간 동안 배양하였다. 배양 종료 6시간 전에 각 웰로부터 100μl의 배양액을 흡출하고, MTT(5mg/ml) 10μl을 투입한 후, 인큐베이터에 넣고 계속 6시간 동안 배양한 다음, 0.01mol/L의 HCl-10% SDS 100μl을 투입하고, 37℃에서 하룻밤 동안 둔 후, 마이크로플레이트 리더로 A570nm 값이 보여주는 T 세포의 증식 수준을 측정하였다.

5. 실험 결과 및 분석

[표 10] 화합물 3047의 DC로 자극된 T 세포의 증식 작용에 미치는 영향

대조군과 비교하여, ^＃P＜0.05，^＃＃P＜0.01이고,

INCB024360군과 비교하여, ^※P＜0.05이다.

표 10을 통해, 대조군과 비교하여, 화합물 3047군 및 INCB024360군의 T 세포 수량이 뚜렷하게 증가하여, 현저한 차이가 있고(^＃P＜0.05，^＃＃P＜0.01), 화합물 3047군과 화합물 INCB024360군을 비교하면 T 세포에 대한 증식 효과 더욱 뚜렷하여 현저한 차이가 있음(^※P＜0.05)을 알 수 있다. 이는 본 발명 중의 화합물이 DC로 자극된 T 세포 증식을 현저하게 촉진시키는 작용을 가질 뿐만 아니라, 또한 효과가 화합물 INCB024360보다 현저하게 우수하며, 나아가 종양 질환, 자가 면역성 질환, 이식 거부 반응 및 감염성 질환의 치료에 사용될 수 있음을 설명한다.

실시예 58 중의 방법으로 하기 화합물을 처리 후 DC에 의해 자극된 T 세포 증식 반응을 측정한 구체적인 결과는 하기 표와 같다:

[표 11] 각 화합물의 DC로 자극된 T 세포의 증식 작용에 대한 영향

대조군과 비교하여, ^＃＃P＜0.01이다.

표 11을 통해, 대조군과 비교하여, 각 화합물 그룹의 T 세포 수량이 모두 현저하게 증가하여, 현저한 차이가 있음을 알 수 있다(^＃＃P＜0.01). 이는 본 발명 중의 화합물이 DC로 자극된 T 세포의 증식을 현저하게 촉진시키는 작용이 있으며, 나아가 종양 질환, 자가 면역성 질환, 이식 거부 반응 및 감염성 질환의 치료에 사용될 수 있음을 나타낸다.

Claims

식 I₀의 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염에 있어서,

그 중, R₁, R₂는 각각 독립적으로 이하 치환기: H, 치환 또는 미치환된 C_1-10 알킬기, 알데하이드기, 치환 또는 미치환된 카르보닐기, 시아노기, CF₃, 치환 또는 미치환된 C_1-10 알콕시기, 치환 또는 미치환된 설폰기, 치환 또는 미치환된 C_3-10 시클로알킬기, 치환 또는 미치환된 C_2-10 알케닐기, 치환 또는 미치환된 C_6-20 아릴기, 치환 또는 미치환된 C_3-14 헤테로아릴기로부터 선택되고;
R₃, R₄는 각각 독립적으로 이하 치환기: H, 치환 또는 미치환된 C_1-10 알킬기, 알데하이드기, 치환 또는 미치환된 C_3-10 시클로알킬기, 시아노기, 치환 또는 미치환된 C_1-10 알콕시기, 치환 또는 미치환된 설폰기, 치환 또는 미치환된 C_6-20 아릴기, 치환 또는 미치환된 C_3-14 헤테로아릴기로부터 선택되거나;
R₃, R₄는 각각 독립적으로 이중치환기로부터 선택되어, a 또는 b 위치의 C 원자와 함께
,
또는
기단을 형성하며, 그 중의 C는 즉 a 또는 b 위치의 C 원자이고, m은 0-6인 정수로부터 선택되며;
n은 0-6인 정수인, 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
제1항에 있어서,
R₁, R₂는 각각 독립적으로 이하 치환기: 임의로 하나 또는 다수의 할로겐, 하이드록시기, 카르복시기, 카르보닐기, 알데하이드기, 시아노기, 아미노기, 아릴기, 헤테로아릴기, C_1-6 알킬기, C_3-12 시클로알킬기, C_2-6 알케닐기, C_3-12 시클로알케닐기에 의해 치환된 C_1-6 알킬기, 카르보닐기, C_1-6 알콕시기, 설폰기, 아미딘기 또는 설폭사이드기로부터 선택되며; 그 중, C_1-6 알킬기, 카르보닐기, C_1-6 알콕시기, 설폰기, 아미딘기 또는 설폭사이드기의 치환기로서의 카르복시기, 카르보닐기, 알데하이드기, 시아노기, 아미노기, 아릴기, 헤테로아릴기, C_3-12 시클로알킬기, C_2-6 알케닐기, C_3-12 시클로알케닐기는 임의로 하나 또는 다수의 H, 할로겐, C_1-6 알킬기, 카르보닐기, C_1-6 알콕시기 또는 설폭사이드기 또는 설폰기에 의해 치환되고; 상기 할로겐은 F, Cl, Br 또는 I로부터 선택되는, 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
제1항에 있어서,
R₁, R₂는 각각 독립적으로 이하 치환기: H, 메틸기, 에틸기, 프로필기, 이소프로필기, R₅C(O)-, R₅S(O)_x-로부터 선택되고; R₅는 C_1-10인 알킬기, C_3-12인 시클로알킬기와, 하이드록시기, 시아노기, C_1-6 알킬기, C_3-12 시클로알킬기, C_1-6 알콕시기, 아릴기 또는 헤테로아릴기에 의해 치환된 C_1-10인 알킬기 또는 C_3-12인 시클로알킬기로부터 선택되며, x는 1 또는 2로부터 선택되는, 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
제3항에 있어서,
R₁, R₂는 각각 독립적으로 이하 치환기: H, 메틸기, 에틸기, 프로필기, 이소프로필기, R₅C(O)-, R₅S(O)_x-로부터 선택되고; R₅는 C_1-10인 알킬기, C_3-12인 시클로알킬기와, 하이드록시기, 시아노기, C_1-6 알킬기, C_3-12 시클로알킬기, C_1-6 알콕시기, 아릴기 또는 헤테로아릴기에 의해 치환된 C_1-6인 알킬기 또는 C_3-8인 시클로알킬기로부터 선택되며, x는 2이고; R₃, R₄는 모두 H인, 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
제1항에 있어서,
식 I₀중의 R₂, R₃, R₄가 각각 H인 경우, 즉 식 I의 화합물이 수득되며,

그 중, R₁은 이하 치환기: H, 아미노기, 설폰기, 니트로기, 카르보닐기, 아미딘기, C_1-6 알킬기와, 할로겐, 하이드록시기, 카르복시기, 카르보닐기, 알데하이드기, 시아노기, 아미노기, 아릴기, 헤테로아릴기, C_3-12 시클로알킬기, C_2-6 알케닐기, C_3-12 시클로알케닐기에 의해 치환된 아미딘기 또는 C_1-6 알킬기 또는 C_1-6 알콕시기 또는 카르보닐기 또는 설폰기 또는 설폭사이드기로부터 선택되고; n은 0-6인 정수인, 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
제5항에 있어서,
상기 R₁은 H, 아미노기, C_1-6 알킬기와, 할로겐, 하이드록시기, 카르복시기, 카르보닐기, 알데하이드기, 시아노기, 아미노기, 아릴기, 헤테로아릴기, C_3-12 시클로알킬기, C_2-6알케닐기, C_3-12 시클로알케닐기에 의해 치환된 C_1-6 알킬기 또는 C_1-6 알콕시기 또는 카르보닐기로부터 선택되는, 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
제5항에 있어서,
상기 R₁은 H, NH₂，CN, 메틸기, 에틸기, 프로필기, 이소프로필기, 부틸기, 시클로프로필기, 시클로부틸기, 시클로펜틸기, 시클로헥실기, 메톡시카르보닐기, 테르트부톡시카르보닐기, 플루오레닐메톡시카르보닐기, 알릴옥시카르보닐기, 벤질기, 5-인돌메틸카르보닐기로부터 선택되는, 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
제5항에 있어서,
상기 n은 0, 1, 2, 3 또는 4로부터 선택되는, 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
제5항에 있어서,
식 I 중의 R₁이 H인 경우, 구조식 Ⅱ
가 수득되는, 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
제9항에 있어서,
상기 n은 0, 1, 2, 또는 3인, 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
제5항에 있어서,
식 I 중의 R₁이 R₀에 의해 치환된 카르보닐기인 경우, 구조식 Ⅲ이 수득되며:

상기 R₀은 H, C_1-6 알킬과, 할로겐, 하이드록시기, 카르복시기, 카르보닐기, 알데하이드기, 시아노기, 아미노기, 아릴기, 헤테로아릴기, C_3-12 시클로알킬기, C_2-6알케닐기, C_3-12 시클로알케닐기에 의해 치환된 C_1-6 알킬기 또는 C_1-6 알콕시기로부터 선택되는, 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
제11항에 있어서,
상기 R₀은 C_1-6 알킬과, 할로겐, 하이드록시기, 카르복시기, 카르보닐기, 알데하이드기, 시아노기, 아미노기, 아릴기, 헤테로아릴기, C_3-12 시클로알킬기, C_2-6 알케닐기, C_3-12 시클로알케닐기에 의해 치환된 C_1-6 알킬기 또는 C_1-6 알콕시기로부터 선택되는, 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
제1항에 있어서,
식 I₀중의 R₁이 H인 경우, 즉 Ⅳ의 화합물이 수득되며,

상기 R₂는 이하 치환기: H, 메틸기, 에틸기, 프로필기, 이소프로필기, R₅C(O)-, R₅S(O)_m-로부터 선택되고; R₅는 H, C_1-10인 알킬기, C_3-12인 시클로알킬기와, 하이드록시기, 시아노기, CF₃, C_1-6 알킬기, C_3-10 시클로알킬기, 알콕시기, 아릴기 또는 헤테로아릴기에 의해 치환된 C_1-10인 알킬기 또는 C_3-12인 시클로알킬기로부터 선택되며; m은 1 또는 2로부터 선택되고;
R₃, R₄는 각각 독립적으로 이하 치환기: H, C_1-10인 알킬기, C_3-12인 시클로알킬기와, 하이드록시기, 시아노기, 할로겐, C_1-6 알킬기, C_3-10 시클로알킬기, 알콕시기, 아릴기 또는 헤테로아릴기에 의해 치환된 C_1-10 알킬기 또는 C_3-12 시클로알킬기 또는 C_1-10 알콕시기 또는 설폰기 또는 C_3-14 헤테로아릴기로부터 선택되는, 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
제13항에 있어서,
R₂는 이하 치환기: H, R₅C(O)-, R₅S(O)m-로부터 선택되고; R₅는 H, C_1-10 알킬기, C_3-12 시클로알킬기와, 하이드록시기, 시아노기, CF₃, C_1-6 알킬기, C_3-10 시클로알킬기, 알콕시기, 아릴기 또는 헤테로아릴기에 의해 치환된 C_1-10인 알킬기 또는 C_3-12인 시클로알킬기로부터 선택되며; m은 1 또는 2로부터 선택되는, 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
제1항에 있어서,
상기 화합물은

,
，
，
，
，
，
，
，
，
,
，
，
，
，
，
，
，
，
，
，
，
，
，
,

，
，
，
，
，
，
，
，
，
，
，
，
，
，
，
，
，
，
，
，

，
，
，
，
，
，
，
，또는
로부터 선택되는, 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염.
하기 화합물의 합성방법에 있어서,

(식 I₀),
2와 3a를 반응시켜 I₀를 획득하는 단계를 포함하며,

,
R₁, R₂는 각각 독립적으로 이하 치환기: H, 치환 또는 미치환된 C_1-10 알킬기, 알데하이드기, 치환 또는 미치환된 카르보닐기, 시아노기, CF₃, 치환 또는 미치환된 C_1-10 알콕시기, 치환 또는 미치환된 설폰기, 치환 또는 미치환된 C_3-10 시클로알킬기, 치환 또는 미치환된 C_2-10 알케닐기, 치환 또는 미치환된 C_6-20 아릴기, 치환 또는 미치환된 C_3-14 헤테로아릴기로부터 선택되고;
R₃, R₄는 각각 독립적으로 이하 치환기: H, 치환 또는 미치환된 C_1-10 알킬기, 알데하이드기, 치환 또는 미치환된 C_3-10 시클로알킬기, 시아노기, 치환 또는 미치환된 C_1-10 알콕시기, 치환 또는 미치환된 설폰기, 치환 또는 미치환된 C_6-20 아릴기, 치환 또는 미치환된 C_3-14 헤테로아릴기로부터 선택되거나;
R₃, R₄는 각각 독립적으로 이중치환기로부터 선택되어, a 또는 b 위치의 C 원자와 함께
,
또는
기단을 형성하며, 그 중의 C는 즉 a 또는 b 위치의 C 원자이고, m은 0-6인 정수로부터 선택되며;
n은 0-6인 정수인, 합성방법.
제16항에 있어서,
상기 2는 1과 2a를 알칼리성 조건하에 반응시켜 획득하며,

,
상기 알칼리는 알칼리금속의 수산화물을 포함하되 단 이에 한정되지 않고, 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화바륨인 것이 바람직하며;
R₃, R₄는 각각 독립적으로 이하 치환기: H, 치환 또는 미치환된 C_1-10 알킬기, 알데하이드기, 치환 또는 미치환된 C_3-10 시클로알킬기, 시아노기, 치환 또는 미치환된 C_1-10 알콕시기, 치환 또는 미치환된 설폰기, 치환 또는 미치환된 C_6-20 아릴기, 치환 또는 미치환된 C_3-14 헤테로아릴기로부터 선택되거나;
R₃, R₄는 각각 독립적으로 이중치환기로부터 선택되어, a 또는 b 위치의 C 원자와 함께
,
또는
기단을 형성하며, 그 중의 C는 즉 a 또는 b 위치의 C 원자이고, m은 0-6인 정수로부터 선택되며;
n은 0-6인 정수인, 합성방법.
제17항에 있어서,
상기 2a는 1a의 산화에 의해 획득되는, 합성방법.
하기 화합물의 합성방법에 있어서,

(식Ⅱ),
상기 n은 0, 1, 2, 3 또는 4로부터 선택되고;
1) 2와 3a'를 반응시켜 Ⅱa를 획득하는 단계;

;
2) Ⅱa를 산성 조건하에 탈보호한 후, 알칼리성 조건하에 반응시켜 Ⅱ를 획득하는 단계;

를 포함하는, 합성방법.
하기 화합물의 합성방법에 있어서,

(식Ⅱ'),
단계는 다음과 같으며:

상기 n은 0, 1, 2, 3 또는 4로부터 선택되고; 식 Ⅱa를 산성 조건하에 반응시켜 식 Ⅱ'를 획득하는, 합성방법.
하기 화합물의 합성방법에 있어서,

(식Ⅲ),
1) Ⅱ를 4a와 반응시켜 Ⅲa를 생성하는 단계;

;
상기 R₃은 H，OH，CN，CH_3-mX_m, 니트로기, C_1-9 알킬기, C_1-9 알콕시기, C_3-9 시클로알콕시기, C_3-12 시클로알킬기, C_1-6 헤테로알킬기, 고리원자수가 3-12개인 헤테로시클로알킬기, 아릴기, 헤테로아릴기와, 할로겐, 하이드록시기, 카르복시기, 카르보닐기, 알데하이드기, 시아노기, 아미노기, 설폰기, 아릴기, 헤테로아릴기, C_3-12 시클로알킬기, C_3-12 시클로알케닐기에 의해 치환된 C_1-6 알킬기 또는 C_1-9 알콕시기 또는 아릴기 또는 헤테로아릴기 또는 카르보닐기로부터 선택되며, m은 1, 2 또는 3이고;
2) Ⅲa로 알칼리성 조건하에 Ⅲ을 생성하는 단계;

를 포함하며,
R₀은 H, C_1-6 알킬과, 할로겐, 하이드록시기, 카르복시기, 카르보닐기, 알데하이드기, 시아노기, 아미노기, 아릴기, 헤테로아릴기, C_3-12 시클로알킬기, C_2-6알케닐기, C_3-12 시클로알케닐기에 의해 치환된 C_1-6 알킬기 또는 C_1-6 알콕시기로부터 선택되는, 합성방법.
제21항에 있어서,
상기 R₃은 H，OH，CN，CH_3-mX_m, 니트로기, C_1-9 알킬기, C_3-9 시클로알콕시기, C_3-12 시클로알킬기, C_1-6 헤테로알킬기, 고리원자수가 3-12개인 헤테로시클로알킬기, 아릴기, 헤테로아릴기와, 할로겐, 하이드록시기, 카르복시기, 카르보닐기, 알데하이드기, 시아노기, 아미노기, 설폰기, 아릴기, 헤테로아릴기, C_3-12 시클로알킬기, C_3-12 시클로알케닐기에 의해 치환된 C_1-6 알킬기 또는 C_1-9 알콕시기 또는 아릴기 또는 헤테로아릴기로부터 선택되고, m은 1, 2 또는 3인 합성방법.
제21항에 있어서,
상기 R₃은 H，OH，CN，CF₃，CHCl₂，CH₂Cl, 니트로기, 메틸기, 에틸기, 프로필기, 이소프로필기, 부틸기, 이소부틸기, sec-부틸기, tert-부틸기, 펜틸기, 1-메틸부틸, 2-메틸부틸, 3-메틸부틸, 1,1-디메틸프로필, 2,2-디메틸프로필, 1,2-디메틸프로필, 1-에틸프로필, 헥실기, 펜틸메틸, 펜틸에틸, 펜틸프로필, 헥실메틸, 헥실에틸, 헥실프로필, 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로펜틸, 시클로헥실, 시클로프로필메틸, 시클로프로필에틸, 시클로프로필프로필, 시클로부틸메틸, 시클로부틸에틸, 시클로부틸프로필, 시클로펜틸메틸, 시클로펜틸에틸, 시클로펜틸프로필, 시클로헥실메틸, 시클로헥실에틸, 시클로헥실프로필, p-메톡시벤질기(PMB), 벤질기(Bn)로부터 선택되거나, 또는 R₃은 치환된 퓨란, 피롤, 티오펜, 피라졸, 이미다졸, 옥사졸, 티오펜, 이소옥사졸, 이소티아졸, 피리딘, 피란, 티오피란, 피리다진, 피리딘, 피라진, 피페라진 중의 어느 하나로부터 선택되고, 벤젠 고리와 두 자리 치환을 이루는, 합성방법.
제21항에 있어서,
상기 식 4a 중의 또는
기단은 카바졸, 아크리딘, 페나진 또는 페노티아진으로부터 선택되는, 합성방법.
약물 조성물에 있어서,
제1항 내지 제15항 중의 어느 한 항에 따른 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염, 및 일종 또는 다종의 약학적으로 허용 가능한 약용 보조제를 포함하는, 약물 조성물.
제1항 내지 제15항 중의 어느 한 항에 따른 상기 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 그의 약물 조성물의 약물 제조에의 용도에 있어서,
상기 약물은 인돌아민 2,3-이산소화효소에 의해 매개되는 트립토판 대사 경로를 갖는 병리학적 특징 질환을 치료하기 위한 것인, 용도.
제1항 내지 제15항 중의 어느 한 항에 따른 상기 화합물 또는 그의 약학적으로 허용 가능한 염 또는 그의 약물 조성물의 약물 제조에의 용도에 있어서,
상기 약물은 암, 감염성 질병, 신경 퇴행성 병변, 우울증, 초려증 또는 연령과 관계가 있는 백내장을 치료하기 위한 것인, 용도.
제27항에 있어서,
상기 암은 폐암, 간암, 결장암, 췌장암, 유선암, 전립선암, 뇌암, 난소암, 자궁경부암, 고환암, 신장암, 두경부암, 림프암, 흑색종 또는 백혈병으로부터 선택되는, 용도.
제28항에 있어서,
상기 신경 퇴행성 질환은 알츠하이머증인, 용도.
제28항에 있어서,
상기 감염성 질병은 세균, 진균, 바이러스 또는 기생충에 의해 야기되는 감염인, 용도.