KR20220057530A - 인자 h 강화 항체 및 이의 용도 - Google Patents
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Abstract
인자 H에 특이적인 신규한 분리된, 합성된 또는 재조합된 항체 및 이의 단편 또는 이러한 항체 및 단편을 암호화하는 핵산 또는 벡터가 본원에 제공된다. 또한, 보체 활성화를 억제하고 보체 활성화와 관련된 장애의 치료를 위한 이러한 항체, 단편, 핵산 또는 벡터의 용도가 본원에 제공된다.
Description
관련 출원의 교차 참조
본 출원은 2019년 7월 17일자로 출원된 미국 임시 특허 출원 제62/875,309호의 우선권 및 이점을 주장하며, 이는 모든 목적을 위해 그 전체 내용이 본원에 인용되어 포함된다.
본 개시내용의 배경기술
보체계는 침입한 병원균에 대항하여 포유 동물과 같은 다수의 유기체의 방어에 기여하는 선천성 면역의 중요한 요소이다. 보체계는 주로 간 내에서 합성되는 30개 초과의 상이한 성분으로 구성된다. 보체계의 활성화는 세 가지 상이한 경로인 고전 경로, 렉틴 경로 및 대체 경로에 의해 발생한다. 세 가지 경로는 C3 전환효소의 형성에서 수렴하며, 이는 각각의 경로에 대해 상이하지만, 유사한 활성도를 갖는다.
고전 보체 경로에서, C1q, C1r 및 C1s로 구성된 보체 성분(C)1 복합체의 활성화는 항체-항원 복합체에 대한 결합에 의해 발생한다. C1 복합체는 C4 및 C2를 분해하여 C4bC2a로 구성된 C3 전환효소가 형성되도록 한다. C3 전환효소는 C3를 활성 성분 C3a 및 C3b로 분해한다. 렉틴 경로에서, 만노오즈 결합 렉틴은 병원성 표면 상의 만노오즈 잔기에 결합하고, 이는 C4 및 C2를 분해할 수 있는 세린 단백질분해효소 MASP-1 및 MASP-2를 활성화시킨다. 고전 경로의 경우와 같이, 이는 C4bC2a C3 전환효소가 형성되도록 한다. 이 C3 전환효소는 C3b와 결합하여 C5 전환효소를 형성할 수 있다. 고전 및 렉틴 경로와 대조적으로, 대체 경로는 혈장 내에서의 C3의 C3(H2O)로의 자발적인 가수분해로 인해 낮은 수준의 지속적인 활성도를 갖는다. 이 C3b-유사 C3(H2O)은 인자 B(FB)와 결합하여 유체 상(fluid phase) C3 전환효소를 형성할 수 있고, 결국 인자 D에 의해 Bb로 활성화된다. 마찬가지로, C3b가 표면에 결합할 때, 이는 FB와 결합하여 C3bB를 형성할 수 있다. 이 복합체는 인자 D에 의해 대체 경로의 C3 전환효소인 C3bBb로 분해되고, 이는 프로퍼딘(인자 P)에 의해 C3bBbP로 안정화될 수 있다. 이 C3 전환효소는 C3을 C3a 및 C3b로 분해할 수 있다. 이 과정 외에, 고전 및 렉틴 활성화 경로에서 발생된 C3b는 대체 경로에 대한 출발 지점으로서 작용할 수 있기 때문에, 대체 경로는 고전 및 렉틴 활성화 경로에 대한 증폭 고리로서 작용한다. 이로 인해, 증폭 고리는 고전 및 렉틴 경로가 강화되도록 한다. 세 가지 경로 중 하나에서 형성된 C3 전환효소는 C3b와 결합하여 C5 전환효소를 형성할 수 있다. 전체 세 가지 보체 경로의 C5 전환효소는 C5를 C5a 및 C5b로 활성화시키고, 이는 보체계의 말단 경로를 개시한다. C5b는 C6, C7, C8 및 C9에 결합하여 막 공격 복합체(MAC)를 형성하며, 이는 막관통 통로를 형성하고, 세포 용해를 유발한다.
병원균의 막에 구멍을 형성한 다음, 보체는 면역 세포를 감염 위치로 유인하고 활성화시키는 C3a 및 C5a와 같은 염증유발 펩타이드의 생성 및 C3b 분자와의 옵소닌 작용에 의해 병원균 또는 변형된 자기 세포(self-cell)를 제거하도록 돕는다. 보체의 강력한 염증유발 특성 때문에, 숙주 세포는 다수의 막 및 가용성 보체 조절 단백질에 의해 충분히 방어된다.
대체 경로는 총 보체 활성도에 대해 80 내지 90% 기여한다. 따라서, 이 경로의 조절은 중요하다. C3의 자발적인 가수분해에 의해 형성된 C3(H2O), 및 C3b는 일반적으로 병원균에 의해 결합되지 않는 경우 인자 H(FH), 인자 I(FI) 및 숙주 세포 표면 분자에 의해 빠르게 비(非)활성화됨으로써 C3 전환효소의 형성을 억제한다. CD55(부패 가속 인자 또는 DAF로도 지칭됨)는 숙주 세포 표면에서 C3b에 결합한다. FI는 C3b를 비활성 형태로 분해하지만, 세포 표면 상에서 발현(CD46, MCP)되거나 혈장 내에서 순환(FH)하는 공동-인자에 의존적이다.
FH는 용액 내 및 세포 표면 상 모두에서 보체의 대체 경로를 조절하는 데 필수적인 혈장 당단백질이다. FH는 FB와 동일한 위치에서 C3b에 결합함으로써 C3 전환효소의 형성을 방지한다. FH는 또한 부패 가속 활성도를 갖고, 즉, 이는 일단 C3 전환효소가 형성되었다면 대체 경로의 C3 전환효소의 해리를 촉진한다. FH가 C3b에 결합하는 지 여부는 세포 표면 상에 존재하는 탄화수소에 의해 결정된다. 숙주 세포 표면 상에 존재하는 시알산, 글리코스아미노글리칸 및 헤파린은 C3b에 대한 FH의 결합을 촉진하는 반면, 병원체 표면 상에 발현된 분자에 대한 C3b의 결합은 FB의 결합을 초래한다. 따라서, FH는 숙주 세포 상의 이의 보체 억제 활성도에는 영향을 미치지만, 병원체 세포의 표면 상의 이의 보체 억제 활성도에는 영향을 미치지 않는데, 이는 FH에 결합하는 세포 표면 분자가 숙주 세포 상에는 발현되지만, 일반적으로 병원체 세포 상에는 발현되지 않기 때문이다. FH는 FH의 N-말단에서 시작하여 1부터 20까지의 번호를 갖는 20개의 보체 조절 단백질(CCP) 도메인을 보유한다. CCP 도메인은 또한 단공통반복(SCR: short consensus repeat) 또는 회밥 도메인(sushi domain)으로 지칭된다. CCP1 내지 CCP4는 조절에 관여하는 도메인이고, CCP19 내지 CCP20은 C3b에 결합하는 데 관여하고, CCP6, CCP7, CCP8, CCP19 및 CCP20은 세포 표면에서 발현된 시알산 및 GAG에 결합한다. CCP19 및/또는 CCP20에 결합하는 항체는 FH의 활성도를 억제한다.
인자 H-관련 단백질(CFHR)은 FH에 대한 항원성 및 구조에 관련된 혈장 당단백질이다. FHR 단백질은 또한 CCP 도메인으로 구성되고, 이들은 FH에서 발견된 CCP 도메인에 대해 다양한 수준의 상동성을 갖는다. 예를 들어, FHR 1은 CCP6, CCP7, CCP18, CCP19 및 CCP20에 상응하는 도메인을 포함한다. FH와 대조적으로, CFHR은 강력한 보체 억제 활성도를 갖지 않는다. CFHR의 일반적 특성은 그들이 보체의 C3b 성분에 결합함으로써 C3b에 결합하기 위한 FH와 경쟁하는 것이고, 따라서 보체의 대체 경로의 양성 조절자인 것으로 간주된다.
돌연변이로 인한 숙주 표면의 손상된 인식 또는 FH 결핍은 보체-매개 조직 손상 및 질병과 관련된다. 정상적인 지혈 동안 보체 활성화를 조절한 다음, FH는 또한 질병에 걸린 세포 및 조직의 보체 매개 손상을 제한하는 데 중요한 역할을 한다. FH 유전자 내 다수의 돌연변이는 FH 단백질의 기능 손상에 이르게 할 수 있는 것으로 기술되었다. FH의 C-말단 영역은 질병에서 돌연변이 다발점이다. 이는 숙주 세포에 대한 FH의 결합을 위해 중요한 영역이다. 이 영역에서의 대부분의 질병-관련 돌연변이는 FH 결합을 방해한다. 돌연변이 FH 유전자를 갖는 대부분의 환자는 이형접합 돌연변이를 갖고, 이는 순환 FH 중 대략 절반이 정상적인 기능을 갖는 것을 의미한다. 그러나, 이는 보체가 활성화되는 특정 상태에서 자기 표면을 방어하는 데 명백하게 충분하지는 않는다. FH 결핍은 막증식성 사구체신염(MPGN) 및 비정형 용혈성 요독증후군(aHUS)과 같은 신장 질병을 초래할 수 있다. 보다 최근에는, FH 돌연변이와 노인황반변성(AMD) 사이의 관계가 기술되었다.
현재, 예를 들어 aHUS에서 FH 결핍에 대한 표준 치료는 혈장 보충 또는 혈장 교환 치료이다. 이러한 치료를 통해, 부족한 보체 조절자가 보충된다. 또한, 혈장 교환 치료는 돌연변이 보체 인자 및/또는 보체 인자에 대항하는 자기항체를 제거한다. 그러나, 혈장 치료는 또한 일부 한계를 갖는다. 전향 임상 연구는 혈장 교환 치료가 aHUS를 치료하는 데 안전하거나 유효하며 혈장 치료의 효율이 기저 돌연변이에 따라 결정되는 것으로 나타나지 않았다. 일부 환자는 신선냉동혈장에 대한 아나필락시스 반응이 나타나고, 이는 임의의 형태의 혈장 치료의 중단이 필요할 수 있다. 또한, 혈장 교환은 혈장-유래 활성 병원성 보체 성분의 투여로 인해 aHUS의 임상상(clinical picture)을 악화시킬 수 있다.
최근에, 치료적 단클론성 항체 에쿨리주맙이 aHUS 및 발작성 야간혈색소 요증(PNH)의 치료를 위해 미국 및 유럽 국가와 같은 다수의 국가에서 승인되었다. 에쿨리주맙은 C5의 C5a 및 C5b로의 분해를 방지하는, C5에 특이적인 인간화 마우스 단클론성 항체(humanized mouse monoclonal antibody)이다. 따라서, 이는 말단 경로의 활성화를 방지하고, 면역 세포의 유입을 감소시킨다. 그러나, 에쿨리주맙의 사용은 원하지 않는 부작용과 관련된다. 이는 말단 경로의 개시를 위한 중요한 성분인 C5를 차단하기 때문에, 에쿨리주맙으로 치료된 환자는 피포성 박테리아(예를 들어, 수막염균)로의 감염에 취약해질 수 있고, C5의 제거는 MAC 형성에 매우 의존적이다. 따라서, 수막염균에 대항하는 백신 접종이 에쿨리주맙으로 치료 받기 전에 환자에게 요구된다. 또한, 에쿨리주맙은 C3의 하류로 작용하기 때문에, C3 침착이 유지되고, 원하지 않거나 과도한 보체 활성화를 수반하는 다수의 장애에 해롭다. 또한, 높은 비용이 에쿨리주맙 치료에 수반되고, 항체의 이용 가능성은 제한적이다.
CCP18에 결합하는 마우스 단클론성 항체는 Cheng 등(Clinical Chemistry, 2005)에 의해 기술된다. X52.1로 불리는 이 항체는 C3b 및 C3d에 대한 FH의 결합을 증가시키고, 이는 FH의 이량체화에 의해 일어나는 것으로 여겨지는 것이 기술된다. Corey 등(J Biol Chem. 2000)에 의해 입증된 바, X52.1에 의해 유도된 C3b 및 C3d에 대한 FH의 증가된 결합은 RBC 및 다수의 암 세포 유형을 포함하는 세포의 보체 매개 용해가 증가되도록 한다. 이는 항체 X52.1이 FH의 보체 억제 활성도를 억제하는 것을 증명한다. 사실상, Corey 등은 이 항체가 암 세포의 보체 매개 용해를 향상시킴으로써 암 치료에서 사용될 수 있다고 시사한다.
원하지 않거나 과도한 보체 활성화와 관련된 장애의 치료에 유효한 약제와 같은, FH에 결합하는 신규하고 개선된 치료제에 대한 지속적인 요구가 존재한다.
본 개시내용의 요약
본 발명은 인자 H(FH)의 보체 조절 단백질 도메인 18(CCP18)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 예를 들어 분리, 합성 또는 재결합 항체, 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다. 이러한 항체 및 항원 결합 단편은 예를 들어 C3b에 대한 FH의 결합 친화성을 증가시키고/시키거나 C3 침착을 억제하는 FH의 능력을 증가시키고/시키거나 용혈능을 억제하는 FH의 능력을 증가시켜서 FH의 활성도를 증강시키는 데 유용하다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 서열 SSVTY(서열 식별 번호: 1) 또는 서열 TSVTY(서열 식별 번호: 13)를 포함하는 경쇄 CDR1 서열; 서열 ATS(서열 식별 번호: 2) 또는 서열 ASS(서열 식별 번호: 14)를 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 서열 QHRSSSNPLT(서열 식별 번호: 3)를 포함하는 경쇄 CDR3 서열; 서열 GFSLTNYG(서열 식별 번호: 5)를 포함하는 중쇄 CDR1 서열; 서열 VWSGGTT(서열 식별 번호: 6) 또는 서열 IWSGGTT(서열 식별 번호: 10)를 포함하는 중쇄 CDR2 서열; 및 서열 ARNFGNYAMDY(서열 식별 번호: 7) 또는 서열 ARNFGNYAMDF(서열 식별 번호: 11)를 포함하는 중쇄 CDR3 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 서열 SSVTY(서열 식별 번호: 1)를 포함하는 경쇄 CDR1 서열; 서열 ATS(서열 식별 번호: 2)를 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 서열 QHRSSSNPLT(서열 식별 번호 3)를 포함하는 경쇄 CDR3 서열; 서열 GFSLTNYG(서열 식별 번호: 5)를 포함하는 중쇄 CDR1 서열; 서열 IWSGGTT(서열 식별 번호: 10)를 포함하는 중쇄 CDR2 서열; 및 서열 ARNFGNYAMDF(서열 식별 번호: 11)를 포함하는 중쇄 CDR3 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 서열 식별 번호: 4 또는 16에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열, 및 서열 식별 번호: 8 또는 12에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 서열 식별 번호: 4에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열, 및 서열 식별 번호: 12에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 서열 SSVTY(서열 식별 번호: 1)을 포함하는 경쇄 CDR1 서열; 서열 ATS(서열 식별 번호: 2)를 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 서열 QHRSSSNPLT(서열 식별 번호: 3)를 포함하는 경쇄 CDR3 서열; 서열 GFSLTNYG(서열 식별 번호: 5)를 포함하는 중쇄 CDR1 서열; 서열 VWSGGTT(서열 식별 번호: 6)를 포함하는 중쇄 CDR2 서열; 및 서열 ARNFGNYAMDY(서열 식별 번호: 7)를 포함하는 중쇄 CDR3 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 서열 식별 번호: 4에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열, 및 서열 식별 번호: 8에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 서열 TSVTY(서열 식별 번호: 13)를 포함하는 경쇄 CDR1 서열; 서열 ASS(서열 식별 번호: 14)를 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 서열 QHRSSSNPLT(서열 식별 번호: 3)를 포함하는 경쇄 CDR3 서열; 서열 GFSLTNYG(서열 식별 번호: 5)를 포함하는 중쇄 CDR1 서열; 서열 VWSGGTT(서열 식별 번호: 6)를 포함하는 중쇄 CDR2 서열; 및 서열 ARNFGNYAMDY(서열 식별 번호: 7)를 갖는 중쇄 CDR3 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 서열 식별 번호: 16에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열, 및 서열 식별 번호: 8에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 서열 TSVTY(서열 식별 번호: 13)을 포함하는 경쇄 CDR1 서열; 서열 ASS(서열 식별 번호: 14)를 포함하는 경쇄 CDR2 서열; 서열 QHRSSSNPLT(서열 식별 번호: 3)를 포함하는 경쇄 CDR3 서열; 서열 GFSLTNYG(서열 식별 번호: 5)를 포함하는 중쇄 CDR1 서열; 서열 IWSGGTT(서열 식별 번호: 10)를 포함하는 중쇄 CDR2 서열; 및 서열 ARNFGNYAMDF(서열 식별 번호: 11)를 포함하는 중쇄 CDR3 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 서열 식별 번호: 16에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열, 및 서열 식별 번호: 12에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 2.5 x 10-8 M 이하의 KD로 FH에 대한 결합 친화성 및/또는 0.1 x 10-9 M 이하의 KD로 CCP18 내지 CCP20으로 구성된 FH 단편에 대한 결합 친화성을 갖거나, 본 항체 또는 단편은 1.25 x 10-8 M 이하의 KD로 FH에 대한 결합 친화성 및/또는 0.04 x 10-9 M 이하의 KD로 CCP18 내지 CCP20으로 구성된 FH 단편에 대한 결합 친화성을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 2.5 x 10-8 M 이하의 KD로 FH에 대한 결합 친화성 및/또는 0.1 x 10-9 M 이하의 KD로 CCP18 내지 CCP20으로 구성된 FH 단편에 대한 결합 친화성을 갖거나, 본 항체 또는 단편은 0.6 x 10-8 M 이하의 KD로 FH에 대한 결합 친화성 및/또는 0.6 x 10-11 M 이하의 KD로 CCP18 내지 CCP20으로 구성된 FH 단편에 대한 결합 친화성을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항체 또는 단편은 10%(v/v) 혈청의 존재 하에 38 nM 이하의 IC50 값, 예를 들어 30 nM 이하의 IC50 값으로 생체 외에서(in vitro) 지질다당류(LPS) 상에 C3 침착을 억제하고/하거나 10%(v/v) 혈청의 존재 하에 150 nM 이하의 IC50 값, 예를 들어 130 nM 이하의 IC50 값으로 생체 외에서 용혈능을 억제하고/하거나 10%(v/v) 혈청의 존재 하에 생체 외에서 C3b에 대한 FH의 KD를 2 μM 이하로 감소(결합 친화성을 증가)시키고/시키거나 10%(v/v) 혈청의 존재 하에 생체 외에서 C3b에 대한 FH의 결합 친화성을 적어도 3배 증가시킨다. 특정 실시형태에서, 혈청은 정상적인 인간 혈청이다.
일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 FH 활성도를 증강시키며, 선택적으로 FH 활성도는 대체 보체 활성화의 억제이고, 추가로 선택적으로 대체 보체 활성화의 억제는 용혈능의 억제; 보체 성분 3(C3)의 침착 억제; 및/또는 C3b, iC3b 및/또는 C3d에 대한 FH의 결합 증가를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 면역글로불린 중쇄 가변 영역 및 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함하고, 본 항체 또는 단편은 추가로 면역글로불린 중쇄 불변 영역 및 면역글로불린 경쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 IgG의 불변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, IgG의 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4(예를 들어, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4)이다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 IgG4(예를 들어, 인간 IgG4)의 불변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, IgG4의 불변 영역은 297 위치에서 돌연변이를 포함한다. 특정 실시형태에서, IgG4의 불변 영역은 297 위치에서 아미노산 잔기 Q를 포함한다. 특정 실시형태에서, IgG4의 불변 영역은 297 위치에서 아미노산 잔기 A를 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 단편은 적어도 Fab 단편을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 단클론성 항체 또는 이의 단편이다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 인간 경쇄 및 중쇄 불변 영역을 포함하는 키메라 또는 인간화 항체, 또는 이의 단편이다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 페길화(PEGylated)된다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 페길화 Fab 단편이다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 본원에 개시된 임의의 항체 또는 단편을 암호화하는 핵산 서열을 포함하는, 분리된, 합성된 또는 재조합된 핵산을 제공한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 본원에 개시된 임의의 핵산을 포함하는 벡터를 제공한다. 일부 실시형태에서, 상기 벡터는 AAV 벡터이다. 일부 실시형태에서, AAV 벡터는 AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11 및 AAV12로 구성된 군으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 본원에 개시된 임의의 핵산 또는 본원에 개시된 임의의 벡터를 포함하는 재조합 세포를 제공한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 본원에 개시된 임의의 항체 또는 단편, 본원에 개시된 임의의 핵산, 본원에 개시된 임의의 벡터 또는 본원에 개시된 임의의 재조합 세포, 및 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 및/또는 부형제를 포함하는 약학 조성물을 제공한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 치료에의 용도를 위한 본원에 개시된 임의의 항체 또는 단편, 본원에 개시된 임의의 핵산, 본원에 개시된 임의의 벡터를 제공한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 대체 보체 활성화를 억제하는 용도를 위한 본원에 개시된 임의의 항체 또는 단편, 본원에 개시된 임의의 핵산 또는 본원에 개시된 임의의 벡터를 제공한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용은 대체 경로의 보체 활성화와 관련된 장애의 치료, 완화 또는 예방에의 용도를 위한 본원에 개시된 임의의 항체 또는 단편, 본원에 개시된 임의의 핵산 또는 본원에 개시된 임의의 벡터를 제공한다. 일부 실시형태에서, 상기 장애는 비정형 용혈성 요독증후군(aHUS), 발작성 야간혈색소 요증(PNH), 노인황반변성(AMD), 막증식성 사구체신염(MPGN) 및 IgA 신증으로 구성된 군으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 대체 경로의 보체 활성화와 관련된 장애의 치료, 완화 또는 예방을 위한 약물의 제조를 위한 본원에 개시된 임의의 항체 또는 단편, 본원에 개시된 임의의 핵산 또는 본원에 개시된 임의의 벡터의 용도를 제공한다. 일부 실시형태에서, 상기 장애는 비정형 용혈성 요독증후군(aHUS), 발작성 야간혈색소 요증(PNH), 노인황반변성(AMD), 막증식성 사구체신염(MPGN) 및 IgA 신증으로 구성된 군으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 본원에 개시된 임의의 항체 또는 단편, 본원에 개시된 임의의 핵산, 본원에 개시된 임의의 벡터 또는 본원에 개시된 임의의 약학 조성물의 치료적으로 유효량을 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대체 경로의 보체 활성화와 관련된 장애를 치료, 완화 또는 예방하기 위한 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 상기 장애는 비정형 용혈성 요독증후군(aHUS), 발작성 야간혈색소 요증(PNH), 노인황반변성(AMD), 막증식성 사구체신염(MPGN) 및 IgA 신증으로 구성된 군으로부터 선택된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 본원에 개시된 임의의 항체 또는 단편, 본원에 개시된 임의의 핵산, 본원에 개시된 임의의 벡터 또는 본원에 개시된 임의의 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대체 보체 활성화를 억제하기 위한 방법을 제공한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 본원에 개시된 임의의 핵산 또는 본원에 개시된 임의의 벡터를 세포에 제공하는 단계 및 상기 세포가 상기 핵산 또는 벡터에 포함된 핵산 서열을 번역하도록 함으로써 항체 또는 단편을 제조하는 단계를 포함하는, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 단편을 제조하기 위한 방법을 제공한다. 일부 실시형태에서, 상기 방법은 상기 항체 또는 단편을 채취, 정제 및/또는 분리하는 단계를 추가로 포함한다.
A. 일반적 기술 및 정의
본원에 달리 정의되지 않는 한, 본원에 기재된 과학적 및 기술적 용어는 당업자에 의해 일반적으로 이해되는 의미를 가질 것이다. 일반적으로, 본원에 기재된 약리학, 세포 및 조직 배양, 분자 생물학, 세포 및 종양 생물학, 신경생물학, 신경화학, 바이러스학, 면역학, 미생물학, 유전학 및 단백질 및 핵산 화학과 관련되어 사용된 명명법 및 이의 기술은 당업계에서 잘 알려지고 일반적으로 사용되는 것들이다. 상충의 경우, 정의를 포함하는 본 명세서가 우선될 것이다.
본 개시내용의 실행은 달리 명시되지 않는 한 당업계의 기술 내에 있는 분자 생물학(재조합 기술 포함), 미생물학, 세포 생물학, 생화학 및 면역학의 통상적인 기술을 이용할 것이다. 이러한 기술은 문헌, 예를 들어 Molecular Cloning: A Laboratory Manual, second edition (Sambrook et al., 1989) Cold Spring Harbor Press; Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R.I. Freshney, ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather and P.E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, and D.G. Newell, eds., 1993-1998) J. Wiley and Sons; Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987); Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel et al., eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Sambrook and Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd. ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (2001); Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (2002); Harlow and Lane Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1998); Coligan et al., Short Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY (2003); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999)에서 충분히 설명된다.
효소 반응 및 정제 기술은 당업계에서 일반적으로 수행된 바와 같이 또는 본원에 기재된 바와 같이 제조업체의 사양에 따라 수행된다. 본원에 기재된 분석 화학, 생화학, 면역학, 분자 생물학, 합성 유기 화학, 및 의약 및 약제 화학과 관련하여 사용된 명명법, 및 이의 실험실 절차 및 기술은 당업계에게 잘 알려지고 일반적으로 사용되는 것들이다. 표준 기술이 화학 합성 및 화학 분석을 위해 사용된다.
이 명세서 및 실시형태 전반에 걸쳐, 단어 "포함하다(comprise)" 또는 "포함하다(comprises)" 또는 “포함하는(comprising)"과 같은 변형은 명시된 정수 또는 정수 군을 포함하되, 임의의 다른 정수 또는 정수 군을 제외하지 않는 것을 의미하는 것으로 이해될 것이다.
실시형태가 언어 "포함하는"으로 본원에 어디에서 기재되든, "구성된" 및/또는 "본질적으로 구성된"의 용어로 기재된 다른 유사한 실시형태가 또한 제공되는 것으로 이해된다.
용어 "포함하는(including)"은 "포함하지만, 이로 제한되지는 않는"을 의미하기 위해 사용된다. "포함하는" 및 "포함하지만, 이로 제한되지는 않"은 상호 교환적으로 사용된다.
용어 "예를 들어(e.g)" 또는 "예를 들어(for example)" 이후의 임의의 예(들)는 포괄적이거나 제한적인 것을 의미하지 않는다.
문맥에 의해 달리 요구되지 않는 한, 단수 용어는 복수를 포함할 것이고, 복수 용어는 단수를 포함할 것이다.
관사("a" 및 "an")는 관사의 문법 상 대상이 하나 또는 하나 초과(즉, 적어도 하나)인 것을 지칭하기 위해 본원에 사용된다. 예로서, "하나의 구성"은 하나의 구성 또는 하나 초과의 구성을 의미한다.
상태 또는 환자를 "치료하는"은 임상 결과를 포함하는 이롭거나 소기의 결과를 얻기 위해 조취를 취하는 것을 의미한다. 질병 또는 상태(예를 들어, 눈 질병)와 관련하여, 치료는 하나 이상 치료(therapy)의 투여(하나 이상의 예방제 또는 치료제의 투여를 포함하지만, 이로 제한되지는 않음)로 인한 감염(예를 들어, 눈 질병 또는 이와 관련된 증상)의 진행, 중증도 및/또는 지속 기간의 감소 또는 개선이나 하나 이상의 증상의 개선을 지칭한다.
본원에 사용된 바, 용어 "~에 특이적인" 및 "특이적으로 결합하는" 또는 "특이적으로 결합할 수 있는"은 항체 및 이의 에피토프(epitope) 사이의 비(非)-공유적 상호작용을 지칭한다. 이는 항체 또는 단편이 다른 결합 부위 또는 다른 항체에 비해 이의 에피토프에 우선적으로 결합하는 것을 나타낸다. 따라서, 항체 또는 단편이 다른 결합 부위 또는 항체에 비-특이적으로 결합하더라도, 이의 에피토프에 대한 항체 또는 단편의 결합 친화성은 임의의 다른 결합 부위 또는 항원에 대한 항체 또는 단편의 결합 친화성보다 현저하게 더 높다.
아미노산 서열 또는 핵산 서열의 동일성 백분율 또는 용어 "% 서열 동일성"은 두 개의 서열을 정렬하고, 필요한 경우 최대 백분율 동일성을 획득하기 위해 차이를 도출한 후 기준 아미노산 서열 또는 핵산 서열 내 잔기와 동일한 아미노산 서열 또는 핵산 서열의 전장(full length) 잔기의 백분율로서 본원에 정의된다. 정렬을 위한 방법 및 컴퓨터 프로그램, 예를 들어 "Align 2"는 당업계에 잘 알려져 있다.
본원에 사용된 바, "FH.07"은 서열 식별 번호: 32의 가변 경쇄 아미노산 서열, 및 서열 식별 번호: 36의 가변 중쇄 아미노산 서열을 포함하는 항체를 지칭한다.
본원에 사용된 바, "FHR-1.3B4"는 서열 식별 번호: 48의 가변 경쇄 아미노산 서열, 및 서열 식별 번호: 52의 가변 중쇄 아미노산 서열을 포함하는 항체를 지칭한다.
본원에 기술된 바와 같은 아미노산 서열에서, 아미노산은 단일 문자 기호로 나타낸다. 이들 단일 문자 기호 및 3개 문자 기호는 당업자에게 잘 알려져 있고, 하기 의미를 갖는다: A(Ala)는 알라닌이고, C(Cys)는 시스테인이고, D(Asp)는 아스파르트산이고, E(Glu)는 글루탐산이고, F(Phe)는 페닐알라닌이고, G(Gly)는 글리신이고, H(His)는 히스티딘이고, I(Ile)는 이소류신이고, K(Lys)는 리신이고, L(Leu)은 류신이고, M(Met)은 메티오닌이고, N(Asn)은 아스파라긴이고, P(Pro)는 프롤린이고, Q(Gln)는 글루타민이고, R(Arg)은 아르기닌이고, S(Ser)는 세린이고, T(Thr)는 트레오닌이고, V(Val)는 발린이고, W(Trp)는 트립토판이고, Y(Tyr)는 티로신이다.
용어 "증강 FH 활성도"는 FH의 활성도가 본 개시내용에 따른 항체 또는 단편이 FH에 결합하는 경우 증가되는 것을 의미한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항체 및 단편에 의해 증강되는 FH의 활성도는 예를 들어 개체에서의 대체 보체 활성화의 억제이다. 본원에 사용된 바, 용어 "대체 보체 활성화"는 대체 경로를 통한 보체계의 활성화를 지칭하고, 즉, 대체 경로의 C3 전환효소, 즉, C3bBb / C3bBbP의 적어도 형성을 포함하거나 이러한 C3 전환효소 형성의 증가를 포함한다. 대체 보체 활성화는 대체 경로의 C3 전환효소에 의한 C3의 C3a 및 C3b로의 분해, 대체 경로의 C5 전환효소, 즉, C3bBbC3b / C3bBbC3bP의 형성 및/또는 C5의 분해 및 C6, C7, C8 및 C9의 후속 결합을 추가로 포함하여 MAC를 형성할 수 있다. 대체 보체 활성화는 대체 경로의 증폭 고리의 증가를 추가로 포함할 수 있다.
일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 단편은 본원에 개시된 대체 보체 활성화 과정 중 임의의 하나 이상을 억제할 수 있다. 일부 실시형태에서, 대체 보체 활성화는 개체(예를 들어, 개체의 체액, 예를 들어 혈액, 간질액 또는 뇌척수액)에서 억제된다. 본원에 사용된 바, 용어 "개체"는 "대상체" 또는 "환자"와 상호 교환적으로 사용되고, 보체계를 이의 면역계의 일부로서 포함하는 인간 또는 동물, 예를 들어 포유동물(예를 들어, 설치류, 유인원, 말, 소, 돼지, 개, 고양이)을 지칭한다. 일부 실시형태에서, 개체는 포유동물이다. 일부 실시형태에서, 포유동물은 인간이다.
본원에 사용된 바, "대체 보체 활성화의 억제"는 이의 억제 결과이거나 유발되는 대체 보체계의 활성도, 인자, 성분의 활성도 또는 양의 임의의 변경을 포함한다. 예를 들어, 대체 보체 활성화의 억제는 용혈능의 억제, 보체 성분 3(C3)의 대상체의 세포 상의 침착 억제, C3b, iC3b 및/또는 C3d에 대한 FH의 결합 증가, 대체 보체 경로의 C3 전환효소 C3bBb/C3bBbP의 형성 억제, C3b에 대한 인자 B의 결합 억제 및/또는 C3b와 인자 B 사이의 상호작용 억제 및 대체 경로의 C3 전환효소에 의한 C3의 C3a 및 C3b로의 분해 억제, 숙주 세포, 특히 숙주 세포 상에 발현된 시알산, 글리코스아미노글리칸 및/또는 헤파린에 대한 FH의 결합 증가, 대체 보체 경로의 증폭 고리 억제, 대체 보체 경로의 C5 전환효소 C3bBbC3bP/C3bBbC3bP의 형성 억제, 대체 경로의 C5 전환효소에 의한 C5의 C5a 및 C5b로의 분해 억제, FH의 부패 가속 활성도 증가, 즉, 일단 대체 경로의 C3 전환효소가 형성되었다면 이들의 해리 촉진 및/또는 C3b가 분해되도록 하는 FI 공동-인자 활성도의 증가를 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 개시내용의 항-FH 항체 및 단편으로 증강된 FH에 의한 대체 보체 활성화의 억제는 용혈성 활성화의 억제, 대상체의 세포 상의 C3 침착 억제, 및/또는 C3b, iC3b 및/또는 C3d에 대한 FH의 결합 증가를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 "억제"는 바람직하게는 명시된 활성도가 적어도 약 25%, 적어도 약 50%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95% 감소된 것을 의미한다. 따라서, "대체 보체 활성화의 억제"는 대체 보체 경로의 활성화가 적어도 약 25%, 적어도 약 50%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95% 감소된 것을 의미한다. 마찬가지로, "용혈능의 억제"는 용혈능이 적어도 약 25%, 적어도 약 50%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95% 감소된 것을 의미한다.
본원에 사용된 바와 같은 "증가"는 바람직하게는 명시된 활성도가 적어도 약 25%, 적어도 약 50%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95% 증가된 것을 의미한다. 따라서, "C3b에 대한 FH의 결합 증가"는 C3b에 대한 FH의 결합이 적어도 약 25%, 적어도 약 50%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 95% 증가된 것을 의미한다. 마찬가지로, "숙주 세포에 대한 FH의 결합 증가"는 숙주 세포에 대한 FH의 결합이 적어도 약 25%, 적어도 약 50%, 적어도 약 75%, 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 100%, 적어도 약 150%, 적어도 약 200%, 적어도 약 250%, 적어도 약 300%, 적어도 약 350%, 적어도 약 400%, 적어도 약 450%, 적어도 약 500%, 적어도 약 550%, 적어도 약 600%, 적어도 약 700%, 적어도 약 800%, 적어도 약 900% 또는 적어도 약 1000% 증가된 것을 의미한다.
본원에 사용된 바, "용혈능"는 보체계의 활성화에 의해 유도된, 바람직하게는 세포 표면에서의 MAC의 형성의 결과로서 적혈구의 파열 및 세포 내용물의 예를 들어 순환으로의 후속 방출을 지칭한다. 용혈능은 예를 들어 선택적으로 일부 변형을 가해서 Sanchez-Corral et al.(2004) 및 Wouters et al.(2008)에 기술된 바와 같은 용혈성 검정을 사용하여 실시예에서 본원에 기재된 바와 같이 측정된다. 이 대표적이고 비제한적 검정에서, 양적혈구(SRBC)와 같은 적혈구는 혈청, 예를 들어 인간 혈청과 함께 37℃에서 1.25시간 동안 진탕하면서 배양된다. 낮은 수준의 FH 또는 기능 장애 FH를 갖는 혈청은 SRBC의 용해를 초래한다. 용해는 20 mM의 EDTA를 함유하는 베로날 완충제(veronal buffer)의 첨가에 의해 중단된 후 사전 냉각된 원심분리기(예를 들어, 7℃)에서 2.5분 동안 원심분리할 수 있다. 적혈구 용해의 백분율은 412 nm에서 상청액의 흡광도를 측정하는 것에 의해 결정된다. 혈청은 예를 들어 원하지 않거나 과도한 대체 경로의 보체 활성화와 관련된 장애, 예를 들어 aHUS를 겪고 있는 인간 개체 또는 건강한 인간 개체로부터의 것일 수 있다. 용혈능을 억제하는 항체 또는 단편의 능력은 항체 또는 단편의 존재 하에 적혈구를 혈청과 배양하는 것에 의해 결정될 수 있다.
"결합 친화성"은 항체 또는 기능적 부분 또는 기능적 균등물의 단일 결합 부위와 이의 결합 상대(예를 들어, 항원) 사이의 비공유적 상호작용의 총 합의 강도를 지칭한다. 달리 명시되지 않는 한, 본원에 기재된 바와 같은 "결합 친화성"은 결합쌍 요소들(본 출원에서 항체와 항원) 사이의 1:1 상호작용을 반영하는 고유 결합 친화성을 지칭한다. 결합 친화성은 본원에서 Kd에 대한 Ka의 비로서 계산되는 평형 해리 상수(KD)로 나타내며, 예를 들어 Chen, Y. et al., 1999를 참조한다. 친화성은 예를 들어 표면 플라즈몬 공명(SPR) 검정, 예를 들어 BiaCore(GE Healthcare Life Sciences) 또는 IBIS Technologies BV(Hengelo, the Netherlands)에서의 IBIS-iSPR 기기 또는 용액 상 검정(solution phase assay), 예를 들어 Kinexa과 같은 당업계에서 알려진 일반적인 방법에 의해 측정될 수 있다.
B. 항-FH 항체 및 이의 단편
국제공개 WO 2016/028150호는 C3b에 대한 FH의 증가된 결합, 매개된 C3 침착 억제 및 용혈능의 억제로 나타난 바와 같은 대체 경로 활성화를 억제하는 FH.07로 지칭되는 뮤린(murine)의 작용제 항-FH 항체(agonistic anti-FH antibody)를 기재한다. 상기 항체의 Fab 및 F(ab')2 단편은 동일한 FH 증강 효과를 갖는 것으로 나타났다. 국제공개 WO 2019/139481호는 FH.07보다 FH에 대한 더 높은 결합 친화성 및 FH 활성도를 증강시키는 증가된 능력을 갖는 FHR-1.3B4로 지칭되는 뮤린의 다른 작용제 항-FH 항체를 기재한다.
일 양태에서, 본 개시내용은 작용제 항-FH 항체(예를 들어, 인간화 항체) 및 이의 단편, 즉, FH 활성도를 증강시키는 항체 및 단편을 제공한다. 일 실시형태에서, 이들 항체는 FH의 도메인 CCP18 내의 동일한 에피토프에 결합하기 위해 항체 FH.07 또는 항체 FHR-1.3B4와 경쟁한다. 증강 항-FH 항체는 대체 보체 경로의 활성화의 강력한 억제제이고, 따라서 보체계의 대체 경로의 원하지 않거나 과도한 활성화와 관련된 장애의 치료에 유용하다. FH는 C3의 C3b로의 분해 및 세포 표면에서 FB에 대한 이의 후속 결합 및 C3 전환효소의 형성이 추가적인 C3 분자의 C3b로의 분해를 촉진하는 대체 경로의 증폭 고리를 특이적으로 억제한다. 본 발명의 항체 및 단편이 C3의 수준에서 보체 활성화를 방해하는 사실의 주요 이점은 표면 상의 C3b의 축적 및 C3a의 방출이 방지되는 것이다. 대조적으로, 보체 활성화가 예를 들어 에쿨리주맙으로 C5 수준에서 억제되는 경우, C3b의 축적 및 C3a의 방출은 억제되지 않는다. C3b는 옵소닌으로서 작용하고, C3a는 아나필라시스독소이다. 따라서, C3b의 축적 및 C3a의 형성 과정은 면역 세포의 유인 및 표적의 옵소노파고사이토시스(opsonophagocytosis)를 초래하기 때문에, C3b의 축적 및 C3a의 형성은 바람직하게는 방지된다. C3b의 축적이 적혈구의 옵소닌 작용을 초래하고, 적혈구가 간 및 비장 내에서 순차적으로 제거되기 때문에, 이는 예를 들어 에쿨리주맙을 복용한 PNH 환자가 여전히 수혈이 필요한 것을 의미한다. 또한, 항-C5 항체의 치료는 세포 상에 C3b의 축적 및 C3a의 형성을 초래하고, 세포는 다른 방법으로 MAC에 의해 용해될 것이다. 항-C5 항체의 중요한 단점은 이 항체가 또한 병원균에 의해 유도된 보체 활성화도 방해하기 때문에 환자가 감염에 취약해질 수 있다는 것이다. 숙주 세포를 보호하는 보체계의 조절자를 표적화함으로써, 이는 방지된다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "항체"는 표적 에피토프에 대해 특이적인, 경쇄 가변 영역(VL)와 쌍을 이루는, 적어도 중쇄 가변 영역(VH)을 포함하는 면역글로불린 단백질을 지칭한다. 이 용어는 다클론성 및 단클론성 항체를 모두 포함한다. 이는 전장 면역글로불린을 포함하는, FH의 CCP18에 특이적으로 결합하는 임의의 형태의 항체를 지칭한다. 본 개시내용에 따른 항체 또는 이의 단편은 적어도 하나의 항원 결합 부위를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "항원 결합 부위"는 적어도 하나의 CDR 서열, 바람직하게는 적어도 두 개의 CDR 서열, 보다 바람직하게는 적어도 세 개의 CDR 서열을 포함하는 항체 또는 이의 단편의 부위를 지칭한다. 예를 들어, 항원 결합 부위는 경쇄 CDR 1 내지 3 또는 중쇄 CDR 1 내지 3을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항원 결합 부위는 경쇄 CDR 1 내지 3 및 중쇄 CDR 1 내지 3을 포함한다.
당업자에게 잘 알려진 바와 같이, 항체는 두 개의 중쇄 및 두 개의 경쇄를 보유한다. 항체의 중쇄는 면역글로불린 분자를 구성하는 두 가지 유형의 사슬 중 더 큰 것이고, 가변 도메인은 항체 결합에 관여한다. 중쇄는 불면 도메인과, 항원 결합에 관여하는 가변 도메인을 포함한다. 항체의 경쇄는 면역글로불린 분자를 구성하는 두 가지 유형의 사슬 중 더 작은 것이다. 경쇄는 불변 도메인 및 가변 도메인을 포함한다. 경쇄의 가변 도메인은 항상은 아니지만 보통 항원 결합에 관여하는 중쇄의 가변 도메인과 함께 있다. 상보성-결정 영역(CDR)은 중쇄 가변 도메인 및 경쇄 가변 도메인 내에 존재하는 초가변 영역(hypervariable region)이다. 전장 항체의 경우, 중쇄의 CDR 1 내지 3 및 연결된 경쇄의 CDR 1 내지 3은 함께 항원 결합 부위를 형성한다.
CDR은 항원 결합에 관여하고, 항원 특이성 및 항체에 대한 결합 친화성을 부여한다. 중쇄 및 경쇄의 각각의 가변 도메인 내에 세 개의 CDR이 존재하고, 각각의 가변 도메인에 대해 CDR1, CDR2 및 CDR3로 지정된다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "CDR 세트"는 표적 항원에 결합할 수 있는 단일 중쇄 또는 경쇄 가변 도메인 내에 존재하는 세 개의 CDR 군을 지칭한다. 이들 CDR의 정확한 경계는 상이한 시스템에 따라 상이하게 정의되었다. 세 개의 중쇄 CDR은 CDRH1, CDRH2 및 CDRH3로 지칭될 수 있고, 세 개의 경쇄 CDR은 CDRL1, CDRL2 및 CDRL3로 지칭될 수 있다.
"항체의 항원 결합 단편"은 반드시 동일한 정도까지는 아니지만, 항체와 동일한 항원, 예를 들어 FH의 CCP18에 특이적으로 결합할 수 있는 항체의 일부로서 본원에 정의된다. FH 활성도 증강 항체의 단편은 또한 반드시 동일한 정도까지는 아니지만, FH 활성도를 추가로 증강시킨다. FH 활성도 억제 항체의 단편은 또한 반드시 동일한 정도까지는 아니지만, FH 활성도를 추가로 억제한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체 단편은 항체(예를 들어, 본원에 개시된 임의의 항체)의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 포함하고, 일부 실시형태에서, 항체의 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 추가로 포함한다. 항체의 단편의 비제한적 예는 단일 도메인 항체, 단일 사슬 항체, 나노체(nanobody), 단일체(unibody), 단일 사슬 가변 단편(scFv), Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')2 단편 및 F(ab)2 단편이다. 일부 실시형태에서, 항체의 단편은 적어도 중쇄 가변 도메인(VH) 및/또는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 단편은 적어도 Fab 단편을 포함한다. 일부 실시형태에서, 동일한 에피토프에 결합하기 위해 본 개시내용의 항체와 경쟁하는 증강 항-FH 항체 FH.07 또는 항체 FHR-1.3B4의 Fab' 단편은 FH의 기능을 증강시키는 능력을 보유하는 것이 입증되었다. 따라서, 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항체의 단편은 본 개시내용에 따른 항체의 Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')2 단편 또는 F(ab)2 단편이다. 다른 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체의 단편은 면역글로불린 중쇄 가변 영역, 면역글로불린 중쇄 불변 영역, 면역글로불린 경쇄 가변 영역 및 면역글로불린 경쇄 불변 영역을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체 및 단편은 FH, 예를 들어 인간 FH의 활성도를 증강시킬 수 있다.
일부 실시형태에서, C3 침착의 억제는 실시예에서 본원에 기재된 C3 침착 검정과 같은 C3 침착 검정을 사용하여 측정된다. 이 대표적이고 비제한적 검정은 미량정량판(microtiter plate)의 LPS 코팅을 포함한다. 이 판은 이어서 항체 또는 단편의 존재 또는 부재 하에 예를 들어 상기 명시된 바와 같은 원하지 않거나 과도한 대체 보체 활성화와 관련된 장애를 겪는 개체 또는 건강한 개체로부터의 혈청으로 배양된다. LPS 상의 C3 침착은 항-C3 항체로 검출될 수 있다.
일부 실시형태에서, C3b에 대한 FH의 결합 증가는 실시예에서 본원에 기재된 바와 같은 ELISA를 사용하여 측정된다. 이 대표적이고 비제한적 검정은 미량정량 ELISA 판의 C3b 코팅 및 예를 들어 상기 명시된 바와 같은 원하지 않거나 과도한 대체 보체 활성화와 관련된 장애를 겪는 개체 또는 건강한 개체로부터의 혈청으로의 상기 판의 배양을 포함한다. 결합된 FH는 항-FH 항체, 예를 들어 과산화효소-라벨링(peroxidase-labeled) 다클론성 항-FH로 검출될 수 있다. C3b에 대한 FH 결합을 향상시키는 항체 또는 단편의 능력은 코팅된 C3b와 배양하기 전에 항체 또는 단편의 존재 하에 혈청을 사전 배양하는 것에 의해 결정될 수 있다. 다른 예로서, C3b에 대한 FH의 결합은 예를 들어 실시예에서 본원에 기재된 바와 같은 표면 플라즈몬 공명(SPR)을 사용하여 결정될 수 있다. SPR은 라벨이 없는 환경에서 실시간으로 생체분자의 상호작용을 측정하기 위한 기술이다. 반응물 중 하나, 예를 들어 C3b는 센서 표면에 고정되고, 나머지, 예를 들어 FH는 예를 들어 본 개시내용의 (상이한 농도의) 항체 또는 단편의 존재 또는 부재 하에 용액 내에서 자유롭고, 상기 표면 상을 통과한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체 또는 이의 단편은 생체 외에서 C3b에 대한 FH의 결합 친화성을 2 μM 이하, 1.95 μM 이하, 1.8 μM 이하, 1.7 μM 이하로 증가(감소된 KD 값)시키고/시키거나 생체 외에서 C3b에 대한 FH의 결합 친화성을 적어도 2배, 적어도 2.5배, 적어도 3배, 적어도 3.5배, 적어도 4배, 적어도 4.5배, 적어도 5배, 적어도 5.5배, 적어도 6배, 적어도 7배, 적어도 8배, 적어도 9배 또는 적어도 10배 증가시킨다. 특정 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체 또는 이의 단편은 생체 외에서 C3b에 대한 FH의 결합 친화성(KD)을 1 μM 미만, 750 nM 미만, 500 nM 미만, 300 nM 미만 또는 250 nM 미만으로 증가시킨다. 특정 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체 또는 이의 단편은 생체 외에서 C3b에 대한 FH의 결합 친화성(KD)을 250 nM 내지 1 μM로 증가시킨다. 특정 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체 또는 이의 단편은 생체 외에서 C3b에 대한 FH의 결합 친화성을 적어도 3배 내지 5배 증가시킨다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용에 의해 제공된 항체 또는 이의 단편은 하나 이상의 기능 검정에서 낮은 생체 외 IC50 값, 예를 들어 일부 실시형태에서, 동일한 기능 검정에 대한 항체 FH.07 또는 항체 FHR-1.3B4의 생체 외 IC50 값보다 더 낮은 생체 외 IC50 값을 갖는다. “IC50”은 당업계에서 잘 알려진 용어이고, 특정 기능의 활성도를 50% 억제 또는 감소시키는 데 필요한 항체 또는 단편의 농도를 지칭한다. 항체 또는 단편의 IC50 값이 낮을수록, 항체 또는 단편의 억제 활성도는 더 강하고, 치료제로서의 이의 잠재력은 더 크다. 일부 실시형태에서, 기능 검정은 상기 본원에 기재된 바와 같은 C3b 침착 검정 및/또는 용혈성 검정이다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체 또는 이의 단편은 10%(v/v)의 정상적인 인간 혈청의 존재 하에 38 nM 이하, 35 nM 이하, 32 nM 이하, 30 nM 이하, 28 nM 이하, 27 nM 이하, 25 nM 이하, 23 nM 이하, 20 nM 이하, 18 nM 이하, 15 nM 이하 또는 10 nM 이하의 IC50 값으로 생체 외에서 LPS 상의 C3 침착을 억제한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체 또는 이의 단편은 10%(v/v)의 정상적인 인간 혈청의 존재 하에 15 nM 내지 30 nM의 IC50 값으로 생체 외에서 LPS 상의 C3 침착을 억제한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체 또는 이의 단편은 10%(v/v)의 정상적인 인간 혈청의 존재 하에 150 nM 이하, 130 nM 이하, 120 nM 이하, 115 nM 이하, 110 nM 이하, 105 nM 이하, 100 nM 이하, 95 nM 이하, 90 nM 이하, 85 nM 이하, 80 nM 이하, 75 nM 이하, 70 nM 이하, 65 nM 이하 또는 60 nM 이하의 IC50 값으로 생체 외에서 용혈능을 억제한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체 또는 이의 단편은 10%(v/v)의 정상적인 인간 혈청의 존재 하에 60 nM 내지 80 nM의 IC50 값으로 생체 외에서 용혈능을 억제한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항체 또는 단편은 10%(v/v)의 정상적인 인간 혈청의 존재 하에 상기 본원에 기재된 바와 같은 낮은 IC50 값으로 생체 외에서 LPS 상의 C3 침착을 억제하고, 10%(v/v)의 정상적인 인간 혈청의 존재 하에 상기 본원에 기재된 바와 같은 낮은 IC50 값으로 생체 외에서 용혈능을 억제한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체 또는 단편은 10%(v/v)의 정상적인 인간 혈청의 존재 하에 38 nM 이하의 IC50 값으로 생체 외에서 LPS 상의 C3 침착을 억제하고, 10%(v/v)의 정상적인 인간 혈청의 존재 하에 150 nM 이하의 IC50 값으로 생체 외에서 용혈능을 억제하거나, 10%(v/v)의 정상적인 인간 혈청의 존재 하에 30 nM 이하의 IC50 값으로 생체 외에서 LPS 상의 C3 침착을 억제하고, 10%(v/v)의 정상적인 인간 혈청의 존재 하에 150 nM 이하의 IC50 값으로 생체 외에서 용혈능을 억제하거나, 10%(v/v)의 정상적인 인간 혈청의 존재 하에 27 nM 이하의 IC50 값으로 생체 외에서 LPS 상의 C3 침착을 억제하고, 10%(v/v)의 정상적인 인간 혈청의 존재 하에 100 nM 이하의 IC50 값으로 생체 외에서 용혈능을 억제한다. 일부 실시형태에서, 10%(v/v)의 정상적인 인간 혈청의 존재 하에 생체 외에서 LPS 상의 C3 침착에 대한 IC50 값은 상기 본원에 기재된 바와 같은 C3 침착 검정에서 결정된다. 일부 실시형태에서, 용혈능에 대한 IC50 값은 상기 본원에 기재된 바와 같은 용혈능 검정에서 결정된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용에 의해 제공된 항체 또는 이의 단편은 도메인 CCP18 내지 CCP20을 포함하는 FH 단편 및/또는 FH에 대한 높은 결합 친화성, 예를 들어 일부 실시형태에서, 항체 FH.07 또는 항체 FHR-1.3B4의 결합 친화성보다 더 높은 결합 친화성을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편의 생체 내(in vivo) 치료 활성도는 전형적으로 예를 들어 항체 또는 단편이 이에 특이적인 에피토프 또는 항원 외의 결합 부위 및/또는 항원에 결합하는 것을 최소화하고, 생체 내 투여되는 데 필요한 항체 또는 항체의 양을 최소화하기 위해 높은 결합 친화성이 필요하다. 일부 실시형태에서, 높은 결합 친화성을 갖는 항체가 바람직하다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 이의 단편은 2.5 x 10-8 M 이하의 해리 상수(KD)로 FH에 대한 결합 친화성 및/또는 0.1 x 10-9 M 이하의 KD로 CCP18 내지 CCP20으로 구성된 FH 단편에 대한 결합 친화성을 갖는다. 따라서, 일 실시형태에서, 본 개시내용은 인자 H(FH)에 특이적으로 결합하고, FH 활성도를 증강시키는, 분리된, 합성된 또는 재조합된 항체 또는 항원 결합 단편을 제공하고, 상기 항체는 2.5 x 10-8 M 이하의 KD로 FH에 대한 결합 친화성 및/또는 0.1 x 10-9 M 이하의 KD로 CCP18 내지 CCP20으로 구성된 FH 단편에 대한 결합 친화성을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체 또는 단편은 22.5 nM 이하, 20 nM 이하, 17.5 nM 이하, 15 nM 이하, 12.5 nM 이하, 10 nM 이하, 9 nM 이하, 8 nM 이하, 7 nM 이하, 6 nM 이하, 5 nM 이하, 4 nM 이하, 3 nM 이하, 2 nM 이하, 1 nM 이하, 0.9 nM 이하, 0.8 nM 이하, 0.7 nM 이하 또는 0.6 nM 이하의 KD로 FH에 대한 결합 친화성을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체 또는 단편은 0.09 x 10-9 M 이하, 0.08 x 10-9 M 이하, 0.07 x 10-9 M 이하, 0.06 x 10-9 M 이하, 0.05 x 10-9 M 이하, 0.04 x 10-9 M 이하, 0.03 x 10-9 M 이하, 0.02 x 10-9 M 이하, 1 x 10-11 M 이하, 0.9 x 10-11 M 이하, 0.8 x 10-11 M 이하, 0.7 x 10-11 M 이하 또는 0.6 x 10-11 M 이하의 KD로 CCP18 내지 CCP20으로 구성된 FH 단편에 대한 결합 친화성을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 이의 단편은 1.25 x 10-8 M 이하의 KD로 FH에 대한 결합 친화성 및/또는 0.04 x 10-9 M 이하의 KD로 CCP18 내지 CCP20으로 구성된 FH 단편에 대한 결합 친화성을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 이의 단편은 0.6 x 10-8 M 이하의 KD로 FH에 대한 결합 친화성 및/또는 0.6 x 10-11 M 이하의 KD로 CCP18 내지 CCP20으로 구성된 FH 단편에 대한 결합 친화성을 갖는다. 일부 실시형태에서, 결합 친화성은 본원에 기재된 바와 같은 검정, 즉, 항체 또는 이의 단편을 포획(capturing)한 후 (FH에 대한 결합 친화성을 위해) 전장 FH 또는 (CCP18 내지 CCP20에 대한 결합 친화성을 위해) 도메인 18 내지 20으로 구성된 FH 단편을 표면 상에 흐르도록 하는, ProtA 칩 상의 SPR에 의해 결합 친화성이 결정되는 검정에서 SPR을 사용하는 것과 같은 표면 플라즈몬 공명(SPR)을 사용하여 결정된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용에 의해 제공된 항체 또는 이의 단편은 FH와 C3b의 상호작용을 증가시킨다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 이의 단편은 2 μM 이하의 해리 상수(KD)로 C3b에 대한 FH의 결합 친화성을 증가시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체 또는 단편은 C3b에 대한 결합 친화성을 2 μM 이하, 1.5 μM 이하, 1 μM 이하, 500 nM 이하, 400 nM 이하 또는 300 nM 이하의 KD로 증가시킨다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체 또는 단편은 생체 외에서 C3b에 대한 FH의 결합 친화성을 적어도 2.5배, 3배, 3.5배, 4배, 4.5배 또는 5배 증가시킨다(KD를 감소시킨다).
일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체 또는 단편은 높은 결합 친화성을 갖고, 낮은 IC50 값으로 생체 외에서 LPS 상의 C3 침착을 억제하고/하거나 낮은 IC50 값으로 생체 외에서 용혈능을 억제한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체 또는 단편은 2.5 x 10-8 M 이하의 KD로 FH에 대한 결합 친화성 및/또는 0.1 x 10-9 M 이하의 KD로 CCP18 내지 CCP20으로 구성된 FH 단편에 대한 결합 친화성을 갖고, 10%(v/v)의 정상적인 인간 혈청의 존재 하에 38 nM 이하의 IC50 값으로 생체 외에서 LPS 상의 C3 침착을 억제하고/하거나 10%(v/v)의 정상적인 인간 혈청의 존재 하에 150 nM 이하의 IC50 값으로 생체 외에서 용혈능을 억제한다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 1.25 x 10-8 M 이하(예를 들어, 10 nM 이하, 5 nM 이하 또는 1 nM 이하)의 KD로 FH에 대한 결합 친화성 및/또는 0.04 x 10-9 M 이하의 KD로 CCP18 내지 CCP20으로 구성된 FH 단편에 대한 결합 친화성을 갖고, 30 nM 이하의 IC50 값으로 생체 외에서 LPS 상의 C3 침착을 억제하고, 10%(v/v)의 정상적인 인간 혈청의 존재 하에 115 nM 이하의 IC50 값으로 생체 외에서 용혈능을 억제한다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 1.25 x 10-8 M 이하(예를 들어, 10 nM 이하, 5 nM 이하 또는 1 nM 이하)의 KD로 FH에 대한 결합 친화성 및/또는 0.04 x 10-9 M 이하의 KD로 CCP18 내지 CCP20으로 구성된 FH 단편에 대한 결합 친화성을 갖고, 10%(v/v)의 정상적인 인간 혈청의 존재 하에 27 nM 이하의 IC50 값으로 생체 외에서 LPS 상의 C3 침착을 억제하고, 10%(v/v)의 정상적인 인간 혈청의 존재 하에 100 nM 이하의 IC50 값으로 생체 외에서 용혈능을 억제한다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 1.25 x 10-8 M 이하(예를 들어, 10 nM 이하, 5 nM 이하 또는 1 nM 이하)의 KD로 FH에 대한 결합 친화성 및/또는 0.04 x 10-9 M 이하의 KD로 CCP18 내지 CCP20으로 구성된 FH 단편에 대한 결합 친화성을 갖고, 10%(v/v)의 정상적인 인간 혈청의 존재 하에 25 nM 이하의 IC50 값으로 생체 외에서 LPS 상의 C3 침착을 억제하고, 10%(v/v)의 정상적인 인간 혈청의 존재 하에 80 nM 이하의 IC50 값으로 생체 외에서 용혈능을 억제한다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 1.25 x 10-8 M 이하(예를 들어, 10 nM 이하, 5 nM 이하 또는 1 nM 이하)의 KD로 FH에 대한 결합 친화성 및/또는 0.04 x 10-9 M 이하의 KD로 CCP18 내지 CCP20으로 구성된 FH 단편에 대한 결합 친화성을 갖고, 10%(v/v)의 정상적인 인간 혈청의 존재 하에 15 nM 내지 25 nM의 IC50 값으로 생체 외에서 LPS 상의 C3 침착을 억제하고, 10%(v/v)의 정상적인 인간 혈청의 존재 하에 15 nM 내지 25 nM의 IC50 값으로 생체 외에서 용혈능을 억제한다. 일부 실시형태에서, 결합 친화성은 본원에 기재된 바와 같은 SPR에 의해 결정된다. 일부 실시형태에서, 생체 외에서 LPS 상의 C3 침착에 대한 IC50 값은 상기 본원에 기재된 바와 같이 C3 침착 검정에서 결정된다. 일부 실시형태에서, 용혈능에 대한 IC50 값은 상기 본원에 기재된 바와 용혈능 검정에서 결정된다.
일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 항원 결합 단편은 항체 FH.07의 결합 친화성보다 CCP18를 포함하는 FH 단편 및 FH에 대한 더 높은 결합 친화성을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 항원 결합 단편은 항체 FH.07의 결합 친화성보다 CCP18 내지 CCP20을 포함하는 FH 단편 및 FH에 대한 더 높은 결합 친화성을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 항원 결합 단편은 항체 FH.07의 IC50 값보다 더 낮은 IC50 값을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 항원 결합 단편은 항체 FH.07보다 더 높은 LPS 상의 C3 침착 억제를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 항원 결합 단편은 항체 FH.07보다 더 높은 용혈능 억제를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 항원 결합 단편은 FH의 CCP18 내의 동일한 에피토프에 결합하기 위해 항체 FH.07와 경쟁한다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 항원 결합 단편은 높은 저장 안정성, 특히 항체 FH.07과 비교하여 개선된 저장 안정성을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 항원 결합 단편은 높은 안정성, 특히 항체 FH.07과 비교하여 개선된 안정성을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 항원 결합 단편은 높은 선택성, 특히 항체 FH.07과 비교하여 증가된 선택성을 갖는다.
일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 항원 결합 단편은 항체 FHR-1.3B4의 결합 친화성보다 CCP18을 포함하는 FH 단편 및/또는 FH에 대한 더 높은 결합 친화성을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 항원 결합 단편은 항체 FHR-1.3B4의 결합 친화성보다 CCP18 내지 CCP20을 포함하는 FH 단편 및/또는 FH에 대한 더 높은 결합 친화성을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 항원 결합 단편은 항체 FHR-1.3B4의 IC50 값보다 더 낮은 IC50 값을 갖는다. 일부 실시형태에서 본원에 개시된 임의의 항체 또는 항원 결합 단편은 항체 FHR-1.3B4보다 LPS 상의 C3 침착을 더 많이 억제한다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 항원 결합 단편은 항체 FHR-1.3B4보다 더 높은 용혈능 억제를 나타낸다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 항원 결합 단편은 FH의 CCP18 내 동일한 에피토프에 결합하기 위해 항체 FHR-1.3B4와 경쟁한다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 항원 결합 단편은 높은 저장 안정성, 특히 항체 FHR-1.3B4와 비교하여 개선된 저장 안정성을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 항원 결합 단편은 높은 안정성, 특히 항체 FHR-1.3B4와 비교하여 개선된 안정성을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 항원 결합 단편은 높은 선택성, 특히 항체 FHR-1.3B4와 비교하여 증가된 선택성을 갖는다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용에 의해 제공된 항체 또는 이의 단편은 FH, 특히 FH의 CCP18 도메인에 결합하기 위해 항체 항-FH.07와 경쟁한다.
표 1은 본 개시내용의 예시적인 항체를 기재한다. CDR 서열은 IMGT 번호 부여 시스템(numbering system)에 따라 번호를 부여하였다(Lefranc 1997, Lefranc 1999 및 Lefranc et al., 2003). LC = 경쇄, HC = 중쇄, CDR = 상보성-결정 영역, VH = 중쇄 가변 영역, VL = 경쇄 가변 영역.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 인자 H(FH)의 보체 조절 단백질 도메인 18(CCP18)에 특이적으로 결합하는 분리된, 합성된 또는 재조합된 항체, 또는 이의 항원 결합 단편을 제공하고, 상기 항체 또는 단편은 표 1에 개시된 항체의 VH 및 VL 서열의 Kabat(Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, NIH Publication No. 91-3242, Bethesda 참조), Chothia(예를 들어, Chothia C & Lesk A M, (1987), J. Mol. Biol. 196: 901-917 참조), MacCallum(MacCallum R M et al., (1996) J. Mol. Biol. 262: 732-745 참조) 또는 당업계에 알려진 임의의 다른 CDR 결정 방법으로 결정된 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체는 항체 1이다. 표 1은 항체 1의 가변 중쇄 및 경쇄 서열뿐만 아니라 각각의 CDR 서열의 개요을 제공한다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 적어도 하나, 두 개 또는 세 개의 항체 1의 중쇄 CDR 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 적어도 하나, 두 개 또는 세 개의 항체 1의 경쇄 CDR 서열을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 “항체 1”은 예를 들어 분리 및/또는 정제 항체 또는 재조합으로 제조된 항체와 같은 표 1에 기재된 적어도 중쇄 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 영역을 포함하는 모든 항체 및 단편을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 1은 FH의 CCP18 내의 동일한 에피토프에 결합하기 위해 항체 FH.07 또는 항체 FHR-1.3B4와 경쟁한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체는 항체 2이다. 표 1은 항체 2의 가변 중쇄 및 경쇄 서열뿐만 아니라 각각의 CDR 서열의 개요를 제공한다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 적어도 하나, 두 개 또는 세 개의 항체 2의 중쇄 CDR 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 적어도 하나, 두 개 또는 세 개의 항체 2의 경쇄 CDR 서열을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 “항체 2”는 예를 들어 분리 및/또는 정제 항체 또는 재조합으로 제조된 항체와 같은 표 1에 기재된 적어도 중쇄 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 영역을 포함하는 모든 항체 및 단편을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 2는 FH의 CCP18 내의 동일한 에피토프에 결합하기 위해 항체 FH.07 또는 항체 FHR-1.3B4와 경쟁한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체는 항체 3이다. 표 1은 항체 3의 가변 중쇄 및 경쇄 서열뿐만 아니라 각각의 CDR 서열의 개요를 제공한다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 적어도 하나, 두 개 또는 세 개의 항체 3의 중쇄 CDR 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 적어도 하나, 두 개 또는 세 개의 항체 3의 경쇄 CDR 서열을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 “항체 3”은 예를 들어 분리 및/또는 정제 항체 또는 재조합으로 제조된 항체와 같은 표 1에 기재된 적어도 중쇄 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 영역을 포함하는 모든 항체 및 단편을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 3은 FH의 CCP18 내의 동일한 에피토프에 결합하기 위해 항체 FH.07 또는 항체 FHR-1.3B4와 경쟁한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체는 항체 4이다. 표 1은 항체 4의 가변 중쇄 및 경쇄 서열뿐만 아니라 각각의 CDR 서열의 개요를 제공한다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 적어도 하나, 두 개 또는 세 개의 항체 4의 중쇄 CDR 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 적어도 하나, 두 개 또는 세 개의 항체 4의 경쇄 CDR 서열을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 “항체 4”는 예를 들어 분리 및/또는 정제 항체 또는 재조합으로 제조된 항체와 같은 표 1에 기재된 적어도 중쇄 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 영역을 포함하는 모든 항체 및 단편을 포함한다. 일부 실시형태에서, 항체 4는 FH의 CCP18 내의 동일한 에피토프에 결합하기 위해 항체 FH.07 또는 항체 FHR-1.3B4와 경쟁한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 하기를 포함하는 인자 H(FH)의 보체 조절 단백질 도메인 18(CCP18)에 특이적으로 결합하는, 분리된, 합성된 또는 재조합된 항체, 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다:
- 서열 SSVTY(서열 식별 번호: 1) 또는 서열 TSVTY(서열 식별 번호: 13)를 갖는 경쇄 CDR1 서열,
- 서열 ATS(서열 식별 번호: 2) 또는 서열 ASS(서열 식별 번호: 14)를 갖는 경쇄 CDR2 서열,
- 서열 QHRSSSNPLT(서열 식별 번호: 3)를 갖는 경쇄 CDR3 서열,
- 서열 GFSLTNYG(서열 식별 번호: 5)를 갖는 중쇄 CDR1 서열,
- 서열 VWSGGTT(서열 식별 번호: 6) 또는 서열 IWSGGTT(서열 식별 번호: 10)를 갖는 중쇄 CDR2 서열; 및/또는
- 서열 ARNFGNYAMDY(서열 식별 번호: 7) 또는 서열 ARNFGNYAMDF(서열 식별 번호: 11)를 갖는 중쇄 CDR3 서열; 및/또는
- 상기의 임의의 조합.
특정 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 하기를 포함한다:
- 서열 SSVTY(서열 식별 번호: 1)를 갖는 경쇄 CDR1 서열,
- 서열 ATS(서열 식별 번호: 2)를 갖는 경쇄 CDR2 서열,
- 서열 QHRSSSNPLT(서열 식별 번호: 3)를 갖는 경쇄 CDR3 서열,
- 서열 GFSLTNYG(서열 식별 번호: 5)를 갖는 중쇄 CDR1 서열,
- 서열 VWSGGTT(서열 식별 번호: 6)를 갖는 중쇄 CDR2 서열, 및
- 서열 ARNFGNYAMDY(서열 식별 번호: 7)를 갖는 중쇄 CDR3 서열.
특정 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 하기를 포함한다:
- 서열 SSVTY(서열 식별 번호: 1)를 갖는 경쇄 CDR1 서열,
- 서열 ATS(서열 식별 번호: 2)를 갖는 경쇄 CDR2 서열,
- 서열 QHRSSSNPLT(서열 식별 번호: 3)를 갖는 경쇄 CDR3 서열,
- 서열 GFSLTNYG(서열 식별 번호: 5)를 갖는 중쇄 CDR1 서열,
- 서열 IWSGGTT(서열 식별 번호: 10)를 갖는 중쇄 CDR2 서열, 및
- 서열 ARNFGNYAMDF(서열 식별 번호: 11)를 갖는 중쇄 CDR3 서열.
특정 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 하기를 포함한다:
- 서열 TSVTY(서열 식별 번호: 13)를 갖는 경쇄 CDR1 서열,
- 서열 ASS(서열 식별 번호: 14)를 갖는 경쇄 CDR2 서열,
- 서열 QHRSSSNPLT(서열 식별 번호: 3)를 갖는 경쇄 CDR3 서열,
- 서열 GFSLTNYG(서열 식별 번호: 5)를 갖는 중쇄 CDR1 서열,
- 서열 VWSGGTT(서열 식별 번호: 6)를 갖는 중쇄 CDR2 서열, 및
- 서열 ARNFGNYAMDY(서열 식별 번호: 7)를 갖는 중쇄 CDR3 서열.
특정 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 하기를 포함한다:
- 서열 TSVTY(서열 식별 번호: 13)를 갖는 경쇄 CDR1 서열,
- 서열 ASS(서열 식별 번호: 14)를 갖는 경쇄 CDR2 서열,
- 서열 QHRSSSNPLT(서열 식별 번호: 3)를 갖는 경쇄 CDR3 서열,
- 서열 GFSLTNYG(서열 식별 번호: 5)를 갖는 중쇄 CDR1 서열,
- 서열 IWSGGTT(서열 식별 번호: 10)를 갖는 중쇄 CDR2 서열, 및
- 서열 ARNFGNYAMDF(서열 식별 번호: 11)를 갖는 중쇄 CDR3 서열.
일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 대체 보체 활성화의 억제, 예를 들어 용혈능의 억제, 보체 성분 3(C3)의 침착 억제 및/또는 C3b, iC3b 및/또는 C3d에 대한 FH의 결합 증가와 같이 FH 활성도를 증강시킨다. 일부 실시형태에서, 본 단편은 적어도 중쇄 가변 도메인(VH) 및/또는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 단편은 적어도 Fab 단편을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 1.25 x 10-8 M 이하의 KD로 FH에 대한 결합 친화성 및/또는 0.04 x 10-9 M 이하의 KD로 CCP18 내지 CCP20으로 구성된 FH 단편에 대한 결합 친화성을 갖는 항체 또는 단편과 같이, 2.5 x 10-8 M 이하의 KD로 FH에 대한 결합 친화성 및/또는 0.1 x 10-9 M 이하의 KD로 CCP18 내지 CCP20으로 구성된 FH 단편에 대한 결합 친화성을 갖는다.
추가의 실시형태에서, 본 개시내용은 서열 SSVTY(서열 식별 번호: 1)를 갖는 경쇄 CDR1 서열, 서열 ATS(서열 식별 번호: 2)를 갖는 경쇄 CDR2 서열, 및 서열 QHRSSSNPLT(서열 식별 번호: 3)를 갖는 경쇄 CDR3 서열, 서열 GFSLTNYG(서열 식별 번호: 5)를 갖는 중쇄 CDR1 서열, 서열 VWSGGTT(서열 식별 번호: 6)를 갖는 중쇄 CDR2 및 서열 ARNFGNYAMDY(서열 식별 번호: 7)를 갖는 중쇄 CDR3 서열을 포함하는, FH의 CCP18에 특이적으로 결합하는 분리된, 합성된 또는 재조합된 항체, 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다. 일 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 서열 식별 번호: 4의 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 항체는 서열 식별 번호: 8의 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 서열 식별 번호: 4의 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열, 및 서열 식별 번호: 8의 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 대체 보체 활성화의 억제, 예를 들어, 용혈능의 억제, 보체 성분 3(C3)의 침착 억제 및/또는 C3b, iC3b 및/또는 C3d에 대한 FH의 결합 증가와 같이 FH 활성도를 증강시킨다. 일부 실시형태에서, 본 단편은 적어도 중쇄 가변 도메인(VH) 및/또는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 단편은 적어도 Fab 단편을 포함한다.
추가의 실시형태에서, 본 개시내용은 서열 SSVTY(서열 식별 번호: 1)를 갖는 경쇄 CDR1 서열, 서열 ATS(서열 식별 번호: 2)를 갖는 경쇄 CDR2 서열, 및 서열 QHRSSSNPLT(서열 식별 번호: 3)를 갖는 경쇄 CDR3 서열, 서열 GFSLTNYG(서열 식별 번호: 5)를 갖는 중쇄 CDR1 서열, 서열 IWSGGTT(서열 식별 번호: 10)를 갖는 중쇄 CDR2 및 서열 ARNFGNYAMDF(서열 식별 번호: 11)를 갖는 중쇄 CDR3 서열을 포함하는, FH의 CCP18에 특이적으로 결합하는 분리된, 합성된 또는 재조합된 항체, 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다. 일 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 서열 식별 번호: 4의 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 항체는 서열 식별 번호: 12의 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 서열 식별 번호: 4의 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열, 및 서열 식별 번호: 12의 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 대체 보체 활성화의 억제, 예를 들어, 용혈능의 억제, 보체 성분 3(C3)의 침착 억제 및/또는 C3b, iC3b 및/또는 C3d에 대한 FH의 결합 증가와 같이 FH 활성도를 증강시킨다. 일부 실시형태에서, 본 단편은 적어도 중쇄 가변 도메인(VH) 및/또는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 단편은 적어도 Fab 단편을 포함한다.
추가의 실시형태에서, 본 개시내용은 서열 TSVTY(서열 식별 번호: 13)를 갖는 경쇄 CDR1 서열, 서열 ASS(서열 식별 번호: 14)를 갖는 경쇄 CDR2 서열, 및 서열 QHRSSSNPLT(서열 식별 번호: 3)를 갖는 경쇄 CDR3 서열, 서열 GFSLTNYG(서열 식별 번호: 5)를 갖는 중쇄 CDR1 서열, 서열 VWSGGTT(서열 식별 번호: 6)를 갖는 중쇄 CDR2 및 서열 ARNFGNYAMDY(서열 식별 번호: 7)를 갖는 중쇄 CDR3 서열을 포함하는, FH의 CCP18에 특이적으로 결합하는 분리된, 합성된 또는 재조합된 항체, 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다. 일 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 서열 식별 번호: 16의 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 항체는 서열 식별 번호: 8의 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 서열 식별 번호: 16의 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열, 및 서열 식별 번호: 8의 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 대체 보체 활성화의 억제, 예를 들어, 용혈능의 억제, 보체 성분 3(C3)의 침착 억제 및/또는 C3b, iC3b 및/또는 C3d에 대한 FH의 결합 증가와 같이 FH 활성도를 증강시킨다. 일부 실시형태에서, 본 단편은 적어도 중쇄 가변 도메인(VH) 및/또는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 단편은 적어도 Fab 단편을 포함한다.
추가의 실시형태에서, 본 개시내용은 서열 TSVTY(서열 식별 번호: 13)를 갖는 경쇄 CDR1 서열, 서열 ASS(서열 식별 번호: 14)를 갖는 경쇄 CDR2 서열, 및 서열 QHRSSSNPLT(서열 식별 번호: 3)를 갖는 경쇄 CDR3 서열, 서열 GFSLTNYG(서열 식별 번호: 5)를 갖는 중쇄 CDR1 서열, 서열 IWSGGTT(서열 식별 번호: 10)를 갖는 중쇄 CDR2 및 서열 ARNFGNYAMDF(서열 식별 번호: 11)를 갖는 중쇄 CDR3 서열을 포함하는, FH의 CCP18에 특이적으로 결합하는 분리된, 합성된 또는 재조합된 항체, 또는 이의 항원 결합 단편을 제공한다. 일 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 서열 식별 번호: 16의 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 항체는 서열 식별 번호: 12의 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 서열 식별 번호: 16의 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열, 및 서열 식별 번호: 12의 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 대체 보체 활성화의 억제, 예를 들어, 용혈능의 억제, 보체 성분 3(C3)의 침착 억제 및/또는 C3b, iC3b 및/또는 C3d에 대한 FH의 결합 증가와 같이 FH 활성도를 증강시킨다. 일부 실시형태에서, 본 단편은 적어도 중쇄 가변 도메인(VH) 및/또는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 단편은 적어도 Fab 단편을 포함한다.
일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 단편은 2.5 x 10-8 M 이하의 KD로 FH에 대한 결합 친화성 및/또는 0.1 x 10-9 M 이하의 KD로 CCP18 내지 CCP20으로 구성된 FH 단편에 대한 결합 친화성을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 22.5 nM 이하, 20 nM 이하, 17.5 nM 이하, 15 nM 이하, 12.5 nM 이하, 10 nM 이하, 9 nM 이하, 8 nM 이하, 7 nM 이하, 6 nM 이하, 5 nM 이하, 4 nM 이하, 3 nM 이하, 2 nM 이하, 1 nM 이하, 0.9 nM 이하, 0.8 nM 이하, 0.7 nM 이하 또는 0.6 nM 이하의 KD로 FH에 대한 결합 친화성 및/또는 0.09 x 10-9 M 이하, 0.08 x 10-9 M 이하, 0.07 x 10-9 M 이하, 0.06 x 10-9 M 이하, 0.05 x 10-9 M 이하, 0.04 x 10-9 M 이하, 0.03 x 10-9 M 이하, 0.02 x 10-9 M 이하, 1 x 10-11 M 이하, 0.9 x 10-11 M 이하, 0.8 x 10-11 M 이하, 0.7 x 10-11 M 이하 또는 0.6 x 10-11 M 이하의 KD로 CCP18 내지 CCP20으로 구성된 FH 단편에 대한 결합 친화성을 갖는다.
일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 단편은 10%(v/v)의 정상적인 인간 혈청의 존재 하에 38 nM 이하의 IC50 값으로 생체 외에서 LPS 상의 C3 침착을 억제한다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 10%(v/v)의 정상적인 인간 혈청의 존재 하에 35 nM 이하, 32 nM 이하, 30 nM 이하, 28 nM 이하, 25 nM 이하, 23 nM 이하, 20 nM 이하, 18 nM 이하, 15 nM 이하 또는 10 nM 이하의 IC50 값으로 생체 외에서 LPS 상의 C3 침착을 억제한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체 또는 이의 단편은 10%(v/v)의 정상적인 인간 혈청의 존재 하에 15 nM 내지 30 nM의 IC50 값으로 생체 외에서 LPS 상의 C3 침착을 억제한다.
일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 단편은 10%(v/v)의 정상적인 인간 혈청의 존재 하에 150 nM 이하의 IC50 값으로 생체 외에서 용혈능을 억제한다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 10%(v/v)의 정상적인 인간 혈청의 존재 하에 105 nM 이하의 IC50 값으로 생체 외에서 용혈능을 억제한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체 또는 이의 단편은 10%(v/v)의 정상적인 인간 혈청의 존재 하에 150 nM 이하, 130 nM 이하, 115 nM 이하, 105 nM 이하, 100 nM 이하, 95 nM 이하, 75 nM 이하, 70 nM 이하, 65 nM 이하 또는 60 nM 이하의 IC50 값으로 생체 외에서 용혈능을 억제한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항체 또는 이의 단편은 10%(v/v)의 정상적인 인간 혈청의 존재 하에 60 nM 내지 80 nM의 IC50 값으로 생체 외에서 용혈능을 억제한다.
일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 단편은 생체 외에서 C3b에 대한 FH의 결합 친화성(KD)을 2 μM 이하, 1.5 μM 이하, 1 μM 이하, 500 nM 이하, 400 nM 이하 또는 300 nM 이하로 증가시키고/시키거나 생체 외에서 C3b에 대한 FH의 결합 친화성을 적어도 2.5배, 3배, 3.5배, 4배, 4.5배 또는 5배 증가시킨다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 단편은 생체 외에서 C3b에 대한 FH의 결합 친화성(KD)을 50 내지 500 nM로 증가시킨다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 단편은 생체 외에서 C3b에 대한 FH의 결합 친화성(KD)을 50 내지 300 nM로 증가시킨다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 단편은 생체 외에서 C3b에 대한 FH의 결합 친화성(KD)을 100 내지 300 nM로 증가시킨다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 단편은 생체 외에서 C3b에 대한 FH의 결합 친화성(KD)을 250 내지 300 nM로 증가시킨다.
선택적으로, 본원에 개시된 임의의 하나 이상의 CDR 중 적어도 하나의 서열은 예를 들어 (추가로) 결합 친화성, 선택성, FH 증강 능력 및/또는 생체 내 또는 저장 안정성을 개선하기 위해 최적화됨으로써, 변이 항체 또는 단편을 생성한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체 또는 단편은 높은 저장 안정성, 특히 항체 FH.07 또는 항체 FHR-1.3B4와 비교하여 개선된 저장 안정성을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체 또는 단편은 높은 생체 내 안정성, 특히 항체 FH.07 또는 항체 FHR-1.3B4와 비교하여 개선된 생체 내 안정성을 갖는다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체 또는 단편은 높은 선택성, 특히 항체 FH.07 또는 항체 FHR-1.3B4와 비교하여 증가된 선택성을 갖는다.
또한, 본 개시내용의 항체 또는 단편의 적어도 하나의 골격 영역(framework region)에서 선택적으로 적어도 하나의 서열은 최적화되어 예를 들어 항체 또는 단편의 결합 효능 또는 안정성을 개선하거나 이의 인간에의 투여 후에 비-인간 서열의 부작용을 감소시킨다. 이는 예를 들어 돌연변이 유발 절차에 의해 수행된다. 당업자는 적어도 하나의 변형된 CDR 또는 골격 서열을 포함하는 항체 변이체를 생성할 수 있다. CDR 및/또는 골격 서열은 예를 들어 이러한 골격 서열을 암호화하는 핵산을 돌연변이화함으로써 최적화된다. 예를 들어, 보존적 아미노산 치환이 적용된다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 CDR, 골격, 가변 중쇄, 가변 경쇄 서열은 본원에 개시된 임의의 하나 이상의 아미노산 서열과 비교하여 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19개 또는 20개의 아미노산 치환, 결실 또는 삽입(예를 들어, 보존적 치환)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 CDR, 골격, 가변 중쇄, 가변 경쇄 서열은 본원에 개시된 임의의 하나 이상의 아미노산 서열과 비교하여 적어도 1, 2, 3, 4개 또는 5개의 아미노산 치환, 결실 또는 삽입(예를 들어, 보존적 치환)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 CDR, 골격, 가변 중쇄, 가변 경쇄 서열은 본원에 개시된 임의의 하나 이상의 아미노산 서열과 비교하여 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19개 또는 20개 이하의 아미노산 치환, 결실 또는 삽입(예를 들어, 보존적 치환)을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 CDR, 골격, 가변 중쇄, 가변 경쇄 서열은 본원에 개시된 임의의 하나 이상의 아미노산 서열과 비교하여 1, 2, 3, 4개 또는 5개 이하의 아미노산 치환, 결실 또는 삽입(예를 들어, 보존적 치환)을 포함한다. 보전적 아미노산 치환의 예는 이소류신, 발린, 류신 또는 메티오닌과 같은 하나의 소수성 잔기의 또 다른 소수성 잔기에 대한 치환 및 하나의 극성 잔기의 또 다른 극성 잔기에 대한 치환, 예를 들어 아르기닌의 리신에 대한 치환, 글루탐산의 아스파르트산에 대한 치환 또는 글루타민의 아스파라긴에 대한 치환을 포함한다.
개선된 항체 또는 단편을 선택하기 위해, 수득하는 변이 항체 또는 단편의 결합 친화성, FH 증강 능력 및/또는 안정성은 예를 들어 본원에 기재된 시험을 사용하여 시험될 수 있다. 일단 FH, 특히 FH의 CCP18에 특이적인 항체 또는 단편이 수득되었다면, 이의 소기의 생물학적 활성도, 즉, FH의 활성도를 증강시키는 그들의 능력은 당업자에게 알려진 다수의 방법에 의해 시험될 수 있다. 이전에 본원에서 기재된 바, FH 활성도를 증강시키는 것은 용혈능의 억제, 세포 상의 C3의 침착 억제 및/또는 C3b에 대한 FH의 결합 증가를 포함할 수 있다. 이들 활성도를 시험하기 위한 기능 검정은 이전에 본원에서 기재되고, 실시예에서 상세하게 기재된다. 전형적으로, CDR을 구성하는 아미노산 수에 따라, 동일한 특이성을 유지하면서 CDR 서열 중 최대 세 개의 아미노산 잔기가 상이할 수 있다. 따라서, 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체 또는 단편은 표 1의 중쇄 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열과 비교하여 각각의 CDR 중 3개 이하, 2개 이하 또는 1개 이하의 아미노산이 상이한 중쇄 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 서열을 보유한다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 표 1에 기재된 바와 동일한 항체의 경쇄 CDR3 및 중쇄 CDR3, 1개 이하의 아미노산이 상이한 항체의 경쇄 CDR2, 및 3개 이하의 아미노산이 상이한 경쇄 CDR1, 중쇄 CDR1 및 중쇄 CDR2를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 표 1에 기재된 바와 동일한 항체의 경쇄 CDR2와 CDR3 및 중쇄 CDR3, 및 2개 이하의 아미노산 또는 1개 이하의 아미노산이 상이한 경쇄 CDR1, 중쇄 CDR1 및 중쇄 CDR2를 포함한다.
따라서, 본 개시내용은 하기를 포함하는 인자 H(FH)의 보체 조절 단백질 도메인 18(CCP18)에 특이적으로 결합하는, 분리된, 합성된 또는 재조합된 항체, 또는 이의 단편을 추가로 제공한다:
- 서열 SSVTY(서열 식별 번호: 1)와 적어도 60% 또는 적어도 80% 동일한 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 ATS(서열 식별 번호: 2)와 적어도 60% 동일한 서열을 갖는 경쇄 CDR2 서열, 및 서열 QHRSSSNPLT(서열 식별 번호: 3)와 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80% 또는 적어도 90% 동일한 서열을 갖는 경쇄 CDR3, 서열 GFSLTNYG(서열 식별 번호: 5)와 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80% 또는 적어도 90% 동일한 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 VWSGGTT(서열 식별 번호: 6)와 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80% 또는 적어도 90% 동일한 서열을 갖는 중쇄 CDR2 및 서열 ARNFGNYAMDY(서열 식별 번호: 7)와 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80% 또는 적어도 90% 동일한 서열을 갖는 중쇄 CDR3 서열,
- 서열 SSVTY(서열 식별 번호: 1)와 적어도 60% 또는 적어도 80% 동일한 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 ATS(서열 식별 번호: 2)와 적어도 60% 동일한 서열을 갖는 경쇄 CDR2 서열, 및 서열 QHRSSSNPLT(서열 식별 번호: 3)와 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80% 또는 적어도 90% 동일한 서열을 갖는 경쇄 CDR3, 서열 GFSLTNYG(서열 식별 번호: 5)와 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80% 또는 적어도 90% 동일한 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 IWSGGTT(서열 식별 번호: 10)와 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80% 또는 적어도 90% 동일한 서열을 갖는 중쇄 CDR2 및 서열 ARNFGNYAMDF(서열 식별 번호: 11)와 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80% 또는 적어도 90% 동일한 서열을 갖는 중쇄 CDR3 서열,
- 서열 TSVTY(서열 식별 번호: 13)와 적어도 60% 또는 적어도 80% 동일한 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 ASS(서열 식별 번호: 14)와 적어도 60% 동일한 서열을 갖는 경쇄 CDR2 서열, 및 서열 QHRSSSNPLT(서열 식별 번호: 3)와 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80% 또는 적어도 90% 동일한 서열을 갖는 경쇄 CDR3, 서열 GFSLTNYG(서열 식별 번호: 5)와 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80% 또는 적어도 90% 동일한 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 VWSGGTT(서열 식별 번호: 6)와 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80% 또는 적어도 90% 동일한 서열을 갖는 중쇄 CDR2 및 서열 ARNFGNYAMDY(서열 식별 번호: 7)와 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80% 또는 적어도 90% 동일한 서열을 갖는 중쇄 CDR3 서열,
- 서열 TSVTY(서열 식별 번호: 13)와 적어도 60% 또는 적어도 80% 동일한 서열을 갖는 경쇄 CDR1, 서열 ASS(서열 식별 번호: 14)와 적어도 60% 동일한 서열을 갖는 경쇄 CDR2 서열, 및 서열 QHRSSSNPLT(서열 식별 번호: 3)와 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80% 또는 적어도 90% 동일한 서열을 갖는 경쇄 CDR3, 서열 GFSLTNYG(서열 식별 번호: 5)와 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80% 또는 적어도 90% 동일한 서열을 갖는 중쇄 CDR1, 서열 IWSGGTT(서열 식별 번호: 10)와 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80% 또는 적어도 90% 동일한 서열을 갖는 중쇄 CDR2 및 서열 ARNFGNYAMDF(서열 식별 번호: 11)와 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80% 또는 적어도 90% 동일한 서열을 갖는 중쇄 CDR3 서열.
일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 FH 활성도를 증강시킨다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 명시된 서열과 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 중쇄 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열, 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3 서열을 포함한다.
본 개시내용은 하기를 포함하는 인자 H(FH)의 보체 조절 단백질 도메인 18(CCP18)에 특이적으로 결합하는, 분리된, 합성된 또는 재조합된 항체, 또는 이의 단편을 추가로 제공한다:
- 선택적으로 1개의 아미노산 치환을 갖는 서열 SSVTY(서열 식별 번호: 1)를 갖는 경쇄 CDR1 서열, 서열 ATS(서열 식별 번호: 2)를 갖는 경쇄 CDR2 서열, 및 선택적으로 1개 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 서열 QHRSSSNPLT(서열 식별 번호: 3)를 갖는 경쇄 CDR3, 선택적으로 1개 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 서열 GFSLTNYG(서열 식별 번호: 5)를 갖는 중쇄 CDR1, 선택적으로 1개 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 서열 VWSGGTT(서열 식별 번호: 6)를 갖는 중쇄 CDR2 및 선택적으로 1개 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR3 서열 ARNFGNYAMDY(서열 식별 번호: 7);
- 선택적으로 1개의 아미노산 치환을 갖는 서열 SSVTY(서열 식별 번호: 1)를 갖는 경쇄 CDR1 서열, 서열 ATS(서열 식별 번호: 2)를 갖는 경쇄 CDR2 서열, 및 선택적으로 1개 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 서열 QHRSSSNPLT(서열 식별 번호: 3)를 갖는 경쇄 CDR3, 선택적으로 1개 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 서열 GFSLTNYG(서열 식별 번호: 5)를 갖는 중쇄 CDR1, 선택적으로 1개 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 서열 IWSGGTT(서열 식별 번호: 10)를 갖는 중쇄 CDR2 및 선택적으로 1개 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR3 서열 ARNFGNYAMDF(서열 식별 번호: 11);
- 선택적으로 1개 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 서열 TSVTY(서열 식별 번호: 13)를 갖는 경쇄 CDR1 서열, 경쇄 서열 CDR2 서열 ASS(서열 식별 번호: 14) 및 선택적으로 1개 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 서열 QHRSSSNPLT(서열 식별 번호: 3)를 갖는 경쇄 CDR3, 선택적으로 1개 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 서열 GFSLTNYG(서열 식별 번호: 5)를 중쇄 CDR1, 선택적으로 1개 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 서열 VWSGGTT(서열 식별 번호: 6)를 갖는 중쇄 CDR2 및 선택적으로 1개 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 중쇄 CDR3 ARNFGNYAMDY(서열 식별 번호: 7); 또는
- 선택적으로 1개의 아미노산 치환을 갖는 서열 TSVTY(서열 식별 번호: 13)를 갖는 경쇄 CDR1 서열, 서열 ASS(서열 식별 번호: 14)를 갖는 경쇄 CDR2 서열, 및 선택적으로 1개 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 서열 QHRSSSNPLT(서열 식별 번호: 3)를 갖는 경쇄 CDR3, 선택적으로 1개 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 서열 GFSLTNYG(서열 식별 번호: 5)를 갖는 중쇄 CDR1, 선택적으로 1개 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 서열 IWSGGTT(서열 식별 번호: 10)를 갖는 중쇄 CDR2 및 선택적으로 1개 또는 2개의 아미노산 치환을 갖는 서열 ARNFGNYAMDF(서열 식별 번호: 11)를 갖는 중쇄 CDR3 서열.
일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 항원 결합 단편은 본원에 개시된 임의의 중쇄 또는 경쇄 서열로부터의 적어도 하나 이상의 CDR(들)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 항원 결합 단편은 서열 식별 번호: 4, 8, 12 또는 16의 임의의 가변 중쇄 또는 가변 경쇄 서열로부터의 적어도 하나 이상의 CDR(들)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 항원 결합 단편은 본원에 개시된 임의의 중쇄 또는 경쇄 서열로부터의 적어도 하나 이상의 CDR를 포함하고, CDR은 Kabat 시스템을 사용하여 결정된다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 항원 결합 단편은 본원에 개시된 임의의 중쇄 또는 경쇄 서열로부터의 적어도 하나 이상의 CDR를 포함하고, CDR은 Chothia 시스템을 사용하여 결정된다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 항원 결합 단편은 본원에 개시된 임의의 중쇄 또는 경쇄 서열로부터의 적어도 하나 이상의 CDR를 포함하고, CDR은 MacCallum 시스템을 사용하여 결정된다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 항원 결합 단편은 본원에 개시된 임의의 중쇄 또는 경쇄 서열로부터의 적어도 하나 이상의 CDR를 포함하고, CDR은 AbM 시스템을 사용하여 결정된다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 항원 결합 단편은 본원에 개시된 임의의 중쇄 또는 경쇄 서열로부터의 적어도 하나 이상의 CDR를 포함하고, CDR은 IMGT 시스템을 사용하여 결정된다.
"Kabat에 따른 번호 부여", "Kabat 번호 부여", "Kabat 정의" 및 "Kabat 라벨링"으로도 지칭되는, Kabat에 의해 기술된 시스템은 항체의 임의의 가변 도메인에 적용할 수 있는 분명한 잔기 번호 부여 시스템을 제공하고, 각각의 사슬의 세 개의 CDR을 정의하는 정확한 잔기 경계를 제공한다(Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987) 및 (1991), 이의 전체 내용은 본원에 인용되어 포함됨). 이들 CDR은 Kabat CDR로 지칭되고, 경쇄 가변 도메인 내에 대략 잔기 24 내지 34(CDR1), 50 내지 56(CDR2) 및 89 내지 97(CDR3) 및 중쇄 가변 도메인 내에 31 내지 35(CDR1), 50 내지 65(CDR2) 및 95 내지 102(CDR3)를 포함한다. CDR이 Kabat에 따라 정의될 때, 경쇄 FR 잔기는 대략 잔기 1 내지 23(LCFR1), 35 내지 49(LCFR2), 57 내지 88(LCFR3) 및 98 내지 107(LCFR4)에 배치되고, 중쇄 FR 잔기는 중쇄 잔기 내에 대략 잔기 1 내지 30(HCFR1), 36 내지 49(HCFR2), 66 내지 94(HCFR3) 및 103 내지 113(HCFR4)에 배치된다. "Kabat 경우와 같은 EU 지표"는 인간 IgG1 EU 항체의 잔기 번호 부여를 지칭한다.
다른 CDR 번호 부여 시스템이 또한 당업계에서 사용된다. Chothia 및 동료는 Kabat CDR 내의 특정 하위 부분이 아미노산 서열 수준에서는 높은 다양성을 갖지만, 거의 동일한 펩타이드 골격 형태를 채택한 것을 발견하였다(Chothia et al. (1987) J. Mol. Biol. 196: 901-917; 및 Chothia et al. (1989) Nature 342: 877-883). 이들 하위 부분은 L1, L2 및 L3 또는 H1, H2 및 H3으로 지명되고, 여기서 “L” 및 “H”는 각각 경쇄 영역 및 중쇄 영역을 나타낸다. 이들 CDR은 "Chothia CDR", "Chothia 번호 부여" 또는 "Chothia에 따른 번호 부여"로 지칭될 수 있고, 경쇄 가변 도메인 내에 대략 잔기 24 내지 34(CDR1), 50 내지 56(CDR2) 및 89 내지 97(CDR3), 및 중쇄 가변 도메인 내에 26 내지 32(CDR1), 52 내지 56(CDR2) 및 95 내지 102(CDR3)를 포함한다(Mol. Biol. 196:901-917 (1987)).
"MacCallum에 따른 번호 부여" 또는 "MacCallum 번호 부여"로도 지칭되는 MacCallum에 의해 기술된 시스템은 경쇄 가변 도메인 내에 대략 잔기 30 내지 36(CDR1), 46 내지 55(CDR2) 및 89 내지 96(CDR3), 및 중쇄 가변 도메인 내에 30 내지 35(CDR1), 47 내지 58(CDR2) 및 93 내지 101(CDR3)을 포함한다(MacCallum et al. ((1996) J. Mol. Biol. 262(5):732-745)).
"AbM에 따른 번호 부여" 또는 "AbM 번호 부여"로도 지칭되는 AbM에 의해 기술된 시스템은 경쇄 가변 도메인 내에 대략 잔기 24 내지 34(CDR1), 50 내지 56(CDR2) 및 89 내지 97(CDR3), 및 중쇄 가변 도메인 내에 26 내지 35(CDR1), 50 내지 58(CDR2) 및 95 내지 102 (CDR3)를 포함한다.
가변 영역의 IMGT(국제 면역유전학 정보 시스템) 번호 부여가 또한 사용될 수 있고, 이는 본원에 그 전체 내용이 분명하게 인용되어 포함되는, Lefranc, M.-P., "The IMGT unique numbering for immunoglobulins, T cell Receptors and Ig-like domains", The Immunologist, 7, 132-136 (1999)에서 기술된 바와 같은 IMGT 방법에 따른 면역글로불린 가변 중쇄 또는 경쇄 내의 잔기 번호 부여이다. 본원에 사용된 바, "IMGT 서열 번호 부여" 또는 "IMGT에 따른 번호 부여"는 IMTG에 따른 가변 영역을 암호화하는 서열의 번호 부여를 지칭한다. 중쇄 가변 도메인의 경우, IMGT에 따라 번호를 부여할 때, 초가변 영역은 CDR1의 경우 아미노산 위치 27 내지 38, CDR2의 경우 아미노산 위치 56 내지 65 및 CDR3의 경우 아미노산 서열 105 내지 117 범위이다. 경쇄 가변 도메인의 경우, IMGT에 따라 번호를 부여할 때, 초가변 영역은 CDR1의 경우 아미노산 위치 27 내지 38, CDR2의 경우 아미노산 위치 56 내지 65 및 CDR3의 경우 아미노산 위치 105 내지 117 범위이다. 본원에 기재된 구조물 및 항원-결합 암(antigen-binding arm)의 일부 실시형태에서, 본원에 기재된 CDR은 Chothia 번호 부여에 따라 번호를 부여할 때 경쇄 가변 도메인 내에 대략 잔기 24 내지 34(CDR1), 49 내지 56(CDR2) 및 89 내지 97(CDR3), 및 중쇄 가변 도메인 내에서 27 내지 35(CDR1), 49 내지 60(CDR2) 및 93 내지 102(CDR3)를 포함한다. 일부 실시형태에서, 경쇄 가변 도메인 내에 CDR2는 Chothia 번호 부여에 따라 번호를 부여할 때 아미노산 49 내지 56을 포함할 수 있다.
본 개시내용에 따른 항체 또는 이의 단편은 일부 실시형태에서 단클론성 항체 또는 단편이다. 단클론성 항체는 실질적으로 단일 분자 종으로 구성된 항체이다. 단클론성 항체는 예를 들어 제조 동안 자발적으로 발생하였던 하나 이상의 돌연변이를 갖는 가능한 변이 항체 또는 단편을 제외하고, 동일한 서열을 갖고 동일한 에피토프에 결합하는 균질한 항체군으로부터 수득된다. 단클론성 항체는 유리하게는 재조합으로 제조될 수 있어서 항혈청 내에 존재하는 다클론성 항체의 것보다 현저하게 더 많은 항체의 양이 수득될 수 있도록 한다. 그러나, 다클론성 항체 및 단편이 또한 본 개시내용으로 포함된다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체 또는 단편은 키메라 또는 인간화 항체이다. 따라서, 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 적어도 인간 경쇄 및 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 또한 중쇄 및 경쇄 가변 영역 내에 인간 골격 영역을 포함한다. 일부 실시형태에서, 전부 인간 서열로 구성된 인간 항체 또는 단편이 제공된다. 일부 실시형태에서, 비-인간 항체 또는 단편의 인간 질병의 치료를 위한 사용은 다수의 요인에 의해 제한되기 때문에 키메라, 인간화 또는 인간 항체의 사용이 비-인간 항체의 사용보다 바람직하다. 인간 신체는 비-인간 항체를 이물질로서 인식할 수 있고, 이는 유해한 부작용 및/또는 순환으로부터의 이 항체 또는 단편의 신속한 제거를 초래하는, 비-인간 항체 또는 단편에 대항하는 면역 반응을 일으킬 것이다. 부작용의 가능성은 키메라, 인간화 또는 인간 항체가 인간에게 투여될 때 감소한다. 또한, 비-인간 항체와 비교할 때 감소된 제거로 인해 키메라, 인간화 또는 인간 항체가 사용될 때 일반적으로 순환에서 보다 긴 반감기가 획득된다. 일부 실시형태에서, 인간 생식세포계열 서열이 본 개시내용에 따른 항체 또는 단편 내 골격 영역을 위해 사용된다. 인간 생식세포계열 서열의 사용은 항체 또는 단편의 면역원성 위험을 최소화하는데, 이들 서열은 골격 영역이 유래된 개체에게 고유하고 또 다른 인간 개체에 적용될 때 면역원성 반응을 유발할 수 있는 체세포 변형을 보유할 가능성이 더 적기 때문이다.
항체의 인간화 또는 키메라 항체를 제공하기 위한 절차는 당업계에 잘 알려져 있다. 모체 비-인간 항체의 특이성 및 친화성은 유지하면서 인간 항체 내의 동일하거나 유사한 위치에서 또한 나타나는 항체 내 아미노산 잔기의 보유를 증가시키는 것을 목표로 하는 다양한 재조합 DNA 기반 접근법이 확립되었다. 예를 들어, 마우스 항체의 가변 영역의 골격 영역은 가장 높은 수준의 상동성을 갖는 대응 인간 골격 영역으로 대체되고, 비-인간 CDR은 그대로 남긴다. 본 개시내용에 따른 항체를 인간화하는 데 적합한 추가 방법은 CDR 이식(grafting)(Queen, C et. al. 1989; Carter, P et al. 1992); 재생(resurfacing)(Padlan, EA, et. al. 1991), 초인간화(Tan, PDA, et.al. 2002), 인간 스트링 보유 최적화(human string content optimization)(Lazar, G.A. et. al. 2007) 및 휴먼니어링(humaneering)(Almagro, JC, et. al. 2008)을 포함하지만, 이로 제한되지는 않는다.
일 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체 또는 단편은 이중특이적 항체와 같은 다중특이적 항체이다. 다중특이적 항체는 적어도 두 개의 상이한 항원 및/또는 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 단클론성 항체이다. 일 실시형태에서, 이중특이적 항체는 예를 들어 본원에 기재된 바와 같이 FH의 CCP18에 특이적으로 결합하는 하나의 가변 경쇄 및 하나의 가변 중쇄를 포함하여 FH에 대한 결합 특이성을 갖고, 또 다른 항체에 대한 결합 특이성을 갖는다. 다른 실시형태에서, 이중특이적 항체는 FH의 두 개의 상이한 에피토프에 결합할 수 있다.
본 개시내용에 따른 항체 또는 단편은 임의의 클래스(class)일 수 있다. 항체의 “클래스”는 이의 중쇄에 의해 보유된 불변 도메인 또는 불변 영역의 유형을 지칭한다. 항체는 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM의 5개의 주요 클래스가 존재하고, 이 중 일부는 추가로 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4와 같은 하위 클래스 또는 이소유형으로 분류될 수 있다. 특정 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체는 IgG(예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4)의 불변 영역(예를 들어, Fc 도메인)을 포함한다. 특정 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체는 인간 IgG(예를 들어, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4)의 불변 영역을 포함한다. Fc 도메인은 항체 의존적 세포독성(ADCC) 및 보체 의존적 세포독성(CDC)을 유도하는 능력을 포함하는 항체의 효과인자 기능(effector function)을 매개한다. 특정 실시형태에서, 본원에 개시된 항체는 Fc의 효과인자 기능을 감소시키는 하나 이상의 돌연변이를 갖는 Fc 도메인을 포함한다. 일부 실시형태에서, 본원에 개시된 항체는 234, 235, 236, 237, 270, 297, 318, 320, 322, 329 및 331로부터 선택된 하나 이상의 위치에서 돌연변이(예를 들어, 야생형 인간 IgG1에 대한 치환)를 포함하는 Fc 도메인을 포함한다. 이러한 돌연변이는 당업계에 알려지고, 비제한적으로 L234A, L235A, G237A, P329A 또는 P329G, A330S, P331S, N297Q, N297A 및 이의 조합을 포함한다. Fc 도메인은 또한 신생아 Fc 수용기 FcRn에 결합함으로써 항체의 재순환을 용이하게 하고, 따라서 항체의 반감기를 증가시킨다. 특정 실시형태에서, 본원에 개시된 항체는 FcRn에 대한 Fc의 결합 친화성을 증가시키는 하나 이상의 돌연변이를 갖는 Fc 도메인을 포함한다. 이러한 돌연변이는 당업계에 알려져 있고, 비제한적으로 M252Y/T256D, T256D/T307Q 및 T256D/T307W를 포함한다.
특정 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체 또는 단편은 천연 항체 또는 단편 내에 자연 발생적으로 존재하는 임의의 것 외에 번역 후 변형을 추가로 포함할 수 있다. 이러한 변형은 아세틸화, 카복실화, 글리코실화, 인산화, 지질화, 페길화(폴리에틸렌 글리콜) 및 아실화를 포함하지만, 이로 제한되지는 않는다. 결과적으로, 변형된 폴리펩타이드는 비-아미노산 성분, 예를 들어 폴리에틸렌 글리콜, 지질, 단당류 또는 다당류 및 인산염을 보유할 수 있다. 특정 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 페길화된다. 추가의 특정 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 페길화 Fab 분자이다.
본 개시내용에 따른 FH와 같은 특정 항원에 특이적인 항체는 당업계에 알려진 다양한 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 인간 FH는 항체를 유도하기 위한 면역원으로서 사용될 수 있다. 다른 예로서, FH 관련 단백질의 인간 FH의 CCP18 도메인이 면역원으로서 사용될 수 있다. 이러한 방법의 일 예는 실시예에서 기재된 바와 같은 면역화 및 혼성세포(hybridoma) 생성으로 인한 것이다. FH에 대한 마우스 단클론성 항체는 예를 들어 마우스, 예를 들어 BALB/c 마우스를 예를 들어 4주 간격으로 선택적으로 몬타나이드(montanide)와 같은 보조제의 존재 하에 FHR-1과 같은 FH 관련 단백질 또는 인간 인자 H로 복강내에서 면역화함으로써 생성될 수 있다. 네 번째 면역화 수일 후에 비장 세포는 예를 들어 골수종 세포주 SP2/0과 융합될 수 있다. 혼성세포의 상청액 내의 인자 H 특이적 항체의 존재는 ELISA에 의해 시험될 수 있다. 예를 들어, 미량정량판은 moAb(예를 들어, 래트(rat)의 항-마우스 카파 moAb RM19)로 코팅되어 마우스 IgG 항체를 포획한다. 항체의 특이성은 비오틴화 인자 H(biotinylated factor H)에 의해 결정될 수 있다. FH 특이적 항체를 제공하는 방법의 다른 예는 면역글로불린 사슬을 암호화하는 재조합 핵산 서열을 발현하는 파지 디스플레이 라이브러리(phage display library)를 스트리닝하는 것에 의한 것이다. 항체 파지 디스플레이를 위한 방법은 당업계에서 사용되었고, 광범위하게 기술되어 있다. 항체를 위한 라이브러리의 스크리닝은 예를 들어, 인간 FH, FH 관련 단백질 또는 인간 FH의 CCP18 도메인을 면역화하기 위해 사용되는 동일한 항원으로 수행될 수 있다.
C. 핵산 및 벡터
본 개시내용은 본원에 개시된 임의의 항체 또는 이의 단편을 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 하나 이상의 분리된, 합성된 또는 재조합된 핵산을 추가로 제공한다. 일부 실시형태에서, 핵산은 표 1에 기재된 바와 같은 항체 1의 적어도 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 암호화한다. 일부 실시형태에서, 핵산은 표 1에 기재된 바와 같은 항체 2의 적어도 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 암호화한다. 일부 실시형태에서, 핵산은 표 1에 기재된 바와 같은 항체 3의 적어도 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 암호화한다. 일부 실시형태에서, 핵산은 표 1에 기재된 바와 같은 항체 4의 적어도 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3 및/또는 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 암호화한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 핵산은 적어도 30개의 뉴클레오티드, 적어도 50개의 뉴클레오티드 또는 적어도 75개의 뉴클레오티드의 길이를 갖는다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 핵산은 항체 1의 중쇄 CDR 서열, 및 경쇄 CDR 서열, 및/또는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 단클론성 키메라 또는 인간화 항체, 또는 이의 단편을 암호화한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 핵산은 항체 2의 중쇄 CDR 서열, 및 경쇄 CDR 서열, 및/또는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 단클론성 키메라 또는 인간화 항체, 또는 이의 단편을 암호화한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 핵산은 항체 3의 중쇄 CDR 서열, 및 경쇄 CDR 서열, 및/또는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 단클론성 키메라 또는 인간화 항체, 또는 이의 단편을 암호화한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 핵산은 항체 4의 중쇄 CDR 서열, 및 경쇄 CDR 서열, 및/또는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 단클론성 키메라 또는 인간화 항체, 또는 이의 단편을 암호화한다.
항체 5 내지 7의 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 핵산 서열은 표 1에 기재되어 있다. 그러나, 표 1에 기재된 핵산 서열과 상이한 핵산을 포함하지만, 표 1에 기재된 중쇄, 경쇄 , 중쇄 CDR 또는 경쇄 CDR 서열의 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 코돈을 포함하는 본 개시내용에 따른 항체의 중쇄 또는 경쇄 CDR를 암호화하는 핵산이 또한 본 개시내용으로 포함된다.
따라서, 핵산 식별 번호: 1, 2, 3, 5, 6 및 7의 임의의 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 분리된, 합성된 또는 재조합된 핵산, 또는 이의 임의의 조합 또는 이의 단편이 제공된다. 핵산 식별 번호: 1, 2, 3, 5, 10 및 11의 임의의 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 분리된, 합성된 또는 재조합된 핵산, 또는 이의 임의의 조합 또는 이의 단편이 추가로 제공된다. 핵산 식별 번호: 3, 5, 6, 7, 13 및 14의 임의의 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 분리된, 합성된 또는 재조합된 핵산, 또는 이의 임의의 조합 또는 이의 단편이 추가로 제공된다. 핵산 식별 번호: 3, 5, 10, 11, 13 및 14의 임의의 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 분리된, 합성된 또는 재조합된 핵산, 또는 이의 임의의 조합 또는 이의 단편이 추가로 제공된다.
핵산 식별 번호: 4 및 8의 임의의 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 분리된, 합성된 또는 재조합된 핵산, 또는 이의 임의의 조합 또는 이의 단편이 추가로 제공된다. 핵산 식별 번호: 4 및 12의 임의의 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 분리된, 합성된 또는 재조합된 핵산, 또는 이의 임의의 조합 또는 이의 단편이 추가로 제공된다. 핵산 식별 번호: 8 및 16의 임의의 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 분리된, 합성된 또는 재조합된 핵산, 또는 이의 임의의 조합 또는 이의 단편이 추가로 제공된다. 핵산 식별 번호: 12 및 16의 임의의 서열에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 분리된, 합성된 또는 재조합된 핵산, 또는 이의 임의의 조합 또는 이의 단편이 추가로 제공된다. 예를 들어 보존적 아미노산 치환에 의해 변형된 중쇄 및/또는 경쇄 CDR을 암호화하는 핵산 또는 항체가 또한 본 개시내용으로 포함된다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 핵산 또는 핵산 서열은 뉴클레오티드 사슬(즉, DNA 및/또는 RNA)을 포함한다. 그러나, 본 개시내용의 핵산 또는 핵산 서열은 예를 들어 DNA/RNA 나선, 펩타이드 핵산(PNA), 잠금 핵산(LNA: locked nucleic acid) 및/또는 리보자임과 같은 다른 유형의 핵산을 포함할 수 있다. 이러한 다른 핵산 구조는 핵산 서열의 기능적 균등물로 지칭되고, 본 개시내용으로 포함된다. 용어 "핵산 서열의 기능적 균등물"은 또한 천연 뉴클레오티드와 동일한 기능을 나타내는 비-천연 뉴클레오티드, 변형된 뉴클레오티드 및/또는 비-뉴클레오티드 구성 요소를 포함하는 사슬을 포함한다.
본 개시내용은 본 개시내용에 따른 하나 이상의 핵산을 포함하는 벡터를 추가로 제공한다. 일부 실시형태에서, 벡터는 플라스미드이다. 플라스미드는 원형으로서 본원에 정의된다. 일부 실시형태에서, 플라스미드는 이중 가닥 DNA 분자이다. 본 개시내용에 따른 핵산을 포함하는 벡터를 제조하기 위한 방법은 당업계에 잘 알려져 있다. 본 개시내용의 벡터를 생성하는 데 적합한 벡터의 비제한적 예는 레트로바이러스 및 렌티바이러스 벡터이다. 본 개시내용에 따른 벡터는 다양한 적용 분야를 위해 사용될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 벡터는 예를 들어 본 개시내용의 항체 또는 단편의 생성을 위해, 세포 내에서 본 개시내용에 따른 핵산의 생체 외 발현을 위해 사용될 수 있다. 본 개시내용에 따른 핵산을 포함하는 본 개시내용에 따른 벡터는 치료적으로 사용될 수 있다. 이러한 벡터의 이를 필요로 하는 인간과 같은 개체로의 투여는 생체 내에서 본 개시내용에 따른 항체 또는 단편이 발현되도록 한다.
일부 실시형태에서, 본 개시내용은 본원에 개시된 임의의 항체 또는 단편을 암호화하는 벡터를 제공한다. 일부 실시형태에서, 벡터는 바이러스 벡터이다. 일부 실시형태에서, 벡터는 AAV 벡터이다. 본 개시내용의 재조합 AAV(rAAV) 벡터는 다양한 아데노-관련 바이러스로부터 생성될 수 있다. 예를 들어, 임의의 AAV 혈청형으로부터의 ITR은 복제, 통합, 제거 및 전사 매카니즘과 관련하여 유사한 구조 및 기능을 갖는 것으로 기대된다. AAV 혈청형의 예는 AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11 및 AAV12를 포함한다. 일부 실시형태에서, rAAV 벡터는 혈청형 AAV1, AAV2, AAV4, AAV5 또는 AAV8로부터 생성된다. 이들 혈청형은 광수용 세포 또는 망막색소상피를 대상으로 하는 것으로 알려진다. 특정 실시형태에서, rAAV 벡터는 혈청형 AAV2부터 생성된다. 특정 실시형태에서, AAV 혈청형은 AAVrh8, AAVrh8R 또는 AAVrh10을 포함한다. rAAV 벡터는 혈청형 AAV1 내지 AAV12로부터 선택된 두 개 이상의 혈청형의 키메라일 수 있는 것으로 또한 이해될 것이다. 벡터의 향성(tropism)은 하나의 혈청형의 재조합 게놈을 또 다른 AAV 혈청형으로부터 유래된 캡시드 내로 패키지(packaging)하는 것에 의해 변경될 수 있다. 일부 실시형태에서, rAAV 바이러스의 ITR은 AAV1 내지 12 중 임의의 하나의 ITR에 기반할 수 있고, AAV1 내지 12, AAV-DJ, AAV-DJ8, AAV-DJ9 또는 다른 변형된 혈청형 중 임의의 하나로부터 선택된 AAV 캡시드와 조합될 수 있다. 특정 실시형태에서, 임의의 AAV 캡시드 혈청형이 본 개시내용의 벡터와 사용될 수 있다. AAV 혈청형의 예는 AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11, AAV12, AAV-DJ, AAV-DJ8, AAV-DJ9, AAVrh8, AAVrh8R 또는 AAVrh10을 포함한다. 특정 실시형태에서, AAV 캡시드 혈청형은 AAV2이다.
본 개시내용에 따른 핵산 또는 벡터를 포함하는 재조합 세포가 추가로 제공된다. 일부 실시형태에서, 핵산 또는 벡터는 세포 내로 도입되어 세포의 핵산 번역 조직(translation machinery)이 암호화된 항체 또는 단편을 제조하도록 할 것이다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 핵산 또는 벡터는 예를 들어 중국 햄스터 난소(CHO), NSO(마우스 골수종) 또는 293(T) 세포주의 세포와 같은 소위 제조자 세포(producer cell) 내에서 발현되고, 이 중 일부는 상업적인 항체 제조에 채택된다. 이러한 제조자 세포의 증식은 본 개시내용에 따른 항체 또는 단편을 제조할 수 있는 제조자 세포주를 수득한다. 일부 실시형태에서, 제조자 세포주는 인간에서 사용하기 위한 항체를 제조하는 데 적합하다. 일부 실시형태에서, 제조자 세포주는 병원성 미생물과 같은 병원체가 없다.
본 개시내용은 본 개시내용에 따른 핵산 또는 벡터를 세포에 제공하는 단계 및 상기 세포가 상기 핵산 또는 벡터에 포함된 핵산 서열을 번역하도록 함으로써 본 개시내용에 따른 항체 또는 단편을 제조하는 단계를 포함하는, 본 개시내용에 따른 항체 또는 단편을 제조하기 위한 방법을 추가로 제공한다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 방법은 상기 항체 또는 단편을 채취, 정제 및/또는 분리하는 단계를 추가로 포함한다. 본 개시내용에 따른 항체 또는 단편을 제조하기 위한 방법으로 수득된 항체 또는 단편이 또한 제공된다.
D. 약학 조성물
일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 항체 또는 단편은 유리하게는 치료 적용 분야에서 사용될 수 있다. 따라서, 본 개시내용에 따른 항체 또는 단편 및 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 및/또는 부형체를 포함하는 약학 조성물이 제공된다. 또한, 본 개시내용에 따른 핵산 또는 벡터(예를 들어, AAV 벡터) 및 적어도 하나의 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 및/또는 부형제를 포함하는 약학 조성물이 제공된다. 적합한 담체의 비제한적 예는 예를 들어 키홀 림펫 헤모시아닌(KLH: keyhole limpet haemocyanin), 혈청 알부민(예를 들어, BSA 또는 RSA) 및 난백 알부민이다. 일부 실시형태에서, 담체는 수성 용액, 예를 들어 식염수 또는 오일 기반 용액과 같은 용액이다. 정제, 캡슐 등에 혼입될 수 있는 부형제의 비제한적 예는 결합제, 예를 들어 트라가칸트 고무, 아카시아, 옥수수 전분 또는 젤라틴, 부형제, 예를 들어 결정셀룰로오스, 붕해제, 예를 들어 옥수수 전분, 호화 녹말(pregelatinized starch) 및 알긴산, 윤활제, 예를 들어 마그네슘 스테아레이트, 감미료, 예를 들어 수크로오스, 락토오스 또는 사카린 및 착향료, 예를 들어 페퍼민트, 살리실산메틸(oil of wintergreen) 또는 체리이다. 일부 실시형태에서, 투여 단위 형태는 캡슐이다. 일부 실시형태에서, 투여 단위 형태는 상기 명시된 하나 이상의 부형제 외에 액체 담체, 예를 들어 지방유를 함유한다. 다양한 기타 물질이 코팅으로서나 투여 단위의 물리적 형태를 변경하기 위해 존재할 수 있다. 예를 들어, 정제는 셸락(shellac) 및/또는 당분 또는 둘 모두로 코팅될 수 있다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 약학 조성물은 인간 용도를 위해 적합하다.
본원에 기재된 약학 조성물은 다양한 상이한 방식으로 투여될 수 있다. 예는 본 개시내용에 따른 항체를 포함하고, 약학적으로 허용 가능한 담체를 함유하는 약학 조성물을 안구 내, 유리체 내, 망막하, 경구, 비강 내, 직장, 국소, 복강 내, 정맥 내, 근육 내, 피하, 진피하, 경피, 척추 강내, 두개 내 방법을 통해 투여하는 단계를 포함한다. 특정 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체, 단편, 벡터 또는 약학 조성물은 대상체에 유체 내로 투여될 수 있다. 특정 실시형태에서, 본원에 개시된 임의의 항체, 단편, 벡터 또는 약학 조성물은 대상체에 망막하로 투여될 수 있다. 구강 투여를 위해, 유효 성분이 고체 투여 형태, 예를 들어 캡슐, 정제 및 분말 또는 액체 투여 형태, 예를 들어 엘릭서(elixir), 시럽 및 현탁액으로 투여될 수 있다. 주입을 위한 멸균 조성물은 본 개시내용의 항체 또는 단편을 주입을 위한 매질, 예를 들어 물 또는 참깨 오일, 코코넛 오일, 땅콩 오일, 목화씨 오일 등과 같은 자연 발생 오일 또는 에틸 올레이트와 같은 합성 지방 매질 내에 용해시키거나 현탁시킴으로써, 통상적인 약학적 관행에 따라 제형화될 수 있다. 완충제, 보존제 및/또는 산화방지제가 또한 혼입될 수 있다.
E. 치료/예방 적용 분야
본 개시내용은 본 개시내용에 따른 항체 또는 단편을 치료에의 용도를 위해 추가로 제공한다. 본 개시내용에 따른 핵산이 치료에의 용도를 위해 추가로 제공된다. 치료는 치료적이거나 예방적일 수 있다. 본 개시내용에 따른 항체 또는 단편은 대체 경로의 보체 활성화와 관련된 장애의 치료, 완화 또는 예방을 위해 특히 적합하다. 따라서, 대체 경로의 보체 활성화와 관련된 장애의 치료, 완화 또는 예방에의 용도를 위해 본 개시내용에 따른 항체 또는 단편이 제공된다. 또한, 대체 경로의 보체 활성화와 관련된 장애의 치료, 완화 또는 예방에의 용도를 위해 본 개시내용에 따른 핵산이 제공된다. 본원에 사용된 바, "대체 보체 활성화와 관련된 장애"는 원하지 않고/않거나 과도한 대체 경로의 보체 활성화가 세포, 조직 또는 세포 외 기질의 손상을 초래하는 장애로서 본원에 정의된다. 원하지 않고/않거나 과도한 대체 경로의 활성화로 인해 손상될 수 있는 세포는 혈액, 예를 들어 적혈구, 상피 세포, 특히 간 및/또는 신장 상피 세포, 혈소판, 백혈구, 내피 세포와 접촉하는 임의의 세포이다. 일부 실시형태에서, 장애는 손상된 FH 기능 또는 FH 결핍과 관련된 장애이다. 일부 실시형태에서, 장애는 손상된 FH 기능 또는 FH 결핍과 관련된 장애이지만, FH 부재로 인한 것은 아니다. 본 개시내용의 항체 및 단편은 FH의 기능을 증강시키기 때문에 항체 및 단편은 손상된 FH 기능 또는 FH 결핍의 영향을 차단하거나 감소시키는 데 특히 적합하다. 그러나, 본 개시내용의 증강 항-FH 항체는 또한 FH가 인위적으로 차단된 건강한 개체의 혈청으로 배양된 적혈구의 용해를 억제할 수 있다. 따라서, 항체 및 단편은 또한 손상된 FH 기능 또는 FH 결핍 이외의 요인으로 인해 유발된 원하지 않고/않거나 과도한 대체 경로의 보체 활성화를 차단하거나 감소시키는 데 사용될 수 있다. 치료될 수 있는 이러한 장애의 비제한적 예는 비정형 용혈성 요독증후군(aHUS), 발작성 야간혈색소 요증(PNH), 노인황반변성(AMD), 막증식성 사구체신염(MPGN)이다.
보체 매개 HUS로도 지칭되는 비정형 용혈성 요독증후군(aHUS)은 용혈성 빈혈, 혈소판 감소증, 전신성 혈전미세혈관증(TMA) 및 신부전을 특징으로 한다. aHUS의 발현은 전형적으로 아동기이고, 질병의 단계(episode)는 예를 들어 감염, 임신, 다른 질병, 수술 또는 외상과 관련된다. aHUS 환자의 60% 초과는 혈장 교환 또는 혈장 보충에도 불구하고 사망하거나 만성 신장 질환(ESRD)으로 발전한다. 보체계의 성분 또는 인자 내의 다수의 돌연변이가 aHUS 환자에서 확인되었다. FH, FI, FB, 막 보조인자 단백질(MCP), 트롬보모둘린(THBD) 또는 C3 내의 돌연변이는 aHUS 환자에서 알려진 돌연변이의 약 50%를 포함하고, 이 중 FH의 돌연변이가 가장 빈번하다(aHUS 환자의 약 20 내지 30%). 대다수의 환자는 돌연변이에 대해 이형접합적이고, 그럼에도 불구하고 병리학적 FH 결핍을 초래한다. 또한, 약 10%의 환자에서, aHUS는 FH에 대항하는 자기항체에 의해 유발되고, 또한 FH의 기능이 감소된다. 현재, aHUS에 대한 표준 치료는 혈장 보충 또는 혈장 교환 치료이다. 또한, 에쿨리주맙이 aHUS 환자의 치료에서 사용된다. 신장 이식은 높은 재발 위험과 관련되고, 이는 aHUS 기저 돌연변이에 의존적이다. 이식은 증가된 재발 위험때문에 FH, FB, FI, C3 또는 THBD 내에 돌연변이를 갖는 어린이에게는 금지된다. 본 개시내용에 따른 항체 또는 단편, 예를 들어 적어도 Fab 단편을 포함하는 항체 또는 단편은 FH 내의 돌연변이 또는 항-FH 자기항체의 존재로 인해 유발된 aHUS의 치료, 완화 또는 예방을 위해 특히 적합하다. FH 상의 증강 효과는 돌연변이를 갖는 FH의 CCP 도메인에 무관하다. 예를 들어, 증강 FH 항체 또는 이의 단편은 FH의 CCP1, CCP6, CCP7, CCP14, CCP17, CCP18, CCP19 및 CCP20 내에 돌연변이를 갖는 aHUS 환자의 대체 보체 활성화를 억제할 수 있다. 그러나, 본 개시내용의 항체 및 단편은 또한 손상된 FH 기능 또는 FH 결핍이 없더라도 FH의 활성도를 증강시킬 수 있기 때문에, 보체 의존적 aHUS의 임의의 형태가 유리하게는 본 개시내용의 항체 또는 단편으로 치료, 완화 또는 예방될 수 있다.
발작성 야간혈색소 요증(PNH)은 전능성 조혈모 세포의 X 염색체 내 유전적 돌연변이에 의해 유발된다. 이 돌연변이는 글리코실포스파티딜리노시톨 막 고정 단백질(GPI-AP)의 합성에 중요한 포스파티딜리노시톨 글리칸 클래스 A 단백질의 결핍을 초래한다. 보체계 CD55의 억제제가 이러한 단백질의 예이고, 숙주 세포 표면에서 C3b와 결합함으로써 C3 전환효소의 형성을 방지한다. 따라서, 이들 단백질의 결핍은 원하지 않거나 과도한 보체 활성화를 초래한다. PNH의 주요 결과 중 하나는 적혈구가 과도한 보체계의 활성으로 인해 용해를 겪는 것이다. 최근에, 에쿨리주맙이 다수의 국가에서 PNH의 치료를 위해 승인되었다. 다른 치료는 수혈, 적혈구 자극제 치료, 코르티코스테로이드 및 단백동화 스테로이드(anabolic steroid) 치료를 포함한다. 본 개시내용의 항체 및 단편은 또한 FH 또는 FH 기능의 정도와 무관하게 FH의 활성도를 증강시킴으로써 보체계의 대체 경로의 활성화를 억제하기 때문에, 본 항체 또는 단편은 유리하게는 PNH 환자에서 사용될 수 있다. 또한, 본 개시내용의 항체 및 단편은 활성화 경로의 보다 하류에서 작용하는 에쿨리주맙과 대조적으로 C3 침착 수준에서 작용하기 때문에, 보다 적은 세포가 C3b에 의해 옵소닌화되는 것으로 인해 간 내의 세포 방혈(depletion)이 감소된다.
노인황반변성(AMD)은 일반적으로 노인에 영향을 미치는 망막 손상이고, 시야의 중심인 황반 내의 시력 손실을 초래한다. FH 내의 돌연변이 및 SNP(단일 뉴클레오티드 다형성)이 최근 약 35%의 AMD 환자에서 관련되었다. SNP는 FH의 CCP7 내에 위치하고, 헤파린에 대한 FH의 결합에 영향을 미침으로써 숙주 세포 표면뿐만 아니라 세포 외 기질에 결합하는 FH의 능력을 손상시키는 것이 입증되었다. 본 개시내용에 따른 항체 또는 단편, 예를 들어 적어도 Fab 단편을 포함하는 항체 또는 단편은 감소된 FH 기능(즉, FH를 암호화하는 유전자 내 SNP에 의해)을 특징으로 하는 AMD의 치료, 완화 또는 예방을 위해 특히 적합하다.
막증식성 사구체신염(MPGN)은 주로 어린이 및 청소년에서 발생하는 만성 신장염의 드문 원인이다. 이는 사구체간질 및 내피 세포의 증식, 및 사구체간질 기질의 팽창, 내피하 면역 침착물 및/또는 내막의 고밀도 침착물에 의한 말단 모세혈관 벽의 두꺼워짐 및 모세혈관 벽으로의 사구체간질의 삽입의 결과로서 사구체의 손상을 유발한다. MPGN은 보통 FH의 전체 부재와 관련된다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 항체 및/또는 단편으로 치료될 수 있는 MPGN은 손상된 FH 기능 또는 FH 결핍과 관련되지만, FH의 부재와는 관련되지 않는다.
따라서, 본 개시내용은 대체 경로의 보체 활성화와 관련된 장애의 치료, 완화 또는 예방에의 용도를 위한 본 개시내용에 따른 항체 또는 단편 또는 핵산을 제공한다. 일부 실시형태에서, 장애는 비정형 용혈성 요독증후군(aHUS), 발작성 야간혈색소 요증(PNH), 노인황반변성(AMD), 막증식성 사구체신염(MPGN)으로 구성된 군으로부터 선택된다. 또한, 대체 경로의 보체 활성화와 관련된 장애의 치료, 완화 또는 예방을 위한 약물의 제조를 위한 본 개시내용에 따른 항체 또는 단편, 핵산 또는 벡터의 용도가 제공된다. 일부 실시형태에서, 장애는 비정형 용혈성 요독증후군(aHUS), 발작성 야간혈색소 요증(PNH), 노인황반변성(AMD), 막증식성 사구체신염(MPGN) 및 IgA 신증으로 구성된 군으로부터 선택된다. 특정 실시형태에서, 장애는 IgA 신증이다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용에 따른 약물 또는 예방제로서의 용도를 위한 항체 또는 단편은 표 1에 기재된 바와 같은 항체의 중쇄 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 항체 또는 이의 단편(즉, Fab, Fab' 또는 F(ab)2 또는 F(ab')2 단편)이다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 단클론성 인간화 또는 키메라 항체 또는 단편이다.
본 개시내용은 본 개시내용에 따른 항체 또는 단편, 또는 본 개시내용에 따른 핵산 또는 벡터를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대체 보체 활성화를 억제하는 방법을 추가로 제공한다. 본 개시내용은 본 개시내용에 따른 항체 또는 단편의 치료적으로 유효량을 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대체 경로의 보체 활성화와 관련된 장애의 치료, 완화 또는 예방하기 위한 방법을 추가로 제공한다. 또한, 본 개시내용에 따른 헥산 또는 벡터의 치료적으로 유효량을 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대체 경로의 보체 활성화와 관련된 장애의 치료, 완화 또는 예방하기 위한 방법이 제공된다. 본 개시내용에 따른 약학 조성물의 치료적으로 유효량을 이를 필요로 하는 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 대체 경로의 보체 활성화와 관련된 장애의 치료, 완화 또는 예방하기 위한 방법이 추가로 제공된다. 일부 실시형태에서, 장애는 비정형 용혈성 요독증후군(aHUS), 발작성 야간혈색소 요증(PNH), 노인황반변성(AMD), 막증식성 사구체신염(MPGN)으로 구성된 군으로부터 선택된다. 본원에 사용된 바, "개체"는 이의 면역계의 일부로서 보체계를 갖는 동물(예를 들어, 포유동물) 또는 인간이다. 특정 실시형태에서, 개체는 인간이다. 일부 실시형태에서, 본 개시내용의 방법에의 용도를 위한 항체는 항체 1의 중쇄 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3; 항체 2의 중쇄 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3; 항체 3의 중쇄 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3; 또는 항체 4의 중쇄 및 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 항체 또는 이의 단편, 예를 들어 Fab, Fab', F(ab)2 또는 F(ab')2 단편이다. 일부 실시형태에서, 본 항체 또는 단편은 단클론성 인간화 또는 키메라 항체, 또는 단편이다.
본 개시내용의 항체, 단편, 핵산을 함유하는 조성물은 예방적 및/또는 치료적 치료를 위해 투여될 수 있다. 치료적 적용에서, 본 개시내용에 따른 항체, 단편, 핵산 또는 조성물은 질병을 이미 겪고 있고/있거나 이미 질병의 증상이 나타난 개체(예를 들어, 인간)에게 질병의 증상 및/또는 이의 합병증을 상쇄하는 데 적합한 양으로 투여된다. 예방적 적용에서, 본 개시내용에 따른 항체, 단편, 핵산 또는 조성물은 이들 증상 또는 이의 합병증의 발현을 방지하기 위해 개체가 장애의 증상을 나타내기 전에 개체에게 투여된다. 예를 들어, 대체 보체 활성화와 관련된 장애를 유발할 수 있거나 유발할 유전적 돌연변이를 갖는 개체는 본 개시내용에 따른 항체, 단편, 핵산 또는 조성물로 예방적으로 치료될 수 있다. 본 항체, 단편, 핵산 또는 벡터 분자는 전형적으로 보체계의 대체 경로의 원하지 않거나 과도한 활성화와 관련된 장애를 치료하는 데 충분한 양인 치료적으로 유효량으로 본 개시내용에 따른 약학 조성물 내에 존재한다.
명료성 및 간결한 설명을 목적으로 하여 본 개시내용의 동일하거나 별도의 양태 또는 실시형태의 일부로서 특성이 본원에 기술될 수 있다. 본 개시내용의 범주는 본원에 기술된 특성의 전부 또는 일부의 조합을 갖는 실시형태를 동일하거나 별도의 실시형태의 일부로서 포함할 수 있는 것으로 당업자에게 이해될 것이다.
실시예
이들 실시예는 단지 예시적인 목적을 위해 제공되며, 본원에 제공된 청구항의 범주를 제한하지 않는다.
시약
인간 정제 인자 H는 CompTech.(Tyler, Texas USA)로부터 획득하였다. 래트의 항-마우스 카파(RM19)는 Sanquin(Business Unit reagents, Sanquin, Amsterdam, the Netherlands)으로부터 획득하였다. 고성능 ELISA 완충제(HPE)는 Sanquin으로부터 획득하였다. 재조합 FH CCP(CCP 15 내지 18, CCP 15 내지 19, CCP18 내지 CCP20 또는 CCP 19 내지 10)는 이전에 기재된 바와 같이 제조하였다(Schmidt et al. 2008). 인간 FH에 대한 마우스의 단클론성 항체(mAbs)는 이전에 기재된 바와 같이 제조하였다. 항-IL-6.8을 이소유형 대조군으로서 사용하였고, Sanquin으로부터 획득하였다. 항-C3.19는 분자의 C3d 단편 상의 에피토프와 반응할 수 있다(Wolbink et al. 1993).
rhFHR 단백질의 발현
C-말단 6x-히스티딘(6xHis) 태그를 보유하는 재조합 인간 인자 H-관련(rhFHR) 단백질을 제조하고, 이전에 기재된 바와 같이 정제하였다(Pouw et al. 2015). 요약하면, 단백질을 HEK293F 세포에서 pcDNA3.1 발현 벡터의 일시적 형질주입에 의해 발현시킨 후 단백질을 HisTrap™ 고성능 1 mL 컬럼(GE Healthcare Life Sciences, Freiburg, Germany)을 사용하여 Ni2+ 친화성 크로마토그래피에 의해 상청액으로부터 정제하였다. rhFHR을 여과하고, Amicon® 울트라 원심분리 여과 장치(Merck Millipore, Darmstadt, Germany)를 사용하여 농축하였다.
항체 생성
BALB/c 마우스를 4주 간격으로 보조제로서 몬타나이드 내에서 25 μg rhFHR-1을 갖는 25 μg의 재조합 인간 인자 H-관련 단백질 1(FHR-1)로 복강 내에서 면역화함으로써 단클론성 항체 FHR-1.3B4를 생성하였다. 네 번째 부스터 면역화 3일 후에, 비장 세포를 골수종 세포주 SP2/0와 융합하였다. 혼성세포의 상청액 내의 FHR-1 특이적 항체의 존재를 ELISA에 의해 시험하였다. 요약하면, 미량정량판을 래트의 항-마우스 카파 moAb(RM19)로 코팅하여 마우스의 IgG 항체를 포획하였다. 이 항체의 특이성은 비오틴화 rhFHR-1에 의해 결정하였다. 요약하면, 비오틴화 rhFHR-1의 결합은 HPE 내의 HRP와 접합된 0.1%(v/v) 스트렙타비딘으로 30분 동안 배양하여 결정하였다. ELISA는 pH 5.5, 0.003%(v/v) H2O2를 함유하는 0.1 M 나트륨 아세테이트 내의 100 μg/mL 3,5,3',5'-테트라메틸벤지딘(TMB)를 사용하여 추가로 전개하였다. 기질 전환을 100 μL H2SO4를 첨가하여 중단하고, 시너지 2 M 다중모드 플레이트 판독기(BioTek Instruments, Winooski, VT, USA)를 사용하여 흡광도를 450 nm에서 측정하고, 540 nm에서 흡광도에 대해 보정하였다. 모든 ELISA 단계를 웰(well) 당 100 μL의 최종 부피로 수행하였다.
CDR 서열을 인간 생식세포계열 항체의 골격 영역으로 이식함으로써 FHR-1.3B4 항체를 인간화하였다. 항체 5를 인간화의 결과로서 제조하였다. 이어서, 특정 아미노산을 항체 5에서 돌연변이화하여 FH에 대한 결합 친화성을 개선하였다. 표 1에 개시된 바와 같은 항체 1, 항체 2, 항체 3 및 항체 4는 FH에 대해 가장 높은 친화성을 나타내는 항체였다.
인자 H에 대한 항체의 결합 친화성
항체 1 내지 4의 결합 친화성을 결정하기 위해, 표면 플라즈몬 공명(SPR) 실험을 BiaCore T200(GE Healthcare) 및 CM5 센서칩(GE Healthcare)을 사용하여 제조업체의 지시에 따라 수행하였다. 요약하면, 항체 1 내지 9 또는 항-FHR-1.3B4를 단백질 A 또는 단백질 G가 결합된 칩 상으로 포획하고, 전장 FH를 감소된 농도에서 포획된 moAB 상에 흐르도록 하였다. SPR 실험으로부터 획득한 결합 동역학은 표 2에 제시되어 있다.
표 2에서 나타낸 바와 같이, 항체 1, 항체 2, 항체 3 및 항체 4는 나노몰 또는 나노몰 이하 친화성으로 인간 FH와 결합하였다. 또한, 항체 1 내지 4는 전장 FH에 대해 FHR-1.3B4의 것보다 더 높은 결합 친화성을 가졌다.
mAbs 에피토프 맵핑(Epitope mapping) 및 경쟁 검정
특정 단클론성 항체(mAbs)의 결합 부위를 맵핑하였다. 구체적으로, mAbs의 반응성을 다양한 CCP 도메인(CCP 15 내지 18, CCP 15 내지 19, CCP18 내지 20 및 CCP 19 내지 20) 및 전장 인간 FH를 포함하는 재조합 FH 단편에 대해 시험하였다. 표 1에 개시된 것들과 같은 mAbs의 에피토프의 위치를 다수의 CCP 도메인(15 내지 18, 15 내지 19, 18 내지 20 또는 19 내지 20)으로 구성된 재조합 인간 FH 단편을 사용하여 결정하였다. 요약하면, FH.07 및 FHR-1.3B4를 RM-19 코팅 미량정량판 상에 포획하여 최적의 결합 구조를 확인하였다. 다음으로, 100배 더 높은 농도의 라벨링되지 않은 명시된 재조합 FH 단편과 혼합된 비오틴화 FH를 1시간 동안 상기 판 상에서 배양하였다. 비오틴화 FH의 결합을 HPE 내의 다중-HRP와 접합된 0.01%(v/v) 스트렙타비딘으로 30분 동안 배양하여 결정하였다. ELISA를 이전에 기재된 바와 같이 추가로 전개하였다. FH.07 및 FHR-1.3B4는 인간 FH의 CCP18에 결합하는 것을 확인하였다.
표 1에 개시된 항체 또는 단편을 사용한 경쟁 검정을 작용제 항-FH 항체 FH.07와 수행하였다. 표 1에 개시된 인간화 항-FHR-1 mAbs가 FH의 결합을 위해 FH.07과 경쟁하는 지 여부를 결정하기 위해, 상기 기재된 바와 같은 유사한 설정을 사용하였다. 요약하면, mAbs를 직접 상기 판에 코팅하고, 10배 더 높은 농도의 명시된 mAbs의 부재 또는 존재 하에 비오틴화 FH(FH-bt)의 결합을 이전에 기재된 바와 같이 ELISA로 평가하였다. FHR-1.3B4는 FH.07과 경쟁하는 것을 확인하였다.
LPS 상의 C3 침착
항체 1 내지 4가 FH에 의한 대체 경로 억제에 효과를 갖는 지 여부를 조사하기 위해, LPS 상의 C3 침착 검정을 수행하였다. 요약하면, 96-웰 미량정량판(Nunc)을 PBS 내의 살모넬라 티포사 LPS(40 μg/mL, L-6386 Sigma-Aldrich)로 실온에서 밤새 코팅하였다. LPS를 사용하여 보체의 대체 경로를 활성화하였다. 상기 판을 PBS+0.1%(중량/부피) 트윈-20, 10%(v/v)로 세정하였다. 정상적인 인간 혈청(NHS, 10%(v/v)의 최종 농도)을 0.05%(중량/부피) 젤라틴, 5 mM MgCl2, 10 mM EGTA 및 0.1%(중량/부피)트윈-20을 함유하는 베로날 완충제(VB; 3 mM 바르비탈, 1.8 mM 나트륨 바르비탈, 145 mM NaCl, pH 7.4)에서 명시된 농도의 항-FH/항-FHR-1 mAbs(항체 1 내지 4 또는 FHR-1.3B4), 이소유형 대조군 또는 음성 대조군으로서 aIL6-8 AB의 존재 또는 부재 하에 배양하였다. C3b 침착을 비오틴화 mAb 항-C3.19(HPE 내의 0.55 μg/mL)로 검출한 후 HPE 내의 폴리-HRP로 접합된 0.01%(v/v) 스트렙타비딘으로 30분 동안 배양하였다. ELISA를 상기 기재된 바와 같이 전개하였다. 표 3은 항체 1 내지 4 및 FHR-1.3B4에 대한 IC50 값을 기재하고 있다. 표 4는 항체 1 내지 4에 대한 IC50 값(2번 반복 실험)을 기재하고 있다.
표 3 및 표 4에서 나타낸 바와 같이, 항체 1 내지 4는 LPS 상의 C3b의 침착을 억제하였다. 이는 대체 경로 활성화에 대한 FH의 억제 기능이 항체 1, 2, 3 또는 4의 첨가에 의해 강화된 것을 나타내었다. 부가하여, 표 3에서 나타낸 바와 같이, 항체 1 내지 4는 더 낮은 IC50 값으로 명시된 바와 같이 FHR-1.3B4보다 LPS 상의 C3b 침착을 억제하는 데 더 효과적이었다.
SRBC 용혈성 검정
인자 H의 기능에 대한 항체 1 내지 4의 효과를 조사하기 위한, Sanchez-Corral et al. (2004) 및 Wouters et al. (2008)에 의해 이전에 기재된 바와 같은 일반적인 용혈성 검정. 요약하면, 20 μg/ml의 항-FH.09(FH에 대한 차단 항체)를 함유하는 사전 희석된 인간 혈청(20%, v/v)을 명시된 mAbs(항체 1 내지 4 또는 FHR-1.3B4)와 사전 배양하고, 양적혈구(SRBC)과 1 대 1 비율로 혼합하여 5 mM MgCl2 및 10 mM EGTA를 갖는 VB 또는 블랭크(blank)로서 10 mM EDTA를 갖는 VB 내의 1.05*108 세포/ml 및 10%(v/v) 혈청의 최종 농도에 도달한 후 37℃에서 75분 동안 진탕하면서 배양하였다. 20 mM EDTA를 갖는 100 μl의 얼음 냉각 VB를 첨가하여 용해를 중단시킨 후 원심분리(2.5분, 1,800 RPM/471 RCF, 7℃)하였다. 용혈작용을 412 nm에서 상청액의 흡광도로서 측정하고, 690 nm에서 측정된 배경 흡광도에 대해 보정하고, 100% 용혈 대조군(0.6%(중량/부피) 사포닌으로 배양된 SRBC)의 백분율로서 표시하였다. 음성 대조군으로서, SRBC를 10 mM EDTA로 보충된 VB 내의 희석된 혈청으로 배양하여 보체 활성화를 방지하였다.
Graphpad prism 7.04를 사용하여 표 1에 개시된 것들과 같은 다양한 항체를 사용한 다수의 실험으로부터 용혈작용의 IC50를 계산하고, 통계적 비교를 일반적인 일원분산분석(one-way ANOVA) 및 던넷(Dunnett)의 다중 비교 시험에 의해 수행하였다. 표 5는 항체 1 내지 4 및 FHR-1.3B4에 대한 IC50 값을 기재하고 있다. 표 6은 항체 1 내지 4의 IC50 값(2번 반복 실험)을 기재하고 있다.
표 5 및 6에 나타낸 바, 항체 1 내지 4는 SRBC 용해를 억제하였다. 또한, 표 6에 나타낸 바, 항체 1 내지 3은 더 낮은 IC50 값으로 명시된 바와 같이 FHR-1.3B4보다 SRBC 용해를 억제하는 데 더 효과적이었다.
항-FH 항체의 존재 하에 C3b에 대한 인자 H의 결합 친화성
표 1에 개시된 것들과 같은 항체 1 내지 4의 존재 하에 C3b에 대한 FH의 결합을 Biacore T200 기기(GE Healthcare, Little Chalfont, UK)를 사용하여 표면 플라즈몬 공명에 의해 결정하였다. 구체적으로, 정제된 C3b(Complement Technologies)를 표준 아민 커플링을 사용하여 CM5 Biacore 센서칩(GE Healthcare)의 유동 세포(flow cell) 상에 고정하였다. 잔여 유동 세포를 기준 표면으로서 사용하고, 임의의 단백질의 첨가 없이 커플링 반응을 수행하여 제조하였다. 2000번의 응답 단위(RU)의 응답을 C3b로 커플링한 후 수득하였다. SPR 실험을 10 μl/분의 유량과 0.01%(중량/부피) 트윈-20(Merck)(PBS-T)이 보충된 인산염 완충 식염수 pH 7.4(PBS, Orphi Farma)를 사용하여 37℃에서 수행하였다.
moAb를 통한 가능한 가교의 간섭 없이 항체의 효과를 결정하기 위해, 재조합으로 제조된 mAbs의 Fab' 단편(항체 1 내지 4)을 사용하였다. Fab' 단편을 혈장 정제된 FH(pdFH)와 혼합하였다. FH를 10 μM(적어도 2배 과량의 몰비) 항-FHR-1 3B4 Fab' 단편 또는 항체 1 내지 4의 Fab' 단편의 부재 또는 존재 하에 칩 상에 상이한 농도(FH 단독인 경우, 10-0.01953 μM 및 moAb Fab' 단편과 복합인 경우, 5-0.01953 μM)로 60초 동안 주입하였다. 또한, 각각의 Fab' 단편을 FH의 첨가 없이 주입하여 Fab' 단편과 표면의 임의의 상호작용을 결정하였다. pdFH 주입 후에 60초의 해리가 이어지고, 표면을 1 M NaCl(Merck)의 1회 주입에 의해 각각의 주기 사이에서 재생시켰다.
데이터를 Scrubber 2(Biologic Software)를 사용하여 분석하고, 친화성을 평형 분석에 의해 결정하였다. 표 7은 항체 1 내지 4에 대한 결합 동역학을 기재하고 있다.
표 7에 나타낸 바와 같이, 항체 1 내지 4의 Fab' 단편의 첨가는 C3b 코팅된 표면 상의 응답을 증가시켰고, 이는 항체 1 내지 4가 C3b에 대한 pdFH의 결합을 향상시키는 것을 나타낸다.
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참조 문헌에 의한 포함
이 명세서에서 언급된 모든 공보, 특허 및 특허 출원은 각각의 개별 공보, 특허 또는 특허 출원이 구체적으로 및 개별적으로 명시되어서 참조 문헌으로 포함되는 것과 동일한 정도로 본원에 인용되어 포함된다.
균등물
본 발명은 이의 사상 또는 본질적인 특징으로부터 벗어나지 않고 다른 특정 형태로 실시될 수 있다. 그러므로, 전술한 실시형태는 모든 점에서 본원에 기재된 발명을 제한하기 보다 예시적인 것으로 간주된다. 따라서, 본 발명의 범주는 전술한 설명보다는 청구된 청구항에 의해 명시되고, 청구항의 균등물의 의미 및 범위 내에 속하는 모든 변형이 본원에 포함되는 것으로 의도된다.
SEQUENCE LISTING
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<120> FACTOR H POTENTIATING ANTIBODIES AND USES THEREOF
<130> GEM-013WO
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<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 20
caaattgttc tctcccagtc tccaacattc ctgtctgcat ctccaggtga gaaggtcaca 60
gtgacttgca gggccagttc aagtgtcaaa tacatgcact ggtatcagca gaaaccagga 120
gcctccccca aaccctggat ttttgccaca tccaacctgg cttctggagt ccctgctcgc 180
ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttat tctctcacaa tcagcagagt ggaggctgaa 240
gatgctgcca cttattactg ccagcagtgg agtattatcc cacccacgtt cggtaatggg 300
accaagctgg agctgaaac 319
<210> 21
<211> 24
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide
<400> 21
gatttctcat tagctaggta tggt 24
<210> 22
<211> 21
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide
<400> 22
atatggagtg gtggaaccgc a 21
<210> 23
<211> 33
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic oligonucleotide
<400> 23
gccagaaatt ttggtaacta cgctgtggac tac 33
<210> 24
<211> 337
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 24
caggtgcagc tgcagcagtc aggacctggc ctagtgcagc cctctcagag cctgtccatt 60
acctgcacag tctctgattt ctcattagct aggtatggtg tacactggat tcgccagtct 120
ccaggaaagg gtctggagtg gctgggagtg atatggagtg gtggaaccgc agactataat 180
gcagctttca tatccagact gaacatcaac aaggacaatt ccaagagcca agttttcttt 240
aaaatgaaca gtctccaagc taatgacaca gccatatatt actgtgccag aaattttggt 300
aactacgctg tggactactg gggtcaagga acctcag 337
<210> 25
<211> 322
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 25
caaattgttc tctcccagtc tccaacaatc ctgtctgcat ctccagggga gaaggtcaca 60
atgacttgca gggccagctc aagtgtaact tacatgcact ggtaccagca gaagccagga 120
tcctccccca aaccctggat ttatgccaca tccaacctgg cttctggagt ccctgctcgc 180
ttcagtggca gtgggtctgg gacctcttac tctctcacaa tcagcagagt ggaggctgaa 240
gatgctgcca cttattactg ccagcagcgc agtagtagta acccgctcac gttcggtgct 300
gggaccaagc tggagctgaa at 322
<210> 26
<211> 349
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide
<400> 26
caggtgcagc tgaggcagtc aggacctggc ctagtgcagc cctcacagag cctgtccatc 60
acctgcacag tctctggttt ctcattaact aactatggtg tatattgggt tcgccagtct 120
ccaggaaagg gtctggagtg gctgggagtg atatggagtg gaggaaccac tgactatagt 180
gcagctttca tatccagact gagcatcagc aaggacaact ccaagagcca agttttcttt 240
aaaatgaaca gtctgcaagc tgatgacaca gccatatact actgtgccag aatttggcac 300
tacgctatgg actacatggg gtcaaggaac ctcacaccgg tctccacag 349
<210> 27
<400> 27
000
<210> 28
<400> 28
000
<210> 29
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 29
Ser Ser Val Lys Tyr
1 5
<210> 30
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 30
Ala Thr Ser
1
<210> 31
<211> 9
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 31
Gln Gln Trp Ser Ile Ile Pro Pro Thr
1 5
<210> 32
<211> 106
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 32
Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Thr Phe Leu Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Val Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Lys Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ala Ser Pro Lys Pro Trp Ile Phe
35 40 45
Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Ser Ile Ile Pro Pro Thr
85 90 95
Phe Gly Asn Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 33
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 33
Asp Phe Ser Leu Ala Arg Tyr Gly
1 5
<210> 34
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 34
Ile Trp Ser Gly Gly Thr Ala
1 5
<210> 35
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 35
Ala Arg Asn Phe Gly Asn Tyr Ala Val Asp Tyr
1 5 10
<210> 36
<211> 112
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 36
Gln Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Asp Phe Ser Leu Ala Arg Tyr
20 25 30
Gly Val His Trp Ile Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Thr Ala Asp Tyr Asn Ala Ala Phe Ile
50 55 60
Ser Arg Leu Asn Ile Asn Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Phe
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Ala Asn Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asn Phe Gly Asn Tyr Ala Val Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100 105 110
<210> 37
<400> 37
000
<210> 38
<400> 38
000
<210> 39
<400> 39
000
<210> 40
<400> 40
000
<210> 41
<400> 41
000
<210> 42
<400> 42
000
<210> 43
<400> 43
000
<210> 44
<400> 44
000
<210> 45
<211> 5
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 45
Ser Ser Val Thr Tyr
1 5
<210> 46
<211> 3
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 46
Ala Thr Ser
1
<210> 47
<211> 10
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 47
Gln Gln Arg Ser Ser Ser Asn Pro Leu Thr
1 5 10
<210> 48
<211> 107
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 48
Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Thr Ile Leu Ser Ala Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Thr Tyr Met
20 25 30
His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr
35 40 45
Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser
50 55 60
Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu
65 70 75 80
Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Ser Ser Asn Pro Leu
85 90 95
Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys
100 105
<210> 49
<211> 8
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 49
Gly Phe Ser Leu Thr Asn Tyr Gly
1 5
<210> 50
<211> 7
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 50
Ile Trp Ser Gly Gly Thr Thr
1 5
<210> 51
<211> 11
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide
<400> 51
Ala Arg Asn Phe Gly Asn Tyr Ala Met Asp Tyr
1 5 10
<210> 52
<211> 117
<212> PRT
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide
<400> 52
Gln Val Gln Leu Arg Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln
1 5 10 15
Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Thr Asn Tyr
20 25 30
Gly Val Tyr Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu
35 40 45
Gly Val Ile Trp Ser Gly Gly Thr Thr Asp Tyr Ser Ala Ala Phe Ile
50 55 60
Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Phe
65 70 75 80
Lys Met Asn Ser Leu Gln Ala Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Asn Phe Gly Asn Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser
100 105 110
Val Thr Val Ser Ser
115
Claims (37)
- 인자 H(FH)의 보체 조절 단백질 도메인 18(CCP18)에 특이적으로 결합하는 분리된, 합성된 또는 재조합된 항체, 또는 이의 항원 결합 단편으로서,
- 서열 SSVTY(서열 식별 번호: 1) 또는 서열 TSVTY(서열 식별 번호: 13)를 포함하는 경쇄 CDR1 서열,
- 서열 ATS(서열 식별 번호: 2) 또는 서열 ASS(서열 식별 번호: 14)를 포함하는 경쇄 CDR2 서열,
- 서열 QHRSSSNPLT(서열 식별 번호: 3)를 포함하는 경쇄 CDR3 서열,
- 서열 GFSLTNYG(서열 식별 번호: 5)를 포함하는 중쇄 CDR1 서열,
- 서열 VWSGGTT(서열 식별 번호: 6) 또는 서열 IWSGGTT(서열 식별 번호: 10)를 포함하는 중쇄 CDR2, 및
- 서열 ARNFGNYAMDY(서열 식별 번호: 7) 또는 서열 ARNFGNYAMDF(서열 식별 번호: 11)를 포함하는 중쇄 CDR3를 포함하는, 분리된, 합성된 또는 재조합된 항체, 또는 이의 항원 결합 단편. - 제1항에 있어서,
- 서열 SSVTY(서열 식별 번호: 1)를 포함하는 경쇄 CDR1 서열,
- 서열 ATS(서열 식별 번호: 2)를 포함하는 경쇄 CDR2 서열,
- 서열 QHRSSSNPLT(서열 식별 번호: 3)를 포함하는 경쇄 CDR3 서열,
- 서열 GFSLTNYG(서열 식별 번호: 5)를 포함하는 중쇄 CDR1 서열,
- 서열 IWSGGTT(서열 식별 번호: 10)를 포함하는 중쇄 CDR2 서열, 및
- 서열 ARNFGNYAMDF(서열 식별 번호: 11)를 포함하는 중쇄 CDR3 서열을 포함하는, 항체 또는 단편. - 제1항에 있어서,
- 서열 SSVTY(서열 식별 번호: 1)를 포함하는 경쇄 CDR1 서열,
- 서열 ATS(서열 식별 번호: 2)를 포함하는 경쇄 CDR2 서열,
- 서열 QHRSSSNPLT(서열 식별 번호: 3)를 포함하는 경쇄 CDR3 서열,
- 서열 GFSLTNYG(서열 식별 번호: 5)를 포함하는 중쇄 CDR1 서열,
- 서열 VWSGGTT(서열 식별 번호: 6)를 포함하는 중쇄 CDR2 서열, 및
- 서열 ARNFGNYAMDY(서열 식별 번호: 7)를 포함하는 중쇄 CDR3 서열을 포함하는, 항체 또는 단편. - 제1항에 있어서,
- 서열 TSVTY(서열 식별 번호: 13)를 포함하는 경쇄 CDR1 서열,
- 서열 ASS(서열 식별 번호: 14)를 포함하는 경쇄 CDR2 서열,
- 서열 QHRSSSNPLT(서열 식별 번호: 3)를 포함하는 경쇄 CDR3 서열,
- 서열 GFSLTNYG(서열 식별 번호: 5)를 포함하는 중쇄 CDR1 서열,
- 서열 VWSGGTT(서열 식별 번호: 6)를 포함하는 중쇄 CDR2 서열,
- 서열 ARNFGNYAMDY(서열 식별 번호: 7)를 포함하는 중쇄 CDR3 서열을
포함하는, 항체 또는 단편. - 제1항에 있어서,
- 서열 TSVTY(서열 식별 번호: 13)를 포함하는 경쇄 CDR1 서열,
- 서열 ASS(서열 식별 번호: 14)를 포함하는 경쇄 CDR2 서열,
- 서열 QHRSSSNPLT(서열 식별 번호: 3)를 포함하는 경쇄 CDR3 서열,
- 서열 GFSLTNYG(서열 식별 번호: 5)를 포함하는 중쇄 CDR1 서열,
- 서열 IWSGGTT(서열 식별 번호: 10)를 포함하는 중쇄 CDR2 서열,
- 서열 ARNFGNYAMDF(서열 식별 번호: 11)를 포함하는 중쇄 CDR3 서열을
포함하는, 항체 또는 단편. - 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 단편은 2.5 x 10-8 M 이하의 KD로 FH에 대한 결합 친화성 및/또는 0.1 x 10-9 M 이하의 KD로 CCP18 내지 CCP20으로 구성된 FH 단편에 대한 결합 친화성을 갖거나, 상기 항체 또는 단편은 1.25 x 10-8 M 이하의 KD로 FH에 대한 결합 친화성 및/또는 0.04 x 10-9 M 이하의 KD로 CCP18 내지 CCP20으로 구성된 FH 단편에 대한 결합 친화성을 갖는, 항체 또는 단편.
- 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 단편은 2.5 x 10-8 M 이하의 KD로 FH에 대한 결합 친화성 및/또는 0.1 x 10-9 M 이하의 KD로 CCP18 내지 CCP20으로 구성된 FH 단편에 대한 결합 친화성을 갖거나, 상기 항체 또는 단편은 0.6 x 10-8 M 이하의 KD로 FH에 대한 결합 친화성 및/또는 0.6 x 10-11 M 이하의 KD로 CCP18 내지 CCP20으로 구성된 FH 단편에 대한 결합 친화성을 갖는, 항체 또는 단편.
- 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 단편은,
- 10%(v/v) 혈청의 존재 하에 38 nM 이하의 IC50 값, 예를 들어 30 nM 이하의 IC50 값으로 생체 외에서(in vitro) 지질다당류 상에 C3 침착을 억제하고/하거나;
- 10%(v/v) 혈청의 존재 하에 150 nM 이하의 IC50 값, 예를 들어 130 nM 이하의 IC50 값으로 생체 외에서 용혈능을 억제하고/하거나;
- 생체 외에서 C3b에 대한 FH의 KD를 2 μM 이하로 감소(결합 친화성을 증가)시키고/시키거나 생체 외에서 C3b에 대한 FH의 결합 친화성을 적어도 3배 증가시키는, 항체 또는 단편. - 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서,
- 서열 식별 번호: 4 또는 16에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열,
- 서열 식별 번호: 8 또는 12에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 포함하는, 항체 또는 단편. - 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 식별 번호: 4에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열, 및 8에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 포함하는, 항체 또는 단편.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 식별 번호: 4에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열, 및 서열 식별 번호: 12에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 포함하는, 항체 또는 단편.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 식별 번호: 16에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열, 및 서열 식별 번호: 8에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 포함하는, 항체 또는 단편.
- 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 서열 식별 번호: 16에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 경쇄 서열, 및 서열 식별 번호: 12에 대해 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 적어도 99% 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 가변 중쇄 서열을 포함하는, 항체 또는 단편.
- 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 단편은 FH 활성도를 증강시키고, 선택적으로 FH 활성도는 대체 보체 활성화의 억제이고, 추가로 선택적으로 대체 보체 활성화의 억제는,
- 용혈능의 억제,
- 보체 성분 3(C3)의 침착의 억제 및/또는
- C3b, iC3b 및/또는 C3d에 대한 FH의 결합 증가를 포함하는, 항체 또는 단편. - 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 단편은 면역글로불린 중쇄 가변 영역 및 면역글로불린 경쇄 가변 영역을 포함하고, 추가로 면역글로불린 중쇄 불변 영역 및 면역글로불린 경쇄 불변 영역을 포함하는, 항체 또는 단편.
- 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 단편은 Fab 단편을 포함하는, 항체 또는 단편.
- 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 단편은 단클론성인, 항체 또는 단편.
- 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 단편은 인간 경쇄 및 중쇄 불변 영역을 포함하는, 항체 또는 단편.
- 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 단편은 페길화(PEGylated)되는, 항체 또는 단편.
- 제19항에 있어서, 상기 항체 또는 단편은 페길화 Fab 단편인, 항체 또는 단편.
- 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 단편을 암호화하는 핵산 서열을 포함하는, 분리된, 합성된 또는 재조합된 핵산.
- 제21항에 따른 핵산을 포함하는 벡터.
- 제22항에 있어서, 상기 벡터는 AAV 벡터인, 벡터.
- 제23항에 있어서, 상기 AAV 벡터는 AAV1, AAV2, AAV3, AAV4, AAV5, AAV6, AAV7, AAV8, AAV9, AAV10, AAV11 및 AAV12로 구성된 군으로부터 선택되는, 벡터.
- 제21항에 따른 핵산 또는 제22항 내지 제24항 중 어느 한 항에 따른 벡터를 포함하는 재조합 세포.
- 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 단편, 제21항에 따른 핵산, 제22항 내지 제24항 중 어느 한 항에 따른 벡터 또는 제25항에 따른 재조합 세포, 및 약학적으로 허용 가능한 담체, 희석제 및/또는 부형제를 포함하는 약학 조성물.
- 치료에의 용도를 위한 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 단편, 제21항에 따른 핵산, 제22항 내지 제24항 중 어느 한 항에 따른 벡터, 제25항에 따른 재조합 세포 또는 제26항에 따른 약학 조성물.
- 대체 보체 활성화를 억제하는 용도를 위한 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 단편, 제21항에 따른 핵산, 제22항 내지 제24항 중 어느 한 항에 따른 벡터, 제25항에 따른 재조합 세포 또는 제26항에 따른 약학 조성물.
- 대체 경로의 보체 활성화와 관련된 장애의 치료, 완화 또는 예방에의 용도를 위한 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 단편, 제21항에 따른 핵산, 제22항 내지 제24항 중 어느 한 항에 따른 벡터, 제25항에 따른 재조합 세포 또는 제26항에 따른 약학 조성물.
- 제29항에 있어서, 상기 장애는 비정형 용혈성 요독증후군(aHUS), 발작성 야간혈색소 요증(PNH), 노인황반변성(AMD), 막증식성 사구체신염(MPGN) 및 IgA 신증으로 구성된 군으로부터 선택되는, 용도를 위한 항체 또는 단편, 핵산, 재조합 세포 또는 약학 조성물.
- 대체 경로의 보체 활성화와 관련된 장애의 치료, 완화 또는 예방을 위한 약물의 제조를 위한 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 단편, 제21항에 따른 핵산, 제22항 내지 제24항 중 어느 한 항에 따른 벡터, 제25항에 따른 재조합 세포 또는 제26항에 따른 약학 조성물의 용도.
- 제31항에 있어서, 상기 장애는 비정형 용혈성 요독증후군(aHUS), 발작성 야간혈색소 요증(PNH), 노인황반변성(AMD), 막증식성 사구체신염(MPGN) 및 IgA 신증으로 구성된 군으로부터 선택되는, 용도.
- 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 단편, 제21항에 따른 핵산, 제22항 내지 제24항 중 어느 한 항에 따른 벡터, 제25항에 따른 재조합 세포 또는 제26항에 따른 약학 조성물의 치료적 유효량을, 이를 필요로 하는 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대체 경로의 보체 활성화와 관련된 장애를 치료, 완화 또는 예방하기 위한 방법.
- 제33항에 있어서, 상기 장애는 비정형 용혈성 요독증후군(aHUS), 발작성 야간혈색소 요증(PNH), 노인황반변성(AMD), 막증식성 사구체신염(MPGN) 및 IgA 신증으로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
- 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 단편, 제21항에 따른 핵산, 제22항 내지 제24항 중 어느 한 항에 따른 벡터, 제25항에 따른 재조합 세포 또는 제26항에 따른 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대체 보체 활성화를 억제하기 위한 방법.
- 제21항에 따른 핵산 또는 제22항 내지 제24항 중 어느 한 항에 따른 벡터를 세포에 제공하는 단계 및 상기 세포가 상기 핵산 또는 벡터에 포함된 핵산 서열을 번역하도록 함으로써 제1항 내지 제20항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 단편을 제조하는 단계를 포함하는, 항체 또는 단편을 제조하기 위한 방법.
- 제36항에 있어서, 상기 항체 또는 단편을 채취, 정제 및/또는 분리하는 단계를 추가로 포함하는, 방법.
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