TW202110893A - 因子h增強抗體及其用途 - Google Patents
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Abstract
本文中提供對因子H特異之新穎經分離之合成或重組抗體及其片段,或者編碼此種抗體及片段之核酸或載體。本文中進一步提供此種抗體、片段、核酸或載體用於抑制補體活化及治療與補體活化相關之病症的用途。
Description
補體系統為先天免疫力之重要部分,其有助於保護許多生物體(諸如哺乳動物)免受侵襲性病原體影響。補體系統由30多種不同的組分組成,該等組分主要在肝臟中合成。補體系統之活化藉由三種不同的途徑發生,即經典途徑、凝集素途徑及替代途徑。該三種途徑在C3轉化酶形成時彙集,該等途徑中之各途徑為不同的但具有類似的活性。
在經典補體途徑中,由C1q、C1r及C1s組成之補體組分(C) 1複合物之活化在結合至抗體-抗原複合物後發生。C1複合物使C4及C2裂解,從而形成由C4bC2a組成之C3轉化酶。C3轉化酶將C3裂解為活性組分C3a及C3b。在凝集素途徑中,甘露糖結合凝集素結合至病原表面上之甘露糖殘基,從而活化能夠使C4及C2裂解之絲胺酸蛋白酶MASP-1及MASP-2。如在經典途徑中,此導致形成C4bC2a C3轉化酶。此C3轉化酶可結合C3b以形成C5轉化酶。與經典途徑及凝集素途徑相反,替代途徑由於C3在血漿中自發水解為C3(H2O)而具有低水準之連續活性。此C3b樣C3(H2O)可藉由結合因子B (FB)形成流體相C3轉化酶,其又藉由因子D活化為Bb。類似地,當C3b結合至表面時,其可結合FB以形成C3bB。此複合物藉由因子D裂解成C3bBb,後者為可藉由備解素(因子P)穩定為C3bBbP之替代途徑C3轉化酶。此C3轉化酶能夠將C3裂解成C3a及C3b。除此過程以外,替代途徑亦充當經典途徑及凝集素活化途徑之擴增環,因為此等途徑中產生之C3b可充當替代途徑之起點。從而,擴增環強化經典途徑及凝集素途徑。該三個活化途徑之一中形成的C3轉化酶可結合C3b,以形成C5轉化酶。所有三個補體途徑之C5轉化酶將C5活化為C5a及C5b,從而引發補體系統之終末途徑。C5b結合C6、C7、C8及C9以形成膜攻擊複合物(MAC),從而形成跨膜通道並引起細胞裂解。
在病原體之膜中形成孔隙後,補體藉由用C3b分子助噬以及產生將免疫細胞吸引至感染部位並活化免疫細胞之促炎性肽(諸如C3a及C5a)來輔助清除病原體或已改變之自體細胞。由於補體之強促炎特性,故宿主細胞受到若干膜及可溶性補體調控蛋白之充分保護。
替代途徑佔總補體活性之80%至90%。因此,此途徑之調控至關重要。由C3自發水解形成之C3(H2O)及C3b在未被病原體結合時一般被因子H (FH)、因子I (FI)及宿主細胞表面分子快速不活化,從而抑制C3轉化酶形成。CD55 (亦稱為衰退加速因子或DAF)結合宿主細胞表面之C3b。FI使C3b裂解為非活性形式,但視表現於細胞表面上之輔因子(CD46、MCP)或在血漿中循環之輔因子(FH)而定。
FH為血漿糖蛋白,其對於控制溶液中及細胞表面上之替代補體途徑皆為必需的。FH在與FB相同之位置結合C3b,從而防止C3轉化酶形成。FH亦具有衰退加速活性,亦即,其在替代途徑C3轉化酶已形成後促進該酶解離。FH是否結合至C3b由細胞表面上存在之碳水化合物決定。宿主細胞表面上存在之唾液酸、糖胺聚糖及肝素促進FH與C3b結合,而C3b與病原體表面表現之分子結合引起FB結合。FH因而在宿主細胞上而非在病原細胞表面上發揮其補體抑制活性,此係因為結合FH之細胞表面分子表現於宿主細胞上但一般不表現於病原細胞上。FH含有20個補體控制蛋白(CCP)結構域,自FH之N末端開始編號為1至20。CCP結構域亦稱為短一致重複(SCR)或壽司(sushi)結構域。CCP 1-4為參與調控之結構域且CCP 19-20參與結合C3b,並且CCP 6、7、8、19及20結合至細胞表面表現之GAG及唾液酸。結合CCP19及/或CCP20之抗體抑制FH活性。
因子H相關蛋白(CFHR)為與FH之結構及抗原性相關的血漿糖蛋白。FHR蛋白亦包含CCP結構域,且此等結構域與FH中所發現之CCP結構域具有不同程度的同源性。舉例而言,FHR1包含對應於CCP6、CCP7、CCP18、CCP19及CCP20之結構域。與FH相比,CFHR不具有強補體抑制活性。CFHR之一個共同特徵為其結合至補體之C3b組分,從而與FH競爭結合至C3b,且因而被視為替代補體途徑之正調控劑。
由於突變所致之FH缺乏或宿主表面識別受損與補體介導之組織損傷及疾病相關。在正常止血過程中在控制補體活化後,FH在限制補體介導之患病細胞及組織損傷方面亦起重要作用。已描述FH基因中可能導致FH蛋白喪失功能之多個突變。FH之C末端區域為疾病之突變熱點。此為FH與宿主細胞結合之關鍵區域。此區域中之大部分疾病相關突變會干擾FH結合。大部分具有突變FH基因之患者具有雜合突變,意謂約一半循環FH具有正常功能。然而,在補體被活化之某些病狀下,此顯然不足以保護自身表面。FH缺乏可能導致腎病,諸如膜增生性腎小球腎炎(MPGN)及非典型溶血性尿毒症候群(aHUS)。最近,已描述FH突變與年齡相關性黃斑疾病(AMD)之間的關係。
目前,FH缺乏(諸如aHUS中)之標準治療為血漿補充或血漿交換療法。利用此種療法,補充缺乏之補體調節劑。血漿交換療法另外移除突變補體因子及/或針對補體因子之自體抗體。然而,血漿療法亦具有一些限制。尚無前瞻性臨床研究證明血漿交換療法在治療aHUS方面安全或有效,且血漿療法之效率可能視潛在突變而定。一些患者對新鮮冷凍血漿產生過敏反應,由此可能需要中止任何形式之血漿療法。此外,由於投與血漿來源之活性病原性補體組分,血漿交換可能使aHUS之臨床表現惡化。
最近,治療性單株抗體依庫珠單抗(eculizumab)已在若干國家(其中包括美國及歐洲國家)經批准用於治療aHUS及陣發性夜間血紅素尿症(PNH)。依庫珠單抗為可防止C5裂解為C5a及C5b之C5特異性人類化小鼠單株抗體。其因而防止終末途徑活化並減少免疫細胞流入。然而,依庫珠單抗之使用與不良副作用相關聯。由於其阻斷引發終末途徑之關鍵組分C5,因此經依庫珠單抗治療之患者變得易感染莢膜細菌(諸如腦膜炎雙球菌(Neisseria meningitidis)),其清除率非常依賴於MAC形成。因此,要求患者在接受依庫珠單抗治療前接種腦膜炎球菌疫苗。此外,由於依庫珠單抗在C3下游起作用,故C3沈積得以維持,此在涉及不良或過度補體活化之若干病症中為不利的。另外,依庫珠單抗治療涉及高成本,且抗體之可用性受限制。
Cheng等人(Clinical Chemistry, 2005)描述結合CCP18之小鼠單株抗體。據描述,此抗體(稱為X52.1)增加FH與C3b及C3d之結合,認為此係由FH二聚引起。X52.1誘導FH與C3b及C3d結合增加導致細胞(包括RBC及如Corey等人(J Biol Chem. 2000)所示之若干類型之癌細胞)之補體介導之溶解增加。此證明抗體X52.1抑制FH之補體抑制活性。實際上,Corey等人表明該抗體可藉由增強補體介導之癌細胞溶解而用於治療癌症。
持續需要結合FH之新穎及改良治療劑,諸如可用於治療與不良或過度補體活化相關之病症的劑。
本發明提供特異性結合因子H (FH)之補體控制蛋白結構域18 (CCP18)的抗體或其抗原結合片段,例如經分離之合成或重組抗體或其抗原結合片段。此種抗體及抗原結合片段可用於增強FH之活性,例如,增加FH對C3b之結合親和力、增加FH抑制C3沈積之能力及/或增加FH抑制溶血活性之能力。在一些實施例中,該抗體或片段包含:輕鏈CDR1序列,其包含序列SSVTY (SEQ ID NO: 1)或序列TSVTY (SEQ ID NO: 13);輕鏈CDR2序列,其包含序列ATS (SEQ ID NO: 2)或序列ASS (SEQ ID NO: 14);輕鏈CDR3序列,其包含序列QHRSSSNPLT (SEQ ID NO: 3);重鏈CDR1序列,其包含序列GFSLTNYG (SEQ ID NO: 5);重鏈CDR2序列,其包含序列VWSGGTT (SEQ ID NO: 6)或序列IWSGGTT (SEQ ID NO: 10);及重鏈CDR3序列,其包含序列ARNFGNYAMDY (SEQ ID NO: 7)或序列ARNFGNYAMDF (SEQ ID NO: 11)。
在一些實施例中,該抗體或片段包含:輕鏈CDR1序列,其包含序列SSVTY (SEQ ID NO: 1);輕鏈CDR2序列,其包含序列ATS (SEQ ID NO: 2);輕鏈CDR3序列,其包含序列QHRSSSNPLT (SEQ ID NO: 3);重鏈CDR1序列,其包含序列GFSLTNYG (SEQ ID NO: 5);重鏈CDR2序列,其包含序列IWSGGTT (SEQ ID NO: 10);及重鏈CDR3序列,其包含序列ARNFGNYAMDF (SEQ ID NO: 11)。在一些實施例中,該抗體或片段包含:可變輕鏈序列,其包含與SEQ ID NO: 4或16具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性之序列;及可變重鏈序列,其包含與SEQ ID NO: 8或12具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性之序列。在一些實施例中,該抗體或片段包含:可變輕鏈序列,其包含與SEQ ID NO: 4具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性之序列;及可變重鏈序列,其包含與SEQ ID NO: 12具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性之序列。
在一些實施例中,該抗體或片段包含:輕鏈CDR1序列,其包含序列SSVTY (SEQ ID NO: 1);輕鏈CDR2序列,其包含序列ATS (SEQ ID NO: 2);輕鏈CDR3序列,其包含序列QHRSSSNPLT (SEQ ID NO: 3);重鏈CDR1序列,其包含序列GFSLTNYG (SEQ ID NO: 5);重鏈CDR2序列,其包含序列VWSGGTT (SEQ ID NO: 6);及重鏈CDR3序列,其包含序列ARNFGNYAMDY (SEQ ID NO: 7)。在一些實施例中,該抗體或片段包含:可變輕鏈序列,其包含與SEQ ID NO: 4具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性之序列;及可變重鏈序列,其包含與SEQ ID NO: 8具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性之序列。
在一些實施例中,該抗體或片段包含:輕鏈CDR1序列,其包含序列TSVTY (SEQ ID NO: 13);輕鏈CDR2序列,其包含序列ASS (SEQ ID NO: 14);輕鏈CDR3序列,其包含序列QHRSSSNPLT (SEQ ID NO: 3);重鏈CDR1序列,其包含序列GFSLTNYG (SEQ ID NO: 5);重鏈CDR2序列,其包含序列VWSGGTT (SEQ ID NO: 6);及重鏈CDR3序列,其具有序列ARNFGNYAMDY (SEQ ID NO: 7)。在一些實施例中,該抗體或片段包含:可變輕鏈序列,其包含與SEQ ID NO: 16具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性之序列;及可變重鏈序列,其包含與SEQ ID NO: 8具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性之序列。
在一些實施例中,該抗體或片段包含:輕鏈CDR1序列,其包含序列TSVTY (SEQ ID NO: 13);輕鏈CDR2序列,其包含序列ASS (SEQ ID NO: 14);輕鏈CDR3序列,其包含序列QHRSSSNPLT (SEQ ID NO: 3);重鏈CDR1序列,其包含序列GFSLTNYG (SEQ ID NO: 5);重鏈CDR2序列,其包含序列IWSGGTT (SEQ ID NO: 10);及重鏈CDR3序列,其包含序列ARNFGNYAMDF (SEQ ID NO: 11)。在一些實施例中,該抗體或片段包含:可變輕鏈序列,其包含與SEQ ID NO: 16具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性之序列;及可變重鏈序列,其包含與SEQ ID NO: 12具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性之序列。
在一些實施例中,該抗體或片段對FH之結合親和力以KD
計為2.5×10-8
M或更低及/或對包含CCP18-20之FH片段之結合親和力以KD
計為0.1×10-9
M或更低,或者其中該抗體或片段對FH之結合親和力以KD
計為1.25×10-8
M或更低及/或對包含CCP18-20之FH片段之結合親和力以KD
計為0.04×10-9
M或更低。在一些實施例中,該抗體或片段對FH之結合親和力以KD
計為2.5×10-8
M或更低及/或對包含CCP18-20之FH片段之結合親和力以KD
計為0.1×10-9
M或更低,或者其中該抗體或片段對FH之結合親和力以KD
計為0.6×10-8
M或更低及/或對包含CCP18-20之FH片段之結合親和力以KD
計為0.6×10-11
M或更低。在一些實施例中,本發明之抗體或片段:在存在10% (v/v)血清時抑制活體外脂多醣(LPS)上之C3沈積,其中IC50
值為38 nM或更低,諸如IC50
值為30 nM或更低;及/或在存在10% (v/v)血清時,抑制活體外溶血活性,其中IC50
值為150 nM或更低,諸如IC50
值為130 nM或更低;及/或在存在10% (v/v)血清時使活體外FH對C3b之KD
值降低(使結合親和力增加)至2 µM或更低;及/或在存在10% (v/v)血清時,使活體外FH對C3b之結合親和力增加至少3倍。在某些實施例中,血清為正常人類血清。
在一些實施例中,該抗體或片段強化FH活性,視情況其中FH活性為抑制替代補體活化,進一步視情況其中抑制替代補體活化包括:抑制溶血活性;抑制補體組分3 (C3)沈積;及/或增加FH與C3b、iC3b及/或C3d之結合。在一些實施例中,該抗體或片段包含免疫球蛋白重鏈可變區及免疫球蛋白輕鏈可變區,且其中該抗體或片段進一步包含免疫球蛋白重鏈恆定區及免疫球蛋白輕鏈恆定區。在一些實施例中,該抗體或片段包含IgG之恆定區。在一些實施例中,IgG之恆定區為IgG1、IgG2、IgG3或IgG4 (例如人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)。在一些實施例中,該抗體或片段包含IgG4 (例如人類IgG4)之恆定區。在一些實施例中,IgG4之恆定區在297位包含突變。在某些實施例中,IgG4之恆定區在297位包含胺基酸殘基Q。在某些實施例中,IgG4之恆定區在297位包含胺基酸殘基A。
在一些實施例中,該片段至少包含Fab片段。在一些實施例中,該抗體或片段為單株抗體或其片段。在一些實施例中,該抗體或片段為嵌合或人類化抗體或其片段,其包含人類輕鏈及重鏈恆定區。在一些實施例中,該抗體或片段經PEG化。在一些實施例中,該抗體或片段為PEG化Fab片段。
在一些實施例中,本發明提供一種經分離之合成或重組核酸,其包含編碼本文中所揭示之抗體或片段中之任一者的核酸序列。在一些實施例中,本發明提供一種載體,其包含本文中所揭示之核酸中之任一者。在一些實施例中,該載體為AAV載體。在一些實施例中,該AAV載體係選自由以下組成之群:AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11及AAV12。
在一些實施例中,本發明提供一種重組細胞,其包含本文中所揭示之核酸中之任一者或本文中所揭示之載體中之任一者。
在一些實施例中,本發明提供一種醫藥組合物,其包含本文中所揭示之抗體或片段中之任一者、本文中所揭示之核酸中之任一者、本文中所揭示之載體中之任一者、或本文中所揭示之重組細胞中之任一者,及醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑及/或賦形劑。
在一些實施例中,本發明提供本文中所揭示之抗體或片段中之任一者、本文中所揭示之核酸中之任一者、本文中所揭示之載體中之任一者以供用於治療。在一些實施例中,本發明提供本文中所揭示之抗體或片段中之任一者、本文中所揭示之核酸中之任一者、或本文中所揭示之載體中之任一者以供用於抑制替代補體活化。在一些實施例中,本發明提供本文中所揭示之抗體或片段中之任一者、本文中所揭示之核酸中之任一者、或本文中所揭示之載體中之任一者以供用於治療、減輕或預防與替代途徑補體活化相關之病症。在一些實施例中,該病症係選自由以下組成之群:非典型溶血性尿毒症候群(aHUS)、陣發性夜間血紅素尿症(PNH)、年齡相關黃斑變性(AMD)、膜增生性腎小球腎炎(MPGN)及IgA腎病。
在一些實施例中,本發明提供一種本文中所揭示之抗體或片段中之任一者、本文中所揭示之核酸中之任一者、或本文中所揭示之載體中之任一者用於製備用以治療、減輕或預防與替代途徑補體活化相關之病症之藥物的用途。在一些實施例中,該病症係選自由以下組成之群:非典型溶血性尿毒症候群(aHUS)、陣發性夜間血紅素尿症(PNH)、年齡相關黃斑變性(AMD)、膜增生性腎小球腎炎(MPGN)及IgA腎病。
在一些實施例中,本發明提供一種治療、減輕或預防與替代途徑補體活化相關之病症的方法,該方法包括向有需要之個體投與治療有效量之本文中所揭示之抗體或片段中之任一者、本文中所揭示之核酸中之任一者、本文中所揭示之載體中之任一者、或本文中所揭示之醫藥組合物中之任一者。在一些實施例中,該病症係選自由以下組成之群:非典型溶血性尿毒症候群(aHUS)、陣發性夜間血紅素尿症(PNH)、年齡相關黃斑變性(AMD)、膜增生性腎小球腎炎(MPGN)及IgA腎病。
在一些實施例中,本發明提供一種抑制替代補體活化之方法,該方法包括向受試者投與本文中所揭示之抗體或片段中之任一者、本文中所揭示之核酸中之任一者、本文中所揭示之載體中之任一者、或本文中所揭示之醫藥組合物中之任一者。
在一些實施例中,本發明提供一種產生本文中所揭示之抗體或片段中之任一者的方法,該方法包括向細胞提供本文中所揭示之核酸中之任一者或本文中所揭示之載體中之任一者,以及允許該細胞轉譯該核酸或載體所包含之核酸序列,從而產生該抗體或片段。在一些實施例中,該方法進一步包括收集、純化及/或分離該抗體或片段。
相關申請案之交叉引用
本申請案主張2019年7月17日申請之美國臨時專利申請案第62/875,309號之權益及優先權,該美國臨時專利申請案之揭示內容出於所有目的以引用之方式整體併入本文中。A. 一般技術及定義
除非本文中另外定義,否則本文中所敍述之科學及技術術語將具有普通熟習此項技術者通常所理解之含義。一般而言,本文中所描述之結合藥理學、細胞及組織培養、分子生物學、細胞及癌症生物學、神經生物學、神經化學、病毒學、免疫學、微生物學、遺傳學以及蛋白質及核酸化學使用之命名法及技術為此項技術中熟知且常用的。在矛盾之情況下,將以本說明書(包括定義)為準。
除非另外指示,否則本發明之實踐將採用分子生物學(包括重組技術)、微生物學、細胞生物學、生物化學及免疫學之習知技術,該等技術在熟習此項技術者能力範圍內。此種技術充分闡明於文獻中,諸如Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 第二版(Sambrook等人, 1989) Cold Spring Harbor Press;Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait編, 1984);Methods in Molecular Biology, Humana Press;Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis編, 1998) Academic Press;Animal Cell Culture (R.I. Freshney編, 1987);Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather及P.E. Roberts, 1998) Plenum Press;Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths及D.G. Newell編, 1993-1998) J. Wiley and Sons;Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.);Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller及M.P. Calos編, 1987);Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel等人編, 1987);PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis等人編, 1994);Sambrook及Russell, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 第3版, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (2001);Ausubel等人, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY (2002);Harlow及Lane Using Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY (1998);Coligan等人, Short Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY (2003);Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999)。
酶促反應及純化技術係根據製造商之說明書、如此項技術中通常所實現或如本文中所描述來進行。結合本文中所描述之分析化學、生物化學、免疫學、分子生物學、合成有機化學以及醫學及製藥化學使用之命名法以及實驗室程序及技術為此項技術中熟知且常用的。使用標準技術進行化學合成及化學分析。
貫穿本說明書及實施例,字組「包含(comprise)」或變化形式(諸如「comprises」或「comprising」)應理解為隱含包括所陳述之整數或整數群組,但不排除任何其他整數或整數群組。
應理解,在本文中以措辭「包含」描述實施例之情況下,亦提供以「由……組成」及/或「基本上由……組成」加以描述之其他類似實施例。
使用術語「包括」意謂「包括但不限於」。「包括」與「包括但不限於」可互換使用。
在術語「例如(e.g.或for example)」之後的任何實例皆不意欲為窮舉的或限制性的。
除非上下文另有要求,否則單數術語將包括複數且複數術語將包括單數。
冠詞「一」在本文中用於指一個或多於一個(亦即,至少一個)該冠詞之語法受詞。舉例而言,「一要素」一個要素或多於一個要素。
「治療」病狀或患者係指採取諸多步驟以獲得有益或所要結果,包括臨床結果。就疾病或病狀(例如眼病)而言,治療係指降低或改善感染(例如眼病或與之相關之症狀)之進展、嚴重程度及/或持續時間,或者改善由投與一或多種療法(包括但不限於一或多種預防劑或治療劑)而引起之一或多種症狀。
如本文中所使用,術語「對……特異」及「特異性結合」或「能夠特異性結合」係指抗體與其抗原決定基之間的非共價相互作用。其指示該抗體或片段優先結合至該抗原決定基而非其他結合位點或其他抗原。因此,儘管該抗體或片段可能非特異性結合至其他結合位點或抗原,但該抗體或片段對其抗原決定基之結合親和力顯著高於該抗體或片段對任何其他結合位點或抗原之結合親和力。
胺基酸序列或核酸序列之一致性百分比或術語「序列一致性%」在本文中定義為胺基酸序列或核酸序列之全長上在比對兩個序列並且在必要時引入空位以達成最大一致性百分比之後與參考胺基酸序列或核酸序列中之殘基一致的殘基的百分比。用於比對之方法及電腦程式在此項技術中為熟知的,例如「Align 2」。
如本文中所使用,「FH.07」係指包含SEQ ID NO: 32之可變輕鏈胺基酸序列及SEQ ID NO: 36之可變重鏈胺基酸序列的抗體。
如本文中所使用,「FHR-1.3B4」係指包含SEQ ID NO: 48之可變輕鏈胺基酸序列及SEQ ID NO: 52之可變重鏈胺基酸序列的抗體。
在如本文中所示之胺基酸序列中,胺基酸由單字母符號表示。此等單字母符號及三字母符號對熟習此項技術者為熟知的且具有以下含義:A (Ala)為丙胺酸,C (Cys)為半胱胺酸,D (Asp)為天冬胺酸,E (Glu)為麩胺酸,F (Phe)為苯丙胺酸,G (Gly)為甘胺酸,H (His)為組胺酸,I (Ile)為異白胺酸,K (Lys)為離胺酸,L (Leu)為白胺酸,M (Met)為甲硫胺酸,N (Asn)為天冬醯胺酸,P (Pro)為脯胺酸,Q (Gln)為麩醯胺酸,R (Arg)為精胺酸,S (Ser)為絲胺酸,T (Thr)為蘇胺酸,V (Val)為纈胺酸,W (Trp)為色胺酸,Y (Tyr)為酪胺酸。
術語「增強FH活性」意謂FH之活性在根據本發明之抗體或片段結合至FH時增加。在一些實施例中,藉由本發明之抗體及片段增強之FH活性為抑制替代補體活化,諸如在個體中。如本文中所使用,術語「替代補體活化」係指經由替代途徑活化補體系統,亦即,至少涉及替代途徑之C3轉化酶(亦即,C3bBb/C3bBbP)之形成,或涉及增加此C3轉化酶之形成。替代補體活化可進一步涉及藉由替代途徑C3轉化酶將C3裂解為C3a及C3b、形成替代途徑C5轉化酶(亦即,C3bBbC3b/C3bBbC3bP)及/或裂解C5以及隨後結合C6、C7、C8及C9以形成MAC。替代補體活化可進一步包括替代途徑擴增環增加。
在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或片段中之任一者皆能夠抑制本文中所揭示之替代補體活化過程中之任一或多個。在一些實施例中,替代補體活化在個體中(例如在個體之體液,諸如血液、間質液或腦脊髓液中)受抑制。如本文中所使用,術語「個體」與「受試者」或「患者」可互換使用,並且係指包含補體系統作為其免疫系統之一部分的人類或動物,諸如哺乳動物(例如,囓齒動物、猿、馬、牛、豬、犬、貓)。在一些實施例中,個體為哺乳動物。在一些實施例中,哺乳動物為人類。
如本文中所使用,「抑制替代補體活化」包括引起或由其抑制所致之替代補體系統之組分、因子或活性之量或活性之任何改變。舉例而言,抑制替代補體活化包括抑制溶血活性、抑制受試者細胞上之補體組分3 (C3)沈積、增加FH與C3b、iC3b及/或C3d結合、抑制替代補體途徑C3轉化酶C3bBb/C3bBbP形成、抑制因子B與C3b結合及/或抑制C3b與因子B之間的相互作用、抑制替代途徑C3轉化酶將C3裂解為C3a及C3b、增加FH與宿主細胞(特定言之,與宿主細胞上表現之唾液酸、糖胺聚糖及/或肝素)結合、抑制替代補體途徑擴增環及抑制替代補體途徑C5轉化酶C3bBbC3bP/C3bBbC3bP形成、抑制替代途徑C5轉化酶將C5裂解為C5a及C5b、增加FH之衰退加速活性(亦即,在替代途徑C3轉化酶形成後促進其解離),及/或增加FI輔因子活性從而引起C3b降解。在特定實施例中,藉由本發明之抗FH抗體及片段而得以增強之FH抑制替代補體活化包括抑制溶血活性、抑制受試者細胞上之C3沈積及/或增加FH與C3b、iC3b及/或C3d之結合。
如本文中所使用,「抑制」較佳意謂所指示之活性降低至少約25%、至少約50%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%或至少約95%。因此,「抑制替代補體活化」意謂替代補體途徑之活性降低至少約25%、至少約50%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%或至少約95%。類似地,「抑制溶血活性」意謂溶血活性降低至少約25%、至少約50%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%或至少約95%。
如本文中所使用,「增加」較佳意謂所指示之活性增加至少約25%、至少約50%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%或至少約95%。因而,「增加FH與C3b結合」意謂FH與C3b結合增加至少約25%、至少約50%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%或至少約95%。類似地,「增加FH與宿主細胞結合」意謂FH與宿主細胞結合增加至少約25%、至少約50%、至少約75%、至少約80%、至少約85%、至少約90%、至少約95%、至少約100%、至少約150%、至少約200%、至少約250%、至少約300%、至少約350%、至少約400%、至少約450%、至少約500%、至少約550%、至少約600%、至少約700%、至少約800%、至少約900%或至少約1000%。
如本文中所使用,「溶血活性」係指較佳由於細胞表面上之MAC形成而導致紅血球破裂以及隨後例如由補體系統活化誘導細胞內含物釋放至循環中。舉例而言,如本文中於實例中所描述,藉由使用如Sanchez-Corral等人, (2004)及Wouters等人, (2008)所描述之溶血分析法來量測溶血活性,視情況進行一些修改。在此代表性非限制性分析法中,將諸如綿羊紅血球(SRBC)之紅血球與血清(例如人類血清)一起例如在37℃下培育1.25小時,同時振盪。具有低水準FH或功能障礙FH之血清引起SRBC溶解。可藉由添加含有20 mM EDTA之佛羅那緩衝液(veronal buffer),繼而在預冷卻離心機(例如7℃)中離心2.5分鐘來終止溶解。藉由在412 nm下量測上清液之吸光度來測定紅血球溶解百分比。血清可例如來自健康人類個體或罹患與不合需要或過度之替代途徑補體活化相關之病症(諸如aHUS)的人類個體。可藉由將紅血球與血清一起在抗體或片段存在下培育來測定抗體或片段抑制溶血活性之能力。
「結合親和力」係指抗體或功能部分或功能等效物之單一結合位點與其結合搭配物(例如抗原)之間的非共價相互作用總和的強度。除非另外指示,否則如本文中所使用,「結合親和力」係指體現結合配對之成員(本申請案中之抗體與抗原)之間的1:1相互作用的固有結合親和力。結合親和力在本文中由平衡解離常數(KD
)表示,其計算為ka
與kd
比率,參見例如Chen, Y.等人, 1999。可藉由此項技術中已知的常用方法來量測親和力,諸如表面電漿子共振(SPR)分析法,諸如BiaCore (GE Healthcare Life Sciences GE Healthcare Life Sciences)或IBIS Technologies BV (Hengelo, 荷蘭)之IBIS-iSPR儀器,或溶液相分析法,諸如Kinexa。B. 抗 FH 抗體及其片段
WO 2016/028150描述一種鼠類促效抗FH抗體,稱為FH.07,其抑制替代途徑活化,如FH與C3b結合增加、抑制所介導之C3沈積及抑制溶血活性所示。抗體之Fab'及F(ab')2片段顯示具有相同的FH增強作用。WO 2019/139481描述另一鼠類促效抗FH抗體,稱為FHR-1.3B4,其對FH之結合親和力高於FH.07且增強FH活性之能力有所增強。
在一個態樣中,本發明提供促效抗FH抗體(例如人類化抗體)及其片段,亦即,增強FH活性之抗體及片段。在一個態樣中,此等抗體與抗體FH.07或抗體FHR-1.3B4競爭結合至FH之結構域CCP18中之相同抗原決定基。增強型抗FH抗體為替代補體途徑活化之有效抑制劑且因此可用於治療與不合需要或過度之補體系統替代途徑活化相關的病症。FH特異性抑制替代途徑擴增環,其中C3裂解成C3b及其隨後在細胞表面結合至FB且形成C3轉化酶促進其他C3分子裂解成C3b。本發明之抗體及片段在C3層面上干擾補體活化之事實的主要優勢為避免C3b在表面上累積及C3a釋放。相反,若在C5層級上抑制補體活化,諸如用依庫珠單抗,則不會抑制C3b累積及C3a釋放。C3b充當調理蛋白,而C3a為過敏毒素。因而較佳防止C3b累積及C3a形成,因為此等過程導致免疫細胞之吸引及標靶之調理吞噬。此意味著例如接受依庫珠單抗之PNH患者仍需要輸血,因為C3b累積會引起紅血球之調理,紅血球隨後在肝臟及脾臟中被清除。此外,用抗C5抗體處理導致細胞上C3b累積及C3a形成,否則其將會被MAC溶解。抗C5抗體之一個重要缺點為患者變得容易感染,此係因為抗體亦干擾由病原體誘導之補體活化。此可藉由靶向保護宿主細胞之補體系統調控劑來避免。
如本文中所使用,術語「抗體」係指至少包含與輕鏈可變區(VL)配對之重鏈可變區(VH)且對靶抗原決定基特異的免疫球蛋白。該術語涵蓋多株及單株抗體。其係指特異性結合至FH之CCP18的任何形式之抗體,包括全長免疫球蛋白。根據本發明之抗體或其片段包含至少一個抗原結合位點。如本文中所使用,術語「抗原結合位點」係指包含至少一個CDR序列、較佳至少兩個CDR序列、更佳至少三個CDR序列之抗體或其片段之位點。舉例而言,抗原結合位點包含輕鏈CDR 1-3或重鏈CDR 1-3。在一些實施例中,抗原結合位點包含輕鏈CDR 1-3及重鏈CDR 1-3。
如熟習此項技術者所熟知,抗體含有兩個重鏈及兩個輕鏈。抗體之重鏈為構成免疫球蛋白分子之兩種類型鏈中較大的一種。重鏈包含恆定域及可變域,該可變域參與抗原結合。抗體之輕鏈為構成免疫球蛋白分子之兩種類型鏈中較小的一種。輕鏈包含恆定域及可變域。輕鏈之可變域通常但並非總是與重鏈之可變域一起參與抗原結合。互補決定區(CDR)為重鏈可變域及輕鏈可變域中所存在之高變區。在全長抗體之情況下,重鏈之CDR 1-3及所連接之輕鏈之CDR 1-3共同形成抗原結合位點。
CDR參與抗原結合並賦予抗原特異性及對抗體之結合親和力。重鏈及輕鏈之各可變域中存在三個CDR,分別命名為各可變域之CDR1、CDR2及CDR3。如本文中所使用,術語「CDR集」係指能夠結合靶抗原之單一重鏈或輕鏈可變域中存在的三個CDR之群組。已根據不同的系統不同地定義此等CDR之確切邊界。三個重鏈CDR可稱為CDRH1、CDRH2及CDRH3,且三個輕鏈CDR可稱為CDRL1、CDRL2及CDRL3。
「抗體之抗原結合片段」在本文中定義為抗體中能夠特異性結合與該抗體所結合之抗原相同的抗原(例如FH之CCP18)但未必達至相同程度的部分。此外,FH活性增強抗體之片段亦增強FH活性,但未必達至相同程度。此外,FH活性抑制抗體之片段亦抑制FH活性,但未必達至相同程度。在一些實施例中,根據本發明之抗體片段包含抗體(例如,本文中所揭示之抗體中之任一者)之重鏈CDR1、CDR2及CDR3序列,且在一些實施例中進一步包含抗體之輕鏈CDR1、CDR2及CDR3序列。抗體片段之非限制性實例為單結構域抗體、單鏈抗體、奈米抗體、單功能抗體、單鏈可變片段(scFv)、Fab片段、Fab'片段、F(ab')2
片段及F(ab)2
片段。在一些實施例中,抗體片段至少包含重鏈可變域(VH)及/或輕鏈可變域(VL)。在一些實施例中,片段至少包含Fab片段。在一些實施例中與本發明之抗體競爭結合至相同抗原決定基之增強型抗FH抗體FH.07或抗體FHR-1.3B4之Fab'片段已顯示保留增強FH功能之能力。在一些實施例中,本發明之抗體之片段因此為根據本發明之抗體之Fab片段、Fab'片段、F(ab')2
片段或F(ab)2
片段。在另一實施例中,根據本發明之抗體之片段包含免疫球蛋白重鏈可變區、免疫球蛋白重鏈恆定區、免疫球蛋白輕鏈可變區及免疫球蛋白輕鏈恆定區。
在一些實施例中,根據本發明之抗體及片段能夠增強FH (諸如人類FH)之活性。
在一些實施例中,使用C3沈積分析法,諸如本文中於實例中所描述之C3沈積分析法來量測對C3沈積之抑制。此代表性非限制性分析法包括用LPS塗覆微量滴定盤。隨後在存在或不存在抗體或片段之情況下將諸盤與例如來自健康個體或者罹患與如以上所指示之不合需要或過度之替代補體活化相關之病症的個體的血清一起培育。可用抗C3抗體偵測LPS上之C3沈積。
在一些實施例中,使用如本文中於實例中所描述之ELISA來量測FH與C3b結合之增加。此代表性非限制性分析法包括用C3b塗覆微量ELISA盤並且將該盤與例如來自健康個體或者罹患與如以上所指示之不合需要或過度之替代補體活化相關之病症的個體的血清一起培育。可用抗FH抗體(諸如經過氧化物酶標記之多株抗FH)偵測結合之FH。可藉由在與所塗覆之C3b一起培育之前在抗體或片段存在下預培育血清來測定抗體或片段增強FH與C3b結合之能力。作為另一實例,可使用表面電漿子共振(SPR)來測定FH與C3b之結合,例如,如本文中於實例中所描述。SPR為在無標籤環境中即時量測生物分子相互作用之技術。將相互作用物之一(例如C3b)固定至感測器表面,並且例如在存在或不存在(不同濃度之)本發明之抗體或片段之情況下使另一相互作用物(例如FH)在溶液中游離並通過表面上。在一些實施例中,根據本發明之抗體或其片段使活體外FH對C3b之結合親和力增加(使KD
值降低)至至多2 μM、至多1.95 μM、至多1.8 μM、至多1.7 μM及/或使活體外FH對C3b之結合親和力增加至少2倍、至少2.5倍、至少3倍、至少3.5倍、至少4倍、至少4.5倍、至少5倍、至少5.5倍、至少6倍、至少7倍、至少8倍、至少9倍、或至少10倍。在特定實施例中,根據本發明之抗體或其片段使活體外FH對C3b之結合親和力(KD
)增加至低於1 μM、低於750 nM、低於500 nM、低於300 nM或低於250 nM。在特定實施例中,根據本發明之抗體或其片段使活體外FH對C3b之結合親和力(KD
)增加至介於250 nM與1 μM之間。在特定實施例中,根據本發明之抗體或其片段使活體外FH對C3b之結合親和力增加至少3至5倍。
在一些實施例中,本發明所提供之抗體或其片段在一或多種功能分析法中具有低活體外IC50
值,諸如在一些實施例中,就相同功能分析而言,其活體外IC50
值低於抗體FH.07或抗體FHR-1.3B4之活體外IC50
值。「IC50
」為此項技術中熟知的術語,並且係指抑制或降低某種功能活性達50%所必需的抗體或片段濃度。抗體或片段之IC50
值愈低,抗體或片段之抑制活性愈強,且其作為治療劑之潛能愈大。在一些實施例中,功能分析為如本文中以上所描述之C3b沈積分析及/或溶血分析。在一些實施例中,根據本發明之抗體或其片段在存在10% (v/v)正常人類血清時抑制活體外LPS上之C3沈積,IC50
值為38 nM或更低、35 nM或更低、32 nM或更低、30 nM或更低、28 nM或更低、27 nM或更低、25 nM或更低、23 nM或更低、20 nM或更低、18 nM或更低、15 nM或更低、或者10 nM或更低。在一些實施例中,根據本發明之抗體或其片段在存在10% (v/v)正常人類血清時抑制活體外LPS上之C3沈積,IC50
值介於15 nM與30 nM之間。在一些實施例中,根據本發明之抗體或其片段在存在10% (v/v)正常人類血清時抑制活體外溶血活性,IC50
值為150 nM或更低、130 nM或更低、120 nM或更低、115 nM或更低、110 nM或更低、105 nM或更低、100 nM或更低、95 nM或更低、90 nM或更低、85 nM或更低、80 nM或更低、75 nM或更低、70 nM或更低、65 nM或更低、或者60 nM或更低。在一些實施例中,根據本發明之抗體或其片段在存在10% (v/v)正常人類血清時抑制活體外溶血活性,IC50
值為介於60 nM與80 nM之間。
在一些實施例中,本發明之抗體或片段在存在10% (v/v)正常人類血清時以如本文中所描述之低IC50
值抑制活體外LPS上之C3沈積,且在存在10% (v/v)正常人類血清時以如本文中以上所描述之低IC50
值抑制活體外溶血活性。在一些實施例中,根據本發明之抗體或片段在存在10% (v/v)正常人類血清時以38 nM或更低之IC50
值抑制活體外LPS上之C3沈積且在存在10% (v/v)正常人類血清時以150 nM或更低之IC50
值抑制活體外溶血活性,在存在10% (v/v)正常人類血清時以30 nM或更低之IC50
值抑制活體外LPS上之C3沈積且在存在10% (v/v)正常人類血清時以150 nM或更低之IC50
值抑制活體外溶血活性,或者在存在10% (v/v)正常人類血清時以27 nM或更低之IC50
值抑制活體外LPS上之C3沈積且在存在10% (v/v)正常人類血清時以100 nM或更低之IC50
值抑制活體外溶血活性。在一些實施例中,在如本文中以上所描述之C3沈積分析中測定存在10% (v/v)正常人類血清時活體外LPS上之C3沈積之IC50
值。在一些實施例中,在如本文中以上所描述之溶血活性分析中測定溶血活性之IC50
值。
在一些實施例中,本發明提供之抗體或其片段對FH及/或包含結構域CCP18-20之FH片段具有高結合親和力,諸如在一些實施例中,高於抗體FH.07或抗體FHR-1.3B4之結合親和力的結合親和力。在一些實施例中,抗體或片段之活體內治療活性典型地需要高結合親和力,例如,以便使該抗體或片段與結合位點及/或除其特異性抗原決定基或抗原以外之抗原的結合最小化,並且使需要投與活體內之抗體或片段之量最小化。在一些實施例中,具有高結合親和力之抗體較佳。在一些實施例中,抗體或其片段對FH之結合親和力以解離常數(KD
)計為2.5×10-8
M或更低及/或對包含CCP18-20之FH片段之結合親和力以KD
計為0.1×10-9
M或更低。在一個實施例中,本發明因此提供一種經分離之合成或重組抗體或其抗原結合片段,其特異性結合至因子H (FH)且強化FH活性,其中該抗體對FH之結合親和力以KD
計為2.5×10-8
M或更低及/或對包含CCP18-20之FH片段之結合親和力以KD
計為0.1×10-9
M或更低。在一些實施例中,根據本發明之抗體或片段對FH之結合親和力以KD
計為22.5 nM或更低、20 nM或更低、17.5 nM或更低、15 nM或更低、12.5 nM或更低、10 nM或更低、9 nM或更低、8 nM或更低、7 nM或更低、6 nM或更低、5 nM或更低、4 nM或更低、3 nM或更低、2 nM或更低、1 nM或更低、0.9 nM或更低、0.8 nM或更低、0.7 nM或更低、或者0.6 nM或更低。在一些實施例中,根據本發明之抗體或片段對包含CCP18-20之FH片段之結合親和力以KD
計為0.09×10-9
M或更低、0.08×10-9
M或更低、0.07×10-9
M或更低、0.06×10-9
M或更低、0.05×10-9
M或更低、0.04×10-9
M或更低、0.03×10-9
M或更低、0.02×10-9
M或更低、1×10-11
M或更低、0.9×10-11
M或更低、0.8×10-11
M或更低、0.7×10-11
M或更低、或者0.6×10-11
M或更低。在一些實施例中,抗體或其片段對FH之結合親和力以KD
計為1.25×10-8
M或更低及/或對包含CCP18-20之FH片段之結合親和力以KD
計為0.04×10-9
M或更低。在一些實施例中,抗體或其片段對FH之結合親和力以KD
計為0.6×10-8
M或更低及/或對包含CCP18-20之FH片段之結合親和力以KD
計為0.6×10-11
M或更低。在一些實施例中,使用表面電漿子共振(SPR),諸如在如本文中所描述之分析法中使用SPR,亦即,在藉由在ProtA晶片上俘獲該抗體或片段,隨後使全長FH (用於對FH之結合親和力)或包含結構域18-20之FH片段(用於對CCP18-20之結合親和力)在表面上流動來進行SPR從而測定結合親和力之分析法中測定結合親和力。
在一些實施例中,本發明提供之抗體或其片段增加FH與C3b之相互作用。在一些實施例中,抗體或其片段增加FH對C3b之結合親和力,其中解離常數(KD
)為2 μM或更低。在一些實施例中,根據本發明之抗體或片段增加對C3b之結合親和力,其中KD
為2 μM或更低、1.5 μM或更低、1 μM或更低、500 nM或更低、400 nM或更低、或者300 nM或更低。在一些實施例中,根據本發明之抗體或片段使活體外FH對C3b之結合親和力增加(使KD
降低)至少2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍或5倍。
在一些實施例中,根據本發明之抗體或片段具有高結合親和力且以低IC50
值抑制活體外LPS上之C3沈積及/或以低IC50
值抑制活體外溶血活性。在一些實施例中,根據本發明之抗體或片段對FH之結合親和力以KD
計為2.5×10-8
M或更低及/或對包含CCP18-20之FH片段之結合親和力以KD
計為0.1×10-9
M或更低,並且在存在10% (v/v)正常人類血清時以38 nM或更低之IC50
值抑制活體外LPS上之C3沈積及/或在存在10% (v/v)正常人類血清時以150 nM或更低之IC50
值抑制活體外溶血活性。在一些實施例中,該抗體或片段對FH之結合親和力以KD
計為1.25×10-8
M或更低(例如10 nM或更低、5 nM或更低、或者1 nM或更低)及/或對包含CCP18-20之FH片段之結合親和力以KD
計為0.04×10-9
M或更低,並且以30 nM或更低之IC50
值抑制活體外LPS上之C3沈積且在存在10% (v/v)正常人類血清時以115 nM或更低之IC50
值抑制活體外溶血活性。在一些實施例中,該抗體或片段對FH之結合親和力以KD
計為1.25×10-8
M或更低(例如10 nM或更低、5 nM或更低、或者1 nM或更低)及/或對包含CCP18-20之FH片段之結合親和力以KD
計為0.04×10-9
M或更低,並且在存在10% (v/v)正常人類血清時以27 nM或更低之IC50
值抑制活體外LPS上之C3沈積且在存在10% (v/v)正常人類血清時以100 nM或更低之IC50
值抑制活體外溶血活性。在一些實施例中,該抗體或片段對FH之結合親和力以KD
計為1.25×10-8
M或更低(例如10 nM或更低、5 nM或更低、或者1 nM或更低)及/或對包含CCP18-20之FH片段之結合親和力以KD
計為0.04×10-9
M或更低,並且在存在10% (v/v)正常人類血清時以25 nM或更低之IC50
值抑制活體外LPS上之C3沈積且在存在10% (v/v)正常人類血清時以80 nM或更低之IC50
值抑制活體外溶血活性。在一些實施例中,該抗體或片段對FH之結合親和力以KD
計為1.25×10-8
M或更低(例如10 nM或更低、5 nM或更低、或者1 nM或更低)及/或對包含CCP18-20之FH片段之結合親和力以KD
計為0.04×10-9
M或更低,並且在存在10% (v/v)正常人類血清時以介於15 nM與25 nM之間的IC50
值抑制活體外LPS上之C3沈積且在存在10% (v/v)正常人類血清時以介於15 nM與25 nM之間的IC50
值抑制活體外溶血活性。在一些實施例中,如本文中所描述藉由SPR測定結合親和力。在一些實施例中,在如本文中以上所描述之C3沈積分析中測定活體外LPS上之C3沈積之IC50
值。在一些實施例中,在如本文中以上所描述之溶血活性分析中測定溶血活性之IC50
值。
在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者對FH及/或包含CCP18之FH片段之結合親和力皆高於抗體FH.07之結合親和力。在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者對FH及/或包含CCP18-20之FH片段之結合親和力皆高於抗體FH.07之結合親和力。在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者之IC50
值皆低於抗體FH.07之IC50
值。在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者皆顯示比抗體FH.07更大程度地抑制LPS上之C3沈積。在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者皆顯示比抗體FH.07更大程度地抑制溶血活性。在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者皆與抗體FH.07競爭結合至FH之CCP18中之相同抗原決定基。在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者皆具有高儲存能力,特定言之,與抗體FH.07相比改良之儲存穩定性。在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者皆具有高穩定性,特定言之,與抗體FH.07相比改良之穩定性。在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者皆具有高選擇性,特定言之,與抗體FH.07相比增加之選擇性。
在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者對FH及/或包含CCP18之FH片段之結合親和力皆高於抗體FHR-1.3B4之結合親和力。在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者對FH及/或包含CCP18-20之FH片段之結合親和力皆高於抗體FHR-1.3B4之結合親和力。在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者之IC50
值皆低於抗體FHR-1.3B4之IC50
值。在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者皆比抗體FHR-1.3B4更大程度地抑制LPS上之C3沈積。在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者皆顯示比抗體FHR-1.3B4更大程度地抑制溶血活性。在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者皆與抗體FHR-1.3B4競爭結合至FH之CCP18中之相同抗原決定基。在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者皆具有高儲存能力,特定言之,與抗體FHR-1.3B4相比改良之儲存穩定性。在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者皆具有高穩定性,特定言之,與抗體FHR-1.3B4相比改良之穩定性。在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者皆具有高選擇性,特定言之,與抗體FHR-1.3B4相比增加之選擇性。
在一些實施例中,本發明提供之抗體或其片段與抗體抗FH.07競爭結合至FH,特定言之,結合至FH之CCP18結構域。
表1列出本發明之例示性抗體。根據IMGT編號系統(Lefranc 1997;Lefranc 1999;及Lefranc等人, 2003)對CDR序列進行編號。LC=輕鏈,HC=重鏈,CDR=互補決定區,VH=重鏈可變區,VL=輕鏈可變區。表 1
:抗體1至抗體4、FH.07及FHR-1.3B4之胺基酸及核苷酸序列
抗體 | 類型 | 識別碼 | 序列 | SEQ ID NO |
抗體1 | 胺基酸 | LC CDR1 | SSVTY | 1 |
抗體1 | 胺基酸 | LC CDR2 | ATS | 2 |
抗體1 | 胺基酸 | LC CDR3 | QHRSSSNPLT | 3 |
抗體1 | 胺基酸 | VL | DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASSSVTYLHWYQQKPGKAPKPLIYATSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHRSSSNPLTFGAGTKLELK | 4 |
抗體1 | 胺基酸 | HC CDR1 | GFSLTNYG | 5 |
抗體1 | 胺基酸 | HC CDR2 | VWSGGTT | 6 |
抗體1 | 胺基酸 | HC CDR3 | ARNFGNYAMDY | 7 |
抗體1 | 胺基酸 | VH | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYGVYWIRQHPGKGLEWIGVVWSGGTTEFNPSLKSRVTISKDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNFGNYAMDYWGQGTSVTVSS | 8 |
抗體2 | 胺基酸 | LC CDR1 | SSVTY | 1 |
抗體2 | 胺基酸 | LC CDR2 | ATS | 2 |
抗體2 | 胺基酸 | LC CDR3 | QHRSSSNPLT | 3 |
抗體2 | 胺基酸 | VL | DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCKASSSVTYLHWYQQKPGKAPKPLIYATSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHRSSSNPLTFGAGTKLELK | 4 |
抗體2 | 胺基酸 | HC CDR1 | GFSLTNYG | 5 |
抗體2 | 胺基酸 | HC CDR2 | IWSGGTT | 10 |
抗體2 | 胺基酸 | HC CDR3 | ARNFGNYAMDF | 11 |
抗體2 | 胺基酸 | VH | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYGVYWIRQHPGKGLEWIGVIWSGGTTEYNPSMKSRVTISKDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNFGNYAMDFWGQGTSVTVSS | 12 |
抗體3 | 胺基酸 | LC CDR1 | TSVTY | 13 |
抗體3 | 胺基酸 | LC CDR2 | ASS | 14 |
抗體3 | 胺基酸 | LC CDR3 | QHRSSSNPLT | 3 |
抗體3 | 胺基酸 | VL | DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASTSVTYMHWYQQKPGKAPKPLIYASSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHRSSSNPLTFGAGTKLELK | 16 |
抗體3 | 胺基酸 | HC CDR1 | GFSLTNYG | 5 |
抗體3 | 胺基酸 | HC CDR2 | VWSGGTT | 6 |
抗體3 | 胺基酸 | HC CDR3 | ARNFGNYAMDY | 7 |
抗體3 | 胺基酸 | VH | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYGVYWIRQHPGKGLEWIGVVWSGGTTEFNPSLKSRVTISKDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNFGNYAMDYWGQGTSVTVSS | 8 |
抗體4 | 胺基酸 | LC CDR1 | TSVTY | 13 |
抗體4 | 胺基酸 | LC CDR2 | ASS | 14 |
抗體4 | 胺基酸 | LC CDR3 | QHRSSSNPLT | 3 |
抗體4 | 胺基酸 | VL | DIQLTQSPSSLSASVGDRVTITCRASTSVTYMHWYQQKPGKAPKPLIYASSNLASGVPSRFSGSGSGTDFTLTISSLQPEDFATYYCQHRSSSNPLTFGAGTKLELK | 16 |
抗體4 | 胺基酸 | HC CDR1 | GFSLTNYG | 5 |
抗體4 | 胺基酸 | HC CDR2 | IWSGGTT | 10 |
抗體4 | 胺基酸 | HC CDR3 | ARNFGNYAMDF | 11 |
抗體4 | 胺基酸 | VH | QVQLQESGPGLVKPSQTLSLTCTVSGFSLTNYGVYWIRQHPGKGLEWIGVIWSGGTTEYNPSMKSRVTISKDTSKNQVSLKLSSVTAADTAVYYCARNFGNYAMDFWGQGTSVTVSS | 12 |
FH.07 | 胺基酸 | LC CDR1 | SSVKY | 29 |
FH.07 | 胺基酸 | LC CDR2 | ATS | 30 |
FH.07 | 胺基酸 | LC CDR3 | QQWSIIPPT | 31 |
FH.07 | 胺基酸 | VL | QIVLSQSPTFLSASPGEKVTVTCRASSSVKYMHWYQQKPGASPKPWIFATSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQWSIIPPTFGNGTKLELK | 32 |
FH.07 | 胺基酸 | HC CDR1 | DFSLARYG | 33 |
FH.07 | 胺基酸 | HC CDR2 | IWSGGTA | 34 |
FH.07 | 胺基酸 | HC CDR3 | ARNFGNYAVDY | 35 |
FH.07 | 胺基酸 | VH | QVQLQQSGPGLVQPSQSLSITCTVSDFSLARYGVHWIRQSPGKGLEWLGVIWSGGTADYNAAFISRLNINKDNSKSQVFFKMNSLQANDTAIYYCARNFGNYAVDYWGQGTS | 36 |
FH.07 | 核酸 | LC CDR1 | tcaagtgtcaaatac | 17 |
FH.07 | 核酸 | LC CDR2 | gccacatcc | 18 |
FH.07 | 核酸 | LC CDR3 | cagcagtggagtattatcccacccacg | 19 |
FH.07 | 核酸 | VL | caaattgttctctcccagtctccaacattcctgtctgcatctccaggtgagaaggtcacagtgacttgcagggccagttcaagtgtcaaatacatgcactggtatcagcagaaaccaggagcctcccccaaaccctggatttttgccacatccaacctggcttctggagtccctgctcgcttcagtggcagtgggtctgggacctcttattctctcacaatcagcagagtggaggctgaagatgctgccacttattactgccagcagtggagtattatcccacccacgttcggtaatgggaccaagctggagctgaaac | 20 |
FH.07 | 核酸 | HC CDR1 | gatttctcattagctaggtatggt | 21 |
FH.07 | 核酸 | HC CDR2 | atatggagtggtggaaccgca | 22 |
FH.07 | 核酸 | HC CDR3 | gccagaaattttggtaactacgctgtggactac | 23 |
FH.07 | 核酸 | VH | caggtgcagctgcagcagtcaggacctggcctagtgcagccctctcagagcctgtccattacctgcacagtctctgatttctcattagctaggtatggtgtacactggattcgccagtctccaggaaagggtctggagtggctgggagtgatatggagtggtggaaccgcagactataatgcagctttcatatccagactgaacatcaacaaggacaattccaagagccaagttttctttaaaatgaacagtctccaagctaatgacacagccatatattactgtgccagaaattttggtaactacgctgtggactactggggtcaaggaacctcag | 24 |
FHR-1.3B4 | 胺基酸 | LC CDR1 | SSVTY | 45 |
FHR-1.3B4 | 胺基酸 | LC CDR2 | ATS | 46 |
FHR-1.3B4 | 胺基酸 | LC CDR3 | QQRSSSNPLT | 47 |
FHR-1.3B4 | 胺基酸 | VL | QIVLSQSPTILSASPGEKVTMTCRASSSVTYMHWYQQKPGSSPKPWIYATSNLASGVPARFSGSGSGTSYSLTISRVEAEDAATYYCQQRSSSNPLTFGAGTKLELK | 48 |
FHR-1.3B4 | 胺基酸 | HC CDR1 | GFSLTNYG | 49 |
FHR-1.3B4 | 胺基酸 | HC CDR2 | IWSGGTT | 50 |
FHR-1.3B4 | 胺基酸 | HC CDR3 | ARNFGNYAMDY | 51 |
FHR-1.3B4 | 胺基酸 | VH | QVQLRQSGPGLVQPSQSLSITCTVSGFSLTNYGVYWVRQSPGKGLEWLGVIWSGGTTDYSAAFISRLSISKDNSKSQVFFKMNSLQADDTAIYYCARNFGNYAMDYWGQGTSVTVSS | 52 |
FHR-1.3B4 | 核酸 | VL | caaattgttctctcccagtctccaacaatcctgtctgcatctccaggggagaaggtcacaatgacttgcagggccagctcaagtgtaacttacatgcactggtaccagcagaagccaggatcctcccccaaaccctggatttatgccacatccaacctggcttctggagtccctgctcgcttcagtggcagtgggtctgggacctcttactctctcacaatcagcagagtggaggctgaagatgctgccacttattactgccagcagcgcagtagtagtaacccgctcacgttcggtgctgggaccaagctggagctgaaat | 25 |
FHR-1.3B4 | 核酸 | VH | caggtgcagctgaggcagtcaggacctggcctagtgcagccctcacagagcctgtccatcacctgcacagtctctggtttctcattaactaactatggtgtatattgggttcgccagtctccaggaaagggtctggagtggctgggagtgatatggagtggaggaaccactgactatagtgcagctttcatatccagactgagcatcagcaaggacaactccaagagccaagttttctttaaaatgaacagtctgcaagctgatgacacagccatatactactgtgccagaatttggcactacgctatggactacatggggtcaaggaacctcacaccggtctccacag | 26 |
在一些實施例中,本發明提供一種經分離之合成或重組抗體或其抗原結合片段,其特異性結合至因子H (FH)之補體控制蛋白結構域18 (CCP18),該抗體或片段包含表1中所揭示之抗體之VH及VL序列之根據Kabat (參見Kabat等人, (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, NIH出版物第91-3242號, Bethesda)、Chothia (參見例如Chothia C及Lesk A M, (1987), J. Mol. Biol. 196: 901-917)、MacCallum (參見MacCallum R M等人, (1996) J. Mol. Biol. 262: 732-745)或此項技術中已知的任何其他CDR確定方法確定的重鏈CDR1、CDR2及CDR3以及輕鏈CDR1、CDR2及CDR3。
在一些實施例中,根據本發明之抗體為抗體1。表1提供抗體1之可變重鏈及輕鏈序列以及個別CDR序列之概述。在一些實施例中,該抗體或片段包含抗體1之重鏈CDR序列中之至少一、二或三個。在一些實施例中,該抗體或片段包含抗體1之輕鏈CDR序列中之至少一、二或三個。如本文中所使用之術語「抗體1」涵蓋至少包括如表1中所示之重鏈及輕鏈CDR1、CDR2及CDR3區的所有抗體及片段,諸如經分離及/或純化之抗體或重組產生之抗體。在一些實施例中,抗體1與抗體FH.07或抗體FHR-1.3B4競爭結合至FH之CCP18中之相同抗原決定基。
在一些實施例中,根據本發明之抗體為抗體2。表1提供抗體2之可變重鏈及輕鏈序列以及個別CDR序列之概述。在一些實施例中,該抗體或片段包含抗體2之重鏈CDR序列中之至少一、二或三個。在一些實施例中,該抗體或片段包含抗體2之輕鏈CDR序列中之至少一、二或三個。如本文中所使用之術語「抗體2」涵蓋至少包括如表1中所示之重鏈及輕鏈CDR1、CDR2及CDR3區的所有抗體及片段,諸如經分離及/或純化之抗體或重組產生之抗體。在一些實施例中,抗體2與抗體FH.07或抗體FHR-1.3B4競爭結合至FH之CCP18中之相同抗原決定基。
在一些實施例中,根據本發明之抗體為抗體3。表1提供抗體3之可變重鏈及輕鏈序列以及個別CDR序列之概述。在一些實施例中,該抗體或片段包含抗體3之重鏈CDR序列中之至少一、二或三個。在一些實施例中,該抗體或片段包含抗體3之輕鏈CDR序列中之至少一、二或三個。如本文中所使用之術語「抗體3」涵蓋至少包括如表1中所示之重鏈及輕鏈CDR1、CDR2及CDR3區的所有抗體及片段,諸如經分離及/或純化之抗體或重組產生之抗體。在一些實施例中,抗體3與抗體FH.07或抗體FHR-1.3B4競爭結合至FH之CCP18中之相同抗原決定基。
在一些實施例中,根據本發明之抗體為抗體4。表1提供抗體4之可變重鏈及輕鏈序列以及個別CDR序列之概述。在一些實施例中,該抗體或片段包含抗體4之重鏈CDR序列中之至少一、二或三個。在一些實施例中,該抗體或片段包含抗體4之輕鏈CDR序列中之至少一、二或三個。如本文中所使用之術語「抗體4」涵蓋至少包括如表1中所示之重鏈及輕鏈CDR1、CDR2及CDR3區的所有抗體及片段,諸如經分離及/或純化之抗體或重組產生之抗體。在一些實施例中,抗體4與抗體FH.07或抗體FHR-1.3B4競爭結合至FH之CCP18中之相同抗原決定基。
在一些實施例中,本發明提供一種經分離之合成或重組抗體或其抗原結合片段,其特異性結合至因子H (FH)之補體控制蛋白結構域18 (CCP18)且包含:
- 輕鏈CDR1序列,其具有序列SSVTY (SEQ ID NO: 1)或序列TSVTY (SEQ ID NO: 13);
- 輕鏈CDR2序列,其具有序列ATS (SEQ ID NO: 2)或序列ASS (SEQ ID NO: 14);
- 輕鏈CDR3序列,其具有序列QHRSSSNPLT (SEQ ID NO: 3);
- 重鏈CDR1,其具有序列GFSLTNYG (SEQ ID NO: 5);
- 重鏈CDR2,其具有序列VWSGGTT (SEQ ID NO: 6)或序列IWSGGTT (SEQ ID NO: 10);及/或
- 重鏈CDR3序列,其具有序列ARNFGNYAMDY (SEQ ID NO: 7)或序列ARNFGNYAMDF (SEQ ID NO: 11);及/或
- 前述之任何組合。
在一特定實施例中,該抗體或片段包含:
- 輕鏈CDR1序列,其具有序列SSVTY (SEQ ID NO: 1);
- 輕鏈CDR2序列,其具有序列ATS (SEQ ID NO: 2);
- 輕鏈CDR3序列,其具有序列QHRSSSNPLT (SEQ ID NO: 3);
- 重鏈CDR1序列,其具有序列GFSLTNYG (SEQ ID NO: 5);
- 重鏈CDR2,其具有序列VWSGGTT (SEQ ID NO: 6);及
- 重鏈CDR3序列,其具有序列ARNFGNYAMDY (SEQ ID NO: 7)。
在一特定實施例中,該抗體或片段包含:
- 輕鏈CDR1序列,其具有序列SSVTY (SEQ ID NO: 1);
- 輕鏈CDR2序列,其具有序列ATS (SEQ ID NO: 2);
- 輕鏈CDR3序列,其具有序列QHRSSSNPLT (SEQ ID NO: 3);
- 重鏈CDR1序列,其具有序列GFSLTNYG (SEQ ID NO: 5);
- 重鏈CDR2,其具有序列IWSGGTT (SEQ ID NO: 10);及
- 重鏈CDR3序列,其具有序列ARNFGNYAMDF (SEQ ID NO: 11)。
在一特定實施例中,該抗體或片段包含:
- 輕鏈CDR1序列,其具有序列TSVTY (SEQ ID NO: 13);
- 輕鏈CDR2序列,其具有序列ASS (SEQ ID NO: 14);
- 輕鏈CDR3序列,其具有序列QHRSSSNPLT (SEQ ID NO: 3);
- 重鏈CDR1序列,其具有序列GFSLTNYG (SEQ ID NO: 5);
- 重鏈CDR2,其具有序列VWSGGTT (SEQ ID NO: 6);及
- 重鏈CDR3序列,其具有序列ARNFGNYAMDY (SEQ ID NO: 7)。
在一特定實施例中,該抗體或片段包含:
- 輕鏈CDR1序列,其具有序列TSVTY (SEQ ID NO: 13);
- 輕鏈CDR2序列,其具有序列ASS (SEQ ID NO: 14);
- 輕鏈CDR3序列,其具有序列QHRSSSNPLT (SEQ ID NO: 3);
- 重鏈CDR1序列,其具有序列GFSLTNYG (SEQ ID NO: 5);
- 重鏈CDR2,其具有序列IWSGGTT (SEQ ID NO: 10);及
- 重鏈CDR3序列,其具有序列ARNFGNYAMDF (SEQ ID NO: 11)。
在一些實施例中,該抗體或片段強化FH活性,諸如抑制替代補體活化,諸如抑制溶血活性、抑制補體組分3 (C3)沈積,及/或增加FH與C3b、iC3b及/或C3d之結合。在一些實施例中,該片段至少包含重鏈可變域(VH)及/或輕鏈可變域(VL)。在一些實施例中,片段至少包含Fab片段。
在一些實施例中,該抗體或片段對FH之結合親和力以KD
計為2.5×10-8
M或更低及/或對包含CCP18-20之FH片段之結合親和力以KD
計為0.1×10-9
M或更低,諸如對FH之結合親和力以KD
計為1.25×10-8
M或更低及/或對包含CCP18-20之FH片段之結合親和力以KD
計為0.04×10-9
M或更低的抗體或片段。
在另一實施例中,本發明提供一種經分離之合成或重組抗體或其抗原結合片段,其特異性結合至FH之CCP18且包含:輕鏈CDR1序列,其具有序列SSVTY (SEQ ID NO: 1);輕鏈CDR2序列,其具有序列ATS (SEQ ID NO: 2);及輕鏈CDR3,其具有序列QHRSSSNPLT (SEQ ID NO: 3);重鏈CDR1,其具有序列GFSLTNYG (SEQ ID NO: 5);重鏈CDR2,其具有序列VWSGGTT (SEQ ID NO: 6);及重鏈CDR3序列,其具有序列ARNFGNYAMDY (SEQ ID NO: 7)。在一個實施例中,該抗體或片段包含可變輕鏈序列,該可變輕鏈序列包含與序列SEQ ID NO: 4具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性之序列。在一些實施例中,該抗體包含可變重鏈序列,該可變重鏈序列包含與序列SEQ ID NO: 8具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性之序列。在一特定實施例中,該抗體或片段包括包含SEQ ID NO: 4之序列的可變輕鏈序列及包含SEQ ID NO: 8之序列的可變重鏈序列。在一些實施例中,該抗體或片段強化FH活性,諸如抑制替代補體活化,諸如抑制溶血活性、抑制補體組分3 (C3)沈積,及/或增加FH與C3b、iC3b及/或C3d之結合。在一些實施例中,該片段至少包含重鏈可變域(VH)及/或輕鏈可變域(VL)。在一些實施例中,該片段至少包含Fab片段。
在另一實施例中,本發明提供一種經分離之合成或重組抗體或其抗原結合片段,其特異性結合至FH之CCP18且包含:輕鏈CDR1序列,其具有序列SSVTY (SEQ ID NO: 1);輕鏈CDR2序列,其具有序列ATS (SEQ ID NO: 2);及輕鏈CDR3,其具有序列QHRSSSNPLT (SEQ ID NO: 3);重鏈CDR1,其具有序列GFSLTNYG (SEQ ID NO: 5);重鏈CDR2,其具有序列IWSGGTT (SEQ ID NO: 10);及重鏈CDR3序列,其具有序列ARNFGNYAMDF (SEQ ID NO: 11)。在一個實施例中,該抗體或片段包含可變輕鏈序列,該可變輕鏈序列包含與序列SEQ ID NO: 4具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性之序列。在一些實施例中,該抗體或片段包含可變重鏈序列,該可變重鏈序列包含與序列SEQ ID NO: 12具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性之序列。在一特定實施例中,該抗體或片段包括包含SEQ ID NO: 4之序列的可變輕鏈序列及包含SEQ ID NO: 12之序列的可變重鏈序列。在一些實施例中,該抗體或片段強化FH活性,抑制替代補體活化,諸如抑制溶血活性、抑制補體組分3 (C3)沈積,及/或增加FH與C3b、iC3b及/或C3d之結合。在一些實施例中,該片段至少包含重鏈可變域(VH)及/或輕鏈可變域(VL)。在一些實施例中,該片段至少包含Fab片段。
在另一實施例中,本發明提供一種經分離之合成或重組抗體或其抗原結合片段,其特異性結合至FH之CCP18且包含:輕鏈CDR1序列,其具有序列TSVTY (SEQ ID NO: 13);輕鏈CDR2序列,其具有序列ASS (SEQ ID NO: 14);及輕鏈CDR3,其具有序列QHRSSSNPLT (SEQ ID NO: 3);重鏈CDR1,其具有序列GFSLTNYG (SEQ ID NO: 5);重鏈CDR2,其具有序列VWSGGTT (SEQ ID NO: 6);及重鏈CDR3序列,其具有序列ARNFGNYAMDY (SEQ ID NO: 7)。在一個實施例中,該抗體或片段包含可變輕鏈序列,該可變輕鏈序列包含與序列SEQ ID NO: 16具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性之序列。在一些實施例中,該抗體或片段包含可變重鏈序列,該可變重鏈序列包含與序列SEQ ID NO: 8具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性之序列。在一特定實施例中,該抗體或片段包括包含SEQ ID NO: 16之序列的可變輕鏈序列及包含SEQ ID NO: 8之序列的可變重鏈序列。在一些實施例中,該抗體或片段強化FH活性,諸如抑制替代補體活化,諸如抑制溶血活性、抑制補體組分3 (C3)沈積,及/或增加FH與C3b、iC3b及/或C3d之結合。在一些實施例中,該片段至少包含重鏈可變域(VH)及/或輕鏈可變域(VL)。在一些實施例中,該片段至少包含Fab片段。
在另一實施例中,本發明提供一種經分離之合成或重組抗體或其抗原結合片段,其特異性結合至FH之CCP18且包含:輕鏈CDR1序列,其具有序列TSVTY (SEQ ID NO: 13);輕鏈CDR2序列,其具有序列ASS (SEQ ID NO: 14);及輕鏈CDR3,其具有序列QHRSSSNPLT (SEQ ID NO: 3);重鏈CDR1,其具有序列GFSLTNYG (SEQ ID NO: 5);重鏈CDR2,其具有序列IWSGGTT (SEQ ID NO: 10);及重鏈CDR3序列,其具有序列ARNFGNYAMDF (SEQ ID NO: 11)。在一個實施例中,該抗體或片段包含可變輕鏈序列,該可變輕鏈序列包含與序列SEQ ID NO: 16具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性之序列。在一些實施例中,該抗體或片段包含可變重鏈序列,該可變重鏈序列包含與序列SEQ ID NO: 12具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性之序列。在一特定實施例中,該抗體或片段包括包含SEQ ID NO: 16之序列的可變輕鏈序列及包含SEQ ID NO: 12之序列的可變重鏈序列。在一些實施例中,該抗體或片段強化FH活性,諸如抑制替代補體活化,諸如抑制溶血活性、抑制補體組分3 (C3)沈積,及/或增加FH與C3b、iC3b及/或C3d之結合。在一些實施例中,該片段至少包含重鏈可變域(VH)及/或輕鏈可變域(VL)。在一些實施例中,該片段至少包含Fab片段。
在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或片段中之任一者對FH之結合親和力以KD
計為2.5×10-8
M或更低及/或對包含CCP18-20之FH片段之結合親和力以KD
計為0.1×10-9
M或更低。在一些實施例中,該抗體或片段對FH之結合親和力以KD
計為22.5 nM或更低、20 nM或更低、17.5 nM或更低、15 nM或更低、12.5 nM或更低、10 nM或更低、9 nM或更低、8 nM或更低、7 nM或更低、6 nM或更低、5 nM或更低、4 nM或更低、3 nM或更低、2 nM或更低、1 nM或更低、0.9 nM或更低、0.8 nM或更低、0.7 nM或更低、或者0.6 nM或更低,及/或對包含CCP18-20之FH片段之結合親和力以KD
計為0.09×10-9
M或更低、0.08×10-9
M或更低、0.07×10-9
M或更低、0.06×10-9
M或更低、0.05×10-9
M或更低、0.04×10-9
M或更低、0.03×10-9
M或更低、0.02×10-9
M或更低、1×10-11
M或更低、0.9×10-11
M或更低、0.8×10-11
M或更低、0.7×10-11
M或更低、或者0.6×10-11
M或更低。
10% (v/v)正常人類血清時抑制活體外LPS上之C3沈積,IC50
值為38 nM或更低。在一些實施例中,該抗體或片段在存在10% (v/v)正常人類血清時抑制活體外LPS上之C3沈積,IC50
值為35 nM或更低、32 nM或更低、30 nM或更低、28 nM或更低、25 nM或更低、23 nM或更低、20 nM或更低、18 nM或更低、15 nM或更低、或者10 nM或更低。在一些實施例中,根據本發明之抗體或其片段在存在10% (v/v)正常人類血清時抑制活體外LPS上之C3沈積,IC50
值介於15 nM與30 nM之間。
在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或片段中之任一者在存在10% (v/v)正常人類血清時抑制活體外溶血活性,IC50
值為150 nM或更低。在一些實施例中,該抗體或片段在存在10% (v/v)正常人類血清時抑制活體外溶血活性,IC50
值為105 nM或更低。在一些實施例中,根據本發明之抗體或其片段在存在10% (v/v)正常人類血清時抑制活體外溶血活性,IC50
值為150 nM或更低、130 nM或更低、115 nM或更低、105 nM或更低、100 nM或更低、95 nM或更低、75 nM或更低、70 nM或更低、65 nM或更低、或者60 nM或更低。在一些實施例中,根據本發明之抗體或其片段在存在10% (v/v)正常人類血清時抑制活體外溶血活性,IC50
值為介於60 nM與80 nM之間。
在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或片段中之任一者使活體外FH對C3b之結合親和力(KD
)增加至2 µM或更低、1.5 µM或更低、1 µM或更低、500 nM或更低、400 nM或更低、或者300 nM或更低,及/或使活體外FH對C3b之結合親和力增加至少2.5倍、3倍、3.5倍、4倍、4.5倍或5倍。在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或片段中之任一者使活體外FH對C3b之結合親和力(KD
)增加至介於50至500 nM之間。在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或片段中之任一者使活體外FH對C3b之結合親和力(KD
)增加至介於50至300 nM之間。在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或片段中之任一者使活體外FH對C3b之結合親和力(KD
)增加至介於100至300 nM之間。在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或片段中之任一者使活體外FH對C3b之結合親和力(KD
)增加至介於250至300 nM之間。
視情況,將本文中所揭示之CDR中任一或多者中之至少一者的序列最佳化,從而產生變異抗體或片段,例如以(進一步)改良結合親和力、選擇性、FH增強能力及/或活體內或儲存穩定性。在一些實施例中,根據本發明之抗體或片段具有高儲存穩定性,特定言之,與抗體FH.07或抗體FHR-1.3B4相比改良之儲存穩定性。在一些實施例中,根據本發明之抗體或片段具有高活體內穩定性,特定言之,與抗體FH.07或抗體FHR-1.3B4相比改良之活體內穩定性。在一些實施例中,根據本發明之抗體或片段具有高選擇性,特定言之,與抗體FH.07或抗體FHR-1.3B4相比增加之選擇性。
另外,視情況將本發明之抗體或片段之構架區中至少一者中之至少一個序列最佳化,例如以改良抗體或片段之結合效力或穩定性或者減少其投與人類之後非人類序列之副作用。此係例如藉由突變誘發程序來進行。熟習此項技術者能夠產生包含至少一個經改變之CDR或構架序列的抗體變異體。CDR及/或構架序列係例如藉由使編碼此種構架序列之核酸突變來進行最佳化。舉例而言,應用保守胺基酸取代。在一些實施例中,本文中所揭示之CDR、構架、可變重鏈、可變輕鏈序列中之任一者與本文中所揭示之胺基酸序列中之任一或多者相比皆包含至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸取代、缺失或插入(例如保守取代)。在一些實施例中,本文中所揭示之CDR、構架、可變重鏈、可變輕鏈序列中之任一者與本文中所揭示之胺基酸序列中之任一或多者相比皆包含至少1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或插入(例如保守取代)。在一些實施例中,本文中所揭示之CDR、構架、可變重鏈、可變輕鏈序列中之任一者與本文中所揭示之胺基酸序列中之任一或多者相比皆包含不超過1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20個胺基酸取代、缺失或插入(例如保守取代)。在一些實施例中,本文中所揭示之CDR、構架、可變重鏈、可變輕鏈序列中之任一者與本文中所揭示之胺基酸序列中之任一或多者相比皆包含不超過1、2、3、4或5個胺基酸取代、缺失或插入(例如保守取代)。保守胺基酸取代之實例包括一個疏水性殘基(諸如異白胺酸、纈胺酸、白胺酸或甲硫胺酸)取代另一疏水性殘基,及一個極性殘基取代另一極性殘基,諸如精胺酸取代離胺酸、麩胺酸取代天冬胺酸或麩醯胺酸取代天冬醯胺酸。
為了選擇改良之抗體或片段,可例如使用本文中所描述之測驗來測驗所得變異抗體或片段之結合親和力、FH增強能力及/或穩定性。一旦已獲得FH (特定言之,FH之CCP18)特異性抗體或片段,便可藉由熟習此項技術者已知的若干方法來測驗其所要生物活性,亦即,其強化FH活性之能力。如本文中先前所描述,增強FH活性可涵蓋抑制溶血活性、抑制細胞上之C3沈積及/或增加FH與C3b結合。用以測驗此等活性之功能分析先前已描述於本文中且詳細描述於實例中。典型地,CDR序列中至多三個胺基酸殘基可變化,同時保留相同特異性,視CDR包含之胺基酸數目而定。因此,在一些實施例中,根據本發明之抗體或片段含有重鏈及輕鏈CDR1、CDR2及CDR3序列,其中與表1之重鏈及輕鏈CDR1、CDR2及CDR3序列相比,各CDR中至多3個、至多2個或至多1個胺基酸發生變化。在一些實施例中,該抗體或片段包含與表1中所示相同之抗體之輕鏈CDR3及重鏈CDR3、其中至多1個胺基酸發生變化之抗體之輕鏈CDR2以及其中至多3個胺基酸發生變化之輕鏈CDR1、重鏈CDR1及重鏈CDR2。在一些實施例中,該抗體或片段包含與表1中所示相同之抗體之輕鏈CDR2及CDR3以及重鏈CDR3,以及其中至多2個胺基酸或至多1個胺基酸發生變化之輕鏈CDR1、重鏈CDR1及重鏈CDR2。
本發明因此進一步提供一種經分離之合成或重組抗體或其片段,其特異性結合至因子H (FH)之補體控制蛋白結構域18 (CCP18)且包含:
- 輕鏈CDR1序列,其具有與序列SSVTY (SEQ ID NO: 1)至少60%或至少80%一致之序列;輕鏈CDR2序列,其具有與序列ATS (SEQ ID NO: 2)至少60%一致之序列;及輕鏈CDR3,其具有與序列QHRSSSNPLT (SEQ ID NO: 3)至少60%、至少70%、至少80%或至少90%一致之序列;重鏈CDR1,其具有與序列GFSLTNYG (SEQ ID NO: 5)至少60%、至少70%、至少80%或至少90%一致之序列;重鏈CDR2,其具有與序列VWSGGTT (SEQ ID NO: 6)至少60%、至少70%、至少80%或至少90%一致之序列;及重鏈CDR3序列,其具有與序列ARNFGNYAMDY (SEQ ID NO: 7)至少60%、至少70%、至少80%或至少90%一致之序列;
- 輕鏈CDR1序列,其具有與序列SSVTY (SEQ ID NO: 1)至少60%或至少80%一致之序列;輕鏈CDR2序列,其具有與序列ATS (SEQ ID NO: 2)至少60%一致之序列;及輕鏈CDR3,其具有與序列QHRSSSNPLT (SEQ ID NO: 3)至少60%、至少70%、至少80%或至少90%一致之序列;重鏈CDR1,其具有與序列GFSLTNYG (SEQ ID NO: 5)至少60%、至少70%、至少80%或至少90%一致之序列;重鏈CDR2,其具有與序列IWSGGTT (SEQ ID NO: 10)至少60%、至少70%、至少80%或至少90%一致之序列;及重鏈CDR3序列,其具有與序列ARNFGNYAMDF (SEQ ID NO: 11)至少60%、至少70%、至少80%或至少90%一致之序列;
- 輕鏈CDR1序列,其具有與序列TSVTY (SEQ ID NO: 13)至少60%或至少80%一致之序列;輕鏈CDR2序列,其具有與序列ASS (SEQ ID NO: 14)至少60%一致之序列;及輕鏈CDR3,其具有與序列QHRSSSNPLT (SEQ ID NO: 3)至少60%、至少70%、至少80%或至少90%一致之序列;重鏈CDR1,其具有與序列GFSLTNYG (SEQ ID NO: 5)至少60%、至少70%、至少80%或至少90%一致之序列;重鏈CDR2,其具有與序列VWSGGTT (SEQ ID NO: 6)至少60%、至少70%、至少80%或至少90%一致之序列;及重鏈CDR3序列,其具有與序列ARNFGNYAMDY (SEQ ID NO: 7)至少60%、至少70%、至少80%或至少90%一致之序列;
- 輕鏈CDR1序列,其具有與序列TSVTY (SEQ ID NO: 13)至少60%或至少80%一致之序列;輕鏈CDR2序列,其具有與序列ASS (SEQ ID NO: 14)至少60%一致之序列;及輕鏈CDR3,其具有與序列QHRSSSNPLT (SEQ ID NO: 3)至少60%、至少70%、至少80%或至少90%一致之序列;重鏈CDR1,其具有與序列GFSLTNYG (SEQ ID NO: 5)至少60%、至少70%、至少80%或至少90%一致之序列;重鏈CDR2,其具有與序列IWSGGTT (SEQ ID NO: 10)至少60%、至少70%、至少80%或至少90%一致之序列;及重鏈CDR3序列,其具有與序列ARNFGNYAMDF (SEQ ID NO: 11)至少60%、至少70%、至少80%或至少90%一致之序列。
在一些實施例中,該抗體或片段強化FH活性。在一些實施例中,該抗體或片段包含與所指示之序列至少85%、至少86%、至少87%、至少88%、至少89%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或至少99%一致之重鏈CDR1、CDR2及/或CDR3序列及/或輕鏈CDR1、CDR2及/或CDR3序列。
本發明進一步提供一種經分離之合成或重組抗體或其片段,其特異性結合至因子H (FH)之補體控制蛋白結構域18 (CCP18)且包含:
- 輕鏈CDR1序列,其具有視情況具有1個胺基酸取代之序列SSVTY (SEQ ID NO: 1);輕鏈CDR2序列,其具有序列ATS (SEQ ID NO: 2);及輕鏈CDR3,其具有視情況具有1或2個胺基酸取代之序列QHRSSSNPLT (SEQ ID NO: 3);重鏈CDR1,其具有視情況具有1或2個胺基酸取代之序列GFSLTNYG (SEQ ID NO: 5);重鏈CDR2,其具有視情況具有1或2個胺基酸取代之序列VWSGGTT (SEQ ID NO: 6);及重鏈CDR3序列ARNFGNYAMDY (SEQ ID NO: 7),其視情況具有1或2個胺基酸取代;
- 輕鏈CDR1序列,其具有視情況具有1個胺基酸取代之序列SSVTY (SEQ ID NO: 1);輕鏈CDR2序列,其具有序列ATS (SEQ ID NO: 2);及輕鏈CDR3,其具有視情況具有1或2個胺基酸取代之序列QHRSSSNPLT (SEQ ID NO: 3);重鏈CDR1,其具有視情況具有1或2個胺基酸取代之序列GFSLTNYG (SEQ ID NO: 5);重鏈CDR2,其具有視情況具有1或2個胺基酸取代之序列IWSGGTT (SEQ ID NO: 10);及重鏈CDR3序列ARNFGNYAMDF (SEQ ID NO: 11),其視情況具有1或2個胺基酸取代;
- 輕鏈CDR1序列,其具有視情況具有1或2個胺基酸取代之序列TSVTY (SEQ ID NO: 13);輕鏈CDR2序列ASS (SEQ ID NO: 14);及輕鏈CDR3,其具有視情況具有1或2個胺基酸取代之序列QHRSSSNPLT (SEQ ID NO: 3);重鏈CDR1,其具有視情況具有1或2個胺基酸取代之序列GFSLTNYG (SEQ ID NO: 5);重鏈CDR2,其具有視情況具有1或2個胺基酸取代之序列VWSGGTT (SEQ ID NO: 6);及重鏈CDR3 ARNFGNYAMDY (SEQ ID NO : 7),其視情況具有1或2個胺基酸取代;或
- 輕鏈CDR1序列,其具有視情況具有1個胺基酸取代之序列TSVTY (SEQ ID NO: 13);輕鏈CDR2序列,其具有序列ASS (SEQ ID NO: 14);及輕鏈CDR3,其具有視情況具有1或2個胺基酸取代之序列QHRSSSNPLT (SEQ ID NO: 3);重鏈CDR1,其具有視情況具有1或2個胺基酸取代之序列GFSLTNYG (SEQ ID NO: 5);重鏈CDR2,其具有視情況具有1或2個胺基酸取代之序列IWSGGTT (SEQ ID NO: 10);及重鏈CDR3序列,其具有視情況具有1或2個胺基酸取代之序列ARNFGNYAMDF (SEQ ID NO: 11)。
在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者皆包含來自本文中所揭示之重鏈或輕鏈序列中之任一者的至少一或多個CDR。在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者皆包含來自SEQ ID NO: 4、8、12或16之可變重鏈或可變輕鏈序列中之任一者的至少一或多個CDR。在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者皆包含來自本文中所揭示之重鏈或輕鏈序列中任一者之至少一或多個CDR,其中該CDR係使用Kabat系統確定。在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者皆包含來自本文中所揭示之重鏈或輕鏈序列中任一者之至少一或多個CDR,其中該CDR係使用Chothia系統確定。在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者皆包含來自本文中所揭示之重鏈或輕鏈序列中任一者之至少一或多個CDR,其中該CDR係使用MacCallum系統確定。在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者皆包含來自本文中所揭示之重鏈或輕鏈序列中任一者之至少一或多個CDR,其中該CDR係使用AbM系統確定。在一些實施例中,本文中所揭示之抗體或抗原結合片段中之任一者皆包含來自本文中所揭示之重鏈或輕鏈序列中任一者之至少一或多個CDR,其中該CDR係使用IMGT系統確定。
由Kabat描述之系統,亦稱為「根據Kabat編號」、「Kabat編號」、「Kabat定義」及「Kabat標記」,提供適用於抗體之任何可變域的明確殘基編號系統,並提供界定各鏈之三個CDR的確切殘基邊界。(Kabat等人, Sequences of Proteins of Immunological Interest, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987)及(1991),其內容係以引用之方式整體併入。此等CDR稱為Kabat CDR,且包含輕鏈可變域中之約殘基24-34 (CDR1)、50-56 (CDR2)及89-97 (CDR3)以及重鏈可變域中之31-35 (CDR1)、50-65 (CDR2)及95-102 (CDR3)。當根據Kabat定義CDR時,輕鏈FR殘基位於約殘基1-23 (LCFR1)、35-49 (LCFR2)、57-88 (LCFR3)及98-107 (LCFR4)處,且重鏈FR殘基約位於重鏈殘基中之殘基1-30 (HCFR1)、36-49 (HCFR2)、66-94 (HCFR3)及103-113 (HCFR4)處。「如Kabat中之EU索引」係指人類IgG1 EU抗體之殘基編號。
此項技術中亦使用其他CDR編號系統。Chothia及其同事發現,儘管在胺基酸序列層級上存在巨大差異,但Kabat CDR內之某些子部分採用近乎相同的肽主鏈構型。(Chothia等人, (1987) J. Mol. Biol. 196: 901-917;及Chothia等人, (1989) Nature 342: 877-883)。此等子部分命名為L1、L2及L3或H1、H2及H3,其中「L」及「H」分別表示輕鏈及重鏈區域。此等CDR可稱為「Chothia CDR」、「Chothia編號」或「根據Chothia編號」,且包含輕鏈可變域中之約殘基24-34 (CDR1)、50-56 (CDR2)及89-97 (CDR3)以及重鏈可變域中之26-32 (CDR1)、52-56 (CDR2)及95-102 (CDR3)。Mol. Biol. 196:901-917 (1987)。
由MacCallum描述之系統,亦稱為「根據MacCallum編號」或「MacCallum編號」,包含輕鏈可變域中之約殘基30-36 (CDR1)、46-55 (CDR2)及89-96 (CDR3)以及重鏈可變域中之30-35 (CDR1)、47-58 (CDR2)及93-101 (CDR3)。MacCallum等人, ((1996) J. Mol. Biol. 262(5):732-745)。
由AbM描述之系統,亦稱為「根據AbM編號」或「AbM編號」,包含輕鏈可變域中之約殘基24-34 (CDR1)、50-56 (CDR2)及89-97 (CDR3)以及重鏈可變域中之26-35 (CDR1)、50-58 (CDR2)及95-102 (CDR3)。
亦可使用可變區之IMGT (國際免疫遺傳學資訊系統)編號,其為根據如Lefranc, M.-P., 「The IMGT unique numbering for immunoglobulins, T cell Receptors and Ig-like domains」, The Immunologist, 7, 132-136 (1999)中所描述之IIMGT方法之免疫球蛋白可變重鏈或輕鏈中之殘基編號,且明確以引入之方式整體併入本文中。如本文中所使用,「IMGT序列編號」或「根據IMTG編號」係指根據IMGT對編碼可變區之序列的編號。對於重鏈可變域,當根據IMGT編號時,高變區對於CDR1而言在胺基酸位置27至38之範圍內,對於CDR2而言在胺基酸位置56至65之範圍內,且對於CDR3而言在胺基酸位置105至117之範圍內。對於輕鏈可變域,當根據IMGT編號時,高變區對於CDR1而言在胺基酸位置27至38之範圍內,對於CDR2而言在胺基酸位置56至65之範圍內,且對於CDR3而言在胺基酸位置105至117之範圍內。在本文中所描述之構築體及抗原結合臂之一些實施例中,當根據Chothia編號進行編號時,本文中所敍述之CDR包含輕鏈可變域中之約殘基24-34 (CDR1)、49-56 (CDR2)及89-97 (CDR3),以及重鏈可變域中之27-35 (CDR1)、49-60 (CDR2)及93-102 (CDR3)。在一些實施例中,當根據Chothia編號進行編號時,輕鏈可變域中之CDR2可包含胺基酸49-56。
根據本發明之抗體或其片段在一些實施例中為單株抗體或片段。單株抗體為實質上由單一分子種類構成之抗體。單株抗體係獲自除了具有例如在產生過程中自發發生之一或多個突變的可能變異抗體或片段以外具有相同序列且結合相同抗原決定基之均質抗體群體。適宜重組產生單株抗體,使得可獲得之抗體之量顯著高於抗血清中存在之多株抗體之量。然而,本發明亦涵蓋多株抗體及片段。在一些實施例中,根據本發明之抗體或片段為嵌合或人類化抗體。在一些實施例中,該抗體或片段因而至少包含人類輕鏈及重鏈恆定區。在一些實施例中,該抗體或片段亦包含重及輕鏈可變區中之人類構架區。在一些實施例中,提供完全由人類序列組成之人類抗體或片段。在一些實施例中,使用嵌合、人類化或人類抗體比使用非人類抗體更合意,此係因為許多因素阻礙使用非人類抗體或片段治療人類疾病。人體可能將非人類抗體識別為外源抗體,此將引起針對非人類抗體或片段之免疫反應,從而導致不利副作用及/或抗體或片段自循環中快速清除。當嵌合、人類化或人類抗體投與人類時,副作用之機率降低。另外,當由於與非人類抗體相比時清除率降低而使用嵌合、人類化或人類抗體時,一般達成更久循環半衰期。在一些實施例中,人類生殖系序列用於根據本發明之抗體或片段中之構架區。使用人類生殖系序列可將抗體或片段之免疫原性風險降至最低,因為此等序列不太可能含有構架區所來源之個體特有並且在應用於另一人類個體時可能引起免疫原性反應的體細胞變異。
抗體人類化或提供嵌合抗體之程序在此項技術中為熟知的。已建立各種基於重組DNA之方法,目標為增加抗體中亦出現在人類抗體中之相同或相似位置的胺基酸殘基的含量,同時保留親本非人類抗體之特異性及親和力。舉例而言,藉由具有最高程度同源性之相應人類構架區取代小鼠抗體之可變區之構架區,而保持非人類CDR完整。適用於使根據本發明之抗體人類化的其他方法包括但不限於CDR移植(Queen, C等人, 1989;Carter, P等人, 1992);表面重整(Padlan, EA等人, 1991)、超人類化(Tan, PDA等人, 2002)、人類串含量最佳化(Lazar, G.A.等人, 2007)及人類工程化(Almagro, JC等人, 2008)。
在一個實施例中,根據本發明之抗體或片段為多特異性抗體,諸如雙特異性抗體。多特異性抗體為對至少兩個不同的抗原及/或抗原決定基具有結合特異性之單株抗體。在一個實施例中,雙特異性抗體對FH具有結合特異性,例如,其包含特異性結合至如本文中所描述之FH之CCP18的一個可變輕鏈及一個可變重鏈,並且對另一抗原具有結合特異性。在另一實施例中,雙特異性抗體可結合至FH之兩個不同的抗原決定基。
根據本發明之抗體或片段可屬於任何類別。抗體之「類別」係指其重鏈所具有之恆定域或恆定區的類型。存在五個主要抗體類別:IgA、IgD、IgE、IgG及IgM,其中一些可進一步分成子類或同型,諸如IgG1、IgG2、IgG3及IgG4。在某些實施例中,根據本發明之抗體包含IgG (例如IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)之恆定區(例如Fc結構域)。在某些實施例中,根據本發明之抗體包含人類IgG (例如人類IgG1、IgG2、IgG3或IgG4)之恆定區(例如Fc結構域)。Fc結構域介導抗體之效應功能,包括誘導抗體依賴性細胞毒性(ADCC)及補體依賴性細胞毒性(CDC)之能力。在某些實施例中,本文中揭示之抗體包含具有一或多個降低Fc之效應功能之突變的Fc結構域。在一些實施例中,本文中揭示之抗體包含在選自234、235、236、237、270、297、318、320、322、329及331之一或多個位置包含突變(例如,相對於野生型人類IgG1之取代)的Fc結構域。此種突變在此項技術中為已知的且包括但不限於L234A、L235A、G237A、P329A或P329G、A330S、P331S、N297Q、N297A及其組合。Fc結構域亦結合新生兒Fc受體FcRn,從而促進抗體之再循環且從而增加抗體之半衰期。在某些實施例中,本文中揭示之抗體包含具有一或多個增加Fc與FcRn之結合親和力之突變的Fc結構域。此種突變在此項技術中為已知的,且包括但不限於M252Y/T256D、T256D/T307Q及T256D/T307W。
在某些實施例中,除了天然抗體或片段中天然存在之任何修飾以外,本文中所揭示之抗體或片段中之任一者皆可進一步包含轉譯後修飾。此種修飾包括但不限於乙醯化、羧酸化、糖基化、磷酸化、脂質化、聚乙二醇化(聚乙二醇)及醯化。因此,經修飾之多肽可含有非胺基酸要素,諸如聚乙二醇、脂質、單醣或多醣及磷酸酯。在特定實施例中,該抗體或片段經PEG化。在其他特定實施例中,該抗體或片段為PEG化Fab分子。
可藉由此項技術中已知的各種方法來製備特定抗原(諸如根據本發明之FH)特異性抗體。舉例而言,可使用人類FH作為引發抗體之免疫原。作為另一實例,可使用FH相關蛋白之人類FH之CCP18結構域作為免疫原。此種方法之一個實例為藉由如實例中所描述之免疫及雜交瘤產生。舉例而言,可藉由視情況在佐劑(諸如montanide)存在下用人類因子H或FH相關蛋白(諸如FHR-1)經腹膜內使小鼠(例如BALB/c小鼠)免疫(例如間隔四週)來產生針對FH之小鼠單株抗體。在第四次免疫之後若干天,可使脾細胞與例如骨髓瘤細胞株SP2/0融合。可藉由ELISA測驗雜交瘤上清液中存在因子H特異性抗體。舉例而言,用moAb (例如大鼠抗小鼠κ moAb RM19)塗佈微量滴定盤以俘獲小鼠IgG抗體。可藉由生物素化因子H測定抗體之特異性。提供FH特異性抗體之方法的另一實例為藉由對表現編碼免疫球蛋白鏈之重組核酸序列的噬菌體呈現庫進行篩檢。此項技術中已廣泛使用並描述用於抗體噬菌體呈現之方法。可用與用於免疫之抗原相同的抗原,例如人類FH、FH相關蛋白或人類FH之CCP18結構域對抗體庫進行篩檢。C. 核酸及載體
本發明進一步提供一或多種經分離之合成或重組核酸,其包含編碼本文中所揭示之抗體或其片段中之任一者的核酸序列。在一些實施例中,該核酸至少編碼抗體1之重鏈CDR1、CDR2及CDR3及/或輕鏈CDR1、CDR2及CDR3,如表1中所示。在一些實施例中,該核酸至少編碼抗體2之重鏈CDR1、CDR2及CDR3及/或輕鏈CDR1、CDR2及CDR3,如表1中所示。在一些實施例中,該核酸至少編碼抗體3之重鏈CDR1、CDR2及CDR3及/或輕鏈CDR1、CDR2及CDR3,如表1中所示。在一些實施例中,該核酸至少編碼抗體4之重鏈CDR1、CDR2及CDR3及/或輕鏈CDR1、CDR2及CDR3,如表1中所示。
在一些實施例中,根據本發明之核酸具有至少30個核苷酸、至少50個核苷酸或至少75個核苷酸之長度。在一些實施例中,根據本發明之核酸編碼包含抗體1之重鏈CDR序列及輕鏈CDR序列及/或重鏈可變區及輕鏈可變區的單株嵌合或人類化抗體或其片段。在一些實施例中,根據本發明之核酸編碼包含抗體2之重鏈CDR序列及輕鏈CDR序列及/或重鏈可變區及輕鏈可變區的單株嵌合或人類化抗體或其片段。在一些實施例中,根據本發明之核酸編碼包含抗體3之重鏈CDR序列及輕鏈CDR序列及/或重鏈可變區及輕鏈可變區的單株嵌合或人類化抗體或其片段。在一些實施例中,根據本發明之核酸編碼包含抗體4之重鏈CDR序列及輕鏈CDR序列及/或重鏈可變區及輕鏈可變區的單株嵌合或人類化抗體或其片段。
編碼抗體5-7之重鏈及輕鏈的核酸序列示於表1中。然而,本發明亦涵蓋編碼根據本發明之抗體之重鏈或輕鏈CDR的核酸,其包含與表1中所示之核酸序列不同的核酸序列,但包含編碼表1中所示之重鏈、輕鏈、重鏈CDR或輕鏈CDR序列之胺基酸序列的核酸密碼子。
因此提供一種經分離之合成或重組核酸,其包含編碼與SEQ ID NO: 1、2、3、5、6及7之序列中之任一者或其任何組合或片段至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致之胺基酸序列的核酸序列。進一步提供一種經分離之合成或重組核酸,其包含編碼與SEQ ID NO: 1、2、3、5、10及11之序列中之任一者或其任何組合或片段至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致之胺基酸序列的核酸序列。進一步提供一種經分離之合成或重組核酸,其包含編碼與SEQ ID NO: 3、5、6、7、13及14之序列中之任一者或其任何組合或片段至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致之胺基酸序列的核酸序列。進一步提供一種經分離之合成或重組核酸,其包含編碼與SEQ ID NO: 3、5、10、11、13及14之序列中之任一者或其任何組合或片段至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致之胺基酸序列的核酸序列。
進一步提供一種經分離之合成或重組核酸,其包含編碼與SEQ ID NO: 4及8之序列中之任一者或其任何組合或片段至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致之胺基酸序列的核酸序列。進一步提供一種經分離之合成或重組核酸,其包含編碼與SEQ ID NO: 4及12之序列中之任一者或其任何組合或片段至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致之胺基酸序列的核酸序列。進一步提供一種經分離之合成或重組核酸,其包含編碼與SEQ ID NO: 8及16之序列中之任一者或其任何組合或片段至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致之胺基酸序列的核酸序列。進一步提供一種經分離之合成或重組核酸,其包含編碼與SEQ ID NO: 12及16之序列中之任一者或其任何組合或片段至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%一致之胺基酸序列的核酸序列。本發明亦涵蓋編碼例如藉由保守胺基酸取代加以修飾之重鏈及/或輕鏈CDR或抗體的核酸。
在一些實施例中,根據本發明之核酸或核酸序列包含核苷酸鏈(亦即,DNA及/或RNA)。然而,本發明之核酸或核酸序列可包含其他種類之核酸結構,諸如DNA/RNA螺旋體、肽核酸(PNA)、鎖核酸(LNA)及/或核糖酶。此種其他核酸結構稱為核酸序列之功能等效物且由本發明涵蓋。術語「核酸序列之功能等效物」亦涵蓋包含展現與天然核苷酸相同之功能的非天然核苷酸、經修飾之核苷酸及/或非核苷酸構建塊的鏈。
本發明進一步提供一種載體,其包含一或多種根據本發明之核酸。在一些實施例中,該載體為質體。質體在本文中定義為環形。在一些實施例中,質體為雙鏈DNA分子。用於製備包含根據本發明之核酸的載體的方法在此項技術中為熟知的。適合產生本發明之載體的載體的非限制性實例為反轉錄病毒及慢病毒載體。根據本發明之載體可用於多種應用。在一些實施例中,根據本發明之載體用於在細胞中活體外表現根據本發明之核酸,諸如用於產生根據本發明之抗體或片段。此外,包含根據本發明之核酸的根據本發明之載體可用於治療。向有需要之個體(諸如人類)投與此種載體引起根據本發明之抗體或片段在活體內表現。
在一些實施例中,本發明提供一種載體,其編碼本文中所揭示之抗體或片段中之任一者。在一些實施例中,該載體為病毒載體。在一些實施例中,該載體為AAV載體。本發明之重組AAV (rAAV)載體可由多種腺相關病毒產生。舉例而言,在複製、整合、切割及轉錄機制方面,預期來自任何AAV血清型之ITR皆具有類似的結構及功能。AAV血清型之實例包括AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11及AAV12。在一些實施例中,rAAV載體係由血清型AAV1、AAV2、AAV4、AAV5或AAV8產生。已知此等血清型靶向感光細胞或視網膜色素上皮細胞。在特定實施例中,rAAV載體係由血清型AAV2產生。在某些實施例中,AAV血清型包括AAVrh8、AAVrh8R或AAVrh10。亦應理解,rAAV載體可為選自血清型AAV1至AAV12之兩個或更多個血清型之嵌合體。可藉由將一種血清型之重組基因組包裝至來源於另一AAV血清型之衣殼中來改變載體之向性。在一些實施例中,rAAV病毒之ITR可基於AAV1-12中任一者之ITR,且可與選自AAV1-12、AAV-DJ、AAV-DJ8、AAV-DJ9或其他經修飾血清型中任一者之AAV衣殼組合。在某些實施例中,任何AAV衣殼血清型皆可與本發明之載體一起使用。AAV血清型之實例包括AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11、AAV12、AAV-DJ、AAV-DJ8、AAV-DJ9、AAVrh8、AAVrh8R或AAVrh10。在某些實施例中,AAV衣殼血清型為AAV2。
進一步提供一種重組細胞,其包含根據本發明之核酸或載體。在一些實施例中,將核酸或載體引入至細胞中,使得細胞之核酸轉譯機制將產生所編碼之抗體或片段。在一些實施例中,在所謂的生產細胞中表現根據本發明之核酸或載體,諸如中國倉鼠卵巢(CHO)、NSO (小鼠骨髓瘤)或293(T)細胞株之細胞,其中一些適於商業抗體生產。此種生產細胞之增殖產生能夠產生根據本發明之抗體或片段的生產細胞株。在一些實施例中,生產細胞株適合產生供在人類中使用之抗體。在一些實施例中,生產細胞株不含病原體,諸如病原微生物。
本發明進一步提供一種產生根據本發明之抗體或片段之方法,該方法包括向細胞提供根據本發明之核酸或載體,以及允許該細胞轉譯該核酸或載體所包含之核酸序列,從而產生根據本發明之抗體或片段。在一些實施例中,根據本發明之方法進一步包括收集、純化及/或分離該抗體或片段。亦提供用根據本發明之產生抗體或片段之方法獲得的抗體或片段。D. 醫藥組合物
在一些實施例中,根據本發明之抗體或片段適宜用於治療應用。因而提供一種包含根據本發明之抗體或片段以及醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑及/或賦形劑的醫藥組合物。亦提供包含根據本發明之核酸或載體(例如,AAV載體)及至少一種醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑及/或賦形劑的醫藥組合物。適合之載劑的非限制性實例為例如匙孔戚血藍蛋白(KLH)、血清白蛋白(例如BSA或RSA)及卵白蛋白。在一些實施例中,該載劑為溶液,諸如水溶液,例如生理鹽水,或基於油之溶液。可併入錠劑、膠囊及其類似物中之賦形劑之非限制性實例為黏合劑,諸如黃蓍樹膠、阿拉伯膠、玉米澱粉或明膠;賦形劑,諸如微晶纖維素;崩解劑,諸如玉米澱粉、預膠凝澱粉及海藻酸;潤滑劑,諸如硬脂酸鎂;甜味劑,諸如蔗糖、乳糖或糖精;及調味劑,諸如薄荷油、冬青油或櫻桃油。在一些實施例中,劑量單位形式為膠囊。在一些實施例中,除一或多種以上所指示之賦形劑以外,劑量單位形式亦含有液體載劑,諸如脂肪油。各種其他材料可作為包衣劑存在或調節劑量單位之物理形式。舉例而言,錠劑可用蟲膠及/或糖或二者包覆。在一些實施例中,根據本發明之醫藥組合物適合人類使用。
本文中所描述之醫藥組合物可用多種不同的方式投與。實例包括經由眼內、玻璃體內、視網膜下、經口、鼻內、直腸、局部、腹膜內、靜脈內、肌肉內、皮下、真皮下、經皮、鞘內及顱內方法投與包含根據本發明之抗體且含有醫藥學上可接受之載劑的醫藥組合物。在特定實施例中,本文中所揭示之抗體、片段、載體或醫藥組合物中之任一者皆可經玻璃體內投與受試者。在特定實施例中,本文中所揭示之抗體、片段、載體或醫藥組合物中之任一者皆可經視網膜下投與受試者。對於經口投與,活性成分可呈諸如膠囊、錠劑及粉劑之固體劑型,或呈諸如酏劑、糖漿及懸浮液之液體劑型投與。可根據習知製藥實務,藉由將本發明之抗體或片段溶解或懸浮於注射用媒劑,諸如水或如芝麻油、椰子油、花生油、棉籽油等天然存在之油或如油酸乙酯之合成脂肪媒劑中來調配注射用無菌組合物。亦可併入緩衝劑、防腐劑及/或抗氧化劑。E. 治療 / 預防應用
本發明進一步提供根據本發明之抗體或片段以供用於療法中。進一步提供根據本發明之核酸以供用於療法中。該療法可治療性的或預防性的。根據本發明之抗體或片段尤其適用於治療、減輕或預防與替代途徑補體活化相關之病症。因此提供一種根據本發明之抗體或片段以供用於治療、減輕或預防與替代途徑補體活化相關之病症。亦提供一種根據本發明之核酸以供用於治療、減輕或預防與替代途徑補體活化相關之病症。如本文中所使用,「與替代補體活化相關之病症」在本文中定義為其中不合需要及/或過度之替代途徑補體活化引起細胞、組織或細胞外基質損傷的病症。可能損傷因不合需要及/或過度之替代途徑活化而損傷之細胞為與血液接觸之任何細胞,例如紅血球、上皮細胞(特定言之,肝臟及/或腎臟上皮細胞)、血小板、白血球、內皮細胞。在一些實施例中,該病症為與FH功能受損或FH缺乏相關之病症。在一些實施例中,該病症為與FH功能受損或FH缺乏相關但與FH不存在無關之病症。因為本發明之抗體及片段強化FH之功能,故該等抗體及片段尤其適合阻斷或降低受損FH功能或FH缺乏之影響。然而,本發明之增強型抗FH抗體亦可抑制與人工阻斷FH之健康個體之血清一起培育之紅血球的溶解。因此,抗體及片段亦可用於阻斷或降低由除FH功能受損或FH缺乏以外之因素引起之不合需要及/或過度之替代途徑補體活化。此種可治療之病症之非限制性實例為非典型溶血性尿毒症候群(aHUS)、陣發性夜間血紅素尿症(PNH)、年齡相關黃斑變性(AMD)、膜增生性腎小球腎炎(MPGN)。
非典型溶血性尿毒症候群(aHUS)亦稱為補體介導之HUS,其特徵為溶血性貧血、血小板減少症、全身性血栓性微血管病(TMA)及腎衰竭。aHUS發作通常在兒童期,且該疾病之急性發作與例如感染、懷孕、其他疾病、手術或外傷相關。儘管進行血漿交換或血漿補充,但超過60%之aHUS患者死亡或發展終末期腎病(ESRD)。在aHUS患者中已鑑定補體系統之組分或因子中之若干突變。FH、FI FB、膜輔因子蛋白(MCP)、血栓調節蛋白(THBD)或C3中之突變占aHUS患者中之已知突變之約50%,其中FH突變最頻繁(佔aHUS患者之約20%至30%)。大多數患者之突變為雜合的,但仍導致病理性FH缺乏。另外,在約10%患者中,aHUS係由針對FH之自體抗體引起,亦導致功能性FH降低。目前,aHUS之標準治療為血漿補充或血漿交換療法。另外,使用依庫珠單抗治療aHUS患者。腎移植與高復發風險相關聯,視aHUS之基礎突變而定。FH、FB、FI、C3或THBD中存在突變之兒童由於復發風險增加而禁用移植。根據本發明之抗體或片段,諸如至少包含Fab片段之抗體或片段尤其適用於治療、減輕或預防由FH中之突變或由於存在抗FH自體抗體而引起之aHUS。對FH之增強作用與FH中攜帶突變之CCP結構域無關。舉例而言,增強型FH抗體或其片段能夠抑制在FH之CCP1、CCP6、CCP7、CCP14、CCP17、CCP18、CCP19及CCP20中攜帶突變之aHUS患者的替代補體活化。然而,因為本發明之抗體及片段在不存在FH功能受損或FH缺乏時亦可強化FH活性,因此適宜用本發明之抗體或片段治療、減輕或預防任何形式之補體依賴性aHUS。
陣發性夜間血紅素尿症(PNH)係由全能造血幹細胞X染色體中之基因突變引起。該突變導致磷脂醯肌醇聚醣A類蛋白缺乏,此對於合成糖基磷脂醯肌醇膜錨定蛋白(GPI-AP)至關重要。補體系統CD55之抑制劑為此種蛋白質之實例,其結合宿主細胞表面之C3b,從而防止形成C3轉化酶。因此,缺乏此等蛋白質導致不合需要或過度之補體活化。PNH之主要後果之一為紅血球由於補體系統之過度活性而發生溶解。最近,在若干國家已批准依庫珠單抗用於治療PNH。其他療法包括輸血、紅血球刺激劑療法、用皮質類固醇及同化類固醇治療。因為本發明之抗體及片段亦可與FH或FH功能之水準無關地增強FH之活性,從而抑制補體系統替代途徑之活化,因此該等抗體及片段適宜用於PNH患者。另外,由於本發明之抗體及片段在C3沈積層面上起作用,與在活化途徑更下游起作用之依庫珠單抗相反,因此由於較少細胞受C3b調理而使肝臟中之細胞耗竭降低。
年齡相關黃斑變性(AMD)為視網膜損傷,通常影響老年個體,導致黃斑(視場中心)視力喪失。最近,FH中之突變及SNP (單核苷酸多態性)已牽涉約35%之AMD患者。SNP位於FH之CCP7中,且顯示影響FH與肝素結合,從而損害FH結合宿主細胞表面以及細胞外基質之能力。根據本發明之抗體或片段,諸如至少包含Fab片段之抗體或片段尤其適用於治療、減輕或預防以FH功能減退(亦即,以編碼FH之基因中之SNP)為特徵之AMD。
膜增生性腎小球腎炎(MPGN)為主要發生在兒童及青少年中之慢性腎炎的罕見原因。其由於腎小球膜及內皮細胞增殖及腎小球膜基質擴增、由內皮下免疫沈積物及/或膜內緻密沈積物致使外周毛細血管壁增厚以及腎小球膜插入毛細血管壁中而造成腎小球損傷。MPGN通常與完全不存在FH相關。在一些實施例中,可用本發明之抗體及/或片段治療之MPGN與FH功能受損或FH缺乏相關,但與FH不存在無關。
本發明因而提供一種根據本發明之抗體或片段或核酸以供用於治療、減輕或預防與替代途徑補體活化相關之病症。在一些實施例中,該病症係選自由以下組成之群:非典型溶血性尿毒症候群(aHUS)、陣發性夜間血紅素尿症(PNH)、年齡相關黃斑變性(AMD)、膜增生性腎小球腎炎(MPGN)。亦提供根據本發明之抗體或片段、核酸或載體用於製備用以治療、減輕或預防與替代途徑補體活化相關之病症的藥物的用途。在一些實施例中,該病症係選自由以下組成之群:非典型溶血性尿毒症候群(aHUS)、陣發性夜間血紅素尿症(PNH)、年齡相關黃斑變性(AMD)、膜增生性腎小球腎炎(MPGN)及IgA腎病。在特定實施例中,該病症為IgA腎病。在一些實施例中,根據本發明之供用作藥物或預防劑之抗體或片段為包含如表1中所示之抗體之重鏈及輕鏈CDR1、CDR2及CDR3的抗體或其片段(亦即,Fab、Fab'或F(ab)2
或F(ab')2
片段)。在一些實施例中,該抗體或片段為單株人類化或嵌合抗體或片段。
本發明進一步提供一種抑制替代補體活化之方法,該方法包括向個體投與根據本發明之抗體或片段,或者根據本發明之核酸或載體。本發明進一步提供一種用於治療、減輕或預防與替代途徑補體活化相關之病症的方法,該方法包括向有需要之個體投與治療有效量之根據本發明之抗體或片段。亦提供一種用於治療、減輕或預防與替代途徑補體活化相關之病症的方法,該方法包括向有需要之個體投與治療有效量之根據本發明之核酸或載體。進一步提供一種用於治療、減輕或預防與替代途徑補體活化相關之病症的方法,該方法包括向有需要之個體投與治療有效量之根據本發明之醫藥組合物。在一些實施例中,該病症係選自由以下組成之群:非典型溶血性尿毒症候群(aHUS)、陣發性夜間血紅素尿症(PNH)、年齡相關黃斑變性(AMD)、膜增生性腎小球腎炎(MPGN)。如本文中所使用,「個體」為具有補體系統作為其免疫系統之一部分的人類或動物(例如,哺乳動物)。在一特定實施例中,該個體為人類。在一些實施例中,用於本發明之方法之抗體為抗體或其片段,諸如Fab、Fab'、F(ab)2
或F(ab')2
片段,其包含抗體1之重鏈及輕鏈CDR1、CDR2及CDR3;抗體2之重鏈及輕鏈CDR1、CDR2及CDR3;抗體3之重鏈及輕鏈CDR1、CDR2及CDR3;或抗體4之重鏈及輕鏈CDR1、CDR2及CDR3。在一些實施例中,該抗體或片段為單株人類化或嵌合抗體或片段。
可投與含有本發明之抗體、片段、核酸的組合物以進行預防性及/或治療性治療。在治療性應用中,以足以抵消疾病及/或其併發症之症狀的量向已罹患疾病及/或已顯示疾病症狀之個體(例如人類)投與根據本發明之抗體、片段、核酸或組合物。在預防性應用中,在個體顯示病症之症狀之前向個體投與根據本發明之抗體、片段、核酸或組合物以防止此等症狀或其併發症發展。舉例而言,可用根據本發明之抗體、片段、核酸或組合物預防性地治療攜帶可能或將會引起與替代補體活化相關之病症的基因突變的個體。抗體、片段、核酸或載體分子通常以治療有效量存在於根據本發明之醫藥組合物中,該治療有效量為足以醫冶與不合需要或過度之補體系統替代途徑活化相關之病症的量。
出於清楚及簡要描述之目的,特徵在本文中可描述為本發明之相同或單獨態樣或實施例之一部分。熟習此項技術者應瞭解,本發明之範疇可包括具有本文中作為相同或單獨實施例之一部分而描述之所有或一些特徵之組合的實施例。實例
提供此等實例僅出於說明性目的而不限制本文中所提供之申請專利範圍之範疇。試劑
人類純化因子H係獲自CompTech. (Tyler,Texas USA)。大鼠抗小鼠κ (RM19)係獲自Sanquin (試劑業務單位,Sanquin,Amsterdam,Netherlands)。高效ELISA緩衝液(HPE)係獲自Sanquin。如之前所描述(Schmidt等人, 2008)來產生重組FH CCP (CCP 15-18、CCP 15-19、CCP 18-20或CCP 19-10)。如先前所描述來製造針對人類FH之小鼠單株抗體(mAb)。抗IL-6.8用作同型對照物且係獲自Sanquin。抗C3.19可與分子之C3d片段上之抗原決定基反應(Wolbink等人, 1993)。rhFHR 蛋白之表現
如先前所描述(Pouw等人, 2015)來產生並純化含有C末端6x組胺酸(6xHis)標籤之重組人類因子H相關(rhFHR)蛋白。簡而言之,藉由在HEK293F細胞中瞬時轉染pcDNA3.1表現載體來表現蛋白質,之後使用HisTrap™高效1 ml管柱(GE Healthcare Life Sciences,Freiburg,Germany)藉由Ni2+
親和層析法自上清液純化蛋白質。使用Amicon®超離心過濾器裝置(Merck Millipore,Darmstadt,Germany)過濾並濃縮rhFHR。抗體產生
單株抗體FHR-1.3B4係藉由間隔四週用25 μg重組人類因子H相關蛋白1 (FHR-1),以含25 μg rhFHR-1之montanide作為佐劑經腹膜內使BALB/c小鼠免疫而產生。在第四次加強免疫之後三天,使脾細胞與骨髓瘤細胞株SP2/0融合。藉由ELISA測驗雜交瘤上清液中存在FHR-1特異性抗體。簡而言之,用大鼠抗小鼠κ moAb (RM19)塗覆微量滴定盤以俘獲小鼠IgG抗體。藉由生物素化rhFHR-1測定抗體之特異性。簡而言之,藉由同0.1% (v/v)與HRP結合之鏈黴親和素一起在HPE中培育30分鐘來測定生物素化rhFHR-1之結合。使用含100 μg/mL 3,5,3',5'-四甲基聯苯胺(TMB)之0.1 M乙酸鈉(含有0.003% (v/v) H2
O2
,pH 5.5)使ELISA進一步顯色。藉由添加100 μL H2
SO4
終止受質轉化,並在450 nm下量測吸光度,且用Synergy 2多模式讀盤儀(BioTek Instruments,Winooski,VT,USA)校正540 nm下之吸光度。所有ELISA步驟皆以100 µL/孔之最終體積進行。
藉由將CDR序列移植至人類生殖系抗體之構架區中來使FHR-1.3B4抗體人類化。作為人類化之結果,產生了抗體5。隨後使抗體5中之某些胺基酸突變以提高對FH之結合親和力。如表1中所揭示之抗體1、抗體2、抗體3及抗體4為對FH展現最高親和力之抗體。抗體對因子 H 之結合親和力
為了測定抗體1至抗體4之結合親和力,使用BiaCore T200 (GE Healthcare)及CM5感測器晶片(GE Healthcare),根據製造商之說明書進行表面電漿子共振(SPR)實驗。簡而言之,將抗體1至抗體9或抗FHR-1.3B4俘獲至蛋白A或蛋白G偶聯晶片上,並且使全長FH以降低之濃度流過所俘獲之moAB。獲自SPR實驗之結合動力學提供於表2中。表 2
:抗體1至抗體9之結合動力學。
樣品ID (濃度= 200 nM) | k締合 ± SEM (所使用之重複實驗次數),M-1 s-1 | K解離 ± SEM (所使用之重複實驗次數),s-1 | Kd±SEM (所使用之重複實驗次數),nM |
FHR-1.3B4 | 59454 ± 2807 (11) | 5.32E-05 ± 2.4E-06 (12) | 0.91 ± 0.05 (11) |
抗體5 | 56674 ± 2131 (11) | 6.16E-04 ± 9.5E-06 (12) | 11.00 ± 0.48 (11) |
抗體6 | 47853 ± 2196 (12) | 2.57E-04 ± 5.2E-06 (12) | 5.45 ± 0.16 (12) |
抗體7 | 48672 ± 1459 (12) | 3.04E-04 ± 5.2E-06 (12) | 6.28 ± 0.14 (12) |
抗體8 | 54558 ± 1570 (12) | 4.81E-05 ± 2.6E-06 (11) | 0.90 ± 0.06 (11) |
抗體9 | 59697 ± 1441 (12) | 5.79E-05 ± 2.6E-06 (11) | 0.98 ± 0.06 (11) |
抗體1 | 53844±1784 (6) | 2.67E-05 ± 2.5E-06 (6) | 0.50 ± 0.05 (6) |
抗體2 | 58499±3557 (6) | 3.06E-05 ± 3.7E-06 (6) | 0.52 ± 0.04 (6) |
抗體3 | 48544±2050 (6) | 4.07E-05 ± 4.0E-06 (4) | 0.85 ± 0.06 (4) |
抗體4 | 55264±1692 (6) | 3.14E-05 ± 4.9E-06 (6) | 0.58 ± 0.10 (6) |
如表2中所示,抗體1、抗體2、抗體3及抗體4以奈莫耳或次奈莫耳親和力結合人類FH。另外,抗體1至抗體4對全長FH之結合親和力高於FHR-1.3B4。抗原決定基定位 mAb 及競爭分析
對某些單株抗體(mAb)之結合位點進行定位。特定言之,測驗mAb對包含不同CCP結構域(CCP 15-18、CCP 15-19、CCP 18-20及CCP 19-20)之重組FH片段及全長人類FH的反應性。使用包含多個CCP結構域(15-18、15-19、18-20或19-20)之重組人類FH片段確定mAb (諸如表1中所揭示者)之抗原決定基的位置。簡而言之,將FH.07及FHR-1.3B4俘獲在經RM-19塗覆之微量滴定盤上以確保最佳結合構型。接下來,在盤上將與100倍高濃度之所指示未標記重組FH片段混合的生物素化FH培育1小時。藉由同0.01% (v/v)與聚HRP結合之鏈黴親和素一起在HPE中培育30分鐘來測定生物素化FH之結合。如先前所描述使ELISA進一步顯色。發現FH.07及FHR-1.3B4結合人類FH之CCP 18。
使用促效抗FH抗體FH.07進行使用表1中所揭示之抗體或片段之競爭分析。為了確定表1中所揭示之人類化抗FHR-1 mAb是否會與FH.07競爭結合FH,使用與以上所描述類似的設置。簡而言之,將mAb直接塗覆至盤上並且如先前所描述藉由ELISA評定不存在或存在10倍高濃度之所指示mAb時生物素化FH (FH-bt)之結合。發現FHR-1.3B4與FH.07競爭。LPS 上之 C3 沈積
為了研究抗體1至抗體4是否影響FH之替代途徑抑制,對LPS進行C3沈積分析。簡而言之,用含傷寒沙門氏菌(Salmonella typhosa
) LPS (40 μg/mL,L-6386 Sigma-Aldrich)之PBS塗覆96孔微量滴定盤(Nunc),在室溫下隔夜。使用LPS活化補體之替代途徑。用PBS + 0.1% (w/v) Tween-20,10% (v/v)洗滌諸盤。在含有0.05% (w/v)明膠、5 mM MgCl2
、10 mM EGTA及0.1% (w/v) Tween-20之佛羅那緩衝液(VB;3 mM巴比妥、1.8 mM巴比妥鈉、145 mM NaCl,pH 7.4)中,在存在或不存在所指示濃度之抗FH/抗FHR-1 mAb (抗體1至抗體4或FHR-1.3B4)、同型對照物或作為陰性對照物之aIL6-8 AB的情況下培育正常人類血清(NHS,最終濃度為10% (v/v))。用生物素化mAb抗C3.19 (0.55 μg/mL,於HPE中)偵測C3b沈積,繼而同0.01% (v/v)與聚HRP結合之鏈黴親和素一起在HPE中培育30分鐘。如以上所描述使ELISA顯色。表3描述抗體1至抗體4及FHR-1.3B4之IC50
值。表4描述抗體1至抗體4之IC50
值(2次重複實驗)。表 3
:抗體1至抗體4及FHR-1.3B4之IC50
值。
表 4
:抗體1至抗體4之IC50
值。
抗體 | μg/ml | nM |
1 | 2.26 | 15.07 |
2 | 2.82 | 18.79 |
3 | 3.47 | 23.12 |
4 | 3.51 | 23.4 |
FHR-1.3B4 | 5.7 | 38.01 |
重複實驗1 | 重複實驗2 | |||
μg/ml | nM | μg/ml | nM | |
抗體 | ||||
1 | 3.5 | 23.35 | 2.26 | 15.07 |
2 | 3.68 | 24.53 | 2.82 | 18.79 |
3 | 4.14 | 27.59 | 3.47 | 23.12 |
4 | 4.34 | 28.95 | 3.51 | 23.4 |
如表3及表4中所示,抗體1至抗體4抑制LPS上之C3b沈積。此指示添加抗體1、2、3或4增強了FH對替代途徑活化之抑制功能。另外,如表3中所示,抗體1至抗體4在抑制LPS上之C3b沈積方面比FHR-1.3B4更有效,如較低IC50
值所指示。SRBC 溶血分析
為了研究抗體1至抗體4對因子H之功能的影響,一般如Sanchez-Corral等人(2004)及Wouters等人(2008)先前所描述進行溶血分析。簡而言之,將含有20 μg/ml抗FH.09 (針對FH之阻斷抗體)之預稀釋人類血清(20%,v/v)與所指示之mAb (抗體1至抗體4或FHR-1.3B4)一起預培育,並且在含5 mM MgCl2
及10 mM EGTA之VB或含10 mM EDTA之VB(作為空白)中與綿羊紅血球(SRBC)以1:1比率混合,以達到10% (v/v)血清及1.05*108
個細胞/ml的最終濃度,繼而在振盪的同時在37℃下培育75分鐘。藉由添加100 μl含20 mM EDTA之冰冷VB,繼而離心(2.5分鐘,1,800 RPM/471 RCF,7℃)來終止溶解。溶血量測為上清液在412 nm下之吸光度,針對在690 nm下量測之背景吸光度進行校正,並表示為100%溶解對照物(與0.6% (w/v)皂苷一起培育之SRBC)之百分比。作為陰性對照,將SRBC與稀釋於補充10 mM EDTA之VB中的血清一起培育以防止補體活化。
使用Graphpad prism 7.04由使用各種抗體(諸如表1中所揭示之抗體)之多次實驗計算溶血之IC50
,並藉由普通單因子ANOVA及鄧奈特(Dunnett)氏多重比較測驗進行統計比較。表5描述抗體1至抗體4及FHR-1.3B4之IC50
值。表6描述抗體1至抗體4之IC50
值(2次重複實驗)。表 5
:抗體1至抗體4及FHR-1.3B4之IC50
值。
表 6
:抗體1至抗體4之IC50
值。
ug/ml | nM | |
抗體 | ||
1 | 10.6 | 70.7 |
2 | 10.1 | 67.3 |
3 | 9.4 | 62.7 |
4 | 11.5 | 76.7 |
FHR-1.3B4 | 11.4 | 76 |
μg/ml | nM | μg/ml | nM | |
抗體 | ||||
1 | 10.7 | 71.33 | 10.9 | 72.67 |
2 | 11.45 | 76.33 | 10.4 | 69.33 |
3 | 11.1 | 74 | 9.1 | 60.67 |
4 | 11.47 | 76.47 | 11.78 | 78.53 |
如表5及表6中所示,抗體1至抗體4抑制SRBC溶解。另外,如表6中所示,抗體1至抗體3在抑制SRBC溶解方面比FHR-1.3B4更有效,如較低IC50
值所指示。存在抗 FH 抗體時因子 H 對 C3b 之結合親和力
使用Biacore T200儀器(GE Healthcare,Little Chalfont,UK),藉由表面電漿子共振來測定存在抗體1至抗體4 (諸如表1中所揭示者)時FH與C3b之結合。特定言之,使用標準胺偶聯將經純化之C3b (Complement Technologies)固定至CM5 Biacore感測器晶片(GE Healthcare)之流動池上。其餘流動池用作參考表面,且藉由在不添加任何蛋白質之情況下進行偶聯反應加以調理。在與C3b偶聯之後獲得2000個反應單位(RU)之反應。在37℃下使用10 μl/min之流速且在補充有0.01% (w/v) Tween-20 (Merck)之磷酸鹽緩衝生理鹽水pH 7.4 (PBS,Orphi Farma) (PBS-T)中進行SPR實驗。
為了在不干擾經由moAb進行之可能之交聯的情況下確定抗體之作用,使用mAb (抗體1至抗體4)之重組產生之Fab'片段。將Fab'片段與血漿純化FH (pdFH)混合。在不存在或存在10 μM (至少2倍莫耳比過量)之抗FHR-1 3B4 Fab'片段或抗體1至抗體4之Fab'片段的情況下,以不同的濃度(對於單獨FH,10 - 0,01953 μM;而在與moAb Fab'片段複合時,5 - 0,01953 μM)注入FH後在晶片上維持60秒。亦在未添加FH之情況下注入各Fab'片段,以確定Fab'片段與表面之任何相互作用。pdFH注射後解離60秒,並在各循環之間藉由單次注射1 M NaCl (Merck)使表面再生。
使用Scrubber 2 (Biologic Software)分析資料,並藉由平衡分析測定親和力。表7列出抗體1至抗體4之結合動力學。表 7
:抗體1至抗體4 (Fab'片段)之結合動力學。
名稱 | KD (所使用之重複實驗次數) |
pdFH | 1.3 µM (2) |
pdFH + FHR-1.3B4 (Fab'片段) | 299 nM (9) |
pdFH + 抗體1 (Fab'片段) | 273 nM (7) |
pdFH + 抗體2 (Fab'片段) | 284 nM (7) |
pdFH + 抗體3 (Fab'片段) | 336 nM (9) |
pdFH + 抗體4 (Fab'片段) | 292 nM (8) |
本說明書中所提及之所有出版物、專利及專利申請案皆以引用之方式併入本文中,達到與如同明確地且個別地指示各個別出版物、專利或專利申請案係以引用之方式併入的相同程度。等效方案
本發明可在不背離其精神或基本特徵之情況以其他特定形式實施本發明。上述實施例因此被視為在所有方面皆為說明性的,而非限制本文中所描述之本發明。本發明之範疇因而由所附申請專利範圍而非由上述發明描述指示,且意欲處於申請專利範圍等效物之含義及範圍內的所有變化皆涵蓋在其中。
Claims (37)
- 一種經分離之合成或重組抗體或其抗原結合片段,其特異性結合至因子H (FH)之補體控制蛋白結構域18 (CCP18)且包含: - 輕鏈CDR1序列,其包含序列SSVTY (SEQ ID NO: 1)或序列TSVTY (SEQ ID NO: 13); - 輕鏈CDR2序列,其包含序列ATS (SEQ ID NO: 2)或序列ASS (SEQ ID NO: 14); - 輕鏈CDR3序列,其包含序列QHRSSSNPLT (SEQ ID NO: 3); - 重鏈CDR1序列,其包含序列GFSLTNYG (SEQ ID NO: 5); - 重鏈CDR2序列,其包含序列VWSGGTT (SEQ ID NO: 6)或序列IWSGGTT (SEQ ID NO: 10);及 - 重鏈CDR3序列,其包含序列ARNFGNYAMDY (SEQ ID NO: 7)或序列ARNFGNYAMDF (SEQ ID NO: 11)。
- 根據請求項1之抗體或片段,其包含: - 輕鏈CDR1序列,其包含序列SSVTY (SEQ ID NO: 1); - 輕鏈CDR2序列,其包含序列ATS (SEQ ID NO: 2); - 輕鏈CDR3序列,其包含序列QHRSSSNPLT (SEQ ID NO: 3); - 重鏈CDR1序列,其包含序列GFSLTNYG (SEQ ID NO: 5); - 重鏈CDR2序列,其包含序列IWSGGTT (SEQ ID NO: 10);及 - 重鏈CDR3序列,其包含序列ARNFGNYAMDF (SEQ ID NO: 11)。
- 根據請求項1之抗體或片段,其包含: - 輕鏈CDR1序列,其包含序列SSVTY (SEQ ID NO: 1); - 輕鏈CDR2序列,其包含序列ATS (SEQ ID NO: 2); - 輕鏈CDR3序列,其包含序列QHRSSSNPLT (SEQ ID NO: 3); - 重鏈CDR1序列,其包含序列GFSLTNYG (SEQ ID NO: 5); - 重鏈CDR2序列,其包含序列VWSGGTT (SEQ ID NO: 6);及 - 重鏈CDR3序列,其包含序列ARNFGNYAMDY (SEQ ID NO: 7)。
- 根據請求項1之抗體或片段,其包含: - 輕鏈CDR1序列,其包含序列TSVTY (SEQ ID NO: 13); - 輕鏈CDR2序列,其包含序列ASS (SEQ ID NO: 14); - 輕鏈CDR3序列,其包含序列QHRSSSNPLT (SEQ ID NO: 3); - 重鏈CDR1序列,其包含序列GFSLTNYG (SEQ ID NO: 5); - 重鏈CDR2序列,其包含序列VWSGGTT (SEQ ID NO: 6);及 - 重鏈CDR3序列,其具有序列ARNFGNYAMDY (SEQ ID NO: 7)。
- 根據請求項1之抗體或片段,其包含: - 輕鏈CDR1序列,其包含序列TSVTY (SEQ ID NO: 13); - 輕鏈CDR2序列,其包含序列ASS (SEQ ID NO: 14); - 輕鏈CDR3序列,其包含序列QHRSSSNPLT (SEQ ID NO: 3); - 重鏈CDR1序列,其包含序列GFSLTNYG (SEQ ID NO: 5); - 重鏈CDR2序列,其包含序列IWSGGTT (SEQ ID NO: 10);及 - 重鏈CDR3序列,其包含序列ARNFGNYAMDF (SEQ ID NO: 11)。
- 根據請求項1至5中任一項之抗體或片段,其中該抗體或片段對FH之結合親和力以KD 計為2.5×10-8 M或更低及/或對包含CCP18-20之FH片段之結合親和力以KD 計為0.1×10-9 M或更低,或者其中該抗體或片段對FH之結合親和力以KD 計為1.25×10-8 M或更低及/或對包含CCP18-20之FH片段之結合親和力以KD 計為0.04×10-9 M或更低。
- 根據請求項1至5中任一項之抗體或片段,其中該抗體或片段對FH之結合親和力以KD 計為2.5×10-8 M或更低及/或對包含CCP18-20之FH片段之結合親和力以KD 計為0.1×10-9 M或更低,或者其中該抗體或片段對FH之結合親和力以KD 計為0.6×10-8 M或更低及/或對包含CCP18-20之FH片段之結合親和力以KD 計為0.6×10-11 M或更低。
- 根據請求項1至7中任一項之抗體或片段,其中該抗體或片段: - 在存在10% (v/v)血清時抑制活體外脂多醣上之C3沈積,其中IC50 值為38 nM或更低,諸如IC50 值為30 nM或更低;及/或 - 在存在10% (v/v)血清時抑制活體外溶血活性,其中IC50 值為150 nM或更低,諸如IC50 值為130 nM或更低;及/或 - 使活體外FH對C3b之KD 降低(使結合親和力增加)至至多2 μM及/或使活體外FH對C3b之結合親和力增加至少3倍。
- 根據請求項1至8中任一項之抗體或片段,其包含: - 可變輕鏈序列,其包含與SEQ ID NO: 4或16具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性之序列; - 可變重鏈序列,其包含與SEQ ID NO: 8或12具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性之序列。
- 根據請求項1至9中任一項之抗體或片段,其包含:可變輕鏈序列,其包含與SEQ ID NO: 4具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性之序列;及可變重鏈序列,其包含與SEQ ID NO: 8具有至少80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或100%序列一致性之序列。
- 根據請求項1至9中任一項之抗體或片段,其包含:可變輕鏈序列,其包含與SEQ ID NO: 4具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性之序列;及可變重鏈序列,其包含與SEQ ID NO: 12具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性之序列。
- 根據請求項1至9中任一項之抗體或片段,其包含:可變輕鏈序列,其包含與SEQ ID NO: 16具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性之序列;及可變重鏈序列,其包含與SEQ ID NO: 8具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性之序列。
- 根據請求項1至9中任一項之抗體或片段,其包含:可變輕鏈序列,其包含與SEQ ID NO: 16具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性之序列;及可變重鏈序列,其包含與SEQ ID NO: 12具有至少80%、至少85%、至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、至少99%或100%序列一致性之序列。
- 根據請求項1至13中任一項之抗體或片段,其中該抗體或片段增強FH活性,視情況其中該FH活性為抑制替代補體活化,進一步視情況其中抑制替代補體活化包括: - 抑制溶血活性; - 抑制補體組分3 (C3)沈積;及/或 - 增加FH與C3b、iC3b及/或C3d之結合。
- 根據請求項1至14中任一項之抗體或片段,其中該抗體或片段包含免疫球蛋白重鏈可變區及免疫球蛋白輕鏈可變區,且進一步包含免疫球蛋白重鏈恆定區及免疫球蛋白輕鏈恆定區。
- 根據請求項1至15中任一項之抗體或片段,其中該抗體或片段包含Fab片段。
- 根據請求項1至16中任一項之抗體或片段,其中該抗體或片段為單株的。
- 根據請求項1至17中任一項之抗體或片段,其中該抗體或片段包含人類輕鏈及重鏈恆定區。
- 根據請求項1至18中任一項之抗體或片段,其中該抗體或片段經PEG化。
- 根據請求項19之抗體或片段,其中該抗體或片段為PEG化Fab片段。
- 一種經分離之合成或重組核酸,其包含編碼根據請求項1至20中任一項之抗體或片段的核酸序列。
- 一種載體,其包含根據請求項21之核酸。
- 如請求項22之載體,其中該載體為AAV載體。
- 如請求項23之載體,其中該AAV載體係選自由以下組成之群:AAV1、AAV2、AAV3、AAV4、AAV5、AAV6、AAV7、AAV8、AAV9、AAV10、AAV11及AAV12。
- 一種重組細胞,其包含根據請求項21之核酸或根據請求項22至24中任一項之載體。
- 一種醫藥組合物,其包含根據請求項1至20中任一項之抗體或片段、根據請求項21之核酸、根據請求項22至24中任一項之載體或根據請求項25之重組細胞,及醫藥學上可接受之載劑、稀釋劑及/或賦形劑。
- 根據請求項1至20中任一項之抗體或片段、根據請求項21之核酸、根據請求項22至24中任一項之載體、根據請求項25之重組細胞、或根據請求項26之醫藥組合物,其係用於療法中。
- 根據請求項1至20中任一項之抗體或片段、根據請求項21之核酸、根據請求項22至24中任一項之載體、根據請求項25之重組細胞、或根據請求項26之醫藥組合物,其係用於抑制替代補體活化。
- 根據請求項1至20中任一項之抗體或片段、根據請求項21之核酸、根據請求項22至24中任一項之載體、根據請求項25之重組細胞、或根據請求項26之醫藥組合物,其係用於治療、減輕或預防與替代途徑補體活化相關之病症。
- 根據請求項29所使用之抗體或片段、核酸、重組細胞或醫藥組合物,其中該病症係選自由以下組成之群:非典型溶血性尿毒症候群(aHUS)、陣發性夜間血紅素尿症(PNH)、年齡相關黃斑變性(AMD)、膜增生性腎小球腎炎(MPGN)及IgA腎病。
- 一種根據請求項1至20中任一項之抗體或片段、根據請求項21之核酸、根據請求項22至24中任一項之載體、根據請求項25之重組細胞、或根據請求項26之醫藥組合物之用途,其係用於製備用以治療、減輕或預防與替代途徑補體活化相關之病症的藥物。
- 根據請求項31之用途,其中該病症係選自由以下組成之群:非典型溶血性尿毒症候群(aHUS)、陣發性夜間血紅素尿症(PNH)、年齡相關黃斑變性(AMD)、膜增生性腎小球腎炎(MPGN)及IgA腎病。
- 減輕或預防與替代途徑補體活化相關之病症的方法,該方法包括向有需要之受試者投與治療有效量之根據請求項1至20中任一項之抗體或片段、根據請求項21之核酸、根據請求項22至24中任一項之載體、根據請求項25之重組細胞、或根據請求項26之醫藥組合物。
- 根據請求項33之方法,其中該病症係選自由以下組成之群:非典型溶血性尿毒症候群(aHUS)、陣發性夜間血紅素尿症(PNH)、年齡相關黃斑變性(AMD)、膜增生性腎小球腎炎(MPGN)及IgA腎病。
- 一種抑制替代補體活化之方法,該方法包括向受試者投與根據請求項1至20中任一項之抗體或片段、根據請求項21之核酸、根據請求項22至24中任一項之載體、根據請求項25之重組細胞、或根據請求項26之醫藥組合物。
- 一種產生抗體或片段之方法,該方法包括向細胞提供根據請求項21之核酸或根據請求項22至24中任一項之載體,及允許該細胞轉譯該核酸或載體所包含之核酸序列,從而產生根據請求項1至20中任一項之抗體或片段。
- 根據請求項36之方法,其進一步包括收集、純化及/或分離該抗體或片段。
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