KR20220057006A - 다중-중합효소연쇄 반응법을 이용한 모발 상태 진단 방법 - Google Patents

다중-중합효소연쇄 반응법을 이용한 모발 상태 진단 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 다중-중합효소연쇄 반응법을 이용한 모발 진단 방법에 관한 것이다.
본 발명의 다중-중합효소연쇄 반응법을 이용한 모발 진단 방법은 탈모 및 모발 굵기와 관련된 IL2RA, Chr20p11, HLA-DQB1, EDAR 유전자의 단일염기다형성 서열을 신속하고 정확하게 검출함으로써 편리하게 모발 성향 및 탈모 가능성 등에 관련된 정보 제공을 할 수 있는 유용한 지표를 제공할 수 있다는 점에서 우수한 효과를 가진다.

Description

다중-중합효소연쇄 반응법을 이용한 모발 상태 진단 방법 {A method for diagnosing hair condition using multiplex PCR}
본 발명은 IL2RA, Chr20p11, HLA-DQB1 및 EDAR 유전자의 단일염기다형성 서열을 멀티플렉스 PCR 방법으로 신속하고 정확하게 구별하는 프라이머 쌍 및 프로브의 세트, 이를 포함하는 조성물과 키트 및 이를 이용한 진단 방법에 관한 것이다.
모발은 성장기(Anagen), 퇴화기(Catagen), 및 휴지기(Telogen)의 주기를 돌며 발모와 탈모를 반복하며 유지된다. 상세하게는, 모발을 성장시키는 성장기(anagen), 성장을 종료하고 모구부가 축소하는 시기인 퇴화기(catagen), 모유두가 활동을 멈추고 모발을 두피에 머무르게 하는 시기인 휴지기(talogen), 모유두가 활동을 시작하거나 또는 새로운 모발을 발생시켜 오래된 모발을 탈모시키는 시기인 발생기로 나눌 수 있다. 따라서 탈모는 정상적인 현상이나 정상인 사람이 성장기 상태의 모발이 많은 데 비해 보통 탈모증(Alopecia)인 사람은 휴지기 상태의 모발이 많아, 눈으로 보이는 탈모현상이 나타내게 된다. 최근 사회적 스트레스의 증가와 더불어 환경 오염 및 인스턴트식품 등 서구화된 식습관, 잦은 파마와 염색, 잘못된 두피관리들로 인하여 탈모 인구가 점차 증가한다고 알려져 있다.
탈모는 단일 원인으로 발생하는 질병이 아니며, 유전적 원인과 남성 호르몬인 안드로겐(androgen)이 중요한 인자로 생각되고 있고, 여성형 탈모에서도 일부는 남성형 탈모와 같은 경로로 일어나는 것으로 추정되고 있으나 임상적으로 그 양상에 차이가 있다. 특히, 원형 탈모증은 자가 면역 질환으로 생각되고 있고, 휴지기 탈모증은 내분비 질환, 영양 결핍, 약물 사용, 출산, 발열, 수술 등의 심한 신체적, 정신적 스트레스 후 발생하는 일시적인 탈모로 모발의 일부가 생장 기간을 다 채우지 못하고 휴지기 상태로 이행하여 탈락됨으로써 발생한다. 현재까지 알려진 바로는 탈모에 가장 주요한 원인은 유전적 요인이다. 탈모는 생명현상을 위협하는 질병은 아니지만 정신적 스트레스를 크게 유발시킨다.
한편, 개인별 유전자의 단일염기다형성(Single-nucleotide polymorphism; SNP)을 분석하여 탈모 가능성을 미리 예측하고, 예방하고자 하는 노력이 이루어지고 있다.
개인별 유전자의 단일염기다형성이란, DNA 염기서열에서 하나의 염기서열(A,T,G,C)의 차이를 보이는 유전적 변화 또는 변이를 의미하는 것으로, 단일 염기 다형현상은 각 개인마다 많은 변이를 보이는 부분이므로 DNA 지문분석에 주로 이용된다. 개인별 단일염기다형성 분석을 이용하면, 유전자에 내재되어 있는 탈모 가능성, 모발 굵기 등의 정보로부터 본연의 모발 성향을 도출할 수 있으므로, 정확도 높은 모발 성향의 진단이 가능한다.
현재 탈모의 치료를 위해서 미녹시딜 등의 바르는 약, 피나스테라이드 등의 먹는 약, 모발 이식술 등이 이용되고 있으며 원형 탈모증의 치료를 위해서는 국소 스테로이드 제제나 전신 스테로이드 제제, 면역 요법 등이 이용되고 있다. 다만, 미녹시딜은 탈모가 진행되는 정수리에만 효과가 있으며, 이마의 헤어 라인에는 효과가 확인되지 않았고, 피나스테라이드는 성기능 장애의 부작용이 있으며, 모발이식술의 경우 비용이 비교적 고가이고 드물게 발생하는 합병증 등의 문제가 발생할 수 있다. 따라서, 탈모는 근본적으로 진행되기 전에 예방하는 것이 보다 중요하다.
이에 따라, 보건복지부에서 탈모와 연관된 일부 유전자들을 선정하여 비의료기관이 직접 검사할 수 있게 하였다. 그러나, 현재까지 개발된 진단 방법들은 시간이 많이 소요되고 그 정확성 측면에서도 충분한 효과를 나타내지 못하여 더욱 민감도하고 특이적인 진단방법이 당업계에서 요구되고 있다.
본 발명자들은 IL2RA, Chr20p11, HLA-DQB1. EDAR의 4가지 유전자의 단일염기다형성을 이용하여 해당 유전자 서열을 확인하는 방법을 완성하였다. 특히, 본 발명의 4가지 유전자의 해당 단일염기다형성 서열 확인 방법은 정확한 개인별 모발 성향 및 탈모 가능성 진단을 가능하게 하므로, 의학 및 미용 분야에서 크게 이용될 수 있다.
본 발명은 IL2RA, Chr20p11, HLA-DQB1 및 EDAR 유전자의 단일염기다형성 서열을 멀티플렉스 PCR 방법으로 신속하고 정확하게 구별하는 프라이머 및 프로브의 세트, 이를 포함하는 조성물, 키트 및 이를 이용한 진단 방법에 관한 것이다. 보다 상세하게는 Taqman probe 기반의 프라이머 세트를 이용하여 IL2RA, Chr20p11, HLA-DQB1, EDAR 유전자의 목적 단일염기다형성 서열을 동시에 신속하게 확인할 수 있는 프라이머 쌍 및 프로브의 세트를 제공한다.
이에 따라,
본 발명의 목적은
서열번호 1 및 서열번호 2로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 3 및 서열번호 4로 표시되는 프로브의 세트; 서열번호 5 및 서열번호 6으로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 7 및 서열번호 8로 표시되는 프로브의 세트; 서열번호 9 및 서열번호 10으로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 11 및 서열번호 12로 표시되는 프로브의 세트; 및 서열번호 13 및 서열번호 14로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 15 및 서열번호 16으로 표시되는 프로브의 세트 이루어진 군으로부터 선택되는 둘 이상의 세트를 포함하는 모발 상태 진단용 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명은 상기 모발 상태 진단용 조성물을 포함하는 진단 키트를 제공하는 것이다.
본 발명은
(a) 시료로부터 분리된 DNA를 수득하는 단계;
(b) 상기 분리된 DNA 시료를 템플릿으로 하여 서열번호 1 및 서열번호 2로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 3 및 서열번호 4로 표시되는 프로브의 세트; 서열번호 5 및 서열번호 6으로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 7 및 서열번호 8로 표시되는 프로브의 세트; 서열번호 9 및 서열번호 10으로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 11 및 서열번호 12로 표시되는 프로브의 세트; 및 서열번호 13 및 서열번호 14로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 15 및 서열번호 16으로 표시되는 프로브의 세트 이루어진 군에서 선택된 둘 이상의 세트를 이용하여 다중-중합효소연쇄 반응 및 혼성화 반응을 수행하는 단계; 및
(c) 혼성화 반응을 통해 확인되는 개인 유전체 SNP 타입을 확인하는 단계;를 포함하는 모발 상태 진단 정보의 제공 방법을 제공하는 것이다.
본 발명은 서열번호 1 및 서열번호 2로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 3 및 서열번호 4로 표시되는 프로브의 세트; 서열번호 5 및 서열번호 6으로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 7 및 서열번호 8로 표시되는 프로브의 세트; 서열번호 9 및 서열번호 10으로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 11 및 서열번호 12로 표시되는 프로브의 세트; 및 서열번호 13 및 서열번호 14로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 15 및 서열번호 16으로 표시되는 프로브의 세트 이루어진 군으로부터 선택되는 둘 이상의 세트를 포함하는 모발 상태 진단용 조성물을 제공하는 것이다.
구체적으로, 서열번호 1 및 서열번호 2로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 3 및 서열번호 4로 표시되는 프로브의 세트; 및 서열번호 5 및 서열번호 6으로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 7 및 서열번호 8로 표시되는 프로브의 세트를 포함하는 모발 상태 진단용 조성물을 제공한다. 또한, 서열번호 9 및 서열번호 10으로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 11 및 서열번호 12로 표시되는 프로브의 세트; 및 서열번호 13 및 서열번호 14로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 15 및 서열번호 16으로 표시되는 프로브의 세트를 포함하는 모발 상태 진단용 조성물을 제공한다.
보다 구체적으로, 서열번호 1 및 서열번호 2로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 3 및 서열번호 4로 표시되는 프로브의 세트; 및 서열번호 5 및 서열번호 6으로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 7 및 서열번호 8로 표시되는 프로브의 세트를 포함하는 다중-중합효소연쇄 반응용 제1세트; 및
서열번호 9 및 서열번호 10으로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 11 및 서열번호 12로 표시되는 프로브의 세트; 및 서열번호 13 및 서열번호 14로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 15 및 서열번호 16으로 표시되는 프로브의 세트를 포함하는 다중-중합효소연쇄 반응용 제2세트;를 포함하는 모발 상태 진단용 조성물을 제공한다.
Chr20p11은, 안드로젠 탈모증과 연관성이 높은 유전자 중 하나로, 상기 유전자에 변이가 존재하면 탈모 발생의 가능성이 높다고 알려져 있다.
IL2RA 및 HLA-DQB1은, 원형탈모와 연관성이 높은 유전자로서, 면역체계에 관여하는 단백질을 생성하는바, 상기 유전자에서 변이가 발견되는 경우 면역체계의 불균형을 초래할 수 있어 자가면역질환의 하나인 원형탈모 발생의 가능성이 높다고 알려져 있다.
EDAR은 모낭 발달 및 모발 형성에 관여하는 유전자로서, 엑소디플스플라신 A 수용체 단백질을 만드는데, 상기 유전자 변이로 땀샘이 많아지면서 부수적으로 모발이 굵어지는 현상이 나타난다고 알려져 있다.
본 발명에 있어서, 서열번호 1 및 서열번호 2로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 3 및 서열번호 4로 표시되는 프로브의 세트는 IL2RA에서 개인별 유전자의 단일염기다형성의 확인을 목적한다. 구체적으로, IL2RA 유전자의 SNP로서 rs3118470의 유전형이 C인 경우 모발 상태가 나빠질 가능성이 높거나 탈모의 위험성이 높은 것으로 예측 정보를 제공할 수 있다. 한편, rs3118470의 유전형이 T인 경우 모발 상태가 나빠질 가능성이 낮거나 탈모의 위험성이 낮은 것으로 예측 정보를 제공할 수 있다.
본 발명에 있어서, 서열번호 5 및 서열번호 6으로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 7 및 서열번호 8로 표시되는 프로브의 세트는 Chr20p11에서 개인별 유전자의 단일염기다형성의 확인을 목적한다. 구체적으로, Chr20p11 유전자의 SNP로서 rs1160312의 유전형이 A인 경우 모발 상태가 나빠질 가능성이 높거나 탈모의 위험성이 높은 것으로 예측 정보를 제공할 수 있다. 한편, rs1160312의 유전형이 G인 경우 모발 상태가 나빠질 가능성이 낮거나 탈모의 위험성이 낮은 것으로 예측 정보를 제공할 수 있다.
본 발명에 있어서, 서열번호 9 및 서열번호 10으로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 11 및 서열번호 12로 표시되는 프로브의 세트는 HLA-DQB1에서 개인별 유전자의 단일염기다형성의 확인을 목적한다. 구체적으로, HLA-DQB1 유전자의 SNP로서 rs9275572의 유전형이 G인 경우 모발 상태가 나빠질 가능성이 높거나 탈모의 위험성이 높은 것으로 예측 정보를 제공할 수 있다. 한편, rs9275572의 유전형이 A인 경우 모발 상태가 나빠질 가능성이 낮거나 탈모의 위험성이 낮은 것으로 예측 정보를 제공할 수 있다.
본 발명에 있어서, 서열번호 13 및 서열번호 14로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 15 및 서열번호 16으로 표시되는 프로브의 세트는 EDAR에서 개인별 유전자의 단일염기다형성의 확인을 목적한다. 구체적으로, EDAR 유전자의 SNP로서 rs3827760의 유전형이 AG인 경우 모발 상태가 나빠질 가능성이 높거나 탈모의 위험성이 높은 것으로 예측 정보를 제공할 수 있다. 한편, rs3827760의 유전형이 AA인 경우 모발 상태가 나빠질 가능성이 낮거나 탈모의 위험성이 낮은 것으로 예측 정보를 제공할 수 있다.
본 발명에서 상기 "모발 상태 진단"은 대상, 예컨대 탈모의 가능성(위험성), 모발이 얇아질 가능성 등 향후 변화될 수 있는 모발 상태를 진단하고 향후 모발 변화에 대한 예후를 예측하기 위한 정보를 제공하는 것을 의미한다. 즉, 개체가 탈모 관련 질병 또는 질환을 현재 가질 가능성을 판정하는 것, 탈모 관련 질병 또는 질환에 걸린 개체의 예후(prognosis)를 판정하는 것, 또는 테라메트릭스(therametrics)(예컨대, 치료 효능에 대한 정보를 제공하기 위하여 객체의 상태를 모니터링하는 것)을 포함한다. 본 발명의 목적상, 증상이 나타나기 전에 근본 원인을 찾아 탈모 위험군, 탈모 중증도, 조기탈모 등을 선행 선별할 수 있는 예측진단으로 개인의 특성에 맞게 치료가 가능한 이점을 제공할 수도 있다. 구체적으로, 상기 모발 상태의 진단은 탈모 위험성에 대한 진단 정보를 제공하는 것일 수 있다.
본 발명에 따른 각각의 프라이머 쌍 및 프로브의 세트는 다중 중합 효소 연쇄반응에 적합하다. 다중 중합효소 연쇄반응(Multiplex PCR)은 여러 개의 중합효소연쇄반응을 한 튜브에서 수행함으로써 다수의 핵산을 동시에 분석할 수 있다는 장점이 있다. 보다 구체적으로, 실시간 다중 중합 효소 연쇄반응에 이용될 수 있으며, Real-time PCR의 대표적인 TaqMan probe 방식과 Self-quenching fluorescence probe 방식 중 TaqMan probe 방식을 이용하는 방식에 적합하게 적용될 수 있다.
기존 상업화 제품의 경우 일반적으로 두 개 형광만을 사용하여 한 튜브에 한 개 유전자의 SNP를 확인하기 때문에, 시간 및 비용적 소모가 크다. 반면, 본 발명에 사용된 것은 4개 형광을 사용하기 때문에 한 튜브에 2개 유전자의 SNP을 확인할 수 있다는 점에서 검사의 capacity가 늘어나고 더 효율적이고 경제적으로 검사가 가능하다.
본원에서 사용되는 용어 "다형성(polymorphism)"이란 하나의 유전자 좌위(locus)에 두 가지 이상의 대립 유전자(allele)가 존재하는 경우를 말하며 다형성 부위 중에서, 사람에 따라 단일 염기만이 다른 것을 단일 염기다형성(single nucleotide polymorphism, SNP)이라 한다. 바람직한 다형성 마커는 선택된 집단에서 1% 이상, 더욱 바람직하게는 5% 또는 10% 이상의 발생 빈도를 나타내는 두 가지 이상의 대립 유전자를 가진다.
본 발명에서 사용되는 용어, "rs_id"란 1998년부터 SNP 정보를 축적하기 시작한 NCBI가 초기에 등록되는 모든SNP에 대하여 부여한 독립된 표지자인 rs-ID를 의미한다. 이와 같은 표에 기재된 rs_id는 본 발명의 다형성 마커인 SNP 마커를 의미한다. 당업자라면 상기 rs_id를 이용하여 SNP의 위치 및 서열을 용이하게 확인할 수 있을 것이다. NCBI의 dbSNP (The Single Nucleotide Polymorphism Database) 번호인 rs_id에 해당하는 구체적인 서열은 시간이 지남에 따라 약간 변경될 수 있다. 본 발명의 범위가 상기 변경된 서열에도 미치는 것은 당업자에게 자명할 것이다.
상기 폴리뉴클레오티드 서열은 DNA 또는 RNA가 될 수 있다
본원에 사용된 용어 "핵산"은 뉴클레오티드의 중합체를 의미한다. 본원에 사용된 용어 "서열"은 올리고뉴클레오티드 또는 핵산의 뉴클레오티드 서열을 의미한다. 명세서를 통틀어, 올리고뉴클레오티드 또는 핵산이 문자의 서열에 의해 표시될 때마다, 뉴클레오티드는 좌에서 우로 5'→순서이다. 올리고뉴클레오티드 또는 핵산은 DNA, RNA, 또는 그의 유사체(예컨대, 포스포로티오에이트 유사체)일 수 있다. 올리고뉴클레오티드 또는 핵산은 개질된 염기 및/또는 골격(예컨대, 개질된 포스페이트 연결부 또는 개질된 당 모이어티)도 또한 포함할 수 있다. 핵산에 안정성 및/또는 다른 이점을 부여하는 합성 골격의 비-제한적 예시는 포스포로티오에이트 연결부, 펩티드 핵산, 잠금 핵산, 자일로스핵산, 또는 그의 유사체를 포함할 수 있다.
본 발명에서 용어 “핵산”은 뉴클레오티드 폴리머를 지칭하며, 달리 한정되지 않는다면 자연적으로 발생한 뉴클레오티드와 유사한 방식(예컨대, 혼성화)으로 작용할 수 있는 천연 뉴클레오티드의 공지된 유사체(analog)를 포함한다.
용어 핵산은, 예를 들어 유전체 DNA; 상보 DNA(cDNA)(이는 보통 전령 RNA(mRNA)의 역전사 또는 증폭으로 얻어지는 mRNA의 DNA 표현임); 합성으로 또는 증폭으로 생성된 DNA 분자; 및 mRNA를 포함한 임의의 형태의 DNA 또는 RNA를 포함한다.
용어 핵산은 단일 가닥 분자뿐만 아니라 이중 또는 삼중 가닥 핵산을 포함한다. 이중 또는 삼중 가닥 핵산에서, 핵산 가닥은 동연(coextensive)일 필요는 없다(즉, 이중 가닥 핵산은 양 가닥의 전체 길이를 따라 이중 가닥일 필요는 없다).
핵산(들)은 고상 매개 화학적 합성(solid phase-mediated chemical synthesis)과 같은 완전한 화학적 합성 과정으로부터, 핵산을 생성하는 임의의 종으로부터 분리를 통해서와 같은 생물학적 공급원으로부터, 또는 DNA 복제, PCR 증폭, 역전사와 같은 분자 생물학 도구에 의한 핵산의 취급과 관련된 과정으로부터, 또는 이들 과정의 결합으로부터 유도될 수 있다.
본 발명에서 용어 “상보”는 2개의 뉴클레오티드 사이의 정확한 쌍형성에 대한 능력을 지칭한다. 즉, 핵산의 주어진 위치에서 뉴클레오티드가 다른 핵산의 뉴클레오티드와 수소 결합을 할 수 있다면, 2개의 핵산은 그 위치에서 서로 상보적인 것으로 여겨진다. 뉴클레오티드의 일부만이 결합하여 2개의 단일 가닥 핵산 분자 사이의 상보성은 “부분적”일 수 있거나, 또는 전체 상보성이 단일 가닥 분자 사이에 존재할 때 상보성은 완전할 수 있다. 핵산 가닥 사이의 상보성의 정도는 핵산 가닥 사이의 혼성화의 효율 및 강도에 상당한 영향을 미친다.
본 발명에서 용어 "프라이머"는 핵산 합성 반응을 프라이밍하기 위한 표적 핵산 서열(예컨대, 증폭될 DNA 주형)에 혼성화되는 짧은 선형 올리고뉴클레오티드를 의미한다. 프라이머는 RNA 올리고뉴클레오티드, DNA 올리고 뉴클레오티드, 또는 키메라 서열일 수 있다. 프라이머는 천연, 합성, 또는 개질된 뉴클레오티드를 함유할 수 있다. 프라이머 길이의 상한 및 하한 둘 모두는 실험적으로 결정된다. 프라이머 길이의 하한은 핵산 증폭 반응 조건에서 표적 핵산과의 혼성화 후 안정한 듀플렉스를 형성하는데 필요한 최소 길이이다. 매우 짧은 프라이머(흔히 3 개 뉴클레오티드 미만 길이)는 이러한 혼성화 조건 하에서 표적 핵산과의 열열학적으로 안정한 듀플렉스를 형성하지 않는다. 상한은 표적 핵산에서 미리 결정된 핵산 서열 이외의 영역에서 듀플렉스 형성을 가질 수 있는 가능성에 의해 보통 결정된다. 일반적으로, 적합한 프라이머 길이는 약 3 개 뉴클레오티드 길이 내지 약 50개 뉴클레오티드 길이의 범위에 있다.
본 발명에서 용어 “프로브”는 하나 이상 유형의 화학 결합을 통하여, 일반적으로 상보적 염기 쌍형성을 통하여, 보통 수소 결합 형성을 통하여 상보적인 서열의 표적 핵산에 결합하고 따라서 이중나선(duplex) 구조를 형성할 수 있는 핵산이다. 프로브는 “프로브 결합 부위”에 결합 또는 혼성화한다. 특히, 일단 프로브가 프로브의 상보적인 표적에 혼성화하면 프로브의 검출을 용이하게 하도록 프로브는 검출가능한 표지로 표지될 수 있다.
그러나 대안적으로, 프로브는 표지화되지 않을 수 있지만, 표지화된 리간드와의 특이적 결합에 의해 직접적으로 또는 간접적으로 검출될 수 있다. 프로브는 크기가 상당히 다양할 수 있다. 일반적으로 프로브는 길이가 적어도 7 내지 18개 뉴클레오티드이다. 다른 프로브는 길이가 적어도 20, 30 또는 40개 뉴클레오티드이다. 또 다른 프로브는 다소 더 길며, 길이가 적어도 50, 60, 70, 80, 또는 90개 뉴클레오티드이다. 또 다른 프로브는 더욱 더 길며, 길이가 적어도 100, 150, 200개 또는 그 이상의 뉴클레오티드이다. 프로브는 또한 상기 값(예컨대, 길이가 15~20개 뉴클레오티드)의 임의의 값으로 한정된 임의의 범위 내에 있는 임의의 길이의 것일 수 있다.
본 발명에서 용어 “혼성화”는 상보적 염기서열을 가진 단일가닥 핵산들 간 수소결합에 의해 이중가닥 핵산이 형성되는 것을 의미하며, 어닐링(annealing)과 유사한 의미로 사용된다.
본 발명에서 "시료"는 표적을 함유하거나 함유하고 있는 것으로 추정되어 분석이 행해질 조성물로, 인체 유래물, 동물 조직 유래물 등에서 채취된 시료로부터 검출되는 것을 특징으로 할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 이때, 액체는 물, 혈액, 소변, 눈물, 땀, 타액, 림프 및 뇌척수액 등임을 특징으로 할 수 있으며, 동물 조직으로는 점막, 피부, 외피, 털, 비늘, 안구, 혀, 뺨, 발굽, 부리, 주둥이, 발, 손, 입, 유두, 귀, 코 등의 조직을 포함한다.
본 발명의 프로브는 예를 들어 리포터와 리포터 형광을 소광할 수 있는 소광자의 형광 물질이 결합할 수 있으며, 인터컬레이팅(intercalating) 형광 물질을 포함할 수 있다. 상기 리포터는 FAM(6-carboxyfluorescein), HEX, Texas red, JOE, ROX_Orange, TAMRA, CY5, CY3, Alexa680 로 구성되는 군에서 선택되는 하나 이상일 수 있으며, 상기 소광자는 TAMRA(6-carboxytetramethyl-rhodamine), BHQ1, BHQ2 또는 Dabcyl을 사용하는 것이 바람직하지만 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 인터컬레이팅 형광 물질은 아크리딘 호모다이머(Acridine homodimer) 및 이의 유도체, 아크리딘 오렌지(Acridine Orange) 및 이의 유도체, 7-아미노액티노마이신 D(7-aminoactinomycin D, 7-AAD) 및 이의 유도체, 액티노마이신 D(Actinomycin D) 및 이의 유도체, 에이씨엠에이(ACMA, 9-amino-6-chloro-2-methoxyacridine) 및 이의 유도체, 디에이피아이(DAPI) 및 이의 유도체, 디하이드로에티듐(Dihydroethidium) 및 이의 유도체, 에티듐 브로마이드(Ethidium bromide) 및 이의 유도체, 에티듐 호모다이머-1(EthD-1) 및 이의 유도체, 에티듐 호모다이머-2(EthD-2) 및 이의 유도체, 에티듐 모노아자이드(Ethidium monoazide) 및 이의 유도체, 헥시디움 아이오다이드(Hexidium iodide) 및 이의 유도체, 비스벤지마이드(bisbenzimide, Hoechst 33258) 및 이의 유도체, 호에크스트 33342(Hoechst 33342) 및 이의 유도체, 호에크스트 34580(Hoechst 34580) 및 이의 유도체, 하이드로옥시스티바미딘(hydroxystilbamidine) 및 이의 유도체, 엘디에스 751(LDS 751) 및 이의 유도체, 프로피디움 아이오다이드(Propidium Iodide, PI)와 이의 유도체 및 사이다이스(Cy-dyes) 유도체로 이루어진 군에서 선택될 수 있다.
본 발명에 따른 일 구체 양태에 따르면, 서열번호 1 및 서열번호 2로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 3 및 서열번호 4로 표시되는 프로브의 세트; 및 서열번호 5 및 서열번호 6으로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 7 및 서열번호 8로 표시되는 프로브의 세트를 포함하는 다중-중합효소연쇄 반응용 제1세트를 이용하여, IL2RA 및 Chr20p11에 대한 실시간 다중-중합효소 반응을 수행하여, SNP를 확인할 수 있다.
본 발명에 따른 다른 구체 양태에 따르면, 서열번호 9 및 서열번호 10으로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 11 및 서열번호 12로 표시되는 프로브의 세트; 및 서열번호 13 및 서열번호 14로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 15 및 서열번호 16으로 표시되는 프로브의 세트를 포함하는 다중-중합효소연쇄 반응용 제2세트를 이용하여, HLA_DQB1 및 EDAR에 대한 실시간 다중-중합효소 반응을 수행하여, SNP를 확인할 수 있다.
상기 각각의 프로브는 이에 제한되지 않으나 FAM(6-carboxyfluorescein), HEX, CY5 및 ROX_Orange로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나와 결합될 수 있다. 구체적으로, 서열번호 3의 경우 FAM, 서열번호 4의 경우 HEX, 서열번호 7의 경우 ROX_Orange, 및 서열번호 8의 경우 CY5와 결합된 것일 수 있다. 또한, 서열번호 11의 경우 FAM, 서열번호 12의 경우 HEX, 서열번호 15의 경우 ROX_Orange, 및 서열번호 16의 경우 CY5와 결합된 것일 수 있다.
본 발명에 따른 다른 구체 양태에 따르면, 상기 제1세트 및 제2세트를 이용하여 각각 실시간 다중-중합효소 반응을 수행하고, 이에 따라 생산된 증폭산물과 프로브의 혼성화 반응을 통해, 이들로부터 IL2RA, Chr20p11, HLA_DQB1 및 EDAR의 SNP 정보를 확인하여 모발 상태에 관한 진단 정보를 제공할 수 있다.
본 발명은 서열번호 1 및 서열번호 2로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 3 및 서열번호 4로 표시되는 프로브의 세트; 서열번호 5 및 서열번호 6으로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 7 및 서열번호 8로 표시되는 프로브의 세트; 서열번호 9 및 서열번호 10으로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 11 및 서열번호 12로 표시되는 프로브의 세트; 및 서열번호 13 및 서열번호 14로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 15 및 서열번호 16으로 표시되는 프로브의 세트 이루어진 군으로부터 선택되는 둘 이상의 세트를 포함하는 모발 상태 진단용 키트를 제공한다.
본 발명에 따르면 모발 상태 진단용 키트는 예컨대 탈모의 가능성, 모발이 얇아질 가능성 등 향후 변화될 수 있는 모발 상태를 진단하고 향후 모발 변화에 대한 예후를 예측하기 위한 정보를 제공할 수 있다. 이에 따라, 탈모 위험군, 탈모 중증도, 조기탈모 등을 선행 선별할 수 있는 예측진단으로 개인의 특성에 맞게 치료가 가능한 이점을 제공할 수도 있다.
상기 진단용 키트는 프라이머 쌍 및 프로브의 세트를 하나의 튜브에 포함하는 것을 특징으로 하는 키트이다. 상기 키트는 예를 들어, 버퍼, DNA 중합효소 조인자 및 데옥시리보뉴클레오타이드-5-트리포스페이트와 같은 타겟 증폭 PCR 반응(예컨대, PCR 반응)을 실시하는데 필요한 시약을 선택적으로 포함할 수 있으며, 다양한 폴리뉴클레오타이드 분자, 역전사효소, 다양한 버퍼 및 시약, 및 DNA 중합효소 활성을 억제하는 항체를 포함하는 것도 가능하다.
이러한 키트를 이용하면, 공통의 PCR 조건을 가지고 프라이머 쌍 및 프로브의 세트들을 포함하여, 실시간 다중-중합효소 연쇄반응을 최소의 반응 개수로 실시하여 신속, 정확하게 진단 정보를 제공하는 것이 가능하다.
여기서, 중합효소연쇄 반응을 실시할 때에는 반응 용기에 반응에 필요한 성분들을 과량으로 제공하는 것이 바람직하다. 반응에 필요한 성분들의 과량은, 반응이 성분의 농도에 실질적으로 제한되지 않는 정도의 양을 의미한다. Mg2+와 같은 조인자, dATP, dCTP, dGTP 및 dTTP를 소망하는 증폭 정도가 달성될 수 있을 정도로 반응 혼합물에 제공하는 것이 필요하다. 이용되는 모든 효소들은 동일한 반응 조건에서 활성 상태일 수 있다. 완충액은 모든 효소들이 최적의 반응 조건에 근접하도록 한다.
본 발명에 있어서 어닐링은 타겟 뉴클레오타이드 서열과 프라이머 사이에 특이적 결합을 가능하게 하는 엄격조건 하에서 실시된다. 어닐링을 위한 엄격조건은 서열-의존적이며 주위 환경적 변수에 따라 다양하다.
다중-중합효소연쇄 반응은 94-95℃에서 주형 DNA를 전 변성시킨 후, 변성(denaturation); 결합(annealing); 및 증폭(extension)의 사이클을 거친 후, 연장(elongation)시키는 일반적인 PCR 반응 조건에서 수행될 수 있다. 상기에서 변성 및 증폭은 95℃ 및 60℃에서 각각 수행될 수 있으며, 어닐링은 60℃ 에서 수행될 수 있다. 각 단계의 시간과 싸이클 수는 당업계에 일반적으로 행해지는 조건에 따라 정해질 수 있다.
본 발명에 따른 키트는 서열번호 1 및 서열번호 2로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 3 및 서열번호 4로 표시되는 프로브의 세트; 및 서열번호 5 및 서열번호 6으로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 7 및 서열번호 8로 표시되는 프로브의 세트를 포함하는 다중-중합효소연쇄 반응용 제1세트; 및 서열번호 9 및 서열번호 10으로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 11 및 서열번호 12로 표시되는 프로브의 세트; 및 서열번호 13 및 서열번호 14로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 15 및 서열번호 16으로 표시되는 프로브의 세트를 포함하는 다중-중합효소연쇄 반응용 제2세트로 구성된 프라이머 쌍 및 프로브의 세트를 포함하는 것일 수 있다. 이에 따라, 상기 제1세트 및 제2세트를 이용하여 각각 실시간 다중-중합효소 반응을 수행하고, 이들로부터 IL2RA, Chr20p11, HLA_DQB1 및 EDAR의 SNP 정보를 확인하여 모발 상태에 관한 진단 정보를 제공할 수 있도록 디자인된 키트를 제공할 수 있다. 이에 따라, 상기 제1세트 및 제2세트는 개별 용기에 제공될 수도 있다.
본 발명은
(a) 시료로부터 분리된 DNA를 수득하는 단계;
(b) 상기 분리된 DNA 시료를 템플릿으로 하여 서열번호 1 및 서열번호 2로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 3 및 서열번호 4로 표시되는 프로브의 세트; 서열번호 5 및 서열번호 6으로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 7 및 서열번호 8로 표시되는 프로브의 세트; 서열번호 9 및 서열번호 10으로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 11 및 서열번호 12로 표시되는 프로브의 세트; 및 서열번호 13 및 서열번호 14로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 15 및 서열번호 16으로 표시되는 프로브의 세트 이루어진 군에서 선택된 둘 이상의 세트로 다중-중합효소연쇄 반응 및 혼성화 반응을 수행하는 단계; 및
(c) 혼성화 반응을 통해 확인되는 개인 유전체 SNP 타입을 확인하는 단계;를 포함하는 모발 상태 진단 정보의 제공 방법을 제공하는 것이다.
본 발명에 따른, 모발 상태 진단 정보의 제공 방법은 (a) 시료로부터 분리된 DNA를 수득하는 단계를 포함한다. 본 발명의 일례로, 출발물질이 gDNA인 경우 gDNA의 분리는 당업계에 공지된 통상의 방법에 따라 실시될 수 있으며, 출발물질이 mRNA인 경우에는 역전사효소를 이용하여 cDNA로 합성될 수도 있다. 본 발명에 따르면, 조직으로부터 DNA를 추출할 수 있는 상업적 키트를 제한없이 사용할 수 있으며, 본 발명의 일실시양태에 의하면 magpurix TB DNA extraction kit를 사용하여 제조사의 지침에 따라 DNA를 수득하였다.
본 발명에 따른, 모발 상태 진단 정보의 제공 방법은 (b) 상기 분리된 DNA 시료를 템플릿으로 하여 서열번호 1 및 서열번호 2로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 3 및 서열번호 4로 표시되는 프로브의 세트; 서열번호 5 및 서열번호 6으로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 7 및 서열번호 8로 표시되는 프로브의 세트; 서열번호 9 및 서열번호 10으로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 11 및 서열번호 12로 표시되는 프로브의 세트; 및 서열번호 13 및 서열번호 14로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 15 및 서열번호 16으로 표시되는 프로브의 세트 이루어진 군에서 선택된 둘 이상의 세트를 이용하여 다중-중합효소연쇄 반응 및 혼성화 반응을 수행하는 단계를 제공한다.
상기 프라이머 쌍 및 프로브들은 아래와 같이 표시된다:
Figure pat00001
구체적으로, 다중-중합효소연쇄 반응에서 프라이머는 유전자 증폭 반응(amplification reactions)에 이용된다. 본 명세서에서 증폭 반응은 핵산 분자를 증폭하는 반응을 의미한다. 특히, 다중 리얼타임(multiplex real-time) PCR로 한 번의 실시간 PCR 반응으로 여러 개의 원하는 유전자를 동시에 증폭시켜, 이를 이용하여 반응을 신속하게 진행할 수 있다.
보다 바람직하게 상기 각각의 프라이머 쌍 및 프로브의 세트는 2개의 다중-중합효소연쇄 반응 및 이와 관련된 혼성화 반응을 수행하도록 디자인될 수 있다. 예를 들어, 서열번호 1 및 서열번호 2로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 3 및 서열번호 4로 표시되는 프로브의 세트; 및 서열번호 5 및 서열번호 6으로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 7 및 서열번호 8로 표시되는 프로브의 세트를 포함하는 다중-중합효소연쇄 반응용 제1세트; 및 서열번호 9 및 서열번호 10으로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 11 및 서열번호 12로 표시되는 프로브의 세트; 및 서열번호 13 및 서열번호 14로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 15 및 서열번호 16으로 표시되는 프로브의 세트를 포함하는 다중-중합효소연쇄 반응용 제2세트로 다중-중합효소연쇄 반응 및 혼성화 반응을 수행하는 단계를 수행하는 것일 수 있다.
위 프라이머 쌍으로 증폭된 산물을 이용하여 프로브에 의한 혼성화 반응이 수행될 수 있다. 프로브에 의한 혼성화 반응을 통해서 특정 유전자 상의 SNP 마커를 동시에 검출함으로써 유전형에 대한 정보를 제공할 수 있는 형광 정보 등을 제공할 수 있다.
즉, 상기 (b) 단계에 따르면 프라이머 쌍을 이용하여 중합효소연쇄 반응이 수행되고, 이에 의해 증폭된 산물에 대하여 프로브와 혼성화 반응을 통해 형광 정보 등을 제공할 수 있다.
본 발명에 따른, 모발 상태 진단 정보의 제공 방법은 혼성화 반응을 통해 확인되는 개인 유전체 SNP 타입을 확인하는 단계;를 포함한다.
위 혼성화 반응을 통해 개인 유전체 SNP 타입에 따라 상이한 형광 값 등이 실시간으로 확인될 수 있다.
이에 따라, 상기 언급된 IL2RA, Chr20p11, HLA-DQB1 및 EDAR 유전자의 단일염기다형성 서열 정보를 제공할 수 있으며, 그 결과를 기초로 모발 상태에 대한 정보를 제공할 수 있다.
구체적으로, IL2RA 유전자의 SNP로서 rs3118470의 유전형이 C인 경우 모발 상태가 나빠질 가능성이 높거나 탈모의 위험성이 높은 것으로 예측 정보를 제공할 수 있다. 한편, rs3118470의 유전형이 T인 경우 모발 상태가 나빠질 가능성이 낮거나 탈모의 위험성이 낮은 것으로 예측 정보를 제공할 수 있다.
또한, Chr20p11 유전자의 SNP로서 rs1160312의 유전형이 A인 경우 모발 상태가 나빠질 가능성이 높거나 탈모의 위험성이 높은 것으로 예측 정보를 제공할 수 있다. 한편, rs1160312의 유전형이 G인 경우 모발 상태가 나빠질 가능성이 낮거나 탈모의 위험성이 낮은 것으로 예측 정보를 제공할 수 있다.
또한, HLA-DQB1 유전자의 SNP로서 rs9275572의 유전형이 G인 경우 모발 상태가 나빠질 가능성이 높거나 탈모의 위험성이 높은 것으로 예측 정보를 제공할 수 있다. 한편, rs9275572의 유전형이 A인 경우 모발 상태가 나빠질 가능성이 낮거나 탈모의 위험성이 낮은 것으로 예측 정보를 제공할 수 있다.
또한, EDAR 유전자의 SNP로서 rs3827760의 유전형이 AG인 경우 모발 상태가 나빠질 가능성이 높거나 탈모의 위험성이 높은 것으로 예측 정보를 제공할 수 있다. 한편, rs3827760의 유전형이 AA인 경우 모발 상태가 나빠질 가능성이 낮거나 탈모의 위험성이 낮은 것으로 예측 정보를 제공할 수 있다.
본 발명의 다중-중합효소연쇄 반응법을 이용한 모발 상태 진단 방법은 탈모 및 모발 굵기와 관련된 IL2RA, Chr20p11, HLA-DQB1, EDAR 유전자의 단일염기다형성 서열을 신속하고 정확하게 검출함으로써 편리하게 모발 성향 및 탈모 가능성 등에 관련된 정보 제공을 할 수 있는 유용한 지표를 제공할 수 있다는 점에서 우수한 효과를 가진다. 특히, 탈모 관련 DTC(Direct-To-Consumer) 검사의 측면에서 기존의 검사 방법보다 훨씬 간편한 방법으로 정확한 진단 정보를 제공할 수 있다는 점에서 우수한 효과를 가진다.
도 1은 Multiplex Real-time PCR을 이용하여 IL2RA와 Chr20p11 각각에 대하여 IL2RA의 rs3118470은 C, Chr20p11의 rs1160312은 A임을 확인한 결과를 나타낸다.
도 2는 샘플 DNA에 대한 sequencing을 통하여 본 발명에 따른 Multiplex Real-time PCR을 통한 IL2RA의 SNP 검출을 재확인한 결과를 나타낸다.
도 3은 샘플 DNA에 대한 sequencing을 통하여 본 발명에 따른 Multiplex Real-time PCR을 통한 Chr20p11의 SNP 검출을 재확인한 결과를 나타낸다.
도 4은 Multiplex Real-time PCR을 이용하여 HLA-DQB1와 EDAR 각각에 대하여 HLA-DQB1의 rs9275572 G, EDAR의 rs3827760은 AG임을 확인한 결과를 나타낸다.
도 5는 샘플 DNA에 대한 sequencing을 통하여 본 발명에 따른 Multiplex Real-time PCR을 통한 HLA-DQB1의 SNP 검출을 재확인한 결과를 나타낸다.
도 6은 샘플 DNA에 대한 sequencing을 통하여 본 발명에 따른 Multiplex Real-time PCR을 통한 EDAR의 SNP 검출을 재확인한 결과를 나타낸다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다. 단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
실시예 1. 다중-중합효소연쇄 반응용 프라이머 및 프로브의 세트의 제조
미국 국립생물공학정보센터 NCBI(National Center for Biotechnology Information, http://www.ncbi.nlm.nih.gov)의 데이터베이스에 등록된 Human genome에서 IL2RA, Chr20p11, HLA-DQB1, EDAR 서열을 분석 후에 하기 표 1의 프라이머 및 프로브 서열을 제작하였다.
[표 1]
Figure pat00002
Human genome DNA를 추출하고 이후 Taqman probe 기반 Real-time 반응법의 주형으로 사용하였다.
실시예 2. 실시간 다중-중합효소연쇄 반응을 이용한 IL2RA와 Chr20p11의 SNP 검출
프라이머 및 프로브의 세트를 이용하여 실험을 위한 Taqman 프라이머 및 프로브 기반 Real-time PCR 조성물을 제조하였다. IL2RA와 Chr20p11의 유전자 서열을 동시에 알기 위해 멀티플랙스 기법을 사용하였으며 이의 조성과 반응 조건은 하기 표 2와 같다.
[표 2]
Figure pat00003
PCR 온도 조건은 95℃에서 10분간 실시 후 95℃ 10초, 60℃ 30초를 1 cycle로 하여 총 40 cycle을 진행하였다.
상기 실험 결과를 도 1에 나타내었다.
도 1에서 확인할 수 있는 바와 같이, IL2RA의 rs3118470은 C, Chr20p11의 rs1160312은 A의 결과를 확인할 수 있었다.
이를 재검증 하기 위하여 샘플 DNA를 마크로젠에 시퀀싱 의뢰하여, IL2RA 및 Chr20p11에 대하여 동일 결과가 확인되는지를 보았다.
그 결과를 도 2 및 도 3에 나타내었다.
도 2(IL2RA) 및 도 3(Chr20p11)에서 확인할 수 있는 바와 같이, sequencing 결과는 본 발명에 따른 실시간 다중-중합효소연쇄 반응을 이용한 검출과 동일 결과를 제공하여, 본 발명에 따른 모발 진단 방법의 우수한 효과를 확인하였다.
실시예 3. 실시간 다중-중합효소연쇄 반응을 이용한 HLA-DQB1과 EDAR의 SNP 검출
프라이머 및 프로브의 세트를 이용하여 실험을 위한 Taqman 프라이머 및 프로브 기반 Real-time PCR 조성물을 제조하였다. HLA-DQB1과 EDAR의 유전자 서열을 동시에 알기 위해 멀티플랙스 기법을 사용하였으며 이의 조성과 반응 조건은 하기 표 3과 같다. 사용된 DNA 시료는 2ng/ul이다.
[표 3]
Figure pat00004
PCR 온도 조건은 95℃에서 10분간 실시 후 95℃ 10초, 60℃ 30초를 1 cycle로 하여 총 40 cycle을 진행하였다. 상기 실험 결과를 도 4에 나타내었다.
도 4에서 확인할 수 있는 바와 같이, HLA-DQB1의 rs9275572 G, EDAR의 rs3827760은 AG의 결과를 확인할 수 있었다.
이를 재검증 하기 위하여 샘플 DNA를 마크로젠 에 시퀀싱 의뢰하여, HLA-DQB1과 EDAR에 대하여 동일 결과가 확인되는지를 보았다.
그 결과를 도 5 및 도 6에 나타내었다.
도 5(HLA-DQB1) 및 도 6(EDAR)에서 확인할 수 있는 바와 같이, sequencing 결과는 본 발명에 따른 실시간 다중-중합효소연쇄 반응을 이용한 검출과 동일 결과를 제공하여, 본 발명에 따른 모발 진단 방법의 우수한 효과를 확인하였다.
위 결과로부터 본원 발명에 따른 다중-중합효소연쇄 반응법을 이용한 개선된 모발 진단 방법 및 이를 이용한 키트가 탈모 및 모발 굵기와 관련된 IL2RA, Chr20p11, HLA-DQB1, EDAR 유전자의 단일염기다형성 서열을 신속하고 정확하게 검출함으로써 편리하게 모발 성향 및 탈모 가능성 등에 정보를 제공할 수 있음을 확인하였다.
이상의 설명으로부터, 본 발명이 속하는 기술분야의 당업자는 본 발명이 그 기술적 사상이나 필수적 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 실시될 수 있다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 이와 관련하여, 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적인 것이 아닌 것으로서 이해해야만 한다. 본 발명의 범위는 상기 상세한 설명보다는 후술하는 특허청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.
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Claims (13)

  1. 서열번호 1 및 서열번호 2로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 3 및 서열번호 4로 표시되는 프로브의 세트; 및 서열번호 5 및 서열번호 6으로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 7 및 서열번호 8로 표시되는 프로브의 세트를 포함하는 다중-중합효소연쇄 반응용 제1세트; 및
    서열번호 9 및 서열번호 10으로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 11 및 서열번호 12로 표시되는 프로브의 세트; 및 서열번호 13 및 서열번호 14로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 15 및 서열번호 16으로 표시되는 프로브의 세트를 포함하는 다중-중합효소연쇄 반응용 제2세트;를 포함하는 모발 상태 진단용 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 모발 상태 진단은 탈모 위험성 진단인, 모발 상태 진단용 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 각각의 세트는 IL2RA 유전자의 SNP로서 rs3118470의 유전형이 C; Chr20p11 유전자의 SNP로서 rs1160312의 유전형이 A; HLA-DQB1 유전자의 SNP로서 rs9275572의 유전형이 G; 및 EDAR 유전자의 SNP로서 rs3827760의 유전형이 AG인 것을 검출하는 것인, 모발 상태 진단용 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 프로브는 FAM(6-carboxyfluorescein), HEX, Texas red, JOE, ROX_Orange, TAMRA, CY5, CY3 및 Alexa680 로 구성되는 군에서 선택되는 하나 이상의 리포터가 결합된 것인, 모발 상태 진단용 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 제1세트 및 제2세트는 실시간 다중-중합효소 연쇄반응을 위한 것인, 모발 상태 진단용 조성물.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 모발 상태 진단용 조성물을 포함하는 모발 상태 진단용 키트.
  7. 제6항에 있어서, 버퍼, DNA 중합효소 조인자 및 데옥시리보뉴클레오타이드-5-트리포스페이트를 더 포함하는 것인, 모발 상태 진단용 키트.
  8. 제6항에 있어서, 상기 키트는 실시간 다중 중합효소 연쇄반응용 키트인, 모발 상태 진단용 조성물.
  9. (a) 시료로부터 분리된 DNA를 수득하는 단계;
    (b) 상기 분리된 DNA 시료를 템플릿으로 하여, 서열번호 1 및 서열번호 2로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 3 및 서열번호 4로 표시되는 프로브의 세트; 및 서열번호 5 및 서열번호 6으로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 7 및 서열번호 8로 표시되는 프로브의 세트를 포함하는 다중-중합효소연쇄 반응용 제1세트; 및 서열번호 9 및 서열번호 10으로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 11 및 서열번호 12로 표시되는 프로브의 세트; 및 서열번호 13 및 서열번호 14로 표시되는 프라이머 쌍과 서열번호 15 및 서열번호 16으로 표시되는 프로브의 세트를 포함하는 다중-중합효소연쇄 반응용 제2세트로 다중-중합효소연쇄 반응 및 혼성화 반응을 수행하는 단계; 및
    (c) 혼성화 반응을 통해 확인되는 개인 유전체 SNP 타입을 확인하는 단계;를 포함하는 모발 상태 진단 정보의 제공 방법.
  10. 제9항에 있어서, 상기 시료는 혈액, 소변, 눈물, 땀, 타액, 림프 및 뇌척수액로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나인, 모발 상태 진단 정보의 제공 방법.
  11. 제9항에 있어서, 상기 프로브는 FAM(6-carboxyfluorescein), HEX, Texas red, JOE, ROX_Orange, TAMRA, CY5, CY3 및 Alexa680 로 구성되는 군에서 선택되는 하나 이상의 리포터가 결합된 것인, 모발 상태 진단 정보의 제공 방법.
  12. 제9항에 있어서, 모발 상태 진단 정보는 탈모의 위험성에 대한 진단 정보를 제공하는 것인, 모발 상태 진단 정보의 제공 방법.
  13. 제12항에 있어서, 개인 유전체 SNP 타입으로 IL2RA 유전자의 SNP로서 rs3118470의 유전형이 C; Chr20p11 유전자의 SNP로서 rs1160312의 유전형이 A; HLA-DQB1 유전자의 SNP로서 rs9275572의 유전형이 G; 및 EDAR 유전자의 SNP로서 rs3827760의 유전형이 AG인 경우 탈모의 위험성이 높다고 예측하는 것인, 모발 상태 진단 정보의 제공 방법.
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