KR20220050874A - 백혈병 또는 골수이형성 증후군을 치료하기 위한 베네토클락스, 길테리티닙, 미도스타우린 또는 다른 화합물과 조합된 아자시티딘 - Google Patents

백혈병 또는 골수이형성 증후군을 치료하기 위한 베네토클락스, 길테리티닙, 미도스타우린 또는 다른 화합물과 조합된 아자시티딘 Download PDF

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다이애나 알. 던시
다니엘 이. 로페스 데 메네제스
카일 맥베스
유민 다이
제시카 장
마크 프라티니
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셀젠 콴티셀 리서치, 인크.
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Abstract

AML을 포함한 질환 및 장애를 치료하기 위해 5-아자시티딘을 추가의 작용제와 조합하여 사용하는 방법이 본원에 제공된다.

Description

백혈병 또는 골수이형성 증후군을 치료하기 위한 베네토클락스, 길테리티닙, 미도스타우린 또는 다른 화합물과 조합된 아자시티딘
관련 출원
본 출원은 2019년 6월 20일에 출원된 미국 가출원 62/864,413을 우선권 주장하며, 이의 전체 내용은 본원에 참조로 포함된다.
분야
급성 골수성 백혈병 (AML)을 포함한 질환 및 장애를 치료하기 위해 5-아자시티딘을 1종 이상의 추가의 치료제와 조합하여 사용하는 방법이 제공된다.
급성 골수성 백혈병 (AML)은 골수 및 혈액에 영향을 미치는 암의 유형이다. AML은 급성 골수 백혈병, 급성 골수모구성 백혈병, 급성 과립구성 백혈병 및 급성 비림프구성 백혈병을 포함한 다양한 명칭으로 공지되어 있다. 급성 골수 백혈병에서의 단어 "급성"은 질환의 급속한 진행을 반영한다. 이는 정상적으로는 다양한 유형의 성숙 혈액 세포, 예컨대 적혈구, 백혈구 및 혈소판으로 발달하는 골수성 세포로 불리는 백혈구의 군에 영향을 미치기 때문에 골수 백혈병으로 불린다. 다시 말해서, AML은 골수에 축적되어 정상 세포의 생산을 방해하는 비정상적 세포의 급속한 증식을 특징으로 하는 골수성 전구체 세포주의 악성종양이다.
AML은 일반적으로 신생으로 분류되거나, 또는 선행 세포독성 화학요법에 대한 노출 후에 또는 선행 골수이형성 증후군 (MDS) 또는 선행 혈액 장애 (AHD)의 병력 후에 일어나는 경우에는 속발성으로 분류된다. 유전자 수준에서의 AML의 발병기전은 또한 불균질하다. AML에서의 유전자 변경은 티로신 키나제 유전자에서의 내부 탠덤 중복, 백혈병유발에 수반되는 유전자의 기능을 변경시키는 염색체 재배열, 및 전사 인자의 활성화를 유발하는 돌연변이 등을 포함한다. AML에서의 유전자 변경의 포괄적 프로파일링은 질환 분류, 위험 계층화 및 예후를 증진시킬 것이고, 궁극적으로 보다 정확한 치료적 개입을 가능하게 할 것이다. MV4-11 및 MOLM-13은 FLT3 돌연변이를 발현하는 AML 세포주이다. 문헌 [Quentmeier et al., Leukemia, 17(1):120-4 (Jan. 2003)]을 참조한다. FLT3-ITD는 MCL-1을 상향조절하여 AML에서 줄기 세포의 생존을 촉진한다. 문헌 [Yoshimoto et al., Blood, 114(24):5034-43 (Dec. 3, 2009)]을 참조한다.
AML 치료의 현행 전략은 완화 유도를 위한 유도 화학요법 (IC) 및 생존 연장을 위해 의도된 저강도 요법을 포함한다. 완화-유도 화학요법은 종양 부담의 완화 또는 적어도 효과적인 감소를 달성하기 위한 세포감소 양식이다. 시타라빈과 안트라시클린의 조합은 완화를 유도하는 치료의 중심이 되어 왔다. 통상의 유도 요법은 7일 동안 100 내지 200 mg/m2/일의 시타라빈 및 3일 동안 45 내지 90 mg/m2/일의 다우노루비신으로 이루어지며, 종종 "7 + 3 프로토콜"로 지칭된다. 완화가 달성되는 경우에, 화학요법 또는 공여자로부터의 줄기 세포 이식 (동종 조혈 줄기 세포 이식 [HSCT])의 추가의 주기가 강화를 위해 사용된다. IC가 보다 젊은 적합한 환자에 대한 표준이 되어 왔지만, 이는 고령 및 부적합 집단에서는 논쟁거리로 남아있다. IC를 받은 고령 환자에서, 결과는 주로 증가된 치료-관련 사망률 및 고령 집단에서 관찰된 보다 낮은 완화율로 이어지는 불량한 예후 인자로 인해 덜 유리하다. 연령, 수행 상태 및 동반이환으로 인해 부적격 또는 부적합한 것으로 간주되는 환자 또는 IC 현행 화학요법 옵션을 받지 않기로 선택한 환자에 대한 치료 옵션은 저용량 시타라빈, 5-아자시티딘 또는 데시타빈을 포함한다.
유도 화학요법이 새로 진단된 AML을 갖는 보다 젊은 성인의 약 60% 내지 80% 및 보다 고령인 성인의 40% 내지 50%에서 형태학적 완전 완화 (CR)를 가져오지만, CR을 달성하지 못할 (즉, 불응성) 환자 집단도 상당하다. 심지어 유도 치료 후에 CR을 달성한 자들에 대해서도, 상당 부분이 결국 재발하여, 3년에는 약 29%만이 무재발 생존일 것이다.
따라서, AML에 대한 보다 효과적인 치료가 필요하고, 본 개시내용은 이러한 필요를 다룬다.
5-아자시티딘을 적어도 1종의 추가의 치료제 및 리신 특이적 데메틸라제-1 (LSD-1) 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염과 조합하여 사용하여 AML을 포함한 질환 및 장애를 치료하는 방법이 본원에 제공된다.
본원의 특정 실시양태는 추가의 치료제가 길테리티닙, 미도스타우린, 퀴자르티닙, 에나시데닙, 이보시데닙 또는 베네토클락스로부터 선택되는 것을 제공한다.
한 측면에서, 급성 골수성 백혈병 (AML)을 갖는 인간 대상체에게 (i) 5-아자시티딘을 포함하는 제약 조성물, (ii) 적어도 1종의 추가의 치료제 및 (iii) 리신 특이적 데메틸라제-1 (LSD-1) 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염의 조합을 투여하는 것을 포함하는, AML을 갖는 인간 대상체를 치료하는 방법이 제공된다.
일부 실시양태에서, 대상체는 집중 유도 화학요법에 적격이 아니다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘 및 적어도 1종의 추가의 치료제는 병용으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘 및 적어도 1종의 추가의 치료제는 순차적으로 투여되며, 여기서 5-아자시티딘이 첫번째로 투여된다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘 및 적어도 1종의 추가의 치료제는 단일 단위 투여 형태로서 공동-제제화된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘 및 적어도 1종의 추가의 치료제는 별개의 투여 형태로서 제제화된다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘 및 LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염은 병용으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘 및 LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염은 순차적으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제 및 LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염은 병용으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제 및 LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염은 순차적으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 피하로 또는 정맥내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 약 75 mg/m2 내지 약 100 mg/m2의 용량으로 피하로 또는 정맥내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 약 75 mg/m2의 용량으로 피하로 또는 정맥내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 28일 주기의 처음 7일 동안 매일 피하로 또는 정맥내로 투여된다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 약 50 mg, 약 60 mg, 약 70 mg, 약 80 mg, 약 90 mg, 약 100 mg, 약 150 mg, 약 200 mg, 약 250 mg, 약 300 mg, 약 350 mg, 약 400 mg, 약 450 mg, 약 500 mg, 약 550 mg 또는 600 mg의 용량으로 경구로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 약 200 mg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 약 300 mg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 28일 주기의 처음 7일, 14일 또는 21일 동안 매일 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 1일에 1 또는 2회 인간 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 캡슐 또는 정제 형태로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 비-장용-코팅 정제 형태로 투여된다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 28일 주기에서 14일 동안 1일에 약 200 mg의 용량으로 경구로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 28일 주기에서 14일 동안 1일에 약 300 mg의 용량으로 경구로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 28일 주기에서 21일 동안 1일에 약 200 mg의 용량으로 경구로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 28일 주기에서 21일 동안 1일에 약 300 mg의 용량으로 경구로 투여된다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 (a) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14일 또는 14일 초과 동안 매일 투여된 후, 임의로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14일 또는 14일 초과의 치료 휴약기가 이어지거나; (b) 14일 이상 동안 매일 투여된 후, 임의로 7일 이상의 치료 휴약기가 이어지거나; (c) 21일 이상 동안 투여된 후, 임의로 7일 이상의 치료 휴약기가 이어지거나; (d) 14일 동안 투여된 후, 임의로 14일의 치료 휴약기가 이어지거나; (e) 21일 이상 동안 투여된 후, 7일 이상의 치료 휴약기가 이어지거나; (f) 14일 동안 투여된 후, 14일의 치료 휴약기가 이어진다. 일부 실시양태에서, 단계 (a), (b), (c), (d), (e) 또는 (f) 중 적어도 한 단계가 반복된다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 (a) 14일 동안 매일 약 300 mg의 용량으로 투여된 후, 14일의 치료 휴약기가 이어지거나; (b) 14일 동안 매일 약 200 mg의 용량으로 투여된 후, 14일의 치료 휴약기가 이어지거나; (c) 21일 동안 매일 약 300 mg의 용량으로 투여된 후, 7일의 치료 휴약기가 이어지거나; (d) 매일 약 200 mg의 용량으로 투여된 후, 7일의 치료 휴약기가 이어진다. 일부 실시양태에서, 단계 (a), (b), (c) 또는 (d) 중 적어도 한 단계가 반복된다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 28일 주기에서 7일 동안 1일마다 5-아자시티딘의 투여를 포함하는 치료 주기를 사용하여 경구로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 28일 주기에서 14일 동안 1일마다 5-아자시티딘의 투여를 포함하는 치료 주기를 사용하여 경구로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 28일 주기에서 21일 동안 1일마다 5-아자시티딘의 투여를 포함하는 치료 주기를 사용하여 경구로 투여된다.
일부 실시양태에서, 적어도 1종의 추가의 치료제는 길테리티닙, 미도스타우린, 퀴자르티닙, 에나시데닙, 이보시데닙 및/또는 베네토클락스를 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1종의 추가의 치료제는 베네토클락스이다. 일부 실시양태에서, 베네토클락스는 경구로 투여된다. 일부 실시양태에서, 베네토클락스는 정제 형태로 투여된다. 일부 실시양태에서, 베네토클락스는 매일 투여된다. 일부 실시양태에서, 베네토클락스는 약 400 mg의 용량으로 투여된다.
일부 실시양태에서, LSD-1 억제제는 하기 구조를 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
Figure pct00001
일부 실시양태에서, LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염은 경구로 투여된다. 일부 실시양태에서, LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염은 정제 또는 캡슐 형태로 투여된다. 일부 실시양태에서, LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염은 1주 1회 투여된다. 일부 실시양태에서, LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염은 약 20 mg, 약 40 mg 또는 약 60 mg의 용량으로 투여된다.
일부 실시양태에서, AML은 5-아자시티딘 단독을 사용한 치료에 대해 내성이다. 일부 실시양태에서, AML은 적어도 1종의 추가의 치료제 단독을 사용한 치료에 대해 내성이다. 일부 실시양태에서, AML은 LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염 단독을 사용한 치료에 대해 내성이다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합은 5-아자시티딘 단독과 비교하여 AML 세포 사멸을 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합은 5-아자시티딘 단독과 비교하여 AML 세포 사멸을 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 100%만큼 증가시킨다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합은 적어도 1종의 추가의 치료제 단독과 비교하여 AML 세포 사멸을 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합은 적어도 1종의 추가의 치료제 단독과 비교하여 AML 세포 사멸을 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 100%만큼 증가시킨다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합은 LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염과 비교하여 AML 세포 사멸을 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합은 LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염과 비교하여 AML 세포 사멸을 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 100%만큼 증가시킨다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합은 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염 중 어느 2종의 조합과 비교하여 AML 세포 사멸을 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합은 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염 중 어느 2종의 조합과 비교하여 AML 세포 사멸을 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 100%만큼 증가시킨다.
일부 실시양태에서, 경구로 투여되는 5-아자시티딘 및 적어도 1종의 추가의 치료제는 정맥내로 또는 피하로 투여되는 5-아자시티딘 및 적어도 1종의 추가의 치료제와 비교하여 AML 세포 사멸을 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 경구로 투여되는 5-아자시티딘 및 적어도 1종의 추가의 치료제는 정맥내로 또는 피하로 투여되는 5-아자시티딘 및 적어도 1종의 추가의 치료제와 비교하여 AML 세포 사멸을 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 100%만큼 증가시킨다.
일부 실시양태에서, 경구로 투여되는 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합은 정맥내로 또는 피하로 투여되는 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합과 비교하여 AML 세포 사멸을 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 경구로 투여되는 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합은 정맥내로 또는 피하로 투여되는 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합과 비교하여 AML 세포 사멸을 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 100%만큼 증가시킨다.
일부 실시양태에서, 방법은 (a) 5-아자시티딘을 28일 주기의 처음 7일 동안 1일 1회 피하로 또는 정맥내로 대상체에게 투여하는 단계; (b) 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기에서 1일 1회 대상체에게 투여하는 단계; 및 (c) LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염을 28일 주기에서 1주 1회 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 (a) 5-아자시티딘을 28일 주기의 제1일, 제2일, 제3일, 제4일, 제5일, 제6일 및 제7일에 피하로 또는 정맥내로 대상체에게 투여하는 단계; (b) 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기의 제1일, 제3일, 제4일, 제5일, 제6일, 제7일, 제8일, 제9일, 제10일, 제11일, 제12일, 제13일, 제14일, 제15일, 제16일, 제17일, 제18일, 제19일, 제20일, 제21일, 제22일, 제23일, 제24일, 제25일, 제26일, 제27일 및 제28일에 대상체에게 투여하는 단계; 및 (c) LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염을 28일 주기의 제1일, 제8일, 제15일 및 제22일에 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 (a) 5-아자시티딘을 28일 주기의 처음 7일 동안 매일 약 75 mg/m2의 용량으로 피하로 또는 정맥내로 투여하는 단계; (b) 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기의 매일 적어도 약 100 mg의 용량으로 대상체에게 투여하는 단계; 및/또는 (c) LSD-1 억제제를 28일 주기의 1주 1회 약 20 mg, 약 40 mg 또는 약 60 mg의 용량으로 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기의 제1일에 약 100 mg의 용량, 제2일에 약 200 mg의 용량, 제3일에 약 300 mg의 용량 및 제4일-제28일에 약 400 mg의 용량으로 대상체에게 공동으로 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 5-아자시티딘을 28일 주기의 처음 7일 동안 매일 약 75 mg/m2의 용량으로 피하로 또는 정맥내로 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기의 매일 약 400 mg의 용량으로 경구로 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 LSD-1 억제제를 28일 주기의 1주 1회 약 20 mg, 약 40 mg 또는 약 60 mg의 용량으로 경구로 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1종의 추가의 치료제를 투여하는 것은 베네토클락스를 투여하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 (a) 5-아자시티딘을 28일 주기의 처음 14일 동안 1일 1회 경구로 대상체에게 투여하는 단계; (b) 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기에서 1일 1회 대상체에게 투여하는 단계; 및 (c) LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염을 28일 주기에서 1주 1회 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 (a) 5-아자시티딘을 28일 주기의 제1일, 제2일, 제3일, 제4일, 제5일, 제6일, 제7일, 제8일, 제9일, 제10일, 제11일, 제12일, 제13일 및 제14일에 경구로 대상체에게 투여하는 단계; (b) 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기의 제1일, 제2일, 제3일, 제4일, 제5일, 제6일, 제7일, 제8일, 제9일, 제10일, 제11일, 제12일, 제13일, 제14일, 제15일, 제16일, 제17일, 제18일, 제19일, 제20일, 제21일, 제22일, 제23일, 제24일, 제25일, 제26일, 제27일 및 제28일에 대상체에게 투여하는 단계; 및 (c) LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염을 28일 주기의 제1일, 제8일, 제15일 및 제22일에 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 5-아자시티딘을 28일 주기의 처음 14일 동안 매일 약 300 mg의 용량으로 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기의 매일 적어도 약 100 mg의 용량으로 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 LSD-1 억제제를 28일 주기의 1주 1회 약 20 mg, 약 40 mg 또는 약 60 mg의 용량으로 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 5-아자시티딘을 28일 주기의 처음 14일 동안 매일 약 200 mg의 용량으로 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기의 매일 적어도 약 100 mg의 용량으로 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 LSD-1 억제제를 28일 주기의 1주 1회 약 20 mg, 약 40 mg 또는 약 60 mg의 용량으로 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기의 제1일에 약 100 mg의 용량, 제2일에 약 200 mg의 용량, 제3일에 약 300 mg의 용량 및 제4일-제28일에 약 400 mg의 용량으로 대상체에게 공동으로 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 5-아자시티딘을 28일 주기의 처음 14일 동안 매일 약 300 mg의 용량으로 경구로 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기의 매일 약 400 mg의 용량으로 경구로 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 LSD-1 억제제를 28일 주기의 1주 1회 약 20 mg, 약 40 mg 또는 약 60 mg의 용량으로 경구로 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1종의 추가의 치료제는 베네토클락스를 투여하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 5-아자시티딘을 28일 주기의 처음 14일 동안 매일 약 200 mg의 용량으로 경구로 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기의 매일 약 400 mg의 용량으로 경구로 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 LSD-1 억제제를 28일 주기의 1주 1회 약 20 mg, 약 40 mg 또는 약 60 mg의 용량으로 경구로 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1종의 추가의 치료제는 베네토클락스를 투여하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 급성 골수성 백혈병은 재발성 유전자 이상을 동반한 급성 골수성 백혈병, 골수이형성증-관련 변화를 동반한 급성 골수성 백혈병, 요법-관련 골수성 신생물, 골수성 육종, 다운 증후군과 관련된 골수성 증식, 모구성 형질세포양 수지상 세포 신생물 및/또는 급성 전골수구성 백혈병을 포함한다.
또 다른 측면에서, 집중 유도 화학요법에 적격이 아닌 급성 골수성 백혈병 (AML)을 갖는 인간 대상체에게
(i) 제1 연속 28일 주기에서:
(a) 5-아자시티딘을 제1일 내지 제7일에 매일 약 75 mg/m2의 용량으로 피하로 또는 정맥내로;
(b) 베네토클락스를 제1일에 약 100 mg; 제2일에 약 200 mg 및 제3일 내지 제28일에 매일 약 400 mg의 용량으로 경구로; 및
(c) 하기 화합물의 베실레이트 염을 포함하는 제약 조성물을:
Figure pct00002
제1일, 제8일, 제15일 및 제22일에 투여하는 단계; 및
(ii) 후속 28일 주기에서:
(d) 5-아자시티딘을 각각의 후속 주기의 제1일 내지 제7일에 매일 약 75 mg/m2의 용량으로 피하로 또는 정맥내로;
(e) 베네토클락스를 각각의 후속 주기의 제1일 내지 제28일에 약 400 mg의 용량으로 경구로; 및
(f) 하기 화합물의 베실레이트 염을 포함하는 제약 조성물을
Figure pct00003
각각의 후속 주기의 제1일, 제8일, 제15일 및 제22일에 투여하는 단계
를 포함하는, 집중 유도 화학요법에 적격이 아닌 AML을 갖는 인간 대상체를 치료하는 방법이 제공된다.
일부 실시양태에서, 제약 조성물은 제1 연속 28일 주기 및 후속 28일 주기에서 약 20 mg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 제1 연속 28일 주기 및 후속 28일 주기에서 약 40 mg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 제1 연속 28일 주기 및 후속 28일 주기에서 약 60 mg의 용량으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 제약 조성물은 제1 연속 28일 주기 및 후속 28일 주기에서 약 20 mg의 용량으로 투여되고; 20 mg의 용량이 허용되는 경우에는, 제2 용량 코호트가 개방될 것이며, 여기서 제약 조성물은 제1 연속 28일 주기 및 후속 28일 주기에서 약 40 mg의 용량으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 40 mg의 용량이 허용되는 경우에는, 제3 용량 코호트가 개방될 것이며, 여기서 제약 조성물은 제1 연속 28일 주기 및 후속 28일 주기에서 약 40 mg의 용량으로 투여된다.
상기 요약 및 하기 도면의 설명과 상세한 설명은 둘 다 예시적이고 설명적이다. 이들은 본 개시내용의 추가의 세부사항을 제공하는 것으로 의도되지만, 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다. 다른 목적, 이점 및 신규 특색은 본 개시내용의 하기 상세한 설명으로부터 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 자명할 것이다.
도 1은 세포주 MV4-11 및 MOLM-13 둘 다에서 길테리티닙과 조합된 5-아자시티딘 및 미도스타우린과 조합된 5-아자시티딘의 최대 EC50 배수 이동을 나타낸다. 3가지 상이한 투여 스케줄로부터의 결과가 제시된다: (i) 5-아자시티딘이 첫번째로 투여됨 (흑색 막대); (ii) 2종의 작용제가 공동으로 투여됨 (밝은 회색 막대); 및 (iii) 5-아자시티딘이 두번째로 투여됨 (중간 회색 막대).
도 2는 3가지 상이한 투여 스케줄을 나타낸다: (i) FLT3 억제제 (FLT3i) 전에 간격을 두고 5-아자시티딘 (AZA)이 첫번째로 투여됨; (ii) 2종의 작용제 (5-아자시티딘 및 FLT3i)가 공동으로 투여됨; 및 (iii) FLT3i가 투여된 후에 간격을 두고 5-아자시티딘이 두번째로 투여됨. FLT3 억제제는 미도스타우린 또는 길테리티닙을 포함한 임의의 적합한 FLT3 억제제일 수 있다.
도 3a-d는 세포주 MV4-11 (도 3a) 및 MOLM-13 (도 3c)에서 베네토클락스와 조합된 5-아자시티딘의 최대 EC50 배수 이동을 나타낸다. 범례에 나타낸 바와 같이, 3가지 상이한 투여 스케줄로부터의 결과가 제시된다: (i) 5-아자시티딘이 첫번째로 투여됨 (흑색 막대); (ii) 2종의 작용제가 공동으로 투여됨 (밝은 회색 막대); 및 (iii) 5-아자시티딘이 두번째로 투여됨 (중간 회색 막대). 3가지 상이한 투여 스케줄에 대해 세포주 MV4-11 (도 3b) 및 MOLM-13 (도 3d)에서 베네토클락스와 조합되어 투여된 5-아자시티딘에 대한 상승작용 지수가 또한 제시된다.
도 4a-c는 MV4-11 세포에서 5-아자시티딘이 첫번째로 투여된 경우 베네토클락스와 5-아자시티딘의 상승작용적 효과를 보여주고 (도 4a), 동시 투여의 경우 상대적으로 더 낮은 상승작용을 보여주고 (도 4b), 베네토클락스가 첫번째로 투여된 경우 상승작용을 보여주는 (도 4c) 반응 표면 분석을 나타낸다. 반응 표면 방법론 (RSM)은 여러 설명 변수와 하나 이상의 반응 변수 사이의 관계를 조사하기 위한 널리 공지된 통계적 방법이다. RSM은 본 경우에 베네토클락스와 5-아자시티딘의 상승작용적 효과인 최적 반응을 얻기 위해 설계된 실험 순서를 사용한다.
도 5는 (a) 5-아자시티딘 및 미도스타우린 ("aza+0.3 μM Mido") 및 (b) 5-아자시티딘 및 길테리티닙 ("aza+0.3 μM Gilt")이 MV4-11 세포주에서 MCL-1 분해를 증대시킨다는 것을 보여주는 웨스턴 블롯을 도시한다.
도 6은 5-아자시티딘 및 베네토클락스 처리가 FLT3ITD MV4-11 세포에서 MCL-1 수준을 감소시킨다는 것을 보여주는 웨스턴 블롯을 도시한다.
도 7a-c는 MOLM-13 이종이식 모델에서의 5-아자시티딘 조합의 생체내 평가를 퍼센트 생존 (y-축) 대 제0일 내지 제70일 (x-축)의 그래프로 도시한다. 도 7a는 5-아자시티딘과 미도스타우린의 조합의 결과를 보여주고, 도 7b는 베네토클락스와 조합된 5-아자시티딘의 결과를 보여주고, 도 7c는 5-아자시티딘과 길테리티닙의 조합의 결과를 보여준다. 도 7a-c에 제시된 실험을 위한 투여는 다음과 같았다: (i) 5-아자시티딘 (낮은 노출, 연장된 지속기간, LEED): 1 mg/kg 복강내로 (IP), 5일 동안 1일 1회, 3회 (qdx5x3); (ii) 5-아자시티딘 (높은 노출, 제한된 지속기간, HELD): 3 mg/kg 복강내로 (IP), 5일 동안 1일 1회 (qdx5); (iii) 미도스타우린 (100 mg/kg 경구로 (PO), 21일 동안 1일 1회 (qdx21)); (iv) 길테리티닙 (4 mg/kg 경구로 (PO), 21일 동안 1일 1회 (qdx21)); 및 (v) 베네토클락스 (100 mg/kg 경구로 (PO), 21일 동안 1일 1회 (qdx21)). P-값 (최상의 단일 작용제 대비) *P < 0.05; **P<0.001; ***P<0.0001.
도 8a, 8b 및 8c는 단일 작용제로서의 5-아자시티딘 (AZA) 및 베네토클락스 (각각 도 8a 및 8b) 및 5-아자시티딘과 베네토클락스의 조합 (도 8c)에 대한 22종의 AML 세포주의 감수성을 도시한다.
도 9a-f는 5-아자시티딘 및 베네토클락스를 사용한 처리 시작 7일 후 MV4-11 세포 (도 9a-c) 및 MOLM-13 세포 (도 9d-f)의 세포 생존을 보여준다. 하기 스케줄을 시험하였다: 제1일, 제2일 및 제3일에 5-아자시티딘 투여, 이어서 제4일에 베네토클락스 투여 (5-아자시티딘 (AZA) 첫번째) (도 9a 및 9d); 제1일에 5-아자시티딘 및 베네토클락스 공-투여, 이어서 제2일 및 제3일에 5-아자시티딘 투여 (동시) (도 9b 및 9e); 및 제1일에 베네토클락스 투여, 이어서 제2일, 제3일 및 제4일에 5-아자시티딘 투여 (베네토클락스 첫번째) (도 9c 및 9f).
도 10a, 10b 및 10c는 야생형 FLT3, FLT3-ITD 또는 FLT3 (D835Y) 돌연변이를 발현하는 조작된 BaF3 세포주의 패널에서 5-아자시티딘-베네토클락스 조합의 상승작용적 효과의 정도와 MCL-1 발현의 상관관계를 도시한다.
도 11은 20종의 AML 세포주의 패널에서 상승작용 지수와 RNASeq에 의해 측정된 MCL1 RNA 수준의 상관관계 (r2 = -0.5607, p = 0.0101)를 도시한다.
도 12a-h는 4종의 상이한 AML 세포주: KG1α (도 12a), MV4-11 (도 12b), THP-1 (도 12c) 및 OCI-AML2 (도 12d)에서의 5-아자시티딘-매개된 MCL-1 분해의 정도를 도시한다. 결과는 KG1α (도 12e) 및 MV4-11 (도 12f) 세포주에서 5-아자시티딘-베네토클락스 상승작용적 활성을 나타냈고 (상승작용 지수 (SI) 각각 70 및 35.5), THP-1 (도 12g) 및 OCI-AML-2 (도 12h) 세포주에서는 상승작용적 활성이 거의 없거나 전혀 없음을 나타냈다 (SI 각각 20.2 및 10.8). 5-아자시티딘-베네토클락스가 가장 큰 상승작용적 효과를 나타낸 (도 12e 및 12f) KG1α (도 12a) 및 MV4-11 (도 12b) 세포주의 경우, 5-아자시티딘은 처리 6시간 후에 시작하여 MCL-1 분해를 가장 빠르게 유도하였다. 대조적으로, 5-아자시티딘-베네토클락스가 단지 경미한 상승작용적 활성을 제공한 THP-1 (도 12g)의 경우, 16시간에 시작하여 더 늦게 5-아자시티딘-매개된 MCL-1 분해를 나타냈고, 24시간까지 불완전한 분해를 나타냈다 (도 12c). 5-아자시티딘-베네토클락스가 가장 낮은 상승작용적 효과를 나타낸 (도 12h) OCI-AML2 (도 12d)의 경우, 5-아자시티딘 처리는 MCL-1의 어떠한 분해도 유도하지 않았다.
도 13a는 카스파제 3의 분해를 평가하는 웨스턴 블롯을 도시한다. 세포를 Z-VAD-FMK, 범-카스파제 억제제로 처리하고, 5-아자시티딘에 의한 MCL-1 분해의 정도를 측정하였다. 도 13b는 5-아자시티딘에 의한 MCL-1 분해의 막대 그래프를 보여주며, 여기서 세포를 20 μM Z-VAD-FMK로 1시간 동안 처리한 후에 추가 16시간 동안 5-아자시티딘 처리하였다. 카스파제 억제는 MV4-11 세포에서 5-아자시티딘에 의한 MCL-1 분해를 부분적으로 제거하였으며, 이는 MCL-1 분해의 추가의 카스파제-비의존성 메카니즘을 시사하였다.
도 14a 및 b는 PBS (비히클), 1 μM 5-아자시티딘으로 24시간 동안 (도 14a) 또는 1 μM 5-아자시티딘으로 48시간 동안 (도 14b) 처리된 MV4-11 세포에 대해 수행된 RNAseq의 결과를 도시한다. 도 14a 및 b는 24시간 (도 14a) 및 48시간 (도 14b)에서 유의하게 변형된 유전자의 볼케이노 플롯을 보여주며, 이는 5-아자시티딘이 24시간에서 133종의 차등 발현된 유전자를 유도하고 48시간에서 226종의 차등 발현된 유전자를 유도하였다는 것을 보여준다. 5-아자시티딘-유도된 차등 발현된 유전자의 추가의 분석시, MCL1 발현을 조절하는 것으로 이전에 밝혀진 2종의 유전자: 활성화 전사 인자 3 (ATF3) 및 스테아로일-CoA 데새투라제 (SCD)를 확인하였다. ATF3 발현은 5-아자시티딘 처리 48시간 후에 2배 증가하였다. 지질 대사 및 MCL1의 조절제인 SCD (스테아로일-CoA 데새투라제)의 발현은 48시간에서 5-아자시티딘 처리에 의해 2.5배 감소하였다. ATF3 (도 14c) 및 SCD (도 14d) 발현의 변경을 실시간 PCR을 사용하여 별개의 실험에서 검증하였다. 0.3 μM 5-아자시티딘 처리는 24시간에서도 또는 48시간에서도 ATF3 발현을 유도하기에 충분하지 않았으므로, ATF3 발현은 시간- 및 농도-의존성 방식으로 증가하였다 (도 14c). 유사하게, SCD 발현은 3 μM 5-아자시티딘으로 처리한 경우에 24시간 내에 급속하게 감소하였지만, 이 시점에서 저농도의 5-아자시티딘에 의해서는 영향을 받지 않았다 (도 14d).
도 15a-c는 상승작용에서 ATF3 및/또는 SCD 유전자의 기능을 평가하기 위한 MV4-11 세포에서의 이들 유전자의 siRNA 녹다운의 결과를 보여준다. MV4-11 세포를 비형질감염된 채로 두거나 또는 ATF3, SCD 또는 대조군 (스크램블링) siRNA로 형질감염시켰다. 대조군으로서, 세포를 siRNA로 형질감염시키고, 형질감염 72시간 후에 RNA 및 qPCR을 위해 수집하였다 (도 15a). 스크램블 siRNA로 처리된 세포에서, ATF3 (도 15b) 또는 SCD (도 15c) 발현의 변화는 관찰되지 않았다. 형질감염 후, 세포를 제1일-제3일 동안 매일 다양한 농도의 5-아자시티딘으로 처리하였다. 제4일에, 세포에 베네토클락스를 투여하고, 이어서 처리 개시 7일 후에 셀타이터-글로(CellTiter-Glo)®를 사용하여 세포 생존율을 시험하였다. 5-아자시티딘-베네토클락스 상승작용을 콤베네피트(Combenefit) 및 최고 단일 작용제 분석을 사용하여 계산하였다 (도 15d-g). 도 15d = 비형질감염 세포; 도 15e = 스크램블링 RNAi; 도 15f = ATF3 녹다운; 및 도 15g = SCD 녹다운.
도 16a, 16b, 16c, 16d, 16e 및 16f는 5-아자시티딘 및 베네토클락스가 주사가능한 5-아자시티딘 (HELD) 또는 경구 5-아자시티딘 (LEED)에 상응하는 용량 및 스케줄에서 생체내 상승작용적 활성을 갖는지 여부에 관한 평가의 결과를 도시한다. 5-아자시티딘-베네토클락스 상승작용을 나타낸 2종의 세포주인 MV4-11 (도 16a-c) 및 MOLM-13 (도 16d-f)을 사용하여 면역결핍 동물에서 파종성 AML 이종이식 마우스를 생성하였다. 시험관내에서, 베네토클락스는 세포주 둘 다를 베네토클락스에 대해 감작화시켰고 (도 16a 및 16d), 5-아자시티딘과 상승작용하였다 (도 16b 및 16e). 경구 5-아자시티딘 (LEED) 요법을 모델링하기 위해, 마우스를 15일 동안 1 mg/kg 5-아자시티딘으로 처리하였다 (낮은 노출, 연장된 지속기간). 대안적으로, 동일한 누적 용량을 사용하지만 주사가능한 5-아자시티딘 (HELD) 요법을 사용하기 위해, 마우스를 5일 동안 3 mg/ml 5-아자시티딘으로 처리하였다 (높은 노출, 제한된 지속기간).
도 17a, 17b, 17c, 17d, 17e, 17f, 17g, 17h, 17i, 17j 및 17k는 5-아자시티딘 및 FLT3 억제제를 사용한 공동-처리가 AML 세포에서 상승작용적 효과를 나타내는지 여부에 관한 조사 결과를 도시한다. 도 17a-d는 MV4-11 세포를 사용한 실험으로부터의 결과를 보여주고, 도 17e-h는 MOLM-13 세포를 사용한 실험으로부터의 결과를 보여준다. 도 17a, 17b, 17e 및 17f는 5-아자시티딘 및 미도스타우린을 사용한 치료로부터의 결과를 보여준다. 도 17c, 17d, 17g 및 17h는 5-아자시티딘 및 길테리티닙을 사용한 치료로부터의 결과를 보여준다. 세포를 제1일-제3일에 5-아자시티딘의 1일 용량으로 처리한 다음, 제4일에 FLT-3 억제제 (미도스타우린 또는 길테리티닙)로 처리하였다. 세포를 제7일에 수집하고, 세포 생존율을 셀타이터-글로® 검정에 의해 평가하였다. 미도스타우린은 MV4-11을 5-아자시티딘에 대해 감작화시켰고 (도 17a), 5-아자시티딘과 상승작용적 활성을 나타냈다 (도 17b). 5-아자시티딘 및 길테리티닙 (도 17c 및 17d)으로 처리된 MV4-11 세포, 뿐만 아니라 5-아자시티딘 및 미도스타우린 (도 17e 및 17f) 또는 길테리티닙 (도 17g 및 17h)으로 처리된 MOLM-13 세포에서 유사한 효과가 관찰되었다. 도 17i는 MOLM-13 세포에서 비히클, 5-아자시티딘 (LEED), 5-아자시티딘 (HELD), 미도스타우린, 5-아자시티딘 (LEED) + 미도스타우린, 및 5-아자시티딘 (HELD) + 미도스타우린의 투여에 대한 퍼센트 생존 (y-축) 대 제1일-제70일의 결과를 보여준다. 도 17j는 MV4-11 세포에서 비히클, 5-아자시티딘 (LEED), 5-아자시티딘 (HELD), 미도스타우린, 5-아자시티딘 (LEED) + 미도스타우린, 및 5-아자시티딘 (HELD) + 미도스타우린의 투여에 대한 퍼센트 생존 (y-축) 대 제1일-제91일의 결과를 보여준다. 도 17k는 MOLM-13 세포에서 비히클, 5-아자시티딘 (LEED), 5-아자시티딘 (HELD), 길테리티닙, 5-아자시티딘 (LEED) + 길테리티닙, 및 5-아자시티딘 (HELD) + 길테리티닙의 투여에 대한 퍼센트 생존 (y-축) 대 제1일-제70일의 결과를 보여준다.
도 18a-c는 다양한 작용제의 세포독성의 평가를 도시한다. 세포독성을 유도하기 위한 단일 작용제 처리로서의 CC-90011, AZA 및 베네토클락스의 효능을 22종의 AML 세포주에서 평가하였다 (도 18a). 도 18a는 단일 작용제 세포독성 (EC50)을 보여주고; 도 18b는 CC-90011에 의한 분화 마커 유도 (EC50)를 보여주고; 도 18c는 CC-90011/(AZA + Ven) 상승작용 지수 (SI)를 보여준다. 4종의 세포주는 AZA 및 베네토클락스에 대해 감수성이었지만 CC-90011에 대해서는 내성 (EC50 > 10 μM)인 반면, 7종의 세포주는 베네토클락스 및 CC-90011 둘 다에 대해 내성이었다 (도 18a). LSD 억제제는 여러 AML 세포주 및 인간 AML 이종이식 모델에서 분화를 증가시킨다 (도 18b). CC-90011에 의한 분화 마커의 유도를 조사하기 위해, 유동 세포측정법을 사용하여 CC-90011 처리 후 22종의 AML 세포주에서 CD11b, CD14 및 CD86 표면 마커 발현을 측정하였다. 이들 세포주 중 17종은 이들 분화 마커 중 적어도 1종의 발현을 증가시킨 반면, HEL, KG-1, MOLM-13, KG-1a 및 NOMO-1을 포함한 5종의 세포주는 이들 분화 마커 중 어떠한 것에서도 변화를 갖지 않았다 (도 18b). AZA+Ven+CC-90011 삼중 조합이 AML 세포주에서 상승작용을 나타내는지 여부를 조사하기 위해, 22종의 AML 세포주 중 13종을 다양한 농도의 AZA+Ven+CC-90011로 처리하였다 (도 18c).
도 19a-m은 셀타이터-글로®를 사용한 세포 생존율의 분석, 및 "최고 단일 작용제" 모델링을 사용하여 맵핑된 표면 및 콤베네피트를 사용한 상승작용의 계산을 도시한다. 도 19a = MV4-11 세포; 도 19b = OCI-AML2 세포; 도 19c = Molm-13 세포; 도 19d = KG1 세포; 도 19e = HL-60 세포; 도 19f = Kasumi-1 세포; 도 19g = GDM-1 세포; 도 19h = THP-1 세포; 도 19i = MUTZ-8 세포; 도 19j = HNT-34 세포; 도 19k = OCI-AML3 세포; 도 19l = HEL 세포; 및 도 19m = SIG-M5 세포.
도 20a-c는 상이한 조합 처리의 비교를 도시한다. AZA+Ven+CC-90011 삼중 조합이 AZA+CC-90011 또는 Ven+CC-90011과 비교하여 더 효과적인지 여부를 찾아내기 위해, 삼중 조합을 이들 작용제의 쌍별 조합과 비교하였다 (도 20a-d). OCI-AML-2에서, AZA+CC-90011 (도 20a), Ven+CC-90011 (도 20b) 또는 AZA+Ven (도 20c)의 이중 조합은 OCI-AML2 세포에서 상승작용을 나타내지 않았다. 그러나, OCI-AML2를 AZA+Ven+CC-90011 조합으로 처리한 경우 (도 20d), 상승작용은 실질적으로 증가된다.
도 21은 실시예 2의 연구 설계를 도시한다.
I. 개관
본 개시내용은 인간 대상체에게 (i) 5-아자시티딘을 포함하는 제약 조성물; 및 (ii) 적어도 1종의 추가의 치료제를 투여함으로써 급성 골수성 백혈병 (AML)을 치료하는 방법에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 추가의 치료제는 길테리티닙, 미도스타우린, 퀴자르티닙, 에나시데닙, 이보시데닙 및/또는 베네토클락스를 포함한다. 일부 실시양태에서, 리신 특이적 데메틸라제-1 (LSD-1) 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염이 (i) 5-아자시티딘을 포함하는 제약 조성물; 및 (ii) 적어도 1종의 추가의 치료제와 조합되어 투여된다. 또한, 인간 대상체에서 AML을 치료하기 위한, 5-아자시티딘을 적어도 1종의 추가의 치료제 및 임의로 LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염과 함께 포함하는 제약 조성물이 개시된다.
또 다른 측면에서, 인간 대상체에게 (i) 5-아자시티딘을 포함하는 제약 조성물; (ii) 적어도 1종의 추가의 치료제; 및 (iii) 리신 특이적 데메틸라제-1 (LSD-1) 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여함으로써 급성 골수성 백혈병 (AML)을 치료하는 방법이 기재된다. 일부 실시양태에서, 추가의 치료제는 길테리티닙, 미도스타우린, 퀴자르티닙, 에나시데닙, 이보시데닙 및/또는 베네토클락스를 포함한다. 일부 실시양태에서, 추가의 치료제는 베네토클락스이다. 또한, 인간 대상체에서 AML을 치료하기 위한, 5-아자시티딘과 적어도 1종의 추가의 치료제 및 리신 특이적 데메틸라제-1 (LSD-1) 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염을 포함하는 제약 조성물이 본원에 개시된다.
일부 실시양태에서, 특정 조합은, 예를 들어 암 유형 및 바람직하지 않은 혈관신생 또는 비정상적 세포 증식과 연관되거나 이를 특징으로 하는 특정 질환 및 상태를 포함한 특정한 질환 또는 장애의 치료에서 상승작용적으로 작용한다.
급성 골수성 백혈병 (AML) (급성 골수 백혈병으로도 공지됨)은 공격성의 불균질 골수 악성종양이다. 미국 암 학회에 따르면, AML은 성인에서 진단된 백혈병의 가장 흔한 유형이고, 모든 성인 백혈병 사례의 32%를 구성한다. 미국 (US)에서 2020년에 대략 19,940명의 사람이 AML로 진단될 것으로 추정되며, 11,180명의 환자가 그 질환으로 사망할 것으로 추정된다. 질환은 환자의 대다수를 차지하는 고령 성인에서 치료하기 특히 어렵고; 따라서, 5년 전체 생존은 단지 대략 29%이다. 문헌 [National Cancer Institute, SEER Cancer Stat Facts: Leukemia - Acute Myeloid Leukemia (AML), https://seer.cancer.gov/statfacts/html/amyl.html (2020년 6월 10일 접속)]. 1970년대 이래로, 초기 표준 요법은, 이를 받기에 충분히 적합한 자들을 위해, 7일의 연속 주입 시타라빈 및 3일의 안트라시클린을 포함하는 '7+3' 요법으로 이루어졌다. 문헌 [Rai et al. Blood 1981:58: 1203-1212]. 다음 35년에 걸쳐, AML 치료를 증대시키려 시도한 다수의 임상 시험은 표준 관리의 변화가 거의 없이 수행되었다. 그러나, AML의 분자적 개체발생을 상술하는 최근의 데이터는 원인 경로를 규명하였으며, 이는 표적화된 약물 요법을 개발하기 위한 노력으로 이어졌다. 문헌 [E. Winer and R. Stone, Ther. Adv. Hematol., 10:PMC6624910 (July 2019)].
AML은 높은 재발률을 가지며, 추가적으로 재발성 및 불응성 AML은 매우 어려운 질환 상태이고, 억제될 임의의 단일 경로를 극복하는데 있어서의 이점을 백혈병성 세포에 제공하는 다수의 비정상적 신호전달 경로에 의해 구동될 가능성이 있기 때문에, 본원에 기재된 조합 치료에 대한 필요가 오랫동안 느껴져 왔다. 따라서, 성공적인 조합 치료는 AML을 퇴치하기 위한 노력에 매우 바람직하다.
본원에 기재된 치료 방법의 한 측면에서, 치료될 환자는 약 60세 이상이다. 본원에 기재된 치료 방법의 또 다른 측면에서, 치료될 환자는 약 65세 이상, 약 70세 이상, 약 75세 이상 또는 약 80세 이상이다. 또 다른 측면에서, 환자는 재발성 AML 대상체이다. 또 다른 측면에서, 환자는 불응성 AML 대상체이다. 치료될 대상체는 또한 약 60세 미만, 약 55세 미만, 약 50세 미만, 약 45세 미만 또는 약 40세 미만일 수 있다. 다른 측면에서, 치료될 환자는 FLT3-ITD 또는 FLT3-TKD인 FLT3 돌연변이를 갖는다. 일부 측면에서, 치료될 환자는 재발성 AML 돌연변이를 갖는다. 예시적인 AML 돌연변이는 Fms-관련 티로신 키나제 3 (FLT3), 키르스텐 래트 육종 바이러스 종양유전자 상동체 (KRAS), 신경모세포종 RAS 바이러스 (V-Ras) 종양유전자 상동체 (NRAS), 원종양유전자 c-Kit (KIT), 단백질 티로신 포스파타제 비-수용체 유형 11 (PTPN11), 뉴로피브로민 1 (NF1), DNA 메틸트랜스퍼라제 3A (DNMT3A), 이소시트레이트 데히드로게나제 1 (IDH1), 이소시트레이트 데히드로게나제 2 (IDH2), 텐-일레븐 전위-2 (TET2), 추가의 섹스 콤-유사 1 (ASXL1), 제스트 인핸서 상동체 2 (EZH2), 혼합-계통 백혈병 1/히스톤-리신 N-메틸트랜스퍼라제 2A (MLL/KMT2A), 뉴클레오포스민 (NPM1), CCAAT 인핸서 결합 단백질 알파 (CEBPA), runt-관련 전사 인자 1 (RUNX1), GATA-결합 인자 2 (GATA2), 종양 단백질 p53 (TP53), 세린 및 아르기닌 풍부 스플라이싱 인자 2 (SRSF2), U2 소형 핵 RNA 보조 인자 1 (U2AF1), 스플라이싱 인자 3b 서브유닛 1 (SF3B1), 아연 핑거 (CCCH 유형), RNA-결합 모티프 및 세린/아르기닌 풍부 2 (ZRSR2), RAD21 코헤신 복합체 성분 (RAD21), 기질 항원 1 (STAG1), 기질 항원 2 (STAG2), 염색체의 구조적 유지 1A (SMC1A), 및 염색체 단백질의 구조적 유지 3 (SMC3)을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
II. 실험 프로토콜
시험될 약물 조합은 이보시데닙, 에나시데닙, 베네토클락스 또는 FLT3 억제제와 조합되어 제공된 5-아자시티딘을 포함한다 (FLT3 ITD 또는 TKD 돌연변이를 갖는 AML 대상체에서). 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 베네토클락스와 조합되어 투여된다.
이소시트레이트 데히드로게나제 (IDH)는 시트르산 주기에서 중요한 효소이다. IDH의 돌연변이된 형태는 높은 수준의 2-히드록시글루타레이트의 (R)-거울상이성질체 (R-2-HG)를 생산하고, 종양의 성장에 기여할 수 있다. IDH1은 세포질에서 이 반응을 촉매하며, 반면 IDH2는 미토콘드리아에서 이 반응을 촉매한다. 이보시데닙 및 에나시데닙은 IDH 억제제이다.
이보시데닙 (팁소보(Tibsovo)®)은 IDH1의 소분자 억제제이다. 신경교종, 급성 골수성 백혈병 (AML), 담관암종 및 연골육종으로 진단된 환자로부터의 종양에서, 이소시트레이트 데히드로게나제 (IDH) 1 및 2의 보존된 활성 부위에 체세포 돌연변이가 관찰된다. 이들 새로운 돌연변이로, 이들 효소는 α-케토글루타레이트를 종양대사물 R-2-히드록시글루타레이트로 환원시키는 새로운 신형 거동을 나타낸다. 이보시데닙은 α-케토글루타레이트-의존성 효소를 경쟁적으로 억제하여, 궁극적으로 후성적 변경 및 손상된 조혈 분화로 이어진다.
시험관내 연구에서, 이보시데닙은 알파-케토글루타레이트 (α-KG) 기질 및 NADPH 보조인자에 대해 비-경쟁적 억제 거동을 나타냈다. 이것으로 인해 이보시데닙이 mIDH1-R132H 동종이량체의 급속한 평형 억제제인 것으로 여겨진다.
에나시데닙 (이디파(Idhifa)®)은 이소시트레이트 데히드로게나제 2 (IDH2) 유전자의 소분자 억제제이다. 상기 언급된 바와 같이, IDH의 돌연변이된 형태는 높은 수준의 R-2-HG를 생산하며, IDH1은 세포질에서 이 반응을 촉매하고, IDH2는 미토콘드리아에서 이 반응을 촉매한다. 에나시데닙은 미토콘드리아에서 총 (R)-2-HG 수준을 감소시킴으로써 이 주기를 방해한다
베네토클락스 (벤클렉스타(Venclexta)® 및 벤클릭스토(Venclyxto)®)는 항아폽토시스 B-세포 림프종-2 (Bcl-2) 단백질을 차단하여 만성 림프구성 백혈병 (CLL) 세포의 프로그램화된 세포 사멸을 유도하기 때문에 BH3 (Bcl-2 상동성 도메인 3)-모방체이다. 일부 림프성 악성종양에서의 Bcl-2의 과다발현은 때때로 화학요법에 대한 증가된 내성과 연관된 것으로 나타났다.
FLT3 억제제는 티로신 키나제 억제제 (TKI)이다. 다른 티로신 키나제 억제제와 같이, 이들은 키나제의 활성 도메인에서 아데노신 트리포스페이트 (ATP) 결합 부위에 대해 경쟁하며, 이는 단백질이 인산화되는 능력을 억제하고, 후속적으로 그 단백질의 활성을 감소시킨다. FLT3 돌연변이는 급성 골수성 백혈병 (AML)에서 가장 흔한 발견 중 하나이다. FLT3/ITD 유전자는 정상 세포유전을 갖는 AML 환자의 대략 30%에서 발견된다. FLT3 유전자는 주로 인간 조혈 전구세포 및 수지상 세포에서 발현되고, 백혈병 세포 증식, 분화 및 생존에서 주요 역할을 한다. FLT3/ITD 유전자의 구성적 활성화는 다수의 하류 신호전달 캐스케이드, 예컨대 STAT5, RAS, MEK 및 PI3K/AKT 경로를 촉발하고, 궁극적으로 아폽토시스의 억제 및 백혈병성 세포 증식의 조절이상을 포함한 백혈병성 세포의 분화를 유발한다. 평가된 FLT3 억제제는 미도스타우린 (리답트(Rydapt)®) 및 길테리티닙 (조스파타(Xospata)®)을 포함한다. 미도스타우린은 박테리아 스트렙토미세스 스타우로스포레우스로부터의 알칼로이드인 스타우로스포린의 반합성 유도체이고, 종양원성 CD135 (FMS-유사 티로신 키나제 3 수용체, FLT3)에 대해 활성이다. 길테리티닙은 또한 AXL 수용체 티로신 키나제의 억제제로서 작용한다.
실시예 2는 집중 유도 화학요법에 적격이 아닌 치료-나이브 AML 대상체에서 베네토클락스 및 5-아자시티딘과 조합된 CC-90011 (4-[2-(4-아미노-피페리딘-1-일)-5-(3-플루오로-4-메톡시-페닐)-1-메틸-6-옥소-1,6-디히드로-피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴의 베실레이트 염)의 안전성 및 내약성을 평가할 실험을 기재한다. CC-90011은 리신 특이적 데메틸라제-1 (LSD-1) 억제제이다. 도 21은 실시예 2에 대한 전체 연구 설계를 보여준다.
실험의 목적은 (1) 집중 유도에 적격이 아닌 치료-나이브 AML 대상체에서 베네토클락스 및 5-아자시티딘과 조합된 CC-90011의 안전성 및 내약성을 평가하고; (2) 집중 유도 화학요법에 적격이 아닌 치료-나이브 AML 대상체에서 베네토클락스 및 5-아자시티딘과 조합된 CC-90011의 예비 효능을 평가하고; (3) 다색 유동 세포측정법 (MFC) 및/또는 차세대 서열분석 (NGS)에 의해 최소 잔류 질환 (MRD) 반응률 및 MRD 전환율을 평가하는 것일 것이다. 추가의 목적은 또한 (1) 골수 흡인물의 평가 및 말초 혈액 도말표본의 검사에 의해 MRD 반응의 지속기간을 탐색하는 것; (2) 베네토클락스 및 5-아자시티딘과 조합되어 제공되는 경우의 CC-90011의 PK 프로파일을 특징화하는 것; (3) 베네토클락스 및 5-아자시티딘과 조합된 CC-90011의 기계론적 효과를 이해하기 위해 PD를 특징화하는 것; (4) 베네토클락스 및 5-아자시티딘과 조합된 CC-90011의 PK, PD 바이오마커 및/또는 임상 결과 사이의 관계를 탐색하는 것; (5) 베네토클락스 및 5-아자시티딘과 조합된 CC-90011 사용시 효능과 상관관계가 있는 골수 및 혈액 내의 분자 및/또는 세포 마커를 평가하는 것; 및 (6) 베네토클락스 및 5-아자시티딘과 조합된 CC-90011의 기준선후 수혈 비의존성 비율을 평가하는 것을 포함할 것이다.
A. 5-아자시티딘
5-아자시티딘 (국립 서비스 센터 명칭 NSC-102816; CAS 등록 번호 320-67-2)은 또한 아자시티딘, AZA 또는 4-아미노-1-B-D-리보푸라노실-1,3,5-트리아진-2(1H)-온으로 공지되어 있다. 시판 제품 비다자(VIDAZA)® (주사용 5-아자시티딘)는 5-아자시티딘을 함유하고, 피하 또는 정맥내 사용을 위한 것이다. 5-아자시티딘은 시티딘의 피리미딘 뉴클레오시드 유사체이다. 5-아자시티딘은 하기 구조를 갖는다:
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5-아자시티딘은 그의 복제 DNA 내로의 혼입 후에 DNA 메틸트랜스퍼라제와 공유 복합체를 형성한다. DNA 메틸트랜스퍼라제는 신생 DNA 메틸화 및 복제 DNA의 딸 DNA 가닥에서 확립된 메틸화 패턴의 재현을 담당한다. 5-아자시티딘에 의한 DNA 메틸트랜스퍼라제의 억제는 DNA 저메틸화를 유도하여, 정상 세포 주기 조절, 분화 및 사멸에 수반되는 유전자의 재발현에 의해 형태학적으로 이형성인 미성숙 조혈 세포 및 암 세포에 대한 정상 기능을 회복시킨다. 이들 시티딘 유사체의 세포독성 효과는 정상 세포 성장 제어 메카니즘에 대해 더 이상 반응성이 아닌 암 세포를 포함한 급속 분열 세포의 사멸을 유발한다. 5-아자시티딘은 또한 RNA 내로 혼입된다. 5-아자시티딘의 세포독성 효과는 DNA, RNA 및 단백질 합성의 억제, RNA 및 DNA 내로의 혼입, 및 DNA 손상 경로의 활성화를 포함한 다중 메카니즘으로부터 생성될 수 있다.
주사가능한 5-아자시티딘은 임상 시험에서 시험되었고, 예컨대, 예를 들어 골수이형성 증후군 (MDS), 급성 골수 백혈병 (AML), 만성 골수 백혈병 (CML), 급성 림프구성 백혈병 (ALL) 및 비호지킨 림프종 (NHL)의 치료에서 유의한 항종양 활성을 나타냈다. 예를 들어, 문헌 [Aparicio et al., Curr. Opin. Invest. Drugs 3(4): 627-33 (2002)]을 참조한다.
5-아자시티딘은 다양한 증식성 장애를 치료하기 위한 피하 (SC) 또는 정맥내 (IV) 투여에 대해 승인되어 있다. 경구 투여는 임상 시험, 예컨대 NCT00761722, NCT01519011, NCT00528982 및 NCT01757535에서 연구되었다. 5-아자시티딘을 사용한 경구 제제 및 치료 방법은 미국 특허 번호 8,846,628에 개시되어 있으며, 이는 이러한 제제 및 치료 방법의 개시내용에 대해 참조로 포함된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 피하로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 정맥내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 약 75 mg/m2 내지 약 100 mg/m2의 용량으로 피하로 또는 정맥내로, 예를 들어 약 75 mg/m2, 약 80 mg/m2, 약 85 mg/m2, 약 90 mg/m2, 약 95 mg/m2 또는 약 100 mg/m2의 용량으로 피하로 또는 정맥내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 약 75 mg/m2의 용량으로 피하로 또는 정맥내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 28일 주기의 처음 7일 동안 매일 피하로 또는 정맥내로 투여된다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 경구로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 캡슐 또는 정제 형태로 투여된다. 일부 실시양태에서, 정제는 비-장용-코팅 정제이다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 약 50 mg, 약 60 mg, 약 70 mg, 약 80 mg, 약 90 mg, 약 100 mg, 약 110 mg, 약 120 mg, 약 130 mg, 약 140 mg, 약 150 mg, 약 160 mg, 약 170 mg, 약 180 mg, 약 190 mg, 약 200 mg, 약 210 mg, 약 220 mg, 약 230 mg, 약 240 mg, 약 250 mg, 약 260 mg, 약 270 mg, 약 280 mg, 약 290 mg, 약 300 mg, 약 310 mg, 약 320 mg, 약 330 mg, 약 340 mg, 약 350 mg, 약 360 mg, 약 370 mg, 약 380 mg, 약 390 mg, 약 400 mg, 약 410 mg, 약 420 mg, 약 430 mg, 약 440 mg, 약 450 mg, 약 460 mg, 약 470 mg, 약 480 mg, 약 490 mg, 약 500 mg, 약 510 mg, 약 520 mg, 약 530 mg, 약 540 mg, 약 550 mg, 약 560 mg, 약 570 mg, 약 580 mg 또는 약 600 mg의 용량으로 경구로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 약 200 mg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 약 300 mg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 28일 주기의 처음 7일, 14일 또는 21일 동안 매일 경구로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 28일 주기의 처음 14일 동안 매일 경구로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 1일에 1회 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 1일에 2회 대상체에게 투여된다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 28일 주기에서 14일 동안 1일에 약 200 mg의 용량으로 경구로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 28일 주기에서 14일 동안 1일에 약 300 mg의 용량으로 경구로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 28일 주기에서 21일 동안 1일에 약 200 mg의 용량으로 경구로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 28일 주기에서 21일 동안 1일에 약 300 mg의 용량으로 경구로 투여된다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14일 또는 14일 초과 동안 매일 경구로 투여된 후, 임의로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14일 또는 14일 초과의 치료 휴약기가 이어진다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 14일 이상 동안 매일 경구로 투여된 후, 임의로 7일 이상의 치료 휴약기가 이어진다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 21일 이상 동안 경구로 투여된 후, 임의로 7일 이상의 치료 휴약기가 이어진다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 14일 동안 경구로 투여된 후, 임의로 14일의 치료 휴약기가 이어진다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 21일 이상 동안 경구로 투여된 후, 7일 이상의 치료 휴약기가 이어진다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 14일 동안 경구로 투여된 후, 14일의 치료 휴약기가 이어진다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 14일 동안 매일 약 300 mg의 용량으로 경구로 투여된 후, 14일의 치료 휴약기가 이어진다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 14일 동안 매일 약 200 mg의 용량으로 경구로 투여된 후, 14일의 치료 휴약기가 이어진다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 21일 동안 매일 약 300 mg의 용량으로 경구로 투여된 후, 7일의 치료 휴약기가 이어진다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 매일 약 200 mg의 용량으로 경구로 투여된 후, 7일의 치료 휴약기가 이어진다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 28일 주기에서 7일 동안 1일마다 5-아자시티딘의 투여를 포함하는 치료 주기를 사용하여 경구로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 28일 주기에서 14일 동안 1일마다 5-아자시티딘의 투여를 포함하는 치료 주기를 사용하여 경구로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 28일 주기에서 21일 동안 1일마다 5-아자시티딘의 투여를 포함하는 치료 주기를 사용하여 경구로 투여된다.
5-아자시티딘은 세포의 세포 생존율 및 후성적 재프로그램화에 영향을 미친다. 문헌 [Taylor and Jones, Cell 20(1):85-93 (1980)]. 고용량에서 5-아자시티딘은 우세하게 급성 세포독성 효과를 발휘하는 것으로 생각되며 (Khan et al., Experimental Hematology 36(2): 149-57, 2008), 반면 저용량에서는 분화를 통해 종양 세포의 클론원성을 억제한다 (Tsai et al., Cancer Cell, 21(3): 430-46, 2012).
5-아자시티딘의 주사가능한 제제인 시판 제품 비다자®는 미국 특허 번호 8,846,628에 기재된 바와 같은 5-아자시티딘의 경구 비-장용 코팅 제제 (CC-486 포함)와 비교하여 비교적 더 높은 용량으로 더 짧은 지속기간 동안 투여된다. 임상 연구는 CC-486의 14 또는 21일 요법의 누적 노출이 5일 동안 투여된 비다자®보다 더 낮지만 (Garcia-Manero et al., Leukemia 30(4):889-96, 2016), CC-486이 비다자®와 비교하여 더 지속가능한 탈메틸화 효과를 유도한다는 것을 밝혀냈다 (Laille et al., PLOSOne 10(8):e0135520, 2015).
5-아자시티딘에 대한 노출 지속기간의 함수로서 세포독성 및 후성적 효과의 차이를 조사하기 위해, 주사가능한 5-아자시티딘의 높은 노출, 제한된 지속기간 (HELD) 투여를 경구로 투여되는 5-아자시티딘의 낮은 노출, 연장된 지속기간 (LEED) 투여와 비교하였다. 비-임상 시스템에서 주사가능한 및 경구 아자시티딘 투여를 모델링하기 위해, 총 5-아자시티딘 노출은 일정하게 유지하면서 노출 지속기간을 변화시켰다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘의 경구 투여를 모델링하기 위해, 5-아자시티딘을 15일 동안 1일 1회 (QDx15) 1 mg/kg의 용량으로, 연장된 지속기간 동안 낮은 노출로 (LEED) 전달하였다. 5-아자시티딘의 정맥내 또는 피하 투여에 의해 동일한 누적 용량을 모델링하기 위해, 5-아자시티딘을 5일 동안 1일 1회 (QDx5) 3 mg/kg의 용량으로, 제한된 지속기간 동안 높은 노출로 (HELD) 투여하였다.
일부 실시양태에서, 다른 작용제와 조합된 5-아자시티딘의 LEED 투여는 지속적인 약역학적 효과 및/또는 개선된 환자 순응도를 제공한다. 지속적인 약역학적 효과는, 예를 들어 MCL-1 분해를 포함하는 5-아자시티딘에 의해 도출된 임의의 변화 및/또는 ATF3 또는 SCD 유전자 발현의 변화를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 다른 작용제와 조합된 5-아자시티딘의 LEED는 다른 작용제와 조합된 5-아자시티딘의 HELD와 비교하여 치료 주기 (즉, 28일 주기)의 종료까지 지속된 전반적 DNA 메틸화의 감소 (예를 들어, 증가된 핵산 혼입으로 인함)를 제공한다. 일부 실시양태에서, 다른 작용제와 조합된 5-아자시티딘의 LEED는 28일 주기의 제21일에 피크에 이르는 분화 마커 상향조절을 제공하고, 28일 주기의 제28일까지 생존력의 점진적 손실을 특징으로 하는 세포 사멸을 갖는다. 일부 실시양태에서, 다른 작용제와 조합된 5-아자시티딘의 HELD는 28일 주기의 제7일에 피크에 이르는 분화 마커 상향조절을 제공하고, 28일 주기에서 제14일 피크에 이어 회복을 특징으로 하는 세포 사멸을 갖는다. 일부 실시양태에서, 다른 작용제와 조합된 5-아자시티딘의 LEED는 다른 작용제와 조합된 5-아자시티딘의 HELD와 비교하여 치료 주기 (즉, 28일 주기) 내내 지속되는, CD11b, CD14, CD86, HLA-DR 및 MERTK를 포함하나 이에 제한되지는 않는 골수 분화 마커의 보다 높은 발현을 제공한다. 일부 실시양태에서, 다른 작용제와 조합된 5-아자시티딘의 LEED는 다른 작용제와 조합된 5-아자시티딘의 HELD와 비교하여 더 현저한 후성적 변화 및 더 광범위한 분화를 제공한다.
III. 제약 제제
A. 5-아자시티딘
특정 실시양태에서, 본원의 방법은, 예를 들어 5-아자시티딘의 IV 또는 SC 투여와 연관된 한계를 극복하기 위해 본원에 제공된 특정한 경구 제제를 투여하는 것을 포함한다. 예를 들어, IV 또는 SC 투여는 정기적으로 보다 긴 기간 동안 5-아자시티딘을 전달하는 능력을 제한함으로써, 5-아자시티딘의 최대 효능을 잠재적으로 제한할 수 있다. 연장된 IV 또는 SC 투여 스케줄의 엄격함을 준수하기 어렵기 때문에, 5-아자시티딘에 대한 연장된 SC 또는 IV 노출은 대상체 (예를 들어, 다발성 혈구감소증을 갖는 대상체)가 요법을 중단하게 할 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Lyons et al., Hematologic Response to Three Alternative Dosing Schedules of Azacitidine in Patients With Myelodysplastic Syndromes, J. Clin. Oncol. (2009) (DOI:10.1200/ JCO.2008.17.1058)]. 따라서, 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 SC 또는 IV 5-아자시티딘 투여와 연관된 이들 또는 다른 한계를 극복하기 위해 본원에 제공된 경구 제제를 투여하는 것을 포함한다.
본원의 특정 실시양태는 5-아자시티딘 (예를 들어, 아자시티딘)을 IV 또는 SC 투여와 비교하여 더 연장된 기간에 걸쳐 더 낮은 용량으로 전달하는 것을 포함하는, 본원에 제공된 5-아자시티딘의 경구 제제를 투여하는 것을 포함하는 방법을 제공한다. 특정한 실시양태에서, 이러한 방법은 본원에 제공된 경구 제제를 투여함으로써 용량-관련 혈구감소증 (예를 들어, 아자시티딘과 연관된 용량-관련 혈구감소증 포함)을 관리하는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 방법은 5-아자시티딘을 포함하는 IV 또는 SC 용량과 비교하여 개선된 안전성 프로파일을 달성하기 위해 본원에 제공된 경구 제제를 투여하는 것을 포함한다.
본원의 실시양태는 5-아자시티딘 및 침투 증진제를 포함하는 (또는 침투 증진제를 포함하지 않는) 제약 제제 및 조성물을 포괄하며, 여기서 제제 및 조성물은 경구 투여용으로 제조된다. 특정한 실시양태는 본원에 제공된 바와 같은 특정한 의학적 적응증을 치료하기 위한 제약 제제 및 조성물의 제조를 위한 5-아자시티딘의 용도에 관한 것이다. 본원에 제공된 5-아자시티딘을 포함한 제약 제제 및 조성물은 5-아자시티딘을 이를 필요로 하는 대상체에 경구 전달하도록 의도된다. 경구 전달 포맷은 정제, 캡슐, 캐플릿, 용액, 현탁액 및 시럽을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
본원의 특정한 실시양태는 정제 또는 캡슐인 고체 경구 투여 형태를 제공한다. 특정 실시양태에서, 제제는 5-아자시티딘을 포함하는 정제이다. 특정 실시양태에서, 제제는 5-아자시티딘을 포함하는 캡슐이다. 특정 실시양태에서, 본원에 제공된 정제 또는 캡슐은 1종 이상의 부형제를 포함하거나 또는 1종 이상의 부형제, 예컨대, 예를 들어 활택제, 희석제, 윤활제, 착색제, 붕해제, 과립화제, 결합제, 중합체 및 코팅제를 필요로 하지 않는다. 특정 실시양태에서, 본원의 실시양태는 비정상적 세포 증식과 연관된 질환을 치료하기 위한 제약 조성물의 제조를 위한 5-아자시티딘의 용도를 포괄하며, 여기서 조성물은 경구 투여용으로 제조된다.
B. 적어도 1종의 추가의 치료제
특정한 실시양태에서, 본원에 제공된 5-아자시티딘 조성물은 1, 2, 3종 또는 그 초과의 다른 약리학적 활성 물질 (또한 본원에서 "추가의 치료제", "제2 활성제" 등으로 명명됨)을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘 조성물은 경구 제제이다. 일부 실시양태에서, 적어도 1종의 추가의 치료제를 갖는 5-아자시티딘 경구 조성물은 본원에 개시된 임의의 질환 또는 장애를 치료하는데 사용된다. 특정한 실시양태에서, 본원에 제공된 경구 제제는 추가의 치료제(들)를 치료 유효량으로 포함한다.
추가의 치료제의 예는 길테리티닙, 미도스타우린, 퀴자르티닙, 에나시데닙, 이보시데닙 및 베네토클락스를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
추가의 치료제의 예는 FLT3 억제제, IDH2 억제제, IDH1 억제제 및 BCL2 억제제를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 제1 세대 FLT3 억제제의 예는 미도스타우린, 레스타우르티닙, 수니티닙 (수텐트(Sutent)®) 및 소라페닙 (넥사바르(Nexavar)®)을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 제2 세대 FLT3 억제제의 예는 퀴자르티닙, 크레놀라닙, 펙시다르티닙 (PLX3397) 및 길테리티닙 (ASP2215)을 포함하나 이에 제한되지는 않으며, 이는 제1 세대 억제제보다 더 강력하고 선택적이다. IDH1 및/또는 IDH2 억제제를 포함한 IDH 억제제의 예는 이보시데닙 및 에나시데닙을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. BCL2 억제제의 예는 베네토클락스 (ABT-199), 나비토클락스 (ABT-263), ABT-737 (4-[4-[[2-(4-클로로페닐)페닐]메틸]피페라진-1-일]-N-[4-[[(2R)-4-(디메틸아미노)-1-페닐술파닐부탄-2-일]아미노]-3-니트로페닐]술포닐벤즈아미드), 오바토클락스 메실레이트 (GX15-070), TW-37 (N-[4-(2-tert-부틸페닐)술포닐페닐]-2,3,4-트리히드록시-5-[(2-프로판-2-일페닐)메틸]벤즈아미드), AT101 ((R)-(-)-고시폴), HA14-1 (2-아미노-6-브로모-α-시아노-3-(에톡시카르보닐)-4H-1-벤조피란-4-아세트산 에틸 에스테르) 및 사부토클락스를 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
추가의 치료제의 예는 길테리티닙, 미도스타우린, 퀴자르티닙, 에나시데닙, 이보시데닙 및 베네토클락스를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 예시적인 추가의 치료제는 베네토클락스이다.
C. 적어도 1종의 추가의 치료제로서의 베네토클락스
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘을 포함하는 경구 제약 조성물은 추가의 치료제로서의 베네토클락스와 함께 사용된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘 경구 조성물은 본원에 개시된 임의의 질환 또는 장애를 치료하기 위해 베네토클락스와 함께 사용된다.
베네토클락스는 BCL-2의 소분자 억제제이고, 정제 형태인 벤클렉스타™로서 시판된다. 베네토클락스는 (i) 만성 림프구성 백혈병 (CLL) 또는 소림프구성 림프종 (SLL)을 갖는 성인 환자의 치료를 위해; (ii) 주사가능한 5-아자시티딘 또는 데시타빈 또는 저용량 시타라빈과 조합되어 75세 이상인 성인 또는 집중 유도 화학요법의 사용을 불가능하게 하는 동반이환을 갖는 성인에서 새로 진단된 급성 골수성 백혈병 (AML)의 치료를 위해 지시된다.
베네토클락스를 사용한 요법은 권장 1일 용량으로 수일 또는 수주의 특정 기간에 걸쳐 매주 증량 스케줄에 따라 개시된다. CLL 및 SLL을 치료하기 위해, 베네토클락스는 제1주 동안 20 mg의 1일 용량, 제2주 동안 50 mg의 1일 용량, 제3주 동안 100 mg의 1일 용량, 제4주 동안 200 mg의 1일 용량, 및 제5주 및 그 이후 동안 400 mg의 1일 용량으로 투여된다. 또 다른 작용제, 예컨대 주사가능한 5-아자시티딘과의 조합 요법으로 AML을 치료하기 위해, 베네토클락스는 제1일 동안 100 mg의 1일 용량, 제2일 동안 200 mg의 1일 용량 및 제3일 및 그 이후 동안 400 mg의 1일 용량으로 투여된다. 주사가능한 5-아자시티딘은 베네토클락스 치료의 제1일에 시작하여, 28일 주기에서 각각의 주기의 제1일-제7일에 75 mg/m2의 투여량으로 IV 또는 피하로 투여된다.
일부 실시양태에서, 베네토클락스는 경구로 투여된다. 일부 실시양태에서, 베네토클락스는 정제 형태로 투여된다. 일부 실시양태에서, 베네토클락스는 매일 투여된다. 일부 실시양태에서, 베네토클락스는 약 20 mg 내지 약 400 mg, 예컨대 약 20 mg, 약 50 mg, 약 100 mg, 약 200 mg 또는 약 400 mg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 베네토클락스는 약 400 mg의 용량으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘 및 베네토클락스는 병용으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘 및 베네토클락스는 순차적으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘 및 베네토클락스가 순차적으로 투여되는 경우에, 5-아자시티딘이 첫번째로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘 및 베네토클락스는 별개의 투여 형태, 예컨대 정맥내 또는 피하 사용에 적합한 주사 및/또는 경구 사용을 위한 정제 또는 캡슐로서 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘 및 베네토클락스는 단일 투여 형태, 예컨대 정맥내 또는 피하 사용에 적합한 주사 또는 경구 사용을 위한 정제 또는 캡슐로서 공동-제제화된다.
D. LSD-1 억제제
최근 연구는 백혈병 줄기 세포 (LSC)의 생존이 질환 재발의 메카니즘 및 궁극적으로 요법 내성에서 주요 역할을 할 가능성이 있는 것으로 제시하였다. 현행 치료는 전암성 또는 악성 클론을 통한 종양 재생을 허용하는 LSC를 피하게 할 수 있다. 따라서, LSC의 근절은 증가된 장기간 생존을 가져올 수 있다. 추가로, 리신-특이적 데메틸라제 1A (LSD1) 활성이 LSC 구획에 존재하고 상승되는 것으로 밝혀졌으며, 이는 LSD1 활성의 억제가 LSC 구획을 잠재적으로 근절할 수 있다는 것을 시사한다.
집중 유도 화학요법에 부적격인 환자에 대한 치료 옵션은 제한되고, 집중 유도 화학요법에 부적격인 환자는 표준 집중 유도 화학요법에 충분히 적합한 환자와 비교하여 더 나쁜 생존 결과를 갖는다. 이러한 환자 집단에서 아자시티딘 및 또 다른 추가의 치료제, 예컨대 베네토클락스를 사용하는 조합 요법이 선행 요법과 비교하여 개선된 반응률을 갖지만, 리신 특이적 데메틸라제-1 (LSD-1) 억제제의 추가는 AML의 발병기전 및 AML 줄기 세포 집단의 증식에 연루된 LSD1의 이상 발현을 선택적으로 억제하여, 더 깊고 더 지속적인 반응을 생성할 수 있다.
따라서, 본 개시내용은 또한 AML을 포함한 질환 및 장애에 대해 (i) 5-아자시티딘과 리신 특이적 데메틸라제-1 (LSD-1) 억제제 및 적어도 1종의 추가의 치료제, 예컨대 베네토클락스를 포함하는 조성물을 사용하는 방법에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 치료되는 대상체는 ≥ 75세이고/거나 집중 유도 화학요법의 사용을 불가능하게 하는 동반이환을 갖는 ≥ 60 내지 74세인 치료-나이브 AML 대상체이다.
LSD-1 억제제를 사용하는 것을 포함하는 본원에 기재된 실시양태에서, LSD-1 억제제는 하기 구조를 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염이다:
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상기 화합물의 화학 명칭은 4-[2-(4-아미노-피페리딘-1-일)-5-(3-플루오로-4-메톡시-페닐)-6-옥소-1,6-디히드로-피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴이며, 화학식이 C23H21F2N5O2이고, 분자량이 437.44이고, CAS 번호가 1821307-10-1이다. 4-[2-(4-아미노-피페리딘-1-일)-5-(3-플루오로-4-메톡시-페닐)-1-메틸-6-옥소-1,6-디히드로-피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴은 미국 특허 번호 US 9,255,097에 기재되어 있다.
본원에 기재된 임의의 실시양태에서, LSD-1 억제제는 경구로 투여될 수 있다. 경구 용량은 전형적으로 1일에 1 내지 4회 또는 그 초과로 약 1.0 mg 내지 약 1000 mg 범위일 수 있다. 일부 실시양태에서, LSD-1 억제제는 약 20 mg, 약 40 mg 또는 약 60 mg 용량으로 투여된다. 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, LSD-1 억제제는 정제 또는 캡슐 형태로 투여될 수 있다. 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, LSD-1 억제제는 1주 1회 투여될 수 있다. 본원에 기재된 임의의 실시양태에서, LSD-1 억제제는 약 60 mg의 용량으로 투여될 수 있다.
IV. 치료 방법
본원에 기재된 바와 같이, 본원의 특정 실시양태는 급성 골수성 백혈병 (AML)을 갖는 인간 대상체에게 (i) 5-아자시티딘을 포함하는 제약 조성물, (ii) 적어도 1종의 추가의 치료제 및 (iii) 리신 특이적 데메틸라제-1 (LSD-1) 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염의 조합을 투여하는 것을 포함하는, AML을 갖는 인간 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.
치료를 필요로 하는 대상체는 AML의 증가된 위험을 갖는 환자 집단의 구성원일 수 있다. 예를 들어, 여러 유전성 유전 장애 및 면역결핍 상태는 AML의 증가된 위험과 연관된다. 이들은 무작위 염색체 파손을 유도하는 DNA 안정성의 결함을 갖는 장애, 예컨대 블룸 증후군, 판코니 빈혈, 리-프라우메니 증후군, 운동실조-모세혈관확장증 및 X-연관 무감마글로불린혈증을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 방법은 특정 유형의 AML을 치료하는데 사용될 수 있다. AML의 예시적인 유형은 재발성 유전자 이상을 동반한 AML, 골수이형성증-관련 변화를 동반한 AML, 요법-관련 골수성 신생물, 골수성 육종, 다운 증후군과 관련된 골수성 증식, 모구성 형질세포양 수지상 세포 신생물 및/또는 급성 전골수구성 백혈병을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
일부 실시양태에서, AML은 하기 돌연변이 중 어느 하나를 갖는 것을 특징으로 한다: Fms-관련 티로신 키나제 3 (FLT3), 키르스텐 래트 육종 바이러스 종양유전자 상동체 (KRAS), 신경모세포종 RAS 바이러스 (V-Ras) 종양유전자 상동체 (NRAS), 원종양유전자 c-Kit (KIT), 단백질 티로신 포스파타제 비-수용체 유형 11 (PTPN11), 뉴로피브로민 1 (NF1), DNA 메틸트랜스퍼라제 3A (DNMT3A), 이소시트레이트 데히드로게나제 1 (IDH1), 이소시트레이트 데히드로게나제 2 (IDH2), 텐-일레븐 전위-2 (TET2), 추가의 섹스 콤-유사 1 (ASXL1), 제스트 인핸서 상동체 2 (EZH2), 혼합-계통 백혈병 1/히스톤-리신 N-메틸트랜스퍼라제 2A (MLL/KMT2A), 뉴클레오포스민 (NPM1), CCAAT 인핸서 결합 단백질 알파 (CEBPA), runt-관련 전사 인자 1 (RUNX1), GATA-결합 인자 2 (GATA2), 종양 단백질 p53 (TP53), 세린 및 아르기닌 풍부 스플라이싱 인자 2 (SRSF2), U2 소형 핵 RNA 보조 인자 1 (U2AF1), 스플라이싱 인자 3b 서브유닛 1 (SF3B1), 아연 핑거 (CCCH 유형), RNA-결합 모티프 및 세린/아르기닌 풍부 2 (ZRSR2), RAD21 코헤신 복합체 성분 (RAD21), 기질 항원 1 (STAG1), 기질 항원 2 (STAG2), 염색체의 구조적 유지 1A (SMC1A), 및 염색체 단백질의 구조적 유지 3 (SMC3).
일부 실시양태에서, AML은 FLT3-ITD 돌연변이를 갖는 것을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, AML은 적어도 1종의 추가의 치료제 단독을 사용한 치료에 대해 내성이다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 적어도 1종의 추가의 치료제 전에 투여된다. 일부 실시양태에서, AML은 FLT3 억제제를 사용한 치료에 대해 반응성이다. 일부 실시양태에서, AML은 MCL-1의 과다발현을 갖는 것을 특징으로 한다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 MCL-1의 발현을 하향조절함으로써 암 세포를 적어도 1종의 추가의 치료제에 의해 매개되는 아폽토시스를 위해 프라이밍한다. 일부 실시양태에서, MCL-1의 발현의 하향조절은 카스파제-의존성 및 비의존성 메카니즘에 의해 매개된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘 및 적어도 1종의 추가의 치료제는 MCL-1 분해를 증대시킨다.
V. 5-아자시티딘, 추가의 치료제 및 LSD-1 억제제의 사용 방법
한 측면에서, 5-아자시티딘을 리신 특이적 데메틸라제-1 (LSD-1) 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 적어도 1종의 추가의 치료제, 예컨대 베네토클락스와 조합하여 포함하는 제약 조성물을 사용하여 AML을 포함한 질환 및 장애를 치료하는 방법이 제공된다. 일부 실시양태에서, 대상체는 집중 유도 화학요법에 적격이 아니다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘 및 적어도 1종의 추가의 치료제는 병용으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘 및 적어도 1종의 추가의 치료제는 순차적으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘 및 적어도 1종의 추가의 치료제는 단일 투여 형태로서 공동-제제화된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘 및 적어도 1종의 추가의 치료제는 병용으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘 및 적어도 1종의 추가의 치료제는 순차적으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 적어도 1종의 치료제 및 LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염은 병용으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 적어도 1종의 치료제 및 LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염은 순차적으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제 및 LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염은 병용으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제 및 LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염은 순차적으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 피하로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 정맥내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 약 75 mg/m2 내지 약 100 mg/m2의 용량으로 피하로 또는 정맥내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 약 75 mg/m2의 용량으로 피하로 또는 정맥내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 28일 주기의 처음 7일 동안 매일 피하로 또는 정맥내로 투여된다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 경구로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 약 50 mg, 약 60 mg, 약 70 mg, 약 80 mg, 약 90 mg, 약 100 mg, 약 150 mg, 약 200 mg, 약 250 mg, 약 300 mg, 약 350 mg, 약 400 mg, 약 450 mg, 약 500 mg, 약 550 mg 또는 600 mg의 용량으로 경구로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 약 200 mg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 약 300 mg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 주기의 처음 7일, 14일 또는 21일 동안 경구로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 1일에 1회 또는 2회 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 캡슐 또는 정제 형태로 투여된다. 일부 실시양태에서, 정제는 비-장용 코팅 정제이다.
일부 실시양태에서, 추가의 치료제는 길테리티닙, 미도스타우린, 퀴자르티닙, 에나시데닙, 이보시데닙 또는 베네토클락스로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 추가의 치료제는 베네토클락스이다.
일부 실시양태에서, 베네토클락스는 경구로 투여된다. 일부 실시양태에서, 베네토클락스는 정제 형태로 투여된다. 일부 실시양태에서, 베네토클락스는 매일 투여된다. 일부 실시양태에서, 베네토클락스는 약 400 mg의 용량으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제 및 LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염은 본원에 개시된 질환을 치료하는 상승작용적 효과를 제공한다. 상승작용은 최고 단일 작용제 (HSA) 모델 및 콤베네피트 패키지 (Di Veroli et al., Bioinformatics. 2016 Sep 15;32(18):2866-8)를 사용하여 측정될 수 있다. 음성 세포주는 EC50의 이동 및/또는 최대 억제 효과의 증대가 있었는지를 결정하기 위한 대조군으로서 사용된다. 다시 말해서, 음성 대조군 세포주로부터의 EC50 및 최대 억제 효과가 기준선 효력 결과를 제공하고, 약물 조합의 EC50의 이동 및 최대 억제 효과를 음성 대조군 세포주로부터의 결과와 비교하여 약물 조합이 상승작용적 효과를 제공하였는지 여부를 결정한다. 구체적으로, 2종의 약물 사이의 상승작용적 상호작용을 결정하는데 하기 단계가 사용된다: (a) 음성 대조군 세포주로부터의 결과와 비교하여 약물의 EC50으로부터 결정된 용량 반응 곡선의 이동 (즉, 효력 이동) 및/또는 최대 억제 효과의 증대의 입증; (b) 2종의 약물 사이의 농도의 매트릭스에 걸친 상승작용, 상가작용 또는 길항작용을 시각화하는 반응 표면 분석; 및 (c) 조합 지수 점수 (소프트웨어 애플리케이션 콤베네피트를 사용하여 유도됨) 분석. (약물 조합이 상승작용적 효과를 나타내도록) 상승작용 지수가 유의하게 되는 한계는 실험적으로 결정되며, 데이터에서의 분산 및 EC50에서의 효력 이동의 확인에 기초한다. 다시 말해서, 용량 반응 곡선에서 명확한 이동이 없는 조합 지수는 상승작용적 상호작용을 구성하지 않을 것이다. 본원에 사용된 바와 같이, 일부 실시양태에서, 상승작용적 효과는 HSA 모델 및 콤베네피트 패키지에 의해 측정시 약 4 초과의 EC50 이동 및/또는 약 20 초과의 상승작용 지수를 갖는 것으로 정의된다.
일부 실시양태에서, AML은 FLT3-ITD 돌연변이를 갖는 것을 특징으로 한다. 일부 실시양태에서, AML은 적어도 1종의 추가의 치료제 단독을 사용한 치료에 대해 내성이다. 일부 실시양태에서, AML은 LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염 단독을 사용한 치료에 대해 내성이다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합은 5-아자시티딘 단독과 비교하여 AML 세포 사멸을 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합은 5-아자시티딘 단독과 비교하여 AML 세포 사멸을, 임상에서 인정되는 임의의 기술에 의해 측정시 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 100%만큼 증가시킨다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘, 베네토클락스, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합은 5-아자시티딘 단독과 비교하여 AML 세포 사멸을 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘, 베네토클락스, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합은 5-아자시티딘 단독과 비교하여 AML 세포 사멸을, 임상에서 인정되는 임의의 기술에 의해 측정시 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 100%만큼 증가시킨다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합은 적어도 1종의 추가의 치료제 단독과 비교하여 AML 세포 사멸을 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합은 적어도 1종의 추가의 치료제 단독과 비교하여 AML 세포 사멸을, 임상에서 인정되는 임의의 기술에 의해 측정시 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 100%만큼 증가시킨다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘, 베네토클락스, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합은 베네토클락스 단독과 비교하여 AML 세포 사멸을 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘, 베네토클락스, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합은 베네토클락스 단독과 비교하여 AML 세포 사멸을, 임상에서 인정되는 임의의 기술에 의해 측정시 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 100%만큼 증가시킨다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합은 LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염과 비교하여 AML 세포 사멸을 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합은 LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염과 비교하여 AML 세포 사멸을, 임상에서 인정되는 임의의 기술에 의해 측정시 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 100%만큼 증가시킨다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘, 베네토클락스, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합은 LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염과 비교하여 AML 세포 사멸을 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘, 베네토클락스, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합은 LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염과 비교하여 AML 세포 사멸을, 임상에서 인정되는 임의의 기술에 의해 측정시 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 100%만큼 증가시킨다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합은 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염 중 어느 2종의 조합과 비교하여 AML 세포 사멸을 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합은 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염 중 어느 2종의 조합과 비교하여 AML 세포 사멸을, 임상에서 인정되는 임의의 기술에 의해 측정시 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 100%만큼 증가시킨다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘, 베네토클락스, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합은 5-아자시티딘, 베네토클락스, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염 중 어느 2종의 조합과 비교하여 AML 세포 사멸을 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘, 베네토클락스, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합은 5-아자시티딘, 베네토클락스, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염 중 어느 2종의 조합과 비교하여 AML 세포 사멸을, 임상에서 인정되는 임의의 기술에 의해 측정시 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 100%만큼 증가시킨다.
일부 실시양태에서, 경구로 투여되는 5-아자시티딘 및 적어도 1종의 추가의 치료제는 정맥내로 또는 피하로 투여되는 5-아자시티딘 및 적어도 1종의 추가의 치료제와 비교하여 AML 세포 사멸을 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 경구로 투여되는 5-아자시티딘 및 적어도 1종의 추가의 치료제는 정맥내로 또는 피하로 투여되는 5-아자시티딘 및 적어도 1종의 추가의 치료제와 비교하여 AML 세포 사멸을, 임상에서 인정되는 임의의 기술에 의해 측정시 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 100%만큼 증가시킨다.
일부 실시양태에서, 경구로 투여되는 5-아자시티딘 및 베네토클락스는 정맥내로 또는 피하로 투여되는 5-아자시티딘 및 베네토클락스와 비교하여 AML 세포 사멸을 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 경구로 투여되는 5-아자시티딘 및 베네토클락스는 정맥내로 또는 피하로 투여되는 5-아자시티딘 및 베네토클락스와 비교하여 AML 세포 사멸을, 임상에서 인정되는 임의의 기술에 의해 측정시 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 100%만큼 증가시킨다.
일부 실시양태에서, 경구로 투여되는 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합은 정맥내로 또는 피하로 투여되는 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합과 비교하여 AML 세포 사멸을 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 경구로 투여되는 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합은 정맥내로 또는 피하로 투여되는 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합과 비교하여 AML 세포 사멸을, 임상에서 인정되는 임의의 기술에 의해 측정시 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 100%만큼 증가시킨다.
일부 실시양태에서, 경구로 투여되는 5-아자시티딘, 베네토클락스, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합은 정맥내로 또는 피하로 투여되는 5-아자시티딘, 베네토클락스, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합과 비교하여 AML 세포 사멸을 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 경구로 투여되는 5-아자시티딘, 베네토클락스, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합은 정맥내로 또는 피하로 투여되는 5-아자시티딘, 베네토클락스, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합과 비교하여 AML 세포 사멸을, 임상에서 인정되는 임의의 기술에 의해 측정시 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 100%만큼 증가시킨다.
일부 실시양태에서, 치료 방법은 1, 2, 3, 4회 및 그 초과를 포함한 1회 이상의 주기 동안 투여된다. 일부 실시양태에서, 1 주기는 약 7일, 약 14일, 약 21일 또는 약 28일의 기간이다. 일부 실시양태에서, 1 주기는 약 28일의 기간이다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 약 28일 주기의 처음 약 7일 동안 1일 1회 피하로 또는 정맥내로 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 약 28일 주기의 제1일-제7일에 1일 1회 피하로 또는 정맥내로 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 약 28일 주기의 연속 7일에 1일 1회 피하로 또는 정맥내로 대상체에게 투여된다.
일부 실시양태에서, LSD-1 억제제는 약 28일 주기에서 약 1주 1회 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, LSD-1 억제제는 약 28일 주기의 약 제1일, 제8일, 제15일 및 제22일에 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, LSD-1 억제제는 약 28일 주기의 약 제7일, 제14일, 제21일 및 제28일에 대상체에게 투여된다.
일부 실시양태에서, 적어도 1종의 추가의 치료제는 약 28일 주기에서 1일 1회 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 적어도 1종의 추가의 치료제는 약 28일 주기에서 약 제1일, 제2일, 제3일, 제4일, 제5일, 제6일, 제7일, 제8일, 제9일, 제10일, 제11일, 제12일, 제13일, 제14일, 제15일, 제16일, 제17일, 제18일, 제19일, 제20일, 제21일, 제22일, 제23일, 제24일, 제25일, 제26일, 제27일 및 제28일에 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 추가의 치료제는 베네토클락스이다.
일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 약 28일 주기의 처음 7일 동안 1일 1회 약 75 mg/m2 내지 약 100 mg/m2, 예컨대 약 75 mg/m2, 약 80 mg/m2, 약 85 mg/m2, 약 90 mg/m2, 약 95 mg/m2 또는 약 100 mg/m2의 용량으로, 바람직하게는 피하로 또는 정맥내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 5-아자시티딘은 약 28일 주기의 연속 7일에 1일 1회 약 75 mg/m2 내지 약 100 mg/m2, 예컨대 약 75 mg/m2, 약 80 mg/m2, 약 85 mg/m2, 약 90 mg/m2, 약 95 mg/m2 또는 약 100 mg/m2의 용량으로, 바람직하게는 피하로 또는 정맥내로 투여된다.
일부 실시양태에서, LSD-1 억제제는 약 28일 주기의 1주 1회 약 20 mg 내지 60 mg, 예컨대 약 20 mg, 약 30 mg, 약 40 mg, 약 50 mg 또는 약 60 mg의 용량으로 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, LSD-1 억제제는 약 28일 주기의 제1일, 제8일, 제15일 및 제22일에 1일 1회 약 20 mg 내지 60 mg, 예컨대 약 20 mg, 약 30 mg, 약 40 mg, 약 50 mg 또는 약 60 mg의 용량으로 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, LSD-1 억제제는 약 28일 주기의 제7일, 제14일, 제21일 및 제28일에 1일 1회 약 20 mg 내지 60 mg, 예컨대 약 20 mg, 약 30 mg, 약 40 mg, 약 50 mg 또는 약 60 mg의 용량으로 대상체에게 투여된다.
일부 실시양태에서, 적어도 1종의 추가의 치료제 (예를 들어, 베네토클락스)는 약 28일 주기에서 1일 1회 적어도 약 100 mg의 용량으로 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 적어도 1종의 추가의 치료제 (예를 들어, 베네토클락스)는 약 28일 주기에서 약 제1일, 제2일, 제3일, 제4일, 제5일, 제6일, 제7일, 제8일, 제9일, 제10일, 제11일, 제12일, 제13일, 제14일, 제15일, 제16일, 제17일, 제18일, 제19일, 제20일, 제21일, 제22일, 제23일, 제24일, 제25일, 제26일, 제27일 및 제28일에 1일 1회 적어도 약 100 mg의 용량으로 대상체에게 투여된다.
일부 실시양태에서, 적어도 1종의 추가의 치료제 (예를 들어, 베네토클락스)는 약 28일 주기에서 1일 1회 약 100 mg 내지 약 400 mg, 예컨대 약 100 mg, 약 150 mg, 약 200 mg, 약 250 mg, 약 300 mg, 약 350 mg 또는 약 400 mg의 용량으로 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 적어도 1종의 추가의 치료제 (예를 들어, 베네토클락스)는 약 28일 주기에서 약 제1일, 제2일, 제3일, 제4일, 제5일, 제6일, 제7일, 제8일, 제9일, 제10일, 제11일, 제12일, 제13일, 제14일, 제15일, 제16일, 제17일, 제18일, 제19일, 제20일, 제21일, 제22일, 제23일, 제24일, 제25일, 제26일, 제27일 및 제28일에 1일 1회 약 100 mg 내지 약 400 mg, 예컨대 약 100 mg, 약 150 mg, 약 200 mg, 약 250 mg, 약 300 mg, 약 350 mg 및 약 400 mg의 용량으로 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 적어도 1종의 추가의 치료제 (예를 들어, 베네토클락스)는 약 28일 주기에서 1일 1회 약 400 mg의 용량으로 대상체에게 투여된다. 일부 실시양태에서, 적어도 1종의 추가의 치료제 (예를 들어, 베네토클락스)는 약 28일 주기에서 약 제1일, 제2일, 제3일, 제4일, 제5일, 제6일, 제7일, 제8일, 제9일, 제10일, 제11일, 제12일, 제13일, 제14일, 제15일, 제16일, 제17일, 제18일, 제19일, 제20일, 제21일, 제22일, 제23일, 제24일, 제25일, 제26일, 제27일 및 제28일에 1일 1회 약 400 mg의 용량으로 대상체에게 투여된다.
일부 실시양태에서, 적어도 1종의 추가의 치료제 (예를 들어, 베네토클락스)는 약 28일 주기의 제1일에 약 100 mg의 용량, 제2일에 약 200 mg의 용량, 제3일에 약 300 mg의 용량 및 약 제4일-제28일에 약 400 mg의 용량으로 대상체에게 투여된다.
일부 실시양태에서, 방법은 5-아자시티딘을 28일 주기의 처음 7일 동안 1일 1회 피하로 또는 정맥내로 대상체에게 투여하는 단계; 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기에서 1일 1회 대상체에게 투여하는 단계; 및 LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염을 28일 주기에서 1주 1회 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 (a) 5-아자시티딘을 28일 주기의 제1일, 제2일, 제3일, 제4일, 제5일, 제6일 및 제7일에 피하로 또는 정맥내로 대상체에게 투여하는 단계; (b) 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기의 제1일, 제3일, 제4일, 제5일, 제6일, 제7일, 제8일, 제9일, 제10일, 제11일, 제12일, 제13일, 제14일, 제15일, 제16일, 제17일, 제18일, 제19일, 제20일, 제21일, 제22일, 제23일, 제24일, 제25일, 제26일, 제27일 및 제28일에 대상체에게 투여하는 단계; 및 (c) LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염을 28일 주기의 제1일, 제8일, 제15일 및 제22일에 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 (a) 5-아자시티딘을 28일 주기의 처음 7일 동안 매일 약 75 mg/m2의 용량으로 피하로 또는 정맥내로 투여하는 단계; 및/또는 (b) 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기의 매일 적어도 약 100 mg의 용량으로 대상체에게 투여하는 단계; 및/또는 (c) LSD-1 억제제를 28일 주기의 1주 1회 약 20 mg, 약 40 mg 또는 약 60 mg의 용량으로 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기의 제1일에 약 100 mg의 용량, 제2일에 약 200 mg의 용량, 제3일에 약 300 mg의 용량 및 제4일-제28일에 약 400 mg의 용량으로 대상체에게 공동으로 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1종의 추가의 치료제를 투여하는 것은 베네토클락스를 투여하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 (a) 5-아자시티딘을 28일 주기의 처음 7일 동안 매일 약 75 mg/m2의 용량으로 피하로 또는 정맥내로 투여하는 단계; 및/또는 (b) 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기의 매일 약 400 mg의 용량으로 경구로 대상체에게 투여하는 단계; 및/또는 (c) LSD-1 억제제를 28일 주기의 1주 1회 약 20 mg, 약 40 mg 또는 약 60 mg의 용량으로 경구로 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1종의 추가의 치료제를 투여하는 것은 베네토클락스를 투여하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 (a) 5-아자시티딘을 28일 주기의 처음 14일 동안 1일 1회 경구로 대상체에게 투여하는 단계; (b) 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기에서 1일 1회 대상체에게 투여하는 단계; 및 (c) LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염을 28일 주기에서 1주 1회 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 (a) 5-아자시티딘을 28일 주기의 제1일, 제2일, 제3일, 제4일, 제5일, 제6일, 제7일, 제8일, 제9일, 제10일, 제11일, 제12일, 제13일 및 제14일에 경구로 대상체에게 투여하는 단계; (b) 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기의 제1일, 제2일, 제3일, 제4일, 제5일, 제6일, 제7일, 제8일, 제9일, 제10일, 제11일, 제12일, 제13일, 제14일, 제15일, 제16일, 제17일, 제18일, 제19일, 제20일, 제21일, 제22일, 제23일, 제24일, 제25일, 제26일, 제27일 및 제28일에 대상체에게 투여하는 단계; 및 (c) LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염을 28일 주기의 제1일, 제8일, 제15일 및 제22일에 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 (a) 5-아자시티딘을 28일 주기의 처음 14일 동안 매일 약 300 mg의 용량으로 투여하는 단계; 및/또는 (b) 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기의 매일 적어도 약 100 mg의 용량으로 대상체에게 투여하는 단계; 및/또는 (c) LSD-1 억제제를 28일 주기의 1주 1회 약 20 mg, 약 40 mg 또는 약 60 mg의 용량으로 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 (a) 5-아자시티딘을 28일 주기의 처음 14일 동안 매일 약 200 mg의 용량으로 투여하는 단계; 및/또는 (b) 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기의 매일 적어도 약 100 mg의 용량으로 대상체에게 투여하는 단계; 및/또는 (c) LSD-1 억제제를 28일 주기의 1주 1회 약 20 mg, 약 40 mg 또는 약 60 mg의 용량으로 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기의 제1일에 약 100 mg의 용량, 제2일에 약 200 mg의 용량, 제3일에 약 300 mg의 용량 및 제4일-제28일에 약 400 mg의 용량으로 대상체에게 공동으로 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1종의 추가의 치료제를 투여하는 것은 베네토클락스를 투여하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 (a) 5-아자시티딘을 28일 주기의 처음 14일 동안 매일 약 300 mg의 용량으로 경구로 투여하는 단계; 및/또는 (b) 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기의 매일 약 400 mg의 용량으로 경구로 대상체에게 투여하는 단계; 및/또는 (c) LSD-1 억제제를 28일 주기의 1주 1회 약 20 mg, 약 40 mg 또는 약 60 mg의 용량으로 경구로 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1종의 추가의 치료제를 투여하는 것은 베네토클락스를 투여하는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 (a) 5-아자시티딘을 28일 주기의 처음 14일 동안 매일 약 200 mg의 용량으로 경구로 투여하는 단계; 및/또는 (b) 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기의 매일 약 400 mg의 용량으로 경구로 대상체에게 투여하는 단계; 및/또는 (c) LSD-1 억제제를 28일 주기의 1주 1회 약 20 mg, 약 40 mg 또는 약 60 mg의 용량으로 경구로 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 1종의 추가의 치료제를 투여하는 것은 베네토클락스를 투여하는 것을 포함한다.
또한, 또 다른 측면에서, 집중 유도 화학요법에 적격이 아닌 급성 골수성 백혈병 (AML)을 갖는 대상체에게 (i) 제1 연속 28일 주기에서: (a) 5-아자시티딘을 제1일 내지 제7일에 매일 약 75 mg/m2의 용량으로 피하로 또는 정맥내로; (b) 베네토클락스를 제1일에 약 100 mg; 제2일에 약 200 mg 및 제3일 내지 제28일에 매일 약 400 mg의 용량으로 경구로; 및 (c) 하기 화합물의 베실레이트 염을 포함하는 제약 조성물을
Figure pct00006
제1일, 제8일, 제15일 및 제22일에 투여하는 단계; 및 (ii) 후속 28일 주기에서: (d) 5-아자시티딘을 각각의 후속 주기의 제1일 내지 제7일에 매일 약 75 mg/m2의 용량으로 피하로 또는 정맥내로; (e) 베네토클락스를 각각의 후속 주기의 제1일 내지 제28일에 약 400 mg의 용량으로 경구로; 및 (f) 하기 화합물의 베실레이트 염을 포함하는 제약 조성물을
Figure pct00007
각각의 후속 주기의 제1일, 제8일, 제15일 및 제22일에 투여하는 단계
를 포함하는, 집중 유도 화학요법에 적격이 아닌 AML을 갖는 인간 대상체를 치료하는 방법이 제공된다.
일부 실시양태에서, 제약 조성물은 제1 연속 28일 주기 및 후속 28일 주기에서 약 20 mg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 제1 연속 28일 주기 및 후속 28일 주기에서 약 40 mg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 제약 조성물은 제1 연속 28일 주기 및 후속 28일 주기에서 약 60 mg의 용량으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 제약 조성물은 제1 연속 28일 주기 및 후속 28일 주기에서 약 20 mg의 용량으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 20 mg의 용량이 허용되는 경우에는, 제2 용량 코호트가 개방될 것이며, 여기서 제약 조성물은 제1 연속 28일 주기 및 후속 28일 주기에서 약 40 mg의 용량으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 40 mg의 용량이 허용되는 경우에는, 제3 용량 코호트가 개방될 것이며, 여기서 제약 조성물은 제1 연속 28일 주기 및 후속 28일 주기에서 약 40 mg의 용량으로 투여된다.
참조로 포함됨: 본 명세서 전반에 걸쳐 언급된 모든 개시내용 (예를 들어, 특허, 간행물 및 웹 페이지)은 그 전문이 참조로 포함된다. 추가로, 하기 개시내용은 또한 그 전문이 본원에 참조로 포함된다: (1) [2008 ASCO poster abstract by Skikne et al., Leukemia, 2008, 22, 1680-84].
VI. 정의
달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 과학 용어는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 본원에 언급된 모든 간행물 및 특허는 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
명세서 및 첨부된 청구범위에 사용된 바와 같이, 단수형은 문맥상 달리 명확하게 지시되지 않는 한 단수뿐만 아니라 복수 지시대상을 포함한다.
용어 "약" 또는 "대략"은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 결정시 특정한 값에 대한 허용되는 오차를 의미하며, 이는 부분적으로 값이 어떻게 측정 또는 결정되는지에 좌우된다. 특정 실시양태에서, 용어 "약" 또는 "대략"은 1, 2, 3 또는 4 표준 편차 이내를 의미한다. 특정 실시양태에서, 용어 "약" 또는 "대략"은 주어진 값 또는 범위의 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 1%, 0.5%, 0.1% 또는 0.05% 이내를 의미한다.
달리 명시되지 않는 한, 본원에 사용된 용어 "치료하다", "치료하는" 및 "치료"는 질환 또는 장애 또는 질환 또는 장애와 연관된 1종 이상의 증상의 근절 또는 호전을 지칭한다. 특정 실시양태에서, 상기 용어는 이러한 질환 또는 장애를 갖는 대상체에게 1종 이상의 예방제 또는 치료제를 투여함으로써 질환 또는 장애의 확산 또는 악화를 최소화하는 것을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 상기 용어는 특정한 질환의 증상의 발병 후, 1종 이상의 추가의 활성제(들)의 존재 또는 부재 하의 본원에 제공된 화합물 또는 투여 형태의 투여를 지칭한다.
달리 명시되지 않는 한, 본원에 사용된 용어 "예방하다", "예방하는" 및 "예방"은 질환 또는 장애 또는 그의 1종 이상의 증상의 발병, 재발 또는 확산의 예방을 지칭한다. 특정 실시양태에서, 상기 용어는 특히 본원에 제공된 질환 또는 장애의 위험이 있는 대상체에 대한, 증상의 발병 전, 1종 이상의 다른 추가의 활성제(들)의 존재 또는 부재 하의 본원에 제공된 화합물 또는 투여 형태를 사용한 치료 또는 그의 투여를 지칭한다. 상기 용어는 특정한 질환의 증상의 억제 또는 감소를 포괄한다. 특히 질환의 가족력을 갖는 대상체는 특정 실시양태에서 예방 요법에 대한 후보이다. 추가로, 증상의 재발 이력이 있는 대상체는 또한 예방을 위한 잠재적 후보이다. 이와 관련하여, 용어 "예방"은 용어 "예방적 치료"와 상호교환가능하게 사용될 수 있다.
달리 명시되지 않는 한, 본원에 사용된 용어 화합물의 "치료 유효량" 및 "유효량"은 질환 또는 장애의 치료 또는 관리에서 치료 이익을 제공하거나 또는 질환 또는 장애와 연관된 1종 이상의 증상을 지연 또는 최소화하기에 충분한 양을 의미한다. 화합물의 "치료 유효량" 및 "유효량"은 질환 또는 장애의 치료 또는 관리에서 치료 이익을 제공하는, 단독의 또는 1종 이상의 다른 작용제(들)와 조합된 치료제의 양을 의미한다. 용어 "치료 유효량" 및 "유효량"은 전체 요법을 개선시키거나, 질환 또는 장애의 증상 또는 원인을 감소 또는 피하거나, 또는 또 다른 치료제의 치료 효능을 증진시키는 양을 포괄할 수 있다.
달리 명시되지 않는 한, 본원에 사용된 화합물의 "예방 유효량"은 질환 또는 장애를 예방하거나 그의 재발을 예방하기에 충분한 양이다. 화합물의 예방 유효량은 질환의 예방에서 예방 이익을 제공하는, 단독의 또는 1종 이상의 다른 작용제(들)와 조합된 치료제의 양을 의미한다. 용어 "예방 유효량"은 전체 예방을 개선시키거나 또 다른 예방제의 예방 효능을 증진시키는 양을 포괄할 수 있다.
본원에 사용된 "종양"은 악성이든 또는 양성이든, 모든 신생물성 세포 성장 및 증식, 및 모든 전암성 및 암성 세포 및 조직을 지칭한다. 본원에 사용된 "신생물성"은 비정상적 조직 성장을 유발하는, 악성이든 또는 양성이든, 조절이상 또는 비조절된 세포 성장의 임의의 형태를 지칭한다. 따라서, "신생물성 세포"는 조절이상 또는 비조절된 세포 성장을 갖는 악성 및 양성 세포를 포함한다.
본원에 사용된 용어 "조성물", "제제" 및 "투여 형태"는 명시된 성분(들) (명시된 양으로, 나타낸 경우)을 포함하는 조성물, 뿐만 아니라 명시된 성분(들)의 명시된 양(들)으로의 조합으로부터 직접적으로 또는 간접적으로 생성되는 임의의 생성물(들)을 포괄하는 것으로 의도된다. "제약" 또는 "제약상 허용되는"은 조성물, 제제 또는 투여 형태 중 임의의 희석제(들), 부형제(들) 또는 담체(들)가 다른 성분(들)과 상용성이고 그의 수용자에게 유해하지 않다는 것을 의미한다. 달리 나타내지 않는 한, 용어 "조성물", "제제" 및 "투여 형태"는 본원에서 상호교환가능하게 사용된다.
본원에 사용된 용어 "비-장용-코팅"은 위를 지나 (예를 들어, 장에서) 활성 성분(들)을 방출하도록 의도된 코팅을 포함하지 않는 제약 조성물, 제제 또는 투여 형태를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 비-장용-코팅 조성물, 제제 또는 투여 형태는 위에서 실질적으로 활성 성분(들)을 방출하도록 설계된다.
본원에 정의된 용어 "대상체"는 인간이다.
실시예
실시예 1
물질 및 방법:
세포, 배양 조건 및 시약
AML 세포주를 아메리칸 티슈 컬쳐 콜렉션(American Tissue Culture Collection) (ATCC)으로부터 구입하거나 또는 셀진(Celgene) 마스터 세포주 은행으로부터 입수하였다. 5% CO2가 있는 가습 분위기 하에 37℃에서 10% 또는 20% 태아 소 혈청 및 10 mM L-글루타민으로 보충된 RPMI 1640 배지에서 세포를 배양하였다. 키인노(Kyinno) (중국 베이징)에 의해 BaF3-FLT3wt, BaF3-FLT3ITD, BaF3-FLT3D538Y를 생성하였다. 0.5 ug/ml 퓨로마이신과 10% FBS를 함유하는 RPMI에서 세포를 성장시켰다. 기하급수적으로 성장하는 세포를 모든 시험관내 연구에 사용하였다. 5-아자시티딘 (DMSO 중 10 mM)을 셀진 화합물 수집 은행으로부터 입수하였다. 길테리티닙 (ASP2215), 미도스타우린 (PKC412), 베네토클락스 (ABT-199), 퀴자르티닙 (AC220), 범 카스파제 억제제 Z-VAD-FMK를 셀렉켐(Selleckchem) (텍사스주 휴스턴)으로부터 구입하고, DMSO 중 10 mM 스톡으로서 재구성하였다.
세포 생존율 검정
384-웰 플레이트 (코닝(Corning) Cat#3764)에 2000개 세포/웰로 50 μl 배지 중에 세포를 플레이팅하였다. 셀 타이터-글로 (프로메가(Promega), 위스콘신주 매디슨)를 제조업체의 지침에 따라 사용하여 % DMSO 대조군 웰로서 계산되는 상대 세포 수를 측정하였다. 엔비전 플레이트 판독기 (퍼킨엘머(PerkinElmer))를 사용하여 나타낸 시간에 발광 값을 정량화하였다. 세포를 5-아자시티딘으로 3일 동안 매일 및/또는 미도스타우린, 길테리티닙 또는 베네토클락스로 1회 처리하였다. 5-아자시티딘에 대한 감수성에 따라 적정된 5-아자시티딘의 9종의 용량을, 평가되는 제2 약물의 6종의 용량과 조합하여, 54종의 가능한 조합을 생성하고, 이들 각각을 모든 실험에 대해 이중으로 평가하였다. 프리즘 버전 7.03 (프리즘 소프트웨어 코포레이션(Prism Software Corporation))을 사용하여 EC50 값을 계산하였다.
조합 효과의 데이터 분석
세포 생존을 약물 농도의 함수로서 플롯팅하고, 이를 사용하여 그래프패드 프리즘 소프트웨어 (캘리포니아주 샌디에고)를 사용하여 EC50 값을 계산하였다. 상승작용 지수를 최고 단일 작용제 모델 및 콤베네피트 소프트웨어에 의해 계산하였다 (콤베네피트: 약물 조합의 분석 및 시각화를 위한 상호작용 플랫폼 (Di Veroli et al., Bioinformatics. 2016 Sep 15;32(18):2866-8)).
웨스턴 블롯
단백질을 나타낸 용량/시간에서 5-아자시티딘 및/또는 억제제로 처리한 후, 1mM PMSF를 함유하는 용해 완충제 (셀 시그널링(Cell Signaling), #9803, 셀 시그널링 테크놀로지스, 매사추세츠주 댄버스)를 사용하여 수거하였다. 비신코닌산 (BCA) 키트 (피어스(Pierce)/써모 피셔(Thermo Fisher), 매사추세츠주 월섬)를 사용하여 용해물을 정량화하였다. 20 내지 30 μg 단백질을 4-12% SDS-PAGE 겔 상에서 분해하고, PVDF 막 (습식-전달에 의해 80V/90분)으로 옮기고, 1시간 동안 오디세이 TBS 차단 완충제로 차단한 다음, 제조업체에 의해 권장된 바와 같은 희석을 사용하여 4℃에서 밤새 적절한 1차 항체로 프로빙하였다. 막을 총 30분 동안 3회 세척한 다음, 암실 내 실온에서 1시간 동안 2차 항체와 함께 인큐베이션하였다. 또 다른 3회 세척 후, 오디세이 적외선 영상화 시스템 및 컴패니언 소프트웨어 (리-코르 바이오사이언시스(LI-COR biosciences), 미국 네브래스카주 링컨)를 제조업체의 지침에 따라 사용하여 이뮤노블롯 막을 스캐닝하고 밴드 강도를 정량화하였다. 처리된 샘플에서의 로딩 대조군에 대한 관심 단백질의 비를 비처리된 세포에서의 상응하는 비에 대해 정규화하였다. 이뮤노블롯팅에 사용된 항체는 하기 공급원으로부터 구입하였다: 산타 크루즈 바이오테크놀로지(Santa Cruz Biotechnology) (미국 텍사스주 달라스)로부터의 BCL-2 (sc-7382), MCL1-(sc-819), 셀 시그널링 테크놀로지(Cell Signaling Technology)로부터의 Bim (2819), 카스파제-3 (9664); 시그마-알드리치(Sigma-Aldrich)로부터의 베타-액틴 (A2228); 압캠(AbCam)으로부터의 DNMTI (abl88453); 리-코르 바이오사이언시스 (네브래스카주 링컨)로부터 구입한 IRDye 680 염소 항-토끼 및 IRDye 800 염소 항-마우스 2차 항체 (#925-68073 및 #925-32212).
유동 세포측정법
PE 마우스 항-인간 CD14 모노클로날 항체 (클론 M5E2, 카탈로그 번호#301850, 바이오레전드(BioLegend), 캘리포니아주 샌디에고), BV421-접합된 마우스 항-인간 CD11b 모노클로날 항체 (클론 M1/70, 카탈로그 번호#101235, 바이오레전드), FITC-접합된 마우스 항-인간 CD86 모노클로날 항체 (클론 2331, 카탈로그 번호#560958, BD 파밍겐(BD Pharmingen), 캘리포니아주 샌디에고)를 1:200 희석으로 FACS 염색에 사용하였다. BD FACS칸토 II를 사용하여 FACS 샘플을 획득하였다. 또한 고정성 생존력 염료 780 (써모피셔 사이언티픽(Thermofisher Scientific), 매사추세츠주 월섬)을 제조업체의 지침에 따라 사용하여 FACS 분석에 의해 세포 생존율을 조사하였다. 간략하게, 105개 세포를 U 바닥 96 웰 플레이트에 시딩하고, 다음 날 9회 용량의 CC-90011 (10uM으로부터 출발, 3배 희석)로 처리하고, 세포를 37℃에서 6일 동안 인큐베이션하고, 염색을 위해 수거하였다. 세포를 DPBS로 1회 세척하고, 1X FVS780으로 염색하고, 염색 완충제로 2회 세척하였다. 샘플을 1:200 희석 표면 항체로 염색하였다. 이어서, 결과를 플로우조 V10 소프트웨어 (트리스타 인크.(TreeStar Inc.), 오레곤주 앳슈랜드)로 분석하였다. 모든 양성 표면 마커에 대한 생존 백분율을 사용하여 EC50 값을 계산하고, 곡선 대조군에 대한 100%로서 DMSO-처리된 샘플에 대해 정규화였다.
RNASeq 분석
MV4-11 세포를 PBS 또는 1 μM의 5-아자시티딘으로 24시간 동안 또는 1 μM의 5-아자시티딘으로 48시간 동안 매일 삼중으로 처리하였다. 처리 후, 세포를 회수하고, PBS 중에서 1회 세척하고, 세포 펠릿으로서 급속 동결시켰다. 세포 펠릿을 RNA 추출 및 라이브러리 제조 및 서열분석을 위해 카노피 바이오사이언시스(Canopy Biosciences)로 보냈다. 퀴아젠(Qiagen) RNeasy 미니 키트를 제조업체의 지침에 따라 사용하여 RNA를 추출하였다. 변형된 프로토콜을 사용하여 miRNA 종을 보존하였다. 200 ng의 총 RNA 및 NEBNext 울트라 II 방향성 라이브러리 프렙 키트를 사용하여 총 RNA Seq 라이브러리를 제조하였다. RNase-H 기반 방법 (뉴 잉글랜드 바이오랩스(New England Biolabs), 매사추세츠주 입스위치)을 사용하여 rRNA 고갈을 수행하였다. 다른 세포주에서의 MCL1 RNA 수준을 RNASeq에 의해 표준 방법을 사용하여 정량화하였다.
라이브러리를 멀티플렉스화하고, 일루미나(Illumina) HiSeq를 사용하여 서열분석하였다. 이어서, 모든 유전자 카운트를 R/바이오컨덕터 패키지 EdgeR 내로 불러오고, TMM 정규화 크기 인자를 계산하여 라이브러리 크기의 차이에 대해 샘플을 조정하였다. 리보솜 유전자 및 백만당 1 카운트 초과의 최소 군 크기 마이너스 1 샘플에서 발현되지 않은 유전자는 추가의 분석에서 제외하였다. 이어서, 차등 발현 분석을 수행하여 조건 사이의 차이에 대해 분석하고, 벤자미니-호크베르크 오류-발견율 조정된 p-값이 0.05 이하인 유전자에 대해 결과를 필터링하였다. 공지된 유전자 온톨로지 (GO) 용어 및 KEGG 경로에서의 전반적 교란을 R/바이오컨덕터 패키지 GAGE를 사용하여 검출하여, 각각의 용어에서 림마에 의해 보고된 보고 log 2 배수-변화 대 각각의 용어 밖에서 발견된 모든 유전자의 배경 log 2 배수-변화의 발현 변화에 대해 시험하였다. R/바이오컨덕터 패키지 히트맵 및 패스뷰를 사용하여, 벤자미니-호크베르크 오류-발견율 조정된 p-값이 0.05 이하인 각각의 GO 용어 또는 KEGG 경로 (각각)에 대한 샘플 군에 걸친 히트맵 또는 주석달린 KEGG 그래프를 디스플레이하였다. 차등 발현된 유전자를 찾아내기 위해, 미가공 카운트를 R/바이오컨덕터 패키지 DESeq2로 분산 안정화시켰다.
ATF3 및 SCD 발현을 검증하기 위해, MV4-11 세포를 PBS 또는 0.3 μM 5-아자시티딘, 1 μM 5-아자시티딘 또는 3 μM 5-아자시티딘으로 24시간 및 48시간 동안 처리하였다. 이 시점에, 세포를 회수하고, 퀴아젠 RNeasy 키트를 제조업체의 지침에 따라 사용하여 RNA를 추출하였다. 슈퍼스크립트 VILO cDNA 합성 키트를 사용하여 역전사를 수행하였다. 검증된 택맨 프로브 및 택맨 패스트 어드밴스드 마스터 믹스를 Viia 7 실시간 PCR 시스템 (인비트로젠/써모피셔 사이언티픽, 매사추세츠주 월섬)과 함께 사용하여 ATF3, SCD 및 18S mRNA의 전사체를 정량화하였다.
간섭 RNA 유전자 침묵
리포펙타민 2000을 제조업체의 제안된 프로토콜에 따라 사용하여 ATF3, SCD 또는 대조군 사일렌서 셀렉트 siRNA (16nM siRNA, 인비트로젠)를 MV4-11 세포 내로 형질감염시켰다. 비처리 세포를 siRNA 없이 모의 형질감염시켰다. 이어서, 세포를 다양한 농도의 5-아자시티딘으로 3일 동안 매일 처리하였다. 제4일에 세포를 베네토클락스로 처리하고, 이어서 제7일에 셀 타이터 글로를 제조업체의 프로토콜에 따라 사용하여 세포 생존율을 조사하였다. 상승작용을 콤베네피트를 사용하여 계산하고 최고 단일 작용제 분석을 사용하여 비교하였다.
형질감염 (5-아자시티딘 또는 베네토클락스 처리 없이) 72시간 후에 siRNA 형질감염된 세포에 대해 유전자 녹다운의 확인을 수행하였다. 퀴아젠 RNeasy 키트를 사용하여 RNA를 추출하고, 슈퍼스크립트 VILO cDNA 합성 키트를 사용하여 역전사를 수행하였다. 검증된 택맨 프로브 및 택맨 패스트 어드밴스드 마스터 믹스를 Viia 7 실시간 PCR 시스템 (인비트로젠/써모피셔 사이언티픽, 매사추세츠주 월섬)과 함께 사용하여 ATF3, SCD 및 18S mRNA의 전사체를 정량화하였다.
5-아자시티딘 및 적어도 1종의 추가의 치료제 이중 조합 검정
실시예 전반에 걸쳐 사용된 바와 같이, LEED는 15일 동안 1일 1회 (QDx15) 1 mg/kg으로 연장된 지속기간 동안 낮은 노출 (LEED)로의 5-아자시티딘의 전달을 지칭한다. 5-아자시티딘의 동일한 누적 용량을 전달하기 위해, 5-아자시티딘을 5일 동안 1일 1회 (QDx5) 3 mg/kg으로 제한된 지속기간 동안 높은 노출 (HELD)로 투여하였다. LEED는 AZA의 경구 투여를 모델링하며, 반면 HELD는 AZA의 정맥내 또는 피하 투여를 모델링한다.
실험은 찰스 리버 래보러토리즈(Charles River Laboratories) (노스캐롤라이나주 모리스빌)에서 연구 제1일에 17.6 내지 28.4 그램 범위의 체중 (BW)을 갖는 8주령의 암컷 NOD/SCID 마우스 (NOD.CB17-Prkdcscid/NcrCrl, 찰스 리버)로 수행하였다. 동물에게 물 (역삼투, 1 ppm Cl), 및 18.0% 조 단백질, 5.0% 조 지방 및 5.0% 조 섬유로 이루어진 NIH 31 변형 및 방사선조사된 랩 다이어트(Lab Diet)®를 자유롭게 공급하였다. 20-22℃ (68-72℉) 및 40-60% 습도에서 12-시간 광 주기 하에 정적 마이크로아이솔레이터 내 방사선조사된 엔리치-오'콥스(Enrich-o'cobs)™ 래보러토리 애니멀 베딩 상에 마우스를 수용하였다.
셀진은 LEED 5-아자시티딘, HELD 5-아자시티딘, 미도스타우린 (메드켐익스프레스(MedChemExpress), 뉴저지주 몬마우스 정션), 길테리티닙 (시그마 알드리치, 미주리주 세인트 루이스) 및 베네토클락스 (ABT-199, 시그마 알드리치, 미주리주 세인트 루이스)를 제공하였다. 본 연구에 사용된 비히클은 PO (경구로) 투여되는 탈이온수 (DI) 중 6% 겔루시르(Gelucire)® 44/14 (가테포세(Gattefosse), 뉴저지주 파라무스) (이는 용융을 위해 44℃로의 수조 가열이 요구되는 왁스상 고체임) 및 IP (복강내) 투여되는 포스페이트 완충 염수 (PBS)였다. 각각의 투여일에, 적절한 양의 LEED 또는 HELD 5-아자시티딘을 PBS 중에 재현탁시켜 각각 0.1 또는 0.3 mg/mL의 투여 현탁액을 생성하였다. 각각의 투여일에, 적절한 양의 미도스타우린을 6% 겔루시르 44/14 중에 용해시켜 10 mg/mL의 투여 용액을 생성하였다. 각각의 투여일에, 적절한 양의 길테리티닙을 DI수 중 0.5% 메틸셀룰로스 중에 용해시켜 0.4 mg/mL의 투여 용액을 생성하였다. 매주, 적절한 양의 베네토클락스를 10% 에탄올:30% PEG400:60% 포살 50 프로필렌 글리콜 중에 용해시켜 10 mg/mL의 투여 용액을 생성하였다. 접종에 사용된 세포를 대수기 성장 동안 수거하고, PBS 중에 5 x 107개 세포/mL의 농도로 재현탁시켰다. 각각의 시험 마우스에게 꼬리 정맥 주사에 의해 5 x 106개 MOLM-13 세포 또는 107개 MV4-11 세포 (0.2 mL 세포 현탁액)를 투여하였다. 종양 세포 접종 3일 후에 투여를 개시하였으며, 이를 연구 제1일로 지정하였다. NOD/SCID 마우스 (n = 9-12/군)를 체중에 따라 무작위화하고, 투여하였다. 포스페이트 완충 염수, LEED 5-아자시티딘 및 HELD 5-아자시티딘을 복강내로 (IP) 투여한 반면 미도스타우린, 길테리티닙 및 베네토클락스를 PO 투여하였다. 비히클을 IP 및 PO 둘 다로 투여하였다. 모든 처리에 대한 투여 부피는 각각의 개별 동물의 체중에 대해 스케일링하여 10 mL/kg이었다.
동물을 백혈병의 진행으로 인한 빈사상태의 종점에 대해 개별적으로 모니터링하였다. 종양 진행으로 인한 전체 뒷다리 마비, 중증 안구 돌출 또는 빈사상태는 안락사하기에 충분한 것으로 간주하였다. 빈사상태 동물은 음식물 및 물에 도달할 수 없는 병든 동물로 정의하였다. 이들 사망을 생존 연구에서의 사망으로서 분류하였다. 질환으로 사망하거나 광범위한 종양 진행으로 인해 안락사된 각각의 마우스에 대해 종점까지의 시간 (TTE) (일)을 기록하였다. 종점에 도달하지 않은 동물은 연구 종료시에 안락사시키고, 마지막 날과 동일한 TTE 값을 배정하였다. 치료-관련 (TR) 원인으로 사망한 것으로 분류된 동물은 사망일과 동일한 TTE 값을 배정하였다. 비-치료-관련 (NTR) 원인으로 사망한 것으로 분류되거나 또는 종점 전 샘플링에 사용된 동물은 TTE 계산 및 모든 추가의 분석으로부터 배제하였다. 중앙 TTE 값을 각각의 군에 대해 계산하였다. 처리된 마우스의 중앙 TTE를 대조군 마우스의 중앙 TTE의 백분율 (%T/C)로서 표현하고, 수명 증가 (ILS)를 다음과 같이 계산하였다: ILS = %T/C - 100%, 여기서 T = 처리군 중앙 TTE 및 C = 대조군 중앙 TTE. 따라서, T = C이면, ILS = 0%이다.
동물을 제1일-제5일에 매일 칭량한 다음, 연구의 완료까지 1주에 2회 칭량하였다. 마우스를 임의의 유해한 치료-관련 (TR) 부작용의 명백한 징후에 대해 빈번하게 관찰하고, 관찰시 임상 징후를 기록하였다. 개별 체중 감소를 프로토콜에 따라 모니터링하고, 허용되는 체중 감소에 대한 한계를 초과한 임의의 동물을 안락사시켰다. 군 평균 체중 감소를 또한 프로토콜에 따라 모니터링하였다. 허용되는 평균 체중 감소에 대한 한계를 초과한 임의의 군에서 투여를 유보하였다. 평균 체중이 회복되면, 그 군에서 보다 낮은 투여량 또는 보다 덜 빈번한 투여 스케줄로 투여를 재개할 수 있다. 최대 허용 용량에 대한 허용되는 독성은 연구 동안 20% 미만의 군 평균 체중 감소 및 10마리의 처리된 동물 중 1마리 이하의 TR 사망으로 정의하였다. 사망은 임상 징후 및/또는 부검에 의해 입증된 바와 같이 치료 부작용에 기인하는 경우에 TR로 분류하거나 또는 투여 기간 동안 또는 마지막 용량의 14일 내에 미지의 원인으로 인한 경우에 TR로 또한 분류할 수 있다. 사망이 치료 부작용 또는 종양 진행과 관련되었다는 증거가 없으면 사망을 NTR로 분류하였다. 비-치료-관련 사망은 사망의 원인에 기초하여 추가로 특징화할 수 있다. 사망은 사고 또는 인간 오류로 인한 경우에 NTRa로 분류할 수 있다. 사망은 사망의 원인이 미지이고 치료 부작용, 전이, 사고 또는 인간 오류와 관련된 이용가능한 사망 증거가 없는 경우에 (이들 병인으로 인한 사망을 배제할 수는 없음) NTRu로 분류할 수 있다. TTE 값에 기초하여 카플란-마이어 방법에 의해 생존을 분석하였다. 로그순위 (만텔-콕스) 및 게한-브레슬로우-윌콕슨 검정으로 TTE 값에 기초하여 2개의 군의 전체 생존 경험 (생존 곡선) 사이의 차이의 유의성을 결정하였다.
5-아자시티딘과 베네토클락스의 조합 결과
도 1-7은 실험에 관한 다양한 정보 및 데이터를 제공한다. 예를 들어, 도 1은 세포주 MV4-11 및 MOLM-13 둘 다에서 길테리티닙과 조합된 5-아자시티딘 및 미도스타우린과 조합된 5-아자시티딘의 최대 EC50 배수 이동을 나타내는 막대 그래프이다. 3가지 상이한 투여 스케줄로부터의 결과가 제시된다: (i) 5-아자시티딘이 첫번째로 투여됨 (흑색 막대); (ii) 2종의 작용제가 공동으로 투여됨 (밝은 회색 막대); 및 (iii) 5-아자시티딘이 두번째로 투여됨 (중간 회색 막대). 도 2는 3가지 상이한 투여 스케줄: (i) FLT3 억제제 (FLT3i) 전에 간격을 두고 5-아자시티딘 (AZA)이 첫번째로 투여됨; (ii) 2종의 작용제 (5-아자시티딘 및 FLT3i)가 공동으로 투여됨; 및 (iii) FLT3i가 투여된 후에 간격을 두고 5-아자시티딘이 두번째로 투여됨을 나타내며, 여기서 FLT3i는 임의의 적합한 FLT3 억제제, 예컨대 미도스타우린 또는 길테리티닙일 수 있다. 도 3a-d는 세포주 MV4-11 (도 3a) 및 MOLM-13 (도 3c)에서 베네토클락스와 조합된 5-아자시티딘의 최대 EC50 배수 이동을 나타낸다. 3가지 상이한 투여 스케줄이 제시된다: (i) 5-아자시티딘이 첫번째로 투여됨 (흑색 막대); (ii) 2종의 작용제가 공동으로 투여됨 (밝은 회색 막대); 및 (iii) 5-아자시티딘이 두번째로 투여됨 (중간 회색 막대). 3가지 상이한 투여 스케줄에 대해 세포주 MV4-11 (도 3b) 및 MOLM-13 (도 3d)에서 베네토클락스와 조합되어 투여된 5-아자시티딘에 대한 상승작용 지수가 또한 제시된다.
도 4a-c는 MV4-11 세포에서 5-아자시티딘이 첫번째로 투여된 경우 베네토클락스와 5-아자시티딘의 상승작용을 보여주고 (도 4a), 동시 투여의 경우 상대적으로 더 낮은 상승작용을 보여주고 (도 4b), 베네토클락스가 첫번째로 투여된 경우 상승작용을 보여주는 (도 4c) 반응 표면 분석을 나타낸다. 반응 표면 방법론 (RSM)은 여러 설명 변수와 하나 이상의 반응 변수 사이의 통계적 관계를 탐색한다. RSM은 본 경우에 베네토클락스와 5-아자시티딘의 상승작용적 효과인 최적 반응을 얻기 위해 설계된 실험 순서를 사용한다.
도 5는 (a) 5-아자시티딘 및 미도스타우린 ("aza+0.3 μM Mido") 및 (b) 5-아자시티딘 및 길테리티닙 ("aza+0.3 μM Gilt")이 MV4-11 세포주에서 MCL-1 분해를 증대시킨다는 것을 보여주는 웨스턴 블롯을 도시한다.
추가로, 도 6은 5-아자시티딘 및 베네토클락스 처리가 FLT3ITD MV4-11 세포에서 MCL-1 수준을 감소시킨다는 것을 보여주는 웨스턴 블롯을 도시한다.
마지막으로, 도 7a-c는 MOLM-13 이종이식 모델에서의 5-아자시티딘 조합의 생체내 평가를 퍼센트 생존 (y-축) 대 제0일 내지 제70일 (x-축)의 그래프로 도시한다. 도 7a-c에 제시된 실험을 위한 투여는 다음과 같았다: (i) 5-아자시티딘 (낮은 노출, 연장된 지속기간, LEED): 1 mg/kg 복강내 (IP), 5일 동안 1일 1회, 3회 (qdx5x3); (ii) 5-아자시티딘 (높은 노출, 제한된 지속기간, HELD): 3 mg/kg 복강내 (IP), 5일 동안 1일 1회 (qdx5); (iii) 미도스타우린 (100 mg/kg 경구 (PO), 21일 동안 1일 1회 (qdx21)); (iv) 길테리티닙 (4 mg/kg 경구 (PO), 21일 동안 1일 1회 (qdx21)); 및 (v) 베네토클락스 (100 mg/kg 경구 (PO), 21일 동안 1일 1회 (qdx21)). P-값 (최상의 단일 작용제 대비) *P < 0.05; **P<0.001; ***P<0.0001. 도 7a는 5-아자시티딘과 미도스타우린의 조합의 결과를 보여주고, 도 7b는 베네토클락스와 조합된 5-아자시티딘의 결과를 보여주고, 도 7c는 5-아자시티딘과 길테리티닙의 조합의 결과를 보여준다. 도 7a의 경우, 시험된 조성물은 비히클, 5-아자시티딘 (낮은 노출, 연장된 지속기간, LEED, 1 mg/kg 5-아자시티딘, 15일 동안 1일 1회 (qdx15) 스케줄), 5-아자시티딘 (높은 노출, 제한된 지속기간, HELD, 3 mg/kg 5-아자시티딘, 5일 동안 1일 1회 (qdx5) 스케줄), 미도스타우린 (100 /kg, 28일 동안 1일 1회 (qdx28)), LEED + 미도스타우린 및 HELD + 미도스타우린이었다. 도 7b의 경우, 시험된 조성물은 비히클, 5-아자시티딘 (LEED), 5-아자시티딘 (HELD), 베네토클락스, LEED + 베네토클락스 및 HELD + 베네토클락스였다. 도 7c의 경우, 시험된 조성물은 비히클, 5-아자시티딘 (LEED), 5-아자시티딘 (HELD), 길테리티닙, LEED + 길테리티닙 및 HELD + 길테리티닙이었다. LEED 및 HELD 5-아자시티딘 투여 둘 다는 비히클 단독과 비교하여 통계적으로 유의한 생존 증가를 유발하였다 (LEED 대 비히클, p = 0.003, 게한-브레슬로우-윌콕슨 검정에 의함; HELD 대 비히클, p = 0.003, 게한-브레슬로우-윌콕슨 검정에 의함). 미도스타우린 단독 및 LEED 또는 HELD 5-아자시티딘과의 조합은 비히클 단독과 비교하여 생존을 유의하게 증가시켰다 (미도스타우린 대 비히클, p = 0.027; LEED + 미도스타우린 대 비히클, p = 0.012; HELD + 미도스타우린 대 비히클, p = 0.003). 미도스타우린과 조합된 HELD 5-아자시티딘 투여는 각각 LEED 또는 HELD 5-아자시티딘과 비교하여 생존을 유의하게 증가시켰다 (LEED + 미도스타우린 대 LEED, p = 0.028; HELD + 미도스타우린 대 HELD, p = 0.039). 미도스타우린 처리 단독과 비교하여 미도스타우린과 조합된 LEED 또는 HELD 사이에서의 유의한 생존 변화는 관찰되지 않았다. 중앙 생존은 비히클 또는 단일 작용제와 비교하여 미도스타우린과 조합된 LEED 또는 HELD 5-아자시티딘에 의해 증가하였다 (LEED + 미도스타우린 = 45일, HELD + 미도스타우린 = 43일, 비히클 = 19일, 미도스타우린 = 34일, LEED = 36일, HELD = 32일 (도 7a). 길테리티닙 단독 및 LEED 또는 HELD 5-아자시티딘과의 조합은 비히클 단독과 비교하여 생존을 유의하게 증가시켰다 (길테리티닙 대 비히클, p = 0.003; LEED + 길테리티닙 대 비히클, p = 0.003; HELD + 길테리티닙 대 비히클, p = 0.003). 길테리티닙과 조합된 낮은 노출, 연장된 지속기간 또는 HELD 5-아자시티딘 투여는 LEED 또는 HELD 5-아자시티딘 단독과 비교하여 생존을 유의하게 증가시켰다 (LEED + 길테리티닙 대 LEED, p = 0.019; LEED + 길테리티닙 대 HELD, p = 0.004; HELD + 길테리티닙 대 LEED, p = 0.008; HELD + 길테리티닙 대 HELD, p = 0.003). 추가로, 길테리티닙과 조합된 LEED 또는 HELD 5-아자시티딘 투여는 길테리티닙 단독과 비교하여 생존을 유의하게 증가시켰다 (LEED + 길테리티닙 대 길테리티닙, p < 0.001; HELD + 길테리티닙 대 길테리티닙, p < 0.001). 베네토클락스 단독 및 LEED 또는 HELD 5-아자시티딘과의 조합은 비히클 단독과 비교하여 생존을 유의하게 증가시켰다 (베네토클락스 대 비히클, p = 0.003; LEED + 베네토클락스 대 비히클, p = 0.002; HELD + 베네토클락스 대 비히클, p = 0.004) (도 7b). 베네토클락스와 조합된 낮은 노출, 연장된 지속기간 또는 HELD 5-아자시티딘 투여는 LEED 또는 HELD 5-아자시티딘 단독과 비교하여 생존을 유의하게 증가시켰다 (LEED + 베네토클락스 대 LEED, p = 0.001; LEED + 베네토클락스 대 HELD, p < 0.001; HELD + 베네토클락스 대 LEED, p = < 0.001; HELD + 베네토클락스 대 HELD, p = < 0.001). 추가로, 베네토클락스와 조합된 LEED 또는 HELD 5-아자시티딘 투여는 베네토클락스 단독과 비교하여 생존을 유의하게 증가시켰다 (LEED + 베네토클락스 대 베네토클락스, p < 0.001; HELD + 베네토클락스 대 베네토클락스, p < 0.001). 베네토클락스와 조합된 낮은 노출, 연장된 지속기간은 베네토클락스와 조합된 HELD와 유의하게 상이하지 않았다. 중앙 생존은 비히클 또는 단일 작용제와 비교하여 베네토클락스와 조합된 LEED 또는 HELD 5-아자시티딘에 의해 증가하였다 (LEED + 베네토클락스 = 46일, HELD + 베네토클락스 = 45일, 비히클 = 19일, 베네토클락스 = 29일, LEED = 36일, HELD = 32일). 중앙 생존은 비히클 또는 단일 작용제와 비교하여 길테리티닙과 조합된 LEED 또는 HELD 5-아자시티딘에 의해 증가하였다 (LEED + 길테리티닙 = 45일, HELD + 길테리티닙 = 43일, 비히클 = 19일, 길테리티닙 = 34일, LEED = 36일, HELD = 32일 (도 7c)).
도 8a, 8b 및 8c는 단일 작용제로서의 5-아자시티딘 (AZA) 및 베네토클락스 및 5-아자시티딘과 베네토클락스의 조합에 대한 22종의 AML 세포주의 감수성을 도시한다. 도 8a는 5-아자시티딘이 0.15 μM 내지 2.5 μM 범위의 EC50 값으로 대부분의 세포주에서 세포독성 효과를 나타냈다는 것을 보여준다. 대조적으로, 도 8b는 조사된 AML 세포주 22종 중 11종이 베네토클락스에 대해 감수성이었다는 것을 보여준다 (EC50 < 10 μM). 도 8c는 표면 반응 분석 및 최고 단일 작용제 모델을 사용한 베네토클락스와 5-아자시티딘의 조합 활성을 보여주며, 여기서 세포주 22종 중 10종은 임의 한계값 20을 초과하는 상승작용적 활성을 나타냈다. 특히, 베네토클락스에 대해 내성인 3종의 세포주 (Kasumi-1, Kasumi-2 및 NOMO-1)는 5-아자시티딘과의 공-처리로 베네토클락스 내성의 역전을 나타냈다. AML에서의 재발성 돌연변이인 FLT3-ITD를 보유하는 세포주는 또한 5-아자시티딘 및 베네토클락스에 의한 상승작용적 활성을 나타냈다.
이들 결과는 놀랍게도 5-아자시티딘과 베네토클락스의 조합이 AML 세포주, 특히 베네토클락스에 대해 내성인 AML 세포주에서 상승작용적 효과를 제공한다는 것을 입증한다.
5-아자시티딘 및 베네토클락스 투여의 특정 스케줄이 5-아자시티딘 및 베네토클락스에 의해 제공되는 상승작용적 효과에 영향을 미치는지 여부를 또한 조사하였다. 도 9a-f는 5-아자시티딘 및 베네토클락스를 사용한 처리 시작 후 MV4-11 세포 (도 9a-c) 및 MOLM-13 세포 (도 9d-f)의 세포 생존을 보여준다. 하기 스케줄을 시험하였다: 제1일, 제2일 및 제3일에 5-아자시티딘 투여, 이어서 제4일에 베네토클락스 투여 (5-아자시티딘 (AZA) 첫번째) (도 9a 및 9d); 제1일에 5-아자시티딘 및 베네토클락스 공-투여, 이어서 제2일 및 제3일에 5-아자시티딘 투여 (동시) (도 9b 및 9e); 및 제1일에 베네토클락스 투여, 이어서 제2일, 제3일 및 제4일에 5-아자시티딘 투여 (베네토클락스 첫번째) (도 9c 및 9f). 제시된 상승작용 지수 (SI)에 의해 반영된 바와 같이, 결과는 두 세포주에 대해, 5-아자시티딘을 첫번째로 투여한 요법이 최대 상승작용적 효과를 제공하였다는 것을 나타낸다. 이들 결과는 5-아자시티딘이 AML 세포를 베네토클락스 활성을 위해 프라이밍할 수 있다는 것을 시사한다.
베네토클락스 내성에 대한 인자 중 하나는 FLT3 돌연변이된 AML에서 상향조절되고 5-아자시티딘 처리 후에 하향조절되는 아폽토시스 조절제 MCL-1의 발현이다. MCL-1 수준이 5-아자시티딘-베네토클락스 조합의 상승작용적 효과의 정도와 상관관계가 있는지 여부를 조사하기 위해, 야생형 FLT3, FLT3-ITD 또는 FLT3 (D835Y) 돌연변이를 발현하는 조작된 BaF3 세포주의 패널을 조사하였다. 조작된 BaF3 세포주는 또한 IL-3과 비의존성으로 증식하였다. 도 10a는 이들 조작된 BaF3 세포주가 베네토클락스에 대해 내성 (EC50 >1 μM)이지만, FLT3 억제제, 예컨대 길테리티닙, 미도스타우린 및 퀴자르티닙에 대해 감수성이라는 것을 보여준다. 도 10a에 제시된 데이터는 또한 하기 표 1에 제시된다.
표 1
Figure pct00008
도 10b는 MCL-1이 모든 세포주에서 검출되었고, 가장 높은 발현 수준은 FLT-ITD 돌연변이 세포주, 이어서 FLT3 (D835Y)에서 관찰되었다는 것을 보여준다. 5-아자시티딘과 베네토클락스의 조합은 상승작용적 효과를 나타냈고, 가장 높은 상승작용 지수는 가장 낮은 수준의 MCL-1을 발현하는 FLT3 (야생형), 이어서 FLT3 (D835Y) (중간 MCL-1 수준) 및 FLT3-ITD (가장 높은 MCL-1)에서 관찰되었다 (도 10c). 이들 결과는 MCL-1 발현이 5-아자시티딘-베네토클락스 상승작용에 대한 결정 인자일 수 있다는 것을 시사한다.
MCL-1과 5-아자시티딘-베네토클락스 상승작용 사이의 관계를 추가로 탐색하기 위해, 20종의 AML 세포주의 패널에서 MCL1 RNA 수준과 5-아자시티딘-베네토클락스 상승작용 지수 사이의 관계를 조사 및 탐색하였다. 도 11은 MCL1 RNA 수준이 20종의 AML 세포주의 패널에서 상승작용 지수 (r2 = -0.5607, p = 0.0101)와 직접적으로 상관관계가 있었다는 것을 보여준다. 이들 결과는 MCL-1이 베네토클락스-유도된 아폽토시스를 위한 AZA 프라이밍을 위한 주요 조절제일 수 있고, 구체적으로 5-아자시티딘이 MCL-1을 특정 한계값 미만으로 낮추어 베네토클락스-매개된 아폽토시스를 가능하게 할 수 있다는 것을 보여준다.
이어서, 4종의 상이한 AML 세포주 KG1α (도 12a), MV4-11 (도 12b), THP-1 (도 12c) 및 OCI-AML-2 (도 12d)에서 5-아자시티딘-매개된 MCL-1 분해의 정도를 탐색하였다. 결과는 KG1α (도 12e) 및 MV4-11 (도 12f) 세포주에서 5-아자시티딘-베네토클락스 상승작용적 활성을 나타냈고 (상승작용 지수 (SI) 각각 70 및 35.5), THP-1 (도 12g) 및 OCI-AML-2 (도 12h) 세포주에서는 상승작용적 활성이 거의 없거나 전혀 없음을 나타냈다 (SI 각각 20.2 및 10.8). 5-아자시티딘-베네토클락스가 가장 큰 상승작용적 효과를 나타낸 (도 12e 및 12f) KG1α (도 12a) 및 MV4-11 (도 12b) 세포주의 경우, 5-아자시티딘은 처리 6시간 후에 시작하여 MCL-1 분해를 가장 빠르게 유도하였다. 대조적으로, 5-아자시티딘-베네토클락스가 단지 경미한 상승작용적 활성을 제공한 THP-1 (도 12g)의 경우, 16시간에 시작하여 더 늦게 5-아자시티딘-매개된 MCL-1 분해를 나타냈고, 24시간까지 불완전한 분해를 나타냈다 (도 12c). 5-아자시티딘-베네토클락스가 가장 낮은 상승작용적 효과를 나타낸 (도 12h) OCI-AML2 (도 12d)의 경우, 5-아자시티딘 처리는 MCL-1의 어떠한 분해도 유도하지 않았다. 이들 결과는 5-아자시티딘이 MCL-1 수준을 낮춤으로써 세포를 베네토클락스-매개된 아폽토시스를 위해 프라이밍한다는 가설을 지지한다.
5-아자시티딘이 MCL-1을 하향조절하는 하나의 가능한 메카니즘은 카스파제 활성화를 유도하는 것이다. 카스파제 활성화는 웨스턴 블롯에서 카스파제 3의 분해를 평가함으로써 검정될 수 있다 (도 13a). 이 효과가 카스파제-의존성인지 여부를 찾아내기 위해, 세포를 범-카스파제 억제제인 Z-VAD-FMK로 처리하고, 5-아자시티딘에 의한 MCL-1 분해의 정도를 측정하였다 (도 13b). 특히, 도 13b는 5-아자시티딘에 의한 MCL-1 분해의 막대 그래프를 보여주며, 여기서 세포를 20 μM Z-VAD-FMK로 1시간 동안 처리한 후에 추가 16시간 동안 5-아자시티딘 처리하였다. 카스파제 억제는 MV4-11 세포에서 5-아자시티딘에 의한 MCL-1 분해를 부분적으로 제거하였으며, 이는 MCL-1 분해의 추가의 카스파제-비의존성 메카니즘을 시사하였다. Z-VAD-FMK는 MCL-1을 분해하는 5-아자시티딘의 능력을 부분적으로 제거하는 것으로 밝혀졌으며, 이는 이러한 과정이 카스파제-의존성 및 비의존성 메카니즘에 의해 매개된다는 것을 시사한다.
5-아자시티딘이 급성 아폽토시스를 위해 베네토클락스를 프라이밍하는 방법을 추가로 이해하기 위해, PBS (비히클), 1 μM AZA로 24시간 동안 (도 14a) 또는 1 μM AZA로 48시간 동안 (도 14b) 처리된 MV4-11 세포에 대해 RNAseq를 수행하였다. 표 2는 도 14a의 RNASeq 데이터에 대한 경로 분석이고, 5-아자시티딘 처리 후의 분석을 나타내며, 이는 KEGG 경로에 기초하여 5-아자시티딘에 의해 유의하게 유도되거나 억제된 유전자의 카테고리화이다.
표 2
Figure pct00009
처리 48시간 후에 5-아자시티딘에 의해 조절된 KEGG 경로에서의 유의한 차이는 관찰되지 않았다. 그러나, 5-아자시티딘 처리 24시간 후에 차등 조절된 상위 KEGG 경로는 "리보솜", "산화성 인산화", "대사 경로" 및 "세포 주기"였다. 이들 결과는 5-아자시티딘이 5-아자시티딘+베네토클락스 조합으로 치료된 환자에서 이전에 관찰된, 세포 대사를 변경시키고, 세포 주기 정지를 유발하고, 산화성 인산화를 억제하는 역할을 한다는 가설을 지지한다.
24시간 (도 14a) 및 48시간 (도 14b)에서 유의하게 변형된 유전자의 볼케이노 플롯은 5-아자시티딘이 24시간에서 133종의 차등 발현된 유전자를 유도하고 48시간에서 226종의 차등 발현된 유전자를 유도하였다는 것을 보여준다. 5-아자시티딘-유도된 차등 발현된 유전자의 추가의 분석시, MCL1 발현을 조절하는 것으로 이전에 밝혀진 2종의 유전자: 활성화 전사 인자 3 (ATF3) 및 스테아로일-CoA 데새투라제 (SCD)를 확인하였다. ATF3은 MCL-1, 뿐만 아니라 면역 및 대사 유전자를 조절하는 것으로 나타난 스트레스 반응성 전사 인자이다. ATF3 발현은 5-아자시티딘 처리 48시간 후에 2배 증가하였다. 한편, 지질 대사 및 MCL1의 조절제인 SCD의 발현은 48시간에서 5-아자시티딘 처리에 의해 2.5배 감소하였다. ATF3 (도 14c) 및 SCD (도 14d) 발현의 변경을 실시간 PCR을 사용하여 별개의 실험에서 검증하였다. 0.3 μM 5-아자시티딘 처리는 24시간에서도 또는 48시간에서도 ATF3 발현을 유도하기에 충분하지 않았으므로, ATF3 발현은 시간- 및 농도-의존성 방식으로 증가하였다 (도 14c). 유사하게, SCD 발현은 3 μM 5-아자시티딘으로 처리한 경우에 24시간 내에 급속하게 감소하였지만, 이 시점에서 저농도의 5-아자시티딘에 의해서는 영향을 받지 않았다 (도 14d).
MCL1 발현의 조절과의 관련성을 고려하여, ATF3 및/또는 SCD가 5-아자시티딘-베네토클락스 상승작용에 기여할 수 있는 것으로 가정하였다. 이를 추가로 탐색하기 위해, 상승작용에서 그의 기능을 평가하기 위해 MV4-11 세포에서 이들 유전자의 siRNA 녹다운을 이용하였다. MV4-11 세포를 비형질감염된 채로 두거나 또는 ATF3, SCD 또는 대조군 (스크램블링) siRNA로 형질감염시켰다. 대조군으로서, 세포를 siRNA로 형질감염시키고, 형질감염 72시간 후에 RNA 및 qPCR을 위해 수집하였다 (도 15a). 이는 세포를 각각 ATF3 또는 SCD siRNA로 형질감염시켰을 때 siRNA 녹다운이 ATF3 또는 SCD의 mRNA 발현을 감소시켰지만 완전히 제거하지는 않았다는 것을 확인시켜 주었다. 추가로, 스크램블 siRNA로 처리된 세포에서, ATF3 (도 15b) 또는 SCD (도 15c) 발현의 변화는 관찰되지 않았다. 형질감염 후, 세포를 제1일-제3일 동안 매일 다양한 농도의 5-아자시티딘으로 처리하였다. 제4일에, 세포에 베네토클락스를 투여하고, 이어서 처리 개시 7일 후에 셀타이터-글로®를 사용하여 세포 생존율을 시험하였다. 5-아자시티딘-베네토클락스 상승작용을 콤베네피트 및 최고 단일 작용제 분석을 사용하여 계산하였다 (도 15d-g). 5-아자시티딘-베네토클락스 상승작용은 형질감염되지 않은 세포에서 확인되었고 (상승작용 지수 = 43) (도 15d), 스크램블 siRNA로 형질감염된 세포 (도 15e)는 46의 상승작용 지수를 가졌기 때문에, 상승작용은 형질감염 자체에 의해 영향을 받지는 않았다. ATF3이 녹다운되었을 때 (도 15f), 5-아자시티딘-베네토클락스는 감소된 상승작용을 가졌다 (상승작용 지수 = 19). 다른 한편으로, SCD가 녹다운되었을 때 (도 15g), 5-아자시티딘-베네토클락스는 증가된 상승작용을 가졌다 (상승작용 지수 = 60). 이 데이터는 5-아자시티딘-유도된 ATF3의 증가 및 SCD의 감소가 5-아자시티딘-베네토클락스 상승작용에서 적어도 부분적인 역할을 한다는 것을 시사한다.
이어서, 5-아자시티딘 및 베네토클락스가 주사가능한 5-아자시티딘 (HELD) 또는 경구 5-아자시티딘 (LEED)에 상응하는 용량 및 스케줄에서 생체내 상승작용적 활성을 갖는지의 여부를 평가하였다. 5-아자시티딘-베네토클락스 상승작용을 나타낸 (도 8c) 2종의 세포주인 MV4-11 (도 16a-c) 및 MOLM-13 (도 16d-f)을 사용하여 면역결핍 동물에서 파종성 AML 이종이식 마우스를 생성하였다. 시험관내에서, 베네토클락스는 세포주 둘 다를 베네토클락스에 대해 감작화시켰고 (도 16a 및 16d), 5-아자시티딘과 상승작용하였다 (도 16b 및 16e). 경구 5-아자시티딘 (LEED) 요법을 모델링하기 위해, 마우스를 15일 동안 1 mg/kg 5-아자시티딘으로 처리하였다 (낮은 노출, 연장된 지속기간). 대안적으로, 동일한 누적 용량을 사용하지만 주사가능한 5-아자시티딘 (HELD) 요법을 사용하기 위해, 마우스를 5일 동안 3 mg/ml 5-아자시티딘으로 처리하였다 (높은 노출, 제한된 지속기간).
MV4-11 이식을 위해, 암컷 NCG 마우스에 0.2mL 세포 현탁액 중 1x107개 세포를 꼬리 정맥을 통해 주사하였다. 제1일을 이식 후 14일로 지정하였다. 제1일에, 마우스를 체중에 기초하여 처리군으로 분류하고, 하기와 같이 투여를 개시하였다: 마우스를 비히클, 고용량 5-아자시티딘 (HELD, 3mg/kg 5일 동안 1일 1회 (qdx5)), 저용량 5-아자시티딘 (LEED, 1mg/kg 5일 동안 1일 1회, 3회 (qdx5x3)), 베네토클락스 (100mg/kg, qdx21), HELD+베네토클락스 또는 LEED+베네토클락스로 처리. 마우스를 초기 처리 후 최대 56일 동안 체중 감소 및 빈사율에 대해 모니터링하여 마우스가 종양 부담으로 인해 사망한 때를 결정하였다. 베네토클락스 단독 또는 LEED 또는 HELD 5-아자시티딘과의 조합은 비히클 단독과 비교하여 생존을 유의하게 증가시켰다 (베네토클락스 대 비히클, p = 0.0493; LEED + 베네토클락스 대 비히클, p = 0.0123; HELD + 베네토클락스 대 비히클, p = 0.04). 베네토클락스와 조합된 LEED 또는 HELD 5-아자시티딘은 5-아자시티딘 단독과 비교하여 생존을 유의하게 증가시켰다 (LEED + 베네토클락스 대 LEED, p = 0.001; HELD + 베네토클락스 대 HELD, p = 0.0004). 그러나, 단지 LEED + 5-아자시티딘만이 베네토클락스 단독보다 유의하게 더 우수하였다 (LEED + 베네토클락스 대 베네토클락스, p = 0.0378). 추가로, 베네토클락스와의 LEED 또는 HELD 5-아자시티딘 조합은 단일 작용제와 비교하여 중앙 생존을 증가시켰다 (LEED + 베네토클락스 = 38, HELD + 베네토클락스 = 37, 비히클 = 29.5, HELD = 35, LEED = 35, 베네토클락스 = 35.5) (도 16c).
이들 실험을 제2 FLT3-ITD 세포주인 MOLM-13으로 반복하였다. 간략하게, 5x106개 MOLM-13 세포를 군당 12마리의 NOD/SCI 마우스에 주사하였다. 종양 세포 접종 3일 후에, 마우스를 MV4-11 세포와 동일한 투여 요법으로 처리하였다. 마우스를 초기 처리 후 최대 70일 동안 체중 감소 및 빈사율에 대해 모니터링하여 마우스가 질환 부담으로 인해 사망한 때를 결정하였다. 베네토클락스 단독 및 LEED 또는 HELD 5-아자시티딘과의 조합은 비히클 단독과 비교하여 생존을 유의하게 증가시켰다 (베네토클락스 대 비히클, p = 0.003; LEED + 베네토클락스 대 비히클, p = 0.002; HELD + 베네토클락스 대 비히클, p = 0.004). 베네토클락스와 조합된 낮은 노출, 연장된 지속기간 또는 HELD 5-아자시티딘 투여는 LEED 또는 HELD 5-아자시티딘 단독과 비교하여 생존을 유의하게 증가시켰다 (LEED + 베네토클락스 대 LEED, p = 0.001; LEED + 베네토클락스 대 HELD, p < 0.001; HELD + 베네토클락스 대 LEED, p = < 0.001; HELD + 베네토클락스 대 HELD, p = < 0.001). 추가로, 베네토클락스와 조합된 LEED 또는 HELD 5-아자시티딘 투여는 베네토클락스 단독과 비교하여 생존을 유의하게 증가시켰다 (LEED + 베네토클락스 대 베네토클락스, p < 0.001; HELD + 베네토클락스 대 베네토클락스, p < 0.001). 중앙 생존은 비히클 또는 단일 작용제와 비교하여 베네토클락스와 조합된 LEED 또는 HELD 5-아자시티딘에 의해 증가하였다 (LEED + 베네토클락스 = 46일, HELD + 베네토클락스 = 45일, 비히클 = 19일, 베네토클락스 = 29일, LEED = 36일, HELD = 32일) (도 16f).
종합하면, 이들 결과는 FLT3-ITD 돌연변이를 갖는 대상체가 AZA+Ven 조합 요법으로부터 이익을 얻을 수 있다는 것을 제시한다.
5-아자시티딘과 FLT-3 억제제의 조합 결과
FLT3 돌연변이는 AML 환자의 ~30%에서 발생하고, 불량한 예후와 연관되었다. 광범위-작용 FLT-3 억제제인 미도스타우린 및 선택적 FLT3 억제제인 길테리티닙이 AML의 치료에 대해 승인되었다. 5-아자시티딘 및 FLT3 억제제를 사용한 공-치료가 AML 세포에서 상승작용적 효과를 나타내는지 여부를 조사하기 위해, 2종의 FLT3-ITD 세포주인 MV4-11 및 MOLM-13 세포를 5-아자시티딘+미도스타우린 또는 5-아자시티딘+길테리티닙으로 처리하였다. 세포를 제1일-제3일에 5-아자시티딘의 1일 용량으로 처리한 다음, 제4일에 FLT-3 억제제 (미도스타우린 또는 길테리티닙)로 처리하였다. 세포를 제7일에 수집하고, 세포 생존율을 셀타이터-글로® 검정에 의해 평가하였다. 미도스타우린은 MV4-11을 5-아자시티딘에 대해 감작화시켰고 (도 17a), 5-아자시티딘과 상승작용적 활성을 나타냈다 (도 17b). 5-아자시티딘 및 길테리티닙 (도 17c 및 17d)으로 처리된 MV4-11 세포, 뿐만 아니라 5-아자시티딘 및 미도스타우린 (도 17e 및 17f) 또는 길테리티닙 (도 17g 및 17h)으로 처리된 MOLM-13 세포에서 유사한 효과가 관찰되었다.
다음으로, 주사가능한 (높은 노출, 제한된 지속기간 또는 HELD 요법) 또는 경구 (낮은 노출, 연장된 지속기간, LEED)와 유사한 용량 및 스케줄을 사용하여 투여된 FLT3 억제제와 5-아자시티딘 사이의 상승작용적 활성을 조사하였다. MOLM-13 및 MV4-11 세포주에 기초한 AML의 2가지 파종성 이종이식 모델을 사용하였다. 5-아자시티딘을 HELD 요법 (3 mg/kg, 5일 동안 매일) 또는 LEED 요법 (1 mg/kg, 15일 동안 1일 1회 (qdx15))으로 사용하여 마우스를 처리하였다. FLT3 억제제 미도스타우린 100mg/kg 매일 21일 동안 및 길테리티닙 4mg/kg qdx21을 단일 작용제로서 또는 HELD 또는 LEED 5-아자시티딘 요법과 함께 투여하였다. MOLM-13 이종이식 모델에서, 미도스타우린 단독 및 LEED 또는 HELD 5-아자시티딘과의 조합은 비히클 단독과 비교하여 생존을 유의하게 증가시켰다 (미도스타우린 대 비히클, p = 0.027; LEED + 미도스타우린 대 비히클, p = 0.012; HELD + 미도스타우린 대 비히클, p = 0.003) (도 17i). 미도스타우린과 조합된 낮은 노출, 연장된 지속기간 또는 HELD 5-아자시티딘 투여는 각각 LEED 또는 HELD 5-아자시티딘과 비교하여 생존을 유의하게 증가시켰다 (LEED + 미도스타우린 대 LEED, p = 0.028; HELD + 미도스타우린 대 HELD, p = 0.039). 미도스타우린 처리 단독과 비교하여 미도스타우린과 조합된 LEED 또는 HELD 사이에서의 유의한 생존 변화는 관찰되지 않았다. 중앙 생존은 비히클 또는 단일 작용제와 비교하여 미도스타우린과 조합된 LEED 또는 HELD 5-아자시티딘에 의해 증가하였다 (LEED + 미도스타우린 = 45일, HELD + 미도스타우린 = 43일, 비히클 = 19일, 미도스타우린 = 34일, LEED = 36일, HELD = 32일 (도 17i).
MV4-11 이종이식 모델에서, 미도스타우린 단독 및 LEED 또는 HELD 5-아자시티딘과의 조합은 비히클 단독과 비교하여 생존을 증가시켰다 (미도스타우린 대 비히클, p = 0.0067; LEED + 미도스타우린 대 비히클, p = 0.0084; HELD + 미도스타우린 대 비히클, p = 0.0625). 미도스타우린과 조합된 LEED 또는 HELD 5-아자시티딘 투여는 LEED 또는 HELD 5-아자시티딘 단독과 비교하여 생존을 유의하게 증가시켰다 (LEED + 미도스타우린 대 LEED, p = <0.0001; HELD + 미도스타우린 대 HELD, p = 0.0015). 추가로, 미도스타우린과 조합된 LEED 또는 HELD 5-아자시티딘은 미도스타우린 단독과 비교하여 생존을 유의하게 증가시키지 않았다 (LEED + 미도스타우린 대 미도스타우린, p = 0.1704; HELD + 미도스타우린 대 미도스타우린, p = 0.8308). 중앙 생존은 비히클 또는 단일 작용제 HELD 또는 LEED와 비교하여 미도스타우린과 조합된 LEED 또는 HELD 5-아자시티딘에 의해 증가하였다 (LEED + 미도스타우린 = 64.5, HELD + 미도스타우린 = 59.5, 비히클 = 29.5, LEED = 35, HELD = 35, 미도스타우린 = 57) (도 17j).
MOLM-13 이종이식 모델에서, 길테리티닙 단독 및 LEED 또는 HELD 5-아자시티딘과의 조합은 비히클 단독과 비교하여 생존을 유의하게 증가시켰다 (길테리티닙 대 비히클, p = 0.003; LEED + 길테리티닙 대 비히클, p = 0.003; HELD + 길테리티닙 대 비히클, p = 0.003). 길테리티닙과 조합된 낮은 노출, 연장된 지속기간 또는 HELD 5-아자시티딘 투여는 LEED 또는 HELD 5-아자시티딘 단독과 비교하여 생존을 유의하게 증가시켰다 (LEED + 길테리티닙 대 LEED, p = 0.019; LEED + 길테리티닙 대 HELD, p = 0.004; HELD + 길테리티닙 대 LEED, p = 0.008; HELD + 길테리티닙 대 HELD, p = 0.003). 추가로, 길테리티닙과 조합된 LEED 또는 HELD 5-아자시티딘 투여는 길테리티닙 단독과 비교하여 생존을 유의하게 증가시켰다 (LEED + 길테리티닙 대 길테리티닙, p < 0.001; HELD + 길테리티닙 대 길테리티닙, p < 0.001). 중앙 생존은 비히클 또는 단일 작용제와 비교하여 길테리티닙과 조합된 LEED 또는 HELD 5-아자시티딘에 의해 증가하였다 (LEED + 길테리티닙 = 45일, HELD + 길테리티닙 = 43일, 비히클 = 19일, 길테리티닙 = 34일, LEED = 36일, HELD = 32일) (도 17k).
종합하면, 이들 결과는 FLT3 억제제와 조합된 LEED 또는 HELD 5-아자시티딘이 단일 작용제 5-아자시티딘 또는 FLT3 억제제 단독과 비교하여 AML 세포를 사멸시키는데 유의하게 더 효과적이라는 것을 시사한다.
5-아자시티딘/베네토클락스/CC-90011 삼중 조합 검정
하기 실시예에 사용된 바와 같이, CC-90011은 4-[2-(4-아미노-피페리딘-1-일)-5-(3-플루오로-4-메톡시-페닐)-1-메틸-6-옥소-1,6-디히드로-피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴 (베실레이트 염 포함)을 지칭한다.
CC-90011 (DMSO 중 30 mM)을 셀진 화합물 수집 은행으로부터 입수하고, DMSO로 10 mM 원액으로 희석하고, 분취하고, -80℃에서 저장하였다. AML 세포주를 384-웰 플레이트에 웰당 2,000개 세포로 시딩한 다음, 각각의 화합물에 대한 EC50의 비에 상응하는 비로, 제0일에 6개 농도의 CC-90011 및 9개 농도의 5-아자시티딘 및 베네토클락스의 혼합물로 매트릭스 포맷으로 처리하였다. 5-아자시티딘을 제1일, 제2일 및 제3일에 매일 투여한 한편, 베네토클락스를 제4일에 투여하였다. 후속적으로, 셀타이터-글로® 시약을 제조업체의 지침 (프로메가 인크.)에 따라 사용하여 세포 생존율을 결정하였다. 프리즘 7.03 (그래프패드 소프트웨어)을 사용하여 비선형 회귀 알고리즘에 의해 50% 세포 사멸을 유도하는 유효 농도 (EC50)를 결정하였다. 최고 단일 작용제 모델을 사용하여 콤베네피트 소프트웨어 (DiVeroli Bioinformatics 2016)에 의해 상승작용 지수 및 3D 그래프를 분석하였다.
5-아자시티딘, 베네토클락스 및 CC-90011의 조합 결과
세포독성을 유도하기 위한 단일 작용제 처리로서의 CC-90011, AZA 및 베네토클락스의 효능을 22종의 AML 세포주에서 평가하였다 (도 18a). 이들 세포주 중 11종은 CC-90011에 대해 감수성이었고, 이 중 8종의 세포주는 CC-90011, AZA 및 베네토클락스에 대해 감수성이었고, 3종의 세포주는 AZA 및 CC-90011에 대해 감수성이었지만 베네토클락스에 대해서는 그렇지 않았다 (사용된 베네토클락스의 최대 농도 10 μM보다 더 큰 EC50). 4종의 세포주는 AZA 및 베네토클락스에 대해 감수성이었지만 CC-90011에 대해서는 내성 (EC50 > 10 μM)인 반면, 7종의 세포주는 베네토클락스 및 CC-90011 둘 다에 대해 내성이었다 (도 18a).
LSD 억제제는 여러 AML 세포주 및 인간 AML 이종이식 모델에서 분화를 증가시킨다 (도 18b). CC-90011에 의한 분화 마커의 유도를 조사하기 위해, 유동 세포측정법을 사용하여 CC-90011 처리 후 22종의 AML 세포주에서 CD11b, CD14 및 CD86 표면 마커 발현을 측정하였다. 이들 세포주 중 17종은 이들 분화 마커 중 적어도 1종의 발현을 증가시킨 반면, HEL, KG-1, MOLM-13, KG-1a 및 NOMO-1을 포함한 5종의 세포주는 이들 분화 마커 중 어떠한 것에서도 변화를 갖지 않았다 (도 18b). 주목할 만하게, 분화 마커의 증가된 발현은 CC-90011 세포독성에 대한 감수성과 상관관계가 없었다.
AZA+Ven+CC-90011 삼중 조합이 AML 세포주에서 상승작용을 나타내는지 여부를 조사하기 위해, 22종의 AML 세포주 중 13종을 다양한 농도의 AZA+Ven+CC-90011로 처리하였다 (도 18c 및 19a-m). 처리 7일 후에, 셀타이터-글로®를 사용하여 세포 생존율을 조사하고, "최고 단일 작용제" 모델링을 사용하여 맵핑된 표면 및 콤베네피트를 사용하여 상승작용을 계산하였다 (도 19a-m). MUTZ-8 및 OCI-AML3이 극도로 높은 상승작용을 가졌기 때문에 (상승작용 지수 점수 각각 115 및 112), AZA+Ven+CC-90011로 처리된 AML 세포주는 다양한 정도의 상승작용을 가졌다. 대조적으로, GDM-1 및 Kasumi-1은 상승작용이 거의 없거나 전혀 없었다 (상승작용 지수 각각 6 및 15). 단일 작용제 베네토클락스 또는 CC-90011에 대해 내성인 세포주 (SIG-M5, MOLM-13, HNT-34, OCI-AML3 및 THP-1)는 AZA+Ven+CC-90011 삼중 조합에 대해 반응성이었다. 이는 AML 환자가 초기에 베네토클락스 또는 CC-90011에 대해 내성이었더라도, AZA+Ven+CC-90011 삼중 조합이 이들 환자에서 효능을 나타낼 수 있다는 것을 시사한다.
AZA+Ven+CC-90011 삼중 조합이 AZA+CC-90011 또는 Ven+CC-90011과 비교하여 더 효과적인지 여부를 결정하기 위해, 삼중 조합을 이들 작용제의 쌍별 조합과 비교하였다 (도 20a-d). OCI-AML-2에서, AZA+CC-90011 (도 20a), Ven+CC-90011 (도 20b) 또는 AZA+Ven (도 20c)의 이중 조합은 OCI-AML2 세포에서 상승작용을 나타내지 않았다. 그러나, OCI-AML2를 AZA+Ven+CC-90011 조합으로 처리한 경우 (도 20d), 상승작용은 실질적으로 증가된다.
이는 삼중 조합이 OCI-AML2 세포에서 단일 작용제 단독 또는 임의의 이중 조합보다 백혈병성 세포를 사멸시키는데 더 우수하다는 것을 입증한다.
실시예 2
하기 실시예에 사용된 바와 같이, CC-90011은 4-[2-(4-아미노-피페리딘-1-일)-5-(3-플루오로-4-메톡시-페닐)-1-메틸-6-옥소-1,6-디히드로-피리미딘-4-일]-2-플루오로-벤조니트릴의 베실레이트 염을 지칭한다.
연구 목적: 연구의 예시적인 목적은 집중 유도에 적격이 아닌 치료-나이브 AML 대상체에서 베네토클락스 및 5-아자시티딘과 조합된 CC-90011의 안전성 및 내약성을 평가한다.
추가의 목적은 (1) 집중 유도 화학요법에 적격이 아닌 치료-나이브 AML 대상체에서 베네토클락스 및 5-아자시티딘과 조합된 CC-90011의 예비 효능을 평가하는 것; 및 (2) 다색 유동 세포측정법 (MFC) 및/또는 차세대 서열분석 (NGS)에 의해 최소 잔류 질환 (MRD) 반응률 및 MRD 전환율을 평가하는 것을 포함한다.
추가의 목적은 (1) 골수 흡인물의 평가 및 말초 혈액 도말표본의 검사에 의해 MRD 반응의 지속기간을 탐색하는 것; (2) 베네토클락스 및 5-아자시티딘과 조합되어 제공되는 경우의 CC-90011의 PK 프로파일을 특징화하는 것; (3) 베네토클락스 및 5-아자시티딘과 조합된 CC-90011의 기계론적 효과를 이해하기 위해 PD를 특징화하는 것; (4) 베네토클락스 및 5-아자시티딘과 조합된 CC-90011의 PK, PD 바이오마커 및/또는 임상 결과 사이의 관계를 탐색하는 것; (5) 베네토클락스 및 5-아자시티딘과 조합된 CC-90011 사용시 효능과 상관관계가 있는 골수 및 혈액 내의 분자 및/또는 세포 마커를 평가하는 것; 및 (6) 베네토클락스 및 5-아자시티딘과 조합된 CC-90011의 기준선후 수혈 비의존성 비율을 평가하는 것을 포함한다.
연구 종점은 하기 표 3에 디스플레이되어 있다.
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
약어: AE = 유해 사건; AZA = 5-아자시티딘; BCL-2 = B-세포 림프종 2; BH3 = BCL-2 상동성 도메인 3; C1D1 = 제1주기 제1일; CD = 분화 클러스터; CD11b = CD11 항원-유사 패밀리 구성원 B; CR = 완전 완화; CRh = 부분 혈액학적 회복을 갖는 CR; CRi = 불완전 혈액학적 회복을 갖는 CR; CRMRD- = 최소 잔류 질환이 없는 CR; DLT = 용량 제한 독성; DNA = 데옥시리보핵산; DOR = 반응 지속기간; ECG = 심전도; ECOG = 동부 협동 종양학 그룹; EFS = 무사건 생존; ICF = 사전 동의서; LVEF = 좌심실 박출 계수; MLFS = 형태학적 무백혈병 상태; LSC = 백혈병성 줄기 세포; MCL-1 = 골수성 세포 백혈병 1; MLFS = 형태학적 무백혈병 상태; MMD = 단핵구에서 대식세포로의 분화-연관; MRD = 최소 잔류 질환; MYL9 = 미오신 경쇄 9; NCI = 국립 암 연구소; NGS = 차세대 서열분석; ORR = 전체 반응률; OS = 전체 생존; PD = 약역학; PK = 약동학; PR = 부분 완화; RNAseq = 리보핵산 서열분석; RP2D = 권장 2상 용량; VEN = 베네토클락스.
등록에 적격인 대상체는 새로 진단된 AML을 가질 것이고, 연령 ≥ 75세 또는 집중 유도 화학요법의 사용을 불가능하게 하는 동반이환을 갖는 ≥ 60 내지 74세로 인해 집중 유도 화학요법에 부적격이어야 한다.
연구는 2개의 파트: 용량 증량 및 용량 확장 파트로 이루어질 것이며, 이는 각각 최대 대략 18명의 대상체 및 40명의 대상체를 등록시킬 것이다.
도 21은 전체 연구 설계를 보여준다.
모든 대상체는 제1주기 동안 베네토클락스 용량 증량을 위해 (제1일-제3일) 및 적어도 최소 제1주기 제8일까지 입원환자일 것이다. 대상체는 CR 또는 부분 완화 (PR)로부터의 재발 기록, 질환 진행, 허용되지 않는 유해 사건(들), 치료의 추가 투여를 막는 병발 질병, 대상체를 철회시키도록 하는 임상연구자의 결정, 대상체의 동의 철회, 시험 치료 또는 절차 요건의 비준수, 사망 또는 행정적 이유의 입증시까지 연구 치료를 계속할 수 있다.
용량 증량: 용량 증량 파트는 28일 주기에서 베네토클락스 및 5-아자시티딘과 조합된 CC-90011의 MTD (도달된 경우) 및 조합 권장 2상 용량 (RP2D)을 결정할 것이다. 용량 증량은 베네토클락스 및 5-아자시티딘에 대한 표준 투여와 조합된, CC-90011의 3종의 용량 수준, 20 mg PO QW, 40 mg PO QW 및 60 mg PO QW를 평가할 것이고, 각각의 용량 코호트에 3 내지 6명의 대상체를 등록시킬 수 있다. 용량 증량 파트는 대략 9 내지 18명의 대상체를 등록시킬 것이다.
용량 증량은 mTPI-2 설계 (Guo, W. et al., Contemp Clin Trials. 2017 Jul;58:23-33)에 의해 안내될 것이고, 대안적 용량 및/또는 스케줄은 SRC에 의한 임상 안전성 및 실험실 데이터의 검토에 기초하여 탐색될 수 있다.
용량 확장: 삼중 조합 요법의 MTD 및/또는 RP2D가 결정되면, 대략 40명의 대상체를 용량 확장 파트에 등록시켜 투여된 CC-90011과 베네토클락스 및 5-아자시티딘의 조합 RP2D의 안전성 및 예비 효능을 추가로 평가할 것이다. 용량 감소는 용량 조절 가이드라인에 따라 관찰된 안전성에 기초하여 이루어질 수 있다.
스크리닝 단계: 대상체 스크리닝 절차는 연구 치료의 시작 전 28일 내에 스크리닝 기간 동안 이루어질 것이다. 사전 동의서 (ICF)는 임의의 다른 연구 절차의 시작 전에 대상체 및 투여 스태프에 의해 서명되고 날짜 기입되어야 한다. 모든 스크리닝 시험 및 절차는 연구 치료의 시작 전 28일 내에 완료되어야 한다.
치료 기간: 적격성이 확인되면, 대상체를 등록시키고, 연속 4주 (28일) 주기로 매주 1회 경구 CC-90011을 사용한 치료를 시작할 것이다. 연구 치료는 각각의 치료 주기의 제1일에 ± 3일의 허용된 범위 하에 개시되어야 한다. 연구 방문은 제1주기 제1일 내지 제1주기 제8일에 시작하여 매일, 이어서 제1 3주기 동안 적어도 매주, 이어서 제4주기로 시작하여 각각의 후속 주기에서 2주마다 (제1일 및 제15일) 이루어질 것이다.
모든 대상체는 제1주기 동안 베네토클락스 용량 증량을 위해 (제1일-제3일) 및 적어도 제1주기 제8일까지 입원할 것이고, 종양 용해 증후군 (TLS)에 대한 예방 및 모니터링을 받을 것이다. 이러한 입원은 프로토콜에 따라 요구되고, 심각한 유해 사건을 구성하지 않는다. 제1주기의 완료시 잔류 형태학적 백혈병의 부재 하에 및 진행중인 혈구감소증의 존재 하에, CC-90011, 베네토클락스 및/또는 5-아자시티딘은 혈액학적 회복을 가능하게 하기 위해 최대 14일 동안 중단될 수 있다. 호중구감소증의 관리를 위해, 환자가 제1주기의 완료 후에 CRi를 달성하거나 형태학적 무백혈병 상태 (MLFS)를 갖는 경우에, 후속 주기는 제29일부터 ANC가 ≥ 500개/μL에 도달할 때까지 또는 최대 14일까지 ANC 회복을 가능하게 하도록 지연될 수 있다. 호중구감소증의 재발성 사건은 치료 강도의 감소 (즉, 후속 주기 동안 베네토클락스를 21일로 및/또는 라벨에 따른 5-아자시티딘 용량 감소)로 해결될 수 있다.
CC-90011의 대상체내 용량 증량은 제1주기 동안 허용되지 않지만, 후속적으로 보다 높은 투여 코호트에서 허용되는 것으로 간주되는 용량으로의 증량은 SRC에 의해 승인된 경우에 후속 주기에서 허용될 수 있다.
치료로부터 이익을 얻을 최상의 기회를 허용하기 위해 및 CC-90011의 작용 메카니즘 및 베네토클락스와 5-아자시티딘 조합에 대한 반응까지의 시간 중앙값을 고려하면, 임상연구자는 환자를 적어도 3 주기 동안 치료하는 것을 목표로 해야 하며, 대상체가 CR 또는 PR로부터의 재발 기록, 질환 진행, 허용되지 않는 유해 사건(들), 치료의 추가 투여를 막는 병발 질병, 대상체를 철회시키도록 하는 임상연구자의 결정, 대상체의 동의 철회, 시험 치료 또는 절차 요건의 비준수, 사망 또는 행정적 이유를 입증하는 경우에 대상체는 보다 조기에 치료로부터 중단될 수 있다.
재발 또는 내성 질환 이외의 이유로 CC-90011을 중단하는 대상체는 재발 또는 내성 질환의 증거가 있을 때까지 또는 대상체가 임상연구자 판단에 따라 이익을 받고 있더라도 유해 사건으로 인해 치료를 더 이상 견딜 수 없을 때까지 베네토클락스 및 5-아자시티딘 조합을 계속할 수 있다. 베네토클락스 및 5-아자시티딘의 조합 치료를 중단하는 대상체는 또한 CC-90011을 사용한 치료를 중단할 것이다.
치료 종료 (EOT): 치료는 CR 또는 PR로부터의 재발 기록, 질환 진행, 허용되지 않는 유해 사건(들), 치료의 추가 투여를 막는 병발 질병, 대상체를 철회시키도록 하는 임상연구자의 결정, 대상체의 동의 철회, 시험 치료 또는 절차 요건의 비준수, 사망 또는 행정적 이유가 있을 때까지 계속될 것이다.
치료 종료 (EOT) 방문은 CC-90011의 마지막 용량 후 가장 이른 날에 및 마지막 용량일로부터 14일 내에 이루어져야 한다. EOT가 스케줄링된 방문 동안 발생하는 경우에, 모든 EOT 평가가 또한 완료되어야 한다.
추적 기간: 추적 기간에, 대상체는 안전성 추적 방문에서 CC-90011의 마지막 용량 또는 마지막 연구 방문 중 어느 기간이든 더 나중인 것 후 28일 (± 3일) 동안 추적될 것이다. 안전성 추적 방문 후에, 모든 대상체는 1년까지 또는 사망, 추적 소실, 추가의 데이터 수집을 위한 동의 철회 또는 시험 종료 중 어느 것이든 먼저 발생하는 것까지 생존 추적에 대해 후속 4주 (± 2주)마다 추적될 것이다. 생존 추적은 기록 검토 (공개 기록 포함) 및/또는 대상체, 가족 또는 대상체의 치료 의사와의 전화 접촉에 의해 수행될 수 있다.
대상체에 대한 연구 지속기간: 전체 연구의 예상 지속기간은 대략 5년일 것이며, 이는 대략 25개월의 등록 기간, 최대 28일 스크리닝 기간, 15개월의 치료 기간 및 마지막 용량 후 1년의 생존 추적 기간을 포함한다. 연구의 실제 지속기간은 중앙 치료 지속기간 및 대상체에 대한 추적에 좌우될 것이다.
각각의 개별 대상체에 대한 연구의 예상 지속기간은 대략 2년일 것이며, 이는 최대 28일 스크리닝 기간, 대략 15개월의 치료 기간 및 마지막 용량 후 1년의 생존 추적 기간을 포함한다.
시험 종료: 시험 종료는 치료후 추적을 완료하기 위한 마지막 대상체의 마지막 방문 날짜 또는 프로토콜에 사전명시된 바와 같은 1차, 2차 및/또는 탐색적 분석에 요구되는 마지막 대상체로부터의 마지막 데이터 포인트의 수령 날짜 중 어느 것이든 더 늦은 날짜로 정의될 것이다.
연구 집단 / 추정 환자 수: 이 연구는 치료-나이브이고 집중 유도 화학요법에 적격이 아닌 최대 58명의 AML 대상체, 즉 용량 증량에 대략 9 내지 18명의 대상체 및 용량 확장에 대략 40명의 대상체를 등록시킬 것이다.
주요 포함 기준: 대상체는 연구에 등록되기 위해 하기 기준을 충족할 것이다: (1) 대상체는 임의의 연구-관련 평가/절차가 수행되기 전에 사전 동의서 (ICF)를 이해하고 자발적으로 서명하여야 한다. (2) 대상체는 연구 방문 스케줄 및 다른 프로토콜 요건을 고수할 의향이 있고 고수할 수 있다. (3) 세계 보건 기구 (WHO) 분류에 의해 정의된 바와 같은 조직학적으로 확인된 치료 나이브 AML이고, 사전 동의서에 서명할 시점에 ≥ 75세이거나, 또는 ICF에 서명할 시점에 하기에 의해 정의된 집중 유도 화학요법의 사용을 불가능하게 하는 동반이환을 갖는 ≥ 60 내지 74세이다: (a) 하기 동반이환 중 적어도 하나를 갖는 ≥ 60 내지 74세: (i) 동부 협동 종양학 그룹 (ECOG) 수행 상태 2; (ii) 다중게이팅 획득 (MUGA) 또는 심장초음파 (ECHO)에 의해 결정된, 치료가 요구되는 울혈성 심부전 (CHF)의 심장 병력 또는 박출 계수 ≤ 50% 또는 만성 안정형 협심증; (iii) 크레아티닌 클리어런스 ≥ 30 mL/분 내지 < 45 mL/분; (iv) 총 빌리루빈 > 1.5 내지 ≤ 3.0x 정상 상한치 (ULN)인 중등도 간 장애; (v) 의사가 집중 화학요법에 비적합한 것으로 판단하는 임의의 다른 동반이환은 스크리닝 동안 및 연구 등록 전에 의뢰자에 의해 검토되어야 한다. (4) 대상체는 적어도 12주의 예상 기대 수명을 가져야 한다. (5) 대상체는 백혈구증가증을 치료하기 위한 히드록시우레아를 제외하고 AML에 대한 선행 요법을 받지 않았다. (6) 대상체는 0 내지 2의 ECOG 수행 상태를 갖는다. (7) 대상체는 하기 스크리닝 실험실 값을 가져야 한다: (a) 백혈구 (WBC) 수 ≤ 25 x 109개/L. 히드록시우레아 또는 백혈구분리반출술은 이 기준을 충족하도록 허용된다. (b) 정상 한계 내의 또는 보충제로 보정가능한 칼륨 및 마그네슘. (c) 요산 ≤ 7.5 mg/dL (446 μmol/L). 저요산혈증제 (예를 들어, 알로퓨리놀, 라스부리카제)를 사용한 선행 및/또는 공동 치료는 허용된다. 라스부리카제는 기준선 글루코스-6-포스페이트 데히드로게나제 (G6PD) 결핍을 갖는 대상체에서 금기된다. (d) 국제 정규화 비 (INR) < 1.5 x ULN 및 활성화 부분 트롬보플라스틴 시간 (aPTT) < 1.5 x ULN. (8) 다음에 의해 정의된 바와 같은 적절한 기관 기능: (a) 신장 기능: 콕크로프트 가울트 식에 의해 계산되거나 또는 24시간 소변 수집에 의해 측정된 크레아티닌 클리어런스 ≥ 30 mL/분; (b) 간 기능: 길버트 증후군 또는 백혈병성 기관 침범으로 인한 것이 아닌 한, AST, ALT ≤ 3x ULN, 빌리루빈 ≤ 1.5x ULN. < 75세인 대상체는 ≤ 3.0x ULN의 빌리루빈을 가질 수 있다; (c) MUGA 또는 ECHO에 의한 좌심실 박출 계수 (LVEF) > 50%. (9) 대상체는 베네토클락스의 제1 용량 전에 및 제1주기 동안 입원, 수화 및 요산-감소제를 사용한 치료를 받을 수 있어야 하고 받을 의향이 있어야 한다. (10) 가임 여성 (FCBP)은 1) 어느 시점에 초경을 달성하였거나, 2) 자궁절제술 또는 양측 난소절제술을 받지 않았거나, 3) 적어도 연속 24개월 동안 자연 폐경후가 아닌 (암 요법 후의 무월경 또는 다른 의학적 상태는 가임을 배제하지 않음) (즉, 이전 연속 24개월 동안 임의의 시점에 월경을 했음) 여성이다. 가임 여성은 (a) 이성 접촉으로부터의 진정한 금욕*을 약속하여야 하거나 (이는 월별 기준으로 검토되고 원문서에 기록됨), 또는 본 연구와 관련된 하기 기간 동안 1종의 고도로 효과적인 피임 방법 플러스 1종의 장벽 방법을 사용하는데 동의하여야 하고 이를 준수할 수 있어야 한다: 1) ICF의 서명으로부터; 2) 연구 치료를 받는 동안; 3) 용량 중단 동안; 및 4) CC-90011의 대상체의 마지막 용량 후 적어도 45일, 베네토클락스의 마지막 용량 후 30일 또는 5-아자시티딘의 마지막 용량 후 90일 중 어느 것이든 더 늦은 일자 동안. 고도로 효과적인 피임 방법은 배란의 억제와 연관된 조합된 호르몬 피임 (에스트로겐 및 프로게스토겐을 함유함) 또는 프로게스토겐-단독 호르몬 피임 (경구, 주사가능, 질내, 패치 또는 이식가능); 양측 난관 결찰; 자궁내 장치 (IUD); 자궁내 호르몬-방출 시스템; 또는 정관절제된 파트너 불임 (정관절제된 파트너가 FCBP 시험 참가자의 유일한 성적 파트너이고 정관절제된 파트너가 외과적 성공의 의학적 평가를 받았다면, 정관절제된 파트너는 고도로 효과적인 산아 제한 방법이라는 것을 주목함)이다. 장벽 방법은 남성 또는 여성 라텍스 또는 비-라텍스 합성 콘돔, 격막, 자궁경부 캡 또는 살정자제 함유 스폰지이다. (b) 연구 치료를 시작하기 전에 임상연구자에 의해 검증시 2회의 임신 검사에서 음성이다: (i) 스크리닝시에 혈청 임신 검사 음성 (적어도 25 mIU/mL의 감도); (ii) 연구 치료의 제1주기 제1일 전 72시간 내에 혈청 또는 소변 임신 검사 음성. 소변 임신 검사는 적어도 25 mIU/mL의 감도를 가져야 한다. (c) 연구 과정 동안 진행중인 임신 검사에 동의한다. 이는 대상체가 이성 접촉으로부터의 진정한 금욕*을 실시하는 경우에도 적용된다. (d) 치료 중에 및 CC-90011의 마지막 용량 후 45일, 베네토클락스의 마지막 용량 후 30일 또는 5-아자시티딘의 마지막 용량 후 90일 중 어느 것이든 더 늦은 일자 동안 임신 또는 난자 공여를 피한다. (11) 남성 대상체는 (a) 이성 성교로부터의 진정한 금욕*을 실시하거나 (이는 월별 기준으로 검토되어야 함), 또는 연구에 참여하면서 임신한 여성 또는 FCBP와의 성적 접촉 동안, 용량 중단 동안, 및 CC-90011의 대상체의 마지막 용량 후 적어도 105일, 베네토클락스의 마지막 용량 후 95일 또는 5-아자시티딘의 마지막 용량 후 90일 중 어느 것이든 더 늦은 일자 동안, 심지어 그가 성공적인 정관절제술을 받았다 하더라도, 콘돔 (라텍스 또는 비-라텍스 합성 콘돔이 권장됨)을 사용하는 것에 동의하여야 한다. 치료 중에 및 CC-90011의 마지막 용량 후 적어도 105일, 베네토클락스의 마지막 용량 후 95일 또는 5-아자시티딘의 마지막 용량 후 90일 중 어느 것이든 더 늦은 일자 동안 정액 또는 정자를 공여하지 않는 것에 동의한다. (*진정한 금욕은 이것이 바람직한 통상의 생활방식에 따르는 경우에 허용된다 [주기적 금욕 (예를 들어, 달력, 배란, 증상체온; 배란 시간을 결정하기 위해 체온을 사용함) 및 금단은 허용되는 피임 방법이 아님].)
임상시험용 제품 (CC-90011): CC-90011은 경구 투여를 위한 캡슐로서 공급될 것이다. 캡슐은 관련 국가 보건 기관의 규정에 따라 임상시험용 용도를 위해 적절하게 라벨링된, 어린이-안전 캡이 구비된 고밀도 폴리에틸렌 병에 공급될 것이다. CC-90011 제제화된 캡슐은 하기 투여량으로 이용가능하다: 20 mg, 40 mg 및 60 mg.
CC-90011은 실온 (25℃ [77℉] 미만)에서 저장될 것이고, 라벨 상에 개별적으로 배정된 만료일 내에 사용되어야 한다. 대상체는 CC-90011 캡슐을 광범위하게 취급하지 않아야 하고, 섭취시까지 포장 내 저장을 유지해야 한다.
임상시험용 제품 (베네토클락스): 베네토클락스 (벤클렉스타®)는 경구 투여를 위한 10 mg, 50 mg 및 100 mg 정제로서 입수가능하다. 대상체는 그의 지역 병원 약국 또는 허가된 유통업체를 통해 상업적으로 입수가능한 제품을 수득할 수 있을 것이다.
임상시험용 제품 (5-아자시티딘): 5-아자시티딘은 재구성 및 투여를 위한 100 mg 단일-용량 바이알 내의 동결건조된 분말로서 공급된다. 대상체는 그의 지역 병원 약국 또는 허가된 유통업체를 통해 상업적으로 입수가능한 제품을 수득할 수 있을 것이다.
치료 투여 및 스케줄: 치료로부터 이익을 얻을 최상의 기회를 허용하기 위해 및 CC-90011의 작용 메카니즘 및 베네토클락스와 5-아자시티딘 조합에 대한 반응까지의 시간 중앙값을 고려하면, 대상체는 적어도 3 주기 동안 치료될 것이며, 대상체가 CR 또는 PR로부터의 재발 기록, 질환 진행, 허용되지 않는 유해 사건(들), 치료의 추가 투여를 막는 병발 질병, 대상체를 철회시키도록 하는 임상연구자의 결정, 대상체의 동의 철회, 시험 치료 또는 절차 요건의 비준수, 사망 또는 행정적 이유를 입증하는 경우에 대상체는 보다 일찍 치료로부터 중단될 수 있다. 이들 이유의 부재 하에, 대상체는 연구 치료를 계속할 수 있다.
재발 또는 내성 질환 이외의 이유로 CC-90011을 중단하는 대상체는 재발 또는 내성 질환의 증거가 있을 때까지 또는 대상체가 임상연구자 판단에 따라 이익을 받고 있더라도 유해 사건으로 인해 치료를 더 이상 견딜 수 없을 때까지 조합 약물을 계속할 수 있다. 베네토클락스 및 5-아자시티딘의 조합 치료를 중단하는 대상체는 또한 CC-90011을 사용한 치료를 중단할 것이다.
CC-90011은 연속 4주 (28일) 주기에서 매주 1회 기준으로 (제1일, 제8일, 제15일 및 제22일에) PO 제공될 것이다. CC-90011은 적어도 240 mL (8 온스)의 물과 함께 투여될 것이다. 대상체는 CC-90011 투여 전 최소 4시간 동안 금식해야 하고, 투여 후 최대 1시간 동안 임의의 음식물 섭취를 삼가해야 한다. 대상체는 각각의 투여 후 적어도 1시간 동안 음식물 또는 다른 의약 섭취를 삼가해야 한다.
용량 증량 파트는 28일 주기에서 20 mg PO QW의 CC-90011의 용량으로 시작할 것이다. 허용되는 경우에, 40 mg PO QW의 제2 용량 수준 코호트가 개방될 수 있고, 이후 60 mg PO QW의 계획된 제3 용량 수준 코호트가 이어질 수 있다. CC-90011의 안전성 및 내약성에 관한 추가의 정보가 연구의 수행 동안 임의의 시점에 이용가능한 경우에, 대안적 용량 및/또는 스케줄이 SRC의 권장에 따라 탐색될 수 있다.
CC-90011, 베네토클락스 및 5-아자시티딘을 동일한 날에 투여하고자 하는 경우에, CC-90011을 첫번째로 투여하고, 이어서 5-아자시티딘을 투여하고, 이어서 CC-90011의 용량으로부터 적어도 6시간 후에 베네토클락스를 투여할 것이다.
베네토클락스는 승인된 라벨 (벤클렉스타®, 2019)에 따라 각각의 28일 주기의 제1일 내지 제28일에 QD 경구로 투여될 것이다. 제1주기에 대해 제1일에 100 mg, 제2일에 200 mg 및 제3일에 400 mg을 투여하는 단기 용량 증량이 이루어진다. 베네토클락스는 후속 일에 400 mg으로 투여된다. 대상체는 제1주기에서 베네토클락스 용량 증량 동안 최소 제1주기 제8일까지 입원할 것이다. 이러한 입원은 프로토콜에 따라 요구되고, 심각한 유해 사건을 구성하지 않는다. 대상체는 매일 대략 동일한 시간 ± 6시간에 그의 1일 용량을 복용하도록 지시받아야 한다. 각각의 용량은 식사 및 물과 함께 복용되어야 하고, 가능한 한 짧은 시간에 걸쳐 소비되어야 한다. 대상체는 정제를 완전히 삼키고 정제를 씹지 않도록 지시받아야 한다. 제1 베네토클락스 용량 전 3일 내 및 베네토클락스의 마지막 용량까지 그레이프프루트, 그레이프프루트 제품, 세빌 오렌지 (세빌 오렌지 함유 마멀레이드 포함) 또는 스타 프루트 소비는 금지된다.
5-아자시티딘은 IV 주입 또는 SC 주사로서 각각의 28일 주기의 제1일 내지 제7일에 75 mg/m2로 승인된 라벨 (비다자®, 2018)에 따라 투여될 것이다.
5-아자시티딘이 정맥내로 투여될 경우, 이는 CC-90011 PK 수집에 사용된 부문에 대해 반대측에 제공되어야 한다. 이는 CC-90011에 대한 집중 PK 샘플 수집이 수행되는 제1주기의 제1일에만 적용된다.
7일 투여 기간 동안 2회 이하의 용량이 누락된 경우에, 대상체가 전체 7일의 요법을 받도록 투여를 계속해야 한다. 7일 투여 기간 동안 3일 이상이 누락된 경우에, 임상연구자는 의뢰자와 접촉해야 하고, 투여에 대한 결정은 사례별 기준으로 이루어질 것이다.
DLT에 대해 평가가능한 대상체의 정의: 적어도 1회 용량의 CC-90011 및/또는 조합 약물(들)을 받은 모든 대상체는 안전성에 대해 평가가능할 것이다.
제1 용량이 용량 증량 동안 대상체의 임의의 코호트에서 투여된 후에, 각각의 코호트의 대상체는 다음 보다 높은 프로토콜-명시된 용량 코호트가 시작될 수 있기 전 적어도 28일 (제1주기, DLT 범위) 동안 관찰될 것이다.
DLT 평가가능한 것으로 간주되는 대상체의 경우, 대상체는 적어도 1회 용량의 CC-90011을 받은 후 제1주기 DLT를 가졌어야 하거나 또는 DLT 없이 제1주기를 완료하였어야 한다. 대상체가 요법의 제1 주기의 CC-90011의 계획된 용량의 75% (즉, 28일 내에 CC-90011의 4회 용량 중 3회) 및 베네토클락스 및 5-아자시티딘의 총 계획된 용량의 80% (즉, >22회 베네토클락스 용량; ≥ 6회 용량의 5-아자시티딘)를 완료하기 전에 독성 이외의 이유 (예를 들어, 개인적 이유 또는 질환 진행)로 연구를 중단하는 경우에, 이 대상체는 치료 주기를 완료한 것으로 간주되지 않을 것이고, 대체될 것이다.
대상체의 다음 코호트에서의 용량 증량에 대한 기준: SRC는 용량 증량 결정을 내릴 것이다. 용량 확장을 위해 SRC에 의해 선택되는 용량 수준에 대해, 적어도 6명의 대상체가 허용되는 용량 수준을 선언하기 위해 용량 증량 파트에서 DLT에 대해 평가되어야 한다.
용량 수준의 수는 DLT의 발생률에 좌우된다. 대상체는 1개 초과의 DLT를 경험할 수 있다. 용량 증량 결정은 DLT 사건을 경험한 대상체의 수에 기초한다.
효능 평가: 연속 혈액 및 골수 샘플링을 사용하여 제2주기 제1일에 시작하여 연구 약물 요법에 대한 반응을 결정할 것이다.
기준선에서, 골수 흡인물 (BMA) 샘플이 요구된다. 생검은 흡인물이 이용가능하지 않은 경우에 수집되어야 하고, 기관 실무에 따라 흡인물에 추가로 수집될 수 있다. BMA로부터의 세포유전학적 및 분자적 프로파일링이 또한 스크리닝시에 요구된다 (이것들이 과거 90일의 대상체의 의학적 기록으로부터 입력하는데 이용가능하지 않는 한). 전혈구 계수, 말초 혈액 도말표본 (PBS) 및 BMA를 사용하여 시점마다 요법에 대한 반응을 결정할 것이다. 샘플은 주기 종료 4일 전까지, 예를 들어 제25일 내지 제28일에 수득될 수 있다.
치료에 대한 반응은 보고된 혈액학 실험실 파라미터, 말초 혈액 도말표본, 골수 흡인물 및/또는 생검에 기초하여 임상연구자에 따라 평가될 것이다.
혈액학적 반응은 이전 혈액학적 장애를 갖는 대상체가 연구에 등록될 수 있기 때문에 평가될 것이다. 수혈 의존성은 연구 치료 전 8주 내에 ≥ 2 단위의 RBC 및/또는 혈소판을 받은 것으로 정의된다. 수혈 비의존성은 수혈이 없는 8주의 기간으로 정의된다.
대상체는 연구 치료가 중단되는 경우에 치료 종료 평가를 받아야 한다. 치료 중단에 대한 이유는 eCRF 페이지 및 원문서에 기록될 것이다.
MRD 상태는 또한 각각의 골수 수집시에 중앙에서 MFC 및/또는 NGS에 의해 평가될 것이다.
최소 잔류 질환은 효능 평가와 동시에 평가될 것이고, 중앙에서 평가될 것이다. 현장은 말초 혈액 및 골수 흡인물 (BMA)/골수 생검 (BMB) 샘플이 수집되고 각각의 골수 수집 시점에 탐색적 시험을 위해 저장되는 것을 보장할 것이다.
진행성 질환은 하기와 같이 정의될 것이다: (1) 기준선 (스크리닝) 골수 모세포 수로부터 골수 모세포 수 백분율의 > 50% 증가 (기준선에서 < 30% 모세포를 갖는 경우에 최소 15% 포인트 증가가 요구됨; 또는 적어도 3개월에 걸쳐 > 70%의 지속적인 골수 모세포 수; 절대 호중구 수 (ANC)의 절대 수준 (> 0.5 x 109개/L)으로의 적어도 100% 개선 부재 및/또는 혈소판 수 > 50 x 109개/L 비수혈), 또는 말초 모세포 (WBC x % 모세포)의 > 25 x 109개/L (> 25,000개/μL)로의 > 50% 증가 (분화 증후군의 부재 하), 또는 새로운 골수외 질환.
진행성 질환 날짜는 기준선으로부터의 골수 모세포 수의 > 50% 증가, > 70%의 기준선 골수 모세포 수를 갖는 대상체에서의 > 70%의 골수 모세포의 지속, 말초 혈액 모세포 수의 배가 또는 새로운 골수외 질환이 존재하는 제1 날짜로 정의된다.
치료 실패는 진행성 질환 또는 적어도 PR을 달성하지 않는 것으로 정의될 것이다. 진행성 질환 (상기 정의된 바와 같음) 또는 허용되지 않는 독성의 부재 하에, 대상체는 임상연구자에 의해 판단시 이익을 도출하는 경우에 치료를 계속할 수 있다.
골수 흡인 및 코어 샘플링 (생검)은 표준 관리에 따라 수행되어야 하고, 국제 혈액학 표준화 협회 (ICSH) 가이드라인에 따라 지역 현장의 실험실에서 분석되어야 한다.
급성 골수성 백혈병 반응 기준은 최상의 전체 반응 카테고리: CR/CRh 비율 및 전체 반응률 (ORR)에 의해 요약될 것이다. ORR은 완전 완화 (즉, CR, CRMRD-, CRi), 형태학적 무백혈병 상태 (MLFS) 및 부분 완화 (PR)의 모든 반응을 포함한다. 최소 잔류 질환 (MRD) 반응률 및 MRD 전환율이 또한 효능 변수로서 평가될 것이다.
전체 생존 (OS), 무사건 생존 (EFS) 및 반응 지속기간 (CR/CRh 및 ORR)을 포함한 임상 활성의 다른 척도가 요약될 것이다.
치료가 중단된 후, 생존 데이터의 수집은 마지막 용량 후 1년 동안 또는 사망, 추적 소실 또는 추가의 데이터 수집을 위한 동의 철회까지 4주마다 스케줄링된다.
혈장에서의 CC-90011의 PK 평가를 위해, 혈액 샘플이 그 시점에서 모든 대상체로부터 수집될 것이다. 시간-매칭 삼중 ECG가 또한 그 시점에서 제1주기 제1일 및 제1주기 제2일에 수집될 것이다.
* * * * *
본 개시내용은 특정 실시양태 및 실시예와 관련하여 기재되었지만; 달리 나타내지 않는 한, 청구된 발명은 이러한 구체적 실시양태 및 실시예로 과도하게 제한되지 않아야 한다.
특정 실시양태가 예시되고 기재되었지만, 하기 청구범위에 정의된 바와 같은 그의 보다 넓은 측면에서의 기술로부터 벗어나지 않으면서 관련 기술분야의 통상의 기술자에 따라 그 안에서 변화 및 변형이 이루어질 수 있다는 것이 이해되어야 한다.
본원에 예시적으로 기재된 실시양태는 본원에 구체적으로 개시되지 않은 임의의 요소 또는 요소들, 제한 또는 제한들의 부재 하에 적합하게 실시될 수 있다. 따라서, 예를 들어, 용어 "포함하는", "포함한", "함유하는" 등은 광범위하게 제한 없이 읽혀질 것이다. 추가적으로, 본원에 사용된 용어 및 표현은 제한이 아니라 설명의 관점에서 사용되었고, 이러한 용어 및 표현의 사용에서 제시되고 기재된 특색 또는 그의 부분의 임의의 등가물을 배제하려는 의도는 없지만, 청구된 기술의 범주 내에서 다양한 변형이 가능한 것으로 인식된다. 추가적으로, 어구 "본질적으로 이루어진"은 구체적으로 언급된 요소 및 청구된 기술의 기본적이고 신규한 특징에 실질적으로 영향을 미치지 않는 추가의 요소를 포함하는 것으로 이해될 것이다. 어구 "이루어진"은 명시되지 않은 임의의 요소를 배제한다.
추가로, 본 개시내용의 특색 또는 측면이 마쿠쉬 군의 관점에서 기재되는 경우에, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 본 개시내용이 또한 마쿠쉬 군의 임의의 개별 구성원 또는 구성원의 하위군의 관점에서 기재된다는 것을 인식할 것이다.
관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 이해되는 바와 같이, 임의의 및 모든 목적을 위해, 특히 서면 설명을 제공하는 관점에서, 본원에 개시된 모든 범위는 또한 종점을 포함한 임의의 및 모든 가능한 하위범위 및 그의 하위범위의 조합을 포괄한다. 임의의 열거된 범위는 해당 범위가 적어도 동일한 1/2, 1/3, 1/4, 1/5, 1/10 등으로 분해되는 것을 충분히 기재하고 가능하게 하는 것으로 용이하게 인식될 수 있다. 비제한적 예로서, 본원에 논의된 각각의 범위는 하위 1/3, 중간 1/3 및 상위 1/3 등으로 용이하게 분해될 수 있다. 또한 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 이해될 바와 같이, 모든 표현, 예컨대 "최대", "적어도", "초과", "미만" 등은 언급된 수를 포함하고, 상기 논의된 바와 같은 하위범위로 후속적으로 분해될 수 있는 범위를 지칭한다. 마지막으로, 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 이해될 바와 같이, 범위는 각각의 개별 구성원을 포함한다.
본 명세서에 언급된 모든 간행물, 특허 출원, 허여된 특허 및 다른 문헌은 각각의 개별 간행물, 특허 출원, 허여된 특허 또는 다른 문헌이 그 전문이 참조로 포함되는 것으로 구체적으로 및 개별적으로 나타내어진 것처럼 본원에 참조로 포함된다. 참조로 포함된 문헌에 담긴 정의는 이들이 본 개시내용에서의 정의와 모순되는 정도까지 배제된다.
다른 실시양태가 하기 청구범위에 제시된다.

Claims (40)

  1. 급성 골수성 백혈병 (AML)을 갖는 인간 대상체에게 (i) 5-아자시티딘을 포함하는 제약 조성물, (ii) 적어도 1종의 추가의 치료제 및 (iii) 리신 특이적 데메틸라제-1 (LSD-1) 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염의 조합을 투여하는 것을 포함하는, AML을 갖는 인간 대상체를 치료하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 대상체가 집중 유도 화학요법에 적격이 아닌 것인 방법.
  3. 제1항에 있어서,
    (a) 5-아자시티딘 및 적어도 1종의 추가의 치료제가 병용으로 투여되거나; 또는
    (b) 5-아자시티딘 및 적어도 1종의 추가의 치료제가 순차적으로 투여되며, 여기서 5-아자시티딘이 첫번째로 투여되는 것인 방법.
  4. 제1항에 있어서,
    (a) 5-아자시티딘 및 적어도 1종의 추가의 치료제가 단일 단위 투여 형태로서 공동-제제화되거나; 또는
    (b) 5-아자시티딘 및 적어도 1종의 추가의 치료제가 별개의 투여 형태로서 제제화되는 것인 방법.
  5. 제1항에 있어서,
    (a) 5-아자시티딘 및 LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염이 병용으로 투여되거나; 또는
    (b) 5-아자시티딘 및 LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염이 순차적으로 투여되는 것인 방법.
  6. 제1항에 있어서,
    (a) 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제 및 LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염이 병용으로 투여되거나; 또는
    (b) 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제 및 LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염이 순차적으로 투여되는 것인 방법.
  7. 제1항에 있어서, 5-아자시티딘이
    (a) 피하로 또는 정맥내로; 및/또는
    (b) 약 75 mg/m2 내지 약 100 mg/m2의 용량으로 피하로 또는 정맥내로; 및/또는
    (c) 약 75 mg/m2의 용량으로 피하로 또는 정맥내로; 및/또는
    (d) 28일 주기의 처음 7일 동안 매일 피하로 또는 정맥내로
    투여되는 것인 방법.
  8. 제1항에 있어서, 5-아자시티딘이
    (a) 약 50 mg, 약 60 mg, 약 70 mg, 약 80 mg, 약 90 mg, 약 100 mg, 약 150 mg, 약 200 mg, 약 250 mg, 약 300 mg, 약 350 mg, 약 400 mg, 약 450 mg, 약 500 mg, 약 550 mg 또는 600 mg의 용량으로 경구로; 및/또는
    (b) 약 200 mg의 용량으로; 및/또는
    (c) 약 300 mg의 용량으로; 및/또는
    (d) 28일 주기의 처음 7일, 14일 또는 21일 동안; 및/또는
    (e) 1일에 1 또는 2회 인간 대상체에게; 및/또는
    (f) 캡슐 또는 정제 형태로
    투여되는 것인 방법.
  9. 제8항에 있어서, 5-아자시티딘이 비-장용-코팅 정제 형태로 투여되는 것인 방법.
  10. 제1항에 있어서, 5-아자시티딘이 경구로:
    (a) 28일 주기에서 14일 동안 1일에 약 200 mg의 용량으로;
    (b) 28일 주기에서 14일 동안 1일에 약 300 mg의 용량으로;
    (c) 28일 주기에서 21일 동안 1일에 약 200 mg의 용량으로; 또는
    (d) 28일 주기에서 21일 동안 1일에 약 300 mg의 용량으로
    투여되는 것인 방법.
  11. 제1항에 있어서, 5-아자시티딘이 경구로:
    (a) 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14일 또는 14일 초과 동안 매일 투여된 후, 임의로 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14일 또는 14일 초과의 치료 휴약기가 이어지거나;
    (b) 14일 이상 동안 매일 투여된 후, 임의로 7일 이상의 치료 휴약기가 이어지거나;
    (c) 21일 이상 동안 투여된 후, 임의로 7일 이상의 치료 휴약기가 이어지거나;
    (d) 14일 동안 투여된 후, 임의로 14일의 치료 휴약기가 이어지거나;
    (e) 21일 이상 동안 투여된 후, 7일 이상의 치료 휴약기가 이어지거나; 또는
    (f) 14일 동안 투여된 후, 14일의 치료 휴약기가 이어지는 것인 방법.
  12. 제1항에 있어서, 5-아자시티딘이 경구로:
    (a) 14일 동안 매일 약 300 mg의 용량으로 투여된 후, 14일의 치료 휴약기가 이어지거나;
    (b) 14일 동안 매일 약 200 mg의 용량으로 투여된 후, 14일의 치료 휴약기가 이어지거나;
    (c) 21일 동안 매일 약 300 mg의 용량으로 투여된 후, 7일의 치료 휴약기가 이어지거나; 또는
    (d) 매일 약 200 mg의 용량으로 투여된 후, 7일의 치료 휴약기가 이어지는 것인 방법.
  13. 제1항에 있어서, 5-아자시티딘이 경구로:
    (a) 28일 주기에서 7일 동안 1일마다 5-아자시티딘의 투여를 포함하는 치료 주기를 사용하여;
    (b) 28일 주기에서 14일 동안 1일마다 5-아자시티딘의 투여를 포함하는 치료 주기를 사용하여; 또는
    (c) 28일 주기에서 21일 동안 1일마다 5-아자시티딘의 투여를 포함하는 치료 주기를 사용하여
    투여되는 것인 방법.
  14. 제1항에 있어서, 적어도 1종의 추가의 치료제가 길테리티닙, 미도스타우린, 퀴자르티닙, 에나시데닙, 이보시데닙 및/또는 베네토클락스를 포함하는 것인 방법.
  15. 제14항에 있어서, 적어도 1종의 추가의 치료제가 베네토클락스인 방법.
  16. 제15항에 있어서, 베네토클락스가
    (a) 경구로; 및/또는
    (b) 정제 형태로; 및/또는
    (c) 매일; 및/또는
    (d) 약 400 mg의 용량으로
    투여되는 것인 방법.
  17. 제1항에 있어서, LSD-1 억제제가 하기 구조를 갖는 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염인 방법.
    Figure pct00015
  18. 제17항에 있어서, LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염이
    (a) 경구로; 및/또는
    (b) 정제 또는 캡슐 형태로; 및/또는
    (c) 1주 1회; 및/또는
    (d) 약 20 mg, 약 40 mg 또는 약 60 mg의 용량으로
    투여되는 것인 방법.
  19. 제1항에 있어서,
    (a) AML이 5-아자시티딘 단독을 사용한 치료에 대해 내성이고/거나;
    (b) AML이 적어도 1종의 추가의 치료제 단독을 사용한 치료에 대해 내성이고/거나;
    (c) AML이 LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염 단독을 사용한 치료에 대해 내성이고/거나;
    (d) 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합이 5-아자시티딘 단독과 비교하여 AML 세포 사멸을 증가시키고/거나;
    (e) 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합이 5-아자시티딘 단독과 비교하여 AML 세포 사멸을 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 100%만큼 증가시키고/거나;
    (f) 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합이 적어도 1종의 추가의 치료제 단독과 비교하여 AML 세포 사멸을 증가시키고/거나;
    (g) 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합이 적어도 1종의 추가의 치료제 단독과 비교하여 AML 세포 사멸을 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 100%만큼 증가시키고/거나;
    (h) 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합이 LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염과 비교하여 AML 세포 사멸을 증가시키고/거나;
    (i) 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합이 LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염과 비교하여 AML 세포 사멸을 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 100%만큼 증가시키고/거나;
    (j) 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합이 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염 중 어느 2종의 조합과 비교하여 AML 세포 사멸을 증가시키고/거나;
    (k) 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합이 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염 중 어느 2종의 조합과 비교하여 AML 세포 사멸을 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 100%만큼 증가시키고/거나;
    (l) 경구로 투여되는 5-아자시티딘 및 적어도 1종의 추가의 치료제가 정맥내로 또는 피하로 투여되는 5-아자시티딘 및 적어도 1종의 추가의 치료제와 비교하여 AML 세포 사멸을 증가시키고/거나;
    (m) 경구로 투여되는 5-아자시티딘 및 적어도 1종의 추가의 치료제가 정맥내로 또는 피하로 투여되는 5-아자시티딘 및 적어도 1종의 추가의 치료제와 비교하여 AML 세포 사멸을 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 100%만큼 증가시키고/거나;
    (n) 경구로 투여되는 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합이 정맥내로 또는 피하로 투여되는 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합과 비교하여 AML 세포 사멸을 증가시키고/거나;
    (o) 경구로 투여되는 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합이 정맥내로 또는 피하로 투여되는 5-아자시티딘, 적어도 1종의 추가의 치료제, LSD-1 억제제 및 그의 제약상 허용되는 염의 조합과 비교하여 AML 세포 사멸을 약 10%, 약 15%, 약 20%, 약 25%, 약 30%, 약 35%, 약 40%, 약 45%, 약 50%, 약 55%, 약 60%, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 약 95% 또는 약 100%만큼 증가시키는 것인 방법.
  20. 제1항에 있어서,
    (a) 5-아자시티딘을 28일 주기의 처음 7일 동안 1일 1회 피하로 또는 정맥내로 대상체에게 투여하는 단계;
    (b) 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기에서 1일 1회 대상체에게 투여하는 단계; 및
    (c) LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염을 28일 주기에서 1주 1회 대상체에게 투여하는 단계
    를 포함하는 방법.
  21. 제1항에 있어서,
    (a) 5-아자시티딘을 28일 주기의 제1일, 제2일, 제3일, 제4일, 제5일, 제6일 및 제7일에 피하로 또는 정맥내로 대상체에게 투여하는 단계;
    (b) 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기의 제1일, 제2일, 제3일, 제4일, 제5일, 제6일, 제7일, 제8일, 제9일, 제10일, 제11일, 제12일, 제13일, 제14일, 제15일, 제16일, 제17일, 제18일, 제19일, 제20일, 제21일, 제22일, 제23일, 제24일, 제25일, 제26일, 제27일 및 제28일에 대상체에게 투여하는 단계; 및
    (c) LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염을 28일 주기의 제1일, 제8일, 제15일 및 제22일에 대상체에게 투여하는 단계
    를 포함하는 방법.
  22. 제21항에 있어서,
    (a) 5-아자시티딘을 28일 주기의 처음 7일 동안 매일 약 75 mg/m2의 용량으로 피하로 또는 정맥내로 투여하는 단계; 및/또는
    (b) 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기의 매일 적어도 약 100 mg의 용량으로 대상체에게 투여하는 단계; 및/또는
    (c) LSD-1 억제제를 28일 주기의 1주 1회 약 20 mg, 약 40 mg 또는 약 60 mg의 용량으로 대상체에게 투여하는 단계
    를 추가로 포함하는 방법.
  23. 제22항에 있어서, 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기의 제1일에 약 100 mg의 용량, 제2일에 약 200 mg의 용량, 제3일에 약 300 mg의 용량 및 제4일-제28일에 약 400 mg의 용량으로 대상체에게 공동으로 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  24. 제1항에 있어서,
    (a) 5-아자시티딘을 28일 주기의 처음 7일 동안 매일 약 75 mg/m2의 용량으로 피하로 또는 정맥내로 투여하는 단계; 및/또는
    (b) 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기의 매일 약 400 mg의 용량으로 경구로 대상체에게 투여하는 단계; 및/또는
    (c) LSD-1 억제제를 28일 주기의 1주 1회 약 20 mg, 약 40 mg 또는 약 60 mg의 용량으로 경구로 대상체에게 투여하는 단계
    를 포함하는 방법.
  25. 제24항에 있어서, 적어도 1종의 추가의 치료제를 투여하는 것이 베네토클락스를 투여하는 것을 포함하는 것인 방법.
  26. 제1항에 있어서,
    (a) 5-아자시티딘을 28일 주기의 처음 14일 동안 1일 1회 경구로 대상체에게 투여하는 단계;
    (b) 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기에서 1일 1회 대상체에게 투여하는 단계; 및
    (c) LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염을 28일 주기에서 1주 1회 대상체에게 투여하는 단계
    를 포함하는 방법.
  27. 제1항에 있어서,
    (a) 5-아자시티딘을 28일 주기의 제1일, 제2일, 제3일, 제4일, 제5일, 제6일, 제7일, 제8일, 제9일, 제10일, 제11일, 제12일, 제13일 및 제14일에 경구로 대상체에게 투여하는 단계;
    (b) 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기의 제1일, 제2일, 제3일, 제4일, 제5일, 제6일, 제7일, 제8일, 제9일, 제10일, 제11일, 제12일, 제13일, 제14일, 제15일, 제16일, 제17일, 제18일, 제19일, 제20일, 제21일, 제22일, 제23일, 제24일, 제25일, 제26일, 제27일 및 제28일에 대상체에게 투여하는 단계; 및
    (c) LSD-1 억제제 또는 그의 제약상 허용되는 염을 28일 주기의 제1일, 제8일, 제15일 및 제22일에 대상체에게 투여하는 단계
    를 포함하는 방법.
  28. 제27항에 있어서,
    (a) 5-아자시티딘을 28일 주기의 처음 14일 동안 매일 약 300 mg의 용량으로 투여하는 단계; 및/또는
    (b) 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기의 매일 적어도 약 100 mg의 용량으로 대상체에게 투여하는 단계; 및/또는
    (c) LSD-1 억제제를 28일 주기의 1주 1회 약 20 mg, 약 40 mg 또는 약 60 mg의 용량으로 대상체에게 투여하는 단계
    를 추가로 포함하는 방법.
  29. 제28항에 있어서, 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기의 제1일에 약 100 mg의 용량, 제2일에 약 200 mg의 용량, 제3일에 약 300 mg의 용량 및 제4일-제28일에 약 400 mg의 용량으로 대상체에게 공동으로 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  30. 제1항에 있어서,
    (a) 5-아자시티딘을 28일 주기의 처음 14일 동안 매일 약 300 mg의 용량으로 경구로 투여하는 단계; 및/또는
    (b) 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기의 매일 약 400 mg의 용량으로 경구로 대상체에게 투여하는 단계; 및/또는
    (c) LSD-1 억제제를 28일 주기의 1주 1회 약 20 mg, 약 40 mg 또는 약 60 mg의 용량으로 경구로 대상체에게 투여하는 단계
    를 포함하는 방법.
  31. 제30항에 있어서, 적어도 1종의 추가의 치료제를 투여하는 것이 베네토클락스를 투여하는 것을 포함하는 것인 방법.
  32. 제27항에 있어서,
    (a) 5-아자시티딘을 28일 주기의 처음 14일 동안 매일 약 200 mg의 용량으로 투여하는 단계; 및/또는
    (b) 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기의 매일 적어도 약 100 mg의 용량으로 대상체에게 투여하는 단계; 및/또는
    (c) LSD-1 억제제를 28일 주기의 1주 1회 약 20 mg, 약 40 mg 또는 약 60 mg의 용량으로 대상체에게 투여하는 단계
    를 추가로 포함하는 방법.
  33. 제32항에 있어서, 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기의 제1일에 약 100 mg의 용량, 제2일에 약 200 mg의 용량, 제3일에 약 300 mg의 용량 및 제4일-제28일에 약 400 mg의 용량으로 대상체에게 공동으로 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  34. 제1항에 있어서,
    (a) 5-아자시티딘을 28일 주기의 처음 14일 동안 매일 약 200 mg의 용량으로 경구로 투여하는 단계; 및/또는
    (b) 적어도 1종의 추가의 치료제를 28일 주기의 매일 약 400 mg의 용량으로 경구로 대상체에게 투여하는 단계; 및/또는
    (c) LSD-1 억제제를 28일 주기의 1주 1회 약 20 mg, 약 40 mg 또는 약 60 mg의 용량으로 경구로 대상체에게 투여하는 단계
    를 포함하는 방법.
  35. 제34항에 있어서, 적어도 1종의 추가의 치료제를 투여하는 것이 베네토클락스를 투여하는 것을 포함하는 것인 방법.
  36. 제1항에 있어서, 급성 골수성 백혈병이 재발성 유전자 이상을 동반한 급성 골수성 백혈병, 골수이형성증-관련 변화를 동반한 급성 골수성 백혈병, 요법-관련 골수성 신생물, 골수성 육종, 다운 증후군과 관련된 골수성 증식, 모구성 형질세포양 수지상 세포 신생물 및/또는 급성 전골수구성 백혈병을 포함하는 것인 방법.
  37. 집중 유도 화학요법에 적격이 아닌 급성 골수성 백혈병 (AML)을 갖는 인간 대상체에게
    (i) 제1 연속 28일 주기에서:
    (a) 5-아자시티딘을 제1일 내지 제7일에 매일 약 75 mg/m2의 용량으로 피하로 또는 정맥내로;
    (b) 베네토클락스를 제1일에 약 100 mg; 제2일에 약 200 mg 및 제3일 내지 제28일에 매일 약 400 mg의 용량으로 경구로; 및
    (c) 하기 화합물의 베실레이트 염을 포함하는 제약 조성물을:
    Figure pct00016

    제1일, 제8일, 제15일 및 제22일에 투여하는 단계; 및
    (ii) 후속 28일 주기에서:
    (d) 5-아자시티딘을 각각의 후속 주기의 제1일 내지 제7일에 매일 약 75 mg/m2의 용량으로 피하로 또는 정맥내로;
    (e) 베네토클락스를 각각의 후속 주기의 제1일 내지 제28일에 약 400 mg의 용량으로 경구로; 및
    (f) 하기 화합물의 베실레이트 염을 포함하는 제약 조성물을
    Figure pct00017

    각각의 후속 주기의 제1일, 제8일, 제15일 및 제22일에 투여하는 단계
    를 포함하는, 집중 유도 화학요법에 적격이 아닌 AML을 갖는 인간 대상체를 치료하는 방법.
  38. 제37항에 있어서, 제약 조성물이
    (a) 제1 연속 28일 주기 및 후속 28일 주기에서 약 20 mg의 용량;
    (b) 제1 연속 28일 주기 및 후속 28일 주기에서 약 40 mg의 용량; 또는
    (c) 제1 연속 28일 주기 및 후속 28일 주기에서 약 60 mg의 용량
    으로 투여되는 것인 방법.
  39. 제38항에 있어서, 제약 조성물이 제1 연속 28일 주기 및 후속 28일 주기에서 약 20 mg의 용량으로 투여되고; 20 mg의 용량이 허용되는 경우에는, 제2 용량 코호트가 개방될 것이며, 여기서 제약 조성물이 제1 연속 28일 주기 및 후속 28일 주기에서 약 40 mg의 용량으로 투여되는 것인 방법.
  40. 제39항에 있어서, 40 mg의 용량이 허용되는 경우에는, 제3 용량 코호트가 개방될 것이며, 여기서 제약 조성물이 제1 연속 28일 주기 및 후속 28일 주기에서 약 40 mg의 용량으로 투여되는 것인 방법.
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