KR20220027341A - 식물 유래 올리고뉴클레오티드를 포함하는 피부 장벽기능 강화용 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 명세서는 식물 유래 올리고뉴클레오티드를 유효성분으로 포함하는 피부 장벽기능 강화용 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 서열번호 1 내지 3으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열, 또는 상기 서열과 상동성을 가지는 서열의 식물 유래 올리고뉴클레오티드를 유효성분으로 포함하고 있어, 상기 올리고뉴클레오티드가 피부세포에 투과할 수 있는 형태로 각질형성세포에 처리되면, 피부 장벽기능과 관련된 마커인 필라그린(filaggrin, FLG) 및 로리크린(loricrin, LOR)의 발현량을 증가시켜 피부 장벽기능 강화하고, 피부 보습 또는 피부 항산화 기능을 개선 및 강화하는 우수한 효과가 있다.
Description
본 명세서는 식물 유래 올리고뉴클레오티드를 유효성분으로 포함하는 피부 장벽기능 강화용 조성물에 관한 것이다.
피부(skin) 중에서 최외각에 위치한 표피(epidermis)의 가장 중요한 기능은, 외부로부터의 다양한 자극, 예컨대 화학 물질, 대기오염물질, 건조한 환경, 자외선 등의 물리, 화학적 자극인자에 대한 방어와 피부를 통한 체내수분의 과도한 발산을 막는 보호기능이며, 이러한 보호기능은 각질 형성세포로 구성된 각질층이 정상적으로 형성되어 있을 때만 유지될 수 있다. 표피 중에서도 가장 바깥에 존재하는 각질층(Stratum corneum, horney layer)은 각질 형성세포로부터 형성되며, 분화가 완결된 각질세포와 그를 둘러싼 지질층으로 구성되어 있다. 각질세포는 표피 최하층에서 지속적으로 증식(proliferation)하는 기저세포(basal cell)가 단계적으로 형태 및 기능상의 변화를 거치며, 피부 표면까지 상승한 특징적인 세포이며, 일정 기간이 경과하면 오래된 각질세포는 피부에서 탈락되고 새로운 각질세포가 그 기능을 대신하게 되는데, 이러한 반복적인 일련의 변화 과정을 표피세포의 분화 혹은 각화(keratinization)라고 부른다. 그런데 이 각화과정이 비정상적으로 과하게 일어나거나, 기저 세포로부터 새로운 세포가 올라와 각질세포가 되는 현상이 반복적으로 일어나지 않으면 피부는 장벽(skin barrier) 기능을 상실하게 되고 그에 따라 피부의 수분 증발량이 증가하면서 건조해지게 된다.
이에, 본 발명자들은 식물 유래 올리고뉴클레오티드를 피부세포에 도입하였을 때 피부 장벽기능이 강화됨을 확인하고, 상기 올리고뉴클레오티드를 포함하는 피부 장벽기능 강화용 조성물을 개발하여 본 발명을 완성하였다.
일 측면에서, 본 발명의 목적은 피부 각질분화를 조절하는 식물 유래 올리고뉴클레오티드를 제공하는 것이다.
다른 측면에서, 본 발명의 목적은 상기 식물 유래 올리고뉴클레오티드를 유효성분으로 포함하는 피부 장벽기능 강화용 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명의 일 측면은, 유효성분으로서 올리고뉴클레오티드를 포함하고, 상기 올리고뉴클레오티드는 서열번호 1 내지 3으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열; 및 상기 서열번호 1 내지 3으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열과 80% 이상의 상동성을 가지고 상기 서열번호 1 내지 3으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 피부 장벽기능 강화능을 보유한 서열;로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열로 표시되는, 피부 장벽기능 강화용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 서열번호 1 내지 3으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열, 또는 상기 서열과 상동성을 가지는 서열의 식물 유래 올리고뉴클레오티드를 유효성분으로 포함하고 있어, 상기 올리고뉴클레오티드가 피부세포에 투과할 수 있는 형태로 각질형성세포에 처리되면, 피부 장벽기능과 관련된 마커인 필라그린(filaggrin, FLG) 및 로리크린(loricrin, LOR)의 발현량을 증가시켜 피부 장벽기능 강화, 피부 보습 또는 피부 항산화 기능 개선 및 강화에 유용하게 사용할 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 측면에 따른 서열번호 1의 올리고뉴클레오티드가 리포좀에 포집된 형태로 각질형성세포에 처리된 경우, 각질형성세포에서의 피부 장벽기능 마커인 필라그린(FLG) 및 로리크린(LOR)의 발현 증가를 확인한 도이다. 도 1의 y축은 정규화된 mRNA 발현량을 나타낸다.
도 2는 본 발명의 일 측면에 따른 서열번호 2의 올리고뉴클레오티드가 리포좀에 포집된 형태로 각질형성세포에 처리된 경우, 각질형성세포에서의 피부 장벽기능 마커인 로리크린(LOR)의 발현 증가를 확인한 도이다. 도 2의 y축은 정규화된 mRNA 발현량을 나타낸다.
도 3은 본 발명의 일 측면에 따른 서열번호 3의 올리고뉴클레오티드가 리포좀에 포집된 형태로 각질형성세포에 처리된 경우, 각질형성세포에서의 피부 장벽기능 마커인 필라그린(FLG) 및 로리크린(LOR)의 발현 증가를 확인한 도이다. 도 3의 y축은 정규화된 mRNA 발현량을 나타낸다.
도 2는 본 발명의 일 측면에 따른 서열번호 2의 올리고뉴클레오티드가 리포좀에 포집된 형태로 각질형성세포에 처리된 경우, 각질형성세포에서의 피부 장벽기능 마커인 로리크린(LOR)의 발현 증가를 확인한 도이다. 도 2의 y축은 정규화된 mRNA 발현량을 나타낸다.
도 3은 본 발명의 일 측면에 따른 서열번호 3의 올리고뉴클레오티드가 리포좀에 포집된 형태로 각질형성세포에 처리된 경우, 각질형성세포에서의 피부 장벽기능 마커인 필라그린(FLG) 및 로리크린(LOR)의 발현 증가를 확인한 도이다. 도 3의 y축은 정규화된 mRNA 발현량을 나타낸다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명의 일 측면에서, "피부"는 생물의 외부를 덮고 있는 기관을 의미하는 것으로서 표피, 진피 및 피하지방층으로 구성되어 있으며 얼굴 또는 몸 전체의 외부를 덮는 조직뿐만 아니라, 두피와 모발을 포함하는 최광의의 개념이다.
본 발명의 일 측면에서, "유전자의 발현"이라 함은 전사, 번역 및 번역 후 변형 등을 포함하는 최광의의 개념이다.
본 발명은 일 측면에서, 유효성분으로서 올리고뉴클레오티드를 포함하고, 상기 올리고뉴클레오티드는 서열번호 1 내지 3으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열; 및 상기 서열번호 1 내지 3으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열과 80% 이상의 상동성을 가지고 상기 서열번호 1 내지 3으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 피부 장벽기능 강화능을 보유한 서열;로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열로 표시되는, 피부 장벽기능 강화용 조성물을 제공할 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 올리고뉴클레오티드는 서열번호 1 내지 3으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열; 및 상기 서열번호 1 내지 3으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열과 80% 이상의 상동성을 가지고 상기 서열번호 1 내지 3으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 피부 장벽기능 강화능을 보유한 서열;로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열로 표시되는 것일 수 있다.
구체적으로, 상기 올리고뉴클레오티드는 서열번호 1 내지 3으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열로 표시될 수 있다.
또한, 구체적으로, 상기 올리고뉴클레오티드는 서열번호 1 내지 3으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열과 80% 이상의 상동성을 가지고 상기 서열번호 1 내지 3으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 피부 장벽기능 강화능을 보유한 서열로 표시될 수 있고, 보다 구체적으로 서열번호 1 내지 3으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열과 80% 이상, 81% 이상, 82% 이상, 83% 이상, 84% 이상, 85% 이상, 86% 이상, 87% 이상, 88% 이상, 89% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 상동성을 가지면서 상기 서열번호 1 내지 3으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 피부 장벽기능 강화능을 보유한 서열로 표시될 수 있다.
본 발명의 일 측면에서, 상기 올리고뉴클레오티드는 애기장대(Arabidopsis) 속 식물, 야생 염소풀(Aegilops tauschii), 암보렐라(Amborella trichopoda), 묏장대(Arabidopsis lyrata), 아스파라거스(Asparagus officinalis), 야생잔디(Brachypodium distachyon), 유채(Brassica napus), 순무(Brassica rapa), 카멜리나(Camelina sativa), 파파야(Carica papaya), 당귤나무(Citrus sinensis), 탱자나무(Citrus trifoliate), 멜론(Cucumis melo), 아티초크(Cynara cardunculus), 디기탈리스 (Digitalis purpurea), 딸기(Fragaria vesca), 콩(Glycine max), 목화(Gossypium hirsutum), 해바라기(Helianthus annuus), 서양 해바라기(Helianthus argophyllus), 돼지감자(Helianthus tuberosus), 아마(Linum usitatissimum), 사과(Malus domestica), 카사바(Manihot esculenta), 메디카고(Medicago truncatula), 담배(Nicotiana tabacum), 이끼(Physcomitrella patens), 가문비나무(Picea abies), 포퓰라나무(Populus trichocarpa), 복숭아(Prunus persica), 벼(Rice), 사탕수수(Saccharum officinarum), 토마토(Solanum lycopersicum), 감자(Solanum tuberosum), 수수(Sorghum bicolor), 카카오(Theobroma cacao), 동부(Vigna unguiculata), 포도(Vitis vinifera), 브리세아 카리나타(Vriesea carinata), 옥수수(Zea mays) 및 땅콩(Arachis hypogaea)으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 식물로부터 유래된 것일 수 있다. 구체적으로, 상기 서열번호 1의 서열; 및 상기 서열번호 1의 서열과 80% 이상의 상동성을 가지고 상기 서열번호 1의 피부 장벽기능 강화능을 보유한 서열;로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열로 표시되는 올리고뉴클레오티드는 애기장대(Arabidopsis) 속 식물, 야생 염소풀(Aegilops tauschii), 암보렐라(Amborella trichopoda), 묏장대(Arabidopsis lyrata), 아스파라거스(Asparagus officinalis), 야생잔디(Brachypodium distachyon), 유채(Brassica napus), 순무(Brassica rapa), 카멜리나(Camelina sativa), 파파야(Carica papaya), 당귤나무(Citrus sinensis), 탱자나무(Citrus trifoliate), 멜론(Cucumis melo), 아티초크(Cynara cardunculus), 디기탈리스 (Digitalis purpurea), 딸기(Fragaria vesca), 콩(Glycine max), 목화(Gossypium hirsutum), 해바라기(Helianthus annuus), 서양 해바라기(Helianthus argophyllus), 돼지감자(Helianthus tuberosus), 아마(Linum usitatissimum), 사과(Malus domestica), 카사바(Manihot esculenta), 메디카고(Medicago truncatula), 담배(Nicotiana tabacum), 이끼(Physcomitrella patens), 가문비나무(Picea abies), 포퓰라나무(Populus trichocarpa), 복숭아(Prunus persica), 벼(Rice), 사탕수수(Saccharum officinarum), 토마토(Solanum lycopersicum), 감자(Solanum tuberosum), 수수(Sorghum bicolor), 카카오(Theobroma cacao), 동부(Vigna unguiculata), 포도(Vitis vinifera), 브리세아 카리나타(Vriesea carinata) 및 옥수수(Zea mays)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 식물로부터 유래된 것일 수 있고, 상기 서열번호 2의 서열; 및 상기 서열번호 2의 서열과 80% 이상의 상동성을 가지고 상기 서열번호 2의 피부 장벽기능 강화능을 보유한 서열;로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열로 표시되는 올리고뉴클레오티드는 애기장대(Arabidopsis) 속 식물 및 묏장대(Arabidopsis lyrata)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 식물로부터 유래된 것일 수 있으며, 상기 서열번호 3의 서열; 및 상기 서열번호 3의 서열과 80% 이상의 상동성을 가지고 상기 서열번호 3의 피부 장벽기능 강화능을 보유한 서열;로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열로 표시되는 올리고뉴클레오티드는 땅콩(Arachis hypogaea) 및 포퓰라나무(Populus trichocarpa)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 식물로부터 유래된 것일 수 있으나, 상기 서열번호 1 내지 3으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열; 및 상기 서열번호 1 내지 3으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열과 80% 이상의 상동성을 가지고 상기 서열번호 1 내지 3으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 피부 장벽기능 강화능을 보유한 서열;로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열로 표시되는 올리고뉴클레오티드의 피부 장벽기능 강화능을 보유하는 서열이라면 그 기원은 제한되지 않는다.
본 발명의 일 측면에 따른 상기 올리고뉴클레오티드는 상기 올리고뉴클레오티드를 피부 또는 피부세포로 전달할 수 있는 다양한 형태들 중 하나 이상의 형태로 포함될 수 있으며, 구체적으로 리포좀에 포집된 형태, 백터에 삽입된 형태 및 세포투과성 펩타이드와 결합된 형태로 이루어진 군으로부터 선택된 하나의 형태로 포함될 수 있다. 본 발명의 일 측면에 따른 상기 올리고뉴클레오티드는 인간 체내에 존재하지 않는 식물 유래 올리고뉴클레오티드로, 상기 올리고뉴클레오티드를 포함하는 조성물이 처리, 투여 또는 도포되는 피부세포의 내부로 상기 올리고뉴클레오티드를 이동하기 위해서는, 상기 올리고뉴클레오티드가 상기 이동을 위한 형태로 포함되는 것이 적절하다.
본 발명의 일 측면에 따른 상기 올리고뉴클레오티드가 리포좀에 포집된 형태로 포함되는 경우, 상기 올리고뉴클레오티드는 상기 리포좀에 대하여 농도가 0.1 내지 400 nM일 수 있으며, 구체적으로, 상기 올리고뉴클레오티드는 상기 리포좀에 대하여 농도가 0.1 nM 이상, 0.5 nM 이상, 1 nM 이상, 2 nM 이상, 3 nM 이상, 4 nM 이상, 5 nM 이상, 6 nM 이상, 7 nM 이상, 8 nM 이상, 9 nM 이상, 10 nM 이상, 11 nM 이상, 12 nM 이상, 13 nM 이상, 14 nM 이상, 15 nM 이상, 16 nM 이상, 17 nM 이상, 18 nM 이상, 19 nM 이상, 20 nM 이상, 25 nM 이상, 30 nM 이상, 35 nM 이상, 40 nM 이상, 45 nM 이상, 50 nM 이상, 60 nM 이상, 70 nM 이상, 80 nM 이상, 90 nM 이상, 100 nM 이상, 120 nM 이상, 140 nM 이상, 160 nM 이상, 180 nM 이상, 200 nM 이상, 250 nM 이상, 300 nM 이상 또는 350 nM 이상일 수 있고, 400 nM 이하, 350 nM 이하, 300 nM 이하, 250 nM 이하, 200 nM 이하, 180 nM 이하, 160 nM 이하, 140 nM 이하, 120 nM 이하, 100 nM 이하, 90 nM 이하, 80 nM 이하, 70 nM 이하, 60 nM 이하, 50 nM 이하, 40 nM 이하, 39 nM 이하, 38 nM 이하, 37 nM 이하, 36 nM 이하, 35 nM 이하, 34 nM 이하, 33 nM 이하, 32 nM 이하, 31 nM 이하, 30 nM 이하, 29 nM 이하, 28 nM 이하, 27 nM 이하, 26 nM 이하, 25 nM 이하, 24 nM 이하, 23 nM 이하, 22 nM 이하, 21 nM 이하, 20 nM 이하, 18 nM 이하, 16 nM 이하, 14 nM 이하, 12 nM 이하, 10 nM 이하, 9 nM 이하, 8 nM 이하, 7 nM 이하, 6 nM 이하, 5 nM 이하, 4 nM 이하, 3 nM 이하 또는 2 nM 이하일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 올리고뉴클레오티드의 농도가 상기 범위 내 일 때, 세포 투과성 및 피부 장벽기능 강화 효과가 우수하며, 피부 장벽기능 강화용 조성물로서 적합하다.
본 발명의 일 측면에 따른 상기 올리고뉴클레오티드가 세포투과성 펩타이드와 결합된 형태로 포함될 수 있고, 상기 세포투과성 펩타이드(Cell Penetrating Peptide, CPP)는 당업계에서 알려진 세포투과성 펩타이드로 본 발명의 일 측면에 따른 상기 올리고뉴클레오티드의 피부 장벽기능 강화능을 유지하면서 이를 세포 내부로 이동시킬 수 있는 세포투과성 펩타이드라면 그 종류는 제한되지 않는다. 상기 세포투과성 펩타이드는 상기 펩타이드의 N-말단 또는 C-말단이 아세틸기, 플루오레닐 메톡시 카르보닐기, 포르밀기, 팔미토일기, 미리스틸기, 스테아릴기, 폴리에틸렌글리콜(PEG) 및 아미노산으로 구성된 군으로부터 선택되는 보호기가 추가적으로 결합된 것일 수 있고, 또는 상기 펩타이드의 N-말단이 히드록시기(-OH) 또는 아미노기(-NH2)로 변형된 것일 수 있으며, 상기 보호기의 결합 또는 변형에 의해 안정성이 더욱 향상된 것일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 상기 올리고뉴클레오티드가 세포투과성 펩타이드와 결합된 형태로 포함되는 경우 상기 올리고뉴클레오티드는 상기 세포투과성 펩타이드와 비공유결합 또는 공유결합을 통해 연결되는 것일 수 있다.
또한, 본 발명의 일 측면에 따른 상기 올리고뉴클레오티드가 세포투과성 펩타이드와 결합된 형태로 포함되는 경우 상기 조성물은 상기 올리고뉴클레오티드와 세포투과성 펩타이드 사이에 링커를 추가로 포함하는 것일 수 있다. 상기 링커는 당업계에 공지된 다양한 링커를 이용할 수 있고, 본 발명의 일 측면에 따른 올리고뉴클레오티드의 피부 장벽기능 강화능을 유지하면서 상기 세포투과성 펩타이드의 활성, 즉 세포투과 활성을 최대화하기 위하여 특별하게 선택된 길이 또는 서열을 가질 수 있다. 구체적으로, 상기 링커는 복수의 아미노산 잔기로 이루어진 링커일 수 있고(예를 들어, Huston, et al., Methods in Enzymology, 203:46-88(1991), 및 Whitlow, et al., Protein Eng., 6:989(1993)에 개시된 서열), 보다 구체적으로 친수성 아미노산, 보다 더 구체적으로 아르기닌 및 글루타민을 포함하는 것일 수 있으며, 상기 링커의 길이는 5 내지 15개의 아미노산일 수 있으나, 링커를 구성하는 아미노산의 종류 및 길이는 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 측면에 따른 올리고뉴클레오티드는 siRNA, shRNA 및 miRNA로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있고, 구체적으로 miRNA일 수 있다. 상기 miRNA는 세포 내에 존재하는 작은 RNA(endogenous small RNA)의 일종으로 단백질을 합성하지 않는 DNA에서 유래되어 헤어핀-구조 전사체(hairpin-shaped transcript)로부터 생성이 된다. miRNA는 표적 mRNA의 3'-UTR의 상보적 서열(sequence)에 결합하여 그 mRNA의 번역 억제 또는 불안정화를 유도하여, 궁극적으로 그 표적 mRNA의 단백질 합성을 억제하는 리프레서(repressor) 역할을 하게 된다. 하나의 miRNA는 여러 개의 mRNA를 타겟팅하며, mRNA 역시 여러 개의 miRNA에 의해 조절될 수 있다고 알려져 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 miRNA는 miRNA 전구체(miRNA precursor), 일차 miRNA (pri-miRNA), 플라스미드 (plasmid) 형태의 miRNA 전구체 및 성숙 miRNA(mature miRNA)일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 측면에 따른 miRNA는 단일 가닥 또는 이중 가닥 형태로 존재할 수 있다. 성숙 miRNA 분자는 주로 단일 가닥으로 존재하지만, 전구체 miRNA 분자는 이중 가닥을 형성할 수 있는 부분적인 자가-상보적인 구조(예를 들어 스템-루프 구조)를 포함할 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 miRNA를 구성하는 핵산 분자 중 적어도 하나는, 인산 골격 구조 (phosphate backbone structure)가 황 원소로 치환한 형태인 포스포로사이오에이트 (phosphorothiolate) 구조가 포함하는 형태; DNA, PNA(petide nucleic acids) 또는 LNA(locked nucleic acid) 분자로 치환된 형태; 또는 당의 2'수산화기가 메틸화, 메톡시화 또는 플르오르화 구조로 치환된 형태일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 올리고뉴클레오티드는 상기 올리고뉴클레오티드를 처리하지 않은 피부세포에 비하여 상기 올리고뉴클레오티드를 처리한 피부세포에서 필라그린(filaggrin, FLG) mRNA 또는 로리크린(loricrin, LOR) mRNA의 발현량을 증가시키는 것일 수 있다.
피부 장벽의 최외각을 이루는 각질층은 천연보습인자와 지질 등으로 이루어져 있다. 상기 필라그린(Filaggrin)은 표피 세포에 존재하는 케라틴 섬유에의 부착과 관련된 단백질로서, 표피의 최종 분화를 촉진한다. 전사 후 변형(post-transcriptional modification) 과정을 거쳐 여러 종류의 친수성 아미노산(hydrophilic amino acid)으로 분해되며, 아미노산 풀(pool)이 천연 보습인자(NMF)를 구성하고, 이는 각질층의 수분 유지를 돕는다고 알려져 있다. 또한 필라그린 유전자 돌연변이가 피부 보습 인자들을 감소시키고, 피부 장벽 기능을 손상시키며, 알러젠(allergen)이나 미생물(microbe)에 대한 피부 방어 능력이 감소시키고, T 세포군을 활성화하여 자가면역 메커니즘에 의한 만성 염증(chronic inflammation)을 일으켜 아토피 습진(Atopic eczema)를 유도하는 중요 유전 위험 요소라고도 알려져 있다. 상기 로리크린(Loricrin)은 각화외피(cornified envelope)에서 발견되는 주요 단백질의 하나로, 주로 최종적으로 분화된 표피세포에서 발현된다.
본 발명의 일 측면에 따른 서열번호 1 내지 3 중 어느 하나로 표시되는 식물 유래 올리고뉴클레오티드는 피부 장벽기능과의 관계가 알려진바 없었으나, 본 발명의 발명자들은 연구를 통하여 특정 서열로 표시되는 올리고뉴클레오티드가 도입된 각질형성세포에서, 피부 장벽기능 마커들, 예를 들어 필라그린(Filaggrin), 로리크린(Loricrin) 등의 발현량이 증가함을 확인하였다. 이는 상기 식물 유래 올리고뉴클레오티드를 포함하는 조성물을 피부에 처리, 투여 또는 도포 시 상기 올리고뉴클레오티드가 피부 장벽기능을 강화할 수 있음을 의미한다.
본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 올리고뉴클레오티드를 조성물 총 중량에 대하여 0.00001 내지 30 중량%로 포함할 수 있다.
일 실시예로서 피부 장벽 기능의 저하는 피부 세포 분화가 잘 이루어지지 않는 것일 수 있으며, 이는 피부 각질층이 정상적인 기능을 할 수 없고, 항산화능이 저하된 것을 의미할 수 있다. 이 경우 피부의 수분 보유력이 떨어질 수 있으며, 피부 염증 및 피부 건조가 나타날 수 있다. 따라서 상기 피부 장벽기능 마커들, 예를 들어 필라그린(Filaggrin), 로리크린(Loricrin) 등의 발현량을 증가시키는 물질은 피부 보습, 피부 장벽 기능 강화 및 아토피 증상을 경감 또는 치료하는 효과를 나타낼 수 있다. 즉, 본 발명의 일 측면에 따른 상기 피부 장벽기능 강화용은 피부 보습 및 항산화로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 용도를 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 피부 외용제 조성물일 수 있다.
또한, 본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 화장료 조성물, 약학 조성물 또는 식품 조성물일 수 있다.
일 실시예로서, 상기 화장료 조성물은 국소 적용에 적합한 모든 제형으로 제공될 수 있다. 예를 들면, 용액, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 유상에 수상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 고체, 겔, 분말, 페이스트, 포말(foam) 또는 에어로졸 조성물의 제형으로 제공될 수 있다. 이러한 제형의 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다.
일 실시예로서, 상기 화장료 조성물은 상기한 물질 이외에 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서, 바람직하게는 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분들을 함유할 수 있다. 본 발명에 따른 화장료 조성물은 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당 및 스핑고 지질로 이루어진 군에서 선택된 물질을 포함할 수 있다. 또한 상기 화장품 조성물은 일 실시예로서, 보습제, 에몰리언트제, 계면 활성제, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, pH 조정제, 유기 및무기 안료, 향료, 냉감제 또는 제한(制汗)제를 포함할 수 있다. 상기 성분의 배합량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 당업자가 용이하게 선정 가능하며, 그 배합량은 조성물 총 중량을 기준으로 0.01 내지 5 중량%, 구체적으로 0.01 내지 3 중량%일 수 있다.
일 실시예로서 상기 약학적 조성물은 피부 장벽 기능 약화에 의한 질병의 예방 또는 치료용일 수 있으며, 예를 들면 건조 피부, 아토피 등의 예방 또는 치료용일 수 있다.
또한, 일 실시예로서 상기 약학적 조성물은 국소 적용에 적합한 모든 제형으로 제공될 수 있다. 예를 들면, 경구, 경피(trandermally), 정맥, 근육, 피하주사에 의해 투여될 수 있다. 일 실시예로서 상기 약학적 조성물은 주사제, 피부 외용 용액제, 현탁제, 유액제, 겔, 패취 또는 분무제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 제형은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 용이하게 제조될 수 있으며, 계면 활성제, 부형제, 수화제, 유화 촉진제, 현탁제, 삼투압 조절을 위한 염 또는 완충제, 착색제, 향신료, 안정화제, 방부제, 보존제 또는 기타 상용하는 보조제를 적당히 사용할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따른 약학적 조성물의 유효 성분은 대상의 연령, 성별, 체중, 병리 상태 및 그 심각도, 투여 경로 또는 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 적용량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 사용 용량은 예를 들어 0.1mg/kg/일 내지 5000mg/kg/일, 보다 구체적으로는 50 mg/kg/일 내지 500 mg/kg/일이 될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
일 실시예로서, 상기 식품 조성물은 건강기능식품 조성물을 포함하며, 상기건강기능식품 조성물은 피부 장벽 기능 약화에 의한 질병의 개선, 완화 또는 예방용일 수 있으며, 예를 들면 건조 피부, 아토피 등의 개선, 완화 또는 예방용일 수 있다.
상기 건강식품기능 조성물은 다양한 형태의 식품 첨가제 또는 기능성 식품을 포함한다. 상기 조성물을 포함하는 침출차, 액상차, 음료, 발효유, 치즈, 요구르트, 주스, 생균제제 및 건강보조식품 등으로 가공될 수 있으며, 그 외 다양한 식품 첨가제의 형태로 사용될 수 있다.
이하, 제조예, 실시예 및 실험예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 아래 제조예, 실시예 및 실험예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 그에 의해 제한되는 것은 아니다.
[제조예] 식물 유래 올리고뉴클레오티드를 포함하는 조성물 제조
본 발명의 일 측면에 따른 식물 유래 올리고뉴클레오티드를 포함하는 조성물을 하기와 같은 방법으로 제조하였다.
먼저, 인간 각질형성세포(Human primary keratinocyte)를 론자사(Lonza, Inc. Walkersville, MD, USA)에서 구입하여 60파이 디쉬에 분주한 뒤, 각질형성배지(Keratinocyte Growth Medium, KGM-Gold??, http://www.lonza.com/products-services/bio-research/primary-cells/human-cells-andmedia/keratinocytes-and-media/kgm-gold-keratinocyte-growth-medium.aspx)를 사용하여 세포를 증식시켰다.
그 후, 상기 각질형성세포에서 ath-miR156a-5p, ath-miR158a-5p 및 ahy-miR167-3p를 각각 과발현시키기 위해서, 서열번호 1 내지 3의 miRNA(Thermofisher 사에서 구입, catolog 4464066)를 각각 도입하였다. 서열번호 1 내지 3의 miRNA의 서열, 정보는 하기와 같다.
(실시예 1) ath-miR156a-5p
- 염기서열: 5'- UGACAGAAGAGAGUGAGCAC - 3'(서열번호 1)
- Assay ID MC10535
- https://www.thermofisher.com/order/genome-database/details/microrna/MC10535?CID=&ICID=&subtype=microrna_mimics_inhibitors
(실시예 2) ath-miR158a-5p
- 염기서열: 5'- CUUUGUCUACAAUUUUGGAAA - 3'(서열번호 2)
- Assay ID MC20315
- https://www.thermofisher.com/order/genome-database/details/microrna/MC20315?CID=&ICID=&subtype=microrna_mimics_inhibitors
(실시예 3) ahy-miR167-3p
- 염기서열: 5'- AGAUCAUGUGGCAGUUUCACC - 3'(서열번호 3)
- Assay ID MC16842
- https://www.thermofisher.com/order/genome-database/details/microrna/MC16842?CID=&ICID=&subtype=microrna_mimics_inhibitors
컨플루언시(Confluency)가 약 70%에서 상기 서열번호 1 내지 3 각각의 miRNA를 농도가 20nM가 되도록 리포좀(liposome)(Lipofectaminer® RNAiMAX Reagent (Thermo Fisher Scientific, https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/13778150))을 이용하여 트랜스펙션하여 세포 안으로 이동시켰다.
또한, 음성 대조군으로 사람의 그 어떤 유전자도 감소시키지 않은, 즉 세포 증식 및 세포 활성에 미치는 영향이 최소 수준인 것으로 기능적으로 입증된 siRNA인 mirVanaTM miRNA Mimic, Negative Control #1 (Thermo Fisher Scientific, https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/4464061?SID=srch-srp-4464061#/4464061?SID=srch-srp-4464061,cataloge 4464061)을 사용하였다. 상기 음성 대조군의 miRNA mimic도 농도가 20nM가 되도록 리포좀(liposome)을 이용하여 트랜스펙션하여 세포 안으로 이동시켰다.
그런 다음, 상기 각 트랜스펙션시킨 세포를 37℃ 5% CO2 인큐베이터에서 약 4일간 배양하였다.
[실험예] 피부 장벽마커의 발현 변화 확인
상기 제조예에서 제조한 실시예 1 내지 3의 피부 장벽마커의 발현 변화를 확인하기 위하여, 하기의 실험을 수행하였다.
먼저, 상기 제조예에서 트랜스펙션시킨 세포(실시예 1 내지 3)를 배양한지 4일째 되는 날, 각 각질형성세포에서 RNA를 추출하였다. 트리졸(Trizol, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) 1 ml을 이용하여 상기 세포를 녹인 뒤, 원심분리기를 이용하여 상층액을 분리하였으며, 이소프로판올(isopropanol) 0.35ml를 넣어 핵산의 펠렛을 형성시키고, 70% EtOH로 세척한 후 펠렛을 물에 녹여 RNA를 분리하였다. 약 1μg의 RNA를 올리고 디티(oligo dT) 및 역전사 효소(reverse transcripase)를 이용하여 cDNA로 만든 뒤, FLG mRNA에 특이적인 프라이머(assay ID: HHs00856927_g1)와 LOR에 특이적인 프라이머(assay ID:Hs01894962_s1)를 이용하여 Applied biosystems사의 taqman 방식의 RT-qPCR을 실시하여 정량 분석하였으며, 그 결과를 도 1 내지 3에 나타내었다. 이 때, 각 유전자의 발현은 하우스키핑(housekeeping) 유전자인 RPLP0의 mRNA(Genebank Accession No.: NM_001002.3) 발현량(assay ID:Hs99999902_m1)으로 정규화(normalization)하였다.
상기 PCR은 하기의 온도사이클에 따라 총 45사이클로 진행하였다.
- 전변성(Pre-denaturation): 95℃, 10min,
- 변성(Denaturation): 95℃, 10sec,
- 어닐링(Annealing) 및 신장(Extension): 60℃, 1min
그 결과, 도 1 내지 3에 나타난 바와 같이, 각질형성세포에 서열번호 1 내지 3의 miRNA를 도입한 경우, 피부 장벽기능 마커 유전자인 필라그린 및 로리크린의 유전자 발현량이 증가하였음을 확인할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따른 조성물의 제형예를 아래에서 설명하나, 다른 여러 가지 제형으로도 응용 가능하며, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
[제형예 1] 영양화장수
하기 표 1에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 영양화장수를 제조할 수 있다.
원료명 | 함량(중량%) |
글리세린 | 3.0 |
부틸렌글리콜 | 3.0 |
프로필렌글리콜 | 3.0 |
카르복시비닐폴리머 | 0.1 |
서열번호 1의 올리고뉴클레오티드 | 0.01 |
밀납 | 4.0 |
폴리솔베이트 60 | 1.5 |
카프릴릭/카프릭 리글리세라이드 | 5.0 |
스쿠알란 | 5.0 |
솔비타세스퀴올레이트 | 1.5 |
세테아릴 알코올 | 1.0 |
트리에탄올아민 | 0.2 |
방부제, 향료 | 적량 |
정제수 | 잔량 |
계 | 100 |
[제형예 2] 영양로션
하기 표 2에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 영양로션을 제조할 수 있다.
원료명 | 함량(중량%) |
정제수 | 잔량 |
글리세린 | 3.0 |
부틸렌글리콜 | 3.0 |
유동파라핀 | 5.0 |
베타글루칸 | 7.0 |
카보머 | 0.1 |
서열번호 1의 올리고뉴클레오티드 | 0.01 |
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 | 3.0 |
스쿠알란 | 5.0 |
세테아릴 글루코사이드 | 1.5 |
소르비탄 스테아레이트 | 0.4 |
폴리솔베이트 60 | 1.5 |
방부제 | 적량 |
향 | 적량 |
색소 | 적량 |
트리에탄올아민 | 0.1 |
계 | 100 |
[제형예 3] 영양크림
하기 표 3에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 영양크림을 제조할 수 있다.
원료명 | 함량(중량%) |
글리세린 | 3.5 |
부틸렌글리콜 | 3.0 |
유동파라핀 | 7.0 |
베타글루칸 | 7.0 |
카보머 | 0.1 |
서열번호 1의 올리고뉴클레오티드 | 0.01 |
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 | 3.0 |
스쿠알란 | 5.0 |
세테아릴 글루코사이드 | 1.5 |
소르비탄 스테아레이트 | 0.4 |
폴리솔베이트 60 | 1.2 |
트리에탄올아민 | 0.1 |
방부제, 향료 | 적량 |
정제수 | 잔량 |
계 | 100 |
[제형예 4] 주사제
하기 표 4에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 주사제를 제조할 수 있다.
원료명 | 중량비(1ml 당) |
염화나트륨 | 9.0mg |
소듐 카르복시메틸셀룰로오즈 | 30.0mg |
Tween 20 | 1.0mg |
서열번호 1의 올리고뉴클레오티드 | 1.0mg |
주사용 증류수 | 잔량 |
[제형예 5] 연고
하기 표 5에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 연고를 제조할 수 있다.
원료명 | 함량(중량%) |
글리세린 | 8.0 |
부틸렌글리콜 | 4.0 |
유동파라핀 | 15.0 |
베타글루칸 | 7.0 |
카보머 | 0.1 |
서열번호 1의 올리고뉴클레오티드 | 0.01 |
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 | 3.0 |
스쿠알란 | 1.0 |
세테아릴 글루코사이드 | 1.5 |
소르비탄 스테아레이트 | 0.4 |
세테아릴 알코올 | 1.0 |
방부제 | 적량 |
향 | 적량 |
색소 | 적량 |
밀납 | 4.0 |
정제수 | 잔량 |
계 | 100 |
<110> AMOREPACIFIC CORPORATION
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plant-derived oligonucleotides
<130> 20p232ind
<160> 3
<170> KoPatentIn 3.0
<210> 1
<211> 20
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ath-miR156a-5p
<400> 1
ugacagaaga gagugagcac 20
<210> 2
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ath-miR158a-5p
<400> 2
cuuugucuac aauuuuggaa a 21
<210> 3
<211> 21
<212> RNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ahy-miR167-3p
<400> 3
agaucaugug gcaguuucac c 21
Claims (12)
- 유효성분으로서 올리고뉴클레오티드를 포함하고,
상기 올리고뉴클레오티드는
서열번호 1 내지 3으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열; 및
상기 서열번호 1 내지 3으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열과 80% 이상의 상동성을 가지고 상기 서열번호 1 내지 3으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 피부 장벽기능 강화능을 보유한 서열;
로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열로 표시되는, 피부 장벽기능 강화용 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 올리고뉴클레오티드는 애기장대(Arabidopsis) 속 식물, 야생 염소풀(Aegilops tauschii), 암보렐라(Amborella trichopoda), 묏장대(Arabidopsis lyrata), 아스파라거스(Asparagus officinalis), 야생잔디(Brachypodium distachyon), 유채(Brassica napus), 순무(Brassica rapa), 카멜리나(Camelina sativa), 파파야(Carica papaya), 당귤나무(Citrus sinensis), 탱자나무(Citrus trifoliate), 멜론(Cucumis melo), 아티초크(Cynara cardunculus), 디기탈리스 (Digitalis purpurea), 딸기(Fragaria vesca), 콩(Glycine max), 목화(Gossypium hirsutum), 해바라기(Helianthus annuus), 서양 해바라기(Helianthus argophyllus), 돼지감자(Helianthus tuberosus), 아마(Linum usitatissimum), 사과(Malus domestica), 카사바(Manihot esculenta), 메디카고(Medicago truncatula), 담배(Nicotiana tabacum), 이끼(Physcomitrella patens), 가문비나무(Picea abies), 포퓰라나무(Populus trichocarpa), 복숭아(Prunus persica), 벼(Rice), 사탕수수(Saccharum officinarum), 토마토(Solanum lycopersicum), 감자(Solanum tuberosum), 수수(Sorghum bicolor), 카카오(Theobroma cacao), 동부(Vigna unguiculata), 포도(Vitis vinifera), 브리세아 카리나타(Vriesea carinata), 옥수수(Zea mays) 및 땅콩(Arachis hypogaea)으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 식물로부터 유래된 것인, 피부 장벽기능 강화용 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 올리고뉴클레오티드는 리포좀에 포집된 형태, 백터에 삽입된 형태 및 세포투과성 펩타이드와 결합된 형태로 이루어진 군으로부터 선택된 하나의 형태로 포함되는, 피부 장벽기능 강화용 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 올리고뉴클레오티드는 상기 리포좀에 대하여 농도가 0.1 내지 400 nM인, 피부 장벽기능 강화용 조성물. - 제3항에 있어서,
상기 올리고뉴클레오티드가 세포투과성 펩타이드와 결합된 형태로 포함되는 경우 상기 조성물은 상기 올리고뉴클레오티드와 세포투과성 펩타이드 사이에 링커를 추가로 포함하는, 피부 장벽기능 강화용 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 올리고뉴클레오티드는 siRNA, shRNA 및 miRNA로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인, 피부 장벽기능 강화용 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 올리고뉴클레오티드는 상기 올리고뉴클레오티드를 처리하지 않은 피부세포에 비하여 상기 올리고뉴클레오티드를 처리한 피부세포에서 필라그린(filaggrin, FLG) mRNA 또는 로리크린(loricrin, LOR) mRNA의 발현량을 증가시키는, 피부 장벽기능 강화용 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 피부 장벽기능 강화용은 피부 보습 및 항산화로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 용도를 포함하는, 피부 장벽기능 강화용 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 조성물은 화장료 조성물인, 피부 장벽기능 강화용 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 조성물은 약학적 조성물인, 피부 장벽기능 강화용 조성물. - 제10항에 있어서,
상기 약학적 조성물은 피부 장벽 기능 약화에 의한 질병의 예방 또는 치료용인, 피부 장벽기능 강화용 조성물. - 제1항에 있어서,
상기 조성물은 식품 조성물인, 피부 장벽기능 강화용 조성물.
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KR1020200107858A KR20220027341A (ko) | 2020-08-26 | 2020-08-26 | 식물 유래 올리고뉴클레오티드를 포함하는 피부 장벽기능 강화용 조성물 |
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Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
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WO2023204608A1 (ko) * | 2022-04-19 | 2023-10-26 | 넥스탭 주식회사 | 감자 유래 엑소좀을 포함하는 피부 개선용 조성물 |
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