KR20220027342A - 식물 유래 올리고뉴클레오티드를 포함하는 멜라닌 생성 조절용 조성물 - Google Patents

식물 유래 올리고뉴클레오티드를 포함하는 멜라닌 생성 조절용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 명세서는 식물 유래 올리고뉴클레오티드를 유효성분으로 포함하는 멜라닌 생성 조절용 조성물에 관한 것으로, 본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 서열번호 1 및 2로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열, 또는 상기 서열과 상동성을 가지는 서열의 식물 유래 올리고뉴클레오티드를 유효성분으로 포함하고 있어, 상기 올리고뉴클레오티드가 피부세포에 투과할 수 있는 형태로 멜라노사이트에 처리되면, 멜라닌 생성을 억제 또는 촉진시켜 색소형성인자의 발현을 조절하는바, 모발을 포함하는 피부를 미백 또는 흑화시키는 우수한 효과가 있다.

Description

식물 유래 올리고뉴클레오티드를 포함하는 멜라닌 생성 조절용 조성물 {Composition for controlling melanin production comprising plant-derived oligonucleotides}
본 명세서는 식물 유래 올리고뉴클레오티드를 유효성분으로 포함하는 멜라닌 생성 조절용 조성물에 관한 것이다.
사람의 피부색을 결정하는 가장 중요한 요인은 인체 내의 멜라노사이트에서 타이로시나제 등의 여러 가지 효소가 작용하여 생성되는 멜라닌으로서, 멜라닌이 필요 이상으로 많이 생기게 되면 기미, 주근깨 및 점 등과 같은 과색소 침착증을 유발하여 미용상으로 좋지 않은 결과를 가져오게 된다. 그리고 피부 내, 외부의 스트레스적 자극에 의해 생겨난 멜라닌은 스트레스가 사라져도 피부 각질화를 통해서 외부로 배출되기 전까지는 없어지지 않는다.
따라서 이러한 멜라닌의 생성을 억제하기 위한 연구가 진행되고 있으며, 아스코르빈산, 코지산, 알부틴, 하이드로퀴논, 글루타치온 또는 이들의 유도체, 또는 타이로시나제 저해활성을 가진 물질들을 화장료나 의약품에 배합하여 사용되어 오고 있다. 그러나, 이들의 불충분한 미백효과, 피부에 대한 안전성 문제로 인해 그 사용이 제한되고 있다.
한편, 모발에 있어서, 멜라닌 생성세포의 기능항진 또는 티로시나제의 활성화 등에 의해 멜라닌 생성량이 증대되면, 백발이 되는 것을 방지하거나, 백발을 개선할 수 있다. 또한 구릿빛 피부를 위해 의도적으로 전신을 태닝하는 경우, 일반적으로 선탠 오일을 이용하여 일광욕을 하거나, 디하이드록시아세톤(dihydroxyaceton, DHA)을 이용하여 화학반응을 일으켜 인위적으로 피부의 색을 검게 만들고 있다. 그러나 DHA는 피부를 거칠게 하며, 자극을 유발하는 등의 단점이 있다.
이에, 본 발명자들은 식물 유래 올리고뉴클레오티드를 피부세포에 도입하였을 때 멜라닌 생성이 억제 또는 촉진됨을 확인하고, 상기 올리고뉴클레오티드를 포함하는 멜라닌 생성 조절용 조성물을 개발하여 본 발명을 완성하였다.
US 2005/0144669 A1 US 10,174,338 B2 JP 6324597 B2 KR 10-1849102 B1
일 측면에서, 본 발명의 목적은 멜라닌 생성을 조절하는 식물 유래 올리고뉴클레오티드를 제공하는 것이다.
다른 측면에서, 본 발명의 목적은 상기 식물 유래 올리고뉴클레오티드를 유효성분으로 포함하는 멜라닌 생성 조절용 조성물을 제공하고자 한다.
본 발명의 일 측면은, 유효성분으로서 올리고뉴클레오티드를 포함하고, 상기 올리고뉴클레오티드는 서열번호 1 및 2로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열; 및 상기 서열번호 1 및 2로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열과 80% 이상의 상동성을 가지고 상기 서열번호 1 및 2로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 멜라닌 생성 조절능을 보유한 서열;로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열로 표시되는, 멜라닌 생성 조절용 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 서열번호 1 및 2로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열, 또는 상기 서열과 상동성을 가지는 서열의 식물 유래 올리고뉴클레오티드를 유효성분으로 포함하고 있어, 상기 올리고뉴클레오티드가 피부세포에 투과할 수 있는 형태로 멜라노사이트에 처리되면, 멜라닌 생성을 억제 또는 촉진시켜 멜라닌 생성을 조절하는바, 피부 또는 모발의 미백 또는 흑화에 유용하게 사용할 수 있다.
도 1은 본 발명의 일 측면에 따른 서열번호 1의 올리고뉴클레오티드가 리포좀에 포집된 형태로 멜라노사이트에 처리된 경우, 생성된 멜라닌의 양을 촬영한 사진(도 1a), 및 음성 대조군에서 생성된 멜라닌의 양을 1로 하였을 때 상기 서열번호 1의 올리고뉴클레오티드가 도입된 멜라노사이트에서 생성된 멜라닌의 상대적인 양을 나타낸 그래프이다(도 1b).
도 2는 본 발명의 일 측면에 따른 서열번호 2의 올리고뉴클레오티드가 리포좀에 포집된 형태로 멜라노사이트에 처리된 경우, 생성된 멜라닌의 양을 촬영한 사진(도 2a), 및 음성 대조군에서 생성된 멜라닌의 양을 1로 하였을 때 상기 서열번호 2의 올리고뉴클레오티드가 도입된 멜라노사이트에서 생성된 멜라닌의 상대적인 양을 나타낸 그래프이다(도 2b).
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명의 일 측면에서, "피부"는 생물의 외부를 덮고 있는 기관을 의미하는 것으로서 표피, 진피 및 피하지방층으로 구성되어 있으며 얼굴 또는 몸 전체의 외부를 덮는 조직뿐만 아니라, 두피와 모발을 포함하는 최광의의 개념이다.
본 발명의 일 측면에서, "멜라닌 생성 조절"이라 함은 피부에서의 멜라닌 생성을 억제 또는 촉진하는 것을 의미하며, 피부에서의 멜라닌 생성을 억제하거나 피부에서의 멜라닌 생성을 촉진하는 것일 수 있다.
본 발명의 일 측면에서, "유전자의 발현"이라 함은 전사, 번역 및 번역 후 변형 등을 포함하는 최광의의 개념이다.
본 발명은 일 측면에서, 유효성분으로서 올리고뉴클레오티드를 포함하고, 상기 올리고뉴클레오티드는 서열번호 1 및 2로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열; 및 상기 서열번호 1 및 2로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열과 80% 이상의 상동성을 가지고 상기 서열번호 1 및 2로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 멜라닌 생성 조절능을 보유한 서열;로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열로 표시되는, 멜라닌 생성 조절용 조성물을 제공할 수 있다.
구체적으로, 본 발명의 일 측면에서, 유효성분으로서 올리고뉴클레오티드를 포함하고, 상기 올리고뉴클레오티드는 서열번호 1의 서열; 및 상기 서열번호 1의 서열과 80% 이상의 상동성을 가지고 상기 서열번호 1의 서열의 멜라닌 생성 억제능을 보유한 서열;로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열로 표시되는, 멜라닌 생성 억제용 조성물을 제공할 수 있다.
또는, 본 발명의 일 측면에서, 유효성분으로서 올리고뉴클레오티드를 포함하고, 상기 올리고뉴클레오티드는 서열번호 2의 서열; 및 상기 서열번호 2의 서열과 80% 이상의 상동성을 가지고 상기 서열번호 2의 서열의 멜라닌 생성 촉진능을 보유한 서열;로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열로 표시되는, 멜라닌 생성 촉진용 조성물을 제공할 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 올리고뉴클레오티드는 서열번호 1 및 2로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열; 및 상기 서열번호 1 및 2로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열과 80% 이상의 상동성을 가지고 상기 서열번호 1 및 2로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 멜라닌 생성 조절능을 보유한 서열;로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열로 표시되는 것일 수 있다.
구체적으로, 상기 올리고뉴클레오티드는 서열번호 1 및 2로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열로 표시될 수 있다.
또한, 구체적으로, 상기 올리고뉴클레오티드는 서열번호 1 및 2로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열과 80% 이상의 상동성을 가지고 상기 서열번호 1 및 2로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 멜라닌 생성 조절능을 보유한 서열로 표시될 수 있고, 보다 구체적으로 서열번호 1 및 2로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열과 80% 이상, 81% 이상, 82% 이상, 83% 이상, 84% 이상, 85% 이상, 86% 이상, 87% 이상, 88% 이상, 89% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 상동성을 가지면서 상기 서열번호 1 및 2로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 멜라닌 생성 조절능을 보유한 서열로 표시될 수 있다.
보다 구체적으로, 상기 올리고뉴클레오티드는 서열번호 1의 서열과 80% 이상의 상동성을 가지고 상기 서열번호 1의 서열의 멜라닌 생성 억제능을 보유한 서열로 표시될 수 있고, 보다 더 구체적으로 서열번호 1의 서열과 80% 이상, 81% 이상, 82% 이상, 83% 이상, 84% 이상, 85% 이상, 86% 이상, 87% 이상, 88% 이상, 89% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 상동성을 가지면서 상기 서열번호 1의 서열의 멜라닌 생성 억제능을 보유한 서열로 표시될 수 있다.
또는, 보다 구체적으로, 상기 올리고뉴클레오티드는 서열번호 2의 서열과 80% 이상의 상동성을 가지고 상기 서열번호 2의 서열의 멜라닌 생성 촉진능을 보유한 서열로 표시될 수 있고, 보다 더 구체적으로 서열번호 2의 서열과 80% 이상, 81% 이상, 82% 이상, 83% 이상, 84% 이상, 85% 이상, 86% 이상, 87% 이상, 88% 이상, 89% 이상, 90% 이상, 91% 이상, 92% 이상, 93% 이상, 94% 이상, 95% 이상, 96% 이상, 97% 이상, 98% 이상 또는 99% 이상의 상동성을 가지면서 상기 서열번호 2의 서열의 멜라닌 생성 촉진능을 보유한 서열로 표시될 수 있다.
본 발명의 일 측면에서, 상기 올리고뉴클레오티드는 애기장대(Arabidopsis) 속 식물, 야생 염소풀(Aegilops tauschii), 암보렐라(Amborella trichopoda), 묏장대(Arabidopsis lyrata), 아스파라거스(Asparagus officinalis), 야생잔디(Brachypodium distachyon), 유채(Brassica napus), 순무(Brassica rapa), 카멜리나(Camelina sativa), 파파야(Carica papaya), 당귤나무(Citrus sinensis), 탱자나무(Citrus trifoliate), 멜론(Cucumis melo), 아티초크(Cynara cardunculus), 디기탈리스 (Digitalis purpurea), 딸기(Fragaria vesca), 콩(Glycine max), 목화(Gossypium hirsutum), 해바라기(Helianthus annuus), 서양 해바라기(Helianthus argophyllus), 돼지감자(Helianthus tuberosus), 아마(Linum usitatissimum), 사과(Malus domestica), 카사바(Manihot esculenta), 메디카고(Medicago truncatula), 담배(Nicotiana tabacum), 이끼(Physcomitrella patens), 가문비나무(Picea abies), 포퓰라나무(Populus trichocarpa), 복숭아(Prunus persica), 벼(Rice), 사탕수수(Saccharum officinarum), 토마토(Solanum lycopersicum), 감자(Solanum tuberosum), 수수(Sorghum bicolor), 카카오(Theobroma cacao), 동부(Vigna unguiculata), 포도(Vitis vinifera), 브리세아 카리나타(Vriesea carinata) 및 옥수수(Zea mays) 로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 식물로부터 유래된 것일 수 있다. 구체적으로, 상기 서열번호 1의 서열; 및 상기 서열번호 1의 서열과 80% 이상의 상동성을 가지고 상기 서열번호 1의 멜라닌 생성 조절능, 보다 구체적으로 멜라닌 생성 억제능을 보유한 서열;로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열로 표시되는 올리고뉴클레오티드는 애기장대(Arabidopsis) 속 식물, 야생 염소풀(Aegilops tauschii), 암보렐라(Amborella trichopoda), 묏장대(Arabidopsis lyrata), 아스파라거스(Asparagus officinalis), 야생잔디(Brachypodium distachyon), 유채(Brassica napus), 순무(Brassica rapa), 카멜리나(Camelina sativa), 파파야(Carica papaya), 당귤나무(Citrus sinensis), 탱자나무(Citrus trifoliate), 멜론(Cucumis melo), 아티초크(Cynara cardunculus), 디기탈리스 (Digitalis purpurea), 딸기(Fragaria vesca), 콩(Glycine max), 목화(Gossypium hirsutum), 해바라기(Helianthus annuus), 서양 해바라기(Helianthus argophyllus), 돼지감자(Helianthus tuberosus), 아마(Linum usitatissimum), 사과(Malus domestica), 카사바(Manihot esculenta), 메디카고(Medicago truncatula), 담배(Nicotiana tabacum), 이끼(Physcomitrella patens), 가문비나무(Picea abies), 포퓰라나무(Populus trichocarpa), 복숭아(Prunus persica), 벼(Rice), 사탕수수(Saccharum officinarum), 토마토(Solanum lycopersicum), 감자(Solanum tuberosum), 수수(Sorghum bicolor), 카카오(Theobroma cacao), 동부(Vigna unguiculata), 포도(Vitis vinifera), 브리세아 카리나타(Vriesea carinata) 및 옥수수(Zea mays)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 식물로부터 유래된 것일 수 있고, 상기 서열번호 2의 서열; 및 상기 서열번호 2의 서열과 80% 이상의 상동성을 가지고 상기 서열번호 2의 멜라닌 생성 조절능, 보다 구체적으로 멜라닌 생성 촉진능을 보유한 서열;로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열로 표시되는 올리고뉴클레오티드는 애기장대(Arabidopsis) 속 식물 및 묏장대(Arabidopsis lyrata)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 식물로부터 유래된 것일 수 있으나, 상기 서열번호 1 및 2로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열; 및 상기 서열번호 1 및 2로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열과 80% 이상의 상동성을 가지고 상기 서열번호 1 및 2로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 멜라닌 생성 조절능을 보유한 서열;로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열로 표시되는 올리고뉴클레오티드의 멜라닌 생성 조절능을 보유하는 서열이라면 그 기원은 제한되지 않는다.
본 발명의 일 측면에 따른 상기 올리고뉴클레오티드는 상기 올리고뉴클레오티드를 피부 또는 피부세포로 전달할 수 있는 다양한 형태들 중 하나 이상의 형태로 포함될 수 있으며, 구체적으로 리포좀에 포집된 형태, 백터에 삽입된 형태 및 세포투과성 펩타이드와 결합된 형태로 이루어진 군으로부터 선택된 하나의 형태로 포함될 수 있다. 본 발명의 일 측면에 따른 상기 올리고뉴클레오티드는 인간 체내에 존재하지 않는 식물 유래 올리고뉴클레오티드로, 상기 올리고뉴클레오티드를 포함하는 조성물이 처리, 투여 또는 도포되는 피부의 내부로 상기 올리고뉴클레오티드를 이동하기 위해서는, 상기 올리고뉴클레오티드가 상기 이동을 위한 형태로 포함되는 것이 적절하다.
본 발명의 일 측면에 따른 상기 올리고뉴클레오티드가 리포좀에 포집된 형태로 포함되는 경우, 상기 올리고뉴클레오티드는 상기 리포좀에 대하여 농도가 0.1 내지 400 nM일 수 있으며, 구체적으로, 상기 올리고뉴클레오티드는 상기 리포좀에 대하여 농도가 0.1 nM 이상, 0.5 nM 이상, 1 nM 이상, 2 nM 이상, 3 nM 이상, 4 nM 이상, 5 nM 이상, 6 nM 이상, 7 nM 이상, 8 nM 이상, 9 nM 이상, 10 nM 이상, 11 nM 이상, 12 nM 이상, 13 nM 이상, 14 nM 이상, 15 nM 이상, 16 nM 이상, 17 nM 이상, 18 nM 이상, 19 nM 이상, 20 nM 이상, 25 nM 이상, 30 nM 이상, 35 nM 이상, 40 nM 이상, 45 nM 이상, 50 nM 이상, 60 nM 이상, 70 nM 이상, 80 nM 이상, 90 nM 이상, 100 nM 이상, 120 nM 이상, 140 nM 이상, 160 nM 이상, 180 nM 이상, 200 nM 이상, 250 nM 이상, 300 nM 이상 또는 350 nM 이상일 수 있고, 400 nM 이하, 350 nM 이하, 300 nM 이하, 250 nM 이하, 200 nM 이하, 180 nM 이하, 160 nM 이하, 140 nM 이하, 120 nM 이하, 100 nM 이하, 90 nM 이하, 80 nM 이하, 70 nM 이하, 60 nM 이하, 50 nM 이하, 40 nM 이하, 39 nM 이하, 38 nM 이하, 37 nM 이하, 36 nM 이하, 35 nM 이하, 34 nM 이하, 33 nM 이하, 32 nM 이하, 31 nM 이하, 30 nM 이하, 29 nM 이하, 28 nM 이하, 27 nM 이하, 26 nM 이하, 25 nM 이하, 24 nM 이하, 23 nM 이하, 22 nM 이하, 21 nM 이하, 20 nM 이하, 18 nM 이하, 16 nM 이하, 14 nM 이하, 12 nM 이하, 10 nM 이하, 9 nM 이하, 8 nM 이하, 7 nM 이하, 6 nM 이하, 5 nM 이하, 4 nM 이하, 3 nM 이하 또는 2 nM 이하일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 올리고뉴클레오티드의 농도가 상기 범위 내일 때, 세포 투과성 및 멜라닌 생성 조절 효과가 우수하며, 멜라닌 생성 조절용 조성물로서 적합하다.
본 발명의 일 측면에 따른 상기 올리고뉴클레오티드가 세포투과성 펩타이드와 결합된 형태로 포함될 수 있고, 상기 세포투과성 펩타이드(Cell Penetrating Peptide, CPP)는 당업계에서 알려진 세포투과성 펩타이드로 본 발명의 일 측면에 따른 상기 올리고뉴클레오티드의 멜라닌 생성 조절능을 유지하면서 이를 세포 내부로 이동시킬 수 있는 세포투과성 펩타이드라면 그 종류는 제한되지 않는다. 상기 세포투과성 펩타이드는 상기 펩타이드의 N-말단 또는 C-말단이 아세틸기, 플루오레닐 메톡시 카르보닐기, 포르밀기, 팔미토일기, 미리스틸기, 스테아릴기, 폴리에틸렌글리콜(PEG) 및 아미노산으로 구성된 군으로부터 선택되는 보호기가 추가적으로 결합된 것일 수 있고, 또는 상기 펩타이드의 N-말단이 히드록시기(-OH) 또는 아미노기(-NH2)로 변형된 것일 수 있으며, 상기 보호기의 결합 또는 변형에 의해 안정성이 더욱 향상된 것일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 상기 올리고뉴클레오티드가 세포투과성 펩타이드와 결합된 형태로 포함되는 경우 상기 올리고뉴클레오티드는 상기 세포투과성 펩타이드와 비공유결합 또는 공유결합을 통해 연결되는 것일 수 있다.
또한, 본 발명의 일 측면에 따른 상기 올리고뉴클레오티드가 세포투과성 펩타이드와 결합된 형태로 포함되는 경우 상기 조성물은 상기 올리고뉴클레오티드와 세포투과성 펩타이드 사이에 링커를 추가로 포함하는 것일 수 있다. 상기 링커는 당업계에 공지된 다양한 링커를 이용할 수 있고, 본 발명의 일 측면에 따른 올리고뉴클레오티드의 멜라닌 생성 조절능을 유지하면서 상기 세포투과성 펩타이드의 활성, 즉 세포투과 활성을 최대화하기 위하여 특별하게 선택된 길이 또는 서열을 가질 수 있다. 구체적으로, 상기 링커는 복수의 아미노산 잔기로 이루어진 링커일 수 있고(예를 들어, Huston, et al., Methods in Enzymology, 203:46-88(1991), 및 Whitlow, et al., Protein Eng., 6:989(1993)에 개시된 서열), 보다 구체적으로 친수성 아미노산, 보다 더 구체적으로 아르기닌 및 글루타민을 포함하는 것일 수 있으며, 상기 링커의 길이는 5 내지 15개의 아미노산일 수 있으나, 링커를 구성하는 아미노산의 종류 및 길이는 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 측면에 따른 올리고뉴클레오티드는 siRNA, shRNA 및 miRNA로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있고, 구체적으로 miRNA일 수 있다. 상기 miRNA는 세포 내에 존재하는 작은 RNA(endogenous small RNA)의 일종으로 단백질을 합성하지 않는 DNA에서 유래되어 헤어핀-구조 전사체(hairpin-shaped transcript)로부터 생성이 된다. miRNA는 표적 mRNA의 3'-UTR의 상보적 서열(sequence)에 결합하여 그 mRNA의 번역 억제 또는 불안정화를 유도하여, 궁극적으로 그 표적 mRNA의 단백질 합성을 억제하는 리프레서(repressor) 역할을 하게 될 수 있다. 하나의 miRNA는 여러 개의 mRNA를 타겟팅하며, mRNA 역시 여러 개의 miRNA에 의해 조절될 수 있다고 알려져 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 miRNA는 miRNA 전구체(miRNA precursor), 일차 miRNA (pri-miRNA), 플라스미드 (plasmid) 형태의 miRNA 전구체 및 성숙 miRNA(mature miRNA)일 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 측면에 따른 miRNA는 단일 가닥 또는 이중 가닥 형태로 존재할 수 있다. 성숙 miRNA 분자는 주로 단일 가닥으로 존재하지만, 전구체 miRNA 분자는 이중 가닥을 형성할 수 있는 부분적인 자가-상보적인 구조(예를 들어 스템-루프 구조)를 포함할 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 miRNA를 구성하는 핵산 분자 중 적어도 하나는, 인산 골격 구조 (phosphate backbone structure)가 황 원소로 치환한 형태인 포스포로사이오에이트 (phosphorothiolate) 구조가 포함하는 형태; DNA, PNA(petide nucleic acids) 또는 LNA(locked nucleic acid) 분자로 치환된 형태; 또는 당의 2'수산화기가 메틸화, 메톡시화 또는 플르오르화 구조로 치환된 형태일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 상기 서열번호 1의 서열; 및 상기 서열번호 1의 서열과 80% 이상의 상동성을 가지고 상기 서열의 멜라닌 생성 억제능을 보유한 서열;로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열로 표시되는 올리고뉴클레오티드는 상기 올리고뉴클레오티드를 처리하지 않은 피부세포에 비하여 상기 올리고뉴클레오티드를 처리한 피부세포에서 멜라닌 생성을 억제하는 것일 수 있고, 상기 올리고뉴클레오티드를 포함하는 조성물은 피부 미백용 조성물일 수 있다. 또한, 본 발명의 일 측면에 따른 상기 서열번호 2의 서열; 및 상기 서열번호 2의 서열과 80% 이상의 상동성을 가지고 상기 서열의 멜라닌 생성 촉진능을 보유한 서열;로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열로 표시되는 올리고뉴클레오티드는 상기 올리고뉴클레오티드를 처리하지 않은 피부세포에 비하여 상기 올리고뉴클레오티드를 처리한 피부세포에서 멜라닌 생성을 촉진하는 것일 수 있고, 상기 올리고뉴클레오티드를 포함하는 조성물은 모발 흑화용 조성물일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 서열번호 1 및 2 중 어느 하나로 표시되는 식물 유래 올리고뉴클레오티드는 멜라닌 생성 조절 기능과의 관계가 알려진바 없었으나, 본 발명의 발명자들은 연구를 통하여 특정 서열로 표시되는 올리고뉴클레오티드가 도입된 멜라노사이트에서 생성된 멜라닌의 양이 감소 또는 증가함을 확인하였다. 이는 상기 식물 유래 올리고뉴클레오티드를 포함하는 조성물을 피부 또는 모발에 처리, 투여 또는 도포 시 상기 올리고뉴클레오티드가 멜라닌 생성을 억제 또는 촉진하여 피부 또는 모발의 미백 또는 흑화 효과를 나타낼 수 있음을 의미한다.
본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 올리고뉴클레오티드를 조성물 총 중량에 대하여 0.00001 내지 30 중량%로 포함할 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 상기 멜라닌 생성 조절용은 피부에서의 미백 또는 흑화 용도를 포함하는 것일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 피부 미백용일 수 있다. 또는 본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 모발 흑화용일 수 있다.
본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 피부 외용제 조성물일 수 있다.
또한, 본 발명의 일 측면에 따른 조성물은 화장료 조성물, 약학 조성물 또는 식품 조성물일 수 있다.
일 실시예로서, 상기 화장료 조성물은 국소 적용에 적합한 모든 제형으로 제공될 수 있다. 예를 들면, 용액, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 유상에 수상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 고체, 겔, 분말, 페이스트, 포말(foam) 또는 에어로졸 조성물의 제형으로 제공될 수 있다. 이러한 제형의 조성물은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 제조될 수 있다.
일 실시예로서, 상기 화장료 조성물은 상기한 물질 이외에 주 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서, 바람직하게는 주 효과에 상승 효과를 줄 수 있는 다른 성분들을 함유할 수 있다. 본 발명에 따른 화장료 조성물은 비타민, 고분자 펩티드, 고분자 다당 및 스핑고 지질로 이루어진 군에서 선택된 물질을 포함할 수 있다. 또한 상기 화장품 조성물은 일 실시예로서, 보습제, 에몰리언트제, 계면 활성제, 자외선 흡수제, 방부제, 살균제, 산화 방지제, pH 조정제, 유기 및무기 안료, 향료, 냉감제 또는 제한(制汗)제를 포함할 수 있다. 상기 성분의 배합량은 본 발명의 목적 및 효과를 손상시키지 않는 범위 내에서 당업자가 용이하게 선정 가능하며, 그 배합량은 조성물 총 중량을 기준으로 0.01 내지 5 중량%, 구체적으로 0.01 내지 3 중량%일 수 있다.
일 실시예로서 상기 약학적 조성물은 피부 색소 과침착 또는 피부 색소 결핍에 의한 질병의 예방 또는 치료용일 수 있다. 구체적으로, 상기 피부 색소 과침착에 의한 질병의 예방 또는 치료용은 염증후 과다색소침착, 기미, 주근깨, 밀크커피색반점, 기타 멜라닌 과다색소침착, 흑색점, 달리 분류되지 않은 백피증, 멜라닌 형성 감소된 기타 장애, 색소성 자색반피부병, 뱀모양 혈관종, 기타 명시된 색소침착의 장애, 철색소침착, 문신색소침착 및 상세불명의 색소침착장애로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 질병의 예방 또는 치료용일 수 있다. 또한, 구체적으로, 상기 피부 색소 결핍에 의한 질병의 예방 또는 치료용은 색소 결핍증, 백반증 및 멜라닌결핍흑색종으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 질병의 예방 또는 치료용일 수 있다.
또한, 일 실시예로서 상기 약학적 조성물은 국소 적용에 적합한 모든 제형으로 제공될 수 있다. 예를 들면, 경구, 경피(trandermally), 정맥, 근육, 피하주사에 의해 투여될 수 있다. 일 실시예로서 상기 약학적 조성물은 주사제, 피부 외용 용액제, 현탁제, 유액제, 겔, 패취 또는 분무제일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다. 상기 제형은 당해 분야의 통상적인 방법에 따라 용이하게 제조될 수 있으며, 계면 활성제, 부형제, 수화제, 유화 촉진제, 현탁제, 삼투압 조절을 위한 염 또는 완충제, 착색제, 향신료, 안정화제, 방부제, 보존제 또는 기타 상용하는 보조제를 적당히 사용할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따른 약학적 조성물의 유효 성분은 대상의 연령, 성별, 체중, 병리 상태 및 그 심각도, 투여 경로 또는 처방자의 판단에 따라 달라질 것이다. 이러한 인자에 기초한 적용량 결정은 당업자의 수준 내에 있으며, 이의 1일 사용 용량은 예를 들어 0.1mg/kg/일 내지 5000mg/kg/일, 보다 구체적으로는 50 mg/kg/일 내지 500 mg/kg/일이 될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
일 실시예로서, 상기 식품 조성물은 건강기능식품 조성물을 포함하며, 상기건강기능식품 조성물은 피부 색소 과침착 또는 피부 색소 결핍에 의한 질병의 개선, 완화 또는 예방용일 수 있다. 구체적으로, 상기 피부 색소 과침착에 의한 질병의 개선, 완화 또는 예방용은 염증후 과다색소침착, 기미, 주근깨, 밀크커피색반점, 기타 멜라닌 과다색소침착, 흑색점, 달리 분류되지 않은 백피증, 멜라닌 형성 감소된 기타 장애, 색소성 자색반피부병, 뱀모양 혈관종, 기타 명시된 색소침착의 장애, 철색소침착, 문신색소침착 및 상세불명의 색소침착장애로 이루어진 군으로부터 선택된 어느 하나 이상의 질병의 개선, 완화 또는 예방용일 수 있다. 또한, 구체적으로, 상기 피부 색소 결핍에 의한 질병의 개선, 완화 또는 예방용은 색소 결핍증, 백반증 및 멜라닌결핍흑색종으로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 질병의 개선, 완화 또는 예방용일 수 있다.
상기 건강식품기능 조성물은 다양한 형태의 식품 첨가제 또는 기능성 식품을 포함한다. 상기 조성물을 포함하는 침출차, 액상차, 음료, 발효유, 치즈, 요구르트, 주스, 생균제제 및 건강보조식품 등으로 가공될 수 있으며, 그 외 다양한 식품 첨가제의 형태로 사용될 수 있다.
이하, 제조예, 실시예 및 실험예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 보다 구체적으로 설명한다. 그러나 아래 제조예, 실시예 및 실험예는 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 예시의 목적으로만 제공된 것일 뿐 본 발명의 범주 및 범위가 그에 의해 제한되는 것은 아니다.
[제조예] 식물 유래 올리고뉴클레오티드를 포함하는 조성물 제조
본 발명의 일 측면에 따른 식물 유래 올리고뉴클레오티드를 포함하는 조성물을 하기와 같은 방법으로 제조하였다.
먼저, 중간 정도로 색소가 있는 조직에서 분리된 인간 1차 멜라노사이트(moderately pigmented Human primary Melanocyte) (Thermofisher 사에서 구입, https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/C1025C?ICID=search-product)을 준비하였다.
그 후, 상기 멜라노사이트에서 ath-miR156a-5p 및 ath-miR158a-5p를 각각 과발현시키기 위해서, 서열번호 1 및 2의 miRNA(Thermofisher 사에서 구입, catolog 4464066)를 각각 도입하였다. 서열번호 1 및 2의 miRNA의 서열, 정보는 하기와 같다.
(실시예 1) ath-miR156a-5p
- 염기서열: 5'- UGACAGAAGAGAGUGAGCAC - 3'(서열번호 1)
- Assay ID MC10535
- https://www.thermofisher.com/order/genome-database/details/microrna/MC10535?CID=&ICID=&subtype=microrna_mimics_inhibitors
(실시예 2) ath-miR158a-5p
- 염기서열: 5'- CUUUGUCUACAAUUUUGGAAA - 3'(서열번호 2)
- Assay ID MC20315
- https://www.thermofisher.com/order/genome-database/details/microrna/MC20315?CID=&ICID=&subtype=microrna_mimics_inhibitors
구체적으로, 상기 서열번호 1 및 2의 miRNA 각각을 농도가 20nM가 되도록 리포좀(liposome)(Lipofectaminer® RNAiMAX Reagent (Thermo Fisher Scientific, https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/13778150))을 이용하여 트랜스펙션하여 세포 안으로 이동시켰다.
또한, 음성 대조군으로 사람의 그 어떤 유전자도 감소시키지 않은, 즉 세포 증식 및 세포 활성에 미치는 영향이 최소 수준인 것으로 기능적으로 입증된 siRNA인 mirVanaTM miRNA Mimic, Negative Control #1 (Thermo Fisher Scientific, https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/4464061?SID=srch-srp-4464061#/4464061?SID=srch-srp-4464061,cataloge 4464061)을 사용하였다. 상기 음성 대조군의 miRNA mimic도 농도가 20nM가 되도록 리포좀(liposome)을 이용하여 트랜스펙션하여 세포 안으로 이동시켰다.
그런 다음, 상기 각 트랜스펙션시킨 세포를 37℃ CO2 인큐베이터에서 약 4일간 배양하였다.
[실험예 1] 실시예 1의 멜라닌 생성 억제 여부 변화 확인
상기 제조예에서 제조한 실시예 1의 멜라닌 생성 억제 여부를 확인하기 위하여, 하기의 실험을 수행하였다.
먼저, 상기 제조예에서 트랜스펙션시킨 세포(실시예 1)을 PBS 완충액 5 ml을 이용하여 두번 워싱(washing)한 후, PBS 완충액 1ml를 넣어준 뒤 스크리퍼(scripper)를 이용하여 세포를 모두 긁어 모으고 13000 rpm으로 5분간 원심 분리(centrifugation)하여 세포 알갱이(cell pellet)를 만들고 그 세포 알갱이의 색깔을 관찰하여 색소 형성 정도를 비교하였다. 또한, 상기 세포 알갱이를 200μl 부피의 1N NaOH에 녹인 뒤, 450nm 흡광도를 측정하여 멜라닌의 양을 측정하였으며, 그 결과는 도 1a 및 도 1b와 같다.
도 1a 및 도 1b에 나타난 바와 같이, 멜라노사이트에 서열번호 1의 miRNA를 도입한 경우, 멜라닌 생성이 억제되어 생성된 멜라닌 양이 음성 대조군에 비해 약 20 내지 30% 이상 감소하였는바, 서열번호 1의 miRNA 또는 상기 서열번호 1의 서열과 80% 이상의 상동성을 가지고 상기 서열의 멜라닌 생성 억제능을 보유한 서열로 표시되는 서열로 표시되는 올리고뉴클레오티드를 포함하는 조성물은 피부세포에서 우수한 피부 미백 효과가 있음을 확인할 수 있다.
[실험예 2] 실시예 2의 멜라닌 생성 촉진 여부 변화 확인
상기 제조예에서 제조한 실시예 2의 멜라닌 생성 촉진 여부를 확인하기 위하여, 상기 실험예 1과 동일한 방법으로 실험을 수행하였으며, 그 결과는 도 2a 및 도 2b와 같다.
도 2a 및 도 2b에 나타난 바와 같이, 멜라노사이트에 서열번호 2의 miRNA를 도입한 경우, 멜라닌 생성이 촉진되어 생성된 멜라닌 양이 음성 대조군에 비해 약 50 내지 70% 이상 증가하였는바, 서열번호 2의 miRNA 또는 상기 서열번호 2의 서열과 80% 이상의 상동성을 가지고 상기 서열의 멜라닌 생성 촉진능을 보유한 서열로 표시되는 서열로 표시되는 올리고뉴클레오티드를 포함하는 조성물은 피부세포에서 우수한 흑화 효과가 있는바, 이를 모발에서의 흑화 용도로 활용할 수 있음을 확인할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따른 조성물의 제형예를 아래에서 설명하나, 다른 여러 가지 제형으로도 응용 가능하며, 이는 본 발명을 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
[제형예 1] 영양화장수
하기 표 1에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 영양화장수를 제조할 수 있다.
원료명 함량(중량%)
글리세린 3.0
부틸렌글리콜 3.0
프로필렌글리콜 3.0
카르복시비닐폴리머 0.1
서열번호 1의 올리고뉴클레오티드 0.01
밀납 4.0
폴리솔베이트 60 1.5
카프릴릭/카프릭 리글리세라이드 5.0
스쿠알란 5.0
솔비타세스퀴올레이트 1.5
세테아릴 알코올 1.0
트리에탄올아민 0.2
방부제, 향료 적량
정제수 잔량
계 100
[제형예 2] 영양로션
하기 표 2에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 영양로션을 제조할 수 있다.
원료명 함량(중량%)
정제수 잔량
글리세린 3.0
부틸렌글리콜 3.0
유동파라핀 5.0
베타글루칸 7.0
카보머 0.1
서열번호 1의 올리고뉴클레오티드 0.01
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 3.0
스쿠알란 5.0
세테아릴 글루코사이드 1.5
소르비탄 스테아레이트 0.4
폴리솔베이트 60 1.5
방부제 적량
향 적량
색소 적량
트리에탄올아민 0.1
계 100
[제형예 3] 영양크림
하기 표 3에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 영양크림을 제조할 수 있다.
원료명 함량(중량%)
글리세린 3.5
부틸렌글리콜 3.0
유동파라핀 7.0
베타글루칸 7.0
카보머 0.1
서열번호 1의 올리고뉴클레오티드 0.01
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 3.0
스쿠알란 5.0
세테아릴 글루코사이드 1.5
소르비탄 스테아레이트 0.4
폴리솔베이트 60 1.2
트리에탄올아민 0.1
방부제, 향료 적량
정제수 잔량
계 100
[제형예 4] 주사제
하기 표 4에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 주사제를 제조할 수 있다.
원료명 중량비(1ml 당)
염화나트륨 9.0mg
소듐 카르복시메틸셀룰로오즈 30.0mg
Tween 20 1.0mg
서열번호 1의 올리고뉴클레오티드 1.0mg
주사용 증류수 잔량
[제형예 5] 연고
하기 표 5에 기재된 조성에 따라 통상적인 방법으로 연고를 제조할 수 있다.
원료명 함량(중량%)
글리세린 8.0
부틸렌글리콜 4.0
유동파라핀 15.0
베타글루칸 7.0
카보머 0.1
서열번호 1의 올리고뉴클레오티드 0.01
카프릴릭/카프릭 트리글리세라이드 3.0
스쿠알란 1.0
세테아릴 글루코사이드 1.5
소르비탄 스테아레이트 0.4
세테아릴 알코올 1.0
방부제 적량
향 적량
색소 적량
밀납 4.0
정제수 잔량
계 100
<110> AMOREPACIFIC CORPORATION <120> Composition for controlling melanin production comprising plant-derived oligonucleotides <130> 20p233ind <160> 2 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 20 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> ath-miR156a-5p <400> 1 ugacagaaga gagugagcac 20 <210> 2 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> ath-miR158a-5p <400> 2 cuuugucuac aauuuuggaa a 21

Claims (12)

  1. 유효성분으로서 올리고뉴클레오티드를 포함하고,
    상기 올리고뉴클레오티드는
    서열번호 1 및 2로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열; 및
    상기 서열번호 1 및 2로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열과 80% 이상의 상동성을 가지고 상기 서열번호 1 및 2로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 멜라닌 생성 조절능을 보유한 서열;
    로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열로 표시되는, 멜라닌 생성 조절용 조성물.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 올리고뉴클레오티드는 애기장대(Arabidopsis) 속 식물, 야생 염소풀(Aegilops tauschii), 암보렐라(Amborella trichopoda), 묏장대(Arabidopsis lyrata), 아스파라거스(Asparagus officinalis), 야생잔디(Brachypodium distachyon), 유채(Brassica napus), 순무(Brassica rapa), 카멜리나(Camelina sativa), 파파야(Carica papaya), 당귤나무(Citrus sinensis), 탱자나무(Citrus trifoliate), 멜론(Cucumis melo), 아티초크(Cynara cardunculus), 디기탈리스 (Digitalis purpurea), 딸기(Fragaria vesca), 콩(Glycine max), 목화(Gossypium hirsutum), 해바라기(Helianthus annuus), 서양 해바라기(Helianthus argophyllus), 돼지감자(Helianthus tuberosus), 아마(Linum usitatissimum), 사과(Malus domestica), 카사바(Manihot esculenta), 메디카고(Medicago truncatula), 담배(Nicotiana tabacum), 이끼(Physcomitrella patens), 가문비나무(Picea abies), 포퓰라나무(Populus trichocarpa), 복숭아(Prunus persica), 벼(Rice), 사탕수수(Saccharum officinarum), 토마토(Solanum lycopersicum), 감자(Solanum tuberosum), 수수(Sorghum bicolor), 카카오(Theobroma cacao), 동부(Vigna unguiculata), 포도(Vitis vinifera), 브리세아 카리나타(Vriesea carinata) 및 옥수수(Zea mays)로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 식물로부터 유래된 것인, 멜라닌 생성 조절용 조성물.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 올리고뉴클레오티드는 리포좀에 포집된 형태, 백터에 삽입된 형태 및 세포투과성 펩타이드와 결합된 형태로 이루어진 군으로부터 선택된 하나의 형태로 포함되는, 멜라닌 생성 조절용 조성물.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 올리고뉴클레오티드는 상기 리포좀에 대하여 농도가 0.1 내지 400 nM인, 멜라닌 생성 조절용 조성물.
  5. 제3항에 있어서,
    상기 올리고뉴클레오티드가 세포투과성 펩타이드와 결합된 형태로 포함되는 경우 상기 조성물은 상기 올리고뉴클레오티드와 세포투과성 펩타이드 사이에 링커를 추가로 포함하는, 멜라닌 생성 조절용 조성물.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 올리고뉴클레오티드는 siRNA, shRNA 및 miRNA로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상인, 멜라닌 생성 조절용 조성물.
  7. 제1항에 있어서,
    상기 서열번호 1의 서열; 및 상기 서열번호 1의 서열과 80% 이상의 상동성을 가지고 상기 서열의 멜라닌 생성 조절능을 보유한 서열;로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열로 표시되는 올리고뉴클레오티드는 상기 올리고뉴클레오티드를 처리하지 않은 피부세포에 비하여 상기 올리고뉴클레오티드를 처리한 피부세포에서 멜라닌 생성을 억제하고,
    상기 서열번호 2의 서열; 및 상기 서열번호 2의 서열과 80% 이상의 상동성을 가지고 상기 서열의 멜라닌 생성 조절능을 보유한 서열;로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상의 서열로 표시되는 올리고뉴클레오티드는 상기 올리고뉴클레오티드를 처리하지 않은 피부세포에 비하여 상기 올리고뉴클레오티드를 처리한 피부세포에서 멜라닌 생성을 촉진하는, 멜라닌 생성 조절용 조성물.
  8. 제1항에 있어서,
    상기 멜라닌 생성 조절용은 피부에서의 미백 또는 흑화 용도를 포함하는, 멜라닌 생성 조절용 조성물.
  9. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 화장료 조성물인, 멜라닌 생성 조절용 조성물.
  10. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 약학적 조성물인, 멜라닌 생성 조절용 조성물.
  11. 제10항에 있어서,
    상기 약학적 조성물은 피부 색소 과침착 또는 피부 색소 결핍에 의한 질병의 예방 또는 치료용인, 멜라닌 생성 조절용 조성물.
  12. 제1항에 있어서,
    상기 조성물은 식품 조성물인, 멜라닌 생성 조절용 조성물.
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