KR20220005045A

KR20220005045A - 종양 치료에 사용하기 위한 pd-l1 안티센스 올리고뉴클레오타이드

Info

Publication number: KR20220005045A
Application number: KR1020217038482A
Authority: KR
Inventors: 프랭크 재신스키; 리차드 클랄; 타마라 텔레만; 스벤 미셸
Original assignee: 세카나 파머씨티컬스 지엠비에이치 엔 씨오. 케이지
Priority date: 2019-05-03
Filing date: 2020-05-04
Publication date: 2022-01-12
Also published as: US20220220485A1; JP2022531415A; AU2020269886A1; CA3135977A1; WO2020225186A1; EP3963074A1; CN114051531A

Abstract

본 발명은 PD-L1을 코딩하는 서열번호 제1서열과 혼성화하는 10 내지 20개의 뉴클레오타이드로 이루어진 올리고뉴클레오타이드로서, 잠재적인 비표적 결합 부위의 수가 근본적으로 감소되어 비표적 효과에 대한 위험이 크게 감소되는 올리고뉴클레오타이드에 관한 것이다. 또한 본 발명은 이러한 올리고뉴클레오타이드 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.

Description

종양 치료에 사용하기 위한 PD-L1 안티센스 올리고뉴클레오타이드

본 발명은 PD-L1을 코딩하는 서열번호 제1서열과 혼성화하는 10 내지 20개의 뉴클레오타이드로 이루어진 올리고뉴클레오타이드로서, 잠재적인 비표적(off-target) 결합 부위의 수가 근본적으로 감소되어 비표적 효과에 대한 위험이 크게 감소되는 올리고뉴클레오타이드에 관한 것이다. 또한 본 발명은 이러한 올리고뉴클레오타이드 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.

지난 수십 년간 암을 연구하는 중에 효과적인 항종양 반응을 개시 및 표출하기 위해 면역계가 필수 불가결하다는 것이 명백해졌다. 따라서 일반적인 암 치료에 있어서 이를 통합할 필요가 있다. 그러나 암세포는 예를 들어 손상된 항원 제시(antigen presentation)로 이어지는 HLA 분자의 하향 조절, IL-10 또는 아데노신과 같은 저해 가용성 매개체의 분비 또는 T 세포 저해 리간드의 발현에 의해 항종양 면역 반응을 회피하는 기전을 발생시켰다.

항원 제시 세포 및 암 세포의 표면에서 발현되는 가장 중요한 저해 리간드는 세포예정사(programmed cell death)-리간드 1 및 2(PD-L1/PD-L2)이다. 분화 클러스터 274(CD274) 또는 B7 상동체 1(B7-H1)이라고도 알려져 있는 세포예정사-리간드 1(PD-L1)는 인간에서 CD274 유전자에 의해 코딩되는 단백질이다. PD-L2(B7-DC 또는 CD273)는 주로 전문 항원 제시 세포(예를 들어 B 세포 및 수지상 세포)에서 발현되는 반면에, PD-L1은 실질 세포, 바이러스-감염 세포 및 종양 세포와 같은 비-림프 세포 뿐만 아니라 다른 면역 세포에서 발현된다. 상기 2개의 리간드는 주변의 활성화된 T 세포, B 세포, 자연 살해 세포 및 골수 세포와 같은 여러 면역 세포에서 발현되는 이들의 수용체인 세포예정사-1(PD-1)과 상호작용한다.

인간에서 PD-1 코딩 유전자(PDCD1)의 유전적 변화는 전신 홍반성 루푸스, 제1형 당뇨병, 다발성 경화증, 류마티스 관절염, 그레이브스병 및 강직성 척추염과 같은 여러 자가면역 질환에 대한 감수성 증가와 관련이 있다. 그러나 다른 음성 면역 조절 인자와 구별되는 PD-1 결핍은 특이적으로 그리고 오직 항원-특이적 자가면역 반응에 영향을 미치는 반면에, 다른 음성 조절 인자의 결핍은 전신, 비-항원-특이적 자가면역 표현형을 나타낸다.

현재까지 단클론 항체에 의한 또는 PD-1 발현의 유전자 조작에 의한 PD-1/PD-LI 상호작용의 차단은 종양 사멸(tumor eradication)의 향상으로 나타났다. 나아가 임상 데이터는 종양에서 PD-L1 발현 증강이 서로 다른 암 환자의 더욱 좋지 않은 생존 예후와 상관관계가 있음을 시사한다. 이들 결과는 PD-1 또는 PD-L1을 표적으로 하는 여러 개의 서로 다른 완전 인간화 단클론 항체의 개발로 이어졌다. 이들 항체의 적용은 예를 들어 일부 환자에서 약물-관련 이상 반응이 있는 비소세포폐암, 흑색종, 신장세포암종 및 호지킨 림프종의 임상 시험에 있어서 인간에게서 양성 반응율을 보였다. 그럼에도 불구하고, PD-1 경로의 치료적 차단은 현재 임상에서 면역학적 항종양 치료를 위한 가장 강력한 표적이다.

그러나 대부분의 암 환자(>70%)는 단클론 항체 치료법을 이용한 PD-1 또는 PD-L1의 치료적 차단에 잘 반응하지 않는다. 이들 데이터는 항종양 면역 치료법을 개선하기 위해서 상가(additive) 및/또는 상승효과를 가질 수 있는 추가 음성 조절 인자를 차단하거나 양성 조절 인자를 활성화하기 위한 제제를 사용하는 조합 치료법에 접근하는 것이 중요함을 시사한다. 다른 공지된 음성(예를 들어 LAG-3; TIM-3; 2B4; CD160) 또는 양성(예를 들어 CD137; CD40) 면역-조절 경로를 표적으로 하는 치료법과 조합하여 mRNA 수준에서 PD-L1 발현을 표적으로 하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 적용하면 PD-1/PD-L1 경로만을 표적으로 하는 것보다 더 좋은 치료 효능을 제공할 수 있다. 여러 연구를 통해 질환 중증도 및 음성 환자 생존 결과와 상관관계가 있는 PD-L1(sPD-L1)의 면역 저해 가용성 형태가 암 환자의 혈청에 존재한다는 것을 알 수 있다. 이에 따라 상기 PD-L1의 가용성 형태는 전신 수준에서 PD-LI에 대한 종래의 단클론 항체에 의해 완전히 포획될 수 없을 가능성이 매우 높다.

나아가 항체는 분자 크기가 크므로 다수의 서로 다른 종양의 경우와 같이 치밀하고 밀집된 조직에서 발현되는 표적에는 도달하지 못할 수 있다. 이에 따라 PD-L1 표적화는 서로 다른 암에 대한 신규한 면역 치료법을 개발하고 개선하기 위한 유망한 접근방법인 것처럼 보이지만 이를 달성하기 위한 만족할만한 해결방안은 아직 발견되지 않았다. 이런 이유로, PD-L1 발현 및/또는 활성을 감소 또는 저해하는 치료제에 대한 과학적 및 의학적 요구는 여전히 높다. 이에 따라 표적 발현의 저해는 종래의 항체 치료법보다 서로 다른 암에 대한 신규한 면역 치료법을 개발 및 개선하기 위한 더 유망한 접근방법이 될 수 있다. 현재 mRNA 발현을 특이적으로 억제하기 위해 두 가지 경쟁 기술로서 안티센스 올리고뉴클레오타이드 및 siRNA가 주로 사용되고 있다.

siRNA는 그의 이중가닥 특성으로 인해 그 자체로서 세포막을 통과하지 못하며 시험관내 및 생체내 그의 활성을 위해서 전달 시스템이 필요하다. 생체내에서 siRNA를 간세포에 효율적으로 전달하는 siRNA용 전달 시스템이 존재하지만, 현재 siRNA를 생체내에서 종양과 같은 간외 조직에 충분한 효능으로 전달할 수 있는 시스템은 없다. 따라서 PD-L1을 표적으로 하는 siRNA 접근방법은 현재 예를 들어 수지상 세포-기반 종양 백신의 생성을 위한 생체외 접근방법으로 제한된다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 경우에 세포 배양에서의 효능은 전형적으로 형질감염 시약을 사용한 형질감염 또는 전기천공 후에 결정된다. PD-L1에 대한 안티센스 접근방법은 예를 들어 WO 2006/042237 또는 WO 2016/057933 또는 Mazanet et al., J. Immunol. 169(2002) 3581-3588에 기재되어 있다. 더 나아가 2',4'-LNA(예를 들어, WO 2014/154843 A1 참고) 또는 제한된(constrained) 에틸 가교 핵산(c-ET)과 같은 소위 3세대 화학구조에 의해 변형된 안티센스 올리고뉴클레오타이드가 전달 시스템 없이 시험관내 및 생체내 세포에 유입되어 표적 하향조절을 달성할 수 있다는 것이 최근에 밝혀졌다. 또한 이중가닥 RNA 분자(WO 2011/127180 참고) 및 5' 말단을 통해 연결된 2개의 안티센스 구성체를 포함하는 소위 "3세대 안티센스 화합물"(WO 2016/138278 참조)이 PD-L1 저해제로서 시험되었다.

그러나 종래기술에 기재된 일부 접근방법에서는 높지 않은 정도의 표적 억제 수준만이 달성되었고 효율적인 표적 억제를 위해서는 상대적으로 높은 농도의 올리고뉴클레오타이드가 필요하였다. 예를 들어 US 8,563,528에서는 10 μM의 농도에서 단 70%의 표적 저해율이 얻어졌다. 형질감염 시약 없이 3세대 올리고뉴클레오타이드에 대한 IC₅₀ 값은 전형적으로 300 내지 600 nM 범위에 있다(Zhang et al. Gene Therapy (2011) 18, 326-333). 생체내 전신 투여 후에는 관련 표적 조직에서 상대적으로 낮은 올리고뉴클레오타이드 농도만이 달성될 수 있다. 따라서 낮은 농도에서 높은 최대 표적 억제에 도달하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 명백히 치료 효과가 향상될 것이다. WO 2018/065589 A1 및 WO 2017/157899 A1은 서로 다른 암에 대한 신규한 면역 치료법을 개발 및 개선하기 위한 접근방법으로서 PD-L1 발현의 저해를 보이는 3세대 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 기재하고 있다.

그러나 표적 영역에 대한 결합에 있어서 증가된 특이성을 가져 부작용이 현저히 감소됨으로써 종양 질환의 효율적인 예방 및/또는 치료에 사용하기 위해 다른 것들 중에서도 독성이 감소된 개선된 올리고뉴클레오타이드, 특히 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 대한 요구가 여전히 존재한다.

본 발명은 PD-L1을 코딩하는 서열번호 제1서열(GRCh38_9_5447492_5473576)과 혼성화하는 10 내지 20개의 뉴클레오타이드를 포함하거나 이들로 이루어진 올리고뉴클레오타이드로서, 서열번호 제1서열의 15400번째 위치 내지 22850번째 위치의 영역 내에서 또는 서열번호 제1서열의 3100번째 위치 내지 19500번째 위치의 영역 내에서 혼성화하는 올리고뉴클레오타이드에 관한 것이다. 추가 선택이 없다면, 상기 올리고뉴클레오타이드는 의도한 표적 서열에 결합할 뿐만 아니라 특정 서열 상보성을 보이는 다른 서열에도 추가로 결합하여 비표적 효과에 대한 위험이 증가된다. 본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 이러한 위험을 강력하게 감소시키기 위해 선택된 것이다.

경우에 따라 본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 불일치(mismatch) 개수가 0개인 표적 RNA에만 결합한다. 상기 올리고뉴클레오타이드가 결합할 수 있는 0개 또는 1개의 불일치 개수를 가진 비표적 RNA는 없으며 상기 올리고뉴클레오타이드가 결합할 수 있는 2개의 불일치 개수를 가진 최대 20개의 비표적이 있다.

본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 예를 들어 하나 이상의 변형 뉴클레오타이드를 포함한다. 상기 올리고뉴클레오타이드는 예를 들어 LNA, c-ET, ENA, 폴리알킬렌 옥사이드-, 2'-플루오로-, 2'-O-메톡시-, FANA 및/또는 2'-O-메틸-변형 뉴클레오타이드를 포함한다. 상기 변형 뉴클레오타이드(들)는 예를 들어 상기 올리고뉴클레오타이드의 5'- 또는 3'-말단 또는 5'- 및 3'-말단에 위치한다.

본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 예를 들어 서열번호 제2서열, 서열번호 제3서열, 서열번호 제4서열, 서열번호 제5서열, 서열번호 제6서열, 서열번호 제7서열, 서열번호 제8서열, 서열번호 제9서열, 서열번호 제10서열, 서열번호 제11서열, 서열번호 제12서열 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하거나 또는 본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 예를 들어 서열번호 제13서열, 서열번호 제14서열, 서열번호 제15서열, 서열번호 제16서열, 서열번호 제17서열, 서열번호 제18서열, 서열번호 제19서열, 서열번호 제20서열, 서열번호 제21서열, 서열번호 제22서열, 서열번호 제23서열, 서열번호 제24서열, 서열번호 제25서열, 서열번호 제26서열, 서열번호 제27서열, 서열번호 제28서열, 서열번호 제29서열, 서열번호 제30서열, 서열번호 제31서열, 서열번호 제32서열, 서열번호 제33서열, 서열번호 제34서열, 서열번호 제35서열, 서열번호 제36서열, 서열번호 제37서열, 서열번호 제38서열, 서열번호 제39서열, 서열번호 제40서열, 서열번호 제41서열, 서열번호 제42서열, 서열번호 제43서열, 서열번호 제44서열, 서열번호 제45서열, 서열번호 제46서열, 서열번호 제47서열, 서열번호 제48서열, 서열번호 제49서열, 서열번호 제50서열, 서열번호 제51서열, 서열번호 제52서열, 서열번호 제53서열, 서열번호 제54서열, 서열번호 제55서열, 서열번호 제56서열, 서열번호 제57서열, 서열번호 제58서열, 서열번호 제59서열, 서열번호 제60서열, 서열번호 제61서열, 서열번호 제62서열, 서열번호 제63서열, 서열번호 제64서열, 서열번호 제65서열, 서열번호 제66서열, 서열번호 제67서열, 서열번호 제68서열, 서열번호 제69서열, 서열번호 제70서열, 서열번호 제71서열, 서열번호 제72서열, 서열번호 제73서열, 서열번호 제74서열, 서열번호 제75서열, 서열번호 제76서열 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함한다.

이와 달리, 본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 서열번호 제2서열, 서열번호 제3서열, 서열번호 제4서열, 서열번호 제5서열, 서열번호 제6서열, 서열번호 제7서열, 서열번호 제8서열, 서열번호 제9서열, 서열번호 제10서열, 서열번호 제11서열, 서열번호 제12서열, 서열번호 제13서열, 서열번호 제14서열, 서열번호 제15서열, 서열번호 제16서열, 서열번호 제17서열, 서열번호 제18서열, 서열번호 제19서열, 서열번호 제20서열, 서열번호 제21서열, 서열번호 제22서열, 서열번호 제23서열, 서열번호 제24서열, 서열번호 제25서열, 서열번호 제26서열, 서열번호 제27서열, 서열번호 제28서열, 서열번호 제29서열, 서열번호 제30서열, 서열번호 제31서열, 서열번호 제32서열, 서열번호 제33서열, 서열번호 제34서열, 서열번호 제35서열, 서열번호 제36서열, 서열번호 제37서열, 서열번호 제38서열, 서열번호 제39서열, 서열번호 제40서열, 서열번호 제41서열, 서열번호 제42서열, 서열번호 제43서열, 서열번호 제44서열, 서열번호 제45서열, 서열번호 제46서열, 서열번호 제47서열, 서열번호 제48서열, 서열번호 제49서열, 서열번호 제50서열, 서열번호 제51서열, 서열번호 제52서열, 서열번호 제53서열, 서열번호 제54서열, 서열번호 제55서열, 서열번호 제56서열, 서열번호 제57서열, 서열번호 제58서열, 서열번호 제59서열, 서열번호 제60서열, 서열번호 제61서열, 서열번호 제62서열, 서열번호 제63서열, 서열번호 제64서열, 서열번호 제65서열, 서열번호 제66서열, 서열번호 제67서열, 서열번호 제68서열, 서열번호 제69서열, 서열번호 제70서열, 서열번호 제71서열, 서열번호 제72서열, 서열번호 제73서열, 서열번호 제74서열, 서열번호 제75서열, 서열번호 제76서열 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함한다.

본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 예를 들어 표 1, 표 2의 올리고뉴클레오타이드 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

본 발명은 또한 본 발명의 올리고뉴클레오타이드 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 올리고뉴클레오타이드, 본 발명의 약제학적 조성물 또는 이들의 조합은 예를 들어 악성 종양 및 양성 종양의 리스트로부터 선택되는 질환 또는 장애를 예방 및/또는 치료하는 방법에 사용된다. 상기 종양은 예를 들어 고형 종양, 혈액 매개 종양, 백혈병, 종양 전이, 혈관종, 청신경종, 신경섬유종, 트라코마, 화농성 육아종, 건선, 성상세포종, 모세포종, 유잉 종양, 두개인두종, 뇌실막종, 수모세포종, 신경교종, 혈관모세포종, 호지킨 림프종, 중피종, 신경모세포종, 비-호지킨 림프종, 송과체종, 망막모세포종, 육종, 정상피종 및 빌름스 종양, 담관암종, 방광암종, 뇌종양, 유방암, 기관지암종, 신장암종, 자궁경부암, 융모막암, 맥락막암종, 낭선암종, 배아암종, 상피암종, 식도암, 자궁경부암종, 결장암종, 대장암종, 자궁내막암, 담낭암, 위암, 두부암, 간암종, 폐암종, 수질암종, 경부암, 비소세포 기관지/폐암종, 난소암, 췌장암종, 유두암종, 유두선암종, 전립선암, 소장암종, 전립선암종, 직장암, 신장세포암종, 피부암, 소세포 기관지/폐암종, 편평세포암종, 피지선암종, 고환암종 및 자궁암으로부터 선택된다.

본 명세서에서 인용 또는 참고한 모든 문헌("본 명세서의 인용 문헌") 및 본 명세서의 인용 문헌에서 인용 또는 참고한 모든 문헌은 본 명세서 또는 본 명세서에 참고로서 포함된 모든 문헌에서 언급한 모든 제품에 대한 제조사 지침, 설명, 제품 규격 및 제품 설명서와 함께 본 명세서에 참고로서 포함되며 본 발명을 실시하는데 사용될 수 있다. 보다 구체적으로, 모든 참고된 문헌들은 개개의 문헌 각각이 구체적이고 그리고 개별적으로 참고로서 포함되는 것으로 표시된 것처럼 동일하게 참고로서 포함된다.

도 1A 및 도 1B는 PD-L1 발현의 저해를 시험하는 HDLM-2 및 MDA-MB-231 세포에서 본 발명의 올리고뉴클레오타이드의 효율 스크리닝을 보여주고 있다. PD-L1 발현 값을 HPRT1 발현 값으로 정규화하였고 모의-처리 세포와 대비하였다. 도 1A는 HDLM-2 세포에서 PD-L1 발현의 저해를 보여주고 있고 도 1B는 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오타이드 투여 후 MDA-MB-231 세포에서 PD-L1 발현 저해를 보여주고 있다.
도 2는 HDML-2 세포에서 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오타이드 A03062H(서열번호 제6서열), A03063H(서열번호 제7서열), A03077HI, A03084HI(서열번호 제27서열), A03107HI(서열번호 제49서열) 및 A03108HI(서열번호 제50서열)를 각각 투여 후 PD-L1 mRNA 발현의 용량-의존적 저해를 보여주고 있다. 각각의 올리고뉴클레오타이드는 10 μM, 2.5 μM, 625 nM, 157 nM, 39 nM, 10 nM, 2.5 nM의 농도로 투여하였다.
도 3은 PD-L1 mRNA와 혼성화하는 종래기술의 안티센스 올리고뉴클레오타이드대비 본 발명의 A03063H(서열번호 제7서열) 및 A03108HI(서열번호 제50서열)의 간 독성 시험을 보여주고 있다. 본 발명의 올리고뉴클레오타이드의 독성이 매우 낮은 5, 9 및 12일 후에 독성을 시험하였다.
도 4는 불일치 개수 0개, 1개 또는 2개로 비표적에 결합하는 n개의 뉴클레오타이드의 길이를 가진 올리고뉴클레오타이드의 수를 보여주는 불일치 시험을 개략적으로 보여주는 것으로, 불일치 개수 0개(0mm)는 상기 올리고뉴클레오타이드가 비표적 뉴클레오타이드 서열에 대해 100% 서열 상동성을 갖는다는 것을 의미하고, 1개(1mm)는 상기 올리고뉴클레오타이드가 비표적 뉴클레오타이드 서열에 대해 ((n-l)/n*100)% 서열 상동성을 갖는다는 것을 의미하며, 2개(2mm)는 상기 올리고뉴클레오타이드가 비표적 뉴클레오타이드 서열에 대해 ((n-2)/n*100)% 서열 상동성을 갖는다는 것을 의미한다.
도 5A 및 도 5B는 HDLM-2 세포(도 5A) 및 MiaPaCa 세포(도 5B)에서 ASO A03063H(서열번호 제7서열) 및 A03108HI(서열번호 제50서열)의 용량-의존적 PD-L1 단백질 녹다운(knockdown)을 보여주고 있다.
도 6은 ASO A03063H(서열번호 제7서열) 및 A03108HI(서열번호 제50서열)를 각각 사용하는 수지상 세포에서의 PD-L1 단백질 녹다운을 나타내고 있다.
도 7A 및 7B는 ASO A03063H(서열번호 제7서열) 및 A03108HI(서열번호 제50서열)를 각각 사용하는 HDLM-2 세포에서의 PD-L1 단백질 녹다운의 지속성을 보여주고 있다. 도 7A는 HDLM-2 세포의 급속한 증식을 입증하고 있고 도 7B는 PD-L1 발현에 대한 ASO A03063H(서열번호 제7서열) 또는 A03108HI(서열번호 제50서열)의 효과를 보여주고 있다.

본 발명은 서열번호 제1서열(GRCh38_9_5447492_5473576)의 PD-L1의 pre-mRNA 서열과 혼성화하고 PD-L1의 발현 및 활성을 각각 저해하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드와 같은 인간 올리고뉴클레오타이드인 성공적인 PD-L1 발현 저해제를 제공한다. 서열번호 제1서열의 pre-mRNA는 PD-L1의 엑손 및 인트론을 포함한다. 본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 서열번호 제1서열의 엑손 영역 또는 인트론 영역과 혼성화하고 표적에 매우 특이적으로 혼성화한다. 이에 따라 본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 매우 낮은 비표적 효과를 가져 결과적으로 부작용과 독성이 현저히 감소하기 때문에 PD-L1 발현 및 활성이 각각 증가하는 장애를 예방 및/또는 치료하는 방법에 사용하기 위한 흥미롭고 매우 효율적인 도구라고 할 수 있다.

본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 서열번호 제1서열의 15400번째 위치 내지 22850번째 위치의 영역 내에서 또는 서열번호 제1서열의 3100번째 위치 내지 19500번째 위치의 영역 내에서 혼성화하는데, 상기 영역의 시작점과 종료점, 즉 3100, 15400, 19500 및 22850번째 위치는 상기 영역에 포함된다.

본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 저해제 기능을 갖는 바, 즉 PD-L1의 전사 및 발현을 각각 저해한다. 본 발명에 따른 저해는 예를 들어 PD-L1과 혼성화하는 안티센스 뉴클레오타이드와 같은 올리고뉴클레오타이드를 투여하지 않은 세포에 비해 PD-L1의 전사 및 발현을 각각 임의의 수준으로 감소시키는 것을 포함한다.

n개의 뉴클레오타이드의 길이를 가진 본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 100% 서열 상보성(즉, 상기 올리고뉴클레오타이드는 임의의 비표적 뉴클레오타이드 서열에 대한 불일치 개수가 0개임)을 가진 임의의 비표적 뉴클레오타이드 서열에 결합하지도 않으며, ((n-l)/n*100)% 서열 상보성(즉, 상기 올리고뉴클레오타이드는 임의의 비표적 서열에 대한 불일치 개수가 1개임)을 가진 임의의 비표적 뉴클레오타이드 서열에도 결합하지도 않는다. 본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 ((n-2)/n*100)% 서열 상보성(즉, 상기 올리고뉴클레오타이드는 각각의 비표적 뉴클레오타이드 서열에 대한 불일치 개수가 2개임)을 가진 매우 제한된 수의 비표적 뉴클레오타이드 서열에만 결합한다. 따라서 이들 조건을 충족하는 본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 서열번호 제1서열의 PD-L1 pre-mRNA와 혼성화하지만 이들 조건을 충족하지 않는 올리고뉴클레오타이드에 비해 비표적 효과를 유발할 위험이 현저히 감소된다. 본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 예를 들어 서열번호 제1서열의 15400번째 위치 내지 22850번째 위치의 영역 또는 서열번호 제1서열의 3100번째 위치 내지 19500번째 위치의 영역과 혼성화한다. 이들 영역 중 하나와 혼성화하지만 본 발명에 따른 불일치에 관해 위에서 언급한 엄격한 조건을 충족하지 않는 올리고뉴클레오타이드는 본 발명의 올리고뉴클레오타이드만큼 비표적 효과를 유발할 위험의 현저한 감소를 보이지 않는다. ((n-2)/n*100)% 서열 상보성을 가진 비표적 뉴클레오타이드 서열에 결합하는 본 발명의 올리고뉴클레오타이드의 비표적 부위의 개수는 최대 5, 최대 10, 최대 15, 최대 20, 최대 25, 최대 30, 최대 35 또는 최대 40개의 비표적 결합 및 효과로 각각 제한된다.

비표적 효과는 올리고뉴클레오타이드의 생물학적 활성으로서, 상기 올리고뉴클레오타이드의 소정 위치 및/또는 생물학적 표적의 생물학적 활성과는 다르고 상기 위치 및/또는 표적에는 없는 생물학적 활성이다. 비표적 효과는 예를 들어 안티센스 올리고뉴클레오타이드(ASO)와 같은 올리고뉴클레오타이드가 상기 핵산 서열의 다른 위치 또는 다른 표적 핵산 서열에 결합하는 것을 포함한다. 상기 비표적 효과는 의도되거나 의도되지 않은 것으로, 예를 들어 생리학적 및/또는 생화학적 효과를 갖거나 비활성(silent)인바, 즉 세포, 조직, 기관 및/또는 유기체에 대한 측정 가능한 효과를 전혀 또는 조금도 갖지 않는다. 상기 비표적 효과는 예를 들어 독성과 같은 부작용에 기여한다.

안티센스 올리고뉴클레오타이드는 siRNA에 비해 중요한 이점이 있다.

안티센스 올리고뉴클레오타이드는 시험관내에서 형질감염 시약 없이 형질감염될 수 있고, 그 결과 상기 형질감염은 siRNA의 형질감염에 필수적인 형질감염 시약을 사용하는 형질감염보다 생체내 조건에 더 가깝다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 생체내 전신 투여는 서로 다른 조직에서 가능하지만, 생체내 siRNA의 투여는 예를 들어 간에서 GalNAc와 같은 전달 시스템에 의존한다. 게다가 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 siRNA보다 짧기 때문에 합성 및 세포내 흡수가 덜 복잡하다. siRNA는 마찬가지로 siRNA를 개시할 수 있는 패신저(passenger) 가닥의 비표적 효과를 지속적으로 나타낸다.

패신저 가닥 RISC 로딩은 패신저 가닥이 RNAi 활성을 의도하지 않은 표적으로 지시하여 독성 부작용을 야기할 수 있기 때문에 RNAi 약물에 대한 중요한 관심사이다(Chackalamannil, Rotella, Ward, Comprehensive Medicinal Chemistry III Elsevier, 03.06.2017 참고). 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 패신저 가닥을 포함하지 않는다.

이하, 본 발명의 요소에 대해 보다 상세하게 설명하기로 한다. 이들 요소는 특정 구현예들에 나열되어 있지만, 임의의 방식 및 임의의 수로 조합하여 추가 구현예를 제공할 수 있음은 물론이다. 다양하게 기재된 실시예들과 구현예들은 명시적으로 기재된 구현예들로만 본 발명을 한정하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 이러한 기재내용은 명시적으로 기재된 구현예들과 임의 개수의 개시된 요소들을 조합하는 구현예들을 뒷받침하고 포괄하는 것으로 이해되어야 한다. 나아가 본원에 기재된 모든 요소들의 임의의 순열 및 조합은 문맥상 달리 나타내지 않는 한 본원의 기재내용에 의해 개시된 것으로 간주되어야 한다.

본 명세서 및 청구범위 전반에 걸쳐 문맥상 다른 의미를 필요로 하지 않는 한, 단어 "포함하다" 및 변형 형태인 "포함한다"와 "포함하는"은 명기된 부재, 정수 또는 단계 또는 부재들, 정수들 또는 단계들의 그룹을 포함하지만 임의의 다른 부재, 정수 또는 단계 또는 부재들, 정수들 또는 단계들의 그룹을 배제하지 않은 의미로 이해될 것이다. 본 발명을 기재하는 문맥상 (특히 청구범위의 문맥상) 사용된 용어 "어느" 및 "하나의" 및 "상기" 및 유사한 참조는 본 명세서에서 달리 나타내거나 문맥상 명백히 모순되지 않는 한 단수와 복수를 모두 포함하는 것으로 해석되어야 한다. 본 명세서에서 수치 범위에 대한 인용은 단지 그 범위 내 속하는 각각의 개별 값을 개별적으로 지칭하는 간편한 방법으로서 제공하고자 하는 것일 뿐이다. 본 명세서에서 달리 나타내지 않는 한 각각의 개별 값은 본 명세서에서 개별적으로 인용된 것처럼 명세서에 통합된다. 본 명세서에 기재된 모든 방법들은 본 명세서에서 달리 나타내거나 문맥상 명백히 모순되지 않는 한 임의의 적합한 순서로 수행될 수 있다. 본 명세서에 제공된 임의의 그리고 모든 예들 또는 예시적인 언어(예를 들어, "~와 같은", "예를 들어")를 사용하는 것은 본 발명을 보다 설명하고자 하는 것일 뿐이며 별도 청구된 본 발명의 범위에 제한을 두려는 것은 아니다. 본 명세서 내 어떠한 언어도 본 발명의 실시에 필수적인 임의의 청구되지 않은 요소를 나타내는 것으로 해석되어서는 안 된다.

본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 예를 들어 10 내지 25개의 뉴클레오타이드, 12 내지 22개의 뉴클레오타이드, 15 내지 20개의 뉴클레오타이드, 16 내지 18개의 뉴클레오타이드 또는 15 내지 17개의 뉴클레오타이드로 이루어지거나 이들을 포함하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드(ASO)이다. 상기 올리고뉴클레오타이드는 예를 들어 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 25개의 뉴클레오타이드로 이루어지거나 이들을 포함한다. 본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 적어도 하나의 변형 뉴클레오타이드를 포함한다. 상기 변형 뉴클레오타이드는 예를 들어 잠금 핵산(LNA, 예를 들어, 2',4'-LNA), cET, ENA, 폴리알킬렌 옥사이드-, 2'-플루오로-, 2'-O-메톡시-, FANA 및/또는 2'-O-메틸-변형 뉴클레오타이드 또는 이들의 조합과 같은 가교된 뉴클레오타이드이다. 일부 구현예에서, 본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 동일하거나 서로 다른 변형을 가진 뉴클레오타이드를 포함한다. 일부 구현예에서, 본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 변형 포스페이트 백본(backbone)을 포함하고 상기 포스페이트는 예를 들어 포스포로티오에이트이다.

본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 상기 하나 이상의 변형 뉴클레오타이드를 예를 들어 상기 올리고뉴클레오타이드의 3'- 및/또는 5'-말단 및/또는 상기 올리고뉴클레오타이드 내 임의의 위치에 포함하되, 변형 뉴클레오타이드가 일렬로 늘어서 있는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 변형 뉴클레오타이드의 뒤를 잇거나 또는 하나의 변형 뉴클레오타이드가 하나 이상의 미변형 뉴클레오타이드와 조합되어 있다. 하기 표 1 및 2는 변형 뉴클레오타이드, 예를 들어 (+)로 표시되어 있는 LNA 및 (*)로 표시되어 있는 포스포로티오에이트(PTO)를 포함하고 (§)로 표시되어 있는 GRCh38_9:5447492-5473576 내 소정의 위치에 첫 번째 뉴클레오타이드가 결합하는 올리고뉴클레오타이드의 구현예들을 나타내고 있다. 표 1 및 2의 서열로 각각 이루어지거나 이들을 포함하는 올리고뉴클레오타이드는 임의의 다른 변형 뉴클레오타이드 및 임의의 다른 조합의 변형 및 미변형 뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 표 1의 올리고뉴클레오타이드는 인간 PD-L1의 pre-mRNA의 엑손 영역과 혼성화한다.

표 1: 예를 들어 서열번호 제1서열의 인간 PD-L1 pre-mRNA의 엑손 영역과 혼성화하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 리스트; Negl은 서열번호 제1서열의 PD-L1과 혼성화하지 않는 음성 대조군을 나타내는 올리고뉴클레오타이드이다. "H"는 "인간 엑손 영역"을 의미하고 인간 PD-L1의 pre-mRNA의 엑손 영역과 주로 혼성화하는 올리고뉴클레오타이드를 나타낸다.

표 2의 올리고뉴클레오타이드는 인간 PD-L1의 pre-mRNA의 인트론 영역과 혼성화한다.

표 2: 인간 PD-L1 pre-mRNA의 인트론 영역과 혼성화하는 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 목록; Neg1(서열번호 제77서열) 및 R01011(서열번호 제78서열)은 각각 서열번호 제1서열의 PD-L1과 혼성화하지 않는 음성 대조군을 나타내는 올리고뉴클레오타이드이다. "HI"는 올리고뉴클레오타이드가 인트론과 혼성화함을 의미한다.

표 1 및 표 2는 LNA-변형과 같은 뉴클레오타이드의 서로 다른 변형을 포함하는 본 발명의 올리고뉴클레오타이드의 안티센스 서열 5'-3'을 보여주고 있다. 이들 표에서 LNA-변형 뉴클레오타이드는 "+"로 표시되어 있고 포스포로티오에이트는 "*"로 표시되어 있다.

본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 예를 들어 인간, 래트 또는 뮤린 PD-L1 발현과 같은 PD-L1의 발현의 적어도 약 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100%를 저해한다.

본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 나노몰 또는 마이크로몰 농도, 예를 들어 0.1, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900 또는 950 nM 또는 1, 10 또는 100 μM의 농도에서 PD-L1의 발현을 저해한다.

본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 예를 들어 1, 3, 5, 9, 10, 15, 27, 30, 40, 50, 75, 82, 100, 250, 300, 500 또는 740 nM 또는 1, 2.2, 3, 5, 6.6 또는 10 μM의 농도로 사용된다.

본 발명의 PD-L1 올리고뉴클레오타이드는 예를 들어 수 주, 수 개월 또는 수 년 동안 12시간마다, 24시간마다, 48시간마다 1회 또는 반복 투여되거나 매주, 2주마다, 3주마다 또는 매월 투여된다.

본 발명은 또한 본 발명의 올리고뉴클레오타이드 및 예를 들어 약제학적으로 허용되는 담체, 부형제 및/또는 희석제를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 일부 구현예에서, 상기 약제학적 조성물은 화학 치료제, 또 다른 올리고뉴클레오타이드, 항체, 저분자 또는 이들의 조합을 더 포함한다.

본 발명의 올리고뉴클레오타이드 또는 약제학적 조성물은 예를 들어 장애를 예방 및/또는 치료하는 방법에 사용하기 위한 것이다. 일부 구현예에서, 장애를 예방 및/또는 치료하는 방법에서 본 발명의 올리고뉴클레오타이드 또는 약제학적 조성물의 사용은 방사선 치료와 조합된다. 상기 방사선 치료는 화학 치료(예를 들어 백금, 겜시타빈)와 추가로 조합될 수 있다. 상기 장애는 예를 들어 PD-L1 불균형, 즉 정상의 건강한 세포, 조직, 기관 또는 대상에서의 수준에 비해 증가된 PD-L1 수준을 특징으로 한다. 상기 PD-L1 수준은 예를 들어 증가된 PD-L1 발현 및 활성에 의해 각각 증가된다. 상기 PD-L1 수준은 당업자에게 공지되어 있는 면역조직화학, 웨스턴 블롯, 실시간 정량 PCR 또는 QuantiGene 분석과 같은 임의의 표준 방법에 의해 측정될 수 있다.

본 발명의 올리고뉴클레오타이드 또는 약제학적 조성물은 국소적으로 또는 전신적으로, 예를 들어 경구, 설하, 비강, 피하, 정맥내, 복강내, 근육내, 종양내, 척추강내, 경피 및/또는 직장 투여된다. 다른 투여 경로들로는 전기천공, 표피, 피부의 압흔(impression), 동맥내, 관절내, 두개내, 피내, 병변내, 근육내, 비강내, 안구내, 척추강내, 전방내, 복강내, 전립선내, 폐내, 척수내, 방광내, 체강내 삽입, 비강 폐 흡입(예를 들어 분무기에 의한 것을 포함한 분말 또는 에어로졸의 흡입 또는 주입에 의함), 피하, 국소(눈 및 질과 직장 전달을 포함한 점막 포함) 또는 경피 투여를 포함하나 이에 한정되는 것은 아니다. 선택적으로 또는 조합으로, 생체외 처리된 면역 세포가 투여된다. 상기 올리고뉴클레오타이드는 단독으로 또는 본 발명의 또 다른 올리고뉴클레오타이드와 조합하여 투여되고, 경우에 따라서는 본 발명과 다른 또 다른 올리고뉴클레오타이드와 같은 또 다른 화합물, 항체 또는 Fab 단편과 같은 이의 단편, HERA 융합 단백질, 리간드 트랩, 나노바디, BiTe, 저분자 및/또는 화학 치료제(예를 들어 백금, 겜시타빈)와 조합하여 투여된다. 일부 구현예에서, 상기 다른 올리고뉴클레오타이드(즉, 본 발명의 일부가 아님), 항체 및/또는 저분자는 자가면역 장애, 예를 들어 자가면역 관절염 또는 염증성 장질환(IBD) 또는 대장염과 같은 위장관 자가면역 질환, 면역 장애, 예를 들어 HIV 감염과 같은 만성 바이러스 감염으로 인한 면역 탈진(exhaustion), 심혈관 장애, 염증 장애, 예를 들어 만성 기도 염증, 박테리아, 바이러스 및/또는 진균 감염, 예를 들어 패혈증 또는 마이코박테리움 보비스 감염, 간 장애, 만성 신장 장애, 정신 장애(예를 들어 정신분열증, 양극성 장애, 알츠하이머병) 및/또는 암의 예방 및/또는 치료에 효과적이다.

본 발명의 올리고뉴클레오타이드 또는 약제학적 조성물은 예를 들어 고형 종양 또는 혈액 종양을 예방 및/또는 치료하는 방법에 사용된다. 본 발명의 올리고뉴클레오타이드 또는 약제학적 조성물을 사용하여 예방 및/또는 치료할 수 있는 암의 예는 고형 종양, 혈액 매개 종양, 백혈병, 종양 전이, 혈관종, 청신경종, 신경섬유종, 트라코마, 화농성 육아종, 건선, 성상세포종, 모세포종, 유잉 종양, 두개인두종, 뇌실막종, 수모세포종, 신경교종, 혈관모세포종, 호지킨 림프종, 중피종, 신경모세포종, 비-호지킨 림프종, 송과체종, 망막모세포종, 육종, 정상피종 및 빌름스 종양, 담관암종, 방광암종, 뇌종양, 유방암, 기관지암종, 신장암종, 자궁경부암, 융모막암, 맥락막암종, 낭선암종, 배아암종, 상피암종, 식도암, 자궁경부암종, 결장암종, 대장암종, 자궁내막암, 담낭암, 위암, 두부암, 간암종, 폐암종, 수질암종, 경부암, 비소세포 기관지/폐암종, 난소암, 췌장암종, 유두암종, 유두선암종, 전립선암, 소장암종, 전립선암종, 직장암, 신장세포암종, 피부암, 소세포 기관지/폐암종, 편평세포암종, 피지선암종, 고환암종 및 자궁암이다.

본 발명의 올리고뉴클레오타이드는 전신 투여되더라도 종양에서 검출가능하고 효과적이라는 것이 본 발명의 큰 이점이다.

일부 구현예에서, 본 발명의 2개 이상의 올리고뉴클레오타이드가 함께, 예를 들어 약제학적 조성물로 동일한 시점에 또는 별개로 또는 시차를 두고 투여된다. 다른 구현예에서, 본 발명의 하나 이상의 올리고뉴클레오타이드는 또 다른 올리고뉴클레오타이드(즉, 본 발명의 일부가 아님)와 같은 또 다른 화합물, 항체, 저분자 및/또는 화학 치료제와 함께, 예를 들어 약제학적 조성물로 동일한 시점에 또는 별개로 또는 시차를 두고 투여된다. 이들 조합의 일부 구현예에서, 상기 면역 억제-역전(reverting) 올리고뉴클레오타이드는 면역 억제 인자의 발현과 활성을 각각 저해하고 상기 다른 올리고뉴클레오타이드(즉, 본 발명의 일부가 아님), 항체 또는 Fab 단편과 같은 이의 단편, HERA 융합 단백질, 리간드 트랩, 나노바디, BiTe 및/또는 저분자는 동일 및/또는 또 다른 면역 억제 인자를 저해(길항제) 또는 자극한다(작용제). 상기 면역 억제 인자 및/또는 상기 면역 자극 인자 및/또는 면역 자극 인자. 상기 면역 억제 인자는 예를 들어 IDO1, IDO2, CTLA-4, PD-1, PD-L1, LAG-3, VISTA, A2AR, CD39, CD73, STAT3, TDO2, TIM-3, TIGIT, TGF-beta, BTLA, MICA, NKG2A, KIR, CD160, Chop, Xbpl 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 상기 면역 자극 인자는 예를 들어 4-IBB, Ox40, KIR, GITR, CD27, 2B4 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.

상기 올리고뉴클레오타이드 및 상기 약제학적 조성물은 각각 투여 단위로서 예를 들어 미세결정질 셀룰로오스, 검, 젤라틴, 전분, 락토오스, 스테아레이트, 감미제, 향미제 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물을 함유하는 캡슐, 정제 및 환제 등의 형태로 각각 제형화된다. 상기 투여 단위는 캡슐의 경우에 예를 들어 지방유와 같은 액체 담체를 함유한다. 경우에 따라서 당 또는 장용제의 코팅은 상기 투여 단위의 일부이다.

비경구, 피하, 피내 또는 국소 투여를 위한 상기 올리고뉴클레오타이드 및/또는 상기 약제학적 조성물은 예를 들어 멸균 희석제, 완충제, 독성 조절제 및 항균제를 포함한다. 바람직한 구현예에서, 상기 올리고뉴클레오타이드 또는 약제학적 조성물은 조절 방출성을 가진 임플란트 또는 마이크로캡슐을 비롯하여 체내에서 분해 또는 즉시 제거되지 않도록 하는 담체와 함께 조제화된다. 정맥내 투여를 위한 담체의 예로는 생리식염수 또는 인산완충식염수가 있다. 경구 투여용 올리고뉴클레오타이드 및/또는 이러한 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 약제학적 조성물은 예를 들어 분말 또는 과립, 마이크로미립자, 나노미립자, 물 또는 비수성 매질 중 현탁액 또는 용액, 캡슐, 겔 캡슐, 사쉐, 정제 또는 마이크로정제를 포함한다. 비경구, 척추강내, 전방내 또는 뇌실내 투여를 위한 올리고뉴클레오타이드 및/또는 이러한 올리고뉴클레오타이드를 포함하는 약제학적 조성물은 예를 들어 경우에 따라 완충제, 희석제 및/또는 침투 증진제, 담체 화합물 및/또는 기타 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제와 같은 다른 적합한 첨가제를 함유한 멸균 수용액을 포함한다.

약제학적으로 허용되는 담체는 예를 들어 액체 또는 고체이고 예를 들어 핵산 및 소정의 약제학적 조성물의 다른 성분들과 조합시 목적으로 하는 부피, 점조도(consistency) 등을 제공하도록 계획된 투여 방식을 염두하여 선택된다. 전형적인 약제학적으로 허용되는 담체로는 결합제(예를 들어 전호화 옥수수 전분, 폴리비닐피롤리돈 또는 히드록시프로필 메틸셀룰로오스 등); 충전제(예를 들어 락토오스 및 기타 당류, 미세결정질 셀룰로오스, 펙틴, 젤라틴, 황산칼슘, 에틸 셀룰로오스, 폴리아크릴레이트 또는 인산수소칼슘 등); 윤활제(예를 들어 스테아르산 마그네슘, 활석, 실리카, 콜로이드성 이산화규소, 스테아르산, 스테아르산 금속, 경화 식물유, 옥수수 전분, 폴리에틸렌글리콜, 벤조산나트륨, 아세트산나트륨 등); 붕해제(예를 들어 전분, 나트륨 전분 글리콜레이트 등); 또는 습윤제(예를 들어 라우릴황산나트륨 등)를 포함하지만 이들에 한정되는 것은 아니다. 경구 투여되는 투여 형태를 위한 서방성 경구 전달 시스템 및/또는 장용성 코팅은 미국특허 제4,704,295호; 제4,556,552호; 제4,309,406호; 및 제4,309,404호에 기재되어 있다. 이들 문구에는 보조제가 포함된다.

상기 면역 억제 인자는 예를 들어 세포, 조직, 기관 또는 대상에서 발현 및/또는 활성이 증가하는 인자이다. 상기 면역 자극 인자는 세포, 조직, 기관 또는 대상에서 상기 세포, 조직, 기관 또는 대상 및 이의 개별 조건에 따라 수준이 증가 또는 감소하는 인자이다.

본 발명의 올리고뉴클레오타이드 또는 약제학적 조성물과 조합되는 항체는 예를 들어 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체 또는 이중 항체이다. 본 발명의 올리고뉴클레오타이드 또는 약제학적 조성물과 조합되는 저분자는 예를 들어 ARL67156(Oncolmmunology 1:3; 2012) 또는 POM-1(Gastroenterology; 2010; 139(3): 1030-1040)이다.

본 발명의 대상은 예를 들어 포유류, 조류 또는 어류이다.

포유류에는 예를 들어 말, 개, 돼지, 고양이 또는 영장류(예를 들어 원숭이, 침팬지 또는 여우원숭이)가 포함된다. 설치류에는 예를 들어 래트, 토끼, 마우스, 다람쥐 또는 기니피그가 포함된다.

실시예

하기 실시예는 본 발명을 추가 설명하기 위해 제공하는 것이지만, 동시에 본 발명에 대한 어떠한 제한을 구성하는 것이 아니다. 오히려, 본 발명의 범위는 본 명세서의 기재내용을 읽은 후 본 발명의 기술적 사상을 벗어나지 않고 당업자에게 그 자체를 시사할 수 있는 이의 다양한 다른 구현예, 변형예 및 등가물을 의미하는 것으로 명확하게 이해되어야 한다.

실시예 1: 인간 암 세포주에서 PD-L1 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 1회 용량 효능 스크리닝

인간 PD-L1에 대한 특이성을 가진 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 설계하기 위해 서열 GRCh38_9_5447492_5473576(서열번호 제1서열)을 사용하였다. 표적 유전자에 대한 특이성에 크게 중점을 두면서 자체 기준에 따라 15, 16 및 17mer를 설계하였다. Negl(예를 들어 WO2014154843 A1에 기재됨)을 대조군 올리고뉴클레오타이드로서 사용하였다.

가상환경에서(in silico) 설계한 PD-L1 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 녹다운 효능을 조사하기 위해서 인간 암 세포주 HDLM-2 및 MDA-MB-231에서 효능 스크리닝을 수행하였다. 따라서 형질감염 시약을 사용하는 것 없이 세포를 각각의 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 대조군 올리고뉴클레오타이드로 3일 동안 2 μM(HDLM-2) 또는 10 μM(MDA-MB-231)의 농도로 처리하였다. 3일의 처리 기간 후에 세포를 용해시키고, QuantiGene Singleplex 분석법(ThermoFisher)을 이용하여 PD-L1 및 HPRT1 mRNA 발현을 분석하였다. PD-L1 발현 값을 HPRT1 발현 값으로 정규화하였고 모의-처리 세포와 대비하였다. 결과를 도 1 및 표 1에 나타내었다. 시험한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 중 8개는 HDLM-2 세포에서 >80%의 녹다운 효능(<0.2의 상대적 PD-L1 mRNA 발현량으로 표시됨)을 가졌다(도 1A). 시험한 안티센스 올리고뉴클레오타이드 중 4개는 MDA-MB-231 세포에서 >70%의 녹다운 효능(<0.3의 상대적 PD-L1 mRNA 발현량으로 표시됨)을 가졌다(도 1B).

이들 올리고뉴클레오타이드의 저해 효과는 하기 표 3 및 4에 나타내었다.

표 3: 모의-처리 세포 대비 HDLM-2 세포에서 평균 PD-L1 발현 값의 리스트. 발현 값은 HPRT1로 정규화함.

표 4: 모의-처리 세포 대비 MDA-MB-231 세포에서 평균 PD-L1 발현 값의 리스트. 발현 값은 HPRT1로 정규화함.

실시예 2: 선택한 PD-L1 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 용량-반응 관계의 조사 및 IC ₅₀ 값의 결정

HDLM-2 세포에서 PD-L1 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 의한 PD-L1 mRNA 발현의 용량-의존적 녹다운을 조사하고 각각의 ID₅₀ 값을 계산하였다. 따라서 형질감염 시약을 사용하는 것 없이 HDLM-2 세포를 각각의 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 3일 동안 다음과 같은 농도로 처리하였다: 10 μM, 2.5 μM, 625 nM, 157 nM, 39 nM, 10 nM, 2.5 nM. 3일의 처리 기간 후에 세포를 용해시키고, QuantiGene Singleplex 분석법(ThermoFisher)을 이용하여 PD-L1 및 HPRT1 mRNA 발현을 분석하였다. PD-L1 발현 값을 HPRT1 발현 값으로 정규화하였고 모의-처리 세포와 대비하였다. 시험한 모든 PD-L1 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 의한 PD-L1 mRNA의 용량-의존적 녹다운(도 2, 표 5)이 하기 표 5에 나타낸 나노몰 범위의 IC₅₀ 값과 함께 관찰되었다.

표 5: 선택한 PD-L1 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 ICeo 값 및 녹다운 효능

실시예 3: 선택한 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 간 독성의 생체내 평가

안티센스 올리고뉴클레오타이드 A03008H 및 A03028(WO 2018/065589 A1에 기재됨) 및 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오타이드 A03063H(서열번호 제7서열) 및 A03108HI(서열번호 제50서열)의 간 독성을 결정하기 위해서 각각의 안티센스 올리고뉴클레오타이드를 마우스에 반복 주사(20 mg/kg)하여 처리하였다. 알라닌 트랜스아미나제의 혈청 수준을 서로 다른 시점에서 결정하였다. 도 3에 나타낸 바와 같이, WO 2018/065589 A1의 시험한 2개의 안티센스 올리고뉴클레오타이드로 처리하면 ALT가 증가하였고 처리한 마우스 중 일부를 희생시켜야만 하였다. 이에 비해, 시험한 2개의 안티센스 올리고뉴클레오타이드 중 어느 것으로도 처리하지 않은 경우에 비히클(vehicle) 대조군과 비교했을 때 ALT가 증가하였다.

실시예 4: 잠재적인 비표적 결합 부위의 조사

본 발명의 올리고뉴클레오타이드의 비표적 효과를 시험하기 위해서 2개의 서로 다른 데이터베이스를 가상환경에서 스크리닝하였다. 이들 데이터베이스는 스플라이싱된 RNA의 서열들을 포함하는 RefSecRNA 및 비-스플라이싱된 RNA의 서열들을 포함하는 ENSEMBL이었다. 표 6 및 7에 나타낸 올리고뉴클레오타이드는 불일치 개수가 0개(즉, 비표적 서열에 대해 100% 서열 상보성(0mm)을 가짐) 또는 불일치 개수가 1개(즉, 비표적 서열에 대해 ((n-l)/n*100)% 서열 상보성(1mm)을 가짐)로 잠재적인 비표적 결합 부위를 갖고 있지 않다. 불일치 개수가 2개(즉, ((n-2)/n*100)% 서열 상보성(2mm)을 가짐)인 본 발명의 올리고뉴클레오타이드의 잠재적인 비표적 부위의 수는 최대 20개로 제한된다(표 6 및 7, RefSeq(유전자 Ids), 2mm 참고). 도 4는 불일치 시험의 원리를 보여주고 있다.

표 6 및 7은 본 발명의 올리고뉴클레오타이드에 대한 불일치 시험 결과를 보여주고 있다.

표 6: 각각의 PD-L1 엑손-결합 안티센스 올리고뉴클레오타이드와 0, 1 또는 2개의 불일치를 허용하는 서열 상보성을 보이는 표적 유전자 이외의 유전자의 수

표 7: 각각의 PD-L1 인트론-결합 안티센스 올리고뉴클레오타이드와 0, 1 또는 2개의 불일치를 허용하는 서열 상보성을 보이는 표적 유전자 이외의 유전자의 수

실시예 5: 2개의 서로 다른 세포주에서 용량-의존적 PD-L1 단백질 녹다운 및 IC ₅₀ 값

ASO A03063H(서열번호 제7서열) 및 A03108HI(서열번호 제50서열)의 PD-L1 단백질 녹다운 효능을 조사하기 위해 2개의 서로 다른 암 세포주를 사용하였다. 따라서 형질감염 시약(짐노틱(gymnotic) 형질감염)을 사용하는 것 없이 HDLM-2 세포(인간 호지킨 림프종 세포) 또는 MiaPaCa-2 세포(인간 췌장암종 세포)를 표시된 ASO로 3일 동안 서로 다른 농도로 처리하였다. MiaPaCa-2 세포에서 PD-L1의 발현을 유도하기 위해서 ASO로 처리 시작한 지 2일 후 상기 세포에 IFN 감마를 첨가하였다. ASO 처리 시작 후 3일째에 PD-L1 단백질 발현을 PD-L1-특이적 항체를 사용하는 유세포 분석에 의해 평가하였다. HDLM-2(도 5A) 및 MiaPaCa-2 세포(도 5B)에 대해 각각의 ASO로 세포를 각각의 농도로 처리한 후 단백질 발현의 척도로서 PD-L1의 중앙 형광 강도(MFI)를 나타내었다. 표 8(HDLM-2 세포) 및 표 9(MiaPaCa-2 세포)는 각각의 농도에서 IC₅₀ 값 및 녹다운 효능을 보여주고 있다.

표 8: HDLM-2 세포에서 ASO A03063H(서열번호 제7서열) 및 A03108HI(서열번호 제50서열)의 IC₅₀ 값

표 9: MiaPaCa-2 세포에서 ASO A03063H(서열번호 제7서열) 및 A03108HI(서열번호 제50서열)의 IC₅₀ 값

실시예 6: 수지상 세포에서 PD-L1 단백질 녹다운

본 실시예에서는 인간 수지상 세포(DC)에서 PD-L1 ASO A03063H(서열번호 제7서열) 및 A03108HI(서열번호 제50서열)의 녹다운 효능을 조사하였다. 따라서 3일 프로토콜로 DC를 생성하였다: 인간 단핵구를 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)로부터 정제하였고, 인터루킨-4(IL-4) 및 과립구-대식세포 콜로니 자극 인자(GM-CSF)를 첨가하여 미성숙 DC로 분화시키고, 사이토킨 칵테일 및 톨-유사(toll-like) 수용체 리간드를 첨가하여 DC로 성숙시켰다. DC의 생성 중에 세포에 ASO(모의)를 처리하지 않거나 대조군 올리고뉴클레오타이드(R01011, 서열번호 제78서열) 또는 PD-L1 특이적 ASO A03063H(서열번호 제7서열) 또는 A03108HI(서열번호 제50서열) 중 하나를 5 μM의 최종 농도로 처리하였다. 도 6에 나타난 바와 같이, R01011은 모의-처리 세포에 비해 잔류 PD-L1 단백질 발현에 거의 영향을 미치지 않았다. 크게 대조적으로, A03063H 또는 A03108HI로 처리하였더니 PD-L1 단백질 발현이 >90% 감소하였다(<0.1의 잔류 PD-L1 단백질 발현량으로 표시됨).

실시예 7: 빠르게 증식하는 세포에서 PD-L1 단백질 녹다운의 지속성

또한 빠르게 증식하는 PD-L1 ASO-처리 HDLM-2 세포에서 PD-L1 단백질 녹다운의 지속성을 조사하였다. 따라서 HDLM-2 세포(인간 호지킨 림프종 세포)를 처리하지 않거나(모의-처리 세포), 대조군 oligo neg1(서열번호 제77서열) 또는 PD-L1-특이적 ASO A03063H(서열번호 제77서열) 또는 A03108HI(서열번호 제50서열)로 5 μM의 최종 농도로 처리하였다. 3일 후 ASO를 제거하기 위해 세포를 철저히 세척하고 세포 증식 염료로 염색하였다. ASO를 세척 제거한 후 0, 3, 5, 7, 10 및 12일째에 증식(도 7A) 및 PD-L1 발현(도 7B, 같은 날 모의-처리 세포 대비 잔류 PD-L1 단백질 발현량으로서 나타냄)과 관련하여 세포를 유세포 분석법에 의해 분석하였다. 도 7A에서 시간 경과에 따른 증식 염료의 균질한 희석에 의해 나타낸 바와 같이, ASO를 세척 제거한 후 3일, 5일, 7일, 10일 및 12일에 HDLM-2 세포의 균질하고 큰 증식이 관찰되었다. PD-L1 단백질 발현에 대한 negl의 부정적인 영향은 관찰되지 않았다. 크게 대조적으로, PD-L1-특이적 ASO A03063H 또는 A03108HI로 세포를 처리하였더니 ASO의 세척 제거한 후 7일까지 >50%의 효능으로 PD-L1 단백질 발현이 크게 지속적으로 감소하였다.

놀랍게도 상기 결과를 통해 세포의 집중 증식과 이에 따른 ASO의 빠른 희석에도 불구하고 PD-L1 단백질 발현의 강력한 저해를 수일 동안, 즉 최대 7일까지 검출할 수 있음을 알 수 있다.

SEQUENCE LISTING <110> Secarna Pharmaceuticals GmbH & Co. KG <120> PD-L1 antisense oligonucleotides for use in tumor treatment <130> P122771PC00 <140> PCT/EP2020/062264 <141> 2020-05-04 <150> EP 19172585.2 <151> 2019-05-03 <160> 78 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 26085 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 tctctggtca cccatacatg ttaattaccc ctgtcattta aaccattgtt ttgtgtaact 60 agaacaaagt attctttcca cgaagtctgt ttgacacgag acacatatag gatgtgagtc 120 tatgacaagg gtaggggcaa caaatgtgag gggttggatg gaaacagagg aagagaaatg 180 agcattgcat agggcagtgg tttaaaaccc tacatgatca aaaatagaac ctggagacaa 240 atcttgatat tgtctttata cataataaaa tgcattttaa aatattcgat gcaaacaaag 300 cagtttgtca tgtcttttgt tttgagtctc tttagtatat gctgcttttg aagatcaaga 360 acatttactg gaaattgctc cttcaccagg aatttgctca catctcttca ggtccactta 420 taagatcttg aaatcagtcc tcctgagatc agtacaaacg aggatcatct ctcctgcttt 480 agaagcaaaa gtggcaagca gggtagacag aggcagaagg aaggatggta ctgataaatc 540 agccaaatta gatggaagaa agcgaattac agctgtactt gcaaagaact cttggctcat 600 tttttccctt aaatattaaa tcactagttt tcaaaacttc 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attattaact ctgtatgaca gaatcatgtc tggaactttt 22380 gttttctgct ttctgtcaag tataaacttc actttgatgc tgtacttgca aaatcacatt 22440 ttctttctgg aaattccggc agtgtacctt gactgctagc taccctgtgc cagaaaagcc 22500 tcattcgttg tgcttgaacc cttgaatgcc accagctgtc atcactacac agccctccta 22560 agaggcttcc tggaggtttc gagattcaga tgccctggga gatcccagag tttcctttcc 22620 ctcttggcca tattctggtg tcaatgacaa ggagtacctt ggctttgcca catgtcaagg 22680 ctgaagaaac agtgtctcca acagagctcc ttgtgttatc tgtttgtaca tgtgcatttg 22740 tacagtaatt ggtgtgacag tgttctttgt gtgaattaca ggcaagaatt gtggctgagc 22800 aaggcacata gtctactcag tctattccta agtcctaact cctccttgtg gtgttggatt 22860 tgtaaggcac tttatccctt ttgtctcatg tttcatcgta aatggcatag gcagagatga 22920 tacctaattc tgcatttgat tgtcactttt tgtacctgca ttaatttaat aaaatattct 22980 tatttatttt gttacttggt acaccagcat gtccattttc ttgtttattt tgtgtttaat 23040 aaaatgttca gtttaacatc ccagtggaga aagttacttg gaatatttgc agccttgttc 23100 ctagttcttt tttcattgct tatacagcat gtttttatac agcatgcttt tgaatcctgc 23160 acaatgaaaa aagtatcaaa agattttatt ttaaaaaaga atgtattgaa aattttcatt 23220 ctctctcatt cggcagcttc ctttaggacc ataccaagaa gagtcaaaat cctgtcatct 23280 acattgaaga tctaagggag agagggtggg agagaaggag tggaacccaa tagaactata 23340 gggaaacaaa gggacttacc tctaagaaag tacttttccc agatctgtaa acgggtatgc 23400 aatccagtgt gtaggaagat agatgtattg cagtcttcaa gttttgaaaa taaagcgagg 23460 aaactagaac taagccaagt tgaggattaa gggctagcaa tggttaggac catagatctg 23520 tggttttaaa caagcatgac aaaacttatc attcaaggaa gtatagacct tttaatgtgt 23580 catccggtga gattttagtc atgaaattcc attttaaaag actatcactt atttgaatca 23640 gatactctta aaggattata atggctattt ctaagaatat gtgtttgact ctagatgctt 23700 ttgtttgttt gtttttgaga cagagttttg ctcttgtcac ccaggctgga gtgcaatggc 23760 actatctcag ctcactgcaa cctccgcctc caggttcaac tgattctcct gcctcagccc 23820 ctcgagtagc tgggattaca ggcacctgcc accactcctg gctaattttt gtacttttag 23880 tagagacagg gtttcacaat gttggccagg ctgatctcga actcctgacc tcaggtgatc 23940 cacccatctc agcctcccaa agggctggga ttacaggtgt gagccacggt gcctggcctc 24000 tggatgtttt cagtagtaat gatgatgcac tatttatgct agcccttggg cagtcaaagc 24060 aataaaaatg tgtgctagac atcaagatat ctggccttcc taatcaggaa aggatatgga 24120 gaactagtct tcctggcttg ccttggtggt atggaaattt tgtgacactt gaggggtctg 24180 tattatagaa aagttaatat gaaaatggtt cataagcttt cattaaactt ttgttctagt 24240 cccttttaca agtgtgtgcc tgtctgccac aagtaggcct aatatatttt ttaagtttta 24300 tttttaattg acatataatt gacttttttt tattattata ctttaagttc tagggtacat 24360 gtgcacaaaa tgtaggtttg ttacatatgt atacatgtgc catgttggtg tgctgcaccc 24420 attaactcgt catttacatt aggtacatct cctaatacta tccctccctc ctccccgtac 24480 cccacgacag gccccggtgt gtgatgttcc ccatcctgtg tccaagtgtt ctcattgttc 24540 atttcccacc tatgagtgag aacatgcggt gtttggtttt ttgtccttgc aatagtttgc 24600 tgagaatggt ttccagcttc atccacgtcc ctacaaagga catgaactca tccttttcta 24660 tggctgcata gtattccatg gggtatatgt gccacatttt cttactccag tctatcattg 24720 gtggacattt gggttggttc caagtctttg ctattgtgaa tagtgctgca ataaacatac 24780 atgtgcatgt gtctttatag cagcatgatt tataatcctt tgggtatata cccagtaatg 24840 ggatggctgg gtcaaatggt atttctagtt ctagatccct gaggaattgc cacactgtct 24900 tccacaatgg ttgaactagt ttacactccc accaacagtg taaaagcgtt cctatttctc 24960 cacatcctct ccagcacctg ttgtttcctg actttttaat gatcgccatt ctaactggtg 25020 tgagatggta tctcattgtg gttttgattt gtatttctct gatggccagt gatggtgagc 25080 tttttttcat gtgtctgttg gctgcataaa tgtcttcttt tgagaagtgt ctgttcatat 25140 ccttcaccca ctttttgatg gggttgtttg attttttctt gtagatttgt ttaagttctt 25200 tgtagattct ggatattagc cctttgtcag atgggtagat tgtaaaaatg ttctcccatt 25260 ctgtaggttg cctgttcact ctgatggtag tttcttttgc tgtgcagaag ctctttagtt 25320 taattagatc ccatttgtca attttggctt ttgttgccat tgcttccagt gttttagtca 25380 tgaagtcctt gcccatgcct atgtcctgaa tggtattgct taggttttct tctagggtat 25440 ttatggtttt aggtctaaca tttaagtctt taatccatct tgaattaatt tttgtataag 25500 gtgtaaggaa gggatccagt ttcagctttc tacatatggc tagccagttt tcccagcacc 25560 atttattaaa tagggaatcc tttccccatt tcttgttttt gtcaggtttg tcaaagatca 25620 gatggttgtg gatgtgtggt attatttctg agggctctgt 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73 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense oligonucleotide <400> 73 ctagtagcct acagtac 17 <210> 74 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense oligonucleotide <400> 74 gcttgcacag taccaca 17 <210> 75 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense oligonucleotide <400> 75 ctggaatggc gagatac 17 <210> 76 <211> 17 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense oligonucleotide <400> 76 tcagacggtg gaggagt 17 <210> 77 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense oligonucleotide <400> 77 cgtttaggct atgtactt 18 <210> 78 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> R01011 <400> 78 gatcattcgc ggacacaac 19

Claims

PD-L1을 코딩하는 서열번호 제1서열과 혼성화하는 10 내지 20개의 뉴클레오타이드로 이루어진 올리고뉴클레오타이드로서, 서열번호 제1서열의 15400번째 위치 내지 22850번째 위치의 영역 내에서 또는 서열번호 제1서열의 3100번째 위치 내지 19500번째 위치의 영역 내에서 혼성화하는 올리고뉴클레오타이드.
제1항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오타이드가 불일치 개수가 0개인 표적 RNA와만 혼성화하는 올리고뉴클레오타이드.
제1항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오타이드가 비표적 뉴클레오타이드 서열에 대해 적어도 2개의 불일치 개수를 갖고 2개의 불일치 개수를 가진 최대 20개의 비표적 결합을 가진 올리고뉴클레오타이드.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오타이드가 하나 이상의 변형 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오타이드가 LNA, c-ET, ENA, 폴리알킬렌 옥사이드-, 2'-플루오로-, 2'-O-메톡시-, FANA 및/또는 2'-O-메틸-변형 뉴클레오타이드를 포함하는 올리고뉴클레오타이드.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 변형 뉴클레오타이드(들)가 상기 올리고뉴클레오타이드의 5'- 또는 3'-말단 또는 5'- 및 3'-말단에 위치하는 올리고뉴클레오타이드.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오타이드가 서열번호 제7서열, 서열번호 제2서열, 서열번호 제3서열, 서열번호 제4서열, 서열번호 제5서열, 서열번호 제6서열, 서열번호 제8서열, 서열번호 제9서열, 서열번호 제10서열, 서열번호 제11서열, 서열번호 제12서열 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 올리고뉴클레오타이드.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오타이드가 서열번호 제50서열, 서열번호 제13서열, 서열번호 제14서열, 서열번호 제15서열, 서열번호 제16서열, 서열번호 제17서열, 서열번호 제18서열, 서열번호 제19서열, 서열번호 제20서열, 서열번호 제21서열, 서열번호 제22서열, 서열번호 제23서열, 서열번호 제24서열, 서열번호 제25서열, 서열번호 제26서열, 서열번호 제27서열, 서열번호 제28서열, 서열번호 제29서열, 서열번호 제30서열, 서열번호 제31서열, 서열번호 제32서열, 서열번호 제33서열, 서열번호 제34서열, 서열번호 제35서열, 서열번호 제36서열, 서열번호 제37서열, 서열번호 제38서열, 서열번호 제39서열, 서열번호 제40서열, 서열번호 제41서열, 서열번호 제42서열, 서열번호 제43서열, 서열번호 제44서열, 서열번호 제45서열, 서열번호 제46서열, 서열번호 제47서열, 서열번호 제48서열, 서열번호 제49서열, 서열번호 제51서열, 서열번호 제52서열, 서열번호 제53서열, 서열번호 제54서열, 서열번호 제55서열, 서열번호 제56서열, 서열번호 제57서열, 서열번호 제58서열, 서열번호 제59서열, 서열번호 제60서열, 서열번호 제61서열, 서열번호 제62서열, 서열번호 제63서열, 서열번호 제64서열, 서열번호 제65서열, 서열번호 제66서열, 서열번호 제67서열, 서열번호 제68서열, 서열번호 제69서열, 서열번호 제70서열, 서열번호 제71서열, 서열번호 제72서열, 서열번호 제73서열, 서열번호 제74서열, 서열번호 제75서열, 서열번호 제76서열 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 올리고뉴클레오타이드.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오타이드가 서열번호 제7서열, 서열번호 제50서열, 서열번호 제2서열, 서열번호 제3서열, 서열번호 제3서열, 서열번호 제4서열, 서열번호 제5서열, 서열번호 제6서열, 서열번호 제8서열, 서열번호 제9서열, 서열번호 제10서열, 서열번호 제11서열, 서열번호 제12서열, 서열번호 제13서열, 서열번호 제14서열, 서열번호 제15서열, 서열번호 제16서열, 서열번호 제17서열, 서열번호 제18서열, 서열번호 제19서열, 서열번호 제20서열, 서열번호 제21서열, 서열번호 제22서열, 서열번호 제23서열, 서열번호 제24서열, 서열번호 제25서열, 서열번호 제26서열, 서열번호 제27서열, 서열번호 제28서열, 서열번호 제29서열, 서열번호 제30서열, 서열번호 제31서열, 서열번호 제32서열, 서열번호 제33서열, 서열번호 제34서열, 서열번호 제35서열, 서열번호 제36서열, 서열번호 제37서열, 서열번호 제38서열, 서열번호 제39서열, 서열번호 제40서열, 서열번호 제41서열, 서열번호 제42서열, 서열번호 제43서열, 서열번호 제44서열, 서열번호 제45서열, 서열번호 제46서열, 서열번호 제47서열, 서열번호 제48서열, 서열번호 제49서열, 서열번호 제51서열, 서열번호 제52서열, 서열번호 제53서열, 서열번호 제54서열, 서열번호 제55서열, 서열번호 제56서열, 서열번호 제57서열, 서열번호 제58서열, 서열번호 제59서열, 서열번호 제60서열, 서열번호 제61서열, 서열번호 제62서열, 서열번호 제63서열, 서열번호 제64서열, 서열번호 제65서열, 서열번호 제66서열, 서열번호 제67서열, 서열번호 제68서열, 서열번호 제69서열, 서열번호 제70서열, 서열번호 제71서열, 서열번호 제72서열, 서열번호 제73서열, 서열번호 제74서열, 서열번호 제75서열, 서열번호 제76서열 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 서열을 포함하는 올리고뉴클레오타이드.
제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오타이드가

및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것으로, 이때 +는 LNA-변형 뉴클레오타이드를 의미하고 *는 포스포로티오에이트를 의미하는 올리고뉴클레오타이드.
제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 올리고뉴클레오타이드 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
악성 종양 및 양성 종양의 리스트로부터 선택되는 질환 또는 장애를 예방 및/또는 치료하는 방법에 사용하기 위한 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 올리고뉴클레오타이드 또는 제11항에 따른 약제학적 조성물.
제12항에 있어서, 상기 종양이 고형 종양, 혈액 매개 종양, 백혈병, 종양 전이, 혈관종, 청신경종, 신경섬유종, 트라코마, 화농성 육아종, 건선, 성상세포종, 모세포종, 유잉 종양, 두개인두종, 뇌실막종, 수모세포종, 신경교종, 혈관모세포종, 호지킨 림프종, 중피종, 신경모세포종, 비-호지킨 림프종, 송과체종, 망막모세포종, 육종, 정상피종 및 빌름스 종양, 담관암종, 방광암종, 뇌종양, 유방암, 기관지암종, 신장암종, 자궁경부암, 융모막암, 맥락막암종, 낭선암종, 배아암종, 상피암종, 식도암, 자궁경부암종, 결장암종, 대장암종, 자궁내막암, 담낭암, 위암, 두부암, 간암종, 폐암종, 수질암종, 경부암, 비소세포 기관지/폐암종, 난소암, 췌장암종, 유두암종, 유두선암종, 전립선암, 소장암종, 전립선암종, 직장암, 신장세포암종, 피부암, 소세포 기관지/폐암종, 편평세포암종, 피지선암종, 고환암종 및 자궁암으로 이루어진 군으로부터 선택되는 올리고뉴클레오타이드 또는 약제학적 조성물.