KR20230133311A - CD73 mRNA 및 CD73 단백질 발현의 양을 감소시키는올리고뉴클레오티드 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 12 내지 18개의 뉴클레오티드를 포함하는 면역억제(immunosuppression)-역전(reverting) 올리고뉴클레오티드에 관한 것으로, 상기 뉴클레오티드 중 적어도 하나는 변형되고, 상기 올리고뉴클레오티드는 서열번호 1(인간) 및/또는 서열번호 2(인간)의 엑토엔자임(CD73)의 핵산 서열의 혼성화 활성 영역과 혼성화한다. 본 발명은 또한 이러한 올리고뉴클레오티드를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 상기 올리고뉴클레오티드 및 약제학적 조성물은 CD73 불균형과 관련된 질환을 예방 및/또는 치료하는 방법에 사용된다.
Description
본 발명은 엑토엔자임(ectoenzyme)(NT5E 또는 CD73)의 핵산 서열과 혼성화하는 올리고뉴클레오티드 및 이러한 올리고뉴클레오티드 및 약제학적으로 허용가능한 담체, 부형제 및/또는 희석제를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 본 발명은 또한 자가면역 질환, 면역 질환, 정신 질환 및/또는 암을 예방 및/또는 치료하는 방법에서의 올리고뉴클레오티드 및/또는 약제학적 조성물의 용도를 포함한다.
최근 몇 년 동안 악성 종양과 같은 여러 다양한 질병의 치료는 면역요법, 특히 소위 "면역 체크포인트(immune checkpoints)"의 억제제에 의한 면역요법의 적용으로 매우 성공적이었다. 이러한 체크포인트는 신호를 높이거나(공동자극 분자) 낮추는 면역 체계의 분자이다. 이 치료적 접근법의 개념은 내인성 항종양 면역 반응의 활성화에 기반한다. 많은 암은 예컨대, 각각 T 세포 및 NK 세포 활성을 억제함으로써 면역 체계로부터 자신을 보호한다. 면역 체크포인트 조절제, 즉 자극제 또는 억제제는 예를 들어 CTLA-4, PD-1, PD-L1, LAG-3, VISTA, A2AR, BTLA, IDO, CD39, CD73, STAT3, TDO2, TIM-3, MICA, NKG2A, KIR, TIGIT, TGF-베타, Ox40, GITR, CD27, CD160, 2B4 및 4-1BB중 하나 이상에 관한 것이다.
CD73은 다양한 유형의 암에 대한 면역력을 향상시킬 수 있는 새롭고 유망한 후보로 간주될 필요가 있다. CD73은 엑토엔자임(NTPdase)이며 AMP를 면역억제성 아데노신으로 전환하는 것을 촉매한다. CD73은 ATP를 ADP로, ADP를 AMP로 전환하는 것으로 알려진 CD39의 하류에서 협력하여 작용한다. 아데노신은 아데노신 수용체 A1, 아데노신 수용체 A2A, 아데노신 수용체 A2B 및 아데노신 수용체 A3를 통해 효능을 발휘한다. 또한, 아데노신에서 유래된 대사산물은 추가적인 면역억제 기능이 있다. 아데노신 또는 그 대사산물에 의해 조절되는 면역 세포의 범위에는 T 림프구, 자연 살해(natural killer, NK) 세포, NKT 세포, 대식세포(macrophage), DC, 호중구(neutrophils), 비만 세포(mast cell) 및 B 세포가 포함된다.
CD73은 림프구(lymphocytes), 대식세포, 수지상세포(dentritic cells), 내피세포(endothelial cells) 및 상피세포(epithelial cells)의 하위 집합을 포함하는 대부분의 조직 및 많은 세포 유형에서 발견된다. 저산소증(hypoxia)은 CD73 mRNA 및 CD73 단백질 발현을 유도하고 미세혈관(microvascular) 내피세포에서 CD73 활성을 증가시킨다. 특히, CD73은 많은 다양한 인간 (고형(solid) 및 혈액(hematologic)) 종양에서 높게 발현되며, 이의 증가된 발현 및 활성은 종양 침습(invasiveness)과 전이(mstastais) 및 더 짧은 환자 생존과 관련이 있다. CD73의 RNA 발현 및 효소 활성은 상이한 유방암 세포주에서 다양하다.
죽어가는 암세포는 종양 미세 환경의 세포외 공간으로 ATP를 방출한다. 살아있는 종양 세포는 종종 높은 수준의 CD39 및 CD73을 발현하고 ATP를 면역억제성 아데노신 및 부가의 아데노신의 면역억제성 하류 대사산물로 전환시킨다. 이에 의해, 종양 세포는 제어되지 않은 증식 및 확장을 수행할 수 있는 능력을 갖게된다. 예를 들어, T 세포의 증식, 세포독성 사이토카인 생성 및 활성화가 억제된다. NK 세포는 감소된 세포독성 잠재력을 나타낸다. 아데노신은 대식세포(면역 억제 M2 표현형)에서 대체 활성화를 유도하여 전염증성 사이토카인 생성을 감소시키며, 면역억제성 사이토카인 IL-10 생성을 증가시킨다. 또한, 아데노신의 하류 대사물, 예컨대, 디옥시-ATP는 이펙터(effector) 면역세포, 예컨대, T세포의 증식을 억제할 수 있다. 다양한 종양에서 관련 치료 표적으로서 CD73의 중요한 역할은 CD73 또는 A2A 수용체 넉아웃 마우스를 사용한 종양 모델이 개선된 질병 결과를 나타낸다는 사실에 의해 확인된다.
Innate Pharma의 항-CD73-항체와 같은 항-인간 CD73 단일클론 항체는 현재 임상 시험 중에 있다. 그러나, CD73에 대한 단일클론 항체는 크기가 커서 조직 침투가 어렵기 때문에 표적에 충분히 도달하지 못할 수 있다. 또한, CD73 소분자 억제제, 예컨대, AB680(Arcus Biosciences)가 현재 임상 시험 중에 있다. 그러나, CD73은 효소 활성에 더하여, 예컨대 암의 침습 및 전이 특성의 중개 기능을 갖는 것으로 밝혀졌다. 따라서, CD73 차단 항체 또는 CD73 소분자 억제제가 CD73의 모든 종양 촉진 기능을 방지한다고 확신할 수 없다.
면역요법은 장기적인 완화 치료 효과를 가져왔지만 지금까지는 소규모 환자 그룹에서였다. 그 이유는 예를 들어 면역계와 종양 세포 사이의 상호 작용에 수많은 면역 체크포인트와 선택적으로 추가 면역억제 메커니즘이 관여하기 때문일 수 있다. 면역 체크포인트와 잠재적인 다른 메커니즘의 조합은 신체의 방어를 피하기 위한 대상체의 종양 및 개별 조건에 따라 달라질 수 있다.
다양한 면역억제 기전의 억제를 위해 항체 및/또는 소분자를 사용하는 일반적인 접근법은 분자 표적이 세포 내에 위치하거나 효소 활성이 없기 때문에 적절하지 않을 수 있다. 따라서, CD73과 같은 "면역 체크포인트"의 기능을 억제하는데 안전하고 효과적인 작용제는 예를 들어 이 효소의 활성에 의해 영향을 받는 질병 또는 상태로 고통 받는 환자의 치료를 위한 중요한 부가물이 될 수 있다.
WO2018065627A1은 CD73 단백질의 발현을 억제하는 면역억제 복귀 올리고뉴클레오티드를 기술한다. 올리고뉴클레오티드의 분야에서, 효율의 증가, 즉 CD73 단백질의 발현 감소 및 CD73 mRNA 양의 감소와 더불어 독성과 같은 바람직하지 않은 부작용을 감소시키고자 하는 지속적인 시도가 있다.
올리고뉴클레오티드의 작용 방식은 항체 또는 소분자의 작용 방식과 다르며, 올리고뉴클레오티드는 예를 들어 다음과 같은 측면에서 매우 바람직하다.
(i) 고형 종양에서 종양 조직의 침투,
(ii) 각각 표적의 다중 기능 및 활동 차단,
(iii) 올리고뉴클레오티드 각각, 또는 항체 또는 소분자와의 조합, 및
(iv) 항체에서는 접근할 수 없거나 소분자를 통해 억제할 수 없는 세포내 효과의 억제.
본 발명의 올리고뉴클레오티드는 각각 CD73 mRNA 양의 감소 및 CD73 단백질 발현의 감소에 매우 성공적이며 놀랍게도 독성 부작용이 없거나 매우 낮다. 따라서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드를 사용하여 CD73 단백질 발현을 표적화하는 것은 예를 들어 다양한 암 및 면역 질환 각각에 대한 면역 요법을 개발하고 개선하면서 독성 부작용과 같은 단점은 매우 낮은 유망한 접근법이다.
본 발명은 12 내지 20개의 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드에 관한 것으로서, 상기 뉴클레오티드 중 적어도 하나는 변형되고, 상기 올리고뉴클레오티드는 표2에 제시된 군으로부터 선택된 혼성화 활성 영역 및 이들의 조합에서 서열번호 2의 엑토엔자임(CD73) pre-mRNA의 핵산 서열과 혼성화한다. 변형된 뉴클레오티드는 예를 들어, LNA, cET, ENA, 2'플루오로 변형된 뉴클레오티드, 2'O-메틸 변형된 뉴클레오티드 및 이들의 조합과 같은 가교 핵산으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 비처리 대조군과 비교하여 CD73 mRNA의 양 또는 CD73 단백질 발현 수준을 적어도 40% 감소시킨다. 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 예를 들어 하기 표1에 제시된다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드는 CD73 mRNA의 양 또는 CD73 단백질 발현 수준을 예를 들어 나노몰 농도로 감소시킨다.
본 발명은 또한 본 발명의 올리고뉴클레오티드 및 약제학적으로 허용가능한 담체, 부형제 및/또는 희석제를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 상기 약제학적 조성물은 또한 예를 들어 화학요법제(예를 들어, 백금(platinum), 젬시타빈(gemcitabine)) 같은 항종양 활성제, 면역 자극제, 예를 들어 다른 올리고뉴클레오타이드인 질병 특이적 제제 또는 종양- 또는 감염-매개 면역억제를 역전시키는 제제, 항체, 탄수화물-변형 항체, 펩티드-기반 치료제, 단백질-기반 치료제, 지질, 치료용 백신, HERA 융합 단백질, 리간드 트랩, Fab 단편, 나노바디, BiTe, DARPin, 소분자 또는 이들의 조합을 더 포함한다. 상기 항종양 활성제, 다른 올리고뉴클레오티드 같은 질병 특이적 제제, 항체, 탄수화물 변형 항체, 펩티드 기반 치료제, 단백질-기반 치료제, 지질, 치료용 백신, HERA 융합 단백질, 리간드 트랩, Fab 단편, 나노바디, BiTe, DARPin 및/또는 소분자는 예를 들어 IDO1, IDO2, CTLA-4, PD-1, PD-L1, LAG-3, VISTA, A2AR, CD39, CD73, STAT3, TDO2, TIM-3, TIGIT, TGF-베타, BTLA, MICA, NKG2A, KIR, CD160, MTDH, Xbp1, Chop 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 면역 억제 인자의 발현 또는 활성을 억제하거나, 4-1BB, Ox40, KIR, GITR, CD27, 2B4 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 면역 자극 인자의 발현 또는 활성을 자극한다.
선택적으로 또는 추가로, 항종양 활성제, 다른 올리고뉴클레오티드 같은 질병 특이적 제제, 항체, 탄수화물-변형 항체, 펩티드-기반 치료제, 단백질-기반 치료제, 지질, 치료용 백신, HERA 융합 단백질, 리간드 트랩, Fab 단편, 나노바디, BiTe, DARPin 및/또는 소분자는 예를 들어 SND1,MTDH, HER-2, BRAF, KRAS, VEGF, EGFR1, EGFR2, BCR/ABL, ABL, MET, ALK, JAK2, BTK, miR-223, CCL18, CCL20, Lcn2, CCL5/CCR9, DDR2, PHD2, IL6, SDF-1/CXCL12 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 암 진행 및/또는 전이에 관련된 인자의 발현 또는 활성을 억제한다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드 및 약제학적 조성물은 각각 CD73 불균형과 관련된 질환을 예방 및/또는 치료하는 방법에서 사용된다. 상기 질환은 예를 들어, 자가면역 질환(autoimmune disorder), 면역 질환(immune disorder), 정신 질환(psychiatric disorder) 및/또는 암이다. 암은 예를 들어, 유방암, 폐암, 악성 흑색종(malignant melanoma), 림프종, 피부암, 골암, 전립선암, 간암, 뇌암, 후두(larynx)암, 담낭(gall bladder)암, 췌장(pancreas)암, 고환(testicular)암, 직장(rectum)암, 부갑상선(parathyroid)암, 갑상선(thyroid)암, 부신(adrenal)암, 신경조직(neural tissue)암, 두경부(head and neck)암, 결장(colon)암, 위(stomach)암, 기관지(bronchi)암, 신장(kidney)암, 기저세포암종(basal cell carcinoma), 편평세포암종(squamous cell carcinoma), 전이성피부암종(metastatic skin carcinoma), 골육종(osteo sarcoma), 에윙육종(Ewing's sarcoma), 세망세포육종(reticulum cell sarcoma), 지방육종(liposarcoma), 골수종(myeloma), 거대세포종양(giant cell tumor), 소세포폐종양(small-cell lung tumor), 섬세포종양(islet cell tumor), 원발성뇌종양(primary brain tumor), 수막종(meningioma), 급성 및 만성림프구성(acute and chronic lymphocytic) 및 과립구성(granulocytic) 종양, 급성 및 만성골수성백혈병(acute and chronic myeloid leukemia), 모발세포종양(hairy-cell tumor), 선종(adenoma), 과형성(hyperplasia), 수질암종(medullary carcinoma), 장신경절신경종(intestinal ganglioneuromas), 윌름종양(Wilm's tumor), 정상피종(seminoma), 난소종양(ovarian tumor), 평활근종종양(leiomyomater tumor), 자궁경부이형성증(cervical dysplasia), 망막모세포종(retinoblastoma), 연조직육종(soft tissue sarcoma), 악성 카르시노이드(malignant carcinoid), 국소피부병변(topical skin lesion), 횡문근육종(rhabdomyosarcoma), 카포시육종(Kaposi's sarcoma), 골육종(osteogenic sarcoma), 악성 고칼슘혈증(malignant hypercalcemia), 신세포종양(renal cell tumor), 진성다혈구증(polycythermia vera), 선암종(adenocarcinoma), 역형성 성상세포종(anaplastic astrocytoma), 다형성 교모세포종(glioblastoma multiforme), 백혈병(leukemia) 또는 표피암종(epidermoid carcinoma)이다.
본 발명에 따라 방법에 사용하기 위한 올리고뉴클레오티드 또는 약제학적 조성물은 예를 들어 국소적으로 또는 전신적으로 투여된다.
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도1a 및 1b는 EFO-21(도1a) 및 MDA-MB 231(도1b) 세포에서 인간 CD73-특이적 ASO의 표적 넉다운 효능 스크린을 나타낸다.
도2는 ASO 처리 3일 후 EFO-21 세포에서 선별된 CD73 ASO에 의한 용량 의존적 CD73 mRNA 넉다운을 나타낸다.
도3은 선행 기술의 ASO와 비교하여 본 발명의 선별된 ASO의 간 독성의 생체내 평가를 나타낸다.
도2는 ASO 처리 3일 후 EFO-21 세포에서 선별된 CD73 ASO에 의한 용량 의존적 CD73 mRNA 넉다운을 나타낸다.
도3은 선행 기술의 ASO와 비교하여 본 발명의 선별된 ASO의 간 독성의 생체내 평가를 나타낸다.
본 발명은 예를 들어 인간 기원의 엑토뉴클레오티다제 CD73의 mRNA 및/또는 pre-mRNA 서열과 혼성화하는 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 이들 올리고뉴클레오티드는 예를 들어 종양 세포 또는 면역 세포와 같은 종양 미세환경 내의 세포에서 CD73 pre-mRNA의 인트론 및/또는 엑손 및/또는 엑손-엑손 접합부 및/또는 엑손-인트론 접합부와 혼성화한다. RNase H의 모집(recruitment)을 통해, pre mRNA가 분해되고 CD73 mRNA의 수준이 감소한다. 그 결과, CD73 단백질의 생산이 억제되고 CD73 단백질의 수준은 예를 들어 종양 세포 또는 종양 관련 면역 세포에서의 CD73 mRNA 및 CD73 단백질 발현의 양이 감소된다. 결과적으로 면역억제성 아데노신과 그 하류 대사산물의 수치가 감소한다. 이러한 모든 효과는 독성 부작용이 없거나 매우 낮은 상태로 항종양 면역 세포의 증가, 면역 활성화(예: 세포독성 T 세포 또는 NK 세포를 통한) 및 종양 세포의 인식 및 제거를 각각 야기한다. 또한, CD73 단백질 수준의 감소는 CD73에 의해 매개되는 종양 세포 침입 및 전이를 예방한다. 따라서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 CD73 단백질 발현 및 활성이 질병 발달 및 진행에 각각 관여하는 질환을 예방 및/또는 치료하는 방법에 사용하는 매우 유망하고 효율적인 도구가 될 수 있다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드는 예를 들어 서열번호 1의 CD73 mRNA(RefSeq ID NM_002526.4) 및/또는 서열번호 2의 pre-mRNA(GRCh38.p13:6:85450083:85495784)와 혼성화한다.
이하, 본 발명의 구성요소에 대해 보다 상세하게 설명한다. 이들 요소는 특정 실시예와 함께 나열되지만, 추가 실시예를 생성하기 위해 임의의 방식 및 개수로 조합될 수 있음을 이해해야 한다. 다양하게 기술된 예 및 실시예는 명시적으로 기술된 실시예만으로 본 발명을 제한하는 것으로 해석되어서는 안된다. 이 명세서는 명시적으로 설명된 실시예를 임의의 수의 개시된 요소와 결합하는 실시예를 지원하고 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 또한, 본 출원에서 설명된 모든 요소의 임의의 순열 및 조합은 문맥상 달리 나타내지 않는 한 본 출원의 명세서에 의해 개시된 것으로 간주되어야 한다.
본 명세서 및 청구범위 전체에 걸쳐, 문맥상 달리 나타내지 않는 한, 용어 "포함하다" 및 변형 형태인 "포함하는"은 언급된 구성, 정수 또는 구성의 단계 또는 그룹을 포함하며, 다른 구성, 정수 또는 구성의 단계 또는 그룹을 배제하지 않는 것으로 이해될 것이다. 본 발명에서(특히 청구범위에서) 사용되는 단어 "한", "하나", "상기" 및 유사 단어는 본 명세서에서 달리 나타내지 않았거나 문맥상 명백히 모순되지 않는 한 단수 및 복수 모두를 포함하는 것으로 해석되어야 한다. 본 명세서에서 값의 범위에 대한 언급은 단지 범위 내에 속하는 각각의 별도의 값을 개별적으로 간편하게 언급하기 위한 의도이다. 본 명세서에서 달리 나타내지 않는 한, 각 개별 값은 본 명세서에서 개별적으로 인용된 것처럼 명세서에 포함된다. 본 명세서에 기술된 모든 방법은 본 명세서에서 달리 나타내지 않거나 문맥상 명백히 모순되지 않는 한 임의의 적합한 순서로 수행될 수 있다. 본 명세서에서 제공되는 임의의 및 모든 예 또는 예시적인 언어("~와 같은", "예를 들어" 등)의 사용은 단지 본 발명을 더 잘 설명하기 위한 것이며 본 발명의 범위를 제한하지 않는다. 명세서의 어떤 언어도 본 발명의 실행에 필수적인 비청구 요소를 나타내는 것으로 해석되어서는 안된다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드는 예를 들어 10 내지 25개의 뉴클레오티드, 10 내지 15개의 뉴클레오티드, 15 내지 20개의 뉴클레오티드, 12 내지 18개의 뉴클레오티드, 또는 14 내지 17개의 뉴클레오티드로 구성되거나 이를 포함하는 안티센스 올리고뉴클레오티드이다. 상기 올리고뉴클레오티드는 예를 들어 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 또는 25개의 뉴클레오티드로 구성되거나 포함한다. 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 변형된 적어도 하나의 뉴클레오티드를 포함한다. 상기 변형된 뉴클레오티드는 예를 들어, 잠긴(locked) 핵산(LNA, 예컨대 2',4'-LNA), cET, ENA, 2'플루오로 변형된 뉴클레오티드, 2'O-메틸 변형된 뉴클레오티드 또는 이들의 조합과 같은 가교된 뉴클레오티드이다. 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 예를 들어, 1개 이상, 2개 이상, 3개 이상 또는 4개 이상의 동일하거나 상이한 변형을 갖는 뉴클레오티드를 포함한다. 또한, 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 선택적으로 변형된 포스페이트 백본을 포함하며, 상기 포스페이트는 예를 들어 포스포로티오에이트(phosphorothioate) 또는 메틸포스포네이트(methylphosphonate) 또는 이들의 조합이다.
본 발명에 따른 감소는 각각 다양한 백분율 및 양으로 발현과 같은 효과를 억제하는 것을 포함한다.
본 발명의 사상은 단백질 발현을 위해 이용 가능한 CD73 mRNA의 제한을 매개하는 안티센스 올리고뉴클레오티드와 같은 올리고뉴클레오티드를 제공한다. 단백질 발현을 제한하기 위해, 상기 올리고뉴클레오티드는 헤테로듀플렉스를 형성할 수 있는 혼성화 표적을 나타내는 상보적인 핵산 서열의 존재를 필요로 한다. 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 서열번호 1의 RNA 및/또는 서열번호 2의 pre-mRNA와 혼성화한다. 상기 올리고뉴클레오티드와 표적 RNA 사이의 헤테로듀플렉스의 형성은 표적 RNA의 RNaseH-매개 분해 또는 불활성화를 유도하여, 단백질 발현을 위해 이용가능한 CD73 mRNA의 양을 제한한다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드는 올리고뉴클레오티드의 3'- 및/또는 5'- 말단 및/또는 올리고뉴큐레오티드 내의 임의의 위치에서 1개 이상, 2개 이상, 3개 이상 또는 4개 이상의 변형된 뉴클레오티드를 포함하고, 상기 변형된 뉴클레오티드는 일련의 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 변형된 뉴클레오티드가 이어지거나, 1개 이상, 2개 이상, 3개 이상 또는 4개 이상의 비변형 뉴클레오티드와 조합된다. 하기 표1은 변형된 뉴클레오티드, 예를 들어 (+)로 표시된 LNA 및 (*)로 표시된 포스포로티오에이트(PTO)를 포함하는 올리고뉴클레오티드의 실시형태를 제시한다. 표1의 서열로 구성되거나 이를 포함하는 올리고뉴클레오티드는 임의의 다른 변형된 뉴클레오티드 및 변형 및 비변형 뉴클레오티드의 임의의 다른 조합을 포함할 수 있다. 표1의 올리고뉴클레오티드는 인간 CD73 mRNA와 혼성화한다.
| 서열 번호 |
명칭 | 안티센스 서열 5'-3' |
PTO (*) 및 LNA (+)를 갖는 안티센스 서열 5'-3' | pre-mRNA 상의 위치 (GRCh38.p13:6:85450083:85495784 (서열번호 2)) |
| 3 | A05046H | GCGAGTGCCGGCGAGT | +G*+C*+G*A*G*T*G*C*C*G*G*C*G*+A*+G*+T | 1 |
| 4 | A05047H | AGCTGTGGCGCGTGAAC | +A*+G*+C*T*G*T*G*G*C*G*C*G*T*G*+A*+A*+C | 41 |
| 5 | A05048H | GCTGGCGTTGACGCACT | +G*+C*+T*G*G*C*G*T*T*G*A*C*G*C*+A*+C*+T | 206 |
| 6 | A05049H | CCTGGTACTGGTCGCCG | +C*+C*+T*G*G*T*A*C*T*G*G*T*C*G*+C*+C*+G | 306 |
| 7 | A05050H | CCGTGTGTCTCAGGTTG | +C*+C*+G*T*G*T*G*T*C*T*C*A*G*G*+T*+T*+G | 39420 |
| 8 | A05051H | CACGCTATGCTCAAAGG | +C*+A*+C*G*C*T*A*T*G*C*T*C*A*A*+A*+G*+G | 40516 |
| 9 | A05052H | TCATACACCACATGGAT | +T*+C*+A*T*A*C*A*C*C*A*C*A*T*G*+G*+A*+T | 41897 |
| 10 | A05053HM | GGCACTCGACACTTGGT | +G*+G*+C*A*C*T*C*G*A*C*A*C*T*T*+G*+G*+T | 41963 |
| 11 | A05054H | CTTATATACCTCGTCCA | +C*+T*+T*A*T*A*T*A*C*C*T*C*G*T*+C*+C*+A | 42000 |
| 12 | A05055H | GTAGAAACCACGTTGAT | +G*+T*+A*G*A*A*A*C*C*A*C*G*T*T*+G*+A*+T | 43770 |
| 13 | A05056H | GCTGTATGGTCAAGTCA | +G*+C*+T*G*T*A*T*G*G*T*C*A*A*G*+T*+C*+A | 44386 |
| 14 | A05057H | CTCGTGTCCTTTGACTG | +C*+T*+C*G*T*G*T*C*C*T*T*T*G*A*+C*+T*+G | 44714 |
| 15 | A05058H | TAGAACCGAGGCTATTA | +T*+A*+G*A*A*C*C*G*A*G*G*C*T*A*+T*+T*+A | 45445 |
| 16 | A05059H | GGACACATAGCTGTGGCG | +G*+G*+A*C*A*C*A*T*A*G*C*T*G*T*G*+G*+C*+G | 48 |
| 17 | A05060H | CTGTGCACGTCGTTGGTG | +C*+T*+G*T*G*C*A*C*G*T*C*G*T*T*G*+G*+T*+G | 156 |
| 18 | A05061H | TGGAGTCCTCGCTGGTCT | +T*+G*+G*A*G*T*C*C*T*C*G*C*T*G*G*+T*+C*+T | 185 |
| 19 | A05062H | TTGACGCACTTGCTGGAG | +T*+T*+G*A*C*G*C*A*C*T*T*G*C*T*G*+G*+A*+G | 198 |
| 20 | A05063H | ATGGCATCGTAGCGCAGG | +A*+T*+G*G*C*A*T*C*G*T*A*G*C*G*C*+A*+G*+G | 378 |
| 21 | A05064H | GGAAATTTGGCCTCTTTG | +G*+G*+A*A*A*T*T*T*G*G*C*C*T*C*T*+T*+T*+G | 17034 |
| 22 | A05065H | AAGTGTATCCAACGATTC | +A*+A*+G*T*G*T*A*T*C*C*A*A*C*G*A*+T*+T*+C | 17153 |
| 23 | A05066H | ATCTACTTCAGGTTGTAA | +A*+T*+C*T*A*C*T*T*C*A*G*G*T*T*G*+T*+A*+A | 21190 |
| 24 | A05067H | TTTGTTCACATTTAGAGT | +T*+T*+T*G*T*T*C*A*C*A*T*T*T*A*G*+A*+G*+T | 21217 |
| 25 | A05068H | CTTTCTGAGCGATGAGTT | +C*+T*+T*T*C*T*G*A*G*C*G*A*T*G*A*+G*+T*+T | 21272 |
| 26 | A05069H** | GTGGATTGCCTGTGTAAA | +G*+T*+G*G*A*T*T*G*C*C*T*G*T*G*T*+A*+A*+A | 800* |
| 27 | A05070H | CTACAGGAACCTTCCGCC | +C*+T*+A*C*A*G*G*A*A*C*C*T*T*C*C*+G*+C*+C | 35216 |
| 28 | A05071H | GCATAGGCCTGGACTACA | +G*+C*+A*T*A*G*G*C*C*T*G*G*A*C*T*+A*+C*+A | 35229 |
| 29 | A05072H | TTCAGATAGCCTAGGTAT | +T*+T*+C*A*G*A*T*A*G*C*C*T*A*G*G*+T*+A*+T | 35256 |
| 30 | A05073H | AACTCGATCTTCAGATAG | +A*+A*+C*T*C*G*A*T*C*T*T*C*A*G*A*+T*+A*+G | 35265 |
| 31 | A05074H | CTCTTTCATCAAACTCGA | +C*+T*+C*T*T*T*C*A*T*C*A*A*A*C*T*+C*+G*+A | 35276 |
| 32 | A05075H** | TTATGCTTGGATCTTCAG | +T*+T*+A*T*G*C*T*T*G*G*A*T*C*T*T*+C*+A*+G | 1001 |
| 33 | A05076H | AGGAGCCATCCAGATAGA | +A*+G*+G*A*G*C*C*A*T*C*C*A*G*A*T*+A*+G*+A | 37334 |
| 34 | A05077H | GGATACCACCTCCATTTA | +G*+G*+A*T*A*C*C*A*C*C*T*C*C*A*T*+T*+T*+A | 39473 |
| 35 | A05078H** | AGGTAATTGTGCCATTGT | +A*+G*+G*T*A*A*T*T*G*T*G*C*C*A*T*+T*+G*+T | 1262 |
| 36 | A05079H | GTGGAACCTTTTAACTGG | +G*+T*+G*G*A*A*C*C*T*T*T*T*A*A*C*+T*+G*+G | 40487 |
| 37 | A05080H | AGTGGACTGGCCGTAGCG | +A*+G*+T*G*G*A*C*T*G*G*C*C*G*T*A*+G*+C*+G | 40536 |
| 38 | A05081H | CGACACTTGGTGCAAAGA | +C*+G*+A*C*A*C*T*T*G*G*T*G*C*A*A*+A*+G*+A | 41956 |
| 39 | A05082H | ATACCTCGTCCATTTTGA | +A*+T*+A*C*C*T*C*G*T*C*C*A*T*T*T*+T*+G*+A | 41994 |
| 40 | A05083H | CGACCTTCAACTGCTGGA | +C*+G*+A*C*C*T*T*C*A*A*C*T*G*C*T*+G*+G*+A | 43814 |
| 41 | A05084H | AACTTGATCCGACCTTCA | +A*+A*+C*T*T*G*A*T*C*C*G*A*C*C*T*+T*+C*+A | 43823 |
| 42 | A05085H | CCTGTGGAAAACTTGATC | +C*+C*+T*G*T*G*G*A*A*A*A*C*T*T*G*+A*+T*+C | 43832 |
| 43 | A05086H | GGTCCTAAAAGGCAGATT | +G*+G*+T*C*C*T*A*A*A*A*G*G*C*A*G*+A*+T*+T | 43979 |
| 44 | A05087H | ACGTAAACTTAACATAGT | +A*+C*+G*T*A*A*A*C*T*T*A*A*C*A*T*+A*+G*+T | 44148 |
| 45 | A05088H | TCAGCATTAGCTGTATGG | +T*+C*+A*G*C*A*T*T*A*G*C*T*G*T*A*+T*+G*+G | 44394 |
| 46 | A05089H | GGATCTGTCAGCATTAGC | +G*+G*+A*T*C*T*G*T*C*A*G*C*A*T*T*+A*+G*+C | 44401 |
| 47 | A05090H | GATTTGTCATCCATGAGC | +G*+A*+T*T*T*G*T*C*A*T*C*C*A*T*G*+A*+G*+C | 44528 |
| 48 | A05091H | ACTCATCAAAGGCACATG | +A*+C*+T*C*A*T*C*A*A*A*G*G*C*A*C*+A*+T*+G | 44646 |
| 49 | A05092H | ATTATCTACTACAGCTTG | +A*+T*+T*A*T*C*T*A*C*T*A*C*A*G*C*+T*+T*+G | 44671 |
| 50 | A05093H | ATAACAGCTAATGCCGTG | +A*+T*+A*A*C*A*G*C*T*A*A*T*G*C*C*+G*+T*+G | 44843 |
| 51 | A05094H | GCTTATGTTAGAAGGTTC | +G*+C*+T*T*A*T*G*T*T*A*G*A*A*G*G*+T*+T*+C | 44926 |
| 52 | A05095H | TCGAGAACTCTGGACATT | +T*+C*+G*A*G*A*A*C*T*C*T*G*G*A*C*+A*+T*+T | 45028 |
| 53 | A05096H | TGGAGGCAGAGCGACTTA | +T*+G*+G*A*G*G*C*A*G*A*G*C*G*A*C*+T*+T*+A | 45083 |
| 54 | A05097H | GGCATAGGTCATTTCATC | +G*+G*+C*A*T*A*G*G*T*C*A*T*T*T*C*+A*+T*+C | 45200 |
| 55 | A05098HI | CGAGAGTATGCTACCA | +C*+G*+A*G*A*G*T*A*T*G*C*T*A*+C*+C*+A | 19245 |
| 56 | A05099HI | TGCGGCCGAGCCATTG | +T*+G*+C*G*G*C*C*G*A*G*C*C*A*+T*+T*+G | 43104 |
| 57 | A05100HI | GAATCAATATGCGGTGA | +G*+A*+A*T*C*A*A*T*A*T*G*C*G*G*+T*+G*+A | 2745 |
| 58 | A05101HI | GTAACAAACGATAGCCT | +G*+T*+A*A*C*A*A*A*C*G*A*T*A*G*+C*+C*+T | 20230 |
| 59 | A05102HI | TGGTTGCAAACTGTGAG | +T*+G*+G*T*T*G*C*A*A*A*C*T*G*T*+G*+A*+G | 20892 |
| 60 | A05103HI | GTAGTCCGACATAGGAG | +G*+T*+A*G*T*C*C*G*A*C*A*T*A*G*+G*+A*+G | 38153 |
| 61 | A05104HI | TTAGATCTGCTAGCTTG | +T*+T*+A*G*A*T*C*T*G*C*T*A*G*C*+T*+T*+G | 40152 |
| 62 | A05105HI | GAGCCATTGGTATTTAA | +G*+A*+G*C*C*A*T*T*G*G*T*A*T*T*+T*+A*+A | 43096 |
| 63 | A05106HI | CACACTCTGCCATCCGCT | +C*+A*+C*A*C*T*C*T*G*C*C*A*T*C*C*+G*+C*+T | 462 |
| 64 | A05107HI | GATCTGGTGTCCATTCTT | +G*+A*+T*C*T*G*G*T*G*T*C*C*A*T*T*+C*+T*+T | 875 |
| 65 | A05108HI | TAGCTGTGGAATACCAAT | +T*+A*+G*C*T*G*T*G*G*A*A*T*A*C*C*+A*+A*+T | 2002 |
| 66 | A05109HI | GCCATCTAACCTTGCCAT | +G*+C*+C*A*T*C*T*A*A*C*C*T*T*G*C*+C*+A*+T | 2516 |
| 67 | A05110HI | ATCAATATGCGGTGAGTG | +A*+T*+C*A*A*T*A*T*G*C*G*G*T*G*A*+G*+T*+G | 2742 |
| 68 | A05111HI | GGCTCCTTTGAACTAGGT | +G*+G*+C*T*C*C*T*T*T*G*A*A*C*T*A*+G*+G*+T | 2834 |
| 69 | A05112HI | CTAGAAAGTGTACACCTC | +C*+T*+A*G*A*A*A*G*T*G*T*A*C*A*C*+C*+T*+C | 2943 |
| 70 | A05113HI | CCTACAATAAAGCTGGAT | +C*+C*+T*A*C*A*A*T*A*A*A*G*C*T*G*+G*+A*+T | 4279 |
| 71 | A05114HI | AGAAGTGAATTGCATAGC | +A*+G*+A*A*G*T*G*A*A*T*T*G*C*A*T*+A*+G*+C | 4737 |
| 72 | A05115HI | CAGAGGTAAGCTGGTTCA | +C*+A*+G*A*G*G*T*A*A*G*C*T*G*G*T*+T*+C*+A | 4791 |
| 73 | A05116HI | ATGCCAAGCTGTGATTTA | +A*+T*+G*C*C*A*A*G*C*T*G*T*G*A*T*+T*+T*+A | 17246 |
| 74 | A05117HI | CTGTTTAGCACTGGCTAT | +C*+T*+G*T*T*T*A*G*C*A*C*T*G*G*C*+T*+A*+T | 17473 |
| 75 | A05118HI | GTTACAGCCTGGTAAAGG | +G*+T*+T*A*C*A*G*C*C*T*G*G*T*A*A*+A*+G*+G | 18767 |
| 76 | A05119HI | ATGTCGAGAGTATGCTAC | +A*+T*+G*T*C*G*A*G*A*G*T*A*T*G*C*+T*+A*+C | 19247 |
| 77 | A05120HI | AGATCCAGACGTTCTTAC | +A*+G*+A*T*C*C*A*G*A*C*G*T*T*C*T*+T*+A*+C | 20003 |
| 78 | A05121HI | GGAGGCTTCAGATATTGT | +G*+G*+A*G*G*C*T*T*C*A*G*A*T*A*T*+T*+G*+T | 20875 |
| 79 | A05122HI | AAGGTGGAACCAGATTCA | +A*+A*+G*G*T*G*G*A*A*C*C*A*G*A*T*+T*+C*+A | 22017 |
| 80 | A05123HI | TGGAACTTTGAGCATGAT | +T*+G*+G*A*A*C*T*T*T*G*A*G*C*A*T*+G*+A*+T | 22507 |
| 81 | A05124HI | CTTAAGTGAAGGCCAACT | +C*+T*+T*A*A*G*T*G*A*A*G*G*C*C*A*+A*+C*+T | 22666 |
| 82 | A05125HI | AATCCACGAGCTTTGGAA | +A*+A*+T*C*C*A*C*G*A*G*C*T*T*T*G*+G*+A*+A | 25130 |
| 83 | A05126HI | GACTCTAGGATTTAACTT | +G*+A*+C*T*C*T*A*G*G*A*T*T*T*A*A*+C*+T*+T | 25479 |
| 84 | A05127HI | CCGCAATAGACTCAGACA | +C*+C*+G*C*A*A*T*A*G*A*C*T*C*A*G*+A*+C*+A | 35793 |
| 85 | A05128HI | ACGCTCATCTTGCCGCCG | +A*+C*+G*C*T*C*A*T*C*T*T*G*C*C*G*+C*+C*+G | 36358 |
| 86 | A05129HI | CATCTGGCTACTGAGAGG | +C*+A*+T*C*T*G*G*C*T*A*C*T*G*A*G*+A*+G*+G | 36857 |
| 87 | A05130HI | ATTAGTGGTGGCGGTAGG | +A*+T*+T*A*G*T*G*G*T*G*G*C*G*G*T*+A*+G*+G | 36962 |
| 88 | A05131HI | GGTACTGAGTATGAAGCT | +G*+G*+T*A*C*T*G*A*G*T*A*T*G*A*A*+G*+C*+T | 37729 |
| 89 | A05132HI | GTAGCAGAGTTTGTGCAT | +G*+T*+A*G*C*A*G*A*G*T*T*T*G*T*G*+C*+A*+T | 37876 |
| 90 | A05133HI | GTAGTCCGACATAGGAGA | +G*+T*+A*G*T*C*C*G*A*C*A*T*A*G*G*+A*+G*+A | 38152 |
| 91 | A05134HI | TTGGCATGAGCATGATTG | +T*+T*+G*G*C*A*T*G*A*G*C*A*T*G*A*+T*+T*+G | 38288 |
| 92 | A05135HI | GATAAGCACTGCCAACAG | +G*+A*+T*A*A*G*C*A*C*T*G*C*C*A*A*+C*+A*+G | 38415 |
| 93 | A05136HI | AATGGTCTCTCGGTTGTA | +A*+A*+T*G*G*T*C*T*C*T*C*G*G*T*T*+G*+T*+A | 39141 |
| 94 | A05137HI | CCAGTCCATGTCAAACTC | +C*+C*+A*G*T*C*C*A*T*G*T*C*A*A*A*+C*+T*+C | 39211 |
| 95 | A05138HI | GATTTACACTAGTTACTC | +G*+A*+T*T*T*A*C*A*C*T*A*G*T*T*A*+C*+T*+C | 39378 |
| 96 | A05139HI | TTTAATCCAGTGGTATGT | +T*+T*+T*A*A*T*C*C*A*G*T*G*G*T*A*+T*+G*+T | 39898 |
| 97 | A05140HI | CTTAGATCTGCTAGCTTG | +C*+T*+T*A*G*A*T*C*T*G*C*T*A*G*C*+T*+T*+G | 40152 |
| 98 | A05141HI | TATTAGAAACTAGACCTC | +T*+A*+T*T*A*G*A*A*A*C*T*A*G*A*C*+C*+T*+C | 40854 |
| 99 | A05142HI | ATGCAGTGCTTTGCTAGA | +A*+T*+G*C*A*G*T*G*C*T*T*T*G*C*T*+A*+G*+A | 41453 |
| 100 | A05143HI | CACAAGGCATAGAGCTAT | +C*+A*+C*A*A*G*G*C*A*T*A*G*A*G*C*+T*+A*+T | 41469 |
| 101 | A05144HI | GTCAGTGGTCTGTATGCA | +G*+T*+C*A*G*T*G*G*T*C*T*G*T*A*T*+G*+C*+A | 42659 |
| 102 | A05145HI | TTGTAAGCATGCTGGTCT | +T*+T*+G*T*A*A*G*C*A*T*G*C*T*G*G*+T*+C*+T | 42712 |
| 103 | A05146HI | GAGCCATTGGTATTTAAT | +G*+A*+G*C*C*A*T*T*G*G*T*A*T*T*T*+A*+A*+T | 43095 |
| 104 | A05147HI | GATAAATGCTAATTGCCT | +G*+A*+T*A*A*A*T*G*C*T*A*A*T*T*G*+C*+C*+T | 43311 |
| 105 | A05148HI | TTGAACCACTCCAGAACA | +T*+T*+G*A*A*C*C*A*C*T*C*C*A*G*A*+A*+C*+A | 43464 |
| 106 | A05149HI | GGTAGTCCTTTGTAATTA | +G*+G*+T*A*G*T*C*C*T*T*T*G*T*A*A*+T*+T*+A | 43683 |
| 107 | A05150HI | ACCAATGCTTAAGAGAC | +A*+C*+C*A*A*T*G*C*T*T*A*A*G*A*+G*+A*+C | 1991 |
| 108 | A05151HI | ATCAATATGCGGTGAGT | +A*+T*+C*A*A*T*A*T*G*C*G*G*T*G*+A*+G*+T | 2743 |
| 109 | A05152HI | CTAGGAATCAATATGCG | +C*+T*+A*G*G*A*A*T*C*A*A*T*A*T*+G*+C*+G | 2749 |
| 110 | A05153HI | TGGTAACAAACGATAGC | +T*+G*+G*T*A*A*C*A*A*A*C*G*A*T*+A*+G*+C | 20232 |
| 111 | A05154H | CGGTGAACCAGATAGTG | +C*+G*+G*T*G*A*A*C*C*A*G*A*T*A*+G*+T*+G | 324 |
| 112 | A05155H | GTGTATCCAACGATTCC | +G*+T*+G*T*A*T*C*C*A*A*C*G*A*T*+T*+C*+C | 17152 |
| 113 | A05156H | GCGATGAGTTTATCCAT | +G*+C*+G*A*T*G*A*G*T*T*T*A*T*C*+C*+A*+T | 21265 |
| 114 | A05157H | ACCTTATATACCTCGTC | +A*+C*+C*T*T*A*T*A*T*A*C*C*T*C*+G*+T*+C | 42002 |
| 115 | Neg1 | +C*+G*+T*T*T*A*G*G*C*T*A*T*G*T*A*+C*+T*+T |
본 발명의 올리고뉴클레오티드는 예를 들어 서열번호 1 및/또는 서열번호 2의 인간 CD73의 mRNA 및/또는 pre-mRNA와 혼성화한다. 이러한 올리고뉴클레오티드는 CD73 안티센스 올리고뉴클레오티드로 불린다. 예를 들어 안티센스 올리고뉴클레오티드인 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 표1에 제시되어 있다. 본 발명은 또한 표1의 올리고뉴클레오티드와 80 내지 99%, 85 내지 98%, 90 내지 95% 또는 93% 서열 상동성을 갖는 안티센스 뉴클레오티드 같은 올리고뉴클레오티드에 대한 것이다. 상기 서열의 각 뉴클레오티드는 변형될 수 있으며, 본 발명의 ASO는 바람직하게는 6 내지 8개의 비변형 뉴클레오티드의 코어를 포함한다. 본 발명의 ASO는 올리고뉴클레오티드의 5'- 및/또는 3'-말단, 즉, 코어의 5'- 및 /또는 3'- 면에서 예를 들어 하나 이상의 변형 뉴클레오티드, 예컨대 1, 2, 3, 4, 또는 5 뉴클레오티드를 포함한다. 상기 5'- 및 3'-말단은 동일하거나 다르게 변형된다. 5'- 및 3'-말단이 동일하게 변형되는 경우, 뉴클레오티드는 각각 5'- 및 3'-말단으로부터 카운트된 동일한 위치에서 변형되며(각각의 경우 말단에서 1부터 카운트 시작), 예를 들어 LNA 변형인 동일한 변형을 갖는다. 5'- 및 3'-말단이 다르게 변형된 경우, 변형된 뉴클레오티드의 위치 및/또는 5'- 및 3'-말단에서의 변형 유형이 다르다. 뉴클레오티드 변형의 유형은 같거나(예: LNA) 다르다. LNA-변형 뉴클레오티드와 같은 변형된 뉴클레오티드는 연속할 필요는 없고, 하나 이상의 변형되지 않은 뉴클레오티드에 의해 분리될 수 있다. 다음에서 본 발명의 ASO의 5'- 및 3'-말단에서의 일부 변형 패턴이 기술되며, 여기서 변형되지 않은 뉴클레오티드는 "_"로 표시되고 숫자는 연속으로 LNA-변형된 뉴클레오티드 같은 변형된 뉴클레오티드의 수를 나타낸다. 변형된 뉴클레오티드(들)는 다음 표2에 나타낸 바와 같이 ASO의 5'- 및/또는 3'-말단의 임의의 위치에 있다.
| 코어의 5'면에서 LNA 변형 | 코어의 3'면에서 LNA 변형 | 약자 |
| 3 | 3 | 3+3 |
| 3 | 2 | 3+2 |
| 2 | 3 | 2+3 |
| 1_1 | 3 | 1_1+3 |
| 1_1 | 2 | 1_1+2 |
| 1_1 | 1_1 | 1_1+1_1 |
| 3 | 1_1 | 3+1_1 |
| 2 | 1_1 | 2+1_1 |
| 2 | 2 | 2+2 |
| 4 | 3 | 4+3 |
| 4 | 2 | 4+2 |
| 4 | 1_1 | 4+1_1 |
| 2_1 | 3 | 2_1+3 |
| 2_1 | 1_1 | 2_1+1_1 |
| 2_1 | 2 | 2_1+2 |
| 3 | 4 | 3+4 |
| 2 | 4 | 2+4 |
| 1_1 | 4 | 1_1+4 |
| 3 | 1_2 | 3+1_2 |
| 1_1 | 1_2 | 1_1+1_2 |
| 2 | 1_2 | 2+1_2 |
예를 들어 LNA-변형 뉴클레오티드를 포함하는 본 발명의 각 ASO의 전형적인 변형 패턴은 예를 들어 하기 표3에 나타냈고, 이는 각 ASO의 5'- 및 3'-말단에서 LNA 변형의 특정 위치를 나타낸다.
| 5'말단에서 변형 위치(5'말단에서 1부터 카운트 시작) | 3'말단에서 변형 위치(3'말단에서 1부터 카운트 시작) | 약자 |
| 뉴클레오티드 1 내지 5 | 뉴클레오티드 1 내지 5 | 5+5 |
| 뉴클레오티드 1 내지 4 | 뉴클레오티드 1 내지 4 | 4+4 |
| 뉴클레오티드 1 내지 3 | 뉴클레오티드 1 내지 3 | 3+3 |
| 뉴클레오티드 1 및 2 | 뉴클레오티드 1 및 2 | 2+2 |
| 뉴클레오티드 1 | 뉴클레오티드 1 | 1+1 |
| 뉴클레오티드 1 내지 5 | 뉴클레오티드 1 내지 4 | 5+4 |
| 뉴클레오티드 1 내지 4 | 뉴클레오티드 1 내지 3 | 4+3 |
| 뉴클레오티드 1 내지 3 | 뉴클레오티드 1 및 2 | 3+2 |
| 뉴클레오티드 1 및 2 | 뉴클레오티드 1 | 2+1 |
| 뉴클레오티드 1 | 뉴클레오티드 1 내지 5 | 1+5 |
| 뉴클레오티드 1 내지 5 | 뉴클레오티드 1 내지 3 | 5+3 |
| 뉴클레오티드 1 내지 4 | 뉴클레오티드 1 및 2 | 4+2 |
| 뉴클레오티드 1 내지 3 | 뉴클레오티드 1 | 3+1 |
| 뉴클레오티드 1 및 2 | 뉴클레오티드 1 내지 5 | 2+5 |
| 뉴클레오티드 1 | 뉴클레오티드 1 내지 4 | 1+4 |
| 뉴클레오티드 1 내지 5 | 뉴클레오티드 1 및 2 | 5+2 |
| 뉴클레오티드 1 내지 4 | 뉴클레오티드 1 | 4+1 |
| 뉴클레오티드 1 내지 3 | 뉴클레오티드 1 내지 5 | 3+5 |
| 뉴클레오티드 1 및 2 | 뉴클레오티드 1 내지 4 | 2+4 |
| 뉴클레오티드 1 | 뉴클레오티드 1 내지 3 | 1+3 |
| 뉴클레오티드 1 내지 5 | 뉴클레오티드 1 | 5+1 |
| 뉴클레오티드 1 내지 4 | 뉴클레오티드 1 내지 5 | 4+5 |
| 뉴클레오티드 1 내지 3 | 뉴클레오티드 1 내지 4 | 3+4 |
| 뉴클레오티드 1 및 2 | 뉴클레오티드 1 내지 3 | 2+3 |
| 뉴클레오티드 1 | 뉴클레오티드 1 및 2 | 1+2 |
| 뉴클레오티드 1 및 2 | 뉴클레오티드 1 및 3 | 2+1_1 |
| 뉴클레오티드 1 및 3 | 뉴클레오티드 1 내지 3 | 1_1+3 |
| 뉴클레오티드 1 및 3 | 뉴클레오티드 1 및 3 | 1_1+1_1 |
| 뉴클레오티드 1 내지 3 | 뉴클레오티드 1 및 3 | 3+1_1 |
| 뉴클레오티드 1 내지 4 | 뉴클레오티드 1 및 3 | 4+1_1 |
| 뉴클레오티드 1, 2 및 4 | 뉴클레오티드 1 내지 3 | 2_1+3 |
| 뉴클레오티드 1, 2 및 4 | 뉴클레오티드 1 및 3 | 2_1+1_1 |
| 뉴클레오티드 1, 2 및 4 | 뉴클레오티드 1 및 2 | 2_1+2 |
| 뉴클레오티드 1 및 3 | 뉴클레오티드 1 내지 4 | 1_1+4 |
| 뉴클레오티드 1 내지 3 | 뉴클레오티드 1,2 및 4 | 3+1_2 |
| 뉴클레오티드 1 및 3 | 뉴클레오티드 1, 2 및 4 | 1_1+1_2 |
| 뉴클레오티드 1 및 2 | 뉴클레오티드 1, 2 및 4 | 2+1_2 |
본 발명의 올리고뉴클레오티드는 서열번호 2의 혼성화 활성 영역과 혼성화한다. 본 발명에서는 놀랍게도 예를 들어 서열번호 2의 CD73 pre-mRNA의 위치 1 내지 400, 위치 401 내지 800, 위치 801 내지 1200, 위치 1601 내지 2000, 위치 2001 내지 2400, 위치 2401 내지 2800, 위치 2801 내지 3200, 위치 4001 내지 4400, 위치 4401 내지 4800, 위치 16801 내지 17200, 위치 17201 내지 17600, 위치 18401 내지 18800, 위치 19201 내지 19600, 위치 20001 내지 20400, 위치 20801 내지 21200, 위치 21201 내지 21600, 위치 22001 내지 22400, 위치 22401 내지 22800, 위치 24801 내지 25200, 위치 25201 내지 25600, 위치 35201 내지 35600, 위치 35601 내지 3600, 위치 36001 내지 36400, 위치 36801 내지 37200, 위치 37201 내지 37600, 위치 37601 내지 38000, 위치 38001 내지 38400, 위치 38401 내지 38800, 위치 38801 내지 39200, 위치 39201 내지 39600, 위치 39601 내지 40000, 위치 40001 내지 40400, 위치 40401 내지 40800, 위치 40801 내지 41200, 위치 41201 내지 41600, 위치 41601 내지 42000, 위치 42001 내지 42400, 위치 42401 내지 42800, 위치 42801 내지 43200, 위치 43201 내지 43600, 위치 43601 내지 44000, 위치 44001 내지 44400, 위치 44401 내지 44800, 위치 44801 내지 45200, 위치 45201 내지 45600, 위치 45201 내지 45701 또는 이들의 조합(범위의 말단 수치를 포함하는)으로부터 선택된 여러 혼성화 활성 영역이 확인 되었다. 이들 영역 및 상이한 영역에서 혼성화하는 올리고뉴클레오티드를 하기 표4에 나타내었다.
| 서열번호 2의 영역 | 서열번호 2 상의 첫 번째 위치 | 서열번호 |
| 1-400 | ||
| A05046H | 1 | 3 |
| A05047H | 41 | 4 |
| A05048H | 206 | 5 |
| A05049H | 306 | 6 |
| A05059H | 48 | 16 |
| A05060H | 156 | 17 |
| A05061H | 185 | 18 |
| A05062H | 198 | 19 |
| A05063H | 378 | 20 |
| A05154H | 324 | 11 |
| 401-800 | ||
| A05106HI | 462 | 63 |
| 801-1200 | ||
| A05107HI | 875 | 64 |
| 1601-2000 | ||
| A05150HI | 1991 | 107 |
| 2001-2400 | ||
| A05108HI | 2002 | 65 |
| 2401-2800 | ||
| A05100HI | 2745 | 57 |
| A05109HI | 2516 | 66 |
| A05110HI | 2742 | 67 |
| A05151HI | 2743 | 108 |
| A05152HI | 2749 | 109 |
| 2801-3200 | ||
| A05111HI | 2834 | 68 |
| A05112HI | 2943 | 69 |
| 4001-4400 | ||
| A05113HI | 4279 | 70 |
| 4401-4800 | ||
| A05114HI | 4737 | 71 |
| A05115HI | 4791 | 72 |
| 16801-17200 | ||
| A05064H | 17034 | 21 |
| A05065H | 17153 | 22 |
| A05155H | 17152 | 112 |
| 17201-17600 | ||
| A05116HI | 17246 | 73 |
| A05117HI | 17473 | 74 |
| 18401-18800 | ||
| A05118HI | 18767 | 75 |
| 19201-19600 | ||
| A05098HI | 19245 | 55 |
| A05119HI | 19247 | 76 |
| 20001-20400 | ||
| A05101HI | 20230 | 58 |
| A05120HI | 20003 | 77 |
| A05153HI | 20232 | 110 |
| 20801-21200 | ||
| A05066H | 21190 | 23 |
| A05102HI | 20892 | 59 |
| A05121HI | 20875 | 78 |
| 21201-21600 | ||
| A05067H | 21217 | 24 |
| A05068H | 21272 | 25 |
| A05156H | 21265 | 113 |
| 22001-22400 | ||
| A05122HI | 22017 | 79 |
| 22401-22800 | ||
| A05123HI | 22507 | 80 |
| A05124HI | 22666 | 81 |
| 24801-25200 | ||
| A05125HI | 25130 | 82 |
| 25201-25600 | ||
| A05126HI | 25479 | 83 |
| 35201-35600 | ||
| A05070H | 35216 | 27 |
| A05071H | 35229 | 28 |
| A05072H | 35256 | 29 |
| A05073H | 35265 | 30 |
| A05074H | 35276 | 31 |
| 35601-36000 | ||
| A05127HI | 35793 | 84 |
| 36001-36400 | ||
| A05128HI | 36358 | 85 |
| 36801-37200 | ||
| A05129HI | 36857 | 86 |
| A05130HI | 36962 | 87 |
| 37201-37600 | ||
| A05076H | 37334 | 33 |
| 37601-38000 | ||
| A05131HI | 37729 | 88 |
| A05132HI | 37876 | 89 |
| 38001-38400 | ||
| A05103HI | 38153 | 60 |
| A05133HI | 38152 | 90 |
| A05134HI | 38288 | 91 |
| 38401-38800 | ||
| A05135HI | 38415 | 92 |
| 38801-39200 | ||
| A05136HI | 39141 | 93 |
| 39201-39600 | ||
| A05050H | 39420 | 7 |
| A05077H | 39473 | 34 |
| A05137HI | 39211 | 94 |
| A05138HI | 39378 | 95 |
| 39601-40000 | ||
| A05139HI | 39898 | 96 |
| 40001-40400 | ||
| A05104HI | 40152 | 61 |
| A05140HI | 40152 | 97 |
| 40401-40800 | ||
| A05051H | 40516 | 8 |
| A05079H | 40487 | 36 |
| A05080H | 40536 | 37 |
| 40801-41200 | ||
| A05141HI | 40854 | 98 |
| 41201-41600 | ||
| A05142HI | 41453 | 99 |
| A05143HI | 41469 | 100 |
| 41601-42000 | ||
| A05052H | 41897 | 9 |
| A05053HM | 41963 | 10 |
| A05054H | 42000 | 11 |
| A05081H | 41956 | 38 |
| A05082H | 41994 | 39 |
| 42001-42400 | ||
| A05157H | 42002 | 114 |
| 42401-42800 | ||
| A05144HI | 42659 | 101 |
| A05145HI | 42712 | 102 |
| 42801-43200 | ||
| A05099HI | 43104 | 56 |
| A05105HI | 43096 | 62 |
| A05146HI | 43095 | 103 |
| 43201-43600 | ||
| A05147HI | 43311 | 104 |
| A05148HI | 43464 | 105 |
| 43601-44000 | ||
| A05055H | 43770 | 12 |
| A05083H | 43814 | 40 |
| A05084H | 43823 | 41 |
| A05085H | 43832 | 42 |
| A05086H | 43979 | 43 |
| A05149HI | 43683 | 106 |
| 44001-44400 | ||
| A05056H | 44386 | 13 |
| A05087H | 44148 | 44 |
| A05088H | 44394 | 45 |
| 44401-44800 | ||
| A05057H | 44714 | 14 |
| A05089H | 44401 | 46 |
| A05090H | 44528 | 47 |
| A05091H | 44646 | 48 |
| A05092H | 44671 | 49 |
| 44801-45200 | ||
| A05093H | 44843 | 50 |
| A05094H | 44926 | 51 |
| A05095H | 45028 | 52 |
| A05096H | 45083 | 53 |
| A05097H | 45200 | 54 |
| 45201-45701 | ||
| A05058H | 45445 | 15 |
표4는 이들 영역에서 혼성화하는 일부 혼성화 활성 영역 및 안티센스올리고뉴클레오티드를 나타낸다.
일부 실시형태에서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 CD73 mRNA의 양 및/또는 CD73 단백질 발현 수준을 예를 들어 약 30% 내지 100%, 35% 내지 99%, 40% 내지 98%, 45% 내지 97%, 50% 내지 96%, 55% 내지 95%, 60% 내지 90%, 65% 내지 85%, 70% 내지 80% 또는 적어도 약 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 100% 감소시킨다. CD73 mRNA 및/또는 CD73 단백질 발현량의 감소는 본 발명의 올리고뉴클레오티드로 처리된 샘플 및 상응하는 비처리 대조군에서의 CD73 mRNA 및/또는 CD73 단백질 발현량의 비교로 확인된다. 비처리 대조군은 예를 들어 본 발명의 올리고뉴클레오티드가 투여되기 전의 대상체 또는 세포, 혈액, 소변, 타액 등과 같은 비처리 샘플에서의 CD73, CD73 mRNA, CD73 pre-mRNA 발현 또는 이들의 조합이다. 비처리 샘플은 예를 들어 본 발명의 올리고뉴클레오티드가 투여되기 전에 대상체로부터 채취된다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드는 예를 들어 세포, 조직, 기관 또는 대상체에서 면역억제를 역전시키는 면역억제-역전 올리고뉴클레오티드이다. 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 CD73 mRNA 및/또는 CD73 단백질 발현의 양을 나노몰 또는 마이크로몰 농도, 예를 들어 0.1, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 150, 200, 250, 300, 350 , 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900 또는 950nM, 또는 1, 10 또는 100μM의 농도로 감소시킨다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드는 예를 들어 1, 3, 5, 9, 10, 15, 27, 30, 40, 50, 75, 82, 100, 250, 300, 500, 또는 740nM 또는 1, 2.2, 3, 5, 6.6 또는 10μM의 농도로 사용된다.
본 발명은 또한 본 발명의 올리고뉴클레오티드 및 약제학적으로 허용가능한 담체, 부형제 및/또는 희석제를 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다. 선택적으로, 상기 약제학적 조성물은 화학요법제, 본 발명과 상이한 또 다른 올리고뉴클레오티드, 항체 및/또는 소분자를 더 포함한다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드 또는 약제학적 조성물은 예를 들어 질환을 예방 및/또는 치료하는 방법에서 사용하기 위한 것이다. 질환을 예방 및/또는 치료하는 방법에서의 본 발명의 올리고뉴클레오티드 또는 약제학적 조성물의 용도는 예를 들어 방사선 요법과 조합된다. 방사선요법은 화학요법(예를 들어, 백금, 젬시타빈)과 추가로 조합될 수 있다. 상기 질환은 예를 들어 CD73 mRNA 및/또는 단백질 불균형 즉, CD73 mRNA 및/또는 단백질 수준이 정상의 건강한 세포, 조직, 기관 또는 대상체의 수준과 비교하여 증가한 것을 특징으로 한다. CD73 수준은 예를 들어 CD73 mRNA 및/또는 CD73 단백질 발현의 증가량에 의해 증가된다. CD73 mRNA 및 단백질 수준은 각각 면역조직화학, 웨스턴 블롯, 정량적 실시간 PCR 또는 QuantiGene 분석과 같은 당업자에게 공지된 임의의 표준 방법에 의해 측정될 수 있다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드 또는 약제학적 조성물은 국소적으로 또는 전신적으로, 예를 들어 경구로, 설하로(sublingually), 비강으로(nasally), 피하로(subcutaneously), 정맥내로(intraveneously), 복강내로(intraperitoneally), 근육내로(intramuscularly), 종양내로(intratumoral), 척수강내로(intrathecal), 경피(transdermal) 및/또는 직장(rectal)으로 투여된다. 선택적으로 또는 조합하여 생체외 처리된 면역 세포가 투여된다. 상기 올리고뉴클레오티드는 단독으로 또는 본 발명의 다른 올리고뉴클레오티드와 조합 및, 선택적으로 본 발명과 다른 올리고뉴클레오티드, 항체, 소분자 및/또는 화학요법제(예를 들어, 백금, 젬시타빈)와 같은 또 다른 화합물과 조합하여 투여된다. 일부 실시형태에서, 다른 올리고뉴클레오티드(즉, 본 발명과 상이함), 항체 및/또는 소분자는 자가면역 질환, 예를 들어 자가면역 관절염 또는 염증성장질환(inflammatory bowel disease, IBD) 또는 대장염(colitis)과 같은 위장관 자가면역 질환, 면역 장애, 예를 들어, HIV 감염과 같은 만성 바이러스 감염으로 인한 면역 고갈, 심혈관 질환, 염증성 질환, 예를 들어 만성 기도 염증, 세균, 바이러스 및/또는 진균 간염, 예를 들어 패혈증 또는 마이코박테리움 보비스(Mycobacterium bovis) 감염, 간 질환, 만성 신장 질환, 정신 질환(예: 정신분열증, 양극성 장애, 알츠하이머병) 및/또는 암의 예방 및/또는 치료에 효과적이다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드 또는 약제학적 조성물은 예를 들어 고형 종양 또는 혈액 종양의 예방 및/또는 치료 방법에서 사용된다. 본 발명의 올리고뉴클레오티드 또는 약제학적 조성물의 사용으로 예방할 수 있는 및/또는 치료할 수 있는 암의 예는 유방암, 폐암, 악성 흑색종(malignant melanoma), 림프종, 피부암, 골암, 전립선암, 간암, 뇌암, 후두(larynx)암, 담낭(gall bladder)암, 췌장(pancreas)암, 고환(testicular)암, 직장(rectum)암, 부갑상선(parathyroid)암, 갑상선(thyroid)암, 부신(adrenal)암, 신경조직(neural tissue)암, 두경부(head and neck)암, 결장(colon)암, 위(stomach)암, 기관지(bronchi)암, 신장암, 기저세포암종(basal cell carcinoma), 편평세포암종(squamous cell carcinoma), 전이성피부암종(metastatic skin carcinoma), 골육종(osteo sarcoma), 유윙육종(Ewing's sarcoma), 세망세포육종(reticulum cell sarcoma), 지방육종(liposarcoma), 골수종(myeloma), 거대세포종양(giant cell tumor), 소세포폐종양(small-cell lung tumor), 섬세포종양(islet cell tumor), 원발성뇌종양(primary brain tumor), 수막종(meningioma), 급성 및 만성림프구성(acute and chronic lymphocytic) 및 과립구성(granulocytic) 종양, 급성 및 만성골수성백혈병(acute and chronic myeloid leukemia), 모발세포종양(hairy-cell tumor), 선종(adenoma), 과형성(hyperplasia), 수질암종(medullary carcinoma), 장신경절신경종(intestinal ganglioneuromas), 윌름종양(Wilm's tumor), 정상피종(seminoma), 난소종양(ovarian tumor), 평활근종종양(leiomyomater tumor), 자궁경부이형성증(cervical dysplasia), 망막모세포종(retinoblastoma), 연조직육종(soft tissue sarcoma), 악성카르시노이드(malignant carcinoid), 국소피부병변(topical skin lesion), 횡문근육종(rhabdomyosarcoma), 카포시육종(Kaposi's sarcoma), 골육종(osteogenic sarcoma), 악성 고칼슘혈증(malignant hypercalcemia), 신세포종양(renal cell tumor), 진성다혈구증(polycythermia vera), 선암종(adenocarcinoma), 역형성 성상세포종(anaplastic astrocytoma), 다형성 교모세포종(glioblastoma multiforme), 백혈병(leukemia) 또는 표피암종(epidermoid carcinoma)이다.
또한, 본 발명의 2개 이상의 올리고뉴클레오티드는 예를 들어 함께, 동시에, 예를 들어 하나의 약제학적 조성물 중에 또는 별도로, 또는 엇갈린 간격으로 투여된다. 이와 달리 또는 추가로, 본 발명의 1개 이상의 올리고뉴클레오티드를 다른 올리고뉴클레오티드(즉, 본 발명의 것과는 다른), 항체, 소분자 및/또는 화학요법제와 같은 또 다른 화합물과 함께, 동시에, 예를 들어 하나의 약제학적 조성물 중에, 또는 별도로, 또는 엇갈린 간격으로 투여된다. 이들 조합의 일부에서, 본 발명의 올리고뉴클레오티드는 예를 들어 CD73 mRNA 및/또는 CD73 단백질 발현을 감소시키고, 상기 다른 올리고뉴클레오티드(본 발명의 것과 다른), 항체 및/또는 소분자는 동일한 및/또는 다른 면역억제인자 및/또는 면역자극인자를 억제(길항제) 또는 자극(작용제)한다. 상기 면역억제인자는 예를 들어, IDO1, IDO2, CTLA-4, PD-1, PD -L1, LAG-3, VISTA, A2AR, CD39, CD73, STAT3, TDO2, TIM-3, TIGIT, TGF-베타, BTLA, MICA, NKG2A, KIR, CD160, MTDH, Xbp1, Chop 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다. 상기 면역자극인자는 예를 들어, 4-1BB, Ox40, KIR, GITR, CD27, 2B4 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
면역억제인자는 예를 들어 세포, 조직, 기관 또는 대상체에서 그의 발현 및/또는 활성이 증가된 인자이다. 면역자극인자는 세포, 조직, 기관 또는 대상체 및 그의 개별적인 조건에 따라 세포, 조직, 기관 또는 대상체에서 그 수준이 증가하거나 감소하는 인자이다.
본 발명의 올리고뉴클레오티드 또는 약제학적 조성물과 조합되는 항체는 예를 들어 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체 또는 이중특이적 항체이다. 본 발명의 올리고뉴클레오티드 또는 약제학적 조성물과 조합되는 소분자는 예를 들어 ADP 유사체 역할을 수행하여 CD73 활성의 경쟁적 억제제인 AB680 또는 AMPCP(아데노신 5'-(α,β-메틸렌)디포스페이트; 예., Structure20, 2161-2173, December 5, 2012)이다.
본 발명의 대상체는 예를 들어, 인간, 개, 고양이 말, 소, 돼지, 새 또는 물고기와 같은 포유동물이다.
실시예
하기 실시예는 본 발명의 다양한 실시형태를 예시하지만, 본 발명은 이들 실시예에 제한되지 않는다. 다음 실험은 CD73을 내생적으로 발현하는 세포에서 수행된다. 즉, 세포는 형질감염된 리포터 구축물을 포함하는 인공 시스템을 나타내지 않는다. 이러한 인공 시스템은 일반적으로 치료학적으로 관련된 생체 내 시스템에 더 가까운 내인성 시스템보다 더 높은 억제 정도와 더 낮은 IC50 값을 나타낸다. 또한, 다음 실험에서는 형질감염제(transfecting agent)가 사용되지 않는다. 즉, 짐노틱 전달(gymnotic delivery)이 수행된다. 형질감염제는 IC50 값에 영향을 미치는 올리고뉴클레오티드의 활성을 증가시키는 것으로 알려져 있다(예를 들어, Zhang et al., Gene Therapy, 2011, 18, 326-333; Stanton et al., Nucleic Acid Therapeutics, Vol. 22, No. .5, 2012 참조). 형질감염제를 사용하는 인공 시스템은 치료적 접근법으로 해석하기 어렵거나 불가능하고 올리고뉴클레오티드에 대해 지금까지 승인된 형질감염 제형이 없기 때문에 아무런 형질감염제 없이 다음 실험을 수행한다.
실시예 1: 인간 CD73-특이적 안티센스 올리고뉴클레오티드(ASO)의 설계
인간 CD73 유전자 내의 엑손 영역에 대한 특이성을 갖는 ASO의 설계를 위해 서열번호 1의 CD73 mRNA(RefSeq ID NM_002526.4)를 사용하였다. 인간 CD73 유전자 내의 인트론 영역에 대한 특이성을 갖는 ASO의 경우, 서열번호 2의 CD73 pre -mRNA(GRCh38.p13:6:85450083:85495784)를 사용하였다. ASO ID 뒤의 "H"는 pre-mRNA의 엑손 영역에 결합하는 인간 CD73 특이적 서열을 나타내고, ASO ID 뒤의 "HM"은 pre-mRNA의 엑손 영역에 결합하는 인간/마우스 교차 반응성 CD73 서열을 나타내고, ASO ID 뒤의 "HI"는 pre-mRNA의 인트론 영역에 결합하는 인간 CD73-특이적 서열을 나타낸다. 16, 17 및 18량체가 사내 기준에 따라 설계되었으며, 모든 실험에서 neg1을 대조군 올리고뉴클레오티드로 사용하였다. 모든 올리고뉴클레오티드 및 그 서열은 표1에 제시되어 있다.
실시예 2: 인간 CD73-특이적 ASO의 표적 넉다운 효능 스크린
인실리코(in silico) 설계된 CD73-특이적 ASO의 넉다운 효능을 조사하기 위해, 인간 세포주에서 두 가지 효능 스크리닝 라운드를 수행하였다. 구체적으로, 형질전환 시약을 첨가하지 않고 3일 동안 5μM 농도의 각 ASO로 세포를 처리하였다. 3일의 처리 기간 후에 세포를 용해시키고, CD73 및 HPRT1 mRNA 발현을 QuantiGene Singleplex 검정(ThermoFisher)을 사용하여 분석하고 CD73 발현 값을 HPRT1 값으로 표준화하였다. 결과는 도1과 표3 및 4에 나타내었다.
도1a) 및 표5에 나타낸 바와 같이, 112개의 시험된 ASO 중 36개(34%)로 처리한 EFO-21 세포에서 >70%의 표적 억제가 유도되었다(모의 처리된 세포와 비교하여, 잔여 CD73 mRNA 발현이 0.3 미만인 것으로 나타남). MDA-MB231 세포에서 또한 CD73-특이적 ASO의 넉다운 효능이 테스트되었다. 도1b) 및 표6에 나타낸 바와 같이, 112개의 시험된 ASO 중 39개(37%)로 처리한 것에서 >50%의 표적 억제가 유도되었다(모의 처리된 세포와 비교하여, 잔여 CD73 mRNA 발현이 0.5 미만인 것으로 나타남). 대조군 올리고뉴클레오티드 neg1은 두 세포주 모두에서 CD73 발현을 억제하지 않았다.
| ASO | 잔여 CD73 mRNA 발현(1로 설정된 모의 처리된 세포와 비교) | ASO | 잔여 CD73 mRNA 발현(1로 설정된 모의 처리된 세포와 비교) |
| A05064H | 0.04 | A05082H | 0.37 |
| A05115HI | 0.08 | A05069H | 0.37 |
| A05114HI | 0.09 | A05123HI | 0.37 |
| A05067H | 0.10 | A05108HI | 0.37 |
| A05107HI | 0.11 | A05075H | 0.37 |
| A05155H | 0.11 | A05153HI | 0.38 |
| A05065H | 0.16 | A05072H | 0.38 |
| A05057H | 0.17 | A05117HI | 0.38 |
| A05098HI | 0.17 | A05136HI | 0.38 |
| A05066H | 0.18 | A05116HI | 0.39 |
| A05062H | 0.18 | A05078H | 0.39 |
| A05056H | 0.18 | A05053HM | 0.40 |
| A05154H | 0.18 | A05052H | 0.40 |
| A05060H | 0.18 | A05050H | 0.40 |
| A05094H | 0.19 | A05084H | 0.40 |
| A05126HI | 0.19 | A05076H | 0.41 |
| A05156H | 0.20 | A05080H | 0.41 |
| A05090H | 0.20 | A05070H | 0.42 |
| A05106HI | 0.21 | A05091H | 0.42 |
| A05089H | 0.22 | A05048H | 0.42 |
| A05110HI | 0.22 | A05096H | 0.42 |
| A05054H | 0.23 | A05146HI | 0.42 |
| A05055H | 0.23 | A05139HI | 0.43 |
| A05058H | 0.24 | A05125HI | 0.43 |
| A05063H | 0.24 | A05103HI | 0.45 |
| A05133HI | 0.25 | A05121HI | 0.46 |
| A05095H | 0.25 | A05135HI | 0.46 |
| A05112HI | 0.26 | A05061H | 0.47 |
| A05051H | 0.26 | A05111HI | 0.47 |
| A05083H | 0.27 | A05148HI | 0.48 |
| A05097H | 0.27 | A05101HI | 0.49 |
| A05150HI | 0.27 | A05129HI | 0.50 |
| A05088H | 0.27 | A05147HI | 0.50 |
| A05149HI | 0.27 | A05074H | 0.50 |
| A05086H | 0.27 | A05143HI | 0.51 |
| A05059H | 0.28 | A05085H | 0.52 |
| A05122HI | 0.30 | A05093H | 0.52 |
| A05144HI | 0.30 | A05102HI | 0.53 |
| A05081H | 0.31 | A05087H | 0.55 |
| A05109HI | 0.31 | A05073H | 0.56 |
| A05068H | 0.32 | A05104HI | 0.57 |
| A05092H | 0.32 | A05120HI | 0.58 |
| A05124HI | 0.33 | A05131HI | 0.59 |
| A05105HI | 0.33 | A05152HI | 0.60 |
| A05100HI | 0.33 | A05113HI | 0.60 |
| A05132HI | 0.33 | A05047H | 0.60 |
| A05137HI | 0.34 | A05046H | 0.61 |
| A05119HI | 0.34 | A05127HI | 0.61 |
| A05071H | 0.35 | A05128HI | 0.63 |
| A05151HI | 0.35 | A05118HI | 0.64 |
| A05140HI | 0.35 | A05077H | 0.64 |
| A05134HI | 0.35 | A05138HI | 0.66 |
| A05157H | 0.35 | A05130HI | 0.68 |
| A05079H | 0.36 | A05099HI | 0.69 |
| A05145HI | 0.36 | A05141HI | 0.74 |
| A05049H | 0.36 | neg1 | 0.88 |
| A05142HI | 0.37 |
| ASO | 잔여 CD73 mRNA 발현(1로 설정된 모의 처리된 세포와 비교) | ASO | 잔여 CD73 mRNA 발현(1로 설정된 모의 처리된 세포와 비교) |
| A05064H | 0.08 | A05139HI | 0.59 |
| A05155H | 0.15 | A05070H | 0.59 |
| A05067H | 0.17 | A05150HI | 0.59 |
| A05057H | 0.18 | A05069H | 0.59 |
| A05154H | 0.20 | A05145HI | 0.61 |
| A05115HI | 0.20 | A05117HI | 0.61 |
| A05090H | 0.20 | A05101HI | 0.61 |
| A05114HI | 0.21 | A05126HI | 0.62 |
| A05065H | 0.23 | A05134HI | 0.62 |
| A05060H | 0.23 | A05079H | 0.63 |
| A05056H | 0.25 | A05108HI | 0.63 |
| A05089H | 0.27 | A05153HI | 0.64 |
| A05098HI | 0.29 | A05077H | 0.65 |
| A05149HI | 0.29 | A05148HI | 0.65 |
| A05062H | 0.29 | A05085H | 0.65 |
| A05054H | 0.30 | A05143HI | 0.66 |
| A05110HI | 0.32 | A05071H | 0.66 |
| A05058H | 0.32 | A05111HI | 0.66 |
| A05066H | 0.33 | A05146HI | 0.67 |
| A05094H | 0.33 | A05135HI | 0.68 |
| A05107HI | 0.33 | A05061H | 0.68 |
| A05156H | 0.34 | A05147HI | 0.69 |
| A05088H | 0.34 | A05104HI | 0.70 |
| A05055H | 0.35 | A05144HI | 0.70 |
| A05083H | 0.36 | A05086H | 0.71 |
| A05092H | 0.38 | A05052H | 0.72 |
| A05122HI | 0.39 | A05116HI | 0.72 |
| A05096H | 0.41 | A05046H | 0.73 |
| A05097H | 0.42 | A05049H | 0.73 |
| A05063H | 0.42 | A05082H | 0.74 |
| A05068H | 0.43 | A05112HI | 0.75 |
| A05157H | 0.44 | A05099HI | 0.78 |
| A05051H | 0.44 | A05105HI | 0.79 |
| A05053HM | 0.44 | A05137HI | 0.80 |
| A05059H | 0.45 | A05080H | 0.80 |
| A05050H | 0.45 | A05118HI | 0.81 |
| A05103HI | 0.46 | A05136HI | 0.81 |
| A05109HI | 0.48 | A05124HI | 0.82 |
| A05075H | 0.49 | A05121HI | 0.83 |
| A05133HI | 0.50 | A05141HI | 0.84 |
| A05140HI | 0.51 | A05048H | 0.89 |
| A05084H | 0.51 | A05087H | 0.90 |
| A05123HI | 0.51 | A05073H | 0.92 |
| A05102HI | 0.52 | A05138HI | 0.93 |
| A05078H | 0.52 | A05125HI | 1.01 |
| A05081H | 0.52 | A05120HI | 1.01 |
| A05076H | 0.54 | neg1 | 1.02 |
| A05095H | 0.54 | A05152HI | 1.02 |
| A05106HI | 0.54 | A05113HI | 1.04 |
| A05093H | 0.54 | A05119HI | 1.04 |
| A05132HI | 0.56 | A05047H | 1.05 |
| A05151HI | 0.56 | A05131HI | 1.10 |
| A05072H | 0.56 | A05128HI | 1.17 |
| A05142HI | 0.57 | A05127HI | 1.32 |
| A05100HI | 0.57 | A05129HI | 1.33 |
| A05091H | 0.57 | A05130HI | 1.62 |
| A05074H | 0.58 |
실시예 3: 선택된 인간 CD73-특이적 ASO에 의한 용량 의존적 표적 넉다운의 조사
EFO 21 세포에서 CD73-특이적 ASO에 의한 CD73 mRNA 발현의 용량-의존적 넉다운을 mRNA 수준에서 조사하고 각각의 IC50 값을 계산하였다. 구체적으로, EFO-21 세포가 5000nM, 1667nM, 556nM, 185nM, 62nM, 21nM 및 7nM 농도의 각 ASO로 3일 동안 처리되었다. 처리 기간 후 세포를 용해하고 QuantiGene Singleplex assay (ThermoFisher)을 사용하여 CD73 및 HPRT1 mRNA 발현을 분석하고 CD73 발현 값을 HPRT1 값으로 표준화하였다(도2 및 표7). 모든 시험된 CD73-특이적 ASO로 처리한 후 CD73 mRNA의 용량-의존적 넉다운이 관찰되었고(도2), 160.4nM(A05064H; 서열번호 21) 내지 1718nM(A05066H; 서열번호 23)의 IC50 값을 가졌다(표7).
| 억제율(%) | ||||||||
| ASO | IC50 (nM) | 7 nM | 21 nM | 62 nM | 185 nM | 556 nM | 1667 nM | 5000 nM |
| A05054H | 718.2 | 5.84 | -1.35 | 2.02 | 8.49 | 33.02 | 48.18 | 65.35 |
| A05055H | 애매함 | 17.61 | 13.34 | 21.04 | 16.75 | 28.17 | 55.40 | 67.35 |
| A05058H | 808.9 | -4.57 | 11.16 | 9.67 | 32.62 | 37.09 | 54.46 | 72.02 |
| A05064H | 160.4 | -10.04 | 23.68 | 32.50 | 48.63 | 73.41 | 88.45 | 93.55 |
| A05065H | 애매함 | 13.41 | 15.99 | 23.01 | -2.53 | 27.93 | 62.35 | 74.13 |
| A05066H | 1718 | -13.17 | 17.43 | 17.54 | 11.63 | 31.44 | 59.64 | 73.39 |
| A05090H | 202.2 | 1.91 | 1.03 | 16.10 | 41.90 | 58.20 | 74.99 | 80.05 |
| A05094H | 512.8 | 16.67 | 0.39 | 11.56 | 26.51 | 46.01 | 64.39 | 75.27 |
| A05095H | 1550 | 16.86 | 11.87 | -3.58 | 15.01 | 26.61 | 51.90 | 66.30 |
| A05106HI | 1571 | -20.92 | 9.22 | 8.77 | 19.96 | 36.08 | 45.95 | 73.69 |
| A05110HI | 189 | -4.31 | 0.48 | 22.87 | 37.55 | 47.58 | 60.01 | 70.92 |
| A05114HI | 230.1 | -17.88 | 9.13 | 18.60 | 37.60 | 62.45 | 76.26 | 85.34 |
| A05126HI | 513.4 | -24.92 | -14.28 | -1.24 | 1.35 | 40.23 | 56.52 | 73.89 |
| A05155H | 292.9 | -15.39 | 1.41 | 10.69 | 32.46 | 59.78 | 81.07 | 85.99 |
| A05156H | 539.5 | -55.01 | 7.68 | 6.33 | 15.54 | 40.18 | 65.53 | 76.43 |
실시예 4: 잠재적 표적 외(off-target) 결합 부위의 조사
본 발명의 올리고뉴클레오티드의 표적 외 효과를 시험하기 위해 2개의 상이한 데이터베이스를 인실리코로 스크리닝하였다. 이들 데이터베이스는 스플라이싱된 RNA의 서열을 포함하는 RefSecRNA 및 스플라이싱되지 않은 RNA의 서열을 포함하는 ENSEMBL이었다. 표8 및 9에 나타낸 올리고뉴클레오티드는 0개의 미스매치로 잠재적 표적 외 결합 부위가 없다. 즉, 표적 외 서열에 대한 100% 서열 상보성(0mm) 및/또는 1개의 미스매치, 즉 표적 외 서열에 대한 ((n-1)/n*100)% 서열 상보성(1mm)을 갖는다. 2개의 미스매치, 즉 ((n-2)/n*100)% 서열 상보성(2mm)을 갖는 본 발명의 올리고뉴클레오티드의 잠재적 표적 외 결합 부위의 수는 최대 22로 제한된다(표8 및 9, RefSeq(Gene Ids), 2mm 참조).
| RefSeq (Gene Ids) | ENSEMBL | |||||
| ASO | 0mm | 1mm | 2mm | 0mm | 1mm | 2mm |
| A05046H | 0 | 0 | 8 | 0 | 0 | 33 |
| A05047H | 0 | 0 | 4 | 0 | 0 | 15 |
| A05048H | 0 | 0 | 7 | 0 | 0 | 18 |
| A05049H | 0 | 0 | 10 | 0 | 0 | 15 |
| A05050H | 0 | 0 | 9 | 0 | 0 | 62 |
| A05051H | 0 | 0 | 4 | 0 | 0 | 49 |
| A05052H | 0 | 0 | 11 | 0 | 0 | 105 |
| A05053HM | 0 | 0 | 4 | 0 | 0 | 23 |
| A05054H | 0 | 0 | 8 | 0 | 0 | 37 |
| A05055H | 0 | 0 | 3 | 0 | 0 | 34 |
| A05056H | 0 | 0 | 10 | 0 | 0 | 75 |
| A05057H | 0 | 0 | 10 | 0 | 0 | 40 |
| A05058H | 0 | 0 | 2 | 0 | 0 | 33 |
| A05059H | 0 | 0 | 4 | 0 | 0 | 12 |
| A05060H | 0 | 0 | 4 | 0 | 0 | 9 |
| A05061H | 0 | 0 | 8 | 0 | 0 | 25 |
| A05062H | 0 | 0 | 2 | 0 | 0 | 12 |
| A05063H | 0 | 0 | 5 | 0 | 0 | 7 |
| A05064H | 0 | 0 | 4 | 0 | 0 | 38 |
| A05065H | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 6 |
| A05066H | 0 | 0 | 5 | 0 | 0 | 40 |
| A05067H | 0 | 0 | 8 | 0 | 0 | 83 |
| A05068H | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 7 |
| A05069H | 0 | 0 | 4 | 0 | 0 | 23 |
| A05070H | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 40 |
| A05071H | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 14 |
| A05072H | 0 | 0 | 5 | 0 | 0 | 46 |
| A05073H | 0 | 0 | 3 | 0 | 0 | 16 |
| A05074H | 0 | 0 | 3 | 0 | 0 | 20 |
| A05075H | 0 | 0 | 9 | 0 | 0 | 42 |
| A05076H | 0 | 0 | 2 | 0 | 0 | 39 |
| A05077H | 0 | 0 | 5 | 0 | 0 | 28 |
| A05078H | 0 | 0 | 2 | 0 | 0 | 43 |
| A05079H | 0 | 0 | 4 | 0 | 0 | 16 |
| A05080H | 0 | 0 | 2 | 0 | 0 | 3 |
| A05081H | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 6 |
| A05082H | 0 | 0 | 2 | 0 | 0 | 10 |
| A05083H | 0 | 0 | 3 | 0 | 0 | 21 |
| A05084H | 0 | 0 | 2 | 0 | 0 | 10 |
| A05085H | 0 | 0 | 3 | 0 | 0 | 36 |
| A05086H | 0 | 0 | 4 | 0 | 0 | 31 |
| A05087H | 0 | 0 | 1 | 0 | 0 | 17 |
| A05088H | 0 | 0 | 7 | 0 | 0 | 21 |
| A05089H | 0 | 0 | 4 | 0 | 0 | 17 |
| A05090H | 0 | 0 | 2 | 0 | 0 | 16 |
| A05091H | 0 | 0 | 6 | 0 | 0 | 57 |
| A05092H | 0 | 0 | 5 | 0 | 0 | 34 |
| A05093H | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 11 |
| A05094H | 0 | 0 | 2 | 0 | 0 | 13 |
| A05095H | 0 | 0 | 1 | 0 | 0 | 16 |
| A05096H | 0 | 0 | 4 | 0 | 0 | 21 |
| A05097H | 0 | 0 | 1 | 0 | 0 | 18 |
| A05154H | 0 | 0 | 2 | 0 | 0 | 25 |
| A05155H | 0 | 0 | 5 | 0 | 0 | 19 |
| A05156H | 0 | 0 | 3 | 0 | 0 | 37 |
| A05157H | 0 | 0 | 2 | 0 | 0 | 32 |
| RefSeq (Gene Ids) | ENSEMBL | |||||
| ASO | 0mm | 1mm | 2mm | 0mm | 1mm | 2mm |
| A05098HI | 0 | 0 | 3 | 0 | 0 | 87 |
| A05099HI | 0 | 0 | 22 | 0 | 0 | 41 |
| A05100HI | 0 | 0 | 1 | 0 | 0 | 24 |
| A05101HI | 0 | 0 | 3 | 0 | 0 | 43 |
| A05102HI | 0 | 0 | 13 | 0 | 0 | 92 |
| A05103HI | 0 | 0 | 1 | 0 | 0 | 21 |
| A05104HI | 0 | 0 | 8 | 0 | 0 | 47 |
| A05105HI | 0 | 0 | 13 | 0 | 0 | 117 |
| A05106HI | 0 | 0 | 6 | 0 | 0 | 35 |
| A05107HI | 0 | 0 | 7 | 0 | 0 | 32 |
| A05108HI | 0 | 0 | 5 | 0 | 0 | 32 |
| A05109HI | 0 | 0 | 3 | 0 | 0 | 24 |
| A05110HI | 0 | 0 | 2 | 0 | 0 | 8 |
| A05111HI | 0 | 0 | 3 | 0 | 0 | 18 |
| A05112HI | 0 | 0 | 1 | 0 | 0 | 16 |
| A05113HI | 0 | 0 | 4 | 0 | 0 | 41 |
| A05114HI | 0 | 0 | 4 | 0 | 0 | 42 |
| A05115HI | 0 | 0 | 3 | 0 | 0 | 27 |
| A05116HI | 0 | 0 | 5 | 0 | 0 | 50 |
| A05117HI | 0 | 0 | 1 | 0 | 0 | 27 |
| A05118HI | 0 | 0 | 3 | 0 | 0 | 25 |
| A05119HI | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 8 |
| A05120HI | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 8 |
| A05121HI | 0 | 0 | 4 | 0 | 0 | 25 |
| A05122HI | 0 | 0 | 8 | 0 | 0 | 44 |
| A05123HI | 0 | 0 | 5 | 0 | 0 | 45 |
| A05124HI | 0 | 0 | 1 | 0 | 0 | 26 |
| A05125HI | 0 | 0 | 4 | 0 | 0 | 50 |
| A05126HI | 0 | 0 | 2 | 0 | 0 | 29 |
| A05127HI | 0 | 0 | 1 | 0 | 0 | 9 |
| A05128HI | 0 | 0 | 4 | 0 | 0 | 6 |
| A05129HI | 0 | 0 | 8 | 0 | 0 | 38 |
| A05130HI | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 6 |
| A05131HI | 0 | 0 | 6 | 0 | 0 | 20 |
| A05132HI | 0 | 0 | 3 | 0 | 0 | 23 |
| A05133HI | 0 | 0 | 1 | 0 | 0 | 6 |
| A05134HI | 0 | 0 | 2 | 0 | 0 | 11 |
| A05135HI | 0 | 0 | 7 | 0 | 0 | 40 |
| A05136HI | 0 | 0 | 4 | 0 | 0 | 10 |
| A05137HI | 0 | 0 | 5 | 0 | 0 | 33 |
| A05138HI | 0 | 0 | 1 | 0 | 0 | 18 |
| A05139HI | 0 | 0 | 3 | 0 | 0 | 43 |
| A05140HI | 0 | 0 | 2 | 0 | 0 | 17 |
| A05141HI | 0 | 0 | 1 | 0 | 0 | 39 |
| A05142HI | 0 | 0 | 1 | 0 | 0 | 25 |
| A05143HI | 0 | 0 | 2 | 0 | 0 | 23 |
| A05144HI | 0 | 0 | 1 | 0 | 0 | 22 |
| A05145HI | 0 | 0 | 6 | 0 | 0 | 20 |
| A05146HI | 0 | 0 | 9 | 0 | 0 | 30 |
| A05147HI | 0 | 0 | 1 | 0 | 0 | 61 |
| A05148HI | 0 | 0 | 8 | 0 | 0 | 37 |
| A05149HI | 0 | 0 | 1 | 0 | 0 | 21 |
| A05150HI | 0 | 0 | 9 | 0 | 0 | 89 |
| A05151HI | 0 | 0 | 2 | 0 | 0 | 19 |
| A05152HI | 0 | 0 | 4 | 0 | 0 | 40 |
| A05153HI | 0 | 0 | 6 | 0 | 0 | 37 |
실시예 5: 선택된 안티센스 올리고뉴클레오티드의 간 독성의 생체내 평가
본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오티드 A05126HI(서열번호 83) 및 A05064H(서열번호 21), 및 대조군 A05027HM(서열번호 116), 예컨대, WO2018/065627 참조)의 간 독성 능력을 확인하기 위해, 마우스에게 각각의 안티센스 올리고뉴클레오티드를 반복 주사(20mg/kg) 처치하였다. 알라닌 트랜스미나제(Alanine transaminase)의 혈청 수준을 다양한 시점에서 측정했다. 도3 및 표10에 나타낸 바와 같이, A05027HM(선행 기술의 대조군, 서열번호 116)로 처치한 마우스에서 담체 대조군 마우스와 비교하여 5일째에 ALT의 유의한 증가가 일어났다. 대조적으로, 본 발명의 2개의 시험 ASO 처치받은 마우스 중 아무도 담체 대조군 동물과 비교하여 ALT의 유의한 증가가 일어나지 않았다.
| 혈청 내 평균 x-배 ALT 수준(담체 대조군과 비교) | p 값(담체 대조군과 비교) | |
| A05027HM(선행 기술의 서열번호 116) | 2.97 | 0.02 |
| A05126HI(서열번호 83) | 1.26 | 0.9 |
| A05064H(서열번호 21) | 1.58 | 0.6 |
SEQUENCE LISTING
<110> Secarna Pharmaceuticals GmbH & Co. KG
<120> Oligonucleotides reducing the amount of CD73 mRNA and CD73
protein expression
<130> P129037PC00
<140> EP 20217955.2
<141> 2020-12-31
<160> 116
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 3562
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 1
actcgccggc actcgcccgg ctcgcccgct ttcgcaccca gttcacgcgc cacagctatg 60
tgtccccgag ccgcgcgggc gcccgcgacg ctactcctcg ccctgggcgc ggtgctgtgg 120
cctgcggctg gcgcctggga gcttacgatt ttgcacacca acgacgtgca cagccggctg 180
gagcagacca gcgaggactc cagcaagtgc gtcaacgcca gccgctgcat gggtggcgtg 240
gctcggctct tcaccaaggt tcagcagatc cgccgcgccg aacccaacgt gctgctgctg 300
gacgccggcg accagtacca gggcactatc tggttcaccg tgtacaaggg cgccgaggtg 360
gcgcacttca tgaacgccct gcgctacgat gccatggcac tgggaaatca tgaatttgat 420
aatggtgtgg aaggactgat cgagccactc ctcaaagagg ccaaatttcc aattctgagt 480
gcaaacatta aagcaaaggg gccactagca tctcaaatat caggacttta tttgccatat 540
aaagttcttc ctgttggtga tgaagttgtg ggaatcgttg gatacacttc caaagaaacc 600
ccttttctct caaatccagg gacaaattta gtgtttgaag atgaaatcac tgcattacaa 660
cctgaagtag ataagttaaa aactctaaat gtgaacaaaa ttattgcact gggacattcg 720
ggttttgaaa tggataaact catcgctcag aaagtgaggg gtgtggacgt cgtggtggga 780
ggacactcca acacatttct ttacacaggc aatccacctt ccaaagaggt gcctgctggg 840
aagtacccat tcatagtcac ttctgatgat gggcggaagg ttcctgtagt ccaggcctat 900
gcttttggca aatacctagg ctatctgaag atcgagtttg atgaaagagg aaacgtcatc 960
tcttcccatg gaaatcccat tcttctaaac agcagcattc ctgaagatcc aagcataaaa 1020
gcagacatta acaaatggag gataaaattg gataattatt ctacccagga attagggaaa 1080
acaattgtct atctggatgg ctcctctcaa tcatgccgct ttagagaatg caacatgggc 1140
aacctgattt gtgatgcaat gattaacaac aacctgagac acacggatga aatgttctgg 1200
aaccacgtat ccatgtgcat tttaaatgga ggtggtatcc ggtcgcccat tgatgaacgc 1260
aacaatggca caattacctg ggagaacctg gctgctgtat tgccctttgg aggcacattt 1320
gacctagtcc agttaaaagg ttccaccctg aagaaggcct ttgagcatag cgtgcaccgc 1380
tacggccagt ccactggaga gttcctgcag gtgggcggaa tccatgtggt gtatgatctt 1440
tcccgaaaac ctggagacag agtagtcaaa ttagatgttc tttgcaccaa gtgtcgagtg 1500
cccagttatg accctctcaa aatggacgag gtatataagg tgatcctccc aaacttcctg 1560
gccaatggtg gagatgggtt ccagatgata aaagatgaat tattaagaca tgactctggt 1620
gaccaagata tcaacgtggt ttctacatat atctccaaaa tgaaagtaat ttatccagca 1680
gttgaaggtc ggatcaagtt ttccacagga agtcactgcc atggaagctt ttctttaata 1740
tttctttcac tttgggcagt gatctttgtt ttataccaat agccaaaaat tctccttgcc 1800
tttaatgtgt gaaactgcat tttttcaagt gagattcaaa tctgcctttt aggacctggc 1860
tttgtgacag caaaaaccat ctttacaggc tcctagaagc tgaaggttag agcattataa 1920
aatgaagaga cagacatgat tactcagggt cagcaaccta gtgagttaga aaaaaaatta 1980
acatagggcc ctataaggag aaagccaact atgttaagtt tacgtgtcca aattttaatg 2040
aaattttact aacaatttta aaccatattt ttcttcttca tatccatttc taatccatca 2100
aacagcttat gtttacataa aattttatca ttcacaagga agttttaagc acactgtctc 2160
atttgatatc cacaacttat ttttggtagg aaagagagat gtttttccca cctgtcagat 2220
gaaaaaactg aagctcaaaa agggttgact tgaccataca gctaatgctg acagatccaa 2280
gacctagacc taggtctttt gaactcaagt ccagcattct caactatatc aagttactgt 2340
tcagaatact taatatctcc tctcttcata attatcaata gccccaagct catggatgac 2400
aaatctctgc tttatttctt gtctctattt tttcacttta tagctcctgt tataatagca 2460
agtttaatgg tataaacaca ggataccatc ctctcttgca acacccatgt gcctttgatg 2520
agtcaggtag caagctgtag tagataatga gaaaggccag aggctgcaaa agacagtcaa 2580
aggacacgag agaaaggaag gggaagaaca ggactccagg actgttttat attatagaaa 2640
agcaagagct aaagagcatt tacacatgtt aaacagatac ttgttaagca tagtgcctga 2700
cacacggcat tagctgttat tttatgagat tccatcagct ctgcctctgt cctctttctt 2760
ctaacatgaa ggtatcatga gaagagaacc ttctaacata agctgtaatt ctaaacctgc 2820
acttgtccct ctccagcaag aggctagcac tgaattcatt ctactcatac tacacaccca 2880
gttatggaat gtccagagtt ctcgaagaaa ataaatgact ttaggaagag gtatacattt 2940
tttaagtcgc tctgcctcca aatctgaaca gtcactgtaa atcattctta agcccagata 3000
tgagaacttc tgctggaaag tgggaccctc tgagtgggtg gtcagaaaat acccatgctg 3060
atgaaatgac ctatgcccaa agaacaaata cttaacgtgg gagtggaacc acatgagcct 3120
gctcagctct gcataagtaa ttcaagaaat gggaggcttc accttaaaaa cagtgtgcaa 3180
atggcagcta gaggttttga taggaagtat gtttgtttct tagtgtttac aaatattaag 3240
tactcttgat acaaaatata cttttaaact tcataacctt tttataaaag ttgttgcagc 3300
aaaataatag cctcggttct atgcatatat ggattagcta taaaaaatgt caataagatt 3360
gtacaaggaa aattagagaa agtcacattt agggtttatt ttttacactt ggccagtaaa 3420
atagggtaaa tcctattaga attttttaaa gaactttttt taagtttcct aaatctgtgt 3480
gtgtattgtg aagtggtata agaaatgact ttgaaccact ttgcaattgt agattcccaa 3540
caataaaatt gaagataagc tc 3562
<210> 2
<211> 45702
<212> DNA
<213> Homo sapiens
<400> 2
actcgccggc actcgcccgg ctcgcccgct ttcgcaccca gttcacgcgc cacagctatg 60
tgtccccgag ccgcgcgggc gcccgcgacg ctactcctcg ccctgggcgc ggtgctgtgg 120
cctgcggctg gcgcctggga gcttacgatt ttgcacacca acgacgtgca cagccggctg 180
gagcagacca gcgaggactc cagcaagtgc gtcaacgcca gccgctgcat gggtggcgtg 240
gctcggctct tcaccaaggt tcagcagatc cgccgcgccg aacccaacgt gctgctgctg 300
gacgccggcg accagtacca gggcactatc tggttcaccg tgtacaaggg cgccgaggtg 360
gcgcacttca tgaacgccct gcgctacgat gccatggtaa gacccgagcc cgcgcccggg 420
atagtagtcc cggactgaga gaggagccgg gctggaaaag cagcggatgg cagagtgtgg 480
caagcctagg tccagggcgc ggagagatgt ggggataaag tgagactccg gccagtgtgc 540
cagctggatg catagaagtc ccttggacga ttcgtcttaa acggacgtta ttgcgccccc 600
actatgagat gggagtattt agaggagcag gacccagtcc tgcctgcgag gggcttaagg 660
tggggtgcgt agaagcactg acagttatcc agagctaggg actgaatcgg atccctcacg 720
cagctctcat ttactgctag atctttcaaa gaatgcttta tctcaatcta gatctttcga 780
aaaatgcttt atctcaatct tattgaaagg gaaaccgcgt cgaagaagct gaataaatta 840
acaggcacca tccccgcaaa aagggagacg tgataagaat ggacaccaga tctctttgac 900
cccggagctt gagagtaatt aagctcacag ctttggggta gattctctgt tcaattacct 960
tctatgtgac cttgagcaag ttatttactc tttcttgcct cagttctatc ctgtataaaa 1020
ataaggatta taattgtaca tagtgcacat agtgtggtct ctatattatt accagacaca 1080
tagtgtggtg tctatatatg ttgttattac cagacactat aatatagggt taagaaaagg 1140
aaagaaagaa agaaagagaa agaaagaaag aaacttcaga gagagccaaa atgtggaaag 1200
acttgggttt caaaggattt caataaagta ggtttggcgg cagagattta ggaagagtcc 1260
aacttaagag ataatgggct cttaaaacat gtgcaaaagt ttagttcaaa gtcccaaatg 1320
ttaggttaaa ggtaatgcct tttctattgc actaaattct agaaagggag cagaggtggt 1380
tgcacagtaa taaataagta caaccaagat gtatatatgg tggttaaaaa aaaaataaaa 1440
ccaccaccca aatttaaccc tgtgtaaaag ccttgagtaa agggattcag caagactgtg 1500
gagaaacttg ggagaagaaa aaagagcttt ggaagaggaa gaactgagaa atctccagag 1560
aaacgtccag agaaatctgt gaagtccaca agtgtggaag ggaaagggaa gtgtgattag 1620
gctgggatac agaaggctaa cagtacactt tatatgagaa gagcttagag gtcaggagag 1680
cacaatgctg aggggtttgt ttggttttat tttcccctct ggaaacttgg agaaaggagg 1740
acaggaaaag atgataagag ggcaccattg tttggtttta aaggtccctc cccaaccccc 1800
cacaacaaga aagctcattt taatgagatg agagaagggg agaaagctcc ctccgttctg 1860
atgcttttga gcttatcagg gacaccctgc agcagaaatt ccagctgatc cttcagcctt 1920
cagagttgat gaggtggggc tcacacacat ctggatttga agaagaatcg tgggtttcaa 1980
gaactctgtg gtctcttaag cattggtatt ccacagctac acttccctga tactttgcac 2040
tcagtaatga caaaataaat atttgtagaa ttgagttgtt gctaccctgt gtctccactt 2100
cctcccagaa gggtagaata aacttacatg tgtttgtttt attttgcata taaaccacga 2160
ctttgtaaac tttacttttt gtgacactct tttctccaca attgtgtgaa ccctttttag 2220
tggaaaaata agaatgaaga attcctagtt ttccctaata atatttccct cttgtaagtc 2280
tagttgagct cctggtgtta atcatggtat caaatgttta tgacaggaca tctaggtgag 2340
gcctgagtaa actgctgtaa gttacagcct atctcttctg tgtttgttca gaatcctttt 2400
tgttggatga aattactttc tttcaaattt tgctcaagaa aattgaattg ggttctgagg 2460
aaaaataggc tacttacgta atgttggcag ggggtaaaga ttgggagcgg atcacatggc 2520
aaggttagat ggctgtgtcc tcaggactta ctctgtgcag tttgggggtg tgtcaaacat 2580
gatttgacgt gcataaaatc ccagttctgt agtgctaaag catgtgctaa agctctgctg 2640
tactccagta ttgcacagat gtttcactgt caattgttta tattatacta accctcagag 2700
aatttattgc tgttgtggta taaacgttcc tccactgtaa ccactcaccg catattgatt 2760
cctaggacac tggggattca aatcagggtg gaaaacagtt gtggaggggc atctccagtt 2820
tcctggagac tggacctagt tcaaaggagc cacataaaag gactgaagca tatggaggac 2880
aaagaggaat ttcctagaat ccagctaaaa cacaggagtc ccctcgagca ggaacttcca 2940
aggaggtgta cactttctag acctactgga gtaatcctga ttgctgtaga ggacccaggg 3000
caatcctgga gaccccctgg aaccactact aggcagaaaa ctgggaagag gatggcaaaa 3060
ctctccagtt agtgtagctg tctcagtgga aggactgttg tcccctgagg cacgaggaag 3120
acagcatgga agcactgaca gtatgcgctt ggcctggtta ctttctctga gcttcatgtt 3180
ccttagctgt aaaacaggag tgataacccc catcttgcag aggttttgtg aggaatacat 3240
gagataatcc ctgctggtgc tcactgaaag tgagtttcat gtgccctggg tggggaggag 3300
gggaattgtg aggaagggaa ggtttgggtt gtgcatcaga ttatctgatt ctcacagcct 3360
ggcacagtct accacctgcc tgccctctac catcttacct aagtaccatt gcctaaacta 3420
tttttgctat agttactcat tgagcagact tatgaaatct ccccacagca caaaactgaa 3480
ggtatccacc tccagaggtg agattctcac caagacaggc tgtggggaag gtagctttga 3540
gcaggtctct agggtcccct agaaaggtgc cttttctctg cttggctgct gcttctgagg 3600
ccctggctgc tgagcccact tcctgcccat aaggctgcag ccttagccct agccaattgc 3660
tcctaaatgg gggaggcagc agccagggtg ggaaccatgg cccccgcctt taactcaccc 3720
aggggacagg ttagtcagat agatggtcct ttgttcgcca ccctccacct cccacataga 3780
caacattcta atgtgtttga tggactgcat atagttttgt ttctacatgc actttcaaaa 3840
cctttgtgtg cttatatttt ataatggcat acccagtcct gttatttagc cctttctgtt 3900
tcttactttt gtcctgaact tattgttttt atgatttgtc catgttgccc tagatgccct 3960
tatacctata catcactgtg aattgtgctc tgtgtatttt acccatctcc acgtatttta 4020
cccatctgct ccctggctga tgggtttgga gatggcgtct aacaccctgc ctccacaaat 4080
aatgctgctc cagatatctt cctggatggt ctcaccagat gatttctacc caggagcaga 4140
attgctggcc acagggcata ctttgagtac tacaagactg gtttcctcaa tgactgacat 4200
cctccattct cttccaccta ctcccatccc caaacaggac atgtaaattt ctatatttta 4260
cctatatatc atggcagtat ccagctttat tgtaggtgta aaatacacat tgctgcttta 4320
tcatgtactt ttctaataac tagtgagttt ggacattttt tgatatgttt gttaactttt 4380
taagcttcct cttctctaat tgcttattca tattctttgg tattttttaa attgggttag 4440
ctttatattt tttgactttc aggagttata ggttttgatc tgtgatcaat tttagacatt 4500
gcaaatatat tatgatgata ttaggtctat taattttgtc catggtatct ttcattgaac 4560
agaaattctt catttcttgt aattgaatta atcttttttt ccttgtggct tgtgcttttg 4620
aaagtttgcc taatagtttg ctaatttaaa gcttatcacc tttaacactc ctcactggaa 4680
attcagagat caccacggtt ctctctgcct tttaagagat aaatctacaa tctgtggcta 4740
tgcaattcac ttctcagcat caccagttcc tcatctataa aatagaagtt tgaaccagct 4800
tacctctgag gtcccataca tatttgaaca actggagccc tacagtgaaa tgttttgatt 4860
cagtgaaggg acaggaggat ggggcaaagg tgtagaggca ggaatctaca caatggacca 4920
ggttggacca gagtgaggta gcaggaatca tggcagaaga ggttgtgtaa actctaaagg 4980
ccacctgaga agtttgagtt atgttgccat gggcagccat gtggtttctg cgtagaagac 5040
cactgtggta taataaaaaa taaatatttg gtccttgtcc ccagtacctg tcacagagtt 5100
cctaaaaccc tagaaatttc ctaagtaata gaaatgtcct ttgtgattca taataaaccc 5160
catgataata cctgggttta tgctcctgca gacttagggt gagatcccta gatagcttca 5220
agatggaacc agtcaccagc aagtccaaga gattagggga tcaaagagtt ggaactttcg 5280
gtaccaccca ccaaagtcca ggaaaggagg gtgggactgg agattcagct ctacaaaaac 5340
tcttgaacaa gatgtgagga gctttttagt tgctgagcat ttggaggttc ctggagggtg 5400
cacacccagg tagggcatga aagctccgca ttgcccccat atcttggcct atccattctt 5460
cacttggctg ttcatctata tcctttgtat agcctttata ataaaccaat gagtgagttc 5520
tgtaagctgt cctagcaagt taattgaagc caaggaggaa gtaatggaaa cccctgattt 5580
atagccattc agccagaagc acaacctcag gcttgtgatc agcctgaagt cagggcagtc 5640
ttgtaggatt gagcccttaa cctatgggat ctgacaatgt cttgagatag tatcagaatt 5700
gaattcaatt ataggacact cagtttgtgt tttctggagt actgtttggt gtctggggga 5760
aatcccacac acatctggtc acagaagtat tctgtgttca gtgtgacagt agaaaaagca 5820
gtttgtgtgt atgtgtgtgt ttgtgctttt gtatgctaat gagatgatct atggctgggg 5880
gcccttagat agcttcggga agggggctgg tcgccagaaa gactaattta tgactagagg 5940
gttagaactt tcagccctac ctctcccact tctagagggt agatgggcta cagattgagt 6000
tcggtctcca acagccagtg aattaatcaa tcatgccttc acgataaacc ttcatgaaga 6060
cccctaaaca accagattca gagagcttcc aagttggtga acatattgag gtgctgggaa 6120
ggtggtgcac atggagtggg catggaagct ttgcccatcc actcccatgc cttgccctgt 6180
gcatctcttc acttgcttgt tccctagtcg tatgctttat aataagccag taaagtgctt 6240
tccaagttct gtgactcgtt ctagccaatt atcaatccca aggatagggt catgggaacc 6300
tccaatttat aactagttgg ttgggaatac aggtggccca ggactctcga ctggtgtctg 6360
aagtgggggc agtcttgtgc atttgagcct tctcacttgt gggatctgat gctaagtcca 6420
ggtagagaat gtcagaatgc atctgaattg ttggacacca agttggtgtc cacacagaat 6480
tggggaattg gttgatgtga ggaaaaaccc tcccagctac atagggaaat cacggttttg 6540
gaagatgagc agaaaagggt gggagggaga agacaagaga gaagagggtg aggaaagagg 6600
ccaggcagca gtccaagtgt gagatgataa cacctgaact ctggtaattg aggagaccaa 6660
atccacggga accagctgca aaaggcattc tgtctggtag gtatagggct aagggagtaa 6720
acgtgggggt gagactggga tcaagtcccc ttcctaccac ttagaatctg tggactggga 6780
gcaggttatt taatctcatg aaacctccat ttccacatgt gtgaggtatg tgattgttgt 6840
ctccacccct agggtgctgt ggggtttaca agagatagta gtgcacataa tgtgcttagc 6900
acagggccag cccctagtaa gtgccggctg tacttgcctt ctctttgcag gggtggctca 6960
ggagagggtg taatcaaaag atgattatga gggttcaagc accaggcaat gggagagtca 7020
gcaggtttta atgcttccac acagaggctg gattcttcta cttccgctta ccgctgacag 7080
ctgaggcctg ctacctcaag ccctgaaatg cagtctgaag acttttcctg gacttactgg 7140
gcaccattgg actgtacagg gctgtggcag acaggagcag tggaaagaga tttggatggg 7200
acgtcagaac acccagattt tacttcttgg ctcttccact tactagctgt gtgaatttgg 7260
cagtggtttc cttatctata aaatggggga attggagagg gtggtctact gcatgttact 7320
tctcagcacc tcagctcctc cccacccctc tctcttgctt ctaatctgcc tacatcactt 7380
ggtttgtctc tggacaagtc taagtttgca tgacaactct ctaatttctc cttcacagtt 7440
atttatttat tttttggcag ctatttcctt gtggagagat agcgtaggtc tttcaggtgc 7500
ttccatttgg ccactgtttg caggtgaaga ggtttccagg atgctcgcgg gatgttactc 7560
tggtagtaac agaaatgatg gcctggggaa tgggaagagt atgagcccag ttttgagcct 7620
gagtctttgg ggctcattta ttcattcaat ctgcaaatct tcattcagca ttactacatg 7680
ccaggctctc tgctaagtgc tgaggatagc gatcaggacc tgctagggtg aaaattactc 7740
ttcagaagat agcagagtgg ataatggcca ttcgagttcc tcttaactac acagagggac 7800
tgggtaagat ctataaagga gagaggttaa acagcaaagc aaaagtgact gaaattctaa 7860
cacccatgca tggggattct tgagctaaag atctggtctg tagaagaaga cacatcagac 7920
cctcatattt agcatctaag ccgaaatcag cagtaagcat gtttcttctc ccataaaaac 7980
ttgtccctaa gaagagagac aagtgcttac aaggactctt atgttaaagg aaactgtcac 8040
aattacttta tcttcagtca tgaagccttt cttgaggaaa gaaaaattag caatactagt 8100
ttgggaagct tgaaagagag attctgtttg caatgacact tttaaaaagg caacaacaac 8160
caaaaaagta attattccta aagctcaggt gtcagaagtt gtgaatgtct agggggttgt 8220
ggatccccaa cctcagagac aggaacagca ccactcccat cctggggctg tggcctcagg 8280
cctctgcttc ctctttttca gtctaaattc cagagcagag aggtgctgga tgaccagctt 8340
caggcagggg agggaggaag taaaggtagt ttctcagctc atcttgtcct cgtactatta 8400
atagcatctg ttgttttctt aactgaaaat tggagagaac caaacaaatc aacatcatat 8460
tggcggcttt ctgcacatca ctcacaaata catctgaatg ctctgtactc tccagtgttt 8520
attttcctca gccacataat cggaatttga acattctttt gacacttctt ttccctcact 8580
tgaataatta gttctatata taatccaaat attagctgga gccctctagc ccctcagaga 8640
tatagttgaa ccttcctgga cctcaattag ttgggcagtt aattctgaat gttgatgtgc 8700
ctattttgca cgtatggaga gtttgtacgt cccccctccc caaacaagta gaatgctgtc 8760
tatttggtac ttgctcattc atacattctt tcaacaacca aacccagttg cagctgggtt 8820
gaaccccagg gtgtttcctg ctattcagtg tgatgccaca ttcacctgct gtggccaaca 8880
ttccttggcc caggactgca gggatggaag ccaacccaac atcagaagtg ggcaacaatg 8940
ccagaaacct atcaaccaaa acaaatgtaa tttgtaatcc tccctggatg atgttgagtg 9000
attggcaact gagccccgtc atatagtaaa tcaggctgtc tctctttaaa aaagagagac 9060
agagagagag agagtctccc aatgttgcct aggctggtct caaactcctg ggctcaagca 9120
atcatccctt cttgcctccc aaaatgctgg gattacaggc atgagccacc atgcccagcc 9180
taggctgtct ctttagctct tcaattatag ggcttcctgc aacctcagcc cttaacgaat 9240
gagctagcgt gtaagtgact agctaaataa atgtgctgca aacctctgac aaatggcttt 9300
ttgacattat taaaatttat ttatgtggaa caaaaaaatt cttttcttct gcatcatgca 9360
tcctacactg cttttaaaga aactctgcta tcctttgttt taccgtctaa catttctttg 9420
tttcccttct gacatgtttc agcctcttgt catcacttgg aacattttta ctgcctcatc 9480
cctctagttt ccatttccta gcctagccca gcccagtatt tttgaaaccc aaatacctgg 9540
aattttgcct gatgtttaaa gccaaaacca aatgaaaatg tgaagaacca aaggagattt 9600
tattcttctg tgactcaaaa tcctgttgtt attgttaaat gaaccctgtg ggatacagtc 9660
tggtattttt aacaccttct gggggtattt gtcaatattt acatttgatg tggatagctt 9720
ataaaagtcc agtggctttg ggtaaaccct gttcactaag aataagaccc agaaggtcat 9780
atgaatcaac gatcaaagaa tgaagatatt ctgaatccaa gtttcttgtt ttgattatta 9840
aaaatacctt gcaattagtt aggcatgaga gaaagcttgt gtataaagtt tggcttgtaa 9900
ttcacatgaa ttctctatac aggccaaaaa ctaccttccc tttgggaata tacaatgacc 9960
ttatttggaa attacttcag gtaattatga agtaataata tctctattca tatgctaaaa 10020
agaattcaaa ataacattca attatcatct cttagaaact aaattaaacg ggtactcacc 10080
caagttgaaa tgcaaacaaa tgcatgatat cattatgtga ccctccccta gcccttaccc 10140
tgtccatggc agatgctaag aaaaacttgt ccctaagaag agagaagtca attgatttag 10200
tcagcctttc ccactgtgtt tggactgagc ctcagaaccc tccttatccc catactgcaa 10260
ggagttactg tcaatcaact agagatggcg ctcaagataa aattattttc catcctgtac 10320
taatataata ataagcatgg aatctattta ttggtttttt cacaacaata aaatatatct 10380
ttagcaagta acaaatggta gaggtaatac ttttagataa agagggaaga atccttctga 10440
cttttctctt tatcacattt tacccacaca caatgtggat ggaatctgca actgaattta 10500
gcagtcacac tgaaactctg ctgcatgacc acactgtcct gaggccatgt gccaacttct 10560
atgttttttt ttcccaaagc tcttccaagg aagagctgcc acttctccat ttactctttt 10620
cacctgtaaa tgaatgctgc cgttggtatt gagaaaatgg gtgaatgaaa gaaatcatga 10680
gaacactcct ggggtgagag caagaggaat gaaaacacgt ggtgtgagag caggtcagag 10740
atggtggtta acacaggaac caggatggag gcctcagact tgaccctggc ctgcaggacg 10800
ttggcctgca ttgtctgcag gaggaaacac agaggtcagt ggatatcctg cggtcttcca 10860
ttaaggcctc ttactattct ggaacatttt atttttatag agaaatctcc cacttcctga 10920
tctccccagt tagaattgat tgatcaaagc agtccctctc cctgttatta aataattaaa 10980
taatatgcat tagttgatcc ctataaccac ttaaaatgta tctaacacag gagaaatctt 11040
tggtaaatat ttactgaatg aatgaacaaa taaataattg gagggaggga gaaagagaca 11100
gagttaaatc ctgaggctgg agtttttggt ccttcagccc cttatcccat tgcccctggc 11160
agccccatcc atgtgacctt gaattctgtc caagtctcat cactttctat gtgtgttgta 11220
atggaaaaaa ggttacaaaa cacagtcttt ctggcctgga gtaccaaaat agtaaagact 11280
tctgttttga aagcctctga caaatgaaca caacagccac agtgataact ttagcaggaa 11340
attgaaccac aaaaagcaag cgagccacaa agccctgaag gctaaaaatg cctcacaggc 11400
caagaggcag ttaggttgca cctgagacag aggctgcttt cttaactggg aaatgggtgt 11460
ctccagatat ataaagctgt gaggagatca ccatggccca gctctgacga gccactggta 11520
cagcattgtt ggttagtttg cctcaacctg cagcagagtt tttattccaa gagttaacag 11580
ttagttaggc tttttccaaa ggttgagatg acaccccaac tcccacaccc atttccgtcc 11640
tgccccagct tgaaaccagg caaagtgagt taagacattg ggagatggga ggggacagga 11700
ggggtagagg cctggcaccc ctctctcttc tgtttcaaga gacactttgt ggagttgtct 11760
agagagactg ggggtaactg ctccttctgc ccccaatctc cccttagctc cccactcctc 11820
cctatcctgc caggccaacc accagcagag aagggcgctt agctccagtg acgctgtgag 11880
tgaggtactt gtgaggatgc atatggttcc tgttggaaat gcacggagga gcagtgaaac 11940
accagaagcc ccatcctctc tcctgcccgt gccctcatgc ccagccagct gaatattcct 12000
gtggcttcca ctcctgcact gtcccctcag tgtcacctcc ccaccacatt cccacagccc 12060
cacttgctgt gtcacctctc ccctgaggga gaggtgtctt cctgccagtc tcttcaccac 12120
caggctcaca caactcccat ccattcactg caggctgcca gactgagctt tccaagcacc 12180
cccggactgc ctccagccct actttctctt caaggcttcc cacttccctc aaaatgaaag 12240
ccctgactcc ttggacacca tacagaccct ccctgatctc ccagcgatgc tcttagcagc 12300
atcatttttt tttctgccag attttcaggt gccctcagtt ccaggagcac caaatcacct 12360
ggatgccatg agctgcttat gacacagttc aaggtgtgac atctttgagg tctctccata 12420
acacctctac tgcagacgtc tgtctctggt gtatcagctg taccttgcac acatgtctct 12480
aaccatctgt ccactgtgtc tgtctgttca cacatcagat tgaccctatg ttctctgtga 12540
caccaggtga gctctggcac cagtgcccag cagatgatta ctgaatgatt aataaaacta 12600
ctcactccac ctgctgcttt taaatgggct ccattttggt atgatttggt gcgtgaacca 12660
ttaaaacttt tcagaagtca ggatttgaaa caaacttggt aaaaagtagt taagcaatgt 12720
cttcgttgta aagtgagaaa ccaagttgct tggaaacagg tgaaaagctt agccagcagc 12780
ttcacaattc acagcctggc actccagtag ccctctctgg acaattgccc aggttttctt 12840
gttttcattt ctgtgtttta atttacaagt tacctttata tttctactaa taccttactg 12900
gcacttgttt gtgaatgaaa caattttttt gagagtttgt taattgttct gtgtgagtgt 12960
ggaaagtttc tttcatataa gatcatcaat tcttttttta aaaatagtgt tttaggtttt 13020
ctcctacata aagaaagtgg tgggggtgag gagctggggg tggaccagat gctcacattg 13080
tatttctatg attttgctgt tggagatact gaagatcatt ttgctgggct ttgctctctt 13140
aaattacaga aaagtgcatt tggtgaagtt tagtgttttt agtaaacata tacaagatgt 13200
catagggata gaattagtga aggaataggg ttcgtgaatg aatgagctca atcttagtaa 13260
tgaaatgttt ggaaagcaac agaacaagag agaaagagca tcagaacatg atttaggtac 13320
cccatacatt tatacaaata aaaaaaagat ctgatttagg gtcatagaaa tcacatacct 13380
aaactgatgg ttaaacaata agtggcaagt aacagtttag ctacaaaaaa tgtacaggaa 13440
cacataagga aagttacatg ggaactttca gagaggacca aaaaaggtgg aataagatta 13500
tctgctctgt tatgatcccc tgtatttctc tgctctatgt tcttctcttg ggcagtcttt 13560
tcctgagatg ttttcatgtt attaatcaaa aataatagaa acgaataaac tagatcaatg 13620
catttacaag attttttgag tgcctgcagt atgcctcggt gtggtgggaa cttggtgtac 13680
tgaggtgagt agcatgatcc tgaagagctt aggaatcact gagttctcgt aagtgcaata 13740
gaagaaaaac tggtagaagg aagtcaaatg aaaatacaag tttctaaaga aaataagtat 13800
ttacaaagga atttgtctgc attaatttct gtggaaaagt tagctatgta tagaagaaag 13860
aaacttgtta gtaattcttt cattcattca tttattcatt caacagtgaa tccctgccat 13920
ggtagtacta actacttgca ctgtggtagt gcaagggata catttgctgt gcaagtagtt 13980
aggaattttt tttttttttt tttttttttt tagtgctttg tgtatgctag gctttatgca 14040
aatatacagc caagcacaga ggttaagaac tttggaatca aaccgaagtg gttctagtcc 14100
cagctccccc ttacaaattg tgtgatcttc aacagttcat ttaacttctc tagatctcag 14160
attttctcat cagtaaaatg agtgcagtaa gagtaccacc ctcacagcat gaaatcagat 14220
tttctgtact ctttactaac tcactttcca tgacgctggc atgtggcaag tgctgactca 14280
atactggctc atttccttaa ctgcttttat tttattcatt cactgccatt ccagaggaaa 14340
ctgcggttct gagatgtgcc ctgggtcact gctgaggagc ggacggagcc tgggagggag 14400
ctacccctgc cttgtttcct cacactttat ggggtgggtg tcaggaatga ggctggaggg 14460
gaaggcaaaa ccagatccct aagagccccc tggaccctgc ttagggtgtt tacttctatc 14520
ataaaggctg tgcttctgta gagacctaag gcagagagtg ccaaggtcag gtttgcattt 14580
gagaaaagtt tttctggcag caatataaag aatagtttag caaaagaaat gagaatagct 14640
ggaaacccag ttaggaggct gtggtagtcc aggagcacac taaggcagca acaataggtg 14700
gatggaaact ggagcattta ggtaagggag agggatgcca gaggacgtga tggtgaggga 14760
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caagaaagtg attgtactat aacaagggag acttatttca ccataggaaa aaaatcataa 15360
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ggggttttgt atttaatgaa taaatatgtt ttggttttac tgactcttga gctttagtaa 21060
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gttggtggta caaatcatag gaataaccat acttgatgtc agttggtact tctggcagca 42600
ttgagggaca ttatatgcca gcctcacttt tagaaattct gttgagagtc acattatgtg 42660
catacagacc actgacatag gacacacttc cccttcctct tcctagggca gagaccagca 42720
tgcttacaag acacacaagc agcttcttgg catctctggg tagttccacc aggatcttcc 42780
tcagtcttat catgctggac ctgtcatttt agctacttat tccaaggagc gtggagggca 42840
ggaccagacc aaaggaggca gcccttcctg ggaggaaagg tgctggcttc ttctgtccct 42900
tccgtgacag aagatggaag ggcaggcgta aaagccccat gagacaaaga ggctgatagc 42960
catcagctgt ccaccactca agcctagact gaaggatgtt agagagagga gctcatgcag 43020
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aaaataatta ttgggcaggc aaacaaaagg aagccagttt tatctctcaa ctaattgctc 43440
ttgacccagt tccctaatgc ccttgttctg gagtggttca aaggctatga tgtcaatgac 43500
ctctttctag agtcatcaca gagctgaggc aactctactt cccccaatta cccaatattg 43560
aacaacagac acattttaca tctggagcat gaaaaagcaa tcaaattctt tgtacttatg 43620
atcactagcg ttcttgtctt ctgtgacact ttacccctgc ttatgaaatt gcttcccttt 43680
tataattaca aaggactacc ttactgttga ttgataatta ccttttctgt agttaaaata 43740
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gtgagttaga aaaaaaatta acatagggcc ctataaggag aaagccaact atgttaagtt 44160
tacgtgtcca aattttaatg aaattttact aacaatttta aaccatattt ttcttcttca 44220
tatccatttc taatccatca aacagcttat gtttacataa aattttatca ttcacaagga 44280
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acacccatgt gcctttgatg agtcaggtag caagctgtag tagataatga gaaaggccag 44700
aggctgcaaa agacagtcaa aggacacgag agaaaggaag gggaagaaca ggactccagg 44760
actgttttat attatagaaa agcaagagct aaagagcatt tacacatgtt aaacagatac 44820
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ctactcatac tacacaccca gttatggaat gtccagagtt ctcgaagaaa ataaatgact 45060
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tagtgtttac aaatattaag tactcttgat acaaaatata cttttaaact tcataacctt 45420
tttataaaag ttgttgcagc aaaataatag cctcggttct atgcatatat ggattagcta 45480
taaaaaatgt caataagatt gtacaaggaa aattagagaa agtcacattt agggtttatt 45540
ttttacactt ggccagtaaa atagggtaaa tcctattaga attttttaaa gaactttttt 45600
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<223> antisense oligonucleotide
<400> 84
ccgcaataga ctcagaca 18
<210> 85
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antisense oligonucleotide
<400> 85
acgctcatct tgccgccg 18
<210> 86
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antisense oligonucleotide
<400> 86
catctggcta ctgagagg 18
<210> 87
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antisense oligonucleotide
<400> 87
attagtggtg gcggtagg 18
<210> 88
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antisense oligonucleotide
<400> 88
ggtactgagt atgaagct 18
<210> 89
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antisense oligonucleotide
<400> 89
gtagcagagt ttgtgcat 18
<210> 90
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antisense oligonucleotide
<400> 90
gtagtccgac ataggaga 18
<210> 91
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antisense oligonucleotide
<400> 91
ttggcatgag catgattg 18
<210> 92
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antisense oligonucleotide
<400> 92
gataagcact gccaacag 18
<210> 93
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antisense oligonucleotide
<400> 93
aatggtctct cggttgta 18
<210> 94
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antisense oligonucleotide
<400> 94
ccagtccatg tcaaactc 18
<210> 95
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antisense oligonucleotide
<400> 95
gatttacact agttactc 18
<210> 96
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antisense oligonucleotide
<400> 96
tttaatccag tggtatgt 18
<210> 97
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antisense oligonucleotide
<400> 97
cttagatctg ctagcttg 18
<210> 98
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antisense oligonucleotide
<400> 98
tattagaaac tagacctc 18
<210> 99
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antisense oligonucleotide
<400> 99
atgcagtgct ttgctaga 18
<210> 100
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antisense oligonucleotide
<400> 100
cacaaggcat agagctat 18
<210> 101
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antisense oligonucleotide
<400> 101
gtcagtggtc tgtatgca 18
<210> 102
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antisense oligonucleotide
<400> 102
ttgtaagcat gctggtct 18
<210> 103
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antisense oligonucleotide
<400> 103
gagccattgg tatttaat 18
<210> 104
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antisense oligonucleotide
<400> 104
gataaatgct aattgcct 18
<210> 105
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antisense oligonucleotide
<400> 105
ttgaaccact ccagaaca 18
<210> 106
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antisense oligonucleotide
<400> 106
ggtagtcctt tgtaatta 18
<210> 107
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antisense oligonucleotide
<400> 107
accaatgctt aagagac 17
<210> 108
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antisense oligonucleotide
<400> 108
atcaatatgc ggtgagt 17
<210> 109
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antisense oligonucleotide
<400> 109
ctaggaatca atatgcg 17
<210> 110
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antisense oligonucleotide
<400> 110
tggtaacaaa cgatagc 17
<210> 111
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antisense oligonucleotide
<400> 111
cggtgaacca gatagtg 17
<210> 112
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antisense oligonucleotide
<400> 112
gtgtatccaa cgattcc 17
<210> 113
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antisense oligonucleotide
<400> 113
gcgatgagtt tatccat 17
<210> 114
<211> 17
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> antisense oligonucleotide
<400> 114
accttatata cctcgtc 17
<210> 115
<211> 18
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> negative control
<400> 115
cgtttaggct atgtactt 18
<210> 116
<211> 16
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> control
<400> 116
gcactcgaca cttggt 16
Claims (14)
12 내지 20개의 뉴클레오티드를 포함하는 올리고뉴클레오티드로서, 상기 뉴클레오티드 중 적어도 하나는 변형되고, 상기 올리고뉴클레오티드는 위치 25201 내지 25600, 위치 4401 내지 4800, 위치 44401 내지 44800, 위치 16801 내지 17200, 위치 21201 내지 21600, 위치 801 내지 1200, 위치 19201 내지 19600, 위치 20801 내지 21200, 위치 1 내지 400, 위치 44001 내지 44400, 위치 44801 내지 45200, 위치 401 내지 800, 위치 44401 내지 44800, 위치 2401 내지 2800, 위치 41601 내지 42000, 위치 43601 내지 44000, 위치 45201 내지 45701, 위치 38001 내지 38400, 위치 2801 내지 3200, 위치 40401 내지 40800, 위치 1601 내지 2000, 위치 22001 내지 22400, 위치 42401 내지 42800, 위치 22401 내지 22800, 위치 42801 내지43200, 위치 37601 내지 3800, 위치 39201 내지 39600, 위치 19201 내지 19600, 위치 35201 내지 35600, 위치 40001 내지 40400, 위치 42001 내지 42400, 위치 41201 내지 41600, 위치 2001 내지 2400, 위치 20001 내지 20400, 위치 17201 내지 17600, 위치 38801 내지 39200, 위치 37201 내지 37600, 위치 39601 내지 40000, 위치 24801 내지 25200, 위치 38401 내지 38800, 위치 43201 내지 43600, 위치 36801 내지 37200, 위치 4001 내지 4400, 위치 35601 내지 36000, 위치 36001 내지 36400, 위치 18401 내지 18800, 위치 40801 내지 41200, 위치 4401 내지 4800, 위치 16801 내지 17200, 위치 25201 내지 25600 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 혼성화 활성 영역에서 서열번호 2의 엑토엔자임(CD73) pre-mRNA의 핵산 서열과 혼성화하는 것을 특징으로 하는 올리고뉴클레오티드.
제1항에 있어서, 상기 변형된 뉴클레오티드는 LNA, cET, ENA, 2'플루오로 변형된 뉴클레오티드, 2'O-메틸 변형된 뉴클레오티드 및 이들의 조합과 같은 가교된 핵산으로 이루어진 군으로부터 선택되는 올리고뉴클레오티드.
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오티드는 비처리 대조군과 비교하여 CD73 mRNA의 양 또는 CD73 단백질 발현 수준을 적어도 50% 감소시키는 것인 올리고뉴클레오티드.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오티드는 서열번호 83, 서열번호 71, 서열번호 47, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 112, 서열번호 72, 서열번호 14, 서열번호 46, 서열번호 48, 서열번호 49, 서열번호 24, 서열번호 25 , 서열번호 113, 서열번호 64, 서열번호 55, 서열번호 76, 서열번호 23, 서열번호 59, 서열번호 78, 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 16, 서열번호 17, 서열번호 18, 서열번호19, 서열번호 20, 서열번호 11, 서열번호 50, 서열번호 51, 서열번호 52, 서열번호 53, 서열번호 54, 서열번호 63, 서열번호 14, 서열번호 46 , 서열번호 48, 서열번호 49, 서열번호 57, 서열번호 66, 서열번호 67, 서열번호 108, 서열번호 109, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11, 서열번호 38, 서열번호 39, 서열번호 12, 서열번호 40, 서열번호 41, 서열번호 42, 서열번호 43, 서열번호 106, 서열번호 15, 서열번호 60, 서열번호 90, 서열번호 91, 서열번호 68, 서열번호 69, 서열번호 8, 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 107, 서열번호 79, 서열번호 101, 서열번호 102, 서열번호 80, 서열번호 81, 서열번호 56, 서열번호 62, 서열번호 103, 서열번호 88, 서열번호 89, 서열번호 7, 서열번호 34, 서열번호 94, 서열번호 95, 서열번호 55, 서열번호 76, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29, 서열번호 30, 서열번호 31, 서열번호 61, 서열번호 97, 서열번호 114, 서열번호 99, 서열번호 100, 서열번호 65, 서열번호 58, 서열번호 77, 서열번호 110, 서열번호 73, 서열번호 74, 서열번호 93, 서열번호 33, 서열번호 96, 서열번호 82, 서열번호 92, 서열번호 104, 서열번호 105, 서열번호 86, 서열번호 87, 서열번호 70, 서열번호 84, 서열번호 85, 서열번호 75, 서열번호 98 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 올리고뉴클레오티드.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오티드는 +G*+A*+C*T*C*T*A*G*G*A*T*T*T*A*A*+C*+T*+T(A05126HI, 서열번호 83), +A*+G*+A*A*G*T*G*A*A*T*T*G*C*A*T*+A*+G*+C(A05114HI, 서열번호 71), +G*+A*+T*T*T*G*T*C*A*T*C*C*A*T*G*+A*+G*+C(A05090H, 서열번호 47), +G*+G*+A*A*A*T*T*T*G*G*C*C*T*C*T*+T*+T*+G(A05064H, 서열번호 21), +A*+A*+G*T*G*T*A*T*C*C*A*A*C*G*A*+T*+T*+C(A05065H, 서열번호 22), +G*+T*+G*T*A*T*C*C*A*A*C*G*A*T*+T*+C*+C(A05155H, 서열번호 112), +C*+A*+G*A*G*G*T*A*A*G*C*T*G*G*T*+T*+C*+A(A05115HI, 서열번호 72), +C*+T*+C*G*T*G*T*C*C*T*T*T*G*A*+C*+T*+G(A05057H, 서열번호 14), +G*+G*+A*T*C*T*G*T*C*A*G*C*A*T*T*+A*+G*+C(A05089H, 서열번호 46), +A*+C*+T*C*A*T*C*A*A*A*G*G*C*A*C*+A*+T*+G(A05091H, 서열번호 48), +A*+T*+T*A*T*C*T*A*C*T*A*C*A*G*C*+T*+T*+G(A05092H, 서열번호 49), +T*+T*+T*G*T*T*C*A*C*A*T*T*T*A*G*+A*+G*+T(A05067H, 서열번호 24), +C*+T*+T*T*C*T*G*A*G*C*G*A*T*G*A*+G*+T*+T(A05068H, 서열번호 25), +G*+C*+G*A*T*G*A*G*T*T*T*A*T*C*+C*+A*+T(A05156H, 서열번호 113), +G*+A*+T*C*T*G*G*T*G*T*C*C*A*T*T*+C*+T*+T(A05107HI, 서열번호 64), +C*+G*+A*G*A*G*T*A*T*G*C*T*A*+C*+C*+A(A05098HI, 서열번호 55), +A*+T*+G*T*C*G*A*G*A*G*T*A*T*G*C*+T*+A*+C(A05119H, 서열번호 76), +A*+T*+C*T*A*C*T*T*C*A*G*G*T*T*G*+T*+A*+A(A05066H, 서열번호 23), +T*+G*+G*T*T*G*C*A*A*A*C*T*G*T*+G*+A*+G(A05102H, 서열번호 59), +G*+G*+A*G*G*C*T*T*C*A*G*A*T*A*T*+T*+G*+T(A05121HI, 서열번호 78), +G*+C*+G*A*G*T*G*C*C*G*G*C*G*+A*+G*+T(A05046H, 서열번호 3), +A*+G*+C*T*G*T*G*G*C*G*C*G*T*G*+A*+A*+C(A05047H, 서열번호 4), +G*+C*+T*G*G*C*G*T*T*G*A*C*G*C*+A*+C*+T(A05048H, 서열번호 5), +C*+C*+T*G*G*T*A*C*T*G*G*T*C*G*+C*+C*+G(A05049H, 서열번호 6), +G*+G*+A*C*A*C*A*T*A*G*C*T*G*T*G*+G*+C*+G(A05059H, 서열번호 16), +C*+T*+G*T*G*C*A*C*G*T*C*G*T*T*G*+G*+T*+G(A05060H, 서열번호 17), +T*+G*+G*A*G*T*C*C*T*C*G*C*T*G*G*+T*+C*+T(A05061H, 서열번호 18), +T*+T*+G*A*C*G*C*A*C*T*T*G*C*T*G*+G*+A*+G(A05062H, 서열번호 19), +A*+T*+G*G*C*A*T*C*G*T*A*G*C*G*C*+A*+G*+G(A05063H, 서열번호 20), +C*+T*+T*A*T*A*T*A*C*C*T*C*G*T*+C*+C*+A(A05054H, 서열번호 11), +A*+T*+A*A*C*A*G*C*T*A*A*T*G*C*C*+G*+T*+G(A05093H, 서열번호 50), +G*+C*+T*T*A*T*G*T*T*A*G*A*A*G*G*+T*+T*+C(A05094H, 서열번호 51), +T*+C*+G*A*G*A*A*C*T*C*T*G*G*A*C*+A*+T*+T(A05095H, 서열번호 52), +T*+G*+G*A*G*G*C*A*G*A*G*C*G*A*C*+T*+T*+A(A05096H, 서열번호 53), +G*+G*+C*A*T*A*G*G*T*C*A*T*T*T*C*+A*+T*+C(A05097H, 서열번호 54), +C*+A*+C*A*C*T*C*T*G*C*C*A*T*C*C*+G*+C*+T(A05106HI, 서열번호 63), +C*+T*+C*G*T*G*T*C*C*T*T*T*G*A*+C*+T*+G(A05057H, 서열번호 14), +G*+G*+A*T*C*T*G*T*C*A*G*C*A*T*T*+A*+G*+C(A05089H, 서열번호 46), +A*+C*+T*C*A*T*C*A*A*A*G*G*C*A*C*+A*+T*+G(A05091H, 서열번호 48), +A*+T*+T*A*T*C*T*A*C*T*A*C*A*G*C*+T*+T*+G(A05092H, 서열번호 49), +G*+A*+A*T*C*A*A*T*A*T*G*C*G*G*+T*+G*+A(A05100HI, 서열번호 47), +G*+C*+C*A*T*C*T*A*A*C*C*T*T*G*C*+C*+A*+T(A05109HI, 서열번호 66), +A*+T*+C*A*A*T*A*T*G*C*G*G*T*G*A*+G*+T*+G(A05110HI, 서열번호 67), +A*+T*+C*A*A*T*A*T*G*C*G*G*T*G*+A*+G*+T(A05151HI, 서열번호 108), +C*+T*+A*G*G*A*A*T*C*A*A*T*A*T*+G*+C*+G(A05152HI, 서열번호 109), +T*+C*+A*T*A*C*A*C*C*A*C*A*T*G*+G*+A*+T(A05052H, 서열번호 9), +G*+G*+C*A*C*T*C*G*A*C*A*C*T*T*+G*+G*+T(A05053HM, 서열번호 10), +C*+T*+T*A*T*A*T*A*C*C*T*C*G*T*+C*+C*+A(A05054H, 서열번호 11), +C*+G*+A*C*A*C*T*T*G*G*T*G*C*A*A*+A*+G*+A(A05081H, 서열번호 38), +A*+T*+A*C*C*T*C*G*T*C*C*A*T*T*T*+T*+G*+A(A05082H, 서열번호 39), +G*+T*+A*G*A*A*A*C*C*A*C*G*T*T*+G*+A*+T(A05055H, 서열번호 12), +C*+G*+A*C*C*T*T*C*A*A*C*T*G*C*T*+G*+G*+A(A05083H, 서열번호 40), +A*+A*+C*T*T*G*A*T*C*C*G*A*C*C*T*+T*+C*+A(A05084H, 서열번호 41), +C*+C*+T*G*T*G*G*A*A*A*A*C*T*T*G*+A*+T*+C(A05085H, 서열번호 42), +G*+G*+T*C*C*T*A*A*A*A*G*G*C*A*G*+A*+T*+T(A05086H, 서열번호 43), +G*+G*+T*A*G*T*C*C*T*T*T*G*T*A*A*+T*+T*+A(A05149HI, 서열번호 106), +T*+A*+G*A*A*C*C*G*A*G*G*C*T*A*+T*+T*+A(A05058H, 서열번호 15), +G*+T*+A*G*T*C*C*G*A*C*A*T*A*G*+G*+A*+G(A05103HI, 서열번호 60), +G*+T*+A*G*T*C*C*G*A*C*A*T*A*G*G*+A*+G*+A(A05133HI, 서열번호 90), +T*+T*+G*G*C*A*T*G*A*G*C*A*T*G*A*+T*+T*+G(A05134HI, 서열번호 91), +G*+G*+C*T*C*C*T*T*T*G*A*A*C*T*A*+G*+G*+T(A05111HI, 서열번호 68), +C*+T*+A*G*A*A*A*G*T*G*T*A*C*A*C*+C*+T*+C(A05112HI, 서열번호 69), +C*+A*+C*G*C*T*A*T*G*C*T*C*A*A*+A*+G*+G(A05051H, 서열번호 8), 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+T*+A*+T*T*A*G*A*A*A*C*T*A*G*A*C*+C*+T*+C(A05141HI, 서열번호 98) 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되고, 여기서 +는 LNA 뉴클레오티드를 가리키고, *는 상기 뉴클레오티드 사이의 포스포로티오에이트(PTO) 결합을 가리키는 것인 올리고뉴클레오티드.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오티드는 CD73 mRNA의 양 또는 CD73 단백질 발현 수준을 나노몰 농도로 감소시키는 것을 특징으로 하는 올리고뉴클레오티드.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 올리고뉴클레오티드 및 약제학적으로 허용가능한 담체, 부형제 및/또는 희석제를 포함하는 약제학적 조성물.
제7항에 있어서, 화학요법제(예컨대, 백금(platinum), 젬시타빈(gemcitabine)) 같은 항종양 활성제, 면역 자극제, 질병 특이적 제제 또는 종양- 또는 감염-매개 면역억제를 역전시키는 제제, 다른 올리고뉴클레오티드, 항체, 탄수화물-변형 항체, 펩티드-기반 치료제, 단백질-기반 치료제, 지질, 치료용 백신, HERA 융합 단백질, 리간드 트랩, Fab 단편, 나노바디, BiTe, DARPin, 소분자 또는 이들의 조합을 더 포함하는 것인 약제학적 조성물.
제8항에 있어서, 상기 항종양 활성제, 질병 특이적 제제, 다른 올리고뉴클레오티드, 항체, 탄수화물-변형 항체, 펩티드-기반 치료제, 단백질-기반 치료제, 지질, 치료용 백신, HERA 융합 단백질, 리간드 트랩, Fab 단편, 나노바디, BiTe, DARPin 및/또는 소분자는 IDO1, IDO2, CTLA- 4, PD-1, PD-L1, LAG-3, VISTA, A2AR, CD39, CD73, STAT3, TDO2, TIM-3, TIGIT, TGF-베타, BTLA, MICA, NKG2A, KIR, CD160, MTDH, Xbp1, Chop 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 면역억제인자의 발현 또는 활성을 억제하거나, 또는 4-1BB, Ox40, KIR, GITR, CD27, 2B4 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 면역자극인자의 발현 또는 활성을 자극하는 것인 약제학적 조성물.
제8항 또는 제9항에 있어서, 상기 항종양 활성제, 질병 특이적 제제, 다른 올리고뉴클레오티드, 항체, 탄수화물-변형 항체, 펩티드-기반 치료제, 단백질-기반 치료제, 지질, 치료용 백신, HERA 융합 단백질, 리간드 트랩, Fab 단편, 나노바디, BiTe, DARPin 및/또는 소분자는 SND1, MTDH, HER-2, BRAF, KRAS, VEGF, EGFR1, EGFR2, BCR/ABL, ABL, MET, ALK, JAK2, BTK, miR-223, CCL18, CCL20, Lcn2, CCL5/CCR9, DDR2, PHD2, IL6, SDF-1/CXCL12 및 이들의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된 암 진행 및/또는 전이와 관련된 인자의 발현 또는 활성을 억제하는 것인 약제학적 조성물.
CD73 불균형과 관련된 질환을 예방 및/또는 치료하는 방법에서 사용되기 위한 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 따른 올리고뉴클레오티드 또는 제7항 내지 제10항 중 어느 한 항에 따른 약학적 조성물.
제11항에 있어서, 상기 질환은 자가면역 질환, 면역 질환, 정신 질환 및/또는 암인 것인 사용되기 위한 올리고뉴클레오티드 또는 약제학적 조성물.
제12항에 있어서, 상기 암은 유방암, 폐암, 악성 흑색종(malignant melanoma), 림프종, 피부암, 골암, 전립선암, 간암, 뇌암, 후두(larynx)암, 담낭(gall bladder)암, 췌장(pancreas)암, 고환(testicular)암, 직장(rectum)암, 부갑상선(parathyroid)암, 갑상선(thyroid)암, 부신(adrenal)암, 신경조직(neural tissue)암, 두경부(head and neck)암, 결장(colon)암, 위(stomach)암, 기관지(bronchi)암, 신장암, 기저세포암종(basal cell carcinoma), 편평세포암종(squamous cell carcinoma), 전이성 피부암종(metastatic skin carcinoma), 골육종(osteo sarcoma), 유윙육종(Ewing's sarcoma), 세망세포육종(reticulum cell sarcoma), 지방육종(liposarcoma), 골수종(myeloma), 거대세포종양(giant cell tumor), 소세포폐종양(small-cell lung tumor), 섬세포종양(islet cell tumor), 원발성 뇌종양(primary brain tumor), 수막종(meningioma), 급성 및 만성림프구성(acute and chronic lymphocytic) 및 과립구성(granulocytic) 종양, 급성 및 만성 골수성 백혈병(acute and chronic myeloid leukemia), 모발세포종양(hairy-cell tumor), 선종(adenoma), 과형성(hyperplasia), 수질암종(medullary carcinoma), 장신경절신경종(intestinal ganglioneuromas), 윌름종양(Wilm's tumor), 정상피종(seminoma), 난소종양(ovarian tumor), 평활근종종양(leiomyomater tumor), 자궁경부이형성증(cervical dysplasia), 망막모세포종(retinoblastoma), 연조직육종(soft tissue sarcoma), 악성 카르시노이드(malignant carcinoid), 국소피부병변(topical skin lesion), 횡문근육종(rhabdomyosarcoma), 카포시육종(Kaposi's sarcoma), 골육종(osteogenic sarcoma), 악성 고칼슘혈증(malignant hypercalcemia), 신세포종양(renal cell tumor), 진성 다혈구증(polycythermia vera), 선암종(adenocarcinoma), 역형성 성상세포종(anaplastic astrocytoma), 다형성 교모세포종(glioblastoma multiforme), 백혈병(leukemia) 또는 표피암종(epidermoid carcinoma)인 것인 사용되기 위한 올리고뉴클레오티드 또는 약제학적 조성물.
제11항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 올리고뉴클레오티드 또는 약제학적 조성물이 국소 또는 전신 투여되는 것인 사용되기 위한 올리고뉴클레오티드 또는 약제학적 조성물.
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