KR20220004979A - 조작된 iga 항체 및 사용 방법 - Google Patents

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쟝네트 헨리카 빌헬미나 레우센
요하네스 제라르두스 마리아 에버스
테레링 기어트 얀 반
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유엠씨 우트레크트 홀딩 비.브이.
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Abstract

본원에서는 변형된 IgA 중쇄 불변 영역을 포함하는 조작된 항체, 약제학적 조성물, 및 사용 방법을 제공한다. 본원에 기술된 조작된 항체는 IgA 도메인의 불변 영역 중에 하나 이상의 아미노산 치환 또는 결실을 포함한다. 추가로, 본원에서는 본원에 기술된 조작된 IgA 항체를 투여함으로써, 암을 비롯한 장애를 치료하는 방법을 제공한다.

Description

조작된 IGA 항체 및 사용 방법
상호 참조
본 출원은 2019년 3월 27일에 출원된 미국 가출원 제62/824,864호의 이익을 주장하며, 이는 그 전문이 본원에서 참조로 포함된다.
본 개시내용의 배경
종양 항원을 표적화하는 IgG 이소타입의 단일클론 항체는 다양한 암의 효과적인 치료인 것으로 입증되었다. 수년에 걸쳐 상이한 종양 항원을 표적화하는 점점 더 많은 수의 단일클론 항체가 암 요법에서의 사용에 대해 승인받았다. 그러나, 그의 임상적 효능 및 부작용은 특히 단일요법으로서 여전히 충분하지 않다. 그러므로, 임상 효능이 증가되고/거나 새로운 표적화 방식 또는 작용 모드를 갖고/거나, 부작용 수 및 중증도가 감소된 새로운 항체 요법을 개발하는 것이 관심의 대상이 되고 있다.
본 발명의 요약
본원에서는 항원 결합 도메인; 및 불변 도메인을 포함하는 항체 또는 그의 기능적 단편으로서, 여기서, 불변 도메인은 면역글로불린 A(IgA) 중쇄 불변 영역을 포함하고, 여기서, IgA 중쇄 불변 영역은 IgA CH2 영역 및 IgA CH3 영역을 포함하고, 여기서, IgA 중쇄 불변 영역은 상응하는 야생형(WT: wild type) IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 적어도 2개의 자연적으로 발생된 글리코실화 부위의 변형을 포함하고, 여기서, 적어도 2개의 자연적으로 발생된 글리코실화 부위는 각각 IgA CH2 영역에 또는 IgA CH3 영역에 존재하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편을 제공한다.
일부 실시양태에서, 적어도 2개의 자연적으로 발생된 글리코실화 부위는 2개의 자연적으로 발생된 N 연결된 글리코실화 부위이다. 일부 실시양태에서, 적어도 2개의 자연적으로 발생된 글리코실화 부위 중 하나 이상의 것은 상응하는 야생형 IgA와 비교하여 본원에 개시된 조작된 항체에서 변형되는 자연적으로 발생된 아스파라긴(N) 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형은 적어도 2개의 자연적으로 발생된 글리코실화 부위 중 하나, 또는 그 둘 모두의 아미노산 치환, 또는 아미노산 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 비보존적 아미노산 치환이다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 상응하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 i. N114 및 N135, ii. N114 및 N15.2, 또는 iii. N135 및 N15.2에 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 상응하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 i. N114T 아미노산 치환 및 N135Q 아미노산 치환, ii. N114T 아미노산 치환 및 N15.2G, N15.2Q, 및 N15.2T로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 치환, 또는 iii. N135Q 아미노산 치환 및 N15.2G, N15.2Q, 및 N15.2T로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 상응하는 야생형 IgA와 비교하여 적어도 3개의 자연적으로 발생된 글리코실화 부위의 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 3개의 자연적으로 발생된 글리코실화 부위는 3개의 N 연결된 글리코실화 부위이다. 일부 실시양태에서, 3개의 자연적으로 발생된 글리코실화 부위는 각각 본원에 기술된 항체에서 변형되는 아스파라긴(N) 아미노산 잔기를 포함한다.
일부 실시양태에서, 변형은 아미노산 치환 또는 아미노산 결실이다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 비보존적 치환이다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 N114, N135, 및 N15.2에 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 i. N114T 아미노산 치환, ii. N135Q 아미노산 치환, 및 iii. N15.2G, N15.2Q, 및 N15.2T로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 항체의 IgA 중쇄 불변 영역은 IgA CH1 영역을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄 불변 영역은 상응하는 야생형 IgA와 비교하여 IgA CH2 영역 중 적어도 하나의 자연적으로 발생된 N 연결된 글리코실화 부위, IgA CH3 영역 중 적어도 하나의 자연적으로 발생된 N 연결된 글리코실화 부위, 및 IgA CH1 영역 내의 적어도 하나의 자연적으로 발생된 글리코실화 부위의 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 i. N45.2, N114, 및 N135, 또는 ii. N45.2, N15.2, 및 N135에 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 i. N45.2G 아미노산 치환, N114T 아미노산 치환, 및 N135Q 아미노산 치환; 또는 ii. N45.2G 아미노산 치환, N135Q 아미노산 치환, 및 N15.2G, N15.2Q, 및 N15.2T로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 항체의 중쇄 불변 영역은 상응하는 야생형 IgA와 비교하여 IgA CH2 영역 중 적어도 2개의 자연적으로 발생된 N 연결된 글리코실화 부위, 및 IgA CH1 영역 내 적어도 하나의 자연적으로 발생된 글리코실화 부위의 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, i. N45.2, N114, 및 N15.2G에 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바, IgA 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 i. N45.2G 아미노산 치환, ii. N114T 아미노산 치환, 및 iii. N15.2G, N15.2Q, 및 N15.2T로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 항체 또는 그의 기능적 단편은 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 더 큰 순환 반감기를 나타낸다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 감소된 응집을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 혈청 단백질과의 감소된 응집을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 IgG 중쇄 불변 영역을 포함하는 유사 항체와 비교하여 증가된 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC: antibody dependent cell mediated cytotoxicity)을 유도한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 증가된 열안정성을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 감소된 글리코실화를 나타낸다.
일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 증가된 친화도로 면역 이펙터 세포 상에 발현된 FcαR에의 결합을 나타낸다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 상응하는 야생형 IgA와 비교하여 적어도 4개의 자연적으로 발생된 글리코실화 부위의 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 4개의 자연적으로 발생된 글리코실화 부위는 4개의 자연적으로 발생된 N 연결된 글리코실화 부위이다. 일부 실시양태에서, 적어도 4개의 자연적으로 발생된 글리코실화 부위는 각각 자연적으로 발생된 아스파라긴(N) 아미노산 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄 불변 영역은 상응하는 야생형 IgA와 비교하여 IgA CH2 영역 내의 적어도 2개의 자연적으로 발생된 N 연결된 글리코실화 부위, IgA CH3 영역 내의 적어도 하나의 자연적으로 발생된 N 연결된 글리코실화 부위, 및 IgA CH1 영역 내의 적어도 하나의 자연적으로 발생된 N 연결된 글리코실화 부위의 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 아미노산 잔기: N45.2, N114, N135, 및 N15.2에 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 항체의 IgA 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 아미노산 잔기: N45.2, N114, N135, 및 N15.2에 비보존적 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 i. N45.2G 아미노산 치환, ii. N114T 아미노산 치환, iii. N135Q 아미노산 치환, 및 iv. N15.2G, N15.2Q, 및 N15.2T로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 적어도 하나의 자연적으로 발생된 N 연결된 글리코실화 부위를 포함하는 상응하는 IgA 항체와 비교하여 더 큰 순환 반감기를 나타낸다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 IgG CH2 도메인 및 IgG CH3 도메인을 포함하는 상응하는 유사 항체와 비교하여 증가된 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC)을 유도한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 적어도 하나의 자연적으로 발생된 N 연결된 글리코실화 부위를 포함하는 상응하는 IgA 항체와 비교하여 증가된 열안정성을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 적어도 하나의 자연적으로 발생된 N 연결된 글리코실화 부위를 포함하는 상응하는 IgA 항체와 비교하여 감소된 글리코실화를 나타낸다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 적어도 하나의 자연적으로 발생된 N 연결된 글리코실화 부위를 포함하는 상응하는 IgA 항체와 비교하여 증가된 친화도로 면역 이펙터 세포 상에 발현된 FcαR에의 결합을 나타낸다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 항체의 IgA 중쇄 불변 영역을 상응하는 야생형 IgA와 비교하여 적어도 하나의 자연적으로 발생된 시스테인(C) 아미노산 잔기의 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형은 적어도 하나의 자연적으로 발생된 시스테인(C) 아미노산 잔기의 아미노산 치환 또는 아미노산 결실이다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 적어도 하나의 자연적으로 발생된 시스테인(C) 아미노산 잔기의 비보존적 아미노산 치환이다. 일부 실시양태에서, 적어도 하나의 자연적으로 발생된 시스테인 아미노산 잔기는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 C147 또는 C86이다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 C86S 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 C147의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 상응하는 WT IgA 항체 또는 그의 기능적 단편과 비교하여 감소된 응집을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 상응하는 WT IgA 구성물과 비교하여 혈청 단백질과의 감소된 응집을 나타낸다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 항체의 IgA 중쇄 불변 영역은 상응하는 야생형 IgA와 비교하여 적어도 2개의 자연적으로 발생된 시스테인(C) 아미노산 잔기의 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형은 적어도 2개의 자연적으로 발생된 시스테인(C) 아미노산 잔기 중 하나, 또는 그 둘 모두의 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형은 적어도 2개의 자연적으로 발생된 시스테인(C) 아미노산 잔기 중 하나, 또는 그 둘 모두의 결실을 포함한다.
일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 적어도 2개의 자연적으로 발생된 시스테인(C) 아미노산 잔기 중 하나의 아미노산 치환, 및 적어도 2개의 자연적으로 발생된 시스테인(C) 아미노산 잔기 중 하나의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 2개의 자연적으로 발생된 시스테인 아미노산 잔기는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 C147 및 C86이다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 C147의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 C86의 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 항체의 IgA 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 자연적으로 발생된 C86 아미노산 잔기의 아미노산 치환, 및 자연적으로 발생된 C147 아미노산 잔기의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 C86S 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 감소된 응집을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 혈청 단백질과의 감소된 응집을 나타낸다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 항체의 IgA 중쇄 불변 영역은 상응하는 야생형 IgA와 비교하여 적어도 하나의 자연적으로 발생된 티로신(Y) 아미노산 잔기의 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형은 적어도 하나의 자연적으로 발생된 티로신(Y) 아미노산 잔기의 아미노산 치환 또는 결실이다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 WT IgA 항체와 비교하여 적어도 하나의 자연적으로 발생된 티로신(Y) 아미노산 잔기의 비보존적 아미노산 돌연변이이다. 일부 실시양태에서, 적어도 하나의 티로신 잔기는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 Y148이다. 일부 실시양태에서, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 아미노산 Y148은 결실된다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 감소된 응집을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 혈청 단백질과의 감소된 응집을 나타낸다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 항체의 IgA 중쇄 불변 영역은 상응하는 야생형 IgA 항체와 비교하여 적어도 하나의 자연적으로 발생된 트레오닌(T) 아미노산 잔기의 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형은 상응하는 야생형 IgA 항체와 비교하여 적어도 하나의 자연적으로 발생된 트레오닌(T) 아미노산 잔기의 아미노산 치환 또는 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 적어도 하나의 자연적으로 발생된 트레오닌(T) 아미노산 잔기의 비보존적 아미노산 치환이다. 일부 실시양태에서, 적어도 하나의 자연적으로 발생된 트레오닌 아미노산 잔기는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 T116 또는 T16이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 감소된 응집을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 혈청 단백질과의 감소된 응집을 나타낸다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 상응하는 야생형 IgA와 비교하여 적어도 2개의 자연적으로 발생된 트레오닌(T) 아미노산 잔기의 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형은 적어도 2개의 자연적으로 발생된 트레오닌(T) 아미노산 잔기 중 하나, 또는 그 둘 모두의 아미노산 치환 또는 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 적어도 2개의 자연적으로 발생된 트레오닌(T) 아미노산 잔기 중 하나, 또는 그 둘 모두의 비보존적 아미노산 치환이다. 일부 실시양태에서, 적어도 2개의 자연적으로 발생된 트레오닌(T) 아미노산 잔기는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 T116 또는 T16이다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 T116S 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 T16S 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 항체의 IgA 중쇄 불변 영역은 상응하는 야생형 IgA와 비교하여 적어도 하나의 자연적으로 발생된 이소류신(I) 아미노산 잔기의 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형은 적어도 하나의 자연적으로 발생된 이소류신(I) 아미노산 잔기의 아미노산 치환 또는 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 적어도 하나의 자연적으로 발생된 이소류신(I) 아미노산 잔기의 비보존적 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 하나의 자연적으로 발생된 이소류신(I) 잔기는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 I115이다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 I115L 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 상응하는 야생형 IgA와 비교하여 적어도 하나의 자연적으로 발생된 류신(L) 아미노산 잔기의 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형은 적어도 하나의 자연적으로 발생된 류신(L) 아미노산 잔기의 아미노산 치환 또는 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 적어도 하나의 자연적으로 발생된 류신(L) 아미노산 잔기의 비보존적 아미노산 치환이다. 일부 실시양태에서, 적어도 하나의 자연적으로 발생된 류신(L) 잔기는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 L15.3이다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 L15.3I 아미노산 치환을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 항체의 IgA 중쇄 불변 영역은 상응하는 야생형 IgA와 비교하여 적어도 하나의 자연적으로 발생된 프롤린(P) 아미노산 잔기의 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 적어도 하나의 자연적으로 발생된 프롤린(P) 아미노산 잔기의 아미노산 치환 또는 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, 아미노산 치환은 적어도 하나의 자연적으로 발생된 프롤린(P) 아미노산 잔기의 비보존적 아미노산 치환이다. 일부 실시양태에서, 적어도 하나의 자연적으로 발생된 프롤린(P) 잔기는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 P124이다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 P124R 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 더 큰 안정성을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 중쇄와 경쇄 사이에 더 큰 안정성을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 중쇄와 경쇄 사이에 공유 결합을 갖는다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 중쇄의 시스테인(C) 아미노산 잔기와 경쇄의 시스테인(C) 아미노산 잔기 사이에 이황화 결합을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 서열 번호 16-21 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 항체는 알로타입 IgA2m(1) 항체 또는 IgA2m(2)의 변형된 IgA의 중쇄 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 알로타입 코카시안 IgA2m(1) 항체이다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 상응하는 야생형 IgA와 비교하여 C-말단 IgA 테일 피스의 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형은 C-말단의 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 12, 10, 8, 6, 4, 또는 2개의 아미노산의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형은 C-말단의 18개의 아미노산의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 C-말단 아미노산 잔기 131-148의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 C-말단 아미노산 잔기 P131-Y148의 결실을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 항체의 IgA 중쇄 불변 영역은 IgA1 CH2 영역 및 IgA1 CH3 영역을 포함하는 IgA1 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA1 불변 영역은 IgA1 CH1 영역을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 IgA2 CH2 영역 및 IgA2 CH3 영역을 포함하는 IgA2 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA2 불변 영역은 IgA2 CH1 영역을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 항원 결합 도메인 및 IgG CH2 영역 및 IgG CH3 영역을 포함하는 IgA 중쇄 불변 영역을 포함하는 상응하는 항체의 순환 반감기의 1%, 5%, 10%, 20%, 또는 30% 이내의 순환 반감기를 나타낸다.
본원에서는 항원 결합 도메인; 및 불변 도메인을 포함하는 항체 또는 그의 기능적 단편으로서, 여기서, 불변 도메인은 IgA2 CH1 영역, IgA2 CH2 영역 및 IgA2 CH3 영역을 포함하는 IgA2 중쇄 불변 영역을 포함하고, 여기서, IgA2 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 상응하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 N135Q 아미노산 치환을 포함하는 것인 항체 또는 그의 기능적 단편을 제공한다.
일부 실시양태에서, 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA2 중쇄 불변 영역과 비교하여 N45.2G 아미노산 치환, N114T 아미노산 치환, I115L 아미노산 치환, T116S 아미노산 치환, 및 N15.2G, N15.2Q, 및 N15.2T로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 치환을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA2 중쇄 불변 영역과 비교하여 C86S 아미노산 치환, P124R 아미노산 치환, C147의 결실, Y148의 결실, L15.3I 아미노산 치환, T16S 아미노산 치환, 또는 이들의 조합을 추가로 포함한다.
본원에서는 항원 결합 도메인; 및 불변 도메인을 포함하는 항체 또는 그의 기능적 단편으로서, 여기서, 불변 도메인은 IgA2 CH2 영역 및 IgA2 CH3 영역을 포함하는 IgA2 중쇄 불변 영역을 포함하고, 여기서, IgA2 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 상응하는 WT IgA2 중쇄 불변 영역과 비교하여 C86S 아미노산 치환, N114T 아미노산 치환, I115L 아미노산 치환, T116S 아미노산 치환, 및 N135Q 아미노산 치환을 포함하는 것인 항체 또는 그의 기능적 단편을 제공한다.
본원에서는 항원 결합 도메인; 및 불변 도메인을 포함하는 항체 또는 그의 기능적 단편으로서, 여기서, 불변 도메인은 IgA2 CH1 영역, IgA2 CH2 영역 및 IgA CH3 영역을 포함하는 IgA2 중쇄 불변 영역을 포함하고, 여기서, IgA2 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA2 중쇄 불변 영역과 비교하여 N45.2G 아미노산 치환, C86S 아미노산 치환, N114T 아미노산 치환, I115L 아미노산 치환, T116S 아미노산 치환, N135Q 아미노산 치환, C147의 결실, 및 Y148의 결실을 포함하는 것인 항체 또는 그의 기능적 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, IgA2 중쇄 불변 영역은 서열 번호 16과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본원에서는 항원 결합 도메인; 및 불변 도메인을 포함하는 항체 또는 그의 기능적 단편으로서, 여기서, 불변 도메인은 IgA2 CH1 영역, IgA2 CH2 영역 및 IgA2 CH3 영역을 포함하는 IgA2 중쇄 불변 영역을 포함하고, 여기서, IgA2 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA2 중쇄 불변 영역과 비교하여 N45.2G 아미노산 치환, C86S 아미노산 치환, N114T 아미노산 치환, I115L 아미노산 치환, T116S 아미노산 치환, 및 C-말단 테일 피스의 결실을 포함하는 것인 항체 또는 그의 기능적 단편을 제공한다.
일부 실시양태에서, C-말단 테일 피스의 결실은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 C-말단 아미노산 잔기 P131-Y148의 결실을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 항체의 IgA2 중쇄 불변 영역은 서열 번호 17과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.1%, 99.2%, 99.3%, 99.4%, 99.5%, 99.6, 99.7%, 99.8%, 99.9% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
본원에서는 항원 결합 도메인; 및 불변 도메인을 포함하는 항체 또는 그의 기능적 단편으로서, 여기서, 불변 도메인은 IgA2 CH1 영역, IgA2 CH2 영역 및 IgA2 CH3 영역을 포함하는 IgA2 중쇄 불변 영역을 포함하고; 여기서, IgA2 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA2 중쇄 불변 영역과 비교하여 N45.2G 아미노산 치환, N114T 아미노산 치환, I115L 아미노산 치환, T116S 아미노산 치환, N135Q 아미노산 치환, N15.2G, N15.2Q, 및 N15.2T로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 치환, L15.3I 아미노산 치환, 및 T16S 아미노산 치환을 포함하는 것인 항체 또는 그의 기능적 단편을 제공한다.
본원에서는 항원 결합 도메인; 및 불변 도메인을 포함하는 항체 또는 그의 기능적 단편으로서, 여기서, 불변 도메인은 IgA2 CH1 영역, IgA2 CH2 영역 및 IgA2 CH3 영역을 포함하는 IgA2 중쇄 불변 영역을 포함하고; 여기서, IgA2 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA2 중쇄 불변 영역과 비교하여 N45.2G 아미노산 치환, N114T 아미노산 치환, I115L 아미노산 치환, T116S 아미노산 치환, N15.2G, N15.2Q, 및 N15.2T로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 치환, L15.3I 아미노산 치환, T16S 아미노산 치환, 및 C-말단 아미노산 P131-Y148의 결실을 포함하는 것인 항체 또는 그의 기능적 단편을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 기능적 단편은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA2 중쇄 불변 영역과 비교하여 C86S 아미노산 치환, P124R 아미노산 치환, C147의 결실, Y148의 결실, 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA2 중쇄 불변 영역은 서열 번호 18-21 중 어느 하나로부터 선택되는 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 아글리코실화된 것이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 야생형 아미노산 잔기 N45.2, N114, I115, T116, N15.2, L15.3, T16, 또는 C-말단 아미노산 잔기 P131-Y148 중 하나 이상의 것을 포함하는 상응하는 IgA보다 증가된 순환 반감기를 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 항체 또는 그의 기능적 단편은 IgG 중쇄 불변 도메인을 포함하는 상응하는 항체와 비교하여 증가된 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC)을 유도한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 야생형 아미노산 잔기 N45.2, N114, I115, T116, N15.2, L15.3, T16, 또는 C-말단 아미노산 잔기 P131-Y148 중 하나 이상의 것을 포함하는 상응하는 IgA와 비교하여 증가된 열안정성을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 야생형 아미노산 잔기 N45.2, N114, I115, T116, N15.2, L15.3, T16, 또는 C-말단 아미노산 잔기 P131-Y148 중 하나 이상의 것을 포함하는 상응하는 IgA와 비교하여 감소된 글리코실화를 나타낸다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 야생형 아미노산 잔기 N45.2, N114, I115, T116, N15.2, L15.3, T16, 또는 C-말단 아미노산 잔기 P131-Y148 중 하나 이상의 것을 포함하는 것과 비교하여 증가된 친화도로 면역 이펙터 세포 상에 발현된 FcαR에의 결합을 나타낸다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 힌지 영역을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 힌지 영역은 IgA 힌지 아미노산 서열 또는 그의 변이체 또는 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 힌지 영역은 인간 IgA 힌지 아미노산 서열 또는 그의 변이체 또는 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 힌지는 IgA1 힌지 또는 IgA2 힌지, 또는 그의 변이체 또는 단편이다. 일부 실시양태에서, 불변 도메인은 경쇄 불변 영역을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 경쇄 불변 영역은 카파 경쇄 불변 영역이고, 여기서, 카파 경쇄 불변 영역은 서열 번호 31의 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 하나 이상의 알부민 결합 영역을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 알부민 결합 도메인은 CH3 영역의 C-말단에 융합된다. 일부 실시양태에서, 불변 영역은 경쇄 불변 영역을 포함하고, 하나 이상의 알부민 결합 도메인은 경쇄 불변 영역에 융합된다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 하나 이상의 알부민 결합 도메인을 포함하지 않는 상응하는 IgA 항체와 비교하여 더 큰 순환 반감기를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 적합한 시험관내 보체 의존성 세포독성(CDC: complement-dependent cytotoxicity) 검정법에서 측정되었을 때, IgG 중쇄 불변 도메인을 포함하는 상응하는 항체와 비교하여 감소된 CDC를 나타낸다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 항체 또는 그의 기능적 단편은 적합한 시험관내 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC) 검정법에서 측정되었을 때, 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 증가된 ADCC를 나타낸다. 일부 실시양태에서, 항원 결합 도메인은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 기술된 항체의 중쇄 가변 영역은 상보성 결정 영역(CDR: complementarity determining region): 서열 번호 33-40 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; 서열 번호 41-48 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2; 및 서열 번호 49-56 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3 중 적어도 하나를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 항체의 경쇄 가변 영역은 상보성 결정 영역(CDR): 서열 번호 57-64 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; 서열 번호 65-72 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 서열 번호 73-80 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3 중 적어도 하나를 포함한다.
일부 실시양태에서, 기술된 항체의 중쇄 가변 영역은 서열 번호 4, 7, 81-86 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.1%, 99.2%, 99.3%, 99.4%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9% 또는 100%의 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 서열 번호 5, 8, 95-100 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99.1%, 99.2%, 99.3%, 99.4%, 99.5%, 99.6%, 99.7%, 99.8%, 99.9% 또는 100%의 동일성을 갖는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄 및 경쇄 CDR은 각각 IgG 항체로부터 유래된 것이다. 일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 4개의 프레임워크 영역(FW): HC-FW1, HC-FW2, HC-FW3, 및 HC-FW4를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 4개의 프레임워크 영역(FW): LC-FW1, LC-FW2, LC-FW3, 및 LC-FW4를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 중쇄 및 경쇄 FW 영역은 각각 IgG 항체로부터 유래된 것이다. 일부 실시양태에서, 중쇄 및 경쇄 FW 영역은 각각 IgA 항체로부터 유래된 것이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 항체 또는 그의 기능적 단편은 키메라 항체, 중쇄 항체, 단일 쇄 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 단일클론 항체, 탈면역화된 항체, 이중특이적 항체, 다중특이적 항체, 다가 항체 또는 이들의 조합이다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 항체의 항원 결합 단편은 Fab, Fab', Fab'-SH, Fv, scFv, F(ab')2, 디아바디, 선형 항체, 단일 도메인 항체(sdAb: single domain antibody), VHH 도메인, 또는 항체 단편으로부터 형성되는 다중특이적 항체를 포함한다. 일부 실시양태에서, 가변 도메인은 GD2, CD20, CD47, CD38, CD19, EGFR, HER2, PD-L1, 또는 CD25에 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 효소, 기질, 보조인자, 형광성 마커, 화학발광성 마커, 펩티드 태그, 자기 입자, 약물, 독소, 방사성핵종, 2차 항체에의 결합 부위, 금속 결합 도메인, 또는 이들의 조합을 추가로 포함한다.
본원에서는 상기 측면들 중 어느 하나의 항체 또는 그의 기능적 단편 및 약제학적으로 허용가능한 담체을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
본원에서는 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 용량의, 상기 측면들 중 어느 하나의 항체 또는 그의 기능적 단편, 또는 상기 개시된 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 치료를 필요로 하는 대상체를 치료하는 방법, 또는 상기 대상체를 치료하는 데 사용하기 위한 조성물을 제공한다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편 또는 약제학적 조성물은 표적 세포에 대해 세포용해성이다. 일부 실시양태에서, 표적 세포는 암 세포이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편 또는 약제학적 조성물은 종양 성장을 억제시킨다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편 또는 약제학적 조성물은 피하로, 정맥내로, 피내로, 복강내로, 경구적으로, 근육내로 또는 두개내로 투여된다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편 또는 약제학적 조성물은 대상체에게 제2 치료제와 함께 조합하여 투여된다. 일부 실시양태에서, 제2 치료제는 항암제, 화학요법제, 방사선 요법, 세포독성제, NSAID, 코르티코스테로이드, 식이 보충제, 예컨대, 항산화제, 또는 이들의 조합을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2 치료제는 항체 또는 그의 기능적 단편 또는 약제학적 조성물 투여 이전, 그와 동시에, 또는 그 이후에 투여된다.
본원에서는 상기 측면 중 어느 하나의 항체 또는 그의 기능적 단편을 코딩하는 단리된 핵산을 제공한다.
본원에서는 중쇄 폴리펩티드를 코딩하는 단리된 핵산 분자로서, 단리된 핵산 분자는 IgA 중쇄 불변 영역을 코딩하는 제1 핵산 서열을 포함하고, 여기서, 제1 핵산 서열은 서열 번호 25-32 중 어느 하나로부터 선택되는 것인, 단리된 핵산 분자를 제공한다. 일부 실시양태에서, 상기 측면의 단리된 핵산 분자는 가변 중쇄 영역을 코딩하는 제2 핵산 서열을 추가로 포함하고, 여기서, 제2 핵산 서열은 서열 번호 87-84 중 어느 하나로부터 선택된다.
본원에서는 상기 측면 중 어느 하나의 단리된 핵산 분자를 포함하는 벡터를 제공한다.
본원에서는 상기 측면 중 어느 하나의 단리된 핵산 분자를 포함하는 숙주 세포를 제공한다. 일부 실시양태에서, 상기 측면 중 어느 하나의 숙주 세포는 경쇄 폴리펩티드를 코딩하는 단리된 핵산 분자를 추가로 포함하고, 여기서, 경쇄 폴리펩티드를 코딩하는 단리된 핵산 분자는 가변 경쇄 영역을 코딩하는 핵산 서열을 포함하고, 여기서, 핵산 서열은 서열 번호101-108 중 어느 하나로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 경쇄 폴리펩티드를 코딩하는 단리된 핵산 분자는 카파 경쇄 불변 영역을 코딩하는 핵산 서열을 추가로 포함하고, 여기서, 핵산 서열은 서열 번호 32의 서열을 포함한다.
본원에서는 상기 측면 중 어느 하나의 항체 또는 그의 기능적 단편을 발현하는 숙주 세포를 제공한다. 일부 실시양태에서, 숙주 세포는 박테리아 세포 또는 포유동물 세포이다. 일부 실시양태에서, 숙주 세포는 CHO 세포, 또는 HEK293 세포이다.
본원에서는 (a) 단리된 핵산 분자에 의해 코딩되는 폴리펩티드의 발현, 및 항체 또는 그의 기능적 단편의 어셈블리를 허용하는 조건하에 배지 중에서 상기 측면 중 어느 하나의 숙주 세포를 배양하는 단계; 및 (b) 배양된 숙주 세포, 또는 숙주 세포의 배지로부터 항체 또는 그의 기능적 단편을 정제하는 단계를 포함하는, 항체 또는 그의 기능적 단편을 제조하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 정제 단계는 크기 배제 크로마토그래피에 의해 수행된다.
본원에서는 CD20 폴리펩티드 또는 그의 변이체에 선택적으로 결합하는 항체 또는 그의 기능적 단편으로서,
(a) 서열 번호 16-21 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 것인 IgA 중쇄 불변 영역; 및 (b) 서열 번호 33의 상보성 결정 영역 중쇄 1(HC-CDR1), 서열 번호 41의 HC-CDR2, 및 서열 번호 49의 HC-CDR3 중 적어도 하나를 포함하는 것인 가변 중쇄 영역; (c) 서열 번호 57의 상보성 결정 영역 경쇄 1(LC-CDR1), 서열 번호 65의 LC-CDR2, 및 서열 번호 73의 LC-CDR3 중 적어도 하나를 포함하는 것인 가변 경쇄 영역; 또는 (d) (b)의 가변 중쇄 및 (c)의 가변 경쇄를 포함하는 것인 항체 또는 그의 기능적 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 가변 중쇄는 서열 번호 81의 아미노산 서열과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함하고, 가변 경쇄는 서열 번호 95의 아미노산 서열과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함한다.
본원에서는 GD2 단백질 또는 그의 변이체에 선택적으로 결합하는 항체 또는 그의 기능적 단편으로서, (a) 서열 번호 16-21 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 것인 IgA 중쇄 불변 영역; 및 (b) 서열 번호 34의 상보성 결정 영역 중쇄 1(HC-CDR1), 서열 번호 42의 HC-CDR2, 및 서열 번호 50의 HC-CDR3 중 적어도 하나를 포함하는 것인 가변 중쇄 영역; (c) 서열 번호 58의 상보성 결정 영역 경쇄 1(LC-CDR1), 서열 번호 66의 LC-CDR2, 및 서열 번호 74의 LC-CDR3 중 적어도 하나를 포함하는 것인 가변 경쇄 영역; 또는 (d) (b)의 가변 중쇄 및 (c)의 가변 경쇄를 포함하는 것인 항체 또는 그의 기능적 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 가변 중쇄는 서열 번호 4의 아미노산 서열과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함하고, 가변 경쇄는 서열 번호 5의 아미노산 서열과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함한다.
본원에서는 Her2 단백질 또는 그의 변이체에 선택적으로 결합하는 항체 또는 그의 기능적 단편으로서, (a) 서열 번호 16-21로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 것인 IgA 중쇄 불변 영역; 및 (b) 서열 번호 35의 상보성 결정 영역 중쇄 1(HC-CDR1), 서열 번호 43의 HC-CDR2, 및 서열 번호 51의 HC-CDR3 중 적어도 하나를 포함하는 것인 가변 중쇄 영역; (c) 서열 번호 59의 상보성 결정 영역 경쇄 1(LC-CDR1), 서열 번호 67의 LC-CDR2, 및 서열 번호 75의 LC-CDR3 중 적어도 하나를 포함하는 것인 가변 경쇄 영역; 또는 (d) (b)의 가변 중쇄 및 (c)의 가변 경쇄를 포함하는 것인 항체 또는 그의 기능적 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 가변 중쇄는 서열 번호 82의 아미노산 서열과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함하고, 가변 경쇄는 서열 번호 96의 아미노산 서열과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함한다.
본원에서는 gp75 단백질 또는 그의 변이체에 선택적으로 결합하는 항체 또는 그의 기능적 단편으로서, (a) 서열 번호 16-21로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 것인 IgA 중쇄 불변 영역; 및 (b) 서열 번호 36의 상보성 결정 영역 중쇄 1(HC-CDR1), 서열 번호 44의 HC-CDR2, 및 서열 번호 52의 HC-CDR3 중 적어도 하나를 포함하는 것인 가변 중쇄 영역; (c) 서열 번호 60의 상보성 결정 영역 경쇄 1(LC-CDR1), 서열 번호 68의 LC-CDR2, 및 서열 번호 76의 LC-CDR3 중 적어도 하나를 포함하는 것인 가변 경쇄 영역; 또는 (d) (b)의 가변 중쇄 및 (c)의 가변 경쇄를 포함하는 것인 항체 또는 그의 기능적 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 가변 중쇄는 서열 번호 83의 아미노산 서열과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함하고, 가변 경쇄는 서열 번호 97의 아미노산 서열과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함한다.
본원에서는 CTLA4 단백질 또는 그의 변이체에 선택적으로 결합하는 항체 또는 그의 기능적 단편으로서, (a) 서열 번호 16-21로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 것인 IgA 중쇄 불변 영역; 및 (b) 서열 번호 37의 상보성 결정 영역 중쇄 1(HC-CDR1), 서열 번호 45의 HC-CDR2, 및 서열 번호 53의 HC-CDR3 중 적어도 하나를 포함하는 것인 가변 중쇄 영역; (c) 서열 번호 61의 상보성 결정 영역 경쇄 1(LC-CDR1), 서열 번호 69의 LC-CDR2, 및 서열 번호 77의 LC-CDR3 중 적어도 하나를 포함하는 것인 가변 경쇄 영역; 또는 (d) (b)의 가변 중쇄 및 (c)의 가변 경쇄를 포함하는 것인 항체 또는 그의 기능적 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 가변 중쇄는 서열 번호 84의 아미노산 서열과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함하고, 가변 경쇄는 서열 번호 98의 아미노산 서열과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함한다.
본원에서는 CD47 단백질 또는 그의 변이체에 선택적으로 결합하는 항체 또는 그의 기능적 단편으로서, (a) 서열 번호 16-21로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 것인 IgA 중쇄 불변 영역; 및 (b) 서열 번호 38의 상보성 결정 영역 중쇄 1(HC-CDR1), 서열 번호 46의 HC-CDR2, 및 서열 번호 54의 HC-CDR3 중 적어도 하나를 포함하는 것인 가변 중쇄 영역; (c) 서열 번호 62의 상보성 결정 영역 경쇄 1(LC-CDR1), 서열 번호 70의 LC-CDR2, 및 서열 번호 78의 LC-CDR3 중 적어도 하나를 포함하는 것인 가변 경쇄 영역; 또는 (d) (b)의 가변 중쇄 및 (c)의 가변 경쇄를 포함하는 것인 항체 또는 그의 기능적 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 가변 중쇄는 서열 번호 85의 아미노산 서열과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함하고, 가변 경쇄는 서열 번호 99의 아미노산 서열과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함한다.
본원에서는 항원 결합 도메인; 및 불변 도메인을 포함하는 항체 또는 그의 기능적 단편으로서, 여기서, 불변 도메인은 IgA2 CH1 영역, IgA2 CH2 영역 및 IgA2 CH3 영역을 포함하는 IgA2 중쇄 불변 영역을 포함하고; 여기서, IgA2 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA2 중쇄 불변 영역과 비교하여 N45.2G 아미노산 치환, N135Q 아미노산 치환, C147의 결실, 및 Y148의 결실을 포함하는 것인 항체 또는 그의 기능적 단편을 제공한다.
본원에서는 항원 결합 도메인; 및 불변 도메인을 포함하는 항체 또는 그의 기능적 단편으로서, 여기서, 불변 도메인은 IgA2 CH1 영역, IgA2 CH2 영역 및 IgA2 CH3 영역을 포함하는 IgA2 중쇄 불변 영역을 포함하고; 여기서, IgA2 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 N45.2G 아미노산 치환, N114T 아미노산 치환, I115L 아미노산 치환, T116S 아미노산 치환, N15.2G, N15.2Q, 및 N15.2T로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 치환, 및 C-말단 아미노산 P131-Y148의 결실을 포함하는 것인 항체 또는 그의 기능적 단편을 제공한다.
일부 실시양태에서, 상기 측면의 항체 또는 그의 기능적 단편은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 C86S 아미노산 치환, P124R 아미노산 치환, C147의 결실, Y148의 결실, L15.3I 아미노산 치환, T16S 아미노산 치환 또는 이들의 조합을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA2 중쇄 불변 영역은 서열 번호 18-21 중 어느 하나로부터 선택되는 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 아글리코실화된 것이다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 야생형 아미노산 잔기 N45.2, N114, I115, T116, N15.2, 또는 C-말단 아미노산 잔기 P131-Y148 중 하나 이상의 것을 포함하는 상응하는 IgA보다 증가된 순환된 반감기를 갖는다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 IgG 중쇄 불변 도메인을 포함하는 상응하는 항체와 비교하여 증가된 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC)을 유도한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 야생형 아미노산 잔기 N45.2, N114, I115, T116, N15.2, 또는 C-말단 아미노산 잔기 P131-Y148 중 하나 이상의 것을 포함하는 상응하는 IgA와 비교하여 증가된 열안정성을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 야생형 아미노산 잔기 N45.2, N114, I115, T116, N15.2, 또는 C-말단 아미노산 잔기 P131-Y148 중 하나 이상의 것을 포함하는 상응하는 IgA와 비교하여 감소된 글리코실화를 나타낸다.
참조에 의한 포함
본 명세서에서 언급된 모든 공개문헌들, 특허들 및 특허 출원들은 각각의 개별 공개문헌, 특허 또는 특허 출원이 마치 구체적으로 및 개별적으로 참조로 포함되는 것으로 명시된 것처럼 동일한 정도로 본원에서 참조로 포함된다.
도면의 간단한 설명
본 개시내용의 특징은 특별히 첨부된 청구범위에서 설명된다. 본 개시내용의 특징 및 이점은 본 개시내용의 원리가 이용되는 예시적인 실시양태를 설명하는 하기 상세한 설명 및 첨부 도면을 참조하여 더 잘 이해될 것이다:
도 1은 IgA2 중쇄의 아미노산 서열(유니프로트(UniProt) 참조 번호: A0A0G2JMB2)(서열 번호 1)을 보여주는 도해이다. 강조 표시된 아미노산은 일부 실시양태에서 본원에 기술된 바와 같이 치환되는 아미노산을 나타낸 것이다. 밑줄로 표시된 서열은 테일 피스를 나타내고, 그들은 모두 또는 그 중 일부는 일부 실시양태에서 본원에 기술된 바와 같이 결실될 수 있다.
도 2는 IgA2 중쇄의 아미노산 서열(유니프로트 참조 번호: P01877)(서열 번호 2)을 보여주는 도해이다. 강조 표시된 아미노산은 일부 실시양태에서 본원에 기술된 바와 같이 치환되는 아미노산을 나타낸 것이다. 밑줄로 표시된 서열은 테일 피스를 나타내고, 그들은 모두 또는 그 중 일부는 일부 실시양태에서 본원에 기술된 바와 같이 결실될 수 있다.
도 3은 대표적인 IgA2 중쇄의 아미노산 서열(유니프로트 참조 번호: A0A286YEY5)(서열 번호 3)을 보여주는 도해이다. 강조 표시된 아미노산은 일부 실시양태에서 본원에 기술된 바와 같이 치환 또는 결실되는 아미노산을 나타낸 것이다. 일부 추가 실시양태에서, 상응하는 아미노산은 유사 IgA 항체, 또는 IgA2 불변 영역을 포함하는 유사 키메라 항체에서 결실될 수 있다.
도 4A-4D는 야생형 IgA (IgA2(m1)) 대비의 조작된 IgA 변이체를 나타낸 개략도를 보여주는 것이다. 도 4A는 야생형 (WT) IgA; IgA2m1 항체를 나타낸 도해를 보여주는 것이다. 야생형 (WT) IgA; IgA2m1은 그의 CH 도메인 중 3개의 N-글리코실화 부위 및 그의 테일 피스 중 1개의 글리코실화 부위를 함유한다.
도 4B는 조작된 IgA3.0+ (플러스) 변이체를 나타낸 도해를 보여주는 것이다. 조작된 IgA3.0+ 변이체는 CH1-P124R 돌연변이, 하나는 세린으로 돌연변이화되고(CH2-C86S), 두 번째 것(CH3-CHS-C147del)은 테일 피스의 마지막 두 아미노산 결실에 의해 제거되는 것인 2개의 유리 시스테인의 제거를 통해 안정화된 중쇄 및 경쇄 결합을 함유하도록 IgA2m1 항체를 조작함으로써 생성된다. 추가로, 3개의 N 연결된 글리코실화 부위는 3개의 N-글리코실화 모티프 중의 중요한 아미노산을 치환함으로써 제거되었다. 3개의 N-글리코실화 모티프 중의 돌연변이는 CH1-N45.2G; CH2-N114T-I115L-T116S; CH3-CHS-N135Q를 포함한다.
도 4C는 전체 테일피스의 결실(CH3-CHS-P131-Y148del)을 함유하는 조작된 IgA3.0- 또는 IgA3.0min 변이체를 나타낸 도해를 보여주는 것이다. IgA3.0min 변이체는 안정화된 중쇄 및 경쇄 결합 (CH1-P124R 돌연변이), 전체 테일피스의 결실(CH3-CHS-P131-Y148del)을 함유하고, 하나는 세린으로 돌연변이화되고(CH2-C86S), 두 번째 것(CH3-CHS-C147del)은 테일피스의 결실로 인해 2개의 유리 시스테인이 결여되어 있다. 추가로, 3개의 N 연결된 글리코실화 부위는 2개의 N-글리코실화 모티프 중의 중요한 아미노산을 치환함으로써, 즉, CH1-N45.2G 및 CH2-N114T-I115L-T116S에 의해, 및 테일피스의 결실에 의한 CH3-CHS-N135Qdel의 결실에 의해 제거되었다.
도 4D는 IgA3.0min의 특징들 모두를 함유하고, 마지막 N 연결된 글리코실화 모티프 CH2-N15.2 중 돌연변이를 추가로 함유하는 조작된 IgA4.0 변이체를 나타낸 도해를 보여주는 것이다. 그러므로, IgA4.0 변이체는 안정화된 중쇄 및 경쇄 결합 (CH1-P124R 돌연변이), 전체 테일피스의 결실(CH3-CHS-P131-Y148del)을 함유하고, 하나는 세린으로 돌연변이화되고(CH2-C86S), 두 번째 것(CH3-CHS-C147del)은 테일피스의 결실로 인해 2개의 유리 시스테인이 결여되어 있다. 추가로, 4개의 N 연결된 글리코실화 부위는 4개의 N-글리코실화 모티프 중의 중요한 아미노산을 치환함으로써 제거되었다(CH1-N45.2G; CH2-N114T-I115L-T116S; CH3-CHS-N135Q; 및 CH2-N15.2G; CH2-N15.2Q; ;CH2-N15.2T 중 하나; 또는 CH2-N15.2T-L15.3I-T16S). IgA4.0 변이체는 아글리코실화된 IgA이다.
도 5A 및 5B는 IgA3.0min 항체 변이체의 수율을 나타낸 것이다.
도 5A는 상이한 중쇄(HC):경쇄(LC):p어드벤테이지(pAdvantage) 비로 형질감염된 HEK293F 세포의 상청액에서의 ELISA에 의해 측정된, 항Her2 IgA 항체, 즉, IgA2-Her2의 농도를 보여주는 것이다.
도 5B는 상이한 중쇄(HC):경쇄(LC):p어드벤테이지 비로 형질감염된 HEK293F 세포의 상청액에서의 ELISA에 의해 측정된, 항CD47 IgA3.0min 항체, 즉, 항CD47 가변 도메인을 함유하는 IgA3.0min 항체(IgA3.0min-C47A8-CQ)의 농도를 보여주는 것이다. 가변 도메인은 C47A8-CQ 항체로부터 수득된 것이다.
도 6A-6C는 ELISA에 의해 측정된 바, HEK293F 세포 대 ExpiCHO-S 세포에서의 IgA3.0min 항체 변이체의 항체 수율 비교를 보여주는 것이다.
도 6A는 HEK293F 세포 대 ExpiCHO 세포에서의 항CD20 IgA3.0min-Obi 항체의 생산율 비교를 보여주는 것이다. IgA3.0min-Obi 항체는 오비누투주맙(Obi) 가변 도메인과 함께 IgA3.0min을 함유한다.
도 6B는 HEK293F 세포 대 ExpiCHO 세포에서의 항Her2 IgA3.0min-Her2 항체의 생산율 비교를 보여주는 것이다. IgA3.0min-Her2 항체는 항Her2 가변 도메인과 함께 IgA3.0min을 함유한다.
도 6C는 HEK293F 세포 대 ExpiCHO 세포에서의 항mCTLA4 IgA3.0min-mCTLA4 항체의 생산율 비교를 보여주는 것이다. IgA3.0min-mCTLA4는 항mCTLA4 가변 도메인과 함께 IgA3.0min을 함유한다.
도 7A-7D는 상이한 중쇄(HC):경쇄(LC):p어드벤테이지 비로 형질감염된 ExpiCHO-S 세포에서의 IgA3.0min 항체 변이체의 농도를 나타낸 것이다.
도 7A는 항GD2 IgA3.0min-ch14.18 항체의 농도를 보여주는 것이다. IgA3.0min-ch14.18 항체는 ch14.18 가변 도메인과 함께 IgA3.0min을 함유한다.
도 7B는 항gp75 IgA3.0min-TA99 항체의 농도를 보여주는 것이다. IgA3.0min-TA99 항체는 TA99 가변 도메인과 함께 IgA3.0min을 함유한다.
도 7C는 항Her2 IgA3.0min-Her2 항체의 농도를 보여주는 것이다. IgA3.0min-Her2 항체는 항Her2 가변 도메인과 함께 IgA3.0min을 함유한다(항Her2 가변 도메인은 항Her2 항체 트라스투주맙으로부터 유래되었다).
도 7D는 항CD20 IgA3.0min-Obi 항체의 농도를 보여주는 것이다. IgA3.0min-Obi 항체는 오비누투주맙(Obi) 가변 도메인과 함께 IgA3.0min을 함유한다.
도 8A-8D는 상이한 중쇄(HC):경쇄(LC):p어드벤테이지 비로 형질감염된 ExpiCHO-S 세포에서의 IgA4.0 항체 변이체의 생산율을 보여주는 것이다.
도 8A는 항CD20 IgA4.0_NG-Obi 변이체의 생산을 보여주는 것이다. IgA4.0_NG-Obi 변이체는 글리코실화 부위 중 CH2-N15.2G 돌연변이를 갖는 IgA4.0 및 Obi로부터의 가변 도메인을 함유한다.
도 8B는 항CD20 IgA4.0_NT-Obi 변이체의 생산을 보여주는 것이다. IgA4.0_NT-Obi 변이체는 글리코실화 부위 중 CH2-N15.2T 돌연변이를 갖는 IgA4.0 및 Obi로부터의 가변 도메인을 함유한다.
도 8C는 항CD20 IgA4.0_NQ-Obi 변이체의 생산을 보여주는 것이다. IgA4.0_NQ-Obi 변이체는 글리코실화 부위 중 CH2-N15.2Q 돌연변이를 갖는 IgA4.0 및 Obi로부터의 가변 도메인을 함유한다.
도 8D는 항CD20 IgA4.0_NLT-TIS-Obi 변이체의 생산을 보여주는 것이다. IgA4.0_NLT-TIS-Obi 변이체는 글리코실화 부위 중 N15.2T-L15.3I-T16S 돌연변이를 갖는 IgA4.0 및 Obi로부터의 가변 도메인을 함유한다.
도 9A-9B는 카파셀렉트(KappaSelect) 칼럼(GE Healthcare)을 이용한, 생산 세포주 ExpiCHO-S(도 9A) 및HEK293F(도 9B) 유래의 상청액으로부터의 IgA3.0min-Obi의 용출 프로파일을 보여주는 것이다.
도 9C-9D는 생산 세포주 ExpiCHO-S(도 9C) 및 HEK293F(도 9D) 유래의 IgA3.0min-Obi의 SEC 분리 프로파일을 보여주는 것이고, SEC 분리시 어떤 응집체도 관찰되지 않는다.
도 10A-10B는 카파셀렉트 칼럼(GE Healthcare)을 이용한, 생산 세포주 ExpiCHO-S(도 10A) 및HEK293F(도 10B) 유래의 상청액으로부터의 IgA3.0min-Her2의 용출 프로파일을 보여주는 것이다.
도 10C-10D는 생산 세포주 ExpiCHO-S(도 10C) 및 HEK293F(도 10D) 유래의 IgA3.0min-Her2의 SEC 용출 프로파일을 보여주는 것이고, SEC시 어떤 응집체도 관찰되지 않는다.
도 11A는 카파셀렉트 칼럼(GE Healthcare)을 이용한, 생산 세포주 ExpiCHO-S 유래의 상청액으로부터의 IgA4.0-Obi의 전형적인 용출 프로파일을 보여주는 것이다.
도 11B는 생산 세포주 ExpiCHO-S 유래의 IgA4.0-Obi의 SEC 용출 프로파일을 보여주는 것이고, SEC시 어떤 응집체도 관찰되지 않는다.
도 12A-12E는 유세포 분석법에 의한 CD20 양성 다우디(Daudi) 세포에의 IgA3.0+-Obi 및 IgA3.0min-Obi의 결합을 보여주는 것이다.
도 12A는 비염색 CD20+다우디 세포 대조군을 보여주는 것이다.
도 12B는 2차 항체 음성 대조군 단독으로 염색된 다우디 세포를 보여주는 것이다.
도 12C는 항CD20 IgA Obi(5 ug/mL) 양성 대조군으로 염색된 것을 보여주는 것이다.
도 12D는 IgA3.0+-Obi(상청액)으로 염색된 다우디 세포를 보여주는 것이다. 도 12E는 IgA3.0min-Obi(상청액)으로 염색된 다우디 세포를 보여주는 것이다. 도 12D-12E는 IgA3.0min-Obi 또는 IgA3.0+-Obi로 형질감염된 HEK293F 세포로부터의 상청액으로 염색된 다우디 세포를 보여주는 것이다. 변이체 IgA3.0+-Obi(도 12D) 및 IgA3.0min-Obi(도 12E), 둘 모두 IgA Obi(도 12C)와 동일한 정도로 CD20 양성 다우디에 결합한다.
도 13은 PMN 결합 검정법에 의해 평가된, IgA3.0min-Obi에 의한 Fc 부분의 PMN에의 결합을 보여주는 것이다. PMN을 상이한 농도의 항체로 코팅된 ELISA 플레이트 웰에 첨가하였다. 일련의 세척을 통해 IgA3.0min-Obi 및 IgA2의 Fc 부분의 PMN에의 결합 강도를 측정한다. 6번째 세척 후, 결합을 플롯팅한다. IgA3.0min-Obi는 야생형 IgA2와 비교하여 PMN에 대하여 동일한 결합 내지 더 우수한 결합을 나타낸다.
도 14는 야생형 IgA2와 비교하여 동일한 코팅 농도의 IgA3.0min을 보여주는 것이다.
도 15는 IgA4.0 변이체의 결합 분석을 보여주는 것이다. IgA4.0 변이체; IgA4.0_NT-Obi, IgA4.0_NQ-Obi, IgA4.0_NG-Obi, 및 IgA4.0_NLT-TIS-Obi로 형질감염된 ExpiCHO-S 세포로부터의 상청액을 CD20 발현 SKBR3 세포 상의 결합에 대해 평가하였다. IgA4.0-Obi의 변이체는 모두 IgA3.0min-Obi 또는 정제된 IgA3.0min-Obi로 형질감염된 ExpiCHO-S 세포로부터의 상청액과 동일한 정도로 SKBR3-CD20에 결합한다.
도 16A-16D는 IgA 변이체가 표적 세포에 대한 PMN 매개 ADCC를 유도한다는 것을 보여주는 것이다.
도 16A는 크로미움 방출 검정법에 의해 측정된 바, IgA3.0min-Her2 항체가 SKBR3 세포의 IgA2-Her2와 유사한 정도로 또는 그보다 우수한 정도로 ADCC를 유도한다는 것을 보여주는 것이다.
도 16B-16C는 크로미움 방출 검정법에 의해 측정된 바, HEK293F 세포 또는 ExpiCHO-S 세포에 의해 생산된 IgA3.0min-Obi 항체가 라모스(Ramos) 세포(도 16B) 및 다우디 세포(도 16C)의 ADCC를 유사한 수준으로 유도한다는 것을 보여주는 것이다.
도 16D는 다우디 세포에 대한 IgA 변이체에 의한 ADCC 유도를 보여주는 것이다. 정제된 IgA3.0min-Obi, IgA3.0min-Obi, IgA4.0_NG-Obi, IgA4.0_NQ-Obi, IgA4.0_NT-Obi, 및 IgA4.0_NLT-TIS-Obi로 형질감염된 세포로부터의 상청액은 정제된 IgG1-Obi와 비교하여 증가된 ADCC를 나타낸다. IgA4.0-obi 변이체; IgA4.0_NG-Obi, IgA4.0_NQ-Obi, IgA4.0_NT-Obi, 및 IgA4.0_NLT-TIS-Obi는 정제된 IgA3.0min-Obi, IgA-3.0min-Obi로 형질감염된 세포로부터의 상청액과 비교하여 유사한 수준의 ADCC 유도를 나타낸다.
도 17A-17C는 IgA 변이체의 열안정성을 보여주는 것이다. SYPRO 오렌지(Orange) 열 이동 검정법을 사용하여, IgA3.0min 및 IgA4.0의 열안정성을 측정하였다. 도 17A는 조작된 IgA3.0min 변이체; Obi 가변 도메인을 갖는 IgA3.0min 및 2.3D11 가변 도메인을 갖는 IgA3.0min이 야생형 IgA2(m1), 즉, ch14.18 가변 도메인을 갖는 IgA2, 및 Her2 가변 도메인을 갖는 IgA2와 비교하여 증가된 열안정성을 나타낸다는 것을 입증한다.
도 17A는 또한 조작된 IgA4.0min 변이체; IgA4.0 NQ, IgA4.0 NT, IgA4.0 NLT-TIS, 및 Obi 가변 도메인을 갖는 모든 IgA4.0 NG는 야생형 IgA2(m1), 즉, ch14.18 가변 도메인을 갖는 IgA2, 및 Her2 가변 도메인을 갖는 IgA2와 비교하여 증가된 열안정성을 보였다는 것을 입증한다. 야생형 IgA2(m1) 대비 조작된 IgA3.0min 변이체 및 조작된 IgA4.0 변이체의 증가된 열안정성은 더 높은 온도로의 이동으로 제시된다.
도 17B는 야생형 IgA2(m1) 대비 분석된 조작된 IgA3.0min 변이체 및 조작된 IgA4.0 변이체의 평균 Tm 값의 플롯을 보여주는 것이다. 플롯은 조작된 IgA3.0min 변이체 및 조작된 IgA4.0 변이체가 야생형 IgA2와 비교아혀 더욱 큰 열안정성을 갖는다는 것을 보여준다.
도 17C는 CD20 발현 라지(Raji) 세포에 대한 PMN-ADCC에서 그의 기능성에 대하여 시험된, 온도를 증가시키면서 온도에 농출시킨 항체를 보여주는 것이다. 야생형 IgA2(m1)은 47℃에서부터 계속 점감하는 효능을 보인 반면, IgA3.0min-Obi 및 IgA4.0_NT-Obi, 둘 모두는 계속 효과를 나타낸다. 71℃에서, IgA3.0min-Obi 뿐만 아니라, IgA4.0_NT-Obi, 둘 모두 50% 초과의 사멸 효능을 보이는 반면, IgA2(m1)은 상기 온도에서 기능을 하지 못한다.
도 18은 야생형 IgA2 대비 조작된 IgA3.0min 변이체 및 조작된 IgA4.0 변이체의, PNG아제 F 처리에 의한 탈글리코실화의 효과를 보여주는 것이다. 야생형 IgA2; IgA2(m1)-UMAB10은 가장 큰 이동을 보인 반면, 조작된 IgA3.0min 변이체; IgA3.0min-Obi는 야생형 IgA2와 비교하여 작은 이동을 보였고, 이는 글리코실화 감소를 시사하는 것이다. 조작된 IgA4.0 변이체; IgA4.0_NG-Obi는 조작된 IgA3.0min 변이체 및 야생형 IgA2와 비교하여 어떤 이동도 이루어지지 않았고, 이는 글리코실화 감소를 시사하는 것이다.
도 19A-19G는 MALDI-TOF-MS로 측정된, 야생형 IgA2 및 조작된 IgA 변이체의 전체 글리코실화 프로파일을 보여주는 것이다.
도 19A는 야생형 IgA2; IgA2-Her2를 생산한 HEK293 세포의 전체 글리코실화 프로파일을 보여주는 것이다.
도 19B는 조작된 IgA3.0min 변이체; IgA3.0min-Her2를 생산한 HEK293 세포의 전체 글리코실화 프로파일을 보여주는 것이다. 프로파일은 조작된 IgA3.0min 변이체에 존재하는 단일 글리코실화 부위로부터의 모든 신호를 나타낸다.
도 19C는 HEK293F 및 ExpiCHO-S에서 생산된 조작된 IgA3.0min 변이체; IgA3.0min-Obi의 글리코실화 부위 특이적 분석을 보여주는 것이다. ExpiCHO-S에서 생산된 IgA3.0min-Obi는 더 적은 유리 갈락토스를 나타내며, 이는 간에서의 ASGPR-의존성 제거에 대해 덜 감수성이라는 것을 시사하는 것이다.
도 19D-19G는 4개의 IgA4.0 변이체; IgA4.0_NG-Obi(도 19D), IgA4.0_NQ-Obi(도 19E), IgA4.0_NT-Obi(도 19F), 및 IgA4.0_NLT-TIS-Obi(도 19G)의 원 고유의 MS 분석을 보여주는 것이다. 큰 플롯은 광범위한 질량 범위의 항체를 나타낸 것이고, 인세트는 최고 피크를 확대한 것이다. 단, 예외적으로, 벌키 N-글리칸의 존재를 제외하면, 관측 질량은 질량 이론치와 거의 동일하고, 이는 IgA4.0 변이체에는 글리코실화가 존재하지 않음을 나타내는 것이다.
도 20A-20B는 조작된 IgA 변이체의 약동학적 성질 및 약물분포 분석을 보여주는 것이다. 100 ㎍의 양으로 야생형 IgG1-디누툭시맙, 야생형-IgA2-디누툭시맙 및 IgA3.0min-디누툭시맙, IgA3.0min-오비누투주맙, IgA4.0-오비누투주맙을 BALB/c 마우스에 주사하고, 명시된 시점에 ELISA에 의해 혈액을 분석하였다.
도 20A는 IgA3.0min 변이체; IgA3.0min-디누툭시맙은 그의 야생형 IgA2 카운터파트와 비교하여 연장된 반감기를 나타내었다는 것을 보여주는 것이다.
도 20B는 오비누투주맙 포맷의 IgA3.0min과 IgA4.0 사이의 비교를 보여주는 것이다. 조작된 IgA4.0 변이체; IgA4.0-오비누투주맙은 조작된 IgA3.0min 변이체; IgA3.0min-오비누투주맙보다 더 우수한 반감기 프로파일을 보였다. 오비누투주맙 IgA4.0은 120시간 후에도 여전히 검출될 수 있다.
도 21A-21B는 IgG1 디누툭시맙, 및 조작된 IgA3.0min 변이체, 디누툭시맙으로부터의 가변 도메인을 함유하는 IgA3.0min 디누툭시맙의 생체분포를 보여주는 것이다. 인듐-111 방사성표지된 IgG1 디누툭시맙 및 조작된 IgA3.0min 변이체, IgA3.0min 디누툭시맙을 생체분포 분석을 위해 마우스에 i.v. 주사하였다. 4시간(도 21A) 및 48시간(도 21B) 후 마우스를 모니터링하여 항체 분포를 추적하였다. IgG1 및 조작된 IgA3.0min 변이체, 둘 모두 종양으로 뚜렷이 침윤된 것인 관찰된다.
도 22는 도 21A-21B로부터의 마우스에서의 IgG1 디누툭시맙 및 조작된 IgA3.0min 변이체, IgA3.0min 디누툭시맙 분포의 방사성표지된 분포를 정량화한 것을 보여주는 것이다. 종양 신호 대 간 신호의 비를 측정하여 배경 신호에 대해 조정하였다. 플롯은 조작된 IgA3.0min 변이체, IgA3.0min 디누툭시맙이 IgG1 디누툭시맙과 비교하여 종양/간 비가 증가된 것으로 나타났다는 것을 보여주는 것이다.
도 23은 조작된 IgA3.0min 변이체; IgA3.0min-Her2 투여시 확립된 종양 모델에서의 종양 성장 억제를 보여주는 것이다. A431-Luc2-Her2 세포를 0일째 hCD89 트랜스제닉 또는 비트랜스제닉 SCID 마우스에 복강내로 주사한 후, 6일째 피하로 pegG-CSF 주사하였다. 6일째부터 계속 생체발광 신호를 측정하고, 당일 마우스를 상이한 처리군으로 무작위화하고, 유의적인 신호를 측정하였다. 7일째를 시작으로 10일 동안 매일 10 ug IgA3.0min-Her2를 복강내 주사하여 처리하였다. 명시된 시점에 생체발광 신호를 측정하였다.
본 개시내용의 상세한 설명
하기 설명 및 실시예는 본 개시내용의 실시양태를 상세히 예시한다. 본 개시내용은 본원에 기술된 특정 실시양태들에 제한되지 않고, 그 자체가 변할 수 있음을 이해해야 한다. 당업자는 본 개시내용의 범주 내에 포함되는 그의 다양한 변형 및 수정이 존재함을 인식할 것이다.
모든 용어는 당업자에 의해 이해되는 바와 같이 이해되도록 의도된다. 달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어는 본 개시내용이 속하는 기술 분야의 통상의 기술자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 갖는다.
본원에 사용된 섹션 표제는 단지 조직화 목적만을 위한 것이며, 기술된 주제를 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
본 개시내용의 다양한 특징이 단일 실시양태의 맥락에서 기술될 수 있지만, 특징은 또한 개별적으로 또는 임의의 적절한 조합으로 제공될 수 있다. 반대로, 본 개시내용은 명확성을 위해 별도의 실시양태의 맥락에서 본원에 기술될 수 있지만, 본 개시내용은 또한 단일 실시양태로 구현될 수 있다.
정의
하기 정의는 본 분야의 정의를 보충하고, 본 출원에 대한 것이며, 임의의 관련된 또는 관련되지 않은 사례, 예컨대, 임의의 공동 소유 특허 또는 출원에 귀속되어서는 안 된다. 본원에 기술된 것과 유사하거나, 등가인 임의의 방법 및 물질이 본 개시내용을 시험하기 위한 실시에 사용될 수 있지만, 바람직한 물질 및 방법이 본원에 기술된다. 따라서, 본원에 사용된 용어는 단지 특정 실시양태를 설명하기 위한 것이며 제한하려는 의도가 아니다.
본 출원에서, 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 단수의 사용은 복수를 포함한다. 본 명세서에서 사용되는 바, 단수 형태 "하나"("a," "an") 및 "그"는 문맥상 달리 명확하게 지시하지 않는 한, 복수 지시 대상을 포함한다는 점에 주의해야 한다. 본 출원에서, "또는"의 사용은 달리 언급되지 않는 한 "및/또는"을 의미한다. 추가로, "포함하는(including)"이라는 용어 뿐만 아니라, "포함하다"("include," "includes") 및 "포함하였다"("included")와 같은 다른 형태의 사용은 제한적이지 않다.
본 명세서에서 "일부 실시양태," "한(an) 실시양태," "한(one) 실시양태" 또는 "다른 실시양태"에 대한 언급은 실시양태와 관련하여 설명된 특정 특성, 구조, 또는 특징이 적어도 일부 실시양태에 포함되지만, 본 개시내용의 모든 실시양태에 반드시 포함된다는 것은 아님을 의미한다.
본 명세서 및 청구범위(들)에서 사용되는 바와 같이, 단어 "포함하는(comprising)"(및 포함하는의 임의의 형태, 예컨대 "포함하다"("comprise" 및 "comprises"), "갖는"(및 갖는의 임의의 형태, 예컨대, 가지다("have" 및 "has")), "포함하는"(including)(및 포함하는의 임의의 형태, 예컨대 "포함하다"("includes" 및 "include") 또는 "함유하는"(containing)(함유하는의 임의의 형태, 예컨대 "함유하다"("contains" 및 "contain"))는 포괄적이거나, 개방형이며, 추가의 언급되지 않은 요소 또는 방법 단계를 배제하지 않는다. 본 명세서에서 논의된 임의의 실시양태는 본 개시내용의 임의의 방법 또는 조성물과 관련하여 구현될 수 있고, 그 반대로도 할 수 있음이 고려된다. 추가로, 본 개시내용의 조성물을 사용하여 본 개시내용의 방법을 달성할 수 있다.
용어 "약" 또는 "대략"은 당업계의 숙련가에 의해 결정된 특정 값에 대해 허용가능한 오류 범위 이내를 의미하며, 이는 값이 측정 또는 결정되는 방법, 즉, 측정 시스템의 한계에 부분적으로 의존할 것이다. 예를 들어, "약"은 당업계의 관례에 따라 1 또는 1 초과의 표준 편차 이내를 의미할 수 있다. 대안적으로, "약"은 주어진 값의 최대 20%, 최대 10%, 최대 5%, 또는 최대 1%의 범위를 의미할 수 있다. 또 다른 예에서, 양 "약 10"은 10 및 9 내지 11의 임의의 양을 포함한다.
추가의 또 다른 예에서, 참조 수치 값과 관련하여 용어 "약"은 또한 해당 값에서 플러스 또는 마이너스 10%, 9%, 8%, 7%, 6%, 5%, 4%, 3%, 2%, 또는 1%의 범위를 포함할 수 있다. 대안적으로, 특히 생물학적 시스템 또는 프로세스와 관련하여, 용어 "약"은 값의 10배 이내, 바람직하게는 5배 이내, 및 더욱 바람직하게는 2배 이내를 의미할 수 있다. 특정 값이 출원 및 청구범위에 기술되어 있는 경우, 달리 언급되지 않는 한, 용어 "약"은 특정 값에 대해 허용가능한 오류 범위 내를 의미한다고 가정해야 한다.
본원에서 사용되는 바, 용어 "항체"는 천연 또는 부분적으로 또는 전체적으로 합성에 의해 제조된 면역글로불린(Ig)을 지칭한다. 이 용어는 또한 항원 결합 도메인이거나, 그와 상동성인 결합 도메인을 갖는 임의의 폴리펩티드 또는 단백질을 포함한다. 상기 용어는 "항원 결합 단편" 또는 "그의 기능적 단편," 또는 "항체의 단편," "항체 단편," "항체의 기능적 단편" 및 하기 기술된 바와 같은 유사한 결합 단편에 대한 다른 상호교환가능한 용어를 추가로 포함한다.
항체는 예를 들어, 단일클론 항체, 키메라 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 재조합 항체, 화학적으로 조작된 항체, 탈면역화된 항체, 친화성 성숙 항체, 다중특이적 항체(예를 들어, 이중특이적 항체 및 다중반응성 항체), 이종접합체 항체, 항체 단편, 및 이들의 조합(예컨대, 또한 탈면역화된 단일클론 항체, 또한 탈면역화된 인간화 항체 등)을 포함한다.
항체는 예를 들어, 뮤린, 키메라, 인간화, 이종접합체, 이중특이적, 디아바디, 트리아바디, 또는 테트라바디일 수 있다. 항원 결합 단편은 예를 들어, Fab', F(ab')2, Fab, Fv, rlgG, scFv, hcAb(중쇄 항체), 단일 도메인 항체, VHH, VNAR, sdAb, 또는 나노바디를 포함할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "단일클론 항체"는 B 세포의 단일 클론에 의해 생산되고, 동일한 에피토프에 결합하는 항체를 지칭한다. 대조적으로, "다중클론 항체"는 상이한 B 세포에 의해 생산되고, 동일한 항원의 상이한 에피토프에 결합하는 항체 집단을 지칭한다. 전체 항체는 전형적으로 4개의 폴리펩티드: 2개의 동일한 카피의 중쇄(H) 폴리펩티드 및 2개의 동일한 카피의 경쇄(L) 폴리펩티드로 구성된다. 각각의 중쇄는 하나의 N-말단 가변(VH) 영역과 3개의 C-말단 불변(CH1, CH2 및 CH3) 영역을 포함하고, 각 경쇄는 하나의 N-말단 가변(VL) 영역과 하나의 C-말단 불변(CL) 영역을 포함한다. 경쇄 및 중쇄의 각 쌍의 가변 영역은 항체의 항원 결합 부위를 형성한다. VH 및 VL 영역은 유사한 일반 구조를 가지며, 각 영역은 서열이 비교적 보존되는 4개의 프레임워크 영역을 포함한다. 프레임워크 영역은 3개의 상보성 결정 영역(CDR)에 의해 연결된다. CDR1, CDR2 및 CDR3으로 알려진 3개의 CDR은 항원 결합을 담당하는 항체의 "초가변 영역"을 형성한다.
본원에서 사용되는 바, "키메라 항체"는 2개의 상이한 종 또는 2개의 상이한 공급원으로부터 유래된 아미노산 서열을 포함하고 합성 분자를 포함하는 항체이다. 비제한적인 예로서, 비인간 CDR 및 인간 가변 영역 프레임워크 또는 불변 또는 Fc 영역을 포함하는 항체, 2개의 상이한 단일클론 항체로부터의 결합 도메인을 갖는 항체, 또는 항체의 생물학적 활성 또는 항체 일부의 결합을 증가 또는 감소시키는 하나 이상의 아미노산 잔기의 돌연변이를 포함하는 항체. 특정 실시양태에서, 재조합 항체는 재조합 DNA 분자로부터 생산되거나, 합성된다. 특정 실시양태에서, 본원에 기술된 항체는 하나 이상의 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 폴리펩티드(들)이다.
본원에서 사용되는 바, "인식하다"라는 것은 항원 결합 도메인과 항원 사이의 회합 또는 결합을 지칭한다. 본원에서 사용되는 바, "항원"은 숙주에서 면역 반응을 유발할 수 있는 항원 물질을 지칭한다. 항원성 물질은 숙주에서 면역 반응을 유발할 수 있는 공동자극 분자와 같은 분자일 수 있다.
본원에서 사용되는 바, "항체 구성물"은 항원 결합 도메인 및 Fc 도메인을 함유하는 구성물을 지칭한다.
본원에서 사용되는 바, "결합 도메인"은 항체 또는 비항체 도메인을 지칭한다.
본원에서 사용되는 바, "항원 결합 도메인"은 항원에 결합할 수 있는 항체 또는 비항체로부터의 결합 도메인을 지칭한다. 항원 결합 도메인은 종양 항원 결합 도메인 또는 항원 제시 세포 상의 항원(예컨대, 분자)에 결합할 수 있는 결합 도메인일 수 있다. 항원 결합 도메인은 주어진 접합체 또는 항체 구성물에 1 초과의 항원 결합 도메인이 있는 경우에 넘버링될 수 있다(예컨대, 제1 항원 결합 도메인, 제2 항원 결합 도메인, 제3 항원 결합 도메인 등). 동일한 접합체 또는 구성물에서 상이한 항원 결합 도메인은 동일한 항원 또는 상이한 항원을 표적화할 수 있다(예컨대, 종양 항원에 결합할 수 있는 제1 항원 결합 도메인, 항원 제시 세포 상의 분자(APC 항원)에 결합할 수 있는 제2 항원 결합 도메인, 및 APC 항원에 결합할 수 있는 제3 항원 결합 도메인). 용어 "항원 결합 도메인"은 에피토프에 특이적으로 결합하는 영역을 포함하고, 항원의 일부 또는 전체에 상보적인 항체의 단편을 지칭한다. 항원 결합 도메인은 예를 들어, 하나 이상의 항체 가변 도메인(항체 가변 영역으로도 불림)에 의해 제공될 수 있다. 특히, 항원 결합 도메인은 항체 경쇄 가변 영역(VL) 및 항체 중쇄 가변 영역(VH)을 포함한다.
본원에서 사용되는 바, 용어 "항원"은 항체 상의 인식 부위와 반응할 수 있는 분자 또는 분자의 일부를 의미한다. 용어 "항원"은 또한 그 자체로 또는 애주번트 또는 캐리어와 함께 면역 반응을 유발할 수 있는 분자 또는 분자의 일부("면역원"으로도 불림)를 포함한다. 본원에 사용된 용어 "항원"은 항체의 생산을 유도할 수 있거나, 항체에 결합할 수 있는 분자 또는 분자의 부분(에피토프)을 포함한다. 상기 용어는 강하게 및 높은 특이도로 반응하는 물질을 포함하며, 이는 또한 항체에 대해 약하게 및/또는 낮은 친화도로 반응하는 물질도 포함한다.
본원에 사용된 용어 "에피토프"는 파라토프로 알려진 항체 분자의 가변 영역에서 특정 항원 결합 부위와 상호작용하는 항원 결정기를 지칭한다. 단일 항원은 1 초과의 에피토프를 가질 수 있다. 따라서, 상기한 항체는 항원의 다른 영역에 결합할 수 있고, 다른 생물학적 효과를 가질 수 있다. 에피토프는 입체형태이거나, 선형일 수 있다. 입체형태 에피토프는 선형 폴리펩티드 쇄의 다른 절편에서 공간적으로 병치된 아미노산에 의해 생성된다. 선형 에피토프는 폴리펩티드 쇄의 인접한 아미노산 잔기에 의해 생성되는 에피토프이다. 특정 상황에서, 에피토프는 항원 상의 당류, 포스포릴 기 또는 술포닐 기의 모이어티를 포함할 수 있다. 당업자에게 공지된 다양한 기술을 사용하여 항체의 항원 결합 도메인이 폴리펩티드 또는 단백질 내에서 "하나 이상의 아미노산과 상호작용"하는지 여부를 측정할 수 있다. 예시적인 기술로는 예컨대, 통상의 교차 차단 검정법, 예컨대, 문헌 [Antibodies, Harlow and Lane (Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harb., NY)]에 기술되어 있는 것, 알라닌 스캐닝 돌연변이 분석, 펩티드 블롯 분석(문헌 [Reineke, 2004, Methods Mol Biol]) 및 펩티드 절단 분석을 포함한다. 추가로, 예컨대, 에피토프 절제, 에피토프 추출 및 항원의 화학적 변형과 같은 방법이 사용될 수 있다(문헌 [Tomer, 2000, Protein Science 9:487-496]). 항체의 항원 결합 도메인이 상호작용하는 폴리펩티드 내의 아미노산을 확인하는 데 사용될 수 있는 또 다른 방법은 질량 분광법에 의해 검출되는 수소/중수소 교환이다. 일반적으로 말하면, 수소/중수소 교환 방법은 관심 단백질을 중수소로 표지한 후, 항체가 중수소로 표지된 단백질에 결합하는 것이다. 이어서, 단백질/항체 복합체는 (중수소로 표지된 상태로 남아 있는) 항체에 의해 보호된 잔기를 제외한 모든 잔기에서 수소-중수소 교환이 일어나도록 물로 전달된다. 항체 해리 후, 표적 단백질에 대해 프로테아제 절단 및 질량 분광법 분석이 수행되고, 이로써, 항체가 상호작용하는 특정 아미노산에 상응하는 중수소 표지된 잔기가 밝혀진다. 예컨대, 문헌 [Ehring (1999) Analytical Biochemistry 267(2):252-259]; [Engen and Smith (2001) Anal. Chem. 73:256A-265A]를 참조한다. 항원/항체 복합체의 X선 결정학은 에피토프 매핑 목적으로도 사용될 수 있다.
본원에서 사용되는 바, "항체 항원 결합 도메인"은 항원에 결합할 수 있는 항체로부터의 결합 도메인을 지칭한다.
본원에서 사용되는 바, "Fc 도메인"은 Fc 수용체에 결합할 수 있는 항체 또는 비항체로부터의 Fc 도메인을 지칭한다. 본원에서 사용되는 바, "Fc 도메인" 및 "Fc 포함 도메인"은 상호교환적으로 사용될 수 있다.
본원에서 사용되는 바, "표적 결합 도메인"은 항원에 결합할 수 있는 항체 또는 비항체로부터의 항원 결합 도메인을 함유하는 구성물을 지칭한다.
본원에서 사용되는 바, 천연 1-거울상이성질체 아미노산에 대한 약어는 통상적이고, 하기와 같을 수 있다: 알라닌(A, Ala); 아르기닌(R, Arg); 아스파라긴(N, Asn); 아스파르트산(D, Asp); 시스테인(C, Cys); 글루탐산(E, Glu); 글루타민(Q, Gin); 글리신(G, Gly); 히스티딘(H, His); 이소류신(I, Ile); 류신(L, Leu); 리신(K, Lys); 메티오닌(M, Met); 페닐알라닌(F, Phe); 프롤린(P, Pro); 세린(S, Ser); 트레오닌(T, Thr); 트립토판(W, Trp); 티로신(Y, Tyr); 발린(V, Val). 달리 명시되지 않는 한, X는 임의의 아미노산을 나타낼 수 있다. 일부 측면에서, X는 아스파라긴(N), 글루타민(Q), 히스티딘(H), 리신(K), 또는 아르기닌(R)일 수 있다.
"약제학적으로 허용가능한"이라는 어구는 본원에서 합리적인 유익/유해 비에 상응하여, 과도한 독성, 자극, 알레르기 반응, 또는 다른 문제나 합병증 없이, 타당 의학적 판단의 범위내에서 인간 및 동물의 조직과 접촉하여 사용하기에 적합한 화합물, 물질, 조성물, 및/또는 제형을 지칭하기 위해 사용된다.
본원에서 사용되는 바, "약제학적으로 허용가능한 부형제" 또는 "약제학적으로 허용가능한 담체"라는 어구는 예컨대, 액체 또는 고체 충전제, 희석제, 부형제, 용매 또는 캡슐화 물질과 같은 약제학적으로 허용가능한 물질, 조성물 또는 비히클을 의미한다. 각 담체는 제제의 다른 성분과 양립할 수 있고, 환자에게 해를 끼치지 않는다는 의미에서 "허용가능"하여야 한다. 약제학적으로 허용가능한 담체로서 작용할 수 있는 물질의 일부 예는 하기를 포함한다: (1) 당, 예컨대, 락토스, 글루코스 및 수크로스; (2) 전분, 예컨대, 옥수수 전분 및 감자 전분; (3) 셀룰로스 및 그의 유도체, 예컨대, 소듐 카복시메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스 및 셀룰로스 아세테이트; (4) 분말 트라가칸트; (5) 맥아; (6) 젤라틴; (7) 활석; (8) 부형제, 예컨대, 코코아 버터 및 좌제 왁스; (9) 오일, 예컨대, 땅콩유, 면실유, 홍화유, 참깨유, 올리브유, 옥수수유 및 대두유; (10) 글리콜, 예컨대, 프로필렌 글리콜; (11) 폴리올, 예컨대, 글리세린, 소르비톨, 만닛톨 및 폴리에틸렌 글리콜; (12) 에스테르, 예컨대, 에틸 올레이트 및 에틸 라우레이트; (13) 아가; (14) 완충화제, 예컨대, 수산화마그네슘 및 수산화알루미늄; (15) 알긴산; (16) 발열원 무함유수; (17) 등장성 염수; (18) 링거액; (19) 에틸 알콜; (20) 포스페이트 완충제 용액; 및 (21) 약제학적 제제에 사용되는 다른 비독성 화합성 물질.
용어 "암," "종양," "증식성 질환," "악성 종양," 또는 "악성 질환"은 탈조절된 세포 성장을 특징으로 하는 포유동물의 생리학적 병태에 관한 것이다. 암은 세포 군이 제어되지 않은 성장 또는 원치않는 성장을 나타내는 질환의 한 부류이다. 암 세포는 또한 다른 위치로 퍼져 전이 형성을 일으킬 수 있다. 예를 들어, 체내 암 세포의 확산은 림프나 혈액을 통해 발생할 수 있다. 제어되지 않은 성장, 침입 및 전이 형성은 또한 암의 악성 특성이라고도 한다. 이러한 악성 특성을 통해 암은 전형적으로 침입하거나, 전이되지 않는 양성 종양과 구별된다.
"항원 인식 모이어티" 또는 "항체 인식 도메인"은 항원에 특이적으로 결합하는 분자 또는 분자의 일부를 지칭한다. 한 실시양태에서, 항원 인식 모이어티는 항체, 항체 유사 분자 또는 그의 단편이고, 항원은 종양 항원 또는 감염성 질환 항원이다.
용어 "항체의 단편," "항체 단편," "항체의 기능적 단편," "항원 결합부" 또는 그의 문법적 상당어구는 본원에서 상호교환적으로 사용되어 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 항체의 하나 이상의 단편 또는 일부를 의미한다(일반적으로, 문헌 [Holliger et al., Nat. Biotech., 23(9):1126-1129 (2005)] 참조). 항체 단편은 바람직하게는, 예를 들어, 하나 이상의 CDR, 가변 영역(또는 그의 일부), 불변 영역(또는 그의 일부), 또는 이들의 조합을 포함한다. 항체 단편의 예로는 (i) VL, VH, CL, 및 CH1 도메인으로 이루어진 1가 단편인 Fab 단편; (ii) 스토크 영역에서 이황화 브릿지에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (iii) 항체의 단일 아암의 VL 및 VH 도메인으로 이루어진 Fv 단편; (iv) 2개의 도메인의 Fv 단편(즉, VL 및 VH)으로 이루어진 1가 분자로, 2개의 도메인이 단일 폴리펩티드 쇄로서 합성될 수 있도록 하는 합성 링커에 의해 연결된 단일 쇄 Fv(scFv: single chain Fv)(예컨대, 문헌 [Bird et al., Science, 242: 423-426 (1988)]; [Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 85: 5879-5883 (1988)]; 및 [Osbourn et al., Nat. Biotechnol., 16: 778 (1998)] 참조) 및 (v) 폴리펩티드 쇄의 이량체로서, 여기서, 각 폴리펩티드 쇄는 동일한 폴리펩티드 쇄 상의 VH와 VL 사이의 쌍형성을 허용하기에는 너무 짧은 펩티드 링커에 의해 VL에 연결된 VH를 포함함으로써 상이한 VH-VL 폴리펩티드 쇄 상의 상보성 도메인 사이의 쌍형성을 유도하여 2개의 기능적 항원 결합 부위를 갖는 이량체 분자를 생성하는 디아바디를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 항체 단편은 당업계에 공지되어 있으며, 예컨대, 미국 특허 제8,603,950호에 더 상세하게 기술되어 있다. 다른 항체 단편은 중쇄 항체의 가변 단편(VHH)을 포함할 수 있다.
용어 "보존적 아미노산 치환" 또는 "보존적 돌연변이"는 하나의 아미노산을 공통 특성을 갖는 또 다른 아미노산으로 대체하는 것을 지칭한다. 개별 아미노산 사이의 공통 특성을 정의하는 기능적 방법은 상동 유기체의 해당 단백질 사이에서 아미노산 변이의 정규화된 빈도를 분석하는 것이다(문헌 [Schulz, G. E. and Schirmer, R. H., Principles of Protein Structure, Springer-Verlag, New York (1979)]). 상기 분석에 따르면, 그룹 내의 아미노산이 서로 우선적으로 교환되어서 전체 단백질 구조에 미치는 영향에 있어 서로 가장 유사한 아미노산 그룹이 정의될 수 있다(문헌 [Schulz, G. E. and Schirmer, R. H., 상기 문헌 동일]). 보존적 돌연변이의 예는 상기 하위 그룹 내 아미노산의 아미노산 치환, 예를 들어, 양전하가 유지될 수 있도록 아르기닌을 리신으로, 및 그 반대; 음전하가 유지될 수 있도록 아스파르트산을 글루탐산으로, 및 그 반대; 유리 -OH가 유지될 수 있도록 트레오닌을 세린으로; 및 유리 -NH2가 유지될 수 있도록 아스파라긴을 글루타민으로의 아미노산 치환을 포함한다. 대안적으로 또는 추가로, 치료 IgA 항체는 적어도 하나의 비보존적 아미노산 치환을 갖는 참조 단백질의 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
용어 "비보존적 돌연변이" 또는 "비보존적 아미노산 치환"은 상이한 그룹 사이의 아미노산 치환, 예를 들어, 트립토판을 리신으로, 또는 세린을 페닐알라닌 등으로의 아미노산 치환을 포함한다. 이 경우에, 비보존적 아미노산 치환은 치료 IgA 항체의 생물학적 활성을 방해하거나, 억제하지 않는 것이 바람직하다. 비보존적 아미노산 치환은 치료 IgA 항체의 생물학적 활성이 야생형 치료 IgA 항체에 비해 증가하도록 치료 IgA 항체의 생물학적 활성을 증진시킬 수 있다.
본원에서 사용되는 바, "인간화" 항체는 비인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 특이적 키메라 면역글로불린, 면역글로불린 쇄 또는 그의 단편(예컨대, 항체의 Fv, Fab, Fab', F(ab')2 또는 다른 항원 결합 부분서열)인 비인간(예컨대 뮤린) 항체 형태를 지칭한다. 대부분의 경우, 인간화 항체는 수용자로부터의 상보적 결정 영역(CDR)의 잔기가 예컨대, 원하는 특이성, 친화성 및 용량을 갖는 마우스, 래트, 또는 토끼와 같은 비인간 종의 CDR(공여자 항체)로부터의 잔기에 의해 대체된 인간 면역글로불린(수용자 항체)이다. 일부 예에서, 인간 면역글로불린의 Fv 프레임워크 영역(FR: framework region) 잔기는 상응하는 비인간 잔기로 대체된다. 추가로, 인간화 항체는 수용자 항체에서도, 유입된 CDR 또는 프레임워크 서열에서도 발견되지 않지만, 항체 성능을 추가로 정제하고ㅡ 최적화하기 위해 포함되는 잔기를 포함할 수 있다. 일반적으로, 인간화 항체는 적어도 하나, 및 전형적으로 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이며, 여기서, 모든 또는 실질적으로 모든 CDR 영역은 비인간 면역글로불린의 CDR 영역에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR 영역은 인간 면역글로불린 컨센서스 서열의 것이다. 인간화 항체는 또한 최적으로 면역글로불린 불변 영역 또는 도메인(Fc)의 적어도 일부, 전형적으로 인간 면역글로불린의 적어도 일부를 포함할 것이다. 다른 형태의 인간화 항체는 원래 항체와 관련하여 변경된 하나 이상의 CDR(1, 2, 3, 4, 5, 6개)을 가지며, 이는 또한 원래 항체로부터의 하나 이상의 CDR"로부터 유래된" 하나 이상의 CDR로 지칭된다.
본원에서 사용되는 바, "단리된 항체"는 그의 자연 환경의 구성요소로부터 분리 및/또는 회수된 것이다. 그의 자연 환경의 오염 성분은 항체의 진단 또는 치료 용도를 방해하는 물질이며, 효소, 호르몬 및 다른 단백질성 또는 비단백질성 성분을 포함할 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 항체는 (1) 로우리(Lowry) 방법에 의해 측정된 바, 항체의 95중량% 초과, 가장 바람직하게는 99중량% 초과로; (2) 스피닝 컵 시쿼네이터를 사용하여 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개 잔기를 수득하기에 충분한 정도로; 또는 (3) 환원 또는 비환원 조건하에 및 쿠마시 블루 또는 바람직하게는 은 염색을 사용하여 SDS-PAGE에 의해 제시되는 바와 같은 균질성으로 정제된다. 단리된 항체는 항체의 자연 환경의 적어도 하나의 성분이 존재하지 않을 것이기 때문에, 재조합 세포내 동소의 항체를 포함한다. 그러나, 일반적으로, 단리된 항체는 적어도 하나의 정제 단계에 의해 제조될 것이다.
"실질적으로 정제된"이란, 항체 또는 그의 기능적 단편이 그의 유래 기점이 되는 세포 또는 조직 공급원으로부터의 세포 물질 또는 다른 오염 단백질이 실질적으로 없거나, 또는 화학적으로 합성된 경우에는, 화학적 전구체 또는 다른 화학물질이 실질적으로 없다는 것을 의미한다. 상기 표현은 항체의 단리 기점 또는 재조합적 생산 기점이 되는 세포의 세포 성분으로부터 분리된 항체 제제를 포함한다. 따라서, 세포 물질이 실질적으로 없는 항체는 약 30(건중량)%, 20(건중량)%, 10(건중량)% 또는 5(건중량)% 미만의 오염 단백질 및 배양 배지를 갖는 제제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 크로마토그래피, 예를 들어, 크기 배제 크로마토그래피 또는 이온 교환 크로마토그래피에 의해 정제될 수 있다.
본원에서 사용되는 바, 용어 "상보성 결정 영역"(CDR, 즉, CDR1, CDR2, 및 CDR3)은 그의 존재가 항원 결합에 필요한 항체 가변 도메인의 아미노산 잔기를 지칭한다. 각각의 가변 도메인은 전형적으로 CDR1, CDR2 및 CDR3으로 확인된 3개의 CDR 영역을 갖는다. 가변 중쇄의 CDR은 CDR-H1, CDR-H2 및 CDR-H3일 수 있다. 가변 경쇄의 CDR은 CDR-L1, CDR-L2 및 CDR-L3일 수 있다. 예시적인 초가변 루프는 아미노산 잔기 26-32(L1), 50-52(L2), 91-96(L3), 26-32(H1), 53-55(H2), 및 96-101(H3)에 존재한다(문헌 [Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)]). 예시적인 CDR(CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3)은 L1의 아미노산 잔기 24-34, L2의 50-56, L3의 89-97, H1의 31-35B, H2의 50-65, 및 H3의 95-102에 존재한다(문헌 [Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th ed. (1991)]). 따라서, HV는 상응하는 CDR 내에 포함될 수 있고, 본원에서 VH 및 VL 도메인의 "초가변 루프"로 언급되는 것은 달리 명시되지 않는 한, 상응하는 CDR을 포함하는 것으로 해석되어야 하고, 그 반대도 마찬가지이다. 가변 도메인의 더 고도로 보존된 영역은 하기 정의된 바와 같이 프레임워크 영역(FR)으로 명명된다. 천연 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각 4개의 FR(각각 FR1, FR2, FR3 및 FR4)을 포함하며, 주로 3개의 초가변 루프에 의해 연결된 β-시트 구성을 채택한다. 각 쇄의 초가변 루프는 FR에 의해 밀접하게 함께 유지되고, 다른 쇄의 초가변 루프와 함께 항체의 항원 결합 부위 형성에 기여한다. 항체의 구조 분석은 서열과 상보성 결정 영역에 의해 형성되는 결합 부위의 형태 사이의 관계를 밝혀냈다(문헌 [Chothia et al., J. Mol. Biol. 227: 799-817 (1992))]; [Tramontano et al., J. Mol. Biol, 215: 175-182 (1990)]). 그의 높은 서열 가변성에도 불구하고, 6개 루프 중 5개는 "정규 구조"라고 하는 주쇄 입체형태의 작은 레퍼토리만을 취한다. 이러한 입체형태는 무엇보다도 루프의 길이에 의해 결정되고, 두 번째로 그의 패킹, 수소 결합 또는 독특한 주쇄 입체형태를 취할 수 있는 능력을 통해 입체형태를 결정짓는 프레임워크 영역 및 루프의 특정 위치의 주요 잔기의 존재에 의해 결정된다.
항체의 "가변 영역"은 단독으로 또는 조합하여 항체 경쇄의 가변 영역 또는 항체 중쇄의 가변 영역을 지칭한다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 각각 초가변 영역으로도 알려진 3개의 상보성 결정 영역(CDR)에 의해 연결된 4개의 프레임워크 영역(FR)으로 구성된다. 각 쇄의 CDR은 FR에 의해 밀접하게 함께 유지되고, 다른 쇄의 CDR과 함께 항체의 항원 결합 부위 형성에 기여한다. CDR을 결정하는 기술은 적어도 2개가 존재한다: (1) 종간 서열 가변성에 기초한 접근법(즉, 문헌 [Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, (5th ed., 1991, National Institutes of Health, Bethesda Md.)]); 및 (2) 항원-항체 복합체의 결정학적 연구에 기초한 접근법(문헌 [Allazikani et al (1997) J. Molec. Biol. 273:927-948)]). CDR은 접근법 중 하나 또는 두 접근법의 조합에 의해 정의된 CDR을 나타낼 수 있다.
항체의 "불변 영역"은 단독으로 또는 조합하여 항체 경쇄의 불변 영역, 즉, 경쇄 불변 영역 또는 항체 중쇄의 불변 영역, 즉, 중쇄 불변 영역을 지칭한다. 불변 영역은 항원 특이성과 관련하여 변하지 않는다.
본원에서 사용되는 바, 용어 "중쇄 영역"은 면역글로불린 중쇄의 불변 도메인으로부터 유래된 아미노산 서열을 포함한다. 중쇄 영역을 포함하는 폴리펩티드는 CH1 도메인, 힌지(예컨대, 상부, 중간 및/또는 하부 힌지 영역) 도메인, CH2 도메인, CH3 도메인, 또는 그의 변이체 또는 단편 중 적어도 하나를 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 면역글로불린 중쇄의 Fc 영역(예컨대, 힌지 부분, CH2 도메인 및 CH3 도메인)을 포함할 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편에는 불변 도메인의 적어도 한 영역(예컨대, CH2 도메인 모두 또는 일부)이 결여되어 있다. 특정 실시양태에서, 불변 도메인 중 적어도 하나, 및 바람직하게는 모두 인간 면역글로불린 중쇄로부터 유래된다. 예를 들어, 한 바람직한 실시양태에서, 중쇄 영역은 완전한 인간 힌지 도메인을 포함한다. 다른 바람직한 실시양태에서, 중쇄 영역은 완전한 인간 Fc 영역(예컨대, 인간 면역글로불린의 힌지, CH2 및 CH3 도메인 서열)을 포함한다. 특정 실시양태에서, 중쇄 영역의 구성 불변 도메인은 상이한 면역글로불린 분자로부터 유래된다. 예를 들어, 폴리펩티드의 중쇄 영역은 IgA 분자로부터 유래된 도메인 및 IgA1 또는 IgA2 분자로부터 유래된 힌지 영역을 포함할 수 있다. 다른 실시양태에서, 불변 도메인은 상이한 면역글로불린 분자의 영역을 포함하는 키메라 도메인이다. 예를 들어, 힌지는 IgA1 분자로부터의 제1 영역 및 IgA2 분자로부터의 제2 영역을 포함할 수 있다. 상기 기술된 바와 같이, 중쇄 영역의 불변 도메인이 자연적으로 발생된(야생형) 면역글로불린 분자로부터 아미노산 서열이 다양하도록 변형될 수 있다는 것이 당업자에 의해 이해될 것이다. 즉, 본원에 개시된 본 발명의 폴리펩티드는 하나 이상의 중쇄 불변 도메인(CH1, 힌지, CH2 또는 CH3) 및/또는 경쇄 불변 도메인(CL)에 대한 변경 또는 변형을 포함할 수 있다. 예시적인 변형은 하나 이상의 도메인에서 하나 이상의 아미노산의 부가, 결실 또는 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형은 표 2의 변형으로부터 선택된다.
본 개시내용의 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 길이가 적어도 약 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 또는 30개의 아미노산 길이인 CDR3 영역을 포함할 수 있다. 본 개시내용의 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 길이가 적어도 약 18개의 아미노산 길이인 CDR3 영역을 포함할 수 있다.
본원에서 사용되는 바, 용어 "힌지 영역"은 CH1 도메인을 CH2 도메인에 연결하는 중쇄 분자의 영역을 포함한다. 힌지 영역은 약 25개의 잔기를 포함할 수 있고, 가요성이고, 이로써, 2개의 N-말단 항원 결합 영역이 비의존적으로 이동할 수 있다. 힌지 영역은 3개의 별개의 도메인으로 세분될 수 있다: 상부, 중간 및 하부 힌지 도메인(문헌 [Roux et al. J. Immunol. 1998 161:4083]).
본원에서 사용되는 바, 용어 "Fv"는 완전한 항원 인식 부위 및 항원 결합 부위를 함유하는 최소 항체 단편이다. 이 단편은 단단한 비공유 결합에서 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄 가변 영역 도메인의 이량체로 구성된다.
이들 2개의 도메인의 폴딩으로부터 항원 결합을 위한 아미노산 잔기에 기여하고, 항체에 항원 결합 특이성을 부여하는 6개의 초가변 루프(H 및 L 쇄로부터 각각 3개의 루프)가 발생한다. 그러나, 단일 가변 도메인(또는 항원에 대해 특이적인 3개의 CDR만을 포함하는 Fv의 절반) 조차도 전체 결합 부위보다 낮은 친화도이지만 항원을 인식하고 결합하는 능력을 갖는다.
항체와 관련하여 "중쇄 가변 영역" 또는 "VH"는 프레임워크 영역으로 알려진 측면 스트레치 사이에 개재된 3개의 CDR을 함유하는 중쇄 단편을 지칭하며, 이러한 프레임워크 영역은 일반적으로 CDR보다 더 고도로 보존되고, CDR을 지지하기 위한 스캐폴드를 형성한다.
항체와 관련하여 "경쇄 가변 영역" 또는 "VL"은 프레임워크 영역으로 알려진 측면 스트레치 사이에 개재된 3개의 CDR을 함유하는 경쇄 단편을 나타내며, 이러한 프레임워크 영역은 일반적으로 CDR보다 더 고도로 보존되고, CDR을 지지하기 위한 스캐폴드를 형성한다.
6개의 초가변 루프(각각 중쇄 및 경쇄로부터 3개의 루프)는 항원 결합을 위한 아미노산 잔기에 기여하고, 항체에 항원 결합 특이성을 부여한다. 그러나, 단일 가변 도메인(또는 항원에 대해 특이적인 3개의 CDR만을 포함하는 Fv의 절반) 조차도 전체 결합 부위보다 낮은 친화도이지만 항원을 인식하고 결합하는 능력을 갖는다.
"프레임워크" 또는 FR 잔기는 초가변 영역 잔기 이외의 가변 도메인 잔기이다.
항체는 이황화 결합에 의해 상호연결된 적어도 2개의 중쇄(H) 및 2개의 경쇄(L)를 갖는 당단백질, 또는 그의 항원 결합부인 것으로 당업계에서 이해된다. 중쇄는 중쇄 가변 영역(VH)과 중쇄 불변 영역(CH1, CH2 및 CH3)으로 구성된다. 경쇄는 경쇄 가변 영역(VL)과 경쇄 불변 영역(CL)으로 구성된다. 중쇄 및 경쇄 모두의 가변 영역은 프레임워크 영역(FR 또는 FWR) 및 초가변 영역(HVR: hypervariable region)을 포함한다. HVR은 항원 결합을 담당하는 항체의 아미노산 잔기이다. 초가변 영역은 일반적으로 가장 높은 서열 가변성을 갖고/거나, 항원 인식에 관여하는 상보성 결정 영역(CDR)으로부터의 아미노산 잔기를 포함한다. VH의 CDR1을 제외하고, CDR은 일반적으로 초가변 루프를 형성하는 아미노산 잔기를 포함한다. CDR은 또한 항원과 접촉하는 잔기인 "특이성 결정 잔기" 또는 "SDR(specificity determining residue)"을 포함한다. SDR은 축약된-CDR 또는 a-CDR이라고 하는 CDR의 영역 내에 함유되어 있다. 예시적인 a-CDR(a-CDR-L1, a-CDR-L2, a-CDR-L3, a-CDR-H1, a-CDR-H2 및 a-CDR-H3)은 L1의 아미노산 잔기 31-34, L2의 50-55, L3의 89-96, H1의 31-35B, H2의 50-58, H3의 95-102에 존재한다(예컨대, 문헌 [Fransson, Front. Biosci. 13:1619-1633 (2008)] 참조).
달리 명시되지 않는 한, 가변 도메인 내의 HVR 잔기 및 다른 잔기(예컨대, FR 잔기)는 본원에서 문헌 [Kabat et al., 상기 문헌 동일]에 따라 넘버링된다. 가변 영역은 항체를 항원에 결합시키는 데 관여하는 항체 중쇄 또는 경쇄의 도메인이다 (예컨대, 문헌 [Kindt et al. Kuby Immunology, 6th ed., W.H. Freeman and Co., p.91 (2007)] 참조). 단일 VH 또는 VL 도메인은 항원 결합 특이성을 부여하기에 충분할 수 있다. 추가로, 특정 항원에 결합하는 항체는 각각 상보적인 VL 또는 VH 도메인의 라이브러리를 스크리닝하기 위해 항원에 결합하는 항체로부터 VH 또는 VL 도메인을 사용하여 단리될 수 있다(예컨대, 문헌 [Portolano et al., J. Immunol. 150:880-887 (1993)]; [Clarkson et al., Nature 352:624-628 (1991)] 참조). 4개의 FWR 영역은 전형적으로 더 보존되는 반면, CDR 영역(CDR1, CDR2 및 CDR3)은 초가변 영역을 나타내고, NH2 말단에서 COOH 말단까지 하기와 같이 배열된다: FWR1, CDR1, FWR2, CDR2, FWR3, CDR3, 및 FWR4. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유하는 반면, 이소타입에 따라, 불변 영역(들)은 숙주 조직 또는 인자에 대한 면역글로불린의 결합을 매개할 수 있다. 항체는 또한 키메라 항체, 인간화 항체 및 재조합 항체, 트랜스제닉 비인간 동물로부터 생성된 인간 항체, 뿐만 아니라, 숙련가가 이용할 수 있는 농축 기술을 사용하여 라이브러리에서 선택된 항체를 포함한다.
용어 "항체 중쇄"는 그의 자연적으로 발생된 형태로 항체 분자에 존재하고, 일반적으로 항체가 속하는 부류를 결정하는 2가지 유형의 폴리펩티드 쇄 중 더 큰 것을 지칭한다.
용어 "항체 경쇄"는 그의 자연적으로 발생된 형태로 항체 분자에 존재하는 2가지 유형의 폴리펩티드 쇄 중 더 작은 것을 지칭한다. 카파("κ") 및 람다("λ") 경쇄는 2가지 주요 항체 경쇄 이소타입을 지칭한다.
항체 또는 그의 항원 결합 단편이 비관련 폴리펩티드 상의 에피토프에 결합하는 것보다 더 큰 친화도 및/또는 결합력으로 결합한다면, 이는 표적에 "특이적으로 결합" 또는 "우선적으로 결합"하는 것이다. 항체 또는 그의 항원 결합 단편 또는 일부의 특이성은 친화도 및/또는 결합력에 기초하여 결정될 수 있다. 이러한 특이적 결합을 측정하는 방법은 또한 당업계에 널리 알려져 있다. 본 개시내용의 특정 실시양태에 따라, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 인간 암 항원에 결합할 수 있지만, 다른 종으로부터의 암 항원에는 결합하지 않을 수 있다. 대안적으로, 특정 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 인간 암 항원 및 하나 이상의 비인간 종으로부터의 암 항원에 결합한다. 예를 들어, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 인간 암 항원에 결합할 수 있고, 경우에 따라, 마우스, 래트, 기니피그, 햄스터, 저빌, 돼지, 고양이, 개, 토끼, 염소, 양, 소, 말, 낙타, 시노몰구스, 마모셋, 레수스 또는 침팬지 암 항원 중 하나 이상의 것에 결합할 수 있거나, 또는 결합하지 않을 수 있다.
항원 결합 단백질과 항원의 해리에 대한 평형 상수(KD)로 표시되는 친화도는 항원 결정기와 항원 결합 단백질 상의 항원 결합 부위 사이의 결합 강도에 대한 척도이고: KD 값이 작을수록, 항원 결정기와 항원 결합 분자의 결합력이 더 강하다. 대안적으로, 친화도는 친화도 상수(KA, 이는 1/KD이다)로 표시될 수 있다. 당업자에게 명백한 바와 같이, 친화도는 관심의 특정 항원에 따라 그 자체로 공지된 방식으로 결정될 수 있다. 따라서, 본원에 정의된 바와 같은 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 상기 아미노산 서열 또는 폴리펩티드가 또 다른 표적 또는 폴리펩티드에 결합하는 친화도보다 적어도 50배, 예컨대, 적어도 100배, 및 바람직하게, 적어도 1000배, 및 최대 10,000배 또는 그 초과로 더 우수한 친화도(상기 기술된 바와 같이, 및 적합하게는 예를 들어, KD로 표시)로 제1 항원에 결합할 때, 제2 표적 또는 항원과 비교하여 제1 표적 또는 항원에 "특이적"인 것으로 일컬어진다. 바람직하게, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 또 다른 표적 또는 항원과 비교하여 표적 또는 항원에 "특이적"인 경우, 이는 표적 또는 항원에 결합할 수 있지만, 다른 표적 또는 항원에는 결합하지 않는다. 그러나, 당업계의 숙련가에 의해 이해되는 바와 같이, 일부 실시양태에서, 표적 상의 결합 부위가 다수의 상이한 리간드에 의해 공유되거나 부분적으로 공유되는 경우, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 표적, 예컨대, 암 연관 항원에 특이적으로 결합할 수 있고, 예를 들어, 종양 진행을 억제/예방하는 기능적 효과를 가질 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항체는 약 1 μM, 100 nM, 10 nM, 5 nM, 2 nM, 1 nM, 0.5 nM, 0.1 nM, 0.05 nM, 0.01 nM, 또는 0.001 nM 또는 그 미만(예컨대, 10-8 M 이하, 예컨대, 10-8 M 내지 10-13 M, 예컨대, 10-9 M 내지 10-13 M)의 해리 상수(KD)를 갖는다. 본 발명의 또 다른 측면은 그의 표적에 대해 증가된 친화도를 갖는 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 예를 들어, 친화도 성숙 항체를 제공한다. 친화도 성숙 항체는 하나 이상의 초가변 영역(HVR)에 하나 이상의 변경을 갖는 항체로서, 상기 변경을 갖지 않는 모체 항체와 비교하여 상기 변경은 항원에 대한 항체의 친화도를 개선시킨다. 이들 항체는 약 5 x 10-9 M, 2 x 10-9 M, 1 x 10-9 M, 5 x 10-10 M, 2 x 10-10 M, 1 x 10-10 M, 5 x 10-11 M, 1 x 10-11 M, 5 x 10-12 M, 1 x 10-12 M, 또는 그 미만의 KD로 항원에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용은 WT IgA 항체 또는 WT IgG 항체와 비교하여 적어도 1.5배, 2배, 2.5배, 3배, 4배, 5배, 10배, 20배 또는 그 초과의 증가된 친화도를 갖고, 상기 중쇄 서열 및 경쇄 서열, 또는 둘 모두를 갖는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 다른 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 그의 기능적 단편은 가변 도메인의 유래 기점이 되는 상응하는 항체와 동일한 에피토프에의 결합에 대하여 경쟁한다. 일부 실시양태에서, 동일한 에피토프에 결합하고/거나, 항체와 동일한 에피토프에의 결합에 대하여 경쟁하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 예컨대, 예를 들어, ADCC 활성을 비롯한 Fc 매개 세포 세포독성과 같은 이펙터 기능 활성을 나타낸다.
KD는 임의의 적합한 검정법에 의해 측정될 수 있다. 예를 들어, KD는 방사성표지된 항원-결합 검정법(RIA)에 의해 측정될 수 있다(예컨대, 문헌 [Chen et al., J. Mol. Biol. 293:865-881(1999)]; [Presta et al., Cancer Res. 57:4593-4599(1997)]). 예를 들어, KD는 표면 플라즈몬 공명 검정법을 사용하여 측정될 수 있다(예컨대, BIACORE®-2000 또는 BIACORE®-3000 사용). 예를 들어, KD는 경쟁 ELISA를 사용하여 측정될 수 있다.
결합력은 항원 결합 분자와 해당 항원 사이의 결합 강도의 척도이다. 결합력은 항원 결정기와 항원 결합 분자 상의 그의 항원 결합 부위 사이의 친화도, 및 항원 결합 분자 상에 존재하는 적절한 결합 부위의 개수 둘 모두와 관련이 있다. 전형적으로, 항원 결합 단백질은 해리 상수(10-5 내지 10-12 몰/ℓ 이하, 및 바람직하게, 10-7 내지 10-12 몰/ℓ 이하, 및 더욱 바람직하게, 10-8 내지 10-12 몰/ℓ의 KD(즉, 105 내지 1012 ℓ/몰 이상, 및 바람직하게, 107 내지 1012 ℓ/몰 이상 및 더욱 바람직하게, 108 내지 1012 ℓ/몰의 회합 상수(KA)))로 그의 동족 또는 특이적 항원에 결합할 것이다. 10- 4 mol/ℓ 초과의 임의의 KD 값(또는 104 M-1 미만의 임의의 KA 값)은 일반적으로 비특이적 결합을 시사하는 것으로 간주된다. 의미가 있는 것(예컨대, 특이적인 것)으로 간주되는 생물학적 상호작용에 대한 KD는 전형적으로 10-10 M (0.1 nM) 내지 10-5 M(10000 nM) 범위이다. 상호작용이 강할수록, 그의 KD는 더 낮아진다. 바람직하게, 본원에 기술된 항LAP 항체 또는 그의 항원 결합 단편 상의 결합 부위는 500 nM 미만, 바람직하게, 200 nM 미만, 더욱 바람직하게, 10 nM 미만, 예컨대, 500 pM 미만의 친화도로 결합할 것이다. 항원 또는 항원 결정기에 대한 항원 결합 단백질의 특이적 결합은 예를 들어, 스캐챠드(Scatchard) 분석 및/또는 경쟁적 결합 검정법, 예컨대, 방사성면역검정법(RIA: radioimmunoassay), 효소 면역검정법(EIA: enzyme immunoassay), 및 샌드위치 경쟁 검정법을 비롯한, 그 자체가 공지된 임의의 적합한 방식, 및 당업계에 그 자체가 공지된 그의 상이한 이형; 뿐만 아니라, 본원에서 언급된 바와 같은 다른 기술로 측정될 수 있다.
본원에서 사용되는 바, 용어 "k온"은 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 항원에 회합하기 위한 속도 상수를 의미하는 것으로 의도된다.
본원에서 사용되는 바, 용어 "K오프"는 항체/항원 복합체로부터 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 해리에 대한 속도 상수를 나타내는 것으로 의도된다.
본원에서 사용되는 바, 용어 "재조합 인간 항체"는 재조합 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 모든 인간 항체, 예컨대, (a) 인간 면역글로불린 유전자 또는 그로부터 제조된 하이브리도마(하기에 추가로 기술)에 대한 트랜스제닉성 또는 염색체이식된 동물(예컨대, 마우스)로부터 단리된 항체, (b) 인간화 항체를 발현하도록 형질전환된 숙주 세포, 예컨대, 트랜스펙토마로부터 단리된 항체, (c) 재조합, 조합 인간 항체 라이브러리로부터 단리된 항체, 및 (d) 인간 면역글로불린 유전자의 다른 DNA 서열로의 스플라이싱을 포함하는 임의의 다른 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 단리된 항체를 포함한다. 상기 재조합 인간 항체는 프레임워크 및 CDR 영역이 본원에 개시된 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 영역을 갖는다. 그러나, 특정 실시양태에서, 이러한 재조합 인간 항체에 대해 시험관내 돌연변이유발(또는 인간 Ig 서열에 대해 트랜스제닉인 동물이 사용되는 경우, 생체내 체세포 돌연변이유발)이 수행될 수 있고, 이로써, 재조합 항체의 VH 및 VL 영역의 아미노산 서열은 인간 면역글로불린 VH 및 VL 서열로부터 유래되고, 관련이 있지만, 생체내 인간 항체 생식계열 레퍼토리 내에 자연적으로 존재하지 않을 수 있는 서열이다.
항체 또는 그의 항원 결합 단편의 맥락에서, "특이성" 또는 "~에 대해 특이적"이라는 용어는 특정 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 결합할 수 있는 상이한 유형의 항원 또는 항원 결정기의 개수를 지칭한다. 항체 또는 항원 결합 단편 또는 그의 일부의 특이성은 친화도 및/또는 결합력에 기초하여 결정될 수 있다. 항원 결합 단백질과 항원의 해리에 대한 평형 상수(KD)로 표시되는 친화도는 항원 결정기와 항원 결합 단백질 상의 항원 결합 부위 사이의 결합 강도에 대한 척도이고: KD 값이 작을수록, 항원 결정기와 항원 결합 분자의 결합력이 더 강하다. 대안적으로, 친화도는 또한 친화도 상수(KA, 이는 1/KD이다)로 표시될 수 있다. 당업자에게 명백한 바와 같이, 친화도는 관심의 특정 항원에 따라 그 자체로 공지된 방식으로 결정될 수 있다. 따라서, 본원에 정의된 바와 같은 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 상기 아미노산 서열 또는 폴리펩티드 또는 폴리펩티드가 또 다른 표적 또는 폴리펩티드에 결합하는 친화도보다 적어도 50배, 예컨대, 적어도 100배, 및 바람직하게, 적어도 1000배, 및 최대 10,000배 또는 그 초과로 더 우수한 친화도(상기 기술된 바와 같이, 및 적합하게는 예를 들어, KD로 표시)로 제1 항원에 결합할 때, 제2 표적 또는 항원과 비교하여 제1 표적 또는 항원에 "특이적"인 것으로 일컬어진다. 바람직하게, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 또 다른 표적 또는 항원과 비교하여 표적 또는 항원에 "특이적"인 경우, 이는 표적 또는 항원에 결합할 수 있지만, 다른 표적 또는 항원에는 결합하지 않을 수 있다.
그러나, 당업계의 숙련가에 의해 이해되는 바와 같이, 일부 실시양태에서, 표적 상의 결합 부위가 다수의 상이한 리간드에 의해 공유되거나 부분적으로 공유되는 경우, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 표적 항원에 특이적으로 결합할 수 있고, 예를 들어, 종양 진행을 억제/예방하는 기능적 효과를 가질 수 있다.
결합력은 항원 결합 분자와 해당 항원 사이의 결합 강도의 척도이다. 결합력은 항원 결정기와 항원 결합 분자 상의 그의 항원 결합 부위 사이의 친화도, 및 항원 결합 분자 상에 존재하는 적절한 결합 부위의 개수 둘 모두와 관련이 있다. 전형적으로, 항원 결합 단백질은 해리 상수(10-5 내지 10-12 몰/ℓ 이하, 및 바람직하게, 10-7 내지 10-12 몰/ℓ 이하, 및 더욱 바람직하게, 10-8 내지 10-12 몰/ℓ의 KD(즉, 105 내지 1012 ℓ/몰 이상, 및 바람직하게, 107 내지 1012 ℓ/몰 이상 및 더욱 바람직하게, 108 내지 1012 ℓ/몰의 회합 상수(KA)))로 그의 동족 또는 특이적 항원에 결합할 것이다. 10- 4 mol/ℓ 초과의 임의의 KD 값(또는 104 M-1 미만의 임의의 KA 값)은 일반적으로 비특이적 결합을 시사하는 것으로 간주된다. 의미가 있는 것(예컨대, 특이적인 것)으로 간주되는 생물학적 상호작용에 대한 KD는 전형적으로 10-10 M (0.1 nM) 내지 10-5 M(10000 nM) 범위이다. 상호작용이 강할수록, 그의 KD는 더 낮아진다. 바람직하게, 본원에 기술된 항LAP 항체 또는 그의 항원 결합 단편 상의 결합 부위는 500 nM 미만, 바람직하게, 200 nM 미만, 더욱 바람직하게, 10 nM 미만, 예컨대, 500 pM 미만의 친화도로 결합할 것이다. 항원 또는 항원 결정기에 대한 항원 결합 단백질의 특이적 결합은 예를 들어, 스캐챠드 분석 및/또는 경쟁적 결합 검정법, 예컨대, 방사성면역검정법(RIA), 효소 면역검정법(EIA), 및 샌드위치 경쟁 검정법을 비롯한, 그 자체가 공지된 임의의 적합한 방식, 및 당업계에 그 자체가 공지된 그의 상이한 이형; 뿐만 아니라, 본원에서 언급된 바와 같은 다른 기술로 측정될 수 있다.
본원에 사용되는 바, 용어 "융합 단백질"은 항체 또는 그의 단편의 아미노산 서열 및 이종성 폴리펩티드(즉, 비관련 폴리펩티드)의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 단일 도메인 항체이다. "단일 도메인 항체"(sdAb) 또는 "단일 가변 도메인(SVD: single　variable　domain) 항체"라는 표현은 일반적으로 항체-항원 결합이 부여될 수 있는 단일 가변 영역(VH 또는 ')을 지칭한다. 즉, 단일 가변 도메인은 또 다른 가변 영역과 상호작용하여 표적 항원을 인식할 필요가 없다. 각 항체 가변 영역(VH * VJ 조성)에 의한 단일 도메인 항체 단량체 단일 아암 항원 결합. 단일 도메인 항체의 예로는 카멜리드(낙타 및 라마)로부터 유래된 것 및 연골 어류(예컨대, 너스 상어) 항체 및 상기 항체(문헌 [Ward et al from human and mouse　antibodies　by recombinant methods, Nature (1989) 341: 544-546]; [Dooley and Flajnik, Dev Comp Immunol (2006) 30: 43-56]; [Muyldermans et, TrendBiochem Sci (2001) 26: 230-235]; [Holt et, Trends Biotechnol (2003): 21: 484-490]; W0 2005/035572; TO 03/035694; [Davies and Riechmann, Febs Lett (1994) 339: 285-290]; W000/29 004;. W0 02/051870))을 포함하고, 항체의 단일 가변 영역은 단일 도메인 항체 가변 영역이 아닐 수 있거나, 가변 도메인은 항원 결합 아암에 존재한다(예컨대, , 동종다량체 또는 이종다량체 함께 존재).
본원에서 사용되는 바, 용어 '변형"은 WT 항체의 WT 중쇄 불변 영역과 비교하여 항체의 중쇄 불변 영역에서 하나 이상의 아미노산 잔기의 아미노산 치환 또는 아미노산 결실을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 변형은 중쇄 불변 영역의 IgA CH1 영역 내의 아미노산 잔기에 있다. 일부 실시양태에서, 변형은 중쇄 불변 영역의 IgA CH2 영역 내의 아미노산 잔기에 있다. 일부 실시양태에서, 변형은 중쇄 불변 영역의 IgA CH3 영역 내의 아미노산 잔기에 있다. 일부 실시양태에서, 변형은 표 2로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 하나 이상의 변형은 상응하는 WT 항체와 비교하여 하나 이상의 변형을 포함하는 항체의 개선된 특성을 초래한다.
"개선된 특성"이라는 용어는 하나 이상의 변형을 포함하지 않는 모체 WT 항체와 비교하여 개선된, 본원에 개시된 하나 이상의 변형을 포함하는 항체와 연관된 특징을 의미한다. 이러한 개선된 특성은 증가된 열안정성, 증가된 순환 반감기, 증가된 ADCC, 감소된 응집, 혈청 단백질과의 감소된 응집, 증가된 종양 표적화, 증가된 안정성, 감소된 글리코실화, 면역 세포에 발현된 FcαR에의 결합 증가를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 일부 실시양태에서, 개선된 특성은 상응하는 WT IgA와 비교하여 항체 또는 그의 기능적 단편의 하나 이상의 이펙터 기능의 증가이다. 이펙터 기능은 항체 이소타입에 따라 달라지는 항체의 Fc 영역에 기인하는 생물학적 활성이다. 항체 이펙터 기능의 예로는 C1q 결합 및 보체 의존성 세포독성(CDC); Fc 수용체 결합; 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC); 식세포작용을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 기능적 단편(예컨대, IgA 중쇄 불변 영역에 본원에 개시된 하나 이상의 변형을 포함하는 것)은 상응하는 WT IgA 항체 또는 상응하는 WT IgG 항체와 비교하여 적어도 2%, 3%, 4%, 5%, 7%, 8%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 적어도 100%의 하나 이상의 개선된 특성을 갖는다.
본원에서 사용되는 바, 용어 "상응하는" 비변형된 항체는 본원에 개시된 하나 이상의 선택 변형을 포함하는 항체와 동일한 서열로 이루어지지만, 특히, 중쇄 불변 영역에 본원에 기술된 하나 이상의 선택 변형은 포함하지 않는 야생형 항체를 의미한다. 일부 실시양태에서, 상응하는 항체는 WT IgA 중쇄 불변 영역을 포함하는 WT IgA 항체일 수 있다. 일부 실시양태에서, 상응하는 항체는 WT IgG 중쇄 불변 영역을 포함하는 WT IgG 항체일 수 있다. 일부 실시양태에서, 상응하는 WT IgA 항체는 WT IgA1 항체이다. 일부 실시양태에서, 상응하는 WT IgA 항체는 WT IgA2 항체이다. 일부 실시양태에서, 상응하는 WT IgA 항체는 서열 번호 1에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 야생형 IgA 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상응하는 WT IgA2 항체는 서열 번호 1에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 야생형 IgA2 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상응하는 WT IgA 항체는 서열 번호 2에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 야생형 IgA 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 상응하는 WT IgA 항체는 서열 번호 2에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 야생형 IgA 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, WT IgA 중쇄 불변 영역은 서열 번호 1에 기재된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, WT IgA2 중쇄 불변 영역은 서열 번호 1에 기재된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 아미노산 변형은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역(예컨대, WT IgA2 중쇄 불변 영역) 중 선택된 위치의 아미노산 잔기와의 비교로 이루어진다.
일부 실시양태에서, WT IgA 중쇄 불변 영역은 서열 번호 2에 기재된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, WT IgA2 중쇄 불변 영역은 서열 번호 2에 기재된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 아미노산 변형은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 2에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역(예컨대, WT IgA2 중쇄 불변 영역) 중 선택된 위치의 아미노산 잔기와의 비교로 이루어진다.
일부 실시양태에서, WT IgA 중쇄 불변 영역은 서열 번호 3에 기재된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, WT IgA2 중쇄 불변 영역은 서열 번호 3에 기재된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 아미노산 변형은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 3에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역(예컨대, WT IgA2 중쇄 불변 영역) 중 선택된 위치의 아미노산 잔기와의 비교로 이루어진다.
본원에 사용된 용어 "Fab"은 각각의 중쇄 및 경쇄의 하나의 불변 도메인 및 하나의 가변 도메인으로 구성된 항체의 영역(1가 항원 결합 단편)을 지칭하는 것으로 의도되지만, 여기서, 중쇄는 CH2 및 CH3 도메인이 결여되어 있고(즉, VH, CH1, VL 및 CL), 또한 힌지 영역의 일부 또는 전부가 결여될 수 있도록 말단절단된다. 이는 효소 파파인으로 전체 항체를 분해함으로써 생성될 수 있다. Fab는 단리된 상기 영역, 또는 전장 항체, 면역글로불린 구성물 또는 Fab 융합 단백질의 맥락에서 상기 영역을 나타낼 수 있다.
본원에 사용된 용어 Fab'는 전체 항체를 펩신으로 처리한 후, 환원하여 무손상 경쇄 및 VH 및 단일 불변 도메인을 포함하는 중쇄의 일부로 이루어진 분자를 생성함으로써 수득될 수 있다. 이러한 방식으로 처리된 항체당 2개의 Fab' 단편이 수득된다.
"scFv"는 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서, 이들 도메인은 단일 폴리펩티드쇄에 존재하는 것인 항체 단편을 의미한다. 예를 들어, 미국 특허 제4,946,778호, 제5,260,203호, 제5,455,030호, 및 제5,856,456호를 참조한다. 일반적으로, Fv 폴리펩티드는 scFv가 항원 결합을 위해 원하는 구조를 형성할 수 있도록 하는 폴리펩티드 링커를 VH 및 VL 도메인 사이에 추가로 포함한다. scFv 리뷰를 위해, 문헌 [Pluckthun (1994) The Pharmacology of Monoclonal Antibodies vol 113 ed. Rosenburg and Moore (Springer-Verlag, New York) pp 269-315]를 참조한다. Fv 단편의 VH 및 VL 도메인 복합체는 또한 이황화 결합에 의해 안정화될 수 있다(미국 특허 제5,747,654호).
본원에서 사용되는 바, 용어 "생체내 반감기" 또는 "순환 반감기"는 주어진 동물에서의 항체 또는 그의 기능적 단편의 순환을 지칭하고, 동물 내의 투여량의 절반이 순환으로부터 제거되는 데 소요되는 시간으로 표시된다.
본원에서 사용되는 바, 용어 "증가된 순환 반감기"는 본 발명에 따라 제공되는 WT IgA 항체에 비해 하나 이상의 변형을 포함하는 항체가 동일한 변형을 포함하지 않는 동일한 항체, 즉 WT 항체, 예를 들어 WT IgA 항체에 비해 혈청 또는 혈장에서 더 큰 지속성을 갖고/거나, 측정된 최대 혈청 또는 혈장 농도의 절반으로 감소시키는 데 더 긴 기간이 소요된다는 것을 의미한다.
"증가된 열안정성"이라는 용어는 일정 온도에서의 인큐베이션 기간 후에 본원에 개시된 항체 또는 기능적 단편의 생물학적 활성, 예컨대, ADCC, 항원에의 결합, FcαR에의 결합이 상응하는 WT IgA 항체에 비해 더 높게 유지된다는 것을 의미한다. 증가된 열안정성은 예를 들어, 하나 이상의(예컨대, 여러) 온도의 조건하에서 평가될 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의(예컨대, 여러) 온도는 적합한 인큐베이션 기간(시간), 예컨대, 1분, 5분, 10분, 15분, 20분, 25분, 30분, 45분, 또는 60분(또는 그 사이, 예컨대, 23분, 37분 등) 동안 3 내지 9 범위의 하나 이상의(예컨대, 여러) pH, 예컨대, pH 3.0, 3.5, 4.0, 4.5, 5.0, 5.5, 6.0, 6.5, 7.0, 7.5, 8.0, 8.5, 또는 9.0(또는 그 사이)에서 45℃ 내지 95℃ 범위의 임의의 온도 또는 온도들, 예컨대, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 또는 95℃(또는 그 사이, 예컨대, 62℃, 68℃, 72℃ 등)일 수 있고, 변이체는 잔류 활성을 유지한다. 그러나, 더 긴 인큐베이션 기간도 사용될 수 있다. "증가된 열안정성"이라는 용어는 "개선된 열안정성"과 상호교환적으로 사용될 수 있다.
본원에서 사용되는 바, IgA 중쇄 불변 영역의 글리코실화 부위 또는 아미노산 잔기와 관련하여 용어 "자연적으로 발생된"이라는 용어는 글리코실화 부위 또는 아미노산 잔기가 자연상에서 IgA 중쇄 불변 영역에서 발견될 수 있고, 자연상 공급원에서 단리될 수 있고, 인간(바이러스 포함)에 의해 실험실에서 의도적으로 변형되지 않았다는 사실을 나타낸다. 유기체에 존재하는 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드 서열은 자연적으로 발생된 서열이다.
용어 "질환," "장애" 또는 "병태"는 본원에서 상호교환적으로 사용되며, , 기능의 수행을 중단시키거나, 또는 방해하고/거나, 환자 또는 환자와 접촉한 대상에게 증상, 예컨대, 불편함, 기능 장애, 고통 또는 심지어 사망을 일으키는 신체 또는 일부 기관의 임의의 상태 변화를 지칭한다. 질환 또는 장애는 또한 디스템퍼, 병, 질병(ailment), 질병(malady), 장애, 질환(sickness), 질환(illness), 통증 또는 병발과 관련될 수 있다.
치료적 또는 예방적 처치 맥락에서 "~을 필요로 하는"이라는 용어는 질환을 앓거나, 질환 진단을 받았거나, 또는 예컨대, 질환 발병 위험에 있는 대상인 경우, 질환 예방을 필요로 하는 것을 의미한다. 따라서, 그를 필요로 하는 대상체는 질환 치료 또는 예방을 필요로 하는 대상체일 수 있다.
본원에서 사용되는 바, "투여하는"이라는 용어는 화합물(예컨대, 본원에 개시된 예컨대, 항체 또는 그의 항원 결합 단편)을, 상기 작용제를 원하는 부위에 적어도 부분적으로 부분적으로 전달하는 방법 또는 경로에 의해 대상체 내로 배치하는 것을 지칭한다. 본원에 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 약제학적 조성물은 정맥내, 동맥내, 조직 실질로의 직접적인 주사 또는 주입 등을 포함하나, 이에 제한되지 않는, 대상체에서 효과적인 치료를 초래하는 임의의 적절한 경로에 의해 투여될 수 있다. 필요하거나, 또는 원하는 경우, 투여는 예를 들어, 뇌실내("icv") 투여, 비내 투여, 두개내 투여, 복내 투여, 소뇌내 투여, 또는 경막내 투여를 포함할 수 있다.
용어 "암"은 비정상 세포의 빠르고, 제어되지 않는 성장을 특징으로 하는 질환을 지칭한다. 암 세포는 국소적으로 또는 혈류와 림프계를 통해 신체의 다른 부분으로 확산될 수 있다.
용어 "항종양 효과"는 예컨대, 종양 부피의 감소, 종양 세포수 감소, 전이 수, 기대 수명의 증가, 종양 세포 증식 감소, 종양 세포 생존 감소, 또는 암 병태와 연관된 다양한 생리학적 증상의 호전을 포함하나, 이에 제한되지 않는, 다양한 수단에 의해 나타날 수 있는 생물학적 효과를 지칭한다. "항종양 효과"는 또한 맨 처음의 종양 발생의 예방에서의 본 발명의 펩티드, 폴리뉴클레오티드, 세포 및 항체의 능력에 의해 나타날 수 있다.
본원에서 사용되는 바, "대상체," "환자," "개인" 등의 용어는 상호교환적으로 사용되며, 척추동물, 포유동물, 영장류 또는 인간을 지칭한다. 포유동물로는 제한 없이, 인간, 영장류, 설치류, 위험한 야생 동물, 농장 동물, 스포츠용 동물, 및 애완동물을 비롯한 야생 또는 가축을 포함한다. 영장류로는 예를 들어, 침팬지, 사이노몰구스 원숭이, 거미 원숭이 및 마카크, 예컨대, 레수스를 포함한다. 설치류로는 예를 들어, 마우스, 래트, 우드척, 흰 족제비, 토끼 및 햄스터를 포함한다. 가축 및 게임 동물은 예를 들어, 소, 말, 돼지, 사슴, 들소, 버팔로, 고양이 종, 예컨대, 집 고양이, 및 개 종, 예컨대, 개, 여우, 늑대, 조류 종, 예컨대, 닭, 에뮤, 타조, 및 어류, 예컨대, 송어, 메기 및 연어를 포함한다. "개체," "환자" 및 "대상체"라는 용어는 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 대상체는 수컷 또는 암컷일 수 있다.
일부 실시양태에서, 대상체는 포유동물이다. 포유동물은 인간, 인간이 아닌 영장류, 마우스, 래트, 개, 고양이, 말 또는 소일 수 있지만, 이들 예로 제한되지 않는다. 인간 이외의 다른 포유동물은 제어되지 않은 세포 성장(예컨대, 암)과 연관된 병태 또는 장애의 동물 모델을 나타내는 대상체로서 유리하게 사용될 수 있다. 비제한적인 예로는 뮤린 종양 모델을 포함한다. 추가로, 본원에 기술된 조성물 및 방법은 가축 및/또는 애완동물을 치료하는 데 사용될 수 있다. 대상체는 이전에 암 진단을 받았거나, 암을 앓는 것으로 확인된 대상일 수 있다. 대상체는 주어진 장애(예컨대, 암) 진단을 받고, 현재 치료를 받고 있거나, 치료를 받고자 하거나, 기존 치료적 처치에 대해 모니터링, 조정 또는 수정이 이루어지고 있거나, 또는 그의 발생 위험이 있는 대상일 수 있다.
"세포독성제"는 세포에 대해 세포독성 및/또는 세포증식억제 효과를 갖는 작용제를 지칭한다. "세포독성 효과"는 표적 세포(들)의 고갈, 제거 및/또는 사멸을 지칭한다. "세포증식억제 효과"는 세포 증식의 억제를 지칭한다.
본원에서 사용되는 바, "단백질," "펩티드" 및 "폴리펩티드"는 상호교환적으로 사용되는 데, 이는 인접 잔기의 알파-아미노 및 카복시 기 사이의 펩티드 결합에 의해 서로 연결된 일련의 아미노산 잔기를 의미한다. "단백질," "펩티드" 및 "폴리펩티드"라는 용어는 그의 크기나 기능에 관계없이 변형된 아미노산(예컨대, 인산화, 당화, 글리코실화 등) 및 아미노산 유사체를 포함하는 아미노산의 중합체를 지칭한다. "단백질" 및 "폴리펩티드"는 종종 비교적 큰 폴리펩티드와 관련하여 사용되는 반면, 용어 "펩티드"는 종종 작은 폴리펩티드와 관련하여 사용되지만, 당업계에서 상기 용어는 중복적으로 사용된다. 용어 "단백질," "펩티드" 및 "폴리펩티드"는 유전자 생성물 및 그의 단편을 언급할 때 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 이러한 용어는 예컨대, 단백질 서열의 천연 및 인공 단백질, 단백질 단편 및 폴리펩티드 유사체(예컨대, 뮤테인, 변이체 및 융합 단백질) 뿐만 아니라, 번역 후 또는 다르게는 공유 또는 비공유 변형된 단백질을 포함한다. 펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질은 단량체 또는 중합체일 수 있다. 폴리펩티드는 임의의 포유동물로부터의 자연적으로 발생된 폴리펩티드의 아미노산 서열을 가질 수 있다. 이러한 천연 서열 폴리펩티드는 자연으로부터 단리될 수 있거나, 재조합 또는 합성 수단에 의해 제조될 수 있다. 일부 실시양태에서, 폴리펩티드는 "변이체"이다. "변이체"는 서열을 정렬하고, 필요한 경우, 최대 서열 동일성(%)을 달성하기 위해 갭을 도입한 후, 서열 동일성의 일부로서 임의의 보존적 치환은 고려하지 않으면서, 천연 서열 폴리펩티드와 적어도 약 80% 아미노산 서열 동일성을 갖는 생물학적 활성 폴리펩티드를 의미한다. 상기 변이체는 예를 들어, 하나 이상의 아미노산 잔기가 폴리펩티드의 N- 또는 C-말단에 부가되거나, 결실된 폴리펩티드를 포함한다. 일부 실시양태에서, 변이체는 적어도 약 80% 아미노산 서열 동일성을 가질 것이다. 일부 실시양태에서, 변이체는 적어도 약 90% 아미노산 서열 동일성을 가질 것이다. 일부 실시양태에서, 변이체는 천연 서열 폴리펩티드와 적어도 약 95% 아미노산 서열 동일성을 가질 것이다. 폴리펩티드의 "유도체"는 예컨대, 또 다른 화학적 모이어티(예컨대, 예를 들어, 폴리에틸렌 글리콜 또는 알부민, 예컨대, 인간 혈청 알부민)에의 접합, 인산화 및 글리코실화를 통해 화학적으로 변형된 폴리펩티드(예컨대, 항체)이다.
"증가된," "증가," 또는 "증진시키다"라는 용어는 모두 본원에서 일반적으로 정적으로 유의한 양만큼의 증가를 의미하기 위해 사용되며; 의심의 여지를 없애기 위해, "증가된," "증가," 또는 "증진시키다"라는 용어는 참조 수준과 비교하여 적어도 10%의 증가, 예를 들어, 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 또는 적어도 약 30%, 또는 적어도 약 40%, 또는 적어도 약 50%, 또는 적어도 약 60%, 또는 적어도 약 70%, 또는 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90% 증가 또는 100%를 포함하여, 최대 100%까지의 증가, 또는 10-100% 사이의 임의의 증가, 또는 참조 수준과 비교하여 적어도 약 2배, 또는 적어도 약 3배, 또는 적어도 약 4배, 또는 적어도 약 5배 또는 적어도 약 10배 증가, 또는 2배 내지 10배 사이의 임의의 증가, 또는 그 초과의 증가를 의미한다.
본원에 사용된 용어 "융합 단백질"은 항체 또는 그의 단편의 아미노산 서열 및 이종성 폴리펩티드(즉, 비관련 폴리펩티드)의 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드를 지칭한다.
"감소시키다(decrease)," "감소시키다(reduce)," "감소," "저하시키다" 또는 "저하시키는" 또는 "억제시키다"라는 용어는 모두 본원에서 일반적으로 통계적으로 유의한 양만큼의 감소를 의미하기 위해 사용사용된다. 예를 들어, "감소시키다," "감소시키다," "감소," 또는 "억제시키다"는 참조 수준과 비교하여 (예컨대, 치료 이전의 참조 수준과 비교하여 치료 후의 종양 크기의) 적어도 10%만큼의 감소, 예를 들어, 적어도 약 20%, 또는 적어도 약 30%, 또는 적어도 약 40%, 또는 적어도 약 50%, 또는 적어도 약 60%, 또는 적어도 약 70%, 또는 적어도 약 80%, 또는 적어도 약 90%만큼의 감소 또는 100%를 포함하여, 최대 100%까지의 감소, 또는 참조 수준과 비교하여 10-100% 사이의 임의의 감소를 의미한다. 마커 또는 증상과 관련하여, 상기 용어는 상기 수준의 통계적으로 유의적인 감소를 의미한다. 감소는 예를 들어, 적어도 10%, 적어도 20%, 적어도 30%, 적어도 40% 또는 그 초과의 감소일 수 있고, 바람직하게, 주어진 질환을 앓지 않는 개체 경우의 정상 범위 내로 허용되는 수준까지 감소된다. 감소시키다 또는 억제시키다라는 것은 예를 들어, 치료되는 장애의 증상, 전이 또는 미세전이의 존재 또는 크기, 원발성 종양의 크기, 휴면 종양의 존재 또는 크기를 나타낼 수 있다.
본원에 사용된 용어 "합성 폴리뉴클레오티드," "합성 유전자" 또는 "합성 폴리펩티드"는 상응하는 폴리뉴클레오티드 서열 또는 그의 일부, 또는 아미노산 서열 또는 그의 일부가 등가의 자연적으로 발생된 서열과 비교하여 디자인되거나, 또는 새로 합성되거나, 또는 변형된 서열로부터 유도되었다는 것을 의미한다. 합성 폴리뉴클레오티드(항체 또는 항원 결합 단편) 또는 합성 유전자는 핵산 또는 아미노산 서열의 화학적 합성을 포함하나, 이에 제한되지 않는, 당업계에 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다. 합성 유전자는 전형적으로 아미노산 또는 폴리뉴클레오티드 수준(또는 둘 모다)에서 자연적으로 발생된 유전자와 다르며, 전형적으로 합성 발현 제어 서열의 맥락 내에 위치한다. 합성 유전자 폴리뉴클레오티드 서열은 천연 유전자와 비교하여 상이한 아미노산을 갖는 단백질을 반드시 코딩하지는 않을 수 있으며; 예를 들어, 이는 또한 다른 코돈을 포함하지만, 동일한 아미노산을 코딩하는 합성 폴리뉴클레오티드 서열을 포함할 수 있다(즉, 뉴클레오티드 변이는 아미노산 수준에서 침묵 돌연변이를 나타낸다).
IgA 항체
IgA는 2개의 서브클래스(IgA1 및 IgA2)를 가지며, 이는 단량체 형태 뿐만 아니라, 이량체 형태, 및 분비 형태로 생성될 수 있다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 단량체일 수 있다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 하나 이상의 IgA1 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 하나 이상의 IgA2 아미노산 서열을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 하나 이상의 IgA1 아미노산 서열 및 하나 이상의 IgA2 아미노산 서열을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 IgA이고, 알로타입의 IgA2 항체: IgA2m(1), IgA2(m)2, 또는 IgA2n이다. 일부 실시양태에서, IgA2m(1) 항체는 코카시안 IgA2m(1) 항체이다. 일부 실시양태에서, IgA2m(2) 항체는 아프리카인 IgA2m(2) 항체 또는 아시아인 IgA2m(2) 항체이다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 적어도 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 99% IgA 아미노산을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 적어도 50, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 99% IgA 아미노산을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 IgA CH3 영역, IgA CH2, 또는 IgA CH1 영역, 또는 그의 임의 조합 중 하나 이상의 것을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IgA CH1 영역을 포함하는 경쇄 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 카파 경쇄 불변 영역을 포함하는 경쇄 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IgG CH3 영역, IgG CH2, 또는 IgG CH1 영역, 또는 그의 임의 조합 중 하나 이상의 것을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IgA CH3 영역, IgA CH2, 및 IgA CH1 영역, 또는 그의 임의 조합을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IgA CH3 영역, IgA CH2, 및 IgG CH1 영역, 또는 그의 임의 조합을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA2 항체는 IgA2 CH3 영역, IgA2 CH2, 또는 IgA2 CH1 영역, 또는 그의 임의 조합 중 하나 이상의 것을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 IgG 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IgG 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IgG 경쇄 가변 영역 및 IgG 중쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 인간화 항체일 수 있다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 키메라 항체일 수 있다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 인간 항체일 수 있다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 단일특이적 항체일 수 있다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 이중특이적 항체일 수 있다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 삼중특이적 항체일 수 있다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 다중특이적 항체일 수 있다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 이중특이적 항체일 수 있다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 세포 표면에서 두 항원에 공동으로 함께 결합한다. 일부 예에서, 2개의 상이한 항원에의 IgA 항체의 결합은 순차적이다. 예를 들어, IgA 항체의 제1 항원에의 결합이 먼저 발생하고, 이로써, 제2 항체 아암에 의해 탐색되는 공간을 제한한다. 결과적으로, 제2 항원의 국소 농도를 상당히 증가시킬 수 있고, 이는 제2 항체 아암의 결합을 촉진할 수 있다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 Fc 도메인 중 적어도 일부를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 CH3, CH2, 및 CH1 도메인을 포함하는 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 CH1을 포함하는 경쇄 불변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 보체 의존성 세포독성(CDC)을 유도한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 다형핵 호중구(PMN: polymorphonuclear 호중구)-매개 종양 세포 용해를 유도한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 카스파제 비의존성 경로를 통해 프로그래밍된 세포 사멸(PCD: programmed cell death)을 유도한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC)을 유도한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 호중구에 의해 매개되는 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC)을 유도한다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 상응하는 IgG 항체와 비교하여 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC)에 대해 호중구를 동원할 수 있는 우수한 능력을 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 더 낮은 이펙터:표적(E:T) 비를 필요로 할 수 있다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 다른 유형의 항체(예컨대, IgG)와 비교하여 더 낮은 종양 옵소닌화 항체 농도를 필요로 할 수 있다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IgA 항체-호중구 결합 후, 종양 세포의 호중구 매개 식세포작용 또는 트로고사이토시스를 유발할 수 있다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IgA 항체-호중구 결합 후, 종양 세포의 트로곱토시스를 유발할 수 있다. 종양 세포를 사멸시키는 이 기전은 주로 가장 잘 특징화된 IgA 수용체인 IgA에 대한 Fc 수용체(FcαRI; CD89)와 상호작용함으로써 매개된다. FcαRI는 단핵구, 대식세포, 과립구, 수지상 세포의 서브세트, 및 쿠퍼 세포 상에서 발현되며, 중간 친화도로 단량체 및 이량체 IgA 이소폼 둘 모두에 결합한다. IgA의 FcαRI에의 결합은 예컨대, 식세포작용, 산화적 폭발, 사이토카인 방출, 항원 제시, 및 ADCC와 같은 이펙터 기능을 매개한다. 인간에서, 2개의 IgA 이소타입, IgA1 및 IgA2, 및 3개의 알로타입 IgA2m(1), IgA2m(2) 및 IgA2n이 분별되었다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IgG 항체보다 더 효율적으로 다형핵 세포(PMN) 매개 ADCC를 촉발시킨다.
일부 실시양태에서, IgA는 B 세포, T 세포, 혈소판, 및/또는 적혈구에 결합하지 않는다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, IgA 항체는 낮은 면역원성을 가질 수 있다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 치료 항체이다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 재조합 항체일 수 있다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 세포주에서 제조된다. 일부 실시양태에서, 세포주는 CHO이다. 일부 실시양태에서, 세포주는 SP20이다. 일부 실시양태에서, 세포주는 HEK 239 세포주이다. 일부 실시양태에서, HEK 293 세포주는 HEK 293 F이다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 그의 기능적 단편은 서열 번호 16-21 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 것을 포함하는 IgA 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 그의 기능적 단편은 IgG 항체로부터의 가변 중쇄 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 항체 또는 그의 기능적 단편은 IgG 항체로부터의 가변 경쇄 도메인을 포함한다. 가변 도메인은 예를 들어, 디누툭시맙, 오비누투주맙, 유니툭신, TA99, 2.3D11, C47A8-CQ, UMAB10, 및 트라스투주맙 및 리툭산(리툭시맙)으로부터 유래될 수 있고, 본 발명의 범주 내에 포함되는 치료 활성을 갖는 다른 항체로는 아바스틴, 허셉틴, 3F8, 8H9, 아바고보맙, 압식시맙, 악톡수맙, 아달리무맙, 아데카투무맙, 아두카누맙, 아펠리모맙, 아푸투주맙, 알라치주맙 페골, ALD518, 알렘투주맙, 알리로쿠맙, 알투모맙 펜테테이트, 아마툭시맙, 아나투모맙 마페나톡스, 아니프로루맙, 안루킨주맙, 아폴리주맙, 아시투모맙, 아셀리주맙, 아티누맙, 아틀리주맙, 아토로리무맙, 바피네우주맙, 바실릭시맙, 바비툭시맙, 벡투모맙, 벨리무맙, 벤랄리주맙, 베르틸리무맙, 베실레소맙, 베바시주맙, 베즐로톡수맙, 비시로맙, 비마그루맙, 비바투주맙 메르탄신, 블리나투모맙, 블로소주맙, 브렌툭시맙 베도틴, 브리아키누맙, 브로달루맙, 카나키누맙, 칸투주맙 메르탄신, 칸투주맙 라브탄신, 카플라시주맙, 카프로맙 펜데타이드, 카를루맙, 카투막소맙, cBR96-독소루비신 면역접합체, CC49, 세델리주맙, 세르톨리주맙 페골, 세툭시맙, Ch.14.18, 시타투주맙 보가톡스, 식수투무맙, 클라자키주맙, 클레놀릭시맙, 클리바투주맙 테트락세탄, 코나투무맙, 콘시주맙, CR6261, 크레네주맙, 다세투주맙, 다클리주맙, 달로투주맙, 다라투무맙, 뎀시주맙, 데노수맙, 데투모맙, 도를리모맙 아리톡스, 드로지투맙, 둘리고투맙, 두필루맙, 두시기투맙, 에크로멕시맙, 에쿨리주맙, 에도바코맙, 에드레콜로맙, 에팔리주맙, 에펀구맙, 엘델루맙, 엘로투주맙, 엘실리모맙, 에나바투주맙, 엔리모맙 페골, 에노키주맙, 에노티쿠맙, 엔시툭시맙, 에피투모맙 시툭세탄, 에프라투주맙, 에를리주맙, 에르투막소맙, 에타라시주맙, 에트롤리주맙, 에볼로쿠맙, 엑스비비루맙, 파놀레소맙, 파라리모맙, 팔레투주맙, 파시누맙, FBTA05, 펠비주맙, 페자키누맙, 피클라투주맙, 피기투무맙, 플란보투맙, 폰톨리주맙, 포랄루맙, 포라비루맙, 프레솔리무맙, 풀라누맙, 푸툭시맙, 갈릭시맙, 가니투맙, 간테네루맙, 가빌리모맙, 젬투주맙 오조가미신, 게보키주맙, 기렌툭시맙, 글렘바투무맙 베도틴, 골리무맙, 고밀리시맙, 구셀쿠맙, 이발리주맙, 이브리투모맙 티욱세탄, 이크루쿠맙, 이고보맙, IMAB362, 임시로맙, 임가투주맙, 인클라쿠맙, 인다툭시맙 라브탄신, 인플릭시맙, 이놀리모맙, 이노투주맙 오조가미신, 인테투무맙, 이필리무맙, 이라투무맙, 이톨리주맙, 익세키주맙, 켈릭시맙, 라베투주맙, 람브롤리주맙, 람팔리주맙, 레브리키주맙, 레말레소맙, 레르델리무맙, 렉사투무맙, 리비비루맙, 리겔리주맙, 린투주맙, 리릴루맙, 로델시주맙, 로르보투주맙 메르탄신, 루카투무맙, 루밀리시맙, 마파투무맙, 마르게툭시맙, 마슬리모맙, 마투주맙, 마브릴리무맙, 메폴리주맙, 메텔리무맙, 밀라투주맙, 민레투모맙, 미투모맙, 모가물리주맙, 모로리무맙, 모타비주맙, 목세투모맙 파수도톡스, 무로모납-CD3, 나콜로맙 타페나톡스, 나밀루맙, 나프투모맙 에스타페나톡스, 나르나투맙, 나탈리주맙, 네바쿠맙, 네시투무맙, 네렐리모맙, 네스바쿠맙, 니모투주맙, 니볼루맙, 노페투모맙 메르펜탄, 오카라투주맙, 오크렐리주맙, 오둘리모맙, 오파투무맙, 올라라투맙, 올로키주맙, 오말리주맙, 오나르투주맙, 온툭시주맙, 오포르투주맙 모나톡스, 오레고보맙, 오르티쿠맙, 오텔릭시주맙, 오틀레투주맙, 옥셀루맙, 오자네주맙, 오조랄리주맙, 파기박시맙, 팔리비주맙, 파니투무맙, 판코맙, 파노바쿠맙, 파르사투주맙, 파스콜리주맙, 파테클리주맙, 파트리주맙, 펨투모맙, 페라키주맙, 페르투주맙, 펙셀리주맙, 피딜리주맙, 피나투주맙 베도틴, 핀투모맙, 플라쿨루맙, 폴라투주맙 베도틴, 포네주맙, 프릴릭시맙, 프리톡사시맙, 프리투무맙, PRO 140, 퀼리주맙, 라코투모맙, 라드레투맙, 라피비루맙, 라무시루맙, 라니비주맙, 락시바쿠맙, 레가비루맙, 레슬리주맙, 릴로투무맙, 리툭시맙, 로바투무맙, 롤레두맙, 로모소주맙, 론탈리주맙, 로벨리주맙, 루플리주맙, 사말리주맙, 사릴루맙, 사투모맙 펜데티드, 세쿠키누맙, 세리반투맙, 세톡사시맙, 세비루맙, SGN-CD19A, SGN-CD33A, 시브로투주맙, 시팔리무맙, 실툭시맙, 심투주맙, 시플리주맙, 시루쿠맙, 솔라네주맙, 솔리토맙, 소넵시주맙, 손투주맙, 스타물루맙, 술레소맙, 수비주맙, 타발루맙, 타카투주맙 테트라세탄, 타도시주맙, 탈리주맙, 타네주맙, 타플리투모맙 팝톡스, 테피바주맙, 텔리모맙 아리톡스, 테나투모맙, 테네릭시맙, 테플리주맙, 테프로투무맙, TGN1412, 티실리무맙, 티가투주맙, 틸드라키주맙, TNX-650, 토실리주맙, 토랄리주맙, 토시투모맙, 토베투맙, 트랄로키누맙, 트라스투주맙, TRBS07, 트레갈리주맙, 트레멜리무맙, 투코투주맙 셀몰류킨, 투비루맙, 유블리툭시맙, 우렐루맙, 우르톡사주맙, 우스테키누맙, 반틱투맙, 바팔릭시맙, 바텔리주맙, 베돌리주맙, 벨투주맙, 베팔리모맙, 베센쿠맙, 비실리주맙, 볼로식시맙, 보르세투주맙 마포도틴, 보투무맙, 잘루투무맙, 자놀리무맙, 자툭시맙, 지랄리무맙, hu14.18K322A, 졸리모맙 아리톡스, 리툭시맙(Rituxan®, CD20), 트라스투주맙(Herceptin®), 알렘투주맙(Campath®, CD52), 이브리투모맙 티욱세탄(Zevalin®, CD20) 토시투모맙-I-131(Bexxar®: CD20), 세툭시맙(Erbitux®), 베바시주맙(VEGF), 파니투무맙(Vectibix®, EGFR), 오파투무맙(Arzerra®, CD20), 이필리무맙(Ypervoy®, CTLA-4), 브렌툭시맙 베도틴(Adectris®, CD30), 퍼투주맙(Perjecta®, HER2), 아도트라스투주맙, 엠탄신(Kadcyla®, HER2), 오비누투주맙(Gazyva®, CD20), 니볼루맙 및 펨브롤리주맙(항PD-1s)을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열 번호 4, 7, 81-86 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 중쇄 가변 영역(VH) 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성을 갖는 VH 서열은 참조 서열 대비 치환(예컨대, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 포함하지만, 상기 서열을 포함하는 항체는 WT 항체의 것과 동일한 항원에 결합할 수 있는 능력을 보유한다. 일부 실시양태에서, 서열 번호 4, 7, 81-86 중 어느 하나의 아미노산 서열에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입, 및/또는 결실되었다. 일부 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 CDR 밖의 영역에서(예컨대, FR에서) 일어난다. 임의적으로, 항체는 상기 서열의 하나 이상의 번역 후 변형을 포함하여, 서열 번호 4, 7, 81-86의 아미노산 서열의 VH 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH는 (a) 서열 번호 33-40 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, (b) 서열 번호 41-48 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 (c) 서열 번호 49-56 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3으로부터 선택되는 1, 2, 또는 3개의 CDR을 포함한다.
한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열 번호 5, 8, 95-100 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 영역(VL)을 포함하는 것인 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성을 갖는 VL 서열은 참조 서열 대비 치환(예컨대, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 포함하지만, 상기 서열을 포함하는 항체는 WT 항체의 것과 동일한 항원에 결합할 수 있는 능력을 보유한다. 일부 실시양태에서, 서열 번호 5, 8, 95-100 중 어느 하나의 아미노산 서열 중 어느 하나에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입, 및/또는 결실되었다. 일부 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 CDR 밖의 영역에서(예컨대, FR에서) 일어난다. 임의적으로, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 상기 서열의 번역 후 변형을 포함하여, 서열 번호 5, 8, 95-100 중 어느 하나의 VL 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, VL은 (a) 서열 번호 57-64 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1, (b) 서열 번호 65-72 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2, 및 (c) 서열 번호 73-80 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 1, 2, 또는 3개의 CDR을 포함한다.
한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 상기 제공된 실시양태 중 임의의 것에서의 것과 같은 VH, 및 상기 제공된 실시양태 중 임의의 것에서의 것과 같은 VL을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 VH 및 VL을 포함하고, 여기서, VH는 서열 번호 4, 7, 81-86 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하고, 여기서, VL은 서열 번호 5, 8, 95-100 중 어느 하나의 아미노산 서열을 포함하고, 임의적으로, 상기 서열의 번역 후 변형을 포함한다.
한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 하기 표 9의 임의의 VH로부터 선택되는 VH를 포함하는 것인, 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 표 9의 임의의 VL로부터 선택되는 VL을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 표 9의 임의의 VH로부터 선택되는 VH 및 표 9의 임의의 VL로부터 선택되는 VL을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 표 9의 임의의 VH로부터 선택되는 VH 및 표 9의 임의의 VL로부터 선택되는 VL을 포함하고, 여기서, 선택된 VH 및 VL이 표 9에 따라 쌍을 형성하는 것인, 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 하기 표 5의 임의의 HC-CDR3으로부터 선택되는 HC-CDR3, 및 하기 표 6의 임의의 LC-CDR3으로부터 선택되는 LC-CDR3을 포함하고, 여기서, 선택된 HC-CDR3 및 LC-CDR3이 표 9에 따라 쌍을 형성하는 것인, 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 표 5의 임의의 CDR-H2로부터 선택되는 HC-CDR2, 및 표 6의 임의의 CDR-L2로부터 선택되는 LC-CDR2를 포함하고, 여기서, 선택된 HC-CDR2 및 LC-CDR2가 표 9에 따라 쌍을 형성하는 것인, 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 표 5의 임의의 HC-CDR1로부터 선택되는 HC-CDR1, 및 표 6의 임의의 LC-CDR1로부터 선택되는 LC-CDR1을 포함하고, 여기서, 선택된 HC-CDR1 및 LC-CDR1이 표 9에 따라 쌍을 형성하는 것인, 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 표 5의 임의의 HC-CDR1, HC-CDR2, 및 HC-CDR3으로부터 선택되는 HC-CDR1, HC-CDR2, 및 HC-CDR3, 및 표 6의 임의의 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3으로부터 선택되는 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3을 포함하고, 여기서, 선택된 HC-CDR1, HC-CDR2, HC-CDR3, LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3이 표 9에 따라 쌍을 형성하는 것인, 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 표 5의 임의의 HC-CDR1, HC-CDR2, 및 HC-CDR3으로부터 선택되는 HC-CDR1, HC-CDR2, 및 HC-CDR3 중 어느 하나, 및 서열 번호 16-21로부터 선택되는 임의의 IgA 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 표 6의 임의의 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3으로부터 선택되는 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3 중 어느 하나, 및 서열 번호 16-21로부터 선택되는 임의의 IgA 중쇄 불변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 표 5의 임의의 HC-CDR1, HC-CDR2, 및 HC-CDR3으로부터 선택되는 HC-CDR1, HC-CDR2, 및 HC-CDR3 중 어느 하나, 및 표 6의 임의의 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3으로부터 선택되는 LC-CDR1, LC-CDR2, 및 LC-CDR3 중 어느 하나, 및 서열 번호 16-21로부터 선택되는 임의의 IgA 중쇄 불변 영역을 포함하고, 여기서, 선택된 HC-CDR1, HC-CDR2, HC-CDR3, 선택된 LC-CDR1, LC-CDR2, LC-CDR3 및 선택된 IgA 중쇄 불변 영역은 표 9에 따라 쌍을 형성한다.
IgA 항체 변형
본원에서는 하나 이상의 아미노산 치환 및/또는 하나 이상의 아미노산 결실을 포함하는 IgA 항체를 기술한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 IgA 항체의 아미노산 넘버링은 (문헌 ["IMGT unique numbering for immunoglobulin and T cell receptor constant domains and Ig superfamily C-like domains." Dev Comp Immunol. 2005;29(3):185-203](상기 문헌의 전문이 본원에서 참조로 포함된다)에 개시된 같이) C-DOMAIN 및 C-LIKE-DOMAIN에 대한 IMGT 고유 넘버링에 따라 표시된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 아미노산 변형은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역(예컨대, WT IgA2 중쇄 불변 영역) 중 선택된 위치의 아미노산 잔기와의 비교로 이루어진다. US62/824,864(상기 문헌은 그 전문이 본원에서 포함된다)는 또한 IMGT 넘버링 체계에 따라 넘버링된 변형된 IgA 중쇄 불변 영역을 포함하는 항체 및 항체 구성물을 포함한다는 점에 주의한다. 일부 아미노산은 그 안에서 부주의하게 잘못 표지되었으며, US62/824,864에 기술된 바와 같은 특정 아미노산 위치는 본원에 제공된 바와 같은 하기의 특정 아미노산 위치에 상응한다. US62/824,864에서 언급된 위치 C92, N120, I121 및 T122는 IMGT 넘버링 체계(하기 표 11에 제시된 IMGT 넘버링, 오직 위치 넘버링을 지칭하기 위해서만)에 따라 정확하게 표지된 본원에 기술된 항체 중의 아미노산 잔기 C86, N114, I115 및 T116에 상응한다. US62/824,864 및 본 출원에 개시된 바와 같은 상기 항체에 대한 참조 야생형 중쇄 불변 영역은 동일하고, 즉, 도 1에 제시된 서열 번호 1과 같다. 따라서, US62/824,864에서 IMGT 명명 체계에서 잔기 C86, N114, I115, 및 T116을 C92, N120, I121, 및 T122로 부주의하게 잘못 표지된 것은 당업자에게 자명할 것이다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 IgA 항체는 불변 영역 내에 적어도 4개의 글리코실화 부위의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 IgA 항체는 항체의 불변 영역 중 적어도 3개의 N 연결된 글리코실화 부위의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체의 불변 영역 중 적어도 3개의 N 연결된 글리코실화 부위 및 항체의 불변 영역 중 적어도 하나의 O 연결된 글리코실화 부위의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 IgA 항체, 또는 기능적 단편은 IgA 중쇄 불변 영역 중 본원에 개시된 하나 이상의 변형(예컨대, 표 2)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 IgA 항체, 또는 기능적 단편은 IgA1 중쇄 불변 영역 중 본원에 개시된 하나 이상의 변형(예컨대, 표 2)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 본원에 개시된 IgA 항체, 또는 기능적 단편은 IgA2 중쇄 불변 영역 중 본원에 개시된 하나 이상의 변형(예컨대, 표 2)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 변형은 일부 실시양태에서, IgA1 중쇄 불변 영역의 CH1 영역, CH2 영역 및/또는 CH3 영역 내의 아미노산 잔기 중에 존재한다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 결실된 테일 피스를 포함한다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 변형은 IgA2 중쇄 불변 영역의 CH1 영역, CH2 영역 및/또는 CH3 영역 내의 아미노산 잔기 중에 존재한다. 일부 실시양태에서, IgA CH1 영역은 서열 번호 109에 기재된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA CH2 영역은 서열 번호 110에 기재된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA CH2 영역은 서열 번호 111에 기재된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 85%, 90%, 95%, 99% 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 IgA 항체 또는 그의 기능적 단편은 3-20, 3-19, 3-18, 3-17, 3-16, 3-15, 3-14, 3-13, 3-12, 3-11, 3-10, 3-9, 3-8, 3-7, 3-6, 3-5, 3-4개의 C-말단 아미노산의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA2 항체는 3-20, 3-19, 3-18, 3-17, 3-16, 3-15, 3-14, 3-13, 3-12, 3-11, 3-10, 3-9, 3-8, 3-7, 3-6, 3-5, 3-4개의 C-말단 아미노산의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, C-말단 아미노산은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, IgA2 항체의 아미노산 131-148로부터의 것이다.
일부 실시양태에서, IgA2 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 아미노산 131-148의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA2 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 아미노산 147-148의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA2 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 아미노산 146-148의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA2 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 아미노산 145-148의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA2 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 아미노산 144-148의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA2 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 아미노산 143-148의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA2 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 아미노산 142-148의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA2 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 아미노산 141-148의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA2 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 아미노산 140-148의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA2 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 아미노산 139-148의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA2 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 아미노산 138-148의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA2 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 아미노산 137-148의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA2 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 아미노산 136-148의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA2 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 아미노산 135-148의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA2 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 아미노산 134-148의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA2 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 아미노산 133-148의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA2 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 아미노산 132-148의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA2 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 아미노산 131-148의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA2 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 아미노산 P131-Y148의 결실을 포함한다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 C-말단 아스파라긴(N) 아미노산의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 돌연변이는 비보존적 아미노산 치환이다. 일부 실시양태에서, 돌연변이는 IgA의 C-말단 아스파라긴(N) 아미노산의 글리코실화 부위를 결실시킨다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, N135의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, N135의 비보존적 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, N135Q 돌연변이를 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 IgA 항체 또는 그의 기능적 단편은 IgA 중쇄 불변 영역 중 적어도 2개의 자연적으로 발생된 글리코실화 부위에 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 IgA 항체 또는 그의 기능적 단편은 IgA 중쇄 불변 영역 중 적어도 3개의 자연적으로 발생된 글리코실화 부위에 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 IgA 항체 또는 그의 기능적 단편은 적어도 4개의 자연적으로 발생된 글리코실화 부위에 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 글리코실화 부위는 N 연결된 글리코실화 부위를 포함한다. 일부 실시양태에서, 글리코실화 부위는 자연적으로 발생된 아스파라긴 잔기를 포함한다. 일부 실시양태에서, 글리코실화 부위는 CH2 영역에, CH3 영역, 및/또는 CH1 영역에 존재한다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, N45.2G, N15.2, L15.3, T16, N114, I115, T116, N135, 또는 이들의 조합에 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, N45.2G, N45.2A, N15.2G, N15.2Q, N15.2T, L15.3I, T16S, N114T, I115L, T116S, N135Q, 또는 이들의 조합인 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에서는 아글리코실화된 항체 또는 그의 기능적 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 아글리코실화된 항체는 IgA2 중쇄 불변 영역 중 4개의 자연적으로 발생된 글리코실화 부위 모두에 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 아글리코실화된 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 잔기; N45.2, N15.2, L15.3, T16, N114, I115, T116, 및 N135에 변형을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 아글리코실화된 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 잔기; N45.2, N15.2, N114, I115, T116, 및 N135에 변형을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 아글리코실화된 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 잔기; N45.2, N15.2, L15.3, T16, N114, I115, T116에 변형, 및 C-말단 테일피스 잔기 P131-Y148의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 아글리코실화된 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 잔기; N45.2, N15.2, N114, I115, T116에 변형, 및 P131-Y148의 결실을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에서는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 잔기 N45.2, N15.2, L15.3, T16, N114, I115, T116, 및 N135에 변형을 포함하는 항체 또는 그의 기능적 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본원에서는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 잔기 N45.2, N15.2, N114, I115, T116, 및 N135에 변형을 포함하는 항체 또는 그의 기능적 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, N45.2G, N45.2A, N15.2G, N114T, I115L, T116S, 및 N135Q인 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 N45.2G, N45.2A, N15.2Q, L15.3I, T16S, N114T, I115L, T116S, 및 N135Q인 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 중쇄 불변 영역은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, N45.2G, N45.2A, N15.2G, N15.2T, N114T, I115L, T116S, 및 N135Q인 아미노산 치환을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 아글리코실화된 항체 중 IgA 중쇄 불변 영역에 N45.2G, N45.2A, N15.2G, N114T, I115L, T116S, 및 N135Q인 산 치환의 조합을 포함한다. 일부 실시양태에서, 아글리코실화된 항체는 N45.2G, N45.2A, N15.2G, T16S, N114T, I115L, T116S인 산 치환의 조합 및 C-말단 테일피스의 결실을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 아글리코실화된 항체 중 IgA 중쇄 불변 영역에 N45.2G, N45.2A, N15.2Q, N114T, I115L, T116S, 및 N135Q인 산 치환의 조합을 포함한다. 일부 실시양태에서, 아글리코실화된 항체는 N45.2G, N45.2A, N15.2Q, T16S, N114T, I115L, T116S인 산 치환의 조합 및 C-말단 테일피스의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 아글리코실화된 항체 중 IgA 중쇄 불변 영역에 N45.2G, N45.2A, N15.2T, N114T, I115L, T116S, 및 N135Q인 산 치환의 조합을 포함한다. 일부 실시양태에서, 아글리코실화된 항체는 N45.2G, N45.2A, N15.2T, T16S, N114T, I115L, T116S인 산 치환의 조합 및 C-말단 테일피스의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 아글리코실화된 항체 중 IgA 중쇄 불변 영역에 N45.2G, N45.2A, N15.2T, L15.3I, T16S N114T, I115L, T116S, 및 N135Q인 산 치환의 조합을 포함한다. 일부 실시양태에서, 아글리코실화된 항체는 N45.2G, N45.2A, N15.2T, L15.3I, T16S, T16S, N114T, I115L, T116S인 산 치환의 조합 및 C-말단 테일피스의 결실을 포함한다.
일부 실시양태에서, 아글리코실화된 항체는 적어도 하나의 글리코실화 부위(예컨대, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, WT 잔기 N45.2, N114, N15.2. 및 N135)를 포함하는 상응하는 항체 또는 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 증가된 순환 반감기를 나타낸다. 일부 실시양태에서, 아글리코실화된 항체는 적어도 하나의 글리코실화 부위(예컨대, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, WT 잔기 N45.2, N114, N15.2. 및 N135)를 포함하는 상응하는 항체 또는 WT IgA 항체와 비교하여 감소된 응집을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 아글리코실화된 항체는 적어도 하나의 글리코실화 부위(예컨대, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, WT 잔기 N45.2, N114, N15.2. 및 N135)를 포함하는 상응하는 항체 또는 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 혈청 단백질과의 감소된 응집을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 아글리코실화된 항체는 적어도 하나의 글리코실화 부위(예컨대, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, WT 잔기 N45.2, N114, N15.2. 및 N135)를 포함하는 상응하는 항체 또는 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 감소된 응집을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 아글리코실화된 항체는 적어도 하나의 글리코실화 부위(예컨대, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, WT 잔기 N45.2, N114, N15.2. 및 N135)를 포함하는 상응하는 항체 또는 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 증가된 열안정성을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 아글리코실화된 항체는 상응하는 WT IgA와 비교하여 증가된 결합 친화도로 Fc 수용체에 결합하는 것으로 보인다. 일부 실시양태에서, 아글리코실화된 항체는 표적 세포의 ADCC를 유도한다. 일부 실시양태에서, 아글리코실화된 항체는 표적 항원에 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 아글리코실화된 항체는 표적 세포에 특이적으로 결합한다.
일부 실시양태에서, 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, N45.2의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, N45.2의 비보존적 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, N45.2G를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 N45.2 아미노산에 돌연변이를 갖지 않는 IgA2 항체와 비교하여 증가된 순환 반감기를 갖는다.
일부 실시양태에서, 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, P124의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, P124의 비보존적 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, P124R을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 P124 아미노산에 돌연변이를 갖지 않는 IgA2 항체와 비교하여 증가된 순환 반감기를 갖는다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 P124 아미노산에 돌연변이를 갖지 않는 IgA2 항체와 비교하여 증가된 안정성을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 바와 같은 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, C86(상기 기술된 바와 같이, US 62/824,864(그의 전문이 본원에 포함)에서 부주의하게 C92로 지칭)의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, C86의 비보존적 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, C86S를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 C86 아미노산에 돌연변이를 갖지 않는 항체와 비교하여 감소된 응집을 보인다. 일부 실시양태에서, 항체는 C86 아미노산에 돌연변이를 갖지 않는 항체와 비교하여 혈청 단백질과 감소된 응집을 보인다. 일부 실시양태에서, 항체는 C86 아미노산에 돌연변이를 갖지 않는 항체와 비교하여 시험관내 또는 생체내에서 감소된 응집을 보인다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, C86의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, C86의 비보존적 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, C86S를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 C86 아미노산에 돌연변이를 갖지 않는 IgA2 항체와 비교하여 감소된 응집을 보인다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 C86 아미노산에 돌연변이를 갖지 않는 IgA2 항체와 비교하여 혈청 단백질과 감소된 응집을 보인다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 C86 아미노산에 돌연변이를 갖지 않는 IgA2 항체와 비교하여 시험관내 또는 생체내에서 감소된 응집을 보인다.
일부 실시양태에서, 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, N114(상기 기술된 바와 같이, US 62/824,864(그의 전문이 본원에 포함)에서 부주의하게 N120으로 지칭)의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, N114의 비보존적 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, N114T를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 N114 아미노산에 돌연변이를 갖지 않는 IgA2 항체와 비교하여 증가된 순환 반감기를 갖는다.
일부 실시양태에서, 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, I115(상기 기술된 바와 같이, US 62/824,864(그의 전문이 본원에 포함)에서 부주의하게 I121로 지칭)의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, I115의 비보존적 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, I115L을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 I115 아미노산에 돌연변이를 갖지 않는 IgA2 항체와 비교하여 증가된 순환 반감기를 갖는다.
일부 실시양태에서, 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, T116(상기 기술된 바와 같이, US 62/824,864(그의 전문이 본원에 포함)에서 부주의하게 T122로 지칭)의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, T116의 비보존적 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, T116S를 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체는 T116 아미노산에 돌연변이를 갖지 않는 IgA2 항체와 비교하여 증가된 순환 반감기를 갖는다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, N114의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, N114의 비보존적 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, N14T를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 N114 아미노산에 돌연변이를 갖지 않는 IgA2 항체와 비교하여 증가된 순환 반감기를 갖는다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, I115의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, I115의 비보존적 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, I115L을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 I115 아미노산에 돌연변이를 갖지 않는 IgA2 항체와 비교하여 증가된 순환 반감기를 갖는다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, T116의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, T116의 비보존적 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, T116S를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 T116 아미노산에 돌연변이를 갖지 않는 IgA2 항체와 비교하여 증가된 순환 반감기를 갖는다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, N15.2의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, N15.2의 비보존적 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, N15.2G, N15.2Q, 또는 N15.2T를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 N15.2 아미노산에 돌연변이를 갖지 않는 IgA2 항체와 비교하여 증가된 순환 반감기를 갖는다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, L15.3의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, L15.3의 비보존적 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, L15.3I를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 L15.3 아미노산에 돌연변이를 갖지 않는 IgA2 항체와 비교하여 증가된 순환 반감기를 갖는다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, T16의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, T16의 비보존적 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, T16S를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 T16S 아미노산에 돌연변이를 갖지 않는 IgA2 항체와 비교하여 증가된 순환 반감기를 갖는다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, C147의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, C147의 비보존적 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 아미노산 C147의 결실을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 C147 아미노산에 돌연변이를 갖지 않는 IgA2 항체와 비교하여 감소된 응집을 보인다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, Y148의 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, Y148의 비보존적 돌연변이를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 아미노산 Y148의 결실을 포함한다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 하나 이상의 알부민 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 알부민 결합 도메인은 IgA 불변 영역의 경쇄 또는 중쇄에 융합된다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 알부민 결합 도메인은 IgA 불변 영역의 중쇄에 융합된다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 알부민 결합 도메인은 IgA 불변 영역의 중쇄의 CH3 영역의 C-말단 영역에 융합된다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 하나 이상의 알부민 결합 도메인을 포함하지 않는 IgA2 항체와 비교하여 증가된 순환 반감기를 갖는다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 하나 이상의 알부민 결합 도메인을 포함하고, 상응하는 IgG 항체의 1%, 5%, 또는 10%의 것 이내의 순환 반감기를 갖는다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 하나 이상의 알부민 결합 도메인 을 포함하고, 상응하는 IgG 항체의 것보다 큰 순환 반감기를 갖는다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 문헌 [Lohse S. et al. Cancer Res. 2015; 76(2):403-17]; [Meyer S. et al. mAbs. 2016; 8(1):87-98]; 또는 [Leusen J. et al. Molecular Immunology. 2015; 68: 35-39]에 기술된 하나 이상의 돌연변이를 포함한다.
일부 실시양태에서, 하나 이상의 돌연변이 또는 결실은 IgA 항체의 순환 반감기를 증가 또는 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 돌연변이 또는 결실은 IgA 항체의 순환 반감기를 증가시킨다. 예를 들어, 하나 이상의 돌연변이는 IgA 항체의 혈청 반감기를 인간에서 최대 21일 이상까지 증가시킬 수 있다. 추가로, 하나 이상의 돌연변이는 IgA 항체의 혈청 반감기를 마우스에서 최대 9일 이상까지 증가시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 돌연변이는 IgA 항체의 혈청 반감기를 면역글로불린 G(IgG) 분자와 유사한 수준으로 증가시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 돌연변이 또는 결실은 IgA 항체의 순환 반감기를 감소시킨다.
일부 실시양태에서, 하나 이상의 돌연변이는 IgA 항체의 혈청 반감기를 적어도 약 7일 내지 약 30일 이상 동안 증가시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 돌연변이는 IgA 항체의 혈청 반감기를 적어도 약 7일 동안 증가시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 돌연변이는 IgA 항체의 혈청 반감기를 최대 약 30일 동안 증가시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 돌연변이는 IgA 항체의 혈청 반감기를 약 7일 내지 약 8일, 약 7일 내지 약 9일, 약 7일 내지 약 10일, 약 7일 내지 약 15일, 약 7일 내지 약 20일, 약 7일 내지 약 25일, 약 7일 내지 약 30일, 약 8일 내지 약 9일, 약 8일 내지 약 10일, 약 8일 내지 약 15일, 약 8일 내지 약 20일, 약 8일 내지 약 25일, 약 8일 내지 약 30일, 약 9일 내지 약 10일, 약 9일 내지 약 15일, 약 9일 내지 약 20일, 약 9일 내지 약 25일, 약 9일 내지 약 30일, 약 10일 내지 약 15일, 약 10일 내지 약 20일, 약 10일 내지 약 25일, 약 10일 내지 약 30일, 약 15일 내지 약 20일, 약 15일 내지 약 25일, 약 15일 내지 약 30일, 약 20일 내지 약 25일, 약 20일 내지 약 30일, 또는 약 25일 내지 약 30일 동안 증가시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 돌연변이는 IgA 항체의 혈청 반감기를 약 7일, 약 8일, 약 9일, 약 10일, 약 15일, 약 20일, 약 25일, 또는 약 30일 동안 증가시킬 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 기능적 단편은 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 더 큰 순환 반감기를 나타낸다. 일부 실시양태에서, 항체는 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 적어도 약 2%, 5%, 10%, 12%, 15%, 20%, at 25%, 50%, 65%, 70%, 75%, 85%, 90%, 95%, 99%, 100%, 150%, 및 200%만큼 더 큰 순환 반감기를 나타낸다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 증가된 안정성을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 돌연변이 및/또는 하나 이상의 결실은 하나 이상의 돌연변이 및/또는 하나 이상의 결실을 포함하지 않는 상응하는 IgA 항체와 비교하여 IgA 항체의 안정성을 증가시킨다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 감소된 응집을 나타낸다. 항체 응집은 물리적 불안정성의 더 일반적인 현상이다. 단백질 응집체는 일반적으로 감소된 활성을 가지며, 더 중요하게는, 에피토프의 다중성 및/또는 형태적 변화로 인해 더 큰 면역원성 잠재능을 갖는다. 면역글로불린 응집체는 심각한 신부전 및 예컨대, 두통, 발열, 오한과 같은 아나필락시스 반응을 일으키는 것으로 알려져 있다. 그러므로, 항체 치료제에서 응집을 감소시키는 것이 유리하다. 추가로, 상업용 정맥내 면역글로불린 제품의 응집체 수준은 세계 보건 기구(WHO: World Health Organization) 표준에 따라 5% 미만으로 제한된다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 돌연변이는 응집을 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 돌연변이 및/또는 하나 이상의 결실은 하나 이상의 돌연변이 및/또는 하나 이상의 결실을 포함하지 않는 상응하는 IgA 항체와 비교하여 IgA 항체의 응집을 감소시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 기능적 단편은 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 감소된 응집을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 항체는 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 적어도 약 2%, 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 12%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 50%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 적어도 100%, 적어도 150%, 및 적어도 200%만큼 감소된 응집을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 기능적 단편은 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 혈청 단백질과 감소된 응집을 나타낸다. 일부 실시양태에서, 항체는 상응하는 WT IgA 항체와 관련하여 적어도 2%, 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 12%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 50%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 적어도 100%, 적어도 150%, 및 적어도 200%만큼 감소된 응집을 나타낸다.
일부 실시양태에서, 본원에 제공된 IgA 항체는 적어도 약 0.1% 내지 최대 약 5% 범위의 응집 수준을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 IgA 항체는 적어도 약 0.1%의 응집 수준을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 IgA 항체는 최대 약 5% 범위의 응집 수준을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 IgA 항체는 약 0.1% 내지 약 0.5%, 약 0.1% 내지 약 1%, 약 0.1% 내지 약 2%, 약 0.1% 내지 약 3%, 약 0.1% 내지 약 4%, 약 0.1% 내지 약 5%, 약 0.5% 내지 약 1%, 약 0.5% 내지 약 2%, 약 0.5% 내지 약 3%, 약 0.5% 내지 약 4%, 약 0.5% 내지 약 5%, 약 1% 내지 약 2%, 약 1% 내지 약 3%, 약 1% 내지 약 4%, 약 1% 내지 약 5%, 약 2% 내지 약 3%, 약 2% 내지 약 4%, 약 2% 내지 약 5%, 약 3% 내지 약 4%, 약 3% 내지 약 5%, 또는 약 4% 내지 약 5% 범위의 응집 수준을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 제공된 IgA 항체는 약 0.1%, 약 0.5%, 약 1%, 약 2%, 약 3%, 약 4%, 또는 약 5% 범위의 응집 수준을 갖는다.
본원에 개시된 치료 항체는 하나 이상의 자연적으로 발생된 아미노산 대신 합성 아미노산을 포함할 수 있다. 이러한 합성 아미노산은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어, 아미노사이클로헥산 카복실산, 노르류신, α-아미노 n-데칸산, 호모세린, S-아세틸아미노메틸-시스테인, 트랜스-3- 및 트랜스-4-하이드록시프롤린, 4-아미노페닐알라닌, 4-니트로페닐알라닌, 4-클로로페닐알라닌, 4-카복시페닐알라닌, β- 페닐세린 β-하이드록시페닐알라닌, 페닐글리신, α-나프틸알라닌, 사이클로헥실알라닌, 사이클로헥실글리신, 인돌린-2-카복실산, 1,2,3,4-테트라하이드로이소퀴놀린-3-카복실산, 아미노말론산, 아미노말론산 모노아미드, N'-벤질-N'-메틸-리신, N',N'-디벤질-리신, 6-하이드록시리신, 오르니틴, α-아미노사이클로펜탄 카복실산, α-아미노사이클로헥산 카복실산, α-아미노사이클로헵탄 카복실산, α-(2-아미노-2-노르보르난)-카복실산, α,γ-디아미노부티르산, α,β-디아미노프로피온산, 호모페닐알라닌, 및 α-tert-부틸글리신을 포함한다.
아미노산을 치환 또는 결실시키는 방법은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 아미노산 치환 또는 결실은 부위 지정 돌연변이유발에 의해 이루어질 수 있다(예를 들어, 문헌 [Zoller and Smith Nucl. Acids Res. 10:6487 (1982)]). 돌연변이유발은 변형시키고자 하는 항체의 불변 도메인의 서열 내에서 하나 이상의 변형을 갖는 올리고뉴클레오티드를 합성함으로써 수행될 수 있다. (예컨대, IgA 중쇄 불변 영역에 하나 이상의 변형을 포함하는) 본 개시내용의 항체는 예컨대, 부위 지정 돌연변이유발, 합성 유전자 구성, 반합성 유전자 구성, 무작위 돌연변이유발, 셔플링 등과 같은 당업계에 공지된 임의의 돌연변이유발 방법을 사용하여 제조될 수 있다. 부위 특이적 돌연변이유발을 통해 원하는 돌연변이의 DNA 서열을 코딩하는 특정 올리고뉴클레오티드 서열 뿐만 아니라, 충분한 개수의 인접 올리고뉴클레오티드를 사용하여 충분한 크기의 프라이머 서열 및 서열 복잡성을 제공하여 횡단되는 결실 접합부의 양쪽에서 안정적인 이중체를 형성함으로써 돌연변이체를 생성할 수 있다. 전형적으로, 길이가 약 17 내지 약 75개 이상의 뉴클레오티드 길이인 프라이머가 바람직하며, 서열의 접합부의 양쪽에 약 10 내지 약 25개 이상의 잔기가 변경된다. 하나 이상의 위치에서 다양한 상이한 돌연변이를 도입하는 다수의 상기와 같은 프라이머를 사용하여 돌연변이체 라이브러리를 생성할 수 있다.
부위 특이적 돌연변이유발 기술은 당업계에 널리 알려져 있다(예컨대, 문헌 [Kunkel et al., Methods Enzymol, 154:367-82, 1987] 참조). 일반적으로, 부위 지정 돌연변이유발은 먼저 단일 가닥 벡터를 수득하거나, 또는 원하는 펩티드를 코딩하는 DNA 서열을 그의 서열 내에 포함하는 이중 가닥 벡터의 두 가닥 중 일부를 용융시킴으로써 수행된다. 원하는 돌연변이화된 서열을 보유하는 올리고뉴클레오티드 프라이머는 일반적으로 합성에 의해 제조된다. 이어서, 상기 프라이머를 단일 가닥 벡터로 어닐링하고, 예컨대, T7 DNA 폴리머라제와 같은 DNA 중합 효소로 처리하여 돌연변이를 포함하는 가닥의 합성을 완료한다. 따라서, 한 가닥은 원래의 돌연변이화되지 않은 서열을 코딩하고, 두 번째 가닥은 원하는 돌연변이를 갖는 이종이중체가 형성된다. 이어서, 상기 이종이중체 벡터를 예컨대, E. 콜라이(E. coli) 세포와 같은 적절한 세포를 형질전환 또는 형질감염시키는데 사용되며, 돌연변이화된 서열 배열을 갖는 재조합 벡터를 포함하는 클론이 선택된다. 이해되는 바와 같이, 이 기술은 전형적으로 단일 가닥 및 이중 가닥 형태로 존재하는 파지 벡터를 사용한다. 부위 지정 돌연변이유발에 유용한 전형적인 벡터는 예컨대, M13 파지와 같은 벡터를 포함한다. 이들 파지는 상업적으로 용이하게 입수가능하고, 이들의 용도는 일반적으로 당업자에게 널리 알려져 있다. 이중 가닥 플라스미드 또한 플라스미드에서 파지로 관심 유전자를 전달하는 단계를 삭제한, 부위 지정 돌연변이유발에 통상적으로 사용된다. 부위 지정 돌연변이유발은 또한 문헌 [Kim Jin-Kyoo et al., (1994) Eur. J. Immunol. 24:542-548]에 기술되어 있는 바와 같이, 뮤린 IgG1 힌지-Fc 단편의 혈장 제거에 영향을 주는 아미노산 잔기를 확인하는 데 사용되었다.
대안적으로, 예컨대, Taq DNA 폴리머라제와 같은 상업적으로 이용가능한 열안정성 효소와 함께 PCR을 사용하여 돌연변이유발성 올리고뉴클레오티드 프라이머를 증폭된 DNA 단편에 도입시킨 후, 적절한 클로닝 또는 발현 벡터로 클로닝할 수 있다. PCR 매개 돌연변이유발 방법에에 대해서는 예컨대, 문헌 [Tomic et al., Nucleic Acids Res., 18(6):1656, 1987], 및 [Upender et al., Biotechniques, 18(1):29-30, 32, 1995]를 참조한다. 열안정성 폴리머라제 외에 열안정성 리가제를 사용하는 PCR은 또한 인산화된 돌연변이유발성 올리고뉴클레오티드를 증폭된 DNA 단편 내로 도입시킨 후, 이어서, 적절한 클로닝 또는 발현 벡터 내로 클로닝하는 데에도 사용될 수 있다(예컨대, 문헌 [Michael, Biotechniques, 16(3):410-2, 1994] 참조).
항체의 Fc 영역 또는 그의 FcR 결합 도메인의 서열 변이체를 생성하는 당업자에게 공지된 다른 방법이 사용될 수 있다. 예를 들어, 항체 또는 그의 단편의 불변 도메인의 아미노산 서열을 코딩하는 재조합 벡터는 서열 변이체를 얻기 위해 예컨대, 하이드록실아민과 같은 돌연변이 유발제로 처리될 수 있다. 예를 들어, ADCC 증가, 응집 감소, FcR에 대한 친화도 증가 및/또는 생체내 반감기 증가와 같은 바람직한 특성을 초래하는 돌연변이체는 하기 기술되는 것과 같은 통상적인 검정을 사용하여 스크리닝될 수 있다.
합성 유전자 구성은 관심 폴리펩티드를 코딩하기 위해 디자인된 폴리뉴클레오티드 분자의 시험관내 합성을 수반한다. 유전자 합성은 다수의 기술, 예컨대, 문헌 [Tian et al. (2004, Nature 432: 1050-1054)]에 기술된 다중 마이크로칩 기반 기술, 및 올리고뉴클레오티드를 합성하고, 광-프로그램가능한 미세유체 칩 상에서 어셈블리하는 유사 기술을 사용하여 수행될 수 있다. 단일 또는 다중 아미노산 치환, 결실 및/또는 삽입은 돌연변이유발, 재조합 및/또는 셔플링, 이어서, 예컨대, 문헌 [Reidhaar-Olson and Sauer, 1988, Science 241: 53-57]; [Bowie and Sauer, 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 2152-2156]; WO 95/17413; 또는 WO 95/22625에 개시된 바와 같은 관련 스크리닝 방법에 의해 이루어지고, 시험될 수 있다. 사용될 수 있는 다른 방법으로는 오류 유발 PCR, 파지 디스플레이 (예컨대, 문헌 [Lowman et al., 1991, Biochemistry 30: 10832-10837]; 미국 특허 제5,223,409호; WO 92/06204) 및 영역 지정 돌연변이유발(문헌 [Derbyshire et al., 1986, Gene 46: 145; Ner et al., 1988, DNA 7: 127])을 포함한다.
돌연변이유발/셔플링 방법은 숙주 세포에 의해 발현되는 클로닝되고, 돌연변이화된 폴리펩티드의 활성을 검출하는 고처리량 자동화 스크리닝 방법과 조합될 수 있다(문헌 [Ness et al., 1999, Nature Biotechnology 17: 893-896]). 활성 폴리펩티드를 코딩하는 돌연변이화된 DNA 분자는 숙주 세포로부터 회수될 수 있고 당업계의 표준 방법을 사용하여 신속하게 시퀀싱될 수 있다. 이러한 방법을 사용함으로써 폴리펩티드 중의 개별 아미노산 잔기의 중요성을 신속하게 결정할 수 있다.
반합성 유전자 구성은 합성 유전자 구성, 및/또는 부위 지정 돌연변이유발, 및/또는 무작위 돌연변이유발, 및/또는 셔플링의 측면을 조합함으로써 달성된다. 반합성 구성은 합성되는 폴리뉴클레오티드 단편을 PCR 기술과 함께 사용하는 프로세스로 유형화된다. 따라서, 유전자의 정의된 영역은 새로 합성될 수 있는 반면, 다른 영역은 부위 특이적 돌연변이유발성 프라이머를 사용하여 증폭될 수 있고, 추가의 다른 영역에 대해 오류 유발 PCR 또는 오류 비유발성 PCR 증폭이 수행될 수 있다. 이어서, 폴리뉴클레오티드 부분서열을 셔플링할 수 있다.
다른 공유 변형
항체의 공유 변형도 본 발명의 범주 내에 포함된다. 이는 화학적 합성에 의해, 또는 적용가능한 경우, 항체의 효소적 또는 화학적 절단에 의해 이루어질 수 있다. 항체의 다른 유형의 공유 변형은 항체의 표적 아미노산 잔기를 선택된 측쇄 또는 N- 또는 C-말단 잔기와 반응할 수 있는 유기 유도체화제와 반응시킴으로써 분자 내로 도입된다.
시스테이닐 잔기는 예컨대, 클로로아세트산 또는 클로로아세트아미드와 같은 할로아세테이트(및 상응하는 아민)와 가장 일반적으로 반응하여 카복시메틸 또는 카복시아미도메틸 유도체를 제공한다. 시스테이닐 잔기는 또한 브로모트리플루오로아세톤, 알파-브로모-(5 이미도조일)프로피온산, 클로로아세틸 포스페이트, N-알킬말레이미드, 3-니트로-2-피리딜 디술피드, 메틸 2-피리딜 디술피드, p-클로로머큐리벤조에이트, 2-클로로머큐리-4-니트로페놀, 또는 클로로-7-니트로벤조-2-옥사-1,3-디아졸과의 반응에 의해 유도체화된다.
히스티딜 잔기는 pH 5.5-7.0에서 디에틸피로카보네이트와의 반응에 의해 유도체화되는데, 이는 상기 작용제가 히스티딜 측쇄에 대해 상대적으로 특이적이기 때문이다. 파라-브로모페나실 브로마이드도 유용하다; 반응은 바람직하게는 pH 6.0에서 0.1 M 소듐 카코딜레이트에서 수행된다. 리시닐 및 아미노 말단 잔기는 숙신산 또는 다른 카복실산 무수물과 반응한다. 이러한 작용제를 사용한 유도체화는 리시닐 잔기의 전하를 역전시키는 효과가 있다. 알파 아미노-함유 잔기를 유도체화하기 위한 다른 적합한 시약은 이미도에스테르, 예컨대, 메틸 피콜린이미데이트, 피리독살 포스페이트, 피리독살, 클로로보로하이드라이드, 트리니트로벤젠술폰산, 메틸이소우레아, 2,4-펜탄디온, 및 글리옥실레이트와의 트랜스아미나제 촉매 반응을 포함한다.
아르기닐 잔기는 페닐글리옥살, 2,3-부탄디온, 1,2-사이클로헥산디온 및 닌히드린과 같은 하나 이상의 통상적인 시약과의 반응에 의해 변형된다. 아르기닌 잔기의 유도체화는 구아니딘 작용기의 높은 pKa 때문에 반응이 알칼리성 조건에서 수행될 것을 요구한다. 추가로, 상기 시약은 아르기닌 엡실론-아미노 기 뿐만 아니라, 리신 기와도 반응할 수 있다.
방향족 디아조늄 화합물 또는 테트라니트로메탄과의 반응에 의해 티로실 잔기에 스펙트럼 표지를 도입하는 데 특히 관심을 두고 티로실 잔기의 특정 변형이 이루어질 수 있다. 가장 일반적으로, N-아세틸이미디졸 및 테트라니트로메탄은 각각 0-아세틸 티로실 종 및 3-니트로 유도체를 형성하는 데 사용된다. 티로실 잔기는 125I 또는 131I를 사용하여 아이도딘화되어 방사성면역검정에 사용하기 위한 표지된 단백질을 제조한다. 카복실 측쇄 기(아스파틸 또는 글루타밀)는 카보디이미드(R-N. dbd.C.dbd.N-R')(여기서, R 및 R'은 상이한 알킬 기, 예컨대, 1-사이클로헥실-3-(2-모르폴리닐-4-에틸)카보디이미드 또는 1-에틸-3-(4-아조니아-4,4-디메틸펜틸)카보디이미드이다)와의 반응에 의해 선택적으로 변형된다. 추가로, 아스파틸 및 글루타밀 잔기는 암모늄 이온과의 반응에 의해 아스파라기닐 및 글루타미닐 잔기로 전환된다.
글루타미닐 및 아스파라기닐 잔기는 빈번하게는 각각 상응하는 글루타밀 및 아스파틸 잔기로 탈아미드화된다. 이러한 잔기는 중성 또는 염기성 조건에서 탈아미드화된다. 이들 잔기의 탈아미드화된 형태는 본 발명의 범주 내에 포함된다. 다른 변형으로는 프롤린 및 리신의 하이드록실화, 세릴 또는 트레오닐 잔기의 하이드록실 기의 인산화, 리신, 아르기닌 및 히스티딘 측쇄의 알파 아미노 기의 메틸화(문헌 [T. E. Creighton, Proteins: Structure and Molecular Properties, W.H. Freeman & Co., San Francisco, pp. 79-86 (1983)]), N-말단 아민의 아세틸화, 및 임의의 C-말단 카복실 기의 아미드화를 포함한다.
공유 변형의 또 다른 유형은 글리코시드를 항체에 화학적으로 또는 효소적으로 커플링하는 것을 포함한다. 이러한 방법은 N- 또는 O-연결된 글리코실화에 대한 글리코실화 능력을 갖는 숙주 세포에서 항체의 생산을 필요로 하지 않는다는 점에서 유리하다. 사용된 커플링 모드에 따라, 당(들)은 (a) 아르기닌 및 히스티딘, (b) 유리 카복실 기, (c) 예컨대, 시스테인의 것과 같은 유리 술프히드릴 기, (d) 예컨대, 세린, 트레오닌, 또는 하이드록시프롤린의 것과 같은 유리 하이드록실 기, (e) 예컨대, 페닐알라닌, 티로신, 또는 트립토판의 것과 같은 방향족 잔기, 또는 (f) 글루타민의 아미드 기에 부착될 수 있다. 이러한 방법은 1987년 9월 11일 공개된 W087I 05330 및 [Aplin and Wriston, CRC Crit. Rev. Biochem., pp. 259-306 (1981)]에 기술되어 있다.
항체 상에 존재하는 임의의 탄수화물 모이어티의 제거는 화학적으로 또는 효소적으로 달성될 수 있다. 화학적 탈글리코실화는 화합물 트리플루오로메탄술폰산 또는 등가 화합물에의 항체 노출을 필요로 한다. 이러한 처리는 항체는 무손상 상태 그대로 유지시키면서, 연결 당(N-아세틸 글루코사민 또는 N-아세틸갈락토사민)을 제외한 대부분의 또는 모든 당을 절단한다. 화학적 탈글리코실화는 문헌 [Hakimuddin, et al. Arch. Biochem. Biophys. 259: 52 (1987)] 및 [Edge et al. Anal. Biochem., 118: 131 (1981)]에 기술되어 있다. 항체 상의 탄수화물 모이어티의 효소적 절단은 문헌 [Thotakura et al. Meth. Enzymol. 138: 350 (1987)]에 기술된 바와 같이, 다양한 엔도 및 엑소글리코시다제 사용에 의해 달성될 수 있다.
항체의 공유 변형의 또 다른 유형은 다양한 비단백질성 중합체, 예컨대, 폴리에틸렌 글리콜, 폴리프로필렌 글리콜, 폴리옥시에틸화 폴리올, 폴리옥시에틸화 소르비톨, 폴리옥시에틸화 글루코스, 폴리옥시에틸화 글리세롤, 폴리옥시알킬렌 또는 예컨대, 덱스트란과 같은 다당류 중합체 중 하나에 항체를 연결하는 것을 포함한다. 이러한 방법은 당업계에 공지되어 있으며, 예컨대, 미국 특허 제4,640,835호; 제4,496,689호; 제4,301,144호; 제4,670,417호; 제 4,791,192호, 제4,179,337호, 제4,766,106호, 제4,179,337호, 제4,495,285호, 제4,609,546호 또는 EP 315 456을 참조한다.
IgA 항체 표적
본원에 기술된 IgA 항체는 세포 표면 상에 발현된 항원을 표적화하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 표적 세포(예컨대, 암 세포)의 표면 상에 발현된 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항원은 인간 항원이다. 일부 실시양태에서, 표적 세포는 인간 세포이다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 하기 단백질 중 하나의 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다: CD20, GD2, CD47, CD38, EGFR, HER2, PD-L1, CD25, CD33, BCMA, CD44, CD21, CD64, α-폴레이트 수용체, CAIX, CD30, ROR1, CEA, EGP-2, EGP-40, HER3, 폴레이트 결합 단백질, GD3, IL-13R-a2, KDR, EDB-F, 메조텔린, EGFR, MUC-1, MAGE-A1, MUC16, h5T4, PSMA, TAG-72, EGFRvIII, CD123, VEGF-R2, BCMA, CD19, CD22, CD30, CD33, CD123, CD38, CD44, CD70, CD274, CD45, CD123, CD138, CD171, ROR1, EGFR, EphA2, FBP, FAP, CEA, EGP2, EGP40, TAG72, PSMA, PSA, PAP, hsp70-2, M-CSF, LAGE-la, p53, NKG2D 리간드, B7-H6, IL-13 Rα 2, IL-11Rα, MUC1, MUC16, CA9, GD3, HMW-MAA, CD171, 루이스 Y(Lewis Y), G250/CAIX, HLA-AI MAGE A1, HLA-A2 NY-ESO-1, PSC1, PCTA-1, MAGE, ELF2M, IGF-I, IGF-II, IGF-I 수용체, hTERT, WT1, MUC1, LMP2, HPV16, HPV18, RGL4, 멜란A(MelanA), MART, ML-IAP, AFP, BCR, ABL, CYP1B1, PLAC1, BORIS, NY-BR-1, RGS5, SART3, EphA2, 글리피칸(Glypican)-3, 5T4, 8H9, ανβ6 인테그린, B7-H3, B7-H6, CAIX, CA9, CSPG4, EGP2, EGP40, EPCAM, ERBB3, ERBB4, ErbB3/4, FAP, FAR, FBP, KDR, MCSP, Mucl, Mucl6, NCAM, PRAME, ROR1, CD44v7/8, 8H9, NCAM, VEGF-R, TAG72, RAGE-1, MN-CA IX, RU1, RU2 (AS), fetal AchR, TEM1, TEM8, PAX5, OY-TES1, LCK, HMWMAA, AKAP-4, SSX2, XAGE 1, tie 2, PDGFR-β, 칼리크레인 4, PBF, PRAME, HSDL1, CA125, TADG-12, MUC16, 만난-MIC-1, HERV-K-MEL, KK-LC-1, KM-HN-1, LAGE-1, MAGE-A4, SP17, SSX4, TAG1, TAG2, ENAH, 맘마글로빈-A, NY-BR-1, BAGE-1, HERV-K-MEL, KK-LC-1, KM-KN-1, LAGE1, MAGE1A, MAGEA2, 뮤싱크(mucink), TRAG3, c-myc, 사이클린 B1, p62, DKK1, RU2AS, k-ras, ME1, NFYC, STEAP1, FGF5, RU2AS, hsp70-2, ARTC1, B-RAF, 베타-카테닌, CDC27, CDK4, CDK12, CDKN2A, CLPP, CSNK1A1, FN1, GAS7, GPNMB, HAUS3, LDLR-푸코실트랜스퍼라제, MART2, MATN, MUM1, MUM2, MUM3, 네오-PAP, 미오신, PPP1R3B, PRDX5, PTPRK, RBAF600, SIRT2, SNRPD1, 트리오스포스페이트 이소머라제, OA1, RAB38, TRP1, TRP2, 멜란-A, BAGE1, GAGE1, GAGE2, GAGE8, GAGE3, GAGE4, GAGE5, GAGE6, GAGE7, GNTVF, LY6K, TRAG3, CASP8, SAGE, DEK-CAN, EFTUD2, FLT3-ITD, 사이클린 A1, FNDC3B, MAGEAG, G250, 헵신, 장 카복실 에스테라제, PBF, CASP5, COA1, OGT, OS9, CALCA, MDM2, 알파 액티닌4, 신장 인자 2, fos-관련 항원 1, 레구마인, 정자 단백질 17, 카보닉 안하이드라제 IX, 폴레이트 수용체-α, 호중구 엘라스타제, 에프린B2, 신경교종 연관 항원, β-인간 융모막 성선 자극 호르몬, 알파태아단백 티로글로불린, 텔로머라제 역전사효소, 장 카복시 에스테라제, 프로스테인 또는 서바이빈.
강글리오시드 G2
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 IgA 항체 또는 그의 기능적 단편(즉, IgA 중쇄 불변 영역에 본원에 개시된 하나 이상의 변형을 포함하는 항체)은 GD2에 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 O-아세틸화된 GD2에 결합한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 GD2에 결합하고, O-아세틸화된 GD2에 결합하지 않는다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 O-아세틸화된 GD2에 결합하고, GD2에 결합하지 않는다. 일부 실시양태에서, 항체는 GD2에 결합하고, O-아세틸화된 GD2에 결합한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 기능적 단편은 인간 GD2 폴리펩티드에 특이적으로 결합한다. 인간 기원의 GD2의 폴리펩티드 및 코딩 핵산 서열 및 다수의 동물의 것은 예컨대, NCBI 웹사이트로부터 공개적으로 이용가능하다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 ch14.18의 중쇄의 적어도 CDR3을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 ch14.18의 중쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 중 1, 2, 또는 3개를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 ch14.18의 경쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 중 1, 2, 또는 3개를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 ch14.18의 중쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 중 1, 2, 또는 3개 및 항체 ch14.18의 경쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 중 1, 2, 또는 3개를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 ch14.18의 중쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 및 항체 ch14.18의 경쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 ch14.18의 중쇄의 적어도 CDR3 및 IgA 힌지를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 ch14.18의 중쇄의 적어도 CDR3, IgA 힌지, CH1 IgA 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 ch14.18의 중쇄의 적어도 CDR3, IgA 힌지, CH1 IgA 영역, 및 CH2 IgA 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 ch14.18의 중쇄의 적어도 CDR3, IgA 힌지, CH1 IgA 영역, CH2 IgA 영역, 및 CH3 IgA 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 아미노산 서열:
Figure pct00001
를 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 아미노산 서열:
Figure pct00002
를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 아미노산 서열:
Figure pct00003
를 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 아미노산 서열:
Figure pct00004
를 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 아미노산 서열: EFTFTDYY[서열 번호 10]을 포함하는 CDR1; 아미노산 서열: IRNRANGYTT[서열 번호 11]을 포함하는 CDR2; 아미노산 서열; 아미노산 서열: ARVSNWAFDY[서열 번호 12]를 포함하는 CDR3 중 하나 이상의 것을 포함하는 가변 중쇄를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 아미노산 서열: QSLLKNNGNTFL[서열 번호 13]을 포함하는 CDR1; 아미노산 서열: KVS[서열 번호 14]를 포함하는 CDR2; 아미노산 서열: SQSTHIPYT[서열 번호 15]를 포함하는 CDR3 중 하나 이상의 것을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 아미노산 서열: EFTFTDYY[서열 번호 10]을 포함하는 CDR1; 아미노산 서열: IRNRANGYTT[서열 번호 11]을 포함하는 CDR2; 아미노산 서열; 아미노산 서열: ARVSNWAFDY[서열 번호 12]를 포함하는 CDR3 중 하나 이상의 것을 포함하는 가변 중쇄; 및 아미노산 서열: QSLLKNNGNTFL[서열 번호 13]을 포함하는 CDR1; 아미노산 서열: KVS[서열 번호 14]를 포함하는 CDR2; 아미노산 서열: SQSTHIPYT[서열 번호 15]를 포함하는 CDR3 중 하나 이상의 것을 포함하는 가변 경쇄를 포함한다.
일부 실시양태에서, 항GD2 IgA 항체는 3F8 항체의 HC-CDR1, HC-CDR2, HC-CDR3, LC-CDR1, LC-CDR2, LC-CDR3 중 하나 이상의 것(예컨대, 2, 3, 4, 5, 또는 6개)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항GD2 항체는 3F8 항체의 가변 중쇄 및/또는 가변 경쇄를 포함한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 VH, (b) 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 VL, 및 (c) 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 가변 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; (b) 서열 번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2; (c) 서열 번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; (d) 서열 번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (e) 서열 번호 66의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 (f) 서열 번호 74의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 CDR을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; (b) 서열 번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2; 및 (c) 서열 번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 또는 3개 모두의 VH CDR 서열; 및 (d) 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (b) 서열 번호 66의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 (c) 서열 번호 74의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 또는 3개 모두의 VL CDR 서열; 및 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 CDR: 서열 번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 서열 번호 74의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본원의 개시내용은 (a) 서열 번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (b) 서열 번호 66의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2 및 (c) 서열 번호 74의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 또는 3개 모두의 VL CDR 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; (b) 서열 번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2 및 (c) 서열 번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 또는 3개 모두의 VH CDR 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 CDR: (a) 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; (b) 서열 번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2; (c) 서열 번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; (d) 서열 번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (e) 서열 번호 66의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 (f) 서열 번호 74의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열 번호 4의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성을 갖는 VH 서열은 참조 서열 대비 치환(예컨대, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 포함하지만, 상기 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 항원에 결합할 수 있는 능력을 보유한다. 일부 실시양태에서, 서열 번호 4의 아미노산 서열에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입, 및/또는 결실된다. 일부 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 CDR 밖의 영역에서(예컨대, FR에서) 일어난다. 임의적으로, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 상기 서열의 번역 후 변형을 포함하여, 서열 번호 4의 아미노산 서열의 VH 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH는 (a) 서열 번호 34의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, (b) 서열 번호 42의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 (c) 서열 번호 50의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3으로부터 선택되는 1, 2, 또는 3개의 CDR을 포함한다.
한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열 번호 5의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성을 갖는 VL 서열은 참조 서열 대비 치환(예컨대, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만, 상기 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 항원에 결합할 수 있는 능력을 보유한다. 일부 실시양태에서, 서열 번호 5의 아미노산 서열 중 어느 하나에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입, 및/또는 결실된다. 일부 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실 CDR 밖의 영역에서(예컨대, FR에서) 일어난다. 임의적으로, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 상기 서열의 번역 후 변형을 포함하여, 서열 번호 5의 VL 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, VL은 (a) 서열 번호 58의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (b) 서열 번호 66의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 (c) 서열 번호 74의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 1, 2, 또는 3개의 CDR을 포함한다.
한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 상기 제공된 실시양태 중 임의의 것에서와 같은 VH, 및 상기 제공된 실시양태 중 임의의 것에서와 같은 VL을 포함하는 것인 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 항체는 상기 서열의 번역 후 변형을 포함하여, 서열 번호 4의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열 번호 5의 VL 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열 번호 16-21 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 IgA 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열 번호 31의 카파 경쇄 불변 영역을 포함한다.
CD20
일부 실시양태에서, IgA 항체는 CD20에 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 타입 II 또는 타입 I/II CD20 결합 영역을 포함하는 항원 결합 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 기능적 단편은 인간 CD20 폴리펩티드에 특이적으로 결합한다. 인간 기원의 CD20의 폴리펩티드 및 코딩 핵산 서열 및 다수의 동물의 것은 예컨대, NCBI 웹사이트로부터 공개적으로 이용가능하다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 CD20 에피토프에 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인을 포함하며, 여기서, 상기 CD20 에피토프는 하기 아미노산 서열: YNCEPANPSEKNSPSTQYCYS[서열 번호 6] 내에 있다.
일부 실시양태에서, CD20 항체의 가변 영역은 PCTNL2017050581(이는 그 전문이 본원에서 참조로 포함된다)에 기술되어 있다. 일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 하기 아미노산 서열:
Figure pct00005
내 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 중 1, 2, 또는 3개를 포함한다. 일부 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 하기 아미노산 서열:
Figure pct00006
내 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 중 1, 2, 또는 3개를 포함한다.
일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 하기 아미노산 서열:
Figure pct00007
을 포함한다. 일부 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 하기 아미노산 서열:
Figure pct00008
을 포함한다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 오비누투주맙의 중쇄의 적어도 CDR3을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 오비누투주맙의 중쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 중 1, 2, 또는 3개를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 오비누투주맙의 경쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 중 1, 2, 또는 3개를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 오비누투주맙의 중쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 중 1, 2, 또는 3개 및 항체 오비누투주맙의 경쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 중 1, 2, 또는 3개를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 오비누투주맙의 중쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 및 항체 오비누투주맙의 경쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 오비누투주맙의 중쇄의 적어도 CDR3 및 IgA 힌지를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 오비누투주맙의 중쇄의 적어도 CDR3, IgA 힌지, CH1 IgA 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 오비누투주맙의 중쇄의 적어도 CDR3, IgA 힌지, CH1 IgA 영역, 및 CH2 IgA 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 오비누투주맙의 중쇄의 적어도 CDR3, IgA 힌지, CH1 IgA 영역, CH2 IgA 영역, 및 CH3 IgA 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 CD20 에피토프 EPANPSEK에 특이적으로 결합한다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 CD20에 특이적으로 결합하고, 동일한 이소타입의 불변 영역을 갖는 리툭시맙과 비교하여 증가된 프로그래밍된 세포 사멸(PCD) 기능을 갖는다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 CD20에 특이적으로 결합하고, 동일한 이소타입의 불변 영역을 갖는 리툭시맙과 비교하여 증가된 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC) 기능성을 갖는다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 CD20에 특이적으로 결합하고, 동일한 이소타입의 불변 영역을 갖는 리툭시맙과 비교하여 증가된 보체 의존성 세포독성(CDC) 기능성을 갖는다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 상응하는 IgG 항체와 비교하여 더 짧은 순환 반감기를 갖는다. 일부 실시양태에서, 항CD20 IgA 항체의 투여는 상응하는 IgG 항체와 비교하여 B 세포 고갈로부터 더 적은 부작용과 연관이 있다. 일부 실시양태에서, 항CD20 항체의 투여는 상응하는 IgG 항체와 비교하여 더 빠른 B 세포 보충과 연관이 있다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 81의 아미노산 서열을 포함하는 VH, (b) 서열 번호 95의 아미노산 서열을 포함하는 VL, 및 (c) 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 가변 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; (b) 서열 번호 41의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2; (c) 서열 번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; (d) 서열 번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (e) 서열 번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 (f) 서열 번호 73의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 CDR을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
본 개시내용은 (a) 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; (b) 서열 번호 41의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2; 및 (c) 서열 번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 또는 3개 모두의 VH CDR 서열; 및 (d) 서열 번호 95의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (b) 서열 번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 (c) 서열 번호 73의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 또는 3개 모두의 VL CDR 서열; 및 서열 번호 81의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 CDR: 서열 번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 서열 번호 73의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본원의 개시내용은 (a) 서열 번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (b) 서열 번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2 및 (c) 서열 번호 73의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 또는 3개 모두의 VL CDR 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; (b) 서열 번호 41의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2 및 (c) 서열 번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 또는 3개 모두의 VH CDR 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 CDR: (a) 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; (b) 서열 번호 41의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2; (c) 서열 번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; (d) 서열 번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (e) 서열 번호 65의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 (f) 서열 번호 73의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열 번호 81의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성을 갖는 VH 서열은 참조 서열 대비 치환(예컨대, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 포함하지만, 상기 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 항원에 결합할 수 있는 능력을 보유한다. 일부 실시양태에서, 서열 번호 81의 아미노산 서열에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입, 및/또는 결실된다. 일부 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 CDR 밖의 영역에서(예컨대, FR에서) 일어난다. 임의적으로, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 상기 서열의 번역 후 변형을 포함하여, 서열 번호 81의 아미노산 서열의 VH 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH는 (a) 서열 번호 33의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, (b) 서열 번호 41의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 (c) 서열 번호 49의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3으로부터 선택되는 1, 2, 또는 3개의 CDR을 포함한다.
한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열 번호 95의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성을 갖는 VL 서열은 참조 서열 대비 치환(예컨대, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만, 상기 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 항원에 결합할 수 있는 능력을 보유한다. 일부 실시양태에서, 서열 번호 95의 아미노산 서열 중 어느 하나에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입, 및/또는 결실된다. 일부 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실 CDR 밖의 영역에서(예컨대, FR에서) 일어난다. 임의적으로, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 상기 서열의 번역 후 변형을 포함하여, 서열 번호 95의 VL 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, VL은 (a) 서열 번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (b) 서열 번호 5의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 (c) 서열 번호 73의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 1, 2, 또는 3개의 CDR을 포함한다.
한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 상기 제공된 실시양태 중 임의의 것에서와 같은 VH, 및 상기 제공된 실시양태 중 임의의 것에서와 같은 VL을 포함하는 것인 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 항체는 상기 서열의 번역 후 변형을 포함하여, 서열 번호 81의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열 번호 95의 VL 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열 번호 16-21 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 IgA 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열 번호 31의 카파 경쇄 불변 영역을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에서는 CD47에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 기능적 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 UMAB10의 중쇄의 적어도 CDR3을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 UMAB10의 중쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 중 1, 2, 또는 3개를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 UMAB10의 경쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 중 1, 2, 또는 3개를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 UMAB10의 중쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 중 1, 2, 또는 3개 및 항체 UMAB10의 경쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 중 1, 2, 또는 3개를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 UMAB10의 중쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 및 항체 UMAB10의 경쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 UMAB10의 중쇄의 적어도 CDR3 및 IgA 힌지를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 UMAB10의 중쇄의 적어도 CDR3, IgA 힌지, CH1 IgA 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 UMAB10의 중쇄의 적어도 CDR3, IgA 힌지, CH1 IgA 영역, 및 CH2 IgA 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 UMAB10의 중쇄의 적어도 CDR3, IgA 힌지, CH1 IgA 영역, CH2 IgA 영역, 및 CH3 IgA 영역을 포함한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 86의 아미노산 서열을 포함하는 VH, (b) 서열 번호 100의 아미노산 서열을 포함하는 VL, 및 (c) 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 가변 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; (b) 서열 번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2; (c) 서열 번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; (d) 서열 번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (e) 서열 번호 72의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 (f) 서열 번호 80의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 CDR을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; (b) 서열 번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2; 및 (c) 서열 번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 또는 3개 모두의 VH CDR 서열; 및 (d) 서열 번호 8의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (b) 서열 번호 72의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 (c) 서열 번호 80의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 또는 3개 모두의 VL CDR 서열; 및 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 CDR: 서열 번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 서열 번호 80의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본원의 개시내용은 (a) 서열 번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (b) 서열 번호 72의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2 및 (c) 서열 번호 80의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 또는 3개 모두의 VL CDR 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; (b) 서열 번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2 및 (c) 서열 번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 또는 3개 모두의 VH CDR 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 CDR: (a) 서열 번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; (b) 서열 번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2; (c) 서열 번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; (d) 서열 번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (e) 서열 번호 72의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 (f) 서열 번호 80의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열 번호 7의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성을 갖는 VH 서열은 참조 서열 대비 치환(예컨대, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 포함하지만, 상기 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 항원에 결합할 수 있는 능력을 보유한다. 일부 실시양태에서, 서열 번호 7의 아미노산 서열에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입, 및/또는 결실된다. 일부 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 CDR 밖의 영역에서(예컨대, FR에서) 일어난다. 임의적으로, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 상기 서열의 번역 후 변형을 포함하여, 서열 번호 7의 아미노산 서열의 VH 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH는 (a) 서열 번호 40의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, (b) 서열 번호 48의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 (c) 서열 번호 56의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3으로부터 선택되는 1, 2, 또는 3개의 CDR을 포함한다.
한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열 번호 8의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성을 갖는 VL 서열은 참조 서열 대비 치환(예컨대, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만, 상기 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 항원에 결합할 수 있는 능력을 보유한다. 일부 실시양태에서, 서열 번호 5의 아미노산 서열 중 어느 하나에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입, 및/또는 결실된다. 일부 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실 CDR 밖의 영역에서(예컨대, FR에서) 일어난다. 임의적으로, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 상기 서열의 번역 후 변형을 포함하여, 서열 번호 8의 VL 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, VL은 (a) 서열 번호 64의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (b) 서열 번호 72의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 (c) 서열 번호 80의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 1, 2, 또는 3개의 CDR을 포함한다.
한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 상기 제공된 실시양태 중 임의의 것에서와 같은 VH, 및 상기 제공된 실시양태 중 임의의 것에서와 같은 VL을 포함하는 것인 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 항체는 상기 서열의 번역 후 변형을 포함하여, 서열 번호 7의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열 번호 8의 VL 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열 번호 16-21 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 IgA 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열 번호 31의 카파 경쇄 불변 영역을 포함한다.
Her2
일부 실시양태에서, 본원에서는 Her2에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 기능적 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 트라스투주맙의 중쇄의 적어도 CDR3을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 트라스투주맙의 중쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 중 1, 2, 또는 3개를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 트라스투주맙의 경쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 중 1, 2, 또는 3개를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 트라스투주맙의 중쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 중 1, 2, 또는 3개 및 항체 트라스투주맙의 경쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 중 1, 2, 또는 3개를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 트라스투주맙의 중쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 및 항체 트라스투주맙의 경쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 트라스투주맙의 중쇄의 적어도 CDR3 및 IgA 힌지를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 트라스투주맙의 중쇄의 적어도 CDR3, IgA 힌지, CH1 IgA 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 트라스투주맙의 중쇄의 적어도 CDR3, IgA 힌지, CH1 IgA 영역, 및 CH2 IgA 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 트라스투주맙의 중쇄의 적어도 CDR3, IgA 힌지, CH1 IgA 영역, CH2 IgA 영역, 및 CH3 IgA 영역을 포함한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 82의 아미노산 서열을 포함하는 VH, (b) 서열 번호 96의 아미노산 서열을 포함하는 VL, 및 (c) 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 가변 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; (b) 서열 번호 43의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2; (c) 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; (d) 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (e) 서열 번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 (f) 서열 번호 75의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 CDR을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; (b) 서열 번호 43의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2; 및 (c) 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 또는 3개 모두의 VH CDR 서열; 및 (d) 서열 번호 96의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (b) 서열 번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 (c) 서열 번호 75의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 또는 3개 모두의 VL CDR 서열; 및 서열 번호 82의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 CDR: 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 서열 번호 75의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본원의 개시내용은 (a) 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (b) 서열 번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2 및 (c) 서열 번호 75의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 또는 3개 모두의 VL CDR 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; (b) 서열 번호 43의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2 및 (c) 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 또는 3개 모두의 VH CDR 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 CDR: (a) 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; (b) 서열 번호 43의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2; (c) 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; (d) 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (e) 서열 번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 (f) 서열 번호 75의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열 번호 82의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성을 갖는 VH 서열은 참조 서열 대비 치환(예컨대, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 포함하지만, 상기 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 항원에 결합할 수 있는 능력을 보유한다. 일부 실시양태에서, 서열 번호 82의 아미노산 서열에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입, 및/또는 결실된다. 일부 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 CDR 밖의 영역에서(예컨대, FR에서) 일어난다. 임의적으로, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 상기 서열의 번역 후 변형을 포함하여, 서열 번호 82의 아미노산 서열의 VH 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH는 (a) 서열 번호 35의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, (b) 서열 번호 43의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 (c) 서열 번호 51의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3으로부터 선택되는 1, 2, 또는 3개의 CDR을 포함한다.
한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열 번호 96의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성을 갖는 VL 서열은 참조 서열 대비 치환(예컨대, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만, 상기 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 항원에 결합할 수 있는 능력을 보유한다. 일부 실시양태에서, 서열 번호 96의 아미노산 서열 중 어느 하나에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입, 및/또는 결실된다. 일부 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실 CDR 밖의 영역에서(예컨대, FR에서) 일어난다. 임의적으로, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 상기 서열의 번역 후 변형을 포함하여, 서열 번호 96의 VL 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, VL은 (a) 서열 번호 59의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (b) 서열 번호 67의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 (c) 서열 번호 75의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 1, 2, 또는 3개의 CDR을 포함한다.
한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 상기 제공된 실시양태 중 임의의 것에서와 같은 VH, 및 상기 제공된 실시양태 중 임의의 것에서와 같은 VL을 포함하는 것인 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 항체는 상기 서열의 번역 후 변형을 포함하여, 서열 번호 82의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열 번호 96의 VL 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열 번호 16-21 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 IgA 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열 번호 31의 카파 경쇄 불변 영역을 포함한다.
gp75
일부 실시양태에서, 본원에서는 gp75 또는 티로신 관련 단백질 1에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 기능적 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 기능적 단편은 인간 gp75 폴리펩티드에 특이적으로 결합한다. 인간 기원의 gp75의 폴리펩티드 및 코딩 핵산 서열 및 다수의 동물의 것은 예컨대, NCBI 웹사이트로부터 공개적으로 이용가능하다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 TA99의 중쇄의 적어도 CDR3을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 TA99의 중쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 중 1, 2, 또는 3개를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 TA99의 경쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 중 1, 2, 또는 3개를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 TA99의 중쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 중 1, 2, 또는 3개 및 항체 TA99의 경쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 중 1, 2, 또는 3개를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 TA99의 중쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 및 항체 TA99의 경쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 TA99의 중쇄의 적어도 CDR3 및 IgA 힌지를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 TA99의 중쇄의 적어도 CDR3, IgA 힌지, CH1 IgA 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 TA99의 중쇄의 적어도 CDR3, IgA 힌지, CH1 IgA 영역, 및 CH2 IgA 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 TA99의 중쇄의 적어도 CDR3, IgA 힌지, CH1 IgA 영역, CH2 IgA 영역, 및 CH3 IgA 영역을 포함한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 83의 아미노산 서열을 포함하는 VH, (b) 서열 번호 97의 아미노산 서열을 포함하는 VL, 및 (c) 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 가변 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; (b) 서열 번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2; (c) 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; (d) 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (e) 서열 번호 68의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 (f) 서열 번호 76의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 CDR을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; (b) 서열 번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2; 및 (c) 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 또는 3개 모두의 VH CDR 서열; 및 (d) 서열 번호 97의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (b) 서열 번호 68의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 (c) 서열 번호 76의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 또는 3개 모두의 VL CDR 서열; 및 서열 번호 83의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 CDR: 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 서열 번호 76의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본원의 개시내용은 (a) 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (b) 서열 번호 68의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2 및 (c) 서열 번호 76의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 또는 3개 모두의 VL CDR 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; (b) 서열 번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2 및 (c) 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 또는 3개 모두의 VH CDR 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 CDR: (a) 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; (b) 서열 번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2; (c) 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; (d) 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (e) 서열 번호 68의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 (f) 서열 번호 76의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열 번호 83의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성을 갖는 VH 서열은 참조 서열 대비 치환(예컨대, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 포함하지만, 상기 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 항원에 결합할 수 있는 능력을 보유한다. 일부 실시양태에서, 서열 번호 83의 아미노산 서열에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입, 및/또는 결실된다. 일부 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 CDR 밖의 영역에서(예컨대, FR에서) 일어난다. 임의적으로, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 상기 서열의 번역 후 변형을 포함하여, 서열 번호 83의 아미노산 서열의 VH 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH는 (a) 서열 번호 36의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, (b) 서열 번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 (c) 서열 번호 52의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3으로부터 선택되는 1, 2, 또는 3개의 CDR을 포함한다.
한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열 번호 97의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성을 갖는 VL 서열은 참조 서열 대비 치환(예컨대, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만, 상기 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 항원에 결합할 수 있는 능력을 보유한다. 일부 실시양태에서, 서열 번호 97의 아미노산 서열 중 어느 하나에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입, 및/또는 결실된다. 일부 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실 CDR 밖의 영역에서(예컨대, FR에서) 일어난다. 임의적으로, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 상기 서열의 번역 후 변형을 포함하여, 서열 번호 97의 VL 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, VL은 (a) 서열 번호 60의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (b) 서열 번호 68의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 (c) 서열 번호 76의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 1, 2, 또는 3개의 CDR을 포함한다
한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 상기 제공된 실시양태 중 임의의 것에서와 같은 VH, 및 상기 제공된 실시양태 중 임의의 것에서와 같은 VL을 포함하는 것인 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 항체는 상기 서열의 번역 후 변형을 포함하여, 서열 번호 83의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열 번호 97의 VL 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열 번호 16-21 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 IgA 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열 번호 31의 카파 경쇄 불변 영역을 포함한다.
CTLA4
일부 실시양태에서, 본원에서는 세포독성 T-림프구-연관 단백질 4(CTLA4: cytotoxic T-lymphocyte-associated protein 4)에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 기능적 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 기능적 단편은 인간 CTLA4 폴리펩티드에 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 기능적 단편은 마우스 CTLA4 폴리펩티드에 특이적으로 결합한다. 인간 기원의 CTLA4의 폴리펩티드 및 코딩 핵산 서열 및 다수의 동물의 것은 예컨대, NCBI 웹사이트로부터 공개적으로 이용가능하다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 83의 아미노산 서열을 포함하는 VH, (b) 서열 번호 98의 아미노산 서열을 포함하는 VL, 및 (c) 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 가변 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; (b) 서열 번호 45의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2; (c) 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; (d) 서열 번호 57의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (e) 서열 번호 69의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 (f) 서열 번호 77의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개 CDR을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; (b) 서열 번호 45의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2; 및 (c) 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 또는 3개 모두의 VH CDR 서열; 및 (d) 서열 번호 98의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (b) 서열 번호 69의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 (c) 서열 번호 77의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 또는 3개 모두의 VL CDR 서열; 및 서열 번호 84의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 CDR: 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 서열 번호 77의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본원의 개시내용은 (a) 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (b) 서열 번호 69의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2 및 (c) 서열 번호 77의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 또는 3개 모두의 VL CDR 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; (b) 서열 번호 45의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2 및 (c) 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 또는 3개 모두의 VH CDR 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 CDR: (a) 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; (b) 서열 번호 45의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2; (c) 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; (d) 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (e) 서열 번호 69의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 (f) 서열 번호 77의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열 번호 84의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성을 갖는 VH 서열은 참조 서열 대비 치환(예컨대, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 포함하지만, 상기 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 항원에 결합할 수 있는 능력을 보유한다. 일부 실시양태에서, 서열 번호 84의 아미노산 서열에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입, 및/또는 결실된다. 일부 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 CDR 밖의 영역에서(예컨대, FR에서) 일어난다. 임의적으로, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 상기 서열의 번역 후 변형을 포함하여, 서열 번호 84의 아미노산 서열의 VH 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH는 (a) 서열 번호 37의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, (b) 서열 번호 45의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 (c) 서열 번호 53의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3으로부터 선택되는 1, 2, 또는 3개의 CDR을 포함한다.
한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열 번호 98의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성을 갖는 VL 서열은 참조 서열 대비 치환(예컨대, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만, 상기 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 항원에 결합할 수 있는 능력을 보유한다. 일부 실시양태에서, 서열 번호 98의 아미노산 서열 중 어느 하나에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입, 및/또는 결실된다. 일부 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실 CDR 밖의 영역에서(예컨대, FR에서) 일어난다. 임의적으로, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 상기 서열의 번역 후 변형을 포함하여, 서열 번호 98의 VL 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, VL은 (a) 서열 번호 61의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (b) 서열 번호 69의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 (c) 서열 번호 77의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 1, 2, 또는 3개의 CDR을 포함한다.
한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 상기 제공된 실시양태 중 임의의 것에서와 같은 VH, 및 상기 제공된 실시양태 중 임의의 것에서와 같은 VL을 포함하는 것인 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 항체는 상기 서열의 번역 후 변형을 포함하여, 서열 번호 84의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열 번호 98의 VL 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열 번호 16-21 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 IgA 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열 번호 31의 카파 경쇄 불변 영역을 포함한다.
CD47
일부 실시양태에서, IgA 항체는 CD47에 특이적으로 결합한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 기능적 단편은 인간 CD47 폴리펩티드에 특이적으로 결합한다. 인간 기원의 CD47의 폴리펩티드 및 코딩 핵산 서열 및 다수의 동물의 것은 예컨대, NCBI 웹사이트로부터 공개적으로 이용가능하다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 암 세포의 표면 상에 발현된 CD47에의 SIRPα 결합을 감소시킨다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 상응하는 야생형 항체와 비교하여 약 0.5 μM 내지 약 999 μM 범위의 결합 친화도(Kd)로 CD47에 결합한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 상응하는 야생형 항체와 비교하여 약 1 mM 내지 약 1000 mM범위의 결합 친화도(Kd)로 CD47에 결합한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 신호 조절 단백질 α(SIRPα: signal regulatory protein α)와 인간 CD47 상호작용을 억제시킨다. 일부 실시양태에서, 상기 인간 CD47과 상기 SIRPα 사이의 상호작용 억제는 상기 IgA 항체의 잠재능을 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 상기 인간 CD47과 상기 SIRPα 사이의 상호작용 억제는 종양 부위에서의 식세포작용 및 암 세포 제거를 증가시킨다. 일부 실시양태에서, 암 세포는 IgA-옵소닌화된 암 세포이다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 CD47에 결합하는 항원 결합 도메인 및 종양 연관 항원(예컨대, 본원에 기술된 것)에 특이적으로 결합하는 항원 결합 도메인을 포함한다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 CD47에 결합한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 암 세포의 CD47 결합을 감소시킨다. 예를 들어, IgA 항체는 신호 조절 단백질 α(SIRPα)와의 인간 CD47 상호작용을 억제시킬 수 있다. 추가로, 인간 CD47과 SIRPα 사이의 상호작용 억제는 IgA 항체의 잠재능을 증가시킬 수 있다. 인간 CD47과 SIRPα 사이의 상호작용 억제는 종양 부위에서의 식세포작용 및 암 세포 제거를 증가시킬 수 있다. 예를 들어, 암 세포는 IgA-옵소닌화된 암 세포일 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기술된 IgA 항체는 암 세포 외의 다른 세포 상의 CD47에의 IgA 항체의 결합을 막는 CD47에의 낮은 친화도의 결합을 갖는다. 일부 실시양태에서, 본원에 기술된 IgA 항체의 낮은 친화도의 CD47 아암은 CD47을 발현하는 종양 세포에 결합한다. 일부 예에서, 본원에 기술된 IgA 항체의 낮은 친화도의 CD47 아암은 종양 세포가 아닌, CD47을 발현하는 세포에 결합하지 않는다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 적어도 약 0.01 마이크로몰(μM) 내지 약 999 μM 이상의 결합 친화도(Kd)로 CD47에 결합한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 적어도 약 0.01 μM의 결합 친화도(Kd)로 CD47에 결합한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 최대 약 999 μM의 결합 친화도(Kd)로 CD47에 결합한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 약 0.01 μM 내지 약 0.1 μM, 약 0.01 μM 내지 약 0.5 μM, 약 0.01 μM 내지 약 1 μM, 약 0.01 μM 내지 약 5 μM, 약 0.01 μM 내지 약 10 μM, 약 0.01 μM 내지 약 50 μM, 약 0.01 μM 내지 약 100 μM, 약 0.01 μM 내지 약 200 μM, 약 0.01 μM 내지 약 300 μM, 약 0.01 μM 내지 약 500 μM, 약 0.01 μM 내지 약 999 μM, 약 0.1 μM 내지 약 0.5 μM, 약 0.1 μM 내지 약 1 μM, 약 0.1 μM 내지 약 5 μM, 약 0.1 μM 내지 약 10 μM, 약 0.1 μM 내지 약 50 μM, 약 0.1 μM 내지 약 100 μM, 약 0.1 μM 내지 약 200 μM, 약 0.1 μM 내지 약 300 μM, 약 0.1 μM 내지 약 500 μM, 약 0.1 μM 내지 약 999 μM, 약 0.5 μM 내지 약 1 μM, 약 0.5 μM 내지 약 5 μM, 약 0.5 μM 내지 약 10 μM, 약 0.5 μM 내지 약 50 μM, 약 0.5 μM 내지 약 100 μM, 약 0.5 μM 내지 약 200 μM, 약 0.5 μM 내지 약 300 μM, 약 0.5 μM 내지 약 500 μM, 약 0.5 μM 내지 약 999 μM, 약 1 μM 내지 약 5 μM, 약 1 μM 내지 약 10 μM, 약 1 μM 내지 약 50 μM, 약 1 μM 내지 약 100 μM, 약 1 μM 내지 약 200 μM, 약 1 μM 내지 약 300 μM, 약 1 μM 내지 약 500 μM, 약 1 μM 내지 약 999 μM, 약 5 μM 내지 약 10 μM, 약 5 μM 내지 약 50 μM, 약 5 μM 내지 약 100 μM, 약 5 μM 내지 약 200 μM, 약 5 μM 내지 약 300 μM, 약 5 μM 내지 약 500 μM, 약 5 μM 내지 약 999 μM, 약 10 μM 내지 약 50 μM, 약 10 μM 내지 약 100 μM, 약 10 μM 내지 약 200 μM, 약 10 μM 내지 약 300 μM, 약 10 μM 내지 약 500 μM, 약 10 μM 내지 약 999 μM, 약 50 μM 내지 약 100 μM, 약 50 μM 내지 약 200 μM, 약 50 μM 내지 약 300 μM, 약 50 μM 내지 약 500 μM, 약 50 μM 내지 약 999 μM, 약 100 μM 내지 약 200 μM, 약 100 μM 내지 약 300 μM, 약 100 μM 내지 약 500 μM, 약 100 μM 내지 약 999 μM, 약 200 μM 내지 약 300 μM, 약 200 μM 내지 약 500 μM, 약 200 μM 내지 약 999 μM, 약 300 μM 내지 약 500 μM, 약 300 μM 내지 약 999 μM, 또는 약 500 μM 내지 약 999 μM의 결합 친화도(Kd)로 CD47에 결합한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 약 0.01 μM, 약 0.1 μM, 약 0.5 μM, 약 1 μM, 약 5 μM, 약 10 μM, 약 50 μM, 약 100 μM, 약 200 μM, 약 300 μM, 약 500 μM, 또는 약 999 μM의 결합 친화도(Kd)로 CD47에 결합한다. .
일부 실시양태에서, IgA 항체는 약 1 mM 내지 약 1,000 밀리몰(mM)의 결합 친화도(Kd)로 CD47에 결합한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 적어도 약 1 mM의 결합 친화도(Kd)로 CD47에 결합한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 최대 약 1,000 mM의 결합 친화도(Kd)로 CD47에 결합한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 약 1 mM 내지 약 5 mM, 약 1 mM 내지 약 10 mM, 약 1 mM 내지 약 50 mM, 약 1 mM 내지 약 100 mM, 약 1 mM 내지 약 200 mM, 약 1 mM 내지 약 300 mM, 약 1 mM 내지 약 400 mM, 약 1 mM 내지 약 500 mM, 약 1 mM 내지 약 600 mM, 약 1 mM 내지 약 800 mM, 약 1 mM 내지 약 1,000 mM, 약 5 mM 내지 약 10 mM, 약 5 mM 내지 약 50 mM, 약 5 mM 내지 약 100 mM, 약 5 mM 내지 약 200 mM, 약 5 mM 내지 약 300 mM, 약 5 mM 내지 약 400 mM, 약 5 mM 내지 약 500 mM, 약 5 mM 내지 약 600 mM, 약 5 mM 내지 약 800 mM, 약 5 mM 내지 약 1,000 mM, 약 10 mM 내지 약 50 mM, 약 10 mM 내지 약 100 mM, 약 10 mM 내지 약 200 mM, 약 10 mM 내지 약 300 mM, 약 10 mM 내지 약 400 mM, 약 10 mM 내지 약 500 mM, 약 10 mM 내지 약 600 mM, 약 10 mM 내지 약 800 mM, 약 10 mM 내지 약 1,000 mM, 약 50 mM 내지 약 100 mM, 약 50 mM 내지 약 200 mM, 약 50 mM 내지 약 300 mM, 약 50 mM 내지 약 400 mM, 약 50 mM 내지 약 500 mM, 약 50 mM 내지 약 600 mM, 약 50 mM 내지 약 800 mM, 약 50 mM 내지 약 1,000 mM, 약 100 mM 내지 약 200 mM, 약 100 mM 내지 약 300 mM, 약 100 mM 내지 약 400 mM, 약 100 mM 내지 약 500 mM, 약 100 mM 내지 약 600 mM, 약 100 mM 내지 약 800 mM, 약 100 mM 내지 약 1,000 mM, 약 200 mM 내지 약 300 mM, 약 200 mM 내지 약 400 mM, 약 200 mM 내지 약 500 mM, 약 200 mM 내지 약 600 mM, 약 200 mM 내지 약 800 mM, 약 200 mM 내지 약 1,000 mM, 약 300 mM 내지 약 400 mM, 약 300 mM 내지 약 500 mM, 약 300 mM 내지 약 600 mM, 약 300 mM 내지 약 800 mM, 약 300 mM 내지 약 1,000 mM, 약 400 mM 내지 약 500 mM, 약 400 mM 내지 약 600 mM, 약 400 mM 내지 약 800 mM, 약 400 mM 내지 약 1,000 mM, 약 500 mM 내지 약 600 mM, 약 500 mM 내지 약 800 mM, 약 500 mM 내지 약 1,000 mM, 약 600 mM 내지 약 800 mM, 약 600 mM 내지 약 1,000 mM, 또는 약 800 mM 내지 약 1,000 mM의 결합 친화도(Kd)로 CD47에 결합한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 약 1 mM, 약 5 mM, 약 10 mM, 약 50 mM, 약 100 mM, 약 200 mM, 약 300 mM, 약 400 mM, 약 500 mM, 약 600 mM, 약 800 mM, 또는 약 1,000 mM의 결합 친화도(Kd)로 CD47에 결합한다.
일부 실시양태에서, 본원에서는 CD47에 특이적으로 결합하는 항체 또는 그의 기능적 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 2.3D11 또는 항체 C47A8-CQ의 중쇄의 적어도 CDR3을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 2.3D11 또는 항체 C47A8-CQ의 중쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 중 1, 2, 또는 3개를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 2.3D11 또는 항체 C47A8-CQ의 경쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 중 1, 2, 또는 3개를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 2.3D11 또는 항체 C47A8-CQ의 중쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 중 1, 2, 또는 3개 및 항체 2.3D11 또는 항체 C47A8-CQ의 경쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 중 1, 2, 또는 3개를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 2.3D11 또는 항체 C47A8-CQ의 중쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3 및 항체 2.3D11 또는 항체 C47A8-CQ의 경쇄의 CDR1, CDR2, 또는 CDR3을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 2.3D11 또는 항체 C47A8-CQ의 중쇄의 적어도 CDR3 및 IgA 힌지를 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 2.3D11 또는 항체 C47A8-CQ의 중쇄의 적어도 CDR3, IgA 힌지, CH1 IgA 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 2.3D11 또는 항체 C47A8-CQ의 중쇄의 적어도 CDR3, IgA 힌지, CH1 IgA 영역, 및 CH2 IgA 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, IgA 항체는 항체 2.3D11 또는 항체 C47A8-CQ의 중쇄의 적어도 CDR3, IgA 힌지, CH1 IgA 영역, CH2 IgA 영역, 및 CH3 IgA 영역을 포함한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 85의 아미노산 서열을 포함하는 VH, (b) 서열 번호 99의 아미노산 서열을 포함하는 VL, 및 (c) 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 가변 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; (b) 서열 번호 46의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2; (c) 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; (d) 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (e) 서열 번호 70의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 (f) 서열 번호 78의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 CDR을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; (b) 서열 번호 46의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2; 및 (c) 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 또는 3개 모두의 VH CDR 서열; 및 (d) 서열 번호 99의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (b) 서열 번호 70의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 (c) 서열 번호 78의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 또는 3개 모두의 VL CDR 서열; 및 서열 번호 85의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 CDR: 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 서열 번호 78의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본원의 개시내용은 (a) 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (b) 서열 번호 70의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2 및 (c) 서열 번호 78의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 또는 3개 모두의 VL CDR 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; (b) 서열 번호 46의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2 및 (c) 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 또는 3개 모두의 VH CDR 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 CDR: (a) 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; (b) 서열 번호 46의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2; (c) 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; (d) 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (e) 서열 번호 70의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 (f) 서열 번호 78의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열 번호 85의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성을 갖는 VH 서열은 참조 서열 대비 치환(예컨대, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 포함하지만, 상기 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 항원에 결합할 수 있는 능력을 보유한다. 일부 실시양태에서, 서열 번호 85의 아미노산 서열에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입, 및/또는 결실된다. 일부 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 CDR 밖의 영역에서(예컨대, FR에서) 일어난다. 임의적으로, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 상기 서열의 번역 후 변형을 포함하여, 서열 번호 85의 아미노산 서열의 VH 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH는 (a) 서열 번호 38의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, (b) 서열 번호 46의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 (c) 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3으로부터 선택되는 1, 2, 또는 3개의 CDR을 포함한다.
한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열 번호 99의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성을 갖는 VL 서열은 참조 서열 대비 치환(예컨대, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만, 상기 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 항원에 결합할 수 있는 능력을 보유한다. 일부 실시양태에서, 서열 번호 99의 아미노산 서열 중 어느 하나에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입, 및/또는 결실된다. 일부 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실 CDR 밖의 영역에서(예컨대, FR에서) 일어난다. 임의적으로, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 상기 서열의 번역 후 변형을 포함하여, 서열 번호 99의 VL 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, VL은 (a) 서열 번호 62의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (b) 서열 번호 70의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 (c) 서열 번호 78의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 1, 2, 또는 3개의 CDR을 포함한다.
한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 상기 제공된 실시양태 중 임의의 것에서와 같은 VH, 및 상기 제공된 실시양태 중 임의의 것에서와 같은 VL을 포함하는 것인 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 항체는 상기 서열의 번역 후 변형을 포함하여, 서열 번호 85의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열 번호 99의 VL 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열 번호 16-21 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 IgA 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열 번호 31의 카파 경쇄 불변 영역을 포함한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 86의 아미노산 서열을 포함하는 VH, (b) 서열 번호 100의 아미노산 서열을 포함하는 VL, 및 (c) 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택되는 하나 이상의 가변 영역을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; (b) 서열 번호 44의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2; (c) 서열 번호 54의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; (d) 서열 번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (e) 서열 번호 71의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 (f) 서열 번호 79의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개의 CDR을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; (b) 서열 번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2; 및 (c) 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 또는 3개 모두의 VH CDR 서열; 및 (d) 서열 번호 100의 아미노산 서열을 포함하는 VL을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (b) 서열 번호 71의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 (c) 서열 번호 79의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 또는 3개 모두의 VL CDR 서열; 및 서열 번호 86의 아미노산 서열을 포함하는 VH를 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 CDR: 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; 및 서열 번호 79의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본원의 개시내용은 (a) 서열 번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (b) 서열 번호 71의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2 및 (c) 서열 번호 79의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 또는 3개 모두의 VL CDR 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 한 측면에서, 본 개시내용은 (a) 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; (b) 서열 번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2 및 (c) 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3으로부터 선택되는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 또는 3개 모두의 VH CDR 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 본 개시내용은 CDR: (a) 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1; (b) 서열 번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2; (c) 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3; (d) 서열 번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (e) 서열 번호 71의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 (f) 서열 번호 79의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다.
한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열 번호 86의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 VH 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성을 갖는 VH 서열은 참조 서열 대비 치환(예컨대, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 포함하지만, 상기 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 항원에 결합할 수 있는 능력을 보유한다. 일부 실시양태에서, 서열 번호 86의 아미노산 서열에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입, 및/또는 결실된다. 일부 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실은 CDR 밖의 영역에서(예컨대, FR에서) 일어난다. 임의적으로, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 상기 서열의 번역 후 변형을 포함하여, 서열 번호 86의 아미노산 서열의 VH 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, VH 는 (a) 서열 번호 39의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1, (b) 서열 번호 47의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2, 및 (c) 서열 번호 55의 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3으로부터 선택되는 1, 2, 또는 3개의 CDR을 포함한다.
한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 서열 번호 100의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 경쇄 가변 도메인(VL)을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99%의 동일성을 갖는 VL 서열은 참조 서열 대비 치환(예컨대, 보존적 치환), 삽입, 또는 결실을 함유하지만, 상기 서열을 포함하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 항원에 결합할 수 있는 능력을 보유한다. 일부 실시양태에서, 서열 번호 100의 아미노산 서열 중 어느 하나에서 총 1 내지 10개의 아미노산이 치환, 삽입, 및/또는 결실된다. 일부 실시양태에서, 치환, 삽입, 또는 결실 CDR 밖의 영역에서(예컨대, FR에서) 일어난다. 임의적으로, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 상기 서열의 번역 후 변형을 포함하여, 서열 번호 100의 VL 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, VL은 (a) 서열 번호 63의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1; (b) 서열 번호 71의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및 (c) 서열 번호 79의 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3으로부터 선택되는 1, 2, 또는 3개의 CDR을 포함한다
한 측면에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 상기 제공된 실시양태 중 임의의 것에서와 같은 VH, 및 상기 제공된 실시양태 중 임의의 것에서와 같은 VL을 포함하는 것인 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 항체는 상기 서열의 번역 후 변형을 포함하여, 서열 번호 86의 아미노산 서열을 포함하는 VH, 및 서열 번호 100의 VL 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열 번호 16-21 중 어느 하나의 아미노산 서열과 적어도 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 또는 100%의 서열 동일성을 갖는 IgA 중쇄 불변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 서열 번호 31의 카파 경쇄 불변 영역을 포함한다.
IgA 항체의 개선된 특성 및 기능
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 기능적 단편은 상응하는 야생형 IgA 항체와 비교하여 개선된 안정성을 나타낸다. 본원에 사용되는 바, 용어 "증가된 안정성"은 증가된 열안정성 및/또는 감소된 응집을 포함한다. 증진되거나, 또는 개선된 안정성은 예를 들어, 가속 안정성 연구에 의해 측정될 수 있다. 가속 안정성 연구의 예로는 보관 온도 증가를 특징으로 하는 연구를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 항체에 대해 관찰된 응집체 형성 감소는 안정성 증가를 나타낸다. 본 개시내용의 항체 및 그의 기능적 단편의 안정성은 상응하는 야생형 IgA 항체 면역글로불린와 비교하여 항체의 용융 온도 전이의 변화를 측정함으로써 시험될 수 있다. 상기 실시양태에서, 증가된 안정성 또는 증가된 열안정성은 상응하는 WT IgA 또는 그의 기능적 단편과 비교하여 항체 또는 그의 기능적 단편에서의 용융 온도 전이의 증가로서 명백해질 것이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 상응하는 WT IgA 항체보다 더 높은 용융 온도를 갖는다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 그의 기능적 단편의 용융 온도는 상응하는 WT IgA 항체보다 적어도 약 0.2배, 0.3배, 0.4배, 0.5배, 0.6배, 0.8배, 1.0배 또는 그 초과만큼 더 높다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 그의 기능적 단편의 용융 온도는 상응하는 WT IgA 항체보다 적어도 약 1℃, 2℃, 3℃, 4℃, 5℃, 6℃, 7℃, 8℃, 9℃, 10℃, 12℃, 15℃ 또는 그 초과만큼 더 높다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 그의 기능적 단편은 적어도 약 60℃, 65℃, 70℃., 75℃, 80℃, 85℃, 90℃ 또는 그 초과의 용융 온도를 갖는다. 일부 실시양태에서, 상기 증가된 안정성은 추가의 이황화 결합 부재하에 있다. 구체적으로, 증가된 안정성은 IgA 중쇄 불변 영역 중 추가의 이황화 결합 부재하에 있다. 한 실시양태에서, 본원에 개시된 항체의 CH3 도메인은 야생형 CH3 도메인과 비교하여 추가의 이황화 결합을 함유하지 않는다. 대안적 실시양태에서, 본원에 개시된 항체의 CH3 도메인은 야생형 CH3 도메인과 비교하여 적어도 하나의 이황화 결합을 함유한다.
단백질 응집을 측정하기 위한 추가 방법은 미국 특허 출원 시리얼 제10/176,809호 및 US20030022243A1(상기 특허들은 그 전문이 본원에서 참조로 포함된다)에 기술되어 있다. 단백질 안정성을 측정하기 위한 다양한 분석 기술이 예컨대, 하기 문헌에서 개요된 것과 같이, 당업계에서 이용가능하다: 문헌 [Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, New York, Pubs., 1991]; 및 [Jones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90, 1993]. 안정성은 선택된 시간 동안 선택된 온도에서 측정될 수 있다. 안정성은 응집체 형성 측정(예컨대, 크기 배제 크로마토그래피 사용 또는 탁도 측정에 의해 및/또는 육안 검사에 의해)을 비롯한 다양한 방식으로 정성적 및/또는 정량적으로 측정된다. 가능한 방법은 하기와 같다: 양이온 교환 크로마토그래피 또는 모세관 구역 전기영동을 이용한 전하 불균일성 평가; 아미노 말단 또는 카복시 말단 서열 분석; 질량 분광 분석; 감소 또는 완전한 항체 비교 SDS-PAGE 분석; 펩티드 맵(예컨대, 트립신 또는 LYS-C) 분석; 항체의 생물학적 활성 또는 항원 결합 기능의 측정. 불안정성은 하기: 응집, 산화(예컨대, Met 산화), 이성질체화(예컨대, Asp 이성질체화), 클리핑/가수분해/단편화(예컨대, 힌지 영역의 단편화), 숙신이미드 형성, 쌍을 이루지 않은 시스테인, N-말단 연장, C-말단 프로세싱 등 중 임의의 하나 이상의 것을 포함한다. "감소된 응집"이라는 용어는 상응하는 WT IgA에 의해 나타나는 응집과 비교하여 다른 항체 분자 및/또는 예컨대, 알부민과 같은 혈청 단백질을 포함하는 다른 거대분자와의 본 개시내용의 항체 또는 그의 기능적 단편의 응집 감소를 지칭한다.
상응하는 WT IgA 항체 또는 그의 변이체와 비교하여 항체의 증가된 열안정성은 당업계의 표준 방법을 사용하는 시차 주사 열량분석법(DSC: differential scanning calorimetry)에 의해 측정될 수 있다(예를 들어, 문헌 [Sturtevant, 1987, Annual Review of Physical Chemistry 38: 463-488] 참조). 상응하는 WT IgA 항체 또는 그의 변이체와 비교하여 항체의 증가된 열안정성은 또한 단백질 열적 언폴딩 분석을 사용하여 측정될 수 있다. 대안적으로, 상응하는 WT IgA 항체 또는 그의 변이체와 비교하여 항체의 감소된 열안정성은 항체의 성능을 WT와 비교하는, 항체에 대한 임의의 적용 검정을 이용하여 측정될 수 있다. 예를 들어, 표적 세포의 ADCC, 항원에의 결합, 또는 면역 세포 상의 FcαR에의 결합.
IgA 항체의 면역 이펙터 기능
본원에서는 WT 중쇄 불변 영역을 포함하는 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 그의 중쇄 불변 영역 내에 하나 이상의 변형을 포함하는 조작된 IgA 변이체 또는 항체를 제공한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 기능적 단편(예컨대, 본원에 개시된 하나 이상의 변형을 포함하는 항체)은 개선된 특성을 나타낸다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 기능적 단편은 상응하는 WT IgA 항체 또는 그의 기능적 단편과 비교하여 적어도 하나의 이펙터 기능 증가를 나타낸다. 이펙터 기능은 항체 이소타입에 따라 달라지는 항체의 Fc 영역에 기인하는 생물학적 활성이다. 항체 이펙터 기능의 예로는 C1q 결합 및 보체 의존성 세포독성(CDC); Fc 수용체 결합; 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC); 식세포작용을 포함한다. 예를 들어, 본원에 개시된 항체 또는 그의 기능적 단편은 상응하는 WT IgA 항체 또는 그의 기능적 단편 또는 상응하는 WT IgG 항체와 비교하여 적어도 하나의 이펙터 기능 증가를 나타낸다. 항체 의존성 세포 세포독성(ADCC)은 면역 이펙터 세포에서 항체의 IgA Fab 부분과 세포 표면의 항원 사이의 복합체 형성과 Fc 부분의 Fc 수용체(FcαR) 결합의 결과이다. 예를 들어, 이펙터 기능 증가는 Fc 수용체(예컨대, FcαR)에의 결합 친화도 증가, ADCC 증가; 증가된 세포 매개 면역; 세포독성 CD8 T 세포에의 결합 증가; NK 세포에의 결합 증가; 대식세포에의 결합 증가; 다형핵 세포에의 결합 증가; 단핵구에의 결합 증가; 대식세포에의 결합 증가; 큰 과립 림프구에의 결합 증가; 과립구에의 결합 증가; 아폽토시스를 유도하는 직접적인 신호전달; 수지상 세포 성숙 증가; 또는 T 세포 프라이밍 증가, 옵소닌화 증가 또는 옵소닌 식세포작용 증가일 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 암 세포의 용해를 유도한다. 용해는 임의의 기전에 의해, 예컨대, 이펙터 기능, 예컨대, C1q 결합 및 보체 의존성 세포독성(CDC); Fc 수용체 결합; 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC); 식세포작용을 매개함으로써, 또는 세포 아폽토시스의 직접적인 유도에 의해 유도될 수 있다.
ADCC
"ADCC 활성"은 ADCC 반응을 유발하는 항체의 능력을 지칭한다. ADCC는 FcR을 발현하는 항원 비특이적 세포독성 세포(예컨대, 자연 살해(NK: natural killer) 세포, 호중구 및 대식세포)가 표적 세포의 표면에 결합된 항체를 인식하고, 이어서, 표적 세포(예컨대, 암 세포)의 용해를 일으키는(즉, "사멸시키는") 세포 매개 반응이다. 1차 매개체 세포는 자연 살해(NK) 세포, 호중구일 수 있다. ADCC 활성은 시험관내 검정법, 예컨대, 실시예 및 문헌 [Shields et al. (2001) J. Biol. Chem., 276:6591-6604]에 기술된 바와 같이, 말초 혈액 단핵구 세포(PBMC: peripheral blood mononuclear cell) 및/또는 NK 이펙터 세포를 이용하여 51Cr 방출 검정법을 이용하여 직접, 또는 당업계에 공지된 또 다른 적절한 방법을 이용하여 평가될 수 있다. ADCC 활성은 표적 세포의 용해가 최대 절반인 항체의 농도로 표현될 수 있다. 따라서, 일부 실시양태에서, 용해 수준이 야생형 대조군에 의한 최대 용해 수준의 절반과 동일한 본 개시내용의 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 농도는 야생형 대조군 자체의 농도보다 적어도 2, 3, 5, 10, 20, 50, 100배 더 낮다.
추가로, 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 그의 기능적 단편은 상응하는 야생형 IgA와 비교하여 더 높은 최대 표적 세포 용해를 나타낼 수 있다. 예를 들어, 본 개시내용의 항체 또는 그의 기능적 단편의 최대 표적 세포 용해는 상응하는 WT IgA 항체 또는 상응하는 WT IgG 항체의 것보다 2%, 3%, 4%, 5%, 10%, 15%, 20%, 25% 또는 그 초과로 더 높을 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 기능적 단편은 IgG 중쇄 불변 도메인을 포함하는 상응하는 WT IgG 항체와 비교하여 증가된 ADCC를 유도한다. 일부 실시양태에서, ADCC는 상응하는 WT IgG 항체와 비교하여 적어도 2%, 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 12%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 50%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 99%, 적어도 100%, 적어도 150%, 및 적어도 200%만큼 증가된다.
CDC
"보체 의존성 세포독성" 또는 "CDC"는 보체의 존재하에 표적(예컨대, 암 세포)을 용해시키는 분자의 능력을 지칭한다. 보체 활성화 경로는 보체계의 제1 성분(C1q)의, 동족 항원과 복합체를 형성한 분자(예컨대, 항체)에의 결합에 의해 개시된다. 보체 활성화를 평가하기 위해, 예컨대, 문헌 [Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996)]에 기술된 바와 같은 CDC 검정법이 수행될 수 있다.
Fc 수용체 결합
일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 Fc 수용체에 결합한다. 일부 실시양태에서, Fc 수용체는 면역 이펙터 세포 상에 발현된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 그의 기능적 단편은 면역 이펙터 세포 상의 Fc 수용체에 결합하고, 이펙터 기능, 예컨대, ADCC, CDC 및/또는 표적 세포(예컨대, 암 세포)의 세포용해를 유도한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 기능적 단편은 IgA 수용체에 결합한다. 한 실시양태에서, IgA 수용체는 인간 IgA에 대한 FcαR과 같은 Fc-알파 수용체(FcαR)이다. 일부 실시양태에서, FcαR은 면역 이펙터 세포 상에서 발현된다. FcαR은 면역 이펙터 세포, 예를 들어, 단핵구, 대식세포, 호중구 및 다른 골수양 세포 상에 존재한다. FcαR은 또한 예컨대, 골수로부터의 후골수 세포, 골수 세포, 전골수 세포 및 일부 골수아세포에서 발견될 수 있다. 이러한 수용체는 또한 골수양 세포주, 예컨대, U937, PLB985, 및 HL60 세포에서도 발견될 수 있다. 또한, FcαR은 림프구에 존재한다고 제안되었다. FcαR의 발현은 골수양 세포의 활성화에 의해 증가될 수 있다. 예를 들어, 포볼 미리스틱 아세테이트(PMA: Phorbol Myristic Acetate)를 사용한 U937 세포 및 PLB985 세포의 자극은 FcαR의 세포 표면 수준을 몇 배 증가시킨다(문헌 [Maliszewski, et al. (1990) J Exp. Med. 172:1665]). FcαR의 표면 수준을 증가시킬 수 있는 다른 작용제로는 칼시트리올, 1-25 디하이드록시 비타민 D3 및 인터페론-γ(IFN-γ)를 포함한다.
FcαR은 단량체, 이량체 및 중합체의 형태로 IgA1 및 IgA2와 상호작용할 수 있다. 이들 수용체를 보유하는 면역 이펙터 세포(예컨대, 호중구)에의 본 개시내용의 항체 또는 그의 기능적 단편의 결합은 다양한 이펙터 기능, 예컨대, 식세포작용, 항체 의존성 세포 세포독성(ADCC), 염증 매개체 방출, 리소자임 생성, 및 슈퍼옥사이드 음이온 생산을 유도한다(문헌 [Maliszewski, et al. (1990) J Exp. Med. 172:1665]).
따라서, 본 개시내용의 항체 또는 그의 기능적 단편(예컨대, 본원에 개시된 하나 이상의 변형을 포함하는 항체)은 적어도 하나의 Fc-수용체 매개 이펙터 세포 기능을 일으킬 수 있다. 용어 "Fc-수용체 매개 이펙터 세포 기능"은 이펙터 면역 세포 상의 Fc 수용체에의 면역글로불린, 예를 들어, IgA의 결합에 의해 유발되는 상기 기재된 것과 같은 이펙터 기능을 포함하는 것으로 의도된다. 이펙터 면역 세포는 면역 반응의 인지 및 활성화 단계와 반대로, 면역 반응의 이펙터 단계에 관여하는 세포이다. 이펙터 면역 세포는 림프구(예컨대, 세포용해성 T 세포(CTL: cytolytic T cell)를 포함하는 B 세포 및 T 세포), 살해 세포, 자연 살해 세포, 대식세포, 단핵구, 호산구, 호중구, 다형핵 세포, 과립구, 비만 세포 및 호염기구를 포함한다. 이펙터 면역 세포는 표적 항원, 표적 세포 또는 미생물을 포식할 수 있다. 이펙터 면역 세포는 또한 표적 세포 또는 미생물을 용해시킬 수 있다.
일부 실시양태에서, 이펙터 면역 세포는 ADCC를 유도할 수 있는 것 (예컨대, 즉, 호중구는 ADCC를 유도할 수 있다)-의존성 세포이다. 예를 들어, FcR을 발현하는 단핵구, 대식세포는 표적 세포를 특이적으로 사멸시키는 것으로, 면역계의 다른 성분에 항원을 제시하거나, 또는 항원 제시 세포에의 결합에 관여한다. 또 다른 실시양태에서, 이펙터 면역 세포는 표적 항원, 표적 세포, 또는 미생물에 대한 식세포작용을 유도하는 것일 수 있다. 이펙터 면역 세포는 표적 항원 또는 표적 세포에 대한 대식세포 활성을 유도하는 대식세포일 수 있거나, 또는 가용성일 수 있다.
본원에 사용된 용어 "표적 세포"는 본 개시내용의 항체 또는 그의 기능적 단편에 의해 표적화될 수 있는 세포를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 표적 세포는 본 개시내용의 항체 또는 그의 기능적 단편에 의해 특이적으로 인식되는 항원을 발현 또는 과다발현하는 세포이다. 항원은 본 개시내용의 항체 또는 그의 기능적 단편에 의해 특이적으로 인식된다. 이는 임의의 세포를 지칭한다. 다른 실시양태에서, 표적 세포는 종양 세포를 포함한다. 종양 세포는 예를 들어, 유방암, 난소암, 전립선암, 고환암, 폐암, 결장암 직장암, 췌장암, 간암, CNS 암, 신장암, 두부암, 경부암, 혈액암 및 암에 있는 종양 세포의 림프계 암을 비롯한, 임의 유형의 것일 수 있다. 종양 세포 외에도 표적 세포는 예를 들어. 자가항체를 표적으로 하는 치료 또는 림프구 생산, 알레르기 또는 자가면역 질환 치료를 위한 IgE 생산 림프구일 수 있다. 추가로, 표적은 미생물(박테리아 또는 바이러스) 또는 가용성 항원(예컨대, 류마티스 인자와 유사하거나 상이한 자가항체 및 독소)일 수 있다. 미생물로는 병원체(예컨대, 바이러스, 박테리아, 진균, 원생동물)를 포함한다. 일부 실시양태에서, 표적 세포는 림프구, 예를 들어, CD20 발현 B 세포일 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 상응하는 WT IgA와 비교하여 적어도 약 2%, 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 12%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 50%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95% 또는 그 초과만큼 증가된, 이펙터 면역 세포 상의 Fc 수용체에의 결합 친화도를 나타낸다.
표적 항원에의 결합
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 및 그의 기능적 단편은 특이적 표적 항원에 결합한다. 용어 "항원"은 임의의 천연 또는 합성 면역원성 물질 면역원성 물질, 면역원성 물질의 단편 또는 부분, 펩티드 에피토프 또는 합텐을 지칭한다. 또한, 용어 "항원"은 비면역원성 형태 및 복합된 경우, 면역원성의 형태로 비복합체 물질에 포함된다. "비착체"라는 용어는 본 발명의 분자 복합체를 형성하기 위해 연결되어 물질의 이동을 포함한다. 연결되는 용어 "복합체"는 본 발명의 분자 복합체를 형성하는 물질을 포함한다. 일부 실시양태에서, 표적 항원은 표적 세포 상에서 발현 또는 과다발현된다. 일부 실시양태에서, 표적 항원에의 항체 또는 그의 기능적 단편의 결합은 (예컨대, ADCC에 의해) 표적 항원을 발현하는 표적 세포의 Fc 매개 세포용해를 유도한다. 일부 실시양태에서, 표적 항원에의 본 개시내용의 항체 또는 그의 기능적 단편의 결합은 표적 항원의 "중화 활성"을 유도한다. 본원에 사용된 용어 "중화 활성"은 표적 항원에 대한 동족 리간드의 결합을 차단하는 항체 또는 그의 기능적 단편의 능력을 지칭한다.
감소된 글리코실화
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 그의 기능적 단편은 상응하는 WT IgA. 항체와 비교하여 감소된 글리코실화를 나타낸다. 항체는 완전히 아글리코실화되거나, 또는 부분적으로 아글리코실화될 수 있다. "글리코실화"라는 용어는 하나 이상의 탄수화물이 폴리펩티드에 공유 연결되는 것을 지칭한다. 전형적으로, 글리코실화는 세포의 세포내 환경 내에서 또는 세포로부터의 추출물 내에서 발생할 수 있는 번역 후 이벤트이다. 글리코실화라는 용어는 예를 들어, N 연결된 글리코실화(하나 이상의 당이 아스파라긴 잔기에 연결) 및/또는 O 연결된 글리코실화(하나 이상의 당이 하이드록실 기를 갖는 아미노산 잔기(예컨대, 세린 또는 트레오닌)에 연결)를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 글리코실화는 N 연결된 글리코실화를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 감소된 글리코실화는 자연적으로 발생된 글리코실화 부위에서 아스파라긴 잔기를 변형함으로써 달성될 수 있다. 일부 실시양태에서, 감소된 글리코실화는 자연적으로 발생된 글리코실화 모티프, 또는 자연적으로 발생된 글리코실화 부위, 예를 들어, 아미노산 서열 NXT 또는 NXS를 함유하는 N 연결된 글리코실화 부위 인근의 또는 그 부위 내의 아미노산 잔기를 변형함으로써 달성된다. 일부 실시양태에서, 감소된 글리코실화는 적어도 하나의, 적어도 2개의, 적어도 3개의, 적어도 4개, 또는 그 초과의 자연적으로 발생된 글리코실화 부위를 변형시킴으로써 달성된다. 일부 실시양태에서, 자연적으로 발생된 글리코실화 부위는 CH2 영역에 존재한다. 일부 실시양태에서, 자연적으로 발생된 글리코실화 부위는 CH3 영역 중에 존재한다. 일부 실시양태에서, 자연적으로 발생된 글리코실화 부위는 CH1 영역 중에서 존재한다. 컨센서스 모티프, 즉, 다양한 글리코실 트랜스퍼라제에 의해 인식되는 아미노산 서열이 기술되어 있다. 예를 들어, NN 연결된 글리코실화 모티프에 대한 컨센서스 모티프는 흔히 NXT 또는 NXS이며, 여기서, X는 프롤린을 제외한 임의의 아미노산일 수 있다. 따라서, 항체 또는 Fc-함유 단편 내의 잠재적인 글리코실화 부위를 확인하기 위해 항체의 서열은 예를 들어, 공개적으로 이용가능한 데이터베이스, 예컨대, 생물 서열 분석 센터(Center for Biological Sequence Analysis)에 의해 제공되는 웹사이트(N 연결된 글리코실화 부위 예측을 위해, www.cbs.dtu.dk/services/NetNGlyc/ 및 O 연결된 글리코실화 부위 예측을 위해 www.cbs.dtu.dk/services/NetOGlyc/ 참조)에 의해 조사된다. 글리코실화를 측정하는 방법은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어, 문헌 [Roth et al, International Journal of Carbohydrate Chemistry, Volume 2012, Article ID 640923], 및 WO2003102018A2(상기 문헌들의 내용은 그 전문이 본원에서 참조로 포함된다)를 참조한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 상응하는 WT IgA와 비교하여 적어도 약 2%, 적어도 5%, 적어도 10%, 적어도 12%, 적어도 15%, 적어도 20%, 적어도 25%, 적어도 50%, 적어도 65%, 적어도 70%, 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 그 초과만큼 감소된 글리코실화를 나타낸다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 기능적 단편은 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 100%, 90%, 80%, 70%, 60%, 50%, 40%, 30%, 20%, 10%, 5% 또는 그 미만으로 더 적게 부분적으로 글리코실화된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 기능적 단편은 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 완전히 글리코실화된다.
생체분포
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 IgA 항체 또는 그의 기능적 단편은 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 증가된 생체분포를 나타낸다. 본원에서 사용되는 용어 "생체분포"는 대상체에게 투여 또는 전달된 본원에 개시된 IgA 항체 또는 그의 기능적 단편의 세포 및/또는 조직 및/또는 기관에의 분포를 지칭한다. 본원에서 사용되는 용어 "증가된 생체분포"는 일반적으로 비히클 또는 상응하는 WT IgA 항체에 의해 유발된 반응과 비교하여 예를 들어, 종양 또는 종양 세포로 표적화된 표적 부위로의 분포가 증가된 본원에 개시된 IgA 항체 또는 그의 기능적 단편의 능력을 지칭한다. 핵의학, 전신 자가방사선촬영, 미세자가방사선촬영; 형광체 이미징, 저온 이미징, 나노 2차 이온 질량 분광법(나노SIMS: nano-secondary ion mass spectroscopy), 매트릭스 보조 레이저 탈착 이미징(MALDI-MS: matrix-assisted laser desorption imaging), 방사선 촬영(X선), 자기 공명 영상(MRI: magnetic resonance imaging), 컴퓨터 단층 촬영(CT: computed tomography), 마이크로-초음파 단일 광자 방출 CT(SPECT: single photon emission CT), 양전자 방출 단층 촬영(PET: positron emission tomography) 등을 포함하나, 이에 제한되지 않는, 당업자에게 공지된 다양한 방법을 사용하여 세포 또는 조직의 생체분포를 평가하고 증가시킬 수 있다. 표적 부위로의 항체의 생체분포 즈가는 비히클 또는 WT IgA 항체와 비교하여 적어도 5%, 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 100%, 125%, 150%, 175%, 200%, 또는 그 초과의 증가를 포함한다. "증가된" 또는 "증진된" 조직 분포 또는 생체분포는 전형적으로 "통계적으로 유의적인" 증가이며, 비히클 또는 대조군 조성물 분포의 1.1, 1.2, 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 30배 또는 그 초과(예컨대, 500, 1000배)(예컨대, 1.5, 1.6, 1.7. 1.8 등과 같이, 그 사이 및 1 초과의 모든 정수 및 소수점 포함)인 증가를 포함할 수 있다.
항체를 제조하는 방법:
일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 숙주 세포에서 제조된다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 숙주 세포로부터 단리된다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 무세포 시스템에서 제조된다. 본 개시내용의 항체, 일부 또는 폴리펩티드를 코딩하는 단리된 핵산 분자는 라이게이션을 위한 블런트 말단 또는 지그재그 말단, 적절한 말단을 제공하기 위한 제한 효소 소화, 적절하게는 점착성 말단의 충전, 바람직하지 않은 연결을 방지하기 위한 알칼리성 포스파타제 처리 및 적절한 리가제에 의한 라이게이션을 비롯한, 종래 기술에 따라 벡터 DNA(예컨대, 발현 벡터)와 조합될 수 있다. 상기 조작 기술은 예컨대, 문헌 [Maniatis et al., Molecular Cloning, Lab. Manual (Cold Spring Harbor Lab. Press, NY, 1982 and 1989)] 및 [Ausubel, 1987, 1993]에 개시되어 있고, 항체 분자 또는 그의 항원 결합 영역을 코딩하는 핵산 서열을 구성하는 데 사용될 수 있다. 따라서, 본 개시내용은 본원에 기재된 단리된 핵산을 포함하는 벡터 또는 발현 벡터를 제공한다. 한 실시양태에서, 경쇄를 코딩하고, 중쇄를 코딩하는 핵산은 상기 약술된 방법에 의해 개별적으로 단리된다. 한 실시양태에서, 경쇄를 코딩하고, 중쇄를 코딩하는 단리된 핵산은 각각이 적합한 프로모터 및 번역 제어하에 있는 한, 별개의 발현 플라스미드 내로, 또는 동일한 플라스미드에 함께 삽입될 수 있다.
일단 단리된 핵산 분자가 발현 벡터에 배치되면, 이어서, 상기 핵산 분자는 숙주 세포, 예컨대, E. 콜라이 세포, 원숭이 COS 세포, 인간 배아 신장 293 세포(예컨대, 293E 세포), 차이니즈 햄스터 난소(CHO: Chinese hamster ovary) 세포, 또는 다르게는 면역글로불린 단백질을 생산하지 않는 골수종 세포를 로 형질감염시켜 재조합 숙주 세포에서 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 합성을 수득한다. 항체의 재조합 생산은 당업계에 널리 알려져 있다. 많은 벡터가 이용가능하다. 벡터 성분은 일반적으로 하기: 신호 서열, 복제 기점, 하나 이상의 선별 마커 유전자, 인핸서 요소, 프로모터, 및 전사 종결 서열 중 하나 이상의 것을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
단리된 핵산 분자는 벡터 DNA의 발현 제어 서열에 작동가능하게 연결된다. 발현 제어 서열은 특정 숙주 유기체에서 작동가능하게 연결된 코딩 서열의 발현에 필요한 DNA 서열을 지칭한다. 예를 들어, 원핵생물에 적합한 제어 서열은 프로모터, 임의적으로, 오퍼레이터 서열, 및 리보솜 결합 부위를 포함한다. 진핵 세포는 프로모터, 폴리아데닐화 신호 및 인핸서를 이용하는 것으로 알려져 있다. "작동가능하게 연결된" 또는 "전사 제어"라는 용어는 이종 핵산 서열을 발현시키는, 조절 서열과 이종 핵산 서열 사이의 기능적 연결을 지칭한다. 예를 들어, 제1 핵산 서열은 제1 핵산 서열이 제2 핵산 서열과 기능적 관계에 위치할 때 제2 핵산 서열과 작동가능하게 연결된 것이다. 예를 들어, 프로모터가 코딩 서열의 전사 또는 발현에 영향을 미치는 경우, 프로모터는 코딩 서열에 작동가능하게 연결된 것이다. 작동 가능하게 연결된 DNA 서열은 서로 인접할 수 있으며, 예컨대, 2개의 단백질 코딩 영역을 연결하는 데 필요한 경우, 동일한 리딩 프레임에 있다.
핵산은 또 다른 핵산 서열과 기능적 관계에 놓일 때 작동가능하게 연결된 것이다. 예를 들어, 프로모터 또는 인핸서는 서열의 전사에 영향을 미치는 경우, 코딩 서열에 작동가능하게 연결된 것이거나; 또는 리보솜 결합 부위가 번역을 용이하게 하도록 위치하는 경우, 코딩 서열에 작동가능하게 연결된 것이다. 일반적으로, 작동가능하게 연결이라는 것은 연결되는 DNA 서열이 인접하고/거나, 인접할 수 있고, 판독 단계에 있다는 것을 의미한다. 그러나, 인핸서는 인접할 필요가 없다. 연결은 편리한 제한 부위에서 라이게이션에 의해 수행된다. 상기 부위가 존재하지 않는 경우, 합성 올리고뉴클레오티드 어댑터 또는 링커가 통상적인 관행에 따라 사용된다.
세포, 세포주 및 세포 배양물은 종종 상호교환적으로 사용되며, 본원에서 이러한 모든 명칭은 자손을 포함한다. 형질전환체 및 형질전환된 세포는 1차 대상 세포 및 그로부터 유래된 배양물을 전달 수와 관계없이 포함한다. 또한, 모든 자손은 의도적이거나 우발적인 돌연변이로 인해 DNA 함량이 정확히 동일하지 않을 수 있음을 이해한다. 원래 형질전환된 세포에서 스크리닝된 것과 동일한 기능 또는 생물학적 활성을 갖는 돌연변이 자손이 포함된다. 별개의 명칭이 의도된 경우, 문맥에서 명확해질 것이다. 대안적 실시양태에서, 적합한 인코딩 핵산 서열은 관심 면역글로불린의 공지된 아미노산 서열에 기초하여 보편적 코돈 표에 따라 디자인될 수 있다.
원하는 항체의 아미노산 서열 변이체는 인코딩 DNA에 적절한 뉴클레오티드 변화를 도입함으로써, 또는 펩티드 합성에 의해 제조될 수 있다. 이러한 변이체는 예를 들어, 항체의 아미노산 서열 내의 잔기로부터의 결실 및/또는 삽입 및/또는 치환을 포함한다. 최종 구성물이 원하는 특성을 갖는다면, 최종 구성물에 도달하기 위해 삭제, 삽입 및 치환의 모든 조합이 이루어진다. 아미노산 변화는 또한 글리코실화 부위의 수 또는 위치를 변경하는 것과 같이 단일, 인간, 인간화 또는 변이체 항체의 번역 후 프로세스를 변경할 수 있다.
항체의 아미노산 서열 변이체를 코딩하는 핵산 분자는 다양한 방법에 의해 제조된다. 이러한 방법에는 천연 공급원으로부터의 단리(자연적으로 발생된 아미노산 서열 변이체의 경우) 또는 항체의 앞서 제조된 변이체, 또는 비변이체 버전의 올리고뉴클레오티드 매개(또는 부위 지정) 돌연변이 유발, PCR 돌연변이유발 및 카세트 돌연변이유발에 의한 제조를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
본 개시내용은 또한 임의적으로, 숙주 세포에 의해 인식되는 조절 제어 서열에 작동가능하게 연결된, 본원에 기술된 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 코딩하는 단리된 핵산 분자, 상기 핵산을 포함하는 벡터 및 숙주 세포, 및 핵산이 발현되도록 상기 숙주 세포를 배양하는 단계, 및 임의적으로, 숙주 세포 배양물 또는 배양 배지로부터 항체를 회수하는 단계를 포함할 수 있는 항체를 제조하는 재조합 기술을 제공한다.
항체 또는 그의 항원 결합 단편의 재조합 생산을 위해, 이를 코딩하는 핵산 분자를 단리시키고, 추가 클로닝(DNA 증폭) 또는 발현을 위해 복제가능한 벡터에 삽입시킬 수 있다. 따라서, 본원에서는 단리된 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 재조합 항체일 수 있다. 용어 "재조합 항체"는 항체의 코딩 서열을 포함하는 발현 벡터(또는 가능하게는 하나 초과의 발현 벡터, 전형적으로 2개의 발현 벡터)로 형질감염된 세포 또는 세포주로부터 발현되는 항체를 지칭하며, 여기서, 상기 코딩 서열은 자연적으로 세포와 관련이 없다. 한 실시양태에서, 재조합 항체는 자연에 존재하는 경우, 동일한 서열을 갖는 항체의 글리코실화 패턴과 상이한 글리코실화 패턴을 갖는다. 한 실시양태에서, 재조합 항체는 인간 숙주 세포가 아닌 포유동물 숙주 세포에서 발현된다. 특히, 개별 포유동물 숙주 세포는 고유한 글리코실화 패턴을 갖는다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 항원 결합 단편은 합성인 것이다. 본 개시내용의 폴리펩티드는 단백질 화학 분야에서 일반적으로 공지된 단백질에 대한 단리/정제 방법에 의해 정제될 수 있다.
한 측면에서, 본원에서는 본원에 기술된 단리된 핵산 분자를 포함하는 숙주 세포 또는 본원에 기술된 상기 단리된 핵산 분자를 포함하는 벡터를 제공한다. 벡터는 클로닝 벡터 또는 발현 벡터일 수 있다. 본원의 벡터에서 DNA를 클로닝하거나, 발현하기에 적합한 숙주 세포는 상기 기술된 원핵생물, 효모 또는 고등 진핵생물 세포이다. 이러한 목적에 적합한 원핵생물로는 진정세균, 예컨대, 그람-음성 또는 그람-양성 유기체, 예를 들어, 엔테로박테리아세아에(Enterobacteriaceae), 예컨대, Escherichia, 예컨대, E. 콜라이, 엔테로박터(Enterobacter), 에르위니아(Erwinia), 클레브시엘라(Klebsiella), 프로테우스(Proteus), 살모넬라(Salmonella), 예컨대, 살모넬라 티피뮤리움(Salmonella typhimurium), 세라티아(Serratia), 예컨대, 세라티아 마르세센스(Serratia marcescens), 및 시겔라(Shigella) 뿐만 아니라, 바실리(Bacilli). 예컨대, B. 섭틸리스(B. subtilis) 및 B. 리케니포르미스(B. licheniformis)(예컨대, 1989년 4월 12일 공개된 DD 266,710에 개시된 B. 리케니포르미스 41 P), 슈도모나스(Pseudomonas), 예컨대, P. 아에루기노사(P. aeruginosa), 및 스트렙토미세스(Streptomyces)를 포함한다. 다른 균주, 예컨대, E. 콜라이 B, E. 콜라이 Xl 776(ATCC 31,537), 및 E. 콜라이 W3110(ATCC 27,325)도 적합하지만, 한 바람직한 E. 콜라이 클로닝 숙주는 E. 콜라이 294(ATCC 31,446)이다. 이러한 예는 제한적인 것이 아니라 예시적인 것이다.
원핵생물 이외에도, 진핵생물 미생물, 예컨대, 사상성 진균 또는 효모가 항체-인코딩 벡터를 위해 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다. 사카로마이세스 세레비지아에(Saccharomyces cerevisiae), 또는 일반 제빵용 효모가 하등 진핵 숙주 미생물 중에서 가장 일반적으로 사용된다. 그러나, 예컨대, 스키조사카로마이세스 폼베(Schizosaccharomyces pombe); 클루이베로마이세스(Kluyveromyces) 숙주,예를 들어, 예컨대, K. 락티스(K. lactis), K. 프라길리스(K. fragilis)(ATCC 12,424), K. 불가리쿠스(K. bulgaricus)(ATCC 16,045), K. 위커하미이(K. wickeramii)(ATCC 24,178), K. 왈티이(K. waltii)(ATCC 56,500), K. 드로소필라룸(K. drosophilarum)(ATCC 36,906), K. 써모톨레란스(K. thermotolerans), 및 K. 마르시아누스(K. marxianus); 야로이야(yarrowia)(EP 402,226); 피치아 파스토리스(Pichia pastoris)(EP 183,070); 칸디다(Candida); 트리코더마 레세이(Trichoderma reesei)(EP 244,234); 뉴로스포라 크라사(Neurospora crassa); 슈완니오마이세스(Schwanniomyces), 예컨대, 슈완니오마이세스 오시덴탈리스(Schwanniomyces occidentalis); 및 사상성 진균, 예를 들어, 예컨대, 뉴로스포라(Neurospora), 페니실리리움(Penicillium), 톨리포크라듐(Tolypocladium), 및 아스페르길루스(Aspergillus) 숙주, 예컨대, A. 니둘란스(A. nidulans) 및 A. 니거(A. niger)와 같은, 다수의 다른 속, 종, 계통이 보편적으로 이용가능하며, 본원에서 유용하다.
무척추동물 세포의 예는 식물 및 곤충 세포를 포함한다. 다수의 바큘로바이러스 균주 및 변이체, 및 예컨대, 스포도프테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda)(쐐기벌레), 애데스 애기프티(Aedes aegypti)(모기), 애데스 알보픽투스(Aedes albopictus)(모기), 드로소필라 멜라노가스터(Drosophila melanogaster)(초파리) 및 봄빅스 모리(Bombyx mori)와 같은 숙주로부터의 상응하는 허용성 곤충 숙주 세포가 확인되었다. 형질감염을 위한 다양한 바이러스 균주, 예컨대, 오토그라파 칼리포르니카(Autographa californica) NPV의 L-1 변이체, 및 봄빅스 모리 NPV의 Bm-5 균주가 공개적으로 이용가능하고, 이러한 바이러스는 특히 스포도프테라 프루기페르다 세포의 형질감염을 위해 본 발명에 따라 본원에서의 바이러스로서 사용될 수 있다.
목화, 옥수수, 감자, 대두, 페튜니아, 토마토, 담배, 개구리밥 및 다른 식물 세포의 식물 세포 배양물 또한 숙주로 사용될 수 있다. 그러나, 척추동물 세포가 가장 큰 관심의 대상이 되어 왔고, 배양물(조직 배양물) 중에서의 척추동물 세포의 증식이 통상의 방법이 되었다. 유용한 포유동물 숙주 세포주의 예는 CHOK1 세포(ATCC CCL61), DXB-11, DG-44 및 차이니즈 햄스터 난소 세포/-DHFR(CHO: Chinese hamster ovary, 문헌 [Urlaub et al, Proc Natl Acad Sci USA 77:4216 (1980)])를 포함한 중국 햄스터 난소 세포; SV40에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 세포주(COS-7, ATCC CRL 1651); 인간 배아 신장 세포주(293 세포 또는 현탁 배양물에서 성장시키기 위해 서브클로닝된 293 세포(문헌 [Graham et al., J. Gen Viral. 36: 59 (1977)]); 베이비 햄스터 신장 세포(BHK: baby hamster kidney, ATCC CCL 10); 마우스 세르톨리 세포(TM4, 문헌 [Mather, Biol. Reprod. 23: 243-251 (1980)]); 원숭이 신장 세포(CV1 ATCC CCL 70); 아프리카 녹색 원숭이 신장 세포(VER0-76, ATCC CRL-1587); 인간 자궁경부 암종 세포(HELA, ATCC CCL 2); 개 신장 세포(MDCK, ATCC CCL 34); 버팔로 래트 간 세포(BRL:buffalo rat liver) 3A, ATCC CRL 1442); 인간 폐 세포(W138, ATCC CCL 75); 인간 간 세포(Hep G2, HB 8065); 마우스 유방 종양(MMT: mouse mammary tumor) 060562, ATCC CCL51); TRI 세포(문헌 [Mather et al., Annals N.Y Acad. Sci. 383: 44-68 (1982)]); MRC 5 세포; FS4 세포; 및 인간 간종양 세포주(Hep G2)이다.
숙주 세포는 항체 제조를 위해 상기 기술된 발현 또는 클로닝 벡터로 형질전환 또는 형질감염되고, 프로모터 유도, 형질전환체 선택 또는 원하는 서열을 코딩하는 유전자 증폭에 적절하게 변형된 통상적인 영양 배지에서 배양된다. 추가로, 선택적 마커에 의해 분리된 전사 단위의 다중 카피를 갖는 신규 벡터 및 형질감염된 세포주가 본원에 기술된 항체의 발현에 특히 유용하고, 바람직하다.
발현 벡터의 형질감염 및 본원에 기술된 키메라, 인간화, 또는 복합 인간 항체의 제조를 위해, 수용 세포주는 골수종 세포일 수 있다. 골수종 세포는 형질감염된 면역글로불린 핵산 서열에 의해 코딩된 면역글로불린을 합성, 어셈블리 및 분비할 수 있으며, 면역글로불린의 글리코실화 기전을 보유한다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, 수용 세포는 재조합 Ig-생산 골수종 세포 SP2/0(ATCC #CRL 8287)이다. SP2/0 세포는 형질감염된 유전자에 의해 코딩된 면역글로불린만을 생산한다. 골수종 세포는 배양물 중에서 또는 마우스의 복강에서 성장할 수 있으며, 여기서, 분비된 면역글로불린은 복수액에서 수득할 수 있다. 다른 적합한 수용 세포는 예컨대, 인간 또는 비인간 기원의 B 림프구와 같은 림프양 세포, 인간 또는 비인간 기원의 하이브리도마 세포, 또는 종간 이종하이브리도마 세포를 포함한다. 당업계의 숙련가에게 공지된 바와 같이, 본원에 기술된 키메라, 인간화, 또는 복합 인간 항체 구성물 또는 항체 폴리펩티드를 보유하는 발현 벡터는 형질전환, 형질감염, 접합, 원형질체 융합, 인산칼슘 침전, 예컨대, 디에틸아미노에틸(DEAE) 덱스트란과 같은 폴리양이온을 사용한 적용과 같은 생화학적 수단, 및 전기천공, 직접 미세주입 및 미세발사체 충격과 같은 기계적 수단을 비롯한, 다양한 적합한 수단 중 임의의 것에 의해 적절한 숙주 세포 내로 도입될 수 있다(문헌 [Johnston et al., 240 Science 1538 (1988)]).
효모는 면역글로불린 H 및 L 쇄 제조에 있어 박테리아에 비해 특정 이점을 제공한다. 효모는 글리코실화를 포함한 번역 후 펩티드 변형을 수행한다. 효모에서 원하는 단백질을 제조하는 데 사용될 수 있는 강력한 프로모터 서열 및 높은 카피수의 플라스미드를 사용하는 재조합 DNA 전략법이 다수 존재한다. 효모는 클로닝된 포유동물 유전자 생성물의 리더 서열을 인식하고, 리더 서열을 보유하는 펩티드(즉, 프리-펩티드)를 분비한다(문헌 [Hitzman et al., 11th Intl. Conf. Yeast, Genetics & Molec. Biol. (Montpelier, France, 1982)]). 효모 유전자 발현 시스템은 항체 폴리펩티드 또는 그의 항원 결합 단편 펩티드, 및 그의 어셈블리된 키메라, 인간화 또는 복합 인간 항체, 단편 및 영역의 제조, 분비 및 안정성 수준에 대해 통상적으로 평가될 수 있다. 효모가 글루코스가 풍부한 배지에서 성장할 때 다량으로 생성되는 해당 효소를 코딩하는 활성 발현 유전자로부터의 프로모터 및 종결 요소를 포함하는 일련의 효모 유전자 발현 시스템 중 임의의 것이 이용될 수 있다. 알려진 해당 유전자는 또한 매우 효율적인 전사 제어 신호를 제공할 수 있다. 예를 들어, 포스포글리세레이트 키나제(PGK: phosphoglycerate kinase) 유전자의 프로모터 및 종결인자 신호가 이용될 수 있다. 효모에서 클로닝된 면역글로불린 cDNA의 발현을 위한 최적의 발현 플라스미드를 평가하기 위해 여러 접근법을 취할 수 있다.
박테리아 균주는 또한 본원에 기술된 항체 분자 또는 그의 단편의 생산을 위한 숙주로서 사용될 수 있고, E. 콜라이 K12 균주, 예컨대, E. 콜라이 W3110(ATCC 27325), 바실러스 종, 장내세균, 예컨대, 살모넬라 티피뮤리움 또는 세라티아 마르세센스, 및 다양한 슈도모나스 종이 사용될 수 있다. 숙주 세포와 호환되는 종에서 유래된 레플리콘 및 제어 서열을 함유하는 플라스미드 벡터는 이러한 박테리아 숙주와 관련하여 사용된다. 벡터는 복제 부위 뿐만 아니라, 형질전환된 세포에서 표현형 선택을 제공할 수 있는 특정 유전자를 보유한다. 박테리아에서 클로닝된 면역글로불린 cDNA 또는 CDR에 의해 코딩된 키메라, 인간화, 또는 복합 인간화 항체 및 그의 단편의 제조를 위한 발현 플라스미드를 평가하는 데 많은 접근법이 이용할 수 있다{문헌 [Glover, 1985]; [Ausubel, 1987, 1993]; [Sambrook, 1989]; [Colligan, 1992-1996] 참조).
숙주 포유동물 세포는 시험관내 또는 생체내에서 성장될 수 있다. 포유동물 세포는 리더 펩티드 제거, H 및 L 쇄의 폴딩 및 어셈블리, 항체 분자의 글리코실화 및 기능적 항체 단백질의 분비를 비롯한, 면역글로불린 단백질 분자에 대한 번역 후 변형을 제공한다. 항체 단백질의 제조를 위한 숙주로서 유용할 수 있는 포유동물 세포는 상기 기술된 림프양 기원의 세포 이외에도, 예컨대, Vero(ATCC CRL 81) 또는 CHO-K1(ATCC CRL 61)와 같은 섬유아세포 기원의 세포를 포함한다. 폴리펩티드를 발현하는데 사용될 수 있는 예시적인 진핵 세포는 COS 7 세포를 포함하는 COS 세포; 293-6E 세포를 포함하는 293 세포; CHO-S 및 DG44 세포를 포함하는 CHO 세포; PER.C6.RTM. 세포(Crucell); 및 NSO 세포를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 특정 진핵 숙주 세포는 가변 중쇄 및/또는 가변 경쇄에 대해 원하는 번역 후 변형을 만드는 능력에 기초하여 선택된다. 예를 들어, 일부 실시양태에서, CHO 세포는 293 세포에서 생산된 동일한 폴리펩티드보다 더 높은 수준의 시알릴화를 갖는 폴리펩티드를 생산한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 폴리펩티드는 임의의 적합한 방법에 따라 폴리펩티드를 코딩하는 하나 이상의 핵산 분자로 조작되거나, 형질감염된 동물에서 생체내에서 생산될 수 있다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 무세포 시스템에서 제조된다. 비제한적인 예시적인 무세포 시스템은 예컨대, 문헌 [Sitaraman et al., Methods Mol. Biol. 498: 229-44 (2009)]; [Spirin, Trends Biotechnol. 22: 538-45 (2004)]; [Endo et al., Biotechnol. Adv. 21: 695-713 (2003)]에 기술되어 있다.
포유동물 세포에서 H 및 L 쇄 핵산 서열의 발현을 위해 많은 벡터 시스템이 이용가능하다(문헌 [Glover, 1985] 참조). 완전 H2L2 항체를 수득하기 위해 다른 접근법을 따를 수 있다. 상기 논의된 바와 같이, 완전 사량체 H2L2 항체 및/또는 항원 결합 단편 펩티드로의 H 및 L 쇄의 세포내 회합 및 연결을 달성하기 위해 동일한 세포에서 H 및 L 쇄를 공동 발현시킬 수 있다. 공동 발현은 동일한 숙주에서 동일하거나, 상이한 플라스미드를 사용하여 이루어질 수 있다. H 및 L 쇄 및/또는 CDR3 영역 펩티드 둘 모두에 대한 유전자는 동일한 플라스미드에 배치될 수 있으며, 이어서, 이는 세포 내로 형질감염되어 두 쇄를 모두 발현하는 세포를 직접 선택할 수 있다. 대안적으로, 세포는 하나의 쇄, 예를 들어, L 쇄를 코딩하는 플라스미드로 먼저 형질감염된 후, 생성된 세포주를 제2 선별가능한 마커를 함유하는 H 쇄 플라스미드로 형질감염시킬 수 있다. 두 경로 중 하나를 통해 항원 결합 펩티드 단편 및/또는 H2L2 분자를 생산하는 세포주는 예컨대, 어셈블리된 H2L2 항체 분자의 생산 증가 또는 형질감염된 세포주의 안정성 증진과 같은, 특성이 증진된 세포를 생성하기 위해 추가의 선별가능한 마커와 함께 펩티드 H, L 또는 H 플러스 L 쇄의 추가 카피를 코딩하는 플라스미드로 형질감염될 수 있다.
추가로, 식물은 미생물 또는 동물 세포의 대규모 배양을 기반으로 하는 재조합 항체 제조를 위한 편리하고, 안전하며 경제적인 대안적인 주류 발현 시스템으로 부상하고 있다. 항체는 식물 세포 배양물 또는 통상적으로 재배된 식물에서 발현될 수 있다. 식물에서의 발현은 식물 전체에서 이루어질 수 있거나, 세포내 색소체로 제한되거나, 또는 종자(내배유)로 제한될 수 있다. 여러 식물 유래 항체가 발전 단계에 도달하였다(예컨대, Biolex, NC 참조).
일부 측면에서, 본원에서는 인간화 항체의 경쇄를 코딩하는 제1 발현 벡터 및 인간화 항체의 중쇄를 코딩하는 제2 발현 벡터로 형질전환된 숙주를 각각의 쇄가 발현되는 조건하에 유지시키는 단계, 및 이렇게 발현된 쇄의 어셈블리에 의해 형성된 인간화 항체를 단리시키는 단계를 포함하는 방법에 의해 제조되는 인간화 항체를 제조하기 위한 방법 및 시스템을 제공한다. 제1 및 제2 발현 벡터는 동일한 벡터일 수 있다. 또한 본원에서는 인간화 항체의 경쇄 또는 중쇄를 코딩하는 DNA 서열; 상기 DNA 서열을 포함하는 발현 벡터; 및 상기 발현 벡터로 형질전환된 숙주를 제공한다. 본원에 제공된 서열 및 정보로부터 인간화 항체를 생성하는 것은 과도한 실험 없이 당업계의 숙련가에 의해 실시될 수 있다. 한 접근법에서 단일클론 항체를 인간화하기 위해 4가지 일반적인 단계가 이용된다. 이는 (1) 출발 항체 경쇄 및 중쇄 가변 도메인의 뉴클레오티드 및 예측된 아미노산 서열을 결정하는 단계, (2) 인간화 항체를 디자인하는 단계, 즉, 인간화 프로세스 동안 어떤 항체 프레임워크 영역을 사용할지를 결정하는 단계; (3) 실제 인간화 방법론/기술; 및 (4) 인간화 항체의 형질감염 및 발현.
정제
"단리된"이라는 용어는 자연 상태에서 변경되거나, 제거된 것을 의미한다. 예를 들어, 살아있는 동물에 자연적으로 존재하는 핵산 또는 폴리펩티드(예컨대, 본원에 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 단편)는 "단리된" 것이 아니지만, 그의 자연 상태의 공존 물질로부터 부분적으로 또는 완전히 분리된 동일한 핵산 또는 폴리펩티드는 "단리된" 것이다. 단리된 핵산 분자 또는 폴리펩티드는 실질적으로 정제된 형태로 존재할 수 있거나, 또는 예컨대, 예를 들어, 숙주 세포와 같은 비천연 환경에 존재할 수 있다. 단리된 폴리펩티드는 그의 자연 환경의 구성요소로부터 분리 및/또는 회수된 것이다. 그의 자연 환경의 오염 성분은 폴리펩티드의 진단 또는 치료 용도를 방해하는 물질이며, 효소, 호르몬 및 다른 단백질성 또는 비단백질성 성분을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 적합한 방법에 의해 정제될 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 폴리펩티드는 (1) 로우리 방법에 의해 측정된 바, 폴리펩티드의 95중량% 초과, 가장 바람직하게는 99중량% 초과로; (2) 스피닝 컵 시쿼네이터를 사용하여 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 적어도 15개 잔기를 수득하기에 충분한 정도로; 또는 (3) 환원 또는 비환원 조건하에 및 쿠마시 블루 또는 바람직하게는 은 염색을 사용하여 SDS-PAGE에 의해 제시되는 바와 같은 균질성으로 정제된다. 단리된 항체는 폴리펩티드의 자연 환경의 적어도 하나의 성분이 존재하지 않을 것이기 때문에, 재조합 세포내의 폴리펩티드를 포함한다. 그러나, 일반적으로, 단리된 폴리펩티드는 적어도 하나의 정제 단계에 의해 제조될 것이다. 한 측면에서, 본원에서는 본원에 제공된 바와 같은 정제된 항체 또는 항원 결합 단편을 개시한다.
일단 발현되고 나면, 본 발명의 전체 항체, 그의 이량체, 개별 경쇄 및 중쇄, 또는 다른 면역글로불린 형태는 공지된 기술, 예컨대, 면역흡수 또는 면역친화성 크로마토그래피, 크로마토그래피 방법, 예컨대, HPLC(고성능 액체 크로마토그래피: high performance liquid chromatography), 황산암모늄 침전, 겔 전기영동 또는 이들의 임의 조합에 의해 회수 및 정제될 수 있다. 일반적으로 문헌 [Scopes, PROTEIN PURIF. (Springer-Verlag, NY, 1982)] 참조한다. 적어도 약 90% 내지 95% 균질성의 실질적으로 순수한 면역글로불린이 유리하며, 98% 내지 99% 또는 그 초과의 균질성을 갖는 면역글로불린은 특히 약제학적 용도에 유리하다. 재조합 기술을 사용하는 경우, 항체는 세포내, 주변세포질 공간에서 생산되거나, 미생물 배양물을 비롯한 배지로 직접 분비될 수 있다. 항체가 세포내에서 생산되는 경우, 제1 단계로, 숙주 세포 또는 용해된 단편인 미립자 파편이 예를 들어, 원심단리 또는 한외여과에 의해 제거된다. 문헌 [Better et al. Science 240: 1041-1043 (1988)]; [ICSU Short Reports 10: 105 (1990)]; 및 [Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 457-461 (1993)]에는 E. 콜라이의 주변세포질 공간으로 분비되는 항체를 단리하기 위한 방법이 기술되어 있다(문헌 [Carter et al., Bio/Technology 10: 163-167 (1992)] 또한 참조).
미생물 또는 포유동물 세포로부터 단리된 항체 조성물은 예를 들어, 하이드록실아파타이트 크로마토그래피 양이온 또는 조류 교환 크로마토그래피, 및 친화성 크로마토그래피를 사용하여 정제될 수 있으며, 친화성 크로마토그래피가 바람직한 정제 기술이다. 친화성 리간드로서 단백질 A의 적합성은 항체에 존재하는 임의의 면역글로불린 Fc 도메인의 종 및 이소타입에 따라 달라진다. 단백질 A는 인간 y1, y2 또는 y4 중쇄를 기반으로 하는 항체를 정제하는 데 사용될 수 있다(문헌 [Lindmark et al., J. Immunol. Meth. 62: 1-13 (1983)]). 단백질 G는 모든 마우스 이소타입과 인간 y3에 대해 권장된다(문헌 [Guss et al., EMBO J. 5: 15671575 (1986)]). 친화성 리간드가 부착된 매트릭스는 대부분 아가로스이지만, 다른 매트릭스도 이용가능하다. 기계적으로 안정적인 매트릭스, 예컨대, 조절 공극 유리 또는 폴리(스티렌디비닐)벤젠을 통해 아가로스로 달성할 수 있는 것보다 더 빠른 유속 및 더 짧은 프로세싱 시간을 달성할 수 있다. 항체가 CH 3 도메인을 포함하는 경우, 베이커본드 ABX(akerbond ABX)™ 수지(J. T. Baker: 미국 뉴저지주 필립스버그 소재)가 정제에 유용하다. 다른 단백질 정제 기술, 예컨대, 이온 교환 칼럼 상에서의 분획화, 에탄올 침전, 역상 HPLC, 실리카 크로마토그래피, 헤파린 세파로스(SEPHAROSE)™ 상에서의 크로마토그래피, 음이온 또는 양이온 교환 수지(예컨대, 폴리아스파르트산 칼럼) 상에서의 크로마토그래피, 크로마토포커싱, 및 황산암모늄 침전 또한 회수하고자 하는 항체에 따라 이용가능하다. 이어서, 일단 정제되고 나면, 부분적으로 또는 원하는 균질성으로, 인간화 또는 복합 인간 항체는 치료적으로 또는 검정 방법, 면역형광 염색 등을 개발하고 수행하는 데 사용될 수 있다. 일반적으로, 문헌 [Vols. I & II Immunol. Meth. (Lefkovits & Pernis, eds., Acad. Press, NY, 1979 and 1981)]을 참조한다.
본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편의 기능적 활성. 이러한 기능적 활성은 생물학적 활성 및 암 세포 항원에 결합하는 능력을 포함한다. 추가로, 기능적 활성을 갖는 폴리펩티드란, 예컨대, 예를 들어, 생물학적 검정법과 같은 특정 검정법에서 용량에 의존하여, 또는 그에 의존하지 않고, 성숙한 형태를 비롯한, 본원에 기술된 항체의 활성과 유사하지만, 반드시 동일하지는 않은 활성을 나타내는 것을 의미한다. 용량 의존성이 존재하는 경우, 본 개시내용의 항체의 것과 동일할 필요는 없지만, 오히려 본원에 기술된 항체와 비교하여 주어진 활성에서 용량 의존성과 실질적으로 유사하다(즉, 후보 폴리펩티드는 본원에 기술된 항체와 비교하여 더 큰 활성을 나타내거나, 또는 약 25배 이하로 더 적은, 약 10배 더 적은, 또는 약 3배 더 적은 활성을 나타낼 것이다).
항체를 코딩하는 핵산 분자
본원에 제공된 정보, 예를 들어, 항체의 핵산 및 아미노산 서열을 사용하여; 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 코딩하는 핵산 분자는 당업자에 의해 용이하게 수득될 수 있다. 상기 핵산 분자는 예를 들어, 당업계에 개시된 종래 방법을 사용하여 수득할 있다. 본 개시내용의 핵산 분자는 예컨대, mRNA, hnRNA, tRNA 또는 임의의 다른 형태와 같은 RNA의 형태, 또는 클로닝에 의해 수득되거나, 합성적으로 제조된 cDNA 및 게놈 DNA를 포함하나, 이에 제한되지 않는 DNA 형태, 또는 그의 임의 조합일 수 있다. DNA는 삼중, 이중 또는 단일 가닥, 또는 그의 임의의 조합일 수 있다. DNA 또는 RNA의 적어도 하나의 가닥의 임의의 부분은 센스 가닥으로도 알려진 코딩 가닥일 수 있거나, 안티센스 가닥으로도 알려진 안티센스 가닥일 수 있다.
본원에서 상호교환적으로 사용되는 "폴리뉴클레오티드," 또는 "핵산 분자"는 임의의 길이의 뉴클레오티드의 중합체를 지칭하고, DNA 및 RNA를 포함한다. 뉴클레오티드는 데옥시리보뉴클레오티드, 리보뉴클레오티드, 변형된 뉴클레오티드 또는 염기, 및/또는 그의 유사체, 또는 DNA 또는 RNA 폴리머라제에 의해 중합체에 혼입될 수 있는 임의의 기질일 수 있다. 핵산 분자는 변형된 뉴클레오티드, 예컨대, 메틸화된 뉴클레오티드 및 그의 유사체를 포함할 수 있다. 존재하는 경우, 뉴클레오티드 구조에 대한 변형은 중합체의 어셈블리 전 또는 후에 부여될 수 있다. 뉴클레오티드의 서열은 비뉴클레오티드 성분에 의해 중단될 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 예컨대, 표지 성분과의 접합에 의해 중합 후에 추가로 변형될 수 있다. 다른 유형의 변형은 예를 들어, "캡," 자연적으로 발생된 뉴클레오티 중 하나 이상의 것의 유사체로의 치환, 뉴클레오티드간 변형, 예컨대, 예를 들어, 비하전 결합(예컨대, 메틸 포스포네이트, 포스포트리에스테르, 포스포아미데이트, 카바메이트 등) 및 하전된 결합(예컨대, 포스포로티오에이트, 포스포로디티오에이트 등)을 갖는 것, 예컨대, 예를 들어, 단백질(예컨대, 뉴클레아제, 독소, 항체, 신호 펩티드, 폴리-L-리신 등)과 같은 펜던트 모이어티를 포함하는 것, 인터칼레이터(예컨대, 아크리딘, 소랄렌 등)를 포함하는 것, 킬레이터(예컨대, 금속, 방사성 금속, 붕소, 산화 금속 등)를 포함하는 것, 알킬레이터를 포함하는 것, 변형된 결합을 포함하는 것(예컨대, 알파 아노머 핵산 등) 뿐만 아니라, 변형되지 않은 형태의 폴리뉴클레오티드(들)를 포함한다. 추가로, 당에 통상적으로 존재하는 임의의 하이드록실 기는 예를 들어, 포스포네이트 기, 포스페이트 기로 대체될 수 있거나, 표준 보호기에 의해 보호되거나, 추가 뉴클레오티드에 대한 추가 연결을 제조하도록 활성화되거나, 또는 활성화되어 추가 뉴클레오티드에의 추가 결합을 제조할 수 있거나, 또는 고체 지지체에 접합될 수 있다. 5' 및 3' 말단 OH는 인산화되거나, 아민 또는 1 내지 20개의 탄소 원자로 이루어진 유기 캡핑 모이어티로 치환될 수 있다. 다른 하이드록실 또한 표준 보호기로 유도체화될 수 있다. 폴리뉴클레오티드는 또한 예를 들어, 2'-O-메틸-, 2'-O-알릴, 2'-플루오로- 또는 2'-아지도-리보스, 카보사이클릭 당 유사체, α-아노머 당, 에피머 당, 예컨대, 아라비노스, 크실로스 또는 릭소스, 피라노스 당, 푸라노스 당, 세도헵툴로스, 비사이클릭 유사체 및 무염기성 뉴클레오시드 유사체, 예컨대, 메틸 리보시드를 비롯한, 당업계에 일반적으로 공지된, 유사한 형태의 리보스 또는 데옥시리보스 당을 함유할 수 있다. 하나 이상의 포스포디에스테르 결합은 대체 연결기로 대체될 수 있다. 이들 대안적 연결기는 포스페이트가 P(O)S("티오에이트"), P(S)S("디티오에이트"), "(O)NR2("아미데이트"), P(O)R, P(O)OR', CO 또는 CH2("포름아세탈")(여기서, 각각의 R 또는 R'는 독립적으로 H 또는 임의적으로 에테르(―O―) 결합을 함유하는 치환 또는 비치환된 알킬(1-20 C), 아릴, 알케닐, 사이클로알킬, 사이클로알케닐 또는 아르알킬이다)로 대체된 실시양태를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 폴리뉴클레오티드의 모든 연결이 동일할 필요는 없다. 상기 설명은 단리된 핵산, RNA 및 DNA를 비롯한, 본원에 언급된 모든 폴리뉴클레오티드에 적용된다.
본 발명의 맥락에서, 일반적으로 존재하는 핵산 염기에 대해 하기 약어가 사용된다. "A"는 아데노신을 지칭하고, "C"는 시토신을 지칭하고, "G"는 구아노신을 지칭하고, "T"는 티미딘을 지칭하고, "U"는 우리딘을 지칭하고. 일부 실시양태에서, 핵산 분자는 단리된 핵산을 포함한다.
핵산은 전체 세포에, 세포 용해물에, 또는 부분적으로 정제되거나 실질적으로 순수한 형태로 존재할 수 있다. 핵산 분자는 밴딩, 칼럼 크로마토그래피, 아가로스 겔 전기영동 및 당업계에 널리 알려져 있는 기술을 포함하나, 이에 제한되지 않는 표준 기술에 의해 다른 세포 성분 또는 다른 오염물, 예컨대, 다른 세포 핵산 또는 단백질로부터 정제될 때 "단리"되거나, "실질적으로 순수화"된 것이다. 문헌 [F. Ausubel, et al., ed. (1987) Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York]을 참조한다. 본 개시내용의 적어도 일부 실시양태에 따른 핵산은 예를 들어, DNA 또는 RNA일 수 있고, 인트론 서열을 함유하거나, 함유하지 않을 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 핵산은 cDNA 분자이다.
본 개시내용의 또 다른 측면은 본원에 기술된 항체 폴리펩티드 또는 그의 기능적 단편 또는 그의 항원 결합 단편을 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 핵산 분자에 관한 것이다. 일부 실시양태에서, 단리된 핵산 분자는 변형된 IgA 중쇄 불변 영역을 코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 변형된 IgA 중쇄 불변 영역을 코딩하는 핵산 서열은 서열 번호 25-32 중 어느 하나로부터 선택된 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 가변 중쇄 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열은 서열 번호 87-84로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 단리된 핵산 분자는 항체의 경쇄 가변 영역 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 경쇄 가변 영역 폴리펩티드를 코딩하는 핵산 서열은 서열 번호 101-108로부터 선택된다.
일단 VH 및 VL 절편을 코딩하는 DNA 절편을 수득하고 나면, 이들 DNA 단편은 표준 재조합 DNA 기술에 의해 추가로 조작되어, 예를 들어, 가변 영역 유전자를 전장 항체 쇄 유전자, Fab 단편 유전자 또는 scFv 유전자로 전환시킬 수 있다. 상기 조작에서, VL- 또는 VH-코딩 DNA 단편은 예컨대, 항체 불변 영역 또는 가요성 링커와 같은 또 다른 단백질을 코딩하는 또 다른 DNA 단편에 작동적으로 연결된다. 이러한 맥락에서 사용되는 용어 "작동적으로 연결된"은 2개의 DNA 단편에 의해 코딩된 아미노산 서열이 프레임내에 유지되도록 2개의 DNA 단편이 연결되는 것을 의미하는 것으로 의도된다. VH 영역을 코딩하는 단리된 DNA는 VH 코딩 DNA를 중쇄 불변 영역(CH1, CH2 및 CH3)을 코딩하는 또 다른 DNA 분자에 작동적으로 연결함으로써 전장 중쇄 유전자로 전환될 수 있다. 인간 중쇄 불변 영역 유전자의 서열은 당업계에 공지되어 있고(예컨대, 문헌 [Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242] 참조), 상기 영역을 포함하는 DNA 단편은 표준 PCR 증폭에 의해 수득할 수 있다. 중쇄 불변 영역은 IgA1 또는 IgA2 불변 영역일 수 있다. Fab 단편 중쇄 유전자의 경우, VH 코딩 DNA는 중쇄 CH1 불변 영역만을 코딩하는 또 다른 DNA 분자에 작동적으로 연결될 수 있다.
VL 영역을 코딩하는 단리된 DNA는 VL 코딩 DNA를 경쇄 불변 영역, CL을 코딩하는 또 다른 DNA 분자에 작동적으로 연결함으로써 전장 경쇄 유전자(뿐만 아니라, Fab 경쇄 유전자)로 전환될 수 있다. 인간 경쇄 불변 영역 유전자의 서열은 당업계에 공지되어 있고(예컨대, 문헌 [Kabat, E. A., et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242] 참조), 상기 영역을 포함하는 DNA 단편은 표준 PCR 증폭에 의해 수득할 수 있다. 경쇄 불변 영역은 카파 또는 람다 불변 영역일 수 있지만, 가장 바람직하게는 카파 불변 영역이다.
scFv 유전자를 생성하기 위해, VH 및 VL 코딩 DNA 단편은 가요성 링커를 코딩하는, 예컨대, 아미노산 서열 (Gly-4-Ser)3을 코딩하는 또 다른 단편에 작동적으로 연결되어, VH 및 VL 서열은 가요성 링커에 의해 연결된 VL와 VH를 가진 연속적인 단일 쇄 단백질로서 발현될 수 있다(예컨대, 문헌 [Bird et al. (1988) Science 242:423-426]; [Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883]; [McCafferty et al., (1990) Nature 348:552-554] 참조).
본 개시내용으로부터 단리된 핵산 분자는 임의적으로 하나 이상의 인트론을 갖는 오픈 리딩 프레임(ORF: open reading frame), 예컨대, 제한하는 것은 아니지만, 적어도 하나의 경쇄의 CDR1, CDR2 및/또는 CDR3으로서의 적어도 하나의 CDR의 적어도 하나의 특정 부분을 포함하는 핵산; 본원에 개시된 항체 또는 가변 영역, 예를 들어, 경쇄의 가변 영역과 연관된 암의 코딩 서열을 포함하는 핵산 분자; 및 상기 기술된 것과 실질적으로 상이한 뉴클레오티드 서열을 포함하지만, 유전자 코드의 축퇴성에 기인하여 적어도 본원에 기술된 바와 같고/거나, 당업계에 공지된 바와 같은 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 여전히 코딩하는 핵산 분자를 포함할 수 있다. 물론, 유전자 코드는 당업계에 널리 알려져 있다. 따라서, 당업자는 본 개시내용의 특정 항체를 코딩하는 이러한 축퇴성 핵산 변이체를 생성하는 것이 통상적일 것이다. 예를 들어, 문헌 [Ausubel et al, 상기 문헌 동일]을 참조하며, 상기 핵산 변이체가 본 발명에 포함된다.
항체의 하나 이상의 쇄를 코딩하는 핵산 서열을 포함하는 핵산 분자가 본원에서 제공된다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자는 항체의 중쇄 또는 경쇄를 코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자는 항체의 중쇄를 코딩하는 핵산 서열, 및 항체의 경쇄를 코딩하는 핵산 서열, 둘 모두를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 핵산 분자는 중쇄를 코딩하는 제1 핵산 서열을 포함하고, 제2 핵산 분자는 경쇄를 코딩하는 제2 핵산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 중쇄 및 경쇄는 하나의 핵산 분자로부터, 또는 2개의 별개의 핵산 분자로부터, 2개의 별개의 폴리펩티드로서 발현된다. 일부 실시양태에서, 예컨대, 항체가 scFv일 때, 단일 핵산 서열은 함께 연결된 중쇄 및 경쇄, 둘 모두를 포함하는 단일 폴리펩티드를 코딩한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체의 중쇄 또는 경쇄를 코딩하는 핵산 서열은 본원에 제공된 CDR 중 적어도 하나를 코딩하는 핵산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체의 중쇄 또는 경쇄를 코딩하는 핵산 서열은 본원에 제공된 CDR 중 적어도 3개를 코딩하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체의 중쇄 또는 경쇄를 코딩하는 핵산 서열은 본원에 제공된 CDR 중 적어도 6개를 코딩하는 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체의 중쇄 또는 경쇄를 코딩하는 핵산 서열은 번역될 때, 중쇄 또는 경쇄의 N 말단에 위치하는 리더 서열을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다. 리더 서열은 천연 중쇄 또는 경쇄 리더 서열일 수 있거나, 또는 또 다른 이종 리더 서열일 수 있다. 용어 "리더 서열"은 포유동물 세포로부터 폴리펩티드의 분비를 촉진하는 폴리펩티드의 N-말단에 위치한 아미노산 잔기의 서열을 지칭한다. 리더 서열은 포유동물 세포로부터 폴리펩티드를 외수송할 때 절단되어 성숙한 단백질을 형성할 수 있다. 리더 서열은 천연 또는 합성일 수 있으며, 이들이 부착된 단백질에 대해 이종성 또는 동종성일 수 있다.
일부 실시양태에서, 핵산 분자는 본원의 표 7-8에서 가변 경쇄 및 가변 중쇄에 대한 아미노산 서열 중 임의의 것을 코딩하는 것이다. 일부 실시양태에서, 핵산 서열은 본원의 표 7-8의 아미노산 서열 가변 경쇄 및 가변 중쇄 중 임의의 것을 코딩하는 핵산과 80% 이상 동일한 것, 예를 들어, 적어도 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98 또는 99% 동일한 것이다. 일부 실시양태에서, 핵산은 본원에 제공된 핵산 서열 중 임의의 하나 이상의 것에 하이브리드화하는 것이다. 일부 실시양태에서, 하이브리드화는 중간 조건하에 있다. 일부 실시양태에서, 하이브리드화는 매우 엄격한 조건, 예컨대, 65℃에서 적어도 약 6X SSC 및 1% SDS, 0.1X SSC 중 약 20% (v/v) 포름아미드로 약 42℃에서 10분 동안 1차 세척, 및 0.2 X SSC 및 0.1% SDS로 65℃에서 후속 세척하에서 이루어진다.
핵산 분자는 당업계에 통상적인 재조합 DNA 기술을 사용하여 구성될 수 있다. 일부 실시양태에서, 핵산 분자는 선택된 숙주 세포에서의 발현에 적합한 발현 벡터에 배치된다.
본원에서 항체 또는 항원 결합 단편을 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 벡터를 제공한다. 중쇄 및/또는 경쇄를 코딩하는 핵산 분자를 포함하는 벡터 또한 제공한다. 이러한 벡터는 DNA 벡터, 파지 벡터, 바이러스 벡터, 레트로바이러스 벡터 등을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 한 실시양태에서, 경쇄를 코딩하는 핵산 및 중쇄를 코딩하는 핵산은 상기에 개략적으로 설명된 방법에 의해 별개로 단리된다. 한 실시양태에서, 경쇄를 코딩하는 단리된 핵산 및 중쇄를 코딩하는 단리된 핵산은 각각이 적합한 프로모터 및 번역 제어하에 있는 한, 별개의 발현 플라스미드에 삽입되거나, 동일한 플라스미드에 함께 삽입될 수 있다. 일부 실시양태에서, 중쇄 및 경쇄는 예컨대, 예를 들어, 항체가 scFv인 경우와 같이, 단일 폴리펩티드의 일부로서 발현된다.
일부 실시양태에서, 제1 벡터는 중쇄를 코딩하는 핵산 분자를 포함하고, 제2 벡터는 경쇄를 코딩하는 핵산 분자를 포함한다. 일부 실시양태에서, 제1 벡터 및 제2 벡터는 유사한 양(예컨대, 유사한 몰량 또는 유사한 질량 양)으로 숙주 세포로 형질감염된다. 일부 실시양태에서, 5:1 내지 1:5의 몰비 또는 질량비의 제1 벡터 및 제2 벡터가 숙주 세포로 형질감염된다. 일부 실시양태에서, 중쇄를 코딩하는 벡터 및 경쇄를 코딩하는 벡터에 대해 1:1 내지 1:5의 질량비가 사용된다. 일부 실시양태에서, 중쇄를 코딩하는 벡터 및 경쇄를 코딩하는 벡터에 대해 1:2의 질량비가 사용된다. 일부 실시양태에서, CHO 또는 CHO 유래 세포, 또는 NSO 세포에서 폴리펩티드의 발현을 위해 최적화된 벡터가 선택된다. 이러한 예시적인 벡터는 예를 들어, 문헌 [Running Deer et al., Biotechnol. Prog.20:880-889 (2004)]에 기술되어 있다.
한 측면에서, 본 개시내용은 핵산 분자를 투여하는 단계를 포함하는 암의 치료 또는 예방 방법으로서, 여기서, 핵산 분자는 VH, VL, VH의 CDR3 영역 또는 VL의 CDR 3 영역 또는 그의 항원 결합 단편을 코딩하며, 여기서, 핵산 분자는 유전자 요법에 의해 본원에 개시된 서열(예컨대, 표 3 또는 표 4)을 포함하는 것인 방법을 제공한다. 유전자 요법은 발현되거나, 발현가능한 핵산을 대상체에게 투여함으로써 수행되는 요법을 의미한다. 본 발명의 이러한 실시양태에서, 핵산은 예방 또는 치료 효과를 매개하는 그의 코딩된 단백질을 생성한다. 당업계에서 이용가능한 유전자 요법을 위한 임의의 방법은 본원의 실시양태에 따라 사용될 수 있다.
유전자 요법의 방법에 대한 일반적인 리뷰를 위해, 문헌 [Goldspiel et al., 1993, Clinical Pharmacy 12:488-505]; [Wu and Wu, 1991, Biotherapy 3:87-95]; [Tolstoshev, 1993, Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 32:573-596]; [Mulligan, 1993, Science 260:926-932]; 및 [Morgan and Anderson, 1993, Ann. Rev. Biochem. 62:191-217; May, 1993, TIBTECH 11(5):155-215]를 참조한다. 사용될 수 있는 재조합 DNA 기술로서, 당업계에 일반적으로 공지된 방법은 문헌 [Ausubel et al. (eds.), 1993, Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, NY]; 및 [Kriegler, 1990, Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, Stockton Press, NY]에 기술되어 있다. 적절한 세포에 치료 항체의 전달은 물리적 DNA 전달 방법(예컨대, 리포솜 또는 화학적 처리)의 사용에 의해 또는 바이러스 벡터(예컨대, 아데노바이러스, 아데노 관련 바이러스, 또는 레트로바이러스)의 사용에 의한 것을 비롯한, 당업계에 공지된 임의의 적합한 접근법을 사용하여 생체외, 동소 또는 생체내에서 유전자 요법을 통해 수행될 수 있다. 예를 들어, 생체내 요법의 경우, 원하는 항체를 코딩하는 핵산을 단독으로 또는 벡터, 리포솜 또는 침전물과 함께 대상체에 직접 주사할 수 있고, 일부 실시양태에서는 항체 화합물의 발현이 필요한 부위에 주사될 수 있다. 생체외 치료를 위해, 피험자의 세포를 제거하고, 핵산을 이들 세포에 도입하고, 변형된 세포를 대상체에게 직접 반환하거나, 또는 예를 들어, 환자 내로 이식되는 다공성 막 내에 캡슐화한다. 예컨대 미국 특허 제4,892,538호 및 제5,283,187호를 참조한다. 핵산을 생존가능 세포에 도입하는 데 이용가능한 다양한 기술이 존재한다. 기술은 핵산이 시험관내에서 배양된 세포로 전달되는지 또는 의도된 숙주의 세포에서 생체내로 전달되는지에 따라 달라진다. 시험관내에서 포유동물 세포로 핵산을 전달하는 데 적합한 기술에는 리포솜 사용, 전기천공, 미세주입, 세포 융합, DEAE-덱스트란 및 인산칼슘 침전을 포함한다. 핵산의 생체외 전달에 일반적으로 사용되는 벡터는 레트로바이러스이다.
본원에 사용되는 바와 같이, 용어 "숙주 세포"는 핵산 분자로 형질감염된 특정 대상 세포 및 이러한 세포의 자손 또는 잠재적 자손을 지칭한다. 이러한 세포의 자손은 후속 세대 또는 숙주 세포 게놈으로의 핵산 분자의 통합에서 발생할 수 있는 돌연변이 또는 환경적 영향으로 인해 핵산 분자로 형질감염된 모체 세포와 동일하지 않을 수 있다.
다른 생체내 핵산 전달 기술로는 바이러스 벡터(예컨대, 아데노바이러스, 단순 헤르페스 I 바이러스, 또는 아데노 관련 바이러스) 및 지질 기반 시스템을 사용한 형질감염을 포함된다. 핵산 및 형질 감염제는 임의적으로 마이크로입자와 결합된다. 예시적인 형질감염제는 인산칼슘 또는 염화칼슘 공동 침전, DEAE-덱스트란 매개 형질감염, 4차 암모늄 양친매성 DOTMA((디올레오일옥시프로필) 트리메틸암모늄 브로마이드, GIBCO-BRL에 의해 Lipofectin으로 상품화됨)(문헌 [Felgner et al, (1987) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 84, 7413-7417]; [Malone et al. (1989) Proc. Natl Acad. Sci. USA 86 6077-6081]); 펜던트 트리메틸암모늄 헤드를 갖는 친유성 글루타메이트 디에스테르(문헌 [Ito et al (1990) Biochem Biophys Acta 1023, 124-132]); 대사가능한 모체 지질, 예컨대, 양이온성 지질 디옥타데실아미도 글리실스페르민(DOGS, Transfectam, Promega) 및 디팔미토일포스파티딜 에탄올아밀스페르민(DPPES)(문헌 [J. P. Behr (1986) Tetrahedron Lett. 27, 5861-5864]; [J. P. Behr et al. (1989) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86, 6982-6986]); 대사가능한 4차 암모늄 염(DOTB, N-(1-[2,3-디올레오일옥시]프로필)-N,N,N-트리메틸암모늄 메틸술페이트(DOTAP)(Boehringer Mannheim), 폴리에틸렌이민(PEI), 디올레오일 에스테르, ChoTB, ChoSC, DOSC)(문헌 [Leventis et al. (1990) Biochim. Inter. 22, 235-241]); 3베타[N-(N',N'-디메틸아미노에탄)-카바모일]콜레스테롤(DC-Chol), 일 대 일 혼합물의 디올레오일포스파티딜 에탄올아민(DOPE)/3베타[N-(N',N' 디메틸아미노에탄)-카바모일]콜레스테롤 DC-Chol(문헌 [Gao ct al., (1991) Biochim. Biophys. Acta 1065, 8-14]), 스퍼민, 스퍼미딘, 리포폴리아민(문헌 [Behr et al, Bioconjugate Chem, 1994, 5: 382-389]), 친유성 폴리리신(LPLL)(문헌 [Zhou et al., (1991) Biochim. Biophys. Acta 939, 8-18]), 과량의 포스파티딜콜린/콜레스테롤과 함께 [[(1,1,3,3-테트라메틸부틸)크레속시]에톡시]에틸]디메틸벤질암모늄 하이드록시드(DEBDA 하이드록시드)(문헌 [Ballas et al., (1988) Biochim. Biophys. Acta 939, 8-18]), 세틸트리메틸암모늄 브로마이드(CTAB)/DOPE 혼합물(문헌 [Pinnaduwage et al, (1989) Biochim. Biophys. Acta 985, 33-37]), 글루탐산(TMAG)과 DOPE, CTAB, DEBDA, 디도데실암모늄 브로마이드(DDAB)의 친지성 디에스테르, 및 포스파티딜에탄올아민과의 혼합물로 스테아릴아민(문헌 [Rose et al., (1991) Biotechnique 10, 520-525]), DDAB/DOPE(TransfectACE, GIBCO BRL), 및 올리고갈락토스 함유 지질을 포함한다. 전달 효율을 증가시키는 예시적인 형질감염 증진제는 예를 들어, DEAE-덱스트란, 폴리브렌, 리소솜 파괴 펩티드(문헌 [Ohmori N I et al, Biochem Biophys Res Commun Jun. 27, 1997; 235(3):726-9]), 콘드로이탄 기반 프로테오글리칸, 황산화 프로테오글리칸, 폴리에틸렌이민, 폴리리신(문헌 [Pollard H et al. J Biol Chem, 1998 273 (13):7507-11]), 인테그린 결합 펩티드 CYGGRGDTP, 선형 덱스트란 구당류, 글리세롤, 올리고뉴클레오티드의 3'-말단 뉴클레오시드간 연결에 테더링된 콜레스테릴 기(문헌 [Letsinger, R. L. 1989 Proc Natl Acad Sci USA 86: (17):6553-6]), 리소포스파티드, 리소포스파티딜콜린, 리소포스파티딜에탄올아민, 및 1-올레오일 리소포스파티딜콜린을 포함한다.
일부 상황에서, 핵산 함유 벡터를 표적 세포로 유도하는 작용제와 함께 핵산을 전달하는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 "표적화" 분자는 표적 세포 상의 세포-표면 막 단백질에 특이적인 항체, 또는 표적 세포 상의 수용체에 대한 리간드를 포함한다. 리포솜이 사용되는 경우, 엔도시토시스와 연관된 세포 표면 막 단백질에 결합하는 단백질은 표적화 및/또는 흡수 촉진에 사용될 수 있다. 이러한 단백질의 예로는 특정 세포 유형에 대해 향성을 갖는 캡시드 단백질 및 그의 단편, 순환에서 내재화를 겪는 단백질에 대한 항체, 및 세포내 국재화를 표적화하고, 세포내 반감기를 증진시키는 단백질을 포함한다. 다른 실시양태에서, 수용체 매개 엔도시토시스가 사용될 수 있다. 이러한 방법은 예를 들어, 문헌 [Wu et al., 1987] 또는 [Wagner et al., 1990]에 기술되어 있다. 현재 알려진 유전자 마킹 및 유전자 요법 프로토콜에 대한 리뷰를 위해, 문헌 [Anderson 1992]를 참조한다. 또한 WO 93/25673 및 상기 특허에서 인용된 참고문헌도 참조한다.
키메라 항원 수용체
한 측면에서, 본원의 개시내용은 본원에 개시된 항원 결합 단편, 막횡단 도메인, 및 세포내 신호전달 도메인을 포함하는 키메라 항원 수용체를 제공한다. 본원에 사용된 용어 "키메라 항원 수용체"(CAR), "인공 T 세포 수용체," "키메라 T 세포 수용체" 또는 "키메라 면역수용체"는 임의의 특이성을 면역 이펙터 세포에 이식하는 조작된 수용체를 지칭한다. CAR은 전형적으로 항원 결합 도메인을 포함하는세포외 도메인(엑토도메인), 막횡단 도메인, 및 세포내(엔도도메인) 도메인을 갖는다. "신호전달 도메인"이라는 용어는 2차 메신저를 생성하거나, 상기 메신저에 반응하여 이펙터로 작용함으로써 정의된 신호전달 경로를 통해 세포 활성을 조절하기 위해 세포 내에서 정보를 전송함으로써 작용하는 단백질의 기능 부분을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "세포내 신호전달 도메인"은 분자의 세포내 부분을 지칭한다. 세포내 신호전달 도메인은 CAR 함유 세포, 예를 들어, CART 세포의 면역 이펙터 기능을 촉진하는 신호를 생성한다. 예컨대, CART 세포에서 면역 이펙터 기능의 예로는 사이토카인의 분비를 비롯한, 세포용해 활성 및 헬퍼 활성을 포함한다.
한 실시양태에서, 세포내 신호전달 도메인은 1차 세포내 신호전달 도메인을 포함할 수 있다. 예시적인 1차 세포내 신호전달 도메인은 1차 자극, 또는 항원 의존성 자극을 담당하는 분자로부터 유래된 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 세포내 신호전달 도메인은 공동자극 세포내 도메인을 포함할 수 있다. 예시적인 공동자극 세포내 신호전달 도메인은 공동자극 신호, 또는 항원 비의존성 자극을 담당하는 분자로부터 유래된 것을 포함한다. 예를 들어, CART의 경우, 1차 세포내 신호전달 도메인은 T 세포 수용체의 세포질 서열을 포함할 수 있고, 공동자극 세포내 신호전달 도메인은 공동 수용체 또는 공동자극 분자로부터의 세포질 서열을 포함할 수 있다.
1차 세포내 신호전달 도메인은 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프 또는 ITAM(immunoreceptor tyrosine-based activation motif)으로 알려진 신호전달 모티프를 포함할 수 있다. 1차 세포질 신호전달 서열을 함유하는 ITAM의 예로는 CD3 제타, FcR 감마, FcR 베타, CD3 감마, CD3 델타, CD3 엡실론, CD5, CD22, CD79a, CD79b, 및 CD66d DAP10 및 DAP12로부터 유래된 것을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
용어 "제타" 또는 대안적으로 "제타 쇄," "CD3 제타" 또는 "TCR 제타"는 진뱅크 수탁 번호(GenBan Acc. No.) BAG36664.1로 제공되는 단백질, 또는 비인간 종, 예컨대, 마우스, 설치류, 원숭이, 유인원 등으로부터의 등가 잔기로 정의되고, "제타 자극 도메인" 또는 대안적으로, "CD3 제타 자극 도메인" 또는 "TCR 제타 자극 도메인"은 T 세포 활성화에 필요한 초기 신호를 기능적으로 전달하기에 충분한 제타 쇄의 세포질 도메인으로부터의 아미노산 잔기로 정의된다. 한 측면에서, 제타의 세포질 도메인은 진뱅크 수탁 번호(GenBank Acc. No.) BAG36664.1의 잔기 52 내지 164, 또는 그의 기능적 오솔로그인, 비인간 종, 예컨대, 마우스, 설치류, 원숭이, 유인원 등으로부터의 등가 잔기를 포함한다.
용어 "공동자극 분자"는 공동자극 리간드와 특이적으로 결합함으로써 T 세포에 의한 공동자극 반응, 예컨대, 제한하는 것은 아니지만, 증식을 매개하는 T 세포 상의 동족 결합 파트너를 지칭한다. 공동자극 분자는 효율적인 면역 반응에 필요한 항원 수용체 또는 그의 리간드 이외의 다른 세포 표면 분자이다. 공동자극 분자로는 MHC 클래스 I 분자, BTLA 및 Toll 리간드 수용체 뿐만 아니라, OX40, CD2, CD27, CD28, CD5, ICAM-1, LFA-1(CD11a/CD18) 및 4-1BB(CD137)를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
공동자극 세포내 신호전달 도메인은 공동자극 분자의 세포내 부분으로부터 유래될 수 있다. 공동자극 분자는 TNF 수용체 단백질, 면역글로불린 유사 단백질, 사이토카인 수용체, 인테그린, 신호전달 림프구 활성화 분자(SLAM(signaling lymphocytic activation molecule) 단백질) 및 활성화 NK 세포 수용체와 같은 단백질 패밀리로 나타낼 수 있다. 상기 분자의 예로는 CD27, CD28, 4-1BB (CD137), OX40, GITR, CD30, CD40, ICOS, BAFFR, HVEM, 림프구 기능 관련 항원 1(LFA-1: lymphocyte function-associated antigen-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, SLAMF7, NKp80, CD160, B7-H3, 및 CD83과 특이적으로 결합하는 리간드를 포함한다.
세포내 신호전달 도메인은 그의 유래 기점이 된 분자의 전체 세포내 부분, 또는 전체 천연 세포내 신호전달 도메인, 또는 그의 기능적 단편을 포함할 수 있다.
또 다른 측면에서, 항원 결합 단편은 인간화 항체 또는 항체 단편을 포함한다. 한 실시양태에서, 항원 결합 단편은 본원에 기술된 항체의 하나 이상의(예컨대, 1, 2, 또는 3개 모두) 경쇄 상보성 결정 영역 1(LC-CDR1), 경쇄 상보성 결정 영역 2(LC-CDR2), 및 경쇄 상보성 결정 영역 3(LC-CDR3), 및 본원에 기술된 항체의 하나 이상의(예컨대, 1, 2, 또는 3개 모두) 중쇄 상보성 결정 영역 1(HC-CDR1), 중쇄 상보성 결정 영역 2(HC-CDR2), 및 중쇄 상보성 결정 영역 3(HC-CDR3)을 포함한다.
막횡단 도메인
막횡단 도메인과 관련하여, 다양한 실시양태에서, CAR은 CAR의 세포외 도메인에 부착된 막횡단 도메인을 포함하도록 디자인될 수 있다. 막횡단 도메인은 막횡단 영역에 인접한 하나 이상의 추가 아미노산, 예컨대, 막횡단의 유래 기점이 된 단백질의 세포외 영역과 관련된 하나 이상의 아미노산(예컨대, 세포외 영역의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개, 최대 15개의 아미노산), 및/또는 막횡단 단백질의 유래 기점이 된 단백질의 세포내 영역과 관련된 하나 이상의 추가 아미노산(예컨대, 세포내 영역의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10개, 최대 15개의 아미노산)을 포함할 수 있다. 한 측면에서, 막횡단 도메인은 사용되는 CAR의 다른 도메인 중 하나와 결합된 도메인이다. 일부 예에서, 막횡단 도메인은 예컨대, 수용체 복합체의 다른 구성원과의 상호작용을 최소화하기 위해 동일하거나 상이한 표면 막 단백질의 막횡단 도메인에의 상기 도메인의 결합을 피하기 위해 아미노산 치환에 의해 선택되거나 변형될 수 있다. 한 측면에서, 막횡단 도메인은 CAR T 세포 표면 상의 또 다른 CAR과 동종이량체화할 수 있다. 다른 측면에서, 막횡단 도메인의 아미노산 서열은 동일한 CAR T 세포에 존재하는 천연 결합 파트너의 결합 도메인과의 상호작용을 최소화하도록 변형되거나, 치환될 수 있다.
막횡단 도메인은 천연 또는 재조합 공급원으로부터 유래될 수 있다. 공급원이 천연인 경우, 도메인은 임의의 막 결합 또는 막횡단 단백질로부터 유래될 수 있다. 한 측면에서, 막횡단 도메인은 CAR이 표적에 결합할 때마다 세포내 도메인(들)에 신호전달을 수행할 수 있다. 막횡단 도메인은 예를 들어, 적어도 예컨대, T 세포 수용체의 알파, 베타 또는 제타 쇄, CD28, CD3 엡실론, CD45, CD4, CD5, CD8, CD9, CD16, CD22, CD33, CD37, CD64, CD80, CD86, CD134, CD137, CD154의 막횡단 영역(들)을 포함할 수 있다.
일부 경우에, 막횡단 도메인은 힌지, 예컨대,인간 단백질로부터의 힌지를 통해 CAR의 세포외 영역, 예컨대, CAR의 항원 결합 도메인에 부착될 수 있다. 예를 들어, 한 실시양태에서, 힌지는 인간 Ig(면역글로불린) 힌지, 예컨대, IgG4 힌지, 또는 CD8a 힌지일 수 있다. 한 측면에서, 힌지 또는 스페이서는 IgG4 힌지를 포함한다.
세포질 도메인
CAR의 세포질 도메인 또는 영역은 세포내 신호전달 도메인을 포함한다. 세포내 신호전달 도메인은 일반적으로 CAR이 도입된 면역 세포의 정상 이펙터 기능 중 적어도 하나의 활성화를 담당한다. "이펙터 기능"이라는 용어는 세포의 특수 기능을 의미한다. 예를 들어, T 세포의 이펙터 기능은 세포용해 활성 또는 사이토카인의 분비를 비롯한 헬퍼 활성일 수 있다. 용어 "세포내 신호전달 도메인"은 이펙터 기능 신호를 전달하고, 세포가 특수 기능을 수행하도록 지시하는 단백질의 부분을 지칭한다. 일반적으로 전체 세포내 신호전달 도메인이 사용될 수 있지만, 많은 경우에 쇄 전체를 사용할 필요는 없다. 세포내 신호전달 도메인의 말단절단된 부분이 사용되는 정도까지, 상기 말단절단된 부분은 이펙터 기능 신호를 전달하는 한, 무손상 쇄 대신으로 사용될 수 있다. 따라서, 세포내 신호전달 도메인이라는 용어는 이펙터 기능 신호를 전달하기에 충분한 세포내 신호전달 도메인의 임의의 말단절단된 부분을 포함하는 것을 의미한다.
본 발명의 CAR에서 사용하기 위한 세포내 신호전달 도메인의 예는 T 세포 수용체(TCR: T cell receptor) 및 항원 수용체 결합 후 신호 전달을 개시하기 위해 협력하여 작용하는 공수용체의 세포질 서열 뿐만 아니라, 동일한 기능 능력을 갖는, 상기 서열의 임의의 유도체 또는 변이체 및 임의의 재조합 서열을 포함한다.
TCR을 통해 생성된 신호만으로는 T 세포를 완전히 활성화시키는 데 충분하지 않고, 2차 및/또는 공동자극 신호도 필요하다는 것이 알려져 있다. 따라서, T 세포 활성화는 2가지 다른 부류의 세포질 신호전달 서열: TCR을 통해 항원 의존성 1차 활성화를 개시하는 것(1차 세포내 신호전달 도메인) 및 항원 비의존성 방식으로 작용하여 2차 또는 공동자극 신호를 제공하는 것(2차 세포질 신호전달 도메인, 예컨대, 공동자극 도메인)에 의해 매개된다고 말할 수 있다.
1차 신호전달 도메인은 자극 방식으로 또는 억제 방식으로 TCR 복합체의 1차 활성화를 조절한다. 자극 방식으로 작용하는 1차 세포내 신호전달 도메인은 면역수용체 티로신 기반 활성화 모티프 또는 ITAM으로 알려진 신호 모티프를 함유할 수 있다.
본 발명에서 특히 사용되는 1차 세포내 신호전달 도메인을 함유하는 ITAM의 예는 TCR 제타, FcR 감마, FcR 베타, CD3 감마, CD3 델타, CD3 엡실론, CD5, CD22, CD79a, CD79b 및 CD66d의 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 본 발명의 CAR, 예컨대, CAR은 CD3 제타의 세포내 신호전달 도메인, 예컨대, 1차 신호전달 도메인을 포함한다. 한 실시양태에서, 1차 신호전달 도메인은 변형된 ITAM 도메인, 예컨대, 천연 ITAM 도메인과 비교하여 변경된(예컨대, 증가 또는 감소된) 활성을 갖는 돌연변이된 ITAM 도메인을 포함한다. 한 실시양태에서, 1차 신호전달 도메인은 변형된 ITAM-함유 1차 세포내 신호전달 도메인, 예컨대, 최적화된 및/또는 말단절단된 ITAM-함유 1차 세포내 신호전달 도메인을 포함한다. 한 실시양태에서, 1차 신호전달 도메인은 1, 2, 3, 4개 또는 그 초과의 ITAM 모티프를 포함한다.
CAR의 세포내 신호전달 도메인은 그 자체로 CD3 제타 신호전달 도메인을 포함할 수 있거나, 또는 본 발명의 CAR의 맥락에서 유용한 임의의 다른 원하는 세포내 신호전달 도메인(들)과 조합될 수 있다. 예를 들어, CAR의 세포내 신호전달 도메인은 CD3 제타 쇄 부분 및 공동자극 신호전달 도메인을 포함할 수 있다. 공동자극 신호전달 도메인은 공동자극 분자의 세포내 도메인을 포함하는 CAR의 일부를 지칭한다. 공동자극 분자는 항원에 대한 림프구의 효율적인 반응에 필요한 항원 수용체 또는 그의 리간드 이외의 세포 표면 분자이다. 상기 분자의 예로는 CD27, CD28, 4-1BB(CD137), OX40, CD30, CD40, PD-1, ICOS, 림프구 기능 관련 항원-1(LFA-1), CD2, CD7, LIGHT, NKG2C, B7-H3, 및 CD83과 특이적으로 결합하는 리간드 등을 포함한다. 예를 들어, CD27 공동자극은 시험관내에서 인간 CART 세포의 확장, 이펙터 기능 및 생존을 증진시키고, 생체내에서 인간 T 세포 지속 및 항종양 활성을 증강시키는 것으로 입증되었다(문헌 [Song et al. Blood. 2012; 119(3):696-706]).
본 발명의 CAR의 세포질 부분 내의 세포내 신호전달 서열은 무작위 또는 특정 순서로 서로 연결될 수 있다. 임의적으로, 짧은 올리고 또는 폴리펩티드 링커, 예를 들어, 2 내지 10개 아미노산(예컨대, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10개 아미노산) 길이의 것이 세포내 신호전달 서열 사이의 결합을 형성할 수 있다. 한 실시양태에서, 글리신-세린 이중선이 적합한 링커로서 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 단일 아미노산, 예컨대, 알라닌, 글리신이 적합한 링커로서 사용될 수 있다.
한 측면에서, 세포내 신호전달 도메인은 2개 이상, 예컨대, 2, 3, 4, 5개, 또는 그 초과의 공동자극 신호전달 도메인을 포함하도록 디자인된다. 한 실시양태에서, 2개 이상, 예를 들어, 2, 3, 4, 5개, 또는 그 초과의 공동자극 신호전달 도메인은 링커 분자, 예컨대, 본원에 기술된 링커 분자에 의해 분리된다. 한 실시양태에서, 세포내 신호전달 도메인은 2개의 공동자극 신호전달 도메인을 포함한다. 일부 실시양태에서, 링커 분자는 글리신 잔기이다. 일부 실시양태에서, 링커는 알라닌 잔기이다.
일부 실시양태에서, CAR은 전체 항원을 실제로 인식하지 못하며; 대신 항원 결정기 또는 에피토프라고 하는 영역인 항원 표면의 일부에만 결합한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 CAR(그의 기능적 부분 및 기능적 변이체 포함)은 글리코실화, 아미드화, 카복실화, 인산화, 에스테르화, N-아실화, 예컨대, 이황화 브릿지를 통해 고리화, 또는 산 부가 염으로 전환되고/거나, 임의적으로, 이량체화 또는 중합화, 또는 접합화를 포함한다.
면역접합체
본 개시내용의 한 측면에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 종양에 대한 강력한 면역 반응을 개시할 수 있고/거나, 직접적인 세포독성이 가능하다. 이와 관련하여, 본원의 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 보체 매개 또는 항체 의존성 세포 세포독성(ADCC) 기전에 의해 종양 세포 용해를 유도할 수 있으며, 둘 모두 이펙터 세포 Fc 수용체 부위 또는 보체 단백질과의 상호작용을 위해 면역글로불린 분자의 무손상 Fc 부분을 필요로 한다. 추가로, 종양 성장에 직접적인 생물학적 효과를 발휘하는 항체는 본 개시내용의 실시에 유용하다. 이러한 직접적인 세포독성 항체가 작용할 수 있는 잠재적 기전은 세포 성장 억제, 세포 분화의 조정, 종양 혈관신생 인자 프로파일의 조정 및 아폽토시스 유도를 포함한다. 본원에 개시된 특정 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 항종양 효과를 발휘하는 기전은 당업계에 일반적으로 알려진 바와 같이, ADCC, ADMMC, 보체 매개 세포 용해 등을 측정하도록 디자인된 임의의 수의 시험내 검정법을 사용하여 평가될 수 있다.
본원에 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 그의 "네이키드" 또는 비접합 형태로 투여될 수 있거나, 그에 접합된 치료제를 가질 수 있다. 한 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 방사선감작제로서 사용된다. 상기 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 방사선감작화제에 접합된다. 본원에 사용된 용어 "방사선감작제"는 전자기 방사선에 대한 방사선감작될 세포의 감수성을 증가시키고/거나, 전자기 방사선으로 치료될 수 있는 질환의 치료를 촉진시키기 위해 치료 유효량으로 동물에게 투여되는 분자, 바람직하게는 저분자량 분자로 정의된다. 전자기 방사선으로 치료될 수 있는 질환으로는 신생물성 질환, 양성 및 악성 종양, 암성 세포를 포함한다.
본원에서 사용된 용어 "전자기 방사선" 및 "방사선"은 10-20 내지 100미터의 파장을 갖는 방사선을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 본 개시내용의 바람직한 실시양태는 예를 들어, 감마선 (10-20 내지 10-13 m), X선 방사선(10-12 내지 10-9 m), 자외선(10 nm 내지 400 nm), 가시광선(400 nm 내지 700 nm), 적외선(700 nm 내지 1.0 mm), 및 마이크로파 방사선(1 mm 내지 30 cm)의 전자기 방사선을 사용할 수 있다.
방사선감작제는 전자기 방사선의 독성 효과에 대한 암세포의 감수성을 증가시키는 것으로 알려져 있다. 다수의 암 치료 프로토콜은 현재 X선의 전자기 방사선에 의해 활성화되는 방사선감작제를 사용한다. X선 활성화된 방사선감작제의 예로는 하기: 메트로니다졸, 미소니다졸, 데스메틸미소니다졸, 피모니다졸, 에타니다졸, 니모라졸, 미토마이신 C, RSU 1069, SR 4233, E09, RB 6145, 니코틴모데옥시아미드, 5-브로모데옥시우리딘(BUdR), 5-아이오도데옥시우리딘(IUdR), 브로모데옥시시티딘, 플루오로데옥시우리딘(FUdR), 하이드록시우레아, 시스플라틴, 및 상기의 치료학적으로 효과적인 유사체 및 유도체를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
암의 광역학 요법(PDT: photodynamic therapy)은 감작화제의 방사선 활성제로서 가시광선을 사용한다. 광역학 방사선감작제의 예로는 하기: 헤마토포르피린 유도체, 포토프린(Photofrin)®, 벤조포르피린 유도체, NPe6, 틴 에티오포르피린(SnET2), 페오보르바이드-a, 박테리오클로로필-a, 나프탈로시아닌, 프탈로시아닌, 징크 프탈로시아닌 및 상기의 치료학적으로 효과적인 유사체 및 유도체를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
또 다른 실시양태에서, 항체는 항체-수용체 접합체가 환자에게 투여된 후, 제거제를 사용하여 순환계로부터 비결합 접합체를 제거하고, 이어서, 세포독성제(예컨대, 방사성핵종)에 접합된 리간드(예컨대, 아비딘)를 투여하는 종양 사전표적화에서 사용하기 위해 수용체(예컨대, 스트렙트아비딘)에 접합될 수 있다.
본 개시내용은 검출가능하게 표지된 형태로 상기 기술된 항체 또는 그의 항원 결합을 추가로 제공한다. 항체는 방사성 동위원소, 친화성 표지(예컨대, 비오틴, 아비딘 등), 효소 표지(예컨대, 호스래디쉬 퍼옥시다제, 알칼리성 포스파타제 등), 형광성 또는 발광성 또는 생체발광성 표지(예컨대, FITC 또는 로다민), 상자성 원자 등을 사용하여 검출가능하게 표지될 수 있다. 상기 표지화를 수행하는 방법은 당업계에 널리 알려져 있고; 예를 들어, 문헌 ([Sternberger, L. A. et al., J. Histochem. Cytochem. 18:315 (1970)]; [Bayer, E. A. et al., Meth. Enzym. 62:308 (1979)]; [Engval, E. et al., Immunol. 109:129 (1972)]; [Goding, J.W. J. Immunol. Meth. 13:215 (1976)])을 참조한다.
"표지"는 항체에 직접 또는 간접적으로 접합되는 검출가능한 화합물 또는 조성물을 지칭한다. 표지는 그 자체로 검출 가능하거나(예컨대, 방사성 동위원소 표지 또는 형광성 표지), 효소 표지의 경우, 검출가능한 기질 화합물 또는 조성물의 화학적 변경을 촉매화할 수 있다. 대안적으로, 표지는 그 자체로 검출가능하지 않을 수 있지만, 검출가능한 또 다른 작용제(예컨대, 에피토프 태그 또는 예컨대, 비오틴-아비딘 등과 같은 결합 파트너 쌍 중 하나)에 의해 결합되는 요소일 수 있다. 따라서, 항체는 그의 단리를 용이하게 하는 표지 또는 태그를 포함할 수 있고, 항체를 확인하기 위한 본 발명의 방법은 표지 또는 태그와의 상호작용을 통해 항원/항체를 단리시키는 단계를 포함한다.
예시적인 치료 면역접합체는 세포독성제, 예컨대, 화학요법제, 독소(예컨대, 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소 활성 독소, 또는 그의 단편), 또는 방사성 동위원소(즉, 방사성접합체)에 접합된 본원에 기술된 항체를 포함한다. 융합 단백질은 하기에서 더 자세히 설명된다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 및 그의 항원 결합 단편은 치료제, 예컨대, 화학요법 세포독소, 예컨대, 세포증식억제제 또는 세포사멸제(예컨대, 파클리탁솔, 사이토칼라신 B 또는 디프테리아 독소, 탁솔, 사이토칼라신 B, 그라미시딘 D, 에티듐 브로마이드, 에메틴, 미토마이신, 에토포시드, 테노포시드, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 콜히신, 독소루비신, 다우노루비신, 디하이드록시 안트라신디온, 미토크산트론, 미트라마이신, 악티노마이신 D, 1-데하이드로테스토스테론, 글루코코르티코이드, 프로카인, 테트라카인, 리도카인, 프로프라놀롤 및 퓨로마이신 및 그의 유사체 또는 동족체), 항대사물질(예컨대, 메토트렉세이트, 6-메르캅토퓨린, 6-티오구아닌, 시타라빈, 플루다라빈, 5-플루오로우라실 데카르바진), 알킬화제(예컨대, 메클로레타민, 티오에파 클로람부실, 멜팔란) 및 카무스틴(BSNU) 및 로무스틴(CCNU), 사이클로포스파미드, 부술판, 디브로모만닛톨, 스트렙토조토신, 미토마이신 C 및 시스-디클로로디아민 백금(II)(DDP) 시스플라틴), 안트라사이클린(예컨대, 다우노루비신(이전의 다우노마이신) 및 독소루비신), 항생제(예컨대, 닥티노마이신(이전의 악티노마이신), 블레오마이신, 미트라마이신 및 안트라마이신(AMC), 및 항유사분열제, 혈전제 또는 항혈관신생제 또는 방사성 표지)에 접합될 수 있다. 면역접합체를 형성하기 위한 적합한 세포독성제 및 화학요법제의 예는 당업계에 공지되어 있고, 예를 들어, WO 05/103081을 참조한다. 또 다른 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 및 그의 항원 결합 단편은 예를 들어, 예컨대, 효소, 형광성 마커, 화학발광 마커, 생체발광 물질 또는 방사성 물질과 같은 검출가능한 기질에 접합된다. 본원에 기술된 측면의 일부 실시양태에서, 본원에 기술된 항체 및 그의 항체 단편은 독소(예컨대, 박테리아, 진균, 식물 또는 동물 기원의 효소 활성 독소, 또는 그의 단편), 소분자, siRNA, 나노입자, 표적화제(예컨대, 미세기포), 또는 방사성 동위원소(즉, 방사성접합체)에 접합된다. 이러한 접합체는 본원에서 "면역접합체"로 지칭된다. 이러한 면역접합체는 예를 들어, 진단법, 진단법 또는 표적화 방법에 사용될 수 있다.
사용될 수 있는 효소 활성 독소 및 그의 단편으로는 디프테리아 A 쇄, 디프테리아 독소의 비결합 활성 단편, 외독소 A 쇄(슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa) 유래), 리신 A 쇄, 아브린 A 쇄, 모데신 A 쇄, 알파-사르신, 알레우리테스 포르디(Aleurites fordii) 단백질, 디안틴 단백질, 피톨라카 아메리카나(Phytolaca americana) 단백질(PAPI, PAPII 및 PAP-S), 모모르디카 카란티아(momordica charantia) 억제제, 쿠르신, 크로틴, 사파오나리아 오피시날리스(sapaonaria officinalis) 억제제, 겔로닌, 미토겔린, 레스트릭토신, 페노마이신, 에노마이신 및 트리코테센을 포함한다. 다양한 방사성 동위원소가 방사성접합체 항체 생산에 사용될 수 있다. 예로는 212 Bi, 131 I, 131 In, 90Y 및 186Re를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
본원에 기술된 항체 또는 그의 항원 결합 단편 및 세포독성제의 접합체는 예컨대, N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티올) 프로피오네이트(SPDP), 이미노티올란(IT), 이미도에스테르의 이작용성 유도체(예컨대, 디메틸 아디피미데이트 HCL), 활성 에스테르(예컨대, 디숙신이미딜 수베레이트), 알데히드(예컨대, 글루타르알데히드), 비스-아지도 화합물(예컨대, 비스(p-아지도벤조일) 헥산디아민), 비스-디아조늄 유도체(예컨대, 비스-(p-디아조늄벤조일)-에틸렌디아민), 디이소시아네이트(예컨대, 톨리엔 2,6-디이소시아네이트), 및 비스-활성 플루오린 화합물(예컨대, 1,5- 디플루오로-2,4-디니트로벤젠)과 같은, 다양한 이작용성 단백질 커플링제 중 임의의 것을 사용하여 제조될 수 있다. 예를 들어, 리신 면역독소는 문헌 [Vitetta et al., 238 Science 1098 (1987)]에 기술되어 있는 바와 같이 제조될 수 있다. 탄소-14-표지된 1-이소티오시아네이토벤질-3-메틸디에틸렌 트리아민펜타아세트산(MX-DTPA)은 항체에의 방사성뉴클레오티드의 접합을 위한 예시적인 킬레이트제이다. WO 94/11026을 참조한다.
다른 실시양태에서, 항체 또는 그의 일부는 항체-수용체 접합체가 대상체에게 투여된 후, 제거제를 사용하여 순환계로부터 비결합 접합체를 제거하고, 이어서, 세포독성제(예컨대, 방사성뉴클레오티드)에 접합된 "리간드"(예컨대, 아비딘)를 투여하는 종양 사전표적화에서 사용하기 위해 "수용체"(예컨대, 스트렙트아비딘)에 접합될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항체 그의 단편은 비오틴에 접합될 수 있고, 비오틴 접합 항체 또는 항체 그의 단편은 예를 들어, 혈관신생의 분자 영상화에서의 사용을 위해 스트렙트아비딘 결합 또는 코팅 작용제, 예컨대, 스트렙트아비딘 코팅 미세기포에 추가로 접합 또는 연결될 수 있다.
상기 치료 모이어티를 항체에 접합시키는 기술은 널리 알려져 있으며, 예컨대, 문헌 [Amon et al., "Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy," in Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy, Reisfeld et al. (eds.), pp. 243-56 (Alan R. Liss, Inc. 1985)]; [Hellstrom et al., "Antibodies For Drug Delivery," in Controlled Drug Delivery (2nd Ed.), Robinson et al. (eds.), pp. 623-53 (Marcel Dekker, Inc. 1987)]; [Thorpe, "Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy: A Review," in Monoclonal Antibodies '84: Biological And Clinical Applications, Pinchera et al. (eds.), pp. 475-506 (1985)]; ["Analysis, Results, And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy," in Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy, Baldwin et al. (eds.), pp. 303-16 (Academic Press 1985)], 및 [Thorpe et al., "The Preparation And Cytotoxic Properties Of Antibody-Toxin Conjugates," Immunol. Rev., 62: 119-58 (1982)] 참조한다.
면역접합체 제조는 미국 특허 제6,306,393호에 기술되어 있다. 면역접합체는 치료제를 항체 성분에 간접적으로 접합시킴으로써 제조될 수 있다. 일반 기술은 문헌 [Shih et al., Int. J. Cancer 41 :832-839 (1988)]; [Shih et al., Int.J. Cancer 46:1101-1106 (1990)]; 및 미국 특허 제5,057,313호(Shih et al.)에 기술되어 있다. 일반적인 방법은 산화된 탄수화물 부분을 갖는 항체 성분을 적어도 하나의 유리 아민 기능을 갖고, 다수의 약물, 독소, 킬레이터, 붕소 부가물 또는 다른 치료제가 로딩된 캐리어 중합체와 반응시키는 것을 포함한다. 이 반응은 초기 쉬프 염기(이민) 결합을 초래하며, 이는 2차 아민으로 환원되어 최종 접합체를 형성함으로써 안정화될 수 있다.
캐리어 중합체는 바람직하게는 적어도 50개 아미노산 잔기의 아미노덱스트란 또는 폴리펩티드이지만, 다른 실질적으로 등가의 중합체 캐리어도 사용될 수 있다. 바람직하게, 최종 면역접합체는 투여 용이성 및 요법에 사용하기 위한 효과적인 표적화를 위해 포유동물 혈청과 같은 수용액에 가용성이다. 따라서, 캐리어 중합체에 대한 가용화 기능은 최종 면역접합체의 혈청 용해도를 증진시킬 것이다. 특히, 아미노덱스트란이 바람직할 것이다.
아미노덱스트란 캐리어를 갖는 면역접합체의 제조 방법은 전형적으로 덱스트란 중합체, 유리하게는 평균 분자량이 약 10,000-100,000인 덱스트란으로 시작한다. 덱스트란은 산화제와 반응하여 그의 탄수화물 고리 일부의 제어된 산화에 영향을 주어 알데히드 기를 생성한다. 산화는 종래 방법에 따라 NaIO4와 같은 해당 화학 시약으로 편리하게 영향을 받는다.
이어서, 산화된 덱스트란을 폴리아민, 바람직하게는 디아민, 및 더욱 바람직하게는 모노- 또는 폴리하이드록시 디아민과 반응시킨다. 적합한 아민은 에틸렌 디아민, 프로필렌 디아민, 또는 다른 유사 폴리메틸렌 디아민, 디에틸렌 트리아민 또는 유사 폴리아민, 1,3-디아미노-2-하이드록시프로판, 또는 다른 유사 하이드록실화된 디아민 또는 폴리아민 등을 포함한다. 덱스트란의 알데히드 기 대비 과량의 아민은 알데히드 기를 쉬프 염기 기로 실질적으로 완전히 전환시키는 데 사용된다.
예컨대, NaBH4, NaBH3CN 등과 같은 환원제는 생성된 쉬프 염기 중간체의 환원 안정화를 위해 사용된다. 생성된 부가물은 가교된 덱스트란을 제거하기 위해 종래의 사이징 칼럼을 통과시킴으로써 정제될 수 있다. 아민 작용기를 도입하기 위해 덱스트란을 유도체화하는 다른 통상적인 방법, 예를 들어, 시아노겐 브로마이드와의 반응, 이어서, 디아민과의 반응 또한 사용될 수 있다. 이어서, 아미노덱스트란은 활성화된 형태, 바람직하게, 종래 수단에 의해, 예컨대, 디사이클로헥실카보디이미드(DCC) 또는 그의 수용성 변이체를 사용하여 제조된 카복실 활성화된 유도체로 로딩되는 특정 약물, 독소, 킬레이터, 면역조정제, 붕소 부가물 또는 다른 치료제의 유도체와 반응하여 중간 부가물을 형성한다.
대안적으로, 예컨대, 포크위드(pokeweed) 항바이러스 단백질 또는 리신 A 쇄 등과 같은 폴리펩티드 독소는 글루타르알데히드 축합에 의해 또는 아미노덱스트란의 아민과 단백질 상의 활성화된 카르복실 기의 반응에 의해 아미노덱스트란에 커플링될 수 있다. 방사성 금속을 위한 킬레이터 또는 자기 공명 증강제는 당업계에 널리 알려져 있다. 에틸렌디아민테트라아세트산(EDTA) 및 디에틸렌트리아민펜타아세트산(DTPA)의 유도체가 전형적이다. 이들 킬레이터는 전형적으로 킬레이터가 캐리어에 부착될 수 있는 측쇄에 기를 갖는다. 이러한 기는 예컨대, 벤질이소티오시아네이트를 포함하며, 이에 의해 DTPA 또는 EDTA가 캐리어의 아민 기에 커플링될 수 있다. 대안적으로, 킬레이터 상의 카복실 기 또는 아민 기는 모두 널리 공지된 수단에 의해 활성화 또는 사전 유도체화 및 이어서, 커플링에 의해 캐리어에 커플링될 수 있다.
예컨대, 카보란과 같은 붕소 부가물은 종래 방법에 의해 항체 성분에 부착될 수 있다. 예를 들어, 카보란은 당업계에 널리 알려진 바와 같이 펜던트 측쇄에 카복실 작용기로 제조될 수 있다. 이러한 카보란을 캐리어, 예컨대, 아미노덱스트란에 부착하는 것은 카보란의 카복실 기의 활성화 및 캐리어 상의 아민과의 축합에 의해 중간 접합체를 생성함으로써 달성될 수 있다. 이어서, 상기 중간 접합체는 항체 성분에 부착되어 하기에 기술된 바와 같이 치료적으로 유용한 면역접합체를 생성한다.
폴리펩티드 캐리어는 아미노덱스트란 대신에 사용될 수 있지만, 폴리펩티드 캐리어는 쇄에 적어도 50개의 아미노산 잔기, 바람직하게는 100-5000개의 아미노산 잔기를 가져야 한다. 아미노산 중 적어도 일부는 리신 잔기 또는 글루타메이트 또는 아스파르테이트 잔기여야 한다. 리신 잔기의 펜던트 아민 및 글루타민 및 아스파르테이트의 펜던트 카복실레이트는 약물, 독소, 면역조정제, 킬레이터, 붕소 부가물 또는 다른 치료제를 부착하는 데 편리한다. 적합한 폴리펩티드 캐리어의 예로는 생성된 로딩된 캐리어 및 면역접합체에 바람직한 용해도 특성을 부여하는, 폴리리신, 폴리글루탐산, 폴리아스파르트산, 그의 공중합체, 및 이들 아미노산 및 다른 것, 예컨대, 세린의 혼합 중합체를 포함한다.
항체 성분과 중간체 접합체의 접합은 약물, 독소, 킬레이터, 면역조정제, 붕소 부가물, 또는 다른 치료제를 로딩한 후, 항체 성분의 탄수화물 부분을 산화시키고, 생성된 알데히드(및 케톤) 카보닐을 캐리어 상에 남아있는 아민 기와 반응시킴으로써 수행된다. 대안적으로, 중간체 접합체는 치료제 로딩 후 중간체 접합체에 도입된 아민 기를 통해 산화된 항체 성분에 부착될 수 있다. 산화는 예컨대, NaIO4 또는 다른 해당 시약을 사용하여 화학적으로, 또는 예컨대, 뉴라미니다제 및 갈락토스 옥시다제를 사용하여 효소적으로 편리하게 수행된다. 아미노덱스트란 캐리어의 경우, 전형적으로는 아미노덱스트란의 모든 아민이 치료제를 로딩하는 데 사용되는 것은 아니다. 아미노덱스트란의 나머지 아민은 산화된 항체 성분과 축합하여 쉬프 염기 부가물을 형성한 후, 이어서, 일반적으로 수소화붕소 환원제로 환원적으로 안정화된다.
본 발명에 따른 다른 면역접합체를 제조하는 데 유사한 방법이 사용된다. 로딩된 폴리펩티드 캐리어는 바람직하게는 항체 성분의 산화된 탄수화물 부분과의 축합을 위해 남아있는 유리 리신 잔기를 갖는다. 폴리펩티드 캐리어 상의 카복실은 필요한 경우, 예컨대, DCC를 사용한 활성화 및 과량의 디아민과의 반응에 의해 아민으로 전환될 수 있다.
최종 면역접합체는 예컨대, 세파크릴(Sephacryl) S-300 상에서의 사이징 크로마토그래피 또는 하나 이상의 CD84Hy 에피토프를 사용하는 친화성 크로마토그래피와 같은 종래 기술을 사용하여 정제된다. 대안적으로, 면역접합체는 항체 성분을 치료제와 직접 접합시킴으로써 제조될 수 있다. 일반적인 방법은 치료제가 산화된 항체 성분에 직접 부착된다는 점을 제외하면 간접 접합 방법과 유사하다. 다른 치료제가 본원에 기술된 킬레이터를 대체할 수 있음을 이해할 것이다. 당업자는 과도한 실험 없이 접합 방법을 고안할 수 있을 것이다.
추가 예시로서, 치료제는 이황화 결합 형성을 통해 환원된 항체 성분의 힌지 영역에 부착될 수 있다. 예를 들어, 파상풍 톡소이드 펩티드는 펩티드를 항체 성분에 부착하는 데 사용되는 단일 시스테인 잔기로 구성될 수 있다. 대안으로서, 이러한 펩티드는 예컨대, N-숙시닐 3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트(SPDP)와 같은 이종이작용성 가교제를 사용하여 항체 성분에 부착될 수 있다(문헌 [Yu et al., Int. J. Cancer56:244 (1994)]). 상기 접합을 위한 일반적인 기술은 당업계에 널리 알려져 있다. 예를 들어, 문헌 [Wong, Chemistry Of Protein Conjugation and Cross-Linking (CRC Press 1991)]; [Upeslacis et al., "Modification of Antibodies by Chemical Methods," in Monoclonal Antibodies: Principles and Applications, Birch et al. (eds.), pages 187-230 (Wiley-Liss, Inc. 1995)]; [Price, "Production and Characterization of Synthetic Peptide-De­rived Antibodies," in Monoclonal Antibodies: Production, Engineering and Clinical Application, Ritter et al. (eds.), pages 60-84 (Cambridge University Press 1995)]를 참조한다.
항체 및 세포독성제의 접합체는 다양한 이작용성 단백질 커플링제, 예컨대, N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티올) 프로피오네이트(SPDP), 이미노티올란(IT), 이미도에스테르의 이작용성 유도체(예컨대, 디메틸 아디피미데이트 HCL), 활성 에스테르(예컨대, 디숙신이미딜 수베레이트), 알데히드(예컨대, 글루타르알데히드), 비스-아지도 화합물(예컨대, 비스(p-아지도-벤조일) 헥산디아민), 비스-디아조늄 유도체(예컨대, 비스-(p-디아조늄벤조일)-에틸렌디아민), 디이소시아네이트(예컨대, 톨리엔 2,6-디이소시아네이트), 및 비스-활성 플루오린 화합물(예컨대, 1,5-디플루오로-2,4-디니트로벤젠)을 사용하여 제조된다. 예를 들어, 리신 면역독소는 문헌 [Vitetta et al., Science 238: 1098 (1987)]에 기술된 바와 같이 제조될 수 있다. 탄소-14-표지된 1-이소티오시아네이토벤질-3-메틸디에틸렌 트리아민펜타아세트산(MX-DTPA)은 항체에의 방사성핵종의 접합을 위한 예시적인 킬레이트제이다(예컨대, W094/11026 참조).
상기 기술된 바와 같이, 항체의 Fc 영역 내의 탄수화물 부분은 치료제를 접합시키는 데 사용될 수 있다. 그러나, 항체 단편이 면역접합체의 항체 성분으로 사용되는 경우, Fc 영역은 부재할 수 있다. 그럼에도 불구하고, 항체 또는 항체 단편의 경쇄 가변 영역에 탄수화물 모이어티를 도입하는 것이 가능하다. 예를 들어, 문헌 [Leung et al., J. Immunol. 154:5919 (1995)]; 미국 특허 제5,443,953호(Hansen et al.)를 참조한다. 이어서, 조작된 탄수화물 모이어티를 사용하여 치료제에 부착시킨다. 추가로, 당업자는 접합 방법의 수많은 가능한 변형을 인식할 것이다. 예를 들어, 탄수화물 모이어티는 혈액, 림프 또는 다른 세포외 체액에서 무손상 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 반감기를 연장하기 위해 폴리에틸렌글리콜을 부착하는 데 사용될 수 있다. 더욱이, 탄수화물 모이어티에 및 유리 술프히드릴 기에 치료제를 부착함으로써 "2가 면역접합체"를 구성하는 것이 가능하다. 상기 유리 술프히드릴 기는 항체 성분의 힌지 영역에 위치할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에서는 표적 항원과 연관된 병태를 진단 또는 치료하는 방법을 제공한다. 일부 실시양태에서, 항원과 연관된 병태는 항원의 발현 또는 생물학적 활성의 증가로 인해 발생한다. 일부 실시양태에서, 항원과 연관된 병태는 항원의 발현 또는 생물학적 활성의 감소로 인해 발생한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 항원에 결합하고, 이에 의해 항원의 발현 및/또는 적어도 하나의 생물학적 활성을 부분적으로 또는 실질적으로 억제시킨다. 본원에 개시된 항원의 발현 및/또는 적어도 하나의 생물학적 활성을 부분적으로 또는 바람직하게는 실질적으로 억제하는 항체 또는 그의 특정 부분 또는 변이체는 단백질 항원 또는 그의 단편에 결합할 수 있고, 이에 의해 항원을 통해 매개되는 활성, 예컨대, 특정 항원에 결합하는 것으로 당업계에 공지된 하나 이상의 수용체 또는 리간드에의 항원의 결합을 억제할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 항원 활성을 약 20-120%만큼, 바람직하게, 적어도 약 10, 20, 30, 40, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100% 또는 그 초과만큼 억제시킬 수 있다. 본원에 개시된 항원의 발현 및/또는 적어도 하나의 생물학적 활성을 부분적으로 또는 바람직하게는 실질적으로 증가시키는 항체 또는 그의 특정 부분 또는 변이체는 단백질 항원 또는 그의 단편에 결합할 수 있고, 이에 의해 항원을 통해 매개되는 활성을 증가시킬 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 항원 활성을 약 20-120%만큼, 바람직하게, 적어도 적어도 약 10, 20, 30, 40, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100% 또는 그 초과만큼 증가시킬 수 있다.
항원 의존성 활성을 증가시키는 항체의 능력은 바람직하게는 본원에 기술된 바와 같이 및/또는 당업계에 공지된 바와 같이 적어도 하나의 적합한 검정법에 의해 평가된다. 일부 실시양태에서, 항원 관련 병태는 면역 관련 질환, 심혈관 질환, 감염성 질환, 악성 질환 또는 신경계 질환일 수 있다.
치료 방법
일부 실시양태에서, 본원에서는 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 용량의 본원에 기술된 치료 IgA 항체 또는 상기 본원에 기술된 치료 IgA 항체를 포함하는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 치료를 필요로 하는 대상체를 치료하는 방법을 개시한다. 일부 실시양태에서, 대상체는 암, 감염성 질환, 또는 자가면역 질환을 앓는다.
일부 실시양태에서, 대상체는 암을 앓는다. 일부 실시양태에서, 대상체는 염증성 장애를 앓는다. 일부 실시양태에서, 암은 본원에 기술된 종양 연관 항원의 발현과 연관이 있다. 일부 실시양태에서, 암은 CD47, CD20, GD2, CD38, CD19, EGFR, HER2, PD-L1, CD25, CD33, BCMA, CD44, α-폴레이트 수용체, CAIX, CD30, ROR1, CEA, EGP-2, EGP-40, HER3, 폴레이트 결합 단백질, GD3, IL-13R-a2, KDR, EDB-F, 메조텔린, CD22, EGFR, MUC-1, MAGE-A1, MUC16, h5T4, PSMA, TAG-72, EGFRvIII, CD123 또는 VEGF-R2의 발현과 연관이 있다.
일부 실시양태에서, 본원에서는 CD20의 과다발현과 연관된 암을 앓는 대상체에게 본원에 기술된 치료 IgA 항체 또는 약제학적 조성물을 투여하는 방법을 개시한다. 일부 실시양태에서, 본원에서는 GD2의 과다발현과 연관된 암을 앓는 대상체에게 본원에 기술된 치료 IgA 항체 또는 약제학적 조성물을 투여하는 방법을 개시한다. 일부 실시양태에서, 본원에서는 메조텔린의 과다발현과 연관된 암을 앓는 대상체에게 본원에 기술된 치료 IgA 항체 또는 약제학적 조성물을 투여하는 방법을 개시한다. 본원에서는 CD38, CD19, EGFR, HER2, PD-L1, CD25, CD33, BCMA, CD44, α-폴레이트 수용체, CAIX, CD30, ROR1, CEA, EGP-2, EGP-40, HER3, 폴레이트 결합 단백질, GD2, GD3, IL-13R-a2, KDR, EDB-F, 메조텔린, CD22, EGFR, MUC-1, MAGE-A1, MUC16, h5T4, PSMA, TAG-72, EGFRvIII, CD123 또는 VEGF-R2의 과다발현과 연관된 암을 앓는 대상체에게 변형된 이펙터 세퍼를 투여하는 방법을 개시한다.
일부 실시양태에서, 암은 전이성 암이다. 다른 실시양태에서, 암은 재발성 또는 난치성 암이다. 일부 실시양태에서, 암은 고형 종양 또는 혈액 악성 종양이다. 일부 실시양태에서, 암은 고형 종양이다. 다른 실시양태에서, 암은 혈액 악성 종양이다. 일부 실시양태에서, 암은 전이성 암이다. 일부 실시양태에서, 암은 재발성 또는 난치성 암이다.
일부 실시양태에서, 암은 고형 종양이다. 예시적인 고형 종양으로는 항문암; 맹장암; 담관암(즉, 담관암종); 방광암; 뇌 종양; 유방암; 자궁경부암; 결장암; 미지의 원발성 암(CUP: cancer of Unknown Primary); 식도암; 안암; 나팔관암; 위장암; 신장암; 간암; 폐암; 수아세포종; 흑색종; 구강암; 난소암; 췌장암; 췌장암; 부갑상선 질환; 음경암; 뇌하수체 종양; 전립선암; 직장암; 피부암; 위암; 고환암; 후두암; 갑상선암; 자궁암; 질암; 외음부암; 또는 교모세포종을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
림프종, 백혈병, 골수종, 또는 B 세포 악성 종양을 포함한다. 일부 경우에, 혈액 악성 종양은 림프종, 백혈병 또는 골수종을 포함한다. 일부 실시양태에서, 예시적인 혈액 악성 종양은 림프종, 백혈병 또는 골수종을 포함한다. 일부 실시양태에서, 예시적인 혈액 악성 종양은 만성 림프구성 백혈병(CLL: chronic lymphocytic leukemia), 소림프구성 림프종(SLL: small lymphocytic lymphoma), 고위험 CLL, 비CLL/SLL 림프종, 전림프구성 백혈병(PLL: prolymphocytic leukemia), 여포성 림프종(FL: follicular lymphoma), 미만성 거대 B 세포 림프종(DLBCL: diffuse large B cell lymphoma), 외투 세포 림프종(MCL: mantle cell lymphoma), 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 다발성 골수종, 결절외 변연부 B 세포 림프종, 결절 변연부 B 세포 림프종, 버킷 림프종, 비버킷 고급 B 세포 림프종, 원발성 종격동 B 세포 림프종(PMBL: primary mediastinal B-cell lymphoma), 면역아세포성 대세포 림프종, 전구 B 림프아세포 림프종, B 세포 전림프구성 백혈병, 림프형질세포성 림프종, 비장 변연부 림프종, 형질 세포 골수종, 형질 세포종, 종격동(흉선) 거대 B 세포 림프종, 혈관내 거대 B 세포 림프종, 원발성 삼출 림프종, 또는 림프종 모양 육아종증을 포함한다. 일부 실시양태에서, 혈액 악성 종양은 골수양 백혈병을 포함한다. 일부 실시양태에서, 혈액 악성 종양은 급성 림프아구성 백혈병(ALL: acute lymphoblastic leukemia) 또는 만성 골수양 백혈병(CML: chronic myeloid leukemia)을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 단편은 GD2, ALK, hNET, GD3, 및 CD20 중 하나에 결합한다. 일부 실시양태에서, GD2 양성 종양은 신경아세포종, 망막아세포종, 흑색종, 소세포 폐암, 교모세포종, 골육종, 횡문근육종, 유잉 육종, 지방육종, 섬유육종, 평활근육종, 및 그의 임의 조합이다. 한 측면에서, 항체 또는 그의 단편은 신경아세포종 세포에 결합한다. 일부 실시양태에서, ALK(역형성 림프종 키나제: anaplastic lymphoma kinase) 양성 종양은 역형성 대세포 림프종, 폐의 선암종, 신경아세포종, 염증성 근섬유아세포종, 신세포 암종, 식도 편평 세포 암종, 유방암, 결장 선암종, 다형성 교모세포종 또는 역형성 갑상선암이다. 일부 실시양태에서, hNET(인간 노르에피네프린 수송체: human norepinephrine transporter) 양성 종양은 방광 종양, 유방 종양, 전립선 종양, 암종, 백혈병, 간암, 폐암, 림프종, 호지킨 림프종, 비호지킨 림프종, 흑색종, 신경아세포종, 난소 종양, 췌장 종양 또는 망막아세포종이다. 일부 경우에서, GD3 양성 종양은 중추 신경계의 신경외배엽 종양, 신경교종, 신경아세포종, 망막아세포종, 뇌실막종, 육종, 흑색종, 유방암, 난소암, 교모세포종, 유잉 육종 또는 소세포 폐암종이다. 일부 실시양태에서, CD20 양성 종양은 백혈병, 림프종 또는 신경아세포종이다.
다른 실시양태에서, 본원에서는 감염성 질환에 기인하여 감염을 앓는 대상체에게 투여하는 방법을 개시한다. 감염성 질환은 박테리아, 바이러스 또는 진균 감염으로 인한 질환일 수 있다. 다른 실시양태에서, 예시적인 바이러스 병원체는 아데노비리다에(Adenoviridae), 엡스타인-바 바이러스(EBV: Epstein-Barr virus), 사이토메갈로바이러스(CMV: Cytomegalovirus), 호흡기 세포 융합 바이러스(RSV: Respiratory Syncytial Virus), JC 바이러스, BK 바이러스, HSV, HHV 바이러스과, 피코르나비리다에(Picornaviridae), 헤르페스비리다에(Herpesviridae), 헤파드나비리다에(Herpesviridae), 플라비비리다에(Flaviviridae), 레트로비리다에(Retroviridae), 오르토믹소비리다에(Orthomyxoviridae), 파라믹소비리다에(Paramyxoviridae), 파포바비리다에(Papovaviridae), 폴리오마바이러스(Polyomavirus), 랍도비리다에(Rhabdoviridae), 및 토가비리다에(Togaviridae)의 바이러스 과의 것들을 포함한다. 예시적인 병원성 바이러스는 천연두, 인플루엔자, 볼거리, 홍역, 수두, 에볼라, 및 풍진을 유발한다. 예시적인 병원성 진균은 칸디다(Candida), 아스페르길루스(Aspergillus), 크립토코커스(Cryptococcus), 히스토플라스마(Histoplasma), 뉴모시스티스(Pneumocystis), 및 스타키보트리스(Stachybotrys)를 포함한다. 예시적인 병원성 박테리아는 스트렙토코커스(Streptococcus), 슈도모나스(Pseudomonas), 쉬겔라(Shigella), 캄필로박터(Campylobacter), 스타필로코커스(Staphylococcus), 헬리코박터(Helicobacter), E. 콜라이, 리케치아(Rickettsia), 바실러스(Bacillus), 보르데텔라(Bordetella), 클라미디아(Chlamydia), 스피로헤타(Spirochete), 및 살모넬라(Salmonella)를 포함한다.
일부 실시양태에서, IgA 항체는 하나 이상의 추가 치료제와 함께 투여된다. 일부 실시양태에서, IgA 항체 및 하나 이상의 추가 치료제는 공동 투여된다. 일부 실시양태에서, IgA 항체 및 하나 이상의 추가 치료제는 순차적으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 조합 요법은 하나 이상의 추가 치료제, 예를 들어, 화학요법제 또는 항신생물제, 예컨대, 사이토카인 및 성장 인자 억제제, 면역억제제, 항염증제, 대사 억제제, 효소 억제제, 및/또는 세포독성 또는 세포증식억제제와 함께 공동으로 제제화되고/거나 그와 함께 공동 투여되는, 본 개시내용의 하나 이상의 항체를 포함할 수 있다. 이러한 맥락에서 용어 "조합"은 작용제가 실질적으로 동시에(contemporaneously), 동시에(simultaneously) 또는 순차적으로 제공됨을 의미한다. 예시적인 화학요법제는 알데스류킨, 알트레타민, 아미포스틴, 아스파라기나제, 블레오마이신, 카페시타빈, 카보플라틴, 카르무스틴, 클라드리빈, 시사프리드, 시스플라틴, 사이클로포스파미드, 시타라빈, 다카르바진(DTIC), 닥티노마이신, 도세탁셀, 독소루비신, 드로나비놀, 듀오카르마이신, 에토포시드, 필그라스팀, 플루다라빈, 플루오로우라실, 겜시타빈, 그라니세트론, 하이드록시우레아, 이다루비신, 이포스파미드, 인터페론 알파, 이리노테칸, 란소프라졸, 레바미솔, 류코보린, 메게스트롤, 메스나, 메토트렉세이트, 메토클로프라미드, 미토마이신, 미토탄, 미톡크산트론, 오메프라졸, 온단세트론, 파클리탁셀(Taxol™), 필로카르핀, 프로클로로페라진, 사프로인, 타목시펜, 탁솔, 토포테칸 하이드로클로라이드, 빈블라스틴, 빈크리스틴 및 비노렐빈 타르트레이트를 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 IgA 항체는 제한 없이, 하기 FDA 승인을 받은 단일클론 항체를 비롯한, 암 치료에서 사용되어 온 유효 용량의 다른 항체와 조합될 수 있다: 리툭시맙(Rituxan®, CD20: 키메라 IgG1), 트라스투주맙(Herceptin®, HER2: 키메라 IgG1), 알렘투주맙(Campath®, CD52: 인간화 IgG1), 이브리투모맙 티욱세탄(Zevalin®, CD20: 뮤린, IgG1, 방사성표지된(이트륨 90), 토시투모맙-I-131(Bexxar®: CD20, 뮤린, IgG2a, 방사성표지(아이오딘 131)), 세툭시맙(Erbitux®, EGFR: 키메라 IgG1), 베바시주맙(VEGF: 인간화, IgG4), 파니투무맙(Vectibix®, EGFR: 인간 IgG2), 오파투무맙(Arzerra® , CD20: 인간 IgG1), 이필리무맙(Ypervoy®, CTLA-4: 인간 IgG1), 브렌툭시맙 베도틴(Adectris®, CD30: 키메라, IgG1, 약물-접합체), 퍼투주맙(Perjecta®, HER2: 인간화 IgG1, 약물 접합체), 아도트라스투주맙 엠탄신(Kadcyla®, HER2: 인간화, IgG1, 약물-접합체), 오비누투주맙(Gazyva®, CD20: 인간화 및 글리콜-조작), 니볼루맙 및 펨브롤리주맙(항PD-1) 등. 트라스투주맙은 HER-2 항원을 표적화한다.
일부 실시양태에서, 항CD47 IgA 항체는 HER2 억제제, 항HER2 항체, EGFR 억제제, 항EGFR 항체와 함께 조합하여 투여된다. 일부 실시양태에서, 항CD47 IgA 항체는 트라스투주맙과 함께 조합하여 투여된다. 일부 실시양태에서, 항CD47 IgA 항체는 c-kit 억제제와 함께 조합하여 투여된다. 투여량
본원에서는 질환(예컨대, 암)의 치료(예방 포함)를 위한 IgA 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 조성물을 제공한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물이다. 조성물은 암의 치료(예방 포함)에 효과적인 양으로 투여된다. 일부 실시양태에서, 조성물(예컨대, 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 또는 상기 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 코딩하는 핵산 분자)은 대상체에서 면역 반응을 증진시키는 데 및/또는 T 세포 활성화를 증가시키는 데 효과적인 양으로 투여된다. 조성물은 임의의 이용가능한 수단, 예컨대, 비경구 투여에 의해 대상체에게 생체내 투여하는 데 사용될 수 있다. 대상체에게로의 투여를 위해, 본원에 기술된 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 조성물 또는 의약은 멸균될 수 있으며, 이는 멸균 여과막을 통한 여과, 또는 당업자에게 공지된 다른 방법에 의해 용이하게 달성될 수 있다. 한 실시양태에서, 조성물 또는 의약은 발열원 또는 내독소가 없도록 처리되었다. 발열원 또는 내독소에 대해 약제학적 조성물 또는 약제를 시험하고, 발열원 또는 내독소가 없는 약제학적 조성물 또는 약제를 제조하거나, 임상적으로 허용되는 수준으로 내독소를 갖는 약제학적 조성물 또는 약제를 제조하는 것은 당업자에게 잘 이해된다. 발열원 또는 내독소에 대해 약제학적 조성물 또는 약제를 시험하는 데 상업용 키트가 이용가능하다.
본원에 기술된 방법에서 비경구 투여와 같은 생체내 투여에 사용되는 조성물은 멸균될 수 있으며, 이는 멸균 여과막을 통한 여과, 또는 당업자에게 공지된 다른 방법에 의해 용이하게 달성된다.
본원에 기술된 IgA 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 우수한 의료 관행과 일치하는 방식으로 제제화, 투약 및 투여된다. 이 맥락에서 고려해야 할 요소에는 치료 중인 특정 장애, 치료 중인 특정 대상체, 개별 대상체의 임상 상태, 장애의 원인, 작용제 전달 부위, 투여 방법, 투여 일정, 및 의료 종사자에게 알려진 다른 인자를 포함한다. 물질/분자, 효능제 또는 길항제의 "치료적 유효량"은 예컨대, 개체의 질환 상태, 연령, 성별, 체중 및 물질/분자, 효능제 또는 길항제가 개체에서 원바는 반응을 유도할 수 있는 능력과 같은 요인에 따라 달라질 수 있다. 치료 유효량은 또한 물질/분자, 효능제 또는 길항제의 치료적으로 유익한 효과가 임의의 독성 또는 유해한 효과를 능가하는 양이다. 치료 유효량은 1회 이상의 투여로 전달될 수 있다. 치료 유효량은 원하는 치료적 및/또는 예방적 결과를 달성하기 위해 필요한 투여량 및 기간 동안 효과적인 양을 의미한다. 투여될 "치료 유효량"은 이러한 고려사항에 의해 결정되며, 암을 호전, 치료 또는 안정화하는 데; 진행까지의 시간(무진행 생존 기간)을 증가시키거나, 또는 종양, 휴면 종양 또는 미세전이의 발생 또는 재발을 치료하거나 예방하는 데 필요한 최소량을 의미한다. 본원에 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 임의적으로 암 또는 암 발병 위험을 예방 또는 치료하기 위해 현재 사용되는 하나 이상의 추가 치료제와 함께 임의로 제제화된다. 이러한 다른 작용제의 유효량은 제제에 존재하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 양, 장애 또는 치료의 유형, 및 상기 논의된 다른 인자에 따라 달라진다. 이들은 일반적으로 지금까지 사용된 투여량의 약 1 내지 99% 또는 이전에 본원에 사용된 것과 동일한 투여량 및 투여 경로로 사용된다.
항체의 용량은 투여하고자 대상체의 연령 및 크기, 표적 질환, 병태, 투여 경로 등에 따라 달라질 수 있다. 바람직한 용량은 전형적으로 체중 또는 체표면적에 따라 계산된다. 본원에 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 성인 환자의 병태 또는 질환을 치료하는 데 사용되는 경우, 본 발명의 항체를 보통 약 0.01 내지 약 20 mg/kg(체중)의 단일 용량으로, 더욱 바람직하게, 약 0.02 내지 약 7, 약 0.03 내지 약 5, 또는 약 0.05 내지 약 3 mg/kg(체중), 약 5 mg/kg(체중), 약 7.5 mg/kg(체중), 약 10 mg/kg(체중), 또는 약 15 mg/kg(체중)으로 정맥내 투여하는 것이 유리할 수 있다. 병태의 중증도에 따라, 치료 빈도 및 지속 기간은 조정될 수 있다. 효과적인 투여량 및 투여 일정은 경험적으로 결정될 수 있고; 예를 들어, 환자의 진행 상황은 주기적인 평가로 모니터링할 수 있으며 그에 따라 용량을 조정할 수 있다. 더욱이, 투여량의 종간 크기 조정은 당업계에 널리 알려진 방법을 사용하여 수행될 수 있다(예컨대, 문헌 [Mordenti et al., 1991, Pharmaceut. Res. 8:1351]).
일부 실시양태에서, 본원의 조성물은 예를 들어, 암의 위험이 있거나, 질환의 초기 단계에 있는 대상체에게 투여할 때 예방 유효량을 포함할 수 있다. "예방 유효량"은 원하는 예방적 결과를 달성하기 위해 필요한 투여량 및 기간 동안 효과적인 양을 의미한다. 전형적으로, 예방 용량은 질환에 걸리기 전에, 또는 질환의 초기 단계에 있는 피험자에게 사용되기 때문에, 용량은 치료 용량보다 낮다.
유리하게는, 상기 기술된 경구 또는 비경구용 약제학적 조성물은 활성 성분의 투여량에 적합한 단위 용량의 투여 형태로 제조된다. 단위 용량의 이러한 투여 형태는 예를 들어, 정제, 환제, 캡슐, 주사제(앰플), 좌제 등을 포함한다.
투여는 예를 들어, 하나 이상의 개별 투여에 의해, 또는 연속 주입에 의해 이루어질 수 있다. 수일 이상에 걸친 반복 투여의 경우, 상태에 따라, 예를 들어, 당업계에 공지된 방법에 의해 측정된 바와 같이, 암이 치료될 때까지 치료가 지속된다. 그러나, 다른 투여 요법이 유용할 수 있다. 하나의 비제한적인 예에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 5 mg/kg, 7.5 mg/kg, 10 mg/kg 또는 15 mg/kg을 포함하나, 이에 제한되지 않는, 약 5 mg/kg 내지 약 15 mg/kg의 용량 범위로 매주 1회, 2주마다 또는 3주마다 투여된다. 본원에 기술된 방법을 사용하는 진행 상황은 종래 기술 및 검정법에 의해 쉽게 모니터링할 수 있다. 본원에 기술된 방법을 사용한 요법의 지속 기간은 의학적으로 지시되는 한, 또는 원하는 치료 효과(예컨대, 본원에 기술된 효과)가 달성될 때까지 계속될 것이다. 특정 실시양태에서, 본원에 기술된 하나 이상의 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 또는 조성물의 투여는 1개월, 2개월, 4개월, 6개월, 8개월, 10개월, 1년, 2년, 3년, 4년, 5년, 10년, 20년, 또는 최대 대상체의 일생 기간 동안에 걸쳐 계속 진행된다.
치료 효능
본 개시내용의 IgA 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 또는 약제학적 조성물을 투여하는, 예를 들어, 암 치료 방법의 효능은 종양 퇴행, 종양 중량 또는 크기 축소, 진행까지의 시간, 생존 기간, 무진행 생존, 전체 반응률, 반응 기간 및 삶의 질을 포함하나, 이에 제한되지 않는, 암 치료를 평가하는 데 보편적으로 사용되는 다양한 종점에 의해 측정될 수 있다. 본원에 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 약물에 대한 임상 반응의 고유한 척도 및 정의를 요구할 수 있다. 암의 경우, 치료 유효량의, 본원에 개시된 항체, 그의 항원 결합 단편 또는 그를 포함하는 조성물은 암 세포의 수를 감소시킬 수 있고/거나; 종양 크기를 축소시킬 수 있고/거나; 말초 기관으로의 암 세포 침윤을 억제(즉, 어느 정도 저속화시키고, 바람직하게는 중지)시킬 수 있고/거나; 종양 전이를 억제(즉, 어느 정도 저속화시키고, 바람직하게는 중지)시킬 수 있고/거나; 종양 성장을 어느 정도 억제시킬 수 있고/거나; 장애와 연관된 증상 중 하나 이상을 어느 정도 완화시킬 수 있다. 본원에 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 성장을 방지하고/거나, 기존 암 세포를 사멸시키는 작용을 하는 정도까지; 세포 증식 억제 및/또는 세포 독성일 수 있다. 암 요법의 경우, 생체내 효능은 예를 들어, 생존 기간, 무진행 생존 기간(PFS: duration of progression free survival), 반응률(RR: response rate), 반응 기간 및/또는 삶의 질을 평가하여 측정할 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 IgA 항체 또는 그의 기능적 단편은 치료받지 않은 대상체와 비교하여 적어도 약 2%, 3%, 5%, 6%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%. 35%. 40%. 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 초과만큼 종양 성장을 억제시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 IgA 항체 또는 그의 기능적 단편은 치료받지 않은 대상체와 비교하여 적어도 약 2%, 3%, 5%, 6%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%. 35%. 40%. 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 초과만큼 종양 생착을 억제시킨다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 IgA 항체 또는 그의 기능적 단편은 종양 세포의 세포용해를 유도한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 IgA 항체 또는 그의 기능적 단편은 상응하는 WT IgA와 비교하여 적어도 약 2%, 3%, 5%, 6%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%. 35%. 40%. 45%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 그 초과만큼 종양 세포의 세포용해 증가를 유도한다.
다른 실시양태에서, 본원에서는 암, 예를 들어, 피부암, 예를 들어, 피부 흑색종에 걸리기 쉽거나, 이로 진단된 인간 대상체의 무진행 생존을 증가시키는 방법을 기술한다. 질환 진행까지의 시간은 약물 투여로부터 질환 진행 또는 사망까지의 시간으로 정의된다. 바람직한 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 및 하나 이상의 화학요법제를 사용하는 본 발명의 조합 치료는 화학요법만을 단독으로 이용한 치료와 비교하여 무진행 생존을 적어도 약 1개월, 1.2개월, 2개월, 2.4개월, 2.9개월, 3.5개월, 예컨대, 약 1 내지 약 5개월만큼 유의적으로 증가시킨다. 또 다른 실시양태에서, 본원에 기술된 방법은 다양한 치료제로 치료되는 암에 걸리기 쉽거나, 암으로 진단된 인간 대상체 군에서 반응률을 유의적으로 증가시킬 수 있다. 반응률은 치료에 반응한 치료 대상체의 비율(%)로 정의된다. 한 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 예컨대, 재조합 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 및 하나 이상의 화학요법제를 사용하는 본원에 기술된 조합 치료는 화학요법 단독으로 치료받는 군과 비교하여 치료받은 대상체 군에서 반응률을 유의적으로 증가시킨다.
본원에서 사용되는 바, 용어 "치료하다," "치료," "치료하는" 또는 "호전"은 치료적 처치를 지칭하며, 여기서, 목적은 질환 또는 장애, 그와 연관된 병태의 진행 또는 중증도를 역전시키거나, 경감시키거나, 호전하거나, 억제하거나, 진행을 느리게 하거나 또는 중지시키는 것이다. 용어 "치료하는"은 예컨대, 제한하는 것은 아니지만, 만성 감염 또는 암과 같은 만성 면역 상태와 관련된 병태, 질환 또는 장애의 적어도 하나의 역효과 또는 증상을 감소 또는 완화시키는 것을 포함한다. 치료는 일반적으로 하나 이상의 증상이나 임상 지표가 감소하면 "효과적"인 것이다. 대안적으로, 질환의 진행이 감소되거나, 중단되면, 치료는 "효과적"인 것이다. 즉, "치료"는 증상 또는 마커의 개선 뿐만 아니라, 치료가 없을 때 예상되는 적어도 진행을 늦추거나 증상을 악화시키는 것을 중지하는 것을 포함한다. 유익하거나, 원하는 임상 결과로는 검출 가능 여부와 상관없이, 하나 이상의 증상(들)의 완화, 질환 정도의 감소, 질환 상태의 안정화(즉, 악화되지 않음), 질환 진행의 지연 또는 감속, 질환 상태의 호전 또는 완화, 및 관해(부분적이든 전체적이든)를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 질환의 "치료"라는 용어는 또한 질환의 증상 또는 부작용으로부터의 경감을 제공하는 것을 포함한다(고식적 치료 포함).
예를 들어, 일부 실시양태에서, 본원에 기술된 방법은 대상체에게 질환, 예를 들어, 암의 증상을 경감시키기 위해 유효량의 본원에 기술된 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 투여하는 단계를 포함한다. 본원에 사용된 "암의 증상 완화"는 질환과 관련된 임의의 병태 또는 증상을 호전 또는 감소시키는 것이다. 등가의 비처리 대조군과 비교하여 상기 감소 또는 예방 정도는 임의의 표준 기술에 의해 측정되 바, 적어도 5%, 10%, 20%, 40%, 50%, 60%, 80%, 90%, 95%, 또는 100%이다. 이상적으로, 암은 당업계에 공지된 임의의 표준 방법에 의해 검출될 때 완전히 제거되며, 이 경우, 암은 치료된 것으로 간주된다. 암 치료를 받고 있는 환자는 의사가 상기 병태를 앓고 있다고 진단한 사람이다. 진단은 임의의 적합한에 의해 수행될 수 있다. 진단 및 모니터링은 예를 들어, 생물학적 샘플에서 암 세포의 수준을 검출하는 것(예를 들어, 조직 또는 림프절 생검, 혈액 검사 또는 소변 검사), 생물학적 샘플에서 암의 대리 마커의 수준을 검출하는 것, 특정 암과 연관된 증상을 검출하는 것, 또는 그러한 암의 전형적인 면역 반응에 관여하는 면역 세포를 검출하는 것을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "유효량"은 질환 또는 장애의 적어도 하나 이상의 증상을 완화하는 데 필요한 항체 또는 그의 항원 결합 단편 또는 그를 포함하는 조성물의 양을 지칭하고, 원하는 효과를 제공하는 데 충분한 약리학적 조성물의 양에 관한 것이다. 따라서, 용어 "치료 유효량"은 전형적인 대상체에게 투여될 때 특정 효과를 나타내기에 충분한, 본원에 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 양을 지칭한다. 본원에 사용된 유효량은 또한 질환의 증상의 발달을 지연시키거나, 증상 질환의 경과를 변경시키거나(예를 들어, 제한하는 것은 아니지만, 질환의 증상의 진행을 늦추거나), 또는 질환의 증상을 역전시기에 충분한 양을 포함할 수 있다. 따라서, 정확한 "유효량"을 지정할 수 없다. 그러나, 임의의 주어진 경우에 대해 적절한 "유효량"은 일상적인 실험만을 사용하여 당업계의 숙련가에 의해 결정될 수 있다.
유효량, 독성 및 치료 효능은 예컨대, LD50(집단의 50%에 치명적인 용량) 및 ED50(집단의 50%에서 치료상 효과적인 용량)을 결정하기 위해 세포 배양물 또는 실험 동물에서 표준 약제학적 절차에 의해 결정될 수 있다. 투여량은 사용된 제형 및 사용된 투여 경로에 따라 달라질 수 있다. 독성 효과와 치료 효과 사이의 용량 비는 치료 지수이며, LD50/ED50 비율로 표현될 수 있다 - 치료 지수가 큰 조성물 및 방법이 바람직하다. 치료 유효 용량은 초기에 세포 배양 검정법에서 추정될 수 있다. 또한, 용량은 세포 배양물에서, 또는 적절한 동물 모델에서 측정된 바와 같이, 증상의 최대 억제의 절반을 달성하는 IC50(즉, 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 농도)을 포함하는 순환 혈장 농도 범위를 달성하도록 동물 모델에서 제제화될 수 있다. 혈장 수준은 예를 들어, 고성능 액체 크로마토그래피로 측정될 수 있다. 특정 투여량의 효과는 적절한 생물학적검정법로 모니터링될 수 있다. 투여량은 의사가 결정할 수 있으며, 필요에 따라 관찰된 치료 효과에 맞게 조정될 수 있다.
암의 치료 및/또는 예방은 암과 연관된 증상의 완화, 암의 진행 억제, 암 퇴행의 촉진, 면역 반응의 촉진, 종양 성장 억제, 종양 크기 억제, 전이 억제, 암 세포 성장 억제, 암 세포 증식 억제, 또는 암 세포 사멸 유발을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
투여 모드
본원에 기술된 IgA 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 그를 필요로 하는 대상체에서 효과적인 치료를 초래하는 임의의 적절한 경로에 의해 상기 대상체에게 투여될 수 있다. 본원에서 사용되는 바, 용어 "투여하는" 및 "도입하는"은 상호교환적으로 사용되며, 원하는 부위, 예컨대, 염증 또는 암 부위에서 상기 작용제의 적어도 부분적 국재화를 초래하는 방법 또는 경로에 의해 대상체 내로 항체 또는 그의 항체 부분을 배치하여 원하는 효과(들)가 생성되도록 하는 것을 지칭한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 또는 그를 포함하는 조성물은 작용제를 전신적으로 또는 원하는 표면 또는 표적으로 전달하는 임의의 투여 모드에 의해, 억제시키고자 하는 암을 앓는 대상체에게 투여되며, 이는 주사, 주입, 점적 및 흡입 투여를 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 경구 투여 형태가 또한 본원에서 고려된다. "주사"는 제한 없이, 정맥내, 근육내, 동맥내, 경막내, 뇌실내, 피막내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내, 기관경유, 피하, 표피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 두개내, 척수내, 뇌척수내, 및 흉골내 주사 및 주입을 포함한다.
본원에 사용된 "비경구 투여" 및 "비경구적으로 투여된"이라는 어구는 일반적으로 주사에 의한 장관 및 국소 투여 이외의 투여 모드를 지칭한다. 본원에 사용된 "전신 투여," "전신적으로 투여되는," "말초 투여" 및 "말초적으로 투여되는"이라는 어구는 표적 부위, 조직 또는 기관, 예컨대, 종양 부위로 직접 투여하는 것이 아니라, 이중특이적 또는 다중특이적 폴리펩티드 작용제가 대상체의 순환계에 유입되고, 이로써, 대사 및 다른 유사한 프로세스를 거치도록 그를 투여하는 것을 지칭한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 또는 그를 포함하는 조성물은 볼루스로서 정맥내 투여를 통해, 또는 근육내, 복강내, 뇌척수내, 피하, 관절내, 활막내, 경막내, 경구, 국소 또는 흡입 경로에 의해 일정 기간에 걸쳐 연속 주입에 의해 투여될 수 있다. 예를 들어, 혈관신생이 일어나는 종양 또는 암 부위에 대한 국소 투여는 광범위한 부작용 또는 독성이 본원에 기술된 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 또는 그를 포함하는 조성물의 사용과 관련된 경우 특히 바람직하다. 생체외 전략법은 또한 일부 실시양태에서 치료적 적용을 위해 사용될 수 있다. 생체외 전략법은 대상체로부터 수득된 세포를 본원에 개시된 핵산 서열로 형질감염시키거나, 형질도입하는 것을 포함한다. 이어서, 형질감염되거나 형질도입된 세포를 대상체로 다시 복귀시킨다. 세포는 제?? 없이, 조혈 세포(예컨대, 골수 세포, 대식세포, 단핵구, 수지상 세포, T 세포, 또는 B 세포), 섬유아세포, 상피 세포, 내피 세포, 각질세포, 또는 근육 세포를 비롯한, 광범위 유형의 세포 중 임의의 것일 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 또는 그를 포함하는 조성물은 비경구, 피하, 복강내, 폐내 및 비내를 비롯한 임의의 적합한 수단에 의해 투여되고, 원하는 경우, 국소 면역억제제 치료인 경우, 병변내 투여에 의해 투여된다.
비경구 주입은 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 또는 피하 투여를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 그의 항원 결합 단편 또는 조성물은 특히 항체의 용량을 감소시키면서 펄스 주입에 의해 적합하게 투여된다. 바람직하게, 투약은 부분적으로 단기 또는 만성인지에 따라 주사, 가장 바람직하게는 정맥내 또는 피하 주사에 의해 투여된다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 그의 항원 결합 단편 또는 조성물은 종양의 장애 또는 위치가 허용되는 경우, 예를 들어, 직접 주사에 의해 국부적으로 투여되고, 주사는 주기적으로 반복될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항체 또는 그의 항원 결합 단편 또는 조성물은 또한 대상체에게 전신적으로, 또는 예를 들어, 휴면 종양 또는 미세전이의 국소 재발 또는 전이를 예방하거나 감소시키기 위해 종양 세포, 예컨대, 종양의 외과적 절제 후 종양 또는 종양 베드에 직접 전달될 수 있다.
항체 표적화 소노포레이션 방법은 본원에 제공된 항체 및 그의 항원 결합 단편을 포함하는 치료 조성물의 효능 및 효력을 증진시키기 위해, 본원에 기술된 종양 억제 방법의 일부 실시양태에서 사용하기 위해 고려된다. 본원에서 사용되는 바, "소노포레이션"은 바람직하게는 초음파 주파수에서 음파의 사용, 또는 세포 원형질막의 투과성을 일시적으로 변형시켜 거대 분자, 예컨대, 치료제의 흡수를 허용하기 위한 조영제(예컨대, 안정화된 미세기포)와 초음파의 상호작용을 지칭한다. 소노포레이션으로 인한 막 투과성은 일시적이며, 초음파 노출 후 세포 내부에 작용제가 포획된 상태 그대로 유지된다. 소노포레이션은 거대 분자의 전달을 증진시키기 위해 미세기포의 음향 캐비테이션을 사용한다.
따라서, 본 방법의 일부 실시양태에서, 예컨대, 미세기포와 같은 초음파 조영제와 혼합된 본원에 기술된 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 암 치료를 필요로 하는 대상체에 국소적으로 또는 전신적으로 주사될 수 있고, 초음파는 표적 전달을 달성하기 위해 정의된 영역, 예를 들어, 종양 부위에 결합되고, 집속될 수 있다. 일부 실시양태에서, 방법은 집속 초음파 방법을 사용하여 표적화된 전달을 달성한다. 본원에서 사용되는 바, HIFU 또는 "고강도 집속 초음파(High Intensity Focused Ultrasound)"는 상부 또는 주변 건강 조직에 손상을 일으키지 않으면서, 악성 또는 병원성 조직을 가열하고 파괴하기 위해 고강도 초음파를 사용하는 비침습적 치료 방법을 지칭한다. 문헌 [Khaibullina et al., 49 J. Nucl. Med. 295 (2008)], 및 WO 2010127369에 기술된 바와 같이, HIFU는 또한 치료제, 예컨대, 항체 또는 그의 항원 단편의 전달 수단으로서 사용될 수 있다.
조영 증강 초음파(CEUS: contrast-enhanced ultrasound)를 사용하는 방법 또한 본원에 기술된 항체 또는 그의 항원 결합 단편과 함께 사용하는 것으로 고려된다. 조영 증강 초음파(CEUS)는 전통적인 의료 초음파에 초음파 조영 매질 및 초음파 조영제를 적용하는 것을 지칭한다. 초음파 조영제는 음파가 물질 간의 계면에서 반사되는 다양한 방식에 의존하는 작용제를 지칭한다. 다양한 미세기포 조영제가 본원에 기술된 조성물 및 방법과 함께 사용가능하다. 미세기포는 그의 쉘 구성, 가스 코어 구성 및 표적인지 여부가 다를 수 있다. 혈관신생 장애의 특징적인 수용체에 결합하는 표적 리간드는 미세기포에 접합되어 미세기포 복합체가 예컨대, 이환된 조직 또는 비정상적인 조직과 같은 관심 부위에 선택적으로 축적될 수 있다. 표적 조영 증강 초음파로 알려진 이러한 형태의 분자 이미징은 표적 미세기포가 관심 영역에 결합하는 경우에만 강력한 초음파 신호를 생성할 것이다. 표적 조영 증강 초음파는 의료 진단 및 의료 치료 모두에서 많은 응용 분야를 가지고 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 기술된 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 표적화된 초음파 전달을 사용하여 암 또는 종양에 대한 치료를 필요로 하는 대상체에게 투여된다.
약제학적 조성물 및 제형
특정 실시양태에서, 본원에서는 대상체에서 투여하기 위한 본원에 개시된 IgA 항체 또는 그의 기능적 단편을 포함하는 약제학적 조성물을 개시한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기술된 IgA 항체를 포함하는 약제학적 조성물은 활성 화합물을 약제학적으로 사용될 수 있는 제제로 프로세싱하는 단계를 용이하게 하는 부형제 및 보조제를 포함하는 하나 이상의 생리학적으로 허용가능한 담체를 사용하여 통상적인 방식으로 제제화된다. 적절한 제제는 선택한 투여 경로에 따라 다르다. 본원에 기술된 약제학적 조성물의 요약은 예를 들어, 문헌 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Nineteenth Ed (Easton, Pa.: Mack Publishing Company, 1995)]; [Hoover, John E., Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania 1975]; [Liberman, H.A. and Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980]; 및 [Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Seventh Ed. (Lippincott Williams & Wilkins1999)]에서 찾아볼 수 있다.
약제학적 조성물은 임의적으로 통상적인 방식으로, 예컨대, 단지 예로서, 통상적인 혼합, 용해, 과립화, 당의정 제조, 레비게이팅, 유화, 캡슐화, 포획 또는 압축 프로세스에 의해 제조된다.
특정 실시양태에서, 조성물은 또한 예컨대, 아세트산, 붕산, 시트르산, 락트산, 인산 및 염산과 같은 산; 예컨대, 수산화나트륨, 인산나트륨, 붕산나트륨, 시트르산나트륨, 아세트산나트륨, 락트산나트륨 및 트리스-하이드록시메틸아미노메탄과 같은 염기; 및 시트레이트/덱스트로스, 중탄산나트륨 및 염화암모늄과 같은 완충제를 포함하는 하나 이상의 pH 조절제 또는 완충화제를 포함할 수 있다. 이러한 산, 염기 및 완충제는 조성물의 pH를 허용가능한 범위로 유지하는 데 필요한 양으로 포함된다.
다른 실시양태에서, 조성물은 또한 조성물의 오스몰 농도이 허용가능한 범위가 되게 하는 데 필요한 양으로 하나 이상의 염을 포함할 수 있다. 이러한 염은 나트륨, 칼륨 또는 암모늄 양이온 및 클로라이드, 시트레이트, 아스코르베이트, 보레이트, 포스페이트, 비카보네이트, 술페이트, 티오술페이트 또는 비술파이트 음이온을 갖는 것을 포함하고; 적합한 염은 염화나트륨, 염화칼륨, 티오황산나트륨, 중아황산나트륨 및 황산암모늄을 포함한다.
본원에 기술된 약제학적 조성물은 경구, 비경구(예컨대, 정맥내, 피하, 근육내, 뇌내, 뇌실내, 관절내, 복강내, 또는 두개내), 비내, 협측, 설하, 또는 직장 투여 경로를 포함하나, 이에 제한되지 않는 임의의 적합한 투여 경로에 의해 투여된다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 비경구(예컨대, 정맥내, 피하, 근육내, 뇌내, 뇌실내, 관절내, 복강내, 또는 두개내) 투여용으로 제제화된다.
본원에 기술된 약제학적 조성물은 치료하고자 하는 개체에 의한 경구 섭취를 위해 수성 경구 분산액, 액체, 겔, 시럽, 엘릭시르, 슬러리, 현탁제 등, 고체 경구 제형, 에어로졸, 방출 조절형 제제, 빠른 용융 제제, 발포성 제제, 동결 건조 제제, 정제, 산제, 환제, 당의정, 캡슐, 지연 방출 제제, 연장 방출 제제, 박동성 방출 제제, 다중 미립자 제제, 및 혼합형 즉시 혼합 방출 및 방출 조절형 제제를 포함하나, 이에 제한되지 않는 임의의 적합한 제형으로 제제화된다.
일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 캡슐로 제제화된다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 용액(예를 들어, IV 투여용)으로 제제화된다. 일부 경우에, 약제학적 조성물은 주입제로서 제제화된다. 일부 경우에, 약제학적 조성물은 주사제로 제제화된다.
본원에 기술된 약제학적 고체 제형은 임의적으로 본원에 기술된 화합물 및 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 첨가제, 예컨대, 화합성 담체, 결합제, 충전제, 현탁화제, 향미제, 감미제, 붕해제, 분산제, 계면활성제, 활택제, 착색제, 희석제, 가용화제, 보습제, 가소제, 안정제, 침투 증진제, 습윤화제, 소포제, 항산화제, 보존제, 또는 그의 하나 이상의 조합을 포함한다.
추가의 다른 측면에서, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, 20th Edition (2000)]에 기술된 것과 같은 표준 코팅 절차를 사용하여 조성물 주위에 필름 코팅을 제공한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (예를 들어, 캡슐에 의한 투여를 위해) 입자로 제제화되고, 입자의 일부 또는 전부가 코팅된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (예를 들어, 캡슐에 의한 투여를 위해) 입자로 제제화되고, 입자의 일부 또는 전부가 마이크로캡슐화된다. 일부 실시양태에서, 조성물은 (예를 들어, 캡슐에 의한 투여를 위해) 입자로 제제화되고, 입자의 일부 또는 전부가 마이크로캡슐화되지 않고 코팅되지 않는다.
특정 실시양태에서, 본원에 제공된 조성물은 또한 미생물 활성을 억제하기 위한 하나 이상의 보존제를 포함할 수 있다. 적합한 보존제는 예컨대, 메르펜 및 티오머살과 같은 수은 함유 물질; 안정화된 이산화염소; 및 예컨대, 염화벤즈알코늄, 브롬화 세틸트리메틸암모늄 및 염화 세틸피리디늄과 같은 4급 암모늄 화합물을 포함한다.
본원에서 언급되는 바와 같이 "증식성 질환"은 세포의 과도한 증식 및 세포 매트릭스의 전환이 암을 비롯한 여러 질환의 병인에 상당히 기여한다는 통합 개념이 나타남을 의미한다.
본원에 사용되는 바와 같이, "환자" 또는 "대상체"는 생리학적 병태, 예를 들어, 암 또는 자가면역 병태 또는 감염 진단을 받았거나, 또는 그를 앓을 것으로 또는 그가 발생할 것으로 의심되는 포유동물 대상체를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 용어 "환자"는 암 발생 가능성이 평균 이상인 포유동물 대상체를 지칭한다. 예시적인 환자는 인간, 유인원, 개, 돼지, 소, 고양이, 말, 염소, 양, 설치류 및 본원에 개시된 요법이 유익할 수 있는 다른 포유동물일 수 있다. 예시적인 인간 환자는 남성 및/또는 여성일 수 있다. "그를 필요로 하는 환자" 또는 "그를 필요로 하는 대상체"는 본원에서 질환 또는 장애, 예를 들어, 제한하는 것은 아니지만, 예컨대, 암과 같은 증식성 장애를 앓는 것으로 진단 받았거나, 또는 의심되는 환자로 지칭된다. 일부 실시양태에서, 암은 고형 종양 또는 혈액 악성 종양이다. 일부 실시양태에서, 암은 고형 종양이다. 다른 실시양태에서, 암은 혈액 악성 종양이다. 일부 실시양태에서, 암은 전이성 암이다. 일부 실시양태에서, 암은 재발성 또는 난치성 암이다. 일부 실시양태에서, 암은 고형 종양이다. 예시적인 고형 종양은 항문암; 맹장암; 담관암(즉, 담관암종); 방광암; 뇌 종양; 유방암; 자궁경부암; 결장암; 미지의 원발성 암(CUP); 식도암; 안암; 나팔관암; 위장암; 신장암; 간암; 폐암; 수아세포종; 흑색종; 구강암; 난소암; 췌장암; 췌장암; 부갑상선 질환; 음경암; 뇌하수체 종양; 전립선암; 직장암; 피부암; 위암; 고환암; 후두암; 갑상선암; 자궁암; 질암; 외음부암; 또는 교모세포종을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 일부 실시양태에서, 백혈병은 예를 들어, 급성 림프아구성 백혈병(ALL), 급성 골수양 백혈병(AML), 만성 림프구성 백혈병(CLL) 및 만성 골수양 백혈병(CML)일 수 있다.
"투여"는 본원에서 환자에게 본 개시내용의 조성물을 제공하는 것을 지칭된다. 제한이 아닌 예로서, 조성물 투여, 예컨대, 주사는 정맥내(i.v.) 주사, 피하(s.c.) 주사, 피내(i.d.) 주사, 복강내(i.p.) 주사, 또는 근육내(i.m.) 주사에 의해 수행될 수 있다. 하나 이상의 상기 경로가 사용될 수 있다. 비경구 투여는 예를 들어, 볼루스 주사 또는 시간 경과에 따른 점진적 관류에 의해 이루어질 수 있다. 대안적으로 또는 공동으로, 투여는 경구 경로에 의해 이루어질 수 있다. 추가로, 투여는 또한 세포의 볼루스 또는 펠렛의 외과적 침착 또는 의료 장치의 배치에 의해 이루어질 수 있다. 한 실시양태에서, 본 개시내용의 조성물은 본원에 기술된 핵산 서열을 발현하는 조작된 세포 또는 숙주 세포, 또는 본원에 기술된 적어도 하나의 핵산 서열을 포함하는 벡터를 증식성 장애를 치료 또는 예방하는 데 효과적인 양으로 포함할 수 있다. 약제학적 조성물은 하나 이상의 약제학적으로 또는 생리학적으로 허용가능한 담체, 희석제 또는 부형제와 함께 본원에 기술된 바와 같은 표적 세포 집단을 포함할 수 있다. 이러한 조성물은 완충제, 예컨대, 중성 완충처리된 염수, 포스페이트 완충처리된 염수 등; 탄수화물, 예컨대, 글루코스, 만노스, 수크로스 또는 덱스트란, 만닛톨; 단백질; 폴리펩티드 또는 아미노산, 예컨대, 글리신; 항산화제; 킬레이트제, EDTA 또는 글루타티온; 애주번트(예컨대, 수산화알루미늄); 및 보존제를 포함할 수 있다.
본원에서 사용되는 바, 용어 "치료," "치료하는" 및 그 문법적 상당 어구는 원하는 약리학적 및/또는 생리학적 효과를 얻는 것을 지칭한다. 실시양태에서, 효과는 치료적 효과로서, 즉, 효과는 질환 및/또는 질환에 기인하는 부작용 증상을 부분적으로 또는 완전히 치유한다. 이를 위해, 본원에 기술된 방법은 본원에 기술된 핵산 서열을 발현하는 숙주 세포, 또는 본원에 기술된 핵산 서열을 포함하는 벡터를 포함하는 조성물을 "치료 유효량"으로 투여하는 단계를 포함한다.
용어 "치료 유효량," "치료량," "면역학적 유효량," 항종양 유효량," "종양 억제 유효량" 또는 이들의 문법적 상당 어구는 원하는 치료 결과를 얻기 위해 필요한 투여량 및 기간에 효과적인 양을 지칭한다. 치료 유효량은 예컨대, 개체의 질환 상태, 연령, 성별, 및 체중 및 개인에서 원하는 반응을 유도하는 본원에 기술된 조성물의 능력과 같은 인자에 따라 달라질 수 있다. 투여되는 본 개시내용의 조성물의 정확한 양은 환자(대상체)의 연령, 체중, 종양 크기, 감염 또는 전이 정도의 개인차를 고려하여 의사에 의해 결정될 수 있다.
대안적으로, 본원에 기술된 하나 이상의 조성물의 환자 또는 대상체에 대한 투여의 약리학적 및/또는 생리학적 효과는 "예방적"일 수 있으며, 즉, 그 효과는 질환 또는 그의 증상을 완전히 또는 부분적으로 예방한다.
"예방 유효량"은 원하는 예방적 결과(예컨대, 질환 발병 예방)를 달성하기 위해 필요한 투여량 및 기간에 효과적인 양을 지칭한다.
"소포제"는 수성 분산액의 응고, 마감된 필름에 기포를 유발하거나, 일반적으로 가공 처리를 손상시킬 수 있는 가공 처리 과정에서 기포 형성을 감소시킨다. 예시적인 소포제는 실리콘 에멀젼 또는 소르비탄 세스쿼리에이트를 포함한다.
"항산화제"는 예를 들어, 부틸화된 하이드록시 톨루엔(BHT), 아스코르브산 나트륨, 아스코르브산, 메타중아황산나트륨 및 토코페롤을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항산화제는 필요한 경우 화학적 안정성을 증진시킨다.
본원에 기술된 제제는 항산화제, 금속 킬레이트제, 티올 함유 화합물 및 다른 일반 안정화제가 유익할 수 있다. 이러한 안정제의 예는 (a) 약 0.5% w/v 내지 약 2% w/v 글리세롤, (b) 약 0.1% w/v 내지 약 1% w/v 메티오닌, (c) 약 0.1% w/v 내지 약 2% w/v 모노티오글리세롤, (d) 약 1 mM 내지 약 10 mM EDTA, (e) 약 0.01% w/v 내지 약 2% w/v 아스코르브산, (f) 0.003% w/v 내지 약 0.02% w/v 폴리소르베이트 80, (g) 0.001% w/v 내지 약 0.05% w/v. 폴리소르베이트 20, (h) 아르기닌, (i) 헤파린, (j) 덱스트란 술페이트, (k) 사이클로덱스트린, (l) 펜토산 폴리술페이트 및 다른 헤파리노이드, (m) 2가 양이온, 예컨대, 마그네슘 및 아연; 또는 (n) 이들의 조합을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.
"결합제"는 점착 특성을 부여하며, 예컨대, 알긴산 및 그의 염; 셀룰로스 유도체, 예컨대 카복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스(예컨대, Methocel®), 하이드록시프로필메틸셀룰로스, 하이드록시에틸셀룰로스, 하이드록시프로필셀룰로스(예컨대, Klucel®), 에틸셀룰로스(예컨대, Ethocel®), 및 미세결정질 셀룰로스(예컨대, Avicel®); 미세결정질 덱스트로스; 아밀로스; 마그네슘 알루미늄 실리케이트; 다당류 산; 벤토나이트; 젤라틴; 폴리비닐피롤리돈/비닐 아세테이트 공중합체; 크로스포비돈; 포비돈; 녹말; 전호화 전분; 트라가칸트, 덱스트린, 당, 예컨대, 수크로스(예컨대, 디pac®), 글루코스, 덱스트로스, 당밀, 만닛톨, 소르비톨, 크실리톨(예컨대, Xylitab®), 및 락토스; 천연 또는 합성 검, 예컨대, 아카시아, 트라가칸트, 가티 검, 이사폴 껍질의 점액, 폴리비닐피롤리돈(예컨대, Polyvidone® CL, Kollidon® CL, Polyplasdone® XL-10), 낙엽송 아라보갈락탄, 비굼(Veegum)®, 폴리에틸렌 글리콜, 왁스, 알긴산 나트륨 등을 포함한다.
"담체" 또는 "담체 물질"은 약제학에서 일반적으로 사용되는 임의의 부형제를 포함하며, 이브루티닙의 화합물 및 항암제와 같은 본원에 개시된 화합물과의 화합성 및 원하는 제형의 방출 프로파일 특성을 기준으로 선택되어야 한다. 예시적인 담체 물질은 예를 들어, 결합제, 현탁화제, 붕해제, 충전제, 계면활성제, 가용화제, 안정제, 활택제, 습윤화제, 희석제 등을 포함한다. "약학적으로 화합성 담체 물질"은 아카시아, 젤라틴, 콜로이드성 이산화규소, 칼슘 글리세로포스페이트, 락트산칼슘, 말토덱스트린, 글리세린, 마그네슘 실리케이트, 폴리비닐피롤리돈(PVP), 콜레스테롤, 콜레스테롤 에스테르, 카제인 나트륨, 대두 레시틴, 타우로콜산, 포스포티딜콜린, 염화나트륨, 인산삼칼슘, 인산이칼륨, 셀룰로스 및 셀룰로스 접합체, 당 소듐 스테아로일 락틸레이트, 카라기난, 모노글리세리드, 디글리세리드, 전호화 전분 등을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 예컨대, 문헌 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Nineteenth Ed (Easton, Pa.: Mack Publishing Company, 1995)]; [Hoover, John E., Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co., Easton, Pennsylvania 1975]; [Liberman, H.A. and Lachman, L., Eds., Pharmaceutical Dosage Forms, Marcel Decker, New York, N.Y., 1980]; 및 [Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, Seventh Ed. (Lippincott Williams & Wilkins1999)]를 참조한다.
"분산제" 및/또는 "점도 조절제"는 액체 매질 또는 과립화 방법 또는 혼합 방법을 통해 약물의 확산 및 균질성을 제어하는 물질을 포함한다. 일부 실시양태에서, 이러한 작용제는 또한 코팅 또는 침식 매트릭스의 효과를 촉진한다. 예시적인 확산 촉진제/분산제는 예컨대, 친수성 중합체, 전해질, 트윈® 60 또는 80, PEG, 폴리비닐 피롤리돈(PVP; Plasdone®으로 시판), 및 탄수화물계 분산제, 예컨대, 예를 들어, 하이드록시프로필 셀룰로스(예컨대, HPC, HPC-SL, 및 HPC-L), 하이드록시프로필 메틸셀룰로스(예컨대, HPMC K100, HPMC K4M, HPMC K15M, 및 HPMC K100M), 카복시메틸셀룰로스 나트륨, 메틸셀룰로스, 하이드록시에틸셀룰로스, 하이드록시프로필셀룰로스, 하이드록시프로필메틸셀룰로스 프탈레이트, 하이드록시프로필메틸셀룰로스 아세테이트 스테아레이트(HPMCAS), 비결정질 셀룰로스, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 트리에탄올아민, 폴리비닐알콜(PVA), 비닐피롤리돈/비닐 아세테이트 공중 합체(S630), 에틸렌 옥시드와 및 포름알데히드와의 4-(1,1,3,3-테트라메틸부틸)-페놀 공중합체(또한 틸록사폴로 공지), 폴록사머(예컨대, 에틸렌 옥시드와 프로필렌 옥시드의 블록 공중합체인 Pluronics F68®, F88®, 및 F108®); 및 폴록사민(예컨대, 프로필렌 옥시드와 에틸렌 옥시드를 에틸렌디아민(BASF Corporation, 미국 뉴저지주 파시패니 소재)에 순차적으로 첨가하여 유도된 4 작용성 블록 공중합체인 폴록사민(Poloxamine) 908®로도 알려진 테로닉(Tetronic) 908®(BASF Corporation, 미국 뉴저지주 파시패니 소재)), 폴리비닐피롤리돈 K12, 폴리비닐피롤리돈 K17, 폴리비닐피롤리돈 K25, 또는 폴리비닐피롤리돈 K30, 폴리비닐피롤리돈/비닐 아세테이트 공중합체(S-630), 폴리에틸렌 글리콜, 예를 들어, 약 300 내지 약 6000, 또는 약 3350 내지 약 4000, 또는 약 7000 내지 약 5400의 분자량을 가질 수 있는 폴리에틸렌 글리콜, 소듐 카복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 폴리소르베이트-80, 알긴산 나트륨, 검, 예를 들어, 예컨대, 트라가칸트 검 및 아카시아검, 구아 검, 크산탄(크산탄 검 포함), 당, 셀룰로스, 예를 들어, 예컨대, 소듐 카복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 소듐 카복시메틸셀룰로스, 폴리소르베이트-80, 알긴산 나트륨, 폴리에톡실화 소르비탄 모노라우레이트, 폴리에톡실화 소르비탄 모노라우레이트, 포비돈, 카보머, 폴리비닐 알콜(PVA), 알기네이트, 키토산 및 이들의 조합을 포함한다. 예컨대, 셀룰로스 또는 트리에틸 셀룰로스와 같은 가소제는 분산제로도 사용될 수 있다. 리포솜 분산액 및 자가 유화 분산액에 특히 유용한 분산제는 디미리스토일 포스파티딜 콜린, 계란의 천연 포스파티딜 콜린, 계란의 천연 포스파티딜 글리세롤, 콜레스테롤 및 이소프로필 미리스테이트이다.
하나 이상의 부식 촉진제와 하나 이상의 확산 촉진제의 조합이 또한 본 조성물에 사용될 수 있다.
용어 "희석제"는 전달 전에 관심 화합물을 희석하는 데 사용되는 화학적 화합물을 지칭한다. 희석제는 또한 더 안정적인 환경을 제공할 수 있기 때문에 화합물을 안정화하는 데 사용될 수 있다. 완충 용액(pH 조절 또는 유지를 제공할 수도 있다)에 용해된 염은 당업계에서 희석제로서 사용되며, 포스페이트 완충처리된 염수 용액을 포함하지만, 이에 제한되지 않는다. 특정 실시양태에서, 희석제는 조성물의 부피를 증가시켜 압축을 촉진하거나, 캡슐 충전용 균질 블렌드를 위한 충분한 부피를 생성시킨다. 이러한 화합물은 예컨대, 락토스, 전분, 만닛톨, 소르비톨, 덱스트로스, 예컨대, 아비셀(Avicel)®과 같은 미세결정질 셀룰로스; 이염기성 인산칼슘, 인산이칼슘 이수화물; 인산삼칼슘, 인산칼슘; 무수 락토스, 분무 건조 락토스; 전호화 전분, 압축 당, 예컨대, 디-Pac®(Amstar); 만닛톨, 하이드록시프로필메틸셀룰로스, 하이드록시프로필메틸셀룰로스 아세테이트 스테아레이트, 수크로스계 희석제, 정제 설탕; 제1 염기성 황산칼슘 1 수화물, 황산칼슘 2 수화물; 락트산 칼슘 삼수화물, 덱스트레이트; 가수 분해된 곡류 고형분, 아밀로스; 분말 셀룰로스, 탄산칼슘; 글리신, 카올린; 만닛톨, 염화나트륨; 이노시톨, 벤토나이트 등을 포함한다.
"충전제"는 락토스, 탄산칼슘, 인산칼슘, 이염기성 인산칼슘, 황산칼슘, 미세결정질 셀룰로스, 셀룰로스 분말, 덱스트로스, 덱스트레이트, 덱스트란, 전분, 전호화 전분, 수크로스, 크실리톨, 락티톨, 만닛톨, 염화나트륨, 폴리에틸렌 글리콜 등과 같은 화합물을 포함한다.
"활택제" 및 "유동화제"는 물질의 접착 또는 마찰을 방지, 감소 또는 억제하는 화합물이다. 예시적인 활택제는 예컨대, 스테아르산, 수산화칼슘, 활석, 소듐 스테아릴 푸머레이트, 예컨대, 광유와 같은 탄화수소, 또는 예컨대, 수소화 대두유(Sterotex®)와 같은 수소화 식물성 오일, 고급 지방산 및 그의 알칼리 금속 및 알칼리 토금속 염, 예컨대, 알루미늄, 칼슘, 마그네슘, 아연, 스테아르산, 스테아르산 나트륨, 글리세롤, 활석, 왁스, 스테아로웨트(Stearowet)®, 붕산, 벤조산 나트륨, 아세트산나트륨, 염화나트륨, 류신, 폴리에틸렌 글리콜(예컨대, PEG-4000) 또는 메톡시폴리에틸렌 글리콜, 예컨대, 카보왁스(Carbowax)™, 올레산 나트륨, 벤조산나트륨, 글리세릴 베헤네이트, 폴리에틸렌 글리콜, 마그네슘 또는 소듐 라우릴 술페이트, 콜로이드 실리카, 예컨대, 실로이드(Syloid)™, Cab-O-S-i-l®, 전분, 예컨대, 옥수수 전분, 실리콘 오일, 계면 활성제 등을 포함한다.
"가소제"는 마이크로캡슐화 물질 또는 필름 코팅을 연화시켜 취성이 낮아지게 만드는 데 사용되는 화합물이다. 적합한 가소제는 예컨대, 폴리에틸렌글리콜, 예컨대, PEG 300, PEG 400, PEG 600, PEG 1450, PEG 3350, 및 PEG 800, 스테아르산, 프로필렌 글리콜, 올레산, 트리에틸 셀룰로스 및 트리아세틴을 포함한다. 일부 실시양태에서, 가소제는 또한 분산제 또는 습윤화제로서 기능을 할 수 있다.
"가용화제"는 예컨대, 트리아세틴, 트리에틸시트레이트, 에틸 올레에이트, 에틸 카프릴레이트, 소듐 라우릴 술페이트, 소듐 도큐세이트, 비타민 E TPGS, 디메틸아세트 아미드, N-메틸피롤리돈, N-하이드록시에틸피롤리돈, 폴리비닐피롤리돈, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스, 하이드록시프로필 사이클로덱스트린, 에탄올, n-부탄올, 이소프로필 알콜, 콜레스테롤, 담즙염, 폴리에틸렌 글리콜 200-600, 글리코푸롤, 트랜스쿠톨, 프로필렌 글리콜, 및 디메틸 이소소르비드 등과 같은 화합물을 포함한다.
"안정제"는 예컨대, 임의의 항산화제, 완충제, 산, 보존제 등과 같은 화합물을 포함한다.
"현탁화제"는 예컨대, 폴리비닐피롤리돈, 예컨대, 폴리비닐피롤리돈 K12, 폴리비닐피롤리돈 K17, 폴리비닐피롤리돈 K25, 또는 폴리비닐피롤리돈 K30, 비닐 피롤리돈/비닐 아세테이트 공중합체(S630), 폴리에틸렌 글리콜, 예컨대, 약 300 내지 약 6000, 또는 약 3350 내지 약 4000, 또는 약 7000 내지 약 5400의 의 분자량을 가질 수 있는 폴리에틸렌 글리콜, 소듐 카복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 하이드록시프로필메틸셀룰로스, 하이드록시메틸셀룰로스 아세테이트 스테아레이트, 폴리소르베이트-80, 하이드록시에틸셀룰로스, 알긴산 나트륨, 검, 예를 들어, 예컨대, 트라가칸트 검 및 아카시아 검, 구아 검, 크산탄(크산탄 검을 포함), 당, 셀룰로스, 예를 들어, 예컨대, 소듐 카복시메틸셀룰로스, 메틸셀룰로스, 소듐 카복시메틸셀룰로스, 하이드록시프로필메틸셀룰로스, 하이드록시에틸셀룰로스, 폴리소르베이트-80, 알긴산 나트륨, 폴리에톡실화 소르비탄 모노라우레이트, 폴리에톡실화 소르비탄 포비돈 등과 같은 화합물을 포함한다.
"계면활성제"는 예컨대, 소듐 라우릴 술페이트, 소듐 도큐세이트, 트윈(Tween) 60 또는 80, 트리아세틴, 비타민 E TPGS, 소르비탄 모노올레에이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트, 폴리소르베이트, 폴락소머, 담즙염, 글리세릴 모노스테아레이트, 에틸렌 옥시드와 프로필렌 옥시드의 공중합체, 예컨대, 플루로닉(Pluronic)®(BASF) 등과 같은 화합물을 포함한다. 일부 다른 계면활성제는 폴리옥시에틸렌 지방산 글리세리드 및 식물성 오일, 예컨대, 폴리옥시에틸렌(60) 수소화 피마자유; 및 폴리옥시에틸렌 알킬에테르 및 알킬페닐 에테르, 예컨대, 옥톡시놀 10, 옥톡시놀 40과 같은 화합물을 포함한다. 일부 실시양태에서, 계면활성제는 물리적 안정성을 증진시키거나, 다른 목적을 위해 포함될 수 있다.
"점도 증진제"는 예컨대, 메틸 셀룰로스, 크산탄 검, 카복시메틸 셀룰로스, 하이드록시프로필 셀룰로스, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스 아세테이트 스테아레이트, 하이드록시프로필메틸 셀룰로스 프탈레이트, 카보머, 폴리비닐 알콜, 알기네이트, 아카시아, 키토산 및 이들의 조합을 포함한다.
"습윤화제"는 예컨대, 올레산, 글리세릴 모노스테아레이트, 소르비탄 모노올레이트, 소르비탄 모노라우레이트, 트리에탄올아민 올레에이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노올레에이트, 폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노라우레이트, 소듐 도큐세이트, 소듐 올레에이트, 소듐 라우릴 술페이트, 소듐 도큐세이트, 트리아세틴, 트윈(Tween) 80, 비타민 E TPGS, 암모늄염 등과 같은 화합물을 포함한다.
임의적으로, 본원에 기술된 조성물을 포함하는 제제는 약제학적으로 허용가능한 염, 전형적으로, 예컨대, 염화나트륨, 및 바람직하게, 그를 대략 생리학적 농도로 함유한다. 임의적으로, 본 발명의 제제는 약제학적으로 허용가능한 보존제를 함유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 보존제 농도는 0.1 내지 2.0%, 전형적으로, 0.1 내지 2.0v/v% 범위이다. 적합한 보존제는 약제학 분야에 공지된 것을 포함한다. 벤질 알콜, 페놀, m-크레졸, 메틸파라벤 및 프로필파라벤이 보존제의 예이다. 임의적으로, 본 발명의 제제는 0.005 내지 0.02%의 농도로 약제학적으로 허용가능한 계면활성제를 포함할 수 있다.
본원에 기술된 조성물은 하기에 적합한 것을 포함하는 고체, 액체 또는 겔 형태로 대상체에게 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 투여하기 위해 특별히 제제화될 수 있다: (1) 예를 들어, 멸균 용액 또는 현탁액, 또는 지속 방출형 제제로서 예를 들어, 피하, 근육내, 정맥내 또는 경막외 주사에 의한 비경구 투여; (2) 예를 들어, 크림, 연고, 또는 피부에 도포되는 방출 조절형 패치 또는 스프레이로서 국소 적용; (3) 예를 들어, 페서리, 크림 또는 폼으로서 질내 또는 직장내로; (4) 안구로; (5) 경피적으로; (6) 경점막으로; 또는 (7) 비강으로 투여. 추가로, 본 개시내용의 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 또는 조성물은 환자 내로 이식될 수 있거나, 또는 약물 전달 시스템을 이용하여 주사될 수 있다. 예컨대, 문헌 [Urquhart et al., 24 Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 199 (1984)]; [Controlled Release of Pesticides & Pharmaceuticals (Lewis, ed., Plenum Press, New York, 1981)]; 미국 특허 제3,773,919호, 제3,270,960호를 참조한다.
본원에 기술된 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하는 본원에 개시된 조성물은 또한 치료되는 특정 적응증에 필요한 1 초과의 활성 화합물, 바람직하게, 서로 불리한 영향을 미치지 않는 상보적 활성을 갖는 것들을 함유할 수 있다. 예를 들어, 조성물은 세포독성제, 사이토카인, 성장 억제제 및/또는 예컨대, VEGFR 길항제와 같은 혈관신생 억제제를 추가로 포함할 수 있다. 이러한 분자는 의도된 목적에 효과적인 양으로 조합되어 적합하게 존재한다. 본원에 기술된 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 조성물의 활성 성분은 또한 콜로이드성 약물 전달 시스템(예를 들어, 리포솜, 알부민 마이크로스피어, 마이크로입자, 마이크로에멀젼, 나노입자 및 나노캡슐) 중 또는 마크로에멀젼 중에 각각 예를 들어, 코아세르베이션 기술 또는 계면 중합화에 의해 제조된 마이크로캡슐, 예를 들어, 하이드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴-마이크로캡슐 및 폴리-(메틸메타실레이트) 마이크로캡슐에 포획될 수 있다. 상기 기술은 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences (16th ed., Osol, ed., 1980)]에 개시되어 있다. 약제학적 조성물은 또한 소포체, 특히, 리포솜로 전달될 수 있다(문헌 [Langer 1990 Science 249:1527-1533]; [Treat et al. (1989) in Liposomes in the Therapy of Infectious Disease and Cancer, Lopez-Berestein and Fidler (eds.), Liss, New York, pp. 353-365]; [Lopez-Berestein, ibid., pp. 317-327] 참조; 일반적으로 동일 문헌 참조). 리포솜은 에멀젼, 발포체, 미셀, 불용성 단층, 인지질 분산액, 라멜라 층 등을 포함하고, 특정 조직으로 M-CSF 항체를 표적화하고, 조성물의 반감기를 증가시키는 비히클 역할을 할 수 있다. 예컨대, 미국 특허 제4,837,028호 및 제5,019,369호(상기 특허들은 본원에서 참조로 포함된다)에 기술된 바와 같이, 리포솜 제조를 위해 다양한 방법이 이용가능하다.
항체를 함유하는 리포솜은 당업계에 공지된 방법에 의해, 예컨대, 문헌 [Epstein et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 82: 3688 (1985)]; [Hwang et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA 77: 4030 (1980)]; 및 미국 특허 제4,485,045호 및 제4,544,545호에 기술된 바와 같은 방법에 의해 제조된다. 순환 시간이 증진된 리포솜은 미국 특허 제5,013,556호에 개시되어 있다. 특히 유용한 리포솜은 포스파티딜콜린, 콜레스테롤 및 PEG-유도체화된 포스파티딜에탄올아민(PEG-PE)을 포함하는 지질 조성물을 사용한 역상 증발법에 의해 생성될 수 있다. 리포솜은 정의된 공극 크기의 필터를 통해 압출되어 원하는 직경을 갖는 리포솜으로 생성된다. 본 발명의 항체의 Fab' 단편은 문헌 [Martin et al., J. Biol. 화학 257: 286-288 (1982)]에 기술된 바와 같이 디술피드 교환 반응을 통해 리포솜에 접합될 수 있다. 화학요법제(예컨대, 독소루비신)는 임의적으로 리포솜 내에 함유된다[예컨대, 문헌 [Gabizon et al., J. National Cancer Inst. 81(19): 1484 (1989)] 참조].
일부 실시양태에서, 지속 방출형 제제가 사용될 수 있다. 지속 방출형 제제의 적합한 예는 본 개시내용의 항체 또는 항원 결합 단편을 함유하는 고체 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스를 포함하고, 여기서, 매트릭스는 성형품, 예컨대, 필름 또는 마이크로캡슐 형태이다. 지속 방출형의 예는 폴리에스테르, 하이드로겔(예를 들어, 폴리(2-하이드록시에틸-메타크릴레이트) 또는 폴리(비닐알콜)), 폴리락티드(미국 특허 제3,773,919호), L-글루탐산 및 y 에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 비분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, 분해성 락트산-글리콜산 공중합체, 예컨대, LUPRON DEPOT™(락트산-글리콜산 공중합체 및 류프롤라이드 아세테이트로 구성된 주사가능한 미소구체), 및 폴리-D-(-)-3 -하이드록시부티르산을 포함한다. 중합체, 예컨대, 에틸렌-비닐 아세테이트 및 락트산-글리콜산은 100일 이상 동안 분자를 방출할 수 있지만, 특정 하이드로겔은 더 짧은 기간 동안 단백질을 방출한다. 캡슐화된 항체가 체내에 장기간 남아 있으면, 37℃에서 습기에 노출되어 변성되거나 응집되어 생물학적 활성이 손실되고 면역원성의 변화가 발생할 수 있다. 관련된 기전에 따라 안정화를 위한 합리적인 전략법을 고안할 수 있다. 예를 들어, 응집 기전이 티오디술피드 교환을 통한 분자간 S--S 결합 형성으로 밝혀지면, 술프히드릴 잔기를 개질시키고, 산성 용액에서 동결 건조하고, 수분 함량을 조절하고 적절한 첨가제를 사용하고 특정 고분자 매트릭스 조성을 개발하여 안정화를 달성 할 수 있다. 특정 상황에서, 약제학적 조성물은 방출 조절형 시스템으로 전달될 수 있다. 한 실시양태에서, 펌프가 사용될 수 있다(문헌 [Langer, 상기 문헌 동일]; [Sefton 1987 CRC Crit. Ref. Biomed. Eng. 14:201] 참조). 또 다른 실시양태에서, 중합체 물질이 사용될 수 있다. 추가의 또 다른 실시양태에서, 방출 조절형 시스템은 조성물의 표적 근처에 배치될 수 있고, 따라서, 전신 용량의 일부만을 필요로 한다(예컨대, 문헌 [Goodson, 1984, in Medical Applications of Controlled Release, supra, vol. 2, pp. 115-138] 참조).
본 개시내용의 약제학적 조성물은, 예컨대, 표준 바늘 및 시린지를 사용하여 피하로 또는 정맥내로 전달될 수 있다. 추가로, 피하 전달과 관련하여, 펜 전달 장치는 본 발명의 약제학적 조성물을 전달하는 데 용이하게 적용된다. 이러한 펜 전달 장치는 재사용가능하거나, 1회용일 수 있다. 재사용가능한 펜 전달 장치는 일반적으로 약제학적 조성물을 포함하는 교체가능한 카트리지를 사용한다. 일단 카트리지 내의 모든 약제학적 조성물이 투여되고, 카트리지가 빈 상태가 되고 나면, 빈 카트리지는 쉽게 폐기되고, 약제학적 조성물을 함유하는 새로운 카트리지로 교체될 수 있다. 이어서, 펜 전달 장치는 재사용될 수 있다. 1회용 펜 전달 장치에는 교체가능한 카트리지가 없다. 오히려, 1회용 펜 전달 장치는 장치 내의 저장소에 수용되는 약제학적 조성물로 미리 충전되어 제공된다. 일단 저장소에서 약제학적 조성물이 고갈되고 나면, 전체 장치를 폐기한다. 다수의 재사용가능한 펜 및 자동주사기 전달 장치는 본 발명의 약제학적 조성물의 피하 전달에 적용된다. 예로는 물론 제한하는 것은 아니지만, 몇 가지만 예로 들자면, AUTOPEN™(Owen Mumford, Inc.: 영국 우드스톡 소재), DISETRONIC™ 펜(Disetronic Medical Systems: 스위스 부르크도르프 소재), HUMALOG MIX 75/25™ 펜, HUMALOG™ 펜, HUMALIN70130™ 펜(Eli Lilly and Co.: 미국 인디애나주 인디애나폴리스 소재), NOVOPEN™ I, II 및 III(Novo Nordisk: 덴마크 코펜하겐 소재), NOVOPEN JUNIOR™(Novo Nordisk: 덴마크 코펜하겐 소재), BD™ 펜(Becton Dickinson: 미국 뉴저지주 프랭클린 레이크스 소재), OPTIPEN™, OPTIPEN PRO™, OPTIPEN STARLET™, 및 OPTICLIK™(Sanofi-Aventis: 독일 프랑크푸르트 소재)를 포함한다. 약제학적 조성물의 피하 전달에 적용되는 1회용 펜 전달 장치의 예로는 물론 제한하는 것은 아니지만, SOLOSTAR™ 펜(Sanofi-Aventis), FLEXPEN™(Novo Nordisk), 및 KWIKPEN™(Eli Lilly)을 포함한다.
주사가능한 제제는 정맥내, 피하, 피내 및 근육내 주사, 점적 주입 등을 위한 제형을 포함할 수 있다. 이러한 주사가능한 제제는 공개적으로 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, 주사가능한 제제는 예를 들어, 주사에 통상적으로 사용되는 멸균 수성 매질 또는 유성 매질에 상기 기술된 항체 또는 그의 염을 용해, 현탁 또는 유화시킴으로써 제조될 수 있다. 주사용 수성 매질로는, 예를 들어, 생리식염수, 글루코스 및 다른 보조제를 함유하는 등장성 용액 등이 있으며, 이는 적절한 가용화제, 예컨대, 알콜(예컨대, 에탄올), 폴리알콜(예: 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜), 비이온성 계면활성제[예컨대, 폴리소르베이트 80, HCO-50(경화 피마자유의 폴리옥시에틸렌(50 mol) 부가물)] 등과 함께 조합하여 사용될 수 있다. 유성 매질로서는, 예컨대, 참깨유, 대두유 등이 사용되며, 이들은 가용화제, 예컨대, 벤질 벤조에이트, 벤질 알콜 등과 함께 조합하여 사용될 수 있다. 이렇게 제조된 주사제는 바람직하게는 적절한 앰플에 충전된다.
본 개시내용의 조성물은 예를 들어, 과립, 분말, 정제, 캡슐, 시럽, 좌제, 주사제, 에멀젼, 엘릭시르, 현탁액 또는 용액 형태일 수 있다. 함유된 상기 항체의 양은 단위 용량으로 제형당 약 5 내지 약 500 mg일 수 있고; 특히, 주사제 형태의 경우, 상기 항체는 약 5 내지 약 100mg으로, 및 다른 제형의 경우, 약 10 내지 약 250 mg으로 함유되는 것이 바람직하다.
경구, 협측 및 설하 투여의 경우, 분말, 현탁액, 과립, 정제, 환제, 캡슐, 겔캡, 및 캐플릿이 고체 제형으로 허용가능하다. 이들은 예를 들어, 본 발명의 하나 이상의 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용가능한 염 또는 호변이성질체를 적어도 하나의 첨가제, 예컨대, 전분 또는 다른 첨가제와 함께 혼합함으로써 제조될 수 있다. 적합한 첨가제는 수크로스, 락토스, 셀룰로스 당, 만닛톨, 말티톨, 덱스트란, 전분, 아가, 알기네이트, 키틴, 키토산, 펙틴, 트라가칸트 검, 아라비아 검, 젤라틴, 콜라겐, 카제인, 알부민, 합성 또는 반합성 중합체 또는 글리세리드이다. 임의적으로, 경구용 제형은 예컨대, 비활성 희석제, 또는 활택제, 예컨대, 마그네슘 스테아레이트, 또는 보존제, 예컨대, 파라벤 또는 소르브산, 또는 항산화제, 예컨대, 아스코르브산, 토코페롤 또는 시스테인, 붕해제, 결합제, 증점제, 완충제, 감미료, 향미제 또는 방향제와 같이, 투여에 도움이 되는 다른 성분을 함유할 수 있다. 정제 및 환제는 당업계에 공지된 적합한 코팅 물질로 추가로 처리될 수 있다.
경구 투여용 액체 제형은 물과 같은 불활성 희석제를 함유할 수 있는 약제학적으로 허용가능한 에멀젼, 시럽, 엘릭시르, 현탁액 및 용액 형태일 수 있다. 일부 실시양태에서, 약제학적 제제 및 의약은 예를 들어, 멸균 액체, 예컨대, 제한하는 것은 아니지만, 오일, 물, 알콜 및 이들의 조합을 사용하여 액체 현탁액 또는 수용액으로서 제조될 수 있다. 일부 실시양태에서, 약제학적 조성물은 동결건조된 형태로 제조될 수 있다. 동결건조된 제제는 당업계에 공지된 동결보호제를 포함할 수 있다. 본원에 사용된 용어 "동결보호제"는 일반적으로 동결 유도 스트레스로부터 단백질에 안정성을 제공하는 작용제를 포함한다. 동결보호제의 예로 폴리올 예컨대, 예를 들어, 만닛톨을 포함하고, 당류, 예컨대, 예를 들어, 수크로스 뿐만 아니라, 예컨대, 예를 들어, 폴리소르베이트, 폴록사머 또는 폴리에틸렌 글리콜 등과 같은 계면활성제를 포함한다. 동결보호제는 또한 제제의 장성에 기여한다. 약제학적으로 적합한 계면활성제, 현탁화제, 유화제가 경구 또는 비경구 투여를 위해 첨가될 수 있다.
상기 언급된 바와 같이, 현탁액은 오일을 포함할 수 있다. 이러한 오일로는 땅콩유, 참깨유, 면실유, 옥수수유 및 올리브유를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 현탁액 제제는 또한 예컨대, 에틸 올레이트, 이소프로필 미리스테이트, 지방산 글리세리드 및 아세틸화된 지방산 글리세리드와 같은 지방산 에스테르를 함유할 수 있다. 현탁액 제제는 알콜, 예컨대, 에탄올, 이소 프로필 알콜, 헥사데실 알콜, 글리세롤 및 프로필렌 글리콜을 포함할 수 있지만, 이에 제한되지 않는다. 에테르, 예컨대, 제한하는 것은 아니지만, 폴리(에틸렌글리콜), 페트롤륨 탄화수소, 예컨대, 광유 및 페트롤라툼; 물 또한 현탁액 제제에 사용될 수 있다.
비강 투여의 경우, 약제학적 제제 및 의약은 적절한 용매(들) 및 임의적으로 다른 화합물, 예컨대, 제한하는 것은 아니지만, 안정화제, 항미생물제, 항산화제, pH 개질제, 계면활성제, 생체이용률 개질제 및 이들의 조합을 함유하는 스프레이 또는 에어로졸일 수 있다. 에어로졸 제제제를 위한 추진제는 압축 공기, 질소, 이산화탄소, 또는 탄화수소계 저비등점 용매를 포함할 수 있다.
주사가능한 제형은 일반적으로 적합한 분산제 또는 습윤화제 및 현탁제를 사용하여 제조될 수 있는 수성 현탁액 또는 오일 현탁액을 포함한다. 주사가능한 형태는 용액상 또는 현탁액 형태일 수 있으며, 이는 용매 또는 희석제로 제조된다. 허용가능한 용매 또는 비히클로는 멸균수, 링거액 또는 등장성 수성 염수 용액을 포함한다. 대안적으로, 멸균 오일이 용매 또는 현탁제로 사용될 수 있다. 바람직하게, 천연 또는 합성 오일, 지방산, 모노-, 디- 또는 트리-글리세리드를 비롯한, 오일 또는 지방산은 비휘발성이다.
주사의 경우, 약제학적 제제 및/또는 의약은 상기 기술된 바와 같이 적절한 용액으로 재구성하기에 적합한 분말일 수 있다. 이들 예로는 동결 건조, 회전 건조 또는 분무 건조 분말, 무정형 분말, 과립, 침전물 또는 미립자를 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 주사를 위해, 제제는 임의적으로 안정제, pH 개질제, 계면활성제, 생체이용률 개질제 및 이들의 조합을 함유할 수 있다.
직장 투여의 경우, 약제학적 제제 및 의약은 장, S자 결장 및/또는 직장에서의 화합물의 방출을 위한 좌제, 연고, 관장제, 정제 또는 크림의 형태일 수 있다. 직장 좌제는 본 발명의 하나 이상의 화합물, 또는 약제학적으로 허용가능한 염 또는 호변이성질체를 허용되는 비히클, 예를 들어, 정상 저장 온도에서 고체상으로 존재하고, 신체 내부에서, 예컨대, 직장에서 약물을 방출하기에 적합한 상기 온도에서는 액상으로 존재하는 코코아 버터 또는 폴리에틸렌 글리콜과 혼합함으로써 제조된다. 오일은 또한 연질 젤라틴 유형의 제제 및 좌제의 제조에 사용될 수 있다. 물, 염수, 수성 덱스트로스 및 관련 당 용액, 및 글리세롤은 현탁화제, 예컨대, 펙틴, 카보머, 메틸 셀룰로스, 하이드록시프로필 셀룰로스 또는 카복시메틸 셀룰로스 뿐만 아니라, 완충제 및 보존제 또한 함유할 수 있는 현탁액 제제의 제조에 사용될 수 있다.
이들 조성물에서 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 농도는 광범위하게, 즉, 약 10중량% 미만, 일반적으로, 적어도 약 25중량% 내지 75중량% 또는 90중량% 정도로 다양할 수 있으며, 선택된 특정 투여 모드에 따라 주로 유체 부피, 점도 등에 의해 선택될 것이다. 경구적으로, 국소적으로 및 비경구적으로 투여가능한 조성물을 제조하는 실제 방법은 당업자에게 알려져 있거나, 또는 그에게 명백할 것이며, 이는 예를 들어, 문헌 [Remington's Pharmaceutical Science, 19th ed., Mack Publishing Co., Easton, Pa. (1995)](상기 문헌은 본원에서 참조로 포함된다)에 상세히 기재되어 있다.
본 발명의 또 다른 실시양태에서, 암 치료를 포함하여, 상기 기술된 질환, 장애 또는 병태의 치료에 유용한 물질을 함유하는 제조 물품을 제공한다. 제조 물품은 용기와 라벨을 포함한다. 적합한 용기로는 예를 들어, 병, 바이알, 시린지 및 시험관을 포함한다. 용기는 예컨대, 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로 형성될 수 있다. 용기는 병태를 치료하는 데 효과적인 조성물을 수용하고, 멸균 접근 포트를 가질 수 있다(예를 들어, 용기는 정맥내 용액 백 또는 피하 주사 바늘로 뚫을 수 있는 마개가 있는 바이알일 수 있다). 조성물 중의 활성제는 본 발명의 항체이다. 용기 상의 라벨 또는 이와 관련된 라벨은 해당 조성물이 선택한 병태를 치료하는 데 사용된다는 것을 명시한다. 제조 물품은 예컨대, 포스페이트 완충처리된 염수, 링거액 및 덱스트로스 용액과 같은 약제학적으로 허용가능한 완충제를 포함하는 제2 용기를 추가로 포함할 수 있다. 이는 다른 완충제, 희석제, 필터, 바늘, 시린지 및 사용 설명서가 있는 패키지 인서트를 비롯한, 상업적 및 사용자 관점에서 바람직한 다른 물질을 추가로 포함할 수 있다. 본원에 기술된 약제학적 조성물 및 의약은 암성 질환을 치료하는 데 유용하다.
진단 및 다른 용도
본원에서는 항원 발현(정상 샘플에 비해 증가 또는 감소된 발현, 및/또는 부적절한 발현, 예컨대, 정상적으로는 에피토프 발현이 일어나지 않는 조직(들) 및/또는 세포(들)에서의 발현 존재)과 연간된 질환, 장애, 또는 병태를 검출, 진단, 및 모니터링하기 위해 항체를 사용하는 방법을 제공한다. 본원에서는 환자가 항체 요법에 반응하는지지 여부를 측정하는 방법을 제공한다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체를 사용하여 환자가 표적 항원을 발현하는 세포를 갖고 있는지 여부를 검출하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 검출 방법은 샘플을 본 개시내용의 항체 또는 그의 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계, 및 결합 수준이 참조 또는 비교 샘플(예컨대, 대조군)의 수준과 상이한지 여부를 측정하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 본 방법은 본원에 기술된 항체 또는 폴리펩티드가 대상체에 대한 적절한 치료인지 여부를 결정하는 데 유용할 수 있다.
일부 실시양태에서, 세포 또는 세포/조직 용해물을 항체와 접촉시키고, 항체와 세포 사이의 결합을 측정한다. 시험 세포가 동일한 조직 유형의 참조 세포와 비교하여 결합 활성을 보인다면, 이는 대상체가 항체 치료로부터 이익을 얻을 수 있다는 것을 시사하는 것일 수 있다. 일부 실시양태에서, 시험 세포는 인간 조직으로부터 유래된 것이다. 일부 실시양태에서, 시험 세포는 인간 혈액으로부터 유래된 것이다.
특이적 항체-항원 결합을 검출하기 위한 당업계에 공지된 다양한 방법이 사용될 수 있다. 수행될 수 있는 예시적인 면역검정법으로는 형광 편광 면역검정법(FPIA: fluorescence polarization immunoassay), 형광 면역검정법(FIA: fluorescence immunoassay), 효소 면역검정법(EIA), 비탁 억제 면역검정법(NIA: nephelometric inhibition immunoassay), 효소 결합 면역흡착 검정법(ELISA: enzyme linked immunosorbent assay), 및 방사성면역검정법(RIA)을 포함한다. 인디케이터 모이어티 또는 표지 기는 대상 항체에 부착될 수 있고, 분석 장비 및 호환가능한 면역검정 방법의 가용성에 의해 종종 지시되는 방법의 다양한 용도의 요구를 충족하도록 선택된다.
적절한 표지로는 제한 없이, 방사성핵종(예를 들어, 125I, 131I, 35S, 3H, 또는 32P), 효소(예를 들어, 알칼리성 포스파타제, 호스래디쉬 퍼옥시다제, 루시페라제 또는 β-글락토시다제), 형광 모이어티 또는 단백질(예를 들어, 플루오레세인, 로다민, 피코에리트린, GFP 또는 BFP), 또는 발광 모이어티(예를 들어, Quantum Dot Corporation(미국 캘리포니아주 팔로알토 소재)에 의해 공급된 QdotTM 나노입자)를 포함한다. 상기 언급된 다양한 면역검정법을 수행하는 데 사용되는 일반적인 기술은 당업계의 숙련가에게 공지되어 있다.
진단 목적으로, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 방사성 동위원소, 형광 표지, 및 당업계에 공지된 다양한 효소-기질 표지를 포함하나, 이에 제한되지 않는 검출가능한 모이어티로 표지될 수 있다. 표지를 항체에 접합시키는 방법은 당업계에 공지되어 있다.
일부 실시양태에서, 항체는 표지될 필요가 없고, 그의 존재는 제1 항체에 결합하는 제2 표지된 항체를 사용하여 검출될 수 있다. 본 발명의 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 암 연관 항원에 대한 친화성 정제 작용제로서 또는 암 연관 항원 단백질에 대한 진단 검정에서, 예컨대, 특정 세포, 조직 또는 혈청에서 암 연관 항원 단백질의 발현을 검출하는 데 사용될 수 있다. 본원에 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 또한 생체내 진단 검정에 사용될 수 있다. 일반적으로, 이러한 목적을 위해 항체는 종양이 면역 신티그라피를 사용하여 국재화될 수 있도록 방사성핵종(예컨대, 111In, 99Tc, 14C, 131I, 125I, 3H, 32p 또는 35S)으로 표지된다.
본 발명의 항체는 임의의 공지된 검정 방법, 예컨대, 경쟁적 결합 검정법, 직접 및 간접 샌드위치 검정법, 예컨대, ELISA, 및 면역침전 검정법에 사용될 수 있다(문헌 [Zola, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp. 147-158 (CRC Press, Inc. 1987)]). 항체는 또한 당업계에 공지된 방법을 사용하여 종양 샘플을 표지하기 위해 면역조직화학법에 사용될 수 있다. 편의상, 본 발명의 항체는 키트, 즉, 진단 검정법을 수행하기 위한 설명서와 함께 미리 결정된 양의 시약으로 이루어진 패키징된 조합물로 제공될 수 있다. 항체가 효소로 표지된 경우, 키트는 효소에 필요한 기질 및 보조인자(예컨대, 검출가능한 발색단 또는 형광단을 제공하는 기질 전구체)를 포함한다. 추가로, 안정화제, 완충제(예컨대, 블록 완충제 또는 용해 완충제) 등과 같은 다른 첨가제가 포함될 수 있다. 다양한 시약의 상대적인 양은 검정법의 감도를 실질적으로 최적화하는 시약 용액의 농도를 제공하기 위해 광범위하게 변할 수 있다. 특히, 시약은 용해시 적절한 농도를 갖는 시약 용액을 제공하는 부형제를 포함하여 일반적으로 동결건조된 건조 분말로 제공될 수 있다.
키트
본원에서는 본원에 기술된 임의의 방법에 사용하기 위한 키트, 의약, 조성물 및 단위 제형 또한 제공한다. 본원에서는 치료 유효량의 본원에 개시된 IgA 항체 또는 그의 항원 결합 단편 중 적어도 하나를 포함하는 키트를 제공한다. 일부 실시양태에서, 키트는 제2 치료제(예컨대, 화학요법제)를 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 수성 형태 또는 동결건조된 형태이다. 키트는 희석제 또는 재구성 용액을 추가로 포함한다.
키트는 항체(또는 단위 제형 및/또는 제조 물품)를 포함하는 하나 이상의 용기를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 하나 이상의 추가제의 존재 또는 부재하에 항체를 포함하는 조성물을 미리 결정된 양(예컨대, 치료 유효량)으로 함유하는 단위 투여량이 제공된다. 일부 실시양태에서, 상기 단위 투여량은 1회용 사전충전형 주사용 시린지로 공급된다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 포함하는 조성물은 염수, 수크로스 등; 완충제, 예컨대, 포스페이트 등을 을 포함할 수 있고/거나; 안정하고 효과적인 pH 범위 내에서 제제화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 적절한 액체, 예를 들어, 멸균수 첨가시 재구성될 수 있는 동결건조 분말로서 제공될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 추가로 수크로스 및 아르기닌을 포함하나, 이에 제한되지 않는 단백질 응집을 억제하는 하나 이상의 물질을 추가로 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 헤파린 및/또는 프로테오글리칸을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 키트는 본원에 기술된 임의의 방법에 따른 암 치료에 사용하기 위한 설명서를 추가로 포함한다. 키트는 적합한 개체 또는 치료의 선택에 대한 설명을 추가로 포함할 수 있다. 키트에 제공된 설명서는 전형적으로 라벨 또는 패키지 인서트(예를 들어, 키트에 포함된 종이 시트)에 작성된 설명서이지만, 기계 판독가능 설명서(예를 들어, 자기 또는 광학 저장 디스크에 저장된 설명서) 또한 허용가능하다. 일부 실시양태에서, 키트는 또 다른 치료제(예컨대, 항암 항체 또는 화학요법제)를 추가로 포함한다.
키트는 적절한 패키징에 존재한다. 적합한 패키징으로는 바이알, 병, 단지, 가요성 패키징(예를 들어, 밀봉된 Mylar 또는 비닐 봉지) 등을 포함하나, 이에 제한되지 않는다. 키트는 임의적으로 추가 성분, 예컨대, 완충제 및 해석 정보를 제공할 수 있다. 따라서, 본 출원은 또한 바이알(예컨대, 밀봉된 바이알), 병, 단지, 가요성 패키징 등을 포함하는 제조 물품을 제공한다.
실시예
실시예 1. 조작된 치료 IgA 항체
하기 아미노산 치환 및 결실을 포함하도록 제1 야생형 IgA2 항체를 조작하였다: IMGT 체계에 따라 넘버링하여, N45.2G, P124R, C86S, N114T, I115L, T116S, C147의 결실, 및 Y148의 결실.
135번 위치의 아스파라긴을 글루타민으로 돌연변이화하도록 제2 야생형 IgA2 항체를 조작하였다. N135Q 돌연변이는 IgA2 항체의 N-글리코실화 부위를 결실시킨다. IMGT 체계에 따라 넘버링하여, N135Q 돌연변이는 N45.2G, P124R, C86S, N114T, I115L, T116S, C147의 결실, 및 Y148의 결실인 추가 돌연변이와 조합될 수 있다.
전체 테일 피스, 아미노산 131-148(PTHINVSVVMAEADGTCY)(서열 번호 9)을 결실시키도록 제3 야생형 IgA2 항체를 조작하였다. N135은 IgA2 항체의 N-글리코실화 부위. 테일 피스 결실은 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, N45.2G, P124R, C86S, N114T, I115L, 및 T116S인 추가 돌연변이화 조합될 수 있다.
표 1은 야생형 IgA2(IgA2_Valerius_hgnc_id=HGNC:5479); (IMGT 체계에 따라 넘버링하여) 하기 아미노산 치환 및 결실: N45.2G, P124R, C86S, N114T, I115L, T116S, C147의 결실, 및 Y148의 결실을 포함하는 조작된 IgA2 항체(IgA2 - 2.0); N135Q 돌연변이를 포함하는 본원에 기술된 조작된 IgA2 항체(IgA3.0 glycosylation mutated hgnc id=HGNC:5470); 테일 피스 아미노산 131-148의 결실을 포함하는 본원에 기술된 조작된 IgA2 항체(IgA2 - 3.0_tailpiece_del_); IgA2(tr|A0A0G2JMB2|A0A0G2JMB2 HUMAN); IgA2(sp|P01877|IGHA2_HUMAN); 및 IgA2(tr|A0A286YEY5|A0A286YEY5 HUMAN)의 동일성(%), 양성률(%), 갭, 및 전체 길이 비교를 상세하게 설명한다.
Figure pct00009
실시예 2 조작된 IgA 변이체
단백질 글리코실화는 순환하는 항체의 기능 및 혈청 반감기에 중요한 역할을 한다. IgA의 불완전한 글리코실화는 전용 수용체에 의한 제거로 이어진다. 불완전하게 글리코실화된 단백질의 내재화를 위한 주요 수용체는 아시알로당단백질 수용체(ASGRP1)이다. 이 수용체는 N-글리코실화된 단백질의 말단 갈락토스를 인식하고, 혈청에서 IgA 제거의 중요한 매개체이다. IgA2(m1) 항체는 총 4개의 N 연결된 글리코실화 부위(CH1-N45.2, CH2-N15.2, CH2-N114, CH3_CHS-N135)에 의해 형성된 복잡한 N 연결된 글리코실화 패턴을 갖는다. IgA2(m1)의 반감기를 증진시키기 위해, 중요한 N-글리코실화 모티프는 단일 N-글리코실화 모티프만 포함하거나, 전혀 포함하지 않도록 조작되었다. 단일 N 연결된 글리코실화 부위는 더 완전한 글리코실화 프로파일을 초래하여 반감기를 증가시키고, 결과적으로 항체 제거율을 감소시켰다. 그러나, 완전히 아글리코실화된 IgA는 글리코실화 의존성 제거를 전혀 받지 않아 반감기를 상당히 증가시킨다. 또한, 이러한 아글리코실화된 변이체는 하등 유기체에서 생산을 허용하여 수율을 크게 증가시키고, 제조 비용을 절감시킬 것이다. 따라서, 단일 또는 비글리코실화된 항체는 생물약제 제조를 간소화하고, 치료 목적을 위한 이상적인 후보가 될 것이다.
조작된 IgA 변이체 디자인
IgA2(m1) 중쇄의 유전자 서열은 IgA 조작을 위한 백본이었고, N 연결된 글리코실화 모티프를 침묵화시키고, 안정화 돌연변이를 도입하였다(표 2; 도 4A-4D). 그 결과, IgA3.0-(min), IgA3.0+(플러스) 및 IgA4.0와 같은 일련의 분자가 생성되었다.
IgA3 .0+ 변이체
IgA3.0+ 분자는 CH1-P124R 돌연변이에 의해 중쇄 및 경쇄 사이의 공유 결합을 허용하도록 변형시켰다. 2개의 시스테인 잔기를 변형 또는 제거하여(CH2-C86S; CH3_CHS-C147del_Y148del) 혈청 단백질과의 시스테인 브릿지 형성을 방지하여 이량체 응집체 및/또는 복합체 형성을 막았다. 추가로, 이들 모티프(CH1-N45.2G; CH2-N114T; CH3_CHS-N135Q)에서 중요한 아미노산의 치환에 의해 3개의 N 연결된 글리코실화 모티프를 침묵화시켰다.
IgA3 .0- 또는 IgA3 . 0min 변이체
IgA3.0min 분자는 IgA3.0+ 중의 CH1 및 CH2와 동일한 돌연변이를 함유하지만, IgA3.0+와 대조적으로, IgA3.0min에서는 거의 전체 테일피스가 결실되었다(CH3_CHS-P131-Y148del).
IgA4 .0 변이체 또는 아글리코실화된 변이체
IgA4.0 분자는 4개의 개별 아미노산 치환에 의해 유일하게 남아 있는 N 연결된 글리코실화 모티프(CH2-N15.2)를 침묵화시켜 4개의 완전히 아글리코실화된 IgA2 분자를 생성함으로써 생성되었다.
표 2에는 야생형(WT) IgA2(m1) 대비 조작된 IgA 변이체; IgA3.0+, IgA3.0min, 및 IgA4.0에서의 돌연변이가 열거되어 있다.
Figure pct00010
Figure pct00011
실시예 3
방법
IgA3 .0/ IgA4 .0 클로닝
IgA3.0+ 및 IgA3.0min 분자를 클로닝하기 위해, IgA3.0(CH1-CH2-CH3-CHS)의 전체 불변 영역을 커버하는 합성 DNA를 주문하고(Baseclear: 네덜란드 라이덴 소재), IgA2(m1) 서열을 대체하면서, pEE14.4 벡터에 클로닝하였다. IgA3.0min 분자 중 일부 경우에서, IgA3.0min의 가변 및 불변 영역 둘 모두(VH-CH1-CH2-CH3-CHS)를 커버하는 gBlocks(IDT)를 pcDNA3.4 벡터에 클로닝하였다. IgA3.0min 벡터를 기반으로 하여, pcDNA3.4 벡터에서 IgA3.0min의 CH1-CH2-CH3-CHS 영역을 IgA4.0에 대한 적절한 돌연변이를 포함하는 gBlocks(IDT)로 대체하여 IgA4.0 분자를 클로닝하였다.
제조
IgA3.0+ 및 IgA3.0min의 제조를 위해, HEK293F 세포(Thermo Fisher)를 제조자의 설명서에 따라 사용하였다. DNA 복합체화를 위해, IgA3.0+ 또는 IgA3.0min 중쇄(HC)에 대한 별도의 벡터와 카파 경쇄(LC) 및 p어드벤테이지(pAdv; Promega)에 대한 벡터를 최적의 HC:LC:pAdv 비로 혼합하고, 형질감염 전에 293펙틴(293fectin)과 복합체를 형성하도록 하였다.
IgA3.0min 및 IgA4.0의 제조를 위해, ExpiCHO-S 세포(Thermo Fisher)를 제조자의 설명서에 따라 사용하였다. DNA 복합체화를 위해, IgA3.0+ 또는 IgA3.0min 또는 IgA4.0 중쇄에 대한 별도의 벡터와 카파 경쇄 및 p어드벤테이지(Promega)에 대한 벡터를 최적의 HC:LC:pAdv 비로 혼합하고, 형질감염 전에 엑스피펙타민(Expifectamine)과 복합체를 형성하도록 하였다.
정제
IgA의 정제 방법은 모든 IgA 변이체에 대해 동일하였고, 하이트랩 카파셀렉트 칼럼(HiTrap KappaSelect) 칼럼(GE Healthcare)이 있는 FPCL을 사용하여 정화 및 여과된 세포 배양 상청액으로부터 카파 경쇄를 포획한 후, 하이프렙 26/60 세파크릴 S-300 HR(HiPrep 26/60 Sephacryl S-300) HR 칼럼을 사용하여 크기 배제 크로마토그래피 방법에 의해 분리함으로써 수행된다.
결합 검정
조작된 항체의 결합을 측정하기 위해, 가변 부분 및 Fc 부분 둘 모두의 결합을 평가하였다.
HEK293F 제조로부터 IgA3.0min-오비누투주맙(IgA3.0min-Obi) EHsms IgA3.0+- 오비누투주맙(IgA3.0+ -Obi)의 정화된 상청액을 FACS 결합 실험에서 CD20 발현 다우디 세포에 대해 시험하였다. ExpiCHO-S 제조로부터의 오비누투주맙-IgA4.0의 정화된 상청액을 FACS 결합 실험에서 희석하지 않고 사용하였다.
간략하면, 상청액을 얼음 위에서 1시간 동안 다우디 세포와 함께 인큐베이션시켰다. 세척 후, 세포를 PE-표지된 항-IgA 항체(Southern Biotech)와 함께 45분 동안 인큐베이션시켰다. 세척 후 세포를 PFA로 고정하고, 칸토 II(Canto II)(BD) 상에서 측정하였다. CD20 인식 대조군 항체를 5-10 ug/mL의 농도로 첨가하였다.
항체 Fc-영역이 FcαR에 결합할 수 있는지 여부를 측정하기 위해, IgA2(m1) 및 IgA3.0min-Obi(25 ㎍/mL)를 카보네이트 완충체 pH 9.0 중 ELISA 플레이트에서 밤새도록 코팅하였다. 플레이트를 1% BSA로 차단한 후, CD89-발현 칼세인(Calcein)-표지된 건강한 공여자 다형핵 호중구(PMN)가 37℃에서 45분 동안 플레이트에 결합되도록 하였다. 이어서, 매 2회의 세척 단계 후, 잔여 신호를 입력 신호(비세척)와 비교하여 결합을 측정하였다. 코팅 농도가 동일한지 여부를 측정하기 위한 추가 대조군은 ELISA 플레이트를 연속 희석된 IgA2(m1) 및 IgA3.0min 항체로 밤새도록 염색하여 수행한 후, 항hIgA-HRP(Southern Biotech)로 이들의 존재를 검출하였다.
ADCC
표적 세포에 51Cr(Perkin-Elmer)을 로딩하고, 2회 세척하고, 연속 희석된 IgA 항체 및 건강한 공여자 PMN과 함께 4시간 동안 인큐베이션시켰다. 상청액 중 크로미움 방출을 측정하고, 하기 공식을 사용하여 비(specific)용해를 계산하였다: ((실험 cpm - 기저 cpm) / (최대 cpm - 기저 cpm)) x 100, 여기서, 최대 용해는 표지된 세포를 1.25% 트리톤과 함께 인큐베이션시킴으로써 측정된 것이고, 최소 용해는 항체 및 이펙터 세포 부재하에서 측정된 것이다. IgA4.0의 경우, ExpiCHO-S 제조의 희석되지 않은 상청액을 평가하였다.
열안정성
시프로 오렌지(Sypro Orange)(Life Technologies)를 사용하여 열 이동 검정법에서 열안정성을 분석하였다. 25 ㎕ PBS 및 3x SYPRO 오렌지(최종 농도)에 희석된 총 12,5 ㎍의 항체를 흰색 96 웰 얇은 벽 PCR 플레이트(Roche)에 옮기고, 옵티컬-콸러티 실링 테이프(Optical-Quality Sealing Tape)(Roche)로 밀봉하였다. 플레이트를 ViiA7(Roche)에서 37℃에서 99℃까지 1.6℃/초의 가열 속도로 가열하고, 각 온도에서 1분 동안 인큐베이션시켰다. 여기 및 방출 파장으로 각각 490 및 575 nm를 사용하여 형광을 동시에 기록하였다.
비안정화된 IgA 분자의 기능성을 평가하기 위해, PBS 중의 항체를 열 순환기에서 5분 동안 상이한 온도(4℃, 12℃의 증분 단계로 23℃-95℃)에서 인큐베이션시켰다. 인큐베이션 후, 완전 배지를 추가하고, 항체를 ADCC에서 10 ㎍/mL의 최종 농도로 직접 사용하였다.
글리코실화 분석
제조사의 설명서(NEB)에 따라 PNG아제 F 처리를 수행하였다. 간략하면, 항체를 먼저 100℃에서 10분 동안 변성시킨 후, 이어서 NP-40, 글리코버퍼(Glycobuffer) 및 PNG아제 F 효소를 첨가하고, 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션시켰다. 샘플을 20 mM DTT가 포함된 램리(Laemmli) 완충제 중에 용해시키고, 10% 미니 프로테안(Mini Protean) TGX SDS-PAGE(Bio-Rad)에서 전개시켰다. 겔을 인스턴트블루(InstantBlue)(Expedeon)로 10분 동안 염색하고, 물로 세정하였다.
글리칸 확인 및 정량화는 질량 분광법에 의해 측정하였다. Her2-IgA2(m1)의 경우, 결합 특이적 시알산 유도체화 후 방출된 IgA2 항체의 N-글리코실화에 대한 반사 양성 모드 MALDI-TOF-MS 분석을 앞서 기술된 바와 같이 수행하였다(문헌 [Meyer, Nederend et al. 2015]). IgA3.0min-Her2, IgA3.0min-Obi 및 IgA4.0-Obi 변이체의 경우 LC/MS2 접근 방식을 사용하였다.
항체를 변성, 환원, 알킬화하고, GluC(Roche(미국 인디애나주 인디애나폴리스 소재)) 및 트립신(Sigma-Aldrich(독일 슈타인하임 소재))으로 단백질분해에 의해 분해하였다. 이를 위해, 10 ㎍의 항체를 100 mM Tris-HCl(pH 8.5), 5 mM 트리스(2-카복시에틸)-포스핀(TCEP, Sigma-Aldrich(독일 슈타인하임 소재)), 30 mM 클로로아세트아미드(CAA, Sigma-Aldrich(독일 슈타인하임 소재)) 및 1% 소듐 데옥시킬레이트(SDC, Sigma-Aldrich(독일 슈타인하임 소재)), 물(MQ)(Q-POD 또는 Q-Gard 1 시스템(Millipore)으로부터 생성, ≥18.2 MΩ에서 작동)에 넣었다. 상기 혼합물을 1:75 w/w의 효소:단백질 비로 GluC와 함께 37℃에서 4 h 동안 인큐베이션시킨 후, 트립신(1:100 w/w)과 함께 37℃에서 밤새도록 인큐베이션시켰다. 이후, 샘플을 0.5% 트리플루오로산(TFA, Sigma-Aldrich(독일 슈타인하임 소재))에 넣고, 최대 속도로 10 min 동안 원심분리하여 SDC를 침전시켰다. 상청액은 고체상 추출(SPE: solid-phase extraction)을 위해 수집하였다.
SPE를 위해, 진공 매니폴드에 배치된 오아시스 μ일루션(Oasis μElution) HLB 96 웰 플레이트(Waters아일랜드 웩스포드 소재)를 사용하였다. 플레이트를 0.5% TFA로 평형화된 아세토니트릴(ACN, BioSolve: 네덜란드 팔켄스바르트 소재)로 컨디셔닝하고, 상청액을 로딩하고, 0.5% TFA로 세척하고, 펩티드를 최종적으로 50% ACN 0.5% TFA로 용리시켰다. 회수된 용출액은 회전 증발에 의해 건조시키고, 후속 LC-MS2 분석을 위해 2% 포름산에서 재구성하였다.
분해 및 탈염된 샘플 각각에 대해, 오비트탭 퓨전 트리브리드(Orbitrap Fusion Tribrid) 질량 분광기(Thermo Fisher Scientific: 독일 브레멘 소재)에 하이픈으로 연결된, 나노 흐름을 달성하기 위한 플로우 스플리터가 장착된 애질런트 1290 인피너티 HPLC(Agilent 1290 Infinity HPLC) 시스템(Agilent Technologies: 독일 발드브론 소재) 사용하여 100 ng을 분석하였다. 샘플을 50 cm 분석 칼럼(50 ㎛ 내경, 2.7 ㎛ Poroshell 120 EC-C18로 패킹; Agilent Technologies,: 네덜란드 암스텔벤 소재)에 연결된 2 cm 트랩 칼럼(100 ㎛ 내경, 3 ㎛ ReproSil-Pur C18-AQ로 패킹; Dr. Maisch GmbH: 독일 암머부흐-엔트링엔 소재)에서 분리하였다. 완충제 A는 0.1% 포름산으로 구성되고, 완충제 B는 80% ACN 중 0.1% 포름산으로 구성되었다. LC 구배는 하기와 같았다: 0-5 min: 100% A(나머지는 B), 5-53 min: 87% A→60% A, 53-58 min 0% A, 58-65 min 100% A.
2 kV 스프레이 전압에서 코팅된 용합 실리카 이미터로부터 전자분무 이온화와 함께 양이온 모드에서 질량 분광법을 수행하였다. 각 샘플은 동일한 MS1 획득 방법을 사용하지만, 다른 MS2 방법을 사용하여 삼중으로 측정하였다. MS1 스캔의 경우, 질량 범위는 60,000의 분해능으로 m/z 350에서 2000, 최대 주입 시간 50 ms하에 AGC 표적 400,000으로 설정하였다. 3가지 MS2 방법은 각각 30 s의 배제 시간을 사용하여 3 s 주기 시간 내에 가장 높은 충전 상태, 가장 낮은 m/z 신호에서 HCD 단편화(30% 정규화된 충돌 에너지, NCE(normalized collision energy))를 시작하였다. HCD에 의한 MS2는 m/z 120에서 4000까지 30,000의 분해능, 50,000의 AGC 표적 및 50 ms의 최대 주입 시간으로 기록하였다. MS2 방법 1의 경우, HCD 단편화만 수행하였다. MS2 방법 2의 경우, HCD 스펙트럼 내 적어도 3개의 옥소늄 이온(Hex: 127.0390, 145.0495, 163.0601; HexNAc: 138.0550, 168.0655, 186.0761, 204.0867; PhosphoHex: 243.0264; NeuAc: 274.0921, 292.1027; 복합체: 366.1395, 405.0793, 407.1660, 512.1974, 657.2349)의 검출이 동일한 전구체 신호에서 스테핑-HCD를 일으켰고, 10%, 25% 및 40%의 NCE와 HCD 단편을 조합하였다. m/z 120에서 4000까지 30,000의 분해능, 200,000의 AGC 표적 및 250 ms의 최대 주입 시간으로 스테핑-HCD를 기록하였다. MS2 방법 3의 경우, 옥소늄 이온 검출이 EThcD(30% 보충 활성화)를 일으켰고, 이는 m/z 120에서 4000까지 30,000의 분해능, 200,000의 AGC 표적 및 250 ms의 최대 주입 시간으로 기록하였다.
상향식 데이터는 비오닉(Byonic) v3.3.11(Protein Metrics Inc.)로 해석하였다. Arg 및 Lys(트립신) 및 Glu 및 Asp(GluC)에서 C-말단 절단 부위를 이용하여 원시 데이터를 검색하였다. 10 ppm의 전구체 질량 허용오차 및 20 ppm의 단편 질량 허용오차를 사용하여 3개의 누락된 절단을 허용하였다. Cys 카바미도메틸화를 고정 변형으로서, 및 Met 산화를 가변 변형으로서 포함시켰다. N-글리코실화를 위해, N-글리칸 생합성을 위한 경로를 따라 279개의 조성물을 포함시켰다.
스카이라인(Skyline)(v3.7.0.11317)을 사용하여 상대 정량화를 수행하였다. 이를 위해 비오닉에 의해 글리코실화된 것으로 밝혀진 각 펩티드를 통합하였고, 이는 주요 오절단 및 산화 변이체 모두를 포함하였다. 이들 각각에 대해 앞서 언급한 279개의 글리칸 조성물을 각 LC-MS2 수행으로부터 통합하였다. 이어서, 이렇게 얻은 통합은 하기 기준을 준수하도록 큐레이팅하였다: 1) 질량 이론치 대비 ≤ 5 ppm 오류, 2) 이론적인 동위원소 패턴에서 ≥ 0.85의 idotp를 가짐, 3) 상기 펩티드에 대한 평균 머무름 시간 ± 2 min 이내로 용출, 4) 뚜렷한 중복 동위원소 패턴이 없음. 글리코펩티드의 결과 목록은 비오닉의 주석과 일치했으며, 상대 정량화에 추가로 사용하였다. 큐레이팅된 펩티드 글리코형 각각에 대해, MS1 면적을 적분하고, 동일한 N-글리코실화 부위에 정보를 제공하는 펩티드를 조합하였다. 정량화의 대안적인 방법으로, 주어진 글리코실화 부위에 대해 알려주는 각 글리코펩티드 조합에 대해 펩티드 스펙트럼 매치(PSM: peptide spectrum match)의 수를 계수하였다.
글리칸 종의 시각화를 위해, 기능성 글리코믹스 컨소시엄(Consortium for Functional Glycomics)의 권장 사항을 따라 진행하였다. 글리코워크벤치(GlycoWorkbench)(v2.1 build 146)를 이용하여 글리칸 카툰을 구성하였다. 원 고유의 MS 분석을 위해, 항체를 15.000 x g에서 10x 15 min 원심분리에 의해 비바스핀(Vivaspin) 500 30 kDa 분자량 컷 오프 필터(Sartorius Stedim Biotech: 독일 소재)를 사용하여 150 mM 아세트산암모늄 pH 7.5로 완충제 교환을 수행하였다. 완충제 교환 후, 항체를 150 mM 아세트산암모늄 pH 7.5를 사용하여 대략 3μM의 농도로 조정하였다.
25 mg/mL CsI 용액을 사용하여 보정된 확장된 질량 범위(EMR: extended mass range)를 갖는 변형된 이그젝티브 플러스 오비트랩(Exactive Plus Orbitrap) 장치(Thermo Fisher Scientific: 브레멘 소재)에서 원 고유의 MS를 수행하였다. 전송 다중극자 및 이온 렌즈의 전압 설정은 필요한 m/z 범위에서 우수한 투과율을 제공하도록 수동으로 최적화하였다. 전자분무 이온화는 1.2 kV의 모세관 전압을 사용하여 금 코팅된 유리 모세관에서 달성되었으며, MS는 80 V의 소스 단편화, 250℃의 소스 온도, 80 V의 충돌 에너지 및 m/z 200에서 35000의 분해능으로 작동시켰다. 대략 3.7x10-10 bar의 가스 압력에 도달하도록 HCD 셀에 질소를 첨가하여 분자의 탈용매화를 추가로 달성하였다. 전하를 질량의 가장 낮은 표준 편차(전형적으로 1 Da 미만의 질량 오류 발생)에 피팅하여 전하 상태 분포로부터 질량을 계산하였다.
약동학적 성질/ 약력학적 성질 연구
IgA의 약동학적 성질/약력학적 성질을 위해, BALB/cByJ 마우스(Jackson Laboratory)에 100 ㎍(1 mg/mL)의 항체를 i.v.로 주사하였다. 명시된 시점에 혈액을 수집하고, 원심분리하여 혈청을 분리하고 수집하였다. 희석된 혈청에 대해 ELISA를 수행하였다.
생체분포
방사성 표지화 전에 항체를 킬레이터에 접합시켰다. 항체를 8 min 동안 12,000 g에서 30 kDa 원심분리 필터를 통해 회전시켰다. 이어서, 원심분리 필터에 0.1 M 중탄산나트륨(pH 8.2) 500 ㎕를 첨가하고, 다시 12,000 g에서 8 min 동안 회전시켰다. 원심분리 필터를 새 튜브에 뒤집어 넣고, 1,000 g에서 2 min 동안 원심분리하여 약 40 ㎕를 수득하고, 여기에 60 ㎕의 중탄산나트륨 완충제를 첨가하여 100 ㎕를 얻었다. 20배 몰 과량의 p-SCN-Bn-DTPA(건조 DMSO 중 2 mg/mL(500 ㎕ 중 1 mg 사용))를 첨가하고, 30 sec 동안 와동시키고, 37℃에서 1시간 인큐베이션시켰다. 이어서, BnDTPA-IgG1-디누툭시맙 또는 BnDTPA-IgA3.0min-디누툭시맙 접합체를 12개 분획에 대해 100 ㎕ 분획에서 0.5 M MES 완충제(pH 5.4)로 용출시키면서, G50 칼럼을 통해 전개시켰다. 5개의 가장 진한 분획을 풀링하고, 12,000g에서 8 min 동안30 kDa 원심분리 필터를 통해 회전시켰다. 500 ㎕ 부피의 0.5 M MES 완충제(pH 5.4)를 원심분리 필터에 첨가하고, 12,300 g에서 추가로 8 min 동안 원심분리하였다. 원심분리 필터를 새로운 미세원심분리관에 뒤집어 넣고, 1,000 g에서 2 min 동안 원심분리하였다. 단백질 농도는 나노드롭(Nanodrop)으로 측정하였다.
항체를 방사성표지하기 위해, 150 uL 인듐 용액(55.5 MBq)을 미세원심분리관의 MES 완충제 중 150 ug 항체에 첨가하고, 실온에서 45 min 동안 인큐베이션시켰다. 반응 혼합물을 G50 칼럼을 통해 전개시키고, PBS(pH 7.4)로 용출시켰다. 샘플은 16개 분획에 대해 100 ㎕ 분획(3 방울)으로 미세원심분리관에 수집하고, 활성을 체크하고, 최고 분획을 조합하였다.
방사성표지된 항체의 순도를 iTLC 스트립에 의해 체크하기 위해, 총 2 ㎕의 반응 혼합물을 iTLC에 피펫팅하고, 2분 동안 건조시켰다. 바닥을 커버하는 측정 실린더에 일정 부피의 0.1 M의 시트레이트 완충제를 추가하였다. iTLC 스트립을 측정 실린더에 넣고, 시트레이트 완충제가 상단에서 약 1 cm가 될 때까지 상승하여 도달하도록 하였다. 스트립을 제거하고, 방사능-TLC를 이용하여 스캔하였다.
생체내 i.p 모델
마우스를 위트레흐트 대학(University of Utrecht)의 동물 시설에서 유지시켰다. 실험은 CB17/lcr-Prkdcscid/lcrlcocrl(Charles river) 배경에서 역교배된 암컷 hCD89 Tg 또는 hCD89 NTg 마우스를 사용하여 수행하였다. 5개 군의 마우스를 12:12 명암 주기하에 먹이와 물을 자유롭게 이용할 수 있도록 제공하면서 하우징하였다. 모든 실험은 국제 지침에 따라 수행되었으며, 국가 동물 과학 절차 중앙 당국(Central Authority for Scientific Procedures on Animals)(CCD)과 지역 실험 동물 복지 기관의 승인을 받았다.
0일째 1x10e5 A431-Luc2-Her2 세포 양으로 i.p. 주사한 후, 6일째 20 ug pegG-CSF(Amgen)를 s.c. 주사하였다. PBS 중 2.5 mg 루시페린(Promega) i.p. 주사 후 10분 경과하였을 때, U-OI 시스템(MiLabs)에서 생체발광(BLI) 신호를 측정하였다. 6일째 마우스를 다른 처리군으로 무작위화하였다. 7일째를 시작으로 10일 동안 매일 10 ㎍ IgA3.0min-Her2를 i.p. 주사하여 처리하였다. 명시된 시점에 BLI 신호를 측정하였다.
실시예 4
결과
다양한 표적에 대한 IgA2, IgA3.0min, IgA3.0+, 및 IgA4.0 분자를 코딩하는 플라스미드를 HEK293F 및/또는 ExpiCHO-S 세포에 형질감염시켰다. IgA3.0min-C47A8-CQ 항체는 도 5A-5B에 제시된 바와 같이, 야생형 IgA2(m1)-Her2 유사한 수준 또는 그보다 우수한 수준으로 발현되었으며, 여기서는 HEK293F에서 상이한 HC:LC:pAdv 비로 시험되었다. 이는 또한 IgA3.0+인 경우에도 상기와 같이 그대로 나타난다.
생산 세포주 사이의 비교로서, IgA3.0- 분자(예컨대, 각각 3개의 상이한 항원 CD20, Her2, 및 mCTLA4를 표적화하는 IgA3.0min-Obi, IgA3.0min-Her2, IgA3.0min-mCTLA4)를 HEK293F 및 ExpiCHO-S 세포, 둘 모두에서 제조하였다(도 6A-6C). IgA3.0min 분자의 발현 수준은 ExpiCHO-S 세포에서 더 높았는데, 이는 상청액에 대한 샌드위치 ELISA에 의해 측정된 바, 거의 1 g/L에 도달하였다. 추가로, 상이한 IgA3.0min 분자(각각 다양한 항원 GD2, gp75, Her2, CD20을 표적화하는 IgA3.0min-ch14.18, IgA3.0min-TA99, IgA3.0min-Her2, IgA3.0min-Obi)를 ExpiCHO-S 세포ExpiCHO-S 세포에서 성공적으로 제조하였다(도 7A-7D). 본 데이터는 조작된 IgA3.0min 및 IgA3.0+ 변이체가 선택된 생산 시스템과 상관없이 적절하게 발현되었다는 것을 시사한다.
또한, ExpiCHO-S 세포에서 발현된 4개의 아글리코실화된 IgA4.0 변이체들은 모두 IgA3.0min 항체와 유사한 발현 수준을 나타내었다(도 8A-8D). 이는 도입된 돌연변이 중 어느 것도 조작된 IgA4.0 변이체의 발현을 막지 못하고, 완전히 아글리코실화된 IgA 항체가 적절하게 발현되었다는 것을 시사한다.
후속하여, IgA3.0min 변이체; IgA3.0min-Obi(도 9A-9B)) 및 IgA3.0min-Her2(도 10A-10B)의 카파 경쇄 의존성 정제, 이어서, IgA3.0min-Obi의 경우, 그의 각각의 SEC 분리(도 9C-9D), 및 IgA3.0min-Her2를 보여주는 도 10C-10D에서는 야생형 IgA2(m1)의 경우에는 테일피스에서의 시스테인에 기인하여 보통 관찰되는 응집체가 나타나지 않았다. 상기 시스테인(IgA3.0+) 또는 전체 테일피스(IgA3.0min)를 제거함으로써, 응집은 발생하지 않았다. 유사하게, IgA4.0 변이체; IgA3.0min 변이체와 같이, 테일피스 또한 결여되어 있는 IgA4.0-Obi(도 11A-11B)dml SEC 분리에서도 응집체 형성은 관찰되지 않았다.
이어서, 다우디 세포에서의 유세포 분석법에 의해 IgA3.0+-Obi 및 IgA3.0min-Obi 분자의 결합 능력을 측정하였다. 예상대로, IgA3.0+-Obi 뿐만 아니라, IgA3.0min-Obi 항체, 둘 모두 다우디 세포 상의 CD20에 결합할 수 있었고, 이는 그의 Fab 단편이 적절하게 폴딩되었다는 것을 시사하는 것이다(도 12A-12E). 이어서, 완전히 아글리코실화된 IgA4.0 변이체가 또한 여전히 표적 항원에 결합할 수 있는지 여부를 평가하기 위해, CD20 보완 SKBR3 세포를 사용하여 유세포 분석 검정법을 수행하였다(도 15). 이러한 FACS 결합 데이터는 조작된 IgA4.0 변이체(IgA4.0_NT-Obi, IgA4.0_NQ-Obi, IgA4.0_NG-Obi, IgA4.0_NG-Obi, 및 IgA4.0_NLT-TIS-Obi)가 CD20과 결합한다는 것을 시사하였을 뿐만 아니라, 조작된 IgA3.0min 분자의 경우, Fab 영역의 폴딩이 조작에 의해 영향을 받지 않는다는 것도 확인시켜 주었다.
Fc 부분이 여전히 FcαR에 결합하는 능력을 유지하는지 여부를 평가하기 위해, 호중구가 IgA 코팅된 플레이트에 결합하도록 허용한 후, 연속하여 세척을 수행하는 IgA-FcαR 결합 검정법을 수행하였다. 수회에 걸쳐 세척한 후에도 호중구는 여전히 IgA 분자에 결합할 수 있었으며, 여기서, IgA3.0min-Obi는 IgA2(m1)와 유사하거나, 더 우수한 결합 프로파일을 나타낸ㄷ(도 13). 호중구에 제시된 IgA 분자의 양이 등가라는 것을 보장하기 위해, IgA 검출 단계를 수행하였고, IgA2(m1) 및 IgA3.0min 항체의 농도가 동일한 것으로 나타났다(도 14).
조작된 IgA 분자가 기능성이고, PMN-매개 ADCC를 유도할 수 있음을 입증하기 위해, 크로미움 방출 검정법을 수행하였다. SKBR3-CD20 세포에서 IgA3.0min-Her2 항체는 IgA2(m1)-Her2와 유사한 정도로 또는 그보다 우수한 정도로 ADCC를 유도할 수 있었다(도 16A). 또한, ExpiCHO-S 세포에서 제조된 IgA3.0min-Obi 항체는 HEK293F 생산된 항체에서만큼 효율적으로 다우디 및 라모스 세포 둘 모두에서 ADCC를 유도하였다(도 16B-16C). 추가로, 완전히 아글리코실화된 IgA4.0 변이체는 IgA3.0min-Obi과 유사한 수준으로 ADCC를 유도하였고(도 16D), 사멸과 관련하여 완전한 기능성을 보였다. 이것은 기능이 심각하게 손상되거나, 제거된 아글리코실화된 IgG1과 극명한 대조를 이룬다(문헌 [Jefferis 2009]). 이러한 데이터는 IgA 변이체를 조작하기 위해 도입된 변형에도 불구하고, IgA3.0min 뿐만 아니라, IgA4.0 둘 모두 ADCC를 유도하는 그의 기능을 여전히 유지하였다는 것을 시사하는 것이다.
조작된 IgA3.0min 및 IgA4.0 변이체가 열적으로 더 안정적인지 여부를 확인하기 위해, SYPRO 열 이동을 수행하였다. 열 순환기에서 그의 온도를 천천히 승온시키면서 SYPRO 오렌지 존재하에 항체를 인큐베이션시켰다. 단백질 언폴딩시, SYPRO 오렌지는 소수성 포켓에 결합할 수 있고, 형광성 신호가 검출될 수 있다. 도 17A는 2개의 야생형 IgA2(m1) 항체 대 2개의 조작된 IgA3.0min 분자 및 4개의 조작된 IgA4.0 항체의 열 안정성 프로파일을 보여주는 것이다. 곡선 이동은 IgA3.0min 변이체 및 IgA4.0 변이체가 야생형 IgA2(m1)보다 더 높은 온도에서 더욱 안정적이었다는 것을 나타낸다. 평가된 상이한 IgA 분자에 대하여 비선형 회귀 분석에 의해 계산된 Tm 값의 평균을 구하였다(도 17B). 조작된 IgA 변이체 두 유형 모두(IgA3.0min 및 IgA4.0) 야생형 IgA2(m1)과 비교하여 더 온도에서 개선된 안정성을 보인다.
관찰된 안정성을 기능성 항-CD20 IgA 항체로 번역하기 위해; 야생형 IgA2 및 IgA3.0min-Obi를 특정 온도로 가열하고, 라지 세포를 사용하여 크로미움 방출 ADCC에서 시험하였다(도 17C). 신호는 4℃에서 인큐베이션된 항체인 대조군으로 정규화하였다. 열에 노출된 항체의 사멸 효율은 야생형 IgA2(m1)과 조작된 IgA3.0min/IgA4.0 분자 사이에 상이하였다. 전자의 것은 47℃ 이상에의 노출시 감소하는 프로파일을 보인 반면, 후자는 71℃에 노출된 후에도 여전히 50% 초과의 활성을 보였다. 시험된 3개 항체의 활성 모두 83℃보다 높은 온도에서는 상실되었다. 이는 항체의 안정성이 기능성면에서 중요하고, 야생형 대비 조작된 IgA 변이체의 개선된 열안정성이 유리하다는 것을 시사하는 것이다.
조작된 IgA3.0min 및 IgA4.0 분자는 야생형 IgA2(m1)과 비교하여 N 연결된 글리코실화가 더 적거나, 전혀 없기 때문에, PNG아제 F 검정법을 수행하여 남아있는 N-글리코실화를 시각화하였다(도 18). 이를 위해, IgA 분자는 가장 안쪽의 GlcNac와 아스파라긴 사이를 절단하여 모든 N 연결된 글리코실화를 제거하는 PNG아제 F로 처리하였다. 이어서, 샘플을 환원 SDS-PAGE 겔에서 전개시켰다. 예상대로, 야생형 IgA2(m1)(HEK293F 생산)은 4개의 N 연결된 글리칸의 존재로 인해 분자량의 주요 이동을 나타내는 반면, IgA3.0min-Obi(HEK293F 생산)의 이동은 단일 글리코실화 이벤트로 인해 미미하다. 그러나, 아글리코실화된 IgA4.0 변이체(ExpiCHO-S 생산)는 어떤 이동도 보이지 않고, 이는 항체가 글리코실화되지 않았음을 시사하는 것이다.
글리코실화 프로파일을 보다 상세하게 평가하기 위해, 항체를 질량 분광법으로 분석하였다. 야생형 IgA2(m1)-Her2 및 IgA3.0min-Her2의 글리코실화 프로파일(도 19A-19B)을 분석하였다. 여러 N-글리칸 종은 4개의 N 연결된 글리코실화 모티프 상의 전체 글리코실화를 반영하는 IgA2(m1)-Her2에서의 MALDI-TOF-MS 분석에 의해 검출하였다. 그러나, LC/MS2 분석에서 얻은 IgA3.0min-Her2 프로파일의 피크는 좌측의 단일 N 연결된 글리코실화 모티프에서만 나왔고, 따라서, 다른 부위가 변형되지 않았기 때문에 전체 글리코실화 프로파일도 반영한다. LC/MS2에 의해 HEK293F 및 ExpiCHO-S 항체 생산 시스템으로부터의 항체를 비교할 때, 글리코실화 프로파일의 실질적인 차이가 관찰되었다(도 19C). ExpiCHO-S에서 글리코실화된 항체의 대다수(>50%)는 이중 안테나 GlcNac에서 종결된 반면, HEK293F는 하이브리드 또는 복합 유형의 글리코실화 종의 더욱 다양한 어레이를 보여주었다. 바람직하지 않은 유리 갈락토스는 ExpiCHO-S 생산 항체보다 HEK293F 생산 항체에 현저히 더 많이 존재하였다. 이러한 결과는 ExpiCHO-S 생산 항체가 이종 글리코실화를 덜 나타내었고, ASGPR 유도 제거와 관련하여 더 우수한 반감기 특성을 가질 것임을 보여주었다. IgA4.0 분자에서 글리코실화 이벤트가 발생하는지 여부를 측정하기 위해, 분해되지 않은 전체 항체를 분석하는 원 고유의 MS 접근법을 취하였다. 4개의 모든 IgA4.0 변이체는 이론적인 펩티드 골격에 매우 가까운 질량을 나타냈다(도 19D-19G). 4개의 변이체 모두에서 36 Da의 일관된 손실이 있으며, 전형적으로 글리칸당 1500-2500 Da이기 때문에, 이는 N-글리칸 종에 기인하지 않을 수 있다. 관찰된 질량 차이는 가능하게는 36 Da에 해당하는 2개의 피로글루타메이트 형성일 수 있다. 따라서, 이 분석은 IgA4.0 항체 변이체의 백본에 N-글리칸이 결여되어 있다는 것을 보여주었으며, 이는 아글리코실화된 IgA 항체가 시험관내 검정에서 완전히 기능성이라는 것을 입증한다.
조작된 IgA3.0 변이체 및 IgA4.0 변이체에서 글리코실화 부위의 손실이 혈청에서 더 나은 반감기를 유도하는지 여부를 측정하기 위해, 약동학적 성질 연구를 셋업하였다. BALB/c 마우스에 100 ㎍ 항체를 i.v. 주사하고, 명시된 시점에 혈청 샘플을 ELISA에 의해 분석하였다. 상이한 포맷의 두 항체인 디누툭시맙과 오비누주맙을 평가하였다. 검출된 혈청 야생형 IgG1-디누툭시맙 수준은 빠르게 제거된 야생형 IgA2-디누툭시맙 수준보다 더 높았다(도 20A). 24시간째 IgA2와 IgA3.0min 사이의 혈청 수준의 차이는 주사 후 처음 1시간 이내에 ASGPR에 의한 제거에 기인하는 것일 수 있다. 이는 ASGPR에 의한 N-글리코실화 의존성 제거가 적기 때문에 IgA3.0min에서 분포 단계가 덜 뚜렷하다는 것을 입증했다. 데이터는 증가된 혈청 반감기가 야생형 IgA2-디누툭시맙과 비교하여 IgA3.0min-디누툭시맙 항체에서 관찰되었음을 보여주었다. Ig4.0-오비누투주맙의 혈청 반감기를 평가하였을 때, 그의 IgA3.0min 카운터파트인 IgA3.0min-오비누투주맙과 비교하여 뚜렷한 혈청 반감기 증가가 관찰된다(도 20B). 이는 조작된 IgA 변이체가 그의 야생형 카운터파트 IgA에 비해 연장된 혈청 반감기를 갖고, 따라서, 더 적은 항체를 사용하여 종양에 유사한 효과를 활용할 수 있음을 보여준다.
IgA3.0min 항체가 종양에 분포하는지 정의하기 위해, 항체가 생체내에서 모니터링하기 위해 111인듐으로 방사성표지된 생체분포 실험을 수행하였다. 이를 위해, GD2 발현 IMR-32 신경아세포종 세포를 NSG 마우스에 피하로 주사하였다. 42일의 성장 후, 마우스에 방사성표지된 야생형 IgG1-디누툭시맙 및 IgA3.0min-디누툭시맙을 정맥내로 주사하였다. 주사 후 24 및 48시간째 마우스를 스크리닝하였다(도 21A-21B). 방사성 신호는 간과 종양 둘 모두에서 관찰되었으며, 이는 항체가 종양에 침윤되었음을 나타낸다. 간 신호는 이화되는 혈류에서 축적된 항체를 나타낸다. 종양/간 비를 측정함으로써, 종양 특이적 신호는 배경에 대해 보정될 것이다. 처음에는 24시간 후 관찰된 신호는 유사하지만, 48시간째, IgA3.0min-디누툭시맙 신호는 그의 IgG1 카운터파트보다 더욱 종양 특이적이다(도 22).
이어서, 생체내 IgA3.0min의 효능을 측정하였다. 이를 위해, hCD89 트랜스제닉 및 비트랜스제닉 SCID가 있는 확립된 종양 모델을 사용하였다(문헌 [Brandsma, Ten Broeke et al. 2015]). 마우스에 A431-luc2-Her2를 i.p. 주사하였다. 일단 종양이 확립되고 나면, PBS 또는 IgA3.0min-Her2를 i.v. 투여하여 마우스를 처리하였다(도 23). 명시된 시점에 BLI에 의해 종양 성장을 모니터링하였다. 종양은 PBS 군에서 기하급수적인 성장을 보였다. 그러나, IgA3.0min-Her2로 처리된 마우스는 58일 후에 종양의 성장을 보이지 않았고, 암을 제어하는 것으로 나타났고, 이는 조작된 IgA 변이체의 효능을 입증하는 것이다.
본 결과는 야생형 IgA2(m1)과 비교하여 모든 조작된 IgA 변이체; IgA3.0+, IgA3.0min, 및 IgA4.0이 그의 기능을 그대로 유지하면서, 개선된 생물약제학적 특성을 입증하였다. 조작된 IgA 변이체는 높은 수준으로 발현되고, 응집체 없이 정제될 수 있으며, 그 결과, 표적 항원에 대한 강력한 결합과 시험관내 및 생체내 모두에서 표적 세포의 효율적인 사멸을 여전히 나타내는, 순수하고 더 안정적인 IgA 항체가 생성된다.
표 3에는 조작된 IgA 변이체의 중쇄 불변 영역의 예시적인 아미노산 서열 및 핵산 서열이 열거되어 있다.
Figure pct00012
Figure pct00013
Figure pct00014
Figure pct00015
Figure pct00016
Figure pct00017
Figure pct00018
표 4에는 조작된 IgA 변이체의 카파 경쇄 불변 도메인의 예시적인 아미노산 서열 및 핵산 서열이 열거되어 있다.
Figure pct00019
표 5에는 조작된 IgA 변이체의 가변 중쇄의 상보성 결정 영역의 아미노산 서열의 예시적인 목록이 열거되어 있다.
Figure pct00020
표 6에는 조작된 IgA 변이체의 가변 경쇄의 상보성 결정 영역의 아미노산 서열의 예시적인 목록이 열거되어 있다.
Figure pct00021
표 7은 조작된 IgA 변이체의 가변 중쇄의 예시적인 아미노산 서열 및 핵산 서열이 열거되어 있다. CDR 영역은 굵은체로 표시되어 있다.
Figure pct00022
Figure pct00023
Figure pct00024
표 8은 조작된 IgA 변이체의 가변 경쇄의 예시적인 아미노산 서열 및 핵산 서열이 열거되어 있다. CDR 영역은 굵은체로 표시되어 있다.
Figure pct00025
Figure pct00026
Figure pct00027
표 9에는 상이한 항원에 결합할 수 있는 예시적인 IgA 변이체 항체가 열거되어 있다. 표에는 IgA 변이체 항체에 대한 가변 경쇄, 가변 중쇄, IgA 중쇄 불변 영역 및 카파 경쇄 불변 영역의 서열의 예시적인 쌍형성이 제시되어 있다.
Figure pct00028
Figure pct00029
Figure pct00030
Figure pct00031
Figure pct00032
표 10에는 WT IgA 중쇄 불변 영역의 CH1, CH2 및 CH3 도메인의 예시적인 서열이 열거되어 있다.
Figure pct00033
Figure pct00034
Figure pct00035
본 개시내용의 바람직한 실시양태가 본원에 제시되고 설명되었지만, 그러한 실시양태가 단지 예로서 제공된다는 것은 당업자에게 명백할 것이다. 이제 본 개시내용으로부터 벗어나지 않고 당업자는 수많은 변이, 변화, 및 치환를 생각해 낼 것이다. 본원에 기술된 실시양태에 대한 다양한 대안, 또는 본원에 기술된 하나 이상의 이들 실시양태 또는 측면의 조합이 본 개시내용을 실시하는 데 사용될 수 있음을 이해해야 한다. 하기 청구범위는 본 개시내용의 범주를 정의하고, 이러한 청구범위의 범주 내의 방법 및 구조 및 그의 등가물은 이로써 포함되도록 의도된다.
SEQUENCE LISTING <110> UMC Utrecht Holding B.V. <120> ENGINEERED IGA ANTIBODIES AND METHODS OF USE <130> P126851PC00 <140> PCT/NL2020/050217 <141> 2020-03-27 <150> US 62/824,864 <151> 2019-03-27 <160> 121 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 340 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IgA2m1 <400> 1 Ala Ser Pro Thr Ser Pro Lys Val Phe Pro Leu Ser Leu Asp Ser Thr 1 5 10 15 Pro Gln Asp Gly Asn Val Val Val Ala Cys Leu Val Gln Gly Phe Phe 20 25 30 Pro Gln Glu Pro Leu Ser Val Thr Trp Ser Glu Ser Gly Gln Asn Val 35 40 45 Thr Ala Arg Asn Phe Pro Pro Ser Gln Asp Ala Ser Gly Asp Leu Tyr 50 55 60 Thr Thr Ser Ser Gln Leu Thr Leu Pro Ala Thr Gln Cys Pro Asp Gly 65 70 75 80 Lys Ser Val Thr Cys His Val Lys His Tyr Thr Asn Pro Ser Gln Asp 85 90 95 Val Thr Val Pro Cys Pro Val Pro Pro Pro Pro Pro Cys Cys His Pro 100 105 110 Arg Leu Ser Leu His Arg Pro Ala Leu Glu Asp Leu Leu Leu Gly Ser 115 120 125 Glu Ala Asn Leu Thr Cys Thr Leu Thr Gly Leu Arg Asp Ala Ser Gly 130 135 140 Ala Thr Phe Thr 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Leu Arg Asp Ala Ser Gly 130 135 140 Ala Thr Phe Thr Trp Thr Pro Ser Ser Gly Lys Ser Ala Val Gln Gly 145 150 155 160 Pro Pro Glu Arg Asp Leu Cys Gly Cys Tyr Ser Val Ser Ser Val Leu 165 170 175 Pro Gly Ser Ala Gln Pro Trp Asn His Gly Glu Thr Phe Thr Cys Thr 180 185 190 Ala Ala His Pro Glu Leu Lys Thr Pro Leu Thr Ala Thr Leu Ser Lys 195 200 205 Ser Gly Asn Thr Phe Arg Pro Glu Val His Leu Leu Pro Pro Pro Ser 210 215 220 Glu Glu Leu Ala Leu Asn Glu Leu Val Thr Leu Thr Cys Leu Ala Arg 225 230 235 240 Gly Phe Ser Pro Lys Asp Val Leu Val Arg Trp Leu Gln Gly Ser Gln 245 250 255 Glu Leu Pro Arg Glu Lys Tyr Leu Thr Trp Ala Ser Arg Gln Glu Pro 260 265 270 Ser Gln Gly Thr Thr Thr Phe Ala Val Thr Ser Ile Leu Arg Val Ala 275 280 285 Ala Glu Asp Trp Lys Lys Gly Asp Thr Phe Ser Cys Met Val Gly His 290 295 300 Glu Ala Leu Pro Leu Ala Phe Thr Gln Lys Thr Ile Asp Arg Leu Ala 305 310 315 320 Gly Lys <210> 22 <211> 1020 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgA2m1 <400> 22 gccagcccca ccagccccaa 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agggcgacac cttcagctgc 900 atggtgggcc acgaggccct gcccctggcc ttcacccaga agaccatcga caggctggcc 960 ggcaagccca cccacgtgaa cgtgagcgtg gtgatggccg aggtggacgg cacctgctac 1020 <210> 23 <211> 1020 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgA2m2 <400> 23 gccagcccca ccagccccaa ggtgttcccc ctgagcctgg acagcacccc ccaggacggc 60 aacgtggtgg tggcctgcct ggtgcagggc ttcttccccc aggagcccct gagcgtgacc 120 tggagcgaga gcggccagaa cgtgaccgcc aggaacttcc cccccagcca ggacgccagc 180 ggcgacctgt acaccaccag cagccagctg accctgcccg ccacccagtg ccccgacggc 240 aagagcgtga cctgccacgt gaagcactac accaacagca gccaggacgt gaccgtgccc 300 tgcagggtgc cccccccccc cccctgctgc caccccaggc tgagcctgca caggcccgcc 360 ctggaggacc tgctgctggg cagcgaggcc aacctgacct gcaccctgac cggcctgagg 420 gacgccagcg gcgccacctt cacctggacc cccagcagcg gcaagagcgc cgtgcagggc 480 ccccccgaga gggacctgtg cggctgctac agcgtgagca gcgtgctgcc cggctgcgcc 540 cagccctgga accacggcga gaccttcacc tgcaccgccg cccaccccga gctgaagacc 600 cccctgaccg ccaacatcac caagagcggc aacaccttca 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tcctgagagt ggccgccgaa gattggaaga agggcgacac cttcagctgc 900 atggtcggac atgaagccct gcctctggct ttcacccaga aaaccatcga cagactggcc 960 ggcaagccca cccatgtcca agtgtctgtt gtcatggcgg aggtggacgg cacc 1014 <210> 26 <211> 966 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgA3.0min <400> 26 gctagcccaa cctctcctaa ggtgttccct ctgagcctgg acagcacccc tcaggatgga 60 aatgtggtgg tggcctgtct ggtgcaggga ttcttcccac aagagcccct gtccgtgact 120 tggagcgaat ctggacaggg cgtgaccgcc agaaacttcc caccttctca ggacgcctct 180 ggcgacctgt acaccacctc ttctcagctg accctgcctg ccacacagtg ccctgatggc 240 aagtctgtga cctgccacgt gaagcactac accaatccta gccaggacgt gaccgtgcct 300 tgcagagttc ctcctcctcc accttgctgt caccctcggc tgtctctgca cagacccgct 360 ctggaagatc tgctgctggg ctctgaggcc aacctgacat gtaccctgac cggcctgaga 420 gatgcttctg gcgccacctt tacctggaca ccttccagcg gaaagtccgc tgttcaggga 480 cctcctgaga gggacctgtg cggctgttac tctgtgtcta gtgtgctgcc tggcagcgcc 540 cagccttgga atcatggcga gacattcacc tgtaccgctg ctcaccccga gctgaaaacc 600 cctctgaccg ccacactgtc 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gcgccacctt tacctggaca ccttccagcg gaaagtccgc tgttcaggga 480 cctcctgaga gggacctgtg cggctgttac tctgtgtcta gtgtgctgcc tggcagcgcc 540 cagccttgga atcatggcga gacattcacc tgtaccgctg ctcaccccga gctgaaaacc 600 cctctgaccg ccacactgtc caagtccggc aacaccttcc ggcctgaagt gcatctgctg 660 cctccaccta gcgaggaact ggccctgaat gagctggtca ccctgacctg tctggccagg 720 ggctttagcc ctaaggacgt gctcgttaga tggctgcagg gctcccaaga gctgcccaga 780 gagaagtatc tgacctgggc ctctcggcaa gagccatctc agggcaccac aacctttgcc 840 gtgaccagca tcctgagagt ggccgccgaa gattggaaga agggcgacac cttcagctgc 900 atggtcggac atgaagccct gcctctggct ttcacccaga aaaccatcga cagactggcc 960 ggcaag 966 <210> 28 <211> 966 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgA4.0_NQ <400> 28 gctagcccaa cctctcctaa ggtgttccct ctgagcctgg acagcacccc tcaggatgga 60 aatgtggtgg tggcctgtct ggtgcaggga ttcttcccac aagagcccct gtccgtgact 120 tggagcgaat ctggacaggg cgtgaccgcc agaaacttcc caccttctca ggacgcctct 180 ggcgacctgt acaccacctc ttctcagctg accctgcctg ccacacagtg ccctgatggc 240 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Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val Lys 1 5 10 15 Gly <210> 44 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR2 TA99 <400> 44 Trp Ile Asn Pro Asp Asn Gly Asn Thr Val Tyr Asp Pro Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 45 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR2 <400> 45 Phe Ile Tyr Tyr Glu Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Ile Lys Ser 1 5 10 15 <210> 46 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR2 2.3D11 <400> 46 Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu Lys Ser 1 5 10 15 <210> 47 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR2 C47A8-CQ <400> 47 Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln 1 5 10 15 Gly <210> 48 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR2 UMAB10 <400> 48 Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys 1 5 10 15 Gly <210> 49 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 Obinutuzumab <400> 49 Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr 1 5 10 <210> 50 <211> 4 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 Dinutuximab (also called Ch14.18 or Unituxin) <400> 50 Gly Met Glu Tyr 1 <210> 51 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 Trastuzumab <400> 51 Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr 1 5 10 <210> 52 <211> 12 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 TA99 <400> 52 Arg Asp Tyr Thr Tyr Glu Lys Ala Ala Leu Asp Tyr 1 5 10 <210> 53 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 <400> 53 Gln Thr Gly Tyr Phe Asp Tyr 1 5 <210> 54 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 2.3D11 <400> 54 Asp Gly Gly Ile Ala Val Thr Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Leu Asp Val 1 5 10 15 <210> 55 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 C47A8-CQ <400> 55 Ser Thr Leu Trp Phe Ser Glu Phe Asp Tyr 1 5 10 <210> 56 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CDR3 UMAB10 <400> 56 Ser Ala Tyr Tyr Gly Ser Asn Val Trp Phe Phe Asp Val 1 5 10 <210> 57 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC CDR1 Obinutuzumab <400> 57 Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr 1 5 10 15 <210> 58 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC CDR1 Dinutuximab (also called Ch14.18 or Unituxin) <400> 58 Arg Ser Ser Gln Ser Leu Val His Arg Asn Gly Asn Thr Tyr Leu His 1 5 10 15 <210> 59 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC CDR1 Trastuzumab <400> 59 Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala Val Ala 1 5 10 <210> 60 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC CDR1 TA99 <400> 60 Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Asn Tyr Leu Ala 1 5 10 <210> 61 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC CDR1 <400> 61 Lys Ser Ser Gln Ser Leu Phe Asn Ser Asn Ala Lys Thr Asn Tyr Leu 1 5 10 15 Asn <210> 62 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC CDR1 2.3D11 <400> 62 Arg Ala Ser Glu Ser Val Ser Ser Asn Leu Ala 1 5 10 <210> 63 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC CDR1 C47A8-CQ <400> 63 Ser Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly His Asn Tyr Val Ser 1 5 10 <210> 64 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC CDR1 UMAB10 <400> 64 Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Met Asp 1 5 10 <210> 65 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC CDR2 Obinutuzumab <400> 65 Gln Met Ser Asn Leu Val Ser 1 5 <210> 66 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC CDR2 Dinutuximab (also called Ch14.18 or Unituxin) <400> 66 Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser 1 5 <210> 67 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC CDR2 Trastuzumab <400> 67 Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser 1 5 <210> 68 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC CDR2 TA99 <400> 68 Asp Ala Lys Thr Leu Ala Asp 1 5 <210> 69 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC CDR2 <400> 69 Tyr Ala Ser Thr Arg His Thr 1 5 <210> 70 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC CDR2 2.3D11 <400> 70 Gly Ala Phe Asn Arg Ala Thr 1 5 <210> 71 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC CDR2 C47A8-CQ <400> 71 Asp Val Thr Lys Arg Pro Ser 1 5 <210> 72 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC CDR2 UMAB10 <400> 72 Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser 1 5 <210> 73 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC CDR3 Obinutuzumab <400> 73 Ala Gln Asn Leu Glu Leu Pro Tyr Thr 1 5 <210> 74 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC CDR3 Dinutuximab (also called Ch14.18 or Unituxin) <400> 74 Ser Gln Ser Thr His Val Pro Pro Leu Thr 1 5 10 <210> 75 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC CDR3 Trastuzumab <400> 75 Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro Thr 1 5 <210> 76 <211> 7 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC CDR3 TA99 <400> 76 Gln His Phe Trp Ser Leu Pro 1 5 <210> 77 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC CDR3 <400> 77 Gln Gln Trp Tyr Asp Tyr Pro Tyr Thr 1 5 <210> 78 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC CDR3 2.3D11 <400> 78 Gln Gln Arg Ser Asp Trp Phe Thr 1 5 <210> 79 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC CDR3 C47A8-CQ <400> 79 Gln Ser Tyr Ala Gly Ser Arg Val Tyr Val 1 5 10 <210> 80 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> LC CDR3 UMAB10 <400> 80 Gln Gln Trp Ile Ser Asn Pro Pro Thr 1 5 <210> 81 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Obinutuzu-mab <400> 81 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ala Phe Ser Tyr Ser 20 25 30 Trp Ile Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Arg Ile Phe Pro Gly Asp Gly Asp Thr Asp Tyr Asn Gly Lys Phe 50 55 60 Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asn Val Phe Asp Gly Tyr Trp Leu Val Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 82 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Trastuzumab <400> 82 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Thr 20 25 30 Tyr Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Arg Ile Tyr Pro Thr Asn Gly Tyr Thr Arg Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Ala Asp Thr Ser Lys Asn Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ser Arg Trp Gly Gly Asp Gly Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 120 <210> 83 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TA99 <400> 83 Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala 1 5 10 15 Leu Val Lys Leu Ser Cys Lys Thr Ser Gly Phe Asn Ile Lys Asp Tyr 20 25 30 Phe Leu His Trp Val Arg Gln Arg Pro Asp Gln Gly Leu Glu Trp Ile 35 40 45 Gly Trp Ile Asn Pro Asp Asn Gly Asn Thr Val Tyr Asp Pro Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Thr Ala Ser Leu Thr Ala Asp Thr Ser Ser Asn Thr Val Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Leu Ser Gly Leu Thr Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Phe Cys 85 90 95 Thr Arg Arg Asp Tyr Thr Tyr Glu Lys Ala Ala Leu Asp Tyr Trp Gly 100 105 110 Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Thr 115 120 <210> 84 <211> 116 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Ab <400> 84 Gln Val Lys Leu Glu Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Asn Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Ser Cys Ser Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Gly 20 25 30 Tyr Gly Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Gln Lys Val Glu Trp 35 40 45 Met Gly Phe Ile Tyr Tyr Glu Gly Ser Thr Tyr Tyr Asn Pro Ser Ile 50 55 60 Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 65 70 75 80 Leu Gln Val Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Gln Thr Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Met Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser 115 <210> 85 <211> 125 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 2.3D11 <400> 85 Gln Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gly 1 5 10 15 Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ala Val Ser Gly Val Ser Ile Arg Ser Ile 20 25 30 Asn Trp Trp Asn Trp Val Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp 35 40 45 Ile Gly Glu Ile Tyr His Ser Gly Ser Thr Asn Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Val Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser Lys Asn Gln Phe Ser 65 70 75 80 Leu Lys Leu Asn Ser Val Thr Ala Ala Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Asp Gly Gly Ile Ala Val Thr Asp Tyr Tyr Tyr Tyr Gly Leu 100 105 110 Asp Val Trp Gly Gln Gly Thr Thr Val Thr Val Ser Ser 115 120 125 <210> 86 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> C47A8-CQ <400> 86 Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr 20 25 30 Tyr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met 35 40 45 Gly Ile Ile Asn Pro Ser Gly Gly Ser Thr Ser Tyr Ala Gln Lys Phe 50 55 60 Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser Thr Ser Thr Val Tyr 65 70 75 80 Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Ser Thr Leu Trp Phe Ser Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 87 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Obinutuzumab <400> 87 caggtgcaat tggtgcagtc tggcgctgaa gttaagaagc ctgggagttc agtgaaggtc 60 tcctgcaagg cttccggata cgccttcagc tattcttgga tcaattgggt gcggcaggcg 120 cctggacaag ggctcgagtg gatgggacgg atctttcccg gcgatgggga tactgactac 180 aatgggaaat tcaagggcag agtcacaatt accgccgaca aatccactag cacagcctat 240 atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggccgtgt attactgtgc aagaaatgtc 300 tttgatggtt actggcttgt ttactggggc cagggaaccc tggtcaccgt ctcgaca 357 <210> 88 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Dinutuximab (also called Ch14.18 or Unituxin) <400> 88 gaagtgcagc tggtgcagag cggcgcggaa gtggaaaaac cgggcgcgag cgtgaaaatt 60 agctgcaaag cgagcggcag cagctttacc ggctataaca tgaactgggt gcgccagaac 120 attggcaaaa gcctggaatg gattggcgcg attgatccgt attatggcgg caccagctat 180 aaccagaaat ttaaaggccg cgcgaccctg accgtggata aaagcaccag caccgcgtat 240 atgcatctga aaagcctgcg cagcgaagat accgcggtgt attattgcgt gagcggcatg 300 gaatattggg gccagggcac cagcgtgacc gtgagcagc 339 <210> 89 <211> 360 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Trastuzumab <400> 89 gaggtgcagc tggtcgagag cggcggaggg ctggtgcagc caggcggcag cctgaggctg 60 tcctgcgccg ccagcggctt caacatcaag gacacctaca tccactgggt gcggcaggcc 120 ccaggcaagg gcctggagtg ggtggccagg atctacccca ccaacggcta caccagatac 180 gccgacagcg tgaagggcag gttcaccatc agcgccgaca ccagcaagaa caccgcctac 240 ctgcagatga acagcctgag ggccgaggac accgccgtgt actactgcag cagatggggc 300 ggggacggct tctacgctat ggactactgg ggccagggca ccctggtgac cgtgagcagc 360 <210> 90 <211> 363 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TA99 <400> 90 gaggttcagt tgcagcagtc tggcgccgaa ctcgttagac ctggcgctct ggttaagctg 60 tcctgcaaga cctccggctt caatatcaag gactacttcc tgcactgggt ccgacagagg 120 cctgaccaag gactggaatg gatcggctgg atcaaccccg acaacggcaa caccgtgtac 180 gaccctaagt tccagggcac cgcttctctg accgccgaca cctcttccaa taccgtgtac 240 ctgcagctgt ccggcctgac ctctgaggat accgccgtgt acttctgcac cagacgggac 300 tacacctacg agaaggccgc tctggattat tggggccagg gcacaaccgt gaccgtgtct 360 aca 363 <210> 91 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> ab <400> 91 caggtgaaac tggaagaaag cggcccgggc ctggtgaacc cgagccagag cctgagcctg 60 agctgcagcg tgaccggcta tagcattacc agcggctatg gctggaactg gattcgccag 120 tttccgggcc agaaagtgga atggatgggc tttatttatt atgaaggcag cacctattat 180 aacccgagca ttaaaagccg cattagcatt acccgcgata ccagcaaaaa ccagtttttt 240 ctgcaggtga acagcgtgac caccgaagat accgcgacct attattgcgc gcgccagacc 300 ggctattttg attattgggg ccagggcacc atggtgaccg tgagcagcgg tgagtgc 357 <210> 92 <211> 375 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 2.3D11 <400> 92 caggtgcagc tgcaggaaag cggcccgggc ctggtgaaac cgagcggcac cctgagcctg 60 acctgcgcgg tgagcggcgt gagcattcgc agcattaact ggtggaactg ggtgcgccag 120 ccgccgggca aaggcctgga atggattggc gaaatttatc atagcggcag caccaactat 180 aacccgagcc tgaaaagccg cgtgaccatt agcgtggata aaagcaaaaa ccagtttagc 240 ctgaaactga acagcgtgac cgcggcggat accgcggtgt attattgcgc gcgcgatggc 300 ggcattgcgg tgaccgatta ttattattat ggcctggatg tgtggggcca gggcaccacc 360 gtgaccgtga gcagc 375 <210> 93 <211> 357 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C47A8-CQ <400> 93 caggtgcagc tggtgcagag cggcgcggaa gtgaaaaaac cgggcgcgag cgtgaaagtg 60 agctgcaaag cgagcggcta tacctttacc agctattata tgcattgggt gcgccaggcg 120 ccgggccagg gcctggaatg gatgggcatt attaacccga gcggcggcag caccagctat 180 gcgcagaaat ttcagggccg cgtgaccatg acccgcgata ccagcaccag caccgtgtat 240 atggaactga gcagcctgcg cagcgaagat accgcggtgt attattgcgc gcgcagcacc 300 ctgtggttta gcgaatttga ttattggggc cagggcaccc tggtgaccgt gagcagc 357 <210> 94 <211> 366 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> UMAB10 <400> 94 caagcctacc tgcagcagtc tggcgccgat ctcgtgcggc ctggcgcctc tgtgaagatg 60 agctgtaaag ccagcggctt caccttcccc agctacaacc tgcactgggt caagcagacc 120 cccagacagg gcctggaatg gatcggagcc atctaccccg gcaacggcga cacctcctac 180 aaccagaagt tcaagggcaa ggccaccctg accgtggaca agagcagcag caccgcctac 240 atgcagctga gcagcctgac cagcgaggac agcgccgtgt acttctgtgc cagaagcgcc 300 tactacggca gcaacgtgtg gttcttcgac gtgtggggca ccggcaccac cgtgacagtg 360 tcatct 366 <210> 95 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Obinutuzu-mab <400> 95 Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Ser Leu Pro Val Thr Pro Gly 1 5 10 15 Glu Pro Ala Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Lys Ser Leu Leu His Ser 20 25 30 Asn Gly Ile Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Gln Lys Pro Gly Gln Ser 35 40 45 Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Gln Met Ser Asn Leu Val Ser Gly Val Pro 50 55 60 Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile 65 70 75 80 Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Ala Gln Asn 85 90 95 Leu Glu Leu Pro Tyr Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 110 <210> 96 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Trastuzumab <400> 96 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Val Asn Thr Ala 20 25 30 Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Ala Ser Phe Leu Tyr Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Thr Thr Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 97 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> TA99 <400> 97 Ile Gln Met Ser Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly Glu 1 5 10 15 Thr Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gly Asn Ile Tyr Asn Tyr Leu 20 25 30 Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Gln Gly Lys Ser Pro His Leu Leu Val Tyr 35 40 45 Asp Ala Lys Thr Leu Ala Asp Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Gln Tyr Ser Leu Lys Ile Ser Ser Leu Gln Thr Glu 65 70 75 80 Asp Ser Gly Asn Tyr Tyr Cys Gln His Phe Trp Ser Leu Pro Phe Thr 85 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Pro Ala Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Arg Ser Asp Trp Phe Thr 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 100 <211> 110 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> C47A8-CQ <400> 100 Gln Ser Val Leu Thr Gln Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Pro Gly Gln 1 5 10 15 Ser Ile Thr Ile Ser Cys Ser Gly Thr Ser Ser Asp Val Gly Gly His 20 25 30 Asn Tyr Val Ser Trp Tyr Gln Gln His Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu 35 40 45 Met Ile Tyr Asp Val Thr Lys Arg Pro Ser Gly Val Pro Asp Arg Phe 50 55 60 Ser Gly Ser Lys Ser Gly Asn Thr Ala Ser Leu Thr Val Ser Gly Leu 65 70 75 80 Gln Ala Glu Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Ser Tyr Ala Gly Ser 85 90 95 Arg Val Tyr Val Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Thr Val Leu 100 105 110 <210> 101 <211> 336 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Obinutuzumab <400> 101 gatatcgtga tgacccagac acctctgagc ctgcctgtga cacctggcga gcctgcttcc 60 atctcctgcc ggtcctctaa gtccctgctg cactctaacg gcatcaccta cctgtactgg 120 tatctgcaga agcccggcca gtctcctcag ctgctgatct accagatgtc caacctggtg 180 tctggcgtgc ccgacagatt ttccggctct ggctctggca ccgacttcac cctgaagatc 240 tccagagtgg aagccgagga cgtgggcgtg tactattgtg cccagaacct ggaactgccc 300 tacacctttg gcggaggcac caaggtggaa atcaag 336 <210> 102 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Dinutuximab (also called Ch14.18 or Unituxin) <400> 102 gaaattgtga tgacccagag cccggcgacc ctgagcgtga gcccgggcga acgcgcgacc 60 ctgagctgcc gcagcagcca gagcctggtg catcgcaacg gcaacaccta tctgcattgg 120 tatctgcaga aaccgggcca gagcccgaaa ctgctgattc ataaagtgag caaccgcttt 180 agcggcgtgc cggatcgctt tagcggcagc ggcagcggca ccgattttac cctgaaaatt 240 agccgcgtgg aagcggaaga tctgggcgtg tatttttgca gccagagcac ccatgtgccg 300 ccgctgacct ttggcgcggg caccaaactg gaactgaaa 339 <210> 103 <211> 321 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Trastuzumab <400> 103 gacatccaga tgacccagtc tccatcctct ctgtccgcct ctgtgggcga cagagtgacc 60 atcacctgta gagccagcca ggacgtgaac accgccgtgg cttggtatca gcagaagcct 120 ggcaaggccc ctaagctgct gatctactcc gcctccttcc tgtactctgg cgtgccctcc 180 agattctccg gcagcagatc tggcaccgac tttaccctga caatctccag cctgcagcct 240 gaggacttcg ccacctacta ctgccagcag cactacacca cacctccaac ctttggccag 300 ggcaccaagg tggaaatcaa g 321 <210> 104 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> TA99 <400> 104 atccagatga gtcagtctcc ggcctcccta tctgcatctg tgggagaaac tgtcaccatc 60 acatgtcgag caagtggaaa tatttacaat tatttagcat ggtatcagca gaaacaggga 120 aaatctcctc acctcctggt ctatgatgca aaaaccttag cagatggtgt gccatcaagg 180 ttcagtggca gtggctcagg gacacaatat tctctcaaga ttagcagcct tcagactgaa 240 gattctggga attattactg tcaacatttt tggagtcttc cattcacgtt cggctcgggg 300 accaagctgg aaataaaa 318 <210> 105 <211> 339 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> ab <400> 105 gatgtgatga tgacccagag cccgagcagc atgagcgtga gcgcgggcga aaaagcgacc 60 attagctgca aaagcagcca gagcctgttt aacagcaacg cgaaaaccaa ctatctgaac 120 tggtatatgc agaaaccggg ccagagcccg aaactgctga cctattatgc gagcacccgc 180 cataccggcg tgccggatcg ctttcgcggc agcggcagcg gcaccgattt taccctgacc 240 attagcagcg tgcaggatga agatcaggcg ttttattatt gccagcagtg gtatgattat 300 ccgtatacct ttggcgcggg caccaaactg gaaattaaa 339 <210> 106 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> 2.3D11 <400> 106 gaaattgtgc tgacccagag cccggcgacc ctgagcctga gcccgggcga acgcgcgacc 60 ctgagctgcc gcgcgagcga aagcgtgagc agcaacctgg cgtggtatca gcagaaaccg 120 ggccaggcgc cgcgcctgct gatttatggc gcgtttaacc gcgcgaccgg cattccggcg 180 cgctttagcg gcagcggcag cggcaccgat tttaccctga ccattagcag cctggaaccg 240 gaagattttg cggtgtatta ttgccagcag cgcagcgatt ggtttacctt tggcggcggc 300 accaaagtgg aaattaaa 318 <210> 107 <211> 330 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C47A8-CQ <400> 107 cagagcgtgc tgacccagcc gagcagcgtg agcgcgagcc cgggccagag cattaccatt 60 agctgcagcg gcaccagcag cgatgtgggc ggccataact atgtgagctg gtatcagcag 120 catccgggca aagcgccgaa actgatgatt tatgatgtga ccaaacgccc gagcggcgtg 180 ccggatcgct ttagcggcag caaaagcggc aacaccgcga gcctgaccgt gagcggcctg 240 caggcggaag atgaagcgga ttattattgc cagagctatg cgggcagccg cgtgtatgtg 300 tttggcaccg gcaccaaact gaccgtgctg 330 <210> 108 <211> 318 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> UMAB10 <400> 108 cagatcgtgc tgagccagag ccccgccatc ctgagtgcta gccctggcga gaaagtgacc 60 atgacctgca gagccagcag cagcgtgtcc tacatggact ggtatcagca gaagcccggc 120 agcagcccca agccctggat ctacgccaca agcaatctgg ccagcggcgt gcccacaaga 180 ttttccggca gcggctctgg caccagctac agcctgacca tcagccgggt ggaagccgaa 240 gatgccgcca cctactactg ccagcagtgg atcagcaacc cccccacctt tggagccggc 300 accaagctgg atctgaag 318 <210> 109 <211> 102 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH1 domain of WT IgA2 heavy chain constant region <400> 109 Ala Ser Pro Thr Ser Pro Lys Val Phe Pro Leu Ser Leu Asp Ser Thr 1 5 10 15 Pro Gln Asp Gly Asn Val Val Val Ala Cys Leu Val Gln Gly Phe Phe 20 25 30 Pro Gln Glu Pro Leu Ser Val Thr Trp Ser Glu Ser Gly Gln Asn Val 35 40 45 Thr Ala Arg Asn Phe Pro Pro Ser Gln Asp Ala Ser Gly Asp Leu Tyr 50 55 60 Thr Thr Ser Ser Gln Leu Thr Leu Pro Ala Thr Gln Cys Pro Asp Gly 65 70 75 80 Lys Ser Val Thr Cys His Val Lys His Tyr Thr Asn Pro Ser Gln Asp 85 90 95 Val Thr Val Pro Cys Pro 100 <210> 110 <211> 101 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH2 domain of WT IgA2 heavy chain constant region <400> 110 Cys Cys His Pro Arg Leu Ser Leu His Arg Pro Ala Leu Glu Asp Leu 1 5 10 15 Leu Leu Gly Ser Glu Ala Asn Leu Thr Cys Thr Leu Thr Gly Leu Arg 20 25 30 Asp Ala Ser Gly Ala Thr Phe Thr Trp Thr Pro Ser Ser Gly Lys Ser 35 40 45 Ala Val Gln Gly Pro Pro Glu Arg Asp Leu Cys Gly Cys Tyr Ser Val 50 55 60 Ser Ser Val Leu Pro Gly Cys Ala Gln Pro Trp Asn His Gly Glu Thr 65 70 75 80 Phe Thr Cys Thr Ala Ala His Pro Glu Leu Lys Thr Pro Leu Thr Ala 85 90 95 Asn Ile Thr Lys Ser 100 <210> 111 <211> 131 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> CH3 domain of WT IgA2 heavy chain constant region including C-terminal Tail-piece <400> 111 Gly Asn Thr Phe Arg Pro Glu Val His Leu Leu Pro Pro Pro Ser Glu 1 5 10 15 Glu Leu Ala Leu Asn Glu Leu Val Thr Leu Thr Cys Leu Ala Arg Gly 20 25 30 Phe Ser Pro Lys Asp Val Leu Val Arg Trp Leu Gln Gly Ser Gln Glu 35 40 45 Leu Pro Arg Glu Lys Tyr Leu Thr Trp Ala Ser Arg Gln Glu Pro Ser 50 55 60 Gln Gly Thr Thr Thr Phe Ala Val Thr Ser Ile Leu Arg Val Ala Ala 65 70 75 80 Glu Asp Trp Lys Lys Gly Asp Thr Phe Ser Cys Met Val Gly His Glu 85 90 95 Ala Leu Pro Leu Ala Phe Thr Gln Lys Thr Ile Asp Arg Leu Ala Gly 100 105 110 Lys Pro Thr His Val Asn Val Ser Val Val Met Ala Glu Val Asp Gly 115 120 125 Thr Cys Tyr 130 <210> 112 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> integrin-binding peptide <400> 112 Cys Tyr Gly Gly Arg Gly Asp Thr Pro 1 5 <210> 113 <211> 102 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IGHA2*01 F CH1 gDNA <400> 113 Ala Ser Pro Thr Ser Pro Lys Val Phe Pro Leu Ser Leu Asp Ser Thr 1 5 10 15 Pro Gln Asp Gly Asn Val Val Val Ala Cys Leu Val Gln Gly Phe Phe 20 25 30 Pro Gln Glu Pro Leu Ser Val Thr Trp Ser Glu Ser Gly Gln Asn Val 35 40 45 Thr Ala Arg Asn Phe Pro Pro Ser Gln Asp Ala Ser Gly Asp Leu Tyr 50 55 60 Thr Thr Ser Ser Gln Leu Thr Leu Pro Ala Thr Gln Cys Pro Asp Gly 65 70 75 80 Lys Ser Val Thr Cys His Val Lys His Tyr Thr Asn Pro Ser Gln Asp 85 90 95 Val Thr Val Pro Cys Pro 100 <210> 114 <211> 307 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IgHA2*01 F CH1 gDNA <400> 114 gcatccccga ccagccccaa ggtcttcccg ctgagcctcg acagcacccc ccaagatggg 60 aacgtggtcg tcgcatgcct ggtccagggc ttcttccccc caggagccac tcagtgtgac 120 ctggagcgaa agcggacaga acgtgaccgc cagaaacttc ccacctagcc aggatgcctc 180 cggggacctg tacaccacga gcagccagct gaccctgccg gccacacagt gcccagacgg 240 caagtccgtg acatgccacg tgaagcacta cacgaatccc agccaggatg tgactgtgcc 300 ctgccca 307 <210> 115 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IGHA2*01 F H gDNA <400> 115 Val Pro Pro Pro Pro Pro 1 5 <210> 116 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IGHA2*01 F H gDNA <400> 116 gttcccccac ctccccca 18 <210> 117 <211> 101 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IGHA2*01 F CH2 gDNA <400> 117 Cys Cys His Pro Arg Leu Ser Leu His Arg Pro Ala Leu Glu Asp Leu 1 5 10 15 Leu Leu Gly Ser Glu Ala Asn Leu Thr Cys Thr Leu Thr Gly Leu Arg 20 25 30 Asp Ala Ser Gly Ala Thr Phe Thr Trp Thr Pro Ser Ser Gly Lys Ser 35 40 45 Ala Val Gln Gly Pro Pro Glu Arg Asp Leu Cys Gly Cys Tyr Ser Val 50 55 60 Ser Ser Val Leu Pro Gly Cys Ala Gln Pro Trp Asn His Gly Glu Thr 65 70 75 80 Phe Thr Cys Thr Ala Ala His Pro Glu Leu Lys Thr Pro Leu Thr Ala 85 90 95 Asn Ile Thr Lys Ser 100 <210> 118 <211> 303 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IGHA2*01 F CH2 gDNA <400> 118 tgctgccacc cccgactgtc gctgcaccga ccggccctcg aggacctgct cttaggttca 60 gaagcgaacc tcacgtgcac actgaccggc ctgagagatg cctctggtgc caccttcacc 120 tggacgccct caagtgggaa gagcgctgtt caaggaccac ctgagcgtga cctctgtggc 180 tgctacagcg tgtccagtgt cctgcctggc tgtgcccagc catggaacca tggggagacc 240 ttcacctgca ctgctgccca ccccgagttg aagaccccac taaccgccaa catcacaaaa 300 tcc 303 <210> 119 <211> 131 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> IGHA2*01 F CH3-CH3 gDNA <400> 119 Gly Asn Thr Phe Arg Pro Glu Val His Leu Leu Pro Pro Pro Ser Glu 1 5 10 15 Glu Leu Ala Leu Asn Glu Leu Val Thr Leu Thr Cys Leu Ala Arg Gly 20 25 30 Phe Ser Pro Lys Asp Val Leu Val Arg Trp Leu Gln Gly Ser Gln Glu 35 40 45 Leu Pro Arg Glu Lys Tyr Leu Thr Trp Ala Ser Arg Gln Glu Pro Ser 50 55 60 Gln Gly Thr Thr Thr Phe Ala Val Thr Ser Ile Leu Arg Val Ala Ala 65 70 75 80 Glu Asp Trp Lys Lys Gly Asp Thr Phe Ser Cys Met Val Gly His Glu 85 90 95 Ala Leu Pro Leu Ala Phe Thr Gln Lys Thr Ile Asp Arg Leu Ala Gly 100 105 110 Lys Pro Thr His Val Asn Val Ser Val Val Met Ala Glu Val Asp Gly 115 120 125 Thr Cys Tyr 130 <210> 120 <211> 394 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> IGHA2*01 F CH3-CHS gDNA <400> 120 ggaaacacat tccggcccga ggtccacctg ctgccgccgc cgtcggagga gctggccctg 60 aacgagctgg tgacgctgac gtgcctggca cgtggcttca gccccaagga tgtgctggtt 120 cgctggctgc aggggtcaca ggagctgccc cgcgagaagt acctgacttg ggcatcccgg 180 caggagcccc agccagggca ccaccacctt cgctgtgacc agcatactgc gcgtggcagc 240 cgaggactgg aagaaggggg acaccttctc ctgcatggtg ggccacgagg ccctgccgct 300 ggccttcaca cagaagacca tcgaccgctt ggcgggtaaa cccacccatg tcaatgtgtc 360 tgtttgcatg gcggaggtgg acggcacctg ctac 394 <210> 121 <211> 121 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> light chain variable region <400> 121 Gln Ile Val Leu Ser Gln Ser Pro Ala Val Leu Phe Ala Ser Pro Gly 1 5 10 15 Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Arg Ala Arg Ser Ser Val Ser Tyr Met 20 25 30 Asp Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Arg Ser Ser Pro Lys Pro Trp Ile Tyr 35 40 45 Ala Thr Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser 50 55 60 Gly Ser Gly Thr Ser Tyr Ser Leu Thr Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp Thr Ser Asn Pro Pro Thr 85 90 95 Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Ala Asp Ala Ala Pro 100 105 110 Thr Val Ser Ile Phe Pro Pro Ser Ser 115 120

Claims (198)

  1. a. 항원 결합 도메인; 및
    b. 면역글로불린 A(IgA) 중쇄 불변 영역을 포함하는 불변 도메인
    을 포함하는 항체 또는 그의 기능적 단편으로서,
    IgA 중쇄 불변 영역은 IgA CH2 영역 및 IgA CH3 영역을 포함하고;
    IgA 중쇄 불변 영역은 상응하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 적어도 2개의 자연적으로 발생된 글리코실화 부위의 변형을 포함하고,
    적어도 2개의 자연적으로 발생된 글리코실화 부위는 각각 IgA CH2 영역에 또는 IgA CH3 영역에 존재하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  2. 제1항에 있어서, 적어도 2개의 자연적으로 발생된 글리코실화 부위가 2개의 자연적으로 발생된 N 연결된 글리코실화 부위인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 적어도 2개의 자연적으로 발생된 글리코실화 부위가 상응하는 야생형 IgA와 비교하여 자연적으로 발생된 아스파라긴(N) 아미노산 잔기를 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 변형이 적어도 2개의 자연적으로 발생된 글리코실화 부위 중 하나, 또는 그 둘 모두의 아미노산 치환, 또는 아미노산 결실을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  5. 제4항에 있어서, 아미노산 치환이 비보존적 아미노산 치환인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이
    IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여
    i. N114 및 N135,
    ii. N114 및 N15.2, 또는
    iii. N135 및 N15.2
    에 아미노산 치환을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이
    IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여
    i. N114T 아미노산 치환 및 N135Q 아미노산 치환,
    ii. N114T 아미노산 치환 및 N15.2G, N15.2Q, 및 N15.2T로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 치환, 또는
    iii. N135Q 아미노산 치환 및 N15.2G, N15.2Q, 및 N15.2T로 구성된 군으로부터의 아미노산 치환
    을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  8. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이 상응하는 야생형 IgA와 비교하여 적어도 3개의 자연적으로 발생된 글리코실화 부위의 변형을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  9. 제8항에 있어서, 적어도 3개의 자연적으로 발생된 글리코실화 부위가 3개의 자연적으로 발생된 N 연결된 글리코실화 부위인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  10. 제8항 또는 제9항에 있어서, 적어도 3개의 자연적으로 발생된 글리코실화 부위가 상응하는 야생형 IgA와 비교하여 자연적으로 발생된 아스파라긴(N) 아미노산 잔기를 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  11. 제8항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 변형이 아미노산 치환 또는 아미노산 결실인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  12. 제11항에 있어서, 아미노산 치환이 비보존적 치환인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  13. 제8항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 N114, N135, 및 N15.2에 아미노산 치환을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  14. 제8항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이
    IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여
    i. N114T 아미노산 치환,
    ii. N135Q 아미노산 치환, 및
    iii. N15.2G, N15.2Q, 및 N15.2T로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 치환
    을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이 IgA CH1 영역을 추가로 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  16. 제15항에 있어서, 중쇄 불변 영역이 상응하는 야생형 IgA와 비교하여 IgA CH2 영역 중의 적어도 하나의 자연적으로 발생된 N 연결된 글리코실화 부위, IgA CH3 영역 중의 적어도 하나의 자연적으로 발생된 글리코실화 부위, 및 IgA CH1 영역 내의 적어도 하나의 자연적으로 발생된 글리코실화 부위의 변형을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  17. 제15항 또는 제16항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이
    IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여
    i. N45.2, N114, 및 N135, 또는
    ii. N45.2, N15.2, 및 N135
    에 아미노산 치환을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  18. 제17항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이
    IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여
    i. N45.2G 아미노산 치환, N114T 아미노산 치환, 및 N135Q 아미노산 치환; 또는
    ii. N45.2G 아미노산 치환, N135Q 아미노산 치환, 및 N15.2G, N15.2Q, 및 N15.2T로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 치환
    을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  19. 제17항에 있어서, 중쇄 불변 영역이 상응하는 야생형 IgA와 비교하여 IgA CH2 영역 중의 적어도 2개의 자연적으로 발생된 N 연결된 글리코실화 부위, 및 IgA CH1 영역 내의 적어도 하나의 자연적으로 발생된 글리코실화 부위의 변형을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  20. 제19항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이 IMGT 체계에 따라 넘버링하여
    i. N45.2, N114, 및 N15.2G
    에 아미노산 치환을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  21. 제20항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이
    IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여
    i. N45.2G 아미노산 치환,
    ii. N114T 아미노산 치환, 및
    iii. N15.2G, N15.2Q, 및 N15.2T로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 치환
    을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  22. 제1항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 더 큰 순환 반감기를 나타내는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  23. 제1항 내지 제22항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 감소된 응집을 나타내는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  24. 제1항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 혈청 단백질과의 감소된 응집을 나타내는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  25. 제1항 내지 제24항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이 IgG 중쇄 불변 영역을 포함하는 상응하는 항체와 비교하여 증가된 항체 의존성 세포 매개 세포독성을 유도하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  26. 제1항 내지 제25항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 증가된 열안정성을 나타내는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  27. 제1항 내지 제26항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 감소된 글리코실화를 나타내는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  28. 제1항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 증가된 친화도로 면역 이펙터 세포 상에 발현된 FcαR에의 결합을 나타내는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  29. 제1항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이 상응하는 야생형 IgA와 비교하여 적어도 4개의 자연적으로 발생된 글리코실화 부위의 변형을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  30. 제29항에 있어서, 적어도 4개의 자연적으로 발생된 글리코실화 부위가 4개의 자연적으로 발생된 N 연결된 글리코실화 부위인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  31. 제29항 또는 제30항에 있어서, 적어도 4개의 자연적으로 발생된 글리코실화 부위가 자연적으로 발생된 아스파라긴(N) 아미노산 잔기를 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  32. 제29항 내지 제31항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄 불변 영역이 상응하는 야생형 IgA와 비교하여 IgA CH2 영역 내의 적어도 2개의 자연적으로 발생된 N 연결된 글리코실화 부위, IgA CH3 영역 내의 적어도 하나의 자연적으로 발생된 N 연결된 글리코실화 부위, 및 IgA CH1 영역 내의 적어도 하나의 자연적으로 발생된 N 연결된 글리코실화 부위의 변형을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  33. 제29항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이
    IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여
    아미노산 잔기: N45.2, N114, N135, 및 N15.2에 아미노산 치환을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  34. 제29항 내지 제33항 중 어느 한 항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 아미노산 잔기: N45.2, N114, N135, 및 N15.2에 비보존적 아미노산 치환을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  35. 제29항 내지 제34항 중 어느 한 항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이
    IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여
    i. N45.2G 아미노산 치환,
    ii. N114T 아미노산 치환,
    iii. N135Q 아미노산 치환, 및
    iv. N15.2G, N15.2Q, 및 N15.2T로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 치환
    을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  36. 제29항 내지 제35항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이 적어도 하나의 자연적으로 발생된 N 연결된 글리코실화 부위를 포함하는 상응하는 IgA 항체와 비교하여 더 큰 순환 반감기를 나타내는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  37. 제29항 내지 제36항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이 IgG CH2 도메인 및 IgG CH3 도메인을 포함하는 상응하는 항체와 비교하여 증가된 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC)을 유도하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  38. 제29항 내지 제37항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이 적어도 하나의 자연적으로 발생된 N 연결된 글리코실화 부위를 포함하는 상응하는 IgA 항체와 비교하여 증가된 열안정성을 나타내는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  39. 제29항 내지 제38항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이 적어도 하나의 자연적으로 발생된 N 연결된 글리코실화 부위를 포함하는 상응하는 IgA 항체와 비교하여 감소된 글리코실화를 나타내는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  40. 제29항 내지 제39항 중 어느 한 항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이 적어도 하나의 자연적으로 발생된 N 연결된 글리코실화 부위를 포함하는 상응하는 IgA 항체와 비교하여 증가된 친화도로 면역 이펙터 세포 상에 발현된 FcαR에의 결합을 나타내는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  41. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이 상응하는 야생형 IgA와 비교하여 적어도 하나의 자연적으로 발생된 시스테인(C) 아미노산 잔기의 변형을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  42. 제41항에 있어서, 변형이 적어도 하나의 자연적으로 발생된 시스테인(C) 아미노산 잔기의 아미노산 치환 또는 아미노산 결실인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  43. 제42항에 있어서, 아미노산 치환이 적어도 하나의 자연적으로 발생된 시스테인(C) 아미노산 잔기의 비보존적 아미노산 치환인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  44. 제41항 내지 제43항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 자연적으로 발생된 시스테인 아미노산 잔기가, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 C147 또는 C86인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  45. 제44항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 C86S 아미노산 치환을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  46. 제44항 또는 제45항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 C147의 결실을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  47. 제44항 내지 제46항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이 상응하는 WT IgA 항체 또는 그의 기능적 단편과 비교하여 감소된 응집을 나타내는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  48. 제44항 내지 제47항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이 상응하는 WT IgA 구성물과 비교하여 혈청 단백질과의 감소된 응집을 나타내는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  49. 제44항 내지 제48항 중 어느 한 항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이 상응하는 야생형 IgA와 비교하여 적어도 2개의 자연적으로 발생된 시스테인(C) 아미노산 잔기의 변형을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  50. 제49항에 있어서, 변형이 적어도 2개의 자연적으로 발생된 시스테인(C) 아미노산 잔기 중 하나, 또는 그 둘 모두의 아미노산 치환을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  51. 제49항에 있어서, 변형이 적어도 2개의 자연적으로 발생된 시스테인(C) 아미노산 잔기 중 하나, 또는 그 둘 모두의 결실을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  52. 제49항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이 적어도 2개의 자연적으로 발생된 시스테인(C) 아미노산 잔기 중 하나의 아미노산 치환, 및 적어도 2개의 자연적으로 발생된 시스테인(C) 아미노산 잔기 중 하나의 결실을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  53. 제49항 내지 제52항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 2개의 자연적으로 발생된 시스테인 아미노산 잔기가, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 C147 및 C86인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  54. 제53항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 C147의 결실을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  55. 제53항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 C86의 아미노산 치환을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  56. 제53항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 자연적으로 발생된 C86 아미노산 잔기의 아미노산 치환 및 자연적으로 발생된 C147 아미노산 잔기의 결실을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  57. 제56항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 C86S 아미노산 치환을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  58. 제49항 내지 제57항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 감소된 응집을 나타내는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  59. 제49항 내지 제58항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 혈청 단백질과의 감소된 응집을 나타내는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  60. 제1항 내지 제59항 중 어느 한 항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이 상응하는 야생형 IgA와 비교하여 적어도 하나의 자연적으로 발생된 티로신(Y) 아미노산 잔기의 변형을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  61. 제60항에 있어서, 변형이 적어도 하나의 자연적으로 발생된 티로신(Y) 아미노산 잔기의 아미노산 치환 또는 결실인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  62. 제60항에 있어서, 아미노산 치환이 WT IgA 항체와 비교하여 적어도 하나의 자연적으로 발생된 티로신(Y) 아미노산 잔기의 비보존적 아미노산 돌연변이인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  63. 제60항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 티로신 잔기가, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 Y148인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  64. 제63항에 있어서, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 아미노산 Y148이 결실된 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  65. 제60항 내지 제64항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 감소된 응집을 나타내는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  66. 제60항 내지 제65항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 혈청 단백질과의 감소된 응집을 나타내는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  67. 제1항 내지 제66항 중 어느 한 항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이 상응하는 야생형 IgA 항체와 비교하여 적어도 하나의 자연적으로 발생된 트레오닌(T) 아미노산 잔기의 변형을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  68. 제67항에 있어서, 변형이 상응하는 야생형 IgA 항체와 비교하여 적어도 하나의 자연적으로 발생된 트레오닌(T) 아미노산 잔기의 아미노산 치환 또는 결실을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  69. 제68항에 있어서, 아미노산 치환이 적어도 하나의 자연적으로 발생된 트레오닌(T) 아미노산 잔기의 비보존적 아미노산 치환인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  70. 제67항 내지 제69항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 자연적으로 발생된 트레오닌 아미노산 잔기가 IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 T116 또는 T16인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  71. 제67항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 감소된 응집을 나타내는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  72. 제67항 내지 제71항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 혈청 단백질과의 감소된 응집을 나타내는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  73. 제1항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이 상응하는 야생형 IgA와 비교하여 적어도 2개의 자연적으로 발생된 트레오닌(T) 아미노산 잔기의 변형을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  74. 제73항에 있어서, 변형이 적어도 2개의 자연적으로 발생된 트레오닌(T) 아미노산 잔기 중 하나, 또는 그 둘 모두의 아미노산 치환 또는 결실을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  75. 제74항에 있어서, 아미노산 치환이 적어도 2개의 자연적으로 발생된 트레오닌(T) 아미노산 잔기 중 하나, 또는 그 둘 모두의 비보존적 아미노산 치환인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  76. 제73항 내지 제75항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 2개의 자연적으로 발생된 트레오닌(T) 아미노산 잔기가, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 T116 또는 T16인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  77. 제76항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 T116S 아미노산 치환을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  78. 제76항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 T16S 아미노산 치환을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  79. 제1항 내지 제78항 중 어느 한 항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이, 상응하는 야생형 IgA와 비교하여 적어도 하나의 자연적으로 발생된 이소류신(I) 아미노산 잔기의 변형을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  80. 제79항에 있어서, 변형이 적어도 하나의 자연적으로 발생된 이소류신(I) 아미노산 잔기의 아미노산 치환 또는 결실을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  81. 제80항에 있어서, 아미노산 치환이 적어도 하나의 자연적으로 발생된 이소류신(I) 아미노산 잔기의 비보존적 아미노산 치환을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  82. 제79항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 자연적으로 발생된 이소류신(I) 잔기가, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 I115인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  83. 제82항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 I115L 아미노산 치환을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  84. 제1항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이 상응하는 야생형 IgA와 비교하여 적어도 하나의 자연적으로 발생된 류신(L) 아미노산 잔기의 변형을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  85. 제84항에 있어서, 변형이 적어도 하나의 자연적으로 발생된 류신(L) 아미노산 잔기의 아미노산 치환 또는 결실을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  86. 제85항에 있어서, 아미노산 치환이 적어도 하나의 자연적으로 발생된 류신(L) 아미노산 잔기의 비보존적 아미노산 치환인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  87. 제84항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 자연적으로 발생된 류신(L) 잔기가, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 L15.3인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  88. 제87항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1-3의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 L15.3I 아미노산 치환을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  89. 제1항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이 상응하는 야생형 IgA와 비교하여 적어도 하나의 자연적으로 발생된 프롤린(P) 아미노산 잔기의 변형을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  90. 제89항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이 적어도 하나의 자연적으로 발생된 프롤린(P) 아미노산 잔기의 아미노산 치환 또는 결실을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  91. 제89항에 있어서, 아미노산 치환이 적어도 하나의 자연적으로 발생된 프롤린(P) 아미노산 잔기의 비보존적 아미노산 치환인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  92. 제89항 내지 제91항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 하나의 자연적으로 발생된 프롤린(P) 잔기가, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 P124인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  93. 제92항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 P124R 아미노산 치환을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  94. 제89항 내지 제93항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 더 큰 안정성을 나타내는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  95. 제89항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 중쇄와 경쇄 사이에 더 큰 안정성을 나타내는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  96. 제89항 내지 제95항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이 중쇄와 경쇄 사이에 공유 결합을 갖는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  97. 제89항 내지 제96항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이 중쇄의 시스테인(C) 아미노산 잔기와 경쇄의 시스테인(C) 아미노산 잔기 사이에 이황화 결합을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  98. 제1항 내지 제97항 중 어느 한 항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이 서열 번호 16-21 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  99. 제1항 내지 제98항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 알로타입 IgA2m(1) 항체 또는 IgA2m(2)인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  100. 제1항 내지 제99항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 알로타입 코카시안 IgA2m(1) 항체인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  101. 제1항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이 상응하는 야생형 IgA와 비교하여 C-말단 IgA 테일 피스의 변형을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  102. 제1항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 변형이 C-말단 25, 24, 23, 22, 21, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 12, 10, 8, 6, 4, 또는 2개의 아미노산의 결실을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  103. 제1항 내지 제102항 중 어느 한 항에 있어서, 변형이 C-말단 18개의 아미노산의 결실을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  104. 제1항 내지 제103항 중 어느 한 항에 있어서, 변형이, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 C-말단 아미노산 잔기 131-148의 결실을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  105. 제1항 내지 제104항 중 어느 한 항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 C-말단 아미노산 잔기 P131-Y148의 결실을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  106. 제1항 내지 제105항 중 어느 한 항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이 IgA1 CH2 영역 및 IgA1 CH3 영역을 포함하는 IgA1 불변 영역을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  107. 제106항에 있어서, IgA1 불변 영역이 IgA1 CH1 영역을 추가로 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  108. 제1항 내지 제106항 중 어느 한 항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이 IgA2 CH2 영역 및 IgA2 CH3 영역을 포함하는 IgA2 불변 영역을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  109. 제108항에 있어서, IgA2 불변 영역이 IgA2 CH1 영역을 추가로 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  110. 제1항 내지 제109항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이, 항원 결합 도메인, 및 IgG CH2 영역 및 IgG CH3 영역을 포함하는 IgA 중쇄 불변 영역을 포함하는 상응하는 항체의 순환 반감기의 1%, 5%, 10%, 20%, 또는 30% 이내의 순환 반감기를 나타내는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  111. a. 항원 결합 도메인; 및
    b. IgA2 CH1 영역, IgA2 CH2 영역 및 IgA2 CH3 영역을 포함하는 IgA2 중쇄 불변 영역을 포함하는 불변 도메인으로서, IgA2 중쇄 불변 영역이, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 상응하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 N135Q 아미노산 치환을 포함하는 것인 불변 도메인
    을 포함하는 항체 또는 그의 기능적 단편.
  112. 제111항에 있어서, 중쇄 불변 영역이
    IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA2 중쇄 불변 영역과 비교하여
    i. N45.2G 아미노산 치환,
    ii. N114T 아미노산 치환,
    iii. I115L 아미노산 치환,
    iv. T116S 아미노산 치환, 및
    v. N15.2G, N15.2Q, 및 N15.2T로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 치환
    을 추가로 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  113. 제111항 또는 제112항에 있어서, 중쇄 불변 영역이
    IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA2 중쇄 불변 영역과 비교하여
    i. C86S 아미노산 치환,
    ii. P124R 아미노산 치환,
    iii. C147의 결실,
    iv. Y148의 결실,
    v. L15.3I 아미노산 치환,
    vi. T16S 아미노산 치환 또는
    vii.이들의 조합
    을 추가로 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  114. a. 항원 결합 도메인; 및
    b. IgA2 CH2 영역 및 IgA2 CH3 영역을 포함하는 IgA2 중쇄 불변 영역을 포함하는 불변 도메인으로서, IgA2 중쇄 불변 영역이
    IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA2 중쇄 불변 영역과 비교하여
    i. C86S 아미노산 치환,
    ii. N114T 아미노산 치환,
    iii. I115L 아미노산 치환,
    iv. T116S 아미노산 치환, 및
    v. N135Q 아미노산 치환을 포함하는 것인 불변 도메인
    을 포함하는 항체 또는 그의 기능적 단편.
  115. a. 항원 결합 도메인; 및
    b. IgA2 CH1 영역, IgA2 CH2 영역 및 IgA CH3 영역을 포함하는 IgA2 중쇄 불변 영역을 포함하는 불변 도메인으로서, IgA2 중쇄 불변 영역이
    IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA2 중쇄 불변 영역과 비교하여
    i. N45.2G 아미노산 치환,
    ii. C86S 아미노산 치환,
    iii. N114T 아미노산 치환,
    iv. I115L 아미노산 치환,
    v. T116S 아미노산 치환,
    vi. N135Q 아미노산 치환,
    vii. C147의 결실, 및
    viii. Y148의 결실을 포함하는 것인 불변 도메인
    을 포함하는 항체 또는 그의 기능적 단편.
  116. 제115항에 있어서, IgA2 중쇄 불변 영역이 서열 번호 16과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  117. a. 항원 결합 도메인; 및
    b. IgA2 CH1 영역, IgA2 CH2 영역 및 IgA2 CH3 영역을 포함하는 IgA2 중쇄 불변 영역을 포함하는 불변 도메인으로서, IgA2 중쇄 불변 영역이
    IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA2 중쇄 불변 영역과 비교하여
    i. N45.2G 아미노산 치환,
    ii. C86S 아미노산 치환,
    iii. N114T 아미노산 치환,
    iv. I115L 아미노산 치환,
    v. T116S 아미노산 치환, 및
    vi. C-말단 테일 피스의 결실을 포함하는 것인 불변 도메인
    을 포함하는 항체 또는 그의 기능적 단편.
  118. 제117항에 있어서, C-말단 테일 피스의 결실이, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여 C-말단 아미노산 잔기 P131-Y148의 결실을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  119. 제117항 또는 제118항에 있어서, IgA2 중쇄 불변 영역이 서열 번호 17과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  120. a. 항원 결합 도메인; 및
    b. IgA2 CH1 영역, IgA2 CH2 영역 및 IgA2 CH3 영역을 포함하는 IgA2 중쇄 불변 영역을 포함하는 불변 도메인으로서, IgA2 중쇄 불변 영역이
    IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA2 중쇄 불변 영역과 비교하여
    i. N45.2G 아미노산 치환,
    ii. N114T 아미노산 치환,
    iii. I115L 아미노산 치환,
    iv. T116S 아미노산 치환,
    v. N135Q 아미노산 치환,
    vi. N15.2G, N15.2Q, 및 N15.2T로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 치환,
    vii. L15.3I 아미노산 치환, 및
    viii. T16S 아미노산 치환을 포함하는 것인 불변 도메인
    을 포함하는 항체 또는 그의 기능적 단편.
  121. a. 항원 결합 도메인; 및
    b. IgA2 CH1 영역, IgA2 CH2 영역 및 IgA2 CH3 영역을 포함하는 IgA2 중쇄 불변 영역을 포함하는 불변 도메인으로서, IgA2 중쇄 불변 영역이
    IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA2 중쇄 불변 영역과 비교하여
    i.N45.2G 아미노산 치환,
    ii. N114T 아미노산 치환,
    iii. I115L 아미노산 치환,
    iv. T116S 아미노산 치환,
    v. N15.2G, N15.2Q, 및 N15.2T로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 치환,
    vi. L15.3I 아미노산 치환,
    vii. T16S 아미노산 치환, 및
    viii. C-말단 아미노산 P131-Y148의 결실을 포함하는 것인 불변 도메인
    을 포함하는 항체 또는 그의 기능적 단편.
  122. 제121항에 있어서, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA2 중쇄 불변 영역과 비교하여
    i. C86S 아미노산 치환,
    ii. P124R 아미노산 치환,
    iii. C147의 결실,
    iv. Y148의 결실, 또는
    v. 이들의 조합
    을 추가로 포함하는 구성물의 항체.
  123. 제121항 또는 제122항에 있어서, IgA2 중쇄 불변 영역이 서열 번호 18-21 중 어느 하나로부터 선택되는 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  124. 제121항 내지 제123항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이 아글리코실화된 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  125. 제121항 내지 제124항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 야생형 아미노산 잔기 N45.2, N114, I115, T116, N15.2, L15.3, T16, 또는 C-말단 아미노산 잔기 P131-Y148 중 하나 이상을 포함하는 상응하는 IgA보다 증가된 순환 반감기를 갖는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  126. 제121항 내지 제125항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이 IgG 중쇄 불변 도메인을 포함하는 상응하는 항체와 비교하여 증가된 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC)을 유도하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  127. 제121항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 야생형 아미노산 잔기 N45.2, N114, I115, T116, N15.2, L15.3, T16, 또는 C-말단 아미노산 잔기 P131-Y148 중 하나 이상을 포함하는 상응하는 IgA와 비교하여 증가된 열안정성을 나타내는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  128. 제121항 내지 제127항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 야생형 아미노산 잔기 N45.2, N114, I115, T116, N15.2, L15.3, T16, 또는 C-말단 아미노산 잔기 P131-Y148 중 하나 이상을 포함하는 상응하는 IgA와 비교하여 감소된 글리코실화를 나타내는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  129. 제121항 내지 제128항 중 어느 한 항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 야생형 아미노산 잔기 N45.2, N114, I115, T116, N15.2, L15.3, T16, 또는 C-말단 아미노산 잔기 P131-Y148 중 하나 이상을 포함하는 것과 비교하여 증가된 친화도로 면역 이펙터 세포 상에 발현된 FcαR에의 결합을 나타내는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  130. 제1항 내지 제129항 중 어느 한 항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이 힌지 영역을 추가로 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  131. 제130항에 있어서, 힌지 영역이 IgA 힌지 아미노산 서열 또는 그의 변이체 또는 단편을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  132. 제131항에 있어서, 힌지 영역이 인간 IgA 힌지 아미노산 서열 또는 그의 변이체 또는 단편을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  133. 제130항 또는 제131항에 있어서, 힌지가 IgA1 힌지 또는 IgA2 힌지, 또는 그의 변이체 또는 단편인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  134. 제1항 내지 제133항 중 어느 한 항에 있어서, 불변 도메인이 경쇄 불변 영역을 추가로 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  135. 제134항에 있어서, 경쇄 불변 영역이 카파 경쇄 불변 영역이고, 카파 경쇄 불변 영역이 서열 번호 31의 서열을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  136. 제1항 내지 제135항 중 어느 한 항에 있어서, IgA 중쇄 불변 영역이 하나 이상의 알부민 결합 영역을 추가로 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  137. 제136항에 있어서, 하나 이상의 알부민 결합 도메인이 CH3 영역의 C-말단에 융합된 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  138. 제136항에 있어서, 불변 영역이 경쇄 불변 영역을 포함하고, 하나 이상의 알부민 결합 도메인이 경쇄 불변 영역에 융합된 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  139. 제136항 내지 제138항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이 하나 이상의 알부민 결합 도메인을 포함하지 않는 상응하는 IgA 항체와 비교하여 더 큰 순환 반감기를 갖는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  140. 제1항 내지 제139항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이, 적합한 시험관내 보체 의존성 세포독성(CDC) 검정법에서 측정되었을 때, IgG 중쇄 불변 도메인을 포함하는 상응하는 항체와 비교하여 감소된 CDC를 나타내는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  141. 제1항 내지 제140항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이, 적합한 시험관내 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC) 검정법에서 측정되었을 때, 상응하는 WT IgA 항체와 비교하여 증가된 ADCC를 나타내는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  142. 제1항 내지 제141항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 결합 도메인이 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  143. 제142항에 있어서, 중쇄 가변 영역이 상보성 결정 영역(CDR):
    서열 번호 33-40 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR1,
    서열 번호 41-48 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR2; 및
    서열 번호 49-56 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 HC-CDR3
    중 적어도 하나를 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  144. 제142항 또는 제143항에 있어서, 경쇄 가변 영역이 상보성 결정 영역(CDR):
    서열 번호 57-64 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR1;
    서열 번호 65-72 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR2; 및
    서열 번호 73-80 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 LC-CDR3
    중 적어도 하나를 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  145. 제142항 내지 제144항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄 가변 영역이 서열 번호 4, 7, 81-86 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 서열을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  146. 제142항 내지 제145항 중 어느 한 항에 있어서, 경쇄 가변 영역이 서열 번호 5, 8, 95-100 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열과 적어도 95%의 동일성을 갖는 서열을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  147. 제143항 내지 제146항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄 및 경쇄 CDR이 각각 IgG 항체로부터 유래된 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  148. 제142항 내지 제147항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄 가변 영역이 4개의 프레임워크 영역(FW): HC-FW1, HC-FW2, HC-FW3, 및 HC-FW4를 추가로 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  149. 제142항 내지 제148항 중 어느 한 항에 있어서, 경쇄 가변 영역이 4개의 프레임워크 영역(FW): LC-FW1, LC-FW2, LC-FW3, 및 LC-FW4를 추가로 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  150. 제148항 또는 제149항에 있어서, 중쇄 및 경쇄 FW 영역이 각각 IgG 항체로부터 유래된 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  151. 제148항 또는 제149항에 있어서, 각각의 중쇄 및 경쇄 FW 영역이 IgA 항체로부터 유래된 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  152. 제1항 내지 제150항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이 인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  153. 키메라 항체, 중쇄 항체, 단일 쇄 항체, 인간화 항체, 인간 항체, 단일클론 항체, 탈면역화된 항체, 이중특이적 항체, 다중특이적 항체, 다가 항체 또는 이들의 조합인 항체.
  154. 제1항 내지 제152항 중 어느 한 항에 있어서, 항원 결합 단편이 Fab, Fab', Fab'-SH, Fv, scFv, F(ab')2, 디아바디, 선형 항체, 단일 도메인 항체(sdAb), 카멜리드 VHH 도메인, 또는 항체 단편으로부터 형성된 다중특이적 항체를 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  155. 제1항 내지 제153항 중 어느 한 항에 있어서, 가변 도메인이 GD2, CD20, CD47, CD38, CD19, EGFR, HER2, PD-L1, 또는 CD25에 특이적으로 결합하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  156. 제1항 내지 제154항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이 효소, 기질, 보조인자, 형광성 마커, 화학발광성 마커, 펩티드 태그, 자기 입자, 약물, 독소, 방사성핵종, 2차 항체에의 결합 부위, 금속 결합 도메인, 또는 이들의 조합을 추가로 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  157. 제1항 내지 제155항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 기능적 단편, 및 약제학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물.
  158. 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 용량의, 제1항 내지 제155항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 기능적 단편, 또는 제156항의 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 치료를 필요로 하는 대상체를 치료하는 방법.
  159. 제156항 또는 제157항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편 또는 약제학적 조성물이 표적 세포에 대해 세포용해성인 방법.
  160. 제158항에 있어서, 표적 세포가 암 세포인 방법.
  161. 제157항 내지 제159항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편 또는 약제학적 조성물이 종양 성장을 억제시키는 것인 방법.
  162. 제157항 내지 제160항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편 또는 약제학적 조성물을 피하, 정맥내, 피내, 복강내, 경구, 근육내 또는 두개내로 투여하는 것인 방법.
  163. 제157항 내지 제161항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편 또는 약제학적 조성물을 제2 치료제와 함께 조합하여 대상체에게 투여하는 것인 방법.
  164. 제162항에 있어서, 제2 치료제가 항암제, 화학요법제, 방사선 요법, 세포독성제, NSAID, 코르티코스테로이드, 식이 보충제 예컨대 항산화제, 또는 이들의 조합을 포함하는 것인 방법.
  165. 제162항 또는 제163항에 있어서, 제2 치료제를 항체 또는 그의 기능적 단편 또는 약제학적 조성물의 투여 이전에, 동시에, 또는 이후에 투여하는 것인 방법.
  166. 제1항 내지 제155항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 기능적 단편을 코딩하는 단리된 핵산.
  167. 중쇄 폴리펩티드를 코딩하는 단리된 핵산 분자로서, 단리된 핵산 분자는 IgA 중쇄 불변 영역을 코딩하는 제1 핵산 서열을 포함하고, 제1 핵산 서열은 서열 번호 25-32 중 어느 하나로부터 선택되는 것인, 단리된 핵산 분자.
  168. 제166항에 있어서, 가변 중쇄 영역을 코딩하는 제2 핵산 서열을 추가로 포함하고, 제2 핵산 서열이 서열 번호 87-84 중 어느 하나로부터 선택되는 것인, 단리된 핵산 분자.
  169. 제165항 내지 제167항 중 어느 한 항의 단리된 핵산 분자를 포함하는 벡터.
  170. 제165항 내지 제167항 중 어느 한 항의 단리된 핵산 분자를 포함하는 숙주 세포.
  171. 제169항에 있어서, 경쇄 폴리펩티드를 코딩하는 단리된 핵산 분자를 추가로 포함하고, 경쇄 폴리펩티드를 코딩하는 단리된 핵산 분자는 가변 경쇄 영역을 코딩하는 핵산 서열을 포함하며, 여기서, 핵산 서열이 서열 번호 101-108 중 어느 하나로부터 선택되는 것인 숙주 세포.
  172. 제170항에 있어서, 경쇄 폴리펩티드를 코딩하는 단리된 핵산 분자가 카파 경쇄 불변 영역을 코딩하는 핵산 서열을 추가로 포함하고, 여기서, 핵산 서열이 서열 번호 32의 서열을 포함하는 것인 숙주 세포.
  173. 제1항 내지 제155항 중 어느 한 항의 항체 또는 그의 기능적 단편을 발현하는 숙주 세포.
  174. 제169항 내지 제172항 중 어느 한 항에 있어서, 숙주 세포가 박테리아 세포 또는 포유동물 세포인 숙주 세포.
  175. 제173항에 있어서, 숙주 세포가 CHO 세포, 또는 HEK293 세포인 숙주 세포.
  176. (a) 제169항 내지 제174항 중 어느 한 항의 숙주 세포를, 단리된 핵산 분자에 의해 코딩되는 폴리펩티드의 발현 및 항체 또는 그의 기능적 단편의 어셈블리를 허용하는 조건하에 배지 중에서 배양하는 단계; 및
    (b) 배양된 숙주 세포, 또는 숙주 세포의 배지로부터 항체 또는 그의 기능적 단편을 정제하는 단계
    를 포함하는, 항체 또는 그의 기능적 단편을 제조하는 방법.
  177. 제175항에 있어서, 정제가 크기 배제 크로마토그래피에 의한 것인 방법.
  178. CD20 폴리펩티드 또는 그의 변이체에 선택적으로 결합하는 항체 또는 그의 기능적 단편으로서,
    (a) 서열 번호 16-21 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 IgA 중쇄 불변 영역; 및
    (b) 서열 번호 33의 상보성 결정 영역 중쇄 1(HC-CDR1), 서열 번호 41의 HC-CDR2, 및 서열 번호 49의 HC-CDR3 중 적어도 하나를 포함하는 가변 중쇄 영역;
    (c) 서열 번호 57의 상보성 결정 영역 경쇄 1(LC-CDR1), 서열 번호 65의 LC-CDR2, 및 서열 번호 73의 LC-CDR3 중 적어도 하나를 포함하는 가변 경쇄 영역; 또는
    (d) (b)의 가변 중쇄 및 (c)의 가변 경쇄
    를 포함하는 상기 항체 또는 그의 기능적 단편.
  179. 제177항에 있어서, 가변 중쇄가 서열 번호 81의 아미노산 서열과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함하고, 가변 경쇄가 서열 번호 95의 아미노산 서열과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  180. GD2 단백질 또는 그의 변이체에 선택적으로 결합하는 항체 또는 그의 기능적 단편으로서,
    (a) 서열 번호 16-21 중 어느 하나로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 IgA 중쇄 불변 영역; 및
    (b) 서열 번호 34의 상보성 결정 영역 중쇄 1(HC-CDR1), 서열 번호 42의 HC-CDR2, 및 서열 번호 50의 HC-CDR3 중 적어도 하나를 포함하는 가변 중쇄 영역;
    (c) 서열 번호 58의 상보성 결정 영역 경쇄 1(LC-CDR1), 서열 번호 66의 LC-CDR2, 및 서열 번호 74의 LC-CDR3 중 적어도 하나를 포함하는 가변 경쇄 영역; 또는
    (d) (b)의 가변 중쇄 및 (c)의 가변 경쇄
    를 포함하는 상기 항체 또는 그의 기능적 단편.
  181. 제180항에 있어서, 가변 중쇄가 서열 번호 4의 아미노산 서열과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함하고, 가변 경쇄가 서열 번호 5의 아미노산 서열과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  182. Her2 단백질 또는 그의 변이체에 선택적으로 결합하는 항체 또는 그의 기능적 단편으로서,
    (a) 서열 번호 16-21로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 IgA 중쇄 불변 영역; 및
    (b) 서열 번호 35의 상보성 결정 영역 중쇄 1(HC-CDR1), 서열 번호 43의 HC-CDR2, 및 서열 번호 51의 HC-CDR3 중 적어도 하나를 포함하는 가변 중쇄 영역;
    (c) 서열 번호 59의 상보성 결정 영역 경쇄 1(LC-CDR1), 서열 번호 67의 LC-CDR2, 및 서열 번호 75의 LC-CDR3 중 적어도 하나를 포함하는 가변 경쇄 영역; 또는
    (d) (b)의 가변 중쇄 및 (c)의 가변 경쇄
    를 포함하는 상기 항체 또는 그의 기능적 단편.
  183. 제182항에 있어서, 가변 중쇄가 서열 번호 82의 아미노산 서열과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함하고, 가변 경쇄가 서열 번호 96의 아미노산 서열과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  184. gp75 단백질 또는 그의 변이체에 선택적으로 결합하는 항체 또는 그의 기능적 단편으로서,
    (a) 서열 번호 16-21로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 IgA 중쇄 불변 영역; 및
    (b) 서열 번호 36의 상보성 결정 영역 중쇄 1(HC-CDR1), 서열 번호 44의 HC-CDR2, 및 서열 번호 52의 HC-CDR3 중 적어도 하나를 포함하는 가변 중쇄 영역;
    (c) 서열 번호 60의 상보성 결정 영역 경쇄 1(LC-CDR1), 서열 번호 68의 LC-CDR2, 및 서열 번호 76의 LC-CDR3 중 적어도 하나를 포함하는 가변 경쇄 영역; 또는
    (d) (b)의 가변 중쇄 및 (c)의 가변 경쇄
    를 포함하는 상기 항체 또는 그의 기능적 단편.
  185. 제184항에 있어서, 가변 중쇄가 서열 번호 83의 아미노산 서열과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함하고, 가변 경쇄가 서열 번호 97의 아미노산 서열과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  186. CTLA4 단백질 또는 그의 변이체에 선택적으로 결합하는 항체 또는 그의 기능적 단편으로서,
    (a) 서열 번호 16-21로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 IgA 중쇄 불변 영역; 및
    (b) 서열 번호 37의 상보성 결정 영역 중쇄 1(HC-CDR1), 서열 번호 45의 HC-CDR2, 및 서열 번호 53의 HC-CDR3 중 적어도 하나를 포함하는 가변 중쇄 영역;
    (c) 서열 번호 61의 상보성 결정 영역 경쇄 1(LC-CDR1), 서열 번호 69의 LC-CDR2, 및 서열 번호 77의 LC-CDR3 중 적어도 하나를 포함하는 가변 경쇄 영역; 또는
    (d) (b)의 가변 중쇄 및 (c)의 가변 경쇄
    를 포함하는 상기 항체 또는 그의 기능적 단편.
  187. 제186항에 있어서, 가변 중쇄가 서열 번호 84의 아미노산 서열과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함하고, 가변 경쇄가 서열 번호 98의 아미노산 서열과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  188. CD47 단백질 또는 그의 변이체에 선택적으로 결합하는 항체 또는 그의 기능적 단편으로서,
    (a) 서열 번호 16-21로부터 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 IgA 중쇄 불변 영역; 및
    (b) 서열 번호 38의 상보성 결정 영역 중쇄 1(HC-CDR1), 서열 번호 46의 HC-CDR2, 및 서열 번호 54의 HC-CDR3 중 적어도 하나를 포함하는 가변 중쇄 영역;
    (c) 서열 번호 62의 상보성 결정 영역 경쇄 1(LC-CDR1), 서열 번호 70의 LC-CDR2, 및 서열 번호 78의 LC-CDR3 중 적어도 하나를 포함하는 가변 경쇄 영역; 또는
    (d) (b)의 가변 중쇄 및 (c)의 가변 경쇄
    를 포함하는 상기 항체 또는 그의 기능적 단편.
  189. 제188항에 있어서, 가변 중쇄가 서열 번호 85의 아미노산 서열과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함하고, 가변 경쇄가 서열 번호 99의 아미노산 서열과 적어도 95%의 서열 동일성을 갖는 폴리펩티드 서열을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  190. a. 항원 결합 도메인; 및
    b. IgA2 CH1 영역, IgA2 CH2 영역 및 IgA2 CH3 영역을 포함하는 IgA2 중쇄 불변 영역을 포함하는 불변 도메인으로서, IgA2 중쇄 불변 영역이
    IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA2 중쇄 불변 영역과 비교하여
    i. N45.2G 아미노산 치환,
    ii. N135Q 아미노산 치환,
    iii. C147의 결실, 및
    iv. Y148의 결실을 포함하는 것인 불변 도메인
    을 포함하는 항체 또는 그의 기능적 단편.
  191. a. 항원 결합 도메인; 및
    b. IgA2 CH1 영역, IgA2 CH2 영역 및 IgA2 CH3 영역을 포함하는 IgA2 중쇄 불변 영역을 포함하는 불변 도메인으로서, IgA2 중쇄 불변 영역이
    IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여
    i. N45.2G 아미노산 치환,
    ii. N114T 아미노산 치환,
    iii. I115L 아미노산 치환,
    iv. T116S 아미노산 치환,
    v. N15.2G, N15.2Q, 및 N15.2T로 구성된 군으로부터 선택되는 아미노산 치환, 및
    vi. C-말단 아미노산 P131-Y148의 결실을 포함하는 것인 불변 도메인
    을 포함하는 항체 또는 그의 기능적 단편.
  192. 제191항에 있어서, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 서열 번호 1의 아미노산 서열을 포함하는 WT IgA 중쇄 불변 영역과 비교하여
    i. C86S 아미노산 치환,
    ii. P124R 아미노산 치환,
    iii. C147의 결실,
    iv. Y148의 결실,
    v. L15.3I 아미노산 치환,
    vi. T16S 아미노산 치환 또는
    vii. 이들의 조합
    을 추가로 포함하는 구성물의 항체.
  193. 제191항 또는 제192항에 있어서, IgA2 중쇄 불변 영역이 서열 번호 18-21 중 어느 하나로부터 선택되는 서열과 적어도 95% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  194. 제191항 내지 제194항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이 아글리코실화된 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  195. 제191항 내지 제194항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이, IMGT 체계에 따라 넘버링하여 야생형 아미노산 잔기 N45.2, N114, I115, T116, N15.2, 또는 C-말단 아미노산 잔기 P131-Y148 중 하나 이상을 포함하는 상응하는 IgA보다 증가된 순환 반감기를 갖는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  196. 제121항 내지 제125항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이 IgG 중쇄 불변 도메인을 포함하는 상응하는 항체와 비교하여 증가된 항체 의존성 세포 매개 세포독성(ADCC)을 유도하는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  197. 제121항 내지 제126항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, IMGT 체계에 따라 넘버링하여 야생형 아미노산 잔기 N45.2, N114, I115, T116, N15.2, 또는 C-말단 아미노산 잔기 P131-Y148 중 하나 이상을 포함하는 상응하는 IgA와 비교하여 증가된 열안정성을 나타내는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
  198. 제121항 내지 제127항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 그의 기능적 단편이, IMGT 체계에 따라 넘버링하여, 야생형 아미노산 잔기 N45.2, N114, I115, T116, N15.2, 또는 C-말단 아미노산 잔기 P131-Y148 중 하나 이상을 포함하는 상응하는 IgA와 비교하여 감소된 글리코실화를 나타내는 것인, 항체 또는 그의 기능적 단편.
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