KR20240021959A - 항개 cd20 항체 - Google Patents

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KR20240021959A
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앨런 브래들리
다니엘 볼랜드
쥐에쉬안 왕
루차 비제이 수타바니
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펫메딕스 리미티드
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Abstract

본 발명은 개 CD20에 결합하는 항체 및 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다. 또한, 본 발명은 개 대상체에서 B 세포에 의해 매개되는 병태를 치료하기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다.

Description

항개 CD20 항체
개(canine) 림프종은 개에서 진단되는 가장 일반적인 암 중 하나로 전체 암의 약 7 내지 14%를 차지한다. 인간과 마찬가지로, 개 림프종에도 상이한 유형이 있으며 빠르게 진행되는 암부터 만성 질환까지 다양하다.
CD20은 B 세포 증식 및 분화 조절에 관여하는 것으로 생각되는 세포 표면 단백질이다. 항원은 4개의 막관통 영역을 포함하며 정상 및 악성 B 세포 모두 거의 모든 B 세포의 표면상에 존재한다.
리툭시맙(rituximab)과 같이 인간 CD20을 인식하는 인간 항체는 과도한 수의 B 세포 또는 과다활성 또는 기능장애 B 세포를 특징으로 하는 인간 질환을 치료하기 위해 사용된다. 이러한 항체는 B 세포를 파괴한다. 리툭시맙은 B 세포 림프종 치료의 혁명적인 발전으로 간주된다.
20년 전 인간을 위한 리툭시맙과 같은 항체가 개발된 이후 개 CD20을 인식하는 수많은 항체가 문헌으로 보고되었다. 그러나 현재로서는 일반적으로 임상적으로 사용되는 것은 없다. 따라서 여전히 상이한 요법이 필요하다. 본 발명은 이러한 필요를 해결하는 것을 목표로 한다.
제1 양태에서, 본 발명은 개 CD20에 결합하는 단리된 개 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이며, 상기 항체는
a) 서열번호 27 또는 서열번호 27과 비교하여 1개 또는 2개의 아미노산 차이를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열,
b) 서열번호 28 또는 서열번호 28과 비교하여 1개, 2개, 3개 또는 4개의 아미노산 차이를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열,
c) 서열번호 29 또는 서열번호 29와 비교하여 1개 또는 2개의 아미노산 차이를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열,
d) 서열번호 30 또는 서열번호 30과 비교하여 1개의 아미노산 차이를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열,
e) 서열번호 31 또는 서열번호 31과 비교하여 1개의 아미노산 차이를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및
f) 서열번호 32 또는 서열번호 32와 비교하여 1개 또는 2개의 아미노산 차이를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 포함한다.
본 발명의 다른 양태에서 또는 제1 양태의 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 7을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 8을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 9를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 10을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 11을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열 및 서열번호 12를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열을 갖는다.
본 발명의 다른 양태에서 또는 제1 양태의 실시양태에서, 항체는 서열번호 17을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 18을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 19를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 20을 포함하는 LC CDR1 서열, 서열번호 21을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 22를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
본 발명의 다른 양태에서 또는 제1 양태의 실시양태에서, 항체는 서열번호 37을 포함하는 HC CDR1 서열, 서열번호 38을 포함하는 HC CDR2 서열, 서열번호 39를 포함하는 HC CDR3 서열, 서열번호 40을 포함하는 LC CDR1 서열, 서열번호 41을 포함하는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 42를 포함하는 LC CDR3 서열을 갖는다.
본 발명의 다른 양태에서 또는 제1 양태의 실시양태에서, 항체는 서열번호 47을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 48을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 49를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 50을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 51을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 52를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
본 발명의 다른 양태에서 또는 제1 양태의 실시양태에서, 항체는 서열번호 82를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 83을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 84를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 85를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 86을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 87을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
본 발명의 다른 양태에서 또는 제1 양태의 실시양태에서, 항체는 서열번호 92를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 93을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 94를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 95를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 96을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 97을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
본 발명의 다른 양태에서 또는 제1 양태의 실시양태에서, 항체는 서열번호 102를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 103을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 104를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 105를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 106을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 107을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
본 발명의 다른 양태에서 또는 제1 양태의 실시양태에서, 항체는 서열번호 112를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 113을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 114를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 115를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 116을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 117을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
본 발명의 다른 양태에서 또는 제1 양태의 실시양태에서, 항체는 서열번호 122를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 123을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 124를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 125를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 126을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 127을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
본 발명의 다른 양태에서 또는 제1 양태의 실시양태에서, 항체는 서열번호 132를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 133을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 134를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 135를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 136을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 137을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
본 발명의 다른 양태에서 또는 제1 양태의 실시양태에서, 항체는 서열번호 142를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 143을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 144를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 145를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 146을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 147을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
본 발명의 다른 양태에서 또는 제1 양태의 실시양태에서, 항체는 서열번호 152를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 153을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 154를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 155를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 156을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 157을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
본 발명의 다른 양태에서 또는 제1 양태의 실시양태에서, 항체는 서열번호 162를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 163을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 164를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 165를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 166을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 167을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
본 발명의 다른 양태에서 또는 제1 양태의 실시양태에서, 항체는 서열번호 172를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 173을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 174를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 175를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 176을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 177을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
본 발명의 다른 양태에서 또는 제1 양태의 실시양태에서, 항체는 서열번호 182를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 183을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 184를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 185를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 186을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 187을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
본 발명의 다른 양태에서 또는 제1 양태의 실시양태에서, 항체는 서열번호 192를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 193을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 194를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 195를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 196을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 197을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
본 발명의 다른 양태에서 또는 제1 양태의 실시양태에서, 항체는 서열번호 202를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 203을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 204를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 205를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 206을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 207을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
본 발명의 다른 양태에서 또는 제1 양태의 실시양태에서, 상기 항체는 서열번호 212를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 213을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 214를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 215를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 216을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 217을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
본 발명의 다른 양태에서 또는 제1 양태의 실시양태에서, 항체는 서열번호 222를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 223을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 224를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 225를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 226을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 227을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
본 발명의 다른 양태에서 또는 제1 양태의 실시양태에서, 항체는 서열번호 232를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 233을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 234를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 235를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 236을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 237을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 24 또는 이에 대해 적어도 75%, 80%, 85% 또는 90% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 26 또는 이에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 LC 가변 영역 서열을 포함한다.
예를 들어, 항체 및 이의 항원 결합 부분은
a) 서열번호 4를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 6을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
b) 서열번호 14를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 16을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
c) 서열번호 34를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 36을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
d) 서열번호 44를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 46을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
e) 서열번호 79를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 81을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 서열번호 238을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
f) 서열번호 89를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 91을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 서열번호 239를 포함하는 LC 가변 영역 서열;
g) 서열번호 99를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 101을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 서열번호 240을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
h) 서열번호 109를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 111을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 서열번호 241을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
i) 서열번호 119를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 121을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
j) 서열번호 129를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 131을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 서열번호 242를 포함하는 LC 가변 영역 서열;
k) 서열번호 139를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 141을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 서열번호 243을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
l) 서열번호 149를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 151을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 서열번호 244를 포함하는 LC 가변 영역 서열;
m) 서열번호 159를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 161을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 서열번호 245를 포함하는 LC 가변 영역 서열;
n) 서열번호 169를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 171을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
o) 서열번호 179를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 181을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 서열번호 246을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
p) 서열번호 189를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 191을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 서열번호 247을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
q) 서열번호 199를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 201을 포함하는 LC 가변 영역 서열 서열번호 248을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
r) 서열번호 209를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 211을 포함하는 LC 가변 영역 서열 서열번호 249를 포함하는 LC 가변 영역 서열;
s) 서열번호 219를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 221을 포함하는 LC 가변 영역 서열; 또는
t) 서열번호 229를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 231을 포함하는 LC 가변 영역 서열 서열번호 250을 포함하는 LC 가변 영역 서열을 갖는다.
예를 들어, 이의 항원 결합 부분은 scFv, Fv, 중쇄 또는 단일 도메인 항체이다.
또한, 본 발명은 위에서 설명되는 항체 또는 이의 항원 결합 부분과 경쟁하는 개 CD20에 결합하는 단리된 개 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 치료 부분에 접합된다.
예를 들어, 치료 부분은 제2 항체 또는 이의 항원 결합 부분이다.
예를 들어, 제2 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 상이한 표적에 결합한다.
예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 반감기 연장 부분, 표지, 세포독소, 리포솜, 나노입자 또는 방사성 동위원소로부터 선택된 추가 부분에 접합된다.
예를 들어, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 a-푸코실화된다.
또한, 본 발명은 위에서 설명되는 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 B 세포에 의해 매개되는 병태의 치료를 필요로 하는 개 대상체에서 B 세포에 의해 매개되는 병태를 치료하는 방법으로서, 유효량의 위에서 설명되는 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 위에서 설명되는 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함한다.
예를 들어, B 세포에 의해 매개되는 병태는 B 세포 림프종 또는 백혈병이다.
예를 들어, B 세포에 의해 매개되는 병태는 면역 매개 질환이다.
예를 들어, 면역 매개 질환은 자가면역 질환이다.
예를 들어, 다른 치료제가 대상체에게 별도로 투여될 수 있다.
예를 들어, 치료제는 세포독성제 또는 방사성독성제이다.
예를 들어, 치료제는 면역억제제이다.
예를 들어, 치료제는 사이토카인 또는 케모카인과 같은 면역학적 조절제이다.
또한, 본 발명은 질환의 치료에 사용하기 위한 위에서 설명되는 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 위에서 설명되는 약제학적 조성물에 관한 것이다.
예를 들어, 질환은 B 세포에 의해 매개되는 질환이다.
예를 들어, B 세포에 의해 매개되는 질환은 B 세포 림프종 또는 백혈병이다.
예를 들어, B 세포에 의해 매개되는 질환은 면역 매개 질환이다.
예를 들어, 면역 매개 질환은 자가면역 질환이다.
또한, 본 발명은 종양 성장 또는 전이를 억제하는 방법에 관한 것이며, 이는 종양 세포를 유효량의 위에서 설명되는 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 위에서 설명되는 약제학적 조성물과 접촉시키는 단계를 포함한다.
또한, 본 발명은 CD20을 발현하는 종양 세포를 사멸시키는 방법에 관한 것이며, 이는 세포를 위에서 설명되는 항체 또는 위에서 설명되는 약제학적 조성물과 접촉시켜 CD20을 발현하는 세포의 사멸을 발생시키는 단계를 포함한다.
예를 들어, 종양 세포는 개 종양 세포이다.
또한, 본 발명은 위에서 설명되는 항체 또는 이의 항체 항원 결합 부분을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다.
예를 들어, 핵산 서열은 서열 번호: 3, 5, 13, 15, 23, 25, 33, 35, 43, 45, 78, 80, 88, 90, 98, 100, 108, 110, 118, 120, 128, 130, 138, 140, 148, 150, 158, 160, 168, 170, 178, 180, 188, 190, 198, 200, 208, 210, 218, 220, 228, 230, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 270,271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300 또는 301로부터 선택되는 서열을 포함한다.
또한, 본 발명은 위에서 설명되는 핵산 서열을 포함하는 벡터에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 위에서 설명되는 핵산 서열 또는 위에서 설명되는 벡터를 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 위에서 설명되는 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 위에서 설명되는 약제학적 조성물을 포함하는 키트에 관한 것이다.
예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 검출하기 위한 시약을 추가로 포함한다.
또한, 본 발명은 위에서 설명되는 단리된 숙주 세포를 배양하는 단계 및 상기 항체를 회수하는 단계를 포함하는 CD20에 결합하는 개 항체를 제조하는 방법에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 CD20에 결합하는 개 항체를 제조하는 방법에 관한 것이며, 이는
a) 개 중쇄 V 유전자 및 개 경쇄 V 유전자를 포함하는 핵산 구축물을 발현하는 이식유전자 마우스를 CD20 항원으로 면역화시키는 단계,
b) 항체 라이브러리를 상기 마우스로부터 생성하는 단계, 및
c) 항체를 상기 라이브러리로부터 단리하는 단계를 포함한다.
또한 본 발명은 개 대상체로부터 유래한 생물학적 검체에서 CD20 단백질 또는 CD20 단백질의 세포외 도메인을 검출하는 방법에 관한 것이며, 이는 생물학적 검체를 본원에서 설명되는 항체 또는 이의 항원 결합 부분과 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 검출 가능한 표지에 연결된다.
예를 들어, 생물학적 검체는 생검, 조직, 혈액, 혈청, 혈장 또는 림프액 검체이다.
또한, 본 발명은 에피토프에서 개와 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이며, 이는 에피토프가 다음의 아미노산 잔기 ENLNLIKAPM(서열번호 303, 서열번호 2의 아미노산 번호 150 내지 159) 중 하나 이상, 예를 들어, 1개 내지 10개, 예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개의 아미노 잔기를 포함하거나 이로 구성된다.
본 발명은 다음의 비제한적인 도면에서 더 설명된다.
도 1. 개 CD20 면역화 Ky9 마우스의 항체 역가. 면역화 후 혈청을 (나타낸 바와 같이) 연속적으로 희석하였고 개 CD20 발현 세포에 첨가하였다. 이후, 세포를 형광단 접합 항마우스 IgG1, IgG2a, IgG2b 2차 항체와 함께 배양하였고 검체를 유세포 분석기에서 평가하였다. 개 CD20 발현 세포에 대한 면역화 전 혈청의 결합은 플롯에서 배경선으로 제시된다.
도 2. (A) PMX001, PMX002, PMX003, PMX004 및 PMX005 mAb의 가변 영역의 아미노산 서열 정렬. 음영은 mAb의 중쇄(HC) 및 경쇄(LC) 서열 모두에 있는 CDR1, CDR2 및 CDR3 영역을 나타낸다. (B) mAb의 HC 및 LC 가변 영역의 아미노산 서열 정렬. 상자는 mAb의 중쇄(HC) 및 경쇄(LC) 서열 모두에 있는 CDR1, CDR2 및 CDR3 영역을 나타낸다.
도 3. 유세포 분석법을 사용한 항개(anti canine) CD20 mAb의 결합 평가. PMX001, PMX002, PMX003, PMX004, PMX005, 1E4-cIGGB, 4E1-7-cIGGB(A 참조) 및 PMX006, PMX007, PMX008, PMX009, PMX010, PMX011(B 참조) 및 PMX003, PMX066, PMX067, PMX069, PMX070, PMX071, PMX072, PMX073, PMX074, PMX075, PMX076, PMX077, PMX078, PMX079, PMX080, PMX081, 1E4-cIGGB, 4E1-7-cIGGB(C 참조)를 10 μg/ml로 cCD20 발현 MDCK II 세포에 적용하였다. 리툭시맙-cIGGB(회색 음영)를 동종형 대조군으로서 사용하였으며 각각의 플롯에 제시하였다. (D) PMX003, PMX115 및 PMX070 mAb의 친화도 결정. cCD20 발현 MDCK II 세포에 대한 1:2 연속 희석 항체의 결합을 결합 검정으로 평가하였고 형광단 신호의 평균 값을 결정하였다. 평균 형광 강도(MFI) 대 농도의 플롯을 사용하여 비선형 회귀 분석을 사용하여 결합의 EC50을 결정하였으며, 이는 세포 표면 발현 개 CD20에 결합하는 항체의 겉보기 Kd이다.
도 4. 항개 CD20 항체의 CDC 활성. 항체의 천연 및 a-푸코실화 형식을 모두 CDC 검정에서 다양한 농도(나타낸 바와 같음)로 분석하였다. 리툭시맙-cIGGB 키메라 항체를 "동종형 대조군"으로 사용하였다. "F"는 항체의 a-푸코실화 형식을 지칭한다.
도 5. 항개 CD20 항체의 ADCC 활성. 항체의 천연 및 a-푸코실화 형식을 모두 ADCC 검정에서 다양한 농도(나타낸 바와 같음)로 분석하였다. 리툭시맙-cIGGB 키메라 항체를 "동종형 대조군"으로 사용하였다. "F"는 항체의 a-푸코실화 형식을 지칭한다. 또한, EC50 값을 각각의 항체에 대하여 제시하였다.
도 6. 개 전혈에 있는 항개 CD20 mAb의 B 세포 고갈 효율. 새로 채혈한 개 전혈을 배양 배지로 희석하였으며 10 μg/ml의 PMX001, PMX003, 1E4-cIGGB, 4E1-7-cIGGB(A 참조), 천연 또는 a-푸코실화 형식의 PMX003 및 4E1-7-cIGGB 항체(B 참조), PMX003, PMX006, PMX007, PMX008, PMX009, PMX010, PMX011(C 참조)와 함께 또는 항체 없이 24시간 동안 배양하였다. 리툭시맙-cIGGB를 "동종형 대조군"(Iso Ctrl)으로 사용하였다. "F"는 항체의 a-푸코실화 형식을 지칭한다.
도 7. 건강한 비글에서 항개 CD20 mAb의 B 세포 고갈 효율. (A 내지 B) 각각의 시험군에 대하여 3마리의 건강한 비글에게 다음 항체를 정맥내 투여로 투여하였다: 동종형 대조군(리툭시맙-cIgGB, 2.5 mg/kg), 저용량의 PMX003(0.5 mg/kg), 고용량의 PMX003(2.5 mg/kg) 및 저용량의 a-푸코실화 PMX003(0.5 mg/kg). "F"는 항체의 a-푸코실화　형식을 지칭한다. 림프구에 있는 CD21+ B 세포(A) 및 CD8+ T 세포(B)의 백분율을 0, 1, 2, 5, 7, 15, 27 및 43일차에 유세포 분석법을 사용하여 분석하였다. 여기에 나타낸 데이터는 네 가지 기술적 반복을 대표한다. (C) 각각의 시험군에 대하여 3마리의 건강한 비글에게 다음 항체를 정맥내 투여로 투여하였다: 동종형 대조군(리툭시맙-cIgGB, 2 mg/kg), 저용량의 PMX115(0.5 mg/kg), 고용량의 PMX115(2 mg/kg), 저용량의 PMX070(0.5 mg/kg) 및 고용량의 PMX070 (2 mg/kg). 림프구에 있는 CD21+ B 세포의 백분율을 0, 1, 4, 7, 14, 21 및 28일차에 유세포 분석법을 사용하여 분석하였다. 여기에 나타낸 데이터는 네 가지 기술적 반복을 대표한다.
도 8. 항CD20 항체에 대한 에피토프 매핑 전략. (A) 개 CD20 세포외 도메인 서열을 벡터 DH01 내지 DH09의 동등한 위치에서 인간 CD20 서열로 돌연변이화하였다. (B) 개 CD20 세포외 도메인 서열을 벡터 DM01 내지 DM09의 동등한 위치에서 뮤린 CD20 서열로 돌연변이화하였다. (C) 개 CD20 세포외 도메인에 있는 소형 루프의 모든 잔기 및 대형 루프의 다른 모든 잔기를 알라닌으로 돌연변이화하여 벡터 S01 내지 S09 및 L01 내지 L25를 생성하였다. 돌연변이화 잔기는 굵은체로 강조된다.
도 9. 개-인간 키메라 CD20 또는 개-마우스 키메라 CD20을 발현하는 MDCK 세포에 대한 PMX003, PMX115 및 PMX070 mAb의 결합을 유세포 분석법으로 평가하였다. 도면에서 01 내지 09의 흑색 막대는 도 8a에 나타낸 DH01 내지 DH09 서열에 대한 결합을 나타내며 도면에서 01 내지 09의 회색 막대는 도 8b에 나타낸 DM01 내지 DM09 서열에 대한 결합을 나타낸다. 야생형 개 CD20을 발현하는 MDCK 세포를 양성 대조군으로 적용하였으며 야생형 MDCK 세포를 음성 대조군으로 사용하였다.
표 1. 아미노산 잔기 및 보존적 아미노산 치환의 예
표 2. 서열
표 3. VH 및 VL 유전자 사용
표 4. 항체에 대한 기능적 데이터 요약
표 5. 항체에 대한 발달가능성 프로파일
이제 본 발명의 실시양태를 더 설명한다. 다음 구절에서, 상이한 실시양태를 설명한다. 이와 같이 정의되는 각각의 양태는 달리 명시되지 않는 한 다른 양태와 조합될 수 있다.
일반적으로, 본원에서 설명되는 세포 및 조직 배양, 병리학, 종양학, 분자 생물학, 면역학, 미생물학, 유전학 및 단백질, 핵산 화학 및 혼성화와 관련하여 사용되는 명명법 및 기법은 당해 기술분야에서 잘 알려져 있고 일반적으로 사용되는 것이다. 본 개시내용의 방법 및 기법은 일반적으로 당해 기술분야에서 알려진 종래의 방법에 따라 그리고 달리 나타내지 않는 한 본 명세서 전반에 걸쳐 인용되고 논의되는 다양한 일반적이고 보다 구체적인 참조문헌에서 설명되는 바와 같이 수행된다. 예를 들어, Green 및 Sambrook 등, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 제4판, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (2012); Therapeutic Monoclonal Antibodies: From Bench to Clinic, Zhiqiang An (편집자), Wiley, (2009); 및 Antibody Engineering, 제2판, 제1권 및 제2권, Ontermann 및 Dubel, eds., Springer-Verlag, Heidelberg (2010)참조.
효소 반응 및 정제 기법 당해 기술분야에서 일반적으로 수행되거나 본원에서 설명되는 바와 같이 제조업체의 사양에 따라 수행된다. 본원에서 설명되는 분석 화학, 합성 유기 화학, 의약 및 약학 화학과 관련하여 사용되는 명명법 및 이들의 실험실 절차 및 기법은 당해 기술분야에 잘 알려져 있고 일반적으로 사용되는 것들이다. 표준 기법이 화학 합성, 화학 분석, 약제학적 제조, 제제화, 전달 및 환자 치료를 위하여 사용된다.
본 발명자들은 개 CD20에 특이적으로 결합하는 전체 개 항체를 개발하였다. 이러한 항체를 개 V, D, J 유전자를 발현하는 이식유전자 설치류에서 생성하였다. 따라서, 항체는 개화 항체 또는 키메라 항체보다 개 대상체에게 투여하기 위한 면역원성이 더 낮다. 또한, 이러한 항체는 가변 영역에 대한 추가 변형 없이 직접 사용할 수 있으므로, 친화도를 감소시키거나 항체를 손상시킬 위험이 없다. 다른 기술은 개 기원의 항체 서열과 다른 종, 전형적으로 설치류의 서열의 생체외(ex vivo) 조합을 통하여 발달 또는 효능 책임이 따를 위험이 있다. 따라서, 본 발명은 개 CD20에 결합하는 단리된 개 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
본 발명의 항체 및 이의 항원 결합 부분의 특성을 치료 방법 및 용도뿐만 아니라 본원에서 설명되는 약제학적 제제에서도 활용할 수 있다.
용어 CD20은 B 림프구 항원 CD20을 지칭한다. 항체 및 이의 항원 결합 부분은 서열번호 1(뉴클레오티드 서열) 및 서열번호 2(아미노산 서열)에서 정의되는 야생형 개 CD20에 특이적으로 결합한다. 달리 명시하지 않는 한, 본원에서 사용되는 용어 CD20은 개 CD20을 지칭한다. B 림프구 항원 CD20 또는 CD20은 전 B(pro-B) 단계(CD45R+, CD117+)에서 시작하여 모든 B 세포의 표면상에서 발현되며 성숙될 때까지 농도가 점진적으로 증가한다. 인간 및 개에서, CD20은 MS4A1 유전자에 의해 암호화된다.
용어 "CD20 결합 분자/단백질/폴리펩티드/작용제/부분", "CD20 항원 결합 분자 분자/단백질/폴리펩티드/작용제/부분", "항CD20 항체", "항CD20 항체 또는 이의 항원 결합 부분"은 모두 개 CD20 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 분자를 지칭한다. 결합 반응을 예를 들어, 관련되지 않은 특이성의 항체를 사용한 음성 대조 시험을 참조하여 표준 방법으로 나타낼 수 있다.
개 CD20인, 관심 항원에 "결합"하거나 "결합 가능한", 본원에서 설명되는 다중특이적, 예를 들어, 이중특이적 또는 삼중특이적 결합제를 포함하는 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 항체 또는 이의 항원 결합 부분이 본원에서 설명되는 바와 같이 항원 CD20을 발현하는 세포 또는 조직을 표적으로 하는 치료제로서 유용하도록 충분한 친화도로 항원에 결합한다.
본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 개 CD20에 특이적으로 결합한다. 즉, CD20 항원에 대한 결합은 비특이적 상호작용과 측정 가능하게 상이하다. 특히, 본원에서 설명되는 항체는 마우스 CD20과 교차 반응하지 않는다.
본원에서 사용되는 용어 특정 폴리펩티드 또는 특정 폴리펩티드 표적상에 있는 에피토프에 "특이적 결합" 또는 "특이적으로 결합" 또는 "특이적"은 예를 들어, 표적에 대한 KD가 적어도 약 10-6 M, 대안적으로 적어도 약 10-7 M, 대안적으로 적어도 약 10-8 M, 대안적으로 적어도 약 10-9 M, 대안적으로 적어도 약 10-10 M, 대안적으로 적어도 약 10-11 M, 대안적으로 적어도 약 10-12 M 또는 그 이하인 분자에 의해 나타날 수 있다. 일 실시양태에서, KD는 적어도 약 10-8 M 내지 약 10-9 M이다, 예를 들어, 일 실시양태에서, KD는 나노몰 범위이다. 일 실시양태에서, 용어 "특이적 결합"은 분자가 임의의 다른 폴리펩티드 또는 폴리펩티드 에피토프에 실질적으로 결합함이 없이 특정 폴리펩티드 또는 특정 폴리펩티드상에 있는 에피토프에 결합하는 결합을 지칭한다. 용어 KD 및 KD는 본원에서 상호교환적으로 사용된다.
본원에서 사용되는 용어 "항체"는 4개의 폴리펩티드 사슬, 2개의 중쇄(H) 및 2개의 경쇄(L)로 구성되는 임의의 면역글로불린(Ig) 분자 또는 이의 항원 결합 부분 또는 Ig의 필수적인 에피토프 결합 특징을 유지하는 이의 임의의 기능적 단편, 돌연변이체, 변이체 또는 유도체를 광범위하게 지칭한다.
전장 항체에서, 각각의 중쇄는 중쇄 가변 영역 또는 도메인(본원에서 HCVR로 약칭) 및 중쇄 불변 영역으로 구성된다. 중쇄 불변 영역은 CH1, CH2 및 CH3의 세 가지 도메인으로 구성된다. 각각의 경쇄는 경쇄 가변 영역 또는 도메인(본원에서 LCVR로 약칭) 및 경쇄 불변 영역으로 구성된다. 경쇄 불변 영역은 CL의 한 가지 도메인으로 구성된다.
중쇄 및 경쇄 가변 영역은 상보성 결정 영역(CDR)이라고 하는 초가변성 영역과 프레임워크 영역(FR)이라고 하는 더 보존된 영역이 산재되어 있는 영역으로 더 세분화될 수 있다. 각각의 중쇄 및 경쇄 가변 영역은 세 가지 CDR 및 네 가지 FR로 구성되며, 아미노 말단에서 카복시 말단까지 다음 순서로 배열된다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4.
면역글로불린 분자는 일반적으로 임의의 동종형, 부류 또는 하위부류일 수 있다. 본 발명의 다양한 양태에 따른 CH3 도메인은 개 IgG 하위유형의 CH3 도메인, 예를 들어, IgG-A, IgG-B, IgG-C 및 IgG-D이다.
개에서, A, B, C 및 D로 지칭되는 네 가지 IgG 중쇄가 있다. 이러한 중쇄는 개 IgG의 네 가지 상이한 하위부류를 나타내며, 이는 IgG-A, IgG-B, IgG-C 및 IgG-D로 지칭된다. 이러한 네 가지 중쇄의 DNA 및 아미노산 서열은 Tang 등 (Vet. Immunol. Immunopathol. 80: 259-270 (2001))에 의해 최초로 식별되었다. 또한, 이러한 중쇄에 대한 아미노산 및 DNA 서열은 GenBank 데이터 베이스로부터 이용 가능하다(IgGA: 수탁번호 제AAL35301.1호, IgGB: 수탁번호 제AAL35302.1호, IgGC: 수탁번호 제AAL35303.1호, IgGD: 수탁번호 제AAL35304.1호). 또한, 개 항체는 경쇄의 두 가지 유형인 카파 및 람다를 함유한다(GenBank 수탁번호 카파 경쇄 아미노산 서열 제ABY 57289.1호, GenBank 수탁번호 제ABY 55569.1호). 본원의 항체는 람다 또는 카파 경쇄를 가질 수 있다. 일 실시양태에서, 경쇄는 람다 경쇄이다.
용어 "CDR"은 항체 가변 서열 내의 상보성 결정 영역을 지칭한다. 3개의 CDR이 각각의 중쇄 및 경쇄의 가변 영역에 있으며, 이는 각각의 가변 영역에 대해 CDR1, CDR2 및 CDR3으로 지정된다. 용어 "CDR 세트"는 항원에 결합할 수 있는 단일 가변 영역에서 발생하는 3개의 CDR군을 지칭한다. 이러한 CDR의 정확한 경계는 당해 기술분야에서 알려진 상이한 시스템에 따라 상이하게 정의될 수 있다.
Kabat 상보성 결정 영역(CDR)은 서열 가변성을 기반으로 하며 가장 일반적으로 사용된다(Kabat 등, (1971) Ann. NY Acad. Sci. 190:382-391 및 Kabat, 등, (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 제5판, 미국 보건복지부, NIH 공보 제91-3242호). 대신, Chothia는 구조적 루프의 위치를 지칭한다(Chothia 및 Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917(1987)). Kabat 번호 지정 시스템은 일반적으로 가변 도메인의 잔기(대략 경쇄의 잔기 1 내지 107 및 중쇄의 잔기 1 내지 113)를 지칭하는 경우 사용한다. 다른 시스템은 ImMunoGeneTics (IMGT) 번호 지정 체계이다. IMGT 번호 지정 체계 Lefranc 등, Dev. Comp. Immunol., 29, 185-203 (2005)에서 설명되어 있다. 달리 명시하지 않는 한 IMGT 번호 지정 체계가 본원에서 사용된다.
키메라 항체는 한 종, 바람직하게는, 설치류 또는 인간 항체로부터 유래한 항체의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 가변 도메인을 함유하는 재조합 단백질이며, 항체 분자의 불변 도메인은 개 항체로부터 유래한다.
본원에서 사용되는 용어 "개화 항체"는 개 및 비개(예를 들어, 뮤린) 항체 모두로부터 유래한 서열을 함유하는 재조합 항체의 형태를 지칭한다. 일반적으로, 개화 항체는 적어도 하나 및 전형적으로 2개의 가변 도메인을 실질적으로 모두 포함할 것이며, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 초가변 루프는 비개 면역글로불린의 것에 상응하며 모든 또는 실질적으로 모든 프레임워크(FR) 영역(및 전형적으로 잔여 프레임의 모두 또는 실질적으로 모두)은 개 면역글로불린 서열의 것이다. 개화 항체는 개 프레임 또는 변형된 개 프레임과 함께 뮤린 또는 인간 항체로부터 유래한 3개의 중쇄 CDR 및 3개의 경쇄 CDRS를 모두 포함할 수 있다. 변형된 개 프레임은 개화 항체의 유효성을 더 최적화할 수 있는, 예를 들어, 표적에 대한 결합을 증가시킬 수 있는 하나 이상의 아미노산 변화를 포함한다. 예를 들어, 초가변 루프의, 비개 서열은 개 서열과 더 비교될 수 있으며 가능한 한 많은 잔기가 실제 개 서열과 유사하도록 변경되었다.
대조적으로, 본 발명의 전체 개 항체는 개 가변 영역을 갖고 다른 종으로부터 유래한 전체 또는 부분 CDR 또는 FR을 포함하지 않는다. 유리하게는, 본원에서 설명되는 전체 개 항체는 개 면역글로불린 서열을 포함하는 이식유전자 마우스로부터 수득되었다. 이러한 면역화된 마우스에서 생산되는 항체는 생체내(in vivo) V(D)J 재조합, 생체내 접합 다양화, 생체내 중쇄 및 경쇄 페어링 및 생체내 초돌연변이를 포함하는 자연 친화도 성숙을 허용하는 생체내 B 세포 신호전달 및 발달을 통해 개발된다. 이러한 방식으로 생산되는 전체 개 항체는 발달가능성을 위한 최적의 특성을 갖는 항체를 생성하여 대규모 생산 전 긴 리드 최적화를 최소화한다. 유리하게는, 이러한 전체 개 항체는 환자 동물에 도입되는 경우 가능한 가장 낮은 면역원성 위험을 나타내며, 결과적으로, 반복 투약 요법을 용이하게 한다. 생체외 mAb 조작이 (위에서 개괄되는 바와 같이) 발달 책임, 면역원성 및 감소된 친화도를 도입할 위험이 있다는 점을 고려하면, 따라서, 본 발명의 전체 개 항체는 임상적 맥락에서 효과적인 요법이 될 가능성이 가장 높다. 따라서, 일 실시양태에서, 용어 개 항체는 전체 개 항체를 지칭한다.
본원에서 사용되는 용어 "단클론성 항체"는 실질적으로 균질한 항체의 집단으로부터 수득되는 항체를 지칭하며, 즉, 집단을 포함하는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는 가능한 자연 발생 돌연변이 및/또는 번역 후 변형(예를 들어 이성체질화, 아미드화, 탄수화물 첨가)를 제외하면 동일하다. 단클론성 항체는 단일 항원 부위에 대해 매우 특이적이며 이에 대해 지시되고 있다. 상이한 결정인자(에피토프)에 대한 상이한 항체를 전형적으로 포함하는 다클론성 항체 제제와 대조적으로, 각각의 단클론성 항체는 항원상에 있는 단일 결정인자에 대한 것이다. 특이성에 더하여, 단클론성 항체는 다른 면역글로불린에 의해 오염되지 않은 하이브리도마 배양물에 의해 합성된다는 점에서 이점이 있다.
용어 "항원 결합 부위"는 항원에 특이적으로 결합하는 영역을 포함하는 항체 또는 항체 단편의 일부를 지칭한다. 항원 결합 부위는 하나 이상의 항체 가변 도메인에 의해 제공될 수 있다. 항원 결합 부위는 항체 또는 항체 단편의 연관되는 VH 및 VL 내에 전형적으로 포함된다.
용어 "에피토프" 또는 "항원 결정인자"는 면역글로불린, 항체 또는 항체 단편이 특이적으로 결합하는 항원 표면상에 있는 부위를 지칭한다. 일반적으로 항원은 여러 또는 많은 상이한 에피토프를 가지며 많은 상이한 항체와 반응한다. 해당 용어는 선형 에피토프 및 구조적 에피토프를 구체적으로 포함한다. 단백질 항원 내의 에피토프는 단백질의 3차 접힘에 의해 병치된 연속 아미노산(일반적으로 선형 에피토프) 또는 비연속 아미노산(일반적으로 구조적 에피토프)으로 형성될 수 있다. 연속 아미노산으로부터 형성되는 에피토프는 변성 용매에 노출되면 항상 그렇지는 않으나 전형적으로 유지되는 반면, 3차 접힘에 의해 형성되는 에피토프는 변성 용매로 처리하면 전형적으로 손실된다. 에피토프는 고유한 공간 구조로 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15개의 아미노산을 전형적으로 포함한다. 특정 항체 또는 항체 단편에 의해 결합되는 에피토프를 결정하는 방법(즉, 알라닌-스캐닝 돌연변이생성 또는 Pepscan에 의한 에피토프 매핑)은 당해 기술분야에서 잘 알려져 있으며, 예를 들어, 면역블롯팅 및 면역침전 검정을 포함하며, 여기서 중첩 또는 연속 펩티드를 특정 항체 또는 항체 단편과의 반응성에 대해 시험하였다. 두 항체가 동일하거나 입체적으로 중첩되는 에피토프를 인식하는 경우, 항체는 기준 항체와 "본질적으로 동일한 에피토프"에 결합한다. 2개의 에피토프가 동일하거나 입체적으로 중첩되는 에피토프에 결합하는지 여부를 결정하기 위해 가장 널리 사용되고 신속한 방법은 경쟁 검정이며, 이는 표지된 항원 또는 표지된 항체를 사용하여 상이한 형식으로 구성할 수 있다.
일 실시양태에서, 본원에서 설명되는 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음의 아미노산 잔기 ITISHFFKMENLNLIKAPM(서열번호 302, 서열번호 2의 아미노산 번호 141 내지 159) 중 1개 이상, 예를 들어, 1개 내지 19개, 예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개 또는 19개의 아미노 잔기를 포함하거나 이로 구성되는 에피토프에 결합한다. 일 실시양태에서, 에피토프는 다음의 아미노산 잔기 ENLNLIKAPM(서열번호 303, 서열번호 2의 아미노산 번호 150 내지 159) 중 하나 이상, 예를 들어, 1개 내지 10개, 예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개의 아미노 잔기를 포함하거나 이로 구성된다.
일 실시양태에서, 에피토프는 예를 들어, 알라닌 스캐닝을 사용하여 예에서 나타낸 바와 같이 부위 지정 돌연변이생성에 의해 결정된다. 일 실시양태에서, 에피토프는 선형 에피토프이다. 일 실시양태에서, 에피토프는 구조적 에피토프이다. 일 실시양태에서, 에피토프는 대형 루프에서 선형 에피토프를 포함한다. 일 실시양태에서, 에피토프는 소형 루프에서 구조적 에피토프를 추가로 포함한다. 일 실시양태에서, 항체는 본원에서 설명되는 바와 같이 PMX003 또는 이의 항원 결합 부분 또는 서열 동일성이 적어도 80%인 항체이다.
본 발명의 다른 양태에서, 본 발명은 또한 다음의 아미노산 잔기 ITISHFFKMENLNLIKAPM(서열번호 302, 서열번호 2의 아미노산 번호 141 내지 159) 중 1개 이상, 예를 들어, 1개 내지 19개, 예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개 또는 19개의 아미노 잔기를 포함하거나 이로 구성되는 에피토프에 결합한다. 일 실시양태에서, 에피토프는 다음의 아미노산 잔기 ENLNLIKAPM(서열번호 303, 서열번호 2의 아미노산 번호 150 내지 159) 중 1개 이상, 예를 들어, 1개 내지 10개, 예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개의 아미노 잔기를 포함하거나 이로 구성되는 에피토프에 결합한다. 예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 본원에서 설명되는 서열을 가질 수 있다.
또한, 본 발명은 본원에서 설명되는 항체 또는 이의 항원 결합 부분과 경쟁하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다.
항체의 단백질분해 소화는 Fv(단편 변수), Fab(항원 결합 단편) 및 Fc(결정화 단편)라고 하는 상이한 단편을 방출한다. Fc 단편은 이황화물에 의해 함께 결합된 두 H 사슬의 카복시 말단 부분을 포함한다. Fc 단편의 불변 도메인은 항체의 효과기 기능을 매개하는 역할을 한다.
본 발명은 항체의 항원 결합 부분 또는 항원 결합 단편까지 확장된다. 용어 "결합 부분" 및 "단편"은 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 항체 단편은 항체의 부분, 예를 들어, F(ab')2, Fab, Fv, scFv, 중쇄, 경쇄, 가변 중쇄(VH), 가변 경쇄(VL) 도메인 등이다. 전장 항체의 기능적 단편은 전체 항체의 표적 특이성을 유지한다. 따라서, Fab(단편, 항체), scFv(단쇄 가변 사슬 단편) 및 단일 도메인 항체(dAb)와 같은 재조합 기능성 항체 단편은 mAb 기반 치료법의 대안으로 치료법을 개발하는 데 사용되어 왔다.
또한, 본 발명은 본원에서 설명되는 서열을 포함하는 항체 모방체까지 확장된다.
"Fv"는 완전한 항원 인식 및 결합 부위를 함유하는 최소 항체 단편이다. 이러한 단편은 강한 비공유 회합으로 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄 가변 영역 도메인의 이량체로 구성된다. 이 두 도메인의 접힘으로부터, 항원 결합을 위한 아미노산 잔기에 기여하고 항체에 대한 항원 결합 특이성을 부여하는 6개의 초가변 루프(H 및 L 쇄에서 각각 3개의 루프)가 발생된다. 그러나, 특히 단일 가변 도메인(또는 항원에 특이적인 3개의 HVR만을 포함하는 Fv의 절반)도 전체 결합 부위보다 더 낮은 친화도이나 항원을 인식하고 결합하는 능력이 있다.
"sFv" 또는 "scFv"로도 약칭되는 "단쇄 Fv"는 단일 폴리펩티드 사슬에 연결된 2개의 가변 도메인, VH 및 VL로 구성되는 항체 단편 scFv 단편(~25kDa)이다. 자연적으로, VH 및 VL 도메인은 소수성 상호작용을 통해 비공유적으로 회합되어 해리되는 경향이 있다. 그러나, 안정한 단편을 도메인을 친수성 가요성 링커와 연결하여 단쇄 Fv(scFv)를 생성함으로써 조작할 수 있다.
가장 작은 항원 결합 단편은 단일 가변 단편, 즉, 가변 중쇄(VH) 또는 가변 경쇄(VL) 도메인이다. VH 및 VL 도메인은 각각 항원에 결합할 수 있다. 경쇄/중쇄 파트너 각각에 대한 결합 또는 실제로 전체 항체의 다른 부분의 존재는 표적 결합에 필요하지 않다. (VH 또는 VL 도메인에 해당하는) 크기가 하나의 단일 도메인으로 감소된 항체의 항원 결합 개체는 "단일 도메인 항체" 또는 "면역글로불린 단일 가변 도메인"으로 일반적으로 지칭된다. 따라서, 단일 도메인 항체(~12 내지 15kDa)는 VH 또는 VL 도메인을 가지며, 즉, 전체 항체의 다른 부분을 갖지 않는다. "도메인 항체"에 대한 용어 "dAb"는 항원에 특이적으로 결합하는 단일 면역글로불린 가변 도메인(VH, VHH 또는 VL) 폴리펩티드를 일반적으로 지칭한다.
용어 "단리"는 자연 환경으로부터 단리된 부분을 지칭한다. 예를 들어, 용어 "단리"는 다른 항체, 항체 또는 항체 단편이 실질적으로 없는 항체 또는 이의 단편을 지칭한다. 또한, 단리된 항체는 다른 세포 물질 및/또는 화학 물질이 실질적으로 없을 수 있다.
본원에서 사용되는 용어 "상동성" 또는 "동일성"은, 필요한 경우, 최대 백분율 상동성을 달성하기 위해 서열을 정렬한 후 그리고 일부 실시양태에서 갭을 도입한 후 그리고 임의의 보존적 치환을 서열 동일성의 일부로서 고려하지 않고 비교되는 참조 폴리펩티드의 잔기와 동일한 서열에 있는 아미노산 잔기의 백분율을 일반적으로 지칭한다. 따라서, 두 아미노산 서열 사이의 상동성 백분율은 두 서열 사이의 동일성 백분율과 동등하다. N-말단 확장 또는 C-말단 확장, 태그 또는 삽입은 동일성 또는 상동성을 감소시키는 것으로 해석되어서는 안 된다. 정렬을 위한 방법 및 컴퓨터 프로그램은 잘 알려져 있다. 두 아미노산 서열 간의 동일성 백분율은 잘 알려진 수학적 알고리즘을 사용하여 결정될 수 있다.
본원에서 "아미노산"은 20개의 자연 발생 아미노산 중 하나 또는 특정한 정의된 위치에 존재할 수 있는 임의의 비천연 유사체를 의미한다. 아미노산은 자연 발생 아미노산 및 합성 아미노산을 모두 포함한다. 대부분의 경우 단백질을 재조합적으로 생산할 경우 자연 발생 아미노산만 사용된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 본원에서 설명되는 이종이량체 단백질 또는 폴리펩티드(예를 들어, 항체)의 아미노산 서열에서 다른 아미노산 잔기로 "아미노산 잔기를 치환"하는 것은 다른 아미노산 잔기로 "아미노산 잔기를 대체"하는 것과 동등하며 이는 기존(예를 들어, 야생형/생식계열) 아미노산 서열의 특정 위치에 있는 특정 아미노산 잔기가 상이한 아미노산 잔기로 대체(또는 치환)되었음을 나타낸다. 이는 통상의 기술자가 이용 가능한 표준 기법을 사용하여, 예를 들어, 재조합 DNA 기술을 사용하여 수행될 수 있다. 아미노산은 야생형(wt)에서 자연에서 발견되는 천연(야생형/생식계열) 서열에 비해 변화되나, 천연 서열에 비해 다른 변화를 함유하는 IgG 분자에서 제조될 수 있다. 본원에서 "야생형" 또는 "WT" 또는 "천연"은 대립유전자 변이를 포함하여 자연에서 발견되는 아미노산 서열 또는 뉴클레오티드 서열을 의미한다. WT 단백질, 폴리펩티드, 항체 또는 면역글로불린은 의도적으로 변형되지 않은 아미노산 서열 또는 뉴클레오티드 서열을 갖는다.
본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음 특성 중 하나 이상을 갖는다:
a) 개 CD20에 특이적으로 결합하고/하거나;
b) 실시예 및 예를 들어 도면에서 나타낸 바와 같이 측정된 KD로 개 CD20에 결합하고/하거나;
c) 실시예에서 측정된 바와 같이 CD20을 발현하는 개 림프종 세포주에서 CDC 및/또는 ADCC와 같은 세포 사멸을 나타내고/내거나;
d) 항체 의존성 세포 식균작용(ADCP)을 촉진하고/하거나;
e) 개 조직에서 CD20 양성 B 세포를 효과적으로 고갈시킬 수 있고/있거나;
f) 개 CD20을 발현하는 세포에 결합할 수 있고/있거나;
g) 적합하게는 세포자멸사를 통한 직접적인 세포 사멸에 의해 개 CD20을 발현하는 세포를 고갈시킬 수 있고/있거나;
h) 실시예에서 나타낸 바와 같이 우수한 안정성을 제공하고/하거나;
i) 다음의 아미노산 잔기 ENLNLIKAPM(서열번호 303, 서열번호 2의 아미노산 번호 150 내지 159), 예를 들어, ITISHFFKMENLNLIKAPM(서열번호 302, 서열번호 2의 아미노산 번호 141 내지 159) 중 1개 이상, 예를 들어, 1개 내지 10개, 예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개의 아미노 잔기를 포함하거나 이로 구성되는 에피토프에 결합하고/하거나;
j) 예를 들어, 실시예에서 나타낸 바와 같이, 벤치마크 시험 항체 1E4 및 4E1-7보다 개 CD20에 대한 결합 능력이 더 강력(5 내지 10배 더 높음)하고/하거나;
k) 예를 들어, 실시예 및 표 4에서 나타낸 바와 같이, 벤치마크 시험 항체 1E4 및 4E1-7보다 ADCC 및/또는 CDC 활성이 더 강력하고/하거나;
l) 예를 들어, 실시예에서 나타낸 바와 같이, 벤치마크 시험 항체 1E4 및 4E1-7 mAb와 비교하여 개 전혈에서 B 세포를 보다 효율적으로 사멸시킨다.
일 실시양태에서, 본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 위의 특성 중 하나 이상 및 선택적으로 다음 특성 중 하나 이상을 갖는다:
a) 20 nM 미만의 EC50 값으로 CDC 활성을 갖고/갖거나;
b) 0.3 nM 미만의 EC50 값으로 ADCC 활성을 갖고/갖거나;
c) 100 ug/ml 초과의 일시적 발현 수율을 갖고/갖거나;
d) Uncle로 결정한 Tm1이 58℃보다 높고/높거나;
e) 약 0.5 mg/kg 내지 2.5 mg/kg의 용량으로 개에서 생체내 세포 사멸을 제공하고/하거나;
f) 개에서 생체내 B 세포 고갈을 적어도 15일 동안 낮은 수준으로 유지하고/하거나;
g) 다음의 아미노산 잔기 ENLNLIKAPM(서열번호 303, 서열번호 2의 아미노산 번호 150 내지 159), 예를 들어, ITISHFFKMENLNLIKAPM (서열번호 302, 서열번호 2의 아미노산 번호 141 내지 159) 중 1개 이상, 예를 들어, 1개 내지 10개, 예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개의 아미노 잔기를 포함하거나 이로 구성되는 에피토프에 결합한다.
이러한 특성은 마우스 모델 또는 개에서의 생체내 연구를 포함하여 실시예에서 개시되는 방법과 같은 당해 기술분야에서 알려진 방법에 의해 측정될 수 있다.
특히, 본 발명자들은 항체 및 이의 항원 결합 부분이 실시예에서 측정된 바와 같이, CD20을 발현하는 개 림프종 세포주에서 세포 사멸에 의해 입증된 바와 같이, CDC 및 ADCC 활성을 모두 나타내는 것을 발견하였다.
일 양태에서, 본 발명은 개 CD20에 결합하는 단리된 개 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이며, 상기 항체는
a) 서열번호 27 또는 이에 대해 적어도 60%, 70%, 80% 또는 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 중쇄(HC) CDR1 서열,
b) 서열번호 28 또는 이에 대해 적어도 60%, 70%, 80% 또는 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열,
c) 서열번호 29 또는 이에 대해 적어도 60%, 70%, 80% 또는 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열,
d) 서열번호 30 또는 이에 대해 적어도 60%, 70%, 80% 또는 90% 서열 동일성을 갖는 아미노선 서열을 포함하거나 이로 구성되는 경쇄(LC) CDR1 서열,
e) 서열번호 31 또는 이에 대해 적어도 60%, 70%, 80% 또는 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및
f) 서열번호 32 또는 이에 대해 적어도 60%, 70%, 80% 또는 90% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 포함한다.
본 발명은 개 CD20에 결합하는 단리된 개 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이며, 상기 항체는
a) 서열번호 27을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열
b) 서열번호 28을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열
c) 서열번호 29를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열
d) 서열번호 30을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열
e) 서열번호 31을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및
f) 서열번호 32를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열
또는 위에서 설명되는 CDR을 가지나 위에서 언급되는 CDR 서열과 비교하여 1, 2, 3 또는 4개의 아미노산 치환을 갖는 하나 이상의 CDR을 갖는 단리된 개 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함한다.
따라서, 본 발명은 개 CD20에 결합하는 단리된 개 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이며, 여기서 상기 항체는
a) 서열번호 27 또는 서열번호 27과 비교하여 1 또는 2개의 아미노산 차이를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 중쇄(HC) CDR1 서열,
b) 서열번호 28 또는 서열번호 28과 비교하여 1개, 2개, 3개 또는 4개의 아미노산 차이를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열,
c) 서열번호 29 또는 서열번호 29와 비교하여 1개 또는 2개의 아미노산 차이를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열,
d) 서열번호 30 또는 서열번호 30과 비교하여 1 개의 아미노산 차이를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 경쇄(LC) CDR1 서열,
e) 서열번호 31 또는 서열번호 31과 비교하여 1개의 아미노산 차이를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및
f) 서열번호 32 또는 서열번호 32와 비교하여 1개 또는 2개의 아미노산 차이를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 포함한다.
일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 7을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 8을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 9를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 10을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 11을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 12를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 17을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 18을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 19를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 20을 포함하는 LC CDR1 서열, 서열번호 21을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 22를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 37을 포함하는 HC CDR1 서열, 서열번호 38을 포함하는 HC CDR2 서열, 서열번호 39를 포함하는 HC CDR3 서열, 서열번호 40을 포함하는 LC CDR1 서열, 서열번호 41을 포함하는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 42를 포함는 LC CDR3 서열을 갖는다.
일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 47을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 48을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 49를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 50을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 51을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 52를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 82를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 83을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 84를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 85를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 86을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 87을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 92를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 93을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 94를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 95를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 96을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 97을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 102를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 103을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 104를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 105를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 106을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 107을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 112를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 113을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 114를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 115를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 116을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 117을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 122를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 123을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 124를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 125를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 126을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 127을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 132를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 133을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 134를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 135를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 136을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 137을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 142를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 143을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 144를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 145를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 146을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 147을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 152를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 153을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 154를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 155를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 156을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 157을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 162를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 163을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 164를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 165를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 166을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 167을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 172를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 173을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 174를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 175를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 176을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 177을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 182를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 183을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 184를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 185를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 186을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 187을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 192를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 193을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 194를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 195를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 196을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 197을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 202를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 203을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 204를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 205를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 206을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 207을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 212를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 213을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 214를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 215를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 216을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 217을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 222를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 223을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 224를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 225를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 226을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 227을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 232를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 233을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 234를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 235를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 236을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 237을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다.
일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 24 또는 이에 대해 적어도 75%, 80%, 85% 또는 90% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 중쇄(HC) 가변 영역 서열 및 서열번호 26 또는 이에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 경쇄(LC) 가변 영역 서열을 포함한다. 일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 24를 포함하는 중쇄(HC) 가변 영역 서열 및 서열번호 26을 포함하는 경쇄(LC) 가변 영역 서열 또는 서열번호 26을 포함하는 LC 가변 영역 서열, LC 가변 영역의 FR1 내의 NVT 서열이 변형된, 예를 들어, FR1에서 1, 2 또는 3개의 아미노산 변형이 있는 LC 가변 영역, 예를 들어, 아래에서 설명되는 서열번호 60, 61, 62, 63, 64 또는 65를 갖는 FR1을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 서열번호 53, 54, 55, 56, 57 또는 58을 포함하는 LC 가변 영역 서열을 포함한다.
예를 들어, 항체 및 이의 항원 결합 부분은
a) 서열번호 4를 포함하거나 이로 구성되는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 6을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
b) 서열번호 14를 포함하거나 이로 구성되는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 16을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
c) 서열번호 34를 포함하거나 이로 구성되는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 36을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
d) 서열번호 44를 포함하거나 이로 구성되는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 46을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
e) 서열번호 79를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 81을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 아래에서 설명되는 NVT 서열이 변형된 LC 가변 영역 서열, 예를 들어, 서열번호 238을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
f) 서열번호 89를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 91을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 아래에서 설명되는 NVT 서열이 변형된 LC 가변 영역 서열, 예를 들어, 서열번호 239를 포함하는 LC 가변 영역 서열;
g) 서열번호 99를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 101을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 아래에서 설명되는 NVT 서열이 변형된 LC 가변 영역 서열, 예를 들어, 서열번호 240을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
h) 서열번호 109를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 111을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 아래에서 설명되는 NVT 서열이 변형된 LC 가변 영역 서열, 예를 들어, 서열번호 241을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
i) 서열번호 119를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 121을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
j) 서열번호 129를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 131을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 아래에서 설명되는 NVT 서열이 변형된 LC 가변 영역 서열, 예를 들어, 서열번호 242를 포함하는 LC 가변 영역 서열;
k) 서열번호 139를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 141을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 아래에서 설명되는 NVT 서열이 변형된 LC 가변 영역 서열, 예를 들어, 서열번호 243을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
l) 서열번호 149를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 151을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 아래에서 설명되는 NVT 서열이 변형된 LC 가변 영역 서열, 예를 들어, 서열번호 244를 포함하는 LC 가변 영역 서열;
m) 서열번호 159를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 161을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 아래에서 설명되는 NVT 서열이 변형된 LC 가변 영역 서열, 예를 들어, 서열번호 245를 포함하는 LC 가변 영역 서열;
n) 서열번호 169를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 171을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
o) 서열번호 179를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 181을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 아래에서 설명되는 NVT 서열이 변형된 LC 가변 영역 서열, 예를 들어, 서열번호 246을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
p) 서열번호 189를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 191을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 아래에서 설명되는 NVT 서열이 변형된 LC 가변 영역 서열, 예를 들어, 서열번호 247을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
q) 서열번호 199를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 201을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 아래에서 설명되는 NVT 서열이 변형된 LC 가변 영역 서열, 예를 들어, 서열번호 248을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
r) 서열번호 209를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 211을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 아래에서 설명되는 NVT 서열이 변형된 LC 가변 영역 서열, 예를 들어, 서열번호 249를 포함하는 LC 가변 영역 서열;
s) 서열번호 219를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 221을 포함하는 LC 가변 영역 서열; 또는
t) 서열번호 229를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 231을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 아래에서 설명되는 NVT 서열이 변형된 LC 가변 영역 서열, 예를 들어, 서열번호 250을 포함하는 LC 가변 영역 서열을 갖는다.
일 실시양태에서, 이의 항원 결합 부분은 F(ab')2, Fab, Fv, scFv, 중쇄, 경쇄, 가변 중쇄(VH) 도메인 또는 가변 경쇄(VL)이다.
다른 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 부분은 서열번호 27을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 28을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 29를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 30을 포함하거나 이로 구성되는 LCDR1 서열, 서열번호 31을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 32를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다. 항체 또는 항원 결합 부분은 생식계열 서열(서열번호 74)과 비교하여 중쇄 가변 서열에 5개의 아미노산 변화가 있고 경쇄 가변 서열(서열번호 76)에 1개의 아미노산 변화가 있는 프레임워크 영역을 갖는다.
일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 7을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 8을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 9를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 10을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 11을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 12를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다. 항체 또는 항원 결합 부분은 생식계열 서열(서열번호 74)과 비교하여 중쇄 가변 서열에 2개의 아미노산 변화가 있고 생식계열 서열(서열번호 76)과 비교하여 경쇄 가변 서열에 3개의 아미노산 변화가 있는 프레임워크 영역을 갖는다.
일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 17을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 18을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 19를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 20을 포함하는 LC CDR1 서열, 서열번호 21을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 22를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다. 항체 또는 항원 결합 부분은 생식계열 서열(서열번호 74)과 비교하여 중쇄 가변 서열에 10개의 아미노산 변화가 있고 경쇄 가변 서열(서열번호 76)에 아미노산 변화가 없는 프레임워크 영역을 갖는다.
일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 37을 포함하는 HC CDR1 서열, 서열번호 38을 포함하는 HC CDR2 서열, 서열번호 39를 포함하는 HC CDR3 서열, 서열번호 40을 포함하는 LC CDR1 서열, 서열번호 41을 포함하는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 42를 포함는 LC CDR3 서열을 갖는다. 항체 또는 항원 결합 부분은 생식계열 서열(서열번호 74)과 비교하여 중쇄 가변 서열에 12개의 아미노산 변화가 있고 경쇄 가변 서열(서열번호 76)에 아미노산 변화가 없는 프레임워크 영역을 갖는다.
일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 47을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 48을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 49를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 50을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 51을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 52를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 갖는다. 항체 또는 항원 결합 부분은 생식계열 서열(서열번호 74)과 비교하여 중쇄 가변 서열에 4개의 아미노산 변화가 있고 경쇄 가변 서열(서열번호 76)에 아미노산 변화가 없는 프레임워크 영역을 갖는다.
일 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 부분은 생식계열 서열(서열번호 74)과 비교하여 중쇄 가변 서열에 1 내지 10개의 아미노산 변화가 있는 프레임워크 영역을 갖는다. 예를 들어, 항체 또는 항원 결합 부분은 생식계열 서열(서열번호 74)과 비교하여 중쇄 가변 서열에 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 아미노산 변화가 있는 프레임워크 영역을 가질 수 있다. 일 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 부분은 생식계열 서열(서열번호 76)과 비교하여 경쇄 가변 서열에 1 내지 10개의 아미노산 변화가 있는 프레임워크 영역을 갖는다. 예를 들어, 항체 또는 항원 결합 부분은 생식계열 서열(서열번호 76)과 비교하여 경쇄 가변 서열에 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 아미노산 변화가 있을 수 있는 프레임워크 영역을 가질 수 있다.
또한, 본 발명은 개 CD20에 결합하는 단리된 개 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이며, 여기서 상기 항체는
a) 서열번호 112 또는 서열번호 112와 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 차이를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열,
b) 서열번호 113 또는 서열번호 113과 비교하여 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 차이를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열,
c) 서열번호 114 또는 서열번호 114와 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 차이를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열,
d) 서열번호 115 또는 서열번호 124와 비교하여 1개의 아미노산 차이를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열,
e) 서열번호 116 또는 서열번호 116과 비교하여 1 또는 2개의 아미노산 차이를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및
f) 서열번호 117 또는 서열번호 117과 비교하여 1개 또는 2개의 아미노산 차이를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 포함한다.
또한, 본 발명은 개 CD20에 결합하는 단리된 개 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이며, 여기서 상기 항체는
a) 서열번호 122 또는 서열번호 122와 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 차이를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열,
b) 서열번호 123 또는 서열번호 123과 비교하여 1개, 2개, 3개 또는 4개의 아미노산 차이를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열,
c) 서열번호 124 또는 서열번호 124와 비교하여 1, 2, 3 또는 4개의 아미노산 차이를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열,
d) 서열번호 125 또는 서열번호 125와 비교하여 1개의 아미노산 차이를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열,
e) 서열번호 126 또는 서열번호 126과 비교하여 1개의 아미노산 차이를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및
f) 서열번호 127 또는 서열번호 127과 비교하여 1, 2 또는 3개의 아미노산 차이를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 포함한다.
본원에서 사용되는 아미노산 변화는 아미노산 치환, 첨가 또는 결실로부터 선택된다. 일 실시양태에서, 아미노산 변화는 아미노산 치환이다.
일 실시양태에서, 항체는 실시예 및 서열 정보에서 나타낸 바와 같은 PMX001, PMX002, PMX003, PMX004, PMX005, PMX 006, PMX 007, PMX 008, PMX 009, PMX 010, PMX 011, PMX066, PMX067, PMX068, PMX069, PMX070, PMX071, PMX072, PMX073, PMX074, PMX075, PMX076, PMX077, PMX078, PMX079, PMX080, PMX081, PMX112, PMX113, PMX114, PMX115, PMX116, PMX117, PMX118, PMX119, PMX120, PMX121, PMX122, PMX123 또는 PMX 124이다. 일 실시양태에서, 항체는 PMX001, PMX002, PMX003, PMX004, PMX005, PMX066, PMX067, PMX068, PMX069, PMX070, PMX071, PMX072, PMX073, PMX074, PMX075, PMX076, PMX077, PMX078, PMX079, PMX080 또는 PMX081로부터 선택된다. 일 실시양태에서, 항체는 PMX003, PMX066, PMX069, PMX070, PMX078 또는 PMX081로부터 선택된다. 일 실시양태에서, 항체는 PMX010, PMX112, PMX115, PMX122 또는 PMX124로부터 선택된다. 일 실시양태에서, 항체는 PMX069, PMX070 또는 PMX115로부터 선택된다.
따라서, 일 실시양태에서, 항체는 상응하는 아미노산 서열(서열번호 4)을 암호화하는 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 3) 및 상응하는 아미노산 서열(서열번호 6)을 암호화하는 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 5)을 갖는다. 생식계열 서열(서열번호 74)과 비교하여 중쇄 가변 서열에 2개의 아미노산 변화 및 생식계열 서열(서열번호 76)과 비교하여 경쇄 가변 서열에 3개의 아미노산 변화가 있다. CDR 서열은 다음과 같다: 중쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 7), CDR2(서열번호 8) 및 CDR3(서열번호 9) 및 경쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호10), CDR2(서열번호 11) 및 CDR3(서열번호 12).
일 실시양태에서, 항체는 상응하는 아미노산 서열(서열번호 14)을 암호화하는 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 13) 및 상응하는 아미노산 서열(서열번호 16)을 암호화하는 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 15:)을 갖는다. 생식계열 서열(서열번호 74)과 비교하여 중쇄 가변 서열에 10개의 아미노산 변화가 있으며 경쇄 가변 서열(서열번호 76)에 아미노산 변화가 없다. CDR은: 중쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 17), CDR2(서열번호 18) 및 CDR3(서열번호 19) 및 경쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 20), CDR2(서열번호 21) 및 CDR3(서열번호 22)이다.
일 실시양태에서, 항체는 상응하는 아미노산 서열(서열번호 24)을 암호화하는 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 23) 및 상응하는 아미노산 서열(서열번호 26)을 암호화하는 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 25)을 갖는다. 생식계열 서열(서열번호 74)과 비교하여 중쇄 가변 서열에 5개의 아미노산 변화가 있으며 경쇄 가변 서열(서열번호 76)에 1개의 아미노산 변화가 있다. CDR은: 중쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 27), CDR2(서열번호 28) 및 CDR3(서열번호 29) 및 경쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 30), CDR2(서열번호 31) 및 CDR3(서열번호 32)이다.
일 실시양태에서, 항체는 상응하는 아미노산 서열(서열번호 34)을 암호화하는 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 33) 및 상응하는 아미노산 서열(서열번호 36)을 암호화하는 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 35)을 갖는다. 생식계열 서열(서열번호 74)과 비교하여 중쇄 가변 서열에 12개의 아미노산 변화가 있으며 경쇄 가변 서열(서열번호 76)에 아미노산 변화가 없다. CDR은 중쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 37), CDR2(서열번호 38) 및 CDR3(서열번호 39) 및 경쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 40), CDR2(서열번호 41) 및 CDR3(서열번호 42)이다.
일 실시양태에서, 항체는 상응하는 아미노산 서열(서열번호 44)을 암호화하는 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 43) 및 상응하는 아미노산 서열(서열번호 46)을 암호화하는 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 45)을 갖는다. 생식계열 서열(서열번호 74)과 비교하여 중쇄 가변 서열에 4개의 아미노산 변화가 있으며 경쇄 가변 서열(서열번호 76)에 아미노산 변화가 없다. CDR은 중쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 47), CDR2(서열번호 48) 및 CDR3(서열번호 49) 및 경쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 50), CDR2(서열번호 51) 및 CDR3(서열번호 52)이다.
일 실시양태에서, 항체는 상응하는 아미노산 서열(서열번호 79)을 암호화하는 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 78) 및 상응하는 아미노산 서열(서열번호 81)을 암호화하는 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 80)을 갖는다. CDR은 중쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 82), CDR2(서열번호 83) 및 CDR3(서열번호 84) 및 경쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 85), CDR2(서열번호 86) 및 CDR3(서열번호 87)이다.
일 실시양태에서, 항체는 상응하는 아미노산 서열(서열번호 89)을 암호화하는 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 88) 및 상응하는 아미노산 서열(서열번호 91)을 암호화하는 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 90)을 갖는다. CDR은 중쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 92), CDR2(서열번호 93) 및 CDR3(서열번호 94) 및 경쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 95), CDR2(서열번호 96) 및 CDR3(서열번호 97)이다.
일 실시양태에서, 항체는 상응하는 아미노산 서열(서열번호 99)을 암호화하는 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 98) 및 상응하는 아미노산 서열(서열번호 101)을 암호화하는 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 100)을 갖는다. CDR은 중쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 102), CDR2(서열번호 103) 및 CDR3(서열번호 104) 및 경쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 105), CDR2(서열번호 106) 및 CDR3(서열번호 107)이다.
일 실시양태에서, 항체는 상응하는 아미노산 서열(서열번호 109)을 암호화하는 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 108) 및 상응하는 아미노산 서열(서열번호 111)을 암호화하는 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 110)을 갖는다. CDR은 중쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 112), CDR2(서열번호 113) 및 CDR3(서열번호 114) 및 경쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 115), CDR2(서열번호 116) 및 CDR3(서열번호 117)이다.
일 실시양태에서, 항체는 상응하는 아미노산 서열(서열번호 119)을 암호화하는 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 118) 및 상응하는 아미노산 서열(서열번호 121)을 암호화하는 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 120)을 갖는다. CDR은 중쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 122), CDR2(서열번호 123) 및 CDR3(서열번호 124) 및 경쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 125), CDR2(서열번호 126) 및 CDR3(서열번호 127)이다.
일 실시양태에서, 항체는 상응하는 아미노산 서열(서열번호 129)을 암호화하는 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 128) 및 상응하는 아미노산 서열(서열번호 131)을 암호화하는 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 130)을 갖는다. CDR은 중쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 132), CDR2(서열번호 133) 및 CDR3(서열번호 134) 및 경쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 135), CDR2(서열번호 136) 및 CDR3(서열번호 137)이다.
일 실시양태에서, 항체는 상응하는 아미노산 서열(서열번호 139)을 암호화하는 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 138) 및 상응하는 아미노산 서열(서열번호 141)을 암호화하는 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 140)을 갖는다. CDR은 중쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 142), CDR2(서열번호 143) 및 CDR3(서열번호 144) 및 경쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 145), CDR2(서열번호 146) 및 CDR3(서열번호 147)이다.
일 실시양태에서, 항체는 상응하는 아미노산 서열(서열번호 149)을 암호화하는 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 148) 및 상응하는 아미노산 서열(서열번호 151)을 암호화하는 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 150)을 갖는다. CDR은 중쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 152), CDR2(서열번호 153) 및 CDR3(서열번호 154) 및 경쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 155), CDR2(서열번호 156) 및 CDR3(서열번호 157)이다.
일 실시양태에서, 항체는 상응하는 아미노산 서열(서열번호 159)을 암호화하는 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 158) 및 상응하는 아미노산 서열(서열번호 161)을 암호화하는 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 160)을 갖는다. CDR은 중쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 162), CDR2(서열번호 163) 및 CDR3(서열번호 164) 및 경쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 165), CDR2(서열번호 166) 및 CDR3(서열번호 167)이다.
일 실시양태에서, 항체는 상응하는 아미노산 서열(서열번호 169)을 암호화하는 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 168) 및 상응하는 아미노산 서열(서열번호 171)을 암호화하는 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 170)을 갖는다. CDR은 중쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 172), CDR2(서열번호 173) 및 CDR3(서열번호 174) 및 경쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 175), CDR2(서열번호 176) 및 CDR3(서열번호 177)이다.
일 실시양태에서, 항체는 상응하는 아미노산 서열(서열번호 179)을 암호화하는 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 178) 및 상응하는 아미노산 서열(서열번호 181)을 암호화하는 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 180)을 갖는다. CDR은 중쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 182), CDR2(서열번호 183) 및 CDR3(서열번호 184) 및 경쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 185), CDR2(서열번호 186) 및 CDR3(서열번호 187)이다.
일 실시양태에서, 항체는 상응하는 아미노산 서열(서열번호 189)을 암호화하는 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 188) 및 상응하는 아미노산 서열(서열번호 191)을 암호화하는 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 190)을 갖는다. CDR은 중쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 192), CDR2(서열번호 193) 및 CDR3(서열번호 194) 및 경쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 195), CDR2(서열번호 196) 및 CDR3(서열번호 197)이다.
일 실시양태에서, 항체는 상응하는 아미노산 서열(서열번호 199)을 암호화하는 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 198) 및 상응하는 아미노산 서열(서열번호 201)을 암호화하는 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 200)을 갖는다. CDR은 중쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 202), CDR2(서열번호 203) 및 CDR3(서열번호 204) 및 경쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 205), CDR2(서열번호 206) 및 CDR3(서열번호 207)이다.
일 실시양태에서, 항체는 상응하는 아미노산 서열(서열번호 209)을 암호화하는 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 208) 및 상응하는 아미노산 서열(서열번호 211)을 암호화하는 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 210)을 갖는다. CDR은 중쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 212), CDR2(서열번호 213) 및 CDR3(서열번호 214) 및 경쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 215), CDR2(서열번호 216) 및 CDR3(서열번호 217)이다.
일 실시양태에서, 항체는 상응하는 아미노산 서열(서열번호 219)을 암호화하는 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 218) 및 상응하는 아미노산 서열(서열번호 221)을 암호화하는 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 220)을 갖는다. CDR은 중쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 222), CDR2(서열번호 223) 및 CDR3(서열번호 224) 및 경쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 225), CDR2(서열번호 226) 및 CDR3(서열번호 227)이다.
일 실시양태에서, 항체는 상응하는 아미노산 서열(서열번호 229)을 암호화하는 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 228) 및 상응하는 아미노산 서열(서열번호 231)을 암호화하는 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 230)을 갖는다. CDR은 중쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 232), CDR2(서열번호 233) 및 CDR3(서열번호 234) 및 경쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 235), CDR2(서열번호 236) 및 CDR3(서열번호 237)이다.
일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 Fc 영역, 예를 들어, 개 Fc 영역, 예를 들어, 개 IgGB Fc 영역을 포함한다.
표 2에서 나타낸 아미노산 및 뉴클레오티드 서열(및/또는 이의 단편)을 포함하나 이에 제한되지 않는 본원에서 설명되는 가변 영역 서열은 항체 분자의 하나 이상의 불변 사슬(및 또는 이의 단편)을 암호화하는 하나 이상의 아미노산 서열 및/또는 뉴클레오티드 서열과 조합하여 사용될 수 있다. 예를 들어, 표 2에서 나타낸 가변 영역 아미노산 서열은 가변 영역 아미노산 서열이 유래한 것과 동일하거나 상이한 종(예를 들어, 인간, 염소, 래트, 양, 닭)의 임의의 항체 분자의 불변 영역에 연결될 수 있다. 바람직하게는, 표 2에서 나타낸 가변 영역 아미노산 서열은 개 항체의 불변 영역에 연결되며 개 IgG A, B, C 또는 D 중 임의의 하나로부터 유래한 불변 영역일 수 있다. 일 실시양태에서, 불변 영역은 개 IgG B 불변 영역이다. 개 IGGB(서열번호 66), 개 IGK(서열번호 73) 또는 개 IGLC5(서열번호 67) 불변 영역이 사용될 수 있다.
또한, 본 위에서 설명되는 바와 같은 항체 및 항원 결합 부분의 변이체가 본 발명의 범위 내에 있다.
본원에서 설명되는 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 변이체는 비변이체 분자에 대하여 적어도 80%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는다. 일 실시양태에서, 서열 동일성은 적어도 95%이다. 일 실시양태에서, 변형은 보존적 서열 변형이다.
본원에 사용되는 용어 "보존적 서열 변형"은 아미노산 서열을 함유하는 항체의 결합 특성에 유의하게 영향을 미치거나 이를 변경시키지 않는 아미노산 변형을 지칭하는 것으로 의도된다. 이러한 보존적 변형은 아미노산 치환, 첨가 및 결실을 포함한다. 변형은 부위 지정 돌연변이생성 및 PCR 매개 돌연변이생성과 같은 당해 기술분야에서 알려진 표준 기법 의해 본 발명의 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 도입될 수 있다. 보존적 아미노산 치환은 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체되는 것이다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 패밀리는 관련 기술분야에 정의되어 있다. 이러한 계열은 염기성 측쇄(예를 들어, 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄(예를 들어, 아스파르트산, 글루탐산), 하전되지 않은 극성 측쇄(예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인, 트립토판), 무극성 측쇄(예를 들어, 알라닌, 발린, 류신, 이소류신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌), 베타-분지형 측쇄(예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소류신) 및 방향족 측쇄(예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)를 갖는 아미노산을 포함한다. 따라서, 본 발명의 항체의 CDR 영역 내에 있는 하나 이상의 아미노산 잔기는 동일한 측쇄 계열의 다른 아미노산 잔기로 대체될 수 있으며 변경된 항체는 본원에서 설명되는 기능적 검정을 사용하여 유지된 기능(즉, CD20 결합)에 대해 시험될 수 있다.
따라서, 이러한 아미노산 변화는 항원에 대한 친화도 또는 특이성과 같은 폴리펩티드의 생물학적 활성, 기능 또는 다른 원하는 특성을 변경하지 않고 전형적으로 이루어질 수 있다. 일반적으로, 폴리펩티드의 비필수 영역의 단일 아미노산 치환은 생물학적 활성을 실질적으로 변경하지 않는다. 또한, 구조 또는 기능이 유사한 아미노산의 치환은 폴리펩티드의 생물학적 활성을 방해할 가능성이 낮다. 본원에서 설명되는 폴리펩티드 및 펩티드를 포함하는 아미노산 잔기의 약어 및 이러한 아미노산 잔기의 보존적 치환이 아래 표 1에 나타나 있다.
아미노산 잔기 및 보존적 아미노산 치환의 예
기존 잔기
세 글자 코드, 단일 글자 코드 		보존적 치환
알라닌, Ala, A Gly, Ser
아르기닌, Arg, R Lys, His
아스파라긴, Asn, N Gln, His
아스파르트산 Asp, D Glu, Asn
시스테인, Cys, C Ser, Ala
글루타민, Gln, Q Asn
글루탐산, Glu, E Asp, Gln
글리신, Gly, G Ala
히스티딘, His, H Asn, Gln
이소류신, Ile, I Leu, Val
류신, Leu, L Ile, Val
리신, lys, K Ar, His
메티오닌, Met, M Leu, Ile, Tyr
페닐알라닌, Phe, F Tyr, Met, Leu
프롤린, Pro, P Ala
세린, Ser, S Thr
트레오닌, Thr, T Ser
트립토판, Trp, W Tyr, Phe
티로신, Tyr, Y Try, Phe
발린, Val, V Ile, Leu
일부 실시양태에서, 본 발명은 하나 이상의 서열 변형을 포함하는, 예를 들어, 서열번호 3 내지 65 또는 서열번호 78 내지 237로부터 선택되는, 본원에서 설명되는 서열과 비교되는 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 변이체이며 비변형된 항체 또는 이의 단편과 비교하여 결합 친화도, 특이성, 열안정성, 발현 수준, 효과기 기능, 글리코실화, 감소된 면역원성 또는 용해도와 같은 특성 중 하나 이상에서 개선이 있는 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 제공한다.
항체가 대규모로 성공적으로 발달될 수 있음을 시사할 수 있는 특성을 측정하는 적합한 방법은 크로마토그래피, 예컨대, 친화도 크로마토그래피 크로마토그래피(단백질 A: MabSelect Sure LX), 음이온 교환 크로마토그래피(Capto Q), 양이온 교환 크로마토그래피(Capto S) 및 완충제 교환(G-25 Fine)을 사용하는 제1 정제를 포함하며, 이후 항체가 온전하게 유지되는지 여부에 대한 평가(예를 들어, 분자량을 결정하기 위한 SDS PAGE 분석, 단량체의 %을 계산하고 응집을 평가하기 위한 HPLC-SEC 및 열안정성(Tm) 연구)가 이어진다.
예를 들어, 단백질의 아스파라긴 연결 글리코실화에 대한 공통 서열이 제거될 수 있다. PMX003(서열번호 26)의 경쇄의 프레임워크 영역 1(FR1)은 단백질의 아스파라긴 연결 글리코실화에 대한 공통 서열인 NVT 서열을 함유한다. 이러한 부위에 결합되는 글리칸을 제거하기 위해, PMX003 mAb의 FR1에 있는 NVT 서열을 PMX006 mAb의 경우 QVT, PMX007 mAb의 경우 AVT, PMX008 mAb의 경우 EVT, PMX009 mAb의 경우 NVA, PMX010 mAb의 경우 SVT 및 PMX011 mAb의 경우 TVT로 돌연변이화하였다. 이러한 변형은 본 발명의 범위 내에 있다.
PMX006 mAb(서열번호 53), PMX007 mAb(서열번호 54), PMX008 mAb(서열번호 55), PMX009 mAb(서열번호 56), PMX010 mAb(서열번호 57), PMX011 mAb(서열번호 58)의 생성된 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 PMX003(서열번호 59), PMX006 mAb(서열번호 60), PMX007 mAb(서열번호 61), PMX008 mAb(서열번호 62), PMX009 mAb(서열번호 63), PMX010 mAb(서열번호 64), PMX011 mAb(서열번호 65)의 FR1 서열은 본 발명의 범위 내에 있으며 이는 서열 표 2에 열거되어 있다. 이는 서열번호 26 대신 PMX003 중쇄와 함께 사용될 수 있다. PMX003에 대한 LC FR1 서열은 서열번호 59에서 나타나 있으며 변형된 LC FR1 서열은 서열번호 60, 61, 62, 63, 64 및 65에서 나타나 있다.
NVT 서열은 PMX001 내지 PMX005(서열번호6, 서열번호16, 서열번호26, 서열번호36, 서열번호46) 및 PMX066 내지 PMX0081(서열번호81, 서열번호91, 서열번호101, 서열번호111, 서열번호121, 서열번호131, 서열번호141, 서열번호151, 서열번호161, 서열번호171, 서열번호181, 서열번호191, 서열번호201, 서열번호211, 서열번호221, 서열번호231)의 경쇄의 FR1의 잔기 위치 11 내지 13에서 발견할 수 있다. PMX001 내지 PMX005 또는 PMX066 내지 PMX081 경쇄의 FR1의 잔기 위치 11 내지 13에서 발견되는 NVT 서열은 QVT, AVT, EVT, NVA, SVT, TVT로부터 선택되는 서열로 돌연변이화될 수 있다. 일 실시양태에서, PMX001 내지 PMX005 또는 PMX066 내지 PMX081 경쇄의 FR1의 잔기 위치 11 내지 13에서 발견되는 NVT 서열은 SVT로 돌연변이화된다.
PMX066(서열번호 81), PMX067(서열번호 91), PMX068(서열번호 101), PMX069(서열번호 111), PMX071(서열번호 131), PMX072(서열번호 141), PMX073(서열번호 151), PMX074(서열번호 161), PMX076(서열번호 181), PMX077(서열번호 191), PMX078(서열번호 201), PMX079(서열번호 211), PMX081(서열번호 231)의 경쇄의 프레임워크 영역 1(FR1)은 단백질의 아스파라긴 연결 글리코실화에 대한 공통 서열인 NVT 서열을 함유한다. 이러한 부위에 결합되는 글리칸을 제거하기 위해, PMX066, PMX067, PMX068, PMX069, PMX071, PMX072, PMX073, PMX074, PMX076, PMX077, PMX078, PMX079 및 PMX081 mAb의 FR1에 있는 NVT 서열은 SVT로 돌연변이화되어 각각 PMX112(서열번호 238), PMX113(서열번호 239), PMX114(서열번호 240), PMX115(서열번호 241), PMX116(서열번호 242), PMX117(서열번호 243), PMX118(서열번호 244), PMX119(서열번호 245), PMX120(서열번호 246), PMX121(서열번호 247), PMX122(서열번호 248), PMX123(서열번호 249) 및 PMX124(서열번호 250)를 생산하였다. 이러한 변형은 본 발명의 범위 내에 있고, 이들 중 경쇄는 각각의 중쇄 대응물과 함께 사용될 수 있으며, 예를 들어, PMX066의 HC(서열번호 79)는 변형된 LC(서열번호 238) 등과 함께 사용될 수 있다.
PMX112 mAb(서열번호 238), PMX113 mAb(서열번호 239), PMX114 mAb(서열번호 240), PMX115 mAb(서열번호 241), PMX116 mAb(서열번호 242), PMX117 mAb(서열번호 243), PMX118 mAb(서열번호 244), PMX119 mAb(서열번호 245), PMX120 mAb(서열번호 246), PMX121 mAb(서열번호 247), PMX122 mAb(서열번호 248), PMX123 mAb(서열번호 249) 및 PMX124 mAb(서열번호 250)의 생성된 경쇄 가변 영역 아미노산 서열은 본 발명의 범위 내에 있으며 서열 표에서 열거되어 있다.
통상의 기술자는 시험관내(in vitro) 및 생체내 발현 라이브러리를 포함하여 본원에서 설명되는 항원 결합 분자를 식별, 수득 및 최적화하는 다양한 상이한 방법이 있음을 인식할 것이다. 이는 실시예에서 더 설명된다. 디스플레이(예를 들어, 리보솜 및/또는 파지 디스플레이) 및/또는 돌연변이생성(예를 들어, 오류 빈발(error-prone) 돌연변이생성)과 같은 당해 기술분야에서 알려진 최적화 기법이 사용될 수 있다. 따라서, 본 발명은 본원에서 설명되는 항체의 서열 최적화 변이체를 또한 포함한다.
일 실시양태에서, 변형이 항체의 면역원성을 감소시키기 위해 이루어질 수 있다. 예를 들어, 한 가지 접근법은 하나 이상의 프레임워크 잔기를 상응하는 개 생식계열 서열로 되돌리는 것이다. 더 구체적으로, 체세포 돌연변이를 거친 항체는 항체가 유래된 생식계열 서열과 다른 프레임워크 잔기를 함유할 수 있다. 이러한 잔기는 항체 프레임워크 서열을 항체가 유래된 생식계열 서열과 비교하여 식별될 수 있다. 일 실시양태에서, 모든 프레임워크 서열은 생식계열 서열이다.
프레임워크 영역 서열의 아미노산 잔기 중 하나 이상을 생식계열 구성으로 되돌리기 위해, 체세포 돌연변이는 예를 들어, 부위 지정 돌연변이생성 또는 PCR 매개 돌연변이생성에 의해 생식계열 서열로 "역돌연변이화"될 수 있다.
다른 유형의 프레임워크 변형은 프레임워크 영역 내에서 또는 심지어 하나 이상의 CDR 영역 내에서 하나 이상의 잔기를 돌연변이화하여 T 세포 에피토프를 제거함으로써 항체의 잠재적인 면역원성을 감소시키는 것을 포함한다.
일부 실시양태에서, 본 개시내용의 항원 결합 단백질, 이의 단편 및 유도체 및 융합 단백질은 번역 후 변형을 거치며, 예를 들어, 글루타민은 고리화되거나 피로글루탐산으로 전환될 수 있으며, 추가적으로 또는 대안적으로 아미노산은 탈아미드화, 이성질체화, 당화 및/또는 산화를 거칠 수 있으나 이에 제한되지 않는다. 본 개시내용의 폴리펩티드는 당해 기술분야에서 잘 알려진 부위에서 글리코실화, 예를 들어, N-연결 또는 O-연결 글리코실화를 포함하는 추가 번역 후 변형을 거칠 수 있다. 이러한 변경을 방지하거나 최소화하기 위해 또는 이러한 처리가 유익한 상황에서 변경을 촉진하기 위해 폴리펩티드의 아미노산 서열에 변화가 이루어질 수 있다. 본 개시내용의 폴리펩티드는 예를 들어 (1) 단백질분해에 대한 민감성을 감소시키고, (2) 산화에 대한 민감성을 감소시키며, (3) 단백질 복합체 형성을 위한 결합 친화도를 변경하고, (4) 결합 친화성을 변경하며, (4) 다른 물리화학적 또는 기능적 특성을 부여하거나 변경하기 위해 변형된 폴리펩티드를 포함한다.
따라서, 다른 실시양태에서, 글리코실화가 변형된다. 예를 들어, 비글리코실화 항체가 제조될 수 있다(즉, 항체는 글리코실화가 결여되어 있다). 일 실시양태에서, 비글리코실화 항체의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열은 서열번호 53, 서열번호 54, 서열번호 55, 서열번호 56, 서열번호 57, 서열번호 58, 서열번호 238, 서열번호 239, 서열번호 240, 서열번호 241, 서열번호 242, 서열번호 243, 서열번호 244, 서열번호 245, 서열번호 246, 서열번호 247, 서열번호 248, 서열번호 249, 서열번호 250을 포함한다. FR1 서열은 서열번호 59, 서열번호 60, 서열번호 61, 서열번호 62, 서열번호 63, 서열번호 64 또는 서열번호 65로서 제공된다.
또한, 글리코실화는 예를 들어, 항원에 대한 항체의 친화도를 증가시키기 위해 변경될 수 있다. 이러한 탄수화물 변형은 예를 들어 항체 서열 내에 있는 하나 이상의 글리코실화 부위를 변경하여 달성될 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 가변 영역 프레임워크 글리코실화 부위를 제거하여 해당 부위에서 글리코실화를 제거하는 하나 이상의 아미노산 치환이 이루어질 수 있다. 이러한 비글리코실화는 항원에 대한 항체의 친화도를 증가시킬 수 있다.
일부 응용분야에서, 결합제는 개 CD20에 결합할 수 있으나 표준 결합제와 비교하여 Fc 수용체에 결합하는 능력이 변경될 수 있다. 일례로, 결합제는 변형된 글리코실화 패턴을 갖는 항체이다. 예를 들어, IgG 분자는 N-연결 올리고당, 예를 들어, 푸코스를 전형적으로 함유한다.
일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 a-푸코실화된다. 암 면역요법에서, 항체는 종양 세포를 고갈시키는 주요 작용 방식으로 Fc 매개 면역 효과기 기능인 항체 의존성 세포 독성(ADCC)에 의존할 수 있다. 이러한 효과기 기능은 항체의 Fc 영역에서 N-연결 글리코실화에 의해 조절된다는 것이 잘 알려져 있다. 특히, Fc N-글리칸상에 코어 푸코스가 부재하면 자연 살해 세포와 같은 면역 효과 세포상에 존재하는 FcγRIIIa에 대한 IgG1 Fc 결합 친화도가 증가하며 향상된 ADCC 활성이 유도되는 것으로 나타났다. 따라서 a-푸코실화된 항체는 치료 효능을 개선하기 위해 유리할 수 있으며 푸코스의 부재/제거는 Fc 수용체와 상호작용하는 항체의 능력을 향상시킨다. 이러한 유형의 항체는 "a-푸코실화된" 것으로 지칭될 수 있다. 이러한 항체는 본원에서 설명되고/되거나 당해 기술분야에서 알려질 수 있는 기법을 사용하여 생산될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체를 암호화하는 핵산 서열은 변형된 글리코실화 능력(예를 들어, 결실, 변형 또는 더 적은 양의 푸코실 트랜스퍼라제)을 갖고 전형적인 푸코스 부분을 첨가하지 못하는 세포주에서 발현될 수 있다.
일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 0.9 내지 4.5 ug/ml(6 내지 30nM) 범위, 예를 들어, 20 nM 미만의 EC50 값을 갖는 CDC 활성을 갖는다.
일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 0.3 nM 미만, 예를 들어, 0.013 ug/ml(0.09nM)의 EC50 값을 갖는 ADCC 활성을 갖는다.
일 실시양태에서, 본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 다음 특성 중 하나 이상을 갖는다:
a) 20 nM 미만의 EC50 값으로 CDC 활성을 갖고/갖거나;
b) 0.3 nM 미만의 EC50 값으로 ADCC 활성을 갖고/갖거나;
c) 100 ug/ml 초과의 일시적 발현 수율을 갖고/갖거나;
d) Uncle로 결정한 Tm1이 58℃보다 높고/높거나
e) 약 0.5 mg/kg 내지 2.5 mg/kg의 용량으로 개에서 생체내 세포 사멸을 제공하고/하거나
f) 개에서 생체내 B 세포 고갈을 적어도 15일 동안 낮은 수준으로 유지하고/하거나
g) 다음의 아미노산 잔기 ENLNLIKAPM(서열번호 303, 서열번호 2의 아미노산 번호 150 내지 159), 예를 들어, ITISHFFKMENLNLIKAPM(서열번호 302, 서열번호 2의 아미노산 번호 141 내지 159) 중 하나 이상, 예를 들어, 1개 내지 10개, 예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개의 아미노 잔기를 포함하거나 이로 구성된다.
ADCC 및 CDC 활성은 실시예에서 설명되는 바와 같이 측정될 수 있다.
일 실시양태에서 항체 및 이의 항원 결합 부분은 실시예에서 측정된 바와 같이, CD20을 발현하는 개 림프종 세포주에서 세포 사멸에 의해 입증된 바와 같이, CDC 및 ADCC 활성을 모두 나타낸다.
일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 위에서 제시되는 특성 중 하나 이상을 가지며 HC CDR 및 LC CDR 및/또는 PMX069, PMX115 또는 PMX070의 HC 및 LC CDRS을 갖는다. 일 실시양태에서, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 PMX069, PMX115 또는 PMX070으로부터 선택된다.
일 실시양태에서, 항체는 표 4에서 설명되는 항체 또는 이의 항원 결합 부분이며 해당 표에서 나타낸 바와 같은 ADCC 또는 CDC에 대한 EC50 값을 갖는다. EC50 값은 실시예에서 설명되는 바와 같이 측정될 수 있다.
일 실시양태에서, 항체의 Fc 부분은 변형될 수 있다.
일 실시양태에서, 변이체에서 있는 하나 이상의 치환은 CDR1, 2 및/또는 3 영역에서 있다. 예를 들어, CDR1, 2 및/또는 3 영역에서 1, 2, 3, 4, 5개 또는 그 이상의 아미노산 치환이 있을 수 있다. 다른 예에서, 1 또는 2개의 아미노산 결실이 있을 수 있다.
일 실시양태에서, 하나 이상의 치환은 프레임워크 영역에서 있다. 예를 들어, 1 내지 20개, 예를 들어, 1 내지 10개, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10개의 아미노산 치환이 HC 가변 영역 및/또는 LC 가변 영역 프레임워크 영역에서 있을 수 있다.
본 발명의 항체는 바람직하게는 KD, IC50 및/또는 EC50 값, 예를 들어, 본원에서 실시예에서 더 설명되는 바와 같은 KD를 가질 수 있다. 적합하게는, KD 값은 항체가 원하는 생물학적 효과를 갖기에 충분하다. 예를 들어, KD는 적어도 약 10 pM 내지 100 uM, 약 100 pM 내지 10 nM 또는 그 이상일 수 있다. EC50 값은 표 4와 같을 수 있으며, 예를 들어, 0.12 내지 0.89 nM일 수 있다. KD, IC50 및/또는 EC50 값은 실시예에서 설명되는 바와 같이 측정될 수 있다.
용어 "KD"는 "평형 해리 상수"를 지칭하며 평형 상태에서 적정 측정으로 또는 해리 속도 상수(Koff)를 결합 속도 상수(Kon)로 나누어 수득한 값을 지칭한다. "KA"는 친화도 상수를 지칭한다. 결합 속도 상수, 해리 속도 상수 및 평형 해리 상수는 항원에 대한 항체의 결합 친화도를 나타내기 위해 사용된다. 결합 및 해리 속도 상수를 결정하는 방법은 당해 기술분야에서 잘 알려져 있다. 형광 기반 기법을 사용하면 높은 민감도와 평형 상태에서 생리학적 완충제의 검체를 검사할 수 있는 능력이 제공된다. BIAcore® SPR 검정과 같은 다른 실험 접근법 및 기구를 사용할 수 있다. 또한, 본 발명은 위에서 설명되는 항체 또는 이의 항원 결합 부분과 경쟁하는 개 CD20에 결합하는 단리된 개 항체 또는 이의 항원 결합 부분에 관한 것이다. 본 발명의 임의의 CD20 항체와 동일한 에피토프 또는 개 CD20의 중첩 에피토프에 또는 이의 근처에 결합하는 항체, 항체 단편 또는 항체 모방체는 CD20에 대한 결합에 대하여 본 발명의 임의의 항체와 교차 경쟁하는 능력을 갖는다. 따라서, 본 발명의 항체는 이러한 교차 반응성을 평가하기 위한 참조 항체로서 사용될 수 있다. 이러한 교차 경쟁 항체는 표준 CD20 결합 검정에서 본원에서 설명되는 항체와 교차 경쟁하는 능력을 기준으로 식별될 수 있다. 예를 들어, BIAcore® 분석, ELISA 검정 또는 유세포 분석법을 사용하여 항체와의 교차 경쟁을 입증할 수 있다.
핵산 서열, 벡터 및 숙주 세포
또한, 본 발명은 본원에서 설명되는 항체 또는 이의 항원 결합 부분의 아미노산 서열, 예를 들어, HC 가변 영역 또는 LC 가변 영역을 암호화하는 핵산 서열에 관한 것이다. 예시적인 서열은 표 2에서 설명되어 있다. 일 실시양태에서, 상기 핵산은 서열번호 3, 5, 13, 15, 23, 25, 33, 35, 43, 45, 78, 80, 88, 90, 98, 100, 108, 110, 118, 120, 128, 130, 138, 140, 148, 150, 158, 160, 168, 170, 178, 180, 188, 190, 198, 200, 208, 210, 218, 220, 228, 230, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 270,271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300 또는 301 이에 대해 적어도 75%, 80% 또는 90% 서열 상동성을 갖는 핵산 서열로부터 선택된다. 일 실시양태에서, 상기 핵산 서열은 링커를 사용하여 제2 핵산 서열에 연결된다. 일 실시양태에서, 상기 제2 핵산은 추가 치료 부분을 암호화한다. 일 실시양태에서, 상기 링커는 핵산 링커이다. 예시적인 핵산이 아래에서 나타나 있다. 그러나, 통상의 기술자는 유전자 코드의 퇴화(degeneracy)로 인해 다른 서열이 예상된다는 것을 이해할 것이다.
또한, 코돈 최적화 뉴클레오티드 서열이 본 발명의 범위 내에 있으며, 이는 서열번호 68 및 69를 포함한다.
본 발명에 따른 핵산은 DNA 또는 RNA를 포함할 수 있으며 전체적으로 또는 부분적으로 합성되거나 재조합적으로 생산될 수 있다. 본원에서 제시되는 뉴클레오티드 서열에 대한 언급은 문맥상 달리 요구하지 않는 한 특정 서열을 갖는 DNA 분자를 포함하며 U가 T를 치환하는 특정 서열을 갖는 RNA 분자를 포함한다.
또한, 본 발명은 위에서 정의되는 바와 같은 적어도 하나의 핵산을 포함하는 핵산 구축물에 관한 것이다. 구축물은 플라스미드, 벡터, 전사 또는 발현 카세트의 형태일 수 있다.
또한, 본 발명은 본원에서 설명되는 CD20 결합 분자를 암호화하는 핵산을 포함하는 벡터에 관한 것이다. 용어 "벡터"는 핵산 서열이 삽입되거나 클로닝될 수 있는, 예를 들어, 플라스미드, 박테리오파지 또는 바이러스로부터 유래한 핵산 분자, 바람직하게는 DNA 분자를 지칭한다. 벡터는 바람직하게는 하나 이상의 고유한 제한 부위를 함유하며 표적 세포 또는 조직 또는 전구 세포 또는 이의 조직을 포함하는 정의된 숙주 세포에서 자가 복제가 가능하거나 클로닝된 서열이 재현 가능하도록 정의된 숙주의 유전체와 통합될 수 있다. 따라서, 벡터는 자가 복제 벡터, 즉, 복제가 염색체 복제와 독립적인 염색체외 개체로서 존재하는 벡터, 예를 들어, 선형 또는 폐쇄형 원형 플라스미드, 염색체외 요소, 미니염색체 또는 인공염색체일 수 있다. 벡터는 자가 복제를 보장하는 임의의 수단을 함유할 수 있다. 대안적으로, 벡터는 숙주 세포에 도입되는 경우 유전체에 통합되고 통합된 염색체(들)와 함께 복제되는 벡터일 수 있다. 벡터 시스템은 단일 벡터 또는 플라스미드, 2개 이상의 벡터 또는 플라스미드를 포함할 수 있으며, 이는 숙주 세포의 유전체로 도입될 전체 DNA 또는 트랜스포존을 함께 함유한다. 벡터의 선택은 벡터와 벡터가 도입될 숙주 세포의 적합성에 따라 전형적으로 다르다. 또한, 벡터는 적합한 형질전환체의 선택에 사용될 수 있는 항생제 저항 유전자와 같은 선택 마커를 포함할 수 있다. 이러한 저항 유전자의 예는 통상의 기술자에게 잘 알려져 있다. 일 실시양태에서, 벡터는 WO2021176362에서 설명된 것과 같은 아데노 연관 바이러스(AAV) 벡터이다.
일부 실시양태에서, 핵산은 또한 리더 서열을 포함할 수 있다. 다른 실시양태에서, 이는 리더 서열을 포함하지 않는다. 천연 면역글로불린 생식계열 리더 서열, 예컨대, 중쇄의 경우 서열번호 71, PMX001 내지 PMX005 및 PMX066 내지 PMX081 mAb의 경쇄의 경우 서열번호 72를 포함하는 임의의 적합한 리더 서열이 사용될 수 있거나 캄파트(Campath) 리더 서열(서열번호 70)(US 8,362,208 B2 참조)과 같은 다른 리더 서열이 단백질 발현을 향상시키기 위해 선택될 수 있다.
일부 실시양태에서, 핵산은 또한 신호 펩티드, 즉, 분비 경로의 제1 막을 통한 분비를 목적으로 하는 단백질의 전위를 매개하는 (면역글로불린과 같은) 분비 단백질의 N 말단상에 있는 짧은 아미노산 서열(13 내지 36개의 아미노산)을 포함할 수 있다. 이러한 서열은 성숙한 단백질에서 존재하지 않으며, 동시 번역 과정에서 절단되나, 단백질의 분비와 정확한 발현을 매개한다. 적합한 신호 서열을 사용하여 재조합 단백질의 발현을 최적화할 수 있다.
또한, 본 발명은 위에서 설명되는 바와 같은 하나 이상의 핵산 구축물을 포함하는 단리된 재조합 숙주 세포에 관한 것이다. 본 발명에서 유용한 숙주 세포는 원핵 세포, 효모 또는 고등 진핵 세포이며 이는 항체 암호화 서열을 함유하는 재조합 박테리오파지 DNA, 플라스미드 DNA 또는 코스미드 DNA 발현 벡터로 형질전환된 박테리아(예를 들어, 대장균(E. coli), 고초균(B. subtilis)); 항체 암호화 서열을 함유하는 재조합 효모 발현 벡터로 형질전환된 효모(예를 들어, 사카로미세스(Saccharomyces), 피키아(Pichia)); 항체 암호화 서열을 함유하는 재조합 바이러스 발현 벡터(예를 들어, 바큘로바이러스(Baculovirus))로 감염된 곤충 세포 시스템; 항체 암호화 서열을 함유하는 재조합 바이러스 발현 벡터(예를 들어, 꽃양배추 모자이크 바이러스(cauliflower mosaic virus, CaMV); 담배 모자이크 바이러스(tobacco mosaic virus, TMV))로 감염되었거나 재조합 플라스미드 발현 벡터(예를 들어, Ti 플라스미드)로 형질전환된 식물 세포 시스템; 또는 포유동물 세포의 유전체(예를 들어, 메탈로티오네인 프로모터) 또는 포유동물 바이러스(예를 들어, 아데노바이러스 후기 프로모터(adenovirus late promoter), 백시니아 바이러스 7.5K 프로모터(vaccinia virus 7.5K promoter))로부터 유래한 프로모터를 함유하는 재조합 발현 구축물을 보유하는 포유동물 세포 시스템(예를 들어, COS, CHO, BHK, 293, 3T3 세포)을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
본 발명에서 숙주세포로서 유용한 원핵 생물은 그람 음성 또는 그람 양성 유기체, 예컨대, 대장균, 고초균, 엔테로박터(Enterobacter), 에르위니아(Erwinia), 클렙시엘라(Klebsiella), 프로테우스(Proteus), 살모넬라(Salmonella), 세라티아(Serratia) 및 시겔라(Shigella)뿐만 아니라 간균(Bacilli), 슈도모나스(Pseudomonas) 및 스트렙토미세스(Streptomyces)를 포함한다. 일 클로닝 숙주는 대장균 294(ATCC 31,446)이나, 다른 균주, 예컨대, 대장균 B, 대장균 X1776(ATCC 31,537) 및 대장균 W3110(ATCC 27,325)도 적합하다. 일 실시양태에서, 본원에서 설명되는 항CD20 항체를 제조하는 방법이 제공되며, 방법은 항체를 암호화하고 항체를 단리하는 폴리뉴클레오티드의 발현에 적합한 조건하에서 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함한다.
항체를 암호화하는 핵산은 생체내에서 암호화된 단백질을 생산하고 치료 효과를 매개하기 위해 개체에게 항체를 두여하기 위해 사용될 수 있다. 대상체로의 폴리뉴클레오티드의 전달은 예를 들어, mRNA 또는 DNA를 세포, 예를 들어, 근육 세포로 직접 도입하여 개체에게 폴리뉴클레오티드 또는 발현 벡터가 투여되도록 직접적일 수 있다. 또한, 폴리뉴클레오티드가 투여 전 시험관내에서 세포로 형질전환되는 간접적인 도입이 예상된다. 또한, 결함이 있거나 약독화된 바이러스와 같은 바이러스 벡터가 사용될 수 있다.
일 실시양태에서, 본원에서 설명되는 항CD20 항체를 제조하는 방법이 제공되며, 방법은 항체를 암호화하고 항체를 단리하는 폴리뉴클레오티드의 발현에 적합한 조건하에서 숙주 세포를 배양하는 단계를 포함한다.
또한, 본 발명은 개 CD20 및 상이한 종으로부터 유래한 세포주, 예를 들어, HEK와 같은 인간 세포주를 포함하는 이종 검정 또는 발현 시스템에 관한 것이다.
검정은 개 CD20을 상이한 종으로부터 유래한 세포주, 예를 들어, 상이한 포유류로부터 유래한 세포주, 예를 들어, 설치류 세포주 또는 HEK와 같은 인간 세포주와 접촉시키는 단계를 포함한다. 예를 들어, 세포주는 개 CD20으로 형질감염되어 안정적이거나 일시적인 방식으로 개 CD20을 발현한다.
면역접합체 및 다른 결합제
본 발명은 본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는 면역접합체 및 기타 결합제에 관한 것이다. 예를 들어, 본 발명에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 치료 부분 또는 비치료 부분에 접합될 수 있다.
일 실시양태에서, 치료 부분은 예를 들어, 항체 또는 항체 단편(예를 들어, Fab, F(ab')2, Fv, 단쇄 Fv 단편(scFv) 또는 단일 도메인 항체, 예를 들어, VH 또는 VHH 도메인) 또는 항체 모방 단백질로부터 선택되는 관심 표적 항원에 결합하는 결합 분자이다.
일 실시양태에서, 본원에서 설명되는 바와 같은 CD20에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 제2 부분을 포함하는 단백질 또는 폴리펩티드는 융합 단백질이다. 일 실시양태에서, 본원에서 설명되는 바와 같은 CD20에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분 및 제2 부분을 포함하는 단백질 또는 폴리펩티드는 약물 접합체이다.
본원에서 사용되는 "접합체"는 약물에 결합된/접합된 본원에서 설명되는 CD20에 결합하는 항체를 포함하는 조성물을 지칭한다.
이러한 접합체는 약물이 공유 결합된 CD20에 결합하는 항체를 포함하는 "약물 접합체" 및 약물이 비공유 결합된 CD20 min에 결합하는 항체를 포함하는 "비공유 약물 접합체"를 포함하다.
본원에서 사용되는 "약물 접합체"는 약물이 공유 결합된 항체를 포함하는 조성물을 지칭한다. 약물은 적합한 링커 부분을 통해 직접적으로 또는 간접적으로 항체 단편에 공유 결합될 수 있다. 약물은 아미노 말단, 카르복실 말단과 같은 임의의 적합한 위치에서 또는 적합한 아미노산 측쇄를 통해 항체에 결합될 수 있다.
일 실시양태에서, 항체는 2개의 부분을 연결하기 위해 펩티드 링커 또는 다른 적합한 링커를 사용하여 제2 부분에 연결된다.
용어 "펩티드 링커"는 하나 이상의 아미노산을 포함하는 펩티드를 지칭한다. 펩티드 링커는 1 내지 50개, 예를 들어 1 내지 20개의 아미노산을 포함한다. 펩티드 링커는 당해 기술분야에서 알려져 있으며 비제한적인 예가 본원에서 설명된다. 적합한 비면역원성 링커 펩티드는 예를 들어, G 및/또는 S 잔기, (G4S)n, (SG4)n 또는 G4(SG4)n 펩티드 링커를 포함하는 링커이며, 여기서 "n"은 일반적으로 1과 10 사이의 수, 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10이다.
결합제는 다중특이적, 예를 들어, 이중특이적일 수 있다.
일 실시양태에서, 결합 분자는 이중특이적이다. 따라서, 일 양태에서, 본 발명은 상기 항체와 상이한 결합 특이성을 갖는 제2 부분에 연결된 본원에서 설명되는 항체를 포함하는 이중특이적 분자에 관한 것이다. 따라서, 제2 항체는 상이한 표적 항원, 예를 들어, 관심 표적에 결합한다.
일 실시양태에서, 결합 분자, 예를 들어 단백질 또는 구축물은 다중특이적이며 추가, 즉 제3, 제4, 제5 등의 부분을 포함한다.
또한, 치료 부분은 반감기 연장 부분, 세포독소 또는 방사성 동위원소로부터 선택될 수 있다.
비치료 부분은 표지, 리포솜 또는 나노입자로부터 선택될 수 있다. 표지는 검출 가능하거나 기능적이다. 표지는 형광단, 형광물질, 방사성표지, 효소, 화학발광물질, 핵 자기 공명 활성 표지 또는 감광제를 포함하나 이에 제한되지 않는 신호를 생성하거나 생성하도록 유도될 수 있는 임의의 분자일 수 있다. 따라서, 결합은 형광 또는 발광, 방사능, 효소 활성 또는 흡광도를 검출하여 검출될 수 있고/있거나 측정될 수 있다.
본 발명에 따르면, 하나의 부분에 연결되는 항체 및 항원 결합 부분은 다른 부분에 더 연결될 수 있다. 예를 들어, a가 치료 부분에 연결될 수 있으며 비치료 부분에 대한 추가 연결은 항체 또는 부분을 통해 제공될 수 있다.
일 실시양태에서, 본 발명에 따른 결합제, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 반감기 연장 부분을 포함할 수 있다. 이는 개 혈청 알부민에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로부터 선택될 수 있다. 대안적으로, 연장된 반감기는 PEG화를 통해 부여될 수 있다.
사용되는 용어 "반감기"는 예를 들어, 자연 메커니즘에 의한 서열 또는 화합물의 분해 및/또는 서열 또는 화합물의 제거 또는 격리로 인해 아미노산 서열, 화합물 또는 폴리펩티드의 혈청 농도가 생체내에서 50%까지 감소하기 위해 소요되는 시간을 일반적으로 지칭할 수 있다. 본 발명의 아미노산 서열, 화합물 또는 폴리펩티드의 생체내 반감기는 약동학적 분석과 같이 그 자체로 알려진 임의의 방식으로 결정될 수 있다. 적합한 기법은 통상의 기술자에게 명백할 것이다. 반감기는 tl/2-알파, tl/2-베타 및 곡선하 면적(AUC)과 같은 매개변수를 사용하여 표현될 수 있다. 반감기(t 알파 및 t 베타) 및 AUC는 시간에 따른 접합체 또는 융합체의 혈청 농도 곡선으로부터 결정될 수 있다. 따라서, 본원에서 사용되는 용어 "반감기"는 tl/2-베타 또는 최종 반감기를 특히 지칭한다(여기서, tl/2-알파 및/또는 AUC 또는 둘 모두는 고려 대상에서 제외될 수 있음).
예를 들어, 제1 단계(알파 단계)에서 약물 조성물(예를 들어, 약물 접합체, 비공유 약물 접합체, 약물 융합체)은 일부가 제거된 채로 환자에서 분포를 주로 거친다. 제2 단계(베타 단계)는 약물 조성물(예를 들어, 약물 접합체, 비공유 약물 접합체, 약물 융합체)이 분포되고 혈청 농도가 약물 조성물이 환자로부터 제거됨에 따라 감소하는 최종 단계이다. t 알파 반감기는 제1 단계의 반감기이며 t 베타 반감기는 제2 단계의 반감기이다.
약제학적 조성물
다른 양태에서, 본원에서 설명되는 항체 또는 단편 및 선택적으로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물이 제공된다. 본원에서 사용되는 약제학적 조성물은 반려 동물을 치료하기 위해 사용되는, 즉, 수의학적 용도를 위한 조성물, 즉, 수의학적 조성물을 지칭한다. 바람직한 실시양태에서, 치료되는 동물은 개이다.
약제학적 조성물은 약제학적 허용 가능한 담체를 선택적으로 포함할 수 있다. 항체, 단백질 또는 구축물 또는 약제학적 조성물은 경구, 국소, 비경구, 설하, 직장, 질, 안구, 비강내, 폐, 피내, 유리체내, 근육내, 복강내, 정맥내, 피하, 두개내, 경피, 경점막, 흡입, 또는 국소, 특히, 귀, 코, 눈 또는 피부, 또는 흡입을 포함하나 이에 제한되지 않는 임의의 종래의 경로로 투여될 수 있다.
비경구 투여는 예를 들어, 정맥내, 근육내, 동맥내, 복강내, 비강내, 직장, 방광내, 피내, 국소 또는 피하 투여를 포함한다. 바람직하게는, 조성물은 비경구 투여된다.
약학적으로 허용 가능한 담체는 미립자일 수 있으므로, 조성물은 예를 들어 정제 또는 분말 형태일 수 있다. 용어 "담체"는 본 발명의 약물 항체 접합체와 함께 투여되는 희석제, 보조제 또는 부형제를 지칭한다. 이러한 약제학적 담체는 액체, 예컨대, 물 및 오일, 예를 들어, 석유, 동물성, 식물성 또는 합성 기원의 오일, 예컨대, 땅콩유, 대두유, 광유, 참깨유 등일 수 있다. 담체는 식염수, 아카시아검, 젤라틴, 전분 페이스트, 활석, 케라틴, 콜로이드 실리카, 우레아 등일 수 있다. 또한 보조제, 안정화제, 증점제, 윤활제 및 착색제가 사용될 수 있다. 일 실시양태에서, 동물에게 투여되는 경우, 본 발명의 항체 또는 조성물 및 약제학적으로 허용 가능한 담체는 멸균된다. 본 발명의 약물 항체 접합체가 정맥내로 투여되는 경우 물은 바람직한 담체이다. 식염수, 수성 덱스트로스 및 글리세롤 용액도 특히 주사용 용액의 경우, 액체 담체로서 사용될 수 있다. 또한, 적합한 약제학적 담체는 부형제, 예컨대, 전분, 글루코스, 락토스, 수크로스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 가루분, 초크(chalk), 실리카 겔, 나트륨 스테아레이트, 글리세롤 모노스테아레이트, 활석, 나트륨 클로라이드, 건조 탈지유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등을 포함한다. 본 발명의 조성물은 또한 원하는 경우, 소량의 습윤제 또는 유화제 또는 pH 완충제를 함유할 수 있다.
본 발명의 약제학적 조성물은 액체 형태, 예를 들면, 용액, 유제 또는 현탁액일 수 있다. 액체는 주사, 주입(예를 들어, IV 주입) 또는 피하 전달에 유용할 수 있다. 경구 투여용인 경우 조성물은 바람직하게는 고체 또는 액체 형태이고, 여기에서 반고체, 반액체, 현탁액 및 겔 형태는 본원에서 고체 또는 액체로 간주되는 형태 내에 포함된다.
경구 투여용 고체 조성물로서 상기 조성물은 산제, 과립제, 압축정, 환제, 캡슐제, 츄잉껌, 웨이퍼 등의 형태로 제형화할 수 있다. 이러한 고체 조성물은 일반적으로 하나 이상의 불활성 희석제를 함유한다. 또한 카르복시메틸셀룰로오스, 에틸 셀룰로오스, 미세결정질 셀룰로오스 또는 젤라틴과 같은 결합제; 전분, 락토스 또는 덱스트린과 같은 부형제; 알긴산, 나트륨 알기네이트, 옥수수 전분 등과 같은 붕해제; 마그네슘 스테아레이트와 같은 윤활제; 콜로이드 규소 다이옥사이드와 같은 활택제; 수크로스 또는 사카린과 같은 감미제; 페퍼민트, 메틸 살리실레이트 또는 오렌지 향료와 같은 향미제; 및 착색제 중 하나 이상이 존재할 수 있다. 조성물이 캡슐(예를 들어 젤라틴 캡슐) 형태인 경우, 이는 위의 유형의 물질에 더하여 폴리에틸렌 글리콜, 사이클로덱스트린 또는 지방유와 같은 액체 담체를 함유할 수 있다.
조성물은 액체 형태, 예를 들어, 엘릭서, 시럽, 용액, 유제 또는 현탁액일 수 있다. 액체는 경구 투여 또는 주사 전달에 유용할 수 있다. 경구 투여용일 경우 조성물은 감미제, 보존제, 염료/착색제 및 향미 강화제 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 주사 투여용 조성물에는 계면활성제, 보존제, 습윤제, 분산제, 현탁제, 완충제, 안정화제 및 등장화제 중 하나 이상이 포함될 수 있다.
조성물은 하나 이상의 투여 단위 형태를 취할 수 있다. 특정 실시양태에서, 조성물을 치료가 필요한 영역에 국소적으로 또는 정맥 주사 또는 주입에 의해 투여하는 것이 바람직할 수 있다.
질환 치료 방법
본 발명은 질환 치료, 본원에서 설명되는 약제학적 조성물 또는 제제 또는 본 발명의 항체 또는 항원 결합 부분의 투여 방법까지 더 확장된다. 또한, 질병 치료에 사용하기 위해 본원에서 설명되는 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는 본원에서 설명되는 약제학적 조성물 또는 제형 또는 결합 분자 또는 융합 단백질이 예상된다.
특히, 본 발명은 B 세포에 의해 매개되는 병태의 치료를 필요로 하는 개 대상체에서 B 세포에 의해 매개되는 병태를 치료하는 방법에 관한 것이며, 이는 유효량의 본원에서 설명되는 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 투여하는 단계를 포함한다.
또한, 본 발명의 양태는 개 대상체에서 B 세포에 의해 매개되는 병태의 치료에 사용하기 위한 본원에서 설명되는 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 약제학적 조성물이다.
예를 들어, 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 개 혈액 및/또는 조직의 B 세포 림프종 세포를 고갈시키기 위해 사용될 수 있다. B 세포에 의해 매개되는 병태는 B 세포 림프종(예를 들어, 미만성 대세포 B 세포 림프종, 호지킨 및 비호지킨 림프종, 소포성 림프종, 점막 연관 림프 조직 림프종 (MALT), 소세포 림프구성 림프종, 만성 림프구성 백혈병, 외투 세포 림프종, 버킷 림프종, 종격동 거대 B 세포 림프종, 발덴스트롬 마크로글로불린혈증, 결절 변연부 B 세포 림프종 (NMZL), 비장 변연부 림프종 (SMZL), 혈관내 거대 B 세포 림프종, 일차 삼출성 림프종, 림프종성 육아종증) 백혈병 또는 면역 매개 질환으로부터 선택된다. 면역 매개 질환은 자가면역 질환일 수 있다. 예는 자가면역 용혈성 빈혈, 면역 매개 혈소판감소증, 자가면역 수포성 질환, 면역 매개 관절염 및 아토피성 피부염, 류마티스 관절염, 전신 홍반 루푸스(SLE), 쇼그렌 증후군, 혈관염, 다발성 경화증, 그레이브스병, 특발성 혈소판감소증, 피부근염, 면역 매개 혈소판감소증, 다발성근육증, 천포창, 면역 매개 용혈성 빈혈 및 수포성 유사천포창을 포함하나 이에 제한되지 않는다.
특정 장애 또는 병태의 치료에 효과적이고 활성인 치료제의 양은 장애 또는 병태의 성격에 따라 달라지며 표준 임상 기법에 의해 결정될 수 있다. 또한, 시험관내 또는 생체내 검정이 최적의 투여량 범위를 식별하는 데 도움이 되도록 선택적으로 사용될 수 있다. 조성물에 사용되는 정확한 용량은 투여 경로, 질환 또는 장애의 심각도에 따라 달라지며 의사의 판단 및 각각의 환자의 상황에 따라 결정되어야 한다. 연령, 체중, 성별, 식이, 투여 시간, 배설 속도, 숙주의 상태, 약물 조합, 반응 민감도 및 질환의 중증도와 같은 요인을 고려하여야 한다.
전형적으로, 양은 조성물 중량을 기준으로 본 발명의 항체 또는 이의 단편의 적어도 약 0.01%이다. 경구 투여용인 경우 그 양은 조성물의 중량을 기준으로 약 0.1% 내지 약 80% 범위로 다양할 수 있다. 바람직한 경구용 조성물은 조성물의 중량을 기준으로 본 발명의 항체 또는 이의 단편의 약 4% 내지 약 50%를 포함할 수 있다.
본 발명의 바람직한 조성물은 비경구 투여 단위량에 본 발명의 항체 또는 이의 단편이 약 0.01중량% 내지 약 2중량% 함유되도록 제조된다.
정맥내 또는 피하 주사와 같은 주사에 의한 투여의 경우, 조성물은 대상체 체중의 약 전형적으로 약 0.01 mg/kg 내지 약 250 mg/kg, 예를 들어, 0.1 mg/kg 내지 약 250 mg/kg, 예를 들어, 동물 체중의 약 0.1 mg/kg 내지 약 20 mg/kg 및 더 바람직하게는 동물 체중의 약 1 mg/kg 내지 약 10 mg/kg을 포함할 수 있으나, 0.1 mg/kg 미만 또한 예상된다. 일 실시양태에서, 조성물은 약 0.5 내지 30 mg/kg, 예를 들어, 약 5 내지 25 mg/kg, 약 10 내지 20 mg/kg, 약 0.5 내지 5 mg/kg, 약 0.5 내지 2.5 mg/kg, 약 0.5 내지 2.0 mg/kg 또는 약 2 또는 3 mg/kg의 용량으로 투여된다. 일 실시양태에서, 조성물은 2 내지 50mg/ml의 용량으로 투여된다. 일 실시양태에서, 조성물은 0.5mg/ml 내지 2.5 mg/ml 또는 0.5mg/ml 내지 5mg/ml의 용량으로 투여된다. 투약 일정은 예를 들어 주 1회부터 2, 3, 4주마다 1회까지 또는 투여 사이에 최대 8주까지 다양할 수 있다. 일 실시양태에서, 조성물은 3주 내지 4주마다 0.5mg/ml 내지 2.5 mg/ml, 예를 들어, 3주 내지 4주마다 0.5 mg/ml 또는 2.5 mg/ml의 용량으로 투여된다. 적합하게는, 투여량 사이에 3 내지 4주 간격을 허용하도록 CD20 양성 세포의 장기간 고갈을 제공하도록 선택한다. 다중 용량, 적합하게는 약 6회 이상의 반복 용량까지 투여될 수 있다.
일 실시양태에서, 치료 후, 대상체는 적어도 7일, 또는 적어도 14일, 또는 적어도 21일, 또는 적어도 28일, 또는 적어도 40일, 또는 적어도 50일, 또는 적어도 60일 동안 질환이 진행되지 않는다. 일 실시양태에서, 치료 후, 대상체는 적어도 7일, 또는 적어도 14일, 또는 적어도 21일, 또는 적어도 28일, 또는 적어도 40일, 또는 적어도 50일, 또는 적어도 60일 동안 질환이 진행되지 않는다.
일 실시양태에서, 생존 일수, 무병 일수 또는 질환이 진행되지 않는 일수는 적어도 2개월, 또는 적어도 3개월, 또는 적어도 4개월, 예를 들어, 적어도 5개월, 예컨대, 적어도 6개월이다.
일 실시양태에서, 생존 일수, 무병 일수, 또는 질환이 진행되지 않는 일수는 적어도 9개월, 200일, 300일 또는 3년 또는 그 이상이다. 일 실시양태에서, 이는 적어도 1년, 2년, 3년 또는 그 이상이다. 본 발명은 반려 동물, 예를 들어, 개에서 CD20 매개 질환 또는 장애를 치료하거나 예방하는 방법을 제공하며, 이는 유효량의 본 발명의 항체 또는 단편을 이를 필요로 하는 동물에게 투여하는 단계를 포함한다.
본원에서 사용되는 "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"는 질환 또는 장애를 억제하거나 완화하는 것을 의미한다. 예를 들어, 치료는 질환 또는 장애와 연관되는 증상의 발생 연기 및/또는 상기 질환으로 인해 발생할 것이거나 발생할 것으로 예상되는 증상의 중증도의 감소를 포함할 수 있다. 용어는 기존 증상의 개선, 추가 증상의 예방, 해당 증상의 기저 원인의 개선 또는 예방을 포함한다. 따라서, 용어는 치료되는 포유류, 예를 들어, 개 환자 중 적어도 일부에 유익한 결과가 부여되고 있음을 나타낸다. 많은 의학적 치료는 치료를 받는 일부 환자에게 효과적이나 전부에게 효과적이지는 않다. 예를 들어, B 세포 림프종 치료에서, 증상의 개선은 치료 후 림프절을 측정하고 성공적인 치료의 표시로 림프절 크기의 감소를 관찰하여 평가될 수 있다.
용어 "대상체" 또는 "환자"는 치료, 관찰 또는 실험의 대상이 되는 개를 지칭한다. 의심의 여지를 없애기 위해, 인간의 치료는 제외된다.
본 발명의 분자 또는 약제학적 조성물은 단독 활성 성분으로서 또는 하나 이상의 다른 치료제, 예를 들어, 암 요법과 조합하여 투여될 수 있다. 치료제는 질환 치료에 유용한 화합물 또는 분자이다. 치료제의 예는 항체, 항체 단편, 약물, 독소, 뉴클레아제, 호르몬, 면역조절제, 친세포자멸사제, 항혈관신생제, 붕소 화합물, 광활성제 또는 염료, 방사성 동위원소, 면역억제제 또는 면역학적 조절제, 예컨대, 사이토카인 또는 케모카인을 포함한다. 일례로, 본 발명의 분자 또는 약제학적 조성물은 여러 달의 기간 동안 거의 매주 단위로 투여되는 여러 주사 및 경구 약물(엘아스파라기나제, 빈크리스틴, 사이톡산, 프레드니손 및 독소루비신)을 포함하는 다작용제 CHOP 기반 화학요법 프로토콜과 조합하여 투여될 수 있다. 투여는 본 발명의 화합물의 투여와 동시에, 이전에 또는 이후에 있을 수 있다.
또한, 본 발명은 종양 성장 또는 전이를 억제하는 방법에 관한 것이며, 이는 종양 세포를 유효량의 본원에서 설명되는 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 약제학적 조성물과 접촉시키는 단계를 포함한다. 방법은 시험관내, 생체내 또는 생체외 방법일 수 있다.
또한, 본 발명은 CD20을 발현하는 종양 세포를 사멸시키는 방법에 관한 것이며, 이는 세포를 본원에서 설명되는 항체 또는 약제학적 조성물과 접촉시켜 CD20을 발현하는 세포의 사멸을 발생시키는 단계를 포함한다. 종양 세포는 개 종양 세포이다. 방법은 시험관내, 생체내 또는 생체외 방법일 수 있다.
또한, 본원에서 설명되는 항체 또는 약제학적 조성물을 사용하여 개 CD20을 발현하는 세포를 제거하는 방법이 제공된다. 방법은 시험관내, 생체내 또는 생체외 방법일 수 있다.
키트
다른 양태에서, 본 발명은 예를 들어, 본원에서 열거되는 질환 또는 면역 반응의 치료 또는 예방을 위한 및/또는 질환의 진단, 예후 또는 모니터링을 위해 CD20을 검출하기 위한 키트를 제공하며, 이는 본 발명의 항체 및 선택적으로 사용을 위한 지시를 포함한다. 이러한 키트는 CD20 단백질의 검출을 돕기 위한 다른 구성요소, 포장, 지시 또는 물질을 포함할 수 있다. 키트는 CD20에 결합하는 표지된 항체 또는 CD20에 결합하는 항체를 포함하는 결합 분자 및 표지를 검출하기 위한 하나 이상의 화합물을 포함할 수 있다.
항체 제조 방법
본원에서 설명되는 항체는 CD20 항원으로 자극 시 개 항체를 발현하는 이식유전자 포유류, 예를 들어, 설치류로부터 수득될 수 있다. 이러한 설치류는 WO20018/189520 및 WO2020/074874에서 설명되어 있다.
따라서, 본원에서 설명되는 항체 또는 단편은 개 CD20 항원으로 자극 시 항체를 발현하는 포유류, 예를 들어, 설치류, 예를 들어, 이식유전자 동물로부터 수득될 수 있다. 이식유전자 설치류, 예를 들어, 마우스는 내인성 항체 유전자를 발현하는 능력이 감소될 수 있다. 따라서, 일 실시양태에서, 설치류는 내인성 경쇄 및/또는 중쇄 항체 유전자를 발현하는 능력이 감소된다. 따라서, 설치류, 예를 들어, 마우스는 내인성 카파 및 람다 경쇄 및/또는 중쇄 항체 유전자의 발현을 파괴하여 마우스 경쇄 및/또는 중쇄가 생산되지 않도록 하는 변형을 포함할 수 있으며, 이는 예를 들어, 아래에 더 설명되는 바와 같다. 이러한 이식유전자 설치류는 당해 기술분야에서 설명되어 있으며 이는 아래의 실시예에서 더 설명된다.
또한, CD20에 결합할 수 있는 개 항체를 생산하는 방법이 본 발명의 범위 내에 있으며, 상기 방법은
a) 이식유전자 설치류, 예를 들어, 마우스를 CD20 항원으로 면역화하는 단계로서, 상기 설치류는 배열되지 않은 개 V, D 및 J 유전자를 포함하는 핵산 구축물을 발현하는 단계,
b) 개 항체를 단리하는 단계를 포함한다.
또한, 개 CD20에 결합할 수 있는 항체를 생산하는 방법이 본 발명의 범위 내에 있으며, 상기 방법은
a) 이식유전자 설치류, 예를 들어, 마우스를 CD20 항원으로 면역화하는 단계로서, 상기 설치류는 배열되지 않은 개 V, D 및 J 유전자를 포함하는 핵산 구축물을 발현하는 단계,
b) 중쇄 및 경쇄 서열을 포함하는 서열의 라이브러리를 상기 설치류, 예를 들어, 마우스로부터 생성하는 단계, 및
c) 중쇄 및 경쇄 서열을 포함하는 항체를 상기 라이브러리로부터 단리하는 단계를 포함한다.
추가 단계는 예를 들어, 실시예에서 나타낸 기능적 검정을 사용하여 CD20에 결합하는 항체를 식별하는 단계를 포함할 수 있다.
시험관내 발현 라이브러리를 사용하여 본원에서 설명되는 폴리펩티드, 핵산, 숙주 세포, 생산물 및 조성물을 제조하거나 생성하는 방법은
a) 아미노산 서열을 암호화하는 핵산 서열의 세트, 컬렉션 또는 라이브러리를 제공하는 단계 및
b) CD20에 결합할 수 있거나 이에 대한 친화도를 가질 수 있는 아미노산 서열에 대해 상기 세트, 컬렉션 또는 라이브러리를 스크리닝하는 단계 및
c) CD20에 결합할 수 있거나 이에 대해 친화도를 가질 수 있는 아미노산 서열(들)을 단리하는 단계를 포함할 수 있다.
위의 방법에서, 아미노산 서열의 세트, 컬렉션 또는 라이브러리는 스크리닝을 용이하게 하기 위해 파지, 파지미드, 리보솜 또는 (효모와 같은) 적합한 미생물상에 표시될 수 있다. 아미노산 서열(의 세트, 컬렉션 또는 라이브러리)을 표시하거나 스크리닝하기 위한 방법, 기법 및 숙주 유기체는 통상의 기술자에게 명백할 것이다(예를 들어, Phage Display of Peptides and Proteins: A Laboratory Manual, Academic Press; 제1판(1996년 10월 28일) Brian K. Kay, Jill Winter, John McCafferty 참조). 라이브러리, 예를 들어, 파지 라이브러리는 항원 특이적 항체 또는 이의 단편을 발현하는 세포 또는 조직을 단리하고, 단리된 세포 또는 조직으로부터 유래한 항체 또는 이의 단편 mRNA를 암호화하는 서열을 클로닝하며, 라이브러리를 사용하여 암호화된 단백질을 표시하여 생성된다. 서열은 박테리아, 효모 또는 다른 발현 시스템에서 발현될 수 있다.
또한, 다른 양태는 위에서 설명되는 방법에 의해 수득되거나 수득 가능한 단리된 항체에 관한 것이다.
다른 방법 및 용도
다른 양태에서, 본원에서 설명되는 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 진단 시험 및 검정과 같은 비치료 목적으로 사용된다. 따라서, 본 발명은 개 대상체로부터 유래한 생물학적 검체에서 개 CD20을 발현하는 개 세포를 검출하거나 개 CD20 단백질을 검출하는 방법에 관한 것이며, 이는 생물학적 검체를 본원에서 설명되는 항체 또는 이의 항원 결합 부분과 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 검출 가능한 표지에 연결된다. 생물학적 검체는 생검, 조직, 혈액, 혈청, 혈장 또는 림프액 검체일 수 있다.
특정 실시양태에서, 방법은 시험 생물학적 검체의 결합량을 대조군 생물학적 검체의 결합량과 비교하는 단계를 포함할 수 있으며, 여기서 대조군 생물학적 항체에 비해 시험 생물학적 검체에 대한 증가된 결합은 시험 생물학적 검체에서 하나 이상의 림프종 세포의 존재를 나타낼 수 있다. 일부 실시양태에서, 생물학적 검체는 개 혈액 또는 바늘 흡인물이다. 또한, 이러한 방법은 생체내 및/또는 시험관내 형식으로 제공된다.
진단 목적을 위한 항체의 변형은 당해 기술분야에서 잘 알려져 있다. 예를 들어, 항체는 비오틴과 같은 리간드 그룹 또는 형광 그룹, 방사성 동위원소 또는 효소와 같은 검출 가능한 마커 그룹으로 변형될 수 있다. 본 발명의 화합물은 진단 목적으로 사용될 수 있으며, 예를 들어, 종래의 기법을 사용하여 표지될 수 있다. 적합한 검출 가능한 표지는 형광단, 발색단, 방사성 원자, 전자 밀도 시약, 효소 및 특정 결합 파트너를 갖는 리간드를 포함하나 이에 제한되지 않는다.
다른 양태에서, 본원에서 설명되는 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 개 CD20을 발현하는 세포 또는 이러한 결합제와 반응하는 세포 표면 단백질을 함유하는 세포(예를 들어, B 세포, B 림프종 세포, 개 CD20)의 단리 및/또는 식별에 사용된다.
또한, 본원에서 설명되는 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 CD20 발현 수준을 결정하기 위한 검정에서 사용될 수 있다. 이후, 발현 수준은 특정 질환이 환자 내에 존재하는지 여부, 환자의 예후, 또는 특정 요법이 효과적인지 여부를 결정하기 위해 기본(예를 들어, 대조) 수준과 상관될 수 있다.
본원에서 달리 정의하지 않는 한, 본 개시내용과 관련하여 사용되는 과학 및 기술 용어는 통상의 기술자에 의해 일반적으로 이해되는 의미를 가질 것이다. 전술한 개시내용은 본 개시내용을 제조하고 사용하는 방법뿐만 아니라 이의 최상의 방식을 포함하는 본 개시내용의 범위 내에 포함되는 특허 대상의 일반적인 설명을 제공하나 아래의 예는 통상의 기술자가 본 개시내용을 더 실시할 수 있게 하기 위해 제공된다. 그러나, 통상의 기술자는 이러한 실시예의 특정 사항이 본 발명을 제한한다고 판독하여서는 아니 되며 본 발명의 범위는 본 개시내용에 첨부되는 청구범위 및 이의 균등물로부터 파악되어야 한다는 점을 이해할 것이다. 본 개시내용의 다양한 추가 양태 및 실시양태는 본 개시내용의 관점에서 통상의 기술자에게 명백할 것이다.
본원에서 언급되는 모든 문서는 유전자 수탁번호, 과학 간행물 및 특허 간행물에 대한 참조를 포함하여 전체가 참조에 의해 본원에 원용된다.
또한, 본원에서 사용되는 경우 "및/또는"은 2개의 특정된 특징 또는 구성요소 중 다른 하나가 있거나 없는 각각의 특정 개시내용으로서 간주되어야 한다. 예를 들어, "A 및/또는 B"는 (i) A, (ii) B 및 (iii) A 및 B 각각의 특정 개시내용으로서 간주되어야 하며, 이는 각각 본원에서 개별적으로 명시되는 것과 같다. 문맥상 달리 지시하지 않는 한, 위에서 제시되는 특징의 설명 및 정의는 본 발명의 임의의 특정 양태 또는 실시양태에 제한되지 않으며 설명되어 있는 모든 양태 및 실시양태에 동일하게 적용된다.
본 발명은 다음의 비제한적인 실시예에 의해 더 예시된다.
실시예
실시예 1: 개 CD20 클로닝
CAMFAM_3.1 복서 참조 유전체 검색을 UCSC 유전체 브라우저(UCSC Genome Browser)를 사용하여 수행하였다. CD20 (MS4A1)에 대한 유전체 서열을 mRNA 서열 AB210085.1과 함께 다운로드하였다. 이러한 서열 데이터를 사용하여, 원활한 클로닝이 가능하도록 서열이 첨가된 cDNA로부터 CD20을 증폭할 수 있도록 프라이머를 설계하였다. 이는 개 혈액에 있는 CD20 서열 확인 및 piggyBac 클로닝 벡터로의 원활한 클로닝을 가능하게 하였다.
개 CD20 mRNA 단리 및 cDNA 생성
비글 전혈이 Envigo RMS(Alconbury, Huntingdon, UK)에 의해 공급되었으며 PBMC를 Ficoll 구배를 사용하여 단리하였다. 간단히 말하면, 10 ml의 전혈을 25 ml의 인산 완충 식염수(PBS)로 희석하였고, 15 ml의 Ficoll Paque Plus(Sigma Aldrich)상에 적층한 후, 800rcf로 10분 동안 실온에서 느리게 가속하고 중단 없이 원심분리하였다. 간기 디스크를 PBS에 수집하였다. 전체 RNA를 QIAGEN RNeasy Mini 키트(Qiagen, Hilden, DE) 및 표준 절차를 사용하여 컬럼상(on-column) DNAse 소화로 PBMC로부터 단리하였으며, cDNA 생성을 표준 절차 및 고정된 올리고 dT 프라이머(ThermoFisher, Massachusetts, US)에 따라 SuperScript™ IV 퍼스트 스트랜드 합성 시스템을 사용하여 수행하였다.
세포 발현을 위한 전장 개 CD20의 뉴클레오티드 및 아미노산 서열은 아래에 나타나 있다:
뉴클레오티드:
ATGACAACACCCAGAAATTCAATGAGTGGAACTCTCCCGGTAGATCCTATGAAAAGCCCTACTGCCATGTATCCTGTTCAAAAAATAATTCCCAAAAGGATGCCTTCAGTGGTGGGCCCTACACAAAACTTCTTCATGAGGGAATCTAAGACACTGGGGGCTGTCCAGATTATGAATGGGCTCTTCCACATTGCCCTAGGCAGCCTCCTGATGATTCACACGGATGTCTATGCGCCCATCTGTATAACTATGTGGTACCCTCTCTGGGGAGGCATTATGTTCATCATTTCTGGATCACTCCTGGCAGCAGCGGACAAAAACCCCAGGAAGAGTTTGGTCAAAGGAAAAATGATAATGAACTCATTGAGCCTCTTTGCTGCTATTTCTGGAATAATTTTTTTGATCATGGACATATTTAATATTACCATTTCCCATTTTTTTAAAATGGAGAATTTGAATCTTATTAAAGCTCCCATGCCATATGTTGACATACACAACTGTGACCCAGCTAACCCCTCTGAGAAAAACTCTTTATCTATACAATATTGTGGCAGCATACGATCTGTTTTCTTGGGCGTTTTTGCTGTGATGGTGATCTTTACCTTTTTCCAGAAACTTGTGACAGCTGGCATTGTTGAGAATGAATGGAAAAAACTGTGCTCTAAACCTAAATCTGATGTAGTTGTTCTGTTAGCTGCTGAAGAAAAAAAAGAACAGCCGATTGAAACAACAGAAGAAATGGTTGAGCTGACTGAAATAGCTTCCCAACCAAAGAAAGAAGAAGACATTGAAATTATTCCAGTCCAAGAAGAAGAAGAGGAACTGGAAATAAACTTTGCAGAACCTCCCCAGGAGCAGGAATCTTCACCAATAGAAAACGACAGCATCCCTTAA (서열번호 1)
단백질:
MTTPRNSMSGTLPVDPMKSPTAMYPVQKIIPKRMPSVVGPTQNFFMRESKTLGAVQIMNGLFHIALGSLLMIHTDVYAPICITMWYPLWGGIMFIISGSLLAAADKNPRKSLVKGKMIMNSLSLFAAISGIIFLIMDIFNITISHFFKMENLNLIKAPMPYVDIHNCDPANPSEKNSLSIQYCGSIRSVFLGVFAVMVIFTFFQKLVTAGIVENEWKKLCSKPKSDVVVLLAAEEKKEQPIETTEEMVELTEIASQPKKEEDIEIIPVQEEEEELEINFAEPPQEQESSPIENDSIP (서열번호 2)
실시예 2: 개 CD20 발현
인간 배아 신장(HEK) 293 세포를 10% 소 태아 혈청(FBS; Sigma Aldrich)이 보충된 DMEM/F12(Life Technologies)에서 단층으로서 90 mm의 원형 조직 배양 플레이트상에서 37℃, 5% CO2에서 성장시켰다. HEK293 세포를 폴리에틸렌이민(PEI MAX: 40 kDa, Polysciences Inc., Eppelheim, Germany)을 사용하여 CD20 cDNA 및 PiggyBac 트랜스포사제로 공동 형질감염시켰다. 30 μl의 PEI MAX(1 mg ml-1), 5 μg의 cDNA 및 1 ml의 DMEM/ F12를 10분 동안 실온에서 배양하였고, 70 내지 80% 합류 HEK293 세포의 90mm 플레이트에 적가하였으며, 사용 전 2일 동안 배양하였다. 48시간 후 적합한 항생제를 사용하여 안정적으로 형질감염된 세포를 선택하였다.
마우스 배아 섬유모세포(MEF)를 10% FBS, 1mM의 나트륨 피루베이트(Sigma-Aldrich), 0.5mM의 β-메르캅토에탄올(Gibco) 및 1% MEM 비필수 아미노산(Sigma-Aldrich)이 보충된 DMEM-고 글루코스(Life Technologies)에서 단층으로서 90 mm 원형 조직 배양 플레이트상에서 37℃, 5% CO2로 성장시켰다. 세포를 제조업체의 권장 지시에 따라 PLUS™ 시약(ThermoFisher Scientific)이 있는 Lipofectamine LTX를 사용하여 CD20 cDNA 및 PiggyBac 트랜스포사제로 형질감염시켰다. 48시간 후 적합한 항생제를 사용하여 안정적으로 형질감염된 세포를 선택하였다.
MDCK II(Madin-Darby 개 신장) 세포를 10% FBS 및 1% MEM 비필수 아미노산(Sigma-Aldrich)이 보충된 DMEM-고 글루코스(Life Technologies)에서 단층으로서 표면 처리 조직 배양 플라스크(T25/ T75/ T175)상에서 37℃, 5% CO2로 성장시켰다. MDCK II 세포를 권장 프로토콜에 따라 PLUS™ 시약(ThermoFisher Scientific)과 Lipofectamine™ LTX 시약을 사용하여 야생형 또는 돌연변이 개 CD20 cDNA 및 piggyBac 트랜스포사제로 공동 형질감염시켰다.
실시예 3: DNA 및 MEF를 사용한 마우스 모델의 면역화
예를 들어, WO2018/189520 및 WO2020/074874에서 실질적으로 설명되는 바와 같은 Ky9TM 마우스를 면역화하였다. 이식유전자 마우스는 개 면역글로불린 가변 유전자 레퍼토리를 마우스 게놈의 상응하는 유전자좌에 삽입하여 변형되고 있다. 이는 마우스 불변 영역(중쇄 및 카파 사슬의 경우) 또는 개 불변 영역(람다 사슬의 경우)과 조합하여 마우스에 있는 개 DNA의 발현으로부터 유래하는 가변 항체 영역을 포함하는 항체의 생산을 허용한다. 이러한 키메라 항체 사슬의 가변 영역에 관한 정보 또는 이를 포함하는 핵산을 사용하여 전체 개 항체를 생성할 수 있다.
DNA 면역화의 경우, 유체역학적 미부 정맥 주사(HTVI)를 사용한 프라임(prime) 및 부스트(boost) 요법을 수행하였으며 조직을 채취하였다. 세포 기반 면역화의 경우, CD20을 안정적으로 발현하는 MEF 세포를 사용하는 프라임 및 부스트 요법을 수행하였으며 조직을 채취하였다. 추가 면역화 요법을 CD20 발현 MEF 세포 부스터와 조합되는 프라임에 대한 HTVI DNA 면역화를 사용하여 수행하였다.
혈청 역가의 결정 :
면역화 전 및 각각의 후속 부스트 후 10일차에 마우스로부터 채혈을 하였다. 혈청을 마이크로베트 200 Z-겔 튜브(Starstedt AG & Co. KG, Germany)에서 원심분리하여 응고된 혈액으로부터 분리하였으며 개 CD20에 대한 항체 역가를 유세포 분석법으로 평가하였다. 혈청을 FACS 완충제(PBS + 3% FBS)에 1:10으로 연속 희석하였고 개 CD20을 안정적으로 발현하는 세포 또는 개 CD20 음성 대조군 세포에 첨가하였다. 개 CD20에 대한 마우스 항체를 동종형 IgG1, IgG2a, IgG2b(BD OptiBuildTM, Becton Dickinson)에 대한 BB700 접합(BD Horizon Brilliant™ Blue 700, BD Biosciences) 또는 FITC 접합 2차 단클론성 항체를 사용하여 검출하였다. 데이터를 BD Accuri C6 유세포 분석기(Becton Dickinson, NJ, USA) 또는 Beckman Coulter CytoFLEX를 사용하여 획득하였다. 면역화 전 혈청을 사용하여 배경을 결정하였다. 항체 역가를 배경보다 양성 신호를 나타내는 최고 희석으로 결정하였다. 도 1은 면역화된 Ky9 마우스 5마리의 항체 역가를 나타낸다.
실시예 4: 항체 생산 세포의 단리, 항체 서열분석, 선택 및 서열 변형
조직 단리: 비장, 림프절 및 골수를 마우스로부터 채취하였다. 비장을 조각으로 자르고 RPMI-1640(Lonza, Basel, CH) + 10% FBS로 얼음상에서 헹구면서 40 μm 세포 여과기(Falcon)를 통해 으깨어 비장 세포를 제조하였다. 유사한 과정이 비장 및 림프절 세포가 일반적으로 풀링되는 림프절의 림프구에 사용되었다. 골수를 RPMI-1640으로 미리 적신 40 μm 세포 여과기를 통해 25 게이지 바늘을 사용하여 RPMI-1640으로 플러싱(flushing)하여 대퇴골 및 경골에서 수집하였다. 모든 세포 유형을 300g으로 5분 동안 펠렛화하였으며 유동 분류에 직접 사용하거나 FBS + 10% 디메틸 설폭사이드(DMSO)에 재현탁한 후 -150℃에서 냉동하였다.
세포 분류: 일반적으로, 항원 특이적 비장 B 세포는 표지된 항원 단백질 프로브(예를 들어, 세포외 도메인) 또는 항원 VLP에 의해 포획될 수 있는데, 이들이 세포 표면상에서 막관통 항체를 우세하게 발현하기 때문이다. 반면, 항원 특이적 형질모세모 또는 형질 세포는 분비된 항체의 우세한 발현으로 인해 단백질 프로브 또는 VLP에 의해 덜 용이하게 표지되는 것으로 생각된다. 따라서, 비장 림프절 검체 또는 골수로부터 단리된 형질모세포 및 형질 세포는 이러한 집단의 항원 특이적 서브세트를 단리하기 위해 항원 프로브를 사용하지 않고 항체 서열 회수의 다음 단계로 진행되었다. CD138 및 CD267(TACI)의 세포 표면 공동발현을 사용하여 형질모세포 및 형질세포의 집단을 식별하였다. 10X 유전체학 크롬 단세포 면역 프로파일링(10X Genomics Chromium Single Cell Immune Profiling)을 위한 형질모세포 및 형질 세포의 대량 분류를 위해 CD138 형질 세포 농축 키트(Miltenyi biotech UK)를 사용하여 이러한 희귀 세포를 농축하였다. 비장 및 림프절 세포로부터 항원 특이적 세포를 분류하기 전 제조업체의 지시(StemCell Technologies UK)에 따라 마우스 범 B 세포(pan-B cell) 단리 키트를 사용하거나 제조업체의 지시(StemCell Technologies UK)에 따라 자체 비오티닐화 항체 칵테일 및 스트렙타비딘 급속구를 사용하여 B 세포 농축을 거쳤다.
이후 CD19, IgM, IgA, IgD, CD138 및 CD267(TACI)을 포함하는 마커를 사용하여 면역화에 반응하는 세포가 풍부한 동종형 전환 B 세포를 식별한다. 이러한 집단 내에서, 항원 특이적 세포는 표면 및 유동 분류 시 표적 항원을 발현하는 표지된 단백질 프로브 또는 VLP로 염색하여 포획할 수 있다. VLP는 CD20으로 안정적으로 형질감염된 HEK 세포 및 EGFP에 융합된 레트로바이러스 gag 단백질로부터 생성되고, gag 발현은 세포로부터 VLP 출아를 가능하게 하며, EGFP는 형광 검출을 위해 VLP를 표지한다. VLP상에 있는 표면 항원은 임의의 정제 또는 변형 단계 없이 재조합 세포로부터 직접 발현되며 천연 형태로 제시된다. 또한, 중국 햄스터 난소 세포(CHO) 또는 마우스 배아 섬유모세포(MEF)와 같은 다른 포유동물 세포주가 VLP 생산을 위해 사용될 수 있다. 원하지 않는 세포 집단 및 사망 세포(F4/80; Ly-6C/G; CD8a; CD4; CD11c; 7AAD 또는 좀비-NIR/FVD EF780)를 식별하는 마커가 모든 염색 패널에 포함되어 이러한 세포를 분류 절차로부터 제외시킨다.
차세대 서열분석 및 후보 선택:
제조업체의 지침에 따라 10X 유전체학 크롬 단세포 면역 프로파일링 시스템 및 V(D)J 키트(10X Genomics)를 사용하여 항체 프로파일링을 위해 분류된 세포를 제조한다. 10X의 경우, 다양한 Illumina 플랫폼 기구가 10X Genomics의 지침에 따라 사용된다. 생식계열 서열 및 초돌연변이를 예측하기 위해 pRESTO/Change-O(Yale University)/IgBlast(NCBI, USA)/Enclone(10X Genomics) 소프트웨어를 기반으로 하는 맞춤형 도구를 사용하여 서열을 분석한다.
가변 면역글로불린 영역은 중형(heavy) 유전자에 대한 면역글로불린 뉴클레오티드 서열의 VDJ 영역 및 Igκ 및 Igλ에 대한 면역글로불린 뉴클레오티드 서열의 VJ 영역을 포함한다. 클론 계열 내에, 면역글로불린 유전자 재조합 및 체세포 초돌연변이 동안 발생하는 V(D)J 분절 내에 공유 돌연변이가 있는 하위 계열이 있다. 고유한 V(D)J 분절 사용을 표시하는 다양한 클론 계열은 일반적으로 상이한 결합 특징을 나타낸다. 재조합 및 초돌연변이 동안 항체가 항원에 대해 더 높은 친화도를 갖는 세포가 선택된다. 친화도는 일반적으로 추가 돌연변이로 인해 증가하며, 예를 들어, WO2015/040401의 도 6에서 군집화된 계열이 표시되어 있다.
클론 계열은 2개 이상의 클론 세포의 관련된 면역글로불린 중쇄 및 경쇄 V(D)J 서열에 의해 일반적으로 정의된다. 관련된 면역글로불린 V(D)J 서열을 V 및 J 유전자 분절의 공유 사용에 의해 식별할 수 있다. 분류된 Ag 특이적 단일 B 세포의 항체 서열 분석의 예는 WO2015/040401의 도 5에서 나타나 있으며, 중쇄 V 유전자 계열 사용에 따라 배열되고 군집화되어 표시되는 계통수를 나타낸다. 이와 같은 계통수로부터, 후보 클론이 선택된다.
예를 들어, 항개 CD20 mAb PMX001, PMX002, PMX003, PMX004 및 PMX005는 모두 동일한 중쇄 V 유전자(cIGHV3-5), 중쇄 J 유전자(cIGHJ4, 서열번호 75에서 제공되는 생식계열 서열과 함께), 경쇄 V 유전자(cIGLV3-3) 및 경쇄 J 유전자(cIGLJ3, 서열번호 77에서 제공되는 생식계열 서열과 함께)에 의해 암호화된다. PMX001 가변 영역 서열은 개 CD20 면역화된 Ky9 마우스로부터 식별되었다. 이는 상응하는 아미노산 서열(서열번호 4)을 암호화하는 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 3) 및 상응하는 아미노산 서열(서열번호 6)을 암호화하는 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 5)을 갖는다. 생식계열 서열(서열번호 74)과 비교하여 중쇄 가변 서열에 2개의 아미노산 변화 및 생식계열 서열(서열번호 76)과 비교하여 경쇄 가변 서열에 3개의 아미노산 변화가 있다. 중쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 7), CDR2(서열번호 8) 및 CDR3(서열번호 9) 및 경쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 10), CDR2(서열번호 11) 및 CDR3(서열번호 12)는 IMGT V-QUEST(http://www.imgt.org/IMGT_vquest/input)를 사용하여 예측된다. PMX mAb의 중쇄 및 경쇄의 CDR3 영역은 길이가 각각 5aa 및 9aa이다.
PMX001 mAb의 히트(Hit) 확장을 이후 모든 개 CD20 면역화된 마우스에서 수행하였으며, 중쇄 및 경쇄 모두에 대해 동일한 VJ 유전자 사용 및 CDR3 길이를 공유하는 후보를 추가 스크리닝을 위해 선택하였다. 추가 돌연변이가 PMX001 mAb와 비교하여 서열에서 발생할 수 있다. 예를 들어, PMX002, PMX003, PMX004 및 PMX005 mAb는 다른 면역화 코호트로부터 선택되었으며 따라서 PMX001 mAb가 식별된 마우스와는 상이하다. 이는 성공적인 유전자 재배열의 수렴 선택을 나타낸다.
PMX002 mAb는 상응하는 아미노산 서열(서열번호 14)을 암호화하는 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 13) 및 상응하는 아미노산 서열(서열번호 16)을 암호화하는 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 15)을 갖는다. 생식계열 서열(서열번호 74)과 비교하여 중쇄 가변 서열에 10개의 아미노산 변화가 있으며 경쇄 가변 서열(서열번호 76)에 아미노산 변화가 없다. 중쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 17), CDR2(서열번호 18) 및 CDR3(서열번호 19) 및 경쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 20), CDR2(서열번호 21) 및 CDR3(서열번호 22)을 IMGT V-QUEST를 사용하여 예측한다.
PMX003mAb는 상응하는 아미노산 서열(서열번호 24)을 암호화하는 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 23) 및 상응하는 아미노산 서열(서열번호 26)을 암호화하는 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 25)을 갖는다. 생식계열 서열(서열번호 74)과 비교하여 중쇄 가변 서열에 5개의 아미노산 변화가 있으며 경쇄 가변 서열(서열번호 76)에 1개의 아미노산 변화가 있다. 중쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 27), CDR2(서열번호 28) 및 CDR3(서열번호 29) 및 경쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 30), CDR2(서열번호 31) 및 CDR3(서열번호 32)을 IMGT V-QUEST를 사용하여 예측한다.
PMX004 mAb는 상응하는 아미노산 서열(서열번호 34)을 암호화하는 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 33) 및 상응하는 아미노산 서열(서열번호 36)을 암호화하는 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 35)을 갖는다. 생식계열 서열(서열번호 74)과 비교하여 중쇄 가변 서열에 12개의 아미노산 변화가 있으며 경쇄 가변 서열(서열번호 76)에 아미노산 변화가 없다. 중쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 37), CDR2(서열번호 38) 및 CDR3(서열번호 39) 및 경쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 40), CDR2(서열번호 41) 및 CDR3(서열번호 42)을 IMGT V-QUEST를 사용하여 예측한다.
PMX005 mAb는 상응하는 아미노산 서열(서열번호 44)을 암호화하는 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 43) 및 상응하는 아미노산 서열(서열번호 46)을 암호화하는 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(서열번호 45)을 갖는다. 생식계열 서열(서열번호 74)과 비교하여 중쇄 가변 서열에 4개의 아미노산 변화가 있으며 경쇄 가변 서열(서열번호 76)에 아미노산 변화가 없다. 중쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 47), CDR2(서열번호 48) 및 CDR3(서열번호 49) 및 경쇄 가변 영역의 CDR1(서열번호 50), CDR2(서열번호 51) 및 CDR3(서열번호 52)을 IMGT V-QUEST를 사용하여 예측한다.
도 2는 PMX 항체 서열의 정렬을 나타낸다.
서열 변형
PMX003(서열번호 26)의 경쇄의 프레임워크 영역 1(FR1)은 단백질의 아스파라긴 연결 글리코실화에 대한 공통 서열인 NVT 서열을 함유한다. 이러한 부위에 결합되는 글리칸을 제거하기 위해, PMX003 mAb의 FR1에 있는 NVT 서열을 PMX006 mAb의 경우 QVT, PMX007 mAb의 경우 AVT, PMX008 mAb의 경우 EVT, PMX009 mAb의 경우 NVA, PMX010 mAb의 경우 SVT 및 PMX011 mAb의 경우 TVT로 돌연변이화하였다.
PMX006 mAb(서열번호 53), PMX007 mAb(서열번호 54), PMX008 mAb(서열번호 55), PMX009 mAb(서열번호 56), PMX010 mAb(서열번호 57), PMX011 mAb(서열번호 58)의 생성된 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 PMX003(서열번호 59), PMX006 mAb(서열번호 60), PMX007 mAb(서열번호 61), PMX008 mAb(서열번호 62), PMX009 mAb(서열번호 63), PMX010 mAb(서열번호 64), PMX011 mAb(서열번호 65)의 FR1 서열은 서열 표에 열거되어 있다.
PMX066(서열번호 81), PMX0067(서열번호 91), PMX068(서열번호 101), PMX0069(서열번호 111), PMX071(서열번호 131), PMX072(서열번호 141), PMX073(서열번호 151), PMX074(서열번호 161), PMX076(서열번호 181), PMX077(서열번호 191), PMX078(서열번호 201), PMX079(서열번호 211), PMX081(서열번호 231)의 경쇄의 프레임워크 영역 1(FR1)은 NVT 서열을 함유한다. 이러한 부위에 결합하는 글리칸을 제거하기 위해, PMX066, PMX0067, PMX068, PMX0069, PMX071, PMX072, PMX073, PMX074, PMX076, PMX077, PMX078, PMX079, PMX081 mAb의 FR1에 있는 NVT 서열은 SVT로 돌연변이화되어 각각 생성된 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 PMX112(서열번호 238), PMX113(서열번호 239), PMX114(서열번호 240), PMX115(서열번호 241), PMX116(서열번호 242), PMX117(서열번호 243), PMX118(서열번호 244), PMX119(서열번호 245), PMX120(서열번호 246), PMX121(서열번호 247), PMX122(서열번호 248), PMX123(서열번호 249) 및 PMX124(서열번호 250)를 생성한다. 서열은 표 2에서 나열되어 있다. 다수의 항체는 항체에 결합되는 글리칸을 생성하지 않는 자연 발생 서열 모티프를 포함한다. 예를 들어, PMX070 및 PMX075는 경쇄의 FR1에서 서열 모티프 SVT를 포함하며 PMX080은 경쇄의 FR1에서 서열 모티프 TVT를 포함한다.
실시예 5: 단일 세포로부터 단클론성 항체의 생성
선택된 후보 클론의 중쇄 및 경쇄 V(D)J 서열을 합성하고 각각 개 IgG 불변 영역 및 개 IGK 또는 IGL 불변 영역의 유전체 서열을 함유하는 발현 벡터로 클로닝한다. 예를 들어, PMX001 내지 PMX005 가변 서열을 개 IGGB(서열번호 66) 및 개 IGLC5 불변 영역(서열번호 67)을 암호화하는 벡터에 클로닝하였다. 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 발현 벡터를 CHO 세포와 같은 적합한 포유동물 세포주에 공동 형질감염시켜 안정한 발현을 수득하였다. 따라서, 전체 개 서열 항체를 생산하였다.
CHO 세포에서의 발현을 용이하게 하기 위해, 코돈 최적화를 예를 들어, PMX003 mAb의 중쇄 가변 영역(서열번호 68) 및 경쇄 가변 영역(서열번호 69)의 뉴클레오티드 서열에 대해 수행할 수 있다. 캄파트 리더(서열번호 70)(US 8,362.208 B2 참조)가 도입되어 PMX001의 천연 리더(중쇄의 경우 서열번호 71, 경쇄의 경우 서열번호 72)를 PMX005 mAb로 대체할 수 있다.
또한, 단클론성 항체 1E4 및 4E1-7이 발현되었다. 1E4 뉴클레오티드 서열을 WO2013063186으로부터 수득하였다. 4E1-7 아미노산 서열을 Mizuno 등 Scientific Reports, 10, Article 11476 (2020) (https://doi.org/10.1038/s41598-020-68470-9)으로부터 수득하였다. 두 항체의 가변 영역을 개 IGGB(서열번호 66) 및 개 IGK(서열번호 73) 불변 영역을 암호화하는 벡터에 클로닝하였다. 리툭시맙-cIGGB 대조군 mAb는 가변 영역 서열(US 5,736,137 참조)을 합성하여 생성되었으며 개 IGGB(서열번호 66) 및 개 IGLC5(서열번호 67) 불변 영역을 암호화하는 벡터에 클로닝되었다.
항체의 Fc 부분에 결합된 N 연결 글리칸의 코어 푸코스는 항체의 Fc 영역에 대한 Fc 수용체의 결합에 영향을 미칠 수 있으며 따라서 ADCC 활성을 감소시킬 수 있다. ADCC 사멸 활성을 향상시키기 위해, Fut8 녹아웃(KO) CHO 세포를, Yamane-Ohnuki 등, Biotechnol Bioeng.　2004년 9월 5일;87(5):614-22.　https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15352059/)에서 설명되는 바와 같이 Fut8 암호화 유전자의 엑손 2를 삭제하여, 풀링된 형태로 생성하였다. KO 세포를 LCA 염색을 사용하여 표현형적으로 선택하였다.
항체 생산을 위해, 6 × 106개의 선택된 CHO 세포 또는 Fut8 녹아웃 CHO 세포를 3 ml의 배양 배지에 시딩하였으며 32℃, 8% CO2에서 200 rpm으로 진탕하면서 배양하였다. 4 % HyClone Cell Boost 7a 보충물 + 0.4 % HyClone Cell Boost 7b 보충물 + 1 % 글루코스를 1, 4, 7 및 10일차에 배지에 첨가하였다. 배양 상층액을 12일차에 수집하였으며 IgG 농도를 표면 플라즈몬 공명(Biacore 8K, Cytiva Life Sciences)을 사용하여 결정하였다.
실시예 6: 결합 검정
유세포 분석법 기반 검정:
HEK293 세포 또는 MDCK II 세포를 개 CD20 cDNA의 전장을 암호화하는 벡터로 안정적으로 형질감염시켰다. 이러한 세포에 대한 항체의 결합을 유세포 분석법을 사용하여 평가하였다. 간단히 말하면, 1-2 x105개의 개 CD20 발현 세포를 후보 mAb와 함께 1시간 동안 +4℃에서 결합 검정을 위해 1 μg/ml 또는 10 μg/ml의 고정된 농도로 그리고 친화도 측정을 위해 다양한 농도(30 μg/ml, 즉, 200nM에서 시작하는 12지점 1:2 연속 희석 항체)에서 배양한 후, 1시간 동안 +4℃에서 5 μg/ml의 FITC 접합 항개 IgG 2차 항체(Bethyl Laboratories)와 함께 배양하였다. 항개 IgG FITC 2차 항체와 함께 그리고 1차 항개 CD20 항체 없이 또는 동종형 대조군 1차 항체와 함께 배양된 세포를 음성 대조군으로서 사용하였다. 데이터를 Beckman Coulter CytoFLEX 또는 BD Accuri C6 Plus 유세포 분석기상에서 획득하였으며 FlowJo 소프트웨어를 사용하여 분석하였다. 친화도 측정을 위해, 염색된 세포를 세척하였고 후보 항체와 함께 배양한 후 15분 동안 1% 파라포름알데하이드/3%FBS/PBS로 고정하였으며 유세포 분석기상에서 데이터를 수집하기 전 2차 항체와 함께 배양한 후 24시간 동안 다시 고정하였다. FITC 채널의 평균 형광 강도(MFI) 값 대 항체 농도를 사용하는 그래프를 그래프패드 프리즘에 플롯팅하였다(도 3d). 세포 표면 개 CD20에 대한 후보 항체의 결합의 겉보기 친화도(Kd)를 log(작용제) 대 반응 - 가변 기울기(4개의 매개변수)에 대한 방정식을 사용하여 CD20 발현 세포의 50%가 염색되었을 경우의 농도, 즉, 결합의 EC50으로 결정하였다.
결합 검정 결과는 도 3a 내지 도 3c에 나타나 있다. 이는 PMX 항체가 4E1-7 항체와 동등한 PMX002를 제외하고 단일 농도 지점(10 ug/ml)에서 시험 항체 1E4 및 4E1-7보다 개 CD20에 대해 더 강한 결합 능력을 가진다는 점을 나타낸다.
ELISA 기반 검정:
아래에서 설명되는 바와 같이 개 CD20 단백질의 세포외 도메인(ECD)의 대형 루프는 CHO 세포에서 발현되며 CAG 프로모터의 제어하에 세포외 배지로 분비된 후, 단백질 A 컬럼을 사용하여 정제된다.
CD20 ECD 단백질이 검정 플레이트에 코팅된다. 항체를 다양한 농도로 첨가하고 결합 능력을 ELISA를 사용하여 결정한다.
SPR 기반 검정:
항개 CD20 mAb의 친화도(Kd)는 재조합 마우스 Fc 태그 CD20 세포외 도메인을 사용하여 SPR로 측정할 수 있다.
dCD20LL-Fc(WO2013/063186, 37페이지, 서열번호 62 참조)로 명명된 CD20의 재조합 세포외 도메인(ECD)(대형 루프)은 안정한 CHO 세포로부터 뮤린 IgG2a Fc 태그와 함께 분비된 형태로 발현되며 단백질 A 크로마토그래피를 사용하여 정화된 상층액으로부터 정제된다. 상호작용의 2가 결합도에 상응하는 겉보기 Kd는 유동 세포 1에 적용된 NHS/EDC 활성화/비활성화를 갖는 CM5 칩의 유동 세포 2상에 dCD20LL-Fc의 100-150 RU를 아민 커플링하여 유도된다. 200 nM 내지 0.1 nM 농도의 후보 IgG를 HBS-EP+ 완충제에서 3배 희석하고 30 μL/분의 속도로 180초 동안 칩 표면에 주입한다. 해리를 10 mM 글리신-HCl pH 2.0의 60초 펄스로 표면을 재생성하기 전 30 μL/분으로 600초 동안 모니터링한다. 1가 친화도에 상응하는 1가 Kd를 전장 IgG의 파파인(또는 SpeB) 소화에 의해 생성되는 후보 항체 Fab 단편을 사용하여 위의 프로토콜을 반복하여 유도한다. 실험을 25℃의 HBS-EP+ 실행 완충제에서 수행한다. 모든 SPR 실험을 Biacore 8K 기구상에서 수행하였으며 Biacore Insight Evaluation 소프트웨어를 사용하여 1:1 결합 모델에 데이터를 피팅(fitting)하여 데이터를 분석하였다.
실시예 7: 기능적 검정
보체 의존성 세포독성(CDC) 활성
개 CD20을 고유하게 발현하는 CLBL-1 개 림프종 종양 세포주(University of Veterinary Medicine Vienna)를 CDC 검정에 대한 대상 세포주로 사용되었다. 96웰 플레이트(바닥이 투명한 백색)의 웰당 10,000개의 CLBL-1 세포를 1:4의 최종 희석으로 2시간 동안 37℃, 5% CO2에서 항개 CD20 항체 및 개 보체 보존 혈청(BioIVT)의 적정(10 μg/ml에서 시작하는 11지점 1:3 희석)으로 배양하였다. 검정을 개 보체 보존 혈청이 유일한 보체 공급원이 되도록 열 불활성화 혈청을 사용하여 제조한 배지(RPMI + 1% L-글루타민 + 20% 소 태아 혈청)를 사용하여 설정하였다. 리툭시맙-cIGGB 키메라 항체를 음성 동종형 대조군으로 사용하였다.
이후 생존 세포를 검정 프로토콜에 따라 CellTitre-Glo® 발광 세포 생존율 분석(Promega)를 사용하여 정량화하였다. 이러한 검정은 생존 세포의 ATP 함량을 세포 생존가능성의 지표로 사용한다. 발광을 CLARIOstar(BMG Labtech)상에서 측정하였다. 데이터를 MARS 소프트웨어(BMG Labtech)를 사용하여 분석하였으며 잔여 생존 세포의 수를 항체가 없는 웰을 기준선으로 사용하여 Microsoft Excel을 사용하여 항체 존재하에서 사멸 백분율을 계산하기 위해 사용하였다. 그래프를 그래프패드 프리즘에서 플롯팅하였다.
도 4는 CDC 활성이 천연 및 a-푸코실화 형태 모두에서 PMX003을 사용하여 관찰되었음을 나타낸다. 개 보체 보존 혈청을 사용한 동일한 실험 설정하에서 1E4 및 4E1-7 시험 항체의 천연 및 a-푸코실화 형태에 대한 CDC 활성은 관찰되지 않았다. 표 4는 항체 PMX066 내지 PMX081에 대한 CDC 활성을 요약한다.
항체 의존성 세포 세포독성(ADCC) 활성
MDCK II 세포주(ATCC)와 같은 개 세포주를 개 CD20 단백질을 암호화하는 구축물 및 형광 단백질(예를 들어, GFP)을 발현하는 구축물로 안정적으로 형질감염시켰다. 형광 단백질을 발현하나 항원은 발현하지 않는 MDCK II 세포주 또는 동종형 대조군 항체를 실험에 음성 대조군으로 사용하였다.
개 말초 혈액 단핵 세포(PBMC, Envigo)를 효과기 세포의 공급원으로 사용하였다. PBMC를 권장 프로토콜에 따라 Ficoll-Paque plus(Cytiva, GE17-1440-02) 밀도 구배 원심분리를 사용하여 나트륨 헤파린 항응고제를 사용하여 새로 채혈한 전혈로부터 단리하였다. PBMC를 50 ng/ml의 재조합 개 IL-2(R&D 시스템)가 보충된 배지(PBMC 배지 = RPMI + 10% 열 불활성화 소 태아 혈청 + 1% 페니실린-스트렙토마이신 + 1% 비필수 아미노산 + 1% L-글루타민+ 1% 나트륨 피루베이트 + 2% HEPES)에 재현탁하였으며 ADCC 검정에서 사용하기 전 24시간 동안 37℃에서 배양하였다.
ADCC 활성을 평가하기 위해, 10,000개의 MDCK II 세포를 효과기: 목표 비율 35:1 및 항체 적정(10 μg/ml 항체에서 시작하는 11점 1:3 희석)으로 24시간 동안 37℃에서 MDCK II 배지(DMEM + 1% L-글루타민 + 10% 소 태아 혈청) 및 PBMC 배지의 1:1 혼합물에서 PBMC와 공동 배양하였다. 리툭시맙-cIGGB를 음성 (동종형) 대조군 항체로 사용하였다.
웰당 생존 세포의 수에 비례하는 GFP 신호를 24시간 배양의 종료 시 웰에 있는 잔여 생존 세포의 수를 측정하기 위해 사용하였다. GFP 신호를 CLARIOstar(BMG Labtech)상에서 측정하였다. 데이터를 MARS 소프트웨어(BMG Labtech)를 사용하여 분석하였으며 항체가 없는 웰을 기준선으로 사용하여 Microsoft Excel을 사용하여 항체 존재하에서 사멸 비율을 계산하였다. 그래프를 그래프패드 프리즘을 사용하여 플롯팅하였다.
도 5는 PMX 항체 존재하에서 ADCC 활성이 관찰되었음을 나타낸다. PMX003 항체는 천연 및 푸코실화 형태 모두에서 시험 항체 1E4 및 4E1-7보다 더 강한 ADCC 활성을 나타낸다. 표 4는 항체 PMX066 내지 PMX081에 대하여 관찰된 ADCC 활성을 요약한다.
항체 의존성 세포 식균작용(ADCP) 활성
ADCP 활성을 측정하기 위한 적합한 방법이 Ito 등 Leuk Lymphoma. 2015년 1월; 56(1): 219-225에서 설명되어 있다.
직접 사멸 활성 / 세포자멸사 검정
직접 사멸은 Mizuno 등 Scientific Reports, 10, 제11476조 (2020)에서 설명되는 바와 같이 측정될 수 있다.
실시예 8: 생체외 - 전혈 검정
생체외 개 모델에서 B 세포 고갈 효율을 평가하기 위해, 100 μl의 새로 채혈한 개 전혈을 헤파린으로 수집하였으며 200 μl의 RPMI1640 + 10% 열 불활성화 소 태아 혈청 + 1% 페니실린/스트렙토마이신/L-글루타민+ 1% 비필수 아미노산 + 1% 나트륨 피루베이트 + 2% HEPES 완충제로 희석하였다. 희석된 혈액을 10 μg/ml의 항개 CD20 항체가 있거나 없이 2시간, 24시간 및 96시간 동안 37℃에서 배양하였다. 배양 후, 검체를 Versalyse 용액(Beckman Coulter)과 함께 실온에서 15분 동안 배양하여 적혈구(RBC)를 용해시켰다. 세척 후, 검체를 항개 CD21 항체 및 항개 CD8 항체(모두 BioRad 제품)로 염색하였으며 CD21+ B 세포 및 CD8+ T 세포의 수를 CytoFLEX 유세포 분석기(Beckman Coulter)상에서 분석하였다. B 세포 고갈의 백분율을 항체가 없는 대조군과 비교하여 CD21+ B 세포 대 CD8+ T 세포의 비율 감소를 기준으로 계산하였다. 도 6a 내지 도 6b의 결과는 PMX003 mAb가 1E4 및 4E1-7 mAb에 비해 개 전혈에서 B 세포를 더욱 효율적으로 사멸시킨다는 점을 나타낸다. 표 4는 항체 PMX066 내지 PMX081에 대하여 관찰된 생체외 특이적 B 세포 고갈 활성을 요약한다.
실시예 9: 생체내 검정
종양 마우스 모델
동계(syngeneic) 종양 마우스 모델을 생성하여 항개 CD20 항체의 생체내 종양 사멸 효율을 평가한다. 마우스 129Sv ES 세포의 유전체 서열을 상동 재조합에 의해 마우스 CD20 암호화 영역을 개 CD20 암호화 영역으로 대체하도록 변형하였다. 표적화 벡터는 양측에 4 내지 4.5kb의 마우스 유전체 서열이 측접하는 개 CD20 암호화 영역의 게놈 DNA 서열을 함유한다. 미세주사 및 생식계열 전달 후, 결과적으로(thus) 생성된 마우스를 Balb/c 마우스와 교배하여 혼합된 유전적 배경의 mCD20/dCD20 이형접합성 자손을 생산한다.
또한, Balb/c 유전적 배경의 마우스 림프종 세포주 A20을 개 CD20을 발현하도록 변형한다. 마우스 CD20 암호화 영역은 A20 세포주를 선형화된 ES 세포 표적화 벡터로 형질감염시켜 개 CD20 암호화 서열로 대체된다.
마우스 종양 사멸 효율을 평가하기 위해, (PBS 100 μl 중) 1백만 개의 개 CD20 녹인(knock-in) A20 세포를 mCD20/dCD20 이형접합성 마우스(6 내지 8주령)에 피하 이식한다. 항개 CD20-mIGG2a 키메라 항체(500 μl의 PBS 중 150 μg) 또는 PBS만 0일차에 1회 복강내 주사한다. 종양의 크기를 매일 측정하며 인도적 종료시점에 도달하면 마우스를 안락사시킨다.
생체내 개 연구
개 연구 1에서, 2 내지 3세, 체중 8 내지 11 kg의 건강한 수컷 비글 12마리(시험군당 3마리)를 프랑스 아보가드로 LS에서 사육하였다. 이들은 모두 연구 전 질환 또는 다른 임상적 이상이 없는 것으로 확인되었다. PMX003 항체의 천연 형식을 CHO 세포에서 생산하였고 2개의 시험군에 투여하였으며 한 군은 0.5 mg/kg의 항체를 투여하였고 다른 군은 2.5 mg/kg의 항체를 투여하였다. PMX003 항체의 a-푸코실화 버전을 Fut8 KO CHO 세포에서 발현시켜 생산하였으며 한 시험군에 0.5 mg/kg을 투여하였다. 대조군은 동종형 대조군인 리툭시맙-cIGGB를 2.5mg/kg으로 투여하였다. 모든 항체를 0일차에 단일 용량 정맥내 주입으로 30분에 걸쳐 투여하였다. CD21+ B 세포의 백분율을 항체 투여 후 0일차(투여 전), 1일차, 2일차, 5일차, 7일차, 15일차, 27일차 및 43일차에 모니터링하고 분석하였다. K3EDTA 항응고제를 갖는 0.5ml의 새로 채혈한 혈액을 1ml의 1x RBC 용해/고정 용액(BioLegend)으로 30분 동안 실온에서 암실에서 고정한 후 18 ml의 1x PBS로 희석하였다. 고정 및 희석된 혈액 검체를 보관 및 영국으로 배송하는 동안 +4℃에서 보관하였다. 검체 분석을 채혈 후 48시간 이내에 수행하였다. 각 검체에 대해, 세포를 400g에서 5분 동안 펠렛화하였고 세포 펠렛을 0.5 ml의 완충액에 재현탁한 후 50 μl의 세포를 각각의 기술 복제의 염색에 사용하였다. 각각의 복제에 대해, 세포를 AF647 접합 항개 CD21 항체(BioRad, 1:10) 및 PE 접합 항개 CD8 항체(BioRad, 1:50)로 염색하였다. 데이터는 파편과 비핵 세포를 제외하기 위해 DAPI에 임계값을 설정하여 Beckman Coulter CytoFLEX를 사용하여 획득하였다. 림프구 집단에 있는 CD21+ B 세포 및 CD8+ T 세포의 백분율을 FlowJo 소프트웨어를 사용하여 분석하였다. B 세포 고갈을 각각의 개에 대한 항체 투여 후 평가 당일의 CD21+ B 세포 백분율을 0일차(기준선)의 백분율과 비교하여 결정하였다. 또한, CD8+ T 세포의 백분율을 평가하였으며 이는 내부 대조군 역할을 하였다. 도 7a 내지 도 7b는 PMX 및 대조군 항체를 투여한 건강한 비글의 B 세포 고갈 결과를 나타낸다. PMX003이 천연 및 a-푸코실화 형태로 투여된 경우 고갈이 관찰되었다. a-푸코실화 형태는 천연 형태보다 더 효과적이었다. PMX003은 1E4를 사용한 개 연구에서 관찰된 것보다 훨씬 더 낮은 용량에서 B 세포 사멸을 나타내었다(Rue 등 Veterinary Immunology and Immunopathology 164(2015), 148-159). 또한, B 세포 고갈을 4E1-7에 대한 개 연구에서 관찰된 것보다 긴 적어도 15일 동안 낮은 수준으로 유지하였다(Mizuno 등).
개 연구 2에서, 2 내지 3세, 체중 8 내지 11 kg의 건강한 수컷 비글 15마리(시험군당 3마리)를 프랑스 아보가드로 LS에서 사육하였다. 이들은 모두 연구 전 질환 또는 다른 임상적 이상이 없는 것으로 확인되었다. PMX070 및 PMX115 항체의 천연 형식을 CHO 세포에서 생산하였고 항체당 2개의 시험군에 투여하였으며 한 군은 0.5mg/kg의 항체를 투여하였고 다른 군은 2mg/kg의 항체를 투여하였다. 대조군은 동종형 대조군인 리툭시맙-cIGGB를 2mg/kg으로 투여하였다. 모든 항체를 0일차에 단일 용량 정맥내 주입으로 30분에 걸쳐 투여하였다. CD21+ B 세포의 백분율을 항체 투여 후 0일차(투여 전), 1일차, 4일차, 7일차, 14일차, 21일차 및 28일차에 모니터링하고 분석하였다. K3EDTA 항응고제를 갖는 1ml의 새로 채혈한 혈액을 2ml의 1x RBC 용해/고정 용액(BioLegend)으로 30분 동안 실온에서 암실에서 고정한 후 12 ml의 1x PBS로 희석하였다. 고정 및 희석된 혈액 검체를 보관 및 영국으로 배송하는 동안 +4℃에서 보관하였다. 검체 분석을 채혈 후 48 내지 72시간 사이에 수행하였다. 각 검체에 대해, 세포를 400g에서 5분 동안 펠렛화하였고 세포 펠렛을 1 ml의 완충액에 재현탁한 후 50 μl의 세포를 각각의 기술 복제의 염색에 사용하였다. 각각의 복제에 대해, 세포를 AF647 접합 항개 CD21 항체(BioRad, 1:10) 및 PE 접합 항개 CD8 항체(BioRad, 1:50)로 염색하였다. 데이터는 파편과 비핵 세포를 제외하기 위해 DAPI에 임계값을 설정하여 Beckman Coulter CytoFLEX를 사용하여 획득하였다. 림프구 집단에 있는 CD21+ B 세포 및 CD8+ T 세포의 백분율을 FlowJo 소프트웨어를 사용하여 분석하였다. B 세포 고갈을 각각의 개에 대한 항체 투여 후 평가 당일의 CD21+ B 세포 백분율을 0일차(기준선)의 백분율과 비교하여 결정하였다. 또한, CD8+ T 세포의 백분율을 평가하였으며 이는 내부 대조군 역할을 하였다. 도 7c는 PMX 및 대조군 항체를 투여한 건강한 비글의 B 세포 고갈 결과를 나타낸다. 고갈이 0.5mg/kg 및 2mg/kg 용량에서 PMX070 및 PMX115에 대해 관찰되었으며 이는 a-푸코실화 형태의 PMX003에서 관찰된 고갈과 유사하였다.
약동학적 분석을 위해, mAb 약물의 혈장 농도를 항체 투여 후 다음 시점에 모니터링하고 분석하였다: 개 연구 1에서 투여 전, T2h, T6h, T24h, T48h, T72h, T120h, T168h, T360h, D27 및 D43 및 개 연구 2에서 투여 전, T2h, T6h, T24h, D4, D7, D14, D21 및 D28. 리튬 헤파린 항응고제가 있는 새로운 혈액을 채혈 직후 얼음상에 배치하였다. 혈액 튜브를 2500g으로 10분 동안 +5℃에서 원심분리하였다. 혈장을 폴리프로필렌 튜브에 수집하였으며 -20℃에서 보관 시까지 얼음상에서 보관하였다. 혈장을 ELISA로 분석할 때까지 냉동 보관하였다. mAb의 농도를 PMX mAb에 대한 항전유전물질형(anti-idiotype) 다클론성 항체를 포획 항체로 사용하고 항개 Fc-HRP(Sigma) 또는 항개 Fc 비오틴(Sigma) + 스트렙타비딘-HRP(BioLegend)를 검출 항체로 사용하여 ELISA로 평가한다. PMX mAb에 대한 항전유전물질형 다클론성 항체 또는 단클론성 항체는 PMX Fab 단편을 사용한 토끼의 면역화, 하이브리도마 세포주 생성 및 PMX mAb에 결합하는 항전유전물질형 항체의 선택 후 동종형 대조군 항체에 결합하는 교차 반응성 항체의 제거에 의해 GenScript에서 생성된다.
면역원성 평가를 위해, 동결 혈장에 있는 항약물 항체(ADA)의 농도를 후보 PMX 항체 및 항약물 항체 사이의 임의의 미리 형성된 복합체의 산 해리 후 ELISA로 평가한다. PMX-마우스Fc 또는 PMX-인간Fc와 같은 후보 항체의 키메라 버전이 생성되며 분획은 비오틴으로 표지된다. 항약물 항체의 존재 및 농도는 표지되지 않은 키메라 항체가 포획 시약으로 사용되고 비오틴 표지 키메라 항체가 스트렙타비딘-HRP와 함께 검출을 위해 사용되는 샌드위치 ELISA 검정 형식을 사용하여 결정된다. 위의 약동학적 검정을 위해 생성된 항전유전물질형 다클론성 항체를 양성 대조군으로 사용하고 표준 곡선을 생성한다.
실시예 10: 에피토프 매핑
항체가 특이적으로 결합하는 개 CD20 항원상의 부위를 확인하기 위해 에피토프 매핑을 수행하였다. 부위 지정 돌연변이생성을 사용하여 개 CD20의 세포외 도메인을 9개 영역으로 나누고 개 서열의 각각의 영역을 인간 서열의 동등한 위치로 대체하여 개-인간 키메라 CD20 발현 벡터를 생성하였다(도 8a). 동일한 전략을 사용하여 개-마우스 키메라 CD20을 생성하였다(도 8b). 돌연변이된 전장 cDNA는 실시예 2에서 설명되는 바와 같이 MDCK 세포에서 발현되었다. 이러한 키메라 돌연변이체에 대한 PMX003, PMX115 및 PMX070의 결합을 야생형 CD20에 대한 결합과 비교하여 서열 ITISHFFKMENLNLIKAPM(서열번호 303)은 PMX003, PMX115 및 PMX070의 에피토프로 식별되었으며, 이는 이 위치의 돌연변이가 유세포 분석에서 감소된 결합을 초래했기 때문이다(도 9). "ENLNLIKAPM"(서열번호 303, 서열번호 2의 아미노산 번호 150 내지 159)를 해당 서열 내에 있는 코어 에피토프로 식별하였다. 이러한 에피토프는 벤치마크 1E4 항체의 에피토프로 설명된 "DIHNCD"와는 상이하다. 에피토프를 조사하는 다른 전략은 알라닌 스캐닝에 의한 전략이며, 여기서 단일 알라닌 돌연변이는 소형 루프의 모든 잔기와 대형 루프의 다른 모든 잔기에서 생성된다(도 8c).
실시예 11: 발달가능성 기준
다음을 포함하는 항체 특성화의 여러 양태가 있다: 1) COGS(매출원가)에 영향을 미치는 최종 안정 발현 수준과 상관관계가 있는 소규모 항체 생산 동안 일시적인 발현 수준. 2) 응집 경향 및 더 높은 농도 제제와의 호환성을 포함하는 다양한 특성과 상관관계가 있는 열 안정성. 열적 안정성은 단백질이 50%가 접히지 않았을 경우 온도인 Tm1 값 및 응집 온도인 Tagg로 반영할 수 있다. 납 항체의 Tm1 및 Tagg 값을 UNcle 단백질 안정성 스크리닝 플랫폼(Unchained Labs)을 사용하여 측정하였다. 3) 크기 및 순도. 단편화 및 응집은 생체내 효능 또는 면역원성에 문제를 일으킬 수 있다. 항체의 크기를 비환원 및 환원 SDS-PAGE 겔상에서 결정하였다. HPLC-SEC는 각각의 후보 생산물이 95% 이상의 단량체로 구성되어 있음을 나타낸다. 입자의 직경을 잠재적인 응집 문제를 감지할 수 있는 UNcle 기계를 사용하여 감지하였다. PMX003, PMX066, PMX067, PMX069, PMX070, PMX071, PMX072, PMX073, PMX074, PMX075, PMX076, PMX077, PMX078, PMX079, PMX080, PMX081, PMX112, PMX115, PMX122 및 PMX124 항체의 발달가능성 매개변수를 표 5에 표시하였다.
실시예 12: 탈글리코실화된 항체의 분석
위의 내용에 더하여, 서열 책임 예측을 계산기내(in silico) 서열 분석을 사용하여 수행하였다. N 연결 글리코실화 모티프(NVT)를 PMX003 mAb의 경쇄 프레임워크 영역 1(FR1) 및 리드 패널의 다른 12개 mAb(PMX070, PMX075 및 PMX080 제외)에서 식별하였다. 이러한 위치에서 글리코실화를 방지하여 책임을 감소시키기 위해 PMX003의 경쇄 FR1에 있는 NVT 서열을 QVT(PMX006), AVT(PMX007), EVT(PMX008), NVA(PMX009), SVT(PMX010) 및 TVT(PMX011)로 돌연변이화하였다. 감소된 SDS-PAGE 겔상에서 기존 PMX003 mAb와 돌연변이 항체의 경쇄 크기를 비교하여 탈글리코실화를 관찰하였다. 이후, 결합 및 기능 평가를 이러한 돌연변이의 영향을 평가하기 위해 수행하였다. 유세포 분석법 분석은 개 CD20 발현 세포에 대한 결합 능력이, 다소 감소한 QVT 및 AVT 돌연변이를 제외하면, 변하지 않은 상태로 유지되었다는 점을 나타낸다(도 3b). 유사하게, 시험관내 ADCC 검정(도 5d 및 도 5e) 및 생체외 전혈 검정(도 6c)에서의 사멸 효능은 이러한 돌연변이에 의해 유의하게 영향을 받지 않았다. 따라서, 결합 및 기능적 활성을 손상시키지 않고 탈글리코실화를 위한 NVT 모티프를 변형하는 것이 가능하다.
서열
서열번호　 설명 서열
1 개 CD20 암호화 영역의 뉴클레오티드 서열 ATGACAACACCCAGAAATTCAATGAGTGGAACTCTCCCGGTAGATCCTATGAAAAGCCCTACTGCCATGTATCCTGTTCAAAAAATAATTCCCAAAAGGATGCCTTCAGTGGTGGGCCCTACACAAAACTTCTTCATGAGGGAATCTAAGACACTGGGGGCTGTCCAGATTATGAATGGGCTCTTCCACATTGCCCTAGGCAGCCTCCTGATGATTCACACGGATGTCTATGCGCCCATCTGTATAACTATGTGGTACCCTCTCTGGGGAGGCATTATGTTCATCATTTCTGGATCACTCCTGGCAGCAGCGGACAAAAACCCCAGGAAGAGTTTGGTCAAAGGAAAAATGATAATGAACTCATTGAGCCTCTTTGCTGCTATTTCTGGAATAATTTTTTTGATCATGGACATATTTAATATTACCATTTCCCATTTTTTTAAAATGGAGAATTTGAATCTTATTAAAGCTCCCATGCCATATGTTGACATACACAACTGTGACCCAGCTAACCCCTCTGAGAAAAACTCTTTATCTATACAATATTGTGGCAGCATACGATCTGTTTTCTTGGGCGTTTTTGCTGTGATGGTGATCTTTACCTTTTTCCAGAAACTTGTGACAGCTGGCATTGTTGAGAATGAATGGAAAAAACTGTGCTCTAAACCTAAATCTGATGTAGTTGTTCTGTTAGCTGCTGAAGAAAAAAAAGAACAGCCGATTGAAACAACAGAAGAAATGGTTGAGCTGACTGAAATAGCTTCCCAACCAAAGAAAGAAGAAGACATTGAAATTATTCCAGTCCAAGAAGAAGAAGAGGAACTGGAAATAAACTTTGCAGAACCTCCCCAGGAGCAGGAATCTTCACCAATAGAAAACGACAGCATCCCTTAA
2 개 CD20 암호화 영역의 아미노산 서열 MTTPRNSMSGTLPVDPMKSPTAMYPVQKIIPKRMPSVVGPTQNFFMRESKTLGAVQIMNGLFHIALGSLLMIHTDVYAPICITMWYPLWGGIMFIISGSLLAAADKNPRKSLVKGKMIMNSLSLFAAISGIIFLIMDIFNITISHFFKMENLNLIKAPMPYVDIHNCDPANPSEKNSLSIQYCGSIRSVFLGVFAVMVIFTFFQKLVTAGIVENEWKKLCSKPKSDVVVLLAAEEKKEQPIETTEEMVELTEIASQPKKEEDIEIIPVQEEEEELEINFAEPPQEQESSPIENDSIP
3 PMX001 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGCTACCACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATACATTAATAGTGGTGGAAGTAGCACAACCTATGCAGACGCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAAAACGCTGTATCTTCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTTCGACTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
4 PMX001 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 EVQLVESGGDLVKPGGSLRLSCVASGFTFSSYHMSWVRQAPGKGLQWVAYINSGGSSTTYADAVKGRFTISRDNAKKTLYLQMNSLRAEDTAVYYCSTFDYWGQGTLVTVSS
5 PMX001 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 TCCTATGTGCTGACACAGCTGCCATCCAGAAATGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTGTACTGATTATCTATTATGATACCAGGAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCAGGTGTGGGACAGCAGTGGTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
6 PMX001 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSRNVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPVLIIYYDTRRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCQVWDSSGNVFGGGTHLTVL
7 PMX001 중쇄 CDR1 GFTFSSYH(Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr His)
8 PMX001 중쇄 CDR2 INSGGSST(Ile Asn Ser Gly Gly Ser Ser Thr)
9 PMX001 중쇄 CDR3 STFDY(Ser Thr Phe Asp Tyr)
10 PMX001 경쇄 CDR1 NIGSKS(Asn Ile Gly Ser Lys Ser)
11 PMX001 경쇄 CDR2 YDT(Tyr Asp Thr)
12 PMX001 경쇄 CDR3 QVWDSSGNV(Gln Val Trp Asp Ser Ser Gly Asn Val)
13 PMX002 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 GAGGTGCAGTTGGTGGAGTCTGGGGGAGACCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCTGGAATCATCTTCAGTAACTACCACATGAGCTGGGTCCGCCAGGTTCCAGGGAAGGGACTTCAGTGGGTCGCATACATTAACAGTGGTGGAAGTACTATAAACTATGCAGACGGTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACTCGCTGTATCTTCAGATGAACAGCCTGAGAGGCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTACGACTTATGACTCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
14 PMX002 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 EVQLVESGGDLVKPGGSLRLSCVASGIIFSNYHMSWVRQVPGKGLQWVAYINSGGSTINYADGVKGRFTISRDNAKNSLYLQMNSLRGEDTAVYYCTTYDSWGQGTLVTVSS
15 PMX002 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 TCCTATGTGCTGACACAGCTGCCATCCAAAAATGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTGTACTGATTATCTATTATGATAGCAGCAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCAGGTGTGGGACAGCAGTGTTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
16 PMX002 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKNVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPVLIIYYDSSRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCQVWDSSVNVFGGGTHLTVL
17 PMX002 중쇄 CDR1 GIIFSNYH(Gly Ile Ile Phe Ser Asn Tyr His)
18 PMX002 중쇄 CDR2 INSGGSTI(Ile Asn Ser Gly Gly Ser Thr Ile)
19 PMX002 중쇄 CDR3 TTYDS(Thr Thr Tyr Asp Ser)
20 PMX002 경쇄 CDR1 NIGSKS(Asn Ile Gly Ser Lys Ser)
21 PMX002 경쇄 CDR2 YDS(Tyr Asp Ser)
22 PMX002 경쇄 CDR3 QVWDSSVNV(Gln Val Trp Asp Ser Ser Val Asn Val)
23 PMX003 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCTGGAATCACCTTCAGTAGGTACCACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTTCAATGGGTCGCATACATTAACAGTGGTGGAAGTAGCACAAGCTATCCAGACGCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACGCTGTATCTTCAGATGGACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCCTGTATTACTGTACGACCTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
24 PMX003 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 EVQLVESGGDLVKPGGSLRLSCVASGITFSRYHMSWVRQAPGKGLQWVAYINSGGSSTSYPDAVKGRFTISRDNAKNTLYLQMDSLRAEDTALYYCTTFDYWGQGTLVTVSS
25 PMX003 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 TCCTATGTGCTGACACAGCTGCCATCCAAAAATGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAACTGGGCCAGGCCCCTGTACTGATTATCTATTATGATAGCAGGAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCAGGTGTGGGACAGCAGTGCTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
26 PMX003 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKNVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPVLIIYYDSRRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCQVWDSSANVFGGGTHLTVL
27 PMX003 중쇄 CDR1 GITFSRYH(Gly Ile Thr Phe Ser Arg Tyr His)
28 PMX003 중쇄 CDR2 INSGGSST(Ile Asn Ser Gly Gly Ser Ser Thr)
29 PMX003 중쇄 CDR3 TTFDY(Thr Thr Phe Asp Tyr)
30 PMX003 경쇄 CDR1 NIGSKS(Asn Ile Gly Ser Lys Ser)
31 PMX003 경쇄 CDR2 YDS(Tyr Asp Ser)
32 PMX003 경쇄 CDR3 QVWDSSANV(Gln Val Trp Asp Ser Ser Ala Asn Val)
33 PMX004 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 GAAGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGAGCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGAGTTTCCTGTGTGGCCTCTGGAATCACCTTCAGTCGCTACCACATGAGTTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGACTTCAGTGGGTCGCATTCATTAACACTGATAGAAGTAGCCCAAAATATGCAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACGCTGTATCTTCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCATTTATTACTGTACGAGTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAA
34 PMX004 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 EVQLVESGGELVKPGGSLRVSCVASGITFSRYHMSWVRQAPGKGLQWVAFINTDRSSPKYADSVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCTSFDYWGQGTLVTVSS
35 PMX004 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 TCCTATGTGCTGACACAGCTGCCATCCAAAAATGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTGTACTGATTATCTATTATGATAGTAGCAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCAGGTGTGGGACAGCAGTGCTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
36 PMX004 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKNVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPVLIIYYDSSRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCQVWDSSANVFGGGTHLTVL
37 PMX004 중쇄 CDR1 GITFSRYH(Gly Ile Thr Phe Ser Arg Tyr His)
38 PMX004 중쇄 CDR2 INTDRSSP(Ile Asn Thr Asp Arg Ser Ser Pro)
39 PMX004 중쇄 CDR3 TSFDY(Thr Ser Phe Asp Tyr)
40 PMX004 경쇄 CDR1 NIGSKS(Asn Ile Gly Ser Lys Ser)
41 PMX004 경쇄 CDR2 YDS(Tyr Asp Ser)
42 PMX004 경쇄 CDR3 QVWDSSANV(Gln Val Trp Asp Ser Ser Ala Asn Val)
43 PMX005 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGGTACCACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATACATTAACAGTGGTGGAAGTGACTCAGACTATGCAGACGCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAATACGCTGTATCTTCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTATTGTACGAGTCTGGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
44 PMX005 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 EVQLVESGGDLVKPGGSLRLSCVASGFTFSRYHMSWVRQAPGKGLQWVAYINSGGSDSDYADAVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTSLDYWGQGTLVTVSS
45 PMX005 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 TCCTATGTGCTGACACAGCTGCCATCCAAAAATGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTGTACTGATTATCTATTATGATAGCAGCAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGTCAGGTGTGGGACAGGAGTGGTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
46 PMX005 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKNVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPVLIIYYDSSRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCQVWDRSGNVFGGGTHLTVL
47 PMX005 중쇄 CDR1 GFTFSRYH(Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr His)
48 PMX005 중쇄 CDR2 INSGGSDS(Ile Asn Ser Gly Gly Ser Asp Ser)
49 PMX005 중쇄 CDR3 TSLDY(Thr Ser Leu Asp Tyr)
50 PMX005 경쇄 CDR1 NIGSKS(Asn Ile Gly Ser Lys Ser)
51 PMX005 경쇄 CDR2 YDS(Tyr Asp Ser)
52 PMX005 경쇄 CDR3 QVWDRSGNV(Gln Val Trp Asp Arg Ser Gly Asn Val)
53 PMX006 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKQVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPVLIIYYDSRRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCQVWDSSANVFGGGTHLTVL
54 PMX007 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKAVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPVLIIYYDSRRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCQVWDSSANVFGGGTHLTVL
55 PMX008 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKEVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPVLIIYYDSRRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCQVWDSSANVFGGGTHLTVL
56 PMX009 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKNVALKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPVLIIYYDSRRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCQVWDSSANVFGGGTHLTVL
57 PMX010 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKSVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPVLIIYYDSRRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCQVWDSSANVFGGGTHLTVL
58 PMX011 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKTVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPVLIIYYDSRRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCQVWDSSANVFGGGTHLTVL
59 PMX003 경쇄 FR1 SYVLTQLPSKNVTLKQPAHITCGGD(Ser Tyr Val Leu Thr Gln Leu Pro Ser Lys Asn Val Thr Leu Lys Gln Pro Ala His Ile Thr Cys Gly Gly Asp)
60 PMX006 경쇄 FR1 SYVLTQLPSKQVTLKQPAHITCGGD(Ser Tyr Val Leu Thr Gln Leu Pro Ser Lys Gln Val Thr Leu Lys Gln Pro Ala His Ile Thr Cys Gly Gly Asp)
61 PMX007 경쇄 FR1 SYVLTQLPSKAVTLKQPAHITCGGD(Ser Tyr Val Leu Thr Gln Leu Pro Ser Lys Ala Val Thr Leu Lys Gln Pro Ala His Ile Thr Cys Gly Gly Asp)
62 PMX008 경쇄 FR1 SYVLTQLPSKEVTLKQPAHITCGGD(Ser Tyr Val Leu Thr Gln Leu Pro Ser Lys Glu Val Thr Leu Lys Gln Pro Ala His Ile Thr Cys Gly Gly Asp)
63 PMX009 경쇄 FR1 SYVLTQLPSKNVALKQPAHITCGGD(Ser Tyr Val Leu Thr Gln Leu Pro Ser Lys Asn Val Ala Leu Lys Gln Pro Ala His Ile Thr Cys Gly Gly Asp)
64 PMX010 경쇄 FR1 SYVLTQLPSKSVTLKQPAHITCGGD(Ser Tyr Val Leu Thr Gln Leu Pro Ser Lys Ser Val Thr Leu Lys Gln Pro Ala His Ile Thr Cys Gly Gly Asp)
65 PMX011 경쇄 FR1 SYVLTQLPSKTVTLKQPAHITCGGD(Ser Tyr Val Leu Thr Gln Leu Pro Ser Lys Thr Val Thr Leu Lys Gln Pro Ala His Ile Thr Cys Gly Gly Asp)
66 개 IGGB 불변 영역 아미노산 서열 ASTTAPSVFPLAPSCGSTSGSTVALACLVSGYFPEPVTVSWNSGSLTSGVHTFPSVLQSSGLYSLSSMVTVPSSRWPSETFTCNVAHPASKTKVDKPVPKRENGRVPRPPDCPKCPAPEMLGGPSVFIFPPKPKDTLLIARTPEVTCVVVDLDPEDPEVQISWFVDGKQMQTAKTQPREEQFNGTYRVVSVLPIGHQDWLKGKQFTCKVNNKALPSPIERTISKARGQAHQPSVYVLPPSREELSKNTVSLTCLIKDFFPPDIDVEWQSNGQQEPESKYRTTPPQLDEDGSYFLYSKLSVDKSRWQRGDTFICAVMHEALHNHYTQKSLSHSPGK
67 개 IGLC5 불변 영역 아미노산 서열 GQPKASPSVTLFPPSSEELGANKATLVCLISDFYPSGVTVAWKADGSPITQGVETTKPSKQSNNKYAASSYLSLTPDKWKSHSSFSCLVTHEGSTVEKKVAPAECS
68 PMX003 중쇄 가변 영역의 코돈 최적화 뉴클레오티드 서열 GAGGTGCAGCTGGTGGAGAGCGGCGGCGACCTGGTGAAGCCTGGCGGCAGCCTGAGACTGAGCTGCGTGGCAAGCGGCATCACCTTCAGCAGATACCACATGAGCTGGGTGAGACAAGCCCCTGGCAAGGGCCTGCAGTGGGTGGCCTACATCAACAGCGGCGGCAGCAGCACAAGCTACCCTGACGCCGTGAAGGGCAGATTCACCATCAGCAGAGACAACGCCAAGAACACCCTGTACCTGCAGATGGACAGCCTGAGAGCCGAGGACACCGCCCTGTACTACTGCACCACCTTCGACTACTGGGGCCAAGGCACCCTGGTGACCGTGAGCAGCG
69 PMX003 경쇄 가변 영역의 코돈 최적화된 뉴클레오티드 서열 AGCTACGTGCTGACACAGCTGCCTAGCAAGAACGTGACCCTGAAGCAGCCTGCCCACATCACCTGCGGCGGCGACAACATCGGCAGCAAGAGCGTGCACTGGTATCAGCAGAAGCTGGGCCAAGCCCCTGTGCTGATCATCTACTACGACAGCAGAAGACCTACCGGCATCCCTGAGAGATTCAGCGGCGCCAACAGCGGCAACACCGCCACCCTGACCATCAGCGGCGCCCTGGCCGAGGACGAGGCCGACTACTACTGCCAAGTGTGGGACAGCAGCGCCAACGTGTTCGGCGGCGGCACCCACCTGACCGTGCTGG
70 캄파트 리더 서열 MGWSCIILFLVATATGVHS
71 PMX001, PMX002, PMX003, PMX004 및 PMX005 중쇄의 네이티브 리더 MESALSWVFLVTILKGVQG
72 PMX001, PMX002, PMX003, PMX004 및 PMX005 경쇄의 네이티브 리더 MAWTHLLLSLLALCTGSVA
73 개 IGK 불변 영역 아미노산 서열 RNDAQPAVYLFQPSPDQLHTGSASVVCLLNSFYPKDINVKWKVDGVIQDTGIQESVTEQDKDSTYSLSSTLTMSSTEYLSHELYSCEITHKSLPSTLIKSFQRSECQRVD
74 cIGHV3-5 IMGT 참조 서열 EVQLVESGGDLVKPGGSLRLSCVASGFTFSSYHMSWVRQAPGKGLQWVAYINSGGSSTSYADAVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCAS
75 cIGHJ4 IMGT 참조 서열 NFDYWGQGTLVTVSS
76 cIGLV3-3 IMGT 참조 서열 SYVLTQLPSKNVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPVLIIYYDSSRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCQVWDSSAKA
77 cIGLJ3 IMGT 참조 서열 SVFGGGTHLTVL
78 PMX066 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 ATGGAGTCTGCGTTCAGCTGGGTGTTCCTTGTCACTATTTTAAAAGGTGTCCAGGGTGCGGTGCAGCTGGTGGAGTCAGGGGGAGACCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCTGGAATCACCTTCAGTAGGTACCACATGAGTTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATACATTAATAGTGGTGGAAGTGCCACAAGTTATACAGACGCTGTGAAGGGCCGATTCAGCATCTCCAGAGACAACGGCAAAAACACGCTTTATCTTCAGATGAATAGCCTGAGAGTCGAGGACTCGGCCGTCTATTACTGTACGACCCTTGACCTCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
79 PMX066 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 AVQLVESGGDLVKPGGSLRLSCVASGITFSRYHMSWVRQAPGKGLQWVAYINSGGSATSYTDAVKGRFSISRDNGKNTLYLQMNSLRVEDSAVYYCTTLDLWGQGTLVTVSS
80 PMX066 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 ATGGCCTGGACCCACCTCCTCCTGAGCCTCCTGGCTCTCTGCACAGGTTCTGTGGCCTCCTATGTGCTGACACAGCTGCCATCCAAAAATGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTGTACTGATTATCTATTATGATAGCCGCAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAACGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGTCAGATGTGGGACAGCAGTGCTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
81 PMX066 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKNVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPVLIIYYDSRRPTGIPERFSGANSGNTATLTINGALAEDEADYYCQMWDSSANVFGGGTHLTVL
82 PMX066 중쇄 CDR1 GITFSRYH
83 PMX066 중쇄 CDR2 INSGGSAT
84 PMX066 중쇄 CDR3 TTLDL
85 PMX066 경쇄 CDR1 NIGSKS
86 PMX066 경쇄 CDR2 YDS
87 PMX066 경쇄 CDR3 QMWDSSANV
88 PMX067 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 ATGGAGTCTGCGCTCAGCTGGGTGTTCCTTGTCACTATTTTAAAAGGTGTCCAGGGTGAGATACAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGACCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCTGGATTCACCTTCAGTCGCTACCACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATATATTAACACTGGTGGAAGTAACACAAACTATGCAGACGCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACGCTGTATCTTCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTACGACCCTTGACTCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
89 PMX067 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 EIQLVESGGDLVKPGGSLRLSCVASGFTFSRYHMSWVRQAPGKGLQWVAYINTGGSNTNYADAVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTTLDSWGQGTLVTVSS
90 PMX067 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 ATGGCCTGGACCCACCTCCTCCTGAGCCTCCTGGCTCTCTGCACAGGTTCTGTGGCCTCCTATGTGCTGACACAGCTGCCATTCAAAAATGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTGTATTGATTATCTATTATGATAGTAGAAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCAGGTGTGGGACAGTAGTGTTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
91 PMX067 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPFKNVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPVLIIYYDSRRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCQVWDSSVNVFGGGTHLTVL
92 PMX067 중쇄 CDR1 GFTFSRYH
93 PMX067 중쇄 CDR2 INTGGSNT
94 PMX067 중쇄 CDR3 TTLDS
95 PMX067 경쇄 CDR1 NIGSKS
96 PMX067 경쇄 CDR2 YDS
97 PMX067 경쇄 CDR3 QVWDSSVNV
98 PMX068 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 ATGGAGTCTGCGCTCAGCTGGGTGTTCCTTGTCACTATTTTAAAAGGTGTCCAGGGTGAACTACAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCCGGATTCACCTTCAGTAGATACTACTTGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATTCATTACCAGTGGTGGCAGTAGCACAAACTATGCAGACGCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACACTGTATCTTCAGATGAATAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTTTATTACTGTACGAGCTTCGACTCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
99 PMX068 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 ELQLVESGGDLVKPGGSLRLSCVASGFTFSRYYLNWVRQAPGKGLQWVAFITSGGSSTNYADAVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTSFDSWGQGTLVTVSS
100 PMX068 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 ATGGCCTGGACCCACCTCCTCCTGAGCCTCCTGGCTCTCTGCACAGGTTCTGTGGCCTCCTATGTGCTGACACAGCTGCCATCCAAAAATGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTGTACTAATTATCTATTATGATAGCAGCAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCAGGTGTGGGACAGCAGTGCTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
101 PMX068 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKNVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPVLIIYYDSSRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCQVWDSSANVFGGGTHLTVL
102 PMX068 중쇄 CDR1 GFTFSRYY
103 PMX068 중쇄 CDR2 ITSGGSST
104 PMX068 중쇄 CDR3 TSFDS
105 PMX068 경쇄 CDR1 NIGSKS
106 PMX068 경쇄 CDR2 YDS
107 PMX068 경쇄 CDR3 QVWDSSANV
108 PMX069 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 ATGGAGTCTGCGCTCAGCTGGGTGTTCCTTGTCACTATTTTAAAAGGTGTCCAGGGTGAGATGCAGCTGGTGGAATCTGGGGGAGCCCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGTGGCCTCTGGATTCACCTTTAGGAGATACCACATGAGTTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGACAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATACATTGACAGTGATGGAAGTCCTACAAGTTATGGAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAATACGCTATTTCTTCAGATGAACAGTCTGAGAGTCGACGACACGGCCGTATATTACTGTACGACTCTTGACTACTGGGGCCGGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
109 PMX069 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 EMQLVESGGALVKPGGSLRLSCVASGFTFRRYHMSWVRQAPGQGLQWVAYIDSDGSPTSYGDSVKGRFTISRDNAKNTLFLQMNSLRVDDTAVYYCTTLDYWGRGTLVTVSS
110 PMX069 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 ATGGCCTGGACCCACCTCCTCCTGAGCCTCCTGGCTCTCTGCACAGGTTCTGTGGCCTCCTATGTGCTGACACAGGTGCCATCCAAAAATGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAGGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTCTACTGATTATCTATTATGATACCAGGAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGCTTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCAGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCAGGTGTGGGACAGCAGTGGTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCATCG
111 PMX069 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQVPSKNVTLKQPAHITCGGDNIGGKSVHWYQQKLGQAPLLIIYYDTRRPTGIPERFSGANSGNTATLTISRALAEDEADYYCQVWDSSGNVFGGGTHLTVI
112 PMX069 중쇄 CDR1 GFTFRRYH
113 PMX069 중쇄 CDR2 IDSDGSPT
114 PMX069 중쇄 CDR3 TTLDY
115 PMX069 경쇄 CDR1 NIGGKS
116 PMX069 경쇄 CDR2 YDT
117 PMX069 경쇄 CDR3 QVWDSSGNV
118 PMX070 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 ATGGAGTCTGCGCTCAGCTGGGTGTTCCTTGTCACTATTTTAAAAGGTGTCCAGGGTGAGATGCAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGACCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCTGGATTCACCTTCAGTCGCTACCACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATACATTAATAGTGGTGGAAGTCCCACAAACTATGCAGACGCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACACTATATCTTCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTACGACCTACGACCAGTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
119 PMX070 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 EMQLVESGGDLVKPGGSLRLSCVASGFTFSRYHMSWVRQAPGKGLQWVAYINSGGSPTNYADAVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTTYDQWGQGTLVTVSS
120 PMX070 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 ATGGCCTGGACCCACCTCCTCCTGAGCCTCCTGGCTCTCTGCACAGGTTCTGTGGCCTCCTATGTGCTGACACAGCTGCCATCCAAAAGTGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTGTACTGATTATCTATTATGATAGCAGCAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCAGGTGTGGGACACCAGTGCTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
121 PMX070 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKSVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPVLIIYYDSSRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCQVWDTSANVFGGGTHLTVL
122 PMX070 중쇄 CDR1 GFTFSRYH
123 PMX070 중쇄 CDR2 INSGGSPT
124 PMX070 중쇄 CDR3 TTYDQ
125 PMX070 경쇄 CDR1 NIGSKS
126 PMX070 경쇄 CDR2 YDS
127 PMX070 경쇄 CDR3 QVWDTSANV
128 PMX071 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 ATGGAGTCTGCGCTCAGCTGGGTGTTCCTTGTCACTATTTTAAAAGGTGTCCAGGGTGAGGTGCACCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCTGGAATCACCTTCAATAGATATTATATGAACTGGGTCCGCCAGACTCCAGGGAAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATACATAGACAGTGGTGGAAGTCCCACAACCTATGCAGACGCTGTAAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACGTTGTATCTTCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTACGAGTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
129 PMX071 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 EVHLVESGGDLVKPGGSLRLSCVASGITFNRYYMNWVRQTPGKGLQWVAYIDSGGSPTTYADAVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTSFDYWGQGTLVTVSS
130 PMX071 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 ATGGCCTGGACCCACCTCCTCCTGAGCCTCCTGGCTCTCTGCACAGGTTCTGTGGCCTCCTATGTGCTGACACAGCTGCCATCCAAAAATGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTATACTGATTATCTATTATGATACCAGCAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCAGGTGTGGGACAGCAGTGCTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
131 PMX071 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKNVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPILIIYYDTSRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCQVWDSSANVFGGGTHLTVL
132 PMX071 중쇄 CDR1 GITFNRYY
133 PMX071 중쇄 CDR2 IDSGGSPT
134 PMX071 중쇄 CDR3 TSFDY
135 PMX071 경쇄 CDR1 NIGSKS
136 PMX071 경쇄 CDR2 YDT
137 PMX071 경쇄 CDR3 QVWDSSANV
138 PMX072 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 ATGGAGTCTGCGCTCAGCTGGGTGTTCCTTGTCACTATTTTAAAAGGTGTCCAGGGTGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGGTACCACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATTCATTAACACTGGTAGAAGTAGCACAAACTATGCAGACGCTGTGGCGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACGCTGTATCTTCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTTCGACCCTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
139 PMX072 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 EVQLVESGGDLVKPGGSLRLSCVASGFTFSRYHMSWVRQAPGKGLQWVAFINTGRSSTNYADAVAGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCSTLDYWGQGTLVTVSS
140 PMX072 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 ATGGCCTGGACCCACCTCCTCCTGAGCCTCCTGGCTCTCTGCACAGGTTCTGTGGCCTCCTATGTGCTGACACAGCTGCCATCCAAAAATGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTGTACTGATTATCTATTATGATAGCAGCAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCAGGTGTGGGACAGCAGTGCTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
141 PMX072 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKNVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPVLIIYYDSSRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCQVWDSSANVFGGGTHLTVL
142 PMX072 중쇄 CDR1 GFTFSRYH
143 PMX072 중쇄 CDR2 INTGRSST
144 PMX072 중쇄 CDR3 STLDY
145 PMX072 경쇄 CDR1 NIGSKS
146 PMX072 경쇄 CDR2 YDS
147 PMX072 경쇄 CDR3 QVWDSSANV
148 PMX073 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 ATGGAGTCTGCGCTCAGCTGGGTGTTCCTTGTCACTATTTTAAAAGGTGTCCAGGGTGAAGTACAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCCGGATTCACCTTCAGTAGATACTACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATTCATTACCAGTGGTGGAAGTAGCACAAGCTATGGAGACGCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACGCTGTATCTTCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTACGAGCTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
149 PMX073 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 EVQLVESGGDLVKPGGSLRLSCVASGFTFSRYYMNWVRQAPGKGLQWVAFITSGGSSTSYGDAVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTSFDYWGQGTLVTVSS
150 PMX073 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 ATGGCCTGGACCCACCTCCTCCTGAGCCTCCTGGCTCTCTGCACAGGTTCTGTGGCCTCCTATGTGCTGACACAGCTGCCATCCAAAAATGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTGTACTGATTATCTATTATGCTAGCAGCAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCAGGTGTGGGACAGCAGTGCTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
151 PMX073 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKNVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPVLIIYYASSRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCQVWDSSANVFGGGTHLTVL
152 PMX073 중쇄 CDR1 GFTFSRYY
153 PMX073 중쇄 CDR2 ITSGGSST
154 PMX073 중쇄 CDR3 TSFDY
155 PMX073 경쇄 CDR1 NIGSKS
156 PMX073 경쇄 CDR2 YAS
157 PMX073 경쇄 CDR3 QVWDSSANV
158 PMX074 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 ATGGAGTCTGCGCTCAGCTGGGTGTTCCTTGTCATTATTTTAAAAGGTGTCCAGGGCGAGGTGCAGTTGGTGGAGTCTGGGGGAGACCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGGTATTACATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATACATTAACAGTGATAGAAGAAGCACAACCTATGCAGACGCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAAAACACGCTGTATCTTCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTACGACCCTTGAATATTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
159 PMX074 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 EVQLVESGGDLVKPGGSLRLSCVASGFTFSRYYMTWVRQAPGKGLQWVAYINSDRRSTTYADAVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTTLEYWGQGTLVTVSS
160 PMX074 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 ATGGCCTGGACCCACCTCCTCCTGAGCCTCCTGGCTCTCTGCACAGGCTCTGTGGCCTCCTATGTGCTGACACAGCTGCCATCCAAAAATGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTGTACTGATTATCTATTATGATAGCCGCAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAACGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCAGGTGTGGGACAGCAGTGCTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
161 PMX074 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKNVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPVLIIYYDSRRPTGIPERFSGANSGNTATLTINGALAEDEADYYCQVWDSSANVFGGGTHLTVL
162 PMX074 중쇄 CDR1 GFTFSRYY
163 PMX074 중쇄 CDR2 INSDRRST
164 PMX074 중쇄 CDR3 TTLEY
165 PMX074 경쇄 CDR1 NIGSKS
166 PMX074 경쇄 CDR2 YDS
167 PMX074 경쇄 CDR3 QVWDSSANV
168 PMX075 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 ATGGAGTCTGCGCTCAGCTGGGTGTTCCTTGTCACTATTTTAAAAGGTGTCCAGGGTGAGGTGCAGTTGGTGGAGTCTGGGGGAGACCTGGTGAAGCCGGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCCGGAATCACCTTCAGTAGATATCACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCGGGGAAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATTCATTAACACTGGTAGAAGTAGCACAAACTATGCGGACGCTGTGGCGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACGCTGTATCTTCAAATGAACGGCCTGACAGTCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTTCGACCCTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
169 PMX075 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 EVQLVESGGDLVKPGGSLRLSCVASGITFSRYHMSWVRQAPGKGLQWVAFINTGRSSTNYADAVAGRFTISRDNAKNTLYLQMNGLTVEDTAVYYCSTLDYWGQGTLVTVSS
170 PMX075 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 ATGGCCTGGACCCACCTCCTCCTGAGCCTCCTGGCTCTCTGCACAGATTCTGTGGCCTCCTATGTGCTGACACAGCTGCCATCCAAAAGTGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTATACTGATTATCTATTATGATAACAACAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCACGTGTGGGACAGCAGTGTTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
171 PMX075 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKSVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPILIIYYDNNRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCHVWDSSVNVFGGGTHLTVL
172 PMX075 중쇄 CDR1 GITFSRYH
173 PMX075 중쇄 CDR2 INTGRSST
174 PMX075 중쇄 CDR3 STLDY
175 PMX075 경쇄 CDR1 NIGSKS
176 PMX075 경쇄 CDR2 YDN
177 PMX075 경쇄 CDR3 HVWDSSVNV
178 PMX076 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 ATGGAGTCTGCGCTCAGCTGGGTGTTCCTTGTCACTATTTTAAAAGGTGTCCAGGGTGAAGTTCAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGACCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCTGGAATCACCTTCAGTAGGTACTACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATACATTGACAGTGGTGGAAGTCCCACAACCTATGCAGACGCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAAAGCGCTGTATCTTCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTACGAGTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
179 PMX076 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 EVQLVESGGDLVKPGGSLRLSCVASGITFSRYYMNWVRQAPGKGLQWVAYIDSGGSPTTYADAVKGRFTISRDNAKKALYLQMNSLRAEDTAVYYCTSFDYWGQGTLVTVSS
180 PMX076 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 ATGGCCTGGACCCACCTCCTCCTGAGCCTCCTGGCTCTCTGCACAGGTTCTGTGGCCTCCTATGTCCTGACACAGCTGCCATCCAAAAATGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTGTACTGATTATCTATTATGATAGCAGCAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTTCTGCCAGGTGTGGGACAGCAGTGCTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
181 PMX076 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKNVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPVLIIYYDSSRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYFCQVWDSSANVFGGGTHLTVL
182 PMX076 중쇄 CDR1 GITFSRYY
183 PMX076 중쇄 CDR2 IDSGGSPT
184 PMX076 중쇄 CDR3 TSFDY
185 PMX076 경쇄 CDR1 NIGSKS
186 PMX076 경쇄 CDR2 YDS
187 PMX076 경쇄 CDR3 QVWDSSANV
188 PMX077 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 ATGGAGTCTGCGCTCAGCTGGGTGTTCCTTGTCACTATTTTAAAAGGTGTCCAGGGTGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCTGGAATCACCTTCAGTAGATATTATATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATACATAAACAGTGGTGGAAGTCCCACAACCTATGCAGACGCTGTAAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACGTTGTATCTTCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTACGAGTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
189 PMX077 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 EVQLVESGGDLVKPGGSLRLSCVASGITFSRYYMNWVRQAPGKGLQWVAYINSGGSPTTYADAVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTSFDYWGQGTLVTVSS
190 PMX077 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 ATGGCCTGGACCCACCTCCTCCTGAGCCTCCTGGCTCTCTGCACAGGTTCTGTGGCCTCCTATGTGCTGACACAGCTGCCATCCAAAAATGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTATACTGATTATCTATTATGATACCAGCAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCAGGTGTGGGACAGCAGTGCTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
191 PMX077 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKNVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPILIIYYDTSRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCQVWDSSANVFGGGTHLTVL
192 PMX077 중쇄 CDR1 GITFSRYY
193 PMX077 중쇄 CDR2 INSGGSPT
194 PMX077 중쇄 CDR3 TSFDY
195 PMX077 경쇄 CDR1 NIGSKS
196 PMX077 경쇄 CDR2 YDT
197 PMX077 경쇄 CDR3 QVWDSSANV
198 PMX078 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 ATGGAGTCTGCGCTCAGCTGGGTGTTCCTTGTCACAATTTTAAAAGGTGTCCAGGGTGAGGTGCAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGACCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCTGGACTCACCTTCAGTAGGTACCACATGAGCTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATACATTAGCAGTGGTGGAAGTAGCACAAACTATGCAGGCTCTGTGAAGGGCCGATTCACCGTCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACTCTGTATCTTCAGATGAACAGTCTGAGAGCCGAAGACACGGCCGTCTATTACTGTACGAGTCTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
199 PMX078 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 EVQLVESGGDLVKPGGSLRLSCVASGLTFSRYHMSWIRQAPGKGLQWVAYISSGGSSTNYAGSVKGRFTVSRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTSLDYWGQGTLVTVSS
200 PMX078 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 ATGGCCTGGACCCACCTCCTCCTGAGCCTCCTGGCTCTCTGCACAGGTTCTGTGGCCTCCTATGTGCTGACACAGCTGCCATCCAAAAATGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTGTACTGATTATCTATTATGATAGTAGGAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCAGGTGTGGGACAGCAGTGATAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
201 PMX078 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKNVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPVLIIYYDSRRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCQVWDSSDNVFGGGTHLTVL
202 PMX078 중쇄 CDR1 GLTFSRYH
203 PMX078 중쇄 CDR2 ISSGGSST
204 PMX078 중쇄 CDR3 TSLDY
205 PMX078 경쇄 CDR1 NIGSKS
206 PMX078 경쇄 CDR2 YDS
207 PMX078 경쇄 CDR3 QVWDSSDNV
208 PMX079 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 ATGGAGTCTGCGCTCAGCTGGGTGTTCCTTGTCACTATTTTAAAAGGTGTCCAGGGTGAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACCTGGTGAAGCCGGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCTGGACTCACCTTCAGTAGATACCACATGAGTTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATTCATTAACAGTGGTAGAAGTGACACAACCTATGCAGACGCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACGCTGTATCTTCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTTTATTACTGTACGACTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
209 PMX079 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 EVQLVESGGDLVKPGGSLRLSCVASGLTFSRYHMSWVRQAPGKGLQWVAFINSGRSDTTYADAVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCTTFDYWGQGTLVTVSS
210 PMX079 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 ATGGCCTGGACCCACCTCCTCCTGAGCCTCCTGGCTCTCTGCACAGGTTATGTGGCCTCCTATGTGCTGACACAGCTGCCATCCAAAAATGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTGCACTGATTATCTATTATGATAGCAGCAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCAGGTGTGGGACAGTAGTGCTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
211 PMX079 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKNVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPALIIYYDSSRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCQVWDSSANVFGGGTHLTVL
212 PMX079 중쇄 CDR1 GLTFSRYH
213 PMX079 중쇄 CDR2 INSGRSDT
214 PMX079 중쇄 CDR3 TTFDY
215 PMX079 경쇄 CDR1 NIGSKS
216 PMX079 경쇄 CDR2 YDS
217 PMX079 경쇄 CDR3 QVWDSSANV
218 PMX080 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 ATGGAGTCTGCGCTCAGCTGGGTGTTCCTCGTCACTATTTTAAAAGGTGTCCAGGGTGAGGTGCAGTTGGTGGAGTCTGGGGGAGACCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCTGGATTAACCTTCAGTAGATATTACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATATATTGATAGTGGTGGAAGTCCCACAAACTATGCAGACGCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACACTGTATCTTCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTATTGTTCGAGTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
219 PMX080 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 EVQLVESGGDLVKPGGSLRLSCVASGLTFSRYYMNWVRQAPGKGLQWVAYIDSGGSPTNYADAVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCSSFDYWGQGTLVTVSS
220 PMX080 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 ATGGCCTGGACCCACCTCCTCCTGAGCCTCCTGGCTCTCTGCACAGGTTCTGTGGCCTCCTATGTGGTGACACAGCTGCCATCCAATACTGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTGTGCTGATTATCTATTATGATAGCAGGAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCAGGTGTGGGACAGTAGTGCTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
221 PMX080 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVVTQLPSNTVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPVLIIYYDSRRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCQVWDSSANVFGGGTHLTVL
222 PMX080 중쇄 CDR1 GLTFSRYY
223 PMX080 중쇄 CDR2 IDSGGSPT
224 PMX080 중쇄 CDR3 SSFDY
225 PMX080 경쇄 CDR1 NIGSKS
226 PMX080 경쇄 CDR2 YDS
227 PMX080 경쇄 CDR3 QVWDSSANV
228 PMX081 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 ATGGAGTCTGCGCTCAGCTGGGTGTTCCTTGTCACTATTTTAAAAGGTGTCCAGGGTGAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGGAGACCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCTGGATACACCTTCACTAGGTATCACATGAGTTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATTCATTAATAGTGATGGAACTGGTATAACCTATGGAGACGCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACACGCTGTATCTTCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCATCTATTACTGTACGACTTTTGACTCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
229 PMX081 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 EVQLVQSGGDLVKPGGSLRLSCVASGYTFTRYHMSWVRQAPGKGLQWVAFINSDGTGITYGDAVKGRFTISRDNAKNTLYLQMNSLRAEDTAIYYCTTFDSWGQGTLVTVSS
230 PMX081 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열 ATGGCCTGGACCCACCTCCTCCTGAGCCTCCTGGCTCTCTGCACAGGTTCTGTGGCCTCCTATGTGCTGACACAGCTGCCATCCAAAAATGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTATACTGATTATCTATTATGATAGCAGGAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCAGGTGTGGGACAGCAGTGGTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
231 PMX081 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKNVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPILIIYYDSRRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCQVWDSSGNVFGGGTHLTVL
232 PMX081 중쇄 CDR1 GYTFTRYH
233 PMX081 중쇄 CDR2 INSDGTGI
234 PMX081 중쇄 CDR3 TTFDS
235 PMX081 경쇄 CDR1 NIGSKS
236 PMX081 경쇄 CDR2 YDS
237 PMX081 경쇄 CDR3 QVWDSSGNV
238 PMX112 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKSVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPVLIIYYDSRRPTGIPERFSGANSGNTATLTINGALAEDEADYYCQMWDSSANVFGGGTHLTVL
239 PMX113 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPFKSVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPVLIIYYDSRRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCQVWDSSVNVFGGGTHLTVL
240 PMX114 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKSVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPVLIIYYDSSRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCQVWDSSANVFGGGTHLTVL
241 PMX115 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQVPSKSVTLKQPAHITCGGDNIGGKSVHWYQQKLGQAPLLIIYYDTRRPTGIPERFSGANSGNTATLTISRALAEDEADYYCQVWDSSGNVFGGGTHLTVI
242 PMX116 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKSVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPILIIYYDTSRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCQVWDSSANVFGGGTHLTVL
243 PMX0117 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKSVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPVLIIYYDSSRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCQVWDSSANVFGGGTHLTVL
244 PMX118 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKSVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPVLIIYYASSRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCQVWDSSANVFGGGTHLTVL
245 PMX119 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKSVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPVLIIYYDSRRPTGIPERFSGANSGNTATLTINGALAEDEADYYCQVWDSSANVFGGGTHLTVL
246 PMX120 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKSVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPVLIIYYDSSRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYFCQVWDSSANVFGGGTHLTVL
247 PMX121 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKSVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPILIIYYDTSRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCQVWDSSANVFGGGTHLTVL
248 PMX122 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKSVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPVLIIYYDSRRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCQVWDSSDNVFGGGTHLTVL
249 PMX123 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKSVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPALIIYYDSSRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCQVWDSSANVFGGGTHLTVL
250 PMX124 경쇄 가변 영역 아미노산 서열 SYVLTQLPSKSVTLKQPAHITCGGDNIGSKSVHWYQQKLGQAPILIIYYDSRRPTGIPERFSGANSGNTATLTISGALAEDEADYYCQVWDSSGNVFGGGTHLTVL
251 PMX066 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(리더 없음) GCGGTGCAGCTGGTGGAGTCAGGGGGAGACCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCTGGAATCACCTTCAGTAGGTACCACATGAGTTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATACATTAATAGTGGTGGAAGTGCCACAAGTTATACAGACGCTGTGAAGGGCCGATTCAGCATCTCCAGAGACAACGGCAAAAACACGCTTTATCTTCAGATGAATAGCCTGAGAGTCGAGGACTCGGCCGTCTATTACTGTACGACCCTTGACCTCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
252 PMX067 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(리더 없음) GAGATACAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGACCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCTGGATTCACCTTCAGTCGCTACCACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATATATTAACACTGGTGGAAGTAACACAAACTATGCAGACGCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACGCTGTATCTTCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTACGACCCTTGACTCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
253 PMX068 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(리더 없음) GAACTACAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCCGGATTCACCTTCAGTAGATACTACTTGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATTCATTACCAGTGGTGGCAGTAGCACAAACTATGCAGACGCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACACTGTATCTTCAGATGAATAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTTTATTACTGTACGAGCTTCGACTCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
254 PMX069 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(리더 없음) GAGATGCAGCTGGTGGAATCTGGGGGAGCCCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTCTCCTGTGTGGCCTCTGGATTCACCTTTAGGAGATACCACATGAGTTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGACAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATACATTGACAGTGATGGAAGTCCTACAAGTTATGGAGACTCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAATACGCTATTTCTTCAGATGAACAGTCTGAGAGTCGACGACACGGCCGTATATTACTGTACGACTCTTGACTACTGGGGCCGGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
255 PMX070 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(리더 없음) GAGATGCAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGACCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCTGGATTCACCTTCAGTCGCTACCACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATACATTAATAGTGGTGGAAGTCCCACAAACTATGCAGACGCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACACTATATCTTCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTACGACCTACGACCAGTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
256 PMX071 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(리더 없음) GAGGTGCACCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCTGGAATCACCTTCAATAGATATTATATGAACTGGGTCCGCCAGACTCCAGGGAAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATACATAGACAGTGGTGGAAGTCCCACAACCTATGCAGACGCTGTAAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACGTTGTATCTTCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTACGAGTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
257 PMX072 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(리더 없음) GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGGTACCACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATTCATTAACACTGGTAGAAGTAGCACAAACTATGCAGACGCTGTGGCGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACGCTGTATCTTCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTTCGACCCTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
258 PMX073 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(리더 없음) GAAGTACAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCCGGATTCACCTTCAGTAGATACTACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATTCATTACCAGTGGTGGAAGTAGCACAAGCTATGGAGACGCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACGCTGTATCTTCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTACGAGCTTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
259 PMX074 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(리더 없음) GAGGTGCAGTTGGTGGAGTCTGGGGGAGACCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCTGGATTCACCTTCAGTAGGTATTACATGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATACATTAACAGTGATAGAAGAAGCACAACCTATGCAGACGCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAAAACACGCTGTATCTTCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTACGACCCTTGAATATTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
260 PMX075 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(리더 없음) GAGGTGCAGTTGGTGGAGTCTGGGGGAGACCTGGTGAAGCCGGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCCGGAATCACCTTCAGTAGATATCACATGAGCTGGGTCCGCCAGGCTCCGGGGAAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATTCATTAACACTGGTAGAAGTAGCACAAACTATGCGGACGCTGTGGCGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACGCTGTATCTTCAAATGAACGGCCTGACAGTCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTTCGACCCTCGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
261 PMX076 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(리더 없음) GAAGTTCAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGACCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCTGGAATCACCTTCAGTAGGTACTACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATACATTGACAGTGGTGGAAGTCCCACAACCTATGCAGACGCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAAAGCGCTGTATCTTCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTACTGTACGAGTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
262 PMX077 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(리더 없음) GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCTGGAATCACCTTCAGTAGATATTATATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATACATAAACAGTGGTGGAAGTCCCACAACCTATGCAGACGCTGTAAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACGTTGTATCTTCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTGTATTACTGTACGAGTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
263 PMX078 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(리더 없음) GAGGTGCAACTGGTGGAGTCTGGGGGAGACCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCTGGACTCACCTTCAGTAGGTACCACATGAGCTGGATCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATACATTAGCAGTGGTGGAAGTAGCACAAACTATGCAGGCTCTGTGAAGGGCCGATTCACCGTCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACTCTGTATCTTCAGATGAACAGTCTGAGAGCCGAAGACACGGCCGTCTATTACTGTACGAGTCTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
264 PMX079 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(리더 없음) GAGGTGCAGCTGGTGGAGTCTGGGGGAGACCTGGTGAAGCCGGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCTGGACTCACCTTCAGTAGATACCACATGAGTTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATTCATTAACAGTGGTAGAAGTGACACAACCTATGCAGACGCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACGCTGTATCTTCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTTTATTACTGTACGACTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
265 PMX080 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(리더 없음) GAGGTGCAGTTGGTGGAGTCTGGGGGAGACCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCTGGATTAACCTTCAGTAGATATTACATGAACTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATATATTGATAGTGGTGGAAGTCCCACAAACTATGCAGACGCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAACGCCAAGAACACACTGTATCTTCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCGTATATTATTGTTCGAGTTTTGACTACTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
266 PMX081 중쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(리더 없음) GAGGTGCAGCTGGTGCAGTCTGGGGGAGACCTGGTGAAGCCTGGGGGGTCCCTGAGACTTTCCTGTGTGGCCTCTGGATACACCTTCACTAGGTATCACATGAGTTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTTCAGTGGGTCGCATTCATTAATAGTGATGGAACTGGTATAACCTATGGAGACGCTGTGAAGGGCCGATTCACCATCTCCAGAGACAATGCCAAGAACACGCTGTATCTTCAGATGAACAGCCTGAGAGCCGAGGACACGGCCATCTATTACTGTACGACTTTTGACTCCTGGGGCCAGGGAACCCTGGTCACCGTCTCCTCAG
267 PMX066 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(리더 없음) TCCTATGTGCTGACACAGCTGCCATCCAAAAATGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTGTACTGATTATCTATTATGATAGCCGCAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAACGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGTCAGATGTGGGACAGCAGTGCTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
268 PMX067 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(리더 없음) TCCTATGTGCTGACACAGCTGCCATTCAAAAATGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTGTATTGATTATCTATTATGATAGTAGAAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCAGGTGTGGGACAGTAGTGTTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
269 PMX068 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(리더 없음) TCCTATGTGCTGACACAGCTGCCATCCAAAAATGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTGTACTAATTATCTATTATGATAGCAGCAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCAGGTGTGGGACAGCAGTGCTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
270 PMX069 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(리더 없음) TCCTATGTGCTGACACAGGTGCCATCCAAAAATGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAGGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTCTACTGATTATCTATTATGATACCAGGAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGCTTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCAGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCAGGTGTGGGACAGCAGTGGTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCATCG
271 PMX070 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(리더 없음) TCCTATGTGCTGACACAGCTGCCATCCAAAAGTGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTGTACTGATTATCTATTATGATAGCAGCAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCAGGTGTGGGACACCAGTGCTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
272 PMX071 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(리더 없음) TCCTATGTGCTGACACAGCTGCCATCCAAAAATGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTATACTGATTATCTATTATGATACCAGCAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCAGGTGTGGGACAGCAGTGCTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
273 PMX072 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(리더 없음) TCCTATGTGCTGACACAGCTGCCATCCAAAAATGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTGTACTGATTATCTATTATGATAGCAGCAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCAGGTGTGGGACAGCAGTGCTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
274 PMX073 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(리더 없음) TCCTATGTGCTGACACAGCTGCCATCCAAAAATGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTGTACTGATTATCTATTATGCTAGCAGCAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCAGGTGTGGGACAGCAGTGCTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
275 PMX074 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(리더 없음) TCCTATGTGCTGACACAGCTGCCATCCAAAAATGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTGTACTGATTATCTATTATGATAGCCGCAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAACGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCAGGTGTGGGACAGCAGTGCTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
276 PMX075 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(리더 없음) TCCTATGTGCTGACACAGCTGCCATCCAAAAGTGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTATACTGATTATCTATTATGATAACAACAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCACGTGTGGGACAGCAGTGTTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
277 PMX076 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(리더 없음) TCCTATGTCCTGACACAGCTGCCATCCAAAAATGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTGTACTGATTATCTATTATGATAGCAGCAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTTCTGCCAGGTGTGGGACAGCAGTGCTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
278 PMX077 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(리더 없음) TCCTATGTGCTGACACAGCTGCCATCCAAAAATGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTATACTGATTATCTATTATGATACCAGCAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCAGGTGTGGGACAGCAGTGCTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
279 PMX078 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(리더 없음) TCCTATGTGCTGACACAGCTGCCATCCAAAAATGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTGTACTGATTATCTATTATGATAGTAGGAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCAGGTGTGGGACAGCAGTGATAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
280 PMX079 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(리더 없음) TCCTATGTGCTGACACAGCTGCCATCCAAAAATGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTGCACTGATTATCTATTATGATAGCAGCAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCAGGTGTGGGACAGTAGTGCTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
281 PMX080 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(리더 없음) TCCTATGTGGTGACACAGCTGCCATCCAATACTGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTGTGCTGATTATCTATTATGATAGCAGGAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCAGGTGTGGGACAGTAGTGCTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
282 PMX081 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(리더 없음) TCCTATGTGCTGACACAGCTGCCATCCAAAAATGTGACCCTGAAGCAGCCGGCCCACATCACCTGTGGGGGAGACAACATTGGAAGTAAAAGTGTTCACTGGTACCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCCCCTATACTGATTATCTATTATGATAGCAGGAGGCCGACAGGGATCCCTGAGCGATTCTCCGGCGCCAACTCGGGGAACACGGCCACCCTGACCATCAGCGGGGCCCTGGCCGAGGACGAGGCTGACTATTACTGCCAGGTGTGGGACAGCAGTGGTAATGTGTTCGGCGGAGGCACCCATCTGACCGTCCTCG
283 PMX006 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(코돈 최적화) AGCTACGTGCTGACACAGCTGCCTAGCAAGCAAGTGACCCTGAAGCAGCCTGCCCACATCACCTGCGGCGGCGACAACATCGGCAGCAAGAGCGTGCACTGGTATCAGCAGAAGCTGGGCCAAGCCCCTGTGCTGATCATCTACTACGACAGCAGAAGACCTACCGGCATCCCTGAGAGATTCAGCGGCGCCAACAGCGGCAACACCGCCACCCTGACCATCAGCGGCGCCCTGGCCGAGGACGAGGCCGACTACTACTGCCAAGTGTGGGACAGCAGCGCCAACGTGTTCGGCGGAGGCACCCACCTGACCGTGCTGG
284 PMX007 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(코돈 최적화) AGCTACGTGCTGACACAGCTGCCTAGCAAGGCCGTGACCCTGAAGCAGCCTGCCCACATCACCTGCGGCGGCGACAACATCGGCAGCAAGAGCGTGCACTGGTATCAGCAGAAGCTGGGCCAAGCCCCTGTGCTGATCATCTACTACGACAGCAGAAGACCTACCGGCATCCCTGAGAGATTCAGCGGCGCCAACAGCGGCAACACCGCCACCCTGACCATCAGCGGCGCCCTGGCCGAGGACGAGGCCGACTACTACTGCCAAGTGTGGGACAGCAGCGCCAACGTGTTCGGCGGAGGCACCCACCTGACCGTGCTGG
285 PMX008 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(코돈 최적화) AGCTACGTGCTGACACAGCTGCCTAGCAAAGAGGTGACCCTGAAGCAGCCTGCCCACATCACCTGCGGCGGCGACAACATCGGCAGCAAGAGCGTGCACTGGTATCAGCAGAAGCTGGGCCAAGCCCCTGTGCTGATCATCTACTACGACAGCAGAAGACCTACCGGCATCCCTGAGAGATTCAGCGGCGCCAACAGCGGCAACACCGCCACCCTGACCATCAGCGGCGCCCTGGCCGAGGACGAGGCCGACTACTACTGCCAAGTGTGGGACAGCAGCGCCAACGTGTTCGGCGGAGGCACCCACCTGACCGTGCTGG
286 PMX009 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(코돈 최적화) AGCTACGTGCTGACACAGCTGCCTAGCAAGAACGTGGCCCTGAAGCAGCCTGCCCACATCACCTGCGGCGGCGACAACATCGGCAGCAAGAGCGTGCACTGGTATCAGCAGAAGCTGGGCCAAGCCCCTGTGCTGATCATCTACTACGACAGCAGAAGACCTACCGGCATCCCTGAGAGATTCAGCGGCGCCAACAGCGGCAACACCGCCACCCTGACCATCAGCGGCGCCCTGGCCGAGGACGAGGCCGACTACTACTGCCAAGTGTGGGACAGCAGCGCCAACGTGTTCGGCGGAGGCACCCACCTGACCGTGCTGG
287 PMX010 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(코돈 최적화) AGCTACGTGCTGACACAGCTGCCTAGCAAGTCCGTGACCCTGAAGCAGCCTGCCCACATCACCTGCGGCGGCGACAACATCGGCAGCAAGAGCGTGCACTGGTATCAGCAGAAGCTGGGCCAAGCCCCTGTGCTGATCATCTACTACGACAGCAGAAGACCTACCGGCATCCCTGAGAGATTCAGCGGCGCCAACAGCGGCAACACCGCCACCCTGACCATCAGCGGCGCCCTGGCCGAGGACGAGGCCGACTACTACTGCCAAGTGTGGGACAGCAGCGCCAACGTGTTCGGCGGAGGCACCCACCTGACCGTGCTGG
288 PMX011 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(코돈 최적화) AGCTACGTGCTGACACAGCTGCCTAGCAAGACCGTGACCCTGAAGCAGCCTGCCCACATCACCTGCGGCGGCGACAACATCGGCAGCAAGAGCGTGCACTGGTATCAGCAGAAGCTGGGCCAAGCCCCTGTGCTGATCATCTACTACGACAGCAGAAGACCTACCGGCATCCCTGAGAGATTCAGCGGCGCCAACAGCGGCAACACCGCCACCCTGACCATCAGCGGCGCCCTGGCCGAGGACGAGGCCGACTACTACTGCCAAGTGTGGGACAGCAGCGCCAACGTGTTCGGCGGAGGCACCCACCTGACCGTGCTGG
289 PMX112 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(코돈 최적화) TCTTACGTGCTGACACAGCTGCCATCTAAGTCCGTGACCCTGAAGCAGCCAGCTCACATCACATGCGGAGGCGACAACATCGGCAGCAAGTCTGTGCATTGGTATCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCTCCCGTGCTGATCATCTACTATGATTCCAGGCGGCCCACCGGAATCCCTGAGAGGTTCTCCGGCGCCAACAGCGGCAATACCGCTACACTGACCATCAACGGCGCCCTGGCTGAGGACGAGGCTGATTACTATTGTCAGATGTGGGACTCCTCCGCCAACGTGTTCGGAGGAGGAACACACCTGACCGTGCTGG
290 PMX113 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(코돈 최적화) TCCTACGTGCTGACACAGCTGCCATTCAAGAGCGTGACCCTGAAGCAGCCAGCTCACATCACATGCGGAGGCGACAACATCGGCTCTAAGTCCGTGCATTGGTATCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCTCCCGTGCTGATCATCTACTATGATTCTAGGCGGCCCACCGGCATCCCTGAGAGGTTCAGCGGCGCCAACTCTGGCAATACCGCTACACTGACCATCTCCGGCGCCCTGGCTGAGGACGAGGCTGATTACTATTGTCAAGTGTGGGACTCCAGCGTGAACGTGTTCGGCGGCGGCACACACCTGACCGTGCTGG
291 PMX114 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(코돈 최적화) AGCTACGTGCTGACACAGCTGCCAAGCAAGTCTGTGACCCTGAAGCAGCCAGCTCACATCACATGCGGAGGCGACAACATCGGCTCCAAGAGCGTGCATTGGTATCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCTCCCGTGCTGATCATCTACTATGATTCCAGCAGGCCAACCGGAATCCCTGAGCGGTTCTCTGGCGCCAACTCCGGCAATACCGCTACACTGACCATCTCTGGCGCCCTGGCTGAGGACGAGGCTGATTACTATTGTCAAGTGTGGGACTCTTCCGCTAACGTGTTCGGCGGCGGCACACACCTGACCGTGCTGG
292 PMX115 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(코돈 최적화) TCCTACGTGCTGACACAGGTGCCATCTAAGTCCGTGACCCTGAAGCAGCCAGCTCACATCACATGCGGAGGCGACAACATCGGAGGCAAGAGCGTGCATTGGTATCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCTCCCCTGCTGATCATCTACTATGATACAAGGCGGCCCACCGGCATCCCTGAGAGATTCAGCGGCGCCAACTCTGGCAATACCGCTACACTGACCATCTCTCGCGCCCTGGCTGAGGACGAGGCTGATTACTATTGTCAAGTGTGGGACTCCAGCGGAAACGTGTTCGGAGGAGGAACACACCTGACCGTGATCG
293 PMX116 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(코돈 최적화) TCCTACGTGCTGACACAGCTGCCATCTAAGTCCGTGACCCTGAAGCAGCCAGCTCACATCACATGCGGAGGCGACAACATCGGCAGCAAGTCTGTGCATTGGTATCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCTCCCATCCTGATCATCTACTATGATACATCTAGGCCAACCGGAATCCCTGAGCGGTTCTCCGGAGCTAACAGCGGCAATACCGCTACACTGACCATCTCCGGCGCCCTGGCTGAGGACGAGGCTGATTACTATTGTCAAGTGTGGGACTCCTCCGCCAACGTGTTCGGAGGAGGAACACACCTGACCGTGCTGG
294 PMX117 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(코돈 최적화) AGCTACGTGCTGACACAGCTGCCAAGCAAGTCTGTGACCCTGAAGCAGCCAGCTCACATCACATGCGGAGGCGACAACATCGGCTCCAAGAGCGTGCATTGGTATCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCTCCCGTGCTGATCATCTACTATGATTCCAGCAGGCCAACCGGAATCCCTGAGCGGTTCTCTGGCGCCAACTCCGGCAATACCGCTACACTGACCATCTCTGGCGCCCTGGCTGAGGACGAGGCTGATTACTATTGTCAAGTGTGGGACTCTTCCGCTAACGTGTTCGGCGGCGGCACACACCTGACCGTGCTGG
295 PMX118 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(코돈 최적화) AGCTACGTGCTGACACAGCTGCCAAGCAAGTCTGTGACCCTGAAGCAGCCAGCTCACATCACATGCGGAGGCGACAACATCGGCTCCAAGAGCGTGCATTGGTATCAGCAGAAGCTGGGACAGGCTCCCGTGCTGATCATCTACTATGCTTCCAGCAGGCCAACCGGAATCCCTGAGCGGTTCTCTGGCGCCAACTCCGGCAATACCGCTACACTGACCATCTCTGGCGCCCTGGCTGAGGACGAGGCTGATTACTATTGTCAAGTGTGGGATTCTTCCGCTAACGTGTTCGGCGGCGGCACACACCTGACCGTGCTGG
296 PMX119 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(코돈 최적화) TCTTACGTGCTGACACAGCTGCCATCTAAGTCCGTGACCCTGAAGCAGCCAGCTCACATCACATGCGGAGGCGACAACATCGGCAGCAAGTCTGTGCATTGGTATCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCTCCCGTGCTGATCATCTACTATGATTCCAGGCGGCCCACCGGAATCCCTGAGAGGTTCTCCGGCGCCAACAGCGGCAATACCGCTACACTGACCATCAACGGCGCCCTGGCTGAGGACGAGGCTGATTACTATTGTCAAGTGTGGGACTCCTCCGCCAACGTGTTCGGAGGAGGAACACACCTGACCGTGCTGG
297 PMX120 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(코돈 최적화) AGCTACGTGCTGACACAGCTGCCAAGCAAGTCTGTGACCCTGAAGCAGCCAGCTCACATCACATGCGGAGGCGACAACATCGGCTCCAAGAGCGTGCATTGGTATCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCTCCCGTGCTGATCATCTACTATGATTCCAGCAGGCCAACCGGAATCCCTGAGCGGTTCTCTGGCGCCAACTCCGGCAATACCGCTACACTGACCATCTCTGGCGCCCTGGCTGAGGACGAGGCTGATTACTTCTGTCAAGTGTGGGACTCTTCCGCTAACGTGTTCGGCGGCGGCACACACCTGACCGTGCTGG
298 PMX121 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(코돈 최적화) TCCTACGTGCTGACACAGCTGCCATCTAAGTCCGTGACCCTGAAGCAGCCAGCTCACATCACATGCGGAGGCGACAACATCGGCAGCAAGTCTGTGCATTGGTATCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCTCCCATCCTGATCATCTACTATGATACATCTAGGCCAACCGGAATCCCTGAGCGGTTCTCCGGAGCTAACAGCGGCAATACCGCTACACTGACCATCTCCGGCGCCCTGGCTGAGGACGAGGCTGATTACTATTGTCAAGTGTGGGACTCCTCCGCCAACGTGTTCGGAGGAGGAACACACCTGACCGTGCTGG
299 PMX122 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(코돈 최적화) TCCTACGTGCTGACACAGCTGCCATCTAAGTCCGTGACCCTGAAGCAGCCAGCTCACATCACATGCGGAGGCGACAACATCGGCAGCAAGTCTGTGCATTGGTATCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCTCCCGTGCTGATCATCTACTATGATTCTAGGCGGCCCACCGGCATCCCTGAGAGGTTCTCCGGCGCCAACAGCGGCAATACCGCTACACTGACCATCTCCGGCGCCCTGGCTGAGGACGAGGCTGATTACTATTGTCAAGTGTGGGACTCCAGCGATAACGTGTTCGGCGGCGGCACACACCTGACCGTGCTGG
300 PMX123 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(코돈 최적화) AGCTACGTGCTGACACAGCTGCCAAGCAAGTCTGTGACCCTGAAGCAGCCAGCTCACATCACATGCGGAGGCGACAACATCGGCTCCAAGAGCGTGCATTGGTATCAGCAGAAGCTGGGACAGGCTCCCGCTCTGATCATCTACTATGATTCCAGCAGGCCAACCGGAATCCCTGAGCGGTTCTCTGGCGCCAACTCCGGCAATACCGCTACACTGACCATCTCTGGCGCCCTGGCTGAGGACGAGGCTGATTACTATTGTCAAGTGTGGGACTCTTCCGCTAACGTGTTCGGCGGCGGCACACACCTGACCGTGCTGG
301 PMX124 경쇄 가변 영역 뉴클레오티드 서열(코돈 최적화) TCCTACGTGCTGACACAGCTGCCATCTAAGTCCGTGACCCTGAAGCAGCCAGCTCACATCACATGCGGAGGCGACAACATCGGCAGCAAGTCTGTGCATTGGTATCAGCAGAAGCTGGGCCAGGCTCCCATCCTGATCATCTACTATGATTCTAGGCGGCCCACCGGCATCCCTGAGAGGTTCTCCGGCGCCAACAGCGGCAATACCGCTACACTGACCATCTCCGGCGCCCTGGCTGAGGACGAGGCTGATTACTATTGTCAAGTGTGGGACTCCAGCGGAAACGTGTTCGGAGGAGGAACACACCTGACCGTGCTGG
VH 및 VL 유전자 사용
항체 클론 V 유전자 J 유전자
HC LC HC LC
　 　 　 　 　
PMX066 V 3-5 V 3-3 J 2 J 3
PMX067 V 3-5 V 3-3 J 4 J 3
PMX068 V 3-5 V 3-3 J 4 J 3
PMX069 V 3-5 V 3-3 J 4 J 3
PMX070 V 3-5 V 3-3 J 4 J 3
PMX071 V 3-5 V 3-3 J 4 J 3
PMX072 V 3-5 V 3-3 J 4 J 3
PMX073 V 3-5 V 3-3 J 4 J 3
PMX074 V 3-5 V 3-3 J 4 J 3
PMX075 V 3-5 V 3-3 J 4 J 3
PMX076 V 3-5 V 3-3 J 4 J 3
PMX077 V 3-5 V 3-3 J 4 J 3
PMX078 V 3-5 V 3-3 J 4 J 3
PMX079 V 3-5 V 3-3 J 4 J 3
PMX080 V 3-5 V 3-3 J 4 J 3
PMX081 V 3-5 V 3-3 J 4 J 3
항체에 대한 기능적 데이터 요약
항체 클론 ADCC CDC 생체외 특정 B 세포 고갈
최대 사멸(%) EC 50 (nM) 최대 사멸(%) EC 50 (nM) 최대 사멸(%) 표준 편자(%)
4E1-7 32 4.32 0.8 NA 30 13
PMX003 34 0.89 90.4 25.03 54 2
PMX066 47 0.15 98.5 12.14 44 14
PMX067 50 0.13 97.8 11.32 62 5
PMX069 38 0.09 98.2 7.60 52 1
PMX070 51 0.29 97.1 11.17 66 1
PMX071 41 0.15 94.3 28.95 50 10
PMX072 50 0.18 91.6 19.62 62 4
PMX073 48 0.21 96.3 11.08 68 3
PMX074 51 0.12 98.9 6.80 68 4
PMX075 46 0.14 98.9 6.02 51 4
PMX076 49 0.14 98.3 7.76 54 6
PMX077 42 0.13 98.7 9.84 62 0
PMX078 40 0.22 98.8 9.08 44 25
PMX079 52 0.12 96.7 16.39 67 11
PMX080 50 0.13 96.2 21.92 56 1
PMX081 51 0.16 98.5 10.55 56 2
발달가능성 프로파일
항체 클론 역가*(mg/ L) SDS-PAGE HPLC-SEC에 따른 순도 % Tm1(℃) 태그(℃) 직경 @25℃(nm)
감소되지 않음 감소됨
PMX003 125 1개의 단일 대역
~150 kDa		 2개의 단일 대역
~50 kDa 및 ~25 kDa		 99.05 % 단량체 62.8 ± 0.07 62.8 10.79 ± 2.80
PMX066 150 1개의 단일 대역~150 kDa 2개의 단일 대역
~50 kDa 및 ~25 kDa		 96.98 % 단량체 62.1 ± 0.11 추정 ~63 10.08 ± 2.76
PMX067 107 1개의 단일 대역~150 kDa 2개의 단일 대역
~50 kDa 및 ~25 kDa		 98.31 % 단량체 64.9 ± 0.05 추정 ~65 10.10 ± 2.15
PMX069 199 1개의 단일 대역~150 kDa 2개의 단일 대역
~50 kDa 및 ~25 kDa		 96.9 % 단량체 59.5 ± 0.03 58.5 9.64 ± 3.05
PMX070 190 1개의 단일 대역~150 kDa 2개의 단일 대역
~50 kDa 및 ~25 kDa		 97 % 단량체 63.7 ± 0.21 55.5 ± 0.34 11.03 ± 2.75
PMX071 106 1개의 단일 대역~150 kDa 2개의 단일 대역
~50 kDa 및 ~25 kDa		 96.59 % 단량체 60.3 ± 0.28 추정 ~62 10.25 ± 2.83
PMX072 116 1개의 단일 대역~150 kDa 2개의 단일 대역
~50 kDa 및 ~25 kDa		 98.83 % 단량체 55.3 ± 0.29 53.8 10.93 ± 2.99
PMX073 85 1개의 단일 대역~150 kDa 2개의 단일 대역
~50 kDa 및 ~25 kDa		 98.82 % 단량체 59.6 ± 0.17 추정 ~60 9.86 ± 2.15
PMX074 159 1개의 단일 대역~150 kDa 2개의 단일 대역
~50 kDa 및 ~25 kDa		 N/A 62.1 ± 0.17 62.2 10.40 ± 2.53
PMX075 100 1개의 단일 대역~150 kDa 2개의 단일 대역
~50 kDa 및 ~25 kDa		 95.17 % 단량체 57.4 ± 0.74 55.4 12.02 ± 3.83
PMX076 110 1개의 단일 대역~150 kDa 2개의 단일 대역
~50 kDa 및 ~25 kDa		 99.44 % 단량체 57.9 ± 0.23 추정 ~60 9.86 ± 2.35
PMX077 121 1개의 단일 대역~150 kDa 2개의 단일 대역
~50 kDa 및 ~25 kDa		 98.85 % 단량체 61.5 ± 0.16 60.5 10.32 ± 2.02
PMX078 97 1개의 단일 대역~150 kDa 2개의 단일 대역
~50 kDa 및 ~25 kDa		 98.5 % 단량체 추정 ~65 58 9.99 ± 2.23
PMX079 110 1개의 단일 대역~150 kDa 2개의 단일 대역
~50 kDa 및 ~25 kDa		 99.31 % 단량체 60.7 ± 0.03 59.9 10.20 ± 1.91
PMX080 97 1개의 단일 대역~150 kDa 2개의 단일 대역
~50 kDa 및 ~25 kDa		 99.48 % 단량체 59.3 ± 0.31 58 10.15 ± 2.69
PMX081 128 1개의 단일 대역~150 kDa 2개의 단일 대역
~50 kDa 및 ~25 kDa		 99.13 % 단량체 61.8 ± 0.08 61.4 9.59 ± 3.32
PMX112 80 1개의 단일 대역~150 kDa 2개의 단일 대역
~50 kDa 및 ~25 kDa		 98.66 % 단량체 63.7 ± 1.64 57.8 ± 0.41 10.84 ± 2.6
PMX115 331 1개의 단일 대역~150 kDa 2개의 단일 대역
~50 kDa 및 ~25 kDa		 99 % 단량체 60.9 ± 0.57 55.2 ± 0.42 10.46 ± 1.75
PMX122 93 1개의 단일 대역~150 kDa 2개의 단일 대역
~50 kDa 및 ~25 kDa		 97 % 단량체 58.7 ±15 57.9 ± 0.09 10.73 ± 2.87
PMX124 139 1개의 단일 대역~150 kDa 2개의 단일 대역
~50 kDa 및 ~25 kDa		 98 % 단량체 63.2 ± 0.25 55.8 ± 0.13 10.66 ± 2.21
* 3개 생산 배치의 평균
SEQUENCE LISTING <110> PetMedix Ltd <120> ANTI CANINE CD20 ANTIBODIES <130> P38561WO1 <140> PCT/GB2022/051559 <141> 2022-06-17 <150> GB 2108677.2 <151> 2021-06-17 <150> GB 2202635.5 <151> 2022-02-25 <160> 365 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 894 <212> DNA <213> Canis familiaris <400> 1 atgacaacac ccagaaattc aatgagtgga actctcccgg tagatcctat gaaaagccct 60 actgccatgt atcctgttca aaaaataatt cccaaaagga tgccttcagt ggtgggccct 120 acacaaaact tcttcatgag ggaatctaag acactggggg ctgtccagat tatgaatggg 180 ctcttccaca ttgccctagg cagcctcctg atgattcaca cggatgtcta tgcgcccatc 240 tgtataacta tgtggtaccc tctctgggga ggcattatgt tcatcatttc tggatcactc 300 ctggcagcag cggacaaaaa ccccaggaag agtttggtca aaggaaaaat gataatgaac 360 tcattgagcc tctttgctgc tatttctgga ataatttttt tgatcatgga catatttaat 420 attaccattt cccatttttt taaaatggag aatttgaatc ttattaaagc tcccatgcca 480 tatgttgaca tacacaactg tgacccagct aacccctctg agaaaaactc tttatctata 540 caatattgtg gcagcatacg atctgttttc ttgggcgttt ttgctgtgat ggtgatcttt 600 acctttttcc agaaacttgt gacagctggc attgttgaga atgaatggaa aaaactgtgc 660 tctaaaccta aatctgatgt agttgttctg ttagctgctg aagaaaaaaa agaacagccg 720 attgaaacaa cagaagaaat ggttgagctg actgaaatag cttcccaacc aaagaaagaa 780 gaagacattg aaattattcc agtccaagaa gaagaagagg aactggaaat aaactttgca 840 gaacctcccc aggagcagga atcttcacca atagaaaacg acagcatccc ttaa 894 <210> 2 <211> 297 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 2 Met Thr Thr Pro Arg Asn Ser Met Ser Gly Thr Leu Pro Val Asp Pro 1 5 10 15 Met Lys Ser Pro Thr Ala Met Tyr Pro Val Gln Lys Ile Ile Pro Lys 20 25 30 Arg Met Pro Ser Val Val Gly Pro Thr Gln Asn Phe Phe Met Arg Glu 35 40 45 Ser Lys Thr Leu Gly Ala Val Gln Ile Met Asn Gly Leu Phe His Ile 50 55 60 Ala Leu Gly Ser Leu Leu Met Ile His Thr Asp Val Tyr Ala Pro Ile 65 70 75 80 Cys Ile Thr Met Trp Tyr Pro Leu Trp Gly Gly Ile Met Phe Ile Ile 85 90 95 Ser Gly Ser Leu Leu Ala Ala Ala Asp Lys Asn Pro Arg Lys Ser Leu 100 105 110 Val Lys Gly Lys Met Ile Met Asn Ser Leu Ser Leu Phe Ala Ala Ile 115 120 125 Ser Gly Ile Ile Phe Leu Ile Met Asp Ile Phe Asn Ile Thr Ile Ser 130 135 140 His Phe Phe Lys Met Glu Asn Leu Asn Leu Ile Lys Ala Pro Met Pro 145 150 155 160 Tyr Val Asp Ile His Asn Cys Asp Pro Ala Asn Pro Ser Glu Lys Asn 165 170 175 Ser Leu Ser Ile Gln Tyr Cys Gly Ser Ile Arg Ser Val Phe Leu Gly 180 185 190 Val Phe Ala Val Met Val Ile Phe Thr Phe Phe Gln Lys Leu Val Thr 195 200 205 Ala Gly Ile Val Glu Asn Glu Trp Lys Lys Leu Cys Ser Lys Pro Lys 210 215 220 Ser Asp Val Val Val Leu Leu Ala Ala Glu Glu Lys Lys Glu Gln Pro 225 230 235 240 Ile Glu Thr Thr Glu Glu Met Val Glu Leu Thr Glu Ile Ala Ser Gln 245 250 255 Pro Lys Lys Glu Glu Asp Ile Glu Ile Ile Pro Val Gln Glu Glu Glu 260 265 270 Glu Glu Leu Glu Ile Asn Phe Ala Glu Pro Pro Gln Glu Gln Glu Ser 275 280 285 Ser Pro Ile Glu Asn Asp Ser Ile Pro 290 295 <210> 3 <211> 337 <212> DNA <213> Canis familiaris <400> 3 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagac ctggtgaagc ctggggggtc cctgagactt 60 tcctgtgtgg cctctggatt caccttcagt agctaccaca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggcttcagtg ggtcgcatac attaatagtg gtggaagtag cacaacctat 180 gcagacgctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa aacgctgtat 240 cttcagatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgttc gacttttgac 300 tactggggcc agggaaccct ggtcaccgtc tcctcag 337 <210> 4 <211> 112 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 4 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr 20 25 30 His Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Asn Ser Gly Gly Ser Ser Thr Thr Tyr Ala Asp Ala Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Lys Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ser Thr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 5 <211> 319 <212> DNA <213> Canis familiaris <400> 5 tcctatgtgc tgacacagct gccatccaga aatgtgaccc tgaagcagcc ggcccacatc 60 acctgtgggg gagacaacat tggaagtaaa agtgttcact ggtaccagca gaagctgggc 120 caggcccctg tactgattat ctattatgat accaggaggc cgacagggat ccctgagcga 180 ttctccggcg ccaactcggg gaacacggcc accctgacca tcagcggggc cctggccgag 240 gacgaggctg actattactg ccaggtgtgg gacagcagtg gtaatgtgtt cggcggaggc 300 acccatctga ccgtcctcg 319 <210> 6 <211> 106 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 6 Ser Tyr Val Leu Thr Gln Leu Pro Ser Arg Asn Val Thr Leu Lys Gln 1 5 10 15 Pro Ala His Ile Thr Cys Gly Gly Asp Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Gln Ala Pro Val Leu Ile Ile Tyr 35 40 45 Tyr Asp Thr Arg Arg Pro Thr Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ala 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Leu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Gly Asn Val 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr His Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 7 <211> 8 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 7 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Tyr His 1 5 <210> 8 <211> 8 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 8 Ile Asn Ser Gly Gly Ser Ser Thr 1 5 <210> 9 <211> 5 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 9 Ser Thr Phe Asp Tyr 1 5 <210> 10 <211> 6 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 10 Asn Ile Gly Ser Lys Ser 1 5 <210> 11 <211> 3 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 11 Tyr Asp Thr 1 <210> 12 <211> 9 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 12 Gln Val Trp Asp Ser Ser Gly Asn Val 1 5 <210> 13 <211> 337 <212> DNA <213> Canis familiaris <400> 13 gaggtgcagt tggtggagtc tgggggagac ctggtgaagc ctggggggtc cctgagactt 60 tcctgtgtgg cctctggaat catcttcagt aactaccaca tgagctgggt ccgccaggtt 120 ccagggaagg gacttcagtg ggtcgcatac attaacagtg gtggaagtac tataaactat 180 gcagacggtg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa ctcgctgtat 240 cttcagatga acagcctgag aggcgaggac acggccgtgt attactgtac gacttatgac 300 tcctggggcc agggaaccct ggtcaccgtc tcctcag 337 <210> 14 <211> 112 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 14 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Ile Ile Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 His Met Ser Trp Val Arg Gln Val Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Asn Ser Gly Gly Ser Thr Ile Asn Tyr Ala Asp Gly Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ser Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Gly Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Thr Tyr Asp Ser Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 15 <211> 319 <212> DNA <213> Canis familiaris <400> 15 tcctatgtgc tgacacagct gccatccaaa aatgtgaccc tgaagcagcc ggcccacatc 60 acctgtgggg gagacaacat tggaagtaaa agtgttcact ggtaccagca gaagctgggc 120 caggcccctg tactgattat ctattatgat agcagcaggc cgacagggat ccctgagcga 180 ttctccggcg ccaactcggg gaacacggcc accctgacca tcagcggggc cctggccgag 240 gacgaggctg actattactg ccaggtgtgg gacagcagtg ttaatgtgtt cggcggaggc 300 acccatctga ccgtcctcg 319 <210> 16 <211> 106 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 16 Ser Tyr Val Leu Thr Gln Leu Pro Ser Lys Asn Val Thr Leu Lys Gln 1 5 10 15 Pro Ala His Ile Thr Cys Gly Gly Asp Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Gln Ala Pro Val Leu Ile Ile Tyr 35 40 45 Tyr Asp Ser Ser Arg Pro Thr Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ala 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Leu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Val Asn Val 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr His Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 17 <211> 8 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 17 Gly Ile Ile Phe Ser Asn Tyr His 1 5 <210> 18 <211> 8 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 18 Ile Asn Ser Gly Gly Ser Thr Ile 1 5 <210> 19 <211> 5 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 19 Thr Thr Tyr Asp Ser 1 5 <210> 20 <211> 6 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 20 Asn Ile Gly Ser Lys Ser 1 5 <210> 21 <211> 3 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 21 Tyr Asp Ser 1 <210> 22 <211> 9 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 22 Gln Val Trp Asp Ser Ser Val Asn Val 1 5 <210> 23 <211> 337 <212> DNA <213> Canis familiaris <400> 23 gaggtgcagc tggtggagtc tgggggagac ctggtgaagc ctggggggtc cctgagactt 60 tcctgtgtgg cctctggaat caccttcagt aggtaccaca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggcttcaatg ggtcgcatac attaacagtg gtggaagtag cacaagctat 180 ccagacgctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa cacgctgtat 240 cttcagatgg acagcctgag agccgaggac acggccctgt attactgtac gacctttgac 300 tactggggcc agggaaccct ggtcaccgtc tcctcag 337 <210> 24 <211> 112 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 24 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 His Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Asn Ser Gly Gly Ser Ser Thr Ser Tyr Pro Asp Ala Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Leu Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Thr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 25 <211> 319 <212> DNA <213> Canis familiaris <400> 25 tcctatgtgc tgacacagct gccatccaaa aatgtgaccc tgaagcagcc ggcccacatc 60 acctgtgggg gagacaacat tggaagtaaa agtgttcact ggtaccagca gaaactgggc 120 caggcccctg tactgattat ctattatgat agcaggaggc cgacagggat ccctgagcga 180 ttctccggcg ccaactcggg gaacacggcc accctgacca tcagcggggc cctggccgag 240 gacgaggctg actattactg ccaggtgtgg gacagcagtg ctaatgtgtt cggcggaggc 300 acccatctga ccgtcctcg 319 <210> 26 <211> 106 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 26 Ser Tyr Val Leu Thr Gln Leu Pro Ser Lys Asn Val Thr Leu Lys Gln 1 5 10 15 Pro Ala His Ile Thr Cys Gly Gly Asp Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Gln Ala Pro Val Leu Ile Ile Tyr 35 40 45 Tyr Asp Ser Arg Arg Pro Thr Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ala 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Leu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ala Asn Val 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr His Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 27 <211> 8 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 27 Gly Ile Thr Phe Ser Arg Tyr His 1 5 <210> 28 <211> 8 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 28 Ile Asn Ser Gly Gly Ser Ser Thr 1 5 <210> 29 <211> 5 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 29 Thr Thr Phe Asp Tyr 1 5 <210> 30 <211> 6 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 30 Asn Ile Gly Ser Lys Ser 1 5 <210> 31 <211> 3 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 31 Tyr Asp Ser 1 <210> 32 <211> 9 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 32 Gln Val Trp Asp Ser Ser Ala Asn Val 1 5 <210> 33 <211> 337 <212> DNA <213> Canis familiaris <400> 33 gaagtgcagc tggtggagtc tgggggagag ctggtgaagc ctggggggtc cctgagagtt 60 tcctgtgtgg cctctggaat caccttcagt cgctaccaca tgagttgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg gacttcagtg ggtcgcattc attaacactg atagaagtag cccaaaatat 180 gcagactctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa cacgctgtat 240 cttcagatga acagcctgag agccgaggac acggccattt attactgtac gagttttgac 300 tactggggcc agggaaccct ggtcaccgtc tcctcaa 337 <210> 34 <211> 112 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 34 Glu Val 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<400> 36 Ser Tyr Val Leu Thr Gln Leu Pro Ser Lys Asn Val Thr Leu Lys Gln 1 5 10 15 Pro Ala His Ile Thr Cys Gly Gly Asp Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Gln Ala Pro Val Leu Ile Ile Tyr 35 40 45 Tyr Asp Ser Ser Arg Pro Thr Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ala 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Leu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ala Asn Val 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr His Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 37 <211> 8 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 37 Gly Ile Thr Phe Ser Arg Tyr His 1 5 <210> 38 <211> 8 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 38 Ile Asn Thr Asp Arg Ser Ser Pro 1 5 <210> 39 <211> 5 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 39 Thr Ser Phe Asp Tyr 1 5 <210> 40 <211> 6 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 40 Asn Ile Gly Ser Lys Ser 1 5 <210> 41 <211> 3 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 41 Tyr Asp Ser 1 <210> 42 <211> 9 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 42 Gln Val 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agcagccggc ccacatcacc 120 tgtgggggag acaacattgg aagtaaaagt gttcactggt accagcagaa gctgggccag 180 gcccctgtac tgattatcta ttatgatagc agcaggccga cagggatccc tgagcgattc 240 tccggcgcca actcggggaa cacggccacc ctgaccatca gcggggccct ggccgaggac 300 gaggctgact attactgcca ggtgtgggac agcagtgcta atgtgttcgg cggaggcacc 360 catctgaccg tcctcg 376 <210> 141 <211> 106 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 141 Ser Tyr Val Leu Thr Gln Leu Pro Ser Lys Asn Val Thr Leu Lys Gln 1 5 10 15 Pro Ala His Ile Thr Cys Gly Gly Asp Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Gln Ala Pro Val Leu Ile Ile Tyr 35 40 45 Tyr Asp Ser Ser Arg Pro Thr Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ala 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Leu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ala Asn Val 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr His Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 142 <211> 8 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 142 Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr His 1 5 <210> 143 <211> 8 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familiaris <400> 149 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Tyr Met Asn Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp Val 35 40 45 Ala Phe Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ser Thr Ser Tyr Gly Asp Ala Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Ser Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 150 <211> 376 <212> DNA <213> Canis familiaris <400> 150 atggcctgga cccacctcct cctgagcctc ctggctctct gcacaggttc tgtggcctcc 60 tatgtgctga cacagctgcc atccaaaaat gtgaccctga agcagccggc ccacatcacc 120 tgtgggggag acaacattgg aagtaaaagt gttcactggt accagcagaa gctgggccag 180 gcccctgtac tgattatcta ttatgctagc agcaggccga cagggatccc tgagcgattc 240 tccggcgcca actcggggaa cacggccacc ctgaccatca gcggggccct ggccgaggac 300 gaggctgact attactgcca ggtgtgggac agcagtgcta atgtgttcgg cggaggcacc 360 catctgaccg tcctcg 376 <210> 151 <211> 106 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 151 Ser Tyr Val Leu Thr Gln Leu Pro Ser Lys Asn Val Thr Leu Lys Gln 1 5 10 15 Pro Ala His Ile Thr Cys Gly Gly Asp Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Gln Ala Pro Val Leu Ile Ile Tyr 35 40 45 Tyr Ala Ser Ser Arg Pro Thr Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ala 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Leu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ala Asn Val 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr His Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 152 <211> 8 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 152 Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr Tyr 1 5 <210> 153 <211> 8 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 153 Ile Thr Ser Gly Gly Ser Ser Thr 1 5 <210> 154 <211> 5 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 154 Thr Ser Phe Asp Tyr 1 5 <210> 155 <211> 6 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 155 Asn Ile Gly Ser Lys Ser 1 5 <210> 156 <211> 3 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 156 Tyr Ala Ser 1 <210> 157 <211> 9 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 157 Gln Val Trp Asp Ser Ser Ala Asn Val 1 5 <210> 158 <211> 394 <212> DNA <213> Canis familiaris <400> 158 atggagtctg cgctcagctg ggtgttcctt gtcattattt taaaaggtgt ccagggcgag 60 gtgcagttgg tggagtctgg gggagacctg gtgaagcctg gggggtccct gagactttcc 120 tgtgtggcct ctggattcac cttcagtagg tattacatga cctgggtccg ccaggctcca 180 gggaaggggc ttcagtgggt cgcatacatt aacagtgata gaagaagcac aacctatgca 240 gacgctgtga agggccgatt caccatctcc agagacaacg ccaaaaacac gctgtatctt 300 cagatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gccgtatatt actgtacgac ccttgaatat 360 tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc tcag 394 <210> 159 <211> 112 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 159 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 Tyr Met Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Asn Ser Asp Arg Arg Ser Thr Thr 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Canis familiaris <400> 170 atggcctgga cccacctcct cctgagcctc ctggctctct gcacagattc tgtggcctcc 60 tatgtgctga cacagctgcc atccaaaagt gtgaccctga agcagccggc ccacatcacc 120 tgtgggggag acaacattgg aagtaaaagt gttcactggt accagcagaa gctgggccag 180 gcccctatac tgattatcta ttatgataac aacaggccga cagggatccc tgagcgattc 240 tccggcgcca actcggggaa cacggccacc ctgaccatca gcggggccct ggccgaggac 300 gaggctgact attactgcca cgtgtgggac agcagtgtta atgtgttcgg cggaggcacc 360 catctgaccg tcctcg 376 <210> 171 <211> 106 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 171 Ser Tyr Val Leu Thr Gln Leu Pro Ser Lys Ser Val Thr Leu Lys Gln 1 5 10 15 Pro Ala His Ile Thr Cys Gly Gly Asp Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Gln Ala Pro Ile Leu Ile Ile Tyr 35 40 45 Tyr Asp Asn Asn Arg Pro Thr Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ala 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Leu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys His Val Trp Asp Ser Ser Val Asn Val 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr His Leu 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gaagtgacac aacctatgca 240 gacgctgtga agggccgatt caccatctcc agagacaacg ccaagaacac gctgtatctt 300 cagatgaaca gcctgagagc cgaggacacg gccgtttatt actgtacgac ttttgactac 360 tggggccagg gaaccctggt caccgtctcc tcag 394 <210> 209 <211> 112 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 209 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Val Ala Ser Gly Leu Thr Phe Ser Arg Tyr 20 25 30 His Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Gln Trp Val 35 40 45 Ala Phe Ile Asn Ser Gly Arg Ser Asp Thr Thr Tyr Ala Asp Ala Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Thr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 100 105 110 <210> 210 <211> 376 <212> DNA <213> Canis familiaris <400> 210 atggcctgga cccacctcct cctgagcctc ctggctctct gcacaggtta tgtggcctcc 60 tatgtgctga cacagctgcc atccaaaaat gtgaccctga agcagccggc ccacatcacc 120 tgtgggggag acaacattgg aagtaaaagt gttcactggt accagcagaa gctgggccag 180 gcccctgcac tgattatcta ttatgatagc agcaggccga cagggatccc tgagcgattc 240 tccggcgcca actcggggaa cacggccacc ctgaccatca gcggggccct ggccgaggac 300 gaggctgact attactgcca ggtgtgggac agtagtgcta atgtgttcgg cggaggcacc 360 catctgaccg tcctcg 376 <210> 211 <211> 106 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 211 Ser Tyr Val Leu Thr Gln Leu Pro Ser Lys Asn Val Thr Leu Lys Gln 1 5 10 15 Pro Ala His Ile Thr Cys Gly Gly Asp Asn Ile Gly Ser Lys Ser Val 20 25 30 His Trp Tyr Gln Gln Lys Leu Gly Gln Ala Pro Ala Leu Ile Ile Tyr 35 40 45 Tyr Asp Ser Ser Arg Pro Thr Gly Ile Pro Glu Arg Phe Ser Gly Ala 50 55 60 Asn Ser Gly Asn Thr Ala Thr Leu Thr Ile Ser Gly Ala Leu Ala Glu 65 70 75 80 Asp Glu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Val Trp Asp Ser Ser Ala Asn Val 85 90 95 Phe Gly Gly Gly Thr His Leu Thr Val Leu 100 105 <210> 212 <211> 8 <212> PRT <213> Canis familiaris <400> 212 Gly Leu Thr Phe Ser Arg Tyr His 1 5 <210> 213 <211> 8 <212> PRT <213> Canis 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Val Leu 100 105 <210> 251 <211> 337 <212> DNA <213> Canis familiaris <400> 251 gcggtgcagc tggtggagtc agggggagac ctggtgaagc ctggggggtc cctgagactt 60 tcctgtgtgg cctctggaat caccttcagt aggtaccaca tgagttgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggcttcagtg ggtcgcatac attaatagtg gtggaagtgc cacaagttat 180 acagacgctg tgaagggccg attcagcatc tccagagaca acggcaaaaa cacgctttat 240 cttcagatga atagcctgag agtcgaggac tcggccgtct attactgtac gacccttgac 300 ctctggggcc agggaaccct ggtcaccgtc tcctcag 337 <210> 252 <211> 337 <212> DNA <213> Canis familiaris <400> 252 gagatacaac tggtggagtc tgggggagac ctggtgaagc ctggggggtc cctgagactt 60 tcctgtgtgg cctctggatt caccttcagt cgctaccaca tgagctgggt ccgccaggct 120 ccagggaagg ggcttcagtg ggtcgcatat attaacactg gtggaagtaa cacaaactat 180 gcagacgctg tgaagggccg attcaccatc tccagagaca acgccaagaa cacgctgtat 240 cttcagatga acagcctgag agccgaggac acggccgtgt attactgtac gacccttgac 300 tcctggggcc agggaaccct ggtcaccgtc tcctcag 337 <210> 253 <211> 337 <212> DNA <213> Canis familiaris <400> 253 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tcagcggcgc cctggccgag 240 gacgaggccg actactactg ccaagtgtgg gacagcagcg ccaacgtgtt cggcggaggc 300 acccacctga ccgtgctgg 319 <210> 287 <211> 319 <212> DNA <213> Canis familiaris <400> 287 agctacgtgc tgacacagct gcctagcaag tccgtgaccc tgaagcagcc tgcccacatc 60 acctgcggcg gcgacaacat cggcagcaag agcgtgcact ggtatcagca gaagctgggc 120 caagcccctg tgctgatcat ctactacgac agcagaagac ctaccggcat ccctgagaga 180 ttcagcggcg ccaacagcgg caacaccgcc accctgacca tcagcggcgc cctggccgag 240 gacgaggccg actactactg ccaagtgtgg gacagcagcg ccaacgtgtt cggcggaggc 300 acccacctga ccgtgctgg 319 <210> 288 <211> 319 <212> DNA <213> Canis familiaris <400> 288 agctacgtgc tgacacagct gcctagcaag accgtgaccc tgaagcagcc tgcccacatc 60 acctgcggcg gcgacaacat cggcagcaag agcgtgcact ggtatcagca gaagctgggc 120 caagcccctg tgctgatcat ctactacgac agcagaagac ctaccggcat ccctgagaga 180 ttcagcggcg ccaacagcgg caacaccgcc accctgacca tcagcggcgc cctggccgag 240 gacgaggccg actactactg ccaagtgtgg gacagcagcg ccaacgtgtt cggcggaggc 300 acccacctga ccgtgctgg 319 <210> 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Pro Ala Asn 20 25 30 Ala Ser Glu Lys Asn Ser Leu Ser Ile Gln Tyr Cys Gly Ser Ile Arg 35 40 45 Ser Val 50 <210> 358 <211> 50 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L18 <400> 358 Asn Ile Thr Ile Ser His Phe Phe Lys Met Glu Asn Leu Asn Leu Ile 1 5 10 15 Lys Ala Pro Met Pro Tyr Val Asp Ile His Asn Cys Asp Pro Ala Asn 20 25 30 Pro Ser Ala Lys Asn Ser Leu Ser Ile Gln Tyr Cys Gly Ser Ile Arg 35 40 45 Ser Val 50 <210> 359 <211> 50 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L19 <400> 359 Asn Ile Thr Ile Ser His Phe Phe Lys Met Glu Asn Leu Asn Leu Ile 1 5 10 15 Lys Ala Pro Met Pro Tyr Val Asp Ile His Asn Cys Asp Pro Ala Asn 20 25 30 Pro Ser Glu Lys Ala Ser Leu Ser Ile Gln Tyr Cys Gly Ser Ile Arg 35 40 45 Ser Val 50 <210> 360 <211> 50 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L20 <400> 360 Asn Ile Thr Ile Ser His Phe Phe Lys Met Glu Asn Leu Asn Leu Ile 1 5 10 15 Lys Ala Pro Met Pro Tyr Val Asp Ile His Asn Cys Asp Pro Ala Asn 20 25 30 Pro Ser Glu Lys Asn Ser Ala Ser Ile Gln Tyr 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Claims (32)

  1. 개(canine) CD20에 결합하는 단리된 개 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 상기 항체는
    a) 서열번호 27 또는 서열번호 27과 비교하여 1개 또는 2개의 아미노산 차이를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열,
    b) 서열번호 28 또는 서열번호 28과 비교하여 1개, 2개, 3개 또는 4개의 아미노산 차이를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열,
    c) 서열번호 29 또는 서열번호 29와 비교하여 1개 또는 2개의 아미노산 차이를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열,
    d) 서열번호 30 또는 서열번호 30과 비교하여 1개의 아미노산 차이를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열,
    e) 서열번호 31 또는 서열번호 31과 비교하여 1개의 아미노산 차이를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및
    f) 서열번호 32 또는 서열번호 32와 비교하여 1개 또는 2개의 아미노산 차이를 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  2. 제1항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
    i) 서열번호 7을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 8을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 9를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 10을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 11을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 12를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열,
    ii) 서열번호 17을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 18을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 19를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 20을 포함하는 LC CDR1 서열, 서열번호 21을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 22를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열,
    iii) 서열번호 37을 포함하는 HC CDR1 서열, 서열번호 38을 포함하는 HC CDR2 서열, 서열번호 39를 포함하는 HC CDR3 서열, 서열번호 40을 포함하는 LC CDR1 서열, 서열번호 41을 포함하는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 42를 포함하는 LC CDR3 서열,
    iv) 서열번호 47을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 48을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 49를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 50을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 51을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 52를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열,
    v) 서열번호 82를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 83을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 84를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 85를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 86을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 87을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열,
    vi) 서열번호 92를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 93을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 94를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 95를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 96을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 97을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열,
    vii) 서열번호 102를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 103을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 104를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 105를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 106을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 107을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열,
    viii) 서열번호 112를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 113을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 114를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 115를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 116을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 117을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열,
    ix) 서열번호 122를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 123을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 124를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 125를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 126을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 127을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열,
    x) 서열번호 132를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 133을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 134를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 135를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 136을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 137을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열,
    xi) 서열번호 142를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 143을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 144를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 145를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 146을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 147을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열,
    xii) 서열번호 152를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 153을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 154를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 155를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 156을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 157을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열,
    xii) 서열번호 162를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 163을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 164를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 165를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 166을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 167을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열,
    xiii) 서열번호 172를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 173을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 174를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 175를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 176을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 177을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열,
    xiv) 서열번호 182를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 183을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 184를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 185를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 186을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 187을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열,
    xv) 서열번호 192를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 193을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 194를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 195를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 196을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 197을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열,
    xvi) 서열번호 202를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 203을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 204를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 205를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 206을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 207을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열,
    xvii) 서열번호 212를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 213을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 214를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 215를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 216을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 217을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열,
    xviii) 서열번호 222를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 223을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 224를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 225를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 226을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 227을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열, 또는
    xix) 서열번호 232를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR1 서열, 서열번호 233을 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR2 서열, 서열번호 234를 포함하거나 이로 구성되는 HC CDR3 서열, 서열번호 235를 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR1 서열, 서열번호 236을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR2 서열, 및 서열번호 237을 포함하거나 이로 구성되는 LC CDR3 서열
    을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 서열번호 24 또는 이에 대해 적어도 75%, 80%, 85% 또는 90% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 26 또는 이에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 서열 동일성을 갖는 서열을 포함하는 LC 가변 영역 서열, 예를 들어, 서열번호 53, 54, 55, 56, 57 또는 58을 포함하는 LC 가변 영역 서열을 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  4. 제3항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은
    a) 서열번호 4를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 6을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
    b) 서열번호 14를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 16을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
    c) 서열번호 34를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 36을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
    d) 서열번호 44를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 46을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
    e) 서열번호 79를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 81을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 서열번호 238을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
    f) 서열번호 89를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 91을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 서열번호 239를 포함하는 LC 가변 영역 서열;
    g) 서열번호 99를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 101을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 서열번호 240을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
    h) 서열번호 109를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 111을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 서열번호 241을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
    i) 서열번호 119를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 121을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
    g) 서열번호 129를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 131을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 서열번호 242를 포함하는 LC 가변 영역 서열;
    k) 서열번호 139를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 141을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 서열번호 243을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
    l) 서열번호 149를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 151을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 서열번호 244를 포함하는 LC 가변 영역 서열;
    m) 서열번호 159를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 161을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 서열번호 245를 포함하는 LC 가변 영역 서열;
    n) 서열번호 169를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 171을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
    o) 서열번호 179를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 181을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 서열번호 246을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
    p) 서열번호 189를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 191을 포함하는 LC 가변 영역 서열 또는 서열번호 247을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
    q) 서열번호 199를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 201을 포함하는 LC 가변 영역 서열 서열번호 248을 포함하는 LC 가변 영역 서열;
    r) 서열번호 209를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 211을 포함하는 LC 가변 영역 서열 서열번호 249를 포함하는 LC 가변 영역 서열;
    s) 서열번호 219를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 221을 포함하는 LC 가변 영역 서열; 또는
    t) 서열번호 229를 포함하는 HC 가변 영역 서열 및 서열번호 231을 포함하는 LC 가변 영역 서열 및 서열번호 250을 포함하는 LC 가변 영역 서열
    을 갖는 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항원 결합 부분은 scFv, Fv, 중쇄 또는 단일 도메인 항체인 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분과 경쟁하는 개 CD20에 결합하는 단리된 개 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 치료 부분에 접합되는 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  8. 제7항에 있어서, 상기 치료 부분은 제2 항체 또는 이의 항원 결합 부분인 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  9. 제8항에 있어서, 상기 제2 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 상이한 표적에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 반감기 연장 부분, 표지, 세포독소, 리포솜, 나노입자 또는 방사성 동위원소로부터 선택된 추가 부분에 접합되는 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 a-푸코실화되는 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 포함하는 약제학적 조성물.
  13. 질환의 치료에 사용하기 위한 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 제12항에 따른 약제학적 조성물.
  14. B 세포에 의해 매개되는 병태의 치료를 필요로 하는 개 대상체에서 상기 B 세포에 의해 매개되는 병태를 치료하는 방법으로서, 유효량의 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 제12항에 따른 약제학적 조성물을 투여하는 단계를 포함하는 방법.
  15. 제13항 또는 제14항에 있어서, 상기 질환은 B 세포에 의해 매개되는 질환, 예를 들어, B 세포 림프종, 백혈병 또는 면역 매개 질환인 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 약제학적 조성물 또는 방법.
  16. 제13항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체에게 다른 치료제를 별도로 투여하는 단계를 추가로 포함하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 약제학적 조성물 또는 방법.
  17. 제16항에 있어서, 상기 치료제는 세포독성제 또는 방사성독성제, 면역억제제 또는 면역학적 조절제, 예컨대, 사이토카인 또는 케모카인인 항체 또는 이의 항원 결합 부분, 약제학적 조성물 또는 방법.
  18. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항체 항원 결합 부분을 암호화하는 핵산 서열.
  19. 제18항에 있어서, 서열번호 3, 5, 13, 15, 23, 25, 33, 35, 43, 45, 78, 80, 88, 90, 98, 100, 108, 110, 118, 120, 128, 130, 138, 140, 148, 150, 158, 160, 168, 170, 178, 180, 188, 190, 198, 200, 208, 210, 218, 220, 228, 230, 251, 252, 253, 254, 255, 256, 257, 258, 259, 260, 261, 262, 263, 264, 265, 266, 267, 268, 269, 270,271, 272, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 284, 285, 286, 287, 288, 289, 290, 291, 292, 293, 294, 295, 296, 297, 298, 299, 300 또는 301로부터 선택되는 서열을 포함하는 핵산 서열.
  20. 제18항 또는 제19항에 따른 핵산 서열을 포함하는 벡터.
  21. 제18항 또는 제19항에 따른 핵산 서열 또는 제20항에 따른 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  22. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 제12항에 따른 약제학적 조성물을 포함하는 키트.
  23. 제22항에 있어서, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분을 검출하기 위한 시약을 추가로 포함하는 키트.
  24. 단리된 제21항에 따른 숙주 세포를 배양하는 단계 및 상기 항체를 회수하는 단계를 포함하는 CD20에 결합하는 개 항체의 제조 방법.
  25. CD20에 결합하는 개 항체의 제조 방법으로서,
    a) 개 중쇄 V 유전자 및 개 경쇄 V 유전자를 포함하는 핵산 구축물을 발현하는 이식유전자 마우스를 CD20 항원으로 면역화시키는 단계,
    b) 항체 라이브러리를 상기 마우스로부터 생성하는 단계, 및
    c) 항체를 상기 라이브러리로부터 단리하는 단계를 포함하는 CD20에 결합하는 개 항체의 제조 방법.
  26. 개 대상체로부터 유래한 생물학적 검체에서 CD20 단백질 또는 CD20 단백질의 세포외 도메인을 검출하는 방법으로서, 생물학적 검체를 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분과 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 검출 가능한 표지에 연결되는, 방법.
  27. 제26항에 있어서, 상기 생물학적 검체는 생검, 조직, 혈액, 혈청, 혈장 또는 림프액 검체인, 방법.
  28. 종양 성장 또는 전이를 억제하는 방법으로서, 종양 세포를 유효량의 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 항원 결합 부분 또는 제12항에 따른 약제학적 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 방법.
  29. CD20을 발현하는 종양 세포를 사멸시키는 방법으로서, 상기 세포를 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 제12항에 따른 약제학적 조성물과 접촉시켜 CD20을 발현하는 세포의 사멸을 발생시키는, 방법.
  30. 제28항에 있어서, 상기 종양 세포는 개 종양 세포인, 방법.
  31. 항체 또는 이의 항원 결합 부분으로서, 에피토프가 다음의 아미노산 잔기 ENLNLIKAPM(서열번호 303, 서열번호 2의 아미노산 번호 150 내지 159) 중 하나 이상, 예를 들어, 1개 내지 10개, 예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 10개의 아미노 잔기를 포함하거나 이로 구성되는 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
  32. 제31항에 있어서, 다음의 아미노산 잔기 ITISHFFKMENLNLIKAPM(서열번호 302, 서열번호 2의 아미노산 번호 141 내지 159) 중 하나 이상, 예를 들어, 1개 내지 19개, 예를 들어, 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개 또는 19개의 아미노 잔기를 포함하거나 이로 구성되는 에피토프에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분.
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