KR20210155745A - 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 포함하는 노화 예방 또는 치료용 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 유효성분으로 포함하는 노화의 예방, 개선, 또는 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명자들은 신경질환 형질전환 동물모델에 파라카세이 유래 소포를 투여하였을 때 뇌-신경기능의 이상을 효율적으로 억제함을 확인하였고, 또한 정신적 스트레스에 의한 정신질환 동물모델에 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 투여하였을 때 스트레스에 의한 정신기능 이상 및 이에 따른 행동 장애의 발생을 효율적으로 억제함을 확인하였는 바, 본 발명에 따른 락토바실러스 파라카세이 유래 소포는 신경질환 또는 정신질환을 예방, 증상 개선, 또는 치료하기 위한 의약품 또는 건강기능식품 등의 개발에 유용하게 이용될 수 있을 것이다.

Description

락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 포함하는 노화 예방 또는 치료용 조성물{Composition for Prevention or Treatment of Aging Comprising Extracellular Vesicles Derived from Lactobacillus paracasei}

본 발명은 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 포함하는 노화 예방 또는 치료용 조성물 등에 관한 것이다.

21세기에 들어서면서 과거 전염병으로 인식되던 급성 감염성질환의 중요성이 덜해지는 반면, 인간과 마이크로바이옴(microbiome)과의 부조화에 의해 발생하는 면역기능 이상을 동반한 만성 질환이 삶의 질과 인간 수명을 결정하는 주요 질환으로 질병패턴이 바뀌었다. 특히, 21세기 고령사회에서 난치성 만성질환으로서, 치매, 파킨슨병, 자폐스펙트럼장애, 루게릭병 등의 퇴행성 뇌질환, 스트레스장애, 우울증과 같은 정신질환 등이 인간 수명과 삶의 질을 결정하는 주요 질환으로서 국민보건에 큰 문제가 되고 있다.

신경세포(뉴런)의 퇴행은 신경세포의 사멸에 의해 뇌-신경조직의 구조 및 기능의 이상을 초래한다. 근위축성측삭경화증(루게릭병), 파킨슨병, 알츠하이머병, 치명적인 가족성 불면증, 헌팅턴병 등 많은 신경 퇴행성 질환이 신경 퇴행 과정의 결과로 발생한다. 또한, 컨스-세이어증후군 (Kearns-Sayre syndrome, KSS), 만성 진행성 외안근마비 (chronic progressive external ophthalmoplegia, CPEO), 멜라스증후군 (mitochondrial encephalomyopathy with lactic acidosis and stroke-like episodes, MELAS), MERRF증후군 (myoclonic epilepsy with ragged-red fibers, MERRF), NARP증후군 (neurogenic weakness with ataxia and retinitis pigmentosa, NARP), 레이증후군 (Leigh syndrome, LS), MIRAS증후군 (mitochondrial recessive ataxia syndrome) 등과 같은 질환도 신경세포의 퇴행성 변화에 의해 발생한다. 이러한 질병은 치료가 불가능하여 진행성 퇴행 및/또는 신경세포의 사멸을 초래한다.

상기 질환에 대한 병인기전 연구가 진행됨에 따라 이러한 질병을 세포 이하 수준에서 서로 관련시키는 많은 유사점이 나타났다. 이러한 유사점을 발견하는 것은 많은 질병을 동시에 개선할 수 있다는 치료 발전에 대한 희망을 제공한다. 비정상적인 단백질 생성과 이의 결과로 유도된 세포 사멸이 다양한 퇴행성 신경질환의 발생에 중요한 역할을 한다는 사실이 밝혀지고 있다. 퇴행성 신경질환 환자의 뇌 조직은 자가포식소체를 축적하여 자가포식이 증가하는데, 이는 퇴행성 신경질환의 발생과정에서 비정상적으로 발생하는 미스폴딩 단백질을 소거하는데 중요한 역할을 한다. 최근 세포 노화의 병인기전 연구에서 여러 가지 스트레스에 의해 세포 노화가 발생하는데, 특히 대사 스트레스(metabolic stress)에 의해 활성화되는 AMPK 신호가 자가포식을 증가시켜 세포 노화를 막는다는 사실이 밝혀졌다.

미토콘드리아 DNA(mtDNA) 돌연변이의 축적 및 활성산소(reactive oxygen species, ROS)의 과도한 생산에 의해 신경세포 노화가 촉진된다고 알려져 있다. 적절한 활성산소의 생성은 AMPK 신호를 지속적으로 활성화 시켜 세포 노화를 억제하지만, 과도한 활성산소 생성은 미토콘드리아 기능에 이상을 초래해서 세포가 사멸하게 된다. 컨스-세이어 증후군 (Kearns-Sayre syndrome, KSS), 만성 진행성 외안근마비 (chronic progressive external ophthalmoplegia, CPEO), 멜라스증후군 (mitochondrial encephalomyopathy with lactic acidosis and stroke-like episodes, MELAS), MERRF증후군 (myoclonic epilepsy with ragged-red fibers, MERRF), NARP증후군 (neurogenic weakness with ataxia and retinitis pigmentosa, NARP), 레이증후군 (Leigh syndrome, LS), MIRAS증후군 (mitochondrial recessive ataxia syndrome) 등과 같은 질환은 미토콘드리아에서 생성되는 활성산소에 미토콘드리아 DNA의 돌연변이가 쉽게 발생하여 미토콘드리아 기능 이상이 초래되고, 세포 노화가 발생하여 퇴행성 신경질환이 발생한다.

한편, 우울증은 감정을 조절하는 뇌의 기능에 변화가 생겨 부정적인 감정이 나타나는 질환으로, 전 세계 3억 명 이상이 앓고 있는 질병이다. 우울증은 도파민, 세로토닌, 노르에피네프린 등 신경전달물질의 화학적 불균형과 관련이 있다. 이중 세로토닌은 뇌척수액에서 발견되는 신경대사물질로, 뇌를 순환하며 신경전달 기능을 한다. 세로토닌은 감정 표현과 밀접한 관련을 가지며, 이 물질이 부족하면 감정이 불안정해서 근심, 걱정이 많아지고, 충동적인 성향이 나타난다. 따라서 현재 우울증 치료제로 사용되고 있는 의약품들 중에는 세로토닌이 재흡수 되는 것을 억제하여 뇌 속에 오랫동안 머물도록 작용하는 것들이 다수 존재한다.

최근에는 우울증, 자폐증, 정신분열증 등의 정신질환이 배앓이와 깊은 관련이 있음이 밝혀졌다. 배앓이는 설사와 변비를 동반하고, 반복되면 과민성대장증후군에 이르는데, 이는 장내세균의 불균형(gut microbial dysbiosis)과 연관이 있음이 밝혀졌다. 좋지 않은 음식, 항생제 사용 등으로 장내세균의 불균형이 초래되면, 장내 유해 미생물이 튼튼했던 대장 방어막에 균열을 초래하여 장 누출 현상이 일어나고, 이후 유해 세균 유래 독소가 전신적으로 흡수되어 우울증이 발생 혹은 악화된다고 보고되고 있다[Pharmacotherapy.2015 Oct;35(10):910-6].

인체에 공생하는 미생물의 개수는 100조 개에 이르러 인간 세포보다 약 10배가 많으며, 미생물의 유전자수는 인간 유전자수의 100배가 넘는 것으로 알려져 있다. 미생물총(microbiota 혹은 microbiome)은 주어진 거주지에 존재하는 진정세균(bacteria), 고세균(archaea), 진핵생물(eukarya)을 포함한 미생물 군집(microbial community)을 말한다.

우리 몸에 공생하는 세균 및 주변 환경에 존재하는 세균은 다른 세포로의 유전자, 저분자화합물, 단백질 등의 정보를 교환하기 위하여 나노미터 크기의 소포(vesicle)를 분비한다. 점막은 200 나노미터(nm) 크기 이상의 입자는 통과할 수 없는 물리적인 방어막을 형성하여 점막에 공생하는 세균인 경우에는 점막을 통과하지 못하지만, 세균 유래 소포는 크기가 20-200 나노미터 크기 정도라서 비교적 자유롭게 점막을 통하여 상피세포를 통과하여 우리 몸에 흡수된다. 국소적으로 분비된 세균 유래 소포는 점막의 상피세포를 통해 흡수되어 국소 염증반응을 유도할 뿐만 아니라, 상피세포를 통과한 소포는 전신적으로 흡수되어 각 장기로 분포하고, 분포된 장기에서 면역 및 염증반응을 조절한다. 예를 들어, 대장균(Eshcherichia coli)과 같은 병원성 그람음성세균에서 유래하는 소포는 국소적으로 염증반응 및 암을 일으키고, 혈관으로 흡수된 경우에는 혈관 내피세포 염증반응을 통해 전신적인 염증반응 및 혈액응고를 촉진시킨다. 또한 인슐린이 작용하는 근육세포 등에 흡수되어서 인슐린저항성과 당뇨병을 유발한다. 반면, 유익한 세균에서 유래하는 소포는 각 장기의 특정 세포로 흡수되어 핵심적인 면역기능 및 대사기능 이상을 조절하여 질병 발생을 억제할 수 있다.

락토바실러스 파라카세이(Lactobacillus paracasei)는 그람양성 간균으로서 혐기성 환경뿐만 아니라 호기성 환경에서도 잘 자라고, 우리 몸에 공생하는 유익한 세균으로 알려져 있다. 세균은 세포간 단백질, 지질, 유전자 등의 교환을 위해 세포 밖 환경으로 이중막 구조의 세포외소포(extracellular vesicle; EV)를 분비한다. 락토바실러스 파라카세이와 같은 그람양성균(gram-positive bacteria) 유래 소포는 세균유래 단백질과 핵산 외에도 세균의 세포벽 구성성분인 펩티도글리칸(peptidoglycan)과 리포테이코산(lipoteichoic acid)도 가지고 있다.

그러나, 락토바실러스 파라카세이에서 분비되는 소포가 신경질환, 또는 정신질환의 예방, 또는 치료를 위해 이용된 경우는 없는 실정이다.

본 발명자들은 상기와 같은 종래의 문제점을 해결하기 위해 예의 연구한 결과, 락토바실러스 파라카세이 균에서 소포를 분리하여 경구로 투여하였을 때 소포가 뇌로 전달되고, 퇴행성 뇌질환 동물모델에 경구로 투여하였을 때 기억, 학습능력 등의 인지 기능 개선을 보였고, 비정상 단백질인 아밀로이드 플라그 형성을 억제하였을 뿐만 아니라, 이러한 효능이 신경세포의 증식, 신경세포 수상돌기 (dendrite) 형성을 증가시키는 기전을 통해 상기 효능이 일어남을 확인하였다. 또한, 본 발명자들은 락토바실러스 파라카세이 유래 소포가 정신적 스트레스에 의한 정신질환 발생에 효능이 있는지를 평가하기 위해, 정신적 스트레스에 의한 정신질환 동물모델에서 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 투여하여 항우울제인 이미프라민과 거의 동일한 수준의 정신질환에 항스트레스 및 항우울 효과를 나타냄을 관찰하였는바, 이에 기초하여 본 발명을 완성하였다.

이에, 본 발명은 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 유효성분으로 포함하는, 신경질환 또는 정신질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

또한, 본 발명은 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 유효성분으로 포함하는, 신경질환 또는 정신질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공하는 것을 다른 목적으로 한다.

또한, 본 발명은 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 유효성분으로 포함하는, 신경질환 또는 정신질환의 예방 또는 치료용 흡입용 조성물을 제공하는 것을 다른 목적으로 한다.

또한, 본 발명은 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 유효성분으로 포함하는, 노화 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공하는 것을 다른 목적으로 한다.

그러나 본 발명이 이루고자 하는 기술적 과제는 이상에서 언급한 과제에 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.

상기와 같은 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 유효성분으로 포함하는, 신경질환 또는 정신질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 유효성분으로 포함하는, 신경질환 또는 정신질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 유효성분으로 포함하는, 신경질환 또는 정신질환의 예방 또는 치료용 흡입용 조성물을 제공한다.

또한, 본 발명은 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 유효성분으로 포함하는, 노화 예방 또는 치료용 약학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 일 구현예로, 상기 신경질환은 경도인지장애 (mild cognitive impairment), 치매 (dementia), 알츠하이머병 (Alzheimer’s disease), 파킨슨병 (Parkinson’s disease), 헌팅톤병 (Huntington’s disease), 루게릭병 (Amyotrophic lateral sclerosis. ALS), 바튼병 (Batten disease), 컨스-세이어증후군 (Kearns-Sayre syndrome, KSS), 만성 진행성 외안근마비 (chronic progressive external ophthalmoplegia, CPEO), 멜라스증후군 (mitochondrial encephalomyopathy with lactic acidosis and stroke-like episodes, MELAS), MERRF증후군 (myoclonic epilepsy with ragged-red fibers, MERRF), NARP증후군 (neurogenic weakness with ataxia and retinitis pigmentosa, NARP), 레이증후군 (Leigh syndrome, LS), 및 MIRAS증후군 (mitochondrial recessive ataxia syndrome)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 질환일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 다른 구현예로, 상기 정신질환은 불안장애, 외상 후 스트레스 장애(Post-traumatic Stress Disorder; PTSD), 공황장애(panic disorder), 우울증(depression), 자폐 스펙트럼 장애(Autism spectrum disorders), 주의력 결핍 과잉 행동 증후군(attention deficit/hyperactivity disorder; ADHD), 및 조현병(schizophrenia)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나 이상의 질환일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 소포는 평균 직경이 10~1000 nm일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 소포는 락토바실러스 파라카세이 배양액에서 분리되는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 소포는 락토바실러스 파라카세이를 첨가하여 제조한 식품에서 분리한 소포를 사용한 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 노화는 뇌 또는 신경세포 노화일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 또 다른 구현예로, 상기 소포는 락토바실러스 파라카세이에서 자연적으로 또는 인공적으로 분비되는 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

또한, 본 발명은 상기 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 신경질환 또는 정신질환의 예방 또는 치료방법을 제공한다.

또한, 본 발명은 락토바실러스 파라카세이 유래 소포의 신경질환 또는 정신질환의 예방 또는 치료용도를 제공한다.

또한, 본 발명은 신경질환 또는 정신질환 치료용 약제 제조를 위한 락토바실러스 파라카세이 유래 소포의 용도를 제공한다.

본 발명자들은 락토바실러스 파라카세이에서 유래하는 소포를 경구로 투여하였을 때 뇌로 소포가 전달됨을 확인하고, 퇴행성 신경질환 질병모델에 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 경구로 투여하였을 때 학습능력과 기억이 정상수준으로 개선되었고, 뇌조직에 아밀로이드 플라그 침착이 억제되며, 해마 (hippocampus)에 있는 줄기세포 증식이 정상수준으로 개선되고, 신경세포의 수상돌기 형성이 정상수준으로 회복됨을 확인하였다. 이에, 본 발명은 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 유효성분으로 포함하는, 신경질환 또는 정신질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물로 사용될 수 있을 것으로 기대된다.

또한, 본 발명자들은 정신적 스트레스에 의한 정신질환 동물모델에 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 투여하였을 때 스트레스에 의한 정신기능 장애의 발생을 효율적으로 억제하는 효과가 있음을 확인하였는 바, 본 발명에 따른 락토바실러스 파라카세이 유래 소포는 정신질환을 예방, 증상 개선, 또는 치료하기 위한 의약품 또는 건강기능식품 등의 개발에도 유용하게 이용될 수 있을 것이다.

도 1은 마우스에 그람양성세균인 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 경구 투여한 후, 시간 별로 소포의 분포양상을 촬영한 사진(A), 경구 투여 후 시간 별로 여러 장기를 적출하여 락토바실러스 파라카세이 유래 소포의 장기별 분포양상을 그래프로 나타낸 결과(B), 및 시간 별로 뇌에 분포된 락토바실러스 파라카세이유래 소포의 형광세기를 그래프로 나타낸 결과(C)를 나타낸 것이다.
도 2는 마우스에 그람음성세균인 아시네토박터 바우마니 유래 소포를 경구 투여한 후, 시간 별로 소포의 분포양상을 촬영한 사진(A), 경구 투여 후 시간 별로 여러 장기를 적출하여 아시네토박터 바우마니 유래 소포의 장기별 분포양상을 그래프로 나타낸 결과(B), 및 주된 장기에 시간 별로 분포된 아시네토박터 바우마니 유래 소포의 형광세기를 그래프로 나타낸 결과(C)를 나타낸 것이다.
도 3은 퇴행성 뇌질환 마우스 모델을 이용한 투여 기간 및 동물 실험 설계 도식도를 나타낸 그림이다. WT-CON은 정상 마우스 그룹, Tg-CON은 퇴행성 뇌질환 마우스 모델 그룹, Tg-LP EVs는 퇴행성 뇌질환 마우스 모델에 락토바실러스 파라카세이 유래 소포 (MDH-001)를 경구 투여한 그룹을 의미한다.
도 4는 정상 마우스 그룹 (WT-CON), 퇴행성 뇌질환 마우스 모델 (Tg-CON) 그룹, 락토바실러스 파라카세이 유래 소포 (MDH-001)를 경구 투여한 그룹 (Tg+MDH001)에서의 물체 및 위치 인지 능력 테스트를 실시한 후 비교한 결과로, 마우스가 두 물체를 탐색하는 시간을 나타낸 결과(A), 2시간 후 새로운 물체를 탐색하는 시간(B), 15분 후 위치가 바뀐 물체를 탐색하는 시간(C), 및 24시간 후 새로운 물체를 탐색하는 시간(D)을 나타낸 결과이다.
도 5는 정상 마우스 그룹 (WT-CON), 퇴행성 뇌질환 마우스 모델 (Tg-CON) 그룹, 락토바실러스 파라카세이 유래 소포 (MDH-001)를 경구 투여한 그룹 (Tg+MDH001)에서의 학습능력 효능을 평가한 결과로, 세 그룹의 마우스가 5일의 학습기간 동안 hidden platform을 찾아가는 시간을 나타낸 결과(A), 학습능력 테스트 때 마우스가 수통의 각 부분에 머문 시간을 나타낸 결과(B), 각 그룹의 마우스가 눈에 보이는 platform을 찾아간 시간(C)을 나타낸 결과이다.
도 6은 정상 마우스 그룹 (WT-CON), 퇴행성 뇌질환 마우스 모델 (Tg-CON) 그룹, 락토바실러스 파라카세이 유래 소포 (MDH-001)를 경구 투여한 그룹 (Tg+MDH001)에서의 기억능력 효능을 평가한 결과로, 어두운 공간(dark chamber)에 들어갔을 때 전기 충격을 받은 각 그룹의 마우스가 dark chamber에 들어가기까지의 시간을 측정한 결과(A), 및 전기 충격을 받은 각 그룹의 마우스가 보인 얼어있는 시간 (freezing time)을 측정한 결과(B)를 나타낸 것이다.
도 7은 퇴행성 뇌질환 동물모델에서 각 그룹별 뇌에서의 아밀로이드 베타(Aβ) 플라그 형광 염색 이미지 및 정량 데이터를 비교한 결과로, 각 그룹 별 대표적인 Aβ 플라그 염색 사진(A), 단위 면적 당 Aβ plaques의 수(B), 및 단위 면적 당 Aβ 플라그의 면적(C)을 나타낸 결과이다.
도 8은 퇴행성 뇌질환 동물모델에서 각 그룹별 뇌에서 초기 신경 신생 (neurogenesis)의 마커인 Ki-67의 발현을 형광 염색 이미지 및 정량 데이터로 나타낸 결과로, 각 그룹 별 대표적인 Ki-67 염색 사진(A), 및 정상 마우스 그룹 (WT-CON) 대비 퇴행성 뇌질환 마우스 모델 그룹 (Tg-CON), 락토바실러스 파라카세이 유래 소포 (MDH-001)를 투여한 그룹 (Tg+MDH001)에서 Ki-67에 염색된 세포의 수를 비율로 나타낸 결과(B)이다.
도 9는 퇴행성 뇌질환 동물모델에서 각 그룹별 뇌에서 중기 이후 신경 신생 (neurogenesis) 마커인 더블코르틴(doublecortin, DCX)의 발현을 염색 이미지 및 정량 데이터로 나타낸 결과로, 각 그룹 별 대표적인 더블코르틴 염색 사진(A), 및 정상 마우스 그룹 (WT-CON) 대비 퇴행성 뇌질환 마우스 모델 그룹 (Tg-CON), 락토바실러스 파라카세이 유래 소포 (MDH-001)를 투여한 그룹 (Tg+MDH001)에서 현미경으로 관찰한 섹션 별로 더블코르틴에 염색된 세포의 평균수(B)를 나타낸 결과이다.
도 10은 퇴행성 뇌질환 동물모델에서 각 그룹별 뇌에서 뉴런 특이적 세포골격 단백질인 미세 소관-관련 단백질 2(MAP2)의 발현을 형광 염색 이미지 및 정량 데이터로 나타낸 결과로, 각 그룹 별 대표적인 MAP2 염색 사진(A), 및 정상 마우스 그룹 (WT-CON) 대비 퇴행성 뇌질환 마우스 모델 그룹 (Tg-CON), 락토바실러스 파라카세이 유래 소포 (MDH-001)를 투여한 그룹 (Tg+MDH001)에서 MAP2의 발현을 비율로 나타낸 결과(B)이다.
도 11은 정신적 스트레스로 유도한 정신질환 동물모델에서 락토바실러스 파라카세이 유래 소포(EV)의 정신기능에 대한 치료 효과를 평가하기 위한 실험 프로토콜을 그림으로 도시한 것이다[CON 또는 CON+Veh: 식염수 투여 정상마우스군 (대조군, 식염수 투여 대조군), CON+MDH-001: 락토바실러스 파라카세이 소포 투여 정상마우스군, RST+Veh: 식염수 투여 스트레스 처치군, RST+MDH-001: 락토바실러스 파라카세이 소포 투여 스트레스 처치군].
도 12는 정신적 스트레스로 유도한 정신질환 동물모델에서 스트레스를 준 후 14-16일째, 락토바실러스 파라카세이 유래 소포의 감정 기능에 대한 치료 효과를 평가하기 위해, 각 마우스 그룹에 대하여 사회성 검사 프로토콜(A) 및 사회성 지표(B 및 C)를 평가한 결과를 나타낸 것이다.
도 13은 정신적 스트레스로 유도한 정신질환 동물모델에서 스트레스를 준 후 14-16일째, 락토바실러스 파라카세이 유래 소포의 감정 기능에 대한 치료 효과를 평가하기 위해, 각 마우스 그룹에 대하여 꼬리매달기 검사(tail suspension test; TST) (A) 및 강제수영검사(forced swim test; FST) (B)를 각각 실시한 결과를 나타낸 것이다.
도 14는 정신적 스트레스로 유도한 정신질환 동물모델에서 스트레스를 준 후 28-30일째, 락토바실러스 파라카세이 유래 소포의 우울증에 대한 치료 효과를 평가하기 위해, 각 마우스 그룹에 대하여 사회성 검사 프로토콜 (A)과 사회성 지표 (B 및 C)를 평가한 결과를 나타낸 것이다.
도 15는 정신적 스트레스로 유도한 정신질환 동물모델에서 스트레스를 준 후 28-30일째, 락토바실러스 파라카세이 유래 소포의 우울증에 대한 치료 효과를 평가하기 위해, 각 마우스 그룹에 대하여 꼬리매달기 검사(tail suspension test; TST)를 실시한 결과를 나타낸 것이다.
도 16은 다양한 스트레스에 의한 세포 노화에 대한 치료 작용 기전을 평가하기 위하여 체외에서 세포에 노화를 촉진하는 인슐린 (insulin), 노화를 억제하는 대조 약물인 메트포민 (metformin), 락토바실러스 파라카세이 유래 소포(MDH-001)를 다양한 농도로 투여한 후 60분에 AMPK의 활성화를 평가한 결과이다.

본 발명은 락토바실러스 파라카세이 세균 유래 소포 및 이의 용도에 관한 것이다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명자들은 세포외막에 lipopolysaccharide (LPS)를 갖고 있는 그람음성세균에서 유래하는 소포를 경구로 투여하였을 때에는 소포가 뇌로 분포하지 않지만, 그람양성균인 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 경구로 투여하였을 때 뇌로 소포가 전달됨을 확인하였다. 또한, APP와 PS1 혈질전환 뇌질환 마우스에 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 경구로 투여하였을 때, 혈질전환 마우스의 학습능력과 기억이 정상수준으로 개선되었고, 뇌조직에 아밀로이드 플라그 침착이 억제되었다. 또한, 해마 (hippocampus)에 있는 줄기세포 증식이 정상수준으로 개선되었을 뿐만 아니라, 신경세포의 수상돌기 형성이 정상수준으로 회복됨을 확인하였다. 또한, 락토바실러스 파라카세이 유래 소포와 정신질환 간의 상관관계를 알아보기 위해 예의 연구한 결과, 정신적 스트레스에 의해 유도한 정신질환 동물 모델에서 락토바실러스 파라카세이 유래 소포 투여가 감정 장애와 같은 정신기능 이상에 효과를 나타냄을 관찰하였는 바, 이에 기초하여 본 발명을 완성하였다.

이에, 본 발명은 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 유효성분으로 포함하는, 신경질환 또는 정신질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공한다.

상기 조성물은 약학적 조성물, 식품 조성물, 및 흡입용 조성물을 포함한다.

본 발명에서 사용되는 용어 "신경 질환"이란, 여러 가지 스트레스에 의해 미토콘드리아 기능에 이상이 초래되어 신경세포의 손상과 노화에 의해 초래되는 질환을 의미하며, 경도인지장애 (mild cognitive impairment), 치매 (dementia), 알츠하이머병 (Alzheimer’s disease), 파킨슨병 (Parkinson’s disease), 헌팅톤병 (Huntington’s disease), 루게릭병 (Amyotrophic lateral sclerosis. ALS), 바튼병 (Batten disease), 컨스-세이어증후군 (Kearns-Sayre syndrome, KSS), 만성 진행성 외안근마비 (chronic progressive external ophthalmoplegia, CPEO), 멜라스증후군 (mitochondrial encephalomyopathy with lactic acidosis and stroke-like episodes, MELAS), MERRF증후군 (myoclonic epilepsy with ragged-red fibers, MERRF), NARP증후군 (neurogenic weakness with ataxia and retinitis pigmentosa, NARP), 레이증후군 (Leigh syndrome, LS), 및 MIRAS증후군 (mitochondrial recessive ataxia syndrome) 등을 포함하나, 이에 제한되지 않는다.

본 발명에서 사용되는 용어, "정신질환"이란, 사람의 사고, 감정, 행동 같은 것에 영향을 미치는 병적인 정신 상태를 의미하는 것으로, 정신기능에 장애가 온 상태를 총칭한다. 본 발명에 있어서, 상기 정신질환은 불안장애, 외상 후 스트레스 장애(Post-traumatic Stress Disorder; PTSD), 공황장애(panic disorder), 우울증(depression), 자폐 스펙트럼 장애(Autism spectrum disorders), 주의력 결핍 과잉 행동 증후군(attention deficit/hyperactivity disorder; ADHD), 및 조현병(schizophrenia) 등을 포함한다.

본 발명에서 사용되는 용어, “소포(vesicle) 또는 세포외소포(extracellular vesicle)”는 다양한 세균에서 분비되는 나노 크기의 막으로 된 구조물을 의미하며, 본 발명에서는 락토바실러스 파라카세이로부터 자연적으로 분비되거나, 인공적으로 생산된 막으로 된 모든 구조물을 총칭한다. 상기 소포는 락토바실러스 파라카세이 균체를 포함하는 배양액을 열처리, 원심분리, 초고속원심분리, 고압처리, 압출, 초음파분해, 세포 용해, 균질화, 냉동-해동, 전기천공, 기계적 분해, 화학물질 처리, 필터에 의한 여과, 겔 여과 크로마토그래피, 프리-플로우 전기영동, 및 모세관 전기영동으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 방법을 사용하여 분리할 수 있다. 또한, 불순물의 제거를 위한 세척, 수득된 소포의 농축 등의 과정을 추가로 포함할 수 있다.

본 발명의 상기 소포는 락토바실러스 파라카세이의 배양액 또는 락토바실러스 파라카세이를 첨가하여 제조한 식품에서 분리될 수 있으며, 락토바실러스 파라카세이로부터 자연적으로 또는 인공적으로 분비된 것일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 상기 락토바실러스 파라카세이의 배양액 또는 발효식품에서 소포를 분리하는 방법은 소포를 포함한다면 특별히 제한되지 않는다. 예컨대 원심분리, 초고속 원심분리, 필터에 의한 여과, 겔 여과 크로마토그래피, 프리-플로우 전기영동, 또는 모세관 전기영동 등의 방법, 및 이들의 조합을 이용하여 소포를 분리할 수 있으며, 또한 불순물의 제거를 위한 세척, 수득된 소포의 농축 등의 과정을 추가로 포함할 수 있다.

본 발명에서 상기 방법에 의하여 분리된 소포는 평균 직경이 10~1000 nm, 10~900 nm, 10~800 nm, 10~700 nm, 10~600 nm, 10~500 nm, 10~400 nm, 10~300 nm, 10~200 nm, 10~100 nm, 10~90 nm, 10~80 nm, 10~70 nm, 10~60 nm, 10~50 nm, 10~40 nm, 또는 20~40 nm 일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 조성물 내의 상기 소포의 함량은 질환의 증상, 증상의 진행 정도, 환자의 상태 등에 따라서 적절히 조절 가능하며, 예컨대, 전체 조성물 중량을 기준으로 0.0001 내지 99.9중량%, 또는 0.001 내지 50중량%일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 상기 함량비는 용매를 제거한 건조량을 기준으로 한 값이다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적 조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 및 희석제를 더 포함할 수 있다. 상기 부형제는 예를 들어, 희석제, 결합제, 붕해제, 활택제, 흡착제, 보습제, 필름-코팅 물질, 및 제어방출첨가제로 이루어진 군으로부터 선택된 하나 이상일 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 서방형 과립제, 장용과립제, 액제, 점안제, 엘실릭제, 유제, 현탁액제, 주정제, 트로키제, 방향수제, 리모나아데제, 정제, 서방형정제, 장용정제, 설하정, 경질캅셀제, 연질캅셀제, 서방캅셀제, 장용캅셀제, 환제, 틴크제, 연조엑스제, 건조엑스제, 유동엑스제, 주사제, 캡슐제, 관류액, 경고제, 로션제, 파스타제, 분무제, 흡입제, 패취제, 멸균주사용액, 또는에어로졸 등의 외용제 등의 형태로 제형화하여 사용될 수 있으며, 상기 외용제는 크림, 젤, 패치, 분무제, 연고제, 경고제, 로션제, 리니멘트제, 파스타제 또는 카타플라스마제 등의 제형을 가질 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 및 희석제로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 올리고당, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로오스, 미정질 셀룰로오스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.

제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.

본 발명에 따른 정제, 산제, 과립제, 캡슐제, 환제, 트로키제의 첨가제로 옥수수전분, 감자전분, 밀전분, 유당, 백당, 포도당, 과당, 디-만니톨, 침강탄산칼슘, 합성규산알루미늄, 인산일수소칼슘, 황산칼슘, 염화나트륨, 탄산수소나트륨, 정제 라놀린, 미결정셀룰로오스, 덱스트린, 알긴산나트륨, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 카올린, 요소, 콜로이드성실리카겔, 히드록시프로필스타치, 히드록시프로필메칠셀룰로오스(HPMC) 1928, HPMC 2208, HPMC 2906, HPMC 2910, 프로필렌글리콜, 카제인, 젖산칼슘, 프리모젤 등 부형제; 젤라틴, 아라비아고무, 에탄올, 한천가루, 초산프탈산셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스칼슘, 포도당, 정제수, 카제인나트륨, 글리세린, 스테아린산, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 메칠셀룰로오스나트륨, 메칠셀룰로오스, 미결정셀룰로오스, 덱스트린, 히드록시셀룰로오스, 히드록시프로필스타치, 히드록시메칠셀룰로오스, 정제쉘락, 전분호, 히드록시프로필셀룰로오스, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, 폴리비닐알코올, 폴리비닐피롤리돈 등의 결합제가 사용될 수 있으며, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, 옥수수전분, 한천가루, 메칠셀룰로오스, 벤토나이트, 히드록시프로필스타치, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 알긴산나트륨, 카르복시메칠셀룰로오스칼슘, 구연산칼슘, 라우릴황산나트륨, 무수규산, 1-히드록시프로필셀룰로오스, 덱스트란, 이온교환수지, 초산폴리비닐, 포름알데히드처리 카제인 및 젤라틴, 알긴산, 아밀로오스, 구아르고무(Guar gum), 중조, 폴리비닐피롤리돈, 인산칼슘, 겔화전분, 아라비아고무, 아밀로펙틴, 펙틴, 폴리인산나트륨, 에칠셀룰로오스, 백당, 규산마그네슘알루미늄, 디-소르비톨액, 경질무수규산 등 붕해제; 스테아린산칼슘, 스테아린산마그네슘, 스테아린산, 수소화식물유(Hydrogenated vegetable oil), 탈크, 석송자, 카올린, 바셀린, 스테아린산나트륨, 카카오지, 살리실산나트륨, 살리실산마그네슘, 폴리에칠렌글리콜 4000, 6000, 유동파라핀, 수소첨가대두유(Lubri wax), 스테아린산알루미늄, 스테아린산아연, 라우릴황산나트륨, 산화마그네슘, 마크로골(Macrogol), 합성규산알루미늄, 무수규산, 고급지방산, 고급알코올, 실리콘유, 파라핀유, 폴리에칠렌글리콜지방산에테르, 전분, 염화나트륨, 초산나트륨, 올레인산나트륨, dl-로이신, 경질무수규산 등의 활택제;가 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 액제의 첨가제로는 물, 묽은 염산, 묽은 황산, 구연산나트륨, 모노스테아린산슈크로스류, 폴리옥시에칠렌소르비톨지방산에스텔류(트윈에스텔), 폴리옥시에칠렌모노알킬에텔류, 라놀린에텔류, 라놀린에스텔류, 초산, 염산, 암모니아수, 탄산암모늄, 수산화칼륨, 수산화나트륨, 프롤아민, 폴리비닐피롤리돈, 에칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 시럽제에는 백당의 용액, 다른 당류 혹은 감미제 등이 사용될 수 있으며, 필요에 따라 방향제, 착색제, 보존제, 안정제, 현탁화제, 유화제, 점조제 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 유제에는 정제수가 사용될 수 있으며, 필요에 따라 유화제, 보존제, 안정제, 방향제 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 현탁제에는 아카시아, 트라가칸타, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스나트륨, 미결정셀룰로오스, 알긴산나트륨, 히드록시프로필메칠셀룰로오스, HPMC 1828, HPMC 2906, HPMC 2910 등 현탁화제가 사용될 수 있으며, 필요에 따라 계면활성제, 보존제, 안정제, 착색제, 방향제가 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 주사제에는 주사용 증류수, 0.9%염화나트륨주사액, 링겔주사액, 덱스트로스주사액, 덱스트로스+염화나트륨주사액, 피이지(PEG), 락테이티드 링겔주사액, 에탄올, 프로필렌글리콜, 비휘발성유-참기름, 면실유, 낙화생유, 콩기름, 옥수수기름, 올레인산에칠, 미리스트산 이소프로필, 안식향산벤젠과 같은 용제; 안식향산나트륨, 살리실산나트륨, 초산나트륨, 요소, 우레탄, 모노에칠아세트아마이드, 부타졸리딘, 프로필렌글리콜, 트윈류, 니정틴산아미드, 헥사민, 디메칠아세트아마이드와 같은 용해보조제; 약산 및 그 염(초산과 초산나트륨), 약염기 및 그 염(암모니아 및 초산암모니움), 유기화합물, 단백질, 알부민, 펩 톤, 검류와 같은 완충제; 염화나트륨과 같은 등장화제; 중아황산나트륨(NaHSO₃) 이산화탄소가스, 메타중아황산나트륨(Na₂S₂O₅), 아황산나트륨(Na₂SO₃), 질소가스(N₂), 에칠렌디아민테트라초산과 같은 안정제; 소디움비설파이드 0.1%, 소디움포름알데히드 설폭실레이트, 치오우레아, 에칠렌디아민테트라초산디나트륨, 아세톤소디움비설파이트와 같은 황산화제; 벤질알코올, 클로로부탄올, 염산프로카인, 포도당, 글루콘산칼슘과 같은 무통화제; 시엠시나트륨, 알긴산나트륨, 트윈 80, 모노스테아린산알루미늄과 같은 현탁화제를 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 좌제에는 카카오지, 라놀린, 위텝솔, 폴리에틸렌글리콜, 글리세로젤라틴, 메칠셀룰로오스, 카르복시메칠셀룰로오스, 스테아린산과 올레인산의 혼합물, 수바날(Subanal), 면실유, 낙화생유, 야자유, 카카오버터+콜레스테롤, 레시틴, 라네트왁스, 모노스테아린산글리세롤, 트윈 또는 스판, 임하우젠(Imhausen), 모놀렌(모노스테아린산프로필렌글리콜), 글리세린, 아뎁스솔리두스(Adeps solidus), 부티룸 태고-G(Buytyrum Tego-G), 세베스파마 16(Cebes Pharma 16), 헥사라이드베이스 95, 코토마(Cotomar), 히드록코테 SP, S-70-XXA, S-70-XX75(S-70-XX95), 히드록코테(Hydrokote) 25, 히드록코테 711, 이드로포스탈(Idropostal), 마사에스트라리움(Massa estrarium, A, AS, B, C, D, E, I, T), 마사-MF, 마수폴, 마수폴-15, 네오수포스탈-엔, 파라마운드-B, 수포시로(OSI, OSIX, A, B, C, D, H, L), 좌제기제 IV 타입(AB, B, A, BC, BBG, E, BGF, C, D, 299), 수포스탈(N, Es), 웨코비(W, R, S, M ,Fs), 테제스터 트리글리세라이드 기제(TG-95, MA, 57)와 같은 기제가 사용될 수 있다.

경구 투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다.

경구 투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜 (propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, "약학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효용량 수준은 환자 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 본 발명이 속하는 기술분야에 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 개체에게 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구 복용, 피하 주사, 복강 투여, 정맥 주사, 근육 주사, 척수 주위 공간(경막내) 주사, 설하 투여, 볼점막 투여, 직장 내 삽입, 질 내 삽입, 안구 투여, 귀 투여, 비강 투여, 흡입, 입 또는 코를 통한 분무, 피부 투여, 경피 투여 등에 따라 투여될 수 있다.

본 발명의 약학적 조성물은 치료할 질환, 투여 경로, 환자의 연령, 성별, 체중 및 질환의 중등도 등의 여러 관련 인자와 함께 활성성분인 약물의 종류에 따라 결정된다. 구체적으로, 본 발명에 따른 조성물의 유효량은 환자의 나이, 성별, 체중에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로는 체중 1 kg 당 0.001 내지 150 mg, 바람직하게는 0.01 내지 100 mg을 매일 또는 격일 투여하거나 1일 1 내지 3회로 나누어 투여할 수 있다. 그러나 투여 경로, 비만의 중증도, 성별, 체중, 연령 등에 따라서 증감될 수 있으므로 상기 투여량이 어떠한 방법으로도 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.

본 발명에서 “개체”란 질병의 치료를 필요로 하는 대상을 의미하고, 보다 구체적으로는 인간 또는 비-인간인 영장류, 생쥐(mouse), 쥐(rat), 개, 고양이, 말, 및 소 등의 포유류일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명에서 “투여”란 임의의 적절한 방법으로 개체에게 소정의 본 발명의 조성물을 제공하는 것을 의미한다.

본 발명에서 “예방”이란 목적하는 질환의 발병을 억제하거나 지연시키는 모든 행위를 의미하고, “치료”란 본 발명에 따른 약학적 조성물의 투여에 의해 목적하는 질환과 그에 따른 대사 이상 증세가 호전되거나 이롭게 변경되는 모든 행위를 의미하며, “개선”이란 본 발명에 따른 조성물의 투여에 의해 목적하는 질환과 관련된 파라미터, 예를 들면 증상의 정도를 감소시키는 모든 행위를 의미한다.

또한, 본 발명은 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 유효성분으로 포함하는 신경질환 또는 정신질환의 예방 또는 개선용 식품 조성물을 제공한다.

상기 식품 조성물은 건강기능성 식품 조성물일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 상기 소포를 식품 첨가물로 사용할 경우, 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용할 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용할 수 있다. 유효성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시 본 발명의 소포는 원료에 대하여 15 중량% 이하, 또는 10 중량% 이하의 양으로 첨가될 수 있다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.

본 발명에 따른 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당 및 과당과 같은 모노사카라이드, 말토오스 및 수크로오스와 같은 디사카라이드, 덱스트린 및 시클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 및 자일리톨, 소르비톨 및 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100 mL당 일반적으로 약 0.01-0.20g, 또는 약 0.04-0.10g 이다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 조합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01-0.20 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

또한, 본 발명은 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 유효성분으로 포함하는 흡입용 조성물 형태로 제공될 수 있다.

흡입 투여제의 경우, 당업계에 공지된 방법에 따라 제형화될 수 있으며, 적합한 추진제, 예를 들면, 디클로로플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 또는 다른 적합한 기체를 사용하여, 가압 팩또는 연무기로부터 에어로졸 스프레이 형태로 편리하게 전달할 수 있다. 가압 에어로졸의 경우, 투약 단위는 계량된 양을 전달하는 밸브를 제공하여 결정할 수 있다. 예를 들면, 흡입기 또는 취입기에 사용되는 젤라틴 캡슐 및 카트리지는 화합물 및 락토오즈 또는 전분과 같은 적합한 분말 기제의 분말 혼합물을 함유하도록 제형화할 수 있다.

또한, 본 발명은 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 유효성분으로 포함하는 노화 또는 노화관련 질환의 예방 또는 치료용 조성물을 제공한다.

본 발명에서 “노화”란 시간이 지남에 따라 일어나는 신체의 모든 생리적 변화를 통칭하는 것으로 개체에 따라 수많은 요인에 의해 매우 다양하게 일어나는 생명 현상을 의미한다. 노화 현상을 구체적으로 살펴보면 각 구성 기관 및 조직의 기능 변화가 일어나는 것으로, 개체의 노화는 결국 그 개체를 구성하는 세포들의 노화에 기인한다.

본 발명에서, 상기 노화는 뇌 또는 신경세포 노화일 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

[실시예]

실시예 1: 락토바실러스 파라카제이 유래 소포의 분리

락토바실러스 파라카제이(Lactobacillus paracasei) 유래 소포(extracellular vesicle; EV)를 분리하기 위하여, 락토바실러스 파라카제이를 MRS(de Man-Rogosa and Sharpe) 배지에 접종하고 37 ℃에서 200 rpm으로 흡광도(OD_600nm)가 1.0 내지 1.5가 될 때까지 배양한 후에, LB(Luria Bertani) 배지에 재접종하여 배양하였다. 그리고 균체가 포함되어 있는 배양액을 회수하여 10,000 g로 4 ℃에서 20 분 동안 원심분리하여 균체를 제거된 상층액을 획득하였다. 획득된 상층액은 다시 0.22 μm의 필터를 이용하여 여과시키고, 여과시킨 상층액은 100 kDa Pellicon 2 Cassette 필터 멤브레인(Merck Millipore)과 MasterFlex pump system(Cole-Parmer)을 이용하여 50 mL 이하의 부피로 농축하였다. 농축시킨 상층액은 다시 0.22 μm의 필터를 이용하여 여과시켜, 락토바실러스 파라카제이 유래 소포(MDH-001)를 분리하였다. 이하의 실시예에서는 분리된 상기 소포를 이용하여 실험을 진행하였다.

실시예 2. 락토바실러스 파라카제이 세균 유래 소포의 약동학적 특성 평가

락토바실러스 파라카제이 유래 소포의 경구 투여 시 약동학적 특성을 알아보기 위해, 형광 염색시약으로 염색한 소포를 마우스에 경구 투여 하여 투여 직전부터 투여 후 72시간까지 몸과 각 장기에서 발현된 형광을 측정하였다.

도 1의 A 및 B에 나타난 바와 같이, 형광 염색된 락토바실러스 파라카제이 유래 소포가 시간이 지나면서 체내로 점차 퍼지는 모습을 확인하였다. 각 장기 별로 관찰 시 경구 투여 후 1시간이 지나자 위에서 락토바실러스 파라카제이 유래 소포의 형광 시그널이 관찰되었으며, 3시간부터 소장, 대장, 폐까지 형광시그널이 관찰되었다. 또한, 위, 소장, 대장, 폐의 형광 시그널은 56시간까지 유지되는 것을 확인하였다.

또한, 도 1의 C에 나타난 바와 같이, 투여 3시간부터는 특이적으로 뇌에서 형광시그널이 관찰되었으며, 이 시그널은 48시간까지 검출되었다.

락토바실러스 파라카제이 유래 소포의 약동학적 특징이 균주 특이적인 현상인지 그람음성세균 특이적인 현상인지 알아보기 위해, 형광염색시약으로 염색한 그람음성 세균 유래 소포인 아시네토박터 바우마니 (Acinetobactor baumannii) 유래 소포를 마우스에 경구 투여하여 같은 방법으로 발현된 형광을 측정하였다.

도 2의 A에 나타난 바와 같이, 아시네토박터 바우마니 유래 소포는 경구 투여 후 3시간이 지나자 위에서 가장 강한 형광 시그널이 관찰되었고, 위에서 확인된 형광 시그널은 시간이 지날수록 감소되는 것을 확인하였다.

또한, 도 2의 B 및 C에 나타난 바와 같이, 아시네토박터 바우마니 유래 소포인 경우에는 뇌에서 형광시그널이 측정되지 않았다. 상기의 결과를 통해 락토바실러스 파라카제이 유래 소포의 약동학적 특징은 균주 특이적인 현상임을 확인하였다.

실시예 3. 신경질환 마우스모델에서 락토바실러스 파라카제이 유래 소포의 인지기능에 대한 효능 평가

Tg-APP/PS1 마우스는 대표적인 퇴행성 뇌질환 마우스 모델로서, 6.5개월부터 조직학적으로 탐지 가능한 플라그의 침착을 보이고, 7 ~ 8개월 시기에 인지기능장애가 안정적으로 탐지되는 동물모델이다. 본 마우스 모델을 이용하여 도 3과 같이 정상 마우스 그룹 (WT-CON), 퇴행성 뇌질환 마우스 모델 그룹 (Tg-CON), 퇴행성 뇌질환 마우스 모델에 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 50 μg/mouse의 용량으로 경구 투여한 그룹 (Tg-Lp EV, MDH-001)으로 나눠 행동검사 및 조직학적 검사를 수행하였다.

퇴행성 뇌질환 마우스 모델에서 락토바실러스 파라카세이 유래 소포의 투여에 의한 인지기능 평가를 위해, 도 4에 나타난 바와 같이 WT-CON, Tg-CON, Tg+MDH-001 각 그룹 별로 새로운 물체 또는 위치가 바뀐 물체에 노출 시켜 10분 동안 물체를 탐색하는 시간을 측정하였다.

그 결과, 도 4의 B 및 D에 나타난 바와 같이, 2시간 또는 24시간 후 측정한 물체 인지 능력 테스트 (Noble object recognition test, NOR)에서 WT-CON과 Tg+MDH-001에서는 새로운 물체를 탐색하는 시간이 길지만, Tg-CON에서는 변화가 없음을 확인하였다.

도 4의 C에 나타난 바와 같이, 위치 인지 능력 테스트 (Noble location recognition test, NLR)에서도 WT-CON과 Tg+MDH-001에서는 위치가 이동된 물체를 탐색하는 시간이 길지만, Tg-CON에서는 변화가 없음을 확인하였다. 상기 결과는 락토바실러스 파라카세이 유래 소포가 퇴행성 뇌질환 마우스에서 단기 및 장기 인지기능 장애의 진행을 억제함을 의미한다.

실시예 4. 신경질환 마우스모델에서 락토바실러스 파라카세이 유래 소포의 학습능력에 대한 효능 평가

상기 실시예를 바탕으로 퇴행성 뇌질환 마우스 모델에서 락토바실러스 파라카세이 유래 소포의 투여에 의한 학습능력 효능평가를 위해, 도 5에서 나타난 바와 같이 5일 동안 수통 내의 숨겨진 플랫폼 (platform)을 찾아가도록 훈련을 시킨 후, 숨겨진 플랫폼을 찾는 평가를 수행하였다.

그 결과, 도 5의 A에 나타난 바와 같이, 5일 간의 훈련기간 동안 숨겨진 플랫폼을 찾아가는 시간이 정상 마우스 그룹 (WT-CON)이 가장 빠르고, 퇴행성 뇌질환 마우스 모델에 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 경구 투여한 그룹 (Tg+MDH-001)도 WT-CON 그룹과 유사한 학습 시간을 보였지만, 양성 대조군인 퇴행성 뇌질환 마우스 모델 그룹 (Tg-CON)은 가장 느린 학습 시간을 보였다.

도 5의 B에 나타난 바와 같이, 숨겨진 플랫폼의 위치를 찾아 머무는 시간에서도 WT-CON 그룹은 플랫폼 위치에 오랜 시간 머물렀고 Tg+MDH-001 그룹도 WT-CON 그룹과 유사한 시간을 보였지만, Tg-CON 그룹은 플랫폼 이외의 주변을 돌아다니며 플랫폼 위치에 머문 시간이 가장 짧은 것을 확인하였다. 상기 결과를 통해 락토바실러스 파라카세이 유래 소포는 퇴행성 뇌질환 마우스의 공간지각 학습 회복 효과 및 공간지각 기억 회복 효과가 있는 것을 확인하였다.

실시예 5. 신경질환 마우스모델에서 락토바실러스 파라카세이 유래 소포의 기억능력에 대한 효능 평가

상기 실시예를 바탕으로 퇴행성 뇌질환 마우스 모델에서 락토바실러스 파라카세이 유래 소포의 투여에 의한 기억능력 효능평가를 재차 평가하기 위해, 도 6에서 나타난 바와 같이 마우스가 어두운 공간 (dark chamber)으로 들어갈 경우 발에 전기 충격을 가해 마우스에게 chamber context와 연계시킨 공포, 불안을 학습시킨 후 24, 72, 120 시간의 장기적인 시간동안 마우스가 공포/불안과 연관시켜 기억하는지 확인하는 시험을 진행하였다.

그 결과, 도 6의 A에 나타난 바와 같이, 정상 마우스 그룹 (WT-CON) 마우스와 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 투여한 퇴행성 뇌질환 마우스 모델 그룹 (Tg+MDH-001)의 마우스는 24, 72, 120시간의 시점에서 실험이 진행되는 300초가 지나도록 어두운 공간에 들어가지 않았지만, 퇴행성 뇌질환 마우스 모델 그룹(Tg-CON)의 마우스는 어두운 공간으로 들어가는 시간이 점차 빨라지는 것을 확인하였다.

또한, 도 6의 B에 나타난 바와 같이, 마우스가 어두운 공간에 들어가 전기 충격을 받고 나왔을 때, 충격으로 인해 얼어있는 시간 (freezing time)도 WT-CON, Tg+MDH-001 그룹의 마우스는 freezing time이 유사하게 높지만, Tg-CON 그룹의 마우스는 WT-CON, Tg+MDH-001 그룹의 마우스에 비해 freezing time이 적은 것을 확인할 수 있었다. 상기 결과를 통해 락토바실러스 파라카세이 유래 소포는 퇴행성 뇌질환 마우스의 기억 능력을 회복시키는 효과도 있는 것을 의미한다.

실시예 6. 신경질환 마우스 모델에서 락토바실러스 파라카세이 유래 소포의 아밀로이드 베타 플라그 형성 평가

아밀로이드 베타(Aβ) 플라그는 알츠하이머병 환자의 뇌에서 대표적으로 발견되는 단백질로, Tg-APP/PS1 모델에서는 마우스의 뇌에 Aβ 플라그가 축적되기 시작하며 알츠하이머 증상을 유도한다고 알려져 있다. 마우스 뇌 절편을 Thioflavin-S 염료를 이용해 형광염색을 수행하여 축적된 Aβ 플라그를 분석하였다.

그 결과, 도 7의 A에 나타난 바와 같이 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 투여 받은 퇴행성 뇌질환 마우스 (Tg+MDH-001) 뇌의 두정엽(Parietal cortex), 해마(Hippocampus), 조롱박피질(Piriform cortex) 지역에 침착되는 Aβ 플라그가 퇴행성 뇌질환 마우스 모델 그룹 (Tg-CON)과 차이가 있음을 확인할 수 있었다).

또한, 도 7의 B 및 C에 나타난 바와 같이, Tg-CON 그룹 대비 Tg+MDH-001 그룹의 뇌의 두정엽 및 조롱박피질 지역에 침착되는 단위 면적당 Aβ 플라그 수와 Aβ 플라그 면적이 감소됨을 확인하였다. 상기 결과는 락토바실러스 파라카세이 유래 소포가 퇴행성 뇌질환 마우스 모델의 Aβ 플라그 축적을 억제하는 효과가 있음을 의미한다.

실시예 7. 신경질환 마우스모델에서 락토바실러스 파라카세이 유래 소포의 신경세포 재생 능력 평가

상기 실시예들을 바탕으로 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 투여한 퇴행성 뇌질환 마우스 모델에서 나타난 신경 기능의 악화를 억제하는 기전을 규명하기 위해, 먼저 신경 신생 (neurogenesis)을 평가하였다.

도 8에 나타난 바와 같이, 신경세포의 분화 (neural differentiation) 마커로 알려진 Ki-67을 형광 염색하여 Ki-67에 염색된 세포의 수를 확인했을 때, 정상 마우스 그룹 (WT-CON)에 비해 퇴행성 뇌질환 마우스 모델 그룹 (Tg-CON)에서 Ki-67에 염색된 세포의 수가 감소함을 관찰하였다.

또한, Tg-CON 그룹에 비해 퇴행성 뇌질환 마우스 모델에 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 투여한 그룹 (Tg+MDH-001)에서 Ki-67에 염색된 세포의 수가 증가한 것을 관찰하였으며 WT-CON 수준으로 회복함을 확인하였다.

신경 줄기세포의 증식 (neurogenesis) 마커로서 신경 줄기세포 (neuronal stem cell)에서 발현되는 더블코르틴(DCX)도 분석하였다.

도 9에 나타난 바와 같이 WT-CON에 비해 Tg-CON에서 더블코르틴에 염색된 세포의 수가 감소함을 관찰하였고, Tg-CON 그룹에 비해 락토바실러스 파라카세이 유래 소포로 치료한 Tg+MDH-001에서 더블코르틴에 염색된 수가 증가하였으며 WT-CON 수준으로 회복함을 확인하였다. 상기 결과들을 통해 락토바실러스 파라카세이 유래 소포는 퇴행성 뇌질환 마우스 모델에서 신경 신생 (neurogenesis)을 유도함을 알 수 있었고, 락토바실러스 파라카세이 유래 소포로 인한 뇌신경 기능의 향상이 뇌신경세포이 신생과 관련이 있음을 확인하였다.

실시예 8. 신경질환 마우스모델에서 락토바실러스 파라카세이 유래 소포의 신경세포 수상돌기 생성능 평가

상기 실시예들을 바탕으로 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 투여한 퇴행성 뇌질환 마우스 모델에서 나타난 신경 기능의 향상에 대한 작용 기전을 규명하기 위해, 신경세포의 수상돌기 (dendritic process) 형성능력을 평가하였다. 수상돌기의 형태 및 수의 변화는 기억 회복에 영향을 미칠 수 있기 때문에, 신경 마커 및 신경 특이적 세포골격 단백질으로 잘 알려진 미세소관 관련 단백질 2 (MAP2)의 발현을 확인하였다. 추가로 MAP2는 신경 발달 과정에서 수상돌기의 모양을 결정하고 성장을 안정화하며, 미세소관의 성장을 안정화 시키는 역할을 한다.

그 결과, 도 10에 나타난 바와 같이 정상 마우스 그룹 (WT-CON)에 비해 퇴행성 뇌질환 마우스 모델 그룹 (Tg-CON)에서 MAP2의 발현이 감소됨을 관찰하였다. Tg-CON 그룹에 비해 퇴행성 뇌질환 마우스 모델에 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 투여한 그룹 (Tg+MDH001)에서 MAP2의 발현을 증가시키며 WT-CON 수준으로 회복시킴을 확인하였다. 상기 결과를 통해 락토바실러스 파라카세이유래 소포는 퇴행성 뇌질환 마우스 모델에서 MAP2를 회복시키는 효과가 있으며, 락토바실러스 파라카세이 유래 소포가 수상돌기의 미세구조를 보호하여 세포간 연결성 (intercellular integrity)을 향상시켜 신경 기능을 향상시킴을 알 수 있었다.

실시예 9. 정신질환 마우스모델에서 정신적 스트레스 자극 14-16일째 락토바실러스 파라카세이 유래 소포에 의한 정신 기능에 대한 치료 효과

마우스를 이용한 실험을 통해 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 정신적 스트레스 자극 후에 투여하는 경우, 스트레스에 의한 감정 기능의 변화에 의한 행동 유발이 차단되는지 알아보고자 하였다. 이를 위해 도 11에 도시한 실험 과정에 따라, 7주령 수컷 C57BL/6 마우스를 구입하여 무작위 4개 그룹 즉, 14일 동안 식염수(0.9% Saline, 100 ㎕)를 투여한 정상 마우스군(CON 또는 CON+Veh), 락토바실러스 파라카세이 유래 소포(2 μg/mouse/100 ㎕)를 투여한 정상 마우스군(CON+MDH-001), 매일 2시간씩 14일 동안 신체구금 스트레스(RST)를 준 마우스에 식염수(0.9% Saline, 100 ㎕)를 투여한 군(RST+Veh), 및 매일 2시간씩 14일 동안 신체구금 스트레스를 준 마우스에 락토바실러스 파라카세이 유래 소포(EV, 2 μg/mouse/100 ㎕)를 투여한 군(RST+MDH-001)으로 나누어 실험을 수행하였다. 실험은 사회성(Sociability)을 측정하는 U-BOX 시험, 꼬리매달기 검사(tail suspension test; TST) 및 강제수영 검사(forced swim test; FST)를 순서대로 진행하며, 스트레스 자극 14-16일째 소포 투여에 따른 우울증 치료 효과를 평가하였다.

먼저, 상기와 같은 실험을 수행한 네 그룹의 마우스에 대하여 U-BOX 시험을 실시하였다. 도 12의 A에 나타난 바와 같이, 상기 시험은 U자 모양의 필드 한 쪽에 표적 마우스를 철망 안에 두고, 반대쪽에는 표적 마우스 없이 철망만을 두어, 표적 마우스와 얼마나 많은 시간을 접촉하는지 확인하였다.

그 결과, 도 12의 B에 나타낸 바와 같이, 대조군 (CON+Veh) 및 대조군에 소포를 투여한 군(CON+MDH-001)에서는 표적 공간(Target)에 머물렀던 시간이 비표적 공간(Non-target)에 머물렀던 시간이 비해 증가되어 있으나, 신체구금 스트레스를 받은 군(RST+Veh)의 경우 표적 공간에 더 적게 머문 것으로 나타났다.

이에 반해, 도 12의 C에 나타난 바와 같이, 소포를 함께 투여한 군(RST+MDH-001)에서는 대조군과 비슷한 수준으로 표적 마우스와 보낸 시간이 증가되어 있음을 확인하였다.

또한, 도 13에 나타난 바와 같이, 각각 꼬리매달기 검사 및 강제수영 검사를 실시한 결과, 대조군 (CON+Veh)과 비교하여 신체구금 스트레스를 받은 군(RST+Veh)에서는 부동성(immortality)이 증가한 반면, 소포를 함께 투여한 군(RST+MDH-001)의 경우 부동성이 감소한 것을 확인하였다.

실시예 10. 정신질환 마우스모델에서 정신적 스트레스 자극 28-30일째 락토바실러스 파라카세이 유래 소포에 의한 정신 기능에 대한 치료 효과

상기 실시예 9의 방법으로 실험을 수행한 후, 스트레스 자극 28-30일째 락토바실러스 파라카세이 유래 소포의 감정 장애에 대한 치료 효과를 평가하였다.

먼저, U-BOX 시험 결과, 도 14에 나타난 바와 같이, 표적 조건에서는 대조군(CON+Veh)에 비해 스트레스를 준 대조군(RST+Veh)의 경우 표적 공간(Target)에 머문 시간이 감소하였다. 이에 반해, 스트레스를 주고 소포를 투여한 군(RST+MDH-001) 에서는 표적 공간에 머문 시간이 대조군 수준으로 회복된 것을 확인하였다.

다음으로, 각각 꼬리매달기 검사를 실시한 결과, 도 15에 나타난 바와 같이, 스트레스를 준 군(RST+Veh)에서는 대조군(CON+Veh)에 비해 부동성이 유의하게 증가한 반면, 스트레스를 주고 소포를 투여한 군(RST+MDH-001)에서는 부동시간이 대조군 수준으로 감소한 것을 확인하였다.

상기 실시예 9 및 10의 결과를 통해 정신적 스트레스를 준 후 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 마우스에 투여하였을 때, 스트레스 이후에 발생하는 정신기능의 장애를 락토바실러스 파라카세이 유래 소포가 효과적으로 억제됨을 알 수 있었다.

실시예 11. 체외 배양 세포에서 AMPK의 활성화에 대한 락토바실러스 파라카세이 유래 소포의 영향 평가

세포 노화는 반복적인 물리적, 화학적, 생물학적, 정신적 스트레스에 의해 세포의 분열 능력이 소실되는 것으로 정의하고, 반복적인 스트레스에 의해 세포의 노화와 함께 세포 재생 능력이 떨어져서 노화 관련 질병이 발생한다. 최근 세포 노화를 억제하는 세포 내 신호전달경로로서 AMPK 단백질의 활성화가 주목을 받고 있다. 이러한 배경에서 본 실시예에서는 락토바실러스 파라카세이 유래 소포(MDH-001)가 세포 내에서 AMPK 활성화를 통해 세포 노화에 미치는 영향을 평가하기 위하여 다음과 같은 방법으로 실험을 수행하였다.

체외에서 락토바실러스 파라카세이 유래 소포 처리 농도에 따른 AMPK 활성을 평가하기 위해, 세포에 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 0, 0.1, 1, 10 μg/ml의 농도로 1시간 처리하였다. 대조군으로 노화를 촉진하는 인슐린 (insulin)과 노화를 억제하는 메트포민 (metformin)을 사용하였다. 상기 약물을 세포에 처리한 후 AMPK 신호전달에서 중요한 지표인 pAMPK의 양 차이를 웨스턴 블롯으로 측정하였다.

그 결과, 도 16에 나타낸 바와 같이, pAMPK의 발현이 양성 대조군인 metformin에 의해 증가하였고, 또한 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 처리한 경우에도 소포의 농도에 의존적으로 pAMPK의 발현이 증가하였다.

상기 진술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.

Claims (5)

1. 락토바실러스 파라카세이 유래 소포를 유효성분으로 포함하는, 노화 예방 또는 치료용 약학적 조성물.
   
2. 제1항에 있어서,
   상기 소포는 락토바실러스 파라카세이 배양액에서 분리되는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
   
3. 제1항에 있어서,
   상기 소포는 락토바실러스 파라카세이를 첨가하여 제조한 식품에서 분리되는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
   
4. 제1항에 있어서,
   상기 소포는 락토바실러스 파라카세이에서 자연적으로 또는 인공적으로 분비되는 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
   
5. 제1항에 있어서,
   상기 노화는 뇌 또는 신경세포 노화인 것을 특징으로 하는, 약학적 조성물.
   

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