KR20210144821A - 규명된 아데노신 지문을 이용한 암의 치료방법 - Google Patents

규명된 아데노신 지문을 이용한 암의 치료방법 Download PDF

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KR20210144821A
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에이미 엘리자베스 앤더슨
데비카 아쇼크
다니엘 엠. 디렌조
아크샤타 알. 우디야바르
매튜 제이. 월터스
스티브 더블유. 영
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아르커스 바이오사이언시즈 인코포레이티드
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Abstract

본 개시내용은 확립된 아데노신 지문을 갖는 개체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다. 확립된 아데노신 지문은 하나 이상의 아데노신 기구 단백질의 혈중 농도 평가, 하나 이상의 아데노신 기구 단백질의 효소 활성 평가 및/또는 아데노신 기구 단백질의 종양 발현 수준 평가를 포함한다. 여기에 개시된 방법은 아데노신의 세포외 생산을 표적으로 하는 제제, 및 그의 수용체 중 하나의 아데노신에 의한 활성화를 길항하는 제제로 구성된 군으로부터 선택된 치료제를 상기 개체에게 투여하는 것을 포함한다.

Description

규명된 아데노신 지문을 이용한 암의 치료방법
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2019년 3월 29일에 출원된 미국 가출원번호 62/826,728에 대한 우선권의 이익을 주장하며, 그 내용은 모든 목적을 위해 본 명세서에 참조로 통합되어 있다.
연방 지원 연구 및 개발 하에 이루어진 발명에 대한 권리에 관한 진술
해당 없음
컴팩트 디스크로 제출된 "서열 목록", 표, 또는 컴퓨터 프로그램 목록 부록에 대한 참조
해당 없음
발명의 간략한 요약
일부 양상에서, 본원에서는 아데노신의 세포외 생성을 표적으로 하고 및/또는 아데노신의 수용체 중 하나의 아데노신에 의한 활성화를 길항하는 치료제를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 확립된 아데노신 지문을 갖는 개체에서 암을 치료하는 방법으로서,
여기서 개체의 암은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되는 특징 중 적어도 하나를 가지는 것인 방법이 제공된다:
(i) 개체로부터의 혈액 내 하나 이상의 아데노신 기구 단백질 농도의 증가 (여기서, 상기 증가는 동일한 유형의 암을 가진 개체로부터의 혈액 내 하나 이상의 아데노신 기구 단백질의 전형적인 농도에 대해 상대적임);
(ii) AMP 가수분해 어세이에 의해 결정된, 개체로부터의 혈액에서 CD73 또는 TNAP의 활성 증가(여기서, 상기 증가는 동일한 유형의 암을 가진 개체로부터의 혈액에서 CD73 및/또는 TNAP의 전형적인 AMP 가수분해 활성에 대해 상대적임);
(iii) 하나 이상의 아데노신 기구 단백질에 대한 면역염색에 의해 결정된, 하나 이상의 아데노신 기구 단백질의 양의 증가를 나타내는 개체의 암으로부터의 생검(여기서, 상기 증가는 동일한 유형의 암을 가진 개체의 생검에서 하나 이상의 아데노신 기구 단백질의 전형적인 양에 대해 상대적임); 및
(iv) mRNA 수준에 의해 결정되는, 하나 이상의 아데노신 기구 단백질의 상향조절을 나타내는 개체의 암으로부터의 생검 (여기서, 상기 상향조절은 동일한 유형의 암을 가진 개체로부터의 생검에서 하나 이상의 아데노신 기구 단백질의 전형적인 양에 대해 상대적임).
일부 양상에서는 혈액 내 가용성 CD73 농도를 검출하고 샘플에서 CD73 매개 및/또는 TNAP 매개 아데노신 모노포스페이트(AMP) 가수분해 활성을 결정하기 위한 키트 및 방법이 제공된다.
본 발명의 다른 목적, 특징, 및 이점은 다음의 상세한 설명 및 도면으로부터 통상의 기술자에게 명백할 것이다.
도 1은 CD73 ELISA 어세이의 원리를 요약한 개략도를 보여준다.
도 2a 내지 도 2c는 말초 혈액에서 가용성 CD73을 정량화하기 위한 로버스트 어세이(Robust Assay)를 나타낸다. 도 2a는 강한 상관관계를 나타내는 건강한 공여자의 혈청 대 혈장 중 가용성 CD73 농도를 플롯하고; 도 2b는 어세이의 정량적 범위를 식별하는 병렬성 평가를 플롯하며; 도 2c는 일반적으로 가용성 CD73 수준이 암 환자에서 상승됨을 보여주는 건강한 개체 및 암을 가진 개체의 가용성 CD73 수준을 플롯한다.
도 3a 내지 도 3c는 AMP-GloTM를 사용한 혈청 내 AMP 가수분해 결정을 나타낸다. 도 3a는 어세이의 원리를 요약한 개략도를 보여주고; 도 3b는 상이한 조건(+/- CD73 억제제 및/또는 TNAP 억제제) 하에 건강한 지원자 혈청에서 AMP 가수분해를 플롯팅하며; 도 3c는 (C) CD73 단백질 농도와 건강한 지원자 및 암 환자 혈청의 AMP 가수분해 활성 사이의 상관관계를 플롯한다.
도 4a 및 도 4b는 CD73 및 TNAP에 대한 인간 종양의 TCGA 분석을 나타낸다. The Cancer Genome Atlas 샘플의 RNAseq에서 CD73(패널 A) 및 TNAP(패널 B) 발현이 플롯되었다. 숫자는 백만 샘플당 log2 카운트의 비율을 나타낸다. 샘플은 CD73/TNAP 비율에 따라 왼쪽에 더 높은 CD73 발현 종양이 있고 오른쪽에 더 높은 TNAP 종양이 있는 순서로 정렬된다.
도 5a 내지 도 5f는 면역염색을 사용한 인간 종양에서의 CD73 검출 및 정량화를 나타낸다. 도 5a 내지 도 5d는 인간 FFPE 종양 샘플에서 CD73(갈색)에 대한 면역염색의 대표적인 이미지를 보여준다. 표시된 종양은 비소세포폐암(NSCLC)(도 5a, 5b), 삼중음성 유방암(TNBC)(도 5c) 및 결장직장암(CRC)(도 5d)이고; 패널 도 5e는 나열된 암에서 총 종양 영역의 백분율로서 CD73 염색 면적의 정량화를 보여주며; 패널 도 5f는 H-점수와 염색 면적 백분율 간의 상관 관계를 플롯한다.
도 6a 내지 도 6e는 면역염색을 사용하여 인간 종양에서 TNAP 검출 및 정량화를 나타낸다. 도 6a 내지 도 6d는 인간 FFPE 종양 샘플에서 TNAP(갈색)에 대한 면역염색의 대표적인 이미지를 보여준다. 표시된 종양은 난소암(A), 비소세포폐암(NSCLC)(B), 유방암(C) 및 결장직장암(CRC)(D)이고; 패널 도 6e는 암 목록에서 총 종양 영역의 백분율로서 TNAP 염색 면적의 정량화를 보여준다.
도 7a 내지 도 7c는 인간 혈장에 있어서 13C5-AMP로부터 13C5-아데노신으로의 CD73 매개 탈인산화 억제를 나타낸다. 도 7a 내지 도 7c는 화합물 A의 특정 시험 농도에서 잔류하는 활성 백분율의 대표적인 플롯을 보여준다. 표시된 데이터 포인트와 도표는 자원자 1(패널 도 7a), 자원자 2(패널 도 7b) 및 자원자 3(패널 도 7c는)에 대한 IC50을 계산하는 데 사용되었다.
I. 총 론
본 개시내용은 개체에서 암의 아데노신 지문을 평가하고 결정하는 것이 암을 보다 효과적으로 치료하기 위한 방법을 제공한다는 발견에 관한 것이다. 특히, 암의 아데노신 지문을 결정하는 것은 특정 치료 요법에 대해 보다 유리한 반응을 보일 개체를 식별하는 수단을 제공한다.
II. 정 의
달리 명시되지 않는 한, 다음 용어는 아래에 설명된 의미를 갖는 것으로 의도된다. 다른 용어는 명세서 전체에서 다른 곳에서 정의된다.
용어 "알킬"은 그 자체로 또는 다른 치환기의 일부로서, 달리 언급되지 않는 한, 지정된 수의 탄소 원자를 갖는 직쇄 또는 분지쇄 탄화수소 라디칼을 의미한다(즉, C1-8은 1 내지 8개의 탄소를 의미함). 알킬은 C1-2, C1-3, C1-4, C1-5, C1-6, C1-7, C1-8, C1-9, C1-10, C2-3, C2-4, C2-5, C2-6, C3-4, C3-5, C3-6, C4-5, C4-6 및 C5-6 과 같이, 임의의 탄소 수를 포함할 수 있다. 알킬 기의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소프로필, n-부틸, t-부틸, 이소부틸, sec-부틸, n-펜틸, n-헥실, n-헵틸, n-옥틸 등을 포함한다.
용어 "알킬렌"은 표시된 수의 탄소 원자를 갖고 2개 이상의 다른 기를 연결하는 직쇄 또는 분지쇄, 포화, 지방족 라디칼, 즉 2가 탄화수소 라디칼을 지칭한다. 알킬렌에 연결된 2개의 모이어티는 알킬렌 기의 동일한 원자 또는 상이한 원자에 연결될 수 있다. 예를 들어, 직쇄 알킬렌은 -(CH2)n-의 2가 라디칼일 수 있으며, 여기서 n은 1, 2, 3, 4, 5 또는 6이다. 대표적인 알킬렌 기는 메틸렌, 에틸렌, 프로필렌, 이소프로필렌, 부틸렌, 이소부틸렌, sec-부틸렌, 펜틸렌 및 헥실렌을 포함하지만 이에 제한되지는 않는다. 본 출원에서 종종 X1 또는 X2 기로 지칭되는 알킬렌 기는 치환 또는 비치환될 수 있다. X1 또는 X2를 포함하는 기가 선택적으로 치환되는 경우, 선택적인 치환은 모이어티의 알킬렌 부분 상에 있을 수 있는 것으로 이해된다.
용어 "시클로알킬"은 표시된 수의 고리 원자(예를 들어, C3-6시클로알킬)를 갖고 완전히 포화되거나 고리 꼭짓점 사이에 1개 이하의 이중 결합을 갖는 탄화수소 고리를 지칭한다. "시클로알킬"은 또한 바이시클릭 및 폴리시클릭 탄화수소 고리, 예를 들어 바이시클로[2.2.1]헵탄, 바이시클로[2.2.2]옥탄 등을 지칭하는 것을 의미한다. 일부 구체예에서, 본 개시내용의 시클로알킬 화합물은 모노시클릭 C3-6 시클로알킬 모이어티이다.
용어 "헤테로시클로알킬"은 표시된 수의 고리 꼭짓점(또는 구성원)을 갖고 1 내지 5개의 탄소 꼭짓점을 대체하는 N, O 및 S로부터 선택된 1 내지 5개의 헤테로원자를 갖는 시클로알킬 고리를 지칭하고, 여기서 질소 및 황 원자는 선택적으로 산화되고, 질소 원자(들)는 선택적으로 4차화된다. 시클로헤테로알킬은 모노시클릭, 바이시클릭 또는 폴리시클릭 고리 시스템일 수 있다. 시클로헤테로알킬 기의 비제한적인 예는 피롤리딘, 이미다졸리딘, 피라졸리딘, 부티로락탐, 발레로락탐, 이미다졸리디논, 히단토인, 디옥솔란, 프탈이미드, 피페리딘, 1,4-디옥산, 모르폴린, 티오모르폴린, 티오모르폴린-S-옥시드, 티오모르폴린-S,S-옥시드, 피페라진, 피란, 피리돈, 3-피롤린, 티오피란, 피론, 테트라히드로푸란, 테트라히드로티오펜, 퀴누클리딘, 등등을 들 수 있다. 를 포함한다. 시클로헤테로알킬 기는 고리 탄소 또는 헤테로원자를 통해 분자의 나머지 부분에 부착될 수 있다.
여기에 사용된 바와 같이, 여기에 묘사된 임의의 화학 구조에서 단일, 이중, 또는 삼중 결합을 교차하는 물결 선 "~~~"는 분자의 나머지 부분에 대한 단일, 이중, 또는 삼중 결합의 점 부착을 나타낸다. 또한, 고리(예: 페닐 고리)의 중심으로 확장되는 결합은 사용 가능한 고리 꼭짓점 중 읨의의 것에서 부착을 나타내는 것을 의미한다. 통상의 기술자는 고리에 부착된 것으로 나타낸 다중 치환기가 안정한 화합물을 제공하고 그렇지 않으면 입체적으로 양립가능한 고리 꼭짓점을 차지할 것이라는 것을 이해할 것이다. 2가 구성요소의 경우 표현은 양쪽 방향(정방향 또는 역방향)을 포함하는 것을 의미한다. 예를 들어, "-C(O)NH-"기는 -C(O)NH- 또는 -NHC(O)- 중 한 방향으로 연결을 포함하는 것을 의미하며, 마찬가지로 "-O-CH2CH2-"는 -O-CH2CH2- 및 -CH2CH2-O-를 모두 포함하는 것을 의미한다.
용어 "할로" 또는 "할로겐"은 그 자체로 또는 다른 치환기의 일부로서, 달리 언급되지 않는 한, 불소, 염소, 브롬, 또는 요오드 원자를 의미한다. 추가로, "할로알킬"과 같은 용어는 모노할로알킬 및 폴리할로알킬을 포함하는 것을 의미한다. 예를 들어, 용어 "C1-4 할로알킬"은 트리플루오로메틸, 2,2,2-트리플루오로에틸, 4-클로로부틸, 3-브로모프로필, 등등을 포함하는 것을 의미한다.
용어 "아릴"은 달리 언급되지 않는 한 함께 융합되거나 공유적으로 연결된 단일 고리 또는 다중 고리(최대 3개의 고리)일 수 있는 다중불포화, 전형적으로 방향족, 탄화수소 기를 의미한다. 아릴 기의 비제한적인 예는 페닐, 나프틸, 및 비페닐을 포함한다.
용어 "헤테로아릴"은 N, O, 및 S로부터 선택된 1 내지 5개의 헤테로원자를 함유하는 아릴 기(또는 고리)를 지칭하며, 여기서 질소 및 황 원자는 선택적으로 산화되고, 질소 원자(들)는 선택적으로 4차화된다. 헤테로아릴기는 헤테로원자를 통해 분자의 나머지 부분에 부착될 수 있다. 헤테로아릴 기의 비제한적 예는 피리딜, 피리다지닐, 피라지닐, 피리민디닐, 트리아지닐, 퀴놀리닐, 퀴녹살리닐, 퀴나졸리닐, 신놀리닐, 프탈라지닐, 벤조트리아지닐, 퓨리닐, 벤즈이미다졸릴, 벤조피라졸릴, 벤조트리아졸릴, 벤지이속사졸릴, 이소벤조푸릴, 이소인돌릴, 인돌리지닐, 벤조트리아지닐, 티에노피리디닐, 티에노피리미디닐, 피라졸로피리미디닐, 이미다조피리딘, 벤조티악솔릴, 벤조푸라닐, 벤조티에닐, 인돌릴, 퀴놀릴, 이소퀴놀릴, 이소티아졸릴, 피라졸릴, 인다졸릴, 프테리디닐, 이미다졸릴, 트리아졸릴, 테트라졸릴, 옥사졸릴, 이속사졸릴, 티아디아졸릴, 피롤릴, 티아졸릴, 푸릴, 티에닐, 등등을 포함한다. 헤테로아릴 고리에 대한 치환기는 하기에 기재된 허용가능한 치환기의 군으로부터 선택할 수 있다.
일부 구체예에서, 상기 용어(예를 들어, "알킬", "아릴" 및 "헤테로아릴")는 선택적으로 치환될 것이다. 각 유형의 라디칼에 대해 선택된 치환기가 아래에 제공된다.
알킬 라디칼에 대한 선택적 치환기(종종 알킬렌, 알케닐, 및 알키닐로 지칭되는 기를 포함)는 할로겐, -OR', -NR'R", -SR', - SiR'R"R"', -OC(O)R', -C(O)R', -CO2R', -CONR'R", -OC(O)NR'R", -NR"C(O)R', -NR'-C(O)NR"R"', -NR"C(O)2R', -NH-C(NH2)=NH, -NR'C(NH2)=NH, -NH-C(NH2)=NR', -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)2NR'R", -NR'S(O)2R", -CN(시아노), -NO2, 아릴, 아릴옥시, 옥소, 시클로알킬 및 헤테로시클로알킬(0부터 (2m'+1)까지)로부터 선택된 다양한 기일 수 있으며, 여기서 m'은 이러한 라디칼에 있는 탄소 원자의 총 수이다. R', R" 및 R"'는 각각 독립적으로 수소, 비치환된 C1-8알킬, 비치환된 아릴, 1-3개의 할로겐으로 치환된 아릴, C1-8알콕시 또는 C1-8티오알콕시기, 또는 비치환된 아릴-C1-4알킬기를 의미한다. R' 및 R"이 동일한 질소 원자에 부착되어 있으면 이들은 질소 원자와 결합하여 3-, 4-, 5-, 6-, 또는 7-원 고리를 형성할 수 있다. 예를 들어, -NR'R"은 1-피롤리디닐 및 4-모르폴리닐을 포함하는 것을 의미한다.
시클로알킬 및 헤테로시클로알킬 라디칼에 대한 선택적 치환기는 C(O)OR', 할로겐, -OR', -NR'R", -SR', -SiR'R"R"', -OC(O)R', -C(O)R', -CO2R', -CONR'R", -OC(O)NR'R", -NR"C(O)R', -NR'-C(O)NR"R"', -NR"C(O)2R', -NH-C(NH2)=NH, - NR'C(NH2)=NH, -NH-C(NH2)=NR', -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)2NR'R", -NR'S(O)2R", -CN(시아노), -NO2, 아릴, 아릴옥시 및 옥소로 선택적으로 치환된 알킬로부터 선택된 다양한 기일 수 있다. R', R" 및 R"'는 각각 독립적으로 수소, 비치환된 C1-8알킬, 비치환된 아릴, 1-3개의 할로겐으로 치환된 아릴, C1-8알콕시 또는 C1-8티오알콕시기, 또는 비치환된 아릴-C1-4알킬기를 의미한다.
유사하게, 아릴 및 헤테로아릴 기에 대한 선택적 치환기는 다양하고 일반적으로 -할로겐, -OR', -OC(O)R', -NR'R", -SR', -R', -CN, -NO2, -CO2R', -CONR'R", -C(O)R', -OC(O)NR'R", -NR"C(O)R', -NR"C(O)2R', -NR'-C(O)NR"R"', -NH-C(NH2)=NH, -NR'C(NH2)=NH, -NH-C(NH2)=NR', -S(O)R', -S(O)2R', -S(O)2NR'R", -NR'S(O)2R", -N3, 퍼플루오로(C1-C4)알콕시, 및 퍼플루오로(C1-C4)알킬로부터 선택되고, 0에서 방향족 고리 시스템 상의 열린 원자가의 총 수까지 범위의 수에서이며; 여기서 R', R" 및 R"'는 수소, C1-8알킬, C1-8할로알킬, C3-6시클로알킬, C2-8알케닐 및 C2-8알키닐로부터 독립적으로 선택된다. 다른 적합한 치환기는 1 내지 6개의 탄소 원자의 알킬렌 테터에 의해 고리 원자에 부착된 각각의 상기 아릴 치환기를 포함한다.
아릴 또는 헤테로아릴 고리의 인접한 원자 상의 치환기 중 2개는 선택적으로 화학식 -TC(O)-(CH2)qU-의 치환기로 대체될 수 있으며, 여기서 T 및 U는 독립적으로 -NH-, -O -, -CH2- 또는 단일결합이고, q는 0 내지 2의 정수이다. 대안적으로, 아릴 또는 헤테로아릴 고리의 인접한 원자 상의 치환기 중 2개는 화학식 -A-(CRfRg)rB-의 치환기로 선택적으로 대체될 수 있으며, 여기서 A 및 B는 독립적으로 -CH2-, -O-, -NH-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, -S(O)2NR'- 또는 단결합이고, r은 1 내지 3의 정수이고, Rf 및 Rg는 각각 독립적으로 할로겐의 H이다. 이렇게 형성된 새로운 고리의 단일 결합 중 하나는 선택적으로 이중 결합으로 대체될 수 있다. 대안적으로, 아릴 또는 헤테로아릴 고리의 인접한 원자 상의 치환기 중 2개는 화학식 -(CH2)sX-(CH2)t-의 치환기로 선택적으로 대체될 수 있으며, 여기서 s 및 t는 독립적으로 0 내지 3의 정수이고, X는 -O-, -NR'-, -S-, -S(O)-, -S(O)2-, 또는 -S(O)2NR'-이다. -NR'- 및 -S(O)2NR'-에서 치환기 R'은 수소 또는 비치환된 C1-6알킬로부터 선택된다.
본원에 사용된 용어 "헤테로원자"는 산소(O), 질소(N), 황(S) 및 규소(Si)를 포함하는 것을 의미한다.
용어 "약제학적으로 허용되는 염"은 본 명세서에 기재된 화합물에서 발견되는 특정 치환기에 따라 비교적 무독성인 산 또는 염기로 제조된 활성 화합물의 염을 포함하는 것을 의미한다. 본 발명의 화합물이 비교적 산성 작용기를 함유하는 경우, 염기 부가 염은 이러한 화합물의 중성 형태를 순수한 또는 적합한 불활성 용매 중에서 충분한 양의 원하는 염기와 접촉시켜 얻을 수 있다. 약학적으로 허용되는 무기 염기로부터 유도된 염의 예는 알루미늄, 암모늄, 칼슘, 구리, 제2철(ferric), 제1철(ferrous), 리튬, 마그네슘, 제2망간(manganic), 제1망간(manganous), 칼륨, 나트륨, 아연 등을 포함한다. 약제학적으로 허용되는 유기 염기로부터 유도된 염은 치환된 아민, 환형 아민, 자연 발생 아민 등을 포함하는 1차, 2차 및 3차 아민의 염을 포함하는데, 예를 들어 아르기닌, 베타인, 카페인, 콜린, N,N'-디벤질에틸렌디아민, 디에틸아민, 2-디에틸아미노에탄올, 2-디메틸아미노에탄올, 에탄올아민, 에틸렌디아민, N-에틸모르폴린, N-에틸피페리딘, 글루카민, 글루코사민, 히스티딘, 히드라바민, 이소프로필아민, 라이신, 메틸글루카민, 모르폴린, 피페라진, 피페리딘, 폴리아민 수지, 프로카인, 퓨린, 테오브로민, 트리에틸아민, 트리메틸아민, 트리프로필아민, 트로메타민 등을 들 수 있다. 본 발명의 화합물이 상대적으로 염기성 작용기를 함유하는 경우, 이러한 화합물의 중성 형태를 순수한 또는 적합한 불활성 용매 중에서 충분한 양의 원하는 산과 접촉시켜 산 부가 염을 수득할 수 있다. 약학적으로 허용되는 산 부가염의 예는 염산, 브롬화수소산, 질산, 탄산, 탄산일수소, 인산, 인산일수소, 인산이수소, 황산, 황산일수소, 요오드화수소산, 또는 아인산 등과 같은 무기산 뿐만 아니라 아세트산, 프로피온산, 이소부티르산, 말론산, 벤조산, 숙신산, 수베르산, 푸마르산, 만델산, 프탈산, 벤젠설폰산, p-톨릴설폰산, 시트르산, 타르타르산, 메탄설폰산 등과 같은 상대적으로 무독성 유기산으로부터 유도된 염을 포함한다. 또한, 아르기네이트 등과 같은 아미노산의 염, 및 글루쿠론산 또는 갈락투노산 등과 같은 유기산의 염이 포함된다(예를 들어, Berge, S.M., et al, "Pharmaceutical Salts", Journal of Pharmaceutical Science, 1977, 66, 1-19 참조). 본 발명의 특정한 특정 화합물은 화합물이 염기 또는 산 부가염으로 전환되도록 하는 염기성 및 산성 작용기를 모두 함유한다.
화합물의 중성 형태는 염을 염기 또는 산과 접촉시키고 통상적인 방식으로 모 화합물을 단리함으로써 재생될 수 있다. 화합물의 모 형태는 극성 용매에서의 용해도와 같은 특정 물리적 특성에서 다양한 염 형태와 상이하지만, 그렇지 않으면 염은 본 발명의 목적을 위한 화합물의 모 형태와 동등하다. 염 형태에 더하여, 본 발명은 전구약물 형태인 화합물을 제공한다. 본 명세서에 기재된 화합물의 전구약물은 생리학적 조건 하에서 쉽게 화학적 변화를 거쳐 본 발명의 화합물을 제공하는 화합물이다. 추가로, 전구약물은 생체외(ex vivo) 환경에서 화학적 또는 생화학적 방법에 의해 본 발명의 화합물로 전환될 수 있다. 예를 들어, 전구약물은 적절한 효소 또는 화학 시약과 함께 경피 패치 레저버(reservoir)에 배치될 때 본 발명의 화합물로 천천히 전환될 수 있다. 전구약물은 본원의 다른 곳에서 더 자세히 설명되어 있다.
염 형태에 더하여, 본 발명은 전구약물 형태인 화합물을 제공한다. 본 명세서에 기재된 화합물의 전구약물은 생리학적 조건 하에서 쉽게 화학적 변화를 거쳐 본 발명의 화합물을 제공하는 화합물이다. 추가로, 전구약물은 생체외 환경에서 화학적 또는 생화학적 방법에 의해 본 발명의 화합물로 전환될 수 있다. 예를 들어, 전구약물은 적절한 효소 또는 화학 시약과 함께 경피 패치 레저버에 배치될 때 본 발명의 화합물로 천천히 전환될 수 있다.
본 발명의 특정 화합물은 비용매화된 형태 뿐만 아니라 수화된 형태를 포함하는 용매화된 형태로 존재할 수 있다. 일반적으로, 용매화된 형태는 비용매화된 형태와 동등하며 본 발명의 범위 내에 포함되는 것으로 의도된다. 본 발명의 특정 화합물은 다중 결정질 또는 비정질 형태로 존재할 수 있다. 일반적으로, 모든 물리적 형태는 본 발명에 의해 고려되는 용도에 대해 동등하고 본 발명의 범위 내에 있는 것으로 의도된다.
본 발명의 특정 화합물은 비대칭 탄소 원자(광학 중심) 또는 이중 결합을 갖고; 라세미체, 부분입체 이성질체(diastereomers), 기하 이성질체, 위치 이성질체(regioisomers) 및 개별 이성질체(예를 들어, 분리된 거울상 이성질체)는 모두 본 발명의 범위 내에 포함되는 것으로 의도된다. 입체화학적 묘사가 제시될 때, 이것은 이성질체 중 하나가 존재하고 다른 이성질체가 실질적으로 없는 화합물을 의미한다. 다른 이성질체가 '실질적으로 없는'은 두 이성질체의 비율이 적어도 80/20, 보다 바람직하게는 90/10, 또는 95/5 이상을 나타낸다. 일부 구체예에서, 이성질체 중 하나는 적어도 99% 이상의 양으로 존재할 것이다.
본 발명의 화합물은 또한 그러한 화합물을 구성하는 하나 이상의 원자에서 비천연 비율의 원자 동위원소를 함유할 수 있다. 동위원소의 부자연스러운 비율은 자연에서 발견되는 양으로부터 해당 원자의 100%로 구성된 양까지의 범위로 정의될 수 있다. 예를 들어, 화합물은 예를 들어 삼중수소(3H), 요오드-125(125I) 또는 탄소-14(14C)와 같은 방사성 동위원소, 또는 중수소(2H) 또는 탄소-13(13C)과 같은 비방사성 동위원소를 포함할 수 있다. 이러한 동위원소 변형은 본 출원 내의 다른 곳에서 설명된 것에 추가적인 유용성(utilities)을 제공할 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 화합물의 동위원소 변이체는 진단 및/또는 영상화 시약으로서, 또는 세포독성/방사성 치료제로서를 포함하지만 이에 제한되지 않는 추가적인 유용성을 발견할 수 있다. 추가로, 본 발명의 화합물의 동위원소 변이체는 치료 동안 향상된 안전성, 내약성 또는 효능에 기여할 수 있는 변경된 약동학적 및 약력학적 특성을 가질 수 있다. 방사성이든 아니든, 본 발명의 화합물의 모든 동위원소 변형은 본 발명의 범위 내에 포함되는 것으로 의도된다.
용어 "환자" 또는 "개체"는 인간 또는 인간이 아닌 동물(예를 들어, 포유동물)을 지칭하기 위해 상호교환가능하게 사용된다.
용어 "투여", "투여하다" 등은 예를 들어 개체, 세포, 조직, 기관, 또는 생물학적 유체에 적용되는 바와 같이, 예를 들어 A2aR/ A2bR(또는 본 명세서에 기재된 다른 억제제 또는 길항제) 또는 이를 포함하는 약제학적 조성물을 개체, 세포, 조직, 기관, 또는 생물학적 유체에 접촉시키는 것을 지칭한다. 세포와 관련하여, 투여는 세포에 대한 시약의 접촉(예를 들어, 시험관내(in vitro) 또는 생체외(ex vivo)), 뿐만 아니라 유체가 세포와 접촉하는 유체에 대한 시약의 접촉을 포함한다.
용어 "치료하다", "치료하는", 치료" 등은 질병, 장애 또는 상태, 또는 그것의 증상이 진단되고, 관찰되는 등 후에 질병, 장애, 또는 개체를 괴롭히는 상태의 기저선 원인 중 적어도 하나, 또는 질병, 장애, 또는 개체를 괴롭히는 상태와 연관된 증상 중 적어도 하나를 일시적으로 또는 영구적으로 제거, 감소, 억제, 완화, 또는 개선하기 위해, 개시되는 행위 과정(예: A2aR/A2bR의 억제제 또는 본 명세서에 기재된 다른 억제제 또는 길항제의 투여)을 지칭한다. 따라서, 치료는 활성 질병을 억제하는 것(예를 들어, 질병, 장애 또는 상태 또는 이와 관련된 임상 증상의 발달 또는 추가 발달을 저지하는 것)을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "치료가 필요한"은 개체가 치료를 필요로 하거나 치료로부터 이익을 얻을 것이라고 의사 또는 다른 간병인이 내린 판단을 지칭한다. 이 판단은 의사 또는 간병인의 전문 지식 영역에 있는 다양한 요소를 기반으로 이루어진다.
용어 "예방하다", "예방하는", "예방" 등은 질병, 장애, 또는 상태 등의 발달에 대한 개체의 위험(예를들어 임상적 증상의 부재에 의해 결정됨)을 일시적으로 또는 영구적으로 예방, 억제, 저해 또는 감소시키는 또는 특정 질병, 장애 또는 상태를 갖는 경향이 있는 개체의 맥락에서 일반적으로 이것들의 발현을 지연시키는 방식(예를 들어, 질병, 장애, 상태 또는 이의 증상의 발현에 앞서서)으로 개시되는 (예를 들어, A2aR/A2bR 억제제 또는 본 명세서에 기재된 다른 억제제 또는 길항제를 투여하는 것과 같은) 행위 과정을 지칭한다. 특정 예에서, 상기 용어는 또한 질병, 장애 또는 상태의 진행을 늦추거나 유해하거나 그렇지 않으면 바람직하지 않은 상태로의 진행을 억제하는 것을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "예방이 필요한"은 개체가 예방저인 보살핌을 필요로 하거나 예방적인 보살핌으로부터 이익을 얻을 것이라고 의사 또는 다른 간병인에 의해 이루어진 판단을 지칭한다. 이 판단은 의사 또는 간병인의 전문 지식 영역에 있는 다양한 요소를 기반으로 이루어진다.
"치료학적 유효량"이라는 어구는 단독으로 또는 약제학적 조성물의 일부로서 및 단일 용량으로 또는 일련의 용량의 일부로서, 개체에게 투여될 때 질병, 장애 또는 상태의 임의의 증상, 양상, 또는 특성에 대해 임의의 검출가능한, 긍정적인 효과를 갖는 양으로 개체에게 투여하는 것을 지칭한다. 치료적 유효량은 관련 생리학적 효과를 측정하여 확인할 수 있으며, 투여 요법 및 개체의 상태에 대한 진단 분석 등과 관련하여 조정될 수 있다. 예를 들어, 투여 후 특정 시간에 A2aR/A2bR 억제제(또는, 예를 들어, 본 명세서에 기재된 다른 억제제 또는 길항제)의 혈청 수준 측정은 치료적 유효량이 사용되었는지 여부를 가리킬 수 있다.
"변화에 영향을 미치기에 충분한 양"이라는 어구는 특정 요법의 투여 전(예를 들어, 기저선선 수준)과 후에 측정된 지표의 수준 사이에 검출가능한 차이가 있음을 의미한다. 지표는 객관적인 매개변수(예: 혈청 농도) 또는 주관적인 매개변수(예: 개체의 웰빙 느낌)를 포함한다.
용어 "소분자"는 약 10 kDa 미만, 약 2 kDa 미만, 또는 약 1 kDa 미만의 분자량을 갖는 화학적 화합물을 지칭한다. 소분자는 무기 분자, 유기 분자, 무기 성분을 함유하는 유기 분자, 방사성 원자를 포함하는 분자, 및 합성 분자를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 치료학적으로, 작은 분자는 세포에 더 투과성이고 분해에 덜 민감하며 큰 분자보다 면역 반응을 덜 유발한다.
용어 "리간드"는 수용체의 작용제 또는 길항제로서 작용할 수 있는, 예를 들어 펩티드, 폴리펩티드, 막-연계 또는 막-결합 분자, 또는 이들의 복합체를 지칭한다. 리간드는 천연 및 합성 리간드, 예를 들어 사이토카인, 사이토카인 변이체, 유사체, 뮤테인, 및 항체로부터 유도된 결합 조성물, 뿐만 아니라 소분자를 포함한다. 이 용어는 또한 작용제나 길항제는 아니지만 생물학적 특성, 예를 들어 신호전달 또는 부착에 유의한 영향을 미치지 않으면서 수용체에 결합할 수 있는 제제를 포함한다. 더욱이, 이 용어는 예를 들어 화학적 또는 재조합 방법에 의해 막-결합 리간드의 가용성 버전으로 변경된 막-결합 리간드를 포함한다. 리간드 또는 수용체는 완전히 세포 내에 있을 수 있다. 즉, 세포질, 핵 또는 일부 다른 세포내 구획에 존재할 수 있다. 리간드와 수용체의 복합체를 "리간드-수용체 복합체"라고 한다.
용어 "억제제" 및 "길항제", 또는 "활성화제" 및 "작용제"는 예를 들어, 리간드, 수용체, 보조인자, 유전자, 세포, 조직, 또는 기관의 활성화를 위한 억제 또는 활성화 분자를 각각 지칭한다. 억제제는 예를 들어 유전자, 단백질, 리간드, 수용체 또는 세포를 감소, 차단, 예방, 활성화 지연, 불활성화, 둔감화, 또는 하향 조절하는 분자이다. 활성화제는 예를 들어 유전자, 단백질, 리간드, 수용체, 또는 세포를 증가, 활성화, 촉진, 활성화 향상, 민감화, 또는 상향 조절하는 분자이다. 억제제는 또한 구성적(constitutive) 활성을 감소, 차단, 또는 비활성화하는 분자로 정의될 수 있다. "작용제"는 표적과 상호작용하여 표적의 활성화 증가를 유발하거나 촉진시키는 분자이다. "길항제"는 작용제의 작용(들)에 반하는 분자이다. 길항제는 작용제의 활성을 방지, 감소, 억제, 또는 중화하고, 길항제는 또한 규명된 작용제가 없는 경우에도 표적, 예를 들어 표적 수용체의 구성적 활성을 예방, 억제, 또는 감소시킬 수 있다.
용어 "조절하다", "조절" 등은 본 명세서에 기재된 아데노신 관련 단백질의 기능 또는 활성을 직접적으로 또는 간접적으로 증가시키거나 감소시키는 분자(예를 들어, 활성화제 또는 억제제)의 능력을 지칭한다. 조절자는 단독으로 작용하거나 보조인자(예: 단백질, 금속 이온, 또는 소분자)를 사용할 수 있다. 조절제의 예는 소분자 화합물 및 기타 생체유기 분자를 포함한다. 소분자 화합물의 수많은 라이브러리(예: 조합 라이브러리)가 상업적으로 이용 가능하며 조절제를 식별하기 위한 출발점 역할을 할 수 있다. 통상의 기술자는 원하는 특성을 갖는 하나 이상의 화합물을 식별하기 위해 이러한 화합물 라이브러리를 스크리닝할 수 있는 하나 이상의 어세이(예: 생화학적 또는 세포 기반 어세이)을 개발할 수 있고; 그 후, 숙련된 의약 화학자는 예를 들어 그의 유사체 및 유도체를 합성하고 평가함으로써 이러한 하나 이상의 화합물을 최적화할 수 있다. 합성 및/또는 분자 모델링 연구도 활성화제 식별에 활용될 수 있다.
분자의 "활성"은 리간드 또는 수용체에 대한 분자의 결합. 촉매 활성; 유전자 발현 또는 세포 신호전달, 분화, 또는 성숙을 자극하는 능력; 항원 활성; 다른 분자의 활동 조절; 등등을 설명하거나 지칭할 수 있다. "증식 활성"이라는 용어는 예를 들어 정상 세포 분열 뿐만 아니라 암, 종양, 이형성증, 세포 형질전환, 전이, 및 혈관신생을 촉진하거나 이에 필요하거나 이와 구체적으로 관련된 활성을 포함한다.
본 명세서에 사용된 바와 같이, "비교할 수 있는", "비교할 수 있는 활성", "비교할 만한 활성", "필적할 만한 효과", "~에 필적하는 효과" 등은 양적으로 및/또는 질적으로 볼 수 있는 상대적인 용어이다. 용어의 의미는 사용되는 상황에 따라 종종 다르다. 예를 들어, 수용체를 활성화시키는 두 가지 제제는 정성적 관점에서 비교 가능한 효과를 갖는 것으로 볼 수 있지만, 당업계에서 허용되는 어세이(예: 용량-반응 어세이) 또는 당업계에서 허용되는 동물 모델에서 결정된 바에 따라 한 가지 제제가 다른 제제 활성의 20%만 달성할 수 있는 경우 두 가지 제제는 정량적 관점에서 비교할 만한 효과가 없는 것으로 볼 수 있다. 한 결과를 다른 결과와 비교할 때(예: 한 결과를 참조 표준과 비교할 때) "필적할 수 있는"은 종종(항상 그런 것은 아니지만) 한 결과가 참조 표준에서 35% 미만, 30% 미만, 25% 미만, 20% 미만, 15% 미만, 10% 미만, 7% 미만, 5% 미만, 4% 미만, 3% 미만, 2% 미만, 또는 1% 미만이다. 특정 구체예에서, 하나의 결과는 참조 표준에서 15% 미만, 10% 미만, 또는 5% 미만 차이가 나는 경우 기준 표준에 필적할 수 있다. 비제한적인 예로서, 활성 또는 효과는 효능, 안정성, 용해도, 또는 면역원성을 지칭할 수 있다.
"실질적으로 순수한"은 성분이 조성물의 총 함량의 약 50% 초과, 전형적으로 총 폴리펩타이드 함량의 약 60% 초과를 구성함을 나타낸다. 보다 전형적으로, "실질적으로 순수한"은 전체 조성물의 적어도 75%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 그 이상이 관심 성분인 조성물을 지칭한다. 일부 경우에, 폴리펩티드는 조성물의 총 함량의 약 90% 초과, 또는 약 95% 초과를 구성할 것이다.
리간드/수용체, 항체/항원, 또는 다른 결합 쌍을 언급할 때 용어 "특이적으로 결합한다" 또는 "선택적으로 결합한다"는 단백질 및 기타 생물학적 제제의 이종 집단에서 단백질의 존재를 결정하는 결합 반응을 나타낸다. 따라서 설계된 조건에서 지정된 리간드는 특정 수용체에 결합하고 샘플에 존재하는 다른 단백질에는 상당한 양으로 결합하지 않는다. 고려되는 방법의, 항체, 또는 항체의 항원-결합 부위로부터 유래된 결합 조성물은 임의의 다른 항체, 또는 이로부터 유도된 결합 조성물의 친화도보다 적어도 2배, 적어도 10배, 적어도 20배 더 크거나, 또는 적어도 100배 더 큰 친화도로 그의 항원, 또는 그의 변이체 또는 뮤테인에 결합한다. 특정 구체예에서, 항체는 예를 들어 Scatchard 분석(Munsen, et al. 1980 Analyt. Biochem. 107:220-239)에 의해 결정되는 바와 같이, 약 109 liters/mol 보다 큰 친화도를 가질 것이다.
예를 들어, 세포, 조직, 기관, 또는 유기체의 "반응"이라는 용어는 생화학적 또는 생리학적 거동, 예를 들어 생물학적 구획 내에서의 농도, 밀도, 부착, 또는 이동, 유전자 비율 변화, 또는 분화 상태의 변화를 포함하며, 여기서 변화는 활성화, 자극, 또는 치료와, 또는 유전 프로그래밍과 같은 내부 메커니즘과 상관관계가 있는 것이다. 특정 맥락에서, 용어 "활성화", "자극" 등은 외부 또는 환경 요인뿐만 아니라 내부 기전에 의해 조절되는 세포 활성화를 지칭하며; 반면 "억제", "하향 조절" 등의 용어는 반대 효과를 지칭한다.
용어 "아데노신 기구 단백질" 또는 "아데노신 기구 mRNA" 또는 "아데노신 기구 유전자"는 각각 아데노신의 세포외 생산에 관여하거나 아데노신 매개 신호전달경로에 관여하는 단백질, mRNA, 또는 암호화 DNA를 지칭한다. 예시적인 단백질 및 상응하는 mRNA는 아데노신 A2a 수용체(A2aR), 아데노신 A2b 수용체(A2bR), 아데노신 A1 수용체(A1R), CD26, 아데노신 데아미나제(ADA), 조직-비특이적 알칼리성 포스파타제(TNAP), CD73, 엑토뉴클레오티드 피로포스파타제/포스포디에스테라제 1(ENPP1), CD38 및/또는 CD39를 포함하지만 이에 제한되지는 않는다.
용어 "아데노신의 세포외 생산을 표적으로 하는 제제"는 아데노신의 세포외 생산에 관여하는 하나 이상의 단백질의 조절제를 지칭한다. 예시적인 조절자는 소분자 화합물, 항체, 및 간섭 RNA를 포함한다. 아데노신의 세포외 생산에 관여하는 단백질에는 조직-비특이적 알칼리성 포스파타제(TNAP), CD73, 엑토뉴클레오티드 피로포스파타제/포스포디에스테라제 1(ENPP1), CD38 및/또는 CD39가 포함되지만 이에 국한되지 않는다. 따라서, 이들 단백질을 표적으로 하는 것으로 알려진 조절자는 본 개시내용과 관련이 있다.
용어 "이의 수용체 중 하나의 아데노신에 의한 활성화를 길항하는 작용제"는 아데노신이 종종 내재성 막 단백질(integral membrane protein)인 아데노신 수용체 단백질과 결합하는 것을 감소시키거나 완전히 방지하는 길항제를 지칭한다. 아데노신에 의해 활성화되는 단백질 수용체는 아데노신 A1 수용체(A1R), 아데노신 A2a 수용체(A2aR) 및/또는 아데노신 A2b 수용체(A2bR)를 포함하지만 이에 제한되지 않는다. 따라서, 이들 수용체를 표적으로 하는 것으로 알려진 길항제는 본 개시내용과 관련이 있다.
III. 구체예의 상세한 설명
특정 치료 요법에 대해 보다 유리한 반응을 보일 개체를 식별하기 위한 수단으로서 개체의 암의 아데노신 지문을 확립하는 방법이 본원에 개시되어 있다. 개체에서 아데노신 핑거프린트를 확립하는 것은 본원에 추가로 기재되어 있지만, 일반적으로 다음 중 하나 이상을 결정하는 것을 포함한다: 개체로부터의 혈액에서 하나 이상의 아데노신 기구 단백질의 발현 수준, 개체의 종양의 생검으로부터 하나 이상의 아데노신 기구 단백질의 발현 수준(또는 mRNA 수준), 개체로부터의 혈액 또는 종양에서 특정 아데노신 기구 단백질의 활성.
이와 같이, 본원에서는 아데노신의 세포외 생성을 표적으로 하고 및/또는 그의 수용체 중 하나의 아데노신에 의한 활성화를 길항하는 치료제를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 확립된 아데노신 지문을 갖는 개체에서 암을 치료하는 방법이 또한 제공되는데,
여기서 개체의 암은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되는 특징 중 적어도 하나를 가지는 것인 방법이다:
(i) 개체로부터의 혈액 내 하나 이상의 아데노신 기구 단백질 농도의 증가 (여기서, 상기 증가는 동일한 유형의 암을 가진 개체로부터의 혈액 내 하나 이상의 아데노신 기구 단백질의 전형적인 농도에 대해 상대적임);
(ii) AMP 가수분해 어세이에 의해 결정된, 개체로부터의 혈액에서 CD73 또는 TNAP의 활성 증가(여기서, 상기 증가는 동일한 유형의 암을 가진 개체로부터의 혈액에서 CD73 및/또는 TNAP의 전형적인 AMP 가수분해 활성에 대해 상대적임);
(iii) 하나 이상의 아데노신 기구 단백질에 대한 면역염색에 의해 결정된, 하나 이상의 아데노신 기구 단백질의 양의 증가를 나타내는 개체의 암으로부터의 생검(여기서, 상기 증가는 동일한 유형의 암을 가진 개체의 생검에서 하나 이상의 아데노신 기구 단백질의 전형적인 양에 대해 상대적임); 및
(iv) mRNA 수준에 의해 결정되는, 하나 이상의 아데노신 기구 단백질의 상향조절을 나타내는 개체의 암으로부터의 생검 (여기서, 상기 상향조절은 동일한 유형의 암을 가진 개체로부터의 생검에서 하나 이상의 아데노신 기구 단백질의 전형적인 양에 대해 상대적임).
아데노신 기구 단백질
종양 미세환경에서 세포외 아데노신은 다양한 종양 모델에서 면역억제 효과를 갖는 것으로 나타났다. 따라서, 세포외 아데노신 및/또는 아데노신 신호전달의 생성에 관여하는 단백질(아데노신 기구 단백질)은 아데노신의 면역억제 효과를 차단, 감소, 또는 억제하기 위한, 가능한 후보이다. 아데노신 기구 단백질에는 아데노신 A2a 수용체(A2aR), 아데노신 A2b 수용체(A2bR), 아데노신 A1 수용체(A1R), CD26, 아데노신 데아미나제(ADA), 조직-비특이적 알칼리 포스파타제(TNAP), CD73, 엑토뉴클레오티드 피로포스파타제/포스포디에스테라제 1(ENPP1), CD38 및/또는 CD39이 포함되지만 이에 국한되지는 않는다.
의료 직원에게 아데노신 기구 단백질의 발현 수준 및/또는 활성 수준에 대해 알려주는 진단 테스트는 특정 치료 요법에 대해 보다 유리한 반응을 보일 개체를 식별하기 위한 수단을 제공한다. 아래에 설명된 것처럼 암의 아데노신 지문을 평가하는 것은 아데노신 기구 단백질에 대한 귀중한 정보를 제공한다.
암의 아데노신 지문
암의 아데노신 지문은 암이 있는 개체에 대한 적합한 치료법을 확인하고 선택하기 위한 결정을 알리는 데 사용될 수 있다. 아데노신 지문은 발현 수준 및/또는 활성 또는 하나 이상의 아데노신 기구 단백질을 평가하는 것을 포함할 수 있다. 발현 수준은 암 샘플에서 mRNA의 양, 암 샘플에서 발현된 단백질의 양, 암을 가진 개체로부터의 혈액에서 발현된 단백질의 양, 또는 이들 각각의 평가의 조합일 수 있다. 활성 평가는 일반적으로 혈액 샘플 또는 아데노신 기구 단백질의 촉매 활성을 평가하는 암 유래 샘플을 사용하는 효소적 어세이를 사용한다.
아데노신 기구 단백질의 혈중 농도 평가.
하나 이상의 아데노신 기구 단백질의 혈중 농도를 결정하는 것은 암을 가진 개체에서 발현되는 관련 단백질의 양에 대한 정보를 제공한다. 혈액 샘플에서 분석물의 농도를 결정하기 위한 많은 알려진 방법이 있다. 한가지 그러한 예는 샌드위치 ELISA 어세이이다. 실시예 1은 개체의 혈액 샘플에서 가용성 CD73의 양을 결정하는 것에 대한 설명을 제공한다. 하나 이상의 추가적인 아데노신 기구 단백질의 농도를 결정하기 위해 다수의 기타 유사하거나 관련된 방법을 사용할 수 있다.
일부 구체예에서, 개체의 아데노신 지문을 평가할 때, 하나 이상의 아데노신 기구 단백질의 농도 증가가 관련된 것으로 생각된다. 상기 증가는 동일한 유형의 암을 가진 개체로부터의 혈액 내 하나 이상의 아데노신 기구 단백질의 전형적인 농도에 상대적으로 결정된다. 일부 구체예에서, 주어진 아데노신 기구 단백질의 전형적인 농도는 동일한 유형의 암을 가진 개체로부터의 혈액 내 역치 값이다. 일부 구체예에서, 주어진 아데노신 기구 단백질의 전형적인 농도는 동일한 유형의 암을 갖는 개체로부터의 혈액 내 하나 이상의 아데노신 기구 단백질의 평균 농도이다. 일부 구체예에서, 상기 증가는 암으로 진단되기 전에 개체에서 하나 이상의 아데노신 기구 단백질의 농도에 상대적이다.
일부 구체예에서, 아데노신 지문을 평가할 때, 가용성 CD73 농도는 관련 임계값으로 간주된다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 개체로부터의 혈액 내 약 1ng/mL의 가용성 CD73 농도는 관련 역치 값으로 간주된다. 일부 구체예에서, 역치 값은 3ng/mL이다. 일부 구체예에서, 역치 값은 8ng/mL이다.
일부 구체예에서, 아데노신 지문을 결정하는 맥락에서 아데노신 기구 단백질의 상승된 수준은 참조 표준 수준에 대한 상대적 증가를 측정함으로써 결정된다. 참조 표준 수준은 동일한 유형의 암을 갖는 개체에서 주어진 단백질의 임계값 또는 평균 수준일 수 있다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 암을 가진 개체로부터의 혈액 내 가용성 CD73 농도는 참조 표준 수준에 비해 적어도 1% 증가가 있을 때 관련된 것으로 생각된다. 일부 구체예에서, 참조 표준 수준에 비해 약 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25% 또는 그 이상의 증가가 관련된 것으로 생각된다.
AMP 가수분해 어세이를 사용하여 아데노신 기구 단백질의 효소 활성 평가.
하나 이상의 아데노신 기구 단백질의 효소 활성을 결정하는 것은 암을 갖는 개체에서 발현되는 관련 단백질의 활성에 대한 정보를 제공한다. 이러한 결정은 암을 가진 개체로부터 채취한 혈액 샘플에서 이루어질 수 있다. 혈액 샘플에서 단백질의 활성을 결정하기 위한 많은 알려진 방법이 있다. 본 개시내용에서 CD73 또는 TNAP의 활성을 측정하기 위한 하나의 특별히 관련된 어세이는 본 출원의 실시예 2에 기재된 AMP-Glo 가수분해 어세이이다.
CD73, TNAP, 또는 다른 단백질에 의해 매개되는 AMP 가수분해의 양은 상이한 방식으로 보고될 수 있다. 일부 구체예에서, 샘플에서 CD73 및/또는 TNAP 매개 가수분해는 샘플에서 총 AMP 가수분해 활성의 백분율로서 보고된다. 아데노신 지문을 결정하는 맥락에서, AMP 가수분해 어세이의 결과는 아데노신의 세포외 생산을 표적으로 하는 하나 이상의 제제 또는 아데노신의 수용체 중 하나의 아데노신에 의한 활성화를 길항하는 제제를 사용한 치료가 적절함을 나타낼 수 있다.
일부 구체예에서, AMP 가수분해 어세이를 통해 개체의 아데노신 지문을 평가할 때, CD73 및/또는 TNAP의 활성 증가가 관련된 것으로 생각된다. 상기 증가는 동일한 유형의 암을 가진 개체로부터의 혈액에서 CD73 및/또는 TNAP의 전형적인 AMP 가수분해 활성에 상대적으로 결정된다. 일부 구체예에서, CD73 및/또는 TNAP의 전형적인 AMP 가수분해 활성은 동일한 유형의 암을 가진 개체에서 역치 값이다. 일부 구체예에서, CD73 및/또는 TNAP의 전형적인 AMP 가수분해 활성은 동일한 유형의 암을 가진 개체로부터의 혈액 내 하나 이상의 아데노신 기구 단백질의 평균 AMP 가수분해 활성이다. 일부 구체예에서, 상기 증가는 암으로 진단되기 전의 개체로부터의 혈액에서 CD73 및/또는 TNAP의 AMP 가수분해 활성에 상대적이다.
일부 구체예에서, AMP-Glo 가수분해 어세이를 통해 개체의 아데노신 지문을 평가할 때, 아데노신 기구 단백질에 의한 AMP 매개 가수분해의 역치 수준이 관련된 것으로 생각된다. 일부 구체예에서, 이러한 결과는 개체의 혈액에서 총 AMP 가수분해 활성의 적어도 10%가 CD73 또는 TNAP에 의해 매개되고; 개체의 혈액에서 총 AMP 가수분해 활성의 적어도 20%가 CD73 또는 TNAP에 의해 매개되고; 또는 개체의 혈액에서 총 AMP 가수분해 활성의 적어도 50%가 CD73 또는 TNAP에 의해 매개되는 는 값을 포함한다.
일부 구체예에서, 아데노신 기구 단백질의 효소 활성 평가는 본 출원의 실시예 7에 기재된 동위원소 AMP 가수분해 어세이를 사용하여 수행된다.
일부 구체예에서, 동위원소 AMP 가수분해 어세이를 통해 개체의 아데노신 지문을 평가할 때, CD73 및/또는 TNAP의 동위원소 AMP 가수분해 활성의 증가가 관련된 것으로 생각된다. 상기 증가는 동일한 유형의 암을 가진 개체로부터의 혈액에서 CD73 및/또는 TNAP의 전형적인 동위원소 AMP 가수분해 활성에 상대적으로 결정된다. 일부 구체예에서, CD73 및/또는 TNAP의 전형적인 동위원소 AMP 가수분해 활성은 동일한 유형의 암을 가진 개체에서 역치 값을 초과하는 증가이다. 일부 구현예에서 CD73 및/또는 TNAP의 전형적인 동위원소 AMP 가수분해 활성은 동일한 유형의 암을 가진 개체로부터의 혈액에서 하나 이상의 아데노신 기구 단백질의 평균 동위원소 AMP 가수분해 활성이다. 일부 구체예에서, 상기 증가는 암으로 진단되기 전의 개체의 혈액에서 CD73 및/또는 TNAP의 동위원소 AMP 가수분해 활성에 상대적이다.
일부 구체예에서, 동위원소 AMP 가수분해 어세이를 통해 개체의 아데노신 지문을 평가할 때, 아데노신 기구 단백질에 의한 AMP 매개 가수분해의 역치 수준이 관련된 것으로 생각된다. 일부 구체예에서, 이러한 결과는 개체의 혈액에서 총 AMP 가수분해 활성의 적어도 10%가 CD73 또는 TNAP에 의해 매개되고;개체의 혈액에서 총 AMP 가수분해 활성의 적어도 20%가 CD73 또는 TNAP에 의해 매개되고; 또는 개체의 혈액에서 총 AMP 가수분해 활성의 적어도 50%가 CD73 또는 TNAP에 의해 매개되는 값을 포함한다.
면역염색을 사용한, 종양에서의 아데노신 기구 단백질의 발현 수준 평가.
면역염색은 특정 단백질의 존재를 식별하고 상기 단백질의 상대적인 양을 정량화하기 위한 잘 확립된 기술이다. 시각화 및 정량화를 위해 상기 단백질을 표지하는 데 사용할 수 있는 여러 가지 방법이 있다. 전형적으로, 면역염색은 암을 가진 개체로부터 종양의 생검을 획득하고 관심 표적에 결합하는 표지된 항체를 적용하는 것을 포함한다. CD73 및 TNAP의 양을 결정하기 위한 예시적인 방법은 실시예 3에 기술되어 있다. 통상의 기술자는 추가의 아데노신 기구 단백질이 실시예 3에 기재된 것과 유사한 기술을 사용하거나 당업계에 공지된 방법에 기초하여 평가될 수 있음을 인식할 것이다.
일부 구체예에서, 면역염색을 통해 개체의 아데노신 지문을 평가할 때, 아데노신 기구 단백질의 증가가 관련된 것으로 생각된다. 상기 증가는 동일한 유형의 암을 가진 개체의 생검에서 이러한 아데노신 기구 단백질의 전형적인 양에 상대적으로 결정된다. 일부 구체예에서, 주어진 아데노신 기구 단백질의 전형적인 양은 동일한 유형의 암을 갖는 개체로부터의 생검에서 역치 값이다. 일부 구체예에서, 주어진 아데노신 기구 단백질의 전형적인 양은 동일한 유형의 암을 갖는 개체로부터의 생검에서 그러한 아데노신 기구 단백질의 평균 양이다. 일부 구체예에서, 상기 증가는 암으로 진단되기 전에 개체의 동일한 조직에서 아데노신 기구 단백질의 양에 상대적이다.
일부 구체예에서, 면역염색을 통해 개체의 아데노신 지문을 평가할 때, 관심 분석물의 염색 면적 백분율은 관련 역치값으로 간주된다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 1%의 염색 면적은 관련 역치값으로 간주된다. 일부 구체예에서, 7, 10, 20% 이상의 염색 면적은 관련 역치값으로 간주된다.
mRNA 수준을 측정에 의한 아데노신 기구 단백질의 평가
생물학적 샘플에서 상대적인 mRNA 수준을 식별하고 정량화하는 많은 방법이 당업계에 알려져 있으며, 이들 각각은 아데노신 기구 mRNA 수준을 평가하는 데 적합하다. 본원에서 고려되는 바와 같이, 일부 구체예에서, mRNA 수준을 측정하는 방법은 개체로부터의 종양의 생검으로부터 수행된다. 아데노신 기구 단백질의 mRNA 수준을 결정하기 위한 예시적인 방법은 실시예 4에 기술되어 있다.
일부 구체예에서, mRNA 수준의 측정을 통해 개체의 아데노신 지문을 평가할 때, 아데노신 기구 mRNA의 상향조절이 관련된 것으로 생각된다. 상향 조절은 동일한 유형의 암을 가진 개체의 생검에서 아데노신 기구 mRNA의 전형적인 양에 상대적으로 결정된다. 일부 구체예에서, 주어진 아데노신 기구 mRNA의 전형적인 양은 동일한 유형의 암을 갖는 개체로부터의 생검에서 역치 값이다. 일부 구체예에서, 주어진 아데노신 기구 mRNA의 전형적인 양은 동일한 유형의 암을 갖는 개체로부터의 생검에서 이러한 아데노신 기구 mRNA의 평균 양이다. 일부 구체예에서, 상기 증가는 암으로 진단되기 전의 개체의 동일한 조직에서 아데노신 기구 mRNA의 양에 상대적이다.
따라서, 일부 구체예에서, 본원의 개시내용은 아데노신 A2a 수용체(A2aR) 및/또는 아데노신 A2b 수용체(A2bR) 길항제 및 CD73 억제제로 구성된 군으로부터 선택된 치료제를 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 확립된 아데노신 지문을 갖는 개체에서 암을 치료하는 방법을 제공하며,
여기서, 개체의 암이 하기로 이루어지는 군에서 선택된 적어도 하나의 특징을 가질 때 개체에게 CD73 억제제가 투여된다:
(i) 개체로부터의 혈액 내 가용성 CD73 농도의 증가(여기서, 상기 증가는 동일한 유형의 암을 가진 개체로부터의 혈액 내 CD73의 전형적인 농도에 대해 상대적임);
(ii) AMP 가수분해 어세이에 의해 결정된, 개체로부터의 혈액 내 CD73 활성의 증가(여기서, 상기 증가는 동일한 유형의 암을 가진 개체로부터의 혈액 내 CD73의 전형적인 AMP 가수분해 활성에 대해 상대적임);
(iii) CD73에 대한 면역염색에 의해 결정된, CD73 양의 증가를 나타내는 개체의 암으로부터의 생검(여기서, 상기 증가는 동일한 유형의 암을 가진 개체로부터의 생검에서 CD73의 전형적인 양에 대해 상대적임);
(iv) mRNA 수준에 의해 결정된, CD73의 상향조절을 나타내는 개체의 암으로부터의 생검(여기서, 상기 상향조절은 동일한 유형의 암을 가진 개체으로부터의 생검에서 CD73의 전형적인 양에 대해 상대적임);
여기서, 개체의 암이 하기로 이루어지는 군에서 선택된 적어도 하나의 특징을 가질 때 개체에게 아데노신 A2a 수용체(A2aR) 또는 아데노신 A2b 수용체(A2bR) 길항제가 투여되는 방법:
(a) 개체로부터의 혈액 내 TNAP 농도의 증가(여기서, 상기 증가는 동일한 유형의 암을 가진 개체으로부터의 혈액 내 TNAP의 전형적인 농도에 대해 상대적임);
(b) AMP 가수분해 어세이에 의해 측정된, 개체로부터의 혈액 내 TNAP 활성의 증가(여기서 상기 증가는 동일한 유형의 암을 가진 개체로부터의 혈액 내 TNAP의 전형적인 AMP 가수분해 활성에 대해 상대적임);
(c) TNAP에 대한 면역염색에 의해 결정된, TNAP의 양의 증가를 나타내는 개체의 암으로부터의 생검(여기서 상기 증가는 동일한 유형의 암을 갖는 개체로부터의 생검에서 TNAP의 전형적인 양에 대해 상대적임);
(d) mRNA 수준에 의해 결정된, TNAP의 상향조절을 나타내는 개체의 암으로부터의 생검(여기서 상기 상향조절은 동일한 유형의 암을 가진 개체로부터의 생검에서 TNAP의 전형적인 양에 대해 상대적임).
일부 구체예에서, 개체의 암이 (i) 내지 (iv)로 구성된 군으로부터 선택된 특징 중 적어도 2개, 3개, 또는 4개를 가질 때 개체에게 CD73 억제제가 투여되고; 또는 개체의 암이 (a) 내지 (d)로 구성된 군으로부터 선택된 특징 중 적어도 2개, 3개, 또는 4개를 가질 때 개체에게 아데노신 A2a 수용체(A2aR) 또는 아데노신 A2b 수용체(A2bR) 길항제가 투여된다.
일부 구체예에서, 개체의 암이 (i) 내지 (iv) 및 (a) 내지 (d) 각각으로부터 선택된 특징 중 적어도 1개, 2개, 3개, 또는 4개를 나타낼 때 단지 아데노신 A2a 수용체(A2aR) 또는 아데노신 A2b 수용체(A2bR) 길항제가 투여된다.
일부 구체예에서, 개체의 암이 (i) 내지 (iv) 및 (a) 내지 (d) 각각으로부터 선택된 특징 중 적어도 1개, 2개, 3개, 또는 4개를 나타낼 때 아데노신 A2a 수용체(A2aR) 및/또는 아데노신 A2b 수용체(A2bR) 길항제 모두가 투여된다.
본 명세서에 기술된 특징들 중 하나 이상의 평가는 선택된 치료제에 더 호의적으로 반응할 개체를 식별하는 데 도움이 된다. 이러한 제제에는 아데노신의 세포외 생산을 표적으로 하는 제제 뿐만 아니라 그 수용체 중 하나의 아데노신에 의한 활성화를 길항하는 제제가 포함된다.
아데노신의 세포외 생산을 표적으로 하는 제제
많은 단백질이 체내에서 아데노신의 세포외 생산에 관여하는 것으로 알려져 있다. 예를 들어, 세포외 아데노신의 생성으로 이어지는 지배적인 경로는 CD73에 의한 ATP의 순차적인 탈인산화인데, 이는 ATP를 ADP로 가수분해한 다음 AMP로 가수분해하는 것이며 CD39는 AMP를 아데노신으로 가수분해한다. TNAP는 또한 AMP로부터의 아데노신 생산에 기여한다. 세포외 아데노신의 생성을 유도하는 대안적인 메커니즘은 CD38에 의한 NAD+의 ADPR로의 가수분해이며, ENPP1에 의한 ADPR의 AMP로의 가수분해이다. ENPP1은 또한 NAD+를 가수분해하여 AMP를 생성할 수 있다. 따라서, 아데노신의 세포외 생산에 관여하는 단백질에는 조직-비특이적 알칼리성 포스파타제(TNAP), CD73, 엑토뉴클레오티드 피로포스파타제/포스포디에스테라제 1(ENPP1), CD38 및/또는 CD39가 포함되지만 이에 국한되지 않는다.
본원에서 고려되는 바와 같이, 본 개시내용은 아데노신의 세포외 생산을 표적으로 하는 하나 이상의 제제를 사용하여 확립된 아데노신 지문을 갖는 개체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.
조직-비특이적 알칼리성 포스파타제(TNAP) 억제제.
여러 TNAP 억제제가 당업계에 공지되어 있다. 일부 구체예에서, 기재된 방법에 유용한 TNAP 억제제는 WO/2013/126608, WO/2006/039480, 또는 WO/2002/092020에 개시된 작용제이고, 각각의 내용은 모든 목적을 위해 본원에 참고로 병합된다. 일부 구체예에서, TNAP 억제제는 하기 화학식을 갖는다:
Figure pct00001
CD 73 억제제.
일부 구체예에서, 기재된 방법에 유용한 CD73 억제제는 화학식 (i)
Figure pct00002
(i)
또는 그의 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 용매화물이고, 여기서,
각각의 R1은 수소, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, 선택적으로 치환된 아릴 및 -C(R2R2)-OC(O)-OR3로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 2개의 R1 기가 선택적으로 조합되어 5- 내지 7원 고리를 형성하고;
각각의 R2는 H 및 선택적으로 치환된 C1-C6알킬로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R3은 H, C1-C6알킬, 및 선택적으로 치환된 아릴로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
R5는 H 및 선택적으로 치환된 C1-C6알킬로 구성된 군으로부터 선택되고;
X는 O, CH2, 및 S로 구성된 군으로부터 선택되고;
A는 다음으로 구성된 군에서 선택되고:
Figure pct00003
각각은 1 내지 5개의 R6치환기로 선택적으로 치환되고, 여기서 아래첨자 n은 0 내지 3의 정수이고;
Z는 CH2, CHR6, NR6, 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고;
각각의 R6은 H, CH3, OH, CN, F, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, 및 OC(O)-C1-C6 알킬로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고; 선택적으로 인접한 고리 꼭짓점에 있는 2개의 R6기는 함께 연결되어 고리 꼭짓점으로서 적어도 하나의 헤테로원자를 갖는 5- 내지 6-원 고리를 형성하고; 및
Het은 다음으로 구성된 군에서 선택되고:
Figure pct00004
여기서 물결선은 화합물의 나머지 부분에 대한 부착점을 나타내고, 여기서:
Ra는 H, NH2, NHR7, NHC(O)R7, NR7R7, R7, OH, SR7 및 OR7로 구성된 군으로부터 선택되고;
Rb는 H, 할로겐, NH2, NHR7, NR7R7, R7, OH, 및 OR7로 구성된 군으로부터 선택되고;
Rc 및 Rd는 H, 할로겐, 할로알킬, NH2, NHR7, NR7R7, R7, OH, OR7, SR7, SO2R7, -X1-NH2, -X1-NHR7, -X1-NR7R7, -X1-OH, -X1-OR7, -X1-SR7 및 -X1-SO2R7로 구성된 군에서 독립적으로 선택되고;
Re 및 Rf는 H, 할로겐, 및 선택적으로 치환된 C1-C6알킬로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 X1은 C1-C4알킬렌이고; 및
각각의 R7은 선택적으로 치환된 C1-C10 알킬, 선택적으로 치환된 C2-C10 알케닐, 선택적으로 치환된 C2-C10 알키닐, 선택적으로 치환된 C3-C7 시클로알킬, 선택적으로 치환된 C3-C7 시클로알킬C1-C4알킬, 선택적으로 치환된 4-7원 시클로헤테로알킬, 선택적으로 치환된 4-7원 시클로헤테로알킬C1-C4알킬, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 아릴C1-C4알킬, 선택적으로 치환된 아릴C2-C4알케닐, 선택적으로 치환된 아릴C2-C4알키닐, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴C1-C4알킬, 선택적으로 치환된 헤테로아릴C1-C4알케닐, 선택적으로 치환된 헤테로아릴C2-C4알키닐로 구성된 군에서 독립적으로 선택되고, 및 선택적으로 질소 원자에 부착된 2개의 R7 기가 함께 연결되어 아릴 고리에 선택적으로 융합된 4- 내지 7-원 헤테로시클릭 고리를 형성하고;
단, 상기 화합물은 X, A 및 Het의 조합이 하기 화학식을 유발하는 것은 아니고:
Figure pct00005
여기서 Rg는 H이거나 또는 2개의 Rg 기가 결합되어 아세토나이드를 형성하고; 및 양쪽 모두의 경우에서
(1) Rc 및 Re는 수소이고 Ra는 -OEt, -OCH2Ph, -SCH2Ph, -NH2, 메틸아미노, 에틸아미노, 디메틸아미노, 디에틸아미노, N-메틸-N-에틸아미노, 페닐아미노, 벤질아미노, 2-페닐에틸아미노, N-벤질 -N-에틸아미노, 디벤질아미노, 4-아미노벤질아미노, 4-클로로벤질아미노, 4-니트로벤질아미노, 또는 4-설파모일벤질아미노; 또는
(2) Rc는 수소이고, Ra는 -NH2이고, Re는 브로모, 클로로, 아미노메틸, 또는 티오에틸이고; 또는
(3) Rc 는 수소이고, Ra 는 벤질아미노이고, Re 는 브로모인 것이다.
일부 구체예에서, 상기 CD73 억제제는 화합물 A:
Figure pct00006
(화합물 A)
또는 그의 약학적으로 허용되는 염이다.
일부 구체예에서, 상기 CD73 억제제는 화합물 B:
Figure pct00007
(화합물 B)
또는 그의 약학적으로 허용되는 염이다.
일부 구체예에서, 상기 CD73 억제제는 화합물 C:
Figure pct00008
(화합물 C)
또는 그의 약학적으로 허용되는 염이다.
일부 구체예에서, 상기 CD73 억제제는 미국특허공개공보 제2017/0267710호(2017년 6월 6일 출원된 미국연속출원 제15/400,748호 참조)에 기재되어 있는데, 그 내용은 모든 목적을 위해 참조로 본 명세서에 병합된다.
일부 구체예에서, 상기 CD73 억제제는 WO2015/164573, WO2017/120508, WO2018/183635, WO2018/094148, WO2018/119284, WO2018/2807635, WO2018/208727, WO2018/208980, WO2017/098421, WO2017/153952에 개시된 작용제이며, 각각의 내용은 모든 목적을 위해 참조로 본 명세서에 병합된다.
일부 구체예에서, 상기 CD73 억제제는 올레클루맙(MEDI-9447), CPI-006, NZV930/SRF373, BMS-986179, 또는 TJ4309이다.
엑토뉴클레오티드 피로포스파타제/포스포디에스테라제 1(ENPP1) 억제제.
일부 구체예에서, 기재된 방법에 유용한 엑토뉴클레오티드 피로포스파타제/포스포디에스테라제 1(ENPP1) 억제제는 MV-626이다.
일부 구체예에서, 기재된 방법에 유용한 ENPP1 억제제는 WO2019/023635에 개시된 작용제이고, 그의 내용은 모든 목적을 위해 본명세서에 참조로 병합된다.
CD38 억제제.
일부 구체예에서, 기재된 방법에 유용한 CD38 억제제는 다라투무맙 또는 이사툭시맙이다.
일부 구체예에서, 상기 CD38 억제제는 WO/2019/034753, US2018/0298106, WO2019/034752에 개시된 작용제이고, 각각의 내용은 모든 목적을 위해 참조로 본 명세서에 병합된다.
CD39 억제제.
CD39는 엑토뉴클레오사이드 트리포스페이트 디포스포하이드롤라제-1로도 알려져 있다. 일부 구체예에서, 기재된 방법에 유용한 CD39 억제제는 IPH5201, SRF617, 또는 TTX-030이다.
일부 구체예에서, 상기 CD39 억제제는 WO2012/085132, WO2017/089334, WO2009/095478, WO2011/154453, 및 WO2018/224685에 개시된 작용제이고, 각각의 내용은 모든 목적을 위해 참조로 본 명세서에 병합된다.
본 개시내용은 임의의 상기의 약학적으로 허용되는 염, 또는 유도체를 포함한다.
아데노신 수용체 중 하나의 아데노신에 의한 활성화를 길항하는 약제
체내에는 세포외 아데노신에 의해 활성화되는 많은 수용체가 있다. 즉, 아데노신의 결합은 효소 활성을 시작하고/하거나 세포 신호를 전파한다. 아데노신에 의한 활성화는 4개의 G-커플링된 아데노신 수용체(A1, A2a, A2b 및 A3)를 통해 발생한다. 아데노신은 주로 A2a 수용체(주로 T 세포에서 발현됨)와 A2b 수용체(골수성 세포에서 발현됨)를 통해 신호를 보내는데, 이는 아데노신에 의해 자극되면 손상된 T 세포 활성화를 유도한다. 이해하고 있는 바는 적지만, A1 수용체는 유방암, 결장암 및 위암과 같은 암의 발병기전에 관여하는 것으로 보고되었으며, A3 수용체는 결장직장암 및 유방암에 관여하는 것으로 보고되었다. 종양 미세 환경에서 아데노신에 의한 이러한 수용체 중 하나 이상의 과활성화는 면역 억제 효과를 유발할 수 있다. 따라서, 이들 수용체에 대한 아데노신의 결합을 차단하거나 예방할 수 있는 길항제는 암 치료에 유용하다. 관련 수용체에는 아데노신 A1 수용체(A1R), 아데노신 A2a 수용체(A2aR) 및/또는 아데노신 A2b 수용체, 및 아데노신 A3 수용체(A3R)가 포함되지만 이에 제한되지는 않는다.
본 명세서에서 고려되는 바와 같이, 본 개시내용은 그의 수용체 중 하나의 아데노신에 의한 활성화를 길항하는 하나 이상의 제제를 사용하여 확립된 아데노신 지문을 갖는 개체에서 암을 치료하는 방법을 제공한다.
아데노신 A1 수용체(A1R) 길항제. 일부 구체예에서, 기재된 방법에 유용한 A1R 길항제는 FK352, KW-3902(Rolofylline), SLV320, BG9719(CVT-124), 또는 BG9928(Adentri)이다.
아데노신 A2a 수용체(A2aR) 및/또는 아데노신 A2b 수용체(A2bR) 길항제.
일부 구체예에서, 기재된 방법에 유용한 아데노신 A2a 수용체(A2aR) 및/또는 아데노신 A2b 수용체(A2bR) 길항제는 하기 화학식 (I)
Figure pct00009
(I)
또는 그의 약학적으로 허용되는 염, 수화물, 또는 용매화물을 갖는 것으로서, 여기서,
G1은 N 또는 CR3a이고;
G2는 N 또는 CR3b이고;
G3은 N 또는 CR3c이고;
R3a, R3b, 및 R3c는 각각 독립적으로 H 또는 C1-3알킬이고;
R1a 및 R1b는 다음으로 구성된 군에서 각각 독립적으로 선택되고:
i) H
ii) 1-3개의 R5치환기로 선택적으로 치환된 C1-8알킬,
iii) 1-3개의 R5치환기로 선택적으로 치환된 -X1-O-C1-8알킬,
iv) -C(O)-R6,
v) 1-3개의 R7치환기로 선택적으로 치환된 Y,
vi) 1-3개의 R7 치환기로 선택적으로 치환된 -X1-Y; 또는
vii) R1a 및 R1b는 이들이 부착된 질소와 함께 1-3개의 R8 치환기로 선택적으로 치환된 5 내지 6원 헤테로시클로알킬 고리를 형성하고, 여기서 헤테로시클로알킬은 O, N, 및 S 로 구성된 군으로부터 선택된 0-2개의 추가 헤테로원자 고리 꼭짓점을 가지고;
각각의 Y는 C3-8시클로알킬 또는 O, N 및 S로 구성된 군으로부터 선택된 1-3개의 헤테로원자 고리 꼭짓점을 갖는 4 내지 6원 헤테로시클로알킬이고;
R2 및 R4는 각각 독립적으로 H 또는 C1-3알킬이고;
Ar1은 페닐 또는 5 내지 6원 헤테로아릴이고, 이들 각각은 1-3개의 R9로 선택적으로 치환되고;
Ar2는 페닐 또는 5 내지 6원 헤테로아릴이고, 이들 각각은 1-3개의 R10으로 선택적으로 치환되고;
여기서, Ar1 및 Ar2의 5 내지 6원 헤테로아릴은 각각 독립적으로 O, N, 및 S로 구성된 군으로부터 선택된 1-3개의 헤테로원자 고리 꼭짓점을 갖고;
각각의 X1은 C1-6알킬렌이고;
각각의 R5는 히드록실, C3-8시클로알킬, 페닐, -O-페닐, -C(O)ORa 및 옥소로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R6은 C1-8알킬 또는 Y이고, 이들 각각은 히드록실, -O-페닐, 페닐, 및 -O-C1-8알킬로 구성된 군으로부터 선택된 1-3개의 치환기로 선택적으로 치환되고;
각각의 R7은 C1-8알킬, 히드록실, -O-C1-8알킬, 옥소, 및 C(O)ORa로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R8은 C1-8알킬, 히드록실, 및 옥소로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
각각의 R9는 C1-8알킬, -O-C1-8알킬, -X1-O-C1-8 알킬, -O-X1-O-C1-8 알킬, -X1-O-X1-O-C1-8 알킬, -C(O)ORa, 할로겐, 시아노, -NRbRc, Y, -X1-C3-8시클로알킬, 및 -X2-Z로 구성된 군에서 선택되고, 여기서 X2는 C1-6알킬렌, -C1-6알킬렌-O-, -C(O)-, 및 -S(O)2-로 구성된 군으로부터 선택되고, Z는 O, N, 및 S로 구성된 군으로부터 선택된 1-3개의 헤테로원자 고리 꼭짓점을 갖는 4 내지 6-원 헤테로시클로알킬이고, 여기서 상기 R9 치환기 각각은 1-3개의 R11로 선택적으로 치환되고;
각각의 R10은 C1-8알킬, 할로, 시아노, -O-C1-8알킬, -X1-O-C1-8알킬, -O-X1-O-C1-8알킬, -S(O)2-C1-6알킬, -C(O)NRdRe, 및 O, N, 및 S로 구성된 군으로부터 선택된 1-3개의 헤테로원자 고리 꼭짓점을 갖는 4-6-원 헤테로아릴로 구성된 군에서 독립적으로 선택되고, 여기서 상기 R10 치환기 각각은 1-3개의 R12로 선택적으로 치환되거나, 또는 Ar2의 인접한 고리 꼭짓점상에서 두 개의 R10가 선택적으로 조합되어 1-2개의 할로겐으로 선택적으로 치환된 5원 헤테로시클릭 고리를 형성하고;
각각의 R11은 히드록실, 할로, 시아노, -NRdRe, -C(O)ORa, 페닐, C3-8시클로알킬, 및 C(O)ORa로 선택적으로 치환된 C1-4알킬로 구성된 군에서 독립적으로 선택되고;
각각의 R12는 할로, 시아노, 히드록시, -C(O)ORa로 구성된 군에서 독립적으로 선택되고; 및
각각의 Ra는 H 또는 C1-6알킬이고;
각각의 Rb 및 Rc는 H, C1-8알킬, -S(O)2-C1-6알킬, -C(O)ORa, 및 -X1-C(O)ORa로 구성된 군에서 독립적으로 선택되고;
각각의 Rd 및 Re는 H, C1-8알킬, -S(O)2-C1-6알킬로 구성된 군에서 독립적으로 선택되고; 및
단, G1 및 G2가 각각 N이고, G3이 CH이고, R2가 CH3이고, R1a 및 R1b가 각각 H인 경우, Ar2는 2-티에닐, 페닐, 2-, 3- 또는 4-메톡시페닐, 3- 또는 4-할로페닐, 2,4-디메톡시페닐, 2,4-디클로로페닐 또는 2- 또는 4-메틸페닐과 다른 것이다.
일부 구체예에서, 상기 아데노신 A2a 수용체(A2aR) 또는 아데노신 A2b 수용체(A2bR) 길항제가 화합물 1
Figure pct00010
(화합물 1)
또는 그의 약학적으로 허용되는 염이다.
일부 구체예에서, 상기 아데노신 A2a 수용체(A2aR) 또는 아데노신 A2b 수용체(A2bR) 길항제가 화합물 2
Figure pct00011
(화합물 2)
또는 그의 약학적으로 허용되는 염이다.
일부 구체예에서, 상기 아데노신 A2a 수용체(A2aR) 또는 아데노신 A2b 수용체(A2bR) 길항제가 화합물 3
Figure pct00012
(화합물 3)
또는 그의 약학적으로 허용되는 염이다.
일부 구체예에서, 아데노신 A2a 수용체(A2aR) 및/또는 아데노신 A2b 수용체(A2bR) 길항제는 미국 공개특허 제2018/0215730호(또한 2018년 6월 19일에 출원된 미국 출원 번호 제15/875,106호 참조, 이의 내용은 모든 목적을 위해 본명세서에 참조로 병합됨)에 기재된 분자이다.
일부 구체예에서, A2a 수용체(A2aR) 및/또는 아데노신 A2b 수용체(A2bR) 길항제는 AZD4635, Ciforadenant(CPI-444), NIR178, 또는 PBF-1129이다.
아데노신 A3 수용체(A3R) 길항제.
일부 구체예에서, 기재된 방법에 유용한 A3R 길항제는 WO2007/063539 A1, US2003/0078232에 기재된 분자이고, 각각의 내용은 모든 목적을 위해 참조로 본 명세서에 병합된다.
암의 종류
통상의 기술자는 본 명세서에 기재된 치료 방법이 종양 기원과 독립적이고 종양의 아데노신 지문을 평가하는 것에 의존한다는 것을 인식할 것이다. 이와 같이, 본 개시내용은 특이적 유형의 암에 제한되지 않는 방법을 제공한다. 따라서, 본 개시내용은 전립선, 결장직장, 췌장, 자궁경부, 위, 자궁내막, 뇌, 간, 방광, 난소, 고환, 머리, 목, 피부(흑색종 및 기저선암 포함), 중피세포, 백혈구(림프종 및 백혈병 포함), 식도, 유방(삼중 음성 유방암 포함), 근육, 결합 조직, 폐(소세포 폐암 및 비소세포 폐암 포함), 부신, 갑상선, 신장 또는 뼈의 암; 또는 교모세포종, 중피종, 신세포암종, 위암종, 육종(카포시 육종 포함), 융모막암종, 피부 기저선세포암종, 및 고환 정액종을 포함하지만 이에 제한되지 않는 다양한 상이한 암을 치료하는 데 유용하다.
본 개시내용의 일부 구체예에서, 상기 암은 흑색종, 결장암, 췌장암, 유방암, 전립선암, 폐암, 백혈병, 뇌종양, 림프종, 육종, 난소암, 두경부암, 자궁경부암 또는 카포시 육종이다.
본 개시내용의 일부 구체예에서, 상기 암은 갑상선, 부신, 중피 내막, 담관, 췌장, 뇌, 신장, 식도, 직장, 결장, 위, 머리, 목, 피부, 고환, 난소, 폐, 자궁내막, 눈, 전립선, 유방 또는 간의 암이며; 또는 교모세포종, 중피종 또는 육종이다.
본 개시내용의 일부 구체예에서, 상기 암은 고환, 난소, 폐, 자궁내막 또는 부신의 암이다.
본 개시내용의 일부 구체예에서, 상기 암은 눈, 전립선, 유방, 신장, 간 또는 폐의 암이다.
일부 구체예에서, 본 개시내용은 아데노신의 세포외 생성을 표적화하는 제제 및/또는 그의 수용체 중 하나의 아데노신에 의한 활성화를 길항하는 제제 및 적어도 하나의 추가적인 치료제(이의 예는 본명세서의 다른 곳에서 설명됨)를 사용하여 특이적 유형의 암을 갖는 것으로 확인된 개체를 치료하는 방법을 제공하는 것이다.
병용 요법
본 개시내용은 단독으로 또는 하나 이상의 활성 치료제와 조합하여 본 명세서에 기재된 치료제의 사용을 고려한다. 추가 활성 치료제는 작은 화학 분자; 단백질, 항체, 펩티바디, 펩티드, DNA, RNA 또는 이러한 거대분자의 단편과 같은 거대분자; 또는 세포 또는 유전자 요법일 수 있다. 이러한 병용 요법에서 다양한 활성제는 종종 상이하고 보완적인 작용 기전을 갖는다. 이러한 조합 요법은 하나 이상의 제제의 용량 감소를 허용함으로써 하나 이상의 제제와 관련된 부작용을 감소 또는 제거함으로써 특히 유리할 수 있다. 또한, 이러한 병용 요법은 기저선 질환, 장애, 또는 상태에 대해 상승적 치료 또는 예방적 효과를 가질 수 있다.
본 명세서에 사용된 "조합"은 개별적으로 투여될 수 있는 요법, 예를 들어 개별 투여를 위해 별도로 제제화될 수 있는 요법(예를 들어, 키트에 제공될 수 있는 바와 같이), 및 단일 제제로 함께 투여될 수 있는 요법(즉, "복합 제제")을 포함하는 것을 의미한다.
특정 구체예에서, 본 명세서에 기재된 치료제는 예를 들어, 하나의 제제가 하나 이상의 다른 제제보다 먼저 투여되는 경우에 순차적으로 투여되거나 적용된다. 다른 구체예에서, 본 명세서에 기재된 치료제는 동시에 투여, 예를 들어 2종 이상의 제제가 동시에 또는 거의 동시에 투여되는 경우; 상기 2종 이상의 제제는 2종 이상의 개별 제제로 존재하거나 단일 제제(즉, 복합 제제)로 조합될 수 있다. 2종 이상의 제제가 순차적으로 투여되는지 또는 동시에 투여되는지 여부에 관계없이, 이들은 본 발명의 목적을 위해 조합하여 투여되는 것으로 간주된다.
본 개시내용의 아데노신의 세포외 생산을 표적으로 하는 제제 및/또는 그의 수용체 중 하나의 아데노신에 의한 활성화를 길항하는 제제는 상황에 따라 적절한 임의의 방식으로 하나 이상의 다른 (활성) 제제와 조합하여 사용될 수 있다. 하나의 구체예에서, 본 명세서에 기재된 하나 이상의 활성제 및 하나 이상의 추가 치료제를 사용한 치료는 일정 기간 동안 유지된다. 또 다른 구체예에서, 적어도 하나의 활성제를 사용한 치료는 감소되거나 중단되는 반면(예를 들어, 개체가 안정된 경우), 본 명세서에 기재된 치료제를 사용한 치료는 일정한 투여 요법으로 유지된다. 추가 구체예에서, 적어도 하나의 활성제를 사용한 치료는 감소되거나 중단되는 반면(예를 들어, 개체가 안정된 경우), 본 명세서에 기재된 치료제를 사용한 치료는 감소된다(예를 들어, 더 낮은 용량, 덜 빈번한 투여 또는 더 짧은 치료 요법). 또 다른 구체예에서, 하나 이상의 활성제를 사용한 치료가 감소되거나 중단되고(예를 들어, 개체가 안정된 경우), 본 명세서에 기재된 치료제를 사용한 치료가 증가된다(예를 들어, 더 높은 용량, 더 빈번한 투여 또는 더 긴 치료 요법). 또 다른 구체예에서, 적어도 하나의 활성제를 사용한 치료가 유지되고 본 명세서에 기재된 치료제를 사용한 치료가 감소되거나 중단된다(예를 들어, 더 낮은 용량, 덜 빈번한 투여 또는 더 짧은 치료 요법). 또 다른 구체예에서, 적어도 하나의 활성제를 사용한 치료 및 본 명세서에 기재된 치료제를 사용한 치료가 감소되거나 중단된다(예를 들어, 더 낮은 용량, 덜 빈번한 투여 또는 더 짧은 치료 요법).
본 개시내용은 아데노신의 세포외 생산을 표적으로 하는 제제 및/또는 그의 수용체 중 하나의 아데노신에 의한 활성화를 길항하는 제제 및 적어도 하나의 추가 치료제 또는 진단제를 사용하여 확립된 아데노신 지문을 갖는 개체에서 암을 치료 및/또는 예방하는 방법을 제공한다. 일부 구체예에서, 추가 치료제는 방사선, 면역조절제 또는 화학요법제이다. 본 발명에서 사용될 수 있는 적합한 면역조절제는 CD4OL, B7, 및 B7RP1; 항-CD40, 항-CD38, 항-ICOS, 및 4-IBB 리간드와 같은 자극 수용체에 대한 활성화 모노클로날 항체(mAb); 수지상 세포 항원 로딩(시험관내 또는 생체내); 수지상 세포 암 백신과 같은 항암 백신; 사이토카인/케모카인, 예를 들어 ILL IL2, IL12, IL18, ELC/CCL19, SLC/CCL21, MCP-1, IL-4, IL-18, TNF, IL-15, MDC, IFNa/b, M-CSF, IL-3, GM-CSF, IL-13, 및 항-IL-10; 세균성 지질다당류(LPS); 인돌아민 2,3-디옥시게나제 1(IDO1) 억제제 및 면역 자극 올리고뉴클레오티드를 포함한다.
특정 구체예에서, 본 개시내용은 신호 전달 억제제(STI)와 조합하여 본 명세서에 기재된 치료제의 투여를 포함한다. 본원에 사용된 용어 "신호 전달 억제제"는 신호전달 경로에서 하나 이상의 단계를 선택적으로 억제하는 작용제를 지칭한다. 본 발명의 신호 전달 억제제(STI)는 다음을 포함한다: (i) bcr/abl 키나제 억제제(예를 들어, GLEEVEC); (ii) 키나제 억제제 및 항체를 포함하는 표피 성장 인자(EGF) 수용체 억제제; (iii) her-2/neu 수용체 억제제(예를 들어, HERCEPTIN); (iv) Akt 패밀리 키나제 또는 Akt 경로의 억제제(예를 들어, 라파마이신); (v) 세포 주기 키나제 억제제(예: 플라보피리돌); 및 (vi) 포스파티딜 이노시톨 키나제 억제제. 면역조절에 관여하는 제제는 또한 암 환자에서 종양 성장의 억제를 위해 본 명세서에 기재된 치료제와 조합하여 사용될 수 있다.
TMB는 개체가 게놈 내에 갖는 체세포 돌연변이의 총 수를 결정하기 위한 유용한 도구이다. 이 정보는 실행 가능한 치료 옵션을 식별하고 선택하는 데 사용할 수 있다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 개체의 종양 돌연변이 부담(TMB)은 추가 화학요법제를 받아야 하는 환자를 식별하기 위해 사용한다. 예를 들어, 일부 구체예에서, 본 명세서에서 제공된 방법은 TMB가 전체 엑솜 시퀀싱(WES)에 의해 결정된 바와 같이 2.0 미만인 경우 화학요법제를 개체에게 추가로 투여하는 것을 포함한다. 일부 구체예에서, 개체는 TMB가 2.5, 3, 3.5, 4, 4.5, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 미만인 경우 화학요법제를 추가로 투여받는다.
화학요법제의 예로는 티오테파 및 시클로포스파미드와 같은 알킬화제; 부술판, 임프로술판 및 피포술판과 같은 알킬 술포네이트; 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파, 우레도파 등의 아지리딘류; 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스파오르아미드 및 트리메틸올로멜라민을 포함하는 에틸렌이민 및 메틸아멜라민; 키오람부실, 클로르나파진, 콜로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로레타민, 메클로레타민 옥시드 히드로클로라이드, 멜팔란, 노벤비친, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드와 같은 질소 머스타드; 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 라니무스틴과 같은 니트로우레아; 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 칼리케아미신, 카라비신, 카미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이신, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르류신, 독소루비신, 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신, 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 퓨로마이신, 퀘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 메토트렉세이트 및 5-플루오로우라실(5-FU)과 같은 항대사물질; 데놉테린, 메토트렉세이트, 프테롭테린, 트리메트렉세이트와 같은 엽산 유사체; 플루다라빈, 6-메르캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌과 같은 퓨린 유사체; 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘, 5-FU와 같은 피리미딘 유사체; 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 테스토락톤과 같은 안드로겐; 아미노글루테티미드, 미토탄, 트리로스탄과 같은 항-부신; 프롤린산과 같은 엽산 보충제; 아세글라톤; 알도포스파미드 배당체; 아미노레불린산; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르미틴; 엘립티늄 아세테이트; 에토글루시드; 질산갈륨; 하이드록시우레아; 렌티난; 로니다민; 미토구아존; 미톡산트론; 모피다몰; 니트라크린; 펜토스타틴; 페나멧; 피라루비신; 포도필린산; 2-에틸히드라지드; 프로카바진; 라족산; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 우레탄; 빈데신; 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미톨락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드(Ara-C); 시클로포스파미드; 티오테파; 탁소이드, 예를 들어 파클리탁셀 및 독세탁셀; 클로람부실; 젬시타빈; 6-티오구아닌; 머캅토퓨린; 메토트렉세이트; 시스플라틴, 카르보플라틴 및 옥살리플라틴과 같은 백금 및 백금 배위 착물; 빈블라스틴; 에토포사이드(VP-16); 이포스파미드; 미토마이신 C; 미톡산트론; 빈크리스틴; 비노렐빈; 나벨빈; 노반트론; 테니포사이드; 다우노마이신; 아미노프테린; 젤로다; 이반드로네이트; CPT11; 토포이소머라제 억제제; 디플루오로메틸오르니틴(DMFO); 레티노산; 에스페라미신; 카페시타빈; 안트라사이클린; 및 상기 중 임의의 것의 약학적으로 허용되는 염, 산 또는 유도체를 포함하지만 이에 제한되지 않는다.
화학요법제는 또한 예를 들어 타목시펜, 랄록시펜, 아로마타제 억제 4(5)-이미다졸, 4-히드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, 오나프리스톤, 및 토레미펜을 포함하는 항에스트로겐; 및 플루타미드, 닐루타미드, 비칼루타미드, 류프롤리드 및 고세렐린과 같은 항안드로겐; 및 상기 중 임의의 것의 약학적으로 허용되는 염, 산 또는 유도체과 같은 종양에 대한 호르몬 작용을 조절하거나 억제하는 작용을 하는 항호르몬제를 포함한다. 특정 구체예에서, 병용 요법은 하나 이상의 화학요법제를 포함하는 화학요법의 요법을 포함한다. 특정 구체예에서, 병용 요법은 호르몬 또는 관련 호르몬제의 투여를 포함한다.
본 명세서에 기재된 치료제와 조합하여 사용될 수 있는 추가 치료 양식은 방사선요법, 종양 항원에 대한 모노클로날 항체, 모노클로날 항체 및 독소의 복합체, T-세포 아주반트, 골수 이식, 또는 항원제시 세포(예를 들어, 수지상 세포 요법)을 포함하는데, 이러한 항원 제시 세포를 자극하기 위해 사용되는 TLR 작용제를 포함하는 것이다.
특정 구체예에서, 본 개시내용은 항종양 활성을 갖는 면역 세포가 암 환자에게 투여되는 신규하고 유망한 형태의 맞춤형 면역요법인 입양 세포 요법(adoptive cell therapy)과 조합하여 본 명세서에 기재된 치료제의 사용을 고려한다. 입양 세포 요법은 종양 침윤 림프구(TIL) 및 예를 들어 키메라 항원 수용체(CAR) 또는 T 세포 수용체(TCR)를 발현하도록 조작된 T 세포를 사용하여 탐구되고 있다. 입양 세포 요법은 일반적으로 개인으로부터 T 세포를 수집하고, 특이적 항원을 표적으로 하거나 그 항종양 효과를 향상시키기 위해 일반적으로 그것을 유전적으로 변형하고, 충분한 수로 증폭하고, 유전자 변형 T 세포를 암 환자에게 주입하는 것을 포함한다. T 세포는 확장된 세포가 나중에 재주입되는 환자로부터 수집될 수 있거나(예를 들어, 자가유래(autologous)) 또는 공여자 환자로부터 수집될 수 있다(예를 들어, 동종이계(allogeneic)).
특정 구체예에서, 본 개시내용은 유전자 발현을 침묵시키기 위한 RNA 간섭-기반 요법과 조합하여 본 명세서에 기재된 화합물의 사용을 고려한다. RNAi는 더 긴 이중 가닥 RNA를 작은 간섭 RNA(siRNA)로 절단하는 것으로 시작한다. siRNA의 한 가닥은 RISC(RNA-induced silencing complex)로 알려진 리보핵단백질 복합체에 통합되는데, 이는 통합된 siRNA 가닥에 적어도 부분적으로 상보적인 mRNA 분자를 식별하는 데 사용된다. RISC는 mRNA에 결합하거나 mRNA를 절단할 수 있으며, 둘 다 번역을 억제한다.
본 개시내용은 면역 체크포인트 억제제와 조합하여 본 명세서에 기재된 치료제의 억제제의 사용을 고려한다.
모든 암의 특징인 엄청난 수의 유전적 및 후성적 변경은 면역계가 종양 세포를 정상 대응물과 구별하는 데 사용할 수 있는 다양한 항원 세트를 제공한다. T 세포의 경우, T-세포 수용체(TCR)에 의한 항원 인식을 통해 시작되는 반응의 궁극적인 진폭(예: 사이토카인 생성 또는 증식 수준) 및 질(예: 사이토카인 생성 패턴과 같이 생성된 면역 반응 유형)은 공동 자극 및 억제 신호(면역 체크포인트) 간의 균형에 의해 조절된다. 정상적인 생리학적 조건에서 면역 체크포인트는 자가면역의 예방하기 위해(즉, 자가 내성 유지) 또한 면역계가 병원성 감염에 반응할 때 손상으로부터 조직을 보호하기 위해 매우 중요하다. 면역 체크포인트 단백질의 발현은 중요한 면역 저항 기전으로서 종양에 의해 제대로 조절되지 않을 수(dysregulate) 있다.
T-세포는 내인성 항종양 면역을 치료적으로 조작하기 위한 노력의 주안점이 되어 왔는데 이는 그것의 i) 모든 세포 구획에서 단백질로부터 유래된 펩티드의 선택적 인식 능력; ii) 항원-발현 세포를 직접 인식하고 죽이는 능력(CD8+ 효과기 T 세포에 의해; 세포독성 T 림프구(CTL)라고도 알려짐); 및 iii) 적응 및 선천적 효과기 기전을 통합하는 CD4+ 헬퍼 T 세포에 의한 다양한 면역 반응을 조화시키는 능력 때문이다.
임상 환경에서, 항원 특이적 T 세포 반응의 증폭을 초래하는 면역 체크포인트의 차단은 인간 암 치료제에서 유망한 접근법인 것으로 나타났다.
T 세포-매개 면역은 반응을 최적화하기 위해 자극 및 억제 신호의 균형을 맞추는 것에 의해 각각 조절되는 다중 순차적 단계를 포함한다. 면역 반응의 거의 모든 억제 신호는 궁극적으로 세포내 신호 전달 경로를 조절하지만, 많은 것은 막 수용체를 통해 시작되며, 그 리간드는 막 결합 또는 가용성(사이토카인)이다. T 세포 활성화를 조절하는 공동 자극 및 억제 수용체 및 리간드는 종종 정상 조직에 비해 암에서 과발현되지 않는 반면, 조직에서 T 세포 효과기 기능을 조절하는 억제 리간드 및 수용체는 종양 세포 또는 종양 미세환경과 연관된 비형질전환된 세포에서 흔히 과발현된다. 가용성 및 막 결합 수용체-리간드 면역 체크포인트의 기능은 작용제 항체(공동 자극 경로의 경우) 또는 길항제 항체(억제 경로의 경우)를 사용하여 조정할 수 있다. 따라서 현재 암 치료제로 승인된 대부분의 항체와 달리 면역 체크포인트를 차단하는 항체는 종양 세포를 직접 표적으로 삼지 않고 오히려 내인성 항종양 활성을 향상시키기 위해 림프구 수용체 또는 그 리간드를 표적으로 한다.[Pardoll, (April 2012) Nature Rev. Cancer 12:252-64 참조].
면역 체크포인트(리간드 및 수용체)의 예는 그 일부가 다양한 유형의 종양 세포에서 선택적으로 상향조절되며 차단 후보인데 PD1(프로그래밍된 세포 사멸 단백질 1); PD-L1(PD1 리간드); BTLA(B 및 T 림프구 감쇠기(attenuator)); CTLA4(세포독성 T-림프구 연관 항원 4); TIM3(T-세포막 단백질 3); LAG3(림프구 활성화 유전자 3); TIGIT(Ig 및 ITIM 도메인을 갖는 T 세포 면역수용체); 및 그 구조적 특징에 따라 2가지 부류로 나눌 수 있는 킬러 억제 수용체: i) 킬러 세포 면역글로불린 유사 수용체(KIR) 및 ii) C형 렉틴 수용체(유형 II 막횡단 수용체 패밀리의 구성원)을 포함한다. 덜 잘 정의된 다른 면역 체크포인트가 문헌에 설명되어 있는데, 수용체(예: 2B4(CD244로도 알려짐) 수용체)와 리간드(예: B7-H3(CD276로도 알려짐)와 같은 특정 B7 패밀리 억제 리간드) 둘다 및 B7-H4(B7-S1, B7x 및 VCTN1로도 알려짐)를 포함하는 것이다. [Pardoll, (April 2012) Nature Rev. Cancer 12:252-64 참조].
본 개시내용은 전술한 면역-체크포인트 수용체 및 리간드, 뿐만 아니라 아직 기술되지 않은 면역-체크포인트 수용체 및 리간드의 억제제와 조합하여 본 명세서에 기재된 치료제의 사용을 고려한다. PD1 및 PD-L1 항체 니볼루맙(Bristol-Myers Squibb), 펨브롤리주맙(Merck), 세미플리맙(Sanofi 및 Regeneron), 아테졸리주맙(Roche), 더발루맙(AstraZeneca) 및 아벨루맙(Merck)을 포함한 면역 체크포인트의 특정 조절제가 현재 이용 가능한 한편, 다른 것들은 개발 중이다.
일부 구체예에서, 본 명세서에 기재된 치료 방법은 개체의 암으로부터의 생검이 암이 PD-L1 양성임을 나타낼 때 PD1 및 PD-L1 억제제의 투여를 포함한다. PD-L1 상태를 결정하는 방법은 당업계에 알려져 있으며 현재 출원의 실시예 6은 PD-L1 상태를 결정하기 위한 FDA 승인 제품을 참조한다. 일부 구체예에서, 암으로부터의 세포의 적어도 1%가 PD-L1을 발현할 때 개체는 PD-L1 양성인 것으로 간주된다. 일부 구체예에서, 암으로부터의 세포의 적어도 10%가 PD-L1을 발현할 때 개체는 PD-L1 양성인 것으로 간주된다. 일부 구체예에서, 암으로부터의 세포의 적어도 50%가 PD-L1을 발현할 때 개체는 PD-L1 양성인 것으로 간주된다. 개체 종양에서 다른 면역 체크포인트의 상태를 결정하기 위해 유사한 어세이를 수행할 수 있다.
본 발명의 일 양상에서, 본 명세서에 기재된 치료제는 (i) 자극성(공동자극성 포함) 수용체의 작용제 또는 (ii) T 세포에 대한 억제(공동 억제 포함) 신호에 대한 길항제인 면역항암제(immuno-oncology agent)와 조합되는데, 이들 둘 다 항원 특이적 T 세포 반응을 증폭시키는 것이다. 특정 자극 및 억제 분자는 면역글로불린 슈퍼 패밀리(IgSF)의 구성원이다. 공동 자극 또는 공동 억제 수용체에 결합하는 막 결합 리간드의 한 가지 중요한 패밀리는 B7 패밀리인데, 이는 B7-1, B7-2, B7-H1(PD-L1), B7-DC(PD-L2), B7-H2(ICOS-L), B7-H3, B7-H4, B7-H5(VISTA) 및 B7-H6를 포함한다. 공동자극 또는 공동억제 수용체에 결합하는 막 결합 리간드의 또 다른 패밀리는 동일기원(cognate)의 TNF 수용체 패밀리 구성원에 결합하는 분자의 TNF 패밀리인데, 이는 CD40 및 CD4OL, OX-40, OX-40L, CD70, CD27L, CD30, CD3OL, 4-1BBL, CD137(4-1BB), TRAIL/Apo2-L, TRAILR1/DR4, TRAILR2/DR5, TRAILR3, TRAILR4, OPG, RANK, RANKL, TWEAKR/Fn14, TWEAK, BAFFR, EDAR, XEDAR, TACI, APRIL, BCMA, LT13R, LIGHT, DcR3, HVEM, VEGI/TL1A, TRAMP/DR3, EDAR, EDA1, XEDAR, EDA2, TNFR1, 림포톡신 a/TNF13, TNFR2, TNFa, LT13R, 림프톡신 a1132, FAS, FASL, RELT, DR6, TROY, NGFR을 포함한다.
또 다른 양상에서, 면역항암제는 T 세포 활성화를 억제하는 사이토카인(예를 들어, IL-6, IL-10, TGF-B, VEGF 및 기타 면역억제 사이토카인) 또는 T 세포 활성화를 자극하는 사이토카인인데, 이는 면역 반응을 자극하기 위한 것이다.
일 양상에서, T 세포 반응은 본 명세서에 기재된 치료제 및 하나 이상의 (i) T 세포 활성화를 억제하는 단백질의 길항제(예를 들어, 면역 체크포인트 억제제) 예컨대 CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, TIM-3, 갈렉틴 9, CEACAM-1, BTLA, CD69, 갈렉틴-1, TIGIT, CD113, GPR56, VISTA, 2B4, CD48, GARP, PD1H, LAIR1, TIM-1 및 TIM-4, 및/또는 (ii) T 세포 활성화를 자극하는 단백질의 작용제 예컨대 B7-1, B7-2, CD28, 4-1BB(CD137), 4-1BBL, ICOS, ICOS-L, OX40, OX4OL, GITR, GITRL, CD70, CD27, CD40, DR3 및 CD2와 조합에 의해 자극될 수 있다. 암 치료를 위해 본 명세서에 기재된 치료제와 조합될 수 있는 다른 제제는 NK 세포 상의 억제 수용체의 길항제 또는 NK 세포 상의 활성화 수용체의 작용제를 포함한다. 예를 들어, 본 명세서의 화합물은 리릴루맙과 같은 KIR의 길항제와 조합될 수 있다.
조합 요법을 위한 또 다른 제제는 RG7155 (W011/70024, W011/107553, W011/131407, W013/87699, W013/119716, W013/132044) 또는 FPA-008 (W011/140249; W013169264; W014/036357)을 포함하는 CSF-1R 길항제 항체와 같이 CSF-1R 길항제를 포함하지만 이제 제한되지는 않는 대식세포 또는 단핵구를 억제하거나 고갈시키는 제제를 포함한다.
또 다른 양상에서, 본 명세서에 기재된 단백질/수용체를 표적화하는 개시된 제제는 하나 이상의, 양성 공동자극 수용체를 결찰(ligate)하는 작용제, 억제 수용체를 통한 신호전달을 약화(attenuate)시키는 차단제, 길항제, 및 하나 이상의, 항종양 T 세포의 빈도를 전신적으로 증가시키는 제제, 종양 미세환경 내에서 뚜렷한 면역 억제 경로를 극복(예: 억제 수용체 결합(예: PD-L1/PD-1 상호작용 차단), Treg를 고갈시키거나 억제(예: 항-CD25 단일클론 항체(예를 들어, 다클리주맙)를 사용하거나 생체외(exo vivo) 항-CD25 비드 고갈에 의해), 또는 T 세포 아네르기 또는 고갈을 역전/방지)하는 제제, 및 종양 부위에서 선천적 면역 활성화 및/또는 염증을 유발하는 제제 중 하나 이상과 함께 사용될 수 있다.
일 양상에서, 면역항암제는 CTLA-4 길항제, 예컨대 길항 CTLA-4 항체이다. 적합한 CTLA-4 항체에는 예를 들어 YERVOY(이필리무맙) 또는 트레멜리무맙이 포함된다.
또 다른 양상에서, 면역항암제는 PD-1 길항제, 예컨대 길항 PD-1 항체이다. 적합한 PD-1 항체는 예를 들어 OPDIVO(니볼루맙), KEYTRUDA(펨브롤리주맙), MEDI-0680(AMP-514; W02012/145493), BGB-108, GB-226, PDR-001, mDX-400, SHR-1210, IBI-308, PF-06801591을 포함한다. 면역항암제에는 PD-1 결합에 대한 특이성에 의문이 제기되었지만 피딜리주맙(CT-011)도 포함될 수 있다. PD-1 수용체를 표적화하기 위한 또 다른 접근법은 AMP-224라고 하는 IgG1의 Fc 부분에 융합된 PD-L2(B7-DC)의 세포외 도메인으로 구성된 재조합 단백질이다.
또 다른 양상에서, 면역항암제는 PD-L1 길항제, 예컨대 길항 PD-L1 항체이다. 적합한 K PD-L1 항체는 예를 들어 MPDL3280A(RG7446; W02010/077634), 더발루맙(MEDI4736), 아테졸리주맙, 아벨루맙, BMS-936559 (W02007/005874), MSB0010718C (W02013/79174), KD-033, CA-327, CA-170, ALN-PDL, TSR-042, 및 STI-1014을 포함한다.
또 다른 양상에서, 면역종양제는 길항 LAG-3 항체와 같은 LAG-3 길항제이다. 적합한 LAG3 항체는 예를 들어 BMS-986016(W010/19570, W014/08218), 또는 IMP-731 또는 IMP-321(W008/132601, W009/44273)을 포함한다.
또 다른 양상에서, 면역항암제는 CD137(4-1BB) 작용제, 예를 들어 작용적인 CD137 항체이다. 적합한 CD137 항체는 예를 들어 우렐루맙 및 PF-05082566(W012/32433)을 포함한다.
또 다른 양상에서, 면역항암제는 GITR 작용제, 예를 들어 작용적인 GITR 항체이다. 적합한 GITR 항체는 예를 들어 BMS-986153, BMS-986156, TRX-518(W006/105021, W009/009116) 및 MK-4166(W011/028683)을 포함한다.
또 다른 양상에서, 면역항암제는 OX40 작용제, 예를 들어 작용적인 OX40 항체이다. 적합한 OX40 항체는 예를 들어 MEDI-6383 또는 MEDI-6469를 포함한다.
또 다른 양상에서, 면역항암제는 OX40 길항제, 예를 들어 길항적인 OX40 항체이다. 적합한 OX4OL 길항제는 예를 들어 RG-7888(W006/029879)을 포함한다.
또 다른 양상에서, 면역항암제는 CD40 작용제, 예컨대 작용적인 CD40 항체이다. 또 다른 구체예에서, 면역항암제는 CD40 길항제, 예를 들어 길항제 CD40 항체이다. 적합한 CD40 항체는 예를 들어 루카투무맙 또는 다세투주맙을 포함한다.
또 다른 양상에서, 면역항암제는 CD27 작용제, 예컨대 작용적인 CD27 항체이다. 적합한 CD27 항체는 예를 들어 바르릴루맙을 포함한다.
또 다른 양상에서, 면역항암제는 MGA271(B7H3에 대해)(W011/109400)이다.
투여량(Dosing)
아데노신의 세포외 생산을 표적으로 하는 제제 및/또는 본 개시내용의 수용체 중 하나의 아데노신에 의한 활성화를 길항하는 제제는 예를 들어 투여 목적(예: 원하는 해결 정도); 제제가 투여되는 개체의 연령, 체중, 성별 및 건강 및 신체 상태; 투여 경로; 및 질병, 장애, 이의 상태 또는 증상의 성질에 의존적인 양으로 개체에 투여할 수 있다. 투여 요법은 또한 투여되는 제제(들)와 관련된 임의의 부작용의 존재, 성질, 및 정도를 고려할 수 있다. 효과적인 투여량 및 투여 요법은 예를 들어 안전성 및 투여량 증량 실험, 생체내 연구(예: 동물 모델), 및 통상의 기술자에게 공지된 기타 방법으로부터 용이하게 결정할 수 있다.
일반적으로, 투여 매개변수는 투여량이 개체에게 비가역적으로 독성이 있을 수 있는 양(최대 허용 용량(MTD)) 미만이고 개체에 대해 측정 가능한 효과를 생성하는 데 필요한 양 초과이어야 함을 지시한다. 이러한 양은 예를 들어 투여 경로 및 기타 요인을 고려하여 ADME와 관련된 약동학적 및 약력학적 매개변수에 의해 결정된다.
유효 용량(ED)은 그것을 복용하는 개체의 일부에서 치료 반응 또는 원하는 효과를 생성하는 제제의 용량 또는 양이다. 제제의 "중간 유효 용량" 또는 ED50은 그것이 투여되는 집단의 50%에서 치료 반응 또는 원하는 효과를 생성하는 작용제의 용량 또는 양이다. ED50은 일반적으로 약제 효과에 대한 합리적인 기대의 척도로 사용되지만, 반드시 모든 관련 요소를 고려하여 임상의가 적절하다고 판단할 수 있는 용량일 필요는 없다. 따라서 어떤 상황에서는 유효량이 계산된 ED50보다 많고, 다른 상황에서는 유효량이 계산된 ED50보다 작으며, 또 다른 상황에서는 유효량이 계산된 ED50과 동일하다.
또한, 본 명세서에 기재된 치료제를 표적으로 하는 작용제의 유효 용량은 개체에게 1회 이상의 용량으로 투여될 때 건강한 개체에 비해 원하는 결과를 생성하는 양일 수 있다. 예를 들어, 특정 장애를 경험하는 개체의 경우, 유효 용량은 해당 장애의 진단 매개변수, 척도, 마커 등을 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90%, 또는 90% 초과 개선하는 것일 수 있으며, 여기서 100%는 정상 개체가 나타내는 진단 매개변수, 척도, 마커 등으로 정의된다.
특정 구체예에서, 본 명세서에 기재된 치료제는 하루 당 개체 체중의 약 0.01 mg/kg 내지 약 50 mg/kg, 또는 약 1 mg/kg 내지 약 25 mg/kg의 투여량 수준으로 원하는 치료 효과를 얻기 위해 하루에 한 번 이상 (예를 들어, 경구로) 투여될 수 있다.
경구 제제의 투여를 위해, 조성물은 1.0 내지 1000 밀리그램의 활성 성분, 특히 1.0, 3.0, 5.0, 10.0, 15.0, 20.0, 25.0, 50.0, 75.0, 100.0, 150.0, 200.0, 250.0, 300.0, 400.0, 500.0, 600.0, 750.0, 800.0, 900.0, 및 1000.0 밀리그램의 활성 성분을 함유하는 정제, 캡슐 등의 형태로 제공될 수 있다.
경구 투여에 추가하여, 본 명세서에 기재된 특정 제제에 대한 적합한 투여 경로는 비경구(예를 들어, 근육내, 정맥내, 피하(예를 들어, 주사 또는 임플란트), 복강내, 수조내, 관절내, 복강내, 뇌내(실질내) 및 뇌실내) 및 안내를 포함한다. 일반적으로 피하 또는 근육내로 투여되는 데포 주사는 정의된 기간에 걸쳐 본 명세서에 기재된 제제를 방출하기 위해 사용될 수도 있다.
특정 구체예에서, 본 명세서에 기재된 원하는 치료제의 투여량은 "단위 투여 형태"에 함유된다. "단위 투여 형태"라는 어구는 물리적으로 분리된 단위를 나타내며, 각 단위는 원하는 효과를 생성하기에 충분한, 단독으로 또는 하나 이상의 추가 제제와 조합하여 본 명세서에 기재된 미리 결정된 양의 치료제를 함유한다. 단위 투여 형태의 매개변수는 특정 제제 및 달성되는 효과에 의존할 것이라는 것이 이해될 것이다.
키트 및 검출 방법
본 개시내용은 또한 본 명세서에 기재된 치료제, 및 그의 약학적 조성물을 포함하는 키트를 고려한다. 키트는 일반적으로 아래에 설명된 바와 같이 다양한 구성요소를 수용하는 물리적 구조의 형태이며, 예를 들어 위에 설명된 방법을 실행하는 데 사용될 수 있다.
키트는 본원에 개시된 화합물 중 하나 이상을 포함할 수 있으며(예를 들어, 멸균 용기에 제공됨), 이는 개체에 투여하기에 적합한 약학적 조성물의 형태일 수 있다. 본 명세서에 기재된 화합물은 사용 준비가 된 형태(예를 들어, 정제 또는 캡슐) 또는 예를 들어 투여 전에 재구성 또는 희석을 필요로 하는 형태(예를 들어, 분말)로 제공될 수 있다. 본 명세서에 기재된 화합물이 사용자에 의해 재구성되거나 희석될 필요가 있는 형태인 경우, 키트는 또한 본 명세서에 기재된 화합물과 함께 또는 별도로 포장된, 희석제(예: 멸균수), 버퍼, 약학적으로 허용되는 부형제 등을 포함할 수 있다. 병용 요법이 고려되는 경우, 키트에는 여러 제제가 별도로 포함되거나 키트에 이미 조합되어 있을 수 있다. 키트의 각 구성 요소는 개별 용기에 포함될 수 있으며 다양한 컨테이너는 모두 단일 패키지에 포함될 수 있다. 본 발명의 키트는 그 안에 수용된 구성요소를 적절하게 유지하기 위해 필요한 조건을 위해 설계될 수 있다(예를 들어, 냉장 또는 냉동).
키트는 그 안에 있는 구성요소에 대한 식별 정보 및 사용 지침(예: 투여 매개변수, 작용 기전을 포함한 활성 성분(들)의 임상 약리학, 약동학 및 약력학, 유해 효과, 금기 사항 등)을 포함하는 라벨 또는 포장 삽입물을 함유한다. 레이블 또는 삽입물에는 로트 번호 및 만료 날짜와 같은 제조업체 정보가 포함될 수 있다. 라벨 또는 포장 삽입물은 예를 들어 구성 요소를 수용하는 물리적 구조에 통합되거나 물리적 구조 내에 별도로 포함되거나 키트의 구성 요소(예: 앰플, 튜브 또는 바이알)에 부착될 수 있다.
라벨 또는 삽입물은 디스크(예: 하드 디스크, 카드, 메모리 디스크), CD- 또는 DVD-ROM/RAM과 같은 광 디스크, DVD, MP3, 자기 테이프, 또는 RAM 및 ROM과 같은 전기 저장 매체 또는 이들 자기/광학 저장 매체와 같은 이들의 하이브리드, FLASH 매체 또는 메모리 유형 카드와 같은 컴퓨터 판독 가능 매체를 추가로 포함하거나 이에 통합될 수 있다. 일부 구체예에서, 실제 지침은 키트에 존재하지 않지만, 예를 들어 인터넷을 통해 원격 소스로부터 지침을 얻기 위한 수단이 제공된다.
가용성 CD73 키트 및 검출 방법.
특정 양상에서, 샘플에서 가용성 CD73(sCD73)을 측정하기 위한 키트가 또한 제공된다. 키트에는 sCD73 포획 항체와 표지된 sCD73 검출 항체가 포함되어 있다. 일부 구체예에서, 포획 항체는 7G2, Thermo Scientific #41-0200이다. 일부 구체예에서, 표지된 sCD73 검출 항체는 AD2 클론, BioLegend #344017이다.
일부 구체예에서, 표지된 sCD73 검출 항체는 비오틴화된 항체이고, 키트는 스트렙타비딘-서양고추냉이(horseradish) 퍼옥시다제, 및 서양고추냉이-퍼옥시다제에 의한 효소적 전환 후에 검출가능한 서양고추냉이 퍼옥시다제 기질을 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 서양고추냉이 퍼옥시다제 기질은 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘(TMB) 또는 2,2'-아지노-디-[3-에틸벤즈티아졸린-6-설폰산](ABTS)이다.
일부 구체예에서 키트는 코팅 버퍼, 세척 버퍼, 및 차단 버퍼 중 하나 이상을 추가로 포함한다. 일부 구체예에서 키트는 차단 버퍼를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 키트는 코팅 버퍼를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 키트는 세척 버퍼를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 코팅 버퍼는 약 0.2 M NaHCO3 버퍼, pH 9.6을 포함한다. 일부 구체예에서, 세척 버퍼는 PBS 중 약 0.1% Tween20을 포함한다. 일부 구체예에서, 차단 버퍼는 PBS 중 약 0.02% Tween20 + 1% 소 혈청 알부민 + 10㎍/ml 소 IgG + 10㎍/ml 마우스 IgG를 포함한다.
추가적인 양상에서는 샘플 내에서 가용성 CD73(sCD73)의 양을 측정하는 방법이 또한 제공된다. 상기 방법에는 다음이 포함된다,
a) 샘플을 고정된 항-CD73 항체와 접촉시켜 포획된 sCD73을 형성하는 단계,
b) 포획된 sCD73을 표지된 항-CD73 항체와 접촉시켜 샌드위치된 sCD73을 형성하는 단계(여기서, 표지된 항-CD73 항체는 고정된 항-CD73 항체보다는 sCD73의 상이한 부분에 결합함);
c) 감지 가능한 신호를 생성하기 위해 샌드위치된 sCD73을 영상화액(imaging solution)과 접촉
d) 감지 가능한 신호를 측정.
일부 구체예에서, 포획 항체는 7G2, Thermo Scientific #41-0200이다. 일부 구체예에서, 표지된 sCD73 검출 항체는 AD2 클론, BioLegend #344017이다.
단계 a)는 고정된 항-CD73 항체와 샘플 내의 sCH73 사이에 포획 sCD73 복합체를 형성하기 위한 인큐베이션 시간을 포함한다. 이것은 몇 분으로부터, 약 1시간, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8시간 이상 또는 하룻밤 사이 중 어디에든 있을 수 있다. 더 긴 시간도 허용된다. 단계 a)와 마찬가지로, 단계 b)는 몇 분으로부터, 약 1시간, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8시간 이상 또는 하룻밤 사이 범위일 수 있는 인큐베이션 시간을 포함한다. 일부 구체예에서, 단계 b)의 인큐베이션 시간은 약 1시간이다. 단계 a) 및 b)와 유사하게, 단계 c)도 또한 몇 분으로부터, 약 1시간, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8시간 이상 또는 하룻밤 사이 범위일 수 있는 인큐베이션 시간을 포함한다. 일부 구체예에서, 단계 c)의 인큐베이션 시간은 약 1시간이다.
일부 구체예에서, 상기 방법은 단계 a), 단계 b), 및 단계 c) 후에 세척 버퍼를 사용한 하나 이상의 세척 단계를 추가로 포함한다. 세척은 전형적으로 원하는 인큐베이션 시간 후에 수행된다. 일부 구체예에서, 세척 버퍼는 PBS 중 약 0.1% Tween20을 포함한다.
일부 구체예에서, 방법은 차단 버퍼를 더 포함한다. 일부 구체예에서, 차단 버퍼는 단계 a) 이전에 샘플에 포함된다. 일부 구체예에서, 차단 버퍼는 또한 단계 b)에서 표지된 항-CD73 항체와 함께 포함된다. 일부 실시양태에서 차단 버퍼는 또한 단계 c)에서 영상화 용액에 포함된다. 일부 구체예에서, 차단 버퍼는 PBS 중 약 0.02% Tween20 + 1% 소 혈청 알부민 + 10㎍/ml 소 IgG + 10㎍/ml 마우스 IgG를 포함한다.
ELISA 어세이에 유용한 많은 영상화 용액이 있다. 표지된 항-CD73 항체의 표지의 정체는 적절한 영상화 용액을 결정할 것이다. 전형적으로 영상화 용액은 형광성 또는 화학발광성인 시약 또는 기질을 포함한다. 예를 들어, 표지된 항-CD73 항체의 표지가 비오틴인 경우, 영상화 용액은 조합하여 검출 가능한 신호를 형성할 수 있거나 기질을 효소적으로 감지 가능한 신호로 전환하는 형광단 또는 부가제에 접합하는 아비딘 또는 스트렙타빈을 일반적으로 포함한다. 일부 구체예에서, 아바딘 또는 비오틴은 서양고추냉이 퍼옥시다제에 접합된다. 서양고추냉이 퍼옥시다제(HRP)에 의해 전환될 때 신호를 형성하는 서양고추냉이 퍼옥시다제(HRP)의 적절한 기질로는 3,3',5,5'-테트라메틸벤지딘(TMB) 또는 2,2'-아지노-디-[3-에틸벤즈티아졸린-6-설폰산]이 포함된다(ABTS).
일부 구체예에서, 샘플은 혈액이다. 일부 구체예에서, 샘플은 혈액 샘플로부터 단리된 혈청이다. 일부 구체예에서, 샘플은 혈액 샘플로부터 단리된 혈장이다.
통상의 기술자는 상이한 아데노신 기구 단백질의 수준이 유사한 샌드위치 ELISA 방법을 사용하여 측정될 수 있음을 인식할 것이다.
가용성 아데노신 모노포스페이트(AMP) 가수분해 활성 키트 및 검출 방법.
추가적인 양상에서, 샘플에서 CD73 매개 및/또는 TNAP 매개 아데노신 모노포스페이트(AMP) 가수분해 활성을 측정하기 위한 키트가 또한 제공된다. 일부 구체예에서, 샘플에서 CD73 매개 아데노신 모노포스페이트(AMP) 가수분해 활성을 측정하기 위한 키트는 CD73 억제제 및 AMP-GloTM를 포함한다. 일부 구체예에서, 샘플에서 TNAP 매개 아데노신 모노포스페이트(AMP) 가수분해 활성을 측정하기 위한 키트는 TNAP 억제제 및 AMP-GloTM를 포함한다.
일부 구체예에서, 본 명세서에 기재된 키트는 아데노신 데아미나제 억제제, SAH 데히드롤라제 억제제 및 ADK 억제제를 추가로 포함한다. 이러한 억제제는 샘플에서 배경 아데노신 분해를 줄이는 데 도움이 될 수 있다. 일부 구체예에서, 아데노신 데아미나제 억제제는 EHNA이다. 일부 구체예에서, SAH 데히드롤라제 억제제는 아리스트로마이신이다. 일부 구체예에서, ADK 억제제는 요오도투베리시딘이다.
일부 구체예에서, 키트는 아데노신 모노포스페이트(AMP)를 추가로 포함한다.
추가적인 양상에서는 샘플에서 CD73 매개된 아데노신 모노포스페이트(AMP) 가수분해 활성을 결정하는 방법이 또한 제공된다. 그 방법은 다음을 포함한다,
a) 샘플을 CD73 억제제, 아데노신 모노포스페이트(AMP), 및 AMP-GloTM와 접촉시켜 CD73i 샘플을 형성하는 단계;
b) 샘플의 개별 분취량을 아데노신 모노포스페이트(AMP), 및 AMP-GloTM와 접촉시켜 기저선(baseline) 샘플을 형성하는 단계;
c) CD73i 샘플 및 기저선 샘플에 대해 특정된 시간 기간 후에 종료 RLU 신호를 측정하는 단계; 및
d) 샘플에서 CD73 매개 AMP 가수분해 활성을 결정하기 위해 CD73i 샘플에 대한 종료 RLU 및 기저선 샘플 사이의 차이를 평가하는 단계.
추가적인 양상에서는 샘플에서 TNAP 매개된 아데노신 모노포스페이트(AMP) 가수분해 활성을 측정하는 방법이 또한 제공된다. 상기 방법은 다음을 포함한다,
a) 샘플을 TNAP 억제제, 아데노신 모노포스페이트(AMP), 및 AMP-GloTM와 접촉시켜 TNAPi 샘플을 형성하는 단계;
b) 샘플의 개별 분취량을 아데노신 모노포스페이트(AMP), 및 AMP-GloTM와 접촉시켜 기저선(baseline) 샘플을 형성하는 단계;
c) TNAPi 샘플 및 기저선 샘플에 대해 특정된 시간 기간 후에 종료 RLU 신호를 측정하는 단계; 및
d) 샘플에서 TNAP 매개 AMP 가수분해 활성을 결정하기 위해 TNAPi 샘플에 대한 종료 RLU 및 기저선 샘플 사이의 차이를 평가하는 단계.
일부 구체예에서, CD73i 샘플, TNAPi 샘플, 및 기저선 샘플은 아데노신 데아미나제 억제제, 아리스트로마이신 데히드롤라제 억제제, 및 ADK 억제제 중 하나 이상을 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, CD73i 샘플 및/또는 TNAPi 샘플은 아데노신 데아미나제 억제제, SAH 데히드롤라제 억제제, 및 ADK 억제제를 추가로 포함한다. 일부 구체예에서, 아데노신 데아미나제 억제제는 EHNA이다. 일부 구체예에서, SAH 데히드롤라제 억제제는 아리스트로마이신이다. 일부 구체예에서, ADK 억제제는 요오도투베리시딘이다.
종료 RLU 신호를 측정하기 위한 특정 시간 주기는 많은 인자에 의존한다. 이들 중 가장 중요한 것은 샘플에 포함된 AMP의 양이다(단계 a 및 b)인데, 이는 RLU가 특정된 시간 기간 후에 남은 AMP의 측정값이기 때문이다. 25 μM AMP를 사용하는 경우 일반적으로 몇 분 정도의 반응 시간으로 측정 가능한 신호 변화를 충분히 볼 수 있다. 일부 구체예에서, 특정된 시간 기간은 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15분 이상이다. 일부 구체예에서, 특정된 시간 기간은 8분이다.
일부 구체예에서, 샘플은 혈액이다. 일부 구체예에서, 샘플은 혈청이다. 일부 구체예에서, 샘플은 혈장이다.
I. 실시예
하기 실시예는 본 발명을 제조하고 사용하는 방법에 대한 완전한 개시 및 설명을 통상의 기술자에게 제공하기 위해 제시되며, 본 발명자들이 자기의 발명으로 간주하는 것의 범위를 제한하도록 의도되지 않으며, 아래의 실험이 수행되었거나 수행될 수 있는 모든 실험임을 나타내려는 의도도 아니다. 현재 시제로 기술된 예시적인 설명이 반드시 수행된 것은 아니며, 그 설명이 그 안에 설명된 성질의 데이터 등을 생성하기 위해 수행될 수 있음을 이해해야 한다. 사용된 숫자(예: 양, 온도 등)와 관련하여 정확성을 보장하기 위해 노력했지만 일부 실험 오류 및 편차를 고려해야 한다.
실시예 1 - 샌드위치 ELISA를 통한 인간 혈액 내 가용성 CD73의 양 측정
샌드위치 ELISA를 통해 인간 혈액 내 가용성 CD73의 양을 결정하는 방법은 미세역가 플레이트의 웰을 코팅하는 포획 항체, 관심 분석물을 함유하는 샘플, 세척 버퍼, 및 결합된 표적을 감출하는 데 사용되는 제2 비오틴-접합 항체를 포함한다. 비오틴화된 항체의 2차 검출은 HRP-스트렙타비딘에 이어 비색 또는 화학발광 기질을 사용하여 수행된다. CD73 ELISA 분석의 원리는 도 1에 요약되어 있다.
재료 및 방법
시약 및 장비
■ sCD73 포획 항체 (7G2, Thermo Scientific #41-0200)
■ 코팅 버퍼:
■ 0.2M NaHCO3 버퍼, pH 9.6 (Thermo Scientific #28382)
■ 세척 버퍼:
■ PBS 중 0.1% Tween20
■ 차단 버퍼:
■ PBS 중 0.02% Tween20 + 1% 소 혈청 알부민 + 10 μg/ml 소 IgG (Jackson ImmunoResearch #001-000-003) + 10 μg/ml 마우스 IgG (Jackson ImmunoResearch #015-000-003)
■ CD73 단백질 표준
■ 비오틴화 sCD73 검출 항체 (AD2 클론, BioLegend #344017)
■ 스트렙타비딘-서양고추냉이 퍼옥시다제 (Thermo Scientific #21130)
■ 화학발광 ELISA 시약 (Thermo Scientific #37069)
■ 96웰 마이크로타이터 플레이트, 평평한 바닥, 흰색, 고결합성 폴리스티렌 (Costar #3922)
■ 플레이트용 접착 포일 씰
■ EnVision 플레이트 리더
프로토콜
코팅 플레이트:
1. 마이크로타이터 플레이트의 웰을 4℃에서 항-sCD73 mAb(2 μg/ml, 100 μl)로 밤새 코팅한다. 인큐베이션을 위해 플레이트를 밀봉한다.
2. PBS 중 0.1% Tween 20으로 웰을 4회 세척한다(Tween/PBS, 각 세척 350 μl).
3. 실온에서 최소 4시간 동안 차단 버퍼(200μl)로 차단한다.　
4. 웰을 4회 세척한다.
- 즉시 플레이트를 사용하거나 웰의 세척 버퍼로 단단히 밀봉하고 4℃에서 보관한다.
엘리사 어세이:
1. 차단 용액에서 각 샘플을 희석(또는 샘플 및 표준에 대한 희석 시리즈 생성)한 다음 각 샘플(100μl)을 웰에 추가한다.
2. 플레이트를 밀봉하고 4℃에서 밤새 배양한다.　
3. 웰을 4회 세척한다.
4. 비오틴화 항-CD73 mAb(0.5 μg/ml, 차단 용액 중 100 μl)를 추가한다.
5. 플레이트를 밀봉하고 실온에서 1시간 동안 인큐베이트한다.　
6. 웰을 4회 세척한다.
7. 웰에 스트렙타비딘-서양고추냉이 퍼옥시다제 (100 μl, 차단 용액 중 1:10000 희석)를 추가한다.
8. 실온에서 1시간 동안 다시 인큐베이트한다.　
9. 웰을 4회 세척한다.
10. 제조업체의 지침에 따라 화학발광 ELISA 시약으로 현상한다.
a. Luminol/Enhancer와 Stable Peroxide Solution을 균등한은 부(parts)로 혼합한다(용액은 실온에서 24시간 동안 안정적임-어두운 곳에 보관).
b. 각 웰에 작업 용액 100 μl를 추가한다.
c. 1000 xg에서 2분 동안 플레이트를 회전시켜 모든 기포를 제거한다.
d. 발광계로 웰에서 화학발광 반응의 강도를 측정한다(1~5분 범위가 최적).
데이터 분석
EnVision 플레이트 판독기의 원시 발광 데이터를 표준 곡선에 대해 보간하여 절대 sCD73 수준을 결정한다. 각각의 희석되지 않은 샘플의 농도는 희석 시리즈의 모든 웰로부터 계산되고 이들 값은 희석 선형성을 평가하기 위해 서로 비교된다.
상기 기재된 분석을 사용하여, 건강 기증자로부터의 혈청 및 나트륨 헤파린 혈장을 평가하여 가용성 CD73을 측정하였다. 도 2a에 도시된 바와 같이, 측정은 높은 상관관계를 보였다. 어세이의 정량적 범위를 결정하기 위해 샘플의 병렬 평가를 수행했다. 도 2b는 이 어세이가 허용 가능한 어세이 병렬성을 입증한다는 것을 보여준다. 도 2c는 건강한 개체와 암이 있는 개체 간의 혈청 sCD73의 비교를 나타낸다. CD73 수준은 건강 기증자보다 암 환자에서 일반적으로 더 높았다.
실시예 2 - AMP-Glo 가수분해 분석을 통한 인간 혈액 내 가용성 CD73 및/또는 TNAP의 양 측정
현재 설명된 어세이는 혈액 샘플에서 AMP의 가수분해 활성의 양이 CD73 및/또는 TNAP로 인한 것인지 결정할 수 있게 한다. 이것은 25 μM의 AMP, CD73 및/또는 TNAP 억제제가 있는 상태에서 AMP-GloTM 어세이를 사용하여 달성된다. AMP-Glo TM는 AMP를 생성하는 생화학적 반응에서 발광 신호를 생성하는 균질한 생화학적 어세이이다. AMP Glo 어세이의 원리는 도 3a에 요약되어 있다.
재료 및 방법
시약
■ CD73 억제제 (화합물 A)
■ AMP-GloTM (Cat. No. V5011, Promega Corporation)
■ PBS - 인산염 버퍼 식염수 (Cat No. 10010023, Gibco)
■ TNAP 억제제 칵테일:
■ 625μM TNAP 억제제 (CAS 496014-13-2, Calbiochem)
■ 10 μM EHNA, 아데노신 데아미나제 억제제 (Cat. No. E114-25 mg, Sigma)
■ 4 μM 아리스트로마이신, SAH 데히드롤라제 억제제 (Cat. No. SC-233890, Chem Cruz)
■ 10 μM 5-요오도투베리시딘, ADK 억제제 (Cat. No. I100-5MG, Sigma)
재료 및 장비
■ 96웰 어세이 플레이트 (Cat No. 3992, Corning)
■ EnVision 판독기
인간 혈청에서 AMP 가수분해 활성의 결정
건강한 지원자 및 암 환자 전혈로부터 분리된 혈청을 -80℃에서 보관하였다. 각 기증자의 혈청 50μl를 4 = x 500ul 분취량으로 옮겼다. 샘플은 다음 조건으로 a-d로 라벨링된다. a) 화합물 A 없음, TNAP 억제제 칵테일 없음, b) 10μM 화합물 A, TNAP 억제제 칵테일 없음, c) 화합물 A 없음, TNAP 억제제 칵테일 포함, d) 10μM 화합물 A, TNAP 억제제 칵테일 포함. 조건 c 및 d에는 TNAP 억제제 칵테일 1:200(0.25μL)을 첨가하고(0.25μL) 조건 b 및 d(10μM 화합물 A 포함)에는 1mM 화합물 A 용액 1:100을 첨가한다(최종 농도는 10 μM). 그런 다음 샘플을 혼합하고 1시간 동안 37℃에서 인큐베이트한 다음 샘플을 18 μL/well에 있어서 25 μM AMP의 최종 농도로 2 μL을 포함하는 저용량 96 웰 AMP GloTM 분석 플레이트로 옮긴다. 다중 채널 피펫을 사용하여 샘플을 6-10회 혼합하고 실온에서 8분 동안 인큐베이트한 후 키트에 제공된 R1 용액 20μL로 반응을 중지한다. 인간 혈청에 CD73 억제제를 첨가하지 않고 어세이에서 최상의 창(window)을 제공한 AMP 스파이크-인 후 시점을 결정하기 위한 일련의 실험에 따라 8분 시점이 선택되었다. 샘플이 R1과 혼합되면 미리 준비된 R2 용액 + AMP glo 시약을 웰당 40μL로 웰에 추가한다. 최종 반응 혼합물은 발광을 측정하기 위해 Wallac EnVision Reader에서 판독하기 전에 30분 동안 인큐베이션된다.
AMP Glo 어세이의 데이터 분석
AMP Glo 어세이로부터의 데이터는 여러 방식으로 분석될 수 있다. 원시 데이터는 Envision Reader의 RLU(Raw Luminescence Units) 형식이다. 데이터는 RLU 값, AMP 잔여량의 백분율(0분에 비해 8분 반응 시간 종료 시 AMP 잔여량), 가수분해 활성(시험 샘플의 RLU와, TNAP 억제제 유/무로 최대 CD73 억제제를 함유한 웰 비교)로서 제시될 수 있다.
전술한 어세이를 사용하여, 건강한 지원자 혈청을 CD73 및/또는 TNAP 억제제의 존재 하에 시험하였고, 측정된 발광(RLU) 값을 도 3b에 나타내었다. 건강한 개체 및 암을 가진 개체에서 CD73의 가수분해 활성 퍼센트와 CD73 단백질 농도 사이의 상관관계는 도 3c에 도시되어 있다.
실시예 3 - 면역염색을 사용하여 CD73 및/또는 TNAP의 양 결정
Cell Signaling Technology의 항-NT5E/CD73 D7F9A 항체 클론 및 Sino Biological의 항알칼리성 포스파타제/ALPL R034 항체 클론을 사용하여 항원 검색(retrieval) 후 포르말린 고정 파라핀 포매(FFPE) 조직에서 엑토 5' 뉴클레오티다제(CD73) 및 조직 비특이적 알칼리 포스파타제(TNAP) 단백질을 검출했다. 단일체(singleplex) 항체 얼룩에 대한 검출은 서양고추냉이 퍼옥시다제(HRP)에 접합된 항-토끼 IgG 및 3,3'-디아미노벤지딘(DAB)의 발색 침착을 사용하여 수행되었다. CD73 및 TNAP 둘 모두의 동시 검출은 상기 항체 클론을 사용하는 다중 형광 어세이로 수행되었고 HRP는 형광 발색원을 침착시키는 데 사용되었다. 양성 염색 면적, 양성 염색 세포의 백분율, H-점수, 결합 양성 점수(CPS), 및 종양 비율 점수(TPS)의 계산은 이미지 분석 프로그램을 사용하여 계산되었다. 단일체 발색 염색을 위해 QuPath Quantitative Pathology & Bioimage Analysis 프로그램을 사용했다. 다중 형광을 위해 Indica labs의 HALO 소프트웨어가 사용되었다. 5a-d 및 6a-d는 각각 CD73 및 TNAP에 대한 면역염색의 대표적인 이미지를 보여준다. 도 5e 및 도 6e는 총 종양 면적의 백분율로서 CD73 및 TNAP의 염색 면적의 정량화를 플롯한다. 도 5f는 염색 면적 백분율과 H-점수 사이의 상관관계를 플롯한다.
실시예 4 - CD73, TNAP, 또는 기타 아데노신 기구 mRNA의 양 결정
Qiagen RNeasy FFPE 키트(#73504)를 사용하여 포르말린 고정 파라핀 포매(FFPE) 조직으로부터 RNA 추출을 수행한다. 조직 절편은 메스를 사용하여 현미경 슬라이드에서 긁어내거나 절편을 미세원심분리기 튜브에 직접 넣는다. nCounter SPRINT 프로파일러상에서 nCounter 종양학 또는 면역학 패널을 사용하여 추출된 RNA로 NanoString 분석을 수행한 다음 nSolver 소프트웨어 패키지를 사용하여 분석한다. Real-time PCR은 Applied Biosystems QuantStudio 6 Flex Real-time PCR 시스템에서 Taqman 프로브를 사용하여 추출된 FFPE RNA에서 생성된 cDNA에 대해 수행된다.
실시예 5 - 개체에서 종양 돌연변이 부담(TMB) 결정
본 명세서에 기재된 개체에서 종양 돌연변이 부담(TMB)을 결정하는 방법은 Goodman et al.Tumor Mutational Burden as an Independent Predictor of Response to Immunotherapy in Diverse Cancers. Mol Cancer Ther. (2017). 16(11):2598-2608에 발행되어 있다.
실시예 6 - 개체의 PD-L1 상태 결정
개체의 PD-L1 상태를 결정하기 위해 알려진 많은 방법이 있다. 한 가지 유용한 방법은 FDA 승인 PD-L1 IHC 22C3 pharmDx 장치와 Dako North America, Inc.에서 개발한 방법을 사용하는 것이다.
실시예 7 - 동위원소 AMP 가수분해 어세이를 사용하여 CD73 및/또는 TNAP의 양 결정
어세이 설계
인간 혈장에서 CD73의 활성은 13C5-AMP에서 13C5-아데노신으로의 탈인산화를 모니터링하는 LC-MS/MS 방법을 사용하여 시험관내(in vitro)에서 평가되었다. 억제제 칵테일은 신경 조직 비특이적 알칼리성 포스파타제(TNAP)를 차단하고 13C5-아데노신을 안정화시키기 위해 사용하였는데, 이는 2,5-디메톡시-N-(퀴놀린-3-일)벤젠설폰아미드 (TNAP 억제제), 에리트로-9-(2-하이드록시-3-노닐)아데닌 (EHNA, 아데노신 데아미나제 억제제), 5-요오도투베르시딘 (아데노신 키나제 억제제) 및 아리스테로마이신 (S-아데노실-L-호모시스테인 히드롤라제 억제제)로 구성되었다.
IC50 값은 비선형 회귀 분석에 의해 추정되었다.
어세이 조건
pH 7.4에서 인간 혈장(50μL)을 CD73 억제제(화합물 A)(0 내지 10μM) 및 EHNA(10μM), 디메톡시-N-(퀴놀린-3-일)벤젠설폰아미드(625μM), 5-요오도투베르시딘(10 μM), 및 아리스테로마이신(4 μM)과 함께 1시간 동안 사전 인큐베이션하였다. 반응은 5 μM 13C5-AMP로 개시되었고, 진탕 수조내 37℃에서 1분 동안 진행되었다. 내부 표준물질(cIMP, 5ng/mL)을 포함하는 0.4M 과염소산 4부피를 첨가하여 반응을 종결시켰다. 샘플을 15분 동안 볼텍싱한 다음 10℃에서 4,200 rpm으로 20분 동안 원심분리했다. 분석 방법 섹션에 설명된 대로 상청액을 LC-MS/MS로 분석했다.
분석 방법 및 데이터 분석
질량 분석기 획득 및 통합은 Applied Biosystems-Sciex Analyst 소프트웨어(버전 1.6.3)로 수행되었다.
장비:
■ API 4000 질량 분석기(Applied Biosystems, Foster City, CA)
■ API 6500 질량 분석기(Applied Biosystems, Foster City, CA)
■ Shimadzu Nexera X2 UHPLC 시스템(Shimadzu Scientific Instruments, Canby, OR)
컬럼: Atlantis dC18, 100Å, 3.0Х100 mm, 3 μm(Waters, Milford, MA)
주입부피: 0.5 μL
유속: 0.80mL/분
HPLC 구배:
Figure pct00013
이온화 모드: 전자분무(ESI)
검출 모드: 양성 MRM(Q1/Q3 전환: 13C5-아데노신의 경우 m/z 273.14/136.10; cIMP의 경우 m/z 330.98/137.10)
CD73 억제제가 없는 샘플의 분석은 샘플에서 CD73의 활성에 대한 정보를 제공한다.　 CD73 억제제 및/또는 TNAP 억제제로 동일한 평가를 수행하면 AMP의 TNAP 매개 탈인산화에 대한 CD73의 상대적 기여도를 평가할 수 있다.
CD73 억제제의 적정을 사용하여, IC50 값은 GraphPad Prism 버전 5.0(GraphPad Software Inc., San Diego, CA)에 포함된 알고리즘을 사용하여 다음 4-매개변수 방정식(가변 기울기 포함)에 데이터를 맞춤으로써 추정되었다. :
Figure pct00014
2명의 지원자로부터의 대표적인 IC50 값은 도 7a 내지 도 7c 뿐만 아니라 하기 표 1에 나타내었다.
표 1: 인간 혈장(IC50)에서 CD73에 대한 화합물 A의 억제 효능
Figure pct00015
본 발명을 수행하기 위해 본 발명자들에게 알려진 최상의 모드를 포함하여 본 발명의 특정 구체예가 본 명세서에 설명된다. 전술한 설명을 읽으면 개시된 구체예의 변형이 해당 기술 분야에서 일하는 개인에게 명백해질 수 있으며, 숙련된 기술자가 이러한 변형을 적절하게 사용할 수 있을 것으로 예상된다. 따라서, 본 발명은 여기에 구체적으로 기술된 것과는 다르게 실시되고, 본 발명은 적용 가능한 법률이 허용하는 바에 따라 여기에 첨부된 청구범위에 인용된 주제의 모든 수정 및 균등물을 포함하도록 의도된다. 또한, 본 명세서에서 달리 나타내지 않거나 문맥상 명백하게 모순되지 않는 한, 모든 가능한 변형에서 전술한 요소의 임의의 조합은 본 발명에 포함된다.
본 명세서에 인용된 모든 간행물, 특허 출원, 수탁 번호, 및 기타 참고 문헌은 마치 각각의 개별 간행물 또는 특허 출원이 참조로 통합되는 것으로 구체적이고 개별적으로 표시된 것처럼 본 명세서에 참조로서 통합된다.

Claims (78)

  1. 아데노신 A2a 수용체(A2aR) 및/또는 아데노신 A2b 수용체(A2bR) 길항제 및 CD73 억제제로 구성된 군으로부터 선택된 치료제를 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 확립된 아데노신 지문을 갖는 개체에서 암을 치료하는 방법으로서,
    여기서, 상기 개체의 암이 하기로 이루어지는 군에서 선택된 적어도 하나의 특징을 가질 때, 상기 개체에게 CD73 억제제가 투여되고:
    (i) 개체로부터의 혈액 내 가용성 CD73 농도의 증가(여기서, 상기 증가는 동일한 유형의 암을 가진 개체로부터의 혈액 내 CD73의 전형적인 농도에 대해 상대적임);
    (ii) AMP 가수분해 어세이에 의해 결정된, 개체로부터의 혈액 내 CD73 활성의 증가(여기서, 상기 증가는 동일한 유형의 암을 가진 개체로부터의 혈액 내 CD73의 전형적인 AMP 가수분해 활성에 대해 상대적임);
    (iii) CD73에 대한 면역염색에 의해 결정된, CD73 양의 증가를 나타내는 개체의 암으로부터의 생검(여기서, 상기 증가는 동일한 유형의 암을 가진 개체로부터의 생검에서 CD73의 전형적인 양에 대해 상대적임);
    (iv) mRNA 수준에 의해 결정된, CD73의 상향조절을 나타내는 개체의 암으로부터의 생검(여기서, 상기 상향조절은 동일한 유형의 암을 가진 개체으로부터의 생검에서 CD73의 전형적인 양에 대해 상대적임);
    여기서, 개체의 암이 하기로 이루어지는 군에서 선택된 적어도 하나의 특징을 가질 때 개체에게 아데노신 A2a 수용체(A2aR) 또는 아데노신 A2b 수용체(A2bR) 길항제를 투여하는 것인 방법:
    (a) 개체로부터의 혈액 내 TNAP 농도의 증가(여기서, 상기 증가는 동일한 유형의 암을 가진 개체으로부터의 혈액 내 TNAP의 전형적인 농도에 대해 상대적임);
    (b) AMP 가수분해 어세이에 의해 측정된, 개체로부터의 혈액 내 TNAP 활성의 증가(여기서 상기 증가는 동일한 유형의 암을 가진 개체로부터의 혈액 내 TNAP의 전형적인 AMP 가수분해 활성에 대해 상대적임);
    (c) TNAP에 대한 면역염색에 의해 결정된, TNAP의 양의 증가를 나타내는 개체의 암으로부터의 생검(여기서 상기 증가는 동일한 유형의 암을 갖는 개체로부터의 생검에서 TNAP의 전형적인 양에 대해 상대적임);
    (d) mRNA 수준에 의해 결정된, TNAP의 상향조절을 나타내는 개체의 암으로부터의 생검(여기서 상기 상향조절은 동일한 유형의 암을 가진 개체로부터의 생검에서 TNAP의 전형적인 양에 대해 상대적임).
  2. 청구항 1에 있어서, 개체의 암이 (i) 내지 (iv)로 구성된 군으로부터 선택된 특징 중 적어도 2개를 가질 때 개체에게 CD73 억제제가 투여되고;
    개체의 암이 (a) 내지 (d)로 구성된 군으로부터 선택된 특징 중 적어도 2개를 가질 때 개체에게 아데노신 A2a 수용체(A2aR) 또는 아데노신 A2b 수용체(A2bR) 길항제가 투여되는 것인 방법.
  3. 청구항 1에 있어서, 개체의 암이 (i) 내지 (iv)로 구성된 군으로부터 선택된 특징 중 적어도 3개를 가질 때 개체에게 CD73 억제제가 투여되고;
    개체의 암이 (a) 내지 (d)로 구성된 군으로부터 선택된 특징 중 적어도 3개를 가질 때 개체에게 아데노신 A2a 수용체(A2aR) 또는 아데노신 A2b 수용체(A2bR) 길항제가 투여되는 것인 방법.
  4. 청구항 1에 있어서, 개체의 암이 (i) 내지 (iv)로 구성된 군으로부터 선택된 특징 중 적어도 4개를 가질 때 개체에게 CD73 억제제가 투여되고;
    개체의 암이 (a) 내지 (d)로 구성된 군으로부터 선택된 특징 중 적어도 4개를 가질 때 개체에게 아데노신 A2a 수용체(A2aR) 또는 아데노신 A2b 수용체(A2bR) 길항제가 투여되는 것인 방법.
  5. 청구항 1 내지 청구항 4 중 어느 한 항에 있어서, 개체의 암이 (i) 내지 (iv) 및 (a) 내지 (d) 각각으로부터 선택된 특징 중 적어도 1개, 2개, 3개, 또는 4개를 나타낼 때 단지 아데노신 A2a 수용체(A2aR) 또는 아데노신 A2b 수용체(A2bR) 길항제가 투여되는 것인 방법.
  6. 청구항 1 내지 청구항 4 중 어느 한 항에 있어서, 개체의 암이 (i) 내지 (iv) 및 (a) 내지 (d) 각각으로부터 선택된 특징 중 적어도 1개, 2개, 3개, 또는 4개를 나타낼 때 아데노신 A2a 수용체(A2aR) 및/또는 아데노신 A2b 수용체(A2bR) 길항제 모두가 투여되는 것인 방법.
  7. 청구항 1 내지 청구항 6 중 어느 한 항에 있어서, 개체로부터의 혈액 내 가용성 CD73의 농도 증가가 1ng/mL의 역치 값보다 높은 것인 방법.
  8. 청구항 7에 있어서, 개체로부터의 혈액 내 가용성 CD73의 농도가 3ng/mL의 역치 값보다 높은 것인 방법.
  9. 청구항 1 내지 청구항 8 중 어느 한 항에 있어서, 개체로부터의 혈액에서 CD73 및/또는 TNAP의 활성 증가가 AMP-Glo 가수분해 어세이에 의해 결정되고 역치 값 초과이고, 상기 CD73 및/또는 TNAP 매개 AMP 가수분해의 역치 값은 개체의 혈액에서의 총 AMP 가수분해 활성의 적어도 10%인 것인 방법.
  10. 청구항 9에 있어서, CD73 및/또는 TNAP 매개 AMP 가수분해의 역치 값이 개체의 혈액에서의 총 AMP 가수분해 활성의 적어도 20%인 방법.
  11. 청구항 1 내지 청구항 9 중 어느 한 항에 있어서, 면역염색에 의해 결정된, CD73 및/또는 TNAP의 양의 증가는 동일한 유형의 암을 갖는 개체로부터의 생검에서 CD73 및/또는 TNAP의 평균 양을 초과하는 측정값인 것인 방법.
  12. 청구항 1 내지 청구항 9 중 어느 한 항에 있어서, 면역염색에 의해 결정된, CD73 및/또는 TNAP의 양의 증가는 역치 값 초과이며, 상기 역치 값은 적어도 7%의 CD73 및/또는 TNAP 염색 면적인 것인 방법.
  13. 청구항 1 내지 청구항 12 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 수준에 의해 결정된, 개체의 생검에서의 CD73 및/또는 TNAP의 상향조절은 동일한 유형의 암을 갖는 개체로부터의 생검에서 CD73 및/또는 TNAP mRNA의 평균 양을 초과하는 측정값인 것인 방법.
  14. 청구항 1 내지 청구항 13 중 어느 한 항에 있어서, 개체로부터의 혈액에서 CD73 및/또는 TNAP의 활성 증가가 동위원소 AMP 가수분해 어세이에 의해 결정되고 역치 값 초과이며, 상기 CD73 및 /또는 TNAP 매개 AMP 가수분해의 역치 값은 개체로로의 혈액에서 총 AMP 가수분해 활성의 적어도 10%인 것인 방법.
  15. 청구항 14에 있어서, CD73 및/또는 TNAP 매개 AMP 가수분해의 역치 값이 개체로의 혈액에서 총 AMP 가수분해 활성의 적어도 20%인 것인 방법.
  16. 청구항 1 내지 청구항 15 중 어느 한 항에 있어서, 개체로부터의 혈액에서 가용성 CD73 또는 TNAP의 농도는 샌드위치 효소-연결 면역 흡착 어세이 (ELISA)에 의해 결정되는 것인 방법.
  17. 청구항 1 내지 청구항 16 중 어느 한 항에 있어서, 혈액 내 가용성 CD73의 농도, 혈액 내 TNAP의 농도, 혈액 내 CD73 매개 아데노신 모노포스페이트 (AMP) 가수분해 활성, 및/또는 혈액 내 TNAP 매개 AMP 가수분해 활성을 결정하기 위해 사용하는 혈액은 혈장 또는 혈청인 것인 방법.
  18. 청구항 1 내지 청구항 17 중 어느 한 항에 있어서, 아데노신 A2a 수용체(A2aR) 및/또는 아데노신 A2b 수용체(A2bR) 길항제가 하기 화학식 (I)
    Figure pct00016
    (I)
    또는 그의 약학적으로 허용되는 염, 수화물, 또는 용매화물을 갖는 것인 방법으로서, 여기서,
    G1은 N 또는 CR3a이고;
    G2는 N 또는 CR3b이고;
    G3은 N 또는 CR3c이고;
    R3a, R3b, 및 R3c는 각각 독립적으로 H 또는 C1-3알킬이고;
    R1a 및 R1b는 각각 다음으로 구성된 군에서 각각 독립적으로 선택되고:
    i) H
    ii) 1-3개의 R5치환기로 선택적으로 치환된 C1-8알킬,
    iii) 1-3개의 R5치환기로 선택적으로 치환된 -X1-O-C1-8알킬,
    iv) -C(O)-R6,
    v) 1-3개의 R7치환기로 선택적으로 치환된 Y,
    vi) 1-3개의 R7 치환기로 선택적으로 치환된 -X1-Y; 또는
    vii) R1a 및 R1b는 이들이 부착된 질소와 함께 1-3개의 R8 치환기로 선택적으로 치환된 5 내지 6원 헤테로시클로알킬 고리를 형성하고, 여기서 헤테로시클로알킬은 O, N, 및 S 로 구성된 군으로부터 선택된 0-2개의 추가 헤테로원자 고리 꼭짓점을 가지고;
    각각의 Y는 C3-8시클로알킬 또는 O, N 및 S로 구성된 군으로부터 선택된 1-3개의 헤테로원자 고리 꼭짓점을 갖는 4 내지 6원 헤테로시클로알킬이고;
    R2 및 R4는 각각 독립적으로 H 또는 C1-3알킬이고;
    Ar1은 페닐 또는 5 내지 6원 헤테로아릴이고, 이들 각각은 1-3개의 R9로 선택적으로 치환되고;
    Ar2는 페닐 또는 5 내지 6원 헤테로아릴이고, 이들 각각은 1-3개의 R10으로 선택적으로 치환되고;
    여기서, Ar1 및 Ar2의 5 내지 6원 헤테로아릴은 각각 독립적으로 O, N, 및 S로 구성된 군으로부터 선택된 1-3개의 헤테로원자 고리 꼭짓점을 갖고;
    각각의 X1은 C1-6알킬렌이고;
    각각의 R5는 히드록실, C3-8시클로알킬, 페닐, -O-페닐, -C(O)ORa 및 옥소로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R6은 C1-8알킬 또는 Y이고, 이들 각각은 히드록실, -O-페닐, 페닐, 및 -O-C1-8알킬로 구성된 군으로부터 선택된 1-3개의 치환기로 선택적으로 치환되고;
    각각의 R7은 C1-8알킬, 히드록실, -O-C1-8알킬, 옥소, 및 C(O)ORa로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R8은 C1-8알킬, 히드록실, 및 옥소로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R9는 C1-8알킬, -O-C1-8알킬, -X1-O-C1-8 알킬, -O-X1-O-C1-8 알킬, -X1-O-X1-O-C1-8 알킬, -C(O)ORa, 할로겐, 시아노, -NRbRc, Y, -X1-C3-8시클로알킬, 및 -X2-Z로 구성된 군에서 선택되고, 여기서 X2는 C1-6알킬렌, -C1-6알킬렌-O-, -C(O)-, 및 -S(O)2-로 구성된 군으로부터 선택되고, Z는 O, N, 및 S로 구성된 군으로부터 선택된 1-3개의 헤테로원자 고리 꼭짓점을 갖는 4 내지 6-원 헤테로시클로알킬이고, 여기서 상기 R9 치환기 각각은 1-3개의 R11로 선택적으로 치환되고;
    각각의 R10은 C1-8알킬, 할로, 시아노, -O-C1-8알킬, -X1-O-C1-8알킬, -O-X1-O-C1-8알킬, -S(O)2-C1-6알킬, -C(O)NRdRe, 및 O, N, 및 S로 구성된 군으로부터 선택된 1-3개의 헤테로원자 고리 꼭짓점을 갖는 4-6-원 헤테로아릴로 구성된 군에서 독립적으로 선택되고, 여기서 상기 R10 치환기 각각은 1-3개의 R12로 선택적으로 치환되거나, 또는 Ar2의 인접한 고리 꼭짓점상에서 두 개의 R10이 선택적으로 조합되어 1-2개의 할로겐으로 선택적으로 치환된 5원 헤테로시클릭 고리를 형성하고;
    각각의 R11은 히드록실, 할로, 시아노, -NRdRe, -C(O)ORa, 페닐, C3-8시클로알킬, 및 C(O)ORa로 선택적으로 치환된 C1-4알킬로 구성된 군에서 독립적으로 선택되고;
    각각의 R12는 할로, 시아노, 히드록시, -C(O)ORa로 구성된 군에서 독립적으로 선택되고; 및
    각각의 Ra는 H 또는 C1-6알킬이고;
    각각의 Rb 및 Rc는 H, C1-8알킬, -S(O)2-C1-6알킬, -C(O)ORa, 및 -X1-C(O)ORa로 구성된 군에서 독립적으로 선택되고;
    각각의 Rd 및 Re는 H, C1-8알킬, -S(O)2-C1-6알킬로 구성된 군에서 독립적으로 선택되고;
    단, G1 및 G2가 각각 N이고, G3이 CH이고, R2가 CH3이고, R1a 및 R1b가 각각 H인 경우, Ar2는 2-티에닐, 페닐, 2-, 3- 또는 4-메톡시페닐, 3- 또는 4-할로페닐, 2,4-디메톡시페닐, 2,4-디클로로페닐 또는 2- 또는 4-메틸페닐이 아닌 것인 방법.
  19. 청구항 18에 있어서, 아데노신 A2a 수용체(A2aR) 또는 아데노신 A2b 수용체(A2bR) 길항제가 화합물 1
    Figure pct00017
    (화합물 1)
    또는 그의 약학적으로 허용되는 염인 것인 방법.
  20. 청구항 18에 있어서, 아데노신 A2a 수용체(A2aR) 또는 아데노신 A2b 수용체(A2bR) 길항제가 화합물 2
    Figure pct00018
    (화합물 2)
    또는 그의 약학적으로 허용되는 염인 것인 방법.
  21. 청구항 18에 있어서, 아데노신 A2a 수용체(A2aR) 또는 아데노신 A2b 수용체(A2bR) 길항제가 화합물 3
    Figure pct00019
    (화합물 3)
    또는 그의 약학적으로 허용되는 염인 것인 방법.
  22. 청구항 1 내지 청구항 17 중 어느 한 항에 있어서, 아데노신 A2a 수용체(A2aR) 및/또는 아데노신 A2b 수용체(A2bR) 길항제가 AZD4635, Ciforadenant(CPI-444), NIR178, 및 PBF-1129로 구성된 군에서 선택되는 것인 방법.
  23. 청구항 1 내지 청구항 17 중 어느 한 항에 있어서, CD73 억제제가 화학식 (i)
    Figure pct00020
    (i)
    또는 그의 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 용매화물이고, 여기서,
    각각의 R1은 수소, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, 선택적으로 치환된 아릴 및 -C(R2R2)-OC(O)-OR3로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 2개의 R1 기가 선택적으로 조합되어 5- 내지 7원 고리를 형성하고;
    각각의 R2는 H 및 선택적으로 치환된 C1-C6알킬로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R3은 H, C1-C6알킬, 및 선택적으로 치환된 아릴로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
    R5는 H 및 선택적으로 치환된 C1-C6알킬로 구성된 군으로부터 선택되고;
    X는 O, CH2, 및 S로 구성된 군으로부터 선택되고;
    A는 다음으로 구성된 군에서 선택되고:
    Figure pct00021

    각각은 1 내지 5개의 R6치환기로 선택적으로 치환되고, 여기서 아래첨자 n은 0 내지 3의 정수이고;
    Z는 CH2, CHR6, NR6, 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고;
    각각의 R6은 H, CH3, OH, CN, F, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, 및 OC(O)-C1-C6 알킬로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고; 선택적으로 인접한 고리 꼭짓점에 있는 2개의 R6기는 함께 연결되어 고리 꼭짓점으로서 적어도 하나의 헤테로원자를 갖는 5- 내지 6-원 고리를 형성하고; 및
    Het은 다음으로 구성된 군에서 선택되고:
    Figure pct00022

    여기서 물결선은 화합물의 나머지 부분에 대한 부착점을 나타내고, 여기서:
    Ra는 H, NH2, NHR7, NHC(O)R7, NR7R7, R7, OH, SR7 및 OR7로 구성된 군으로부터 선택되고;
    Rb는 H, 할로겐, NH2, NHR7, NR7R7, R7, OH, 및 OR7로 구성된 군으로부터 선택되고;
    Rc 및 Rd는 H, 할로겐, 할로알킬, NH2, NHR7, NR7R7, R7, OH, OR7, SR7, SO2R7, -X1-NH2, -X1-NHR7, -X1-NR7R7, -X1-OH, -X1-OR7, -X1-SR7 및 -X1-SO2R7로 구성된 군에서 독립적으로 선택되고;
    Re 및 Rf는 H, 할로겐, 및 선택적으로 치환된 C1-C6알킬로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 X1은 C1-C4알킬렌이고; 및
    각각의 R7은 선택적으로 치환된 C1-C10 알킬, 선택적으로 치환된 C2-C10 알케닐, 선택적으로 치환된 C2-C10 알키닐, 선택적으로 치환된 C3-C7 시클로알킬, 선택적으로 치환된 C3-C7 시클로알킬C1-C4알킬, 선택적으로 치환된 4-7원 시클로헤테로알킬, 선택적으로 치환된 4-7원 시클로헤테로알킬C1-C4알킬, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 아릴C1-C4알킬, 선택적으로 치환된 아릴C2-C4알케닐, 선택적으로 치환된 아릴C2-C4알키닐, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴C1-C4알킬, 선택적으로 치환된 헤테로아릴C1-C4알케닐, 선택적으로 치환된 헤테로아릴C2-C4알키닐로 구성된 군에서 선택되고, 및 선택적으로 질소 원자에 부착된 2개의 R7 기가 함께 연결되어 아릴 고리에 선택적으로 융합된 4- 내지 7-원 헤테로시클릭 고리를 형성하고;
    단, 상기 화합물은 X, A 및 Het의 조합이 하기 화학식을 유발하는 화합물은 아니고:
    Figure pct00023

    여기서 Rg는 H이거나 또는 2개의 Rg 기가 결합되어 아세토나이드를 형성하고; 및 양쪽 모두의 경우에서
    (1) Rc 및 Re는 수소이고 Ra는 -OEt, -OCH2Ph, -SCH2Ph, -NH2, 메틸아미노, 에틸아미노, 디메틸아미노, 디에틸아미노, N-메틸-N-에틸아미노, 페닐아미노, 벤질아미노, 2-페닐에틸아미노, N-벤질 -N-에틸아미노, 디벤질아미노, 4-아미노벤질아미노, 4-클로로벤질아미노, 4-니트로벤질아미노, 또는 4-설파모일벤질아미노이고; 또는
    (2) Rc는 수소이고, Ra는 -NH2이고, Re는 브로모, 클로로, 아미노메틸, 또는 티오에틸이고; 또는
    (3) Rc 는 수소이고, Ra 는 벤질아미노이고, Re 는 브로모인 것인 방법.
  24. 청구항 23에 있어서, CD73 억제제가 화합물 A
    Figure pct00024
    (화합물 A)
    또는 그의 약학적으로 허용되는 염인 것인 방법.
  25. 청구항 23에 있어서, CD73 억제제가 화합물 B
    Figure pct00025
    (화합물 B)
    또는 그의 약학적으로 허용되는 염인 것인 방법.
  26. 청구항 23에 있어서, CD73 억제제가 화합물 C
    Figure pct00026
    (화합물 C)
    또는 그의 약학적으로 허용되는 염인 것인 방법.
  27. 청구항 1 내지 청구항 17 중 어느 한 항에 있어서, CD73 억제제가 올레클루맙(MEDI-9447), CPI-006, NZV930/SRF373, BMS-986179, 및 TJ4309로 구성된 군으로부터 선택된 것인 방법.
  28. 청구항 1 내지 청구항 27 중 어느 한 항에 있어서, 개체의 암으로부터의 생검이 그 암이 PD-L1 양성이라는 것을 나타낼 때 그 개체에게 PD1 억제제 및/또는 PD-L1 억제제를 투여하는 것을 더 포함하는 것인 방법.
  29. 청구항 28에 있어서, PD1 및/또는 PD-L1 억제제가 펨브롤리주맙, 니볼루맙, MEDI-0680, BGB-108, GB-226, PDR-001, mDX-400, SHR-1210, IBI-308, PF-06801591, 아테졸리주맙, 더발루맙, 아벨루맙, BMS-936559, KD-033, CA-327, CA-170, ALN-PDL, TSR-042, 및 STI-1014으로 구성된 군으로부터 선택된 것인 방법.
  30. 청구항 28에 있어서, PD1 및/또는 PD-L1 억제제가 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 아테졸리주맙, 더발루맙 및 아벨루맙으로 구성된 군으로부터 선택된 것인 방법.
  31. 청구항 1 내지 청구항 30 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체가 총 엑솜 시퀀싱(WES)에 의해 결정된, 2.0 미만의 종양 돌연변이 부하(tumor mutation burden, TMB)를 가질 때 개체에게 화학요법제를 투여하는 것을 더 포함하는 것인 방법.
  32. 청구항 31에 있어서, 화학요법제가 백금계 또는 안트라사이클린계 화학요법제를 포함하는 것인 방법.
  33. 청구항 32에 있어서, 화학요법제가 시스플라틴, 카르보플라틴, 옥살리플라틴, 및 독소루비신으로 구성된 군으로부터 선택된 것인 방법.
  34. 청구항 1 내지 청구항 33 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 전립선, 결장, 직장, 췌장, 자궁경부, 위, 자궁내막, 뇌, 간, 방광, 난소, 고환, 머리, 목, 피부(흑색종 및 기저선암 포함), 중피세포, 백혈구(림프종 및 백혈병 포함), 식도, 유방(삼중 음성 유방암 포함), 근육, 결합 조직, 폐(소세포 폐암 및 비소세포 폐암 포함), 부신, 갑상선, 신장 또는 뼈의 암; 또는 교모세포종, 중피종, 신세포암종, 위암종, 육종(카포시 육종 포함), 융모막암종, 피부 기저선세포암종 또는 고환 정액종인 것인 방법.
  35. 아데노신의 세포외 생성을 표적으로 하고 및/또는 아데노신 수용체 중 하나의 아데노신에 의한 활성화를 길항하는 치료제를 개체에게 투여하는 단계를 포함하는, 확립된 아데노신 지문을 갖는 개체에서 암을 치료하는 방법으로서,
    여기서 개체의 암은 다음으로 구성된 군으로부터 선택되는 특징 중 적어도 하나를 가지는 것인 방법:
    (i) 개체로부터의 혈액 내 하나 이상의 아데노신 기구 단백질 농도의 증가 (여기서, 상기 증가는 동일한 유형의 암을 가진 개체로부터의 혈액 내 하나 이상의 아데노신 기구 단백질의 전형적인 농도에 대해 상대적임);
    (ii) AMP 가수분해 어세이에 의해 결정된, 개체로부터의 혈액에서 CD73 또는 TNAP의 활성 증가(여기서, 상기 증가는 동일한 유형의 암을 가진 개체로부터의 혈액에서 CD73 및/또는 TNAP의 전형적인 AMP 가수분해 활성에 대해 상대적임);
    (iii) 하나 이상의 아데노신 기구 단백질에 대한 면역염색에 의해 결정된, 하나 이상의 아데노신 기구 단백질의 양의 증가를 나타내는 개체의 암으로부터의 생검(여기서, 상기 증가는 동일한 유형의 암을 가진 개체의 생검에서 하나 이상의 아데노신 기구 단백질의 전형적인 양에 대해 상대적임); 및
    (iv) mRNA 수준에 의해 결정되는, 하나 이상의 아데노신 기구 단백질의 상향조절을 나타내는 개체의 암으로부터의 생검 (여기서, 상기 상향조절은 동일한 유형의 암을 가진 개체로부터의 생검에서 하나 이상의 아데노신 기구 단백질의 전형적인 양에 대해 상대적임).
  36. 청구항 35에 있어서, 상기 암이 (i) 내지 (iv)로부터 선택된 적어도 2개의 특징을 갖는 것인 방법.
  37. 청구항 35에 있어서, 상기 암이 (i) 내지 (iv)로부터 선택된 적어도 3개의 특징을 갖는 것인 방법.
  38. 청구항 35에 있어서, 상기 암이 (i) 내지 (iv)로부터 선택된 적어도 4개의 특징을 갖는 것인 방법.
  39. 청구항 35 내지 청구항 38 중 어느 한 항에 있어서, 특징 (i) 내지 (iv)의 어느 하나 중 하나 이상의 아데노신 기구 단백질이 CD73 또는 TNAP인 것인 방법.
  40. 청구항 35 내지 청구항 39 중 어느 한 항에 있어서, 개체로부터의 혈액 내 하나 이상의 아데노신 기구 단백질 농도의 증가는 동일한 유형의 암을 가진 개체의 혈액 내 하나 이상의 아데노신 기구 단백질 중 어느 하나의 평균 농도를 초과하는 측정값인 것인 방법.
  41. 청구항 35 내지 청구항 40 중 어느 한 항에 있어서, 개체로부터의 혈액 내 CD73 및/또는 TNAP의 활성 증가가 AMP-Glo 가수분해 어세이에 의해 결정되고 역치 값 초과이고, 상기 CD73 및/또는 TNAP 매개 AMP 가수분해의 역치값은 개체로부터의 혈액에서 총 AMP 가수분해 활성의 적어도 10%인 것인 방법.
  42. 청구항 41에 있어서, 상기 CD73 및/또는 TNAP 매개 AMP 가수분해의 역치값은 개체의 혈액에서 총 AMP 가수분해 활성의 적어도 20%인 것인 방법.
  43. 청구항 35 내지 청구항 42 중 어느 한 항에 있어서, 면역염색에 의해 결정되는, 하나 이상의 아데노신 기구 단백질 농도의 증가는 동일한 유형의 암을 가진 개체의 생검에서 하나 이상의 아데노신 기구 단백질 중 어느 하나의 평균 양을 초과하는 측정값인 것인 방법.
  44. 청구항 35 내지 청구항 43 중 어느 한 항에 있어서, mRNA 수준에 의해 결정되는, 개체로부터의 생검에서 하나 이상의 아데노신 기구 단백질의 상향조절은 동일한 유형의 암을 가진 개체의 생검에서 하나 이상의 아데노신 기구 단백질 중 어느 하나의 평균 양을 초과하는 측정값인 것인 방법.
  45. 청구항 35 내지 청구항 44 중 어느 한 항에 있어서, 개체로부터의 혈액 내 CD73 및/또는 TNAP의 활성 증가는 동위원소 AMP 가수분해 어세이에 의해 결정되고 역치 값 초과이며, 상기 CD73 및/또는 TNAP 매개 AMP 가수분해의 역치 값은 개체의 혈액에서 총 AMP 가수분해 활성의 적어도 10%인 방법.
  46. 청구항 45에 있어서, 상기 CD73 및/또는 TNAP 매개 AMP 가수분해의 역치 값은 개체의 혈액에서 총 AMP 가수분해 활성의 적어도 20%인 것인 방법.
  47. 청구항 35 내지 청구항 46 중 어느 한 항에 있어서, 상기 개체에서의 혈액 내 하나 이상의 아데노신 기구 단백질의 농도는 샌드위치 효소-연결 면역 흡착 어세이법 (ELISA)에 의해 결정되는 것인 방법.
  48. 청구항 35 내지 청구항 47 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 아데노신 기구 단백질의 농도, 혈액 내 CD73 매개 아데노신 모노포스페이트(AMP) 가수분해 활성, 및/또는 TNAP 매개 AMP 가수분해 활성을 결정하기 위해 사용되는 혈액은 혈장 또는 혈청인 것인 방법.
  49. 청구항 35 내지 청구항 48 중 어느 한 항에 있어서, 아데노신의 세포외 생성을 표적으로 하는 약제가 조직-비특이적 알칼라인 포스파타제(TNAP) 억제제, CD73 억제제, 엑토뉴클레오티드 피로포스페이타제/포스포디에스테라제 1 (ENPP1) 억제제, CD38 억제제, 및 CD39 억제제로 구성된 군에서 선택되는 것인 방법.
  50. 청구항 35 내지 청구항 48 중 어느 한 항에 있어서, 그의 수용체 중 하나의 아데노신에 의한 활성화를 길항하는 약제가 아데노신 A1 수용체 (A1R) 길항제, 아데노신 A2a 수용체 (A2aR) 및/또는 아데노신 A2b 수용체 (A2bR) 길항제, 또는 아데노신 A3 수용체 길항제 (A3R)인 것인 방법.
  51. 청구항 35 내지 청구항 48 중 어느 한 항에 있어서, 아데노신의 수용체 중 하나의 아데노신에 의한 활성화를 길항하는 약제가 아데노신 A2a 수용체 (A2aR) 및/또는 아데노신 A2b 수용체 (A2bR) 길항제인 것인 방법.
  52. 청구항 51에 있어서, 아데노신 A2a 수용체(A2aR) 및/또는 아데노신 A2b 수용체(A2bR) 길항제가 하기 화학식 (I)
    Figure pct00027
    (I)
    또는 그의 약학적으로 허용되는 염, 수화물, 또는 용매화물을 갖는 것인 방법으로서, 여기서,
    G1은 N 또는 CR3a이고;
    G2는 N 또는 CR3b이고;
    G3은 N 또는 CR3c이고;
    R3a, R3b, 및 R3c는 각각 독립적으로 H 또는 C1-3알킬이고;
    R1a 및 R1b는 다음으로 구성된 군에서 각각 독립적으로 선택되고:
    i) H
    ii) 1-3개의 R5치환기로 선택적으로 치환된 C1-8알킬,
    iii) 1-3개의 R5치환기로 선택적으로 치환된 -X1-O-C1-8알킬,
    iv) -C(O)-R6,
    v) 1-3개의 R7치환기로 선택적으로 치환된 Y,
    vi) 1-3개의 R7 치환기로 선택적으로 치환된 -X1-Y; 또는
    vii) R1a 및 R1b는 이들이 부착된 질소와 함께 1-3개의 R8 치환기로 선택적으로 치환된 5 내지 6원 헤테로시클로알킬 고리를 형성하고, 여기서 헤테로시클로알킬은 O, N, 및 S 로 구성된 군으로부터 선택된 0-2개의 추가 헤테로원자 고리 꼭짓점을 가지고;
    각각의 Y는 C3-8시클로알킬 또는 O, N 및 S로 구성된 군으로부터 선택된 1-3개의 헤테로원자 고리 꼭짓점을 갖는 4 내지 6원 헤테로시클로알킬이고;
    R2 및 R4는 각각 독립적으로 H 또는 C1-3알킬이고;
    Ar1은 페닐 또는 5 내지 6원 헤테로아릴이고, 이들 각각은 1-3개의 R9로 선택적으로 치환되고;
    Ar2는 페닐 또는 5 내지 6원 헤테로아릴이고, 이들 각각은 1-3개의 R10으로 선택적으로 치환되고;
    여기서, Ar1 및 Ar2의 5 내지 6원 헤테로아릴은 각각 독립적으로 O, N, 및 S로 구성된 군으로부터 선택된 1-3개의 헤테로원자 고리 꼭짓점을 갖고;
    각각의 X1은 C1-6알킬렌이고;
    각각의 R5는 히드록실, C3-8시클로알킬, 페닐, -O-페닐, -C(O)ORa 및 옥소로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R6은 C1-8알킬 또는 Y이고, 이들 각각은 히드록실, -O-페닐, 페닐, 및 -O-C1-8알킬로 구성된 군으로부터 선택된 1-3개의 치환기로 선택적으로 치환되고;
    각각의 R7은 C1-8알킬, 히드록실, -O-C1-8알킬, 옥소, 및 C(O)ORa로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R8은 C1-8알킬, 히드록실, 및 옥소로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R9는 C1-8알킬, -O-C1-8알킬, -X1-O-C1-8 알킬, -O-X1-O-C1-8 알킬, -X1-O-X1-O-C1-8 알킬, -C(O)ORa, 할로겐, 시아노, -NRbRc, Y, -X1-C3-8시클로알킬, 및 -X2-Z로 구성된 군에서 선택되고, 여기서 X2는 C1-6알킬렌, -C1-6알킬렌-O-, -C(O)-, 및 -S(O)2-로 구성된 군으로부터 선택되고, Z는 O, N, 및 S로 구성된 군으로부터 선택된 1-3개의 헤테로원자 고리 꼭짓점을 갖는 4 내지 6-원 헤테로시클로알킬이고, 여기서 상기 R9 치환기 각각은 1-3개의 R11로 선택적으로 치환되고;
    각각의 R10은 C1-8알킬, 할로, 시아노, -O-C1-8알킬, -X1-O-C1-8알킬, -O-X1-O-C1-8알킬, -S(O)2-C1-6알킬, -C(O)NRdRe, 및 O, N, 및 S로 구성된 군으로부터 선택된 1-3개의 헤테로원자 고리 꼭짓점을 갖는 4-6-원 헤테로아릴로 구성된 군에서 독립적으로 선택되고, 여기서 상기 R10 치환기 각각은 1-3개의 R12로 선택적으로 치환되거나, 또는 Ar2의 인접한 고리 꼭짓점상에서 두 개의 R10가 선택적으로 조합되어 1-2개의 할로겐으로 선택적으로 치환된 5원 헤테로시클릭 고리를 형성하고;
    각각의 R11은 히드록실, 할로, 시아노, -NRdRe, -C(O)ORa, 페닐, C3-8시클로알킬, 및 C(O)ORa로 선택적으로 치환된 C1-4알킬로 구성된 군에서 독립적으로 선택되고;
    각각의 R12는 할로, 시아노, 히드록시, -C(O)ORa로 구성된 군에서 독립적으로 선택되고; 및
    각각의 Ra는 H 또는 C1-6알킬이고;
    각각의 Rb 및 Rc는 H, C1-8알킬, -S(O)2-C1-6알킬, -C(O)ORa, 및 -X1-C(O)ORa로 구성된 군에서 독립적으로 선택되고;
    각각의 Rd 및 Re는 H, C1-8알킬, -S(O)2-C1-6알킬로 구성된 군에서 독립적으로 선택되고; 및
    단, G1 및 G2가 각각 N이고, G3이 CH이고, R2가 CH3이고, R1a 및 R1b가 각각 H인 경우, Ar2는 2-티에닐, 페닐, 2-, 3- 또는 4-메톡시페닐, 3- 또는 4-할로페닐, 2,4-디메톡시페닐, 2,4-디클로로페닐 또는 2- 또는 4-메틸페닐이 아닌 것인 방법.
  53. 청구항 51에 있어서, 아데노신 A2a 수용체(A2aR) 또는 아데노신 A2b 수용체(A2bR) 길항제가 화합물 1
    Figure pct00028
    (화합물 1)
    또는 그의 약학적으로 허용되는 염인 것인 방법.
  54. 청구항 51에 있어서, 아데노신 A2a 수용체(A2aR) 또는 아데노신 A2b 수용체(A2bR) 길항제가 화합물 2
    Figure pct00029
    (화합물 2)
    또는 그의 약학적으로 허용되는 염인 것인 방법.
  55. 청구항 51에 있어서, 아데노신 A2a 수용체(A2aR) 또는 아데노신 A2b 수용체(A2bR) 길항제가 화합물 3
    Figure pct00030
    (화합물 3)
    또는 그의 약학적으로 허용되는 염인 것인 방법.
  56. 청구항 51에 있어서, 아데노신 A2a 수용체(A2aR) 및/또는 아데노신 A2b 수용체(A2bR) 길항제가 AZD4635, Ciforadenant(CPI-444), NIR178, 및 PBF-1129로 구성된 군에서 선택되는 것인 방법.
  57. 청구항 50에 있어서, 아데노신의 수용체 중 하나의 아데노신에 의한 활성화를 길항하는 약제가 A1R 길항제인 것인 방법.
  58. 청구항 50에 있어서, 그의 수용체 중 하나의 아데노신에 의한 활성화를 길항하는 약제가 A3R 길항제인 것인 방법.
  59. 청구항 59에 있어서, 아데노신의 세포외 생성을 표적으로 하는 치료제가 CD73 억제제인 것인 방법.
  60. 청구항 59에 있어서, CD73 억제제가 화학식 (i)
    Figure pct00031
    (i)
    또는 그의 약학적으로 허용되는 염, 수화물 또는 용매화물이고, 여기서,
    각각의 R1은 수소, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, 선택적으로 치환된 아릴 및 -C(R2R2)-OC(O)-OR3로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되거나, 또는 2개의 R1 기가 선택적으로 조합되어 5- 내지 7원 고리를 형성하고;
    각각의 R2는 H 및 선택적으로 치환된 C1-C6알킬로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 R3은 H, C1-C6알킬, 및 선택적으로 치환된 아릴로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
    R5는 H 및 선택적으로 치환된 C1-C6알킬로 구성된 군으로부터 선택되고;
    X는 O, CH2, 및 S로 구성된 군으로부터 선택되고;
    A는 다음으로 구성된 군에서 선택되고:
    Figure pct00032

    이들 각각은 1 내지 5개의 R6치환기로 선택적으로 치환되고, 여기서 아래첨자 n은 0 내지 3의 정수이고;
    Z는 CH2, CHR6, NR6, 및 O로 구성된 군으로부터 선택되고;
    각각의 R6은 H, CH3, OH, CN, F, 선택적으로 치환된 C1-C6 알킬, 및 OC(O)-C1-C6 알킬로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고; 선택적으로 인접한 고리 꼭짓점에 있는 2개의 R6기는 함께 연결되어 고리 꼭짓점으로서 적어도 하나의 헤테로원자를 갖는 5- 내지 6-원 고리를 형성하고; 및
    Het은 다음으로 구성된 군에서 선택되고:
    Figure pct00033

    여기서 물결선은 화합물의 나머지 부분에 대한 부착점을 나타내고, 여기서:
    Ra는 H, NH2, NHR7, NHC(O)R7, NR7R7, R7, OH, SR7 및 OR7로 구성된 군으로부터 선택되고;
    Rb는 H, 할로겐, NH2, NHR7, NR7R7, R7, OH, 및 OR7로 구성된 군으로부터 선택되고;
    Rc 및 Rd는 H, 할로겐, 할로알킬, NH2, NHR7, NR7R7, R7, OH, OR7, SR7, SO2R7, -X1-NH2, -X1-NHR7, -X1-NR7R7, -X1-OH, -X1-OR7, -X1-SR7 및 -X1-SO2R7로 구성된 군에서 독립적으로 선택되고;
    Re 및 Rf는 H, 할로겐, 및 선택적으로 치환된 C1-C6알킬로 구성된 군으로부터 독립적으로 선택되고;
    각각의 X1은 C1-C4알킬렌이고; 및
    각각의 R7은 선택적으로 치환된 C1-C10 알킬, 선택적으로 치환된 C2-C10 알케닐, 선택적으로 치환된 C2-C10 알키닐, 선택적으로 치환된 C3-C7 시클로알킬, 선택적으로 치환된 C3-C7 시클로알킬C1-C4알킬, 선택적으로 치환된 4-7원 시클로헤테로알킬, 선택적으로 치환된 4-7원 시클로시클로킬C1-C4알킬, 선택적으로 치환된 아릴, 선택적으로 치환된 아릴C1-C4알킬, 선택적으로 치환된 아릴C2-C4알케닐, 선택적으로 치환된 아릴C2-C4알키닐, 선택적으로 치환된 헤테로아릴, 선택적으로 치환된 헤테로아릴C1-C4알킬, 선택적으로 치환된 헤테로아릴C1-C4알케닐, 선택적으로 치환된 헤테로아릴C2-C4알키닐로 구성된 군에서 선택적으로 선택되고, 선택적으로 질소 원자에 부착된 2개의 R7 기가 함께 연결되어 선택적으로 아릴 고리에 융합된 4- 내지 7-원 헤테로시클릭 고리를 형성하고;
    단, 화합물은 X, A 및 Het의 조합이 하기 화학식을 유발하는 화합물은 아니고:
    Figure pct00034

    여기서 Rg는 H이거나 또는 2개의 Rg 기가 결합되어 아세토나이드를 형성하고; 양쪽 모두의 경우에서
    (1) Rc 및 Re는 수소이고 Ra는 -OEt, -OCH2Ph, -SCH2Ph, -NH2, 메틸아미노, 에틸아미노, 디메틸아미노, 디에틸아미노, N-메틸-N-에틸아미노, 페닐아미노, 벤질아미노, 2-페닐에틸아미노, N-벤질 -N-에틸아미노, 디벤질아미노, 4-아미노벤질아미노, 4-클로로벤질아미노, 4-니트로벤질아미노, 또는 4-설파모일벤질아미노; 또는
    (2) Rc는 수소이고, Ra는 -NH2이고, Re는 브로모, 클로로, 아미노메틸, 또는 티오에틸이고; 또는
    (3) Rc 는 수소이고, Ra 는 벤질아미노이고, Re 는 브로모인 것인 방법.
  61. 청구항 59에 있어서, CD73 억제제가 화합물 A
    Figure pct00035
    (화합물 A)
    또는 그의 약학적으로 허용되는 염인 것인 방법.
  62. 청구항 59에 있어서, CD73 억제제가 화합물 B
    Figure pct00036
    (화합물 B)
    또는 그의 약학적으로 허용되는 염인 것인 방법.
  63. 청구항 59에 있어서, CD73 억제제가 화합물 C
    Figure pct00037
    (화합물 C)
    또는 그의 약학적으로 허용되는 염인 것인 방법.
  64. 청구항 59에 있어서, CD73 억제제가 올레클루맙(MEDI-9447), CPI-006, NZV930/SRF373, BMS-986179, 및 TJ4309로 구성된 군으로부터 선택된 것인 방법.
  65. 청구항 49에 있어서, 아데노신의 세포외 생성을 표적으로 하는 치료제가 TNAP 억제제인 것인 방법.
  66. 청구항 49에 있어서, 아데노신의 세포외 생성을 표적으로 하는 치료제가 ENPP1 억제제인 것인 방법.
  67. 청구항 49에 있어서, 아데노신의 세포외 생성을 표적으로 하는 약제가 CD38 억제제인 것인 방법.
  68. 청구항 49에 있어서, 아데노신의 세포외 생성을 표적으로 하는 약제가 CD39 억제제인 것인 방법.
  69. 청구항 35 내지 청구항 68 중 어느 한 항에 있어서, 개체의 암으로부터의 생검이 그 암이 PD-L1 양성이라는 것을 나타낼 때 그 개체에게 PD1 억제제 및/또는 PD-L1 억제제를 투여하는 것을 더 포함하는 것인 방법.
  70. 청구항 69에 있어서, PD1 및/또는 PD-L1 억제제가 펨브롤리주맙, 니볼루맙, MEDI-0680, BGB-108, GB-226, PDR-001, mDX-400, SHR-1210, IBI-308, PF-06801591, 아테졸리주맙, 더발루맙, 아벨루맙, BMS-936559, KD-033, CA-327, CA-170, ALN-PDL, TSR-042, 및 STI-1014으로 구성된 군으로부터 선택된 것인 방법.
  71. 청구항 69에 있어서, PD1 및/또는 PD-L1 억제제가 펨브롤리주맙, 니볼루맙, 아테졸리주맙, 더발루맙 및 아벨루맙으로 구성된 군으로부터 선택된 것인 방법.
  72. 청구항 35 내지 청구항 71 중 어느 한 항에 있어서, WES에 의해 결정된, TMB가 2.0 미만일 때 개체에게 화학요법제를 투여하는 것을 더 포함하는 것인 방법.
  73. 청구항 72에 있어서, 화학요법제가 백금계 또는 안트라사이클린계 화학요법제를 포함하는 것인 방법.
  74. 청구항 73에 있어서, 화학요법제가 시스플라틴, 카르보플라틴, 옥살리플라틴, 및 독소루비신으로 구성된 군으로부터 선택된 것인 방법.
  75. 청구항 35 내지 청구항 74 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암이 전립선, 결장, 직장, 췌장, 자궁경부, 위, 자궁내막, 뇌, 간, 방광, 난소, 고환, 머리, 목, 피부(흑색종 및 기저선암 포함), 중피세포, 백혈구(림프종 및 백혈병 포함), 식도, 유방(삼중 음성 유방암 포함), 근육, 결합 조직, 폐(소세포 폐암 및 비소세포 폐암 포함), 부신, 갑상선, 신장 또는 뼈의 암; 또는 교모세포종, 중피종, 신세포암종, 위암종, 육종(카포시 육종 포함), 융모막암종, 피부 기저선세포암종 또는 고환 정액종인 것인 방법.
  76. 아데노신의 세포외 생성을 표적으로 하는 제제 및/또는 그의 수용체 중 하나의 아데노신에 의한 활성화를 길항하는 제제를 필요로 하는 개체에게 투여하는 것을 포함하는, 하나 이상의 아데노신 기구 단백질의 발현 및/또는 활성을 변경하는 암을 갖는 것으로 식별된 개체를 치료하는 방법.
  77. 청구항 76에 있어서, 하나 이상의 아데노신 기구 단백질이 조직-비특이적 알칼리성 포스파타제(TNAP), CD73, 엑토뉴클레오티드 피로포스파타제/포스포디에스테라제 1(ENPP1), CD38, CD39, 아데노신 A1 수용체(A1R), 아데노신 A2a 수용체(A2aR), 아데노신 A2b 수용체(A2bR), 및 아데노신 A3 수용체(A3R)로 구성된 군으로부터 선택된 것인 방법.
  78. 청구항 1 내지 청구항 77 중 어느 한 항에 있어서, 개체가 인간 개체인 것인 방법.
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