KR20210135423A - 면역원성 조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 면역원성 조성물, SARS-CoV-2 백신, 그리고 벡터를 제공한다. 면역원성 조성물에는 서열식별번호 1, 서열식별번호 2, 서열식별번호 3, 서열식별번호 4로 구성되는 그룹에서 선택되는 서열을 포함하는 재조합 단백질, 여기서 재조합 단백질에는 최소한 6개의 아미노산의 길이가 되는 IgG1 Fc 단백질 조각이 들어있으며, 그리고 서열식별번호 1~4와 최소한 80% 상응하는 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화되는 폴리펩티드, 또는 재조합 단백질을 암호화하는 핵산 분자가 있다. SARS-CoV-2 백신에는 상기 재조합 단백질 또는 상기 재조합 단백질을 암호화하는 핵산 분자가 있다. 벡터에는 상기 재조합 단백질을 암호화하는 핵산 분자가 있다.

Description

면역원성 조성물{IMMUNOGENIC COMPOSITION}
본 정규출원은 2020년 5월 4일에 출원된 예비특허출원 번호 63/019,442에 대해 35 U.S.C. § 119(e) 규정에 따라 우선권을 주장하며, 그 전체 내용은 본 출원에 참조로 포함된다.
본 출원은 아래에 제시된 '서열 리스트'에 관한 것으로서, 'Sequence.txt'라는 제목이 붙여진 전자 문서로 제공된다. 이 '서열 리스트'의 전체 내용은 본 출원에 참조로 포함된다.
본 발명은 면역원성 조성물, 특히 코로나 바이러스에 대항하는 면역원성 조성물에 관한 것이다.
코로나 바이러스 감염증 2019, 일명 코로나19는 중증 급성 호흡기 증후군 코로나 바이러스 2(이하 SARS-CoV-2라고 함)에 의해 야기되는 전염성 질병이다. SARS-CoV-2의 출현에 이어 바이러스의 매우 빠른 전세계적인 확산은 심각한 우려를 불러일으켰다. 결국 세계보건기구(WHO)는 2020년 1월 30일에 국제적 공중보건 비상사태를 선포하게 되었다. 그러므로 코로나19에 대항하기 위한 준비로 효과적인 백신을 개발하는 것이 매우 시급하다.
SARS-CoV-2는 전도 기능 단일 가닥 RNA(리보 핵산) 바이러스이며, 니도 바이러스목 코로나 바이러스과 코로나 바이러스아과의 베타 코로나 바이러스 (beta-CoVs)에 속한다. ((2018). Arch. Virol. 163, 2601-2631). 중증 급성 호흡기 증후군 코로나 바이러스(SARS-CoV) 및 중동 호흡기 증후군 코로나 바이러스(MERS-CoV) 역시 베타 코로나 바이러스(beta-CoVs)에 속한다. (N Engl J Med. 2003 May 15; 348(20): 1967-76.; N Engl J Med. 2012 Nov 8; 367(19):1814-20.) 특히 SARS-CoV 및 SARS-CoV-2 바이러스가 숙주 세포에 진입하는 것은 바이러스의 외막에 소재한 S 단백질의 수용체 결합부위(RBD)와 세포에 있는 안지오텐신 전환효소 2(ACE2)의 상호 작용에 의해 중재된다.
본 발명의 한 가지 목적은 면역원성 조성물을 제공하는 것으로서, 이 면역원성 조성물은 서열식별번호 1, 서열식별번호 2, 서열식별번호 3, 서열식별번호 4로 구성되는 그룹에서 선택되는 서열을 포함하는 재조합 단백질, 이 재조합 단백질에는 최소한 6개의 아미노산의 길이가 되는 IgG1 Fc 단백질 조각이 들어있으며, 그리고 서열식별번호 1~4와 최소한 80% 상응하는 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화되는 폴리펩티드, 또는 재조합 단백질을 암호화하는 핵산 분자로 구성된다.
위에서 설명한 면역원성 조성물에서, IgG1 Fc 단백질 조각의 길이는 12개에서 18개 아미노산 사이이다.
위에서 설명한 면역원성 조성물에서, 재조합 단백질은 분비 시그널 펩티드와 융합한다.
위에서 설명한 면역원성 조성물은 더 나아가서 면역원성 화합물, 보조제, 약제학적으로 허용 가능한 담체, 안정제 또는 방부제를 포함한다.
상기 목적 및 기타 목적을 달성하기 위해 본 발명은 SARS-CoV-2 백신을 제공한다. SARS-CoV-2 백신은 서열식별번호 1, 서열식별번호 2, 서열식별번호 3, 서열식별번호 4로 구성되는 그룹에서 선택되는 서열을 포함하는 재조합 단백질, 이 재조합 단백질에는 최소한 6개의 아미노산의 길이가 되는 IgG1 Fc 단백질 조각이 들어있으며, 그리고 서열식별번호 1~4와 최소한 80% 상응하는 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화되는 폴리펩티드, 또는 재조합 단백질을 암호화하는 핵산 분자로 구성된다.
위에서 설명한 백신에서, IgG1 Fc 단백질 조각의 길이는 12개에서 18개 아미노산 사이이다
위에서 설명한 백신에서, 상기 재조합 단백질은 SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 인산단백질, SARS-CoV-2의 외피 단백질, 또는 SARS-CoV-2의 막 단백질과 융합한다.
위에서 설명한 백신에서, 상기 핵산 분자가 암호화하는 재조합 단백질은 SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 인산단백질, SARS-CoV-2의 외피 단백질, 또는 SARS-CoV-2의 막 단백질과 융합한다.
위에서 설명한 백신은 더 나아가서 면역원성 화합물, 보조제, 약제학적으로 허용 가능한 담체, 안정제 또는 방부제를 포함한다.
상기 목적 및 기타 목적을 달성하기 위해 본 발명은 벡터(전달체)를 제공한다. 이 벡터는 서열식별번호 1, 서열식별번호 2, 서열식별번호 3, 서열식별번호 4로 구성되는 그룹에서 선택되는 서열을 포함하는 재조합 단백질을 암호화하는 핵산 분자, 그리고 서열식별번호 1~4와 최소한 80% 상응하는 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화되는 폴리펩티드로 구성된다. 그리고 재조합 단백질에는 최소한 6개의 아미노산의 길이가 되는 IgG1 Fc 단백질 조각이 들어있다.
위에서 설명한 벡터에서, 상기 핵산 분자가 암호화하는 재조합 단백질은 SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 인산단백질, SARS-CoV-2의 외피 단백질, 또는 SARS-CoV-2의 막 단백질과 융합한다.
위에서 설명한 벡터에서, 벡터는 바큘로 바이러스, 천연두 바이러스, 에비폭스 바이러스, 아데노 바이러스, 알파 바이러스, 랍도 바이러스, 그리고 헤르페스 바이러스로 구성되는 그룹에서 선택된다.
위에서 설명한 벡터에서, 벡터는 바큘로 바이러스이다.
상기 목적 및 기타 목적을 달성하기 위해 본 발명은 서열식별번호 6, 서열식별번호 7, 서열식별번호 8, 그리고 서열식별번호 9로 구성되는 그룹에서 선택되는 서열을 포함하는 핵산 분자로 구성되는 면역원성 조성물을 제공한다.
상기 면역원성 조성물, 백신, 그리고 벡터는 SARS-CoV-2 바이러스에 대항하는 중화항체를 유도할 수 있으며, 코로나 바이러스 감염증 2019 (코로나19) 예방에 사용될 수 있다.
도면 1은 RBD-Fc (서열식별번호 1)의 아미노산 서열을 보여 준다.
도면 2는 S2βTM-Fc (서열식별번호 2)의 아미노산 서열을 보여 준다.
도면 3은 S1-Fc (서열식별번호 3)의 아미노산 서열을 보여 준다.
도면 4는 SβTM-Fc (서열식별번호 4)의 아미노산 서열을 보여 준다.
도면 5는 분비 시그널 펩티드 (서열식별번호 5)의 아미노산 서열을 보여 준다.
도면6은 RBD-Fc, S2βTM-Fc, S1-Fc, 그리고 SβTM-Fc의 DNA (디옥시 리보핵산) 겔 전기영동 영상을 보여 준다.
도면 7은 바이러스에 감염된 세포 증식 추세를 보여 준다.
도면 8은 감염 후 3일차, 4일차, 그리고 5일차 백신 후보들의 발현 수준의 웨스턴 블롯 영상을 보여 준다. (A) RBD-Fc (B) S2βTM-Fc (C) S1-Fc (D) SβTM-Fc
도면 9는 정제된 백신 후보들의 SDS-PEGE (좌) 그리고 웨스턴 블롯 (우) 영상을 보여 준다. 화살표는 발현된 단백질의 예상 위치를 나타낸다. (A) RBD-Fc (B) S2βTM-Fc (C) S1-Fc (D) SβTM-Fc (S) 샘플액 (FT) 통과 액체 (W) 세척액 (E) 용출액
도면 10은 면역 접종된 생쥐 혈액 샘플의 혈청 내 중화항체가를 보여 준다.
도면 11은 면역 접종된 생쥐의 SARS-CoV-2 바이러스에 대한 항혈청 플라크 감소 중화시험 (PRNT) 결과를 보여 준다.
도면 12는 SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 인산단백질(서열식별번호 10), 외피 단백질 (서열식별번호 11), 그리고 막 단백질(서열식별번호 12)의 아미노산 서열을 보여 준다.
도면 13은 RBD-Fc(서열식별번호 6)의 DNA 서열을 보여 준다.
도면 14는 S2βTM-Fc(서열식별번호 7)의 DNA 서열을 보여 준다.
도면 15(도면 15a, 15b)는 S1-Fc(서열식별번호 8)의 DNA 서열을 보여 준다.
도면 16(도면 16a, 16b, 16c)은 SβTM-Fc(서열식별번호 9)의 DNA 서열을 보여 준다.
본 발명의 목적, 특징 및 효능을 충분히 이해할 수 있도록 돕기 위해 아래의 구체적인 실시예를 도면과 함께 제시하여 다음과 같이 설명한다.
백신 후보의 발현
우선 재조합 단백질 RBD-Fc, S2βTM-Fc, S1-Fc, 그리고 SβTM-Fc를 암호화하는 네 가지 백신 후보의 DNA 서열을 설계한다. 도면 13은 RBD-Fc의 DNA 서열을, 도면 14는 S2βTM-Fc의 DNA 서열을, 도면 15는 S1-Fc의 DNA 서열을, 그리고 도면 16은 SβTM-Fc의 DNA 서열을 보여 준다.
백신 후보들은 SARS-CoV-2 돌기 단백질(등록번호: NC_045512의 아미노산 서열에 따라 설계된다. 여기서 RBD-Fc는 인간 IgG1 고정 중쇄 2와 고정 중쇄 3(Fc 단백질)과 융합하는 SARS-CoV-2 돌기 단백질의 수용체 결합부위를 나타낸다. RBD-Fc의 아미노산 서열은 도면 1에 표시되었다. S2βTM-Fc는 막관통 단백질을 삭제하고 Fc 단백질과 융합하는 SARS-CoV-2 돌기 단백질의 부차적 단위 S2를 나타낸다. S2βTM-Fc의 아미노산 서열은 도면 2에 표시되었다. S1-Fc는 Fc 단백질과 융합하는 SARS-CoV-2 돌기 단백질의 부차적 단위 S1을 나타낸다. S1-Fc의 아미노산 서열은 도면 3에 표시되었다. SβTM-Fc는 막관통 단백질을 삭제하고 Fc 단백질과 융합하는 SARS-CoV-2 돌기 단백질을 나타낸다. SβTM-Fc의 아미노산 서열은 도면 4에 표시되었다. 백신 생산 목적을 위해서, 백신 후보들의 모든 구조물은 분비 시그널 펩티드와 융합하며, 이 분비 시그널 펩티드는 재조합 단백질의 N 말단에 소재하고 Fc 서열은 재조합 단백질의 C 단말에 소재한다. 분비 시그널 펩티드의 아미노산 서열은 도면 5에 표시되었다. 하지만 기타 실시예에서는 분비 시그널 펩티드가 필요하지 않다.
상기 네 가지 백신 후보의 DNA 서열들은 제각기 pFastBac 1 벡터에 클론(복제)된다. 다른 실시예에서, 벡터는 천연두 바이러스, 에비폭스 바이러스, 아데노 바이러스, 알파 바이러스, 랍도 바이러스, 헤르페스 바이러스, 또는 기타 적합한 벡터 시스템에서 선택될 수 있다.
상기 백신 후보들의 DNA 서열이 들어 있는 재조합 Bacmid DNA 생산을 위해, 상기 백신 후보들의 DNA 서열이 들어 있는 네 개의 pFastBac 1 벡터를 각각 따로 대장균 종 DH10Bac로 변형시킨다. 재조합 Bacmid DNA는 PCR 분석으로 확인된다. 도면 6에 표시된 바와 같이, 'M'은 분자량 마커를 나타내며, 숫자 '1', '2' 및 '3'은 상기 재조합 Bacmid DNA이 취득되는 대장균 집락의 일련번호를 나타낸다. RBD-Fc, S2βTM-Fc, S1-Fc, 그리고 SβTM-Fc의 이론적 재조합 Bacmid DNA의 크기는 각각 3,809 bps, 4,700 bps, 5,159 bps, 그리고 6,743 bps이다. 결정된 재조합 Bacmid DNA의 크기는 각각 3,900 bps, 4,800 bps, 5,200 bps, 그리고 6,800 bps이다, 이는 상기 이론적 재조합 Bacmid DNA의 크기에 상응한다. 재조합 Bacmid DNA의 상기 변형과 PCR 분석은 Bac-to-Bac?? 바큘로 바이러스 발현 시스템 사용자 매뉴얼에 따라 실시한다.
그런 다음, 바큘로 바이러스 생산을 위해 상기 백신 후보들의 각각의 DNA 서열이 들어 있는 재조합 Bacmid DNA를 각각 따로 에스 프루기페르다(S. frugiperda) 세포(sf9 세포)내로 형질주입한다. 바큘로 바이러스는 DNA 시퀀싱으로 확인된다. 상기 재조합 Bacmid DNA의 형질주입은 Bac-to-Bac?? Baculovirus Expression System USER GUIDE. Bac-to-Bac?? 바큘로 바이러스 발현 시스템 사용자 매뉴얼에 따라 실시한다.
끝으로 상기 백신 후보들의 DNA 서열로 구성되는 바큘로 바이러스로 Sf9 세포를 각각 따로 감염비(MOI) 0.1, 0.001, 그리고 0.0001로 5일 동안 감염시킨다. 바이러스에 감염된 세포 증식 추세는 도면 7에 표시되었다. 감염 후 3일차, 4일차, 5일차 시간 점에서 Sf9 세포를 수거하여 백신 후보들의 발현 수준을 검사한다. 감염된 sf0 세포에서 합성되는 단백질은 웨스턴 블롯으로 알아내며, 결과는 도면 8에 표시되었다. 단백질 기준 위치와 킬로달턴(kda)으로 표시되는 크기로 볼 때, 세포 내에서 합성되는 단백질 대부분은 55 kda (A: RBD-Fc), 110 kda (B: S2βTM-Fc), 130 kda (C: S1-Fc), 그리고 170 kda (D: SβTM-Fc) 재조합 단백질 부분인 것으로 나타났다. 상기 웨스턴 블롯팅은 '폴리아크릴아마이드 겔 전기 영동법과 삭제 안내(Bio-Rad)' 참고문헌에 따라 실시한다.
백신 후보 생산
Sf9 세포를 준비한다. sf9 세포를 27℃온도, 곤충-XPRESS 무단백질 배지(Lonza Ltd)에서 밀도가 3.5~5Х106 세포/mL 될 때까지 성장시킨다. 상기 백신 후보들의 DNA 서열이 들어 있는 바큘로 바이러스 발현 벡터로 sf9 세포를 감염비(MOI) 0.1~0.001로 감염시켜 상기 백신 후보들의 생산한다. sf9 세포 감염 과정에서, 바큘로 바이러스 다각체 프로모터의 전사 조절하에 백신 후보들이 생산된다. Sf9 세포는 감염 후 72~96시간에서 6,000 x g로15분 동안 원심분리방법으로 수확한다. sf9 세포의 상청액은 4° C 온도에 저장한다.
백신 후보 RBD-Fc의 정제
본 실시예에서, 변성되지 않았고 인간에게 사용하는 코로나 바이러스 백신의 요소로 적합한 RBD-Fc의 정제는 단백질 A 친화 크로마토그래피로 실시한다. 재조합 바큘로 바이러스로 감염된 sf9 세포로부터 RBD-Fc를 정제하기 위해 아래 절차를 이용한다.
상기 '백신 후보 발현' 절차에 따라 RBD-Fc가 들어 있는 감염된 sf9 세포의 배양액 2 L을 준비한다. 감염될 sf9 세포의 처음 세포 농도는 1.0 x 106 cells/mL이다. 그리고 sf9 세포의 감염된 세포 농도가 4.0 x 106 cells/mL에 달할 때까지 (생존력 40-60%, MOI=0.1) 삼일 동안 sf9 세포를 감염시킨다. 감염된 sf9 세포의 배양액을 9000 x g로 20분 동안 원심 분리시켜 상청액을 취득한 다음, 상청액을 필터(구멍 크기 0.22 μm)로 여과하여 샘플액을 취득한다.
단백질 A 레진(Eshmuno A, Merck Millipore) 20 mL로 채워진 Pharmacia XK 16/40 컬럼을 준비해서 AKTA Pure 크로마토그래피 시스템에 탑재시킨다. 상기 샘플액을 20 mL/min의 흐름 속도(PreC: 0.30 Mpa)로 컬럼에 붓는다. 그런 다음 흘러서 컬럼을 통과한 액체를 수거한다. 상기 샘플액을 컬럼에 적재한 다음, 세척액의 280 nm에서의 자외선 흡수도가 베이스라인으로 되돌아 갈 때까지 컬럼을 PBS(pH 7.3)로 더 씻는다. 컬럼을 통과하는 세척액을 수거한다. 컬럼을 씻은 다음, 구연산 용액(0.3 M)을 용출액으로 컬럼에 적재하여 단백질 A에 묶인 RBD-Fc가 들어 있는 용출액을 취득한다.
오염된 단백질도 컬럼을 통과하여 용출액으로 흘러 들어가기 때문에, RBD-Fc가 들어 있는 이전의 용출액은 대략 100 mM 구연산(pH 3.0)의 5배의 컬럼 용량으로 단백질 A 레진 컬럼으로부터 다시 용출된다. 그리고 1M 트리스-HCl(pH 9.0)로 용출액을 중화한다. 다음과 같이 SDS-PAGE로 샘플액, 통과액, 세척액, 그리고 용출액을 분석한다. 샘플액, 통과액, 세척액, 그리고 용출액에 들은 단백질을 2% 도데실 황산 나트륨과 5% 베타-메르캅토에탄올이 있는 끓는 수조에서 10분 동안 파괴하고 SDS-PAGE(0.1% SDS가 있는 10% 폴리아크릴아미드 겔)로 분석한 다음 쿠마시 블루로 염색한다. SDS-PAGE 분석은 '폴리아크릴아마이드 겔 전기 영동법과 삭제 안내(Bio-Rad)' 참고문헌에 따라 실시한다.
S2βTM-Fc, SβTM-Fc의 정제는 RBD-Fc 정제와 같은 절차로 실시한다.
상기 네 가지 백신 후보의 정제 결과는 도면 9에 표시되었다. 상기 절차를 통해서 정제된 백신 후보를 취득한다.
다른 실시예에서는 기타 기존의 단백질 정제 기술을 이용하여 상기 백신 후보들을 정제한다.
SARS-CoV-2 바이러스에 대항하는 면역 접종된 생쥐의 항혈청 플라크 감소 중화시험 (PRNT)
우선 C57BL/6 생쥐 (생후 7주차, 암컷, 무게는 18~22 g) 12 그룹을 준비한다. 각 그룹에는 생쥐 10마리가 들어 있다. 다섯 그룹의 생쥐에게 PBS 50 μl에 들은 백신 후보들 20 μg을 근육주사로 세 번 접종한다. 다섯 그룹의 생쥐에게 수산화 알루미늄을 보조제로 함유한 PBS 50 μl에 들은 백신 후보들 20 μg을 근육주사로 세 번 접종한다. 한 그룹의 생쥐에게 수산화 알루미늄을 보조제로 함유한 PBS 50 μl를 근육주사로 세 번 접종한다. 한 그룹의 생쥐에게 PBS 50 μl를 근육주사로 세 번 접종한다. 접종 상태는 표 1에 표시되었다.
그룹 번호 항원 μg/투여 보조제
1 RBD-Fc 20 -
2 S2βTM-Fc -
3 S1-Fc -
4 RBD-Fc+ S2βTM-Fc -
5 S2βTM-Fc+S1-Fc -
6 - -
7 RBD-Fc Al(OH)3*
8 S2βTM-Fc Al(OH)3*
9 S1-Fc Al(OH)3*
10 RBD-Fc+S2βTM-Fc Al(OH)3*
11 S2βTM-Fc+S1-Fc Al(OH)3*
12 - Al(OH)3*
* 보조제의 양은 투여당 500 μg이다.그 다음은 면역화 시간점에서, 그룹 1, 6, 7 생쥐의 혈액을 샘플로 채취하여 중화항체가를 알아낸다. 결과는 도면 10에 표시되었다. RBD-Fc와 보조제를 투여한 그룹 7 생쥐의 중화항체가가 더 높다.
끝으로 베로 E6 세포의 단층 그룹 12개를 24-홈 플레이트의 12개 홈에 미리 넣어 시험 그룹으로 삼는다. 상기 세 번 면역 접종된 생쥐에게서 취득한 12개의 0.1 mL 시험 혈청(5120배 희석)을 각각 따로 SARS-CoV-2 바이러스(국립대만대학교 의과대학 의학검사 및 생물기술학과 Sui-Yuan Chang 교수 제공) 100 PFU/0.1 mL와 혼합하여 37℃온도에서 60분 동안 공동 배양한다. 그런 다음 12개의 SARS-CoV-2와 시험 혈청 혼합물을 각각 따로 12 시험 그룹에 첨가한다. 한편, 두 개의 양성 대조 홈(베로 E6 세포는 상기 혈청 없이 100 PFU의 SARS-CoV-2 바이러스와 37℃온도에서 60분 동안 공동 배양됨)을 각 분석을 위한 양성 대조 홈으로 수립하여 세포 단층의 전염성을 보장한다. 이어서 12 시험 그룹과 두 대조 그룹의 배지를 제거한 다음, 겹배지를 12 시험 그룹과 두 양성 대조 그룹에 첨가한다. 시험 그룹과 양성 대조 그들이 있는 24-홈 플레이트를 5%의 CO2에서 37°C 온도로 6일 동안 배양하고 6일차 되는 날 플라크를 센다. 플라크 감소 중화시험 결과는 도면 11에 표시되었다. 이는 시험 그룹에 Fc 단백질과 융합되는 RBD 영역이 들어 있을 때(그룹 1, 3-5, 7 및 9-10) SARS-CoV-2 바이러스에 대항하는 중화항체를 효과적으로 유도할 수 있다는 것을 나타낸다. Fc 단백질과 융합하는RBD 영역과 보조제가 들어 있는 시험 그룹들의 효능이 더 낫다. 그리고 S2βTM-Fc가 Fc 단백질과 융합하고 보조제가 있는 조합도 SARS-CoV-2 바이러스에 대항하는 중화항체를 유도할 수 있다.
또한 SARS-CoV-2에 사용되는 SARS-CoV-2 재조합 단백질 한 조각을 RBD, S1 단백질, S2 단백질 또는 돌기 단백질과 최소한 80%, 81%, 82%, 83%, 84%, 85%, 86%, 87%, 88%, 89%, 90%, 91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일하게 설계할 수 있으며, SARS-CoV-2에 사용되는 Fc 단백질 한 조각이 최소한 6개의 아미노산 길이, 가급적이면 12~18개의 아미노산 길이가 되도록 설계할 수 있다. Fc 단백질 조각은 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 또는 18개의 아미노산 길이가 될 수 있다.
도면 12는 SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 인산단백질, 외피 단백질 및 막 단백질의 아미노산 서열을 보여 준다. 코로나19 백신 사용을 위해, SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 인산단백질, 외피 단백질 또는 막 단백질은 코로나19 백신의 일부분으로 설계될 수도 있다. 즉 SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 인산단백질, 외피 단백질 및 막 단백질을 상기 백신 후보들과 융합할 수 있다.
여기에 사용된 것처럼, 두 개의 아미노산 서열의 '퍼센트 상동성'은 'Karlin and Altschul, Proc, Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268, 1990'에 설명되고 'Karlin and Altschul, Proc, Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877, 1993'에서 설명한 것처럼 수정된 알고리즘을 사용하여 결정한다. 이러한 알고리즘은 'Altschul et al., J. Mol. Biol. 215:403-410, 1990'의 NBLAST 및 XBLAST 프로그램에 포함되었다. XBLAST 프로그램, 스코어 = 50, 단어 길이 = 3으로 BLAST 단백질 검색을 수행하여 참고 폴리펩티드와 상응하는 아미노산 서열을 취득한다. 비교용 틈새 정렬을 취득하기 위해, Gapped BLAST를 'Altschul et al., Nucleic Acids Res. 25:3389-3402, 1997'에 설명된 바와 같이 활용한다. BLAST 및 Gapped BLAST 프로그램들을 활용할 때는 각각의 프로그램(예를 들어 XBLAST 및 NBLAST)의 디폴트 매개변수들을 사용한다. www.ncbi.nlm.nih.gov를 참고한다.
위에서 언급한 바와 같이, Fc 단백질과 융합하는 SARS-CoV-2 재조합 단백질은 SARS-CoV-2 바이러스에 대항하는 중화항체를 유도할 수 있으며, 코로나 바이러스 감염증 2019(코로나19)에 대항하는 백신으로 사용될 수 있다.
상기 구체적인 실시예로 본 발명을 제시하였다. 하지만 해당 기술 분야의 통상적인 지식을 가진 이는 본 발명의 실시예를 참고하여 본 발명의 기술사상을 벗어나지 않는 범위 내에서 다양한 형태의 치환, 변경을 할 수 있으며, 이러한 것들은 본 발명의 범위에 속한다고 할 것이다. 그러므로 본 발명의 보호범위는 특허청구의 범위에 기재된 것을 준거로 해야 할 것이다.
<110> ADIMMUNE CORPORATION <120> IMMUNOGENIC COMPOSITION <130> IP2389TW <150> US 63/019,442 <151> 2020-05-04 <160> 12 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 458 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> recombinant spike protein <400> 1 Asn Ile Thr Asn Leu Cys Pro Phe Gly Glu Val Phe Asn Ala Thr Arg 1 5 10 15 Phe Ala Ser Val Tyr Ala Trp Asn Arg Lys Arg Ile Ser Asn Cys Val 20 25 30 Ala Asp Tyr Ser Val Leu Tyr Asn Ser Ala Ser Phe Ser Thr Phe Lys 35 40 45 Cys Tyr Gly Val Ser Pro Thr Lys Leu Asn Asp Leu Cys Phe Thr Asn 50 55 60 Val Tyr Ala Asp Ser Phe Val Ile Arg Gly Asp Glu Val Arg Gln Ile 65 70 75 80 Ala Pro Gly Gln Thr Gly Lys Ile Ala Asp Tyr Asn Tyr Lys Leu Pro 85 90 95 Asp Asp Phe Thr Gly Cys Val Ile Ala Trp Asn Ser Asn Asn Leu Asp 100 105 110 Ser Lys Val Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Leu Tyr Arg Leu Phe Arg Lys 115 120 125 Ser Asn Leu Lys Pro Phe Glu Arg Asp Ile Ser Thr Glu Ile Tyr Gln 130 135 140 Ala Gly Ser Thr Pro Cys Asn Gly Val Glu Gly Phe Asn Cys Tyr Phe 145 150 155 160 Pro Leu Gln 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ggtactggcg tcctgaccga gtctaacaag 1860 aagttcctgc cattccagca gttcggtcgc gacatcgctg acactaccga cgccgtgcgt 1920 gacccacaga ccctggaaat cctggacatc actccatgct ctttcggagg tgtgtcagtc 1980 atcactcctg gcaccaacac ttcaaaccag gtggccgtcc tgtaccagga cgtcaactgc 2040 accgaggtgc ctgtcgccat ccacgctgac cagctgaccc ccacttggcg cgtctactca 2100 accggttcca acgtgttcca gactcgtgct ggctgcctga tcggagccga gcacgtgaac 2160 aactcctacg aatgcgacat ccccatcgga gctggtatct gcgcctccta ccagacccaa 2220 actaacagcc cacgcagggc tcgcggcgga agcggtggct ctggaggttc aggcggatcc 2280 ggtggcagca cttgcccacc ttgcccagct ccagaactgc tgggaggtcc aagcgtgttc 2340 ctgttccctc ctaagcctaa ggacaccctg atgatctccc gtacccctga ggtcacttgc 2400 gtcgtggtcg acgtgagcca cgaggacccc gaagtcaagt tcaactggta cgtggacggc 2460 gtggaagtcc acaacgctaa gaccaagccc cgcgaggaac agtacaactc cacttaccgt 2520 gtggtcagcg tgctgaccgt cctgcaccag gactggctga acggaaagga atacaagtgc 2580 aaggtctcta acaaggccct gcctgctccc atcgaaaaga ctatctcaaa ggctaagggt 2640 cagcccaggg agccacaggt gtacaccctg cctccctcta gagaggaaat gaccaagaac 2700 caggtctcac tgacttgcct ggtgaaggga ttctacccat ccgacatcgc cgtggagtgg 2760 gaaagcaacg gtcagcctga gaacaactac aagaccactc cacctgtcct ggactctgac 2820 ggttcattct tcctgtactc taagctgact gtggacaagt cacgttggca gcagggcaac 2880 gtgttctctt gctcagtcat gcacgaagct ctgcacaacc actacaccca gaagtccctg 2940 agcctgtctc ctggcaagta actcgaggca tgcggtacca agcttgtcga gaagtactag 3000 aggatcataa tcagccatac cacatttgta gaggttttac ttgctttaaa aaacctccca 3060 cacctccccc tgaacctgaa acataaaatg aatgcaattg ttgttgttaa cttgtttatt 3120 gcagcttata atggttacaa ataaagcaat agcatcacaa atttcacaaa taaagcattt 3180 ttttcactgc attctagttg tggtttgtcc aaactcatca atgtatctta tcatgtctgg 3240 atctgatcac tgcttgagcc taggagatcc gaaccagata agtgaaatct agttccaaac 3300 tattttgtca tttttaattt tcgtattagc ttacgacgct acacccagta cccatctatt 3360 ttgtcactct tccctaaata atccttaaaa actccatttc cacccctccc agttcccaac 3420 taattttgtc cgcccacaca ggggcatttt tcttcctgtt atgtgaattc ctgcagcccg 3480 ggaggatcca ctaagttcta gagcggccgc cacgcggtgg agctccggct tttgttgccg 3540 gttactggag ggtcagttgc gcgcttagac gtatcatggg tcgtagctgt tatcgctggc 3600 gtgcacctgc acgagctatg aggaggagga gactta 3636 <210> 9 <211> 4545 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> recombinant spike protein <400> 9 aagaatttta ctgttttcgt aacagttttg taataaaaaa acctataaat attccggatt 60 attcataccg tcccaccatc gggcgcggat cccggtccga agcgcgcgga attcatgctg 120 ctggtgaacc agtcccacca gggattcaac aaggagcaca ctagcaagat ggtctctgct 180 atcgtgctgt acgtcctgct ggctgctgct gctcacagcg ccttcgctgc cgacgtgaac 240 ctcaccacta ggacccagct gcctcccgct tacaccaact ctttcactag gggtgtctac 300 tacccagaca aggtgttcag atccagcgtc ctgcacagca ctcaggacct gttcctgcct 360 ttcttctcta acgtgacctg gttccacgcc atccacgtct ccggtaccaa cggcactaag 420 cgcttcgaca acccagtcct gcctttcaac gacggcgtgt acttcgcttc aaccgaaaag 480 tccaacatca tccgtggatg gatcttcggt accactctgg acagcaagac tcagtctctg 540 ctgatcgtga acaacgccac caacgtggtc atcaaggtct gcgagttcca gttctgcaac 600 gaccccttcc tgggagtgta ctaccacaag aacaacaagt catggatgga gtccgagttc 660 cgcgtgtact cttcagctaa caactgcact ttcgagtacg tcagccagcc attcctgatg 720 gacctggaag gaaagcaggg taacttcaag aacctgaggg agttcgtgtt caagaacatc 780 gacggttact tcaagatcta cagcaagcac acccccatca acctggtgag agacctgcca 840 cagggattct ctgctctgga acccctggtc gacctgccaa tcggtatcaa catcacccgc 900 ttccagactc tgctggctct gcaccgttcc tacctgactc ctggcgactc cagctctgga 960 tggactgctg gagctgctgc ttactacgtg ggatacctgc agccaaggac cttcctgctg 1020 aagtacaacg agaacggtac catcactgac gccgtggact gcgctctgga cccactgtca 1080 gaaaccaagt gcactctgaa gtccttcacc gtcgagaagg gtatctacca gactagcaac 1140 ttcagggtcc agcctaccga atctatcgtg agattcccaa acatcactaa cctgtgccct 1200 ttcggcgagg tgttcaacgc caccagattc gcttccgtct acgcctggaa caggaagaga 1260 atcagcaact gcgtggctga ctactctgtc ctgtacaaca gcgcctcttt ctcaaccttc 1320 aagtgctacg gcgtgtcacc tactaagctg aacgacctgt gcttcaccaa cgtgtacgcc 1380 gactccttcg tcatcagggg agacgaggtg agacagatcg ctcctggcca gactggaaag 1440 atcgccgact acaactacaa gctgcccgac gacttcaccg gttgcgtgat cgcttggaac 1500 agcaacaacc tggactctaa ggtcggtggc aactacaact acctgtaccg cctgttccgt 1560 aagagcaacc tgaagccctt cgagagggac atcagcactg aaatctacca ggccggatct 1620 accccatgca acggtgtgga aggcttcaac tgctacttcc ctctgcagtc ttacggtttc 1680 cagcccacta acggtgtcgg ctaccagcca tacagagtgg tcgtgctgag cttcgagctg 1740 ctgcacgccc ctgctactgt gtgcggtccc aagaagtcta ccaacctggt gaagaacaag 1800 tgcgtcaact tcaacttcaa cggcctgacc ggaactggtg tgctgaccga atcaaacaag 1860 aagttcctgc ctttccagca gttcggccgc gacatcgctg acaccactga cgccgtccgt 1920 gacccacaga ccctggagat cctggacatc actccttgct cattcggagg tgtgtccgtc 1980 atcactcccg gaaccaacac ttccaaccag gtggctgtcc tgtaccagga cgtgaactgc 2040 actgaggtgc ctgtggctat ccacgctgac cagctgaccc caacttggcg cgtctactca 2100 accggctcca acgtgttcca gactcgtgct ggttgcctga tcggcgccga gcacgtcaac 2160 aacagctacg aatgcgacat ccctatcggc gctggaatct gcgcctctta ccagacccag 2220 actaacagcc cccgcagggc taggtctgtg gcttcccaga gcatcatcgc ttacaccatg 2280 tcactgggtg ctgaaaactc cgtcgcctac agcaacaact ctatcgccat cccaaccaac 2340 ttcactatct cagtcaccac tgagatcctg cctgtgagca tgaccaagac ttctgtcgac 2400 tgcactatgt acatctgcgg cgacagcacc gaatgctcta acctgctgct gcagtacggt 2460 tccttctgca cccagctgaa ccgtgctctg actggcatcg ccgtggagca ggacaagaac 2520 actcaggaag tgttcgctca ggtcaagcag atctacaaga ccccacctat caaggacttc 2580 ggcggattca acttctccca gatcctgcca gacccttcaa agccctccaa gcgcagcttc 2640 atcgaagacc tgctgttcaa caaggtgacc ctggccgacg ctggattcat caagcagtac 2700 ggagactgcc tgggtgacat cgccgctcgt gacctgatct gcgctcagaa gttcaacggt 2760 ctgaccgtcc tgcccccact gctgactgac gagatgatcg cccagtacac ttcagccctg 2820 ctggctggta ccatcacttc tggatggacc ttcggtgctg gtgctgctct gcagatccca 2880 ttcgctatgc agatggccta ccgtttcaac ggaatcggtg tgacccagaa cgtcctgtac 2940 gaaaaccaga agctgatcgc taaccagttc aacagcgcca tcggcaagat ccaggacagc 3000 ctgtcatcca ctgcctctgc tctgggaaag ctgcaggacg tcgtgaacca gaacgcccag 3060 gctctgaaca ccctggtgaa gcagctgagc tctaacttcg gagctatctc atccgtcctg 3120 aacgacatcc tgtctcgcct ggacaaggtg gaggccgaag tccagatcga ccgcctgatc 3180 actggtcgtc tgcagtcact gcagacctac gtgactcagc agctgatcag ggccgctgaa 3240 atcagagcct ccgctaacct ggccgctacc aagatgtcag agtgcgtgct gggacagtcc 3300 aagcgtgtcg acttctgcgg caagggatac cacctgatgt cattcccaca gtccgctcct 3360 cacggcgtcg tgttcctgca cgtgacctac gtccctgccc aggagaagaa cttcaccact 3420 gcccccgcta tctgccacga cggcaaggct cacttcccta gggaaggagt gttcgtctca 3480 aacggtaccc actggttcgt gactcagaga aacttctacg agccccagat catcaccact 3540 gacaacactt tcgtctccgg caactgcgac gtcgtgatcg gaatcgtgaa caacaccgtc 3600 tacgaccccc tgcagccaga actggactca ttcaaggagg aactggacaa gtacttcaag 3660 aaccacacct ccccagacgt ggacctgggc gacatctcag gaatcaacgc ttccgtcgtg 3720 aacatccaga aggagatcga ccgcctgaac gaagtcgcca agaacctgaa cgagagcctg 3780 atcgacctgc aggagctggg caagtacgaa cagtacatca agtggcctgg tggctctgga 3840 ggttcaggcg gatccggtgg cagcggaggt tcaacctgcc ctccctgccc tgctccagag 3900 ctgctgggcg gaccttctgt gttcctgttc ccacctaagc ccaaggacac cctgatgatc 3960 agccgtaccc cagaagtgac ttgcgtcgtg gtcgacgtct ctcacgagga ccctgaagtc 4020 aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag gtccacaacg ctaagaccaa gcctcgcgag 4080 gaacagtaca actcaactta ccgtgtggtc tccgtgctga ccgtcctgca ccaggactgg 4140 ctgaacggca aggagtacaa gtgcaaggtg tcaaacaagg ccctgcctgc tcccatcgaa 4200 aagactatct ccaaggccaa gggacagcct agggagcccc aggtctacac cctgccccca 4260 tcaagagagg aaatgaccaa gaaccaggtc tccctgactt gcctggtgaa gggtttctac 4320 ccctcagaca tcgctgtgga gtgggaatcc aacggccagc cagaaaacaa ctacaagacc 4380 actcctcccg tgctggactc agacggctcc ttcttcctgt acagcaagct gactgtcgac 4440 aagtctcgct ggcagcaggg aaacgtgttc tcttgctcag tcatgcacga ggctctgcac 4500 aaccactaca cccagaagtc cctgagcctg tctcccggca agtaa 4545 <210> 10 <211> 419 <212> PRT <213> Unknown <220> <223> Corona Virus <400> 10 Met Ser Asp Asn Gly Pro Gln Asn Gln Arg Asn Ala Pro Arg Ile Thr 1 5 10 15 Phe Gly Gly Pro Ser Asp Ser Thr Gly Ser Asn Gln Asn Gly Glu Arg 20 25 30 Ser Gly Ala Arg Ser Lys Gln Arg Arg Pro Gln Gly Leu Pro Asn Asn 35 40 45 Thr Ala Ser Trp Phe Thr Ala Leu Thr Gln His Gly Lys Glu Asp Leu 50 55 60 Lys Phe Pro Arg Gly Gln Gly Val Pro Ile Asn Thr Asn Ser Ser Pro 65 70 75 80 Asp Asp Gln Ile Gly Tyr Tyr Arg Arg Ala Thr Arg Arg Ile Arg Gly 85 90 95 Gly Asp Gly Lys Met Lys Asp Leu Ser Pro Arg Trp Tyr Phe Tyr Tyr 100 105 110 Leu Gly Thr Gly Pro Glu Ala Gly Leu Pro Tyr Gly Ala Asn Lys Asp 115 120 125 Gly Ile Ile Trp Val Ala Thr Glu Gly Ala Leu Asn Thr Pro Lys Asp 130 135 140 His Ile Gly Thr Arg Asn Pro Ala Asn Asn Ala Ala Ile Val Leu Gln 145 150 155 160 Leu Pro Gln Gly Thr Thr Leu Pro Lys Gly Phe Tyr Ala Glu Gly Ser 165 170 175 Arg Gly Gly Ser Gln Ala Ser Ser Arg Ser Ser Ser Arg Ser Arg Asn 180 185 190 Ser Ser Arg Asn Ser Thr Pro Gly Ser Ser Arg Gly Thr Ser Pro Ala 195 200 205 Arg Met Ala Gly Asn Gly Gly Asp Ala Ala Leu Ala Leu Leu Leu Leu 210 215 220 Asp Arg Leu Asn Gln Leu Glu Ser Lys Met Ser Gly Lys Gly Gln Gln 225 230 235 240 Gln Gln Gly Gln Thr Val Thr Lys Lys Ser Ala Ala Glu Ala Ser Lys 245 250 255 Lys Pro Arg Gln Lys Arg Thr Ala Thr Lys Ala Tyr Asn Val Thr Gln 260 265 270 Ala Phe Gly Arg Arg Gly Pro Glu Gln Thr Gln Gly Asn Phe Gly Asp 275 280 285 Gln Glu Leu Ile Arg Gln Gly Thr Asp Tyr Lys His Trp Pro Gln Ile 290 295 300 Ala Gln Phe Ala Pro Ser Ala Ser Ala Phe Phe Gly Met Ser Arg Ile 305 310 315 320 Gly Met Glu Val Thr Pro Ser Gly Thr Trp Leu Thr Tyr Thr Gly Ala 325 330 335 Ile Lys Leu Asp Asp Lys Asp Pro Asn Phe Lys Asp Gln Val Ile Leu 340 345 350 Leu Asn Lys His Ile Asp Ala Tyr Lys Thr Phe Pro Pro Thr Glu Pro 355 360 365 Lys Lys Asp Lys Lys Lys Lys Ala Asp Glu Thr Gln Ala Leu Pro Gln 370 375 380 Arg Gln Lys Lys Gln Gln Thr Val Thr Leu Leu Pro Ala Ala Asp Leu 385 390 395 400 Asp Asp Phe Ser Lys Gln Leu Gln Gln Ser Met Ser Ser Ala Asp Ser 405 410 415 Thr Gln Ala <210> 11 <211> 75 <212> PRT <213> Unknown <220> <223> Corona Virus <400> 11 Met Tyr Ser Phe Val Ser Glu Glu Thr Gly Thr Leu Ile Val Asn Ser 1 5 10 15 Val Leu Leu Phe Leu Ala Phe Val Val Phe Leu Leu Val Thr Leu Ala 20 25 30 Ile Leu Thr Ala Leu Arg Leu Cys Ala Tyr Cys Cys Asn Ile Val Asn 35 40 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Thr Ser Arg Thr Leu 165 170 175 Ser Tyr Tyr Lys Leu Gly Ala Ser Gln Arg Val Ala Gly Asp Ser Gly 180 185 190 Phe Ala Ala Tyr Ser Arg Tyr Arg Ile Gly Asn Tyr Lys Leu Asn Thr 195 200 205 Asp His Ser Ser Ser Ser Asp Asn Ile Ala Leu Leu Val Gln 210 215 220

Claims (14)

  1. 서열식별번호 1, 서열식별번호 2, 서열식별번호 3, 서열식별번호 4로 구성되는 그룹에서 선택되는 서열을 포함하는 재조합 단백질, 재조합 단백질에는 최소한 6개의 아미노산의 길이가 되는 IgG1 Fc 단백질 조각이 들어있으며, 그리고 서열식별번호 1~4와 최소한 80% 상응하는 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화되는 폴리펩티드, 또는
    재조합 단백질을 암호화하는 핵산 분자로 구성되는 면역원성 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서,
    IgG1 Fc 단백질 조각의 길이가 12개에서 18개 아미노산 사이인 면역원성 조성물.
  3. 청구항 1에 있어서,
    상기 재조합 단백질이 분비 시그널 펩티드와 융합하는 면역원성 조성물.
  4. 청구항 1에 있어서,
    더 나아가서 면역원성 화합물, 보조제, 약제학적으로 허용 가능한 담체, 안정제 또는 방부제가 포함되는 면역원성 조성물.
  5. 서열식별번호 1, 서열식별번호 2, 서열식별번호 3, 서열식별번호 4로 구성되는 그룹에서 선택되는 서열을 포함하는 재조합 단백질, 여기서 재조합 단백질에는 최소한 6개의 아미노산의 길이가 되는 IgG1 Fc 단백질 조각이 들어있으며, 그리고 서열식별번호 1~4와 최소한 80% 상응하는 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화되는 폴리펩티드, 또는
    재조합 단백질을 암호화하는 핵산 분자로 구성되는 SARS-CoV-2 백신.
  6. 청구항 5에 있어서,
    IgG1 Fc 단백질 조각의 길이가 12개에서 18개 아미노산 사이인 백신.
  7. 청구항 5에 있어서,
    재조합 단백질이 SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 인산단백질, SARS-CoV-2의 외피 단백질, 그리고 SARS-CoV-2의 막 단백질과 융합하는 백신.
  8. 청구항 5에 있어서,
    상기 핵산 분자가 암호화하는 재조합 단백질은 SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 인산단백질, SARS-CoV-2의 외피 단백질, 또는 SARS-CoV-2의 막 단백질과 융합하는 백신.
  9. 청구항 5에 있어서,
    더 나아가서 면역원성 화합물, 보조제, 약제학적으로 허용 가능한 담체, 안정제 또는 방부제가 포함되는 백신.
  10. 서열식별번호 1, 서열식별번호 2, 서열식별번호 3, 서열식별번호 4로 구성되는 그룹에서 선택되는 서열을 포함하는 재조합 단백질을 암호화하는 핵산 분자, 그리고 서열식별번호 1~4와 최소한 80% 상응하는 폴리뉴클레오티드에 의해 암호화되는 폴리펩티드로 구성되는, 재조합 단백질에는 최소한 6개의 아미노산의 길이가 되는 IgG1 Fc 단백질 조각이 들어있는 벡터(전달체).
  11. 청구항 10에 있어서,
    상기 핵산 분자가 암호화하는 재조합 단백질은 SARS-CoV-2의 뉴클레오캡시드 인산단백질, SARS-CoV-2의 외피 단백질, 또는 SARS-CoV-2의 막 단백질과 융합하는 벡터.
  12. 청구항 10에 있어서,
    벡터는 바큘로 바이러스, 천연두 바이러스, 에비폭스 바이러스, 아데노 바이러스, 알파 바이러스, 랍도 바이러스, 그리고 헤르페스 바이러스로 구성되는 그룹에서 선택되는 벡터.
  13. 청구항 12에 있어서,
    벡터는 바큘로 바이러스인 벡터.
  14. 서열식별번호 6, 서열식별번호 7, 서열식별번호 8, 그리고 서열식별번호 9로 이루어지는 그룹에서 선정되는 서열을 포함하는 핵산 분자로 구성되는 면역원성 조성물.
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CN114874999B (zh) * 2022-04-22 2023-04-21 中国医学科学院病原生物学研究所 一种基于痘苗病毒载体的新型冠状病毒病毒样颗粒疫苗
CN116474083A (zh) * 2023-02-20 2023-07-25 上海君拓生物医药科技有限公司 一种VLP-mRNA复合多价病毒疫苗及其制备方法和应用

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CN111088283B (zh) * 2020-03-20 2020-06-23 苏州奥特铭医药科技有限公司 mVSV病毒载体及其病毒载体疫苗、一种基于mVSV介导的新冠肺炎疫苗
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