JP7170783B2 - 免疫原性組成物、SARS-CoV-2ワクチン、及びベクター - Google Patents
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Description
本非仮出願は米国特許法第119条(e)に基づく優先権を主張するものであり、ここに本明細書の一部を構成するものとして2020年5月4日に提出された米国仮出願特許第63/019,442号の全内容を援用する。
本発明は、免疫原性組成物に関し、より詳しくは、コロナウイルスに対する免疫原性組成物に関する。
Coronavirus Disease 2019(COVID-19)はSevere Acute Respiratory Syndrome Coronavirus 2(以下、SARS-CoV-2という)に起因する感染症である。SARS-CoV-2の出現はその急速な世界的な感染拡大により深刻な懸念をもたらし、2020年1月30日に世界保健機関(WHO)が国際的な公衆衛生上の緊急事態宣言を発するに至った。このため、COVID-19に対する予防策として効果的なワクチンを開発することが急務となっている。
本発明は以上の実情に鑑みなされたものであって、免疫原性組成物を提供することを目的とする。前記免疫原性組成物は組み換えタンパク質或いは前記組み換えタンパク質をコードしている核酸分子を含む。前記組み換えタンパク質は配列番号1、配列番号2、配列番号3と配列番号4、及び配列番号1~4の何れか1つと少なくとも80%の相同性を有するポリヌクレオチドによりコードされた任意のポリペプチドからなるグループから選択される配列を含み、少なくとも6アミノ酸長を有しているIgG1 Fcタンパク質フラグメントを含む。
〔図1〕RBD-Fcのアミノ酸配列を図示する(配列番号1)。
〔図2〕S2△TM-Fcのアミノ酸配列を図示する(配列番号2)。
〔図3〕S1-Fcのアミノ酸配列を図示する(配列番号3)。
〔図4〕S△TM-Fcのアミノ酸配列を図示する(配列番号4)。
〔図5〕分泌シグナルペプチドのアミノ酸配列を図示する(配列番号5)。
〔図6〕RBD-Fc、S2△TM-Fc、S1-Fc、及びS△TM-FcのDNAゲル電気泳動画像を示す。
〔図7〕ウイルスに感染した細胞の増殖傾向を示す。
〔図8〕ウエスタンブロット画像における感染後3日目、4日目、及び5日目のワクチン候補の発現レベルを示し、(A)はRBD-Fcを示し、(B)はS2△TM-Fcを示し、(C)はS1-Fcを示し、(D)はS△TM-Fcを示す。
〔図9〕精製ワクチン候補のSDS-PEGE(左)及びウエスタンブロット(右)画像を示し、矢印は発現したタンパク質の予想される位置を示し、(A)はRBD-Fcを示し、(B)はS2△TM-Fcを示し、(C)はS1-Fcを示し、(D)はS△TM-Fcを示し、(S)は液体試料を示し、(FT)はフロースルー液体を示し、(W)は洗液を示し、(E)は溶出液を示す。
〔図10〕免疫化したマウスから採取した血液の血清中の中和抗体(NT)価を示す。
〔図11〕SARS-CoV-2ウイルスに対し免疫化したマウスから採取した抗血清のプラーク減少中和試験(PRNT)の結果を示す。
〔図12〕ヌクレオカプシドリンタンパク質(配列番号10)、エンベロープタンパク質(配列番号11)、及びSARS-CoV-2の膜タンパク質(配列番号12)のアミノ酸配列を図示する。
〔図13〕RBD-FcのDNA配列を図示する(配列番号6)。
〔図14〕S2△TM-FcのDNA配列を図示する(配列番号7)。
〔図15〕S1-FcのDNA配列を図示する(配列番号8)。
〔図16〕S△TM-FcのDNA配列を図示する(配列番号9)。
本発明の目的、特徴、及び効果についての理解を促すため、添付図面を参照しつつ本発明の実施形態について詳しく説明する。
まず、4つのワクチン候補のDNA配列は組み換えタンパク質RBD-Fc、S2△TM-Fc、S1-Fc、及びS△TM-Fcをコードするように設計されている。図13はRBD-FcのDNA配列を図示する。図14はS2△TM-FcのDNA配列を図示する。図15はS1-FcのDNA配列を図示する。図16はS△TM-FcのDNA配列を図示する。
sf9細胞を調製し、sf9細胞は27℃の細胞濃度3.5~5×106cells/mLでタンパク質フリー昆虫細胞培地(Lonza Ltd)で増殖する。4つのワクチン候補を製造するために、上述の4つのワクチン候補のDNA配列を含むsf9細胞を感染多重度(MOI)0.1~0.001で前記バキュロウイルス発現ベクターに感染させる。sf9細胞の感染中に、前記バキュロウイルスポリヘドリンプロモーターの転写制御下で前記ワクチン候補が製造される。感染から72~96時間後に6,000 x gで15分間遠心分離を行ってsf9細胞を獲得する。sf9細胞の上清(supernatant)は4°Cで保管する。
本実施形態では、非変性でヒト用コロナウイルスワクチンの成分として適合するRBD-Fcの精製はタンパク質Aアフィニティークロマトグラフィーにより実施する。前記組み換えバキュロウイルスに被感染sf9細胞からRBD-Fcを精製するために、下記工程を用いている。
なし
Claims (12)
- 免疫原性組成物であって、
前記免疫原性組成物は組み換えタンパク質或いは前記組み換えタンパク質をコードしている核酸分子を含み、
前記組み換えタンパク質は配列番号1の配列を含み、かつ
前記組み換えタンパク質は少なくとも6アミノ酸長を有しているIgG1 Fcタンパク質フラグメントを含む、ことを特徴とする免疫原性組成物。 - 前記組み換えタンパク質は分泌シグナルペプチドと融合していることを特徴とする請求項1に記載の免疫原性組成物。
- 免疫原性化合物と、補助剤(adjuvants)と、薬学的に許容される担体と、安定剤(stabilisers)または防腐剤(preservatives)と、をさらに含むことを特徴とする請求項1に記載の免疫原性組成物。
- SARS-CoV-2ワクチンであって、
前記SARS-CoV-2ワクチンは組み換えタンパク質或いは前記組み換えタンパク質をコードしている核酸分子を含み、
前記組み換えタンパク質は配列番号1の配列を含み、かつ
前記組み換えタンパク質は少なくとも6アミノ酸長を有しているIgG1 Fcタンパク質フラグメントを含む、ことを特徴とするSARS-CoV-2ワクチン。 - 前記組み換えタンパク質はSARS-CoV-2のヌクレオカプシドリンタンパク質、SARS-CoV-2のエンベロープタンパク質、及びSARS-CoV-2の膜タンパク質と融合していることを特徴とする請求項4に記載のSARS-CoV-2ワクチン。
- 前記核酸分子によりコードされる組み換えタンパク質はSARS-CoV-2のヌクレオカプシドリンタンパク質、SARS-CoV-2のエンベロープタンパク質、またはSARS-CoV-2の膜タンパク質と融合していることを特徴とする請求項4に記載のSARS-CoV-2ワクチン。
- 免疫原性化合物と、補助剤と、薬学的に許容される担体、安定剤または防腐剤と、をさらに含むことを特徴とする請求項4に記載のSARS-CoV-2ワクチン。
- ベクターであって、
前記ベクターは組み換えタンパク質をコードしている核酸分子を含み、
前記組み換えタンパク質は配列番号1の配列を含み、かつ
前記組み換えタンパク質は少なくとも6アミノ酸長を有しているIgG1 Fcタンパク質フラグメントを含む、ことを特徴とするベクター。 - 前記核酸分子によりコードされる組み換えタンパク質はSARS-CoV-2のヌクレオカプシドリンタンパク質、SARS-CoV-2のエンベロープタンパク質、またはSARS-CoV-2の膜タンパク質と融合していることを特徴とする請求項8に記載のベクター。
- 前記ベクターはバキュロウイルス、ワクシニアウイルス、アビポックスウイルス、アデノウイルス、アルファウイルス、ラブドウイルス、及びヘルペスウイルスからなるグループから選択されることを特徴とする請求項8に記載のベクター。
- 前記ベクターはバキュロウイルスであることを特徴とする請求項10に記載のベクター。
- 配列番号6の配列を含む核酸分子を有することを特徴とする免疫原性組成物。
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