JPH0656893A - 血液伝播型非ａ非ｂ型肝炎ウイルス由来の抗原タンパク質を有する融合タンパク質、およびそれを発現する大腸菌の形質転換体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【目的】 非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス感染症の診断薬とし
て有用な融合タンパク質を開発する。 【構成】 血液伝播型非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス由来の少
なくともコアタンパク質のエピトープを含む親水性領域
（Ａ）と、少なくともエンベロープタンパク質のエピト
ープを含む親水性領域（Ｂ）とを結合してなる融合タン
パク質、および血液伝播型非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス由来
の少なくともコアタンパク質のエピトープを含む親水性
領域（Ａ）をコードするｃＤＮＡの下流に少なくともエ
ンベロープタンパク質のエピトープを含む親水性領域
（Ｂ）をコードするｃＤＮＡが連結してなる遺伝子を有
する組み換えプラスミドで形質転換した大腸菌。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業の利用分野】本発明は、診断薬として有用な新規
な融合タンパク質、それをコードする遺伝子およびそれ
を発現する形質転換体に関し、さらに詳しくは血液伝播
型非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス由来のコアタンパク質のエピ
トープを含む親水性領域とエンベロープタンパク質のエ
ピトープを含む親水性領域とを結合してなる融合タンパ
ク質、その遺伝子、およびそれを発現する大腸菌の形質
転換体に関する。

【０００２】

【従来の技術】ウイルス性肝炎は肝炎ウイルスの感染に
よりおこる肝疾患である。肝炎ウイルスとして現在まで
にＡ型、Ｂ型、およびＤ型（デルタ）の各肝炎ウイルス
が分離同定されていた。しかしこれらの肝炎ウイルスの
感染によらないウイルス性肝炎が多数存在することが報
告された。このような肝炎を総称して非Ａ非Ｂ型肝炎と
呼ぶようになった。従って非Ａ非Ｂ型肝炎の病因ウイル
スが一種であるとは限らず、実際経口感染型ウイルス
（食物や水を介して伝染する）および血液伝播型ウイル
ス（主として血液を介して伝播し輸血後などに多発す
る）の存在が報告されている。非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス
は、従来他のウイルスの発見の経緯とは異なり、ウイル
ス遺伝子の非構造タンパク質領域のクローニングから発
見された（Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４４（４９０９）３５９
−３６２（１９８９））。

【０００３】この非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスは現在のとこ
ろエンベロープウイルスであると考えられている。その
ウイルスゲノムの非構造タンパク質領域の一部を、ヒト
・スーパーオキサイド・ジスムターゼ（ＳＯＤ）との融
合タンパクとして酵母で発現させたＣ１００−３ポリペ
プチドが診断薬として提供され、それを用いる抗体アッ
セイ系（Ｏｒｔｈｏ ＨＣＶ ＥＬＩＳＡ Ｔｅｓｔ
Ｓｙｓｔｅｍ）が確立されている（Ｓｃｉｅｎｃｅ、２
４４（４９０９）３６２−３６４（１９８９））。しか
しながら、この非構造タンパク質に対する抗体は、ウイ
ルス感染後、すぐに産生されるものではないため、感染
初期には発見しにくいという問題がある。

【０００４】一方、血液伝播型非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス
の構造タンパク質領域についてもいくつかの研究グルー
プによって遺伝子がクローニングされた（たとえば、Ｗ
Ｏ９０／１１０８９、ＷＯ９０／１４４３６、岡本ら：
Ｊａｐａｎ Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、６０（３）１６７
−１７７（１９９０）、加藤ら：Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃ
ｅｒ Ｒｅｓ．、８１、１０９２−１０９４（１９９
０）、加藤ら：Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ、８７、９５２４−９５２８（１９９０）、
および高見沢ら：Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．、６５（３）１１９
５−１２１３（１９９１）など）。

【０００５】また、血液伝播型非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス
と他のエンベロープウイルス（例えばフラビウイルス
等）の核酸配列の比較に基づいて、その構造タンパク質
の一つと考えられるコアタンパク質を大腸菌内やバキュ
ロウイルスベクターを用いて昆虫細胞中、動物細胞中で
発現させることに成功している（村磯ら：Ｂｉｏｃｈｅ
ｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．、１７２
（２）５１１−５１６（１９９０）、松浦ら：第４９回
日本癌学会 抄録集ｐ１１３、１９９０年、松浦ら：
第３８回日本ウイルス学会総会 抄録集 ｐ．４７、１
９９０年、原田ら：Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．、６５（６）３０
１５−３０２１、（１９９１））。

【０００６】コアタンパク質を用いたコア抗体検出率
は、前述のＯｒｔｈｏ ＨＣＶ ＥＬＩＳＡ Ｔｅｓｔ
Ｓｙｓｔｅｍ による検出率より優れているという評
価が得られている（千葉ら：Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８８、４６４１−４６４５、
（１９９１））。しかしながら、輸血用の血液の血液伝
播型非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスに対する抗体検査では偽陰
性を防ぐことが重要であり、そのためにはできるだけ多
くの抗原部位を有する抗原を使用することが望まれてい
た。

【０００７】またワクチンに関していえば、現時点で有
効な非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスに対するワクチンは存在し
ない。また非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスのエンベロープタン
パク質がワクチンの抗原タンパク質として有望と考えら
れているものの、バキュロウイルスやワクチニアウイル
スなど動物細胞で発現されるエンベロープタンパク質の
量はわずかであった。大量生産が可能な大腸菌の系で
は、今までエンベロープタンパク質を発現させることに
成功していなかった。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】このような状況をもと
に、本発明者らは血液伝播型非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス由
来の少なくともコアタンパク質の親水性領域をコードす
るｃＤＮＡの下流に少なくともエンベロープタンパク質
のそれぞれの親水性領域をコードするｃＤＮＡを連結さ
せた遺伝子を有する組み換えプラスミドで大腸菌を形質
転換し、培養すると、血液伝播型非Ａ非Ｂ型肝炎ウイル
ス由来のコアタンパク質とエンベロープタンパク質とか
らなる融合タンパク質が効率よく得られることを見いだ
し、本発明を完成するに至った。

【０００９】

【課題を解決するための手段】かくして本発明によれ
ば、第一の発明として、血液伝播型非Ａ非Ｂ型肝炎ウイ
ルス（以下、単に非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスという）由来
の少なくともコアタンパク質のエピトープを含む親水性
領域（Ａ）と少なくともエンベロープタンパク質のエピ
トープを含む親水性領域（Ｂ）とを結合してなる融合タ
ンパク質、およびそれを大量に発現する大腸菌の形質転
換体が提供される。また、第二の発明として、血液伝播
型非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス由来の少なくともコアタンパ
ク質のエピトープを含む親水性領域をコードするｃＤＮ
Ａの下流に少なくともエンベロープタンパク質のエピト
ープを含む親水性領域をコードするｃＤＮＡが連結して
なる遺伝子を有する組み換えプラスミドで形質転換した
大腸菌が提供される。

【００１０】コアタンパク質の少なくともエピトープを
含む親水性領域（Ａ）は、疎水性領域を実質的に含まな
いコアタンパク質あればよく、コアタンパク質の疎水性
領域のアミノ酸が１０個程度以下、好ましくは５個以
下、さらに好ましくは全く含まないものであって、その
分子量が１〜２１Ｋｄ、好ましくは８〜１０Ｋｄである
ものであればよい。このようなものの具体例としては、
配列番号１記載の第１〜８２番目のアミノ酸配列を有す
るものやＣＰ９タンパク質やＣＰ１０タンパク質（Ｈｅ
ｐａｔｏｌｏｇｙ、１５、２、１８０−１８６（１９９
２））などが挙げられる。なお、コアタンパク質の疎水
性領域とは、コアタンパク質のカルボキシ末端側に存在
する膜領域と言われる領域であり、具体例としては配列
番号５記載の第１７０〜１９０番目のアミノ酸配列が挙
げられる。

【００１１】また、エンベロープタンパク質の少なくと
もエピトープを含む親水性領域（Ｂ）は、エンベロープ
タンパク質の疎水性領域を実質的に含まないものであれ
ばよく、エンベロープタンパク質の疎水性領域のアミノ
酸が１０個程度以下、好ましくは５個以下、さらに好ま
しくは全く含まないものであって、その分子量が１〜２
１Ｋｄ、好ましくは８〜２０Ｋｄであるものであればよ
い。このようなものの具体例としては、配列番号２記載
のアミノ酸配列を有するものなどが挙げられる。なお、
エンベロープタンパク質の疎水性領域とは、エンベロー
プタンパク質のカルボキシ末端側に存在する膜領域と言
われる領域であり、具体例としては配列番号５記載の第
３６５〜３８０番目のアミノ酸配列が挙げられる。

【００１２】また、本発明の融合タンパク質は、コアタ
ンパク質の親水性領域とエンベロープタンパク質の親水
性領域からなるが、これらのタンパク質のほかにＮＳ４
タンパク質のエピトープを含む配列番号３に示すアミノ
酸配列など他の血液伝播型非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス由来
の抗原タンパク質のエピトープを結合するものであっっ
てもよく、このような融合タンパク質の具体例として
は、融合タンパク質Ｃ８３Ｅ３６５４（本願明細書実施
例２参照）が挙げられる（配列番号４）。

【００１３】本発明の融合タンパク質は、通常、適当な
ベクターに融合タンパク質をコードする遺伝子を組み込
んだ組み換えベクターを形質転換した大腸菌内で発現さ
せることにより製造される。

【００１４】非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス由来のタンパク質
をコードする遺伝子は、例えば、ＧＰＴが１００以上で
あり、非Ａ非Ｂ型肝炎と診断された日本人の血液から公
知技術によってウイルスＲＮＡを単離し、逆転写酵素に
よりｃＤＮＡを調製した後、非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスの
公知配列（高見沢ら、前掲参照）に基づいて設計された
プライマーを使用したＰＣＲ反応（Ｓａｉｋｉら：雑誌
Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３９、４８７−、（１９８８））を
行いクローニングベクターに挿入し、クローニングする
ことができる。

【００１５】コアタンパク質のエピトープを含む親水性
領域をコードするｃＤＮＡ（以下、コア遺伝子というこ
とがある）は、前述のごとく実質的にコアタンパク質の
疎水性領域のアミノ酸をコードする領域を実質的に含ま
ないものであり、このようなコア遺伝子の具体例として
は、配列番号１記載の第１〜２４３番目の塩基配列から
なるｃＤＮＡが挙げられる。疎水性領域が存在すると大
腸菌内での発現が著しく阻害される（本願明細書比較例
１参照）。

【００１６】また、エンベロープタンパク質のエピトー
プを含む親水性領域をコードするｃＤＮＡ（以下、エン
ベロープ遺伝子ということがある）の具体例としては、
配列番号２記載の塩基配列からなるｃＤＮＡが挙げられ
る。

【００１７】本発明においてはコア遺伝子とエンベロー
プ遺伝子との連結の順序が重要である。即ち、エンベロ
ープ遺伝子は、コア遺伝子の下流に連結させる必要があ
り、逆にするとタンパク質を大腸菌内で発現させること
はできない（本願明細書比較例２参照）。さらに、エン
ベロープ遺伝子のＣ末端側に他の抗原タンパク質をコー
ドする遺伝子を連結させたものを用いると発現量が向上
することがある（本願明細書実施例２参照）。このよう
なタンパク質をコードするｃＤＮＡとして、例えば配列
番号 記載の塩基配列を有する非構成タンパク質ＮＳ
４のエピトープをコードするｃＤＮＡなどを挙げること
ができる。

【００１８】エンベロープ遺伝子のＮ末端側に前記のコ
ア遺伝子、必要に応じてＣ末端側に他の抗原遺伝子を連
結させたｃＤＮＡは、これらの遺伝子を常法にしたがっ
て読み枠がずれないように、適当な合成アダプターを用
いて連結させることにより作製される。

【００１９】組み換えベクターの作製に供されるベクタ
ーは、一般の遺伝子組み換えの技術に使用されるベクタ
ーを使用すればよく、例えば、ｐＢＲ３２２、ｐＢＲ３
２５、ｐＵＣ１８などのプラスミドや、λ−ファージ、
Ｍ１３ファージなどのファージ、ｐＨＣ７９（Ｇｅｎ
ｅ、１１、２９１（１９８０））などのコスミドが例示
される。

【００２０】ベクターに融合タンパク質をコードする遺
伝子を組み込んで組み換えベクターを作製する方法は常
法に従えばよく、例えばベクターを制限酵素で切断した
後、適当な発現制御配列の支配下に、上記遺伝子を直接
結合すればよい。用いられる発現制御配列は、大腸菌内
で機能するものであれば良く、例えばｌａｃプロモータ
ー・オペレーター、ｔｒｐプロモーター、ｔａｃプロモ
ーター、ｌｐｐプロモーター、ＰＬプロモーターなどが
例示される。

【００２１】融合タンパク質をコードする遺伝子を組み
込んだ組み換えベクターで、大腸を形質転換して融合タ
ンパク質の産生能を有する大腸菌を得ることができる。
このような形質転換大腸菌として、ＮＺ−９２０１（微
工研寄託第１３０８９号）が挙げられる。

【００２２】目的とする融合タンパク質が発現している
かどうかを調べる方法は、常法に従えばよく、例えば、
形質転換体を誘導条件下で培養し、それを破砕し、粗タ
ンパク質を回収した後、さらにＳＤＳポリアクリルアミ
ドゲル電気泳動によって分画した後、ゲルをクマジーブ
リリアントブルーの染色液によって染色するか、あるい
は非Ａ非Ｂ型肝炎患者の血清を用いたイムノアッセイに
よって確認できる。

【００２３】融合タンパク質は公知の常法、例えば塩
析、ゲル濾過、イオン交換およびアフィニティーカラム
クロマトグラフィーによる分離法、高速液体クロマトグ
ラフィー、電気泳動による分画法等を適宜組み合わせて
採用することにより精製出来る。精製された融合タンパ
ク質の分子量は、常法、例えば、ＳＤＳポリアクリルア
ミドゲル電気泳動によって測定すればよい。

【００２４】このようにして得られた本発明の融合タン
パク質の抗原性は、非Ａ非Ｂ型肝炎患者血清を用いたイ
ムノアッセイにより調べることができる。

【００２５】

【発明の効果】かくして本発明によれば、ワクチンの有
効成分としての使用が期待される血液伝播型非Ａ非Ｂ型
肝炎ウイルス由来エンベロープタンパク質を含む融合タ
ンパク質を大量に得ることができ、さらに、この融合タ
ンパク質は、コアタンパク質のエピトープをも有するた
めに、有効な非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス検出試薬・感染症
診断薬としての利用も期待される。

【００２６】

【実施例】以下に実施例をあげて本発明をさらに具体的
に説明する。 実施例１ 組み換えプラスミドｐＧＥＸ−ＣＶ３６５４
の作製 （Ａ）血液伝播型非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス構造タンパク
質領域の遺伝子クローニング Ｂ型肝炎陰性でＧＰＴ値１００以上のヒト血清０．５ｍ
ｌに５倍量のグアニジウムチオシアネート溶液（４Ｍグ
アニジウムチオシアネート、５０ｍＭトリス塩酸ｐＨ
７．６、１０ｍＭ ＥＤＴＡ、０．１Ｍ ２−メルカプ
トメタノール、２％ザルコシル）を加えフェノール／ク
ロロホルム抽出しグリコーゲンをキャリアーとしてエタ
ノール沈澱により血清中の全ＲＮＡを精製した。一方、
岡本ら（前掲参照）の結果をもとに以下の配列を持つ４
本の合成ＤＮＡプライマーを作製した。

【００２７】（１）5' CATATGAGCACGAATCCTAA、（２）
5' CCCAACGAGCAAGTCGACGT、（３）5' TGATCATGCATACTCC
CGGGT、（４）5' GCTGCCGTTGGTATTCACAA

【００２８】前記ＲＮＡから（４）の合成ＤＮＡをプラ
イマーを用いて、ｃＤＮＡ合成システム（ベーリンガー
マンハイム社製）でｃＤＮＡを作製した。合成したｃＤ
ＮＡ（約１．２６ｋｂｐ）をテンプレートとして、プラ
イマー（１）と（２）を使ったＰＣＲ法を行いこのｃＤ
ＮＡ断片を増幅した。増幅されたｃＤＮＡ断片の５’末
端をＴ４ポリヌクレオチドキナーゼによりリン酸化した
後、ＳｍａＩで消化したｐＵＣ１８と連結し得られた約
３．４１ｋｂｐのプラスミドをｐＩＫＣと命名した。ま
た、プライマー（３）と（４）を用いて前記と同様の操
作を行い、得られた約３．４５ｋｂｐのプラスミドをｐ
ＩＫＥと命名した。ついで、得られたｐＩＫＣとｐＩＫ
Ｅを制限酵素ＡｖａＩで消化した後、連結し、得られた
約４．０１ｋｂｐのプラスミドをｐＩＫ４ＣＥと命名し
た。

【００２９】（Ｂ）ｐＩＫ４ＣＥの核酸塩基配列とアミ
ノ酸配列の決定 上記（Ａ）で作成したｐＩＫ４ＣＥにクローニングされ
た非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルスのｃＤＮＡ塩基配列を調べる
ためＭ１３ファージに、組み込んだ１．２６ｋｂｐのｃ
ＤＮＡ断片をリクローニングし、Ｓｅｑｕｅｎａｓｅシ
ーケンスキット（Ｕｎｉｔｅｄ Ｓｔａｔｅｓ Ｂｉｏ
ｃｈｅｍｉｃａｌ社製）により塩基配列を決定した。そ
の結果得られた塩基配列と、それから予測されるアミノ
酸配列の解読結果を配列番号５に示した。

【００３０】（Ｃ）非構造タンパク質のアミノ酸配列を
コードするＤＮＡの合成 特表平２−５００８８０号公報のタンパク質Ｃ１００−
３（ＮＳ３タンパク質とＮＳ４タンパク質の一部）のア
ミノ酸配列を基にして、配列番号３に示す４０アミノ酸
（この４０アミノ酸が抗原性を有することは、この４０
アミノ酸からなる合成ペプチドが血液伝播型非Ａ非Ｂ型
肝炎患者と認定された患者血清と反応する事によって確
認した）をコードするＤＮＡを化学合成で作製した。即
ち、４０アミノ酸をコードするＤＮＡ配列として大腸菌
の好適なコドンユセッジを配慮して配列番号３に示す塩
基配列を設計し、以下に示す１２本のＤＮＡフラグメン
トを合成した。

【００３１】 Ｕ１：5'-GATCCGTGGTGCTGTCCGGC-3'、Ｌ１：3'-GCACCACGACAGGCCGTTCGGCC-5' Ｕ２：5'-AAGCCGGCGATCATTCCGGA-3'、Ｌ２：3'-GCTAGTAAGGCCTGGCGCTT-5' Ｕ３：5'-CCGCGAAGTCCTGTACCGCG-3'、Ｌ３：3'-CAGGACATGGCGCTTAA-5'、 Ｕ４：5'-AATTCGATGAGATGGAAGAGTG-3'、Ｌ４：3'-GCTACTCTACCTTCTCACGAGAGTCGT -5'、 Ｕ５5'-CTCTCAGCACTTACCGTACATCGAGCAA-3'、Ｌ５：3'-GAATGGCATGTAGCTCGTTCCGT ACTA-5'、 Ｕ６：5'-GGCATGATGCTGGCCAATTAAGAATT-3'、Ｌ６：3'-CGACCGGTTAATTCTTAAGATC- 5'

【００３２】Ｕ１とＬＩ、Ｕ２とＬ２、Ｕ３とＬ３、Ｕ
４とＬ４、Ｕ５とＬ５、Ｕ６とＬ６をそれぞれアニーリ
ングして、アニールしたＵ１／Ｌ１、Ｕ２／Ｌ２、Ｕ３
／Ｌ３を混合して制限酵素ＢａｍＨＩと制限酵素Ｅｃｏ
ＲＩで切断したｐＧＥＸ−２Ｔ（ファルマシア社製）に
ＤＮＡライゲースを使用して挿入した。得られたプラス
ミドをｐＧＥＸ−ＣＶ１２３６と命名した。また、同じ
くＵ４／Ｌ４、Ｕ５／Ｌ５、Ｕ６／Ｌ６を混合して、制
限酵素ＥｃｏＲＩと制限酵素ＸｂａＩで切断したｐＧＥ
Ｘ−２ＴにＤＮＡライゲースを使用して挿入した。得ら
れたプラスミドをｐＵＣ−ＣＶ１２５４と命名した。

【００３３】プラスミドｐＵＣ−ＣＶ１２５４を制限酵
素ＥｃｏＲＩで切断して回収した７１ｂｐの断片を先に
得られたｐＧＥＸ−ＣＶ１２３６のＥｃｏＲＩサイトに
ＤＮＡライゲースを使用して挿入した。こうして出来た
プラスミドをｐＧＥＸ−ＣＶ３６５４と命名した。この
プラスミドｐＧＥＸ−ＣＶ３６５４は、非Ａ非Ｂ型肝炎
ウイルス由来の非構造タンパク質遺伝子の一部を有して
いる。

【００３４】 実施例２ 融合タンパク質Ｃ８３Ｚ３６５４の製造 （Ａ）融合タンパク質発現ベクターの作製 実施例１（Ａ）で作製したプラスミドｐＩＫ４ＣＥを制
限酵素ＮｄｅＩと制限酵素ＦｓｐＩで切断後、クレノウ
処理で平滑末端にし、約０．６ｋｂｐのＤＮＡ断片をア
ガロースゲルから回収した。ｔａｃプロモーターを有す
るプラスミドｐＫＫ２２３−３（ファルマシア社製）を
制限酵素ＥｃｏＲＩで切断後、クレノウ処理で平滑末端
にし、先に回収した０．６ｋｂｐのＤＮＡ断片をＤＮＡ
ライゲースを使って挿入した。

【００３５】このプラスミドを大腸菌ＴＧ１に導入し、
出現したアンピシリン耐性の形質転換菌から挿入ＤＮＡ
が正方向（配列番号４の方向とｐＫＫ２２３−３のｔａ
ｃプロモーターの転写方向とが同一方向の場合を正方向
とする）に挿入されているプラスミドを持ったコロニー
を選択した。正方向のプラスミド（これをｐＫＫＦｓｐ
と命名）の選択は制限酵素ＫｐｎＩと制限酵素Ｈｉｎｄ
ＩＩＩで切断した時、約０．３４ｋｂｐ断片が出現する
事で容易に選択出来る。

【００３６】このプラスミドｐＫＫＦｓｐの制限酵素Ｋ
ｐｎＩサイトに合成ＤＮＡアダプター（5'-CCTATGGCCAT
AGGGTAC-3'）を挿入して得られたプラスミドをｐＫＫＦ
ｓｐＡＤと命名した。ｐＧＥＸ−２Ｔ（ファルマシア社
製）を制限酵素ＢａｌＩと制限酵素ＰｖｕＩで切断後、
約１．４ｋｂｐのＤＮＡ断片を回収した。次にｐＫＫＦ
ｓｐＡＤを制限酵素ＢａｌＩと制限酵素ＰｖｕＩで切断
した後、約２ｋｂｐのＤＮＡ断片を回収した。

【００３７】続いて、先に回収した約１．４ｋｂｐのＤ
ＮＡ断片とこの約２ｋｂｐのＤＮＡ断片を連結し、得ら
れたプラスミドをｐＨＣ８３Ｚと命名した。この組み換
えプラスミドｐＨＣ８３Ｚは、コアタンパク質の一部を
コードする遺伝子とＧＳＴの一部をコードする遺伝子を
有している。

【００３８】さらに、この組み換えプラスミドｐＨＣ８
３Ｚを制限酵素ＢａｌＩと制限酵素ＢａｍＨＩで切断
し、約３ＫｂｐのＤＮＡ断片を得た。また、実施例１で
作製した組み換えプラスミドｐＩＫ４ＣＥを制限酵素Ｆ
ｓｐＩとＢａｍＨＩとで切断し、４３２ｂｐのＤＮＡ断
片を得た。

【００３９】先に得た約３ＫｂｐのＤＮＡ断片とこの４
３２ｂｐの断片とを連結し、得られた組み換えプラスミ
ドをｐＨＣ８３Ｅと命名した。この組み換えプラスミド
ｐＨＣ８３Ｅを制限酵素ＢａｍＨＩと制限酵素ＰｖｕＩ
で切断し、約２．９ＫｂｐのＤＮＡ断片を得た。

【００４０】また、実施例１で作製した組み換えプラス
ミドｐＧＥＸ−ＣＶ３６５４を同様に制限酵素ＢａｍＨ
ＩとＰｖｕＩで切断後に回収した約１．１ｋｂｐのＤＮ
Ａ断片を挿入して、得られたプラスミドをｐＨＣ８３Ｅ
３６５４と命名した。このプラスミドｐＨＣ８３Ｅ３６
５４は、コアタンパク質のエピトープをコードする遺伝
子、エンベロープタンパク質のエピトープをコードする
遺伝子、ＮＳ４タンパク質のエピトープをコードする遺
伝子を有している。

【００４１】このプラスミドｐＨＣ８３Ｅ３６５４で大
腸菌ＪＭ１０９を形質転換し、得られた形質転換大腸菌
をＮＺ−９２０１（微工研寄託第１３０８９号）と命名
した。

【００４２】 （Ｂ）融合タンパク質Ｃ８３Ｅ３６５４の発現 上記（Ａ）で得られた形質転換大腸菌ＮＺ−９２０１を
５０μｇ／ｍｌのアンピシリンを添加したＬＢ培地１ｍ
ｌで増やし、１ｍＭイソプロピル−β−Ｄ−チオガラク
トピラノシド（以下、ＩＰＴＧという）で誘導し、さら
に３７℃で４時間振とう培養した。その菌体を遠心分離
で集め、レムリのバッファーに懸濁して、１００℃で１
０分間煮沸して可溶化した。そのライセートを１５％Ｓ
ＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動で分析した。コ
ントロールとして実施例３（Ａ）で作製したｐＨＣ８３
Ｅで大腸菌ＪＭ１０９を形質転換した形質転換大腸菌Ｊ
Ｍ１０９／［ｐＨＣ８３Ｅ］を同様に処理した。

【００４３】電気泳動後のゲルをクマジーブリリアント
ブルーの染色液で染色後、脱色したところ、形質転換大
腸菌ＮＺ−９２０１（微工研寄第１３０８９号）のライ
セートでは分子量３１Ｋｄのタンパク質がメジャーバン
ドとして観察された。このタンパク質はｐＨＣ８３Ｅで
形質転換した大腸菌ＪＭ１０９／［ｐＨＣ８３Ｅ］には
認められなかった。またこのタンパク質が非Ａ非Ｂ慢性
肝炎患者の血清と特異的に反応することをイムノブロッ
ト法で確認した。この３１Ｋｄのタンパク質をＣ８３Ｅ
３６５４と命名した。

【００４４】比較例１ エンベロープタンパク質の疎水
性領域を含む融合タンパク質の発現 実施例２（Ａ）で作製したｐＨＣ８３Ｚを制限酵素Ｂａ
ｌＩと制限酵素ＢａｍＨＩで切断し、約３ＫｂｐのＤＮ
Ａ断片を得た。また、ｐＩＫ４ＣＥを処理する制限酵素
としてＦｓｐＩとＥｃｏＲＩを用いて得られた約６９０
ｂｐのＤＮＡ断片を、合成したＥｃｏＲＩ／ＢａｍＨＩ
アダプターを介して先に得た約３ＫｂｐのＤＮＡ断片と
連結し、得られた組み換えプラスミドをｐＨＣ８３Ｅｎ
ｖと命名した。

【００４５】組み換えプラスミドｐＨＣ８３Ｅｎｖを制
限酵素ＢａｍＨＩと制限酵素ＰｖｕＩで切断し、約３．
１ＫｂｐのＤＮＡ断片を得た。ついで実施例１で作製し
た組み換えプラスミドｐＧＥＸ−ＣＶ３６５４を制限酵
素ＢａｍＨＩと制限酵素ＰｖｕＩで切断し、得られた約
１．１ｋｂｐのＤＮＡ断片と先に得た約３．１Ｋｂｐの
ＤＮＡ断片を連結し、得られた組み換えプラスミドをｐ
ＨＣ８３Ｅｎｖ３６５４と命名した。このプラスミド
は、５’上流からコアタンパク質のエピトープをコード
する遺伝子、エンベロープタンパク質の親水性領域のエ
ピトープと膜領域とをコードする遺伝子、ＮＳ４タンパ
ク質のエピトープをコードする遺伝子が連結したものを
有している。

【００４６】実施例２（Ｂ）の方法と同様に、組み換え
プラスミドｐＨＣ８３Ｅｎｖ３６５４で大腸菌ＪＭ１０
９を形質転換し、その形質転換体の融合タンパク質発現
量を調べたが、クマジーブリリアントブルー染色は、予
想分子量４１Ｋｄを有するタンパク質は検出されなかっ
た。また、ウエスタンブロット法でさえも、予想分子量
のタンパク質は、ごく微量しか検出されなかった。この
ことは、エンベロープタンパク質の膜領域を含む遺伝子
を用いた場合、大腸菌において融合タンパク質の発現が
阻害されることを示している。

【００４７】比較例２ エンベロープ遺伝子から翻訳が
開始される融合タンパク質の発現 実施例２（Ａ）で作製した組み換えプラスミドｐＨＣ８
３Ｅ３６５４を制限酵素ＫｐｎＩと制限酵素ＢａｍＨＩ
で切断し、約４４０ｂｐのＤＮＡ断片を回収した。この
断片の配列は、翻訳開始コドンに続いてエンベロープタ
ンパク質が翻訳されるような配列になっている。この断
片を実施例２（Ａ）と同様にプラスミドｐＫＫ２２３−
３（ファルマシア社製）のｔａｃプロモーター下流に連
結することを試みた。しかし、目的の組み換えプラスミ
ドを得ることはできなかった。

【００４８】

【配列表】

配列番号:1 配列の長さ:570 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:Genomic DNA 起源 生物名:血液伝播型非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス 配列 ATG AGC ACG AAT CCT AAA CCT CAA AGA AAA ACC AAA CGT AAC ACC AAC 48 Met Ser Thr Asn Pro Lys Pro Gln Arg Lys Thr Lys Arg Asn Thr Asn 1 5 10 15 CGC CGC CCA CAG GAC GTC AAG TTC CCG GGC GGT GGT CAG ATC GTT GGT 96 Arg Arg Pro Gln Asp Val Lys Phe Pro Gly Gly Gly Gln Ile Val Gly 20 25 30 GGA GTT TAC CTG TTG CCG CGC AGG GGC CCC AGG TTG GGT GTG CGC GCA 144 Gly Val Tyr Leu Leu Pro Arg Arg Gly Pro Arg Leu Gly Val Arg Ala 35 40 45 ACT AGG AAG ACT TCC GAG CGG TCG CAG CCT CGT GGA AGG CGA CAA CCT 192 Thr Arg Lys Thr Ser Glu Arg Ser Gln Pro Arg Gly Arg Arg Gln Pro 50 55 60 ATC CCC AAG GCT CGC CGG CCC GAG GGC AGG GCC TGG GCT CAG CCC CGG 240 Ile Pro Lys Ala Arg Arg Pro Glu Gly Arg Ala Trp Ala Gln Pro Arg 65 70 75 80 TAC CCT TGG CCC CTC TAT GGC AAT GAG GGT CTG GGG TGG GCA GGA TGG 288 Tyr Pro Trp Pro Leu Tyr Gly Asn Glu Gly Leu Gly Trp Ala Gly Trp 85 90 95 CTC CTG TCA CCC CGA GGC TCT CGG CCT AGT TTG TCA CCC ACG GAC CCC 336 Leu Leu Ser Pro Arg Gly Ser Arg Pro Ser Leu Ser Pro Thr Asp Pro 100 105 110 CGG CGT AGG TCG CGT AAT TTG GGT AAG GTC ATC GAT ACC CTT ACA TGC 384 Arg Arg Arg Ser Arg Asn Leu Gly Lys Val Ile Asp Thr Leu Thr Cys 115 120 125 GGC TTC GGA GCC CTC ATG GGG TAC ATT CCG CTC GTC GGC GCC CCC CTA 432 Gly Phe Gly Ala Leu Met Gly Tyr Ile Pro Leu Val Gly Ala Pro Leu 130 135 140 GGC ATG GGC CCC AGG GCC CTG CGG CAT GGC GTC CGG CGT CTG GAG GAC 480 Gly Met Gly Pro Arg Ala Leu Arg His Gly Val Arg Arg Leu Glu Asp 145 150 155 160 GGC GTG AAC TAC GCA ACA GGG AAT CTG CCC GGT TGC TCT TTC TCT ATC 528 Gly Val Asn Tyr Ala Thr Gly Asn Leu Pro Gly Cys Ser Phe Ser Ile 165 170 175 TTC CTT CTA GCT TTG CTG TCT TGT CTG ACC ATC CCA GCT TCC 570 Phe Leu Leu Ala Leu Leu Ser Cys Leu Thr Ile Pro Ala Ser 180 185 190

【００４９】

【配列表】

配列番号:2 配列の長さ:435 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:Genomic DNA 起源 生物名:血液伝播型非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス 配列 AAC GAG TCC GGG GTG TAC CAT GTC ACG AAC GAC TGC TCC AAC TCA AGT 48 Asn Glu Ser Gly Val Tyr His Val Thr Asn Asp Cys Ser Asn Ser Ser 1 5 10 15 ATT GTG TAT GAG GCA GCG GAC ATG ATC ATG CAA CCC CCC GGG TGC GTG 96 Ile Val Tyr Glu Ala Ala Asp Met Ile Met Gln Pro Pro Gly Cys Val 20 25 30 CCC TGC ATC CGA GAG AAC AAT TCC TCC CGT TGC TGG GTG GCG CTC ACC 144 Pro Cys Ile Arg Glu Asn Asn Ser Ser Arg Cys Trp Val Ala Leu Thr 35 40 45 CCC ACG CTC GCG GCC AGG AAC AAC AGC ATC CCC ACC ACG ACA ATA CGA 192 Pro Thr Leu Ala Ala Arg Asn Asn Ser Ile Pro Thr Thr Thr Ile Arg 50 55 60 CGC CAC GGA TCT TTG CTT GTT GGG GCA GCT GCT CTC TGT TCC GCT ATG 240 Arg His Gly Ser Leu Leu Val Gly Ala Ala Ala Leu Cys Ser Ala Met 65 70 75 80 TAC GTA GGG GAT CTC TGC GGA TCT GTC TTC CTC GTC TCC CAG CTG TTC 288 Tyr Val Gly Asp Leu Cys Gly Ser Val Phe Leu Val Ser Gln Leu Phe 85 90 95 ACC TTC TCA CCT CGC CGG TAT GAG ACG GTA CAA GAA TGC AAC TGC TCA 336 Thr Phe Ser Pro Arg Arg Tyr Glu Thr Val Gln Glu Cys Asn Cys Ser 100 105 110 CTC TAT CCC GGC CAC GTA TCA GGT CAC CGC ATG GCT TGG GAT ATG ATG 384 Leu Tyr Pro Gly His Val Ser Gly His Arg Met Ala Trp Asp Met Met 115 120 125 ATG AAC TGG TCA CCT ACA ACG GCC CTA GTG GTA TCG CAG TTA CCC GGA 432 Met Asn Trp Ser Pro Thr Thr Ala Leu Val Val Ser Gln Leu Pro Gly 130 135 140 TCC 435 Ser 145

【００５０】

【配列表】

配列番号:3 配列の長さ:120 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:他の核酸 合成DNA 配列 GTG GTG CTG TCC GGC AAG CCG GCG ATC ATT CCG GAC CGC GAA GTC CTG 48 Val Val Leu Ser Gly Lys Pro Ala Ile Ile Pro Asp Arg Glu Val Leu 1 5 10 15 TAC CGC GAA TTC GAT GAG ATG GAA GAG TCC TCT CAG CAC TTA CCG TAC 96 Tyr Arg Glu Phe Asp Glu Met Glu Glu Ser Ser Gln His Leu Pro Tyr 20 25 30 ATC GAG CAA GGC ATG ATG CTG GCC 120 Ile Glu Gln Gly Met Met Leu Ala 35 40

【００５１】

【配列表】

配列番号:4 配列の長さ:271 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:他の核酸 Hybrid DNA 配列 ATG AGC ACG AAT CCT AAA CCT CAA AGA AAA ACC AAA CGT AAC ACC AAC 48 Met Ser Thr Asn Pro Lys Pro Gln Arg Lys Thr Lys Arg Asn Thr Asn 1 5 10 15 CGC CGC CCA CAG GAC GTC AAG TTC CCG GGC GGT GGT CAG ATC GTT GGT 96 Arg Arg Pro Gln Asp Val Lys Phe Pro Gly Gly Gly Gln Ile Val Gly 20 25 30 GGA GTT TAC CTG TTG CCG CGC AGG GGC CCC AGG TTG GGT GTG CGC GCA 144 Gly Val Tyr Leu Leu Pro Arg Arg Gly Pro Arg Leu Gly Val Arg Ala 35 40 45 ACT AGG AAG ACT TCC GAG CGG TCG CAG CCT CGT GGA AGG CGA CAA CCT 192 Thr Arg Lys Thr Ser Glu Arg Ser Gln Pro Arg Gly Arg Arg Gln Pro 50 55 60 ATC CCC AAG GCT CGC CGG CCC GAG GGC AGG GCC TGG GCT CAG CCC CGG 240 Ile Pro Lys Ala Arg Arg Pro Glu Gly Arg Ala Trp Ala Gln Pro Arg 65 70 75 80 TAC CCT ATG GGC AAC GAG TCC GGG GTG TAC CAT GTC ACG AAC GAC TGC 288 Tyr Pro Met Gly Asn Glu Ser Gly Val Tyr His Val Thr Asn Asp Cys 85 90 95 TCC AAC TCA AGT ATT GTG TAT GAG GCA GCG GAC ATG ATC ATG CAA CCC 336 Ser Asn Ser Ser Ile Val Tyr Glu Ala Ala Asp Met Ile Met Gln Pro 100 105 110 CCC GGG TGC GTG CCC TGC ATC CGA GAG AAC AAT TCC TCC CGT TGC TGG 384 Pro Gly Cys Val Pro Cys Ile Arg Glu Asn Asn Ser Ser Arg Cys Trp 115 120 125 GTG GCG CTC ACC CCC ACG CTC GCG GCC AGG AAC AAC AGC ATC CCC ACC 432 Val Ala Leu Thr Pro Thr Leu Ala Ala Arg Asn Asn Ser Ile Pro Thr 130 135 140 ACG ACA ATG CGA CGC CAC GGA TCT TTG CTT GTT GGG GCA GCT GCT CTC 480 Thr Thr Met Arg Arg His Gly Ser Leu Leu Val Gly Ala Ala Ala Leu 145 150 155 160 TGT TCC GCT ATG TAC GTA GGG GAT CTC TGC GGA TCT GTC TTC CTC GTC 528 Cys Ser Ala Met Tyr Val Gly Asp Leu Cys Gly Ser Val Phe Leu Val 165 170 175 TCC CAG CTG TTC ACC TTC TCA CCT CGC CGG TAT GAG ACG GTA CAA GAA 576 Ser Gln Leu Phe Thr Phe Ser Pro Arg Arg Tyr Glu Thr Val Gln Glu 180 185 190 TGC AAC TGC TCA CTC TAT CCC GGC CAC GTA TCA GGT CAC CGC ATG GCT 624 Cys Asn Cys Ser Leu Tyr Pro Gly His Val Ser Gly His Arg Met Ala 195 200 205 TGG GAT ATG ATG ATG AAC TGG TCA CCT ACA ACG GCC CTA GTG GTA TCG 672 Trp Asp Met Met Met Asn Trp Ser Pro Thr Thr Ala Leu Val Val Ser 210 215 220 CAG TTA CCC GGA TCC GTG GTG CTG TCC GGC AAG CCG GCG ATC ATT CCG 720 Gln Leu Pro Gly Ser Val Val Leu Ser Gly Lys Pro Ala Ile Ile Pro 225 230 235 240 GAC CGC GAA GTC CTG TAC CGC GAA TTC GAT GAG ATG GAA GAG TGC TCT 768 Asp Arg Glu Val Leu Tyr Arg Glu Phe Asp Glu Met Glu Glu Cys Ser 245 250 255 CAG CAC TTA CCG TAC ATC GAG CAA GGC ATG ATG CTG GCC AAT TAA 813 Gln His Leu Pro Tyr Ile Glu Gln Gly Met Met Leu Ala Asn *** 260 265 270

【００５２】

【配列表】

配列番号:5 配列の長さ:1260 配列の型:核酸 鎖の数:二本鎖 トポロジー:直鎖状 配列の種類:Genomic DNA 起源 生物名：血液伝播型非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス 配列 ATG AGC ACG AAT CCT AAA CCT CAA AGA AAA ACC AAA CGT AAC ACC AAC 48 Met Ser Thr Asn Pro Lys Pro Gln Arg Lys Thr Lys Arg Asn Thr Asn 1 5 10 15 CGC CGC CCA CAG GAC GTC AAG TTC CCG GGC GGT GGT CAG ATC GTT GGT 96 Arg Arg Pro Gln Asp Val Lys Phe Pro Gly Gly Gly Gln Ile Val Gly 20 25 30 GGA GTT TAC CTG TTG CCG CGC AGG GGC CCC AGG TTG GGT GTG CGC GCA 144 Gly Val Tyr Leu Leu Pro Arg Arg Gly Pro Arg Leu Gly Val Arg Ala 35 40 45 ACT AGG AAG ACT TCC GAG CGG TCG CAG CCT CGT GGA AGG CGA CAA CCT 192 Thr Arg Lys Thr Ser Glu Arg Ser Gln Pro Arg Gly Arg Arg Gln Pro 50 55 60 ATC CCC AAG GCT CGC CGG CCC GAG GGC AGG GCC TGG GCT CAG CCC CGG 240 Ile Pro Lys Ala Arg Arg Pro Glu Gly Arg Ala Trp Ala Gln Pro Arg 65 70 75 80 TAC CCT TGG CCC CTC TAT GGC AAT GAG GGT CTG GGG TGG GCA GGA TGG 288 Tyr Pro Trp Pro Leu Tyr Gly Asn Glu Gly Leu Gly Trp Ala Gly Trp 85 90 95 CTC CTG TCA CCC CGA GGC TCT CGG CCT AGT TTG TCA CCC ACG GAC CCC 336 Leu Leu Ser Pro Arg Gly Ser Arg Pro Ser Leu Ser Pro Thr Asp Pro 100 105 110 CGG CGT AGG TCG CGT AAT TTG GGT AAG GTC ATC GAT ACC CTT ACA TGC 384 Arg Arg Arg Ser Arg Asn Leu Gly Lys Val Ile Asp Thr Leu Thr Cys 115 120 125 GGC TTC GGA GCC CTC ATG GGG TAC ATT CCG CTC GTC GGC GCC CCC CTA 432 Gly Phe Gly Ala Leu Met Gly Tyr Ile Pro Leu Val Gly Ala Pro Leu 130 135 140 GGC ATG GGC CCC AGG GCC CTG CGG CAT GGC GTC CGG CGT CTG GAG GAC 480 Gly Met Gly Pro Arg Ala Leu Arg His Gly Val Arg Arg Leu Glu Asp 145 150 155 160 GGC GTG AAC TAC GCA ACA GGG AAT CTG CCC GGT TGC TCT TTC TCT ATC 528 Gly Val Asn Tyr Ala Thr Gly Asn Leu Pro Gly Cys Ser Phe Ser Ile 165 170 175 TTC CTT CTA GCT TTG CTG TCT TGT CTG ACC ATC CCA GCT TCC GCT TAC 576 Phe Leu Leu Ala Leu Leu Ser Cys Leu Thr Ile Pro Ala Ser Ala Tyr 180 185 190 GAA GTG CGC AAC GAG TCC GGG GTG TAC CAT GTC ACG AAC GAC TGC TCC 624 Glu Val Arg Asn Glu Ser Gly Val Tyr His Val Thr Asn Asp Cys Ser 195 200 205 AAC TCA AGT ATT GTG TAT GAG GCA GCG GAC ATG ATC ATG CAA CCC CCC 672 Asn Ser Ser Ile Val Tyr Glu Ala Ala Asp Met Ile Met Gln Pro Pro 210 215 220 GGG TGC GTG CCC TGC ATC CGA GAG AAC AAT TCC TCC CGT TGC TGG GTG 720 Gly Cys Val Pro Cys Ile Arg Glu Asn Asn Ser Ser Arg Cys Trp Val 225 230 235 240 GCG CTC ACC CCC ACG CTC GCG GCC AGG AAC AAC AGC ATC CCC ACC ACG 768 Ala Leu Thr Pro Thr Leu Ala Ala Arg Asn Asn Ser Ile Pro Thr Thr 245 250 255 ACA ATA CGA CGC CAC GGA TCT TTG CTT GTT GGG GCA GCT GCT CTC TGT 816 Thr Ile Arg Arg His Gly Ser Leu Leu Val Gly Ala Ala Ala Leu Cys 260 265 270 TCC GCT ATG TAC GTA GGG GAT CTC TGC GGA TCT GTC TTC CTC GTC TCC 864 Ser Ala Met Tyr Val Gly Asp Leu Cys Gly Ser Val Phe Leu Val Ser 275 280 285 CAG CTG TTC ACC TTC TCA CCT CGC CGG TAT GAG ACG GTA CAA GAA TGC 912 Gln Leu Phe Thr Phe Ser Pro Arg Arg Tyr Glu Thr Val Gln Glu Cys 290 295 300 AAC TGC TCA CTC TAT CCC GGC CAC GTA TCA GGT CAC CGC ATG GCT TGG 960 Asn Cys Ser Leu Tyr Pro Gly His Val Ser Gly His Arg Met Ala Trp 305 310 315 320 GAT ATG ATG ATG AAC TGG TCA CCT ACA ACG GCC CTA GTG GTA TCG CAG 1008 Asp Met Met Met Asn Trp Ser Pro Thr Thr Ala Leu Val Val Ser Gln 325 330 335 TTA CCC GGA TCC CAC AAG CCG TCG TGG ATA TGG TGG CGG GGC CAC TGG 1056 Leu Pro Gly Ser His Lys Pro Ser Trp Ile Trp Trp Arg Gly His Trp 340 345 350 GGA GTC CTA GCG GGC CTT GCC TAC TAT TCC ATG GTG GGG AAC TGG GCT 1104 Gly Val Leu Ala Gly Leu Ala Tyr Tyr Ser Met Val Gly Asn Trp Ala 355 360 365 AAA GTG TTG GTT GTG ATG CTA CTC TTT GCC GGT GTT AGC GGC TCG TCT 1152 Lys Val Leu Val Val Met Leu Leu Phe Ala Gly Val Ser Gly Ser Ser 370 375 380 ACC TAC ACG ACA GGG GGA CAA GTG GGT CGC CAG ACT AGT CGT CAC GGG 1200 Thr Tyr Thr Thr Gly Gly Gln Val Gly Arg Gln Thr Ser Arg His Gly 385 390 395 400 GCC CTC TTC AGC CAG GGG GCG TCT CAG GAA GTC CAA CTT GTG AAT ACC 1248 Ala Leu Phe Ser Gln Gly Ala Ser Gln Glu Val Gln Leu Val Asn Thr 405 410 415 AAC GGC AGC GGG 1260 Asn Gly Ser 419

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁵ 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ａ６１Ｋ 39/00 Ｈ 9284−4Ｃ 39/29 9284−4Ｃ Ｃ１２Ｎ 15/51 15/62 15/70 Ｃ１２Ｐ 21/02 ＺＮＡ Ｃ 8214−4Ｂ Ｇ０１Ｎ 33/576 Ｚ 9015−2Ｊ (Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:19） (72)発明者 長内 正俊 東京都渋谷区幡ヶ谷２−43−２ オリンパ ス光学工業株式会社内 (72)発明者 森 エリコ 東京都渋谷区幡ヶ谷２−43−２ オリンパ ス光学工業株式会社内 (72)発明者 金子 恭庸 東京都渋谷区幡ヶ谷２−43−２ オリンパ ス光学工業株式会社内 (72)発明者 中村 誠 東京都渋谷区幡ヶ谷２−43−２ オリンパ ス光学工業株式会社内

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 血液伝播型非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス由来
   の少なくともコアタンパク質のエピトープを含む親水性
   領域（Ａ）と、少なくともエンベロープタンパク質のエ
   ピトープを含む親水性領域（Ｂ）とを結合してなる融合
   タンパク質。
2. 【請求項２】 血液伝播型非Ａ非Ｂ型肝炎ウイルス由来
   の少なくともコアタンパク質のエピトープを含む親水性
   領域（Ａ）をコードするｃＤＮＡの下流に少なくともエ
   ンベロープタンパク質のエピトープを含む親水性領域
   （Ｂ）をコードするｃＤＮＡが連結してなる遺伝子を有
   する組み換えプラスミドで形質転換した大腸菌。