KR20210134672A - 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상을 선택하는 방법 - Google Patents

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에리나 야마카와
마사시 고토
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다이니뽄 스미토모 세이야쿠 가부시키가이샤
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Abstract

대상으로부터 채취된 시료를 사용하여, 종양 단백질 p53(TP53) 유전자 및/또는 BCL6 공동-리프레서(BCOR) 유전자에 있어서의 변이의 유무를 결정하는 공정, 그리고 TP53 야생형 및/또는 BCOR 야생형의 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 포함하는, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상을 선택하는 방법을 개시한다.

Description

암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상을 선택하는 방법
본 발명은 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상을 선택하는 방법에 관한 것이다.
생체에 의한 종양 세포나 바이러스 감염 세포 등의 배제에는 세포성 면역, 특히 세포 상해성 T 세포(CTL이라고 칭한다)가 중요한 작용을 하고 있다. CTL은 종양 세포 상의 항원 펩티드(종양 항원 펩티드)와 MHC(Major Histocompatibility Complex) 클래스 I 항원의 복합체를 인식한 전구체 T 세포가 분화 증식하여 생성되는 것이며, 종양 세포를 공격한다.
MHC는 인간에서는 인간 백혈구형 항원(HLA)이라고 불리고, HLA-A, B 및 Cw 등이 알려져 있다. 종양 항원 펩티드는 종양에서 고발현하고 있는 단백질, 즉 종양 항원 단백질이 세포 내에서 합성된 후, 프로테아제에 의해 세포 내에서 분해됨으로써 생성된다. 생성된 종양 항원 펩티드는 소포체 내에서 MHC 클래스 I 항원과 결합하여 복합체를 형성하고, 세포 표면에 운반되어서 항원 제시된다. 이 항원 제시된 종양 항원 펩티드(킬러 펩티드)를 종양 반응성의 CTL이 인식하고, 세포 상해 작용이나 림포카인의 산생을 통하여 항종양 효과를 나타낸다.
종양 항원 단백질 또는 종양 항원 유래의 킬러 펩티드를 소위 암 면역 요법제(암 백신)의 주성분으로서 이용함으로써, 암 환자의 체내의 암 특이적 CTL을 증강시키는 치료법의 개발이 검토되고 있다. 예를 들어, WT1(Wilm's tumor 1)을 표적으로 한 암 면역 요법이 계속 개발되고 있다. WT1은 소아의 신장암인 윌름스 종양의 책임 유전자로서 동정된 유전자이며, 징크 핑거 구조를 갖는 전사 인자이다(비특허문헌 1 참조). 당초, WT1 유전자는 암 억제 유전자인 것으로 여겨졌지만, 그 후의 연구에 의해, 조혈기 종양이나 고형암에 있어서는 오히려 암 유전자로서 작용하는 것이 나타났다. 또한, WT1 유전자는 많은 악성 종양에 있어서 고발현하고 있는 것이 보고되어 있다(비특허문헌 2 참조). WT1은 백혈병 및 고형암에 있어서의 새로운 종양 항원 단백질인 것으로 생각되고 있다(비특허문헌 3 참조). 그래서, WT1 단백 혹은 WT1 단백 유래의 펩티드를 이용한 암 백신 요법이나 수지상 세포 요법, WT1 단백 유래의 펩티드와 HLA 복합체를 인식하는 TCR형 항체, 혹은 TCR형 항체를 이용한 키메라 항원 수용체(CAR) 유전자 개변 T 세포 요법 등이 개발 중이다.
당해 WT1 단백질에 대해서, 예를 들어 WT1126-134 펩티드, WT1235-243 펩티드, WT110-18 펩티드, WT1187-195 펩티드, WT1302-310 펩티드, 및 WT137-45 펩티드 등, MHC 클래스 I에 결합하여 제시되는 킬러 펩티드가 보고되어 있다(특허문헌 1, 특허문헌 2, 비특허문헌 4 및 5 참조).
또한, 암 면역 요법에 있어서 중요한 작용을 하고 있는 세포로서는, CTL 이외에 헬퍼 T(Th1) 세포를 들 수 있다. 일반적으로, 항원 단백질은 세포 내 리소좀으로 분해되고, 13 내지 17 잔기 정도의 아미노산으로 구성되는 단편 펩티드의 일부가 항원 펩티드(헬퍼 펩티드)로서 MHC 클래스 II 분자에 결합한다. 그 후, 항원 펩티드와 MHC 클래스 II 분자의 복합체가 TCR·CD3 복합체에 제시되어서 활성화된 Th1 세포는 CTL의 유도 및 활성화를 촉진한다. 인간의 MHC 클래스 II 분자로서 HLA-DR, DQ 및 DP 등이 알려져 있고, WT1 단백에서 유래되는 복수의 헬퍼 펩티드가 지금까지 동정되어 있다(비특허문헌 6 및 7 참조).
암 면역 요법의 효과를 충분히 발휘시키기 위해서는, 미리 대상의 응답을 예측하고, 그 효과를 기대할 수 있는 대상을 선택하는 것이 중요하다. 그러나, 상기 MHC 클래스 I에 결합하여 제시되는 킬러 펩티드 및/또는 MHC 클래스 II 분자에 결합하는 헬퍼 펩티드를 이용하여 WT1을 표적으로 한 암 면역 요법이 계속 개발되고 있는 한편, 지금까지, WT1 항원 단백질 유래의 항원 펩티드를 이용한 WT1 펩티드 백신에 의한 치료 또는 예방의 효과를 기대할 수 있는 대상을 미리 선택하는 방법에 관한 보고는 없었다.
국제 공개 제00/06602호 국제 공개 제00/18795호
Am J Hum Genet. 1993; 52: 192-203 Blood.1997; 89: 1405-1412 Immunogenetics. 2000; 51: 99-107 Clin Cancer Res. 2005; 11: 8799-807 Blood. 2008 Oct 1; 112(7): 2956-64 J Immunother. 2007; 30: 282-93 Cancer Immunol Immunother. 2010; 59: 1467-79
따라서, 본 발명은 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상을 선택하는 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다. 여기서, 의약 조성물은 WT1 킬러 펩티드 및/또는 WT1 헬퍼 펩티드를 포함한다.
본 발명자들은 상기 과제를 해결하기 위해 예의 검토한 결과, 종양 단백질 p53(Tumor Protein p53(TP53)) 유전자 및/또는 BCL6 공동-리프레서(BCL6 co-repressor(BCOR)) 유전자에 있어서의 변이의 유무, 그리고 WT1 유전자의 mRNA 발현량 등에 기초하여, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상을 선택하는 방법을 알아내고, 본 발명을 완성하기에 이르렀다.
즉, 예를 들어 본 발명은 이하의 발명을 포함한다.
〔1〕
암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상을 선택하는 방법으로서,
상기 대상으로부터 채취된 시료를 사용하여, TP53 유전자 및/또는 BCOR 유전자에 있어서의 변이의 유무를 결정하는 공정, 그리고
TP53 야생형 및/또는 BCOR 야생형의 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 포함하고,
상기 의약 조성물은, RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7), VLDFAPPGA(서열 번호: 9), CMTWNQMNL(서열 번호: 3), CYTWNQMNL(서열 번호: 4), CNKRYFKLSHLQMHSRK(서열 번호: 11), CNKRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호: 12), CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(서열 번호: 13), WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14), CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 15) 및 WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호: 16)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 방법.
〔2〕
상기 의약 조성물이, RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7) 및 VLDFAPPGA(서열 번호: 9)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔1〕에 기재된 방법.
〔3〕
상기 의약 조성물이, CMTWNQMNL(서열 번호: 3) 및 CYTWNQMNL(서열 번호: 4)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔1〕 또는 〔2〕에 기재된 방법.
〔4〕
상기 의약 조성물이, RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7) 및 VLDFAPPGA(서열 번호: 9)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드, 그리고
CMTWNQMNL(서열 번호: 3) 및 CYTWNQMNL(서열 번호: 4)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔1〕 내지 〔3〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔5〕
상기 의약 조성물이, 식 (1):
Figure pct00001
[식 중, Xa 및 Ya는 단결합을 나타내고, 종양 항원 펩티드 A는 이하의 아미노산 서열:
RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7) 및 VLDFAPPGA(서열 번호: 9) 중에서 선택되는 어느 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 나타내고, 종양 항원 펩티드 A의 N 말단 아미노산의 아미노기가 식 (1) 중의 Ya와 결합하고, 종양 항원 펩티드 A의 C 말단 아미노산의 카르보닐기가 식 (1) 중의 수산기와 결합하고,
R1은 수소 원자 또는 종양 항원 펩티드 B를 나타내고,
종양 항원 펩티드 B는, 종양 항원 펩티드 A와는 서열이 다르고 또한 이하의 아미노산 서열:
CMTWNQMNL(서열 번호: 3) 및 CYTWNQMNL(서열 번호: 4) 중에서 선택되는 어느 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 나타내고, 종양 항원 펩티드 B의 시스테인 잔기의 티오에테르기가 식 (1) 중의 티오에테르기와 결합한다.]
로 표시되는 화합물 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔1〕 내지 〔4〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔6〕
상기 의약 조성물이, RMFPNAPYL(서열 번호: 2)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔1〕 내지 〔5〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔7〕
상기 의약 조성물이, YMFPNAPYL(서열 번호: 2)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔1〕 내지 〔5〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔8〕
상기 의약 조성물이, C-CMTWNQMNL(C-C간은 디술피드 결합을 나타낸다, 서열 번호: 21)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔1〕 내지 〔5〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔9〕
상기 의약 조성물이, C-CYTWNQMNL(C-C간은 디술피드 결합을 나타낸다, 서열 번호: 10)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔1〕 내지 〔5〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔10〕
상기 의약 조성물이, CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 15)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔1〕 내지 〔9〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔11〕
상기 의약 조성물이, WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호: 16)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔1〕 내지 〔9〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔12〕
상기 의약 조성물이, WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔1〕 내지 〔9〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔13〕
식 (1)로 표시되는 화합물이, 식 (2):
Figure pct00002
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
로 표시되는 화합물 또는 그의 약학상 허용되는 염인, 〔5〕에 기재된 방법.
〔14〕
식 (1)로 표시되는 화합물이, 식 (3):
Figure pct00003
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)으로 표시되는 화합물 또는 그의 약학상 허용되는 염인, 〔5〕에 기재된 방법.
〔15〕
상기 의약 조성물이, CNKRYFKLSHLQMHSRK(서열 번호: 11), CNKRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호: 12), CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(서열 번호: 13), WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14), CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 15) 및 WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호: 16)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 더 포함하는, 〔1〕 내지 〔14〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔16〕
식 (1)로 표시되는 화합물이, 식 (2):
Figure pct00004
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
로 표시되는 화합물 또는 그의 약학상 허용되는 염이며,
상기 의약 조성물이 추가로 WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14) 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔5〕에 기재된 방법.
〔17〕
식 (1)로 표시되는 화합물이, 식 (3):
Figure pct00005
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)으로 표시되는 화합물 또는 그의 약학상 허용되는 염이며,
상기 의약 조성물이 추가로 WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14) 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔5〕에 기재된 방법.
〔18〕
상기 의약 조성물이 약학상 허용되는 담체를 포함하는, 〔1〕 내지 〔17〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔19〕
TP53 야생형의 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는, 〔1〕 내지 〔18〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔20〕
TP53 야생형 및 BCOR 야생형의 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는, 〔1〕 내지 〔19〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔21〕
상기 대상으로부터 채취한 시료를 사용하여, WT1 유전자의 mRNA 발현량을 결정하는 공정, 및 상기 WT1 유전자의 mRNA 발현량이 기준값 미만 또는 이하인 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 더 포함하는, 〔1〕 내지 〔20〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔22〕
〔1〕 내지 〔18〕의 어느 것에 기재된 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여한 상기 대상으로부터 채취한 시료를 사용하여, WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포를 검출하는 공정, 및
투여 전의 상기 대상으로부터 채취한 시료와 비교하여, 상기 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 증가한 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 더 포함하는, 〔1〕 내지 〔21〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔23〕
WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포를 검출하는 공정이, WT1 펩티드와 HLA 분자의 복합체를 상기 시료와 반응시키고, 상기 시료에 포함되는 상기 복합체를 인식하는 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포의 존재 또는 세포수를 조사함으로써 실시되는, 〔22〕에 기재된 방법.
〔24〕
상기 WT1 펩티드와 HLA 분자의 복합체가 테트라머의 형태인, 〔23〕에 기재된 방법.
〔25〕
상기 HLA 분자가 상기 대상의 HLA에 적합한 것인, 〔23〕 또는 〔24〕에 기재된 방법.
〔26〕
WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포를 검출하는 공정이 플로 사이토메트리법에 의한 해석을 포함하는, 〔22〕 내지 〔25〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔27〕
〔1〕 내지 〔18〕의 어느 것에 기재된 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 복수회 투여한 대상에 있어서, 지연형 과민 반응이 검출된 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 더 포함하는, 〔1〕 내지 〔26〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔28〕
대상에 있어서의 〔1〕 내지 〔18〕의 어느 것에 기재된 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여한 개소에 있어서의 반응과, 상기 대상에 있어서의 상기 의약 조성물 또는 상기 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여하고 있지 않은 개소에 있어서의 반응을 비교하여, 투여한 개소에 있어서의 반응과 투여하고 있지 않은 개소에 있어서의 반응의 차가 기준값 이상인 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 더 포함하는, 〔27〕에 기재된 방법.
〔29〕
상기 대상의 개정 IPSS(IPSS-R)에 기초하는 핵형이 매우 불량 이외인 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 더 포함하는, 〔1〕 내지 〔28〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔30〕
대상에 있어서의 〔1〕 내지 〔18〕의 어느 것에 기재된 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여한 대상으로부터 채취된 시료에 있어서의 골수 아구의 비율을, 상기 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여하기 전의 대상으로부터 채취된 시료에 있어서의 골수 아구의 비율로 나눈 값이 기준값 미만 또는 이하인 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 더 포함하는, 〔1〕 내지 〔29〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔31〕
상기 시료가 체액, 점막, 세포, 조직 및 세포 또는 조직의 배양물 그리고 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, 〔1〕 내지 〔30〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔32〕
상기 암이 백혈병, 골수 이형성 증후군, 다발성 골수종, 악성 림프종, 위암, 대장암, 폐암, 유방암, 배세포암, 간암, 피부암, 방광암, 전립선암, 자궁암, 자궁경암, 난소암 및 뇌종양으로 이루어지는 군에서 선택되는, 〔1〕 내지 〔31〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔33〕
〔1〕 내지 〔32〕의 어느 것에 기재된 방법에 의해, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상을 선택하는 공정, 및
선택된 대상에 대하여 〔1〕 내지 〔18〕의 어느 것에 기재된 의약 조성물을 투여하는 공정을 포함하는, 암의 치료 방법.
〔34〕
암의 치료 방법에 사용하기 위한 의약 조성물로서,
RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7), VLDFAPPGA(서열 번호: 9), CMTWNQMNL(서열 번호: 3), CYTWNQMNL(서열 번호: 4), CNKRYFKLSHLQMHSRK(서열 번호: 11), CNKRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호: 12), CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(서열 번호: 13), WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14), CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 15) 및 WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호: 16)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하고,
상기 치료 방법은, 〔1〕 내지 〔33〕의 어느 것에 기재된 방법에 의해, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상을 선택하는 공정, 및
선택된 대상에 대하여 상기 의약 조성물을 투여하는 공정을 포함하는, 의약 조성물.
〔35〕
암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상을 선택하는 방법으로서,
상기 대상으로부터 채취된 시료를 사용하여, WT1 유전자의 mRNA 발현량을 결정하는 공정, 및
상기 WT1 유전자의 mRNA 발현량이 기준값 미만 또는 이하인 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 포함하고,
상기 의약 조성물은, RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7), VLDFAPPGA(서열 번호: 9), CMTWNQMNL(서열 번호: 3), CYTWNQMNL(서열 번호: 4), CNKRYFKLSHLQMHSRK(서열 번호: 11), CNKRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호: 12), CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(서열 번호: 13), WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14), CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 15) 및 WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호: 16)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 방법.
〔36〕
상기 의약 조성물이, RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7) 및 VLDFAPPGA(서열 번호: 9)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔35〕에 기재된 방법.
〔37〕
상기 의약 조성물이, CMTWNQMNL(서열 번호: 3) 및 CYTWNQMNL(서열 번호: 4)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔35〕 또는 〔36〕에 기재된 방법.
〔38〕
상기 의약 조성물이, RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7) 및 VLDFAPPGA(서열 번호: 9)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드, 그리고
CMTWNQMNL(서열 번호: 3) 및 CYTWNQMNL(서열 번호: 4)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔35〕 내지 〔38〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔39〕
상기 의약 조성물이, 식 (1):
Figure pct00006
[식 중, Xa 및 Ya는 단결합을 나타내고, 종양 항원 펩티드 A는 이하의 아미노산 서열:
RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7) 및 VLDFAPPGA(서열 번호: 9) 중에서 선택되는 어느 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 나타내고, 종양 항원 펩티드 A의 N 말단 아미노산의 아미노기가 식 (1) 중의 Ya와 결합하고, 종양 항원 펩티드 A의 C 말단 아미노산의 카르보닐기가 식 (1) 중의 수산기와 결합하고,
R1은 수소 원자 또는 종양 항원 펩티드 B를 나타내고,
종양 항원 펩티드 B는, 종양 항원 펩티드 A와는 서열이 다르고 또한 이하의 아미노산 서열:
CMTWNQMNL(서열 번호: 3) 및 CYTWNQMNL(서열 번호: 4) 중에서 선택되는 어느 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 나타내고, 종양 항원 펩티드 B의 시스테인 잔기의 티오에테르기가 식 (1) 중의 티오에테르기와 결합한다.]
로 표시되는 화합물 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔35〕 내지 〔38〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔40〕
상기 의약 조성물이, RMFPNAPYL(서열 번호: 2)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔35〕 내지 〔39〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔41〕
상기 의약 조성물이, YMFPNAPYL(서열 번호: 2)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔35〕 내지 〔39〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔42〕
상기 의약 조성물이, C-CMTWNQMNL(C-C간은 디술피드 결합을 나타낸다, 서열 번호: 21)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔35〕 내지 〔39〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔43〕
상기 의약 조성물이, C-CYTWNQMNL(C-C간은 디술피드 결합을 나타낸다, 서열 번호: 10)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔35〕 내지 〔39〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔44〕
상기 의약 조성물이, CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 15)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔35〕 내지 〔43〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔45〕
상기 의약 조성물이, WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호: 16)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔35〕 내지 〔43〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔46〕
상기 의약 조성물이, WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔35〕 내지 〔43〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔47〕
식 (1)로 표시되는 화합물이, 식 (2):
Figure pct00007
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
로 표시되는 화합물 또는 그의 약학상 허용되는 염인, 〔39〕에 기재된 방법.
〔48〕
식 (1)로 표시되는 화합물이, 식 (3):
Figure pct00008
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)으로 표시되는 화합물 또는 그의 약학상 허용되는 염인, 〔39〕에 기재된 방법.
〔49〕
상기 의약 조성물이, CNKRYFKLSHLQMHSRK(서열 번호: 11), CNKRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호: 12), CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(서열 번호: 13), WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14), CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 15) 및 WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호: 16)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 더 포함하는, 〔35〕 내지 〔48〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔50〕
식 (1)로 표시되는 화합물이, 식 (2):
Figure pct00009
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
로 표시되는 화합물 또는 그의 약학상 허용되는 염이며,
상기 의약 조성물이 추가로 WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14) 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔39〕에 기재된 방법.
〔51〕
식 (1)로 표시되는 화합물이, 식 (3):
Figure pct00010
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)으로 표시되는 화합물 또는 그의 약학상 허용되는 염이며,
상기 의약 조성물이 추가로 WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14) 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔39〕에 기재된 방법.
〔52〕
상기 의약 조성물이 약학상 허용되는 담체를 포함하는, 〔35〕 내지 〔50〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔53〕
상기 대상으로부터 채취된 시료를 사용하여, TP53 유전자 및/또는 BCOR 유전자에 있어서의 변이의 유무를 결정하는 공정, 그리고
TP53 야생형 및/또는 BCOR 야생형의 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 더 포함하는, 〔35〕 내지 〔52〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔54〕
TP53 야생형의 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는, 〔53〕에 기재된 방법.
〔55〕
TP53 야생형 및 BCOR 야생형의 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는, 〔53〕 또는 〔54〕에 기재된 방법.
〔56〕
〔35〕 내지 〔52〕의 어느 것에 기재된 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여한 상기 대상으로부터 채취한 시료를 사용하여, WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포를 검출하는 공정, 및
투여 전의 상기 대상으로부터 채취한 시료와 비교하여, 상기 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 증가한 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 더 포함하는, 〔35〕 내지 〔55〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔57〕
WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포를 검출하는 공정이, WT1 펩티드와 HLA 분자의 복합체를 상기 시료와 반응시키고, 상기 시료에 포함되는 상기 복합체를 인식하는 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포의 존재 또는 세포수를 조사함으로써 실시되는, 〔56〕에 기재된 방법.
〔58〕
상기 WT1 펩티드와 HLA 분자의 복합체가 테트라머의 형태인, 〔57〕에 기재된 방법.
〔59〕
상기 HLA 분자가 상기 대상의 HLA에 적합한 것인, 〔57〕 또는 〔58〕에 기재된 방법.
〔60〕
WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포를 검출하는 공정이 플로 사이토메트리법에 의한 해석을 포함하는, 〔56〕 내지 〔59〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔61〕
〔35〕 내지 〔52〕의 어느 것에 기재된 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 복수회 투여한 대상에 있어서, 지연형 과민 반응이 검출된 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 더 포함하는, 〔35〕 내지 〔60〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔62〕
대상에 있어서의 〔35〕 내지 〔52〕의 어느 것에 기재된 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여한 개소에 있어서의 반응과, 상기 대상에 있어서의 상기 의약 조성물 또는 상기 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여하고 있지 않은 개소에 있어서의 반응을 비교하여, 투여한 개소에 있어서의 반응과 투여하고 있지 않은 개소에 있어서의 반응의 차가 기준값 이상인 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 더 포함하는, 〔61〕에 기재된 방법.
〔63〕
상기 대상의 개정 IPSS(IPSS-R)에 기초하는 핵형이 매우 불량 이외인 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 더 포함하는, 〔35〕 내지 〔62〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔64〕
대상에 있어서의 〔35〕 내지 〔52〕의 어느 것에 기재된 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여한 대상으로부터 채취된 시료에 있어서의 골수 아구의 비율을, 상기 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여하기 전의 대상으로부터 채취된 시료에 있어서의 골수 아구의 비율로 나눈 값이 기준값 미만 또는 이하인 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 더 포함하는, 〔35〕 내지 〔63〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔65〕
상기 시료가 체액, 점막, 세포, 조직 및 세포 또는 조직의 배양물 그리고 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, 〔35〕 내지 〔64〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔66〕
상기 암이 백혈병, 골수 이형성 증후군, 다발성 골수종, 악성 림프종, 위암, 대장암, 폐암, 유방암, 배세포암, 간암, 피부암, 방광암, 전립선암, 자궁암, 자궁경암, 난소암 및 뇌종양으로 이루어지는 군에서 선택되는, 〔35〕 내지 〔65〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔67〕
〔35〕 내지 〔66〕의 어느 것에 기재된 방법에 의해, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상을 선택하는 공정, 및
선택된 대상에 대하여 〔35〕 내지 〔52〕의 어느 것에 기재된 의약 조성물을 투여하는 공정을 포함하는, 암의 치료 방법.
〔68〕
암의 치료 방법에 사용하기 위한 의약 조성물로서,
RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7), VLDFAPPGA(서열 번호: 9), CMTWNQMNL(서열 번호: 3), CYTWNQMNL(서열 번호: 4), CNKRYFKLSHLQMHSRK(서열 번호: 11), CNKRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호: 12), CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(서열 번호: 13), WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14), CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 15) 및 WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호: 16)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하고,
상기 치료 방법은, 〔35〕 내지 〔66〕의 어느 것에 기재된 방법에 의해, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상을 선택하는 공정, 및
선택된 대상에 대하여 상기 의약 조성물을 투여하는 공정을 포함하는, 의약 조성물.
〔69〕
암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상인지의 여부의 지표를 제공하기 위한 마커로서의, TP53 유전자 및/또는 BCOR 유전자의 사용으로서,
상기 의약 조성물은, RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7), VLDFAPPGA(서열 번호: 9), CMTWNQMNL(서열 번호: 3), CYTWNQMNL(서열 번호: 4), CNKRYFKLSHLQMHSRK(서열 번호: 11), CNKRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호: 12), CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(서열 번호: 13), WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14), CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 15) 및 WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호: 16)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 사용.
〔70〕
유전자에 있어서의 변이의 유무에 기초하여, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상인지의 여부의 지표를 제공하는, 〔69〕에 기재된 사용.
〔71〕
WT1 유전자의 mRNA 발현량에 기초하여, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상인지의 여부의 지표를 제공하기 위한 마커로서의 WT1 유전자의 사용으로서,
상기 의약 조성물은, RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7), VLDFAPPGA(서열 번호: 9), CMTWNQMNL(서열 번호: 3), CYTWNQMNL(서열 번호: 4), CNKRYFKLSHLQMHSRK(서열 번호: 11), CNKRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호: 12), CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(서열 번호: 13), WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14), CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 15) 및 WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호: 16)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 사용.
〔72〕
WT1 유전자의 mRNA 발현량이 기준값 미만 또는 이하인 경우에, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는, 〔71〕에 기재된 사용.
〔73〕
암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 후보 물질의 효과를 평가하는 방법으로서,
상기 의약 조성물 또는 상기 의약 조성물에 포함되는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여한 대상으로부터 채취한 시료를 사용하여, WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포를 검출하는 공정, 및
투여 전의 상기 대상으로부터 채취한 시료와 비교하여, 상기 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 증가한 경우에, 상기 후보 물질은 암의 치료 및 예방에 대하여 효과를 기대할 수 있다라는 지표를 제공하는 공정을 포함하고,
상기 의약 조성물은, RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7), VLDFAPPGA(서열 번호: 9), CMTWNQMNL(서열 번호: 3), CYTWNQMNL(서열 번호: 4), CNKRYFKLSHLQMHSRK(서열 번호: 11), CNKRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호: 12), CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(서열 번호: 13), WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14), CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 15) 및 WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호: 16)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 방법.
〔74〕
암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 후보 물질의 효과를 평가하는 방법으로서,
상기 의약 조성물 또는 상기 의약 조성물에 포함되는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 복수회 투여한 대상에 있어서, 지연형 과민 반응이 검출된 경우에, 상기 후보 물질은 암의 치료 및 예방에 대하여 효과를 기대할 수 있다라는 지표를 제공하는 공정을 포함하고,
상기 의약 조성물은, RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7), VLDFAPPGA(서열 번호: 9), CMTWNQMNL(서열 번호: 3), CYTWNQMNL(서열 번호: 4), CNKRYFKLSHLQMHSRK(서열 번호: 11), CNKRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호: 12), CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(서열 번호: 13), WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14), CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 15) 및 WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호: 16)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 방법.
〔75〕
암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상을 선택하는 방법으로서,
상기 대상의 개정 IPSS(IPSS-R)에 기초하는 핵형이 매우 불량 이외인 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 포함하고,
상기 의약 조성물은, RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7), VLDFAPPGA(서열 번호: 9), CMTWNQMNL(서열 번호: 3), CYTWNQMNL(서열 번호: 4), CNKRYFKLSHLQMHSRK(서열 번호: 11), CNKRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호: 12), CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(서열 번호: 13), WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14), CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 15) 및 WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호: 16)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 방법.
〔76〕
상기 의약 조성물이, RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7) 및 VLDFAPPGA(서열 번호: 9)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔75〕에 기재된 방법.
〔77〕
상기 의약 조성물이, CMTWNQMNL(서열 번호: 3) 및 CYTWNQMNL(서열 번호: 4)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔75〕 또는 〔76〕에 기재된 방법.
〔78〕
상기 의약 조성물이, RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7), 및 VLDFAPPGA(서열 번호: 9)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드, 그리고
CMTWNQMNL(서열 번호: 3) 및 CYTWNQMNL(서열 번호: 4)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔75〕 내지 〔77〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔79〕
상기 의약 조성물이, 식 (1):
Figure pct00011
[식 중, Xa 및 Ya는 단결합을 나타내고, 종양 항원 펩티드 A는 이하의 아미노산 서열:
RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7) 및 VLDFAPPGA(서열 번호: 9) 중에서 선택되는 어느 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 나타내고, 종양 항원 펩티드 A의 N 말단 아미노산의 아미노기가 식 (1) 중의 Ya와 결합하고, 종양 항원 펩티드 A의 C 말단 아미노산의 카르보닐기가 식 (1) 중의 수산기와 결합하고,
R1은 수소 원자 또는 종양 항원 펩티드 B를 나타내고,
종양 항원 펩티드 B는, 종양 항원 펩티드 A와는 서열이 다르고 또한 이하의 아미노산 서열:
CMTWNQMNL(서열 번호: 3) 및 CYTWNQMNL(서열 번호: 4) 중에서 선택되는 어느 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 나타내고, 종양 항원 펩티드 B의 시스테인 잔기의 티오에테르기가 식 (1) 중의 티오에테르기와 결합한다.]
로 표시되는 화합물 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔75〕 내지 〔78〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔80〕
상기 의약 조성물이, RMFPNAPYL(서열 번호: 2)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔75〕 내지 〔79〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔81〕
상기 의약 조성물이, YMFPNAPYL(서열 번호: 8)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔75〕 내지 〔79〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔82〕
상기 의약 조성물이, C-CMTWNQMNL(C-C간은 디술피드 결합을 나타낸다, 서열 번호: 21)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔75〕 내지 〔79〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔83〕
상기 의약 조성물이, C-CYTWNQMNL(C-C간은 디술피드 결합을 나타낸다, 서열 번호: 10)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔75〕 내지 〔79〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔84〕
상기 의약 조성물이, CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 15)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔75〕 내지 〔83〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔85〕
상기 의약 조성물이, WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호: 16)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔75〕 내지 〔83〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔86〕
상기 의약 조성물이, WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔75〕 내지 〔83〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔87〕
식 (1)로 표시되는 화합물이, 식 (2):
Figure pct00012
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
로 표시되는 화합물인, 〔79〕에 기재된 화합물 또는 그의 약학상 허용되는 염인, 5에 기재된 방법.
〔88〕
식 (1)로 표시되는 화합물이, 식 (3):
Figure pct00013
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)으로 표시되는 화합물인, 항 1에 기재된 화합물 또는 그의 약학상 허용되는 염인, 〔79〕에 기재된 방법.
〔89〕
상기 의약 조성물이, CNKRYFKLSHLQMHSRK(서열 번호: 11), CNKRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호: 12), CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(서열 번호: 13), WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14), CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 15) 및 WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호: 16)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 더 포함하는, 〔75〕 내지 〔88〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔90〕
식 (1)로 표시되는 화합물이, 식 (2):
Figure pct00014
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
로 표시되는 화합물 또는 그의 약학상 허용되는 염이며,
상기 의약 조성물이 추가로 WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14) 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔79〕에 기재된 방법.
〔91〕
식 (1)로 표시되는 화합물이, 식 (3):
Figure pct00015
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)으로 표시되는 화합물 또는 그의 약학상 허용되는 염이며,
상기 의약 조성물이 추가로 WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14) 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔79〕에 기재된 방법.
〔92〕
상기 의약 조성물이 약학상 허용되는 담체를 포함하는, 〔75〕 내지 〔91〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔93〕
상기 대상으로부터 채취된 시료를 사용하여, TP53 유전자 및/또는 BCOR 유전자에 있어서의 변이의 유무를 결정하는 공정, 그리고
TP53 야생형 및/또는 BCOR 야생형의 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 더 포함하는, 〔75〕 내지 〔92〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔94〕
TP53 야생형의 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는, 〔93〕에 기재된 방법.
〔95〕
TP53 야생형 및 BCOR 야생형의 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는, 〔92〕 또는 〔93〕에 기재된 방법.
〔96〕
상기 대상으로부터 채취한 시료를 사용하여, WT1 유전자의 mRNA 발현량을 결정하는 공정, 및 상기 WT1 유전자의 mRNA 발현량이 기준값 미만 또는 이하인 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 더 포함하는, 〔75〕 내지 〔95〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔97〕
〔75〕 내지 〔92〕의 어느 것에 기재된 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여한 상기 대상으로부터 채취한 시료를 사용하여, WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포를 검출하는 공정, 및
투여 전의 상기 대상으로부터 채취한 시료와 비교하여, 상기 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 증가한 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 더 포함하는, 〔75〕 내지 〔96〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔98〕
WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포를 검출하는 공정이, WT1 펩티드와 HLA 분자의 복합체를 상기 시료와 반응시키고, 상기 시료에 포함되는 상기 복합체를 인식하는 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포의 존재 또는 세포수를 조사함으로써 실시되는, 〔97〕에 기재된 방법.
〔99〕
상기 WT1 펩티드와 HLA 분자의 복합체가 테트라머의 형태인, 〔98〕에 기재된 방법.
〔100〕
상기 HLA 분자가 상기 대상의 HLA에 적합한 것인, 〔98〕 또는 〔99〕에 기재된 방법.
〔101〕
WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포를 검출하는 공정이 플로 사이토메트리법에 의한 해석을 포함하는, 〔97〕 내지 〔100〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔102〕
〔75〕 내지 〔92〕의 어느 것에 기재된 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 복수회 투여한 대상에 있어서, 지연형 과민 반응이 검출된 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 더 포함하는, 〔75〕 내지 〔101〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔103〕
대상에 있어서의 〔75〕 내지 〔92〕의 어느 것에 기재된 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여한 개소에 있어서의 반응과, 상기 대상에 있어서의 상기 의약 조성물 또는 상기 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여하고 있지 않은 개소에 있어서의 반응을 비교하여, 투여한 개소에 있어서의 반응과 투여하고 있지 않은 개소에 있어서의 반응의 차가 기준값 이상인 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 더 포함하는, 〔102〕에 기재된 방법.
〔104〕
대상에 있어서의 〔75〕 내지 〔92〕의 어느 것에 기재된 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여한 대상으로부터 채취된 시료에 있어서의 골수 아구의 비율을, 상기 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여하기 전의 대상으로부터 채취된 시료에 있어서의 골수 아구의 비율로 나눈 값이 기준값 미만 또는 이하인 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 더 포함하는, 〔75〕 내지 〔103〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔105〕
상기 시료가 체액, 점막, 세포, 조직 및 세포 또는 조직의 배양물 그리고 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, 〔75〕 내지 〔104〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔106〕
상기 암이 백혈병, 골수 이형성 증후군, 다발성 골수종, 악성 림프종, 위암, 대장암, 폐암, 유방암, 배세포암, 간암, 피부암, 방광암, 전립선암, 자궁암, 자궁경암, 난소암 및 뇌종양으로 이루어지는 군에서 선택되는, 〔75〕 내지 〔105〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔107〕
〔75〕 내지 〔106〕의 어느 것에 기재된 방법에 의해, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상을 선택하는 공정, 및
선택된 대상에 대하여 〔75〕 내지 〔92〕의 어느 것에 기재된 의약 조성물을 투여하는 공정을 포함하는, 암의 치료 방법.
〔108〕
암의 치료 방법에 사용하기 위한 의약 조성물로서,
RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7), VLDFAPPGA(서열 번호: 9), CMTWNQMNL(서열 번호: 3), CYTWNQMNL(서열 번호: 4), CNKRYFKLSHLQMHSRK(서열 번호: 11), CNKRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호: 12), CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(서열 번호: 13), WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14), CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 15) 및 WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호: 16)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하고,
상기 치료 방법은, 〔75〕 내지 〔107〕의 어느 것에 기재된 방법에 의해, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상을 선택하는 공정, 및
선택된 대상에 대하여 상기 의약 조성물을 투여하는 공정을 포함하는, 의약 조성물.
〔109〕
암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상을 선택하는 방법으로서,
상기 의약 조성물은, RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7), VLDFAPPGA(서열 번호: 9), CMTWNQMNL(서열 번호: 3), CYTWNQMNL(서열 번호: 4), CNKRYFKLSHLQMHSRK(서열 번호: 11), CNKRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호: 12), CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(서열 번호: 13), WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14), CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 15) 및 WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호: 16)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하고,
상기 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여한 대상으로부터 채취된 시료에 있어서의 골수 아구의 비율을, 상기 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여하기 전의 대상으로부터 채취된 시료에 있어서의 골수 아구의 비율로 나눈 값이 기준값 미만 또는 이하인 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 포함하는, 방법.
〔110〕
상기 의약 조성물이, RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7) 및 VLDFAPPGA(서열 번호: 9)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔109〕에 기재된 방법.
〔111〕
상기 의약 조성물이, CMTWNQMNL(서열 번호: 3) 및 CYTWNQMNL(서열 번호: 4)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔109〕 또는 〔110〕에 기재된 방법.
〔112〕
상기 의약 조성물이, RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7) 및 VLDFAPPGA(서열 번호: 9)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드, 그리고
CMTWNQMNL(서열 번호: 3) 및 CYTWNQMNL(서열 번호: 4)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔109〕 내지 〔111〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔113〕
상기 의약 조성물이, 식 (1):
Figure pct00016
[식 중, Xa 및 Ya는 단결합을 나타내고, 종양 항원 펩티드 A는 이하의 아미노산 서열:
RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7) 및 VLDFAPPGA(서열 번호: 9) 중에서 선택되는 어느 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 나타내고, 종양 항원 펩티드 A의 N 말단 아미노산의 아미노기가 식 (1) 중의 Ya와 결합하고, 종양 항원 펩티드 A의 C 말단 아미노산의 카르보닐기가 식 (1) 중의 수산기와 결합하고,
R1은 수소 원자 또는 종양 항원 펩티드 B를 나타내고,
종양 항원 펩티드 B는, 종양 항원 펩티드 A와는 서열이 다르고 또한 이하의 아미노산 서열:
CMTWNQMNL(서열 번호: 3) 및 CYTWNQMNL(서열 번호: 4) 중에서 선택되는 어느 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 나타내고, 종양 항원 펩티드 B의 시스테인 잔기의 티오에테르기가 식 (1) 중의 티오에테르기와 결합한다.]
로 표시되는 화합물 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔109〕 내지 〔112〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔114〕
상기 의약 조성물이, RMFPNAPYL(서열 번호: 2)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔109〕 내지 〔113〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔115〕
상기 의약 조성물이, YMFPNAPYL(서열 번호: 8)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔109〕 내지 〔113〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔116〕
상기 의약 조성물이, C-CMTWNQMNL(C-C간은 디술피드 결합을 나타낸다, 서열 번호: 21)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔109〕 내지 〔113〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔117〕
상기 의약 조성물이, C-CYTWNQMNL(C-C간은 디술피드 결합을 나타낸다, 서열 번호: 10)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔109〕 내지 〔113〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔118〕
상기 의약 조성물이, CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 15)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔109〕 내지 〔117〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔119〕
상기 의약 조성물이, WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호: 16)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔109〕 내지 〔117〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔120〕
상기 의약 조성물이, WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔109〕 내지 〔117〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔121〕
식 (1)로 표시되는 화합물이, 식 (2):
Figure pct00017
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
로 표시되는 화합물인, 〔113〕에 기재된 화합물 또는 그의 약학상 허용되는 염인, 5에 기재된 방법.
〔122〕
식 (1)로 표시되는 화합물이, 식 (3):
Figure pct00018
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)으로 표시되는 화합물인, 항 1에 기재된 화합물 또는 그의 약학상 허용되는 염인, 〔113〕에 기재된 방법.
〔123〕
상기 의약 조성물이, CNKRYFKLSHLQMHSRK(서열 번호: 11), CNKRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호: 12), CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(서열 번호: 13), WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14), CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 15) 및 WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호: 16)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 더 포함하는, 〔109〕 내지 〔122〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔124〕
식 (1)로 표시되는 화합물이, 식 (2):
Figure pct00019
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
로 표시되는 화합물 또는 그의 약학상 허용되는 염이며,
상기 의약 조성물이 추가로 WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14) 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔113〕에 기재된 방법.
〔125〕
식 (1)로 표시되는 화합물이, 식 (3):
Figure pct00020
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)으로 표시되는 화합물 또는 그의 약학상 허용되는 염이며,
상기 의약 조성물이 추가로 WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14) 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 〔113〕에 기재된 방법.
〔126〕
상기 의약 조성물이 약학상 허용되는 담체를 포함하는, 〔109〕 내지 〔125〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔127〕
상기 대상으로부터 채취된 시료를 사용하여, TP53 유전자 및/또는 BCOR 유전자에 있어서의 변이의 유무를 결정하는 공정, 그리고
TP53 야생형 및/또는 BCOR 야생형의 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 더 포함하는, 〔109〕 내지 〔126〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔128〕
TP53 야생형의 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는, 〔127〕에 기재된 방법.
〔129〕
TP53 야생형 및 BCOR 야생형의 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는, 〔127〕 또는 〔128〕에 기재된 방법.
〔130〕
상기 대상으로부터 채취한 시료를 사용하여, WT1 유전자의 mRNA 발현량을 결정하는 공정, 및 상기 WT1 유전자의 mRNA 발현량이 기준값 미만 또는 이하인 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 더 포함하는, 〔109〕 내지 〔129〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔131〕
〔109〕 내지 〔126〕의 어느 것에 기재된 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여한 상기 대상으로부터 채취한 시료를 사용하여, WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포를 검출하는 공정, 및
투여 전의 상기 대상으로부터 채취한 시료와 비교하여, 상기 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 증가한 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 더 포함하는, 〔109〕 내지 〔130〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔132〕
WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포를 검출하는 공정이, WT1 펩티드와 HLA 분자의 복합체를 상기 시료와 반응시키고, 상기 시료에 포함되는 상기 복합체를 인식하는 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포의 존재 또는 세포수를 조사함으로써 실시되는, 〔131〕에 기재된 방법.
〔133〕
상기 WT1 펩티드와 HLA 분자의 복합체가 테트라머의 형태인, 〔132〕에 기재된 방법.
〔134〕
상기 HLA 분자가 상기 대상의 HLA에 적합한 것인, 〔132〕 또는 〔133〕에 기재된 방법.
〔135〕
WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포를 검출하는 공정이 플로 사이토메트리법에 의한 해석을 포함하는, 〔131〕 내지 〔134〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔136〕
〔109〕 내지 〔126〕의 어느 것에 기재된 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 복수회 투여한 대상에 있어서, 지연형 과민 반응이 검출된 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 더 포함하는, 〔109〕 내지 〔135〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔137〕
대상에 있어서의 〔109〕 내지 〔126〕의 어느 것에 기재된 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여한 개소에 있어서의 반응과, 상기 대상에 있어서의 상기 의약 조성물 또는 상기 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여하고 있지 않은 개소에 있어서의 반응을 비교하여, 투여한 개소에 있어서의 반응과 투여하고 있지 않은 개소에 있어서의 반응의 차가 기준값 이상인 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 더 포함하는, 〔136〕에 기재된 방법.
〔138〕
상기 대상의 개정 IPSS(IPSS-R)에 기초하는 핵형이 매우 불량 이외인 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 더 포함하는, 〔109〕 내지 〔137〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔139〕
상기 시료가 체액, 점막, 세포, 조직 및 세포 또는 조직의 배양물 그리고 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되는, 〔109〕 내지 〔138〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔140〕
상기 암이 백혈병, 골수 이형성 증후군, 다발성 골수종, 악성 림프종, 위암, 대장암, 폐암, 유방암, 배세포암, 간암, 피부암, 방광암, 전립선암, 자궁암, 자궁경암, 난소암 및 뇌종양으로 이루어지는 군에서 선택되는, 〔109〕 내지 〔139〕의 어느 것에 기재된 방법.
〔141〕
〔109〕 내지 〔140〕의 어느 것에 기재된 방법에 의해, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상을 선택하는 공정, 및
선택된 대상에 대하여 〔109〕 내지 〔126〕의 어느 것에 기재된 의약 조성물을 투여하는 공정을 포함하는, 암의 치료 방법.
〔142〕
암의 치료 방법에 사용하기 위한 의약 조성물로서,
RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7), VLDFAPPGA(서열 번호: 9), CMTWNQMNL(서열 번호: 3), CYTWNQMNL(서열 번호: 4), CNKRYFKLSHLQMHSRK(서열 번호: 11), CNKRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호: 12), CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(서열 번호: 13), WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14), CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 15) 및 WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호: 16)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하고,
상기 치료 방법은, 〔109〕 내지 〔140〕의 어느 것에 기재된 방법에 의해, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상을 선택하는 공정, 및
선택된 대상에 대하여 상기 의약 조성물을 투여하는 공정을 포함하는, 의약 조성물.
〔143〕
대상으로부터 채취된 시료를 사용하여, TP53 유전자 및/또는 BCOR 유전자에 있어서의 변이의 유무를 결정하는 공정, 그리고
TP53 야생형 및/또는 BCOR 야생형인 대상에 대하여 암을 치료 또는 예방하기 위한 유효량의 의약 조성물을 투여하는 공정을 포함하고,
상기 의약 조성물은, RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7), VLDFAPPGA(서열 번호: 9), CMTWNQMNL(서열 번호: 3), CYTWNQMNL(서열 번호: 4), CNKRYFKLSHLQMHSRK(서열 번호: 11), CNKRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호: 12), CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(서열 번호: 13), WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14), CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 15) 및 WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호: 16)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 암의 치료 방법.
〔144〕
대상으로부터 채취된 시료를 사용하여, WT1 유전자의 mRNA 발현량을 결정하는 공정, 및
상기 WT1 유전자의 mRNA 발현량이 기준값 미만 또는 이하인 대상에 대하여, 암을 치료 또는 예방하기 위한 유효량의 의약 조성물을 투여하는 공정을 포함하고,
상기 의약 조성물은, RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7), VLDFAPPGA(서열 번호: 9), CMTWNQMNL(서열 번호: 3), CYTWNQMNL(서열 번호: 4), CNKRYFKLSHLQMHSRK(서열 번호: 11), CNKRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호: 12), CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(서열 번호: 13), WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14), CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 15) 및 WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호: 16)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 암의 치료 방법.
〔145〕
대상의 개정 IPSS(IPSS-R)에 기초하는 핵형이 매우 불량 이외인 경우에, 상기 대상에 대하여 암을 치료 또는 예방하기 위한 유효량의 의약 조성물을 투여하는 공정을 포함하고,
상기 의약 조성물은, RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7), VLDFAPPGA(서열 번호: 9), CMTWNQMNL(서열 번호: 3), CYTWNQMNL(서열 번호: 4), CNKRYFKLSHLQMHSRK(서열 번호: 11), CNKRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호: 12), CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(서열 번호: 13), WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14), CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 15) 및 WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호: 16)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 암의 치료 방법.
〔146〕
RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7), VLDFAPPGA(서열 번호: 9), CMTWNQMNL(서열 번호: 3), CYTWNQMNL(서열 번호: 4), CNKRYFKLSHLQMHSRK(서열 번호: 11), CNKRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호: 12), CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(서열 번호: 13), WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14), CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 15) 및 WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호: 16)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는 의약 조성물 또는 상기 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여한 대상으로부터 채취된 시료에 있어서의 골수 아구의 비율을, 상기 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여하기 전의 대상으로부터 채취된 시료에 있어서의 골수 아구의 비율로 나눈 값이 기준값 미만 또는 이하인 경우에, 상기 대상에 대하여 암을 치료 또는 예방하기 위한 유효량의 의약 조성물을 투여하는 공정을 포함하는, 암의 치료 방법.
본 발명에 따르면, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상을 선택하는 방법이 제공된다. 여기서, 의약 조성물은 WT1 킬러 펩티드 및/또는 WT1 헬퍼 펩티드, 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함한다. 각 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상을 선발함으로써, 그 의약 조성물을 사용하여 효과적인 암의 치료 또는 예방을 행할 수 있다.
도 1은 WT1 펩티드 칵테일 백신의 시험 결과와, 리고세르팁의 ONTIME 시험에 있어서의 대조(BSC)의 비교를 행한 결과를 도시한다.
도 2는 TP53 야생형 및 BCOR 야생형, 그리고 TP53 변이형 또는 BCOR 변이형의 생존 곡선을 도시한다.
도 3은 TP53 야생형 및 BCOR 야생형, 그리고 TP53 변이형 또는 BCOR 변이형에 대해서, WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응의 양성 또는 음성에 의한 생존 곡선을 비교한 결과를 도시한다.
도 4는 실시예 5에 있어서의 WT1 mRNA의 발현량에 의해 생존 곡선을 비교한 결과(결과 (1))를 도시한다.
도 5는 WT1 mRNA의 발현량에 대해서, WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응의 양성 또는 음성에 의한 생존 곡선을 비교한 결과(결과 (1))를 도시한다.
도 6은 실시예 5에 있어서의 WT1 mRNA의 발현량에 의해 생존 곡선을 비교한 결과(결과 (2))를 도시한다.
도 7은 WT1 mRNA의 발현량에 대해서, WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응의 양성 또는 음성에 의한 생존 곡선을 비교한 결과(결과 (2))를 도시한다.
도 8은 HLA 테트라머 어세이에 의한 해석 결과와 WT1 킬러 펩티드 콘쥬게이트를 사용한 DTH 시험의 판정을 쌍방향으로부터 해석한 결과를 도시한다.
도 9는 WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응의 양성 또는 음성, 및 골수 아구의 안정화에 대해서, 생존 곡선을 비교한 결과를 도시한다.
도 10은 WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응의 양성 또는 음성에 의한 급성 골수성 백혈병(AML) 이행 기간을 비교한 결과를 도시한다.
도 11은 WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응의 양성 또는 음성에 의한 생존 곡선을 비교한 결과를 도시한다.
도 12는 IPSS-R의 핵형에 대하여 WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응의 양성 또는 음성에 의한 생존 곡선을 비교한 결과를 도시한다.
도 13은 각 성차의 생존 기간 중앙값을, 히스토리컬 데이터 및 리고세르팁 시험의 BSC의 생존 기간 중앙값과 비교한 결과를 도시한다.
도 14는 실시예 11에 있어서의 WT1 mRNA의 발현량에 의해 생존 곡선을 비교한 결과를 도시한다.
도 15는 WT1 mRNA의 발현량에 대해서, WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응의 양성 또는 음성에 의한 생존 곡선을 비교한 결과를 도시한다.
도 16은 말초혈 중의 WT1 mRNA 발현량과 골수액 중의 WT1 mRNA 발현량의 관계를 도시한다.
이하, 본 발명의 실시 형태에 대하여 상세하게 설명한다.
본 명세서에 있어서 「아미노산 잔기」란, 펩티드 또는 단백질 분자 상에서, 펩티드 또는 단백질을 구성하고 있는 아미노산의 1단위에 해당하는 부분을 의미한다. 「아미노산 잔기」로서는, 천연 혹은 비천연의 α-아미노산 잔기, β-아미노산 잔기, γ-아미노산 잔기 또는 δ-아미노산 잔기를 들 수 있다. 구체적으로는, 천연의 α-아미노산 잔기, 오르니틴 잔기, 호모세린 잔기, 호모시스테인 잔기, β-알라닌, γ-아미노부탄산 또는 δ-아미노펜탄산 등을 들 수 있다. 「아미노산 잔기」에 광학 활성체가 있을 수 있는 경우, L체, D체의 어느 것이어도 되지만, L체가 바람직하다.
본 명세서에 있어서 「아미노산 잔기」를 약호로 표시하는 경우, 다음 약호로 기술한다.
Ala 또는 A: 알라닌 잔기
Arg 또는 R: 아르기닌 잔기
Asn 또는 N: 아스파라긴 잔기
Asp 또는 D: 아스파르트산 잔기
Cys 또는 C: 시스테인 잔기
Gln 또는 Q: 글루타민 잔기
Glu 또는 E: 글루탐산 잔기
Gly 또는 G: 글리신 잔기
His 또는 H: 히스티딘 잔기
Ile 또는 I: 이소류신 잔기
Leu 또는 L: 류신 잔기
Lys 또는 K: 리신 잔기
Met 또는 M: 메티오닌 잔기
Phe 또는 F: 페닐알라닌 잔기
Pro 또는 P: 프롤린 잔기
Ser 또는 S: 세린 잔기
Thr 또는 T: 트레오닌 잔기
Trp 또는 W: 트립토판 잔기
Tyr 또는 Y: 티로신 잔기
Val 또는 V: 발린 잔기
Abu: 2-아미노부티르산 잔기(α-아미노부티르산 잔기라고도 한다)
Orn: 오르니틴 잔기
Cit: 시트룰린 잔기
본 명세서에 있어서 「펩티드」의 아미노산 서열은, 통상의 방법에 따라서 N 말단 아미노산의 아미노산 잔기가 좌측에 위치하고, C 말단 아미노산의 아미노산 잔기가 우측에 위치하도록 기술한다. 또한 「펩티드」에 있어서 특별히 언급이 없는 한, N 말단 아미노산의 아미노산 잔기의 아미노기는 수소 원자와 결합하고, C 말단 아미노산의 아미노산 잔기의 카르보닐기는 수산기와 결합하고 있다. 펩티드의 2가기란, N 말단 아미노산의 아미노산 잔기의 아미노기 및 C 말단 아미노산의 아미노산 잔기의 카르보닐기를 통하여 결합하는 기를 의미한다.
본 명세서에 있어서의 화합물에 있어서, 예를 들어 식 (2) 내지 및 (3)으로 표시되는 화합물에 있어서, 그의 부분 구조에 해당하는 펩티드에 대해서도 특별히 언급이 없는 한, N 말단 아미노산의 아미노산 잔기의 아미노기는 수소 원자와 결합하고, C 말단 아미노산의 아미노산 잔기의 카르보닐기는 수산기와 결합하고 있다.
본 명세서에 있어서의 「R1」은 수소 원자 또는 종양 항원 펩티드 B를 나타내고, 바람직하게는 종양 항원 펩티드 B를 들 수 있다. R1이 수소 원자인 식 (1)의 화합물에 대해서, 그의 서열은 WT1 단백의 부분 서열과 완전히 동일하지는 않다. 즉, R1이 수소 원자인 식 (1)의 화합물은 종양 항원 펩티드 A의 N 말단측에 시스테인 잔기가 부가된 것이 되기 때문에, 서열 번호: 1에 기재된 인간의 WT1의 아미노산 서열에 있어서 연속하는 8 내지 35 잔기의 아미노산을 포함하는 부분 펩티드가 아니다.
R1이 수소 원자인 식 (1)의 화합물로서, 예를 들어 이하의 아미노산 서열을 들 수 있다.
CRMFPNAPYL(서열 번호: 40),
CCMTWNQMNL(서열 번호: 41),
CCYTWNQMNL(서열 번호: 42),
CALLPAVPSL(서열 번호: 43),
CSLGEQQYSV(서열 번호: 44) 및
CRVPGVAPTL(서열 번호: 45).
본 명세서에 있어서의 「Xa」 및 「Ya」는 독립적으로, 단결합 또는 1 내지 4 잔기의 아미노산을 포함하는 펩티드의 2가기를 나타낸다. Xa의 아미노산 잔기수와 Ya의 아미노산 잔기수의 합은 0 내지 4의 정수이다. 예를 들어 당해 합이 0의 정수이다란, Xa 및 Ya가 단결합인 것을 의미한다. 또한, 당해 합이 4의 정수인 경우로서는, 예를 들어 Xa 및 Ya가 독립적으로 2 잔기의 아미노산을 포함하는 펩티드의 2가기인 경우, Xa가 3 잔기의 아미노산을 포함하는 펩티드의 2가기이며 또한 Ya가 1 잔기의 아미노산을 포함하는 펩티드의 2가기인 경우, Xa가 4 잔기의 아미노산을 포함하는 펩티드의 2가기이며 또한 Ya가 단결합인 경우 등을 들 수 있다.
당해 합의 정수로서 바람직하게는 0 내지 2를 들 수 있고, 보다 바람직하게는 0 내지 1을 들 수 있고, 가장 바람직하게는 0을 들 수 있다. 즉, Xa 및 Ya로서는, 모두 단결합인 경우가 가장 바람직하다.
당해 합의 정수가 2인 경우로서는, Xa가 2 잔기의 아미노산을 포함하는 펩티드의 2가기이며 또한 Ya가 단결합인 경우, Xa 및 Ya가 독립적으로 1 잔기의 아미노산을 포함하는 펩티드의 2가기인 경우, 또는 Xa가 단결합이며 또한 Ya가 2 잔기의 아미노산을 포함하는 펩티드의 2가기인 경우를 들 수 있다.
당해 합의 정수가 1인 경우로서는, Xa가 1 잔기의 아미노산을 포함하는 펩티드의 2가기이며 또한 Ya가 단결합인 경우, 또는 Xa가 단결합이며 또한 Ya가 1 잔기의 아미노산을 포함하는 펩티드의 2가기인 경우를 들 수 있다. 이 중 바람직하게는, Xa가 단결합이며 또한 Ya가 알라닌 잔기, 류신 잔기 또는 메티오닌 잔기인 경우를 들 수 있다.
본 실시 형태에 있어서, 의약 조성물은 특정한 WT1 킬러 펩티드 및/혹은 WT1 헬퍼 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염, 즉 RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7), VLDFAPPGA(서열 번호: 9), CMTWNQMNL(서열 번호: 3), CYTWNQMNL(서열 번호: 4), CNKRYFKLSHLQMHSRK(서열 번호: 11), CNKRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호: 12), CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(서열 번호: 13), WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14), CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 15) 및 WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호: 16)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함한다. 본 실시 형태에 있어서의 의약 조성물이 상기 이외의 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는 것을 방해하는 것은 아니고, 의약 조성물은 상기 이외의 펩티드, 예를 들어 다른 WT1 킬러 펩티드 및/또는 WT1 헬퍼 펩티드를 더 포함하고 있어도 된다.
본 명세서에 있어서의 「WT1 펩티드」란, 서열 번호: 1에 기재된 인간의 WT1의 아미노산 서열에 있어서 존재하는 연속하는 아미노산을 포함하는 부분을 포함하는 펩티드이다.
WT1 킬러 펩티드란, MHC 클래스 I 구속성 WT1 펩티드를 의미한다.
본 명세서에 있어서의 「MHC 클래스 I 구속성」이란, 주요 조직 적합 항원(Major Histocompatibility Complex, MHC)의 클래스 I인 MHC 클래스 I 분자와 결합하여 CTL을 유도하는 특성을 의미한다. 「MHC 클래스 I 구속성 WT1 펩티드」란, 인 비트로 및/또는 인 비보로 MHC 클래스 I 항원에 결합하여, 복합체로서 제시되는 펩티드이며, 또한 해당 복합체가 전구체 T 세포에 인식된 결과 CTL을 유도하는 펩티드를 의미한다.
MHC는 인간에서는 인간 백혈구형 항원(HLA)이라고 불린다. MHC 클래스 I 분자에 상당하는 HLA는 HLA-A, B, Cw, F 및 G 등의 서브타입으로 분류된다. 「MHC 클래스 I 구속성」으로서, 바람직하게는 HLA-A 구속성, HLA-B 구속성 또는 HLA-Cw 구속성을 들 수 있다.
HLA의 각 서브타입에 대해서 다형(대립 유전자)이 알려져 있다. HLA-A의 다형으로서는, HLA-A1, HLA-A2(A0201, A0206 등), HLA-A24 등의 27종 이상을 들 수 있고, HLA-B의 다형으로서는, HLA-B7, HLA-B40, HLA-B4403 등의 59종 이상을 들 수 있고, HLA-Cw의 다형으로서는, HLA-Cw0301, HLA-Cw0401, HLA-Cw0602 등의 10종 이상을 들 수 있다. 이들 다형 중, 바람직하게는 HLA-A2나 HLA-A24를 들 수 있다.
MHC 클래스 I 구속성 WT1 펩티드(WT1 킬러 펩티드)는 「MHC 클래스 I 구속성 WT1 에피토프」라고도 불린다. 본 명세서에 있어서의 「MHC 클래스 I 구속성 WT1 에피토프」란, MHC 클래스 I 항원과 결합하여 복합체로서 제시되는 펩티드 그 자체를 의미한다. 즉, MHC 클래스 I 구속성 WT1 펩티드가 인 비트로 및/또는 인 비보로, 감마-인터페론-유도성 리소좀 티올 리덕타제(Gamma-Interferon-inducible Lysosomal Thiol Reductase(GILT, GLT)) 등의 프로테아좀 및/혹은 프로테아제에 의한 세포 내에서의 결합체의 분해(Proteolysis, 디술피드 결합의 환원적 개열), 그리고/또는 내형질 세망 아미노펩티다제 1(Endoplasmic reticulum aminopeptidase 1(ERAP1, ER-aminopeptidase 1))에 의한 최적의 잔기수로의 절단(트리밍이라고도 한다.)에 의해, MHC 클래스 I 구속성 WT1 에피토프를 생성한다. 당해 생성에 있어서는, 먼저 프로테아좀 및/혹은 프로테아제에 의한 분해의 결과, MHC 클래스 I 구속성 WT1 에피토프의 C 말단 아미노산이 생성되고, 다음으로 ERAP1에 의한 트리밍(절단)의 결과, MHC 클래스 I 구속성 WT1 에피토프의 N 말단 아미노산이 생성된다고 하는 생성 과정이 주로 생각된다. 단, 당해 생성에 있어서는, 당해 생성 과정 이외의 과정도 경유할 수 있다. 또한, 현재 ERAP1은 ERAAP(ER aminopeptidase associated with antigen presentation)라고도 불리며, 이전에는 A-LAP, PILS-AP 또는 ARTS-1이라고도 불리고 있었다.
따라서, MHC 클래스 I 구속성 WT1 펩티드로서는, MHC 클래스 I 구속성 WT1 에피토프의 C 말단 아미노산의 카르보닐기에 아미노산이 부가되어서 생성되는 아미노산을 포함하는 펩티드가 바람직하다.
WT1 킬러 펩티드의 길이는 WT1 킬러 펩티드로서 기능하는 한 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어 7 내지 30 잔기, 7 내지 15 잔기, 8 내지 12 잔기, 8 내지 11 잔기, 8 잔기, 또는 9 잔기의 아미노산을 포함하는 것 또는 이들의 결합체여도 된다. WT1 킬러 펩티드는 7 잔기 이상 또는 8 잔기 이상의 아미노산을 포함하는 것 또는 이들의 결합체여도 되고, 30 잔기 이하, 25 잔기 이하, 22 잔기 이하, 20 잔기 이하, 18 잔기 이하, 15 잔기 이하, 12 잔기 이하, 11 잔기 이하, 10 잔기 이하 또는 9 잔기 이하의 아미노산을 포함하는 것 또는 이들의 결합체여도 된다.
WT1 킬러 펩티드로서는, 예를 들어 RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7), VLDFAPPGA(서열 번호: 9), CMTWNQMNL(서열 번호: 3) 및 CYTWNQMNL(서열 번호: 4)에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 서열 번호 1 내지 9 중에서 선택되는 어느 아미노산 서열 중에 아미노산 잔기의 개변을 함유하는 개변 아미노산 서열을 포함하고 또한 CTL 유도 활성을 갖는 펩티드 등을 들 수 있다. 본 실시 형태에 있어서의 의약 조성물은, 예를 들어 RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7), VLDFAPPGA(서열 번호: 9), CMTWNQMNL(서열 번호: 3) 및 CYTWNQMNL(서열 번호: 4)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는 것이어도 된다. 또한, 본 실시 형태에 있어서의 의약 조성물은, 예를 들어 HLA의 서브타입 A2 타입(A-0201, A0206 등)에 대응하는 RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7), 및 VLDFAPPGA(서열 번호: 9)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는 것이어도 되고, 예를 들어 HLA의 서브타입 A24 타입(A-2402 등)에 대응하는 CMTWNQMNL(서열 번호: 3) 및 CYTWNQMNL(서열 번호: 4)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는 것이어도 된다. 또한, 본 실시 형태에 있어서의 의약 조성물은, 예를 들어 RMFPNAPYL(서열 번호: 2)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는 것이어도 되고, YMFPNAPYL(서열 번호: 8)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는 것이어도 되고, C-CYTWNQMNL(C-C간은 디술피드 결합을 나타낸다, 서열 번호: 10)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는 것이어도 되고, C-CMTWNQMNL(C-C간은 디술피드 결합을 나타낸다, 서열 번호: 21)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는 것이어도 된다.
본 명세서에 있어서 「아미노산 서열을 포함하는 펩티드」는, 당해 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 그리고 당해 아미노산 서열의 N 말단 아미노산 및/또는 C 말단 아미노산에 추가적인 아미노산이 부가된 펩티드를 포함한다. 「MHC 클래스 I 구속성 WT1 펩티드」가 부가되는 경우, C 말단측에 부가된 펩티드가 바람직하다. 「MHC 클래스 I 구속성 WT1 에피토프」가 부가되는 경우, C 말단측에 대한 부가가 바람직하다.
본 발명에 있어서의 「아미노산 서열 중에 아미노산 잔기의 개변을 함유하는 개변 아미노산 서열을 포함하고 또한 CTL 유도 활성을 갖는 펩티드」는, 「개변 킬러 펩티드」라고도 불린다. 당해 개변 킬러 펩티드는 아미노산 서열에 있어서, 1 내지 3개의 아미노산이 결실, 치환 및/또는 부가된 아미노산 서열을 포함하고, MHC 클래스 I에 결합하고, CTL을 유도하는 펩티드를 의미한다. 치환되는 아미노산의 치환 위치로서는, 9 잔기의 아미노산을 포함하는 펩티드의 경우, 1위치(N 말단), 2위치, 3위치 및 9위치를 들 수 있다. 부가(삽입도 포함된다)되는 아미노산의 수는 바람직하게는 1 또는 2이며, 보다 바람직하게는 1이다. 바람직한 부가 위치로서는, C 말단을 들 수 있다. 결실되는 아미노산의 수는 바람직하게는 1이다. 개변에 있어서, 부가되는 아미노산 또는 치환되는 아미노산은 유전자에 의해 코드되는 20종류의 아미노산 이외의 비천연 아미노산이어도 된다.
HLA의 서브타입의 다형마다, HLA 항원에 결합할 수 있는 펩티드의 아미노산 서열의 규칙성(결합 모티프)이 존재하는 것이 알려져 있다. 예를 들어 HLA-A24의 결합 모티프로서, 8 내지 11 잔기의 아미노산을 포함하는 펩티드에 있어서, 2위치의 아미노산이 Tyr, Phe, Met 또는 Trp이며, C 말단의 아미노산이 Phe, Leu, Ile, Trp 또는 Met인 것이 알려져 있다(J.Immunol., 152, p3913, 1994, J.Immunol., 155, p4307, 1994, Immunogenetics, 41, p178, 1995). 따라서, 예를 들어 9 잔기의 아미노산을 포함하는 펩티드의 경우, 2위치가 Tyr, Phe, Met 또는 Trp에 의해 및/또는 9위치가 Phe, Leu, Ile, Trp 또는 Met에 의해 치환되는 것이 가능하고, 당해 치환이 이루어진 펩티드가 개변 킬러 펩티드로서 바람직하다. 마찬가지로, HLA-A*02:01의 결합 모티프로서, 8 내지 11 잔기의 아미노산을 포함하는 펩티드에 있어서, 2위치의 아미노산이 Leu 또는 Met이며, C 말단의 아미노산이 Val 또는 Leu인 것이 알려져 있는 것으로부터, 예를 들어 9 잔기의 아미노산을 포함하는 펩티드의 경우, 2위치가 Leu 또는 Met에 의해 및/또는 9위치가 Val 또는 Leu에 의해 치환되는 것이 가능하고, 당해 치환이 이루어진 펩티드가 개변 킬러 펩티드로서 바람직하다.
개변 킬러 펩티드로서는 예를 들어, 다음과 같은 펩티드를 들 수 있다.
RMFPNAPYL(서열 번호: 2)의 개변 킬러 펩티드인
RYFPNAPYL(서열 번호: 22)(국제 공개 03/106682호 참조);
FMFPNAPYL(서열 번호: 23),
RLFPNAPYL(서열 번호: 24),
RMMPNAPYL(서열 번호: 25),
RMFPNAPYV(서열 번호: 26) 혹은
YMFPNAPYL(서열 번호: 7)(국제 공개 제2009/072610호 참조);
CMTWNQMNL(서열 번호: 3)의 개변 킬러 펩티드인
CYTWNQMNL(서열 번호: 4)(국제 공개 제02/79253호 참조);
Xaa-Met-Thr-Trp-Asn-Gln-Met-Asn-Leu(서열 번호: 27)
(본 서열 중 Xaa는 Ser 또는 Ala를 나타낸다) 혹은
Xaa-Tyr-Thr-Trp-Asn-Gln-Met-Asn-Leu(서열 번호: 28)
(본 서열 중 Xaa는 Ser, Ala, Abu, Arg, Lys, Orn, Cit, Leu, Phe 또는 Asn을 나타낸다)(국제 공개 2004/026897호 참조);
ALLPAVPSL(서열 번호: 5)의 개변 킬러 펩티드인
AYLPAVPSL(서열 번호: 29)(국제 공개 제2003/106682호 참조);
SLGEQQYSV(서열 번호: 6)의 개변 킬러 펩티드인
FLGEQQYSV(서열 번호: 30),
SMGEQQYSV(서열 번호: 31) 혹은
SLMEQQYSV(서열 번호: 32)(국제 공개 제2009/072610호 참조); 또는
RVPGVAPTL(서열 번호: 7)의 개변 킬러 펩티드인
RYPGVAPTL(서열 번호: 33)(국제 공개 제2003/106682호 참조).
넓게 HLA 서브타입을 커버하는 관점에서, 본 실시 형태에 있어서의 의약 조성물은 각각 다른 HLA의 서브타입에 대응하는 복수의 펩티드를 포함하는 것이 바람직하다. 예를 들어, HLA의 서브타입 A2 타입에 대응하는 상기 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염 및 HLA의 서브타입 A24 타입에 대응하는 상기 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염의 양쪽을 포함하는 것이 바람직하다. 그러한 경우에는, 예를 들어 의약 조성물은 식 (1):
Figure pct00021
[식 중, Xa 및 Ya는 단결합을 나타내고, 종양 항원 펩티드 A는 이하의 아미노산 서열:
RMFPNAPYL(서열 번호: 2), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7), YMFPNAPYL(서열 번호: 8) 및 VLDFAPPGA(서열 번호: 9) 중에서 선택되는 어느 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 나타내고, 종양 항원 펩티드 A의 N 말단 아미노산의 아미노기가 식 (1) 중의 Ya와 결합하고, 종양 항원 펩티드 A의 C 말단 아미노산의 카르보닐기가 식 (1) 중의 수산기와 결합하고,
R1은 수소 원자 또는 종양 항원 펩티드 B를 나타내고,
종양 항원 펩티드 B는, 종양 항원 펩티드 A와는 서열이 다르고 또한 이하의 아미노산 서열:
CMTWNQMNL(서열 번호: 3) 및 CYTWNQMNL(서열 번호: 4) 중에서 선택되는 어느 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 나타내고, 종양 항원 펩티드 B의 시스테인 잔기의 티오에테르기가 식 (1) 중의 티오에테르기와 결합한다.]
로 표시되는 화합물 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는 것이어도 된다.
상기 식 (1)로 표시되는 화합물은 시스테인 잔기가 디술피드 결합을 형성하고 있는 것 등에 의해, 용액 중에서의 산화제 등에 대한 안정성이 우수하여 의약품 원료로서 일정한 품질을 갖는다.
또한, 본 실시 형태에 있어서의 의약 조성물이 상기 식 (1)로 표시되는 화합물(WT1 킬러 펩티드의 결합체)을 포함하는 경우(R1이 수소 원자인 경우를 제외한다), 체내에서 ERAP1에 의한 N 말단의 시스테인 잔기간의 디술피드 결합의 환원적 개열에 의해 결합체가 분해되어, 다른 HLA 서브타입에 대응하는 2종류의 에피토프가 생성된다. 식 (1)로 표시되는 결합체와 같이, 다른 HLA 서브타입에 대응하는 복수 종류의 에피토프가 체내에 있어서 생성되는 결합체는 대상에 따라 다른 HLA 서브타입에 넓게 대응 가능하고, 큰 집단을 하나의 결합체에 의해 커버할 수 있기 때문에, 대상에 있어서 효율적으로 CTL을 유도할 수 있다(국제 공개 2014/157692호 참조).
본 실시 형태에 있어서의 「종양 항원 펩티드 A」란, 7 내지 30 잔기의 아미노산을 포함하는 MHC 클래스 I 구속성 WT1 펩티드이다. 식 (1)에 있어서 종양 항원 펩티드 A는, N 말단 아미노산의 아미노기가 식 (1) 중의 Ya와 결합하고, C 말단 아미노산의 카르보닐기가 식 (1) 중의 수산기와 결합한다.
또한, 상기 식 (1)로 표시되는 화합물은, 식 (2):
Figure pct00022
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
로 표시되는 화합물이어도 되고,
식 (3):
Figure pct00023
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)으로 표시되는 화합물이어도 된다.
또한, 상기 식 (1)로 표시되는 화합물은, 식 (2):
Figure pct00024
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
로 표시되는 화합물 또는 그의 약학상 허용되는 염이며,
상기 의약 조성물이 추가로 WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14) 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하고 있어도 되고,
식 (1)로 표시되는 화합물이, 식 (3):
Figure pct00025
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)으로 표시되는 화합물 또는 그의 약학상 허용되는 염이며,
상기 의약 조성물이 추가로 WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14) 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하고 있어도 된다.
본 실시 형태에 있어서의 의약 조성물은 WT1 헬퍼 펩티드를 더 포함하고 있어도 된다. 본 실시 형태에 있어서의 의약 조성물이 CNKRYFKLSHLQMHSRK(서열 번호: 11), CNKRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호: 12), CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(서열 번호: 13), WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14), CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 15) 및 WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호: 16)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 포함하는 경우에는, 상기 군에서 선택되는 다른 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 및/또는 그 이외의 다른 WT1 헬퍼 펩티드를 더 포함하고 있어도 된다.
WT1 헬퍼 펩티드란, MHC 클래스 II 구속성 WT1 펩티드를 의미한다.
본 명세서에 있어서의 「MHC 클래스 II 구속성」이란, MHC 클래스 II 분자와 결합하여 헬퍼 T 세포를 유도하는 특성을 의미한다.
MHC 클래스 II 분자에 상당하는 HLA는 HLA-DR, DQ 및 DP 등의 서브타입으로 분류된다. 「MHC 클래스 II 구속성」으로서, 바람직하게는 HLA-DR 구속성, HLA-DQ 구속성 또는 HLA-DP 구속성을 들 수 있다.
본 명세서에 있어서의 「MHC 클래스 II 구속성 WT1 펩티드」란, 인 비트로 및/또는 인 비보로 MHC 클래스 II 항원에 결합하고, 헬퍼 T 세포를 유도하는 펩티드를 의미한다.
WT1 헬퍼 펩티드의 길이는 WT1 헬퍼 펩티드로서 기능하는 한 특별히 한정되지 않지만, 예를 들어 7 내지 30 잔기 또는 14 내지 30 잔기의 아미노산을 포함하는 것이어도 된다. WT1 헬퍼 펩티드는 7 잔기 이상, 8 잔기 이상, 10 잔기 이상, 12 잔기 이상 또는 14 잔기 이상의 아미노산을 포함하는 것이어도 되고, 30 잔기 이하, 25 잔기 이하, 22 잔기 이하 또는 20 잔기 이하의 아미노산을 포함하는 것이어도 된다.
WT1 헬퍼 펩티드로서는, 예를 들어 CNKRYFKLSHLQMHSRK(서열 번호: 11), CNKRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호: 12), CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(서열 번호: 13), WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14), CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 15), WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호: 16), SGQAYMFPNAPYLPSCLES(서열 번호: 17)(국제 공개 2007/120673호 참조), RSDELVRHHNMHQRNMTKL(서열 번호: 18)(국제 공개 2007/120673호 참조), PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(서열 번호: 19)(국제 공개 2007/120673호 참조) 및 KRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호: 20)(국제 공개 2005/045027호 참조)에 기재된 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 서열 번호: 11 내지 20으로 이루어지는 군에서 선택되는 어느 아미노산 서열 중에 아미노산 잔기의 개변을 함유하는 개변 아미노산 서열을 포함하고 또한 헬퍼 T 세포 유도 활성을 갖는 펩티드 등을 들 수 있다. 본 실시 형태에 있어서의 의약 조성물은, 예를 들어 CNKRYFKLSHLQMHSRK(서열 번호: 11), CNKRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호: 12), CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(서열 번호: 13), WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14), CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 15) 및 WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호: 16)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는 것이어도 된다. 또한, 본 실시 형태에 있어서의 의약 조성물은, 예를 들어 CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 15)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는 것이어도 되고, WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호: 16)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는 것이어도 되고, WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는 것이어도 된다.
「아미노산 서열을 포함하는 펩티드」에 대해서는, 전술한 바와 같이 당해 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 그리고 당해 아미노산 서열의 N 말단 아미노산 및/또는 C 말단 아미노산에 추가로 아미노산이 부가된 펩티드를 의미한다. WT1 헬퍼 펩티드는 당해 아미노산 서열에, 1 또는 2 이상의 시스테인 잔기를 포함하는 것이어도 된다. 예를 들어 당해 아미노산 서열에 시스테인 잔기가 부가되는 경우, 당해 아미노산 서열의 N 말단측 또는/및 C 말단측에 부가되어도 된다.
본 명세서에 있어서의 「아미노산 서열 중에 아미노산 잔기의 개변을 함유하는 개변 아미노산 서열을 포함하고 또한 헬퍼 T 세포 유도 활성을 갖는 펩티드」는, 「개변 헬퍼 펩티드」라고도 불린다. 당해 개변 헬퍼 펩티드는 아미노산 서열에 있어서, 1 내지 3개의 아미노산이 결실, 치환 및/또는 부가된 아미노산 서열을 포함하고, MHC 클래스 II에 결합하고, 헬퍼 T 세포를 유도하는 펩티드를 의미한다. 부가(삽입도 포함된다)되는 아미노산의 수는 바람직하게는 1 내지 3이다. 결실되는 아미노산의 수는 바람직하게는 1 내지 5이다. 개변에 있어서, 부가되는 아미노산 또는 치환되는 아미노산은 유전자에 의해 코드되는 20종류의 아미노산 이외의 비천연 아미노산이어도 된다.
개변 헬퍼 펩티드로서는, 예를 들어 다음과 같은 펩티드를 들 수 있다.
SGQARMFPNAPYLPSCLES(서열 번호: 34)의 개변 헬퍼 펩티드인
SGQAYMFPNAPYLPSCLES(서열 번호: 35)(특허문헌 6 참조),
SGQARMFPNAPYLPSC(서열 번호: 36) 혹은
SGQAYMFPNAPYLPSC(서열 번호: 37); 또는
PGCNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(서열 번호: 19)의 개변 헬퍼 펩티드인
PGCNKRYFKLSHLQMHSRK(서열 번호: 38),
PGCNKRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호: 39),
CNKRYFKLSHLQMHSRK(서열 번호: 11),
CNKRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호: 12) 혹은
CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(서열 번호: 13).
본 실시 형태에 있어서의 펩티드 또는 화합물은 본 명세서의 실시예에 기재된 방법, 또는 통상의 펩티드 합성에 있어서 사용되는 방법에 준하여 제조할 수 있다. 제조 방법으로서는, 문헌(펩티드 신서시스(Peptide Synthesis), Interscience, New York, 1966; 더 프로테인즈(The Proteins), Vol 2, Academic Press Inc., New York, 1976; 펩티드 합성, 마루젠(주), 1975; 펩티드 합성의 기초와 실험, 마루젠(주), 1985; 의약품의 개발 속 제14권·펩티드 합성, 히로카와 쇼텐, 1991) 등에 기재되어 있는 방법을 들 수 있다. 또한, 예를 들어 식 (1)로 표시되는 화합물을 제조하는 방법에 대해서는, 국제 공개 2014/157692호 등을 참조할 수도 있다.
예를 들어, Fmoc법 혹은 Boc법을 사용하여 고상 합성기로 제조하는 방법이나, Boc-아미노산 혹은 Z-아미노산을 액상 합성법으로 축차 축합시켜서 제조하는 방법을 들 수 있다(Fmoc은 9-플루오레닐메톡시카르보닐기, Boc는 t-부톡시카르보닐기, Z는 벤질옥시카르보닐기를 각각 나타낸다).
본 실시 형태에 있어서의 펩티드 또는 화합물을 제조하기 위한 중간체에 있어서, 아미노기, 카르복시기, 머캅토기 등의 관능기는 필요에 따라 보호, 탈보호의 기술을 사용하여, 적당한 보호기로 보호하고 또한 탈보호할 수 있다. 적합한 보호기, 보호하는 방법, 및 탈보호하는 방법으로서는, 「Protective Groups in Organic Synthesis 2nd Edition(John Wiley & Sons, Inc.; 1990)」 등에 상세하게 기재되어 있다. 예를 들어, 머캅토기의 보호기로서는 아세트아미도메틸기 또는 트리틸기 등을 들 수 있다.
본 실시 형태에 있어서의 펩티드 또는 화합물이 디술피드 결합을 갖는 경우, 통상의 펩티드 화학에 사용되는 방법에 준하여, 시스테인 잔기를 포함하는 다른 2개의 펩티드 간에서, 또는 시스테인 잔기를 포함하는 펩티드와 시스테인 간에서, 당해 디술피드 결합을 형성할 수 있다. 디술피드 결합의 형성 방법은 문헌(펩티드 신서시스(Peptide Synthesis), Interscience, New York, 1966; 더 프로테인즈(The Proteins), Vol 2, Academic Press Inc., New York, 1976; 펩티드 합성, 마루젠(주), 1975; 펩티드 합성의 기초와 실험, 마루젠(주), 1985; 의약품의 개발 속 제14권·펩티드 합성, 히로카와 쇼텐, 1991) 등에 기재되어 있는 방법을 들 수 있다.
구체적으로는, 펩티드에 포함되는 시스테인 잔기가 1개인 경우, 시스테인 측쇄 상의 머캅토기의 보호기를 포함하는 모든 보호기를 제거한 후, 불활성 용매 중에서 산화시킴으로써 디술피드 결합을 갖는 화합물(디술피드 화합물)을 제조할 수 있다. 또한, 머캅토기를 갖는 2개의 중간체를 적당한 용매 중에 혼합하여 산화시킴으로써 제조할 수 있다. 당해 산화의 방법으로서는, 통상의 펩티드 합성으로 디술피드 결합을 형성시키는 공지된 방법을 적절히 선택하면 된다. 예를 들어 요오드 산화, 알칼리 조건 하에서 공기 산화 반응에 부치는 방법, 또는 알칼리성 혹은 산성 조건 하 산화제를 첨가하여 디술피드 결합을 형성하는 방법 등을 들 수 있다. 여기서 산화제로서는, 요오드, 디메틸술폭시드(DMSO), 페리시안화칼륨 등을 들 수 있다. 용매로서는 물, 아세트산, 메탄올, 클로로포름, DMF 혹은 DMSO 등, 또는 이들의 혼합액을 사용할 수 있다. 산화 반응에 의해 종종, 대칭, 비대칭성 디술피드 화합물의 혼합물을 부여한다. 목적으로 하는 비대칭성 디술피드 화합물은 여러가지 크로마토그래피 또는 재결정 등으로 정제함으로써 얻을 수 있다. 혹은 활성화된 머캅토기를 갖는 중간체와 머캅토기를 갖는 중간체를 혼합함으로써 선택적인 디술피드 결합을 형성할 수 있다. 활성화된 머캅토기를 갖는 중간체로서는, Npys기(3-니트로-2-피리딘술페닐기)가 결합한 머캅토기 등을 들 수 있다. 혹은, 미리 한쪽의 중간체와 예를 들어 2,2'-디티오비스(5-니트로피리딘)을 혼합함으로써 머캅토기를 활성화한 후, 다른 쪽의 중간체를 가함으로써 선택적인 디술피드 결합을 형성할 수 있다(Tetrahedron Letters. Vol.37. No.9, pp.1347-1350).
펩티드에 포함되는 시스테인 잔기가 2개 이상인 경우에도, 상기와 마찬가지의 방법을 사용할 수 있다. 이 경우에는 디술피드 결합 양식이 다른 이성체가 얻어진다. 시스테인 측쇄의 보호기를 특정한 조합으로 함으로써, 목적으로 하는 시스테인 잔기간에 디술피드 결합을 형성한 2량체를 얻을 수 있다. 상기 보호기의 조합으로서는, MeBzl(메틸벤질)기와 Acm(아세트아미도메틸)기, Trt(트리틸)기와 Acm기, Npys(3-니트로-2-피리딜티오)기와 Acm기, S-Bu-t(S-tert-부틸)기와 Acm기 등을 들 수 있다. 예를 들어 MeBzl기와 Acm기의 조합의 경우, 먼저 MeBzl기와 시스테인 측쇄 이외의 기타의 보호기를 제거한 후, 펩티드 단량체를 포함하는 용액을 공기 산화 반응에 부쳐서 탈보호된 시스테인 잔기간에 디술피드 결합을 형성하고, 이어서 요오드에 의한 탈보호 및 산화를 행하여 Acm기로 보호되고 있었던 시스테인 잔기간에 디술피드 결합을 형성하는 방법 등을 들 수 있다.
얻어진 본 실시 형태에 있어서의 펩티드 또는 화합물은, 당업자에게 공지된 방법이나 통상의 펩티드 화학에 사용되는 방법에 준하여 정제할 수 있다. 예를 들어 여러가지 크로마토그래피(예를 들어, 실리카겔 칼럼 크로마토그래피, 이온 교환 칼럼 크로마토그래피, 겔 여과, 혹은 역상 크로마토그래피), 또는 재결정 등으로 정제할 수 있다. 예를 들어 재결정 용매로서는, 메탄올, 에탄올 혹은 2-프로판올 등의 알코올계 용매, 디에틸에테르 등의 에테르계 용매, 아세트산에틸 등의 에스테르계 용매, 벤젠 혹은 톨루엔 등의 방향족 탄화수소계 용매, 아세톤 등의 케톤계 용매, 헥산 등의 탄화수소계 용매, 디메틸포름아미드 혹은 아세토니트릴 등의 비프로톤계 용매, 물, 또는 이들의 혼합 용매 등을 사용할 수 있다. 기타 정제 방법으로서는, 실험 화학 강좌(일본 화학회 편, 마루젠) 1권 등에 기재된 방법 등을 사용할 수 있다.
디술피드 화합물의 정제 방법은 문헌(펩티드 신서시스(Peptide Synthesis), Interscience, New York, 1966; 더 프로테인즈(The Proteins), Vol 2, Academic Press Inc., New York, 1976; 펩티드 합성, 마루젠(주), 1975; 펩티드 합성의 기초와 실험, 마루젠(주), 1985; 의약품의 개발 속 제14권·펩티드 합성, 히로카와 쇼텐, 1991) 등에 기재되어 있다. 그 중에서도, HPLC가 바람직하다.
본 실시 형태에 있어서의 화합물에 있어서 하나 이상의 비대칭점이 있는 경우, 통상의 방법에 따라서, 그 비대칭점을 갖는 원료(아미노산)를 사용함으로써 제조할 수 있다. 또한, 본 실시 형태에 있어서의 화합물의 광학 순도를 높이기 위해서, 제조 공정의 적당한 단계에서 광학 분할 등을 행해도 된다. 광학 분할법으로서 예를 들어, 본 실시 형태에 있어서의 화합물 혹은 그의 중간체를 불활성 용매중(예를 들어 메탄올, 에탄올, 혹은 2-프로판올 등의 알코올계 용매, 디에틸에테르 등의 에테르계 용매, 아세트산에틸 등의 에스테르계 용매, 톨루엔 등의 탄화수소계 용매, 또는 아세토니트릴 등의 비프로톤계 용매, 및 이들의 혼합 용매), 광학 활성의 산(예를 들어, 만델산, N-벤질옥시알라닌, 혹은 락트산 등의 모노카르복실산, 타르타르산, o-디이소프로필리덴타르타르산 혹은 말산 등의 디카르복실산, 또는 캄포술폰산 혹은 브로모캄포술폰산 등의 술폰산)과 염을 형성시키는 디아스테레오머법에 의해 행할 수 있다. 본 실시 형태에 있어서의 화합물 또는 중간체가 카르복시기 등의 산성 관능기를 갖는 경우에는, 광학 활성의 아민(예를 들어 α-페네틸아민, 키닌, 퀴니딘, 신코니딘, 신코닌, 스트리키닌 등의 유기 아민)과 염을 형성시킴으로써 광학 분할을 행할 수도 있다.
염을 형성시키는 온도로서는, 실온부터 용매의 비점까지의 범위로부터 선택된다. 광학 순도를 향상시키기 위해서는, 일단 용매의 비점 부근까지 온도를 높이는 것이 바람직하다. 석출된 염을 여과 취출할 때, 필요에 따라 냉각하여 수율을 향상시킬 수 있다. 광학 활성의 산 또는 아민의 사용량은, 기질에 대하여 약 0.5 내지 약 2.0 당량의 범위, 바람직하게는 1 당량 전후의 범위가 적당하다. 필요에 따라 결정을 불활성 용매 중(예를 들어 메탄올, 에탄올, 2-프로판올 등의 알코올계 용매, 디에틸에테르 등의 에테르계 용매, 아세트산에틸 등의 에스테르계 용매, 톨루엔 등의 탄화수소계 용매, 아세토니트릴 등의 비프로톤계 용매 및 이들의 혼합 용매)에서 재결정하여, 고순도의 광학 활성의 염을 얻을 수도 있다. 또한, 필요에 따라 광학 분할한 염을 통상의 방법으로 산 또는 염기로 처리하여 프리체로서 얻을 수도 있다.
본 명세서에 있어서의 「약학상 허용되는 염」으로서는, 산 부가염 및 염기 부가염을 들 수 있다. 예를 들어 산 부가염으로서는, 염산염, 브롬화수소산염, 황산염, 요오드화수소산염, 질산염, 인산염 등의 무기산염, 시트르산염, 옥살산염, 아세트산염, 포름산염, 프로피온산염, 벤조산염, 트리플루오로아세트산염, 말레산염, 타르타르산염, 메탄술폰산염, 벤젠술폰산염, 파라톨루엔술폰산염 등의 유기산염을 들 수 있고, 염기 부가염으로서는, 나트륨염, 칼륨염, 칼슘염, 마그네슘염, 암모늄염 등의 무기 염기염, 트리에틸암모늄염, 트리에탄올암모늄염, 피리디늄염, 디이소프로필암모늄염 등의 유기 염기염 등을 들 수 있고, 나아가 아르기닌, 아스파르트산, 글루탐산 등의 염기성 혹은 산성 아미노산과 같은 아미노산염을 들 수 있다.
본 실시 형태에 있어서의 펩티드 혹은 화합물 또는 그의 약학상 허용되는 염의 수화물, 에탄올 용매화물 등의 용매화물도 본 실시 형태에 포함된다. 또한, 본 실시 형태에 있어서의 의약 조성물은 식 (1)로 표시되는 화합물의 모든 디아스테레오머, 에난티오머 등의 존재할 수 있는 모든 입체 이성체, 및 모든 양태의 결정형도 포함하고 있다.
본 실시 형태에 있어서의 의약 조성물은, WT1 유전자가 발현하고 있는 암이나 WT1 유전자의 발현 레벨의 상승을 수반하는 암(WT1 관련 암)의 치료 또는 예방에 사용할 수 있다. 이러한 암으로서는, 예를 들어 백혈병, 골수 이형성 증후군, 다발성 골수종, 악성 림프종, 위암, 대장암, 폐암, 유방암, 배세포암, 간암, 피부암, 방광암, 전립선암, 자궁암, 자궁경암, 난소암, 성선외 배세포 종양, 뇌종양, 뇌암, 두개외 배세포 종양, 골암, 췌장암, 두경부암, 턱암, 식도암, 하인두암, 후두암, 구순 및 구강암, 수아종, 흑색종, 메르켈 세포암, (흉막 중피종, 심막 중피종, 복막 중피종 등의) 중피종, (골육종, 평활근 육종, 카포시 육종, 악성 섬유성 조직구종, 지방 육종, 유잉 육종, 융기성 피부 섬유 육종 등의) 육종, 신경아종, 망막아종, 간아종, 신장아종, 글리아 종양, 피부 또는 안와 내 악성 멜라노마, 편평 상피암, 경부 편평 상피암, 안 내 흑색종, 담도암, 결장암, 십이지장암, 소장암, 직장암, 항문부암, 충수암, 담관암, 간외 담관암, 췌도 세포암, 정소암, 난관의 카르시노마, 자궁 내막 카르시노마, 자궁경부 카르시노마, 질 카르시노마, 외음부 카르시노마, 호지킨병, 비호지킨 림프종, 림프 형질 세포성 림프종, 기관지 선종/카르시노이드, 버킷 림프종, 카르시노이드 종양, 소뇌 아스트로사이토마, 만성 비강 및 부비강암, 비인두암, 타액선암, 설하선암, 이하선암, 내분비계암, 갑상선암, 부갑상선암, 부신암, 유조직 육종, 요도암, 음경암, 성상 세포종, 기저 세포암, 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 급성 림프 아구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병을 포함하는 만성 또는 급성 백혈병, 소아 고형암, 림프구성 림프종, 신장 또는 요관의 암, 신우 카르시노마, 중추 신경계(CNS) 종양, 원발성 CNS 림프종, 종양 신맥관 형성, 척추 종양, 뇌간 글리옴, 하수체 아데노마, 카포시 육종, 편평 상피암, 편평 세포암, T 세포 림프종, 다형성 교아종, 악성 흑색종, 비소세포 폐암, 소세포 폐암, 신장세포암, AIDS 관련암 및 아스베스토 유발암 등을 들 수 있다. 암은 예를 들어 상기 예시로 이루어지는 군에서 선택되어도 되고, 예를 들어 백혈병, 골수 이형성 증후군, 다발성 골수종, 악성 림프종, 위암, 대장암, 폐암, 유방암, 배세포암, 간암, 피부암, 방광암, 전립선암, 자궁암, 자궁경암, 난소암 및 뇌종양으로 이루어지는 군에서 선택되어도 된다. 암은 예를 들어 백혈병, 골수 이형성 증후군, 다발성 골수종, 방광암, 뇌종양, 유방암, 폐암, 대장암, 악성 림프종, 식도암, 두경부암, 간암, 난소암, 췌장암, 전립선암 및 위암으로 이루어지는 군에서 선택되어도 되고, 백혈병, 골수 이형성 증후군 및 다발성 골수종으로 이루어지는 군에서 선택되어도 되고, 골수 이형성 증후군, 유방암, 폐암, 대장암 및 방광암으로 이루어지는 군에서 선택되어도 된다.
본 실시 형태에 있어서, 대상은 인간이어도 되고 인간 이외의 동물이어도 된다. 인간 이외의 동물은 포유 동물인 것이 바람직하다. 대상은 암을 가진 인간, 암을 가진 것이 의심되는 인간 또는 암의 발증 리스크가 있는 인간이어도 되고, 암을 가진 인간인 것이 바람직하다. 대상이 암을 가진 경우에는, 환자라고 표현하는 경우도 있다.
본 실시 형태의 펩티드 혹은 화합물 또는 그의 약학상 허용되는 염은, 각 펩티드 혹은 화합물 또는 각 염에 따라서 적절한 형태로 함으로써, 암의 세포성 면역 요법에 있어서의 CTL 유도제의 유효 성분, 암 백신의 유효 성분 또는/및 의약 조성물의 유효 성분으로 할 수 있다.
본 실시 형태의 의약 조성물, 펩티드 혹은 화합물 또는 그의 약학상 허용되는 염은, 펩티드 또는 화합물의 세포성 면역이 효과적으로 성립하도록 약학상 허용되는 담체, 예를 들어 적당한 아쥬반트와 함께 투여할 수 있다. 또한, 동일한 이유에 의해, 본 실시 형태의 의약 조성물은 약학상 허용되는 담체, 예를 들어 적당한 아쥬반트를 포함할 수 있다. 아쥬반트로서는, 침강성 아쥬반트 및 유성 아쥬반트 등을 들 수 있다. 침강성 아쥬반트는 펩티드가 흡착되는 무기물의 현탁제를 나타낸다. 침강성 아쥬반트로서는, 구체적으로는 수산화나트륨, 수산화알루미늄(알럼, Alum), 인산칼슘, 인산알루미늄, 명반, 페페스, 카르복시비닐 폴리머 등을 들 수 있다. 유성 아쥬반트는, 펩티드를 포함하는 수용액을 광유로 둘러싸서 미셀을 만들어 유화하는 유유제를 나타낸다. 유성 아쥬반트로서는, 구체적으로는 유동 파라핀, 라놀린, 프로인트 아쥬반트(완전 프로인트 아쥬반트, 불완전 프로인트 아쥬반트), 몬타나이드, W/O 에멀션 등을 들 수 있다. 또한, 예를 들어 아쥬반트로서는, 문헌(Clin. Microbiol. Rev., 7: 277-289, 1994)에 기재된 것 등이 응용 가능하고, 구체적으로는 균체 유래 성분, GM-CSF, 인터류킨-2, 인터류킨-7 혹은 인터류킨-12 등의 사이토카인, 식물 유래 성분, 해양 생물 유래 성분, 수산화알루미늄과 같은 광물 겔, 리솔레시틴, 플루로닉 폴리올와 같은 계면 활성제, 다가 음이온, 펩티드, 또는 유유탁액(에멀션 제제) 등을 들 수 있다. 균체 유래 성분으로서는, 리피드 A(lipid A), 그의 유도체인 모노포스포릴리피드 A(monophosphoryl lipid A), 세균(BCG균 등의 미코박테리움(Mycobacterium)속 세균을 들 수 있다)의 사균, 세균 유래의 단백질, 폴리뉴클레오티드, 프로인트 불완전 아쥬반트(Freund's Incomplete Adjuvant), 프로인트 완전 아쥬반트(Freund's Complete Adjuvant), 세포벽 골격 성분(예를 들어 BCG-CWS 등을 들 수 있다), 트레할로오스디미콜레이트(TDM) 등을 들 수 있다.
또한 본 실시 형태의 펩티드 또는 화합물은 리포솜 제제, 직경 수㎛의 비즈에 결합시킨 입자상의 제제, 리피드를 결합시킨 제제, W/O 에멀션 제제 등으로 하여 투여할 수도 있다.
또한 본 실시 형태의 펩티드 또는 화합물(콘쥬게이트체)은 MHC 클래스 II 구속성 WT1 펩티드(즉 헬퍼 펩티드)와 함께 투여할 수 있다. 함께 투여하는 방법으로서는, 콘쥬게이트체와 헬퍼 펩티드를 개별로 투여하는 것도 가능하지만, 하나의 의약 조성물 중에 콘쥬게이트체와 헬퍼 펩티드를 포함하는 칵테일 제제(칵테일제, 칵테일)가 보다 바람직하다. 본 칵테일 제제는, MHC 클래스 I 구속성 WT1 펩티드(즉 킬러 펩티드)를 발생할 수 있는 콘쥬게이트체 및 MHC 클래스 II 구속성 WT1 펩티드(즉 헬퍼 펩티드)를 포함하는 것이다. 따라서, 암 면역 요법에 있어서의 암 백신으로서, 헬퍼 펩티드를 함유한 본 칵테일 제제를 투여함으로써, CTL을 포함하는 다른 T 세포의 기능 항진에 중요한 헬퍼 T 세포(helper T cell)의 활성화도 가능하게 되어, 콘쥬게이트체의 기능·약효(세포성 면역능 등)를 향상시킬 수 있다.
본 실시 형태에 관계되는, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상을 선택하는 방법(이하, 「본 실시 형태의 선택 방법」이라고도 함)에 있어서는, 이하의 (1) 내지 (6)으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 또는 2 이상의 조합에 기초하여, 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공할 수 있다. 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공함으로써, 대상의 의약 조성물에 대한 응답을 예측하는 것도 가능하다.
(1) TP53 유전자 및/또는 BCOR 유전자에 있어서의 변이
(2) WT1 유전자의 mRNA 발현량
(3) 개정 IPSS(IPSS-R)에 기초하는 핵형
(4) WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포의 증가 유무
(5) 지연형 과민 반응의 유무
(6) 골수 아구의 비율의 변화
(1) 내지 (6)으로 이루어지는 군에서 선택되는 2 이상의 조합에 기초하여, 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 경우, 실시하는 순번은 상기 순번으로 한정되는 것은 아니다. 당업자는 선발의 효율, 대상의 상태나 부담 등을 고려하여, 실시하는 공정 및 순번을 적절히 설정할 수 있다. 또한, 예를 들어 병, 병상, 게놈 정보, 치료에 대한 리스크 요인 및 검사 데이터 등의 환자의 치료에 관한 빅 데이터로부터, 인공 지능, 기계 학습, 또는/및 통계학적 방법 등에 의해 유효한 조합을 추측하고, 선택하는 것도 가능하다. 예를 들어, 의약 조성물 또는 펩티드의 투여를 필요로 하지 않는 (1) 내지 (3)으로부터 선택되는 하나 이상에 기초하는 선발을 먼저 실시하고, 그 결과에 기초하여 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상을 좁힌 후에, 의약 조성물 또는 펩티드의 투여를 필요로 하는 (4) 내지 (6)으로부터 선택되는 하나 이상에 기초하는 선발을 실시함으로써, 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상을 선택할 수도 있다. 또한, 예를 들어 반대로 먼저 (4) 내지 (6)으로부터 선택되는 하나 이상에 기초하는 선발을 실시하고, 그 결과에 기초하여 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상을 좁힌 후에, (1) 내지 (3)으로부터 선택되는 하나 이상에 기초하는 선발을 실시하는 것도 가능하다. 또한, 예를 들어 이미 대상의 IPSS-R에 기초하는 핵형이 결정되어 있는 경우에는, (3)에 기초하는 선발에 의해 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상을 좁힌 후에, (1) 내지 (2) 및 (4) 내지 (6)으로부터 선택되는 하나 이상에 기초하는 선발을 실시하는 것도 가능하다. 의약 조성물 또는 펩티드의 투여를 필요로 하는 선발을 실시한 후에, 동일한 대상에 대하여 의약 조성물 또는 펩티드의 미투여로 실시하는 것이 바람직한 선발을 실시하는 경우에는, 소정의 기간이 경과하여, 의약 조성물 또는 펩티드의 투여 영향이 충분히 감소하고 나서 행하는 것도 가능하다.
본 실시 형태에 있어서의 시료는 대상으로부터 채취 가능하다면 특별히 한정되지 않고, 예를 들어 혈액, 림프액, 복수, 흉수, 담, 수액(뇌척수액), 눈물, 콧물, 타액, 소변, 질액, 정액 및 관절액 등의 체액, 점막, 세포, 조직, 그리고 세포 혹은 조직의 배양물 등을 들 수 있다. 혈액은 혈장, 혈청, 간질액을 포함한다. 세포는 적혈구, 백혈구, 혈소판, 조혈 줄기세포, 골수혈, 골수 아구 등의 혈액 세포, 혈액 순환 종양 세포, 백혈병 세포, 이형성을 수반하는 아구, 뇌종양, 대장암 세포, 폐암 세포, 유방암 세포, 자궁암 세포, 위암 세포, 간암 세포, 전립선암 세포, 신장암 세포, 췌장암 세포, 육종 세포, 악성 중피종 세포, 림프종 세포 등의 악성 종양(암) 세포를 포함한다. 암을 포함하는 조직을 암 조직이라고 한다.
시료는, 당해 분야의 공지된 방법에 기초하여 대상으로부터 채취할 수 있다. 예를 들어 혈액이나 림프액이면, 공지된 채혈 방법에 의해 채취할 수 있다. 예를 들어 세포나 조직이면, 천자, 천자 흡인, 찰과, 복강 세정, 침 생검 및 외과적 생검 등의 공지된 방법에 의해 채취할 수 있다. 본 실시 형태에 있어서의 시료는 체액, 점막, 세포, 조직 및 세포 또는 조직의 배양물 그리고 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되어도 되고, 혈액, 수액, 혈액 세포, 암 세포, 암 조직 및 세포 또는 암 조직의 배양물 그리고 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되어도 되고, 혈액, 수액, 암 세포, 암 조직 및 암 세포 또는 암 조직의 배양물 그리고 이들의 조합으로 이루어지는 군에서 선택되어도 되고, 혈액 또는 수액이어도 된다.
암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과로서는, 암의 종류 및 대상의 상태 등에 따라 다른 경우도 있는데, 예를 들어 생존 기간의 연장, 골수 아구의 안정화, 암 세포의 감소, 전이의 예방 및 진행의 지연(골수 이형성 증후군(MDS) 환자이라면, 급성 골수성 백혈병(AML) 이행 기간의 연장) 등을 들 수 있다. 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상에는, 예를 들어 의약 조성물이 주효할 가능성이 높은 대상, 의약 조성물의 투여에 의해 생존 기간이 연장될 가능성이 높은 대상 등이 포함된다.
「WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응」이란, WT1 항원 펩티드의 투여 등에 의해 특이적으로 유도되는 면역 반응이다. 「WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응」이 유도되고 있는 것은, 예를 들어 후술하는 HLA 테트라머 어세이에 의한 판정 결과가 양성인 것 또한/또는 지연성 과민 반응이 양성인 것 등에 의해 확인할 수 있다.
(1) TP53 유전자 및/또는 BCOR 유전자에 있어서의 변이
TP53 유전자는 393 아미노산을 포함하는 핵 내 단백질 p53을 코드하고 있는 암 억제 유전자이다. BCOR 유전자는 BCL6의 공동-리프레서이며, 전사 인자에 결합하여, 유전자 발현을 특이적으로 저해하는 유전자이다. 모두 예후 불량 인자인 것이 보고되어 있다.
본 명세서에 있어서 TP53 유전자 및/또는 BCOR 유전자에 있어서의 변이란, TP53 유전자 및 BCOR 유전자의 양쪽에 있어서의 변이, TP53 유전자에 있어서의 변이, 또는 BCOR 유전자에 있어서의 변이를 의미한다. TP53 유전자 및/또는 BCOR 유전자에 있어서의 변이는, 각각의 염기 서열에 대하여 뉴클레오티드 염기의 치환, 결실, 삽입 또는 이들의 조합이어도 된다. TP53 유전자 및/또는 BCOR 유전자에 있어서의 변이는 1 내지 20개, 1 내지 10개, 1 내지 8개, 1 내지 5개, 1 내지 4개, 1 내지 3개, 1 내지 2개 또는 1개의 뉴클레오티드 염기의 치환, 결실, 삽입 또는 이들의 조합이어도 된다.
본 명세서에 있어서 TP53 야생형이란, TP53 유전자에 변이가 존재하지 않는 경우, 또는 TP53 유전자에 변이가 존재하더라도 본래의 기능을 상실하지 않거나 혹은 이상을 수반하지 않는 경우(침묵 변이 및 동의 변이 등을 포함한다)를 말한다. TP53 변이형이란, TP53 유전자에 변이가 존재하고, 또한 본래의 기능을 상실하거나 혹은 이상을 수반하는 경우를 말한다. BCOR 야생형이란, BCOR 유전자에 변이가 존재하지 않는 경우, 또는 BCOR 유전자에 변이가 존재하더라도 본래의 기능을 상실하지 않거나 혹은 이상을 수반하지 않는 경우(침묵 변이 및 동의 변이 등을 포함한다)를 말한다. BCOR 변이형이란, BCOR 유전자에 변이가 존재하고, 또한 본래의 기능을 상실하거나 혹은 이상을 수반하는 경우를 말한다. 따라서, TP53 야생형 및/또는 BCOR 야생형은, TP53 또는 BCOR의 어느 것이 야생형인 경우, 그리고 TP53 및 BCOR의 양쪽이 야생형인 경우를 포함한다.
본 실시 형태의 선택 방법은 대상으로부터 채취된 시료를 사용하여, TP53 유전자 및/또는 BCOR 유전자에 있어서의 변이의 유무를 결정하는 공정과,
대상이 TP53 야생형 및/또는 BCOR 야생형인 경우에, 상기 대상은 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 포함한다.
대상, 시료, 의약 조성물 등에 대해서는 전술한 바와 같다.
TP53 유전자 및/또는 BCOR 유전자에 있어서의 변이의 유무를 결정하는 공정이란, 대상에 있어서의 TP53 유전자 및/또는 BCOR 유전자에 대응하는 유전자에 있어서, 야생형의 염기 서열과의 차이(변이)가 보이고, 그 변이가, 야생형이 갖고 있었던 본래의 기능을 상실시키는 변이 또는 이상을 수반하는 변이인 경우에는, 「TP53 변이형 및/또는 BCOR 변이형」이라고 하고, 야생형의 염기 서열과의 차이(변이)가 보이지 않는 경우 또는 변이가 각 유전자의 전사량 및 각 유전자가 코드하는 단백질의 기능에 변화가 발생하지 않는 변이(침묵 변이 및 동의 변이 등을 포함한다)인 경우에는, 「TP53 야생형 및 BCOR 야생형」이라고 결정하는 공정이다. 야생형의 염기 서열과의 차이(변이)는 대상의 TP53 유전자 및/또는 BCOR 유전자에 대응하는 유전자의 염기 서열을, 야생형의 TP53 유전자 및/또는 BCOR 유전자와 비교함으로써 검출해도 된다. 대상의 TP53 유전자 및/또는 BCOR 유전자에 대응하는 유전자의 염기 서열의 결정 및 야생형의 염기 서열과의 비교는 당업자에게 공지된 방법에 의해 행할 수 있다. 예를 들어 시료로부터 통상의 방법에 의해 DNA를 추출하고, 차세대 시퀀스법(NGS) 등에 의해 각 유전자의 서열을 결정하고, 대응하는 야생형의 유전자 서열과 비교함으로써 변이의 유무를 결정할 수 있다. 또한, 예를 들어 변이에 따라서는, 염기 서열을 결정하지 않더라도, PCR-RFLP(Restriction Fragment Length Polymorphism, 제한 효소 단편 길이 다형)법에 의해 변이의 유무를 결정할 수도 있다. 또한, 예를 들어 시판하고 있는 DNA 변이/다형 검출 키트를 사용하여 행할 수도 있다.
본 실시 형태의 선택 방법은, 예를 들어 TP53 유전자 및 BCOR 유전자에 있어서의 변이의 유무를 결정하는 공정을 포함하고 있어도 되고, 그 결과, TP53 야생형의 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 포함해도 되고, BCOR 야생형의 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 포함해도 되고, TP53 야생형 및 BCOR 야생형의 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 포함해도 된다.
또한, 본 실시 형태의 선택 방법은, 예를 들어 TP53 유전자에 있어서의 변이의 유무를 결정하는 공정을 포함하고 있어도 되고, 그 결과, TP53 야생형의 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 포함해도 된다. 마찬가지로 본 실시 형태의 선택 방법은, 예를 들어 BCOR 유전자에 있어서의 변이의 유무를 결정하는 공정을 포함하고 있어도 되고, 그 결과, BCOR 야생형의 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 포함해도 된다.
본 실시 형태의 선택 방법은, 예를 들어 반대로 TP53 변이형 및/또는 BCOR 변이형의 경우에, 그 대상은 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이 아니라는 지표를 제공하는 것을 포함하는 것이어도 된다.
본래의 기능을 상실하지 않거나 또는 이상을 수반하지 않는 경우에는, 각 유전자가 야생형 동일하거나 또는 실질적으로 동일(침묵 변이 및 동의 변이 등을 포함한다)을 의미한다.
이와 같이 TP53 유전자 및/또는 BCOR 유전자는, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상인지의 여부의 지표를 제공하기 위한 마커로서 사용할 수 있다.
(2) WT1 유전자의 mRNA 발현량
본 발명은 다른 형태에 있어서, WT1 유전자의 mRNA 발현량에 기초하여, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상을 선택하는 방법을 제공한다.
본 실시 형태의 선택 방법은 대상으로부터 채취된 시료를 사용하여, WT1 유전자의 mRNA 발현량을 결정하는 공정과,
WT1 유전자의 mRNA 발현량이 기준값 미만 또는 이하인 경우에, 그 대상은 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 포함한다.
WT1 유전자의 mRNA 발현량을 결정하는 공정은 정량 PCR 등의 당업자에게 공지된 방법에 의해 실시할 수 있다. 또한, 예를 들어 WT1 mRNA 측정 키트 II 「오츠카」(오츠카 세이야쿠 가부시키가이샤) 등의 시판되는 키트를 사용하여 행할 수도 있다. 예를 들어 시료로부터 RNA를 추출하고, WT1에 특이적인 프라이머를 사용하여 리얼타임 PCR 장치 등에 의해 RT-PCR 등의 정량 PCR 반응을 행하고, 표준 곡선에 기초하여 WT1 mRNA 및 내재성 대조로서 하우스키핑 유전자(GAPDH, β-액틴 등)의 mRNA의 측정값을 산출할 수 있다. 그 후, 예를 들어 이하의 식(수학식 1)에 나타내는 바와 같이, WT1 mRNA 측정값을 하우스키핑 유전자의 mRNA 측정값으로 나눈 값(하우스키핑 유전자의 mRNA 1카피당의 WT1 mRNA 카피수)에, 건강 성인의 1μg RNA당의 하우스키핑 유전자의 평균 mRNA 카피수(하우스키핑 유전자의 mRNA 발현량)를 곱하여 WT1 mRNA 발현량(카피/μg RNA)을 산출할 수 있다. 따라서, WT1 mRNA 발현량(카피/μg RNA)은 이하의 식(수학식 1)에 의해 산출되는 값인 것으로 할 수도 있다.
Figure pct00026
하우스키핑 유전자로서 GAPDH를 사용하는 경우에는, 예를 들어 시료로부터 RNA를 추출하고, WT1에 특이적인 프라이머를 사용하여 리얼타임 PCR 장치 등에 의해 RT-PCR 등의 정량 PCR 반응을 행하고, 표준 곡선에 기초하여 WT1 mRNA 및 GAPDH mRNA의 측정값을 산출할 수 있다. 그 후, 예를 들어 이하의 식에 나타내는 바와 같이, WT1 mRNA 측정값을 GAPDH mRNA 측정값으로 나눈 값(GAPDH mRNA 1카피당의 WT1 mRNA 카피수)에, 건강 성인의 1μg RNA당의 평균 GAPDH mRNA 카피수(GAPDH mRNA 발현량)를 곱하여 WT1 mRNA 발현량(카피/μg RNA)을 산출할 수 있다. 따라서, WT1 mRNA 발현량(카피/μg RNA)은 이하의 식(수학식 2)에 의해 산출되는 값인 것으로 할 수도 있다. 또한, 2.7×107(카피/μg RNA)은 건강 성인의 1μg RNA당의 평균 GAPDH mRNA 측정값이다.
Figure pct00027
또한, WT1 mRNA 발현량(카피/μg RNA)은 WT1 mRNA 측정 키트 II 「오츠카」(오츠카 세이야쿠 가부시키가이샤) 및 부속된 프로토콜에 따라서, 상기 식(수학식 2)에 의해 산출된 값으로 할 수도 있다.
본 실시 형태의 선택 방법에 있어서는, WT1 유전자의 mRNA 발현량이 기준값 미만 또는 이하인 경우에, 그 대상은 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공할 수 있다. WT1 유전자의 mRNA 발현량의 기준값은, 예를 들어 50 내지 100000(카피/μg RNA) 사이의 값이어도 되고, 100 내지 50000(카피/μg RNA) 사이의 값이어도 되고, 1000 내지 20000(카피/μg RNA) 사이의 값이어도 되고, 2000 내지 10000(카피/μg RNA) 사이의 값이어도 되고, 3000 내지 10000(카피/μg RNA) 사이의 값이어도 되고, 4000 내지 10000(카피/μg RNA) 사이의 값이어도 된다. 또한, WT1 유전자의 mRNA 발현량의 기준값은, 예를 들어 50(카피/μg RNA) 이상의 값, 100(카피/μg RNA) 이상의 값, 250(카피/μg RNA) 이상의 값, 500(카피/μg RNA) 이상의 값, 750(카피/μg RNA) 이상의 값, 1000(카피/μg RNA) 이상의 값, 1000(카피/μg RNA) 이상의 값, 1250(카피/μg RNA) 이상의 값, 1500(카피/μg RNA) 이상의 값, 1750(카피/μg RNA) 이상의 값, 2000(카피/μg RNA) 이상, 2250(카피/μg RNA) 이상의 값, 2500(카피/μg RNA) 이상의 값, 2750(카피/μg RNA) 이상의 값, 3000(카피/μg RNA) 이상의 값, 3250(카피/μg RNA) 이상의 값, 3500(카피/μg RNA) 이상의 값, 3750(카피/μg RNA) 이상의 값, 4000(카피/μg RNA) 이상의 값이어도 되고, 15000(카피/μg RNA) 이하의 값, 14000(카피/μg RNA) 이하의 값, 13000(카피/μg RNA) 이하의 값, 12000(카피/μg RNA) 이하의 값, 11000(카피/μg RNA) 이하의 값, 10000(카피/μg RNA) 이하의 값이어도 되고, 50(카피/μg RNA), 100(카피/μg RNA), 250(카피/μg RNA), 500(카피/μg RNA), 750(카피/μg RNA), 1000(카피/μg RNA), 1000(카피/μg RNA), 1250(카피/μg RNA), 1500(카피/μg RNA), 1750(카피/μg RNA), 2000(카피/μg RNA), 2250(카피/μg RNA), 2500(카피/μg RNA), 2750(카피/μg RNA), 3000(카피/μg RNA), 3250(카피/μg RNA), 3500(카피/μg RNA), 3750(카피/μg RNA) 이상, 4000(카피/μg RNA), 15000(카피/μg RNA), 14000(카피/μg RNA), 13000(카피/μg RNA), 12000(카피/μg RNA), 11000(카피/μg RNA), 10000(카피/μg RNA)이어도 된다. 본 실시 형태의 선택 방법에 있어서는, 예를 들어 WT1 유전자의 mRNA 발현량이 4000(카피/μg RNA) 미만 또는 이하인 경우에, 그 대상은 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 것이어도 되고, WT1 유전자의 mRNA 발현량이 10000(카피/μg RNA) 미만 또는 이하인 경우에, 그 대상은 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 것이어도 된다. 본 실시 형태의 선택 방법에 있어서는, WT1 유전자의 mRNA 발현량이 4000 내지 10000(카피/μg RNA) 사이의 값 미만 또는 이하인 경우에, 그 대상은 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 것임이 바람직하다.
대상이 골수 이형성 증후군(MDS) 환자일 경우에는, WT1 유전자의 mRNA 발현량의 기준값은 100000(카피/μg RNA) 이하의 값인 것이 바람직하고, 4000 내지 10000(카피/μg RNA) 사이의 값인 것이 보다 바람직하고, 10000(카피/μg RNA) 이하의 값인 것이 더욱 바람직하다. 대상으로부터 채취된 시료에 있어서의 WT1 유전자의 mRNA 발현량이 상기 기준값 미만 또는 이하인 경우에는, OS가 길어지는 경향이 있다.
이와 같이 WT1 유전자는, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상인지의 여부의 지표를 제공하기 위한 마커로서 사용할 수 있다.
(3) 개정 IPSS(IPSS-R)에 기초하는 핵형
본 발명은 다른 형태에 있어서, 개정 IPSS(IPSS-R)에 기초하는 핵형에 기초하여, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상을 선택하는 방법을 제공한다.
본 실시 형태의 선택 방법은, 대상의 개정 IPSS(IPSS-R, "Greenberg et al., Blood 120, no.12, p2454-2465(2012)")에 기초하는 핵형이 매우 불량 이외인 경우에, 그 대상은 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 포함한다. 본 실시 형태의 선택 방법은, 이 공정 전에, 대상으로부터 채취된 시료를 사용하여, 대상의 IPSS-R에 기초하는 핵형을 결정하는 공정을 포함하고 있어도 된다.
IPSS-R에 기초하는 핵형은, G 분염법 및 Q 분염법 등 당업자에게 공지된 방법에 의해 해석하여 결정할 수 있다. 대상의 IPSS-R에 기초하는 핵형이 매우 불량 이외인 경우에, 그 대상은 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표가 제공된다. 본 실시 형태의 선택 방법은, 예를 들어 대상의 IPSS-R에 기초하는 핵형이 좋음/매우 좋음, 중간 또는 불량일 경우에, 그 대상은 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표가 제공되어도 되고, 중간 또는 불량일 경우에, 그 대상은 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표가 제공되어도 되고, 불량일 경우에, 그 대상은 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표가 제공되어도 되고, 좋음/매우 좋음일 경우에, 그 대상은 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표가 제공되어도 되고, 좋음/매우 좋음 또는 중간일 경우에, 그 대상은 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표가 제공되어도 된다. 또한, 대상의 IPSS-R에 기초하는 핵형이 매우 불량일 경우에, 그 대상은 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이 아니라는 지표가 제공되어도 된다.
(4) WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포의 증가 유무
본 발명은 다른 형태에 있어서, WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포의 증가 유무에 기초하여, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상을 선택하는 방법을 제공한다.
본 실시 형태의 선택 방법은, 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여한 대상으로부터 채취한 시료를 사용하여, WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포를 검출하는 공정과,
투여 전의 대상으로부터 채취한 시료와 비교하여, 상기 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 증가한 경우에, 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 포함한다. 대상, 시료, 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염 등에 대해서는 전술한 바와 같다.
WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포의 검출은, 예를 들어 HLA 모노머법, HLA 다이머법, HLA 테트라머법(Int.J.Cancer: 100, 565-570(2002)), HLA 펜타머법, HLA 덱스트라머법, 엘리스폿법, 리얼타임 RT-PCR법 및 한계 희석법(Nat.Med.: 4, 321-327(1998))에 의해 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포의 존재 또는 세포수를 측정함으로써 확인할 수 있다. 따라서, WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포를 검출하는 공정은, WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포의 존재 또는 세포수를 측정하는 공정이어도 된다. WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포의 검출은 HLA 테트라머법에 의해 측정하는 것이 바람직하다. HLA 테트라머는 HLAα쇄와 β2 마이크로글로불린을 펩티드와 회합시킨 복합체(HLA 모노머)를 비오틴화하고, 형광 표지한 아비딘에 결합시킴으로써 4량체화하여 제작한다. HLA 테트라머로 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포를 염색하고, 플로 사이토미터로 해석함으로써 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포의 존재 또는 세포수를 측정할 수 있다. HLA 모노머법, HLA 다이머법, HLA 펜타머법 및 HLA 덱스트라머법도 마찬가지의 원리에 기초하여 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포의 존재 또는 세포수를 측정할 수 있다.
WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포를 검출하는 공정은, WT1 펩티드와 HLA 분자의 복합체를 상기 시료와 반응시키고, 상기 시료에 포함되는 상기 복합체를 인식하는 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포의 존재 또는 세포수를 조사함으로써 실시되어도 된다. WT1 펩티드와 HLA 분자의 복합체는, 예를 들어 HLA 모노머, HLA 다이머, HLA 테트라머, HLA 펜타머 및 HLA 덱스트라머로 이루어지는 군에서 선택되어도 된다. 여기서 HLA 분자는, 대상의 HLA에 적합한 것이 바람직하다. HLA 분자는, 예를 들어 HLA-A24 항원 또는 HLA-A2 항원이어도 된다. WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포를 검출하는 공정은 플로 사이토메트리법에 의한 해석을 포함하고 있어도 된다.
또한, 상기 시료에 포함되는 상기 복합체를 인식하는 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포의 존재 또는 세포수를 조사하는 것은, 예를 들어 CD8 양성 또는 CD8/CD3 양성의 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포에 대한 HLA 테트라머 결합 세포의 비율을 측정함으로써 행해도 된다.
HLA 테트라머에 결합한 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포의 존재 또는 세포수는, 예를 들어 CD8 양성 세포, 또는 CD8/CD3 양성 세포에 대한 HLA 테트라머 결합 세포의 비율을 측정함으로써 구할 수 있다.
여기서 CD8 양성 세포는, 예를 들어 형광 표지한 마우스 항인간 CD8 모노클로날 항체를 사용하여 표지·검출할 수 있다. 또한 CD3 양성 세포는 형광 표지한 마우스 항인간 CD3 모노클로날 항체를 사용하여 표지·검출할 수 있다.
여기에서 사용하는 형광 색소는, HLA 테트라머에 있어서 사용되는 형광 색소와 다른 것을 사용할 필요가 있다. 즉, PE 표지한 HLA 테트라머를 사용하는 경우에는, FITC 표지한 마우스 항인간 CD8 모노클로날 항체, 및 PerCP 표지한 마우스 항인간 CD3 모노클로날 항체를 사용한다고 하는 것처럼, 형광 색소를 구별할 필요가 있다.
구체적인 조작은, CD8 양성 세포에 대한 HLA 테트라머 결합 세포의 비율을 측정하는 경우에, 예를 들어 PE 표지 HLA 테트라머와 생체 시료를 접촉시킨 후, FITC 표지 마우스 항인간 CD8 모노클로날 항체를 추가로 첨가하여 반응시키고, 염색된 세포를 플로 사이토미터나 형광 현미경으로 해석한다. CD8 양성 세포(CD8+)를 선택하고, 그 중의 테트라머 양성 세포(CD8+tetramer+)의 비율을 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포의 비율로 할 수 있다(이하):
WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포(％)=
(CD8+tetramer+ 세포수/CD8+ 세포수)×100.
또한, CD3 양성 및 CD8 양성 세포에 대한 HLA 테트라머 결합 세포의 비율을 측정하는 경우에는, 예를 들어 PE 표지 HLA 테트라머와 생체 시료를 접촉시킨 후, FITC 표지 마우스 항인간 CD8 모노클로날 항체 및 PerCP 표지 마우스 항인간 CD3 항체를 추가로 첨가하여 반응시키고, 염색된 세포를 플로 사이토미터나 형광 현미경으로 해석한다. CD3 양성 및 CD8 양성 세포(CD3+CD8+)를 선택하고, 그 중의 테트라머 양성 세포(CD3+CD8+tetramer+)의 비율을 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포의 비율로 할 수 있다(이하):
WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포(％)=
(CD3+CD8+tetramer+ 세포수/CD3+CD8+ 세포수)×100.
본 실시 형태의 선택 방법은 투여 전의 대상으로부터 채취한 시료와 비교하여, WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 증가한 경우에, 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 포함한다. 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여하기 전의 대상으로부터 채취한 시료는, 투여 후의 대상으로부터 채취한 시료와 동종이다. 예를 들어 투여 전의 대상으로부터 채취한 시료가 혈액일 경우에는, 투여 후의 대상으로부터 채취한 시료도 혈액이다. 시료의 채취 타이밍은 적절히 설정할 수 있는데, 예를 들어 가장 가까운 투여 후, 투여 직후 내지 12개월, 투여 직후 내지 6개월, 투여 직후 내지 3개월, 투여 직후 내지 2개월, 투여 직후 내지 1개월, 투여 직후 내지 4주일, 투여 직후 내지 3주일, 투여 직후 내지 2주일, 투여 직후 내지 1주일, 투여 직후 내지 3일간 또는 투여 직후 내지 1일에 채취한 시료를 사용할 수 있다. 또한, 예를 들어 투여 직후 이후 및/또는 12개월 이내여도 되고, 예를 들어 투여 후 1일, 3일, 1주일, 2주일, 3주일, 4주일, 1개월, 2개월, 3개월 혹은 6개월 미만 또는 이내에 채취한 시료를 사용할 수 있다. 또한, 예를 들어 투여 후 1일, 3일, 1주일, 2주일, 3주일, 4주일, 1개월, 2개월, 3개월 혹은 6개월 이상 또는 초과에 채취한 시료를 사용할 수 있다. 투여 횟수는 특별히 제한되지 않고, 1회 내지 1000회, 1회 내지 100회, 1회 내지 50회, 1회 내지 10회, 1회 내지 5회, 1회 내지 3회, 1회 내지 2회 또는 1회 행해도 된다. 투여 횟수는 예를 들어 1회 이상 또는 1000회 미만이어도 되고, 100회, 50회, 10회, 5회, 4회, 3회 혹은 2회 미만 또는 이내여도 되고, 100회, 50회, 10회, 5회, 4회, 3회 혹은 2회 이상 또는 초과여도 된다.
WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 증가한 경우에는, 투여 전의 대상으로부터 채취한 시료에 있어서의 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 검출되지 않고, 투여 후의 대상으로부터 채취한 시료에 있어서 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 검출된 경우도 포함된다.
예를 들어, 투여 후의 대상으로부터 채취한 시료에 있어서의 CD8 T 세포 중의 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포의 비율(양성률)이, 투여 전의 대상으로부터 채취한 시료에 있어서의 CD8 T 세포 중의 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포의 비율(양성률)과 비교하여 소정의 비율 이상 증가한 경우에, WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 증가했다고 할 수 있다. 또한, 예를 들어
(a) 투여 전의 대상으로부터 채취한 시료에 있어서의 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 검출되지 않고, 투여 후의 대상으로부터 채취한 시료에 있어서 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 검출되어, 그 비율(양성률)이 기준값 이상인 경우, 및/또는
(b) 투여 후의 대상으로부터 채취한 시료에 있어서의 CD8 T 세포 중의 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포의 비율(양성률)이, 투여 전의 대상으로부터 채취한 시료에 있어서의 CD8 T 세포 중의 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포의 비율(양성률)과 비교하여, 소정의 비율 이상인 경우
에, WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 증가했다고 할 수 있다.
(a)에 대해서
투여 전의 대상으로부터 채취한 시료에 있어서의 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 검출되지 않은(존재하지 않는) 경우에는, 투여 후의 대상으로부터 채취한 시료에 있어서의 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포의 세포수와 비교한 배율을 산출할 수 없다. 이 경우에는, 예를 들어 미리 설정한 기준값 이상이면 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 증가했다(양성)고 판단할 수 있다. 예를 들어, 당업자라면 이미 행하고 있는 시험의 결과 등을 참고로, WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 양성이라고 판단되는 범위를 설정하고, 그 범위에 포함되는 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포의 수에 대해서, WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 증가했다(양성)고 판단하는 기준이 되는 값을 적절히 설정할 수 있다. 예를 들어, WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포를 검출하는 공정이 플로 사이토메트리법에 의한 해석을 포함하는 경우, CD8이 양성이며 WT1 펩티드가 양성인 세포 집단이 포함되는 게이트를 설정하고, 그 범위에 포함되는 투여 후의 대상으로부터 채취한 시료에 있어서의 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포수(이벤트)가 기준값 이상, 예를 들어 1 이상, 2 이상, 3 이상, 4 이상, 5 이상, 6 이상, 7 이상, 8 이상, 9 이상, 10 이상, 15 이상, 또는 20 이상이면, WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 증가했다(양성)고 판단할 수 있다.
(b)에 대해서
투여 전의 대상으로부터 채취한 시료에 있어서의 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 검출된 경우에는, 투여 후의 대상으로부터 채취한 시료에 있어서의 CD8 T 세포 중의 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포의 비율(양성률)이, 투여 전의 대상으로부터 채취한 시료에 있어서의 CD8 T 세포 중의 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포의 비율(양성률)과 비교하여 소정의 비율 이상인 경우에, WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 증가했다(양성)고 판단할 수 있다. 예를 들어 당업자라면, 이미 행하고 있는 시험의 결과 등을 참고로, WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 양성이라고 판단되는 범위를 설정하고, 그 범위에 포함되는 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포의 수의 투여 전후의 비율에 대해서, WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 증가했다(양성)고 판단하는 기준이 되는 값을 적절히 설정할 수 있다. 예를 들어, WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포를 검출하는 공정이 플로 사이토메트리법에 의한 해석을 포함하는 경우, CD8이 양성이며 WT1 테트라머가 양성인 세포 집단이 포함되는 게이트를 설정하고, 그 범위에 포함되는 투여 후의 대상으로부터 채취한 시료에 있어서의 투여 후의 CD8 T 세포 중의 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포 비율(양성률)이 투여 전과 비교하여 유지되었다고 하는 비율 이상인 경우에, WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 증가했다(양성)고 판단할 수 있다. 또한, 유지되었다고 하는 비율 이하인 경우에, WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 감소했다(음성)고 판단할 수 있다. 유지되었다고 하는 비율은, 예를 들어 0.1초과 내지 5.0배 미만, 0.5초과 내지 2.0배 미만, 0.8초과 내지 1.2배 미만, 0.9초과 내지 1.1배 미만 또는 1.0배 등으로 설정할 수 있다. 유지되었다고 하는 비율은, 예를 들어 0.01, 0.05, 0.1, 0.15, 0.2, 0.25, 0.3, 0.35, 0.4, 0.45, 0.5, 0.55, 0.6, 0.65, 0.7, 0.75, 0.8, 0.85, 0.9, 0.95 혹은 1.0 이상 또는 초과여도 되고, 5.0배, 4.5배, 4.0배, 3.5배, 3.0배, 2.5배, 2.0배, 1.8배, 1.5배, 1.4배, 1.3배, 1.2배, 1.1배 혹은 1.0배 미만 또는 이하여도 된다.
의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 복수회 투여하는 경우에는, 예를 들어 각 투여 후의 어느 시점에서 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 증가했다(양성) 또는 변함없다(유지)고 판정된 경우, 양성 판정 또는 유지 판정으로 하고, 어느 시점에 있어서든 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 감소한(음성) 판정이었을 경우, 음성 판정으로 해도 된다.
상술한 바와 같이, WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포의 증가 유무에 기초하여, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 후보 물질의 효과를 평가하는 것도 가능하다. 즉, 본 실시 형태에 있어서의 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 후보 물질의 효과를 평가하는 방법은, 상기 의약 조성물 또는 상기 의약 조성물에 포함되는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여한 대상으로부터 채취한 시료를 사용하여, WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포를 검출하는 공정과,
투여 전의 상기 대상으로부터 채취한 시료와 비교하여, 상기 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 증가한 경우에, 상기 후보 물질은 암의 치료 및 예방에 대하여 효과를 기대할 수 있다라는 지표를 제공하는 공정을 포함한다. 대상, 시료, 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염 등에 대해서는 전술한 바와 같다.
(5) 지연형 과민 반응의 유무
본 발명은 다른 형태에 있어서, 지연형 과민 반응의 유무에 기초하여, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상을 선택하는 방법을 제공한다.
본 실시 형태의 선택 방법은, 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 복수회 투여한 대상에 있어서 지연형 과민 반응이 검출된 경우에, 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 포함한다. 대상, 시료, 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염 등에 대해서는 전술한 바와 같다.
의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여한 대상에 대하여 동일한 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여하면, 지연형 과민 반응이 검출되는 경우가 있다. 지연형 과민 반응(Delayed Type Hypersensitivity, DTH 반응)은 쿰스-젤(Cooms-Gell) 분류의 IV형에 속하는 세포성 면역 기서에 의한 알레르기 반응이다. 이 지연형 과민 반응의 유무는, WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포의 면역 반응이 유도되어 있는지의 여부의 지표로 할 수 있다.
지연형 과민 반응의 시험(DTH 시험)은 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염이 1회 이상 투여된 대상에, 동일한 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여함으로써 행할 수 있다. 즉, 본 실시 형태의 선택 방법은, 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 1회 이상 투여한 대상에 있어서, 동일한 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여하고, 지연형 과민 반응이 검출된 경우에, 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 것이다. 전자의 1회 이상의 투여는 DTH 시험을 위한 투여가 아니고, 후자의 동일한 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염의 투여가 DTH 시험을 위한 투여에 해당한다. 여기서, 동일한 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염은 실질적으로 동일하면 되고, 예를 들어 1회 이상 투여된 의약 조성물이 2종류 이상의 펩티드가 혼합된 백신일 경우에, DTH 시험에 있어서 2종류 이상의 펩티드를 따로따로 투여하여 시험하는 것을 방해하지 않는다. 예를 들어, 1회 이상 투여된 의약 조성물이 RMFPNAPYL(서열 번호: 2)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드, C-CYTWNQMNL(서열 번호: 10)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드, 및 WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 포함하는 경우에, RMFPNAPYL(서열 번호: 2)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 및 C-CYTWNQMNL(서열 번호: 10)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드와, C-CYTWNQMNL(서열 번호: 10)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 따로따로 투여함으로써 DTH 시험을 행해도 된다. 또한, RMFPNAPYL(서열 번호: 2)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 및 C-CYTWNQMNL(서열 번호: 10)의 아미노산 서열을 포함하는 펩티드는 수학식 3에 나타내는 바와 같이, 콘쥬게이트의 형태여도 된다.
DTH 시험에 있어서, 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염은 통상적으로 피내에 투여된다. 대상에 대하여 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염이 최초로 투여되는 개소와는 다른 개소에 투여되는 것이 바람직하다. DTH 시험을 위한 투여 후의 판정의 타이밍은 당업자가 적절히 설정할 수 있는데, 예를 들어 가장 가까운 투여 후 1시간 내지 1주일 후, 12시간 내지 5일 후, 1일 후 내지 3일 후 또는 2일 후에 행할 수 있다. 또한, 예를 들어 투여 직후 이후 및/또는 1주일 이내여도 되고, 예를 들어 투여 후 1일, 2일, 3일, 4일, 5일 혹은 6일 미만 또는 이내여도 되고, 투여 후 1일, 2일, 3일, 4일, 5일 혹은 6일 이상 또는 초과여도 된다. 또한, DTH 시험은 다른 타이밍에서 복수회 행하고, 결과의 평균값에 의해 지연형 과민 반응의 유무를 판정하는 것이 바람직하다. DTH 시험의 횟수는 예를 들어 2회 이상 및/또는 20회 이내여도 되고, 예를 들어 2회, 3회, 4회, 5회, 7회, 10회, 15회 혹은 20회 미만 또는 이내여도 되고, 예를 들어 2회, 3회, 4회, 5회, 7회, 10회 혹은 15회 이상 또는 초과여도 된다. 당업자라면, 지연형 과민 반응을 검출하기 위하여 충분한 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염의 투여량을 적절히 설정할 수 있다.
DTH 시험에 있어서의 지연형 과민 반응이 검출되었는지의 여부(지연형 과민 반응의 유무)의 판정에 대해서는, 예를 들어 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 1회 이상 투여한 대상에 있어서, DTH 시험을 위한 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여한 개소에 있어서의 반응과, 상기 대상에 있어서의 DTH 시험을 위한 상기 의약 조성물 또는 상기 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여하고 있지 않은 개소에 있어서의 반응을 비교하여, 투여한 개소에 있어서의 반응과 투여하고 있지 않은 개소에 있어서의 반응의 차가 기준값 이상인 경우에, 지연형 과민 반응이 검출되었다(지연형 과민 반응 있음)고 할 수 있다. 대상에 있어서의 상기 의약 조성물 또는 상기 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여하고 있지 않은 개소란, 투여하는 의약 조성물 또는 상기 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염에 의해 전혀 아무것도 투여하고 있지 않은 개소여도 되고, 의약 조성물에 있어서의 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염 이외의 담체 및 용매 등만(비이클)을 투여한 개소여도 된다.
또한, 투여 개소와 투여하고 있지 않은 개소의 반응의 차는, 예를 들어 투여 개소와 투여하고 있지 않은 개소(대조)의 발적 장경의 차로부터 도출할 수 있다. 당업자라면, WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응이 양성이라고 판정하는 기준값을 적절히 설정할 수 있는데, 예를 들어 투여하고 있지 않은 개소에 대한 투여 개소의 피부에 있어서의 발적 장경이 +0.1㎜ 내지 100㎜ 사이의 값 이상인 경우에, 지연형 과민 반응이 검출되었다고 해도 되고, +0.5㎜ 내지 50㎜ 사이의 값 이상인 경우에, 지연형 과민 반응이 검출되었다고 해도 되고, +1㎜ 내지 10㎜ 사이의 값 이상인 경우에, 지연형 과민 반응이 검출되었다고 해도 되고, 2㎜ 이상인 경우에, 지연형 과민 반응이 검출되었다고 해도 된다. 그 이상이면, 지연형 과민 반응이 검출되었다고 하는 상기 발적 장경의 범위의 하한값이 0.1㎜, 0.2㎜, 0.3㎜, 0.4㎜, 0.5㎜, 0.6㎜, 0.7㎜, 0.8㎜, 0.9㎜, 1.0㎜여도 되고, 상한값이 100㎜, 90㎜, 80㎜, 70㎜, 60㎜, 50㎜, 40㎜, 30㎜, 20㎜, 15㎜, 10㎜여도 된다. 투여하고 있지 않은 개소에 대한 투여 개소의 피부에 있어서의 발적 장경에 대응하는 스코어를 미리 설정해 두고, 스코어에 의해 지연형 과민 반응의 유무를 판정할 수도 있다. 예를 들어 발적 장경이 2㎜ 미만을 스코어 0, 2㎜ 이상 5㎜ 미만을 스코어 +/-, 5㎜ 이상 10㎜ 미만을 스코어 1, 10㎜ 이상 15㎜ 미만을 스코어 2, 15㎜ 이상을 스코어 3으로 설정할 수도 있다. 상기 판정에는, 복수회 투여 후의 대상에 있어서의 스코어의 평균을 사용해도 되고, 투여 후의 대상에 있어서의 최대의 스코어를 사용해도 된다.
상술한 바와 같이 지연형 과민 반응의 유무에 기초하여, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 후보 물질의 효과를 평가하는 것도 가능하다. 즉, 본 실시 형태에 있어서의 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 후보 물질의 효과를 평가하는 방법은, 의약 조성물 또는 상기 의약 조성물에 포함되는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 복수회 투여한 대상에 있어서, 지연형 과민 반응이 검출된 경우에, 의약 조성물의 후보 물질은 암의 치료 및 예방에 대하여 효과를 기대할 수 있다라는 지표를 제공하는 공정을 포함한다.
상기 의약 조성물 또는 상기 의약 조성물에 포함되는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 복수회 투여한 대상에 있어서, 지연형 과민 반응이 검출된 경우에, 상기 후보 물질은 암의 치료 및 예방에 대하여 효과를 기대할 수 있다라는 지표를 제공하는 공정을 포함한다. 대상, 시료, 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염 등에 대해서는 전술한 바와 같다.
(6) 골수 아구의 비율의 변화
본 실시 형태의 선택 방법은, 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여한 대상으로부터 채취된 시료에 있어서의 골수 아구의 비율을, 상기 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여하기 전의 대상으로부터 채취된 시료에 있어서의 골수 아구의 비율로 나눈 값이 기준값 미만 또는 이하인 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 포함한다. 대상, 시료, 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염 등에 대해서는 전술한 바와 같다.
골수액 등의 시료에 있어서의 골수 아구의 비율의, 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염의 투여 전후의 변화가 작을수록 골수 아구가 안정화되어 있다고 할 수 있다. 예를 들어, 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염의 투여 후의 대상에 있어서의 골수 아구의 비율을, 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염의 투여 전의 대상에 있어서의 골수 아구의 비율로 나눈 비율(이하, 골수 아구의 변화율이라고도 함)이 0％ 내지 300％ 이하, 0％ 내지 200％ 이하, 0％ 내지 150％ 이하, 0％ 내지 100％ 이하, 0％ 내지 50％ 이하인 경우에, 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공한다고 해도 된다. 여기서, 골수 아구의 변화율은 예를 들어 0％ 이상 혹은 300％ 미만 또는 이하여도 되고, 예를 들어 50％, 100％, 150％, 200％ 혹은 250％ 이상 또는 초과여도 되고, 50％, 100％, 150％, 200％ 혹은 250％ 미만 또는 이하여도 된다.
또한, 예를 들어 한 시점부터 수 시점의 골수 아구의 변화율의 평균에 기초하여, 상기 기준값 미만 또는 이하라고 판단해도 되고, 또는 한 시점부터 수 시점의 골수 아구의 변화율의 최댓값에 기초하여, 상기 기준값 미만 또는 이하라고 판단해도 되고, 예를 들어 상기 기준값 미만 또는 이하에서 두 시점 이상 추이한 경우에, 상기 기준값 미만 또는 이하라고 판단해도 된다. 상기 시점은, 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염의 투여 후의 골수 아구의 비율의 측정 타이밍을 의미한다. 골수 아구의 비율의 측정 타이밍은, 예를 들어 1일 내지 365일마다, 1일 내지 180일마다, 1일 내지 90일마다, 1일 내지 60일마다, 1일 내지 30일마다, 1일 내지 4주마다여도 된다. 측정 타이밍은 예를 들어 1일마다 이상 또는 365일 미만이어도 되고, 180일, 90일, 60일, 30일, 4주일, 3주일, 2주일, 1주일, 3일 혹은 1일마다 이상 또는 초과여도 되고, 180일, 90일, 60일, 30일, 4주일, 3주일, 2주일, 1주일 혹은 3일 미만 또는 이하여도 된다. 또한, 예를 들어 치료 후 100일까지의 골수 아구의 변화율이 150％ 이하에 있어서 두 시점 이상 추이한 경우에, 골수 아구의 변화율이 150％ 이하라고 판단할 수 있다.
(7) 성차
본 실시 형태의 선택 방법은 상기 (1) 내지 (6)으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 또는 2 이상의 조합에 기초하여, 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공할 수 있는데, 대상의 성별이 수형(대상이 인간일 경우에는 남성)일 경우에는, 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 더 포함해도 된다.
(암의 치료 또는 예방 방법)
본 실시 형태의 암의 치료 또는 예방 방법은 상술한 선택 방법에 의해, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상을 선택하는 공정과,
선택된 대상에 대하여 의약 조성물을 투여하는 공정을 포함한다.
본 실시 형태의 암의 치료 또는 예방 방법은 상술한 (1) 내지 (6)으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 또는 2 이상의 조합에 기초하는 선택 방법에 의해, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물을 투여하는 대상을 결정하고, 당해 의약 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 또한, 본 실시 형태의 암의 치료 또는 예방 방법은 상술한 (1) 내지 (6)으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 또는 2 이상의 조합에 기초하는 선택 방법에 의해, 대상에 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물을 투여할지의 여부를 결정하고, 대상에 당해 의약 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 따라서, 본 실시 형태의 암의 치료 또는 예방 방법은, 예를 들어 (1)에서 상술한 바와 같이, TP53 유전자 및/또는 BCOR 유전자에 있어서의 변이의 유무를 결정하고, TP53 야생형 및/또는 BCOR 야생형의 대상에 대하여 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 본 실시 형태의 암의 치료 또는 예방 방법은, 예를 들어 (2)에서 상술한 바와 같이, WT1 유전자의 mRNA 발현량을 결정하고, WT1 유전자의 mRNA 발현량이 기준값 미만 또는 이하인 대상에 대하여, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 본 실시 형태의 암의 치료 또는 예방 방법은, 예를 들어 (3)에서 상술한 바와 같이, IPSS-R에 기초하는 핵형이 매우 불량 이외인 대상에 대하여, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 본 실시 형태의 암의 치료 또는 예방 방법은, 예를 들어 (4)에서 상술한 바와 같이, 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여한 대상으로부터 채취한 시료를 사용하여 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포를 검출하고, 투여 전의 대상으로부터 채취한 시료와 비교하여, 상기 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 증가한 대상에 대하여 당해 의약 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 본 실시 형태의 암의 치료 또는 예방 방법은, 예를 들어 (5)에서 상술한 바와 같이, 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 복수회 투여한 것에 의해 지연형 과민 반응이 검출된 대상에 대하여 당해 의약 조성물을 투여하는 것을 포함한다. 본 실시 형태의 암의 치료 또는 예방 방법은, 예를 들어 (6)에서 상술한 바와 같이, 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여한 후의 골수 아구의 비율을, 상기 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여하기 전의 골수 아구의 비율로 나눈 값이 기준값 미만 또는 이하인 대상에 대하여 당해 의약 조성물을 투여하는 것을 포함한다.
본 실시 형태의 암의 치료 또는 예방 방법에 있어서의 제제 중의 본 실시 형태의 의약 조성물의 투여량은, 치료 목적의 질환, 환자의 연령, 체중 등에 따라 적절히 조정할 수 있는데, 0.0001mg 내지 1000mg이어도 되고, 0.001mg 내지 1000mg이어도 되고, 0.1mg 내지 10mg이어도 된다. 예를 들어 1회의 투여량은 1.75mg 내지 17.5mg, 3.5mg 내지 10.5mg 또는 10.5mg이어도 된다. 또한, 1회의 투여량은 0.0001mg 이상, 0.0005mg 이상, 0.001mg 이상, 0.005mg 이상, 0.01mg 이상, 0.05mg 이상, 0.1mg 이상, 0.25mg 이상, 0.5mg 이상, 0.75mg 이상, 1.0mg 이상, 1.25mg 이상, 1.5mg 이상, 1.75mg 이상, 2.0mg 이상, 2.25mg 이상, 2.5mg 이상, 2.75mg 이상, 3.0mg 이상, 3.25mg 이상, 3.5mg 이상, 3.75mg 이상, 4.0mg 이상, 4.25mg 이상, 5.5mg 이상, 5.75mg 이상, 6.0mg 이상이어도 되고, 1000mg 이하, 750mg 이하, 500mg 이하, 250mg 이하, 125mg 이하, 100mg 이하, 50mg 이하, mg 이하, 40mg 이하, 35mg 이하, 30mg 이하, 25mg 이하, 20mg 이하, 15mg 이하, 10mg 이하여도 된다.
투여 방법으로서는, 피내 투여, 피하 투여, 근육내 투여, 정맥내 투여, 경피 투여 등을 들 수 있다. CTL을 효율적으로 유도하는 피내 투여 및 피하 투여가 바람직하다. 투여 횟수 및 투여 간격은 치료 또는 예방 목적의 질환, 환자의 개체차에 따라 적절히 조정할 수 있지만, 통상적으로 복수회이며, 수일 내지 수월에 1회 투여하는 것이 바람직하다. 예를 들어 1일간 내지 6개월마다 1회 투여해도 되고, 3일간 내지 3개월마다 1회 투여해도 되고, 1주일 내지 4주일마다 1회 투여해도 되고, 2주일 내지 4주일에 1회 투여해도 되고, 6주일, 5주일, 4주일, 3주일, 2주일 또는 일주일마다 1회 투여해도 된다. 또한, 최소로 1일간, 2일간, 3일간, 4일간, 5일간, 6일간, 1주일, 2주일, 3주일, 4주일, 5주일, 6주일, 7주일, 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월마다, 최대로 12개월, 10개월, 8개월, 6개월, 5개월, 4개월, 3개월, 2개월, 1개월, 6주일, 5주일, 4주일, 3주일, 2주일, 1주일, 6일간 또는 5일간마다 1회 투여해도 된다.
상기 투여의 타이밍은 소정의 기간이 경과한 후, 예를 들어 1개월, 2개월, 3개월, 4개월, 5개월, 6개월, 7개월, 8개월, 9개월, 10개월, 11개월 또는 12개월 경과한 후로 변경하는 것도 가능하다. 예를 들어 최초의 6개월간은 2주일마다 1회 투여하고, 1개월 이후 5개월까지는 2주일마다 1회 투여하고, 6개월 이후는 2주일 내지 4주일마다 1회 투여하는 것으로 할 수도 있다. 예를 들어 최초의 6개월은 2주일마다 투여하고, 그 후에는 2주일 내지 4주일마다 투여하는 것으로 할 수도 있다.
본 실시 형태는 암의 치료 또는 예방 방법에 사용하기 위한 의약 조성물도 포함한다. 의약 조성물, 암의 치료 또는 예방 방법 등에 대해서는 전술한 바와 같다.
본 실시 형태에는, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물을 투여하는 대상을 결정하는 방법도 포함된다. 대상은, 상술한 (1) 내지 (6)으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 또는 2 이상의 조합에 기초하여 결정할 수 있다. 상기 방법은 예를 들어 (1)에서 상술한 바와 같이, TP53 유전자 및/또는 BCOR 유전자에 있어서의 변이의 유무를 결정하고, TP53 야생형 및/또는 BCOR 야생형의 대상을, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물을 투여할 대상으로 결정하는 것을 포함한다. 또한, 상기 방법은 예를 들어 (2)에서 상술한 바와 같이, WT1 유전자의 mRNA 발현량을 결정하고, WT1 유전자의 mRNA 발현량이 기준값 미만 또는 이하인 대상을, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물을 투여하는 대상으로 결정하는 것을 포함한다. 또한, 상기 방법은 예를 들어 (3)에서 상술한 바와 같이, IPSS-R에 기초하는 핵형이 매우 불량 이외인 대상을, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물을 투여하는 대상으로 결정하는 것을 포함한다. 또한, 상기 방법은 예를 들어 (4)에서 상술한 바와 같이, 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여한 대상으로부터 채취한 시료를 사용하여 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포를 검출하고, 투여 전의 대상으로부터 채취한 시료와 비교하여, 상기 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 증가한 대상을, 당해 의약 조성물을 투여하는 대상으로 결정하는 것을 포함한다. 또한, 상기 방법은 예를 들어 (5)에서 상술한 바와 같이, 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 복수회 투여한 것에 의해 지연형 과민 반응이 검출된 대상을, 당해 의약 조성물을 투여하는 대상으로 결정하는 것을 포함한다. 또한, 상기 방법은 예를 들어 (6)에서 상술한 바와 같이, 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여한 후의 골수 아구의 비율을, 상기 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여하기 전의 골수 아구의 비율로 나눈 값이 기준값 미만 또는 이하인 대상을, 당해 의약 조성물을 투여하는 대상으로 결정하는 것을 포함한다.
본 실시 형태에는, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물을 투여할지의 여부를 결정하는 방법도 포함된다. 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물을 투여할지의 여부는, 상술한 (1) 내지 (6)으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 또는 2 이상의 조합에 기초하여 결정할 수 있다. 상기 방법은 예를 들어 (1)에서 상술한 바와 같이, 대상으로부터 채취한 시료를 사용하여 TP53 유전자 및/또는 BCOR 유전자에 있어서의 변이의 유무를 결정하고, TP53 야생형 및 BCOR 야생형의 경우에는, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물을 대상에 투여하고, TP53 변이형 및/또는 BCOR 변이형의 경우에는, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물을 대상에 투여하지 않는 것을 결정하는 것을 포함한다. 또한, 상기 방법은 예를 들어 (2)에서 상술한 바와 같이, 대상으로부터 채취한 시료에 있어서의 WT1 유전자의 mRNA 발현량을 결정하고, WT1 유전자의 mRNA 발현량이 기준값 미만 또는 이하인 경우에는, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물을 대상에 투여하고, WT1 유전자의 mRNA 발현량이 기준값 이상 또는 기준값 초과였을 경우에는, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물을 대상에 투여하지 않는 것을 결정하는 것을 포함한다. 또한, 상기 방법은 예를 들어 (3)에서 상술한 바와 같이, 대상의 IPSS-R에 기초하는 핵형이 매우 불량 이외인 경우에는, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물을 대상에 투여하고, 대상의 IPSS-R에 기초하는 핵형이 매우 불량일 경우에는, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물을 대상에 투여하지 않는 것을 결정하는 것을 포함한다. 또한, 상기 방법은 예를 들어 (4)에서 상술한 바와 같이, 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여한 대상으로부터 채취한 시료를 사용하여 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포를 검출하고, 투여 전의 대상으로부터 채취한 시료와 비교하여, 상기 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 증가한 경우에는 당해 의약 조성물을 대상에 투여하고, 상기 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 유지 또는 감소된 경우에는 당해 의약 조성물을 대상에 투여하지 않는 것을 결정하는 것을 포함한다. 또한, 상기 방법은 예를 들어 (5)에서 상술한 바와 같이, 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 복수회 투여한 것에 의해 대상에 있어서 지연형 과민 반응이 검출된 경우에는, 당해 의약 조성물을 대상에 투여하고, 대상에 있어서 지연형 과민 반응이 검출되지 않은 경우에는, 당해 의약 조성물을 대상에 투여하지 않는 것을 결정하는 것을 포함한다. 또한, 상기 방법은 예를 들어 (6)에서 상술한 바와 같이, 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여한 후의 골수 아구의 비율을, 상기 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여하기 전의 골수 아구의 비율로 나눈 값이 기준값 미만 또는 이하인 경우에, 당해 의약 조성물을 대상에 투여하고, 기준값 이상 또는 기준값 초과였을 경우에는, 당해 의약 조성물을 대상에 투여하지 않는 것을 결정하는 것을 포함한다.
본 실시 형태에는, 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물을 투여해야 할 대상을 스크리닝하는 방법도 포함된다. 상기 스크리닝은, 상술한 (1) 내지 (6)으로 이루어지는 군에서 선택되는 1 또는 2 이상의 조합에 기초하여 실시할 수 있다. 상기 방법은 예를 들어 (1)에서 상술한 바와 같이, TP53 유전자 및/또는 BCOR 유전자에 있어서의 변이의 유무를 결정하고, TP53 야생형 및/또는 BCOR 야생형의 대상을 선택하는 것을 포함한다. 또한, 상기 방법은 예를 들어 (2)에서 상술한 바와 같이, WT1 유전자의 mRNA 발현량을 결정하고, WT1 유전자의 mRNA 발현량이 기준값 미만 또는 이하인 대상을 선택하는 것을 포함한다. 또한, 상기 방법은 예를 들어 (3)에서 상술한 바와 같이, IPSS-R에 기초하는 핵형이 매우 불량 이외인 대상을 선택하는 것을 포함한다. 또한, 상기 방법은 예를 들어 (4)에서 상술한 바와 같이, 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여한 대상으로부터 채취한 시료를 사용하여 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포를 검출하고, 투여 전의 대상으로부터 채취한 시료와 비교하여, 상기 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 증가한 대상을 선택하는 것을 포함한다. 또한, 상기 방법은 예를 들어 (5)에서 상술한 바와 같이, 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 복수회 투여한 것에 의해 지연형 과민 반응이 검출된 대상을 선택하는 것을 포함한다. 또한, 상기 방법은 예를 들어 (6)에서 상술한 바와 같이, 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여한 후의 골수 아구의 비율을, 상기 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여하기 전의 골수 아구의 비율로 나눈 값이 기준값 미만 또는 이하인 대상을 선택하는 것을 포함한다.
실시예
이하에 실시예를 들어서 본 발명을 상세하게 설명하지만, 본 발명은 전혀 이들에 한정되지 않는다.
〔실시예 1: 본 실시예에 있어서의 대상 및 WT1 펩티드 칵테일 백신의 효과〕
이하의 실시예는 특별히 언급하지 않는 한 원칙적으로, 설명에 따른 동의를 취득한 재발·난치성 골수 이형성 증후군(MDS) 환자 중, 하기의 식 (3)에 나타내는 WT1 킬러 펩티드 콘쥬게이트 및 WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14)로 표시되는 WT1 헬퍼 펩티드를 포함하는 W/O 에멀션 형태의 칵테일 백신(국제 공개 2014/157692호 참조. 이하, WT1 펩티드 칵테일 백신이라고도 함)의 제1 및 2상 임상 시험에 참가한 환자수는 47 증례이며, 그의 HLA형에 관한 내역은 HLA-A*02:01 또는 HLA-A*02:06 양성의 골수 이형성 증후군(MDS) 환자 12 증례, HLA-A*24:02 양성의 MDS 환자 28 증례, HLA-A*02:01 양성이며 HLA-A*24:02 양성의 MDS 환자 5 증례, HLA-A*02:06 양성이며 HLA-A*24:02 양성의 MDS 환자 2 증례이다. 또한, 제1상 시험에 있어서의 증례는 고리스크 환자(H) 7 증례에 더하여, 저리스크 환자(L) 5 증례를 포함하고 있고, 제2상 시험에 있어서의 증례는 고리스크 환자(H) 35 증례이다. 본 실시예에서는 고리스크 환자만을 대상으로 하고, 아자시티딘 무효 고리스크 환자 42 증례(제1상 시험의 7 증례와 제2상 시험의 35 증례의 합계)를 대상으로 하여 행하였다. 또한, 상기 고리스크 환자는 개정 IPSS(IPSS-R)에 있어서의 리스크 분류에 있어서, 중간 내지 매우 높음의 환자에 해당한다. 아자시티딘 무효 고리스크 환자 42 증례에는, 아자시티딘이 성공하지 않거나 또는 성공하지 않게 된 환자 40 증례, 아자시티딘의 부작용에 의해 투여를 계속할 수 없었던 증례 2 증례가 포함된다.
Figure pct00028
(식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)으로 표시된다.
제1 및 2상 임상 시험에 있어서는, 백신 유도로서, 6개월간, 2주일마다 상기 WT1 펩티드 칵테일 백신을 피내 투여(ID)하고, 그 후에는 투여를 중지할 때까지 2주일 내지 4주일마다의 투여를 계속하였다. 제1상 시험에서는, 코호트 1은 투여량을 3.5mg(WT1 킬러 펩티드 콘쥬게이트 2mg+WT1 헬퍼 펩티드 1.5mg), 코호트 2는 투여량을 10.5mg(WT1 킬러 펩티드 콘쥬게이트 6mg+WT1 헬퍼 펩티드 4.5mg)으로 하여 행하였다. 제2상 시험에서는, 권장 투여량 10.5mg(WT1 킬러 펩티드 콘쥬게이트 6mg+WT1 헬퍼 펩티드 4.5mg)에 의해 행하였다.
본 시험에 있어서의 생존 기간 중앙값(mOS)은 8.6개월(90％ 신뢰 구간 6.8-11.1개월)이며, 히스토리컬 데이터(95％ 신뢰 구간 5.0-7.2개월, Prebet et al., Journal of Clinical Oncology 29, no.24, p3322-3327(2011))의 5.6개월과 비교하여 연장 경향이 있음을 알았다.
〔실시예 2: WT1 펩티드 백신의 효과 및 핵형의 영향〕
실시예 1에 있어서의 WT1 펩티드 칵테일 백신의 시험 결과와, 리고세르팁의 ONTIME 시험(제3상 임상 시험, Garcia-Manero et al., The Lancet Oncology 17, no.4, p496-508(2016)의 Table S1 "MDS cytogenetic prognosis")에 있어서의 대조(리고세르팁 시험의 BSC)의 비교를 행한 결과를 도 1에 도시하였다. 또한, 리고세르팁의 제3상 시험에 있어서의 환자 집단과의 차이를 고려하여, 아자시티딘의 부작용에 의한 무효 증례 2 증례 및 아구수<5％ 이하의 고리스크 증례 6 증례, 및 핵형 불명의 1 증례를, 실시예 1의 42 증례로부터 제외한 33 증례로 비교를 실시하고 있다.
핵형별의 mOS는, 핵형 매우 불량을 제외한 좋음/매우 좋음 내지 불량군에서는 리고세르팁 시험의 BSC와 비교하여 긴 경향이 있고, mOS의 연장이 WT1 펩티드 칵테일 백신의 효과에 의한 것일 가능성이 시사되었다. 핵형 매우 불량군에서는, WT1 펩티드 칵테일 백신 투여군의 mOS는 리고세르팁 시험의 BSC와 동등하였다.
〔실시예 3: WT1 펩티드 백신에 의한 치료의 효과를 기대할 수 있는 환자를 선택하기 위한 유전자 바이오마커의 탐색〕
실시예 1에 기재된 고리스크 증례 42 증례 중, 설명에 따른 동의를 취득한 29 증례에 대하여 골수 이형성 증후군(MDS)에 관련하는 유전자 검사를 실시하였다. 29 증례 중, 아자시티딘의 부작용에 의한 무효 증례인 1 증례를 제외하는 28 증례를 계속되는 유전자 해석에 사용하였다. WT1 펩티드 칵테일 백신의 투여 개시 전 28일 이내에, 환자로부터 골수액을 채취하였다.
골수액으로부터의 DNA 추출 및 검체의 품질 평가
골수액 0.5mL의 샘플로부터, Wizard Genomic DNA purification Kit(프로메가 가부시키가이샤)를 사용하여, 본 키트 부속의 프로토콜(3A Isolating Genomic DNA from whole blood)에 따라서 DNA의 추출을 행하였다.
추출한 DNA의 품질 평가로서, 아가로오스 겔 전기 영동에 의해 고분자 영역에 명확한 밴드를 검출할 수 있는지를 확인하였다. 또한, Quant-iT PicoGreen dsDNA Assay Kit(Life Technologies사)를 사용하여 플레이트 리더로 형광 강도를 측정하고, 검량선으로부터 농도를 산출하였다.
차세대 시퀀스법(NGS)에 의한 어세이
급성 골수성 백혈병(AML), 골수 이형성 증후군(MDS), 골수 증식성 종양(MPN), 만성 골수성 백혈병(CML), 만성 골수 단구성 백혈병(CMML), 및 약년성 골수 단구성 백혈병(JMML) 등의 골수성 악성 종양에 관련한 변이를 타깃으로 한 TruSight Myeloid Sequencing Panel(일루미나 가부시키가이샤)을 사용하여, 차세대 시퀀스법(NGS)에 의해 어세이를 행하였다. 골수액으로부터 추출한 게놈 DNA에 대하여 TruSight Myeloid Sequencing Panel이 대상으로 하는 서열을 해석하였다. 상기 패널을 사용하여 측정 대상 영역을 증폭하여 라이브러리를 제작한 후, AgilentDNA1000 Kit(애질런트 테크놀로지스사)를 사용한 전기 영동 분석으로 쇄 길이 분포를 확인하고, 리얼타임 PCR 장치(어플라이드 바이오시스템사)를 사용하여 정량을 행하였다. 정량 결과를 라이브러리 평균 사이즈로 보정하고, 라이브러리 농도를 산출하였다. MiSeq(일루미나사)로 염기 서열을 결정하였다. 상기 패널은 이하의 표 1에 나타낸 40 유전자가 망라되어 있다.
Figure pct00029
바이오 인포매틱스 해석
상기 MiSeq(일루미나 가부시키가이샤)로 결정한 염기 서열을, MiSeq Reporter(일루미나 가부시키가이샤)를 사용한 바이오 인포매틱스 해석에 의해 유전자 변이를 해석하였다.
결과
유전자 변이 해석의 결과를 표 2에 나타내었다. 표 중의 굵은 가로선은 mOS를 나타내는 선이며, 위로부터 아래로 갈수록 생존 기간(OS)이 길어지는 순서로 되어 있다. 또한, IPSS-R 핵형이 좋음/매우 좋음 또는 중간인 환자의 IPSS-R 핵형의 기재는 생략하고 있다.
Figure pct00030
TP53 변이형 또는 BCOR 변이형의 증례는 OS가 짧은 경향이 있음을 알았다. 이에 의해, TP53 및 BCOR 유전자에 있어서의 변이의 유무가, WT1 펩티드 백신에 의한 치료의 효과를 기대할 수 있는 환자를 선택하기 위한 유전자 마커로서 유용할 가능성이 시사되었다. 또한, OS가 짧은 집단에 핵형 매우 불량의 증례가 많은 경향이 보였다.
〔실시예 4: TP53/BCOR 유전자 변이의 유전자 마커로서의 유용성〕
TP53 및 BCOR 유전자에 있어서의 변이의 유무의 유전자 마커로서의 유용성을 검증하기 위해서, 상기 변이의 유무에 따른 생존 곡선의 비교를 행하였다.
실시예 1에 기재된 환자를, TP53 야생형 및 BCOR 야생형인 환자 17 증례, TP53 변이형 또는 BCOR 변이형인 환자 11 증례로 나누고, 생존 곡선을 비교하였다. 도 2에 도시하는 바와 같이, TP53 야생형 및 BCOR 야생형의 전체 생존 기간 중앙값(mOS)은 TP53 또는 BCOR 변이형의 mOS와 비교하여 긴 경향이 있었다.
또한, TP53 야생형 및 BCOR 야생형 17 증례, TP53 변이형 또는 BCOR 변이형 11 증례에 대해서, 후술하는 HLA 테트라머 어세이 및 지연형 과민 반응에 의해, WT1 펩티드 칵테일 백신에 의해 유도되는 WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응을 확인하였다. TP53 야생형 및 BCOR 야생형, 또는 TP53 변이형 혹은 BCOR 변이형에 대해서, 생존 기간(OS) 및 면역 반응을 비교한 결과를 도 3에 도시하였다. 또한, 도 3에 도시되는 결과는 면역 반응의 판정이 불능이었던 4 증례를 제외한, TP53 야생형 및 BCOR 야생형 15 증례, TP53 변이형 또는 BCOR 변이형 9 증례에 관한 것이다.
TP53 야생형 및 BCOR 야생형에 대해서는 전체 생존 기간이 긴 경향이 있는 것이 나타났다. 또한, TP53 야생형 및 BCOR 야생형은 면역 반응이 양성인 증례를 많이 볼 수 있었다(14 증례/15 증례). 한편, TP53 변이형 또는 BCOR 변이형은, 면역 반응의 양성·음성에 관계 없이, 전체 생존 기간이 짧은 경향이 있는 것이 나타났다.
이에 의해, TP53 및 BCOR 유전자에 있어서의 변이의 유무가, WT1 펩티드 백신에 의한 치료의 효과를 기대할 수 있는 환자를 선택하기 위한 유전자 마커로서 유용한 것이 나타났다.
〔실시예 5: WT1 mRNA의 유전자 마커로서의 유용성 1〕
실시예 1의 아자시티딘 무효 고리스크 환자 42 증례 중, 아자시티딘의 부작용에 의한 무효 증례인 2 증례를 제외한 40 증례에 대해서, WT1 mRNA의 발현을 확인하였다.
말초혈로부터의 DNA 추출 및 검체의 품질 평가
WT1 펩티드 칵테일 백신의 투여 개시 전 28일 이내에, 환자로부터 말초혈 및 골수액을 채취하였다. 전혈 7mL 또는 골수액 0.5mL로부터, RNA 전자동 정제 장치 QIAcube(Qiagen사)를 사용하여 RNA의 추출 및 정제를 행하였다. QIAcube 유저 매뉴얼에 따라서, RNeasy mini Kit(Qiagen사)의 시약이나 튜브 등, 및 샘플을 세팅하였다. QIAcube에 보존되어 있는 QIAcube Standard Program으로부터 RNeasy-Mini-program을 선택하고, RNA를 추출하였다.
WT1 mRNA의 발현 해석
WT1 mRNA의 발현 해석은 WT1 mRNA 측정 키트 II 「오츠카」(오츠카 세이야쿠 가부시키가이샤)를 사용하여 행하였다. 이하, 특별히 언급하지 않는 한 시약은 상기 키트 부속의 것을 사용하였다.
RNase 무함유 물을 첨가함으로써 추출한 RNA의 농도를 50ng/μL로 조정하였다. WT1·GAPDH 혼합 RNA 표준액을 표준액 1, 표준액 1을 표준액 희석액으로 10배 희석한 것을 표준액 2, 마찬가지로 10배 희석을 반복하여 표준액 5까지 조제하였다. 1반응당, RT-PCR용 믹스액(R1) 10μL 및 금속 이온 용액 5μL의 비율로 혼화한 것을 반응액으로 하였다. 리얼타임 PCR 장치(어플라이드 바이오시스템즈 7500 Fast Dx, 어플라이드 바이오시스템즈사)를 사용하여, 상기 키트에 부속된 프로토콜의 「3. 측정 조작」에 따라서 RT-PCR 반응을 행하였다. 표준액 1 내지 5로부터 작성한 표준 곡선을 사용하여, 샘플의 WT1 mRNA 및 GSDPH mRNA의 측정값을 산출하였다.
상기 키트에 부속된 프로토콜의 「4. WT1 mRNA 발현량의 산출 방법」에 따라서, 이하와 같이 WT1 mRNA 발현량을 산출하였다.
구체적으로는 이하의 식에 나타내는 바와 같이, WT1 mRNA 측정값을 GAPDH mRNA 측정값으로 나눈 값(GAPDH mRNA 1카피당의 WT1 mRNA 카피수)에, 건강 성인의 1μg RNA당의 평균 GAPDH mRNA 카피수(GAPDH mRNA 발현량)를 곱하여 WT1 mRNA 발현량을 산출하였다. 또한, 2.7×107(카피/μg RNA)은 건강 성인의 1μg RNA당의 평균 GAPDH mRNA 측정값이다.
Figure pct00031
결과 (1)
WT1 mRNA의 발현 해석의 결과를 도 4에 도시하였다. 40 증례 중 전체 증례에 있어서 말초혈 중에 WT1 mRNA의 발현이 보였다. WT1 mRNA 발현량이 10000카피/μg RNA 미만인 증례의 mOS는, WT1 mRNA 발현량이 10000카피/μg RNA 이상인 증례의 mOS와 비교하여 긴 경향이 있었다.
또한, WT1 mRNA 발현량이 10000카피/μg RNA 미만인 27 증례, WT1 mRNA 발현량이 10000카피/μg RNA 이상인 13 증례에 대해서, 후술하는 HLA 테트라머 어세이 및 지연형 과민 반응에 의해 WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응을 확인하였다. WT1 mRNA의 발현량에 대해서, 생존 기간(OS) 및 WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응을 비교한 결과를 도 5에 도시하였다. 또한, 도 5에 도시되는 결과는, WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응의 판정이 불능이었던 4 증례를 제외한, WT1 mRNA 발현량이 10000카피/μg RNA 미만인 25 증례, WT1 mRNA 발현량이 10000카피/μg RNA 이상인 11 증례에 관한 것이다.
WT1 mRNA 발현량이 10000카피/μg RNA 미만인 증례군에 대해서는, WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응이 보인 증례의 OS가 긴 경향이 있는 것이 나타났다. 한편, WT1 mRNA 발현량이 10000카피/μg RNA 이상인 증례군은, WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응의 양성과 음성에 의한 OS에 차는 보이지 않았다. 또한, 말초혈 중의 WT1 mRNA 발현량과 골수액 중의 WT1 mRNA 발현량이 상관 관계에 있고, 골수액 중에서도 동일한 경향이 보이는 것도 확인했다(도 16).
결과 (2)
WT1 mRNA의 발현 해석의 결과를 도 6에 도시하였다. 40 증례 중 전체 증례에 있어서 말초혈 중에 WT1 mRNA의 발현이 보였다. WT1 mRNA 발현량이 4000카피/μg RNA 미만인 증례의 mOS는, WT1 mRNA 발현량이 4000카피/μg RNA 이상인 증례의 mOS와 비교하여 긴 경향이 있었다.
또한, WT1 mRNA 발현량이 4000카피/μg RNA 미만인 22 증례, WT1 mRNA 발현량이 4000카피/μg RNA 이상인 18 증례에 대해서, 후술하는 HLA 테트라머 어세이 및 지연형 과민 반응에 의해 WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응을 확인하였다. WT1 mRNA의 발현량에 대해서, 생존 기간(OS) 및 WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응을 비교한 결과를 도 7에 도시하였다. 또한, 도 7에 도시되는 결과는, WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응의 판정이 불능이었던 4 증례를 제외한, WT1 mRNA 발현량이 4000카피/μg RNA 미만인 21 증례, WT1 mRNA 발현량이 4000카피/μg RNA 이상인 15 증례에 관한 것이다.
WT1 mRNA 발현량이 4000카피/μg RNA 미만인 증례군에 대해서는, WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응이 보인 증례의 OS가 긴 경향이 있는 것이 나타났다. 한편, WT1 mRNA 발현량이 4000카피/μg RNA 이상인 증례군은, WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응의 양성·음성에 의한 OS에 차는 보이지 않았다. 또한, 말초혈 중의 WT1 mRNA 발현량과 골수액 중의 WT1 mRNA 발현량이 상관 관계에 있고, 골수액 중에서도 동일한 경향이 보이는 것도 확인했다(도 16).
이에 의해, WT1 mRNA의 발현량이, WT1 펩티드 백신에 의한 치료의 효과를 기대할 수 있는 환자를 선택하기 위한 유전자 마커로서 유용한 것이 나타났다. 또한, 상기 마커의 기준값으로서, 10000카피/μg RNA 및 4000카피/μg RNA의 양쪽이 유용한 것이 나타났다.
〔실시예 6: HLA 테트라머 어세이에 의한 WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응의 검출〕
WT1 펩티드 칵테일 백신의 투여 전후에 환자로부터 채취한 혈액에 대해서, 테트라머 시약을 사용하여 플로 사이토메트리법에 의해, 림프구 중 또는 CD8 양성 림프구 중의 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포 비율의 측정을 실시하였다.
투여 및 채혈
실시예 1의 아자시티딘 무효 고리스크 환자 42 증례에 대하여 검사를 실시하였다. HLA형에 관한 42 증례의 내역은, HLA-A*02:01 혹은 HLA-A*02:06 양성의 골수 이형성 증후군(MDS) 환자 10 증례, HLA-A*24:02 양성의 MDS 환자 25 증례, HLA-A*02:01 양성이며 HLA-A*24:02 양성의 MDS 환자 5 증례, HLA-A*02:06 양성이며 HLA-A*24:02 양성의 MDS 환자 2 증례이다. 환자로부터의 말초혈의 채취 및 어세이는 의약 조성물의 투여 개시 전 28일 이내, 2회째 투여 후 15일째, 6회째 투여 후 15일째, 12회째 투여 후 15일째, 18회째 투여 후 15일째, 이후 6회 투여마다 투여 후 15일째, 최종 투여 후 28일 이내에 행하였다. 투여는 1회에 대하여 WT1 펩티드 칵테일 백신 1.75mg, 3.5mg 또는 10.5mg을 환자에게 피내 투여하였다.
HLA 테트라머 시약
WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포는 HLA 구속성이 있기 때문에, 환자의 HLA에 적합한 테트라머 시약을 사용하여 측정을 행하였다. HLA-A*24:02 양성의 환자용으로서, WT1 단백질의 CYTWNQMNL를 포함하는 펩티드(서열 번호: 4)를 사용하여 제작된 형광 색소 피코에리트린(PE) 표지 HLA-A*24:02의 테트라머(T-Select HLA-A*24:02 WT1(mutant)Tetramer-CYTWNQMNL PE 표지, 가부시키가이샤 이가쿠 세부츠가쿠 겐큐쇼)를 사용하였다. 이하, 본 시약을 「PE 표지 WT1 2402」라고도 나타낸다.
HLA-A*02:01 또는 HLA-A*02:06 양성의 환자용으로서, WT1 단백질의 RMFPNAPYL을 포함하는 펩티드(서열 번호: 2)를 사용하여 제작된 형광 색소 알로피코시아닌(APC) 표지 HLA-A*02:01의 테트라머(T-Select HLA-A*02:01 WT1126-134 Tetramer-RMFPNAPYL-APC, 가부시키가이샤 이가쿠 세부츠가쿠 겐큐쇼, HLA-A*02:01 및 HLA-A*02:06의 양쪽을 검출 가능) 및 WT1 단백질의 VLDFAPPGA를 포함하는 펩티드(서열 번호: 9)를 형광 색소 피코에리트린(PE)으로 표지한 HLA-A*02:01의 테트라머(HLA-A*02:01 Tetramer-VLDFAPPGA-PE, 가부시키가이샤 이가쿠 세부츠가쿠 겐큐쇼에 위탁 제조, HLA-A*02:01 및 HLA-A*02:06의 양쪽을 검출 가능)를 사용하였다. 이하, 전자의 시약을 「APC 표지 WT1 0201」, 후자의 시약을 「PE 표지 WT1 0201」이라고도 나타낸다. 테트라머 시약은 사용 전에 마이크로튜브에 넣고, 실온에서 1620×g로 5분간 원심하고 상청을 사용하였다.
염색
HLA-A*24:02를 갖는 환자 대상의 염색은 이하와 같이 행하였다.
샘플용 튜브에 채취한 혈액을 2.5mL 및 대조용 튜브에 나머지의 혈액을 분주하였다. 샘플용 튜브에 PE 표지 WT1 2402를 5μL 첨가하였다. 암소·실온에서 10분 반응시킨 후, 샘플용 튜브에 FITC 표지 CD8(사이토스태트/콜터 클론 T8-FITC, 베크만 콜터 가부시키가이샤)을 15μL, 7-AAD(7-AAD Staining Solution, 닛폰 벡톤 디킨슨 가부시키가이샤), PC5 표지 CD4(IO Test CD4-PC5, 베크만 콜터 가부시키가이샤), PC5 표지 CD19(IO Test CD19-PC5, 베크만 콜터 가부시키가이샤)를 각 12.5μL씩 첨가하고 교반하였다. 실온에서 15분 반응시킨 후, 용해 용액 조제액(BD FACSTM Lysing solution(닛폰 벡톤 디킨슨 가부시키가이샤)을 정제수로 10배 희석한 것)을 26mL씩 첨가한 후, 교반하고, 실온에서 10분 정치 후, 300×g로 5분 원심하였다. 아스피레이터로 상청을 흡인 제거하고, 교반 후 30mL의 아지드화PBS(1％ 아지드화나트륨 함유 PBS)를 각 튜브에 분주하고, 300×g로 5분 원심하였다. 아스피레이터로 상청을 흡인 제거 후, 300μL의 CellFix 조제액(BD FACS Cell Fix, 닛폰 벡톤 디킨슨 가부시키가이샤)에 재부유시키고, 측정용 튜브로 옮겨 담았다.
HLA-A*02:01 또는 HLA-A*02:06을 갖는 환자 대상의 염색은 이하와 같이 행하였다.
샘플용 튜브에 채취한 혈액을 2.5mL 및 대조용 튜브에 나머지 혈액을 분주하였다. 샘플용 튜브에 APC 표지 WT1 0201과 PE 표지 WT1 0201을 5μL씩 첨가하였다. 암소·실온에서 10분 반응시킨 후, 샘플용 튜브 FITC 표지 CD8을 15μL, 7-AAD, APC-H7 표지 CD3(CD3 APC-H7 표지, 닛폰 벡톤 디킨슨 가부시키가이샤), 퍼시픽 블루 표지 CD4(IOTest CD4-Pacific Blue, 베크만 콜터 가부시키가이샤), PE-Cy7 표지 CD19(IOTest CD19-PC7, 베크만 콜터 가부시키가이샤)를 각 12.5μL씩 첨가하고 교반하였다. 실온에서 15분 반응시킨 후, 용해 용액 조제액을 26mL씩 첨가한 후, 잘 교반하였다. 실온에서 10분 정치 후, 300×g로 5분 원심하였다. 아스피레이터로 상청을 흡인 제거하고, 교반 후 30mL의 아지드화PBS를 각 튜브에 분주하고, 300×g로 5분 원심하였다. 아스피레이터로 상청을 흡인 제거 후, 300μL의 CellFix 조제액에 재부유시키고, 측정용 튜브로 옮겨 담았다.
HLA-A*24:02 및 HLA-A*02:01 또는 HLA-A*02:06의 양쪽을 갖는 환자 대상의 염색은, HLA-A*24:02를 갖는 환자 대상의 염색 및 HLA-A*02:01 혹은 HLA-A*02:06을 갖는 환자 대상의 염색의 양쪽의 조작에 의해 행하였다.
플로 사이토메트리 해석
플로 사이토메트리법에 의해, 림프구 중 또는 CD8 양성 림프구 중의 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포 비율의 측정을 실시하였다.
상기에서 제작한 샘플을 플로 사이토미터 FACS CantoII(BD biosciences사)로 측정하였다. 플로 사이토미터에서는 세포의 특성(크기 및 내부 구조)에 따른 강도의 산란광(크기를 반영한 전방 산란광(FSC) 및 내부 구조를 반영한 측방 산란광(SSC)), 그리고 결합한 표지 항체량에 의존한 형광이 발생한다. 샘플 중의 개개의 세포에 대해서, 이들 파라미터의 강도를 측정하였다. 얻어진 파라미터의 강도를 기초로 개개의 세포의 분포를 그래프화함으로써, 특정한 집단을 산출할 수 있다. 세포의 크기와 내부 구조부터 림프구에 상당하고, 또한 항CD4 항체·항CD19 항체·7-AAD 염색 용액이 음성이며, 또한 항CD8 항체만 양성(HLA-A*02:01 혹은 HLA-A*02:06을 갖는 환자 대상) 혹은 항CD3 항체·항CD8 항체가 양쪽 모두 양성(HLA-A*02:01/06을 갖는 환자 대상)이 되는 림프구 분획을 추출하고, 당해 분획에서의 테트라머 양성/림프구 분획 또는 테트라머 양성/CD8 양성 세포 분획을 평가하였다. FITC 표지 CD8 양성이며 PE 표지 WT1 2402 양성 세포 집단의 게이트는, y축의 103을 기준으로 설정했다(게이트 CD8(+)tet(+)). FITC 표지 CD8 양성이며 PE 표지 WT1 0201 양성 세포 집단의 게이트는, y축의 3x102을 기준으로 설정했다(게이트 CD8(+)tet(+)). FITC 표지 CD8 양성이며 APC 표지 WT1 0201 양성 세포 집단의 게이트는, y축의 3x102을 기준으로 설정했다(게이트 CD8(+)tet(+)).
HLA-A*24:02 환자에서는, WT1 펩티드 칵테일 백신의 투여 전에 게이트 CD8(+)tet(+)에 이벤트를 보인 경우에, WT1 펩티드 칵테일 백신의 투여 전후의 CD8 강양성 림프구를 분모로 한 PE 표지 WT1 24:02 양성 세포의 비율을 비교하였다. 투여 전에 게이트 CD8(+)tet(+)에 이벤트를 보이지 않는 경우에는, 투여 후에 게이트 CD8(+)tet(+) 내의 이벤트수를 산출하였다. HLA-A*02:01 혹은 HLA-A*02:06 환자에서는, WT1 펩티드 칵테일 백신의 투여 전에 게이트 CD8(+)tet(+)에 이벤트를 보인 경우에, WT1 펩티드 칵테일 백신의 투여 전후의 CD8 강양성 림프구를 분모로 한 PE 표지 WT1 02:01 혹은 02:06 양성 세포 또한 APC 표지 WT1 02:01 혹은 02:06 양성 세포의 비율을 비교하였다. 투여 전에 게이트 CD8(+)tet(+)에 이벤트를 보이지 않는 경우에는, 투여 후에 게이트 CD8(+)tet(+) 내의 이벤트수를 산출하였다. HLA 테트라머 어세이에 의한 WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응이 양성인지 음성인지를 판단하기 위한 기준을 이하와 같이 설정하였다. 투여 후, 어느 시점에서 양성 또는 유지로 판정된 경우, HLA 테트라머 어세이에 의한 판정은 양성 또는 유지로 하였다. 투여 후, 어느 시점에 있어서든 음성 판정이었을 경우 HLA 테트라머 어세이에 의한 판정은 음성으로 하였다.
Figure pct00032
결과
상기 기준에 기초하여 전체 47 증례에 대하여 판정을 행한 결과, HLA 테트라머 어세이에 의한 판정이 양성으로 판정된 것은 30 증례(63.8％), HLA 테트라머 어세이에 의한 판정이 유지로 판정된 것은 3 증례(6.4％), HLA 테트라머 어세이에 의한 판정이 음성으로 판정된 것은 13 증례(27.7％)였다. 1 증례(2.1％)에 대해서는, HLA 테트라머 어세이에 의한 판정이 불능이었다.
〔실시예 7: 지연성 과민 반응(DTH 반응)의 검출〕
DTH용 약액의 조제
실시예 1에 나타낸 WT1 펩티드 칵테일 백신 중, WT1 킬러 펩티드 콘쥬게이트 20mg에 주사 용수 2mL, WT1 헬퍼 펩티드 18mg에 주사 용수 1.8mL를 각각 첨가하고, WT1 킬러 펩티드 콘쥬게이트 용액(10mg/mL) 및 WT1 헬퍼 펩티드 용액(10mg/mL)을 조제하였다. 또한, 락트산 링거액을 사용하여 각각 10배로 희석(1mg/mL)하였다. DTH용 약액은 조제 후 3시간 이내에 사용하였다.
접종 및 측정
2종류의 DTH용 약액(WT1 킬러 펩티드 콘쥬게이트 용액, WT1 헬퍼 펩티드 용액) 100μL(100μg)를 각각 3㎝ 이상 이격하여 환자의 전완에 피내 주사하였다. 음성 대조로서, DTH용 약액의 투여 부위로부터 3㎝ 이상 이격된 동측 전완에 락트산 링거액(대조 용액) 100μL을 피내 주사하였다. 투여 2일 후에 발적 직경[장경, 단경, 및 성상(이중 발적, 경결, 궤양 등)]을 측정하였다. WT1 킬러 펩티드 콘쥬게이트 용액 또는 WT1 헬퍼 펩티드 용액의 발적 장경으로부터 대조 용액의 발적 장경의 차를 산출하고, 그 차에 의해, 이하의 표에 따라서 DTH 반응을 스코어화하였다.
Figure pct00033
DTH 시험은, WT1 펩티드 칵테일 백신의 투여 개시 전(투여 전 28일 이내), 2회 투여 후 2일째, 12회 투여 후 2일째, 최종 투여 후(투여 후 28일 이내)에 행하였다. DTH 반응을 상기 기준에 기초하여 스코어 판정하였다. 투여 후의 각 증례에 있어서의 최대의 스코어를 이후의 해석에 제공하였다.
결과
상기 기준에 기초하여 전체 47 증례에 대하여 스코어 판정한 결과, 스코어 0이 11 증례(23.4％), 스코어 +/-이 4 증례(8.5％), 스코어 1이 9 증례(19.1％), 스코어 2가 4 증례(8.5％), 스코어 3이 9 증례(19.1％), 스코어 판정이 불능이었던 환자가 7 증례(14.9％), DTH 시험을 실시할 수 없었던 환자가 3 증례(6.4％)였다.
〔실시예 8: WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응의 양성 또는 음성을 분류하는 기준의 설정〕
WT1 펩티드 칵테일 백신에 의해 유도되는 WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응에 관하여, HLA 테트라머 어세이에 의한 판정 결과와 WT1 킬러 펩티드 콘쥬게이트를 사용한 DTH 시험의 최대 스코어를 쌍방향으로부터 해석하고, WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응의 양성 또는 음성을 분류하는 기준을 설정하였다.
본 실시예에 대해서는, WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응의 종합적인 판정을 목적으로 하고 있는 것으로부터, 실시예 1에 기재된 고리스크 증례 42 증례에 저리스크 증례 5 증례를 추가한 전체 47 증례를 해석 대상으로 하였다. 단, 이 중, 실시예 6에 있어서 HLA 테트라머 어세이에 의한 판정이 불능이었던 1 증례, 그리고 실시예 7에 있어서 DTH 스코어 판정 불능이라고 판단된 증례 및 DTH 시험을 실시할 수 없었던 10 증례는 본 해석으로부터 제외하였다.
HLA 테트라머 어세이에 의한 판정 결과에 의해 양성 판정이 된 증례의 대부분은, WT1 킬러 펩티드 콘쥬게이트를 사용한 DTH 시험의 판정에 있어서도 +/- 이상의 스코어임을 알았다(도 8의 좌측 도면). 또한, WT1 킬러 펩티드 콘쥬게이트를 사용한 DTH 시험의 판정이 +/- 미만의 스코어인 증례의 대부분이 HLA 테트라머 어세이로 음성 판정임을 알았다(도 8의 우측 도면). 이들 결과로부터, 도 8의 우측 도면 및 좌측 도면에 있어서, 각각의 화살표로 나타내는 위치를 WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응 양성의 기준으로서 설정하였다.
즉, HLA 테트라머 어세이에 의한 판정 결과가 양성이거나, WT1 킬러 펩티드 콘쥬게이트를 사용한 DTH 시험의 판정이 +/- 이상의 스코어(대조와의 차가 2㎜ 이상)일 경우에는, WT1 펩티드 칵테일 백신에 의한 WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응이 양성이라고 판정할 수 있다. 한편, HLA 테트라머 어세이에 의한 해석 결과가 유지 또는 음성이고, 또한 WT1 킬러 펩티드 콘쥬게이트를 사용한 DTH 시험의 판정이 0(대조와의 차가 2㎜ 미만)일 경우에는, WT1 펩티드 칵테일 백신에 의한 WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응이 음성이라고 판정할 수 있다.
전체 47 증례를 상기 기준으로 분류한 바, 33 증례(70.2％)가 WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응 양성으로 판정되고, 9 증례(19.1％)가 WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응 음성이라고 판정되었다. 5 증례에 대해서는, DTH 시험 미실시 또는 DTH 시험에 의해 내출혈을 보였기 때문에 판정 불능이며, WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응이 불명(10.7％)이었다.
〔실시예 9: WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응 및 임상 효과의 해석〕
실시예 1에 기재된 아자시티딘 무효 고리스크 환자 42 증례 중, 실시예 8의 기준에 의해 WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응이 양성이라고 판정된 28 증례, 음성으로 판정된 8 증례의 계 36 증례에 대해서, 임상 효과와의 관계를 이하와 같이 해석하였다. 또한, 아자시티딘의 부작용에 의한 무효 증례인 2 증례, DTH 시험 미실시 또는 DTH 시험에 의해 내출혈을 보였기 때문에 WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응이 판정 불능이었던 4 증례는 해석으로부터 제외하고 있다.
골수 아구의 변화
WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응과 골수 아구의 변화에 대하여 해석하였다. 첫회 투여 후 약 3개월(2주일 1회 투여로 2회째 투여 후 약 15일 및/또는 6회째 투여 후 약 15일에 골수액을 채취) 후까지의 골수 아구의 비율의 Pre값에 대한 변화가 150％ 이하에 있어서 두 시점 이상 추이한 경우에는, 아구의 안정화 있음으로 판정하고, 골수 아구의 비율의 Pre값에 대한 변화가 150％를 초과한 경우에는, 아구의 안정화 없음(증악)으로 판정하였다. 도 9에 도시하는 바와 같이, WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응이 양성인 증례군에 있어서는, 아구가 장기적으로 안정된 증례가 많이 보였다.
AML 이행 기간
WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응의 양성 또는 음성에 의한 급성 골수성 백혈병(AML) 이행 기간을 비교하였다. 도 10에 도시하는 바와 같이, WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응이 양성인 증례군에 있어서는, AML 이행 기간이 긴 경향이 있었다.
생존 곡선
WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응의 양성 또는 음성에 의한 생존 곡선을 비교하였다. 도 11에 도시하는 바와 같이, WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응이 양성이라고 판정된 28 증례의 mOS는, WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응이 음성이라고 판정된 8 증례의 mOS와 비교하여 긴 경향이 있었다.
골수 아구의 안정화와 생존 곡선
도 9에 도시하는 바와 같이, WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응이 음성이라고 판정된 8 증례에 있어서, 골수 아구의 안정화가 보인 증례는 없었다. 한편, 면역 반응이 양성이라고 판정된 28 증례에 있어서는, 15 증례(53.6％)에 있어서 골수 아구의 안정화가 보였다. WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응이 양성이며, 또한 골수 아구의 안정화가 보인 증례의 mOS가 가장 긴 경향이 있었다.
핵형과 생존 곡선
핵형이 불분명한 1 증례를 제외한 35 증례를 IPSS-R의 핵형별로 분류하고, WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응과 생존 곡선을 비교하였다. 도 12에 도시하는 바와 같이, 좋음/중간/불량군에 있어서는, WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응이 양성이라고 판정된 증례군은, WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응이 음성이라고 판정된 증례군과 비교하여 mOS가 긴 경향이 있음을 알았다. 또한, 예후 불량인 핵형 매우 불량군에 있어서도 마찬가지로, WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응이 양성이라고 판정된 증례군의 mOS는 WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응이 음성이라고 판정된 증례군보다 긴 경향이 있었다.
결과
WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응이 양성이라고 판단된 증례군은, WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응이 음성이라고 판단된 증례군과 비교하여 골수 아구가 안정화된 증례가 많이 보이고, AML 이행 기간의 연장이 보였다. 또한, mOS도 연장 경향이 있는 것이 나타났다. WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응이 유도됨으로써, 골수 아구가 안정화되고, 그에 수반하여 AML 이행 기간 및 생존 기간의 연장이 보인 가능성이 시사되었다. 핵형이 예후 양호인 증례군과 예후 불량인 증례군에서 층별 해석을 행한 경우에도, 마찬가지로 mOS의 연장의 경향이 보였다.
〔실시예 10: 성차에 의한 해석〕
실시예 1의 아자시티딘 무효 고리스크 환자 42 증례 중, 아자시티딘의 부작용에 의한 무효 증례인 2 증례를 제외한 40 증례에 대해서, 각 성차의 생존 기간 중앙값을, 히스토리컬 데이터 및 리고세르팁 시험의 BSC의 생존 기간 중앙값과 비교하였다.
표 5에 도시하는 바와 같이, 남성에서 WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응이 양성이라고 판정되는 증례가 많이 보였다. 히스토리컬 데이터(Prebet et al., Journal of Clinical Oncology 29, no.24, 3322-3327) 및 리고세르팁의 ONTIME 시험(Garcia-Manero et al., The Lancet Oncology 17, no.4, p496-508(2016))의 대조(리고세르팁 시험의 BSC)와 비교한 결과, 도 13에 도시하는 바와 같이, WT1 펩티드 칵테일 백신은 여성보다 남성에게 있어서 OS의 연장이 보이고, 효과가 높을 가능성이 시사되었다.
Figure pct00034
〔실시예 11: WT1 mRNA의 유전자 마커로서의 유용성 2〕
실시예 1의 아자시티딘 무효 고리스크 환자 42 증례 중, 아자시티딘의 부작용에 의한 무효 증례인 2 증례를 제외한 40 증례에 대해서, WT1 mRNA의 발현을 확인하였다.
말초혈로부터의 DNA 추출 및 검체의 품질 평가
WT1 펩티드 칵테일 백신의 투여 개시 전 28일 이내에, 환자로부터 말초혈 및 골수액을 채취하였다. 전혈 7mL 또는 골수액 0.5mL로부터, RNA 전자동 정제 장치 QIAcube(Qiagen사)를 사용하여 RNA의 추출 및 정제를 행하였다. QIAcube 유저 매뉴얼에 따라서, RNeasy mini Kit(Qiagen사)의 시약이나 튜브 등, 및 샘플을 세팅하였다. QIAcube에 보존되어 있는 QIAcube Standard Program으로부터 RNeasy-Mini-program을 선택하고, RNA를 추출하였다.
WT1 mRNA의 발현 해석
WT1 mRNA의 발현 해석은 WT1 mRNA 측정 키트 II 「오츠카」(오츠카 세이야쿠 가부시키가이샤)를 사용하여 행하였다. 이하, 특별히 언급하지 않는 한 시약은 상기 키트 부속의 것을 사용하였다.
RNase 무함유 물을 첨가함으로써 추출한 RNA의 농도를 50ng/μL로 조정하였다. WT1·GAPDH 혼합 RNA 표준액을 표준액 1, 표준액 1을 표준액 희석액으로 10배 희석한 것을 표준액 2, 마찬가지로 10배 희석을 반복하여 표준액 5까지 조제하였다. 1반응당, RT-PCR용 믹스액(R1) 10μL 및 금속 이온 용액 5μL의 비율로 혼화한 것을 반응액으로 하였다. 리얼타임 PCR 장치(어플라이드 바이오시스템즈 7500 Fast Dx, 어플라이드 바이오시스템즈사)를 사용하여, 상기 키트에 부속된 프로토콜의 「3. 측정 조작」에 따라서 RT-PCR 반응을 행하였다. 표준액 1 내지 5로부터 제작한 표준 곡선을 사용하여, 샘플의 WT1 mRNA 및 GSDPH mRNA의 측정값을 산출하였다.
상기 키트에 부속된 프로토콜의 「4. WT1 mRNA 발현량의 산출 방법」에 따라서, 이하와 같이 WT1 mRNA 발현량을 산출하였다.
구체적으로는 이하의 식에 나타내는 바와 같이, WT1 mRNA 측정값을 GAPDH mRNA 측정값으로 나눈 값(GAPDH mRNA 1카피당의 WT1 mRNA 카피수)에, 건강 성인의 1μg RNA당의 평균 GAPDH mRNA 카피수(GAPDH mRNA 발현량)를 곱하여 WT1 mRNA 발현량을 산출하였다. 또한, 2.7×107(카피/μg RNA)은 건강 성인의 1μg RNA당의 평균 GAPDH mRNA 측정값이다.
Figure pct00035
WT1 mRNA의 발현 해석의 결과를 도 14에 도시하였다. 40 증례 중 전체 증례에 있어서 말초혈 중에 WT1 mRNA의 발현이 보였다. WT1 mRNA 발현량이 10000카피/μg RNA 이하인 증례의 mOS는, WT1 mRNA 발현량이 10000카피/μg RNA보다 높은 증례의 mOS와 비교하여 긴 경향이 있었다.
또한, WT1 mRNA 발현량이 10000카피/μg RNA 이하인 30 증례, WT1 mRNA 발현량이 10000카피/μg RNA보다 높은 10 증례에 대해서, 후술하는 HLA 테트라머 어세이 및 지연형 과민 반응에 의해 WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응을 확인하였다. WT1 mRNA의 발현량에 대해서, 생존 기간(OS) 및 WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응을 비교한 결과를 도 15에 도시하였다. 또한, 도 15에 도시되는 결과는, WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응의 판정이 불능이었던 4 증례를 제외한, WT1 mRNA 발현량이 10000카피/μg RNA 이하인 28 증례, WT1 mRNA 발현량이 10000카피/μg RNA보다 높은 8 증례에 관한 것이다.
이에 의해, WT1 mRNA의 발현량이, WT1 펩티드 백신에 의한 치료의 효과를 기대할 수 있는 환자를 선택하기 위한 유전자 마커로서 유용함이 나타났다. 또한, 상기 마커의 기준값으로서, 10000카피/μg RNA가 유용함이 나타났다.
WT1 mRNA 발현량이 10000카피/μg RNA 이하인 증례군에 대해서는, WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응이 보인 증례의 OS가 긴 경향이 있음이 나타났다. 한편, WT1 mRNA 발현량이 10000카피/μg RNA보다 높은 증례군은, WT1 항원 펩티드 특이적 면역 반응의 양성과 음성에 의한 OS에 차는 보이지 않았다. 또한, 말초혈 중의 WT1 mRNA 발현량과 골수액 중의 WT1 mRNA 발현량이 상관 관계에 있고, 골수액 중에서도 동일한 경향이 보이는 것도 확인했다(도 16).
SEQUENCE LISTING <110> Sumitomo Dainippon Pharma Co., Ltd. International Institute of Cancer Immunology, Inc. <120> METHOD OF SELECTING SUBJECT FOR TREATMENT OR PREVENTION OF CANCER <130> FP20-0198-00 <150> JP2019-036458 <151> 2019-02-28 <160> 45 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 449 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Gly Ser Asp Val Arg Asp Leu Asn Ala Leu Leu Pro Ala Val Pro 1 5 10 15 Ser Leu Gly Gly Gly Gly Gly Cys Ala Leu Pro Val Ser Gly Ala Ala 20 25 30 Gln Trp Ala Pro Val Leu Asp Phe Ala Pro Pro Gly Ala Ser Ala Tyr 35 40 45 Gly Ser Leu Gly Gly Pro Ala Pro Pro Pro Ala Pro Pro Pro Pro Pro 50 55 60 Pro Pro Pro Pro His Ser Phe Ile Lys Gln Glu Pro Ser Trp Gly Gly 65 70 75 80 Ala Glu Pro His Glu Glu Gln Cys Leu Ser Ala Phe Thr Val His Phe 85 90 95 Ser Gly Gln Phe Thr Gly Thr Ala Gly Ala Cys Arg Tyr Gly Pro Phe 100 105 110 Gly Pro Pro Pro Pro Ser Gln Ala Ser Ser Gly Gln Ala Arg Met Phe 115 120 125 Pro Asn Ala Pro Tyr Leu Pro Ser Cys Leu Glu Ser Gln Pro Ala Ile 130 135 140 Arg Asn Gln Gly Tyr Ser Thr Val Thr Phe Asp Gly Thr Pro Ser Tyr 145 150 155 160 Gly His Thr Pro Ser His His Ala Ala Gln Phe Pro Asn His Ser Phe 165 170 175 Lys His Glu Asp Pro Met Gly Gln Gln Gly Ser Leu Gly Glu Gln Gln 180 185 190 Tyr Ser Val Pro Pro Pro Val Tyr Gly Cys His Thr Pro Thr Asp Ser 195 200 205 Cys Thr Gly Ser Gln Ala Leu Leu Leu Arg Thr Pro Tyr Ser Ser Asp 210 215 220 Asn Leu Tyr Gln Met Thr Ser Gln Leu Glu Cys Met Thr Trp Asn Gln 225 230 235 240 Met Asn Leu Gly Ala Thr Leu Lys Gly Val Ala Ala Gly Ser Ser Ser 245 250 255 Ser Val Lys Trp Thr Glu Gly Gln Ser Asn His Ser Thr Gly Tyr Glu 260 265 270 Ser Asp Asn His Thr Thr Pro Ile Leu Cys Gly Ala Gln Tyr Arg Ile 275 280 285 His Thr His Gly Val Phe Arg Gly Ile Gln Asp Val Arg Arg Val Pro 290 295 300 Gly Val Ala Pro Thr Leu Val Arg Ser Ala Ser Glu Thr Ser Glu Lys 305 310 315 320 Arg Pro Phe Met Cys Ala Tyr Pro Gly Cys Asn Lys Arg Tyr Phe Lys 325 330 335 Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His Thr Gly Glu Lys Pro 340 345 350 Tyr Gln Cys Asp Phe Lys Asp Cys Glu Arg Arg Phe Ser Arg Ser Asp 355 360 365 Gln Leu Lys Arg His Gln Arg Arg His Thr Gly Val Lys Pro Phe Gln 370 375 380 Cys Lys Thr Cys Gln Arg Lys Phe Ser Arg Ser Asp His Leu Lys Thr 385 390 395 400 His Thr Arg Thr His Thr Gly Lys Thr Ser Glu Lys Pro Phe Ser Cys 405 410 415 Arg Trp Pro Ser Cys Gln Lys Lys Phe Ala Arg Ser Asp Glu Leu Val 420 425 430 Arg His His Asn Met His Gln Arg Asn Met Thr Lys Leu Gln Leu Ala 435 440 445 Leu <210> 2 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 2 Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 3 Cys Met Thr Trp Asn Gln Met Asn Leu 1 5 <210> 4 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 4 Cys Tyr Thr Trp Asn Gln Met Asn Leu 1 5 <210> 5 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 5 Ala Leu Leu Pro Ala Val Pro Ser Leu 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 6 Ser Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val 1 5 <210> 7 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 7 Arg Val Pro Gly Val Ala Pro Thr Leu 1 5 <210> 8 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 8 Tyr Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu 1 5 <210> 9 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 9 Val Leu Asp Phe Ala Pro Pro Gly Ala 1 5 <210> 10 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(2) <223> DISULFID <400> 10 Cys Cys Tyr Thr Trp Asn Gln Met Asn Leu 1 5 10 <210> 11 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 11 Cys Asn Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg 1 5 10 15 Lys <210> 12 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 12 Cys Asn Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg 1 5 10 15 Lys His <210> 13 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 13 Cys Asn Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg 1 5 10 15 Lys His Thr Gly 20 <210> 14 <211> 18 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 14 Trp Ala Pro Val Leu Asp Phe Ala Pro Pro Gly Ala Ser Ala Tyr Gly 1 5 10 15 Ser Leu <210> 15 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 15 Cys Trp Ala Pro Val Leu Asp Phe Ala Pro Pro Gly Ala Ser Ala Tyr 1 5 10 15 Gly Ser Leu <210> 16 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 16 Trp Ala Pro Val Leu Asp Phe Ala Pro Pro Gly Ala Ser Ala Tyr Gly 1 5 10 15 Ser Leu Cys <210> 17 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 17 Ser Gly Gln Ala Tyr Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu Pro Ser Cys 1 5 10 15 Leu Glu Ser <210> 18 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 18 Arg Ser Asp Glu Leu Val Arg His His Asn Met His Gln Arg Asn Met 1 5 10 15 Thr Lys Leu <210> 19 <211> 22 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 19 Pro Gly Cys Asn Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His 1 5 10 15 Ser Arg Lys His Thr Gly 20 <210> 20 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 20 Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His Ser Arg Lys His 1 5 10 15 <210> 21 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <220> <221> MISC_FEATURE <222> (1)..(2) <223> DISULFID <400> 21 Cys Cys Met Thr Trp Asn Gln Met Asn Leu 1 5 10 <210> 22 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 22 Arg Tyr Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu 1 5 <210> 23 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 23 Phe Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu 1 5 <210> 24 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 24 Arg Leu Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu 1 5 <210> 25 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 25 Arg Met Met Pro Asn Ala Pro Tyr Leu 1 5 <210> 26 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 26 Arg Met Phe 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<400> 33 Arg Tyr Pro Gly Val Ala Pro Thr Leu 1 5 <210> 34 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 34 Ser Gly Gln Ala Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu Pro Ser Cys 1 5 10 15 Leu Glu Ser <210> 35 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 35 Ser Gly Gln Ala Tyr Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu Pro Ser Cys 1 5 10 15 Leu Glu Ser <210> 36 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 36 Ser Gly Gln Ala Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu Pro Ser Cys 1 5 10 15 <210> 37 <211> 16 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 37 Ser Gly Gln Ala Tyr Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu Pro Ser Cys 1 5 10 15 <210> 38 <211> 19 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 38 Pro Gly Cys Asn Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His 1 5 10 15 Ser Arg Lys <210> 39 <211> 20 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 39 Pro Gly Cys Asn Lys Arg Tyr Phe Lys Leu Ser His Leu Gln Met His 1 5 10 15 Ser Arg Lys His 20 <210> 40 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 40 Cys Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu 1 5 10 <210> 41 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 41 Cys Cys Met Thr Trp Asn Gln Met Asn Leu 1 5 10 <210> 42 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 42 Cys Cys Tyr Thr Trp Asn Gln Met Asn Leu 1 5 10 <210> 43 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 43 Cys Ala Leu Leu Pro Ala Val Pro Ser Leu 1 5 10 <210> 44 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 44 Cys Ser Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val 1 5 10 <210> 45 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> peptide <400> 45 Cys Arg Val Pro Gly Val Ala Pro Thr Leu 1 5 10

Claims (19)

  1. 암을 치료 또는 예방하기 위한 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상을 선택하는 방법으로서,
    상기 대상으로부터 채취된 시료를 사용하여, 종양 단백질 p53(Tumor Protein p53(TP53)) 유전자 및/또는 BCL6 공동-리프레서(BCL6 co-repressor(BCOR)) 유전자에 있어서의 변이의 유무를 결정하는 공정, 그리고
    TP53 야생형 및/또는 BCOR 야생형의 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 포함하고,
    상기 의약 조성물은, RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7), VLDFAPPGA(서열 번호: 9), CMTWNQMNL(서열 번호: 3), CYTWNQMNL(서열 번호: 4), CNKRYFKLSHLQMHSRK(서열 번호: 11), CNKRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호: 12), CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(서열 번호: 13), WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14), CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 15) 및 WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호: 16)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 의약 조성물이, RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7) 및 VLDFAPPGA(서열 번호: 9)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 의약 조성물이, CMTWNQMNL(서열 번호: 3) 및 CYTWNQMNL(서열 번호: 4)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 의약 조성물이, RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7) 및 VLDFAPPGA(서열 번호: 9)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드, 그리고
    CMTWNQMNL(서열 번호: 3) 및 CYTWNQMNL(서열 번호: 4)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 방법.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 의약 조성물이, 식 (1):
    Figure pct00036

    [식 중, Xa 및 Ya는 단결합을 나타내고, 종양 항원 펩티드 A는 이하의 아미노산 서열:
    RMFPNAPYL(서열 번호: 2), YMFPNAPYL(서열 번호: 8), ALLPAVPSL(서열 번호: 5), SLGEQQYSV(서열 번호: 6), RVPGVAPTL(서열 번호: 7) 및 VLDFAPPGA(서열 번호: 9) 중에서 선택되는 어느 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 나타내고, 종양 항원 펩티드 A의 N 말단 아미노산의 아미노기가 식 (1) 중의 Ya와 결합하고, 종양 항원 펩티드 A의 C 말단 아미노산의 카르보닐기가 식 (1) 중의 수산기와 결합하고,
    R1은 수소 원자 또는 종양 항원 펩티드 B를 나타내고,
    종양 항원 펩티드 B는, 종양 항원 펩티드 A와는 서열이 다르고 또한 이하의 아미노산 서열:
    CMTWNQMNL(서열 번호: 3) 및 CYTWNQMNL(서열 번호: 4) 중에서 선택되는 어느 아미노산 서열을 포함하는 펩티드를 나타내고, 종양 항원 펩티드 B의 시스테인 잔기의 티오에테르기가 식 (1) 중의 티오에테르기와 결합한다.]
    로 표시되는 화합물 또는 그의 약학상 허용되는 염을 포함하는, 방법.
  6. 제5항에 있어서, 식 (1)로 표시되는 화합물이, 식 (2):
    Figure pct00037

    (식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
    로 표시되는 화합물 또는 그의 약학상 허용되는 염인, 방법.
  7. 제5항에 있어서, 식 (1)로 표시되는 화합물이, 식 (3):
    Figure pct00038

    (식 중, C와 C간의 결합은 디술피드 결합을 나타낸다.)
    으로 표시되는 화합물 또는 그의 약학상 허용되는 염인, 방법.
  8. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 의약 조성물이, CNKRYFKLSHLQMHSRK(서열 번호: 11), CNKRYFKLSHLQMHSRKH(서열 번호: 12), CNKRYFKLSHLQMHSRKHTG(서열 번호: 13), WAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 14), CWAPVLDFAPPGASAYGSL(서열 번호: 15) 및 WAPVLDFAPPGASAYGSLC(서열 번호: 16)로 이루어지는 군에서 선택되는 아미노산 서열을 포함하는 펩티드 또는 그의 약학상 허용되는 염을 더 포함하는, 방법.
  9. 제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 의약 조성물이 약학상 허용되는 담체를 포함하는, 방법.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, TP53 야생형의 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는, 방법.
  11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, TP53 야생형 및 BCOR 야생형의 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는, 방법.
  12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상으로부터 채취한 시료를 사용하여, WT1 유전자의 mRNA 발현량을 결정하는 공정, 및 상기 WT1 유전자의 mRNA 발현량이 기준값 미만 또는 이하인 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 더 포함하는, 방법.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 기재된 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여한 상기 대상으로부터 채취한 시료를 사용하여, WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포를 검출하는 공정, 및
    투여 전의 상기 대상으로부터 채취한 시료와 비교하여, 상기 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포가 증가한 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 더 포함하는, 방법.
  14. 제13항에 있어서, WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포를 검출하는 공정이, WT1 펩티드와 HLA 분자의 복합체를 상기 시료와 반응시키고, 상기 시료에 포함되는 상기 복합체를 인식하는 WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포의 존재 또는 세포수를 조사함으로써 실시되는, 방법.
  15. 제14항에 있어서, 상기 WT1 펩티드와 HLA 분자의 복합체가 테트라머의 형태인, 방법.
  16. 제14항 또는 제15항에 있어서, 상기 HLA 분자가 상기 대상의 HLA에 적합한 것인, 방법.
  17. 제13항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, WT1 항원 펩티드 특이적 CD8 T 세포를 검출하는 공정이 플로 사이토메트리법에 의한 해석을 포함하는, 방법.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 기재된 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 복수회 투여한 대상에 있어서, 지연형 과민 반응이 검출된 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 더 포함하는, 방법.
  19. 제18항에 있어서, 대상에 있어서의 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 기재된 의약 조성물 또는 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여한 개소에 있어서의 반응과, 상기 대상에 있어서의 상기 의약 조성물 또는 상기 펩티드 혹은 그의 약학상 허용되는 염을 투여하고 있지 않은 개소에 있어서의 반응을 비교하여, 투여한 개소에 있어서의 반응과 투여하고 있지 않은 개소에 있어서의 반응의 차가 기준값 이상인 경우에, 상기 대상은 상기 의약 조성물의 효과를 기대할 수 있는 대상이라는 지표를 제공하는 공정을 더 포함하는, 방법.
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