JPWO2020175657A1 - がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果を期待できる対象を選択する方法 - Google Patents

がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果を期待できる対象を選択する方法 Download PDF

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Abstract

対象から採取された試料を用いて、Ｔｕｍｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｐ５３（ＴＰ５３）遺伝子及び／又はＢＣＬ６ ｃｏ−ｒｅｐｒｅｓｓｏｒ（ＢＣＯＲ）遺伝子における変異の有無を決定する工程、並びにＴＰ５３野生型及び／又はＢＣＯＲ野生型の場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程を含む、がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果を期待できる対象を選択する方法を開示する。

Description

本発明は、がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果を期待できる対象を選択する方法に関する。
生体による腫瘍細胞やウイルス感染細胞等の排除には細胞性免疫、とりわけ細胞傷害性Ｔ細胞（ＣＴＬと称する）が重要な働きをしている。ＣＴＬは、腫瘍細胞上の抗原ペプチド（腫瘍抗原ペプチド）とＭＨＣ（Ｍａｊｏｒ Ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ Ｃｏｍｐｌｅｘ）クラスＩ抗原との複合体を認識した前駆体Ｔ細胞が分化増殖して生成されるものであり、腫瘍細胞を攻撃する。
ＭＨＣは、ヒトではヒト白血球型抗原（ＨＬＡ）と呼ばれ、ＨＬＡ−Ａ、Ｂ及びＣｗなどが知られている。腫瘍抗原ペプチドは、腫瘍で高発現しているタンパク質、すなわち腫瘍抗原タンパク質が細胞内で合成された後、プロテアーゼにより細胞内で分解されることによって生成される。生成された腫瘍抗原ペプチドは、小胞体内でＭＨＣクラスＩ抗原と結合して複合体を形成し、細胞表面に運ばれて抗原提示される。この抗原提示された腫瘍抗原ペプチド（キラーペプチド）を腫瘍反応性のＣＴＬが認識し、細胞傷害作用やリンフォカインの産生を介して抗腫瘍効果を示す。
腫瘍抗原タンパク質又は腫瘍抗原由来のキラーペプチドをいわゆるがん免疫療法剤（がんワクチン）の主成分として利用することにより、がん患者の体内のがん特異的ＣＴＬを増強させる治療法の開発が検討されている。例えば、ＷＴ１（Ｗｉｌｍ’ｓ ｔｕｍｏｒ １）を標的としたがん免疫療法が開発されつつある。ＷＴ１は小児の腎癌であるウイルムス腫瘍の責任遺伝子として同定された遺伝子であり、ジンクフィンガー構造を有する転写因子である（非特許文献１参照）。当初、ＷＴ１遺伝子は癌抑制遺伝子であるとされたが、その後の研究により、造血器腫瘍や固形癌においてはむしろ癌遺伝子として働くことが示された。また、ＷＴ１遺伝子は多くの悪性腫瘍において高発現していることが報告されている（非特許文献２参照）。ＷＴ１は、白血病及び固形癌における新しい腫瘍抗原タンパク質であると考えられている（非特許文献３参照）。そこで、ＷＴ１タンパクあるいはＷＴ１タンパク由来のペプチドを利用したがんワクチン療法や樹状細胞療法、ＷＴ１タンパク由来のペプチドとＨＬＡ複合体を認識するＴＣＲ様抗体、あるいはＴＣＲ様抗体を利用したキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）遺伝子改変Ｔ細胞療法などが開発中である。
当該ＷＴ１タンパク質に関して、例えば、ＷＴ１１２６−１３４ペプチド、ＷＴ１２３５−２４３ペプチド、ＷＴ１１０−１８ペプチド、ＷＴ１１８７−１９５ペプチド、ＷＴ１３０２−３１０ペプチド、及びＷＴ１３７−４５ペプチドなど、ＭＨＣクラスＩに結合し提示されるキラーペプチドが報告されている（特許文献１、特許文献２、非特許文献４及び５参照）。
また、がん免疫療法において重要な働きをしている細胞としては、ＣＴＬの他にヘルパーＴ（Ｔｈ１）細胞が挙げられる。一般的に、抗原タンパク質は細胞内リソソームで分解され、１３〜１７残基程度のアミノ酸から構成される断片ペプチドの一部が、抗原ペプチド（ヘルパーペプチド）としてＭＨＣクラスＩＩ分子に結合する。その後、抗原ペプチドとＭＨＣクラスＩＩ分子の複合体がＴＣＲ・ＣＤ３複合体に提示されて活性化されたＴｈ１細胞は、ＣＴＬの誘導及び活性化を促す。ヒトのＭＨＣクラスＩＩ分子としてＨＬＡ−ＤＲ、ＤＱ及びＤＰなどが知られており、ＷＴ１タンパクに由来する複数のヘルパーペプチドがこれまで同定されている（非特許文献６及び７参照）。
がん免疫療法の効果を十分発揮させるためには、予め対象の応答を予測し、その効果を期待できる対象を選択することが重要である。しかしながら、上記ＭＨＣクラスＩに結合し提示されるキラーペプチド及び／又はＭＨＣクラスＩＩ分子に結合するヘルパーペプチドを利用してＷＴ１を標的としたがん免疫療法が開発されつつある一方で、これまでに、ＷＴ１抗原タンパク質由来の抗原ペプチドを利用したＷＴ１ペプチドワクチンによる治療又は予防の効果が期待できる対象を予め選択する方法に関する報告はなかった。
国際公開第００／０６６０２号 国際公開第００／１８７９５号
Am J Hum Genet. 1993; 52: 192-203 Blood.1997; 89: 1405-1412 Immunogenetics. 2000; 51: 99-107 Clin Cancer Res. 2005; 11: 8799-807 Blood. 2008 Oct 1; 112(7): 2956-64 J Immunother. 2007; 30: 282-93 Cancer Immunol Immunother. 2010; 59: 1467-79
したがって、本発明は、がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果を期待できる対象を選択する方法を提供することを目的とする。ここで、医薬組成物は、ＷＴ１キラーペプチド及び／又はＷＴ１ヘルパーペプチドを含む。
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討した結果、Ｔｕｍｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｐ５３（ＴＰ５３）遺伝子及び／又はＢＣＬ６ ｃｏ−ｒｅｐｒｅｓｓｏｒ（ＢＣＯＲ）遺伝子における変異の有無、並びにＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量等に基づき、がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果を期待できる対象を選択する方法を見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、例えば、本発明は以下の発明を含む。
〔１〕
がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果を期待できる対象を選択する方法であって、
上記対象から採取された試料を用いて、ＴＰ５３遺伝子及び／又はＢＣＯＲ遺伝子における変異の有無を決定する工程、並びに
ＴＰ５３野生型及び／又はＢＣＯＲ野生型の場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程を含み、
上記医薬組成物は、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）、ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）、ＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫ（配列番号：１１）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨ（配列番号：１２）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧ（配列番号：１３）、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）、ＣＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１５）及びＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＣ（配列番号：１６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、方法。
〔２〕
上記医薬組成物が、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）及びＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔１〕に記載の方法。
〔３〕
上記医薬組成物が、ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）及びＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔１〕又は〔２〕に記載の方法。
〔４〕
上記医薬組成物が、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）及びＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド、並びに
ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）及びＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔１〕〜〔３〕のいずれかに記載の方法。
〔５〕
上記医薬組成物が、式（Ｉ）：
Figure 2020175657
 ［式中、Ｘａ及びＹａは、単結合を表し、腫瘍抗原ペプチドＡは、以下のアミノ酸配列：
ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）及びＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）の中から選ばれるいずれかのアミノ酸配列からなるペプチドを表し、腫瘍抗原ペプチドＡのＮ末端アミノ酸のアミノ基が式（１）中のＹａと結合し、腫瘍抗原ペプチドＡのＣ末端アミノ酸のカルボニル基が式（１）中の水酸基と結合し、
Ｒ１は、水素原子又は腫瘍抗原ペプチドＢを表し、
腫瘍抗原ペプチドＢは、腫瘍抗原ペプチドＡとは配列が異なり且つ以下のアミノ酸配列：
ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）及びＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）の中から選ばれるいずれかのアミノ酸配列からなるペプチドを表し、腫瘍抗原ペプチドＢのシステイン残基のチオエーテル基が式（１）中のチオエーテル基と結合する。］
で表される化合物又はその薬学上許容される塩を含む、〔１〕〜〔４〕のいずれかに記載の方法。
〔６〕
上記医薬組成物が、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載の方法。
〔７〕
上記医薬組成物が、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載の方法。
〔８〕
上記医薬組成物が、Ｃ−ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（Ｃ−Ｃ間はジスルフィドボンドを表す、配列番号：２１）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載の方法。
〔９〕
上記医薬組成物が、Ｃ−ＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（Ｃ−Ｃ間はジスルフィドボンドを表す、配列番号：１０）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔１〕〜〔５〕のいずれかに記載の方法。
〔１０〕
上記医薬組成物が、ＣＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１５）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔１〕〜〔９〕のいずれかに記載の方法。
〔１１〕
上記医薬組成物が、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＣ（配列番号：１６）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔１〕〜〔９〕のいずれかに記載の方法。
〔１２〕
上記医薬組成物が、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔１〕〜〔９〕のいずれかに記載の方法。
〔１３〕
式（１）で表される化合物が、式（２）：
Figure 2020175657
 （式中、ＣとＣの間の結合はジスルフィド結合を表す。）
で表される化合物又はその薬学上許容される塩である、〔５〕に記載の方法。
〔１４〕
式（１）で表される化合物が、式（３）：
Figure 2020175657
 （式中、ＣとＣの間の結合はジスルフィド結合を表す。）で表される化合物又はその薬学上許容される塩である、〔５〕に記載の方法。
〔１５〕
上記医薬組成物が、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫ（配列番号：１１）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨ（配列番号：１２）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧ（配列番号：１３）、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）、ＣＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１５）及びＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＣ（配列番号：１６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩をさらに含む、〔１〕〜〔１４〕のいずれかに記載の方法。
〔１６〕
式（１）で表される化合物が、式（２）：
Figure 2020175657
 （式中、ＣとＣの間の結合はジスルフィド結合を表す。）
で表される化合物又はその薬学上許容される塩であり、
上記医薬組成物がさらにＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）又はその薬学上許容される塩を含む、〔５〕に記載の方法。
〔１７〕
式（１）で表される化合物が、式（３）：
Figure 2020175657
 （式中、ＣとＣの間の結合はジスルフィド結合を表す。）で表される化合物又はその薬学上許容される塩であり、
上記医薬組成物がさらにＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）又はその薬学上許容される塩を含む、〔５〕に記載の方法。
〔１８〕
上記医薬組成物が、薬学上許容される担体を含む、〔１〕〜〔１７〕のいずれかに記載の方法。
〔１９〕
ＴＰ５３野生型の場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する、〔１〕〜〔１８〕のいずれかに記載の方法。
〔２０〕
ＴＰ５３野生型及びＢＣＯＲ野生型の場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する、〔１〕〜〔１９〕のいずれかに記載の方法。
〔２１〕
上記対象から採取した試料を用いて、ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量を決定する工程、及び上記ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量が基準値未満又は以下であった場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程をさらに含む、〔１〕〜〔２０〕のいずれかに記載の方法。
〔２２〕
〔１〕〜〔１８〕のいずれかに記載された医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与した上記対象から採取した試料を用いて、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を検出する工程、及び
投与前の上記対象から採取した試料と比較して、上記ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が増加していた場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程をさらに含む、〔１〕〜〔２１〕のいずれかに記載の方法。
〔２３〕
ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を検出する工程が、ＷＴ１ペプチドとＨＬＡ分子との複合体を上記試料と反応させ、上記試料に含まれる上記複合体を認識するＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の存在又は細胞数を調べることにより実施される、〔２２〕に記載の方法。
〔２４〕
上記ＷＴ１ペプチドとＨＬＡ分子との複合体がテトラマーの形態である、〔２３〕に記載の方法。
〔２５〕
上記ＨＬＡ分子が、上記対象のＨＬＡに適合したものである、〔２３〕又は〔２４〕に記載の方法。
〔２６〕
ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を検出する工程が、フローサイトメトリー法による解析を含む、〔２２〕〜〔２５〕のいずれかに記載の方法。
〔２７〕
〔１〕〜〔１８〕のいずれかに記載された医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を複数回投与した対象において、遅延型過敏反応が検出された場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程をさらに含む、〔１〕〜〔２６〕のいずれかに記載の方法。
〔２８〕
対象における〔１〕〜〔１８〕のいずれかに記載された医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与した箇所における反応と、上記対象における上記医薬組成物又は上記ペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与していない箇所における反応を比較し、投与した箇所における反応と投与していない箇所における反応との差が基準値以上である場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程をさらに含む、〔２７〕に記載の方法。
〔２９〕
上記対象の改訂ＩＰＳＳ（ＩＰＳＳ−Ｒ）に基づく核型がＶｅｒｙ ｐｏｏｒ以外である場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程をさらに含む、〔１〕〜〔２８〕のいずれかに記載の方法。
〔３０〕
対象における〔１〕〜〔１８〕のいずれかに記載された医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与した対象から採取された試料における骨髄芽球の割合を、上記医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与する前の対象から採取された試料における骨髄芽球の割合で除した値が、基準値未満又は以下であった場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程をさらに含む、〔１〕〜〔２９〕のいずれかに記載の方法。
〔３１〕
上記試料が体液、粘膜、細胞、組織及び細胞又は組織の培養物並びにこれらの組合せからなる群から選択される、〔１〕〜〔３０〕のいずれかに記載の方法。
〔３２〕
上記癌が、白血病、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、悪性リンパ腫、胃癌、大腸癌、肺癌、乳癌、胚細胞癌、肝癌、皮膚癌、膀胱癌、前立腺癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巣癌及び脳腫瘍からなる群から選択される、〔１〕〜〔３１〕のいずれかに記載の方法。
〔３３〕
〔１〕〜〔３２〕のいずれかに記載の方法により、がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果を期待できる対象を選択する工程、及び
選択された対象に対して〔１〕〜〔１８〕のいずれかに記載の医薬組成物を投与する工程を含む、がんの治療方法。
〔３４〕
がんの治療方法に使用するための医薬組成物であって、
ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）、ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）、ＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫ（配列番号：１１）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨ（配列番号：１２）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧ（配列番号：１３）、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）、ＣＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１５）及びＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＣ（配列番号：１６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含み、
上記治療方法は、〔１〕〜〔３３〕のいずれかに記載の方法により、がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果を期待できる対象を選択する工程、及び
選択された対象に対して上記医薬組成物を投与する工程を含む、医薬組成物。
〔３５〕
がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果を期待できる対象を選択する方法であって、
上記対象から採取された試料を用いて、ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量を決定する工程、及び
上記ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量が基準値未満又は以下であった場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程を含み、
上記医薬組成物は、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）、ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）、ＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫ（配列番号：１１）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨ（配列番号：１２）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧ（配列番号：１３）、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）、ＣＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１５）及びＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＣ（配列番号：１６）、からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、方法。
〔３６〕
上記医薬組成物が、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）及びＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔３５〕に記載の方法。
〔３７〕
上記医薬組成物が、ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）及びＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔３５〕又は〔３６〕に記載の方法。
〔３８〕
上記医薬組成物が、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）及びＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド、並びに
ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）及びＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）
からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔３５〕〜〔３８〕のいずれかに記載の方法。
〔３９〕
上記医薬組成物が、式（Ｉ）：
Figure 2020175657
 ［式中、Ｘａ及びＹａは、単結合を表し、腫瘍抗原ペプチドＡは、以下のアミノ酸配列：
ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）及びＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）の中から選ばれるいずれかのアミノ酸配列からなるペプチドを表し、腫瘍抗原ペプチドＡのＮ末端アミノ酸のアミノ基が式（１）中のＹａと結合し、腫瘍抗原ペプチドＡのＣ末端アミノ酸のカルボニル基が式（１）中の水酸基と結合し、
Ｒ１は、水素原子又は腫瘍抗原ペプチドＢを表し、
腫瘍抗原ペプチドＢは、腫瘍抗原ペプチドＡとは配列が異なり且つ以下のアミノ酸配列：
ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）及びＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）の中から選ばれるいずれかのアミノ酸配列からなるペプチドを表し、腫瘍抗原ペプチドＢのシステイン残基のチオエーテル基が式（１）中のチオエーテル基と結合する。］
で表される化合物又はその薬学上許容される塩を含む、〔３５〕〜〔３８〕のいずれかに記載の方法。
〔４０〕
上記医薬組成物が、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔３５〕〜〔３９〕のいずれかに記載の方法。
〔４１〕
上記医薬組成物が、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔３５〕〜〔３９〕のいずれかに記載の方法。
〔４２〕
上記医薬組成物が、Ｃ−ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（Ｃ−Ｃ間はジスルフィドボンドを表す、配列番号：２１）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔３５〕〜〔３９〕のいずれかに記載の方法。
〔４３〕
上記医薬組成物が、Ｃ−ＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（Ｃ−Ｃ間はジスルフィドボンドを表す、配列番号：１０）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔３５〕〜〔３９〕のいずれかに記載の方法。
〔４４〕
上記医薬組成物が、ＣＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１５）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔３５〕〜〔４３〕のいずれかに記載の方法。
〔４５〕
上記医薬組成物が、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＣ（配列番号：１６）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔３５〕〜〔４３〕のいずれかに記載の方法。
〔４６〕
上記医薬組成物が、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔３５〕〜〔４３〕のいずれかに記載の方法。
〔４７〕
式（１）で表される化合物が、式（２）：
Figure 2020175657
 （式中、ＣとＣの間の結合はジスルフィド結合を表す。）
で表される化合物又はその薬学上許容される塩である、〔３９〕に記載の方法。
〔４８〕
式（１）で表される化合物が、式（３）：
Figure 2020175657
 （式中、ＣとＣの間の結合はジスルフィド結合を表す。）で表される化合物又はその薬学上許容される塩である、〔３９〕に記載の方法。
〔４９〕
上記医薬組成物が、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫ（配列番号：１１）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨ（配列番号：１２）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧ（配列番号：１３）、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）、ＣＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１５）及びＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＣ（配列番号：１６）、からなる群から選択されるアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩をさらに含む、〔３５〕〜〔４８〕のいずれかに記載の方法。
〔５０〕
式（１）で表される化合物が、式（２）：
Figure 2020175657
 （式中、ＣとＣの間の結合はジスルフィド結合を表す。）
で表される化合物又はその薬学上許容される塩であり、
上記医薬組成物がさらにＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）又はその薬学上許容される塩を含む、〔３９〕に記載の方法。
〔５１〕
式（１）で表される化合物が、式（３）：
Figure 2020175657
 （式中、ＣとＣの間の結合はジスルフィド結合を表す。）で表される化合物又はその薬学上許容される塩であり、
上記医薬組成物がさらにＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）又はその薬学上許容される塩を含む、〔３９〕に記載の方法。
〔５２〕
上記医薬組成物が、薬学上許容される担体を含む、〔３５〕〜〔５０〕のいずれかに記載の方法。
〔５３〕
上記対象から採取された試料を用いて、ＴＰ５３遺伝子及び／又はＢＣＯＲ遺伝子における変異の有無を決定する工程、並びに
ＴＰ５３野生型及び／又はＢＣＯＲ野生型の場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程をさらに含む、〔３５〕〜〔５２〕のいずれかに記載の方法。
〔５４〕
ＴＰ５３野生型の場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する、〔５３〕に記載の方法。
〔５５〕
ＴＰ５３野生型及びＢＣＯＲ野生型の場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する、〔５３〕又は〔５４〕に記載の方法。
〔５６〕
〔３５〕〜〔５２〕のいずれかに記載された医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与した上記対象から採取した試料を用いて、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を検出する工程、及び
投与前の上記対象から採取した試料と比較して、上記ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が増加していた場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程をさらに含む、〔３５〕〜〔５５〕のいずれかに記載の方法。
〔５７〕
ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を検出する工程が、ＷＴ１ペプチドとＨＬＡ分子との複合体を上記試料と反応させ、上記試料に含まれる上記複合体を認識するＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の存在又は細胞数を調べることにより実施される、〔５６〕に記載の方法。
〔５８〕
上記ＷＴ１ペプチドとＨＬＡ分子との複合体がテトラマーの形態である、〔５７〕に記載の方法。
〔５９〕
上記ＨＬＡ分子が、上記対象のＨＬＡに適合したものである、〔５７〕又は〔５８〕に記載の方法。
〔６０〕
ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を検出する工程が、フローサイトメトリー法による解析を含む、〔５６〕〜〔５９〕のいずれかに記載の方法。
〔６１〕
〔３５〕〜〔５２〕のいずれかに記載された医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を複数回投与した対象において、遅延型過敏反応が検出された場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程をさらに含む、〔３５〕〜〔６０〕のいずれかに記載の方法。
〔６２〕
対象における〔３５〕〜〔５２〕のいずれかに記載された医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与した箇所における反応と、上記対象における上記医薬組成物又は上記ペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与していない箇所における反応を比較し、投与した箇所における反応と投与していない箇所における反応との差が基準値以上である場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程をさらに含む、〔６１〕に記載の方法。
〔６３〕
上記対象の改訂ＩＰＳＳ（ＩＰＳＳ−Ｒ）に基づく核型がＶｅｒｙ ｐｏｏｒ以外である場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程をさらに含む、〔３５〕〜〔６２〕のいずれかに記載の方法。
〔６４〕
対象における〔３５〕〜〔５２〕のいずれかに記載された医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与した対象から採取された試料における骨髄芽球の割合を、上記医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与する前の対象から採取された試料における骨髄芽球の割合で除した値が、基準値未満又は以下であった場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程をさらに含む、〔３５〕〜〔６３〕のいずれかに記載の方法。
〔６５〕
上記試料が体液、粘膜、細胞、組織及び細胞又は組織の培養物並びにこれらの組合せからなる群から選択される、〔３５〕〜〔６４〕のいずれかに記載の方法。
〔６６〕
上記癌が、白血病、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、悪性リンパ腫、胃癌、大腸癌、肺癌、乳癌、胚細胞癌、肝癌、皮膚癌、膀胱癌、前立腺癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巣癌及び脳腫瘍からなる群から選択される、〔３５〕〜〔６５〕のいずれかに記載の方法。
〔６７〕
〔３５〕〜〔６６〕のいずれかに記載の方法により、がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果を期待できる対象を選択する工程、及び
選択された対象に対して〔３５〕〜〔５２〕のいずれかに記載の医薬組成物を投与する工程を含む、がんの治療方法。
〔６８〕
がんの治療方法に使用するための医薬組成物であって、
ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）、ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）、ＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫ（配列番号：１１）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨ（配列番号：１２）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧ（配列番号：１３）、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）、ＣＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１５）及びＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＣ（配列番号：１６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含み、
上記治療方法は、〔３５〕〜〔６６〕のいずれかに記載の方法により、がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果を期待できる対象を選択する工程、及び
選択された対象に対して上記医薬組成物を投与する工程を含む、医薬組成物。
〔６９〕
がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果を期待できる対象であるか否かの指標を提供するためのマーカーとしての、ＴＰ５３遺伝子及び／又はＢＣＯＲ遺伝子の使用であって、
上記医薬組成物は、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）、ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）、ＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫ（配列番号：１１）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨ（配列番号：１２）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧ（配列番号：１３）、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）、ＣＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１５）及びＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＣ（配列番号：１６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、使用。
〔７０〕
遺伝子における変異の有無に基づき、がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果を期待できる対象であるか否かの指標を提供する、〔６９〕に記載の使用。
〔７１〕
ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量に基づき、がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果を期待できる対象であるか否かの指標を提供するためのマーカーとしての、ＷＴ１遺伝子の使用であって、
上記医薬組成物は、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）、ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）、ＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫ（配列番号：１１）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨ（配列番号：１２）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧ（配列番号：１３）、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）、ＣＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１５）及びＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＣ（配列番号：１６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、使用。
〔７２〕
ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量が基準値未満又は以下である場合に、がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する、〔７１〕に記載の使用。
〔７３〕
がんを治療又は予防するための医薬組成物の候補物質の効果を評価する方法であって、
上記医薬組成物又は上記医薬組成物に含まれるペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与した対象から採取した試料を用いて、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を検出する工程、及び
投与前の上記対象から採取した試料と比較して、上記ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が増加していた場合に、上記候補物質はがんの治療及び予防に対して効果が期待できるとの指標を提供する工程を含み、
上記医薬組成物は、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）、ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）、ＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫ（配列番号：１１）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨ（配列番号：１２）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧ（配列番号：１３）、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）、ＣＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１５）及びＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＣ（配列番号：１６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、方法。
〔７４〕
がんを治療又は予防するための医薬組成物の候補物質の効果を評価する方法であって、
上記医薬組成物又は上記医薬組成物に含まれるペプチド若しくはその薬学上許容される塩を複数回投与した対象において、遅延型過敏反応が検出された場合に、上記候補物質はがんの治療及び予防に対して効果が期待できるとの指標を提供する工程を含み、
上記医薬組成物は、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）、ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）、ＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫ（配列番号：１１）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨ（配列番号：１２）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧ（配列番号：１３）、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）、ＣＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１５）及びＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＣ（配列番号：１６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、方法。
〔７５〕
がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果を期待できる対象を選択する方法であって、
上記対象の改訂ＩＰＳＳ（ＩＰＳＳ−Ｒ）に基づく核型がＶｅｒｙ ｐｏｏｒ以外である場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程を含み、
上記医薬組成物は、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）、ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）、ＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫ（配列番号：１１）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨ（配列番号：１２）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧ（配列番号：１３）、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）、ＣＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１５）及びＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＣ（配列番号：１６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、方法。
〔７６〕
上記医薬組成物が、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）及びＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔７５〕に記載の方法。
〔７７〕
上記医薬組成物が、ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）及びＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔７５〕又は〔７６〕に記載の方法。
〔７８〕
上記医薬組成物が、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）、及びＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド、並びに
ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）及びＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔７５〕〜〔７７〕のいずれかに記載の方法。
〔７９〕
上記医薬組成物が、式（Ｉ）：
Figure 2020175657
 ［式中、Ｘａ及びＹａは、単結合を表し、腫瘍抗原ペプチドＡは、以下のアミノ酸配列：
ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）及びＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）の中から選ばれるいずれかのアミノ酸配列からなるペプチドを表し、腫瘍抗原ペプチドＡのＮ末端アミノ酸のアミノ基が式（１）中のＹａと結合し、腫瘍抗原ペプチドＡのＣ末端アミノ酸のカルボニル基が式（１）中の水酸基と結合し、
Ｒ１は、水素原子又は腫瘍抗原ペプチドＢを表し、
腫瘍抗原ペプチドＢは、腫瘍抗原ペプチドＡとは配列が異なり且つ以下のアミノ酸配列：
ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）及びＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）の中から選ばれるいずれかのアミノ酸配列からなるペプチドを表し、腫瘍抗原ペプチドＢのシステイン残基のチオエーテル基が式（１）中のチオエーテル基と結合する。］
で表される化合物又はその薬学上許容される塩を含む、〔７５〕〜〔７８〕のいずれかに記載の方法。
〔８０〕
上記医薬組成物が、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔７５〕〜〔７９〕のいずれかに記載の方法。
〔８１〕
上記医薬組成物が、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔７５〕〜〔７９〕のいずれかに記載の方法。
〔８２〕
上記医薬組成物が、Ｃ−ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（Ｃ−Ｃ間はジスルフィドボンドを表す、配列番号：２１）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔７５〕〜〔７９〕のいずれかに記載の方法。
〔８３〕
上記医薬組成物が、Ｃ−ＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（Ｃ−Ｃ間はジスルフィドボンドを表す、配列番号：１０）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔７５〕〜〔７９〕のいずれかに記載の方法。
〔８４〕
上記医薬組成物が、ＣＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１５）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔７５〕〜〔８３〕のいずれかに記載の方法。
〔８５〕
上記医薬組成物が、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＣ（配列番号：１６）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔７５〕〜〔８３〕のいずれかに記載の方法。
〔８６〕
上記医薬組成物が、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔７５〕〜〔８３〕のいずれかに記載の方法。
〔８７〕
式（１）で表される化合物が、式（２）：
Figure 2020175657
 （式中、ＣとＣの間の結合はジスルフィド結合を表す。）
で表される化合物である、〔７９〕に記載の化合物又はその薬学上許容される塩である、５に記載の方法。
〔８８〕
式（１）で表される化合物が、式（３）：
Figure 2020175657
 （式中、ＣとＣの間の結合はジスルフィド結合を表す。）で表される化合物である、項１に記載の化合物又はその薬学上許容される塩である、〔７９〕に記載の方法。
〔８９〕
上記医薬組成物が、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫ（配列番号：１１）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨ（配列番号：１２）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧ（配列番号：１３）、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）、ＣＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１５）及びＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＣ（配列番号：１６）、からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩をさらに含む、〔７５〕〜〔８８〕のいずれかに記載の方法。
〔９０〕
式（１）で表される化合物が、式（２）：
Figure 2020175657
 （式中、ＣとＣの間の結合はジスルフィド結合を表す。）
で表される化合物又はその薬学上許容される塩であり、
上記医薬組成物がさらにＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）又はその薬学上許容される塩を含む、〔７９〕に記載の方法。
〔９１〕
式（１）で表される化合物が、式（３）：
Figure 2020175657
 （式中、ＣとＣの間の結合はジスルフィド結合を表す。）で表される化合物又はその薬学上許容される塩であり、
上記医薬組成物がさらにＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）又はその薬学上許容される塩を含む、〔７９〕に記載の方法。
〔９２〕
上記医薬組成物が、薬学上許容される担体を含む、〔７５〕〜〔９１〕のいずれかに記載の方法。
〔９３〕
上記対象から採取された試料を用いて、ＴＰ５３遺伝子及び／又はＢＣＯＲ遺伝子における変異の有無を決定する工程、並びに
ＴＰ５３野生型及び／又はＢＣＯＲ野生型の場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程をさらに含む、〔７５〕〜〔９２〕のいずれかに記載の方法。
〔９４〕
ＴＰ５３野生型の場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する、〔９３〕に記載の方法。
〔９５〕
ＴＰ５３野生型及びＢＣＯＲ野生型の場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する、〔９２〕又は〔９３〕に記載の方法。
〔９６〕
上記対象から採取した試料を用いて、ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量を決定する工程、及び上記ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量が基準値未満又は以下であった場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程をさらに含む、〔７５〕〜〔９５〕のいずれかに記載の方法。
〔９７〕
〔７５〕〜〔９２〕のいずれかに記載された医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与した上記対象から採取した試料を用いて、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を検出する工程、及び
投与前の上記対象から採取した試料と比較して、上記ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が増加していた場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程をさらに含む、〔７５〕〜〔９６〕のいずれかに記載の方法。
〔９８〕
ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を検出する工程が、ＷＴ１ペプチドとＨＬＡ分子との複合体を上記試料と反応させ、上記試料に含まれる上記複合体を認識するＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の存在又は細胞数を調べることにより実施される、〔９７〕に記載の方法。
〔９９〕
上記ＷＴ１ペプチドとＨＬＡ分子との複合体がテトラマーの形態である、〔９８〕に記載の方法。
〔１００〕
上記ＨＬＡ分子が、上記対象のＨＬＡに適合したものである、〔９８〕又は〔９９〕に記載の方法。
〔１０１〕
ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を検出する工程が、フローサイトメトリー法による解析を含む、〔９７〕〜〔１００〕のいずれかに記載の方法。
〔１０２〕
〔７５〕〜〔９２〕のいずれかに記載された医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を複数回投与した対象において、遅延型過敏反応が検出された場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程をさらに含む、〔７５〕〜〔１０１〕のいずれかに記載の方法。
〔１０３〕
対象における〔７５〕〜〔９２〕のいずれかに記載された医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与した箇所における反応と、上記対象における上記医薬組成物又は上記ペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与していない箇所における反応を比較し、投与した箇所における反応と投与していない箇所における反応との差が基準値以上である場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程をさらに含む、〔１０２〕に記載の方法。
〔１０４〕
対象における〔７５〕〜〔９２〕のいずれかに記載された医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与した対象から採取された試料における骨髄芽球の割合を、上記医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与する前の対象から採取された試料における骨髄芽球の割合で除した値が、基準値未満又は以下であった場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程をさらに含む、〔７５〕〜〔１０３〕のいずれかに記載の方法。
〔１０５〕
上記試料が体液、粘膜、細胞、組織及び細胞又は組織の培養物並びにこれらの組合せからなる群から選択される、〔７５〕〜〔１０４〕のいずれかに記載の方法。
〔１０６〕
上記癌が、白血病、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、悪性リンパ腫、胃癌、大腸癌、肺癌、乳癌、胚細胞癌、肝癌、皮膚癌、膀胱癌、前立腺癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巣癌及び脳腫瘍からなる群から選択される、〔７５〕〜〔１０５〕のいずれかに記載の方法。
〔１０７〕
〔７５〕〜〔１０６〕のいずれかに記載の方法により、がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果を期待できる対象を選択する工程、及び
選択された対象に対して〔７５〕〜〔９２〕のいずれかに記載の医薬組成物を投与する工程を含む、がんの治療方法。
〔１０８〕
がんの治療方法に使用するための医薬組成物であって、
ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）、ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）、ＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫ（配列番号：１１）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨ（配列番号：１２）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧ（配列番号：１３）、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）、ＣＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１５）及びＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＣ（配列番号：１６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含み、
上記治療方法は、〔７５〕〜〔１０７〕のいずれかに記載の方法により、がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果を期待できる対象を選択する工程、及び
選択された対象に対して上記医薬組成物を投与する工程を含む、医薬組成物。
〔１０９〕
がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果を期待できる対象を選択する方法であって、
上記医薬組成物は、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）、ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）、ＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫ（配列番号：１１）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨ（配列番号：１２）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧ（配列番号：１３）、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）、ＣＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１５）及びＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＣ（配列番号：１６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含み、
上記医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与した対象から採取された試料における骨髄芽球の割合を、上記医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与する前の対象から採取された試料における骨髄芽球の割合で除した値が、基準値未満又は以下であった場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程を含む、方法。
〔１１０〕
上記医薬組成物が、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）及びＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔１０９〕に記載の方法。
〔１１１〕
上記医薬組成物が、ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）及びＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔１０９〕又は〔１１０〕に記載の方法。
〔１１２〕
上記医薬組成物が、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）及びＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド、並びに
ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）及びＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔１０９〕〜〔１１１〕のいずれかに記載の方法。
〔１１３〕
上記医薬組成物が、式（Ｉ）：
Figure 2020175657
 ［式中、Ｘａ及びＹａは、単結合を表し、腫瘍抗原ペプチドＡは、以下のアミノ酸配列：
ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）及びＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）の中から選ばれるいずれかのアミノ酸配列からなるペプチドを表し、腫瘍抗原ペプチドＡのＮ末端アミノ酸のアミノ基が式（１）中のＹａと結合し、腫瘍抗原ペプチドＡのＣ末端アミノ酸のカルボニル基が式（１）中の水酸基と結合し、
Ｒ１は、水素原子又は腫瘍抗原ペプチドＢを表し、
腫瘍抗原ペプチドＢは、腫瘍抗原ペプチドＡとは配列が異なり且つ以下のアミノ酸配列：
ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）及びＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）の中から選ばれるいずれかのアミノ酸配列からなるペプチドを表し、腫瘍抗原ペプチドＢのシステイン残基のチオエーテル基が式（１）中のチオエーテル基と結合する。］
で表される化合物又はその薬学上許容される塩を含む、〔１０９〕〜〔１１２〕のいずれかに記載の方法。
〔１１４〕
上記医薬組成物が、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔１０９〕〜〔１１３〕のいずれかに記載の方法。
〔１１５〕
上記医薬組成物が、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔１０９〕〜〔１１３〕のいずれかに記載の方法。
〔１１６〕
上記医薬組成物が、Ｃ−ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（Ｃ−Ｃ間はジスルフィドボンドを表す、配列番号：２１）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔１０９〕〜〔１１３〕のいずれかに記載の方法。
〔１１７〕
上記医薬組成物が、Ｃ−ＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（Ｃ−Ｃ間はジスルフィドボンドを表す、配列番号：１０）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔１０９〕〜〔１１３〕のいずれかに記載の方法。
〔１１８〕
上記医薬組成物が、ＣＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１５）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔１０９〕〜〔１１７〕のいずれかに記載の方法。
〔１１９〕
上記医薬組成物が、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＣ（配列番号：１６）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔１０９〕〜〔１１７〕のいずれかに記載の方法。
〔１２０〕
上記医薬組成物が、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、〔１０９〕〜〔１１７〕のいずれかに記載の方法。
〔１２１〕
式（１）で表される化合物が、式（２）：
Figure 2020175657
 （式中、ＣとＣの間の結合はジスルフィド結合を表す。）
で表される化合物である、〔１１３〕に記載の化合物又はその薬学上許容される塩である、５に記載の方法。
〔１２２〕
式（１）で表される化合物が、式（３）：
Figure 2020175657
 （式中、ＣとＣの間の結合はジスルフィド結合を表す。）で表される化合物である、項１に記載の化合物又はその薬学上許容される塩である、〔１１３〕に記載の方法。
〔１２３〕
上記医薬組成物が、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫ（配列番号：１１）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨ（配列番号：１２）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧ（配列番号：１３）、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）、ＣＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１５）及びＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＣ（配列番号：１６）、からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩をさらに含む、〔１０９〕〜〔１２２〕のいずれかに記載の方法。
〔１２４〕
式（１）で表される化合物が、式（２）：
Figure 2020175657
 （式中、ＣとＣの間の結合はジスルフィド結合を表す。）
で表される化合物又はその薬学上許容される塩であり、
上記医薬組成物がさらにＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）又はその薬学上許容される塩を含む、〔１１３〕に記載の方法。
〔１２５〕
式（１）で表される化合物が、式（３）：
Figure 2020175657
 （式中、ＣとＣの間の結合はジスルフィド結合を表す。）で表される化合物又はその薬学上許容される塩であり、
上記医薬組成物がさらにＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）又はその薬学上許容される塩を含む、〔１１３〕に記載の方法。
〔１２６〕
上記医薬組成物が、薬学上許容される担体を含む、〔１０９〕〜〔１２５〕のいずれかに記載の方法。
〔１２７〕
上記対象から採取された試料を用いて、ＴＰ５３遺伝子及び／又はＢＣＯＲ遺伝子における変異の有無を決定する工程、並びに
ＴＰ５３野生型及び／又はＢＣＯＲ野生型の場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程をさらに含む、〔１０９〕〜〔１２６〕のいずれかに記載の方法。
〔１２８〕
ＴＰ５３野生型の場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する、〔１２７〕に記載の方法。
〔１２９〕
ＴＰ５３野生型及びＢＣＯＲ野生型の場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する、〔１２７〕又は〔１２８〕に記載の方法。
〔１３０〕
上記対象から採取した試料を用いて、ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量を決定する工程、及び上記ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量が基準値未満又は以下であった場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程をさらに含む、〔１０９〕〜〔１２９〕のいずれかに記載の方法。
〔１３１〕
〔１０９〕〜〔１２６〕のいずれかに記載された医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与した上記対象から採取した試料を用いて、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を検出する工程、及び
投与前の上記対象から採取した試料と比較して、上記ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が増加していた場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程をさらに含む、〔１０９〕〜〔１３０〕のいずれかに記載の方法。
〔１３２〕
ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を検出する工程が、ＷＴ１ペプチドとＨＬＡ分子との複合体を上記試料と反応させ、上記試料に含まれる上記複合体を認識するＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の存在又は細胞数を調べることにより実施される、〔１３１〕に記載の方法。
〔１３３〕
上記ＷＴ１ペプチドとＨＬＡ分子との複合体がテトラマーの形態である、〔１３２〕に記載の方法。
〔１３４〕
上記ＨＬＡ分子が、上記対象のＨＬＡに適合したものである、〔１３２〕又は〔１３３〕に記載の方法。
〔１３５〕
ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を検出する工程が、フローサイトメトリー法による解析を含む、〔１３１〕〜〔１３４〕のいずれかに記載の方法。
〔１３６〕
〔１０９〕〜〔１２６〕のいずれかに記載された医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を複数回投与した対象において、遅延型過敏反応が検出された場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程をさらに含む、〔１０９〕〜〔１３５〕のいずれかに記載の方法。
〔１３７〕
対象における〔１０９〕〜〔１２６〕のいずれかに記載された医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与した箇所における反応と、上記対象における上記医薬組成物又は上記ペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与していない箇所における反応を比較し、投与した箇所における反応と投与していない箇所における反応との差が基準値以上である場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程をさらに含む、〔１３６〕に記載の方法。
〔１３８〕
上記対象の改訂ＩＰＳＳ（ＩＰＳＳ−Ｒ）に基づく核型がＶｅｒｙ ｐｏｏｒ以外である場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程をさらに含む、〔１０９〕〜〔１３７〕のいずれかに記載の方法。
〔１３９〕
上記試料が体液、粘膜、細胞、組織及び細胞又は組織の培養物並びにこれらの組合せからなる群から選択される、〔１０９〕〜〔１３８〕のいずれかに記載の方法。
〔１４０〕
上記癌が、白血病、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、悪性リンパ腫、胃癌、大腸癌、肺癌、乳癌、胚細胞癌、肝癌、皮膚癌、膀胱癌、前立腺癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巣癌及び脳腫瘍からなる群から選択される、〔１０９〕〜〔１３９〕のいずれかに記載の方法。
〔１４１〕
〔１０９〕〜〔１４０〕のいずれかに記載の方法により、がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果を期待できる対象を選択する工程、及び
選択された対象に対して〔１０９〕〜〔１２６〕のいずれかに記載の医薬組成物を投与する工程を含む、がんの治療方法。
〔１４２〕
がんの治療方法に使用するための医薬組成物であって、
ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）、ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）、ＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫ（配列番号：１１）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨ（配列番号：１２）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧ（配列番号：１３）、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）、ＣＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１５）及びＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＣ（配列番号：１６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含み、
上記治療方法は、〔１０９〕〜〔１４０〕のいずれかに記載の方法により、がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果を期待できる対象を選択する工程、及び
選択された対象に対して上記医薬組成物を投与する工程を含む、医薬組成物。
〔１４３〕
対象から採取された試料を用いて、ＴＰ５３遺伝子及び／又はＢＣＯＲ遺伝子における変異の有無を決定する工程、並びに
ＴＰ５３野生型及び／又はＢＣＯＲ野生型である対象に対してがんを治療又は予防するための有効量の医薬組成物を投与する工程を含み、
上記医薬組成物は、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）、ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）、ＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫ（配列番号：１１）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨ（配列番号：１２）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧ（配列番号：１３）、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）、ＣＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１５）及びＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＣ（配列番号：１６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、がんの治療方法。
〔１４４〕
対象から採取された試料を用いて、ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量を決定する工程、及び
上記ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量が基準値未満又は以下である対象に対してがんを治療又は予防するための有効量の医薬組成物を投与する工程を含み、
上記医薬組成物は、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）、ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）、ＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫ（配列番号：１１）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨ（配列番号：１２）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧ（配列番号：１３）、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）、ＣＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１５）及びＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＣ（配列番号：１６）、からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、がんの治療方法。
〔１４５〕
対象の改訂ＩＰＳＳ（ＩＰＳＳ−Ｒ）に基づく核型がＶｅｒｙ ｐｏｏｒ以外である場合に、上記対象に対してがんを治療又は予防するための有効量の医薬組成物を投与する工程を含み、
上記医薬組成物は、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）、ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）、ＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫ（配列番号：１１）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨ（配列番号：１２）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧ（配列番号：１３）、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）、ＣＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１５）及びＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＣ（配列番号：１６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、がんの治療方法。
〔１４６〕
ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）、ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）、ＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫ（配列番号：１１）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨ（配列番号：１２）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧ（配列番号：１３）、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）、ＣＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１５）及びＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＣ（配列番号：１６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド若しくはその薬学上許容される塩を含む医薬組成物又は上記ペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与した対象から採取された試料における骨髄芽球の割合を、上記医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与する前の対象から採取された試料における骨髄芽球の割合で除した値が、基準値未満又は以下であった場合に、上記対象に対してがんを治療又は予防するための有効量の医薬組成物を投与する工程を含む、がんの治療方法。
本発明によれば、がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果を期待できる対象を選択する方法が提供される。ここで、医薬組成物は、ＷＴ１キラーペプチド及び／又はＷＴ１ヘルパーペプチド、又はその薬学上許容される塩を含む。各医薬組成物の効果を期待できる対象を選抜することで、その医薬組成物を用いて効果的ながんの治療又は予防を行うことができる。
ＷＴ１ペプチドカクテルワクチンの試験結果と、リゴサチブのＯＮＴＩＭＥ試験における対照（ＢＳＣ）との比較を行った結果を示す。 ＴＰ５３野生型及びＢＣＯＲ野生型、並びにＴＰ５３変異型又はＢＣＯＲ変異型の生存曲線を示す。 ＴＰ５３野生型及びＢＣＯＲ野生型、並びにＴＰ５３変異型又はＢＣＯＲ変異型について、ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応の陽性又は陰性による生存曲線を比較した結果を示す。 実施例５におけるＷＴ１ ｍＲＮＡの発現量により生存曲線を比較した結果（結果（１））を示す。 ＷＴ１ ｍＲＮＡの発現量について、ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応の陽性又は陰性による生存曲線を比較した結果（結果（１））を示す。 実施例５におけるＷＴ１ ｍＲＮＡの発現量により生存曲線を比較した結果（結果（２））を示す。 ＷＴ１ ｍＲＮＡの発現量について、ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応の陽性又は陰性による生存曲線を比較した結果（結果（２））を示す。 ＨＬＡテトラマーアッセイによる解析結果とＷＴ１キラーペプチドコンジュゲートを用いたＤＴＨ試験の判定を双方向から解析した結果を示す。 ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応の陽性又は陰性、及び骨髄芽球の安定化について、生存曲線を比較した結果を示す。 ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応の陽性又は陰性による急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）移行期間を比較した結果を示す。 ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応の陽性又は陰性による生存曲線を比較した結果を示す。 ＩＰＳＳ−Ｒの核型についてＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応の陽性又は陰性による生存曲線を比較した結果を示す。 各性差の生存期間中央値を、ヒストリカルデータ及びリゴサチブ試験のＢＳＣの生存期間中央値と比較した結果を示す。 実施例１１におけるＷＴ１ ｍＲＮＡの発現量により生存曲線を比較した結果を示す。 ＷＴ１ ｍＲＮＡの発現量について、ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応の陽性又は陰性による生存曲線を比較した結果を示す。 末梢血中のＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量と骨髄液中のＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量の関係を示す。
以下、本発明の実施形態について詳細に説明する。
本明細書において「アミノ酸残基」とは、ペプチド又はタンパク質分子上で、ペプチド又はタンパク質を構成しているアミノ酸の一単位に当たる部分を意味する。「アミノ酸残基」としては、天然若しくは非天然のα−アミノ酸残基、β−アミノ酸残基、γ−アミノ酸残基又はδ−アミノ酸残基が挙げられる。具体的には、天然のα−アミノ酸残基、オルニチン残基、ホモセリン残基、ホモシステイン残基、β−アラニン、γ−アミノブタン酸又はδ−アミノペンタン酸などが挙げられる。「アミノ酸残基」に、光学活性体があり得る場合、Ｌ体、Ｄ体の何れであってもよいが、Ｌ体が好ましい。
本明細書において「アミノ酸残基」を略号で表示する場合、次の略号で記述する。
Ａｌａ又はＡ：アラニン残基
Ａｒｇ又はＲ：アルギニン残基
Ａｓｎ又はＮ：アスパラギン残基
Ａｓｐ又はＤ：アスパラギン酸残基
Ｃｙｓ又はＣ：システイン残基
Ｇｌｎ又はＱ：グルタミン残基
Ｇｌｕ又はＥ：グルタミン酸残基
Ｇｌｙ又はＧ：グリシン残基
Ｈｉｓ又はＨ：ヒスチジン残基
Ｉｌｅ又はＩ：イソロイシン残基
Ｌｅｕ又はＬ：ロイシン残基
Ｌｙｓ又はＫ：リジン残基
Ｍｅｔ又はＭ：メチオニン残基
Ｐｈｅ又はＦ：フェニルアラニン残基
Ｐｒｏ又はＰ：プロリン残基
Ｓｅｒ又はＳ：セリン残基
Ｔｈｒ又はＴ：スレオニン残基
Ｔｒｐ又はＷ：トリプトファン残基
Ｔｙｒ又はＹ：チロシン残基
Ｖａｌ又はＶ：バリン残基
Ａｂｕ：２−アミノ酪酸残基（α−アミノ酪酸残基とも言う）
Ｏｒｎ：オルニチン残基
Ｃｉｔ：シトルリン残基
本明細書において「ペプチド」のアミノ酸配列は、常法に従って、Ｎ末端アミノ酸のアミノ酸残基が左側に位置し、Ｃ末端アミノ酸のアミノ酸残基が右側に位置するように記述する。また「ペプチド」において、特に断りの無い限り、Ｎ末端アミノ酸のアミノ酸残基のアミノ基は水素原子と結合し、Ｃ末端アミノ酸のアミノ酸残基のカルボニル基は水酸基と結合している。ペプチドの二価基とは、Ｎ末端アミノ酸のアミノ酸残基のアミノ基及びＣ末端アミノ酸のアミノ酸残基のカルボニル基を介して結合する基を意味する。
本明細書における化合物において、たとえば式（２）〜及び（３）で表される化合物において、その部分構造にあたるペプチドについても、特に断りの無い限り、Ｎ末端アミノ酸のアミノ酸残基のアミノ基は水素原子と結合し、Ｃ末端アミノ酸のアミノ酸残基のカルボニル基は水酸基と結合している。
本明細書における「Ｒ１」は、水素原子又は腫瘍抗原ペプチドＢを表し、好ましくは、腫瘍抗原ペプチドＢが挙げられる。Ｒ１が水素原子である式（１）の化合物については、その配列はＷＴ１タンパクの部分配列と完全に同一ではない。すなわち、Ｒ１が水素原子である式（１）の化合物は、腫瘍抗原ペプチドＡのＮ末端側にシステイン残基が付加されたものとなるため、配列番号：１に記載のヒトのＷＴ１のアミノ酸配列において連続する８〜３５残基のアミノ酸からなる部分ペプチドではない。
Ｒ１が水素原子である式（１）の化合物として、例えば、以下のアミノ酸配列が挙げられる。
ＣＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：４０）、
ＣＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４１）、
ＣＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４２）、
ＣＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：４３）、
ＣＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：４４）及び
ＣＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：４５）。
本明細書における「Ｘａ」及び「Ｙａ」は、独立して、単結合又は１〜４残基のアミノ酸からなるペプチドの二価基を表す。Ｘａのアミノ酸残基数とＹａのアミノ酸残基数の和は０〜４の整数である。例えば、当該和が０の整数であるとは、Ｘａ及びＹａが単結合であることを意味する。また、当該和が４の整数である場合としては、例えばＸａ及びＹａが独立して２残基のアミノ酸からなるペプチドの二価基である場合、Ｘａが３残基のアミノ酸からなるペプチドの二価基であり且つＹａが１残基のアミノ酸からなるペプチドの二価基である場合、Ｘａが４残基のアミノ酸からなるペプチドの二価基であり且つＹａが単結合である場合などが挙げられる。
当該和の整数として、好ましくは０〜２が挙げられ、より好ましくは０〜１が挙げられ、最も好ましくは０が挙げられる。すなわち、Ｘａ及びＹａとしては、共に単結合である場合が最も好ましい。
当該和の整数が２である場合としては、Ｘａが２残基のアミノ酸からなるペプチドの二価基であり且つＹａが単結合である場合、Ｘａ及びＹａが独立して１残基のアミノ酸からなるペプチドの二価基である場合、又はＸａが単結合であり且つＹａが２残基のアミノ酸からなるペプチドの二価基である場合が挙げられる。
当該和の整数が１である場合としては、Ｘａが１残基のアミノ酸からなるペプチドの二価基であり且つＹａが単結合である場合、又はＸａが単結合であり且つＹａが１残基のアミノ酸からなるペプチドの二価基である場合が挙げられる。このうち好ましくは、Ｘａが単結合であり且つＹａがアラニン残基、ロイシン残基又はメチオニン残基である場合が挙げられる。
本実施形態において、医薬組成物は、特定のＷＴ１キラーペプチド及び／若しくはＷＴ１ヘルパーペプチド又はその薬学上許容される塩、すなわち、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）、ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）、ＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫ（配列番号：１１）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨ（配列番号：１２）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧ（配列番号：１３）、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）、ＣＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１５）及びＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＣ（配列番号：１６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含む。本実施形態における医薬組成物が上記以外のペプチド又はその薬学上許容される塩を含むことを妨げるものではなく、医薬組成物は、上記以外のペプチド、例えば、他のＷＴ１キラーペプチド及び／又はＷＴ１ヘルパーペプチドをさらに含んでいてもよい。
本明細書における「ＷＴ１ペプチド」とは、配列番号：１に記載のヒトのＷＴ１のアミノ酸配列において存在する連続するアミノ酸からなる部分を含むペプチドである。
ＷＴ１キラーペプチドとは、ＭＨＣクラスＩ拘束性ＷＴ１ペプチドを意味する。
本明細書における「ＭＨＣクラスＩ拘束性」とは、主要組織適合抗原（Ｍａｊｏｒ Ｈｉｓｔｏｃｏｍｐａｔｉｂｉｌｉｔｙ Ｃｏｍｐｌｅｘ、ＭＨＣ）のクラスＩであるＭＨＣクラスＩ分子と結合してＣＴＬを誘導する特性を意味する。「ＭＨＣクラスＩ拘束性ＷＴ１ペプチド」とは、インビトロ及び／又はインビボで、ＭＨＣクラスＩ抗原に結合し、複合体として提示されるペプチドであり、且つ該複合体が前駆体Ｔ細胞に認識された結果ＣＴＬを誘導するペプチドを意味する。
ＭＨＣは、ヒトではヒト白血球型抗原（ＨＬＡ）と呼ばれる。ＭＨＣクラスＩ分子に相当するＨＬＡは、ＨＬＡ−Ａ、Ｂ、Ｃｗ、Ｆ及びＧなどのサブタイプに分類される。「ＭＨＣクラスＩ拘束性」として、好ましくは、ＨＬＡ−Ａ拘束性、ＨＬＡ−Ｂ拘束性又はＨＬＡ−Ｃｗ拘束性が挙げられる。
ＨＬＡの各サブタイプについて、多型（対立遺伝子）が知られている。ＨＬＡ−Ａの多型としては、ＨＬＡ−Ａ１、ＨＬＡ−Ａ２（Ａ０２０１、Ａ０２０６等）、ＨＬＡ−Ａ２４などの２７種以上が挙げられ、ＨＬＡ−Ｂの多型としては、ＨＬＡ−Ｂ７、ＨＬＡ−Ｂ４０、ＨＬＡ−Ｂ４４０３などの５９種以上が挙げられ、ＨＬＡ−Ｃｗの多型としては、ＨＬＡ−Ｃｗ０３０１、ＨＬＡ−Ｃｗ０４０１、ＨＬＡ−Ｃｗ０６０２などの１０種以上が挙げられる。これら多型の中、好ましくは、ＨＬＡ−Ａ２やＨＬＡ−Ａ２４が挙げられる。
ＭＨＣクラスＩ拘束性ＷＴ１ペプチド（ＷＴ１キラーペプチド）は、「ＭＨＣクラスＩ拘束性ＷＴ１エピトープ」とも呼ばれる。本明細書における「ＭＨＣクラスＩ拘束性ＷＴ１エピトープ」とは、ＭＨＣクラスＩ抗原と結合し複合体として提示されるペプチドそのものを意味する。すなわち、ＭＨＣクラスＩ拘束性ＷＴ１ペプチドが、インビトロ及び／又はインビボで、Ｇａｍｍａ−Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｉｎｄｕｃｉｂｌｅ Ｌｙｓｏｓｏｍａｌ Ｔｈｉｏｌ Ｒｅｄｕｃｔａｓｅ（ＧＩＬＴ，ＧＬＴ）等のプロテオソーム及び／若しくはプロテアーゼによる細胞内での結合体の分解（Ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ、ジスルフィド結合の還元的開裂）、並びに／又はＥｎｄｏｐｌａｓｍｉｃ ｒｅｔｉｃｕｌｕｍ ａｍｉｎｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ １（ＥＲＡＰ１、ＥＲ−ａｍｉｎｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ １）による最適な残基数への切断（トリミングとも言う。）によって、ＭＨＣクラスＩ拘束性ＷＴ１エピトープを生成する。当該生成においては、まずプロテオソーム及び／若しくはプロテアーゼによる分解の結果、ＭＨＣクラスＩ拘束性ＷＴ１エピトープのＣ末端アミノ酸が生じ、次にＥＲＡＰ１によるトリミング（切断）の結果、ＭＨＣクラスＩ拘束性ＷＴ１エピトープのＮ末端アミノ酸が生じるという生成過程が主に考えられる。ただし、当該生成においては、当該生成過程以外の過程も経由し得る。尚、現在、ＥＲＡＰ１は、ＥＲＡＡＰ（ＥＲ ａｍｉｎｏｐｅｐｔｉｄａｓｅ ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ ｗｉｔｈ ａｎｔｉｇｅｎ ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ）とも呼ばれ、かつては、Ａ−ＬＡＰ、ＰＩＬＳ−ＡＰ又はＡＲＴＳ−１とも呼ばれていた。
したがって、ＭＨＣクラスＩ拘束性ＷＴ１ペプチドとしては、ＭＨＣクラスＩ拘束性ＷＴ１エピトープのＣ末端アミノ酸のカルボニル基にアミノ酸が付加されて生成されるアミノ酸からなるペプチドが好ましい。
ＷＴ１キラーペプチドの長さは、ＷＴ１キラーペプチドとして機能する限り特に限定されないが、例えば、７〜３０残基、７〜１５残基、８〜１２残基、８〜１１残基、８残基、又は９残基のアミノ酸からなるもの又はこれらの結合体であってよい。ＷＴ１キラーペプチドは、７残基以上又は８残基以上のアミノ酸からなるもの又はこれらの結合体であってよく、３０残基以下、２５残基以下、２２残基以下、２０残基以下、１８残基以下、１５残基以下、１２残基以下、１１残基以下、１０残基以下又は９残基以下のアミノ酸からなるもの又はこれらの結合体であってよい。
ＷＴ１キラーペプチドとしては、例えば、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）、ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）及びＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）、に記載されたアミノ酸配列を含むペプチド又は配列番号１〜９の中から選ばれるいずれかのアミノ酸配列中にアミノ酸残基の改変を含有する改変アミノ酸配列を含み且つＣＴＬ誘導活性を有するペプチド等が挙げられる。本実施形態における医薬組成物は、例えば、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）、ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）及びＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含むものであってもよい。また、本実施形態における医薬組成物は、例えば、ＨＬＡのサブタイプＡ２タイプ（Ａ−０２０１、Ａ０２０６等）に対応するＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）、及びＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含むものであってよく、例えば、ＨＬＡのサブタイプＡ２４タイプ（Ａ−２４０２等）に対応するＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）及びＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含むものであってもよい。また、本実施形態における医薬組成物は、例えば、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含むものであってよく、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含むものであってよく、Ｃ−ＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（Ｃ−Ｃ間はジスルフィドボンドを表す、配列番号：１０）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含むものであってよく、Ｃ−ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（Ｃ−Ｃ間はジスルフィドボンドを表す、配列番号：２１）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含むものであってもよい。
本明細書において「アミノ酸配列を含むペプチド」は、当該アミノ酸配列からなるペプチド並びに当該アミノ酸配列のＮ末端アミノ酸及び／又はＣ末端アミノ酸に更なるアミノ酸が付加されたペプチドを包含する。「ＭＨＣクラスＩ拘束性ＷＴ１ペプチド」が付加される場合、Ｃ末端側に付加されたペプチドが好ましい。「ＭＨＣクラスＩ拘束性ＷＴ１エピトープ」が付加される場合、Ｃ末端側への付加が好ましい。
本発明における「アミノ酸配列中にアミノ酸残基の改変を含有する改変アミノ酸配列を含み且つＣＴＬ誘導活性を有するペプチド」は、「改変キラーペプチド」とも呼ばれる。当該改変キラーペプチドは、アミノ酸配列において、１〜３個のアミノ酸が、欠失、置換及び／又は付加されたアミノ酸配列からなり、ＭＨＣクラスＩに結合し、ＣＴＬを誘導するペプチドを意味する。置換されるアミノ酸の置換位置としては、９残基のアミノ酸からなるペプチドの場合、１位（Ｎ末端）、２位、３位及び９位が挙げられる。付加（挿入も包含される）されるアミノ酸の数は好ましくは１又は２であり、より好ましくは１である。好ましい付加位置としては、Ｃ末端が挙げられる。欠失されるアミノ酸の数は好ましくは１である。改変において、付加されるアミノ酸又は置換されるアミノ酸は、遺伝子によりコードされる２０種類のアミノ酸以外の非天然アミノ酸であってもよい。
ＨＬＡのサブタイプの多型ごとに、ＨＬＡ抗原に結合できるペプチドのアミノ酸配列の規則性（結合モチーフ）が存在することが知られている。例えば、ＨＬＡ−Ａ２４の結合モチーフとして、８〜１１残基のアミノ酸からなるペプチドにおいて、２位のアミノ酸が、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＴｒｐであり、Ｃ末端のアミノ酸が、Ｐｈｅ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｔｒｐ又はＭｅｔであることが知られている（J.Immunol.,152,p3913,1994,J.Immunol.,155,p4307,1994,Immunogenetics,41,p178,1995）。よって、例えば９残基のアミノ酸からなるペプチドの場合、２位がＴｙｒ、Ｐｈｅ、Ｍｅｔ又はＴｒｐにより、及び／又は９位がＰｈｅ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ、Ｔｒｐ又はＭｅｔにより、置換することが可能であり、当該置換がなされたペプチドが改変キラーペプチドとして好ましい。同様に、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１の結合モチーフとして、８〜１１残基のアミノ酸からなるペプチドにおいて、２位のアミノ酸が、Ｌｅｕ又はＭｅｔであり、Ｃ末端のアミノ酸が、Ｖａｌ又はＬｅｕであることが知られていることから、例えば９残基のアミノ酸からなるペプチドの場合、２位がＬｅｕ又はＭｅｔにより、及び／又は９位がＶａｌ又はＬｅｕにより、置換することが可能であり、当該置換がなされたペプチドが改変キラーペプチドとして好ましい。
改変キラーペプチドとしては例えば、次のようなペプチドが挙げられる。
ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）の改変キラーペプチドである
ＲＹＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２２）（国際公開０３／１０６６８２号参照）；
ＦＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２３）、
ＲＬＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２４）、
ＲＭＭＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２５）、
ＲＭＦＰＮＡＰＹＶ（配列番号：２６）若しくは
ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：７）（国際公開第２００９／０７２６１０号参照）；
ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）の改変キラーペプチドである
ＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）（国際公開第０２／７９２５３号参照）；
Xaa-Met-Thr-Trp-Asn-Gln-Met-Asn-Leu（配列番号：２７）
（本配列中XaaはSer又はAlaを表す）若しくは
Xaa-Tyr-Thr-Trp-Asn-Gln-Met-Asn-Leu（配列番号：２８）
（本配列中XaaはSer、Ala、Abu、Arg、Lys、Orn、Cit、Leu、Phe又はAsnを表す）（国際公開２００４／０２６８９７号参照）；
ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）の改変キラーペプチドである
ＡＹＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：２９）（国際公開第２００３／１０６６８２号参照）；
ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）の改変キラーペプチドである
ＦＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：３０）、
ＳＭＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：３１）若しくは
ＳＬＭＥＱＱＹＳＶ（配列番号：３２）（国際公開第２００９／０７２６１０号参照）；又は
ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）の改変キラーペプチドである
ＲＹＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：３３）（国際公開第２００３／１０６６８２号参照）。
広くＨＬＡサブタイプをカバーする観点から、本実施形態における医薬組成物は、それぞれ異なるＨＬＡのサブタイプに対応する複数のペプチドを含むことが好ましい。例えば、ＨＬＡのサブタイプＡ２タイプに対応する上記ペプチド又はその薬学上許容される塩及びＨＬＡのサブタイプＡ２４タイプに対応する上記ペプチド又はその薬学上許容される塩の両方を含むことが好ましい。そのような場合には、例えば、医薬組成物は、式（Ｉ）：
Figure 2020175657
 ［式中、Ｘａ及びＹａは、単結合を表し、腫瘍抗原ペプチドＡは、以下のアミノ酸配列：
ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）及びＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）の中から選ばれるいずれかのアミノ酸配列からなるペプチドを表し、腫瘍抗原ペプチドＡのＮ末端アミノ酸のアミノ基が式（１）中のＹａと結合し、腫瘍抗原ペプチドＡのＣ末端アミノ酸のカルボニル基が式（１）中の水酸基と結合し、
Ｒ１は、水素原子又は腫瘍抗原ペプチドＢを表し、
腫瘍抗原ペプチドＢは、腫瘍抗原ペプチドＡとは配列が異なり且つ以下のアミノ酸配列：
ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）及びＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）の中から選ばれるいずれかのアミノ酸配列からなるペプチドを表し、腫瘍抗原ペプチドＢのシステイン残基のチオエーテル基が式（１）中のチオエーテル基と結合する。］
で表される化合物又はその薬学上許容される塩を含むものであってもよい。
上記式（Ｉ)で表される化合物は、システイン残基がジスルフィド結合を形成していること等により、溶液中での酸化剤などに対する安定性に優れており、医薬品原料として一定の品質を有する。
また、本実施形態における医薬組成物が、上記式（Ｉ）で表される化合物（ＷＴ１キラーペプチドの結合体）を含む場合（Ｒ１が水素原子である場合を除く）、体内でＥＲＡＰ１によるＮ末端のシステイン残基間のジスルフィド結合の還元的開裂により、結合体が分解され、異なるＨＬＡサブタイプに対応する２種類のエピトープが生成される。式（Ｉ）で表される結合体のように、異なるＨＬＡサブタイプに対応する複数種類のエピトープが体内において生成される結合体は、対象により異なるＨＬＡサブタイプに広く対応可能であり、大きなＰｏｐｕｌａｔｉｏｎを一つの結合体によりカバーすることができるため、対象において効率的にＣＴＬを誘導することができる（国際公開２０１４／１５７６９２号参照）。
本実施形態における「腫瘍抗原ペプチドＡ」とは、７〜３０残基のアミノ酸からなるＭＨＣクラスＩ拘束性ＷＴ１ペプチドである。式（１）において腫瘍抗原ペプチドＡは、Ｎ末端アミノ酸のアミノ基が式（１）中のＹａと結合し、Ｃ末端アミノ酸のカルボニル基が式（１）中の水酸基と結合する。
また、上記式（１）で表される化合物は、式（２）：
Figure 2020175657
 （式中、ＣとＣの間の結合はジスルフィド結合を表す。）
で表される化合物であってもよく、
式（３）：
Figure 2020175657
 （式中、ＣとＣの間の結合はジスルフィド結合を表す。）で表される化合物であってもよい。
また、上記式（１）で表される化合物は、式（２）：
Figure 2020175657
 （式中、ＣとＣの間の結合はジスルフィド結合を表す。）
で表される化合物又はその薬学上許容される塩であり、
上記医薬組成物がさらにＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）又はその薬学上許容される塩を含んでいてもよく、
式（１）で表される化合物が、式（３）：
Figure 2020175657
 （式中、ＣとＣの間の結合はジスルフィド結合を表す。）で表される化合物又はその薬学上許容される塩であり、
上記医薬組成物がさらにＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）又はその薬学上許容される塩を含んでいてもよい。
本実施形態における医薬組成物は、ＷＴ１ヘルパーペプチドをさらに含んでいてもよい。本実施形態における医薬組成物がＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫ（配列番号：１１）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨ（配列番号：１２）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧ（配列番号：１３）、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）、ＣＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１５）及びＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＣ（配列番号：１６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチドを含む場合には、上記群から選択される他のアミノ酸配列を含むペプチド及び／又はそれ以外の他のＷＴ１ヘルパーペプチドをさらに含んでいてもよい。
ＷＴ１ヘルパーペプチドとは、ＭＨＣクラスＩＩ拘束性ＷＴ１ペプチドを意味する。
本明細書における「ＭＨＣクラスＩＩ拘束性」とは、ＭＨＣクラスＩＩ分子と結合してヘルパーＴ細胞を誘導する特性を意味する。
ＭＨＣクラスＩＩ分子に相当するＨＬＡは、ＨＬＡ−ＤＲ、ＤＱ及びＤＰなどのサブタイプに分類される。「ＭＨＣクラスＩＩ拘束性」として、好ましくは、ＨＬＡ−ＤＲ拘束性、ＨＬＡ−ＤＱ拘束性又はＨＬＡ−ＤＰ拘束性が挙げられる。
本明細書における「ＭＨＣクラスＩＩ拘束性ＷＴ１ペプチド」とは、インビトロ及び／又はインビボで、ＭＨＣクラスＩＩ抗原に結合し、ヘルパーＴ細胞を誘導するペプチドを意味する。
ＷＴ１ヘルパーペプチドの長さは、ＷＴ１ヘルパーペプチドとして機能する限り特に限定されないが、例えば、７〜３０残基又は１４〜３０残基のアミノ酸からなるものであってよい。ＷＴ１ヘルパーペプチドは、７残基以上、８残基以上、１０残基以上、１２残基以上又は１４残基以上のアミノ酸からなるものであってよく、３０残基以下、２５残基以下、２２残基以下又は２０残基以下のアミノ酸からなるものであってよい。
ＷＴ１ヘルパーペプチドとしては、例えば、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫ（配列番号：１１）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨ（配列番号：１２）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧ（配列番号：１３）、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）、ＣＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１５）、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＣ（配列番号：１６）、ＳＧＱＡＹＭＦＰＮＡＰＹＬＰＳＣＬＥＳ（配列番号：１７）（国際公開２００７／１２０６７３号参照）、ＲＳＤＥＬＶＲＨＨＮＭＨＱＲＮＭＴＫＬ（配列番号：１８）（国際公開２００７／１２０６７３号参照）、ＰＧＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧ（配列番号：１９）（国際公開２００７／１２０６７３号参照）及びＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨ（配列番号：２０）（国際公開２００５／０４５０２７号参照）に記載されたアミノ酸配列を含むペプチド又は配列番号：１１〜２０からなる群から選択されるいずれかのアミノ酸配列中にアミノ酸残基の改変を含有する改変アミノ酸配列を含み且つヘルパーＴ細胞誘導活性を有するペプチド等が挙げられる。本実施形態における医薬組成物は、例えば、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫ（配列番号：１１）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨ（配列番号：１２）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧ（配列番号：１３）、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）、ＣＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１５）及びＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＣ（配列番号：１６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含むものであってもよい。また、本実施形態における医薬組成物は、例えば、ＣＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１５）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含むものであってよく、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＣ（配列番号：１６）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含むものであってよく、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）のアミノ酸配列からなるペプチド又はその薬学上許容される塩を含むものであってよい。
「アミノ酸配列を含むペプチド」については、上述したとおり、当該アミノ酸配列からなるペプチド並びに当該アミノ酸配列のＮ末端アミノ酸及び／又はＣ末端アミノ酸に更なるアミノ酸が付加されたペプチドを意味する。ＷＴ１ヘルパーペプチドは、当該アミノ酸配列に、１又は２以上のシステイン残基を含むものであってもよい。例えば、当該アミノ酸配列にシステイン残基が付加される場合、当該アミノ酸配列のＮ末端側又は／及びＣ末端側に付加されてよい。
本明細書における「アミノ酸配列中にアミノ酸残基の改変を含有する改変アミノ酸配列を含み且つヘルパーＴ細胞誘導活性を有するペプチド」は、「改変ヘルパーペプチド」とも呼ばれる。当該改変ヘルパーペプチドは、アミノ酸配列において、１〜３個のアミノ酸が、欠失、置換及び／又は付加されたアミノ酸配列からなり、ＭＨＣクラスＩＩに結合し、ヘルパーＴ細胞を誘導するペプチドを意味する。付加（挿入も包含される）されるアミノ酸の数は好ましくは１〜３である。欠失されるアミノ酸の数は好ましくは１〜５である。改変において、付加されるアミノ酸又は置換されるアミノ酸は、遺伝子によりコードされる２０種類のアミノ酸以外の非天然アミノ酸であってもよい。
改変ヘルパーペプチドとしては、例えば、次のようなペプチドが挙げられる。
ＳＧＱＡＲＭＦＰＮＡＰＹＬＰＳＣＬＥＳ（配列番号：３４）の改変ヘルパーペプチドである
ＳＧＱＡＹＭＦＰＮＡＰＹＬＰＳＣＬＥＳ（配列番号：３５）（特許文献６参照）、
ＳＧＱＡＲＭＦＰＮＡＰＹＬＰＳＣ（配列番号：３６）若しくは
ＳＧＱＡＹＭＦＰＮＡＰＹＬＰＳＣ（配列番号：３７）；又は
ＰＧＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧ（配列番号：１９）の改変ヘルパーペプチドである
ＰＧＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫ（配列番号：３８）、
ＰＧＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨ（配列番号：３９）、
ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫ（配列番号：１１）、
ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨ（配列番号：１２）若しくは
ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧ（配列番号：１３）。
本実施形態におけるペプチド又は化合物は、本明細書の実施例に記載された方法、又は通常のペプチド合成において用いられる方法に準じて製造することができる。製造方法としては、文献（ペプタイド・シンセシス(Peptide Synthesis),Interscience,New York,1966;ザ・プロテインズ(The Proteins),Vol 2,Academic Press Inc.,New York,1976；ペプチド合成，丸善（株），１９７５；ペプチド合成の基礎と実験、丸善（株），１９８５；医薬品の開発 続 第１４巻・ペプチド合成，広川書店，１９９１）などに記載されている方法が挙げられる。また、例えば、式（１）で表される化合物を製造する方法については、国際公開２０１４／１５７６９２号等を参照することもできる。
例えば、Ｆｍｏｃ法若しくはＢｏｃ法を用いて固相合成機で製造する方法や、Ｂｏｃ−アミノ酸若しくはＺ−アミノ酸を液相合成法で逐次縮合させて製造する方法が挙げられる（Ｆｍｏｃは９−フルオレニルメトキシカルボニル基、Ｂｏｃはｔ−ブトキシカルボニル基、Ｚはベンジルオキシカルボニル基をそれぞれ表す）。
本実施形態におけるペプチド又は化合物を製造するための中間体において、アミノ基、カルボキシ基、メルカプト基などの官能基は、必要に応じて保護、脱保護の技術を用い、適当な保護基で保護し、また脱保護することができる。好適な保護基、保護する方法、及び脱保護する方法としては、「Protective Groups in Organic Synthesis 2nd Edition(John Wiley & Sons, Inc.;1990)」などに詳細に記載されている。たとえば、メルカプト基の保護基としてはアセトアミドメチル基又はトリチル基などが挙げられる。
本実施形態におけるペプチド又は化合物がジスルフィド結合を有する場合、通常のペプチド化学に用いられる方法に準じて、システイン残基を含む異なる２つのペプチド間で、又はシステイン残基を含むペプチドとシステイン間で、当該ジスルフィド結合を形成することができる。ジスルフィド結合の形成方法は、文献（ペプタイド・シンセシス（Peptide Synthesis),Interscience,New York,1966;ザ・プロテインズ(The Proteins),Vol 2,Academic Press Inc.,New York,1976；ペプチド合成，丸善（株），１９７５；ペプチド合成の基礎と実験、丸善（株），１９８５；医薬品の開発 続 第１４巻・ペプチド合成，広川書店，１９９１）などに記載されている方法が挙げられる。
具体的には、ペプチドに含まれるシステイン残基が１個の場合、システイン側鎖上のメルカプト基の保護基を含むすべての保護基を除去した後、不活性溶媒中で酸化させることにより、ジスルフィド結合を有する化合物（ジスルフィド化合物）を製造することができる。また、メルカプト基を持つ２つの中間体を適当な溶媒中に混合し酸化することにより製造することができる。当該酸化の方法としては、通常のペプチド合成でジスルフィド結合を形成させる公知の方法を適宜選択すればよい。例えば、ヨウ素酸化、アルカリ条件下で空気酸化反応に付す方法、又はアルカリ性若しくは酸性条件下酸化剤を添加してジスルフィド結合を形成する方法などが挙げられる。ここで、酸化剤としては、ヨウ素、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、フェリシアン化カリウムなどが挙げられる。溶媒としては水、酢酸、メタノール、クロロホルム、ＤＭＦ若しくはＤＭＳＯなど、又はこれらの混合液を用いることができる。酸化反応によりしばしば、対称、非対称性ジスルフィド化合物の混合物を与える。目的の非対称性ジスルフィド化合物は種々のクロマトグラフィー、又は再結晶などで精製することによって得ることができる。あるいは活性化されたメルカプト基をもつ中間体とメルカプト基をもつ中間体を混合することにより選択的なジスルフィド結合を形成することができる。活性化されたメルカプト基をもつ中間体としては、Ｎｐｙｓ基（３−ニトロ−２−ピリジンスルフェニル基）が結合したメルカプト基などが挙げられる。あるいは、あらかじめ一方の中間体と例えば２，２'−ジチオビス（５−ニトロピリジン）を混合することによりメルカプト基を活性化した後、他方の中間体を加えることにより選択的なジスルフィド結合を形成することができる（Tetrahedron Letters.Vol.37.No.9,pp.1347-1350）。
ペプチドに含まれるシステイン残基が２個以上の場合も、前記と同様の方法を用いることができる。この場合はジスルフィド結合様式が異なる異性体が得られる。システイン側鎖の保護基を特定の組み合わせにすることにより、目的のシステイン残基間でジスルフィド結合を形成した二量体を得ることができる。前記保護基の組み合わせとしては、ＭｅＢｚｌ（メチルベンジル）基とＡｃｍ（アセトアミドメチル）基、Ｔｒｔ（トリチル）基とＡｃｍ基、Ｎｐｙｓ（３−ニトロ−２−ピリジルチオ）基とＡｃｍ基、Ｓ−Ｂｕ−ｔ（Ｓ−ｔｅｒｔ−ブチル）基とＡｃｍ基などが挙げられる。例えばＭｅＢｚｌ基とＡｃｍ基の組み合わせの場合、まずＭｅＢｚｌ基とシステイン側鎖以外のその他の保護基を除去した後、ペプチド単量体を含む溶液を空気酸化反応に付して脱保護されたシステイン残基間にジスルフィド結合を形成し、次いでヨウ素による脱保護及び酸化を行ってＡｃｍ基で保護されていたシステイン残基間にジスルフィド結合を形成する方法などが挙げられる。
得られた本実施形態におけるペプチド又は化合物は、当業者に公知の方法や通常のペプチド化学に用いられる方法に準じて精製することができる。例えば、種々のクロマトグラフィー（例えば、シリカゲルカラムクロマトグラフィー、イオン交換カラムクロマトグラフィー、ゲルろ過、若しくは逆相クロマトグラフィー）、又は再結晶などで精製することができる。例えば、再結晶溶媒としては、メタノール、エタノール若しくは２−プロパノールなどのアルコール系溶媒、ジエチルエーテルなどのエーテル系溶媒、酢酸エチルなどのエステル系溶媒、ベンゼン若しくはトルエンなどの芳香族炭化水素系溶媒、アセトンなどのケトン系溶媒、ヘキサンなどの炭化水素系溶媒、ジメチルホルムアミド若しくはアセトニトリルなどの非プロトン系溶媒、水、又はこれらの混合溶媒などを用いることができる。その他精製方法としては、実験化学講座（日本化学会編、丸善）１巻などに記載された方法などを用いることができる。
ジスルフィド化合物の精製方法は、文献（ペプタイド・シンセシス（Peptide Synthesis),Interscience,New York,1966;ザ・プロテインズ(The Proteins),Vol 2,Academic Press Inc.,New York,1976;ペプチド合成，丸善（株），１９７５；ペプチド合成の基礎と実験、丸善（株），１９８５；医薬品の開発 続 第１４巻・ペプチド合成，広川書店，１９９１）などに記載されている。中でも、ＨＰＬＣが好ましい。
本実施形態における化合物において、１つ以上の不斉点がある場合、通常の方法に従って、その不斉点を有する原料（アミノ酸）を用いることによって、製造することができる。また、本実施形態における化合物の光学純度を上げるために、製造工程の適当な段階で光学分割などを行ってもよい。光学分割法として例えば、本実施形態における化合物若しくはその中間体を不活性溶媒中（例えばメタノール、エタノール、若しくは２−プロパノールなどのアルコール系溶媒、ジエチルエーテルなどのエーテル系溶媒、酢酸エチルなどのエステル系溶媒、トルエンなどの炭化水素系溶媒、又はアセトニトリルなどの非プロトン系溶媒、及びこれらの混合溶媒）、光学活性な酸（例えば、マンデル酸、Ｎ−ベンジルオキシアラニン、若しくは乳酸などのモノカルボン酸、酒石酸、ｏ−ジイソプロピリデン酒石酸若しくはリンゴ酸などのジカルボン酸、又はカンファースルフォン酸若しくはブロモカンファースルフォン酸などのスルホン酸）と塩を形成させるジアステレオマー法により行うことができる。本実施形態における化合物又は中間体がカルボキシ基などの酸性官能基を有する場合は、光学活性なアミン（例えばα−フェネチルアミン、キニン、キニジン、シンコニジン、シンコニン、ストリキニーネなどの有機アミン）と塩を形成させることにより光学分割を行うこともできる。
塩を形成させる温度としては、室温から溶媒の沸点までの範囲から選択される。光学純度を向上させるためには、一旦、溶媒の沸点付近まで温度を上げることが望ましい。析出した塩を濾取する際、必要に応じて冷却し収率を向上させることができる。光学活性な酸、又はアミンの使用量は、基質に対し約０．５〜約２．０当量の範囲、好ましくは１当量前後の範囲が適当である。必要に応じ結晶を不活性溶媒中（例えばメタノール、エタノール、２−プロパノールなどのアルコール系溶媒、ジエチルエーテルなどのエーテル系溶媒、酢酸エチルなどのエステル系溶媒、トルエンなどの炭化水素系溶媒、アセトニトリルなどの非プロトン系溶媒及びこれらの混合溶媒）で再結晶し、高純度の光学活性な塩を得ることもできる。また、必要に応じて光学分割した塩を通常の方法で酸又は塩基で処理しフリー体として得ることもできる。
本明細書における「薬学上許容される塩」としては、酸付加塩及び塩基付加塩が挙げられる。例えば、酸付加塩としては、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、ヨウ化水素酸塩、硝酸塩、リン酸塩などの無機酸塩、クエン酸塩、シュウ酸塩、酢酸塩、ギ酸塩、プロピオン酸塩、安息香酸塩、トリフルオロ酢酸塩、マレイン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、パラトルエンスルホン酸塩などの有機酸塩が挙げられ、塩基付加塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、アンモニウム塩などの無機塩基塩、トリエチルアンモニウム塩、トリエタノールアンモニウム塩、ピリジニウム塩、ジイソプロピルアンモニウム塩などの有機塩基塩などが挙げられ、さらにはアルギニン、アスパラギン酸、グルタミン酸などの塩基性あるいは酸性アミノ酸といったアミノ酸塩が挙げられる。
本実施形態におけるペプチド若しくは化合物又はその薬学上許容される塩の水和物、エタノール溶媒和物などの溶媒和物も、本実施形態に含まれる。さらに、本実施形態における医薬組成物は、式（Ｉ)で表される化合物のあらゆるジアステレオマー、エナンチオマーなどの存在し得るあらゆる立体異性体、及びあらゆる態様の結晶形も包含している。
本実施形態における医薬組成物は、ＷＴ１遺伝子が発現しているがんやＷＴ１遺伝子の発現レベルの上昇を伴うがん（ＷＴ１関連がん）の治療又は予防に用いることができる。このようながんとしては、例えば、白血病、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、悪性リンパ腫、胃癌、大腸癌、肺癌、乳癌、胚細胞癌、肝癌、皮膚癌、膀胱癌、前立腺癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巣癌、性腺外胚細胞腫瘍、脳腫瘍、脳癌、頭蓋外胚細胞腫瘍、骨癌、膵癌、頭頚部癌、顎癌、食道癌、下咽頭癌、喉頭癌、口唇及び口腔癌、髄芽腫、黒色腫、メルケル細胞癌、（胸膜中皮腫、心膜中皮腫、腹膜中皮腫等の）中皮腫、（骨肉腫、平滑筋肉腫、カポジ肉腫、悪性線維性組織球腫、脂肪肉腫、ユーイング肉腫、隆起性皮膚線維肉腫等の）肉腫、神経芽腫、網膜芽腫、肝芽腫、腎芽腫、グリア腫瘍、皮膚又は眼窩内悪性メラノーマ、扁平上皮癌、頸部扁平上皮癌、眼内黒色腫、胆道癌、結腸癌、十二指腸癌、小腸癌、直腸癌、肛門部癌、虫垂癌、胆管癌、肝外胆管癌、膵島細胞癌、精巣癌、卵管のカルシノーマ、子宮内膜カルシノーマ、子宮頚部カルシノーマ、膣カルシノーマ、外陰部カルシノーマ、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫、気管支腺腫／カルチノイド、バーキットリンパ腫、カルチノイド腫瘍、小脳アストロサイトーマ、慢性鼻腔及び副鼻腔癌、鼻咽頭癌、唾液腺癌、舌下腺癌、耳下腺癌、内分泌系癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、柔組織肉腫、尿道癌、陰茎癌、星状細胞腫、基底細胞癌、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ球性白血病を含む慢性又は急性白血病、小児固形がん、リンパ球性リンパ腫、腎臓又は尿管の癌、腎盂カルシノーマ、中枢神経系（ＣＮＳ）腫瘍、原発性ＣＮＳリンパ腫、腫瘍新脈管形成、脊椎腫瘍、脳幹グリオーム、下垂体アデノーマ、カポシ肉腫、扁平上皮癌、扁平細胞癌、Ｔ細胞リンパ腫、多型性膠芽腫、悪性黒色腫、非小細胞肺癌、小細胞肺癌、腎細胞癌、ＡＩＤＳ関連癌及びアスベスト誘発癌等が挙げられる。癌は、例えば、上記例示からなる群から選択されてもよく、例えば、白血病、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、悪性リンパ腫、胃癌、大腸癌、肺癌、乳癌、胚細胞癌、肝癌、皮膚癌、膀胱癌、前立腺癌、子宮癌、子宮頸癌、卵巣癌及び脳腫瘍からなる群から選択されてもよい。がんは、例えば、白血病、骨髄異形成症候群、多発性骨髄腫、膀胱癌、脳腫瘍、乳癌、肺癌、大腸癌、悪性リンパ腫、食道癌、頭頚部癌、肝癌、卵巣癌、膵癌、前立腺癌及び胃癌からなる群から選択されてもよく、白血病、骨髄異形成症候群及び多発性骨髄腫からなる群から選択されてもよく、骨髄異形成症候群、乳癌、肺癌、大腸癌及び膀胱癌からなる群から選択されてもよい。
本実施形態において、対象は、ヒトであってもよく、ヒト以外の動物であってもよい。ヒト以外の動物は、哺乳動物であることが好ましい。対象は、がんを有するヒト、がんを有することが疑われるヒト又はがんの発症リスクのあるヒトであってよく、がんを有するヒトであることが好ましい。対象ががんを有する場合には、患者という表現をする場合もある。
本実施形態のペプチド若しくは化合物又はその薬学上許容される塩は、各ペプチド若しくは化合物又は各塩に応じて適切な形態とすることにより、がんの細胞性免疫療法におけるＣＴＬ誘導剤の有効成分、がんワクチンの有効成分又は／及び医薬組成物の有効成分とすることができる。
本実施形態の医薬組成物、ペプチド若しくは化合物又はその薬学上許容される塩は、ペプチド又は化合物の細胞性免疫が効果的に成立するように、薬学上許容される担体、例えば適当なアジュバントとともに投与することができる。また、同様の理由により、本実施形態の医薬組成物は、薬学上許容される担体、例えば適当なアジュバントを含むことができる。アジュバントとしては、沈降性アジュバントおよび油性アジュバント等が挙げられる。沈降性アジュバントは、ペプチドが吸着する無機物の懸濁剤を表す。沈降性アジュバントとしては、具体的には、水酸化ナトリウム、水酸化アルミニウム（アラム、Ａｌｕｍ）、リン酸カルシウム、リン酸アルミニウム、ミョウバン、ペペス、カルボキシビニルポリマー等が挙げられる。油性アジュバントは、ペプチドを含む水溶液を鉱油で包みミセルをつくり乳化する油乳剤を表す。油性アジュバントとしては、具体的には、流動パラフィン、ラノリン、フロイントアジュバント（完全フロイントアジュバント、不完全フロイントアジュバント）、モンタナイド、Ｗ／Ｏエマルション等が挙げられる。また、例えば、アジュバントとしては、文献（Ｃｌｉｎ. Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ.Ｒｅｖ．，７：２７７-２８９，１９９４）に記載のものなどが応用可能であり、具体的には、菌体由来成分、ＧＭ-ＣＳＦ、インターロイキン−２、インターロイキン−７若しくはインターロイキン−１２などのサイトカイン、植物由来成分、海洋生物由来成分、水酸化アルミニウムの如き鉱物ゲル、リソレシチン、プルロニックポリオールの如き界面活性剤、ポリアニオン、ペプチド、又は油乳濁液（エマルジョン製剤）などを挙げることができる。菌体由来成分としては、リピドＡ（ｌｉｐｉｄ Ａ）、その誘導体であるモノホスホリルリピドＡ（ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌ ｌｉｐｉｄ Ａ）、細菌（ＢＣＧ菌などのＭｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ属細菌が挙げられる）の死菌、細菌由来のタンパク質、ポリヌクレオチド、フロイント不完全アジュバント（Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ Ｉｎｃｏｍｐｌｅｔｅ Ａｄｊｕｖａｎｔ）、フロイント完全アジュバント（Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ Ｃｏｍｐｌｅｔｅ Ａｄｊｕｖａｎｔ）、細胞壁骨格成分（例えばＢＣＧ-ＣＷＳなどが挙げられる）、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）などが挙げられる。
また本実施形態のペプチド又は化合物は、リポソーム製剤、直径数μｍのビーズに結合させた粒子状の製剤、リピッドを結合させた製剤、Ｗ／Ｏエマルション製剤などにして投与することもできる。
さらに本実施形態のペプチド又は化合物（コンジュゲート体）は、ＭＨＣクラスＩＩ拘束性ＷＴ１ペプチド（すなわちヘルパーペプチド）と共に投与することができる。共に投与する方法としては、コンジュゲート体とヘルパーペプチドを個別に投与することも可能であるが、一つの医薬組成物の中にコンジュゲート体とヘルパーペプチドを含むカクテル製剤（カクテル剤、カクテル）がより好ましい。本カクテル製剤は、ＭＨＣクラスＩ拘束性ＷＴ１ペプチド（すなわちキラーペプチド）を生じ得るコンジュゲート体及びＭＨＣクラスＩＩ拘束性ＷＴ１ペプチド（すなわちヘルパーペプチド）を含むものである。よって、がん免疫療法におけるがんワクチンとして、ヘルパーペプチドを含有した本カクテル製剤を投与することによって、ＣＴＬを含む他のＴ細胞の機能亢進に重要であるヘルパーＴ細胞（ｈｅｌｐｅｒ Ｔ ｃｅｌｌ）の活性化も可能となり、コンジュゲート体の機能・薬効（細胞性免疫能など）を向上させることができる。
本実施形態に係る、がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果が期待できる対象を選択する方法（以下、「本実施形態の選択方法」ともいう）においては、以下の（１）〜（６）からなる群から選択される１又は２以上の組合せに基づき、効果が期待できる対象であるとの指標を提供することができる。医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供することにより、対象の医薬組成物に対する応答を予測することも可能である
（１）ＴＰ５３遺伝子及び／又はＢＣＯＲ遺伝子における変異
（２）ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量
（３）改訂ＩＰＳＳ（ＩＰＳＳ−Ｒ）に基づく核型
（４）ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の増加の有無
（５）遅延型過敏反応の有無
（６）骨髄芽球の割合の変化
（１）〜（６）からなる群から選択される２以上の組合せに基づき、効果が期待できる対象であるとの指標を提供する場合、実施する順番は上記順番に限られるものではない。当業者は選抜の効率、対象の状態や負担等を考慮し、実施する工程及び順番を適宜設定することができる。また、例えば、病気、病状、ゲノム情報、治療に対するリスク要因及び検査データ等の患者の治療に関するビッグデータから、人工知能、機械学習、又は／及び統計学的方法等によって有効な組み合せを推測し、選択することも可能である。例えば、医薬組成物又はペプチドの投与を必要としない（１）〜（３）から選択される１以上に基づく選抜を先に実施し、その結果に基づき医薬組成物の効果が期待できる対象を絞った後に、医薬組成物又はペプチドの投与を必要とする（４）〜（６）から選択される１以上に基づく選抜を実施することにより、医薬組成物の効果が期待できる対象を選択することもできる。また、例えば、逆に先に（４）〜（６）から選択される１以上に基づく選抜を実施し、その結果に基づき医薬組成物の効果が期待できる対象を絞った後に、（１）〜（３）から選択される１以上に基づく選抜を実施することも可能である。さらに、例えば、既に対象のＩＰＳＳ−Ｒに基づく核型が決定している場合には、（３）に基づく選抜により医薬組成物の効果が期待できる対象を絞った後に、（１）〜（２）及び（４）〜（６）から選択される１以上に基づく選抜を実施することも可能である。医薬組成物又はペプチドの投与を必要とする選抜を実施した後に、同じ対象に対して医薬組成物又はペプチドの未投与で実施することが好ましい選抜を実施する場合には、所定の期間が経過し、医薬組成物又はペプチドの投与の影響が十分減少してから行うことも可能である。
本実施形態における試料は、対象から採取可能であれば特に限定されず、例えば、血液、リンパ液、腹水、胸水、痰、髄液（脳脊髄液）、涙液、鼻汁、唾液、尿、膣液、精液及び関節液等の体液、粘膜、細胞、組織、並びに細胞若しくは組織の培養物等が挙げられる。血液は、血漿、血清、間質液を含む。細胞は、赤血球、白血球、血小板、造血幹細胞、骨髄血、骨髄芽球等の血液細胞、血液循環腫瘍細胞、白血病細胞、異形成を伴う芽球、脳腫瘍、大腸癌細胞、肺癌細胞、乳癌細胞、子宮癌細胞、胃癌細胞、肝癌細胞、前立腺癌細胞、腎癌細胞、膵臓癌細胞、肉腫細胞、悪性中皮腫細胞、リンパ腫細胞等の悪性腫瘍（がん）細胞を含む。がんを含む組織をがん組織という。
試料は、当該分野の公知の方法に基づいて対象より採取することができる。例えば、血液やリンパ液であれば、公知の採血方法により採取することができる。例えば、細胞や組織であれば、穿刺、穿刺吸引、擦過、腹腔洗浄、針生検及び外科的生検等の公知の方法により採取することができる。本実施形態における試料は、体液、粘膜、細胞、組織及び細胞又は組織の培養物並びにこれらの組合せからなる群から選択されてもよく、血液、髄液、血液細胞、がん細胞、がん組織及び細胞又はがん組織の培養物並びにこれらの組合せからなる群から選択されてもよく、血液、髄液、がん細胞、がん組織及びがん細胞又はがん組織の培養物並びにこれらの組合せからなる群から選択されてもよく、血液又は髄液であってもよい。
がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果としては、がんの種類及び対象の状態等により異なる場合もあるが、例えば、生存期間の延長、骨髄芽球の安定化、がん細胞の減少、転移の予防及び進行の遅延（骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）患者であれば、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）移行期間の延長）等が挙げられる。医薬組成物の効果が期待できる対象には、例えば、医薬組成物が奏効する可能性が高い対象、医薬組成物の投与により生存期間が延長する可能性が高い対象等が含まれる。
「ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応」とは、ＷＴ１抗原ペプチドの投与等により特異的に誘導される免疫反応である。「ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応」が誘導されていることは、例えば、後述するＨＬＡテトラマーアッセイによる判定結果が陽性であること且つ／又は遅延性過敏反応が陽性であること等により確認することができる。
（１）ＴＰ５３遺伝子及び／又はＢＣＯＲ遺伝子における変異
ＴＰ５３遺伝子は３９３アミノ酸からなる核内タンパク質ｐ５３をコードしている癌抑制遺伝子である。ＢＣＯＲ遺伝子は、ＢＣＬ６のコリプレッサであり、転写因子に結合して、遺伝子発現を特異的に阻害する遺伝子である。いずれも予後不良因子であることが報告されている。
本明細書において、ＴＰ５３遺伝子及び／又はＢＣＯＲ遺伝子における変異とは、ＴＰ５３遺伝子及びＢＣＯＲ遺伝子の両方における変異、ＴＰ５３遺伝子における変異、又はＢＣＯＲ遺伝子における変異を意味する。ＴＰ５３遺伝子及び／又はＢＣＯＲ遺伝子における変異は、それぞれの塩基配列に対してヌクレオチド塩基の置換、欠失、挿入又はこれらの組合せであってよい。ＴＰ５３遺伝子及び／又はＢＣＯＲ遺伝子における変異は、１〜２０個、１〜１０個、１〜８個、１〜５個、１〜４個、１〜３個、１〜２個又は１個のヌクレオチド塩基の置換、欠失、挿入又はこれらの組合せであってよい。
本明細書において、ＴＰ５３野生型とは、ＴＰ５３遺伝子に変異が存在しない場合、又はＴＰ５３遺伝子に変異が存在しても本来の機能を失わない若しくは異常を伴わない場合（サイレント変異及びシノニマス変異等を含む）を言う。ＴＰ５３変異型とは、ＴＰ５３遺伝子に変異が存在し、かつ本来の機能を失う若しくは異常を伴う場合を言う。ＢＣＯＲ野生型とは、ＢＣＯＲ遺伝子に変異が存在しない場合、又はＢＣＯＲ遺伝子に変異が存在しても本来の機能を失わない若しくは異常を伴わない場合（サイレント変異及びシノニマス変異等を含む）を言う。ＢＣＯＲ変異型とは、ＢＣＯＲ遺伝子に変異が存在し、かつ本来の機能を失う若しくは異常を伴う場合を言う。したがって、ＴＰ５３野生型及び／又はＢＣＯＲ野生型は、ＴＰ５３又はＢＣＯＲのいずれかが野生型である場合、並びにＴＰ５３及びＢＣＯＲの両方が野生型である場合を含む。
本実施形態の選択方法は、対象から採取された試料を用いて、ＴＰ５３遺伝子及び／又はＢＣＯＲ遺伝子における変異の有無を決定する工程と、
対象がＴＰ５３野生型及び／又はＢＣＯＲ野生型の場合に、上記対象は医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程とを含む。
対象、試料、医薬組成物等については上述したとおりである。
ＴＰ５３遺伝子及び／又はＢＣＯＲ遺伝子における変異の有無を決定する工程とは、対象におけるＴＰ５３遺伝子及び／又はＢＣＯＲ遺伝子に対応する遺伝子において、野生型の塩基配列との違い（変異）が認められ、その変異が、野生型が有していた本来の機能を失わせる変異又は異常を伴う変異である場合には、「ＴＰ５３変異型及び／又はＢＣＯＲ変異型」とし、野生型の塩基配列との違い（変異）が認められない場合又は変異が各遺伝子の転写量及び各遺伝子がコードするタンパク質の機能に変化が生じない変異（サイレント変異及びシノニマス変異等を含む）である場合には、「ＴＰ５３野生型及びＢＣＯＲ野生型」と決定する工程である。野生型の塩基配列との違い（変異）は、対象のＴＰ５３遺伝子及び／又はＢＣＯＲ遺伝子に対応する遺伝子の塩基配列を、野生型のＴＰ５３遺伝子及び／又はＢＣＯＲ遺伝子と比較することにより検出してもよい。対象のＴＰ５３遺伝子及び／又はＢＣＯＲ遺伝子に対応する遺伝子の塩基配列の決定及び野生型の塩基配列との比較は、当業者に公知の方法により行うことができる。例えば、試料から常法によりＤＮＡを抽出し、次世代シーケンス法（ＮＧＳ）等により各遺伝子の配列を決定し、対応する野生型の遺伝子配列と比較することで変異の有無を決定することができる。また、例えば、変異によっては、塩基配列を決定しなくとも、ＰＣＲ−ＲＦＬＰ（Ｒｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎ Ｆｒａｇｍｅｎｔ Ｌｅｎｇｔｈ Ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ、制限酵素断片長多型）法により変異の有無を決定することもできる。また、例えば、市販のＤＮＡ変異／多型検出キットを使用して行うこともできる。
本実施形態の選択方法は、例えば、ＴＰ５３遺伝子及びＢＣＯＲ遺伝子における変異の有無を決定する工程を含んでいてもよく、その結果、ＴＰ５３野生型の場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程を含んでもよく、ＢＣＯＲ野生型の場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程を含んでもよく、ＴＰ５３野生型及びＢＣＯＲ野生型の場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程を含んでもよい。
また、本実施形態の選択方法は、例えば、ＴＰ５３遺伝子における変異の有無を決定する工程を含んでいてもよく、その結果、ＴＰ５３野生型の場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程を含んでもよい。同様に、本実施形態の選択方法は、例えば、ＢＣＯＲ遺伝子における変異の有無を決定する工程を含んでいてもよく、その結果、ＢＣＯＲ野生型の場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程を含んでもよい。
本実施形態の選択方法は、例えば、逆に、ＴＰ５３変異型及び／又はＢＣＯＲ変異型の場合に、その対象は医薬組成物の効果を期待できる対象ではないとの指標を提供することを含むものであってもよい。
本来の機能を失わない又は異常を伴わない場合は、各遺伝子が野生型同一又は実質的に同一（サイレント変異及びシノニマス変異等を含む）を意味する。
このように、ＴＰ５３遺伝子及び／又はＢＣＯＲ遺伝子は、がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果を期待できる対象であるか否かの指標を提供するためのマーカーとして使用することができる。
（２）ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量
本発明は、別の形態において、ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量に基づき、がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果を期待できる対象を選択する方法を提供する。
本実施形態の選択方法は、対象から採取された試料を用いて、ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量を決定する工程と、
ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量が基準値未満又は以下であった場合に、その対象は医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程とを含む。
ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量を決定する工程は、定量ＰＣＲ等の当業者に公知の方法により実施することができる。また、例えば、ＷＴ１ ｍＲＮＡ測定キットII「オーツカ」（大塚製薬株式会社）等の市販のキットを用いて行うこともできる。例えば、試料からＲＮＡを抽出し、ＷＴ１に特異的なプライマーを用いてリアルタイムＰＣＲ装置等によりＲＴ−ＰＣＲ等の定量ＰＣＲ反応を行い、標準曲線に基づきＷＴ１ ｍＲＮＡ及び内在性コントロールとしてハウスキーピング遺伝子（ＧＡＰＤＨ、β−アクチン等）のｍＲＮＡの測定値を算出することができる。その後、例えば、以下の式（数１）に示すように、ＷＴ１ ｍＲＮＡ測定値をハウスキーピング遺伝子のｍＲＮＡ測定値で除した値（ハウスキーピング遺伝子のｍＲＮＡ １コピーあたりのＷＴ１ ｍＲＮＡコピー数）に、健康成人の１μｇ ＲＮＡあたりのハウスキーピング遺伝子の平均ｍＲＮＡコピー数（ハウスキーピング遺伝子のｍＲＮＡ発現量）を乗じてＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量（コピー／μｇ ＲＮＡ）を算出することができる。したがって、ＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量（コピー／μｇ ＲＮＡ）は、以下の式（数１）により算出される値であるとすることもできる。
Figure 2020175657
ハウスキーピング遺伝子としてＧＡＰＤＨを用いる場合には、例えば、試料からＲＮＡを抽出し、ＷＴ１に特異的なプライマーを用いてリアルタイムＰＣＲ装置等によりＲＴ−ＰＣＲ等の定量ＰＣＲ反応を行い、標準曲線に基づきＷＴ１ ｍＲＮＡ及びＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡの測定値を算出することができる。その後、例えば、以下の式に示すように、ＷＴ１ ｍＲＮＡ測定値をＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡ測定値で除した値（ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡ １コピーあたりのＷＴ１ ｍＲＮＡコピー数）に、健康成人の１μｇ ＲＮＡあたりの平均ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡコピー数（ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡ発現量）を乗じてＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量（コピー／μｇ ＲＮＡ）を算出することができる。したがって、ＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量（コピー／μｇ ＲＮＡ）は、以下の式（数２）により算出される値であるとすることもできる。なお、２．７×１０７（コピー／μｇ ＲＮＡ）は、健康成人の１μｇ ＲＮＡあたりの平均ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡ測定値である。
Figure 2020175657
また、ＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量（コピー／μｇ ＲＮＡ）は、ＷＴ１ ｍＲＮＡ測定キットＩＩ「オーツカ」（大塚製薬株式会社）及び付属のプロトコルに従い、上記式（数２）により算出された値とすることもできる。
本実施形態の選択方法においては、ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量が基準値未満又は以下であった場合に、その対象は医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供することができる。ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量の基準値は、例えば、５０〜１０００００（コピー／μｇ ＲＮＡ）間の値であってよく、１００〜５００００（コピー／μｇ ＲＮＡ）間の値であってよく、１０００〜２００００（コピー／μｇ ＲＮＡ）間の値であってよく、２０００〜１００００（コピー／μｇ ＲＮＡ）間の値であってよく、３０００〜１００００（コピー／μｇ ＲＮＡ）間の値であってよく、４０００〜１００００（コピー／μｇ ＲＮＡ）間の値であってよい。また、ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量の基準値は、例えば、５０（コピー／μｇ ＲＮＡ）以上の値、１００（コピー／μｇ ＲＮＡ）以上の値、２５０（コピー／μｇ ＲＮＡ）以上の値、５００（コピー／μｇ ＲＮＡ）以上の値、７５０（コピー／μｇ ＲＮＡ）以上の値、１０００（コピー／μｇ ＲＮＡ）以上の値、１０００（コピー／μｇ ＲＮＡ）以上の値、１２５０（コピー／μｇ ＲＮＡ）以上の値、１５００（コピー／μｇ ＲＮＡ）以上の値、１７５０（コピー／μｇ ＲＮＡ）以上の値、２０００（コピー／μｇ ＲＮＡ）以上、２２５０（コピー／μｇ ＲＮＡ）以上の値、２５００（コピー／μｇ ＲＮＡ）以上の値、２７５０（コピー／μｇ ＲＮＡ）以上の値、３０００（コピー／μｇ ＲＮＡ）以上の値、３２５０（コピー／μｇ ＲＮＡ）以上の値、３５００（コピー／μｇ ＲＮＡ）以上の値、３７５０（コピー／μｇ ＲＮＡ）以上の値、４０００（コピー／μｇ ＲＮＡ）以上の値であってよく、１５０００（コピー／μｇ ＲＮＡ）以下の値、１４０００（コピー／μｇ ＲＮＡ）以下の値、１３０００（コピー／μｇ ＲＮＡ）以下の値、１２０００（コピー／μｇ ＲＮＡ）以下の値、１１０００（コピー／μｇ ＲＮＡ）以下の値、１００００（コピー／μｇ ＲＮＡ）以下の値であってよく、５０（コピー／μｇ ＲＮＡ）、１００（コピー／μｇ ＲＮＡ）、２５０（コピー／μｇ ＲＮＡ）、５００（コピー／μｇ ＲＮＡ）、７５０（コピー／μｇ ＲＮＡ）、１０００（コピー／μｇ ＲＮＡ）、１０００（コピー／μｇ ＲＮＡ）、１２５０（コピー／μｇ ＲＮＡ）、１５００（コピー／μｇ ＲＮＡ）、１７５０（コピー／μｇ ＲＮＡ）、２０００（コピー／μｇ ＲＮＡ）、２２５０（コピー／μｇ ＲＮＡ）、２５００（コピー／μｇ ＲＮＡ）、２７５０（コピー／μｇ ＲＮＡ）、３０００（コピー／μｇ ＲＮＡ）、３２５０（コピー／μｇ ＲＮＡ）、３５００（コピー／μｇ ＲＮＡ）、３７５０（コピー／μｇ ＲＮＡ）以上、４０００（コピー／μｇ ＲＮＡ）、１５０００（コピー／μｇ ＲＮＡ）、１４０００（コピー／μｇ ＲＮＡ）、１３０００（コピー／μｇ ＲＮＡ）、１２０００（コピー／μｇ ＲＮＡ）、１１０００（コピー／μｇ ＲＮＡ）、１００００（コピー／μｇ ＲＮＡ）であってよい。本実施形態の選択方法においては、例えば、ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量が４０００（コピー／μｇ ＲＮＡ）未満又は以下であった場合に、その対象は医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供するものであってよく、ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量が１００００（コピー／μｇ ＲＮＡ）未満又は以下であった場合に、その対象は医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供するものであってよい。本実施形態の選択方法においては、ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量が４０００〜１００００（コピー／μｇ ＲＮＡ）間の値未満又は以下であった場合に、その対象は医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供するものであることが好ましい。
対象が骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）患者である場合には、ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量の基準値は、１０００００（コピー／μｇ ＲＮＡ）以下の値であることが好ましく、４０００〜１００００（コピー／μｇ ＲＮＡ）間の値であることがより好ましく、１００００（コピー／μｇ ＲＮＡ）以下の値であることがさらに好ましい。対象から採取された試料におけるＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量が上記基準値未満又は以下である場合には、ＯＳが長くなる傾向にある。
このように、ＷＴ１遺伝子は、がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果を期待できる対象であるか否かの指標を提供するためのマーカーとして使用することができる。
（３）改訂ＩＰＳＳ（ＩＰＳＳ−Ｒ）に基づく核型
本発明は、別の形態において、改訂ＩＰＳＳ（ＩＰＳＳ−Ｒ）に基づく核型に基づき、がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果を期待できる対象を選択する方法を提供する。
本実施形態の選択方法は、対象の改訂ＩＰＳＳ（ＩＰＳＳ−Ｒ、“Greenberg et al., Blood 120, no.12, p2454-2465 (2012)”）に基づく核型がＶｅｒｙ ｐｏｏｒ以外である場合に、その対象は医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程を含む。本実施形態の選択方法は、この工程の前に、対象から採取された試料を用いて、対象のＩＰＳＳ−Ｒに基づく核型を決定する工程を含んでいてもよい。
ＩＰＳＳ−Ｒに基づく核型は、Ｇ分染法及びＱ分染法等当業者に公知の方法により解析して決定することができる。対象のＩＰＳＳ−Ｒに基づく核型が、Ｖｅｒｙ ｐｏｏｒ以外である場合に、その対象は医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標が提供される。本実施形態の選択方法は、例えば、対象のＩＰＳＳ−Ｒに基づく核型が、Ｇｏｏｄ／Ｖｅｒｙ ｇｏｏｄ、Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ又はＰｏｏｒである場合に、その対象は医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標が提供されてもよく、Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ又はＰｏｏｒである場合に、その対象は医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標が提供されてもよく、Ｐｏｏｒである場合に、その対象は医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標が提供されてもよく、Ｇｏｏｄ／Ｖｅｒｙ ｇｏｏｄである場合に、その対象は医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標が提供されてもよく、Ｇｏｏｄ／Ｖｅｒｙ ｇｏｏｄ又はＩｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅである場合に、その対象は医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標が提供されてもよい。また、対象のＩＰＳＳ−Ｒに基づく核型が、Ｖｅｒｙ ｐｏｏｒである場合に、その対象は医薬組成物の効果を期待できる対象ではないとの指標が提供されてもよい。
（４）ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の増加の有無
本発明は、別の形態において、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の増加の有無に基づき、がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果を期待できる対象を選択する方法を提供する。
本実施形態の選択方法は、医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与した対象から採取した試料を用いて、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を検出する工程と、
投与前の対象から採取した試料と比較して、上記ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が増加していた場合に、対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程とを含む。対象、試料、医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩等については上述したとおりである。
ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の検出は、例えば、ＨＬＡモノマー法、ＨＬＡダイマー法、ＨＬＡテトラマー法（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ：１００，５６５−５７０（２００２））、ＨＬＡペンタマー法、ＨＬＡデキストラマー法、エリスポット法、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法及び限界希釈法（Ｎａｔ．Ｍｅｄ．：４，３２１−３２７（１９９８））によりＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の存在又は細胞数を測定することにより確認することができる。したがって、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を検出する工程は、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の存在又は細胞数を測定する工程であってもよい。ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の検出は、ＨＬＡテトラマー法により測定することが好ましい。ＨＬＡテトラマーは、ＨＬＡα鎖とβ２ミクログロブリンをペプチドと会合させた複合体（ＨＬＡモノマー）をビオチン化し、蛍光標識したアビジンに結合させることにより４量体化して作製する。ＨＬＡテトラマーでＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を染色し、フローサイトメーターで解析することによりＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の存在又は細胞数を測定することができる。ＨＬＡモノマー法、ＨＬＡダイマー法、ＨＬＡペンタマー法及びＨＬＡデキストラマー法も同様の原理に基づきＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の存在又は細胞数を測定することができる。
ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を検出する工程は、ＷＴ１ペプチドとＨＬＡ分子との複合体を上記試料と反応させ、上記試料に含まれる上記複合体を認識するＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の存在又は細胞数を調べることにより実施されてもよい。ＷＴ１ペプチドとＨＬＡ分子との複合体は、例えば、ＨＬＡモノマー、ＨＬＡダイマー、ＨＬＡテトラマー、ＨＬＡペンタマー及びＨＬＡデキストラマーからなる群から選択されてもよい。ここで、ＨＬＡ分子は、対象のＨＬＡに適合していることが好ましい。ＨＬＡ分子は、例えば、ＨＬＡ−Ａ２４抗原又はＨＬＡ−Ａ２抗原であってよい。ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を検出する工程は、フローサイトメトリー法による解析を含んでいてもよい。
また、上記試料に含まれる上記複合体を認識するＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の存在又は細胞数を調べることは、例えば、ＣＤ８陽性又はＣＤ８／ＣＤ３陽性のＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞に対するＨＬＡテトラマー結合細胞の割合を測定することにより行われてもよい。
ＨＬＡテトラマーに結合したＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の存在又は細胞数は、例えば、ＣＤ８陽性細胞、又はＣＤ８／ＣＤ３陽性細胞に対するＨＬＡテトラマー結合細胞の割合を測定することにより求めることができる。
ここでＣＤ８陽性細胞は、例えば蛍光標識したマウス抗ヒトＣＤ８モノクローナル抗体を用いて標識・検出することができる。またＣＤ３陽性細胞は蛍光標識したマウス抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体を用いて標識・検出することができる。
ここで用いる蛍光色素は、ＨＬＡテトラマーにおいて用いられる蛍光色素と異なるものを用いる必要がある。すなわち、ＰＥ標識したＨＬＡテトラマーを用いる場合は、ＦＩＴＣ標識したマウス抗ヒトＣＤ８モノクローナル抗体、及びＰｅｒＣＰ標識したマウス抗ヒトＣＤ３モノクローナル抗体を用いるというように、蛍光色素を区別する必要がある。
具体的な操作は、ＣＤ８陽性細胞に対するＨＬＡテトラマー結合細胞の割合を測定する場合は、例えば、ＰＥ標識ＨＬＡテトラマーと生体試料とを接触させた後、ＦＩＴＣ標識マウス抗ヒトＣＤ８モノクローナル抗体をさらに添加して反応させ、染色された細胞をフローサイトメーターや蛍光顕微鏡で解析する。ＣＤ８陽性細胞（ＣＤ８＋）を選択し、その中のテトラマー陽性細胞（ＣＤ８＋ｔｅｔｒａｍｅｒ＋）の割合を、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の割合とすることができる（以下）：
ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞（％）＝
（ＣＤ８＋ｔｅｔｒａｍｅｒ＋細胞数／ＣＤ８＋細胞数）×１００。
また、ＣＤ３陽性及びＣＤ８陽性細胞に対するＨＬＡテトラマー結合細胞の割合を測定する場合は、例えばＰＥ標識ＨＬＡテトラマーと生体試料とを接触させた後、ＦＩＴＣ標識マウス抗ヒトＣＤ８モノクローナル抗体及びＰｅｒＣＰ標識マウス抗ヒトＣＤ３抗体をさらに添加して反応させ、染色された細胞をフローサイトメーターや蛍光顕微鏡で解析する。ＣＤ３陽性及びＣＤ８陽性細胞（ＣＤ３＋ＣＤ８＋）を選択し、その中のテトラマー陽性細胞（ＣＤ３＋ＣＤ８＋ｔｅｔｒａｍｅｒ＋）の割合を、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の割合とすることができる（以下）：
ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞（％）＝
（ＣＤ３＋ＣＤ８＋ｔｅｔｒａｍｅｒ＋細胞数／ＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞数）×１００。
本実施形態の選択方法は、投与前の対象から採取した試料と比較して、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が増加していた場合に、対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程を含む。医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与する前の対象から採取した試料は、投与後の対象から採取した試料と同種である。例えば、投与前の対象から採取した試料が血液である場合には、投与後の対象から採取した試料も血液である。試料の採取のタイミングは適宜設定できるが、例えば、直近の投与後、投与直後〜１２ヶ月、投与直後〜６ヶ月、投与直後〜３ヶ月、投与直後〜２ヶ月、投与直後〜１ヶ月、投与直後〜４週間、投与直後〜３週間、投与直後〜２週間、投与直後〜１週間、投与直後〜３日間又は投与直後〜１日に採取した試料を用いることができる。また、例えば、投与直後以降及び／又は１２か月以内であってよく、例えば投与後１日、３日、１週間、２週間、３週間、４週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月若しくは６ヶ月未満又は以内に採取した試料を用いることができる。また、例えば、投与後１日、３日、１週間、２週間、３週間、４週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月若しくは６ヶ月以上又は超に採取した試料を用いることができる。投与回数は特に制限されず、１回〜１０００回、１回〜１００回、１回〜５０回、１回〜１０回、１回〜５回、１回〜３回、１回〜２回又は１回行ってもよい。投与回数は、例えば、１回以上又は１０００回未満であってよく、１００回、５０回、１０回、５回、４回、３回若しくは２回未満又は以内であってよく、１００回、５０回、１０回、５回、４回、３回若しくは２回以上又は超であってもよい。
ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が増加していた場合には、投与前の対象から採取した試料におけるＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が検出されず、投与後の対象から採取した試料においてＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が検出された場合も含まれる。
例えば、投与後の対象から採取した試料におけるＣＤ８ Ｔ細胞中のＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の比率（陽性率）が、投与前の対象から採取した試料におけるＣＤ８ Ｔ細胞中のＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の比率（陽性率）と比較して所定の比率以上増加していた場合に、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が増加していたとすることができる。また、例えば、
（ａ）投与前の対象から採取した試料におけるＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が検出されず、投与後の対象から採取した試料においてＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が検出され、その比率（陽性率）が基準値以上である場合、及び／又は
（ｂ）投与後の対象から採取した試料におけるＣＤ８ Ｔ細胞中のＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の比率（陽性率）が、投与前の対象から採取した試料におけるＣＤ８ Ｔ細胞中のＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の比率（陽性率）と比較して、所定の比率以上である場合
に、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が増加していたとすることができる。
（ａ）について
投与前の対象から採取した試料におけるＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が検出されない（存在しない）場合には、投与後の対象から採取した試料におけるＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の細胞数と比較した倍率を算出することができない。この場合には、例えば、予め設定した基準値以上であればＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が増加した（陽性）と判断することができる。例えば、当業者であれば、既に行っている試験の結果等を参考に、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が陽性であると判断される範囲を設定し、その範囲に含まれるＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の数について、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が増加した（陽性）と判断する基準となる値を適宜設定することができる。例えば、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を検出する工程が、フローサイトメトリー法による解析を含む場合、ＣＤ８が陽性且つＷＴ１ペプチドが陽性である細胞集団が含まれるゲートを設定し、その範囲に含まれる投与後の対象から採取した試料におけるＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞数（イベント）が基準値以上、例えば、１以上、２以上、３以上、４以上、５以上、６以上、７以上、８以上、９以上、１０以上、１５以上、又は２０以上であれば、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が増加した（陽性）と判断することができる。
（ｂ）について
投与前の対象から採取した試料におけるＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が検出された場合には、投与後の対象から採取した試料におけるＣＤ８ Ｔ細胞中のＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の比率（陽性率）が、投与前の対象から採取した試料におけるＣＤ８ Ｔ細胞中のＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の比率（陽性率）と比較して、所定の比率以上である場合に、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が増加した（陽性）と判断することができる。例えば、当業者であれば、既に行っている試験の結果等を参考に、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が陽性であると判断される範囲を設定し、その範囲に含まれるＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の数の投与前後の比率について、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が増加（陽性）と判断する基準となる値を適宜設定することができる。例えば、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を検出する工程が、フローサイトメトリー法による解析を含む場合、ＣＤ８が陽性且つＷＴ１テトラマーが陽性である細胞集団が含まれるゲートを設定し、その範囲に含まれる投与後の対象から採取した試料における投与後のＣＤ８ Ｔ細胞中のＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞比率（陽性率）が投与前と比較して維持されたとする比率以上である場合に、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が増加した（陽性）と判断することができる。また、維持されたとする比率以下である場合に、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が減少した（陰性）と判断することができる。維持されたとする比率は、例えば、０．１超〜５．０倍未満、０．５超〜２．０倍未満、０．８超〜１．２倍未満、０．９超〜１．１倍未満又は１．０倍等と設定することができる。維持されたとする比率は、例えば、０．０１、０．０５、０．１、０．１５、０．２、０．２５、０．３、０．３５、０．４、０．４５、０．５、０．５５、０．６、０．６５、０．７、０．７５、０．８、０．８５、０．９、０．９５若しくは１．０以上又は超であってよく、５．０倍、４．５倍、４．０倍、３．５倍、３．０倍、２．５倍、２．０倍、１．８倍、１．５倍、１．４倍、１．３倍、１．２倍、１．１倍若しくは１．０倍未満又は以下であってよい。
医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を複数回投与する場合には、例えば、各投与後のいずれかの時点でＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が増加した（陽性）又は変わらない（維持）と判定された場合、陽性判定又は維持判定とし、いずれの時点においてもＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が減少した（陰性）判定であった場合、陰性判定としてもよい。
上述したように、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の増加の有無に基づき、がんを治療又は予防するための医薬組成物の候補物質の効果を評価することも可能である。すなわち、本実施形態における、がんを治療又は予防するための医薬組成物の候補物質の効果を評価する方法は、上記医薬組成物又は上記医薬組成物に含まれるペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与した対象から採取した試料を用いて、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を検出する工程と、
投与前の上記対象から採取した試料と比較して、上記ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が増加していた場合に、上記候補物質はがんの治療及び予防に対して効果が期待できるとの指標を提供する工程とを含む。対象、試料、医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩等については上述したとおりである。
（５）遅延型過敏反応の有無
本発明は、別の形態において、遅延型過敏反応の有無に基づき、がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果を期待できる対象を選択する方法を提供する。
本実施形態の選択方法は、医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を複数回投与した対象において、遅延型過敏反応が検出された場合に、対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程を含む。対象、試料、医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩等については上述したとおりである。
医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与した対象に対して、同じ医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与すると、遅延型過敏反応が検出される場合がある。遅延型過敏反応（Ｄｅｌａｙｅｄ Ｔｙｐｅ Ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ、ＤＴＨ反応）は、Ｃｏｏｍｓ−Ｇｅｌｌ分類のＩＶ型に属する細胞性免疫機序によるアレルギー反応である。この遅延型過敏反応の有無は、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の免疫反応が誘導されているか否かの指標とすることができる。
遅延型過敏反応の試験（ＤＴＨ試験）は、医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を１回以上投与された対象に、同じ医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与することにより行うことができる。つまり、本実施形態の選択方法は、医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を１回以上投与した対象において、同じ医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与し、遅延型過敏反応が検出された場合に、対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供するものである。前者の１回以上の投与は、ＤＴＨ試験のための投与ではなく、後者の同じ医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩の投与が、ＤＴＨ試験のための投与に該当する。ここで、同じ医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩は、実質的に同じであればよく、例えば、１回以上投与された医薬組成物が２種類以上のペプチドが混合されたワクチンである場合に、ＤＴＨ試験において２種類以上のペプチドを別々に投与して試験することを妨げない。例えば、１回以上投与された医薬組成物がＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）のアミノ酸配列からなるペプチド、Ｃ−ＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：１０）のアミノ酸配列からなるペプチド、及びＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）のアミノ酸配列からなるペプチドを含む場合に、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）のアミノ酸配列からなるペプチド及びＣ−ＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：１０）のアミノ酸配列からなるペプチドと、Ｃ−ＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：１０）のアミノ酸配列からなるペプチドを別々に投与することでＤＴＨ試験を行ってもよい。また、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）のアミノ酸配列からなるペプチド及びＣ−ＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：１０）のアミノ酸配列からなるペプチドは、式３に示されるように、コンジュゲートの形態であってもよい。
ＤＴＨ試験において、医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩は通常皮内に投与される。対象に対して医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩が最初に投与される箇所とは、異なる箇所に投与されることが好ましい。ＤＴＨ試験のための投与後の判定のタイミングは当業者が適宜設定できるが、例えば、直近の投与後１時間〜１週間後、１２時間〜５日後、１日後〜３日後又は２日後に行うことができる。また、例えば、投与直後以降及び／又は１週間以内であってよく、例えば、投与後１日、２日、３日、４日、５日若しくは６日未満又は以内であってよく、投与後１日、２日、３日、４日、５日若しくは６日以上又は超であってよい。また、ＤＴＨ試験は異なるタイミングで複数回行い、結果の平均値により遅延型過敏反応の有無を判定することが好ましい。ＤＴＨ試験の回数は、例えば、２回以上及び／又は２０回以内であってよく、例えば、２回、３回、４回、５回、７回、１０回、１５回若しくは２０回未満又は以内であってよく、例えば、２回、３回、４回、５回、７回、１０回若しくは１５回以上又は超であってもよい。当業者であれば、遅延型過敏反応を検出するために十分な医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩の投与量を適宜設定することができる。
ＤＴＨ試験における遅延型過敏反応が検出されたか否か（遅延型過敏反応の有無）の判定については、例えば、医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を１回以上投与した対象において、ＤＴＨ試験のための医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与した箇所における反応と、上記対象におけるＤＴＨ試験のための上記医薬組成物又は上記ペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与していない箇所における反応を比較し、投与した箇所における反応と投与していない箇所における反応との差が基準値以上である場合に、遅延型過敏反応が検出された（遅延型過敏反応有り）とすることができる。対象における上記医薬組成物又は上記ペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与していない箇所とは、投与する医薬組成物又は上記ペプチド若しくはその薬学上許容される塩によって、全く何も投与していない箇所であってもよく、医薬組成物におけるペプチド若しくはその薬学上許容される塩以外の担体及び溶媒等のみ（ビークル）を投与した箇所であってもよい。
また、投与箇所と投与していない箇所の反応の差は、例えば、投与箇所と投与していない箇所（対照）との発赤長径の差から導き出すことができる。当業者であれば、ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応が陽性であると判定する基準値を適宜設定することができるが、例えば、投与していない箇所に対する投与箇所の皮膚における発赤長径が＋０．１ｍｍ〜１００ｍｍ間の値以上である場合に、遅延型過敏反応が検出されたとしてもよく、＋０．５ｍｍ〜５０ｍｍ間の値以上である場合に、遅延型過敏反応が検出されたとしてもよく、＋１ｍｍ〜１０ｍｍ間の値以上である場合に、遅延型過敏反応が検出されたとしてもよく、２ｍｍ以上である場合に、遅延型過敏反応が検出されたとしてもよい。それ以上であると遅延型過敏反応が検出されたとする上記発赤長径の範囲の下限値が０．１ｍｍ、０．２ｍｍ、０．３ｍｍ、０．４ｍｍ、０．５ｍｍ、０．６ｍｍ、０．７ｍｍ、０．８ｍｍ、０．９ｍｍ、１．０ｍｍであってよく、上限値が、１００ｍｍ、９０ｍｍ、８０ｍｍ、７０ｍｍ、６０ｍｍ、５０ｍｍ、４０ｍｍ、３０ｍｍ、２０ｍｍ、１５ｍｍ、１０ｍｍであってよい。投与していない箇所に対する投与箇所の皮膚における発赤長径に対応するスコアを予め設定しておき、スコアにより遅延型過敏反応の有無を判定することもできる。例えば、発赤長径が２ｍｍ未満をスコア０、２ｍｍ以上５ｍｍ未満をスコア＋／−、５ｍｍ以上１０ｍｍ未満をスコア１、１０ｍｍ以上１５ｍｍ未満をスコア２、１５ｍｍ以上をスコア３と設定することもできる。上記判定には、複数回投与後の対象におけるスコアの平均を用いてもよく、投与後の対象における最大のスコアを用いてもよい。
上述したように、遅延型過敏反応の有無に基づき、がんを治療又は予防するための医薬組成物の候補物質の効果を評価することも可能である。すなわち、本実施形態における、がんを治療又は予防するための医薬組成物の候補物質の効果を評価する方法は、医薬組成物又は上記医薬組成物に含まれるペプチド若しくはその薬学上許容される塩を複数回投与した対象において、遅延型過敏反応が検出された場合に、医薬組成物の候補物質はがんの治療及び予防に対して効果が期待できるとの指標を提供する工程を含む。
上記医薬組成物又は上記医薬組成物に含まれるペプチド若しくはその薬学上許容される塩を複数回投与した対象において、遅延型過敏反応が検出された場合に、上記候補物質はがんの治療及び予防に対して効果が期待できるとの指標を提供する工程を含む。対象、試料、医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩等については上述したとおりである。
（６）骨髄芽球の割合の変化
本実施形態の選択方法は、医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与した対象から採取された試料における骨髄芽球の割合を、上記医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与する前の対象から採取された試料における骨髄芽球の割合で除した値が、基準値未満又は以下であった場合に、上記対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程を含む。対象、試料、医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩等については上述したとおりである。
骨髄液等の試料における骨髄芽球の割合の、医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩の投与前後の変化が、小さいほど骨髄芽球が安定化しているといえる。例えば、医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩の投与後の対象における骨髄芽球の割合を、医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩の投与前の対象における骨髄芽球の割合で除した割合（以下、骨髄芽球の変化率ともいう）が、０％〜３００％以下、０％〜２００％以下、０％〜１５０％以下、０％〜１００％以下、０％〜５０％以下であった場合に、対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供するとしてもよい。ここで、骨髄芽球の変化率は、例えば、０％以上若しくは３００％未満又は以下であってよく、例えば、５０％、１００％、１５０％、２００％若しくは２５０％以上又は超であってもよく、５０％、１００％、１５０％、２００％若しくは２５０％未満又は以下であってもよい。
また、例えば、１時点から数時点の骨髄芽球の変化率の平均に基づき、上記基準値未満又は以下であると判断してもよく、又は１時点から数時点の骨髄芽球の変化率の最大値に基づき、上記基準値未満又は以下であると判断してもよく、例えば、上記基準値未満又は以下で２時点以上推移した場合に、上記基準値未満又は以下であると判断してもよい。上記時点は、医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩の投与後の骨髄芽球の割合の測定タイミングを意味する。骨髄芽球の割合の測定タイミングは、例えば、１日〜３６５日毎、１日〜１８０日毎、１日〜９０日毎、１日〜６０日毎、１日〜３０日毎、１日〜４週毎であってもよい。測定タイミングは、例えば、１日毎以上又は３６５日未満であってよく、１８０日、９０日、６０日、３０日、４週間、３週間、２週間、１週間、３日若しくは１日毎以上又は超であってもよく、１８０日、９０日、６０日、３０日、４週間、３週間、２週間、１週間若しくは３日未満又は以下であってもよい。また、例えば、治療後１００日までの骨髄芽球の変化率が、１５０％以下において２時点以上推移した場合に、骨髄芽球の変化率が１５０％以下であると判断することができる。
（７）性差
本実施形態の選択方法は、上記（１）〜（６）からなる群から選択される１又は２以上の組合せに基づき、効果が期待できる対象であるとの指標を提供することができるが、対象の性別が雄（対象がヒトである場合には男性）である場合には、対象は上記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程をさらに含んでもよい。
（がんの治療又は予防方法）
本実施形態のがんの治療又は予防方法は、上述した選択方法により、がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果を期待できる対象を選択する工程と、
選択された対象に対して医薬組成物を投与する工程とを含む。
本実施形態のがんの治療又は予防方法は、上述した（１）〜（６）からなる群から選択される１又は２以上の組合せに基づく選択方法により、がんを治療又は予防するための医薬組成物を投与する対象を決定し、当該医薬組成物を投与することを含む。また、本実施形態のがんの治療又は予防方法は、上述した（１）〜（６）からなる群から選択される１又は２以上の組合せに基づく選択方法により、対象にがんを治療又は予防するための医薬組成物を投与するか否かを決定し、対象に当該医薬組成物を投与することを含む。したがって、本実施形態のがんの治療又は予防方法は、例えば、（１）にて上述したように、ＴＰ５３遺伝子及び／又はＢＣＯＲ遺伝子における変異の有無を決定し、ＴＰ５３野生型及び／又はＢＣＯＲ野生型の対象に対してがんを治療又は予防するための医薬組成物を投与することを含む。本実施形態のがんの治療又は予防方法は、例えば、（２）にて上述したように、ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量を決定し、ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量が基準値未満又は以下であった対象に対して、がんを治療又は予防するための医薬組成物を投与することを含む。本実施形態のがんの治療又は予防方法は、例えば、（３）にて上述したように、ＩＰＳＳ−Ｒに基づく核型がＶｅｒｙ ｐｏｏｒ以外である対象に対して、がんを治療又は予防するための医薬組成物を投与することを含む。本実施形態のがんの治療又は予防方法は、例えば、（４）にて上述したように、医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与した対象から採取した試料を用いて、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を検出し、投与前の対象から採取した試料と比較して、上記ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が増加していた対象に対して、当該医薬組成物を投与することを含む。本実施形態のがんの治療又は予防方法は、例えば、（５）にて上述したように、医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を複数回投与したことにより、遅延型過敏反応が検出された対象に対して、当該医薬組成物を投与することを含む。本実施形態のがんの治療又は予防方法は、例えば、（６）にて上述したように、医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与した後の骨髄芽球の割合を、上記医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与する前の骨髄芽球の割合で除した値が、基準値未満又は以下であった対象に対して、当該医薬組成物を投与することを含む。
本実施形態のがんの治療又は予防方法における、製剤中の本実施形態の医薬組成物の投与量は、治療目的の疾患、患者の年齢、体重などにより適宜調整することができるが、０．０００１ｍｇ〜１０００ｍｇであってよく、０．００１ｍｇ〜１０００ｍｇであってよく、０．１ｍｇ〜１０ｍｇであってよい。例えば、１回の投与量は、１．７５ｍｇ〜１７．５ｍｇ、３．５ｍｇ〜１０．５ｍｇ又は１０．５ｍｇであってよい。また、１回の投与量は、０．０００１ｍｇ以上、０．０００５ｍｇ以上、０．００１ｍｇ以上、０．００５ｍｇ以上、０．０１ｍｇ以上、０．０５ｍｇ以上、０．１ｍｇ以上、０．２５ｍｇ以上、０．５ｍｇ以上、０．７５ｍｇ以上、１．０ｍｇ以上、１．２５ｍｇ以上、１．５ｍｇ以上、１．７５ｍｇ以上、２．０ｍｇ以上、２．２５ｍｇ以上、２．５ｍｇ以上、２．７５ｍｇ以上、３．０ｍｇ以上、３．２５ｍｇ以上、３．５ｍｇ以上、３．７５ｍｇ以上、４．０ｍｇ以上、４．２５ｍｇ以上、５．５ｍｇ以上、５．７５ｍｇ以上、６．０ｍｇ以上であってよく、１０００ｍｇ以下、７５０ｍｇ以下、５００ｍｇ以下、２５０ｍｇ以下、１２５ｍｇ以下、１００ｍｇ以下、５０ｍｇ以下、ｍｇ以下、４０ｍｇ以下、３５ｍｇ以下、３０ｍｇ以下、２５ｍｇ以下、２０ｍｇ以下、１５ｍｇ以下、１０ｍｇ以下であってよい。
投与方法としては、皮内投与、皮下投与、筋肉内投与、静脈内投与、経皮投与などが挙げられる。ＣＴＬを効率良く誘導する皮内投与及び皮下投与が好ましい。投与回数及び投与間隔は、治療又は予防目的の疾患、患者の個体差により適宜調整することができるが、通常複数回であり、数日〜数月に１回投与するのが好ましい。例えば、１日間〜６ヶ月毎に１回投与してもよく、３日間〜３ヶ月毎に１回投与してもよく、１週間〜４週間毎に１回投与してもよく、２週間〜４週間に１回投与してもよく、６週間、５週間、４週間、３週間、２週間又は１週間毎に１回投与してもよい。また、最小で１日間、２日間、３日間、４日間、５日間、６日間、１週間、２週間、３週間、４週間、５週間、６週間、７週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月毎、最大で１２ヶ月、１０ヶ月、８ヶ月、６ヶ月、５ヶ月、４ヶ月、３ヶ月、２ヶ月、１ヶ月、６週間、５週間、４週間、３週間、２週間、１週間、６日間又は５日間毎に１回投与してもよい。
上記投与のタイミングは、所定の期間が経過後、例えば、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、４ヶ月、５ヶ月、６ヶ月、７ヶ月、８ヶ月、９ヶ月、１０ヶ月、１１ヶ月又は１２ヶ月経過後に変更することも可能である。例えば、最初の６ヶ月間は、２週間毎に１回投与し、１ヶ月以降５ヶ月までは２週間毎に１回投与し、６ヶ月以降は、２週間〜４週間毎に１回投与するとすることもできる。例えば、最初の６ヶ月は２週間毎に投与し、その後は２週間〜４週間毎に投与するとすることもできる。
本実施形態は、がんの治療又は予防方法に使用するための医薬組成物も含む。医薬組成物、がんの治療又は予防方法等については、上述したとおりである。
本実施形態には、がんを治療又は予防するための医薬組成物を投与する対象を決定する方法も含まれる。対象は、上述した（１）〜（６）からなる群から選択される１又は２以上の組合せに基づき決定することができる。上記方法は、例えば、（１）にて上述したように、ＴＰ５３遺伝子及び／又はＢＣＯＲ遺伝子における変異の有無を決定し、ＴＰ５３野生型及び／又はＢＣＯＲ野生型の対象を、がんを治療又は予防するための医薬組成物を投与する対象に決定することを含む。また、上記方法は、例えば、（２）にて上述したように、ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量を決定し、ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量が基準値未満又は以下であった対象を、がんを治療又は予防するための医薬組成物を投与する対象に決定することを含む。また、上記方法は、例えば、（３）にて上述したように、ＩＰＳＳ−Ｒに基づく核型がＶｅｒｙ ｐｏｏｒ以外である対象を、がんを治療又は予防するための医薬組成物を投与する対象に決定することを含む。また、上記方法は、例えば、（４）にて上述したように、医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与した対象から採取した試料を用いて、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を検出し、投与前の対象から採取した試料と比較して、上記ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が増加していた対象を、当該医薬組成物を投与する対象に決定することを含む。また、上記方法は、例えば、（５）にて上述したように、医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を複数回投与したことにより、遅延型過敏反応が検出された対象を、当該医薬組成物を投与する対象に決定することを含む。また、上記方法は、例えば、（６）にて上述したように、医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与した後の骨髄芽球の割合を、上記医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与する前の骨髄芽球の割合で除した値が、基準値未満又は以下であった対象を、当該医薬組成物を投与する対象に決定することを含む。
本実施形態には、がんを治療又は予防するための医薬組成物を投与するか否かを決定する方法も含まれる。がんを治療又は予防するための医薬組成物を投与するか否かは、上述した（１）〜（６）からなる群から選択される１又は２以上の組合せに基づき決定することができる。上記方法は、例えば、（１）にて上述したように、対象から採取した試料を用いてＴＰ５３遺伝子及び／又はＢＣＯＲ遺伝子における変異の有無を決定し、ＴＰ５３野生型及びＢＣＯＲ野生型の場合には、がんを治療又は予防するための医薬組成物を対象に投与し、ＴＰ５３変異型及び／又はＢＣＯＲ変異型の場合には、がんを治療又は予防するための医薬組成物を対象に投与しないことを決定することを含む。また、上記方法は、例えば、（２）にて上述したように、対象から採取した試料におけるＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量を決定し、ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量が基準値未満又は以下であった場合には、がんを治療又は予防するための医薬組成物を対象に投与し、ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量が基準値以上又は基準値超であった場合には、がんを治療又は予防するための医薬組成物を対象に投与しないことを決定することを含む。また、上記方法は、例えば、（３）にて上述したように、対象のＩＰＳＳ−Ｒに基づく核型がＶｅｒｙ ｐｏｏｒ以外である場合には、がんを治療又は予防するための医薬組成物を対象に投与し、対象のＩＰＳＳ−Ｒに基づく核型がＶｅｒｙ ｐｏｏｒである場合には、がんを治療又は予防するための医薬組成物を対象に投与しないことを決定することを含む。また、上記方法は、例えば、（４）にて上述したように、医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与した対象から採取した試料を用いて、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を検出し、投与前の対象から採取した試料と比較して、上記ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が増加していた場合には、当該医薬組成物を対象に投与し、上記ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が維持又は減少していた場合には、当該医薬組成物を対象に投与しないことを決定することを含む。また、上記方法は、例えば、（５）にて上述したように、医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を複数回投与したことにより、対象において遅延型過敏反応が検出された場合には、当該医薬組成物を対象に投与し、対象において遅延型過敏反応が検出されない場合には、当該医薬組成物を対象に投与しないことを決定することを含む。また、上記方法は、例えば、（６）にて上述したように、医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与した後の骨髄芽球の割合を、上記医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与する前の骨髄芽球の割合で除した値が、基準値未満又は以下であった場合に、当該医薬組成物を対象に投与し、基準値以上又は基準値超であった場合には、当該医薬組成物を対象に投与しないことを決定することを含む。
本実施形態には、がんを治療又は予防するための医薬組成物を投与すべき対象をスクリーニングする方法も含まれる。上記スクリーニングは、上述した（１）〜（６）からなる群から選択される１又は２以上の組合せに基づき実施することができる。上記方法は、例えば、（１）にて上述したように、ＴＰ５３遺伝子及び／又はＢＣＯＲ遺伝子における変異の有無を決定し、ＴＰ５３野生型及び／又はＢＣＯＲ野生型の対象を選択することを含む。また、上記方法は、例えば、（２）にて上述したように、ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量を決定し、ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量が基準値未満又は以下であった対象を選択することを含む。また、上記方法は、例えば、（３）にて上述したように、ＩＰＳＳ−Ｒに基づく核型がＶｅｒｙ ｐｏｏｒ以外である対象を選択することを含む。また、上記方法は、例えば、（４）にて上述したように、医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与した対象から採取した試料を用いて、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を検出し、投与前の対象から採取した試料と比較して、上記ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が増加していた対象を選択することを含む。また、上記方法は、例えば、（５）にて上述したように、医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を複数回投与したことにより、遅延型過敏反応が検出された対象を選択することを含む。また、上記方法は、例えば、（６）にて上述したように、医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与した後の骨髄芽球の割合を、上記医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与する前の骨髄芽球の割合で除した値が、基準値未満又は以下であった対象を選択することを含む。
以下に実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明は何らこれらに限定されるも
のではない。
〔実施例１：本実施例における対象及びＷＴ１ペプチドカクテルワクチンの効果〕
以下の実施例は特に言及しない限り原則として、インフォームドコンセントを取得した再発・難治性骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）患者のうち、下記の式（３）に示されるＷＴ１キラーペプチドコンジュゲート及びＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）で表されるＷＴ１ヘルパーペプチドを含むＷ／Ｏエマルション形態のカクテルワクチン（国際公開２０１４／１５７６９２号参照。以下、ＷＴ１ペプチドカクテルワクチンともいう）の第１及び２相臨床試験に参加した患者数は４７症例であり、そのＨＬＡ型に関する内訳は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１又はＨＬＡ−Ａ＊０２：０６陽性の骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）患者１２症例、ＨＬＡ−Ａ＊２４：０２陽性のＭＤＳ患者２８症例、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１陽性かつＨＬＡ−Ａ＊２４：０２陽性のＭＤＳ患者５症例、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０６陽性かつＨＬＡ−Ａ＊２４：０２陽性のＭＤＳ患者２症例である。また、第１相試験における症例は、高リスク患者（Ｈ）７症例に加え、低リスク患者（Ｌ）５症例を含んでおり、第２相試験における症例は高リスク患者（Ｈ）３５症例である、本実施例では高リスク患者のみを対象とし、アザシチジン無効高リスク患者４２症例（第１相試験の７症例と第２相試験の３５症例の合計）を対象として行った。なお、上記高リスク患者は、改訂ＩＰＳＳ（ＩＰＳＳ−Ｒ）におけるリスク分類において、Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ〜Ｖｅｒｙ ｈｉｇｈの患者に該当する。アザシチジン無効高リスク患者４２症例には、アザシチジンが奏功しないか又は奏功しなくなった患者４０症例、アザシチジンの副作用により、投与が継続できなかった症例２症例が含まれる。
Figure 2020175657
 （式中、ＣとＣの間の結合はジスルフィド結合を表す。）で表される
第１及び２相臨床試験においては、ワクチン誘導として、６ヶ月間、２週間毎に上記ＷＴ１ペプチドカクテルワクチンを皮内投与（ＩＤ）し、その後は投与を中止するまで２週間〜４週間毎の投与を継続した。第１相試験では、コホート１は投与量を３．５ｍｇ（ＷＴ１キラーペプチドコンジュゲート２ｍｇ＋ＷＴ１ヘルパーペプチド１．５ｍｇ）、コホート２は投与量を１０．５ｍｇ（ＷＴ１キラーペプチドコンジュゲート６ｍｇ＋ＷＴ１ヘルパーペプチド４．５ｍｇ）として行った。第２相試験では、推奨投与量１０．５ｍｇ（ＷＴ１キラーペプチドコンジュゲート６ｍｇ＋ＷＴ１ヘルパーペプチド４．５ｍｇ）により行った。
本試験における生存期間中央値（ｍＯＳ）は、８．６ヶ月（９０％信頼区間６．８−１１．１ヶ月）であり、ヒストリカルデータ（９５％信頼区間５．０−７．２ヶ月、Prebet et al., Journal of Clinical Oncology 29, no.24, p3322-3327 (2011)）の５．６ヶ月と比較して延長傾向にあることが分かった。
〔実施例２：ＷＴ１ペプチドワクチンの効果及び核型の影響〕
実施例１におけるＷＴ１ペプチドカクテルワクチンの試験結果と、リゴサチブのＯＮＴＩＭＥ試験（第３相臨床試験、Garcia-Manero et al., The Lancet Oncology 17, no.4, p496-508 (2016)のTable S1 “MDS cytogenetic prognosis”）における対照（リゴサチブ試験のＢＳＣ）との比較を行った結果を図１に示す。なお、リゴサチブの第３相試験における患者集団との違いを考慮し、アザシチジンの副作用による無効症例２症例及び芽球数＜５％以下のハイリスク症例６症例、及び核型不明の１症例を、実施例１の４２症例から除いた３３症例で比較を実施している。
核型別のｍＯＳは、核型Ｖｅｒｙ ｐｏｏｒを除くＧｏｏｄ／Ｖｅｒｙ ｇｏｏｄ〜Ｐｏｏｒ群では、リゴサチブ試験のＢＳＣと比較して長い傾向にあり、ｍＯＳの延長がＷＴ１ペプチドカクテルワクチンの効果によるものである可能性が示唆された。核型Ｖｅｒｙ ｐｏｏｒ群では、ＷＴ１ペプチドカクテルワクチン投与群のｍＯＳはリゴサチブ試験のＢＳＣと同等であった。
〔実施例３：ＷＴ１ペプチドワクチンによる治療の効果が期待できる患者を選択するための遺伝子バイオマーカーの探索〕
実施例１に記載の高リスク症例４２症例のうち、インフォームドコンセントを取得した２９症例について骨髄異形性症候群（ＭＤＳ）に関連する遺伝子検査を実施した。２９症例中、アザシチジンの副作用による無効症例である１症例を除く２８症例を続く遺伝子解析に用いた。ＷＴ１ペプチドカクテルワクチンの投与開始前２８日以内に、患者から骨髄液を採取した。
骨髄液からのＤＮＡ抽出及び検体の品質評価
骨髄液０．５ｍＬのサンプルから、Ｗｉｚａｒｄ Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（プロメガ株式会社）を用いて、本キット付属のプロトコル（３Ａ Ｉｓｏｌａｔｉｎｇ Ｇｅｎｏｍｉｃ ＤＮＡ ｆｒｏｍ ｗｈｏｌｅ ｂｌｏｏｄ）に従って、ＤＮＡの抽出を行った。
抽出したＤＮＡの品質評価として、アガロースゲル電気泳動により、高分子領域に明確なバンドが検出できるかを確認した。また、Ｑｕａｎｔ−ｉＴ ＰｉｃｏＧｒｅｅｎ ｄｓＤＮＡ Ａｓｓａｙ Ｋｉｔ（Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）を用いてプレートリーダーで蛍光強度を測定し、検量線から濃度を算出した。
次世代シーケンス法（ＮＧＳ）によるアッセイ
急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、骨髄異形性症候群（ＭＤＳ）、骨髄増殖性腫瘍（ＭＰＮ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、慢性骨髄単球性白血病（ＣＭＭＬ）、及び若年性骨髄単球性白血病（ＪＭＭＬ）等の骨髄性悪性腫瘍に関連した変異をターゲットとしたＴｒｕＳｉｇｈｔ Ｍｙｅｌｏｉｄ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ Ｐａｎｅｌ（イルミナ株式会社）を用いて、次世代シーケンス法（ＮＧＳ）によりアッセイを行った。骨髄液より抽出したゲノムＤＮＡに対して、ＴｒｕＳｉｇｈｔ Ｍｙｅｌｏｉｄ Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ Ｐａｎｅｌが対象とする配列を解析した。上記パネルを用いて測定対象領域を増幅しライブラリを作製した後、ＡｇｉｌｅｎｔＤＮＡ１０００ Ｋｉｔ（アジレントテクノロジーズ社）を用いた電気泳動分析で鎖長分布を確認し、リアルタイムＰＣＲ装置（アプライドバイオシステム社）を用いて定量を行った。定量結果をライブラリ平均サイズで補正し、ライブラリ濃度を算出した。ＭｉＳｅｑ(イルミナ社)で塩基配列を決定した。上記パネルは、以下の表１に示された４０遺伝子が網羅されている。
Figure 2020175657
バイオインフォマティクス解析
上記ＭｉＳｅｑ（イルミナ株式会社）にて決定した塩基配列を、ＭｉＳｅｑ Ｒｅｐｏｒｔｅｒ（イルミナ株式会社）を用いたバイオインフォマティクス解析によって遺伝子変異を解析した。
結果
遺伝子変異解析の結果を表２に示す。表中の太横線はｍＯＳを表す線であり、上から下へ行くほど生存期間（ＯＳ）が長くなる順番になっている。なお、ＩＰＳＳ−Ｒ核型がＧｏｏｄ／Ｖｅｒｙ ｇｏｏｄ又はＩｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅである患者のＩＰＳＳ−Ｒ核型の記載は省略している。
Figure 2020175657
ＴＰ５３変異型又はＢＣＯＲ変異型の症例は、ＯＳが短い傾向にあることが分かった。これにより、ＴＰ５３及びＢＣＯＲ遺伝子における変異の有無が、ＷＴ１ペプチドワクチンによる治療の効果が期待できる患者を選択するための遺伝子マーカーとして有用である可能性が示唆された。また、ＯＳの短い集団に核型Ｖｅｒｙ ｐｏｏｒの症例が多い傾向が見られた。
〔実施例４：ＴＰ５３／ＢＣＯＲ遺伝子変異の遺伝子マーカーとしての有用性〕
ＴＰ５３及びＢＣＯＲ遺伝子における変異の有無の遺伝子マーカーとしての有用性を検証するため、上記変異の有無による生存曲線の比較を行った。
実施例１に記載の患者を、ＴＰ５３野生型及びＢＣＯＲ野生型である患者１７症例、ＴＰ５３変異型又はＢＣＯＲ変異型である患者１１症例に分け、生存曲線を比較した。図２に示されるように、ＴＰ５３野生型及びＢＣＯＲ野生型の全生存期間中央値（ｍＯＳ）は、ＴＰ５３又はＢＣＯＲ変異型のｍＯＳと比較して長い傾向にあった。
さらに、ＴＰ５３野生型及びＢＣＯＲ野生型１７症例、ＴＰ５３変異型又はＢＣＯＲ変異型１１症例について、後述するＨＬＡテトラマーアッセイ及び遅延型過敏反応により、ＷＴ１ペプチドカクテルワクチンによって誘導されるＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応を確認した。ＴＰ５３野生型及びＢＣＯＲ野生型、又はＴＰ５３変異型若しくはＢＣＯＲ変異型について、生存期間（ＯＳ）及び免疫反応を比較した結果を図３に示す。なお、図３に示される結果は、免疫反応の判定が不能であった４症例を除く、ＴＰ５３野生型及びＢＣＯＲ野生型１５症例、ＴＰ５３変異型又はＢＣＯＲ変異型９症例に関するものである。
ＴＰ５３野生型及びＢＣＯＲ野生型については、全生存期間が長い傾向にあることが示された。また、ＴＰ５３野生型及びＢＣＯＲ野生型は、免疫反応が陽性である症例が多く見受けられた（１４症例／１５症例）。一方、ＴＰ５３変異型又はＢＣＯＲ変異型は、免疫反応の陽性・陰性にかかわらず、全生存期間が短い傾向にあることが示された。
これにより、ＴＰ５３及びＢＣＯＲ遺伝子における変異の有無が、ＷＴ１ペプチドワクチンによる治療の効果が期待できる患者を選択するための遺伝子マーカーとして有用であることが示された。
〔実施例５：ＷＴ１ ｍＲＮＡの遺伝子マーカーとしての有用性 １〕
実施例１のアザシチジン無効高リスク患者４２症例のうち、アザシチジンの副作用による無効症例である２症例を除く４０症例について、ＷＴ１ ｍＲＮＡの発現を確認した。
末梢血からのＤＮＡ抽出及び検体の品質評価
ＷＴ１ペプチドカクテルワクチンの投与開始前２８日以内に、患者から末梢血及び骨髄液を採取した。全血７ｍＬ又は骨髄液０．５ｍＬより、ＲＮＡ全自動精製装置ＱＩＡｃｕｂｅ（Ｑｉａｇｅｎ社）を用いてＲＮＡの抽出及び精製を行った。ＱＩＡｃｕｂｅユーザーマニュアルに従い、ＲＮｅａｓｙ ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ社）の試薬やチューブ等、及びサンプルをセットした。ＱＩＡｃｕｂｅに保存されている、ＱＩＡｃｕｂｅ Ｓｔａｎｄａｒｄ ＰｒｏｇｒａｍからＲＮｅａｓｙ−Ｍｉｎｉ− ｐｒｏｇｒａｍを選択し、ＲＮＡを抽出した。
ＷＴ１ ｍＲＮＡの発現解析
ＷＴ１ ｍＲＮＡの発現解析は、ＷＴ１ ｍＲＮＡ測定キットII「オーツカ」（大塚製薬株式会社）を用いて行った。以下、特に言及しないかぎり試薬は上記キット付属のものを使用した。
ＲＮａｓｅ ｆｒｅｅ水を添加することにより抽出したＲＮＡの濃度を５０ｎｇ／μＬに調整した。ＷＴ１・ＧＡＰＤＨ混合ＲＮＡ標準液を標準液１、標準液１を標準液希釈液で１０倍希釈したものを標準液２、同様に１０倍希釈を繰り返し、標準液５まで調製した。１反応あたり、ＲＴ−ＰＣＲ用ミックス液（Ｒ１）１０μＬ及び金属イオン溶液５μＬの割合で混和したものを反応液とした。リアルタイムＰＣＲ装置（アプライドバイオシステムズ ７５００ Ｆａｓｔ Ｄｘ、アプライドバイオシステムズ社）を使用し、上記キットに付属のプロトコルの「３．測定操作」に従ってＲＴ−ＰＣＲ反応を行った。標準液１〜５より作成した標準曲線を用いて、サンプルのＷＴ１ ｍＲＮＡ及びＧＳＤＰＨ ｍＲＮＡの測定値を算出した。
上記キットに付属のプロトコルの「４．ＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量の算出方法」に従って、以下のようにＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量を算出した。
具体的には以下の式に示すように、ＷＴ１ ｍＲＮＡ測定値をＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡ測定値で除した値（ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡ １コピーあたりのＷＴ１ ｍＲＮＡコピー数）に、健康成人の１μｇ ＲＮＡあたりの平均ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡコピー数（ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡ発現量）を乗じてＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量を算出した。なお、２．７×１０７（コピー／μｇ ＲＮＡ）は、健康成人の１μｇ ＲＮＡあたりの平均ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡ測定値である。
Figure 2020175657
結果（１）
ＷＴ１ ｍＲＮＡの発現解析の結果を図４に示す。４０症例中全症例において末梢血中にＷＴ１ ｍＲＮＡの発現が認められた。ＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量が１００００コピー／μｇ ＲＮＡ未満である症例のｍＯＳは、ＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量が１００００コピー／μｇ ＲＮＡ以上である症例のｍＯＳと比較して長い傾向にあった。
さらに、ＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量が１００００コピー／μｇ ＲＮＡ未満である２７症例、ＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量が１００００コピー／μｇ ＲＮＡ以上である１３症例について、後述するＨＬＡテトラマーアッセイ及び遅延型過敏反応によりＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応を確認した。ＷＴ１ ｍＲＮＡの発現量について、生存期間（ＯＳ）及びＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応を比較した結果を図５に示す。なお、図５に示される結果は、ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応の判定が不能であった４症例を除く、ＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量が１００００コピー／μｇ ＲＮＡ未満である２５症例、ＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量が１００００コピー／μｇ ＲＮＡ以上である１１症例に関するものである。
ＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量が１００００コピー／μｇ ＲＮＡ未満である症例群については、ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応が認められた症例のＯＳが長い傾向にあることが示された。一方、ＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量が１００００コピー／μｇ ＲＮＡ以上である症例群は、ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応の陽性と陰性によるＯＳに差は見られなかった。また、末梢血中のＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量と骨髄液中のＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量が相関関係にあり、骨髄液中でも同様の傾向が見られることも確認した（図１６）。
結果（２）
ＷＴ１ ｍＲＮＡの発現解析の結果を図６に示す。４０症例中全症例において末梢血中にＷＴ１ ｍＲＮＡの発現が認められた。ＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量が４０００コピー／μｇ ＲＮＡ未満である症例のｍＯＳは、ＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量が４０００コピー／μｇ ＲＮＡ以上である症例のｍＯＳと比較して長い傾向にあった。
さらに、ＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量が４０００コピー／μｇ ＲＮＡ未満である２２症例、ＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量が４０００コピー／μｇ ＲＮＡ以上である１８症例について、後述するＨＬＡテトラマーアッセイ及び遅延型過敏反応によりＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応を確認した。ＷＴ１ ｍＲＮＡの発現量について、生存期間（ＯＳ）及びＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応を比較した結果を図７に示す。なお、図７に示される結果は、ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応の判定が不能であった４症例を除く、ＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量が４０００コピー／μｇ ＲＮＡ未満である２１症例、ＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量が４０００コピー／μｇ ＲＮＡ以上である１５症例に関するものである。
ＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量が４０００コピー／μｇ ＲＮＡ未満である症例群については、ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応が認められた症例のＯＳが長い傾向にあることが示された。一方、ＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量が４０００コピー／μｇ ＲＮＡ以上である症例群は、ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応の陽性・陰性によるＯＳに差は見られなかった。また、末梢血中のＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量と骨髄液中のＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量が相関関係にあり、骨髄液中でも同様の傾向が見られることも確認した（図１６）。
これにより、ＷＴ１ ｍＲＮＡの発現量が、ＷＴ１ペプチドワクチンによる治療の効果が期待できる患者を選択するための遺伝子マーカーとして有用であることが示された。また、上記マーカーの基準値として、１００００コピー／μｇ ＲＮＡ及び４０００コピー／μｇ ＲＮＡの両方が有用であることが示された。
〔実施例６：ＨＬＡテトラマーアッセイによるＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応の検出〕
ＷＴ１ペプチドカクテルワクチンの投与前後に患者から採取した血液について、テトラマー試薬を用いてフローサイトメトリー法により、リンパ球中又はＣＤ８陽性リンパ球中のＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞比率の測定を実施した。
投与及び採血
実施例１のアザシチジン無効高リスク患者４２症例について検査を実施した。ＨＬＡ型に関する４２症例の内訳は、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１あるいはＨＬＡ−Ａ＊０２：０６陽性の骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）患者１０症例、ＨＬＡ−Ａ＊２４：０２陽性のＭＤＳ患者２５症例、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１陽性かつＨＬＡ−Ａ＊２４：０２陽性のＭＤＳ患者５症例、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０６陽性かつＨＬＡ−Ａ＊２４：０２陽性のＭＤＳ患者２症例である。患者からの末梢血の採取及びアッセイは、医薬組成物の投与開始前２８日以内、２回目投与後１５日目、６回目投与後１５日目、１２回目投与後１５日目、１８回目投与後１５日目、以降６回投与毎に投与後１５日目、最終投与後２８日以内に行った。投与は一回につきＷＴ１ペプチドカクテルワクチン１．７５ｍｇ、３．５ｍｇ又は１０．５ｍｇを患者に皮内投与した。
ＨＬＡテトラマー試薬
ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞はＨＬＡ拘束性があるため、患者のＨＬＡに適合したテトラマー試薬を用いて測定を行った。ＨＬＡ−Ａ＊２４：０２陽性の患者用として、ＷＴ１タンパク質のＣＹＴＷＮＱＭＮＬから成るペプチド（配列番号：４）を用いて作製された蛍光色素Ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ（ＰＥ）標識ＨＬＡ−Ａ＊２４：０２のテトラマー（Ｔ−Ｓｅｌｅｃｔ ＨＬＡ−Ａ＊２４：０２ ＷＴ１（ｍｕｔａｎｔ）Ｔｅｔｒａｍｅｒ−ＣＹＴＷＮＱＭＮＬ ＰＥ標識、株式会社医学生物学研究所）を用いた。以下、本試薬を「ＰＥ標識ＷＴ１ ２４０２」とも表す。
ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１又はＨＬＡ−Ａ＊０２：０６陽性の患者用として、ＷＴ１タンパク質のＲＭＦＰＮＡＰＹＬから成るペプチド（配列番号：２）を用いて作製された蛍光色素アロフィコシアニン（ＡＰＣ）標識ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１のテトラマー（Ｔ−Ｓｅｌｅｃｔ ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１ ＷＴ１１２６−１３４ Ｔｅｔｒａｍｅｒ−ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ−ＡＰＣ、株式会社医学生物学研究所、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１及びＨＬＡ−Ａ＊０２：０６の両方を検出可能）及びＷＴ１タンパク質のＶＬＤＦＡＰＰＧＡから成るペプチド（配列番号：９）を蛍光色素Ｐｈｙｃｏｅｒｙｔｈｒｉｎ（ＰＥ）で標識したＨＬＡ−Ａ＊０２：０１のテトラマー（ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１ Ｔｅｔｒａｍｅｒ−ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ−ＰＥ、株式会社医学生物学研究所に委託製造、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１及びＨＬＡ−Ａ＊０２：０６の両方を検出可能）を用いた。以下、前者の試薬を「ＡＰＣ標識ＷＴ１ ０２０１」、後者の試薬を「ＰＥ標識ＷＴ１ ０２０１」とも表す。テトラマー試薬は使用前にマイクロチューブに入れ、室温にて１６２０×ｇで５分間遠心し上清を使用した。
染色
ＨＬＡ−Ａ＊２４：０２を持つ患者対象の染色は以下のように行った。
サンプル用チューブに採取した血液を２．５ｍＬ及びコントロール用チューブに残りの血液を分注した。サンプル用チューブにＰＥ標識ＷＴ１ ２４０２を５μＬ添加した。暗所・室温で１０分反応させた後、サンプル用チューブにＦＩＴＣ標識ＣＤ８（サイトスタット／コールタークローンＴ８−ＦＩＴＣ、ベックマン・コールター株式会社）を１５μＬ、７−ＡＡＤ（７−ＡＡＤ Ｓｔａｉｎｉｎｇ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ、日本ベクトン・ディッキンソン株式会社）、ＰＣ５標識ＣＤ４（ＩＯ Ｔｅｓｔ ＣＤ４−ＰＣ５、ベックマン・コールター株式会社）、ＰＣ５標識ＣＤ１９（ＩＯ Ｔｅｓｔ ＣＤ１９−ＰＣ５、ベックマン・コールター株式会社）を各１２．５μＬずつ添加し撹拌した。室温で１５分反応させた後、Ｌｙｓｉｎｇ ｓｏｌｕｔｉｏｎ調製液（ＢＤ ＦＡＣＳＴＭ Ｌｙｓｉｎｇ ｓｏｌｕｔｉｏｎ（日本ベクトン・ディッキンソン株式会社）を精製水で１０倍希釈したもの）を２６ｍＬずつ添加した後、攪拌し、室温で１０分静置後、３００×ｇで５分遠心した。アスピレーターで上清を吸引除去し、攪拌後３０ｍＬのアジ化ＰＢＳ（１％アジ化ナトリウム含有ＰＢＳ）を各チューブに分注して、３００×ｇで５分遠心した。アスピレーターで上清を吸引除去後、３００μＬのＣｅｌｌＦｉｘ調製液（ＢＤ ＦＡＣＳ Ｃｅｌｌ Ｆｉｘ、日本ベクトン・ディッキンソン株式会社）に再浮遊させ、測定用チューブに移し替えた。
ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１又はＨＬＡ−Ａ＊０２：０６を持つ患者対象の染色は以下のように行った。
サンプル用チューブに採取した血液を２．５ｍＬ及びコントロール用チューブに残りの血液を分注した。サンプル用チューブにＡＰＣ標識ＷＴ１ ０２０１とＰＥ標識ＷＴ１ ０２０１を５μＬずつ添加した。暗所・室温で１０分反応させた後、サンプル用チューブＦＩＴＣ標識ＣＤ８を１５μＬ、７−ＡＡＤ、ＡＰＣ−Ｈ７標識ＣＤ３（ＣＤ３ ＡＰＣ−Ｈ７標識、日本ベクトン・ディッキンソン株式会社）、Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ標識ＣＤ４（ＩＯＴｅｓｔ ＣＤ４−Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ、ベックマン・コールター株式会社）、ＰＥ−Ｃｙ７標識ＣＤ１９（ＩＯＴｅｓｔ ＣＤ１９−ＰＣ７、ベックマン・コールター株式会社）を各１２．５μＬずつ添加し撹拌した。室温で１５分反応させた後、Ｌｙｓｉｎｇ ｓｏｌｕｔｉｏｎ調製液を２６ｍＬずつ添加した後、よく攪拌した。室温で１０分静置後、３００×ｇで５分遠心した。アスピレーターで上清を吸引除去し、攪拌後３０ｍＬのアジ化ＰＢＳを各チューブに分注して、３００×ｇで５分遠心した。アスピレーターで上清を吸引除去後、３００μＬのＣｅｌｌＦｉｘ調製液に再浮遊させ、測定用チューブに移し替えた。
ＨＬＡ−Ａ＊２４：０２及び、ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１又はＨＬＡ−Ａ＊０２：０６の両方を持つ患者対象の染色は、ＨＬＡ−Ａ＊２４：０２を持つ患者対象の染色及びＨＬＡ−Ａ＊０２：０１あるいはＨＬＡ−Ａ＊０２：０６を持つ患者対象の染色の両方の操作により行った。
フローサイトメトリー解析
フローサイトメトリー法により、リンパ球中又はＣＤ８陽性リンパ球中のＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞比率の測定を実施した。
上記で作成したサンプルをフローサイトメーターＦＡＣＳ ＣａｎｔｏＩＩ（ＢＤ ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）で測定した。フローサイトメーターでは細胞の特性（大きさ及び内部構造）に応じた強度の散乱光（大きさを反映した前方散乱光（ＦＳＣ）及び内部構造を反映した側方散乱光（ＳＳＣ））、並びに結合した標識抗体量に依存した蛍光が発生する。サンプル中の個々の細胞について、これらのパラメータの強度を測定した。得られたパラメータの強度を基に個々の細胞の分布をグラフ化することにより、特定のポピュレーションを算出することができる。細胞の大きさと内部構造からリンパ球に相当し、かつ抗ＣＤ４抗体・抗ＣＤ１９抗体・７−ＡＡＤ ｓｔａｉｎｉｎｇ ｓｏｌｕｔｉｏｎが陰性、さらに抗ＣＤ８抗体のみ陽性（ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１あるいはＨＬＡ−Ａ＊０２：０６を持つ患者対象）あるいは抗ＣＤ３抗体・抗ＣＤ８抗体が両方とも陽性（ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１／０６を持つ患者対象）となるリンパ球分画を抽出して、当該分画でのテトラマー陽性／リンパ球分画又はテトラマー陽性／ＣＤ８陽性細胞分画を評価した。ＦＩＴＣ標識ＣＤ８陽性且つＰＥ標識ＷＴ１ ２４０２陽性細胞集団のゲートは、ｙ軸の１０３を目安に設定した（ゲートＣＤ８（＋）ｔｅｔ（＋））。ＦＩＴＣ標識ＣＤ８陽性且つＰＥ標識ＷＴ１ ０２０１陽性細胞集団のゲートは、ｙ軸の３ｘ１０２を目安に設定した（ゲートＣＤ８（＋）ｔｅｔ（＋））。ＦＩＴＣ標識ＣＤ８陽性且つＡＰＣ標識ＷＴ１ ０２０１陽性細胞集団のゲートは、ｙ軸の３ｘ１０２を目安に設定した（ゲートＣＤ８（＋）ｔｅｔ（＋））。
ＨＬＡ−Ａ＊２４：０２患者では、ＷＴ１ペプチドカクテルワクチンの投与前にゲートＣＤ８（＋）ｔｅｔ（＋）にイベントを認めた場合はＷＴ１ペプチドカクテルワクチンの投与前後のＣＤ８強陽性リンパ球を分母としたＰＥ標識ＷＴ１ ２４：０２陽性細胞の比率を比較した。投与前にゲートＣＤ８（＋）ｔｅｔ（＋）にイベントを認めない場合は、投与後にゲートＣＤ８（＋）ｔｅｔ（＋）内のイベント数を算出した。ＨＬＡ−Ａ＊０２：０１あるいはＨＬＡ−Ａ＊０２：０６患者では、ＷＴ１ペプチドカクテルワクチンの投与前にゲートＣＤ８（＋）ｔｅｔ（＋）にイベントを認めた場合は、ＷＴ１ペプチドカクテルワクチンの投与前後のＣＤ８強陽性リンパ球を分母としたＰＥ標識ＷＴ１ ０２：０１あるいは０２：０６陽性細胞かつＡＰＣ標識ＷＴ１ ０２：０１あるいは０２：０６陽性細胞の比率を比較した。投与前にゲートＣＤ８（＋）ｔｅｔ（＋）にイベントを認めない場合は、投与後にゲートＣＤ８（＋）ｔｅｔ（＋）内のイベント数を算出した。ＨＬＡテトラマーアッセイによるＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応が陽性か陰性かの判断するための基準を以下のように設定した。投与後、いずれかの時点で陽性又は維持と判定された場合、ＨＬＡテトラマーアッセイによる判定は陽性又は維持とした。投与後、いずれの時点においても陰性判定であった場合ＨＬＡテトラマーアッセイによる判定は陰性とした。
Figure 2020175657
結果
上記基準に基づき、全４７症例について判定を行った結果、ＨＬＡテトラマーアッセイによる判定が陽性と判定されたのは３０症例（６３．８％）、ＨＬＡテトラマーアッセイによる判定が維持と判定されたのは３症例（６．４％）、ＨＬＡテトラマーアッセイによる判定が陰性と判定されたのは１３症例（２７．７％）であった。１症例（２．１％）については、ＨＬＡテトラマーアッセイによる判定が不能であった。
〔実施例７：遅延性過敏反応（ＤＴＨ反応）の検出〕
ＤＴＨ用薬液の調製
実施例１に示されたＷＴ１ペプチドカクテルワクチンのうち、ＷＴ１キラーペプチドコンジュゲート２０ｍｇに注射用水２ｍＬ、ＷＴ１ヘルパーペプチド１８ｍｇに注射用水１．８ｍＬをそれぞれ加え、ＷＴ１キラーペプチドコンジュゲート溶液（１０ｍｇ／ｍＬ）及びＷＴ１ヘルパーペプチド溶液（１０ｍｇ／ｍＬ）を調製した。さらに、乳酸リンゲル液を用いてそれぞれ１０倍に希釈（１ｍｇ／ｍＬ）した。ＤＴＨ用薬液は調製後３時間以内に使用した。
接種及び測定
２種類のＤＴＨ用薬液（ＷＴ１キラーペプチドコンジュゲート溶液、ＷＴ１ヘルパーペプチド溶液）１００μＬ（１００μｇ）をそれぞれ３ｃｍ以上離して患者の前腕に皮内注射した。陰性コントロールとして、ＤＴＨ用薬液の投与部位より３ｃｍ以上離れた同側前腕に乳酸リンゲル液（コントロール溶液）１００μＬを皮内注射した。投与２日後に発赤径［長径、短径、及び性状（二重発赤、硬結、潰瘍など）］を測定した。ＷＴ１キラーペプチドコンジュゲート溶液又はＷＴ１ヘルパーペプチド溶液の発赤長径からコントロール溶液の発赤長径の差を算出し、その差により、以下の表に従ってＤＴＨ反応をスコア化した。
Figure 2020175657
ＤＴＨ試験は、ＷＴ１ペプチドカクテルワクチンの投与開始前（投与前２８日以内）、２回投与後２日目、１２回投与後２日目、最終投与後（投与後２８日以内）に行った。ＤＴＨ反応を上記基準に基づきスコア判定した。投与後の各症例における最大のスコアを以降の解析に供した。
結果
上記基準に基づき全４７症例についてスコア判定した結果、スコア０が１１症例（２３．４％）、スコア＋／−が４症例（８．５％）、スコア１が９症例（１９．１％）、スコア２が４症例（８．５％）、スコア３が９症例（１９．１％）、スコア判定が不能であった患者が７症例（１４.９％）、ＤＴＨ試験が実施できなかった患者が３症例（６．４％）であった。
〔実施例８：ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応の陽性又は陰性を分類する基準の設定〕
ＷＴ１ペプチドカクテルワクチンによって誘導されるＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応に関し、ＨＬＡテトラマーアッセイによる判定結果とＷＴ１キラーペプチドコンジュゲートを用いたＤＴＨ試験の最大スコアを双方向から解析し、ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応の陽性又は陰性を分類する基準を設定した。
本実施例については、ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応の総合的な判定を目的としていることから、実施例１に記載の高リスク症例４２症例に低リスク症例５症例を加えた全４７症例を解析対象とした。ただし、このうち、実施例６においてＨＬＡテトラマーアッセイによる判定が不能であった１症例、並びに実施例７においてＤＴＨスコア判定不能と判断された症例及びＤＴＨ試験が実施できなかった１０症例は、本解析から除外した。
ＨＬＡテトラマーアッセイによる判定結果により陽性判定となった症例の多くは、ＷＴ１キラーペプチドコンジュゲートを用いたＤＴＨ試験の判定においても＋／−以上のスコアであることが分かった（図８の左図）。また、ＷＴ１キラーペプチドコンジュゲートを用いたＤＴＨ試験の判定が＋／−未満のスコアである症例の多くが、ＨＬＡテトラマーアッセイで陰性判定であることが分かった（図８の右図）。これらの結果より、図８の右図及び左図において、それぞれの矢印で示す位置をＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応陽性の基準として設定した。
すなわち、ＨＬＡテトラマーアッセイによる判定結果が陽性であるか、ＷＴ１キラーペプチドコンジュゲートを用いたＤＴＨ試験の判定が＋／−以上のスコア（対照との差が２ｍｍ以上）である場合には、ＷＴ１ペプチドカクテルワクチンによるＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応が陽性であると判定することができる。一方、ＨＬＡテトラマーアッセイによる解析結果が維持又は陰性であり、且つＷＴ１キラーペプチドコンジュゲートを用いたＤＴＨ試験の判定が０（対照との差が２ｍｍ未満）である場合には、ＷＴ１ペプチドカクテルワクチンによるＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応が陰性であると判定することができる。
全４７症例を上記の基準で分類したところ、３３症例（７０．２％）がＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応陽性と判定され、９症例（１９．１％）がＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応陰性であると判定された。５症例については、ＤＴＨ試験未実施又はＤＴＨ試験により内出血を認めたため判定不能であり、ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応が不明（１０．７％）であった。
〔実施例９：ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応及び臨床効果の解析〕
実施例１に記載のアザシチジン無効高リスク患者４２症例中、実施例８の基準によりＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応が陽性であると判定された２８症例、陰性と判定された８症例の計３６症例について、臨床効果との関係を以下のように解析した。なお、アザシチジンの副作用による無効症例である２症例、ＤＴＨ試験未実施又はＤＴＨ試験により内出血を認めたためＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応が判定不能であった４症例は解析より除いている。
骨髄芽球の変化
ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応と骨髄芽球の変化について解析した。初回投与後約３ヶ月（２週間１回投与で２回目投与後約１５日及び／又は６回目投与後約１５日に骨髄液を採取）後までの骨髄芽球の割合のＰｒｅ値に対する変化が１５０％以下において２時点以上推移した場合には、芽球の安定化ありと判定し、骨髄芽球の割合のＰｒｅ値に対する変化が１５０％を超えた場合には、芽球の安定化なし（増悪）と判定した。図９に示されるように、ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応が陽性である症例群においては、芽球が長期的に安定した症例が多く認められた。
ＡＭＬ移行期間
ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応の陽性又は陰性による急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）移行期間を比較した。図１０に示されるように、ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応が陽性である症例群においては、ＡＭＬ移行期間が長い傾向にあった。
生存曲線
ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応の陽性又は陰性による生存曲線を比較した。図１１に示されるように、ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応が陽性であると判定された２８症例のｍＯＳは、ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応が陰性であると判定された８症例のｍＯＳと比較して長い傾向にあった。
骨髄芽球の安定化と生存曲線
図９に示されるように、ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応が陰性であると判定された８症例において、骨髄芽球の安定化が認められた症例はなかった。一方、免疫反応が陽性であると判定された２８症例においては、１５症例（５３．６％）において骨髄芽球の安定化が認められた。ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応が陽性であり、且つ骨髄芽球の安定化が認められた症例のｍＯＳが最も長い傾向にあった。
核型と生存曲線
核型が不明である１症例を除く３５症例をＩＰＳＳ−Ｒの核型別に分類し、ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応と生存曲線を比較した。図１２に示されるように、Ｇｏｏｄ／Ｉｎｔｅｒｍｅｄｉａｔｅ／Ｐｏｏｒ群においては、ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応が陽性であると判定された症例群は、ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応が陰性であると判定された症例群と比較してｍＯＳが長い傾向にあることが分かった。また、予後不良である核型Ｖｅｒｙ Ｐｏｏｒ群においても同様にＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応が陽性であると判定された症例群のｍＯＳはＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応が陰性であると判定された症例群よりも長い傾向にあった。
結果
ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応が陽性であると判断された症例群は、ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応が陰性であると判断された症例群と比較して、骨髄芽球の安定化した症例が多く認められ、ＡＭＬ移行期間の延長が認められた。また、ｍＯＳも延長傾向にあることが示された。ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応が誘導されることにより、骨髄芽球が安定化し、それに伴ってＡＭＬ移行期間及び生存期間の延長が認められた可能性が示唆された。核型が予後良好である症例群と予後不良である症例群とで層別解析を行った場合にも、同様にｍＯＳの延長の傾向が見られた。
〔実施例１０：性差による解析〕
実施例１のアザシチジン無効高リスク患者４２症例のうち、アザシチジンの副作用による無効症例である２症例を除く４０症例について、各性差の生存期間中央値を、ヒストリカルデータ及びリゴサチブ試験のＢＳＣの生存期間中央値と比較した。
表５に示されるように、男性でＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応が陽性であると判定される症例が多く認められた。ヒストリカルデータ（Prebet et al., Journal of Clinical Oncology 29, no.24, 3322-3327）及びリゴサチブのＯＮＴＩＭＥ試験（Garcia-Manero et al., The Lancet Oncology 17, no.4, p496-508 (2016)）の対照（リゴサチブ試験のＢＳＣ）と比較した結果、図１３に示されるように、ＷＴ１ペプチドカクテルワクチンは女性よりも男性においてＯＳの延長が認められ、効果が高い可能性が示唆された。
Figure 2020175657
〔実施例１１：ＷＴ１ ｍＲＮＡの遺伝子マーカーとしての有用性 ２〕
実施例１のアザシチジン無効高リスク患者４２症例のうち、アザシチジンの副作用による無効症例である２症例を除く４０症例について、ＷＴ１ ｍＲＮＡの発現を確認した。
末梢血からのＤＮＡ抽出及び検体の品質評価
ＷＴ１ペプチドカクテルワクチンの投与開始前２８日以内に、患者から末梢血及び骨髄液を採取した。全血７ｍＬ又は骨髄液０．５ｍＬより、ＲＮＡ全自動精製装置ＱＩＡｃｕｂｅ（Ｑｉａｇｅｎ社）を用いてＲＮＡの抽出及び精製を行った。ＱＩＡｃｕｂｅユーザーマニュアルに従い、ＲＮｅａｓｙ ｍｉｎｉ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ社）の試薬やチューブ等、及びサンプルをセットした。ＱＩＡｃｕｂｅに保存されている、ＱＩＡｃｕｂｅ Ｓｔａｎｄａｒｄ ＰｒｏｇｒａｍからＲＮｅａｓｙ−Ｍｉｎｉ− ｐｒｏｇｒａｍを選択し、ＲＮＡを抽出した。
ＷＴ１ ｍＲＮＡの発現解析
ＷＴ１ ｍＲＮＡの発現解析は、ＷＴ１ ｍＲＮＡ測定キットII「オーツカ」（大塚製薬株式会社）を用いて行った。以下、特に言及しないかぎり試薬は上記キット付属のものを使用した。
ＲＮａｓｅ ｆｒｅｅ水を添加することにより抽出したＲＮＡの濃度を５０ｎｇ／μＬに調整した。ＷＴ１・ＧＡＰＤＨ混合ＲＮＡ標準液を標準液１、標準液１を標準液希釈液で１０倍希釈したものを標準液２、同様に１０倍希釈を繰り返し、標準液５まで調製した。１反応あたり、ＲＴ−ＰＣＲ用ミックス液（Ｒ１）１０μＬ及び金属イオン溶液５μＬの割合で混和したものを反応液とした。リアルタイムＰＣＲ装置（アプライドバイオシステムズ ７５００ Ｆａｓｔ Ｄｘ、アプライドバイオシステムズ社）を使用し、上記キットに付属のプロトコルの「３．測定操作」に従ってＲＴ−ＰＣＲ反応を行った。標準液１〜５より作成した標準曲線を用いて、サンプルのＷＴ１ ｍＲＮＡ及びＧＳＤＰＨ ｍＲＮＡの測定値を算出した。
上記キットに付属のプロトコルの「４．ＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量の算出方法」に従って、以下のようにＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量を算出した。
具体的には以下の式に示すように、ＷＴ１ ｍＲＮＡ測定値をＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡ測定値で除した値（ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡ １コピーあたりのＷＴ１ ｍＲＮＡコピー数）に、健康成人の１μｇ ＲＮＡあたりの平均ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡコピー数（ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡ発現量）を乗じてＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量を算出した。なお、２．７×１０７（コピー／μｇ ＲＮＡ）は、健康成人の１μｇ ＲＮＡあたりの平均ＧＡＰＤＨ ｍＲＮＡ測定値である。
Figure 2020175657
ＷＴ１ ｍＲＮＡの発現解析の結果を図１４に示す。４０症例中全症例において末梢血中にＷＴ１ ｍＲＮＡの発現が認められた。ＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量が１００００コピー／μｇ ＲＮＡ以下である症例のｍＯＳは、ＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量が１００００コピー／μｇ ＲＮＡより高い症例のｍＯＳと比較して長い傾向にあった。
さらに、ＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量が１００００コピー／μｇ ＲＮＡ以下である３０症例、ＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量が１００００コピー／μｇ ＲＮＡより高い１０症例について、後述するＨＬＡテトラマーアッセイ及び遅延型過敏反応によりＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応を確認した。ＷＴ１ ｍＲＮＡの発現量について、生存期間（ＯＳ）及びＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応を比較した結果を図１５に示す。なお、図１５に示される結果は、ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応の判定が不能であった４症例を除く、ＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量が１００００コピー／μｇ ＲＮＡ以下である２８症例、ＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量が１００００コピー／μｇ ＲＮＡより高い８症例に関するものである。
これにより、ＷＴ１ ｍＲＮＡの発現量が、ＷＴ１ペプチドワクチンによる治療の効果が期待できる患者を選択するための遺伝子マーカーとして有用であることが示された。また、上記マーカーの基準値として、１００００コピー／μｇ ＲＮＡが有用であることが示された。
ＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量が１００００コピー／μｇ ＲＮＡ以下である症例群については、ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応が認められた症例のＯＳが長い傾向にあることが示された。一方、ＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量が１００００コピー／μｇ ＲＮＡより高い症例群は、ＷＴ１抗原ペプチド特異的免疫反応の陽性と陰性によるＯＳに差は見られなかった。また、末梢血中のＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量と骨髄液中のＷＴ１ ｍＲＮＡ発現量が相関関係にあり、骨髄液中でも同様の傾向が見られることも確認した（図１６）。

Claims (19)

  1. がんを治療又は予防するための医薬組成物の効果を期待できる対象を選択する方法であって、
    前記対象から採取された試料を用いて、Ｔｕｍｏｒ Ｐｒｏｔｅｉｎ ｐ５３（ＴＰ５３）遺伝子及び／又はＢＣＬ６ ｃｏ−ｒｅｐｒｅｓｓｏｒ（ＢＣＯＲ）遺伝子における変異の有無を決定する工程、並びに
    ＴＰ５３野生型及び／又はＢＣＯＲ野生型の場合に、前記対象は前記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程を含み、
    前記医薬組成物は、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）、ＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）、ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）、ＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫ（配列番号：１１）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨ（配列番号：１２）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧ（配列番号：１３）、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）、ＣＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１５）及びＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＣ（配列番号：１６）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、方法。
  2. 前記医薬組成物が、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）及びＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、請求項１に記載の方法。
  3. 前記医薬組成物が、ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）及びＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、請求項１又は２に記載の方法。
  4. 前記医薬組成物が、ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）及びＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド、並びに
    ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）及びＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩を含む、請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
  5. 前記医薬組成物が、式（Ｉ）：
    Figure 2020175657
     ［式中、Ｘａ及びＹａは、単結合を表し、腫瘍抗原ペプチドＡは、以下のアミノ酸配列：
    ＲＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：２）、ＹＭＦＰＮＡＰＹＬ（配列番号：８）、ＡＬＬＰＡＶＰＳＬ（配列番号：５）、ＳＬＧＥＱＱＹＳＶ（配列番号：６）、ＲＶＰＧＶＡＰＴＬ（配列番号：７）及びＶＬＤＦＡＰＰＧＡ（配列番号：９）の中から選ばれるいずれかのアミノ酸配列からなるペプチドを表し、腫瘍抗原ペプチドＡのＮ末端アミノ酸のアミノ基が式（１）中のＹａと結合し、腫瘍抗原ペプチドＡのＣ末端アミノ酸のカルボニル基が式（１）中の水酸基と結合し、
    Ｒ１は、水素原子又は腫瘍抗原ペプチドＢを表し、
    腫瘍抗原ペプチドＢは、腫瘍抗原ペプチドＡとは配列が異なり且つ以下のアミノ酸配列：
    ＣＭＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：３）及びＣＹＴＷＮＱＭＮＬ（配列番号：４）の中から選ばれるいずれかのアミノ酸配列からなるペプチドを表し、腫瘍抗原ペプチドＢのシステイン残基のチオエーテル基が式（１）中のチオエーテル基と結合する。］
    で表される化合物又はその薬学上許容される塩を含む、請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法。
  6. 式（１）で表される化合物が、式（２）：
    Figure 2020175657
     （式中、ＣとＣの間の結合はジスルフィド結合を表す。）
    で表される化合物又はその薬学上許容される塩である、請求項５に記載の方法。
  7. 式（１）で表される化合物が、式（３）：
    Figure 2020175657
     （式中、ＣとＣの間の結合はジスルフィド結合を表す。）で表される化合物又はその薬学上許容される塩である、請求項５に記載の方法。
  8. 前記医薬組成物が、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫ（配列番号：１１）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨ（配列番号：１２）、ＣＮＫＲＹＦＫＬＳＨＬＱＭＨＳＲＫＨＴＧ（配列番号：１３）、ＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１４）、ＣＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬ（配列番号：１５）及びＷＡＰＶＬＤＦＡＰＰＧＡＳＡＹＧＳＬＣ（配列番号：１６）、からなる群から選択されるアミノ酸配列を含むペプチド又はその薬学上許容される塩をさらに含む、請求項１〜７のいずれか一項に記載の方法。
  9. 前記医薬組成物が、薬学上許容される担体を含む、請求項１〜８のいずれか一項に記載の方法。
  10. ＴＰ５３野生型の場合に、前記対象は前記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する、請求項１〜９のいずれか一項に記載の方法。
  11. ＴＰ５３野生型及びＢＣＯＲ野生型の場合に、前記対象は前記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の方法。
  12. 前記対象から採取した試料を用いて、ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量を決定する工程、及び前記ＷＴ１遺伝子のｍＲＮＡ発現量が基準値未満又は以下であった場合に、前記対象は前記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程をさらに含む、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の方法。
  13. 請求項１〜９のいずれか一項に記載された医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与した前記対象から採取した試料を用いて、ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を検出する工程、及び
    投与前の前記対象から採取した試料と比較して、前記ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞が増加していた場合に、前記対象は前記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程をさらに含む、請求項１〜１２のいずれか一項に記載の方法。
  14. ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を検出する工程が、ＷＴ１ペプチドとＨＬＡ分子との複合体を前記試料と反応させ、前記試料に含まれる前記複合体を認識するＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞の存在又は細胞数を調べることにより実施される、請求項１３に記載の方法。
  15. 前記ＷＴ１ペプチドとＨＬＡ分子との複合体がテトラマーの形態である、請求項１４に記載の方法。
  16. 前記ＨＬＡ分子が、前記対象のＨＬＡに適合したものである、請求項１４又は１５に記載の方法。
  17. ＷＴ１抗原ペプチド特異的ＣＤ８ Ｔ細胞を検出する工程が、フローサイトメトリー法による解析を含む、請求項１３〜１６のいずれか一項に記載の方法。
  18. 請求項１〜９のいずれか一項に記載された医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を複数回投与した対象において、遅延型過敏反応が検出された場合に、前記対象は前記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程をさらに含む、請求項１〜１７のいずれか一項に記載の方法。
  19. 対象における請求項１〜９のいずれか一項記載された医薬組成物又はペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与した箇所における反応と、前記対象における前記医薬組成物又は前記ペプチド若しくはその薬学上許容される塩を投与していない箇所における反応を比較し、投与した箇所における反応と投与していない箇所における反応との差が基準値以上である場合に、前記対象は前記医薬組成物の効果を期待できる対象であるとの指標を提供する工程をさらに含む、請求項１８に記載の方法。
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