KR20210130479A - 방광암 세포의 이동성 예측용 조성물 및 이를 포함하는 키트 - Google Patents

방광암 세포의 이동성 예측용 조성물 및 이를 포함하는 키트 Download PDF

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Abstract

본 발명은 방광암 세포의 이동성 예측용 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 MOESIN mRNA 또는 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함함으로써, 방광암의 타 기관으로의 전이 가능성 또는 비침윤성 방광암의 침윤성 방광암으로의 진행 가능성을 효율적으로 예측할 수 있다.

Description

방광암 세포의 이동성 예측용 조성물 및 이를 포함하는 키트 {COMPOSITION FOR PREDICTING MIGRATION OF BLADDER CANCER CELL AND KIT COMPRISING THE SAME}
본 발명은 방광암 세포의 이동성 예측용 조성물 및 키트에 관한 것이다.
방광암은 비뇨기계 영역에서 가장 빈번하게 발생하는 암으로서, 서양에서는 매년 인구 10만 명 당 16.5명이 발병하는데 비하여 한국에서는 4.5명이 발생하는 것으로 보고되고 있다. 한국에서는 방광암 발생률이 서양에 비해 낮은 편이지만 해마다 증가하는 추세이며, 비뇨기계 암 중 가장 발생빈도가 높은 암으로 알려져 있다.
방광암은 암세포의 침윤정도에 따라 크게 비침윤성(noninvasive) 방광암과 침윤성(invasive) 방광암으로 구분된다. 비침윤성 방광암은 암이 근육층의 침범 없이 점막에 국한된 병변으로써 경요도 방광절제술(transurethral resection of bladder tumor) 또는 방광내 항암제 또는 BCG를 주입하여 비교적 간단하게 치료가 가능하나, 암의 재발과 침윤성 암으로의 진행이 문제가 된다. 한편, 침윤성 방광암은 암이 근육층 까지 침투한 상태를 말하는 것으로서, 이의 치료를 위하여는 근치적 방광적출술과 함께 복잡한 요로전환(urinary diversion)을 수행하여야 할 뿐 아니라, 환자에게 치명적인 결과를 초래할 수도 있다. 따라서, 일차 치료 후 재발과 진행에 대한 예측과 조기발견 및 예방이 매우 중요하다.
국제공개특허 WO/2019/081608
본 발명은 방광암 세포의 이동성 예측용 조성물 및 키트를 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명은 방광암 세포의 이동성을 예측하기 위한 정보제공방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명은 방광암 세포의 이동성 감소용 약학 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
1. MOESIN mRNA 또는 그 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는 방광암 세포의 이동성 예측용 조성물.
2. 위 1에 있어서, 상기 방광암 세포는 적어도 일부가 스페로이드 형태인, 조성물.
3. 위 1에 있어서, 상기 제제는 프라이머, 프로브, 항체, 압타머, DNA, RNA, 단백질 및 폴리펩티드로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나인, 조성물.
4. 위 1 내지 3 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는 방광암 세포의 이동성 예측용 키트.
5. 피검체로부터 분리된 시료에서 MOESIN mRNA 또는 그 단백질의 발현 수준을 측정하는 단계;를 포함하는 방광암 세포의 이동성을 예측하기 위한 정보제공방법.
6. 위 5에 있어서, 상기 피검체의 측정값이 대조군의 측정값 보다 높으면 대조군 대비 방광암 세포의 이동 정도가 높을 것으로 예측하는 단계;를 더 포함하는, 정보제공방법.
7. 위 5에 있어서, 상기 시료는 조직, 세포, 전혈, 혈청, 혈장, 타액, 객담, 뇌척수액 및 뇨로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나인, 정보제공방법.
8. 위 5에 있어서, 상기 단백질의 발현 수준은 웨스턴 블랏팅(western blotting), ELISA(enzyme linked immunosorbent assay), 방사선면역분석법(Radioimmunoassay), 방사면역 확산법(Radioimmunodiffusion), 오우크테로니(Ouchterlony) 면역 확산법, 로케트(Rocket) 면역전기영동, 조직면역 염색, 면역 침전분석법(immunoprecipitation assay), 보체 고정 분석법(complete fixation assay), 유세포분석(Fluorescence Activated Cell Sorter, FACS), 단백질 칩(protein chip), 역전사효소 중합효소반응(RT-PCR), 경쟁적 역전사효소 중합효소반응(Competitive RT-PCR), 실시간 역전사효소 중합효소반응(Real-time RT-PCR), RNase 보호 분석법(RPA; RNase protection assay), 노던 블롯팅 (Northern blotting) 및 DNA 칩으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 방법으로 측정되는 것인, 정보제공방법.
9. 위 5에 있어서, 상기 피검체는 비침윤성 방광암 환자인, 정보제공방법.
10. MOESIN mRNA 또는 그 단백질의 발현을 저해하는 제제를 포함하는 방광암 세포의 이동성 감소용 약학 조성물.
11. 위 10에 있어서, 상기 제제는 서열번호 2 내지 서열번호 4 중 적어도 하나를 포함하는 것인, 약학 조성물.
본 발명 방광암 세포 이동성 예측용 조성물, 키트 및 정보제공방법을 이용하여 방광암 세포의 이동성 또는 근육 침윤 가능성을 적은 비용으로 간편하고 신속하게 예측할 수 있다.
본 발명 방광암 세포 이동성 예측용 조성물, 키트 및 방법을 이용하여 비침윤성 방광암의 침윤성 방광암으로의 진행 가능성을 예측할 수 있다.
본 발명 약학 조성물은 방광암 세포의 이동성 또는 근육 침윤 정도를 감소시킬 수 있다.
본 발명 약학 조성물은 방광암의 전이를 억제하거나, 비침습성 방광암의 침습성 방광암으로의 진행을 억제할 수 있다.
도1A는 One-way ANOVA 분석을 통해 비침윤성 방광암 환자와 침윤성 방광암 환자의 소변 액체 생검 시료에서 유의적인 발현량의 차이를 보이는 단백질을 선별한 결과를 나타낸다.
도 1B는 paired student t-test 분석을 통해 비침윤성 방광암 환자 시료와 근육 침윤성 방광암 환자 시료에서 순열검정법(permutation test)으로 유의적인 발현량 차이를 보이는 단백질을 선별한 결과를 나타낸다.
도 2A는 세포 이동 어세이와 침윤 어세이를 통해 방광암 세포주를 비침윤세포군과 침윤세포군으로 나눈 후, 초고해상도 질량분석기를 사용하여 단백체 프로파일링을 수행한 결과를 나타낸다.
도 2B는 student t-test 분석을 통해 비침윤세포군과 침윤세포군 방광암 세포주 두 그룹에서 유의적인 발현량 차이를 보이는 단백질을 선별한 결과를 나타낸다.
도 3A는 소변 액체 생검 시료의 단백체 프로파일 결과와 방광암 세포주의 단백체 프로파일 결과에서 선별된 단백질들을 나타낸다.
도 3B는 소변 액체 생검 시료의 단백체 프로파일 결과와 방광암 세포주의 단백체 프로파일 결과에서 중복으로 선별된 12 종류의 단백질에 대한 생물정보학 기반 기능 분석 결과를 나타낸다.
도 4는 비침윤성 방광암 환자와 침윤성 방광암 환자의 소변 액체 생검 시료에서 MOESIN의 세포면역화학염색법을 수행한 결과를 나타낸다.
도 5는 방광암 세포주에서 MOESIN 넉다운을 확인한 RT-PCR결과를 나타낸다.
도 6은 트랜스웰 이동 어세이를 통해 방광암 세포주에서 MOESIN 발현 억제에 따른 세포 이동 능력 감소를 확인한 결과를 나타낸다.
도 7은 트랜스웰 이동 어세이를 통해 방광암 세포주에서 MOESIN 발현 억제에 따른 세포 침윤 능력 감소를 확인한 결과를 나타낸다.
도 8은 고초점현미경을 이용하여 3차원 구상체의 침윤 능력을 확인한 결과를 나타낸다.
이하, 본 발명을 상세하게 설명한다.
본 발명은 MOESIN mRNA 또는 그 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는 방광암 세포의 이동성 예측용 조성물을 제공한다.
본 발명 조성물을 이용해 MOESIN mRNA 또는 그 단백질의 발현 수준을 측정함으로써 방광암 세포의 이동성을 예측할 수 있다.
본 발명 조성물을 이용하여 세포의 이동성을 예측함으로써, 방광암이 근육 침윤 되었거나, 근육 침윤이 될 가능성이 높다는 것을 알 수 있다.
또한, 본 발명 조성물을 이용하여 비침윤성 방광암의 침윤성 방광암으로의 진행되었거나, 진행될 가능성이 높다는 것을 알 수 있다.
또한, 본 발명 조성물을 이용하여 세포의 이동성을 예측함으로써, 방광암의 타 기관으로 전이가 일어났거나, 일어날 가능성이 높다는 것을 알 수 있다.
용어 '비침윤성 방광암'은 암이 근육층의 침범 없이 상피세포나 방광의 점막에 국한된 병변으로 방광암 환자의 약 75%가 비침윤성 방광암에 해당한다. 비침윤성 방광암은 비교적 간단한 치료가 가능하나, 재발률이 높다는 것과 침윤성 방광암으로 진행 가능성이 있다는 것이 문제가 된다.
용어 '침윤성 방광암'은 암이 방광의 근육층 이상으로 침범한 경우를 말하며, 이의 치료를 위하여는 근치적 방광적출술과 함께 복잡한 요로전환을 수행하여야 할 뿐 아니라, 환자에게 치명적인 결과를 초래할 수도 있다. 따라서, 비침윤성 방광암으로부터 침윤성 방광암으로의 진행 가능성을 예측하여, 이에 적합한 치료를 수행할 필요성이 있다.
MOESIN mRNA의 서열은 NCBI genbank 등에 공지된 서열을 활용할 수 있다.
MOESIN 단백질의 서열은 NCBI genbank 등에 공지된 서열을 활용할 수 있다. 예를 들어, 인간의 경우 MOESIN 단백질은 서열번호 1의 서열일 수 있다. 서열번호 1: MPKTISVRVTTMDAELEFAIQPNTTGKQLFDQVVKTIGLREVWFFGLQYQDTKGFSTWLKLNKKVTAQDVRKESPLLFKFRAKFYPEDVSEELIQDITQRLFFLQVKEGILNDDIYCPPETAVLLASYAVQSKYGDFNKEVHKSGYLAGDKLLPQRVLEQHKLNKDQWEERIQVWHEEHRGMLREDAVLEYLKIAQDLEMYGVNYFSIKNKKGSELWLGVDALGLNIYEQNDRLTPKIGFWSEIRNISFNDKKFVIKPIDKKAPDFVFYAPRLRINKRILALCMGNHELYMRRRKPDTIEVQQMKAQAREEKHQKQMERAMLENEKKKREMAEKEKEKIEREKEELMERLKQIEEQTKKAQQELEEQTRRALELEQERKRAQSEAEKLAKERQEAEEAKEALLQASRDQKKTQEQLALEMAELTARISQLEMARQKKESEAVEWQQKAQMVQEDLEKTRAELKTAMSTPHVAEPAENEQDEQDENGAEASADLRADAMAKDRSEEERTTEAEKNERVQKHLKALTSELANARDESKKTANDMIHAENMRLGRDKYKTLRQIRQGNTKQRIDEFESM.
MOESIN 단백질 서열은 위 서열번호 1에 한정되지 않고, 방광암 세포의 이동성 예측의 대상이 되는 개체 종의 서열을 사용할 수 있다.
방광암 세포의 이동성 예측 대상은 현재 방광암을 보유하고 있거나, 방광암을 보유한 경험이 있는 동물 또는 방광암의 보유가 의심되는 동물 등일 수 있다. 예를 들어, 방광암 세포의 이동성 예측 대상은 비침윤성 방광암을 보유하는 동물일 수 있다.
동물은 인간을 포함한 포유류일 수 있다.
MOESIN mRNA 또는 그 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제는 MOESIN mRNA 또는 그 단백질을 검출할 수 있는 물질이면 제한되지 않으나, 예를 들어, 프라이머, 프로브, 항체, 압타머, DNA, RNA, 단백질 또는 폴리펩티드로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나일 적어도 하나일 수 있다.
용어 '프라이머'는 짧은 자유 3 말단 수산화기를 가지는 핵산 서열로, 상보적인 주형(template)와 염기쌍을 형성할 수 있고 주형 가닥 복사를 위한 시작 지점으로 기능을 하는 짧은 핵산 서열을 의미한다. 프라이머는 진단, DNA 시퀀싱 등에 사용될 수 있으며, 통상적으로 15 내지 30 염기쌍의 길이로 합성하여 사용될 수 있으나 사용 목적에 따라 길이를 달리하여 합성할 수 있으며, 공지된 방법으로 메틸화, 캡화 등으로 변형시킬 수 있다.
용어 '프로브'는 mRNA와 특이적 결합을 이룰 수 있는 짧게는 수 염기 내지 길게는 수백 염기에 해당하는 RNA 또는 DNA 등의 핵산 단편을 의미하며 표지(Labelling)되어 있어서 특정 mRNA의 존재 유무를 확인할 수 있다. 프로브는 올리고 뉴클레오티드 프로브, 단쇄 DNA(single stranded DNA) 프로브, 이중쇄 DNA(double stranded DNA) 프로브, RNA 프로브 등의 형태로 제작될 수 있다. 당업자는 MOESIN 유전자의 서열을 바탕으로 상기 프라이머　또는　프로브를 당해 기술분야의 통상적인 방법에 따라 디자인할 수 있다.
용어 '항체'는 당해 분야에서 일반적으로 사용되는 용어로 항원성 부위에 대해서 지시되는 특이적인 단백질 분자를 의미한다. 본 발명의 목적상 항체는 MOESIN 단백질에 특이적으로 결합하는 항체를 의미한다.
항체의 형태는 특별히 제한되지 않고 폴리클로날 항체, 모노클로날 항체 및 재조합 항체를 모두 포함할 수 있다. 모노클로날 항체는 당해 분야에 널리 공지된 하이브리도마 방법, 또는 파지 항체 라이브러리기술을 이용하여 제조될 수 있다. 폴리클로날 항체는 항원을 동물에 주사하고 동물로부터 채혈하여 항체를 포함하는 혈청을 수득하는 것을 포함하는 당해 분야에 널리 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다. 이러한 폴리클로날 항체는 염소, 토끼, 양, 원숭이, 말, 돼지, 소, 개 등의 임의의 동물 종 숙주로부터 제조 가능하다. 항체는 키메라 항체, 인간화 항체, 인간항체 등의 특수항체도 포함할 수 있다. 또한, 항체는 2개의 전체 길이의 경쇄 및 2개의 전체 길이의 중쇄를 가지는 완전한 형태뿐만 아니라 항체 분자의 기능적인 단편을 포함할 수 있다. 항체 분자의 기능적인 단편이란 적어도 항원 결합기능을 보유하고 있는 단편을 의미하며, Fab, F(ab'), F(ab') 2 및 Fv 등을 포함한다.
MOESIN 단백질의 발현 수준은 웨스턴 블랏팅(western blotting), ELISA(enzyme linked immunosorbent assay), 방사선면역분석법(Radioimmunoassay), 방사면역 확산법(Radioimmunodiffusion), 오우크테로니(Ouchterlony) 면역 확산법, 로케트(Rocket) 면역전기영동, 조직면역 염색, 면역 침전분석법(immunoprecipitation assay), 보체 고정 분석법(complete fixation assay), 유세포분석(Fluorescence Activated Cell Sorter, FACS), 단백질 칩(protein chip) 등으로 측정될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명 조성물은 방광암 세포의 이동성을 예측하기 위해 사용될 수 있다.
방광암 세포의 이동성 예측을 통해 방광암 세포가 근육으로 침윤되었거나, 침윤될 가능성이 높다는 것을 예측할 수 있다.
방광암 세포의 이동성 예측을 통해 방광암 세포가 타 기관으로 전이되었거나, 전이될 가능성이 높다는 것을 예측할 수 있다.
또한, 본 발명은 상기 조성물을 포함하는 방광암 세포의 이동성 예측용 키트를 제공한다.
상기 키트는 MOESIN mRNA 또는 그 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함할 뿐만 아니라, 그 키트가 이용하는 MOESIN mRNA 또는 그 단백질의 발현 수준을 측정하는 분석 방법에 적합한 하나 이상의 다른 구성 성분　조성물, 용액 또는 장치를 더 포함할 수 있다.
상기 키트가 MOESIN mRNA 발현량을 측정하기 위한 키트일 경우, RT-PCR을 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함하는 키트일 수 있다. RT-PCR 키트는 MOESIN mRNA에 대한 특이적인 각각의　프라이머　쌍 이외에도 테스트 튜브 또는 다른 적절한 컨테이너, 반응 완충액, 데옥시리보뉴클레오티드(dNTPs), Taq-폴리머라제 및 역전사효소와 같은 효소, DNase, RNase 억제제, DEPC-수(dEPC water), 멸균수 등을 포함할 수 있다. 또한, 정량 대조군으로 사용되는 유전자에 특이적인　프라이머　쌍을 포함할 수 있다.
상기 키트는 MOESIN 유전자의 뉴클레오티드 서열, 상기 뉴클레오티드 서열에 상보적인 서열, 상기 뉴클레오티드의 단편 또는 상기 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩되는 단백질에 특이적으로 결합하는 물질의 면역학적 검출을 위하여 기질, 적합한 완충용액, 발색 효소 또는 형광물질로 표지된 2차　항체, 발색 기질을 포함할 수 있다. 상기 기질은 니트로셀룰로오스 막, 폴리비닐 수지로 합성된 96 웰 플레이트, 폴리스티렌 수지로 합성된 96 웰 플레이트 및 유리 슬라이드 글라스 등이 이용될 수 있고, 발색효소는 퍼옥시다아제(peroxidase), 알칼라인 포스파타아제(alkaline phosphatase)가 사용될 수 있고, 형광물질은 FITC, RITC 등이 사용될 수 있고, 발색 기질은 2,2'-아지노-비스(3-에틸벤조티아졸린-6-설폰산)(ABTS) 또는 o-페닐렌디아민(OPD), 테트라메틸 벤지딘(TMB) 등이 사용될 수 있다.
상기 키트는 MOESIN mRNA의 발현량을 측정할 수 있는 항암제 내성 진단용 마이크로어레이(microarray)일 수 있다. 상기 마이크로어레이는 상기 지표인자를 이용하여 당해 기술분야에 공지된 방법에 따라 당업자가 용이하게 제조할 수 있으며, 일 구체예에 따르면 상기 MOESIN mRNA 또는 그의 단편에 해당하는 서열의 cDNA가　프로브로서 기판에 부착되어 있는 마이크로어레이일 수 있다.
상기 키트는 MOESIN 단백질에 특이적으로 결합할 수 있는 항체, 기질과의 반응에 의해서 발색하는 표지체가 접합된 2차 항체 접합체(conjugate), 상기 표지체와 발색 반응할 발색 기질 용액, 세척액 및 효소반응 정지용액 등을 포함할 수 있으며, 사용되는 시약 성분을 포함하는 다수의 별도 패키징 또는 컴파트먼트로 제작될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
상기 기질은 니트로셀룰로오스 막, 폴리비닐 수지로 합성된 96 웰 플레이트, 폴리스티렌 수지로 합성된 96 웰 플레이트 및 유리 슬라이드 글라스 등이 이용될 수 있고, 발색 효소는 퍼옥시다아제(peroxidase), 알칼라인 포스파타아제(alkaline phosphatase)등이 사용될 수 있고, 형광물질은 FITC, RITC 등이 사용될 수 있고, 발색 기질은 2,2'-아지노-비스(3-에틸벤조티아졸린-6-설폰산)(ABTS) 또는 o-페닐렌디아민(OPD), 테트라메틸 벤지딘(TMB) 등이 사용될 수 있다.
구체적인 예로, 키트는 ELISA 키트, 샌드위치 ELISA등 다양한 ELISA 방법을 구현하기 위하여, ELISA를 수행하기 위해 필요한 필수 요소를 포함하는 키트일 수 있다.
ELISA 키트는 MOESIN 단백질에 대한 특이적인 항체를 포함한다. 항체는 MOESIN 단백질에 대한 특이성 및 친화성이 높고 다른 단백질에 교차 반응성이 거의 없는 항체로, 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체 또는 재조합 항체일 수 있다. 또한 ELISA 키트는 대조군 단백질에 특이적인 항체를 포함할 수 있다. 그 외 ELISA 키트는 결합된 항체를 검출할 수 있는 시약, 예를 들면, 표지된 2차 항체, 발색단(chromopores), 효소 및 그의 기질 또는 항체와 결합할 수 있는 다른 물질 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않을 수 있다.
이 외에도, 키트는 웨스턴 블롯, 면역침전분석법, 보체 고정 분석법, 유세포분석 또는 단백질 칩 등을 구현하기 위한 키트일 수 있으며, 각 분석 방법에 적합한 부가적인 구성을 추가로 포함할 수 있다. 이 분석 방법들을 통하여, 항원-항체 복합체 형성량을 비교함으로써 방광암 세포의 이동성을 예측할 수 있다.
또한, 본 발명은 피검체로부터 분리된 시료에서 MOESIN mRNA 또는 그 단백질의 발현 수준을 측정하는 단계;를 포함하는 방광암 세포의 이동성을 예측하기 위한 정보제공방법을 제공한다.
방광암 세포의 이동성 예측을 통해 방광암 세포가 근육으로 침윤되었거나, 침윤될 가능성이 높다는 것을 예측할 수 있다. 또한, 비침윤성 방광암이 침윤성 방광암으로 진행되었거나, 진행될 가능성이 높다는 것을 예측할 수 있다.
방광암 세포의 이동성 예측을 통해 방광암 세포가 타 기관으로 전이되었거나, 전이될 가능성이 높다는 것을 예측할 수 있다.
피검체는 현재 방광암을 보유하고 있거나 방광암을 보유한 경험이 있는 동물 또는 방광암의 보유가 의심되는 동물 등일 수 있다. 구체적으로 피검체는 비침윤성 방광암을 보유하는 동물일 수 있다.
시료는 조직, 세포, 전혈, 혈청, 혈장, 타액, 객담, 뇌척수액 및 뇨로 이루어진 군에서 선택될 수 있다.
mRNA 또는 단백질의 발현 수준의 측정은 전술한 MOESIN mRNA 또는 그 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제를 상기 시료에 처리하여 수행되는 것일 수 있다.
mRNA의 발현 수준을 측정하기 위해 역전사효소 중합효소반응(RT-PCR), 경쟁적 역전사효소 중합효소반응(Competitive RT-PCR), 실시간 역전사효소 중합효소반응(Real-time RT-PCR), RNase 보호 분석법(RPA; RNase protection assay), 노던 블롯팅 (Northern blotting) 및 DNA 칩 등을 이용할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.
단백질의 발현 수준을 측정하기 위한 분석 방법에는 웨스턴 블랏팅(western blotting), ELISA(enzyme linked immunosorbent assay), 방사선면역분석법(Radioimmunoassay), 방사면역 확산법(Radioimmunodiffusion), 오우크테로니(Ouchterlony) 면역 확산법, 로케트(Rocket) 면역전기영동, 조직면역 염색, 면역 침전분석법(immunoprecipitation assay), 보체 고정 분석법(complete fixation assay), 유세포분석(Fluorescence Activated Cell Sorter, FACS), 단백질 칩(protein chip) 등이 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명 정보제공방법은 피검체의 MOESIN mRNA 또는 그 단백질의 발현 수준을 대조군의 MOESIN mRNA 또는 그 단백질의 발현 수준과 비교하는 단계를 더 포함할 수 있다.
대조군은 방광암 세포가 근육층까지 침범하지 않은 방광암 환자일 수 있으며, 예컨대 방광암 세포가 상피세포에만 존재하는 방광상피내암 환자 또는 방광암 세포가 점막에 국한된 비침윤성 방광암 환자일 수 있다.
본 발명 정보제공방법은 피검체의 MOESIN mRNA 또는 그 단백질의 발현 수준 측정값이 대조군의 MOESIN mRNA 또는 그 단백질의 발현 수준 측정값 보다 높으면 대조군 대비 방광암 세포의 이동 정도가 높을 것으로 예측하는 단계;를 더 포함할 수 있다.
본 발명 정보제공방법은 피검체의 MOESIN mRNA 또는 그 단백질의 발현 수준 측정값이 대조군의 MOESIN mRNA 또는 그 단백질의 발현 수준 측정값 보다 높으면 대조군 대비 방광암 세포의 근육 침윤 정도가 높을 것으로 예측하는 단계;를 더 포함할 수 있다.
본 발명 정보제공방법은 피검체의 MOESIN mRNA 또는 그 단백질의 발현 수준 측정값이 대조군의 MOESIN mRNA 또는 그 단백질의 발현 수준 측정값 보다 높으면 대조군 대비 침윤성 방광암으로의 진행 가능성이 높을 것으로 예측하는 단계;를 더 포함할 수 있다.
예를 들어, 본 발명 정보제공방법은 비침윤성 방광암 환자인 피검체의 MOESIN mRNA 또는 그 단백질의 발현 수준이 암 세포가 근육층까지 침범하지 않은 방광암 환자인 대조군의 MOESIN mRNA 또는 그 단백질의 발현 수준 보다 높으면, 피검체의 암이 침윤성 방광암으로 진행될 가능성이 높은 것으로 예측하는 단계를 더 포함할 수 있다.
종래 방광암의 근육 침윤 가능성을 예측하는 방법은 알려져 있지 않았으며, 침윤이 이미 진행된 것을 확인하는 방법도 부작용이 심한 침습적인 방법만 알려져 있었다. 전술한 바와 같이 본 발명은 시료로부터 MOESIN mRNA 또는 그 단백질 발현 수준을 측정함으로써 방광암 세포의 이동 가능성을 예측할 수 있으며 구체적으로 방광암 세포의 근육으로의 침윤 또는 다른 기관으로의 전이를 예측할 수 있는바, 본 발명 예측용 조성물, 키트, 방법을 이용하면 보다 간편하고 빠르고 정확하게 침윤성 방광암으로의 진행 가능성 또는 타 기관으로의 전이 가능성을 예측할 수 있다.
추가로, 본 발명은 MOESIN mRNA 또는 그 단백질의 발현을 저해하는 제제를 포함하는 방광암 세포의 이동성 감소용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명 약학 조성물은 방광암 세포의 이동성을 감소시킴으로써, 방광암의 근육 침윤 정도를 저해하거나, 다른 기관으로의 전이를 저해할 수 있다.
즉, 본 발명은 MOESIN mRNA 또는 그 단백질의 발현을 저해하는 제제를 포함하는 방광암 전이 억제용 약학 조성물을 제공할 수 있다.
용어 '전이 억제'는 타 기관으로 암세포의 전이가 전혀 진행되지 않는 것 뿐만 아니라, 본 발명 약학 조성물이 투여되지 않은 경우에 비해 타 기관으로 암세포의 전이 정도가 감소하는 것을 모두 포함한다.
또한, 본 발명은 MOESIN mRNA 또는 그 단백질의 발현을 저해하는 제제를 포함하는 비침윤성 방광암의 침윤성 방광암으로의 진행 억제용 약학 조성물을 제공할 수 있다.
용어 '비침윤성 방광암의 침윤성 방광암으로의 진행 억제'는 비침윤성 방광암의 침윤성 방광암으로의 진행이 전혀 일어나지 않는 것 뿐만 아니라, 본 발명 약학 조성물이 투여되지 않은 경우에 비해 비침윤성 방광암의 침윤성 방광암으로의 진행 정도가 감소하는 것을 모두 포함한다.
MOESIN mRNA 또는 그 단백질의 발현을 저해하는 제제는 서열번호 2와 적어도 60% 이상, 70% 이상, 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더 더욱 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함할 수 있다.
MOESIN mRNA 또는 그 단백질의 발현을 저해하는 제제는 서열번호 3과 적어도 60%이상, 70% 이상, 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더 더욱 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함할 수 있다.
MOESIN mRNA 또는 그 단백질의 발현을 저해하는 제제는 서열번호 4와 적어도 60%이상, 70% 이상, 바람직하게는 80% 이상, 더욱 바람직하게는 90% 이상, 더 더욱 바람직하게는 95% 이상의 서열 상동성을 갖는 서열을 포함할 수 있다.
본 발명 조성물은 약학적으로 허용가능한 담체를 추가로 포함할 수 있으며, 담체와 함께 제제화될 수 있다. 용어, '약학적으로 허용가능한 담체'란 생물체를 자극하지 않고 투여 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 저해하지 않는 담체 또는 희석제를 말한다. 액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용되는 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로오스 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다.
본 발명 조성물은 어떠한 제형으로도 적용 가능하며, 경구용 또는 비경구용 제형으로 제조할 수 있다. 본 발명의 약학적 제형은 구강(oral), 직장(rectal), 비강(nasal), 국소(topical; 볼 및 혀 밑을 포함), 피하, 질(vaginal) 또는 비경구(parenteral; 근육 내, 피하 및 정맥내를 포함) 투여에 적당한 것 또는 흡입(inhalation) 또는 주입(insufflation)에 의한 투여에 적당한 형태를 포함한다.
본 발명 조성물은 약학적으로 유효한 양으로 투여한다. 유효용량 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학 분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명 조성물의 투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설률 및 질환의 중증도 등에 따라 그 범위가 매우 다양할 수 있다. 일반적으로 인비보 동물모델 및 인비트로에서 효과적인 것으로 측정된 EC50을 기초로 계산될 수 있으며, 예를 들면 체중 1kg당 0.01 μg 내지 1 g 일 수 있으며, 일별, 주별, 월별 또는 연별의 단위 기간으로, 단위 기간 당 일회 내지 수회 나누어 투여될 수 있으며, 또는 인퓨전 펌프를 이용하여 장기간 연속적으로 투여될 수 있다. 반복투여 횟수는 약물이 체내 머무는 시간, 체내 약물 농도 등을 고려하여 결정된다. 질환 치료 경과에 따라 치료가 된 후라도, 재발을 위해 조성물이 투여될 수 있다.
본 발명 조성물은 선택적으로 화학치료제, 항염증제, 항바이러스제 및/또는 면역조절제 등을 추가로 포함할 수 있다.
본 발명 조성물은 포유동물에 투여된 후 활성 성분의 신속, 지속 또는 지연된 방출을 제공할 수 있도록 당업계에 공지된 방법을 사용하여 제형화될 수 있다. 제형은 분말, 과립, 정제, 에멀젼, 시럽, 에어로졸, 연질 또는 경질 젤라틴 캅셀, 멸균 주사용액, 멸균 분말의 형태일 수 있다.
이하, 본 발명을 구체적으로 설명하기 위해 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다.
방광암 세포 이동성 예측 마커 선별
비침윤성(non-invasive) 방광암 환자 6명, 기질침윤(stromal invasive) 방광암 환자 5명, 근육 침윤(muscle invasive) 방광암 환자 5명의 소변 액체 생검 시료(urine liquid cytology)에서 초고해상도 질량분석기 (high resolution mass spectrometry) Q-exactive plus (Thermo) 를 사용해 단백체 프로파일링 (protein profiling)을 수행하였다. 총 3259개의 단백질이 동정되었으며, 16명 환자의 시료에서 1779개의 단백질의 발현양이 측정되었다.
One-way ANOVA 분석을 통해서 비침윤성, 기질 침윤, 근육 침윤 방광암 환자에서 p-value < 0.05 이하의 유의적인 발현양의 차이를 보이는 182개의 단백질을 선별하였다 (도 1A 참조). paired student t-test 분석을 통해서 비침윤성 방광암 환자 시료와 근육 침윤 방광암 환자 시료 사이에서 순열검정법(permutation test)으로 유의적인 발현 차이를 보이는 단백질 188개를 선별하였다 (도 1B 참조).
또한, 세포 이동 어세이와 침윤 어세이를 통해 세포 이동 및 침윤 능력에 따라 8개의 방광암 세포주 (T24, J82, 253J-BV, 253J, 5637, RT4, HT1376, HT1197)를 비침윤세포군 (RT4, HT-1376, HT-1197) 과 침윤세포군 (T24, J82, 253J-BV) 으로 나누고, 초고해상도 질량분석기 (high resolution mass spectrometry) Q-exactive plus (Thermo)를 사용하여 단백체 프로파일링을 수행하였다 (도 2A 참조). 방광암 침윤 및 이동에 연관된 단백질 후보군을 선별하기 위해 student t-test 로 두 그룹간의 단백질 발현 차이를 평가하였다. 순열검정법 (permutation test)를 통해 총 677개의 단백질이 통계적으로 유의미하게 발현 변화가 있는 것을 확인하였다(도 2B 참조).
방광암 침윤 및 이동에 연관된 단백질 후보군을 선별하기 위해 소변 액체 생검 시료의 단백체 프로파일 결과와 방광암 세포주의 단백체 프로파일 결과의 비교 분석을 진행하였다. 12개의 단백질 (ATP1B1, CLTC, GRHL2, KPNA3, LDHB, LLGL2, MSN(;MOESIN), MVP, NCAM2, PARP4, PPA2, VAPA)이 두 결과에서 중복 선별되었다(도 3A 참조). 12개의 단백질에 대한 생물정보학 기반 기능 분석 결과, 5개의 단백질 (MSN(;MOESIN), VAPA, NCAM2, LLGL2, GRHL2)이 암의 침윤 및 이동에 관련된 것으로 확인되었다(도 3B 참조).
방광암 세포 이동성 예측 마커의 검증
1. 세포면역화학염색법 (Immunocytochemistry)
MOESIN 마커의 검증을 위해, 독립적인 소변 액체 생검 시료에서 MOESIN의 세포면역화학염색법을 수행하였다. 액체 생검 시료는 13명의 비침윤성 방광암 환자(non-invasive bladder urothelial carcinoma; NIBUC), 10명의 기질 침윤 방광암 환자(stromal invasive bladder urothelial carcinoma; SIBUC), 7명의 근육 침윤 방광암 환자(muscle-invasive bladder urothelial carcinoma; MIBUC)의 시료를 이용하였다. 즉, 13명의 비침윤성 방광암 환자, 17명의 침윤성 방광암 환자(invasive bladder urothelial carcinoma; IBUC, SIBUC+ MIBUC)의 시료를 이용하였다.
세포면역화학염색법 수행 결과, 하기 표 1에 기재된 것처럼 근육 침윤이 있는 환자군(SIBUC 및 MIBUC 환자군)에서 MOESIN 면역 염색률이 유의적으로 증가하였다 (p-value = 0.046)(도 4A 및 4B 참조). 또한, MOESIN의 침윤 예측력(predictive ability)이 침윤 여부에 따라서 더욱 유의적이라는 것을 확인하였다 (p-value = 0.023).
Figure pat00001
2. MOESIN 넉다운 세포주 이용 검증
2-1. MOESIN 넉다운 세포주 제작
또한, MOESIN 마커의 검증을 위해, MOESIN이 넉다운된 방광암 세포주를 제작하고 암세포의 침윤, 이동 여부 등을 확인하였다.
T24와 J82 방광암 세포주를 각각 DMEM medium+10% FBS (fetal bovine serum, Gibco) + 1% PS (Penicillin streptomycin, Gibco) 조성에서 37℃ (5% CO2) 인큐베이터에서 배양하였다.
MOESIN 발현을 넉다운하기 위하여 siMOESIN(MOESIN targeting siRNA) 및 siControl(negative control siRNA; non-targeting siRNA) (바이오니아, 한국)을 구매하고, 제조업체의 설명서에 따라 RNAimax (thermofisher)를 이용하여 각각의 siRNA를 T24와 J82 방광암 세포주에 트렌스펙션 (transfection)하였다. siMOESIN은 서열번호 2(5'-GUCGUAAGCCUGAUACCAU-3', siMOESIN#1), 서열번호 3(5'-GUCGCAAGCCUGAUACCAU-3', siMOESIN#2 또는 서열번호 4(5'- CUCAAGAUCUGGAGAUGUA-3', siMOESIN#3)를 이용하였다. siControl은 제조업체에서 제공하는 negative control siRNA(non-targeting siRNA)를 이용하였다. 48시간이 경과한 후 RT-PCR을 수행하였고, siMOESIN을 트랜스펙션한 세포에서 MOESIN 발현이 억제되고 siConrol을 트랜스펙션한 J82 와 T24 세포에서 MOESIN 발현이 억제되지 않는 것을 확인하였다 (도 5 참조).
MOESIN 발현을 확인하기 위한 RT-PCR 프라이머는 하기 표 2에 기재하였다.
MOESIN forward primer 5'-TGGGTGGGGTTTGTGAAGTC-3' (서열번호 5)
MOESIN reverse primer 5'-GCACACTGATCGTTTTGGGC-3' (서열번호 6)
SiMOESIN#1을 트랜스펙션하여 MOESIN 발현이 넉다운된 T24 방광암 세포주를 실시예 1, siMOESIN#1을 트랜스펙션하여 MOESIN 발현이 넉다운된 J82 방광암 세포주를 실시예 2, siControl을 트랜스펙션한 T24 방광암 세포주를 비교예 1, siControl을 트랜스펙션한 J82 방광암 세포주를 비교예 2로 표현하였다.
2-2. Moesin 발현 여부에 따른 방광암 세포 이동 능력 평가
T24와 J82 세포주에서 MOESIN 발현 억제에 따른 방광암 세포의 이동 능력을 평가하기 위하여 트랜스웰 이동 어세이 (Transwell migration assay)를 수행하였다. 24웰 플레이트 트랜스웰 상위 챔버에 실시예 1, 실시예 2, 비교예 1 및 비교예 2 를 각각 1X105 세포로 넣고, 하위 챔버에 5% FBS가 포함된 배지 600 μl를 넣은 후 37℃ 인큐베이터에서 24시간 배양하였다. 배양 후 상위 챔버 안의 세포를 제거하고 상위 챔버의 멤브레인 표면에 이동된 세포를 4% 파라포름알데하이드 (paraformaldehyde)로 고정시킨 후 0.1% 크리스탈 바이올렛 (crystal violet)으로 15분 동안 염색하였다. 현미경을 이용하여 각 멤브레인 표면의 세포 이미지를 얻었으며, 염색된 세포수를 측정하였다(도 6 참조). 위 실험을 통해 방광암 세포주에서 MOESIN의 발현 억제 시 통계적으로 유의하게 세포 이동 능력이 감소하는 것을 확인하였다.
2-3. MOESIN 발현 여부에 따른 방광암 세포 침윤 능력 평가
T24와 J82 세포주에서 MOESIN 발현 억제에 따른 방광암 세포의 침윤 능력을 평가하기 위하여 트랜스웰 이동 어세이 (Transwell invasion assay)를 수행하였다. 24웰 플레이트의 매트리젤 (Matrigel) 코팅된 트랜스웰 상위 챔버에 실시예 1, 실시예 2, 비교예 1 및 비교예 2 를 각각 2X105 세포로 넣고 하위 챔버에 10% FBS가 포함된 배지 600μl를 넣은 후 37℃ 인큐베이터에서 24시간 배양하였다. 배양 후 상위 챔버 안의 세포와 매트리젤을 면봉으로 닦아 제거한 후 상위 챔버의 멤브레인 표면에 이동된 세포를 4% 파라포름알데히드 (paraformaldehyde)로 고정시킨 후 0.1% 크리스탈 바이올렛으로 15분 동안 염색하였다. 현미경을 이용하여 각 멤브레인 표면의 세포 이미지를 얻었으며, 염색된 세포수를 측정하였다(도 7 참조). 위 실험을 통해 방광암 세포주에서 MOESIN의 발현 억제 시 통계적으로 유의하게 세포 침윤 능력이 감소하는 것을 확인하였다.
2-4. MOESIN 발현 여부에 따른 3차원 구상체의 침윤 능력 평가
생체 내 모방체 모델 (in vivo mimic model)에서 MOESIN 발현에 따른 3차원 구상체의 침윤 능력을 평가하기 위하여, 먼저 siRNA 방법을 통해 얻은 실시예 1, 실시예 2, 비교예 1 및 비교예 2 5X105의 세포 각각을 폴리 헤마 (poly2-hydroxyethyl methacrylate)로 코팅된 세포 배양 디쉬에 넣어 골고루 섞고(shaking) 인큐베이터에서 24시간 배양하여 3차원 구상체 (spheroids) 형성을 유도하였다. 유도된 3차원 구상체를 100μm 사이즈의 메시 (mesh)에 걸려 100μm 이상의 직경을 갖는 구상체를 제거하였고, 100μm 이하의 직경을 갖는 3차원 구상체를 매트리젤 (Matrigel)과 콜라젠 (collagen type I) 이 1:1로 혼합된 매트릭스와 섞어서 3차원 PDMS 세포 배양 몰드에 100μl 씩 넣어 37도에서 굳힌 후 50μl 의 3차원 구상체에 미디엄(DMEM medium+10% FBS+1% PS+2% 매트리젤)을 첨가 후 24시간 동안 세포 배양 하였다.
매트릭스에서 배양된 3차원 구상체 몰드에서 배양액을 제거한 후 4% 파라포름알데하이드를 이용하여 20분간 고정시킨 뒤, 0.5% 트리톤 X-100 (triton X-100)을 4시간 처리하여 3차원 세포내의 투과율을 높였다. Phalloidin (1:100) 과 Hoechest 33342 (1:100)의 혼합액으로 24시간 동안 염색하고 PBS로 세척한 후, 고초점현미경 (Leica TCS SP8)을 이용하여 3차원 구상체의 침윤 능력을 확인하였다(도 8 참조). 위 실험을 통해 비슷한 사이즈의 3차원 구상체 침윤 능력을 비교한 결과, 방광암 세포주에서 moesin을 넉다운시킨 경우 3차원 구상체에서 매트릭스로 뻗어나가는 능력 (3차원 구상체의 침윤 능력)이 감소하는 것을 확인하였다.
전술한 실험 결과들을 통해 MOESIN이 방광암 이동, 침윤 과정에 중요한 역할을 하며, 방광암 세포의 침윤을 예측하는 마커로서 유효하다는 것을 확인하였다.
<110> SEOUL NATIONAL UNIVERSITY HOSPITAL <120> COMPOSITION FOR PREDICTING MIGRATION OF BLADDER CANCER CELL AND KIT COMPRISING THE SAME <130> 19P10047 <160> 6 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 576 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 1 Met Pro Lys Thr Ile Ser Val Arg Val Thr Thr Met Asp Ala Glu Leu 1 5 10 15 Glu Phe Ala Ile Gln Pro Asn Thr Thr Gly Lys Gln Leu Phe Asp Gln 20 25 30 Val Val Lys Thr Ile Gly Leu Arg Glu Val Trp Phe Phe Gly Leu Gln 35 40 45 Tyr Gln Asp Thr Lys Gly Phe Ser Thr Trp Leu Lys Leu Asn Lys Lys 50 55 60 Val Thr Ala Gln Asp Val Arg Lys Glu Ser Pro Leu Leu Phe Lys Phe 65 70 75 80 Arg Ala Lys Phe Tyr Pro Glu Asp Val Ser Glu Glu Leu Ile Gln Asp 85 90 95 Ile Thr Gln Arg Leu Phe Phe Leu Gln Val Lys Glu Gly Ile Leu Asn 100 105 110 Asp Asp Ile Tyr Cys Pro Pro Glu Thr Ala Val Leu Leu Ala Ser Tyr 115 120 125 Ala Val Gln Ser Lys Tyr Gly Asp Phe Asn Lys Glu Val His Lys Ser 130 135 140 Gly Tyr Leu Ala Gly Asp Lys Leu Leu Pro Gln Arg Val Leu Glu Gln 145 150 155 160 His Lys Leu Asn Lys Asp Gln Trp Glu Glu Arg Ile Gln Val Trp His 165 170 175 Glu Glu His Arg Gly Met Leu Arg Glu Asp Ala Val Leu Glu Tyr Leu 180 185 190 Lys Ile Ala Gln Asp Leu Glu Met Tyr Gly Val Asn Tyr Phe Ser Ile 195 200 205 Lys Asn Lys Lys Gly Ser Glu Leu Trp Leu Gly Val Asp Ala Leu Gly 210 215 220 Leu Asn Ile Tyr Glu Gln Asn Asp Arg Leu Thr Pro Lys Ile Gly Phe 225 230 235 240 Trp Ser Glu Ile Arg Asn Ile Ser Phe Asn Asp Lys Lys Phe Val Ile 245 250 255 Lys Pro Ile Asp Lys Lys Ala Pro Asp Phe Val Phe Tyr Ala Pro Arg 260 265 270 Leu Arg Ile Asn Lys Arg Ile Leu Ala Leu Cys Met Gly Asn His Glu 275 280 285 Leu Tyr Met Arg Arg Arg Lys Pro Asp Thr Ile Glu Val Gln Gln Met 290 295 300 Lys Ala Gln Ala Arg Glu Glu Lys His Gln Lys Gln Met Glu Arg Ala 305 310 315 320 Met Leu Glu Asn Glu Lys Lys Lys Arg Glu Met Ala Glu Lys Glu Lys 325 330 335 Glu Lys Ile Glu Arg Glu Lys Glu Glu Leu Met Glu Arg Leu Lys Gln 340 345 350 Ile Glu Glu Gln Thr Lys Lys Ala Gln Gln Glu Leu Glu Glu Gln Thr 355 360 365 Arg Arg Ala Leu Glu Leu Glu Gln Glu Arg Lys Arg Ala Gln Ser Glu 370 375 380 Ala Glu Lys Leu Ala Lys Glu Arg Gln Glu Ala Glu Glu Ala Lys Glu 385 390 395 400 Ala Leu Leu Gln Ala Ser Arg Asp Gln Lys Lys Thr Gln Glu Gln Leu 405 410 415 Ala Leu Glu Met Ala Glu Leu Thr Ala Arg Ile Ser Gln Leu Glu Met 420 425 430 Ala Arg Gln Lys Lys Glu Ser Glu Ala Val Glu Trp Gln Gln Lys Ala 435 440 445 Gln Met Val Gln Glu Asp Leu Glu Lys Thr Arg Ala Glu Leu Lys Thr 450 455 460 Ala Met Ser Thr Pro His Val Ala Glu Pro Ala Glu Asn Glu Gln Asp 465 470 475 480 Glu Gln Asp Glu Asn Gly Ala Glu Ala Ser Ala Asp Leu Arg Ala Asp 485 490 495 Ala Met Ala Lys Asp Arg Ser Glu Glu Glu Arg Thr Thr Glu Ala Glu 500 505 510 Lys Asn Glu Arg Val Gln Lys His Leu Lys Ala Leu Thr Ser Glu Leu 515 520 525 Ala Asn Ala Arg Asp Glu Ser Lys Lys Thr Ala Asn Asp Met Ile His 530 535 540 Ala Glu Asn Met Arg Leu Gly Arg Asp Lys Tyr Lys Thr Leu Arg Gln 545 550 555 560 Ile Arg Gln Gly Asn Thr Lys Gln Arg Ile Asp Glu Phe Glu Ser Met 565 570 575 <210> 2 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MOESIN siRNA 1 <400> 2 gucguaagcc ugauaccau 19 <210> 3 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MOESIN siRNA 2 <400> 3 gucgcaagcc ugauaccau 19 <210> 4 <211> 19 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MOESIN siRNA 3 <400> 4 cucaagaucu ggagaugua 19 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MOESIN forward primer <400> 5 tgggtggggt ttgtgaagtc 20 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> MOESIN reverse primer <400> 6 gcacactgat cgttttgggc 20

Claims (11)

  1. MOESIN mRNA 또는 그 단백질의 발현 수준을 측정하는 제제를 포함하는 방광암 세포의 이동성 예측용 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 방광암 세포는 적어도 일부가 스페로이드 형태인, 조성물.
  3. 청구항 1에 있어서, 상기 제제는 프라이머, 프로브, 항체, 압타머, DNA, RNA, 단백질 및 폴리펩티드로 이루어진 군에서 선택되는 적어도 하나인, 조성물.
  4. 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항의 조성물을 포함하는 방광암 세포의 이동성 예측용 키트.
  5. 피검체로부터 분리된 시료에서 MOESIN mRNA 또는 그 단백질의 발현 수준을 측정하는 단계;를 포함하는 방광암 세포의 이동성을 예측하기 위한 정보제공방법.
  6. 청구항 5에 있어서, 상기 피검체의 측정값이 대조군의 측정값 보다 높으면 대조군 대비 방광암 세포의 이동 정도가 높을 것으로 예측하는 단계;를 더 포함하는, 정보제공방법.
  7. 청구항 5에 있어서, 상기 시료는 조직, 세포, 전혈, 혈청, 혈장, 타액, 객담, 뇌척수액 및 뇨로 이루어진 군에서 선택된 적어도 하나인, 정보제공방법.
  8. 청구항 5에 있어서, 상기 발현 수준은 웨스턴 블랏팅(western blotting), ELISA(enzyme linked immunosorbent assay), 방사선면역분석법(Radioimmunoassay), 방사면역 확산법(Radioimmunodiffusion), 오우크테로니(Ouchterlony) 면역 확산법, 로케트(Rocket) 면역전기영동, 조직면역 염색, 면역 침전분석법(immunoprecipitation assay), 보체 고정 분석법(complete fixation assay), 유세포분석(Fluorescence Activated Cell Sorter, FACS), 단백질 칩(protein chip), 역전사효소 중합효소반응(RT-PCR), 경쟁적 역전사효소 중합효소반응(Competitive RT-PCR), 실시간 역전사효소 중합효소반응(Real-time RT-PCR), RNase 보호 분석법(RPA; RNase protection assay), 노던 블롯팅 (Northern blotting) 및 DNA 칩으로 이루어진 군에서 선택된 하나 이상의 방법으로 측정되는 것인, 정보제공방법.
  9. 청구항 5에 있어서, 상기 피검체는 비침윤성 방광암 환자인, 정보제공방법.
  10. MOESIN mRNA 또는 그 단백질의 발현을 저해하는 제제를 포함하는 방광암 세포의 이동성 감소용 약학 조성물.
  11. 청구항 10에 있어서, 상기 제제는 서열번호 2 내지 서열번호 4 중 적어도 하나를 포함하는 것인, 약학 조성물.
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