KR20210116513A - 제형 - Google Patents

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KR20210116513A
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tcr
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ratio
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앤디 존슨
마틴 에브너
루카즈 그루드지엔
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이뮤노코어 리미티드
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Abstract

본 발명은 (i) 가용성 T 세포 수용체 (TCR)와 scFV를 포함하는 치료학적 유효량의 이중특이적 단백질; 및 (ii) 계면활성제를 포함하는 약제학적 제형에 관한 것이다. 단백질에 대한 계면활성제의 w/w 비율은 0.75:1 내지 1.5:1의 범위에 있다. 제형은 증량제 및/또는 안정화제를 추가로 포함할 수 있다. 추가 약제학적 제형은 (i) 가용성 T 세포 수용체 (TCR)와 scFV를 포함하는 치료학적 유효량의 이중특이적 단백질; (ii) 증량제; 및 (iii) 안정화제를 포함한다. 증량제에 대한 안정화제의 w/w 비율은 1:1보다 클 수 있다.

Description

제형
본 발명은 제형에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 가용성 T 세포 수용체 (TCR)와 scFv를 포함하는 이중특이적 단백질의 약제학적 제형에 관한 것이다.
생명공학의 발전으로 약제학적 적용을 위한 단백질을 만들 수 있게 되었다. 단백질은 종래의 유기 및 무기 약물 (예를 들어, 복잡한 3차원 구조 이외에 다중 작용기를 가짐)보다 더 크고 더 복잡하기 때문에, 그러한 단백질의 제형은 특별한 문제를 제기한다. 단백질이 생물학적 활성을 유지하기 위해, 제형은 단백질의 다중 작용기를 분해로부터 보호하면서 동시에 단백질의 아미노산 중 적어도 핵심 서열의 형태적 무결성을 손상시키지 않아야 한다. 단백질의 분해 경로는 화학적 불안정성 (예를 들어, 결합 형성 또는 절단에 의한 단백질의 변형을 포함하여 새로운 화학적 개체를 생성하는 임의의 공정) 또는 물리적 불안정성 (예를 들어, 단백질의 고차 구조의 변화)을 포함할 수 있다. 화학적 불안정성은 탈아미드화, 라세미화,가수분해, 산화, 베타 제거 또는 이황화 교환으로부터 발생할 수 있다. 물리적 불안정성은, 예를 들어, 변성, 응집, 침전 또는 흡착으로부터 발생할 수 있다. 3개의 가장 일반적인 단백질 분해 경로는 단백질 응집, 탈아미드화 및 산화이다 (Cleland et al Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems 10(4): 307-377 (1993)).
단편 및 변이체를 포함하는 항체는 성공적인 약제학적 제형이 기술되어 있는 치료 단백질의 부류이다 (Wang et al. J Pharm Sci. 2007 Jan;96(1):1-26.). 그러나 가용성 T 세포 수용체 (TCR)와 scFv를 포함하는 이중특이적 단백질을 위한 안정한 약제학적 제형에 관한 기술은 극히 제한된다. 단백질 제형의 공지된 복잡성 및 TCR 이중특이적 단백질과 항체 사이의 다수의 차이로 인해, 항체를 제형화하기 위해 개발된 기술은 이들 이중특이적 TCR 단백질에 적용될 것으로 예상되지 않을 수 있다. 예를 들어, 항체 제형에서 높은 단백질 농도 (즉, 1 mg/ml 초과)는 요구되는 치료 효과를 유지하면서 환자에게 투여되는 의약품의 부피를 최소화하는 것이 바람직하다. TCR-scFv 이중특이적 단백질은 낮은 단백질 농도에서 특히 강력하도록 설계되고, 따라서 낮은 단백질 농도를 갖는 제형이 바람직하다 (즉, 1 mg/ml 미만). 심지어 낮은 수준의 응집 또는 바이알 표면 (즉, 흡수 손실)과의 간단한 접촉도 단백질 활성의 상당한 손실을 초래할 수 있기 때문에, 낮은 단백질 농도는 특히 문제가 된다.
또한, 항체와는 달리, TCR은 용액 내에서 본질적으로 불안정한 것으로 알려져 있고, 이는 고온 (예를 들어, -30℃ 또는 -20℃ 초과, 예를 들어, 2 내지 8℃)에서 및/또는 장기간 보관하는 동안 단백질 안정성을 유지하는 것이 간단하지 않는다는 것을 의미한다. 고온에서 및 장기간 보관 동안 치료 단백질의 안정성은 임상 센터에서 편리하고 저비용 수송 및 보관을 허용하는 바람직한 기능이다. 마지막으로, 글리코실화는 글리코실화의 변화가 단백질 분해 속도에 영향을 미칠 수 있기 때문에 항체 제형에서 중요한 고려 사항이다. TCR-scFv 이중특이적 단백질은 일반적으로 대장균 (E.coli)에서 생성되고 따라서 글리코실화되지 않는다.
TCR-scFv 이중특이적 단백질에 대한 약제학적 제형을 제공할 필요가 있다. 그러한 제형은 낮은 단백질 농도에서 및 고온에서의 장기간 보관 동안 단백질 안정성을 유지하는 것이 특히 바람직하다.
제1 양태에서, 본 발명은 하기를 포함하는 약제학적 제형을 제공한다:
가용성 T 세포 수용체 (TCR)와 scFv를 포함하는 치료학적 유효량의 이중특이적 단백질; 및
계면활성제;
여기서 단백질에 대한 계면활성제의 w/w 비율은 0.75:1 내지 1.5:1의 범위에 있다.
본 발명자들은 0.75:1 내지 1.5:1의 범위에 있는 단백질에 대한 계면활성제의 w/w 비율이 안정한 제형을 제공한다는 것을 확인하였다. 계면활성제는 단백질 응집 및 표면 흡수 둘 모두를 방지하기 위해 단백질 제형에 통상적으로 사용되는 부형제이다. 광범위한 계면활성제 농도는 응집 (0.02 내지 2.0 mg/mL 또는 0.002 내지 0.2%)을 방지하는 데 적합하고, 농도가 높을수록 침전을 방지하는 데 더 우수하다는 것이 당업계에 밝혀졌다 (Wang, Eur J Pharm Biopharm. 2017 May;114: 263-277). 또한, 공지된 단백질 제형에서 단백질의 중량이 계면활성제의 중량보다 상당한 과량으로 존재한다는 것이 일반적이고; 예를 들어, 시판되는 치료 항체 트라스투주맙 (Heceptin®) 및 베바시주맙 (Avastin®)의 제형에서, 항체는 계면활성제보다 50배 초과 과량으로 존재한다. 본 발명자들은 TCR-scFv 이중특이적 단백질 제형에서 0.75:1 내지 1.5:1의 좁은 범위를 벗어나는 단백질에 대한 계면활성제의 w/w 비율을 증가시키거나 감소시키는 것이 예기치 않게 단백질 안정성의 실질적인 손실로 이어진다는 것을 확인하였다. 이론에 얽매이지 않고, 본 발명자들은 약물의 높은 효능의 결과로써 제형 중의 단백질의 낮은 농도가 단백질이 계면활성제 농도의 작은 변화에 더 민감하다는 것을 의미하는 것으로 가정한다.
단백질에 대한 계면활성제의 w/w 비율은 0.8:1 내지 1.2:1, 0.9:1 내지 1.1:1 또는 0.95:1 내지 1.05:1의 범위에 있을 수 있다. 상기 비율은 0.75:1, 0.8:1, 0.85:1, 0.9:1, 0.95:1, 1:1, 1.05:1, 1.1:1, 1.15:1, 1.2:1일 수 있다. 바람직한 비율은 1:1이다.
본 발명의 제형은 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 계면활성제를 포함할 수 있다. 약제학적으로 허용되는 계면활성제의 예에는 폴리소르베이트 (예를 들어, 폴리소르베이트 20, 40, 60 또는 80); 폴리옥사머 (예를 들어, 폴록사머 188); 트리톤; 나트륨 옥틸 글리코사이드; 라우릴-, 미리스틸-, 리놀레일-, 또는 스테아릴-설포베타인; 라우릴-, 미리스틸-, 리놀레일- 또는 스테아릴-사르코신; 리놀레일-, 미리스틸-, 또는 세틸-베타인; 라우로아미도프로필-, 코카미도프로필-, 리놀레아미도프로필-, 미리스타미도프로필-, 팔미도프로필-, 또는 이소스테아르아미도프로필-베타인 (예를 들어, 라우로아미도프로필); 미리스타미도프로필-, 팔미도프로필-, 또는 이소 스테아르아미도프로필-디메틸아민; 나트륨 메틸 코코일-, 또는 디나트륨 메틸 올레일-타우레이트, 폴리에틸 글리콜, 폴리프로필 글리콜, 및 에틸렌과 프로필렌 글리콜과의 공중합체가 포함된다. 바람직하게는, 본 발명의 제형에서, 계면활성제는 폴리소르베이트, 예컨대 폴리소르베이트 20 (상업적 명칭 Tween® 20) 또는 폴리소르베이트 80 (상업적 명칭 Tween® 80)이다. 더욱 바람직하게는, 계면활성제는 폴리소르베이트 20 (Tween® 20)이다. 계면활성제는 0.1% 이하의 w/v 농도로 존재할 수 있다. 예를 들어, 계면활성제는 0.9%, 0.8%, 0.7%, 0.6%, 0.5%, 0.4%, 0.3%, 0.2%의 w/v 농도로 존재할 수 있다. 계면활성제의 농도는 0.02%일 수 있다. 계면활성제의 농도는 0.05%일 수 있다. 계면활성제는 0.02%의 농도에서 존재하는 폴리소르베이트 20인 것이 바람직하다.
제1 양태의 제형은 증량제 및/또는 안정화제를 추가로 포함할 수 있다. 바람직하게는, 증량제에 대한 안정화제의 비율은 1:1보다 크다.
제2 양태에서, 본 발명은 하기를 포함하는 약제학적 제형을 제공한다:
가용성 T 세포 수용체 (TCR)와 scFv를 포함하는 치료학적 유효량의 이중특이적 단백질;
증량제; 및
안정화제;
여기서 증량제에 대한 안정화제의 w/w 비율은 1:1보다 크다.
본 발명자들은 증량제에 대한 안정화제의 w/w 비율이 1:1보다 큰 증량제 및 안정화제의 사용이 동결건조 준비가 된 안정한 제형을 제공한다는 것을 확인하였다. 이당류 안정화제, 예컨대 트레할로스 또는 수크로스와 증량제, 예컨대 만니톨을 포함하는 혼합물은 동결건조된 단백질 제형에 적합한 부형제인 것으로 알려져 있다 (Johnson, J Pharm Sci. 2002 Apr; 91(4):914-22.).
만니톨은 결정질 구조를 용이하게 형성하고, 건조 동안 붕괴되지 않는 안정한 케이크의 형성을 촉진한다. 그러나 결정질 상태에서, 만니톨은 단백질과 상호작용할 수 없어 잠재적으로 응집을 유발할 수 있다. 비정질상을 형성하는 수크로스의 첨가는 응집을 방지할 수 있다. 케이크 안정성과 응집 방지 사이에 충분한 균형을 제공하기 위해 적어도 3:1의 수크로스에 대한 만니톨의 중량비가 요구된다는 것이 당업계에 제안되어 있고; 낮은 비율이 만니톨 결정화를 억제하는 것으로 나타났다 (Jena et al, Pharm Res. 2016 Jun;33(6):1413-25; Johnson et al, J Pharm Sci. 2002 Apr;91(4):914-22). 당업계의 교시에 반하여, 본 발명자들은 1:1 미만 (바람직하게는 1:5)의 안정화제 (예를 들어, 수크로스/트레할로스)에 대한 증량제 (예를 들어, 만니톨)의 비율이 응집을 최소화하는 안정한 케이크를 생성한다는 것을 확인하였다. 본 발명자들은 과량일 경우, 결정질 만니톨이 동결건조 상태에서 TCR-scFv 이중특이적 단백질의 구조 상에 과도한 변형을 야기할 수 있고, 후속적으로 전개, 변성 및 응집을 유발할 수 있다는 것을 가정한다.
증량제에 대한 안정화제의 w/w 비율은 바람직하게는 3:1 내지 7:1, 더욱 바람직하게는 4:1 내지 6:1의 범위에 있을 수 있다. 예를 들어, 상기 비율은 2:1 또는 3:1 또는 4:1 또는 5:1 또는 6:1일 수 있다. 증량제에 대한 안정화제의 비율은 바람직하게는 약 5:1, 예를 들어, 5.5:0.9 내지 4.5:1.1일 수 있다. 증량제에 대한 안정화제의 비율은 더욱 바람직하게는 5:1일 수 있다. 안정화제의 농도는 4.5 내지 5.5% (w/v), 예를 들어, 5%의 범위에 있을 수 있다. 제형에 사용되는 증량제의 농도는 0.9 내지 1.1% (w/v), 예를 들어, 1%일 수 있다.
증량제는 벌크 (bulk)를 리오 케이크 (lyo cake)에 첨가하는 기능을 하는 약제학적으로 허용되는 화합물이다. 증량제로서 기능하는 화합물은 당업계에 공지되어 있고, 폴리올, 예컨대 만니톨 또는 소르비톨, 탄수화물, 단순 당, 중합체 또는 단백질을 포함한다. 바람직하게는, 증량제는 폴리올이다. 더욱 바람직하게는, 증량제는 만니톨이다. 바람직하게는, 만니톨은 1%의 농도로 존재한다.
안정화제는 동결 또는 동결건조 (lyophilisation) (동결-건조 (freeze-drying)) 시 동결건조 보호제/세포 보호제로서 기능하고, 따라서 응집 및/또는 다른 화학적 또는 물리적 불안정성을 방지하는 약제학적으로 허용되는 화합물이다. 안정화제로서 기능하는 화합물은 당업계에 공지되어 있다. 안정화제의 예에는 당, 당-알코올 및 아미노산이 포함된다. 바람직하게는, 안정화제는 이당류이다. 더욱 바람직하게는, 안정화제는 트레할로스 또는 수크로스이다. 안정화제는 트레할로스와 수크로스와의 혼합물일 수 있다. 바람직하게는, 안정화제는 5%의 농도로 존재하는 트레할로스이다. 본 발명의 바람직한 제형에서, 안정화제는 트레할로스이고 증량제는 만니톨이다. 만니톨에 대한 트레할로스의 w/w 비율은 바람직하게는 5:1이다.
본 발명의 제형은 완충제를 추가로 포함할 수 있다. 약제학적으로 허용되는 완충제는 당업계에 공지되어 있다. 예에는 포스페이트, 시트레이트, 리신, 히스티딘, 아세테이트, 숙시네이트 및 트리스 완충제가 포함된다. 이들 중 임의의 것이 본 발명에 사용될 수 있다. 바람직한 완충제는 포스페이트-시트레이트이다. 완충제의 농도는 약 20 mM 내지 약 50 mM, 예를 들어, 20 mM, 30 mM, 40 mM 또는 50 mM일 수 있다. 바람직하게는, 완충제 농도는 50 mM이다. 바람직하게는, 제형은 50 mM 포스페이트-시트레이트 완충제를 포함한다.
약제학적 제형의 최적 pH는 단백질의 1차 서열 및 이의 농도뿐만 아니라 다른 부형제의 동일성 및 농도에 의존한다. 본 발명의 바람직한 제형에서, pH는 약 pH 6 내지 약 pH 7, 바람직하게는 6.3 내지 6.7의 범위에 있다. 예를 들어, pH는 pH 6.0, 또는 pH 6.1, 또는 pH 6.2, 또는 pH 6.3, 또는 pH 6.4, 또는 pH 6.5, 또는 pH 6.6, 또는 pH 6.7, 또는 pH 6.8, 또는 pH 6.9 또는 pH 7.0일 수 있다. pH 6.5가 바람직하다. pH 6.0이 또한 바람직하다.
제형은 수성 제형(aqueous formulation)일 수 있다. 바람직하게는 수성 담체는 약제학적으로 허용되는 것 (인간에게 투여하기에 안전하고 비-독성임)이다. 수성 담체는 증류수 또는 멸균수일 수 있다. 일부 구현예에서, 수성 제형은 동결될 수 있다. 대안적으로, 수성 제형은 동결건조되어 동결건조된 제형을 생성할 수 있다. 액체 제형으로부터 동결건조된 약제학적 제형을 제조하기 위한 적합한 프로토콜 및 방법은 당업계에 공지되어 있다. 투여 전 동결건조된 제형의 재구성을 위한 방법은 당업계에 공지되어 있다. 요약하면, 동결-건조는 제형을 동결시킨 다음 1차 건조에 적합한 온도에서 동결된 내용물로부터 얼음을 승화시켜 수행된다. 전형적으로, 1차 건조는 적절한 압력에서 약 -30 내지 25℃ (단, 생성물은 1차 건조 동안 동결된 상태로 유지됨)의 범위이고, 전형적으로 약 0.05 mBar 내지 약 0.5 mBar의 범위일 것이다. 샘플을 담는 용기의 제형, 크기 및 유형 (예를 들어, 유리 바이알) 및 액체의 부피는 주로 건조에 필요한 시간을 결정할 것이고, 이 시간은 몇 시간에서 며칠까지 다양할 수 있다. 2차 건조 단계는 주로 용기의 유형 및 크기, 그리고 사용된 단백질의 유형에 따라 약 0 내지 40℃에서 수행될 수 있다. 2차 건조에 필요한 시간 및 압력은, 예를 들어, 온도 및 다른 파라미터에 따라 적절한 동결건조 케이크를 생성하는 시간 및 압력일 것이다. 2차 건조 시간은 생성물의 원하는 잔류 수분 수준으로 결정되고 전형적으로 적어도 약 5시간 (예를 들어, 15 내지 24시간) 걸린다. 압력은 1차 건조 단계 동안 사용된 것과 동일할 수 있다. 동결-건조 조건은 제형 및 바이알 크기에 따라 달라질 수 있다.
본 발명의 약제학적 제형은 바람직하게는 안정하다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 '안정성' 또는 '안정한'은 이중특이적 단백질의 하나 이상의 생물물리학적 및/또는 화학적 특징이 2 내지 8℃에서 연장된 기간 동안 보관될 때 본질적으로 변하지 않는 제형을 의미한다. 연장된 기간은, 적어도 최대 2년, 더욱 바람직하게는 적어도 최대 5년 이상을 의미한다. 추가적인 또는 대안적인 조건이 2 내지 8℃에서 제형의 잠재적 장기 안정성의 지표로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 안정하다는 것은 단백질이 본질적으로 정의된 수의 동결 해동 주기, 예컨대 적어도 5 또는 적어도 10의 동결 해동 주기 후에 변하지 않는다는 것을 의미할 수 있거나; 안정하다는 것은 단백질이 본질적으로 적어도 1개월 동안 고온에서, 예컨대 약 30℃의 온도에서 단기 보관 후에 변하지 않는다는 것을 의미할 수 있다.
제형의 안정성은 외관 (색상 및 탁도), 단백질 농도, pH, 가시 영역 이하 (subvisible)의 입자의 존재, 응집, 변성 및 단백질 활성을 포함하지만 이로 제한되지 않는 하나 이상의 생물물리학적 또는 화학적 특징을 조사하여 평가될 수 있다. 당업자는 단백질 제형의 안정성을 평가하는 데 사용될 수 있는 다양한 분석 기술을 알고 있다. 예로는 육안 검사, 네펠로법 (nephelometry), 광 차단, 280 nm에서의 흡광도, 모세관 겔 전기영동 (CGE), 음이온 교환 크로마토그래피 (AIEX), 크기 배제 크로마토그래피 (SEC), 단백질 활성 검정이 포함되지만 이로 제한되지 않는다. 동결건조된 샘플의 경우, 추가 분석 기술은 케이크의 물리적 안정성 평가 및 (예를 들어, 카를 피셔 (Karl Fischer) 평가를 통한) 수분 함량의 결정을 포함할 수 있다. 구체적인 기술은 예시 섹션에 추가로 제공된다. 바람직하게는, 제형의 안정성은 하기 특징들 중 하나 이상, 바람직하게는 모두를 평가함으로써 결정된다; pH, 시각적 외관, 단백질 농도, 가시 영역 이하의 입자의 존재, CGE, SEC, AIEX 및 단백질 활성.
이중특이적 단백질은 가용성 TCR과 scFv 항체 단편을 포함하며, 바람직하게는 링커를 통해 융합된다. 링커 서열은 일반적으로 가요성을 제한할 수 있는 벌키한 측쇄를 갖지 않는 아미노산, 예컨대 글리신, 알라닌 및 세린으로 구성된다는 점에서 가요성이 있다. 링커 서열의 사용 가능 또는 최적의 길이는 용이하게 결정된다. 종종 링커 서열의 길이는 약 12개 미만, 예컨대 10개 미만, 또는 5 내지 10개의 아미노산일 것이다. TCR은 2개의 이황화 결합 사슬로 구성된다. 각 사슬 (알파 및 베타)은 일반적으로 2개의 도메인, 즉 가변 및 불변 도메인 (각각 TRAV/TRBV 및 TRAC/TRBC라고 함)을 갖는 것으로 간주된다. 각 사슬의 가변 도메인은 N-말단에 위치되고 프레임워크 서열에 임베딩된 3개의 상보성 결정 영역 (CDR)을 포함한다. CDR은 펩타이드-MHC 결합을 위한 인식 부위를 포함한다. 가용성 TCR은 TRAV 및 TRBV를 포함할 수 있고, 바람직하게는 인간일 수 있다. 가용성 TCR은 항원 (항원의 예에는 NY-ESO, MAGEA4 또는 PRAME가 포함됨)에 대한 초생리적 친화성을 갖도록 천연 또는 야생형 (바람직하게는 인간) TCR에 관한 돌연변이를 함유할 수 있다. 가용성 TCR은 이종 이량체 αβ TCR 폴리펩타이드 쌍일 수 있고, 여기서 α 및 β 폴리펩타이드는 각각 TCR 가변 및 불변 영역을 갖지만, TCR 막관통 및 세포질 영역이 없다. TCR α 및 β 폴리펩타이드의 불변 영역의 잔기 사이에 비-천연(non-native) 이황화 결합이 존재할 수 있다. 가용성 TCR은 병든 세포, 예컨대 암 세포 또는 바이러스 또는 세균 감염 세포에 존재하는 항원을 인식할 수 있다. 가용성 TCR의 2개의 사슬은 단쇄 (WO2004/033685) 또는 이황화 결합 이량체 (WO03/020763)로서 생성될 수 있다. 특정 구현예에서, 가용성 TCR은 TRAV 및 TRBV 영역 및 세포외 알파 사슬 TRAC 불변 도메인 서열 및 세포외 베타 사슬 TRBC1 또는 TRBC2 불변 도메인 서열을 갖는 알파 베타 이종 이량체를 포함한다. TRAC 또는 TRBV 서열은 절단 또는 치환에 의해 변형되어 TRAC의 엑손 2의 Cys4와 TRBC1 또는 TRBC2의 엑손 2의 Cys2 사이의 천연 이황화 결합을 삭제할 수 있다. TRAC 또는 TRBV 서열(들)은 TRAC의 Thr 48 및 TRBC1 또는 TRBC2의 Ser 57에 대한 시스테인 잔기의 치환에 의해 변형될 수 있고, 상기 시스테인은 TCR의 알파 및 베타 불변 도메인 사이에 이황화 결합을 형성한다. α 및 β 폴리펩타이드의 불변 영역은 TRAC*01의 엑손 2의 Cys4와 TRBC1 또는 TRBC2의 엑손 2의 Cys2 사이의 천연 이황화 결합에 의해 연결될 수 있다. 가용성 TCR은 Vα-L-Vβ, Vβ-L-Vα, Vα-Cα-L-Vβ, 또는 Vα-L-Vβ-Cβ 유형의 단쇄 αβ TCR 폴리펩타이드일 수 있고, 여기서 Va 및 Vβ는 각각 TCR α 및 β 가변 영역이고, Ca 및 Cβ α는 각각 TCR α 및 β 불변 영역이고, L은 링커 서열이다.
용어 "단쇄 Fv" 또는 "scFv"는 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하는 항체 단편을 의미하고, 여기서 이들 도메인은 단일 폴리펩타이드 사슬에 존재한다. 일반적으로, Fv 폴리펩타이드는 scFv가 항원 결합을 위해 원하는 구조를 형성할 수 있게 하는 VH와 VL 도메인 사이의 폴리펩타이드 링커를 추가로 포함한다. scFv는 인간 항체에서 유도되거나 인간화되었을 수 있다. scFv는 CD3을 인식하는 항체에서 유도될 수 있다. 특정 구현예에서, 항-CD3 scFv는 UCHT1 항체에서 유도될 수 있다 (Shalaby et al. J Exp Med. 1992 Jan 1;175(1):217-25, US5821337). scFv는 가용성 TCR의 N- 또는 C-말단에 융합될 수 있다. scFv가 가용성 TCR의 N 말단에 융합되는 것이 바람직하다 (WO2010/133828).
TCR-scFv 이중특이적 단백질은 1 mg/ml 미만, 0.5 mg/ml 미만, 바람직하게는 0.3 mg/l 미만의 농도로 존재할 수 있다. TCR-scFv 이중특이적 단백질의 농도는 0.05 내지 0.5 mg/ml 또는 0.1 내지 0.3 mg/ml의 범위에 있을 수 있거나 0.5, 0.4, 0.3, 0.2 또는 0.1 mg/ml일 수 있다. 바람직한 농도는 0.2 mg/ml이다.
본 발명의 제형에 포함될 수 있는 특정 TCR-scFv 이중특이적 단백질은 WO2011001152, WO2017/109496, WO2017/175006 및 WO2018234319에 개시된 것을 포함한다. WO2011/001152의 특정 TCR-scFv 이중특이적 단백질은 서열 번호 45의 알파 사슬, 여기서 아미노산 1 내지 109는 서열 번호 8로 대체되고, 위치 1에서의 아미노산은 A이고 알파 사슬의 C 말단은 서열 번호 45의 넘버링에 기초하여 F196부터 S203까지 포함하는 8개의 아미노산에 의해 절단됨; 및 서열 번호 36의 베타 사슬을 가지며, 여기서 잔기 259 내지 370은 서열 번호 27에 상응하고, 위치 1 및 2에서의 아미노산은 각각 A 및 I이다. 그러한 TCR-scFv 이중특이적 단백질을 포함하는 제형은 바람직하게는 6.5의 pH를 가질 수 있다.
본 발명에 따른 특정 제형은:
WO2011001152의 서열 번호 45의 알파 사슬, 여기서 아미노산 1 내지 109는 WO2011001152의 서열 번호 8로 대체되고, 위치 1에서의 아미노산은 A이고 알파 사슬의 C 말단은 서열 번호 45의 넘버링에 기초하여 F196부터 S203까지 포함하는 8개의 아미노산에 의해 절단됨; 및 WO2011001152의 서열 번호 36의 베타 사슬을 가지며, 여기서 잔기 259 내지 370은 WO2011001152의 서열 번호 27에 상응하고, 위치 1 및 2에서의 아미노산은 각각 A 및 I이고, 0.2 mg/ml의 농도로 존재하는 TCR-scFv 이중특이적 단백질;
50 mM 포스페이트-시트레이트 완충제,
5% 트레할로스,
1% 만니톨, 및
0.02% w/v 폴리소르베이트 20을 포함하고,
6.5의 pH를 갖는다.
대안적인 바람직한 구현예에서, 제형은
WO2017/109496에 기재된 바와 같은 0.5 mg/ml TCR-scFv 이중특이적 단백질,
50 mM 포스페이트-시트레이트 완충제,
5% 트레할로스,
1% 만니톨, 및
0.05% w/v 폴리소르베이트 20을 포함하고,
6.0의 pH를 갖는다.
추가의 대안적인 바람직한 구현예에서, 제형은
WO2017/175006에 기재된 바와 같은 0.2 mg/ml TCR-scFv 이중특이적 단백질,
50 mM 포스페이트-시트레이트 완충제,
5% 트레할로스,
1% 만니톨, 및
0.02% w/v 폴리소르베이트 20을 포함하고,
6.0의 pH를 갖는다.
바람직하게는 본 발명의 제형에서 이중특이적 단백질은 비-글리코실화이다.
추가 양태에서, 본 발명은 또한 하기를 포함하는 약제학적 제형의 제조 방법을 제공한다:
(i) 가용성 T 세포 수용체 (TCR)와 scFV를 포함하는 치료학적 유효량의 이중특이적 단백질 및 (ii) 계면활성제를 제형화하는 단계,
여기서 단백질에 대한 계면활성제의 w/w 비율은 0.75:1 내지 1.5:1의 범위에 있음.
추가 양태에서, 본 발명은 또한 하기를 포함하는 약제학적 제형의 제조 방법을 제공한다:
(i) 가용성 T 세포 수용체 (TCR)와 scFV를 포함하는 치료학적 유효량의 이중 특이성 단백질, (ii) 증량제 및 (iii) 안정화제를 제형화하는 단계,
여기서 증량제에 대한 안정화제의 비율은 1:1보다 큼.
본 발명은 또한 의약에 사용하기 위한 본 발명의 제형을 제공한다. 제형은 암 또는 감염성 질환을 포함하는 질환의 치료 방법에 사용하기 위한 것일 수 있다. 상기 암은 흑색종 (피부 흑색종 또는 포도막 흑색종 (안구 흑색종으로도 알려짐), 악성 흑색점 흑색종, 표재 확산 흑색종, 말단 흑자 흑색종, 점막 흑색종, 결절성 흑색종, 폴립성 흑색종, 섬유조직형성흑색종, 멜라닌결핍흑색종, 연조직 흑색종, 작은 모반-유사 세포를 갖는 소세포 흑색종 및 스피트조이드 흑색종을 포함하지만 이로 제한되지 않음)일 수 있다. 대안적으로, 상기 암은 유방 (삼중 음성 포함), 난소, 자궁내막, 식도, 폐 (NSCLC 및 SCLC), 방광, 결장, 위, 간, 췌장, 전립선, 결합 조직 (즉, 육종) 또는 두경부일 수 있거나; 상기 암은 백혈병 또는 림프종일 수 있다.
바람직한 구현예에서, 제형은 주사, 예컨대 정맥내 주사에 의해 투여될 수 있다. 제형은 연속 주입을 통해 (예컨대, 몇 시간, 며칠 또는 몇 주에 걸쳐) 또는 간헐적 주입을 통해 (예컨대, 주 1회, 2회 또는 3회, 또는 덜 빈번하게) 투여될 수 있다.
대안적으로, 제형은 종양내 피하, 근육내, 경막내, 장내 (경구 또는 직장 포함), 흡입 또는 비강내를 포함하는 임의의 다른 적절한 경로에 의한 투여에 적합할 수 있다.
추가 양태에서, 본 발명은 본원에 개시된 치료학적 유효량의 약제학적 제형을 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 인간 대상체의 치료 방법을 제공한다.
본 발명의 임의의 하나의 양태의 바람직한 특징은 필요한 부분만 수정하여 본 발명의 서로 다른 양태에 적용한다. 본원에 언급된 선행 기술 문헌은 법률에 의해 허용되는 최대 범위까지 포함된다.
본 발명은 이제 다음의 비-제한적인 실시예에서 설명될 것이다. 이하 첨부된 도면을 참조한다.
도 1은 0.2 mg/ml의 TCR-scFv 이중특이적 단백질, 50 mM 포스페이트-시트레이트 pH 6.5, 5% 트레할로스, 1% 만니톨, 및 0.02% Tween 20을 포함하는 제형에 대한 SE-UPLC, AE-HPLC 및 CGE 분석 결과를 제공한다.
도 2는 0.2 mg/ml의 대체 TCR-scFv 이중특이적 단백질, 50 mM 포스페이트-시트레이트 pH 6.5, 5% 트레할로스, 1% 만니톨, 및 0.02% Tween 20을 포함하는 제형에 대한 SE-UPLC, AE-HPLC 및 CGE 분석 결과를 제공한다.
도 3은 0.2 mg/ml의 TCR-scFv 이중특이적 단백질, 50 mM 포스페이트-시트레이트 pH 6.5, 5% 트레할로스, 1% 만니톨, 및 0.06%, 0.04%, 0.02%, 0.01%, 또는 0.005% Tween 20 중 어느 하나를 포함하는 제형에 대한 광 차단 분석 결과를 제공한다.
도 4는 0.2 mg/ml의 TCR-scFv 이중특이적 단백질, 50 mM 포스페이트-시트레이트 pH 6.5, 5% 트레할로스, 1% 만니톨, 및 0.02%, 0.03%, 0.04%, 0.05%, 0.06%, 0.07%, 또는 0.08% Tween 20 중 어느 하나를 포함하는 제형에 대한 실험 계획 (DoE) 분석 결과를 제공한다.
도 5는 0.5 mg/ml의 TCR-scFv 이중특이적 단백질, 50 mM 포스페이트-시트레이트 pH 7.5, 120 mM NaCl 및 0.05% Tween 20을 포함하는 제형에 대한 SE-UPLC, AE-HPLC 및 CGE 분석 결과를 제공한다.
도 6은 1% 수크로스의 존재 또는 부재 하에 0.2 mg/ml의 TCR-scFv 이중특이적 단백질, 50 mM 포스페이트-시트레이트 pH 6.5, 5% 만니톨, 및 0.02% Tween 20을 포함하는 제형에 대한 탁도 분석 결과를 제공한다.
실시예
실시예 1 - 가용성 TCR-scFv 이중특이적 단백질에 대한 안정한 수성 제형
A)
항-CD3 scFv에 융합된 가용성 TCR을 포함하는 이중특이적 단백질 (WO2011/001152의 서열 번호 45의 알파 사슬, 여기서 아미노산 1 내지 109는 WO2011001152의 서열 번호 8로 대체되고, 위치 1에서의 아미노산은 A이고, 알파 사슬의 C 말단은 서열 번호 45의 넘버링에 기초하여 F196부터 S203까지 포함하는 8개의 아미노산에 의해 절단됨; 및 WO2011/001152의 서열 번호 36의 베타 사슬, 여기서 잔기 259 내지 370이 WO2011/001152의 서열 번호 27에 상응하고, 위치 1 및 2에서의 아미노산은 각각 A 및 I임)을 공지된 방법을 사용하여 제조하고 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)를 사용하여 제형 완충제로 완충제 교환했다. 이어서, 단백질을 제형 완충제를 사용하여 0.20 ± 0.02 mg/mL의 최종 농도로 희석시키고, 라미네이트 기류 (LAF) 벤치의 병에 채웠다.
제형 완충제는 50 mM 포스페이트-시트레이트, 5% 트레할로스, 1% 만니톨, 및 0.02% Tween 20을 포함했다. pH는 6.5였다.
단백질 안정성을 <-60℃ 또는 +5℃에서 24개월에 걸쳐 모니터링했다. 각 온도에서의 안정성은 모세관 겔 전기영동 (CGE), 음이온 교환 고성능 액체 크로마토그래피 (AE-HPLC) 및 크기 배제 초고성능 액체 크로마토그래피 (SE-UPLC)를 포함하는 다양한 분석 방법을 사용하여 평가했다. 추가 평가에는 육안 검사, 단백질 함량 및 pH 측정, 광 차단에 의한 비가시적 입자의 검출 및 기능을 확인하기 위한 활성 검정이 포함됐다. 단백질 안정성을 또한 10의 동결 해동 주기에 걸쳐 입증했다.
SE-UPLC를 사용하여 다량체 및 다른 고분자량 종의 존재를 검출했고, 0.2 M 포스페이트 pH 7.5 이동상이 0.2 ml/min의 등용매로 유동하는, 1.7 μm, 4.6 x 300 mm의 UPLC SE 칼럼을 사용하여 UPLC 시스템 상에서 수행했다. 상기 방법은 UPLC 시스템 상에서 형광에 의한 검출을 사용하여 칼럼에 적절한 양을 주입한 후 SE 칼럼 상에서 테스트 샘플의 단백질 성분을 분리하는 단계를 포함한다. 도 1a는 +5℃에서 24개월 동안 8개의 시점에서 SE-UPLC에 의해 측정된 순도의 평가를 나타낸다. 0개월에서의 순도는 99.2%였고, 24개월에서의 순도는 99.3%였다. 최소 허용 기준 = >95%이다.
AE-HPLC를 사용하여 전하-기반 분해를 검출했고, 포스페이트 pH 8.2 이동상이 0.2 ml/min으로 유동하는, 2 x 250 mm의 약한 AE 칼럼을 사용하여 HPLC 시스템 상에서 수행했다. 단백질을 포스페이트 pH 8.2 완충제에서 NaCl 구배로 용출시켰다. 상기 방법은 HPLC 시스템 상에서 형광에 의한 검출을 사용하여 칼럼에 적절한 양을 주입한 후 AE 칼럼 상에서 테스트 샘플의 단백질 성분을 분리하는 단계를 포함한다. 도 1b는 +5℃에서 24개월 동안 8개의 시점에서 AE-HPLC에 의해 측정된 바와 같은 전하 상태의 평가를 나타낸다. 0개월에서의 주요 피크 %는 기준에 비해 +3.4%였고, 24개월에서 판독값은 -1.9%였고, 이는 생성물이 이 제형에서 안정하였음을 입증했다 (기준의 ±15% 이내의 허용 기준).
CGE를 사용하여 저분자량 불순물 및 단편과 같은 분해물의 존재를 결정했다. 상기 방법은 칩 및 표준 CGE 둘 모두를 사용하여 수행했다. 칩 방법에서 샘플을 0.2 mg/mL의 최종 농도로 제조했고, 70℃에서 5분 동안 가열했다. 냉각 후 변성된 샘플을 칩에 로딩하고, Bioanalyzer (Agilent technologies) 상에서 분리시켰다. 표준 CGE를 Proteolab SDS MW 분석 키트로부터 시약을 사용하는 다이오드 어레이 검출기 (Beckman Coulter) 및 분리 모세관 (57 cm x 50 μm ID, 베어 용융-실리카)이 있는 PA 800 Plus 기기 상에서 실행했다. 샘플은 SDS 샘플 완충제로 희석시키고 70℃에서 5분 동안 가열하기 전에 0.2 mg/mL로 준비했다. 분석은 220 nm에서 판독되고, 마이그레이션 시간 및 수정된 피크 영역 %가 기록된다. 최소 허용 기준 = >95%이다.
도 1c는 +5℃에서 24개월 동안 7개의 시점에서 CGE에 의한 순도의 평가를 나타낸다. 0개월에서의 순도는 99.6%였고, T=24개월에서의 순도는 99.7%였고, 이는 생성물이 이 제형에서 안정하였음을 입증했다.
다중 동결/해동 주기에 따른 안정성의 평가를 장기 안정성의 추가 지표로서 사용했다. 동결 해동 주기는 샘플을 <-60 미만으로 급속 동결시키고, 이어서 실온 (약 22℃)에서 인큐베이션하여 수행됐다. 안정성을 상기 기재된 바와 같은 SE-UPLC로 평가했다. 결과는 10의 동결 해동 주기에 노출되기 전 99.6%의 순도 및 그 후에 99.5%의 순도를 나타냈고, 이는 생성물이 이 제형에서 안정하였음을 나타냈다.
시각적 분석을 약전 방법 (Ph. Eur.2.2.1, 2.2.2 및 2.9.20)의 원리에 따라 수행했다. 본질적으로 입자를 함유하지 않는 투명한 무색 용액을 +5℃에서 0개월에서 관찰하고, 24개월 후에 관찰했다. 또한, 10의 동결 해동 주기 후에 시각적 변화가 감지되지 않았다.
단백질 농도 및 pH는 24개월 후 명시된 값의 +/- 0.02 mg/ml 및 0.2 pH 단위 내에 있었다.
레이저 광 차단에 의한 가시 영역 이하의 입자의 평가는 ≥25 μm의 입자가 ≤600/바이알에서 존재했고, ≥10 μm의 입자가 24개월 후 (즉, 허용 기준 이내) ≤6000/바이알에서 존재했음을 나타냈다. 탁도 측정값은 허용 가능한 범위 내에 있었다 (<3 NTU (유백광 I의 표준)).
이들 데이터는 제형이 2 내지 8℃ 사이의 온도에서 장기간 보관하는 동안 안정하다는 것을 입증한다.
동결건조된 제형을 동결시켜 제조했고, 이어서 0.6 ml 샘플을 2R 유리 바이알에 -45℃에서 2시간 동안 유지시킨 다음 -15℃/0.07 mbar에서 22시간 동안 1차 건조시킨 후 +40℃/0.07 mbar에서 23시간 동안 2차 건조시켰다. 이어서 샘플을 진공 하에서 고무 마개로 바이알에 밀봉했다. 동결건조된 샘플을 +5℃에서 장기간 보관했다. 바이알에 주사용 멸균수 0.6 ml를 첨가하고 혼합하여 샘플을 재구성했다.
B)
항-CD3 scFv에 융합된 대안적인 가용성 TCR을 포함하는 제2 이중특이적 단백질 (WO2017/175006에 기재된 바와 같음)을 0.20 ± 0.02 mg/mL의 최종 농도로 제조했다. 제형 완충제는 20 mM 포스페이트-시트레이트, 5% 트레할로스, 1% 만니톨, 및 0.02% Tween 20을 포함했다. pH는 6.0이었다.
안정성 평가를 A 부분에 기재된 것과 동일한 방법을 사용하여 12개월 동안 수행했다.
SE-UPLC, AE-HPLC 및 CGE 데이터는 각각 도 2a 내지 도 2c에 나타나 있다. SE-UPLC에 의한 순도는 0개월에서 98.9%였고, 12개월에서 99.3%였다. AE-HPLC에 의한 전하 상태는 0개월에서 기준에 비해 -12.2%의 주요 피크였고, 12개월에서 -19.5%였다 (기준의 ±20% 이내의 허용 기준). CGE에 의한 순도는 0개월에서 98.8%였고, 12개월에서 98.3%였다. 각 경우에, 데이터의 외삽(extrapolation)은 안정성이 24개월 이상 예상될 수 있다는 것을 나타낸다.
또한, 안정성을 10의 동결 해동 주기 후 SE-UPLC로 입증했다.
이들 데이터는 제형이 2 - 8℃ 사이의 온도에서 장기간 보관하는 동안 안정하다는 것을 입증한다.
실시예 2 - 제형 최적화
A - 세제 단백질 비율
세제와 단백질 사이의 중량비는 안정한 제형을 생성하는 데 중요한 요소인 것으로 확인되었다.
이에 대한 증거를 5의 동결 해동 주기 후에, 크기가 2 μm 이상인 가시 영역 이하의 입자의 존재를 평가한 레이저 광 차단 (LO) 측정으로부터 수득했다. 제형 완충제는 실시예 1A의 TCR-scFv 이중특이적 단백질, 50 mM 포스페이트-시트레이트, 5% 트레할로스, 1% 만니톨, 및 5가지의 상이한 농도 중 하나인 Tween 20을 포함했다. pH는 6.5였다. 단백질 농도를 0.2 mg/ml로 일정하게 유지했다. 검정을 PAMAS SVSS-C 또는 등가 입자 사이징 기기에서 수행했다. 샘플을 0.4 ml의 사전 실행 부피 및 0.1 ml의 측정 부피로 3회 수행하여, 순수하게 분석했다. ≥2 μm, ≥10 μm 및 ≥25 μm의 입자에 대한 입자 수를 결정했다.
도 3은 단백질에 대한 Tween-20의 비율이 1인 경우, 크기가 ≥10 μm인 입자의 수가 가장 적고, 따라서 가장 높은 안정성을 수득했다는 것을 나타낸다.
세제 단백질 비율의 중요성에 대한 추가 증거를 실험 계획 (DoE) 연구로부터 수득했다. 이 실험에서, 실시예 1A의 이중특이적 단백질의 안정성을 0.2 mg/ml의 고정된 단백질 농도로 32개의 상이한 조건에서 조사했다. 변수에는 세제 농도가 포함됐다. 각 경우에, 제형을 +30℃, ±3℃에서 1개월 동안 보관했고, 안정성을 고온에서 그리고 5x 동결 해동 주기를 통해 모니터링했다. Tween 20 농도의 효과 (및 따라서 1 내지 4의 Tween 20/단백질 w/w 비율)를 SE-UPLC, AE-HPLC 및 CGE를 포함하는 다수의 분석 방법에 걸쳐 평가했다. 또한, 이중특이적 단백질 활성을 ELISA를 사용하여 평가했다. 그 결과는 도 4에 요약되어 있다.
B - 만니톨 + 수크로스/트레할로스
만니톨 및 수크로스 또는 트레할로스 둘 모두의 포함은 제형에서 중요한 요소이고 동결건조 준비가 된 제형을 제공하는 데 필요한 것으로 확인됐다.
실시예 1A의 이중특이적 단백질을 0.5 mg/ml의 최종 단백질 농도로 50 mM 포스페이트-시트레이트, 120 mM NaCl 및 0.05% Tween 20을 포함하는 제형 완충제에서 제조했다. pH는 7.5였다. 안정성을 실시예 1에 기재된 것과 동일한 방법을 사용하여 평가했다. 도 5a 내지 도 5c는 +5℃에서 36개월 동안 SE-UPLC, AE-HPLC 및 CGE 데이터를 나타낸다. 데이터는 제형이 12개월 후에 안정하지 않았다는 것을 나타낸다. DoE 방법론을 사용하여, 5% 만니톨 또는 5% 수크로스의 첨가가 안정성을 향상시켰다는 것이 후속적으로 확인됐다. NaCl의 생략이 또한 바람직했다. 그러나, 5% 만니톨을 포함하는 제형은 레이저 광 차단 (LO) 및 탁도 (NTU) 측정에 의해 결정된 바와 같은 10의 동결 해동 주기 후에 높은 수준의 응집을 초래했다. 탁도를 탁도계 및 공지된 탁도 표준에 대한 교정을 사용하는 네펠로법으로 결정했다.
도 6은 1% 수크로스의 첨가가 동결 해동 유도 응집을 감소시켰다는 것을 입증한다.
동결건조 준비성을 추가 조사하기 위해, 제형을 0.2 mg/ml의 최종 단백질 농도로 50 mM 포스페이트-시트레이트, 5% 만니톨, 1% 수크로스, 0.02% Tween 20을 포함하여 제조했다. pH는 6.5였다. 샘플을 유리 DP lyo 바이알에서 동결건조시키고, 50℃, 25℃ 및 40℃에서 1, 2 및 3개월 동안 보관했다. 그 후에 샘플을 0.5 ml의 초순수 (ultra pure water)를 첨가하여 재수화시키고, 실온에서 1시간 동안 인큐베이션한 후 탁도, 레이저 광 차단, SE-UPLC, AE-HLPC, CGE 및 단백질 활성을 포함하는 다수의 기술을 사용하여 평가했다. 증가된 응집 및 단백질 활성의 상당한 손실이 더 높은 온도에서 관찰됐고, 이는 제형이 장기간 보관에 적합하지 않았다는 것을 나타냈다.
장기간 안정성을 개선시키고 액체 안정성을 유지하기 위해, 수크로스에 대한 만니톨의 비율이 안정성을 유지하는 데 중요하고, 트레할로스를 수크로스와 교환할 수 있었다는 것이 후속적으로 확인됐다. 2개의 상이한 만니톨/수크로스 비율을 포함하는 실시예 1A의 이중특이적 단백질의 제형을 동결건조 및 25℃ 또는 40℃에서 4주 동안 보관 후 평가했다. 안정성의 평가를 탁도, 레이저 광 차단, SE-UPLC, AE-HLPC 및 단백질 활성을 포함하는 다수의 기술을 사용하여 수행했다. 탁도 데이터는 아래 표에 나타나 있고, 수크로스에 비해 더 높은 농도의 만니톨이 증가된 응집을 초래한다는 것을 나타낸다.
Figure pct00001

Claims (24)

  1. 약제학적 제형으로서,
    가용성 T 세포 수용체 (TCR)와 scFV를 포함하는 치료학적 유효량의 이중특이적 단백질; 및
    계면활성제를 포함하고;
    상기 단백질에 대한 계면활성제의 w/w 비율이 0.75:1 내지 1.5:1의 범위에 있는, 약제학적 제형.
  2. 제1항에 있어서, 상기 단백질에 대한 계면활성제의 w/w 비율이 1:1인, 약제학적 제형.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 증량제를 추가로 포함하는, 약제학적 제형.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 안정화제를 추가로 포함하는, 약제학적 제형.
  5. 제3항에 추가된 제4항에 있어서, 상기 증량제에 대한 안정화제의 비율이 1:1 초과인, 약제학적 제형.
  6. 약제학적 제형으로서, 가용성 T 세포 수용체 (TCR)와 scFV를 포함하는 치료학적 유효량의 이중특이적 단백질;
    증량제; 및
    안정화제를 포함하고;
    상기 증량제에 대한 안정화제의 w/w 비율이 1:1 초과인, 약제학적 제형.
  7. 제5항 또는 제6항에 있어서, 상기 증량제에 대한 안정화제의 비율이 1.5:1 초과인, 약제학적 제형.
  8. 제7항에 있어서, 상기 증량제에 대한 안정화제의 비율이 3:1 내지 7:1의 범위에 있는, 약제학적 제형.
  9. 제6항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 계면활성제를 추가로 포함하는, 약제학적 제형.
  10. 제1항 내지 제5항 및 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 계면활성제가 폴리소르베이트인, 약제학적 제형.
  11. 제10항에 있어서, 상기 폴리소르베이트가 폴리소르베이트 20인, 약제학적 제형.
  12. 제3항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 증량제가 폴리올인, 약제학적 제형.
  13. 제12항에 있어서, 상기 폴리올이 만니톨인, 약제학적 제형.
  14. 제4항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 안정화제가 이당류인, 약제학적 제형.
  15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 완충제를 추가로 포함하는, 약제학적 제형.
  16. 제15항에 있어서, 상기 완충제가 포스페이트/시트레이트인, 약제학적 제형.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, pH가 6 내지 7의 범위에 있는, 약제학적 제형.
  18. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형이 수성인, 약제학적 제형.
  19. 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제형이 동결건조되는, 약제학적 제형.
  20. 수성 약제학적 제형의 제조 방법으로서,
    (i) 가용성 T 세포 수용체 (TCR)와 scFV를 포함하는 치료학적 유효량의 이중특이적 단백질 및 (ii) 계면활성제를 제형화하는 단계를 포함하고,
    상기 단백질에 대한 계면활성제의 w/w 비율은 0.75:1 내지 1.5:1의 범위에 있는, 수성 약제학적 제형의 제조 방법.
  21. 수성 약제학적 제형의 제조 방법으로서,
    (i) 가용성 T 세포 수용체 (TCR)와 scFV를 포함하는 치료학적 유효량의 이중특이적 단백질, (ii) 증량제 및 (iii) 안정화제를 제형화하는 단계를 포함하고,
    상기 증량제에 대한 안정화제의 비율은 1:1 초과인, 수성 약제학적 제형의 제조 방법.
  22. 제20항 또는 제21항에 있어서, 제2항 내지 제5항 및 제7항 내지 제19항 중 어느 한 항의 특징에 의해 변형되는, 수성 약제학적 제형의 제조 방법.
  23. 제1항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 의약에 사용하기 위한, 약제학적 제형.
  24. 제23항에 있어서, 암, 바람직하게는 흑색종의 치료 방법에 사용하기 위한, 약제학적 제형.
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