KR20210114554A - 녹내장의 치료를 위한 항-서열 유사성 19를 가진 패밀리, 멤버 a5 항체의 용도 - Google Patents

녹내장의 치료를 위한 항-서열 유사성 19를 가진 패밀리, 멤버 a5 항체의 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 대상의 녹내장을 치료하기 위한 FAM19A5에 특이적으로 결합하는 길항제(예를 들어 항체 또는 이의 항원-결합 부분)의 제약학적 용도에 관한 것이다.

Description

녹내장의 치료를 위한 항-서열 유사성 19를 가진 패밀리, 멤버 A5 항체의 용도{USE OF ANTI-FAMILY WITH SEQUENCE SIMILARITY 19, MEMBER A5 ANTIBODIES FOR THE TREATMENT OF GLAUCOMA}
전자적 방식으로 제출된 서열목록의 참조
본 출원과 함께 제출된 ASCII 텍스트 파일 형식의 전자적 방식으로 제출된 서열목록(파일명: 3763.006PC02_SeqListing_ST25.txt; 크기: 166,906바이트; 생성일: 2018년 6월 25일)의 내용은 그 전체가 본 명세서에 참고로 포함된다.
기술분야
본 발명은 서열 유사성 19를 가진 패밀리, 멤버 A5(FAM19A5)에 특이적으로 결합하는 항체, 이의 항원 결합 단편, 또는 이러한 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 조성물을 사용하여 대상(예를 들어 인간)의 녹내장을 치료하는 방법을 제공한다.
녹내장은 망막 시신경 머리(optic nerve head)의 구조 변화(예를 들어 망막 신경절 세포(RGC)의 진행성 상실 및 원반의 오그라듬)를 특징으로 하는 안과 질환이며, 결과적으로 시력이 손상된다(Vohra et al., Surv Ophthalmol 58(4): 311-20 (2013)). 치료하지 않고 방치한다면 녹내장은 영구적인 실명을 초래할 수 있다. 녹내장은 일반적으로 노인층에게 더 큰 영향을 미치지만, 신생아를 포함하여 모든 연령의 개체에게 영향을 미칠 수 있다(Ram et al., Indian J Med Res 140(4): 472-474 (2014)). 2020년까지 전 세계적으로 대략 7960만 명의 인간이 녹내장을 가지게 되고, 이 중 1100만 명을 넘는 인간은 녹내장으로 인해 양 눈이 실명될 것으로 추정된다(Gupta et al., Am Fam Physician 93(8): 668-674 (2016)).
녹내장의 주요 위험 요인은 눈 안의 증가된 유체 압력으로 인한 상승된 안내 압력(IOP)인 것으로 추정된다. 따라서, 현재 이용할 수 있는 대부분의 치료 옵션(예를 들어 (i) 점안제: 프로스타글란딘, 베타 차단제, 알파-아드레날린 효현제, 및 축동성(miotic) 또는 콜린성 제제; (ii) 경구약: 탄산무수화효소 저해제; 또는 (iii) 수술: 레이저 요법)은 상승된 안내 압력을 감소시키는데 주로 초점을 두고 있다(Harasymowycz et al., J Ophthalmol 2016: 6509809 (2016)). 그러나, 이러한 치료 옵션은 수많은 바람직하지 않은 부작용(예를 들어 불규칙적인 심박수, 비정상적 혈압, 흐린 시력, 발기부전, 피로, 통증 및/또는 불편함)을 야기한다. 더욱이, 상승된 안내 압력이 녹내장의 위험 요인이긴 하지만, 많은 녹내장 환자는 정상적인 안내 압력(즉 정상 안압 녹내장)을 나타내기도 한다(Sommer et al., Arch Ophthalmol 109 (8): 1090-1095 (1991)). 따라서, 녹내장에 대한 더 효과적이고 포괄적인 치료 옵션이 요구된다.
두 가지 가장 흔한 형태의 녹내장은 (1) 개방각 녹내장(OAG) 및 (2) 폐쇄각 녹내장이며, 이 중 OAG가 대략 7배 더 흔하다(Gupta et al., Am Fam Physician 93(8): 668-674 (2016)). 녹내장의 정확한 원인은 아직 충분히 해명되지 않았지만, 동물 연구는 녹내장과 관련된 구조 손상(예를 들어 망막 신경절 세포의 상실)과 염증 간의 강한 연관성을 밝혀냈다(Tezel et al., Invest Ophthalmol Vis Sci 42: 1787-1794 (2001); Wang et al., Invest Ophthalmol Vis Sci 49: 1916-1923 (2008)).
FAM19A5 단백질에 대한 길항제를 사용하여 대상의 녹내장을 치료하는 방법이 본 명세서에 개시된다. 특정 구체예에서, FAM19A5 길항제는 녹내장과 관련된 염증을 감소, 완화, 또는 저해함으로써 대상을 치료한다.
대상의 녹내장을 치료하기 위한 FAM19A5(family with sequence similarity 19, member A5) 단백질에 대한 길항제("FAM19A5 길항제")가 본 명세서에 개시된다. 또한, 대상의 녹내장과 관련된 염증을 감소, 완화, 또는 저해하기 위한 FAM19A5 길항제가 본 명세서에 개시된다.
일부 구체예에서, 녹내장은 개방각 녹내장, 폐쇄각 녹내장, 정상 안압 녹내장("NTG"), 선천성 녹내장, 이차성 녹내장, 색소성 녹내장, 의사박리성(pseudo-exfoliative) 녹내장, 외상성 녹내장, 신생혈관성 녹내장, 홍채 각막 내피 증후군, 및 포도막염 녹내장으로 구성되는 군으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 녹내장은 시신경 손상, 망막 신경절 세포("RGC") 상실, 및 높은 안내 압력("IOP"), 손상된 혈액-망막 장벽, 및/또는 대상의 망막 및/또는 시신경 내에서의 미세아교세포 활성 수준의 증가와 관련된다. 일부 구체예에서, 녹내장은 시신경 머리 쪽의 기계적 손상 및/또는 대상의 망막 및/또는 시신경 내에서의 염증 수준의 증가에 의해 야기된다.
일부 구체예에서, 본 명세서에 개시된 FAM19A5 길항제는 (i) 대상에서의 망막 신경 세포 변성의 개시를 지연시키거나; (ii) 대상의 망막 및/또는 시신경 내에서의 염증 수준을 감소시키거나; (iii) 대상의 망막의 신경절 세포층 내에서의 망막 신경절 세포의 빈도를 증가시키거나 또는 망막 신경절 세포의 상실을 감소시키거나 또는 망막 신경절 세포의 수를 회복시키거나; 또는 (iv) 이들의 임의의 조합을 수행한다.
일부 구체예에서, FAM19A5 길항제는 안티센스 올리고뉴클레오타이드, siRNA, shRNA, miRNA, FAM19A5 표적화 dsRNA, 앱타머, PNA, 또는 그것을 포함하는 벡터이다.
일부 구체예에서, FAM19A5 길항제는 FAM19A5 단백질에 특이적으로 결합하는 항체("항-FAM19A5 항체"), 또는 이의 항원-결합 부분이다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3과 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 11, 12, 및 13을 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 23, 24, 및 25를 포함한다. 다른 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3과 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 14, 15, 및 16을 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 26, 27, 및 28을 포함한다. 추가 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3과 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 17, 18, 및 19를 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 29, 30, 및 31을 포함한다. 특정 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3과 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 20, 21, 및 22를 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 32, 33, 및 34를 포함한다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 35, 36, 37, 또는 38에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 39, 40, 41, 또는 42에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 키메라 항체, 인간 항체, 또는 인간화된 항체이다.
일부 구체예에서, FAM19A5 길항제는 유리체내(intravitreally) 경로로 투여된다. 일부 구체예에서, 대상은 인간이다.
구체예
구체예 1. 서열 유사성 19를 가진 패밀리, 멤버 A5("FAM19A5") 단백질에 대한 길항제를 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상의 녹내장을 치료하는 방법.
구체예 2. 서열 유사성 19를 가진 패밀리, 멤버 A5("FAM19A5") 단백질에 대한 길항제를 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상의 녹내장과 관련된 염증을 감소, 완화, 또는 저해하는 방법.
구체예 3. 녹내장은 개방각 녹내장, 폐쇄각 녹내장, 정상 안압 녹내장("NTG"), 선천성 녹내장, 이차성 녹내장, 색소성 녹내장, 의사박리성 녹내장, 외상성 녹내장, 신생혈관성 녹내장, 홍채 각막 내피 증후군, 및 포도막염 녹내장으로 구성되는 군으로부터 선택되는, 구체예 1 또는 2의 방법.
구체예 4. 녹내장은 시신경 손상, 망막 신경절 세포("RGC") 상실, 높은 안내 압력("IOP"), 손상된 혈액-망막 장벽, 및/또는 대상의 망막 및/또는 시신경 내에서의 미세아교세포 활성 수준의 증가와 관련되는, 구체예 1 내지 3 중 어느 하나의 방법.
구체예 5. 녹내장은 시신경 머리 쪽의 기계적 손상 및/또는 대상의 망막 및/또는 시신경 내에서의 염증 수준의 증가에 의해 야기되는, 구체예 1 내지 4 중 어느 하나의 방법.
구체예 6. 길항제는 대상에서의 망막 신경 세포 변성의 개시를 지연시키는, 구체예 1 내지 5 중 어느 하나의 방법.
구체예 7. 길항제는 대상의 망막 및/또는 시신경 내에서의 염증의 수준을 감소시키는, 구체예 1 내지 6 중 어느 하나의 방법.
구체예 8. 길항제는 대상의 망막의 신경절 세포층 내에서의 망막 신경절 세포의 빈도를 증가시키거나 또는 망막 신경절 세포의 상실을 감소시키거나 또는 망막 신경절 세포의 수를 회복시키는, 구체예 1 내지 7 중 어느 하나의 방법.
구체예 9. 길항제는 안티센스 올리고뉴클레오타이드, siRNA, shRNA, miRNA, FAM19A5 표적화 dsRNA, 앱타머, PNA, 또는 그것을 포함하는 벡터인, 구체예 1 내지 8 중 어느 하나의 방법.
구체예 10. 길항제는 FAM19A5 단백질에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 이의 항원-결합 부분("항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분"), 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 또는 이의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터인, 구체예 1 내지 8 중 어느 하나의 방법.
구체예 11. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은:
(a) 효소-결합 면역흡착 분석(ELISA)에 의해 측정했을 때 10 nM 이하의 KD로 가용성 인간 FAM19A5에 결합하는 특성;
(b) ELISA에 의해 측정했을 때 1 nM 이하의 KD로 막 결합 인간 FAM19A5에 결합하는 특성; 및
(c) (a)와 (b) 둘 다로부터 선택된 특성을 나타내는, 구체예 10의 방법.
구체예 12. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 인간 FAM19A5 에피토프와의 결합에 대해 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3과 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 기준 항체(reference antibody)와 교차-경합(cross-compete)하며, 여기서
(i) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하거나;
(ii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하거나;
(iii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 30의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(iv) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 33의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하는, 구체예 10 또는 11의 방법.
구체예 13. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3과 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는 기준 항체와 동일한 FAM19A5 에피토프와 특이적으로 결합하며, 여기서
(i) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하거나;
(ii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하거나;
(iii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 30의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
(iv) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 33의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하는, 구체예 10 내지 12 중 어느 하나의 방법.
구체예 14. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 SEQ ID NO: 6 또는 SEQ ID NO: 9인, 적어도 하나의 FAM19A5 에피토프와 특이적으로 결합하는, 구체예 10 내지 13 중 어느 하나의 방법.
구체예 15. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 SEQ ID NO: 6 또는 SEQ ID NO: 9인, FAM19A5 에피토프에만 결합하는, 구체예 10 내지 13 중 어느 하나의 방법.
구체예 16. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 추가의 FAM19A5 에피토프와 더 결합하는, 구체예 10 내지 14 중 어느 하나의 방법.
구체예 17. 추가의 FAM19A5 에피토프는 SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, 및 이들의 임의의 조합으로 구성되는 군으로부터 선택되는, 구체예 16의 방법.
구체예 18. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3과 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하는, 구체예 10 내지 17 중 어느 하나의 방법.
구체예 19. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 19, 또는 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하는, 구체예 18의 방법.
구체예 20. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 17, 또는 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는, 구체예 18 또는 19의 방법.
구체예 21. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 18, 또는 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는, 구체예 18 내지 20 중 어느 하나의 방법.
구체예 22. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 29, 또는 SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하는, 구체예 18 내지 21 중 어느 하나의 방법.
구체예 23. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 30, 또는 SEQ ID NO: 33의 아미노산 서열을 포함하는, 구체예 18 내지 22 중 어느 하나의 방법.
구체예 24. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 31, 또는 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하는, 구체예 18 내지 23 중 어느 하나의 방법.
구체예 25. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3과 경쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3을 포함하며, 여기서
(i) 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 11, 12, 및 13을 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 23, 24, 및 25를 포함하거나;
(ii) 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 14, 15, 및 16을 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 26, 27, 및 28을 포함하거나;
(iii) 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 17, 18, 및 19를 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 29, 30, 및 31을 포함하거나; 또는
(iv) 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 20, 21, 및 22를 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 32, 33, 및 34를 포함하는, 구체예 10 내지 24 중 어느 하나의 방법.
구체예 26. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, 또는 SEQ ID NO: 38을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및/또는 SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, 또는 SEQ ID NO: 42를 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 구체예 10 내지 25 중 어느 하나의 방법.
구체예 27. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 SEQ ID NO: 35를 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO: 39를 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 구체예 26의 방법.
구체예 28. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 SEQ ID NO: 36을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO: 40을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 구체예 26의 방법.
구체예 29. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 SEQ ID NO: 37을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO: 41을 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 구체예 26의 방법.
구체예 30. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 SEQ ID NO: 38을 포함하는 중쇄 가변 도메인 및 SEQ ID NO: 42를 포함하는 경쇄 가변 도메인을 포함하는, 구체예 26의 방법.
구체예 31. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 35, 36, 37, 또는 38에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 구체예 10 내지 25 중 어느 하나의 방법.
구체예 32. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 39, 40, 41, 또는 42에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 구체예 10 내지 25 중 어느 하나의 방법.
구체예 33. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 중쇄 가변 영역과 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 35, 36, 37, 또는 38에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 39, 40, 41, 또는 42에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하는, 구체예 10 내지 25 중 어느 하나의 방법.
구체예 34. 항-FAM19A5 항체는 키메라 항체, 인간 항체, 또는 인간화된 항체인, 구체예 10 내지 33 중 어느 한 항의 방법.
구체예 35. 이의 항원-결합 부분은 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 또는 단쇄 Fv(scFv)인, 구체예 10 내지 33 중 어느 하나의 방법.
구체예 36. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, 및 이들의 변이체로 구성되는 군으로부터 선택되는, 구체예 10 내지 35 중 어느 하나의 방법.
구체예 37. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 IgG2, IgG4, 또는 이들의 조합인, 구체예 36의 방법.
구체예 38. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 IgG2/IgG4 이소타입 항체를 포함하는, 구체예 36의 방법.
구체예 39. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 Fc 기능이 없는 불변 영역을 더 포함하는, 구체예 10 내지 38 중 어느 하나의 방법.
구체예 40. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 제2 결합 모이어티를 가진 분자에 연결되며, 이로써 이중특이적 분자를 형성하는, 구체예 10 내지 39 중 어느 하나의 방법.
구체예 41. 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 제제에 연결되며, 이로써 면역콘쥬게이트를 형성하는, 구체예 10 내지 40 중 어느 하나의 방법.
구체예 42. FAM19A5의 단백질의 길항제는 제약학적으로 허용되는 담체와 함께 제제화되는, 구체예 1 내지 41 중 어느 하나의 방법.
구체예 43. FAM19A5 단백질의 길항제는 유리체내 경로로 투여되는, 구체예 1 내지 42 중 어느 하나의 방법.
구체예 44. 대상은 인간인, 구체예 1 내지 43 중 어느 하나의 방법.
도 1은 건강한(즉 녹내장 유도가 없는) 동물("나이브")(naive)에 대한 인간 IgG1("hIgG") 또는 항-FAM19A5 항체("FAM19A5 Ab")로 치료된 녹내장-유도 동물에서의 안내 압력의 비교를 도시한다. 안내 압력은 녹내장 유도 후 제0일("D0"), 제14일("D14"), 및 제28일("D28")에 측정되었다. 데이터는 평균±S.D.로 표시된다.
도 2는 건강한 동물("나이브")에 대한 인간 IgG1("hIgG") 또는 항-FAM19A5 항체("FAM19A5 Ab")로 치료된 녹내장-유도 동물에서의 망막전위도검사(ERG) 측정 결과의 비교를 도시한다. 녹내장 유도 후 28일째에 상이한 동물에서의 망막 전위 차이가 A-타임(좌측 패널) 및 진동소파 전위(oscillatory potential) 등급(우측 패널)을 분석함으로써 평가되었다. 데이터는 평균±S.D.로 표시된다. 막대 위의 "*"는 IgG1-치료된 동물과 비교하여 통계적으로 유의한 차이(p < 0.001)를 나타낸다.
도 3a 및 3b는 건강한 동물("나이브")에 대한 인간 IgG1("hIgG") 또는 항-FAM19A5("G4") 항체로 치료된 녹내장-유도 동물의 망막 신경절 세포층에서 관찰된 망막 신경절 세포("RGC")의 수의 비교를 도시한다. 도 3a는 RGC 세포 계수를 절대값(좌측 패널)으로서, 그리고 관찰된 세포의 총 수 중 퍼센트(우측 패널)로서 나타낸다. 데이터는 평균±S.D.로 표시된다. 막대 위의 "*"는 IgG1-치료된 동물과 비교하여 통계적으로 유의한 차이(p < 0.05)를 나타낸다. 도 3b는 각 그룹의 대표 동물로부터 얻은 망막 신경절 세포층의 형광 이미지(100x 배율)를 도시한다.
도 4는 상공막 정맥 소작술에 의해 유도된 녹내장의 토끼 모델에서의 FAM19A5 항체의 항염증 효과를 도시한다. 염증에 대한 마커로서, 녹내장 유도 후 28일째(동물은 매주 간격으로 총 4회 항체를 투여받음)에, FAM19A5 항체("녹내장 + FAM19A5 Ab") 또는 인간 IgG1 대조군 항체("녹내장 + 인간 IgG")로 치료된 녹내장-유도 토끼, 또는 전혀 치료하지 않은 토끼("나이브")(건강한 동물 대조군)에서의 Iba-1 발현이 평가되었다. 상부 패널은 각 그룹으로부터 얻은 대표적인 면역조직화학 이미지를 도시한다. 하부 패널은 상부 패널의 박스 영역을 더 높은 배율로 도시한다.
본 명세서는 인간 서열 유사성 19를 가진 패밀리, 멤버 A5(FAM19A5) 단백질에 특이적으로 결합하는 길항제(예를 들어 분리된 단클론성 항체, 또는 이의 항원 결합 부분)를 대상에게 투여함으로써 녹내장이 치료될 수 있다는 것을 개시한다. 하나의 가능한 치료 메커니즘은 녹내장과 관련된 염증을 감소, 완화, 또는 저해하는 것이다.
본 명세서에 개시된 다수의 용어 및 문구가 정의된다. 이와 관련하여 상세한 설명 전체에서 추가적으로 정의된다.
I. 정의
본 명세서 전체에서, 용어 "한" 또는 "어떤"은 하나 이상을 말한다. 예를 들어 "한 항체"는 하나 이상의 항체를 나타내는 것으로 이해된다. 이와 같이, 용어 "한"(또는 "어떤"), "하나 이상의" 및 "적어도 하나의"는 본 명세서에서 상호 교환하여 사용될 수 있다.
또한, "및/또는"은 두 명시된 특징 또는 성분 각각이 나머지 하나와 함께 또는 단독으로 구체적으로 개시된다는 것으로 해석되어야 한다. 따라서, "A 및/또는 B"은 "A 및 B", "A 또는 B", "A"(단독), 및 "B"(단독)을 포함하는 것으로 의도된다. 또한, "A, B 및/또는 C"은 A, B 및 C; A, B 또는 C; A 또는 C; A 또는 B; B 또는 C; A 및 C; A 및 B; B 및 C; A(단독); B(단독); 및 C(단독)의 양태들을 각각 포함하는 것으로 의도된다.
어떤 양태가 "포함하는"으로 서술된 경우 "구성되는" 및/또는 "본질적으로 구성되는"으로 설명된 다른 유사한 양태도 또한 제공되는 것으로 이해된다.
특별한 언급이 없는 한, 본 명세서에서 사용된 모든 기술 및 과학 용어는 본 발명의 당업자에게 통상 이해되는 것과 동일한 의미를 가진다. 예를 들어, 문헌(the Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology, Juo, Pei-Show, 2nd ed., 2002, CRC Press; The Dictionary of Cell and Molecular Biology, 3rd ed., 1999, Academic Press; and the Oxford Dictionary Of Biochemistry And Molecular Biology, Revised, 2000, Oxford University Press)은 본 명세서에서 사용된 대부분의 용어에 대한 일반적인 사전적 의미를 당업자에게 제공한다.
단위, 접두사 및 기호는 Systeme International de Unites(SI)에서 승인된 형태로 표시된다. 수치 범위는 그 범위를 한정하는 숫자들을 포괄적으로 포함한다. 특별한 언급이 없는 한, 아미노산 서열은 아미노에서 카복시 배향으로 좌측에서 우측으로 쓰여진다. 개시된 표제는 본 발명의 다양한 양태의 제한이 아니며, 이들은 전체적으로 명세서를 참조한 것일 수 있다. 따라서, 하기 정의된 용어들은 그 전체가 명세서를 참조하여 더 상세하게 설명된다.
용어 "약"은 대략(approximately), 대충(roughly), 근처(around), 또는 근처의 영역 내를 의미한다. 용어 "약"이 수치 범위와 함께 사용될 때 그것은 제시된 수치 값 위와 아래로 경계를 확장시킴으로써 해당 범위를 변형한다. 일반적으로, 용어 "약"은, 예를 들어 위나 아래로(더 높거나 더 낮게) 10 퍼센트까지 언급된 값의 위와 아래로 수치 값을 변형할 수 있다.
용어 "녹내장"은 망막 신경절 세포의 진행성 상실과 시신경 위축을 특징으로 하는 일군의 안-관련 질환 및/또는 장애를 말한다. 녹내장은 시신경 손상, 망막 신경절 세포("RGC") 상실, 높은 안내 압력("IOP"), 손상된 혈액-망막 장벽, 및/또는 대상의 망막 및/또는 시신경 내에서의 미세아교세포 활성 수준의 증가와 관련될 수 있다. 녹내장은 무증상일 수 있거나, 또는 눈과 관련된 다음의 증상: 작열감 또는 따가움, 눈물, 건조함, 피로, 흐린 시력/박명시, 터널 시야, 햇빛 아래서 보는 것이 어려움, 어두운 장소에서 보는 것이 어려움, 빛 주변의 광륜 및/또는 실명 중 어느 것을 가질 수 있다(Lee et al., Arch Ophthalmol 116: 861-866 (1998)). 용어 "녹내장"은 녹내장의 원인 및 증상과 무관하게 모든 종류의 녹내장을 포함한다.
녹내장이라는 용어는, 제한은 아니지만, 개방각 녹내장, 폐쇄각 녹내장, 정상 안압 녹내장("NTG"), 선천성 녹내장, 이차성 녹내장, 색소성 녹내장, 의사박리성 녹내장, 외상성 녹내장, 신생혈관성 녹내장, 홍채 각막 내피 증후군, 및/또는 포도막염 녹내장을 포함한다. 위험 요인 중 일부는 상승된 안내 압력, 유전적 소인(예를 들어 녹내장 가족력, 특정한 민족 집단), 연령, 식이, 당뇨병, 고혈압, 및/또는 눈의 물리적 상해을 포함한다.
용어 "염증"은 상해 및/또는 손상 부위에서 면역 세포(예를 들어 미세아교세포)와 혈장 단백질의 축적 및 활성화를 수반하는 혈관화된 조직에서의 선천 면역 시스템의 복합 반응을 말한다. 건강한 개체에서, 혈액-망막 장벽은 혈액으로부터 망막으로, 그리고 망막으로부터 혈액으로 물질의 자유 유동을 방지하는 견고한 장벽을 제공한다. 그러나, 녹내장 환자에서는 이 장벽이 손상된다. 이 혈관 조절장애는 망막 시신경 머리로의 혈액 유동을 제한하고, 시신경 머리로 자유롭게 이동할 수 있는 다양한 염증 매개인자(예를 들어 TNF-α, IL-6, IL-9, IL-10, 및 산화질소)를 생성한다.
용어 "시신경 손상"은 시신경의 정상 구조 또는 기능의 변경을 말한다. 시신경의 정상 구조 또는 기능의 변경은 녹내장을 포함하는 임의의 질환, 장애, 또는 상해의 결과일 수 있다. 시신경의 정상 기능의 변경은 시신경이 적절히 기능하는 능력, 예컨대 망막으로부터 뇌로 시각 정보를 전달하는 능력의 변경을 포함한다. 기능의 변경은, 예를 들어 시력 상실, 손상된 중심 시력, 비정상적 색각 등으로서 나타날 수 있다. 구조 변경의 예들은 망막의 신경 섬유 상실, 시신경의 비정상적 오그라듬, 및/또는 망막 신경절 세포층으로부터의 세포의 상실을 포함한다. "시신경 손상"은 대상의 한쪽 시신경 또는 양쪽 시신경에 대한 시신경 손상을 포함할 수 있다.
용어 "망막 신경절 세포"(RGC)는 망막의 최내층(즉 신경절 세포층) 근처에 위치한 특정 뉴런을 말한다. 이들 세포는 광수용기로부터 모인 시각 정보를 뇌로 운반하는데 중요한 역할을 한다(Sanes et al., Annu Rev Neurosci 38: 221-46 (2015)). RGC는 크기, 연결부, 및 시각 자극에 대한 반응의 측면에서 상당히 다양할 수 있지만, 이들은 모두 뇌로 연장된 긴 축삭돌기를 가진다는 본질적인 특성을 공유한다.
용어 "안내 압력"(IOP)은 눈 내부에서 유지되는 압력을 말한다. 눈의 전방은 각막, 홍채, 동공 및 수정체에 의해 경계가 지어진다. 이 전방은 각막과 수정체에 산소와 영양분을 제공하는 물 같은 유체인 수성 체액으로 채워진다. 수성 체액은 눈의 모양을 유지하는데 도움을 주는 필수 압력을 제공한다. 수성 체액의 정상 분비가 방해되었을 때 안내 압력이 영향을 받는다.
용어 "미세아교세포"는 망막 내에 존재하는 신경교 세포의 한 종류를 말한다. 이들 세포는 대식세포처럼 거동하며 외래 항원 및/또는 상해에 대해 주변 미세환경을 꾸준히 점검한다. 변화가 감지되는 경우 미세아교세포가 활성화되고, 잠재적으로 해로운 파편에 대해 식세포 작용을 함으로써 손상을 제한하고, 염증 매개인자를 분비하고, 및 다른 면역 세포와 상호작용함으로써 효과적인 면역 반응을 생성하여 외래 항원 및/또는 상해에 대해 반응한다(Kettenmann et al., Physiol Rev 91(2): 461-553 (2011)). 활성화된 미세아교세포는 Iba-1의 증가된 표면 발현에 의해 휴지 상태에 있는 것들과 구별될 수 있다. 미세아교세포 세포는 또한 발생중인 망막에서의 프로그램된 세포 사멸에 수반되며, 미세아교세포에 의해 방출된 신경 성장 인자(NGF)는 망막의 뉴런 세포 사멸을 유도할 수 있다(Ashwell et al., Visual Neuroscience 2(5): 437-448 (1989)).
용어 "치료한다", "치료하는" 및 "치료"는 질환과 관련된 증상, 합병증, 상태 또는 생화학적 지표의 진행, 발생, 심각성 또는 재발을 반전, 개선, 완화, 저해 또는 지연시킬 목적으로 대상에 대해 수행된 임의의 종류의 개입 또는 과정, 또는 대상에게 활성제를 투여하는 것을 말한다. 치료는 질환을 가진 대상 또는 질환을 갖지 않은 대상(예를 들어 예방)에 대해 이루어질 수 있다.
용어 "투여"는 당업자에게 공지된 다양한 방법 및 송달 시스템(delivery systems) 중 어느 것을 사용하여, 대상에게 치료제 또는 치료제를 포함하는 조성물을 물리적으로 주입하는 것을 말한다. 본 명세서에 개시된 항체용의 상이한 투여 경로는 정맥내, 복강내, 근육내, 피하, 척추 또는 다른 비경구(parenterally) 투여 경로, 예를 들어 주사(injection)에 의한 것을 포함한다. 용어 "비경구 투여"는 일반적으로 주사에 의한, 장(enteral) 및 국부적(topical) 투여 이외의 다른 투여 방식을 의미하며, 제한은 아니지만, 유리체내(intravitreally), 정맥내(intravenous), 복강내, 근육내(intramuscular), 동맥내, 척추강내(intrathecal), 림프내, 병소내, 낭내(intracapsular), 안와내(intraorbital), 심장내, 피내(intradermal), 기관지경(transtracheal), 폐(pulmonarily), 피하(subcutaneous), 표피하, 관절내, 낭하, 지주막하, 심실내(intraventricularly), 유리체내, 경막외, 및 흉골하 주사 및 주입, 뿐만 아니라 생체내 전기천공을 포함한다. 또는, 본 명세서에 개시된 항체는 비-비경구 경로를 통해서, 예컨대 국부적, 상피 또는 점막 투여 경로를 통해서, 예를 들어 비내, 경구, 질, 직장, 설하 또는 국부적 경로를 통해서 투여될 수 있다. 또한, 투여는, 예를 들어 1회, 여러 번, 및/또는 한 번 이상의 연장된 기간에 걸쳐서 수행될 수 있다.
용어 "치료적 유효량"은 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여, 대상의 질환 또는 장애를 "치료하기에" 효과적인 또는 질환 또는 장애(예를 들어 녹내장)의 위험, 잠재성, 가능성 또는 발생을 감소시키기에 효과적인, 약물의 양을 말한다. "치료적 유효량"은 질환 또는 장애(예를 들어 녹내장)를 갖고 있거나 가질 위험이 있는 대상에게 일부 개선이나 이익을 제공하는 약물 또는 치료제의 양을 포함한다. 따라서, "치료적 유효량"은 질환 또는 장애의 위험, 잠재성, 가능성 또는 발생을 감소시키거나 또는 일부 완화, 경감시키고 및/또는 적어도 하나의 지표(예를 들어 증가된 염증)를 감소시키고, 및/또는 질환 또는 장애의 적어도 하나의 임상 증상을 감소시키는 양이다.
용어 "대상"은 임의의 인간 또는 비-인간 동물을 포함한다. 용어 "비-인간 동물"은 모든 척추동물, 예를 들어 포유류 및 비-포유류, 예컨대 비-인간 영장류, 양, 개, 소, 닭, 양서류, 파충류 등을 포함한다.
용어 "서열 유사성 19를 가진 패밀리, 멤버 A5" 또는 "FAM19A5"는 5개의 고도로 상동성인 단백질의 TAFA 패밀리(FAM19 패밀리라고도 알려져 있음)에 속하며 뇌와 척수에서 우세하게 발현되는 단백질을 말한다(Tang T. Y. et al., Genomics 83(4):727-34 (2004)). 이들 단백질은 고정된 위치에 보존된 시스테인 잔기를 함유하며, CC-케모카인 패밀리의 멤버인 대식세포 염증 단백질 1-알파(MIP-1-알파)와 관련된다. TAFA 단백질은 뇌와 척수의 특정 영역에서 우세하게 발현된다. 이들 단백질은 신경발생 과정에서 성인 신경 줄기 세포에 의해 발생되고 분배되는 것으로 추정된다. FAM19A5는 또한 TAFA5 또는 케모카인-유사 단백질 TAFA-5(Chemokine-like protein TAFA-5)라고도 알려져 있다.
FAM19A5는 척추동물의 뇌에서 우세하게 발현되며, 완전한 중추신경계의 발생, 분화, 형성에 중요한 역할을 하는 것으로 밝혀졌다. FAM19A5는 또한 많은 중추신경계 손상 및/또는 퇴행성 뇌 질환(예를 들어 헌팅턴병, 파킨슨병, 알츠하이머병, 뇌척수 손상, 뇌졸중 및 뇌종양)의 발병기전에서 유의한 역할을 한다. 중추신경계의 손상시 신경 줄기 세포가 FAM19A5를 생성하고, 이것은 정상 성상교세포의 반응성 성상교세포로의 분화를 유도한다. 이들 반응성 성상교세포는 (미세아교세포와 함께) 광범위한 ECM들(예를 들어 프로테오글리칸)을 발현할 수 있고, 신경교 흉터의 형성을 유도할 수 있으며, 이것은 중추신경계의 손상된 영역을 그물처럼 둘러싸서 뉴런의 재생을 방해할 수 있다. FAM19A5에 대한 항체는 중추신경계 상해 및/또는 질환의 예방 및/또는 치료에 사용될 수 있다(미국특허 제9,579,398호 참고).
인간에서, FAM19A5를 암호화하는 유전자는 염색체 22에 위치된다. 다음과 같은 3가지 인간 FAM19A5(UniProt: Q7Z5A7) 이소폼이 있으며, 이들은 선택적 스플라이싱에 의해 생성되는 것으로 추정된다: 132개의 아미노산으로 구성된 이소폼 1(UniProt: Q7Z5A7-1); 125개의 아미노산으로 구성된 이소폼 2(UniProt: Q7Z5A7-2); 및 53개의 아미노산으로 구성된 이소폼 3(UniProt: Q7Z5A7-3). 인간 FAM19A5 단백질은 막 결합 형태와 가용성(분비된) 형태로 존재하는 것으로 추정된다. 이소폼 1은 하나의 경막 영역을 가진 막 단백질인 것으로 추정된다. 이소폼 2는 분비된 단백질(가용성)로서 Tang T. Y. et al., Genomics 83(4):727-34 (2004)에 보고되었고, 아미노산 위치 1-25에 신호 펩타이드를 함유한다. 이소폼 3은 EST 데이터에 기초하여 예상된다. 아래는 3가지 공지된 인간 FAM19A5 이소폼의 아미노산 서열이다.
(I) 이소폼 1(UniProt: Q7Z5A7-1, 경막 단백질): 이 이소폼이 표준 서열로서 선택되었다.
MAPSPRTGSR QDATALPSMS STFWAFMILA SLLIAYCSQL AAGTCEIVTL DRDSSQPRRT IARQTARCAC RKGQIAGTTR ARPACVDARI IKTKQWCDML PCLEGEGCDL LINRSGWTCT QPGGRIKTTT VS (SEQ ID NO: 1)
(II) 이소폼 2(UniProt: Q7Z5A7-2, 가용성 단백질):
MQLLKALWAL AGAALCCFLV LVIHAQFLKE GQLAAGTCEI VTLDRDSSQP RRTIARQTAR CACRKGQIAG TTRARPACVD ARIIKTKQWC DMLPCLEGEG CDLLINRSGW TCTQPGGRIK TTTVS (SEQ ID NO: 2)
(III) 이소폼 3(UniProt: Q7Z5A7-3):
MYHHREWPAR IIKTKQWCDM LPCLEGEGCD LLINRSGWTC TQPGGRIKTT TVS (SEQ ID NO: 3)
용어 "FAM19A5"는 세포에 의해 자연적으로 발현되는 FAM19A5의 임의의 변이체 또는 이소폼을 포함한다. 따라서, 본 명세서에 개시된 항체는 동일한 종의 상이한 이소폼(예를 들어 인간 FAM19A5의 상이한 이소폼)들과 교차-반응할 수 있거나, 또는 인간 이외의 종의 FAM19A5(예를 들어 마우스 FAM19A5)와 교차-반응할 수 있다. 또는, 항체는 인간 FAM19A5에 특이적일 수 있으며, 다른 종과는 교차-반응성을 나타내지 못할 수 있다. FAM19A5, 또는 이의 임의의 변이체 및 이소폼은 이들을 자연적으로 발현하는 세포 또는 조직으로부터 분리되거나 또는 재조합적으로 생성될 수 있다. 인간 FAM19A5를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드는 GenBank 수탁번호 No. BC039396을 가지며 다음의 서열을 가진다:
[표 1a]
인간 FAM19A5의 폴리뉴클레오타이드 서열
Figure pat00001
용어 "FAM19A5 단백질에 대한 길항제"는 FAM19A5 단백질의 발현을 억제하는 모든 길항제를 말한다. 이러한 길항제는 펩타이드, 핵산, 또는 화합물일 수 있다. 더 구체적으로, 길항제는 안티센스-올리고뉴클레오타이드, siRNA, shRNA, miRNA, dsRNA, 앱타머, FAM19A5 표적화 PNA(펩타이드 핵산), 또는 이들을 포함하는 벡터일 수 있다. 일부 구체예에서, 길항제는 FAM19A5 단백질에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 이의 항원-결합 부분일 수 있다.
용어 "항체" 및 "항체들"은 당업계의 용어이며 본 명세서에서 상호 교환하여 사용될 수 있고, 항원에 특이적으로 결합하는 항원 결합 부위를 가진 분자를 말한다. 본 명세서에서 사용된 용어는 전체 항체 및 임의의 항원 결합 단편(즉 "항원-결합 부분") 또는 이들의 단쇄를 포함한다. 하나의 구체예에서, "항체"는 이황화물 결합에 의해 상호-연결된 적어도 2개의 중쇄(H)와 2개의 경쇄(L)를 포함하는 당단백질, 또는 이의 항원-결합 부분을 말한다. 다른 구체예에서, "항체"는 단일 가변 도메인, 예를 들어 VHH 도메인을 포함하는 단쇄 항체를 말한다. 각 중쇄는 중쇄 가변 영역(VH로 약기됨)과 중쇄 불변 영역으로 이루어진다. 특정 자연-발생 항체에서, 중쇄 불변 영역은 3개의 도메인 CH1, CH2 및 CH3으로 이루어진다. 특정 자연-발생 항체에서, 각 경쇄는 경쇄 가변 영역(VL로 약기됨)과 경쇄 불변 영역으로 이루어진다. 경쇄 불변 영역은 하나의 도메인 CL로 이루어진다.
VH 및 VL 영역은 프레임워크 영역(FR)이라 칭하는, 더 보존되는 영역들이 산재된, 상보성 결정 영역(CDR)이라 칭하는, 초가변성의 영역으로 더 세분될 수 있다. 각각의 VH 및 VL은 3개의 CDR와 4개의 FR로 이루어지며, 이들은 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, 및 FR4의 순서로 아미노-말단에서 카복시-말단을 향해 배열된다. 중쇄 및 경쇄의 가변 영역은 항원과 상호작용하는 결합 도메인을 함유한다. 항체의 불변 영역은 면역 시스템의 다양한 세포(예를 들어 이펙터 세포) 및 정통 보체 시스템의 제1 성분(C1q)를 포함하는 숙주 조직 또는 인자들과 면역글로불린의 결합을 매개할 수 있다.
용어 "Kabat 넘버링"은 당업계에서 인정되며 항체, 또는 이의 항원-결합 부분의 중쇄 및 경쇄 가변 영역에서 아미노산 잔기를 넘버링하는 시스템을 말한다. 특정 양태에서, 항체의 CDR은 Kabat 넘버링 시스템에 따라서 결정될 수 있다(예를 들어 Kabat EA & Wu TT (1971) Ann NY Acad Sci 190: 382-391 and Kabat EA et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 참고). Kabat 넘버링 시스템을 사용하면, 항체 중쇄 분자 내에서의 CDR은 전형적으로 아미노산 위치 31 내지 35(이것은 선택적으로 35 이후에 하나 또는 2개의 추가의 아미노산을 포함할 수 있음; Kabat 넘버링 방식에서 35A 및 35B로 언급됨)(CDR1), 아미노산 위치 50 내지 65(CDR2), 및 아미노산 위치 95 내지 102 (CDR3)에 존재한다. Kabat 넘버링 시스템을 사용하면, 항체 경쇄 분자 내에서 CDR은 전형적으로 아미노산 위치 24 내지 34(CDR1), 아미노산 위치 50 내지 56(CDR2), 및 아미노산 위치 89 내지 97(CDR3)에 존재한다. 특정한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항체의 CDR은 Kabat 넘버링 방식에 따라서 결정되었다.
용어 "Kabat에서의 아미노산 위치 넘버링" 및 "Kabat 위치" 또는 관련되는 변형 용어는 문헌(Kabat et al, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991))에서 항체 컴필레이션의 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄 가변 도메인에 대해 사용된 넘버링 시스템을 말한다. 이 넘버링 시스템을 사용하면, 실제 선형 아미노산 서열은 더 적은 또는 추가의 아미노산을 함유할 수 있는데, 이것은 가변 도메인의 FW 또는 CDR의 단축, 또는 이것에의 삽입에 해당한다. 예를 들어, 중쇄 가변 도메인은 H2의 잔기 52 이후 단일 아미노산 삽입(Kabat에 따르면 잔기 52a) 및 중쇄 FW 잔기 82 이후 삽입된 잔기(Kabat에 따르면 잔기 82a, 82b, 및 82c 등)를 을 포함할 수 있다(표 1b 참고).
[표 1b]
Figure pat00002
잔기의 Kabat 넘버링은 "표준" Kabat 넘버링된 서열과 항체의 서열의 상동성의 영역에서 정렬에 의해 주어진 항체에 대해 결정될 수 있다. Chothia는 구조 루프의 위치를 대신 말한다(Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). Chothia CDR-H1 루프의 단부는 Kabat 넘버링 관례를 사용하여 넘버링되었을 때 루프의 길이에 따라 H32 내지 H34 사이에서 변한다(이것은 Kabat 넘버링 방식이 H35A와 H35B에 삽입을 위치시키기 때문이다; 35A도 35B도 존재하지 않는다면 루프는 32에서 끝난다; 35A만 존재하면 루프는 33에서 끝난다; 35A와 35B가 둘 다 존재하면 루프는 34에서 끝난다). AbM 초가변 영역은 Kabat CDR과 Chothia 구조 루프 사이의 절충점을 표시하며, Oxford Molecular의 AbM 항체 모델링 소프트웨어에 의해 사용된다.
IMGT(ImMunoGeneTics)도 CDR을 포함하는 면역글로불린 가변 영역에 대한 넘버링 시스템을 제공한다. 예를 들어 Lefranc, M.P. et al., Dev. Comp. Immunol. 27: 55-77(2003)를 참고하며, 이것은 본 명세서에 참고로 포함된다. IMGT 넘버링 시스템은 5,000개를 넘는 서열의 정렬, 구조 데이터, 및 초가변 루프의 특성화에 기초했으며, 모든 종에 대해 가변 영역과 CDR 영역을 용이하게 비교한다. IMGT 넘버링 스키마에 따르면, VH-CDR1은 위치 26 내지 35에 있고, VH-CDR2는 위치 51 내지 57에 있고, VH-CDR3은 위치 93 내지 102에 있고, VL-CDR1은 위치 27 내지 32에 있고, VL-CDR2는 위치 50 내지 52에 있고, VL-CDR3은 위치 89 내지 97에 있다.
본 명세서에 개시된 모든 중쇄 불변 영역 아미노산 위치에 대해, 넘버링은 서열화된 최초의 인간 IgG1인 골수종 단백질 EU의 아미노산 서열을 설명한 문헌(Edelman et al., 1969, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 63(1):78-85)에 최초로 제시된 EU 인덱스에 따른다. Edelman et al.의 EU 인덱스는 또한 문헌(Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed., United States Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda)에도 제시된다. 따라서, 용어 "Kabat에 제시된 EU 인덱스" 또는 "Kabat의 EU 인덱스" 및 "Kabat에 제시된 EU 인덱스에 따른 위치" 및 관련되는 변형 용어는 Kabat 1991에 제시된 것과 같은 Edelman et al.의 인간 IgG1 EU 항체에 기초한 잔기 넘버링 시스템을 말한다.
가변 도메인(중쇄와 경쇄 모두) 및 경쇄 불변 영역 아미노산 서열에 사용된 넘버링 시스템은 Kabat 1991에 제시된 것이다.
항체는 면역글로불린 분자의 임의의 타입(예를 들어 IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 또는 IgY), 임의의 유형(예를 들어 IgD, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 또는 IgA2), 또는 임의의 아형(예를 들어 인간에서 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4; 및 마우스에서IgG1, IgG2a, IgG2b 및 IgG3)를 가질 수 있다. 면역글로불린, 예를 들어 IgG1은 몇몇 알로타입으로 존재하며, 이들은 최대 몇 개의 아미노산이 서로 상이하다. 본 명세서에 개시된 항체는 통상 알려진 이소타입, 유형, 아형, 또는 알로타입 중 어느 것으로부터 유래할 수 있다. 특정 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항체는 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4 아형 또는 이들의 임의의 하이브리드이다. 특정 구체예에서, 항체는 인간 IgG1 아형 또는 인간 IgG2 또는 인간 IgG4 아형의 것이다.
"항체"는, 예로서, 자연-발생 및 비-자연-발생 항체; 단클론성 및 다클론성 항체; 키메라 및 인간화된 항체; 인간 및 비-인간 항체, 전체 합성 합체; 단쇄 항체; 단일특이적 항체; 다중특이적 항체(이중특이적 항체를 포함); 2개의 중쇄와 2개의 경쇄 분자를 포함하는 테트라머 항체; 항체 경쇄 모노머; 항체 중쇄 모노머; 항체 경쇄 다이머; 항체 중쇄 다이머; 항체 경쇄-항체 중쇄 쌍; 인트라바디; 헤테로콘쥬게이트 항체; 1가 항체; 낙타화 항체; 아피바디; 항-이디오타입(항-Id) 항체(예를 들어 항-항-Id 항체를 포함), 및 충분히 항원 결합할 수 있는 단일 모노머 가변 항체 도메인(예를 들어 VH 도메인 또는 VL 도메인)으로 구성된 결합 분자를 포함하는 단일-도메인 항체(sdAb)를 포함한다(Harmen M. M. and Haard H. J. Appl Microbiol Biotechnol. 77(1): 13-22 (2007)).
용어 "항체의 항원-결합 부분"은 항원(예를 들어 인간 FAM19A5)에 특이적으로 결합하는 능력을 보유한 항체의 하나 이상의 단편을 말한다. 이러한 "단편"은, 예를 들어 약 8 내지 약 1500개 아미노산 길이, 적합하게는 약 8 내지 약 745개 아미노산 길이, 적합하게는 약 8 내지 약 300개, 약 8 내지 약 200개 아미노산, 또는 약 10개 내지 약 50, 또는 100개 아미노산 길이이다. 항체의 항원-결합 기능은 전장 항체의 단편에 의해 수행될 수 있다는 것이 밝혀졌다. 항체, 예를 들어 본 명세서에 개시된 항-FAM19A5 항체의 "항원-결합 부분"에 포함되는 결합 단편의 예들은 (i) VL, VH, CL, 및 CH1 도메인으로 구성된 1가 단편인 Fab 단편; (ii) 힌지 영역에서 이황화물 브릿지에 의해 연결된 2개의 Fab 단편을 포함하는 2가 단편인 F(ab')2 단편; (iii) VH 및 CH1 도메인으로 구성된 Fd 단편; (iv) 항체의 단일 팔의 VL 및 VH 도메인으로 구성된 Fv 단편, 및 이황화물-연결된 Fvs(sdFv); (v) VH 도메인으로 구성된 dAb 단편(Ward et al., (1989) Nature 341: 544-546); 및 (vi) 분리된 상보성 결정 영역(CDR) 또는 (vii) 합성 링커에 의해 선택적으로 이어질 수 있는 둘 이상의 분리된 CDR의 조합을 포함한다. 또한, Fv 단편의 두 도메인인 VL과 VH는 별개의 유전자에 의해 코딩되지만, 이들은 합성 링커에 의해, 재조합 방법을 사용하여, 이어질 수 있으며, 이로써 VL과 VH 영역이 쌍을 이루어 1가 분자를 형성한 단일 단백질 사슬(단쇄 Fv(scFv)라고 함)이 될 수 있다;(예를 들어 Bird et al., (1988) Science 242:423-426; 및 Huston et al., (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883 참고). 이러한 단쇄 항체도 또한 항체의 "항원-결합 부분"에 포함된다. 이들 항체 단편은 당업자에게 공지된 종래의 기술을 사용하여 얻어지며, 단편들은 무손상 항체와 동일한 방식으로 유용성에 대해 스크리닝된다. 항원-결합 부분은 재조합 DNA 기술에 의해, 또는 무손상 면역글로불린의 효소 또는 화학 절단에 의해 생성될 수 있다.
용어 "가변 영역" 또는 "가변 도메인"은 당업계에서 통상적으로 상호 교환하여 사용된다. 가변 영역은 전형적으로 항체의 일부분, 일반적으로 경쇄 또는 중쇄의 일부분, 전형적으로 성숙한 중쇄에서 약 아미노 말단 110 내지 120개 아미노산 및 성숙한 경쇄에서 약 90 내지 115개 아미노산을 말하며, 항체 중 서열이 광범하게 상이하고, 특정 항원에 대한 특정 항체의 결합 및 특이성과 관련하여 사용된다. 서열 변동성은 상보성 결정 영역(CDR)이라고 불리는 영역에 집중되며, 가변 도메인에서 더 고도로 보존된 영역은 프레임워크 영역(FR)이라고 불린다.
경쇄 및 중쇄의 CDR은 항원과 항체의 상호작용 및 특이성을 주로 담당하는 것으로 추정된다. 특정 구체예에서, 가변 영역은 인간 가변 영역이다. 특정 구체예에서, 가변 영역은 설치류 또는 뮤린 CDR과 인간 프레임워크 영역(FR)을 포함한다. 특정 구체예에서, 가변 영역은 영장류(예를 들어 비-인간 영장류) 가변 영역이다. 특정 구체예에서, 가변 영역은 설치류 또는 뮤린 CDR과 영장류(예를 들어 비-인간 영장류) 프레임워크 영역(FR)을 포함한다.
용어 "중쇄"는 항체와 관련하여 사용된 경우, 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여, 임의의 상이한 타입, 예를 들어 알파(α), 델타(δ), 엡실론(ε), 감마(γ) 및 뮤(μ)를 말할 수 있으며, 이들은 각각 IgG의 아형, 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4를 포함하여, 항체의 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM 유형을 발생시킨다.
용어 "경쇄"는 항체와 관련하여 사용된 경우, 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여 임의의 상이한 타입, 예를 들어 카파(κ) 및 람다(λ)를 말할 수 있다. 경쇄 아미노산 서열은 당업계에 잘 공지되어 있다. 특정한 구체예에서, 경쇄는 인간 경쇄이다.
용어 "VL" 및 "VL 도메인"은 상호 교환하여 사용되며 항체의 경쇄 가변 영역을 말한다.
용어 "VH" 및 "VH 도메인"은 상호 교환하여 사용되며 항체의 중쇄 가변 영역을 말한다.
용어 "불변 영역" 또는 "불변 도메인"은 상호 교환 가능하며 당업계에서의 통상적인 의미를 가진다. 불변 도메인은 항체 부분이며, 예를 들어 항체와 항원의 결합에는 직접 연루되지 않지만 Fc 수용체와의 상호작용과 같은 다양한 이펙터 기능을 나타낼 수 있는 경쇄 및/또는 중쇄의 카복시 말단 부분이다. 면역글로불린 분자의 불변 영역은 일반적으로 면역글로불린 가변 도메인에 비해 더 보존된 아미노산 서열을 가진다.
"Fc 영역"(단편 결정화 가능한 영역) 또는 "Fc 도메인" 또는 "Fc"는 면역 시스템의 다양한 세포(예를 들어 이펙터 세포) 상에 위치된 Fc 수용체 또는 정통 보체 시스템의 제1 성분(C1q)과의 결합을 포함하여, 숙주 조직 또는 인자들과 면역글로불린의 결합을 매개하는 항체의 중쇄의 C-말단 영역을 말한다. 따라서, Fc 영역은 제1 불변 영역 면역글로불린 도메인(예를 들어 CH1 또는 CL)을 제외한 항체의 불변 영역을 포함한다. IgG, IgA 및 IgD 항체 이소타입에서, Fc 영역은 항체의 두 중쇄의 제2(CH2) 및 제3(CH3) 불변 도메인으로부터 유래된 2개의 동일한 단백질 단편을 포함한다; IgM 및 IgE Fc 영역은 각 폴리펩타이드 사슬에 3개의 중쇄 불변 도메인(CH 도메인 2-4)을 포함한다. IgG의 경우, Fc 영역은 면역글로불린 도메인 Cγ2 및 Cγ3과 Cγ1과 Cγ2 사이의 힌지를 포함한다. 면역글로불린 중쇄의 Fc 영역의 경계는 다양하지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 일반적으로 위치 C226이나 P230에 있는 아미노산 잔기(또는 이들 두 아미노산 사이의 아미노산)에서 중쇄의 카복시-말단까지 늘어난 것으로서 한정되며, 여기서 넘버링은 Kabat에서와 같은 EU 인덱스를 따른다. 인간 IgG Fc 영역의 CH2 도메인은 약 아미노산 231에서 약 아미노산 340까지 연장되고, CH3 도메인은 Fc 영역에서 Cm 도메인의 C-말단 측에 위치되는데, 그것은 IgG의 약 아미노산 341에서 약 아미노산 447까지 연장된다. Fc 영역은 임의의 알로타입 변이체를 포함하는 자생 서열 Fc, 또는 변이체 Fc(예를 들어 비-자연-발생 Fc)일 수 있다. 또한, Fc는 분리된 상태의 영역을 말하거나 또는 "Fc 융합 단백질"(예를 들어 항체 또는 면역유착(immunoadhesion))이라고도 하는, "Fc 영역을 포함하는 결합 단백질"과 같은 Fc-포함 단백질 폴리펩타이드와 관계된 영역을 말한다.
"자생 서열 Fc 영역" 또는 "자생 서열 Fc"는 자연에서 발견된 Fc 영역의 아미노산 서열과 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 자생 서열 인간 Fc 영역은 자생 서열 인간 IgG1 Fc 영역; 자생 서열 인간 IgG2 Fc 영역; 자생 서열 인간 IgG3 Fc 영역; 및 자생 서열 인간 IgG4 Fc 영역뿐만 아니라 이들의 자연-발생 변이체를 포함한다. 자생 서열 Fc는 Fe들의 다양한 알로타입을 포함한다(예를 들어 Jefferis et al. (2009) mAbs 1:1; Vidarsson G. et al. Front Immunol. 5:520(2014년 10월 20일 온라인 공개) 참고).
"Fc 수용체" 또는 "FcR"은 면역글로불린의 Fc 영역에 결합하는 수용체이다. IgG 항체에 결합하는 FcR은 Fcγ 패밀리의 수용체를 포함하고, 이들 수용체의 대립형질 변이체 및 다른 방식으로 스플라이싱된 형태를 포함한다. Fcγ 패밀리는 3개의 활성화 수용체(마우스에서의 FcγRI, FcγRIII, 및 FcγRIV; 인간에서의 FcγRIA, FcγRIIA, 및 FcγRIIIA)와 하나의 저해 수용체(FcγRIIB)로 구성된다. 인간 IgG1은 대부분의 인간 Fc 수용체와 결합하며 가장 강한 Fc 이펙터 기능을 도출한다. 인간 IgG1가 결합하는 활성화 Fc 수용체의 종류에 대해서는 뮤린 IgG2a와 동등하다고 간주된다. 반면, 인간 IgG4는 최소한의 Fc 이펙터 기능을 도출한다(Vidarsson G. et al. Front Immunol. 5:520(2014년 10월 20일 온라인 공개) 참고).
불변 영역은 하나 이상의 이펙터 기능을 제거하기 위해, 예를 들어 재조합 기술에 의해 조작될 수 있다. "이펙터 기능"은 항체 Fc 영역과 Fc 수용체 또는 리간드의 상호작용, 또는 그로부터 생기는 생화학적 이벤트를 말한다. 예시적인 "이펙터 기능"은 C1q 결합, 보체 의존성 세포독성(CDC), Fc 수용체 결합, FcγR-매개 이펙터 기능, 예컨대 ADCC 및 항체 의존성 세포-매개 포식작용(ADCP), 및 세포 표면 수용체(예를 들어 B 세포 수용체; BCR)의 하향조절을 포함한다. 이러한 이펙터 기능은 일반적으로 Fc 영역이 결합 도메인(예를 들어 항체 가변 도메인)과 조합되는 것을 필요로 한다. 따라서, 용어 "Fc 기능이 없는 불변 영역"은 Fc 영역에 의해 매개된 하나 이상의 이펙터 기능이 감소되거나 없는 불변 영역을 포함한다.
항체의 이펙터 기능은 상이한 접근법에 의해 감소 또는 회피될 수 있다. 항체의 이펙터 기능은 Fc 영역을 결여한 항체 단편(예를 들어 예컨대 Fab, F(ab')2, 단쇄 Fv(scFv), 또는 모노머 VH 또는 VL 도메인으로 구성된 sdAb)을 사용하여 감소되거나 회피될 수 있다. 또는, Fc 영역의 다른 가치 있는 속성(예를 들어 연장된 반감기 및 헤테로다이머화)은 보유하면서 항체의 이펙터 기능을 감소시키기 위해 소위 말하는 무글리코실화(aglycosylated) 항체가 Fc 영역에서 특정 잔기에 연결된 당을 제거함으로써 생성될 수 있다. 무글리코실화 항체는, 예를 들어 당이 부착된 잔기를 결실 또는 변경함으로써, 당을 효소적으로 제거함으로써, 글리코실화 저해제의 존재하에 배양된 세포에서 항체를 생성함으로써, 또는 단백질을 글리코실화할 수 없는 세포(예를 들어 박테리아 숙주 세포)에서 항체를 발현함으로써 생성될 수 있다(예를 들어 미국 특허공개 제20120100140호 참고). 다른 접근법은 이펙터 기능이 감소된 IgG 아형으로부터의 Fc 영역을 이용하는 것인데, 예를 들어 IgG2 및 IgG4 항체는 IgG1 및 IgG3보다 더 낮은 수준의 Fc 이펙터 기능을 갖는 것을 특징으로 한다. Fc 부분의 CH2 도메인에서 힌지 영역에 가장 가까이 있는 잔기가 항체의 이펙터 기능을 담당하며, 그것은 선천 면역 시스템의 이펙터 세포 상에서 C1q(보체) 및 IgG-Fc 수용체(FcγR)에 대해 상당히 중첩된 결합 부위를 함유한다(Vidarsson G. et al. Front Immunol. 5:520(2014년 10월 20일 온라인 공개)). 따라서, Fc 이펙터 기능이 감소되거나 없는 항체는, 예를 들어 IgG4 이소타입의 IgG 항체로부터의 CH2 도메인과 IgG1 이소타입의 IgG 항체로부터의 CH3 도메인을 포함하는 키메라 Fc 영역, 또는 IgG2로부터의 힌지 영역과 IgG4로부터의 CH2 영역을 포함하는 키메라 Fc 영역(예를 들어 Lau C. et al. J. Immunol. 191:4769-4777 (2013) 참고), 또는 변경된 Fc 이펙터 기능, 예를 들어 Fc 기능이 감소되거나 없는 돌연변이를 가진 Fc 영역을 생성함으로써 제조될 수 있다. 돌연변이를 가진 이러한 Fc 영역은 당업계에 공지되어 있다. 예를 들어, 미국 특허공개 제20120100140호와 거기 인용된 미국출원 및 PCT 출원들 그리고 An et al. mAbs 1:6, 572-579 (2009)를 참고하며, 이들의 개시는 그 전체가 본 명세서에 참고로 포함된다.
"힌지", "힌지 도메인" 또는 "힌지 영역" 또는 "항체 힌지 영역"은 CH1 도메인을 CH2 도메인과 잇고 힌지의 상부, 중앙, 및 하부 부분을 포함하는 중쇄 불변 영역의 도메인을 말한다(Roux et al. J. Immunol. 1998 161:4083). 힌지는 항체의 결합 영역과 이펙터 영역 사이에 가요성의 수준을 변화시키며, 또한 두 중쇄 불변 영역 사이에 분자간 이황화물 결합을 위한 부위를 제공한다. 본 명세서에 개시된 힌지는 모든 IgG 이소타입에 대해 Glu216에서 시작해서 Gly237에서 끝난다(Roux et al., 1998 J Immunol 161:4083). 야생형 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 힌지의 서열이 당업계에 공지되어 있다(예를 들어 Kabat EA et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242; Vidarsson G. et al., Front Immunol. 5:520(2014년 10월 20일 온라인 공개) 참고).
용어 "CH1 도메인"은 중쇄 불변 도메인에서 가변 도메인과 힌지를 연결하는 중쇄 불변 영역을 말한다. 본 명세서에 개시된 CH1 도메인은 A118에서 시작해서 V215에서 끝난다. 용어 "CH1 도메인"은 야생형 CH1 도메인, 뿐만 아니라 이의 자연적으로 존재하는 변이체(예를 들어 알로타입)를 포함한다. (야생형 및 알로타입을 포함하는) IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4의 CH1 도메인 서열은 당업계에 공지되어 있다(예를 들어, Kabat EA et al., (1991)(상동) 및 Vidarsson G. et al., Front Immunol. 5:520(2014년 10월 20일 온라인 공개) 참고). 예시적인 CH1 도메인은 항체의 생물학적 활성, 예를 들어 반감기를 변형하는 돌연변이를 가진 CH1 도메인을 포함하며, 이들은 예를 들어 미국 특허공개 제20120100140호 및 거기 인용된 미국특허 및 출원과 PCT 출원들에 개시된다.
용어 "CH2 도메인"은 중쇄 불변 도메인에서 힌지와 CH3 도메인을 연결하는 중쇄 불변 영역을 말한다. 본 명세서에 개시된 CH2 도메인은 P238에서 시작해서 K340에서 끝난다. 용어 "CH2 도메인"은 야생형 CH2 도메인, 뿐만 아니라 이의 자연적으로 존재하는 변이체(예를 들어 알로타입)를 포함한다. (야생형 및 알로타입을 포함하는) IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4의 CH2 도메인 서열은 당업계에 공지되어 있다(예를 들어, Kabat EA et al., (1991)(상동) 및 Vidarsson G. et al., Front Immunol. 5:520(2014년 10월 20일 온라인 공개) 참고). 예시적인 CH2 도메인은 항체의 생물학적 활성, 예를 들어 반감기 및/또는 감소된 Fc 이펙터 기능을 변형하는 돌연변이를 가진 CH2 도메인을 포함하며, 이들은 예를 들어 미국 특허공개 제20120100140호 및 거기 인용된 미국특허 및 출원과 PCT 출원들에 개시된다.
용어 "CH3 도메인"은 중쇄 불변 도메인에서 CH2 도메인에 대해 C-말단인 중쇄 불변 영역을 말한다. 본 명세서에 개시된 CH3 도메인은 G341에서 시작해서 K447에서 끝난다. 용어 "CH3 도메인"은 야생형 CH3 도메인, 뿐만 아니라 이의 자연적으로 존재하는 변이체(예를 들어 알로타입)를 포함한다. (야생형 및 알로타입을 포함하는) IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4의 CH3 도메인 서열은 당업계에 공지되어 있다(예를 들어, Kabat EA et al., (1991)(상동) 및 Vidarsson G. et al., Front Immunol. 5:520(2014년 10월 20일 온라인 공개) 참고). 예시적인 CH3 도메인은 항체의 생물학적 활성, 예를 들어 반감기를 변형하는 돌연변이를 가진 CH3 도메인을 포함하며, 이들은 예를 들어 미국 특허공개 제20120100140호 및 거기 인용된 미국특허 및 출원과 PCT 출원들에 개시된다.
용어 "이소타입"은 중쇄 불변 영역 유전자에 의해 암호화되는 항체 유형(예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgM, IgA1, IgA2, IgD, 및 IgE 항체)을 말한다.
용어 "알로타입"은 몇 개의 아미노산이 차이가 있는 특정한 이소타입 그룹 내에서 자연-발생한 변이체를 말한다(예를 들어 Jefferis et al. (2009) mAbs 1:1 참고). 본 명세서에 개시된 항체는 임의의 알로타입을 가질 수 있다. IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4의 알로타입은 당업계에 공지되어 있다(예를 들어, Kabat EA et al., (1991)(상동); Vidarsson G. et al., Front Immunol. 5:520(2014년 10월 20일 온라인 공개); 및 Lefranc MP, mAbs 1:4, 1-7(2009) 참고).
용어 "항원을 인식하는 항체" 및 "항원에 특이적인 항체"는 용어 "항원에 특이적으로 결합하는 항체"와 함께 본 명세서에서 상호 교환하여 사용된다.
용어 "분리된 항체"는 상이한 항원 특이성을 가진 다른 항체가 실질적으로 없는 항체를 말한다. 예를 들어 FAM19A5에 특이적으로 결합하는 분리된 항체는 FAM19A5 이외의 다른 항원에 특이적으로 결합하는 항체가 실질적으로 없다. 그러나, FAM19A5의 에피토프에 특이적으로 결합하는 분리된 항체는 상이한 종으로부터의 다른 FAM19A5 단백질에 대해 교차-반응성을 가질 수 있다.
"결합 친화성"은 일반적으로 분자(예를 들어 항체)의 단일 결합 부위와 그것의 결합 파트너(예를 들어 항원) 간의 비-공유 상호작용의 전체 합계 강도를 말한다. 특별한 언급이 없는 한, 용어 "결합 친화성"은 결합 쌍의 멤버(예를 들어 항체와 항원) 간의 1:1 상호작용을 반영하는 고유한 결합 친화성을 말한다. 파트너 Y에 대한 분자 X의 친화성은 일반적으로 해리 상수(KD)에 의해 표시될 수 있다. 친화성은, 제한은 아니지만, 평형 해리 상수(KD), 및 평형 결합 상수(KA)를 포함하는, 당업계에 공지된 다수의 방식으로 측정 및/또는 표시될 수 있다. KD는 koff/kon의 몫으로부터 계산되고 몰 농도(M)로 표시되며, KA는 kon/koff의 몫으로부터 계산된다. kon은 예를 들어 항원에 대한 항체의 결합 속도 상수를 말하고, koff는 예를 들어 항원에 대한 항체의 해리 속도 상수를 말한다. kon 및 koff는 면역분석(예를 들어 효소-결합 면역흡착 분석(ELISA)), BIACORE™ 또는 역학적 배제 분석(KINEXA®)과 같은, 당업자에게 공지된 기술에 의해 결정될 수 있다.
용어 "특이적으로 결합한다", "특이적으로 인식한다", "특이적 결합", "선택적 결합" 및 "선택적으로 결합한다"는 항체와 관련하여 유사한 용어들로서 항원(예를 들어 에피토프 또는 면역 복합체)에 결합하는 분자(예를 들어 항체)를 말하며, 이러한 결합은 당업자에 의해 이해되는 대로이다. 항원에 특이적으로 결합하는 분자는, 예를 들어 면역분석, BIACORE™, KINEXA® 3000 기기(Sapidyne Instruments, Boise, ID), 또는 당업계에 공지된 다른 분석들에 의해 결정되었을 때, 일반적으로 더 낮은 친화성으로 다른 펩타이드 또는 폴리펩타이드에 결합할 수 있다. 특정한 구체예에서, 항원에 특이적으로 결합하는 분자는 이 분자가 다른 항원에 결합할 때의 KA보다 적어도 2 logs, 2.5 logs, 3 logs, 4 logs 또는 그 이상 더 큰 KA으로 그 항원에 결합한다.
항체는 전형적으로 10-5 내지 10-11 M 이하의 해리 상수에 의해 반영되는, 높은 친화성으로 동족 항원에 특이적으로 결합한다. 약 10-4 M를 초과하는 KD는 일반적으로 비특이적 결합을 나타낸다고 간주된다. 항원과 "특이적으로 결합하는" 항체는 높은 친화성으로 항원 및 실질적으로 동일한 항원에 결합하는 항체를 말하며, 이것은 예를 들어 정해진 항원을 사용하여 면역분석(예를 들어 ELISA) 또는 BIACORE™ 2000 기기에서 표면 플라즈몬 공명(SPR) 기술에 의해 결정되었을 때, 10-7 M 이하, 바람직하게 10-8 M 이하, 더욱더 바람직하게 10-9 M 이하, 및 가장 바람직하게 10-8 M 내지 10-10 M 이하의 KD를 갖는 것을 의미하고, 이것은 관련 없는 항원에는 높은 친화성으로 결합하지 않는다.
용어 "항원"은 임의의 천연 또는 합성 면역원성 물질, 예컨대 단백질, 펩타이드 또는 합텐을 말한다. 항원은 FAM19A5 또는 이의 단편일 수 있다.
"에피토프"는 당업계의 용어로서 항체가 특이적으로 결합할 수 있는 항원의 국소화된 영역을 말한다. 에피토프는, 예를 들어 폴리펩타이드의 연속(contiguous) 아미노산들(선형 또는 연속 에피토프)일 수 있거나, 또는 에피토프는, 예를 들어 폴리펩타이드 또는 폴리펩타이드들의 둘 이상의 비-연속 영역들이 합쳐진 것(입체형태적, 비-선형, 불연속, 또는 비-연속 에피토프)일 수 있다. 연속 아미노산으로부터 형성된 에피토프는 항상 그렇지는 않지만 전형적으로 변성 용매에 노출시 보유되고, 3차 접힘에 의해 형성된 에피토프는 전형적으로 변성 용매로 처리시 상실된다. 에피토프는 전형적으로 독특한 공간적 입체형태에서 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 또는 20개 아미노산을 포함한다. 에피토프가 주어진 항체에 의해 결합된 것을 결정하는 방법(즉 에피토프 맵핑)이 당업계에 잘 공지되어 있고, 이것은 예를 들어 면역블롯팅 및 면역침전 분석을 포함하며, 예를 들어 FMAM19A5로부터의 중첩 또는 연속 펩타이드가 주어진 항체(예를 들어 항-FAM19A5 항체)와의 반응성에 대해 시험된다. 에피토프의 공간적 입체형태를 결정하는 방법은 당업계의 기술 및 본 명세서에 개시된 것들을 포함하며, 예를 들어 엑스선 결정학, 2-차원 핵자기공명 및 HDX-MS를 포함한다(예를 들어 Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, G. E. Morris, Ed. (1996) 참고).
특정 구체예에서, 항체가 결합한 에피토프는, 예를 들어 NMR 분광법, 엑스선 회절 결정학 연구, ELISA 분석, 질량분광법과 결합된 수소/중수소 교환(예를 들어 액체 크로마토그래피 전자분무 질량분광법), 어레이-기반 올리고-펩타이드 스캐닝 분석, 및/또는 돌연변이유발 맵핑(예를 들어 부위-지정 돌연변이유발 맵핑)에 의해 결정될 수 있다. 엑스선 결정학의 경우, 결정화는 당업계에 공지된 방법 중 어느 것을 사용하여 달성될 수 있다(예를 들어 Giege R et al, (1994) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50(Pt 4): 339-350; McPherson A (1990) Eur J Biochem 189: 1-23; Chayen NE (1997) Structure 5: 1269-1274; McPherson A (1976) J Biol Chem 251: 6300-6303). 항체:항원 결정은 공지된 엑스선 회절 기술을 사용하여 연구될 수 있으며, X-PLOR(Yale University, 1992, Molecular Simulations, Inc.에 의해 배포; 예를 들어 Meth Enzymol (1985) volumes 114 & 115, eds Wyckoff H.W. et al.,; 미국 특허공개 제2004/0014194호 참고), 및 BUSTER(Bricogne G. (1993) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 49(Pt1):37-60; Bricogne G. (1997) Meth Enzymol 276A:361-423, ed Carter CW; Roversi P. et al., (2000) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 56(Pt 10):1316-1323)과 같은 컴퓨터 소프트웨어를 사용하여 연구될 수 있다. 돌연변이유발 맵핑 연구는 당업자에게 공지된 임의의 방법을 사용하여 수행될 수 있다. 알라닌 스캐닌 돌연변이유발 기술을 포함하는 돌연변이유발 기술에 대한 설명은, 예를 들어 Champe M. et al., (1995) J Biol Chem 270:1388-1394 및 Cunningham B.C. & Wells J.A. (1989) Science 244: 1081-1085를 참고한다.
용어 "에피토프 맵핑"은 항체-항원 인식에 대한 분자 결정소의 확인 과정을 말한다.
둘 이상의 항체와 관련하여 용어 "동일한 에피토프에 결합한다"는 주어진 방법에 의해 결정되었을 때 항체들이 아미노산 잔기의 동일한 세그먼트에 결합한다는 것을 의미한다. 항체들이 본 명세서에 개시된 항체와 "FAM19A5 상의 동일한 에피토프"에 결합하는지의 여부를 결정하는 기술은, 에피토프 맵핑 방법, 예컨대 에피토프의 원자 분해능을 제공하는 항원:항체 복합체의 결정의 엑스선 분석 및 수소/중수소 교환 질량분광법(HDX-MS)을 포함한다. 다른 방법은 항체와 항원 단편 또는 항원의 돌연변이된 변이체의 결합을 모니터링하며, 여기서 항원 서열 내에서 아미노산 잔기의 변형으로 인한 결합의 손실이 주로 에피토프 성분의 표시로서 간주된다. 이에 더하여, 에피토프 맵핑용 컴퓨터 조합 방법이 또한 사용될 수 있다. 이들 방법은 조합 파지 디스플레이 펩타이드 라이브러리로부터 특정한 짧은 펩타이드를 친화성 분리할 수 있는 관심 항체의 능력에 의존한다. 동일한 VH 및 VL 또는 동일한 CDR1, 2 및 3 서열을 가진 항체는 동일한 에피토프에 결합할 것으로 예상된다.
"표적과의 결합에 대해 다른 항체와 경합하는" 항체는 나머지 항체와 표적의 결합을 (부분적으로 또는 완전히) 저해하는 항체를 말한다. 두 항체가 표적과의 결합에 대해 서로 경합하는지의 여부, 즉 하나의 항체가 나머지 항체와 표적의 결합의 저해하는지의 여부와 저해하는 정도는 공지된 경합 실험을 사용하여 결정될 수 있다. 특정 구체예에서, 항체는 다른 항체와 표적의 결합에 대해 경합하며 이 결합을 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% 또는 100%까지 저해한다. 저해 또는 경합의 수준은 항체가 "차단 항체"(즉 표적과 먼저 인큐베이션된 저온 항체)인지에 따라 상이할 수 있다. 경합 분석은, 예를 들어 E.d. Harlow and David Lane, Cold Spring Harb Protoc; 2006; doi:10.1101/pdb.prot4277 또는 E.d. Harlow and David Lane에 의한 "Using Antibodies"(Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, USA 1999)의 제11장에 설명된 대로 수행될 수 있다. 경합 항체는 동일한 에피토프, 중첩 에피토프 또는 인접 에피토프(예를 들어 입체 장해에 의해 증명된 대로)에 결합한다.
다른 경합 결합 분석은 고체상 직접 또는 간접 방사성면역분석(RIA), 고체상 직접 또는 간접 효소면역분석(EIA), 샌드위치 경합 분석(Stahli et al., Methods in Enzymology 9:242 (1983) 참고); 고체상 직접 바이오틴-아비딘 EIA(Kirkland et al., J. Immunol. 137:3614 (1986) 참고); 고체상 직접 표지화 분석, 고체상 직접 표지화 샌드위치 분석(Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press (1988) 참고); 1-125 표지를 사용한 고체상 직접 표지 RIA( Morel et al., Mol. Immunol. 25(1):7 (1988) 참조); 고체상 직접 바이오틴-아비딘 EIA(Cheung et al., Virology 176:546 (1990)); 및 직접 표지화 RIA(Moldenhauer et al., Scand. J. Immunol. 32:77 (1990))를 포함한다.
"이중특이적" 또는 "이중기능성 항체"는 두 상이한 중쇄/경쇄 쌍과 두 상이한 결합 부위를 가진 인공 하이브리드 항체이다. 이중특이적 항체는 하이브리도마의 융합 또는 Fab' 단편의 연결을 포함하는 여러 가지 방법에 의해 생성될 수 있다(예를 들어 Songsivilai & Lachmann, Clin. Exp. Immunol. 79:315-321 (1990); Kostelny et al., J. Immunol. 148, 1547-1553 (1992)를 참고).
용어 "단클론성 항체"는 특정 에피토프에 대해 단일 결합 특이성 및 친화성을 나타내는 항체 또는 모든 항체가 특정 에피토프에 대해 단일 결합 특이성 및 친화성을 나타내는 항체들의 조성물을 말한다. 따라서, 용어 "인간 단클론성 항체"는 단일 결합 특이성을 나타내고 인간 점라인 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 및 선택적 불변 영역을 가진 항체 또는 항체 조성물을 말한다. 하나의 구체예에서, 인간 단클론성 항체는 트랜스제닉 비-인간 동물, 예를 들어 불멸화 세포에 융합된 인간 중쇄 트랜스젠과 경쇄 트랜스젠을 포함하는 게놈을 가진, 트랜스제닉 마우스로부터 얻어진 B 세포를 포함하는 하이브리도마에 의해 생성된다.
용어 "재조합 인간 항체"는 (a) 인간 면역 글로불린 유전자에 대해 트랜스젠이거나 트랜스염색체성(transchromosomal)인 동물(예를 들어 마우스)로부터 분리된 항체 또는 그로부터 제조된 하이브리도마, (b) 항체를 발현하도록 형질전환된 숙주 세포로부터, 예를 들어 트랜스펙토마(transfectoma)로부터 분리된 항체, (c) 재조합, 조합 인간 항체 라이브러리로부터 분리된 항체, 및 (d) 다른 DNA 서열에 대한 인간 면역글로불린 유전자 서열을 스플라이싱을 수반하는 임의의 다른 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 분리된 항체와 같은, 재조합 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 분리된 모든 인간 항체를 포함한다. 이러한 재조합 인간 항체는 점라인 유전자에 의해 암호화되지만, 예를 들어 항체 성숙화 동안 발생하는 후속 재배열 및 돌연변이를 포함하는 특정한 인간 점라인 면역글로불린 서열을 이용하는 가변 및 불변 영역을 포함한다. 당업계에 공지된 대로(예를 들어 Lonberg (2005) Nature Biotech. 23(9): 1117-1125 참고), 가변 영역은 외래 항원에 대해 특이적인 항체를 형성하도록 재배열한 다양한 유전자에 의해 암호화된, 항원 결합 도메인을 함유한다. 재배열에 더하여, 가변 영역은 외래 항원에 대한 항체의 친화성을 증가시키기 위해 다수의 단일 아미노산 변화(체세포 돌연변이 또는 초돌연변이라고 한다)에 의해 더 변형될 수 있다. 불변 영역은 항원에 대한 추가의 반응(즉 이소타입 스위치)에서 변할 것이다. 따라서, 항원에 반응하여 경쇄 및 중쇄 면역글로불린 폴리펩타이드를 암호화하는 재배열되고 체세포 돌연변이된 핵산 분자는 원래 핵산 분자와 서열 동일성을 가질 수 없지만, 실질적으로 동일하거나 유사할 것이다(즉 적어도 80% 동일성을 가진다).
용어 "인간 항체(HuMAb)"는 프레임워크와 CDR 영역이 둘 다 인간 점라인 면역글로불린 서열로부터 유래된 가변 영역을 가진 항체를 말한다. 또한, 이 항체가 불변 영역을 함유한다면, 불변 영역 역시 인간 점라인 면역글로불린 서열로부터 유래된다. 본 명세서에 개시된 항체는 인간 점라인 면역글로불린 서열(예를 들어 시험관내 무작위 또는 부위-특정 돌연변이유발에 의해 또는 생체내 체세포 돌연변이에 의해 도입된 돌연변이)에 의해 암호화되지 않는 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 그러나, 본 명세서에 개시된 "인간 항체"는 마우스와 같은 다른 포유류 종의 점라인으로부터 유래된 CDR 서열이 인간 프레임워크 서열에 접목된 항체는 포함하지 않는다. 용어 "인간 항체"와 "완전한 인간 항체"는 동의어로서 사용된다.
용어 "인간화된 항체"는 비-인간 항체의 CDR 도메인 밖의 아미노산의 일부, 대부분 또는 전부가 인간 면역글로불린으로부터 유래된 상응하는 아미노산으로 치환된 항체를 말한다. 항체의 인간화된 형태의 하나의 구체예에서, CDR 도메인 밖의 아미노산의 일부, 대부분 또는 전부가 인간 면역글로불린으로부터의 아미노산으로 치환되고, 하나 이상의 CDR 영역 내의 아미노산의 일부, 대부분 또는 전부는 그대로 남는다. 아미노산의 작은 첨가, 결실, 삽입, 치환 또는 변형은 항체가 특정 항원에 결합하는 능력을 없애지 않는 한 허용된다. "인간화된 항체"는 원래 항체와 유사한 항원 특이성을 보유한다.
"키메라 항체"는 하나의 종으로부터 가변 영역이 유래되고 다른 종으로부터 불변 영역이 유래된 항체, 예컨대 마우스 항체로부터 가변 영역이 유래되고 인간 항체로부터 불변 영역이 유래된 항체를 말한다.
용어 "교차-반응한다"는 상이한 종들로부터의 FAM19A5에 결합하는 본 명세서에 개시된 항체의 능력을 말한다. 예를 들어, 인간 FAM19A5에 결합하는 본 명세서에 개시된 항체는 또한 다른 종의 FAM19A5(예를 들어 마우스 FAM19A5)에도 결합할 수 있다. 교차-반응성은 결합 분석(예를 들어 SPR, ELISA)에서 정제된 항원과의 특이적 반응성을 검출함으로써 또는 FAM19A5를 생리학적으로 발현하는 세포와의 결합, 또는 기능적 상호작용을 검출함으로써 측정될 수 있다. 교차-반응성을 결정하는 방법은 본 명세서에 개시된 표준 결합 분석, 예를 들어 BIACORE® 2000 SPR 기기(Biacore AB, Uppsala, Sweden)를 사용한 BIACORE® 표면 플라즈몬 공명(SPR) 분석, 또는 유세포계수 기술을 포함한다.
용어 "자연-발생"은 자연에서 발견될 수 있다는 것을 말한다. 예를 들어, 자연의 출처로부터 분리될 수 있고 실험실에서 인간에 의해 의도적으로 변형되지 않은 유기체에 존재하는 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드 서열은 자연-발생적이다.
용어 "폴리펩타이드"는 적어도 두 개의 연속 연결된 아미노산 잔기를 포함하는 사슬을 말하며, 사슬의 길이에는 상한은 없다. 단백질에서의 하나 이상의 아미노산 잔기는, 제한은 아니지만, 글리코실화, 포스포릴화 또는 이황화물 결합 형성과 같은 변형을 함유할 수 있다. "단백질"은 하나 이상의 폴리펩타이드를 포함할 수 있다.
"핵산 분자"는 DNA 분자 및 RNA 분자를 포함한다. 핵산 분자는 단일-가닥 또는 이중-가닥일 수 있고, cDNA일 수 있다.
용어 "벡터"는 그것이 연결된 다른 핵산을 수송할 수 있는 핵산 분자를 말한다. 한 가지 종류의 벡터는 "플라스미드"이고, 이것은 추가의 DNA 세그먼트가 리게이션될 수 있는 원형의 이중가닥 DNA 루프를 말한다. 다른 종류의 벡터는 추가의 DNA 세그먼트가 바이러스 게놈에 리게이션될 수 있는 바이러스 벡터이다. 특정한 벡터(예를 들어 박테리아 복제 기원을 가진 박테리아 벡터 및 에피솜 포유류 벡터)는 이들이 도입된 숙주 세포에서 자가 복제할 수 있다. 다른 벡터(예를 들어 비-에피솜 포유류 벡터)는 숙주 세포에 도입시 숙주 세포의 게놈에 통합될 수 있고, 이로써 숙주 게놈과 함께 복제된다. 또한, 특정한 벡터는 이들이 작동 가능하게 연결된 유전자의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 본 명세서에서 "재조합 발현 벡터"(또는 간단히 "발현 벡터")로 언급된다. 일반적으로, 재조합 DNA 기술에서 유용성을 가진 발현 벡터는 주로 플라스미드의 형태이다. 본 명세서에서, "플라스미드"와 "벡터"는 플라스미드가 벡터의 가장 흔히 사용되는 형태기 때문에 상호 교환하여 사용될 수 있다. 그러나, 바이러스(예를 들어 복제 결합 레트로바이러스, 아데노바이러스 및 아데노-관련 바이러스) 벡터와 같은 다른 형태의 발현 벡터도 또한 포함되며, 이들은 동등한 기능을 수행한다.
용어 "재조합 숙주 세포"(또는 간단히 "숙주 세포")는 세포에 자연적으로 존재하지 않는 핵산을 포함하는 세포를 말하며, 재조합 발현 벡터가 도입된 세포일 수 있다. 이러한 용어는 특정한 해당 세포뿐만 아니라 이러한 세포의 자손도 언급한다는 것이 이해되어야 한다. 돌연변이나 환경적 영향으로 인해 이어진 세대들에서는 특정한 변형이 일어날 수 있기 때문에, 이러한 자손은 실제로 모 세포와 동일할 수 없지만 그래도 여전히 용어 "숙주 세포"의 범위 내에 포함된다.
용어 "연결된"은 둘 이상의 분자의 회합을 말한다. 연결은 공유 연결 또는 비-공유 연결일 수 있다. 연결은 또한 유전자 연결(즉 재조합적으로 융합됨)일 수 있다. 이러한 연결은 화학적 콘쥬게이션 및 재조합 단백질 생성과 같은 당업계에 공지된 여러 가지 기술을 사용하여 달성될 수 있다.
용어 "치료적 유효량"은 단독으로 또는 다른 치료제와 조합하여, 대상의 질환 또는 장애를 "치료"하기에 효과적인 또는 질환 또는 장애(예를 들어 녹내장)의 위험, 잠재성, 가능성 또는 발생을 감소시키기에 효과적인, 약물의 양을 말한다. "치료적 유효량"은 질환 또는 장애(예를 들어 녹내장)를 갖고 있거나 가질 위험이 있는 대상에게 일부 개선이나 이익을 제공하는 약물 또는 치료제의 양을 포함한다. 따라서, "치료적 유효"량은 질환 또는 장애의 위험, 잠재성, 가능성 또는 발생을 감소시키거나 또는 일부 완화, 경감시키고 및/또는 적어도 하나의 지표(예를 들어 녹내장과 관련된 증가된 염증)를 감소시키고, 및/또는 질환 또는 장애(예를 들어 녹내장)의 적어도 하나의 임상 증상을 감소시키는 양이다.
II. 녹내장의 치료 방법
FAM19A5에 대한 길항제를 대상에게 투여하는 단계를 포함하는, 대상의 녹내장을 치료하는 방법이 개시된다. 하나의 구체예에서, 길항제는 FAM19A5 단백질에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 이의 항원-결합 부분("항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분"), 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 또는 이의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터이다. 하나의 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 FAM19A5 단백질에 결합하여 FAM19A5 활성을 감소시킨다. 하나의 구체예에서, 감소된 FAM19A5 활성은 녹내장과 관련된 염증을 감소, 완화, 또는 저해한다.
항-FAM19A5 항체는 녹내장 환자에서 관찰된 망막 신경절 세포의 상실을 감소 및/또는 방지할 수 있다(실시예 8 참고). 녹내장에 대해 현재 이용할 수 있는 대부분의 치료 옵션과 달리, 하나의 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 상승된 안내 압력을 감소시키는데 대한 효과는 없을 수 있다(실시예 6 참고). 대신, 항-FAM19A5 항체는 미세아교세포 세포의 활성화를 조절함으로써 망막의 시신경 머리 주변에서 염증을 억제하는 것으로 드러났다(실시예 9 참고). 따라서, 본 명세서에 개시된 방법은 시신경 머리 내에서의 망막 신경절 세포의 상실을 감소, 완화 또는 예방함으로써 녹내장을 치료할 수 있다. 특정한 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 망막 내에서의 미세아교세포 세포의 활성을 조절하고, 이로써 대상에서 생성된 염증 매개인자의 수준을 감소시킴으로써 녹내장을 치료한다.
하나의 구체예에서, 녹내장은 개방각 녹내장, 폐쇄각 녹내장, 정상 안압 녹내장("NTG"), 선천성 녹내장, 이차성 녹내장, 색소성 녹내장, 의사박리성 녹내장, 외상성 녹내장, 신생혈관성 녹내장, 홍채 각막 내피 증후군, 및 포도막염 녹내장으로 구성되는 군으로부터 선택된다. 하나의 구체예에서, 녹내장은 시신경 손상, 망막 신경절 세포("RGC") 상실, 높은 안내 압력("IOP"), 손상된 혈액-망막 장벽, 및/또는 대상의 망막 및/또는 시신경 내에서의 미세아교세포 활성 수준의 증가와 관련된다.
하나의 구체예에서, 본 방법에서 치료되는 대상은 토끼 또는 마우스와 같은 비-인간 동물이다. 하나의 구체예에서, 본 방법에서 치료되는 대상은 인간이다.
일부 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 이중특이적 분자 또는 면역콘쥬게이트, 또는 그것의 조성물은 정맥내, 경구, 비경구, 척추강내, 뇌실내, 폐, 근육내, 피하, 유리체내, 또는 심실내 경로로 투여된다.
예를 들어 본 명세서에 개시된 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 투여에 대해, 투약량은 약 0.0001 내지 100 mg/kg의 범위이다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 또는 이의 조성물은 녹내장을 치료하기 위한 하나 이상의 추가의 제제(예를 들어 (i) 프로스타글란딘 유사체, 예컨대 XALATAN®, LUMIGAN®, TRAVATAN Z®; (ii) 알파 작동제, 예컨대 ALPHAGAN® P 및 IOPIDINE®; 및 (iii) 탄산무수화효소 저해제, 예컨대 TRUSOPT® 및 AZOPT®)와 조합하여 투여될 수 있다. 하나 이상의 추가의 치료 약물의 용량 및 투여는 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 각 약물의 제품 라벨에 지시된다.
III. FAM19A5 길항제
한 구체예에서, FAM19A5 길항제는 안티센스 올리고뉴클레오타이드, siRNA, shRNA, miRNA, dsRNA, 앱타머, FAM19A5를 특이적으로 표적화하는 PNA(펩타이드 핵산), 또는 이들을 포함하는 벡터이다. 다른 구체예에서, FAM19A5 길항제는 FAM19A5 단백질에 특이적으로 결합하는 항체, 또는 이의 항원-결합 부분, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 또는 이들의 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터이다.
본 명세서에 개시된 방법에 유용한 항체는 특정한 기능적 특성을 특징으로 하는 단클론성 항체를 포함한다. 예를 들어, 항체는 가용성 FAM19A5 및 막 결합 FAM19A5를 포함하는 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합한다. 가용성 및/또는 막 결합 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는 것에 더하여, 본 명세서에 개시된 항체는 또한 (a) 10 nM 이하의 KD로 가용성 인간 FAM19A5에 결합하거나; (b) 1 nM 이하의 KD로 막 결합 인간 FAM19A5에 결합하거나; 또는 (a)와 (b)를 둘 다 나타낸다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은, 예를 들어 10-7 M 이하, 10-8 M 이하, 10-9 M(1 nM) 이하, 10-10 M(0.1 nM) 이하, 10-11 M 이하, 또는 10-12 M(1 pM) 이하, 예를 들어 10-12 M 내지 10-7 M, 10-11 M 내지 10-7 M, 10-10 M 내지 10-7 M, 또는 10-9 M 내지 10-7 M, 예를 들어 10-12 M, 5 X 10-12 M, 10-11 M, 5 X 10-11 M, 10-10 M, 5 X 10-10 M, 10-9 M, 5 X 10-9 M, 10-8 M, 5 X 10-8 M, 10-7 M, 또는 5 X 10-7 M의 KD의 높은 친화성으로 가용성 인간 FAM19A5 또는 막 결합 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합한다. 다양한 종의 인간 FAM19A5에 대한 항체의 결합 능력을 평가하는 표준 분석은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어 ELISA, 웨스턴 블롯, 및 RIA를 포함한다. 적합한 분석들이 실시예에 상세히 설명된다. 항체의 결합 동력학(예를 들어 결합 친화성)이 또한 ELISA, BIACORE™ 분석 또는 KINEXA®과 같은 당업계에 공지된 표준 분석에 의해 평가될 수 있다. FAM19A5의 기능적 특성(예를 들어 리간드 결합)에 대한 항체의 효과를 평가하는 분석이 아래 및 실시예에 더 상세히 설명된다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은, 예를 들어 ELISA에 의해 결정되었을 때, 10-7 M 이하, 10-8 M(10 nM) 이하, 10-9 M(1 nM) 이하, 10-10 M 이하, 10-12 M 내지 10-7 M, 10-11 M 내지 10-7 M, 10-10 M 내지 10-7 M, 10-9 M 내지 10-7 M, 또는 10-8 M 내지 10-7 M의 KD로 가용성 인간 FAM19A5와 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 10 nM 이하, 예를 들어 0.1 내지 10 nM, 0.1 내지 5 nM, 0.1 내지 1 nM, 0.5 내지 10 nM, 0.5 내지 5 nM, 0.5 내지 1 nM, 1 내지 10 nM, 1 내지 5 nM, 또는 5 내지 10 nM의 KD로 가용성 FAM19A5와 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 ELISA에 의해 결정되었을 때, 약 1 pM, 2 pM, 3 pM, 4 pM, 5 pM, 6 pM, 7 pM, 8 pM, 9 pM, 10 pM, 20 pM, 30 pM, 40 pM, 50 pM, 60 pM, 70 pM, 80 pM, 90 pM, 100 pM, 200 pM, 300 pM, 400 pM, 500 pM, 600 pM, 700 pM, 800 pM, 또는 900 pM, 또는 약 1 nM, 2 nM, 3 nM, 4 nM, 5 nM, 6 nM, 7 nM, 8 nM, 또는 9 nM, 또는 약 10 nM, 20 nM, 30 nM, 40 nM, 50 nM, 60 nM, 70 nM, 80 nM, 또는 90 nM의 KD로 가용성 인간 FAM19A5와 특이적으로 결합한다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은, 예를 들어 ELISA에 의해 결정되었을 때, 10-7 M 이하, 10-8 M(10 nM) 이하, 10-9 M(1 nM) 이하, 10-10 M 이하, 10-12 M 내지 10-7 M, 10-11 M 내지 10-7 M, 10-10 M 내지 10-7 M, 10-9 M 내지 10-7 M, 또는 10-8 M 내지 10-7 M의 KD로 막 결합 인간 FAM19A5와 결합한다. 특정 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은, ELISA에 의해 결정되었을 때, 10 nM 이하, 예를 들어 0.1 내지 10 nM, 0.1 내지 5 nM, 0.1 내지 1 nM, 0.5 내지 10 nM, 0.5 내지 5 nM, 0.5 내지 1 nM, 1 내지 10 nM, 1 내지 5 nM, 또는 5 내지 10 nM의 KD로 막 결합 인간 FAM19A5와 특이적으로 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 ELISA에 의해 결정되었을 때, 약 1 pM, 2 pM, 3 pM, 4 pM, 5 pM, 6 pM, 7 pM, 8 pM, 9 pM, 10 pM, 20 pM, 30 pM, 40 pM, 50 pM, 60 pM, 70 pM, 80 pM, 90 pM, 100 pM, 200 pM, 300 pM, 400 pM, 500 pM, 600 pM, 700 pM, 800 pM, 또는 900 pM, 또는 약 1 nM, 2 nM, 3 nM, 4 nM, 5 nM, 6 nM, 7 nM, 8 nM, 또는 9 nM, 또는 약 10 nM, 20 nM, 30 nM, 40 nM, 50 nM, 60 nM, 70 nM, 80 nM, 또는 90 nM의 KD로 막 결합 인간 FAM19A5와 결합한다.
특정 구체예에서, 본 명세서에 개시된 방법에 유용한 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 인간 FAM19A5 에피토프와의 결합에 대해 본 명세서에 개시된 CDR 또는 가변 영역을 포함하는 항-FAM19A5 항체와 교차-경합한다 (또는 결합을 저해한다).
특정 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3과 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 기준 항체의 결합을 저해하며, 여기서 (i) 기준 항체의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12 및 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하고, 기준 항체의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24 및 SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하거나; (ii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하거나; (iii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 30의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하거나; (iv) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 33의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하거나; (v) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 89의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 90의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 91의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 92의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 93의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 94의 아미노산 서열을 포함하거나; (vi) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 95의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 96의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 97의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 98의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 99의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 100의 아미노산 서열을 포함하거나; (vii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 101의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 102의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 103의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 104의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 105의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열을 포함하거나; (viii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 107의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 108의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 109의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 110의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 111의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 112의 아미노산 서열을 포함하거나; (ix) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 113의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 114의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 115의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 116의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 117의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 118의 아미노산 서열을 포함하거나; (x) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 119의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 120의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 121의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 122의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 123의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 124의 아미노산 서열을 포함하거나; (xi) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 125의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 126의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 127의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 128의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 129의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 130의 아미노산 서열을 포함하거나; (xii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 131의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 132의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 133의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 134의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 135의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 136의 아미노산 서열을 포함하거나; (xiii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 137의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 138의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 139의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 140의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 141의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 142의 아미노산 서열을 포함하거나; (xiv) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 143의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 144의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 145의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 146의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 147의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 148의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 (xv) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 149의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 150의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 151의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 152의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 153의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 154의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 기준 항체는 (a) SEQ ID NOs: 35 및 39를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (b) SEQ ID NOs: 36 및 40을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (c) SEQ ID NOs: 37 및 41을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (d) SEQ ID NOs: 38 및 42를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (e) SEQ ID NOs: 155 및 166을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (f) SEQ ID NOs: 156 및 167을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (g) SEQ ID NOs: 157 및 168을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (h) SEQ ID NOs: 158 및 169를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (i) SEQ ID NOs: 159 및 170을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (j) SEQ ID NOs: 160 및 171을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (k) SEQ ID NOs: 161 및 172를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (l) SEQ ID NOs: 162 및 173을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (m) SEQ ID NOs: 163 및 174를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (n) SEQ ID NOs: 164 및 175를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; 또는 (o) SEQ ID NOs: 165 및 176을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
특정 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 이러한 기준 항체와 인간 FAM19A5의 결합을 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 또는 90% 또는 100%까지 저해한다. 경합 항체는 동일한 에피토프, 중첩 에피토프 또는 인접 에피토프(예를 들어 입체 장해에 의해 증명됨)와 결합한다. 두 항체가 표적과의 결합에 대해 서로 경합하는지의 여부는 RIA 및 EIA와 같은 당업계에 공지된 경합 실험을 사용하여 결정될 수 있다.
특정 구체예에서, 항-FAM19A5 항체또는 이의 항원 결합 부분은 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3과 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하는 본 명세서에 개시된 기준 항체와 동일한 FAM19A5 에피토프에 결합하며, 여기서 (i) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하거나; (ii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하거나; (iii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 30의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하거나; (iv) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 33의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하거나; (v) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 89의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 90의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 91의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 92의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 93의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 94의 아미노산 서열을 포함하거나; (vi) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 95의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 96의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 97의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 98의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 99의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 100의 아미노산 서열을 포함하거나; (vii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 101의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 102의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 103의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 104의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 105의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 106의 아미노산 서열을 포함하거나; (viii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 107의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 108의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 109의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 110의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 111의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 112의 아미노산 서열을 포함하거나; (ix) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 113의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 114의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 115의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 116의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 117의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 118의 아미노산 서열을 포함하거나; (x) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 119의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 120의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 121의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 122의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 123의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 124의 아미노산 서열을 포함하거나; (xi) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 125의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 126의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 127의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 128의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 129의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 130의 아미노산 서열을 포함하거나; (xii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 131의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 132의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 133의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 134의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 135의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 136의 아미노산 서열을 포함하거나; (xiii) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 137의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 138의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 139의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 140의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 141의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 142의 아미노산 서열을 포함하거나; (xiv) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 143의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 144의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 145의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 146의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 147의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 148의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 (xv) 중쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 149의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 150의 아미노산 서열을 포함하고, 중쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 151의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 CDR1은 SEQ ID NO: 152의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR2는 SEQ ID NO: 153의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 CDR3은 SEQ ID NO: 154의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 기준 항체는 (a) SEQ ID NOs: 35 및 39를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (b) SEQ ID NOs: 36 및 40을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (c) SEQ ID NOs: 37 및 41을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (d) SEQ ID NOs: 38 및 42를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (e) SEQ ID NOs: 155 및 166을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (f) SEQ ID NOs: 156 및 167을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (g) SEQ ID NOs: 157 및 168을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (h) SEQ ID NOs: 158 및 169를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (i) SEQ ID NOs: 159 및 170을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (j) SEQ ID NOs: 160 및 171을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (k) SEQ ID NOs: 161 및 172를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (l) SEQ ID NOs: 162 및 173을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (m) SEQ ID NOs: 163 및 174를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; (n) SEQ ID NOs: 164 및 175를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; 또는 (o) SEQ ID NOs: 165 및 176을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열을 포함한다.
두 항체가 동일한 에피토프에 결합하는지의 여부를 결정하는 기술은, 예를 들어 에피토프 맵핑 방법, 예컨대 에피토프의 원자 분해능을 제공하는 항원:항체 복합체 결정의 엑스선 분석 및 수소/중수소 교환 질량분광법(HDX-MS), 항체와 항원 단편 또는 항원의 돌연변이된 변이체의 결합을 모니터링하는 방법(여기서 항원 서열 내에서 아미노산 잔기의 변형으로 인한 결합은 손실이 주로 에피토프 성분의 표시로서 간주됨), 에피토프 맵핑을 위한 컴퓨터 조합 방법을 포함한다.
본 명세서에 개시된 방법에 유용한 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은, 예를 들어 항체와 인간 FAM19A5의 단편의 결합에 의해 결정되었을 때, 성숙한 인간 FAM19A5의 적어도 하나의 에피토프와 결합할 수 있다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 TLDRDSSQPRRTIARQTARC(SEQ ID NO: 6 또는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 잔기 42 내지 61)의 아미노산 서열 내에 위치된 단편, 예를 들어 SEQ ID NO: 6의 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 아미노산을 가진 에피토프와 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 SEQ ID NO: 2의 아미노산 잔기 46 내지 51(즉, DSSQPR), 예를 들어 아미노산 잔기 46, 50, 및 52(즉, D---P-R), 예를 들어 아미노산 잔기 46, 47, 48, 및 50(즉, DSS-P)에 해당하는 하나 이상의 아미노산에서 SEQ ID NO: 6에 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 CDMLPCLEGEGCDLLINRSG(SEQ ID NO: 9 또는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 잔기 90 내지 109)의 아미노산 서열 내에 위치된 단편, 예를 들어 SEQ ID NO: 9의 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 아미노산을 가진 에피토프와 결합한다. 특정 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 SEQ ID NO: 4의 하나 이상의 아미노산 잔기 99 내지 107(즉, EGCDLLINR), 예를 들어 아미노산 잔기 102, 103, 105, 및 107(즉, DL-I-R), 예를 들어 아미노산 잔기 99, 100, 102, 103, 105, 및 107(즉, EG-DL-I-R), 예를 들어 아미노산 잔기 99, 100, 및 107(즉, EG------R)에서 SEQ ID NO: 9에 결합한다.
일부 구체예에서, 적어도 하나의 에피토프는 SEQ ID NO: 6과 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 가진다. 일부 구체예에서, 적어도 하나의 에피토프는 SEQ ID NO: 9와 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 가진다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은, SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10, 또는 SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10의 아미노산 서열 내에 위치된 단편, 예를 들어 SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 아미노산을 가진 에피토프인, 인간 FAM19A5에만 결합한다.
일부 구체예에서, 본 발명의 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 SEQ ID NO: 6 또는 이의 단편과 자생 입체형태(즉 비변성) 상태로 결합한다. 일부 구체예에서, 본 발명의 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 SEQ ID NO: 9 또는 이의 단편과 자생 입체형태(즉 비변성) 상태로 결합한다. 다른 구체예에서, 적어도 하나의 에피토프는 SEQ ID NO: 5와 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100% 동일한 아미노산 서열을 가진다. 에피토프는 SEQ ID NO: 10과 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 적어도 약 100% 동일한 아미노산 서열을 가진다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 글리코실화 및 비글리코실화 인간 FAM19A5와 모두 결합한다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 하나 이상의 추가의 FAM19A5 에피토프와 더 결합한다. 따라서, 특정한 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 SEQ ID NO: 6의 에피토프와 추가의 에피토프 또는 SEQ ID NO: 9의 에피토프와 추가의 에피토프에 결합한다. 다른 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 SEQ ID NO: 5의 에피토프, SEQ ID NO: 9의 에피토프, 및 추가의 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 SEQ ID NO: 6의 에피토프, SEQ ID NO: 10의 에피토프, 및 추가의 에피토프에 결합한다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 추가의 FAM19A5 에피토프는 QLAAGTCEIVTLDR(SEQ ID NO: 5, 에피토프 F1), TLDRDSSQPRRTIARQTARC(SEQ ID NO: 6, 에피토프 F2), TARCACRKGQIAGTTRARPA(SEQ ID NO: 7, 에피토프 F3), ARPACVDARIIKTKQWCDML(SEQ ID NO: 8, 에피토프 F4), CDMLPCLEGEGCDLLINRSG(SEQ ID NO: 9, 에피토프 F5), 또는 NRSGWTCTQPGGRIKTTTVS(SEQ ID NO: 10, 에피토프 F6), 또는 SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, 또는 이들의 임의의 조합의 아미노산 서열 내에 위치된 단편으로부터 선택된다. SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, 또는 SEQ ID NO: 10의 아미노산 서열 내에 위치된 단편은 SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, 또는 SEQ ID NO: 10 중 어느 것의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 아미노산을 가진 단편을 포함한다. 일부 구체예에서, 하나 이상의 추가의 FAM19A5 에피토프는 SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10, 또는 SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10의 아미노산 서열 내에 위치된 단편, 예를 들어 SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10의 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20개 아미노산을 가진 단편, 또는 이들의 임의의 조합으로부터 선택된다. 일부 구체예에서, 본 발명의 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 하나 이상의 추가의 에피토프에 자생 입체형태(즉 비변성) 상태로 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 하나 이상의 추가의 FAM19A5 에피토프의 글리코실화 및 비글리코실화 형태에 모두 결합한다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 EP2, EP4, 및/또는 EP8로서 확인된 적어도 하나의 FAM19A5 에피토프에 결합하며, 여기서 EP2는 아미노산 DSSQP(SEQ ID NO: 66)을 포함하고, EP4는 아미노산 ARCACRK(SEQ ID NO: 68)을 포함하고, EP8은 아미노산 TCTQPGGR(SEQ ID NO: 72)을 포함한다. 일부 구체예에서, 적어도 하나의 에피토프는 EP2, EP4, 또는 EP8과 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 가진다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 단지 EP2에만 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 EP4와 EP8에 결합한다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 EP6, EP7, 또는 EP8로서 확인된 적어도 하나의 FAM19A5 에피토프에 결합하며, 여기서 EP6은 아미노산 KTKQWCDML(SEQ ID NO: 70)을 포함하고, EP7은 아미노산 GCDLLINR(SEQ ID NO: 71)을 포함하고, EP8은 아미노산 TCTQPGGR(SEQ ID NO: 72)을 포함한다. 일부 구체예에서, 적어도 하나의 에피토프는 EP6, EP7, 또는 EP8과 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 가진다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 단지 EP6, EP7, 또는 EP8에만 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 EP6, EP7, 및 EP8에 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 EP7 및 EP8에 결합한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 EP7에 결합한다.
일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원 결합 부분은 SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, 및 이들의 임의의 조합으로 구성되는 군으로부터 선택된 하나 이상의 FAM19A5 에피토프에 결합한다.
특정 구체예에서, 예를 들어 면역분석(예를 들어 ELISA), 표면 플라즈몬 공명, 또는 역학적 배제 분석에 의해 측정되었을 때, FAM19A 패밀리의 다른 단백질보다 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 더 높은 친화성으로 FAM19A5(예를 들어 인간 FAM19A5)와 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분이 개시된다. 특정한 구체예에서, 예를 들어 면역분석에 의해 측정되었을 때, FAM19A 패밀리의 다른 단백질과 교차 반응성 없이 FAM19A5(예를 들어 인간 FAM19A5)에 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 부분이 개시된다.
특정 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 자생 항체가 아니거나 또는 자연 발생 항체가 아니다. 예를 들어, 항-FAM19A5 항체는, 예컨대 더 많은, 더 적은, 또는 상이한 타입의 번역 후 변형(post-translational modification)을 가짐으로써, 자연 발생인 항체의 것과는 상이한 번역 후 변형을 가진다.
IV. 예시적인 항-FAM19A5 항체
본 명세서에 개시된 방법에 사용될 수 있는 특정한 항체는 본 명세서에 개시된 CDR 및/또는 가변 영역 서열을 가진 항체, 예를 들어 단클론성 항체, 뿐만 아니라 이들의 가변 영역 또는 CDR 서열과 적어도 80% 동일성(예를 들어 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 또는 적어도 99% 동일성)을 가진 항체이다. 본 발명의 상이한 항-FAM19A5 항체의 VH 및 VL 아미노산 서열이 각각 표 4 및 5에 제공된다.
가변 중쇄 CDR 아미노산 서열(Kabat 시스템에 따름)
항체 VH-CDR1 VH-CDR2 VH-CDR3
항-FAM19A5
("2-13")		 SHGMF
(SEQ ID NO: 11)		 EITNDGSGTNYGSAVKG
(SEQ ID NO: 12)		 STYECPGGFSCWGDTGQIDA
(SEQ ID NO: 13)
항-FAM19A5
("3-2")		 SFNMF
(SEQ ID NO: 14)		 QISSSGSSTNYAPAVRG
(SEQ ID NO: 15)		 SSYDCPYGHCSSGVDSAGEIDA (SEQ ID NO: 16)
항-FAM19A5
("1-65")		 SYQMG
(SEQ ID NO: 17)		 VINKSGSDTS
(SEQ ID NO: 18)		 GSASYITAATIDA
(SEQ ID NO: 19)
항-FAM19A5
("1-28")		 GFDFSDYG
(SEQ ID NO: 20)		 IRSDGSNP
(SEQ ID NO: 21)		 AKDGNGYCALDAYRSGGYSCGVYPGSIDA (SEQ ID NO: 22)
항-FAM19A5
("P2-C12")		 TYAVT
(SEQ ID NO: 89)		 YINWRGGTSYANWAKG
(SEQ ID NO: 90)		 DASSGAAFGSYGMDP
(SEQ ID NO: 91)
항-FAM19A5
("13B4")		 SSNWWS
(SEQ ID NO: 95)		 EIYHGGTTNYNPSLKG
(SEQ ID NO: 96)		 WQLVGGLDV
(SEQ ID NO: 97)
항-FAM19A5
("13F7")		 GYSWT
(SEQ ID NO: 101)		 EISHFGSANYNPSLKS
(SEQ ID NO: 102)		 ALRGTYSRFYYGMDV
(SEQ ID NO: 103)
항-FAM19A5
("15A9")		 SYYWS
(SEQ ID NO: 107)		 YIYPSGSTNYNPSLKS
(SEQ ID NO: 108)		 VNPFGYYYAMDV
(SEQ ID NO: 109)
항-FAM19A5
("P1-A03")		 SDYMS
(SEQ ID NO: 113)		 IIYPSTTTYYASWAKG
(SEQ ID NO: 114)		 GSNWSSGMNL
(SEQ ID NO: 115)
항-FAM19A5
("P1-A08")		 TYYMS
(SEQ ID NO: 119)		 IVYPSGTTYYANWAKG
(SEQ ID NO: 120)		 GDSFGYGL
(SEQ ID NO: 121)
항-FAM19A5
("P1-F02")		 NYYMG
(SEQ ID NO: 125)		 IIYASGSTYYASWAKG
(SEQ ID NO: 126)		 IDIGVGDYGWAYDRLDL
(SEQ ID NO: 127)
항-FAM19A5
("P2-A01")		 GYYMS
(SEQ ID NO: 131)		 IIYPSGSTDYASWAKG
(SEQ ID NO: 132)		 VAGYVGYGYETFFDI
(SEQ ID NO: 133)
항-FAM19A5
("P2-A03")		 NYDMS
(SEQ ID NO: 137)		 FMDTDGSAYYATWAKG
(SEQ ID NO: 138)		 RGSSYYGGIDI
(SEQ ID NO: 139)
항-FAM19A5
("P2-F07")		 SYYMN
(SEQ ID NO: 143)		 IIYPSGTTYYAGWAKG
(SEQ ID NO: 144)		 TVSGYFDI
(SEQ ID NO: 145)
항-FAM19A5
("P2-F11")		 SYGVS
(SEQ ID NO: 149)		 YIANNYNPHYASWAKG
(SEQ ID NO: 150)		 DNYGMDP
(SEQ ID NO: 151)
가변 경쇄 CDR 아미노산 서열(Kabat 시스템에 따름)
항체 VL-CDR1 VL-CDR2 VL-CDR3
항-FAM19A5
("2-13")		 SGGSYSYG
(SEQ ID NO: 23)		 WDDERPS
(SEQ ID NO: 24)		 GTEDISGTAGV
(SEQ ID NO: 25)
항-FAM19A5
("3-2")		 SGGGSYAGSYYYG
(SEQ ID NO: 26)		 ESNKRPS
(SEQ ID NO: 27)		 GSWDSSNGGI
(SEQ ID NO: 28)
항-FAM19A5
("1-65")		 SGGGSSGYGYG
(SEQ ID NO: 29)		 WNDKRPS
(SEQ ID NO: 30)		 GNDDYSSDSGYVGV
(SEQ ID NO: 31)
항-FAM19A5
("1-28")		 GYGYG
(SEQ ID NO: 32)		 QND
(SEQ ID NO: 33)		 GSEDSSTLAGI
(SEQ ID NO: 34)
항-FAM19A5
("P2-C12")		 QASQSISSYLS
(SEQ ID NO: 92)		 EASKLAS
(SEQ ID NO: 93)		 QQGYSSTNVWNA
(SEQ ID NO: 94)
항-FAM19A5
("13B4")		 SGDKLGNVYAS
(SEQ ID NO: 98)		 QDNKRPS
(SEQ ID NO: 99)		 QAWDSSTAV
(SEQ ID NO: 100)
항-FAM19A5
("13F7")		 RSSQSLLHSNGYNYLD
(SEQ ID NO: 104)		 LGSNRAS
(SEQ ID NO: 105)		 MQARQTPLT
(SEQ ID NO: 106)
항-FAM19A5
("15A9")		 RASQSISTSLN
(SEQ ID NO: 110)		 GASTLQS
(SEQ ID NO: 111)		 QESASIPRT
(SEQ ID NO: 112)
항-FAM19A5
("P1-A03")		 LASEDIYSGIS
(SEQ ID NO: 116)		 GASNLES
(SEQ ID NO: 117)		 LGGYSYSSTGLT
(SEQ ID NO: 118)
항-FAM19A5
("P1-A08")		 TADTLSRSYAS
(SEQ ID NO: 122)		 RDTSRPS
(SEQ ID NO: 123)		 ATSDGSGSNYQYV
(SEQ ID NO: 124)
항-FAM19A5
("P1-F02")		 LASEDIYSGIS
(SEQ ID NO: 128		 GASNLES
(SEQ ID NO: 129)		 LGGYSYSSIT
(SEQ ID NO: 130)
항-FAM19A5
("P2-A01")		 LASEDIYSGIS
(SEQ ID NO: 134)		 GASNLES
(SEQ ID NO: 135)		 LGGVTYSSTGTHLT
(SEQ ID NO: 136)
항-FAM19A5
("P2-A03")		 QASQSIGGNLA
(SEQ ID NO: 140)		 RASTLAS
(SEQ ID NO: 141)		 QSPAYDPAAYVGNA
(SEQ ID NO: 142)
항-FAM19A5
("P2-F07")		 LASEDIYSALA
(SEQ ID NO: 146)		 GTSNLES
(SEQ ID NO: 147)		 QGYSSYPLT
(SEQ ID NO: 148)
항-FAM19A5
("P2-F11")		 QASQSVYNNKNLA
(SEQ ID NO: 152)		 AASTLAS
(SEQ ID NO: 153)		 QGEFSCSSADCNA
(SEQ ID NO: 154)
가변 중쇄 아미노산 서열
항체 VH 아미노산 서열 (SEQ ID NO)
항-FAM19A5
("2-13")		 AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKASGFTFSSHGMFWVRQTPGKGLEYVAEITNDGSGTNYGSAVKGRATISRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTGTYFCARSTYECPGGFSCWGDTGQIDAWGHGTEVIVSS
(SEQ ID NO: 35)
항-FAM19A5("3-2") AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKASGFTFSSFNMFWVRQAPGKGLEYVAQISSSGSSTNYAPAVRGRATISRDNGQSTVRLQLNNPGAEDTGTYYCAKSSYDCPYGHCSSGVDSAGEIDAWGHGTEVIVSS
(SEQ ID NO: 36)
항-FAM19A5
("1-65")		 AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKASGFTFSSYQMGWVRQAPGKGLEWVGVINKSGSDTSYGSAVKGRATISRDNGQSTVRLQLNNLRAEDTGTYFCAKGSASYITAATIDAWGHGTEVIVSS
(SEQ ID NO: 37)
항-FAM19A5
("1-28")		 AVTLDESGGGLQTPGGALSLVCKASGFDFSDYGMGWVRQAPGKGLEWVAAIRSDGSNPSYGSAVKGRATISKDNGRSTVRLQLNNLRAEDTATYYCAKDGNGYCALDAYRSGGYSCGVYPGSIDAWGHGTEVIVSS (SEQ ID NO:38)
항-FAM19A5
("P2-C12")		 QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSTYAVTWVRQAPGKGLEWIGYINWRGGTSYANWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSPTTEDTATYFCARDASSGAAFGSYGMDPWGPGTLVTVSS
(SEQ ID NO: 155)
항-FAM19A5
("13B4")		 QVQLQESGPGLVKPSGTLSLNCAVSGGSISSSNWWSWVRQPPGKGLEWIGEIYHGGTTNYNPSLKGRVTMSVDKTKNQFSLRLSSVTAVDTAVYYCARWQLVGGLDVWGQGTTVTVSS (SEQ ID NO: 156)
항-FAM19A5
("13F7")		 QVQLQEWGAGLLKPSETLSLTCAINAESFNGYSWTWIRQTPGKGLEWIGEISHFGSANYNPSLKSRATISADKSKNQFSLKLTSVTAVDTAVYYCARALRGTYSRFYYGMDVWGQGTTVTVSS
(SEQ ID NO: 157)
항-FAM19A5
("15A9")		 QVQLQESGPGLVKPSETLSLTCTVSGGSISSYYWSWIRQPPGKGLEWIGYIYPSGSTNYNPSLKSRVTISVDTSKNQFSLNLKSVTAVDTAVYYCARVNPFGYYYAMDVWGQGTTVTVSS
(SEQ ID NO: 158)
항-FAM19A5
("P1-A03")		 QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLSSDYMSWVRQAPGEGLEWIGIIYPSTTTYYASWAKGRFTISKTSSTTVELKMTSLTTEDTATYFCARGSNWSSGMNLWGPGTLVTVSS (SEQ ID NO: 159)
항-FAM19A5
("P1-A08")		 QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSTYYMSWVRQAPGKGLEWIGIVYPSGTTYYANWAKGRFTISTASTTVDLMITSPTTEDTATYFCARGDSFGYGLWGPGTLVTVSS (SEQ ID NO: 160)
항-FAM19A5
("P1-F02")		 QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSNYYMGWVRQAPGEGLEWIGIIYASGSTYYASWAKGRFTISKTSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARIDIGVGDYGWAYDRLDLWGQGTLVTVSS
(SEQ ID NO: 161)
항-FAM19A5
("P2-A01")		 QEQLVESGGRLVTPGTPLTLSCTASGFFLSGYYMSWVRQAPGKGLEWIGIIYPSGSTDYASWAKGRFTISKTSTTVDLKITTPTTEDTATYFCARVAGYVGYGYETFFDIWGPGTLVTVSL
(SEQ ID NO: 162)
항-FAM19A5
("P2-A03")		 QSVEESGGRLVTPGTPLTLTCTVSGFSLNNYDMSWVRQAPGKGLEYIGFMDTDGSAYYATWAKGRFTISRTSTTVDLKMTSPTTEDTATYFCARRGSSYYGGIDIWGPGTPVTVSL (SEQ ID NO: 163)
항-FAM19A5
("P2-F07")		 QSLEESGGRLVTPGTPLTLTCTASGFSLSSYYMNWVRQAPGKGLEWIGIIYPSGTTYYAGWAKGRFTISKTSTTVDLKITSPTSEDTATYFCARTVSGYFDIWGPGTLVTVSL (SEQ ID NO: 164)
항-FAM19A5
("P2-F11")		 QEQLVESGGRLVTPGTTLTLTCTVSGFSLSSYGVSWVRQAPGKGLEWIGYIANNYNPHYASWAKGRFTISKTSSTTVDLKMTSLTTEDTATYFCARDNYGMDPWGPGTLVTVSS (SEQ ID NO: 165)
가변 경쇄 아미노산 서열
항체 VL 아미노산 서열 (SEQ ID NO)
항-FAM19A5
("2-13")		 ALTQPSSVSANPGETVKITCSGGSYSYGWFQQKSPGSALVTVIYWDDERPSDIPSRFSGALSGSTNTLTITGVQADDEAVYFCGTEDISGTAGVFGAGTTLTVL (SEQ ID NO: 39)
항-FAM19A5
("3-2")		 ALTQPSSVSANPGETVKITCSGGGSYAGSYYYGWYQQKAPGSAPVTLIYESNKRPSDIPSRFSGSTSGSTATLTITGVQADDEAIYYCGSWDSSNGGIFGAGTTLTVL (SEQ ID NO: 40)
항-FAM19A5
("1-65")		 ALTQPSSVSANPGETVKITCSGGGSSGYGYGWYQQKSPSSAPLTVIYWNDKRPSDIPSRFSGSKSGSTHTLTITGVQAEDEAVYFCGNDDYSSDSGYVGVFGAGTTLTVL (SEQ ID NO: 41)
항-FAM19A5
("1-28")		 ALTQPSSVSANLEGTVEITCSGSGYGYGWYQQKSPGSAPVTVIYQNDKRPSDIPSRFSGSKSGSTGTLTITGVQVEDEAVYYCGSEDSSTLAGIFGAGTTLTVL (SEQ ID NO: 42)
항-FAM19A5
("P2-C12")		 ELDMTQTPSSVSAAVGGTVTIKCQASQSISSYLSWYQQKPGQPPKLLIYEASKLASGVPSRFSGSGYGTEFTLTISDLECADAATYYCQQGYSSTNVWNAFGGGTNVEIK (SEQ ID NO: 166)
항-FAM19A5
("13B4")		 SYELTQPLSVSVSPGQTASITCSGDKLGNVYASWYQQKPGQSPTLVIYQDNKRPSGIPERFSGSNSGKTATLTISGTQALDEADYYCQAWDSSTAVFGGGTKLTVL (SEQ ID NO: 167)
항-FAM19A5
("13F7")		 DIVMTQTPLSLPVAPGEPASISCRSSQSLLHSNGYNYLDWYVQKPGQPPQLLIYLGSNRASGVPDRFSGSGSGTDFTLKISRVEAEDVGVYYCMQARQTPLTFGGGTKVEIK (SEQ ID NO: 168)
항-FAM19A5
("15A9")		 DIQMTQSPSSLSASVGDRITISCRASQSISTSLNWYQQTPGKAPRLLIYGASTLQSGVPSRFSGGGSGTDFSLTITSLQPEDFATYYCQESASIPRTFGQGTKLDIK (SEQ ID NO: 169)
항-FAM19A5
("P1-A03")		 ELVMTQTPPSLSASVGETVRIRCLASEDIYSGISWYQQKPEKPPTLLISGASNLESGVPPRFSGSGSGTDYTLTIGGVQAEDAATYYCLGGYSYSSTGLTFGAGTNVEIK (SEQ ID NO: 170)
항-FAM19A5
("P1-A08")		 ELVLTQSPSVQVNLGQTVSLTCTADTLSRSYASWYQQKPGQAPVLLIYRDTSRPSGVPDRFSGSSSGNTATLTISGAQAGDEADYYCATSDGSGSNYQYVFGGGTQLTVT (SEQ ID NO: 171)
항-FAM19A5
("P1-F02")		 ELDMTQTPPSLSASVGETVRIRCLASEDIYSGISWYQQKPGKPPTLLIYGASNLESGVPPRFSGSGSGTDYTLTIGGVQAEDAATYYCLGGYSYSSITFGAGTNVEIK (SEQ ID NO: 172)
항-FAM19A5
("P2-A01")		 ELVMTQTPPSLSASVGETVRIRCLASEDIYSGISWYQQKPGKPPTLLIYGASNLESGVPPRFSGSGSGSDYTLTIGGVQAEDAATYYCLGGVTYSSTGTHLTFGAGTNVEIK (SEQ ID NO: 173)
항-FAM19A5
("P2-A03")		 ELDLTQTPASVSEPVGGTVTIKCQASQSIGGNLAWYQQKPGQPPKLLIYRASTLASGVPSRFKGSGSGTDFTLTISDLECADAATYYCQSPAYDPAAYVGNAFGGGTELEIL (SEQ ID NO: 174)
항-FAM19A5
("P2-F07")		 ELDLTQTPPSLSASVGGTVTINCLASEDIYSALAWYQQKPGKPPTLLISGTSNLESGVPPRFSGSGSGTDYTLTIGGVQAEDAATYFCQGYSSYPLTFGAGTNVEIK (SEQ ID NO: 175)
항-FAM19A5
("P2-F11")		 ELDLTQTPSSVSAAVGGTVTINCQASQSVYNNKNLAWYQQKPGQPPKLLIYAASTLASGVSSRFKGSGSGTQFTLTISDVQCDDAATYYCQGEFSCSSADCNAFGGGTELEIL (SEQ ID NO: 176)
중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 분리된 항-FAM19A5 항체, 또는 이의 항원-결합 부분이 개시되며, 여기서 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NOs: 35-38 또는 155-165의 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구체예에서, 분리된 항-FAM19A5 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 SEQ ID NOs: 35-38 또는 155-165로 구성되는 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역의 CDR을 포함한다.또한, 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 분리된 항-FAM19A5 항체, 또는 이의 항원-결합 부분이 개시되며, 여기서 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NOs: 39-42 또는 166-176의 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구체예에서, 분리된 항-FAM19A5 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 SEQ ID NOs: 39-42 또는 166-176로 구성되는 군으로부터 선택된 경쇄 가변 영역의 CDR을 포함한다.
특정 구체예에서, 분리된 항-FAM19A5 항체, 또는 이의 항원 결합 부분은 SEQ ID NOs: 35-38 또는 155-165로 구성되는 군으로부터 선택된 중쇄 가변 영역의 CDR 및 SEQ ID NOs: 39-42 또는 166-176로 구성되는 군으로부터 선택된 경쇄 가변 영역의 CDR을 포함한다.
또한, 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 분리된 항-FAM19A5 항체, 또는 이의 항원-결합 부분이 개시되며, 여기서 (i) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 35의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 39의 아미노산 서열을 포함하고; (ii) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 36의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 40의 아미노산 서열을 포함하고; (iii) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 37의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 41의 아미노산 서열을 포함하고; (iv) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 38의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 42의 아미노산 서열을 포함하고; (v) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 155의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 166의 아미노산 서열을 포함하고; (vi) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 156의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 167의 아미노산 서열을 포함하고; (vii) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 157의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 168의 아미노산 서열을 포함하고; (viii) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 158의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 169의 아미노산 서열을 포함하고; (ix) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 159의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 170의 아미노산 서열을 포함하고; (x) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 160의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 171의 아미노산 서열을 포함하고; (xi) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 161의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 172의 아미노산 서열을 포함하고; (xii) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 162의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 173의 아미노산 서열을 포함하고; (xiii) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 163의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 174의 아미노산 서열을 포함하고; (xiv) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 164의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 175의 아미노산 서열을 포함하고; 및 (xv) 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 165의 아미노산 서열을 포함하며, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NO: 176의 아미노산 서열을 포함한다.
중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 분리된 항-FAM19A5 항체, 또는 이의 항원-결합 부분이 개시되며, 여기서 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NOs: 35-38 또는 155-165에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
또한, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 분리된 항-FAM19A5 항체, 또는 이의 항원-결합 부분이 개시되며, 여기서 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NOs: 39-42 또는 166-176에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
또한, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는, 분리된 항-FAM19A5 항체, 또는 이의 항원-결합 부분이 개시되며, 여기서 중쇄 가변 영역은 SEQ ID NOs: 35-38 또는 155-165에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 SEQ ID NOs: 39-42 또는 166-176에 제시된 아미노산 서열과 적어도 약 80%, 적어도 약 85%, 적어도 약 90%, 적어도 약 95%, 적어도 약 96%, 적어도 약 97%, 적어도 약 98%, 적어도 약 99%, 또는 약 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다.
일부 구체예에서, 본 발명은 분리된 항-FAM19A5 항체, 또는 이의 항원-결합 부분을 제공하며, 이것은
(a) SEQ ID NOs: 35 및 39를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(b) SEQ ID NOs: 36 및 40을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(c) SEQ ID NOs: 37 및 41을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(d) SEQ ID NOs: 38 및 42를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(e) SEQ ID NOs: 155 및 166을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(f) SEQ ID NOs: 156 및 167을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(g) SEQ ID NOs: 157 및 168을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(h) SEQ ID NOs: 158 및 169를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(i) SEQ ID NOs: 159 및 170을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(j) SEQ ID NOs: 160 및 171을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(k) SEQ ID NOs: 161 및 172를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(l) SEQ ID NOs: 162 및 173을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(m) SEQ ID NOs: 163 및 174를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열;
(n) SEQ ID NOs: 164 및 175를 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열; 또는
(o) SEQ ID NOs: 165 및 176을 각각 포함하는 중쇄 및 경쇄 가변 영역 서열
을 포함한다.
특정 구체예에서, 본 발명의 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 (i) 2-13의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 2-13의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (ii) 3-2의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 3-2의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (iii) 1-65의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 1-65의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (iv) 1-28의 중쇄 CDR1, CDR2 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 1-28의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (v) P2-C12의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 P2-C12의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (vi) 13B4의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 13B4의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (vii) 13F7의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 13F7의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (viii) 15A9의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 15A9의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (ix) P1-A03의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 P1-A03의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (x) P1-A08의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 P1-A08의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (xi) P1-F02의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 P1-F02의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (xii) P2-A01의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 P2-A01의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (xiii) P2-A03의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 P2-A03의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; (xiv) P2-F07의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 P2-F07의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합; 또는 (xv) P2-F11의 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 조합, 및/또는 P2-F11의 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 본 명세서에 개시된 상이한 항-FAM19A5 항체에 대한 VH CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열이 표 2에 제공된다. 본 명세서에 개시된 상이한 항-FAM19A5 항체에 대한 VL CDR1, CDR2, 및 CDR3의 아미노산 서열은 표 3에 제공된다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는, 본 발명의 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은:
(a) SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;
(b) SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; 및/또는
(c) SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3
을 포함한다.
특정한 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 상기 VH CDR 중 1개, 2개, 또는 3개 전부를 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은:
(a) SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;
(b) SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는
(c) SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3
을 포함한다.
특정한 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 상기 VL CDR 중 1개, 2개, 또는 3개 전부를 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은:
(a) SEQ ID NO: 11의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;
(b) SEQ ID NO: 12의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2;
(c) SEQ ID NO: 13의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3
(d) SEQ ID NO: 23의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;
(e) SEQ ID NO: 24의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는
(f) SEQ ID NO: 25의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3
을 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는, 본 발명의 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은:
(a) SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;
(b) SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; 및/또는
(c) SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3
을 포함한다.
특정한 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 상기 VH CDR 중 1개, 2개, 또는 3개 전부를 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은:
(a) SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;
(b) SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는
(c) SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3
을 포함한다.
특정한 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 상기 VL CDR 중 1개, 2개, 또는 3개 전부를 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은:
(a) SEQ ID NO: 14의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;
(b) SEQ ID NO: 15의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2;
(c) SEQ ID NO: 16의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3
(d) SEQ ID NO: 26의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;
(e) SEQ ID NO: 27의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는
(f) SEQ ID NO: 28의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3
을 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는, 본 발명의 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은:
(a) SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;
(b) SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; 및/또는
(c) SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3
을 포함한다.
특정한 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 상기 VH CDR 중 1개, 2개, 또는 3개 전부를 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은:
(a) SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;
(b) SEQ ID NO: 30의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는
(c) SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3
을 포함한다.
특정한 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 상기 VL CDR 중 1개, 2개, 또는 3개 전부를 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은:
(a) SEQ ID NO: 17의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;
(b) SEQ ID NO: 18의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2;
(c) SEQ ID NO: 19의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3
(d) SEQ ID NO: 29의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;
(e) SEQ ID NO: 30의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는
(f) SEQ ID NO: 31의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3
을 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는, 본 발명의 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은:
(a) SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;
(b) SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2; 및/또는
(c) SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3
을 포함한다.
특정한 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 상기 VH CDR 중 1개, 2개, 또는 3개 전부를 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은:
(a) SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;
(b) SEQ ID NO: 33의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는
(c) SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3
을 포함한다.
특정한 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 상기 VL CDR 중 1개, 2개, 또는 3개 전부를 포함한다.
일부 구체예에서, 인간 FAM19A5에 특이적으로 결합하는, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은:
(a) SEQ ID NO: 20의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR1;
(b) SEQ ID NO: 21의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR2;
(c) SEQ ID NO: 22의 아미노산 서열을 포함하는 VH CDR3
(d) SEQ ID NO: 32의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR1;
(e) SEQ ID NO: 33의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR2; 및/또는
(f) SEQ ID NO: 34의 아미노산 서열을 포함하는 VL CDR3
을 포함한다.
특정한 구체예에서, 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 상기 CDR 중 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 또는 6개를 포함한다.
본 명세서에 개시된 VH 도메인, 또는 이의 하나 이상의 CDR은 중쇄, 예를 들어 전장 중쇄를 형성하기 위해 불변 도메인에 연결될 수 있다. 유사하게, 본 명세서에 개시된 VL 도메인, 또는 이의 하나 이상의 CDR은 경쇄, 예를 들어 전장 경쇄를 형성하기 위해 불변 도메인에 연결될 수 있다. 전장 중쇄와 전장 경쇄는 조합되어 전장 항체를 형성할 수 있다.
특정한 구체예에서, 항체 경쇄 및 중쇄, 예를 들어 분리된 경쇄 및 중쇄를 포함하는 항체가 개시된다. 경쇄와 관련하여, 특정한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항체의 경쇄는 카파 경쇄이다. 다른 특정한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항체의 경쇄는 람다 경쇄이다. 또 다른 특정한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항체의 경쇄는 인간 카파 경쇄 또는 인간 람다 경쇄이다. 특정 구체예에서, FAM19A5(예를 들어 인간 FAM19A5) 폴리펩타이드에 특이적으로 결합하는, 본 명세서에 개시된 항체는 임의의 VL 또는 VL CDR 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하며, 여기서 경쇄의 불변 영역은 인간 카파 경쇄 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 구체예, FAM19A5(예를 들어 인간 FAM19A5) 폴리펩타이드에 특이적으로 결합하는, 본 명세서에 개시된 항체는 VL 또는 VL CDR 아미노산 서열을 포함하는 경쇄를 포함하며, 여기서 경쇄의 불변 영역은 인간 람다 경쇄 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 인간 불변 영역 서열의 비제한적 예들은 당업계에 공지되어있으며, 예를 들어 미국특허 제5,693,780호 및 Kabat E.A. et al., (1991)(상동)을 참고한다.
중쇄와 관련하여, 일부 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항체의 중쇄는 알파(α), 델타(δ), 엡실론(ε), 감마(γ) 또는 뮤(μ) 중쇄일 수 있다. 다른 특정한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항체의 중쇄는 인간 알파(α), 델타(δ), 엡실론(ε), 감마(γ) 또는 뮤(μ) 중쇄를 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, FAM19A5(예를 들어 인간 FAM19A5)에 특이적으로 결합하는, 본 명세서에 개시된 항체는 VH 또는 VH CDR 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하며, 여기서 중쇄의 불변 영역은 인간 감마(γ) 중쇄 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 다른 구체예에서, FAM19A5(예를 들어 인간 FAM19A5)에 특이적으로 결합하는, 본 명세서에 개시된 항체는 VH 또는 VH CDR 아미노산 서열을 포함하는 중쇄를 포함하며, 여기서 중쇄의 불변 영역은 본 명세서에 개시되거나 당업계에 공지된 인간 중쇄의 아미노산 서열을 포함한다. 인간 불변 영역 서열의 비제한적 예들은 당업계에 공지되어있으며, 예를 들어 미국특허 제5,693,780호 및 Kabat E.A. et al., (1991)(상동)을 참고한다.
일부 구체예에서, FAM19A5(예를 들어 인간 FAM19A5)에 특이적으로 결합하는, 본 명세서에 개시된 항체는 VH 또는 VH CDR 및 VL 또는 VL CDR을 포함하는 VL 도메인 및 VH 도메인을 포함하며, 여기서 불변 영역은 IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 또는 IgY 면역글로불린 분자, 또는 인간 IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 또는 IgY 면역글로불린 분자의 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 다른 특정한 구체예에서, FAM19A5(예를 들어 인간 FAM19A5)에 특이적으로 결합하는, 본 명세서에 개시된 항체는 임의의 아미노산 서열을 포함하는 VL 도메인 및 VH 도메인을 포함하며, 여기서 불변 영역은 IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 또는 IgY 면역글로불린 분자, 면역글로불린 분자의 임의의 아형(예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2)의 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 불변 영역은 아형(예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4) 및 알로타입(예를 들어 G1m, G2m, G3m 및 nG4m) 및 이들의 변이체를 포함하는, 자연-발생인, 인간 IgG의 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다(예를 들어, Vidarsson G. et al., Front Immunol. 5:520(2014년 10월 20일 온라인 공개) 및 Jefferis R. and Lefranc M.P., mAbs 1:4, 1-7 (2009) 참고). 일부 구체예에서, 불변 영역은 인간 IgG1, IgG2, IgG3, 또는 IgG4, 또는 이들의 변이체의 불변 영역의 아미노산 서열을 포함한다.
특정 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 Fc 이펙터 기능, 예를 들어 보체-의존성 세포독성(CDC) 및/또는 항체-의존성 세포 포식작용(ADCP)을 갖지 않는다. 이펙터 기능은 Fc 영역에 의해 매개되며, 선천 면역 시스템의 이펙터 세포 상에서 C1q(보체) 및 IgG-Fc 수용체(FcγR)에 대해 상당히 중첩된 결합 부위를 함유하므로 Fc 영역의 CH2 도메인에서 힌지 영역에 가장 가까이 있는 잔기가 항체의 이펙터 기능을 담당한다. 또한, IgG2 및 IgG4 항체는 IgG1 및 IgG3 항체보다 더 낮은 수준의 Fc 이펙터 기능을 가진다. 항체의 이펙터 기능은 다음과 같이 당업계에 공지된 상이한 접근법에 의해 감소되거나 회피될 수 있다: (1) Fc 영역을 결여한 항체 단편(예를 들어 Fab, F(ab')2, 단쇄 Fv(scFv), 또는 모노머 VH 또는 VL 도메인으로 구성된 sdAb)의 사용; (2) 당이 부착된 잔기의 결실 또는 변경, 효소적으로 당의 제거, 글리코실화 저해제의 존재하에 배양된 세포에서 항체의 생성, 또는 단백질을 글리코실화할 수 없는 세포(예를 들어 박테리아 숙주 세포)에서의 항체의 발현(미국 특허공개 제20120100140호 참고)에 의해 생성될 수 있는, 무글리코실화 항체의 생성; (3) 이펙터 기능이 감소된 IgG 아형으로부터의 Fc 영역(예를 들어 IgG2 또는 IgG4 항체로부터의 Fc 영역 또는 IgG2 또는 IgG4 항체로부터의 CH2 도메인을 포함하는 키메라 Fc 영역)의 이용(미국 특허공개 제20120100140호 및 Lau C. et al., J. Immunol. 191:4769-4777 (2013) 참고); 및 (4) Fc 기능이 감소되거나 없는 돌연변이를 가진 Fc 영역의 생성(미국 특허공개 제20120100140호 및 거기 인용된 미국출원 및 PCT 출원들과 An et al. mAbs 1:6, 572-579 (2009) 참고).
일부 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, 단쇄 Fv(scFv), 또는 모노머 VH 또는 VL 도메인으로 구성된 sdAb이다. 이러한 항체 단편은 당업계에 잘 공지되어 있으며 상기 설명되어있다.
일부 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 Fc 이펙터 기능이 감소되거나 없는 Fc 영역을 포함한다. 일부 구체예에서, 불변 영역은 인간 IgG2 또는 IgG4의 Fc 영역의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 IgG2/IgG4 이소타입의 것이다. 일부 구체예에서, 항-FAM19A5 항체는 IgG4 이소타입의 IgG 항체로부터의 CH2 도메인과 IgG1 이소타입의 IgG 항체로부터의 CH3 도메인을 포함하는 키메라 Fc 영역, 또는 IgG2로부터의 힌지 영역과 IgG4로부터의 CH2 영역을 포함하는 키메라 Fc 영역, 또는 감소되거나 없는 Fc 기능을 가져오는 돌연변이를 가진 Fc 영역을 포함한다. Fc 이펙터 기능이 감소되거나 없는 Fc 영역은 당업계에 공지된 것들을 포함한다(예를 들어, Lau C. et al., J. Immunol. 191:4769-4777 (2013); An et al., mAbs 1:6, 572-579 (2009); 및 미국 특허공개 제20120100140호 및 거기 인용된 미국특허와 특허공개 및 PCT 공개들을 참고). 또한, Fc 이펙터 기능이 감소되거나 없는 Fc 영역은 당업자에 의해 쉽게 제조될 수 있다.
V. 핵산 분자
본 발명의 다른 양태는 본 명세서에 개시된 항체 또는 이의 항원-결합 부분 중 어느 하나를 암호화하는 하나 이상의 핵산 분자에 관한 것이다. 핵산은 전체 세포에, 세포 용해물에, 또는 부분적으로 정제된 형태나 실질적으로 순수한 형태로 존재할 수 있다. 핵산은 알칼리성/SDS 처리, CsCl 밴딩, 칼럼 크로마토그래피, 제한 효소, 아가로오스 겔 전기영동 및 당업계에 잘 공지된 다른 기술들을 포함하는 표준 기술에 의해, 다른 세포 성분 또는 다른 오염물, 예를 들어 다른 세포 핵산(예를 들어 다른 염색체 DNA, 예컨대 자연에서 분리된 DNA에 연결된 염색체 DNA) 또는 단백질로부터 정제되었을 때, "분리되거나" 또는 "실질적으로 순수하다"(F. Ausubel, et al., ed. (1987) Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing and Wiley Interscience, New York 참고). 본 명세서에 개시된 핵산은, 예를 들어 DNA 또는 RNA일 수 있고, 인트론 서열을 함유할 수 있거나 또는 함유하지 않을 수 있다. 특정 구체예에서, 핵산은 cDNA 분자이다.
본 명세서에 개시된 핵산은 표준 분자생물학 기술을 사용하여 얻어질 수 있다. 하이브리도마(예를 들어 하기 상술된 인간 면역글로불린 유전자를 지닌 트랜스제닉 마우스로부터 제조된 하이브리도마)에 의해 발현된 항체의 경우, 이 하이브리도마에 의해 제조된 항체의 경쇄 및 중쇄를 암호화하는 cDNA는 표준 PCR 증폭 또는 cDNA 클로닝 기술에 의해 얻어질 수 있다. 면역글로불린 유전자 라이브러리(예를 들어 파지 디스플레이 기술을 사용)로부터 얻어진 항체의 경우, 이 항체를 암호화하는 핵산이 라이브러리로부터 회수될 수 있다.
본 명세서에 개시된 특정 핵산 분자는 본 발명의 다양한 항-FAM19A5 항체의 VH 및 VL 서열을 암호화하는 것들이다. 이러한 항체의 VH 서열을 암호화하는 예시적인 DNA 서열이 SEQ ID NOs: 43-46 및 177에 제시된다. 이러한 항체의 VL 서열을 암호화하는 예시적인 DNA 서열은 SEQ ID NOs: 47-50 및 178에 제시된다.
가변 중쇄 폴리뉴클레오타이드 서열
항체 가변 중쇄 폴리뉴클레오타이드 서열 (SEQ ID NO)
항-FAM19A5 (2-13) GCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAGCGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCACCTTCAGCAGCCATGGCATGTTCTGGGTGCGACAGACGCCCGGCAAGGGGTTGGAATATGTCGCTGAAATTACCAATGATGGTAGTGGCACAAACTACGGGTCGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACGGGCAGAGCACAGTGAGGCTGCAGCTGAACAACCTCAGGGCTGAGGACACCGGCACCTACTTCTGCGCCAGATCTACTTATGAATGTCCTGGTGGTTTTAGTTGTTGGGGTGATACTGGTCAAATAGACGCATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCCA (SEQ ID NO: 43)
항-FAM19A5 (3-2) GCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAGCGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCACCTTCAGCAGCTTCAACATGTTCTGGGTGCGACAGGCGCCCGGCAAGGGGCTGGAATACGTCGCTCAAATTAGCAGCAGTGGTAGTAGCACAAACTACGCACCCGCGGTGAGGGGCCGTGCCACCATCTCGAGGGACAACGGGCAGAGCACAGTGAGGCTGCAGCTGAACAACCCCGGGGCTGAAGACACCGGCACCTACTACTGCGCCAAAAGTAGTTATGACTGTCCTTACGGTCATTGTAGTAGTGGTGTTGATAGTGCTGGTGAGATCGACGCATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCCA (SEQ ID NO: 44)
항-FAM19A5 (1-65) GCCGTGACACTGGACGAATCTGGGGGAGGGCTGCAGACTCCAGGCGGAGCTCTGAGCCTGGTGTGCAAGGCATCCGGGTTCACCTTTAGCTCCTACCAGATGGGATGGGTGCGGCAGGCACCAGGGAAGGGCCTGGAGTGGGTCGGAGTGATCAACAAATCTGGGAGTGACACAAGCTACGGCAGCGCCGTGAAGGGAAGGGCCACCATCAGCAGGGACAATGGCCAGAGTACCGTGCGGCTGCAGCTGAACAATCTGCGCGCTGAGGACACTGGCACCTACTTCTGTGCTAAGGGATCAGCAAGCTATATCACAGCCGCTACTATTGATGCATGGGGACACGGGACAGAAGTCATCGTGTCTAGT (SEQ ID NO: 45)
항-FAM19A5 (1-28) GCCGTGACGTTGGACGAGTCCGGGGGCGGCCTCCAGACGCCCGGAGGAGCGCTCAGCCTCGTCTGCAAGGCCTCCGGGTTCGACTTCAGCGATTATGGCATGGGTTGGGTGCGACAGGCTCCAGGCAAGGGGCTGGAGTGGGTTGCTGCTATTAGAAGTGATGGTAGTAACCCATCATACGGGTCGGCGGTGAAGGGCCGTGCCACCATCTCGAAGGACAACGGGCGAAGCACAGTGAGGCTGCAGCTGAACAACCTCAGGGCTGAGGACACCGCCACCTACTACTGCGCCAAGGATGGTAATGGTTACTGTGCTCTCGATGCTTATCGTAGTGGTGGTTATAGTTGTGGTGTTTATCCTGGTAGCATCGACGCATGGGGCCACGGGACCGAAGTCATCGTCTCCTCC (SEQ ID NO: 46)
항-FAM19A5
(P2-C12)		 CAGTCGCTGGAGGAGTCCGGGGGTCGCCTGGTCACGCCTGGGACACCCCTGACACTCACCTGCACCGTCTCTGGATTCTCCCTCAGTACCTATGCAGTGACCTGGGTCCGCCAGGCTCCAGGGAAGGGGCTGGAATGGATCGGATACATTAATTGGCGTGGTGGGACATCCTACGCGAACTGGGCGAAAGGCCGATTCACCATCTCCAAAACCTCGTCGACCACGGTGGATCTGAAAATGACCAGTCCGACAACCGAGGACACGGCCACCTATTTCTGTGCCAGAGATGCTAGTAGTGGTGCTGCTTTTGGGTCTTACGGCATGGACCCCTGGGGCCCAGGGACCCTCGTCACCGTCTCTTCA (SEQ ID NO: 177)
가변 경쇄 폴리뉴클레오타이드 서열
항체 가변 경쇄 폴리뉴클레오타이드 서열 (SEQ ID NO)
항-FAM19A5 (2-13) GGCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCCAGGAGAAACCGTCAAGATAACCTGCTCCGGGGGTAGCTATAGCTATGGCTGGTTCCAGCAGAAGTCTCCTGGCAGTGCCCTTGTCACTGTGATCTACTGGGATGATGAGAGACCCTCGGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTGCCCTATCCGGCTCCACAAACACATTAACCATCACTGGGGTCCAAGCCGACGACGAGGCTGTCTATTTCTGTGGGACTGAAGACATCAGCGGCACTGCTGGTGTATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTGGG (SEQ ID NO: 47)
항-FAM19A5 (3-2) GGCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCCAGGAGAAACCGTCAAGATCACCTGCTCCGGGGGTGGCAGCTATGCTGGAAGTTACTATTATGGCTGGTACCAGCAGAAGGCACCTGGCAGTGCCCCTGTCACTCTGATCTATGAAAGCAACAAGAGACCCTCGGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCACATCTGGCTCCACAGCCACACTAACCATCACTGGGGTCCAAGCCGATGACGAGGCTATCTATTACTGTGGGAGCTGGGACAGTAGCAATGGTGGTATATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTAGG (SEQ ID NO: 48)
항-FAM19A5 (1-65) GCCCTGACTCAGCCCTCTTCCGTGTCAGCCAACCCTGGAGAAACTGTGAAGATCACCTGCAGCGGAGGAGGGAGCTCCGGATACGGATATGGGTGGTATCAGCAGAAATCCCCATCTAGTGCCCCCCTGACTGTGATCTATTGGAACGACAAGAGGCCTAGTGATATTCCATCAAGATTCAGTGGATCAAAAAGCGGGTCCACTCACACCCTGACAATCACTGGCGTGCAGGCAGAGGACGAAGCCGTCTACTTCTGCGGAAATGACGATTACTCAAGCGATTCTGGCTATGTGGGCGTCTTTGGCGCAGGAACCACACTGACAGTGCTG (SEQ ID NO: 49)
항-FAM19A5 (1-28) GCCCTGACTCAGCCGTCCTCGGTGTCAGCAAACCTGGAAGGAACCGTCGAGATCACCTGCTCCGGGAGTGGCTATGGTTATGGCTGGTATCAGCAGAAGTCTCCTGGCAGTGCCCCTGTCACTGTGATCTATCAGAACGACAAGAGACCCTCGGACATCCCTTCACGATTCTCCGGTTCCAAATCCGGCTCCACGGGCACATTAACCATCACTGGGGTCCAAGTCGAGGACGAGGCTGTCTATTACTGTGGGAGTGAAGACAGCAGCACTCTTGCTGGTATATTTGGGGCCGGGACAACCCTGACCGTCCTA (SEQ ID NO: 50)
항-FAM19A5
(P2-C12)		 GAGCTCGATATGACCCAGACTCCATCCTCCGTGTCTGCAGCTGTGGGAGGCACAGTCACCATCAAGTGCCAGGCCAGTCAGAGCATTAGTAGCTACTTATCCTGGTATCAGCAGAAACCAGGGCAGCCTCCCAAGCTCCTGATCTATGAAGCATCCAAACTGGCCTCTGGGGTCCCATCGCGGTTCAGCGGCAGTGGATATGGGACAGAGTTCACTCTCACCATCAGCGACCTGGAGTGTGCCGATGCTGCCACTTACTACTGTCAACAGGGTTATAGTAGTACTAATGTTTGGAATGCTTTCGGCGGAGGCACCAATGTGGAAATCAAA (SEQ ID NO: 178)
본 명세서에 개시된 항-FAM19A5 항체의 제조 방법은 신호 펩타이드와 함께 중쇄 및 경쇄를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열, 예를 들어 각각 SEQ ID NOs: 43 및 47, SEQ ID NOs: 44 및 48, SEQ ID NOs: 45 및 49, SEQ ID NOs: 46 및 50, SEQ ID NOs: 177 및 178을 포함하는 셀라인에서 항체의 관련된 중쇄 및 경쇄를 발현하는 것을 포함할 수 있다. 이들 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 숙주 세포는 본 발명에 포함된다.VH 및 VL 세그먼트를 암호화하는 DNA 단편이 얻어진 후, 이들 DNA 단편은, 예를 들어 가변 영역 유전자를 전장 항체 사슬 유전자, Fab 단편 유전자 또는 scFv 유전자로 전환하기 위해, 표준 재조합 DNA 기술에 의해 더 조작될 수 있다. 이들 조작에서, VL- 또는 VH-암호화 DNA 단편은 항체 불변 영역 또는 가요성 링커와 같은 다른 단백질을 암호화하는 다른 DNA 단편에 작동 가능하게 연결된다. 용어 "작동 가능하게 연결된"은 2개의 DNA 단편에 의해 암호화된 아미노산 서열이 인-프레임(in-frame)을 유지하도록 2개의 DNA 단편이 이어지는 것을 의미한다.
VH 영역을 암호화하는 분리된 DNA는 VH-암호화 DNA를 중쇄 불변 영역(힌지, CH1, CH2 및/또는 CH3)을 암호화하는 다른 DNA 분자에 작동 가능하게 연결함으로써 전장 중쇄 유전자로 전환될 수 있다. 인간 중쇄 불변 영역 유전자의 서열은 당업계에 공지되어 있으며(예를 들어 Kabat, E.A., et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 참고), 이들 영역을 포함하는 DNA 단편이 표준 PCR 증폭에 의해 얻어질 수 있다. 중쇄 불변 영역은 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, IgE, IgM 또는 IgD 불변 영역, 예를 들어 IgG2 및/또는 IgG 4 불변 영역일 수 있다. Fab 단편 중쇄 유전자의 경우, VH-암호화 DNA는 단지 중쇄 CH1 불변 영역만을 암호화하는 다른 DNA 분자에 작동 가능하게 연결될 수 있다.
VL 영역을 암호화하는 분리된 DNA는 VL-암호화 DNA를 경쇄 불변 영역 CL을 암호화하는 다른 DNA 분자에 작동 가능하게 연결함으로써 전장 경쇄 유전자로 전환될 수 있다. 인간 경쇄 불변 영역 유전자의 서열은 당업계에 공지되어 있으며(예를 들어 Kabat, E.A., et al., (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242 참고), 이들 영역을 포함하는 DNA 단편이 표준 PCR 증폭에 의해 얻어질 수 있다. 경쇄 불변 영역은 카파 또는 람다 불변 영역일 수 있다.
scFv 유전자를 생성하기 위해, VH- 및 VL-암호화 DNA 단편이 가요성 링커를 암호화하는, 예를 들어 아미노산 서열 (Gly4-Ser)3을 암호화하는 다른 단편에 작동 가능하게 연결되며, 이로써 VL과 VH 영역이 가요성 링커에 의해 이어진 상태로 VH 및 VL 서열이 연속 단쇄 단백질로서 발현될 수 있다(예를 들어 Bird et al. (1988) Science 242:423-426; Huston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883; McCafferty et al., (1990) Nature 348:552-554 참고).
일부 구체예에서, 본 발명은 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 분리된 핵산 분자를 포함하는 벡터를 제공한다. 다른 구체예에서, 벡터는 유전자 요법에 사용될 수 있다.
본 발명에 적합한 벡터는 발현 벡터, 바이러스 벡터, 및 플라스미드 벡터를 포함한다. 하나의 구체예에서, 벡터는 바이러스 벡터이다.
발현 벡터는 적절한 숙주 세포에 도입되었을 때, 삽입된 코딩 서열의 전사 및 번역을 위한 필수 요소, 또는 RNA 바이러스 벡터의 경우, 복제 및 번역을 위한 필수 요소를 함유하는 임의의 핵산 구성물이다. 발현 벡터는 플라스미드, 파지미드, 바이러스, 및 이들의 유도체를 포함할 수 있다.
본 발명의 발현 벡터는 본 명세서에 개시된 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 하나의 구체예에서, 항체 또는 이의 항원-결합 부분에 대한 코딩 서열은 발현 제어 서열에 작동 가능하게 연결된다. 두 핵산 서열은 이들이 각 성분 핵산 서열이 그것의 기능성을 보유하도록 허용하는 방식으로 공유 연결되었을 때 작동 가능하게 연결된 것이다. 코딩 서열 및 유전자 발현 제어 서열은, 코팅 서열의 발현 또는 전사 및/또는 번역이 유전자 발현 제어 서열의 영향 또는 제어하에 있는 방식으로 이들이 공유 연결되었을 때 작동 가능하게 연결된 것이다. 두 DNA 서열은, 5' 유전자 발현 서열에서 프로모터의 유도가 코딩 서열의 전사를 가져오고, 두 DNA 서열의 연결의 성격이 (1) 프레임-시프트 돌연변이의 도입을 가져오거나, (2) 코딩 서열의 전사를 지시하는 프로모터 영역의 능력을 방해하거나, 또는 (3) 단백질로 번역되는 상응하는 RNA 전사체의 능력을 방해하지 않는다면, 작동 가능하게 연결된 것이다. 따라서, 유전자 발현 서열은 이 유전자 발현 서열이 코딩 핵산 서열의 전사를 행할 수 있었다면 코딩 핵산 서열에 작동 가능하게 연결된 것이며, 이로써 전사체는 원하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분으로 번역된다.
바이러스 벡터는, 제한은 아니지만, 레트로바이러스, 예컨대 Moloney 뮤린 백혈병 바이러스, Harvey 뮤린 육종 바이러스, 뮤린 유방 종양 바이러스, 및 Rous 육종 바이러스; 렌티바이러스; 아데노바이러스; 아데노-관련 바이러스; SV40-타입 바이러스; 폴리오마바이러스; 엡스타인-바 바이러스; 유두종 바이러스; 헤르페스 바이러스; 우두 바이러스; 폴리오 바이러스; 및 RNA 바이러스, 예컨대 레트로바이러스로부터의 핵산 서열을 포함한다. 당업계에 공지된 다른 벡터들도 쉽게 이용할 수 있다. 특정 바이러스 벡터는 비-필수 유전자가 관심 유전자로 치환된 비-세포변성(non-cytopathic) 진핵생물 바이러스에 기초한다. 비-세포변성 바이러스는 레트로바이러스를 포함하며, 이것의 생애 주기는 게놈 바이러스 RNA의 DNA로의 역 전사와 후속하여 숙주 세포 DNA로의 프로바이러스의 통합을 수반한다. 레트로바이러스는 인간 유전자 요법 시험을 위해 승인되었다. 복제-결함(즉 원하는 단백질의 합성을 지시할 수 있지만 감염성 입자는 제조할 수 없음)이 있는 레트로바이러스가 가장 유용하다. 이러한 유전자 변경된 레트로바이러스 발현 벡터는 생체내 유전자의 고 효능 형질도입(transduction)에서 유용성을 가진다. 복제-결함 레트로바이러스를 생성하는 표준 프로토콜(플라스미드에 외래 유전자 물질의 통합, 플라스미드로 패키징 셀라인의 트랜스펙션, 패키징 셀라인에 의한 재조합 레트로바이러스의 생성, 조직 배양 배지로부터 바이러스 입자의 수집, 및 바이러스 입자로 표적 세포의 감염 단계를 포함)은 문헌(Kriegler, M., Gene Transfer and Expression, A Laboratory Manual, W.H. Freeman Co., New York (1990) 및 Murry, E.J., Methods in Molecular Biology, Vol. 7, Humana Press, Inc., Cliffton, N.J. (1991))에 제시된다.
하나의 구체예에서, 바이러스는 이중-가닥 DNA 바이러스인 아데노-관련 바이러스이다. 아데노-관련 바이러스는 복제 결함이 되도록 조작될 수 있고, 광범위한 세포 타입 및 종을 감염시킬 수 있다. 또한, 아데노-관련 바이러스는 열 및 지질 용매 안정성; 조혈 세포를 포함하는 다양한 계통의 세포에서의 높은 형질도입 빈도; 및 균교대증 저해의 결여와 같은 이점을 가지며, 이로써 많은 일련의 형질도입이 가능하다. 보고된 바에 따르면, 아데노-관련 바이러스는 부위-특정 방식으로 인간 세포 DNA에 통합될 수 있으며, 이로써 삽입 돌연변이유발의 확률 및 레트로바이러스 감염의 삽입된 유전자 발현 특징의 변동성을 최소화한다. 이에 더하여, 야생형 아데노-관련 바이러스 감염이 선택압의 부재하에 100 계대 이상 동안 조직 배양물에서 추적되었으며, 이는 아데노-관련 바이러스 게놈 통합이 상대적으로 안정한 이벤트임을 시사한다. 또한, 아데노-관련 바이러스는 염색체외 방식으로 기능할 수 있다.
다른 구체예에서, 벡터는 렌티바이러스로부터 유래된다. 특정 구체예에서, 벡터는 비-분열 세포를 감염시킬 수 있는 재조합 렌티바이러스의 벡터이다.
렌티바이러스 게놈 및 프로바이러스 DNA는 전형적으로 레트로바이러스에서 발견되는 3개의 유전자 gag, pol 및 env를 가지며, 이들의 측면에는 2개의 긴 말단 반복부(LTR) 서열이 있다. gag 유전자는 내부 구조(바탕질, 캡시드 및 뉴클레오캡시드) 단백질을 암호화하고, pol 유전자는 RNA-지정 DNA 중합효소(역 전사효소), 프로테아제 및 인테그라아제를 암호화하고, env 유전자는 바이러스 외피 당단백질을 암호화한다. 5' 및 3' LTR은 비리온 RNA의 전사 및 폴리아데닐화를 촉진하는 작용을 한다. LTR은 바이러스 복제에 필요한 다른 시스-작용 서열을 모두 함유한다. 렌티바이러스는 vif, vpr, tat, rev, vpu, nef 및 vpx(HIV-1, HIV-2 및/또는 SIV에서)를 포함하는 추가의 유전자를 가진다.
5' LTR에 인접해서 게놈(tRNA 프라이머 결합 부위)의 역 전사에 필요한 서열이 있으며, 이것은 입자(Psi 부위)에 바이러스 RNA의 언캡시데이션에 효과적이다. 언캡시데이션(또는 감염성 비리온에 레트로바이러스 RNA의 패키징)에 필수적인 서열이 바이러스 게놈에서 빠질 경우, 이 시스 결함은 게놈 DNA의 언캡시데이션을 방지한다.
그러나, 돌연변이는 모든 비리온 단백질의 합성을 여전히 지시할 수 있다. 본 발명은 패키징 기능을 지닌 둘 이상의 벡터, 즉 gag, pol 및 env, 뿐만 아니라 rev 및 tat로 적합한 숙주 세포를 트랜스펙션하는 것을 포함하는 비-분열 세포를 감염시킬 수 있는 재조합 렌티바이러스의 생성 방법을 제공한다. 아래 개시된 것과 같이, 기능적 tat 유전자를 결여한 벡터는 특정 용도에 바람직하다. 따라서, 예를 들어, 제1 벡터는 바이러스 gag와 바이러스 pol을 암호화하는 핵산을 제공할 수 있고, 다른 벡터는 바이러스 env를 암호화하는 핵산을 제공할 수 있으며, 이로써 패키징 세포가 생성된다. 패키징 세포에, 이식 벡터로서 확인된, 이종성 유전자를 제공하는 벡터를 도입하는 것은 관심의 외래 유전자를 지닌 감염성 바이러스 입자를 방출하는 프로듀서(producer) 세포를 제공한다.
벡터 및 외래 유전자의 구성형태에 따라서, 제2 벡터는 바이러스 외피(env) 유전자를 암호화하는 핵산을 제공할 수 있다. env 유전자는 레트로바이러스를 포함하는, 거의 모든 적합한 바이러스로부터 유래될 수 있다. 일부 구체예에서, env 단백질은 인간 및 다른 종의 세포의 형질도입을 허용하는 양쪽성 외피 단백질이다.
레트로바이러스-유래 env 유전자의 예들은, 제한은 아니지만, Moloney 뮤린 백혈병 바이러스(MoMuLV 또는 MMLV), Harvey 뮤린 육종바이러스(HaMuSV 또는 HSV), 뮤린 유방 종양 바이러스(MuMTV 또는 MMTV), 기본(gibbon) 원숭이 백혈병 바이러스(GaLV 또는 GALV), 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 및 Rous 육종 바이러스(RSV)를 포함한다. 다른 env 유전자들, 예컨대 수포성 구내염 바이러스(VSV) 단백질 G(VSV G), 간염 바이러스 및 인플루엔자의 것도 사용될 수 있다.
바이러스 env 핵산 서열을 제공하는 벡터는 조절 서열과 작동 가능하게 회합된다.
특정 구체예에서, 벡터는 비-분열 세포를 형질도입하는 벡터의 능력을 손상시키지 않고 HIV 병독성 유전자 env, vif, vpr, vpu 및 nef가 결실된 렌티바이러스 벡터를 포함한다.
일부 구체예에서, 벡터는 3' LTR의 U3 영역의 결실을 포함하는 렌티바이러스 벡터를 포함한다. U3 영역의 결실은 완전 결실 또는 부분 결실일 수 있다.
일부 구체예에서, 본 명세서에 개시된 FVIII 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 렌티바이러스 벡터는 세포에서 (a) gag, pol, 또는 gag 및 pol 유전자를 포함하는 제1 뉴클레오타이드 서열 및 (b) 이종성 env 유전자를 포함하는 제2 뉴클레오타이드 서열로 트랜스펙션될 수 있으며, 이때 렌티바이러스 벡터는 기능적 tat 유전자를 결여한다. 다른 구체예에서, 세포는 rev 유전자를 포함하는 제4 뉴클레오타이드 서열로 더 트랜스펙션된다. 특정 구체예에서, 렌티바이러스 벡터는 vif, vpr, vpu, vpx 및 nef, 또는 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 기능적 유전자를 결여한다.
특정 구체예에서, 렌티바이러스 벡터는 gag 단백질, Rev-반응 요소, 중심 폴리퓨린 트랙(cPPT), 또는 이들의 임의의 조합을 암호화하는 하나 이상의 뉴클레오타이드 서열을 포함한다.
렌티바이러스 벡터의 예들은 WO9931251, W09712622, W09817815, W09817816, 및 WO9818934에 개시되며, 이들은 그 전체가 본 명세서에 참고로 포함된다.
다른 벡터는 플라스미드 벡터를 포함한다. 플라스미드 벡터는 당업계에 공지되어 있다(예를 들어, Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989를 참고). 플라스미드 벡터는 숙주 게놈 내에서 복제할 수 없고 통합될 수 없는 특성으로 인해 생체내에서 세포에 유전자를 송달하는데 특히 유익한 것으로 판명되었다. 그러나, 숙주 세포와 양립하는 프로모터를 가진 이들 플라스미드는 플라스미드 내에서 작동 가능하게 암호화된 유전자로부터 펩타이드를 발현할 수 있다. 상업적 공급자로부터 이용할 수 있는 플라스미드는 pBR322, pUC18, pUC19, 다양한 pcDNA 플라스미드, pRC/CMV, 다양한 pCMV 플라스미드, pSV40, 및 pBlueScript를 포함한다. 특정한 플라스미드의 추가의 예들은 pcDNA3.1, 카탈록 번호 V79020; pcDNA3.1/hygro, 카탈록 번호 V87020; pcDNA4/myc-His, 카탈록 번호 V86320; 및 pBudCE4.1, 카탈록 번호 V53220를 포함하며, 이것은 모두 Invitrogen(Carlsbad, CA.)의 제품이다. 다른 플라스미드들도 당업자에게 잘 공지되어 있다. 또한, 플라스미드는 DNA의 특정 단편을 제거 및/또는 부가하기 위해 표준 분자생물학 기술을 사용하여 주문 설계될 수 있다.
VI. 항체 생성
FAM19A5(예를 들어 인간 FAM19A5)에 면역특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편은 항체의 합성을 위한 당업계에 공지된 임의의 방법에 의해, 예를 들어 화학적 합성 또는 재조합 발현 기술에 의해 생성될 수 있다. 본 명세서에 개시된 방법은, 특별한 언급이 없는 한, 분자생물학, 미생물학, 유전자 분석, 재조합 DNA, 유기화학, 생화학, PCR, 올리고뉴클레오타이드 합성 및 변형, 핵산 혼성화, 및 당업계 기술 범위 내의 관련 분야의 종래의 기술들을 이용한다. 이들 기술은 본 명세서에서 인용된 참고자료들에 자세히 기술되어있다(예를 들어, Maniatis T et al., (1982) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook J et al., (1989), Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Second Edition, Cold Spring Harbor Laboratory Press; Sambrook J et al., (2001) Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Ausubel FM et al., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates); Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons (1987 and annual updates) Gait (ed.) (1984) Oligonucleotide Synthesis: A Practical Approach, IRL Press; Eckstein (ed.) (1991) Oligonucleotides and Analogues: A Practical Approach, IRL Press; Birren B et al., (eds.) (1999) Genome Analysis: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press를 참고).
특정한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항체는, 예를 들어 합성, DNA 서열의 유전자 조작을 통한 생성을 수반하는 임의의 수단에 의해 제조, 발현, 생성 또는 분리된 항체(예를 들어 재조합 항체)이다. 특정 구체예에서, 이러한 항체는 생체내 동물 또는 포유류(예를 들어 인간)의 항체 점라인 레퍼토리 내에 자연적으로 존재하지 않는 서열(예를 들어 DNA 서열 또는 아미노산 서열)을 포함한다.
VII. 제약학적 조성물
생리학적으로 허용되는 담체, 부형제 또는 안정제(Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) Mack Publishing Co., Easton, PA) 중에서 원하는 정도의 순도를 가진 본 명세서에 개시된 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함하는 조성물이 개시된다. 허용되는 담체, 부형제 또는 안정제는 이용된 투약량 및 농도에서 수혜자에게 비독성이며, 버퍼, 예컨대 포스페이트, 시트레이트 및 다른 유기산; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함하는 항산화제; 보존제(예컨대 염화 옥타데실디메틸벤질암모늄; 염화헥사메토늄; 염화벤잘코늄; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레졸시놀; 사이클로헥산올; 3-펜타놀; 및 m-크레졸); 저 분자량(약 10개 잔기 미만) 폴리펩타이드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴, 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌, 또는 리신; 단당류, 이당류, 및 글루코오스, 만노오스, 또는 덱스트린을 포함하는 다른 탄수화물들; 킬레이트화제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 수크로오스, 만니톨, 트레할로오스 또는 소르비톨; 염-형성 반대-이온, 예컨대 나트륨; 금속 복합체(예를 들어 Zn-단백질 복합체); 및/또는 비-이온 계면활성제, 예컨대 TWEEN™, PLURONICS™ 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함한다.
특정한 구체예에서, 제약학적 조성물은 본 명세서에 개시된 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 이중특이적 분자, 또는 면역콘쥬게이트, 및 선택적으로 하나 이상의 추가의 예방 또는 치료제를, 제약학적으로 허용되는 담체 중에 포함한다. 특정한 구체예에서, 제약학적 조성물은 본 명세서에 개시된 항체 또는 이의 항원-결합 부분의 유효량, 및 선택적으로 하나 이상의 추가의 예방 또는 치료제를, 제약학적으로 허용되는 담체 중에 포함한다. 일부 구체예에서, 항체는 제약학적 조성물에 포함된 유일한 활성 성분이다. 본 명세서에 개시된 제약학적 조성물은 FAM19A5 활성을 감소시키는데 유용할 수 있으며, 이로써 녹내장과 같은 안 질환, 장애, 또는 상태를 치료할 수 있다.
비경구 제조물에서 사용된 제약학적으로 허용되는 담체는 수성 비히클, 비수성 비히클, 항균제, 등장제, 버퍼, 항산화제, 국소 마취제, 현탁 및 분산제, 유화제, 금속 이온의 봉쇄 또는 킬레이트화제 및 다른 제약학적으로 허용되는 물질을 포함한다. 수성 비히클의 예들은 염화나트륨 주사액, 링거 주사액, 등장 덱스트로오스 주사액, 멸균수 주사액, 덱스트로오스 및 락테이트 링거 주사액을 포함한다. 비수성 비경구 비히클은 식물 기원의 고정유, 면실유, 옥수수유, 참깨유 및 땅콩유를 포함한다. 정균 또는 정진균 농도의 항균제가 다수-용량 용기에 패키지된 비경구 제조물에 첨가될 수 있으며, 이들은 페놀 또는 크레졸, 수은함유물질, 벤질 알코올, 클로로부탄올, 메틸 및 프로필 p-하이드록시벤조산 에스테르, 티메로살, 염화벤잘코늄 및 염화벤제토늄을 포함한다. 등장제는 염화나트륨 및 덱스트로오스를 포함한다. 버퍼는 포스페이트 및 시트레이트를 포함한다. 항산화제는 중황산나트륨을 포함한다. 국소 마취제는 프로카인 염산염을 포함한다. 현탁 및 분산제는 나트륨 카복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스 및 폴리비닐피롤리돈을 포함한다. 유화제는 폴리소르베이트 80(TWEEN® 80)을 포함한다. 금속 이온의 봉쇄 또는 킬레이트화제는 EDTA를 포함한다. 제약학적 담체는 또한 수 혼화성 비히클용 에틸 알코올, 폴리에틸렌 글리콜 및 프로필렌 글리콜을 포함하고, pH 조정용 수산화나트륨, 염산, 시트르산 또는 락트산을 포함한다.
제약학적 조성물은 대상에 대한 임의의 투여 경로에 맞게 제제화될 수 있다. 투여 경로의 구체적인 예들은 비내, 경구, 비경구, 척추강내, 뇌실내, 폐, 피하, 또는 심실내 경로를 포함한다. 피하, 근육내 또는 정맥내 주사를 특징으로 하는 비경구 투여가 또한 고려된다. 주사가능물질이 종래의 형태로, 액체 용액 또는 현탁액, 주사 전에 액체 중에서 용액 또는 현탁액으로 되기에 적합한 고체 형태, 또는 에멀젼으로서 제조될 수 있다. 주사가능물질, 용액 및 에멀젼은 또한 하나 이상의 부형제를 함유한다. 적합한 부형제는, 예를 들어 물, 식염수, 덱스트로오스, 글리세롤 또는 에탄올이다. 또한, 원한다면, 투여될 제약학적 조성물은 소량의 비-독성 보조 물질, 예컨대 습윤 또는 유화제, pH 완충제, 안정제, 용해성 증진제, 및 다른 이러한 제제들, 예컨대 나트륨 아세테이트, 소르비탄 모노라우레이트, 트리에탄올아민 올레에이트 및 사이클로덱스트린을 함유할 수 있다.
항체의 비경구 투여용 제조물은 바로 주사 가능한 멸균 용액, 피하주사용 정제를 포함하는 사용 직전에 용매와 바로 조합될 수 있는 멸균 건조 가용성 제품, 예컨대 동결건조된 분말, 바로 주사 가능한 멸균 현탁액, 사용 직전에 비히클과 바로 조합될 수 있는 멸균 건조 불용성 제품 및 멸균 에멀젼을 포함한다. 용액은 수성 또는 비수성일 수 있다.
정맥내 투여되는 경우, 적합한 담체는 생리학적 식염수 또는 포스페이트 완충 식염수(PBS), 및 증점 및 용해제를 함유하는 용액, 예컨대 글루코오스, 폴리에틸렌 글리콜, 및 폴리프로필렌 글리콜 및 이들의 혼합물을 포함한다.
항체를 포함하는 국부용 혼합물은 국소 및 전신 투여에 대해 설명된 대로 제조된다. 얻어진 혼합물은 용액, 현탁액, 에멀젼 등일 수 있으며, 크림, 겔, 연고, 에멀젼, 용액, 엘릭시르, 로션, 현탁액, 팅크, 페이스트, 폼, 에어로졸, 관주제, 스프레이, 좌약, 붕대, 피부 패치 또는 국부적 투여에 적합한 임의의 다른 제제로서 제제화될 수 있다.
본 명세서에 개시된 항체 또는 이의 항원-결합 부분은, 예컨대 흡입에 의한, 국부적 투여용 에어로졸로서 제제화될 수 있다(예를 들어 미국특허 제4,044,126호, 제4,414,209호 및 제4,364,923호 참고, 이 특허들은 염증성 질환, 특히 천식의 치료에 유용한 스테로이드의 송달을 위한 에어로졸을 개시함). 기도 투여용의 이들 제제는 분무기용의 에어로졸 또는 용액의 형태이거나, 또는 흡입제용의 마이크로파인 분말일 수 있으며, 단독으로 사용되거나 또는 락토오스와 같은 비활성 담체와 조합하여 사용된다. 이 경우, 제제의 입자는, 50 마이크론 미만, 구체적으로 10 마이크론 미만의 직경을 가진다.
본 명세서에 개시된 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 국소 또는 국부적 적용, 예컨대 피부 및 점막에 국부적 적용, 예컨대 눈에 국소 적용을 위해, 젤, 크림 및 로션으로 제제화될 수 있고, 눈에 적용 또는 수조내 또는 척추내 적용을 위해 제제화될 수 있다. 국부적 투여는 경피 송달을 위해 고려되며, 또한 눈이나 점막 투여, 또는 흡입 요법용으로 고려된다. 다른 제약학적으로 허용되는 부형제와 조합하여 또는 단독으로 항체의 코 용액이 또한 투여될 수 있다.
이온영동 및 전기영동 장치를 포함하는 경피 패치가 당업자에게 잘 공지되어 있으며, 항체 투여용으로 사용될 수 있다. 예를 들어, 이러한 패치는 미국특허 제6,267,983호, 제6,261,595호, 제6,256,533호, 제6,167,301호, 제6,024,975호, 제6,010715호, 제5,985,317호, 제5,983,134호, 제5,948,433호, 및 제5,860,957호에 개시된다.
특정 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항체 또는 이의 항원-결합 부분을 포함하는 제약학적 조성물은 동결건조된 분말이며, 이것은 용액, 에멀젼 및 다른 혼합물로서 투여용으로 복원될 수 있다. 동결건조된 분말은 또한 고체 또는 겔로서 복원 및 제제화될 수 있다. 동결건조된 분말은 본 명세서에 개시된 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 또는 이의 제약학적으로 허용되는 유도체를 적합한 용매에 용해함으로써 제조된다. 일부 구체예에서, 동결건조된 분말은 멸균 상태이다. 용매는 분말 또는 분말로부터 제조된 복원된 용액의 안정성 또는 다른 약물학적 성분을 개선하는 부형제를 함유할 수 있다. 사용될 수 있는 부형제는, 제한은 아니지만, 덱스트로오스, 소르비톨, 프럭토오스, 콘 시럽, 자일리톨, 글리세린, 글루코오스, 수크로오스 또는 다른 적합한 제제를 포함한다. 또한, 용매는, 하나의 구체예에서, pH가 약 중성인 버퍼, 예컨대 시트레이트, 나트륨 또는 칼륨 포스페이트 또는 당업자에게 알려진 다른 버퍼를 함유할 수 있다. 용액을 후속 멸균 여과한 후 당업자에게 공지된 표준 조건하에서의 동결건조는 원하는 제제를 제공한다. 하나의 구체예에서, 얻어진 용액은 동결건조용 바이알에 배분된다. 각 바이알은 화합물의 단일 투약량 또는 다수 투약량을 함유할 수 있다. 동결건조된 분말은 적절한 조건하에, 예컨대 약 4℃ 내지 실온에서 보관될 수 있다.
주사용수에 의한 이 동결건조된 분말의 복원은 비경구 투여에 사용하기 위한 제제를 제공한다. 복원을 위해 동결건조된 분말이 멸균수 또는 다른 적합한 담체에 첨가된다. 정확한 양은 선택된 화합물에 따른다. 이러한 양은 경험적으로 결정될 수 있다.
본 명세서에 개시된 항체 또는 이의 항원-결합 부분, 이중특이적 분자, 또는 면역콘쥬게이트 및 본 명세서에 개시된 다른 조성물은 또한 치료 대상의 특정 조직, 수용체, 또는 다른 신체 영역에 표적화되도록 제제화될 수 있다. 많은 표적화 방법이 당업자에게 잘 공지되어 있다. 모든 이러한 표적화 방법을 본 조성물에 사용하는 것이 고려된다. 표적화 방법의 비제한적 예들은, 예를 들어 미국특허 제6,316,652호, 제6,274,552호, 제6,271,359호, 제6,253,872호, 제6,139,865호, 제6,131,570호, 제6,120,751호, 제6,071,495호, 제6,060,082호, 제6,048,736호, 제6,039,975호, 제6,004,534호, 제5,985,307호, 제5,972,366호, 제5,900,252호, 제5,840,674호, 제5,759,542호 및 제5,709,874호를 참고한다. 특정한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 항-FAM19A5 항체 또는 이의 항원-결합 부분은 녹내장을 치료하고 및/또는 녹내장과 관련된 염증을 감소, 완화, 또는 저해하기 위해 사용될 수 있다.
생체내 투여에 사용되는 조성물은 멸균될 수 있다. 예를 들어 멸균 여과 막을 통한 여과에 의해 쉽게 멸균될 수 있다.
VIII. 키트
본 명세서에 개시된 하나 이상의 항체, 또는 이의 항원-결합 부분, 이중특이적 분자, 또는 이의 면역콘쥬게이트를 포함하는 키트가 개시된다. 특정한 구체예에서, 본 명세서에 개시된 하나 이상의 항체 또는 이의 항원-결합 부분과 같은, 제약학적 조성물의 성분들 중 하나 이상으로 채워진 하나 이상의 용기, 선택적인 사용 설명서를 포함하는 제약학적 팩 또는 키트가 개시된다. 일부 구체예에서, 키트는 본 명세서에 개시된 제약학적 조성물 및 임의의 예방 또는 치료제를 함유한다.
실시예
아래의 실시예를 참고하여 다음의 실험 방법을 상세히 설명한다.
실시예 1: 인간 FAM19A5 단백질의 발현 및 정제
재조합 인간 FAM19A5 단백질을 아래 설명된 대로 생성해서 정제하고, 이 정제된 단백질을 결합 친화성 분석에 기초한 항체 스크리닝 분석에 사용했다. 먼저, FAM19A5 유전자를 발현하는 LPS-hT 플라스미드를 박테리아에 형질전환하고 단백질 과발현을 유도했다. 생성된 FAM19A5 단백질을 Ni-NTA 친화성 크로마토그래피(Qiagen, Valencia, CA, USA)를 사용하여 정제했다. 이미다졸을 점차 높은 농도로 사용하여 Ni-칼럼으로부터 His-택된 FAM19A5 단백질을 제거했다. 용액 중 단백질 발현을 코마씨 브릴리언트 블루(Coomassie Brilliant Blue) R-250 염료를 사용하여 측정했다. FAM19A5 이미다졸 함유 용액만을 취해 PBS를 사용하여 FAM19A5 단백질을 농축했다. 농축이 완료되었을 때 FAM19A5 단백질의 순도와 농도를 웨스턴 블롯 분석을 사용하여 측정했다. 이어서 농축된 단백질을 사용하여 FAM19A5-특이적 항체에 대해 스크리닝했다.
실시예 2: 항체 라이브러리 FAM19A5의 생성
1. 면역화
FAM19A5 펩타이드를 합성하고 C-말단 단부에서 KLH(Anygen)에 콘쥬게이트해서 닭의 면역화를 위한 항원으로서 사용했다. 합성 펩타이드 KLH 콘쥬게이트(KLH-VTLDRDSSQPRRTIARQT)(SEQ ID NO: XX) 50μg을 750μL 포스페이트 완충 식염수(PBS)에 혼합하고 30분간 37℃에서 인큐베이션했다. 이후, 2% 스쿠알렌 내독소 MPL(모노포스포릴레이트 지질 A 종)에서 독소를 제거하고, 유중수 에멀젼 애쥬번트(RIBI + MPL + TDM + CWS 애쥬번트, Sigma, St. Louis, Mo, USA)를 함유하는 TDW 및 CWS의 세포벽 성분의 미코박테리아를 에멀젼화하고, 이것을 이후 3마리 닭에 피하 주사했다. 닭은 면역화 사이에 대략 2-3주 간격으로 총 3회 면역화했다. FAM19A5 단백질을 과발현했던 HEK293T 세포의 세포용해물을 사용하여 면역화된 닭으로부터 얻어진 항체의 역가를 면역 블롯팅을 통해서 측정했다. 3회 면역화시킨 닭의 혈청을 1차 항체로서 사용했다. 사용된 2차 항체는 HRP(양고추냉이 퍼옥시다아제)(토끼 항-닭 IgG(Y)-HRP, Millipore corporation, Billeria, MA, USA)에 콘쥬게이트된 항-닭 IgG(Y) 다클론성 항체였다.
2. 면역화된 닭으로부터의 단쇄 가변 단편(scFv) 라이브러리의 제조
TRI 시약(Invitro-gen, Carlsbad , CA USA)을 사용하여 상기 설명된 면역화된 닭의 비장, 골수 및 활액낭으로부터 RNA를 추출했다. Oligo-dT 프라이머와 Superscript™ III 제1-가닥 합성 시스템(Invitrogen)을 사용하여 제1 가닥 cDNA를 합성했다. 닭의 면역 시스템으로부터 얻어진 cDNA에 대해, 확장형 고 충실도 PCR 시스템(Roche Molecular Systems, IN, USA)을 사용하여 단쇄 가변 영역 라이브러리를 생성했다. 각 반응에서 cDNA 1μL, 각 프라이머 60pmol, 10 x 반응 버퍼 용액 10μL, 8μL의 2.5mM dNTP(Promega, Madison, WI, USA), 및 Taq DNA 중합효소 0.58μL를 물과 혼합했다. 최종 부피는 100μL였다. PCR 반응을 다음의 조건을 사용하여 수행했다: 30 사이클 (i) 94℃에서 15초, (ii) 56℃에서 30초, 및 (iii) 72℃에서 90초, 이후 72℃에서 10분간 최종 확장. 약 350bp의 길이를 가진 단편을 포함하는 PCR 생성물을 1.5% 아가로오스 겔 위에 로딩하고, 전기영동 후 QIAGEN Gel II 추출 키트(QIAGEN, Valencia, CA, USA)를 사용하여 뉴클레오타이드 단편을 정제했다. 정제된 PCR 생성물을 OD 260nm에서 판독하여 정량했다(1 유닛 OD = 50μg/mL).
2차 PCR로부터의 2개의 VH 및 VL 제1 생성물을 중첩 확장 PCR(오버랩 익스텐션 PCR)에 의해 무작위로 연결했다. 각 PCR 반응물을 100ng의 정제된 VL 및 VH 생성물, 각 프라이머 60pmol, 10 x 반응 버퍼 10μL, 8μL의 2.5mM dNTP, Taq DNA 중합효소 0.5μL 및 물과 100μL의 최종 부피로 혼합했다. PCR을 다음의 조건하에서 수행했다: 25 사이클 (i) 94℃에서 15초, (ii) 56℃에서 30초, 및 (iii) 72℃에서 2분, 이후 72℃에서 10분간 최종 확장. 약 700bp의 길이를 가진 단쇄 가변 영역 단편을 포함하는 PCR 생성물을 1.5% 아가로오스 겔 위에 로딩하고, 전기영동 후 QIAGEN Gel II 추출 키트(QIAGEN)를 사용하여 뉴클레오타이드 단편을 정제했다. 정제된 PCR 생성물을 OD 260nm에서 판독하여 정량했다(1 유닛 OD = 500.5μg/mL).
3. 라이브러리, 리게이션(ligation) 및 형질전환
PCR 생성물의 scFv 단편과 벡터 pComb3X-SS(The Scripps Research Institute CA, USA)를 Sfi I 제한 효소로 절단(digest)했다. 정제된 중첩 PCT 생성물 100.5μg을 Sfi I 30유닛(16 유닛 당 μg DNA, Roche Molecular Systems, Pleasanton, CA, USA), 10 x 반응 버퍼 20μL 및 물과 최종 부피 200μL로 혼합했다. pComb3X-SS 벡터 20μg을 Sfi I 120 유닛(6 유닛 당 μg DNA), 10 x 반응 버퍼 20μL 및 물과 최종 부피 200μL로 혼합했다. 혼합물을 8시간 동안 50℃에서 절단했다. 이후, scFv 단편(약 700bp) 및 벡터(약 3400bp)를 포함하는 절단된 생성물을 1% 아가로오스 겔 위에 로딩하고 겔 추출 키트 II QIAGEN(QIAGEN, Valencia, CA, USA)을 사용하여 정제했다. Sfi I-제한된 pComb3X 벡터 1400ng과 절단된 scFv 단편 700ng을 5 x 리가아제 버퍼, 10μL의 T4 DNA 리가아제(Invitrogen, Carlsbad, CA, USA) 및 물과 최종 부피 200μL로 혼합했다. 혼합물을 16시간 동안 16℃에서 인큐베이션하여 리게이션을 수행했다.
에탄올로 침전 후 DNA 펠릿을 물 15μL에 용해했다. 라이브러리를 생성하기 위해, 리게이션 샘플을 이콜리(E. coli) 균주 ER2738(New England Biolabs Inc., Hitchin, Hertfordshine, SG4 OTY, England, UK)에 바이브레이터 유전자(유전자 펄서: Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA)를 사용하여 전기천공을 통해서 형질전환했다. 세포를 수퍼 브로스(SB) 배지 5mL와 혼합하고 37℃에서 1시간 동안 250rpm에서 교반하면서 인큐베이션했다. 이후, 100mg/mL 카나마이신 3μL를 SB 배지 10mL에 첨가했다. 라이브러리 크기를 결정하기 위해, 배양물 샘플 0.1μL, 1μL 및 10μL를 50μg/mL 카나마이신을 함유하는 루리아 브로스(LB) 한천판 위에 문질러발랐다. 1시간 교반 후, 100mg/mL 카나마이신 4.5μL를 LB 배양물에 첨가하고 추가로 1시간 더 교반했다. 이후, 물 중의 VCM13 헬퍼 파지 2mL(>1011 cfu/mL)를 100mg/mL 카나마이신 92.5μL를 함유하는 예열된 LB(183mL)와 함께 LB 배지에 첨가했다. 이 혼합물을 추가로 2시간 동안 37℃에서 250rpm에서 교반했다. 이후, 카나마이신 280μL(50mg/mL)를 배양물에 첨가하고 37℃에서 하룻밤 교반했다. 다음날, 박테리아 펠릿을 고속 원심분리기(Beckman, JA-10 로터)를 사용하여 4℃, 3,000g에서 원심분리했다. 이후, 박테리아 펠릿을 사용하여 파지미드 DNA를 추출했고 상청액은 멸균 원심분리병으로 옮겼다. 이후, 폴리에틸렌글리콜-8000(PEG-8000, Sigma) 8g과 염화나트륨 6g을 상청액에 첨가한 다음 얼음에서 30분간 유지했다. 이후, 상청액을 4℃, 15,000g에서 15분간 원심분리했다. 이후, 상청액을 버리고 파지 펠릿을 완충 식염수(TBS)에 현탁했다.
실시예 3: 면역화된 항원에 대한 라이브러리 패닝(바이오패닝)(bio-panning)
자기 비드(Dynabeads M - 270 Epoxy, Invitrogen)를 사용하여 바이오-패닝을 수행했다. 실온에서 대략 1 x 107 비드를 재조합 FAM19A5 단백질 5μg으로 실온에서 20시간 동안 비드와 단백질을 함께 회전 교반하여 코팅했다. 코팅이 완료되면 비드를 포스페이트 완충 식염수(PBS)로 4번 세척하고 실온에서 3% BSA를 함유하는 PBS 중에서 1시간 동안 차단했다. 이후, 코팅된 비드를 상기 설명된 파지-디스플레이된 scFv와 함께 실온에서 2시간 동안 배양했다. 항원 코팅된 비드에 결합되지 않은 파지를 제거하기 위해, 비드를 0.05% Tween 20/PBS로 세척했다. 이후, 결합된 파지를 50μL의 0.1M 글리신/염화수소(0.1M 글리신-HCl, pH 2.2)로 용출하고 염화수소와 함께 2M Tris(Tris-HCl, pH 9.1) 3μL로 중화했다. 이 파지-함유 상청액을 사용하여 이콜리 ER2738 세포를 감염시켰고, VCSM13 헬퍼 파지를 사용하여 하룻밤 증폭하고 구제했다. 또한, 50μg/mL 카나마이신을 함유하는 LB 한천판 상에 파지-감염된 배양물을 블롯팅함으로써 파지-감염된 배양물로부터의 파지 역가에 의해 투입(인풋) 및 생성(아웃풋)을 결정했다. 다음날, PEG-8000과 NaCl을 사용하여 파지를 침전시켰고, 이어서 이것을 바이오패닝에 사용했다. 바이오패닝은 상기 과정을 반복함으로써 최대 총 5회 수행했다. 각 증폭에서 파지를 스크리닝하고 FAM19A5 단백질에 대한 높은 친화성에 대해 선택했다.
실시예 4: 파지 ELISA에 의한 클론의 선택
바이오패닝으로부터 선택된 클론을 분석하기 위해, 파지-디스플레이된 scFv로부터 개별 클론을 무작위로 선택했고 ELISA를 사용하여 클론이 FAM19A5 재조합 단백질에 결합하는 것을 확인했다. FAM19A5 재조합 단백질을 0.1M NaHCO3 버퍼에 희석하고, 단백질을 웰 당 100ng을 사용하여 16시간 동안 4℃에서 96웰 마이크로타이터 플레이트를 코팅했다. 다음날, 플레이트를 1시간 동안 37℃에서 3% BSA/PBS로 차단했다. 이후, 파지 상청액을 6% BSA/PBS와 혼합하고 37℃에서 2시간 동안 배양했다. 이후, 상청액을 함유하는 플레이트를 0.05% Tween 20/PBS로 세척했다. HRP-콘쥬게이트된 M13 항체(a-M13-HRP, Pierce Chemical Co, Rockford, IL, USA)를 1/5000으로 희석했다. 희석된 항체 50μL를 플레이트에 첨가하고 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션했다. 인큐베이션 및 세척 후, 색 전개를 위해 플레이트에 0.05M 시트레이트 버퍼 용액, 1μg/mL의 2,2'-아지노-비스(3-에틸벤조티아졸린-6-설폰산)(ABTS, Amresco, Solon, OH, USA), 및 0.1% H2O2를 첨가했다. 각 웰에 대한 흡광도를 405nm에서 측정했다.
종합하면, FAM19A5 재조합 단백질에 결합하고 높은 흡광도를 나타낸 24개 클론을 분석했고, 24개 클론으로부터 독특한 서열을 가진 13개의 scFv 클론을 얻었다. 클론의 추가 선택 후, 최고의 친화성을 가진 클론 1-65, 2-13, 및 3-2를 얻었다.
실시예 5: 항-FAM19A5-IgG2/4 항체의 생성
1. 포유류 발현 벡터에 항-FAM19A5 scFv의 서브클로닝
FAM19A5 scFv 유전자 서열에서, 인간 Cκ 유전자를 경쇄 가변 도메인에 연결했고, CH1, CH2, 및 CH3 유전자의 인간 면역글로불린 이소타입 IgG2/4를 중쇄 가변 영역에 연결했다. 제한 부위(Genscript, USA)를 첨가함으로써 각 경쇄와 각 중쇄를 가진 항체를 합성했다. 클로닝을 용이하게 하기 위해 합성된 유전자를 변형된 제한 부위를 가진 포유류 세포 발현 벡터에 삽입했다. 먼저, 경쇄 유전자를 Hind III 및 Xba I(New England Biolabs, UK) 제한 효소를 사용하여 벡터에 삽입한 후, NheI 및 BamHI(New England Biolabs, UK) 제한 효소를 사용하여 벡터에 중쇄 유전자를 첨가했다.
2. 항-FAM19A5 항체의 정제
항-FAM19A5-IgG2/4 항체를 발현 및 정제하기 위해, 포유류 세포 트랜스펙션 및 과발현 주사 시스템을 사용했다. 세포 배양 부피의 1/10에 상응하는 150mM 염화나트륨(NaCl, Merck) 중에서 2μg/mL의 포유류 발현 벡터와 4μg의 폴리에틸렌이민(PEI, Polysciences, Warrington, PA, USA)을 혼합했다. 혼합물을 실온에서 15분간 방치했다. 혼합물을 HEK293F 세포(2 x 106 세포/mL, Invitrogen)에 가한 후, 이것을 7% CO2 및 37℃에서 6일간 135rpm의 교반 조건에서 100 U/mL 페니실린 및 스트렙토마이신(Invitrogen)을 함유하는 Freestyle™ 293 발현 배양 배지에서 인큐베이션했다. 세포 배양 상청액으로부터 발현된 항-FAM19A5 IgG2/4 항체를 정제하기 위해, 단백질 A 비드(RepliGen, Waltham, MA, USA) 친화성 겔 크로마토그래피를 사용했다. 단백질 A 크로마토그래피 정제된 항체는 4-12% Bis-Tris 구배 겔 전기영동 상에서 전개되었다. 단백질의 크기 및 수율을 코마씨 브릴리언트 블루 염색에 의해 확인했다.
실시예 6: 항-FAM19A5 항체의 생체내 투여 후 안내 압력의 평가
생체내 FAM19A5 활성의 중화가 녹내장과 주로 관련된 상승된 안내 압력을 완화할 수 있었는지의 여부를 평가하기 위해 녹내장의 토끼 모델을 사용했다. 간단히 말해서, 뉴질랜드 화이트 토끼(수컷, 체중 2-2.5kg)(Hanlim Experiment Animal Research Institute, Kyonggi-Do, South Korea)를 Zoletil 50(VIRBAC, France)과 자일라진(Rompun®, Bayer AG, Germany)으로 마취시켰다. 이후, 안와로부터 토끼의 눈을 들어올려 안구강을 노출시켰다. 각 눈에 대해, 노출된 눈 위와 아래에 위치된 상공막 정맥을 공막 및 다른 인접한 혈관에 영향 없이 상공막 정맥을 폐색하기에 충분한 깊이로 전기소작기를 사용하여 소작했다.
녹내장 유도(제0일) 후 대략 2주째에, 토끼는 정상 인간 IgG 면역글로불린(대조군) 또는 항-FAM19A5 항체를 유리체내 주사를 통해서 각 눈에 투여받았다(50μL 부피로 100μg/눈). 동물은 총 4주 동안 주 1회 항체를 투여받았다. 나이브(녹내장이 없고 항체 주사를 받지 않은) 토끼를 추가 대조군으로 사용했다. 녹내장 유도 후 0일, 14일 및 28일째에 TonoVet®을 사용하여 안내 압력을 측정했다. 도 1에 도시된 대로, 측정된 모든 시간에서, 항-FAM19A5 항체는 토끼의 안내 압력에는 효과가 없었다. IgG 대조군 항체 또는 항-FAM19A5 항체를 투여받은 토끼는 나이브 동물과 비교하여 유사하게 상승된 안내 압력을 나타냈다.
실시예 7: 항-FAM19A5 항체의 생체내 투여 후 망막 전위 차이의 평가
망막전위도검사(ERG)는 광수용기(간상체 및 추상체), 내부 망막 세포(양극 및 무축삭 세포) 및 신경절 세포를 포함하는 망막의 다양한 세포에 의해 발생된 전기 활성을 측정하는 진단 시험이다. 일반적으로, 밝은 빛이 비칠 때 건강한 눈의 ERG는 처음에는 마이너스 편향("A-파")이 있고 이후 B-파가 뒤따르는 복합 파형을 나타낼 것이며, 상승은 점점 가파르게 되고 피크는 더 빨라지는데, 이때 "진동소파 전위"(OP)라고 알려진 중첩된 고-주파 진동이 나타난다. A-파는 간상체의 종합적 반응에 의해 통제되고, 암소시의 B-파는 간상체 양극 뉴런의 반응에 의해 통제된다. OP는 양극 세포, 무축삭 세포 및 신경절 세포가 상호작용하는 내망상층 내에서 발생한다(Wilsey et al., Curr Opin Ophthalmol 27(2): 118-124 (2016)). 이들 값을 평가함으로써 망막 내의 상이한 세포들의 건강을 평가할 수 있다.
실시예 6에서 상세히 설명된 대로 뉴질랜드 화이트 토끼에서 녹내장을 유도했고, 동물의 각 눈에 인간 IgG 대조군 항체 또는 항-FAM19A5 항체를 주사했다. 항-FAM19A5 항체의 최초 투여 후 4주째에 다음의 값을 측정하여 동물의 눈에서의 전기 활성(즉 "망막 전위 차이")를 평가했다: (i) A-파에 대한 반응 시간(시간 대 피크 진폭)("A-타임") 및 (ii) 진동소파 전위.
도 2에 도시된 대로, 항-FAM19A5 항체를 투여받은 동물에서 A-타임은 대조군 항체를 투여받은 동물과 비교했을 때 현저한 개선이 있었다(좌측 패널). 항-FAM19A5 항체를 투여받은 동물에 대한 A-타임은 나이브(건강한) 동물의 A-타임과 더 비슷했다. 유사하게, 항-FAM19A5 항체의 투여는 녹내장-유도된 토끼에서 측정된 진동소파 전위를 유의하게 개선했다(우측 패널). IgG 대조군 항체를 투여받은 동물에서는 검출 가능한 진동소파 전위가 측정되지 않았다. 반면, FAM19A5-특이적 항체를 투여받은 동물에서 진동소파 전위는 나이브 동물의 것과 비슷했다. 종합하면, 이들 결과는 녹내장-유도된 토끼에 항-FAM19A5 항체의 투여가 녹내장과 관련된 망막 손상을 개선할 수 있음을 시사한다.
실시예 8: 항-FAM19A5 항체의 생체내 투여 후 망막 신경절 세포 빈도의 평가
상기 ERG 분석으로부터의 결과를 확인하기 위해, 실시예 6에 설명된 대로 뉴질랜드 화이트 토끼에서 녹내장을 다시 유도했고, 동물의 각 눈에 인간 IgG 대조군 항체 또는 항-FAM19A5 항체를 주사했다. 이후, 항-FAM19A5 항체의 최초 투여 후 4주째에 동물을 죽였다. 각 동물로부터 양쪽 눈을 수거하고 10% 중성 완충된 포르말린 용액에 대략 24시간 동안 고정했다. 이후, 눈을 PBS로 세척한 후, 각막, 수정체 및 유리체막을 분리했다. 이후, 눈을 컵 모양으로 만들고 50% 메탄올에 30분 동안 고정했다. 이후, 눈을 멸균 증류수로 세척하고, 각 눈을 12-웰 플레이트의 웰에 넣었다. 0.1% 에티듐 브로마이드의 대략 0.5mL를 각 웰에 첨가하고, 이 용액에서 30분 동안 눈을 인큐베이션했다. 인큐베이션 후, 눈을 멸균 증류수로 세척하고 60mm 접시 위에 장착시켰다. 형광 현미경을 사용하여 망막 신경절 세포층에서의 세포의 수를 측정했다.
도 3a 및 3b에 도시된 대로, IgG 대조군 항체를 투여받은 녹내장-유도된 토끼에서 망막 신경절 세포의 수는 나이브 대조군 토끼의 세포 수보다 유의하게 더 낮았다(절대값 및 망막 신경절 세포층에 있는 총 세포 중 퍼센트 모두). 그러나, 항-FAM19A5 항체를 투여받은 동물에서는 망막 신경절 세포층에서 관찰된 망막 신경절 세포의 수가 현저하게 증가했다. 이러한 결과는 항-FAM19A5 항체의 투여가 녹내장에서 관찰된 망막 신경절 세포의 상실을 감소시키고 내망상층과 망막 신경 세포의 신경 연결부를 보호할 수 있음을 시사한다.
실시예 9: 항-FAM19A5 항체의 생체내 투여의 항염증 효과
녹내장의 정확한 원인은 아직 충분히 밝혀지지 않았지만, 동물 연구는 녹내장과 관련된 구조 손상(예를 들어 망막 신경절 세포의 상실)과 염증의 강한 연관성을 확인했다(Tezel et al., Invest Ophthalmol Vis Sci 42: 1787-1794 (2001); Wang et al., Invest Ophthalmol Vis Sci 49: 1916-1923 (2008)).
실시예 3에서 관찰된 증가된 망막 신경절 세포 빈도가 항-FAM19A5 항체의 항염 특성으로 인한 것인지의 여부를 평가하기 위해, 상기 실시예에 설명된 대로 뉴질랜드 화이트 토끼에서 녹내장을 유도했다. 녹내장 유도 후 약 2주째에, 동물은 유리체내 주사를 통해서 각 눈에 인간 IgG(대조군) 또는 FAM19A5-특이적 항체 100μg을 투여받았다. 동물은 총 4주 동안 매주 1회 항체를 투여받았다. 마지막 항체 투여 후, 토끼를 죽이고 눈을 절제해서 4% 파라포름알데하이드(pH 7.4)에 고정했다. 눈을 OCT 저온장치 절편화 매질로 포매시키고 절편화가 준비될 때까지 -80℃에 보관했다. 준비가 완료되면 눈을 5μm 두께 절편으로 절단한 후, 이것을 염색을 위해 유리 슬라이드 위에 장착했다.
미세아교세포 활성화시 특이적으로 발현되는 칼슘-결합 단백질인 Iba-1에 대해 염색함으로써 항-FAM19A5 항체의 항염 특성을 평가했다(Bosco et al., J Comp Neurol 519(4): 599-620 (2011)). 간단히 말해서, 파라핀 제거 후, 조직 절편을 10% 정상 말 혈청(Vector laboratories, Cat # S-2000, Lot # ZC0621)으로 대략 1시간 동안 차단했다. 이후, 조직 절편을 0.1% Triton X-100과 3% 정상 말 혈청을 함유하는 버퍼("희석 버퍼") 중에 1:250 농도의 토끼 항-Iba-1 항체(Wako, Cat# 019-19741, Lot# LKG5732)("일차 항체")로 4℃에서 하룻밤 염색했다. 다음날 아침에 조직 절편을 세척하고, 희석 버퍼 중에 1:500 농도로 바이오틴화된 염소 항-토끼 IgG(Vector laboratories, Cat # BA-1000, Lot # ZB0318)로 대략 1시간 동안 염색했다. 이후, 조직 절편을 세척하고 추가로 1시간 더 아비딘-바이오틴 퍼옥시다아제 복합 용액(Vector laboratories, Cat # 6200)으로 처리했다. 이후, 조직 절편을 세척하고 DAB 기질 용액으로 처리했다(DAB 버퍼 1mL마다 DAB 크로모겐 1방울)(Vector laboratories, Cat # SK-4100, Lot # ZC1214). 원하는 색 강도가 달성되었으면(대략 1분), 조직 절편을 세척하고 명시야 광 현미경 아래에서 분석했다.
도 4에 도시된 대로, 나이브 동물과 비교하여, 녹내장 유도된 동물(IgG 대조군 그룹 및 항-FAM19A5 항체 그룹 모두)은 시신경 머리 영역 내에서 유의하게 더 높은 수준의 Iba-1 발현을 나타냈다. 그러나, 두 항체 치료군 중, FAM19A5 항체 치료된 동물은 IgG 대조군 항체를 투여받은 동물보다 Iba-1 양성 염색이 유의하게 더 적었다. 이 결과는 FAM19A5 항체가 시신경 머리 내에서의 미세아교세포의 염증-매개 활성화를 억제함으로써 녹내장을 치료한다는 것을 시사한다.
개요 및 요약 부분을 포함하는 상세한 설명 부분은 청구항을 해석하기 위해 사용되도록 의도된다는 것이 인정되어야 한다. 개요 및 요약 부분은 본 발명자(들)에 의해 고찰된 대로 본 발명의 전부는 아니지만 하나 이상의 예시적인 구체예를 제시할 수 있고, 따라서 본 발명과 첨부된 청구항을 어떤 식으로도 제한하려고 의도하지 않는다.
본 발명은 명시된 기능들과 이들의 관계의 실시형태를 예시하는 기능적 구성 요소의 보조하에 상기 개시되었다. 이들 기능적 구성 요소의 경계는 설명의 편의를 위해 본 명세서에서 자의적으로 한정되었다. 명시된 기능들과 이들의 관계가 적절히 수행되는 한 대안의 경계도 한정될 수 있다.
특정한 구체예들에 대한 전술한 설명은 본 발명의 일반적인 성질을 충분히 드러낼 것이며, 제3자는 당업계의 지식을 적용함으로써 본 발명의 일반적인 개념으로부터 벗어나지 않고 과도한 실험 없이 이러한 특정한 구체예들을 다양한 용도에 맞게 쉽게 변형 및/또는 개조할 수 있다. 따라서, 이러한 개조 및 변형은 본 명세서에 제시된 교시 및 지침에 기초하여 개시된 구체예들의 등가물의 의미와 범위 내에 있도록 의도된다. 본 명세서에서 사용된 문구 또는 용어는 제한이 아닌 설명의 목적을 위한 것임이 이해되어야 하며, 본 명세서의 용어 또는 문구는 교시 및 지침에 비추어 당업자에 의해 해석되어야 한다.
본 발명의 범위 및 영역은 상기 설명된 예시의 구체예들 중 어느 것에 의해 제한되어서는 안 되며, 청구항 및 그것의 등가물에 따라서만 한정되어야 한다.
본 명세서에서 인용된 모든 간행물, 특허, 특허출원, 인터넷 사이트 및 수탁번호/데이터베이스 서열(폴리뉴클레오타이드와 폴리펩타이드 서열을 모두 포함)은 각 개별 간행물, 특허, 특허출원, 인터넷 사이트 또는 수탁 번호/데이터베이스 서열이 참고로 포함되도록 구체적으로 그리고 개별적으로 적시된 것과 동일한 범위로 모든 목적을 위해 그 전체가 참고로 본 명세서에 포함된다.
이 PCT 출원은 2017년 6월 27일자 제출된 미국 가출원 제62/525,639호 및 2017년 11월 7일자 제출된 제62/582,889호의 우선권의 이익을 주장하며, 이들은 모두 그 전체가 본 명세서에 참고로서 포함된다.
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caaccgagga cacggccacc tatttctgtg ccagagatgc tagtagtggt 300 gctgcttttg ggtcttacgg catggacccc tggggcccag ggaccctcgt caccgtctct 360 tca 363 <210> 178 <211> 330 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-C12antibodyVL <400> 178 gagctcgata tgacccagac tccatcctcc gtgtctgcag ctgtgggagg cacagtcacc 60 atcaagtgcc aggccagtca gagcattagt agctacttat cctggtatca gcagaaacca 120 gggcagcctc ccaagctcct gatctatgaa gcatccaaac tggcctctgg ggtcccatcg 180 cggttcagcg gcagtggata tgggacagag ttcactctca ccatcagcga cctggagtgt 240 gccgatgctg ccacttacta ctgtcaacag ggttatagta gtactaatgt ttggaatgct 300 ttcggcggag gcaccaatgt ggaaatcaaa 330 <210> 179 <211> 451 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> P2-C12 HC <400> 179 Gln Ser Leu Glu Glu Ser Gly Gly Arg Leu Val Thr Pro Gly Thr Pro 1 5 10 15 Leu Thr Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Ala 20 25 30 Val Thr Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Ile Gly 35 40 45 Tyr Ile Asn Trp Arg Gly Gly Thr Ser Tyr Ala Asn Trp Ala Lys Gly 50 55 60 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Claims (19)

  1. 대상의 녹내장을 치료하기 위한 FAM19A5(family with sequence similarity 19, member A5) 단백질에 대한 길항제("FAM19A5 길항제")를 포함하는 녹내장의 예방 또는 치료용 제약학적 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 녹내장은 개방각 녹내장, 폐쇄각 녹내장, 정상 안압 녹내장("NTG"), 선천성 녹내장, 이차성 녹내장, 색소성 녹내장, 의사박리성 녹내장, 외상성 녹내장, 신생혈관성 녹내장, 홍채 각막 내피 증후군, 및 포도막염 녹내장으로 구성되는 군으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 녹내장의 예방 또는 치료용 제약학적 조성물.
  3. 제 1 항에 있어서, 상기 녹내장은 시신경 손상, 망막 신경절 세포("RGC") 상실, 높은 안내 압력("IOP"), 손상된 혈액-망막 장벽, 또는 대상의 망막 또는 시신경 내에서의 미세아교세포 활성 수준의 증가와 관련되는 것을 특징으로 하는 녹내장의 예방 또는 치료용 제약학적 조성물.
  4. 제 1 항에 있어서, 상기 녹내장은 시신경 머리에 대한 기계적 손상, 또는 대상의 망막 또는 시신경 내에서의 염증 수준의 증가에 의해 야기되는 것을 특징으로 하는 녹내장의 예방 또는 치료용 제약학적 조성물.
  5. 제 1 항에 있어서, 상기 FAM19A5 길항제는 (i) 대상의 망막 신경 세포 변성의 개시를 지연시키거나; (ii) 대상의 망막 또는 시신경 내에서의 염증의 수준을 감소시키거나; (iii) 대상의 망막의 신경절 세포층 내에서의 망막 신경절 세포의 빈도를 증가시키거나 또는 망막 신경절 세포의 상실을 감소시키거나 또는 망막 신경절 세포의 수를 회복시키거나; 또는 (iv) 이들의 임의의 조합을 수행하는 것을 특징으로 하는 녹내장의 예방 또는 치료용 제약학적 조성물.
  6. 제 1 항에 있어서, 상기 FAM19A5 길항제는 펩타이드 또는 화합물인 것을 특징으로 하는 녹내장의 예방 또는 치료용 제약학적 조성물.
  7. 제 1 항에 있어서, 상기 FAM19A5 길항제는 안티센스 올리고뉴클레오타이드, siRNA, shRNA, miRNA, FAM19A5 표적화 dsRNA, 앱타머, PNA, 또는 그것을 포함하는 벡터인 것을 특징으로 하는 녹내장의 예방 또는 치료용 제약학적 조성물.
  8. 1 항에 있어서, 상기 FAM19A5 길항제는 FAM19A5 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원-결합 부분("항-FAM19A5 항체"), 상기 항-FAM19A5 항체를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 또는 상기 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 벡터인 것을 특징으로 하는 녹내장의 예방 또는 치료용 제약학적 조성물.
  9. 제 8 항에 있어서, 상기 항-FAM19A5 항체는 SEQ ID NO: 5(QLAAGTCEIVTLDR), 6(TLDRDSSQPRRTIARQTARC), 7(TARCACRKGQIAGTTRARPA), 9 (CDMLPCLEGEGCDLLINRSG), 또는 10(NRSGWTCTQPGGRIKTTTVS)의 서열 유사성 19를 가진 사람 패밀리, 멤버 A5 (FAM19A5) 에피토프에 결합하는 것을 특징으로 하는 녹내장의 예방 또는 치료용 제약학적 조성물.
  10. 제 8 항에 있어서, 상기 항-FAM19A5 항체는 SEQ ID NO: 2의 아미노산 잔기 (i) 46 내지 51(즉, DSSQPR), (ii) 46, 50 및 52(즉, D---P-R), 또는 (iii) 46, 47, 48 및 50(즉, DSS-P)에 해당하는, SEQ ID NO: 6의 FAM19A5 에피토프에 결합하는 것을 특징으로 하는 녹내장의 예방 또는 치료용 제약학적 조성물.
  11. 제 8 항에 있어서, 상기 항-FAM19A5 항체는 SEQ ID NO: 4의 아미노산 잔기 (i) 99 내지 107(즉, EGCDLLINR), (ii) 102, 103, 105, 및 107(즉, DL-I-R), (iii) 99, 100, 102, 103, 105, 및 107(즉, EG-DL-I-R), 또는 (iv) 99, 100, 및 107(즉, EG------R)에 해당하는, SEQ ID NO: 9의 FAM19A5 에피토프에 결합하는 것을 특징으로 하는 녹내장의 예방 또는 치료용 제약학적 조성물.
  12. 제 8 항에 있어서, 상기 항-FAM19A5 항체는 EP2, EP4, EP6, EP7 또는 EP8로 확인된 FAM19A5 에피토프로서, EP2는 아미노산 DSSQP(SEQ ID NO: 66)를 포함하고, EP4는 아미노산 ARCACRK(SEQ ID NO: 68)를 포함하고, EP6은 아미노산 KTKQWCDML(SEQ ID NO: 70)을 포함하고, EP7은 아미노산 GCDLLINR(SEQ ID NO: 71)을 포함하고, EP8은 아미노산 TCTQPGGR(SEQ ID NO: 72)을 포함하는 FAM19A5 에피토프에 결합하는 것을 특징으로 하는 녹내장의 예방 또는 치료용 제약학적 조성물.
  13. 제 9 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-FAM19A5 항체는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3과 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 11, 12, 및 13을 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 23, 24, 및 25를 포함하는 것을 특징으로 하는 녹내장의 예방 또는 치료용 제약학적 조성물.
  14. 제 9 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-FAM19A5 항체는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3과 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 14, 15, 및 16을 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 26, 27, 및 28을 포함하는 것을 특징으로 하는 녹내장의 예방 또는 치료용 제약학적 조성물.
  15. 제 9 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-FAM19A5 항체는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3과 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 17, 18, 및 19를 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 29, 30, 및 31을 포함하는 것을 특징으로 하는 녹내장의 예방 또는 치료용 제약학적 조성물.
  16. 제 9 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항-FAM19A5 항체는 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3과 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3을 포함하며, 여기서 중쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 20, 21, 및 22를 포함하고, 경쇄 CDR1, CDR2, 및 CDR3은 각각 SEQ ID NOs: 32, 33, 및 34를 포함하는 것을 특징으로 하는 녹내장의 예방 또는 치료용 제약학적 조성물.
  17. 제 8 항에 있어서, 상기 항-FAM19A5 항체는 키메라 항체, 인간 항체, 또는 인간화된 항체인 것을 특징으로 하는 녹내장의 예방 또는 치료용 제약학적 조성물.
  18. 제 1 항에 있어서, 상기 FAM19A5 길항제는 유리체내 투여되는 것을 특징으로 하는 녹내장의 예방 또는 치료용 제약학적 조성물.
  19. 제 8 항의 항-FAM19A5 항체, 이중특이적 분자, 또는 이의 면역콘쥬게이트를 포함하는 키트.
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