KR20210104090A

KR20210104090A - Syk 억제제의 염 및 이의 결정형

Info

Publication number: KR20210104090A
Application number: KR1020217021852A
Authority: KR
Inventors: 웬위안 췐; 홍지안 왕; 밍 장; 페이 류; 레이 싱; 종위안 후; 야후이 궈; 옌롱 류; 후이후이 장
Original assignee: 치아타이 티안큉 파마수티컬 그룹 주식회사
Priority date: 2018-12-14
Filing date: 2019-12-13
Publication date: 2021-08-24
Also published as: JP2022513844A; WO2020119785A1; SG11202106210QA; EP3896063A1; US20220017498A1; CN113166106B; EP3896063A4; EP3896063B1; JP7472138B2; CN113166106A

Abstract

본 발명은 Syk 억제제의 염 및 이의 결정형에 관한 것으로, 보다 상세하게는 5-플루오로-1-메틸-3-((5-(4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일)아미노)-6-(1H-피라졸-3-일)퀴놀린-2(1H)-케타민 염산염, 이의 결정형, 이의 제조방법, 이의 약학 조성물 및 이의 용도를 제공한다.
화학식 Ⅰ로 표시되는 화합물의 염산염 및 이의 결정형은 우수한 염 형성성, 높은 안정성 및 낮은 흡습성을 가지고, 물성, 안정성 및 대사 안정성 측면에서 장점을 가지며, 제조 의약품으로 가치가 있다.

Description

SYK 억제제의 염 및 이의 결정형

<관련 출원과의 상호 참조>

본 출원은 중국 특허청(China National Intellectual Property Administration)에 2018년 12월 14일자로 출원된 중국특허출원 제201811533849.X호에 대한 우선권 및 이익을 주장하며, 모든 내용은 전체가 본 출원에 참조로 포함된다.

본 발명은 의료 화학 분야에 속하며, Syk 억제제의 염 및 이의 결정형에 관한 것으로, 보다 구체적으로는 5-플루오로-1-메틸-3-((5-(4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일)아미노)-6-(1H-피라졸-3-일)퀴놀린-2(1H)-온 [5-fluoro-1-methyl-3-((5-(4-(oxetan-3-yl)piperazin-1-yl)pyridin-2-yl)amino)-6-(1H-pyrazol-3-yl)quinolin-2(1H)-one] 염산염과 이의 결정형, 이의 제조방법 및 이의 약학적 조성물과 용도에 관한 것이다.

비장 티로신 키나아제(Spleen tyrosine kinase, Syk)는 세포 내 티로신 단백질 키나아제로, ZAP70 단백질 키나아제 계열에 속한다. Syk는 B 세포의 초기 발달, 림프구 개체 발생, 및 성숙한 B 세포의 기능에서 중요한 역할을 한다. 이 과정에서, Src 키나아제에 의한 인산화 없이 다양한 신호 전달 경로 및 기능에 관여한다. Syk는 조혈 줄기세포에서 편재적으로 발현될 뿐만 아니라, 상피 세포, 간세포, 섬유아세포, 신경세포 및 유방 조직과 같은 비 조혈 세포에서도 발현되며, 다양한 기능을 가진다.

Syk PTK의 기능 장애는 알레르기 반응, 천식, 염증 및 자가면역질환과 같은 많은 인간 질병에서 발견되며, 수많은 연구에서 Syk는 급성 또는 만성 염증에서 중요한 매개체임을 보여주었다. Syk의 활성화는 몇 가지 일반적인 B 세포 악성 종양에서 발견된다. 예를 들면, 항원 독립적 인산화된 Syk는 소포 림프종, 미만성 거대 B-세포 림프종, 외투 세포 림프종 및 B 세포 만성 림프구성 백혈병에서 검출될 수 있다. 연구자들은 소포 림프종 및 미만성 거대 B-세포 림프종의 세포에서 Syk의 억제가 하류 신호 분자의 인산화 수준을 감소시켜, 종양 세포의 증식과 생존을 억제할 수 있음을 발견하였다. 또한, Syk 전위는 골수이형성증후군 및 말초 T-세포 림프종에서 발견되어, 키나아제가 원종양유전자로서 작용할 수 있음을 시사한다. 따라서, Syk 활성의 억제는 B 세포 림프종 및 백혈병을 포함한 특정 유형의 암을 치료하는 데 사용될 수 있다.

본 발명은 SYK 억제제의 염 및 이의 결정형을 제공한다.

보다 상세하게는, 5-플루오로-1-메틸-3-((5-(4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일)아미노)-6-(1H-피라졸-3-일)퀴놀린-2(1H)-온 [5-fluoro-1-methyl-3-((5-(4-(oxetan-3-yl)piperazin-1-yl)pyridin-2-yl)amino)-6-(1H-pyrazol-3-yl)quinolin-2(1H)-one] 염산염과 이의 결정형, 이의 제조방법, 이의 약학적 조성물 및 용도를 제공한다.

본 발명은 하기와 같은 화학명을 갖는 화학식 Ⅰ의 화합물을 제공한다:

5-플루오로-1-메틸-3-((5-(4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일)아미노)-6-(1H-피라졸-3-일)퀴놀린-2(1H)-온[5-fluoro-1-methyl-3-((5-(4-(oxetan-3-yl)piperazin-1-yl)pyridin-2-yl)amino)-6-(1H-pyrazol-3-yl)quinolin-2(1H)-one]

일 양상에 있어서, 본 발명은 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염을 제공한다.

일부 실시예에서, 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염은 화학식 Ⅰ의 화합물의 1:1 염산염 (화학식 Ⅱ)이다.

상기 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염은 결정형 또는 무정형일 수 있고, 바람직하게는 결정형일 수 있다.

화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 결정형은 높은 안정성, 적은 흡습성, 더 나은 생체 내 대사 수준, 더 긴 반감기, 비장 티로신 키나아제에 대한 더 나은 억제 활성, 더 나은 물리적 특성, 안정성과 대사 안정성 및 높은 약물 기량성을 특징으로 한다.

일부 실시예에서, 상기 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염은 X-선 분말 회절 스펙트럼에서 2θ 값이 약 4.9°, 10.1°, 12.2°, 15.5°, 19.6°, 및 23.8°인 회절 피크를 갖는 것을 특징으로 하는 A형 결정이다;

특징적으로, X-선 분말 회절 스펙트럼에서 2θ 값이 약 4.9°, 10.1°, 12.2°, 15.5°, 17.8°, 19.2°, 19.6°, 22.9°, 23.8° 및 25.6°인 회절 피크를 가지며;

특징적으로, X-선 분말 회절 스펙트럼에서 2θ 값이 약 4.9°, 9.6°, 10.1°, 12.2°, 15.5°, 16.3°, 17.8°, 19.2°, 19.6°, 20.4°, 22.9°, 23.3°, 23.8°, 25.6°, 26.8°, 27.4°, 29.0° 및 36.8°인 회절 피크를 가지며; 및

특징적으로, X-선 분말 회절 스펙트럼에서 2θ 값이 약 4.9°, 9.6°, 10.1°, 12.2°, 14.4°, 15.5°, 16.3°, 17.3°, 17.8°, 19.2°, 19.6°, 20.4°, 22.9°, 23.3°, 23.8°, 25.6°, 26.8°, 27.4°, 28.3°, 29.0°, 31.2°, 31.6°, 31.9°, 32.3°, 33.0°, 34.3° 및 36.8°인 회절 피크를 가진다.

본 발명의 일 실시예에서, 상기 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 A형 결정에 대한 X-선 분말 회절 스펙트럼에서 특징적인 피크의 위치 및 강도는 표 1에 나타내었다.

표 1 : A형 결정에 대한 XRPD 패턴 특성 데이터

번호	회절각 2θ(^o)	상대 강도 (%)	번호	회절각 2θ (^o)	상대 강도 (%)
1	4.89	27.2	15	23.80	17.9
2	9.64	8.6	16	25.62	13.5
3	10.11	68.4	17	26.76	8.7
4	12.17	20.3	18	27.43	7.6
5	14.43	2.4	19	28.30	4.1
6	15.50	100	20	28.99	7.1
7	16.25	6.3	21	31.20	3.3
8	17.30	4.7	22	31.55	3
9	17.78	10.1	23	31.93	3.6
10	19.21	12.6	24	32.30	1.9
11	19.64	18.5	25	32.99	4.1
12	20.35	6.5	26	34.26	2.8
13	22.86	10.4	27	36.82	5.1
14	23.34	6

본 발명의 일 실시예에서, 도 1에 나타난 바와 같은 X-선 분말 회절 패턴을 갖는 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 A형 결정이 제공된다.

본 발명의 일 실시예에서, 시차주사열량측정(DSC) 패턴에서 약 272 ℃에서 흡수 피크를 갖는 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 A형 결정이 제공된다.

본 발명의 일 실시예에서, 도 2에 나타난 바와 같은 DSC 패턴을 갖는 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 A형 결정이 제공된다.

본 발명의 일 실시예에서, 도 3에 나타난 바와 같은 열중량 분석(TGA) 패턴을 갖는 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 A형 결정이 제공된다.

일부 실시예에서, 상기 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염은 X-선 분말 회절 스펙트럼에서 2θ 값이 약 5.2°, 10.4°, 14.7°, 15.5° 및 25.3°인 회절 피크를 갖는 것을 특징으로 하는 B형 결정이다;

특징적으로, X-선 분말 회절 스펙트럼에서 2θ 값이 약 5.2°, 10.4°, 14.7°, 15.5°, 16.5°, 20.7°, 21.5°, 22.8°, 25.3° 및 27.9°인 회절 피크를 가지며;

특징적으로, X-선 분말 회절 스펙트럼에서 2θ 값이 약 5.2°, 10.4°, 14.7°, 15.5°, 16.5°, 17.1°, 17.5°, 20.3°, 20.7°, 21.5°, 22.8°, 23.8°, 24.7°, 25.3°, 27.5°, 27.9° 및 31.2°인 회절 피크를 가지며; 및

특징적으로, X-선 분말 회절 스펙트럼에서 2θ 값이 약 5.2°, 10.4°, 13.1°, 14.7°, 15.5°, 16.5°, 17.1°, 17.5°, 20.0°, 20.3°, 20.7°, 21.5°, 22.8°, 23.2°, 23.8°, 24.7°, 25.3°, 25.9°, 26.2°, 27.5°, 27.9°, 28.2°, 29.7°, 30.0°, 30.3°, 31.2°, 31.7°, 32.3°, 34.5°, 34.9° 및 36.6°인 회절 피크를 가진다.

본 발명의 일 실시예에서, 상기 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 B형 결정에 대한 X-선 분말 회절 스펙트럼에서 특징적인 피크의 위치 및 강도는 표 2에 나타내었다.

표 2 : B형 결정에 대한 XRPD 패턴 특성 데이터

번호	회절각 2θ (^o)	상대 강도 (%)	번호	회절각 2θ (^o)	상대 강도 (%)
1	5.20	44.4	17	25.34	100
2	10.35	52.2	18	25.92	7.4
3	13.09	7.3	19	26.22	6.2
4	14.74	59.8	20	27.47	14.8
5	15.50	67.8	21	27.89	51.1
6	16.50	22	22	28.18	9.8
7	17.14	12.5	23	29.66	4.7
8	17.45	10.4	24	30.04	8.7
9	20.02	5.0	25	30.31	7.8
10	20.33	17.1	26	31.22	10.1
11	20.72	45.2	27	31.73	4.7
12	21.52	46.4	28	32.31	5.4
13	22.78	29.3	29	34.45	4.7
14	23.21	8.2	30	34.91	4.7
15	23.78	18.0	31	36.64	4.7
16	24.67	18.2

본 발명의 일 실시예에서, 도 4에 나타난 바와 같은 X-선 분말 회절 패턴을 가지는 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 B형 결정이 제공된다.

다른 양상에서, 본 발명은 하기의 단계를 포함하는 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 A형 결정 제조방법을 제공한다:

(1) 화학식 Ⅰ의 화합물을 예열된 용매에 첨가한 다음, 용액이 맑아질 때까지 다른 용매를 적가하고 온도를 유지하면서 교반하는 단계;

(2) 단계 (1)의 용액에 희석된 염산을 적가하고 온도를 유지하면서 밤새 교반하는 단계; 및

(3) 단계 (2)의 용액에 용매를 천천히 적가하고, 교반하여 고체를 침전시키고 여과 및 건조하여 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 A형 결정을 제공하는 단계.

본 발명의 일 실시예에서, 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 A형 결정의 상기 제조방법에 따른 단계 (1)의 예열된 용매는 물, 에틸 아세테이트(ethyl acetate), 디클로로메탄(dichloromethane), 에탄올(ethanol), 아세톤(acetone), 아세토니트릴(acetonitrile), 테트라하이드로퓨란(tetrahydrofuran) 및 메틸 터트-부틸 에더(methyl tert-butyl ether)로 이루어진 군에서 선택되고; 바람직하게는 상기 예열된 용매는 물 또는 에틸 아세테이트이다.

본 발명의 일 실시예에서, 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 A형 결정의 상기 제조방법에 따른 단계 (1)의 예열된 용매는 30 내지 40 ℃, 바람직하게는 35 내지 38 ℃이다.

본 발명의 일 실시예에서, 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 A형 결정의 상기 제조방법에 따른 단계 (1)의 다른 용매는 포름산(formic acid), 아세트산(acetic acid), 프로피온산(propionic acid) 및 옥살산(oxalic acid)으로 이루어진 군에서 선택되고; 바람직하게는 상기 다른 용매는 포름산이다.

본 발명의 일 실시예에서, 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 A형 결정의 상기 제조방법에 따른 단계 (1)의 화학식 Ⅰ의 화합물 대 상기 다른 용매에 대한 몰 부피비는 1 mmol:0.8 mL 내지 1 mmol:1.5 mL, 바람직하게는 1 mmol:0.8 mL 내지 1 mmol:1.2 mL, 보다 바람직하게는 1 mmol:0.8 mL 내지 1 mmol:1.0 mL이다.

본 발명의 일 실시예에서, 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 A형 결정의 상기 제조방법에 따른 단계 (1)의 예열된 용매 대 상기 다른 용매에 대한 부피비는 0.5:1 내지 3:1, 바람직하게는 0.5:1 내지 2:1이다.

본 발명의 일 실시예에서, 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 A형 결정의 상기 제조방법에 따른 단계 (2)의 희석된 염산 중 염산 대 단계 (1)의 화학식 Ⅰ의 화합물의 몰 비는 1:1 내지 3:1, 바람직하게는 1:1 내지 2:1이다.

본 발명의 일 실시예에서, 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 A형 결정의 상기 제조방법에 따른 단계 (2)의 희석된 염산의 농도는 1 내지 2 mol/L, 바람직하게는 1 내지 1.2 mol/L이며; 상기 희석된 염산은 시판되는 농축 염산을 물로 희석하여 얻거나, 시판되는 농축 염산 및 단계 (1)의 예열된 용매와 같은 다른 용매를 혼합한 것이다.

본 발명의 일 실시예에서, 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 A형 결정의 상기 제조방법에 따른 단계 (3)의 용매는 메탄올(methanol), 에탄올(ethanol), 아세톤(acetone), 이소프로판올(isopropanol), 아세토니트릴(acetonitrile), 테트라하이드로퓨란(tetrahydrofuran), 에틸렌 글리콜(ethylene glycol) 및 프로필렌 글리콜(propylene glycol)로 이루어진 군에서 선택되고; 바람직하게는 상기 용매는 에탄올이다.

본 발명의 일 실시예에서, 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 A형 결정의 상기 제조방법에 따른 단계 (3)의 용매 대 단계 (1)의 화학식 Ⅰ의 화합물 몰 부피비는 2 mL:1 mmol 내지 10 mL:1 mmol, 바람직하게는 4 mL:1 mmol 내지 9 mL:1 mmol이다.

화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 A형 결정의 상기 제조에서, 단계 (1) 및 단계 (2)의 "온도 유지" 는 교반 온도가 단계 (1)의 예열된 용매와 같은 온도로 유지되는 것을 의미한다.

또 다른 양상에서, 본 발명은 하기의 단계를 포함하는 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 B형 결정 제조방법을 추가로 제공한다:

(1) 화학식 Ⅰ의 화합물을 용매에 첨가한 다음, 용해시키기 위해 교반하는 단계;

(2) 단계 (1)의 용액에 희석된 염산을 첨가하고 밤새 교반하는 단계; 및

(3) 단계 (2)의 용액을 원심분리하고 고체를 건조시켜 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 B형 결정을 제공하는 단계.

본 발명의 일 실시예에서, 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 B형 결정의 상기 제조방법에 따른 단계 (1)의 용매는 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 아세트산, 아세톤, 아세토니트릴 및 이의 둘 이상의 혼합 용매로 이루어진 군에서 선택되고; 바람직하게는 상기 용매는 에탄올, 아세트산, 아세톤 또는 이의 둘 이상의 혼합 용매이며, 보다 바람직하게는 상기 용매는 에탄올, 에탄올 및 아세트산의 혼합 용매, 또는 아세톤 및 아세트산의 혼합 용매이다.

본 발명의 일 실시예에서, 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 B형 결정의 상기 제조방법에 따른 화학식 Ⅰ의 화합물 대 단계 (1)의 용매의 몰 부피비는 1 mmol:10 mL 내지 1 mmol:40 mL, 바람직하게는 1 mmol:20 mL 내지 1 mmol:35 mL이다.

본 발명의 일 실시예에서, 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 B형 결정의 상기 제조방법에 따른 단계 (1)의 용매는 아세트산 및 에탄올의 혼합 용매 또는 아세트산 및 아세톤의 혼합 용매이고, 상기 아세트산 대 에탄올 또는 아세트산 대 아세톤의 부피비는 1:5 내지 1:10, 바람직하게는 1:5 내지 1:8이다.

본 발명의 일 실시예에서, 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 B형 결정의 상기 제조방법에 따른 단계 (1)의 화학식 Ⅰ의 화합물 대 단계 (2)의 염산의 몰 비는 1:1 내지 1:5, 바람직하게는 1:1 내지 1:3.5이다.

본 발명의 일 실시예에서, 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 B형 결정의 상기 제조방법에 따른 단계 (2)의 희석된 염산의 농도는 1 내지 2 mol/L, 바람직하게는 1 내지 1.2 mol/L 이며; 상기 희석된 염산은 시판되는 농축 염산을 물로 희석하여 얻은 것이다.

또 다른 양상에서, 본 발명은 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염을 제공하며, 여기서 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 A형 결정은 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염 중량의 50% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 보다 바람직하게는 90% 이상 및 가장 바람직하게는 95% 이상을 차지한다. 또한, 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염은, 예를 들어, 소량의 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 B형 결정과 같이, 소량의 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 다른 결정 또는 무정형을 포함할 수 있다.

또 다른 양상에서, 본 발명은 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염을 제공하며, 여기서 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 B형 결정은 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염 중량의 50% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 보다 바람직하게는 90% 이상 및 가장 바람직하게는 95% 이상을 차지한다.

또 다른 양상에서, 본 발명은 상기 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 치료적 유효량을 포함하는 약학 조성물을 제공한다; 상기 약학 조성물은 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체 또는 다른 부형제를 포함할 수 있다.

또 다른 양상에서, 본 발명은 Syk 수용체 관련 질환을 치료하기 위한 의약 제조에서의 상기 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염 또는 약학 조성물의 용도를 제공한다.

또 다른 양상에서, 본 발명은 상기 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염 또는 약학 조성물의 치료적 유효량을, 필요로 하는 포유동물에게 투여하는 것을 포함하는, Syk 수용체 관련 질환을 치료하기 위한 방법을 제공한다.

또 다른 양상에서, 본 발명은 포유동물에서 Syk 수용체 관련 질환을 치료에 사용되는 상기 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염 또는 약학 조성물을 제공한다.

본 발명의 일부 실시예에서, 포유동물은 인간이다.

본 발명에서, 상기 약학 조성물은 특정 제형으로 제형화될 수 있고, 투여 경로는 바람직하게는 경구 투여, 비경구 투여 (피하, 근육 내 및 정맥 내 투여 포함), 직장 투여 등이다. 예를 들어, 경구 투여를 위한 적절한 제형은 정제, 캡슐, 과립, 가루, 알약, 분말, 환제, 시럽 또는 현탁액을 포함하고; 비경구 투여에 적절한 제형은 주사용 수성 또는 비수성 용액 또는 에멀젼을 포함하며; 직장 투여에 적절한 제형은 친수성 또는 소수성 담체를 가진 좌제를 포함한다. 투여 형태 또한 활성 성분의 신속, 지연 또는 변형 방출을 위해 원하는 대로 제형화될 수 있다.

본 발명의 일부 실시예에서, Syk 수용체 관련 질환은 암 또는 염증성 질환에서 선택된다.

본 발명의 일부 실시예에서, Syk 수용체 관련 질환은 B-세포 림프종(B-cell lymphoma), 호지킨 림프종(Hodgkin's lymphoma), 비호지킨 림프종(non-Hodgkin's lymphoma), 모양세포성 백혈병(hairy cell leukemia), 다발성 골수종(multiple myeloma), 만성 과립구성 백혈병(chronic granulocytic leukemia), 급성 과립구성 백혈병(acute granulocytic leukemia), 만성 림프구 백혈병(chronic lymphocytic leukemia), 급성 림프구 백혈병(acute lymphocytic leukemia), 류마티스 관절염(rheumatoid arthritis), 알레르기 비염(allergic rhinitis), 만성 폐쇄성 폐질환 (chronic obstructive pulmonary disease, COPD), 성인 호흡곤란 증후군 (adult respiratory distress syndrome, ARDs), 알레르기-유도 염증성 질환(allergy-induced inflammatory diseases), 다발성 경화증(multiple sclerosis), 자가면역질환(autoimmune diseases), 급성 면역 반응(acute inflammatory reactions), 알레르기성 장애(allergic disorders), 또는 다낭성 신장 질환(polycystic kidney disease)에서 선택된다.

본 발명에서, 시료의 X-선 분말 회절 스펙트럼은 하기의 조건에서 측정되었다:

기기: Bruker D8 ADVANCE X-ray diffractometer; 타겟: Cu:Kα; 파장 λ = 1.54056 Å; 2θ 각 범위: 4°-40°; 스캐닝 속도: 10°/min; 시료의 회전 속도: 15 rpm; Cu-타겟 튜브 압력 및 전류: 40 KV, 40 mA.

본 발명에서, DSC 스펙트럼은 하기의 조건에서 측정되었다:

기기: TA Q2000 differential scanning calorimeter; 온도 범위: 30-300 ℃; 가열 속도: 10 ℃/min.

본 발명에서, 열중량 분석(TGA)은 하기의 조건에서 측정되었다:

기기: TA Q5000 thermogravimetric analyzer; 온도 범위: 25-300 ℃; 가열 속도: 10 ℃/min.

X-선 분말 회절 스펙트럼에서, 결정 화합물에서 얻어진 회절 패턴은 일반적으로 특정 결정에 대해 특징적이며, 밴드의 상대적인 강도 (특히 낮은 각도에서)는 결정화 조건, 입자 크기 및 다른 측정 조건의 차이에 따라 발생하는 지배적인 방향 효과로 인해 달라질 수 있다. 따라서, 회절 피크의 상대적인 강도는 해당 결정의 특성이 아니며, 알려진 결정과 동일 여부를 결정하기 위해서는 피크의 상대적인 강도보다 피크의 상대적인 위치를 고려하는 것이 중요하다. 또한, 결정학 분야에서 잘 알려진 것처럼, 어느 주어진 결정의 피크 위치에 약간의 오차가 있을 수 있다. 예를 들면, 피크의 위치는 온도 변화, 시료의 이동 또는 시료 분석시 기기의 교정에 의해 이동될 수 있으며, 2θ 값의 측정 오차는 때때로 약 ±0.2°이다. 따라서, 이러한 오차는 결정 구조를 결정할 때 고려되어야 한다.

XRD 패턴에서, 피크의 위치는 일반적으로 2θ 각 또는 결정면 거리 d로 표현되며, 둘 사이에는 간단한 변환 관계가 있다: d = λ/2sinθ, 여기서, d는 결정면 거리, λ는 입사 X-선의 파장, 및 θ는 회절 각을 나타낸다.

동일 화합물의 동일한 결정에 대해, XRD 패턴의 피크 위치는 일반적으로 유사하나, 상대적인 강도에서 오차가 클 수 있다. 또한, 혼합물의 식별에서, 예를 들어, 함량 감소와 같은 이유로, 회절 선 일부가 없을 수 있으며, 이 경우 고 순도 시료에서 관찰된 모든 밴드에 의존할 필요가 없고, 하나의 밴드가 주어진 결정에 대해 특징적일 수 있다.

DSC는 결정 구조의 변화 또는 결정형의 용융으로 인해 결정형이 열을 흡수하거나 방출할 때 전이 온도를 측정한다. 동일 화합물의 동일한 결정에 대해, 연속 분석에서 열 전이 온도 및 융점의 오차는 일반적으로 약 5 ℃ 이내, 대게 약 3℃ 또는 약 2℃ 이내이며, 언급될 때 화합물의 주어진 DSC 피크 또는 융점은 DSC 피크 또는 융점 ± 5 ℃를 의미한다.

DSC는 다른 결정을 식별하기 위한 보조적 방법을 제공한다. 다른 결정형은 다른 전이 온도 특성에 의해 식별될 수 있다. 혼합물의 경우, 이의 DSC 피크 또는 융점이 더 큰 범위에서 달라질 수 있다. 또한, 용융 온도는 가열 속도와 관련이 있다.

정의 및 설명

본 명세서 및 청구항에 사용된 바와 같이, 하기 용어들은 달리 명시되지 않는 한, 지시된 의미를 갖는다:

"포유동물"은 인간; 실험실 포유동물 및 애완동물(예를 들어, 고양이, 개, 돼지, 소, 양, 염소, 말, 토끼)과 같은 가축; 및 야생 포유동물과 같은 비-가축 포유동물을 포함한다.

용어 "약학 조성물"은 인간과 같은 포유동물에게 생물학적 활성 화합물을 전달하기 위한, 당업계에서 일반적으로 인식된 비히클과 함께 본원에 개시된 화합물의 제형을 의미한다. 상기 비히클은 그의 사용을 위한 모든 약학적으로 허용가능한 담체를 포함한다. 약학 조성물은 유기체에 대한 화합물의 투여를 용이하게 한다.

용어 "치료적 유효량"은 원하는 효과를 제공하기 위해 충분하지만 독성이 없는 약물 또는 약제의 양을 의미한다. 유효량의 결정은 대상의 나이와 일반적인 상태, 및 특정 활성 물질에 따라 사람마다 다르다. 케이스에서 적절한 유효량은 일반적인 테스트를 고려하여 당업자에 의해 결정될 수 있다.

용어 "약학적으로 허용가능한 담체"는 활성 성분과 함께 투여되는 것으로, 유기체에 유의한 자극 영향 없이, 활성 화합물의 생물학적 활성 및 특성을 손상시키지 않는 것을 의미한다. 담체에 대한 추가 정보는 Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st Ed., Lippincott, Williams & Wilkins (2005)을 참조할 수 있으며, 그 내용은 참조로 포함된다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이, 달리 언급되지 않는 한, 용어 "포함하다" 및 "포함하는" 또는 이들의 등가물은 개방형 서술이며, 명시되지 않은 요소, 구성 성분 및 단계가 열거된 항목에 추가로 포함될 수 있음을 의미한다.

모든 특허, 특허 출원 및 다른 확인된 간행물은 설명 및 공개의 목적으로 여기에 참조로 명시적으로 포함된다. 이러한 간행물은 본 출원의 출원일 이전에 공개되었기 때문에 제공된다. 이 문서의 날짜 또는 이 문서의 내용에 대한 설명에 관한 모든 서술은 신청자가 이용할 수 있는 정보를 기반으로 하며, 이러한 문서의 날짜 또는 문서 내용의 정확성에 대한 승인을 구성하지 않는다. 게다가, 어느 국가 또는 어느 지역에서든, 여기 이러한 간행물에 대한 언급은 해당 간행물이 당 업계에서 일반적으로 인정되는 지식의 일부를 형성한다는 것을 인정하는 것으로 해석되어서는 안된다.

본 발명은 Syk 억제제의 염 및 이의 결정형에 관한 것으로, 보다 상세하게는 5-플루오로-1-메틸-3-((5-(4-(옥세탄-3-일)피페라진-1-일)피리딘-2-일)아미노)-6-(1H-피라졸-3-일)퀴놀린-2(1H)-케타민 염산염, 이의 결정형, 이의 제조방법, 이의 약학 조성물 및 이의 용도를 제공한다. 상기 화합물의 염산염 및 이의 결정형은 우수한 염 형성성, 높은 안정성 및 낮은 흡습성을 가지고, 물성, 안정성 및 대사 안정성 측면에서 장점을 가지며, 제조 의약품으로 가치가 있다.

도 1은 실시예 2에서 화학식 Ⅱ의 염산염의 A형 결정의 X선 분말 회절(XRPD) 패턴을 나타낸 것이다.
도 2는 실시예 2에서 화학식 Ⅱ의 염산염의 A형 결정의 시차 주사 열량계(DSC) 패턴을 나타낸 것이다.
도 3은 실시예 2에서 화학식 Ⅱ의 염산염의 A형 결정의 열 중량 분석(TGA) 패턴을 나타낸 것이다.
도 4는 실시예 6에서 화학식 Ⅱ의 염산염의 B형 결정의 X선 분말 회절(XRPD) 패턴을 나타낸 것이다.
도 5는 실시예 2에서 화학식 Ⅱ의 염산염의 A형 결정의 동적 증기 수착(DVS) 패턴을 나타낸 것이다.

이하, 하기의 특정 예들은 당업자가 본 발명을 보다 명확히 이해하고 실행할 수 있도록 제시된다. 이들 특정 예들은 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아니라, 단지, 예시적인 설명이자 본 발명을 대표하는 것으로 간주되어야 한다.

쉽게 산화되거나 가수분해가 가능한 물질과 관련된 모든 실험은 질소 분위기 하에서 수행되었다. 달리 명시되지 않는 한, 본 발명에서 모든 출발 물질은 상업적으로 이용가능하며, 추가 정제없이 사용되었다. 본 발명에 사용된 용매는 모두 상업적으로 이용가능하며, 특별한 처리없이 사용되었다. 화합물은 수동 또는 ChemDraw® 소프트웨어로 명명 되어지며, 상업적으로 이용가능한 화합물에 대해서는 공급자의 카탈로그 이름이 제공한다.

본 발명에서 하기의 약어가 사용된다: DMAP는 4-디메틸아미노피리딘(4-dimethylaminopyridine); Pd₂(dba)₃는 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐[tris(dibenzylideneacetone)dipalladium]; Xantphos는 4,5-비스(디페닐포스피노)-9,9-디메티리크산텐[4,5-bis(diphenylphosphino)-9,9-dimethylxanthene]; Pd(dppf)Cl₂는 1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]팔라듐 디클로라이드[1,1'-bis(diphenylphosphino)ferrocene]palladium dichloride]를 나타낸다.

실시예 1: 화학식 Ⅰ의 화합물의 제조

단계 1:

0 ℃, 질소 분위기하에서 테트라하이드로퓨란(tetrahydrofuran) (600 mL)에 용해된 1a (59.00 g, 436.59 mmol) 용액에 수소화나트륨(sodium hydride) (19.24 g, 480.99 mmol, 순도: 60%)을 첨가하였다. 30분 동안 교반한 후, 반응 혼합물에 메틸 트리플레이트(methyl triflate) (93.14 g, 567.57 mmol, 62.09 mL)를 첨가한 다음, 15 ℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물에 포화 염화 암모늄(saturated ammonium chloride) (1 L)을 첨가하여 반응을 퀀치(quench)한 다음, 에틸 아세테이트(ethyl acetate)를 가하여 추출하였다 (500 mL × 3). 유기상을 포화 염수(saturated brine) (1 L)로 세척하고 무수 황산나트륨(anhydrous sodium sulfate)으로 건조시켰다. 여과 및 농축 후, 잔여물은 컬럼 크로마토그래피하여 1b를 수득하였다.

¹H NMR (400MHz, CDCl₃) δ = 7.22 - 7.08 (m, 2H), 7.03 (br d, J=3.0 Hz, 1H), 6.86 - 6.73 (m, 1H), 6.58 (d, J=2.5 Hz, 1H), 3.81 (s, 3H).

단계 2:

질소 분위기 하에서, 디메틸 설폭시드(dimethyl sulfoxide) (400 mL)에 용해된 1b (55.00 g, 368.72 mmol) 용액에 N-브로모숙시니미드(N-bromosuccinimide) (65.63 g, 368.72 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 20 ℃에서 1시간 동안 교반하였다. N-브로모숙시니미드 (65.63 g, 368.72 mmol)를 다시 첨가한 후, 반응 혼합물을 60 ℃에서 10시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 물 (6 L)에 부어 여과하였다. 필터 케이크를 아세톤(acetone) (2 L)에 용해시킨 후 여과하였고, 여과된 필터 케이크를 아세톤 (500 mL)으로 세척하였다. 여과액을 농축한 후, 잔여물을 컬럼 크로마토그래피하여 1c를 수득하였다.

¹H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 7.72 (dt, J=5.8, 8.2 Hz, 1H), 6.99 (d, J=7.8 Hz, 1H), 6.93 (t, J=8.8 Hz, 1H), 3.15 (s, 3H).

단계 3:

질소 분위기 하에서, 아세토니트릴(acetonitrile) (300 mL) 및 물 (600 mL)에 용해된 1c (31.0 g, 173.04 mmol) 용액에 N-브로모숙시니미드 (40.04 g, 224.95 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 15 ℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 여과하고, 필터 케이크를 물 (300 mL)로 세척한 다음 건조하여 1d를 수득하였다.

¹H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 7.99 (dd, J=7.3, 8.3 Hz, 1H), 6.98 (d, J=8.5 Hz, 1H), 3.14 (s, 3H).

단계 4:

0 ℃, 질소 분위기 하에서, 에탄올(ethanol) (300 mL)에 용해된 1d (32.00 g, 124.01 mmol) 및 트리에틸아민(triethylamine) (25.1 g, 248.02 mmol) 용액에 트리메틸실릴디아조메탄(trimethylsilyldiazomethane) (2 mol/L, 65.11 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 0-15 ℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 농축하였다. 잔여물을 에틸 아세테이트(ethyl acetate) (500 mL)로 슬러리화하고 여과한 다음, 필터 케이크를 건조시켜 1e를 수득하였다.

¹H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ= 10.17 (br s, 1H), 7.65 (dd, J=7.5, 9.0 Hz, 1H), 7.30 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.11 (s, 1H), 3.69 (s, 3H).

단계 5:

0 ℃, 질소 분위기 하에서, 디클로로메탄(dichloromethane) (200 mL)에 용해된 1e (10.0 g, 36.76 mmol), 피리딘(pyridine) (8.72 g, 110.27 mmol) 및 DMAP (449.04 mg, 3.68 mmol) 용액에 트리플루오로메탄술폰산 무수물(trifluoromethanesulfonic anhydride) (13.48 g, 47.78 mmol)을 적가하고, 반응 혼합물을 15 ℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 물 (300 mL)로 퀀치한 다음, 1 N 염산(hydrochloric acid)으로 pH 5로 조정하였다. 유기상을 포화 염화 나트륨(saturated sodium chloride) (250 mL)으로 세척하고, 무수 황산 나트륨으로 건조하며, 여과 및 농축하여 1f를 수득하였다.

¹H NMR (400MHz, CDCl₃) δ = 7.93 (s, 1H), 7.82 - 7.75 (m, 1H), 7.11 (d, J=9.0 Hz, 1H), 3.79 (s, 3H).

단계 6:

질소 분위기 하에서, 테트라하이드로퓨란 (200 mL)에 1f (10.00 g, 24.74 mmol), 1g (6.38 g, 27.21 mmol), Pd₂(dba)₃ (2.27 g, 2.47 mmol), Xantphos (2.15 g, 3.71 mmol) 및 탄산 세슘(cesium carbonate) (16.12 g, 49.48 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 50 ℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 물 (200 mL)에 첨가하여 여과하고, 필터 케이크를 에틸 아세테이트 (100 mL)로 슬러리화하였다. 여과 후, 고체를 건조시켜 1h를 수득하였다.

¹H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 9.07 - 8.76 (m, 2H), 8.00 (br d, J=2.3 Hz, 1H), 7.68 - 7.40 (m, 2H), 7.32 (br dd, J=9.0, 13.3 Hz, 2H), 4.71 - 4.39 (m, 4H), 3.75 (s, 3H), 3.52 - 3.39 (m, 1H), 3.14 (br s, 4H), 2.42 (br s, 4H).

단계 7:

질소 분위기 하에서, 1,4-디옥산(1,4-dioxane) (160 mL) 및 물 (40 mL)에 1h (9.00 g, 18.43 mmol), 탄산칼륨(potassium carbonate) (6.37 g, 46.07 mmol), Pd(dppf)Cl₂ (1.08 g, 1.47 mmol) 및 1i (5.36 g, 27.64 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 110 ℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응이 완료된 후, 반응 혼합물을 냉각시켜 고체로 침전시킨 후 여과하여, 필터 케이크를 물 (200 mL) 및 에틸 아세테이트 (100 mL)로 세척한 다음 건조하여 화학식 Ⅰ의 화합물을 얻었다.

¹H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ = 13.08 (br s, 1H), 9.04 (br s, 1H), 8.78 (br s, 1H), 8.16 - 7.70 (m, 3H), 7.57 - 7.23 (m, 3H), 6.73 (br s, 1H), 4.74 - 4.37 (m, 4H), 3.79 (br s, 3H), 3.56 (br s, 2H), 3.14 (br s, 3H), 2.42 (br s, 4H).

실시예 2: 화학식 Ⅱ의 염산염의 A형 결정의 제조

탈이온수 (5440 mL)를 50 L 반응 케틀(reaction kettle)에 첨가하고, 200 rpm의 속도로 기계적으로 교반하였다. 반응 케틀의 내부 온도가 35-38 ℃될 때까지 가열한 후, 화학식 Ⅰ의 화합물 (1360 g)을 배치에 첨가하고, 반응 혼합물을 0.5시간 동안 교반하여 황색 현탁액을 형성하였다. 용액이 완전히 맑아질 때까지 약 1시간 동안 반응 케틀에 포름산(formic acid) (2720 mL)을 적가한 다음, 생성된 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 제조된 1 mol/L 수성 염산 용액 (4290 mL)을 약 2시간 동안 반응 케틀에 적가하고, 여전히 황색 투명한 액체인 반응 혼합물을 조건 변화없이 밤새 교반하였다. 에탄올 (24900 mL)을 반응 케틀에 약 5시간 동안 적가하고, 약 7000 mL의 에탄올이 첨가되었을 때 밝은 황색 고체가 침전되기 시작하였으며, 고체가 완전히 침전될 때까지 적가를 계속하였다. 반응 혼합물을 조건 변화없이 밤새 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 여과한 다음, 필터 케이크를 진공에서 일정한 중량으로 건조하여 화학식 Ⅱ의 염산염의 A형 결정을 수득하였다. (1220 g, 순도: 99.79%).

실시예 3: 화학식 Ⅱ의 염산염의 A형 결정의 제조

탈이온수 (2 mL)를 100 mL 반응 플라스크에 첨가하였다. 반응 플라스크의 내부 온도가 35-38 ℃ 될 때까지 가열한 후, 화학식 Ⅰ의 화합물 (0.6 g)을 첨가하고 반응 혼합물을 0.5시간 동안 교반하여 황색 현탁액을 형성하였다. 용액이 완전히 맑아질 때까지 약 5분 동안 반응 플라스크에 포름산 (1 mL)을 적가한 다음, 생성된 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 제조된 1 mol/L 수성 염산 용액 (1.26 mL)을 약 5분 동안 반응 플라스크에 적가하고, 여전히 황색 투명한 액체인 반응 혼합물을 조건 변화없이 밤새 교반하였다. 에탄올 (8 mL)을 반응 플라스크에 약 15분 동안 적가하고, 약 5 mL의 에탄올이 첨가되었을 때 밝은 황색 고체가 침전되기 시작하였으며, 고체가 완전히 침전될 때까지 적가를 계속하였다. 반응 혼합물을 조건 변화없이 4시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 여과한 다음, 필터 케이크를 진공에서 일정한 중량으로 건조하여 화학식 Ⅱ의 염산염의 A형 결정을 수득하였다. (0.55 g)

실시예 4: 화학식 Ⅱ의 염산염의 A형 결정의 제조

탈이온수 (2 mL)를 100 mL 반응 플라스크에 첨가하였다. 반응 플라스크의 내부 온도가 35-38 ℃ 될 때까지 가열한 후, 화학식 Ⅰ의 화합물 (0.6 g)을 첨가하고 반응 혼합물을 0.5시간 동안 교반하여 황색 현탁액을 형성하였다. 용액이 완전히 맑아질 때까지 약 5분 동안 반응 플라스크에 포름산 (1 mL)을 적가한 다음, 생성된 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 제조된 1 mol/L 수성 염산 용액 (2.52 mL)을 약 5분 동안 반응 플라스크에 적가하고, 여전히 황색 투명한 액체인 반응 혼합물을 조건 변화없이 밤새 교반하였다. 에탄올 (8 mL)을 반응 플라스크에 약 15분 동안 적가하고, 약 5 mL의 에탄올이 첨가되었을 때 밝은 황색 고체가 침전되기 시작하였으며, 고체가 완전히 침전될 때까지 적가를 계속하였다. 반응 혼합물을 조건 변화없이 4시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 여과한 다음, 필터 케이크를 진공에서 일정한 중량으로 건조하여 화학식 Ⅱ의 염산염의 A형 결정을 수득하였다. (0.55 g)

실시예 5: 화학식 Ⅱ의 염산염의 A형 결정의 제조

에틸 아세테이트 (2 mL)를 100 mL 반응 플라스크에 첨가하였다. 반응 플라스크의 내부 온도가 35-38 ℃ 될 때까지 가열한 후, 화학식 Ⅰ의 화합물 (1.0 g)을 첨가하고 반응 혼합물을 0.5시간 동안 교반하여 황색 현탁액을 형성하였다. 용액이 완전히 맑아질 때까지 약 15분 동안 반응 플라스크에 포름산 (3 mL)을 적가한 다음, 생성된 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 35% 수성 염산 용액 (0.26 mL) 및 에틸 아세테이트 (2.0 mL)를 약 5분 동안 반응 플라스크에 적가하고, 여전히 황색 투명한 액체인 반응 혼합물을 조건 변화없이 밤새 교반하였다. 에탄올 (20 mL)을 반응 플라스크에 약 15분 동안 적가하고, 약 15 mL의 에탄올이 첨가되었을 때 밝은 황색 고체가 침전되기 시작하였으며, 고체가 완전히 침전될 때까지 적가를 계속하였다. 반응 혼합물을 조건 변화없이 4시간 동안 교반하였다. 상기 반응 혼합물을 여과한 다음, 필터 케이크를 진공에서 일정한 중량으로 건조하여 화학식 Ⅱ의 염산염의 A형 결정을 수득하였다. (0.95 g).

실시예 6: 화학식 Ⅰ의 염산염의 B형 결정의 제조

화학식 Ⅰ의 화합물 (500 mg)을 40 mL 유리 바이알에 첨가한 다음, 에탄올 (35 mL)을 첨가하였다. 자석 교반기에서 40 ℃로 2시간 동안 교반한 다음, 반응 혼합물을 물로 10배 희석된 1.2 mol/L 희석 염산 (3 mL)에 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 자석 교반기에서 40 ℃로 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 원심 분리하고, 고체는 진공 건조 오븐에서 밤새 건조하여 화학식 Ⅱ의 염산염의 B형 결정을 수득하였다.

실시예 7: 화학식 Ⅰ의 염산염의 B형 결정의 제조

화학식 Ⅰ의 화합물 (500 mg)을 40 mL 유리 바이알에 첨가한 다음, 에탄올 (29.2 mL) 및 아세트산 (5.8 mL)의 혼합 용액을 첨가하였다. 자석 교반기에서 40 ℃로 2시간 동안 교반한 다음, 반응 혼합물을 물로 10배 희석된 1.2 mol/L 희석 염산 (3 mL)에 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 자석 교반기에서 40 ℃로 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 원심 분리하고, 고체는 진공 건조 오븐에서 밤새 건조하여 화학식 Ⅱ의 염산염의 B형 결정을 수득하였다.

실시예 8: 화학식 Ⅰ의 염산염의 B형 결정의 제조

화학식 Ⅰ의 화합물 (500 mg)을 40 mL 유리 바이알에 첨가한 다음, 아세톤 (29.2 mL) 및 아세트산 (5.8 mL)의 혼합 용액을 첨가하였다. 자석 교반기에서 40 ℃로 2시간 동안 교반한 다음, 반응 혼합물을 물로 10배 희석된 1.2 mol/L 희석 염산 (3 mL)에 첨가하였다. 생성된 반응 혼합물을 자석 교반기에서 40 ℃로 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 원심 분리하고, 고체는 진공 건조 오븐에서 밤새 건조하여 화학식 Ⅱ의 염산염의 B형 결정을 수득하였다.

실험예 1: 화학식 Ⅱ의 염산염의 A형 결정의 안정성 확인

"API 및 제제의 안정성 테스트 지침" (General Principles 9001 of the Four Parts of the Chinese Pharmacopoeia, 2015 Edition)에 따라, 화학식 Ⅱ의 화합물의 A형 결정의 안정성을 고온 (60 ℃, 개방), 고습 (실온, 상대적 습도 92.5%, 개방) 및 조도(illumination) (1.2×10⁶ Lux·hr/near UV energy of 200w·hr/m²의 총 조도, 개방)에서 조사하였다.

화학식 Ⅱ의 염산염의 A형 결정 (5 mg)을 칭량하고, 유리 시료 병의 바닥에 놓고 얇은 층으로 펼쳤다. 시료를 고온 고습한 상태로 둔 바이알을 알루미늄 호일로 밀봉하고, 알루미늄 호일에 작은 구멍을 뚫어 시료가 대기와 충분히 접촉할 수 있도록 하였다. 시료룰 강한 빛 아래에 둔 바이알을 알루미늄 호일 밀봉없이 개방하여 두었다. 5일 및 10일에 다른 조건에 둔 시료를 채취하여 XRPD 스펙트럼에 대해 테스트하였다. 테스트 결과를 0일 초기 테스트 결과와 비교하였고, 그 결과는 하기 표 3에 나타내었다:

실험 조건	시점 (time point)	결정형 (Crystalline form)
	0 일	A형 결정
고온 (60 ℃, 개방)	5 일	A형 결정
고온 (60 ℃, 개방)	10 일	A형 결정
고습 (실온, 상대적 습도 92.5%, 개방)	5 일	A형 결정
고습 (실온, 상대적 습도 92.5%, 개방)	10 일	A형 결정
조도 (1.2×10⁶ Lux·hr/near UV energy of 200w·hr/m²의 총 조도, 개방)		A형 결정

상기 결과는 화학식 Ⅱ의 염산염의 A형 결정이 고온, 고습 및 조도 조건에서 우수한 안정성을 가짐을 보여준다.

실험예 2: 화학식 Ⅱ의 염산염의 A형 결정의 흡습성(hygroscopicity) 확인

기기 : SMS DVS Advantage;

방법 : 테스트를 위해 화학식 Ⅱ의 염산염의 A형 결정 10-15 mg을 DVS 시료 트레이에 넣는다;

DVS 파라미터는 하기와 같다:

온도: 25 ℃

밸런싱(balancing): dm/dt = 0.01%/min (최단: 10 분, 최장: 180 분)

건조: 0% RH에서 120 분 동안 건조

RH (%) 테스트 구배: 10%

RH (%) 테스트 구배 범위: 0%-90%-0%

결과: 화학식 Ⅱ의 염산염의 A형 결정의 DVS 패턴을 도 5에 나타내었고, 여기서 △W = 1.371%;

결론 : 화학식 Ⅱ의 염산염의 A형 결정은 25±1 ℃ 및 80±2% RH에서 흡습성이 적다.

실험예 3: 유기 용매에서 화학식 Ⅱ의 염산염의 A형 결정의 안정성 확인

화학식 Ⅱ의 염산염의 A형 결정 (60 mg)을 칭량하여 8 mL 유리 바이알에 넣었다. 메탄올 (4 mL)을 첨가한 후, 유리 바이알을 자석 교반기에 놓고 혼합물을 각각 24시간 동안 20 ℃ 및 50 ℃에서 교반하였다. 현탁액을 원심 분리하여 유기 용매를 제거하고, 생성된 고체를 진공에서 건조한 다음 XRPD 스펙트럼에 대해 테스트하여 화학식 Ⅱ의 염산염의 A형 결정의 XRPD 스펙트럼과 비교하였다.

상기 방법에 따라, 에탄올, 에틸 아세테이트, 아세톤, 아세토니트릴, 테트라하이드로퓨란, 1,4-디옥산 및 n-헥산을 유기 용매로 사용하여 유사 테스트를 진행하였다.

그 결과, 화학식 Ⅱ의 염산염의 A형 결정의 XRPD 스펙트럼은 24시간 동안 상기 용매에 현탁된 후에도 변하지 않았고, 이는 조사된 용매 시스템에서 화학식 Ⅱ의 염산염의 A형 결정에 대한 결정형의 변형이 발생하지 않고 상기 결정형이 비교적으로 안정함을 시사한다.

실험예 4: 화학식 Ⅰ의 화합물에 의한 Syk 키나아제 억제의 인비트로 ( in vitro ) 테스트

4.1 실험 목적: 균질 시간 분해 형광법 (HTRF) 기술로 기질과 효소 사이 상호작용을 검출하고, 지표로 화합물의 반 억제 농도 (IC₅₀) 값을 취하여 티로신 키나아제 (Syk)에 대한 화합물의 억제를 평가한다.

4.2 실험 물질:

티로신 키나아제(tyrosine kinase) (Invitrogen, PV3857)

디티오트레이톨 (dithiothreitol, DTT) (Sigma #43815)

아데노신 3 인산 (adenosine triphosphate, ATP) (Sigma #A7699)

염화마그네슘 (magnesium chloride, MgCl₂) (Sigma #63020)

염화망간 (manganese chloride, MnCl₂) (Sigma #M1787)

에틸렌디아민테트라아세트산(ethylenediaminetetraacetic acid, EDTA) (Invitrogen #15575-020)

4-하이드록시에틸피페라진 에탄술폰산 완충용액 (4-hydroxyethylpiperazine ethanesulfonic acid buffer, HEPES buffer) (Invitrogen #15630-080)

HTRF® KinEASE™ 티로신 키나아제 키트 (Cisbio #62TK0PEC, 20000 tests)

저 용량, 384-웰(well), 흰색 폴리스티렌 플레이트 (Greiner #784075)

384 마이크로플레이트 (Greiner #781946)

원심 분리기 (Eppendorf #5810R)

피펫터 (Eppendorf)

피펫 (Greiner)

피펫팅 건(pipetting gun) (Eppendorf)

멀티드롭 자동 디스펜서

완전 자동화된 마이크로플레이트 전처리 시스템인 POD 810 플레이트 어셈블러.

다기능 마이크로 플레이트 리더기, Envision Reader.

4.3 실험 절차 및 방법:

a) 화합물의 희석 및 적용

1) 화학식 Ⅰ의 화합물의 분말을 칭량하고 일정량의 디메틸 설폭시드에 용해시켜 초기 농도는 10 mM 이었다;

2) 화합물의 농도를 0.74 mM로 희석시키고, 완전 자동화된 마이크로플레이트 전처리 시스템을 사용하여 웰당 135 nL 씩 시료를 첨가하였다. 화합물의 초기 농도는 10 μM이었고, 3배 감소 구배 희석 후 11개의 농도 포인트를 획득하였다.

b) 효소와 기질의 반응

1) 실험 완충용액의 희석을 준비하였다. 키트 내 5× HTRF 완충용액을 1× 로 희석하고, 후에 사용하기 위해 키트 메뉴얼에 따라 특정량의 DTT 및 MgCl₂ 용액을 첨가하였다;

2) 1× HTRF 완충용액을 사용하여 티로시나제 반응 용액을 제조하여 티로신 키나아제의 최종 농도는 0.0156 ng/μL 이었다;

3) 티로신 키나아제-기질-비오틴/ATP의 혼합 용액을 제조하여 최종 기질 농도는 0.2 μM 및 ATP 농도는 2 μM 이었다;

4) 티로시나제 용액 및 티로신 키나아제-기질-비오틴/ATP의 혼합 용액을 멀티드롭 자동 디스펜서를 사용하여 웰당 5 μL 씩 화학식 Ⅰ의 화합물과 함께 마이크로플레이트에 첨가하고, 이를 23 ℃에서 1시간 동안 배양하였다.

c) 검출

1) An EDTA 용액 (13.33 mL)을 키트 내 검출 완충용액에 첨가한 다음, 키트 메뉴얼에 따라 특정량의 우라늄(uranium, Eu) 표지된 항체 및 스트렙트아비딘(streptavidin) XL-665을 첨가하여 검출 용액을 제조하였다;

2) 상기 검출 용액 (10 μL)을 멀티드롭 자동 디스펜서를 사용하여 상기 마이크로플레이트의 각 웰에 첨가하고, 생성된 혼합물을 23 ℃에서 1시간 배양하여 효소와 기질의 혼합 용액의 반응을 중지시켰다;

3) 원심 분리 후, 생성된 상층액을 다기능 마이크로플레이트 리더기로 판독하였다.

d) 데이터 분석

XL-Fit를 사용하여 데이터를 분석하여 화학식 Ⅰ의 화합물의 IC₅₀ 값을 계산하였다.

실험예 5: 화학식 Ⅰ의 화합물에 의한 AKT 인산화 억제의 인비트로 ( in vitro ) 테스트

5.1 실험 목적: 효소결합 면역분석법(ELISA)에 의한 세포 내 단백질 키나아제 AKT 인산화를 검출하고, 지표로 화합물의 반 억제 농도 (IC₅₀) 값을 취하여 AKT 인산화에 대한 화합물의 억제를 평가한다.

5.2 실험 물질

세포 주 : Ramos cell line

세포 배양 배지 (RPMI1640, Invitrogen #22400-105; 10% 소 태아 혈청, Gibco #10099-141; L-글루타민 1×, Gibco #25030-081)

실험을 위한 배지 (무혈청, RPMI 1640, Invitrogen #22400-105; L-글루타민 1×, Gibco # 25030)

용해 완충액(lysis buffer) (Tris-HCl, Invitrogen 15567-1000 mL; NaCl, domestic; 데옥시콜레이트 염(sodium deoxycholate, Sigma 30970-25G); 폴리에틸렌 글리콜 옥틸페닐 에더(polyethylene glycol octylphenyl ether, Sigma T9284-100 mL); 소듐 도데실 설포네이트(sodium dodecyl sulfonate, Sigma L3771); EDTA, Invitrogen 15575-038-100 mL; 초순수(ultrapure water, MilliQ))

프로테아제 억제제(protease inhibitor) (Roche, 4693159001-30/BOX)

포스파타제(phosphatase) 억제제 혼합물 2 (Sigma, P5726-5 ML)

포스파타제 억제제 혼합물 3 (Sigma, P0044-5 ML)

Goat anti-human immunoglobulin M (F(ab')2 Goat Anti-Human IgM) (JacksonImmuno Research-109-006-129)

인산화 AKT 검출 키트(phosphorylation AKT detection kit) (Phospho-AKT 1/2/3(ser473)) (TGR Bioscience, EKT002)

10× Hank's balanced salt solution (Gibco #14065-056)

96-웰 세포 플레이트 (Greiner #655090)

컴파운드 V-웰 희석 플레이트 (Axygen #WITP02280)

CO₂ 인큐베이터 (Thermo #371)

원심 분리기 (Eppendorf #5810R)

Vi-cell 세포 계수기 (Beckman Coulter)

피펫터 (Eppendorf)

피펫 (Greiner)

피펫팅 건 (Eppendorf)

다기능 마이크로플레이트 리더기 (Envision Reader)

5.3 실험 절차 및 방법

a) 세포 시딩(seeding) (Ramos cells)

1) 37 ℃ 수조에서 세포 배양 배지를 예열하고, Ramos 부유 세포 배양물을 피펫팅하여 5분 동안 1000 rpm으로 원심 분리하였다;

2) 원심 분리 후 상층액을 피펫팅한 다음, 예열된 세포 배양 배지(10 mL)를 원심 분리 튜브에 첨가하였다. 피펫팅으로 세포를 재현탁한 다음, Ramos 세포 현탁액 (1 mL)을 피펫팅하여 Vi-cell 세포 계수기로 세포 계수를 수행하였다;

3) Ramos 세포 재현탁액을 세포 배양 배지로 5×10⁶ cells/mL의 세포 밀도가 되도록 희석하고, 희석된 세포를 피펫팅 건으로 96-웰 세포 배양 플레이트 (100 μL/well)에 첨가하였다; 상기 세포 배양 플레이트를 37 ℃, 5% CO₂에서 밤새 배양하였다.

b) 세포 기아(starvation)

밤새 배양한 후, 시드된 세포를 다음 날 5분 동안 1000 rpm에서 원심 분리하였다. 원래의 세포 배양 배지를 피펫팅한 다음, 실험을 위한 무 혈청 배지를 첨가하였다. 세포 배양 플레이트를 37 ℃, 5% CO₂에서 배양하고 세포를 밤새 굶겼다.

c) 테스트 시료의 제조 및 적용

1) 테스트 시료로 화학식 Ⅰ의 화합물을 디메틸 설폭시드에 용해시켜 초기 농도가 5 mM인 화학식 Ⅰ의 화합물 용액을 수득하였다; 컴파운드 V-웰 희석 플레이트를 사용하여 용액의 3배 구배 희석을 수행하여 10개의 농도 포인트를 얻었다;

2) 또 다른 새로운 컴파운드 V-웰 희석 플레이트를 실험을 위한 무혈청 배지에 웰당 198 μL로 첨가한 다음, 초기 농도 (2 μL)의 용액 및 3배 구배 희석 후의 각 화합물 용액 (2 μL)을 각각의 웰에 첨가하고, 상기 혼합물을 피펫팅 건으로 잘 혼합하였다; 이 때, 화합물은 100-배 희석되었고, 웰 내 희석된 화학식 Ⅰ의 화합물의 최대 농도는 50 μΜ이다;

3) 단계 2)에서 수득한 각 희석된 화합물 용액을 b)에서 밤새 굶긴 세포 배양 플레이트에 웰당 25 μL씩 첨가하고, 여기서 각 웰 당 세포 배양 배지는 100 μL 이며, 각 화합물 용액은 5배 희석된 것이다; 이 때, 웰 내 상기 희석된 화학식 Ⅰ의 화합물의 최대 농도는 10 μM이고, 다른 웰 내에는 3배 구배 희석으로 얻은 10개의 농도 포인트에서 희석된 화학식 Ⅰ의 화합물이 있다;

4) 단계 3)의 세포 배양 플레이트를 1시간 동안 1000 rpm으로 원심 분리한 다음, 37 ℃, 5% CO₂인큐베이터에 넣어 1시간 동안 반응시켰다.

d) 자극 인자를 이용한 자극

1) 2배의 증류수로 10× 염류 완충액(balanced salt solution)을 1× 염류 완충액으로 희석하여 1× 염류 완충액의 튜브 두 개를 제조하였고, 후에 사용하기 위해 각각 37 ℃ 온도 조절기와 4 ℃의 냉장고에 두었다;

2) 용해를 위한 혼합 용액 튜브를 준비해 4 ℃의 냉장고에 보관하여 나중에 사용한다. 공식은 하기와 같다:

1 프로테아제 억제제 정제(tablet) + 100 μL 포스파타제 억제제 혼합물 2 + 100 μL 포스파타제 억제제 혼합물 3 + 10 mL 용해 완충액;

3) Goat anti-human immunoglobulin M (F(ab')2 Goat Anti-Human IgM) (1.2 mg/mL) 을 37 ℃로 예열한 1× 염류 완충액을 사용하여 60 μg/mL로 희석하였다;

4) After one hour of treatment of Ramos 세포를 화합물로 1시간 동안 처리한 후, 희석된 goat anti-human immunoglobulin M (F(ab')2 Goat Anti-Human IgM) (25 μL)를 웰 당 첨가하였고, 여기서 IgM의 작용 농도는 10 μg/mL 이다;

5) IgM로 세포를 10분 동안 자극한 다음, 4000 rpm으로 5분 동안 원심 분리하여 96-웰 플레이트의 바닥에 부유 세포를 침전시켰다. 96 웰 플레이트 내 액체를 부유 세포 없이 약간 부어 버리고, 잔여 액체는 종이 타월을 사용하여 흡수시켰다;

6) 사전 냉각시킨 (4 ℃) 1× 염류 완충액 (250 μL)을 각 웰에 첨가하고 4000 rpm으로 5분 동안 원심 분리하여 IgM에 의한 세포의 자극을 종료하였다.

e) 세포 용해물의 제조

1) 96 웰 플레이트 내 액체를 부드럽게 따라내고 잔여 액체를 종이 타월을 사용하여 흡수시켰다; 용해를 위한 혼합 용액 (100 μL)을 각 웰에 첨가하고 혼합물을 진탕기로 4 ℃에서 1시간 동안 흔들어 세포를 용해시켰다;

2) 1시간 동안 세포를 용해시킨 후, 상기 세포를 4 ℃에서 4000 rpm으로 5분 동안 원심 분리하고 그 상층액을 부드럽게 피펫팅하여 세포 용해물을 수득하였다.

f) 효소결합 면역분석법 (Elisa)

1) 인산화된 AKT 검출 키트 내 96-웰 Elisa 플레이트를 실온으로 균형을 맞추고 웰당 50 μL로 세포 용해물을 첨가하였다;

2) 키트 내 포획 항체 시약 및 검출 항체 시약을 1:1의 비율로 혼합한 다음, 상기 혼합물을 웰당 50 μL로 96 웰 Elisa 플레이트에 첨가하였다; 세포 용해물과 항체 시약 혼합물로 생성된 혼합 용액을 실온에서 1시간 동안 진탕기로 흔들었다;

3) 키트 내 세척 용액 (10×)을 이중 증류수를 이용하여 1×로 희석하였다; Elisa 플레이트 내 액체를 버리고 상기 플레이트를 흡수 종이에 두드려 건조시켰다; 세척을 위해 1× 세척 용액 (200 μL)을 각 웰에 첨가한 다음, 상기 플레이트를 두드려 건조시켰고, 이 과정을 4번 반복하였다;

4) ADHP 희석제를 이용하여 기질 10-아세틸-3,7-디하이드록시페나진(10-acetyl-3,7-dihydroxyphenazine, ADHP) (100×)을 1×로 희석한 다음, 96 웰 Elisa 플레이트에 웰당 100 μL 씩 첨가하고, 상기 혼합물을 실온에서 10분 동안 진탕기로 흔들어주었다;

5) 정지 용액 (10 μL)을 각 웰에 첨가하고, 혼합물을 즉시 원심 분리하여 실온에서 5분 동안 진탕한 다음, Envision Reader 다기능 마이크로플레이트 리더기로 판독하였다.

g) 데이터 분석

XL-Fit를 이용하여 데이터를 분석하여 화합물에 대한 IC₅₀ 값을 계산하였다.

하기 표 4는 실험예 4 및 실험예 5의 결과를 나타낸 것이다.

시료	Syk
시료	Syk 키나아제 억제에 대한 IC₅₀(nM)	AKT 인산화의 억제에 대한 IC₅₀(nM)
화학식 Ⅰ의 화합물	12	170

Claims

하기 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염(hydrochloride):
제 1 항에 있어서,
상기 염산염은 화학식 Ⅰ의 화합물과 1:1의 염산염인 것을 특징으로 하는, 염산염.
제 1 항 또는 제 2 항에 있어서,
상기 염산염은 결정형인 것을 특징으로 하는, 염산염.
제 3 항에 있어서,
상기 염산염은 X-선 분말 회절 스펙트럼에서 2θ 값이 약 4.9°, 10.1°, 12.2°, 15.5°, 19.6° 및 23.8°인 회절 피크를 가지는 A형 결정인 것을 특징으로 하는, 염산염.
제 4 항에 있어서,
상기 염산염은 X-선 분말 회절 스펙트럼에서 2θ 값이 약 4.9°, 10.1°, 12.2°, 15.5°, 17.8°, 19.2°, 19.6°, 22.9°, 23.8° 및 25.6°인 회절 피크를 가지는 A형 결정인 것을 특징으로 하는, 염산염.
제 5 항에 있어서,
상기 염산염은 X-선 분말 회절 스펙트럼에서 2θ 값이 약 4.9°, 9.6°, 10.1°, 12.2°, 15.5°, 16.3°, 17.8°, 19.2°, 19.6°, 20.4°, 22.9°, 23.3°, 23.8°, 25.6°, 26.8°, 27.4°, 29.0° 및 36.8°인 회절 피크를 가지는 A형 결정인 것을 특징으로 하는, 염산염.
제 6 항에 있어서,
상기 염산염은 X-선 분말 회절 스펙트럼에서 2θ 값이 약 4.9°, 9.6°, 10.1°, 12.2°, 14.4°, 15.5°, 16.3°, 17.3°, 17.8°, 19.2°, 19.6°, 20.4°, 22.9°, 23.3°, 23.8°, 25.6°, 26.8°, 27.4°, 28.3°, 29.0°, 31.2°, 31.6°, 31.9°, 32.3°, 33.0°, 34.3° 및 36.8°인 회절 피크를 가지는 A형 결정인 것을 특징으로 하는, 염산염.
제 4 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 염산염은 시차주사열량계(DSC) 분석에서 측정한 흡수 피크가 약 272 ℃인 A형 결정인 것을 특징으로 하는, 염산염.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 염산염은 X-선 분말 회절 스펙트럼에서 2θ 값이 약 5.2°, 10.4°, 14.7°, 15.5° 및 25.3°인 회절 피크를 가지는 B형 결정인 것을 특징으로 하는, 염산염.
제 9 항에 있어서,
상기 염산염은 X-선 분말 회절 스펙트럼에서 2θ 값이 약 5.2°, 10.4°, 14.7°, 15.5°, 16.5°, 20.7°, 21.5°, 22.8°, 25.3° 및 27.9°인 회절 피크를 가지는 B형 결정인 것을 특징으로 하는, 염산염.
제 10 항에 있어서,
상기 염산염은 X-선 분말 회절 스펙트럼에서 2θ 값이 약 5.2°, 10.4°, 14.7°, 15.5°, 16.5°, 17.1°, 17.5°, 20.3°, 20.7°, 21.5°, 22.8°, 23.8°, 24.7°, 25.3°, 27.5°, 27.9° 및 31.2°인 회절 피크를 가지는 B형 결정인 것을 특징으로 하는, 염산염.
제 11 항에 있어서,
상기 염산염은 X-선 분말 회절 스펙트럼에서 2θ 값이 약 5.2°, 10.4°, 13.1°, 14.7°, 15.5°, 16.5°, 17.1°, 17.5°, 20.0°, 20.3°, 20.7°, 21.5°, 22.8°, 23.2°, 23.8°, 24.7°, 25.3°, 25.9°, 26.2°, 27.5°, 27.9°, 28.2°, 29.7°, 30.0°, 30.3°, 31.2°, 31.7°, 32.3°, 34.5°, 34.9° 및 36.6°인 회절 피크를 가지는 B형 결정인 것을 특징으로 하는, 염산염.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 A형 결정은 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염 중량의 50% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 보다 바람직하게는 90% 이상 및 가장 바람직하게는 95% 이상을 차지하는 것을 특징으로 하는, 염산염.
제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서,
상기 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 B형 결정은 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염 중량의 50% 이상, 바람직하게는 75% 이상, 보다 바람직하게는 90% 이상 및 가장 바람직하게는 95% 이상을 차지하는 것을 특징으로 하는, 염산염.
제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 따른 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염을 유효성분으로 함유하는 약학 조성물.
제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항에 따른 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염 또는 제 15 항에 따른 약학 조성물의 Syk 수용체 관련 질환을 치료하기 위한 약제 제조를 위한 용도.
제 16 항에 있어서,
상기 Syk 수용체 관련 질환은 암 또는 염증성 질환에서 선택되는 것을 특징으로 하는, 용도.
제 16 항 또는 제 17 항에 있어서,
상기 Syk 수용체 관련 질환은 B-세포 림프종, 호지킨 림프종, 비호지킨 림프종, 모양세포성 백혈병, 다발성 골수종, 만성 과립구성 백혈병, 급성 과립구성 백혈병, 만성 림프구 백혈병, 급성 림프구 백혈병, 류마티스 관절염, 알레르기 비염, 만성 폐쇄성 폐질환 (COPD), 성인 호흡곤란 증후군 (ARDs), 알레르기-유도 염증성 질환, 다발성 경화증, 자가면역질환, 급성 면역 반응, 알레르기성 장애, 및 다낭성 신장 질환로 이루어진 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는, 용도.
(1) 화학식 Ⅰ의 화합물을 예열된 용매에 첨가한 다음, 용액이 맑아질 때까지 다른 용매를 적가하고 온도를 유지하면서 교반하는 단계;
(2) 단계 (1)의 용액에 희석된 염산을 적가하고 온도를 유지하면서 밤새 교반하는 단계; 및
(3) 단계 (2)의 용액에 용매를 천천히 적가하고, 교반하여 고체를 침전시키고 여과 및 건조하여 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 A형 결정을 제공하는 단계;를 포함하는, 제 4 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 따른 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 제조방법.
(1) 화학식 Ⅰ의 화합물을 용매에 첨가한 다음, 용해시키기 위해 교반하는 단계;
(2) 단계 (1)의 용액에 희석된 염산을 첨가하고 밤새 교반하는 단계; 및
(3) 단계 (2)의 용액을 원심분리하고 고체를 건조시켜 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 B형 결정을 제공하는 단계;를 포함하는, 제 9 항 내지 제 12 항 중 어느 한 항에 따른 화학식 Ⅰ의 화합물의 염산염의 제조방법.