KR20210097835A - 분해성 담체를 수용하는 용기 - Google Patents
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Abstract
본 개시내용은 플루오로중합체를 포함하고 생물학적 제제 포획 모이어티를 포함하는 분해성 담체를 수용하는 (예를 들어, 백 형태의) 용기, 그러한 용기를 포함하는 세포 단리 시스템, 및 그러한 용기를 사용하여 생물학적 제제를 배양하는 방법에 관한 것이다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 외부 표면 및 내부 표면을 갖는 용기를 제공하고, 내부 표면은 플루오로중합체를 포함하고, 분해성 담체는 용기 안에 수용되고; 여기서 담체는 복수의 생물학적 제제 포획 모이어티를 포함한다.
한 실시양태에서, 본 개시내용은 외부 표면 및 내부 표면을 갖는 용기를 제공하고, 내부 표면은 플루오로중합체를 포함하고, 분해성 담체는 용기 안에 수용되고; 여기서 담체는 복수의 생물학적 제제 포획 모이어티를 포함한다.
Description
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2018년 12월 31일에 출원된 미국 특허 가출원 제62/786913호를 우선권으로 주장하고, 이는 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.
발명의 배경
발명의 분야
본 개시내용은 일반적으로 분해성 담체를 수용하는 용기(예컨대 백)에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 개시내용은 플루오로중합체를 포함하고 생물학적 제제 포획 모이어티를 포함하는 분해성 담체를 수용하는 백과 같은 용기, 그러한 백을 포함하는 세포 분리 시스템 및 그러한 백을 사용하여 생물학적 제제를 배양하는 방법에 관한 것이다.
기술적 배경
세포 배양 및 세포 분리는 여러 응용 분야에서 중요한 과정이다. 예를 들어, 치료적 응용(예를 들어 면역요법, 재생 의학 등)에 사용하기 위한 특정 세포는 일반적으로 시험관 내에서 분리되고 배양된다. 예를 들어, 전구 세포와 중간엽 줄기 세포 및 단핵구와 기타 면역 세포와 같은 세포는 혈액에 상대적으로 낮은 농도로 존재하고, 따라서 일반적으로 혈액으로부터 분리되어 시험관내 배양된다. 유사하게, 신경 세포, 심근세포, 상피 세포 및 재생 의학을 위한 기타 세포(예를 들어, 뼈 복구, 피부 복구, 췌도 재생 등)는 시험관내에서 배양될 수 있다.
플루오로중합체 백은 일반적으로 세포 배양에 사용된다. 그러한 백은 일반적으로 저렴하고 일회용이며 휴대가 간편하고 사용하기 쉽다. 관례적으로 세포와 피드 배지는 배양 백 내에서 혼합된다. 영양소가 소비되고 세포 폐기물이 축적됨에 따라 피드 배지를 제거하고 보충해야 한다. 세포가 백 내에 부유 상태로 남아 있을 수 있기 때문에 원하는 세포를 고갈된 배지와 함께 제거할 수 있다.
하나의 통상적인 세포 분리 공정은 원하는 세포를 고체 지지체에 선택적으로 고정시키는 것을 포함한다. 예를 들어, 세포 매개 면역에서 중심적인 역할을 하는 T 세포는 세포 표면에 T 세포 수용체(TCR)가 존재함으로써 다른 림프구와 구별될 수 있다. T 세포 수용체에 결합할 수 있는 부착된 단백질을 갖는 고체 지지체는 세포 배양물 내에서 T 세포를 선택적으로 포획하는 반면, 원하지 않는 세포는 현탁된 상태로 유지된다. 그러나, 예를 들어 고정 단백질을 절단함으로써 포획된 세포를 방출하면 분리된 세포가 바람직하지 않게 변경될 수 있다.
따라서, 원하는 세포의 개선된 보유를 용이하게 하는 세포 배양 및 분리 물품에 대한 필요성이 남아 있다.
발명의 요약
한 양태에서, 본 개시내용은 외부 표면 및 내부 표면을 갖는 용기(예를 들어, 백 형태)를 제공하고, 내부 표면은 플루오로중합체를 포함하고, 분해성 담체는 용기 안에 수용되고; 여기서 담체는 복수의 생물학적 제제 포획 모이어티를 포함한다.
또 다른 양태에서, 본 개시내용은 생물학적 제제를 배양하는 방법을 제공하고, 이는 본원에 기재된 용기를 제공하는 단계, 용기는 생물학적 제제를 수용함; 용기 안에 수용된 제1 수성 배지에서 담체 및 생물학적 제제를 혼합하는 단계; 제1 수성 배지를 용기로부터 제거하는 단계; 제2 수성 배지를 용기에 첨가하는 단계; 및 담체를 분해하는 단계를 포함한다.
본 개시내용의 다른 양태는 본원의 개시내용을 고려하여 당업자에게 명백할 것이다.
도면의 간단한 설명
도 1은 본 개시내용의 일 실시양태에 따른 백의 개략적인 평면도(상부) 및 단면도(하부)이다.
도 2는 본 개시내용의 특정 실시양태에 따른 백의 개략적인 평면도이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 백의 개략적인 단면도이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 백의 개략적인 단면도이다.
도 1은 본 개시내용의 일 실시양태에 따른 백의 개략적인 평면도(상부) 및 단면도(하부)이다.
도 2는 본 개시내용의 특정 실시양태에 따른 백의 개략적인 평면도이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 백의 개략적인 단면도이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 백의 개략적인 단면도이다.
상세한 설명
본 개시내용은 플루오로중합체를 포함하는 내부 표면을 갖고, 생물학적 제제 포획 모이어티를 포함하는 분해성 담체를 수용하는 용기(예를 들어, 백)에 관한 것이다. 본 개시내용은 원하는 세포가 용기 내에서 포획되고 현탁액으로부터 물리적으로 분리될 수 있고, 담체를 분해함으로써 세포 기능에 유해한 영향을 미치지 않으면서 추가로 재현탁될 수 있음을 입증한다.
본 개시내용의 용기는 다수의 형태로 제공될 수 있다. 하나의 특히 편리한 형태는 예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 플루오로중합체 물질의 하나 이상의 시트로부터 형성된 백이다. 당업자는 세포 배양에 사용되는 것과 같은 백 구조에 익숙할 것이며, 본원의 설명에 기초하여 본 개시내용의 방법 및 백에 사용하기 위한 통상적인 백 구조를 조정할 수 있을 것이다. 물론, 당업자는 본 개시내용의 용기가 다수의 다른 형태, 예를 들어 플라스크, 튜브, 접시로 제공될 수 있음을 이해할 것이다.
따라서, 본 개시내용의 한 양태는 예를 들어 백 형태 외부 표면 및 내부 표면을 갖는 백 형태의 용기이며, 내부 표면은 플루오로중합체를 포함한다. 그러한 백의 실시양태는 도 1에서 개략적인 평면도(상단) 및 단면도(하단)로 나타난다. 도 1의 백(100)은 외부 표면(112) 및 내부 표면(114)을 갖는 백 벽(110)을 포함하고, 백으로 배지를 첨가하거나 백으로부터 배지를 제거하기 위한 (예를 들어, 각각 피드 배지 또는 폐 배지) 백의 맞은편 끝에 위치한 포트(130 및 140)를 추가로 포함한다. 당업자는 포트의 수 및 위치가 특별히 제한되지 않고, 이에 따라 예를 들어 사용 및 제조의 편의를 위해 배치될 수 있음을 이해할 것이다. 백(100)은 두 장의 플루오로중합체-함유 시트(예를 들어, 플루오린화 에틸렌 프로필렌 시트의 층을 내부 표면에 갖는 두 장의 시트)를 가장자리에서 (예를 들어, 레이저 용접, 코로나 방전, 방사선, 열 또는 용융 적층, 에칭, 플라스마 처리, 습윤, 접착체, 또는 이들의 조합에 의해) 함께 접합하여 구획(120)을 형성하는 제품일 수 있다. 포트(130 및 140)는 밀봉된 구획(120)을 제공하도록 밀봉 가능할 수 있다.
용기 벽은 그 조성이 균일할 수 있거나, 대안적으로 둘 이상의 별개의 도메인(예를 들어 둘 이상의 층)을 포함할 수 있다. 예를 들어, 두 장의 플루오로중합체 시트를 함께 접합한 다음, 접합된 시트를 코팅하는 것은 내부 표면(114)과 조성이 상이한 외부 표면(112)을 제공할 수 있다. 유사하게, 두 장의 다층 시트를 함께 접합하는 것은 내부 표면(114)과 조성이 상이한 외부 표면(112)을 제공할 수 있다. 다층 시트는 플루오르중합체 및 비플루오린화 중합체 물질 모두로 형성될 수 있고; 그러한 경우에, 플루오로중합체 층이 하나 이상의 다층 시트의 내부 표면에 제공될 수 있다. 용기의 두께, 구획의 부피, 용기 및/또는 구획의 형상은 특별히 제한되지 않으며, 사용 또는 제조의 편의 및/또는 특정 용도에 맞게 선택될 수 있다. 예를 들어, 용기 벽의 두께는 0.0003 인치 내지 0.2 인치 범위 내일 수 있고, 구획의 부피는 100 mL 내지 100 L 범위 내일 수 있다.
도 2는 본 개시내용의 백 및 방법에 사용하기에 적합한 배양 백에 대한 구성의 몇 가지 예시적인 실시양태를 도시한다. 백(200a)은 구획(220a)에 대한 접근을 제공하는 단지 하나의 포트(230a)를 갖는다. 백(200b)은 시스템을 통한 더 긴 경로 길이가 제공될 수 있는 소위 "구불구불한" 구성이며; 포트(230b 및 240b)는 백을 형성하는 시트의 적절한 용접에 의해 형성된 구불구불한 형상의 구획(220b)에 의해 형성된 구불구불한 경로에 의해 연결된다. 그리고 백(200c)은 포트(230c)와 포트(240c) 사이에 대응하는 비직사각형 구획(220c)을 갖는 비직사각형 형상을 갖는다.
용기의 하나 이상의 벽은 다공성일 수 있고, 예를 들어 세포 배양에서 생성 및 소비되는 기체(예를 들어 O2, CO2)에 대해서는 투과성일 수 있지만 액체(예를 들어 물)에 대해서는 불투과성일 수 있다. 이는 용기 벽을 가로질러 대기와 기체의 수동적 교환을 허용하여 백 안의 세포의 호흡을 허용할 수 있다.
본 개시내용의 용기는 바람직하게는 용기 내의 유체의 오염이 실질적으로 없도록 형성된다. 따라서, 용기의 내부 표면은 유기물이 유체로 침출되지 않는 재료로 형성되는 것이 바람직하다. 예를 들어, 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 용기 벽의 내부 표면은 0.1 mg/cm2 미만(예를 들어, 0.05 mg/cm2 미만, 또는 0.05 mg/cm2 미만)의 수중 총 유기 탄소(total organic carbon, TOC)를 갖는 중합체(예를 들어, 플루오린화 에틸렌 프로필렌과 같은 플루오로중합체)로 형성된다. 그러한 용기는 예를 들어 미국 특허 출원 공개 번호 2016/0178490 및 2016/0178491에 기재되며, 이들 각각은 그 전체가 참조로 본원에 포함된다; 당업자는 본원의 설명에 기초하여, 본 개시내용의 용기 및 방법에서 사용하기 위해 그러한 용기를 개조할 수 있다. 특히, 본 개시내용의 용기는 그의 내부 표면에 반응성 작용기를 가질 필요는 없지만, 분해성 담체가 분해성 코팅인 경우와 같은 일부 사례에서, 반응성 작용기는 아래에 설명된 바와 같이 분해성 담체를 용기의 내부 표면에 공유적으로 부착하기 위해 사용될 수 있다.
용기는 분해성 담체를 포함하고, 담체는 복수의 생물학적 제제 포획 모이어티를 포함한다. 본원에서 사용된 생물학적 제제 포획 모이어티는 생물학적 제제가 선택적으로 결합할 수 있는 물질이다. 생물학적 제제와 각각의 포획 모이어티 사이의 결합은 (예를 들어, 원심분리 또는 여과에 걸쳐) 생물학적 제제를 담체 상에 유지시키기에 충분하고, 공유성이거나 비공유성일 수 있다. 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 생물학적 제제 포획 모이어티는 하나 이상의 압타머를 포함한다. 그러한 특정 실시양태에서, 하나 이상의 압타머는 펩타이드, 폴리펩타이드, 올리고뉴클레오타이드, 및 폴리뉴클레오타이드 (즉, DNA 및 RNA)로부터 선택된다. 예를 들어, 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 생물학적 제제 포획 모이어티는 무작위의 합성 생성 서열 풀로부터 선택된 올리고뉴클레오타이드 압타머를 포함한다.
본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 생물학적 제제 포획 모이어티는 생물학적 제제가 선택적으로 회합할 수 있는 적어도 둘의 자리를 갖는 DNA 압타머를 포함한다. 예를 들어, 그러한 특정 실시양태에서, 생물학적 제제에 대해 선택적인 뉴클레오타이드 하위서열의 적어도 5 , 또는 적어도 10, 또는 적어도 25, 또는 적어도 50, 또는 적어도 75, 또는 적어도 100 개의 사례가 DNA 압타머 서열에 존재한다.
본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 생물학적 제제 포획 모이어티는 폴리펩타이드에 부착된 복수의 압타머(예를 들어, 올리고뉴클레오타이드 압타머)를 포함한다. 예를 들어, 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 생물학적 제제 포획 모이어티는 아비딘 단백질에 부착된 복수의 비오틴화 압타머를 포함한다. 그러한 특정 실시양태에서, 비오틴화 압타머는 올리고뉴클레오타이드 또는 폴리펩타이드를 포함한다. 그러한 특정 실시양태에서, 생물학적 제제 포획 모이어티는 적어도 10, 또는 적어도 25, 또는 적어도 50, 또는 적어도 75, 또는 적어도 100, 또는 적어도 200, 또는 적어도 300, 또는 적어도 400을 포함한다. 또는 적어도 500, 또는 적어도 600, 또는 적어도 700, 또는 적어도 800, 또는 적어도 900, 또는 적어도 1000 개의 압타머(예를 들어, 아비딘 단백질에 부착된 비오틴화 압타머)를 포함한다. 그러한 특정 실시양태에서, 생물학적 제제 포획 모이어티는 10 내지 1000, 또는 10 내지 900, 또는 10 내지 800, 또는 10 내지 700, 또는 10 내지 600, 또는 10 내지 500, 또는 10 내지 400, 또는 10 내지 300, 또는 10 내지 200, 또는 25 내지 1000, 또는 50 내지 1000, 또는 100 내지 1000, 또는 200 내지 1000, 또는 또는 400 내지 1000, 또는 500 내지 1000, 또는 600 내지 1000, 또는 700 내지 1000, 또는 800 내지 1000, 또는 10 내지 400, 또는 100 내지 500, 또는 200 내지 600, 또는 40 내지 300 또는 500 내지 900, 또는 600 내지 1000의 범위 내의 수의 압타머(예를 들어, 아비딘 단백질에 부착된 비오틴화 압타머)를 포함한다.
본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 생물학적 제제는 무기 화학족 및 유기 소분자로부터 선택된다. 예를 들어, 그러한 특정 실시양태에서, 생물학적 제제는 금속 이온이다. 그러한 다른 실시양태에서, 생물학적 제제는 비타민, 호르몬, 또는 펩타이드이다. 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 생물학적 제제는 예를 들어 단백질, 효소 또는 핵산(즉 DNA 또는 RNA)과 같은 거대분자이다. 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 생물학적 제제는 예를 들어 세포 소기관 (예를 들어, 핵, 리보솜, 미토콘드리아, 액포, 조면 소포체, 활면 소포체, 골지체, 리소좀, 중심체, 소포, 막) 또는 세포 단편과 같은 복합 생물학적 시스템이다. 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 생물학적 제제는 박테리아 또는 세포군이다.
본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 생물학적 제제는 세포(예를 들어, 정상 세포 또는 병든 세포)이다. 예를 들어, 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 세포는 혈액 세포, 줄기 세포, 또는 면역 세포이다. 그러한 특정 실시양태에서, 세포는 백혈구이다. 그러한 특정 실시양태에서, 세포는 단핵구이다. 그러한 특정 실시양태에서, 세포는 예를 들어, 중간엽 줄기 세포, 또는 전구 세포와 같은 줄기 세포이다. 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 세포는 T 세포 (예를 들어, 조절 T 세포), 내피 전구 세포, 또는 자연 살해 세포이다. 당업자는 생물학적 제제가, 특정 실시양태에서, 세포 배양에서 보유를 위해 포획 가능한 바람직한 생물학적 제제(즉 양성 선택)일 수 있고, 대안으로 다른 실시양태에서, 세포 배양으로부터 제거하기 위해 포획 가능한 바람직하지 않은 생물학적 제제(즉 음성 선택)일 수 있음을 이해할 것이다.
예를 들어, 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 생물학적 제제 포획 모이어티는 내피 전구 세포의 CD31 마커와 선택적으로 회합할 수 있는 하나 이상의 압타머를 포함한다. 또 다른 예에서, 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 생물학적 제제 포획 모이어티는 T 조절 세포(예를 들어, CD4, CD25, CD27)의 하나 이상의 마커와 선택적으로 회합할 수 있는 하나 이상의 압타머를 포함한다. 또 다른 예에서, 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 생물학적 제제 포획 모이어티는 중간엽 줄기 세포(예를 들어, CD73, CD90, CD105)의 하나 이상의 마커와 선택적으로 회합할 수 있는 하나 이상의 압타머를 포함한다. 그러한 특정 실시양태에서, 생물학적 제제 포획 모이어티는 폴리펩타이드에 부착된 복수의 압타머(예를 들어, 올리고뉴클레오타이드 압타머)를 포함한다.
본원에서 사용된 분해성 담체는 분해되지 않는 상태에서 생물학적 제제 포획 모이어티가 (예를 들어, 공유 링커를 통해) 부착될 수 있는 표면을 갖는 물질이다. 담체는 예를 들어 생물학적 제제를 배양하거나 단리하기에 충분한 시간 동안 또는 심지어 무기한 동안 수성 배지의 존재에서 분해되지 않은 상태로 남아 있을 수 있다. 담체는 단편으로 분해되거나 부분적으로 또는 완전히 용해될 수 있고, 분해된 상태에서 생물학적 제제로부터 분리될 수 있다.
본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 생물학적 제제 포획 모이어티는 분해성 담체의 표면의 작용기에 공유 결합된다. 예를 들어, 분해성 담체의 표면은 카르복실기, 하이드록실기, 알데하이드기, 카르보닐기, 아민기, 이민기, 아미드기, 에스테르기, 무수물기, 티올기, 디설파이드, 페놀, 구아니딘, 티오에테르, 인돌, 이미다졸 또는 디아조늄기로 작용화될 수 있다. 당업자는 이러한 "작용기"가 생물학적 제제 포획 모이어티가 공유적으로 연결된 기로 식별됨을 이해할 것이며; 예를 들어, "아민" 작용기는 카르복시 보유 생물학적 제제 포획 모이어티에 부착되어 생물학적 제제 포획 모이어티에 대한 카르복사미드 결합을 형성할 수 있다.
그러한 특정 실시양태에서, 생물학적 제제 포획 모이어티는 단백질에 부착된 복수의 압타머(예를 들어, 올리고뉴클레오타이드 압타머)를 포함하고, 단백질은 펩타이드 결합을 통해 분해성 담체의 표면의 카르복실기에 부착된다. 그러한 다른 실시양태에서, 생물학적 제제 포획 모이어티는 분해성 담체의 표면의 알데하이드기에 이민 결합을 통해 부착된 아민 말단 압타머(예를 들어, DNA 압타머)를 포함한다.
분해성 담체 표면의 단위당 생물학적 제제 포획 모이어티의 수(즉, 포획 모이어티 밀도)는 특별히 제한되지 않지만, 당업자는 포획 모이어티 밀도가 일반적으로 분해성 담체 표면의 단위당 포획될 수 있는 생물학적 제제(예를 들어, 세포)의 수(즉, 포획된 제제 밀도)보다 더 클 수 있음을 이해할 것이다. 따라서, 특정 실시양태에서, 분해성 담체의 포획 모이어티 밀도는 분해성 담체의 포획되 제제 밀도보다 더 크다.
본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 분해성 담체는 복수의 분해성 마이크로담체(예를 들어, 중합체 마이크로담체)를 포함하고, 마이크로담체는 생물학적 제제 포획 모이어티가 부착될 수 있는 표면을 갖는다. 예를 들어, 도 3의 백(300)은 구획(320)을 둘러싸는 백 벽(310)(외부 표면(312) 및 내부 표면(314)을 가짐), 복수의 분해성 마이크로담체(350)를 수용하는 구획(320)을 포함한다. 특정 실시양태에서, 마이크로담체의 평균 크기는 0.5 μm 내지 1000 μm, 또는 0.5 μm 내지 900 μm, 또는 0.5 μm 내지 800 μm, 또는 0.5 μm 내지 700 μm, 또는 0.5 μm 내지 600 μm, 또는 0.5 μm 내지 500 μm, 또는 0.5 μm 내지 400 μm, 또는 0.5 μm 내지 300 μm, 또는 0.5 μm 내지 250 μm, 또는 1 μm 내지 1000 μm, 또는 5 μm 내지 1000 μm, 또는 10 μm 내지 1000 μm, 또는 25 μm 내지 1000 μm, 또는 50 μm 내지 1000 μm, 또는 100 μm 내지 1000 μm, 또는 200 μm 내지 1000 μm, 또는 300 μm 내지 1000 μm, 또는 400 μm 내지 1000 μm, 또는 500 μm 내지 1000 μm, 또는 10 μm 내지 750 μm, 또는 10 μm 내지 500 μm, 또는 20 μm 내지 400 μm, 또는 50 μm 내지 300 μm의 범위 이내이다.
본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 분해성 담체는 용기의 내부 표면의 적어도 일부(예를 들어, 적어도 대부분 또는 심지어 전체)에 인접하여 배치된 분해성 코팅(예를 들어, 중합체 코팅)을 포함한다. 그러한 특정 실시양태에서, 분해성 코팅은 용기의 내부 표면에 공유적으로 부착된다. 예를 들어, 도 4의 백(400)은 밀봉된 구획(420)을 둘러싸는 백 벽(410)(외부 표면(412) 및 내부 표면(414)을 가짐), 내부 표면(414)에 인접하여 배치된(예를 들어, 공유적으로 부착된) 분해성 코팅(460)을 수용하는 밀봉된 구획(420)을 포함한다. 그러한 특정 실시양태에서, 분해성 코팅은 10 nm (예를 들어, 대략 단층) 내지 10 mm, 또는 10 nm 내지 1 mm, 또는 10 nm 내지 500 μm, 또는 10 nm 내지 100 μm, 또는 10 nm 내지 1 μm, 또는 1 μm 내지 10 mm, 또는 100 μm 내지 10 mm, 또는 500 μm 내지 10 mm, 또는 1 mm 내지 10 mm의 범위 내의 두께를 갖는다. 그러한 특정 실시양태에서, 분해성 코팅은 용기의 내부 표면의 작용기(예를 들어, 내부 표면을 포함하는 플루오로중합체의 작용기)에 공유적으로 연결된다. 특정 실시양태에서, 작용기는 카르복실 기, 하이드록실 기, 카르복실기, 하이드록실기, 알데하이드기, 카르보닐기, 아민기, 이민기, 아미드기, 에스테르기, 무수물기, 티올기, 디설파이드, 페놀, 구아니딘, 티오에테르, 인돌, 이미다졸 또는 디아조늄기이다.
본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 분해성 담체는 절단성 중합체를 포함한다. 예를 들어, 그러한 특정 실시양태에서, 분해성 담체는 예를 들어, 다당류와 같은 효소-절단성 중합체를 포함한다. 그러한 특정 실시양태에서, 다당류는 전분(예를 들어, 알파-아밀레이스에 의해 절단 가능)이다. 그러한 다른 실시양태에서, 다당류는 폴리갈락투론산(예를 들어, 펙티네이스에 의해 절단 가능)이다. 또 다른 예에서, 그러한 특정 실시양태에서, 분해성 담체는 예를 들어, 폴리(락틱-코-글리콜산)(PLGA), 폴리락트산(PLA), 또는 폴리카프로락톤과 같은 가수분해성 중합체를 포함한다. 그러한 특정 실시양태에서, 중합체 가수분해는 6 미만의 pH, 또는 8 초과의 pH에서 가속화된다. 그러한 특정 실시양태에서, 중합체 가수분해는 예를 들어 아민과 같은 가수분해 촉매의 존재에서 가속화된다.
본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 분해성 담체는 예를 들어 수성 배지에 분해되지 않은 채로 남아 있을 수 있는 담체를 제공하기에 충분한 수의 가교를 갖는 가교된 중합체를 포함한다. 그러한 특정 실시양태에서, 분해성 담체는 임계 수준 미만의 효소를 갖는 수성 배지에 분해되지 않은 채로 남아 있을 수 있는 담체를 제공하기에 충분한 다수의 가교(예를 들어, 글리세롤 디에테르 가교)를 갖는 효소-절단성 중합체 (예를 들어, 다당류)를 포함한다. 그러한 다른 실시양태에서, 분해성 담체는 임계 수준 미만의 가수분해 촉매를 갖는 수성 배지에, 또는 임계 범위 밖의 pH를 갖는 수성 배지에 분해되지 않은 채로 남아 있을 수 있는 담체를 제공하기에 충분한 수의 가교를 갖는 가수분해성 중합체(예를 들어, PLGA, PLA, 또는 폴리카프로락톤)를 포함한다. 또 다른 예에서, 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 분해성 담체는 다른 가용성인 중합체의 불용성 가교 네트워크를 포함한다. 예를 들어, 그러한 특정 실시양태에서, 분해성 담체는 임계 수준 미만의 글루타티온을 갖는 수성 배지에 분해되지 않은 채로 남아 있을 수 있는 티오에테르 가교된 중합체 네트워크(예를 들어, 하이드로겔)를 포함한다.
특정 실시양태에서, 분해성 담체의 가교된 중합체는 중합체(예를 들어, 다당류)의 효소 절단을 방지하는 가교제를 포함한다. 예를 들어, 그러한 특정 실시양태에서, Ca2+ 가교된 다당류(예를 들어, 폴리갈락투론산)를 포함하는 분해성 담체는 임계 수준 미만의 Ca2+-킬레이트제(예를 들어, EDTA)를 갖는 수성 배지에서 분해되지 않은 채로 남아 있을 수 있고, 즉, 배지가 임계 수준 초과의 절단 효소(예를 들어, 펙티네이스)를 포함하는 경우에도 마찬가지이다.
본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 분해성 담체는 (예를 들어, 450 nm 미만, 또는 420 nm 미만의 파장을 갖는 복사선으로) 조사 시 분해 가능하거나, 분해성 담체의 분해가 가속화된다. 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 분해성 담체는 승온(예를 들어, 37 ℃ 초과, 또는 40 ℃ 초과)에 노출 시 분해 가능하거나, 분해성 담체의 분해가 가속화된다.
본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 용기의 내부 표면은 폴리테트라플루오로에틸렌 (PTFE), 퍼플루오로알콕시 (PFA), 에틸렌 테트라플루오로에틸렌 (ETFE), 폴리비닐리덴 플루오라이드 (PVDF), 폴리클로로트리플루오로에틸렌 (PCTFE), 에틸렌 클로로트리플루오로에틸렌 (ECTFE), 플루오린화 에틸렌 프로필렌 (FEP), 에틸렌 플루오린화 에틸렌 프로필렌 (EFEP), 퍼플루오로폴리에테르 (PFPE), 변성 폴리테트라플루오로에틸렌 (TFM), 폴리비닐 플루오라이드 (PVF), 이들의 임의의 혼합으로부터 선택된 플루오로중합체를 포함한다. 예를 들어, 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 용기의 내부 표면은 플루오린화 에틸렌 프로필렌을 포함한다. 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 용기의 내부 표면은 본질적으로 플루오로중합체(예를 들어, 플루오린화 에틸렌 프로필렌)로 구성되거나 플루오로중합체이다. 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 백의 내부 표면을 포함하는 물질은 0.0003 인치 이상, 0.0004 인치 이상, 0.0005 인치 이상, 0.0006 인치 이상, 0.001 인치 이상, 또는 0.10 인치 이상의 두께를 갖는다. 예를 들어, 그러한 특정 실시양태에서, 용기의 내부 표면의 물질은 0.0003 인치 내지 0.2 인치, 또는 0.0003 인치 내지 0.1 인치, 또는 0.0005 인치 내지 0.08 인치, 또는 0.001 인치 내지 0.07 인치, 또는 0.001 인치 내지 0.05 인치, 또는 0.001 인치 내지 0.03 인치, 또는 0.001 인치 내지 0.018 인치, 또는 0.001 인치 내지 0.016 인치, 또는 0.001 인치 내지 0.014 인치, 또는 0.001 인치 내지 0.012 인치의 범위 내의 두께를 갖는다.
본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 용기 벽을 구성하는 물질은 내부 표면에 플루오로중합체의 층이 있고, 외부 표면에 또 다른 중합체 물질(플루오로중합체 또는 기타)의 층이 있는 다층 물질이다. 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 용기의 외부 표면의 물질은 0.0005 인치 이상, 또는 0.001 인치 이상, 또는 0.005 인치 이상, 또는 0.0075 인치 이상, 또는 0.01 인치 이상, 또는 0.02 인치 이상, 또는 0.03 인치 이상, 또는 0.04 인치 이상, 또는 0.05 인치 이상, 또는 0.06 인치 이상, 또는 0.07 인치 이상, 또는 0.08 인치 이상, 또는 0.09 인치 이상, 또는 0.1 인치 이상, 또는 0.11 인치 이상의 두께를 갖는다. 예를 들어, 그러한 특정 실시양태에서, 용기의 외부 표면의 물질은 0.0005 인치 내지 0.2 인치, 또는 0.005 인치 내지 0.18 인치, 또는 0.01 인치 내지 0.16 인치, 또는 0.01 인치 내지 0.14 인치, 또는 0.01 인치 내지 0.12 인치, 또는 0.06 인치 내지 0.13 인치, 또는 0.09 인치 내지 0.126 인치의 범위 내의 두께를 갖는다.
특정 실시양태에서, 분해성 담체는 복수의 마이크로담체를 포함하고 용기의 내부 표면은 본원에 기재된 바와 같은 복수의 생물학적 제제 포획 모이어티를 추가로 포함한다. 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 용기의 내부 표면에 부착된 생물학적 제제 포획 모이어티는 분해성 담체의 생물학적 제제 포획 모이어티와 동일하다. 다른 실시양태에서, 용기의 내부 표면에 부착된 생물학적 제제 포획 모이어티는 분해성 담체의 생물학적 제제 포획 모이어티가 선택적인 제제 이외의 생물학적 제제에 대해 선택적이다. 유리하게는, 본 발명자들은 그러한 용기가 생물학적 제제 포획 효율을 개선할 수 있거나 두 가지의 별개의 생물학적 제제의 단리 및 분리를 용이하게 할 수 있는 것으로 결정했다.
본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 용기의 외부 표면은 플루오로중합체 이외의 물질을 포함한다. 예를 들어, 그러한 특정 실시양태에서, 용기의 외부 표면의 물질은 열가소성 중합체, 열가소성 탄성중합체, 실리콘, 고무, 또는 이들의 임의의 조합을 포함한다. 대안적으로, 용기의 외부 표면은, 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 예를 들어 내부 표면의 플루오로중합체와 같은 플루오로중합체를 포함할 수 있다. 그러한 특정 실시양태에서, 내부 표면 및 외부 표면(즉, 용기 벽)의 물질은 플루오로중합체(예를 들어, 플루오린화 에틸렌 프로필렌)로 본질적으로 구성되거나 플루오로중합체이다.
본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 용기는 생물학적 제제를 포함한다. 그러한 특정 실시양태에서, 생물학적 제제는 생물학적 제제 포획 모이어티를 통해 담체에 부착된다. 예를 들어, 그러한 특정 실시양태에서, 생물학적 제제는 분해성 마이크로담체의 표면, 또는 분해성 코팅에 결합된 압타머를 통해 담체와 회합된 세포이다. 특정 실시양태에서, 용기의 내부 표면은 복수의 생물학적 제제 포획 모이어티를 포함하고, 이의 적어도 일부가 생물학적 제제에 부착된다. 예를 들어, 그러한 특정 실시양태에서, 생물학적 제제는 세포이고, 분해성 마이크로담체의 표면에 결합된 압타머, 또는 용기의 내부 표면에 결합된 압타머와 회합할 수 있다. 그러한 특정 실시양태에서, 분해성 마이크로담체의 생물학적 제제 포획 모이어티는 용기의 내부 표면에서 생물학적 제제 포획 모이어티와 동일하다.
본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 용기는 수성 배지를 추가로 포함한다. 수성 배지는 예를 들어, 생물학적 제제 및 하나 이상의 표적외 제제를 포함하는 세포 배양 배지일 수 있다. 본원에서 사용된 표적외 제제는 예를 들어, 생물학적 제제 이외의 세포, 세포 단편, 단백질, 비타민, 호르몬, 펩타이드, 및 금속 이온을 포함하는 생물학적 제제 이외의 물질이다 (즉, 생물학적 제제 포획 모이어티에 의해 포획 가능).
본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 용기는 표적외 제제(예를 들어, 생물학적 제제 이외의 세포)를 포함하고, 표적외 제제의 20% 이하가 분해성 담체 또는 용기의 내부 표면에 부착된다. 예를 들어, 그러한 특정 실시양태에서, 17.5% 미만, 또는 15% 미만, 또는 12.5% 미만, 또는 10% 미만, 또는 7.5% 미만, 또는 5% 미만, 또는 4% 미만, 또는 그 미만 3% 미만, 또는 2% 미만, 또는 1% 미만의 표적외 제제가 분해성 담체 또는 용기의 내부 표면에 부착된다.
본 개시내용의 또 다른 양태 본원에 달리 기재된 바와 같은 바와 같은 용기를 포함하는 세포 단리 시스템이다. 예를 들어, 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 세포 단리 시스템은 수성 배지를 수용하는 본원에 달리 기재된 바와 같은 용기, 및 수성 배지와 담체를 혼합하도록 구성된 로커를 포함한다. 또 다른 예에서, 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 세포 단리 시스템은 용기 수성 배지를 수용하는 본원에 달리 기재된 바와 같은 용기, 및 담체(예를 들어, 복수의 분해성 마이크로담체를 포함함)를 수성 배지로부터 분리하도록 구성된 원심분리기를 포함한다. 또 다른 예에서, 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 세포 단리 시스템은 수성 배지를 수용하는 본원에 달리 기재된 바와 같은 용기, 및 담체(예를 들어, 복수의 분해성 마이크로담체 포함)를 수성 배지로부터 분리하도록 구성된 용기의 출구와 유체 연통하는 필터를 포함한다. 특정 실시양태에서, 세포 단리 시스템의 용기 안의 수성 배지는 예를 들어 생물학적 제제 이외의 세포와 같은 표적외 제제를 포함한다.
유리하게는, 본 발명자들은 본원에 기재된 담체의 분해가 세포 기능에 유해한 영향을 미치지 않으면서 포획된 (예를 들어, 그리고 단리된) 생물학적 제제를 (예를 들어, 저장될 또는 추가로 배양될) 수성 배지로 방출시킬 수 있는 것으로 결정했다. 바람직하게는, 내부 표면의 플루오로중합체는 생물학적 제제 이외의 물질 (즉, 표적외 제제)의 접착을 방지하여, 용기에서 분리된 생물학적 제제의 순도를 증가시킬 수 있다.
따라서, 본 개시내용의 또 다른 양태는 생물학적 제제를 배양하는 방법이고, 방법은 생물학적 제제를 수용하는 본원게 달리 기재된 바와 같은 용기를 제공하는 단계, 및 용기 안에 수용된 제1 수성 배지에서 담체 및 생물학적 제제를 혼합하는 단계를 포함한다. 방법은 제1 수성 배지를 용기로부터 제거하는 단계, 제2 수성 배지를 용기에 첨가하는 단계 및 담체를 분해하는 단계를 추가로 포함한다.
본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 용기는 생물학적 제제를 포함하는 혈액 샘플(예를 들어, 전혈 샘플)을 수용한다. 예를 들어, 그러한 특정 실시양태에서, 용기는 혈액 샘플을 수용하고 생물학적 제제는 단핵구이다. 특정 실시양태에서, 용기는 하나 이상의 표적외 제제를 추가로 포함한다. 예를 들어, 그러한 특정 실시양태에서, 용기는 생물학적 제제 (예를 들어, 단핵구, 줄기 세포, T 세포, 내피 전구 세포, 또는 자연 살해 세포) 및 하나 이상의 표적외 제제 (예를 들어, 생물학적 제제 이외의 세포)를 포함하는 샘플 (예를 들어, 전혈 샘플)을 수용한다.
본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 제1 수성 배지는 세포 배양 배지이다. 그러한 특정 실시양태에서, 생물학적 제제는 세포이고, 생물학적 제제는 용기에서 배양된다 (즉, 제제가 제1 수성 배지에서 성장하거나 팽창한다). 물론, 수성 배지를 포함하는 하나 이상의 표적외 제제(예를 들어, 용기 안에 수용된 전혈 샘플에 포함됨)가 또한 제1 수성 배지에서 팽창할 수 있다. 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 생물학적 제제 및 담체는 로커에서 혼합된다. 혼합은 생물학적 제제 포획 모이어티와 생물학적 제제가 회합되도록 하기에 충분한 시간 동안 수행된다. 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 생물학적 제제는 세포이고, 혼합은 생물학적 제제를 팽창시키기에 충분한 시간 및 온도에서 수행된다. 특정 실시양태에서, 혼합은 로커에서 수행된다.
본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 담체는 복수의 분해성 마이크로담체를 포함하고, 제1 수성 배지를 제거하는 단계는 담체를 침강시키고 제1 수성 배지를 용기로부터 경사분리하는 것을 포함한다. 예를 들어, 그러한 특정 실시양태에서, 제1 수성 배지를 제거하는 것은 원심분리기로 마이크로담체를 침강시키고 제1 수성 배지를 용기로부터 경사분리하는 것을 포함한다. 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 제1 수성 배지는 마이크로담체를 보유하도록 구성된 필터를 통해 용기로부터 제거된다. 예를 들어, 그러한 특정 실시양태에서, 제1 수성 배지는 분해되지 않은 상태의 분해성 마이크로담체보다 작은 기공 크기를 갖는 필터를 통해 용기로부터 제거된다.
다른 실시양태에서, 담체는 용기의 내부 표면에 인접하여 배치된 분해성 코팅을 포함하고, 제1 수성 배지를 제거하는 것은 제1 수성 배지를 용기로부터 경사분리하는 것(즉, 침강 또는 여과 없음)을 포함한다.
물론, 당업자는 소량의 제1 수성 배지가 용기에 보유될 수 있음을 이해할 것이다.
제1 수성 배지의 제거 후, 본원에 달리 기재된 바와 같은 용기는 예를 들어 생물학적 제제 및 선택적으로 하나 이상의 표적외 제제를 포함하는 세포를 수용할 수 있다. 바람직하게는, 용기에 남아 있는 대부분의 세포는 분해성 담체 및 선택적으로 생물학적 제제 포획 모이어티를 통해 용기의 내부 표면에 부착된 생물학적 제제를 포함할 수 있다. 예를 들어, 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 생물학적 제제는 세포이고, 제1 수성 배지를 제거한 후 용기 안의 세포의 80 % 이상, 또는 82.5 % 이상, 또는 85 % 이상, 또는 87.5 % 이상, 또는 90 % 이상, 또는 92.5 % 이상, 또는 95 % 이상, 또는 97.5 % 이상, 또는 98 % 이상, 또는 98.5% 이상, 또는 99 % 이상이 생물학적 제제이다
본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 담체를 분해하는 단계는 담체가 제1 수성 배지의 pH와 상이한 pH를 겪는 것을 포함한다. 예를 들어, 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 담체를 분해하는 단계는 담체가 6 미만 또는 8 초과의 pH를 겪는 것을 포함한다. 그러한 특정 실시양태에서, 용기에 첨가되는 제2 수성 배지는 6 미만 또는 8 초과의 pH를 갖는다. 그러한 다른 실시양태에서, 제2 수성 배지의 pH는 제2 수성 배지를 용기에 첨가한 후 조정된다. 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 담체를 분해하는 단계는 담체를 가수분해 촉매(예를 들어, 아민 촉매)와 접촉시키는 것을 포함한다. 그러한 특정 실시양태에서, 용기에 첨가된 제2 수성 배지는 가수분해 촉매를 포함한다. 그러한 다른 실시양태에서, 가수분해 촉매는 제2 수성 배지를 첨가한 후 용기에 첨가된다. 특정 실시양태에서, 제2 수성 배지의 pH는 가수분해 촉매에 의해 촉매화된 가수분해 반응을 가능하게 하거나 심지어 가속화한다. 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 담체를 분해하는 단계는 담체를 효소, 또는 효소 및 킬레이트제와 접촉시키는 것을 포함한다. 그러한 특정 실시양태에서, 용기에 첨가된 제2 수성 배지는 효소를 포함한다. 그러한 다른 실시양태에서, 효소는 제2 수성 배지를 첨가한 후 용기에 첨가된다. 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 담체를 분해하는 단계는 담체가 승온(예를 들어, 37 ℃ 초과, 또는 40 ℃ 초과의 온도)을 겪는 것을 포함한다. 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 담체를 분해하는 단계는 담체를 (예를 들어, 450 nm 미만, 또는 420 nm 미만의 파장을 갖는 복사선으로) 조사하는 것을 포함한다.
유리하게는, 본 발명자들은 담체 분해(예를 들어, 단편화, 부분적 용해, 또는 용해)가 생물학적 제제에 유해한 영향을 미치지 않으면서 포획된 생물학적 제제를 담체로부터 분리할 수 있는 것으로 결정했다. 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 방법은 제2 수성 배지(즉, 분해된 담체 포함)에서 생물학적 제제를 배양하는 단계를 추가로 포함한다. 그러한 특정 실시양태에서, 제2 수성 배지는 세포 배양 배지이다. 본원에 달리 기재된 바와 같은 특정 실시양태에서, 방법은, 예를 들어 생물학적 제제를 침강시키고 제2 수성 배지를 제거하여 분해된 담체를 제거하는 단계 및 제3 수성 배지를 용기에 첨가하는 단계를 추가로 포함한다. 그러한 특정 실시양태에서, 제3 수성 배지는 세포 배양 배지, 또는 세포 저장 배지이다.
본 개시내용의 또 다른 양태는 아래에 열거된 실시양태에 의해 제공되고, 이는 임의의 수 및 기술적으로 또는 논리적으로 일관성이 없는 임의의 방식으로 조합될 수 있다.
실시양태 1. 외부 표면 및 내부 표면을 갖는 용기(예를 들어, 백 형태), 내부 표면은 플루오로중합체를 포함하고, 용기 안에 분해성 담체가 수용됨;
여기서 담체는 복수의 생물학적 제제 포획 모이어티를 포함함.
실시양태 2. 실시양태 1의 용기, 여기서 분해성 담체는 복수의 분해성 마이크로담체를 포함하고, 각각의 마이크로담체는 복수의 생물학적 제제 포획 모이어티를 포함한다.
실시양태 3. 실시양태 2의 용기, 여기서 마이크로담체의 평균 직경은 약 0.5 μm 내지 약 1000 μm(예를 들어, 약 5 μm 내지 약 750 μm, 또는 약 10 μm 내지 약 500 μm, 또는 약 25 μm 내지 약 300 μm)의 범위 이내이다.
실시양태 4. 실시양태 2 또는 3의 용기, 여기서 용기의 내부 표면은 복수의 생물학적 제제 포획 모이어티를 포함한다.
실시양태 5. 실시양태 1의 용기, 여기서 분해성 담체는 용기의 내부 표면의 적어도 일부(예를 들어, 적어도 대부분)에 인접하여 배치된 분해성 코팅을 포함한다.
실시양태 6. 실시양태 1-5 중 임의의 용기, 여기서 생물학적 제제 포획 모이어티는 하나 이상의 압타머를 포함한다.
실시양태 7. 실시양태 1-6 중 임의의 용기, 여기서 생물학적 제제는 세포이다.
실시양태 8. 실시양태 7의 용기, 여깅서 세포는 혈액 세포 또는 면역 세포이다.
실시양태 9. 실시양태 7의 용기, 여기서 세포는 단핵구, 줄기 또는 전구 세포 (예를 들어, 중간엽 줄기 세포), T 세포 (예를 들어, 조절 T 세포), 내피 전구 세포, 또는 자연 살해 세포이다.
실시양태 10. 실시양태 1-9 중 임의의 용기, 여기서 분해성 담체는 중합체를 포함한다.
실시양태 11. 실시양태 10의 용기, 여기서 분해성 담체는 다당류(예를 들어, 전분 또는 폴리갈락투론산)를 포함한다.
실시양태 12. 실시양태 10의 용기, 여기서 분해성 담체는 폴리(락틱-코-글리콜산) (PLGA), 폴리락트산 (PLA), 및 폴리카프로락톤으로부터 선택된 하나 이상의 중합체를 포함한다.
실시양태 13. 실시양태 10-12 중 어느 하나의 용기, 여기서 중합체는 가교된다 (예를 들어, 티오에테르 가교, Ca2+ 가교, 또는 글리세롤 디에테르 가교).
실시양태 14. 실시양태 1-13 중 어느 하나의 용기, 여기서 담체는 6 미만의 pH, 또는 약 8의 pH에서 물에서 분해 가능하다.
실시양태 15. 실시양태 1-13 중 어느 하나의 용기, 여기서 담체는 가수분해 촉매(예를 들어, 아민 촉매)와 접촉 시 물에서 분해 가능하다.
실시양태 16. 실시양태 1-13 중 어느 하나의 용기, 여기서 담체는 효소, 또는 효소 및 킬레이트제와 접촉 시 물에서 분해 가능하다.
실시양태 17. 실시양태 16의 용기, 여기서 효소는 아밀레이스 또는 펙티네이스이다.
실시양태 18. 실시양태 1-13 중 어느 하나의 용기, 여기서 담체는 승온(예를 들어, 37 ℃ 초과, 또는 40 ℃ 초과의 온도)에 노출 시 물에서 분해 가능하다.
실시양태 19. 실시양태 1-13 중 어느 하나의 용기, 여기서 담체는 (예를 들어, 450 nm 미만, 또는 420 nm 미만의 파장을 갖는 복사선으로) 조사 시 물에서 분해 가능하다.
실시양태 20. 실시양태 1-19 중 어느 하나의 용기, 여기서 플루오로중합체는 폴리테트라플루오로에틸렌 (PTFE), 퍼플루오로알콕시 (PFA), 에틸렌 테트라플루오로에틸렌 (ETFE), 폴리비닐리덴 플루오라이드 (PVDF), 폴리클로로트리플루오로에틸렌 (PCTFE), 에틸렌 클로로트리플루오로에틸렌 (ECTFE), 플루오린화 에틸렌 프로필렌 (FEP), 에틸렌 플루오린화 에틸렌 프로필렌 (EFEP), 퍼플루오로폴리에테르 (PFPE), 변성 폴리테트라플루오로에틸렌 (TFM), 폴리비닐 플루오라이드 (PVF), 이들의 임의의 혼합이다.
실시양태 21. 실시양태 1-19 중 어느 하나의 용기, 여기서 플루오로중합체는 플루오린화 에틸렌 프로필렌(FEP)이다.
실시양태 22. 실시양태 1-21 중 어느 하나의 용기, 여기서 분해성 담체는 생물학적 제제에 부착되고, 생물학적 제제는 생물학적 제제 포획 모이어티를 통해 담체에 부착된다.
실시양태 23. 수성 배지를 수용하는, 실시양태 1-22 중 어느 하나의 용기.
실시양태 24. 표적외 제제를 수용하는, 실시양태 23의 용기.
실시양태 25. 실시양태 24의 용기, 여기서 표적외 제제는 생물학적 제제 이외의 세포이다.
실시양태 26. 실시양태 24 또는 25의 용기, 여기서 표적외 제제의 20% 미만(예를 들어, 15% 미만, 10% 미만, 5% 미만, 또는 1% 미만)이 담체 또는 용기의 내부 표면에 접착된다.
실시양태 27. 실시양태 23-25 중 어느 하나의 용기 및 담체와 수성 배지를 혼합하도록 구성된 로커를 포함하는 세포 단리 시스템.
실시양태 28. 실시양태 23-25 중 어느 하나의 용기 및 담체를 수성 배지로부터 분리하도록 구성된 원심분리기를 포함하는 세포 단리 시스템.
실시양태 29. 실시양태 23-25 중 어느 하나의 용기 및 용기의 출구와 유체 연통하는 필터를 포함하는 세포 단리 시스템, 필터는 담체를 수성 배지로부터 분리하도록 구성된다.
실시양태 30. 다음 단계를 포함하는, 생물학적 제제 배양 방법
실시양태 1-21 중 어느 하나에 따른 용기를 제공하는 단계, 용기는 생물학적 제제를 수용함;
용기 안에 수용된 제1 수성 배지에서 담체 및 생물학적 제제를 혼합하는 단계;
제1 수성 배지를 용기로부터 제거하는 단계;
제2 수성 배지를 용기에 첨가하는 단계; 및
담체를 분해하는 단계.
실시양태 31. 실시양태 30의 방법, 여기서 담체는 복수의 분해성 마이크로담체를 포함하고, 여기서 제1 수성 배지를 제거하는 단계는 원심분리기로 마이크로담체를 침강시키고 제1 수성 배지를 용기로부터 경사분리하는 것을 포함한다.
실시양태 32. 실시양태 30의 방법, 여기서 담체는 복수의 분해성 마이크로담체를 포함하고, 여기서 제1 수성 배지는 마이크로담체를 보유하도록 구성된 필터를 통해 용기로부터 제거된다.
실시양태 33. 실시양태 30의 방법, 여기서 담체는 용기의 내부 표면에 인접하여 배치된 분해성 코팅을 포함하고, 여기서 제1 수성 배지를 제거하는 단계는 제1 수성 배지를 용기로부터 경사분리하는 것을 포함한다.
실시양태 34. 실시양태 30-34 중 어느 하나의 방법, 여기서
생물학적 제제는 세포이고;
제1 수성 배지를 제거한 후 용기 안의 세포의 80 % 이상(예를 들어, 85 % 이상, 또는 90 % 이상, 또는 95 % 이상, 또는 98 % 이상, 또는 99 % 이상)이 생물학적 제제이다.
실시양태 35. 실시양태 30-34 중 어느 하나의 방법, 여기서 담체를 분해하는 단계는 담체가 6 미만 또는 약 8의 pH를 겪는 것을 포함한다.
실시양태 36. 실시양태 30-34 중 어느 하나의 방법, 여기서 담체를 분해하는 단계는 담체를 가수분해 촉매(예를 들어, 아민 촉매)와 접촉시키는 것을 포함한다.
실시양태 37. 실시양태 30-34 중 어느 하나의 방법, 여기서 담체를 분해하는 단계는 담체를 효소 및 선택적으로 킬레이트제와 접촉시키는 것을 포함한다.
실시양태 38. 실시양태 30-34 중 어느 하나의 방법, 여기서 담체를 분해하는 단계는 담체를 승온(예를 들어, 37 ℃ 초과, 또는 40 ℃ 초과의 온도)에 노출시키는 것을 포함한다.
실시양태 39. 실시양태 30-34 중 어느 하나의 방법, 여기서 담체를 분해하는 단계는 담체를 (예를 들어, 450 nm 미만, 또는 420 nm 미만의 파장을 갖는 복사선으로) 조사하는 것을 포함한다.
실시양태 40. 분해된 담체를 용기로부터 제거하는 단계를 추가로 포함하는 실시양태 30-39 중 어느 하나의 방법.
실시양태 41. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 있어서, 용기는 백 형태인 용기 또는 방법.
본원에 나타난 세부 사항은 단지 예로서 그리고 본 발명의 바람직한 실시양태의 예시적인 논의를 목적으로 하며, 본 발명의 다양한 실시양태의 원리 및 개념 측면의 가장 유용하고 쉽게 이해되는 설명인 것으로 여겨지는 것을 제공하기 위해 제시된다. 이와 관련하여, 본 발명의 기본적인 이해를 위해 필요한 것보다 더 상세하게 본 발명의 구조적 세부사항을 보여주도록 시도되지 않으며, 본 발명의 여러 형태가 실제로 어떻게 구현되는지 당업자에게 명백하도록 도면 및/또는 실시예와 함께 설명이 이루어진다. 따라서, 개시된 공정 및 장치가 설명되기 전에, 본원에 기재된 양태가 특정 실시양태, 장치, 또는 구성에 제한되지 않으며 물론 다양할 수 있음을 이해해야 한다. 본원에서 사용된 용어는 단지 특정 양태를 설명할 목적이며, 본원에서 구체적으로 정의되지 않는 한, 제한하려는 의도가 아님을 또한 이해해야 한다.달리 지시되거나 문맥상 명백히 모순되지 않는 한, 본 발명을 설명하는 맥락에서 (특히, 하기 청구범위의 맥락에서) 사용된 용어 "a", "an", "the" 및 유사한 지시어는 단수 및 복수를 모두 포함하는 것으로 해석되어야 한다. 본원에서 값의 범위의 언급은 단지 그 범위 내에 속하는 각각의 개별 값을 개별적으로 지칭하는 속기 방법을 제공하도록 의도된다. 본원에서 달리 지시되지 않는 한, 각각의 개별적인 값은 마치 본 명세서에서 개별적으로 언급된 것처럼 명세서에 포함된다. 본원에서 범위는 "약" 하나의 특정 값 및/또는 내지 "약" 또 다른 특정 값으로 표현될 수 있다. 그러한 범위가 표현될 때, 다른 양태가 하나의 특정 값 및/또는 내지 다른 특정 값을 포함한다. 유사하게, 값이 선행하는 "약"을 사용하여 근사치로 표현될 때, 특정 값이 또 다른 양태를 형성함이 이해될 것이다. 각 범위의 종점은 다른 종점과 관련하여, 그리고 다른 종점에 무관하게 중요함이 또한 이해될 것이다.
본원에 기재된 모든 방법은 본원에서 달리 지시되거나 문맥상 명백하게 모순되지 않는 한 임의의 적적한 순서의 단계로 수행될 수 있다. 본원에 제공된 임의의 그리고 모든 예 또는 예시적인 언어(예를 들어, "예컨대")의 사용은 단지 본 발명을 더 잘 설명하도록 의도되며 달리 청구된 본 발명의 범위에 제한을 가하지 않는다. 본 명세서의 어떤 언어도 본 발명의 실시에 필수적인 임의의 청구되지 않은 요소를 나타내는 것으로 해석되어서는 안된다.
문맥상 달리 명확하게 요구되지 않는 한, 상세한 설명 및 청구범위 전체에 걸쳐, 단어 '포함하다', '포함하는' 등은 배타적이거나 철저한 의미와는 달리 포괄적 의미로; 다시 말해서 "포함하지만 이에 제한되지 않는"의 의미로 해석되어야 한다. 단수 또는 복수를 사용하는 단어는 각각 복수 및 단수를 또한 포함한다. 또한, 단어 "여기에서", "위의" 및 "아래의" 및 유사한 의미의 단어는, 본 출원에서 사용될 때, 본 출원의 임의의 특정 부분이 아니라 전체로서 본 출원을 지칭해야 한다.
당업자가 이해할 것과 같이, 본원에 개시된 각각의 실시양태는 이의 특정한 언급된 요소, 단계, 성분 또는 구성요소를 포함하거나, 필수적으로 이로 구성되거나, 이로 구성될 수 있다. 본원에서 사용된 전이 용어 "포함하다"는 포함하지만 이에 제한되지 않음을 의미하고, 명시되지 않은 요소, 단계, 성분, 또는 구성요소를 포함하는 것을 상당한 양으로도 허용한다. 전이구 "구성되는"은 명시되지 않은 임의의 요소, 단계, 성분 또는 구성요소를 배제한다. 전이구 "필수적으로 구성되는"은 실시양태의 범위를 명시된 요소, 단계, 성분 또는 구성요소 및 실시양태에 실질적으로 영향을 미치지 않는 것으로 제한한다.
달리 지시되지 않는 한, 명세서 및 청구범위에서 사용된 성분의 양, 특성, 예컨대 분자량, 반응 조건 등을 표현하는 모든 수치는 모든 경우에 용어 "약"에 의해 변형될 수 있는 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 반대로 지시되지 않는 한, 명세서 및 첨부된 청구범위에 제시된 수치 파라미터는 본 발명에 의해 획득하도록 추구되는 원하는 특성에 따라 변할 수 있는 근사치이다. 적어도 균등론의 적용을 청구범위의 범위로 제한하려는 시도는 아니지만, 각각의 수치 파라미터는 적어도 보고된 유효 자릿수의 수에 비추어 그리고 일반적인 반올림 기법을 적용하여 해석되어야 한다. 추가의 명확성이 요구되는 경우, 용어 "약"은 언급된 수치 값 또는 범위와 함께 사용될 때 당업자에 의해 합리적으로 부여된 의미를 갖는다, 즉, 당해 분야에서 전형적인 확실성의 언급된 값 또는 범위보다 다소 많거나 적은 것을 나타낸다.
본 발명의 넓은 범위를 제시하는 수치 범위 및 파라미터가 근사치임에도 불구하고, 특정 실시예에 제시된 수치 값은 가능한 한 정확하게 보고된다. 그러나 임의의 수치 값은 각각의 테스트 측정에서 발견되는 표준 편차로부터 필연적으로 발생하는 특정한 오차를 본질적으로 포함한다.
본원에 개시된 발명의 대안적인 요소 또는 실시양태의 그룹화는 제한으로서 해석되지 않아야 한다. 각각의 그룹 구성원은 개별적으로 또는 본원에서 발견된 그룹의 다른 구성원 또는 다른 요소와 임의의 조합으로 언급되고 청구될 수 있다. 편의성 및/또는 특허성의 이유로 그룹의 하나 이상의 구성원이 그룹에 포함되거나 그룹에서 삭제될 수 있는 것으로 예상된다. 그러한 임의의 포함 또는 삭제가 일어날 때, 본 명세서는 변형된 그룹을 포함하는 것으로 간주되어 첨부된 청구범위에 사용된 모든 마쿠쉬 그룹의 기재된 설명을 충족시킨다.
본 발명의 일부 실시양태는 본 발명을 수행하기 위해 발명자들에게 알려진 최상의 방식을 포함하여 본원에 기재된다. 물론, 이들 기재된 실시양태의 변형이 전술한 설명 독해시 당업자에게 명백해질 것이다. 본 발명자들은 당업자가 그러한 변형을 적절해 채택할 것을 기대하며, 본 발명자들은 본원에 구체적으로 기재된 것과 다르게 본 발명을 실시하고자 한다. 따라서, 본 발명은 적용 가능한 법률에 의해 허용되는 바와 같이 여기에 첨부된 청구범위에 인용된 발명 대상의 모든 변형 및 등가물을 포함한다. 또한, 모든 가능한 변형으로 위에 기재된 요소의 임의의 조합이 본원에 달리 지시되거나 문맥상 명백하게 모순되지 않는 한 본 발명에 포함된다.
본 명세서 전반에 걸쳐 특허 및 인쇄된 간행물에 대한 수많은 참조가 이루어졌다. 인용된 참고문헌 및 인쇄된 간행물 각각은 그 전체가 참조로 본원에 개별적으로 포함된다.
또한, 본원에 개시된 발명의 실시양태는 본 발명의 원리를 예시하는 것으로 이해되어야 한다. 사용될 수 있는 다른 변형이 발명의 범위 내에 있다. 따라서, 제한이 아닌 예로서 본 발명의 대안적인 구성이 본원의 교시에 따라 이용될 수 있다. 따라서, 본 발명은 도시되고 설명된 바와 같이 정확하게 제한되지 않는다.
Claims (23)
- 외부 표면 및 내부 표면을 갖는 용기(예를 들어, 백 형태), 내부 표면은 플루오로중합체를 포함하고, 용기 안에 분해성 담체가 수용됨;
여기서 담체는 복수의 생물학적 제제 포획 모이어티를 포함함. - 제1항에 있어서, 분해성 담체는 약 0.5 μm 내지 약 1000 μm 범위의 평균 직경을 갖는 복수의 분해성 마이크로담체를 포함하고, 각각의 마이크로담체는 복수의 생물학적 제제 포획 모이어티를 포함하는 용기.
- 제2항에 있어서, 용기의 내부 표면은 복수의 생물학적 제제 포획 모이어티를 포함하는 용기.
- 제1항에 있어서, 분해성 담체는 용기의 내부 표면의 적어도 대부분에 인접하여 배치된 분해성 코팅을 포함하는 용기.
- 제1항에 있어서, 생물학적 제제 포획 모이어티는 하나 이상의 압타머를 포함하는 용기.
- 제1항에 있어서, 생물학적 제제는 세포인 용기.
- 제1항에 있어서, 세포는 혈액 세포 또는 면역 세포, 예를 들어, 단핵구, 줄기 또는 전구 세포(예를 들어, 중간엽 줄기 세포), T 세포(예를 들어, 조절 T 세포), 내피 전구 세포, 또는 자연 살해 세포인 용기.
- 제1항에 있어서, 분해성 담체는 다당류(예를 들어, 전분 또는 폴리갈락투론산)를 포함하는 용기.
- 제1항에 있어서, 분해성 담체는 폴리(락틱-코-글리콜산) (PLGA), 폴리락트산 (PLA), 및 폴리카프로락톤으로부터 선택된 하나 이상의 중합체를 포함하는 용기.
- 제1항에 있어서, 담체는 6 미만의 pH, 또는 약 8의 pH에서 물에서 분해 가능한 용기.
- 제1항에 있어서, 담체는 가수분해 촉매(예를 들어, 아민 촉매)와 접촉 시 물에서 분해 가능한 용기.
- 제1항에 있어서, 담체는 효소, 또는 효소 및 킬레이트제와 접촉 시 물에서 분해 가능한 용기.
- 제1항에 있어서, 담체는 40 ℃ 초과의 온도에 노출 시 물에서 분해 가능한 용기.
- 제1항에 있어서, 담체는 (예를 들어, 450 nm 미만, 또는 420 nm 미만의 파장을 갖는 복사선으로) 조사 시 물에서 분해 가능한 용기.
- 제1항에 있어서, 플루오로중합체는 폴리테트라플루오로에틸렌 (PTFE), 퍼플루오로알콕시 (PFA), 에틸렌 테트라플루오로에틸렌 (ETFE), 폴리비닐리덴 플루오라이드 (PVDF), 폴리클로로트리플루오로에틸렌 (PCTFE), 에틸렌 클로로트리플루오로에틸렌 (ECTFE), 플루오린화 에틸렌 프로필렌 (FEP), 에틸렌 플루오린화 에틸렌 프로필렌 (EFEP), 퍼플루오로폴리에테르 (PFPE), 변성 폴리테트라플루오로에틸렌 (TFM), 폴리비닐 플루오라이드 (PVF), 이들의 임의의 혼합인 용기.
- 제1항에 있어서, 분해성 담체는 생물학적 제제에 부착되고, 생물학적 제제는 생물학적 제제 포획 모이어티를 통해 담체에 부착되는 용기.
- 제1항에 있어서, 표적외 제제, 예를 들어, 생물학적 제제 이외의 세포를 수용하고, 여기서 표적외 제제의 20% 미만이 담체 또는 용기의 내부 표면에 부착되는 용기.
- 수성 배지를 수용하는 제1항의 용기, 및 담체를 수성 배지와 혼합하도록 구성된 하나 이상의 로커, 담체를 수성 배지로부터 분리하도록 구성된 원심분리기, 및 용기의 출구와 유체 연통하는 필터를 포함하는 세포 단리 시스템, 필터는 담체를 수성 배지로부터 분리하도록 구성됨.
- 다음 단계를 포함하는, 생물학적 제제 배양 방법
제1항에 따른 용기를 제공하는 단계, 용기는 생물학적 제제를 수용함;
용기 안에 수용된 제1 수성 배지에서 담체 및 생물학적 제제를 혼합하는 단계;
제1 수성 배지를 용기로부터 제거하는 단계;
제2 수성 배지를 용기에 첨가하는 단계; 및
담체를 분해하는 단계. - 제19항에 있어서, 담체는 복수의 분해성 마이크로담체를 포함하고, 여기서 제1 수성 배지를 제거하는 단계는 원심분리기로 마이크로담체를 침강시키고 제1 수성 배지를 용기로부터 경사분리하는 것; 또는 제1 수성 배지를 마이크로담체를 보유하도록 구성된 필터를 통해 용기로부터 제거하는 것을 포함하는 방법.
- 제19항에 있어서, 담체는 용기의 내부 표면에 인접하여 배치된 분해성 코팅을 포함하고, 제1 수성 배지를 제거하는 것은 제1 수성 배지를 용기로부터 경사분리하는 것을 포함하는 방법.
- 제19항에 있어서,
생물학적 제제는 세포이고;
제1 수성 배지를 제거한 후 용기 안의 세포의 80 % 이상이 생물학적 제제인 방법. - 제19항에 있어서, 담체를 분해하는 단계는 담체가 6 미만 또는 약 8의 pH를 겪는 것; 담체를 가수분해 촉매(예를 들어, 아민 촉매)와 접촉시키는 것을 포함하고; 담체를 분해하는 단계는 담체를 효소 및 선택적으로 킬레이트제와 접촉시키는 것; 담체를 승온(예를 들어, 37 ℃ 초과, 또는 40 ℃ 초과의 온도)에 노출시키는 것; 또는 담체를 (예를 들어, 450 nm 미만, 또는 420 nm 미만의 파장을 갖는 복사선으로) 조사하는 것을 포함하는 방법.
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