KR20210065243A - 다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰 및 이의 제조방법 - Google Patents

다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰 및 이의 제조방법 Download PDF

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Abstract

본 발명에 따른 다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰은, 하나의 레이어를 형성하도록 구비되는 베이스배양막 및 상기 베이스배양막과 다른 높이로 하나 이상의 레이어를 형성하도록 구비되어 사이에 세포가 배양되는 세포배양공간을 형성하며, 포어가 복수 개 형성된 n개의 상부배양막(n은 1이상의 자연수)을 포함한다.

Description

다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰 및 이의 제조방법{Insert Well Having Multi-Layer 3D Basement Membrane Structure and Its Manufacturing Method}
본 발명은 다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰 및 이의 제조방법에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 기저막으로 구성되는 동시에 물질확산 및 유동을 구현할 수 있는 구조체를 가지는 다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰 및 이의 제조방법에 관한 것이다.
최근에는 동물실험의 비효율성 및 윤리적인 문제로 인해 대체 방안을 모색하고 있는 추세이다.
동물실험을 대체하기 위하여, 최근에는 인체유래세포를 체외에서 배양하고 인체기관을 모사한 생체모사형 테스트베드를 구현하여 신약 및 화장품을 검증하려는 시도가 증가하고 있다.
이와 같은 생체모사형 테스트베드는 인체 내 미세환경을 보다 유사하게 모사할 수 있어, 환자 맞춤형 진단 및 치료(최적 약물치료 스케쥴링, 조직 재생 방안 정립 등)를 위한 궁극적 방안으로 인식되고 있다.
그리고 현재까지 연구가 이루어진 세포배양방법은 2차원 배양기법 및 3차원 배양기법으로 분류될 수 있다.
다만, 2차원 세포배양 시에는 생체에서 동물세포가 3차원으로 증식하는 것과 형태적으로 차이가 날 수밖에 없으며, 이러한 이질적인 환경은 세포의 유전자 발현에도 영향을 미치게 된다. 즉 체외의 동물세포배양은 생체 내 동물세포와의 대응성이 떨어진다는 문제가 있다.
따라서 이와 같은 문제점들을 해결하기 위한 방법이 요구된다.
국제공개특허 WO2017/214541호
본 발명은 상술한 종래 기술의 문제점을 해결하기 위하여 안출된 발명으로서, 기저막으로 구성되는 동시에 물질확산 및 유동을 구현할 수 있는 구조체를 가지는 다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰 및 이의 제조방법을 제공하기 위한 목적을 가진다.
본 발명의 과제들은 이상에서 언급한 과제들로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제들은 아래의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
상기한 목적을 달성하기 위한 본 발명의 다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰은, 하나의 레이어를 형성하도록 구비되는 베이스배양막 및 상기 베이스배양막과 다른 높이로 하나 이상의 레이어를 형성하도록 구비되어 사이에 세포가 배양되는 세포배양공간을 형성하며, 포어가 복수 개 형성된 n개의 상부배양막(n은 1이상의 자연수)을 포함한다.
이때 상기 상부배양막은 적어도 일부가 상기 베이스배양막 또는 인접한 다른 상부배양막에 대해 상부로 이격되어 상기 세포배양공간을 형성할 수 있다.
그리고 상기 상부배양막 중 상기 베이스배양막과 인접한 제1상부배양막은, 양측이 개구되고, 기 설정된 경로를 가지는 마이크로 채널을 상기 베이스배양막과의 사이에 형성할 수 있다.
또한 상기 상부배양막은 하부에서 상부의 레이어로 갈수록 상기 포어의 크기가 점차 커지도록 형성될 수 있다.
또는 상기 상부배양막은 하부에서 상부의 레이어로 갈수록 상기 포어의 크기가 점차 작아지도록 형성될 수 있다.
한편 상기 베이스배양막에는 포어가 형성될 수 있다.
더불어 본 발명은 내측에 상하 개구된 배양홀을 형성하는 측벽부와, 상기 측벽부의 하부에 구비되며, 상기 베이스배양막의 둘레가 부착되는 저면부를 포함하여, 상기 배양홀 내에 상기 상부배양막이 구비되는 웰 유닛을 더 포함할 수 있다.
이때 상기 웰 유닛의 저면부 하단에는 상기 베이스배양막을 융착시키기 위한 융착돌기가 형성될 수 있다.
여기서 상기 융착돌기의 폭은 상기 측벽부의 폭의 1/10로 형성될 수 있다.
또한 상기 융착돌기의 높이는 상기 측벽부의 폭의 2배로 형성될 수 있다.
그리고 상기한 목적을 달성하기 위한 본 발명의 다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰 제조방법은, 베이스배양막 및 n개의 상부배양막을 준비하는 (a)단계, 압착돌기가 형성된 제1몰드와, 상기 압착돌기와 대향되는 삽입홈을 포함하는 제2몰드 사이에, 상기 상부배양막 중 상기 베이스배양막과 인접하여 구비될 제1상부배양막을 위치시키는 (b)단계, 상기 제1몰드 및 상기 제2몰드를 통해 상기 제1상부배양막을 열융착하여 기 설정된 경로를 가지도록 함몰된 마이크로 채널을 형성하는 (c)단계, 상기 상부배양막에 포어를 형성하는 (d)단계 및 상기 베이스배양막과 상기 상부배양막을 적층하여 복수의 레이어를 형성하는 (e)단계를 포함한다.
이때 상기 (e)단계는, 내측에 상하 개구된 배양홀을 형성하는 측벽부와, 상기 측벽부의 하부에 구비되는 저면부를 포함하는 웰 유닛의 상기 저면부 하단에 상기 베이스배양막을 융착시키는 (e-1)단계 및 상기 베이스배양막 상에 상기 상부배양막을 적층하여 상기 배양홀 내에 복수의 레이어를 형성하는 (e-2)단계를 포함할 수 있다.
상기한 과제를 해결하기 위한 본 발명의 다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰 및 이의 제조방법은, 상하가 개구된 구조이기 때문에 다층을 구성하는 기저막의 포어 크기, 분포 밀도, 두께, 형상에 따라 세포배양환경을 체내 구조와 유사하게 만들 수 있어 인큐베이터 내에서 세포를 용이하게 생장 및 분화시킬 수 있는 장점이 있다.
특히 본 발명은 체내 세포 구조와 유사한 마이크로 채널 및 기저막이 다층으로 적층된 구조체를 형성함에 따라 세포에 배양액을 지속적으로 공급해줄 수 있고, 단위 영역 내에 마이크로 채널을 최대한 많이 배치함으로써 세포가 배양되는 면적을 극대화할 수 있는 장점이 있다.
또한 본 발명의 실시예에서는, 마이크로 채널에 니들을 연결할 경우 배양액 종류를 다르게 넣을 수 있는 장점이 있으며, 각 레이어마다 포어 크기 및 사이즈를 조절함으로써 세포분화-약물이동-전이를 동시에 관찰할 수 있다.
더불어 본 발명은 기존의 플라스틱 실험기구 제작 공정과 비교하여 단가/절차/효율성이 향상된 공정을 확보하는 '공정기술 개발 측면'과 기존의 실험기구의 한계를 뛰어 넘는 바이오 부품 개발이라는 신제품 개발 측면'을 동시에 달성할 수 있는 장점이 있다.
본 발명의 효과들은 이상에서 언급한 효과들로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 효과들은 청구범위의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.
도 1 및 도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰의 모습을 나타낸 도면;
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰 내에서 이루어지는 배양액의 유동 과정을 나타낸 도면;
도 4 및 도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰 제조방법에 있어서. 제1상부배양막을 형성하는 과정을 나타낸 도면; 및
도 6 및 도 7은 본 발명의 일 실시예에 따른 다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰에 있어서, 웰 유닛의 모습을 나타낸 도면이다.
이하 본 발명의 목적이 구체적으로 실현될 수 있는 본 발명의 바람직한 실시예를 첨부된 도면을 참조하여 설명한다. 본 실시예를 설명함에 있어서, 동일 구성에 대해서는 동일 명칭 및 동일 부호가 사용되며 이에 따른 부가적인 설명은 생략하기로 한다.
도 1 및 도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰의 모습을 나타낸 도면이다.
도 1 및 도 2에 도시된 바와 같이, 본 발명의 일 실시예에 따른 다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰은 하나의 베이스배양막(210)과, n개의 상부배양막(220~240)을 포함하는 기저막 어레이(200)와, 웰 유닛(100)을 포함한다.
상기 베이스배양막(210)은 하나의 레이어를 형성하도록 구비되며, 상기 상부배양막(220~240)은 상기 베이스배양막(210)과 다른 높이로 하나 이상의 레이어를 형성하도록 구비된다. 특히 상기 상부배양막(220~240)은 n개가 형성될 수 있다(n은 1이상의 자연수).
이에 따라 상기 베이스배양막(210)과 상부배양막(220~240), 또는 서로 인접한 한 쌍의 상부배양막(220~240) 사이에는 세포가 배양되는 세포배양공간이 형성된다.
보다 구체적으로 상기 상부배양막(220~240)은 적어도 일부가 상기 베이스배양막(210) 또는 인접한 다른 상부배양막(220~240)에 대해 상부로 이격되어 3차원 구조를 형성하고, 사이사이에 상기 세포배양공간을 형성하게 된다.
본 실시예에서 상기 상부배양막(220~240)은 총 3개가 형성되는 것으로 하였으며, 이들은 각각 설명의 편의를 위해 하부에서 상부 순으로 제1상부배양막(220), 제2상부배양막(230) 및 제3상부배양막(240)이라 칭하도록 한다. 다만, 상기 상부배양막(220~240)의 개수는 본 실시예에 제한되지 않고 다양하게 이루어질 수 있다.
그리고 각각의 상부배양막(220~240)은 포어(222, 232, 242)가 복수 개 형성될 수 있으며, 이는 도 3과 같이 배양액이 각 상부배양막(220~240)을 통해 인입되거나 배출되도록 유동될 수 있도록 하기 위한 것이다.
이때 상기 상부배양막(220~240)은 하부에서 상부의 레이어로 갈수록 상기 포어(222, 232, 242)의 크기가 점차 커지도록 형성될 수도 있으며, 또는 하부에서 상부의 레이어로 갈수록 상기 포어(222, 232, 242)의 크기가 점차 작아지도록 형성될 수도 있다.
이와 같이 본 실시예는 각 레이어마다 포어(222, 232, 242)의 사이즈를 조절함으로써 세포분화-약물이동-전이를 동시에 관찰할 수 있도록 할 수 있다.
그리고 제2상부배양막(230) 및 상기 제3상부배양막(240)은 각 포어(232, 242)의 크기에 따라 호기성 환경과 혐기성 환경을 거꾸로 배치시킬 수도 있으며, 또는 호기성 환경, 혐기성 환경 중 어느 하나의 환경으로만 배치시킬수도 있다.
예컨대, 포어(232, 242)의 크기가 3(5)~10(8)㎛일 경우 세포배양공간을 호기성 환경으로 형성하거나 화학주성, 세포 운동성, 증식 및 이동에 대한 연구를 위한 환경을 형성할 수 있으며, 포어(232, 242)의 크기가 0.4~5(3)㎛일 경우 세포배양공간을 혐기성 환경으로 형성하거나 약물, 호르몬 수송 연구를 위한 환경을 형성할 수 있다.
한편 도 1 내지 도 3, 특히 도 2에 도시된 바와 같이, 본 실시예에서 상기 베이스배양막(210)과 인접한 제1상부배양막(220)은, 양측이 개구된 개구부(224)를 형성하며, 기 설정된 경로를 가지는 마이크로 채널을 상기 베이스배양막(210)과의 사이에 형성할 수 있다.
이때 상기 제1상부배양막(220)의 개구부(224)에는 니들이 연결되어 별도의 배양액(M2)을 직접 주입하도록 할 수 있으며, 또한 주입된 배양액(M2)이 반대 측으로 배출될 수도 있다.
이와 같은 제1상부배양막(220)은 상기 베이스배양막(210) 상에 다수 개가 배치될 수도 있으며, 이와 같은 경우 세포가 배양되는 면적을 극대화할 수 있다.
또한 본 실시예에서 상기 제1상부배양막(220)의 포어(222)는 3㎛ 이하로 형성하여 물질만이 제1상부배양막(220)을 통과할 수 있도록 하였으나, 상기 제1상부배양막(220)의 포어(222) 크기는 다양하게 이루어질 수 있을 것이다.
한편 본 실시예의 경우, 내측에 상하 개구된 배양홀을 형성하는 측벽부(120)와, 상기 측벽부(120)의 하부에 구비되며, 상기 베이스배양막(210)의 둘레가 부착되는 저면부(130, 도 6 및 도 7 참조)를 포함하여, 상기 배양홀 내에 상기 상부배양막(220~240)이 구비되는 웰 유닛(100)을 더 포함할 수 있다.
이와 같은 웰 유닛(100)은 하단에 상기 베이스배양막(210)이 부착되고, 상기 배양홀 내에 상부배양막(220~240)이 수용되도록 고정시킬 수 있도록 구비되며, 웰 플레이트(10)의 수용홈(12)에 거치되어 상기 기저막 어레이(200)를 상기 수용홈(12)에 수용된 배양액(M1)에 침지시킬 수 있다. 이를 위해 상기 웰 유닛(100)의 측벽부(120) 상부에는, 상기 웰 유닛(100) 자체를 상기 웰 플레이트(10)에 거치하기 위한 거치부(110)가 형성될 수 있다.
이와 같은 웰 플레이트(10)의 보다 상세한 구조에 대해서는 후술하도록 하며, 이하에서는 본 발명의 일 실시예에 따른 다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰 제조방법에 대해 설명하도록 한다.
본 발명의 일 실시예에 따른 다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰 제조방법은, 먼저 베이스배양막(210) 및 n개의 상부배양막(220)을 준비하는 (a)단계가 수행된다. 본 단계에서는 각 기저막 어레이(200)를 형성하기 위한 원재료가 준비되며, 상기 원재료는 예컨대 플라스틱 필름일 수 있다.
다음으로, 도 4에 도시된 바와 같이, 압착돌기(310)가 형성된 제1몰드(300a)와, 상기 압착돌기(310)와 대향되는 삽입홈(320)을 포함하는 제2몰드(300b)를 포함하는 몰드 어셈블리(300) 사이에, 상기 상부배양막(220~240) 중 상기 베이스배양막(210)과 인접하여 구비될 제1상부배양막(220)을 위치시키는 (b)단계가 수행된다.
그리고 상기 (b)단계에 이어, 도 5에 도시된 바와 같이 상기 제1몰드(300a) 및 상기 제2몰드(300b)를 통해 상기 제1상부배양막(220)을 열융착하여 기 설정된 경로를 가지도록 함몰된 마이크로 채널을 형성하는 (c)단계가 수행된다.
즉 도 4 및 도 5에 도시된 바와 같이 제1몰드(300a) 및 제2몰드(300b)에는 서로 대응되는 압착돌기(310) 및 삽입홈(320)을 포함함에 따라 상기 제1상부배양막(220)은 요철 형상으로 제조될 수 있으며, 함몰된 영역은 마이크로 채널을 형성하게 된다.
이후 상기 상부배양막(220~240)에 포어(222, 232, 242)를 형성하는 (d)단계가 수행되며, 본 단계에서는 상기 베이스배양막(210)에 포어(212)를 함께 형성하는 과정이 더 수행될 수도 있다.
다음으로, 상기 베이스배양막(210)과 상기 상부배양막(220)을 적층하여 복수의 레이어를 형성하는 (e)단계가 수행된다.
이때 상기 (e)단계는, 내측에 상하 개구된 배양홀을 형성하는 측벽부(120)와, 상기 측벽부(120)의 하부에 구비되는 저면부(130, 도 6 및 도 7 참조)를 포함하는 웰 유닛(100)의 상기 저면부(130) 하단에 상기 베이스배양막(210)을 융착시키는 (e-1)단계와, 상기 베이스배양막(210) 상에 상기 상부배양막(220~240)을 적층하여 상기 배양홀 내에 복수의 레이어를 형성하는 (e-2)단계를 포함할 수 있다.
그리고 도 6 및 도 7은, 본 발명의 일 실시예에 따른 다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰에 있어서, 상기 베이스배양막(210)을 융착시키기 위한 웰 유닛(100)의 모습이 자세히 도시된다. 도 6의 경우, 상기 웰 유닛(100)을 하부에서 바라본 모습이며, 도 7은 상기 웰 유닛(100)의 단면을 나타낸 모습이다.
전술한 바와 같이 상기 웰 유닛(100)은 내측에 상하 개구된 배양홀을 형성하는 측벽부(120)와, 상기 측벽부(120)의 하부에 구비되며, 상기 베이스배양막(210)의 둘레가 부착되는 저면부(130)와, 상기 측벽부(120)의 상부에 구비되는 거치부(110)를 포함할 수 있다.
본 실시예에서 상기 측벽부(120)는 기둥 형태로 복수 개가 형성되며, 상기 거치부(110) 및 상기 저면부(130)를 서로 연결하는 형태를 가진다. 따라서 서로 인접한 측벽부(120) 사이로는 배양액이 유동될 수 있다.
한편 본 실시예에서 상기 웰 유닛(100)의 저면부(130) 하단에는, 상기 베이스배양막(210)을 융착시키기 위한 융착돌기(132)가 형성될 수 있다. 이와 같은 융착돌기(132)는 열융착에 의해 상기 베이스배양막(210)의 둘레부와 융착되며, 그 형태 및 세부 치수는 상기 융착돌기(132)의 재질에 따라 다양하게 형성될 수 있다.
예컨대, 본 실시예의 경우 상기 융착돌기(132)는 폴리머 수지로 형성될 수 있으며, 이와 같은 경우 상기 융착돌기(132)의 폭(d)은 상기 측벽부(120)의 폭(w)의 1/10로 형성될 수 있다.
또한 상기 융착돌기(132)의 높이(h)는 상기 측벽부(130)의 폭(w)의 2배로 형성될 수 있다. 예를 들어, 웰 플레이트(10)에 삽입되는 웰 유닛(100)의 측벽부(120) 폭(w)이 2mm일 경우 상기 융착돌기(132)의 폭(d)은 0.2mm로 형성될 수 있으며, 융착돌기(132)의 높이(h)는 0.4mm로 형성될 수 있을 것이다.
이상과 같은 과정을 거쳐 본 발명에 따른 다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰이 제조되며, 이후 활용 목적에 따라 기저막 어레이(200)의 적층 전후로 친수성, 소수성을 부여하거나 세포부착이 용이하도록 추가적인 표면처리를 수행할 수 있다.
이와 같은 본 발명은 상하가 개구된 구조이기 때문에 다층을 구성하는 기저막 어레이(200)의 포어 크기, 분포 밀도, 두께, 형상에 따라 세포배양환경을 체내 구조와 유사하게 만들 수 있어 인큐베이터 내에서 세포를 용이하게 생장 및 분화시킬 수 있게 된다.
이상과 같이 본 발명에 따른 바람직한 실시예를 살펴보았으며, 앞서 설명된 실시예 이외에도 본 발명이 그 취지나 범주에서 벗어남이 없이 다른 특정 형태로 구체화될 수 있다는 사실은 해당 기술에 통상의 지식을 가진 이들에게는 자명한 것이다. 그러므로, 상술된 실시예는 제한적인 것이 아니라 예시적인 것으로 여겨져야 하고, 이에 따라 본 발명은 상술한 설명에 한정되지 않고 첨부된 청구항의 범주 및 그 동등 범위 내에서 변경될 수도 있다.
10: 웰 플레이트
100: 웰 유닛
110: 거치부
120: 측벽부
130: 저면부
132: 융착돌기
200: 기저막 어레이
210: 베이스 배양막
220: 제1상부배양막
230: 제2상부배양막
240: 제3상부배양막

Claims (12)

  1. 하나의 레이어를 형성하도록 구비되는 베이스배양막; 및
    상기 베이스배양막과 다른 높이로 하나 이상의 레이어를 형성하도록 구비되어 사이에 세포가 배양되는 세포배양공간을 형성하며, 포어가 복수 개 형성된 n개의 상부배양막(n은 1이상의 자연수);
    을 포함하는 다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰.
  2. 제1항에 있어서,
    상기 상부배양막은 적어도 일부가 상기 베이스배양막 또는 인접한 다른 상부배양막에 대해 상부로 이격되어 상기 세포배양공간을 형성하는 다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰.
  3. 제1항에 있어서,
    상기 상부배양막 중 상기 베이스배양막과 인접한 제1상부배양막은,
    양측이 개구되고, 기 설정된 경로를 가지는 마이크로 채널을 상기 베이스배양막과의 사이에 형성하는 다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰.
  4. 제1항에 있어서,
    상기 상부배양막은 하부에서 상부의 레이어로 갈수록 상기 포어의 크기가 점차 커지도록 형성된 다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰.
  5. 제1항에 있어서,
    상기 상부배양막은 하부에서 상부의 레이어로 갈수록 상기 포어의 크기가 점차 작아지도록 형성된 다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰.
  6. 제1항에 있어서,
    상기 베이스배양막에는 포어가 형성된 다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰.
  7. 제1항에 있어서,
    내측에 상하 개구된 배양홀을 형성하는 측벽부와, 상기 측벽부의 하부에 구비되며, 상기 베이스배양막의 둘레가 부착되는 저면부를 포함하여, 상기 배양홀 내에 상기 상부배양막이 구비되는 웰 유닛을 더 포함하는 다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰.
  8. 제7항에 있어서,
    상기 웰 유닛의 저면부 하단에는 상기 베이스배양막을 융착시키기 위한 융착돌기가 형성된 다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰.
  9. 제8항에 있어서,
    상기 융착돌기의 폭은 상기 측벽부의 폭의 1/10로 형성되는 다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰.
  10. 제8항에 있어서,
    상기 융착돌기의 높이는 상기 측벽부의 폭의 2배로 형성되는 다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰.
  11. 베이스배양막 및 n개의 상부배양막을 준비하는 (a)단계;
    압착돌기가 형성된 제1몰드와, 상기 압착돌기와 대향되는 삽입홈을 포함하는 제2몰드 사이에, 상기 상부배양막 중 상기 베이스배양막과 인접하여 구비될 제1상부배양막을 위치시키는 (b)단계;
    상기 제1몰드 및 상기 제2몰드를 통해 상기 제1상부배양막을 열융착하여 기 설정된 경로를 가지도록 함몰된 마이크로 채널을 형성하는 (c)단계;
    상기 상부배양막에 포어를 형성하는 (d)단계; 및
    상기 베이스배양막과 상기 상부배양막을 적층하여 복수의 레이어를 형성하는 (e)단계;
    를 포함하는 다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰 제조방법.
  12. 제11항에 있어서,
    상기 (e)단계는,
    내측에 상하 개구된 배양홀을 형성하는 측벽부와, 상기 측벽부의 하부에 구비되는 저면부를 포함하는 웰 유닛의 상기 저면부 하단에 상기 베이스배양막을 융착시키는 (e-1)단계; 및
    상기 베이스배양막 상에 상기 상부배양막을 적층하여 상기 배양홀 내에 복수의 레이어를 형성하는 (e-2)단계;
    를 포함하는 다층 3차원 기저막 구조의 인서트 웰 제조방법.
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