KR20210052326A - 신규 화합물의 근위축성측색경화증 예방, 개선 또는 치료 용도 - Google Patents

신규 화합물의 근위축성측색경화증 예방, 개선 또는 치료 용도 Download PDF

Info

Publication number
KR20210052326A
KR20210052326A KR1020200142053A KR20200142053A KR20210052326A KR 20210052326 A KR20210052326 A KR 20210052326A KR 1020200142053 A KR1020200142053 A KR 1020200142053A KR 20200142053 A KR20200142053 A KR 20200142053A KR 20210052326 A KR20210052326 A KR 20210052326A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
pyrano
dihydro
dimethyl
chromen
oxo
Prior art date
Application number
KR1020200142053A
Other languages
English (en)
Other versions
KR102374601B1 (ko
Inventor
박범준
Original Assignee
(주)피알지에스앤텍
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by (주)피알지에스앤텍 filed Critical (주)피알지에스앤텍
Priority to CN202080074944.7A priority Critical patent/CN114929711A/zh
Priority to BR112022008073A priority patent/BR112022008073A2/pt
Priority to PCT/KR2020/015014 priority patent/WO2021086101A1/ko
Priority to EP20881417.8A priority patent/EP4056573A4/en
Priority to JP2022525112A priority patent/JP7386992B2/ja
Priority to US17/772,136 priority patent/US20220402930A1/en
Priority to AU2020375506A priority patent/AU2020375506B2/en
Publication of KR20210052326A publication Critical patent/KR20210052326A/ko
Application granted granted Critical
Publication of KR102374601B1 publication Critical patent/KR102374601B1/ko
Priority to AU2024202310A priority patent/AU2024202310A1/en

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D493/00—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system
    • C07D493/02—Heterocyclic compounds containing oxygen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D493/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/35—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having six-membered rings with one oxygen as the only ring hetero atom
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y115/00—Oxidoreductases acting on superoxide as acceptor (1.15)
    • C12Y115/01—Oxidoreductases acting on superoxide as acceptor (1.15) with NAD or NADP as acceptor (1.15.1)
    • C12Y115/01001—Superoxide dismutase (1.15.1.1)

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Abstract

본 발명은 신규 화합물의 근위축성측색경화증 예방, 개선 또는 치료 용도에 관한 것으로서, 본 발명자들은 ALS 질환에 있어 SOD1 응집이 중요한 원인 중 하나라는 점을 밝혀내고, TDP-43 또는 세포 내 스트레스의 조절억제에 의한 WT-SOD1의 응집이 sALS의 원인이 될 수 있다는 가능성을 제시하였다. 또한, 본 발명자들은 SOD1 응집 및 미스폴딩(misfolding) 억제제로서, 새로운 화합물인 PRG-A-01(SLC-B036)을 발굴하였다. 상기 화합물은 ALS 모델 마우스에서 근육 약화 및 운동 장애에 대한 보호 효과를 나타냈다. 조직학적 분석 결과, PRG-A-01(SLC-B036) 처리에 의해 척수 내 신경이 유지되었다. 또한, 본 발명자들은 보다 더 최적화된 약물가능한 후보 화합물(PRG-A-04)을 얻었다. 결론적으로, 본 발명의 화합물은 ALS 질환에 대한 치료제로서의 개발에 유용하게 활용될 수 있다.

Description

신규 화합물의 근위축성측색경화증 예방, 개선 또는 치료 용도{Ues of novel compounds for preventing, improving or treating amyotrophic lateral sclerosis}
본 발명은 신규 화합물의 근위축성측색경화증 예방, 개선 또는 치료 용도에 관한 것이다.
근위축성측색경화증(amyotrophic lateral sclerosis; ALS)은 치명적인 신경퇴행성 질환으로, 척수 내 세포 사멸에 의해 운동 뉴런이 선택적으로 소실된다. 약 10-20%의 환자가 유전적 패턴(가족성 ALS, familial ALS; fALS)을 보이며, 나머지는 산발성 ALS(sporadic ALS; sALS)로 분류된다. 일부 유전자들이 가족성 ALS의ALS-연관 유전자 좌위에서 알려졌고, 그 중 SOD1은 fALS에서 최초로 밝혀진 유전자이다. fALS 관련 유전자들이 sALS 발병에도 작용할 것이라 추측되지만, 현재까지 sALS에 대한 정확한 원인은 밝혀지지 않고 있다. 또한, ALS는 임상 증상에 따라 전형적인 ALS와 치매를 동반한 ALS 및 비전형적인 ALS로 분류된다. 실제로, SOD1의 돌연변이는 전형적인 ALS를 유발하고, C9orf72는 치매를 동반한 ALS와 연관되어 있다.
ALS의 중요한 특징 중의 하나는 진행성 질환으로, 신경세포 사멸이 신경 연결을 통해 전파된다는 점이다. 사실, 알츠하이머 및 파킨슨병도 유사한 표현형을 보인다. 상기 특징과 관련하여, 프리온-유사 전파 기전(prion-like propagation)이 제기되었으며, 이는 미스폴딩된(misfolded) 단백질이 정상 단백질을 비정상 단백질로 변형시킨다는 것이다. 실제로, 돌연변이 아밀로이드 베타(Amyloid beta; Aβ)는 정상 Aβ를 비정상 Aβ로 변형시킬 수 있다. 최근, 돌연변이 또는 미스폴딩된 SOD1도 질병이 진행되는 과정에서 분비되고 전파될 수 있다고 보고되었다. 하지만, ALS 질환 치료제를 타겟으로 한 SOD1 응집 및 미스폴딩(misfolding) 억제제에 대해서는 많은 연구가 진행되지 않았다.
한국공개특허 10-2018-0081520(2018.07.16)
본 발명은 신규 화합물의 근위축성측색경화증 예방, 개선 또는 치료 용도에 관한 것이다.
상기 목적을 달성하기 위해서, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 수화물 또는 이의 염을 제공한다.
[화학식 1]
Figure pat00001
상기 화학식 1에서,
Figure pat00002
이 단일결합일 때 X는 CH이고, R1 및 R2는 각각 다르며, (C1~C4)알콕시, 하이드록시 또는 (C1~C4)알킬카르복시에서 선택되며,
Figure pat00003
이 이중결합일 때 X는 N이고, R1 및 R2는 각각 동일하거나 다를 수 있고, 수소, (C1~C4)알킬, (C1~C4)알콕시, 하이드록시, 할로, 나이트로, 시아노 또는 (C1~C4)알킬카르복시에서 선택됨.
또한, 본 발명은 하기 화학식 2로 표시되는 화합물, 이의 수화물 또는 이의 염을 포함하는 근위축성측색경화증 예방 또는 치료용 약학조성물을 제공한다.
[화학식 2]
Figure pat00004
상기 화학식 2에서,
Figure pat00005
이 단일결합 또는 이중결합이며,
n은 0 내지 1의 정수,
X는 CH 또는 N이고,
R1 및 R2는 각각 동일하거나 다를 수 있고, 수소, (C1~C4)알킬, (C1~C4)알콕시, 하이드록시, 할로, 나이트로, 시아노 또는 (C1~C4)알킬카르복시에서 선택됨.
또한, 본 발명은 상기 화학식 2로 표시되는 화합물, 이의 수화물 또는 이의 염을 포함하는 근위축성측색경화증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
본 발명은 신규 화합물의 근위축성측색경화증 예방, 개선 또는 치료 용도에 관한 것으로서, 본 발명자들은 ALS 질환에 있어 SOD1 응집이 중요한 원인 중 하나라는 점을 밝혀내고, TDP-43 또는 세포 내 스트레스의 조절억제에 의한 WT-SOD1의 응집이 sALS의 원인이 될 수 있다는 가능성을 제시하였다. 또한, 본 발명자들은 SOD1 응집 및 미스폴딩(misfolding) 억제제로서, 새로운 화합물인 PRG-A-01(SLC-B036)을 발굴하였다. 상기 화합물은 ALS 모델 마우스에서 근육 약화 및 운동 장애에 대한 보호 효과를 나타냈다. 조직학적 분석 결과, PRG-A-01(SLC-B036) 처리에 의해 척수 내 신경이 유지되었다. 또한, 본 발명자들은 보다 더 최적화된 약물가능한 후보 화합물(PRG-A-04)을 얻었다. 결론적으로, 본 발명의 화합물은 ALS 질환에 대한 치료제로서의 개발에 유용하게 활용될 수 있다.
도 1은 돌연변이 SOD1이 WT(wild type; 야생형; 정상형)-SOD1 응집을 촉진시킨다는 결과를 나타낸다. A. 돌연변이 SOD1s가 WT-SOD1 응집을 유도한다는 결과를 나타낸다. B. 생체 외 시험(in vitro)에서 돌연변이 SOD1s은 SOD1 응집을 촉진시킨다는 결과를 나타낸다. C. ER-스트레스는 WT-SOD1 응집을 유도한다는 결과를 나타낸다. D. 저산소 조건은 SOD1 응집 및 미스폴딩을 촉진한다는 결과를 나타낸다.
도 2A는 돌연변이 SOD1이 WT-SOD1 응집을 촉진시킨다는 결과를 나타낸다. 도 2B는 저산소 조건 및 Zn/Cu 이온 불균형이 WT-SOD1 응집을 유도한다는 결과를 나타낸다.
도 3은 미스폴딩된 SOD1 응집에 대한 화합물 억제제 스크리닝 결과를 나타낸다. A. 화합물 스크리닝에 대한 대표 그래프를 나타낸다. 음성 대조군 (-; 빨간색 선)은 돌연변이 SOD1 없이 반응시켰고, 양성 대조군 (+; 파란색 선)은 화합물 없이 돌연변이 SOD1로 반응시켰다. B. PRG-A-01이 SOD1 응집을 억제시킨다는 결과를 나타낸다. C. PRG-A-01은 용량에 따른 돌연변이 SOD1 응집 차단 효과를 보인다는 결과를 나타낸다.
도 4는 미스폴딩된 SOD1 응집에 대한 화합물 억제제 스크리닝 결과를 나타낸다. A. 화합물을 스크리닝하는 ELISA 시스템에 대한 모식도를 나타낸다. B. SOD1 발현에 대한 화합물의 효과를 나타낸다. C. 미변성 젤 분석(native gel analysis)을 이용하여, SOD1 응집에 대한 화합물의 효과를 시험한 결과를 나타낸다. D. PRG-A-01의 화학구조를 나타낸다. E. PRG-A-01은 세포독성이 없다는 결과를 나타낸다.
도 5는 PRG-A-01이 SOD1 응집 및 미스폴딩을 차단한다는 결과를 나타낸다. A. TDP-43 과발현에 의해 유도된 SOD1 응집이 PRG-A-01 처리로 억제되는 결과를 나타낸다. B. TDP-43 과발현을 통해 유도된 SOD1 응집이 PRG-A-01에 의해 감소되는 결과를 나타낸다. C. PRG-A-01이 SOD1의 다량체 형성을 차단한다는 결과를 나타낸다. D. PRG-A-01은 SOD1의 미스폴딩 형성을 감소시킨다는 결과를 나타낸다. E. PRG-A-01의 용량에 따른 미스폴딩 SOD1 억제 효과를 나타낸다. F. PRG-A-01은 돌연변이 SOD1의 미스폴딩을 억제한다는 결과를 나타낸다.
도 6은 PRG-A-01이 SOD1 응집 및 미스폴딩을 차단한다는 결과를 나타낸다. A. TDP-43 과발현은 WT-SOD1 응집을 유도한다는 결과를 나타낸다. B. 돌연변이 SOD1은 TDP43의 세포 내 분포(localization)에 영향을 준다는 결과를 나타낸다. C. PRG-A-01은 저산소 스트레스에 의해 유도된 SOD1의 응집을 차단한다는 결과를 나타낸다.
도 7은 ALS 마우스 모델에서 PRG-A-01의 생체 내(in vivo) 효과를 확인한 결과이다. A. PRG-A-01 투여 실험에 대한 모식도를 나타낸다. B. ALS 마우스 모델에서 악력(grip strength) 측정 결과를 나타낸다(12주령부터 PRG-A-01 투여). C. 비디오 파일 내 마우스의 스냅 샷을 나타낸다. D. SOD1G93A - Tg 마우스 척수의 조직학적 분석 결과를 나타낸다. E. PRG-A-01의 작용 기전에 대한 간단한 모식도를 나타낸다.
도 8은 PRG-A-01의 생체 내 효과를 나타낸다. A 및 B. 수컷(A) 및 암컷(B) SOD1G93A - Tg ALS 모델 마우스에서 앞발의 악력 측정 결과를 나타낸다. C. 행동 실험 모식도를 나타낸다. D. SOD1G93A - Tg ALS 모델 마우스의 Kaplan-Meier 생존 곡선을 나타낸다. E. PRG-A-01의 약물동태학적(pharmacokinetics; PK) 분석 결과를 나타낸다.
도 9는 PRG-A-01의 최적화 결과를 나타낸다. A 및 B. MTT 분석을 통한 세포 독성 측정 결과를 나타낸다. C. SOD1 응집에 대한 미변성 젤 분석 결과를 나타낸다. D. SOD의 IF 염색 결과를 나타낸다. E. ALS 치료 후보 화합물인 PRG-A-04의 화학 구조를 나타낸다.
도 10은 PRG-A-02(A), PRG-A-03(B) 및 PRG-A-04(C)의 약물동태학적 분석 결과를 나타낸다.
도 11은 ALS 모델 마우스에서 PRG-A 화합물들의 효과를 나타낸다. A. 마우스들의 스냅 샷을 나타낸다. B. PRG-A-04의 우수한 효과를 나타낸다. C. PRG-A-01, PRG-A-02 및 PRG-A-03의 Kaplan-Meier 생존 곡선 결과를 나타낸다.
이에, 본 발명자들은 SOD1 단백질의 전파(propagation) 또는 WT-SOD1와 돌연변이/미스폴딩된 SOD1 간의 상호작용을 차단하는 것이 ALS 질환을 타겟으로 하는 치료제가 될 수 있을 것이라 판단하고, 본 발명을 완성하였다.
본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 수화물 또는 이의 염을 제공한다.
[화학식 1]
Figure pat00006
상기 화학식 1에서,
Figure pat00007
이 단일결합일 때 X는 CH이고, R1 및 R2는 각각 다르며, (C1~C4)알콕시, 하이드록시 또는 (C1~C4)알킬카르복시에서 선택되며,
Figure pat00008
이 이중결합일 때 X는 N이고, R1 및 R2는 각각 동일하거나 다를 수 있고, 수소, (C1~C4)알킬, (C1~C4)알콕시, 하이드록시, 할로, 나이트로, 시아노 또는 (C1~C4)알킬카르복시에서 선택됨.
바람직하게는, 상기 화합물은
Figure pat00009
이 단일결합일 때 X는 CH이고, R1 및 R2는 각각 다르며, (C1~C4)알콕시, 하이드록시 또는 (C1~C4)알킬카르복시에서 선택되며,
Figure pat00010
이 이중결합일 때 X는 N이고, R1 및 R2는 각각 수소일 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
보다 바람직하게는, 상기 화합물은 (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 3-(4-하이드록시-3-메톡시페닐)프로파노에이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl 3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)propanoate; SNU-C4], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 (E)-3-(피리딘-4-일)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(pyridin-4-yl)acrylate; SNU-C9], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 3-(4-아세톡시-3-메톡시페닐)프로파노에이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl 3-(4-acetoxy-3-methoxyphenyl)propanoate; SNU-C15]로 이루어진 군에서 선택될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
또한, 본 발명은 하기 화학식 2로 표시되는 화합물, 이의 수화물 또는 이의 염을 포함하는 근위축성측색경화증 예방 또는 치료용 약학조성물을 제공한다.
[화학식 2]
Figure pat00011
상기 화학식 2에서,
Figure pat00012
이 단일결합 또는 이중결합이며,
n은 0 내지 1의 정수,
X는 CH 또는 N이고,
R1 및 R2는 각각 동일하거나 다를 수 있고, 수소, (C1~C4)알킬, (C1~C4)알콕시, 하이드록시, 할로, 나이트로, 시아노 또는 (C1~C4)알킬카르복시에서 선택됨.
바람직하게는, 상기 화합물은
Figure pat00013
이 단일결합일 때 n은 1이고, X는 CH이고, R1 및 R2는 각각 동일하거나 다를 수 있고, (C1~C4)알콕시, 하이드록시 또는 (C1~C4)알킬카르복시에서 선택될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
바람직하게는, 상기 화합물은
Figure pat00014
이 이중결합일 때 n은 0 내지 1의 정수, X는 CH 또는 N이고, R1 및 R2는 각각 동일하거나 다를 수 있고, 수소, (C1~C4)알콕시, 하이드록시, 할로, 나이트로 또는 (C1~C4)알킬카르복시에서 선택될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
보다 바람직하게는, 상기 화합물은 (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 (E)-3-(4-하이드록시-3-메톡시페닐)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)acrylate; PRG-A-01; SLC-B036], (S,E)-7-((3-(4-하이드록시-3-메톡시페닐)알릴)옥시)-8,8-디메틸-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-2-원[(S,E)-7-((3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)allyl)oxy)-8,8-dimethyl-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-2-one; PRG-A-02], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 3-(4-하이드록시-3-메톡시페닐)프로파노에이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl 3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)propanoate; SNU-C4], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 (E)-3-(3,4-디메톡시페닐)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(3,4-dimethoxyphenyl)acrylate; SNU-C5], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]chromen-7-일 3-(3,4-디메톡시페닐)프로파노에이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl 3-(3,4-dimethoxyphenyl)propanoate; SNU-C7], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 (E)-3-(피리딘-4-일)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(pyridin-4-yl)acrylate; SNU-C9], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 (E)-3-(3-하이드록시페닐)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(3-hydroxyphenyl)acrylate; SNU-C10], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일(E)-3-(4-플루오로페닐)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(4-fluorophenyl)acrylate; SNU-C11; PRG-A-03], (S,E)-7-((3-(4-플루오로페닐)알릴)옥시)-8,8-디메틸-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-2-원[(S,E)-7-((3-(4-fluorophenyl)allyl)oxy)-8,8-dimethyl-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-2-one; SNU-C13], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 (E)-3-(3-아세톡시페닐)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(3-acetoxyphenyl)acrylate; SNU-C14], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 3-(4-아세톡시-3-메톡시페닐)프로파노에이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl 3-(4-acetoxy-3-methoxyphenyl)propanoate; SNU-C15], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 (E)-3-(4-아세톡시-3-메톡시페닐)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(4-acetoxy-3-methoxyphenyl)acrylate; SNU-C17], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 (E)-3-(3,4-디플루오로페닐)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(3,4-difluorophenyl)acrylate; SNU-C18] 및 (S,E)-7-((3-(3-메톡시-4-니트로페닐)알릴)옥시)-8,8-디메틸-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]chromen-2-one[(S,E)-7-((3-(3-methoxy-4-nitrophenyl)allyl)oxy)-8,8-dimethyl-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-2-one; PRG-A-04]으로 이루어진 군에서 선택될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
보다 바람직하게는, 상기 약학조성물은 슈퍼옥사이드 디스뮤타아제 1(Superoxide dismutase 1; SOD1)의 응집 및 미스폴딩(misfolding)을 억제할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물은 유효 성분 이외에 약제학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 보조제를 사용하여 제조될 수 있으며, 상기 보조제로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제 또는 향미제 등의 가용화제를 사용할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 투여를 위해서 유효 성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용 가능한 담체를 1 종 이상 포함하여 약학 조성물로 바람직하게 제제화할 수 있다. 액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용 가능한 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다.
본 발명의 약학 조성물의 약제 제제 형태는 과립제, 산제, 피복정, 정제, 캡슐제, 좌제, 시럽, 즙, 현탁제, 유제, 점적제 또는 주사 가능한 액제 및 활성 화합물의 서방출형 제제 등이 될 수 있다. 본 발명의 약학 조성물은 정맥내, 동맥내, 복강내, 근육내, 동맥내, 복강내, 흉골내, 경피, 비측내, 흡입, 국소, 직장, 경구, 안구내 또는 피내 경로를 통해 통상적인 방식으로 투여할 수 있다. 본 발명의 약학 조성물의 유효성분의 유효량은 질환의 예방 또는 치료 요구되는 양을 의미한다. 따라서, 질환의 종류, 질환의 중증도, 조성물에 함유된 유효 성분 및 다른 성분의 종류 및 함량, 제형의 종류 및 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자에 따라 조절될 수 있다. 이에 제한되는 것은 아니나, 예컨대, 성인의 경우, 1일 1회 내지 수회 투여시, 본 발명의 조성물은 1일 1회 내지 수회 투여시, 0.01ng/kg~10g/kg의 용량으로 투여할 수 있다.
또한, 본 발명은 하기 화학식 2로 표시되는 화합물, 이의 수화물 또는 이의 염을 포함하는 근위축성측색경화증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
[화학식 2]
Figure pat00015
상기 화학식 2에서,
Figure pat00016
이 단일결합 또는 이중결합이며,
n은 0 내지 1의 정수,
X는 CH 또는 N이고,
R1 및 R2는 각각 동일하거나 다를 수 있고, 수소, (C1~C4)알킬, (C1~C4)알콕시, 하이드록시, 할로, 나이트로, 시아노 또는 (C1~C4)알킬카르복시에서 선택됨.
바람직하게는, 상기 화합물은
Figure pat00017
이 단일결합일 때 n은 1이고, X는 CH이고, R1 및 R2는 각각 동일하거나 다를 수 있고, (C1~C4)알콕시, 하이드록시 또는 (C1~C4)알킬카르복시에서 선택될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
바람직하게는, 상기 화합물은
Figure pat00018
이 이중결합일 때 n은 0 내지 1의 정수, X는 CH 또는 N이고, R1 및 R2는 각각 동일하거나 다를 수 있고, 수소, (C1~C4)알콕시, 하이드록시, 할로, 나이트로 또는 (C1~C4)알킬카르복시에서 선택될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
보다 바람직하게는, 상기 화합물은 (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 (E)-3-(4-하이드록시-3-메톡시페닐)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)acrylate; PRG-A-01; SLC-B036], (S,E)-7-((3-(4-하이드록시-3-메톡시페닐)알릴)옥시)-8,8-디메틸-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-2-원[(S,E)-7-((3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)allyl)oxy)-8,8-dimethyl-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-2-one; PRG-A-02], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 3-(4-하이드록시-3-메톡시페닐)프로파노에이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl 3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)propanoate; SNU-C4], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 (E)-3-(3,4-디메톡시페닐)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(3,4-dimethoxyphenyl)acrylate; SNU-C5], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]chromen-7-일 3-(3,4-디메톡시페닐)프로파노에이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl 3-(3,4-dimethoxyphenyl)propanoate; SNU-C7], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 (E)-3-(피리딘-4-일)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(pyridin-4-yl)acrylate; SNU-C9], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 (E)-3-(3-하이드록시페닐)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(3-hydroxyphenyl)acrylate; SNU-C10], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일(E)-3-(4-플루오로페닐)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(4-fluorophenyl)acrylate; SNU-C11; PRG-A-03], (S,E)-7-((3-(4-플루오로페닐)알릴)옥시)-8,8-디메틸-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-2-원[(S,E)-7-((3-(4-fluorophenyl)allyl)oxy)-8,8-dimethyl-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-2-one; SNU-C13], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 (E)-3-(3-아세톡시페닐)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(3-acetoxyphenyl)acrylate; SNU-C14], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 3-(4-아세톡시-3-메톡시페닐)프로파노에이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl 3-(4-acetoxy-3-methoxyphenyl)propanoate; SNU-C15], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 (E)-3-(4-아세톡시-3-메톡시페닐)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(4-acetoxy-3-methoxyphenyl)acrylate; SNU-C17], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 (E)-3-(3,4-디플루오로페닐)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(3,4-difluorophenyl)acrylate; SNU-C18] 및 (S,E)-7-((3-(3-메톡시-4-니트로페닐)알릴)옥시)-8,8-디메틸-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]chromen-2-one[(S,E)-7-((3-(3-methoxy-4-nitrophenyl)allyl)oxy)-8,8-dimethyl-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-2-one; PRG-A-04]으로 이루어진 군에서 선택될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본 발명의 건강기능식품 조성물은 유기산, 인산염, 항산화제, 유당 카제인, 덱스트린, 포도당, 설탕 및 솔비톨로 이루어진 군에서 선택되는 하나 이상의 첨가제를 추가로 포함할 수 있다. 유기산은 이에 제한되는 것은 아니지만 구연산, 후말산, 아디픽산, 젖산 또는 사과산일 수 있으며, 인산염은 이에 제한되는 것은 아니지만 인산나트륨, 인산칼륨, 산성피로인산염 또는 폴리인산염(중합인산염)일 수 있으며, 항산화제는 이에 제한되는 것은 아니지만 폴리페놀, 카테킨, 알파-토코페롤, 로즈마리 추출물, 감초 추출물, 키토산, 탄닌산 또는 피틴산 등의 천연 항산화제일 수 있다.
본 발명의 또 다른 구체예에서, 상기 건강기능식품은 상기 유효성분 이외에도 여러 가지 영양제, 비타민, 광물(전해질), 합성 풍미제 및 천연 풍미제 등의 풍미제, 착색제 및 중진제(치즈, 초콜릿 등), 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 또한 본 발명의 일실시예에 따른 식품 조성물은 천연 과일 주스, 과일 쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다.
본 발명의 일실시예에 따르면, 건강기능식품의 제형은 이에 제한되는 것은 아니지만 고형, 분말, 과립, 정제, 캡슐, 액상 또는 음료 형태일 수 있다.
또한, 상기 건강기능식품은 이에 제한되는 것은 아니지만 과자류, 당류, 아이스크림 제품류, 유가공품, 식육제품, 어육제품, 두부류 또는 묵류, 식용유지류, 면류, 다류, 음료류, 특수영양식품, 건강보조식품, 조미식품, 얼음, 인삼제품류, 김치절임식품, 건포류, 과일, 야채, 과일 또는 야채의 건조제품, 절단제품, 과일쥬스, 야채쥬스, 이들의 혼합쥬스, 칩류, 면류, 축산가공식품, 수산가공식품, 유가공식품, 발효유식품, 두류식품, 곡류식품, 미생물발효식품, 제과제빵, 양념류, 육가공류, 산성음료수, 감초류, 허브류 등의 식품의 제조에 사용될 수 있다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.
하기의 실험예는 본 발명에 따른 각각의 실시예에 공통적으로 적용되는 실험예를 제공하기 위한 것이다.
< 실험예 >
1. 마우스
실험은 부산대학교에서 승인한 동물 정책에 따라 실험실 동물 관리 평가 및 인증 협회 승인 시설에서 수행하였다. B6SJL-Tg (SOD1G93A) 마우스는 Jackson Laboratory (Stock No : 002726)로 구입하였다. 모든 마우스는 온도 및 빛-조절 조건 하에서 유지시켰고(20~23℃, 명암 주기 12hr-12hr), 멸균된 음식 및 물을 제공하였다.
2. 생체 내( in vivo ) 약물 처리 및 조직학적 분석
SOD1G93A 마우스는 12주령 또는 14주령 마우스에 비히클(DMSO), SLC-B036(10 mg/kg, 20 mg/kg)을 6주 동안 매주 2회 복강 주사를 통해 투여하였다. 대조군 마우스는 동일한 조건으로 처리하였다. 조직학적 분석을 위해, 마우스는 18주에 희생시켰다. 마우스 절개 후, 기본적인 조직 가공 절차에 따라 4% 파라포름알데히드를 사용하여 척수를 48시간 동안 고정시켰고, 파라핀 블록에 포매시켰다. Leica microtome으로 포매된 조직(척수의 경추 부위)를 5 μm로 절단하였고, 접착-코팅 슬라이드(Marienfeld laboratory glassware, Germany)로 옮겼다. 탈파라핀화 및 재수화 후에, 척수 신경의 수를 확인하기 위해서, 슬라이드를 헤마톡실린 및 에오신으로 염색시켰다.
3. 운동 수행 측정
행동 실험을 위해, 악력측정기(grip strength meter)를 이용하여 2주 마다 악력을 확인하였다. 마우스는 앞다리로 텐션 바(tension bar)를 잡게 한 후, 바를 놓을 때까지 꼬리를 천천히 잡아당겼다. 마우스의 운동성, 호흡 및 사지 마비를 확인하기 위해서, 투여 종료 시점에 영상 분석을 수행하였다(18~20주).
4. 세포 배양 및 시약
HEK293 세포는 American Type Culture Collection (ATCC, Manassas, VA, USA)에서 구입하였고, 10% 우태아혈청 및 1% 페니실린-스트렙토마이신이 포함된 DMEM 액체 배지에서 37℃, 5% CO2로 유지시켰다. SK-N-SH 세포는 Korean Cell Line Bank (KCLB, Seoul, South Korea)에서 구입하였고, 10% 우태아혈청, 1% 항생제, 25mM HEPES, 300mg/L L-Glu가 포함된 MEM 배지에서 유지시켰다. 인간 섬유아세포(9세 여성)는 Coriell Cell Repositories (New Jersey, USA)에서 구입하였고, 15% FBS, 2 mM Glutamine, 항생제가 제외된 26 mM HEPES가 포함된 EMEM에서 유지시켰다. 타프시가진(Thapsigargin)(ER calcium scavenger: CAS 67526-95-8)는 Calbiochem (Darmstadt, Germany)에서 구입하였다. CoCl2 (hypoxia-inducer: C8661)는 Sigma Aldrich (St, Louis, Mo, USA)에서 구입하였다.
5. 화합물 스크리닝
화합물 스크리닝을 위해, 본 발명자들은 ELISA 분석 시스템을 적용하였다. WT-SOD1와 돌연변이 SOD1 간 결합 억제제를 선별하기 위해서, 본 발명자들은 0.5% 파라포름알데히드(paraformaldehyde; PFA)를 사용하여, WT-SOD1 재조합 단백질을 96-웰 플레이트 상에 고정시켰다. 플레이트를 건조시키고, 인산 완충 식염수(phosphate-buffered saline; PBS)로 씻어낸 후, 최종 농도 50 μM의 화합물들을 반응시킨 다음, 돌연변이 SOD1-GST (A4V, G37R, G85R, G93A) 단백질을 첨가하였다. 2시간 반응 후, 96-웰 플레이트를 PBS로 씻어냈고, 비 특이적 반응(non specific reaction) 방지를 위해 3% 스킴 밀크로 차단시켰다. 플레이트는 anti-GST antibody (1:10,000으로 희석)로 1시간 동안 반응시킨 후, anti-mouse IgG-HRP (1:50,000으로 희석)로 1시간 동안 반응시켰다. 2번 씻어낸 후, 플레이트는 3,3′,5,5′-테트라메틸벤지딘(tetramethylbenzidine; TMB) 용액(Calbiochem)으로 30분 동안, 정지 용액(1N H2SO4)으로 30분 동안 반응시켰다. 최종적으로, 본 발명자들은 ELISA reader(450 nm 흡광도)를 사용하여 수치를 분석하였다. 음성 대조군 (-; 빨간색 선)은 돌연변이 SOD1 없이 반응시켰고, 양성 대조군 (+; 파란색 선)은 화합물 없이 돌연변이 SOD1로 반응시켰다.
6. 재조합 단백질
재조합 단백질을 제조하기 위해서, pGEX-4T1 (Invitrogen)에 TEV 프로테아제 절단 사이트를 추가하여 만든 개량 벡터인, pGEX-TEV vector의 EcoRI 및 HindIII 사이트에 인간 SOD1 (WT, A4V, G37R, G85R, G93A)를 결합시켰다. 재조합 단백질들은 대장균(Escherichia coli; E.coli) strain BL21 (DE3)에서 GST-융합 단백질로 발현시켰다. 상기 단백질들은 글루타치온-친화 크로마토그래피로 정제하였다.
7. 웨스턴 블랏 분석
SDS-PAGE를 위해, RIPA buffer (50 mM Tris-Cl, pH 7.5, 150 mM NaCl, 1% NP-40, 0.1% SDS 및 10% sodium deoxycholate)와, Native-PAGE를 위해 lysis buffer (50 mM Tris-Cl, pH 7.5, 150 mM NaCl, 0.3% NP-40)를 사용하여 세포로부터 단백질을 추출하였다. SDS-PAGE 또는 Native-PAGE에 의해 샘플들을 분리하였고, PVDF 멤브레인으로 옮겼다. 블랏된 멤브레인은 3% 스킴 밀크가 포함된 TBST buffer로 1시간 동안 차단시켰고, 특정 항체들과 반응시켰다. 반응된 항체는 ECL 및 X-ray 필름 노출에 의해 검출하였다. 본 발명에 사용된 항체들은 다음과 같다: pan-SOD1 (GTX100554)는 Genetex (California, USA)에서 구입하였다. 미스폴딩된 SOD1 특이 항체(B8H10)는 MediMabs (Montreal, Canada)에서 구입하였다. Actin (sc-1616), GST (sc-138), GFP (Green fluorescent protein; sc-8036)는 Santa Cruz biotechnology (Santa Cruz, CA, USA)에서 구입하였다. TDP-43 antibody (10782-2-AP)는 Proteintech (Rosemont, IL, USA)에서 구입하였다. Anti-FLAG (Sigma; F3165)는 Sigma Aldrich (St, Louis, Mo, USA)에서 구입하였고, HRP-conjugated goat anti-mouse, goat anti-rabbit 및 mouse anti-goat antibodies (Pierce, Thermo Fisher Scientific, Inc., Rockford, IL, USA)는 2차 항체로 사용되었다.
8. 닷 블랏 분석
미스폴딩된 SOD1 발현을 검출하기 위해서, SOD1 벡터로 형질주입된 세포를 화합물로 24시간 동안 처리하였다. 반응 후, 세포들을 계면활성제 미포함 용해 완충액으로 용해 시킨 다음, Bio-Dot SF Microfiltration apparatus (Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA)를 이용하여 세포 용해물을 니트로셀룰로오스 멤브레인 상에 고정시켰다. 펩타이드 반응의 경우, SOD1 재조합 단백질을 화합물로 1시간 동안 반응시킨 후, 샘플들을 멤브레인 상에 로딩하였다. 각 멤브레인은 TBS로 씻어냈고, 비 특이적 반응(non specific reaction) 방지를 위해 3% 스킴 밀크로 차단시켰다. 차단 후, 멤브레인은 미스폴딩된 SOD1 또는 Actin antibody (1% 스킴 밀크를 포함하는 TBST 내 1:8,000)로 30분 동안 반응시켰고, 이후 2차 항체(goat anti-mouse IgG-horseradish peroxidase, 1% 스킴 밀크 차단 완충액 내 1:50,000)로 30분 동안 반응시켰다. 단백질들에 반응된 항체는 ECL 및 X-ray 필름 노출에 의해 검출하였다. Actin은 로딩 대조군으로 사용되었다.
9. 면역형광 염색
커버슬립 상 세포들은 PBS로 씻어냈고, 4% PFA로 30분 동안 상온에서 고정시킨 다음, 0.1% Triton X-100/PBS로 10분 동안 침투시켰다. 세포들을 차단 용액(PBS 내 anti-Human Antibody 1:500 희석)으로 1시간 동안 처리한 후, 세포들을 anti-pan SOD1 (1:400 희석), 미스폴딩된 SOD1 (B8H10; 차단 용액 내 1:200 희석)으로 밤새도록 4℃에서 반응시켰다. 최종적으로, 세포들을 FITC 및 로다민-접합 2차 항체로 4℃에서 6시간 동안 반응시켰다. 핵은 4, 6-디아미디노-2-페닐인돌(4, 6-diamidino-2-phenylindole; DAPI)로 염색하였고, 소포체(endoplasmic reticulum; ER)는 ER-Tracker Red dye를 사용하여 10분 동안 염색하였다. 세포들은 PBS로 3번 씻어냈고, 이후 커버슬립을 마운팅 용액[H-5501; Vector Laboratories (Burlingame, CA, USA)]으로 마운팅하였고, 형광현미경(Zeiss)으로 분석하였다.
10. 벡터의 형질주입
GFP-SOD1 (WT, G85R, G93A), non-tagged SOD1 (WT, A4V, G37R, G85R, G93A), tdTomato-TDP43 발현 벡터는 Addgene (Cambridge, MA, USA)에서 구입하였다. 형질주입은 Jet-PEI reagent (JetPEI; Polyplus transfection, New York, NY, USA)을 사용하여 제조자의 프로토콜에 따라 수행하였다. 간단히 설명하면, 벡터는 150 mM NaCl 완충액 내 JetPEI reagent로 혼합한 다음, 혼합물을 15분 동안 반응시켰다. 혼합물을 무혈청 배지 내 세포에 첨가하여 4시간 동안 반응시켰다. 반응 후, 세포들을 10% FBS가 첨가된 배양 배지로 교체하였다.
11. 세포 생존율 측정
세포 생존율을 확인하기 위해서, 세포들을 0.5 mg/ml의 MTT solution (475989; Merck, Darmstadt, Germany) 용액으로 37℃에서 4시간 동안 반응시켰다. 잔여 용액을 제거하고, PBS로 씻어낸 후, 침전물을 200 μl DMSO에 녹였고, 540 nm에서 흡광도를 측정하여 정량화하였다.
< 실시예 >
본 발명자들은 GFP-WT-SOD1이 발현된 세포 내로 돌연변이 SOD1을 형질주입(transfection)시켰다. 세포질 내 WT-SOD1은 돌연변이 타입에 상관없이 돌연변이 SOD1에 의해 응집되었다(도 1A 및 도 2). 또한 WT-SOD1 단백질과 돌연변이 재조합 SOD1 단백질간의 상호작용을 Native-PAGE를 통해 확인한 결과, 돌연변이 SOD1의 처리에 의해 WT-SOD1이 응집되는 것으로나타났다(도 1B; G93A-반응은 너무 큰 응집으로 인해 젤 내로 이동되지 않았다). 다음으로, 본 발명자들은 세포 스트레스에 의한 WT-SOD1의 응집을 확인하였다. ALS는 운동 뉴런에 특이적인 질환이고, Ca2+은 뉴런 기능 뿐만 아니라 근육 수축에 있어서도 중요하므로, 본 발명자들은 SOD1 응집에 대한 Thapsigargin (ER 칼슘 제거제)의 효과를 시험하였다. Thapsigarigin의 처리는 확실히 돌연변이 SOD1s 뿐만 아니라 WT-SOD1의 응집도 촉진시켰다(도 1C). 또한, 본 발명자들은 CoCl2 (저산소-유도제)에 의한 SOD1의 응집 및 미스폴딩된 SOD1의 증가를 확인하였다(도 1D; CoCl2-처리 세포에서는 적색 신호가 증가하였다) 한편, SOD1은 효소 활성을 위해 Cu/Zn 이온을 사용하는 것으로도 알려져 있다. 이에, 본 발명자들은 SOD1 응집에 있어 Cu/Zn 이온이 결핍된 조건이 SOD1 응집에 미치는 효과를 확인하였다. 도 2에서 나타낸 바와 같이, TPEN (Zn2+ chelator) 및 ATN-224 (Cu2+ chelator)는 WT-SOD1의 응집을 유도하였다. 상기 결과는 SOD1이 유전적 돌연변이 없이 세포 스트레스 조건에 의해 응집되거나, 미스폴딩된 형태로 전환될 수 있고, 또한 SOD1의 미스폴딩이 산발성 ALS의 원인이 될 수 있음을 뒷받침한다.
만약 SOD1 응집이 ALS 질환의 원인이라면, SOD1 응집 차단은 약물 개발에 있어 가능성 있는 전략 중 하나이다. 사실, 미스폴딩된 SOD1에 대한 중화 항체는 SOD1 동물 모델에서 좋은 효과를 나타냈다. 이를 증명하기 위해서, 본 발명자들은 ELISA에 기반한 화합물 스크리닝 시스템을 구축하였다. 본 발명자들은 미스폴딩된 SOD1와 WT-SOD1의 결합에 대한 선택적 결합 억제제를 발굴하기 위해서, ELISA 플레이트에 WT-SOD1를 고정시키고, GST 태깅이 된 돌연변이 SOD1s (A4V, G37R, G85R, G93A)와 반응시켰다(도 4A). 이전에 본 발명자들은 유사한 스크리닝을 수행하였고, 화합물 라이브러리를 확보한 바 있다. 상기 화합물 라이브러리를 사용하여, 본 발명자들은 각 화합물의 억제 효과를 측정하였다(도 3A). SOD1은 이량체 형성 후 수퍼옥사이드를 제거하므로, 본 발명자들은 너무 강한 결합 억제제들(SLC-B035 등)은 제거하였고, 돌연변이에 특이적인 화합물들(SLC-B040 또는 B036 등)을 선택하였다(도 3A). 상기 화합물들은 SOD1 발현에는 영향을 미치지 않았다.(도 4B). 다음으로, 본 발명자들은 미변성 젤 분석을 통해, 선택된 화합물들의 SOD1 응집에 대한 효과를 확인하였고(도 4C), 첫번째 히트 화합물로 SLC-B036을 선택하였다(도 4D). 실제로, 상기 화합물은 용량-의존적 방식으로 돌연변이 SOD1의 응집을 차단할 수 있었다(도 3B 및 도 3C). 더구나, 상기 화합물은 정상 인간 섬유아세포에서 세포 독성 효과를 나타내지 않았다(도 4E). 이후, SLC-B036은 PRG-A-01로 재명명하였다.
다음으로, 본 발명자들은 WT-SOD1의 응집에 대한 화합물들의 효과를 확인하였다. 최근, TDP-43의 과발현 또는 결핍이 SOD1 미스폴딩을 유도할 수 있다고 보고되고 있다. 본 발명자들도 면역형광법 분석을 통해 TDP-43 과발현에 의한 WT-SOD1의 응집을 확인할 수 있었다(도 5A 및 도 6A). 또한, SOD1 돌연변이들은 세포질(F2 fraction) 및 불용성(F4 fraction) TDP43 단백질을 증가시켰는데, 이는 TDP-43과 SOD1이 ALS의 발병과 연관되어 있다는 것을 의미한다(도 6B). PRG-A-01의 처리는 TDP-43 뿐만 아니라 SOD1의 응집을 감소시킬 수 있었다(도 5A). 또한, 미변성 젤 분석 결과에서, PRG-A-01의 처리에 의한 SOD1 및 TDP43 응집의 감소를 확인하였다(도 5B). 글루타르알데히드를 사용한 교차 결합실험(crooss-linking experiment) 결과, PRG-A-01의 억제 효과는 더욱 분명하게 나타났다. 교차결합을 통해 형성된 SOD1 및 TDP-43의 다량체 사이즈에 해당되는 밴드는 PRG-A-01 처리에 의해 약해졌다(도 5C). PRG-A-01이 SOD1의 미스폴딩 형성을 차단할 수 있는지 알아보기 위해서, 본 발명자들은 닷 블랏 분석을 수행하였다. WT- 또는 돌연변이 SOD1로 형질주입된 세포 용해물을 흡입기로 옮겨 미스폴딩 SOD1에 특이적인 항체와 반응시켰다. 화합물이 처리된 세포에서, 밴드 세기는 분명히 감소하였다(도 5D). 또한, 본 발명자들은 G93A 형질주입된 세포 용해물에서, PRG-A-01 처리에 의해 미스폴딩된 SOD1의 용량-의존적 감소를 확인할 수 있었다(도 5E). PRG-A-01와 SOD1-G93A를 반응하면, 미스폴딩에 특이적인 항체가 돌연변이 SOD1를 인지하지 못하였는데(도 5F), 이는 PRG-A-01이 단백질 구조를 바꾸고 미스폴딩된 SOD1를 WT-SOD1 형태로 바로 잡을 수 있다는 것을 시사한다. 또한 본 발명자들은 저산소 스트레스가 SOD1 미스폴딩을 유도할 수 있다는 것을 밝혀냈으므로, 저산소 조건에서 PRG-A-01의 효과를 확인하였다. CoCl2로 유도된 미스폴딩 SOD1의 신호 전달은 PRG-A-01 처리에 의해 감소되었는데(도 6C), 이는 PRG-A-01이 SOD1 미스폴딩에 의한 병의 유발을 억제한다는 것을 나타낸다.
화합물의 생체 내(in vivo) 효과를 확인하기 위해서, 본 발명자들은 SOD1G93A-Tg 마우스 모델에게 PRG-A-01를 i.p 로 주 2회 투여하였다(도 7A). PRG-A-01의 처리는 근육 강도 감소를 늦출 수 있었다. 야생형 마우스와 비교하여, PRG-A-01의 처리된 마우스는 약 70 %의 근육 강도를 유지하였다(도 7B). 반대로, 비히클-처리된 마우스는 40 % 이하의 근육 강도를 나타냈다(도 7B). 또한, PRG-A-01의 늦은 처리(14주령에 시작)에도 불구하고 근육 기능에 좋은 효과를 나타냈다(도 8A 및 도 8B). 이에 더하여 PRG-A-01은 용량-의존적 효과를 보였는데, 10 mg/kg 투여 보다 20 mg/kg 투여가 더 효과적이었다(도 8A 및 도 8B). 행동 관측은 매우 인상적인 결과를 나타냈는데, 14주령 투여에도 불구하고 (표현형은 14주령에 시작), PRG-A-01 처리된 마우스는 17주령에서도 여전히 운동 능력을 갖고 있었다(도 7C 및 도 8C). 상기 효과는 성별과 무관하게 관측할 수 있었다. 반대로, 비히클-처리된 마우스는 일어서지 못했고, 자가 호흡에 문제를 나타냈다. 조직학적 분석 결과, 경추의 척수 신경 생존율은 PRG-A-01 처리된 마우스에 높았다(도 7D). 반대로, 비히클-처리된 마우스 척수에서는 대부분의 신경이 사라졌다(도 7D). 다만, PRG-A-01은 수명을 단지 10일 연장시켰다(도 8D). 이와 관련하여, 본 발명자들은 생체 내 시스템에서 PRG-A-01의 반감기가 매우 짧을 수도 있다고 예측하고 있다. 실제로, PRG-A-01는 신체 내에서 30분 내에 빠르게 사라졌는데, 혈액 내에서 너무 빠르게 사라져서 약물동태학(pharmacokinetic; PK) 데이터를 얻을 수 없었다(도 8E).
빠른 분해를 극복하기 위해서, 본 발명자들은 PRG-A-01 관련 유도체들을 제작하였고, 이들 화합물들의 효과를 확인하였다(표 1). 새롭게 합성된 화합물 중에서, PRG-A-02, PRG-A-03 및 PRG-A-04는 PRG-A-01과 유사하거나 더 우수한 효과를 나타냈다. 실제로, 상기 화합물들은 신경(도 9A) 및 정상 섬유아세포(도 9B)에서 세포독성은 나타내지 않았다. 또한, 본 발명자들은 non-SDS-PAGE gel(도 9C) 및 IF 분석(도 9D)을 통하여 SOD1 응집에 대한 상기 화합물들의 효과를 확인하였다. 본 발명의 세포 기반 분석 및 시험관 내 분석에 따라, 3개의 화합물(PRG-A-02, PRG-A-03 및 PRG-A-04)을 선택하였고, PK를 분석하였다. 오직 PRG-A-04 만이 적절한 PK 프로파일을 나타냈으므로(도 10), 본 발명자들은 ALS 치료 후보 화합물로서 PRG-A-04을 선택하였다.
생체 내 분석에서, 본 발명자들은 PRG-A-04 처리군 뿐만 아니라 PRG-A-02 및 PRG-A-03 투여군으로부터 좋은 효과를 확인할 수 있었다(도 11A 및 도 11B). 보다 흥미로운 결과는, ALS 모델 마우스의 수명이 PK 프로파일에 따라 늘어났다는 점이다(도 11C 및 도 11D). 비록 본 발명자들은 PRG-A-04의 수명 데이터를 얻을 수는 없었으나, 다른 화합물들에 비해 분명히 수명이 연장되리라는 것을 예측할 수 있다.
No. MW Western Blot Immunofluorscence ELISA In vivo Toxicity (MTT) PK study
PRG -A-01
(SLC-B036)		 422.43 효과 ○ 효과 ○ 효과 ○ 효과 ○ 독성 없음 BA
매우 낮음
PRG -A-02 408.44 효과 ○ 효과 ○ 효과 ○ 효과 ○ 독성 없음 BA
매우 낮음 (0.3%)
SNU-C4 424.449 효과 × 효과 × 효과 × - 독성 없음 -
SNU-C5 436.46 효과 × 효과 × 효과 ○ - 독성 없음 -
SNU-C7 438.476 효과 × 효과 × 효과 × - 독성 없음 -
SNU-C9 377.396 효과 ○ 효과 ○ 효과 × - 독성 없음 -
SNU-C10 392.407 효과 ○ 효과 ○ 효과 ○ - 독성 없음 -
PRG -A-03
(SNU-C11)		 394.398 효과 ○ 효과 ○ 효과 ○ 효과 ○ 독성 없음 BA
매우 낮음 (3.7%)
SNU-C13 380.415 효과 × - - - - -
SNU-C14 434.444 효과 ○ 효과 ○ 효과 ○ - 독성 없음 -
SNU-C15 466.486 효과 ○ 효과 ○ 효과 × - 독성 없음 -
SNU-C17 464.47 효과 ○ 효과 ○ - - - -
SNU-C18 412.11 효과 ○ 효과 ○ - - 독성 있음 -
PRG -A-04
(SNU-C19)		 437.15 효과 ○ 효과 ○ 효과 ○ 효과 ○ 독성 없음 BA=60.7 %
본 발명에서 사용한 화합물들의 화학구조 및 NMR 데이터는 다음과 같다.
(S,E)-7-((3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)allyl)oxy)-8,8-dimethyl-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-2-one(PRG-A-02)
Figure pat00019
1H NMR: EW15731-164-P1D4 (400 MHz, CDCl3)
δ 7.58 (d, J = 12 Hz, 1H), 7.16 (s, 1H), 6.90 - 6.86 (m, 3H), 6.78 (s, 1H), 6.51 (d, J =16 Hz, 1H), 6.22 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.14 - 6.10 (m, 1H), 5.65 (s, 1H), 4.32 - 4.30 (m, 1H), 4.22- 4.20 (m, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.61 - 3.58 (m, 1H), 3.11 - 3.05 (m, 1H), 3.89 - 3.87 (m, 1H), 1.43 (s, 3H), 1.36 (s, 3H).
(S)-8,8- dimethyl -2- oxo -7,8- dihydro - 2H,6H - pyrano[3,2-g]chromen -7- yl 3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)propanoate (Compound 4; SNU-C4)
Figure pat00020
1H NMR (CDCl3, 400MHz): δ ppm 7.59 (d, 1H), 7.06 (s, 1H), 6.82 - 6.73 (m, 2H), 6.64 - 6.57 (m, 2H), 6.24 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.44 (br.s, 1H), 5.01 (t, J = 4.6 Hz, 1H), 3.79 (s, 3H), 3.09 (ddd, J = 17.2, 4.7, 1.2 Hz, 1H), 2.85 (app.t, J = 7.2 Hz, 2H), 2.70 - 2.59 (m, 3H), 1.31 (s, 3H), 1.29 (s, 3H).
HRMS: Calcd for C24H25O7+ [M+H]+ 425.1595, found 286.1652.
(S)-8,8- dimethyl -2- oxo -7,8- dihydro - 2H,6H - pyrano[3,2-g]chromen -7- yl (E)-3-(3,4-dimethoxyphenyl)acrylate (Compound 5; SNU-C5)
Figure pat00021
1H NMR (CDCl3, 400MHz): δ ppm 7.67 - 7.55 (m, 2H), 7.18 (s, 1H), 7.08 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 7.02 (s, 1H), 6.88 - 6.81 (m, 2H), 6.28 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.24 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 5.20 (app.t, J = 4.6 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.89 (s, 3H), 3.25 (dd, J = 17.3, 4.8 Hz, 1H), 2.94 (dd, J = 17.3, 4.5 Hz, 1H), 1.45 (s, 3H), 1.39 (s, 3H).
(S)-8,8- dimethyl -2- oxo -7,8- dihydro - 2H,6H - pyrano[3,2-g]chromen -7- yl 3-(3,4-dimethoxyphenyl)propanoate (Compound 7; SNU -C7)
Figure pat00022
1H NMR (CDCl3, 400MHz): δ ppm 7.59 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 7.07 (s, 1H), 6.83 - 6.63 (m, 4H), 6.24 (d, J = 9.6 Hz, 1H), 5.03 (app.t, J = 4.8 Hz, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.80 (s, 3H), 3.11 (dd, J = 17.3, 4.6 Hz, 1H), 2.87 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.69 (dd, J = 17.2, 4.6 Hz, 1H), 2.63 (app.td, J = 7.3, 1.9 Hz, 2H), 1.31 (s, 3H), 1.30 (s, 3H).
(S)-8,8- dimethyl -2- oxo -7,8- dihydro - 2H,6H - pyrano[3,2-g]chromen -7- yl (E)-3-(pyridin-4-yl)acrylate (Compound 9; SNU -C9)
Figure pat00023
1H NMR (CDCl3, 400MHz): δ ppm 8.72 - 8.59 (m, 2H), 7.60 (d, 1H), 7.57 (d, 1H), 7.36 - 7.30 (m, 2H), 7.18 (s, 1H), 6.83 (s, 1H), 6.58 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.24 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 5.21 (app.t, J = 4.6 Hz, 1H), 3.26 (ddd, J = 17.2, 4.8, 1.2 Hz, 1H), 3.00 - 2.89 (m, 1H), 1.44 (s, 3H), 1.39 (s, 3H).
(S)-8,8- dimethyl -2- oxo -7,8- dihydro - 2H,6H - pyrano[3,2-g]chromen -7- yl (E)-3-(3-hydroxyphenyl)acrylate (Compound 10; SNU -C10)
Figure pat00024
1H NMR (CD2Cl2, 400MHz): δ ppm 7.64 - 7.55 (m, 2H), 7.25 (app.t, J = 7.9 Hz, 1H), 7.21 (s, 1H), 7.13 - 7.06 (m, 1H), 7.00 - 6.95 (m, 1H), 6.86 (ddd, J = 8.1, 2.6, 1.0 Hz, 1H), 6.78 (s, 1H), 6.40 (d, J = 15.9 Hz, 1H), 6.18 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.18 (app.t, J = 4.8 Hz, 1H), 3.25 (ddd, J = 17.3, 4.9, 1.2 Hz, 1H), 2.94 (dd, J = 17.3, 4.7 Hz, 1H), 1.42 (s, 3H), 1.38 (s, 3H), 1.25 (brs, 1H).
(S)-8,8- dimethyl -2- oxo -7,8- dihydro - 2H,6H - pyrano[3,2-g]chromen -7- yl (E)-3-(4-fluorophenyl)acrylate (Compound 11; SNU -C11; PRG -A-03)
Figure pat00025
1H NMR (CD2Cl2, 400MHz): δ ppm 7.66 - 7.55 (m, 2H), 7.55 - 7.46 (m, 2H), 7.18 (s, 1H), 7.11 - 7.01 (m, 2H), 6.76 (s, 1H), 6.35 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.16 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.17 (app.t, J = 4.7 Hz, 1H), 3.23 (ddd, J = 17.3, 4.8, 1.2 Hz, 1H), 2.92 (dd, J = 17.3, 4.7 Hz, 1H), 1.40 (s, 3H), 1.36 (s, 3H).
( S,E )-7-((3-(4- fluorophenyl ) allyl )oxy)-8,8- dimethyl -7,8- dihydro - 2H,6H -pyrano[3,2-g]chromen-2-one (Compound 13; SNU-C13)
Figure pat00026
1H NMR (CDCl3, 400MHz): δ ppm 7.57 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 7.38 - 7.29 (m, 2H), 7.16 (s, 1H), 7.06 - 6.93 (m, 2H), 6.77 (s, 1H), 6.55 (d, J = 15.8 Hz, 1H), 6.25 - 6.13 (m, 2H), 4.33 (ddd, J = 12.8, 5.8, 1.5 Hz, 1H), 4.19 (ddd, J = 12.8, 6.3, 1.4 Hz, 1H), 3.58 (dd, J = 7.4, 5.0 Hz, 1H), 3.08 (dd, J = 16.4, 5.0 Hz, 1H), 2.85 (ddd, J = 16.4, 7.4, 1.1 Hz, 1H), 1.42 (s, 3H), 1.35 (s, 3H).
(S)-8,8- dimethyl -2- oxo -7,8- dihydro - 2H,6H - pyrano[3,2-g]chromen -7- yl (E)-3-(3-acetoxyphenyl)acrylate (Compound 14; SNU -C14)
Figure pat00027
1H NMR (CDCl3, 400MHz): δ ppm 7.63 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 7.42 - 7.33 (m, 2H), 7.25 - 7.22 (m, 1H), 7.17 (s, 1H), 7.11 (app.dt, J = 7.4, 2.1 Hz, 1H), 6.83 (s, 1H), 6.40 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.24 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.19 (app.t, J = 4.7 Hz, 1H), 3.24 (ddd, J = 17.2, 4.7, 1.2 Hz, 1H), 2.93 (dd, J = 17.2, 4.5 Hz, 1H), 2.30 (s, 3H), 1.43 (s, 3H), 1.39 (s, 3H).
(S)-8,8- dimethyl -2- oxo -7,8- dihydro - 2H,6H - pyrano[3,2-g]chromen -7- yl 3-(4-acetoxy-3-methoxyphenyl)propanoate (Compound 15; SNU -C15)
Figure pat00028
1H NMR (CDCl3, 400MHz): δ ppm 7.58 (d, J = 9.5, 0.8 Hz, 1H), 7.10 (s, 1H), 6.87 (dd, J = 7.9, 1.1 Hz, 1H), 6.77 (d, 1H), 6.74 - 6.65 (m, 2H), 6.23 (dd, J = 9.5, 2.2 Hz, 1H), 5.02 (app.t, J = 4.7 Hz, 1H), 3.74 (d, J = 1.2 Hz, 3H), 3.10 (ddd, J = 17.2, 4.8, 1.1 Hz, 1H), 2.90 (t, J = 7.5 Hz, 2H), 2.72 - 2.60 (m, 3H), 2.30 (d, J = 1.3 Hz, 3H), 1.31 (s, 3H), 1.30 (s, 3H).
(S)-8,8- dimethyl -2- oxo -7,8- dihydro - 2H,6H - pyrano[3,2-g]chromen -7- yl (E)-3-(4-acetoxy-3-methoxyphenyl)acrylate (Compound 17; SNU -C17)
Figure pat00029
1H NMR (CD2Cl2, 600MHz): δ ppm 7.67 - 7.56 (m, 2H), 7.21 (s, 1H), 7.14 - 7.09 (m, 2H), 7.03 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.78 (s, 1H), 6.41 (d, J = 16.0 Hz, 1H), 6.19 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 5.20 (app.t, J = 4.7 Hz, 1H), 3.82 (s, 3H), 3.26 (ddd, J = 17.3, 4.8, 1.2 Hz, 1H), 2.95 (dd, J = 17.3, 4.5 Hz, 1H), 2.27 (s, 3H), 1.43 (s, 3H), 1.38 (s, 3H).
(S)-8,8- dimethyl -2- oxo -7,8- dihydro - 2H,6H - pyrano[3,2-g]chromen -7- yl (E)-3-(3,4-difluorophenyl)acrylate (Compound 18; SNU -C18)
Figure pat00030
1H NMR (CDCl3, 400MHz): δ ppm 7.62 - 7.53 (m, 2H), 7.32 (ddd, J = 11.1, 7.6, 2.2 Hz, 1H), 7.24 - 7.11 (m, 3H), 6.83 (s, 1H), 6.33 (d, J = 16.0, 1H), 6.24 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 5.19 (app.t, J = 4.7 Hz, 1H), 3.25 (ddd, J = 17.4, 4.8, 1.1 Hz, 1H), 2.93 (dd, J = 17.4, 4.5 Hz, 1H), 1.43 (s, 3H), 1.39 (s, 3H).
( S,E )-7-((3-(3- methoxy -4- nitrophenyl ) allyl )oxy)-8,8- dimethyl -7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-2-one (Compound 19; PRG -A-04)
Figure pat00031
1H NMR (CDCl3, 400MHz): δ ppm 7.85 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 9.5 Hz, 1H), 7.16 (s, 1H), 7.05 - 6.97 (m, 2H), 6.78 (s, 1H), 6.60 (app.dt, J = 15.9, 1.7 Hz, 1H), 6.40 (app.dt, J = 15.9, 5.5 Hz, 1H), 6.22 (d, J = 9.4 Hz, 1H), 4.39 (ddd, J = 13.6, 5.4, 1.7 Hz, 1H), 4.24 (ddd, J = 13.4, 5.5, 1.6 Hz, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.59 (dd, J = 7.1, 4.9 Hz, 1H), 3.11 (dd, J = 16.7, 4.9 Hz, 1H), 2.87 (dd, J = 16.7, 7.2 Hz, 1H), 1.43 (s, 3H), 1.38 (s, 3H).
이상으로 본 발명 내용의 특정한 부분을 상세히 기술하였는 바, 당업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서, 이러한 구체적 기술은 단지 바람직한 실시양태일 뿐이며, 이에 의해 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백할 것이다. 따라서 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항들과 그것들의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (12)

  1. 하기 화학식 1로 표시되는 화합물, 이의 수화물 또는 이의 염:
    [화학식 1]
    Figure pat00032

    상기 화학식 1에서,
    Figure pat00033
    이 단일결합일 때 X는 CH이고, R1 및 R2는 각각 다르며, (C1~C4)알콕시, 하이드록시 또는 (C1~C4)알킬카르복시에서 선택되며,
    Figure pat00034
    이 이중결합일 때 X는 N이고, R1 및 R2는 각각 동일하거나 다를 수 있고, 수소, (C1~C4)알킬, (C1~C4)알콕시, 하이드록시, 할로, 나이트로, 시아노 또는 (C1~C4)알킬카르복시에서 선택됨.
  2. 제1항에 있어서, 상기 화합물은
    Figure pat00035
    이 단일결합일 때 X는 CH이고, R1 및 R2는 각각 다르며, (C1~C4)알콕시, 하이드록시 또는 (C1~C4)알킬카르복시에서 선택되며,
    Figure pat00036
    이 이중결합일 때 X는 N이고, R1 및 R2는 각각 수소인 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 수화물 또는 이의 염.
  3. 제1항에 있어서, 상기 화합물은 (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 3-(4-하이드록시-3-메톡시페닐)프로파노에이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl 3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)propanoate], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 (E)-3-(피리딘-4-일)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(pyridin-4-yl)acrylate], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 3-(4-아세톡시-3-메톡시페닐)프로파노에이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl 3-(4-acetoxy-3-methoxyphenyl)propanoate]로 이루어진 군에서 선택된 것을 특징으로 하는 화합물, 이의 수화물 또는 이의 염.
  4. 하기 화학식 2로 표시되는 화합물, 이의 수화물 또는 이의 염을 포함하는 근위축성측색경화증 예방 또는 치료용 약학조성물:
    [화학식 2]
    Figure pat00037

    상기 화학식 2에서,
    Figure pat00038
    이 단일결합 또는 이중결합이며,
    n은 0 내지 1의 정수,
    X는 CH 또는 N이고,
    R1 및 R2는 각각 동일하거나 다를 수 있고, 수소, (C1~C4)알킬, (C1~C4)알콕시, 하이드록시, 할로, 나이트로, 시아노 또는 (C1~C4)알킬카르복시에서 선택됨.
  5. 제4항에 있어서, 상기 화합물은
    Figure pat00039
    이 단일결합일 때 n은 1이고, X는 CH이고, R1 및 R2는 각각 동일하거나 다를 수 있고, (C1~C4)알콕시, 하이드록시 또는 (C1~C4)알킬카르복시에서 선택되는 것을 특징으로 하는 근위축성측색경화증 예방 또는 치료용 약학조성물.
  6. 제4항에 있어서, 상기 화합물은
    Figure pat00040
    이 이중결합일 때 n은 0 내지 1의 정수, X는 CH 또는 N이고, R1 및 R2는 각각 동일하거나 다를 수 있고, 수소, (C1~C4)알콕시, 하이드록시, 할로, 나이트로 또는 (C1~C4)알킬카르복시에서 선택되는 것을 특징으로 하는 근위축성측색경화증 예방 또는 치료용 약학조성물.
  7. 제4항에 있어서, 상기 화합물은 (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 (E)-3-(4-하이드록시-3-메톡시페닐)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)acrylate], (S,E)-7-((3-(4-하이드록시-3-메톡시페닐)알릴)옥시)-8,8-디메틸-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-2-원[(S,E)-7-((3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)allyl)oxy)-8,8-dimethyl-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-2-one], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 3-(4-하이드록시-3-메톡시페닐)프로파노에이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl 3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)propanoate], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 (E)-3-(3,4-디메톡시페닐)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(3,4-dimethoxyphenyl)acrylate], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]chromen-7-일 3-(3,4-디메톡시페닐)프로파노에이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl 3-(3,4-dimethoxyphenyl)propanoate], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 (E)-3-(피리딘-4-일)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(pyridin-4-yl)acrylate], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 (E)-3-(3-하이드록시페닐)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(3-hydroxyphenyl)acrylate], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일(E)-3-(4-플루오로페닐)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(4-fluorophenyl)acrylate], (S,E)-7-((3-(4-플루오로페닐)알릴)옥시)-8,8-디메틸-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-2-원[(S,E)-7-((3-(4-fluorophenyl)allyl)oxy)-8,8-dimethyl-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-2-one], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 (E)-3-(3-아세톡시페닐)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(3-acetoxyphenyl)acrylate], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 3-(4-아세톡시-3-메톡시페닐)프로파노에이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl 3-(4-acetoxy-3-methoxyphenyl)propanoate], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 (E)-3-(4-아세톡시-3-메톡시페닐)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(4-acetoxy-3-methoxyphenyl)acrylate], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 (E)-3-(3,4-디플루오로페닐)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(3,4-difluorophenyl)acrylate] 및 (S,E)-7-((3-(3-메톡시-4-니트로페닐)알릴)옥시)-8,8-디메틸-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]chromen-2-one[(S,E)-7-((3-(3-methoxy-4-nitrophenyl)allyl)oxy)-8,8-dimethyl-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-2-one]으로 이루어진 군에서 선택된 것을 특징으로 하는 근위축성측색경화증 예방 또는 치료용 약학조성물.
  8. 제4항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 약학조성물은 슈퍼옥사이드 디스뮤타아제 1(Superoxide dismutase 1; SOD1)의 응집 및 미스폴딩(misfolding)을 억제하는 것을 특징으로 하는 근위축성측색경화증 예방 또는 치료용 약학조성물.
  9. 하기 화학식 2로 표시되는 화합물, 이의 수화물 또는 이의 염을 포함하는 근위축성측색경화증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물:
    [화학식 2]
    Figure pat00041

    상기 화학식 2에서,
    Figure pat00042
    이 단일결합 또는 이중결합이며,
    n은 0 내지 1의 정수,
    X는 CH 또는 N이고,
    R1 및 R2는 각각 동일하거나 다를 수 있고, 수소, (C1~C4)알킬, (C1~C4)알콕시, 하이드록시, 할로, 나이트로, 시아노 또는 (C1~C4)알킬카르복시에서 선택됨.
  10. 제9항에 있어서, 상기 화합물은
    Figure pat00043
    이 단일결합일 때 n은 1이고, X는 CH이고, R1 및 R2는 각각 동일하거나 다를 수 있고, (C1~C4)알콕시, 하이드록시 또는 (C1~C4)알킬카르복시에서 선택되는 것을 특징으로 하는 근위축성측색경화증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  11. 제9항에 있어서, 상기 화합물은
    Figure pat00044
    이 이중결합일 때 n은 0 내지 1의 정수, X는 CH 또는 N이고, R1 및 R2는 각각 동일하거나 다를 수 있고, 수소, (C1~C4)알콕시, 하이드록시, 할로, 나이트로 또는 (C1~C4)알킬카르복시에서 선택되는 것을 특징으로 하는 근위축성측색경화증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  12. 제9항에 있어서, 상기 화합물은 (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 (E)-3-(4-하이드록시-3-메톡시페닐)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)acrylate], (S,E)-7-((3-(4-하이드록시-3-메톡시페닐)알릴)옥시)-8,8-디메틸-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-2-원[(S,E)-7-((3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)allyl)oxy)-8,8-dimethyl-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-2-one], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 3-(4-하이드록시-3-메톡시페닐)프로파노에이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl 3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)propanoate], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 (E)-3-(3,4-디메톡시페닐)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(3,4-dimethoxyphenyl)acrylate], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]chromen-7-일 3-(3,4-디메톡시페닐)프로파노에이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl 3-(3,4-dimethoxyphenyl)propanoate], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 (E)-3-(피리딘-4-일)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(pyridin-4-yl)acrylate], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 (E)-3-(3-하이드록시페닐)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(3-hydroxyphenyl)acrylate], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일(E)-3-(4-플루오로페닐)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(4-fluorophenyl)acrylate], (S,E)-7-((3-(4-플루오로페닐)알릴)옥시)-8,8-디메틸-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-2-원[(S,E)-7-((3-(4-fluorophenyl)allyl)oxy)-8,8-dimethyl-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-2-one], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 (E)-3-(3-아세톡시페닐)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(3-acetoxyphenyl)acrylate], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 3-(4-아세톡시-3-메톡시페닐)프로파노에이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl 3-(4-acetoxy-3-methoxyphenyl)propanoate], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 (E)-3-(4-아세톡시-3-메톡시페닐)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(4-acetoxy-3-methoxyphenyl)acrylate], (S)-8,8-디메틸-2-옥소-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]크로멘-7-일 (E)-3-(3,4-디플루오로페닐)아크릴레이트[(S)-8,8-dimethyl-2-oxo-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-7-yl (E)-3-(3,4-difluorophenyl)acrylate] 및 (S,E)-7-((3-(3-메톡시-4-니트로페닐)알릴)옥시)-8,8-디메틸-7,8-디하이드로-2H,6H-피라노[3,2-g]chromen-2-one[(S,E)-7-((3-(3-methoxy-4-nitrophenyl)allyl)oxy)-8,8-dimethyl-7,8-dihydro-2H,6H-pyrano[3,2-g]chromen-2-one]으로 이루어진 군에서 선택된 것을 특징으로 하는 근위축성측색경화증 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
KR1020200142053A 2019-10-30 2020-10-29 신규 화합물의 근위축성측색경화증 예방, 개선 또는 치료 용도 KR102374601B1 (ko)

Priority Applications (8)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN202080074944.7A CN114929711A (zh) 2019-10-30 2020-10-30 新型化合物在预防、改善或治疗肌萎缩侧索硬化症中的用途
BR112022008073A BR112022008073A2 (pt) 2019-10-30 2020-10-30 Composto representado pela fórmula 1, um hidrato deste ou um sal deste, composição farmacêutica para prevenção ou tratamento de esclerose lateral amiotrófica e composição de alimento funcional saudável para prevenção ou melhora de esclerose lateral amiotrófica
PCT/KR2020/015014 WO2021086101A1 (ko) 2019-10-30 2020-10-30 신규 화합물의 근위축성측색경화증 예방, 개선 또는 치료 용도
EP20881417.8A EP4056573A4 (en) 2019-10-30 2020-10-30 USE OF A NEW COMPOUND TO PREVENT, IMPROVE OR TREAT AMYOTROPHIC LATERAL SCLERosis
JP2022525112A JP7386992B2 (ja) 2019-10-30 2020-10-30 新規な化合物の筋萎縮性側索硬化症の予防、改善または治療用途
US17/772,136 US20220402930A1 (en) 2019-10-30 2020-10-30 Use of novel compound, for preventing, improving or treating amyotrophic lateral sclerosis
AU2020375506A AU2020375506B2 (en) 2019-10-30 2020-10-30 Use of novel compound, for preventing, improving or treating amyotrophic lateral sclerosis
AU2024202310A AU2024202310A1 (en) 2019-10-30 2024-04-10 Use of novel compound, for preventing, improving or treating amyotrophic lateral sclerosis

Applications Claiming Priority (4)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020190136458 2019-10-30
KR20190136458 2019-10-30
KR20190154520 2019-11-27
KR1020190154520 2019-11-27

Publications (2)

Publication Number Publication Date
KR20210052326A true KR20210052326A (ko) 2021-05-10
KR102374601B1 KR102374601B1 (ko) 2022-03-16

Family

ID=75918568

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020200142053A KR102374601B1 (ko) 2019-10-30 2020-10-29 신규 화합물의 근위축성측색경화증 예방, 개선 또는 치료 용도

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR102374601B1 (ko)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20230049295A (ko) 2021-10-06 2023-04-13 (주)피알지에스앤텍 데커신 유도체의 신규 합성방법

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003087082A1 (en) * 2002-04-09 2003-10-23 Elcom Biotechnology, Co., Ltd. Pyranocoumarin derivatives
WO2012128521A2 (ko) * 2011-03-18 2012-09-27 부산대학교 산학협력단 프로게린 발현 억제제를 유효성분으로 함유하는 노화 관련 질환 치료용 약학조성물 및 상기 프로게린 발현 억제제의 스크리닝 방법
KR20180081520A (ko) 2015-11-12 2018-07-16 에프. 호프만-라 로슈 아게 근위축성 측삭 경화증의 치료를 위한 화합물

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2003087082A1 (en) * 2002-04-09 2003-10-23 Elcom Biotechnology, Co., Ltd. Pyranocoumarin derivatives
WO2012128521A2 (ko) * 2011-03-18 2012-09-27 부산대학교 산학협력단 프로게린 발현 억제제를 유효성분으로 함유하는 노화 관련 질환 치료용 약학조성물 및 상기 프로게린 발현 억제제의 스크리닝 방법
KR20180081520A (ko) 2015-11-12 2018-07-16 에프. 호프만-라 로슈 아게 근위축성 측삭 경화증의 치료를 위한 화합물

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
Jee-Hyun Lee 등, 약학회지, 2017, 제61 권, 페이지 178-187 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20230049295A (ko) 2021-10-06 2023-04-13 (주)피알지에스앤텍 데커신 유도체의 신규 합성방법
WO2023058875A1 (ko) 2021-10-06 2023-04-13 (주)피알지에스앤텍 데커신 유도체의 신규 합성방법

Also Published As

Publication number Publication date
KR102374601B1 (ko) 2022-03-16

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR20140054066A (ko) 대사 경로 조절을 위한 조성물 및 방법
KR20180036318A (ko) 2-아미노-2-(1-도데실-1h-1,2,3-트리아졸-4-일)프로판-1,3-디올 유도체를 유효성분으로 포함하는 퇴행성 신경질환 및 우울증 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR102374601B1 (ko) 신규 화합물의 근위축성측색경화증 예방, 개선 또는 치료 용도
KR20220002151A (ko) 티로신을 유효성분으로 함유하는 단백질 내 티로신의 니트로화에 의한 질환의 예방, 개선 또는 치료용 조성물
JP7386992B2 (ja) 新規な化合物の筋萎縮性側索硬化症の予防、改善または治療用途
US20210386822A1 (en) Anticancer pharmaceutical composition containing if1 as active ingredient
JP6000206B2 (ja) 抗アレルギー用経口組成物
KR20200023235A (ko) 강글리오사이드를 함유하는 근육 질환 예방 또는 치료용, 또는 근 기능 개선용 조성물
CN113631156A (zh) 通过给药维生素k快速改善内皮功能、降低动脉僵硬度并逆转血管的钙化
KR101540319B1 (ko) cyb5R3 유전자 또는 단백질을 유효성분으로 포함하는 암 예방 및 치료용 약학적 조성물
KR101971800B1 (ko) 우슬 추출물 및 왕불류행 추출물을 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR101924018B1 (ko) 신경섬유종증 2형 증후군 예방 또는 치료용 조성물
KR20130033595A (ko) 일산화탄소 또는 일산화탄소 공급체를 유효성분으로 함유하는 소포체 스트레스 관련 질환의 예방 또는 치료용 조성물
KR20210125259A (ko) 후코스테롤을 유효성분으로 함유하는 난소암 예방 또는 치료용 조성물
JP6113325B2 (ja) 抗アレルギー用経口組成物
KR20170047458A (ko) 에틸 파이루베이트(ethyl pyruvate)를 포함하는 말초신경계 퇴행성 질환의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR102152977B1 (ko) 암 예방 또는 치료용 펩타이드 및 이를 포함하는 약학적 조성물
KR102070305B1 (ko) 아출 추출물을 포함하는 암의 예방 및 치료용 조성물
US20230241088A1 (en) Composition for preventing or treating lung cancer comprising ortho-topolin riboside as active ingredient
KR20240006143A (ko) 신규화합물을 함유하는 파킨슨 질환 예방 또는 치료용 조성물
KR20130112236A (ko) 부티르산 나트륨을 유효성분으로 함유하는 고 글루코즈로 유도된 염증 억제용 조성물
KR20240006144A (ko) 신규화합물을 함유하는 알츠하이머 질환 예방 또는 치료용 조성물
KR20220160900A (ko) 스티그마스테롤을 유효성분으로 함유하는 난소암 예방 또는 치료용 조성물
KR20200134528A (ko) 멜라토닌을 유효성분으로 포함하는 암의 예방 또는 치료용 약학적 조성물
KR20240012182A (ko) 칸타리딘을 유효성분으로 포함하는 교모세포종 예방 또는 치료용 조성물

Legal Events

Date Code Title Description
E701 Decision to grant or registration of patent right