KR20210047456A - 자마의 속성 재배 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명에서는 뽕나무버섯균의 균사속을 속성 증식시키는 방법과 무병 자마의 속성 재배 방법이 제공된다.
본 발명에 따른 뽕나무버섯균의 균사속을 속성 증식시키는 방법에 의하면 뽕나무버섯균의 균사속이 현저히 빠르고 풍부하게 증식되고, 잡균의 증식이 저해되어 단시간에 균사속을 속성 증식시킬 수 있고, 본 발명의 자마 속성 재배용 배지는 균사속이 풍부하게 증식되어 있어, 천마의 프로토콤의 비대화와 자마로의 재배에 효용성이 높다. 또한 본 발명의 자마 속성 재배방법에 의하면 자마로의 재배기간을 종래 기술에 비하여 50% 이상 단축할 수 있으며, 오염율이 낮아서 무병 자마를 얻게 한다.

Description

자마의 속성 재배 방법 {Rapid cultivating method of immature tuber of Gastrodia elata}

본 발명은 자마(子麻)의 속성 재배 방법에 관한 것으로서, 더 상세하게는 단기간에 무병(無病) 자마를 얻을 수 있는 자마의 속성 재배 방법에 에 관한 것이다.

천마(天麻, Gastrodia elata)는 난초과(蘭草科, Orchidaceae)에 속하며 광합성 능력이 퇴화된 식물로, 뽕나무버섯균(Armillaria sp.)과 공생관계를 형성하고 있다. 한국, 중국, 일본 및 타이완 등에 분포하는 다년생 고등식물로, 높이 1m, 덩이줄기(塊莖)는 굵으며 긴타원형이고 가로로 뻗으며 길이 7~15㎝이다. 이 덩이줄기는 중풍, 고혈압, 현기증, 신경성 질환 등에 효능이 좋아 두부질환의 예방과 치료제로 이용되어 왔다. 또한 무분별한 야생천마의 수집으로 인한 천마유전자원이 소멸되어가고 있는 상태이며, 국제자연보호연맹에서는 멸종위기 2급 식물로 지정 보호되고 있는 식물이기도 하다 (특허등록 10-1698316호).

뽕나무버섯균은 토양 및 나무로부터 무기성분과 광합성 산물을 각각 흡수하여 생장하고, 뽕나무버섯균의 균사속(rhizomorph)이 천마와 접촉하게 되면 여러 가지 감염과정을 통해 천마세포내로 침입하게 된다. 이때 천마에 있는 여러 가지 효소에 의해 뽕나무버섯균의 균사가 분해되어 영양물질로 흡수하게 된다. 즉 뽕나무버섯균의 균사속이 천마에 감염되어 상호간에 양분과 수분을 교환하나, 천마는 뽕나무버섯에 붙어 양분과 수분을 공급받는 기생체형태의 식물인 것이다.

일반 천마 농가에서 자마를 사용하여 천마를 재배하고 있다. 이때 사용되는 자마는 가을 수확(11월) 후 이듬해 봄에 식재(4월)할 때 까지 저온창고에 보관하게 된다. 그러나 수확 시 자마의 표면에 난 상처나 토양으로부터 감염된 병원균이 자마에 존재하게 되고, 이는 저온저장 시 활성화되어 자마의 부패 현상으로까지 이르기도 한다. 이러한 부패 현상은 공생균과의 연결이 끊어진 상태로 자마를 보관할 때 다른 병원균에 의한 감염이 더욱 활성화되는 것으로 생각된다. 따라서 비록 표면적으로는 자마의 상태가 양호하다고 할지라도 이듬해 식재 후 뽕나무버섯 균사속과의 연결(6~7월)이 이뤄지기에 앞서 토양온도가 상승함에 따라 토양에 있는 병원균이나 저장 자마의 표면에 있던 병원균들이 뽕나무버섯균 보다 더 빨리 활성화되어 천마 생산에 영향을 주게 되는 것이다. 따라서 천마 생산의 증가를 위해서는 무병 자마의 재배의 필요성이 높았다.

한편 자마의 재배시 사용되는 공생균인 뽕나무버섯균은 통상적으로 참나무, 참나무 가지 또는 참나무 톱밥에서 균사속을 형성하도록 성장시켰으나, 균사속이 자라는 속도가 느려서 오랜 시간(통상 30~45일)이 소요되었고, 또한 오염으로 인한폐기율이 높은 (약 40% 이상) 문제점이 있었다.

따라서 뽕나무버섯균의 균사속의 형성 기간의 단축과 오염율을 낮출 수 있는 기술의 개발이 절실히 요구되어 오고 있다.

이에 본 발명자들이 지속적으로 연구한 결과, 참나무 톱밥과 포플러나무 톱밥을 혼합하여 사용시 뽕나무버섯균(Armillaria sp.)의 균사속이 단시간에 현저하게 발달(증식)시킬 수 있어서, 이를 이용하여 단기간에 무병 자마를 재배할 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 목적은 뽕나무버섯균의 균사속을 속성 증식시키는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또 다른 목적은 무병 자마의 속성 재배 방법을 제공하는 것이다.

상기 본 발명의 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 뽕나무버섯균의 균사속을 속성 증식시키는 방법을 제공한다.

상기 방법은

i) 뽕나무버섯균을 고체 배양하는 단계;

ⅱ) 참나무 톱밥과 포플러나무 톱밥의 혼합 톱밥을 멸균하는 단계; 및

ⅲ) 단계 ⅱ)로부터의 멸균된 혼합톱밥을 단계 i)로부터의 뽕나무버섯균 배양배지 위에 얹고 배양하여 균사속을 증식시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 한다.

또한 본 발명은 상기 뽕나무버섯균의 균사속을 속성 증식시키는 방법에 의해 제조된 자마 속성 재배용 배지를 제공한다.

단계 i) 뽕나무버섯균 고체 배양

뽕나무버섯균(Armillaria sp.)을 고체 배양한다.

본 발명에서 고체 배양은 뽕나무버섯균을 미강과 감자전분과 포도당이 첨가되어 있는 PDA(potato dextrose agar) 혼합배지에서 뽕나무버섯균을 접종하여 배양한다.

혼합배지는 물과 미강(米糠)을 15 : 1 ~ 20 : 1(v/w)로 잘 혼합한 후 PDA를 첨가하여 PDA가 풀어질때까지 교반한 후 배양통에 분주하여 121℃에서 30~40분간 멸균하고 냉각하여 제조할 수 있다.

PDA은 일반적으로 고체배지 제조시 통상의 사용양으로 첨가한다. 일예로 물과 미강 혼합액 1000ml에 39g을 첨가한다.

접종은 PDA 배지에서 고체배양한 뽕나무버섯균을 사용하여 수행한다. 구체적으로는 뽕나무버섯균이 배양된 PDA 배지를 가로×세로 1cm×1cm 크기로 잘라서 상기 혼합배지에 올려놓는 것으로 수행할 수 있다. 접종이 고체배양한 뽕나무버섯균을 사용함에 의해, 액체배양한 뽕나무버섯균을 이용시에 비하여 배양 시간이 단축되고 균사속의 증식이 증진된다.

배양은 항온·항습·암 조건에서 4~5일간 수행한다.

항온·항습·암 조건은 뽕나무버섯균의 균사속이 왕성하게 자라기에 적절한 온도 및 습도를 가르키며, 바람직하게는 24~27℃의 온도 및 50~60%의 습도이며, 빛이 차단된 것이다.

단계 ⅱ) 멸균된 혼합 톱밥 제조

참나무 톱밥과 포플러나무 톱밥의 혼합하여 혼합톱밥을 멸균한다.

혼합은 참나무 톱밥 : 포플러나무 톱밥을 7 : 3 ~ 5 : 5의 중량비의 혼합비로 혼합한다. 가장 바람직하게는 참나무 톱밥 : 포플러나무 톱밥을 7 : 3의 중량비로 혼합한다.

본 발명에서 참나무(Quercus)는 갈참나무(Qercus aliena), 굴참나무(Quercus variabilis), 떡갈나무(Quercus dentata), 종가시나무(Quercus glauca), 물참나무(Quercus grosseserrata), 산떡갈나무(Quercus mongolicodentata), 상수리나무(Quercus acutissima), 신갈나무(Quercus mongolica), 졸참나무(Quercus serrata), 가시나무(Quercus myrsinaefolia), 붉가시나무(Quercus acuta), 개가시나무(Quercus gilva), 및 코르크나무(Quercus suber)로 이루어지는 군에서 선택되는 1종 이상을 사용할 수 있다.

본 발명에서 포플러나무(Populus)는 사시나무(P. davidiana), 수원사시나무(P. glandulosa), 황철나무(P. maximowiczii), 물황철나무(P. koreana), 당버들(P. simonii), 은백양(P. alba), 양버들(P. deltoides), 미루나무, 이태리포플러, 현사시나무, 양황철나무 및 수원포플러로 이루어지는 군에서 선택되는 1종 이상을 사용할 수 있다.

혼합톱밥에 증류수를 첨가하여 반죽한 후 멸균한다. 증류수는 혼합톱밥에 대하여 0.8 ~ 1 (w/v) 비율로 참가한다.

반죽된 혼합톱밥의 멸균은 120℃ 이상에서 90 ~ 270분간 수행할 수 있다. 바람직하게는 121℃에서 90분간 3회 멸균한다.

단계 ⅲ) 뽕나무버섯균 균사속 증식

단계 ⅱ)로부터의 멸균된 혼합톱밥을 단계 i)로부터의 뽕나무버섯균 배양배지 위에 얹고 배양하여 균사속을 증식시킨다.

멸균톱밥은 1~3cm 두께로 뽕나무버섯균 배양배지 위에 얹고, 바람직하게는 2cm 두께로 얹는다.

뽕나무버섯균은 항온·항습·암 조건하에 2~3주간, 바람직하게는 3주간 배양하여 균사속을 증식시킨다.

상기와 같은 뽕나무버섯균의 균사속을 속성 증식시키는 방법은 상기와 같이 특정 혼합비로 혼합한 혼합톱밥을 사용함에 의해, 뽕나무버섯균의 균사속이 현저히 빠르고(약 20일) 풍부하게 증식되고, 또한 멸균된 혼합톱밥을 사용함에 의해 잡균의 증식이 저해되어(오염율 5% 이하) 뽕나무버섯균의 증식 속도가 현저히 증가된다 (표 2, 도 1). 종래 기술에 의하면 균사속이 자라는 속도가 느려서 자마 재배 배지를 얻으려면 약 40일이 소요되었고, 또한 오염으로 인한 폐기율이 40% 이상이었는데, 본 발명에 따른 방법에 의하면 이와 같은 종래 기술의 문제점을 해소할 수 있다.

또한 상기와 같은 뽕나무버섯균의 균사속을 속성 증직시키는 방법에 의해 제조된 자마 속성 재배용 배지는 종래 기술에 비하여, 균사속이 2배 이상 증식되어 있어, 자마의 속성 재배(증식)에 특히 유용하다 (표 2, 도 1, 도 2, 도 5).

본 발명의 또 다른 목적에 따라서, 본 발명은 하기 단계들을 포함하는 무병 자마의 속성 재배 방법을 제공한다:

a) 천마 종자를 발아시켜 프로토콤을 제조하는 단계;

b) 뽕나무버섯균을 고체 배양하는 단계;

c) 참나무 톱밥과 포플러나무 톱밥의 혼합 톱밥을 멸균하는 단계;

d) 단계 c)로부터의 멸균된 혼합톱밥을 단계 b)로부터의 뽕나무버섯균 배양배지 위에 얹고 배양하여 균사속을 증식시키는 단계; 및

e) 단계 d)로부터의 균사속이 증식된 배지 위에 단계 a)로부터의 프로토콤을 얹은 후 멸균되지 않은, 참나무 톱밥 또는 참나무 톱밥과 포플러나무 톱밥의 혼합톱밥을 얹어 1개월 이상 배양하여 자마를 얻는 단계.

본 발명에서 ‘프로토콤(protocorm, 原生球莖)’은 기내배양시에 천마의 발아체를 의미하며, 프로토콤이 생장되어 자마로 발달되며, 자마를 기외로 이식하여토양 배양하면 최종 천마(성마)로 재배될 수 있다.

단계 a) 천마 종자 발아 및 프로토콤 제조

천마 종자를 발아시켜 프로토콤을 제조한다.

천마 종자 발아는 애주름버섯균(Mycena sp.)을 발아 균주로 사용하여 발아한다. 구체적으로는 낙엽미강 배지에서 애주름버섯균을 배양한 후, 한천 배지 중앙에 애주름버섯균이 배양된 낙엽 절편을 올려 놓은 후 천마 종자를 살포하여 1개월 이상 배양하면 천마가 발아하여 발아체가 생성된다.

본 발명에서 사용될 수 있는 애주름버섯균으로는 천마 종자를 발아시킬 수 있는 균주이면 사용될 수 있으며 바람직하게는 애주름버섯(Mycena sp. KFRI 1212) 또는 수탁번호 KACC93258P로 기탁된 애주름버섯(Mycena purpureofusca) NIFOS101 균주가 사용될 수 있다.

낙엽미강 배지는 통상의 방법으로 제조할 수 있다. 일례로는 실시예와 같이 물과 미강을 혼합하여 용기에 분주한 후, 낙엽을 물에 하루정도 불린 후 낙엽을 적절하게 절단하여 올려서 멸균하여 제조할 수 있다.

천마 종자는 천마 종자를 포함하고 있는 꼬투리를 화염 소독한 후 사용한다.

발아체는 프로토콤 배양배지에 옮겨 계대배양하여 1.5 ~ 2cm 크기로 증식된 프로토콤을 제조한다. 프로토콤 배양배지는 하이포넥스 배지(Hyponex powder, peptone, sucrose, agar 포함)를 사용할 수 있다.

단계 b) 내지 단계 d)는 상기 단계 ⅰ) ~ ⅲ)에서 정의된 바와 같다.

단계 e) 자마 제조

단계 d)로부터의 균사속이 증식된 배지 위에 단계 a)로부터의 프로토콤을 얹은 후 멸균되지 않은, 참나무 톱밥 또는 참나무 톱밥과 포플러나무 톱밥의 혼합톱밥을 얹어 1개월 이상 배양하여 자마를 얻는다.

본 단계에서는 멸균되지 않는 톱밥을 사용한다. 프로토콤의 비대화를 통한 자마로의 증식에 톱밥에 존재하는 미생물환경이 더 효과적이다. 멸균된 톱밥을 사용할 경우 프로토콤의 비대화가 제대로 이루어지지 않는다. 단계 b) 내지 단계 d)를 통하여 뽕나무버섯균의 균사속이 충분히 증식되었으므로 멸균되지 않은 톱밥의 미생물환경으로부터 뽕나무버섯균이 영양분을 얻어 프로토콤으로 전달함에 따라 자마로의 증식이 가속화된다.

본 단계에서는 멸균되지 않은, 참나무 톱밥 또는 참나무 톱밥과 포플러나무 톱밥의 혼합톱밥이 사용될 수 있으며, 바람직하게는 멸균되지 않은 참나무 톱밥을 사용한다.

배양은 상기와 같이 항온·항습·암 조건 하에 1개월 이상 배양하여 자마를 얻는다.

본 발명에 따른 재배 방법에 의하면 종래 방법(4개월, 오염율 60%)에 비하여 현저히 단기간(약2개월)에 자마를 얻을 수 있으며, 또한 오염율이 현저히 저하 (5%)되어 무병 자마를 얻을 수 있다 (실험예 3).

본 발명의 뽕나무버섯균의 균사속을 속성 증식시키는 방법에 의하면 뽕나무버섯균의 균사속이 현저히 빠르고 풍부하게 증식되고, 잡균의 증식이 저해되어 단시간에 균사속을 속성 증식시킬 수 있다.

본 발명의 자마 속성 재배용 배지는 균사속이 풍부하게 증식되어 있어, 천마의 프로토콤의 비대화와 자마로의 재배(증식)에 효용성이 높다.

본 발명의 자마 속성 재배방법에 의하면 자마로의 재배기간을 종래 기술에 비하여 50% 이상 단축할 수 있으며, 오염율이 낮아서 무병 자마를 얻게 한다.

도 1은 혼합톱밥의 혼합비에 따른 뽕나무버섯균 배양 5일후 균사속 증식 상태를 보여주는 사진이다.
도 2는 톱밥의 멸균처리에 따른 뽕나무버섯균 배양 10일후 균사속 증식 상태를 보여주는 사진이다.
도 3는 천마 종자의 파종 직후를 보여주는 사진이다.
도 4는 천마 종자의 발아체를 프로토콤으로 증식되는 과정을 보여주는 사진이다.
도 5는 프로토콤을 자마로 속성 배양되는 과정을 보여주는 사진이다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 구체적인 실시예를 통하여 본 발명의 구성 및 효과를 보다 상세히 설명하기로 한다. 그러나 하기 실시예는 본 발명을 보다 명확하게 이해시키기 위하여 예시한 것일 뿐이며, 본 발명의 권리범위가 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.

실시예

실험예 1: 톱밥의 혼합비에 따른 뽕나무버섯균의 균사속 증식

물과 미강을 20 : 1 (v/w)로 잘 혼합한 500ml에 PDA 19.5g를 첨가하여 PDA가 풀어질 때까지 교반한 후 배양통(SPL, 310120)에 25~30ml씩 분주하여 121℃에서 40분간 멸균하고 냉각하여 미강과 PDA의 혼합배지를 제조하였다.

표 1에 나타낸 비율로 혼합한 톱밥을 각각 1.5kg씩 준비한 후, 2차 증류수를 1L 200ml~1L 300ml 정도 넣고 잘 반죽한 후, 락앤락 통에 넣어주고 4각 꼭지점 중 하나의 모퉁이에 공간을 만들어 100ml의 2차 증류수를 더해준 후, 121℃에서 90분씩 3번 반복해서 멸균하였다.

	혼합비
비교예 1	물참나무 톱밥:미루나무 톱밥 = 10:0
실시예 1	물참나무 톱밥:미루나무 톱밥 = 7:3
실시예 2	물참나무 톱밥:미루나무 톱밥 = 5:5
비교예 2	물참나무 톱밥:미루나무 톱밥 = 0:10

PDA 배지에서 뽕나무버섯균(Armillaria mellea; 춘천균)을 암조건에서 그리고 25℃의 온도 및 52%의 습도 하에 고체상으로 10~15일간 종균 배양한 후, 뽕나무버섯균이 배양된 PDA 배지를 가로×세로 1cm×1cm 크기로 잘라서 절편으로 상기에서 제조된 배양통 안의 혼합배지에 올려놓아 접종한 후, 상기에서 제조된 멸균된 톱밥을 그 위에 각각 2cm 두께로 얹은 후 암조건에서 그리고 25℃의 온도, 52%의 항온·항습 조건하에 3주간 배양하여 균사속의 증식 여부를 관찰하여 그 결과(증식률, %)를 표 2에 나타냈다. 아울러 멸균톱밥을 얹은 후 5일차에 각각의 배양통을 촬영한 사진을 도 1에 나타내었다.

	배양 5일차	배양 10일차	배양 20일차
비교예 1	3%	10%	40%
실시예 1	20%	50%	90%이상
실시예 2	15%	40%	80%이상
비교예 2	3%	20%	60%

도 1과 표 2에 나타낸 바와 같이, 멸균톱밥을 얹은 후 배양 5일차에 실시예 1 및 실시예 2의 경우는 균사속이 비교예 1 및 2에 비하여 눈에 띄게 증식한 것을 볼 수 있었다 (실시예 1은 멸균톱밥 층에 최고 1.5cm까지 균사속이 증식하였고, 실시예 2는 최고 1cm까지 균사속이 증식하였다).

배양 10일차에 실시예 1 및 실시예 2의 경우는 균사속이 톱밥 위로 자라는 것을 볼 수 있었고 (이 시기에는 균사속이 톱밥층에 40%~50% 증식되어 있다고 예상할 수 있음; 배양통을 흔들었을 때 균사속이 완전이 퍼진 배양통은 톱밥이 균사속에 얽혀서 움직이지 않는데, 이 시기에는 배지에 가까운 멸균톱밥은 균사속이 얽혀 고정되어있으나 위쪽으로 갈수록 톱밥이 흔들렸다).

배양 20일차(약 3주)에 실시예 1 및 실시예 2의 경우는 균사속이 80~90% 이상이 멸균톱밥 위로 자라나 있었으나 비교예 1 및 2의 경우는 균사속 발달이 60% 이하였다.

상기와 같은 결과에 의하면, 상기와 같이 특정 혼합비로 혼합한 혼합톱밥을 사용함에 의해, 뽕나무버섯균의 균사속이 약 2배이상 빠른 속도로 증식되는 것을 확인할 수 있다.

실험예 2: 톱밥의 멸균 처리에 따른 뽕나무버섯균의 균사속 증식

하기 표 3과 같이 처리한 혼합톱밥을 사용하는 것을 제외하고는 실험예 1과 동일하게 수행하여 뽕나무버섯균의 균사속의 증식 여부를 관찰하였고 배양 10일차에 각각의 배양통 바닥을 아래에서 촬영한 사진을 도 2에 나타내었다.

	혼합비 및 멸균처리
실시예 3	물참나무 톱밥:미루나무 톱밥의 7:3 혼합톱밥 & 멸균처리
비교예 3	물참나무 톱밥:미루나무 톱밥의 7:3 혼합톱밥, 멸균처리 없음

도 2에 나타낸 바와 같이, 배양 10일차에 실시예 3의 경우는 균사속이 많이 증식되어 톱밥 위로 증식하기 시작하였고, 비교예 3의 경우는 배양통의 바닥 부분의 뽕나무버섯균이 새까맣게 죽어있었고 균사속이 톱밥 위로 증식하여 올라오지 못함을 관찰하였다.

상기와 같은 결과에 의하면, 실시예 3과 같이 멸균된 혼합톱밥을 사용하는 경우 뽕나무버섯균의 증식이 현저히 증가됨을 알 수 있다.

실험예 3: 무병 자마 속성 재배

<천마 종자 발아 및 프로토콤 제조>

낙엽을 물에 하루 전날 담궈둔 후, 온전한 낙옆을 1.5 x 1.5cm 정사각형이 되게 잘랐다.

2차 증류수 500ml에 미강 100g을 잘 섞어서 10~12ml씩 배양통(SPL, 310120)에 분주한 후 상기에서 준비한 낙엽 절편을 6~7개씩 겹치지 않게 잘 올려놓은 후 120℃ 이상에서 90분간 멸균하여 낙엽미강 배지를 제조하였다.

250ml 삼각플라스크를 준비하고 증류수 100ml에 PDB(Potato Dextrose Broth, Difco) 2.4g을 넣고 호일로 입구를 싼 다음 121℃에서 20분간 멸균한다. 애주름버섯균 (Mycena sp. KFRI 1212)이 배양된 PDA 배지를 플레이트의 절반정도 바둑판 모양(약 0.25x0.25cm)으로 작게 잘라 넣고 쉐이커 RPM 110에서 5~7일정도 액체배양한 애주름버섯균을 멸균된 Homogenizer로 분쇄한 후 4ml씩 상기 낙엽미강 배지에 뿌려준 후, 잘 퍼지도록 흔들어 주고 5일간 항온·항습·암 조건에서 배양하였다.

애주름버섯균이 하얗게 핀 낙엽 1.5x1.5cm을 플레이트 상의 한천(물 1L에 한천 10g) 배지 중앙으로 옮긴 후, 그 위와 주변에, 화염 소독된 천마 꼬투리 중앙을 매스를 이용하여 중앙을 갈라서 천마 종자를 골고루 뿌려 파종하였다 (도 3).

1개월간 항온항습 조건에서 배양하여 천마 종자가 발아시켰고, 발아체들을 긁어서 하이포넥스 배지에 옮겼다. 하이포넥스 배지는 증류수를 양의 2/3를 넣고 스티어 바를 넣고 교방기를 돌리면서 1L 기준으로 하이포넥스 2g, 펩톤 1g, 슈크로스 20g을 첨가한 후 나머지 양의 증류수를 채우고 pH 5.5를 맞춘 후, 한천 12g을 넣고 교방기를 한천이 풀어질때까지(약 30초) 돌려준 다음 호일로 입구를 막고 121 ℃에서 20분간 멸균한 후, 교방기로 30초 정도 돌려준 다음 플레이트에 분주하여 굳혀 준비하였다. 하이포넥스 배지에 옮겨준 발아체들이 0.2cm 정도 자라면 새로운 하이포넥스 배지에 일정한 간격을 띄우고 6개씩 계대를 해주었다 (도 4의 A). 항온항습 조건에서 약 1개월 배양하여 사방 1.5~2cm정도의 크기의 프로토콤을 얻었다(도 4의 B).

<자마 속성 재배용 배지 준비>

상기 실험예 1의 실시예 1과 동일한 방식으로 뽕나무버섯균의 균사속을 속성 증식시켜서 제조된 자마 속성 재배용 배지를 준비하였다.

<자마 재배>

상기 자마 속성 재배용 배지 상에 상기에서 얻은 프로토콤을 배양통 측면에 가깝게 3~5개 얹은 후(도 4의 C), 그 위에 멸균되지 않은 참나무 톱밥을 증류수를 첨가하여 잘 반죽하여 3~4cm 두께로 얹은 후(도 5의 A), 40일 항온항습 조건에서 배양하여 자마를 얻었다(도 5의 B, C).

본 발명의 방법에 의하면 최종 자마를 얻기까지 약2개월이 소요된바, 종래 자마 재배방법(4개월 이상)에 비하여 2배 빨리 속성 재배가 가능함을 확인할 수 있었다. 아울러 오염율이 5% 이하로 줄어들어 종래기 자마 재배방법(60%)에 비하여 무병 자마를 재배하기에 본 발명의 방법이 적합함을 확인할 수 있었다.

Claims (11)

1. i) 뽕나무버섯균을 고체 배양하는 단계;
   ⅱ) 참나무 톱밥과 포플러나무 톱밥의 혼합 톱밥을 멸균하는 단계; 및
   ⅲ) 단계 ⅱ)로부터의 멸균된 혼합톱밥을 단계 i)로부터의 뽕나무버섯균 배양배지 위에 얹고 배양하여 균사속을 증식시키는 단계를 포함하는 뽕나무버섯균의 균사속을 속성 증식시키는 방법.
   
2. 제 1항에 있어서, 상기 혼합톱밥은 참나무 톱밥 : 포플러나무 톱밥을 7 : 3 ~ 5 : 5의 중량비로 혼합된 것을 특징으로 하는 뽕나무버섯균의 균사속을 속성 증식시키는 방법.
   
3. 제 1항에 있어서, 상기 혼합톱밥은 참나무 톱밥 : 포플러나무 톱밥은 7 : 3의 중량비로 혼합된 것을 특징으로 하는 뽕나무버섯균의 균사속을 속성 증식시키는 방법.
   
4. 제 1항에 있어서, 상기 참나무는 물참나무이고, 상기 포플러나무는 미루나무인 것을 특징으로 하는 뽕나무버섯균의 균사속을 속성 증식시키는 방법.
   
5. 제 1항에 있어서, 혼합톱밥의 멸균은 혼합톱밥에 대하여 증류수를 0.8 ~ 1 (w/v) 비율로 참가한 후 반죽된 혼합톱밥을 120℃ 이상에서 90 ~ 270분간 수행하는 것을 특징으로 하는 뽕나무버섯균의 균사속을 속성 증식시키는 방법.
   
6. 제 1항에 있어서, 단계 ⅲ)에서 멸균톱밥은 2~3cm 두께로 뽕나무버섯균 배양배지 위에 얹고, 배양은 항온·항습·암 조건하에 3주 이상 수행하는 것을 특징으로 하는 뽕나무버섯균의 균사속을 속성 증식시키는 방법.
   
7. 제 1항에 따른 뽕나무버섯균의 균사속을 속성 증식시키는 방법에 의해 제조된 자마 속성 재배용 배지.
   
8. a) 천마 종자를 발아시켜 프로토콤을 제조하는 단계;
   b) 뽕나무버섯균을 고체 배양하는 단계;
   c) 참나무 톱밥과 포플러나무 톱밥의 혼합 톱밥을 멸균하는 단계;
   d) 단계 c)로부터의 멸균된 혼합톱밥을 단계 b)로부터의 뽕나무버섯균 배양배지 위에 얹고 배양하여 균사속을 증식시키는 단계; 및
   e) 단계 d)로부터의 균사속이 증식된 배지 위에 단계 a)로부터의 프로토콤을 얹은 후 멸균되지 않은, 참나무 톱밥 또는 참나무 톱밥과 포플러나무 톱밥의 혼합톱밥을 얹어 1개월 이상 배양하여 자마를 얻는 단계를 포함하는 무병 자마의 속성 재배 방법.
   
9. 제8항에 있어서, 천마 종자의 발아는 애주름버섯균(Mycena sp.)을 사용하여 수행하는 것을 특징으로 하는 무병 자마의 속성 재배 방법.
   
10. 제8항에 있어서, 단계 d)에서 상기 혼합톱밥은 참나무 톱밥 : 포플러나무 톱밥을 7 : 3 ~ 5 : 5의 중량비로 혼합된 것을 특징으로 하는 무병 자마의 속성 재배 방법.
    
11. 제8항에 있어서, 단계 e)에서 멸균되지 않은 참나무 톱밥을 사용하는 것을 특징으로 하는 무병 자마의 속성 재배 방법.

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