CN109041841B - 红花槭的快速扦插工艺 - Google Patents

Abstract

本发明属于植物种苗繁殖技术领域，公开了红花槭的快速扦插工艺，其包括如下步骤：1)以红花槭实生苗嫩枝作为插穗，每个插穗保留1片顶叶，长度为6‑8cm；插入到基质中，插入基质的深度为3‑4cm，浇透水；2)选用遮光率为70％的遮阳网，日常管理插床温度保持在25‑30℃，相对湿度保持在85‑90％；每天喷水1‑2次，保持叶面新鲜和插床湿润，每隔10天喷施尿素液一次。本发明对基质进行了改进，能够促进红花槭生根，提高对植物病原菌的拮抗力，无需对插条进行消毒和植物调节剂浸泡等常规处理，缩短了流程，简化了扦插工艺，节省了成本，具备较好的市场推广价值。

Description

红花槭的快速扦插工艺

技术领域

本发明属于植物种苗繁殖技术领域，具体涉及红花槭的快速扦插工艺。

背景技术

红花槭为槭树科槭树属的常见植物，落叶乔木,原产于加拿大南部、东部以及美国大部，后来引入到我国。红花槭树体高大、直立。树型直立向上，树冠呈椭圆形或圆形，开张优美。老树皮粗糙，深灰色，有鳞片或皱纹。新树皮光滑，浅灰色。小枝光滑，有皮孔，通常为绿色，冬季常变为红色。单叶对生，掌状3～5裂。花为红色，稠密簇生，少部分微黄色，先花后叶。花期４月。果实为翅果，多呈微红色，成熟时变为棕色。喜湿润环境及排水良好的微酸性土壤。因其秋季色彩夺目，树冠整洁，被广泛应用于公园、小区、街道栽植，孤植、列植、丛植皆可，深受人们的喜爱。

目前，红花槭繁殖的方法主要包括种子繁殖，嫁接繁殖和扦插繁殖。通过种子播种进行种苗繁殖，但红花槭种子需要进口和播种较为困难，而且使用种子进行繁殖，其优良性质难以保持，后代变异较大，自然状态下植物体本身所具备的优良性状难以表现，无法形成标准一致的树木景观。嫁接方式可以用于繁殖出新的品种，但是嫁接工艺较为复杂，难以大规模快速繁殖。为尽快扩大优良株系的繁殖系数，扩大种苗繁殖数量，扦插繁殖是一种行之有效的技术手段。植物在扦插繁殖中，插穗上不定根的形成是扦插成败的关键，现有技术一般采用植物生长调节剂来浸泡插穗，主要包括生长素类、细胞分裂素、赤霉素、脱落酸、酚类物质等。现有技术中的红花槭扦插方法大多采用生长调节剂浸泡处理，然后消毒处理，再扦插到特定基质中，从而完成扦插过程。中国专利“CN107047263A”公开了一种红花槭半木质化新梢扦插方法，其特征在于：包括材料准备、插穗处理、扦插前预处理、扦插、扦插后处理、初期管理、苗期管理；所述的插穗处理：插穗剪好后使用50%多菌灵可湿性粉剂500倍液浸泡插穗最下端至1cm处15-20min；所述的扦插前预处理：扦插前，使用吲哚乙酸和苦楝素以质量比1:1配制成浓度300mg/L的预处理液，采用预处理液处理插穗基部，速蘸18-25s后进行扦插。中国专利“CN104509439A” 公开了一种美国红枫组织快繁的方法，包括以下步骤：（1）以美国红枫的幼嫩茎段为外植体，进行表面消毒；（2）在初代培养基上进行培养，培养时间为25-30天；（3）在增殖培养基上进行培养，培养时间20-40天；（4）在生根培养基进行上生根培养，培养至长合适的根为止。该方法成活率可达到80%以上，繁殖速度快，但是需要对植物材料进行消毒、初代培养、增殖培养以及生根培养，而且需要使用大量的植物调节剂，成本较高。文献“激素和基质对红花槭嫩枝扦插生根的影响，江苏林业科技2011年”对红花槭扦插条件进行了试验，验证了多种激素调节剂以及基质对扦插成活率的影响，扦插成活率最高可达到90%。

上述研究均需要采用植物生长调节剂和消毒剂进行处理，从而提高生根率以及避免病原菌侵染，才能保证较高的扦插成活率；上述扦插方式较为复杂，而且大多需要人工处理。如果将插穗不经处理直接扦插到普通基质，生根成活率很低，而且会感染病原菌。

秸秆中含有珍贵而平衡的细胞内含物，包括有机质，C，N，P，K以及各种微量元素，它更提供土壤保水性、排水性及空隙度等物理性条件，这些营养及环境条件更形成利于土壤微生物繁衍滋生的“有机温床”，因而改善了土壤的生物性。酒糟是酿酒后剩余的残渣，属于酿酒行业加工废弃物，含有丰富的粗蛋白，可以用于微生物发酵的氮源来使用。

发明内容

针对现有技术提出的技术问题，本发明提供了红花槭的快速扦插工艺，本发明工艺无需对红花槭进行消毒和植物调节剂处理，简化了扦插流程，提高了扦插成活率。

本发明是通过如下技术方案来实现的：

红花槭的快速扦插工艺，其包括如下步骤：

1)以红花槭实生苗嫩枝作为插穗，每个插穗保留1片顶叶，长度为6-8cm；插入到基质中，插入基质的深度为3-4cm，浇透水；

2)在光照管理上，选用遮光率为70％的遮阳网，日常管理插床温度保持在25-30℃，相对湿度保持在85-90％；每天喷水1-2次，保持叶面新鲜和插床湿润，每隔10天喷施尿素液一次。

进一步的，所述工艺包括如下步骤：

1）以2年红花槭实生苗嫩枝作为插穗，选取距枝顶3叶以下的中段部分，上切口为横切，下切口为斜切，每个插穗保留1片顶叶，长度为6-8cm；按5cm×10cm的株行距垂直引孔插入到基质中，插入基质的深度为3-4cm，浇透水；整个扦插时间控制在6小时之内完成；

2）在光照管理上，选用遮光率为70％的遮阳网，日常管理插床温度保持在25-30℃，相对湿度保持在85-90％；每天喷水1-2次，保持叶面新鲜和插床湿润，每隔10天喷施0.1％尿素液一次；两个月后检查扦插指标。

进一步的，所述基质按照如下步骤制备而得：

步骤1）将河沙、泥炭、黄土按照1:1:1的质量比混合，然后灭菌，得到培养物；挑取摩西球囊霉菌单个孢子，接种于1kg上述培养物中，并播种20粒小麦种子，培养60天，去除小麦的地上部分的茎叶，得到组分A；

步骤2）将水稻秸秆粉碎，过20-50目筛，然后与酒糟按照2:1的质量比混合，然后添加4-5倍重量的水，加热至100℃，保温条件下煮沸30min，然后自然冷却至室温，再接种棘孢木霉菌种子液和褐色球形固氮菌种子液，接种量均为5-8%，培养24h，然后按照6-8%的接种量接种巨大芽孢杆菌种子液，继续培养72-96h，得到组分B；

步骤3）将组分A、组分B、蛭石按照5:5:2的质量比，混合搅拌均匀，得到基质。

优选地，所述棘孢木霉菌种子液按照如下方法制备而得：

将棘孢木霉菌接种到PDA固体培养基上培养，得到单菌落；挑取单菌落接种到PDA液体培养基中进行种子培养，得到OD_600nm值为0.6-0.8的棘孢木霉菌种子液。

所述褐色球形固氮菌种子液按照如下方法制备而得：将褐色球形固氮菌在YPD固体培养基上28℃培养基36-48h，然后接种到YPD液体培养基中，再置于28℃、150rpm的摇床中振荡培养，得到OD_600nm值为1.0-1.2褐色球形固氮菌种子液。

优选地，所述巨大芽孢杆菌种子液按照如下方法制备而得：将巨大芽孢杆菌接种到LB固体培养基上培养24-36h，得到单菌落；然后接种到LB液体培养基上进行种子培养，培养温度为30℃，获得OD_600nm值为0.5-0.7的巨大芽孢杆菌种子液。

本发明实施方式具体使用的菌株为摩西球囊霉菌CGMCC No.0927，棘孢木霉菌ATCC52438，褐色球形固氮菌ATCC4412，巨大芽孢杆菌ATCC14581。本发明所述菌种均可以从CGMCC、ATCC以及其他商业途径购买得到。本发明还可以采用同一种属的其他功能类似的菌株来完成本发明。

本发明技术方案通过对现有技术的改进，带来一系列的有益效果，主要包括以下几个方面：

本发明采用的四种菌株进行配伍制备的基质能够促进红花槭生根，提高对植物病原菌的拮抗力，并且四种菌株配伍产生了较好的协同作用；本发明无需对插条进行消毒和植物调节剂浸泡等常规处理，缩短了流程，简化了扦插工艺，节省了人力物力，具备较好的市场推广价值。

摩西球囊霉菌与槭树可以形成较好的共生关系，提高抗病率和对钾离子和磷的吸收，对病原菌产生较好的抗性；本发明通过对摩西球囊霉菌进行植物共生培养，得到富含养料的摩西球囊霉菌剂。棘孢木霉菌能够分泌纤维素酶，可以对秸秆中的纤维素降解，还具备溶磷、产生吲哚乙酸；褐色球形固氮菌可以与槭树形成较好的共生关系，执行固氮功能，其分泌物还可以刺激根毛生长，还能产生纤维素酶来降解纤维素；巨大芽孢杆菌具备解磷固钾，分泌合成多种有机酸、酶以及生理活性物质等；本发明首先接种棘孢木霉菌和褐色球形固氮菌，能够产生纤维素酶等酶类，利用秸秆作为底物产生还原糖，可以供巨大芽孢杆菌利用；本发明采用酒糟为氮源，可以维持菌株生长，酒糟发酵还可以产生蛋白和氨基酸物质，提高基质养分；部分未降解完毕的纤维素和木质素，会提高基质通气性能和保水性能；产生的有机酸、小分子蛋白以及氨基酸类物质，能够促进根部吸收，有助于生根。本发明采用三种菌株发酵水稻秸秆和酒糟，结合摩西球囊霉菌剂和蛭石，养分充足，能够促进土壤腐殖质化，刺激槭树扦插生根，并且抑制植物病原菌的发生。

附图说明

图1：不同菌株配伍对插穗根部腐烂数的影响；

图2：不同菌株配伍对插穗平均生根数的影响；

图3：不同菌株配伍对插穗生根率的影响。

具体实施方式

本领域技术人员可以借鉴本文内容，适当改进工艺参数实现。特别需要指出的是，所有类似的替换和改动对本领域技术人员来说是显而易见的，它们都被视为包括在本发明。本发明的产品及方法已经通过较佳实施例进行了描述，相关人员明显能在不脱离本发明内容、精神和范围内对本文所述的产品及方法进行改动或适当变更与组合，来实现和应用本发明技术。为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明进行详细说明。

实施例1

红花槭的快速扦插工艺，其包括如下步骤：

选取2年红花槭实生苗嫩枝作为插穗，选取距枝顶3叶以下的中段部分，上切口为横切，下切口为斜切，每个插穗保留1片顶叶，长度为6cm；6月1日剪取插穗；剪插条时要求剪刀锋利，插条切口要平滑，不能破裂；按5cm×10cm的株行距垂直引孔插入到基质中，插入基质的深度为3cm，浇透水；整个扦插时间控制在6小时之内完成；

在光照管理上，选用遮光率为70％的遮阳网，日常管理插床温度保持在25-30℃，相对湿度保持在85-90％；每天喷水1-2次，保持叶面新鲜和插床湿润，每隔10天喷施0.1％尿素液（重量比，0.1g尿素添加到100g水中）一次；两个月后（8月1日）检查扦插指标。

所述基质按照如下步骤制备而得：

步骤1）将河沙、泥炭、黄土按照1:1:1的质量比混合，然后灭菌，得到培养物；挑取摩西球囊霉菌单个孢子，接种于1kg上述培养物中，并播种20粒小麦种子，常规培养（控制合适的水分60-80%、温度25-28℃以及光照12-14小时）60天，去除小麦的地上部分（茎叶），得到组分A；

步骤2）将水稻秸秆粉碎，过50目筛，然后与酒糟按照2:1的质量比混合，然后添加4倍重量的水，加热至100℃，保温条件下煮沸30min，然后自然冷却至室温，再接种棘孢木霉菌种子液和褐色球形固氮菌种子液，接种量均为5%，培养24h，然后按照8%的接种量接种巨大芽孢杆菌种子液，继续培养96h，得到组分B；

步骤3）将组分A、组分B、蛭石按照3:3:1的质量比，混合搅拌均匀，得到基质。

所述棘孢木霉菌种子液按照如下方法制备而得：

将棘孢木霉菌接种到PDA固体培养基上培养，得到单菌落；挑取单菌落接种到PDA液体培养基中进行种子培养，得到OD_600nm值为0.6-0.8的棘孢木霉菌种子液；

所述褐色球形固氮菌种子液按照如下方法制备而得：

所述褐色球形固氮菌种子液按照如下方法制备而得：将褐色球形固氮菌在YPD固体培养基上28℃培养基36-48h，然后接种到YPD液体培养基中，再置于28℃、150rpm的摇床中振荡培养，得到OD_600nm值为1.0-1.2褐色球形固氮菌种子液；

所述巨大芽孢杆菌种子液按照如下方法制备而得：

将巨大芽孢杆菌接种到LB固体培养基上培养24-36h，得到单菌落；然后接种到LB液体培养基上进行种子培养，培养温度为30℃，获得OD_600nm值为0.5-0.7的巨大芽孢杆菌种子液。

实施例2

红花槭的快速扦插工艺，其包括如下步骤：

选取2年红花槭实生苗嫩枝作为插穗，选取距枝顶3叶以下的中段部分，上切口为横切，下切口为斜切，每个插穗保留1片顶叶，长度为8cm；6月1日剪取插穗；剪插条时要求剪刀锋利，插条切口要平滑，不能破裂；按5cm×10cm的株行距垂直引孔插入到基质中，插入基质的深度为4cm，浇透水；整个扦插时间控制在6小时之内完成；

在光照管理上，选用遮光率为70％的遮阳网，日常管理插床温度保持在25-30℃，相对湿度保持在85-90％；每天喷水1-2次，保持叶面新鲜和插床湿润，每隔10天喷施0.1％尿素液一次；两个月后（8月1日）检查扦插指标。

所述基质按照如下步骤制备而得：

步骤1）将河沙、泥炭、黄土按照1:1:1的质量比混合，然后灭菌，得到培养物；挑取摩西球囊霉菌单个孢子，接种于1kg上述培养物中，并播种20粒小麦种子，常规培养（控制合适的水分60-80%、温度25-28℃以及光照12-14小时）60天，去除小麦的地上部分（茎叶），得到组分A；

步骤2）将水稻秸秆粉碎，过20目筛，然后与酒糟按照2:1的质量比混合，然后添加5倍重量的水，加热至100℃，保温条件下煮沸30min，然后自然冷却至室温，再接种棘孢木霉菌种子液和褐色球形固氮菌种子液，接种量均为8%，培养24h，然后按照6%的接种量接种巨大芽孢杆菌种子液，继续培养72h，得到组分B；

步骤3）将组分A、组分B、蛭石按照5:5:2的质量比，混合搅拌均匀，得到基质。

所述棘孢木霉菌种子液按照如下方法制备而得：

将棘孢木霉菌接种到PDA固体培养基上培养，得到单菌落；挑取单菌落接种到PDA液体培养基中进行种子培养，得到OD_600nm值为0.6-0.8的棘孢木霉菌种子液；

所述褐色球形固氮菌种子液按照如下方法制备而得：

将褐色球形固氮菌在YPD固体培养基上28℃培养基36-48h，然后接种到YPD液体培养基中，再置于28℃、150rpm的摇床中振荡培养，得到OD_600nm值为1.0-1.2褐色球形固氮菌种子液；

所述巨大芽孢杆菌种子液按照如下方法制备而得：

将巨大芽孢杆菌接种到LB固体培养基上培养24-36h，得到单菌落；然后接种到LB液体培养基上进行种子培养，培养温度为30℃，获得OD_600nm值为0.5-0.7的巨大芽孢杆菌种子液。

对比例1

红花槭的扦插工艺，其包括如下步骤：

选取2年红花槭实生苗嫩枝作为插穗，选取距枝顶3叶以下的中段部分，上切口为横切，下切口为斜切，每个插穗保留1片顶叶，长度为6cm；6月1日剪取插穗；剪插条时要求剪刀锋利，插条切口要平滑，不能破裂；置于800倍多菌灵溶液中浸泡10分钟；再置于植物调节剂中（100mg/L的APT1+100mg/L的NAA）浸泡3h；按5cm×10cm的株行距垂直引孔插入到基质（黄土、河沙以及蛭石按重量比2:1:1配制而成）中，插入基质的深度为3cm，浇透水；整个扦插时间控制在6小时之内完成；

在光照管理上，选用遮光率为70％的遮阳网，日常管理插床温度保持在25-30℃，相对湿度保持在85-90％；每天喷水1-2次，保持叶面新鲜和插床湿润，每隔10天喷施0.1％尿素液一次；两个月后检查扦插指标。

实施例3

各组别扦插指标检测：

分为三个组别：实施例1-2和对比例1，每组别的扦插株数均为100株，后期的管理工艺完全相同，扦插生根率的具体指标见表1：

表1

组别	扦插株数	平均生根数（条/株）	平均根总长（cm/株）	生根率％
					实施例1	100	11.2	103.4	97.0
实施例2	100	10.9	98.6	95.0
					对比例1	100	9.1	84.3	87.0

通过表1可见，与常规的扦插工艺相比较（对比例1），实施例1-2在各方面指标均明显优于对比例1，其中，实施例1平均生根数较对比例1提高2.1条，平均根的总长比对比例1多19.1cm，生根率可以提高10%。

实施例4

不同菌株配伍制备的基质对红花槭生根性能参数的影响：

组别设置：对照组1：不添加组分B，其余同实施例1；对照组2：不添加组分A，其余同实施例1；对照组3：不添加棘孢木霉菌种子液，其余同实施例1；对照组4：不添加褐色球形固氮菌种子液，其余同实施例1；对照组5：不添加巨大芽孢杆菌种子液，其余同实施例1；实验组：实施例1。各组别的扦插株数均为100株，分别检测了各组别的根部的腐烂数目（见图1）、每株平均生根数（图2）、以及生根率（见图3），如图1所示，实验组插穗的根部腐烂数较少，仅为1条，而对照组1和对照组2较高，达到了10条以上，说明四种菌株配伍能够保护插穗免受植物病原菌的侵染；如图2-3所示，实验组的每株平均生根条数最多，分别比对照组1高出2.4条，比对照组2高出2.9条，实验组的生根率最高，分别比对照组1-2高出14％和12％；上述实验说明本发明采用的四种菌株进行配伍制备的基质能够促进红花槭生根，提高对植物病原菌的拮抗力，并且产生了较好的协同作用，简化了扦插工艺，节省了人力物力，具备较好的市场推广价值。

最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的精神和范围。

Claims (5)

1.红花槭的快速扦插工艺，其特征在于，所述工艺包括如下步骤：

1)以红花槭实生苗嫩枝作为插穗，每个插穗保留1片顶叶，长度为6-8cm；插入到基质中，插入基质的深度为3-4cm，浇透水；

2)在光照管理上，选用遮光率为70％的遮阳网，温度保持在25-30℃，相对湿度保持在85-90％；每天喷水1-2次，每隔10天喷施尿素液一次；

所述基质按照如下步骤制备而得：

步骤1）将河沙、泥炭、黄土按照1:1:1的质量比混合，然后灭菌，得到培养物；挑取摩西球囊霉菌单个孢子，接种于1kg上述培养物中，并播种20粒小麦种子，培养60天，去除小麦的地上部分的茎叶，得到组分A；

步骤2）将水稻秸秆粉碎，过20-50目筛，然后与酒糟按照2:1的质量比混合，然后添加4-5倍重量的水，加热至100℃，保温条件下煮沸30min，然后自然冷却至室温，再接种棘孢木霉菌种子液和褐色球形固氮菌种子液，接种量均为5-8%，培养24h，然后按照6-8%的接种量接种巨大芽孢杆菌种子液，继续培养72-96h，得到组分B；

步骤3）将组分A、组分B、蛭石按照5:5:2的质量比，混合搅拌均匀，得到基质。

2.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于，所述工艺包括如下步骤：

1）以2年生红花槭实生苗嫩枝作为插穗，选取距枝顶3叶以下的中段部分，上切口为横切，下切口为斜切，每个插穗保留1片顶叶，长度为6-8cm；按5cm×10cm的株行距垂直引孔插入到基质中，插入基质的深度为3-4cm，浇透水；整个扦插时间控制在6小时之内完成；

2）在光照管理上，选用遮光率为70％的遮阳网，温度保持在25-30℃，相对湿度保持在85-90％；每天喷水1-2次，每隔10天喷施0.1％尿素液一次；两个月后检查扦插指标。

3.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于，所述棘孢木霉菌种子液按照如下方法制备而得：

将棘孢木霉菌接种到PDA固体培养基上培养，得到单菌落；挑取单菌落接种到PDA液体培养基中进行种子培养，得到OD_600nm值为0.6-0.8的棘孢木霉菌种子液。

4.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于，所述褐色球形固氮菌种子液按照如下方法制备而得：将褐色球形固氮菌在YPD固体培养基上28℃培养36-48h，然后接种到YPD液体培养基中，再置于28℃、150rpm的摇床中振荡培养，得到OD_600nm值为1.0-1.2褐色球形固氮菌种子液。

5.根据权利要求1所述的工艺，其特征在于，所述巨大芽孢杆菌种子液按照如下方法制备而得：将巨大芽孢杆菌接种到LB固体培养基上培养24-36h，得到单菌落；然后接种到LB液体培养基上进行种子培养，培养温度为30℃，获得OD_600nm值为0.5-0.7的巨大芽孢杆菌种子液。

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