KR20210047313A - Smarca2/brm atp분해효소 저해제로서의 우레아 화합물 및 조성물 - Google Patents

Abstract

BRM-매개 및/또는 BRG1-매개 질환 또는 장애를 치료하는 데 유용한 것으로 나타난 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염이 제공된다:
[화학식 I]

식 중, R¹ 내지 R⁶은 본 명세서에 규정된 바와 같다.

Description

SMARCA2/BRM ATP분해효소 저해제로서의 우레아 화합물 및 조성물

서열목록

본 출원은 ASCII 형식으로 전자적으로 제출되고, 그 전체가 본 명세서에 참고로 포함된 서열목록을 포함한다. 2016년 11월 30일자로 생성된 상기 ASCII 사본은 PAT057524-US-PSP_SL.txt로 명명되며, 용량이 31,078 바이트이다.

기술분야

본 발명은 BRG1/SMARCA4-돌연변이체 암을 포함하는 BRM-매개 및/또는 BRG1-매개 장애 또는 질환의 치료를 위한 화합물, 이러한 화합물을 포함하는 조성물 및 이들의 용도에 관한 것이다.

포유류 SWI/SNF(mSWI/SNF) 다중-단백질 복합체는 ATP-의존적 뉴클레오솜 리모델링을 통해 염색질 구조를 조절하고, 이에 의해 다수의 중요한 세포 과정을 제어한다. mSWI/SNF 복합체의 몇몇 서브유닛은 종양 억제자로서 역할을 하며, 최근의 게놈 연구는 모든 암에 걸쳐 대략 20%의 종합적 돌연변이 빈도로 이들 서브유닛 중 몇몇에서 재발 돌연변이를 나타내었다. SMARCA4로도 알려진 촉매적 SWI/SNF 서브유닛 BRG1은 폐 선암종 및 다른 암 유형에서 빈번하게 돌연변이된다.

BRM(SMARCA2로도 알려짐)은 BRG1의 파라로그(또는 SMARCA4로도 알려진 BRM/SWI2-관련 유전자 1)이며, 이들 두 단백질은 포유류 SWI/SNF 염색질 리모델링 복합체 내에서 상호 배타적인 ATP-의존적 서브유닛으로서 작용한다. BRM 또는 BRG1 중 하나는 세포가 촉매적으로 활성인 SWI/SNF 복합체를 조립하는 데 필요하다. SWI/SNF 복합체의 다중 변이체는 상이한 서브유닛 조성물로 특성규명되었지만, 각각의 복합체에 하나의 촉매적 서브유닛(BRM 또는 BRG1)만이 존재한다.

BRG1은 종양 억제자로서 작용하는 것으로 나타났고, 인간 암에서 유의하게 돌연변이된다. BRG1의 종양 억제 기능에 대한 증거는 분화 및 세포 주기 저지를 초래하는 BRG1-돌연변이체 세포주에서 야생형 BRG1의 재발현에 의해 입증되었다. Brg1+/- 마우스는 1년에 10% 발생률로 유방 암종이 발생한다. BRG1에서의 기능상실 돌연변이는 확립된 비소세포 폐암 계통의 대략 30%에서 확인되었고, BRG1의 침묵은 폐, 췌장 및 난소암, 흑색종 및 소아 간상(rhabdoid) 육종을 포함하는 다수의 다른 암 세포주 및 종양 샘플에서 발견된다. 중요하게는, 암 게놈 아틀라스(Cancer Genome Atlas: TCGA) 프로젝트로부터의 최근의 결과는 모든 종양 샘플의 대략 10%(다른 잘 특성규명된 종양유전자 및 종양 억제자, 예컨대 EGFR 및 LKB1과 유사한 비율)에서 발생된 폐 선암종을 갖는 환자로부터의 종양 샘플에서 현저하게 돌연변이된 유전자로서 BRG1 돌연변이를 확인하였다. TCGA 프로젝트는 마찬가지로 폐로부터의 암을 포함하는 다양한 암에서 BRM 돌연변이 및 결실을 확인하였다.

SWI/SNF 돌연변이체 암의 치료적 표적화에 대한 통찰은 잔여 SWI/SNF 복합체가 SWI/SNF 돌연변이를 갖는 암의 생존에서 어떤 역할을 한다는 것을 나타내는 연구로부터 초래되었다. 특히, 복합체의 2가지 ATP분해효소인 BRM과 BRG1 사이에서 합성 치사 관계가 발견되었고, 이에 의해 하나의 상실은 다른 하나에 대한 의존을 야기한다. 예를 들어, BRM 고갈은 BRG1-돌연변이체 암세포에서 성장 저해를 유도하는 것으로 입증되었다. 추가적으로, 다른 연구는 SNF5-결핍 종양 세포(SNF5는 SWI/SNF 복합체의 서브유닛임)가 BRG1에 의존적이라는 것을 나타내었다. 최종적으로, SWI/SNF 돌연변이를 결여하는 특정 암은 또한, 예컨대 급성 골수성 백혈병(AML)에서 BRG1 저해에 민감한 것으로 보고되었다. 따라서, BRG1 및 BRM을 포함하는 특정 SWI/SNF 서브유닛의 저해는 암을 포함하는 인간 질환의 치료를 위한 신규한 치료제의 개발에 대한 기회를 제시한다.

BRM-매개 및/또는 BRG1-매개 장애 또는 질환을 위한 신규한 치료 및 요법에 대한 필요가 남아있다. 본 발명은 BRM 및/또는 BRG1 저해제인 화합물, 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 이의 약제학적 조성물 및 이의 조합물을 제공한다. 본 발명은 유효량의 BRM 및/또는 BRG1 저해제(예를 들어, 본 발명의 화합물)를 BRM-매개 및/또는 BRG1-매개 장애 또는 질환의 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, BRM-매개 및/또는 BRG1-매개 장애 또는 질환의 치료 방법을 추가로 제공한다.

본 발명의 일 양상은 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 제공하며, 여기서 R¹ 내지 R⁶은 본 명세서에 규정된 바와 같다.

[화학식 I]

본 발명의 다른 양상은 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 1종 이상의 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

본 발명의 또 다른 양상에서, 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 1종 이상의 치료적 활성제를 포함하는 약제학적 조합물이 제공된다.

본 발명의 또 다른 양상에서, 치료적 유효량의 화학식 I의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 BRM-매개 및/또는 BRG1-매개 장애 또는 질환의 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, BRM-매개 및/또는 BRG1-매개 장애 또는 질환의 치료 방법이 제공된다.

본 발명의 또 다른 양상에서, 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 제조하는 공정이 제공된다.

본 발명의 다양한(열거된) 실시형태가 본 명세서에 기재된다. 각각의 실시형태에 명시된 특징은 다른 명시된 특징과 조합하여 본 발명의 추가의 실시형태를 제공할 수 있음이 인정될 것이다.

실시형태 1: 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:

[화학식 I]

식 중, R¹은 수소, 아미노 및 히드록시-치환된 C_1-2알킬로부터 선택되고; R²는 수소이며; R³은 C_1-2알킬 및 할로-치환된-C_1-2알킬로부터 선택되고; R⁴는 수소이며; R⁵는 수소 및 할로로부터 선택되고; R⁶은 수소 및 할로로부터 선택된다.

실시형태 2: 실시형태 1에 따른 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 식 중, R¹은 수소, 아미노 및 히드록시-메틸로부터 선택되고; R²는 수소이며; R³은 메틸, 디플루오로메틸 및 트리플루오로메틸로부터 선택되고; R⁴는 수소이며; R⁵는 수소, 클로로 및 플루오로로부터 선택되며; R⁶은 수소 및 플루오로로부터 선택된다.

실시형태 3: 하기로부터 선택되는 실시형태 1에 따른 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:

실시형태 4: 치료적 유효량의 실시형태 1 내지 3 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 및 1종 이상의 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는, 약제학적 조성물.

실시형태 5: 치료적 유효량의 실시형태 1 내지 4 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 및 1종 이상의 치료적 활성제를 포함하는, 약제학적 조합물.

실시형태 6: 실시형태 5에 따른 약제학적 조합물로서, 상기 1종 이상의 치료적 활성제는 항암제, 항알레르기제, 항구토제, 진통제, 면역조절제 및 세포보호제로부터 독립적으로 선택된, 약제학적 조합물.

실시형태 7: BRM-매개 및/또는 BRG1-매개 장애 또는 질환의 치료 방법으로서, 치료적 유효량의 실시형태 1 내지 27 중 어느 하나에 따른 화합물 또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염을 BRM-매개 및/또는 BRG1-매개 장애 또는 질환의 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.

실시형태 8: 실시형태 7에 따른 방법으로서, 상기 장애 또는 질환은 BRG1-결핍증 및/또는 BRM-결핍증을 특징으로 하는 악성종양인, 방법.

실시형태 9: 실시형태 7 또는 8에 따른 방법으로서, 상기 장애 또는 질환은 BRG1 돌연변이 및/또는 BRM 돌연변이를 특징으로 하는 악성종양인, 방법.

실시형태 10: 실시형태 7 내지 9 중 어느 하나에 있어서, 상기 장애 또는 질환은 고형 종양, 백혈병 또는 림프종인, 방법.

실시형태 11: 실시형태 7 내지 10 중 어느 하나에 있어서, 상기 장애 또는 질환은 비소세포 폐암종, 폐 선암종, 폐 암종, 거대 세포 폐 암종, 비소세포 폐암종, 폐 편평 세포 암종, 소세포 폐암, 피부 흑색종, 결합조직형성 흑색종, 포도막흑색종, 난소의 소세포 암종(고칼슘혈증 유형), 난소 간상 종양, 피부 편평 세포 암종, 신경교종, 자궁 암육종, 자궁 체부 내막 암종, 난소 장액낭선암종, 방광 요로 상피세포 암종, 원발성 중추 신경계 림프종, 식도 암종, 방광암, 방광암 형질세포양 변이, 위 선암종, 선낭암종, 림프양 신생물 미만성 거대 B-세포림프종, 췌장암, 직장결장 선암종, 담낭암, 육종, 두경부암, 자궁 및 자궁경관내 암, 수모세포종, 피부 T 세포 림프종, 간세포암종, 신장 유두상 세포 암종, 유방암, 맨틀 세포 림프종, 담낭암, 고환 생식 세포암, 신장 세포 투명 세포 암종, 전립선암, 소아 유잉 육종, 흉선종, 신장 혐색소세포, 신장 비-투명 세포 암종, 크롬친화세포종 및 부신경절종, 갑상선암, 악성 말초 신경초 종양, 신경내분비 전립선암, 두경부 편평세포 암종, 부신겉질샘암종, 자궁 및 자궁경관내 암, 피부 편평 세포 암종, 고환 생식 세포암, 교모세포종, 다형성 교모세포종, 유잉 육종, 투명 세포 신세포 암종, 신경모세포종, 미만성 거대 B 세포 림프종, 급성 골수성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종, 악성 간상 종양, 상피모양 육종, 가족성 신경초종증, 신장 수질 암종, 활막 육종, 및 수막종으로 이루어진 군으로부터 선택되는, 방법.

실시형태 12: 실시형태 7 내지 11 중 어느 하나에 있어서, 상기 장애 또는 질환은 비소세포 폐암종, 폐 선암종, 폐 암종, 거대 세포 폐 암종, 비소세포 폐암종, 폐 편평 세포 암종, 소세포 폐암, 피부 흑색종, 결합조직형성 흑색종 및 포도막흑색종으로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.

실시형태 13: 실시형태 7 또는 8에 있어서, 상기 장애 또는 질환은 BRG1-결핍증을 특징으로 하는 악성종양인, 방법.

실시형태 14: 실시형태 7, 8 또는 13 중 어느 하나에 있어서, 상기 장애 또는 질환은 BRG1 돌연변이를 특징으로 하는 악성종양인, 방법.

실시형태 15: 실시형태 7, 8, 13 및 14 중 어느 하나에 있어서, 상기 장애 또는 질환은 비소세포 폐암종, 폐 선암종, 폐 암종, 거대 세포 폐 암종, 비소세포 폐암종, 폐 편평 세포 암종, 소세포 폐암, 피부 흑색종, 결합조직형성 흑색종, 포도막흑색종, 난소의 소세포 암종, 피부 편평 세포 암종, 신경교종, 자궁 암육종, 자궁 체부 내막 암종, 난소 장액낭선암종, 방광 요로 상피세포 암종, 원발성 중추 신경계 림프종, 식도 암종, 방광암, 방광암 형질세포양 변이, 위 선암종, 선낭암종, 림프양 신생물 미만성 거대 B-세포림프종, 췌장암, 직장결장 선암종, 담낭암, 육종, 두경부암, 자궁 및 자궁경관내 암, 수모세포종, 피부 T 세포 림프종, 간세포암종, 신장 유두상 세포 암종, 유방암, 맨틀 세포 림프종, 담낭암, 고환 생식 세포암, 신장 세포 투명 세포 암종, 전립선암, 소아 유잉 육종, 흉선종, 신장 혐색소세포, 신장 비-투명 세포 암종, 크롬친화세포종 및 부신경절종 및 갑상선암으로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.

실시형태 16: 실시형태 7, 8 및 13 내지 15 중 어느 하나에 있어서, 상기 장애 또는 질환은 비소세포 폐암종, 폐 선암종, 폐 암종, 거대 세포 폐 암종, 비소세포 폐암종, 폐 편평 세포 암종, 소세포 폐암, 피부 흑색종, 결합조직형성 흑색종 및 포도막흑색종으로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.

실시형태 17: 실시형태 7 또는 8에 있어서, 상기 장애 또는 질환은 BRM-결핍증을 특징으로 하는 악성종양인, 방법.

실시형태 18: 실시형태 7, 8 및 17 중 어느 하나에 있어서, 상기 장애 또는 질환은 BRM 돌연변이를 특징으로 하는 악성종양인, 방법.

실시형태 19: 실시형태 7, 8 및 17, 18 중 어느 하나에 있어서, 상기 장애 또는 질환은 악성 말초 신경초 종양, 신경내분비 전립선암, 유방암, 방광 요로 상피세포 암종, 선낭암종, 위 선암종, 유방 암종, 난소 장액낭선암종, 자궁 암육종, 식도 암종, 두경부 편평세포 암종, 비소세포 폐암종, 폐 선암종, 폐 편평 세포 암종, 소세포 폐암, 췌장암, 부신겉질샘암종, 피부 흑색종, 육종, 직장결장 선암종, 자궁 및 자궁경관내 암, 간세포암종, 피부 편평 세포 암종, 고환 생식 세포암, 교모세포종, 다형성 교모세포종, 담낭암, 유잉 육종, 투명 세포 신세포 암종, 신경모세포종, 급성 골수성 백혈병 및 미만성 거대 B-세포림프종으로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.

실시형태 20: 실시형태 7, 8 및 17 내지 19 중 어느 하나에 있어서, 상기 장애 또는 질환은 비소세포 폐암종, 폐 선암종, 폐 암종, 거대 세포 폐 암종, 비소세포 폐암종, 폐 편평 세포 암종, 소세포 폐암, 피부 흑색종, 결합조직형성 흑색종 및 포도막흑색종으로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.

실시형태 21: 실시형태 7에 있어서, 상기 장애 또는 질환은 BRM 또는 BRG1 이외의 SWI/SNF 서브유닛에서의 돌연변이를 특징으로 하는 악성종양인, 방법.

실시형태 22: 실시형태 7 또는 21에 있어서, 상기 장애 또는 질환은 고형 종양, 백혈병 또는 림프종인, 방법.

실시형태 23: 실시형태 7, 21 및 22 중 어느 하나에 있어서, 상기 장애 또는 질환은 악성 간상 종양(SNF5/SMARCB1의 결핍을 특징으로 함), 상피모양 육종, 가족성 신경초종증, 신장 수질 암종, 유잉 육종, 활막 육종, 자궁 체부 내막 암종, 위 선암종, 방광 요로 상피세포 암종, 방광암, 선낭암종, 담낭암, 결합조직형성 흑색종, 피부 편평 세포 암종, 췌장암, 간세포암종, 흑색종, 미만성 거대 B-세포림프종, 유방암, 결장직장암, 난소 투명 세포 암종, 신경모세포종, 식도 암종, 폐암, 신장 투명 세포 암종, 중피종, 유방의 선낭암종, 선낭암종, 갑상선암, 수막종, 포도막흑색종 및 급성 골수성 백혈병으로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.

실시형태 24: 실시형태 7, 21, 22 및 23 중 어느 하나에 있어서, 상기 장애 또는 질환은 악성 간상 종양, 유방암, 췌장암, 난소암, 난소 투명 세포 암종, 방광암, 신장 투명 세포 암종, 결장직장암, 위암, 간암, 흑색종, 신경교종, 급성 골수성 백혈병 및 폐암으로 이루어진 군으로부터 선택된, 방법.

실시형태 25: 의약으로서 사용하기 위한, 실시형태 1 내지 3 중 어느 하나에 따른 화합물, 또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염.

본 발명의 다른 특징은 예시적인 실시형태에 대한 위의 설명 과정에서 명백해질 것이며, 이러한 실시형태는 본 발명의 예시를 위하여 제공된 것으로, 이를 제한하고자 하는 것이 아니다.

정의

본 명세서를 해석할 목적으로, 하기 정의가 적용될 것이며, 적절한 경우 단수로 사용된 용어는 또한 복수형을 포함할 것이다. 본 명세서에 사용된 용어는 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한 하기와 같은 의미를 갖는다.

본 명세서에 기재된 모든 방법은 본 명세서에 달리 명시되지 않는 한 또는 맥락에 의해 달리 명백히 모순되지 않는 한 임의의 적합한 순서로 수행될 수 있다. 본 명세서에 제공된 모든 예, 또는 예시적인 언어(예컨대, "~와 같은")의 사용은 단지 본 발명을 더 잘 설명하고자 한 것으로, 달리 청구된 본 발명의 범위를 제한하지 않는다.

본 발명의 맥락에서 (특히, 청구범위의 맥락에서) 사용되는 단수형 용어 및 유사한 용어는 본 명세서에서 달리 지시되지 않는 한, 또는 맥락에 의해 명백하게 모순되지 않는 한, 단수형과 복수형 둘 다를 포함하는 것으로 해석되어야 한다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같은 "알킬"이라는 용어는 일반식 C_nH_2n+1의 탄화수소 라디칼을 지칭한다. 알칸 라디칼은 직쇄 또는 분지쇄일 수 있다. 예를 들어, "C₁-C₆ 알킬" 또는 "C₁ 내지 C₆ 알킬"은 1 내지 6 개의 탄소 원자를 함유하는 1가, 직쇄 또는 분지쇄 지방족기(예컨대, 메틸, 에틸, n-프로필, i-프로필, n-부틸, i-부틸, s-부틸, t-부틸, n-펜틸, 1-메틸부틸, 2-메틸부틸, 3-메틸부틸, 네오펜틸, 3,3-디메틸프로필, 헥실l, 2-메틸펜틸 등)를 지칭한다. 알킬이 하나 이상의 치환체로 치환될 때, 치환체는 알킬의 임의의 탄소 원자 상에서 치환될 수 있다.

"할로겐" 또는 "할로"는 불소, 염소, 브롬 또는 요오드(치환체로서 바람직한 할로겐은 불소 및 염소임)일 수 있다.

"할로알킬"은 하나 이상의 할로겐으로 치환된, 특정된 수의 탄소 원자를 갖는 분지쇄 및 직쇄 포화 지방족 탄화수소기 양쪽 모두를 포함하는 것으로 의도된다. 따라서, "C₁-C₆ 할로알킬" 또는 "C₁ 내지 C₆ 할로알킬"은 플루오로메틸, 디플루오로메틸, 트리플루오로메틸, 트리클로로메틸, 펜타플루오로에틸, 펜타클로로에틸, 2,2,2-트리플루오로에틸, 헵타플루오로프로필, 및 헵타클로로프로필을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 것으로 의도된다.

본 명세서에 언급되는 바와 같은 용어 "치환된"은 적어도 하나의 수소 원자가 비수소 기로 대체되며, 단, 정상 원자가는 유지되고 치환은 안정한 화합물로 이어짐을 의미한다. 치환체가 케토(즉, =O)인 경우, 원자상의 2개의 수소는 대체된다. 케토 치환체는 방향족 모이어티 상에 존재하지 않는다.

"약제학적으로 허용 가능한"이라는 어구는 물질 또는 조성물이 제형을 포함하는 다른 성분 및/또는 이것으로 치료 중인 포유류와 화학적으로 및/또는 독성학적으로 적합하여야 한다는 것을 나타낸다.

달리 명시되지 않는 한, "본 발명의 화합물은"이라는 용어는, 화학식 (I)의 화합물뿐만 아니라, (부분입체 이성질체, 거울상이성질체 및 라세미체를 포함하는) 입체이성질체, 기하 이성질체, (회전이성질체 및 회전장애 이성질체를 포함하는) 형태 이성질체, 호변 이성질체, (중수소 치환을 포함하는) 동위원소 표지된 화합물 및 본질적으로 형성된 잔기(예컨대, 다형체, 용매화물 및/또는 수화물)와 같은 이성질체를 지칭한다. 염을 형성할 수 있는 모이어티가 존재할 때, 염, 특히 약제학적으로 허용 가능한 염이 또한 포함된다.

공정 조건에 따라 본 발명의 최종 생성물은 유리(중성) 또는 염 형태로 수득된다. 이들 최종 생성물의 유리 형태와 염 둘 다는 본 발명의 범위 내에 있다. 원하는 경우, 화합물의 한 형태는 또 다른 형태로 전환될 수 있다. 유리 염기 또는 산은 염으로 전환될 수 있으며; 염은 유리 화합물 또는 또 다른 염으로 전환될 수 있고; 본 발명의 이성질체 화합물의 혼합물은 개별적인 이성질체로 분리될 수 있다.

약제학적으로 허용 가능한 염이 바람직하다. 그러나, 다른 염이 예컨대, 제조시 이용될 수 있는 단리 또는 정제 단계에서 유용할 수 있어서, 본 발명의 범위 내에서 고려된다.

본 명세서에서 사용된, "약제학적으로 허용 가능한 염"은 모 화합물이 그의 산 또는 염기 염을 제조함으로써 변형되는, 개시된 화합물의 유도체를 지칭한다. 예를 들어, 약제학적으로 허용 가능한 염은 아세트산염, 아스코르브산염, 아디프산염, 아스파르트산염, 벤조산염, 베실산염, 브롬화물/히드로브롬화물, 중탄산염/탄산염, 중황산염/황산염, 캄포르설폰산염, 카프르산염, 염화물/히드로염화물, 클로르테오필로네이트(chlortheophyllonate), 시트르산염, 에탄디설폰산염, 푸마르산염, 글루셉트산염, 글루콘산염, 글루쿠론산염, 글루탐산염, 글루타르산염, 글리콜산염, 마뇨산염, 히드로요오드화물/요오드화물, 이세티오산염, 젖산염, 락토비온산염, 라우릴황산염, 말산염, 말레산염, 말론산염/히드록시말론산염, 만델산염, 메실산염, 메틸황산염, 뮤케이트(mucate), 나프토에이트(naphthoate), 냅실산염, 니코틴산염, 질산염, 옥타데칸산염, 올레산염, 옥살산염, 팔미트산염, 파모산염, 페닐아세트산염, 인산염/인산수소/인산이수소, 폴리갈락투론산염, 프로피온산염, 살리실산염, 스테아르산염, 숙신산염, 술팜산염, 설포살리실산염, 타르타르산염, 토실산염, 트리플루오로아세테이트 또는 크시나포에이트 염 형태를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

약제학적으로 허용 가능한 산 부가염은 무기산 및 유기산으로 형성될 수 있다. 염이 유도될 수 있는 무기산은, 예를 들어, 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산 등을 포함한다. 염이 유도될 수 있는 유기 산은, 예를 들어, 아세트산, 프로피온산, 글리콜산, 옥살산, 말레산, 말론산, 숙신산, 푸마르산, 타르타르산, 시트르산, 벤조산, 만델산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 톨루엔설폰산, 설포살리실산 등을 포함한다.

약제학적으로 허용 가능한 염기 부가 염은 무기 염기 및 유기 염기로 형성될 수 있다. 염이 유도될 수 있는 무기 염기는 예를 들어, 암모늄염 및 주기율표의 I 내지 XII족으로부터의 금속을 포함한다. 소정 실시형태에서, 염은 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 마그네슘, 철, 은, 아연, 및 구리로부터 유도되고; 특히 적합한 염은 암모늄, 칼륨, 나트륨, 칼슘 및 마그네슘염을 포함한다. 염이 유도될 수 있는 유기 염기는, 예를 들어 1차, 2차, 및 3차 아민, 자연적으로 발생하는 치환된 아민을 포함하는 치환된 아민, 환식 아민, 염기성 이온 교환 수지 등을 포함한다. 소정 유기 아민은 이소프로필아민, 벤자틴, 콜리네이트, 디에탄올아민, 디에틸아민, 리신, 메글루민, 피페라진 및 트로메타민을 포함한다.

본 발명의 약제학적으로 허용 가능한 염은 통상적인 화학적 방법에 의해 염기성 또는 산성 잔기를 함유하는 모 화합물로부터 합성될 수 있다. 일반적으로, 이러한 염은 이들 화합물의 유리 산 또는 염기 형태를 물 또는 유기 용매 또는 이 둘의 혼합물 중에서 화학량론적인 양의 적절한 염기 또는 산과 반응시킴으로써 제조될 수 있으며; 일반적으로는, 에테르, 에틸 아세테이트, 에탄올, 이소프로판올, 또는 아세토니트릴 같은 비수성 매질이 바람직하다. 적합한 염의 목록은 문헌[Allen, L.V., Jr., ed., Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 22nd Edition, Pharmaceutical Press, London, UK (2012)]에서 찾아볼 수 있으며, 이의 개시내용은 본 명세서에 참고로 포함된다.

수소 결합을 위한 공여자 및/또는 수용자로서 작용할 수 있는 기를 함유하는 본 발명의 화합물은 적합한 공결정 형성제를 사용하여 공결정을 형성할 수 있다. 이들 공결정은 본 발명의 화합물로부터, 공지된 공결정 형성 절차에 의해 제조될 수 있다. 그러한 절차는 결정화 조건 하에서의 분쇄, 가열, 공-승화, 공-용융, 또는 용액에서 본 발명의 화합물과 공-결정 형성제와의 접촉 및 그에 의해 형성된 공-결정의 단리를 포함한다. 적합한 공-결정 형성제는 WO 2004/078163에 기재된 것들을 포함한다. 따라서, 본 발명은 또한 본 발명의 화합물을 포함하는 공-결정을 제공한다.

본 명세서에 주어진 임의의 화학식은 또한 화합물의 비표지된 형태와, 동위원소 표지된 형태를 나타내도록 의도된다. 동위원소 표지된 화합물은, 하나 이상의 원자가 선택된 원자 질량 또는 질량수를 갖는 원자로 대체된 것을 제외하고는 본 명세서에 주어진 화학식에 의해 묘사된 구조를 갖는다. 본 발명의 화합물 내로 혼입될 수 있는 동위원소의 예는 수소, 탄소, 질소, 산소, 인, 불소, 염소, 및 요오드의 동위원소, 예컨대, 각각 ²H, ³H, ¹¹C, ¹³C, ¹⁴C, ¹⁵N, ¹⁸F ³¹P, ³²P, ³⁵S, ³⁶Cl, ¹²³I, ¹²⁴I, ¹²⁵I를 포함한다. 본 발명은 본 명세서에 정의된 바와 같은 다양한 동위원소 표지된 화합물, 예를 들어 그 내부에 방사성 동위원소, 예컨대 ³H 및 ¹⁴C가 존재하는 화합물 또는 그 내부에 비방사성 동위원소, 예컨대 ²H 및 ¹³C가 존재하는 화합물을 포함한다. 이러한 동위원소 표지된 화합물은 약물 또는 기질 조직 분포 분석을 비롯하여, 대사 연구(¹⁴C 사용), 반응 동역학 연구(예를 들어, ²H 또는 ³H 사용), 검출 또는 영상화 기술, 예를 들어 양전자 방출 단층촬영(PET) 또는 단일-광자 방출 컴퓨터 단층촬영(SPECT)에, 또는 환자의 방사선 치료에 유용하다. 특히, ¹⁸F 또는 표지 화합물은 PET 또는 SPECT 연구에 특히 바람직할 수 있다.

나아가, 보다 무거운 동위원소, 특히 중수소(즉, ²H 또는 D)로의 치환은 더 큰 대사 안정성, 예를 들어 체내 반감기 증가 또는 투약량 요건의 감소 또는 치료 지수의 향상으로 인한 특정한 치료 이점을 제공할 수 있다. 이 맥락에서 중수소는 본 발명의 화합물의 치환기로 간주된다고 이해된다. 이러한 보다 무거운 동위원소, 특히 중수소의 농축은 동위원소 농축 인자에 의해 정의될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같이 용어 "동위원소 농축 계수"(isotopic enrichment factor)는 동위원소 존재비와 명시된 동위원소의 자연 존재비 사이의 비를 의미한다. 본 발명의 화합물의 치환체가 중수소로 표시되는 경우, 이러한 화합물은 각각의 지정된 중수소 원자에 대하여 적어도 3500(각각의 지정된 중수소 원자에서 52.5%의 중수소 혼입률), 적어도 4000(60%의 중수소 혼입률), 적어도 4500(67.5%의 중수소 혼입률), 적어도 5000(75%의 중수소 혼입률), 적어도 5500(82.5%의 중수소 혼입률), 적어도 6000(90%의 중수소 혼입률), 적어도 6333.3(95%의 중수소 혼입률), 적어도 6466.7(97%의 중수소 혼입률), 적어도 6600(99%의 중수소 혼입률), 또는 적어도 6633.3(99.5%의 중수소 혼입률)의 동위원소 농축 계수를 갖는다.

예를 들어, 본 발명의 중수소화된 화합물은 하기와 같을 수 있다:

본 발명의 동위원소 표지된 화합물은 일반적으로, 다른 상황에서 이용되는 비-동위원소 표지된 시약을 적절하거나 용이하게 이용 가능한 동위원소 표지된 시약으로 치환함으로써, 당업자에게 공지된 통상적인 기법 또는 아래에 기재된 반응식 또는 실시예 및 제조에 개시된 공정(또는 본 명세서에 개시된 공정과 유사한 공정)에 의해 제조될 수 있다. 이러한 화합물은 예컨대, 생체 내 또는 시험관 내에서 생물학적 수용체에 결합된 본 발명의 화합물을 영상화하기 위한, 또는 잠재적인 약제학적 화합물이 표적 단백질 또는 수용체에 결합하는 능력을 결정하는데 있어 표준물 및 시약으로서 다양한 잠재적인 용도를 갖는다.

"용매화물"이라는 용어는 유기 또는 무기의 하나 이상의 용매 분자와 본 발명의 화합물의 물리적 회합을 의미한다. 이러한 물리적 회합은 수소 결합을 포함한다. 특정한 경우, 예를 들어, 하나 이상의 용매 분자가 결정질 고체의 결정 격자에 혼입되는 경우, 용매화물은 단리 가능하게 된다. 용매화물 중의 용매 분자는 규칙적 배열 및/또는 비-정렬된 배열로 존재할 수 있다. 용매화물은 화학량론적 또는 비화학량론적 양의 용매 분자를 포함할 수 있다. "용매화물"은 용액상 및 단리 가능한 용매화물을 모두 포함한다. 예시적인 용매화물은 수화물, 에탄올레이트, 메탄올레이트 및 이소프로판올레이트를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 용매화의 방법은 일반적으로 당업계에 공지되어 있다.

본 명세서에 사용된 "다형체"는 동일한 화학 구조/조성을 갖지만 결정을 형성하는 분자 및/또는 이온의 공간 배열이 상이한 결정질 형태(들)를 지칭한다. 본 발명의 화합물은 무정형 고체 또는 결정성 고체로서 제공될 수 있다. 고체로서 본 발명의 화합물을 제공하기 위해 동결 건조를 사용할 수 있다.

"BRM" 및 "BRG1"은 각각 SMARCA2 및 SMARCA4로도 알려진 SWI/SNF 복합체에서의 ATP분해효소 서브유닛의 2개의 파라로그를 지칭한다. 달리 구체적으로 언급되지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 BRM은 인간 BRM(Entrez Gene 6595)을 지칭하며, 이의 단백질 서열은 스위스-프롯(Swiss-Prot) 수탁 번호 P51531.2를 갖고; 본 명세서에 사용되는 바와 같은 BRG1은 인간 BRG1(Entrez Gene 6597)를 지칭하며, 이의 단백질 서열은 스위스-프롯: 수탁 번호 P51532.2를 가진다. BRM, BRG1 및 SWI/SNF 복합체는 문헌[Wilson, BG, et al. Nat Rev Cancer. 2011 Jun 9;11(7):481-92]에서 이러한 검토가 상세하게 기재된다. BRG1(SMARCA4) 게놈 서열은 NCBI 기준 서열: NG_011556.1을 갖고; 이의 mRNA는 NCBI 참조 번호 NM_001128844.1, NM_001128849.1, NM_001128845.1, NM_001128846.1, NM_001128847.1, NM_001128848.1 및 NM_003072.3을 포함하는 다양한 스플라이스 형태(즉, 전사체 변이체)로부터 생긴다. BRM(SMARCA2) 게놈 서열은 NCBI 기준 서열: NC_000009.11을 갖고, 이의 mRNA는 NCBI 참조 번호 NM_003070.3 및 NM_139045.2를 포함하는 2개의 스플라이스 형태(즉, 전사체 변이체)로부터 생성된다.

용어 "BRM 매개된 장애 또는 질환"은 BRM에 의해 직접적으로 또는 간접적으로 조절되는 임의의 장애 또는 질환을 지칭한다. 용어 "BRG1 매개된 장애 또는 질환"은 BRG1에 의해 직접적으로 또는 간접적으로 조절되는 임의의 장애 또는 질환을 지칭한다. BRM 매개 또는 BRG1 매개된 장애 또는 질환은 BRG1 결핍증 및/또는 BRM 결핍증을 특징으로 할 수 있다. BRM 매개 또는 BRG1 매개 장애 또는 질환은 BRM/SMARCA2 또는 BRG1/SMARCA4 이외의 SWI/SNF 서브유닛에서의 돌연변이, 예를 들어, ARID1A, ARID1B, ARID2, PBRM1, SMARCB1/SNF5, SMARCE1, SMARCC1, SMARCC2, PHF10, DPF1, DPF3, DPF2, ACTL6A, ACTL6B, SMARCD2, SMARCD3, SMARCD1, BCL11A, BCL11B, BCL7A, BCL7B, BCL7C, BRD9, BRD7, SS18 및 ACTB에서의 돌연변이를 특징으로 할 수 있다. BRM 매개된 또는 BRG1 매개된 장애 또는 질환은 상기 기재한 바와 같은 BRM, BRG1 또는 기타 SWI/SNF 서브유닛에 대한 의존을 특징으로 하며, 상기 의존은 BRM, BRG1 또는 기타 SWI/SNF 서브유닛의 돌연변이와 관련되지 않는다.

용어 "BRG1 결핍" 및 "BRG1 결핍증"은 BRG1 유전자의 돌연변이 또는 결실을 갖거나, 대조군, 예를 들어, 기준 또는 정상 또는 비암성 세포에 비해 BRG1의 생성, 발현, 수준, 안정성 및/또는 활성의 유의한 감소를 갖는 세포(암세포, 세포주, 조직, 조직 유형, 종양 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않음)를 지칭한다. 감소는 적어도 약 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%일 수 있다. 일부 실시형태에서, 감소는 적어도 20%이다. 일부 실시형태에서, 감소는 적어도 50%이다. BRG1 유전자에서의 돌연변이는 기능상실을 야기하며, 이때 돌연변이는 프레임시프트 또는 미스센스 돌연변이를 초래하는 넌센스, 삽입/결실인 유형일 수 있다. BRG1 결핍 세포는 BRG1 유전자가 돌연변이되거나 결실된 유전자가 돌연변이 또는 결실된 것을 포함한다.

용어 "BRM-결핍" 및 "BRM-결핍증"은 BRM 유전자의 기능 상실("LOF") 돌연변이 또는 결실을 갖거나, 또는 대조군, 예를 들어, 기준 또는 정상 또는 비암성 세포에 비해 BRM의 생성, 발현, 수준, 안정성 및/또는 활성의 유의한 감소를 갖는 세포(암세포, 세포주, 조직, 조직 유형, 종양 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않음)를 지칭한다. 감소는 적어도 약 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80% 또는 90%일 수 있다. 일부 실시형태에서, 감소는 적어도 20%이다. 일부 실시형태에서, 감소는 적어도 50%이다. BRM 결핍 세포는 BRM 유전자가 돌연변이되거나 결실된 유전자가 돌연변이 또는 결실된 것을 포함한다.

"BRG1 결핍증 관련 장애 또는 질환" 또는 "BRG1 결핍증을 특징으로 하는 장애 또는 질환"이라는 용어는 세포가 BRG1 결핍인 장애 또는 질환을 지칭한다. 예를 들어, BRG1 결핍증 관련 장애 또는 질환에서, 하나 이상의 질환 세포는 BRG1 유전자의 돌연변이 또는 결실을 가질 수 있거나, BRG1의 생성, 발현, 수준, 안정성 및/또는 활성의 유의한 감소를 가질 수 있다. BRG1 결핍증 관련 장애 또는 질환을 앓고 있는 환자에서, 일부 질환 세포(예를 들어, 암세포)는 BRG1 결핍일 수 있는 반면, 다른 세포는 그렇지 않을 수 있다.

"BRM 결핍증 관련 장애 또는 질환" 또는 "BRM 결핍증을 특징으로 하는 장애 또는 질환"이라는 용어는 세포가 BRM 결핍인 장애 또는 질환을 지칭한다. 예를 들어, BRM 결핍증 관련 장애 또는 질환에서, 하나 이상의 질환 세포는 BRM 유전자의 돌연변이 또는 결실을 가질 수 있거나, BRM의 생성, 발현, 수준, 안정성 및/또는 활성의 유의한 감소를 가질 수 있다. BRM 결핍증 관련 장애 또는 질환을 앓고 있는 환자에서, 일부 질환 세포(예를 들어, 암세포)는 BRM 결핍일 수 있는 반면, 다른 세포는 그렇지 않을 수 있다.

암으로도 불리는 "악성종양"이라는 용어는 비정상 세포가 대조군 없이 분할되고 근처의 조직으로 침윤할 수 있는 질환을 지칭한다. 악성종양 세포는 혈액 및 림프계를 통해 신체의 다른 부분으로 확산될 수 있다. 몇몇 주요 유형의 악성종양이 있다. 암종은 내부 기관을 받치거나 뒤덮는 피부에서 또는 조직에서 시작하는 악성종양이다. 육종은 뼈, 연골, 지방, 근육, 혈관 또는 다른 결합 또는 지지조직에서 시작하는 악성종양이다. 백혈병은 혈액-형성 조직, 예컨대 골수에서 시작하고, 매우 다수의 비정상 혈액 세포가 생성되고 혈액에 유입되는, 악성종양이다. 림프종 및 다발성 골수종은 면역계 세포에서 시작하는 악성종양이다. 중추 신경계 암은 뇌 및 척수 조직에서 시작하는 악성종양이다.

용어 "고형 종양"은 보통 낭종 또는 액체 영역을 함유하지 않는 조직의 비정상적 덩어리로 형성된 악성종양/암에 관한 것이다. 고형 종양은 기원의 조직/세포에 따라 명명/분류된다. 예는 육종 및 암종을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

"백혈병"이라는 용어는 혈액-형성 조직, 예컨대 골수에서 시작하는 혈액학적 또는 혈액 세포 악성종양/암을 지칭한다. 예는 급성 골수성 백혈병(AML), 만성 골수성 백혈병(CML), 급성 림프구성 백혈병(ALL) 및 만성 림프구성 백혈병(CLL)을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

용어 "림프종"은 면역계의 세포에서 시작하는 림프 세포 악성종양/암을 지칭한다. 예는 비호지킨 림프종 및 다발성 골수종을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

본 명세서에 사용된 바와 같은 "환자"라는 용어는 모든 포유류 종을 포괄한다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "대상체"는 동물을 지칭한다. 전형적으로 동물은 포유류이다. 대상체는 또한, 예를 들어, 영장류(예를 들어, 인간), 소, 양, 염소, 말, 개, 고양이, 토끼, 랫트, 마우스, 어류, 조류 등을 지칭한다. 소정 실시형태에서, 대상체는 영장류이다. 또 다른 실시형태에서, 대상체는 인간이다. 예시적인 대상체는 암 질환에 대한 위험 인자를 갖는 임의의 연령의 인간을 포함한다.

본 설명에 사용되는 대상체는 이러한 대상체가 이러한 치료로부터 생물학적으로, 의학적으로 또는 삶의 질 면에서 유익을 얻을 경우에 이러한 치료를 "필요로 한다"(바람직하게는, 인간).

본 설명에 사용되는 용어 "저해하다", "저해" 또는 "저해하는"은 주어진 병태, 증상, 또는 장애, 또는 질환의 감소 또는 억제, 또는 생물학적 활성 또는 과정의 기저 활성의 유의미한 감소를 지칭한다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같은, 임의의 질환/장애와 관련하여 "치료하다", "치료하는" 또는 "치료"라는 용어는 포유류에서, 특히 인간에서의 질환/장애의 치료를 지칭하며, 다음을 포함한다: (a) 질병/장애의 개선(즉, 질병/장애, 또는 이의 임상 증상 중 적어도 1종의 발달의 둔화 또는 정지 또는 감소); (b) 질병/장애의 경감 또는 조정(즉, 물리적으로(예컨대, 식별 가능한 증상의 안정화), 생리학적으로(예컨대, 물리적 파라미터의 안정화) 또는 둘 다에 있어서 질병/장애의 퇴행 유발); (c) 대상체가 식별하지 못할 수도 있는 것들을 포함한, 적어도 1종의 물리적 파라미터의 경감 또는 개선; 및/또는 (d) 특히, 포유류이 질병 또는 장애에 취약하나 아직 이를 앓고 있다고 진단되지 않은 경우, 이러한 포유류에서 발생하는 질병 또는 장애의 발병 또는 발달 또는 진행의 방지 또는 지연.

본 발명의 화합물의 "치료적 유효량"이라는 용어는 대상체의 생물학적 또는 의학적 반응, 예를 들어, 효소 또는 단백질 활성의 감소 또는 저해를 일으키거나, 증상을 개선, 병태의 완화, 질병 진행을 지연 또는 연기하거나 질병을 예방하는 등의 본 발명의 화합물의 양을 지칭한다. 하나의 비제한적 실시형태에서, "치료적 유효량"은 대상체에게 투여될 때, (1) BRM 및/또는 BRG1에 의해 매개되는 병태 또는 장애 또는 질환을 적어도 부분적으로 완화하고/하거나, 저해하고/하거나 예방하고/하거나 개선하거나; 또는 (2) BRM 및/또는 BRG1의 활성을 감소시키거나 저해하는 데 효과적인 본 발명의 화합물의 양을 지칭한다.

또 다른 비-제한적인 구현예에서, 용어 "치료적 유효량"은 세포, 또는 조직, 또는 비-세포 생물학적 물질 또는 배지에 투여될 때, BRM 및/또는 BRG1의 활성을 적어도 부분적으로 감소시키거나 저해하거나; BRM 및/또는 BRG1 수용체의 발현을 적어도 부분적으로 감소시키거나 저해하는데 효과적인 본 발명의 화합물의 양을 지칭한다.

유효량은 대상체의 크기 및 체중, 질병의 유형 또는 본 발명의 특정 화합물과 같은 요인에 따라 달라질 수 있다. 당업자는 본 명세서에 내포된 요인들을 연구하고, 과도한 실험 없이 본 발명의 화합물의 유효량에 대해 결정할 수 있을 것이다.

투여 요법은 유효량을 구성하는 것에 영향을 줄 수 있다. 본 발명의 화합물은 BRM 및/또는 BRG1 매개 병태의 발병 전후에 대상체에게 투여될 수 있다. 또한, 다수의 분할 투약량 및 시간차 투약량은 매일 또는 순차적으로 투여될 수 있으며, 용량은 지속적으로 주입될 수 있거나 또는 볼루스 주입일 수 있다. 또한, 치료적 또는 예방적 상황의 위급성에 의해 나타낸 바와 같이, 본 발명의 화합물(들)의 투약량은 비례적으로 증가 또는 감소될 수 있다.

화합물의 제조

본 발명의 화합물은 본 명세서에 제공된 방법, 반응식 및 실시예의 관점에서, 유기 합성 분야의 당업자에게 공지된 다수의 방법으로 제조될 수 있다. 당업자가 이해할 수 있는 바와 같이, 본 발명의 화합물은 합성 유기 화학 업계에 공지된 합성 방법과 함께, 또는 그 변형에 의해, 후술하는 방법을 이용하여 합성될 수 있다. 바람직한 방법은 아래에 기재된 것을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 반응은 사용된 시약 및 재료에 적절하고 수행중인 변환에 적합한 용매 또는 용매 혼합물 중에서 수행된다. 유기 화학 분야의 당업자는 분자 상에 존재하는 작용체가 제안된 변환과 일치해야 함을 이해할 것이다. 이것은 때때로, 본 발명의 원하는 화합물을 수득하기 위하여 하나의 특정 공정 반응식을 또 다른 것에 대신하여 선택하거나 합성 단계들의 순서를 변경하기 위한 판단을 요구할 것이다.

출발 물질은 시그마 알드리치 또는 다른 상업 벤더와 같은 상업적 공급원으로부터 일반적으로 사용할 수 있으며, 또는 본 발명에 기재된 바와 같이 제조하거나, 당업자에게 주지된 방법을 사용하여 용이하게 제조된다(예컨대, 부록(Beilstein 온라인 데이터베이스를 통해 또한 이용 가능함)을 포함하는 문헌[Louis F. Fieser and Mary Fieser, Reagents for Organic Synthesis, v. 1-19, Wiley, New York (1967-1999 ed.)], 문헌[Larock, R.C., Comprehensive Organic Transformations, 2^nd-ed., Wiley-VCH Weinheim, Germany (1999)], 또는 문헌[Beilsteins Handbuch der organischen Chemie, 4, Aufl. ed. Springer-Verlag, Berlin]에 일반적으로 기재된 방법에 의해 제조된다).

예시의 목적을 위해, 하기 도시하는 반응식은 본 발명의 화합물뿐만 아니라 주요 중간체를 합성하기 위한 잠재적 경로를 제공한다. 개별 반응 단계에 대한 더 상세한 설명에 대해서는, 하기 실시예 부문을 참조한다. 당업자라면 다른 합성 경로를 사용하여 본 발명의 화합물을 합성할 수 있음을 알 것이다. 특정 출발 물질 및 시약이 반응식에 도시되어 있고 하기에서 논의되지만, 다양한 유도체 및/또는 반응 조건을 제공하기 위해 다른 출발 물질 및 시약으로 용이하게 대체될 수 있다. 또한, 하기 기재된 방법에 의해 제조된 다수의 화합물은 당업자에게 잘 알려진 통상적인 화학을 사용하여 본 발명에 비추어 추가로 변형될 수 있다.

본 발명의 화합물의 제조에서, 중간체의 멀리 있는 작용기의 보호가 필요할 수 있다. 이러한 보호에 대한 필요는 멀리 있는 작용기의 성질 및 제조 방법의 조건에 따라 변할 것이다. 이러한 보호에 대한 필요는 당업자에 의해 용이하게 결정된다. 보호기 및 이들의 사용에 대한 전반적인 설명은, 문헌[Greene, T.W. et al., Protecting Groups in Organic Synthesis, 4th Ed., Wiley (2007)]을 참조한다. 트리틸 보호기와 같이, 본 발명의 화합물의 제조에 포함된 보호기는 하나의 위치 이성질체로서 도시될 수 있지만, 또한 위치 이성질체의 혼합물로서 존재할 수 있다.

본 명세서에서 아래에 사용되는 다음 약어는 대응하는 의미를 갖는다:

(app) 겉보기; (br) 브로드; (BSA) 소 혈청 알부민; (d) 이중선; (dd) 이중선의 이중선; (DCM) 디클로로메탄; (DIPEA) 디이소프로필에틸아민; (DMF) N,N-디메틸포름아미드; (DMSO) 디메틸설폭시드; (ESI) 전기분무 이온화; (Et) 에틸; (EtOAc) 에틸 아세테이트; (h) 시간(들); (HPLC) 고압 액체 크로마토그래피; (LAH) 수소화알루미늄리튬; (LCMS) 액체 크로마토그래피 및 질량분석법; (LHMDS) 리튬 헥사메틸디실라지드; (MTBE) 메틸 tert-부틸 에테르; (MeCN) 아세토니트릴; (MeOH) 메탄올; (MHz) 메가 헤르츠; (MS) 질량분석법; (m) 다중선; (mg) 밀리그램; (min) 분; (㎖) 밀리리터; (m㏖) 밀리몰; (m/z) 질량 대 전하비; (NMR) 핵 자기 공명; (Ph) 페닐; (ppm) 백만분율; (q) 사중선; (Rt) 체류 시간; (RT) 실온; (s) 단일선; (t) 삼중선; (TBDMS) t-부틸디메틸실릴; (tert) 3차; (TFA) 트리플루오로아세트산; (THF) 테트라히드로푸란; (TMAF) 테트라메틸 암모늄 플루오라이드: (TMS) 트리메틸실릴.

실시예의 특성규명에 사용되는 LC/MS 방법

LC/MS 데이터를 Waters Micromass ZQ가 있거나, 또는 Waters SQ 검출기 또는 Waters 25 ACQUITY Qda 검출기를 구비한 Waters ACQUITY UPLC가 있는 Agilent 1100 HPLC 시스템을 사용하여 기록하였다. 모든 LCMS 데이터를 획득하기 위해 사용한 방법을 이하에 기재한다.

LCMS 방법 1

컬럼 Sunfire C18 3.0×30 ㎜, 3.5 ㎛

칼럼 온도 40℃

용리액 A: H₂O 함유 0.05% TFA, B: MeCN

유속 2.0 ㎖/분

구배 1.7분에 5% 내지 95% B, 0.3분 95% B

LCMS 방법 2

컬럼 XBridge C18 3.0×30 ㎜, 3.5 ㎛

칼럼 온도 40℃

용리액 A: H₂O + 5 mM 수산화암모늄, B: MeCN

유속 2.0 ㎖/분

구배 1.7분에 5% 내지 95% B, 0.3분 95% B

LCMS 방법 3

컬럼 AcQuity UPLC BEH C18 2.1×30 ㎜, 1.7 ㎛

칼럼 온도 50℃

용리액 A: 수 중 0.1% 포름산, B: MeCN 중 0.1% 포름산

유속 1.0 ㎖/분

구배 1.5분에 2% 내지 98% B, 0.3분 98% B

LCMS 방법 4

컬럼 AcQuity UPLC BEH C18 2.1×30 ㎜, 1.7 ㎛

칼럼 온도 50℃

용리액 A: 수 중 5 mM NH₄OH, B: MeCN 중 5 mM NH₄OH

유속 1.0 ㎖/분

구배 1.2분에 1% 내지 30% B, 0.95분에 30% 내지 98% B

실시예의 특성규명에서 사용된 NMR

다음과 같은 주파수에서 작동하는 Bruker 푸리에 변환 분광기로 ¹H NMR 스펙트럼을 획득하였다: ¹H NMR: 400 MHz(Bruker). 스펙트럼 데이터는 다음의 형식으로 보고된다: 화학적 이동(다중도, 수소의 수). 화학적 이동은 테트라메틸실란 내부 표준(δ 단위, 테트라메틸실란 = 0 ppm)의 ppm 다운필드로 명시되어 있고/있거나 용매 피크에 대해 참조되어 있는데, ¹H NMR 스펙트럼은 CD₃SOCD₃의 경우 2.50 ppm, CD₃OD의 경우 3.31 ppm, CD₃CN의 경우 1.94 ppm, D₂O의 경우 4.79 ppm, CD₂Cl₂의 경우 5.32 ppm 및 CDCl₃의 경우 7.26 ppm에서 나타난다.

실시예의 정제에 사용되는 방법

중간체 및 최종 생성물의 정제를 정상, 역상 크로마토그래피 또는 초임계유체 크로마토그래피(SFC) 중 하나를 통해 수행하였다. 순상 크로마토그래피는 적절한 용매 시스템(예컨대, 헥탄 및 에틸 아세테이트; DCM 및 MeOH; 또는 달리 지시되지 않으면)의 구배로 용리시키는 사전포장된 SiO₂ 카트리지(예컨대, Teledyne Isco, Inc.의 RediSep® Rf 칼럼)를 사용하여 수행하였다. 이하에 기재하는 방법을 이용하여 역상 분취 HPLC를 수행하였다:

(1) 염기성 방법: XBridge 5 ㎛ 칼럼, 아세토니트릴 및 물 중의 5mM NH₄OH.

(2) 포름산 방법: XBridge 5 ㎛ 칼럼; 아세토니트릴 중 0.1% 폼산 및 물.

상기 HPLC 방법을 15 % 아세토니트릴로부터 40% 아세토니트릴까지의 집중 구배로 실행하였다.

일반 합성 반응식

반응식 1 및 2(이하에 나타냄)는 화학식 I의 화합물을 포함하는 본 발명의 화합물을 제조하기 위한 잠재적 경로를 기재하며, 여기서 R¹ 내지 R⁶은 발명의 내용에서 정의한 바와 같다. 이하의 반응식의 출발 물질은 상업적으로 입수가능하거나 당업자에게 공지된 방법에 따라 또는 본 명세서에 개시된 방법에 의해 제조될 수 있다. 화학식 I의 화합물은 실질적으로 광학적으로 순수한 출발 물질을 이용하여 또는 분리 크로마토그래피, 재결정화 또는 당업계에 잘 공지된 다른 분리 기법에 의해 실질적으로 광학적으로 순수하게 제조될 수 있다. 더 자세한 설명은 아래 실시예 부분을 참조한다.

단계 (a)는 적합한 온도, 예컨대 RT에서 적합한 용매, 예컨대 DCM 또는 다이옥산 중의 (비)치환된 페닐 클로로포르메이트(예를 들어, R은 H 또는 니트로기일 수 있음) 및 (비)치환된 4-아미노피리딘과 적합한 염기, 예컨대 피리딘의 반응을 수반한다.

단계 (b)는 적합한 온도, 예컨대 60℃에서 적합한 용매, 예컨대 THF 또는 다이옥산 중의 치환된 5-아미노이소티아졸(또는 치환된 3-아미노벤조티아졸) 및 단계 (a)에서 얻은 카바메이트 중간체와 적합한 염기, 예컨대 디이소프로필에틸아민의 반응을 수반한다. 대안적으로, 치환된 5-아미노이소티아졸(또는 치환된 3-아미노벤조티아졸)은 처음에 적합한 염기, 예컨대 LHMDS에 의해 탈양성자화되고, 이어서, 단계 (a)에서 얻어진 카바메이트 중간체와 반응될 수 있다. 우레아의 형성 후에, R¹ 내지 R⁶ 기는 목적하는 생성물을 제공하는 데 필요하다면 추가적인 전환을 겪을 수 있다.

우레아 생성물의 형성은 적합한 온도, 예컨대 RT에서 적합한 용매, 예컨대 THF 중 (비)치환된 4-아미노피리딘과 트리포스겐, 다음에 치환된 5-아미노이소티아졸과 적합한 염기, 예컨대 트리에틸아민의 반응을 수반한다. 우레아의 형성 후에, R¹ 내지 R⁶ 기는 목적하는 생성물을 제공하는 데 필요하다면 추가적인 전환을 겪을 수 있다.

실시예

본 명세서에 개시된 방법을 사용하여 하기 실시예를 제조, 단리 및 특성규명하였다. 하기 실시예는 본 발명의 부분적 범주를 보여주는 것으로서, 본 발명의 범주를 제한하고자 하는 것이 아니다.

달리 명시되지 않는 한, 출발 물질은 일반적으로 비제한적인 상업적 공급원, 예컨대, TCI Fine Chemicals(일본 소재), Aurora Fine Chemicals LLC(캘리포니아주 샌디에이고 소재), FCH Group(우크라이나 소재), Aldrich Chemicals Co. (위스콘신주 밀워키 소재), Acros Organics(뉴저지주 페어론 소재), Maybridge Chemical Company, Ltd.(영국 콘월 소재), Matrix Scientific(미국 소재), Enamine Ltd(우크라이나 소재), Combi-Blocks, Inc.(미국 샌디에이고 소재), Oakwood Products, Inc.(미국 소재), Apollo Scientific Ltd.(미국 소재)로부터 입수 가능하다.

실시예 1

1-(2-클로로피리딘-4-일)-3-(3-(디플루오로메틸)이소티아졸-5-일)우레아

0℃에서 DCM(100 ㎖) 중 2-클로로-4-아미노피리딘(1.57 g, 12.25 m㏖) 및 피리딘(1.38 ㎖, 17.05 m㏖)의 혼합물에 4-니트로페닐 클로로포르메이트(2.6 g, 12.89 m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 2분 동안 유지한 다음, 실온까지 가온시켰다. 다시 20분 후에, 혼합물을 진공에서 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 디옥산(80 ㎖)에서 취하였다. 디옥산(10 ㎖) 중 3-(디플루오로메틸)이소티아졸-5-아민(중간체 1)(1.60 g, 10.66 m㏖)의 용액을 빠르게 첨가한 후에, DIPEA(6.51 ㎖, 37.3 m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 60℃로 가열하였다. 3시간 후에, 혼합물을 실온으로 냉각시킨 다음, 물 및 EtOAc를 첨가하였다. 유기층을 반복적으로 물, 포화 수성 중탄산나트륨 및 염수로 세척하였다. 유기상을 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켜 잔사를 얻었고 플래시 크로마토그래피(EtOH/EtOAc/헵탄)에 의해 정제하였다. 부분적으로 정제된 잔사를 에테르와 함께 분쇄하고, 얻어진 고체를 물에서 취하였다. 동결건조물은 잔여 에테르를 제거하여 표제 화합물을 제공하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.08 (s, 1H), 10.15 (s, 1H), 8.26 (d, J = 4 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 2 Hz, 1H), 7.46 (dd, J = 4, 2 Hz, 1H), 7.15 (s, 1H), 6.97 (t, J = 52 Hz, 1H). MS (ESI) m/z 305.1 [M + H]⁺. LCMS: Rt = 1.25분, m/z 305.1 (M+H)(LCMS 방법 1). ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 11.08 (s, 1H), 10.15 (s, 1H), 8.26 (d, J = 4 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 2 Hz, 1H), 7.46 (dd, J = 4, 2 Hz, 1H), 7.15 (s, 1H), 6.97 (t, J = 52 Hz, 1H).

실시예 2

1-(2-클로로피리딘-4-일)-3-(3-메틸이소티아졸-5-일)우레아

THF(2 ㎖) 중 2-클로로-4-아미노피리딘(101 ㎎, 0.786 m㏖) 용액을 실온에서 THF(2 ㎖) 중 트리포스겐(101 ㎎, 0.340 m㏖) 용액에 서서히 첨가하였다. 이어서, 트리에틸아민(0.11 ㎖, 0.790 m㏖)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 20분 동안 교반한 후에, THF(2 ㎖) 중 3-메틸-5-아미노이소티아졸 염산염(120 ㎎, 0.797 m㏖) 및 트리에틸아민(0.12 ㎖, 0.863 m㏖)의 혼합물을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 18시간 동안 교반하고, EtOAc와 수성 KOH로 나누었다. 합한 유기 추출물을 MgSO₄로 건조시키고, 농축하였다. 잔사를 HPLC(염기성 방법)로 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. LCMS: Rt =0.85분, m/z 269.0 (M+H)(LCMS 방법 2). ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 10.78 (s, 1H), 9.87 (s, 1H), 8.24 (d, J = 4 Hz, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.43 (d, J = 4 Hz, 1H), 6.73 (s, 1H), 2.30 (s, 3H).

실시예 3

1-(2-클로로피리딘-4-일)-3-(3-(트리플루오로메틸)이소티아졸-5-일)우레아

DMF(1.2 ㎖) 중 3-(트리플루오로메틸)이소티아졸-5-아민(중간체 2)(70 ㎎, 0.41 m㏖) 및 페닐(2-클로로피리딘-4-일)카바메이트(중간체 3)(104 ㎎, 0.41 m㏖)의 빙량 혼합물에 LHMDS(THF 중 1M, 0.41 ㎖, 0.41 m㏖)의 용액을 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 가온시키고, 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공에서 농축시키고, 이어서, HPLC(염기성 방법)에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻었다. LCMS: Rt =1.38분, m/z 323 (M+H)(LCMS 방법 1). ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.21 (br s, 1H), 10.18 (br s, 1H), 8.23 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.46 (dd, J = 5.7, 1.9 Hz, 1H), 7.22 (s, 1H).

실시예 4

1-(5-아미노-2-클로로피리딘-4-일)-3-(3-(디플루오로메틸)이소티아졸-5-일)우레아

에탄올(84 ㎖) 및 물(25 ㎖) 중 1-(5-니트로-2-클로로피리딘-4-일)-3-(3-(디플루오로메틸)이소티아졸-5-일)우레아(중간체 5)(7.63 g, 21.82 m㏖), 철(4.87 g, 87 m㏖) 및 염화암모늄(9.34 g, 175 m㏖)의 혼합물을 1시간 동안 50℃에서 가열하였다. 혼합물을 셀라이트에 여과시키고, 필터 케이크를 MeOH로 린스하고, 여과액을 진공에서 농축시켰다. 잔사를 EtOAc에서 취하고 염수로 세척하였다. 유기 분획을 황산마그네슘으로 건조시키고, 진공에서 농축시켜 잔사를 제공하고, 이를 실리카겔 크로마토그래피(EtOAc/헵탄)에 의해 정제한 후, 물 + 0.1% 포름산 및 아세토니트릴 + 0.1% 포름산으로 용리하는 C18 칼럼 상의 ISCO 역상 정제를 이용하여 정제하였다. LCMS: Rt =0.76분, m/z =320.2(M+H)(LCMS 방법 2). ¹H NMR (400 MHz, 메탄올-d₄) δ 7.88 (s, 1H), 7.84 (s, 1H), 6.99 (s, 1H), 6.66 (t, J = 54.9 Hz, 1H).

실시예 5

1-(2-클로로-5-(히드록시메틸)피리딘-4-일)-3-(3-(디플루오로메틸)이소티아졸-5-일)우레아

단계 1: 1-(5-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-2-클로로피리딘-4-일)-3-(3-(디플루오로메틸)이소티아졸-5-일)우레아의 합성

LHMDS(THF 중 1M, 9.2 ㎖, 9.2 m㏖)를 DMF(30 ㎖) 중 페닐(5-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-2-클로로피리딘-4-일)카바메이트(중간체 6)(3.46 g, 8.81 m㏖) 및 3-(디플루오로메틸)이소티아졸-5-아민(중간체 1)(1.15 g, 7.66 m㏖)의 용액에 적가하고, 반응물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. MeOH(10 ㎖)를 이용하여 반응을 ??칭하고(quench), 휘발물을 진공에서 제거하였다. 잔사를 1:1 EtOAc/포화 수성 NH₄Cl에서 취하고, 층을 분리시켰다. 수성층을 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 합하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 휘발물을 진공에서 제거하였다. 조질의 잔사를 실리카겔 크로마토그래피(EtOAc/헵탄)에 의해 정제하였다. LCMS: Rt =1.79분, m/z = 449.2 (M+H)(LCMS 방법 1). ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.39 (s, 1H), 8.93 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 8.14 (s, 1H), 7.19 (s, 1H), 6.96 (t, J = 54.5 Hz, 1H), 4.79 (s, 2H), 0.86 (s, 9H), 0.07 (s, 6H).

단계 2: 1-(2-클로로-5-(히드록시메틸)피리딘-4-일)-3-(3-(디플루오로메틸)이소티아졸-5-일)우레아의 합성

TBAF(THF 중 1M, 2.45 ㎖, 2.45 m㏖)를 THF(8 ㎖) 중의 1-(5-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-2-클로로피리딘-4-일)-3-(3-(디플루오로메틸)이소티아졸-5-일)우레아(상기 단계 1에서 얻음)(1.1 g, 2.45 m㏖) 용액에 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물에 붓고, 생성물을 EtOAc로 추출하였다. 유기 추출물을 합하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 휘발물을 진공에서 제거하였다. 조질의 생성물을 실리카겔 크로마토그래피(MeOH/DCM)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. LCMS: Rt =0.78분, m/z =335.2(M+H)(LCMS 방법 2). ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 11.75 (s, 1H), 9.22 (s, 1H), 8.23 (s, 1H), 8.15 (s, 1H), 7.20 (s, 1H), 6.97 (t, J = 56 Hz, 1H), 5.79 (t, J = 5 Hz, 1H), 4.59 (d, J = 5 Hz, 2H).

실시예 6

1-(5-아미노-2-플루오로피리딘-4-일)-3-(3-(디플루오로메틸)이소티아졸-5-일)우레아

1-(5-니트로-2-클로로피리딘-4-일)-3-(3-(디플루오로메틸)이소티아졸-5-일)우레아(중간체 5)(3.77 g, 8.62 m㏖), TMAF(3.61 g, 38.8 m㏖) 및 DMF(83 ㎖)의 혼합물을 75℃에서 1시간 동안 가열하였다. 반응을 물로 ??칭하고, EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 분획을 물, 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켰다. 이어서, 잔사를 플래시 크로마토그래피(EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 부분적으로 정제된 생성물(2.73 g)을 제공하고, 에탄올(100 ㎖) 및 물(20 ㎖)에서 취하였다. 염화암모늄(2.13 g, 39.8 m㏖) 및 철(1.91 g, 34.2 m㏖)을 첨가하고, 혼합물을 45℃로 30분 동안 가열하였다. 이어서, 반응 혼합물을 셀라이트의 짧은 패드 상에서 여과시키고, 이를 MeOH로 세척하였다. 여과액을 농축시키고, 이어서, EtOAc 및 물로 희석시켰다. 수성층을 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 분획을 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔사를 실리카겔 크로마토그래피(EtOAc/헵탄), 다음에 물 + 0.1% 포름산 및 아세토니트릴 + 0.1% 포름산으로 용리하는 C18 칼럼 상의 ISCO 역상 정제에 의해 순차적으로 정제하였다. 소량의 불순물 분획을 최종적으로 HPLC(포름산 방법)에 의해 정제하고, 합한 분획으로 표제 화합물을 얻었다. LCMS: Rt =1.12분, m/z 304.2 (M+H)(LCMS 방법 1). ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 11.15 (s, 1H), 8.92 (s, 1H), 7.63 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.14 (s, 1H), 6.95 (t, J = 54.5 Hz, 1H), 4.82 (s, 2H).

실시예 7

1-(3-(디플루오로메틸)이소티아졸-5-일)-3-(2-플루오로-5-(히드록시메틸)피리딘-4-일)우레아

단계 1: 1-(5-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-2-플루오로피리딘-4-일)-3-(3-(디플루오로메틸)이소티아졸-5-일)우레아의 합성.

DMF(2 ㎖) 중 3-(디플루오로메틸)이소티아졸-5-아민(중간체 1)(48 ㎎, 0.323 m㏖), 및 페닐(5-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-2-플루오로피리딘-4-일)카바메이트(중간체 7)(135 ㎎, 0.323 m㏖)의 용액에 LHMDS(THF 중 1M, 0.484 ㎖, 0.484 m㏖)를 첨가하고, 얻어진 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 혼합물을 진공에서 농축시키고, 생성물을 실리카겔 크로마토그래피(EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. LCMS: Rt =1.76분, m/z 433.2 (M+H)(LCMS 방법 1)

단계 2: 1-(3-(디플루오로메틸)이소티아졸-5-일)-3-(2-플루오로-5-(히드록시메틸)피리딘-4-일)우레아의 합성.

THF(5 ㎖) 중 1-(5-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-2-플루오로피리딘-4-일)-3-(3-(디플루오로메틸)이소티아졸-5-일)우레아(119 ㎎, 0.275 m㏖)의 용액에 TBAF(THF 중 1M, 0.275 ㎖, 0.275 m㏖)를 첨가하고, 얻어진 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공에서 농축시키고, 실리카겔 크로마토그래피(개질제로서 수산화나트륨과 함께 MeOH/DCM)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. LCMS: Rt =1.16분, m/z 337 (M+H)(LCMS 방법 1). ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 11.76 (s, 1H), 9.26 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 7.77 (s, 1H), 7.22 - 6.70 (m, 2H), 5.73 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 4.59 (d, J = 5.1 Hz, 2H).

실시예 8

1-(3-(디플루오로메틸)이소티아졸-5-일)-3-(2-플루오로-3-(히드록시메틸)피리딘-4-일)우레아

단계 1: 1-(3-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-2-플루오로피리딘-4-일)-3-(3-(디플루오로메틸)이소티아졸-5-일)우레아의 합성

DMF(35 ㎖) 중 3-(디플루오로메틸)이소티아졸-5-아민(중간체 1)(1.04 g, 6.93 m㏖), 및 페닐(3-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-2-플루오로피리딘-4-일)카바메이트(중간체 8)(3.39 g, 9.00 m㏖)의 용액에 0℃에서 LHMDS(THF 중 1M, 13.8 ㎖, 13.8 m㏖)를 첨가하였다. 냉각욕을 제거하고, 얻어진 혼합물을 실온에서 45분 동안 교반하였다. 혼합물을 진공에서 농축시키고, 생성물을 실리카겔 크로마토그래피(EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. LCMS: Rt =1.74분, m/z 433.3 (M+H)(LCMS 방법 1).

단계 2: 1-(3-(디플루오로메틸)이소티아졸-5-일)-3-(2-플루오로-3-(히드록시메틸)피리딘-4-일)우레아의 합성

THF(40 ㎖) 중 1-(3-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-2-플루오로피리딘-4-일)-3-(3-(디플루오로메틸)이소티아졸-5-일)우레아(2.19 g, 5.06 m㏖)의 용액에 TBAF(THF 중 1M, 6.6 ㎖, 6.6 m㏖)를 첨가하고, 얻어진 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응을 물로 ??칭한 다음, EtOAc로 희석시켰다. 수성층을 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 분획을 합하고, 염수로 세척하고 나서, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켰다. 조질의 혼합물을 플래시 크로마토그래피(MeOH/DCM)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. LCMS: Rt =1.12분, m/z 319.2 (M+H)(LCMS 방법 1). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.89 (s, 1H), 9.44 (s, 1H), 8.10 - 8.02 (m, 2H), 7.05 (s, 1H), 6.95 (t, J = 54.5 Hz, 1H), 5.83 (s, 1H), 4.62 (s, 2H).

중간체

중간체 1

3-(디플루오로메틸)이소티아졸-5-아민

단계 1: 3-메틸-5-니트로이소티아졸

Cu 분말(96 g, 1.5 ㏖)을 5 ℓ 반응기에 넣었다. 물(1 ℓ)을 첨가한 후에, NaNO₂(104 g, 1.5 ㏖)를 첨가하였다. 수성 HCl(12 M, 1.5 ㎖, 18 m㏖)을 첨가하고, 반응 혼합물을 20분 동안 교반하였다. 500 ㎖의 물 및 수성 HCl(12 M, 65 ㎖, 0.78 ㏖) 중 3-메틸-5-아미노이소티아졸 염산염(58 g, 507 m㏖) 용액을 30℃ 미만의 온도를 유지하면서 첨가 깔때기를 통해 적가하였다. 추가적인 100 ㎖의 물을 첨가하였다. 반응 혼합물을 첨가 후 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 및 MTBE를 이용하여 셀라이트를 통해 여과시켰다. 여과액을 반응기에 옮기고, 층을 분리시켰다. 수성층을 MTBE로 2회 세척하였다. 합한 유기층을 MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜 표제 화합물을 제공하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.12 (s, 1H), 2.50 (s, 3H).

단계 2: 5-니트로이소티아졸-3-카복실산

기계식 교반기 및 온도 모니터를 구비한 수욕 내 1 ℓ 3-구 둥근 바닥 플라스크에 3-메틸-5-니트로이소티아졸(26.5 g, 184 m㏖)을 첨가하고, 이어서, 30℃ 미만의 온도를 유지하는 속도로 H₂SO₄(350 ㎖)를 첨가하였다. CrO₃(55.1 g, 552 m㏖)을 6부분으로 20분마다 첨가하여, 온도가 24℃ 미만으로 유지되는 것을 보장하였다. 반응물을 수욕의 존재 하에 3일 동안 교반하면서 두었다. 반응 혼합물을 얼음물(총 1.4 ℓ)에 붓고, Et₂O(1 ℓ)로 3회 추출하였다. 합한 유기층을 염수로 세척한 다음, MgSO₄로 건조시키고, 여과시키고, 농축시켜 황색 고체를 제공하였다. 고체를 헵탄(80 ㎖) 및 Et₂O(20 ㎖)에서 취하고, 분쇄하였다. 2분의 격렬한 교반 후에, 혼합물을 여과시키고, 이어서, 5:1 헵탄/에테르 혼합물(최소량)로 린스하여 표제 화합물을 제공하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.89 (s, 1H), 8.57 (s, 1H).

단계 3: (5-니트로이소티아졸-3-일)메탄올

플라스크를 THF(50 ㎖) 중 5-니트로이소티아졸-3-카복실산(3.0 g, 17.2 m㏖)으로 채우고, 빙욕 상에서 냉각시킨 다음, 보란 테트라히드로푸란 복합체(THF 중 1M)(22.4 ㎖, 22.4 m㏖)를 30분에 걸쳐 적가하고, 반응물을 밤새 가온하였다. 반응 혼합물을 0℃로 재냉각시킨 다음, 메탄올(20 ㎖)을 적가하였다. 반응을 0℃에서 5분 동안 격렬하게 교반한 다음, 실온으로 가온시키고 다시 15분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 진공에서 절반의 용적으로 농축시킨 다음, EtOAc(100 ㎖), 포화 수성 NH₄Cl(50 ㎖) 및 물(50 ㎖)로 희석시켰다. 층을 분리시키고, 수성 부분을 EtOAc(2×100 ㎖)로 추출하였다. 유기 분획을 합하고, 염수로 세척하고 나서, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켰다. 실리카겔 크로마토그래피(EtOAc/DCM)를 통한 정제로 표제 화합물을 제공하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.09 (s, 1H), 5.77 (t, J = 6.1 Hz, 1H), 4.58 (d, J = 6.1 Hz, 2H). MS (ESI) m/z 161.0 [M + H]⁺.

단계 4: 5-니트로이소티아졸-3-카브알데히드의 합성

데스-마틴(Dess-Martin) 페리오디난(2.23 g, 5.27 m㏖)을 0℃에서 DCM(25 ㎖) 중의 (5-니트로이소티아졸-3-일)메탄올(767 ㎎, 4.79 m㏖)에 5분에 걸쳐 소량 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 10분 동안 교반하고, 실온으로 가온시키고, 실온에서 20분 동안 교반하였다. 혼합물을 DCM으로 희석시켰다. 포화 수성 NaHCO₃ 및 포화 수성 티오황산나트륨을 첨가하였다. 혼합물을 10분 동안 격렬하게 교반하고, 이어서, 두 층을 분리시켰다. 수성층을 DCM으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 진공에서 농축시켜 표제 화합물을 제공하였다. 생성물을 정제 없이 다음 단계에서 직접 사용하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 9.85 (s, 1H), 8.58 (s, 1H).

단계 5: 3-(디플루오로메틸)-5-니트로이소티아졸의 합성

DAST(0.201 ㎖, 1.518 m㏖)를 0℃에서 DCM(3.5 ㎖) 중 5-니트로이소티아졸-3-카브알데히드(상기 단계 1에서 얻음)(80 ㎎, 0.506 m㏖)의 용액에 적가 방식으로 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 25분 동안 교반하고, 실온으로 가온시키고, 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 0℃에서 포화 수성 NaHCO₃로 ??칭시키고, DCM으로 희석시켰다. 혼합물을 1분 동안 격렬하게 교반하고, 두 층을 분리시켰다. 수성층을 DCM으로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 진공에서 농축시켜 표제 화합물을 제공하였다. 생성물을 정제 없이 다음 단계에서 즉시 사용하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.54 (s, 1H), 7.16 (t, J = 52 Hz, 1H).

단계 6: 3-(디플루오로메틸)이소티아졸-5-아민의 합성

3-(디플루오로메틸)-5-니트로이소티아졸(49 ㎎, 0.27 m㏖), 철가루(46 ㎎, 0.81 m㏖) 및 아세트산(1.5 ㎖)의 혼합물을 50℃로 2시간 동안 가열하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석시키고, 30% 수산화암모늄으로 염기화하였다. 유기층을 분리시키고, 진공에서 농축한 다음, 실리카겔 크로마토그래피(EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻었다. LCMS: Rt = 0.42분; m/z 151.2 (M+H)(LCMS 방법 2); ¹H NMR (400 MHz, 메탄올-d4) δ 6.46 (t, J = 55.0 Hz, 1H), 6.39 (s, 1H). ¹⁹F NMR (376 MHz, MeOD) δ -116.06.

중간체 2

3-(트리플루오로메틸)이소티아졸-5-아민

단계 1: 4,4,4-트리플루오로-3-옥소부탄니트릴의 합성

건조 100 ㎖ 플라스크를 KOt-Bu(THF 중 1M, 85 ㎖, 85 m㏖)로 채우고, 얼음 상에서 냉각시켰다. 30분 후에, 에틸 트리플루오로아세테이트(7.27 ㎖, 60.9 m㏖) 및 아세토니트릴(3.18 ㎖, 60.9 m㏖)의 혼합물을 3분에 걸쳐 첨가하였다. 반응 혼합물은 현탁액이 되었다. 혼합물을 서서히 실온까지 가온시키고, 24시간 동안 교반하였다. 혼합물을 1M HCl로 ??칭시키고, 조질의 생성물을 에테르로 추출하고 나서, 물로 세척하였다. 유기층을 분리시키고, 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켜 표제 화합물을 제공하고, 이를 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다. LCMS: Rt =0.22분, m/z 136.1 (M-1)(LCMS 방법 4). ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 2.99 (s, 2H).

단계 2: (Z)-3-아미노-4,4,4-트리플루오로부트-2-엔니트릴의 합성

톨루엔(100 ㎖) 중 4,4,4-트리플루오로-3-옥소부탄니트릴(단계 1에서 제조)(1.1 g, 8.03 m㏖), 포름산암모늄(1.518 g, 24.08 m㏖) 및 아세트산(0.046 ㎖, 0.803 m㏖)의 혼합물을 비공비 조건 하에 18시간 동안 120℃로 가열하였다. 혼합물을 진공에서 농축시키고 추가 정제 없이 다음 단계에서 사용하였다.

단계 3: (Z)-3-아미노-4,4,4-트리플루오로부트-2-엔티오아미드의 합성

DMF(20 ㎖) 중 (Z)-3-아미노-4,4,4-트리플루오로부트-2-엔니트릴(단계 2에서 제조)(1.00 g, 7.35 m㏖), MgCl₂ (0.70 g, 7.35 m㏖) 및 NaSH(0.824 g, 14.70 m㏖)의 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트와 물로 나누었다. 합한 유기 추출물을 황산마그네슘으로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켜 표제 화합물을 제공하였다. LCMS: Rt =0.81분, m/z 171 (M+H)(LCMS 방법 1).

단계 4: 3-(트리플루오로메틸)이소티아졸-5-아민의 합성

피리딘(24 ㎖) 중 (Z)-3-아미노-4,4,4-트리플루오로부트-2-엔티오아미드(단계 3에서 제조)(1.2 g, 7.05 m㏖)의 혼합물에 0 내지 5℃에서 H₂O₂(3 ㎖, 29.4 m㏖)를 첨가하고, 혼합물을 실온까지 가온시키고, 2시간 동안 교반하였다. 혼합물을 진공에서 농축시키고, 잔사를 실리카겔 상의 크로마토그래피(에틸 아세테이트/헵탄)로 표제 화합물을 제공하였다. LCMS: Rt =0.97분, m/z 169 (M+H)(LCMS 방법 1). ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.21 (s, 2H), 6.44 (s, 1H).

중간체 3

페닐(2-클로로피리딘-4-일)카바메이트

0℃에서 DCM(315 ㎖) 중 2-클로로피리딘-4-아민(12.9 g, 101 m㏖) 및 피리딘(8.13 ㎖, 101 m㏖)의 용액에 페닐 클로로포르메이트(13.3 ㎖, 106 m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 2시간에 걸쳐 가온시켜 진공에서 농축하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 교반하였다. 고체를 소결 플라스틱 깔때기로 여과시키고, 물로 린스하고 나서, 40℃에서 24시간 동안 고진공 하에 건조시켜 표제 화합물을 제공하였다. LCMS: Rt =1.20분, m/z =249.2(M+H)(LCMS 방법 2).

중간체 4

페닐(2-클로로-5-니트로피리딘-4-일)카바메이트

0℃에서 디옥산(4 ㎖) 중 4-아미노-2-클로로-5-니트로피리딘(150 ㎎, 0.864 m㏖) 및 피리딘(0.070 ㎖, 0.86 m㏖) 용액에 페닐 클로로포르메이트(0.114 ㎖, 0.907 m㏖)를 첨가하였다. 혼합물을 80℃에서 18시간 동안 가열하고, 실온으로 냉각시키고, 물에 부었다. 생성물을 EtOAc로 추출하였다. 합한 유기 추출물을 Na₂SO₄로 건조시키고, 진공에서 농축하였다. 조질의 잔사를 실리카겔 크로마토그래피(EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. LCMS: Rt =1.51분, m/z = 294.1 (M+H)(LCMS 방법 1).

중간체 5

1-(5-니트로-2-클로로피리딘-4-일)-3-(3-(디플루오로메틸)이소티아졸-5-일)우레아

디옥산(59 ㎖) 중 페닐(2-클로로-5-니트로피리딘-4-일)카바메이트(중간체 4)(4.50 g, 15.32 m㏖), 3-(디플루오로메틸)이소티아졸-5-아민(중간체 1)(2.0 g, 13.32 m㏖) 및 DIPEA (5.8 ㎖, 33.3 m㏖) 용액을 85℃에서 16시간 동안 가열하였다. 혼합물을 진공에서 농축시키고, 잔사를 실리카겔 크로마토그래피(EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. LCMS: Rt =1.43분, m/z =350.1(M+H)(LCMS 방법 1).

중간체 6

페닐(5-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-2-클로로피리딘-4-일)카바메이트

단계 1: 메틸 6-클로로-4-((4-메톡시벤질)아미노)니코티네이트의 합성

MeCN(60 ㎖) 중 p-메톡시벤질아민(19.0 ㎖, 146 m㏖), 메틸 4,6-디클로로니코티네이트(25 g, 121 m㏖), 트리에틸아민(20.3 ㎖, 146 m㏖)의 혼합물을 실온에서 24시간 동안 교반하였다. 더 많은 4-메톡시벤질아민(2.5 ㎖)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 72시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 잔사를 EtOAc와 수성 포화 NH₄Cl로 나누었다. 유기 추출물을 합하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켰다. 조질의 잔사를 실리카겔 크로마토그래피(EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. LCMS: Rt =1.42분, m/z =307.1(M+H)(LCMS 방법 1).

단계 2: (6-클로로-4-((4-메톡시벤질)아미노)피리딘-3-일)메탄올의 합성

THF(150 ㎖) 중 LAH 용액(THF 중 2M, 21.52 ㎖, 43.0 m㏖)에 0℃에서 교반하면서 THF(100 ㎖) 중 메틸 6-클로로-4-((4-메톡시벤질)아미노)니코티네이트(단계 1에서 제조)(12 g, 39.1 m㏖) 용액을 적가하였다. 반응을 실온으로 가온시키고 30분 동안 교반하였다. 반응을 빙욕에서 EtOAc의 느린 첨가로 ??칭시킨 후, LAH를 ??칭시키기 위한 스타인하트(Steinhardt) 조건이 이어졌다(2 ㎖ H₂O, 다음에 2 ㎖의 15% NaOH 및 6 ㎖의 H₂O). 얻어진 용액을 15분 동안 교반시키고, 실온으로 가온시켰다. 혼합물을 셀라이트에 여과시키고, 여과액을 분별 깔때기에 옮겼다. 생성물을 추가로 물로 희석시키고, 이어서, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 합하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 휘발물을 진공에서 제거하여 표제 화합물을 제공하였다. LCMS: Rt =0.84분, m/z =279.3(M+H)(LCMS 1 방법 1).

단계 3: (4-아미노-6-클로로피리딘-3-일)메탄올의 합성

TFA(2.71 ㎖, 35.2 m㏖) 중 (6-클로로-4-((4-메톡시벤질)아미노)피리딘-3-일)메탄올(단계 2에서 제조)(9.82 g, 35.2 m㏖) 용액을 60℃에서 18시간 동안 가열하였다. 반응물을 10% 수성 K₂CO₃을 이용하여 pH ~7로 중화시켰다. 이어서, 혼합물을 분별 깔때기에 옮기고, DCM으로 추출하였다. 유기층을 합하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 휘발물을 진공에서 제거하여 약간의 표제 화합물을 제공하였다. 수성층을 진공에서 농축시키고, 얻어진 고체를 이소프로판올에서 희석시켰다. 불용성 염을 여과시키고, 용액을 얼음에서 냉각시켰다. 침전된 추가적인 염을 여과시켰다. 휘발물을 진공에서 제거하여 보다 많은 양의 표제 화합물을 제공하였다. LCMS: Rt =0.26분, m/z =159.1(M+H)(LCMS 방법 2).

단계 4: 5-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-2-클로로피리딘-4-아민의 합성

DMF(10 ㎖) 중 (4-아미노-6-클로로피리딘-3-일)메탄올(단계 3에서 제조)(5 g, 32 m㏖), TBDMSCl(5.23 g, 34.7 m㏖) 및 이미다졸(5.37 g, 79 m㏖)의 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 유기층을 합하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 휘발물을 진공에서 제거하였다. 조질의 잔사를 실리카겔 크로마토그래피(EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. LCMS: Rt =1.52분, m/z =273.2(M+H)(LCMS 방법 2).

단계 5: 페닐(5-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-2-클로로피리딘-4-일)카바메이트의 합성

DCM(75 ㎖) 중 5-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-2-클로로피리딘-4-아민(단계 4에서 제조)(5.55 g, 20.3 m㏖) 및 피리딘(1.8 ㎖, 22.4 m㏖)의 용액에 실온에서 교반하면서 페닐 클로로포르메이트(2.68 ㎖, 21.4 m㏖)를 첨가하였다. 반응을 2시간에 걸쳐 실온으로 가온시켰다. 휘발물을 진공에서 제거하고, 잔사를 EtOAc 및 포화 수성 NaHCO₃으로 희석시켰다. 이어서, 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 합하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 휘발물을 진공에서 제거하였다. 조질의 잔사를 실리카겔 크로마토그래피(EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. LCMS: Rt =1.94분, m/z =393.3(M+H)(LCMS 방법 1).

중간체 7

페닐(5-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-2-플루오로피리딘-4-일)카바메이트

단계 1: 메틸 4-아미노-6-플루오로니코티네이트의 합성.

메틸-4,6-디클로로니코티네이트(6.75 g, 32.8 m㏖) 및 TMAF(8.0 g, 86 m㏖)를 함유하는 500 ㎖ 플라스크에 DMF(100 ㎖)를 첨가하고, 중간체 메틸-4,6-디플루오로니코티네이트의 완전한 형성을 LCMS에 의해 확인할 때까지 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반시켰다. 이어서, 이 반응 혼합물에 이소프로판올(35 ㎖, 70 m㏖) 중 2M 암모니아 용액을 첨가하고, 실온에서 20시간 동안 교반하였다. 표제 화합물의 완전한 형성을 LCMS에 의해 확인하였다. 반응 혼합물을 물로 ??칭하고, 조질의 생성물을 EtOAc로 추출하였다. 유기층을 염수로 세척하고 나서, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켰다. 잔사를 실리카겔 크로마토그래피(EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻었다. LCMS: Rt =0.97분, m/z 174(M+H)(LCMS 방법 1). ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 8.43 (s, 1H), 7.52 (s, 2H), 6.30 (s, 1H), 3.82 (s, 3H).

단계 2: (4-아미노-6-플루오로피리딘-3-일)메탄올의 합성.

THF(200 ㎖)로 추가로 희석시킨 LAH(THF 중 2M, 24.8 ㎖, 49.6 m㏖)의 빙랭(0℃) 용액에 45분에 걸쳐 첨가 깔때기를 통해, THF(100 ㎖) 중 메틸 4-아미노-6-플루오로니코티네이트(4.22 g, 24.8 m㏖) 용액을 첨가하여 현탁액을 생성하였다. 혼합물을 실온으로 2시간 동안 가온시키고 이 후에 LCMS에 의해 반응 완료를 판단하였다. 반응 혼합물을 THF(200 ㎖)로 희석시키고, 얼음 상에서 냉각시켰다. 버블링이 중단될 때까지 황산나트륨 10수화물을 혼합물에 여러 번 첨가하였다. 혼합물을 18시간 동안 교반한 다음, 여과시키고, 진공에서 농축시켰다. 얻어진 잔사를 실리카겔 크로마토그래피(EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻었다. LCMS: Rt =0.27분, m/z 143(M+H)(LCMS 방법 3). ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 7.63 (s, 1H), 6.20 (s, 2H), 6.09 (s, 1H), 5.04 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 4.35 (d, J = 5.5 Hz, 2H).

단계 3: 5-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-2-플루오로피리딘-4-아민의 합성.

DMF(50 ㎖) 중 (4-아미노-6-플루오로피리딘-3-일)메탄올(1.52 g, 10.7 m㏖), TBDMSCl(1.77 g, 11.8 m㏖), 및 이미다졸(1.82 g, 26.7 m㏖)의 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 이 후에 TLC, 100% EtOAc에 의해 반응 완료를 판단하였다. 반응 혼합물을 진공에서 농축시킨 다음, 실리카겔 크로마토그래피(EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻었다. LCMS: Rt =1.46분, m/z 257(M+H)(LCMS 방법 1). 　 ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.60 (s, 1H), 6.11 (s, 2H), 6.04 (s, 1H), 4.50 (s, 2H), 0.81 (s, 9H), 0.00 (s, 6H).

단계 4: 페닐(5-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-2-플루오로피리딘-4-일) 카바메이트의 합성.

디옥산(30 ㎖) 중 (4-아미노-6-플루오로피리딘-3-일)메탄올(1.45 g, 5.66 m㏖) 및 피리딘(0.46 ㎖, 5.66 m㏖)의 혼합물에 페닐 클로로포르메이트(0.710 ㎖, 5.66 m㏖)를 첨가하고, 얻어진 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 혼합물을 EtOAc로 희석시킨 다음, 중탄산나트륨 다음에 물로 세척하였다. 유기 부분을 황산나트륨으로 건조시키고 진공에서 농축하였다. 잔사를 실리카겔 크로마토그래피(EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 표제 화합물을 얻었다. LCMS: Rt =1.89분, m/z 377 (M+H)(LCMS 방법 1). 　 ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) δ 9.66 (s, 1H), 8.03 (s, 1H), 7.41 (s, 1H), 7.39 - 7.31 (m, 2H), 7.16 - 7.09 (m, 2H), 6.74 - 6.52 (m, 1H), 4.78 (s, 2H), 0.80 (s,9 H), 0.00 (s, 6H).

중간체 8

페닐(3-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-2-플루오로피리딘-4-일)카바메이트

단계 1: 메틸 2,4-디플루오로니코티네이트의 합성

THF(120 ㎖) 중 2,4-디플루오로피리딘(5 g, 43.4 m㏖)의 용액을 -78℃에서 리튬 디이소프로필아미드(THF/헵탄/에틸벤젠 중 2M, 26.1 ㎖, 52.1 m㏖)의 교반 용액에 적가하였다. 1시간 동안 교반한 후에, 반응물을 -78℃에서 캐뉼라를 통해 THF(120 ㎖) 중 메틸 클로로포르메이트(5.05 ㎖, 65.2 m㏖)의 교반 용액에 옮겼다. 반응 혼합물을 실온으로 30분에 걸쳐 가온시켰다. 반응을 물(100 ㎖)을 이용하여 서서히 ??칭시키고, EtOAc(3×100㎖)로 추출하였다. 유기층을 합하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 휘발물을 진공에서 제거하였다. 생성물을 실리카겔 크로마토그래피(EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. LCMS: Rt =0.94분, m/z174.1(M+H)(LCMS 방법 1).

단계 2: 메틸 4-아미노-2-플루오로니코티네이트의 합성

디옥산(40 ㎖) 중 메틸 2,4-디플루오로니코티네이트(단계 1에서 제조)(2 g, 11.55 m㏖)의 용액에 디옥산(0.5M, 46.2 ㎖, 23.11 m㏖) 중 암모니아를 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NaHCO_3(aq)에 붓고, EtOAc(3×100㎖)로 추출하였다. 유기층을 합하고, Na₂SO₄로 건조시키고, 여과시키고, 휘발물을 진공에서 제거하였다. 생성물을 실리카겔 크로마토그래피(EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. LCMS: Rt =0.77분, m/z 171.1(M+H)(LCMS 방법 1).

단계 3: (4-아미노-2-플루오로피리딘-3-일)메탄올의 합성

빙욕에서 교반시키면서 THF(70 ㎖) 중 메틸 4-아미노-2-플루오로니코티네이트(2.02 g, 11.87 m㏖)의 용액에 LAH(THF 중 2M, 7.1 ㎖, 14.2 m㏖)를 적가하였다. 반응물을 0℃에서 30분 동안 교반하고, 반응물을 황산나트륨 10수화물(3.5 g)을 서서히 첨가함으로써 ??칭시켰다. 혼합물을 15분 동안 교반한 후에, 무수 Na₂SO₄를 첨가하였다. 혼합물을 셀라이트에 여과시키고, 휘발물을 진공에서 제거하였다. ¹H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.56 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 6.47 (dd, J = 5.7, 1.2 Hz, 1H), 6.29 (s, 2H), 4.96 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 4.40 (d, J = 5.4 Hz, 2H).

단계 4: 3-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-2-플루오로피리딘-4-아민의 합성

(4-아미노-2-플루오로피리딘-3-일)메탄올(1.57 g, 11.05 m㏖), TBDMSCl (2.00 g, 13.26 m㏖) 및 이미다졸(1.88 g, 27.6 m㏖)의 혼합물을 실온에서 DMF(30 ㎖)에서 교반하였다. 90분 후에, 반응을 포화 수성 NaHCO₃로 ??칭하고, EtOAc로 희석시켰다. 수성층을 EtOAc로 추출하였다. 유기 분획을 합하고, 염수로 세척하고 나서, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켰다. 조질의 혼합물을 플래시 크로마토그래피(EtOAc/헵탄)에 의해 정제하였다. LCMS: Rt =1.47분, m/z257.3(M+H)(LCMS 방법 1).

단계 5: 페닐(3-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-2-플루오로피리딘-4-일)카바메이트의 합성

디옥산(40 ㎖) 중 3-(((tert-부틸디메틸실릴)옥시)메틸)-2-플루오로피리딘-4-아민(2.36 g, 9.20 m㏖) 및 피리딘(0.89 ㎖, 11.0 m㏖)의 용액에 페닐 클로로포르메이트(1.21 ㎖, 9.7 m㏖)를 실온에서 첨가하였다. 2.5시간 후에, 반응을 포화 수성 NaHCO₃로 ??칭하고, EtOAc로 희석시켰다. 수성층을 EtOAc로 추출하였다. 유기 분획을 합하고, 염수로 세척하고 나서, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과시키고, 진공에서 농축시켰다.

조질의 혼합물을 플래시 크로마토그래피(EtOAc/헵탄)에 의해 정제하여 표제 화합물을 제공하였다. LCMS: Rt =1.91분, m/z377.4(M+H)(LCMS 방법 1). 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.92 (s, 1H), 8.11 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 7.78 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 7.52 - 7.42 (m, 2H), 7.36 - 7.26 (m, 1H), 7.26 - 7.19 (m, 2H), 4.90 (s, 2H), 0.87 (s, 9H), 0.08 (s, 6H).

약제학적 조성물 및 조합물

본 발명의 화합물은 전형적으로 약제학적 조성물(예컨대, 본 발명의 화합물 및 적어도 하나의 약제학적으로 허용 가능한 담체)로서 사용된다. "약제학적으로 허용 가능한 담체(희석제 또는 부형제)"는 생물학적 활성제를 동물, 특히 포유류에게 전달하기 위하여 당해 분야에서 일반적으로 허용되는 매질을 지칭하며, 당업자에게 공지된 바와 같이, 일반적으로 안전한 것으로 인식되는(generally recognized as safe: GRAS) 용매, 분산 매질, 코팅제, 계면활성제, 항산화제, 보존제(예를 들어, 항박테리아제, 항진균제), 등장제, 흡수 지연제, 염, 보존제, 약물 안정화제, 결합제, 완충제(예를 들어, 말레산, 타르타르산, 락트산, 시트르산, 아세트산, 중탄산나트륨, 인산나트륨 등), 붕해제, 윤활제, 감미제, 향미제, 염료 등 및 이들의 조합물을 포함한다(예를 들어, 문헌[Allen, L.V., Jr. et al., Remington: The Science and Practice of Pharmacy (2 Volumes), 22nd Edition, Pharmaceutical Press (2012)] 참조).

일 양상에서, 본 발명은 본 발명의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. 추가 실시형태에서, 본 조성물은 본 명세서에 기재된 것과 같은 적어도 2종의 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함한다. 본 발명의 목적을 위하여, 달리 지정되지 않는 한, 용매화물 및 수화물은 일반적으로 조성물로 간주된다. 바람직하게는, 약제학적으로 허용 가능한 담체는 멸균 상태이다. 약제학적 조성물은 경구 투여, 비경구 투여 및 직장 투여 등과 같은 특정 투여 경로용으로 제형화될 수 있다. 또한, 본 발명의 약제학적 조성물은 고체 형태(제한 없이 캡슐, 정제, 환제, 과립제, 분말 또는 좌제를 포함함) 또는 액체 형태(제한 없이 용액, 현탁액 또는 에멀션을 포함함)로 제조될 수 있다. 약제학적 조성물은 멸균과 같은 통상적인 약제학적 작업이 실시될 수 있고/있거나 통상적인 비활성 희석제, 윤활제 또는 완충제뿐만 아니라 보조제, 예컨대 보존제, 안정화제, 습윤제, 유화제 및 완충제 등을 함유할 수 있다. 전형적으로, 약제학적 조성물은 하기 중 한 가지 이상과 함께 유효 성분을 포함하는 정제 또는 젤라틴 캡슐이다:

a) 희석제, 예를 들어, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 만니톨, 소르비톨, 셀룰로스 및/또는 글리신;

b) 윤활제, 예를 들어, 실리카, 활석, 스테아르산, 이의 마그네슘 또는 칼슘 염 및/또는 폴리에틸렌글리콜; 정제의 경우도 마찬가지

c) 결합제, 예를 들어, 마그네슘 알루미늄 실리케이트, 전분 페이스트, 젤라틴, 트래거캔스, 메틸셀룰로스, 카르복시메틸셀룰로스나트륨 및/또는 폴리비닐피롤리돈; 원하는 경우

d) 붕해제, 예를 들어, 전분, 한천, 알긴산 또는 이의 나트륨 염, 또는 발포성 혼합물; 및

e) 흡착제, 착색제, 향미제 및 감미제.

정제는 당업계에 공지된 방법에 따라 필름 코팅되거나 장용 코팅될 수 있다.

경구 투여에 적합한 조성물은 정제, 로젠지, 수성 또는 유성 현탁제, 분산성 분말 또는 과립제, 에멀션, 경질 또는 연질 캡슐, 또는 시럽 또는 엘릭서의 형태로 본 발명의 화합물의 유효량을 포함한다. 경구 사용을 위한 조성물은 약제학적 조성물의 제조를 위해 당업계에 공지된 임의의 방법에 따라 제조되며, 이러한 조성물은 약제학적 보기 좋고 맛 좋은 제제를 제공하기 위하여 감미제, 향미제, 착색제 및 보존제로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 작용제를 함유할 수 있다. 정제는 유효 성분을 정제의 제조에 적합한 약제학적으로 허용 가능한 무독성 부형제와의 혼합물로 함유할 수 있다. 이러한 부형제는 예를 들어 불활성 희석제, 예컨대 탄산칼슘, 탄산나트륨, 락토스, 인산칼슘 또는 인산나트륨; 과립화제 및 붕해제, 예를 들어 옥수수 전분 또는 알긴산; 결합제, 예를 들어 전분, 젤라틴 또는 아카시아; 및 활택제, 예를 들어 스테아르산 마그네슘, 스테아르산 또는 활석이다. 정제는 코팅되지 않거나, 위장관에서 붕해 및 흡수를 지연시켜 장기간에 걸친 지속적인 작용을 제공하기 위해 공지된 기법에 의해 코팅된다. 예를 들어, 시간 지연 물질, 예컨대 글리세릴 모노스테아레이트 또는 글리세릴 디스테아레이트가 이용될 수 있다. 경구 사용을 위한 제형은, 유효 성분이 불활성 고형 희석제, 예를 들어, 탄산칼슘, 인산칼슘 또는 카올린과 혼합되는 경질 젤라틴 캡슐로서, 또는 유효 성분이 물 또는 오일 매질, 예를 들어, 땅콩유, 액체 파라핀 또는 올리브유와 혼합되는 연질 젤라틴 캡슐로서 제시될 수 있다.

특정한 주사용 조성물은 수성 등장성 용액 또는 현탁액이고, 좌제는 유리하게는 지방 에멀션 또는 현탁액으로부터 제조된다. 상기 조성물은 멸균될 수 있고/있거나 보조제, 예컨대 보존제, 안정제, 습윤제 또는 유화제, 용액 촉진제, 삼투압 조절을 위한 염 및/또는 완충제를 함유할 수 있다. 또한, 조성물은 치료적으로 유용한 다른 물질을 함유할 수 있다. 상기 조성물은 각각 통상적인 혼합, 과립화 또는 코팅 방법에 따라 제조되며, 약 0.1 내지 75%의 유효 성분을 함유하거나 약 1 내지 50%의 유효 성분을 함유한다.

경피 적용에 적합한 조성물은 유효량의 본 발명의 화합물을 적합한 담체와 함께 포함한다. 경피 전달에 적합한 담체는 숙주 피부의 통과를 보조하도록 흡수 가능한 약리학적으로 허용 가능한 용매를 포함한다. 예를 들어, 경피 장치는 배킹 부재, 화합물을 선택적으로 담체와 함께 함유하는 저장소, 선택적으로 제어되고 미리 결정된 속도로 장기간에 걸쳐 화합물을 숙주의 피부로 전달하기 위한 속도 제어 배리어, 및 피부에 장치를 고정하기 위한 수단을 포함하는 밴드의 형태이다.

예를 들어, 피부 및 눈에 대한 국소 적용에 적합한 조성물은 수용액, 현탁액, 연고, 크림, 젤, 또는 예를 들어, 에어로졸 등에 의한 전달을 위한 분무형 제형을 포함한다. 이러한 국소 전달 시스템은 피부 적용을 위해, 예를 들어, 피부암의 치료를 위해, 예를 들어, 썬크림, 로션, 스프레이 등에서 예방적 사용을 위해 특히 적절할 것이다. 따라서 당업계에 잘 알려진 화장용 제형을 비롯하여, 국소로 사용하기에 특히 적합하다. 이는 가용화제, 안정제, 등장성 향상제, 완충제 및 보존제를 함유할 수 있다.

본 명세서에서 사용되는 바와 같은 국소 적용은 또한 흡입 또는 비강 내 적용에 관한 것일 수 있다. 이는 편리하게는, 적합한 추진제를 사용하거나 사용하지 않고서, 건조 분말 흡입기로부터 건조 분말의 형태로(단독으로, 혼합물로서, 예를 들어 락토스와의 건조 배합물로서, 또는 예를 들어 인지질과의 혼합 성분 입자로서) 또는 가압 용기, 펌프, 스프레이, 아토마이저 또는 네뷸라이저로부터 에어로졸 스프레이 제시의 형태로 전달될 수 있다.

본 발명은 추가로 유효 성분으로서 본 발명의 화합물을 포함하는 무수 약제학적 조성물 및 투여 형태를 제공하는데, 이는 물이 특정 화합물의 분해를 용이하게 할 수 있기 때문이다.

본 발명의 무수 약제학적 조성물 및 투여 형태는 무수 또는 낮은 수분 함유 성분을 이용하여, 그리고 낮은 수분 또는 낮은 습도 조건을 이용하여 제조될 수 있다. 무수 약제학적 조성물은 이의 무수 성질이 유지되도록 제조 및 저장될 수 있다. 따라서, 무수 조성물은, 그것이 적합한 제형 키트 내에 포함될 수 있도록 물에 대한 노출을 방지하는 것으로 알려진 재료를 사용하여 패키징된다. 적합한 포장의 예는 완전 밀봉된 포일, 플라스틱, 단위 용량 용기(예를 들어, 바이알), 블리스터 팩, 및 스트립 팩을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

본 발명은 추가로, 유효 성분으로서의 본 발명의 화합물을 분해하는 속도를 감소시키는 하나 이상의 작용제를 포함하는 약제학적 조성물 및 제형을 제공한다. 본 명세서에서 "안정제"로서 언급되는 이러한 물질은 아스코르브산과 같은 항산화제, pH 완충제, 또는 염 완충제 등을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

본 발명의 화합물은 통상적으로 약제학적 제형으로 제형화되어, 약물의 용이하게 제어 가능한 투약량을 제공하고, 환자에게 능숙하고(elegant) 용이하게 취급가능한 제품을 제공한다. 본 발명의 화합물에 대한 투여 요법은, 물론, 공지된 인자, 예컨대 특정한 작용제의 약력학적 특성 및 그의 투여 방식 및 경로; 수용자의 종, 연령, 성별, 건강, 의학적 상태 및 체중; 증상의 특성 및 정도; 병행 치료의 종류; 치료 빈도; 투여 경로, 환자의 신장 및 간 기능 및 목적하는 효과에 따라 달라질 것이다. 본 발명의 화합물은 단일한 일일 용량으로 투여될 수 있거나, 전체 일일 투약량이 일일 2, 3, 또는 4회의 분할된 용량으로 투여될 수 있다.

특정 예에서, 항암제, 항알레르기제, 항구토제, 진통제, 면역조절제 및 세포보호제로부터 독립적으로 선택된 1종 이상의 치료적 활성제와 병용하여 본 발명의 화합물을 투여하는 것이 유리할 수 있다.

"병용 요법"이라는 용어는 본 발명에 기재된 치료 질병, 장애 또는 병태를 치료하기 위한 2종 이상의 치료제의 투여를 지칭한다. 이러한 투여는 이들 치료제를 실질적으로 동시적인 방식으로, 예컨대 고정된 비율의 활성 성분을 갖는 단일 캡슐로 공동투여하는 것을 포괄한다. 대안적으로, 이러한 투여는 각 활성 성분에 대해 여러 용기로 또는 개별적인 용기(예를 들어, 캡슐, 산제 및 리퀴드)로 공동 투여하는 것을 포괄한다. 본 발명의 화합물 및 추가의 치료제는 동일한 투여 경로를 통해 또는 다른 투여 경로를 통해 투여될 수 있다. 분말 및/또는 액체는 투여 전에 원하는 용량으로 재구성될 수 있거나 희석될 수 있다. 또한, 이러한 투여는 거의 동시에 또는 다른 시간에 각각의 유형의 치료제를 순차적으로 사용하는 것도 포함한다. 어느 경우든, 치료 요법은 본 명세서에 기재된 질병, 병태 또는 장애를 치료하는데 있어서 약물 조합물의 유리한 효과를 제공할 것이다.

병용 요법에서 사용에 대해 고려되는 일반적인 화학치료제는 카페시타빈(Xeloda®), N4-펜톡시카보닐-5-데옥시-5-플루오로시티딘, 카보플라틴(Paraplatin®), 시스플라틴(Platinol®), 클라드리빈(Leustatin®), 시클로포스파마이드(Cytoxan® 또는 Neosar®), 시타라빈, 시토신 아라비노시드(Cytosar-U®), 시타라빈 리포좀 인젝션(DepoCyt®), 다카바진(DTIC-Dome®), 독소루비신 염산염(Adriamycin®, Rubex®), 플루다라빈 포스페이트(Fludara®), 5-플루오로우라실(Adrucil®, Efudex®), 겜시타빈(디플루오로데옥시시티딘), 이리노테칸(Camptosar®), L-아스파라기나제(ELSPAR®), 6-머캅토퓨린(Purinethol®), 메토트렉세이트(Folex®), 펜토스타틴, 6-티오구아닌, 티오테파, 및 주사용 토포테칸 염산염(Hycamptin®)을 포함한다.

본 발명의 화합물과 병용하기 위한 특정 관심 대상의 항암제는 하기를 포함한다:

포스포이노시티드 3-키나제(PI3K) 저해제: 4-[2-(1H-인다졸-4-일)-6-[[4-(메틸설폰일)피페라진-1-일]메틸]티에노[3,2-d]피리미딘-4-일]모르폴린(GDC 0941로도 알려져 있으며, PCT 공개 번호 WO 09/036082 및 WO 09/055730에 기재되어 있음); 4-(트리플루오로메틸)-5-(2,6-디모르폴리노피리미딘-4-일)피리딘-2-아민(BKM120 또는 NVP-BKM120으로도 알려져 있으며, PCT 공개 번호 WO2007/084786에 기재되어 있음); 알펠리십(BYL719): (5Z)-5-[[4-(4-피리디닐)-6-퀴놀리닐]메틸렌]-2,4-티아졸리딘디온(GSK1059615, CAS 958852-01-2); 5-[8-메틸-9-(1-메틸에틸)-2-(4-모르폴리닐)-9H-퓨린-6-일]-2-피리미딘아민(VS-5584, CAS 1246560-33-7) 및 에베롤리무스(AFINITOR^®).

미토겐-활성화 단백질 키나제(MEK) 저해제: XL-518(GDC-0973로도 알려짐, Cas No. 1029872-29-4, ACC Corp.으로부터 입수 가능); 셀루메티닙(5-[(4-브로모-2-클로로페닐)아미노]-4-플루오로-N-(2-히드록시에톡시)-1-메틸-1H-벤즈이미다졸-6-카복스아미드, AZD6244 또는 ARRY 142886으로도 알려져 있고, PCT 공개 번호 WO2003077914에 기재됨); 2-[(2-클로로-4-요오도페닐)아미노]-N-(시클로프로필메톡시)-3,4-디플루오로-벤즈아미드(CI-1040 또는 PD184352로도 알려져 있고, PCT 공개 번호 WO2000035436에 기재됨); N-[(2R)-2,3-디히드록시프로폭시]-3,4-디플루오로-2-[(2-플루오로-4-요오도페닐)아미노]-벤즈아미드(PD0325901로도 알려져 있으며 PCT 공개 번호 WO2002006213에 기재된 바와 같음); 2,3-비스[아미노[(2-아미노페닐)티오]메틸렌]-부탄디니트릴(U0126으로도 알려져 있으며, 미국 특허 제2,779,780호에 기재됨); N-[3,4-디플루오로-2-[(2-플루오로-4-요오도페닐)아미노]-6-메톡시페닐]-1-[(2R)-2,3-디히드록시프로필]-사이클로프로판설폰아미드(RDEA119 또는 BAY869766으로도 알려져 있으며, PCT 공개 번호 WO2007014011에 기재된 바와 같음); (3S,4R,5Z,8S,9S,11E)-14-(에틸아미노)-8,9,16-트리히드록시-3,4-디메틸-3,4,9, 19-테트라히드로-1H-2-벤즈옥사시클로테트라데신-1,7(8H)-디온](E6201로도 알려져 있으며, PCT 공개 번호 WO2003076424에 기재됨); 2'-아미노-3'-메톡시플라본(독일에 소재한 Biaffin GmbH & Co., KG로부터 입수 가능한 PD98059로서 알려져 있음); (R)-3-(2,3-디히드록시프로필)-6-플루오로-5-(2-플루오로-4-요오도페닐아미노)-8-메틸피리도[2,3-d]피리미딘-4,7(3H,8H)-디온(TAK-733, CAS 1035555-63-5); 피마서팁(AS-703026, CAS 1204531-26-9); 트라메티닙 디메틸 설폭시드(GSK-1120212, CAS 1204531-25-80); 2-(2-플루오로-4-요오도페닐아미노)-N-(2-히드록시에톡시)-1,5-디메틸-6-옥소-1,6-디히드로피리딘-3-카복스아미드(AZD 8330); 3,4-디플루오로-2-[(2-플루오로-4-요오도페닐)아미노]-N-(2-히드록시에톡시)-5-[(3-옥소-[1,2]옥사지난-2-일)메틸]벤즈아미드(CH 4987655 또는 Ro 4987655); (); 및 5-[(4-브로모-2-플루오로페닐)아미노]-4-플루오로-N-(2-히드록시에톡시)-1-메틸-1H-벤즈이미다졸-6-카복스아미드(MEK162).

표피성장인자 수용체(EGFR) 저해제: 에를로티닙 염산염(Tarceva®), 게피티닙(Iressa®); 다코미티닙(PF299804); N-[4-[(3-클로로-4-플루오로페닐)아미노]-7-[[(3"S")-테트라히드로-3-푸라닐]옥시]-6-퀴나졸리닐]-4(디메틸아미노)-2-부텐아미드, Tovok®); 반데타닙(Caprelsa®); 라파티닙(Tykerb®); (3R,4R)-4-아미노-1-((4-((3-메톡시페닐)아미노)피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-5-일)메틸)피페리딘-3-올(BMS690514); 카너티닙 이염산염(CI-1033); 6-[4-[(4-에틸-1-피페라지닐)메틸]페닐]-N-[(1R)-1-페닐에틸]-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-4-아민(AEE788, CAS 497839-62-0); 무브리티닙(TAK165); 펠리티닙(EKB569); 아파티닙(BIBW2992); 네라티닙(HKI-272); N-[4-[[1-[(3-플루오로페닐)메틸]-1H-인다졸-5-일]아미노]-5-메틸피롤로[2,1-f][1,2,4]트리아진-6-일]-카밤산, (3S)-3-모르폴리닐메틸 에스테르 (BMS599626); N-(3,4-디클로로-2-플루오로페닐)-6-메톡시-7-[[(3aα,5β,6aα)-옥타히드로-2-메틸시클로펜타[c]피롤-5-일]메톡시]-4-퀴나졸린아민(XL647, CAS 781613-23-8); 및 4-[4-[[(1R)-1-페닐에틸]아미노]-7H-피롤로[2,3-d]피리미딘-6-일]-페놀(PKI166, CAS 187724-61-4).

EGFR 항체: 세툭시맙(Erbitux®); 파니투무맙(Vectibix®); 마투주맙(EMD-72000); 트라스투주맙(Herceptin®); 니모투주맙(hR3); 잘루투무맙; TheraCIM h-R3; MDX0447(CAS 339151-96-1); 및 ch806(mAb-806, CAS 946414-09-1).

MAPK 저해제: 베무라피닙(Zelboraf®), 소라피닙(Nexavar®), 다브레피닙(Tafinlar®), 트라메티닙(Mekinist®) 및 셀루메티닙(AZD6244, ARRY-142886)

EED/EZH2 저해제: 타제메토스타트(EPZ-6438), GSK2816126(CAS1346574-57-9), CPI-1205(CAS 1621862-70-1) 및 DS-3201(DS-3201b로도 알려짐, Daiichi Sankyo, Inc).

면역관문 조절제: 펨브롤리주맙(Keytruda®), 니볼루맙(Opdivo®), 아테졸리주맙(Tecentriq®) 및 이필리무맙(Yervoy®).

일부 환자는 본 발명의 화합물 및/또는 다른 항암제(들)에 대해, 투여 동안 또는 그 후에 알레르기 반응을 경험할 수 있고; 따라서, 알레르기 반응의 위험을 최소화하기 위해 항알레르기제가 종종 투여된다. 적합한 항알레르기제에는 코르티코스테로이드(Knutson, S., et al., PLoS One, DOI:10.1371/journal.pone.0111840 (2014)), 예컨대 덱사메타손(예를 들어, Decadron®), 베클로메타손(예를 들어, Beclovent®), 히드로코르티손(또한 코르티손, 히드로코르티손 숙신산나트륨, 히드로코르티손 인산나트륨으로도 알려져 있고, 상표명 Ala-Cort®, 히드로코르티손 인산염, Solu-Cortef®, Hydrocort Acetate® 및 Lanacort®로 시판됨), 프레드니솔론(상표명 DeltaCortel®, Orapred®, Pediapred® 및 Prelone®으로 판매됨), 프레드니손(상표명 Deltasone®, Liquid Red®, Meticorten® 및 Orasone®으로 판매됨), 메틸프레드니솔론(또한 6-메틸프레드니솔론, 메틸프레드니솔론 아세테이트, 메틸프레드니솔론 숙신산나트륨으로도 알려져 있음, 상표명 Duralone®, Medralone®, Medrol®, M-Prednisol® 및 Solu-Medrol®로 판매됨); 항히스타민제, 예컨대 디펜히드라민(예를 들어, Benadryl®), 히드록시진 및 시프로헵타딘; 및 기관지확장제, 예컨대 베타-아드레날린성 수용체 효능제, 알부테롤(예를 들어, Proventil®) 및 테르부탈린(Brethine®)이 포함된다.

일부 환자는 본 발명의 화합물 및/또는 다른 항암제(들)의 투여 동안 및 그 후에 오심을 경험할 수 있고; 따라서, 오심(상부 위) 및 구토를 방지하기 위해 항구토제가 사용된다. 적합한 항구토제는 아프레피탄트(Emend®), 온단세트론(Zofran®), 그라니세트론 HCl(Kytril®), 로라제팜(Ativan®), 덱사메타손(Decadron®), 프로클로르페라진(Compazine®), 카소피탄트(Rezonic® 및 Zunrisa®) 및 이들의 조합물.

치료 기간 동안 경험한 통증을 완화시키기 위한 의약은 환자를 보다 편안하게 하기 위해 종종 처방된다. 통상의 일반의약품 진통제, 예컨대 Tylenol®이 종종 사용된다. 그러나 오피오이드 진통제 약물, 예컨대 히드로코돈/파라세타몰 또는 히드로코돈/아세트아미노펜(예를 들어, Vicodin®), 모르핀(예를 들어, Astramorph® 또는 Avinza®), 옥시코돈(예를 들어, OxyContin® 또는 Percocet®), 옥시모르폰 염산염(Opana®) 및 펜타닐(예를 들어, Duragesic®) 또한, 중등도 또는 중증 통증에 유용하다.

본 발명의 화합물과 병용하기 위한 특정 관심 대상의 면역조절제는 하기를 포함한다: 아푸투주맙(Roche®로부터 입수 가능함); 페그필그라스팀(Neulasta®); 레날리도미드(CC-5013, Revlimid®); 탈리도미드(Thalomid®), 악티미드(CC4047); 및 IRX-2(인터류킨 1, 인터류킨 2, 및 인터페론 γ를 포함한 인간 사이토카인의 혼합물, CAS 951209-71-5, IRX Therapeutics로부터 입수 가능함).

정상 세포를 치료 독성으로부터 보호하고 기관 독성을 제한하기 위한 노력으로, 세포보호제(예컨대 신경보호제, 유리-라디칼 스캐빈저, 심장보호제, 안트라시클린 혈관외유출 중화제, 영양소 등)가 보조 요법으로서 사용될 수 있다. 적합한 세포보호제는 아미포스틴(Ethyol®), 글루타민, 디메스나(Tavocept®), 메스나(Mesnex®), 덱스라족산(Zinecard® 또는 Totect®), 크살리프로덴(Xaprila®) 및 류코보린(칼슘 류코보린, 시트로보룸 인자 및 폴린산으로도 공지됨)을 포함한다.

코드 번호, 일반명 또는 상표명에 의해 확인되는 활성 화합물의 구조는 표준 일람 ["The Merck Index"] 현행판 또는 데이터베이스, 예를 들어 Patents International(예를 들어, IMS World Publications)로부터 얻을 수 있다.

일 실시형태에서, 본 발명은 본 발명의 적어도 1종의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 인간 또는 동물 대상체에게 투여하는데 적합한 약제학적으로 허용 가능한 담체와 함께, 단독으로 또는 다른 항암제와 함께 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.

다른 실시형태에서, 본 발명은 세포 증식성 질환, 예컨대 악성 종양을 앓고 있는 인간 또는 동물 대상체를 치료하는 방법을 제공한다. 본 발명은 치료적 유효량의 본 발명의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 단독으로 또는 다른 항암제와 병용하여 세포 증식성 질환의 치료가 필요한 인간 또는 동물 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 상기 대상체를 치료하는 방법을 제공한다.

특히, 조성물은 조합 치료제로서 함께 제형화되거나 별개로 투여될 것이다.

일 실시형태에서, 본 발명은 폐 암종(비소세포 폐암종, 폐 선암종, 폐 암종, 거대 세포 폐 암종, 비소세포 폐암종, 폐 편평 세포 암종, 소세포 폐암을 포함하지만, 이들로 제한되지 않음)의 치료를 위한 본 발명의 화합물 또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 아비트렉세이트(메토트렉세이트), 아브락산(파클리탁셀 알부민-안정화 나노입자 제형), 아파티닙 디말리에이트, 아피니토르(에베롤리무스), 알레센자(알렉티닙), 알렉티닙, 알림타(페메트렉세드 이나트륨), 아바스틴(베바시주맙), 베바시주맙, 카보플라틴, 세리티닙, 크리조티닙, 사이람자(라무시루맙), 도세탁셀, 에를로티닙 염산염, 에베롤리무스, 폴렉스(메토트렉세이트), 폴렉스 PFS(메토트렉세이트), 게피티닙, 길로트리프(아파티닙 디말리에이트), 겜시타빈 염산염, 겜자르(겜시타빈 염산염), 이레사(게피티닙), 키트루다(펨브롤리주맙), 메클로르에타민 염산염, 메토트렉세이트, 메토트렉세이트 LPF(메토트렉세이트), 멕세이트(메토트렉세이트), 멕세이트-AQ(메토트렉세이트), 무스타르겐(메클로르에타민 염산염), 나벨빈(비노렐빈 타르트레이트),네시투무맙, 니볼루맙, 옵디보(니볼루맙), 오시머티닙, 파클리탁셀, 파클리탁셀 알부민-안정화된 나노입자 제형, 파라플라트(카보플라틴), 파라플라틴(카보플라틴), 펨브롤리주맙, 페메트렉세드 이나트륨, 포르트라자(네시투무맙), 라무시루맙, 타그리소(오시머티닙), 타세바(에를로티닙 염산염), 탁솔(파클리탁셀), 탁소텔(도세탁셀),비노렐빈 타르트레이트, 잘코리(크리조티닙), 자이카디아(세리티닙), 카보플라틴-탁솔 및 겜시타빈-시스플라틴으로 이루어진 군으로부터 선택되는 1종 이상의 치료적 활성제를 포함하는 약제학적 조합물을 제공한다.

다른 실시형태에서, 본 발명은 흑색종(피부 흑색종, 결합조직형성 흑색종 및 포도막흑색종을 포함하지만, 이들로 제한되지 않음)의 치료를 위해, 본 발명의 화합물 또는 이들의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 알데스류킨, 콤비메티닙, 코텔릭(콤비메티닙), 다브라페닙, 다카바진, DTIC-Dome(다카바진), IL-2(알데스류킨), ImLygic(탈리모겐 라허파렙벡), 인터류킨-2(알데스류킨), 인트론 A(재조합 인터페론 Alfa-2b), 이필리무맙, 키트루다(펨브롤리주맙), 메키니스트(트라메티닙), 니볼루맙, 옵디보(니볼루맙), 페그인터페론 알파-2b, PEG-인트론(페그인터페론 알파-2b), 펨브롤리주맙, 프로류킨(알데스류킨), 재조합 인터페론 알파-2b, 실라트론(페그인터페론 알파-2b), 타핀라(다브라페닙), 탈리모겐 라허파렙벡, 트라메티닙, 베무라페닙, 여보이(이필리무맙) 및 젤보라프(베무라페닙)로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상의 치료적 활성제를 포함하는 약제학적 조합물을 제공한다.

악성 종양의 치료를 위한 병용 요법에서, 본 발명의 화합물 및 다른 항암제(들)는 동시에, 공동으로 또는 어떠한 구체적 시간 제한 없이 순차적으로 투여될 수 있으며, 여기서 이러한 투여는 대상체의 신체 내에서 2종의 화합물의 치료적으로 유효한 수준을 제공한다.

바람직한 실시형태에서, 본 발명의 화합물 및 다른 항암제(들)는 일반적으로 주입에 의해 또는 경구로 임의의 순서로 순차적으로 투여된다. 투약 요법은 질환의 병기, 환자의 신체적 적합도, 개별 약물의 안전성 프로파일 및 개별 약물의 내약성과, 조합물을 투여하는 주치의 및 개업의(들)에게 주지된 다른 기준에 따라 달라질 수 있다. 본 발명의 화합물 및 다른 항암제(들)는 치료에 사용되는 특정한 사이클에 따라 서로 수분, 수시간, 수일, 또는 심지어 수주 내로 간격을 두고 투여될 수 있다. 또한, 주기는 치료 주기 동안 하나의 약물을 다른 것보다 더 자주 투여하는 것 및 약물의 투여당 상이한 용량으로 투여하는 것을 포함할 수 있다.

본 발명의 다른 양상에서, 둘 이상의 개별 약제학적 조성물을 포함하는 키트가 제공된되며, 이 중 적어도 하나는 본 발명의 화합물을 함유한다. 일 실시형태에서, 키트는 상기 조성물들을 개별적으로 보유하는 수단, 예컨대 용기, 분리형 병, 또는 분리형 포일 패킷을 포함한다. 그러한 키트의 예로는 정제, 캡슐 등의 패키징에 전형적으로 사용되는 것과 같은 블리스터 팩이 있다.

본 발명의 키트는 상이한 투여 형태, 예를 들어, 경구 및 비경구 투여 형태를 투여하기 위해, 상이한 투여 간격으로 별개의 조성물을 투여하기 위해, 또는 서로에 대해 별개의 조성물들을 적정하기 위해 사용될 수 있다. 순응성을 돕기 위해, 본 발명의 키트는 통상적으로 투여 지침을 포함한다.

본 발명의 화합물은 또한 공지된 치료 과정, 예를 들어 호르몬의 투여 또는 특히 방사선과 병용하여 유리하게 사용될 수 있다. 본 발명의 화합물은 특히 방사선증감제로서, 특히 방사선요법에 대해 불량한 감수성을 나타내는 종양의 치료를 위해 사용될 수 있다.

본 발명의 병용 요법에서, 본 발명의 화합물 및 다른 치료제는 동일하거나 상이한 제조자에 의해 제조 및/또는 제형화될 수 있다. 또한, 본 발명의 화합물 및 다른 치료제(또는 약제)는: (i) 의사에게 조합 제품을 배포하기 이전에(예컨대, 본 발명의 화합물 및 다른 치료제를 포함하는 키트의 경우에); (ii) 투여 직전에 의사 자신에 의해(또는 의사의 지도 하에); (iii) 환자 자신에 의해, 예컨대, 본 발명의 화합물 및 다른 치료제를 순차적으로 투여하는 동안, 병용 요법으로 합해질 수 있다.

적용을 위한 약제학적 조성물(또는 제형)은 약물을 투여하기 위해 사용되는 방법에 따라 다양한 방식으로 패키징될 수 있다. 일반적으로, 유통용 물품은 약제학적 제형이 적절한 형태로 놓여있는 용기를 포함한다. 적합한 용기는 당업자에게 주지되어 있고, 병(플라스틱 및 유리), 사세(sachet), 앰풀, 플라스틱 백, 금속 실린더 등과 같은 물질을 포함한다. 용기는 또한, 패키지의 내용물에 무분별하게 접근하는 것을 방지하기 위하여 부정 조작 방지 조립물을 포함할 수 있다. 또한, 용기에는 용기의 내용물을 설명하는 라벨이 부착된다. 라벨은 또한 적절한 경고문을 포함할 수 있다.

본 발명의 약제학적 조성물 또는 조합물은 약 50 내지 70 ㎏의 대상체의 경우, 약 1 내지 1000 ㎎의 유효 성분(들), 또는 약 1 내지 500 ㎎ 또는 약 1 내지 250 ㎎ 또는 약 1 내지 150 ㎎ 또는 약 0.5 내지 100 ㎎, 또는 약 1 내지 50 ㎎의 유효 성분의 단위 투약량으로 존재할 수 있다. 화합물, 약제학적 조성물, 또는 이들의 조합의 치료적으로 유효한 투약량은 대상체의 종, 체중, 연령 및 개별 상태, 치료되는 장애 또는 질환 또는 이의 중증도에 따라 달라진다. 통상의 의사, 임상의 또는 수의사는 장애 또는 질환의 진행을 예방, 치료 또는 억제하는 데 필요한 각각의 활성 성분의 유효량을 용이하게 결정할 수 있다.

위에 언급된 투약량 특성은 유리하게도 포유류, 예컨대, 마우스, 랫트, 개, 원숭이 또는 분리된 기관, 조직 및 이의 제제를 이용한 체외 및 체내 시험에서 증명할 수 있다. 본 발명의 화합물은 체외에서 용액, 예컨대, 수성 용액의 형태로, 그리고 체내에서 장용으로, 비경구적으로, 유리하게는 정맥내로, 예컨대, 현탁액 또는 수성 용액으로 적용될 수 있다. 시험관 내 투약량은 약 10^-3 몰 내지 10^-9 몰 농도의 범위일 수 있다. 생체 내 치료적 유효량은 투여 경로에 따라, 약 0.1 내지 500 ㎎/kg, 또는 약 1 내지 100 ㎎/kg의 범위일 수 있다.

약리학 및 효용

SWI/SNF 염색질 리모델링 복합체의 돌연변이는 암에서 매우 일반적이며, 대략 20%의 빈도로 생긴다(Kadoch, C., Hargreaves, D. C., et al. 2013 Nat Genet. 45: 592-601)(Shain, A.H., and Pollack, J.R. 2013 PLoS ONE 8(1): e55119). SWI/SNF 복합체는 다중 서브유닛으로 이루어지며, 중요한 세포 사건, 예컨대 유전자 발현의 조절을 제어하기 위한 염색질의 ATP-의존적 리모델링에서 작용한다. SWI/SNF 복합체 내의 촉매적 ATP분해효소 서브유닛은 BRM/SMARCA2 또는 BRG1/SMARCA4 중 하나로 이루어지고, 따라서 상호 배타적이다(Hodges, C., Kirkland, J.G., et al. 2016 Cold Spring Harb Persp Med 6(8)). shRNA를 통한 기능적 게놈 선별은 이들 두 SWI/SNF ATP분해효소, 즉, BRM 및 BRG1 간에 강력한 합성치사 관계를 나타내었다(문헌[Hoffman, G.R; Rahal, R et al. 2014 PNAS 111(8): 3128-33]; 문헌[Wilson, B.G., Helming, K.C., et al. 2014 Molecular and Cellular Biology 34(6): 1136-44]). 특히, 예컨대 기능상실 돌연변이 또는 결실을 통해 기능적 BRG1을 결여하는 암세포는 shRNA 매개 넉다운을 통한 BRM의 고갈에 절묘하게 민감하여, 성장 저해를 초래한다(문헌[Hoffman, G.R., Rahal, R et al., 2014 PNAS 111(8): 3128-33]; 문헌[Oike, T., Ogiwara, H., et al. 2013 Cancer Research 73(17): 5508-5518]); 및 문헌[Vangamudi, B., Paul, T.A., et al. 2015 Cancer Research 75(18): 3865-3878]). 따라서, 이들 연구는 SWI/SNF ATP분해효소 중 하나의 부재 하에, 암세포가 생존을 위해 남아있는 ATP분해효소에 고도로 의존적일 수 있어서, 표적 요법에 이용될 수 있는 약점을 노출한다는 것을 나타낸다. BRG1에서의 유전적 병변은 사실 다양한 암에서, 대부분 비-소세포 폐암에서 대략 10%로 확인되었지만, 다른 암 유형, 예컨대 간, 췌장암, 흑색종 등에서도 확인되었다. (문헌[Imielinski, M., A. H. Berger, et al. (2012) Cell 150(6): 1107-1120]; The Cancer Genome Atlas (TCGA) Data Portal, 및 cBioPortal for Cancer Genomics). 이렇게 해서, 이들은 분명하게 충족되지 않은 의학적 필요를 갖는 매우 유의한 환자 집단을 구성하며, BRM의 치료적 저해가 유리한 것으로 예측되었다. 특정 암세포가 BRG1 기능 상실로 인해 BRM에 의존적인 것처럼, 흥미롭게도, 다른 암 유형은 SWI/SNF 복합체의 다른 서브유닛에서의 돌연변이를 포함하는 다양한 메커니즘을 통해 잠재적으로 발생되는 BRG1-의존적이 되는 것으로 보고되었다(문헌[Shi, J; Whyte, W.A., et al. 2013 Genes and Development 27(24): 2648-2662]; 문헌[Xi, W., Sansam, C.G., et al. 2009 Cancer Research 69(20): 8094-8101]; 및 문헌[Zuber, J., Shi, J., et al. 2011 Nature 478(7370), 524-528]). 또한, SWI/SNF 활성이 다른 질환 상황에서 변경되는 것으로 보고되었는데, 이는 이것을 암 이외의 다른 질환에서 매력적인 치료제로 만든다(Han, P., Li, W., et al. 2014 Nature 514(7520): 102-06). 따라서, ATP분해효소 중 하나 또는 둘 다를 저해할 가능성은 상이한 유형의 암 및 질환을 치료함에 있어서 다중 적용을 가질 수 있다.

기능상실을 야기할 수 있는 BRG1 돌연변이, 결실 또는 발현의 상실은 다양한 유형의 암에서 생길 수 있다(문헌[The Cancer Genome Atlas (TCGA) Data Portal; the cBioPortal for Cancer Genomics]; 문헌[Becker, T. M., S. Haferkamp, et al. (2009) Mol Cancer 8: 4.]; 문헌[Matsubara, D., Kishaba, Y., et al. 2013 Cancer Science 104(2): 266-273]; 및 문헌[Yoshimoto, T., Matsubara, D., et al. 2015 Pathology International 65(11): 595-602]). BRG1 돌연변이, 결실, 발현의 상실을 갖는 구체적 암 유형의 예는 비소세포 폐암종, 폐 선암종, 폐 암종, 거대 세포 폐 암종, 비소세포 폐암종, 폐 편평 세포 암종, 소세포 폐암, 피부 흑색종, 결합조직형성 흑색종, 포도막흑색종, 난소의 소세포 암종, 피부 편평 세포 암종, 신경교종, 자궁 암육종, 자궁 체부 내막 암종, 난소 장액낭선암종, 방광 요로 상피세포 암종, 원발성 중추 신경계 림프종, 식도 암종, 방광암, 방광암 형질세포양 변이, 위 선암종, 선낭암종, 림프양 신생물 미만성 거대 B-세포림프종, 췌장암, 직장결장 선암종, 담낭암, 육종, 두경부암, 자궁 및 자궁경관내 암, 수모세포종, 피부 T 세포 림프종, 간세포암종, 신장 유두상 세포 암종, 유방암, 맨틀 세포 림프종, 담낭암, 고환 생식 세포암, 신장 세포 투명 세포 암종, 전립선암, 소아 유잉 육종, 흉선종, 신장 혐색소세포, 신장 비-투명 세포 암종, 크롬친화세포종 및 부신경절종, 갑상선암을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

BRG1-의존성이 입증된 악성 간상 종양을 포함하는 SMARCB1/SNF5-돌연변이체 암(Xi, W., Sansam, C.G., et al. 2009 Cancer Research 69(20): 8094-8101)뿐만 아니라 SMARCB1/SNF-돌연변이체 상피모양 육종, 가족성 신경초종증, 신장 수질 암종 및 유잉 육종(문헌[Jahromi, M.S; Putnam, A.R, et al. 2012 Cancer Genetics 205(7-8): 391-404]; 문헌[Prensner, J.R., Iyer, M.K., et al. 2013 Nature Genetics 45(11): 1392-8]; 및 문헌[Roberts, C.W.M., and Biegel, J.A., 2009 Cancer Biology and Thereapy 8(5): 412-416]) 및 돌연변이를 통해 생기지 않는 SWI/SNF 복합체에서의, 예컨대 활막 육종에서의 SNF5가 결핍된 암(Kadoch, C., and Crabtree, G.R., 2013 Cell 153(1): 71-85)뿐만 아니라 BRG1-의존적 조혈 악성종양, 예컨대 급성 골수성 백혈병(AML)(문헌[Shi, J., Whyte, W.A., et al. 2013 Genes and Development 27(24): 2648-2662]; 및 문헌[Zuber, J., Shi, J., et al. 2011 Nature 478(7370), 524-528])이 입증되었다. BRM-돌연변이체(결실을 포함) 또는 SNF5/SMARCB1 돌연변이체(결실을 포함) 암(암 게놈 아틀라스(TCGA) 데이터 포털, 및 암 게놈에 대한 cBioPortal)은 악성 말초 신경초 종양, 신경내분비 전립선암, 유방암, 방광 요로 상피세포 암종, 선낭암종, 위 선암종, 난소 장액낭선암종, 자궁 암육종, 식도 암종, 두경부 편평세포 암종, 비소세포 폐암종, 폐 선암종, 폐 편평 세포 암종, 소세포 폐암, 췌장암, 부신겉질샘암종, 피부 흑색종, 육종, 직장결장 선암종, 자궁 및 자궁경관내 암, 간세포암종, 피부 편평 세포 암종, 고환 생식 세포암, 교모세포종, 다형성 교모세포종, 담낭암, 유잉 육종, 투명 세포 신세포 암종, 신경모세포종, 흉선종, 미만성 거대 B 세포 림프종, 급성 골수성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 수모세포종, 크롬친화세포종 및 부신경절종 및 다발성 골수종을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.

BRM, BRG1 또는 BRM 및 BRG1 저해 중 하나가 유리한 이중 저해제는 또한 ARID1A, ARID1B, ARID2, PBRM1, SMARCE1, SMARCC1, SMARCC2, PHF10, DPF1, DPF3, DPF2, ACTL6A, ACTL6B, SMARCD2, SMARCD3, SMARCD1, BCL11A, BCL11B, BCL7A, BCL7B, BCL7C, BRD9 및 ACTB와 같은, 위에서 상세히 기술된 바와 같은 BRG1/SMARCA4, BRM/SMARCA2 또는 SNF5/SMARCB1 이외의 SWI/SNF 서브유닛의 돌연변이 또는 결핍을 포함하는 암에 적용 가능할 수 있다. 다른 경우에, BRM/BRG1 ATP분해효소에 대한 의존성은 SWI/SNF 돌연변이 이외의 메커니즘으로부터 생긴다.

본 발명의 화합물은 BRM-매개 및/또는 BRG1-매개 장애 또는 질환에 대한 바람직한 치료적 이점을 가진다. 유리 형태 또는 약제학적으로 허용 가능한 염 형태의 본 발명의 화합물은 적어도 하기 시험 절차 중 하나를 이용하여 입증될 수 있는 중요한 약리학적 특성을 나타낸다. 본 발명의 화합물은 생화학적 분석에서 이들이 BRM 및 BRG1 활성을 저해하는 능력에 대해 평가되었다.

BRM ATP분해효소 저해 분석

I. 재조합 BRM ATP분해효소 도메인의 단리

A. His₁₀-ZZ-HCV3C-BRM(636-1331)의 pFastBac1로의 클로닝

His₁₀ 태그를 암호화하는 서열(서열번호 1), 단백질 A(스타필로코커스 아우레우스(Staphylococcus aureus))의 면역글로불린 G(IgG) 결합 ZZ 도메인 및 인간 리노바이러스 3C 프로테아제 부위를 표준 DNA 합성 방법을 이용하여 BRM 잔기 636 내지 1331 상류에 융합시켰다. 합성한 작제물을 정지 코돈을 포함하기 위해 다음의 5' 및 3'프라이머: 5'-GACCGAACTAGTATGGCTTCTCACCACCAT-3' (서열번호 2) 및 5'-AGCGTTAAGCTTTTAATCCTCGATGGCGCG-3' (서열번호 3)를 이용하여 PCR 증폭에 의해 pFastBac1(라이프 테크놀로지즈(Life Technologies))의 MCS에 클로닝시키고, 표준 분자 생물학 기법을 이용하여 SpeI 및 HindIII 부위에 결찰시켰다. 최종 재조합 벡터인 pFB1-His₁₀-ZZ-HCV3C-BRM(636-1331)은 ATP분해효소 및 SnAC 도메인을 암호화하는 천연 BRM 서열 상류의 HCV3C 프로테아제-절단 His₁₀-ZZ 태그(밑줄) 발현을 초래한다.

B. BRM(636-1331)의 발현

제조업자(Life Technologies)에 의해 상세히 기술된 바와 같은 표준 프로토콜을 이용하여 DH10Bac 세포로 형질전환시키는 것에 의해 재조합 박미드(bacmid)를 생성하기 위해 상기 생성된 재조합 벡터를 사용하였다. 박미드를 스포돕테라 프루기페르다 9(Spodoptera frugiperda 9: Sf9) 세포에 대해 형질감염시키고, Life Technologies에 의해 상세히 기술된 바와 같은 표준 방법을 이용하여 바이러스를 증폭시킴으로써 고 역가 P3 바이러스를 생성하였다. WAVE 생물반응기(GE Healthcare Life Sciences)에서 1:100 v/v의 바이러스로 대수 성장기(1.5×10⁶개의 세포/㎖)에 25L의 Sf9 세포로부터 His₁₀-ZZ-HCV3C-BRM(636-1331)을 발현시켰다. 27℃의 로킹 인큐베이터(rocking incubator) 상에서 감염을 진행시키고, 감염 후 3일에 감염과 일치되는 전반적 세포 직경의 증가와 함께 세포 생존도가 80%로 하락한 후에 채취하였다. 세포를 4,000×g에서 20분 동안 채취하고, 순간 냉동시키고, 사용할 때까지 -80℃에서 저장하였다.

C. BRM(636-1331)의 정제

재조합 His₁₀-ZZ-HCV3C-BRM(636-1331)을 발현시키는 Sf9 세포를 프로테아제 저해제 칵테일(Roche cOmplete)을 보충한 50 mM Tris(8.0), 300 mM NaCl, 10% 글리세롤 및 2 mM TCEP에서 세포 페이스트의 그램당 7.5 ㎖ 용해 완충액(lysis buffer)을 이용하여 용해시켰다. 세포를 해동 시 용해시키고, 균질화하고, 후속적으로 50,000×g에서 30분 동안 JA25.50 로터에서 정화시켜 불용성 물질을 제거하였다. 정화된 용해물을 5 ㎖ His-Trap HP 칼럼(GE Healthcare Life Sciences)에 적용하고, 25 mM 이미다졸을 보충한 프로테아제 저해제 없이 용해 완충제에서 격렬하게 세척하였다. 결합된 단백질을 500 mM 이미다졸을 보충한 용해 완충제에 대해 15개의 칼럼 용적 구배로 용리시켰다. His₁₀-ZZ-HCV3C-BRM(636-1331)을 함유하는 분획을 모으고, His₁₀-ZZ 태그의 제거를 달성하기 위해 HCV3C 프로테아제를 보충한 50 mM Tris(8.0), 300 mM NaCl, 10% 글리세롤 및 2 mM TCEP에 대해 밤새 투석하였다. 쿠마씨-염색한 SDS/PAGE 및 LC/MS에 의해 절단을 모니터링하였다. 온전한 질량은 HCV3C 절단 부위의 잔여물인, 2가지의 비천연 아미노산인 Gly-Pro에 의해 진행된 BRM 잔기 636-1331과 일치되었다. 예상 질량은 두 인산화 부위와 일치되게 예측한 것보다 160 Da 더 컸다.

절단 생성물을 100 mM의 최종 NaCl 농도로 염을 보충하지 않은 투석 완충제에서 희석시키고, 0.2 ㎛ 주사기 필터를 통과시키고, 50 mM Tris(8.0), 100 mM NaCl, 10% 글리세롤 및 1 mM TCEP에서 미리 평형상태로 만든 1 ㎖ HiTrap Q HP 칼럼(GE Health Biosciences)에 즉시 장입하였다. 포획 후에, 결합된 단백질은 1 M NaCl로 보충한 동일한 완충제와 경쟁하였다. BRM(636-1331)을 함유하는 분획을 모으고, 50 mM Tris(8.0), 200 mM NaCl, 10% 글리세롤 및 2 mM TCEP에서 평형상태로 만든 S200 16/60 크기 배제 칼럼에 장입하였다. 정제된 작제물을 2.5 ㎎/㎖로 농축시키고, 순간 냉동시키고, 하류 분석에서 사용할 때까지 -80℃에서 저장하였다.

II. Brm ATP분해효소 저해 활성

Brm ATP분해효소-SnAC(636-1331)의 ATP분해효소 활성의 화합물 저해를 Promega로부터의 ADP-Glo 분석 키트(V6930)를 이용함으로써 측정하였다.　 100% DMSO 중의 120 nℓ의 화합물을 EDC Biosystems로부터의 ATS 음향 전달 시스템을 이용하여 백색의 384 웰 마이크로타이터 분석 플레이트에 옮겼다.　 MultiFlo FX 멀티-모드 디스펜서를 이용하여 모든 후속 시약 첨가를 수행하였다.　 분석 완충제는 20 mM HEPES pH 7.5, 1 mM MgCl₂, 20 mM KCl, 1 mM DTT, 0.01% BSA, 0.005% Tween 20이었다.　 분석 완충제 중의 4 ㎕의 7.5 nM Brm ATP분해효소-SnAC를 분석 플레이트에 첨가하고, 5분 동안 화합물과 함께 인큐베이션하였다.　 분석 완충제 중의 2 ㎕의 255 μM ATP 및 6 nM pCMV-dR8.91 플라스미드를 분석 플레이트에 첨가하여 반응을 개시하였다.　 시약의 최종 농도는 5nM BRM ATP분해효소-SnAC, 85 μM ATP, 및 2 nM pCMV-dR8.91 플라스미드였다.　 ATP분해효소 반응물을 실온에서 60분 동안 인큐베이션하였다.　 3 ㎕의 ADP-Glo 시약을 첨가하여 반응을 중단시키고, 30분 동안 실온에서 인큐베이션하였다.　 3 ㎕의 키나제 검출 시약을 분석 플레이트에 첨가하였고, 이를 90분 동안 실온에서 인큐베이션하였다.　 초민감 발광 검출을 이용하는 2103 Multilabel Envision 판독기로 플레이트를 판독하였다.　 화합물 농도에 대해 플롯팅한 저해값%의 비선형 회귀 분석에 의해 이중 데이터 지점의 평균으로부터 IC₅₀ 값을 결정하였다.

BRG1 ATP분해효소 저해 분석

I. 재조합 BRG1 ATP분해효소 도메인의 단리

A. BRG1(658-1361)-His₆의 pDEST8에의 클로닝

곤충 세포에서 발현을 위한 작제물 BRG1(658-1361)-His₆을 다음과 같이 PCR에 의해 전장 BRG1 플라스미드인 pDONR221-BRG1-His₆(OPS7173)로부터 서브클로닝하였다. 다음의 프라이머를 이용하여 BRG1(658-1361)-His₆을 암호화하는 ATTB 측접 PCR 단편을 생성하였다:

제조업자의 프로토콜(Life Technologies)에 따라 Gateway® 방법을 이용하여 벡터 pDEST8 내로 이 PCR 단편을 재조합하였다. 서열분석에 의해 삽입을 확인하였고, 박미드 생성으로의 진행 전에 OPS 데이터베이스(OPS8023)에 입력하였다.

B. BRG1(658-1361)-His₆의 발현

제조업자(Life Technologies)에 의해 상세히 기술된 바와 같은 표준 프로토콜을 이용하여 DH10Bac 세포로 형질전환시키는 것에 의해 재조합 박미드를 생성하기 위해 상기 생성된 재조합 벡터를 사용하였다. 박미드를 스포돕테라 프루기페르다 9(Sf9) 세포로 형질감염시키고, Life Technologies에 의해 상세히 기술된 바와 같은 표준 방법을 이용하여 바이러스를 증폭시킴으로써 고 역가 P3 바이러스를 생성하였다. BRG1(658-1361)-His₆을 15개의 바이러스/세포로 대수성장기(1.5 내지 3.9×10⁶개의 세포/㎖)에 Sf9 세포로부터 발현시켰다. 27℃의 로킹 인큐베이터 상에서 감염을 진행시키고, 감염 후 3일에 감염과 일치되는 전반적 세포 직경의 증가와 함께 세포 생존도가 80%로 하락한 후에 채취하였다. 세포를 4,000×g에서 20분 동안 채취하고, 순간 냉동시키고, 사용할 때까지 -80℃에서 저장하였다.

C. BRG1(658-1361)-His₆의 정제

재조합 BRG1(658-1361)-His₆을 발현시키는 Sf9 세포를 프로테아제 저해제 칵테일(Roche cOmplete)을 보충한 50 mM Tris(8.0), 300 mM NaCl, 5% 글리세롤 및 1 mM TCEP에서 세포 페이스트의 그램당 7.5 ㎖ 용해 완충액을 이용하여 용해시켰다. 세포를 해동 시 용해시키고, 균질화하고, 후속적으로 50,000×g에서 30분 동안 JA25.50 로터에서 정화시켜 불용성 물질을 제거하였다. 정화된 용해물을 5 ㎖ His-Trap HP 칼럼(GE Healthcare Life Sciences)에 적용하고, 20 mM 이미다졸을 보충한 프로테아제 저해제 없이 용해 완충제에서 격렬하게 세척하였다. 결합된 단백질을 250 mM 이미다졸을 보충한 용해 완충제에 대해 10개의 칼럼 용적 구배로 용리시켰다. BRG1(658-1361)-His₆을 함유하는 분획을 모으고, 50 mM Tris pH 8.0, 5% 글리세롤 및 1 mM TCEP를 이용하여 전도도가 약 6 mS/㎝(~60 mM NaCl)에 도달될 때까지 희석시키고, 0.2㎛ 필터를 통과시키고, 50 mM Tris(pH8.0), 100 mM NaCl, 5% 글리세롤, 및 1 mM TCEP에서 미리 평형상태로 만든 5 ㎖ HiTrap Q HP 칼럼(GE Health Biosciences)에 즉시 장입하였다. 포획 후에, 결합된 단백질은 1 M NaCl로 보충한 동일한 완충제와 경쟁하였다. BRG1(658-1361)-His₆을 함유하는 분획을 모으고, 50 mM Tris(8.0), 200 mM NaCl, 5% 글리세롤 및 1 mM TCEP에서 평형상태로 만든 S200 16/60 크기 배제 칼럼에 장입하였다. 정제된 작제물을 1 내지 2.5 ㎎/㎖로 농축시키고, 순간 냉동시키고, 하류 분석에서 사용할 때까지 -80℃에서 저장하였다.

BRG1 ATP분해효소 저해 활성

Brg1 ATP분해효소-SnAC(658-1361)의 ATP분해효소 활성의 화합물 저해를 Promega로부터의 ADP-Glo 분석 키트(V6930)를 이용함으로써 측정하였다.　 100% DMSO 중의 120 nℓ의 화합물을 EDC Biosystems로부터의 ATS 음향 전달 시스템을 이용하여 백색의 384 웰 마이크로타이터 분석 플레이트에 옮겼다.　 MultiFlo FX 멀티-모드 디스펜서를 이용하여 모든 후속 시약 첨가를 수행하였다.　 분석 완충제는 20 mM HEPES pH 7.5, 1 mM MgCl₂, 20 mM KCl, 1 mM DTT, 0.01% BSA, 0.005% Tween 20이었다.　 분석 완충제 중의 4 ㎕의 7.5 nM Brg1 ATP분해효소-SnAC를 분석 플레이트에 첨가하고, 5분 동안 화합물과 함께 인큐베이션하였다.　 분석 완충제 중의 2 ㎕의 195 μM ATP 및 6 nM pCMV-dR8.91 플라스미드를 분석 플레이트에 첨가하여 반응을 개시하였다.　시약의 최종 농도는 5nM Brg1 ATP분해효소-SnAC, 65 μM ATP, 및 2 nM pCMV-dR8.91 플라스미드였다.　 ATP분해효소 반응물을 실온에서 60분 동안 인큐베이션하였다.　 3 ㎕의 ADP-Glo 시약을 첨가하여 반응을 중단시키고, 30분 동안 실온에서 인큐베이션하였다.　 3 ㎕의 키나제 검출 시약을 분석 플레이트에 첨가하였고, 이를 90분 동안 실온에서 인큐베이션하였다.　 초민감 발광 검출을 이용하는 2103 Multilabel Envision 판독기로 플레이트를 판독하였다.　 화합물 농도에 대해 플롯팅한 저해값%의 비선형 회귀 분석에 의해 이중 데이터 지점의 평균으로부터 IC₅₀ 값을 결정하였다.

BRM/BRG1 ATP분해효소 저해 분석을 위해 사용한 pCMV-dR8.91 플라스미드:

시약을 구비한 형질전환 프로토콜 후에 One Shot Stbl3 화학적으로 적격인 이콜라이(E. coli)(카탈로그 번호 C73C7303, Invitrogen/Thermo Fisher Scientific)를 이용하여 플라스미드 주형 pCMV-dR8.91(이하의 서열 참조)을 증식시킨다.　 이어서, 암피실린/카베니실린 항생제 선택 배지(카탈로그 번호 L1010, Teknova)를 함유하는 LB 한천 플레이트 상에서 형질전환된 박테리아 콜로니를 선택한다.　 　Qiagen 플라스미드 단리 키트(Maxi prep, 제품 Id 번호 10063)를 구비한 제조업자 프로토콜에 따라 필요한 규모에 따라 단리한 플라스미드 DNA 및 100 마이크로그램/㎖로 암피실린을 함유하는 LB 액체 브로스(카탈로그 번호 10855001, Invitrogen)에서 박테리아 콜로니를 성장시켰다.

상기 기재한 두 분석(예를 들어, BRM ATP분해효소 저해 분석; 및 BRG1 ATP분해효소 저해 분석)으로부터의 본 발명의 대표적인 화합물의 저해 활성 데이터를 다음의 표 1에 제공한다.

SEQUENCE LISTING <110> NOVARTIS AG <120> UREA COMPOUNDS AND USES THEREOF <130> PAT057524-US-PSP <140> <141> <160> 8 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic 10xHis tag <400> 1 His His His His His His His His His His 1 5 10 <210> 2 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 2 gaccgaacta gtatggcttc tcaccaccat 30 <210> 3 <211> 30 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 3 agcgttaagc ttttaatcct cgatggcgcg 30 <210> 4 <211> 852 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 4 Met Ala Ser His His His His His His His His His His Ala Gln His 1 5 10 15 Asp Glu Ala Val Asp Asn Lys Phe Asn Lys Glu Gln Gln Asn Ala Phe 20 25 30 Tyr Glu Ile Leu His Leu Pro Asn Leu Asn Glu Glu Gln Arg Asn Ala 35 40 45 Phe Ile Gln Ser Leu Lys Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ala Asn Leu Leu 50 55 60 Ala Glu Ala Lys Lys Leu Asn Asp Ala Gln Ala Pro Lys Val Asp Asn 65 70 75 80 Lys Phe Asn Lys Glu Gln Gln Asn Ala Phe Tyr Glu Ile Leu His Leu 85 90 95 Pro Asn Leu Asn Glu Glu Gln Arg Asn Ala Phe Ile Gln Ser Leu Lys 100 105 110 Asp Asp Pro Ser Gln Ser Ala Asn Leu Leu Ala Glu Ala Lys Lys Leu 115 120 125 Asn Asp Ala Gln Ala Pro Lys Val Asp Ala Asn Gly Gly Gly Gly Ser 130 135 140 Gly Gly Gly Gly Ser Leu Glu Val Leu Phe Gln Gly Pro Glu Glu Ser 145 150 155 160 Asp Ser Asp Tyr Glu Glu Glu Asp Glu Glu Glu Glu Ser Ser Arg Gln 165 170 175 Glu Thr Glu Glu Lys Ile Leu Leu Asp Pro Asn Ser Glu Glu Val Ser 180 185 190 Glu Lys Asp Ala Lys Gln Ile Ile Glu Thr Ala Lys Gln Asp Val Asp 195 200 205 Asp Glu Tyr Ser Met Gln Tyr Ser Ala Arg Gly Ser Gln Ser Tyr Tyr 210 215 220 Thr Val Ala His Ala Ile Ser Glu Arg Val Glu Lys Gln Ser Ala Leu 225 230 235 240 Leu Ile Asn Gly Thr Leu Lys His Tyr Gln Leu Gln Gly Leu Glu Trp 245 250 255 Met Val Ser Leu Tyr Asn Asn Asn Leu Asn Gly Ile Leu Ala Asp Glu 260 265 270 Met Gly Leu Gly Lys Thr Ile Gln Thr Ile Ala Leu Ile Thr Tyr Leu 275 280 285 Met Glu His Lys Arg Leu Asn Gly Pro Tyr Leu Ile Ile Val Pro Leu 290 295 300 Ser Thr Leu Ser Asn Trp Thr Tyr Glu Phe Asp Lys Trp Ala Pro Ser 305 310 315 320 Val Val Lys Ile Ser Tyr Lys Gly Thr Pro Ala Met Arg Arg Ser Leu 325 330 335 Val Pro Gln Leu Arg Ser Gly Lys Phe Asn Val Leu Leu Thr Thr Tyr 340 345 350 Glu Tyr Ile Ile Lys Asp Lys His Ile Leu Ala Lys Ile Arg Trp Lys 355 360 365 Tyr Met Ile Val Asp Glu Gly His Arg Met Lys Asn His His Cys Lys 370 375 380 Leu Thr Gln Val Leu Asn Thr His Tyr Val Ala Pro Arg Arg Ile Leu 385 390 395 400 Leu Thr Gly Thr Pro Leu Gln Asn Lys Leu Pro Glu Leu Trp Ala Leu 405 410 415 Leu Asn Phe Leu Leu Pro Thr Ile Phe Lys Ser Cys Ser Thr Phe Glu 420 425 430 Gln Trp Phe Asn Ala Pro Phe Ala Met Thr Gly Glu Arg Val Asp Leu 435 440 445 Asn Glu Glu Glu Thr Ile Leu Ile Ile Arg Arg Leu His Lys Val Leu 450 455 460 Arg Pro Phe Leu Leu Arg Arg Leu Lys Lys Glu Val Glu Ser Gln Leu 465 470 475 480 Pro Glu Lys Val Glu Tyr Val Ile Lys Cys Asp Met Ser Ala Leu Gln 485 490 495 Lys Ile Leu Tyr Arg His Met Gln Ala Lys Gly Ile Leu Leu Thr Asp 500 505 510 Gly Ser Glu Lys Asp Lys Lys Gly Lys Gly Gly Ala Lys Thr Leu Met 515 520 525 Asn Thr Ile Met Gln Leu Arg Lys Ile Cys Asn His Pro Tyr Met Phe 530 535 540 Gln His Ile Glu Glu Ser Phe Ala Glu His Leu Gly Tyr Ser Asn Gly 545 550 555 560 Val Ile Asn Gly Ala Glu Leu Tyr Arg Ala Ser Gly Lys Phe Glu Leu 565 570 575 Leu Asp Arg Ile Leu Pro Lys Leu Arg Ala Thr Asn His Arg Val Leu 580 585 590 Leu Phe Cys Gln Met Thr Ser Leu Met Thr Ile Met Glu Asp Tyr Phe 595 600 605 Ala Phe Arg Asn Phe Leu Tyr Leu Arg Leu Asp Gly Thr Thr Lys Ser 610 615 620 Glu Asp Arg Ala Ala Leu Leu Lys Lys Phe Asn Glu Pro Gly Ser Gln 625 630 635 640 Tyr Phe Ile Phe Leu Leu Ser Thr Arg Ala Gly Gly Leu Gly Leu Asn 645 650 655 Leu Gln Ala Ala Asp Thr Val Val Ile Phe Asp Ser Asp Trp Asn Pro 660 665 670 His Gln Asp Leu Gln Ala Gln Asp Arg Ala His Arg Ile Gly Gln Gln 675 680 685 Asn Glu Val Arg Val Leu Arg Leu Cys Thr Val Asn Ser Val Glu Glu 690 695 700 Lys Ile Leu Ala Ala Ala Lys Tyr Lys Leu Asn Val Asp Gln Lys Val 705 710 715 720 Ile Gln Ala Gly Met Phe Asp Gln Lys Ser Ser Ser His Glu Arg Arg 725 730 735 Ala Phe Leu Gln Ala Ile Leu Glu His Glu Glu Glu Asn Glu Glu Glu 740 745 750 Asp Glu Val Pro Asp Asp Glu Thr Leu Asn Gln Met Ile Ala Arg Arg 755 760 765 Glu Glu Glu Phe Asp Leu Phe Met Arg Met Asp Met Asp Arg Arg Arg 770 775 780 Glu Asp Ala Arg Asn Pro Lys Arg Lys Pro Arg Leu Met Glu Glu Asp 785 790 795 800 Glu Leu Pro Trp Ile Ile Lys Asp Asp Ala Glu Val Glu Arg Leu Thr 805 810 815 Cys Glu Glu Glu Glu Glu Lys Ile Phe Gly Arg Gly Ser Arg Gln Arg 820 825 830 Arg Asp Val Asp Tyr Ser Asp Ala Leu Thr Glu Lys Gln Trp Leu Arg 835 840 845 Ala Ile Glu Asp 850 <210> 5 <211> 77 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 5 ggggacaagt ttgtacaaaa aagcaggctt cgaaggagat agaaccatgg aagaaagtgg 60 ctcagaagaa gaggaag 77 <210> 6 <211> 76 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic primer <400> 6 ggggaccact ttgtacaaga aagctgggtc tcagtgatga tgatgatgat gctcctcgat 60 ggccttgagc cactgc 76 <210> 7 <211> 711 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 7 Met Glu Glu Ser Gly Ser Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu Glu 1 5 10 15 Gln Pro Gln Ala Ala Gln Pro Pro Thr Leu Pro Val Glu Glu Lys Lys 20 25 30 Lys Ile Pro Asp Pro Asp Ser Asp Asp Val Ser Glu Val Asp Ala Arg 35 40 45 His Ile Ile Glu Asn Ala Lys Gln Asp Val Asp Asp Glu Tyr Gly Val 50 55 60 Ser Gln Ala Leu Ala Arg Gly Leu Gln Ser Tyr Tyr Ala Val Ala His 65 70 75 80 Ala Val Thr Glu Arg Val Asp Lys Gln Ser Ala Leu Met Val Asn Gly 85 90 95 Val Leu Lys Gln Tyr Gln Ile Lys Gly Leu Glu Trp Leu Val Ser Leu 100 105 110 Tyr Asn Asn Asn Leu Asn Gly Ile Leu Ala Asp Glu Met Gly Leu Gly 115 120 125 Lys Thr Ile Gln Thr Ile Ala Leu Ile Thr Tyr Leu Met Glu His Lys 130 135 140 Arg Ile Asn Gly Pro Phe Leu Ile Ile Val Pro Leu Ser Thr Leu Ser 145 150 155 160 Asn Trp Ala Tyr Glu Phe Asp Lys Trp Ala Pro Ser Val Val Lys Val 165 170 175 Ser Tyr Lys Gly Ser Pro Ala Ala Arg Arg Ala Phe Val Pro Gln Leu 180 185 190 Arg Ser Gly Lys Phe Asn Val Leu Leu Thr Thr Tyr Glu Tyr Ile Ile 195 200 205 Lys Asp Lys His Ile Leu Ala Lys Ile Arg Trp Lys Tyr Met Ile Val 210 215 220 Asp Glu Gly His Arg Met Lys Asn His His Cys Lys Leu Thr Gln Val 225 230 235 240 Leu Asn Thr His Tyr Val Ala Pro Arg Arg Leu Leu Leu Thr Gly Thr 245 250 255 Pro Leu Gln Asn Lys Leu Pro Glu Leu Trp Ala Leu Leu Asn Phe Leu 260 265 270 Leu Pro Thr Ile Phe Lys Ser Cys Ser Thr Phe Glu Gln Trp Phe Asn 275 280 285 Ala Pro Phe Ala Met Thr Gly Glu Lys Val Asp Leu Asn Glu Glu Glu 290 295 300 Thr Ile Leu Ile Ile Arg Arg Leu His Lys Val Leu Arg Pro Phe Leu 305 310 315 320 Leu Arg Arg Leu Lys Lys Glu Val Glu Ala Gln Leu Pro Glu Lys Val 325 330 335 Glu Tyr Val Ile Lys Cys Asp Met Ser Ala Leu Gln Arg Val Leu Tyr 340 345 350 Arg His Met Gln Ala Lys Gly Val Leu Leu Thr Asp Gly Ser Glu Lys 355 360 365 Asp Lys Lys Gly Lys Gly Gly Thr Lys Thr Leu Met Asn Thr Ile Met 370 375 380 Gln Leu Arg Lys Ile Cys Asn His Pro Tyr Met Phe Gln His Ile Glu 385 390 395 400 Glu Ser Phe Ser Glu His Leu Gly Phe Thr Gly Gly Ile Val Gln Gly 405 410 415 Leu Asp Leu Tyr Arg Ala Ser Gly Lys Phe Glu Leu Leu Asp Arg Ile 420 425 430 Leu Pro Lys Leu Arg Ala Thr Asn His Lys Val Leu Leu Phe Cys Gln 435 440 445 Met Thr Ser Leu Met Thr Ile Met Glu Asp Tyr Phe Ala Tyr Arg Gly 450 455 460 Phe Lys Tyr Leu Arg Leu Asp Gly Thr Thr Lys Ala Glu Asp Arg Gly 465 470 475 480 Met Leu Leu Lys Thr Phe Asn Glu Pro Gly Ser Glu Tyr Phe Ile Phe 485 490 495 Leu Leu Ser Thr Arg Ala Gly Gly Leu Gly Leu Asn Leu Gln Ser Ala 500 505 510 Asp Thr Val Ile Ile Phe Asp Ser Asp Trp Asn Pro His Gln Asp Leu 515 520 525 Gln Ala Gln Asp Arg Ala His Arg Ile Gly Gln Gln Asn Glu Val Arg 530 535 540 Val Leu Arg Leu Cys Thr Val Asn Ser Val Glu Glu Lys Ile Leu Ala 545 550 555 560 Ala Ala Lys Tyr Lys Leu Asn Val Asp Gln Lys Val Ile Gln Ala Gly 565 570 575 Met Phe Asp Gln Lys Ser Ser Ser His Glu Arg Arg Ala Phe Leu Gln 580 585 590 Ala Ile Leu Glu His Glu Glu Gln Asp Glu Glu Glu Asp Glu Val Pro 595 600 605 Asp Asp Glu Thr Val Asn Gln Met Ile Ala Arg His Glu Glu Glu Phe 610 615 620 Asp Leu Phe Met Arg Met Asp Leu Asp Arg Arg Arg Glu Glu Ala Arg 625 630 635 640 Asn Pro Lys Arg Lys Pro Arg Leu Met Glu Glu Asp Glu Leu Pro Ser 645 650 655 Trp Ile Ile Lys Asp Asp Ala Glu Val Glu Arg Leu Thr Cys Glu Glu 660 665 670 Glu Glu Glu Lys Met Phe Gly Arg Gly Ser Arg His Arg Lys Glu Val 675 680 685 Asp Tyr Ser Asp Ser Leu Thr Glu Lys Gln Trp Leu Lys Ala Ile Glu 690 695 700 Glu His His His His His His 705 710 <210> 8 <211> 12150 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polynucleotide <400> 8 ttgattattg actagttatt aatagtaatc aattacgggg tcattagttc atagcccata 60 tatggagttc cgcgttacat aacttacggt aaatggcccg cctggctgac cgcccaacga 120 cccccgccca ttgacgtcaa taatgacgta tgttcccata gtaacgccaa tagggacttt 180 ccattgacgt caatgggtgg agtatttacg gtaaactgcc cacttggcag tacatcaagt 240 gtatcatatg ccaagtacgc cccctattga cgtcaatgac ggtaaatggc ccgcctggca 300 ttatgcccag tacatgacct tatgggactt tcctacttgg cagtacatct acgtattagt 360 catcgctatt accatggtga tgcggttttg gcagtacatc aatgggcgtg gatagcggtt 420 tgactcacgg ggatttccaa gtctccaccc cattgacgtc aatgggagtt tgttttggca 480 ccaaaatcaa cgggactttc caaaatgtcg taacaactcc gccccattga cgcaaatggg 540 cggtaggcgt gtacggtggg aggtctatat aagcagagct cgtttagtga accgtcagat 600 cgcctggaga cgccatccac gctgttttga cctccataga agacaccggg accgatccag 660 cctccgcggc cgggaacggt gcattggaac gcggattccc cgtgccaaga gtgacgtaag 720 taccgcctat agagtctata ggcccacccc cttggcttct tatgcgacgg atcgatcccg 780 taataagctt cgaggtccgc ggccggccgc gttgacgcgc acggcaagag gcgaggggcg 840 gcgactggtg agagatgggt gcgagagcgt cagtattaag cgggggagaa ttagatcgat 900 gggaaaaaat tcggttaagg ccagggggaa agaaaaaata taaattaaaa catatagtat 960 gggcaagcag ggagctagaa cgattcgcag ttaatcctgg cctgttagaa acatcagaag 1020 gctgtagaca aatactggga cagctacaac catcccttca gacaggatca gaagaactta 1080 gatcattata taatacagta gcaaccctct attgtgtgca tcaaaggata gagataaaag 1140 acaccaagga agctttagac aagatagagg aagagcaaaa caaaagtaag aaaaaagcac 1200 agcaagcagc agctgacaca ggacacagca atcaggtcag ccaaaattac cctatagtgc 1260 agaacatcca ggggcaaatg gtacatcagg ccatatcacc tagaacttta aatgcatggg 1320 taaaagtagt agaagagaag gctttcagcc cagaagtgat acccatgttt tcagcattat 1380 cagaaggagc caccccacaa gatttaaaca ccatgctaaa cacagtgggg ggacatcaag 1440 cagccatgca aatgttaaaa gagaccatca atgaggaagc tgcagaatgg gatagagtgc 1500 atccagtgca tgcagggcct attgcaccag gccagatgag agaaccaagg ggaagtgaca 1560 tagcaggaac tactagtacc cttcaggaac aaataggatg gatgacacat aatccaccta 1620 tcccagtagg agaaatctat aaaagatgga taatcctggg attaaataaa atagtaagaa 1680 tgtatagccc taccagcatt ctggacataa gacaaggacc aaaggaaccc tttagagact 1740 atgtagaccg attctataaa actctaagag ccgagcaagc ttcacaagag gtaaaaaatt 1800 ggatgacaga aaccttgttg gtccaaaatg cgaacccaga ttgtaagact attttaaaag 1860 cattgggacc aggagcgaca ctagaagaaa tgatgacagc atgtcaggga gtggggggac 1920 ccggccataa agcaagagtt ttggctgaag caatgagcca agtaacaaat ccagctacca 1980 taatgataca gaaaggcaat tttaggaacc aaagaaagac tgttaagtgt ttcaattgtg 2040 gcaaagaagg gcacatagcc aaaaattgca gggcccctag gaaaaagggc tgttggaaat 2100 gtggaaagga aggacaccaa atgaaagatt gtactgagag acaggctaat tttttaggga 2160 agatctggcc ttcccacaag ggaaggccag ggaattttct tcagagcaga ccagagccaa 2220 cagccccacc agaagagagc ttcaggtttg gggaagagac aacaactccc tctcagaagc 2280 aggagccgat agacaaggaa ctgtatcctt tagcttccct cagatcactc tttggcagcg 2340 acccctcgtc acaataaaga taggggggca attaaaggaa gctctattag atacaggagc 2400 agatgataca gtattagaag aaatgaattt gccaggaaga tggaaaccaa aaatgatagg 2460 gggaattgga ggttttatca aagtaagaca gtatgatcag atactcatag aaatctgcgg 2520 acataaagct ataggtacag tattagtagg acctacacct gtcaacataa ttggaagaaa 2580 tctgttgact cagattggct gcactttaaa ttttcccatt agtcctattg agactgtacc 2640 agtaaaatta aagccaggaa tggatggccc aaaagttaaa caatggccat tgacagaaga 2700 aaaaataaaa gcattagtag aaatttgtac agaaatggaa aaggaaggaa aaatttcaaa 2760 aattgggcct gaaaatccat acaatactcc agtatttgcc ataaagaaaa aagacagtac 2820 taaatggaga aaattagtag atttcagaga acttaataag agaactcaag atttctggga 2880 agttcaatta ggaataccac atcctgcagg gttaaaacag aaaaaatcag taacagtact 2940 ggatgtgggc gatgcatatt tttcagttcc cttagataaa gacttcagga agtatactgc 3000 atttaccata cctagtataa acaatgagac accagggatt agatatcagt acaatgtgct 3060 tccacaggga tggaaaggat caccagcaat attccagtgt agcatgacaa aaatcttaga 3120 gccttttaga aaacaaaatc cagacatagt catctatcaa tacatggatg atttgtatgt 3180 aggatctgac ttagaaatag ggcagcatag aacaaaaata gaggaactga gacaacatct 3240 gttgaggtgg ggatttacca caccagacaa aaaacatcag aaagaacctc cattcctttg 3300 gatgggttat gaactccatc ctgataaatg gacagtacag cctatagtgc tgccagaaaa 3360 ggacagctgg actgtcaatg acatacagaa attagtggga aaattgaatt gggcaagtca 3420 gatttatgca gggattaaag taaggcaatt atgtaaactt cttaggggaa ccaaagcact 3480 aacagaagta gtaccactaa cagaagaagc agagctagaa ctggcagaaa acagggagat 3540 tctaaaagaa ccggtacatg gagtgtatta tgacccatca aaagacttaa tagcagaaat 3600 acagaagcag gggcaaggcc aatggacata tcaaatttat caagagccat ttaaaaatct 3660 gaaaacagga aagtatgcaa gaatgaaggg tgcccacact aatgatgtga aacaattaac 3720 agaggcagta caaaaaatag ccacagaaag catagtaata tggggaaaga ctcctaaatt 3780 taaattaccc atacaaaagg aaacatggga agcatggtgg acagagtatt ggcaagccac 3840 ctggattcct gagtgggagt ttgtcaatac ccctccctta gtgaagttat ggtaccagtt 3900 agagaaagaa cccataatag gagcagaaac tttctatgta gatggggcag ccaataggga 3960 aactaaatta ggaaaagcag gatatgtaac tgacagagga agacaaaaag ttgtccccct 4020 aacggacaca acaaatcaga agactgagtt acaagcaatt catctagctt tgcaggattc 4080 gggattagaa gtaaacatag tgacagactc acaatatgca ttgggaatca ttcaagcaca 4140 accagataag agtgaatcag agttagtcag tcaaataata gagcagttaa taaaaaagga 4200 aaaagtctac ctggcatggg taccagcaca caaaggaatt ggaggaaatg aacaagtaga 4260 taaattggtc agtgctggaa tcaggaaagt actattttta gatggaatag ataaggccca 4320 agaagaacat gagaaatatc acagtaattg gagagcaatg gctagtgatt ttaacctacc 4380 acctgtagta gcaaaagaaa tagtagccag ctgtgataaa tgtcagctaa aaggggaagc 4440 catgcatgga caagtagact gtagcccagg aatatggcag ctagattgta cacatttaga 4500 aggaaaagtt atcttggtag cagttcatgt agccagtgga tatatagaag cagaagtaat 4560 tccagcagag acagggcaag aaacagcata cttcctctta aaattagcag gaagatggcc 4620 agtaaaaaca gtacatacag acaatggcag caatttcacc agtactacag ttaaggccgc 4680 ctgttggtgg gcggggatca agcaggaatt tggcattccc tacaatcccc aaagtcaagg 4740 agtaatagaa tctatgaata aagaattaaa gaaaattata ggacaggtaa gagatcaggc 4800 tgaacatctt aagacagcag tacaaatggc agtattcatc cacaatttta aaagaaaagg 4860 ggggattggg gggtacagtg caggggaaag aatagtagac ataatagcaa cagacataca 4920 aactaaagaa ttacaaaaac aaattacaaa aattcaaaat tttcgggttt attacaggga 4980 cagcagagat ccagtttgga aaggaccagc aaagctcctc tggaaaggtg aaggggcagt 5040 agtaatacaa gataatagtg acataaaagt agtgccaaga agaaaagcaa agatcatcag 5100 ggattatgga aaacagatgg caggtgatga ttgtgtggca agtagacagg atgaggatta 5160 acacatggaa ttctgcaaca actgctgttt atccatttca gaattgggtg tcgacatagc 5220 agaataggcg ttactcgaca gaggagagca agaaatggag ccagtagatc ctagactaga 5280 gccctggaag catccaggaa gtcagcctaa aactgcttgt accaattgct attgtaaaaa 5340 gtgttgcttt cattgccaag tttgtttcat gacaaaagcc ttaggcatct cctatggcag 5400 gaagaagcgg agacagcgac gaagagctca tcagaacagt cagactcatc aagcttctct 5460 atcaaagcag taagtagtac atgtaatgca acctataata gtagcaatag tagcattagt 5520 agtagcaata ataatagcaa tagttgtgtg gtccatagta atcatagaat ataggaaaat 5580 ggccgctgat cttcagacct ggaggaggag atatgaggga caattggaga agtgaattat 5640 ataaatataa agtagtaaaa attgaaccat taggagtagc acccaccaag gcaaagagaa 5700 gagtggtgca gagagaaaaa agagcagtgg gaataggagc tttgttcctt gggttcttgg 5760 gagcagcagg aagcactatg ggcgcagcgt caatgacgct gacggtacag gccagacaat 5820 tattgtctgg tatagtgcag cagcagaaca atttgctgag ggctattgag gcgcaacagc 5880 atctgttgca actcacagtc tggggcatca agcagctcca ggcaagaatc ctggctgtgg 5940 aaagatacct aaaggatcaa cagctcctgg ggatttgggg ttgctctgga aaactcattt 6000 gcaccactgc tgtgccttgg aatgctagtt ggagtaataa atctctggaa cagatttgga 6060 atcacacgac ctggatggag tgggacagag aaattaacaa ttacacaagc ttaatacact 6120 ccttaattga agaatcgcaa aaccagcaag aaaagaatga acaagaatta ttggaattag 6180 ataaatgggc aagtttgtgg aattggttta acataacaaa ttggctgtgg tatataaaat 6240 tattcataat gatagtagga ggcttggtag gtttaagaat agtttttgct gtactttcta 6300 tagtgaatag agttaggcag ggatattcac cattatcgtt tcagacccac ctcccaaccc 6360 cgaggggacc cgacaggccc gaaggaatag aagaagaagg tggagagaga gacagagaca 6420 gatccattcg attagtgaac ggatccttgg cacttatctg ggacgatctg cggagcctgt 6480 gcctcttcag ctaccaccgc ttgagagact tactcttgat tgtaacgagg attgtggaac 6540 ttctgggacg cagggggtgg gaagccctca aatattggtg gaatctccta caatattgga 6600 gtcaggagct aaagaatagt gctgttagct tgctcaatgc cacagccata gcagtagctg 6660 aggggacaga tagggttata gaagtagtac aaggagcttg tagagctatt cgccacatac 6720 ctagaagaat aagacagggc ttggaaagga ttttgctata agctcgaggc cgccccggtg 6780 accttcagac cttggcactg gaggtggccc ggcagaagcg cggcatcgtg gatcagtgct 6840 gcaccagcat ctgctctctc taccaactgg agaactactg caactaggcc caccactacc 6900 ctgtccaccc ctctgcaatg aataaaacct ttgaaagagc actacaagtt gtgtgtacat 6960 gcgtgcatgt gcatatgtgg tgcgggggga acatgagtgg ggctggctgg agtggcgatg 7020 ataagctgtc aaacatgaga attaattctt gaagacgaaa gggcctcgtg atacgcctat 7080 ttttataggt taatgtcatg ataataatgg tttcttagtc tagaattaat tccgtgtatt 7140 ctatagtgtc acctaaatcg tatgtgtatg atacataagg ttatgtatta attgtagccg 7200 cgttctaacg acaatatgta caagcctaat tgtgtagcat ctggcttact gaagcagacc 7260 ctatcatctc tctcgtaaac tgccgtcaga gtcggtttgg ttggacgaac cttctgagtt 7320 tctggtaacg ccgtcccgca cccggaaatg gtcagcgaac caatcagcag ggtcatcgct 7380 agccagatcc tctacgccgg acgcatcgtg gccggcatca ccggcgccac aggtgcggtt 7440 gctggcgcct atatcgccga catcaccgat ggggaagatc gggctcgcca cttcgggctc 7500 atgagcgctt gtttcggcgt gggtatggtg gcaggccccg tggccggggg actgttgggc 7560 gccatctcct tgcatgcacc attccttgcg gcggcggtgc tcaacggcct caacctacta 7620 ctgggctgct tcctaatgca ggagtcgcat aagggagagc gtcgaatggt gcactctcag 7680 tacaatctgc tctgatgccg catagttaag ccagccccga cacccgccaa cacccgctga 7740 cgcgccctga cgggcttgtc tgctcccggc atccgcttac agacaagctg tgaccgtctc 7800 cgggagctgc atgtgtcaga ggttttcacc gtcatcaccg aaacgcgcga gacgaaaggg 7860 cctcgtgata cgcctatttt tataggttaa tgtcatgata ataatggttt cttagacgtc 7920 aggtggcact tttcggggaa atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt tctaaataca 7980 ttcaaatatg tatccgctca tgagacaata accctgataa atgcttcaat aatattgaaa 8040 aaggaagagt atgagtattc aacatttccg tgtcgccctt attccctttt ttgcggcatt 8100 ttgccttcct gtttttgctc acccagaaac gctggtgaaa gtaaaagatg ctgaagatca 8160 gttgggtgca cgagtgggtt acatcgaact ggatctcaac agcggtaaga tccttgagag 8220 ttttcgcccc gaagaacgtt ttccaatgat gagcactttt aaagttctgc tatgtggcgc 8280 ggtattatcc cgtattgacg ccgggcaaga gcaactcggt cgccgcatac actattctca 8340 gaatgacttg gttgagtact caccagtcac agaaaagcat cttacggatg gcatgacagt 8400 aagagaatta tgcagtgctg ccataaccat gagtgataac actgcggcca acttacttct 8460 gacaacgatc ggaggaccga aggagctaac cgcttttttg cacaacatgg gggatcatgt 8520 aactcgcctt gatcgttggg aaccggagct gaatgaagcc ataccaaacg acgagcgtga 8580 caccacgatg cctgtagcaa tggcaacaac gttgcgcaaa ctattaactg gcgaactact 8640 tactctagct tcccggcaac aattaataga ctggatggag gcggataaag ttgcaggacc 8700 acttctgcgc tcggcccttc cggctggctg gtttattgct gataaatctg gagccggtga 8760 gcgtgggtct cgcggtatca ttgcagcact ggggccagat ggtaagccct cccgtatcgt 8820 agttatctac acgacgggga gtcaggcaac tatggatgaa cgaaatagac agatcgctga 8880 gataggtgcc tcactgatta agcattggta actgtcagac caagtttact catatatact 8940 ttagattgat ttaaaacttc atttttaatt taaaaggatc taggtgaaga tcctttttga 9000 taatctcatg accaaaatcc cttaacgtga gttttcgttc cactgagcgt cagaccccgt 9060 agaaaagatc aaaggatctt cttgagatcc tttttttctg cgcgtaatct gctgcttgca 9120 aacaaaaaaa ccaccgctac cagcggtggt ttgtttgccg gatcaagagc taccaactct 9180 ttttccgaag gtaactggct tcagcagagc gcagatacca aatactgttc ttctagtgta 9240 gccgtagtta ggccaccact tcaagaactc tgtagcaccg cctacatacc tcgctctgct 9300 aatcctgtta ccagtggctg ctgccagtgg cgataagtcg tgtcttaccg ggttggactc 9360 aagacgatag ttaccggata aggcgcagcg gtcgggctga acggggggtt cgtgcacaca 9420 gcccagcttg gagcgaacga cctacaccga actgagatac ctacagcgtg agctatgaga 9480 aagcgccacg cttcccgaag ggagaaaggc ggacaggtat ccggtaagcg gcagggtcgg 9540 aacaggagag cgcacgaggg agcttccagg gggaaacgcc tggtatcttt atagtcctgt 9600 cgggtttcgc cacctctgac ttgagcgtcg atttttgtga tgctcgtcag gggggcggag 9660 cctatggaaa aacgccagca acgcggcctt tttacggttc ctggcctttt gctggccttt 9720 tgctcacatg ttctttcctg cgttatcccc tgattctgtg gataaccgta ttaccgcctt 9780 tgagtgagct gataccgctc gccgcagccg aacgaccgag cgcagcgagt cagtgagcga 9840 ggaagcggaa gagcgcccaa tacgcaaacc gcctctcccc gcgcgttggc cgattcatta 9900 atgcagctgt ggaatgtgtg tcagttaggg tgtggaaagt ccccaggctc cccagcaggc 9960 agaagtatgc aaagcatgca tctcaattag tcagcaacca ggtgtggaaa gtccccaggc 10020 tccccagcag gcagaagtat gcaaagcatg catctcaatt agtcagcaac catagtcccg 10080 cccctaactc cgcccatccc gcccctaact ccgcccagtt ccgcccattc tccgccccat 10140 ggctgactaa ttttttttat ttatgcagag gccgaggccg cctcggcctc tgagctattc 10200 cagaagtagt gaggaggctt ttttggaggc ctaggctttt gcaaaaagct tggacacaag 10260 acaggcttgc gagatatgtt tgagaatacc actttatccc gcgtcaggga gaggcagtgc 10320 gtaaaaagac gcggactcat gtgaaatact ggtttttagt gcgccagatc tctataatct 10380 cgcgcaacct attttcccct cgaacacttt ttaagccgta gataaacagg ctgggacact 10440 tcacatgagc gaaaaataca tcgtcacctg ggacatgttg cagatccatg cacgtaaact 10500 cgcaagccga ctgatgcctt ctgaacaatg gaaaggcatt attgccgtaa gccgtggcgg 10560 tctgtaccgg gtgcgttact ggcgcgtgaa ctgggtattc gtcatgtcga taccgtttgt 10620 atttccagct acgatcacga caaccagcgc gagcttaaag tgctgaaacg cgcagaaggc 10680 gatggcgaag gcttcatcgt tattgatgac ctggtggata ccggtggtac tgcggttgcg 10740 attcgtgaaa tgtatccaaa agcgcacttt gtcaccatct tcgcaaaacc ggctggtcgt 10800 ccgctggttg atgactatgt tgttgatatc ccgcaagata cctggattga acagccgtgg 10860 gatatgggcg tcgtattcgt cccgccaatc tccggtcgct aatcttttca acgcctggca 10920 ctgccgggcg ttgttctttt taacttcagg cgggttacaa tagtttccag taagtattct 10980 ggaggctgca tccatgacac aggcaaacct gagcgaaacc ctgttcaaac cccgctttaa 11040 acatcctgaa acctcgacgc tagtccgccg ctttaatcac ggcgcacaac cgcctgtgca 11100 gtcggccctt gatggtaaaa ccatccctca ctggtatcgc atgattaacc gtctgatgtg 11160 gatctggcgc ggcattgacc cacgcgaaat cctcgacgtc caggcacgta ttgtgatgag 11220 cgatgccgaa cgtaccgacg atgatttata cgatacggtg attggctacc gtggcggcaa 11280 ctggatttat gagtgggccc cggatctttg tgaaggaacc ttacttctgt ggtgtgacat 11340 aattggacaa actacctaca gagatttaaa gctctaaggt aaatataaaa tttttaaccc 11400 ggatctttgt gaaggaacct tacttctgtg gtgtgacata attggacaaa ctacctacag 11460 agatttaaag ctctaaggta aatataaaat ttttaagtgt ataatgtgtt aaactactga 11520 ttctaattgt ttgtgtattt tagattccaa cctatggaac tgatgaatgg gagcagtggt 11580 ggaatgcctt taatgaggaa aacctgtttt gctcagaaga aatgccatct agtgatgatg 11640 aggctactgc tgactctcaa cattctactc ctccaaaaaa gaagagaaag gtagaagacc 11700 ccaaggactt tccttcagaa ttgctaagtt ttttgagtca tgctgtgttt agtaatagaa 11760 ctcttgcttg ctttgctatt tacaccacaa aggaaaaagc 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Claims (11)

1. 하기 화학식 I의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
   [화학식 I]
   

   

   
   식 중,
   R¹은 수소, 아미노 및 히드록시-치환된 C_1-2알킬로부터 선택되고;
   R²는 수소이며;
   R³은 C_1-2알킬 및 할로-치환된-C_1-2알킬로부터 선택되고;
   R⁴는 수소이며;
   R⁵는 수소 및 할로로부터 선택되고;
   R⁶은 수소 및 할로로부터 선택된다.
2. 제1항에 있어서,
   R¹은 수소, 아미노 및 히드록시-메틸로부터 선택되고;
   R²는 수소이며;
   R³은 메틸, 디플루오로메틸 및 트리플루오로메틸로부터 선택되고;
   R⁴는 수소이며;
   R⁵는 수소, 클로로 및 플루오로로부터 선택되고;
   R⁶은 수소 및 플루오로로부터 선택되는, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염.
3. 제2항에 있어서, 하기로부터 선택된, 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염:
   

   
4. 치료적 유효량의 제1항의 화합물, 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염, 및 1종 이상의 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는, 약제학적 조성물.
5. 치료적 유효량의 제1항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염 및 1종 이상의 치료적 활성제를 포함하는, 약제학적 조합물.
6. 제5항에 있어서, 상기 1종 이상의 치료적 활성제는 항암제, 항알레르기제, 항구토제, 진통제, 면역조절제 및 세포보호제로부터 독립적으로 선택된, 약제학적 조합물.
7. BRM-매개 및/또는 BRG1-매개 장애 또는 질환의 치료 방법으로서, 치료적 유효량의 제1항의 화합물 또는 이의 약제학적으로 허용 가능한 염을 상기 장애 또는 질환의 치료가 필요한 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
8. 제7항에 있어서, 상기 장애 또는 질환은 BRG1-결핍증 및/또는 BRM-결핍증을 특징으로 하는 악성종양인, 방법.
9. 제8항에 있어서, 상기 장애 또는 질환은 BRG1 돌연변이 및/또는 BRM 돌연변이를 특징으로 하는 악성종양인, 방법.
10. 제9항에 있어서, 상기 장애 또는 질환은 고형 종양, 백혈병 또는 림프종인, 방법.
11. 제10항에 있어서, 상기 장애 또는 질환은 비소세포 폐암종, 폐 선암종, 폐 암종, 거대 세포 폐 암종, 비소세포 폐암종, 폐 편평 세포 암종, 소세포 폐암, 피부 흑색종, 결합조직형성 흑색종, 포도막흑색종, 난소의 소세포 암종(고칼슘혈증 유형), 난소 간상(rhabdoid) 종양, 피부 편평 세포 암종, 신경교종, 자궁 암육종, 자궁 체부 내막 암종, 난소 장액낭선암종, 방광 요로 상피세포 암종, 원발성 중추 신경계 림프종, 식도 암종, 방광암, 방광암 형질세포양 변이, 위 선암종, 선낭암종, 림프양 신생물 미만성 거대 B-세포림프종, 췌장암, 직장결장 선암종, 담낭암, 육종, 두경부암, 자궁 및 자궁경관내 암, 수모세포종, 피부 T 세포 림프종, 간세포암종, 신장 유두상 세포 암종, 유방암, 맨틀 세포 림프종, 담낭암, 고환 생식 세포암, 신장 세포 투명 세포 암종, 전립선암, 소아 유잉 육종, 흉선종, 신장 혐색소세포, 신장 비-투명 세포 암종, 크롬친화세포종 및 부신경절종, 갑상선암, 악성 말초 신경초 종양, 신경내분비 전립선암, 두경부 편평세포 암종, 부신겉질샘암종, 자궁 및 자궁경관내 암, 피부 편평 세포 암종, 고환 생식 세포암, 교모세포종, 다형성 교모세포종, 유잉 육종, 투명 세포 신세포 암종, 신경모세포종, 미만성 거대 B 세포 림프종, 급성 골수성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 다발성 골수종, 악성 간상 종양, 상피모양 육종, 가족성 신경초종증, 신장 수질 암종, 활막 육종, 및 수막종으로부터 선택된, 방법.