KR20210007265A - 파클리탁셀로부터의 잔류 용매 제거방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 파클리탁셀로부터의 잔류 용매 제거방법에 관한 것으로, 건조 단계 전에 무정형 파클리탁셀 시료에 알코올 용매를 처리함으로써 잔류 용매를 효과적으로 제거하는 방법을 제공한다.

Description

파클리탁셀로부터의 잔류 용매 제거방법 {Method for removing residual solvent from paclitaxel}

본 발명은 파클리탁셀로부터의 잔류 용매 제거방법에 관한 것으로, 건조 단계 전에 무정형 파클리탁셀 시료에 알코올 용매를 처리함으로써 잔류 용매를 효과적으로 제거하는 방법을 제공한다.

파클리탁셀(Paclitaxel)은 유방암(breast cancer), 난소암(ovarian cancer), 두경부암(head and neck cancer), 카포시 종양(kaposi's sarcoma), 비소세포성 폐암(non-small lung cancer) 등의 치료에 가장 많이 사용되고 있는 항암물질이다. 식물체(yew tree)로부터 추출(extraction), 반합성(semi-synthesis), 식물세포배양(plant cell culture)에 의해 파클리탁셀이 생산되고 있는데, 최근에는 파클리탁셀의 안정적인 대량 생산을 위해 식물세포배양이 각광 받고 있다. 최종 정제된 파클리탁셀이 원료의약품(active pharmaceutical ingredient, API)으로 사용되기 위해서는 여러 가지 규격(specifications)이 충족되어야 한다. 특히, 원료의약품 형태(morphology)는 제형 과정에서 의약품의 용해성 및 투과성에 많은 영향을 미치는 매우 중요한 인자이다. 파클리탁셀은 의약품의 특성에 따른 BCS (Biopharmaceutics Classification System)에서 class IV로 분류되어 의약품의 용해와 장 투과성에 의해 생체이용률이 상당히 제한적이다. 따라서 경구 고형 제형을 위한 원료의약품의 대규모 제조에서 낮은 생체이용률 약물의 형태 제어(morphology control)는 그 활용도 측면에서 매우 중요하다. 1997년 열처리에 의한 파클리탁셀의 형태 조절 방법이 개발되었으나 고온 제조 공정으로 비실용적이다. 이후 용매유도방법(solvent-induced method)이 개발되어 기존 방법의 고온 처리 문제점을 보완하였다.

국제의약품 규제조화위원회(International Conference on Harmonisation, ICH) Q3C 가이던스에 따르면, 제조된 원료의약품의 잔류 용매 농도는 엄격히 규제되고 있다. 용매의 독성 정도(Class 1 > Class 2 > Class 3)에 따라 그 용매의 허용 농도가 결정되며, 반드시 허용치 이하로 제거되어야 한다. 이러한 규정치를 충족하기 위하여 여러 가지 건조 방법들이 도입되고 있는데, 일반적으로 파클리탁셀의 잔류 용매를 제거를 위해 회전증발(rotary evaporation), 진공건조(vacuum drying), 마이크로웨이브를 이용한 건조(microwave-assisted drying) 등이 사용되고 있다. 이들 건조 방법들은 건조 특성에 따라 조업 조건, 시간, 효율, 장치 비용, 설치 공간 등에서 차이를 보이는데, 일반적으로 회전증발은 상대적으로 조업이 간단하고 경제적인 건조방법으로 범용으로 이용되고 있다. 또한 용매유도방법에 의한 무정형 파클리탁셀 제조를 위해 비극성 용매인 메틸렌 클로라이드, 펜탄, 아세토니트릴/헥산 (1:2, v/v), 클로로포름 등이 사용되고 있다. 이들 용매 중 메틸렌 클로라이드, 펜탄, 아세토니트릴, 헥산은 기존의 건조 방법으로 ICH 규정치를 쉽게 충족시킬 수 있는 반면 클로로포름은 ICH 규정치를 충족시키기 어려운 실정이다. 클로로포름은 ICH Class 2에 해당되는 용매로 한계 농도(60 ppm) 이하로 엄격하게 제한되고 있다. 따라서, 클로로포름 유도 무정형 파클리탁셀로부터 잔류 클로로포름을 효율적으로 제거할 수 있는 방법이 절실히 필요한 실정이다.

파클리탁셀로부터 잔류 용매를 제거하는 방법과 관련하여, 대한민국 등록특허 제10-1381502호에는 마이크로웨이브를 이용하여 잔류 메틸렌 클로라이드 또는 메탄올을 제거하는 방법이 개시되어 있으나, 이는 조 파클리탁셀(crude paclitaxel)에 바로 마이크로웨이브를 처리하므로 무정형의 파클리탁셀을 수득할 수 없고, 마이크로웨이브를 장시간 처리해야 하는 단점이 있다.

이러한 배경 하에, 본 발명자들은 알코올 용매를 파클리탁셀에 전 처리한 후 건조 단계를 수행하는 경우, 파클리탁셀로부터 잔류 클로로포름 및 알코올을 효과적으로 제거할 수 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로, 알코올 용매 전 처리에 의해 무정형 파클리탁셀로부터 잔류 용매를 효율적으로 제거하는 방법을 제공하는데 목적이 있다.

상술한 과제를 해결하기 위해, 본 발명은 다음의 단계를 포함하는 파클리탁셀로부터의 잔류 용매 제거방법을 제공한다:

a) 정제된 파클리탁셀에 용매를 처리하여 용매유도방법으로 무정형 파클리탁셀을 제조하는 단계;

b) 무정형 파클리탁셀 시료를 건조시켜 용매를 제거하는 단계;

c) 알코올 용매를 처리하는 단계; 및

d) 알코올 용매가 처리된 파클리탁셀 시료를 건조하는 단계.

본 발명의 바람직한 일실시예에 따르면, 상기 정제된 파클리탁셀은 다음의 단계를 수행하여 제조될 수 있다:

a-1) 택서스속(Taxus genus) 식물체의 세포 배양액으로부터 바이오매스를 수득하는 단계;

a-2) 유기용매 추출을 수행하는 단계;

a-3) 액체-액체 추출을 수행하는 단계;

a-4) 흡착제를 처리하는 단계;

a-5) 헥산 침전 추출을 수행하는 단계; 및

a-6) 분별침전단계.

본 발명의 바람직한 다른 일실시예에 따르면, 상기 a) 및 b) 단계의 용매는 클로로포름일 수 있다.

본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 b) 단계의 건조는 회전증발, 진공건조, 초임계 건조, 분무 건조 또는 마이크로웨이브 건조일 수 있다.

본 발명의 바람직한 다른 일실시예에 따르면, 상기 b) 단계의 건조는 클로로포름의 농도에 변화가 없을 때 까지 수행하는 것일 수 있다.

본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 c) 단계의 알코올 용매가 메탄올 용매인 경우, 건조된 파클리탁셀 시료 1 g 당 3 mL 내지 20 mL의 메탄올 용매를 처리할 수 있다.

본 발명의 바람직한 다른 일실시예에 따르면, 상기 c) 단계의 알코올 용매가 에탄올 용매인 경우, 건조된 파클리탁셀 시료 1 g 당 3 mL 내지 10 mL의 에탄올 용매를 처리할 수 있다.

본 발명의 바람직한 다른 일실시예에 따르면, 상기 d) 단계의 건조는 클로로포름과 알코올 사이의 수소 결합을 절단하지 않는 건조방법으로 수행될 수 있다.

본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 d) 단계의 건조가 회전증발인 경우, 10분 내지 30분 동안 수행할 수 있다.

본 발명의 바람직한 또 다른 일실시예에 따르면, 상기 잔류 용매는 클로로포름 및 알코올로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 것일 수 있다.

본 발명의 바람직한 다른 일실시예에 따르면, 상기 클로로포름의 농도는 60 ppm 이하로 제거되고, 상기 알코올이 메탄올인 경우 3,000 ppm 이하로 제거되며, 상기 알코올이 에탄올인 경우 5,000 ppm 이하로 제거될 수 있다.

본 발명의 파클리탁셀로부터의 잔류 용매 제거방법은 알코올 용매를 전 처리하는 간단한 방법으로 짧은 시간에 효과적으로 잔류 클로로포름을 제거할 수 있다는 점에서 종래의 잔류 용매 제거방법보다 공정 시간이 획기적으로 단축되며, 상대적으로 조업이 간단하고 경제적인 건조방법인 회전증발을 이용하므로 경제성 또한 우수하다. 또한, 추가의 공정 없이 잔류 클로로포름 및 메탄올을 동시에 ICH 규정치 이하로 제거할 수 있는 이점이 있다. 따라서, 본 발명에 따른 파클리탁셀로부터의 잔류 용매 제거방법은 파클리탁셀의 원료의약품 대량 생산 과정에서 잔류 용매를 효과적으로 제거하는데 유용하게 활용될 수 있다.

도 1은 용매유도방법으로 무정형 파클리탁셀을 제조하기 전까지 수행되는 파클리탁셀의 분리 및 정제방법의 일례를 개략도로 나타낸 것이다.
도 2는 클로로포름 유도 방법으로 제조된 무정형 파클리탁셀 시료의 회전증발 및 마이크로웨이브를 이용한 건조 시간에 따른 잔류 클로로포름의 농도 변화를 그래프로 나타낸 것이다.
도 3은 상이한 양의 메탄올 (각각 5 mL, 10 mL 및 20 mL)을 전 처리하고 회전증발을 수행한 후 수득된 건조 파클리탁셀 시료에서 회전증발 건조 시간에 따른 잔류 용매의 농도 변화를 그래프로 나타낸 것으로, (A)는 5 mL, (B)는 10 mL, (C)는 20 mL의 메탄올을 전 처리하였을 때의 결과를 나타낸다.
도 4는 상이한 양의 에탄올 (각각 5 mL 및 10 mL)을 전 처리하고 회전증발을 수행한 후 수득된 건조 파클리탁셀 시료에서 회전증발 건조 시간에 따른 잔류 용매의 농도 변화를 그래프로 나타낸 것으로, (A)는 5 mL, (B)는 10 mL의 에탄올을 전 처리하였을 때의 결과를 나타낸다.
도 5는 메탄올 전 처리 시료로부터의 잔류 용매 제거 메커니즘을 개략도로 나타낸 것이다.
도 6은 초음파가 잔류 용매 제거에 미치는 영향을 보여주는 것으로, (A)는 메탄올 전 처리 후 25℃에서 회전증발을 수행하여 수득된 건조 파클리탁셀 시료의 건조 시간에 따른 잔류 용매의 농도 변화를 그래프로 나타낸 것이고, (B)는 클로로포름과 메탄올 사이의 수소 결합 네트워크에 대한 초음파의 영향을 모식도로 나타낸 것이다.
도 7은 회전증발을 통한 건조 단계를 수행하기 전, 메탄올 전 처리 여부에 따른 건조 파클리탁셀 입자 표면의 변화를 SEM 이미지를 나타낸 것으로, (A), (C) 및 (E)는 순서대로 메탄올 전 처리 단계 없이 각각 25℃, 35℃ 및 45℃에서 회전증발을 수행한 후 수득된 건조 파클리탁셀 시료의 SEM 이미지를 나타내고, (B), (D) 및 (F)는 순서대로 메탄올을 전 처리하고 각각 25℃, 35℃ 및 45℃에서 회전증발을 수행한 후 수득된 건조 파클리탁셀 시료의 SEM 이미지를 나타낸다.

상술한 바와 같이, 현재까지 클로로포름 유도 무정형 파클리탁셀로부터 잔류 클로로포름을 효율적으로 제거할 수 있는 방법은 전무한 실정이며, 이의 개발이 절실히 요구되고 있다.

이러한 배경 하에, 본 발명자들은 알코올 용매를 파클리탁셀에 전 처리한 후 건조단계를 수행하여 파클리탁셀로부터 잔류 클로로포름 및 알코올을 동시에 효과적으로 제거할 수 있는 방법을 제공함으로써 상술한 문제의 해결방안을 모색하였다. 본 발명의 파클리탁셀로부터의 잔류 용매 제거방법은 알코올 용매를 전 처리하는 간단한 방법으로 짧은 시간에 효과적으로 잔류 클로로포름을 제거할 수 있다는 점에서 종래의 잔류 용매 제거방법보다 공정 시간이 획기적으로 단축되며, 상대적으로 조업이 간단하고 경제적인 건조방법인 회전증발을 이용하므로 경제성 또한 우수하다. 또한, 추가의 공정 없이 잔류 클로로포름 및 메탄올을 동시에 ICH 규정치 이하로 제거할 수 있는 이점이 있다. 따라서, 본 발명에 따른 파클리탁셀로부터의 잔류 용매 제거방법은 파클리탁셀의 원료의약품 대량 생산 과정에서 잔류 용매를 효과적으로 제거하는데 유용하게 활용될 수 있다.

이하, 본 발명을 보다 상세히 설명한다.

본원 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다.

본원 명세서 전체에서, "A 및/또는 B"의 기재는, "A 또는 B, 또는, A 및 B"를 의미한다.

본 명세서에서 사용되는 정도의 용어 "약", "실질적으로" 등은 언급된 의미에 고유한 제조 및 물질 허용오차가 제시될 때 그 수치에서 또는 그 수치에 근접한 의미로 사용되고, 본원의 이해를 돕기 위해 정확하거나 절대적인 수치가 언급된 개시 내용을 비양심적인 침해자가 부당하게 이용하는 것을 방지하기 위해 사용된다.

본 발명은 다음의 단계를 포함하는 파클리탁셀로부터의 잔류 용매 제거방법을 제공한다:

a) 정제된 파클리탁셀에 용매를 처리하여 용매유도방법으로 무정형 파클리탁셀을 제조하는 단계;

b) 무정형 파클리탁셀 시료를 건조시켜 용매를 제거하는 단계;

c) 알코올을 처리하는 단계; 및

d) 알코올이 처리된 파클리탁셀 시료를 건조하는 단계.

본 발명의 파클리탁셀로부터의 잔류 용매 제거방법은 용매유도방법으로 제조된 무정형 파클리탁셀로부터 잔류 용매를 제거하는 것을 목적으로 하며, 무정형 파클리탁셀을 제조하기 전의 정제된 파클리탁셀은 공지된 통상적인 방법으로 수득되며, 예를 들어, 통상적으로 바이오매스로부터의 파클리탁셀 추출 및 정제방법은 용매추출, 액체-액체 추출, 흡착제 처리, 헥산침전 및 분별침전의 단계를 포함하지만, 이에 한정되지 않는다.

본 발명의 일실시예에서는 a-1) 택서스속(Taxus genus) 식물체의 세포 배양액으로부터 바이오매스를 수득하는 단계; a-2) 유기용매 추출을 수행하는 단계; a-3) 액체-액체 추출을 수행하는 단계; a-4) 흡착제를 처리하는 단계; a-5) 헥산 침전 추출을 수행하는 단계; 및 a-6) 분별침전단계를 거쳐 정제된 파클리탁셀 시료를 수득하였으며, 구체적인 방법은 도 1에 나타내었다.

상기 파클리탁셀 분리 및 정제방법에 있어서, a-1) 단계의 택서스속(Taxus genus) 식물체의 세포 배양액으로부터 수득한 바이오매스는 택서스속 식물체, 이의 세포, 이의 세포 조각(cell debris) 및 이의 세포 배양액으로 이루어진 군 중에서 선택한 1종 이상을 포함할 수 있다.

또한, 상기 택서스속 식물체는 택서스 브레비폴리아(Taxus brevifolia), 택서스 카나덴시스(Taxus canadensis), 택서스 쿠스피다타(Taxus cuspidata), 택서스 바카타(Taxus baccata), 택서스 글로보사(Taxus globosa), 택서스 플로리다나(Taxus floridana), 택서스 월리치아나(Taxus wallichiana), 택서스 메디아(Taxus media) 또는 택서스 치넨시스(Taxus chinensis) 등이 포함될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.

상기 바이오매스를 수득하는 단계는 통상적으로 식물세포배양액으로부터 바이오매스를 수득하는 방법이라면 특별히 제한하지 않는다.

본 발명의 파클리탁셀 정제방법에 있어서, 상기 a-2) 단계의 유기용매 추출은 통상적으로 식물체에서 유효성분을 추출하기 위해 사용하는 유기용매를 사용하는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 C1 내지 C4의 알코올을 포함할 수 있다.

상기 유기용매의 구체적인 예로는 메탄올, 에탄올, 프로판올, 메틸렌 클로라이드에서 선택되는 1종 또는 2종 이상의 혼합물을 사용할 수 있으며, 바이오매스로부터 파클리탁셀을 가급적 많이 회수할 수 있는 유기용매로 바람직하게는 메탄올을 사용할 수 있다.

나아가, 상기 유기용매 추출의 조건은 통상적으로 식물체에서 유효성분을 추출하는 방법에서 사용할 수 있는 조건이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 20 내지 45℃에서 30분 내지 2시간 동안 수행할 수 있다.

만약, 20℃ 미만의 온도로 처리할 경우, 낮은 온도로 인해 파클리탁셀의 추출 효율이 감소하는 문제가 발생할 수 있으며, 45℃를 초과하는 온도로 처리할 경우, 높은 온도로 인해 파클리탁셀이 분해되는 문제가 발생할 수 있다.

만약, 30분 미만으로 처리할 경우, 바이오매스 내의 파클리탁셀이 모두 추출되지 않아 파클리탁셀의 추출효율이 낮아지는 문제가 발생할 수 있으며, 2시간을 초과하는 시간으로 처리할 경우, 과도한 조업 시간으로 경제적인 문제가 발생할 수 있다.

더불어, 상기 용매 추출은 1회 내지 수회 반복 수행할 수 있으며, 바람직하게는 2회 이상, 더욱 바람직하게는 3회 내지 5회 반복 수행할 수 있고, 이후 수득된 추출액은 감압상태 하에서 농축한 뒤 건조하여 액체-액체 추출단계에 사용할 수 있다.

본 발명의 파클리탁셀 정제방법에 있어서, 상기 a-3) 단계의 액체-액체 추출은 통상적으로 비극성 유기용매와 극성 유기용매의 상분리를 이용하여 파클리탁셀에 함유되어 있는 극성 불순물을 제거하는 방법이라면 특별히 제한하지 않는다.

예를 들어, 상기 비극성 유기용매는 메틸렌 클로라이드, 에틸아세테이트 및 에테르로 이루어진 군 중에서 선택한 1종 이상의 화합물을 포함할 수 있다. 또한, 상기 극성 유기용매는 C1 내지 C4의 알코올로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함할 수 있다.

또한, 상기 액체-액체 추출은 1회 내지 수회 반복 수행할 수 있으며, 바람직하게는 2회 이상, 더욱 바람직하게는 3회 내지 5회 반복 수행할 수 있다.

나아가, 만약 극성 유기용매가 C1 내지 C4의 알코올인 경우, 비극성 유기용매로 메틸렌 클로라이드를 사용하는 것이 바람직하고, 메틸렌 클로라이드는 알코올 농축액의 20 내지 30 %(v/v)로 바람직하게 사용될 수 있으며, 과도한 메틸렌 클로라이드의 사용은 후속 공정에 많은 부담을 초래하게 된다.

본 발명의 파클리탁셀 정제방법에 있어서, 상기 a-4) 단계의 흡착제 처리는 타르 등의 불순물을 제거하기 위해 실리카계 흡착제를 사용하는 것이 바람직하며, 실리카계 흡착제를 사용하는 경우, 바이오매스 유래 왁스, 타르 등의 불순물을 효과적으로 제거할 수 있으며, 파클리탁셀의 순도 및 정제공정의 효율성을 높이는데 효과적이다.

또한, 상기 d) 단계의 흡착제는 상기 a-3) 단계에서 수득된 조추출물/흡착제의 비율이 1:0.5 내지 1:2.5 (w/w)가 되도록 처리할 수 있다.

상기 흡착제는 20 내지 60℃에서 30분 동안 처리할 수 있고, 이후 여과지로 여과하여 감압상태에서 건조할 수 있다.

본 발명의 파클리탁셀 정제방법에 있어서, 상기 a-5) 단계의 헥산 침전 추출은 a-4) 단계에서 수득한 조추출물에 헥산을 첨가함으로써 파클리탁셀보다 비극성인 물질을 제거할 수 있다.

본 발명의 파클리탁셀 정제방법에 있어서, 상기 a-6) 단계의 분별침전단계는a-6-1) 단계 이후 수득된 파클리탁셀 조추출물을 수용성 유기용매에 용해하는 단계; a-6-2) 수용성 유기용매와 물의 부피비가 50:50 ~ 20:80이 될 때까지 교반 하에 물을 첨가하여 분별 침전을 수행하는 단계; 및 a-6-3) 분별 침전 이후 교반하여 파클리탁셀을 수득하는 단계를 포함할 수 있다.

상기 a-6-1) 단계에서 조추출물을 수용성 유기용매에 용해하는 것은 수용성 유기용매에 조추출물을 균일하게 분산할 수 있는 함량의 혼합이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 수용성 유기용매 100 중량부에 대하여 1 ~ 5 중량부의 조추출물을 용해할 수 있다.

만약, 수용성 유기용매 100 중량부에 대하여 1 중량부 미만의 추출물을 혼합할 경우, 추출 수율 감소 및 과도한 용매 사용으로 인한 경제적 문제가 발생할 수 있으며, 수용성 유기용매 100 중량부에 대하여 5 중량부를 초과하는 추출물을 혼합할 경우, 추출한 파클리탁셀의 순도가 저하되는 문제가 발생할 수 있다.

상기 수용성 유기용매는 통상적으로 식물체에서 유효성분을 추출하기 위해 사용하는 유기용매라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 C1 ~ C4의 알콜 및 메틸렌 클로라이드로 이루어진 군 중 1종 이상을 포함할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 메탄올일 수 있다.

다음으로, a-6-2) 수용성 유기용매와 물의 부피비가 50:50 ~ 80:20이 될 때까지 교반 하에 물을 첨가하여 분별 침전을 수행하는 단계에 대해 설명한다.

상기 물의 첨가량은 수용성 유기용매와 물의 부피비가 50:50 ~ 80:20으로 혼합할 수 있으며, 더욱 바람직하게는 수용성 유기용매와 물의 부피비가 53:47 ~ 65: 35로 혼합할 수 있다.

다음으로, a-6-3) 분별 침전 이후 교반하여 파클리탁셀을 수득하는 단계에서, 교반 조건은 통상적으로 식물체에서 성분 침전에 사용되는 조건이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 15 ~ 26℃에서 5분 ~ 2시간 동안 100 ~ 300rpm으로 교반할 수 있다.

만약, 15℃ 미만에서 교반할 경우, 낮은 온도로 인해 파클리탁셀 침전 시 경제성 문제가 발생할 수 있으며, 26℃를 초과하는 온도에서 교반할 경우, 높은 온도로 인해 파클리탁셀의 침전 효율이 감소하는 문제가 발생할 수 있다.

만약, 5분 미만으로 교반할 경우, 파클리탁셀의 침전이 잘 이루어지지 않아 파클리탁셀 침전물 수율이 감소하는 문제가 발생할 수 있으며, 2시간을 초과하는 시간으로 교반할 경우, 과도한 조업 시간으로 인해 조업효율이 저하되는 문제가 발생할 수 있다.

만약, 100rpm 미만의 속도로 교반할 경우, 교반으로 인해 수득할 수 있는 이점인 파클리탁셀 침전 속도가 느려 파클리탁셀 침전 시간이 증가하는 문제가 발생할 수 있으며, 300rpm을 초과하는 속도로 교반할 경우, 과도한 혼합으로 조업효율이 저하되는 문제가 발생할 수 있다.

전술한 방법으로 정제된 파클리탁셀이 수득되면 본 발명의 잔류 용매 제거방법의 첫 번째 단계인 무정형 파클리탁셀 제조 단계를 수행한다. 구체적으로, 파클리탁셀을 무정형 형태로 제조하기 위해 용매유도방법을 수행하며, 용매유도방법에 사용되는 용매는 비극성 용매로, 예를 들어, 메틸렌 클로라이드, 펜탄, 아세토니트릴/헥산(1:2, v.v), 클로로포름일 수 있다. 본 발명에서는 클로로포름을 사용하여 무정형 파클리탁셀을 제조하였다.

다음으로, 본 발명의 잔류 용매 제거방법의 b) 무정형 파클리탁셀 시료를 건조시켜 용매를 제거하는 단계를 수행한다. 구체적으로, 용매유도방법에 사용된 용매를 건조시키는데 통상적으로 사용되는 회전증발, 진공건조, 초임계 건조, 분무 건조 또는 마이크로웨이브 건조가 적용될 수 있으나, 이에 한정되지 않는다. 다만, 경제성 및 공정 용이성 측면에서 회전증발을 적용하는 것이 선호된다. 상기 b) 단계의 건조는 용매의 농도에 변화가 없을 때 까지 수행될 수 있다.

본 발명의 구체적인 일실시예에서는 정제된 파클리탁셀 시료 1g을 20 mL 클로로포름에 녹여 용매유도방법으로 무정형 파클리탁셀을 제조한 후, 회전증발로 건조하였고, 회전증발을 약 30분 가량 수행하였을 때, 더 이상 클로로포름의 농도에 변화가 없음을 확인하였다. 그러나, 용매유도방법에 사용된 용매의 양 및 건조방법의 종류에 따라 건조시간이 달라질 수 있으며, 이는 당해 기술분야의 통상의 기술자가 적절하게 조절할 수 있다.

다음으로, c) 알코올 용매를 처리하는 단계가 수행된다.

상기 c) 단계는 본 발명의 잔류 용매 제거방법에 있어서 가장 핵심적인 단계로, 잔류 용매, 특히 잔류 클로로포름과 알코올을 동시에 제거하는데 중요한 영향을 미친다. 상기 c) 단계에 사용되는 알코올 용매는 클로로포름과 수소 결합을 형성하는 것이라면 제한 없이 사용될 수 있으나, 바람직하게는 C1 내지 C4의 알코올, 보다 바람직하게는 메탄올 또는 에탄올이 사용될 수 있다. 알코올은 상기 b) 단계에서 잔류 용매의 농도가 더 이상 감소하지 않을 때 첨가된다.

이때, 첨가되는 알코올이 메탄올인 경우, 건조된 무정형 파클리탁셀 시료 1g 당 3mL 내지 20mL, 보다 바람직하게는 5mL 내지 10mL를 첨가할 수 있다. 상기 범위보다 메탄올의 양이 적게 첨가되는 경우, 조업 상의 문제점이 발생할 수 있고, 상기 범위보다 메탄올의 양이 많이 첨가되는 경우, 오랜 시간 건조하여도 메탄올이 ICH 규정치 이하의 농도로 제거되지 않는 문제점이 발생한다.

다르게는, 첨가되는 알코올이 에탄올인 경우, 건조된 무정형 파클리탁셀 시료 1g 당 3mL 내지 10mL, 보다 바람직하게는 5mL 내지 10mL를 첨가할 수 있다. 상기 범위보다 에탄올의 양이 적게 첨가되는 경우, 조업 상의 문제점이 발생할 수 있고, 상기 범위보다 에탄올의 양이 많이 첨가되는 경우, 오랜 시간 건조하여도 에탄올이 ICH 규정치 이하의 농도로 제거되지 않는 문제점이 발생한다.

마지막으로, d) 알코올이 처리된 파클리탁셀 시료를 건조하는 단계가 수행된다.

상기 d) 단계의 건조방법은 클로로포름과 알코올 사이에 수소 결합을 파괴시키지 않는 것이라면 제한 없이 사용 가능하다. 예를 들어, 회전증발, 진공건조, 초임계 건조, 분무 건조 또는 마이크로웨이브 건조가 적용될 수 있다. 다만, 경제성 및 공정 용이성 측면에서 회전증발을 적용하는 것이 선호된다. 그러나, 수소 결합에 영향을 미치는 초음파 처리 등과 같은 방법은 본 건조 단계에서 사용될 수 없다.

상기 d) 단계의 건조방법이 회전증발인 경우, 회전증발이 수행되는 온도는 예를 들면, 20℃ 내지 45℃일 수 있다.

상기 d) 단계의 건조방법이 회전증발인 경우, 회전증발이 수행되는 시간은 c) 단계에 알코올이 처리되는 양에 따라 달라질 수 있으나, 건조된 무정형 파클리탁셀 시료 1 g 당 20 mL의 메탄올을 처리하는 것을 기준으로 하였을 때, 20분이면 충분하다. 바람직하게는 건조된 무정형 파클리탁셀 시료 1 g 당 5 mL 내지 10 mL의 메탄올을 처리하는 것을 기준으로 하였을 때, 10분 내지 15분동안 회전증발을 수행하는 것이 가장 효과적이다.

c) 단계에서 메탄올이 아닌 다른 알코올 용매, 예를 들어, 에탄올, 프로판올 또는 부탄올이 사용되는 경우에도 상기와 유사한 조건으로 d) 단계의 건조방법이 수행될 수 있다.

예를 들어, 전 처리되는 알코올 용매가 에탄올이고, 건조방법이 회전증발인 경우, 건조된 무정형 파클리탁셀 시료 1 g 당 10 mL의 에탄올을 처리하는 것을 기준으로 하였을 때, 회전증발이 수행되는 시간은 20분 이상, 바람직하게는 20분 내지 30분이고, 건조 온도는 20℃ 내지 45℃이다.

도 3에서 확인되는 바와 같이, 메탄올 첨가 후에는 건조 10분 내지 20분이면 잔류 클로로포름이 완전히 제거되었고, 상대적으로 많은 메탄올 첨가량(20 mL)과 낮은 건조 온도(25℃)에서는 시료 건조에 조금 더 많은 시간(~20 분)이 요구되었다. 따라서, 가장 바람직한 메탄올 첨가량은 건조된 무정형 파클리탁셀 시료 1g 당 5mL 내지 10mL이며, 회전증발로 건조단계를 수행하는 경우 최소 10분 이상, 바람직하게는 10분 내지 15분 동안 수행하는 것이 효과적이다. 건조 온도의 경우, 온도가 낮을수록 조금 더 많은 건조 시간이 요구되었으나, 잔류 클로로포름을 완전히 제거하는데 소요되는 건조 시간에는 큰 영향을 미치지는 않았다.

또한, 도 4에서 확인되는 바와 같이, 에탄올 첨가 후에도 건조 20분이면 잔류 클로로포름이 완전히 제거되었고, 에탄올의 ICH 규정치 농도를 고려하였을 때, 가장 바람직한 에탄올의 첨가량은 건조된 무정형 파클리탁셀 시료 1g 당 5mL 내지 10mL이며, 회전증발로 건조단계를 수행하는 경우 최소 20분 이상, 바람직하게는 20분 내지 30분 동안 수행하는 것이 효과적이다. 건조 온도의 경우, 온도가 낮을수록 잔류 클로로포름을 제거하는데 좀 더 많은 건조 시간이 요구되었으나, 잔류 클로로포름을 완전히 제거하는데 소요되는 건조 시간에는 큰 영향을 미치지는 않았다.

도 5에 나타낸 바와 같이, 본 발명자들은 상기 c) 단계의 메탄올 처리에 의해 형성된 클로로포름-메탄올 혼합물의 높은 증기압으로 인해 파클리탁셀의 입자 표면의 구조가 손상되고 많은 기공이 형성되어 잔류 용매 제거가 촉진될 뿐만 아니라, 클로로포름의 수소와 메탄올의 하이드록실기의 산소는 수소 결합을 형성하게 되어 잔류 클로로포름과 메탄올의 증발이 동시에 촉진될 것으로 예상하였다. 이를 확인하기 위해 메탄올 전 처리 여부에 따른 파클리탁셀의 입자 표면의 변화를 주사전자현미경으로 관찰하였고, 초음파 처리에 따른 수소 결합의 절단이 잔류 용매 제거에 미치는 영향을 확인하였다.

그 결과, 도 6에서 확인되는 바와 같이, 초음파 처리에 의해 클로로포름-메탄올 사이의 수소 결합을 절단한 경우, 상대적으로 휘발성이 큰 잔류 클로로포름은 쉽게 증발되었으나 잔류 메탄올의 증발은 제한적이었고, 도 7에서 확인되는 바와 같이, 메탄올 전 처리한 건조 시료의 표면은 매우 거칠고 갈라진 형태를 보였으며, 많은 기공이 형성되어 잔류 용매의 증발이 매우 용이한 상태였다. 이러한 결과로부터 알코올 전 처리에 의한 클로로포름-알코올 혼합물의 높은 증기압과 수소 결합에 의해 잔류 용매를 효율적으로 제거할 수 있음을 확인하였다.

또한, 알코올을 전 처리 하더라도 건조 시 클로로포름과 알코올 사이의 수소 결합이 파괴되는 경우, 잔류 클로로포름과 알코올이 동시에 제거되는 효과를 나타낼 수 없으므로, 잔류 클로로포름과 알코올의 동시 제거를 위해서는 수소 결합을 파괴하지 않는 건조 방법을 적절히 선택하여 수행하는 것이 바람직하다.

본 발명의 잔류 용매 제거방법을 통해 수득된 무정형 파클리탁셀 시료의 클로로포름 및 알코올은 ICH 규정치 이하의 농도로 제거되거나 완전히 제거될 수 있고, 바람직하게는 클로로포름의 농도는 60 ppm 이하로 제거되고, 상기 알코올이 메탄올인 경우 3,000 ppm 이하, 에탄올인 경우 5,000 ppm 이하로 제거되며, 각각 ICH 규정치 이하로 제거되어 원료의약품 규격에 부합하였다.

본 발명의 잔류 용매 제거방법은 상대적으로 조업이 간단하고 경제적인 건조방법인 회전증발을 이용하면서, 건조 전 알코올을 처리하는 간단한 방법으로 잔류 클로로포름과 알코올을 동시에 효과적으로 제거할 수 있는 이점이 있다.

더불어, 본 발명은 상술한 바와 같은 파클리탁셀로부터의 잔류용매 제거방법에 의해 수득된 무정형 파클리탁셀을 포함하는 약학적 조성물을 제공한다. 상기 약학적 조성물은 통상적으로 파클리탁셀을 포함할 수 있는 것이라면 특별히 제한하지 않으나, 바람직하게는 항암제, 류마티스 관절염 치료제 또는 알츠하이머 치료제일 수 있다.

상기 항암제는 악성종양의 치료를 위하여 사용되는 화학요법제의 총칭으로, 대부분의 항암제는 암세포의 각종 대사경로에 개입하여 주로 헥산의 합성을 억제하거나 항암활성을 나타내는 약제이다. 정상세포를 손상하지 않고 종양세포만을 저해하는 것은 어렵기 때문에 작용 메커니즘이 여러 가지로 다른 각양각색의 약제가 많은 기업에 의하여 연구되어 왔다. 의약품에 관련된 생물공학의 응용 중 가장 주력하고 있는 분야이다. 현재 판매되고 있는 항암제는 작용 메커니즘에 따라 면역을 부활화하는 것, 대사길항작용이 있는 것, 종양세포를 직접 살상하는 항생물질의 세 가지 종류로 대별된다.

본 발명에 따른 잔류 용매 제거방법으로 수득된 무정형 파클리탁셀을 포함하는 약학적 조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 또는 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.

상세하게는, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제될 수 있다.

경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 상기 파클리탁셀에 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose), 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제될 수 있다. 또한, 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스테아레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용될 수 있다.

경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.

비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제 및 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween)61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등 이 사용될 수 있다.

이상에서 본 발명의 일실시예에 대하여 설명하였으나, 본 발명의 사상은 본 명세서에 제시되는 실시 예에 제한되지 아니하며, 본 발명의 사상을 이해하는 당업자는 동일한 사상의 범위 내에서, 구성요소의 부가, 변경, 삭제, 추가 등에 의해서 다른 실시예를 용이하게 제안할 수 있을 것이나, 이 또한 본 발명의 사상범위 내에 든다고 할 것이다.

파클리탁셀 생산 및 정제

식물세포배양을 통한 파클리탁셀 생산을 위해 택서스 치넨시스(Taxus chinensis) 잎으로부터 유도된 세포주(cell line)를 이용하였으며, 현탁(suspension) 세포는 Gambor’s B5 배지, 24℃, 암조건(darkness condition)에서 교반(150 rpm)하여 배양하였다. 배양액은 2주마다 새로운 배지(medium)로 교체하였으며 배양과 생산을 위해 말토오스(1-2%, w/v)와 유도인자(AgNO₃, 4 μM)를 각각 첨가하였다. 세포 배양 후 원심분리기를 이용하여 배양액으로부터 식물세포(biomass)를 회수하였다. 바이오매스/메탄올 비율을 1/1 (w/v)로 혼합하여 추출한 후 메틸렌 클로라이드를 첨가(추출액의 25%)하여 액-액 추출(liquid-liquid extraction)을 수행하였다. 상 분리(phase separation)를 통해 하층인 메틸렌 클로라이드 층으로 파클리탁셀을 회수하여 농축/건조하였다. 건조된 조 추출물(crude extract)을 흡착제(Sylopute) 처리하고 여과하였다. 여과액을 건조하여 헥산 침전 및 분별 침전(fractional precipitation)을 수행하여 파클리탁셀 침전물을 얻었다. 건조된 침전물은 ODS(C18)-HPLC 및 Silica-HPLC를 이용하여 최종 정제(paclitaxel 순도: 92.7%)한 후 이하 실시예에 이용하였다. 본 실시예에서 사용된 파클리탁셀의 분리 및 정제 방법은 도 1에 나타내었다.

무정형 파클리탁셀 제조 및 건조 방법

2-1. 무정형 파클리탁셀의 제조

먼저 1 g의 시료(순도: 92.7%)를 20 mL의 클로로포름에 녹인 후 회전증발(CCA-1100, EYELA, 일본)로 건조하여 클로로포름-유도 무정형 파클리탁셀을 제조하였다. 제조된 시료의 형태는 SEM 및 XRD 분석을 통해 확인하였다.

2-2. 회전증발 및 마이크로웨이브를 이용한 건조에 의한 잔류 클로로포름 제거

상기 실시예 2-1의 클로로포름-유도 무정형 파클리탁셀 시료의 잔류 용매를 제거하기 위해, 먼저 시료를 간단한 회전증발(8 hr, 45℃, 감압 상태)을 수행한 후 추가적으로 마이크로웨이브를 이용한 건조(3 hr, 55℃, 300 W)를 수행하였다. 건조된 시료를 디메틸아세트아미드에 용해시킨 후 가스 크로마토그래피(gas chromatography, GC) 분석으로 잔류 클로로포름 및 메탄올 농도를 각각 측정하였다.

구체적으로, 잔류 클로로포름과 메탄올의 함량은 HP-5 컬럼(25 m, 0.33 mm 필름, 0.20 mm ID)과 FID (flame ionization detector)가 장착된 가스 크로마토그래피 (YL6500GC, 영린기기, 대한민국)를 이용하여 분석하였다. 컬럼의 분리 온도는 40~250℃로 18℃/분의 속도로 프로그래밍하여 사용하였다. 캐리어 가스 (헬륨)의 유속은 0.7 mL/분이었다. 클로로포름과 메탄올의 검출 한계(limits of detection, LOD)는 각각 1 ppm 및 0.5 ppm이었다.

그 결과, 도 2에서 확인되는 바와 같이 총 11시간의 건조에도 불구하고 잔류 클로로포름 농도는 820 ppm 정도로 거의 변화가 없었다. ICH Q3C 가이던스에 의하면, 잔류 클로로포름 농도는 60 ppm 이하로 엄격하게 제한되고 있다. 결과적으로 통상적인 회전증발 및 마이크로웨이브를 이용한 건조 방법으로는 잔류 클로로포름 농도에 대한 ICH 규정치 (60 ppm)를 충족시키기 어려웠다.

2-3. 메탄올 전 처리에 의한 잔류 용매 제거

상기 실시예 2-1의 클로로포름-유도 무정형 파클리탁셀 시료의 잔류 용매를 제거하기 위해, 건조 온도(25, 35 또는 45℃)를 달리하여 감압 상태에서 회전증발을 수행하였다. 잔류 클로로포름의 농도 변화가 없는 시점(건조 30 분경)에 메탄올을 첨가(메탄올: 5 mL, 10 mL 또는 20 mL)하여 추가 회전증발을 수행하였다. 건조된 시료를 디메틸아세트아미드에 용해시킨 후 가스 크로마토그래피(gas chromatography, GC) 분석으로 잔류 클로로포름 및 메탄올 농도를 상기 실시예 2-2와 동일한 방법으로 측정하였다.

도 3에 나타난 바와 같이, 메탄올 첨가 전에는 모든 조건에서 거의 일정한 잔류 클로로포름 농도(800-1100 ppm)를 유지하였는데, 메탄올 첨가 후에는 건조 10-20분이면 잔류 클로로포름이 완전히 제거되었다. 상대적으로 많은 메탄올 첨가량(20 mL)과 낮은 건조 온도(25℃)에서는 시료 건조에 조금 더 많은 시간(~20 분)이 요구되었다. 결과적으로, 메탄올 전 처리에 의한 단순 회전증발에 의해 클로로포름-유도 무정형 파클리탁셀의 잔류 클로로포름 농도를 ICH 규정치(60 ppm) 이하로 충분히 제거 가능하였다. 또한 모든 실험 조건에서 잔류 메탄올의 농도도 374-2231 ppm으로 ICH 규정치(<3000 ppm)에 충족되었다.

2-4. 에탄올 전 처리에 의한 잔류 용매 제거

알코올 용매로 에탄올(5 mL 또는 10 mL)을 사용하는 것을 제외하고, 상기 실시예 2-3과 동일하게 회전증발을 수행하였다.

도 4에 나타난 바와 같이, 에탄올 첨가 전에는 마찬가지로 모든 조건에서 거의 일정한 잔류 클로로포름 농도(800-1100 ppm)를 유지하였는데, 메탄올 첨가 후에는 건조 20분이면 잔류 클로로포름이 완전히 제거되었다. 온도가 낮을수록 잔류 클로로포름을 제거하는데 좀 더 많은 건조 시간이 요구되었으나, 잔류 클로로포름을 완전히 제거하는데 소요되는 건조 시간에는 영향을 미치지는 않았다. 그러나, 에탄올을 20 mL 이상 첨가하는 경우, 단순 회전증발에 의해 잔류 에탄올의 농도가 ICH 규정치(<5000 ppm) 이하로 제거되지 않았다 (데이터 미도시). 또한, 건조 온도가 낮을수록 잔류 에탄올의 농도가 높으므로, 에탄올을 전 처리하는 경우에는 건조 온도를 약 20℃ 이상으로 적절하게 조절하는 것이 바람직하다는 것을 알 수 있었다. 결과적으로, 에탄올 전 처리에 의한 단순 회전증발에 의해 클로로포름-유도 무정형 파클리탁셀의 잔류 클로로포름 농도를 ICH 규정치(60 ppm) 이하로 충분히 제거 가능하였고, 10 mL 이하의 에탄올 첨가 및 20℃ 내지 45℃의 건조 온도 조건에서 잔류 에탄올 농도도 ICH 규정치(<5000 ppm)에 충족되었다.

메탄올 전 처리에 의한 클로로포름 제거 메카니즘 확인

3-1. 메탄올 전 처리에 의한 클로로포름 제거 원리

본 발명자들은 건조 시 메탄올 전 처리에 의한 잔류 용매 제거 메카니즘을 제안하였으며, 이의 개략도를 도 5에 나타내었다. 클로로포름-메탄올 혼합물은 높은 증기압을 가질 뿐만 아니라 메탄올의 하이드록실기의 산소와 클로로포름의 수소 사이에 수소 결합(hydrogen bond)이 형성된다. 따라서, 건조 시 높은 증기압으로 인하여 시료의 구조가 손상되고 시료 표면에 많은 기공이 형성되어, 수소 결합이 형성된 잔류 클로로포름과 메탄올의 증발이 동시에 촉진된다.

3-2. 초음파 처리에 의한 수소 결합 절단 시 잔류 용매 제거에 미치는 영향

건조 시 초음파 처리에 의한 클로로포름과 메탄올 간 수소 결합의 절단(breakage)이 잔류 용매 제거에 미치는 영향을 조사하기 위하여, 40 kHz 초음파 세척기 (JAC-4020, KODO, 대한민국) (초음파 파워: 530 W)를 이용하여 건조 온도(25℃)에서 메탄올이 첨가(메탄올: 5 mL)된 시료를 회전증발을 수행하였다.

도 6의 (A)에서 확인되는 바와 같이, 초음파 없이 건조할 경우(drying without ultrasound), 메탄올 전 처리 후 잔류 클로로포름이 건조 10분 만에 완전히 제거되었으며 잔류 메탄올 또한 ICH 규정치 이하(<3000 ppm)로 충분히 제거 가능하였다. 하지만 초음파를 이용한 건조의 경우(drying with ultrasound), 메탄올 전 처리 후 잔류 클로로포름은 건조 10분 만에 완전히 제거되는 반면 잔류 메탄올은 ICH 규정치 이상 (>3000 ppm)의 많은 양이 검출되었다. 즉, 초음파에 의한 수소 결합의 절단(breakage)으로 상대적으로 휘발성이 큰(즉, 비점이 낮은) 클로로포름의 증발은 여전히 원활하나 메탄올의 증발은 상당히 제한적임을 알 수 있었다.

3-3. 주사전자현미경( SEM )을 통한 입자 표면 분석

클로로포름-메탄올 혼합물의 높은 증기압이 파클리탁셀 입자 표면에 미치는 영향을 확인하기 위해, 메탄올 전 처리 단계 없이 각각 25℃, 35℃ 및 45℃에서 회전증발을 수행한 후 수득된 건조 시료와 메탄올을 전 처리하고 각각 25℃, 35℃ 및 45℃에서 회전증발을 수행한 후 수득된 건조 시료의 입자 표면을 주사전자현미경(MIRAⅡ LMH, Tescan, 체코) 분석을 통하여 조사하였다. 가속 전압은 10 kV ~ 15 kV로 유지하고 각 시료의 배율을 달리하여 입자 표면을 관찰하였다. 분석을 위한 시료의 양은 약 1 mg이었다.

도 7의 (A), (C) 및 (E)는 순서대로 메탄올 전 처리 단계 없이 각각 25℃, 35℃ 및 45℃에서 회전증발을 수행한 후 수득된 건조 파클리탁셀 시료의 SEM 이미지를 나타내고, 도 7의 (B), (D) 및 (F)는 순서대로 메탄올을 전 처리하고 각각 25℃, 35℃ 및 45℃에서 회전증발을 수행한 후 수득된 건조 파클리탁셀 시료의 SEM 이미지를 나타낸다.

그 결과, 메탄올 전 처리 단계 없이 회전증발만으로 수득된 건조 파클리탁셀의 입자 표면은 도 7의 (A), (C) 및 (E)에 나타난 바와 같이, 표면이 매우 매끈하고 기공은 전혀 확인되지 않았다. 이는 시료 표면이 경화되어 기공 형성이 어려워 잔류 용매가 충분히 제거되지 못하였음을 의미한다. 반면, 메탄올 전 처리 후 회전증발을 수행하여 수득된 건조 파클리탁셀의 입자 표면은 도 7의 (B), (D) 및 (F)에 나타난 바와 같이 표면이 매우 거칠고 갈라진 형태를 보였다. 이는 클로로포름-메탄올 혼합물의 높은 증기압으로 인해 시료 표면의 구조가 손상되고 많은 기공이 형성되어 잔류 용매 제거가 촉진되는 것을 의미한다.

Claims (11)

1. 다음의 단계를 포함하는 파클리탁셀로부터의 잔류 용매 제거방법:
   a) 정제된 파클리탁셀에 용매를 처리하여 용매유도방법으로 무정형 파클리탁셀을 제조하는 단계;
   b) 무정형 파클리탁셀 시료를 건조시켜 용매를 제거하는 단계;
   c) 알코올 용매를 처리하는 단계; 및
   d) 알코올 용매가 처리된 파클리탁셀 시료를 건조하는 단계.
2. 제1항에 있어서, 상기 a) 단계의 정제된 파클리탁셀은 다음의 단계를 수행하여 제조되는 것인 파클리탁셀로부터의 잔류 용매 제거방법:
   a-1) 택서스속(Taxus genus) 식물체의 세포 배양액으로부터 바이오매스를 수득하는 단계;
   a-2) 유기용매 추출을 수행하는 단계;
   a-3) 액체-액체 추출을 수행하는 단계;
   a-4) 흡착제를 처리하는 단계;
   a-5) 헥산 침전 추출을 수행하는 단계; 및
   a-6) 분별침전단계.
3. 제1항에 있어서, 상기 a) 및 b) 단계의 용매는 클로로포름인 파클리탁셀로부터의 잔류 용매 제거방법.
4. 제1항에 있어서, 상기 b) 단계의 건조는 회전증발, 진공건조, 초임계 건조, 분무 건조 또는 마이크로웨이브 건조인 파클리탁셀로부터의 잔류 용매 제거방법.
5. 제4항에 있어서, 상기 건조는 클로로포름의 농도에 변화가 없을 때까지 수행하는 것인 파클리탁셀로부터의 잔류 용매 제거방법.
6. 제1항에 있어서, 상기 c) 단계의 알코올 용매가 메탄올 용매인 경우, 건조된 파클리탁셀 시료 1 g 당 3 mL 내지 20 mL의 메탄올 용매를 처리하는 것인 파클리탁셀로부터의 잔류 용매 제거방법.
7. 제1항에 있어서, 상기 c) 단계의 알코올 용매가 에탄올 용매인 경우, 건조된 파클리탁셀 시료 1 g 당 3 mL 내지 10 mL의 에탄올 용매를 처리하는 것인 파클리탁셀로부터의 잔류 용매 제거방법.
8. 제1항에 있어서, 상기 d) 단계의 건조는 클로로포름과 알코올 사이의 수소 결합을 절단하지 않는 건조방법으로 수행되는 파클리탁셀로부터의 잔류 용매 제거방법.
9. 제8항에 있어서, 상기 d) 단계의 건조가 회전증발인 경우, 10분 내지 30분 동안 수행하는 파클리탁셀로부터의 잔류 용매 제거방법.
10. 제1항에 있어서, 상기 잔류 용매는 클로로포름 및 알코올로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상인 것인 파클리탁셀로부터의 잔류 용매 제거방법.
11. 제10항에 있어서, 상기 클로로포름의 농도는 60 ppm 이하로 제거되고, 상기 알코올이 메탄올인 경우 3,000 ppm 이하로 제거되며, 상기 알코올이 에탄올인 경우 5,000 ppm 이하로 제거되는 것인 파클리탁셀로부터의 잔류 용매 제거방법.

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