KR20200144593A - 포유동물의 번식 능력을 감소시키는 방법 - Google Patents

포유동물의 번식 능력을 감소시키는 방법 Download PDF

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Abstract

본 발명은 포유동물의 번식 능력을 감소시키기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 상기 조성물 및 방법은 (a) 트립톨리드 골격을 포함하고 암컷 포유동물에서 난포 고갈을 일으키는 다이터페노이드 에폭사이드; 및 (b) 암컷 포유동물에서 난포 고갈을 일으키는 유기 다이에폭사이드의 용도 및 투여를 포함한다.

Description

포유동물의 번식 능력을 감소시키는 방법{REDUCING THE REPRODUCTIVE CAPACITY OF MAMMALS}
본 발명은 포유동물의 번식 능력을 감소시키기 위한 조성물 및 방법에 관한 것이다. 상기 조성물 및 방법은 (a) 트립톨리드 골격을 포함하고 암컷 포유동물에서 난포 고갈을 일으키는 다이터페노이드 에폭사이드; 및 (b) 암컷 포유동물에서 난포 고갈을 일으키는 유기 다이에폭사이와의 조합의 용도 및 투여를 포함한다.
계속 출원 정보
본 출원은 2012년 8월 23일자로 출원된 미국 가출원 제 61/692,624 호(본원에 참고로 인용된다)를 우선권 주장한다.
포유동물의 번식 능력을 감소시키는 조성물, 특히 난포 고갈을 유도하는 조성물이 다양한 이유로 바람직할 수 있다. 상기와 같은 조성물을 사용하여 유해동물, 예를 들어 설치류의 불임을 유도하여 상기 유해동물의 집단을 박멸하고 연구용 동물 모델을 생성시킬 수 있다. 예를 들어, 난포 고갈이 유도된 래트와 같은 동물을 사용하여 다른 동물, 예를 들어 인간에서의 갱년기 및 그의 영향을 연구하는데 사용될 수 있는 동물 모델을 생성시킬 수 있다.
설치류 유해동물은 세계의 농식품점에 대한 주요 피해 원인이다. 설치류는 식품 저장품을 먹고 오염시키며, 질병을 옮기고, 기간시설에 손상을 입히며, 자생적인 야생생물 및 생태계를 파괴할 수 있다. 수십년간, 설치류 집단을 박멸하고자 살서제가 사용되어 왔으나, 아직까지 설치류 집단을 박멸하기가 어려운 것으로 나타났으며 설치류 손상이 만연해 있다. 설치류 집단을 박멸하기 어려운 한 가지 이유는 설치류가 비교적 짧은 임신기간(예를 들어, 수주 정도)을 갖는 경향이 있으며, 따라서 전체 집단을 제거하지 않는 한, 상기 살서제가 소모되거나 고갈되고 나면 상기 집단은 스스로 복원될 수 있다. 또한, 독성물질은 상기 유해동물을 특이적으로 표적화할 수 없으며 인간을 포함한 다른 동물에 해를 입힐 수도 있다. 따라서, 살서제의 사용은 다른 환경적 우려로 인해 감소될 수 있다.
래트 번식률은 입수할 수 있는 음식물의 양 및 음식물 공급원의 질에 매여 있다. 따라서, 중독이 상기 집단을 감소시키지만, 상기 중독은 또한 식품에 대한 경쟁을 감소시켜, 생존자의 번식을 억제할 수 없게 할 수도 있다.
살서제의 사용에 대한 유망한 대안은 난포 고갈을 촉진하여 생식력 억제를 통해 설치류 유해동물의 집단을 처리하는 제형을 사용함을 포함한다. 에폭사이드 4-비닐사이클로헥센 다이에폭사이드(VCD)는 위관영양을 통해 스프래그 다우리 래트(라투스 노르베기쿠스(Rattus norvegicus))에서 비-재생성 원시 난포 고갈을 일으키기에 유효하였다. 그러나, 집단 처리용으로 유효하기 위해서는 고갈을 위한 난포를 다수, 예를 들어 전부 표적화하여, 생식력 및 새끼 생산에 즉각적인 영향을 미치는 것이 바람직하다. 따라서, 여러 단계의 난포 고갈을 유도하는 개선된 조성물 및 상기 조성물의 사용 방법이 바람직하다.
본 발명의 목적은 포유동물의 번식 능력을 감소시키기 위해 사용될 수 있는 조성물을 제공하는 것이다. 특히, 본 발명의 조성물은 암컷 포유동물뿐만 아니라 수컷 포유동물에게 투여시 난포 고갈을 유도한다. 본 발명의 또 다른 목적은 상기 본 발명의 조성물로 상기 포유동물 집단을 감소시키는 방법을 제공하는 것이다.
본 발명의 목적들은
(a) 트립톨리드 골격을 포함하고 암컷 포유동물에서 난포 고갈을 일으키는 다이터페노이드 에폭사이드; 및
(b) 암컷 포유동물에서 난포 고갈을 일으키는 유기 다이에폭사이드
를 포함하는, 암컷 포유동물에서 난포를 고갈시키기에 적합한 조성물에 의해 수행될 수 있다.
본 발명의 바람직한 실시태양에서, 상기 트립톨리드 골격을 포함하는 다이터페노이드 에폭사이드(a)는 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 염이다:
[화학식 I]
Figure pat00001
상기 식에서,
X1은 H, R1, OH 또는 OR1이고;
X2는 H, R1, OH, OR1, =O 또는 Y이고;
X3은 H 또는 OH이고;
X4는 H, OH 또는 OR1이고;
R1은 C1-4 알킬 기이고;
Y는 (CR2R3O)nP(O)(O-Z+)2이고;
각각의 R2는 독립적으로 H, C1-6 알킬, 아릴-C1-6 알킬-, C3-6 사이클로알킬 또는 아릴이고, 각각의 R3은 독립적으로 H, C1-6 알킬, 아릴-C1-6 알킬-, C3-6 사이클로알킬 또는 아릴이거나,
R2 및 R3은 이들이 결합된 탄소 원자와 함께 C3-7 사이클로알킬 기를 형성하고,
R2 및 R3 중 임의의 알킬 또는 사이클로알킬 기는 할로, C1-6 알콕시 및 NRaRb로 이루어진 군으로부터 선택된 1 내지 5 개의 치환기로 선택적으로 치환될 수 있고,
R2 및 R3 중 임의의 아릴 기는 C1-6 알킬, C1-6 알콕시, NRaRb, 나이트로 및 시아노로 이루어진 군으로부터 선택된 1 내지 5 개의 치환기로 선택적으로 치환될 수 있고;
n은 1, 2 또는 3이고;
각각의 Z는 H이고;
Ra 및 Rb는 각각 독립적으로 H, C1-6 알킬, C3-6 사이클로알킬 또는 아릴이거나,
Ra 및 Rb는 이들이 결합된 질소 원자와 함께 피롤리디노, 피페리디노, 피페라니노, 아제티디노, 모폴리노 또는 티오모폴리노 기를 형성한다.
본 발명의 바람직한 실시태양에서, X1은 H, CH3, OH 또는 OCH3이다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시태양에서, X2는 H, CH3, OH, OCH3 또는 =O이다.
또 다른 바람직한 실시태양에서, X2는 Y이다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시태양에서, X3은 H이다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시태양에서, X4는 H, OH 또는 OCH3이다.
본 발명의 바람직한 실시태양에서, (a)는 트립톨리드, 트립다이올리드, 16-하이드록시트립톨리드, 트립토니드 또는 민넬리드이다.
특히 바람직한 실시태양에서, (a)는 트립톨리드이다.
본 발명의 바람직한 실시태양에서, 상기 유기 다이에폭사이드는 8 내지 14개의 탄소 원자를 함유한다.
본 발명의 바람직한 실시태양에서, 상기 유기 다이에폭사이드는 2 내지 4개의 고리를 함유한다.
본 발명의 바람직한 실시태양에서, 상기 유기 다이에폭사이드는 4-비닐사이클로헥센 다이에폭사이드(VCD), 글리세롤 다이글리시딜 에테르, 3,4-에폭시-사이클로헥실-메틸-3,4-에폭시사이클로헥실 카복실레이트, 1,4-사이클로헥산다이메탄올 다이글리시딜 에테르, 에틸렌 글리콜 다이글리시딜 에테르, 레소르시놀 글리시딜 에테르 및 1,4-부탄다이올 다이글리시딜 에테르로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함한다.
본 발명의 바람직한 실시태양에서, 상기 유기 다이에폭사이드는 4-비닐사이클로헥센 다이에폭사이드이다.
본 발명의 바람직한 실시태양에서, (a)는 트립톨리드이고, (b)는 4-비닐사이클로헥센 다이에폭사이드이다.
본 발명은 또한 유효량의 상술한 조성물을 암컷 포유동물에게 투여함을 포함하는, 상기 암컷 포유동물에서 난포 고갈을 유도하는 방법을 포함한다.
본 발명의 바람직한 실시태양에서, 상기 포유동물은 인간 또는 비-인간 포유동물이다.
본 발명은 또한 유효량의 상술한 조성물을 포유동물에게 투여함을 포함하는, 상기 포유동물의 번식 능력을 감소시키는 방법을 포함한다.
본 발명의 바람직한 실시태양에서, 상기 포유동물은 암컷이다.
본 발명의 바람직한 실시태양에서, 상기 포유동물은 수컷이다.
본 발명의 바람직한 실시태양에서, 상기 포유동물은 상기 조성물의 투여에 의해 불임으로 된다.
본 발명은 또한 유효량의 상술한 조성물을 비-인간 포유동물의 집단에게 투여함을 포함하는, 상기 비-인간 포유동물의 집단의 집단 크기를 제어하는 방법을 포함한다.
본 발명은 또한 유효량의
(a) 트립톨리드 골격을 포함하고 암컷 포유동물에서 난포 고갈을 일으키는 다이터페노이드 에폭사이드; 및
(b) 암컷 포유동물에서 난포 고갈을 일으키는 유기 다이에폭사이드
를 암컷 포유동물에게 투여함을 포함하는, 상기 암컷 포유동물에서 난포 고갈을 유도하는 방법을 포함한다.
본 발명의 하나의 태양에서, (a) 및 (b)를 별도의 조성물로서 투여한다.
본 발명은 또한 유효량의
(a) 트립톨리드 골격을 포함하고 암컷 포유동물에서 난포 고갈을 일으키는 다이터페노이드 에폭사이드; 및
(b) 암컷 포유동물에서 난포 고갈을 일으키는 유기 다이에폭사이드
를 포유동물에게 투여함을 포함하는, 상기 암컷 포유동물의 번식 능력을 감소시키는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 유효량의
(a) 트립톨리드 골격을 포함하고 암컷 포유동물에서 난포 고갈을 일으키는 다이터페노이드 에폭사이드; 및
(b) 암컷 포유동물에서 난포 고갈을 일으키는 유기 다이에폭사이드
를 비-인간 포유동물의 집단에게 투여함을 포함하는, 상기 비-인간 포유동물의 집단의 집단 크기를 제어하는 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 (a) 및 (b)를 조합함을 포함하는, 상술한 조성물의 제조 방법을 제공한다.
본 발명의 보다 완전한 이해 및 그의 수반되는 이점들 중 다수를 하기 상세한 설명과 함께 하기 도면을 참고하여 보다 잘 이해하게 되는 바와 같이 쉽게 획득할 것이다.
본 발명의 예시적인 실시태양을 첨부된 도면과 관련하여 개시할 것이다.
도 1 및 2는 배양된 대조용 난소를 예시한다.
도 3은 시험관내 배양 시스템을 예시한다. a. 출생후 4일째 래트 새끼로부터의 난소 수집. b. 해부 현미경 하에서 난소로부터 과잉 조직 손질. c. 단리된 난소를 배지상에 부유하는 막 위에 놓는다.
도 4는 30 ㎛ VCD로 처리된 배양된 난소를 예시한다.
도 5는 30 ㎛ VCD 및 5 ㎚ 트립톨리드로 처리된 배양된 난소를 예시한다.
도 6은 30 ㎛ VCD 및 10 ㎚ 트립톨리드로 처리된 배양된 난소를 예시한다.
도 7은 연구 래트의 사료/먹이 소비를 예시한다.
도 8은 상기 연구 래트의 체중 증가를 예시한다.
도 9는 VCD 및 트립톨리드를 함유하는 먹이를 먹인 래트의 난포수를 예시한다.
도 10은 VCD 및 트립톨리드를 함유하는 먹이를 먹인 래트의 난소의 난소 상을 예시한다.
도 11은 연구 래트의 난소 중량을 예시한다.
도 12는 증가하는 트립톨리드 농도와 함께 일정한 VCD(0.099% 농도)를 갖는 먹이를 소비하는 미성숙한 암컷 래트의 결과를 예시한다.
도 13은 전체 치료기간 동안 무제한적인 사료와 물을 소비하는 미성숙한 암컷 래트의 결과를 예시한다.
도 14는 한배 당 태어난 새끼에 대한 효과가 트립톨리드에 용량 의존적임을 예시한다. x-축은 체중 ㎏당 소비된 총 트립톨리드 ㎎을 나타낸다.
도 15는 활성 성분이 없는 대조용 먹이를 소비하는 미성숙한 암컷 래트, 및 15일 동안 0.099%의 VCD 및 고 용량의 트립톨리드가 있는 먹이를 먹는 처리된 암컷의 결과를 예시한다.
도 16은 난포 고갈의 시험관내 생물분석의 결과를 예시한다.
상기 도면들을 반드시 축척으로 도시할 필요는 없음을 알 것이다. 예를 들어, 상기 도면들의 요소들 중 일부의 치수를 본 발명의 예시된 실시태양의 이해의 개선을 돕기 위해서 다른 요소들에 비해 확대시킬 수도 있다.
본 발명은
(a) 트립톨리드 골격을 포함하고 조성물 중에 혼입시, 즉 에폭사이드 (b)와 함께 사용시, 암컷 포유동물에서 난포 고갈을 일으키는 다이터페노이드 에폭사이드; 및
(b) 암컷 포유동물에서 난포 고갈을 일으키는 유기 다이에폭사이드
를 포함하는, 상기 암컷 포유동물에서 난포를 고갈시키기에 적합한 조성물을 제공한다.
트립톨리드는 널리-공지된 다이터페노이드 에폭사이드이며 상기 화합물의 다수의 유도체 및 유사체도 또한 널리-공지되어 있고 본 발명에 사용될 수 있다.
참조로서, 상기 트립톨리드 골격을 하기의 구조에 의해 나타낼 수 있다:
Figure pat00002
물론, 본 발명의 화합물들은 상기 골격상에 다양한 상이한 치환기들을 갖는다. 상기와 같은 화합물들의 예를 하기에 개시한다.
본 발명의 바람직한 실시태양에서, 트립톨리드 골격을 포함하는 다이터페노이드 에폭사이드(a)는 하기 화학식 I의 화합물 또는 그의 염이다:
화학식 I
Figure pat00003
상기 식에서,
X1은 H, R1, OH 또는 OR1이고;
X2는 H, R1, OH, OR1, =O 또는 Y이고;
X3은 H 또는 OH이고;
X4는 H, OH 또는 OR1이고;
R1은 C1-4 알킬 기이고;
Y는 (CR2R3O)nP(O)(O-Z+)2이고;
각각의 R2는 독립적으로 H, C1-6 알킬, 아릴-C1-6 알킬-, C3-6 사이클로알킬 또는 아릴이고, 각각의 R3은 독립적으로 H, C1-6 알킬, 아릴-C1-6 알킬-, C3-6 사이클로알킬 또는 아릴이거나,
R2 및 R3은 이들이 결합된 탄소 원자와 함께 C3-7 사이클로알킬 기를 형성하고,
R2 및 R3 중 임의의 알킬 또는 사이클로알킬 기는 할로, C1-6 알콕시 및 NRaRb로 이루어진 군으로부터 선택된 1 내지 5 개의 치환기로 선택적으로 치환될 수 있고,
R2 및 R3 중 임의의 아릴 기는 C1-6 알킬, C1-6 알콕시, NRaRb, 나이트로 및 시아노로 이루어진 군으로부터 선택된 1 내지 5 개의 치환기로 선택적으로 치환될 수 있고;
n은 1, 2 또는 3이고;
각각의 Z는 H이고;
Ra 및 Rb는 각각 독립적으로 H, C1-6 알킬, C3-6 사이클로알킬 또는 아릴이거나,
Ra 및 Rb는 이들이 결합된 질소 원자와 함께 피롤리디노, 피페리디노, 피페라니노, 아제티디노, 모폴리노 또는 티오모폴리노 기를 형성한다.
본 발명의 바람직한 실시태양에서, X1은 H, CH3, OH 또는 OCH3이다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시태양에서, X2는 H, CH3, OH, OCH3 또는 =O이다.
또 다른 바람직한 실시태양에서, X2는 Y이다. 본 발명의 특히 바람직한 실시태양에서, X2가 Y일 때, X1, X3 및 X4는 H이다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시태양에서, X3은 H이다.
본 발명의 또 다른 바람직한 실시태양에서, X4는 H, OH 또는 OCH3이다.
본 발명의 바람직한 실시태양에서, (a)는 트립톨리드, 트립다이올리드, 16-하이드록시트립톨리드, 트립토니드 또는 민넬리드, 및 이들의 염이다.
특히 바람직한 실시태양에서, (a)는 트립톨리드이다.
화합물 (a)에 대한 상세한 설명 및 제조 방법은 다양한 참고문헌들, 예를 들어 미국특허 제 6,294,546 호, 미국특허 제 7,626,044 호, 미국특허 제 6,548,537 호, 미국특허 제 6,004,999 호, 미국특허 제 8,268,882 호 및 국제특허공개 제 WO 2010/129918 호에 제공되며, 이들은 각각 본원에 참고로 인용된다. (a)의 범위내의 상이한 화합물들의 혼합물은 본 발명에 포함된다.
본 발명 조성물의 성분 (b)는 암컷 포유동물에서 난포 고갈을 일으킬 수 있는 유기 다이에폭사이드이다. 본 발명의 바람직한 실시태양에서, 상기 유기 다이에폭사이드는 8 내지 14개의 탄소 원자를 함유한다. 본 발명의 또 다른 바람직한 실시태양에서, 상기 유기 다이에폭사이드는 2개의 에폭사이드 고리를 포함하여, 2 내지 4개의 고리를 함유한다.
본 발명의 바람직한 실시태양에서, 상기 유기 다이에폭사이드는 4-비닐사이클로헥센 다이에폭사이드(VCD), 글리세롤 다이글리시딜 에테르, 3,4-에폭시-사이클로헥실-메틸-3,4-에폭시사이클로헥실 카복실레이트, 1,4-사이클로헥산다이메탄올 다이글리시딜 에테르, 에틸렌 글리콜 다이글리시딜 에테르, 레소르시놀 글리시딜 에테르 및 1,4-부탄다이올 다이글리시딜 에테르로 이루어진 군으로부터 선택된 1종 이상을 포함한다. 다이에폭사이드들의 혼합물은 본 발명의 범위내에 있다.
본 발명에 사용될 수 있는 다른 유기 다이에폭사이드는 1,2,3,4-다이에폭시부탄, 1,2,4,5-다이에폭시펜탄, 1,2,5,6-다이에폭시펜탄, 1,2,6,7-다이에폭시펜탄, 1,2,7,8-다이에폭시옥탄, 1,2,3,4-다이에폭시사이클로헥산, 1,2,5,6-다이에폭시사이클로옥탄, 9,10,12,13-다이에폭시스테아르산, 3,4-에폭시-6-메틸-사이클로헥실메틸-3,4-에폭시-6-메틸-사이클로헥산카복실레이트, 레소르시놀다이글리시딜 에테르, 헥사에폭시스쿠알렌, 비스-(2,3-에폭시-2-메틸프로필)에테르, 비스-(3,4-에폭시부틸)에테르, 에틸렌 글리콜 비스-(2,3-에폭시-2-메틸프로필)에테르, 2,3-에폭시-2-에틸헥실-9,10-에폭시스테아레이트, 2-에틸-1,3-헥산다이올 비스-(9,10-에폭시스테아레이트), 2,3-비스(글리시딜옥시)-1,4-다이옥산, 비스-(3,4-에폭시사이클로헥실메틸)아디페이트, 비스-(3,4-에폭시-메틸사이클로헥실메틸)아디페이트, 3,4-에폭시-6-메틸사이클로헥실메틸 3-4-에폭시-6-메틸사이클로헥산카복실레이트, 리모넨 다이옥사이드 및 비스-(2,3-에폭시사이클로펜틸)에테르를 포함한다. 상기와 같은 화합물들은 예를 들어 문헌[Weil, Industrial Hygiene Journal, July-August 1963, pp. 305-325] 및 문헌[Van Duuren, Annals New York Academy of Sciences, 1969, pp. 633-651](이들은 모두 본원에 참고로 인용된다)에 개시되어 있다.
본 발명의 바람직한 실시태양에서, 상기 유기 다이에폭사이드는 4-비닐사이클로헥센 다이에폭사이드를 포함한다. 본 발명의 매우 특히 바람직한 실시태양에서, (a)는 트립톨리드이고, (b)는 4-비닐사이클로헥센 다이에폭사이드이다.
상기 에폭사이드의 화학 반응성을 문헌["Detection of epoxides with 4-(p-nitrobenzyl) pyridine." Agarwal et. al. 1979, Bull. Environm . Contam . Toxicol. 23, 825-829](본원에 참고로 인용된다)에 보고된 방법을 근거로 4-(p-나이트로벤질)피리딘(NBP)을 사용하여 알킬화 분석에서 측정할 수 있다.
상기 에폭사이드의 생물 활성을 문헌["Characterization of a rat in vitro ovarian culture system to study the ovarian toxicant 4-vinylcyclohexene diepoxide." Devine et. al. 2002, Toxicol . Appl . Pharmacol . 184, 107-115](본원에 참고로 인용된다)에 보고된 방법을 근거로 래트 새끼 난소를 사용하여 시험관내 생물분석에서 평가할 수 있다. 생물학적 활성을 미세 몰 농도의 상기 에폭사이드를 사용하여 1주일간 배양후에 난소 단편 중 난포의 수에 의해 측정할 수 있다. 일반적으로, 생물학적으로 활성인 에폭사이드는 또한 화학적으로 활성이나 이의 역은 그렇지 않다.
본 발명은 또한 유효량의 상술한 조성물을 암컷 포유동물에게 투여함을 포함하는, 상기 암컷 포유동물에서 난포 고갈을 유도하는 방법을 포함한다.
본 발명의 바람직한 실시태양에서, 상기 포유동물은 인간 또는 비-인간 포유동물이다. 비-인간 포유동물의 예는, 예를 들어, 설치류(예를 들어, 래트, 마우스, 다람쥐, 프레리 도그, 뒤쥐, 우드척, 햄스터, 뉴트리아, 비버, 들쥐류), 사향뒤쥐, 고양이, 개, 돼지, 말, 소, 코요테, 여우, 양, 사슴, 염소, 담비, 주머니쥐, 토끼, 산토끼, 캥거루, 왈라비, 오소리, 낙타, 코끼리, 당나귀, 라쿤, 곰, 땅돼지, 두더쥐, 박쥐 및 수퇘지를 포함한다.
상기 나열된 포유동물들은 본원에 개시된 발명의 임의의 실시태양에 사용될 수 있다.
본 발명은 또한 포유동물에게 유효량의 상술한 조성물을 투여함을 포함하는, 상기 포유동물의 번식 능력을 감소시키는 방법을 포함한다.
본 발명의 바람직한 실시태양에서, 상기 포유동물은 암컷이다. 본 발명의 또 다른 실시태양에서, 상기 포유동물은 수컷이다. 트립톨리드 경구 노출은 수컷 래트 생식력을 최종적으로 불임으로 손상시키는 것으로 공지되어 있다. 따라서, 수컷 및 암컷을 모두 본 발명에 따라 처리할 수 있다. 본 발명의 바람직한 실시태양에서, 상기 포유동물을 본 발명에서의 처리에 의해 불임케 한다. 즉 상기 동물은 그의 번식 능력을 상실한다.
본 발명은 또한 유효량의 상술한 조성물을 비-인간 포유동물의 집단에게 투여함을 포함하는, 상기 비-인간 포유동물의 집단의 집단 크기를 제어하는 방법을 포함한다. 본 발명의 상기 태양에서, 다수의 동물, 즉 집단을 일련의 지역, 예를 들어 공원 또는 야생 보존지역, 농업, 밀집식 가축사육 업체, 상업, 주택, 연합 토지에 걸쳐 처리를 위해 표적화한다. 본 발명의 상기 실시태양은 도심 대중교통 수단, 예를 들어 도심 지하철에서 설치류(예를 들어, 래트) 집단을 박멸하기에 특히 유용하다. 예를 들어 뉴욕 지하철은 많은 설치류 집단이 있는 것으로 널리 알려져 있다. 본 발명의 상기 실시태양에서, 본 발명의 조성물을 상기 지하철 전체에 걸쳐 상기 설치류가 먹도록 제공한다. 상기와 같은 처리는 상기 동물 집단의 크기를 감소시키고, 가능하게는 상기 집단을 제거할 것으로 예상된다.
본 발명은 또한 (a) 및 (b)를 경우에 따라 별도로, 즉 (a) 및 (b)를 단일 조성물 중에 혼입시키지 않는 상술한 방법들 모두를 포함한다. 또한, (a) 및 (b)를 바람직하게는 동시에 투여할 것이지만, 상기 실시태양에 관하여 (a) 및 (b)를 상이한 시기에 투여할 수 있음도 또한 본 발명의 범위내에 있으며, 이때 (a) 및 (b)는 모두 함께 제공되어 본 발명에 의해 제공되는 상승 효과를 제공할 것이다. 바람직하게, (a) 및 (b)를 서로 24, 12, 6, 3, 2 또는 1 시간이내에 투여한다.
다양한 실시태양에 따라, 본 발명의 조성물을, 난포 고갈을 유도함으로써 포유동물에서 불임을 일으키도록 형성시킨다. 이들 실시태양의 다양한 태양에 따라, 모든 단계의 난포가 표적화된다. 난소 기능의 영구적인 상실을 일으키기 위해서, 유한한 난포의 원시 풀을 표적화한다. 새끼 생산을 빠르게 감소시키기 위해서 성장하는 난포를 표적화한다.
본 발명의 성분 (b)(예를 들어, VCD)를 사용하여 원시/1차 난포를 표적화하고, 성분 (a)(예를 들어, 트립톨리드)를 사용하여 성장하는 난포를 표적화한다. 상기 조합을 사용하여 본 발명에 의해 상기와 같이 처리된 포유동물에서 번식을 영구적으로 억제한다. 또한, 트립톨리드는 수컷 포유동물에서 생식력을 감소시키는 것으로 공지되어 있으며, 따라서 상기 조성물은 수컷 및 암컷 포유동물 모두에서 생식력을 감소시킨다. 상기 조성물을 또한 포유동물, 예를 들어 폐경 전후 여성의 난소 기능부전을 가속화하는데 사용할 수 있다.
활성제의 용량은 동물의 처리 목적 및 유형에 따라 변할 수 있다. 그러나, 본 명세의 예시적인 실시태양에 따라, 상기 조성물은 약 1 mM 내지 약 750 mM, 또는 약 1 mM 내지 약 500 mM, 또는 약 10 mM 내지 약 100 mM의 (b) 및 약 1 nM 내지 약 10 mM, 또는 약 5 nM 내지 약 1 mM, 또는 약 5 nM 내지 약 20 nM의 (a)를 포함한다. 이러한 범위는 이들 사이의 모든 특정한 값들 및 하위범위, 예를 들어 10 nM, 25 nM, 50 nM, 100 nM, 250 nM, 500 nM, 5 mM, 25 nM, 50 mM 및 250 mM을 포함한다. 놀랍고도 뜻밖으로, 본 발명의 조성물은 모든 단계의 난포를 고갈시키는 것으로 밝혀졌다. 상기 고갈은 (b) 및 (a)의 상승작용적 조합으로부터 생성되는 것으로 생각되며, 이러한 조합은 사용자가 상기 조합을 포함하지 않는 조성물에 비해 상기 작용제들 각각을 보다 낮은 농도로 사용할 수 있게 하는 것으로 생각되고 난포의 보다 높은 고갈 백분율을 생성시킨다.
시험관내 배양 용도를 위해서, 상기 (a) 대 (b)의 몰비는 1/5 내지 1/75,000의 범위일 수 있으며, 이들 사이의 모든 특정한 값들 및 하위범위들, 예를 들어 1/10, 1/25, 1/50, 1/100, 1/250, 1/500, 1/1,000, 1/2,500, 1/5,000, 1/10,000, 1/25,000 및 1/50,000을 포함한다. 생체내 용도(예를 들어, 먹이)의 경우, 상기 상응하는 몰비는 일반적으로 1/5 내지 1/500이며, 이들 사이의 모든 특정한 값들 및 하위범위들, 예를 들어 1/10, 1/25, 1/50, 1/100 및 1/250을 포함한다.
시험관내 배양 용도를 위해서, 상기 (a) 대 (b)의 중량비는 일반적으로 1/2 내지 1/50,000의 범위일 수 있으며, 이들 사이의 모든 특정한 값들 및 하위범위들, 예를 들어 1/10, 1/25, 1/50, 1/100, 1/250, 1/500, 1/1,000, 1/2,500, 1/5,000, 1/10,000 및 1/25,000을 포함한다. 생체내 용도(예를 들어, 먹이)의 경우, 상기 상응하는 중량비는 일반적으로 1/5 내지 1/500이며, 이들 사이의 모든 특정한 값들 및 하위범위들, 예를 들어 1/10, 1/25, 1/50, 1/100 및 1/250을 포함한다.
VCD를 포함하는 조성물이 난포 고갈의 유도를 위해 연구되었지만, VCD는 단독(유일한 활성 성분으로서)으로는 저 농도 또는 <15일의 짧은 노출 기간에서 조기 난소 기능부전을 일으키지 않는 것으로 밝혀졌다. 조기 난소 기능부전은 알/난포가 난소 중에 존재함에도 불구하고 더 이상 배란이 일어나지 않는 때이다. 집단 박멸의 수단으로서 작용하는 조성물 및 방법을 위해서, 상기 난소 기능부전은 바람직하게는 신속하게, 예를 들어 설치류 처리 10일 이내에 발생한다.
다양한 실시태양에 따라서, 난포 고갈을 유도하는 방법은 VCD 및 트립톨리드를 포함하는 조성물을 제공하는 과정들을 포함하며, 여기에서 상기 조성물은 난포의 여러 단계의 고갈을 유도한다. 예를 들어, 상기 조성물은 원시, 2차 및 3차 난포의 고갈 및 황체의 고갈을 일으킬 수 있다. 추가의 태양에 따라서, 상기 조합은 원시 난포 고갈의 증가, 및 단지 VCD만을 포함하는 조성물에 비해 상기 원시 난포의 더 완전한 파괴를 일으킬 수 있다.
본 발명에 개시된 조성물 및 방법을 사용하여 상기 조성물을 포유동물 집단에 먹임으로써 다양한 포유동물(예를 들어, 설치류, 돼지, 코요테, 개, 고양이, 말 및 상술한 다른 동물들)을 불임케 하고 상기와 같은 동물의 집단 등을 박멸할 수 있다. 상기 나타낸 바와 같이, 상기 조성물은 수컷 포유동물의 생식력을 감소시키며, 따라서 상기 조성물을 집단의 수컷 및 암컷 모두에게 투여하는 것은 상기 집단을, 수컷 및 암컷 중 어느 하나의 생식력에만 영향을 미치는 조성물에 비해 더욱 감소시키는 것으로 생각된다.
추가의 실시태양에 따라, VCD 및 트립톨리드를 포함하는 조성물(여기에서 상기 조성물은 다수 단계의 난포의 고갈을 유도한다)의 투여에 의해 유도된 난포 고갈을 갖는 비-인간 포유동물 암컷을 제공한다. 상기 동물을, 예를 들어 폐경 및 갱년기 치료의 연구에 사용할 수 있으며 동물, 예를 들어 인간을 위한 동물 모델로서 사용할 수도 있다.
상기 포유동물을 다양한 기법에 따라, 예를 들어 위관영양에 따라서 및 먹이를 사용하여 먹일 수 있다. 위관영양을 사용하는 경우, (b)(예를 들어, VCD)의 농도는 전형적으로 약 50 내지 약 200 ㎎/㎏/공급일의 상기 사료의 범위이고 (a)(예를 들어, 트립톨리드)의 양은 약 25 ㎍/㎏ 체중 내지 약 100 ㎍/㎏ 체중의 상기 조성물의 범위이다. 이러한 범위는 상기 범위 사이의 모든 특정한 값들 및 하위범위들을 포함하며, 35, 60, 75, 90, 125, 150 및 175 ㎍/㎏ 체중을 포함한다.
먹이가 사용되는 경우, 예시적인 실시태양에 따라, 상기 먹이를, 소비되는 활성 성분이 불리한 부작용을 일으키지 않고, 먹이가 다른 음식물 공급원의 존재하에서 섭취되며, 상기 먹이가 환경적으로 중성인, 즉 상기 활성 성분이 상기 환경 중에서 지속되지 않고 잔류 조직 축적(이는 비-표적 동물의 2차적인 노출의 원인이 될 수 있다)이 발생하지 않으며, 상기 활성 성분이 인간을 위험에 놓이게 하지 않고, 상기 먹이 생산을 생산용으로 비율에 따라 증감할 수 있도록 제형화한다. 상기 먹이는 고체, 반고체 또는 액체일 수 있다.
본 발명에 따른 조성물은 본 발명에 개시된 성분들뿐만 아니라 추가적인 및/또는 또 다른 불활성 물질, 보존제, 및 유사한 조성물 중에서 전형적으로 발견되는 다른 구성성분들을 포함할 수 있다. 예시적인 불활성 물질 및/또는 보존제들을 나열하는 경우에, 이들 성분은 단지 예시적이며, 다른 유사한 성분들을 하기 실시예들에 나열된 물질들 대신 사용할 수 있을 것으로 생각된다.
실시예
본 발명을 일반적으로 개시하였지만, 몇몇 특정한 실시예들을 참조하여 추가의 이해를 얻을 수 있으며, 이들 실시예는 단지 예시를 목적으로 본 발명에 제공되고 달리 명시되지 않는 한 제한으로 의도되지 않는다.
시험관내
실시예 1(비교예)
도 1 및 2는 4일령 래트 새끼 난소의 상을 예시한다. 상기 대조용 난소는 풍부한 원시/1차 및 발생 2차 난포를 예시한다.
실시예 2(비교예)
도 3은 난포-고갈 조성물(패트릭 제이 디바인(Patrick J. Devine)에 의해 개발됨)의 효능을 평가하기 위한 시험관내 배양 시스템을 예시한다. 본 발명의 다양한 실시예들에 설명된 바와 같이, 난소를 무혈청 배지에서 트립톨리드의 존재 또는 부재 하에서, 고나도트로핀 없이, 배지 변화 없이, 및 활성 성분을 배양 출발시 단지 1회만 가하여 8일간 VCD와 함께 배양한다. 난소를 수거하고 조직학을 위해 처리하여 난소 카운팅을 수행한다.
도 4는 30 ㎛ VCD로 처리된 난소를 예시한다. 예시된 바와 같이, 상기 난소는 원시 난포의 38% 감소를 나타내었다. 다른 단계의 난포들은 상기 처리에 현저한 영향을 받지 않았다.
실시예 3
도 5는 실시예 2(비교예)의 시스템 및 방법을 사용하여 30 ㎛ VCD 및 5 ㎚ 트립톨리드로 처리된 배양된 난소를 예시한다. 상기 난소는 겉보기에 건강한 난포를 갖지 않으며 광범위한 폐쇄 및 농축을 나타낸다. 예시된 바와 같이, 상기 조성물의 상기 난소에의 시험관내 적용은 모든 단계의 난포의 100% 고갈을 야기하였다.
실시예 4
도 6은 30 ㎛ VCD 및 10 ㎚ 트립톨리드로 처리된 배양된 난소를 예시한다. 예시된 바와 같이, 상기 조성물의 상기 난소에의 시험관내 적용은 모든 단계의 난포의 100% 고갈을 야기하였다.
생체내
실시예 5
생체내 연구를 어린 암컷 스프래그-다우리 래트의 15-일 먹이주기 시험을 사용하여 수행하였다. 상기 VCD 농도를 75 mM로 일정하게 유지시키고 상기 트립톨리드 농도를 하기에 나타낸 바와 같이 변화시켰다. 실험 설계는 하기와 같았다:
대조용 활성 성분 없음(n=6)
VCD + 트립톨리드 25 ㎍/㎏ 체중(n=7)
VCD + 트립톨리드 50 ㎍/㎏ 체중(n=7)
VCD + 트립톨리드 100 ㎍/㎏ 체중(n=7)
상기 실험을 소비되는 먹이의 기호성 및 양, 래트의 건강(매일 기록되는 체중), 및 난포 분석을 위해 수거된 난소를 평가하기 위해서 설계하였다. 상기 래트는 연속해서 15일 동안 상기 대조용 또는 처리 먹이와 함께 표준 사료에 접근하였다. 도 7은 각 그룹에 대한 평균 1일 소비/체중을 예시하고 도 8은 각 그룹에 대한 체중 경향을 예시한다.
도 9는 상기 그룹들 각각에 대한 원시 난포 수, 2차 난포 수, 동난포 수, 및 황체 수를 예시한다. 상기 대조군에 비해, 트립톨리드 50 ㎍/㎏으로 처리된 그룹은 원시 난포 수의 50% 고갈, 2차 난포 수의 64% 고갈, 동난포 수의 80% 고갈, 및 황체수의 100% 고갈을 나타내었다. 도 10은 각 그룹으로부터의 난소의 상을 예시하고 도 11은 각 그룹에 대한 난소 중량을 예시한다.
생체내 효능
2개의 활성 성분, 4-비닐사이클로헥센 다이에폭사이드 0.099 중량% 및 트립톨리드 0.0012%를 함유하는 먹이 조성물을 미성숙한 스프래그 다우리 암컷 래트에 연속해서 15일의 밤 동안 무제한적인 물 및 실험용 래트 사료의 존재 하에서 제공하였으며 이들 래트는 하룻밤에 체중의 >10%를 소비하였다. 투여가 끝난 후 다음날에 상기 암컷 래트를 21일 동안, 처리되지 않은, 입증된 다자란 수컷 번식동물과 번식시켰다. 활성 성분이 없는 유화액을 소비한 대조용 래트는 상기 투여 출발일로부터 평균 39.7일 후에 평균 12.2 마리 래트 새끼의 한배 새끼를 낳았다. 본 발명의 먹이 조성물을 소비한 래트는 상기 투여 출발일로부터 평균 55.9일 후에 평균 4.3 마리 새끼의 한배 새끼 크기를 가졌다. 그러나, 본 발명의 조성물을 마신 8 마리의 래트 중 2 마리는 결코 한배 새끼를 분만하지 않았으며 또 다른 2 마리의 래트는 한 마리의 한배 새끼를 분만하였다.
추가로 본 발명의 먹이를 먹인 그룹에서, 총 8 마리의 래트 중 최소량, 8 ㎎/체중 ㎏을 소비한 래트 대 16 ㎎/체중 ㎏을 소비한 다른 7 마리의 래트는 15 마리의 한배 새끼를 낳았으며, 이는 소비된 조성물과 새끼/한배의 수 사이에 반대의 용량 반응 관계를 명백히 가리킨다. 이러한 결과는 본 발명의 먹이의 소비 후 난포 수가 감소된 상기에 제공된 데이터와 일치한다. 상기 데이터 세트에서 성장하는 난포 및 황체에 대해 먹이의 보다 현저한 효과가 존재하였으며 이는 보다 적은 배란을 암시하였다. 따라서, 암컷 래트에 의한 본 발명의 조성물의 소비는 65% 더 적은 새끼를 생산하는 정도로 난소 배란을 감소시켰으며 상기 지연된 배란은 분만까지의 시간을 현저하게 연장시킨다. 야생에서 1년 미만으로 짧게 사는 래트에서 상기 2 가지 효과의 결합은 암컷 래트당 래트 새끼의 총수 및 최종적으로 전체 집단 크기에 대해 현저한 효과를 발휘한다.
실시예 6: 먹이 조성물의 생체내 적용
일정한 농도의 VDC 및 증가하는 트립톨리드 농도를 갖는 먹이 조성물을 제조하였다.
미성숙한 암컷 래트는 15일 동안 증가하는 트립톨리드 농도, 즉 낮은 농도 3.99 ㎍/㎖, 중간 농도 7.96 ㎍/㎖ 및 높은 농도 11.92 ㎍/㎖와 함께 일정한 VCD(0.099% 농도)를 갖는 먹이를 소비하였다. 도 12a는 낮은, 중간, 높은 용량 그룹 평균±SEM의 하루에 소비된 트립톨리드의 양이다. 도 12b는 낮은, 중간, 높은 트립톨리드 용량 그룹 평균±SEM의 하루에 소비된 VCD의 양이다.
미성숙한 암컷 래트는 전체 처리기간 동안 무제한적인 사료 및 물이 주어졌다. 0일은 빛이 차단된 기간 동안 제공된 활성 성분 트립톨리드 및 VCD가 있는 먹이를 먹은 첫날밤을 나타낸다. 다음날 아침 소비된 먹이의 양을 측정하고 상기 래트들을 일반적인 건강에 대해 평가하고 칭량하였다. 결과를 도 13에 나타낸다. 도 13에 제공된 데이터는 상기 래트들이 상기 먹이를 먹고 있는 시간 동안 상기 래트들은 계속해서 유사한 속도로 성장하였음을 보인다. 또한, 상기 래트들의 일반적인 상태는 양호하였으며 이들 래트는 상기 먹이를 전체 15일의 기간 동안 일정한 양, 이들의 체중의 약 8% 내지 10%의 양으로 먹었다.
미성숙한 암컷 래트는 15일 동안 높은 트립톨리드 농도 및 0.099% VCD가 있는 먹이를 먹었다. 최종 먹이를 섭취한 후 당일에 암컷 래트를 처리되지 않은, 입증된 번식하는 수컷 래트와 번식시켰다. 한배당 새끼의 수를 출산 후 4일째에 카운트하였다. 상기 결과를 도 14에 나타낸다. 도 14에 제공된 데이터는 한배당 낳은 새끼에 대한 영향이 트립톨리드에 용량 의존적이었음을 보인다. 트립톨리드 용량의 양과 한배당 낳은 새끼의 수 사이에 강한 역의 상관성이 있다.
미성숙한 암컷 래트는 활성 성분이 없는 대조용 먹이를 먹었으며, 처리된 암컷은 15일 동안 0.099% VCD 및 고 용량의 트립톨리드를 갖는 먹이를 먹었다. 먹이 먹기를 끝낸 후 당일에 상기 처리된 암컷 래트를 입증된 번식용 수컷 래트와 번식시켰다. 분만까지의 일수를 번식 0일째로부터 분만까지 카운트하였다. 상기 데이터를 도 15에 나타내며, 이때 기호는 각 그룹에 대한 평균±SEM이다.
실시예 7: 시험관내 분석
난포 고갈의 시험관내 생물분석에서, 난소를 상이한 화학물질들과 함께 8일 동안 배양하였다.
대조용 - 화학물질 없음, 트립톨리드 - 5 nM(Trip), 다이에폭사이드, RDE, CHDE, Quetol, ERL 4221, BDE, GDE, 각각 30 μM + 트립톨리드 5 nM
난소를 난포 고갈 측정을 위한 조직학적 분석을 위해 제조하였다.
화학 반응성(에폭사이드 분석에서 반응성) 대 생물 활성(난포 고갈)을 비교하였다.
Figure pat00004
순위, 1 - 최소 화학 반응성/생물 활성, 6 - 최대 화학 반응성/생물 활성
결론:
1. 선행 실험에서 30 μM로 시험된 상기 다이에폭사이드들 중 어느 것도 현저한 난포 고갈을 일으키지 않았다.
2. 상기 실험에서, 5 nM의 트립톨리드는 현저한 난포 고갈을 일으키지 않았다.
3. 오직 트립톨리드 및 GDE, BDE, CHDE, Quetol 및 ERL 4221을 병용한 경우에만 현저한 난포 고갈이 존재하였다. 트립톨리드 + RDE 조합은 현저한 난포 고갈을 일으키지 않았다.
4. ERL 4221은 화학 활성과 생물 활성 간에 최상의 관계를 예시한다. ERL 4221은 최소로 화학적으로 반응성인 반면 트립톨리드와 병용시 최대로 생물 활성이었다.
5. 트립톨리드 및 상기 다이에폭사이드 GDE, BDE, CHDE, Quetol, ERL 4221의 병용은 명백히 상승작용적인 상호작용을 통해 현저한 난포 고갈을 일으켰다.
본 발명을 다수의 예시적인 실시태양 및 실시예들을 참조하여 상기에 개시하였다. 본 발명에 도시되고 개시된 특정 실시태양들은 본 발명의 바람직한 실시태양 및 그의 최선의 방식을 예시하며 특허청구범위에 설명된 바와 같은 본 발명의 범위를 제한하고자 하는 것은 아님을 알아야 한다. 변화 및 변형이 본 발명의 범위로부터 이탈됨 없이 본 발명에 개시된 실시태양들에 대해 수행될 수 있음을 인식할 것이다. 상기 및 다른 변화 또는 변형을 하기 특허청구범위 및 그의 정당한 등가물에 나타낸 바와 같이 본 발명의 범위내에 포함시키고자 한다.
명백하게, 본 발명의 다수의 변형 및 변화들은 상기 교시에 비추어 가능하다. 따라서, 첨부된 특허청구범위의 범위내에서 본 발명을 구체적으로 본 발명에 개시된 바와 달리 실시할 수도 있음은 물론이다.

Claims (6)

  1. 트립톨리드 및 4-비닐사이클로헥센 다이에폭사이드를 포함하는, 암컷 래트의 번식 능력을 감소시키기 위한 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서,
    상기 조성물 내에서 트립톨리드의 농도가 1nM 내지 10mM이고, 상기 조성물 내에서 4-비닐사이클로헥센 다이에폭사이드의 농도가 1 mM 내지 750mM인 조성물.
  3. 제 1 항에 있어서,
    트립톨리드 대 4-비닐사이클로헥센 다이에폭사이드의 몰비가 1/5 내지 1/75,000인 조성물.
  4. 제 1 항에 있어서,
    트립톨리드 대 4-비닐사이클로헥센 다이에폭사이드의 몰비가 1/2 내지 1/50,000인 조성물.
  5. 제 1 항에 있어서,
    트립톨리드 대 4-비닐사이클로헥센 다이에폭사이드의 몰비가 1/5 내지 1/500인 조성물.
  6. 제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 따른 조성물의 유효량을 암컷 래트에 투여함을 포함하는, 암컷 래트의 번식 능력을 감소시키는 방법.
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