KR20200144551A - 알츠하이머병을 검출하고 치료하는 항체-기반 방법 - Google Patents

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Abstract

본원에는 인산화된 및 탈인산화된 타우에 결합하는 항체 및 항원 결합 단편, 및 알츠하이머병 및 다른 타우병증을 검출하고 치료하는데 있어서의 사용 방법이 개시된다. 또한, 인간 대상체에서 알츠하이머병의 병기를 결정하는 방법 및 항-타우 요법의 유효성을 모니터링하는 방법이 포함된다.

Description

알츠하이머병을 검출하고 치료하는 항체-기반 방법
본 출원은 2018년 3월 28일에 출원된 미국 출원 번호 62/649,208, 2018년 4월 30일에 출원된 미국 출원 번호 62/664,662, 및 2018년 7월 25일에 출원된 미국 출원 번호 62/703,299를 우선권 주장하며, 이들 출원은 각각 그 전체 내용이 본원에 참조로 포함된다.
본원에는 알츠하이머병 및 다른 타우병증의 검출, 모니터링, 예방 및/또는 치료를 위한 항체, 조성물, 키트 및 방법이 개시된다.
알츠하이머병 (AD)은 기억력 및 인지 능력에 관여하는 것들과 같은 고등 뇌 구조의 파괴와 연관되는 진행성 신경변성 장애이다. 이러한 질환은 인지 기능의 결핍으로 이어지고, 기억력, 학습, 언어 및 의도적이고 목적의식이 있는 움직임을 수행할 수 있는 능력을 저하시킨다. AD는 또한, 수반되는 행동적, 정서적, 대인적 및 사회적 악화를 동반한다. 이러한 인지적 및 행동적 결함은 생활을 어렵게 만든다 (Burns et al., Alzheimer's disease, The Lancet, vol. 360, Jul. 13, 2002). 말기 AD 환자는 종종 말하지 못하고, 언어를 이해하지 못하며, 자신의 기본적인 개인 간호를 처리할 수 없어, 결국 풀 타임 간호와 감독이 필요하며 종종 가족 구성원과 요양원에 의존한다. AD는 노인성 치매의 주요 원인이며 인구 중 노인 비율이 증가함에 따라 유병률이 증가할 것으로 예상된다. AD 환자의 총 수는 2000년 내지 2050년에 적어도 3배 증가할 것으로 예상되므로, AD는 전 세계적인 공중 보건 문제가 될 것이다 (Sloane et al., The Public Health Impact of Alzheimer's Disease, 2000-2050: Potential Implication of Treatment Advances, Annu. Rev. Public Health, 23:213-31, 2002). AD의 임상적 검출, 관리 및 치료는 여전히 상당히 부적절하다. AD를 검출하고 치료하는 유효한 방법에 대한 충족되지 않은 요구가 여전히 존재한다.
AD는 조직학적으로, 뇌 절편을 분석하여 뇌에서 뉴런외 플라크와 세포내 및 세포외 신경원섬유 엉킴의 존재를 확인함으로써 병리학적으로 특징규명되어 왔다. 플라크는 주로 β 아밀로이드 (Aβ)로 구성되는 반면, 엉킴은 타우의 병리학적 형태, 예컨대 타우 이형태체 및 그의 응집체를 포함한다. 연구는 아밀로이드와 타우 발병기전 사이의 연관성을 시사하지만, 플라크 및 엉킴과 질환 과정 사이의 관계는 여전히 불명확하다 (Hardy et al., Genetic dissection of Alzheimer's disease and related dementias: amyloid and its relationship to tau, Nature Neuroscience, vol 1, No. 5, 1998; Oddo et al., Aβ Immunotherapy Leads to Clearance of Early, but Not Late, Hyperphosphorylated Tau Aggregates via the Proteasome, Neuron, 43: 321-332, 2004; Rapoport et al., 2002; Roberson, et al., Reducing Endogenous Tau Ameliorates Amyloid β-Induced Deficits in an Alzheimer's Disease Mouse Model, Science, 316:750, 2007; Shipton et al., Tau Protein Is Required for Amyloid β-Induced Impairment of Hippocampal Long-Term Potentiation, J. Neuroscience, 31(5):1688-1692, 2011). AD 병리에 있어서 Aβ의 중심 역할은 초기에 "Aβ 캐스케이드"라는 가설에서 제안되었으며, 여기서는 Aβ 침착에 이어 타우 인산화와 엉킴 형성이 뒤따르고, 이어서 뉴런 사멸이 초래된다 (Hardy and Allsop, Amyloid deposition as the central event in the aetiology of Alzheimer's disease, TiPS, vol 12, 1991; Hardy and Selkoe, The Amyloid Hypothesis of Alzheimer's Disease: Progress and Problems on the Road to Therapeutics, Science, vol 297, 2002) (고찰을 위해, 문헌 [Walsh and Selkoe, Deciphering the Molecular Basis of Memory Failure in Alzheimer's Disease, Neuron, 44:181-193, 2004; Seabrook et al., Beyond Amyloid the Next Generation of Alzheimer's Disease Therapeutics, Molecular Intervention, 7(5), 2007] 참조).
따라서, AD에 대한 치료적 접근법은 종종, Aβ 및 타우를 표적화하는데 초점을 맞추고 있으며 이러한 표적에 대한 많은 연구가 오늘날에도 계속되고 있다. AD 환자를 대상으로 임상 시험이 진행중인 가장 진행된 질환-표적화 요법은 수동 면역요법, 예컨대 Aβ 제거를 위한 BAN2401, 아두카누맙(ADUCANUMAB), 간테네루맙(GANTENERUMAB) 및 크레네주맙(CRENEZUMAB); 타우 단백질을 표적화하는 C2N 8E12, RO 7105705 및 BIIB092; 및 활성 백신, 예컨대 Aβ 요법의 경우, CAD106, Lu AF20513, ABvac 40, 또는 질환 변형된 타우를 표적화하는 ACI-35 및 AADvac1을 포함한다.
최근 연구는 타우 응집을 방지하거나 또는 역전시키는 화합물 (Wischik et al., Selective inhibition of Alzheimer's disease-like tau aggregation by phenothiazines, Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 93:11213-11218, 1996; Necula et al., Cyanine Dye N744 Inhibits Tau Fibrillization by Blocking Filament Extension: Implications for the Treatment of Tauopathic Neurodegenerative Diseases, Biochemistry, 44:10227-10237, 2005; Pickhardt et al., Screening for Inhibitors of Tau Polymerization, Current Alzheimer Research, 2:219-226, 2005; Taniguchi et al., Inhibition of Heparin-induced Tau Filament Formation by Phenothiazines, Polyphenols, and Porphyrins, The Journal of Biological Chemistry, 280:9, 7614-7623, 2005; Larbig et al., Screening for Inhibitors of Tau Protein Aggregation into Alzheimer Paired Helical Filaments: A Ligand Based Approach Results in Successful Scaffold Hopping, Current Alzheimer Research, 4:315-323, 2007), 타우 키나제를 억제하거나 또는 타우 포스파타제를 활성화하는 소분자 유형 약물 (Iqbal and Grundke-Iqbal, Inhibition of Neurofibrillary Degeneration: A Promising Approach to Alzheimer's Disease and Other Tauopathies, Current Drug Targets, 5:495-502, 2004; Noble et al., Inhibition of glycogen synthase kinase-3 by lithium correlates with reduced tauopathy and degeneration in vivo, PNAS, 102:19, 6990-6995, 2005; Iqbal and Grundke-Iqbal, Developing pharmacological therapies for Alzheimer disease, Cell. Mol. Life Sci., 64:2234-2244, 2007), 미세소관 안정화 약물 (Zhang et al., Microtubule-binding drugs offset tau sequestration by stabilizing microtubules and reversing fast axonal transport deficits in a tauopathy model, PNAS, 102(1): 227-231, 2005), 미스폴딩된 타우 단백질의 단백질분해적 분해를 용이하게 하는 약물 (Dickey et al., Development of a High Throughput Drug Screening Assay for the Detection of Changes in Tau Levels-Proof of Concept with HSP90 inhibitors, Current Alzheimer Research, 2:231-238, 2005, Dickey et al., Pharmacologic reductions of total tau levels; implications for the role of microtubule dynamics in regulating tau expression, Molecular Neurodegeneration, 1:6, 2006), 및 면역억제 약물 (Zilka et al., Chaperon-like Antibodies Targeting Misfolded Tau Protein: New Vistas in the Immunotherapy of Neurodegenerative Foldopathies, Journal of Alzheimer's Disease, 15:169-177, 2008)을 포함한, 특히 타우 캐스케이드를 직접적으로 또는 간접적으로 표적화하는 수많은 치료적 접근법 (고찰을 위해, 예를 들어, 문헌 [Dickey and Petrucelli, Pharmacologic reductions of total tau levels; implications for the role of microtubule dynamics in regulating tau expression, Molecular Neurodegeneration, 1:6, 2006; Schneider and Mandelkow, Tau-Based Treatment Strategies in Neurodegenerative Disease, Neurotherapeutics, 5:443-457, 2008; Zilka et al., Chaperone-like Antibodies Targeting Misfolded Tau Protein: New Vistas in the Immunotherapy of Neurodegenerative Foldopathies, Journal of Alzheimer's Disease, 15:169-177, 2008] 참조) 뿐만 아니라 능동 및 수동 면역화를 포함한 면역요법 전략으로 이어졌다 (Schneider and Mandelkow et al., Tau-Based Treatment Strategies in Neurodegenerative Diseases, Neurotherapeutics, 5:443-457, 2008; Zilka et al., Chaperon-like Antibodies Targeting Misfolded Tau Protein: New Vistas in the Immunotherapy of Neurodegenerative Foldopathies, Journal of Alzheimer's Disease, 15:169-177, 2008, Tabira, T. Immunization Therapy for Alzheimer disease: A Comprehensive Review of Active Immunization Strategies. Tohoku J. Exp. Med., 220: 95-106 (2010)). 또한, 연구자들은 AD를 치료하기 위한 새로운 모노클로날 항체 (mAb) 요법에 초점을 맞추었다. 고찰을 위해, 예를 들어, 문헌 [Citron et al., Alzheimer's disease: strategies for disease modification, Nature Reviews, 9:397, 2010, and Asuni et al., Immunotherapy Targeting Pathological Tau Conformers In a Tangle Mouse Model Reduces Brain Pathology with Associated Functional Improvements, The Journal of Neuroscience, 27(34):9115-9129, 2007]을 참조할 수 있다. 질환 형태의 타우를 표적화하는 치료용 항체는 AD 및 다른 타우병증의 치료 및/또는 진단을 위한 유망한 접근법을 나타낸다 (WO 2004/007547, US2008/0050383).
이와 같이 AD 및 다른 타우병증을 치료하기 위한 치료 전략에 대한 연구가 늘어나고 있음에도 불구하고, 특히 질환 과정의 초기 단계에서, 적절하게 표적화된 치료 결정이 이루졌다는 것을 보장하기 위해 치매를 나타내는 환자에서 AD 및 다른 타우병증을 정확하게 검출할 수 있고 이를 다른 뇌 병리와 정확하게 구별할 수 있는 진단 도구에 대한 충족되지 않은 요구가 남아 있다 (Blennow and Hampel, CSF markers for incipient Alzheimer's disease, Lancet Neurol., 2:605-613, 2003; Blennow, CSF markers for incipient Alzheimer's disease, Lancet Neurol., 2:605-613, 2005). 지난 20년 동안 전임상 AD에 대한 생체내 뇌 지표와 샘플-기반 바이오마커를 확인하기 위해 상당한 노력을 기울였지만, 모두 성공하지 못하였다. 연구는 주로 뇌척수액 (CSF)과 혈액에 초점을 맞추고 있지만, 상이한 유형의 치매를 정확하게 검출하고 구별하는 확실한 마커는 밝혀내지 못하였다. 예를 들어, 몇 가지 CSF 및 혈액 바이오마커가 검출 정확도에 있어서의 적절한 개선없이 광범위하게 연구되어 왔다. 이들은 신경변성 (t-타우, NFL, NSE, VLP-1), APP 대사 (Aβ42, Aβ40, Aβ38, sAPPα 및 sAPPβ), 엉킴 병리 (p-타우) 및 신경교 활성화 (YKL-40, MCP-1 및 GFAP)의 바이오마커를 포함한다 (Olsson et al., CSF and blood biomarkers for the diagnosis of Alzheimer's disease: a systematic review and meta-analysis, Lancet Neurol., 7:673-84, 2016). 3종의 CSF 바이오마커가 전구 경도 인지 장애에 사용되는 것으로 보고되었다 (MCI 및 AD 치매: CSF Aβ1-42 (Aβ1-42), Aβ1-42 : Aβ1-40 비로서 표현되기도 함, t-타우, 및 p-타우 Thr181 & Thr231 단백질) (Cavedo et al., The Road Ahead to Cure Alzheimer's Disease: Development of Biological Markers and Neuroimaging Methods for Prevention Trials Across all Stages and Target Populations, J. Prev. Alzheimer's Dis., 3:181-202, 2014). 그럼에도 불구하고, 초기 단계 AD의 정확한 검출 및 환자에서 AD를 다른 타우병증 또는 다른 원인의 치매와 구별하는 방법은, 특히 CSF 기반 검정의 경우에 여전히 도전과제이다.
연구에 따르면, 트레오닌 181, 트레오닌 181 및 231, 트레오닌 231, 트레오닌 231 및 235, 세린 199, 세린 396 및 404를 포함한, 타우의 상이한 인산화된 에피토프가, 일부 모순적인 보고가 있긴 하지만 AD와 상관관계가 있을 수 있다고 시사된 바 있다 (Andreasen et al., Cerebrospinal fluid levels of total-tau, phospho-tau and A beta 42 predicts development of Alzheimer's disease in patients with mild cognitive impairment, Acta Neurol. Scand. Suppl., 179:47-51, 2003; Formichi et al., Cerebrospinal fluid tau, A beta, and phosphorylated tau protein for the diagnosis of Alzheimer's disease, J. Cell Physiol., 208:39-46, 2006; Blennow and Hampel, CSF markers for incipient Alzheimer's disease, Lancet Neurol., 2:605-613, 2003). 예를 들어, CSF p-타우181의 반복적인 평가는 2년 기간에 걸쳐 질환 진행에 대해 비감수성이었기 때문에 유용한 임상 바이오마커를 제공하지 못했다고 시사된 바 있다 (Bouwman et al., Longtitudinal changes of CSF biomarkers in memory clinic patients, Neurology, 69:1006-1011, 2007). 따라서 CSF 타우 및 Aβ 바이오마커의 예측력과 시간 경과에 따른 그들의 역학은 여전히 논란의 여지가 있다. CSF 중의 이러한 바이오마커를 검출할 수 있는 능력조차도 제한된다는 것이 AD 진단의 어려움을 더욱 악화시킨다. 예를 들어, 여러 연구에 따르면 AD 환자의 CSF 중의 Aβ42, t-타우 및 p-타우 수준의 종방향 변화가 보고된 반면 (Andersson et al., Neurobiol Aging, 29:1466-1473, 2008; Blomberg et al., Neurosci. Lett., 214:163-166, 1996; Arai et al., JAGS, 45:1228-31, 1997; Kanai et al., Ann. Neurol., 44:17-26; Kanai et al., Neurosci. Lett., 267: 65-68, 1999; Hampel et al., Ann Neurol., 49:545-546, 2001; Hoglund et al., Dement. Geriatr. Cogn. Disord., 19:256-265, 2005), 다른 연구들은 시간이 지남에 따라 이러한 CSF 바이오마커에 있어서의 유의미한 변화가 없다고 보고하였다 (Nishimura et al., Methods Find. Exp. Clin. Pharmacol., 20:227-235, 1998; Andreasen et al., Arch. Neurol., 56:673-680, 1999; Sunderland et al., Biol. Psychiatry, 46:750-755, 1999; Tapiola et al., Neurosci. Lett., 280:119-122, 2000; deLeon et al., Neurobiol. Aging, 27:394-401, 2006; Mollenhauer et al., J. Neural. Transm., 112:933-948, 2005; Zetterberg et al., Alzheimers Res. Ther., 5(2):9, 2007; Mattsson et al., J. Alzheimers Dis., 30(4):767-778, 2012; Toledo et al., Acta Neuropathol. 125(5):659-70, 2013). CSF 바이오마커가 시간이 지남에 따라 일부 환자에서의 질환 진행을 반영하지 않는 것으로 보이는 이유는 알려져 있지 않다. 한 가지 가능성은 뇌 유래 단백질이 CSF 구획에서 희석된다는 것이다 (deLeon et al., Longitudinal cerebrospinal fluid tau load increases in mild cognitive impairment, Neurosci Lett., 333:183-186, 2004). 또 다른 잠재적인 설명은 치매를 갖지 않은 노인 (65세 이상)이 젊은 사람보다 더 높은 p-타우 수준을 갖는 경향이 있으므로, 치매를 갖지 않은 노인에서 질환 진행에 따른 바이오마커의 상승이 은폐된다는 것이다 (Bouwman et al., CSF biomarker levels in early and late onset Alzheimer's disease, Neurobiol Aging, 30:1895-1901, 2008). 이러한 요인과 다른 요인은 효과적인 CSF-기반 검정의 결여에 기여한다.
CSF 바이오마커를 검출하는데 사용되는 이용가능한 검정은 거의 전적으로 고전적인 ELISA 포맷을 수반하는 면역검정에 초점을 맞추고 있으며, 그 중에는 이노테스트(INNOTEST) hTAU, 이노테스트 포스포-타우 (포스포-트레오닌 181을 인식함) 및 이노테스트 Aβ42가 있다. 그러나, 이러한 검정의 특이도 및 감도는 일반적으로, 특히 전임상 단계에 있는 알츠하이머병을 예측하기에 충분하지 않다 (Wennstroem et al., The Inflammatory Marker YKL-40 Is Elevated in Cerebrospinal Fluid from Patients with Alzheimer's but Not Parkinson's Disease or Dementia with Lewy Bodies, 10(8): e0135458, PlosOne, 2015; Wang et al., Analysis of Cerebrospinal Fluid and [11C]PIB PET Biomarkers for Alzheimer's Disease with Updated Protocols, 52(4):1403-13, JAD 2016).
샘플-기반 진단 검정 외에도, 최근 몇 년 동안 분자 영상화에 있어서의 발전으로 인해, 양전자 방출 단층촬영 (PET)을 위한 잠재적인 타우-특이적 트레이서 작업이 이루어졌다. 타우 PET 트레이서로서 3가지 계열의 방사성트레이서가 개발되었다: 아리퀴놀린 유도체 THK5117 및 THK5351, 피리도-인돌 유도체 AV-1451 (T807 및 플로르타우시피르(Flortaucipir)로서 알려지기도 함), 및 페닐/피리디닐-부타디에닐 벤조티아졸/벤조티아졸륨 유도체 PBB3 (Saint-Aubert et al., Tau PET imaging: present and future directions, Mol. Neurodegener., 12:19, 2017). 타우 PET 트레이서는 표적을 벗어난 결합을 표시하여, 대부분 효소 MAO B 또는 뉴로멜라닌을 인식하기 때문에 (Barrio et al., The Irony of PET Tau Probe Specificity, J. Nucl. Med., 59(1):115-116, 2018; Lemoine et al., Comparative binding properties of the tau PET tracers THK5117, THK5351, PBB3, and T807 in postmortem Alzheimer brains, Alzheimers Res. Ther., 9(1):96, 2017; Ng et al., Monoamine oxidase B inhibitor, selegiline, reduces 18F-THK5351 uptake in the human brain, Alzheimers Res. Ther., 9(1):25, 2017), 차세대 타우 PET 트레이서가 개발되었다: PI-2620, MK-6240, GTP1 및 RO6958948 (www.alzforum.org). 그러나, 다수의 조직 표적에 대한 비-특이적 결합은 일부 새로 개발된 트레이서에 여전히 존재하므로, 개선된 기술의 여지가 있음을 시사한다 (The 12th Human Amyloid Imaging, Miami, Florida, USA 2018).
여러 신경병리학적 연구로부터의 결과는 환자의 뇌에서의 타우 병리의 양이 AD의 진행과 밀접한 상관관계가 있음을 보여주었다. 타우 병변의 해부학적 국소화 패턴은 알츠하이머병 과정 전반에 걸쳐 병에 걸린 인지 도메인과 뇌 위축의 패턴 및 정도에 상응할 수 있다 (Braak and Braak, Neuropathological stageing of Alzheimer-related changes, Acta Neuropathol, 82:239-59, 1991; Murray et al., Neuropathologically defined subtypes of Alzheimer's disease with distinct clinical characteristics: a retrospective study, Lancet Neurol., (9):785-96, 2011; Nelson et al., Correlation of Alzheimer disease neuropathologic changes with cognitive status: a review of the literature, J. Neuropathol. Exp. Neurol., 71:362-81, 2012). 유사하게, 여러 독립적인 영상화 연구 결과, 타우 PET 시그널의 분포가 인지 저하와 상관관계가 있을 수 있는 것으로 밝혀졌다 (Ossenkoppele et al., Tau PET patterns mirror clinical and neuroanatomical variability in Alzheimer's disease, Brain, 139:1551-67, 2016; Bejanin et al., Tau pathology and neurodegeneration contribute to cognitive impairment in Alzheimer's disease, Brain, 140(12):3286-3300, 2017; Mattsson et al., AV-1451 and CSF T-tau and P-tau as biomarkers in Alzheimer's disease, EMBO Mol. Med., 9:1212-1223, 2017; Mattsson et al., Comparing 18F-AV-1451 with CSF t-tau and p-tau for diagnosis of Alzheimer disease, Neurology, 5:e388-e395, 2018). 따라서, 뇌에서 타우의 PET 영상화를 위한 개선된 시약 및 방법의 개발은 시간이 지남에 따라 AD 환자의 진단 정확도와 모니터링을 증강시키는데 도움이 될 수 있다. CSF 타우 바이오마커는 주로 질환 상태 바이오마커로서 유용하지만, 타우 PET 영상화는 AD 진행, 예컨대 전구 단계에서 치매로의 과도기를 모니터링하는데에도 유용할 수 있다 (Mattsson et al., Comparing 18F-AV-1451 with CSF t-tau and p-tau for diagnosis of Alzheimer disease, Neurology, 5:e388-e395, 2018). 그러나 뇌 조영제의 침습성 및 방사성 성질을 고려할 때, AD에 대한 정확도 및 특이도가 개선된 비-침습성 CSF-기반 검정이 유익할 것이다.
그러나 현재 이용가능한 바이오마커는 임상 사용에 있어 몇 가지 제한 사항을 나타낸다. 총 타우, p-타우 및 Aβ42의 CSF 수준은 질환이 있는 사례와 대조군 사례 사이에 상당히 중복되는 것으로 나타났다 (Hulstaert et al., Improved discrimination of AD patients using beta-amyloid(1-42) and tau levels in CSF, Neurology, 52:1555-1562, 1999; Hu et al., Levels of nonphosphorylated and phosphorylated tau in cerebrospinal fluid Alzheimer's disease patients: an ultrasensitive bienzyme-substrate-recycle enzyme-linked immunosorbent assay, Am. J. Pathol., 160:1269-1278, 2002). 질환 이질성은 CSF 바이오마커에 있어서의 중복의 주요 원인인 것으로 간주된다 (Iqbal et al., Subgroups of Alzheimer's disease based on cerebrospinal fluid molecular markers, 58:748-757, 2005). 타우 PET 영상화에서, 새로운 타우-지향 방사성트레이서의 개발에 대한 중대한 도전과제는 비-특이적 결합을 극복하는 것이다 (Barrio et al., The Irony of PET Tau Probe Specificity, J. Nucl. Med., 59:115-116, 2018; Lemoine et al. Comparative binding properties of the tau PET tracers THK5117, THK5351, PBB3, and T807 in postmortem Alzheimer brains, Alzheimers Res. Ther., 9(1):96, 2017; Ng et al., Monoamine oxidase B inhibitor, selegiline, reduces 18F-THK5351 uptake in the human brain, Alzheimers Res. Ther., 9(1):25. 2017). 추가로, 최근 보고서에 따르면 병리학적 타우 입체형태는 다양한 인간 타우병증에 따라 다양하며 타우 리간드는 다양한 타우 병리학적 실체에 대해 차별적인 결합 친화도를 갖고 있다 (Choi et al., Development of tau PET Imaging Ligands and their Utility in Preclinical and Clinical Studies, 52(1):24-30, 2018). 따라서, 또 다른 도전과제는 다수의 인간 타우병증의 진단에 활용하기 위해 다양한 타우 병리학적 병변에 대한 결합 효력을 개선하는 것이다.
최근 AD를 표적화하는 보다 강력한 치료법의 개발은 AD를 조기에 정확하게 검출하고 환자에서의 다른 형태의 치매와 구별할 필요성을 강조한다. 유효한 바이오마커는, 이용가능한 경우, 환자 계층화 및 질환 진행의 종방향 모니터링에도 유용할 것인데, 이는 플라크와 엉킴의 상대적인 양이 질환의 상이한 병기에 있는 AD 환자 사이에 현저한 차이를 나타낼 수 있기 때문이다. 바이오마커 데이터를 기반으로 하는 환자의 계층화는 치료에 더 반응하기 쉬운 환자의 하위군을 확인하는 방법일 수도 있다 (Hampel et al., Perspective on future role of biological markers in clinical therapy trials of Alzheimer's disease: a long-range point of view beyond 2020, Biochem. Pharmacol., 88(4):426-46, 2014).
따라서, 본원에는 알츠하이머병 및 다른 타우병증의 개선된 검출, 모니터링, 예방 및/또는 치료를 제공하는 항체, 조성물, 키트 및 방법이 개시된다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용은 타우에 결합할 수 있는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 제공한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 타우 내의 인산화된 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 그러한 인산화된 에피토프를 갖는 타우 종은 또 다른 타우병증을 가진 환자 또는 건강한 대상체에서보다 더 큰 농도로 AD 환자로부터의 샘플 (예를 들어, 혈액 또는 CSF)에 존재한다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호(SEQ ID NO): 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 타우 단백질 2N4R (서열식별번호: 9) 상의 에피토프에 결합할 수 있으며, 여기서 에피토프는 인산화된다. 에피토프는 타우 단백질 2N4R의 잔기 188-227 (서열식별번호: 10) 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 타우 단백질 2N4R의 잔기 210-221 (서열식별번호: 11) 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 에피토프는 적어도 하나의 인산화된 잔기를 포함한다. 특정 실시양태에서, 에피토프는 하나 초과의 인산화된 잔기를 포함한다. 이러한 인산화된 잔기(들)는 타우 단백질 2N4R (서열식별번호: 9)의 위치 217에서의 포스포-트레오닌을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 또한 타우 단백질 2N4R의 위치 210에서의 인산화된 세린, 위치 212에서의 트레오닌, 위치 214에서의 세린, 또는 위치 220에서의 트레오닌, 또는 그의 임의의 조합을 포함한다. 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 SRTPSLPpTPPTR (서열식별번호: 12)을 포함하거나 또는 그로 이루어지는 에피토프에 결합할 수 있다.
다양한 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 타우 단백질 2N4R의 잔기 188-227 (서열식별번호: 10) 중 하나 이상을 포함하는 타우 상의 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 타우 단백질 2N4R의 잔기 210-221 (서열식별번호: 11) 중 하나 이상을 포함한다. 특정 실시양태에서, 에피토프는 적어도 하나의 인산화된 잔기를 포함하며, 여기서 적어도 하나의 인산화된 잔기는 타우 단백질 2N4R (서열식별번호: 9)의 위치 217에서의 포스포-트레오닌일 수 있다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 또한 타우 단백질 2N4R의 위치 210에서의 인산화된 세린, 위치 212에서의 트레오닌, 위치 214에서의 세린, 또는 위치 220에서의 트레오닌, 또는 그의 임의의 조합을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 SRTPSLPpTPPTR (서열식별번호: 12)을 포함하거나 또는 그로 이루어지는 에피토프에 결합할 수 있다.
다양한 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 타우 단백질 2N4R의 잔기 151-188 (서열식별번호: 13) 중 하나 이상을 포함하는 타우 상의 에피토프에 결합할 수 있다. 특정 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 타우 단백질 2N4R의 잔기 163-172 (서열식별번호: 14) 중 하나 이상을 포함하는 에피토프에 결합할 수 있다. 에피토프는 KGQANATRIP (서열식별번호: 14의 서열)를 포함할 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 항체는 DC2E7 또는 그의 항원 결합 단편이며, 여기서 DC2E7은 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션(American Type Culture Collection) 특허 기탁 번호 PTA-124992 하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생산된 항체이다.
또 다른 실시양태에서, 본원에는 항체 DC2E2 또는 그의 항원 결합 단편이 개시되며, 여기서 DC2E2는 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 특허 기탁 번호 PTA-124991 하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생산된 항체이다.
다양한 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편은 제2 작용제에 접합된다. 일부 실시양태에서, 이러한 작용제는 적어도 하나의 검출가능한 표지, 또는 AD 또는 또 다른 타우병증에 대한 적어도 하나의 치료제이다. 특정 실시양태에서, 작용제는 방사성표지이다.
또한 본원에는 대상체에서 AD 또는 또 다른 타우병증을 치료하거나, 그의 진행을 지연시키거나, 또는 그의 진행을 예방하는 방법이 개시된다. 일부 실시양태에서, 방법은 앞서 개시된 실시양태 중 어느 하나에 따른 적어도 하나의 항체의 유효량을 대상체에게 투여하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 적합한 AD 치료를 투여하기 전에 또는 그의 투여를 권장하기 전에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편 중 하나 이상을 사용하여 AD를 검출하는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 방법은 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편을 사용하여 AD를 갖는 것으로 진단된 환자에게 AD 치료를 투여하는 단계를 포함한다.
다양한 실시양태에서, 대상체에서 타우병증을 검출하는 방법은 대상체로부터 생물학적 샘플을 수득하는 단계; 대상체로부터의 샘플을 타우와 복합체를 형성할 수 있는 분자 (예를 들어, 타우에 결합하여 타우-항체 복합체를 형성할 수 있는 본원에 개시된 적어도 하나의 항체 또는 항원 결합 단편을 사용함)의 유효량과 접촉시키는 단계; 본원에 기재된 항체 또는 항원 결합 단편을 사용하여 타우-분자 복합체의 존재 및/또는 양을 검출하며, 여기서 타우-분자 복합체의 존재 및/또는 양은 대상체에서의 타우병증을 나타내는 것인 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 타우-분자 복합체를 형성하는 분자는 타우에 결합하여 타우-항체 복합체를 형성할 수 있는 제1 항체이며, 여기서 타우-항체 복합체의 존재는 제1 항체와 상이한 타우 상의 에피토프에 결합할 수 있는 제2 항-타우 항체 또는 항원 결합 단편을 사용하여 검출된다. 특정 실시양태에서, 제1 또는 제2 항체 또는 항원 결합 단편은 고체 표면 또는 입자에 연결된다 (예를 들어, 그 위에 공유적으로 또는 비-공유적으로 코팅된다). 일부 실시양태에서, 제1 또는 제2 항체는 검출가능한 표지에 접합된다. 개시된 방법은, 예를 들어, 인산화된 타우에 결합하고 샘플 중의 인산화된 타우의 존재 및/또는 양을 검출할 수 있는 (여기서 샘플 중의 인산화된 타우의 증가된 수준은 대상체가 또 다른 타우병증보다는 알츠하이머병을 갖는다는 것을 나타냄) 본원에 개시된 항체 또는 단편 중 어느 하나 이상을 사용하는 고전적 ELISA, 디지털 ELISA 검정, 또는 다른 ELISA 검정 포맷을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 생물학적 샘플은 뇌척수액이다. 특정 실시양태에서, 생물학적 샘플은 혈청 및/또는 혈장이다.
다양한 실시양태에서, 대상체에서 알츠하이머병을 또 다른 타우병증 또는 또 다른 원인의 치매와 구별하는 방법은 대상체로부터 뇌척수액 또는 혈액 샘플을 수득하는 단계, 샘플을 본원에 개시된 항-타우 항체 또는 그의 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계, 및 동일한 샘플 중의 항체 또는 항원 결합 단편과 복합체를 형성한 인산화된 타우의 존재 및/또는 양을 검출하며, 여기서 건강한 대조군 대상체로부터의 샘플 중의 수준과 비교하여 샘플 중의 인산화된 타우의 존재 및/또는 상승된 수준, 또는 역치를 초과하는 인산화된 타우의 상승된 수준은 대상체가 또 다른 타우병증 또는 대안적 원인 (즉, 또 다른 형태)의 치매 또는 또 다른 신경변성 장애보다는 알츠하이머병을 갖는다는 것을 나타내는 것인 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 인산화된 타우에 결합하여 인산화된 타우-항체 복합체를 형성할 수 있는 항-타우 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 대상체에서 알츠하이머병 (AD) 또는 경도 인지 장애 (MCI)를 검출하는 방법은 대상체로부터의 생물학적 샘플을 타우와 복합체를 형성할 수 있는 분자 (예를 들어, 타우에 결합하여 타우-항체 복합체를 형성할 수 있는 본원에 개시된 적어도 하나의 항체 또는 항원 결합 단편을 사용함)의 유효량과 접촉시키는 단계; 타우-항체 복합체의 존재 및/또는 양을 검출하는 단계; 및 샘플 중의 항체에 결합된 타우의 존재/양을 대조군 샘플 중의 양 또는 역치와 비교하며, 여기서 대조군 샘플 또는 역치와 비교하여 항체와 복합체를 형성한 타우의 존재 및/또는 증가된 양은 대상체에서의 AD 또는 MCI를 나타내는 것인 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, MCI는 환자에서의 AD의 전구증상이다. 일부 실시양태에서, 방법은 MCI 및/또는 AD를 다른 신경계 질환과 구별한다. 일부 실시양태에서 다른 신경계 질환은 파킨슨병, 다발성 경화증, 근위축성 측삭 경화증, 및/또는 전두측두엽 치매로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 뇌척수액 (CSF)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 혈액을 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 혈장 및/또는 혈청 분획을 포함한다. 일부 실시양태에서, 역치는 약 9.3 pg/ml의 타우 또는 약 5.3 pg/ml의 타우이다. 일부 실시양태에서, 역치는 약 100-600 pg/ml이다. 일부 실시양태에서, 역치는 약 300 pg/ml이다.
다양한 실시양태에서, 대상체에서 알츠하이머병 (AD) 또는 경도 인지 장애 (MCI)를 검출하는 방법은 생물학적 샘플을 수득하는 단계; 생물학적 샘플 중에서 적어도 위치 트레오닌 217에서 인산화된 타우 단백질 2N4R의 존재 및/또는 양을 검출하는 단계; 및 트레오닌 217에서 인산화된 타우 단백질 2N4R의 존재/양을 대조군 샘플 중의 양 또는 역치와 비교하며, 여기서 대조군 샘플 또는 역치와 비교하여 트레오닌 217에서 인산화된 타우 단백질 2N4R의 존재 및/또는 증가된 양은 대상체에서의 AD 또는 MCI를 나타내는 것인 단계를 포함한다. 다양한 실시양태에서, MCI는 환자에서의 AD의 전구증상이다. 일부 실시양태에서, 방법은 MCI 및/또는 AD를 다른 신경계 질환과 구별한다. 일부 실시양태에서 다른 신경계 질환은 파킨슨병, 다발성 경화증, 근위축성 측삭 경화증, 및/또는 전두측두엽 치매로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 뇌척수액 (CSF)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 혈액을 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 혈장 및/또는 혈청 분획을 포함한다. 일부 실시양태에서, 역치는 약 9.3 pg/ml의 타우이다. 일부 실시양태에서, 역치는 약 9.3 pg/ml의 타우 또는 약 5.3 pg/ml의 타우이다. 일부 실시양태에서, 역치는 약 100-600 pg/ml이다. 일부 실시양태에서, 역치는 약 300 pg/ml이다.
다양한 실시양태에서, 대상체에서 알츠하이머병 및/또는 경도 인지 장애를 파킨슨병, 다발성 경화증, 근위축성 측삭 경화증, 및/또는 전두측두엽 치매와 구별하는 방법은 대상체로부터의 생물학적 샘플을 타우와 복합체를 형성할 수 있는 분자 (예를 들어, 타우에 결합하여 타우-항체 복합체를 형성할 수 있는 본원에 개시된 적어도 하나의 항체 또는 항원 결합 단편을 사용함)의 유효량과 접촉시키는 단계; 동일한 샘플 중의 항체 또는 항원 결합 단편과 복합체를 형성한 타우의 존재 및/또는 양을 검출하는 단계; 및 샘플 중의 항체에 결합된 타우의 존재/양을 대조군 샘플 중의 양 또는 역치와 비교하며, 여기서 대조군 샘플 또는 역치와 비교하여 항체와 복합체를 형성한 타우의 존재 및/또는 증가된 양은 대상체에서의 알츠하이머병 및/또는 경도 인지 장애 (MCI)를 나타내는 것인 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 뇌척수액 (CSF)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 혈액을 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 혈장 및/또는 혈청 분획을 포함한다. 일부 실시양태에서, 역치는 약 9.3 pg/ml의 타우이다. 일부 실시양태에서, 역치는 약 100-600 pg/ml이다. 일부 실시양태에서, 역치는 약 300 pg/ml이다.
다양한 실시양태에서, 대상체에서 알츠하이머병 및/또는 경도 인지 장애를 파킨슨병, 다발성 경화증, 근위축성 측삭 경화증, 및/또는 전두측두엽 치매와 구별하는 방법은 대상체로부터 생물학적 샘플을 수득하는 단계; 생물학적 샘플 중의 적어도 위치 트레오닌 217에서 인산화된 타우 단백질 2N4R의 존재 및/또는 양을 검출하는 단계; 및 트레오닌 217에서 인산화된 타우 단백질 2N4R의 존재/양을 대조군 샘플 중의 양 또는 역치와 비교하며, 여기서 대조군 샘플 또는 역치와 비교하여 트레오닌 217에서 인산화된 타우 단백질 2N4R의 존재 및/또는 증가된 양은 대상체에서의 알츠하이머병 또는 경도 인지 장애를 나타내는 것인 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 뇌척수액 (CSF)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 혈액을 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 혈장 및/또는 혈청 분획을 포함한다. 일부 실시양태에서, 역치는 약 9.3 pg/ml의 타우이다. 일부 실시양태에서, 역치는 약 9.3 pg/ml의 타우 또는 약 5.3 pg/ml의 타우이다. 일부 실시양태에서, 역치는 약 100-600 pg/ml이다. 일부 실시양태에서, 역치는 약 300 pg/ml이다.
다양한 실시양태에서, 경도 인지 장애를 가진 환자가 알츠하이머병에 걸릴 가능성을 예측하는 방법은 대상체로부터의 생물학적 샘플을 타우와 복합체를 형성할 수 있는 분자 (예를 들어, 타우에 결합하여 타우-항체 복합체를 형성할 수 있는 본원에 개시된 적어도 하나의 항체 또는 항원 결합 단편을 사용함)의 유효량과 접촉시키는 단계; 동일한 샘플 중의 항체 또는 항원 결합 단편과 복합체를 형성한 타우의 존재 및/또는 양을 검출하는 단계; 및 샘플 중의 항체에 결합된 타우의 존재/양을 대조군 샘플 중의 양 또는 역치와 비교하며, 여기서 대조군 샘플 또는 역치와 비교하여 항체와 복합체를 형성한 타우의 존재 및/또는 증가된 양은 상기 환자가 알츠하이머병에 걸릴 증가된 가능성을 나타내는 것인 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 뇌척수액 (CSF)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 혈액을 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 혈장 및/또는 혈청 분획을 포함한다. 일부 실시양태에서, 역치는 약 9.3 pg/ml의 타우이다. 일부 실시양태에서, 역치는 약 100-600 pg/ml이다. 일부 실시양태에서, 역치는 약 300 pg/ml이다.
다양한 실시양태에서, 경도 인지 장애를 가진 환자가 알츠하이머병에 걸릴 가능성을 예측하는 방법은 대상체로부터 생물학적 샘플을 수득하는 단계; 생물학적 샘플 중의 적어도 위치 트레오닌 217에서 인산화된 타우 단백질 2N4R의 존재 및/또는 양을 검출하는 단계; 및 트레오닌 217에서 인산화된 타우 단백질 2N4R의 존재/양을 대조군 샘플 중의 양 또는 역치와 비교하며, 여기서 대조군 샘플 또는 역치와 비교하여 트레오닌 217에서 인산화된 타우 단백질 2N4R의 존재 및/또는 증가된 양은 상기 환자가 알츠하이머병에 걸릴 증가된 가능성을 나타내는 것인 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 뇌척수액 (CSF)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 혈액을 포함한다. 일부 실시양태에서, 생물학적 샘플은 혈장 및/또는 혈청 분획을 포함한다. 일부 실시양태에서, 역치는 약 9.3 pg/ml의 타우이다. 일부 실시양태에서, 역치는 약 100-600 pg/ml이다. 일부 실시양태에서, 역치는 약 300 pg/ml이다.
본 명세서에 포함되고 그의 일부를 구성하는 첨부 도면은 본 발명의 몇 가지 비-제한적인 실시양태를 예시하고, 본 설명과 함께 본 개시의 원리를 설명하는 역할을 한다.
도 1. ELISA를 사용한 모노클로날 항체 DC2E2에 대한 이소타입 결정.
도 2a-2d. ELISA에서 타우 결실 돌연변이체 및 타우 펩티드를 사용한 항체 DC2E2의 에피토프 맵핑. (도 2a) 타우 단백질 상의 DC2E2 결합 부위를 평가하는데 사용된 타우 결실 돌연변이체 및 펩티드의 개략도. (도 2b) ELISA에 의한 인간 6개 이소형에 대한 DC2E2의 면역반응성. (도 2c) ELISA에 의한 타우 결실 돌연변이체를 사용한 DC2E2 결합 부위의 결정. (도 2d) 경쟁적 ELISA에 의한 타우 유래 펩티드를 사용한 DC2E2 결합 부위의 결정.
도 3. 상이한 타우 단백질에 대한 DC2E2의 면역반응성. 레인 1: 인간 알츠하이머병 뇌 조직으로부터 단리된 사르코실-불용성 타우; 레인 2: 타우151-391; 레인 3: 인산화된 타우151-391; 레인 4: 타우 2N4R; 레인 5: 인산화된 타우 2N4R.
도 4. ELISA를 사용한 모노클로날 항체 DC2E7의 이소타입 결정.
도 5a-d. 항체 DC2E2에서의 가변 영역의 뉴클레오티드 및 아미노산 서열. 도 5a는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 보여준다. 도 5b는 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 보여주며, CDR 서열이 볼드체로 밑줄쳐 있다. 도 5c는 중쇄 가변 영역을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 보여준다. 도 5d는 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 보여주며, CDR 서열이 볼드체로 밑줄쳐 있다. 상보성 결정 영역 (CDR)은 IMGT 넘버링 시스템에 따라 확인되었다.
도 6a-d: 항체 DC2E7에서의 가변 영역의 뉴클레오티드 및 아미노산 서열. 도 6a는 경쇄 가변 영역을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 보여준다. 도 6b는 경쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 보여주며, CDR 서열이 볼드체로 밑줄쳐 있다. 도 6c는 중쇄 가변 영역을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 보여준다. 도 6d는 중쇄 가변 영역의 아미노산 서열을 보여주며, CDR 서열이 볼드체로 밑줄쳐 있다. 상보성 결정 영역 (CDR)은 IMGT 넘버링 시스템에 따라 확인되었다.
도 7. 상이한 타우 단백질에 대한 DC2E7의 면역반응성. 레인 1: 타우 2N4R; 레인 2: 시험관내 인산화된 2N4R; 레인 3: 태아 타우; 레인 4: 인간 알츠하이머병 뇌 조직으로부터 단리된 사르코실-불용성 타우. 모든 형태의 타우 단백질을 인식하는 범 타우 모노클로날 항체인 DC25가 대조군으로서 사용되었다.
도 8. 타우 단백질 상의 DC2E7 결합 부위를 평가하기 위해 사용된 타우 결실 돌연변이체의 개략도.
도 9. 타우 결실 돌연변이체를 사용한 이뮤노블롯팅에 의한 타우 단백질 상의 DC2E7 결합 부위의 결정.
도 10. 영역 188-227 내의 타우 상의 잠재적 인산화 부위의 개략도.
도 11. 타우 점 돌연변이체를 사용한 이뮤노블롯팅에 의한 타우 단백질 상의 DC2E7 결합 부위의 결정. 점 돌연변이의 인산화 정도를 측정하기 위한 대조군으로서 Mab DC25가 사용되었다.
도 12. 타우-유래 펩티드를 사용한 경쟁적 ELISA에 의한 타우 단백질 상의 DC2E7 에피토프의 결정.
도 13. 알츠하이머병 (해마 CA1), FTD - 픽병 (치아 이랑, 해마), CBD (미상핵) 및 PSP (조가비핵/미상핵) 뇌 절편에서의 항체 DC2E7 및 DC2E2의 결합. 모노클로날 항체 AT8이 대조군으로서 사용되었다. 툴 바 100 μm.
도 14. 브라크(Braak) 병기 1, 브라크 병기 3 및 브라크 병기 6 뇌 절편에서 항체 DC2E7 및 DC2E2의 결합. 툴 바 100 μm.
도 15. 알츠하이머병 (해마 CA1), FTD에서의 픽체 - 픽병 (치아 이랑, 해마), 및 CBD에서의 코일체 및 성상세포 병리 (미상핵)로부터의 뇌 절편에서 항체 DC2E7 및 DC2E2의 결합. 툴 바 20 μm.
도 16. DC2E7 디지털 ELISA 검정에 대한 예시적인 교정 곡선.
도 17a-b. 건강한 개체로부터의 3가지 인간 CSF를 사용한 스파이크 회수 실험. (도 17a) 인간 CSF에서 스파이크된 DC2E7 캘리브레이터의 추정 농도. (도 17b) 인간 CSF에서 스파이크된 DC2E7 캘리브레이터의 회수율 (%).
도 18. 대조군 및 AD 샘플로부터의 DC2E7 디지털 ELISA 결과.
도 19. AD 및 다른 타우병증 샘플로부터의 DC2E7 디지털 ELISA 결과.
도 20: AD 및 다른 인간 타우병증에서 불용성 타우 종에 대한 DC2E7 결합.
도 21: pT217 타우 및 pT181 타우 검정을 사용한 AD 및 FTD 대상체로부터의 CSF 샘플의 비교.
도 22: pT217 타우 및 pT181 타우 검정을 사용한 AD 및 대조군 대상체로부터의 CSF 샘플의 비교.
도 23a-b: pT217 타우 검정을 사용한 대조군, MCI 및 AD 대상체로부터의 CSF 샘플의 비교 (도 23a). pT217 타우 검정을 사용한 대조군, AD, PD, MS, ALS 및 FTD 대상체로부터의 CSF 샘플의 비교 (도 23b).
도 24 : DC2E7로부터 유래된 단리된 scFV 항체 단편의 흡광도.
도 25a-d: DC2E7로부터 유래된 scFV 항체 단편의 아미노산 서열의 정렬. 도 25a는 DC2E7 서열과 비교한 scFV 항체 경쇄 가변 도메인을 보여준다. 도 25b는 DC2E7 서열과 비교한 scFV 항체 중쇄 가변 도메인을 보여준다. 도 25c는 DC2E7과 비교 시 더 높은 친화도를 나타내는 scFV 항체 단편의 가변 경쇄 도메인을 보여준다. 도 25d는 DC2E7과 비교 시 더 높은 친화도를 나타내는 scFV 항체 단편의 가변 중쇄 도메인을 보여준다. DC2E7의 서열과 동일한 잔기는 점으로 표시된다. CDR은 IMGT 넘버링 시스템에 따라 확인되었다.
도 26: 타우 유래 펩티드 2E7pep에 대한 DC2E7 및 DC149 항체의 친화도의 비교.
도 27a-b: DC2E7 및 DC149의 아미노산 서열의 정렬. 도 27a는 DC2E7 경쇄 서열과 비교한 DC149 가변 경쇄 도메인을 보여준다. 도 27b는 DC2E7 중쇄 서열과 비교한 DC149 가변 중쇄 도메인을 보여준다. DC2E7의 서열과 동일한 잔기는 점으로 표시된다. CDR은 IMGT 넘버링 시스템에 따라 확인되었다.
도 28a-b: DC2E7 및 DC807의 아미노산 서열의 정렬. 도 28a는 DC2E7 경쇄 서열과 비교한 DC807 가변 경쇄 도메인을 보여준다. 도 28b는 DC2E7 중쇄 서열과 비교한 DC807 가변 중쇄 도메인을 보여준다. DC2E7의 서열과 동일한 잔기는 점으로 표시된다. CDR은 IMGT 넘버링 시스템에 따라 확인되었다.
도 29: 인산화된 타우 캘리브레이터 (좌측 패널) 및 2E7 펩티드 캘리브레이터 (2E7pep) (우측 패널)를 사용하여 알츠하이머병, 다른 타우병증 및 대조군 개체로부터의 샘플에서 pT217 타우 디지털 ELISA 검정에 의해 측정된 바와 같은 pT217 타우의 분포.
정의
본 개시내용을 더 잘 이해하기 위해, 특정 정의가 먼저 제공된다.
용어 "친화도"는 분자 (예를 들어, 항체)의 단일 결합 부위와 그의 결합 파트너 (예를 들어, 항원) 사이의 총 비-공유 상호작용의 강도를 지칭한다. 그의 파트너 Y에 대한 분자 X의 친화도는 일반적으로, 평형 해리 상수 (KD) (또는 역 평형 연합 상수, KA)로 나타낼 수 있다. 친화도는 본원에 기재된 것들을 포함하여 관련 기술분야에 공지된 통상적 방법에 의해 측정될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Pope M.E., Soste M.V., Eyford B.A., Anderson N.L., Pearson T.W., (2009) J. Immunol. Methods. 341(1-2):86-96] 및 이에 기재된 방법을 참조한다.
용어 "아미노산"은 자연 발생, 변형된 및 합성 아미노산 뿐만 아니라 자연 발생 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 아미노산 유사체 및 아미노산 모방체를 지칭한다. 자연 발생 아미노산은 유전 코드에 의해 코딩된 것들 뿐만 아니라 나중에 변형되는 아미노산, 예를 들어, 히드록시프롤린, 감마-카르복시글루타메이트 및 O-포스포세린이다. 아미노산 유사체는 자연 발생 아미노산과 동일한 기본 화학 구조, 즉 수소, 카르복실 기, 아미노 기 및 R 기에 결합되는 알파 탄소를 갖는 화합물, 예를 들어, 호모세린, 노르류신, 메티오닌 술폭시드, 메티오닌 메틸 술포늄을 지칭한다. 이러한 유사체는 변형된 R 기 (예를 들어, 노르류신) 또는 변형된 펩티드 골격을 갖지만, 자연 발생 아미노산과 동일한 기본 화학 구조를 유지한다. 아미노산 모방체는 아미노산의 일반적인 화학 구조와 상이한 구조를 갖지만, 자연 발생 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 화합물을 지칭한다. 적합한 아미노산은 펩티드에서 발견되는 20개의 통상적인 자연 발생 아미노산의 D- 및 L-이성질체 둘 다 뿐만 아니라 유기 합성 또는 다른 대사 경로에 의해 제조된 자연 발생 아미노산 및 비-자연 발생 아미노산을 포함하나 제한되지 않는다. 이러한 비-자연 발생 아미노산의 예는 N-아세틸글루코사미닐-L-세린, N-아세틸글루코사미닐-L-트레오닌 및 O-포스포티로신을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 변형된 아미노산은 히드록시프롤린, 피로글루타메이트, 감마-카르복시글루타메이트, O-포스포세린, 아제티딘카르복실산, 2-아미노아디프산, 3-아미노아디프산, 베타-알라닌, 아미노프로프리온산, 2-아미노부티르산, 4-아미노부티르산, 6-아미노카프로산, 2-아미노헵탄산, 2-아미노이소부티르산, 3-아미노이소부티르산, 2-아미노피멜산, 3급-부틸글리신, 2,4-디아미노이소부티르산, 데스모신, 2,2'-디아미노피멜산, 2,3-디아미노프로프리온산, N-에틸글리신, N-메틸글리신, N-에틸아스파라긴, 호모프롤린, 히드록시리신, 알로-히드록시리신, 3-히드록시프롤린, 4-히드록시프롤린, 이소데스모신, 알로-이소류신, N-메틸알라닌, N-메틸글리신, N-메틸이소류신, N-메틸펜틸글리신, N-메틸발린, 나프트알라닌, 노르발린, 노르류신, 오르니틴, 펜틸글리신, 피페콜산 및 티오프롤린을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 용어 아미노산은 또한 특정 유기체에서의 대사산물이지만 단백질로의 통합을 위한 유전 코드에 의해 코딩되지 않는 자연 발생 아미노산을 포함한다. 이러한 아미노산은 오르니틴, D-오르니틴 및 D-아르기닌을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
용어 "항체"는 유전적으로 조작된, 자연, 또는 전체 또는 부분적으로 합성 또는 재조합적으로 생산된 이뮤노글로불린을 지칭한다. 무손상 항체는 전형적으로, 중쇄 및 경쇄를 포함하며, 각각은 항원에 대한 결합 포켓을 형성하는 가변 도메인 및 이펙터 기능에 기여하는 불변 도메인으로 구성된다. 항체는 그의 선택된 중쇄로 인해, 인간 부류: IgG, IgM, IgA, IgD 및 IgE 중 임의의 것, 또는 그의 유도체 또는 단편을 포함한 임의의 이뮤노글로불린 부류 및 하위부류의 구성원일 수 있다. 마찬가지로, 항체의 경쇄, 예컨대 불변 도메인의 아미노산 서열에 근거하여 결정된 인간 카파 (κ) 또는 람다 (λ) 경쇄는 임의의 종으로부터 유래될 수 있다.
기본 항체 구조 단위는 전형적으로 사량체를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 사량체는 폴리펩티드 쇄의 2개의 동일한 쌍을 포함하며, 각각의 쌍은 하나의 "경쇄" (약 25 kDa) 및 하나의 "중쇄" (약 50-70 kDa)를 갖는다. 각각의 쇄의 아미노-말단 부분은 주로 항원 인식을 담당하는 약 100 내지 110개 또는 그 초과의 아미노산의 가변 영역을 포함한다. 각각의 쇄의 카르복시-말단 부분은 주로 이펙터 기능을 담당하는 불변 영역을 규정한다. 인간 경쇄는 카파 및 람다 경쇄로서 분류된다. 중쇄는 뮤, 델타, 감마, 알파 또는 엡실론으로서 분류되며 항체의 이소타입을 각각 IgM, IgD, IgA 및 IgE로서 규정한다. 경쇄 및 중쇄 내에서, 가변 및 불변 영역은 약 12개 이상의 아미노산의 "J" 영역에 의해 연결되고, 중쇄는 또한 약 10개 이상의 아미노산의 "D" 영역을 포함한다. 일반적으로, 문헌 [Fundamental Immunology Ch 7. (Paul, W., 2nd ed. Raven Press, N.Y. (1989)]을 참조한다 (모든 목적을 위해 그 전체 내용이 참조로 포함됨). 각각의 경쇄/중쇄 쌍의 가변 영역은 항체 결합 부위를 형성한다. 따라서, 무손상 항체는 전형적으로 2개의 결합 부위를 갖는다. 이중기능적 또는 이중특이적 항체를 제외하고는, 2개의 결합 부위가 동일하다. 쇄는 모두, 상보성 결정 영역 또는 CDR이라고도 하는 3개의 초가변 영역에 의해 연결된 비교적 보존된 프레임워크 영역 (FR)의 동일한 일반 구조를 나타낸다. 각각의 쌍의 2개 쇄로부터의 CDR은 프레임워크 영역에 의해 정렬되어 특이적 에피토프에 결합할 수 있다. N-말단에서 C-말단으로, 경쇄와 중쇄 둘 다는 도메인 FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4를 포함한다. IMGT 넘버링 시스템에 따라 각각의 도메인에 아미노산을 할당할 수 있다. 대안적 정의가 또한 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1987 and 1991)), 또는 Clothia & Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987); Clothia et al. Nature 342:878-883 (1989)]을 참조한다.
"항체 단편" 또는 "항원 결합 단편"은 전장 항체의 일부분, 일반적으로 적어도 항원 결합 부분/도메인 또는 그의 가변 영역을 포함한다. 용어 항체 단편은 상기 논의된 용어 항체의 서브세트이다. 항체 단편 또는 항원 결합 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2, Fd, scFv, (scFv)2, scFv-Fc, Fv 단편, 디아바디, 단일쇄 항체 분자, 면역독소, 및 항체 단편으로부터 형성된 다중-특이적 항체를 포함한다. 또한, 항체 단편은 병리학적 타우에 결합하는 VH 쇄의 특징을 갖는데, 즉 VL 쇄와 함께 어셈블리될 수 있거나, 또는 병리학적 타우에 결합하는 VL 쇄의 특징을 갖는데, 즉 VH 쇄와 함께 어셈블리될 수 있어 기능적 항원 결합 포켓을 형성하며, 그에 의해 타우에 결합하는 특성을 제공하는 단일쇄 폴리펩티드를 포함한다. 상기 용어는 또한, 그 자체로는 이펙터 기능 (예를 들어, 항체-의존성 세포-매개 세포독성 ("ADCC") 또는 보체 의존성 세포독성 ("CDC"))을 제공할 수 없지만 적절한 항체 불변 도메인(들)과 조합된 후에 이러한 기능을 제공할 수 있는 단편을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 "타우에 결합할 수 있는" 항체 또는 그의 결합 단편은 다른 항원 표적보다 타우와 우선적으로 결합하는 항체 또는 결합 단편을 지칭한다. 상기 용어는 "항-타우" 항체 또는 "타우에 결합하는 항체"와 상호교환가능하다. 일부 실시양태에서, 타우에 결합할 수 있는 항체 또는 결합 단편은 다른 항원보다 그 항원에 대한 더 높은 친화도로 그렇게 할 수 있다. 일부 실시양태에서, 타우에 결합할 수 있는 항체 또는 결합 단편은, 예를 들어, 표면 플라즈몬 공명 또는 통상의 기술자에게 공지된 다른 방법에 의해 측정된 바와 같이, 적어도 약 10-1, 10-2, 10-3, 10-4, 10-5, 10-6, 10-7, 10-8, 10-9, 10-11, 10-12 또는 그 초과 (또는 그 사이의 임의의 값)의 KD로 그러한 항원에 결합할 수 있다.
용어 "키메라" 항체는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부분이 특정한 종으로부터 유래되거나 또는 특정한 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체 내의 상응하는 서열과 동일하거나 또는 상동인 반면 (예를 들어, 키메라 인간화, 클래스-전환된 항체), 나머지 쇄(들)는 또 다른 종으로부터 유래되거나 또는 또 다른 항체 클래스 또는 서브클래스에 속하는 항체 내의 상응하는 서열과 동일하거나 또는 상동인 항체 뿐만 아니라 그들이 원하는 생물학적 활성을 나타내는 한은, 그러한 항체의 단편을 지칭한다 (미국 특허 번호 4,816,567; 및 문헌 [Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)]).
한 실시양태에서, 용어 "키메라 항체"는 통상적으로 재조합 DNA 기술에 의해 제조된, 하나의 공급원 또는 종으로부터의 가변 영역 및 상이한 공급원 또는 종으로부터 유래된 불변 영역의 적어도 일부분을 포함하는 모노클로날 항체를 지칭한다. 일부 실시양태에서, 키메라 항체는 뮤린 가변 영역 및 인간 불변 영역을 포함한다. 이러한 뮤린/인간 키메라 항체는 뮤린 이뮤노글로불린 가변 영역을 코딩하는 DNA 세그먼트 및 인간 이뮤노글로불린 불변 영역을 코딩하는 DNA 세그먼트를 포함하는 이뮤노글로불린 유전자를 발현함으로써 생산될 수 있다. "키메라 항체"의 다른 형태는 클래스 또는 서브클래스가 원래의 항체의 그것으로부터 변형되거나 또는 변화된 것일 수 있다. 이러한 "키메라" 항체는 "클래스-전환된 항체"로서 지칭되기도 한다. 키메라 항체를 생산하는 방법은 현재 관련 기술분야에 공지된 통상적 재조합 DNA 및 유전자 형질감염 기술을 수반한다. 예를 들어, 문헌 [Morrison, S. L., et al., Proc. Natl. Acad Sci. USA 81 (1984) 6851-6855]; 미국 특허 번호 5,202,238 및 5,204,244를 참조한다.
"경쟁적 결합"은 시험중인 이뮤노글로불린/항체/결합 단편이 공통 항원, 예컨대 타우 (예를 들어, 서열식별번호: 12의 타우)에 대한 참조 항체의 특이적 결합을 억제하는 검정에서 결정될 수 있다. 수많은 유형의 경쟁적 결합 검정, 예를 들어, 고체 상 직접 또는 간접 방사면역검정 (RIA), 고체 상 직접 또는 간접 효소 면역검정 (EIA), 샌드위치 경쟁 검정 (문헌 [Stahli et al., Methods in Enzymology 9:242 (1983)] 참조); 고체 상 직접 비오틴-아비딘 EIA (문헌 [Kirkland et al., J. Immunol 137:3614 (1986)] 참조); 고체 상 직접 표지된 검정, 고체 상 직접 표지된 샌드위치 검정 (문헌 [Harlow and Lane, Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press (1988)] 참조); I125 표지를 사용하는 고체 상 직접 표지 RIA (문헌 [Morel et al., Mol. Immunol. 25(1):7 (1988)] 참조): 고체 상 비오틴-아비딘 EIA (Cheung et al., Virology 176:546 (1990)); 및 직접 표지된 RIA (Moldenhauer et al., Scand. J. Immunol. 32:77 (1990))가 공지되어 있다. 일부 실시양태에서, 이러한 검정은 이들, 즉 표지되지 않은 시험 이뮤노글로불린 및 표지된 참조 이뮤노글로불린 중 하나를 보유하는 고체 표면 또는 세포에 결합된 정제된 항원의 사용을 수반한다. 경쟁적 억제는 시험 이뮤노글로불린의 존재 하에 고체 표면 또는 세포에 결합된 표지의 양을 결정함으로써 측정될 수 있다. 일부 실시양태에서, 시험 이뮤노글로불린은 과량으로 존재한다. 통상적으로, 경쟁하는 항체가 과량으로 존재하는 경우, 이는 공통 항원에 대한 참조 항체의 특이적 결합을 적어도 50-55%, 55-60%, 60-65%, 65-70%, 70-75% 또는 그 초과만큼 억제할 것이다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "접합된"은 제1 분자 (예를 들어, 항체)의 작용기와 제2 분자 (예를 들어, 검출가능한 시그널 또는 치료제 또는 치료 약물)의 작용기 사이의 화학적 반응으로부터 형성된 결합 또는 화학적 모이어티를 지칭한다. 이러한 결합은 공유적 연결 및 비-공유적 연결을 포함하나 이에 제한되지는 않으며, 이러한 화학적 모이어티는 에스테르, 카르보네이트, 이민 포스페이트 에스테르, 히드라존, 아세탈, 오르토에스테르, 펩티드 연결 및 올리고뉴클레오티드 연결을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
"진행을 지연하는 것" 및 "진행을 예방하는 것"은 특정한 질환, 예컨대 AD에 걸리기 쉽거나, 또는 그렇지 않으면 그 질환에 걸릴 위험이 있는 환자에게 치료제를 투여하는 것을 지칭한다. 예방은 AD에 걸릴 위험이 있는 대상체에 대한 방지적 투여를 포괄한다. 일반적 집단 내의 누구나 AD에 걸릴 위험이 있다. 일부 개체는 AD에 걸릴 위험이 증가된다. 일부 개체는 AD에 대한 유전적 위험이 증가된다. 진행을 지연시키고 그 진행을 예방하면, 질환의 발병 위험을 제거 또는 감소시킬 수 있거나 또는 질환의 발병을 지연시킬 수 있다. AD 발병 또는 진행의 지연은 유사한 집단 또는 개체에 있어서의 표준 질환 진행 일정과 비교함으로써 측정될 수 있다. 문헌 [Ostrowitzki et al., Alzherimers Res Ther., 9(1):95, 2017]을 참조한다. 진행을 지연시키기 위한 구체적으로 예시되고 예시적인 실시양태가 하기에 설명된다.
용어 "에피토프"는 이뮤노글로불린 또는 항체 (또는 그의 항원 결합 단편)와 특이적으로 결합할 수 있는 항원 상의 부위를 지칭한다. 따라서, 타우 상의 에피토프는 이뮤노글로불린 또는 항체 (또는 그의 항원 결합 단편)와 특이적으로 결합할 수 있는 타우 상의 부위이다. 특이적 결합은 일부 실시양태에서, 비-특이적 상호작용과 측정가능하게 상이한 결합을 지칭한다. 특이적 결합은, 예를 들어, 일반적으로 결합 활성을 갖지 않는 유사한 구조의 분자인 대조군 분자의 결합과 비교해서 특정 분자의 결합을 결정함으로써, 또는 유사한 결합 친화도를 공유하지만 표지되지 않은 대조군 분자와의 경쟁 검정에 의해 측정될 수 있다. 이러한 경우, 표지된 표적의 프로브에 대한 결합이 과량의 비-표지된 표적에 의해 경쟁적으로 억제되면, 특이적 결합이 표시된다. 이러한 용어는, 예를 들어, 적어도 약 10-4 M, 대안적으로 적어도 약 10-5 M, 대안적으로 적어도 약 10-6 M, 대안적으로 적어도 약 10-7 M, 대안적으로 적어도 약 10-8 M, 대안적으로 적어도 약 10-9 M, 대안적으로 적어도 약 10-10 M, 대안적으로 적어도 약 10-11 M, 대안적으로 적어도 약 10-12 M, 또는 그 초과의 표적에 대한 Kd를 갖는 분자에 의해 나타낼 수 있다. 한 실시양태에서, 용어 "특이적 결합"은 특정 분자가 임의의 다른 폴리펩티드 또는 에피토프와 실질적으로 결합하지 않으면서 특정한 폴리펩티드 또는 특정한 폴리펩티드 상의 에피토프에 결합하는 결합을 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 에피토프는 단백질의 3차 폴딩에 의해 병치된 인접 아미노산 또는 비-인접 아미노산으로부터 형성될 수 있다. 에피토프는 항체에 의해 결합된 코어 영역 주변에 추가적인 아미노산 연장물, 예를 들어, 코어 에피토프 펩티드의 N 및/또는 C 말단 상에 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20개, 또는 그 초과의 아미노산을 포함할 수 있다. 연속 아미노산으로부터 형성된 에피토프는 전형적으로, 변성 용매에 대한 노출 시 유지되는 반면, 3차 폴딩에 의해 형성된 에피토프는 전형적으로 변성 용매로의 처리 시 상실된다. 에피토프는 전형적으로, 적어도 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15개의 아미노산을 포함하며, 종종 독특한 공간적 입체형태로 존재한다. 에피토프의 공간적 입체형태를 결정하는 방법은, 예를 들어, 알라닌 스캐닝, X-선 결정학 및 2차원 핵 자기 공명을 포함한다. 예를 들어, 문헌 [Epitope Mapping Protocols in Methods in Molecular Biology, Vol. 66, G. E. Morris, Ed. (1996)]을 참조한다. 개시된 항체에 대한 예시적인 방법이 본원에서 논의되고 사용된다. "입체형태적 에피토프"는 항체 또는 그의 타우-결합 단편이 입체형태적-특이적 방식으로 결합하는 에피토프이다. 단백질-기반 에피토프의 경우, 결합은 에피토프-운반-단백질의 2차, 3차 또는 4차 구조에 따라 달라질 수 있다. 달리 말하면, 항체는 구조 특이적 방식으로, 또는 4차-구조-특이적 방식으로 결합한다.
본원에 논의된 바와 같은 타우 상의 에피토프는 타우 단백질 2N4R 상의 아미노산 잔기와 관련하여 확인된다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는, 예를 들어, 정렬 프로그램, 예컨대 BLAST®를 통해 다른 타우 이소형 및 단편 상의 상응하는 아미노산 잔기를 쉽게 확인할 수 있었다. 달리 명시되지 않는 한, 타우 상의 특정한 아미노산 잔기에 대한 언급은 타우 단백질 2N4R을 지칭하며 다른 타우 이소형 및 단편 상의 상응하는 위치를 포괄하는 것으로 이해되어야 한다.
"Fab" 단편은 항체의 파파인 소화에 의해 생산될 수 있으며, 각각은 단일 항원-결합 부위 및 잔류 "Fc" 단편을 포함하며, 그의 명칭은 쉽게 결정화할 수 있는 능력을 반영한다 (단편 결정화가능함). 펩신 처리는 2개의 항원-결합 부위를 갖고 여전히 항원과 가교 결합할 수 있는 F(ab')2 단편을 산출한다. "Fv"는 Fab 단편에 포함되는 중쇄의 가변 영역 부분이다. 이들 단편 중 임의의 것은 또한, 재조합적으로 생산될 수 있다. 항체의 Fc 부분은 항체-의존성 세포성 세포독성 (ADCC) 및 보체 의존성 세포독성 또는 포식작용을 포함한 항체의 이펙터 기능과 연관된다. 항체의 Fc 영역에서의 변경 (예를 들어, 돌연변이 또는 글리코실화 변화)을 사용하여 그의 이펙터 기능 중 임의의 것을 조정할 수 있을 뿐만 아니라 그의 혈청 반감기 및 다른 약동학적 특성을 증가시킬 수 있다.
Fab 단편은 또한 경쇄의 불변 도메인과 중쇄의 제1 불변 도메인 (CH1)을 함유한다. Fab' 단편은 전형적으로, 항체 힌지 영역으로부터의 하나 이상의 시스테인을 포함한 중쇄 CH1 도메인의 카르복시 말단에 몇 개의 잔기를 부가함으로써 Fab 단편과 상이하다. Fab'-SH는 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)가 적어도 하나의 유리 티올 기를 보유하고 있는, Fab'에 대한 본원에서의 명칭이다. F(ab')2 항체 단편은 원래, 그들 사이에 힌지 시스테인을 갖는 Fab' 단편 쌍으로서 생산되었다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링이 또한 공지되어 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "Fc"는 제1 불변 영역 이뮤노글로불린 도메인을 제외한 항체의 불변 영역을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. 따라서 Fc는 IgA, IgD 및 IgG의 마지막 2개의 불변 영역 이뮤노글로불린 도메인, 및 IgE 및 IgM의 마지막 3개의 불변 영역 이뮤노글로불린 도메인, 및 이들 도메인에 대한 가요성 힌지 N-말단을 지칭한다. IgA 및 IgM의 경우, Fc는 J 쇄를 포함할 수 있다. IgG의 경우, Fc는 이뮤노글로불린 도메인 C 감마 2 및 C 감마 3 (C감마2 및 C감마3), 및 C 감마 1 (C감마1)과 C 감마 2 (C감마2) 사이의 힌지를 포함한다. Fc 영역의 경계가 다양할 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 통상적으로, 그의 카르복실-말단에 잔기 C226 또는 P230을 포함하도록 규정되며, 여기서 넘버링은 EU 넘버링 시스템에 따른다 (Edelman G. M. et al., (1969) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 63(1); 78-85). Fc 영역의 C-말단 리신 (EU 넘버링 시스템에 따른 잔기 447)은, 예를 들어, 항체의 생산 또는 정제 동안, 또는 항체의 중쇄를 코딩하는 핵산을 재조합적으로 조작함으로써 제거될 수 있다. 따라서, 무손상 항체의 조성물은 모든 K447 잔기가 제거된 항체 집단, K447 잔기가 제거되지 않은 항체 집단, 및 K447 잔기가 있는 항체와 K447 잔기가 없는 항체의 혼합물을 갖는 항체 집단을 포함할 수 있다. Fc는 단리되는 이러한 영역 또는 Fc 폴리펩티드, 예를 들어 항체의 맥락에서 이러한 영역를 지칭할 수 있다. Fc는 천연 서열 Fc 또는 변이체 Fc일 수 있다. 항체 이펙터 기능을 변경하기 위한 Fc 부분 내의 아미노산 잔기의 대체는 관련 기술분야에 공지되어 있다 (예를 들어, Winter et al., 미국 특허 번호 5,648,260 및 5,624,821 참조). PCT 출원 WO 93/10151 (본원에 참조로 포함됨)에 기재된 하나의 적합한 Fc는 인간 IgG1 항체의 N-말단 힌지 영역에서부터 Fc 영역의 천연 C-말단까지 연장되는 단일쇄 폴리펩티드이다. 또 다른 유용한 Fc 폴리펩티드는 미국 특허 번호 5,457,035 및 문헌 [Baum et al., 1994, EMBO J. 13:3992-4001]에 기재된 Fc 돌연변이 단백질이다. 이러한 돌연변이 단백질의 아미노산 서열은 아미노산 19가 Leu에서 Ala로 변경되었고, 아미노산 20이 Leu에서 Glu로 변경되었으며, 아미노산 22가 Gly에서 Ala로 변경된 것을 제외하고는 WO 93/10151에 제시된 천연 Fc 서열의 아미노산 서열과 동일하다. 상기 돌연변이 단백질은 Fc 수용체에 대해 감소된 친화도를 나타낼 수 있다.
"Fv"는 완전한 항원-인식 및 항원-결합 부위를 함유하는 최소 항체 단편을 지칭한다. 이러한 영역은 단단히 비-공유적으로 연합된, 하나의 중쇄 및 하나의 경쇄 가변 도메인의 이량체로 이루어진다. 이러한 입체 배치에서, 각각의 가변 도메인의 3개의 초가변 영역이 상호작용하여 VH-VL 이량체의 표면 상의 항원-결합 부위를 규정한다. 집합적으로, 6개의 초가변 영역은 항체에 항원-결합 특이성을 부여한다. 그러나, 단일 가변 도메인 (또는 항원에 특이적인 3개의 초가변 영역만을 포함하는 Fv의 절반)조차도, 전체 결합 부위보다 더 낮은 친화도이긴 하지만 항원을 인식하고 이에 결합할 수 있는 능력을 가질 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이, 특정한 인간 배선 이뮤노글로불린 서열로부터의 중쇄 또는 경쇄 가변 "프레임워크 영역"을 포함하는 인간화 항체는, 예를 들어, 자연 발생 체세포 돌연변이 또는 부위 지정 돌연변이의 의도적인 도입으로 인해, 특정한 배선 서열의 중쇄 또는 경쇄 가변 프레임워크 영역과 비교 시 아미노산 차이를 함유할 수 있다. 다양한 실시양태에서, 선택된 인간화 항체는 중쇄 또는 경쇄 가변 프레임워크 영역의 아미노산 서열이 인간 배선 이뮤노글로불린 유전자의 중쇄 또는 경쇄 가변 프레임워크 영역에 의해 코딩되는 아미노산 서열과 적어도 90% 동일할 수 있으며, 다른 종의 배선 이뮤노글로불린 아미노산 서열 (예를 들어, 뮤린 배선 서열)과 비교할 때 인간화 항체가 인간으로부터 유래된 것으로서 확인시켜 주는 아미노산 잔기를 함유한다. 특정 경우에, 인간화 항체는 배선 이뮤노글로불린 유전자에 의해 코딩되는 중쇄 또는 경쇄 가변 프레임워크 영역과 적어도 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% 또는 그 초과의 아미노산 서열 동일성을 공유할 수 있다. 일부 실시양태에서, 특정한 인간 배선 서열로부터 유래된 인간화 항체의 중쇄 또는 경쇄 가변 프레임워크 영역은 인간 배선 이뮤노글로불린 유전자에 의해 코딩되는 중쇄 또는 경쇄 가변 프레임워크 영역의 아미노산 서열과 11개 이하의 아미노산, 바람직하게 5개 이하, 또는 훨씬 더 바람직하게 4개, 3개, 2개 또는 1개 이하의 아미노산 차이를 나타낼 것이다.
"프레임워크 영역" 또는 "FR" 잔기는 본원에 정의된 바와 같은 초가변 영역 잔기 이외의 가변 도메인 잔기이다. 이들은 가변 도메인 내의 초가변 영역을 괄호 안에 제시한다. FR 잔기는 표준 넘버링 시스템, 예를 들어, 카바트(Kabat), 코티아(Chothia) 또는 변형된 코티아 넘버링 체계에 따라 확인될 수 있다. IMGT 고유 넘버링 시스템에서, 보존된 아미노산은 항상 동일한 위치, 예를 들어, 시스테인 23 (1st-CYS), 트립토판 41 (CONSERVED-TRP), 소수성 아미노산 89, 시스테인 104 (2nd-CYS), 페닐알라닌 또는 트립토판 118 (J-PHE 또는 J-TRP)을 갖는다. 예를 들어, 문헌 [Lefranc M. P., Immunology Today 18, 509 (1997); Lefranc M. P., The Immunologist, 7, 132-136 (1999); Lefranc, M. P., Pommie, C., Ruiz, M., Guidicelli, V., Foulquier, E., Truong, L., Thouvenin-Contet, V. and Lefranc, Dev. Comp. Immunol., 27, 55-77 (2003)]을 참조한다. 또 다른 실시양태에서, IMGT 고유 넘버링은 프레임워크 영역 (FR1-IMGT: 위치 1 내지 26, FR2-IMGT: 39-55, FR3-IMGT: 66-104 및 FR4-IMGT: 118 내지 128) 및 상보성 결정 영역: CDR1-IMGT: 27 내지 38, CDR2-IMGT: 56 내지 65 및 CDR3-IMGT: 105 내지 117의 표준화된 한계 결정을 제공한다. IMGT 고유 넘버링은 IMGT 콜리어 드 펄(Colliers de Perles)로서 지명된 2D 그래픽 표현에서 사용될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Ruiz, M. and Lefranc, M. P., Immunogenetics, 53, 857-883 (2002); Kaas, Q. and Lefranc, M. P., Current Bioinformatics, 2, 21-30 (2007)]을 참조한다. 이는 또한 3D 구조를 나타내기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [IMGT/3Dstructure-DB Kaas, Q., Ruiz, M. and Lefranc, M. P., T cell receptor and MHC structural data. Nucl. Acids. Res., 32, D208-D210 (2004)]을 참조한다.
본원에서의 용어 "힌지" 또는 "힌지 영역" 또는 "항체 힌지 영역"은 항체 또는 그의 타우-결합 단편의 제1 불변 도메인과 제2 불변 도메인 사이의 아미노산을 포함하는 가요성 폴리펩티드를 포함한다. 본원에 언급된 바와 같은 "힌지 영역"은 2개의 중쇄를 브릿징하는 시스테인 잔기를 포괄하는, IgA, IgD 및 IgG에만 존재하는 6-62개 아미노산 길이의 서열일 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "인간 항체"는 인간 배선 이뮤노글로불린 서열로부터 유래된 가변 및 불변 영역을 갖는 항체를 포함하는 것으로 의도되며, 이는, 예를 들어, 인간으로부터 단리되거나 또는 재조합적으로 생산될 수 있다. 항체의 불변 영역은, 예를 들어, 인간 IgG1 유형 항체의 불변 영역일 수 있다. 이러한 영역은 동종이인자형일 수 있으며, 예를 들어, 문헌 [Johnson, G., and Wu, T. T., Nucleic Acids Res. 28 (2000) 214-218] 및 여기에 참조된 데이터베이스에 의해 기재된다.
용어 "인간화 항체"는 프레임워크 영역 (FR) 및/또는 상보성 결정 영역 (CDR)을 모 이뮤노글로불린의 것 (예를 들어, 모 마우스 이뮤노글로불린 잔기)과 비교 시 인간으로부터의 이뮤노글로불린의 아미노산 잔기를 포함하도록 변형시킨 항체를 지칭한다. 한 실시양태에서, 뮤린 CDR은 "인간화 항체"를 제조하기 위해 인간 항체의 프레임워크 영역 내로 그라프팅된다. 또 다른 실시양태에서, 인간 프레임워크는 마우스 항체 내로 "그라프팅"되거나 또는 스플라이싱되어, 마우스 항체의 CDR을 보존하고 그의 프레임워크를 인간 기원의 프레임워크로 대체한다. 그라프팅 및 스플라이싱은 PCR 및 돌연변이 유발을 포함한 다양한 재조합 DNA 기술에 의해 수행될 수 있다. 다양한 인간화 방법이 관련 기술분야에 존재한다 (예를 들어, CDR 그라프팅, 재형성, 트랜스제닉 동물, 조합 라이브러리). 예를 들어, 문헌 [Riechmann, L., et al., Nature 332 (1988) 323-327; Neuberger, M.S., et al., Nature 314 (1985) 268-270; Sastry L, Alting-Mess M, Huse WD, Short JM, Sorge JA, Hay BN, Janda KD, Benkoviv SJ, Lerner RA (1989) Cloning of the immunological repertoire for generation of monoclonal catalytic antibodies: construction of a heavy chain variable region-specific cDNA library. Proc Natl Acad Sci USA 86, 5728-5732; 및 Huse WD, Sastry S, Iverson SA, Kang AS, Alting-Mees M, Burton DR, Benkoviv SJ, Lerner RA (1989) Generation of a large combinatorial library of the immunoglobulin repertoire in phage lambda. Science 246, 1275-1281]을 참조한다. 일부 실시양태에서, 인간화 항체는 원래의 항원-결합 특성은 유지하면서 더 인간과 유사하다 (Presta, L.G. Engineering of therapeutic antibodies to minimize immunogenicity and optimize function. Advanced Drug Delivery Reviews, Volume 58, Issues 5-6: 640-656 (2006)). 일부 실시양태에서, 설치류 항체의 가변 도메인의 서열은 알려진 인간 가변-도메인 서열의 라이브러리 또는 인간 배선 서열의 라이브러리에 대항하여 스크리닝된다. 이때, 설치류와 가장 가까운 인간 서열이 인간화 항체에 대한 인간 프레임워크 영역으로서 받아 들여질 수 있다 (Sims et al., J. Immunol. 1993; 151:2296 et seq.; Chothia et al., Chothia and Lesk, J. Mol. Biol. 1987; 196901-917). 또 다른 실시양태에서, 인간화는 경쇄 또는 중쇄의 특정한 하위군의 모든 인간 항체의 컨센서스 서열로부터 유래된 특정한 프레임워크 영역을 사용하는 것을 수반한다. 몇 가지 상이한 인간화 항체에 대해 동일한 프레임워크를 사용할 수 있다 (Carter et al., PNAS USA, 1992; 89:4285 et seq.; Presta et al., J Immunol 1993; 151:2623 et seq.). 인간 환자에서 항체 분자의 면역원성을 감소시키도록 설계된 다른 방법은 베니어링된 항체 (예를 들어, 미국 특허 번호 6,797,492 및 미국 특허 출원 공개 20020034765 및 20040253645 참조) 및 T-세포 에피토프 분석 및 제거에 의해 변형된 항체 (예를 들어, 미국 특허 출원 공개 20030153043 및 미국 특허 번호 5,712,120 참조)를 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본원에 기재된 인간화 항체의 CDR은 마우스 모노클로날 DC2E7 항체의 CDR 서열, 즉 서열식별번호: 1-6에 상응한다.
본원에서 사용될 때 용어 "초가변 영역"은 항원-결합에 가장 직접적으로 기여하는 항체의 아미노산 잔기를 지칭한다. 이러한 용어는 용어 "상보성 결정 영역" (또는 "CDR")과 동의어이다. 한 실시양태에서, IMGT에 따르면, 초가변 영역은 일반적으로, 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 각각에 있는 3개의 연장물 내의 아미노산을 포함한다 (예를 들어, 경쇄 가변 도메인 내의 잔기 27-32 (LCDR1), 49-51 (LCDR2) 및 88-96 (LCDR3) 및 중쇄 가변 도메인 내의 26-33 (HCDR1), 51-58 (HCDR2) 및 97-102 (HCDR3)).
용어 "불용성 타우"는 타우의 응집체 (예를 들어, 신경원섬유 엉킴, 신경망 실, 픽체, 코일체 등)를 지칭하며, 이는, 예를 들어, 뇌 또는 용액에서 그의 특징적인 패턴에 의해 확인될 수 있다. 예를 들어, 타우 응집체는 균질화된 뇌 샘플의 원심분리에 의해 분리될 수 있고, 예를 들어, 웨스턴 블롯 또는 ELISA 검정에 의해 평가될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Lasagna-Reeves et al., FASEB J. 26:1946-59 (2012)]을 참조한다. 타우 응집체는 타우 단량체, 타우 이량체, 삼량체 또는 올리고머, 예컨대 과립형 타우 올리고머 (GTO), 및 특히, 쌍형성된 나선형 필라멘트 (PHF) 및 직선 필라멘트 (SF)를 포함한 다양한 유형의 필라멘트로 구성될 수 있다 (Cowan, C.M. and Mudher, A., Are tau aggregates toxic or protective in tauopathies?, Frontiers in Neurology, 4:114 (2013)).
본원에 사용된 바와 같은 용어 "단리된 핵산"은 게놈, cDNA 또는 합성 기원의 폴리뉴클레오티드 또는 그의 일부 조합을 의미하며, 이는 그의 기원으로 인해 (1) "단리된 핵산"이 자연에서 발견되는 폴리뉴클레오티드의 전부 또는 일부분과 연관되지 않거나, (2) 자연에서 연결되지 않는 폴리뉴클레오티드에 작동가능하게 연결되거나, 또는 (3) 더 큰 서열의 일부로서 자연에서 발생하지 않는다.
"연결된"은 펩티드, 항체, 화합물 또는 고체 입자에 대한 모이어티의 부착을 지칭한다. 이러한 용어는 모이어티가 펩티드, 항체, 화합물 또는 고체 입자와 커플링되거나, 복합체를 형성하거나, 또는 공유적으로 또는 비-공유적으로 부착되는 경우를 포함한다. 예를 들어, 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편은 비드 또는 다른 고체 입자 상에 공유적으로 또는 비-공유적으로 코팅될 수 있다. 모이어티는 화학적으로 가교 결합되거나, 또는 펩티드 또는 항체와의 융합으로서 발현 또는 합성될 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은, "타우-분자 복합체를 형성할 수 있는 분자"는 타우 종과 우선적으로 결합하여 복합체를 형성할 수 있는 임의의 작용제이다. 이러한 용어는 항체, 예를 들어, 본원에 개시된 항-타우 항체 뿐만 아니라 항원 수용체, Fc-접합된 수용체, 수용체 단편, 보체 인자, 및 타우와 복합체를 형성할 수 있는 임의의 다른 적합한 결합 모이어티를 포괄한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "핵산"은 DNA 분자 및 RNA 분자를 포함하는 것으로 의도된다. 핵산 분자는 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다.
"병리학적 타우"는 병리학적 타우 이형태체 및 구조를 포함하고 하기의 모든 것을 포괄한다: 질환 변형된 타우 (예를 들어, 과인산화된 타우, 말단절단된 타우 등), 잘못 정렬된 타우, 무질서한 타우, 무질서한 가용성 타우, 불용성 타우, 타우 올리고머 및 필라멘트, 세포외 및 세포내 타우 응집체, 예컨대 신경원섬유 엉킴, 신경망 실, 신경염성 플라크, 고스트 엉킴 및 축삭 스페로이드, 픽체, 코일체, 다발 형상의 성상세포, 성상세포 플라크, 또는 AD 또는 또 다른 타우병증과 연관된 임의의 다른 형태의 타우.
본원에 사용된 바와 같은 "샘플" 또는 "생물학적 샘플"은 시험 목적으로 대상체로부터 수득된 조직 또는 체액 (예를 들어, 혈액, CSF 등)의 임의의 일부분을 지칭한다. 샘플은 대상체로부터 직접적으로 단리될 수 있거나 또는 시험 전에 추가로 프로세싱될 수 있다 (예를 들어, 희석, 고정, 변성, 분할, 분리, 원심분리, 면역 복합체 해리 등에 의함). 진단 또는 모니터링 목적으로 사용되는 샘플의 일부분도 상기 용어에 포함된다. 샘플은 또한 시험 동안 또는 시험 후에 추가로 프로세싱될 수 있다 (예를 들어, 면역침전, 정제, 분할 등에 의함). 용어 "샘플" 및 "생물학적 샘플"은 이러한 프로세싱 단계 전, 동안 및/또는 후에 조직 또는 체액에 동등하게 적용된다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "대조군 샘플"은 건강한 환자 또는 또 다른 진단된 타우병증을 가진 환자 또는 생물학적 유체, 예를 들어, CSF 중에 알려진 수준의 타우 종을 갖는 환자로부터 수득된 샘플을 지칭한다.
다양한 유형의 타우 (즉, 타우 단백질 종)는 대상체, 예를 들어, 뇌 조직 또는 샘플, 예컨대 CSF 또는 혈액에 존재할 수 있다. 이러한 유형의 타우에 대한 세부사항은 공지되어 있으며, 예를 들어, WO2004/007547 A2 및 U.S. 9,518,101 (그들의 전체 내용이 본원에 참조로 포함됨)에 기재되어 있다. 추가의 이소형 사양 (예를 들어, 타우 2N4R) 없이 사용될 때 용어 "타우"는 달리 명시되지 않는 한 모든 형태의 타우 뿐만 아니라 타우 단편을 포괄한다.
용어 "제약상 허용되는"은 동물 또는 인간에서 생체내 사용을 위해 생물학적으로 또는 약리학적으로 상용성인 것을 의미하고, 바람직하게는 연방 또는 주 정부의 규제 기관에 의해 승인되거나 또는 미국 약전에 열거되거나 또는 동물, 보다 특히 인간에 사용하기 위해 일반적으로 인정되는 다른 약전에 열거된 것을 의미한다.
용어 "인산화된 타우"는 하나 이상의 인산화된 아미노산을 포함하는 임의의 타우 이소형을 지칭한다. 성인 인간 뇌 타우의 가장 긴 형태는 80개의 세린 또는 트레오닌 잔기와 5개의 티로신 잔기를 갖고 있으며; 따라서, 분자의 거의 80%가 인산화될 가능성이 있다. 문헌 [Goedert, M. et al., Multiple isoforms of human microtubule-associated protein tau: sequences and localization in neurofibrillary tangles of Alzheimer's disease. Neuron 3, 519-526 (1989)]을 참조한다. 용어 인산화된 타우는 또한 인산화된 타우 아미노산의 임의의 조합을 지칭한다. 타우는 미세소관 역학, 축삭 수송 및 신경 돌기 성장을 조절하는데 중요한 역할을 한다. 타우의 이러한 기능 모두는 부위-특이적 인산화에 의해 조정될 수 있으며, 정상적인 인산화 이벤트의 변경 (예를 들어, 과인산화, 비정상적인 인산화)이 신경변성 질환, 예컨대 AD에 기여할 수 있다 (Johnson GV et al., Tau phosphorylation in neuronal cell function and dysfunction. J. Cell Sci. 2004 Nov 15;117(Pt 24): 5721-9).
일부 실시양태에서, 인산화된 타우는 아미노산 188과 227 사이에 하나 이상의 인산화된 잔기의 임의의 조합을 갖는 타우 단백질을 지칭한다 (타우 단백질 2N4R 또는 또 다른 타우 단편 또는 이소형 내의 동등한 잔기에서 넘버링된 바와 같음). 또 다른 실시양태에서, 인산화된 타우는 적어도 트레오닌 217에서 인산화된 타우를 지칭한다 (타우 단백질 2N4R 또는 또 다른 타우 단편 또는 이소형 내의 동등한 잔기에서 넘버링된 바와 같음). 일부 실시양태에서, 타우 단백질은 본 실시예에서 검출된 인산화된 타우 단백질에서와 같이 인산화된다.
"생리학적 타우"는 건강한 개체의 뇌에서 발견되는 천연의 언폴딩된 타우 단백질을 지칭하며, 그 길이는 다양할 수 있다. 이러한 타우 단백질은 전형적으로, 고도로 가용성이며, 일반적으로 응집되는 경향이 덜하다. 문헌 [Wang et al., Tau in physiology and pathology, Nature Reviews, 17:22-35, 2016]을 참조한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "재조합 숙주 세포" (또는 간단히 "숙주 세포")는 재조합 발현 벡터가 도입된 세포를 지칭하는 것으로 의도된다. 이러한 용어는 특정한 대상체 세포 뿐만 아니라 그러한 세포의 자손을 지칭하는 것으로 이해되어야 한다. 특정 변형이 돌연변이 또는 환경적 영향으로 인해 다음 세대에서 발생할 수 있기 때문에, 그러한 자손은 실제로 모세포와 동일하지 않을 수 있지만, 본원에 사용된 바와 같은 용어 "숙주 세포"의 범위 내에 여전히 포함된다.
항체와 관련하여 본원에 사용된 바와 같은 "특이적으로 결합한다"는 항체가 구조적으로 상이한 항원(들) 또는 에피토프에 대한 것보다 더 큰 친화도로 그의 표적 항원 또는 에피토프에 결합한다는 것을 의미한다.
"단일쇄 Fv" 또는 "scFv" 항체 단편은 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 이들 도메인은 단일 폴리펩티드 쇄에 존재한다. 바람직하게, Fv 폴리펩티드는 scFv가 항원 결합을 위한 원하는 구조를 형성할 수 있도록 해주는 VH 도메인과 VL 도메인 사이의 폴리펩티드 링커를 추가로 포함한다. scFv의 고찰을 위해, 문헌 [Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)]을 참조할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "치료"는 특정 질환, 이러한 질환의 한 가지 이상의 증상, 또는 질환에 대한 소인을 치료, 치유, 경감, 구제, 변경, 제거, 완화, 개선 또는 영향을 미칠 목적으로, 상기 질환, 질환의 증상 또는 질환에 대한 소인이 있는 대상체에게 치료제를 적용하거나 또는 투여하는 것으로서 정의된다. 더욱이, 본 개시내용의 조성물이 단독으로 또는 또 다른 치료제와 조합하여, 치료의 부재 하에서의 증상과 비교 시, 치료되는 알츠하이머병 또는 또 다른 타우병증의 적어도 한 가지 증상을 치료, 치유, 경감, 구제, 변경, 제거, 완화, 개선 또는 영향을 미치는 한, 그 결과는 장애의 모든 증상이 치료, 치유, 경감, 구제, 변경, 제거, 완화, 개선 또는 영향을 미쳤는지의 여부에 관계없이 기저 장애의 치료로 간주되어야 한다. 치료는 치료제의 "유효량"을 사용하여 달성될 수 있으며, 이는 부분적 및 완전한 치료, 예를 들어, 질환, 이러한 질환의 한 가지 이상의 증상, 또는 질환에 대한 소인을 부분적으로 또는 완전히 치료하는 것, 치유하는 것, 경감시키는 것, 구제하는 것, 변경하는 것, 제거하는 것, 완화시키는 것, 개선시키는 것 또는 영향을 미치는 것을 포함하는 것으로 이해되어야 한다. "유효량"은 실증적으로 결정될 수 있다. 마찬가지로, "치료상 유효량"은 명시된 치료 효과를 달성하는데 유효한 농도이다.
"타우병증"은 병리학적 타우의 형성과 연관된 질환을 지칭한다. 타우병증은 환자의 뇌에서 비정상적인 형태의 미세소관 연관 단백질 타우의 출현을 동반하는 모든 신경계 질환을 포괄한다. 이러한 용어는 하기 질환을 포함하나 그에 제한되지는 않는다: 알츠하이머병, 게르스트만-슈트라우슬러-샤인커병, 영국 치매, 덴마크 치매, 픽병, 진행성 핵상 마비, 피질기저 변성, 은친화성 세립체 질환, 괌 파킨슨증-치매 콤플렉스, 엉킴 단독 치매, 구상 신경교 봉입을 수반한 백질 타우병증, 전두측두엽 치매 (예를 들어, FTDP-17), 17번 염색체 만성 외상성 뇌병증과 연계된 파킨슨증, 및 끄덕임 질환. 예를 들어, 문헌 [Goedert M, Clavaguera F and Tolnay M. The propagation of prion-like protein inclusions in neurodegenerative diseases. Trends Neurol. Sci]을 참조한다. 일부 실시양태에서, 전두측두엽 치매 (FTD)를 가진 대상체는 비달변성/비문법적 원발성 진행성 실어증 (nfPPA), 문의성 변이형 원발성 진행성 실어증 (svPPA), 행동 변이형 전두측두엽 치매 (bvFTD) 또는 근위축성 측삭 경화증/전두측두엽 치매 (ALS/FTD)를 가질 수 있다. 한 실시양태에서, 이들 비정상적인 형태의 타우 중 하나 이상이 적어도 하나의 검정에서 본원에 기재된 항체 또는 결합 단편 중 하나에 의해 인식된다. 일부 실시양태에서, 검정은 IHC이다. 다른 실시양태에서, 검정은 ELISA이다. 용어 "또 다른 타우병증"은 병리학적 타우의 출현을 동반하는 AD 이외의 모든 신경계 질환 (예를 들어, 타우-기반 원인의 치매), 예를 들어, 상기 열거된 다른 타우병증 중 임의의 것을 포괄한다. 대조적으로, 치매는 또한 비-타우 기반 병인으로 인해 발생할 수 있으며, 이는 용어 타우병증을 벗어난다.
용어 "가변 도메인"은 이뮤노글로불린의 특정 부분이 항체 사이의 서열에 있어서 광범위하게 상이하고, 그의 특정한 항원에 대한 각각의 특정한 항체의 결합 및 특이성에 사용된다는 사실을 지칭한다. 그러나, 가변성은 종종, 항체의 가변 도메인 전반에 걸쳐 고르게 분포되지 않는다. 그것은 경쇄 및 중쇄 가변 도메인 모두에서 초가변 영역이라고 하는 3개의 세그먼트에 집중되어 있다. 가변 도메인의 보다 고도로 보존된 부분을 프레임워크 영역 (FR)이라고 한다. 천연 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각 4개의 FR을 포함하며, 이는 종종 베타-시트 입체 배치를 채택하고, 종종 베타-시트 구조를 연결하는 루프를 형성하고, 일부 경우에는 베타-시트 구조의 일부를 형성하는 루프를 형성하는 3개의 초가변 영역에 의해 연결된다. 각각의 쇄 내의 초가변 영역 (HVR)은 FR에 의해 아주 근접하여 결합되어 있고, 다른 쇄로부터의 초가변 영역과 함께 항체의 항원-결합 부위의 형성에 기여한다 (문헌 [Kabat, et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)] 참조). 대조적으로, 항체의 "불변 도메인"은 전형적으로, 항체를 항원에 결합시키는데 직접적으로 수반되지는 않지만, 항체 의존성 세포성 세포독성 (ADCC)에 기여한다.
본원에 사용된 바와 같은 용어 "벡터"는 그에 연결된 또 다른 핵산을 수송할 수 있는 핵산 분자를 지칭하는 것으로 의도된다. 한 가지 유형의 벡터는 "플라스미드"이며, 이는 추가적인 DNA 세그먼트가 라이게이션될 수 있는 원형 이중 가닥 DNA 루프를 지칭한다. 또 다른 유형의 벡터는 바이러스 벡터이며, 여기서 추가적인 DNA 세그먼트가 바이러스 게놈에 라이게이션될 수 있다. 특정 벡터는 이들이 도입되는 숙주 세포에서 자기 복제할 수 있다 (예를 들어, 박테리아 복제 기점을 갖는 박테리아 벡터 및 에피솜 포유동물 벡터). 다른 벡터 (예를 들어, 비-에피솜 포유동물 벡터)는 숙주 세포 내로의 도입 시 숙주 세포의 게놈으로 통합될 수 있으며, 그에 의해 숙주 게놈과 함께 복제된다. 더욱이, 특정 벡터는 작동적으로 연결된 유전자의 발현을 지시할 수 있다. 이러한 벡터는 본원에서 "재조합 발현 벡터" (또는 간단히 "발현 벡터")로서 지칭된다. 일반적으로, 재조합 DNA 기술에 유용한 발현 벡터는 종종 플라스미드의 형태이다. 본 명세서에서 "플라스미드"와 "벡터"는 상호교환가능하게 사용될 수 있는데, 이는 플라스미드가 가장 흔하게 사용되는 벡터 형태이기 때문이다. 그러나, 본 발명은 동등한 기능을 제공하는 다른 형태의 발현 벡터, 예컨대 바이러스 벡터 (예를 들어, 복제 결함 레트로바이러스, 아데노바이러스 및 아데노-연관 바이러스)를 포함하도록 의도된다.
본원에 사용된 바와 같은, 단수 형태는 문맥상 달리 명백하게 나타내지 않는 한 복수 형태를 또한 포함하는 것으로 의도된다. 더욱이, 용어 "포함하는 것", "포함하는", "갖는 것", "갖는", "함께" 또는 그의 변형이 상세한 설명 및/또는 청구 범위에서 사용되는 한, 이러한 용어는 용어 "포함하는 것"과 유사한 방식으로 포괄적인 것으로 의도된다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "약" 및 "대략"은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 결정된 바와 같은 특정한 값에 대해 허용가능한 오차 범위 이내를 의미하며, 이는 그 값이 측정 또는 결정되는 방법, 즉 측정 시스템의 제한 사항에 부분적으로 좌우될 것이다. 예를 들어, "약"은 관련 기술분야의 실행에 따라, 1 내지 1.5 표준 편차(들) 또는 1 내지 2 표준 편차를 의미할 수 있다. 대안적으로, "약"은 주어진 값의 20%, 10%, 5%, 또는 1% 이하를 포함하는 범위를 의미할 수 있다. 대안적으로, 특히 생물학적 시스템 또는 프로세스와 관련하여, 상기 용어는 특정 값의 한 자릿수 이하, 5배 이하, 및 2배 이하를 의미할 수 있다. 특정한 값이 본 출원 및 청구 범위에 기재되어 있는 경우, 달리 언급되지 않는 한, 용어 "약"은 특정한 값에 대해 허용가능한 오차 범위 내를 의미한다고 가정해야 한다. 또한, 본원에 기재된 모든 범위는 종말점 뿐만 아니라 그 사이의 모든 점을 포함한다. 용어 "또는"은 문맥상 달리 명백하게 나타내지 않는 한 "및/또는"을 의미하는 것으로 이해될 것이다. 본원에 인용되는 모든 참고문헌은 그 전체 내용이 본원에 참조로 포함된다. 포함된 참고문헌 내의 어떠한 내용도 본원에 제공된 자료와 모순되거나 또는 불일치하는 경우, 본 개시내용이 우선할 것이다.
항체
본원에는 AD를 검출하고, 모니터링하고, 치료하고 예방하는데 유용한 신규 항-타우 항체가 기재된다. 일부 실시양태에서, 항체는 인산화된 타우에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체는 생물학적 샘플 (예를 들어, CSF 또는 혈액) 중의 인산화된 타우에 결합할 수 있어, AD를 다른 타우병증과 비-침습적으로 구별하는데 유용하게 한다. 일부 실시양태에서, 항체는 제2 작용제 (예를 들어, 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편 이외의 작용제, 예컨대 방사성트레이서 또는 치료제)에 접합될 수 있다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편 중 하나 이상은 서로 접합된다. 일부 실시양태에서, 항체 및/또는 접합된 항체는 뇌 내의 타우에 결합하기 위해 혈액-뇌 장벽을 가로질러, 뇌에서의 AD 및 다른 타우병증의 생체내 검출 또는 치료에 유용하게 한다.
항체 CDR 및 가변 도메인의 서열 뿐만 아니라 전장 타우 단백질 2N4R 및 그의 일부분은 하기 표 1에 제시되어 있다. 다양한 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 및 결합 단편은 상기 표에 개시된 CDR 및/또는 가변 도메인 서열 중 하나 이상을 포함하고/거나 상기 표에 개시된 타우 단백질 2N4R의 하나 이상의 부분에 결합한다.
표 1
Figure pct00001
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
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다양한 실시양태에서, 본원에 개시된 타우에 결합할 수 있는 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 상기 표 1에 개시된 아미노산 서열 중 하나 이상을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체는 표 1에 개시된 하나 이상의 서열의 변이체를 포함하는 한편, 타우, 예를 들어 위치 217에서 인산화된 타우에 결합할 수 있는 능력을 보유한다.
예를 들어, 일부 실시양태에서 타우에 결합할 수 있는 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 1, 또는 위치 5 및 6 중 하나 이상에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 2, 또는 위치 1, 4, 5, 6, 및 8 중 하나 이상에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고/거나, 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 4, 또는 위치 2에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5, 또는 위치 3에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 6, 또는 위치 4 및 6 중 하나 이상에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함한다.
특정한 위치에서의 치환은 아미노산 서열, 예를 들어, 펩티드 서열의 아미노 말단 단부 (또는 상기 표 내의 좌측 단부)에서 시작하는 표 1에 열거된 서열에서 좌측에서 우측으로 (아미노에서 카르복시 말단으로) 카운팅함으로써 결정될 수 있다.
다양한 실시양태에서, HCDR1 내의 위치 5에서의 치환은 글리신이고, HCDR1 내의 위치 6에서의 치환은 글리신이다. 일부 실시양태에서, HCDR2 내의 위치 1에서의 치환은 발린이고, HCDR2 내의 위치 4에서의 치환은 알라닌이고, HCDR2 내의 위치 5에서의 치환은 글리신이고, HCDR2 내의 위치 6에서의 치환은 세린이고/거나, HCDR2 내의 위치 8에서의 치환은 발린이다. 일부 실시양태에서, LCDR1 내의 위치 2에서의 치환은 아스파라긴이다. 일부 실시양태에서, LCDR2 내의 위치 3에서의 치환은 글리신이다. 일부 실시양태에서, LCDR3 내의 위치 4에서의 치환은 아르기닌이고/거나, LCDR3 내의 위치 6에서의 치환은 트레오닌이다.
다양한 실시양태에서, HCDR1은 위치 5에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 위치 8에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고/거나, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고/거나, LCDR1은 위치 2에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고/거나 LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, HCDR1 내의 위치 5에서의 치환은 글리신이고, HCDR2 내의 위치 8에서의 치환은 발린이고, LCDR1 내의 위치 2에서의 치환은 아스파라긴이다.
다양한 실시양태에서, 표 1에 개시된 것들의 변이체 서열을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편은 도 24-27b에 제시된 것들로부터 선택된 항체 CDR (예를 들어, 모든 6개의 CDR) 및/또는 전체 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인 서열 (예를 들어, 특정한 항체 클론의 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열의 쌍형성된 세트) 중 임의의 것을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 타우에 결합할 수 있는 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하는 것인 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 개시된다. 다양한 실시양태에서, CDR 및/또는 가변 도메인 서열은 표 1에 열거된 것들로부터 선택된다. 일부 실시양태에서, HCDR1은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 타우에 결합할 수 있는 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로서, 여기서 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 7, 또는 위치 1, 2, 3, 9, 12, 19, 30, 31, 35, 37, 42, 43, 48, 49, 51, 54, 55, 56, 58, 62, 63, 64, 65, 66, 68, 69, 70, 73, 76, 77, 78, 79, 80, 83, 84, 88, 94, 96, 107, 108, 및 112 중 하나 이상에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하고/거나, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 8, 또는 위치 3, 7, 11, 14, 17, 19, 20, 21, 24, 25, 28, 39, 42, 49, 52, 56, 69, 71, 75, 92, 94, 99, 105, 및 106 중 하나 이상에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 개시된다.
일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 위치 1, 2, 3, 9, 12, 19, 30, 31, 35, 37, 42, 43, 48, 49, 51, 54, 55, 56, 58, 62, 63, 64, 65, 66, 68, 69, 70, 73, 76, 77, 78, 79, 80, 83, 84, 88, 94, 96, 107, 108, 및 112 중 하나 이상에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역 내의 위치 1에서의 치환은 글리신이고, 위치 2에서의 치환은 알라닌이고, 위치 3에서의 치환은 아르기닌이고, 위치 9에서의 치환은 아르기닌이고, 위치 12에서의 치환은 알라닌이고, 위치 19에서의 치환은 아르기닌이고, 위치 30에서의 치환은 글리신이고, 위치 31에서의 치환은 글리신이고, 위치 35에서의 치환은 아르기닌이고, 위치 37에서의 치환은 알라닌이고, 위치 42에서의 치환은 글리신이고, 위치 43에서의 치환은 메티오닌이고, 위치 48에서의 치환은 이소류신이고, 위치 49에서의 치환은 트레오닌이고, 위치 51에서의 치환은 발린이고, 위치 54에서의 치환은 알라닌이고, 위치 55에서의 치환은 글리신이고, 위치 56에서의 치환은 세린이고, 위치 58에서의 치환은 발린이고, 위치 62에서의 치환은 글리신이고, 위치 63에서의 치환은 알라닌이고, 위치 64에서의 치환은 알라닌 및 글루탐산으로부터 선택되고, 위치 65에서의 치환은 글루탐산이고, 위치 66에서의 치환은 아스파르트산이고, 위치 68에서의 치환은 류신이고, 위치 69에서의 치환은 알라닌이고, 위치 70에서의 치환은 트레오닌이고, 위치 73에서의 치환은 아스파라긴이고, 위치 76에서의 치환은 글루탐산이고, 위치 77에서의 치환은 세린이고, 위치 78에서의 치환은 알라닌이고, 위치 79에서의 치환은 메티오닌이고, 위치 80에서의 치환은 세린, 류신, 및 히스티딘으로부터 선택되고, 위치 83에서의 치환은 트레오닌이고, 위치 84에서의 치환은 알라닌이고, 위치 88에서의 치환은 프롤린이고, 위치 94에서의 치환은 시스테인이고, 위치 95에서의 치환은 글리신이고, 위치 107에서의 치환은 알라닌이고, 위치 108에서의 치환은 프롤린이고/거나, 위치 112에서의 치환은 프롤린이다.
일부 실시양태에서, 경쇄 가변 영역은 위치 3, 7, 11, 14, 17, 19, 20, 21, 24, 25, 28, 39, 42, 49, 52, 56, 69, 71, 75, 92, 94, 99, 105, 및 106 중 하나 이상에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함하며, 여기서 경쇄 가변 영역 내의 위치 3에서의 치환은 아르기닌이고, 위치 7에서의 치환은 프롤린이고, 위치 11에서의 치환은 세린 또는 류신으로부터 선택되고, 위치 14에서의 치환은 프롤린이고, 위치 17에서의 치환은 발린이고, 위치 19에서의 치환은 알라닌이고, 위치 20에서의 치환은 알라닌이고, 위치 21에서의 치환은 발린이고, 위치 24에서의 치환은 글루탐산이고, 위치 25에서의 치환은 트레오닌이고, 위치 28에서의 치환은 아스파라긴이고, 위치 39에서의 치환은 이소류신이고, 위치 42에서의 치환은 세린 및 아스파르트산으로부터 선택되고, 위치 49에서의 치환은 프롤린이고, 위치 52에서의 치환은 글리신이고, 위치 56에서의 치환은 프롤린이고, 위치 69에서의 치환은 글리신이고, 위치 71에서의 치환은 히스티딘이고, 위치 75에서의 치환은 발린이고, 위치 92에서의 치환은 아르기닌이고, 위치 94에서의 치환은 트레오닌이고, 위치 99에서의 치환은 세린이고, 위치 105에서의 치환은 글리신이고/거나, 위치 106에서의 치환은 발린이다.
다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 위치 1, 3, 30, 37, 48, 58, 63, 68, 76, 77, 및 80 중 하나 이상에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하고/거나, 경쇄 가변 영역은 위치 7, 11, 20, 28, 39, 및 69 중 하나 이상에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 2에서의 치환은 알라닌이고/거나, 위치 35에서의 치환은 아르기닌이다.
일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 49에서의 치환은 트레오닌이고/거나, 위치 79에서의 치환은 메티오닌이고/거나, 경쇄 가변 영역 내의 위치 19에서의 치환은 알라닌이다.
일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 43에서의 치환은 메티오닌이고, 위치 65에서의 치환은 글루탐산이고/거나, 위치 80에서의 치환은 세린이고/거나, 경쇄 가변 영역 내의 위치 56에서의 치환은 프롤린이고, 위치 94에서의 치환은 트레오닌이다.
일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 12에서의 치환은 알라닌이고,위치 64에서의 치환은 글루탐산이고, 위치 78에서의 치환은 알라닌이고/거나, 경쇄 가변 영역 내의 위치 21에서의 치환은 발린이다.
일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 107에서의 치환은 알라닌이고/거나, 경쇄 가변 영역 내의 위치 42에서의 치환은 아스파르트산이다.
일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 19에서의 치환은 아르기닌이고, 위치 51에서의 치환은 발린이고, 위치 66에서의 치환은 아스파르트산이고, 위치 84에서의 치환은 알라닌이고/거나, 경쇄 가변 영역 내의 위치 99에서의 치환은 세린이다.
일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 31에서의 치환은 글리신이고/거나, 위치 80에서의 치환은 세린이다.
일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 73에서의 치환은 아스파라긴이고/거나, 경쇄 가변 영역 내의 위치 11에서의 치환은 류신이다.
일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 37에서의 치환은 알라닌이고/거나, 경쇄 가변 영역 내의 위치 42에서의 치환은 세린이다.
일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 80에서의 치환은 류신이고/거나, 경쇄 가변 영역 내의 위치 11에서의 치환은 류신이고, 위치 105에서의 치환은 글리신이다.
일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 54에서의 치환은 알라닌이고/거나, 위치 56에서의 치환은 세린이다.
일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 37에서의 치환은 알라닌이고, 위치 68에서의 치환은 류신이고, 위치 83에서의 치환은 트레오닌이고, 위치 99에서의 치환은 시스테인이고, 경쇄 가변 영역 내의 위치 25에서의 치환은 트레오닌이고, 위치 49에서의 치환은 프롤린이고/거나, 위치 52에서의 치환은 글리신이다.
일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 19에서의 치환은 아르기닌이고, 위치 42에서의 치환은 글리신이고/거나, 위치 112에서의 치환은 프롤린이다.
일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 80에서의 치환은 류신이고, 경쇄 가변 영역 내의 위치 3에서의 치환은 아르기닌이고/거나, 위치 17에서의 치환은 발린이다.
일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 19에서의 치환은 아르기닌이고, 위치 37에서의 치환은 알라닌이고, 위치 55에서의 치환은 글리신이고, 위치 70에서의 치환은 트레오닌이고, 경쇄 가변 영역 내의 위치 11에서의 치환은 류신이고/거나, 위치 42에서의 치환은 세린이다.
일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 64에서의 치환은 알라닌이고, 위치 69에서의 치환은 알라닌이고/거나, 경쇄 가변 영역 내의 위치 42에서의 치환은 세린이다.
일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 9에서의 치환은 아르기닌이고/거나, 위치 62에서의 치환은 글리신이고/거나, 경쇄 가변 영역 내의 위치 11에서의 치환은 세린이고/거나, 위치 14에서의 치환은 프롤린이다.
일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 37에서의 치환은 알라닌이고/거나, 경쇄 가변 영역 내의 위치 75에서의 치환은 발린이다.
일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 56에서의 치환은 세린이고, 위치 88에서의 치환은 프롤린이고/거나, 위치 96에서의 치환은 글리신이고/거나, 경쇄 가변 영역 내의 위치 11에서의 치환은 류신이고, 위치 24에서의 치환은 글루탐산이고, 위치 42에서의 치환은 아스파르트산이고, 위치 71에서의 치환은 히스티딘이고, 위치 92에서의 치환은 아르기닌이고/거나, 위치 106에서의 치환은 발린이다.
일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 80에서의 치환은 히스티딘이고/거나, 위치 108에서의 치환은 프롤린이다.
일부 실시양태에서, 타우에 결합할 수 있는 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 위치 1, 3, 30, 37, 48, 58, 63, 68, 76, 77, 및 80 중 하나 이상에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및 위치 7, 11, 20, 28, 39, 및 69 중 하나 이상에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 1에서의 치환은 글리신이고, 위치 3에서의 치환은 아르기닌이고, 위치 30에서의 치환은 글리신이고, 위치 37에서의 치환은 알라닌이고, 위치 48에서의 치환은 이소류신이고, 위치 58에서의 치환은 발린이고, 위치 63에서의 치환은 알라닌이고, 위치 68에서의 치환은 류신이고, 위치 76에서의 치환은 글루탐산이고, 위치 77에서의 치환은 세린이고/거나, 위치 80에서의 치환은 세린이고, 경쇄 가변 영역 내의 위치 7에서의 치환은 프롤린이고, 위치 11에서의 치환은 류신 및 세린으로부터 선택되고, 위치 20에서의 치환은 알라닌이고, 위치 28에서의 치환은 아스파라긴이고, 위치 39에서의 치환은 이소류신이고/거나, 위치 69에서의 치환은 글리신이다.
다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 68에서의 치환은 류신이고/거나, 경쇄 가변 영역 내의 위치 39에서의 치환은 이소류신이다.
다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 48에서의 치환은 이소류신이다.
다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 30에서의 치환은 글리신이고/거나, 위치 58에서의 치환은 발린이고, 경쇄 가변 영역 내의 위치 7에서의 치환은 프롤린이고/거나, 위치 69에서의 치환은 글리신이다.
다양한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역 내의 위치 11에서의 치환은 세린이다.
다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 77에서의 치환은 세린이고/거나, 경쇄 가변 영역 내의 위치 11에서의 치환은 류신이고, 위치 20에서의 치환은 알라닌이고/거나, 위치 28에서의 치환은 아스파라긴이다.
다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 37에서의 치환은 알라닌이고, 위치 63에서의 치환은 알라닌이고/거나, 위치 80에서의 치환은 세린이고/거나, 경쇄 가변 영역 내의 위치 11에서의 치환은 류신이다.
다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 1에서의 치환은 글리신이고, 위치 3에서의 치환은 아르기닌이고, 위치 76에서의 치환은 글루탐산이고/거나, 위치 77에서의 치환은 세린이다.
다양한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역 내의 위치 11에서의 치환은 류신이다.
일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 타우에 결합할 수 있는 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 25의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 28의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 29의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 30의 아미노산 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 타우에 결합할 수 있는 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 1, 또는 위치 5 및 6 중 하나 이상에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 2, 또는 위치 1, 4, 5, 6, 및 8 중 하나 이상에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열식별번호: 4, 또는 위치 2에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5, 또는 위치 3에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 6, 또는 위치 4 및 6 중 하나 이상에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 개시된다. 다양한 실시양태에서, HCDR1 내의 위치 5에서의 치환은 글리신이고, HCDR1 내의 위치 6에서의 치환은 글리신이고, HCDR2 내의 위치 1에서의 치환은 발린이고, HCDR2 내의 위치 4에서의 치환은 알라닌이고, HCDR2 내의 위치 5에서의 치환은 글리신이고, HCDR2 내의 위치 6에서의 치환은 세린이고, HCDR2 내의 위치 8에서의 치환은 발린이고, LCDR1 내의 위치 2에서의 치환은 아스파라긴이고, LCDR2 내의 위치 3에서의 치환은 글리신이고/거나, LCDR3 내의 위치 4에서의 치환은 아르기닌이고/거나, LCDR3 내의 위치 6에서의 치환은 트레오닌이다.
다양한 실시양태에서, 타우에 결합할 수 있는 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로서, 여기서 HCDR1은 위치 5에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 위치 8에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 위치 2에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고/거나, LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 타우에 결합할 수 있는 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로서, 여기서 HCDR1 내의 위치 5에서의 치환은 글리신이고, HCDR2 내의 위치 8에서의 치환은 발린이고/거나, LCDR1 내의 위치 2에서의 치환은 아스파라긴이다.
다양한 실시양태에서, 타우에 결합할 수 있는 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로서, HCDR1은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR1은 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 41의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
HCDR1은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR1은 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
HCDR1은 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR1은 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
HCDR1은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR1은 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
HCDR1은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR1은 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
HCDR1은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR1은 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
HCDR1은 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 37의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR1은 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
HCDR1은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR1은 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
HCDR1은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR1은 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 42의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
HCDR1은 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 37의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR1은 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
HCDR1은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR1은 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 타우에 결합할 수 있는 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 43의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 47의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 48의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 49의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 50의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 51의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 52의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 53의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 54의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 55의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 56의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 57의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 58의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 59의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 60의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 61의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 62의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 63의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 65의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 66의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 67의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 68의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 69의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 70의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 71의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 72의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 73의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 74의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 75의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 76의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 77의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 78의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 79의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 80의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 81의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 82의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 83의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 84의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 85의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 86의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 87의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 88의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 89의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 90의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 91의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 92의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 93의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 94의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 95의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 96의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 97의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 98의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 57의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 58의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 65의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 66의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 77의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 78의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 79의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 80의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 83의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 84의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 85의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 86의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 91의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 92의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 93의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 94의 아미노산 서열을 포함한다.
또한 본원에는 다양한 실시양태에서, 본 단락에 개시된 바와 같은 서열에 의해 규정된 항체 또는 그의 항원 결합 단편과 결합에 대해 경쟁할 수 있는 항체 또는 항원 결합 단편이 개시된다. 또 다른 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 본 단락에 개시된 바와 같은 서열에 의해 규정된 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 것과 동일한, 타우 단백질 2N4R (서열식별번호: 9) 상의 에피토프에 결합할 수 있다.
다양한 실시양태에서, 본원에 개시되는 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 타우 단백질 2N4R의 잔기 188-227 (서열식별번호: 10) 중 하나 이상을 포함하는 타우 상의 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 타우 단백질 2N4R의 잔기 210-221 (서열식별번호: 11) 중 하나 이상을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본원에 개시되는 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 타우 단백질 2N4R의 잔기 188-227 (서열식별번호: 10)을 포함하는 타우 상의 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 타우 단백질 2N4R의 잔기 210-221 (서열식별번호: 11)을 포함한다. 에피토프는 적어도 하나, 또는 하나 초과의 인산화된 잔기를 함유할 수 있으며, 이는 타우 단백질 2N4R (서열식별번호: 9)의 위치 217에서의 포스포-트레오닌을 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 또한 타우 단백질 2N4R의 위치 210에서의 인산화된 세린, 위치 212에서의 트레오닌, 위치 214에서의 세린, 또는 위치 220에서의 트레오닌, 또는 그의 임의의 조합을 포함한다. 특정 실시양태에서, 에피토프는 SRTPSLPpTPPTR (서열식별번호: 12의 서열)을 포함하거나 또는 그로 이루어진다. 특정 실시양태에서, 에피토프는 하나 초과의 인산화된 잔기를 포함하는 영역, 예를 들어, SRpTPSLPpTPPTR (서열식별번호: 31의 서열)을 포함하거나 또는 그로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 통상의 기술자에게 공지된 임의의 방법에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 알라닌 스캐닝 또는 결실/돌연변이 유발 연구를 사용하여 에피토프를 결정한다. 일부 실시양태에서, 질량 분광측정법을 사용하여 에피토프를 결정한다. 특정 실시양태에서, 에피토프는 항체-타우 복합체의 결정 구조에 의해 결정되며, 여기서 에피토프는 항체 결합 포켓의 5 옹스트롬 내에 있는 타우 상의 임의의 접촉 잔기로서 정의된다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 서열식별번호: 7의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 서열식별번호: 8의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 서열식별번호: 29의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 서열식별번호: 30의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 위치 1, 3, 30, 37, 48, 58, 63, 68, 76, 77, 및 80 중 하나 이상에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및/또는 위치 7, 11, 20, 28, 39, 및 69 중 하나 이상에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 68에서의 치환은 류신이고, 경쇄 가변 영역 내의 위치 39에서의 치환은 이소류신이다. 다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 48에서의 치환은 이소류신이다. 다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 30에서의 치환은 글리신이고, 위치 58에서의 치환은 발린이고, 경쇄 가변 영역 내의 위치 7에서의 치환은 프롤린이고, 위치 69에서의 치환은 글리신이다. 다양한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역 내의 위치 11에서의 치환은 세린이다. 다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 77에서의 치환은 세린이고, 경쇄 가변 영역 내의 위치 11에서의 치환은 류신이고, 위치 20에서의 치환은 알라닌이고, 위치 28에서의 치환은 아스파라긴이다. 다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 37에서의 치환은 알라닌이고, 위치 63에서의 치환은 알라닌이고, 위치 80에서의 치환은 세린이고, 경쇄 가변 영역 내의 위치 11에서의 치환은 류신이다. 다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 1에서의 치환은 글리신이고, 위치 3에서의 치환은 아르기닌이고, 위치 76에서의 치환은 글루탐산이고, 위치 77에서의 치환은 세린이다. 다양한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역 내의 위치 11에서의 치환은 류신이다.
다른 측면에서, 본원에는 타우 단백질 2N4R (서열식별번호: 9)에의 결합에 대해 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 경쟁할 수 있는 항체로서, 여기서 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체가 개시된다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 서열식별번호: 29의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 서열식별번호: 30의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 위치 1, 3, 30, 37, 48, 58, 63, 68, 76, 77, 및 80 중 하나 이상에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및/또는 위치 7, 11, 20, 28, 39, 및 69 중 하나 이상에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 68에서의 치환은 류신이고, 경쇄 가변 영역 내의 위치 39에서의 치환은 이소류신이다. 다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 48에서의 치환은 이소류신이다. 다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 30에서의 치환은 글리신이고, 위치 58에서의 치환은 발린이고, 경쇄 가변 영역 내의 위치 7에서의 치환은 프롤린이고, 위치 69에서의 치환은 글리신이다. 다양한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역 내의 위치 11에서의 치환은 세린이다. 다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 77에서의 치환은 세린이고, 경쇄 가변 영역 내의 위치 11에서의 치환은 류신이고, 위치 20에서의 치환은 알라닌이고, 위치 28에서의 치환은 아스파라긴이다. 다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 37에서의 치환은 알라닌이고, 위치 63에서의 치환은 알라닌이고, 위치 80에서의 치환은 세린이고, 경쇄 가변 영역 내의 위치 11에서의 치환은 류신이다. 다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 1에서의 치환은 글리신이고, 위치 3에서의 치환은 아르기닌이고, 위치 76에서의 치환은 글루탐산이고, 위치 77에서의 치환은 세린이다. 다양한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역 내의 위치 11에서의 치환은 류신이다.
다양한 실시양태에서, 경쟁은 유동 세포계수법 또는 형광 현미경검사, ELISA, HTRF 및/또는 SPR에 의해 측정된다. 한 실시양태에서, 경쟁 ELISA는 경쟁적 결합을 측정하기 위해 사용된다. 또 다른 실시양태에서, 비아코어(BIACORE) 검정이 사용된다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체와 경쟁하는 항체 또는 항원 결합 단편은 서열식별번호: 7의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 서열식별번호: 8의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체와 경쟁하는 항체 또는 항원 결합 단편은 서열식별번호: 29의 중쇄 가변 영역 아미노산 서열 및 서열식별번호: 30의 경쇄 가변 영역 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체와 경쟁하는 항체 또는 항원 결합 단편은 위치 1, 3, 30, 37, 48, 58, 63, 68, 76, 77, 및 80 중 하나 이상에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역, 및/또는 위치 7, 11, 20, 28, 39, 및 69 중 하나 이상에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체와 경쟁하는 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 내의 위치 68에서의 치환이 류신이고, 경쇄 가변 영역 내의 위치 39에서의 치환이 이소류신인 것을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 48에서의 치환은 이소류신이다. 다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 30에서의 치환은 글리신이고, 위치 58에서의 치환은 발린이고, 경쇄 가변 영역 내의 위치 7에서의 치환은 프롤린이고, 위치 69에서의 치환은 글리신이다. 다양한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역 내의 위치 11에서의 치환은 세린이다. 다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 77에서의 치환은 세린이고, 경쇄 가변 영역 내의 위치 11에서의 치환은 류신이고, 위치 20에서의 치환은 알라닌이고, 위치 28에서의 치환은 아스파라긴이다. 다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 37에서의 치환은 알라닌이고, 위치 63에서의 치환은 알라닌이고, 위치 80에서의 치환은 세린이고, 경쇄 가변 영역 내의 위치 11에서의 치환은 류신이다. 다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 1에서의 치환은 글리신이고, 위치 3에서의 치환은 아르기닌이고, 위치 76에서의 치환은 글루탐산이고, 위치 77에서의 치환은 세린이다. 다양한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역 내의 위치 11에서의 치환은 류신이다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체와 동일한, 타우 단백질 2N4R (서열식별번호: 9) 상의 하나 이상의 아미노산에 결합할 수 있으며, 여기서 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 본원에 개시된 항체와 경쟁하는 항체 또는 항원 결합 단편은 타우 단백질 2N4R의 잔기 188-227 (서열식별번호: 10) 중 하나 이상을 포함하는 타우 상의 에피토프에 결합할 수 있다. 특정 실시양태에서, 에피토프는 타우 단백질 2N4R의 잔기 210-221 (서열식별번호: 11) 중 하나 이상을 포함한다. 다른 실시양태에서, 에피토프는 적어도 하나의 인산화된 잔기를 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 적어도 하나의 인산화된 잔기는 타우 단백질 2N4R (서열식별번호: 9)의 위치 217에서의 포스포-트레오닌을 포함하고, 임의적으로 또한 타우 단백질 2N4R의 위치 210에서의 인산화된 세린, 위치 212에서의 트레오닌, 위치 214에서의 세린, 또는 위치 220에서의 트레오닌, 또는 그의 임의의 조합을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 에피토프는 SRTPSLPpTPPTR (서열식별번호: 12의 서열)을 포함하거나 또는 그로 이루어진다. 특정 실시양태에서, 에피토프는 SRpTPSLPpTPPTR (서열식별번호: 31의 서열)을 포함하거나 또는 그로 이루어진다.
다양한 실시양태에서, 타우 단백질 2N4R의 잔기 188-227 (서열식별번호: 10)을 포함하거나 또는 그로 이루어지는 타우 단백질 2N4R의 영역 또는 단편에 결합할 수 있는 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로서, 여기서 상기 영역 또는 단편은 인산화된다. 다양한 실시양태에서, 상기 영역 또는 단편은 타우 단백질 2N4R의 잔기 210-221 (서열식별번호: 11)을 포함하거나 또는 그로 이루어진다. 다양한 실시양태에서, 상기 영역 또는 단편은 타우 단백질 2N4R의 잔기 217에 상응하는 위치에서 인산화되고, 임의적으로 또한 타우 단백질 2N4R (서열식별번호: 9)의 세린 210, 트레오닌 212, 세린 214, 및 트레오닌 220에 상응하는 위치 중 하나 이상에서 인산화된다. 다양한 실시양태에서, 타우 단백질 2N4R의 영역 또는 단편은 SRTPSLPpTPPTR (서열식별번호: 12의 서열)을 포함하거나 또는 그로 이루어진다. 특정 실시양태에서, 에피토프는 SRpTPSLPpTPPTR (서열식별번호: 31의 서열)을 포함하거나 또는 그로 이루어진다.
다양한 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편은, 예를 들어, 유동 세포계수법 또는 형광 현미경검사, ELISA, HTRF 및/또는 SPR에 의해 측정된 바와 같이, 타우 상의 인산화된 에피토프에 결합할 수 있다. 한 실시양태에서, ELISA는 인산화된 및 탈인산화된 타우에의 결합에 대해 측정하거나 또는 검사하기 위해 사용된다. 또 다른 실시양태에서, 비아코어 검정이 사용된다.
다양한 실시양태에서, 본원에는 타우 단백질 2N4R의 잔기 151-188 (서열식별번호: 13) 중 하나 이상을 포함하는 타우 상의 에피토프에 결합할 수 있는 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 개시된다. 일부 실시양태에서, 타우 상의 에피토프는 타우 단백질 2N4R의 잔기 163-172 (서열식별번호: 14) 중의 하나 이상을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 본원에는 타우 단백질 2N4R의 잔기 151-188 (서열식별번호: 13)을 포함하는 타우 상의 에피토프에 결합할 수 있는 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 개시된다. 일부 실시양태에서, 타우 상의 에피토프는 타우 단백질 2N4R의 잔기 163-172 (서열식별번호: 14)를 포함한다. 특정 실시양태에서, 에피토프는 KGQANATRIP (서열식별번호: 14의 서열)를 포함하거나 또는 그로 이루어진다. 특정 실시양태에서, 에피토프 상의 잔기 중 하나 이상이 인산화되며, 예를 들어, 타우 단백질 2N4R의 위치 169에서의 인산화된 트레오닌이다.
다양한 실시양태에서, 본원에는 타우 단백질 2N4R의 잔기 151-188 (서열식별번호: 13)을 포함하는 타우의 일부분 또는 단편에 결합할 수 있는 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 개시된다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 타우 단백질 2N4R의 잔기 163-172 (서열식별번호: 14)를 포함하는 타우의 일부분 또는 단편에 결합할 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체의 에피토프는 통상의 기술자에게 공지된 임의의 방법에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 알라닌 스캐닝 또는 결실/돌연변이 유발 연구를 사용하여 에피토프를 결정한다. 일부 실시양태에서, 질량 분광측정법을 사용하여 에피토프를 결정한다. 특정 실시양태에서, 에피토프는 항체-타우 복합체의 결정 구조에 의해 결정되며, 여기서 에피토프는 항체 결합 포켓의 5 옹스트롬 내에 있는 타우 상의 임의의 접촉 잔기로서 정의된다.
다양한 실시양태에서, 타우에 결합할 수 있는 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 개시된다. 특정 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 21의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 타우 단백질 2N4R (서열식별번호: 9) 상의 하나 이상의 아미노산에의 결합에 대해 앞서 기재된 항체 또는 그의 항원 결합 단편과 경쟁할 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 본 단락에서 앞서 개시된 항체 또는 항원 결합 단편에 의해 결합된 타우 단백질 2N4R (서열식별번호: 9) 상의 동일한 에피토프에 결합할 수 있다. 한 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 본 단락에서 앞서 개시된 항체 또는 항원 결합 단편에 의해 결합된 타우 단백질 2N4R (서열식별번호: 9)의 단편 또는 영역에 결합할 수 있다.
다양한 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 항원 결합 단편 중 임의의 것은 중쇄 불변 영역 및 경쇄 불변 영역을 포함할 수 있다. 이러한 중쇄 불변 영역은 IgG, IgM, IgA, IgD, 및 IgE 이소타입일 수 있거나, 또는 무손상 중쇄의 적어도 하나의 이펙터 기능을 보유하는 그의 유도체 또는 단편일 수 있다. 중쇄 불변 영역은 인간 IgG 이소타입일 수 있다. 중쇄 불변 영역은 인간 IgG1 또는 인간 IgG4 이소타입일 수 있다. 중쇄 불변 영역은 인간 IgG1 이소타입일 수 있다. 경쇄 불변 영역은 인간 카파 경쇄 또는 람다 경쇄일 수 있거나, 또는 무손상 경쇄의 적어도 하나의 이펙터 기능을 보유하는 그의 유도체 또는 단편일 수 있다. 경쇄 불변 영역은 인간 카파 경쇄일 수 있다.
다양한 실시양태에서, 개시된 항체 또는 항원 결합 단편 중 임의의 것은 설치류 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 키메라 항체 또는 그의 항원 결합 단편, CDR-그라프팅된 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 또는 인간화 항체 또는 그의 항원 결합 단편일 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 개시된 항체 또는 항원 결합 단편 중 임의의 것은 인간 프레임워크 또는 하나 이상의 복귀 돌연변이를 갖는 인간 프레임워크를 포함한, 인간 또는 인간-유래 중쇄 및 경쇄 가변 영역을 포함한다. 예를 들어, 미국 특허 번호 7,566,771 (그의 개시내용은 본원에 참조로 포함됨)에 개요 서술된 복귀 돌연변이 전략을 참조한다. 다양한 실시양태에서, 개시된 항체 또는 항원 결합 단편 중 임의의 것은 Fab, Fab', F(ab')2, Fd, scFv, (scFv)2, scFv-Fc, 또는 Fv 단편일 수 있다.
다양한 실시양태에서, 항체 DC2E7 또는 그의 기능적 항원 결합 단편이 개시되며, 여기서 DC2E7은 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 특허 기탁 번호 PTA-124992 하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생산된 항체이다. 다양한 실시양태에서, 항체 DC2E2 또는 그의 기능적 항원 결합 단편이 개시되며, 여기서 DC2E2는 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 특허 기탁 번호 PTA-124991 하에 기탁된 하이브리도마에 의해 생산된 항체이다. 또한, 타우 단백질 2N4R (서열식별번호: 9) 상의 동일한 에피토프에 결합할 수 있거나 또는 타우 단백질 2N4R (서열식별번호: 9)에의 결합에 대해 항체 DC2E7 또는 항체 DC2E2와 경쟁할 수 있는 항체 및 항원 결합 단편이 개시된다.
다양한 실시양태에서, 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 단편 중 임의의 것은 제2 작용제에 접합될 수 있다. 제2 작용제는, 예를 들어, 효소, 방사성동위원소, 형광단, 핵 자기 공명 마커, 또는 중금속을 포함하나 이에 제한되지는 않는 적어도 하나의 검출가능한 작용제일 수 있다. 한 실시양태에서, 적어도 하나의 검출가능한 표지는 방사성동위원소이다. 일부 실시양태에서, 검출가능한 표지 (예를 들어, 방사성표지)에 접합된 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 검출가능한 표지 (예를 들어, 방사성표지)에 접합된 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 25의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 28의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 29의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 30의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 검출가능한 표지에 접합된 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 일부 실시양태에서, 검출가능한 표지 (예를 들어, 방사성표지)에 접합된 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 43의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 47의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 48의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 49의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 50의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 51의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 52의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 53의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 54의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 55의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 56의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 57의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 58의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 59의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 60의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 61의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 62의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 63의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 65의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 66의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 67의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 68의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 69의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 70의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 71의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 72의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 73의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 74의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 75의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 76의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 77의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 78의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 79의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 80의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 81의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 82의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 83의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 84의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 85의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 86의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 87의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 88의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 89의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 90의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 91의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 92의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 93의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 94의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 95의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 96의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 97의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 98의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 57의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 58의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 65의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 66의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 77의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 78의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 79의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 80의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 83의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 84의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 85의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 86의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 91의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 92의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 93의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 94의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 검출가능한 표지 (예를 들어, 방사성표지)에 접합된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열에 의해 규정된 본 항체와 동일한 에피토프에 결합하거나 또는 결합에 대해 경쟁할 수 있다.
본 개시내용과 일치하는 적합한 유형의 검출가능한 표지의 예는 효소, 방사성동위원소 및 방사성핵종, 콜로이드성 금속, 형광 화합물, 화학발광 화합물, 비오티닐 기, 2차 리포터 (예를 들어, 류신 지퍼 쌍 서열, 2차 항체에 대한 결합 부위, 금속 결합 도메인, 에피토프 태그)에 의해 인식된 미리 결정된 폴리펩티드 에피토프, 및 화학/전기화학/생체발광 화합물을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 효소는 퍼옥시다제 (예를 들어, 양고추냉이 퍼옥시다제), 루시페라제, 알칼리성 포스파타제, β-갈락토시다제, 글루코스 옥시다제, 글루코스 아밀라제, 탄산 안히드라제, 아세틸콜린에스테라제, 리소자임, 말레이트 데히드로게나제, 또는 글루코스-6 포스페이트 데히드로게나제를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 대안적으로, 표지는 비오틴, 디곡신-게닌 또는 5-브로모-데스옥시우리딘일 수 있다. 로다민, 란탄족 인광체, 플루오레세인 및 그의 유도체, 플루오로크롬, 로다민 및 그의 유도체, 녹색 형광 단백질 (GFP), 적색 형광 단백질 (RFP), 단실, 움벨리페론 등을 포함한 형광 표지가 또한 항체 및 그의 항원 결합 단편과 조합될 수 있다. 이러한 접합체는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 방법에 의해 제조될 수 있다. 이들은 직접적으로; 스페이서 기 또는 연결 기, 예컨대 폴리알데히드, 글루타르알데히드, 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA) 또는 디에틸렌트리아민펜타아세트산 (DPTA)을 통해; 또는 다른 결합제, 예컨대 관련 기술분야에 일상적으로 공지된 것들의 존재 하에 표지와 결합될 수 있다.
다른 검출가능한 표지는 방사성 표지, 예컨대 아이오딘-123, 아이오딘-125, 아이오딘-126, 아이오딘-133, 아이오딘-131, 브로민-77, 테크네튬-99m, 인듐-113m, 갈륨-67, 갈륨-68, 루테늄-95, 루테늄-97, 루테늄-103, 루테늄-106, 수은-203, 스칸듐-47, 텔루륨-121m, 텔루륨-128, 툴륨-165, 툴륨-167, 툴륨-168, 플루오린-18, 이트륨-99, 및 지르코늄-89를 포함할 수 있다. 직접적으로 또는 간접적으로, 예를 들어, 킬레이트제, 예컨대 EDTA 또는 DTPA를 통해, 항체를 방사성동위원소로 표지시키기 위한 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 기존의 방법이 사용될 수 있다.
다양한 실시양태에서, 개시된 항체 또는 항원 결합 단편 중 임의의 것은 제2 작용제에 접합될 수 있으며, 여기서 제2 작용제는 알츠하이머병 또는 또 다른 타우병증에 대한 적어도 하나의 치료제일 수 있다. 일부 실시양태에서, 알츠하이머병에 대한 치료제에 접합된 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 표 1에 제시된 것들로부터 선택된 어느 하나 이상의 (예를 들어, 모든 6개의 CDR 및/또는 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인) 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 43의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 47의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 48의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 49의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 50의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 51의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 52의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 53의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 54의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 55의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 56의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 57의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 58의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 59의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 60의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 61의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 62의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 63의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 65의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 66의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 67의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 68의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 69의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 70의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 71의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 72의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 73의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 74의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 75의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 76의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 77의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 78의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 79의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 80의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 81의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 82의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 83의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 84의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 85의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 86의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 87의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 88의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 89의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 90의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 91의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 92의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 93의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 94의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 95의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 96의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 97의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 98의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 57의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 58의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 65의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 66의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 77의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 78의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 79의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 80의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 83의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 84의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 85의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 86의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 91의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 92의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 93의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 94의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 서열식별번호: 29 및 30을 포함한다. 일부 실시양태에서, 치료제에 접합된 항체 또는 항원 결합 단편은 서열에 의해 규정된 본 항체와 동일한 에피토프에 결합하거나 또는 결합에 대해 경쟁할 수 있다.
일부 실시양태에서, 치료제는 아밀로이드 베타 또는 타우에 대항한 수동 면역요법, 또는 아세틸콜린에스타라제의 억제제일 수 있다. 일부 실시양태에서, 치료제는 하기 중 하나 이상으로부터 선택될 수 있다: CAD106, 간테네루맙, 크레네주맙, IVIG, AADvac1, ACI-35, NIC5-15, CHF-5074, MK-8931, AZD 3293, LY33 14814, 엘렌베세스타트(Elenbecestat), 티데글루십(Tideglusib), 비강내 후물린(Humulin) R, 비강내 글루리신, 도네페질을 수반한 SB742457, 아젤리라곤(Azeliragon), 니발디핀. 문헌 [Godyn et al., Pharmacological Reports, 68:127-138, 2016]을 참조한다. 일부 실시양태에서, 치료제는 하기로부터 선택될 수 있다: 아두카누맙, ALZT-OP1a + ALZT-OP1b, 아리피프라졸, AVP-786, AZD3293 (LY3314814), 브렉스프르프라졸 (OPC-34712), CAD106, CNP520, 엘렌베세스타트, 인슐린 (후물린), 루마테페론, JNJ-54861911, 메틸페니데이트, MK-4305 (수보렉산트(suvorexant)), 나빌론(Nabilone), 닐바디핀(Nilvadipine), 피오글리타존(Pioglitazone), RVT-101 (인테피르딘(intepirdine)), 소듐 올리고-만누라레이트 (GV-971), TRx0237, TTp488 (아젤리라곤), AADvac1, ABBV-8E12, AD-SVF 세포, ANAVEX 2-73, 아토목세틴(Atomoxetine), AVP-786, AZD0530 (사라카티닙(saracatinib)), BAC, BAN2401, 벤포티아민(Benfotiamine), BI409306, 브리오스타틴(Bryostatin) 1, 칸데사르탄(Candesartan), CB-AC-02, 실로스타졸(Cilostazol), CPC-201, CT1812, DAOIB, 드로나비놀(Dronabinol), E2609, 포르모테롤(Formoterol), hUCB-MSC, JNJ-54861991, 레베티라세탐(Levetiracetam), 리라글루티드(Liraglutide), LY3202626, 뉴감(NewGam) 10% IVIG, 닐로티닙(Nilotinib), ORM-12741, 피마반세린(Pimavanserin), 피로멜라틴(Piromelatine), 포시펜(Posiphen), PQ912, 프로부콜(Probucol), 라사길린(Rasagiline), 릴루졸(Riluzole), RVT-101, S47445, 사르그라모스팀(Sargramostim), 심바스타틴(Simvastatin) + L-아르기닌 + 테트라히드로비오프테린 (SLAT), STA-1, SUVN-502, T-817 MA, 테미사르탄(Temisartan), UB-311, 발라시클로비르(Valacyclovir), VX-745, 자나메마(Xanamema). 문헌 [Cummings et al., Alzheimer's disease drug development pipeline: 2017, Alzheimer's & Dementia, 3:367-384, 2017]을 참조한다. 일부 실시양태에서, 항-타우 요법은 소분자 또는 펩티드 백신 요법, 또는 항-타우 항체 요법을 포함한다. 미국 특허 번호 9,518,101을 참조하며; 그 전체 내용이 참조로 포함된다.
추가 실시양태에서, 공식 (A)-(L)-(C)을 갖는 면역접합체가 제공되며, 여기서 (A)는 본원에 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 단편이고; (L)은 임의적 링커이고; (C)는 제2 작용제 (예를 들어, 검출가능한 표지, 또는 AD 또는 또 다른 타우병증을 치료하기 위한 치료제)이고; 링커 (L)은 (A)를 (C)에 연결한다. 일부 실시양태에서, (C)는 치료제, 조영제, 검출가능한 작용제, 또는 진단제이다. 일부 실시양태에서, 이들 접합체는 항체-약물 접합체 (ADC)로서 본원에 지칭된다.
본원에 사용된 바와 같은 임의적 링커 (L)는 존재하거나 부재할 수 있다. 존재하는 경우, (L)은 (A)를 (C)에 연결하기 위해 사용되는 분자이다. 일부 실시양태에서, 링커는 항체와 제2 작용제 둘 다에 대한 공유 결합을 형성할 수 있다. 적합한 링커는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 널리 공지되어 있으며, 직쇄 또는 측쇄 탄소 링커, 헤테로시클릭 탄소 링커 또는 펩티드 링커를 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 항체 및 제2 작용제가 폴리펩티드인 경우, 링커는 그들의 측기를 통해 (예를 들어, 시스테인에 대한 디술피드 연결을 통해) 구성분 아미노산에 연결될 수 있다. 그러나, 또 다른 실시양태에서, 링커는 말단 아미노산의 알파 탄소 아미노 기 및 카르복실 기에 연결될 수 있다.
일부 상황에서, 면역접합체가 그의 표적 부위에 도달했을 때 항체로부터 제2 작용제를 유리시키는 것이 바람직하다. 따라서, 이러한 상황에서 면역접합체는 표적 부위 근처에서 절단가능한 연결을 포함할 수 있다. 항체로부터 제2 작용제를 방출하기 위한 링커의 절단은 효소적 활성에 의해, 또는 면역접합체가 표적 세포 내부 또는 표적 부위 근처에 적용되는 조건에 의해 촉진될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 링커 단위는 절단가능하지 않으며 약물은 방출되지 않거나 또는, 예를 들어, 항체 분해에 의해 방출된다.
항체 또는 그의 항원 결합 단편에 대한 약물 및/또는 링커의 공유 부착을 위해 수많은 상이한 반응이 이용가능하다. 이는 종종, 리신의 아민 기, 글루탐산 및 아스파르트산의 유리 카르복실산 기, 시스테인의 술프히드릴 기 및 방향족 아미노산의 다양한 모이어티를 포함한, 항체 분자의 아미노산 잔기의 반응에 의해 달성된다. 공유 부착의 가장 흔히 사용되는 비-특이적 방법 중 하나는 화합물의 카르복시 (또는 아미노) 기를 항체의 아미노 (또는 카르복시) 기에 연결하는 카르보디이미드 반응이다. 추가적으로, 화합물의 아미노 기를 항체 분자의 아미노 기에 연결하기 위해 이작용성 작용제, 예컨대 디알데히드 또는 이미도에스테르가 사용되어 왔다. 항체에 대한 약물의 부착에 또한 이용가능한 것은 쉬프(Schiff) 염기 반응이다. 이러한 방법은 글리콜 또는 히드록실 기를 함유하는 약물의 퍼아이오데이트 산화를 수반하므로, 알데히드를 형성한 다음 결합제와 반응한다. 부착은 결합제의 아미노 기와 함께 쉬프 염기의 형성을 통해 발생한다. 이소티오시아네이트는 또한 약물을 결합제에 공유적으로 부착시키기 위한 커플링 작용제로서 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 링커는 세포내 환경에 (예를 들어, 리소솜 또는 엔도솜 또는 카베올레아 내에) 존재하는 절단제에 의해 절단될 수 있다. 링커는, 예를 들어, 리소솜 또는 엔도솜 프로테아제를 포함하나 이에 제한되지는 않는 세포내 펩티다제 또는 프로테아제 효소에 의해 절단되는 펩티딜 링커일 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Dubowchik and Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123]을 참조한다. 이러한 링커의 다른 예는, 예를 들어, 미국 특허 번호 6,214,345에 기재되어 있다. 다른 실시양태에서, 절단가능한 링커는 pH 감수성, 즉 특정 pH 값에서 가수분해에 대해 감수성이다. 전형적으로, pH 감수성 링커는 산성 조건 하에 가수분해가능하다. 예를 들어, 리소솜에서 가수분해가능한 산 불안정 링커 (예를 들어, 히드로존, 세미카르바존, 티오세미카르바존, 시스-아코니트산 아미드, 오르토에스테르, 아세탈, 케탈 등)가 사용될 수 있다. 예를 들어, 미국 특허 번호 5,122,368; 5,824,805; 5,622,929; 문헌 [Dubowchik and Walker, 1999, Pharm. Therapeutics 83:67-123; Neville et al., 1989, Biol. Chem. 264:14653-14661]을 참조한다. 또 다른 실시양태에서, 링커는 환원 조건 하에서 절단가능하다 (예를 들어, 디술피드 링커). 예를 들어, SATA (N-숙신이미딜-S-아세틸티오아세테이트), SPDP (N 숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트), SPDB (N-숙신이미딜-3-(2-피리딜디티오)부티레이트) 및 SMPT (N-숙신이미딜-옥시카르보닐-알파-메틸-알파(2 피리딜-디티오)톨루엔)-, SPDB 및 SMPT를 사용하여 형성될 수 있는 것들을 포함한, 다양한 디술피드 링커가 관련 기술분야에 공지되어 있다. (예를 들어, 문헌 [Thorpe et al., 1987, Cancer Res. 47:5924-5931; Wawrzynczak et al., In lmmunoconjugates: Antibody Conjugates in Radiolmagery and Therapy of Cancer (C. W. Vogel ed., Oxford U. Press, 1987)]을 참조한다. 또한, 미국 특허 번호 4,880,935를 참조한다). 또 다른 실시양태에서, 링커는 말로네이트 링커 (Johnson et al., 1995, Anticancer Res. 15:1387-93), 말레이미도벤조일 링커 (Lau et al., 1995, Bioorg-Med-Chem. 3(10): 1299-1304), 또는 3'-N-아미드 유사체 (Laur et al., 1995, Bioorg-Med-Chem. 3(10): 1305-12)이다.
또 다른 실시양태에서, 링커 단위는 절단가능하지 않으며 약물은 항체 분해에 의해 방출된다 (미국 공개 번호 2005/0238649 참조). 한 실시양태에서, 링커는 세포외 환경에 실질적으로 감수성이지 않다. 링커와 관련하여 본원에 사용된 바와 같은 "세포외 환경에 실질적으로 감수성이지 않다는 것"은 항체-약물 접합체 화합물이 세포외 환경 (예를 들어, 혈장)에 존재할 때, 이러한 항체-약물 접합체 화합물의 샘플 중의 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5%, 약 3% 이하, 또는 1% 이하의 링커가 절단된다는 것을 의미한다. 링커가 세포외 환경에 실질적으로 감수성이지 않은지의 여부는, 예를 들어, 미리 결정된 기간 (예를 들어, 2, 4, 8, 16 또는 24시간) 동안 항체-약물 접합체 화합물을 혈장과 함께 인큐베이션하고 혈장에 존재하는 유리 약물의 양을 정량화함으로써 결정될 수 있다.
일부 실시양태에서, (L)은 또한 스페이서 기 또는 연결 기, 예컨대 폴리알데히드, 글루타르알데히드, 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA) 또는 디에틸렌트리아민펜타아세트산 (DPTA)을 포함할 수 있다.
일부 실시양태에서, 하나 초과의 제2 작용제가 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편에 직접적으로 또는 링커에 의해 부착될 수 있다. 특정 실시양태에서, 제2 작용제 대 항체의 비는 평균 약 1:1 내지 약 1:8의 범위일 수 있다. 미국 특허 번호 7,498,298을 참조한다. ADC의 로딩 (약물/항체 비)은 상이한 방식으로 제어될 수 있다. W02006/034488을 참조한다.
핵산, 벡터, 숙주 세포
또한 본원에 기재된 항체 또는 항원 결합 단편 중 임의의 것의 이뮤노글로불린 쇄의 적어도 하나의 가변 영역을 코딩하는 단리된 핵산(들)이 개시된다. 특정 실시양태에서, 단리된 핵산(들)은 이전에 기재된 항체 또는 항원 결합 단편 중 어느 하나의 항체 또는 항원 결합 단편을 코딩한다. 다른 실시양태는 상기 핵산을 포함하는 단리된 벡터를 제공한다. 또 다른 실시양태는 상기 핵산 또는 벡터 중 임의의 것을 포함하는 단리된 숙주 세포를 포함한다.
본원에 기재된 항체 또는 항원 결합 단편을 코딩하는 폴리뉴클레오티드 또는 핵산은, 예를 들어, DNA, cDNA, RNA 또는 합성적으로 생산된 DNA 또는 RNA, 또는 이들 폴리뉴클레오티드 중 임의의 것을 단독으로 또는 조합하여 포함하는 재조합적으로 생산된 키메라 핵산 분자일 수 있다. 일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드는 벡터의 일부이다. 이러한 벡터는 추가 유전자, 예컨대 마커 유전자 및/또는 제어 요소를 포함할 수 있으며, 이는 적합한 숙주 세포에서 및 적합한 조건 하에서 벡터의 선택 및/또는 발현을 허용한다.
일부 실시양태에서, 폴리뉴클레오티드는 하나 이상의 발현 제어 서열에 작동가능하게 연결되어, 원핵 또는 진핵 세포에서의 발현을 허용한다. 폴리뉴클레오티드의 발현은 폴리뉴클레오티드를 번역가능한 mRNA로 전사하는 것을 포함할 수 있다. 진핵 세포, 예를 들어 포유동물 세포에서의 발현을 보장하는 조절 요소는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지되어 있다. 이들은 통상적으로, 전사의 개시를 보장하는 조절 서열 및 임의적으로 전사의 종결 및 전사체의 안정화를 보장하는 폴리-A 시그널을 포함한다. 추가적인 조절 요소는 전사 뿐만 아니라 번역 인핸서, 및/또는 자연적으로 연합된 또는 이종 프로모터 영역을 포함할 수 있다.
이와 관련하여, 관련 기술분야의 통상의 기술자는 경쇄 및/또는 중쇄의 적어도 CDR 및/또는 가변 도메인을 코딩하는 폴리뉴클레오티드가 이뮤노글로불린 쇄 둘 다의 가변 도메인 또는 단지 하나의 가변 도메인을 코딩할 수 있다는 것을 인지할 것이다. 마찬가지로, 폴리뉴클레오티드는 동일한 프로모터의 제어 하에 있을 수 있거나 또는 발현을 위해 별도로 제어될 수 있다. 원핵 숙주 세포에서의 발현을 허용하는 가능한 조절 요소는, 예를 들어, 이. 콜라이(E. coli)에서의 PL, lac, trp 또는 tac 프로모터를 포함하고, 진핵 숙주 세포에서의 발현을 허용하는 조절 요소의 예는 효모에서의 GAL1 프로모터의 AOXI, 또는 포유동물 및 다른 동물 세포에서의 CMV-, SV40-, RSV-프로모터, CMV-인핸서, SV40-인핸서 또는 글로빈 인트론이다.
전사의 개시를 담당하는 요소 외에도, 이러한 조절 요소는 또한 폴리뉴클레오티드의 하류에 있는 전사 종결 시그널, 예컨대 SV40-폴리-A 부위 또는 tk-폴리-A 부위를 포함할 수 있다. 더욱이, 사용된 발현 시스템에 따라, 폴리펩티드를 세포 구획으로 유도할 수 있거나 또는 이를 배지 내로 분비할 수 있는 리더 서열이 폴리뉴클레오티드의 코딩 서열에 부가될 수 있으며, 이는 관련 기술분야에 공지되어 있다. 사용되는 경우, 리더 서열(들)은 번역, 개시 및 종결 서열, 및 임의적으로 번역된 단백질 또는 그의 일부분을 주변 세포질 공간 또는 세포외 배지로 분비하는 것을 지시할 수 있는 리더 서열과 함께 적절한 단계에서 어셈블리될 수 있다. 일부 실시양태에서, 이종 서열은 원하는 특징, 예를 들어, 발현된 재조합 산물의 안정화 또는 단순화된 정제를 부여하는 C- 또는 N-말단 확인 펩티드를 포함하여 융합 단백질을 코딩할 수 있다. 이러한 맥락에서, 적합한 발현 벡터는 관련 기술분야에 공지되어 있으며, 오카야마-베르그(Okayama-Berg) cDNA 발현 벡터 pcDV1 (파마시아(Pharmacia)), pCDM8, pRc/CMV, PcDNA1, PcDNA3 (인비트로젠(Invitrogen)), 및 pSPORT1 (GIBCO BRL)을 포함하나 제한되지 않는다.
일부 실시양태에서, 발현 제어 서열은 진핵 숙주 세포를 형질전환 또는 형질감염시킬 수 있는 벡터 내의 진핵 프로모터 시스템일 수 있지만, 원핵 숙주에 대한 제어 서열이 또한 사용될 수 있다. 일단 벡터가 적절한 숙주 내로 통합되면, 이러한 숙주는 뉴클레오티드 서열의 고 수준 발현에 적합한 조건 하에서 유지되며, 원하는 경우에 이뮤노글로불린 경쇄, 중쇄, 경쇄/중쇄 이량체 또는 무손상 항체, 결합 단편 또는 다른 이뮤노글로불린 형태의 수집 및 정제가 뒤따를 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Beychok, Cells of Immunoglobulin Synthesis, Academic Press, N.Y., (1979)]을 참조한다.
다양한 실시양태에서, 본 개시내용의 항체의 이뮤노글로불린 쇄의 가변 도메인을 코딩하는 폴리뉴클레오티드를 임의적으로 본 개시내용의 항체의 다른 이뮤노글로불린 쇄의 가변 도메인을 코딩하는 또 다른 폴리뉴클레오티드와 조합하여 포함하는 벡터, 특히 플라스미드, 코스미드, 바이러스 및 박테리오파지가 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 벡터는 발현 벡터 및/또는 유전자 전달 또는 표적화 벡터이다. 바이러스, 예컨대 레트로바이러스, 백시니아 바이러스, 아데노-연관 바이러스, 헤르페스 바이러스 또는 소 유두종 바이러스로부터 유래된 발현 벡터는 본 개시내용의 폴리뉴클레오티드 또는 벡터를 표적화된 세포 집단 내로 전달하기 위해 사용될 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 임의의 방법을 사용하여 재조합 바이러스 벡터를 구축할 수 있다. 대안적으로, 본 발명에 의해 제공되는 폴리뉴클레오티드 및 벡터는 표적 세포로 전달하기 위해 리포솜으로 재구성될 수 있다. 본 개시내용의 폴리뉴클레오티드 (예를 들어, 이뮤노글로불린 쇄 코딩 서열의 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인(들))를 함유하는 벡터(들)는 세포성 숙주의 유형에 따라 달라지는 공지된 방법에 의해 숙주 세포로 전달될 수 있다. 예를 들어, 염화칼슘 형질감염은 원핵 세포에 통상적으로 사용되는 반면, 인산칼슘 처리 또는 전기천공은 다른 세포성 숙주에 사용될 수 있다.
일부 실시양태에서, 숙주 세포는 본원에 기재된 폴리뉴클레오티드 또는 벡터로 형질전환된다. 숙주 세포는 원핵 또는 진핵 세포일 수 있다. 숙주 세포에 존재하는 폴리뉴클레오티드 또는 벡터는 숙주 세포의 게놈 내로 통합될 수 있거나 또는 염색체외로 유지될 수 있다. 숙주 세포는 임의의 원핵 또는 진핵 세포, 예컨대 박테리아, 곤충, 진균, 식물, 동물 또는 인간 세포일 수 있다. 바람직한 진균 세포는, 예를 들어, 사카로미세스(Saccharomyces) 속, 예컨대 에스. 세레비지아에(S. cerevisiae)의 세포이다. 재조합 생산 절차에 이용되는 숙주에 따라, 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩된 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 글리코실화될 수 있다. 본 개시내용과 일치하는 특정 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 또한 초기 메티오닌 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 본원에 개시된 폴리뉴클레오티드는 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 통상적으로 공지된 기술 중 임의의 것을 사용하여 숙주를 형질전환 또는 형질감염시키는데 사용될 수 있다. 더욱이, 융합되고 작동가능하게 연결된 유전자를 제조하고, 이를, 예를 들어, 포유동물 세포 및 박테리아에서 발현하는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있다. 일반적으로, 삽입된 폴리뉴클레오티드의 효율적인 전사를 용이하게 하는 프로모터 서열을 함유하는 발현 벡터가 숙주와 연계해서 사용된다. 발현 벡터는 전형적으로, 복제 기점, 프로모터 및 종결 인자 뿐만 아니라 형질전환된 세포의 표현형 선별을 제공할 수 있는 특이적 유전자를 함유한다. DNA 서열에 적합한 원천 세포와 이뮤노글로불린 발현 및 분비를 위한 숙주 세포는 수많은 공급원, 예컨대 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션으로부터 수득될 수 있다 (문헌 ["Catalogue of Cell Lines and Hybridomas," Fifth edition (1985) Manassas, Va., U.S.A.] 및 본원에 참조로 포함된 다른 이용가능한 버전). 더욱이, 본 발명의 세포를 포함하는 트랜스제닉 동물, 예를 들어 포유동물은 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편의 대규모 생산에 사용될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 항체 DC2E7을 생산하는 하이브리도마가 개시된다. 이러한 하이브리도마는 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션에 특허 기탁 번호 PTA-124992로 기탁되었다.
또 다른 실시양태에서, 항체 DC2E2를 생산하는 하이브리도마가 개시된다. 이러한 하이브리도마는 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션에 특허 기탁 번호 PTA-124991로 기탁되었다.
조성물, 제형 및 조합물
일부 예시적인 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 AD 또는 또 다른 타우병증의 검출, 예방 및/또는 치료에 또한 유용한 하나 이상의 추가적인 화합물과 함께 공동-제형화될 수 있고/거나 공동-투여될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 인간 대상체로부터의 생물학적 샘플 (예를 들어, CSF 또는 혈액) 중의 인산화된 타우를 검출하기 위한 검정에 사용하기 위해 제형화된다. 특정 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 검출가능한 표지, 예를 들어, 효소, 방사성동위원소, 형광단, 핵 자기 공명 마커, 또는 중금속에 접합된다. 일부 실시양태에서, 본원에 기재된 2종 이상 (예를 들어, 3, 4, 5종 등)의 항체 또는 항원 결합 단편이 검정에 사용하기에 적합하게 제형화된다. 특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 단독으로 또는 적합한 검출가능한 표지에 접합하여, 항체 클론 DC2E7 또는 DC2E2 및/또는 이들 클론으로부터의 CDR 또는 가변 도메인을 포함하는 항체 또는 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제형은 진단 검정, 예컨대 하기 기재된 고전적 및 디지털 ELISA 검정에 사용하기에 적합한 추가적인 요소 및 시약 (예를 들어, 고체 지지체 또는 입자, 예컨대 자기 비드)을 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 및 항원 결합 단편은 생물학적 샘플 중의 인산화된 타우를 검출하는 방법에 사용하기 위해 제조된다. 예를 들어, 항체는 하기 실시예 3에서 논의된 바와 같이 제조 및 제형화될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편, 예를 들어, DC2E7, DC149, DC807, 및/또는 DC2E2 또는 그의 항원 결합 단편 또는 변이체는, 예를 들어, 단백질 G 친화성 칼럼을 사용하여 무혈청 하이브리도마 상청액으로부터 정제될 수 있다. 이어서, 이와 같이 정제된 상청액은, 예를 들어, 0.1 M 글리신-HCl, pH 2.7로 용출되고, 1 M 트리스-HCl pH 9.0으로 중화될 수 있다. 풀링된 분획은 완충 용액, 예컨대 포스페이트 완충 염수 (PBS)에서 투석될 수 있다. 일부 실시양태에서, 완충된 항체 용액은, 예를 들어, 한외여과에 의해 농축될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 농도는 공식 c (mg/ml) = A280 nm/1.43을 사용하여 280 nm에서의 흡광도를 측정함으로써 결정된다.
DC2E7 또는 항원 결합 단편은, 디지털 ELISA에서 포획 항체로서 사용되는 경우, 적합한 완충 용액에서 준비될 수 있다. 일부 실시양태에서, DC2E7 또는 항원 결합 단편은 고체 지지체 (예를 들어, 고체 표면 또는 ELISA 포획 비드) 상에 고정화된다. 일부 실시양태에서, DC2E7 또는 항원 결합 단편은, 예를 들어, 하기 실시예 10에 따라 기재된 바와 같이 고체 표면에 연결된다. 간단히 말해서, DC2E7은 비드, 예를 들어, 자기 비드 (퀀테릭스(Quanterix))에 커플링될 수 있다. 일부 실시양태에서, DC2E7은 약 0.1-5.0 mg/mL (예를 들어, 약 1.0 mg/mL)의 농도로 비드에 커플링된다. 일부 실시양태에서, DC2E2 또는 항원 결합 단편은 검출기 항체로서 사용되며 검출가능한 표지에 접합될 수 있다. 예를 들어, 항체 또는 항원 결합 단편은 검출 목적을 위해, 예를 들어, 항체 농도에 비해 1-200배 (예를 들어, 약 120배) 과량의 비오틴에 노출시킴으로써 비오티닐화될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 검출가능한 표지와 함께 공동-제형화될 수 있고/거나 공동-투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 검출가능한 표지는 효소, 방사성동위원소, 형광단, 핵 자기 공명 마커, 또는 중금속이다. 일부 실시양태에서, 검출가능한 표지는 항체 또는 항원 결합 단편과 연합 (예를 들어, 공유 또는 비-공유)되어 있다. 항체 투여를 위한 적합한 첨가제 및 제형화 조건, 예를 들어, 비경구 투여 (예를 들어, 정맥내, 피하, 복강내, 근육내), 또는 정맥내, 근육내 또는 피하 주사를 위한 항체를 제형화하기 위해 관련 기술분야에 공지된 것들을 사용할 수 있다.
일부 실시양태에서, 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 AD 또는 또 다른 타우병증의 예방 및/또는 치료에 또한 유용한 추가적인 화합물과 조합하여 제형화된다. 이들은 AD에 대한 능동 및 수동 면역요법에 유용한 화합물, 예컨대 베타-아밀로이드 펩티드 (예를 들어, N-말단 아밀로이드 베타 펩티드), 및 다른 화합물, 예컨대 돌연변이된 디프테리아 독소, KLH 또는 다른 운반체에 접합되거나 접합되지 않을 수 있는 타우 펩티드를 포함하나, 제한되지 않는다. 다른 옵션은 베타-아밀로이드에 대항한 항체, 예컨대 바피네우주맙(bapineuzumab), 솔라네우주맙(solaneuzumab), 간테네루맙, 크레네주맙, 포네주맙(ponezumab), 및 IVIG 이뮤노글로불린, A 베타 올리고머를 표적화하는 다른 면역화 요법, 다른 타우 항체, 타우의 과인산화를 방지하는 화합물, 및 타우 응집체를 표적화하는 다른 능동 및 수동 면역화 요법을 포함한다.
본원에 기재된 항체 및 타우-결합 단편과의 조합 요법에 도움이 될 수 있는 다른 약물은 아밀로이드-베타 응집 억제제 (예를 들어, 트라미프로세이트), 감마-세크레타제 억제제 (예를 들어, 세마가세스타트) 및 감마-세크레타제 조정제 (타렌플루르빌)를 포함한다. 더욱이, 본원에 개시된 신규 항체 중 하나 이상은 전술한 치료제 중 둘 이상과 조합하여 사용되거나 또는 제형화될 수 있다. 질환의 초기에는, 조합 요법이 유리할 수 있다. 조합 요법, 예컨대 hAb와 성장 인자 및 뉴런 가소성 및 재생을 유도하는 다른 생물학적 활성 분자의 조합이 또한 질환의 후기에 유리하다. 이러한 조합 요법은 투여되는 치료제의 더 낮은 투여량을 유리하게 활용하므로, 다양한 단독 요법과 연관된 가능한 독성 또는 합병증을 피할 수 있다. 관련된 실시양태에 따르면, 본원에 기재된 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 아세틸콜린에스테라제 억제제 (예를 들어, 도네페질, 리바스티그민, 갈란타민, 타크린, 영양 보충제), N-메틸-D-아스파르테이트 (NMDA) 수용체 길항제 (예를 들어, 메만틴), DNA 복구의 억제제 (예를 들어, 피렌제핀 또는 그의 대사산물), 전이 금속 킬레이터, 성장 인자, 호르몬, 비-스테로이드성 항-염증 약물 (NSAID), 항산화제, 지질 강하제, 선택적 포스포디에스테라제 억제제, 타우 응집의 억제제, 단백질 키나제의 억제제, 항-미토콘드리아 기능 장애 약물의 억제제, 뉴로트로핀, 열 충격 단백질의 억제제, 지단백질-연관 포스포리파제 A2의 억제제, 및 그의 임의의 제약상 허용되는 염으로부터 선택된 적어도 하나의 조합 작용제와 조합하여 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 개시된 항체 및/또는 그의 타우-결합 단편은 콜린에스테라제 억제제 (ChEI) 및/또는 메만틴과 조합된다. 한 실시양태에서, 조합 작용제는 항-아폽토시스 화합물, 금속 킬레이터, DNA 복구의 억제제, 3-아미노-1-프로판술폰산 (3APS), 1,3-프로판디술포네이트 (1,3PDS), 세크레타제 활성화제, 베타-세크레타제 억제제, 감마-세크레타제 억제제, 베타-아밀로이드 펩티드, 베타-아밀로이드 항체, 신경 전달 물질, 베타-시트 차단제, 항-염증 분자 및 콜린에스테라제 억제제로 이루어진 군으로부터 선택된다. 한 실시양태에서, 콜린에스테라제 억제제는 리바스티그민, 도네페질, 갈란타민 또는 영양 보충제이다. 또 다른 실시양태에서, 추가적인 작용제는 BACE 억제제; 무스카린 길항제; 콜린에스테라제 억제제; 감마 세크레타제 억제제; 감마 세크레타제 조정제; HMG-CoA 환원효소 억제제; 비-스테로이드성 항염증제; N-메틸-D-아스파르테이트 수용체 길항제; 항-아밀로이드 항체; 비타민 E; 니코틴성 아세틸콜린 수용체 효능제; CB1 수용체 역 효능제 또는 CB1 수용체 길항제; 항생제; 성장 호르몬 분비 촉진제; 히스타민 H3 길항제; AMPA 효능제; PDE4 억제제; GABAA 역 효능제; 아밀로이드 응집의 억제제; 글리코겐 신타제 키나제 베타 억제제; 알파 세크레타제 활성의 촉진제; PDE-10 억제제 및 콜레스테롤 흡수 억제제로부터 선택된다.
본원에 기재된 항체 및 항원 결합 단편과 조합하여 사용될 수 있는 다른 화합물은 미국 특허 9,518,101 (이는 그 전체 내용이 본원에 참조로 포함됨)에 기재된 치료용 항체 및 펩티드를 포함한다. 또한 치료 약물 표적 (페이지 36-39), 알칸술폰산 및 알칸올 황산 (페이지 39-51), 콜린에스테라제 억제제 (페이지 51-56), NMDA 수용체 길항제 (페이지 56-58), 에스트로겐 (페이지 58-59), 비-스테로이드성 항염증 약물 (페이지 60-61), 항산화제 (페이지 61-62), 퍼옥시솜 증식인자-활성화된 수용체 (PPAR) 효능제 (페이지 63-67), 콜레스테롤 저하제 (페이지 68-75); 아밀로이드 억제제 (페이지 75-77), 아밀로이드 형성 억제제 (페이지 77-78), 금속 킬레이터 (페이지 78-79), 항정신병제 및 항우울제 (페이지 80-82), 영양 보충제 (페이지 83-89), 및 뇌에서 생물학상 활성 물질 (페이지 89-93 참조) 및 전구 약물 (페이지 93 및 94)의 가용성을 증가시키는 화합물을 포함한, WO 2004/058258 (이는 그 전체 내용이 본원에 참조로 포함됨) 기재된 화합물 (특히 페이지 16 및 17 참조)이 유용하다. 조합하여 사용될 수 있는 다른 화합물은 문헌 [Cummings et al., Alzheimer's disease drug development pipeline: 2017, Alzheimer's & Dementia: Translational Research & Clinical Interventions 3 (2017) 367-384]에 기재된 것들을 포함한다.
또한 본원에는 본원에 기재된 바와 같은 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 및 또 다른 성분, 예컨대 담체를 포함하는 조성물이 제공된다. 또한 본원에 기재된 바와 같은 인간화 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 및 담체, 예를 들어, 진단 또는 치료 용도에 적합한 담체를 포함하는 조성물/제형이 제공된다.
한 실시양태에서, 본 개시내용에 따라 사용되는 항체의 제형 및 조성물은 원하는 순도를 갖는 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 임의적 담체, 예를 들어, 제약상 허용되는 담체, 희석제, 부형제 또는 안정화제 (Remington's Pharmaceutical Sciences 21st edition, Mohr, M. Ed. (2006))와 혼합하여 동결건조된 제형 또는 수성 용액의 형태로, 저장 및/또는 투여를 위해 준비된다. 한 실시양태에서, 허용되는 담체, 부형제 또는 안정화제는 이용된 투여량 및 농도에서 수용자에게 무독성이고, 완충제, 예컨대 포스페이트, 시트레이트, 및 다른 유기 산; 아스코르브산 및 메티오닌을 포함한 항산화제; 보존제 (예컨대, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드, 벤즈에토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알콜; 알킬 파라벤, 예컨대 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레소르시놀; 시클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레솔); 저분자량 (약 10개 미만의 잔기) 폴리펩티드; 단백질, 예컨대 혈청 알부민, 젤라틴 또는 이뮤노글로불린; 친수성 중합체, 예컨대 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예컨대 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신; 모노사카라이드, 디사카라이드 및 다른 탄수화물 (글루코스, 만노스, 또는 덱스트란 포함); 킬레이트제, 예컨대 EDTA; 당, 예컨대 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염-형성 반대-이온, 예컨대 나트륨; 금속 착물 (예를 들어, Zn-단백질 착물); 및/또는 비이온성 계면활성제, 예컨대 TWEEN, PLURONICS 또는 폴리에틸렌 글리콜 (PEG)을 포함한다. 동결건조된 항체 제형의 예가 WO 97/04801 (본원에 명백히 참조로 포함됨)에 기재되어 있다.
한 실시양태에서, 항체 및 그의 항원 결합 단편은 대상체에게 투여하기에 적합한 제약 조성물 내로 혼입될 수 있다. 특정 실시양태에서, 제약 조성물은 본원에 개시된 바와 같은 항체 또는 그의 항원 결합 단편 및 제약상 허용되는 담체를 포함한다. 한 실시양태에서, "제약상 허용되는 담체"는 생리학적으로 상용성인 임의의 및 모든 용매, 분산 매질, 코팅, 항박테리아제 및 항진균제, 등장제 및 흡수 지연제 등을 포함한다. 제약상 허용되는 담체의 추가적인 예는 물, 염수, 포스페이트 완충 염수, 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올 등 뿐만 아니라 그의 조합 중 하나 이상을 포함한다. 많은 경우에, 조성물은 등장제, 예를 들어, 당, 폴리알콜, 예컨대 만니톨, 소르비톨 또는 염화나트륨을 포함할 것이다. 제약상 허용되는 담체는 항체 또는 그의 항원 결합 단편의 저장 수명 또는 유효성을 증강시키는 보조 물질, 예컨대 습윤제 또는 유화제, 보존제 또는 완충제를 소량으로 추가로 포함할 수 있다.
개시된 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하는 본원에 기재된 조성물은 다양한 형태일 수 있다. 이들은, 예를 들어, 액체, 반액체, 반고체 및 고체 투여 형태, 예컨대 액체 용액 (예를 들어, 주사가능한 및 주입가능한 용액), 분산액 또는 현탁액, 정제, 환제, 분말, 리포솜 및 좌제를 포함한다. 일부 실시양태에서, 이러한 조성물은 또한 완충제 (예를 들어, 중성 완충 염수 또는 포스페이트 완충 염수), 탄수화물 (예를 들어, 글루코스, 만노스, 수크로스 또는 덱스트란), 만니톨, 단백질, 폴리펩티드 또는 아미노산, 예컨대 글리신, 항산화제, 킬레이트제, 예컨대 EDTA 또는 글루타티온, 아주반트 (예를 들어, 수산화알루미늄) 및/또는 보존제를 포함할 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 조성물은 동결건조물로서 제형화될 수 있다. 항체 및 그의 항원 결합 단편은 또한 리포솜 내에 캡슐화될 수 있다.
진단 검정에 사용하거나 또는 내부 투여하기에 적합한 투여 형태는 일반적으로, 유닛 또는 용기당 약 0.1 밀리그램 내지 약 500 밀리그램의 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 함유한다. 이들 조성물에서, 활성 성분은 통상적으로, 조성물의 총 중량을 기준으로 하여 약 0.5-99.999 중량%의 양으로 존재할 것이다. 바람직한 투여 형태는 의도된 용도 및/또는 투여 방식에 의존한다.
특정 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편은 혈액-뇌 장벽을 횡단할 수 있거나 또는 혈액-뇌 장벽을 횡단하도록 제형화된다. AD 및 관련 타우병증을 포함한 특정 신경변성 질환은 혈액-뇌 장벽의 투과성에 있어서의 증가와 연관되어, 항체 또는 그의 항원 결합 단편이 뇌로 쉽게 도입될 수 있다. 혈액-뇌 장벽이 무손상 상태로 유지되는 경우, 물리적 방법, 지질-기반 방법, 및 수용체 및 채널-기반 방법을 포함하나 이에 제한되지는 않는, 상기 장벽을 가로질러 분자를 수송하기 위한 몇 가지 관련 기술분야에 공지된 접근법이 존재한다. 혈액-뇌 장벽을 우회하는 방법은 뇌에 직접 주입하는 방법 (예를 들어, 문헌 [Papanastassiou et al., Gene Therapy 9: 398-406 (2002)] 참조) 및 전달 장치를 뇌에 이식하는 방법 (예를 들어, 문헌 [Gill et al., Nature Med. 9: 589-595 (2003): 및 Gliadel Wafers, T.M., Guildford Pharmaceutical] 참조)을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 상기 장벽을 우회하는 방법은 초음파 (예를 들어, 미국 특허 공개 번호 2002/0038086 참조); 삼투압 (예를 들어, 고장성 만니톨의 투여에 의함 (Neuwelt, E. A., Implication of the Blood-Brain Barrier and its Manipulation, Vols 1 & 2, Plenum Press, N.Y. (1989))); 예를 들어, 브래디키닌 또는 투과제 A-7에 의한 투과 (예를 들어, 미국 특허 번호 5,112,596, 5,268,164, 5,506,206, 및 5,686,416 참조), 및 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 코딩하는 유전자를 함유하는 벡터로 혈액-뇌 장벽을 가로지르는 뉴런의 형질감염 (예를 들어, 미국 특허 공개 번호 2003/0083299 참조)을 포함하나 이에 제한되지는 않는다. 혈액-뇌 장벽을 가로질러 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 수송하는 지질-기반 방법은 혈액-뇌 장벽의 혈관 내피 상의 수용체에 결합하는 그의 활성 단편과 커플링되는 리포솜 내에 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 캡슐화하는 것 (예를 들어, 미국 특허 출원 공개 번호 20020025313 참조), 및 저밀도 지단백질 입자 (예를 들어, 미국 특허 출원 공개 번호 20040204354 참조) 또는 아포지단백질 E (예를 들어, 미국 특허 출원 공개 번호 20040131692 참조)에 항체 또는 그의 항원 결합 단편을 코팅하는 것을 포함하나 이에 제한되지는 않는다.
다양한 실시양태에서, 조성물은 본원에 기재된 어느 하나 이상의 항체 또는 항원 결합 단편 및 담체 및/또는 희석제를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 표 1에 제시된 것들로부터 선택된 어느 하나 이상의 (예를 들어, 모든 6개의 CDR 및/또는 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인) 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 표 1에 제시된 서열 중 임의의 것, 예를 들어, 표 1에 열거된 6개의 CDR의 세트 및/또는 쌍형성된 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 일부 실시 양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 서열식별번호: 29 및 30을 포함한다. 일부 실시양태에서, 조성물은 진단 검정, 예를 들어, 고전적 또는 디지털 ELISA에 사용하기에 적합하다. 일부 실시양태에서, 조성물은 제약 조성물이고 제약상 허용되는 담체를 포함한다.
특정 실시양태에서, 조성물은 앞서 기재된 바와 같은 임의의 2개의 항체 또는 항원 결합 단편을 포함한다. 특정 실시양태에서, 조성물은 적어도 하나의 추가 항체 또는 항원 결합 단편, 및/또는 적어도 하나의 추가적인 작용제를 포함한다. 예시적인 실시양태에서, 하나의 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하고; 다른 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 제1 항체 또는 항원 결합 단편은 표 1에 제시된 것들로부터 선택된 어느 하나 이상의 (예를 들어, 모든 6개의 CDR 및/또는 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인) 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 표 1에 제시된 서열 중 임의의 것, 예를 들어, 표 1에 열거된 6개의 CDR의 세트 및/또는 쌍형성된 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 서열식별번호: 29 및 30을 포함한다. 일부 실시양태에서, 제2 항체 또는 항원 결합 단편은 표 1에 제시된 것들로부터 선택된 어느 하나 이상의 (예를 들어, 모든 6개의 CDR 및/또는 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인) 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 표 1에 제시된 서열 중 임의의 것, 예를 들어, 표 1에 열거된 6개의 CDR의 세트 및/또는 쌍형성된 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 서열식별번호: 29 및 30을 포함한다.
일부 실시양태에서, 조성물은 진단 검정, 예를 들어, 고전적 또는 디지털 ELISA에 사용하기에 적합하다. 일부 실시양태에서, 조성물은 제약 조성물이고 제약상 허용되는 담체를 포함한다. 제약 조성물은 알츠하이머병 또는 또 다른 타우병증을 치료하기 위한 적어도 하나의 추가적인 치료제를 추가로 포함할 수 있다.
치료 방법
본원에 기재된 항체 및 조성물은 AD 및 다른 타우병증의 다양한 치료 및 예방 방법에 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 및 조성물은 항-타우 기반 치료에 적합한 환자를 검출하거나, 치료 선택을 알리거나, 또는 시간 경과에 따른 치료의 진행을 모니터링하는데 사용될 수 있다. 다른 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 및 조성물은 AD 및 다른 타우병증의 치료 또는 예방을 필요로 하는 환자에게 하나 이상의 항체 또는 조성물을 투여함으로써 AD 및 다른 타우병증에 대한 직접적인 치료 또는 예방으로서 사용될 수 있다.
예방적 (즉, 방지적) 적용에서, 본원에 개시된 항체 및 제약 조성물 (예를 들어, 항체 DC2E7, 또는 항체 DC2E7과 동일한 에피토프에 결합할 수 있거나 또는 항체 DC2E7로부터의 CDR 또는 가변 도메인을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편)은 알츠하이머병 또는 또 다른 타우병증에 걸리기 쉽거나, 또는 그렇지 않으면 이에 걸릴 위험이 있는 환자에게 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 제약 조성물은 질환의 생화학적, 조직학적 및/또는 행동적 증상, 그의 합병증, 및 질환의 발생 동안 제시되는 중간 병리학적 표현형을 포함하여 질환의 위험을 제거 또는 감소시키거나, 중증도를 감소시키거나, 또는 질환의 발병을 지연시키기에 충분한 양으로 투여된다. 치료적 적용에서, 조성물은 이러한 질환을 앓고 있는 것으로 의심되거나, 진단되고/거나 이미 앓고 있는 환자에게, 질환의 합병증 및 질환의 발생에 있어서의 중간 병리학적 표현형을 포함한 질환의 증상 (생화학적, 조직학적, 및/또는 행동적)을 치료하거나, 또는 적어도 부분적으로 감소, 정지 또는 역전시키기에 충분한 양으로 투여된다.
일부 실시양태에서, 알츠하이머병을 치료하는 것은 시간이 지남에 따라 행동적, 기능적 및 인지적 저하를 감소시키거나 또는 예방하는 것을 지칭한다. 일부 실시양태에서, 알츠하이머병의 행동적, 기능적 및 인지적 측면은 신경심리학적 테스팅, 미니-정신 상태 검사, 미니-코그 검사, 신경정신행동 검사, 블레스드 로스(Blessed Roth) 치매 평가 스케일, 스페인어 및 영어 신경심리학적 평가 스케일 (SENAS), 정신 행동 평가, 기능 평가, 시계 그리기 테스트, 보스턴 명명 테스트, 캘리포니아 언어 학습 테스트, 인지 증상 체크리스트, 지속적인 성능 테스트, 제어된 구두 단어 연관 시험, 코그니스타트(Cognistat), d2 주의력 테스트, 델리스-카플란(Delis-Kaplan) 실행 기능 시스템, 치매 평가 스케일, 숫자 각성 테스트, 형상 유창성 테스트, 수지력 테스트, 할스테드(Halstead) 카테고리 테스트, 할스테드-레이탄(Halstead-Reitan) 신경심리학적 배터리, 후퍼(Hooper) 시각적 조직 테스트, 카플란 베이크레스트(Kaplan Baycrest) 신경인지 평가, 카우프만 쇼트(Kaufman Short) 신경심리학적 평가, 루리아-네브라스카(Luria-Nebraska) 신경심리학적 배터리, 기억 평가 스케일, 빠른 신경학적 선별 테스트, 신경심리학적 상태 평가를 위한 반복가능한 배터리, 스트룹(Stroop) 테스트, 기호 숫자 양식 테스트, 촉각 성능 테스트, 주제별 인식 테스트, 런던 타워, 트레일 메이킹 테스트 A 및 B, 구두 (단어) 유창성 테스트 및 위스콘신 카드 정렬 테스트를 포함하나 이에 제한되지는 않는, 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 일련의 표준화된 테스트 중 어느 하나 이상에 의해 평가될 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 우울증, 불안, 실어증, 동요 및 행동 파라미터에 대한 추가적인 테스트가 또한 사용된다. 또한, 일부 실시양태에서, 환자는 개시된 항체 또는 그의 항원 결합 단편 중 하나 이상을 수반하는 본원에 개시된 검출 방법 중 임의의 것을 사용하여 치료 효능에 대해 진단 또는 모니터링될 수 있다.
일부 실시양태에서, 본원에 개시된 항체 및 제약 조성물 (예를 들어, 항체 DC2E7, 또는 항체 DC2E7과 동일한 에피토프에 결합할 수 있거나 또는 항체 DC2E7로부터의 CDR 또는 가변 도메인을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편)은 환자에서 AD 또는 또 다른 타우병증을 치료하기 위해 투여될 수 있다. 일부 실시양태에서, 알츠하이머병 치료의 효능은 알츠하이머병 평가 스케일-인지 서브스케일 (ADAS-cog), 임상 치매 평가 박스 총점 (CDR-sb), 일상 생활의 알츠하이머병 공동 연구 활동 스케일 (ADCS-ADL), 신경정신행동 검사 (NPI), 진행성 악화 스케일 (PDS), 일상 생활의 암스테르담 도구 활동 (IADL), 임상 치매 평가 스케일 (CDR), 치매 장애 평가 스케일 (DAD) 및 미니 정신 상태 평가 (MMSE)로 이루어진 군으로부터 선택된 적어도 하나의 평가에서의 개선, 또는 악화의 결여 또는 악화율에 있어서의 감소에 의해 결정된다. 일부 실시양태에서, 치료는 ADAS-cog 점수의 악화율에 있어서의 감소를 초래한다. 다른 실시양태에서, 치료는 2 내지 5점의 ADAS-cog 점수의 악화율에 있어서의 중앙값 감소를 초래한다.
일부 실시양태에서, 알츠하이머병의 진행을 지연시키는 방법으로서, 개시된 항체, 예를 들어, 항체 DC2E7, 또는 항체 DC2E7과 동일한 에피토프에 결합하거나 또는 항체 DC2E7로부터의 CDR 또는 가변 도메인을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편 중 하나 이상을 투여하는 것을 포함하는 방법이 제공된다. 한 실시양태에서, AD의 진행을 "지연시키는 것"은 이러한 질환의 발생을 지연, 방해, 느리게, 지연, 안정화 및/또는 연기하는 것을 의미한다. 이러한 지연은 질환의 병력 및/또는 치료받는 개체에 따라 다양한 기간 동안 일어날 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백한 바와 같이, 충분하거나 또는 상당한 지연은 개체에게 질환을 발생시키지 않는다는 점에서 사실상 예방을 포괄할 수 있다. 한 실시양태에서, AD 또는 또 다른 타우병증의 진행을 "지연"시키는 방법은 이러한 방법을 사용하지 않는 것과 비교할 때, 주어진 기간 내에 질환의 발생 확률을 감소시키고/거나 주어진 기간 내에 질환의 정도를 감소시키는 방법이다. 이러한 비교는 전형적으로, 통계학상 유의미한 수의 대상체를 사용하는 임상 연구를 기반으로 한다.
특정 실시양태에서, AD 또는 또 다른 타우병증은 수일, 수개월 또는 수년 지연될 수 있다. 예를 들어, 방법은 AD 또는 또 다른 타우병증의 진행을 1주 이상, 1개월 이상 또는 1년 이상 지연시킬 수 있다.
환자, 대상체 또는 개체는 포유동물, 예컨대 인간, 소, 말, 개, 고양이, 돼지 및 양 동물을 포함한다. 대상체는 인간일 수 있으며, 질환에 걸리거나 걸리지 않을 수 있거나, 또는 현재 증상을 보일 수 있다. AD의 경우에는, 사실상 누구라도 충분히 오래 살면 AD를 앓을 위험이 있다. 따라서, 본 방법은 대상체 환자의 위험에 대한 어떠한 평가도 할 필요없이 일반 집단에게 방지적으로 투여될 수 있다. 다른 실시양태에서, 대상체는 본원에 개시된 검출 방법을 사용하여 AD에 대해 평가된다.
한 실시양태에서, 본원에서 환자는 임의적으로, 치료에 앞서 진단 테스트를 거치며, 이는 본원에 개시된 진단 방법을 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 개시된 방법은 AD의 알려진 유전적 위험이 있는 개체에게 유용하다. 이러한 개체는 상기 질환을 경험한 친척이 있는 개체, 및 유전적 또는 생화학적 마커의 분석에 의해 그의 위험이 결정되는 개인을 포함한다. AD에 대한 위험의 유전적 마커는 APP 유전자에서의 돌연변이, 특히 각각 하디(Hardy) 및 스웨덴 돌연변이로서 지칭되는 위치 717 및 위치 670 및 671에서의 돌연변이를 포함한다. 문헌 [Hardy (1997) Trends Neurosci. 20:154-9]을 참조한다. 다른 위험 마커는 프레세닐린 유전자, PS1 PS2 및 ApoE4에서의 돌연변이, AD의 가족력, 고콜레스테롤혈증 또는 아테롬성 경화증이다. 현재 AD를 앓고 있는 개인은 또한 행동 특징으로부터 확인될 수 있다. 무증상 환자의 경우에는, 임의의 연령 (예를 들어, 10, 20, 30대)에서 치료를 시작할 수 있다. 일부 환자에서는, 환자가 더 많은 나이, 예를 들어, 40, 50, 60 또는 70세, 또는 그 이후, 또는 그 사이의 임의의 기간에 도달할 때까지 치료 및/또는 모니터링을 시작하는 것이 필요치 않을 수 있다. 치료는 일정 기간에 걸쳐 여러 번 투여해야 할 수 있다. 치료는 본원에 개시된 AD 검출 방법을 사용하는 것을 포함하여 다양한 방식으로 모니터링될 수 있다.
이러한 테스트 중 하나 이상을 주기적으로 사용하면 의사 또는 다른 의료 전문가에게 알츠하이머병 및 관련 타우병증의 진행 또는 퇴행 및 추가 치료의 필요성에 대해 조언해 줄 수 있다. 테스트의 선택과 치료의 성공를 결정하는 것은 알츠하이머병 분야의 의료 전문가의 전문 지식 내에 있다. 하나 이상의 테스트에서 개선된 점수는 대상체에서의 AD의 중증도가 감소했다는 지표이다.
다양한 실시양태에서, 대상체에서 알츠하이머병 또는 또 다른 타우병증을 치료하거나, 진행을 지연시키거나 또는 진행을 예방하는 방법으로서, 본원에 기재된 적어도 하나의 항체 또는 항원 결합 단편의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 방법이 개시된다. 이러한 방법은 운동 장애 감소, 운동 기능 개선, 인지 장애 감소, 인지 기능 개선 또는 그의 조합을 초래할 수 있다. 본원에 기재된 임의의 항체의 사용은 항체 또는 항원 결합 단편을 알츠하이머병의 치료, 진행 지연 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 투여함으로써 알츠하이머병을 치료하거나, 진행을 지연시키거나 또는 그를 예방하는데 사용될 수 있다.
AD 및 다른 타우병증을 검출하고 그의 진행을 모니터링하는 방법
본원의 개시내용은 부분적으로, 특정 생물학적 샘플 (예를 들어, 혈액 또는 CSF)에서 검출될 수 있고 AD, 다른 타우병증, 및 다른 형태의 치매를 확인하고 구별하는데 사용될 수 있는 타우 상의 특정 에피토프 잔기, 특히 타우 상의 하나 이상의 인산화된 잔기를 함유하는 것들의 발견에 초점을 맞추고 있다. 예를 들어, 유용한 에피토프 잔기는 타우 단백질 2N4R의 잔기 188-227 (서열식별번호: 10) 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 에피토프는 타우 단백질 2N4R의 잔기 210-221 (서열식별번호: 11) 중 하나 이상을 포함한다. 특정 실시양태에서, 에피토프는 타우 단백질 2N4R (서열식별번호: 9)의 위치 217에서의 적어도 하나의 인산화된 잔기, 예를 들어, 포스포-트레오닌을 포함하고, 임의적으로 또한 타우 단백질 2N4R의 위치 210에서의 인산화된 세린, 위치 212에서의 트레오닌, 위치 214에서의 세린, 또는 위치 220에서의 트레오닌, 또는 그의 임의의 조합을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, 에피토프는 SRTPSLPpTPPTR (서열식별번호: 12의 서열) 또는 그 내에 하나 이상의 추가적인 인산화된 위치를 갖는 아미노산 잔기의 연장물을 포함하거나 또는 그로 이루어진다. 또 다른 실시양태에서, 에피토프는 SRpTPSLPpTPPTR (서열식별번호: 31의 서열)을 포함하거나 또는 그로 이루어진다. 본 개시내용은 부분적으로, 이들 샘플 중의 인산화된 타우 종의 양이, AD를 다른 타우병증과 구별하고 다른 형태의 치매를 가진 대상체와 구별하며, 그에 의해 이러한 검정의 결과에 근거하여 AD 또는 또 다른 타우병증 또는 또 다른 원인의 치매를 진단, 모니터링 및/또는 그에 대한 치료 결정을 가이드하는데 사용될 수 있다는 놀라운 발견에 근거한다. 이론에 얽매이는 것은 아니지만, (예를 들어, 위치 217에서의) 이러한 인산화된 에피토프의 수준이 특정 샘플에서 AD, 다른 타우병증 및 다른 형태의 치매를 구별하는데 사용될 수 있다는 발견은, 인산화된 에피토프가 종종 상이한 타우병증 전반에 걸쳐 뇌에서 검출될 수 있다는 사실을 고려할 때 특히 예상치 못한 일이다.
본원에 제공된 개시내용은 또한 부분적으로, 특정 유형의 생물학적 샘플 (예를 들어, CSF 또는 혈액) 중의 이들 특정한 인산화된 타우 에피토프에 결합할 수 있고 샘플 중의 결합 수준에 근거하여 AD, 다른 타우병증 및 다른 형태의 치매를 확인하고 구별하는데 특히 유용한 항체 (예를 들어, 표 1에 제시된 하나 이상의 서열, 예를 들어, 표 1에 제시된 것들로부터 선택된 모든 6개의 CDR 및/또는 중쇄 및/또는 경쇄 가변 도메인을 포함하는 임의의 항체)에 초점을 맞추고 있다. 본 개시내용은 부분적으로, 이들 샘플 중의 개시된 항체에 의해 결합된 인산화된 타우 종의 양이, AD를 다른 타우병증과 구별하고 다른 형태의 치매를 가진 대상체와 구별하며, 그에 의해 이러한 검정의 결과에 근거하여 AD 또는 또 다른 타우병증 또는 또 다른 원인의 치매를 진단, 모니터링 및/또는 그에 대한 치료 결정을 가이드하는데 사용될 수 있다는 놀라운 발견에 근거한다.
AD 이외에, 전두측두엽 치매 (FTD), 피질기저 질환 (CBD) 및 진행성 핵상 마비 (PSP)를 포함한 다른 타우병증이 관련 기술분야에 공지되어 있다 (Murray et al., Clinicopathologic assessment and imaging of tauopathies in neurodegenerative dementias, Alzheimer's Research & Therapy, 6:1, 2014). 치매의 수많은 다른 원인이 또한 알려져 있다. 이론에 얽매이는 것은 아니지만, 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편에 의해 결합되는, AD 환자 및 다른 타우병증 환자로부터의 특정 생물학적 샘플 (예를 들어, CSF 또는 혈액) 중의 인산화된 타우 종의 증가된 양이, 이러한 체액에서 AD를 비-침습적으로 검출하고 AD를 다른 원인의 치매 또는 다른 타우병증과 구별하는데 있어서의 그들의 유용성에 기여할 수 있다.
건강한 대상체와 치매 환자 둘 다로부터의 특정 유형의 샘플 (예를 들어, 혈액 및/또는 CSF)에는 수많은 타우 종이 존재한다. 이러한 많은 잠재적 표적에도 불구하고, 진단 능력을 제공할 수 있도록 이러한 샘플 중의 특정한 타우 종에 결합할 수 있는 항체 (예를 들어, AD 및/또는 다른 타우병증을 가진 대상체로부터의 샘플에만 존재하거나 또는 상승된 수준 및/또는 뚜렷한 수준으로 대상체로부터의 샘플에 존재하는 타우 종에 결합하는 항체)는 이전에 확인된 바 없다. 이론에 얽매이는 것은 아니지만, 일부 실시양태에서 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편은 또 다른 타우병증, 다른 신경계 질환 환자로부터의 비교가능한 샘플 또는 건강한 대상체에서보다 더 큰 수준으로 AD 환자로부터의 특정 유형의 샘플 (예를 들어, 혈액 또는 CSF)에 존재하는 타우 상의 인산화된 에피토프에 결합할 수 있는 능력 때문에 관련 기술분야에 비해 개선을 제공한다. 이러한 차이는 일부 실시양태에서, 치매를 나타내는 대상체가 AD, 또 다른 타우병증, 또는 또 다른 원인의 치매를 갖는지의 여부를 검출하고/거나, AD 치료 과정을 모니터링하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 항체에 의해 결합된 타우 양의 뚜렷한 역치 또는 배수 차이 (예를 들어, 건강한 대상체에서의 수준과 비교 시, 또는 알려진 원인의 치매를 나타내는 대상체와 비교 시)가 대상체에서 검출될 수 있고, 이는 AD, 또 다른 타우병증, 또는 또 다른 원인의 치매와의 상관관계를 보일 수 있다. 일부 실시양태에서, 이러한 차이는 치매를 나타내는 대상체가 AD 또는 또 다른 타우병증을 갖는지의 여부를 검출하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 이러한 차이는 치매를 나타내는 대상체가 AD 또는 일부 다른 원인의 치매를 갖는지의 여부를 검출하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 이러한 차이는 치매를 나타내는 대상체가 AD 또는 또 다른 타우병증을 갖는지의 여부를 구별하기 위해 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 이러한 차이는 치매를 나타내는 대상체가 AD 또는 일부 다른 원인의 치매를 갖는지의 여부를 구별하기 위해 사용될 수 있다.
다양한 실시양태에서, 대상체에서 타우병증을 검출하는 방법으로서, 대상체로부터 생물학적 샘플을 수득하는 단계; 대상체로부터의 샘플을 타우-분자 복합체를 형성할 수 있는 분자 (예를 들어, 타우에 결합하여 타우-항체 복합체를 형성할 수 있는 본원에 개시된 적어도 하나의 수용체, 항체, 또는 항원 결합 단편)의 유효량과 접촉시키는 단계; 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편을 사용하여 타우-분자 복합체의 존재 및/또는 양을 검출하며, 여기서 타우-분자 복합체의 존재 및/또는 양은 대상체에서의 타우병증을 나타내는 것인 단계를 포함하는 방법이 개시된다. 다양한 실시양태에서, 대상체에서 타우병증을 검출하는 방법은 대상체로부터의 생물학적 샘플을 타우에 결합하여 타우-항체 복합체를 형성할 수 있는 본원에 개시된 적어도 하나의 항체 또는 항원 결합 단편의 유효량과 접촉시키며, 여기서 타우-항체 복합체의 존재 및/또는 양은 대상체에서의 타우병증을 나타내는 것인 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 검출은, 예를 들어, 매그큐 캄파니 리미티드(MagQu Co. Ltd.)로부터의 생물검정 장치를 사용하는 면역자기 감소 생물-검정에 의해 이루어진다.
일부 실시양태에서, 샘플 중에서 검출된 타우는 인산화된 타우이다. 다양한 실시양태에서, 적어도 하나의 항체 또는 항원 결합 단편은 타우 단백질 2N4R의 잔기 188-227 (서열식별번호: 10) 중 하나 이상을 포함하는 타우 상의 에피토프에 결합할 수 있다. 다양한 실시양태에서, 적어도 하나의 항체 또는 항원 결합 단편은 타우 단백질 2N4R의 잔기 210-221 (서열식별번호: 11) 중 하나 이상을 포함하는 타우 상의 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 방법에 사용되는 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 방법에 사용되는 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 위치 2에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 위치 2 및 12 중 하나 이상에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고/거나, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고/거나; 여기서 LCDR1은 위치 2에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고/거나, LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함한다. 다양한 실시양태에서, HCDR1 내의 위치 2에서의 치환은 글리신이고, HCDR2 내의 위치 2에서의 치환은 이소류신이고, HCDR2 내의 위치 12에서의 치환은 발린이고/거나, LCDR1 내의 위치 2에서의 치환은 아스파라긴이다.
다양한 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 표 1에 제시된 서열 중 임의의 것, 예를 들어, 표 1에 열거된 6개의 CDR의 세트 및/또는 쌍형성된 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 방법에 사용되는 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함한다. 개시된 방법에 사용되는 항체 또는 항원 결합 단편은 다양한 실시양태에서, DC2E7 또는 그의 항원 결합 단편, 또는 타우에 결합할 수 있는 본원에 개시된 변이체 중 임의의 것을 포함할 수 있다. 다양한 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 검출가능한 표지를 추가로 포함한다.
일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 7, 또는 위치 1, 2, 3, 9, 12, 19, 30, 31, 35, 37, 42, 43, 48, 49, 51, 54, 55, 56, 58, 62, 63, 64, 65, 66, 68, 69, 70, 73, 76, 77, 78, 79, 80, 83, 84, 88, 94, 96, 107, 108, 및 112 중 하나 이상에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하고/거나, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 8, 또는 위치 3, 7, 11, 14, 17, 19, 20, 21, 24, 25, 28, 39, 42, 49, 52, 56, 69, 71, 75, 92, 94, 99, 105, 및 106 중 하나 이상에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 1에서의 치환은 글리신이고, 위치 2에서의 치환은 알라닌이고, 위치 3에서의 치환은 아르기닌이고, 위치 9에서의 치환은 아르기닌이고, 위치 12에서의 치환은 알라닌이고, 위치 19에서의 치환은 아르기닌이고, 위치 30에서의 치환은 글리신이고, 위치 31에서의 치환은 글리신이고, 위치 35에서의 치환은 아르기닌이고, 위치 37에서의 치환은 알라닌이고, 위치 42에서의 치환은 글리신이고, 위치 43에서의 치환은 메티오닌이고, 위치 48에서의 치환은 이소류신이고, 위치 49에서의 치환은 트레오닌이고, 위치 51에서의 치환은 발린이고, 위치 54에서의 치환은 알라닌이고, 위치 55에서의 치환은 글리신이고, 위치 56에서의 치환은 세린이고, 위치 58에서의 치환은 발린이고, 위치 62에서의 치환은 글리신이고, 위치 63에서의 치환은 알라닌이고, 위치 64에서의 치환은 알라닌 및 글루탐산으로부터 선택되고, 위치 65에서의 치환은 글루탐산이고, 위치 66에서의 치환은 아스파르트산이고, 위치 68에서의 치환은 류신이고, 위치 69에서의 치환은 알라닌이고, 위치 70에서의 치환은 트레오닌이고, 위치 73에서의 치환은 아스파라긴이고, 위치 76에서의 치환은 글루탐산이고, 위치 77에서의 치환은 세린이고, 위치 78에서의 치환은 알라닌이고, 위치 79에서의 치환은 메티오닌이고, 위치 80에서의 치환은 세린, 류신, 및 히스티딘으로부터 선택되고, 위치 83에서의 치환은 트레오닌이고, 위치 84에서의 치환은 알라닌이고, 위치 88에서의 치환은 프롤린이고, 위치 94에서의 치환은 시스테인이고, 위치 95에서의 치환은 글리신이고, 위치 107에서의 치환은 알라닌이고, 위치 108에서의 치환은 프롤린이고/거나, 위치 112에서의 치환은 프롤린이고/거나; 경쇄 가변 영역 내의 위치 3에서의 치환은 아르기닌이고, 위치 7에서의 치환은 프롤린이고, 위치 11에서의 치환은 세린 및 류신으로부터 선택되고, 위치 14에서의 치환은 프롤린이고, 위치 17에서의 치환은 발린이고, 위치 19에서의 치환은 알라닌이고, 위치 20에서의 치환은 알라닌이고, 위치 21에서의 치환은 발린이고, 위치 24에서의 치환은 글루탐산이고, 위치 25에서의 치환은 트레오닌이고, 위치 28에서의 치환은 아스파라긴이고, 위치 39에서의 치환은 이소류신이고, 위치 42에서의 치환은 세린 및 아스파르트산으로부터 선택되고, 위치 49에서의 치환은 프롤린이고, 위치 52에서의 치환은 글리신이고, 위치 56에서의 치환은 프롤린이고, 위치 69에서의 치환은 글리신이고, 위치 71에서의 치환은 히스티딘이고, 위치 75에서의 치환은 발린이고, 위치 92에서의 치환은 아르기닌이고, 위치 94에서의 치환은 트레오닌이고, 위치 99에서의 치환은 세린이고, 위치 105에서의 치환은 글리신이고/거나, 위치 106에서의 치환은 발린이다.
다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 68에서의 치환은 류신이고, 경쇄 가변 영역 내의 위치 39에서의 치환은 이소류신이다. 다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 48에서의 치환은 이소류신이다. 다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 30에서의 치환은 글리신이고, 위치 58에서의 치환은 발린이고, 경쇄 가변 영역 내의 위치 7에서의 치환은 프롤린이고, 위치 69에서의 치환은 글리신이다. 다양한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역 내의 위치 11에서의 치환은 세린이다. 다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 77에서의 치환은 세린이고, 경쇄 가변 영역 내의 위치 11에서의 치환은 류신이고, 위치 20에서의 치환은 알라닌이고, 위치 28에서의 치환은 아스파라긴이다. 다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 37에서의 치환은 알라닌이고, 위치 63에서의 치환은 알라닌이고, 위치 80에서의 치환은 세린이고, 경쇄 가변 영역 내의 위치 11에서의 치환은 류신이다. 다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 1에서의 치환은 글리신이고, 위치 3에서의 치환은 아르기닌이고, 위치 76에서의 치환은 글루탐산이고, 위치 77에서의 치환은 세린이다. 다양한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역 내의 위치 11에서의 치환은 류신이다.
다양한 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 표 1에 제시된 서열 중 임의의 것, 예를 들어, 표 1에 열거된 6개의 CDR의 세트 및/또는 쌍형성된 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 방법은 대상체로부터의 생물학적 샘플 (예를 들어, 혈액 또는 CSF)을 적어도 하나의 포획 항체 및 적어도 하나의 검출 항체와 접촉시키는 단계를 포함한다. 일부 실시양태에서, 하나 초과의 포획 항체 및/또는 하나 초과의 검출 항체가 사용된다. 일부 실시양태에서, 포획 및 검출 항체는 동일하다 (예를 들어, 샘플 중 타우 올리고머를 검출하는 경우). 일부 실시양태에서, 제1 항체 또는 항원 결합 단편 (예를 들어, 검출 항체)이 타우-항체 복합체를 형성할 수 있으며, 여기서 타우-항체 복합체의 존재는 본원에 개시된 제2 항-타우 항체 또는 항원 결합 단편 (예를 들어, 검출 항체)을 사용하여 검출된다. 일부 실시양태에서, 제2 항체 또는 항원 결합 단편은 제1 항체와 상이한 타우 상의 에피토프에 결합한다.
일부 실시양태에서, 제1 항체 또는 항원 결합 단편은 타우 단백질 2N4R의 잔기 188-227 (서열식별번호: 10) 중 하나 이상 또는 타우 단백질 2N4R의 잔기 210-221 (서열식별번호: 11) 중 하나 이상을 포함하는 타우 상의 에피토프에 결합할 수 있다. 에피토프는 타우 단백질 2N4R (서열식별번호: 9)의 위치 217에서의 적어도 하나의 인산화된 잔기를 포함할 수 있고, 임의적으로 또한 타우 단백질 2N4R의 위치 210에서의 인산화된 세린, 위치 212에서의 트레오닌, 위치 214에서의 세린, 또는 위치 220에서의 트레오닌, 또는 그의 임의의 조합을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 타우 상의 에피토프는 SRTPSLPpTPPTR (서열식별번호: 12)을 포함하거나 또는 그로 이루어진다. 특정 실시양태에서, 타우 상의 에피토프는 SRpTPSLPpTPPTR (서열식별번호: 31)을 포함하거나 또는 그로 이루어진다. 일부 실시양태에서, 제1 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 제1 항체 또는 항원 결합 단편은 항체 DC2E7 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 제1 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 25의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 28의 아미노산 서열을 포함한다. 일부 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 29의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 30의 아미노산 서열을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 제2 항체 또는 항원 결합 단편은 타우 단백질 2N4R의 잔기 151-188 (서열식별번호: 13) 중 하나 이상을 포함하는 타우 상의 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 타우 단백질 2N4R의 잔기 163-172 (서열식별번호: 14) 중 하나 이상을 포함한다. 특정 실시양태에서, 에피토프 상의 잔기 중 하나 이상은 인산화되며, 예를 들어, 타우 단백질 2N4R의 위치 169에서의 인산화된 트레오닌이다. 일부 실시양태에서, 제2 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제2 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 21의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 제2 항체 또는 항원 결합 단편은 항체 DC2E2 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다.
다른 실시양태에서, 제1 및 제2 항체가 역전되고/거나 하나 초과의 제1 및 제2 항체가 사용된다 (이는 동일하거나 상이한 항체일 수 있다).
상기 역전된 실시양태 중 일부에서, 제1 항체 또는 항원 결합 단편은 타우 단백질 2N4R의 잔기 151-188 (서열식별번호: 13) 중 하나 이상을 포함하는 타우 상의 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 타우 단백질 2N4R의 잔기 163-172 (서열식별번호: 14) 중 하나 이상을 포함한다. 특정 실시양태에서, 에피토프 상의 잔기 중 하나 이상은 인산화되며, 예를 들어, 타우 단백질 2N4R의 위치 169에서의 인산화된 트레오닌이다. 일부 실시양태에서, 제1 항체 또는 항원 결합 단편은 표 1에 제시된 서열 중 임의의 것, 예를 들어, 표 1에 열거된 6개의 CDR의 세트 및/또는 쌍형성된 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 제1 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 항체 또는 항원 결합 단편은 서열식별번호: 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제1 항체 또는 항원 결합 단편은 항체 DC2E2 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다.
상기 역전된 실시양태 중 일부에서, 제2 항체 또는 항원 결합 단편은 타우 단백질 2N4R의 잔기 188-227 (서열식별번호: 10) 중 하나 이상 또는 타우 단백질 2N4R의 잔기 210-221 (서열식별번호: 11) 중 하나 이상을 포함하는 타우 상의 에피토프에 결합할 수 있다. 제2 항체 또는 항원 결합 단편에 의해 결합된 에피토프는 타우 단백질 2N4R (서열식별번호: 9)의 위치 217에서의 적어도 하나의 인산화된 잔기를 포함할 수 있다. 일부 실시양태에서, 에피토프는 또한 타우 단백질 2N4R의 위치 210에서의 인산화된 세린, 위치 212에서의 트레오닌, 위치 214에서의 세린, 또는 위치 220에서의 트레오닌, 또는 그의 임의의 조합을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제2 항체는 SRTPSLPpTPPTR (서열식별번호: 12)을 포함하는 타우 상의 에피토프에 결합할 수 있다. 일부 실시양태에서, 제2 항체 또는 항원 결합 단편은 표 1에 제시된 서열 중 임의의 것, 예를 들어, 표 1에 열거된 6개의 CDR의 세트 및/또는 쌍형성된 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다.
일부 실시양태에서, 제2 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제2 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 제2 항체 또는 항원 결합 단편은 항체 DC2E7 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 제1 또는 제2 항체 또는 항원 결합 단편은 고체 표면 또는 입자 상에 연결되고/거나 코팅된다. 고체 표면은 미세역가 플레이트의 표면 일 수 있다. 미세역가 플레이트 또는 멀티웰 플레이트는 전형적으로, 예를 들어, 2:3 직사각형 매트릭스에 배열된 6, 12, 24, 48, 96, 384, 또는 1536개 또는 그 초과의 샘플 웰을 갖는다. 각각의 웰은 전형적으로, 수십 나노리터 내지 수 밀리리터의 액체를 보유한다. 고체 입자가 고체 표면 대신 또는 고체 표면에 부가하여 사용되는 경우, 이는 비드일 수 있다. 입자는 자기 비드일 수 있다. 비드는 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리아미드, 폴리우레탄, 페놀계 중합체, 니트로셀룰로스, 자연 유래 중합체, 라텍스 고무, 폴리사카라이드, 폴리펩티드, 복합 재료, 세라믹, 실리카 또는 실리카-기반 재료, 탄소, 금속 또는 금속 화합물, 금, 은, 강철, 알루미늄, 구리, 무기 유리 또는 실리카 재료, 또는 그의 조합을 포함하는 플라스틱 또는 합성 중합체 비드일 수 있다. 비드는 구형, 디스크, 링 또는 큐브-유사 형상을 가질 수 있다.
특정 실시양태에서, 제1 및/또는 제2 항체는 검출가능한 표지에 접합될 수 있다. 이러한 표지는 효소, 방사성동위원소, 비오틴, 핵 자기 공명 마커, 중금속, 또는 그의 조합을 포함할 수 있다. 방법은 검출가능한 표지로부터 시그널을 검출하는 단계를 추가로 포함할 수 있다. 한 실시양태에서, 표지를 검출하는 것은 타우에 결합한 후 표지된 항체로부터의 형광 시그널 또는 그 시그널의 강도를 검출함으로써 달성된다. 일부 실시양태에서, 검출가능한 표지는 비오틴이며, 이는 효소, 바람직하게 양고추냉이 퍼옥시다제, 알칼리성 포스파타제 또는 β-갈락토시다제에 접합된 스트렙타비딘과 샘플을 접촉시킴으로써 검출된다.
특정 실시양태에서, 본원에 개시된 타우 검출 방법은 고전적/통상적 ELISA 검정 (즉, 아날로그 판독 시스템)을 포함한다. 추가적으로 또는 대안적으로, 방법은 디지털 ELISA (즉, 단일 면역복합체까지 총 아날로그 시그널을 측정하는 것보다는 디지털 방식으로 농도를 결정할 수 있게 하는 디지털 판독 시스템이지만, 일부 농도에서는 이러한 방법이 아날로그 시그널을 판독하는데 사용될 수도 있음)를 포함할 수 있다. 문헌 [Rissin, D.M., et al., Single-molecule enzyme-linked immunosorbent assay detects serum proteins at subfemtomolar concentrations. Nat. Biotechnol., 2010. 28(6), 555-559]을 참조한다. 예를 들어, 단일 분자 어레이 (시모아(simoa))를 사용할 수 있는데, 이는 자기 마이크로비드 상에 샌드위치 복합체를 형성한 후, 비드가 기질 용액 중에서 마이크로 웰, 예를 들어, 펨토리터 크기의 마이크로 웰의 어레이로 전달되는 디지털 ELISA이다. 일부 실시양태에서, 이들 웰은 각각 단 하나의 비드를 수용한다. 일부 실시양태에서, 검출 항체에 표지된 효소에 대한 형광발생 기질을 부가한 후, 오일 필름을 적용하여 웰을 작은 용적이 되도록 밀봉하는데, 예를 들어, 반응 용적을 50 fL로 제한한다. 일부 실시양태에서, 이러한 작은 용적은 비드 상에 단 하나의 샌드위치 복합체가 존재하는 경우일지라도 판독가능한 시그널을 검출할 수 있게 해준다. 리포터로서, 효소 β-갈락토시다제 및 기질 레소루핀-β-D-갈락토피라노시드를 사용할 수 있으며, 비드를 함유하는 모든 웰과 마찬가지로 검출가능한 시그널을 갖는 웰을 카운팅한다. 이러한 카운트 사이의 비는 비드당 평균 효소 출력 (AEB)을 제공할 수 있다. AEB가 낮은 경우 (<0.1), 포아송(Poisson) 통계를 사용하여, 비드가 그의 표면 상에 단지 하나 이하의 복합체를 갖고 있다는 것을 보여줄 수 있다. AEB 시그널이 더 높아져서, 비드당 하나 초과의 복합체의 확률이 증가하면, 광도 계산으로의 전환이 사용될 수 있으며, 이는 시그널 >0.1에서도 사용가능한 AEB를 허용한다. 전환을 위한 알고리즘은 시모아 기기용 소프트웨어, 예를 들어, 96-웰 미세역가 플레이트 또는 별도의 바이알로부터 샘플링 및 보정하는 소프트웨어를 사용하여 구현될 수 있다.
다른 면역검정이 관련 기술분야에 공지되어 있으며 샘플 중의 인산화된 타우를 검출하기 위해 개시된 항체 및 표지된 항체와 함께 사용될 수 있다. 예를 들어, 단일 분자 카운팅 (SMC) 플랫폼, 예를 들어, 형광 표지가 있는 항체 및 형광 표지가 없는 항체가 비드 또는 플레이트 상의 타우와 샌드위치 복합체를 형성한 다음, 이러한 복합체가 분해되고, 형광으로 표지된 (예를 들어, 알렉사 플루오르(Alexa Fluor)) 검출 항체의 분자를 모세관으로 끌어 들여 형광단을 여기시키는 레이저 빔을 통과할 때 카운팅하는 플랫폼이 사용될 수 있다. 형광이 배경 역치를 초과하여 도달하면 디지털 이벤트를 카운팅할 수 있다. 더 높은 농도에서는, 방출된 모든 광자의 총합이 시그널에 대한 판독 값으로서 사용되어, 높은 동적 범위를 허용할 수 있다. 일부 실시양태에서, 검출은, 예를 들어, 머크 밀리포어(Merck Millipore) (싱귤렉스(Singulex)에 의해 개발됨)로부터의 단일 분자 카운팅 장치를 사용하여 단일 분자 카운팅에 의해 수행된다. 사용될 수 있는 또 다른 고감도 면역검정은 자기 나노입자를 본원에 개시된 항체에 부착하는 것, 및 분석물에 결합한 후 농도-의존적 방식으로 교류 자기장에서 나노입자의 진동 상의 변경을 검출하는 것, 예를 들어, 면역자기 감소 (IMR)를 검출하는 것을 수반한다. 일부 실시양태에서, 검출은, 예를 들어, 매그큐 캄파니 리미티드로부터의 생물-검정을 사용하는 면역자기 감소 생물-검정에 의해 이루어진다.
다양한 실시양태에서, 샘플은 항체 또는 그의 항원 결합 단편과 접촉되기 전에 희석될 수 있다. 특정 상황에서, 순환하는 항원은 혈액에서도 순환하는 항원에 대항하여 자연적으로 존재하는 항체에 의해 은폐될 수 있다. HIV 단백질 p24는 널리 알려진 예이다. 또한, 자연적으로 존재하는 타우/항-타우 항체 복합체가 문헌에 보고되었다 (Wu J, Li L. Autoantibodies in Alzheimer's disease: potential biomarkers, pathogenic roles, and therapeutic implications. Journal of Biomedical Research. 2016;30(5):361-372). 이러한 복합체의 존재는 본원에 개시된 검출 검정을 방해할 수 있다. 따라서, 다양한 실시양태에서, 샘플은 본 개시내용의 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉되기 전에, 면역 복합체 해리 (ICD) (예를 들어, 타우가 더 이상 자연적으로 존재하는 항체/분자에 결합되지 않도록 샘플 중의 자연적으로 존재하는 타우-항체/타우-분자 복합체를 해리시키므로, 본 개시내용의 방법에 의해 자유롭게 검출될 수 있음)를 거칠 수 있다. 일부 실시양태에서, 면역 복합체 해리는 샘플에 열 및/또는 산을 적용하거나 또는 ICD를 달성하는 임의의 다른 공지된 방법에 의해 달성된다.
전술한 실시양태 중 임의의 것에서, 생물학적 샘플은 뇌척수액 (CSF)을 포함할 수 있다. CSF는, 예를 들어, 의료 환경에서 수행되는 요추 천자에 의해 환자로부터 수득될 수 있다. 대안적으로, 생물학적 샘플은 혈장 및/또는 혈청을 포함할 수 있다.
다양한 실시양태에서, 본원에 개시된 방법은 샘플 중의 인산화된 타우의 존재 및/또는 양을 검출하는데, 이는 샘플 중의 인산화된 타우의 양과 건강한 개체로부터의 대조군 샘플 중의 수준과 비교하며, 여기서 대조군에 비해 샘플 중의 인산화된 타우의 수준에서의 증가는 타우병증을 나타낸다. 또 다른 실시양태에서, 검출된 타우병증은 알츠하이머병이다. 특정 실시양태에서, 건강한 대조군 및/또는 알려진 비-AD 타우병증 샘플을 가진 환자로부터의 샘플에 비해 대상체로부터의 샘플 중의 인산화된 타우의 수준에서의 증가는 대상체가 또 다른 타우병증 또는 또 다른 원인의 치매보다는 알츠하이머병을 갖는다는 것을 나타낸다.
예를 들어, 건강한 대상체로부터의 대조군 샘플 중의 수준과 비교 시, 치매를 가진 대상체로부터의 샘플 중의 항체 또는 항원 결합 단편에 의해 검출된 타우의 수준에 있어서의 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 75, 100배, 또는 그 초과 배수의 증가 (또는 그 사이의 임의의 배수 증가)는 AD 또는 또 다른 타우병증의 존재를 나타낼 수 있다. 일부 실시양태에서, 배수 증가는 약 1-100배, 또는 약 2-3배이다. 일부 실시양태에서, 배수 증가는 약 1-50배, 1-25배, 1-10배, 또는 1-5배이다. 일부 실시양태에서, 치매를 가진 대상체로부터의 샘플 중의 결합된 타우의 수준이 건강한 대상체로부터의 대조군 샘플에서 관찰된 역치 (예를 들어, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 9.3, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 125, 150, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 또는 1000 pg/ml, 또는 그 사이의 임의의 값)보다 더 크다는 것은 AD 또는 또 다른 타우병증의 존재를 나타낼 수 있다. 일부 실시양태에서, 역치는 약 9.3 pg/ml의 타우이다. 일부 실시양태에서, 역치는 0.93 내지 93 pg/ml의 타우의 임의의 값이다. 일부 실시양태에서, 역치는 약 5.37 pg/ml이다. 일부 실시양태에서, 역치는 약 305 pg/ml이다. 일부 실시양태에서, 역치는 약 100-600 pg/ml이다. 일부 실시양태에서, AD 이외의 알려진 타우병증 (예를 들어, FTD, CBD, 또는 PSP)을 가진 환자로부터의 대조군 샘플, 또는 또 다른 형태의 치매를 가진 환자로부터의 대조군 샘플 중의 수준과 비교 시, 치매를 가진 대상체로부터의 샘플 중의 항체 또는 항원 결합 단편에 의해 검출된 타우의 수준에 있어서의 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50배, 또는 그 초과의 배수 증가 (또는 그 사이의 임의의 배수 증가)는 상기 치매를 가진 대상체에서의 AD의 존재를 나타낼 수 있다. 일부 실시양태에서, 배수 증가는 약 1-100배, 또는 약 1-50배, 또는 약 1-25배, 또는 약 1-5배, 또는 약 2-3배이다. 일부 실시양태에서, 치매를 가진 대상체로부터의 샘플 중의 결합된 타우의 수준이 AD 이외의 알려진 타우병증 (예를 들어, FTD, CBD, 또는 PSP)을 가진 환자로부터의 대조군 샘플, 또는 또 다른 형태의 치매를 가진 환자로부터의 대조군 샘플에서 관찰된 역치 (예를 들어, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 9.3, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 125, 150, 200, 205, 210, 215, 220, 225, 230, 235, 240, 245, 250, 255, 260, 265, 270, 275, 280, 285, 290, 300, 305, 310, 315, 320, 325, 330, 335, 340, 345, 350, 355, 360, 365, 370, 375, 380, 385, 390, 395, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 590, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 또는 1000 pg/ml, 또는 그 사이의 임의의 값)보다 더 크다는 것은 상기 치매를 가진 대상체에서의 AD의 존재를 나타낼 수 있다. 다양한 실시양태에서, 항체 결합에 의해 검출된 타우의 수준은 일상적인 방법, 예를 들어, 형광 강도 측정, 웨스턴 블롯, 질량 분광측정법, 고전적 ELISA, 디지털 ELISA, 또는 통상의 기술자에게 공지된 다른 방법을 사용하여 정량화된다.
일부 실시양태에서, 검출 검정이 인산화된 타우 단백질, 즉 하나 이상의 인산화된 위치를 포함하는 전장 타우 단백질을 사용하여 교정될 때, 역치는 약 0.1-10 pg/ml이다. 일부 실시양태에서, 검출 검정이 하기 서열을 갖는 2E7 합성 펩티드 (2E7pep)를 사용하여 교정될 때, 역치는 약 100-600 pg/ml이다: GQKGQANATRIPAKGGGSGGGSGGGSSRTPSLPpTPPTREPK.
다양한 실시양태에서, 대상체에서 알츠하이머병을 또 다른 타우병증 또는 또 다른 원인의 치매와 구별하는 방법으로서, 대상체로부터 생물학적 샘플을 수득하는 단계; 대상체로부터의 샘플을 타우-분자 복합체를 형성할 수 있는 분자 (예를 들어, 타우에 결합하여 타우-항체 복합체를 형성할 수 있는 본원에 개시된 적어도 하나의 수용체, 또는 항체, 또는 항원 결합 단편)의 유효량과 접촉시키는 단계; 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편을 사용하여 타우-분자 복합체의 존재 및/또는 양을 검출하며, 여기서 건강한 대조군 대상체로부터의 샘플 중의 수준과 비교하여 및/또는 AD 이외의 알려진 타우병증 (예를 들어, FTD, CBD, 또는 PSP)을 가진 대상체로부터의 샘플 중의 수준과 비교하여, 샘플 중의 분자에 결합된 인산화된 타우의 존재 및/또는 상승된 수준은 대상체가 또 다른 타우병증 또는 대안적 원인의 치매보다는 알츠하이머병을 갖는다는 것을 나타내는 것인 단계를 포함하는 방법이 개시된다. 다양한 실시양태에서, 전두측두엽 치매 (FTD)를 가진 대상체는 비달변성/비문법적 원발성 진행성 실어증 (nfPPA), 문의성 변이형 원발성 진행성 실어증 (svPPA), 행동 변이형 전두측두엽 치매 (bvFTD), 또는 근위축성 측삭 경화증/전두측두엽 치매 (ALS/FTD)를 가질 수 있다.
다양한 실시양태에서, 대상체에서 알츠하이머병을 또 다른 타우병증 또는 또 다른 원인의 치매와 구별하는 방법으로서, 대상체로부터 뇌척수액 또는 혈액 샘플을 수득하는 단계; 샘플을 본원에 개시된 항-타우 항체 또는 그의 항원 결합 단편과 접촉시키는 단계; 및 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편을 사용하여 타우-항체 복합체의 존재 및/또는 양을 검출하며, 여기서 건강한 대조군 대상체로부터의 샘플 중의 수준과 비교하여 및/또는 AD 이외의 알려진 타우병증 (예를 들어, FTD, CBD, 또는 PSP)을 가진 대상체로부터의 샘플 중의 수준과 비교하여, 샘플 중의 항체에 결합된 인산화된 타우의 존재 및/또는 상승된 수준은 대상체가 또 다른 타우병증 또는 또 다른 형태의 치매보다는 알츠하이머병을 갖는다는 것을 나타내는 것인 단계를 포함하는 방법이 개시된다. 일부 실시양태에서, 방법은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편을 사용하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하며, 항체 또는 항원 결합 단편은 인산화된 타우에 결합하여 인산화된 타우-항체 복합체를 형성할 수 있고; 샘플 중의 항체 또는 항원 결합 단편과 복합체를 형성한 인산화된 타우의 존재 및/또는 양을 검출하며, 여기서 건강한 대조군 대상체로부터의 샘플 중의 수준과 비교하여 샘플 중의 인산화된 타우의 존재 및/또는 상승된 수준은 대상체가 또 다른 타우병증 또는 대안적 원인의 치매보다는 알츠하이머병을 갖는다는 것을 나타낸다. 특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 또는 결합 단편은 항체 DC2E7 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 항체-타우 복합체는 타우에 결합할 수 있는 제2 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로 검출된다. 일부 실시양태에서, 제2 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 제2 항체 또는 항원 결합 단편은 서열식별번호: 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 제2 항체 또는 항원 결합 단편은 항체 DC2E2 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 검출 및 포획 항체는 역전된다.
다양한 실시양태에서, 알츠하이머병을 앓고 있는 대상체에게 알츠하이머병에 대한 치료제를 투여하는 것을 포함하는 치료 방법이 개시되며, 여기서 대상체는 전술한 방법 중 임의의 것에 따라 알츠하이머병을 갖는 것으로 확인되었다. 치료는 AD를 치료하는 항체, 치료용 펩티드, 또는 소분자, 예를 들어, 본원에 언급된 치료 중 임의의 것을 투여하는 것을 포함할 수 있다. 다양한 실시양태에서, 치료제는 미국 특허 번호 9,518,101 및/또는 WO 2016/079597 (그 전체 내용이 본원에 참조로 포함됨)에 개시된 항체 또는 치료용 펩티드 중 하나 이상을 포함할 수 있다. 특정 실시양태에서, 치료제는 항체 DC2E7 또는 그의 항원 결합 단편 및/또는 DC2E2, 또는 그의 항원 결합 단편일 수 있다. 한 실시양태에서, 치료제는 DC2E7 및/또는 DC2E2와 동일한 에피토프에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편일 수 있다.
또한 본원에는, 특정 실시양태에서, 뇌에서 인산화된 타우의 패턴을 검출하며, 그에 의해 AD 또는 또 다른 타우병증을 진단하기 위해 대상체에게 (예를 들어, 정맥내로) 투여될 수 있는 검출가능한 표지 (예를 들어, 방사성표지)에 접합된 개시된 항체 및 항원 결합 단편의 용도가 개시된다.
다양한 실시양태에서, 인간 대상체에서 알츠하이머병 또는 또 다른 타우병증을 검출하는 방법으로서, 인간 대상체에게 검출가능한 표지, 예컨대 방사성동위원소에 접합된 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편을 투여하는 단계, 및 환자의 뇌 중의 방사성동위원소 또는 다른 검출가능한 표지로부터의 시그널을 검출하며, 여기서 시그널의 검출은 대상체가 알츠하이머병 또는 또 다른 타우병증을 갖는다는 것을 나타내는 것인 단계를 포함하는 방법이 개시된다. 일부 실시양태에서, 검출가능한 표지에 접합된 개시된 항체 및 항원 결합 단편에 의해 결합된 타우 종의 뇌 분포는 대상체가 AD 또는 또 다른 타우병증을 갖는지의 여부를 결정하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 항체 결합은 다른 타우병증, 예컨대 FTD - 픽병 (여기서 타우 종은 치아 이랑에서 더 두드러질 수 있고, 어느 정도는 해마에서 더 두드러질 수 있음), CBD (여기서 타우 종은 미상핵에서 더 두드러질 수 있음) 및 PSP (여기서 타우 종은 조가비핵/미상핵에서 더 두드러질 수 있음)와 비교 시 AD (여기서 타우 종은 해마 CA1에서 더 두드러질 수 있음)에서 상이할 수 있다. 일부 실시양태에서, 대상체에게 검출가능한 표지에 접합된 항체 및 항원 결합 단편을 (예를 들어, 정맥내 투여를 통해) 투여한 다음, 그의 뇌를 (예를 들어, PET를 통해) 영상화하여 뇌에서 상기 표지된 항체 및 항원 결합 단편에 의해 결합된 타우의 맵을 생성한다. 이러한 맵은 AD 및 다른 타우병증에 대한 알려진 맵에 대항하여 분석하여, 환자가 AD 또는 또 다른 타우병증을 갖는지의 여부를 결정할 수 있다.
특정 실시양태에서, 검출은 양전자 방출 단층촬영에 의해 수행된다. 뇌에서의 시그널의 분포는 대상체가 알츠하이머병 또는 또 다른 타우병증을 갖는지의 여부를 나타낼 수 있다. 문헌 [Murray et al., Clinicopathologic assessment and imaging of tauopathies in neurodegenerative dementias, Alzheimer's Research & Therapy, 6:1, 2014]을 참조한다. 특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 또는 결합 단편은 항체 DC2E7 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 또는 결합 단편은 항체 DC2E7 또는 그의 항원 결합 단편과 동일한 에피토프에 결합하거나 또는 결합에 대해 경쟁하는 항체 또는 항원 결합 단편을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 방사성동위원소에 접합된 항체 또는 그의 항원 결합 단편은 본원에 기재된 바와 같이 대상체에게 투여될 수 있다. 방사성 시그널은 양전자 방출 단층촬영에 의해 뇌에서 검출될 수 있다. 이어서, 체내 항체 접합체 농도의 3차원 영상은 컴퓨터 분석에 의해 구축될 수 있다. 뇌 전반에 걸친 시그널의 농도는 AD 또는 다른 타우병증과 연관된 뚜렷한 패턴과의 상관관계를 보여주기 위해 사용될 수 있거나, 또는 치매를 나타내는 환자가 AD, 또 다른 타우병증, 또는 또 다른 원인의 치매를 갖는지의 여부를 결정하기 위해 사용될 수 있다. 이러한 시그널 패턴은 대상체가 AD 또는 또 다른 타우병증을 갖는지를 결정하기 위해 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 해석될 수 있다. 문헌 [Murray et al., Clinicopathologic assessment and imaging of tauopathies in neurodegenerative dementias, Alzheimer's Research & Therapy, 6:1, 2014]을 참조한다.
다양한 실시양태에서, 치매 증상을 나타내는 인간 대상체는 치료 결정을 내리기 전에 먼저, 본원에 개시된 알츠하이머병 또는 또 다른 타우병증을 검출하는 방법 중 어느 하나 이상을 적용받게 된다. 특정 실시양태에서, 샘플 (예를 들어, CSF 또는 혈액)을 치매 증상을 나타내는 인간 대상체로부터 취하고, 상기 기재된 방법에 따라 분석하고/거나, 인간 대상체에게 방사성동위원소와 접합된 항체 DC2E7을 투여하며, 대상체가 알츠하이머병 또는 또 다른 타우병증을 갖는지를 결정하기 위해 대상체의 뇌에서 시그널을 검출한다. 한 실시양태에서, 알츠하이머병 또는 또 다른 타우병증을 갖는 것으로 결정된 인간 대상체에게 AD 또는 또 다른 타우병증을 치료하는 제약 조성물을 투여할 수 있다. 한 실시양태에서, 제약 조성물은 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편을 포함한다. 한 실시양태에서, 제약 조성물은 미국 특허 번호 9,518,101 및/또는 WO 2016/079597에 개시된 항체 또는 치료용 펩티드 중 하나 이상을 포함한다. 대안적으로, 대상체에게 알츠하이머병 또는 또 다른 타우병증을 갖지 않는 것으로 결정되면, 대안적 치료가 투여될 수 있다.
다양한 실시양태에서, 인간 대상체에서 알츠하이머병의 병기를 결정하는 방법으로서, 대상체로부터 뇌척수액 또는 혈액 샘플을 수득하는 단계; 샘플을 타우-분자 복합체를 형성할 수 있는 분자 (예를 들어, 타우에 결합하여 타우-항체 복합체를 형성할 수 있는 본원에 개시된 적어도 하나의 수용체, 항체, 또는 항원 결합 단편)의 유효량과 접촉시키는 단계; 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편을 사용하여 타우-분자 복합체의 양을 검출하는 단계; 및 상기 분자와 복합체를 형성한 타우의 양을 알려진 AD 병기의 샘플 중의 양 또는 역치와 비교하며, 그에 의해 알츠하이머병의 병기를 확인하는 단계를 포함하는 방법이 개시된다. 일부 실시양태에서, 샘플 중의 더 많은 양의 타우는 AD의 병기가 더 진행되었다는 것을 나타낸다. 다양한 실시양태에서, 수준 및/또는 역치는 전술한 바와 같이 평가된다. 일부 실시양태에서, 진행된 병기는 알려진 AD 병기, 예를 들어, 브라크 병기 I-VI의 샘플 중에서 검출된 인산화된 타우의 양과 비교하여 결정된다 (Braak et al., "Neuropathological stageing of Alzheimer-related changes". Acta Neuropathologica, 82(4): 239-59 (1991)).
다양한 실시양태에서, 인간 대상체에서 알츠하이머병의 병기를 결정하는 방법으로서, 대상체로부터 뇌척수액 또는 혈액 샘플을 수득하는 단계; 샘플을 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키며, 여기서 항체 또는 항원 결합 단편은 인산화된 타우에 결합하여 인산화된 타우-항체 복합체를 형성할 수 있는 것인 단계; 샘플 중의 항체 또는 항원 결합 단편과 복합체를 형성한 인산화된 타우의 양을 검출하는 단계; 및 항체와 복합체를 형성한 타우의 양을 알려진 AD 병기의 샘플 중의 양 또는 역치와 비교하며, 그에 의해 알츠하이머병의 병기를 확인하는 단계를 포함하는 방법이 개시된다. 일부 실시양태에서, 샘플 중의 더 많은 양의 타우는 AD의 병기가 더 진행되었다는 것을 나타낸다. 다양한 실시양태에서, 수준 및/또는 역치는 전술한 바와 같이 평가된다. 일부 실시양태에서, 진행된 병기는 알려진 AD 병기, 예를 들어, 브라크 병기 I-VI의 샘플 중에서 검출된 인산화된 타우의 양과 비교하여 결정된다 (예를 들어, 문헌 [Braak et al., "Neuropathological stageing of Alzheimer-related changes". Acta Neuropathologica, 82(4): 239-59 (1991)] 참조). 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 또는 결합 단편은 항체 DC2E7 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다. 일부 실시양태에서, 샘플 중에서 결정된 타우의 수준은 알려진 AD 병기의 환자로부터의 샘플 및/또는 건강한 개체로부터의 대조군 샘플 중의 수준과 비교하여, 시험 대상체가 자신의 샘플 중에 상승된 양의 타우를 갖고 있는지의 여부를 결정한다.
다양한 실시양태에서, 알츠하이머병에 대한 항-타우 요법의 유효성을 결정하는 방법으로서, 인간 대상체로부터 뇌척수액 또는 혈액 샘플을 수득하는 단계; 샘플을 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키며, 여기서 항체 또는 항원 결합 단편은 인산화된 타우에 결합하여 인산화된 타우-항체 복합체를 형성할 수 있는 것인 단계; 및 샘플 중의 항체 또는 항원 결합 단편과 복합체를 형성한 인산화된 타우의 존재 및/또는 양을 검출하며, 여기서 건강한 대조군 대상체로부터의 샘플 중의 수준 또는 역치와 비교하여 샘플 중의 인산화된 타우의 상승된 수준은 대상체가 알츠하이머병에 대한 항-타우 요법에 반응할 가능성이 더 높다는 것을 나타내는 것인 단계를 포함하는 방법이 개시된다. 다양한 실시양태에서, 역치 초과의 상승된 수준 또는 타우에 있어서의 배수 증가는 전술한 바와 같이 결정된다.
일부 실시양태에서, 알츠하이머병에 대한 항-타우 요법의 유효성을 결정하는데 사용되는 항-타우 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 또는 결합 단편은 항체 DC2E7 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다.
특정 실시양태에서, 항-타우 요법은 이러한 요법에 반응할 가능성이 더 높은 것으로서 확인된 대상체에게 투여된다. 한 실시양태에서, 항-타우 요법은 타우에 결합하고 뇌로부터의 그의 제거를 촉진시키거나 또는 타우 병리의 확산을 억제하는 항체를 투여하는 것을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 항-타우 요법은 본원에 개시된 것들 중 임의의 것, 및/또는 미국 특허 번호 9,518,101 및 WO 2016/079597에 개시된 임의의 것을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 항-타우 요법은 소분자 또는 펩티드 백신 요법 또는 항체 요법을 포함한다. 미국 특허 번호 9,518,101 및 WO 2016/079597을 참조하며; 그 전체 내용이 참조로 포함된다.
다양한 실시양태에서, 알츠하이머병에 대한 항-타우 요법의 유효성을 모니터링하는 방법으로서, (a) 치료에 앞서 인간 대상체로부터 뇌척수액 또는 혈액 샘플을 수득하는 단계; (b) 샘플을 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉시키며, 여기서 항체 또는 항원 결합 단편은 인산화된 타우에 결합하여 인산화된 타우-항체 복합체를 형성할 수 있는 것인 단계; (c) 항체 또는 항원 결합 단편과 복합체를 형성한 인산화된 타우의 존재 및/또는 양을 검출하는 단계; (d) 항-타우 요법을 대상체에게 투여하는 단계; (e) 항-타우 요법을 투여한 후 단계 (a)-(c)를 반복하며, 그에 따라 치료 전의 샘플 중의 수준과 비교 시 치료 후의 샘플 중의 인산화된 타우의 수준에서의 감소는 유효한 요법을 나타내는 것인 단계를 포함하는 방법이 개시된다. 일부 실시양태에서, 항-타우 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 방법은 치료 전에 수득된 샘플 중의 수준과 비교 시 치료 후에 수득된 샘플 중의 더 낮은 수준의 인산화된 타우를 갖는 대상체에게 항-타우 요법을 다시 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 또는 결합 단편은 항체 DC2E7 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 항-타우 요법은 소분자 또는 펩티드 백신 또는 항체 요법을 포함한다. WO 2016/079597 및 미국 특허 번호 9,518,101을 참조하며; 그 전체 내용이 참조로 포함된다. 한 실시양태에서, 항-타우 요법은 타우에 결합하고 뇌로부터의 그의 제거를 촉진시키는 항체를 투여하는 것을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항-타우 요법은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항-타우 항체 또는 항원 결합 단편을 투여하는 것을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 항-타우 요법은 본원에 개시된 것들 중 임의의 것, 및/또는 미국 특허 번호 9,518,101 및 WO 2016/079597에 개시된 임의의 것을 포함한다.
AD를 모니터링하고/거나 확증하는 다른 방법
AD 진단을 확증하는데 사용하기 위하여, 예를 들어, 행동 평가에 의해 AD 상태를 결정, 확증 및/또는 모니터링하기 위해, 또는 치료의 효과 및/또는 질환 진행을 평가하기 위해, 수많은 추가적인 척도가 사용될 수 있다. 일부 실시양태에서, 이러한 척도는 알츠하이머병 활동 스케일-인지 서브스케일 13 (ADAS-Cog 13) 점수에 있어서의 평균 변화 및 일상 생활의 알츠하이머병 공동 연구 활동 (ADCS-ADL) 점수에 있어서의 평균 변화를 포함한다. 다른 척도는 MRI 부피측정에 있어서의 변화, 임상 치매 평가 (CDR-SB/CDR-GS)에 있어서의 변화, 신경정신과 행동: 신경정신행동 검사 (NPI) 총 및 도메인 점수에 있어서의 변화, 및/또는 인지: MMSE 총 점수에 있어서의 변화를 포함할 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 척도는 하기 중 임의의 것을 포함할 수 있다: 사망 발생까지의 시간, 제도화, 일상 생활 활동 수행 능력의 상실, 중증 치매까지의 시간, ADCS-ADL, ADAS-cog 점수, MMSE 점수, 인지 능력, 혈장 CSF 바이오마커, ADAS-총 점수, 삶의 질에 의해 평가된 삶의 질 알츠하이머병 스케일, 행동 테스트 점수, 및 미국 FDA의 임상 치매 평가-박스 총점.
다양한 실시양태에서, 인간 대상체에서 알츠하이머병 또는 또 다른 타우병증을 검출하는 방법은 방사성동위원소에 접합된 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편을 대상체에게 투여하는 단계; 및 환자의 뇌에서 시그널을 검출하며, 여기서 검출된 뇌에서의 시그널 패턴은 대상체가 알츠하이머병 또는 또 다른 타우병증을 갖는지의 여부를 나타내는 것인 단계를 포함한다. 시그널의 검출은 양전자 방출 단층촬영에 의해 수행될 수 있다. 뇌에서의 시그널의 분포는 대상체가 알츠하이머병 또는 또 다른 타우병증을 갖는지의 여부를 나타내기 위해 사용될 수 있다. 한 실시양태에서, 투여된 방사성동위원소에 접합된 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 DC2E7 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다.
치료 또는 진단 용도로 본원에 개시된 항체 및 항원 결합 단편은 임의의 적합한 투여 경로, 예를 들어, 비경구, 국소, 피내, 정맥내, 경구, 피하, 복강내, 비강내 또는 근육내 경로에 의해 투여될 수 있다. 전형적인 투여 경로는 피하일 수 있지만 다른 경로도 동일하게 효과적일 수 있다. 또 다른 전형적인 경로는 근육내 주사일 수 있다. 이러한 유형의 주사는 전형적으로, 팔 또는 다리 근육에서 수행된다. 정맥내 주사 뿐만 아니라 복강내 주사, 동맥내, 두개내 또는 피내 주사가 또한 사용될 수 있다. 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편은 생리학상 허용되는 담체 및/또는 희석제, 예를 들어, 멸균 액체, 예컨대 물, 오일, 염수, 글리세롤 또는 에탄올 중의 물질의 용액 또는 현탁액의 주사가능한 투여량으로서 투여될 수 있다. 본원에 개시된 항체 또는 항원 결합 단편은 또한 투여를 위해 두개골에 작은 구멍을 뚫음으로써 투여될 수 있으며, 이는 혈액 뇌 장벽을 가로지르는 것을 허용할 수 있다.
키트
다양한 실시양태에서, 본원에 기재된 항체 또는 항원 결합 단편 중 하나 이상을 포함하는 키트가 본원에 개시된다. 특정 실시양태에서, 키트는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함한다. 한 실시양태에서, 항체 또는 결합 단편은 항체 DC2E7 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다.
특정 실시양태에서, 키트는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 표 1에서의 것들, 예를 들어, 표 1에서의 것들로부터의 6개의 CDR의 세트로부터 선택된 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함한다. 일부 실시양태에서, 항체 또는 항원 결합 단편은 경쇄 가변 도메인 및 중쇄 가변 도메인 및 표 1에서의 것들로부터 선택된 경쇄 가변 도메인, 예를 들어, 표 1에서의 것들로부터 선택된 쌍형성된 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다.
특정 실시양태에서, 키트는 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 위치 2에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 위치 2 및 12 중 하나 이상에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고/거나, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고/거나, 여기서 LCDR1은 위치 2에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고/거나, LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함한다. 다양한 실시양태에서, HCDR1 내의 위치 2에서의 치환은 글리신이고, HCDR2 내의 위치 2에서의 치환은 이소류신이고/거나, HCDR2 내의 위치 12에서의 치환은 발린이고/거나, LCDR1 내의 위치 2에서의 치환은 아스파라긴이다. 다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역은 위치 1, 3, 30, 37, 48, 58, 63, 68, 76, 77, 및 80 중 하나 이상에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하고/거나, 경쇄 가변 영역은 위치 7, 11, 20, 28, 39, 및 69 중 하나 이상에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함한다. 다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 68에서의 치환은 류신이고, 경쇄 가변 영역 내의 위치 39에서의 치환은 이소류신이다. 다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 48에서의 치환은 이소류신이다. 다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 30에서의 치환은 글리신이고, 위치 58에서의 치환은 발린이고, 경쇄 가변 영역 내의 위치 7에서의 치환은 프롤린이고, 위치 69에서의 치환은 글리신이다. 다양한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역 내의 위치 11에서의 치환은 세린이다. 다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 77에서의 치환은 세린이고, 경쇄 가변 영역 내의 위치 11에서의 치환은 류신이고, 위치 20에서의 치환은 알라닌이고, 위치 28에서의 치환은 아스파라긴이다. 다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 37에서의 치환은 알라닌이고, 위치 63에서의 치환은 알라닌이고, 위치 80에서의 치환은 세린이고, 경쇄 가변 영역 내의 위치 11에서의 치환은 류신이다. 다양한 실시양태에서, 중쇄 가변 영역 내의 위치 1에서의 치환은 글리신이고, 위치 3에서의 치환은 아르기닌이고, 위치 76에서의 치환은 글루탐산이고, 위치 77에서의 치환은 세린이다. 다양한 실시양태에서, 경쇄 가변 영역 내의 위치 11에서의 치환은 류신이다.
다양한 실시양태에서, 키트는 2종 이상의 항체 또는 항원 결합 단편을 포함한다. 특정 실시양태에서, 키트는 하기를 포함한다:
a. 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편으로서, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체 또는 항원 결합 단편; 및
b. 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 또 다른 항체 또는 항원 결합 단편으로서, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 것인 또 다른 항체 또는 항원 결합 단편.
특정 실시양태에서, 키트는 2종 이상의 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하며, 여기서 하나의 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함하고; 다른 항체 또는 항원 결합 단편은 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 서열식별번호: 21의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 포함한다. 특정 실시양태에서, 키트는 항체 또는 DC2E7 또는 그의 항원 결합 단편 및/또는 항체 또는 DC2E2 또는 그의 항원 결합 단편을 포함한다.
다양한 실시양태에서, 키트는 2종 이상의 항체 또는 항원 결합 단편을 포함한다. 특정 실시양태에서, 키트는 하기를 포함한다:
a. 표 1에 제시된 서열 중 임의의 것, 예를 들어, 표 1에 열거된 6개의 CDR의 세트 및/또는 쌍형성된 중쇄 및 경쇄 가변 도메인 서열을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편;
b. 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 또 다른 항체 또는 항원 결합 단편으로서, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 것인 또 다른 항체 또는 항원 결합 단편.
다양한 실시양태에서, 키트는 2종 이상의 항체 또는 항원 결합 단편을 포함한다. 특정 실시양태에서, 키트는 하기를 포함한다:
a. 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편으로서, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 25의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 28의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체 또는 항원 결합 단편; 및
b. 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하는 또 다른 항체 또는 항원 결합 단편으로서, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 것인 또 다른 항체 또는 항원 결합 단편.
또 다른 실시양태에서, 전술한 키트 중 임의의 것은 본원에 개시된 방법에 따라 대상체로부터의 샘플 중의 인산화된 타우를 검출하며 그에 의해 대상체에서의 알츠하이머병을 검출하기 위해 하나 이상의 항체 또는 항원 결합 단편을 사용하는 것에 대한 지침을 추가로 포함할 수 있다. 이러한 지침에 따라 샘플은 뇌척수액 또는 혈액일 필요가 있다. 키트는 고전적 ELISA 또는 디지털 ELISA와 함께 사용하기 위한 추가적인 성분을 추가로 포함할 수 있다.
실시예
전술한 실시양태 중 몇 가지는 하기 제시된 비-제한적인 예에 예시된다. 그러나, 본 명세서 전체를 고려하면 본 개시내용의 다른 실시양태가 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백할 것이다. 본 명세서 및 실시예는 단지 예시적인 것으로 간주되도록 의도된다. 또한, 본원에 인용된 모든 참고문헌은 그 전체 내용이 참조로 포함된 것으로 간주되어야 한다.
실시예 1
재조합 인간 타우 단백질의 제조
인간 전장 타우 2N4R 및 타우 결실 돌연변이체: 재조합 타우 단백질을 클론 τ40으로부터 생성하였으며 (Goedert et al., Multiple isoforms of human microtubule-associated protein tau: sequences and localization in neurofibrillary tangles of Alzheimer's disease, Neuron 3, 519-526 (1989)), 이를 발현 플라스미드 pET-17b (노바젠(Novagen))로 서브클로닝하고 박테리아에서 발현하였다. 각각의 타우 결실 돌연변이체는 DNA 시퀀싱에 의해 검증하였다. 모든 타우 결실 돌연변이체 및 타우 펩티드는 441개 아미노산 길이이므로 타우441이라고도 하는 가장 긴 인간 타우 이소형 2N4R에 따라 넘버링하였다 (D'Souza, I., and Schellenberg, G.D. (2005). Regulation of tau isoform expression and dementia. Biochimica et biophysica acta 1739, 104-115). 타우 단백질의 생산은 하기 단계를 수반하였다: a) 박테리아에서의 타우의 발현; b) 이온 교환 크로마토그래피에 의한 타우 정제; c) 겔-여과에 의한 타우 정제; d) 단리된 타우의 농축 및 저장.
a) 인간 전장 타우 (2N4R) 및 재조합 타우 결실 돌연변이체의 박테리아 발현: 인간 타우 (상기) 발현 플라스미드를 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli) (이. 콜라이), 생산 균주 BL21 (DE3)로 형질전환시켰다. 적절한 발현 플라스미드를 함유하는 박테리아 세포를 문헌 ["Molecular Cloning: A Laboratory Manual" by Sambrook and Russell (2001)]에 기재된 바와 같이 배양하고 유도하였다. 타우 단백질 또는 그의 단편의 발현을 구동시키는 pET-17b 플라스미드로 형질전환된 BL21 (DE3) 박테리아의 단일 집락을 300 rpm에서 100 μg/ml 암피실린과 함께 500 mL의 루리아(Luria) 브로스 배지에서 37℃ 하에 성장시키고, 이소프로필-β-D-1-티오갈락토피라노시드 (IPTG)를 0.4 mM의 최종 농도로 부가함으로써 유도시켰다. 37℃에서 3시간 더 인큐베이션한 후, 3,000xg에서 15분 동안 4℃ 하에 원심분리함으로써 박테리아를 수집하였다.
b) 염기성 및 중성 타우 단백질 (6개의 타우 이소형, 타우 이소형 2N4R의 점 돌연변이체: Ser198Ala, Ser199Ala, Ser202Ala, Thr205Ala, Ser208Ala, Ser210Ala, Thr212Ala, Ser214Ala, Thr217Ala, Ser231Ala, 타우221-441, 타우99-441, 타우188-44, 타우31-441, 타우151-391, 타우127-441, 타우2N4RΔ(134-168), 타우2N4RΔ(49-243))의 양이온-교환 크로마토그래피 정제는 본질적으로 이전에 보고된 바와 같이 수행하였다 (Krajciova et al., Preserving free thios of intrinsically disordered tau protein without use of a reducing agent, Analytical Biochemistry, 383:343-345, 2008). 발현 후, 박테리아 펠릿을 10 ml의 용해 완충액 (50 mM 1,4-피페라진디에탄술폰산 (PIPES) pH 6.9, 50 mM 염화나트륨 (NaCl), 1 mM 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA), 5 mM 디티오트레이톨 (DTT), 0.1 mM 페닐메틸술포닐 플루오라이드 (PMSF), 5% (v/v) 글리세롤)에 재현탁시키고, 액체 질소에서 신속하게 동결시키며, 타우 단백질의 정제에 사용할 때까지 -80℃ 하에 저장하였다. 타우 단백질 정제를 위해, 동결된 박테리아 현탁액을 신속하게 해동하고 얼음 위에 놓아 두었다. 박테리아 세포벽은 50% 듀티 사이클, 50 W 전력 출력, 30초 동안 6회, 30초 일시 중지로 설정된 소노플러스(Sonopuls) HD 2200, 팁 TT-13 (반델린(Bandelin; 독일))을 사용하여 얼음 위에서 초음파처리에 의해 파괴시켰다. 용해물을 원심분리 (4℃에서 15분 동안 21,000xg)에 의해 정화시키고, 0.45 μm 막 필터를 통해 상청액을 여과하였다. 재조합 타우 단백질의 대규모 정제는 AKTA-FPLC 워크스테이션 (아머샴 바이오사이언시스(Amersham Biosciences; 스웨덴))을 사용하여 6℃에서 수행하였다. 여과된 용해물을 용해 완충액으로 평형시킨 5-ml 하이트랩(HiTrap) SP HP 칼럼 (지이 헬스케어(GE Healthcare; 스웨덴 웁살라)) 상으로 3 ml/min 유량으로 로딩하고, 280 nm에서의 기준선이 안정될 때까지 60 ml의 용해 완충액으로 광범위하게 세척하였다. 결합된 타우 단백질을 완충액 B (1 M NaCl로 보충된 용해 완충액)의 구배 (15 ml 내에서 0-30%)에 의해 용출시켰다. 개별 1 mL 분획을 수집하고 소듐 도데실 술페이트-폴리아크릴아미드 겔 전기 영동 (SDS-PAGE)으로 분석하였다. 양전하를 띤 타우 단백질과 함께 정제되는 핵산을 제거하기 위해, 타우 단백질을 함유하는 분획을 풀링하고, 완충액 B의 덜 가파른 구배 (45 ml에서 0-30%)를 수반하는 5-ml 하이트랩 SP HP 칼럼 (지이 헬스케어; 스웨덴 웁살라)을 사용하여 제2 양이온-교환 크로마토그래피 단계로 정제하였다. 산성 타우 단백질 (타우1-226, 타우1-136, 타우1-242)의 음이온-교환 크로마토그래피 정제는 기존에 보고된 바와 같이 수행하였다 (Csokova et al., Rapid purification of truncated tau proteins: model approach to purification of functionally active fragments of disordered proteins, implication for neurodegenerative diseases, Protein Expression and Purification, 35:366-372, 2004). 발현 후, 박테리아 펠릿을 10 ml의 히스티딘 용해 완충액 (20 mM 히스티딘, pH 6.0, 50 mM NaCl, 1 mM EDTA, 5 mM DTT, 0.1 mM PMSF, 및 5% (v/v) 글리세롤)에 재현탁시켰다. 박테리아 세포벽은 50% 듀티 사이클, 50 W 전력 출력, 30초 동안 6회, 30초 일시 중지로 설정된 소노플러스 HD 2200, 팁 TT-13 (반델린; 독일)을 사용하여 얼음 위에서 초음파처리에 의해 파괴시켰다. 용해물을 원심분리 (4℃에서 15분 동안 21,000xg)에 의해 정화시켰다. 박테리아 용해물을 1% 스트렙토마이신 술페이트 (메덱스포르트(Medexport; 러시아))에 의해 침전시키고, 5분 동안 얼음 위에서 인큐베이션하며, 원심분리 (4℃에서 15분 동안 21,000xg)에 의해 정화시키고, 0.45 μm 막 필터를 통해 여과하였다. 이와 같이 여과된 스트렙토마이신 침전된 용해물을 5 ml 하이트랩 Q세파로즈 HP 칼럼 (아머샴 바이오사이언시스; 스웨덴) 상으로 3 ml/min 유량으로 로딩하고, A280 기준선이 안정될 때까지 30-50 ml의 히스티딘 용해 완충액으로 광범위하게 세척하였다. 타우 단백질을 히스티딘 용해 완충액에서 2-단계 염 구배 (40 ml 중 0.05-0.5 M NaCl에 이어 20 ml 중 0.5-1 M NaCl)로 용출시켰다.
c) 정제의 최종 겔-여과 단계 (모든 타우 단백질에 대해 동일함)에서는, 이온 교환 크로마토그래피에 의해 수득된 풀링된 타우 단백질 분획을 100 mM NaCl이 보충된 염기성/중성 또는 산성 타우 단백질에 대해 각각 PIPES 또는 히스티딘 용해 완충액에서 3 ml/min으로 겔-여과 칼럼 (하이로드(HiLoad) 26/60 슈퍼덱스(Superdex) 200 프렙 등급 칼럼, 지이 헬스케어) 상으로 주사하였다. 용출된 타우 단백질을 풀링하였다.
d) 겔-여과 정제 후 타우 단백질 농축을 위해, 풀링된 분획을 1.5 용적의 2.5% 글리세롤로 희석하고, 하이트랩 SP HP 칼럼 (염기성 및 중성 타우 단백질) 또는 하이트랩 Q HP 칼럼 (산성 타우 단백질) 상에 다시 로딩하였다. 이어서, 이와 같이 농축된 재조합 타우 단백질을 1 M NaCl 단계 구배로 상기 칼럼으로부터 용출시켰다. 최종적으로, 상기 완충액을 5 mL 하이트랩 탈염 칼럼 (지이 헬스케어)을 사용하여, 아르곤으로 포화된 포스페이트-완충 염수 (PBS, 8.09 mM 인산이나트륨 (Na2HPO4), 1.47 mM 인산이수소 칼륨 (KH2PO4), 136.89 mM NaCl, 2.7 mM 염화칼륨 (KCl))로 교환하였다. 정제된 샘플의 단백질 정량화는 소 혈청 알부민 (BSA)을 표준으로서 사용하여, 비신코닌산 (BCA) 정량화 키트 (피어스(Pierce; 미국))를 사용하여 수행하였다. 타우 단백질을 작업용 분취액으로 분취하고, 액체 질소에서 급속-동결시키며, -70℃ 하에 저장하였다.
실시예 2
인간 타우1-242에 대항하여 모노클로날 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주의 제조, ELISA에 의한 모노클로날 항체의 스크리닝, 및 모노클로날 항체 DC2E2의 초기 특징규명
6주령 Balb/c 마우스를 완전 프로인트 아주반트 (시그마(SIGMA)) 중의 50 μg의 재조합 타우1-242- (실시예 1에 기재된 바와 같이 제조됨)로 피하로 프라이밍하고, 불완전 프로인트 아주반트 중의 50 μg의 동일한 항원으로 4주 간격으로 3회 부스팅하였다. 융합 3일 전, 마우스에게 PBS 중의 동일한 항원 50 μg을 정맥내로 주사하였다. 면역화된 마우스로부터의 비장 세포를 문헌 [Kontsekova et al., The effect of postfusion cell density on establishment of hybridomas, Folia Biol. 34, 18-22 (1988)]의 방법에 따라 NS/0 골수종 세포와 융합시켰다. 비장 세포를 NS/0 골수종 세포와 혼합하고 (비 5:1), 10% 디메틸 술폭시드가 보충된 무혈청 둘베코 변형 이글 배지 (DMEM) 중의 1 ml의 50% 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 1550 (세르바(Serva))에서 1분 동안 융합시켰다. 이와 같이 융합된 세포를 96-웰 플레이트 상에서 웰당 2.5 x 105개 비장 세포의 밀도로, 20% 말 혈청, L-글루타민 (2 mM), 히포크산틴 (0.1 mM), 아미노프테린 (0.04 mM), 티미딘 (0.016 mM) 및 젠타마이신 (40 U/ml)을 함유하는 DMEM에 재현탁시켰다.
세포를 37℃에서 10일 동안 인큐베이션하고, 성장하는 하이브리도마를 효소-결합 면역흡착 검정 (ELISA)에 의해 항-타우1-242-특이적 모노클로날 항체의 생산에 관하여 스크리닝하였다. 미세역가 플레이트를 PBS 중의 37℃에서 타우1-242 (5 μg/ml, 50 μl/웰)로 밤새 코팅하였다. 비-특이적 결합을 감소시키기 위해 1% 무지방 분유로 플레이트를 차단하고, PBS-0.05% 트윈 20으로 세척하며, 50 μl/웰의 하이브리도마 배양 상청액과 함께 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 결합된 모노클로날 항체를 양고추냉이 퍼옥시다제 (HRP, 다코(DAKO))와 접합된 양 항-마우스 이뮤노글로불린 (Ig)으로 검출하였다. 반응은 퍼옥시다제 기질로서 TMB 원 (켐-엔-텍 다이아그노스틱스(Kem-En-Tec Diagnostics))을 사용하여 전개하였고 50 μl의 2 M H2SO4로 중지하였다. 450 nm에서의 흡광도는 파워웨이브(Powerwave) HT (바이오-텍(Bio-Tek))를 사용하여 측정하였다. 흡광도 값이 음성 대조군 (PBS) 값의 적어도 2배인 판독 값을 양성으로 간주하였다. 양성 하이브리도마 배양물은 문헌 [Kontsekova et al., One-step method for establishing 8-azaguanine-resistant hybridomas suitable for preparation of triomas, J. Immunol. Methods, 145, 247-250 (1991)]에 기재된 절차에 따라 연질 한천에서 추가로 서브클로닝하였다.
이와 같이 생산되고 선택된 양성 하이브리도마 배양물 중에서, 모노클로날 항체 DC2E2 (아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션에 ATCC 특허 기탁 지명 PTA-124991로 기탁된 마우스 하이브리도마 세포주에 의해 생산됨)를 확인하였다. DC2E2는 하기에 기재된 바와 같이 추가로 특징규명하였다. 항체 이소타입은 마우스 Ig 이소타이핑 키트 (ISO-2, 시그마)를 사용하여 ELISA에 의해 뮤린 IgG1인 것으로 결정하였다 (도 1).
실시예 3
재조합 타우 결실 돌연변이체, 타우-유래 펩티드 및 질량 분광측정법을 사용하는 DC2E2 에피토프의 맵핑
인간 타우 단백질 2N4R의 결실 돌연변이체는 ELISA를 사용하여 DC2E2의 에피토프 맵핑에 사용하였다 (도 2a). 재조합 인간 타우 이소형 2N4R, 1N4R, 2N3R, 0N4R, 1N3R, 0N3R 및 타우 결실 돌연변이체는 실시예 1에 기재된 바와 같이 제하였다. 미세역가 플레이트는 재조합 타우 단백질 (PBS 중의 5 μg/ml, 50 μl/웰)로 37℃ 하에 밤새 코팅하였다. 비-특이적 결합을 감소시키기 위해 PBS-트윈20 (0.1% v/v)으로 플레이트를 차단하고, 50 μl/웰의 DC2E2 하이브리도마 배양 상청액과 함께 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 결합된 모노클로날 항체를 HRP-접합된 (다코) 양 항-마우스 Ig로 검출하였다. 반응은 퍼옥시다제 기질로서 TMB 원 용액 (켐-엔-텍 다이아그노스틱스)을 사용하여 전개하였고 50 μl의 2 M H2SO4로 중지하였다. 파워웨이브 HT (바이오-텍)를 사용하여 450 nm에서의 흡광도를 측정하였다. 흡광도 값이 음성 대조군 (PBS) 값의 적어도 2배인 판독 값을 양성으로 간주하였다. DC2E2는 하기 인간 타우 단백질: 6개의 인간 타우 이소형 (도 2b), 타우 1-242, 타우 31-441, 타우 99-441, 타우 1-226, 타우 151-391, 타우 127-441을 인식하였지만, 결실 돌연변이체 타우 1-136, 타우 221-441 및 타우 2N4R(Δ134-168)은 인식하지 못하였다 (도 2c). 취합해 보면, 이러한 발견은 DC2E2가 아미노산 151과 188 사이의 타우의 프롤린 도달 영역에 위치한, 타우 상의 결합 부위 또는 에피토프를 인식한다는 것을 시사한다.
에피토프를 추가로 규정하기 위해, 경쟁 ELISA를 수행하였다. 경쟁 실험을 위해, DC2E2 모노클로날 항체 (mAb)를 다음과 같이, 단백질 G 친화성 칼럼 상의 무혈청 하이브리도마 상청액으로부터 정제하였다. 하이브리도마 상청액을 pH 7.5로 조정하고, 용액을 원심분리에 의해 미리 청정화시키고, 0.45 μm 막 필터를 통해 여과하고, 5 ml 단백질 G 세파로스 칼럼 상에 로딩하였다. DC2E2 mAb를 0.1 M 글리신-HCl, pH 2.7로 상기 칼럼에서 용출시켰다. 용출된 분획을 1 M 트리스-HCl pH 9.0으로 즉시 중화시켰다. 풀링된 분획을 PBS에 대항하여 투석하고, 한외여과에 의해 농축시키며, -70℃ 하에 저장하였다. 항체의 농도는 공식 c (mg/ml) = A280 nm/1.43을 사용하여 280 nm에서의 흡광도를 측정함으로써 결정하였다.
경쟁 ELISA를 위해, 펩티드 (타우 141-170, 161-190, 181-210, 171-200)를 90% 초과의 순도로 EZ바이오랩스(EZBiolabs)에 의해 합성하였다. ELISA 플레이트 (눈크 메디소르프(Nunc Medisorp), 써모 사이언티픽(Thermo Scientific; 덴마크))를 PBS 중의 50 μl/웰의 0.4 μg/ml의 재조합 정제된 타우 1-242로 4℃ 하에 밤새 코팅하였다. 상기 플레이트를 PBS/트윈 20 (0.1% v/v)으로 4회 세척하고, 25℃에서 2시간 동안 PBS/트윈 20으로 차단하였다. 펩티드를 5 mM의 최종 농도로 PBS에 별도로 용해시켰다. PBS/트윈 20 중의 펩티드의 연속 희석액 (2,5배)을 원뿔형 웰 바닥이 있는 폴리프로필렌 플레이트 (그라이너(Greiner), #651201)에서 제조하였다 (농도 범위 200 μM, 32 μM, 12.8 μM, 5.1 μM, 2 μM, 0.8 μM, 및 0.3 μM). 각각의 희석액 60μl를 웰당 부가하였다. 정제된 DC2E2를 PBS/트윈 20 중의 0.6 μg/ml의 농도로 희석하고, 이와 같이 희석된 항체 60 μl를 펩티드의 각각의 연속 희석액과 혼합하여, 200 μM, 32 μM, 12.8 μM, 5.1 μM, 2 μM, 0.8 μM, 및 0.3 μM의 농도에서 각각의 시험 펩티드를 함유하는 0.36 ng의 항체/60 μl와의 120 μl 혼합물을 생성하였다. 항체/펩티드 혼합물을 250 rpm으로 설정된 회전 플랫폼 상에서 25℃ 하에 1시간 동안 인큐베이션하였다. 50마이크로리터 (50 μl)의 항체/펩티드 혼합물을 폴리프로필렌 플레이트로부터 타우1-242-코팅되고 PBS/트윈 20-차단된 플레이트로 옮기고 (이중으로), 250 rpm으로 설정된 회전 플랫폼 상에서 25℃ 하에 1시간 동안 인큐베이션하였다. 상기 플레이트를 PBS/트윈 20으로 4회 세척하고, PBS/트윈 20에서 1:1000으로 희석된 폴리클로날 염소 항-마우스 이뮤노글로불린/HRP (다코, #P0447) 50 μl와 함께 회전 플랫폼 (250 rpm으로 설정됨) 상에서 25℃ 하에 1시간 동안 인큐베이션하였다. 상기 플레이트를 PBS/트윈으로 4회 세척한 다음, 퍼옥시다제 기질로서 50 μl/웰의 TMB 원 용액 (켐-엔-텍 다이아그노스틱스)과 함께 인큐베이션하였다. 50 μl의 2 M H2SO4 (머크(Merck))를 부가함으로써 상기 반응을 중단시켰다. 파워웨이브 HT (바이오-텍)를 사용하여 450 nm에서의 흡광도를 측정하였다.
경쟁 ELISA를 하기 펩티드로 수행하였다: 타우 141-170, 161-190, 171-200, 181-210 (도 2d). 펩티드 타우 161-190만이 DC2E2에의 결합에 대해 타우 1-242와 경쟁하였다 (도 2d). 그러나, 타우의 C-말단으로 펩티드가 이동하거나 (171-200, 181-210) 또는 타우의 N-말단으로 펩티드가 이동하면 (141-170), DC2E2에의 결합에 대해 타우 1-242와 경쟁하는 활성이 상실되었다. 이러한 결과는 에피토프가 아미노산 161과 181 사이에 위치한다는 것을 시사한다.
LC/MALDI 질량 분광측정법 접근법은 에피토프를 보다 정확하게 규정하기 위한 목적으로 사용하였다. 결합 부위의 서열은 단백질분해적으로 소화된 타우 단백질을 자기 비드 상에 고정화된 DC2E2 모노클로날 항체에 결합시키고, 후속적으로 LC/MALDI 질량 분광측정법에 의해 용출된 펩티드를 확인함으로써 확인되었다. 타우 단백질 (타우 2N4R 및 타우151-391)은 트립신, Glu-C, 키모트립신의 혼합물로 37℃ 하에 밤새 또는 포름산으로 108℃ 하에 2시간 동안 소화시켰다. 결합 반응은 PBS 중 1% CHAPS에서 2시간 동안 수행하였다. 결합되지 않은 펩티드는 PBS 중 1% CHAPS로 3회 세척하여 제거하였다. 결합된 펩티드는 포름산으로 3회 세척하여 용출시키고 동결건조시켰다. 펩티드를 UHPLC (디오넥스(Dionex), 얼티메이트 3000 나노-LC 시스템)에 의해 분리하고, 분획을 HCCA 매트릭스 용액과 혼합하며, MTP 앵커 칩(Anchor Chip) 384 MALDI 샘플 플레이트 (브루커 달토닉스(Bruker Daltonics)) 상으로 분배하였다. 분획화된 샘플은 양이온 모드에서 작동하는 MALDI TOF/TOF (울트라플렉스트렘(Ultraflextreme), 브루커 달토닉스) 기기로 분석하였다. 수집된 MS 및 MS/MS 스펙트럼은 마스코트(Mascot) 검색 엔진 (매트릭스 사이언스(Matrix Science))을 사용하여 타우 단백질의 데이터베이스에 대항하여 검색되었다.
데이터베이스 분석 결과, 몇 가지 펩티드 서열이 밝혀졌는데, 그들 모두는 KGQANATRIP을 함유하고 있다. 이러한 펩티드는 프롤린이 풍부한 영역인 163-172 영역 내의 타우 2N4R 상에 위치한다.
실시예 4
DC2E2는 알츠하이머병에서의 불용성 타우, 인산화된 타우 및 비인산화된 타우에 특이적인 A68 삼중항을 인식한다
알츠하이머병에서는, 타우가 과인산화된다. 따라서, DC2E2의 결합 특성에 대한 세부 특징규명을 위해, 과인산화된 PHF-타우 및 시험관내 인산화된 타우를 조사하였다.
사르코실 불용성 타우 복합체 (PHF-타우)를 사르코실 방법을 이용하여 인간 AD 뇌로부터 단리하였다 (Greenberg and Davies, A preparation of Alzheimer's paried helical filaments that displays distint tau proteins by polyacrylamide gel electrophoresis, PNAS, 87:5827-31, 1990). 단백질 추출을 위해, 동결된 인간 AD 뇌 조직 (전두엽 피질, 네덜란드 브레인 뱅크(Netherlands brain bank)로부터 수득된 브라크 병기 VI의 샘플)을 10 용적의 냉 추출 완충액 (10 mM 트리스 pH 7.4, 0.8 M NaCl, 1 mM EGTA 및 10% 수크로스)에서 균질화시키고, 균질물을 20,000xg에서 20분 동안 원심분리하였다. 사르코실-불용성 타우를 제조하기 위해, 상청액에 N-라우로일사르코신 (시그마)을 1%의 최종 농도가 되도록 보충하고, 진탕시키면서 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 100,000xg에서 1시간 동안 원심분리한 후, 이로써 생성된 상청액을 버리고, 사르코실-불용성 타우 분획을 함유하는 펠릿을 불용성 타우의 제조에 사용된 상청액의 1/50 용적에 재현탁시켰다.
타우 2N4R 및 타우151-391의 시험관내 인산화를 위해, 키나제 추출물을 사용하였다. 성체 래트 뇌 (1 g/2,5 ml)를 키나제 완충액 (10 mM TRIS-HCl, pH 7,4; 5 mM EGTA, 2 mM DTT; 1 mM PMSF; 2 mM MgCl2, 류펩틴 (20 μg/ml), 펩스타틴 (20 μg/ml), 아프로티닌 (20 μg/ml))에서 균질화시키고, 100,000xg에서 30분 동안 4℃ 하에 원심분리한 후, 상청액 (키나제 추출물)을 타우의 인산화에 사용하였다. 인산화 반응은 37℃ 하에 10 mM TRIS-HCl, pH 7,4; 5 mM EGTA, 2 mM DTT; 1 mM PMSF; 류펩틴 (20 μg/ml); 펩스타틴 (20 μg/ml); 아프로티닌 (20 μg/ml); 2 mM ATP; 2 mM MgCl2 및 10 μM 오카다산에서 수행하였다. 뇌 키나제 추출물 (5 μl)을 50 μl 타우 용액 (1 μM)에 부가하고 반응물을 37℃ 하에 24시간 동안 인큐베이션하였다. 타우의 인산화는 6개의 재조합 인간 타우 이소형에 대항하여 생성된 토끼 항혈청을 사용하여 SDS-PAGE 및 이뮤노블롯팅함으로써 분석하였다 (Csokova et al., Rapid purification of truncated tau proteins: model approach to purification of functionally active fragments of disordered proteins, implication for neurodegenerative diseases, Protein Expression and Purification, 35:366-372, 2004).
인산화된 및 비인산화된 타우 단백질 2N4R 및 타우151-391 및 사르코실 불용성 PHF-타우는 DC2E2를 사용하여 이뮤노블롯팅함으로써 분석하였다. 가용성 타우 단백질을 동일한 용적의 2x SDS (소듐 도데실술페이트) 샘플 로딩 완충액 (β-메르캅토에탄올 수반) (Laemmli, 1970)으로 희석하고, 레인당 250 ng의 단백질을 로딩하였다. 불용성 PHF-타우의 경우에는, 펠릿을 불용성 타우 분획의 제조에 사용된 가용성 분획의 1/50 용적에서 1x SDS-샘플 로딩 완충액에 용해시켰다. 이어서, 동일한 용적의 가용성 타우 및 사르코실-불용성 타우 분획을 이뮤노블롯팅에 사용하였으며, 이는 가용성 분획 중의 총 단백질 15 μg에 상응하였다 (문헌 [Filipcik et al. 2010] 참조). 샘플을 95℃에서 5분 동안 가열하고, 5-20% 구배 SDS 폴리아크릴아미드 겔 상으로 로딩하고, 25 mA에서 40분 동안 트리스-글리신-SDS 완충제 시스템에서 전기영동하였다. 단백질을 폴리비닐리덴 플루오라이드 (PVDF) 막으로 옮겼다 (10 mM CAPS, pH 12에서 150 mA 하에 1시간). 이와 같이 옮긴 후, 상기 막을 포스페이트-완충-염수 (PBS; 136.89 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 8.09 mM Na2HPO4, 1.47 mM KH2PO4) 중 5% 무지방 분유에서 1시간 동안 실온 하에 차단시킨 다음, DC2E2 하이브리도마 배양 상청액과 함께 12시간 동안 인큐베이션한 후, 대량의 PBS-T (1% 트윈 20)로 3회 세척하였다. 상기 막을 2차 항체로서 PBS 중 1% 무지방 분유로 1:3,000으로 희석한 HRP 접합된 염소 항-마우스 Ig (다코, 덴마크)와 함께 (실온에서 1시간 동안) 인큐베이션하였다. 이러한 인큐베이션 후에 PBS 중 0.1% 트윈 20으로 세척하였다 (3회). 블롯은 슈퍼시그널 웨스트 피코(SuperSignal West Pico) 화학발광 기질 (피어스; 미국)로 전개하였고, 단백질 시그널은 LAS3000 영상화 시스템 (후지 포토 필름 캄파니(FUJI Photo Film Co.; 일본))을 사용하여 검출하였다. 화학발광 시그널 강도는 AIDA (고급 영상 데이터 분석기, 레이테스트(Raytest; 독일 스트라우벤하르트)) 소프트웨어를 사용하여 정량화하였다.
DC2E2는 2가지 형태의 타우 단백질, 생체내 인산화된 타우 2N4R, 151-391 및 야생형 (비인산화된) 형태의 타우 2N4R 및 타우151-391을 인식하였다 (도 3).
더욱이, DC2E2가 AD 신경원섬유 변성에서 병리학적 타우 (PHF-타우)의 특색인 A68 삼중항을 인식한 것은 주목할 만하다. 이러한 결과는 DC2E2가 상이한 유형의 타우 단백질, AD 뇌로부터 단리된 병리학적 타우, 생리학적 타우 (2N4R), 말단절단된 타우151-391 및 그의 인산화된 형태를 인식하고 이에 결합할 수 있다는 것을 입증한다. 따라서, DC2E2는 에피토프 인산화와 무관하게 에피토프를 인식하였다. DC2E2의 개시된 결합 특성은 항체를 AD에 대한 진단 도구로서 사용할 가능성을 시사한다.
실시예 5
DC2E2 가변 영역의 시퀀싱
DC2E2의 경쇄 및 중쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 및 아미노산 서열의 결정 (도 5). DC2E2 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (도 5a 및 5c)은 DC2E2 모노클로날 항체를 발현하는 마우스 하이브리도마 세포주 DC2E2 (ATCC)로부터 추출된 총 RNA를 사용하여 합성된 cDNA의 DNA 시퀀싱에 의해 결정하였다. 총 RNA는 RNeasy 미니 키트 (퀴아젠(Qiagen; 독일))를 사용하여 추출하였다. 제1 가닥 cDNA의 합성은 제조업체의 프로토콜 (어플라이드 바이오시스템즈(Applied Biosystems; 미국))에 따라 "고 용량 cDNA 역전사" 키트를 사용하여 수행하였다. 2x 역전사 마스터-믹스를 위한 시약의 조성은 하기와 같다 (20 μL 반응물당 양): 2 μL의 10x RT 완충액; 0.8 μL의 25x dNTP 혼합물 (100 mM); 2 μl의 10x RT 무작위 프라이머 (50 μM); 1 μL의 멀티스크라이브(MultiScribe)™ 리버스 트랜스크립타제 (50 U/μL); 4.2 μL의 뉴클레아제 무함유 H2O. 역전사를 위해, 2x 역전사 마스터-믹스 10 μL를 RNA 샘플 (1 μg/10μL)과 혼합하고, cDNA를 하기 조건 하에 합성하였다: 25℃에서 10분, 37℃에서 120분, 85℃에서 5분, 및 4℃로의 최종 냉각. 경쇄 및 중쇄의 가변 영역을 코딩하는 유전자는 퓨션(Phusion)® 고성능 DNA 폴리머라제 (써모 피셔 사이언티픽(Thermo Fisher Scientific; 미국))를 사용하여 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR)에 의해 증폭시켰다. 경쇄 및 중쇄 각각에 대한 정방향 프라이머 (M13-L6 5'-TGTAAAACGACGGCCAGTΑTGAGGTKCYYTGYTSAGYTYCTGRGG-3' 및 M13-H1 5'-TGTAAAACGACGGCCAGTATGAAATGCAGCTGGGTCATSTTCTTC-3')가 마우스 이뮤노글로불린 시그널 서열 정방향 프라이머의 라이브러리를 스크리닝한 후에 선택되었다. 시그널 서열 정방향 프라이머를 사용하는 것이, 가변 영역의 시작 부분이 프라이머 설계에 사용될 때 편향이 도입되지 않으면서, 경쇄와 중쇄 항체 둘 다의 전체 V-유전자를 증폭시키는 이점을 갖고 있다. 경쇄 및 중쇄에 대한 역방향 프라이머 (M13-KC 5'-CAGGAAACAGCTATGACCACTGGATGGTGGGAAGATGG-3' 및 M13-CG1 5'-CAGGAAACAGCTATGACCCAGTGGATAGACAGATGGGGG-3')가 카파 및 IgG1 쇄 불변 영역 각각으로부터 유래되었다.
PCR 산물을 시퀀싱하고, 이로써 생성되는 DC2E2의 경쇄 및 중쇄의 가변 영역의 DNA 서열이 도 5a 및 5c에 각각 제시되어 있다. 상보성 결정 영역 (CDR)은 DC2E2 경쇄 및 중쇄 단백질 서열에서 밑줄쳐 있다 (각각 도 5b 및 5d). 임뮤노제네틱스(ImMunoGeneTics) (IMGT) 넘버링 시스템에 따라 CDR 및 프레임워크 영역 (FR)을 확인하였다 (예를 들어, 문헌 [Lefranc M.P. The IMGT unique numbering for immunoglobulins, T-cell receptors, and Ig-like domains. The Immunologist, 7, 132-136, 1999 (1999)] 참조).
실시예 6
인간 알츠하이머병에서 불용성 타우 종에 대항하여 모노클로날 항체를 생산하는 하이브리도마 세포주의 제조, ELISA에 의한 모노클로날 항체의 스크리닝, 및 모노클로날 항체 DC2E7의 초기 특징규명
AD 뇌로부터의 사르코실-불용성 타우 (PHF-타우)가 Balb/c 마우스의 면역화를 위한 면역원으로서 사용되었다. 사르코실 불용성 타우 복합체는 실시예 4에 기재된 바와 같이 사르코실 방법 (Greenberg and Davies, A preparation of Alzheimer paired helical filaments that diplays distinct tau proteins by polyacrylamide gel electrophoresis, PNAS, 87:5827-31, 1990)을 사용하여 인간 AD 뇌 (전두엽 피질, 브라크 병기 VI, 네덜란드 브레인 뱅크)로부터 단리하였다.
6주령 Balb/c 마우스를 완전 프로인트 아주반트 (시그마) 중의 인간 알츠하이머의 뇌 조직으로부터 단리된 대략 20-30 μg의 불용성 타우 단백질로 피하로 프라이밍하고, 불완전 프로인트 아주반트 중의 20-30 μg의 동일한 항원으로 4주 간격으로 5회 부스팅하였다. 융합 3일 전, 마우스에게 PBS 중의 동일한 항원 20-30 μg을 정맥내로 주사하였다. 면역화된 마우스로부터의 비장 세포를 문헌 [Kontsekova et al., The effect of postfusion cell density on establishment of hybridomas, Folia Biol. 34, 18-22 (1988)]의 방법에 따라 NS/0 골수종 세포와 융합시켰다. 비장 세포를 NS/0 골수종 세포와 혼합하고 (비 5:1), 10% 디메틸 술폭시드가 보충된 무혈청 둘베코 변형 이글 배지 (DMEM) 중의 1 ml의 50% 폴리에틸렌 글리콜 (PEG) 1550 (세르바)에서 1분 동안 융합시켰다. 이와 같이 융합된 세포를 96-웰 플레이트 상에서 웰당 2.5 x 105개 비장 세포의 밀도로, 20% 말 혈청, L-글루타민 (2 mM), 히포크산틴 (0.1 mM), 아미노프테린 (0.04 mM), 티미딘 (0.016 mM) 및 젠타마이신 (40 U/ml)을 함유하는 DMEM에 재현탁시켰다.
세포를 37℃에서 10-14일 동안 인큐베이션하고, 성장하는 하이브리도마를 효소-결합 면역흡착 검정 (ELISA)에 의해 항 PHF-타우-특이적 모노클로날 항체의 생산에 관하여 스크리닝하였다. 미세역가 플레이트를 PBS 중의 37℃에서 PHF-타우 (5 μg/ml, 50 μl/웰)로 밤새 코팅하였다. 비-특이적 결합을 감소시키기 위해 1% 무지방 분유로 플레이트를 차단하고, PBS-0.05% 트윈 20으로 세척하며, 50 μl/웰의 하이브리도마 배양 상청액과 함께 37℃에서 1시간 동안 인큐베이션하였다. 결합된 모노클로날 항체는 양고추냉이 퍼옥시다제 (HRP, 다코)와 접합된 양 항-마우스 이뮤노글로불린 (Ig)으로 검출하였다. 반응은 퍼옥시다제 기질로서 TMB 원 (켐-엔-텍 다이아그노스틱스)을 사용하여 전개하였고 50 μl의 2 M H2SO4로 중지하였다. 450 nm에서의 흡광도는 파워웨이브 HT (바이오-텍)를 사용하여 측정하였다. 흡광도 값이 음성 대조군 (PBS) 값의 적어도 2배인 판독 값을 양성으로 간주하였다. 양성 하이브리도마 배양물은 문헌 [Kontsekova et al., One-step method for establishing 8-azaguanine-resistant hybridomas suitable for preparation of triomas, J. Immunol. Methods, 145, 247-250 (1991)]에 기재된 절차에 따라 연질 한천에서 추가로 서브클로닝하였다.
양성 하이브리도마 배양물 중에서, 모노클로날 항체 DC2E7 (아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션에 ATCC 특허 기탁 지명 PTA-124992로 기탁된 마우스 하이브리도마 세포주에 의해 생산됨)이 확인되었다. DC2E7은 하기에 기재된 바와 같이 추가로 특징규명하였다. 항체 이소타입은 마우스 Ig 이소타이핑 키트 (ISO-2, 시그마)를 사용하여 ELISA에 의해 뮤린 IgG2a인 것으로 결정하였다 (도 4).
실시예 7
DC2E7 가변 영역의 시퀀싱
DC2E7의 경쇄 및 중쇄 가변 영역의 뉴클레오티드 및 아미노산 서열의 결정 (도 6). DC2E7 가변 영역의 뉴클레오티드 서열 (도 6a 및 6c)은 DC2E7 모노클로날 항체를 발현하는 마우스 하이브리도마 세포주 DC2E7 (ATCC)로부터 추출된 총 RNA를 사용하여 합성된 cDNA의 DNA 시퀀싱에 의해 결정하였다. 총 RNA는 RNeasy 미니 키트 (퀴아젠; 독일)를 사용하여 추출하였다. 제1 가닥 cDNA의 합성은 제조업체의 프로토콜 (어플라이드 바이오시스템즈; 미국)에 따라 "고 용량 cDNA 역전사" 키트를 사용하여 수행하였다. 2x 역전사 마스터-믹스를 위한 시약의 조성은 하기와 같다 (20 μL 반응물당 양): 2 μL의 10x RT 완충액; 0.8 μL의 25x dNTP 혼합물 (100 mM); 2 μl의 10x RT 무작위 프라이머 (50 μM); 1 μL의 멀티스크라이브™ 리버스 트랜스크립타제 (50 U/μL); 4.2 μL의 뉴클레아제 무함유 H2O. 역전사를 위해, 2x 역전사 마스터-믹스 10 μL를 RNA 샘플 (1 μg/10μL)과 혼합하고, cDNA를 하기 조건 하에 합성하였다: 25℃에서 10분, 37℃에서 120분, 85℃에서 5분, 및 4℃로의 최종 냉각. 경쇄 및 중쇄의 가변 영역을 코딩하는 유전자의 증폭은 퓨션® 고성능 DNA 폴리머라제 (써모 피셔 사이언티픽; 미국)를 사용하여 폴리머라제 연쇄 반응 (PCR)에 의해 수행하였다. 정방향 프라이머 (M13-L12 5'-TGTAAAACGACGGCCAGTATGAAGTTTCCTTCTCAACTTCTGCTC-3' 및 M13-H5 5'-TGTAAAACGACGGCCAGTATGGACTCCAGGCTCAAMAGTTTTCCTT-3')가 마우스 이뮤노글로불린 시그널 서열 정방향 프라이머의 라이브러리를 스크리닝한 후에 선택되었다. 시그널 서열 정방향 프라이머의 활용은 가변 영역의 시작 부분이 프라이머 설계에 사용될 때 편향이 도입되지 않으면서, 경쇄와 중쇄 항체 둘 다의 전체 V-유전자를 증폭시키는 이점을 갖고 있다. 경쇄 및 중쇄에 대한 역방향 프라이머 (M13-KC 5'-CAGGAAACAGCTATGACCACTGGATGGTGGGAAGATGG-3' 및 M13-CG2a 5'-CAGGAAACAGCTATGACCCAGTGGATAGACCGATGGGGC-3')가 카파 및 IgG2a 쇄 불변 영역 각각으로부터 유래되었다.
PCR 산물을 시퀀싱하고, 이로써 생성되는 DC2E7의 경쇄 및 중쇄의 가변 영역의 DNA 서열이 도 6a 및 6c에 각각 제시되어 있다. 상보성 결정 영역 (CDR)은 DC2E7 경쇄 및 중쇄 단백질 서열에서 밑줄쳐 있다 (각각 도 6b 및 6d). 임뮤노제네틱스 (IMGT) 넘버링 시스템에 따라 CDR 및 프레임워크 영역 (FR)을 확인하였다 (예를 들어, 문헌 [Lefranc M.P. The IMGT unique numbering for immunoglobulins, T-cell receptors, and Ig-like domains. The Immunologist, 7, 132-136, 1999 (1999)] 참조).
실시예 8
모노클로날 항체 DC2E7은 인산화된 형태의 타우 단백질에 특이적이다
재조합 전장 타우 2N4R, 인산화된 2N4R, PHF-타우 및 태아 타우를 이뮤노블롯팅에 의한 모노클로날 항체 DC2E7의 결합 활성의 추가 특징규명을 위해 사용하였다. 재조합 인간 타우 이소형 2N4R은 실시예 1에 기재된 바와 같이 제조하였다. PHF-타우는 실시예 4에 기재된 바와 같이 제조하였다.
태아 래트 타우 추출 및 정제는 본질적으로, 1% 과염소산을 사용하여 문헌 [Ivanovova et al., High-yield purification of fetal tau preserving its structure and phosphorylation, J. Immunol. Methods, 339:17-22, 2008]에 기재된 바와 같이 수행하였다. 1-7일령 새끼 래트로부터 수득된 뇌 조직을 빙냉 1% 과염소산 (과염소산 5 ml당 조직 1.5 g; 애플리켐(Applichem))에서 균질화하고 20분 동안 얼음 위에 방치시켜 두었다. 균질액을 15,000xg에서 20분 동안 스피닝시키고 투명한 상청액을 농축시키며, 동시에 완충액을 아미콘(Amicon) 울트라 원심분리 필터 장치 (밀리포어(Millipore))를 사용하여 세척 완충액 (20 mM 트리스, pH 7.4, 150 mM NaCl, 0.1% 트윈 20)으로 변경하였다. 여과된 추출물을 0.2 ml/min의 유량으로 고정화된 범-타우 mAb DC25를 운반하는 세파로스로 패킹된 폴리-프렙 칼럼 C10/10 (지이 헬스케어) 상으로 로딩하였다. 결합되지 않은 단백질은 (280 nm에서의) 용출 분획의 흡광도가 안정될 때까지 10-15 ml 세척 완충액으로 세척하였다. mAb DC25에 결합된 태아 타우는 0.1 M 글리신 (pH 2.6)으로 용출시켰다. 용출된 0.5 ml 분획을 50 μl의 1 M 트리스-HCl (pH 9)로 즉시 중화시키고 SDS-PAGE에 의해 검정하였다. 태아 타우를 함유하는 분획은 PBS로의 동시 완충제 교환과 함께 아미콘 울트라 원심분리 필터 장치 (밀리포어)를 사용하여 농축시켰다. 친화성 크로마토그래피에 의해 정제된 태아 타우는 10% 트리클로로아세트산을 함유하는 빙냉 아세톤 4 용적을 부가함으로써 문헌 [Chen et al., (2005)]에 따라 침전시켰다. 혼합물을 -20℃ 하에 2시간 동안 인큐베이션하고 15,000xg에서 20분 동안 2℃ 하에 원심분리하였다. 상청액을 버리고 침전물을 1 ml의 빙냉 아세톤에 재현탁시키고, 얼음 위에 20분간 방치시켜 둔 다음, 상기와 같이 다시 원심분리하였다. 이로써 생성된 펠릿을 실온에서 건조시키고 침전 전에 그 용적과 동일한 용적의 PBS에 용해시켰다.
전장 타우 이소형 2N4R, 사르코실 불용성 PHF-타우 및 태아 타우는 실시예 4에 기재된 바와 같이 DC2E7을 사용하여 이뮤노블롯팅함으로써 분석하였다. 이뮤노블롯팅에서 DC2E7 항체는 PHF-타우 및 태아 타우를 인식하였다 (도 7). 시험된 2가지 유형의 타우는 인산화되었지만, 인산화 수준은 상이하였다. 재조합 인간 타우 2N4R에 대해서는 면역반응성이 관찰되지 않았다. 다른 한편으로는, 항체는 인간 타우 이소형 2N4R의 시험관내 인산화된 버전에 결합하였다. 그 결과는 DC2E7이 인산화되는 에피토프를 인식하므로, 항체가 인산화된 타우 종에 특이적이라는 것을 나타낸다. 항체에 의해 인식되는 에피토프는 인산화된 PHF-타우, 태아 타우 및 시험관내 인산화된 타우에 존재한다. 따라서, DC2E7은 알츠하이머병 뇌 조직으로부터 유래된 인산화된 타우 (PHF-타우)를 생리학적 타우 (2N4R)와 구별할 수 있다.
실시예 9
재조합 타우 결실 돌연변이체, 타우 점 돌연변이체, 및 타우-유래 펩티드를 사용한 DC2E7 포스포에피토프의 맵핑
DC2E7의 면역반응성은 항체가 인산화된 타우 (태아 타우, PHF-타우, 시험관내 인산화된 타우; 상기 참조) 상의 에피토프를 인식한다는 것을 시사하였다. 따라서, 에피토프를 결정하기 위해, 타우 단백질의 인산화된 결실 돌연변이체를 사용하였다 (도 8). 타우 결실 돌연변이체의 인산화는 실시예 4에 기재된 바와 같이 키나제 추출물을 사용하여 수행하였다.
인간 타우 단백질 2N4R의 인산화된 결실 돌연변이체 (타우 1-296, 타우 188-441, 타우 221-441, 타우 151-391, 타우 122-227)를 이뮤노블롯팅에서 DC2E7의 에피토프의 국재화에 사용하였다 (실시예 4 참조). 이뮤노블롯팅 분석은 DC2E7이 타우 단백질 221-441을 제외하고는, 하기 결실 돌연변이체 모두를 인식하였다는 것을 입증하였다: 타우1-296, 타우188-441, 타우151-391, 타우122-227 (도 9). 이러한 결과는 DC2E7 포스포-에피토프가 아미노산 잔기 188과 227 사이의 프롤린 도달 영역에 있다는 것을 나타낸다.
타우 결실 돌연변이체를 갖는 DC2E7 에피토프의 상기 언급된 맵핑은 Pro188-Ala227 사이의 에피토프를 제안하였다. 이러한 타우 영역에서는 PHF-타우 상에 검출된 11개의 인산화 부위 (Ser191, Tyr197, Ser198, Ser199, Ser202, Thr205, Ser208, Ser210, Thr212, Ser214, Thr217)가 있다 (Hanger et al., 2009, Fig. 10). 이들 중 4개 (Ser198, Ser199, Ser202, Thr217)는 태아 타우에서도 발견되었다 (Morishima-Kawashima et al., 1995, Fig. 10). DC2E7은 또한 태아 타우를 인식하기 때문에, 첫 번째 초점은 태아 타우에 존재하고 확증된 포스포-부위에 있었다 (Ser198; Ser199; Ser202; Thr217).
DC2E7에 대한 정확한 포스포-부위(들)를 규정하기 위해, 세린 및 트레오닌 잔기가 알라닌으로 대체된 단일 점 돌연변이를 갖는 돌연변이된 형태의 타우 2N4R이 생성되었다. 원하는 점 돌연변이 (Ser198Ala; Ser199Ala; Ser202Ala; Thr217Ala)를 인간 2N4R 타우 단백질에 삽입하는 것은 제조업체의 지침에 따라 퀵체인지(QuickChange) 부위 지정 돌연변이 유발 키트 (애질런트 테크놀로지스(Agilent Technologies; 미국 캘리포니아주))를 사용하여 수행하였다. 야생형 2N4R 타우 단백질에 대한 코딩 서열을 함유하는 5-50 μg의 플라스미드 및 각각의 프라이머 125 ng을 하나의 50 μl 반응물에 사용하였다. 순환 파라미터는 하기와 같다: 95℃에서 30초 동안, 이어서 PCR을 계속해서 16회 반복하였다: 95℃에서 30초 동안 변성, 55℃에서 60초 동안 어닐링, 68℃에서 6분 동안 신장. 전체 반응물을 메틸화된 DNA에 특이적인 DpnI로 소화시켜, 모 플라스미드를 제거하였다. 50 μl의 초적격 에스케리키아 콜라이 XL-1 블루 (돌연변이 유발 키트와 함께 제공됨)를 1 μl의 반응물로 형질전환시키고, 암피실린이 보충된 LB-한천 플레이트 상에 살포하였다. 성장한 집락으로부터 플라스미드를 단리하고 DNA 시퀀싱을 사용하여 돌연변이 유발의 검증을 수행하였다. 원하는 돌연변이를 갖는 플라스미드를 실시예 1에 기재된 바와 같이 재조합 단백질의 생산에 사용하였다.
제조된 타우 돌연변이체를 실시예 1에 기재된 바와 같이 정제하고, 래트 뇌로부터의 키나제 추출물에 의해 인산화시키고, 이뮤노블롯팅에서 DC2E7로 염색하였다. 타우의 결실 돌연변이체의 인산화는 분자량의 이동을 유도하므로, 범 타우 항체 DC25 (에피토프 347-353 aa, 액손 뉴로사이언스 에스이(AXON Neuroscience SE))로 염색하여 나타낸 바와 같이 모든 단백질이 인산화되었다 (도 11). 인산화된 타우 점 돌연변이체의 분석은 DC2E7이 모든 단일 돌연변이 (Ser198Ala, Ser199Ala, Ser202Ala)를 검출하였지만 Thr217Ala은 검출하지 못하였다는 것을입증하였다 (도 11). 이러한 결과는 위치 217에서의 포스포-트레오닌이 항체 DC2E7에 의해 인식되는 에피토프의 핵심 부분을 창출한다는 것을 시사하였다.
그러나, 포스포-부위 Thr217에 근접하여 위치한 다른 포스포-부위는 에피토프의 일부일 수 있거나, 또는 에피토프의 창출에 수반될 수 있다. 따라서, 포스포-부위 Thr205, Ser208, Ser210, Thr212, Ser214, Ser231이 DC2E7에 의해 인식되는 에피토프에 미치는 가능한 영향을 조사하였다. 단일 점 돌연변이 (Thr205Ala, Ser208Ala, Ser210Ala, Thr212Ala, Ser214Ala, Ser231A)를 가진 제조된 돌연변이체 타우 단백질을 키나제 추출물에 의해 인산화하고 DC2E7을 사용한 이뮤노블롯팅에서 시험하였다 (도 11). 이뮤노블롯팅 분석은 항체가 점 돌연변이를 수반하는 모든 타우 단백질을 인식한다는 것을 입증하였다 (도 11). 따라서, Thr217에 근접하여 위치한 포스포-부위는 DC2E7에 의해 인식되는 에피토프에 영향을 미치지 않았다.
이러한 맵핑 실험은 DC2E7의 에피토프 내에 포스포-트레오닌 217이 존재한다는 것을 시사하였다. 항체 결합에 대한 DC2E7 에피토프 영역 내의 잔기의 효과를 조사하기 위해, 상이한 포스포-부위를 수반하는 상이한 길이의 합성 펩티드를 경쟁적 ELISA에서 분석하였다. 펩티드 (타우 210-224/pT212/pT217, 210-222/pT212/pT217, 210-221/pT212/pT217, 210-220/pT212/pT217, 210-219/pT212/pT217, 210-218/pT212/pT217, 타우 201-230/pT212, 타우 193-222/pS208, 193-222/pS214, 타우 193-231/pS208/pS210/pT212/pS214/pT217, 타우 193-231/pS202/pS205/pT212/pT220, 타우 201-229)는 95% 초과의 순도로 EZ바이오랩스 (USA)에 의해 합성하였다. 합성된 각각의 펩티드는 비인산화된 펩티드 타우 201-229 (음성 대조군으로서 사용됨)를 제외하고는, 잔기 Thr217 주위에 위치한 포스포-부위(들)를 함유하였다. 양성 대조군으로서, 시험관내 인산화된 타우151-391을 사용하였다.
다음으로, 모든 펩티드를 대상으로, DC2E7에의 결합에 대해 시험관내 인산화된 타우151-391과 경쟁할 수 있는 능력에 관하여 경쟁 ELISA에 의해 분석하였다. ELISA 플레이트 (눈크 메디소르프, 써모 사이언티픽, 덴마크)를 PBS에서 200 x 희석된 50 μl/웰의 PHF-타우로 37℃에서 밤새 코팅하였다. 이와 같이 코팅된 플레이트를 PBS/트윈 20 (0.05% v/v)으로 5회 세척하고, 25℃에서 1시간 동안 PBS/트윈 20으로 차단시켰다. 각각의 펩티드를 1 mM의 최종 농도로 PBS에 별도로 용해시켰다. PBS/트윈 20 중의 펩티드의 연속 희석액 (2.5x)을 200 μM; 80 μM; 32 μM; 12.8 μM; 5.12 μM; 2.048 μM; 0.8192 μM; 0.32768 μM의 농도 범위 내에서 원뿔형 웰 바닥이 있는 폴리프로필렌 미세역가 플레이트 (그라이너)에서 제조하였다. 모노클로날 항체 DC2E7을 PBS에서 0.6 μg/ml의 농도로 희석하고, 이러한 희석된 항체 60μl를 각각의 웰에 부가하여, 120 μl/웰의 혼합물을 생성하는 펩티드의 연속 희석액으로 만들었다. 항체/펩티드 혼합물을 230 rpm으로 설정된 회전 플랫폼 상에서 25℃ 하에 1시간 동안 인큐베이션하였다. 50 μl/웰의 항체/펩티드 혼합물을 폴리프로필렌 플레이트로부터 PHF-타우 코팅되고 PBS/트윈 20 차단된 ELISA 플레이트로 옮기고 (이중으로), 25℃ 하에 1 시간 동안 인큐베이션하였다. 상기 플레이트를 PBS/트윈 20으로 5회 세척하고, PBS/트윈 20에서 1:1000으로 희석된 폴리클로날 염소 항-마우스 이뮤노글로불린/HRP (다코) 50 μl/웰과 함께 25℃ 하에 1시간 동안 인큐베이션하였다. 세척 후, 상기 플레이트를 1.5 μl/2 ml의 30% H2O2 (시그마)가 보충된 0.1 M Na-아세테이트 pH=6.0 (로스(Roth)) 중의 50 μl/웰의 1 mg/2 mL o-PDA (o-페닐렌디아민, 시그마)와 함께 25℃ 하의 암실에서 20분 동안 인큐베이션하였다. 50 μl/웰의 2 M H2SO4 (머크)를 부가한 다음, 상기 플레이트를 492 nm에서 판독함으로써 (파워웨이브 HT, 바이오-텍) 반응을 중지시켰다.
인산화된 트레오닌 217을 포괄하는 모든 분석된 펩티드는 DC2E7에의 결합에 대해 인산화된 타우151-391과 경쟁하였다 (도 12). 요약하면, DC2E7은 인산화된 트레오닌 217을 포함하는 타우 에피토프에 결합한다. 다른 포스포-부위는 항체 면역반응성에 영향을 미치는 것으로 보이지 않았다. 그러나 특히, 상기 시험된 펩티드의 C 말단 부분을 224에서 220 아미노산으로 단축시키면 (210-220/pT212/pT217, 210-219/pT212/pT217, 210-218/pT212/pT217), 인산화된 트레오닌 217의 존재에도 불구하고 경쟁 활성이 상실되었다. 따라서, 그러한 데이터는 DC2E7이 잔기 210-SRTPSLPTPPTR-221을 포함하는 12개 아미노산의 인간 인산화된 타우 상의 포스포에피토프에 결합하며, 여기서 적어도 트레오닌 217이 인산화된다는 것을 시사한다.
실시예 10
모노클로날 항체 DC2E2 및 DC2E7은 인간 알츠하이머병 뇌 및 타우병증에서의 병리를 인식한다
본 실시예는 DC2E7 및 DC2E2가 알츠하이머병에서의 신경원섬유 병변을 인식한다는 것을 보여준다. 면역조직화학 연구에는 하기 뇌 영역이 사용되었다: 알츠하이머병 (브라크 병기 6), FTD (픽병), 및 대조군 뇌 (브라크 병기 1 및 3)로부터의 해마 및 내후각 피질; 피질기저 변성 (CBD)으로부터의 미상핵; 및 진행성 핵상 마비 (PSP)로부터의 조가비핵/미상핵. 뇌 조직 파라핀 블록은 암스테르담 브레인 뱅크(Amsterdam brain bank)로부터 수득하였다.
파라핀에 포매된 뇌 블록을 마이크로톰 (라이카(Leica) RM2255) 상에서 커팅하여 8μm 두께의 절편이 되도록 하였다. 이들 절편을 히스토본드(HistoBond) 슬라이드 (독일 마리엔펠트) 위에 놓아두었다. 면역조직화학을 위해, 절편을 포름산 (4℃ 하에 1분 동안 98% 또는 1시간 동안 80%) 및 열 (오토클레이브, 121℃, 20분)로 미리 처리한 다음, 1차 항체와 함께 밤새 인큐베이션하였다 (AT8 1:1000, DC2E7 1:10000, DC2E2 1:200). 모든 절편을 항-마우스 비오티닐화된 2차 항체와 함께 실온에서 1시간 동안 인큐베이션하였고, 아비딘-비오틴 퍼옥시다제-복합체와 함께 1시간 동안 인큐베이션하였다. 면역반응은 VIP (벡타스타인 엘라이트(Vectastain Elite) ABC 키트, 벡터 래보러토리즈(Vector Laboratories; 미국 캘리포니아주))로 시각화하고 메틸 그린 (벡터 래보러토리즈)으로 대조 염색하였다.
면역조직화학적 분석 결과, DC2E7과 DC2E2 둘 다는 조직병리학적 염색에 대한 황금 표준인 것으로 간주되는 모노클로날 항체 AT8과 유사한 방식으로 알츠하이머병 및 다른 타우병증에서 타우 병리를 인식하는 것으로 밝혀졌다 (도 13). DC2E7 및 DC2E2는 AD 환자의 해마에서의 신경원섬유 병리, FTD 환자의 치아 이랑에 있는 픽체, CBD 및 PSP 중 하나를 앓고 있는 환자의 미상핵에 있는 신경교 타우 병리를 염색하였다. DC2E7 및 DC2E2는 브라크 병기 1에 대한 기준을 충족시키는 정상 뇌에서의 타우 병리는 인식하지 못하며, 전구 기 (브라크 병기 3)에서는 두 항체가 해마 신경원섬유 병리에서 확인되었고, 충분히 발달한 AD에서는 항체가 신경원섬유 엉킴, 신경망 실 및 신경염성 플라크의 형태로 광범위한 타우 병리를 시각화하였다 (도 14). 더 높은 배율을 사용함으로써, 항체가 AD에서의 신경원섬유 엉킴, FTD에서의 픽체, 및 PSP 및 CBD에서의 신경교 타우 병리에 결합하였다는 것이 입증되었다 (도 15).
실시예 11
DC2E7 ELISA
DC2E7 ELISA에 대한 표준의 제조
시험관내 인산화된 타우151-391을 친화성 크로마토그래피에 의해 정제하였다. 2개의 칼럼을 준비하였다: DC2E7 및 DC190 (에피토프 368-376, 액손 뉴로사이언스, SE). 항체를 실시예 3에 기재된 방법에 따라 정제하였다. 항체를 제조업자의 권장 사항에 따라 CnBr-활성화된 세파로스 4B (지이 헬스케어, #17-0430-01)에 커플링시켰다. 시험관내 인산화 반응물 (실시예 4 참조)을 PBS에 대항하여 4℃에서 투석하였다 (3 x 100배 과량). 모든 정제 단계는 4℃에서 수행하였다. DC2E7 칼럼을 3 x 5 ml의 WBNP0.1 완충액 (50 mM 트리스 pH 7.4, 150 mM NaCl 및 0.1% NP40)으로 세척하였다. 시험관내 인산화 반응물을 빙냉 WBNP1 완충액 (50 mM 트리스 pH 7.4, 150 mM NaCl 및 1% NP40)으로 4배 희석하고 0.2 μm 필터를 통해 여과하였다. 샘플을 DC2E7 칼럼 상에 적용하였다. 샘플을 유입한 후, 수지 칼럼을 하기과 같이 세척하였다: WBNP1 완충액으로 2 x 5 mL, WBNP0.1 완충액으로 2 x 5 mL, 50 mM 트리스.HCl pH 7.4, 150 mM NaCl로 1 x 5 mL. 결합된 단백질을 3 x 2 ml의 용출 완충액 (100 mM 글리신/HCl, pH 2.8)으로 용출시켰다. 용출된 단백질을 1 M 트리스.HCl, pH 9로 즉시 pH 7-8로 조정하고 WBNP0.1 완충액으로 1:1로 희석하였다. 샘플을 DC190 친화성 칼럼 상에 적용하고 DC2E7 친화성 정제에 대해 기재된 바와 같이 정제하였다. 용출된 단백질을 PBS에 대항하여 투석하고 농도를 분광광도계로 추정하였다. 정제된 단백질은 "DC2E7 캘리브레이터"로 지명하였다.
DC2E7 ELISA는 시모아-HD1 분석기 (퀀테릭스)를 사용하여 고감도 포맷인 디지털 ELISA로 설정하였다. 디지털 ELISA를 위한 시약은 퀀테릭스 홈브루(Quanterix Homebrew) 검정 개발 가이드에 따라 하기 세부사항과 함께 준비하였다. 포획 항체로서 DC2E7 항체를 사용하였고, 검출기 항체로서 DC2E2 항체를 사용하였다. DC2E7을 0.5 mg/mL의 농도로 자기 비드 (퀀테릭스)에 커플링시켰다. 검출기 항체는 DC2E2의 비오티닐화에 의해 제조하였으며, 이때 항체 농도에 비해 120배 과량의 비오틴, EZ-링크™ NHS-PEG4-비오틴 (써모 사이언티픽, #21329)을 사용하였다. DC2E7 캘리브레이터는 캘리브레이터 희석제 (20 mM 인산나트륨 pH 7.4, 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 2% BSA 및 0.01% 카제인)에서 100 pg/mL부터 시작하고, 이어서 50, 25, 12.5, 6.25, 3.13, 1.56 및 0 pg/ml로 일련의 2배 희석도로 희석하였다. 준비된 캘리브레이터 농도를 샘플 희석제 (80 mM 인산나트륨 pH 7.4, 548 mM NaCl, 10.8 mM KCl, 0.04% 카제인 및 0.4% 트윈 20)와 3:1 비로 혼합하였다. 대조군 개체로부터의 CSF 샘플을 또한, 이전에 기재된 바와 같이, 샘플 희석제로 희석하였다. CSF 샘플의 스파이크 회수는 10, 5, 2 및 0 pg/ml의 DC2E7 캘리브레이터로 CSF의 스파이크를 사용하여 수행하였다. 희석된 캘리브레이터 및 샘플을 96 웰 플레이트 내로 피펫팅하고, 시모아 HD1 분석기에 삽입하며, 또한 포획 항체 DC2E7 비드를 비드 희석제에 희석시키며, 검출기 DC2E2를 검출기 희석제에 1.2 μg/ml로 희석시키고, SBG를 SBG 희석제에서 200 pM으로 희석시키며, 기질 RGP를 분석기에 삽입하였다 (모든 완충액, SBG 및 RGP는 퀀테릭스로부터 수득되었음). 검정은 시모아 1.5 소프트웨어에서 프로그래밍하였고 분석을 수행하였다. 분석 후 평가는 그래프패드 프리즘(Graphpad Prism)에 의해 및/또는 시모아 1.5 소프트웨어에 포함된 소프트웨어에 의해 수행하였다. 교정 곡선의 예가 도 16에 제시되어 있다. 스파이크 회수 실험의 예가 도 17에 제시되어 있다.
실시예 12
DC2E7 디지털 ELISA는 알츠하이머병 환자와 대조군 개체를 유의미하게 구별한다
DC2E7 디지털 ELISA를 알츠하이머병 환자 (n = 20) 및 건강한 개체 (n = 20)로부터의 CSF 샘플의 분석에 사용하였다 (도 18). 분석은 DC2E7 디지털 ELISA가 알츠하이머병 환자와 대조군 개체를 매우 높은 유의성으로 구별하였다는 것을 입증하였다. ROC 곡선의 면적은 1에 매우 가까웠다. >4.43 pg/mL 농도에서 상기 검정은 95% 감도와 89.5% 특이도를 제공하고 >6.19 pg/mL 농도에서 감도는 95%이고 특이도는 100%이다.
실시예 13
DC2E7 디지털 ELISA는 알츠하이머병 환자와 다른 타우병증을 앓고 있는 환자를 유의미하게 구별한다
DC2E7 디지털 ELISA를 알츠하이머병 환자 (n = 6) 및 전두측두엽 치매 환자 (n = 16)로부터의 CSF 샘플의 분석에 사용하였다 (도 19). 분석은 DC2E7 디지털 ELISA가 알츠하이머병 환자를 다른 타우병증 환자와 매우 높은 유의성으로 구별하였다는 것을 입증하였다. ROC 곡선의 면적은 0.97이다. >3.89 pg/ml 농도에서 상기 검정은 93.8% 감도 및 100% 특이도를 제공한다.
실시예 14
DC2E7은 알츠하이머병 및 인간 타우병증에서의 불용성 타우 종을 인식한다
이전 결과는 DC2E7이 인산화된 타우에서 발생하는 에피토프를 인식하였다는 것을 보여주었다. 따라서, 다른 타우병증에서 발생하는 인산화된 타우 단백질에 대한 DC2E7의 면역반응성을 분석하였다.
불용성 타우 복합체 (비정상적인 타우 형태)는 실시예 4에 기재된 바와 같이 인간 AD 뇌 (브라크 병기 V, 전두엽 피질, 암스테르담 브레인 뱅크), 피질기저 변성 (런던 브레인 뱅크(London brain bank), 전두 피질) 및 FTD (암스테르담 브레인 뱅크)로부터 단리하였다. 추출된 불용성 타우 단백질은 실시예 4에 기재된 바와 같이 DC2E7을 사용한 이뮤노블롯팅에서 분석하였다.
AD 및 전술한 타우병증을 가진 환자로부터의 뇌에 대한 이뮤노블롯 분석 결과, 불용성 타우 분획이 DC2E7을 사용하여 검출가능한 것으로 밝혀졌다. 그 결과는 타우병증에서 병리학적 타우 응집체가 AD에서의 PHF-타우와 유사한 과인산화된 타우로 구성된다는 것을 시사한다 (도 20). 더욱이, DC2E7은 AD와 유사하게 CBD 및 FTD에서 60, 64 및 68 kDa (A68 삼중항)의 3가지 주요 PHF-타우-유사 밴드를 인식하였다.
실시예 15
pT217 타우 디지털 ELISA 검정은 높은 감도 및 특이도로 AD 환자를 FTD 및 건강한 대상체와 구별하였다
항체 DC2E7을 사용하는 pT217 타우 디지털 검정은 AD 환자 (n = 30), FTD 환자 (nfPPA, n = 14; svPPA, n = 10; bvFTD, n = 10, PSP, n = 19; 및 CBD, n = 15), 및 건강한 개체 (n = 30)로부터의 CSF를 분석하기 위해 사용하였다. 이러한 검정을 이노테스트 포스포-타우 (181P) 검정과 비교하였다.
분석은 pT217 타우 디지털 ELISA 검정이 AD 환자를 FTD 및 건강한 대상체와 구별하였다는 것을 입증하였다. 이러한 검정은 이노테스트 포스포-타우(181P) 검정 (> 52 pg/ml, 78.0% 감도, 100% 특이도, 도 21)과 비교 시, AD를 FTD/대조군으로부터 더 잘 분리하였다 (> 5.37 pg/ml, 94.1% 감도, 91.7% 특이도, 도 21). 상기 검정은 또한 AD 환자를 건강한 대상체와 구별하는데 있어서 p-타우 181 검정 (> 52 pg/ml, AUC 0.93, 95% CI, 0.85-0.97, 92% 감도, 87.5% 특이도)보다 약간 더 우수하였다 (> 3.855 pg/ml, AUC 0.96, 95% CI, 0.89-0.99, 95% 감도, 89.7% 특이도) (도 22). AD 군에서 pT217 검정과 pT181 검정 사이의 높은 상관관계 (P<0.0001, 스피어만 계수 r=0.8226)를 건강한 대조군 (P<0.5, 스피어만 계수 r=0.4032) 및 FTD (P=0.387, 스피어만 계수 r=0.232)에서 관찰된 낮은 상관관계와 비교하면, CSF 중의 pT217 타우 종이 CSF 중의 AD 특이적 바이오마커를 제공할 수 있다는 것을 시사한다. pT217 타우 자체와 비교할 때, 이노테스트 Aβ42/pT217 타우 비를 사용하는 경우에 혜택이 관찰되지 않았다.
AD 군에서는 pT217 타우 검정과 pT181 타우 검정 사이에 높은 상관관계가 관찰되었으며 (P <0.0001, 스피어만 계수 r=0.8226), 치매에 걸리지 않은 대조군에서는 낮은 상관관계가 관찰되었다 (P<0.5, 스피어만 계수 r=0.4032).
FTD 환자에서는 pT217 타우 검정과 pT181 타우 검정 사이에 상관관계가 관찰되지 않았고 (P = 0.7517, 스피어만 계수 r = 0.08929); 이때 동일한 FTD 환자에서는 pT181 검정과 HTAU 검정 사이에 강한 상관관계가 관찰되었다 (P = 0.0019, 스피어만 계수 r = 0.7321).
이러한 결과 모두는 CSF 중의 pT217 타우 종이 CSF 중의 AD 특이적 바이오마커를 제공할 수 있다는 것을 시사한다.
실시예 16
pT217 타우 디지털 ELISA 검정은 상이한 캘리브레이터를 사용하여 높은 감도 및 특이도로 AD 환자를 FTD 및 건강한 대상체와 구별하였다
pT217 타우 디지털 ELISA 검정은 경도 인지 장애 (MCI)를 가진 대상체와 건강한 대상체를 구별할 수 있다. 뇌척수액 (CSF) 중의 pT217 타우 농도는 MCI를 가진 대상체와 AD를 가진 대상체에 대해 유사하다 (도 23a). MCI를 가진 3명의 대상체는 나중에 AD를 발병하였다.
pT217 타우 검정은 타우 병리가 존재할 수 있는, 다발성 경화증 (MS), 파킨슨병 (PD), 근위축성 측삭 경화증 (ALS), 및 전두측두엽 치매 (FTD)를 포함한 다른 신경계 장애를 가진 대상체로부터의 CSF 샘플을 시험하기 위해 사용하였다 (도 23b). FTD 환자는 상당히 이질적인 집단을 나타내며, 이들 환자 중 일부는 진행성 핵상 마비 (PSP) 또는 피질기저 변성 (CBD)을 앓고 있는 반면, 다른 환자는 원발성 진행성 실어증 (PPA)에 전형적인 증상을 나타냈다. pT217 타우 디지털 ELISA 검정은 AD와 다른 신경계 장애를 구별한다 (컷-오프 9.3 pg/ml, 특이도 94%, 감도 100%).
pT217 타우 디지털 ELISA 검정은 선택된 캘리브레이터에 관계없이 유사한 감도 및 특이도로 AD 환자를 FTD 환자 및 건강한 대상체와 구별할 수 있다. 시험관내 인산화된 타우 단백질 또는 합성 펩티드를 사용한 AD 환자, FTD 환자 및 건강한 대상체로부터의 CSF 샘플 중의 pT217 타우의 분포는 유사한 감도 및 특이도를 보여주었다. 인산화된 타우 단백질 캘리브레이터를 사용하면, 상기 검정은 94.1% 감도 및 91.7% 특이도 (>5.37 pg/ml)를 나타냈다. 2E7 펩티드 (2E7pep)를 사용하면, 상기 검정은 93.9% 감도 및 90.0% 특이도 (>305 pg/ml)를 나타냈다 (도 29). 2E7pep는 하기 아미노산 서열을 보유하였다: GQKGQANATRIPAKGGGSGGGSGGGSSRTPSLP pT PPTREPK. 첫 번째 밑줄쳐 있는 서열은 DC2E2 항체의 에피토프를 나타내고, 두 번째 밑줄쳐 있는 서열은 DC2E7 항체의 에피토프를 나타낸다 (처음 3개의 아미노산과 마지막 아미노산은 타우 단백질로부터 유래되는 반면, 서열 (GGGS)3은 DC2E2의 에피토프와 DC2E7의 에피토프를 연결하는 링커임).
실시예 17
재조합 기술에 의한 항체 DC2E7의 최적화
DC2E7 항체의 친화도는 리보솜 디스플레이 및 파지 디스플레이 기술에 의해 최적화되었다. 먼저, DC2E7 하이브리도마 세포주로부터의 증폭 및 클로닝을 통해 항체 DC2E7의 scFv 포맷을 코딩하는 cDNA를 생성하였다. scFv DC2E7에 대한 유전자는 오류가 발생하기 쉬운 PCR에 의해 돌연변이시켰고, 돌연변이된 scFv DC2E7 단편의 라이브러리는 리보솜 디스플레이 기술 (Hanes et al., 1998) 및 파지 디스플레이 기술 (Harrison et al., 1996)에 의해 2E7pep에 대항하여 친화도 선택하였다.
4 라운드의 선택 후, 단리된 scFv의 단편을 발현 벡터로 클로닝하여, scFv가 myc-태그와 융합되고 이. 콜라이 JM109에서 발현되도록 하였다 (Sanmark et al., 2015). 돌연변이된 DC2E7 scFv를 함유하는 30개 집락의 박테리아 용해물을 펩티드 경쟁 면역검정을 사용하여 시험하였다. 면역검정은 PBS 중 100 μl/웰의 0.01 μg/ml의 2E7pep로 코팅된 96 웰 미세역가 플레이트에서 밤새 4℃ 하에 수행하였다. 플레이트를 4회 세척하고 PBS-T에서 30분 동안 실온 하에 차단하였다. 결합은 실온에서 1시간 동안 진탕 플랫폼 상에서, 10,000 x 희석된 항-myc 항체를 함유하는 PBS-T 중의 100 μl의 10x 희석된 박테리아 용해물로 수행하였다. 웰을 PBS-T로 4회 세척하고, 용해물당 10 μg/ml 농도에서 2E7pep와의 경쟁을 진탕 플랫폼 상에서 실온 하에 2시간 동안 수행하였다. 이어서, 플레이트를 PBS-T로 4회 세척하고 PBS-T에서 1:10000으로 희석된 스트렙타비딘-HRP 접합체와 함께 실온 하에 1시간 동안 인큐베이션하였다. 상기 플레이트를 PBS-T로 4회 세척하고 TMB 기질을 사용하여 5분 동안 전개한 후, 1 M H2SO4를 사용하여 비색 반응을 중지시켰다. 450 nm에서의 흡광도는 미세역가 플레이트 흡광도 판독기를 사용하여 판독하였다.
리보솜 디스플레이 및 파지 디스플레이에 의해 생성된 scFv에 대한 흡광도가 도 24에 제시되어 있다. scFv K+는 돌연변이되지 않은 DC217을 나타낸다. scFv K+에 상응하는 라인 위의 시그널을 보여주는 모든 scFv는 원래의 DC217 scFv와 비교 시, 더 높은 친화도 (별표로 표지됨)를 가질 것으로 예상된다.
리보솜 디스플레이 및 파지 디스플레이에 의해 단리된 scFv의 중쇄 및 경쇄 아미노산 서열의 정렬 (클론 명칭의 끝에 있는 "PD"는 그것이 파지 디스플레이에 의해 수득되었다는 것을 나타냄)은 도 25에 제시되어 있다. VL (도 25a) 및 VH (도 25b) 서열이 제시되어 있다. DC2E7에 비해 결합이 개선된 항체가 도 25c (경쇄) 및 도 25d (중쇄)에 제시되어 있다. 첫 번째 라인은 원래의 DC2E7 항체를 나타낸다. DC2E7 내의 서열과 동일한 잔기는 점으로 표시된다. VL 및 VH 내의 아미노산 잔기의 넘버링 및 CDR의 표지화는 IMGT 넘버링 시스템에 따른다.
실시예 18
항체 DC2E7, DC149, 및 DC807의 비교
항체 DC149는 실시예 2에 기재된 것과 유사한 방식으로 생성되었으며, 다음과 같은 차이점이 있다: 마우스를 위치 Thr212 및 Thr217에서 이중 인산화된 펩티드, 즉 제1 시스테인을 통해 KLH에 접합된 CSRpTPSLPpTPPTREPK (2N4R 타우의 210-224)로 면역화시켰다. 스크리닝은 실시예 2에 기재된 바와 같이 ELISA에 의해 수행하였고, 이때 DC149는 SRTPSLPpTPPTREPK를 포함하는 펩티드 (즉, DC2E7에 결합하는 Thr217에서 모노-인산화된 동일한 펩티드)에 대한 특이적 결합에 의해 확인하였고, DC807은 이중-인산화된 펩티드에 대한 특이적 결합에 의해 확인하였다. DC149 및 DC807 항체는 비인산화된 펩티드 또는 비인산화된 타우 단백질에 결합하지 않은 반면, DC807은 또한 모노-인산화된 펩티드에 결합하지 않았다.
DC2E7, 및 DC149 및 DC807은 실시예 10에 기재된 것과 유사한 설정을 사용하여 고전적 ELISA 검정에서 분석하였으며, 이때 2E7pep 캘리브레이터를 사용하였다. 3가지 항체 모두는 매우 유사한 친화도로 적어도 Thr217 상에서 인산화된 타우 펩티드에 결합하였다 (도 26).
항체 DC217, DC149 및 DC807에 대한 아미노산 서열은 클로닝 및 질량 분광측정법에 의해 결정하였다. DC2E7 및 DC149에서의 중쇄 및 경쇄 서열의 정렬은 도 27a-b에 제시되어 있다. DC2E7 및 DC807에서의 중쇄 및 경쇄 서열의 정렬은 도 28a-b에 제시되어 있다. DC2E7의 서열과 동일한 잔기는 점으로 표시된다. VL 및 VH의 상보성-결정 영역 (CDR)은 박스로 표시된다. VL 및 VH 내의 아미노산 잔기의 넘버링 및 CDR의 표지화는 IMGT 넘버링 시스템에 따른다.
참고 문헌:
Hanes et al., (1998). Ribosome display efficiently selects and evolves high-affinity antibodies in vitro from immune libraries. PNAS, Vol. 95, pp. 14130-14135. doi.org/10.1073/pnas.95.24.14130.
Harrison et al., (1996). Screening of phage antibody libraries. vol. 26783-109, pp. 83-109. doi.org/10.1016/S0076-6879(96)67007-4.
Kabat, E. A., Wu, T. T., Perry, H. M., Gottesmann, K. S. & Foeller, C. (1991) in Sequences of Proteins of Immunological Interest (U.S. Department of Health and Human Services, Bethesda, MD) Vol. I, pp. 151 and 464, 5th Ed.
실시예 19
pT217 검정의 독립적인 검증
이전에 논의한 pT217 검출 및 정량화를 위한 프로토콜은 HD-1 분석기를 사용하여 시모아에 적용하였다. 이러한 프로토콜은 인간 CSF 샘플에서 pT217을 측정하는데 적합한 것으로 밝혀졌다. 검정의 감도, 선형성, 평행도 및 회수율을 분석하였다. 표준 곡선은 2E7 pep 캘리브레이터 펩티드를 CSF 샘플과 PBS에 스파이킹함으로써 측정하였다. DC2E7을 포획 항체로서 사용하였고, DC2E2를 검출 항체로서 사용하였다. 관찰된 검출 한계는 184.4 pg/mL였다. 반복성을 평가하였다: 검정내 (표준 곡선의 선형 범위 내의 값에 대해 <15%), 검정간 (표준 곡선의 선형 범위 내의 값에 대해 <15%), 및 플레이트내 (표준 곡선의 선형 범위 내의 값에 대해 <15%). 평행도 및 회수율은 <15%인 것으로 결정되었다.
SEQUENCE LISTING <110> AXON NEUROSCIENCE SE <120> ANTIBODY-BASED METHODS OF DETECTING AND TREATING ALZHEIMER'S DISEASE <130> 11634.0018-00304 <140> PCT/IB2019/000358 <141> 2019-03-27 <150> 62/703,299 <151> 2018-07-25 <150> 62/664,662 <151> 2018-04-30 <150> 62/649,208 <151> 2018-03-28 <160> 212 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 1 Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe Gly 1 5 <210> 2 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 2 Ile Ser Gly Asp Ser Asn Thr Ile 1 5 <210> 3 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic peptide" <400> 3 Ala Arg Thr Leu Ala Tyr 1 5 <210> 4 <211> 6 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic 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45 Gln Leu Leu Ile Tyr Leu Met Ser Thr Arg Ala Ser Gly Val Ser Asp 50 55 60 Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Glu Ile Ser 65 70 75 80 Arg Val Lys Ala Glu Asp Val Gly Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Phe Val 85 90 95 Glu Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Thr Gly Thr Lys Leu Glu Leu Gln Arg 100 105 110 <210> 207 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 207 Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser Gly Asp Ser Asn Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Thr Leu Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110 <210> 208 <211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 208 Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Leu Ser Ser Phe 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser Ser Gly Ser Ser Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Ile Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ser Arg Arg Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser 100 105 110 <210> 209 <211> 108 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 209 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Ser Ser Ser Phe Ser Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Glu Asp Ile Tyr Asn Arg 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Thr Pro Gly Asn 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<211> 112 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 211 Asp Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 20 25 30 Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Glu Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Tyr Ile Ser Gly Asp Ser Asn Thr Ile Tyr Tyr Ala Asp Thr Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Pro Lys Asn Thr Leu Phe 65 70 75 80 Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Thr Leu Ala Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser 100 105 110 <210> 212 <211> 118 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <221> source <223> /note="Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide" <400> 212 Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Lys Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Ala Met Ser Trp Val Arg Gln Asn Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Ile Ser Ser Gly Gly Thr Ile Tyr Ser Pro Asp Ser Val Lys 50 55 60 Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Gly Arg Asn Ile Leu Tyr Leu 65 70 75 80 Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Met Tyr Ser Cys Ala 85 90 95 Arg Val Asn Tyr Asp Tyr Gly Tyr Ala Met Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Ser Val Thr Val Ser 115

Claims (176)

  1. 타우에 결합할 수 있는 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서
    HCDR1은 서열식별번호: 1, 또는 위치 5 및 6 중 하나 이상에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고,
    HCDR2는 서열식별번호: 2, 또는 위치 1, 4, 5, 6, 및 8 중 하나 이상에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고,
    HCDR3은 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고,
    LCDR1은 서열식별번호: 4, 또는 위치 2에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고,
    LCDR2는 서열식별번호: 5, 또는 위치 3에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고,
    LCDR3은 서열식별번호: 6, 또는 위치 4 및 6 중 하나 이상에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 것인
    항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  2. 제1항에 있어서,
    HCDR1 내의 위치 5에서의 치환이 글리신이고, HCDR1 내의 위치 6에서의 치환이 글리신인 것,
    HCDR2 내의 위치 1에서의 치환이 발린이고, HCDR2 내의 위치 4에서의 치환이 알라닌이고, HCDR2 내의 위치 5에서의 치환이 글리신이고, HCDR2 내의 위치 6에서의 치환이 세린이고, HCDR2 내의 위치 8에서의 치환이 발린인 것,
    LCDR1 내의 위치 2에서의 치환이 아스파라긴인 것,
    LCDR2 내의 위치 3에서의 치환이 글리신인 것, 및/또는
    LCDR3 내의 위치 4에서의 치환이 아르기닌인 것 및/또는 LCDR3 내의 위치 6에서의 치환이 트레오닌인 것인
    항체 또는 항원 결합 단편.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서,
    HCDR1이 위치 5에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 것,
    HCDR2가 위치 8에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 것,
    HCDR3이 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하는 것,
    LCDR1이 위치 2에서의 치환을 갖는 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하는 것,
    LCDR2가 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 것, 및/또는
    LCDR3이 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 것인
    항체 또는 항원 결합 단편.
  4. 제3항에 있어서,
    HCDR1 내의 위치 5에서의 치환이 글리신인 것,
    HCDR2 내의 위치 8에서의 치환이 발린인 것, 및/또는
    LCDR1 내의 위치 2에서의 치환이 아스파라긴인 것인
    항체 또는 항원 결합 단편.
  5. 제1항에 있어서,
    HCDR1이 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2가 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3이 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR1이 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2가 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3이 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 것인
    항체 또는 항원 결합 단편.
  6. 제1항에 있어서,
    HCDR1이 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2가 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3이 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR1이 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2가 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3이 서열식별번호: 41의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    HCDR1이 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2가 서열식별번호: 34의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3이 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR1이 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2가 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3이 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    HCDR1이 서열식별번호: 32의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2가 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3이 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR1이 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2가 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3이 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    HCDR1이 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2가 서열식별번호: 35의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3이 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR1이 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2가 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3이 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    HCDR1이 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2가 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3이 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR1이 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2가 서열식별번호: 40의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3이 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    HCDR1이 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2가 서열식별번호: 36의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3이 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR1이 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2가 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3이 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    HCDR1이 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2가 서열식별번호: 37의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3이 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR1이 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2가 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3이 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    HCDR1이 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2가 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3이 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR1이 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2가 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3이 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    HCDR1이 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2가 서열식별번호: 38의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3이 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR1이 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2가 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3이 서열식별번호: 42의 아미노산 서열을 포함하는 것인
    항체 또는 항원 결합 단편.
  7. 제1항에 있어서,
    HCDR1이 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2가 서열식별번호: 37의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3이 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR1이 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2가 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3이 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    HCDR1이 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2가 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3이 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR1이 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2가 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3이 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 것인
    항체 또는 항원 결합 단편.
  8. 제1항에 있어서,
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 것인
    항체 또는 항원 결합 단편.
  9. 제1항에 있어서,
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 43의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 44의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 45의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 46의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 47의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 48의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 49의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 50의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 51의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 52의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 53의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 54의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 55의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 56의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 57의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 58의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 59의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 60의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 61의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 62의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 63의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 64의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 65의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 66의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 67의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 68의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 69의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 70의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 71의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 72의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 73의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 74의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 75의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 76의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 77의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 78의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 79의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 80의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 81의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 82의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 83의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 84의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 85의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 86의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 87의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 88의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 89의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 90의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 91의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 92의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 93의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 94의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 95의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 96의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 97의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 98의 아미노산 서열을 포함하는 것인
    항체 또는 항원 결합 단편.
  10. 제1항에 있어서,
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 57의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 58의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 65의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 66의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 77의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 78의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 79의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 80의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 83의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 84의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 85의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 86의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 91의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 92의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 93의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 94의 아미노산 서열을 포함하는 것인
    항체 또는 항원 결합 단편.
  11. 타우에 결합할 수 있는 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  12. 제11항에 있어서, 중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 21의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체 또는 항원 결합 단편.
  13. 타우에 결합할 수 있는 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 25의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 28의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  14. 제11항에 있어서, 중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 29의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 30의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체 또는 항원 결합 단편.
  15. 타우 단백질 2N4R (서열식별번호: 9)에의 결합에 대해 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 따른 항체와 경쟁할 수 있는 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 따른 항체에 의해 결합된 타우 단백질 2N4R (서열식별번호: 9) 상의 동일한 에피토프에 결합할 수 있는 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  17. 타우 단백질 2N4R (서열식별번호: 9) 상의 에피토프에 결합할 수 있으며, 여기서 에피토프는 인산화된 것인 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  18. 제17항에 있어서, 타우 상의 에피토프가 타우 단백질 2N4R의 잔기 188-227 (서열식별번호: 10) 중 하나 이상을 포함하는 것인 항체 또는 항원 결합 단편.
  19. 제17항 또는 제18항에 있어서, 타우 상의 에피토프가 타우 단백질 2N4R의 잔기 210-221 (서열식별번호: 11) 중 하나 이상을 포함하는 것인 항체 또는 항원 결합 단편.
  20. 제17항 내지 제19항 중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 인산화된 잔기가 타우 단백질 2N4R (서열식별번호: 9)의 위치 217에서의 포스포-트레오닌을 포함하는 것인 항체 또는 항원 결합 단편.
  21. 제20항에 있어서, 에피토프가 또한 타우 단백질 2N4R의 위치 210에서의 인산화된 세린, 위치 212에서의 트레오닌, 위치 214에서의 세린, 또는 위치 220에서의 트레오닌, 또는 그의 임의의 조합을 포함하는 것인 항체 또는 항원 결합 단편.
  22. 제17항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 에피토프가 SRTPSLPpTPPTR (서열식별번호: 12의 서열)을 포함하거나 또는 그로 이루어지는 것인 항체 또는 항원 결합 단편.
  23. 제17항 내지 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 에피토프가 SRpTPSLPpTPPTR (서열식별번호: 31의 서열)을 포함하거나 또는 그로 이루어지는 것인 항체 또는 항원 결합 단편.
  24. 제17항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 항체이거나 또는 결합에 대해 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 따른 항체와 경쟁하는 것인 항체 또는 항원 결합 단편.
  25. 타우 단백질 2N4R의 잔기 151-188 (서열식별번호: 13) 중 하나 이상을 포함하는 타우 상의 에피토프에 결합할 수 있는 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  26. 제25항에 있어서, 타우 상의 에피토프가 타우 단백질 2N4R의 잔기 163-172 (서열식별번호: 14) 중 하나 이상을 포함하는 것인 항체 또는 항원 결합 단편.
  27. 제25항 또는 제26항에 있어서, 타우 상의 에피토프가 KGQANATRIP (서열식별번호: 14의 서열)를 포함하고, 임의적으로 에피토프 상의 잔기 중 하나 이상이 인산화되며, 임의적으로 인산화가 타우 단백질 2N4R의 위치 169에서의 인산화된 트레오닌을 포함하는 것인 항체 또는 항원 결합 단편.
  28. 제25항 내지 제27항 중 어느 한 항에 있어서, 타우 상의 에피토프가 KGQANATRIP (서열식별번호: 14의 서열)로 이루어지는 것인 항체 또는 항원 결합 단편.
  29. 제25항 내지 제28항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 제13항 또는 제14항에 따른 항체이거나 또는 결합에 대해 제13항 또는 제14항에 따른 항체와 경쟁하는 것인 항체 또는 항원 결합 단편.
  30. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 중쇄 불변 영역 및 경쇄 불변 영역을 추가로 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편.
  31. 제30항에 있어서, 인간 IgG 이소타입 중쇄 불변 영역을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편.
  32. 제31항에 있어서, 인간 IgG 이소타입이 인간 IgG1 이소타입 또는 인간 IgG4 이소타입인 항체 또는 항원 결합 단편.
  33. 제1항 내지 제32항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 카파 경쇄 불변 영역을 추가로 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편.
  34. 제1항 내지 제30항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편이 설치류 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 키메라 항체 또는 그의 항원 결합 단편, CDR-그라프팅된 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 및 인간화 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로부터 선택되는 것인 항체 또는 항원 결합 단편.
  35. 제1항 내지 제29항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편이 Fab, Fab', F(ab')2, Fd, scFv, (scFv)2, scFv-Fc, 또는 Fv 단편인 항체 또는 항원 결합 단편.
  36. 제1항 내지 제12351항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편이 제2 작용제에 접합되는 것인 항체 또는 항원 결합 단편.
  37. 제36항에 있어서, 제2 작용제가 적어도 하나의 검출가능한 표지인 항체 또는 항원 결합 단편.
  38. 제37항에 있어서, 적어도 하나의 검출가능한 표지가 효소, 방사성동위원소, 형광단, 비오틴, 핵 자기 공명 마커, 또는 중금속을 포함하는 것인 항체 또는 항원 결합 단편.
  39. 제38항에 있어서, 적어도 하나의 검출가능한 표지가 방사성동위원소 또는 비오틴을 포함하는 것인 항체 또는 항원 결합 단편.
  40. 제36항에 있어서, 제2 작용제가 알츠하이머병 또는 또 다른 타우병증에 대한 적어도 하나의 치료제를 포함하는 것인 항체 또는 항원 결합 단편.
  41. 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편의 이뮤노글로불린 쇄의 적어도 하나의 가변 영역을 코딩하는 단리된 핵산.
  42. 제41항의 핵산을 포함하는 단리된 벡터.
  43. 제41항의 핵산 및/또는 제42항의 벡터를 포함하는 단리된 숙주 세포.
  44. 타우에 결합할 수 있는 항체 또는 그의 단편을 생산하는 방법으로서, 상기 항체 또는 그의 단편을 생산하기에 충분한 조건 하에 제43항의 숙주 세포를 배양하는 것을 포함하는 방법.
  45. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 따른 하나 이상의 항체 또는 항원 결합 단편 및 제약상 허용되는 담체 및/또는 희석제를 포함하는 제약 조성물.
  46. 제45항에 있어서, 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 따른 2종 이상의 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하는 제약 조성물.
  47. 제45항 또는 제46항에 있어서, 알츠하이머병 또는 또 다른 타우병증을 치료하기 위한 적어도 하나의 추가적인 치료제를 추가로 포함하는 제약 조성물.
  48. 대상체에서 알츠하이머병 또는 또 다른 타우병증을 치료하거나, 그의 진행을 지연시키거나, 또는 그의 진행을 예방하는 방법으로서, 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 항체 또는 제45항 내지 제47항 중 어느 한 항에 따른 제약 조성물의 유효량을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는 방법.
  49. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편 또는 제45항 내지 제47항 중 어느 한 항의 제약 조성물의 용도로서, 알츠하이머병의 치료, 진행 지연 또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 상기 항체 또는 항원 결합 단편을 투여함으로써 알츠하이머병을 치료하거나, 그의 진행을 지연시키거나 또는 그를 예방하기 위한 의약의 제조에서의 용도.
  50. 대상체에서 타우병증을 검출하는 방법으로서,
    대상체로부터 생물학적 샘플을 수득하는 단계;
    샘플을 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편의 유효량과 접촉시키는 단계, 및
    샘플 중의 타우에의 항체 또는 항원 결합 단편의 결합을 검출하며,
    그에 의해 대상체에서 타우병증을 검출하는 단계
    를 포함하는 방법.
  51. 제50항에 있어서, 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편이 검출가능한 표지를 추가로 포함하는 것인 방법.
  52. 제50항 또는 제51항에 있어서, 대조군 샘플 또는 역치와 비교하여 항체 또는 항원 결합 단편과 복합체를 형성한 타우의 존재 및/또는 증가된 양이 대상체에서의 타우병증을 나타내며, 임의적으로 여기서 타우병증은 알츠하이머병인 방법.
  53. 대상체에서 타우병증을 검출하는 방법으로서,
    대상체로부터 생물학적 샘플을 수득하는 단계;
    샘플을 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편 ("제1 항체")의 유효량과 접촉시키는 단계, 및
    생물학적 샘플을 타우와 복합체를 형성할 수 있는 분자와 접촉시키며, 임의적으로 여기서 분자는 타우에 결합할 수 있는 제2 항체 또는 항원 결합 단편 ("제2 항체")인 단계,
    샘플 중의 타우에의 제1 및/또는 제2 항체의 결합을 검출하며,
    그에 의해 대상체에서 타우병증을 검출하는 단계
    를 포함하는 방법.
  54. 제53항에 있어서, 제1 및/또는 제2 항체가 검출가능한 표지를 추가로 포함하는 것인 방법.
  55. 제53항 또는 제54항에 있어서, 제1 항체가 타우에 결합하여 타우-항체 복합체를 형성하고, 제2 항체가 타우-항체 복합체에 결합하거나, 또는 제2 항체가 타우에 결합하여 타우-항체 복합체를 형성하고, 제1 항체가 타우-항체 복합체에 결합하고,
    대조군 샘플 또는 역치와 비교하여 타우-항체 복합체의 존재 및/또는 증가된 양이 대상체에서의 타우병증을 나타내는 것인
    방법.
  56. 제53항 내지 제55항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 항체가 제2 항체와 상이한 타우 상의 에피토프에 결합하는 것인 방법.
  57. 제56항에 있어서, 제1 항체가 타우 단백질 2N4R의 잔기 188-227 (서열식별번호: 10) 중 하나 이상을 포함하는 타우 상의 에피토프에 결합하는 것인 방법.
  58. 제57항에 있어서, 제1 항체가 타우 단백질 2N4R의 잔기 210-221 (서열식별번호: 11) 중 하나 이상을 포함하는 타우 상의 에피토프에 결합하는 것인 방법.
  59. 제57항 또는 제58항에 있어서, 타우 상의 에피토프가 타우 단백질 2N4R (서열식별번호: 9)의 위치 217에서의 적어도 하나의 인산화된 잔기를 포함하고, 임의적으로 또한 타우 단백질 2N4R의 위치 210에서의 인산화된 세린, 위치 212에서의 트레오닌, 위치 214에서의 세린, 또는 위치 220에서의 트레오닌, 또는 그의 임의의 조합을 포함하는 것인 방법.
  60. 제59항에 있어서, 타우 상의 에피토프가 SRTPSLPpTPPTR (서열식별번호: 12)을 포함하는 것인 방법.
  61. 제59항에 있어서, 타우 상의 에피토프가 SRpTPSLPpTPPTR (서열식별번호: 31)을 포함하는 것인 방법.
  62. 제53항 내지 제61항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 항체가 제1항 내지 제10항, 제13항 및 제14항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하는 것인 방법.
  63. 제53항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 항체가 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3, 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 것인 방법.
  64. 제53항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 항체가 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열식별번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3, 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하거나; 또는
    제1 항체가 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3, 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 것인
    방법.
  65. 제53항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 항체가 서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열식별번호: 25의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3, 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열식별번호: 28의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 것인 방법.
  66. 제53항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 항체가 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
  67. 제53항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 항체가 서열식별번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 58의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 65의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 66의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 77의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 78의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 79의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 80의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 83의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 84의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 85의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 86의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 91의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 92의 아미노산 서열을 포함하거나; 또는
    중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 93의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 94의 아미노산 서열을 포함하는 것인
    방법.
  68. 제53항 내지 제62항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 항체가 서열식별번호: 29의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 30의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
  69. 제53항 내지 제68항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 항체가 타우 단백질 2N4R의 잔기 151-188 (서열식별번호: 13) 중 하나 이상을 포함하는 타우 상의 에피토프에 결합하는 것인 방법.
  70. 제69항에 있어서, 제2 항체가 타우 단백질 2N4R의 잔기 163-172 (서열식별번호: 14) 중 하나 이상을 포함하는 타우 상의 에피토프에 결합하는 것인 방법.
  71. 제53항 내지 제70항 중 어느 한 항에 있어서, 제2 항체가 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 15의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 16의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 17의 아미노산 서열을 포함하고; 여기서 LCDR1은 서열식별번호: 18의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 19의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 20의 아미노산 서열을 포함하는 것인 방법.
  72. 제71항에 있어서, 제2 항체가 서열식별번호: 21의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 22의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
  73. 제53항 내지 제72항 중 어느 한 항에 있어서, 제1 및/또는 제2 항체가 고체 표면 또는 입자에 연결되는 것인 방법.
  74. 제73항에 있어서, 입자가 비드인 방법.
  75. 제74항에 있어서, 비드가 자기 비드인 방법.
  76. 제74항에 있어서, 비드가 플라스틱 또는 합성 중합체 비드인 방법.
  77. 제74항에 있어서, 비드가 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리스티렌, 폴리아미드, 폴리우레탄, 페놀계 중합체, 니트로셀룰로스, 자연 유래 중합체, 라텍스 고무, 폴리사카라이드, 폴리펩티드, 복합 재료, 세라믹, 실리카 또는 실리카-기반 재료, 탄소, 금속 또는 금속 화합물, 금, 은, 강철, 알루미늄, 구리, 무기 유리 또는 실리카 재료, 또는 그의 조합을 포함하는 것인 방법.
  78. 제74항 내지 제77항 중 어느 한 항에 있어서, 비드가 구형, 디스크, 링 또는 큐브-유사 형상을 갖는 것인 방법.
  79. 제54항에 있어서, 검출가능한 표지가 효소, 방사성동위원소, 형광단, 비오틴, 핵 자기 공명 마커, 중금속, 또는 그의 조합을 포함하는 것인 방법.
  80. 제79항에 있어서, 검출가능한 표지로부터 시그널을 검출하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  81. 제80항에 있어서, 검출가능한 표지가 비오틴이며, 이는 효소, 바람직하게 양고추냉이 퍼옥시다제, 알칼리성 포스파타제 또는 β-갈락토시다제에 접합된 스트렙타비딘과 샘플을 접촉시킴으로써 검출되는 것인 방법.
  82. 제50항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 방법이 고전적 ELISA를 포함하는 것인 방법.
  83. 제50항 내지 제81항 중 어느 한 항에 있어서, 방법이 디지털 ELISA 또는 단일 분자 어레이를 포함하는 것인 방법.
  84. 제50항 내지 제83항 중 어느 한 항에 있어서, 샘플이 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉되기 전에 희석되는 것인 방법.
  85. 제50항 내지 제84항 중 어느 한 항에 있어서, 샘플이 항체 또는 항원 결합 단편과 접촉되기 전에 면역 복합체 해리를 거치는 것인 방법.
  86. 제85항에 있어서, 면역 복합체 해리가, 열 및/또는 산을 샘플에 적용하는 것을 포함하는 것인 방법.
  87. 제50항 내지 제86항 중 어느 한 항에 있어서, 생물학적 샘플이 뇌척수액 (CSF) 또는 혈액을 포함하는 것인 방법.
  88. 제87항에 있어서, 샘플이 혈액의 혈장 및/또는 혈청 분획을 포함하는 것인 방법.
  89. 제50항 내지 제88항 중 어느 한 항에 있어서, 방법이 샘플 중의 인산화된 타우의 양을 검출하며, 임의적으로 샘플 중에서 검출된 인산화된 타우가 대조군 샘플에서보다 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25배, 또는 그 초과의 배수로 더 높고/거나, 임의적으로 샘플 중에서 검출된 인산화된 타우가 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 pg/ml의 역치보다 더 큰 것인 방법.
  90. 제89항에 있어서, 샘플 중에서 검출된 인산화된 타우가 약 100-600 pg/ml의 역치보다 더 큰 것인 방법.
  91. 제90항에 있어서, 역치가 약 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 또는 590 pg/ml인 방법.
  92. 제91항에 있어서, 역치가 약 300 pg/ml인 방법.
  93. 제91항에 있어서, 역치가 약 305 pg/ml인 방법.
  94. 제91항에 있어서, 역치가 약 295 pg/ml인 방법.
  95. 제50항 내지 제94항 중 어느 한 항에 있어서, 샘플 중의 인산화된 타우의 양을 건강한 개체로부터의 대조군 샘플 중의 수준과 비교하며, 여기서 대조군에 비해 샘플 중의 인산화된 타우의 수준에서의 증가는 타우병증을 나타내는 것인 단계를 포함하는 방법.
  96. 제50항 내지 제95항 중 어느 한 항에 있어서, 검출된 타우병증이 AD인 방법.
  97. 제96항에 있어서, 샘플 중의 인산화된 타우의 양을 역치 또는 AD 이외의 알려진 타우병증을 가진 환자로부터의 대조군 샘플 중의 수준과 비교하며, 여기서 샘플 중의 인산화된 타우의 증가된 수준은 대상체가 또 다른 타우병증 또는 또 다른 원인의 치매보다는 알츠하이머병을 갖는다는 것을 나타내는 것인 단계를 포함하는 방법.
  98. 대상체에서 알츠하이머병을 또 다른 타우병증 또는 또 다른 원인의 치매와 구별하는 방법으로서,
    대상체로부터 뇌척수액 또는 혈액 샘플을 수득하는 단계;
    제50항 내지 제97항 중 어느 한 항의 방법을 수행하여 샘플 중의 인산화된 타우의 양을 결정하는 단계; 및
    인산화된 타우의 수준을 대조군 샘플 중의 수준 또는 역치와 비교하며,
    여기서 대조군 샘플 중의 수준 또는 역치와 비교하여 샘플 중의 인산화된 타우의 증가된 수준은 대상체가 또 다른 타우병증 또는 대안적 원인의 치매보다는 알츠하이머병을 갖는다는 것을 나타내는 것인 단계
    를 포함하는 방법.
  99. 제98항에 있어서, 다른 타우병증 또는 대안적 원인의 치매가 전두측두엽 치매 (FTD) 또는 또 다른 신경계 장애, 예컨대 파킨슨병 (PD), 다발성 경화증 (MS), 및/또는 근위축성 측삭 경화증 (ALS)을 포함하는 것인 방법.
  100. 제98항 또는 제99항에 있어서, 대조군 샘플이 건강한 개체 또는 AD 이외의 알려진 타우병증을 가진 환자로부터의 것인 방법.
  101. 제98항 내지 제100항 중 어느 한 항에 있어서, 샘플 중에서 검출된 인산화된 타우가 대조군 샘플 중에서보다 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25배, 또는 그 초과의 배수로 더 높은 것인 방법.
  102. 제98항 내지 제101항 중 어느 한 항에 있어서, 샘플 중에서 검출된 인산화된 타우가 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 9.3, 또는 10 pg/ml의 역치보다 더 크거나 또는 약 100-600 pg/ml의 역치보다 더 큰 것인 방법.
  103. 제102항에 있어서, 역치가 약 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 또는 590 pg/ml인 방법.
  104. 제103항에 있어서, 역치가 약 300 pg/ml인 방법.
  105. 제103항에 있어서, 역치가 약 305 pg/ml인 방법.
  106. 제103항에 있어서, 역치가 약 295 pg/ml인 방법.
  107. 알츠하이머병을 앓고 있는 대상체에게 알츠하이머병에 대한 치료제를 투여하는 것을 포함하며, 여기서 대상체는 제50항 내지 제106항 중 어느 한 항의 방법에 따라 알츠하이머병을 갖는 것으로 확인된 것인 치료 방법.
  108. 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 따른 하나 이상의 항체 또는 항원 결합 단편, 및 알츠하이머병 또는 또 다른 타우병증을 갖는 대상체를 확인하기 위해 상기 하나 이상의 항체 또는 항원 결합 단편을 사용하는 것에 대한 지침을 포함하는 키트.
  109. 제108항에 있어서, 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 따른 2종 이상의 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하는 키트.
  110. 인간 대상체에서 알츠하이머병 또는 또 다른 타우병증을 검출하는 방법으로서, 방사성동위원소에 접합된 제1항 내지 제35항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편을 대상체에게 투여하는 단계, 및 환자의 뇌에서 방사성동위원소로부터의 시그널을 검출하며, 여기서 시그널의 검출은 대상체가 알츠하이머병 또는 또 다른 타우병증을 갖는다는 것을 나타내는 것인 단계를 포함하는 방법.
  111. 제110항에 있어서, 검출이 양전자 방출 단층촬영에 의해 수행되는 것인 방법.
  112. 제110항 또는 제111항에 있어서, 뇌에서의 시그널의 분포 패턴이, 대상체가 알츠하이머병 또는 또 다른 타우병증을 갖는지의 여부를 나타내는 것인 방법.
  113. 제110항 내지 제112항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편이 타우 단백질 2N4R의 잔기 188-227 (서열식별번호: 10) 중 하나 이상을 포함하는 타우 상의 에피토프에 결합하는 것인 방법.
  114. 제110항 내지 제113항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편이 타우 단백질 2N4R의 잔기 210-221 (서열식별번호: 11) 중 하나 이상을 포함하는 타우 상의 에피토프에 결합하는 것인 방법.
  115. 제113항 또는 제114항에 있어서, 타우 상의 에피토프가 타우 단백질 2N4R (서열식별번호: 9)의 위치 217에서의 적어도 하나의 인산화된 잔기를 포함하고, 임의적으로 또한 타우 단백질 2N4R의 위치 210에서의 인산화된 세린, 위치 212에서의 트레오닌, 위치 214에서의 세린, 또는 위치 220에서의 트레오닌, 또는 그의 임의의 조합을 포함하는 것인 방법.
  116. 제115항에 있어서, 타우 상의 에피토프가 SRTPSLPpTPPTR (서열식별번호: 12)을 포함하는 것인 방법.
  117. 제115항에 있어서, 타우 상의 에피토프가 SRpTPSLPpTPPTR (서열식별번호: 31)을 포함하는 것인 방법.
  118. 제110항 내지 제117항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편이 제1항 내지 제10항, 제13항 및 제14항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하는 것인 방법.
  119. 제110항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3, 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 것인 방법.
  120. 제110항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열식별번호: 33의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열식별번호: 37의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3, 서열식별번호: 4의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하거나; 또는
    HCDR1이 서열식별번호: 1의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2가 서열식별번호: 2의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3이 서열식별번호: 3의 아미노산 서열을 포함하고; LCDR1이 서열식별번호: 39의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2가 서열식별번호: 5의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3이 서열식별번호: 6의 아미노산 서열을 포함하는 것인
    방법.
  121. 제110항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열식별번호: 23의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR1, 서열식별번호: 24의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR2, 서열식별번호: 25의 아미노산 서열을 포함하는 HCDR3, 서열식별번호: 26의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR1, 서열식별번호: 27의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR2, 및 서열식별번호: 28의 아미노산 서열을 포함하는 LCDR3을 포함하는 것인 방법.
  122. 제110항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열식별번호: 7의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 8의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
  123. 제110항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열식별번호: 57의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 58의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하거나; 또는
    서열식별번호: 65의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 66의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하거나; 또는
    서열식별번호: 77의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 78의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하거나; 또는
    서열식별번호: 79의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 80의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하거나; 또는
    서열식별번호: 83의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 84의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하거나; 또는
    서열식별번호: 85의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 86의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하거나; 또는
    서열식별번호: 91의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 92의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하거나; 또는
    서열식별번호: 93의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 94의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인
    방법.
  124. 제110항 내지 제118항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편이 서열식별번호: 29의 아미노산 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역 및 서열식별번호: 30의 아미노산 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함하는 것인 방법.
  125. 인간 대상체에서 알츠하이머병의 병기를 결정하는 방법으로서,
    대상체로부터 뇌척수액 또는 혈액 샘플을 수득하는 단계;
    제50항 내지 제97항 중 어느 한 항의 방법을 수행하여 샘플 중의 인산화된 타우의 양을 결정하는 단계; 및
    인산화된 타우의 수준을 알려진 AD 병기의 환자로부터의 샘플 중의 수준 또는 역치 수준과 비교하며,
    그에 의해 알츠하이머병의 병기를 확인하는 단계
    를 포함하는 방법.
  126. 제125항에 있어서, 역치 수준이 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 pg/ml, 또는 약 100-600 pg/ml인 방법.
  127. 알츠하이머병에 대한 항-타우 요법의 유효성을 결정하는 방법으로서,
    인간 대상체로부터 뇌척수액 또는 혈액 샘플을 수득하는 단계;
    제50항 내지 제97항 중 어느 한 항의 방법을 수행하여 샘플 중의 인산화된 타우의 양을 결정하는 단계
    를 포함하며;
    여기서 건강한 대조군 대상체로부터의 샘플 중의 수준과 비교하고/거나 역치 수준과 비교하여 샘플 중의 인산화된 타우의 상승된 수준은 대상체가 알츠하이머병에 대한 항-타우 요법에 반응할 가능성이 더 높다는 것을 나타내는 것인
    방법.
  128. 제127항에 있어서, 역치 수준이 약 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 pg/ml, 또는 약 100-600 pg/ml인 방법.
  129. 제127항 또는 제128항에 있어서, 항-타우 요법을 이러한 요법에 반응할 가능성이 더 높은 것으로 확인된 대상체에게 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  130. 제129항에 있어서, 항-타우 요법이 항-타우 항체, 소분자, 또는 펩티드 백신 요법을 포함하는 것인 방법.
  131. 제130항에 있어서, 항-타우 요법이, 타우에 결합하고 뇌로부터의 그의 제거를 촉진시키는 항체를 투여하는 것을 포함하는 것인 방법.
  132. 제130항에 있어서, 항-타우 요법이 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항의 항-타우 항체 또는 항원 결합 단편을 투여하는 것을 포함하는 것인 방법.
  133. 알츠하이머병에 대한 항-타우 요법의 유효성을 모니터링하는 방법으로서,
    a) 치료에 앞서 인간 대상체로부터 뇌척수액 또는 혈액 샘플을 수득하는 단계;
    b) 제50항 내지 제97항 중 어느 한 항의 방법을 수행하여 샘플 중의 인산화된 타우의 양을 결정하는 단계;
    c) 항-타우 요법을 대상체에게 투여하는 단계;
    d) 항-타우 요법을 투여한 후 단계 a)-b)를 반복하며, 그에 따라 치료 전의 샘플 중의 수준과 비교 시 치료 후의 샘플 중의 인산화된 타우의 수준에서의 감소는 유효한 요법을 나타내는 것인 단계
    를 포함하는 방법.
  134. 제133항에 있어서, 치료 전에 수득된 샘플 중의 수준과 비교 시 치료 후에 수득된 샘플 중의 인산화된 타우의 더 낮은 수준을 갖는 대상체에게 항-타우 요법의 투여를 계속하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  135. 제133항 또는 제134항에 있어서, 항-타우 요법이 항-타우 항체, 소분자, 또는 펩티드 백신 요법을 포함하는 것인 방법.
  136. 제135항에 있어서, 항-타우 요법이, 타우에 결합하고 뇌로부터의 그의 제거를 촉진시키는 항체를 투여하는 것을 포함하는 것인 방법.
  137. 제135항에 있어서, 항-타우 요법이 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편을 투여하는 것을 포함하는 것인 방법.
  138. 항체 DC2E7을 생산하는 하이브리도마로서, 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 특허 기탁 번호 PTA-124992 하에 기탁된 하이브리도마.
  139. 항체 DC2E2를 생산하는 하이브리도마로서, 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션 특허 기탁 번호 PTA-124991 하에 기탁된 하이브리도마.
  140. 대상체에서 알츠하이머병 (AD) 또는 경도 인지 장애 (MCI)를 검출하는 방법으로서,
    대상체로부터의 생물학적 샘플을 타우에 결합하여 타우-항체 복합체를 형성할 수 있는 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항원 결합 단편의 유효량과 접촉시키는 단계;
    타우-항체 복합체의 존재 및/또는 양을 검출하는 단계; 및
    샘플 중의 항체에 결합된 타우의 존재/양을 대조군 샘플 중의 양 또는 역치와 비교하며,
    여기서 대조군 샘플 또는 역치와 비교하여 항체와 복합체를 형성한 타우의 존재 및/또는 증가된 양은 대상체에서의 AD 또는 MCI를 나타내는 것인 단계
    를 포함하는 방법.
  141. 제140항에 있어서, MCI가 환자에서의 AD의 전구증상을 나타내는 것인 방법.
  142. 제140항 또는 제141항에 있어서, 타우-항체 복합체의 양이 MCI 및/또는 AD를 다른 신경계 질환과 구별하는 것인 방법.
  143. 제142항에 있어서, 다른 신경계 질환이 파킨슨병, 다발성 경화증, 근위축성 측삭 경화증, 및/또는 전두측두엽 치매로부터 선택되는 것인 방법.
  144. 제140항 내지 제143항 중 어느 한 항에 있어서, 생물학적 샘플이 뇌척수액 (CSF)을 포함하는 것인 방법.
  145. 제140항 내지 제143항 중 어느 한 항에 있어서, 생물학적 샘플이 혈액을 포함하는 것인 방법.
  146. 제145항에 있어서, 샘플이 혈액의 혈장 및/또는 혈청 분획을 포함하는 것인 방법.
  147. 제140항 내지 제146항 중 어느 한 항에 있어서, 항체와 복합체를 형성한 타우의 증가된 양이 약 9.3 pg/ml의 타우의 역치를 초과하는 양인 방법.
  148. 제140항 내지 제146항 중 어느 한 항에 있어서, 항체와 복합체를 형성한 타우의 증가된 양이 약 0.9, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20 pg/ml의 타우, 또는 약 100-600 pg/ml의 타우의 역치를 초과하는 양인 방법.
  149. 제140항 내지 제146항 중 어느 한 항에 있어서, 역치가 약 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 또는 590 pg/ml인 방법.
  150. 제149항에 있어서, 역치가 약 300 또는 305 pg/ml인 방법.
  151. 제149항에 있어서, 역치가 약 295 pg/ml인 방법.
  152. 대상체에서 알츠하이머병 (AD) 또는 경도 인지 장애 (MCI)를 검출하는 방법으로서,
    대상체로부터 생물학적 샘플을 수득하는 단계;
    생물학적 샘플 중의 적어도 위치 트레오닌 217에서 인산화된 타우 단백질 2N4R의 존재 및/또는 양을 검출하는 단계; 및
    트레오닌 217에서 인산화된 타우 단백질 2N4R의 존재/양을 대조군 샘플 중의 양 또는 역치와 비교하며,
    여기서 대조군 샘플 또는 역치와 비교하여 트레오닌 217에서 인산화된 타우 단백질 2N4R의 존재 및/또는 증가된 양은 대상체에서의 AD 또는 MCI를 나타내는 것인 단계
    를 포함하는 방법.
  153. 제152항에 있어서, MCI가 환자에서의 AD의 전구증상인 방법.
  154. 제152항 또는 제153항에 있어서, 증가된 양이 MCI 및/또는 AD를 다른 신경계 질환과 구별하는 것인 방법.
  155. 제154항에 있어서, 다른 신경계 질환이 파킨슨병, 다발성 경화증, 근위축성 측삭 경화증, 및/또는 전두측두엽 치매로부터 선택되는 것인 방법.
  156. 제152항 내지 제155항 중 어느 한 항에 있어서, 생물학적 샘플이 뇌척수액 (CSF)을 포함하는 것인 방법.
  157. 제152항 내지 제155항 중 어느 한 항에 있어서, 생물학적 샘플이 혈액을 포함하는 것인 방법.
  158. 제157항에 있어서, 샘플이 혈액의 혈장 및/또는 혈청 분획을 포함하는 것인 방법.
  159. 제152항 내지 제158항 중 어느 한 항에 있어서, 타우의 증가된 양이 약 9.3 pg/ml의 타우의 역치를 초과하는 양인 방법.
  160. 제152항 내지 제158항 중 어느 한 항에 있어서, 타우의 증가된 양이 약 0.9, 1, 1.5, 2, 2.5, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 또는 20 pg/ml의 타우의 역치를 초과하는 양인 방법.
  161. 제152항 내지 제158항 중 어느 한 항에 있어서, 타우의 증가된 양이 약 100-600 pg/ml의 역치를 초과하는 양인 방법.
  162. 제161항에 있어서, 역치가 약 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250, 260, 270, 280, 290, 300, 310, 320, 330, 340, 350, 360, 370, 380, 400, 410, 420, 430, 440, 450, 460, 470, 480, 490, 500, 510, 520, 530, 540, 550, 560, 570, 580, 또는 590 pg/ml인 방법.
  163. 제152항 내지 제162항 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 위치 트레오닌 217에서 인산화된 타우 단백질 2N4R의 존재 및/또는 양이 제1항 내지 제10항, 제13항 및 제14항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편을 사용하여 검출되는 것인 방법.
  164. 대상체에서 알츠하이머병 및/또는 경도 인지 장애를 파킨슨병, 다발성 경화증, 근위축성 측삭 경화증, 및/또는 전두측두엽 치매와 구별하는 방법으로서,
    대상체로부터의 생물학적 샘플을 타우에 결합하여 타우-항체 복합체를 형성할 수 있는 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항원 결합 단편의 유효량과 접촉시키는 단계;
    타우-항체 복합체의 존재 및/또는 양을 검출하는 단계; 및
    샘플 중의 항체에 결합된 타우의 존재/양을 대조군 샘플 중의 양 또는 역치와 비교하며,
    여기서 대조군 샘플 또는 역치와 비교하여 항체와 복합체를 형성한 타우의 존재 및/또는 증가된 양은 대상체에서의 알츠하이머병 및/또는 경도 인지 장애를 나타내는 것인 단계
    를 포함하는 방법.
  165. 제164항에 있어서, 항체 또는 항원 결합 단편이 제1항 내지 제10항, 제13항 및 제14항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하는 것인 방법.
  166. 대상체에서 알츠하이머병 및/또는 경도 인지 장애를 파킨슨병, 다발성 경화증, 근위축성 측삭 경화증, 및/또는 전두측두엽 치매와 구별하는 방법으로서,
    대상체로부터 생물학적 샘플을 수득하는 단계;
    생물학적 샘플 중의 적어도 위치 트레오닌 217에서 인산화된 타우 단백질 2N4R의 존재 및/또는 양을 검출하는 단계; 및
    트레오닌 217에서 인산화된 타우 단백질 2N4R의 존재/양을 대조군 샘플 중의 양 또는 역치와 비교하며,
    여기서 대조군 샘플 또는 역치와 비교하여 트레오닌 217에서 인산화된 타우 단백질 2N4R의 존재 및/또는 증가된 양은 대상체에서의 AD 또는 MCI를 나타내는 것인 단계
    를 포함하는 방법.
  167. 제166항에 있어서, 생물학적 샘플 중의 적어도 위치 트레오닌 217에서 인산화된 타우 단백질 2N4R의 존재 및/또는 양이 제1항 내지 제10항, 제13항 및 제14항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편을 사용하여 검출되는 것인 방법.
  168. 경도 인지 장애를 가진 환자가 알츠하이머병에 걸릴 가능성을 예측하는 방법으로서,
    대상체로부터의 생물학적 샘플을 타우에 결합하여 타우-항체 복합체를 형성할 수 있는 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 따른 적어도 하나의 항체 또는 항원 결합 단편의 유효량과 접촉시키는 단계;
    타우-항체 복합체의 존재 및/또는 양을 검출하는 단계; 및
    샘플 중의 항체에 결합된 타우의 존재/양을 대조군 샘플 중의 양 또는 역치와 비교하며,
    여기서 대조군 샘플 또는 역치와 비교하여 항체와 복합체를 형성한 타우의 존재 및/또는 증가된 양은 상기 환자가 알츠하이머병에 걸릴 증가된 가능성을 나타내는 것인 단계
    를 포함하는 방법.
  169. 경도 인지 장애를 가진 환자가 알츠하이머병에 걸릴 가능성을 예측하는 방법으로서,
    대상체로부터 생물학적 샘플을 수득하는 단계;
    생물학적 샘플 중의 적어도 위치 트레오닌 217에서 인산화된 타우 단백질 2N4R의 존재 및/또는 양을 검출하는 단계; 및
    트레오닌 217에서 인산화된 타우 단백질 2N4R의 존재/양을 대조군 샘플 중의 양 또는 역치와 비교하며,
    여기서 대조군 샘플 또는 역치와 비교하여 적어도 트레오닌 217에서 인산화된 타우 단백질 2N4R의 존재 및/또는 증가된 양은 상기 환자가 알츠하이머병에 걸릴 증가된 가능성을 나타내는 것인 단계
    를 포함하는 방법.
  170. 제169항에 있어서, 생물학적 샘플 중의 적어도 위치 트레오닌 217에서 인산화된 타우 단백질 2N4R의 존재 및/또는 양이 제1항 내지 제10항, 제13항 및 제14항 중 어느 한 항의 항체 또는 항원 결합 단편을 포함하는 항체 또는 항원 결합 단편을 사용하여 검출되는 것인 방법.
  171. 타우에 결합할 수 있는 항체 또는 그의 항원 결합 단편으로서, 중쇄 가변 영역 및 경쇄 가변 영역을 포함하며, 여기서 중쇄 가변 영역은 3개의 중쇄 상보성 결정 영역 (HCDR1, HCDR2, 및 HCDR3)을 포함하고, 경쇄 가변 영역은 3개의 경쇄 상보성 결정 영역 (LCDR1, LCDR2, 및 LCDR3)을 포함하고, 여기서 HCDR1은 서열식별번호: 101의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR2는 서열식별번호: 102의 아미노산 서열을 포함하고, HCDR3은 서열식별번호: 103의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR1은 서열식별번호: 104의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR2는 서열식별번호: 105의 아미노산 서열을 포함하고, LCDR3은 서열식별번호: 106의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체 또는 그의 항원 결합 단편.
  172. 제171항에 있어서, 중쇄 가변 영역이 서열식별번호: 107의 아미노산 서열을 포함하고, 경쇄 가변 영역이 서열식별번호: 108의 아미노산 서열을 포함하는 것인 항체 또는 항원 결합 단편.
  173. 대상체에서 알츠하이머병 (AD)을 치료하는 방법으로서,
    제50항 내지 제97항, 제110항 내지 제124항 및 제140항 내지 제163항 중 어느 한 항의 방법을 사용하여 대상체에서 AD를 검출하는 단계; 및
    AD를 갖는 것으로 확인된 대상체에게 AD에 대한 치료를 투여하는 단계
    를 포함하는 방법.
  174. 제173항에 있어서, 치료가 하기 중 하나 이상을 포함하는 것인 방법:
    a) 항-타우 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 예를 들어, 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편;
    b) 아밀로이드 베타에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편;
    c) 아밀로이드 베타 및/또는 타우에 대항한 유전자 요법; 및/또는
    c) 펩티드 백신 요법으로서, 예를 들어, 아미노산 서열이 KDNIKHVPGGGS로 이루어지는 합성 펩티드를 포함하는 백신을 사용하는 펩티드 백신 요법.
  175. 제50항 내지 제97항, 제110항 내지 제124항, 및 제140항 내지 제163항 중 어느 한 항의 방법에 따라 알츠하이머병을 갖는 것으로 확인된 환자를 치료하는 방법으로서, 환자에게 알츠하이머병에 대한 치료를 투여하는 것을 포함하는 방법.
  176. 제175항에 있어서, 치료가 하기 중 하나 이상을 포함하는 것인 방법:
    a) 항-타우 항체 또는 그의 항원 결합 단편, 예를 들어, 제1항 내지 제40항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 항원 결합 단편;
    b) 아밀로이드 베타에 결합하는 항체 또는 그의 항원 결합 단편;
    c) 아밀로이드 베타 및/또는 타우에 대항한 유전자 요법; 및/또는
    c) 펩티드 백신 요법으로서, 예를 들어, 아미노산 서열이 KDNIKHVPGGGS로 이루어지는 합성 펩티드를 포함하는 백신을 사용하는 펩티드 백신 요법.
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Families Citing this family (10)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EA035943B1 (ru) 2013-03-13 2020-09-03 Протена Биосайенсес Лимитед Антитело, связывающееся с тау-белком человека
CA3022673A1 (en) 2016-05-02 2017-11-09 Prothena Biosciences Limited Tau immunotherapy
IL262726B1 (en) 2016-05-02 2024-03-01 Prothena Biosciences Ltd Antibodies that recognize tau
EP3619233A4 (en) 2017-05-02 2021-03-03 Prothena Biosciences Limited ANTIBODIES RECOGNIZING TAU PROTEIN
TW202100550A (zh) 2019-03-03 2021-01-01 愛爾蘭商普羅帝納生物科學公司 識別ｔａｕ之抗體
WO2021048619A2 (en) 2019-09-09 2021-03-18 Axon Neuroscience Se Biomarkers and treatments of alzheimer's disease and mild cognitive impairment
US20240059766A1 (en) * 2020-12-16 2024-02-22 Voyager Therapeutics, Inc. Tau binding compounds
CA3203800A1 (en) * 2021-02-19 2022-08-25 Eisai R&D Management Co., Ltd. Anti-pt217 tau antibody
CN117003863A (zh) * 2022-04-28 2023-11-07 厦门大学 针对p-tau 217的抗体及其用途
CN114778856B (zh) * 2022-05-30 2023-03-17 苏州宇测生物科技有限公司 磷酸化tau蛋白检测试剂盒

Family Cites Families (38)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4880935A (en) 1986-07-11 1989-11-14 Icrf (Patents) Limited Heterobifunctional linking agents derived from N-succinimido-dithio-alpha methyl-methylene-benzoates
AU600575B2 (en) 1987-03-18 1990-08-16 Sb2, Inc. Altered antibodies
US5202238A (en) 1987-10-27 1993-04-13 Oncogen Production of chimeric antibodies by homologous recombination
US5204244A (en) 1987-10-27 1993-04-20 Oncogen Production of chimeric antibodies by homologous recombination
FI102355B1 (fi) 1988-02-11 1998-11-30 Bristol Myers Squibb Co Menetelmä yhdistävän välikappaleen omaavien antrasykliini-immunokonjugaattien valmistamiseksi
US5859205A (en) 1989-12-21 1999-01-12 Celltech Limited Humanised antibodies
US5112596A (en) 1990-04-23 1992-05-12 Alkermes, Inc. Method for increasing blood-brain barrier permeability by administering a bradykinin agonist of blood-brain barrier permeability
US5268164A (en) 1990-04-23 1993-12-07 Alkermes, Inc. Increasing blood-brain barrier permeability with permeabilizer peptides
US6797492B2 (en) 1991-05-17 2004-09-28 Merck & Co., Inc. Method for reducing the immunogenicity of antibody variable domains
US5262522A (en) 1991-11-22 1993-11-16 Immunex Corporation Receptor for oncostatin M and leukemia inhibitory factor
US5622929A (en) 1992-01-23 1997-04-22 Bristol-Myers Squibb Company Thioether conjugates
WO1994002178A1 (en) 1992-07-27 1994-02-03 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Targeting of liposomes to the blood-brain barrier
US6214345B1 (en) 1993-05-14 2001-04-10 Bristol-Myers Squibb Co. Lysosomal enzyme-cleavable antitumor drug conjugates
US5457035A (en) 1993-07-23 1995-10-10 Immunex Corporation Cytokine which is a ligand for OX40
CU22615A1 (es) 1994-06-30 2000-02-10 Centro Inmunologia Molecular Procedimiento de obtención de anticuerpos monoclonales murinos menos inmunogénicos. anticuerpos monoclonales obtenidos
PT1516628E (pt) 1995-07-27 2013-09-24 Genentech Inc Formulação de proteína liofilizada isotónica estável
EP0871490B1 (en) 1995-12-22 2003-03-19 Bristol-Myers Squibb Company Branched hydrazone linkers
AU5508798A (en) * 1996-11-19 1998-06-10 Trustees Of The University Of Pennsylvania, The Diagnostic and therapeutic reagents for alzheimer's disease
GB2339430A (en) 1997-05-21 2000-01-26 Biovation Ltd Method for the production of non-immunogenic proteins
US6514221B2 (en) 2000-07-27 2003-02-04 Brigham And Women's Hospital, Inc. Blood-brain barrier opening
US20030083299A1 (en) 2000-11-04 2003-05-01 Ferguson Ian A. Non-invasive delivery of polypeptides through the blood-brain barrier
DE10121982B4 (de) 2001-05-05 2008-01-24 Lts Lohmann Therapie-Systeme Ag Nanopartikel aus Protein mit gekoppeltem Apolipoprotein E zur Überwindung der Blut-Hirn-Schranke und Verfahren zu ihrer Herstellung
EP1521831B1 (en) 2002-07-12 2008-04-09 Axon Neuroscience Forschungs- und Entwicklungs Gmbh Transgenic animal expressing truncated alzheimer's tau protein
CA2507762C (en) 2002-12-03 2013-02-05 Blanchette Rockefeller Neurosciences Institute Artificial low-density lipoprotein carriers for transport of substances across the blood-brain barrier
NZ541282A (en) 2002-12-24 2009-02-28 Bellus Health International Ltd Therapeutic formulations for the treatment of beta-amyloid related diseases
ZA200603619B (en) 2003-11-06 2008-10-29 Seattle Genetics Inc Monomethylvaline compounds capable of conjugation to ligands
NZ580115A (en) 2004-09-23 2010-10-29 Genentech Inc Cysteine engineered antibody light chains and conjugates
US8012936B2 (en) 2006-03-29 2011-09-06 New York University Tau fragments for immunotherapy
US20080220449A1 (en) * 2007-02-08 2008-09-11 Oligomerix, Inc. Biomarkers and assays for Alzheimer's disease
US8093018B2 (en) * 2008-05-20 2012-01-10 Otsuka Pharmaceutical Co., Ltd. Antibody identifying an antigen-bound antibody and an antigen-unbound antibody, and method for preparing the same
US8613924B2 (en) * 2009-08-06 2013-12-24 Immunas Pharma, Inc. Antibodies that specifically bind to A beta oligomers and use thereof
SG10201912964PA (en) * 2011-09-19 2020-02-27 Axon Neuroscience Se Protein-based therapy and diagnosis of tau-mediated pathology in alzheimer's disease
CN104024274B (zh) * 2011-12-20 2017-07-18 詹森生物科技公司 抗PHF‑tau抗体及其用途
US8853505B2 (en) * 2012-02-27 2014-10-07 Syngenta Participations Ag Variety corn line AA2205
US8980270B2 (en) * 2013-01-18 2015-03-17 Ipierian, Inc. Methods of treating a tauopathy
HUE053239T2 (hu) 2014-11-19 2021-06-28 Axon Neuroscience Se Humanizált tau-ellenanyagok Alzheimer-kór kezelésére
EP3412688A4 (en) * 2016-02-05 2019-12-04 Jiangsu Hengrui Medicine Co., Ltd. THROMBIN ANTIBODY, ANTIGENBINDING FRAGMENT, AND PHARMACEUTICAL USE THEREOF

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