KR20200143385A - Mospd2와, t 세포 또는 nk 세포 특이적 분자에 대한 2중 특이적 항체 - Google Patents

Mospd2와, t 세포 또는 nk 세포 특이적 분자에 대한 2중 특이적 항체 Download PDF

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야니브 살렘
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Abstract

운동성 정자 도메인 함유 단백질 2(MOSPD2)와, T 세포 특이적 또는 NK 세포 특이적 수용체 분자에 특이적으로 결합하는 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 이를 함유하는 약학 조성물 및 키트, 그리고 이를 제조 및 사용하는 방법이 본원에 개시되어 있다.

Description

MOSPD2와, T 세포 또는 NK 세포 특이적 분자에 대한 2중 특이적 항체
전자 제출된 서열 목록에 대한 참조
본원과 함께 전자 제출된 서열 목록(파일명: 3182089PC01_SequenceListing_ST25.txt; 크기 34,597 바이트; 및 생성일: 2019년 3월 12일)의 내용은 전체로서 본원에 참조로 첨부되어 있다.
본 발명의 분야
본 발명은 운동성 정자 도메인 함유 단백질 2(Motile Sperm Domain Containing Protein 2; MOSPD2)와, T 세포 특이적 또는 NK 세포 특이적 수용체 분자에 특이적으로 결합하는 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 이를 함유하는 약학 조성물 및 키트, 그리고 이를 제조 및 사용하는 방법에 관한 것이다.
MOSPD2는 길이가 518개 아미노산이고, 인간과 마우스간 상동성이 90%인 고도로 보존된 단백질이다. 바이오인포매틱스 분석은, MOSPD2가 CRAL-TRIO 영역(세포성 레티날데히드 결합 단백질(Cellular RetinALdehyde-Binding Protein; CRALBP) 및 TRIO 단백질의 명칭을 따서 명명됨)을 함유한다고 밝혔다. MOSPD2는 또한 선충류의 주 정자 단백질과 구조상 관련된 영역 및 경막 영역 1개를 함유한다.
MOSPD2는 염증 발생 조직으로 침습한 단핵구와 다양한 유형의 종양에서 발현된다(국제특허출원공개공보 WO 2017/021857). 이는 암 세포 전이와 연관되어 있으며, 단핵구의 이동을 촉진한다(국제특허출원공개공보 WO 2017/021857). 따라서 (예컨대 항 MOSPD2 항체에 의한) MOSPD2의 억제는 염증성 질환 및 장애의 치료수단(국제특허출원공개공보 WO 2017/021855)이자, 암 및 암의 전이의 치료수단(국제특허출원공개공보 WO 2017/021857)인 것으로 기술된 바 있다.
항체는 T 세포를 활성화하여, T 세포가 종양을 인지 및 공격하도록 만드는데 사용되고 있다. 예를 들어 항원 특이적 T 세포 수용체(TCR)/CD3 복합체에 대한 항체는 T 세포를 활성화하는 것으로 보고된 바 있다[Davis et al., J. Immunol. 137:3758-3767 (1986)]. 게다가, 종양 세포상 항원 및 TCR/CD3 복합체 둘다를 인지하는 2중 특이적 항체는 T 세포를 활성화하고, 종양 세포의 T 세포 매개 용해를 유도하는 것으로 보고된 바 있다[Jung et al., Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A. 84:4611-4615 (1987); Jung et al., Immunol . Today 9:257-260 (1988); Staerz et al., Nature 314:628-631 (1985); and Perez et al., Nature 316:354-356 (1985)]. MOSPD2에 대한 2중 특이적 항체가 필요한 것이다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 (i) 운동성 정자 도메인 함유 단백질 2(MOSPD2)에 대한 항원 결합 도메인 1개 이상과, (ii) T 세포 또는 NK 세포 특이적 수용체 분자에 대한 항원 결합 도메인 1개 이상을 포함하는, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 관한 것이다. 몇몇 구현예에서, T 세포 또는 NK 세포 특이적 수용체 분자는 CD3, T 세포 수용체(TCR), CD28, CD16, NKG2D, Ox40, 4-1BB, CD2, CD5 또는 CD95이다. 몇몇 구현예에서, MOSPD2에 대한 항원 결합 도메인 1개 이상은 항 MOSPD2 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv, sdFv 단편들, 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역, 상보성 결정 영역(CDR), 중쇄 CDR1, 중쇄 CDR2, 중쇄 CDR3, 경쇄 CDR1, 경쇄 CDR2 또는 경쇄 CDR3이다. 몇몇 구현예에서, T 세포 또는 NK 세포 특이적 수용체 분자는 CD3이고, CD3에 대한 항원 결합 도메인 1개 이상은 항 CD3 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv, sdFv 단편들, 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역, CDR, 중쇄 CDR1, 중쇄 CDR2, 중쇄 CDR3, 경쇄 CDR1, 경쇄 CDR2 또는 경쇄 CDR3이다.
몇몇 구현예에서, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 이하의 항원 결합 도메인들, 즉
(i) 항 MOSPD2 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 중쇄 가변 영역; 및
(ii) 항 MOSPD2 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 경쇄 가변 영역
중 1개 이상을 포함한다.
몇몇 구현예에서, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 이하의 항원 결합 도메인들, 즉
(i) 항 CD3 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 중쇄 가변 영역; 및
(ii) 항 CD3 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 경쇄 가변 영역
중 1개 이상을 포함한다.
몇몇 구현예에서, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 이하의 항원 결합 도메인들, 즉
(i) 항 MOSPD2 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 중쇄 가변 영역;
(ii) 항 MOSPD2 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 경쇄 가변 영역;
(iii) 항 CD3 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 중쇄 가변 영역; 및
(iv) 항 CD3 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 경쇄 가변 영역
을 포함한다.
몇몇 구현예에서, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 이하의 항원 결합 도메인들, 즉
(i) 항 MOSPD2 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 중쇄 가변 영역;
(ii) 항 MOSPD2 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 경쇄 가변 영역;
(iii) 항 CD3 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 중쇄 가변 영역; 및
(iv) 항 CD3 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 경쇄 가변 영역
을 N 말단에서 C 말단의 순서로 포함한다.
몇몇 구현예에서, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 항원 결합 도메인들 중 1개 이상은 펩티드 링커에 의해 연결된다. 몇몇 구현예에서, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 항원 결합 도메인들 중 1개 이상은 펩티드 링커에 의해 연결된다. 몇몇 구현예에서, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 항원 결합 도메인 모두는 펩티드 링커에 의해 연결된다.
몇몇 구현예에서, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 항원 결합 도메인 적어도 1개는 인간의 것이거나 인간화된 것이다.
몇몇 구현예에서, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 단일 사슬 폴리펩티드이다.
몇몇 구현예에서, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 분자량은 약 60,000 달톤 이하이다.
몇몇 구현예에서, 2중 특이적 항체는 나노바디, 다이아바디, 크로스맙(CrossMab), 듀오바디, 2가 항체, 2중 특이적 T 세포 결합체(Bispecific T Cell Engager; BiTE), 2중 친화성 재표적화(DART), 3중체, 미니항체, TriBi 미니바디, 인트라바디 또는 쿼드로마(quadroma)이다.
몇몇 구현예에서, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 평형 해리 상수(KD) 약 10-6 M 내지 약 10-12 M로 MOSPD2 및/또는 CD3에 특이적으로 결합한다.
몇몇 구현예에서, MOSPD2에 대한 2중 특이적 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 1개 이상의 항원 결합 도메인은 이하와 같은 MOSPD2의 아미노산 영역들, 즉 약 505번 내지 약 515번, 약 500번 내지 약 515번, 약 230번 내지 약 240번, 약 510번 내지 약 520번, 약 210번 내지 약 220번, 약 15번 내지 약 25번, 약 505번 내지 약 520번, 약 505번 내지 약 515번, 약 90번 내지 약 100번, 약 505번 내지 약 525번, 약 230번 내지 약 245번, 약 505번 내지 약 510번, 약 130번 내지 약 140번, 약 220번 내지 약 230번, 약 15번 내지 약 30번, 약 80번 내지 약 95번, 약 40번 내지 약 50번, 약 460번 내지 약 475번, 약 340번 내지 약 350번, 약 500번 내지 약 515번, 약 460번 내지 약 470번, 약 325번 내지 약 335번, 약 20번 내지 약 35번, 약 215번 내지 약 225번, 약 510번 내지 약 520번, 약 175번 내지 약 190번, 약 500번 내지 약 510번, 약 505번 내지 약 530번, 약 60번 내지 약 75번, 약 500번 내지 약 520번, 약 145번 내지 약 160번, 약 502번 내지 약 515번, 약 85번 내지 약 100번, 약 205번 내지 약 220번, 약 175번 내지 약 190번, 약 500번 내지 약 505번, 약 500번 내지 약 525번, 약 495번 내지 약 505번, 약 495번 내지 약 510번, 약 190번 내지 약 200번, 약 190번 내지 약 198번, 약 502번 내지 약 515번, 약 1번 내지 약 60번, 약 80번 내지 약 240번, 약 90번 내지 약 235번, 약 330번 내지 약 445번, 약 330번 내지 약 430번, 약 495번 내지 약 515번, 약 145번 내지 약 240번, 약 145번 내지 약 220번, 약 145번 내지 약 200번, 약 160번 내지 약 240번, 약 160번 내지 약 220번, 약 160번 내지 약 200번, 약 175번 내지 약 240번, 약 175번 내지 약 220번, 약 175번 내지 약 200번, 약 170번 내지 약 190번, 약 178번 내지 약 185번, 약 85번 내지 약 140번, 약 85번 내지 약 130번, 약 90번 내지 약 140번, 약 90번 내지 약 130번, 약 95번 내지 약 140번, 약 95번 내지 약 130번, 약 100번 내지 약 130번, 약 100번 내지 약 140번, 약 110번 내지 약 130, 또는 약 115번 내지 약 127번(이상, 서열 번호 1에 따라 번호가 메겨짐) 중 1개 이상에 특이적으로 결합한다.
몇몇 구현예에서, MOSPD2에 대한 2중 특이적 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 1개 이상의 항원 결합 도메인은 서열 번호 1 ~ 4 또는 이의 기능성 변이체중 1개 이상, 또는 서열 번호 5 ~ 8 또는 이의 기능성 변이체중 1개 이상에 의해 암호화되는 폴리펩티드에 특이적으로 결합한다.
몇몇 구현예에서, MOSPD2에 대한 2중 특이적 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 1개 이상의 항원 결합 도메인은 약 10-6 M 내지 약 10-12 M의 KD로 MOSPD2에 특이적으로 결합한다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 암호화하는 핵산에 관한 것이다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 암호화하는 핵산을 포함하는 발현 벡터에 관한 것이다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편과, 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. 몇몇 구현예에서, 본 약학 조성물은 전신 투여 또는 국소 투여에 적합하다. 몇몇 구현예에서, 본 약학 조성물은 비강, 경구, 복막내 또는 종양내 투여에 적합하다. 몇몇 구현예에서, 본 약학 조성물은 정맥내 투여, 근육내 투여 또는 피하 투여에 적합하다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 본원에 기술된 약학 조성물을, 암을 치료 또는 예방하는데 유효한 양으로 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 본원에 기술된 약학 조성물을, 암의 전이를 치료 또는 예방하는데 유효한 양으로 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암의 전이를 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이다.
몇몇 구현예에서, 본 방법은 항암 약물 유효량만큼을 대상체에 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 몇몇 구현예에서, 항암 약물은 아비라테론 아세트산염, 아비트렉세이트(메토트렉세이트), 아브락산(파클리탁셀 알부민 안정화 나노입자 제제), ABVD, ABVE, ABVE-PC, AC, AC-T, 애드세트리스(브렌툭시맙 베도틴), ADE, 아도-트라스투주맙 엠탄신, 아드리아마이신(독소루비신 염화수소산염), 아드루실(플루오로우라실), 아파티닙 디말레이트, 아피니토(에버롤리무스), 아킨지오(네투피탄트 및 팔로노세트론 염화수소산염), 알다라(이미퀴모드), 알데스류킨, 알렘투주맙, 알림타(페메트렉시드 2나트륨), 알록시(팔로노세트론 염화수소산염), 암보클로린(Ambochlorin)(클로람부실), 암보클로린(클로람부실), 아미노레불린산, 아나스트로졸, 아프레피탄트, 아레디아(파미드로네이트 2나트륨), 아리미덱스(아나스트로졸), 아로마신(엑세메스탄), 어래논(넬라라빈), 삼산화비소, 아르제라(오파투무맙), 아스파라기나아제 어위니아 크리산테미(Erwinia chrysanthemi), 아바스틴(베바시주맙), 엑시티닙, 아자시티딘, BEACOPP, 베세넘(Becenum)(카무스틴), 벨레오닥(벨리노스타트), 벨리노스타트, 벤다무스틴 염화수소산염, BEP, 베바시주맙, 벡사로텐, 벡사(토시투모맙 및 I131 요오드 토시투모맙), 비칼루타미드, BiCNU(카무스틴), 블레오마이신, 블리나투모맙, 블린사이토(블리나투모맙), 보르테조밉, 보술리프(보수티닙), 보수티닙, 브렌툭시맙 베도틴, 부설판, 부설펙스(부설판), 카바지탁셀, 카보잔티닙-S-말레이트, CAF, 캄파트(알렘투주맙), 캄프토사르(이리노테칸 염화수소산염), 카페시타빈, CAPOX, 카보플라틴, 카보플라틴-탁솔, 카필조밉, 카무브리스(카무스틴), 카무스틴, 카무스틴 임플란트, 카소덱스(비칼루타미드), CeeNU(로무스틴), 세리티닙, 세루비딘(도노루비신 염화수소산염), 서바릭스(재조합 HPV 2가 백신), 세툭시맙, 클로람부실, 클로람부실-프레드니손, CHOP, 시스플라틴, 클라펜(사이클로포스파미드), 클로파라빈, CMF, 코메트리크(카보잔티닙-S-말레이트), COPP, COPP-ABV, 코스메겐(닥티노마이신), 크리조티닙, CVP, 사이클로포스파미드, 사이포스(Cyfos)(이포스파미드), 사이람자(라무시루맙), 시타라빈, 시타라빈, 리포조말, 싸이토사-U(시타라빈), 싸이톡산(사이클로포스파미드), 다브라페닙, 다카바진, 다코젠(데시타빈), 닥티노마이신, 다사티닙, 도노루비신 염화수소산염, 데시타빈, 데가렐릭스, 데니루킨 디프티톡스, 데노수맙, 데포Cyt(리포좀 시타라빈), 데포폼(리포좀 시타라빈), 덱스라족산 염화수소산염, 디누툭시맙, 도세탁셀, 독실(독소루비신 염화수소산염 리포좀), 독소루비신 염화수소산염, 독소루비신 염화수소산염 리포좀, 독스-SL(독소루비신 염화수소산염 리포좀), DTIC-돔(다카바진), 에퓨덱스(플루오로우라실), 엘리텍(Elitek)(라스부리카제), 엘렌스(에피루비신 염화수소산염), 엘록사틴(옥살리플라틴), 엘트롬보팍 올라민, 에멘드(아프레피탄트), 엔잘루타미드, 에피루비신 염화수소산염, EPOCH, 얼비툭스(세툭시맙), 에리불린 메실산염, 에리벳지(비스모데집), 엘로티닙 염화수소산염, 에르위나제(아스파라기나아제 어위니아 크리산테미), 에토포포스(에토포시드 인산염), 에토포시드, 에토포시드 인산염, 에바세트(독소루비신 염화수소산염 리포좀), 에버롤리무스, 에비스타(랄록시펜 염화수소산염), 엑세메스탄, 파레스톤(토레미펜), 파리닥(파노비노스탓), 파슬로덱스(풀베스트란트), FEC, 페마라(레트로졸), 필그라스팀, 플루다라(플루다라빈 인산염), 플루다라빈 인산염, 플루오로플렉스(플루오로우라실), 플루오로우라실, 폴렉스(Folex)(메토트렉세이트), 폴렉스 PFS(메토트렉세이트), 폴피리, 폴피리-베바시주맙, 폴피리-세툭시맙, 폴피리녹스, 폴플록스(Folflox), 폴로틴(프랄라트렉세이트), FU-LV, 풀베스트란트, 가다실(재조합 HPV 4가 백신), 가다실 9(재조합 HPV 9가 백신), 가싸이바(오비누투주맙), 게피티닙, 겜시타빈 염화수소산염, 겜시타빈-시스플라틴, 겜시타빈-옥살리플라핀, 겜투주맙 오조가미신, 겜자(겜시타빈 염화수소산염), 길로트리프(아파티닙 디말리에이트), 글리벡(이마티닙 메실산염), 글리아델(카무스틴 임플란트), 글리아델 웨이퍼(카무스틴 임플란트), 글루카피다제, 고세렐린 아세트산염, 할라벤(에리불린 에실산염), 허셉틴(트라스투주맙), HPV 2가 백신(재조합체), HPV 9가 백신(재조합체), HPV 4가 백신(재조합체), 하이캄틴(토?j칸 염화수소산염), 하이퍼-CVAD, 입랜스(팔보시클립), 이브리투모맙 티우세탄, 이브루티닙, ICE, 아이클루시그(포나티닙 염화수소산염), 이다마이신(이다루비신 염화수소산염), 이다루비신 염화수소산염, 이델라리십, 이펙스(이포스파미드), 이포스파미드, 이포스파미드(이포스파미드), 이마티닙 메실산염, 임브루비카(이브루티닙), 이미퀴모드, 인리타(엑시티닙), 인트론 A(재조합 인터페론 알파-2b), 131번 요오드 토시투모맙 및 토시투모맙, 이필리무맙, 이레사(게피티닙), 이리노테칸 염화수소산염, 이스토닥스(로미뎁신), 익사베필론, 익셈프라(익사베필론), 자카피(룩솔리티닙 인산염), 제브타나(카바지탁셀), 캐싸일라(아도-트라스투주맙 엠탄신), 케옥시펜(랄록시펜 염화수소산염), 케피반스(팔리페르민), 키트루다(펨브롤리주맙), 키프롤리스(카필조밉), 란레오티드 아세트산염, 라파티닙 디토실산염, 레날리도마이드, 렌바티닙 메실산염, 렌비마(렌바티닙 메실산염), 레트로졸, 류코보린 칼슘, 류케란(클로람부실), 루프롤라이드 아세트산염, 레불란(아미노레불린산), 린폴리진(클로람부실), 리포독스(독소루비신 염화수소산염 리포좀), 리포좀 시타라빈, 로무스틴, 루프론(루프롤라이드 아세트산염), 루프론 데포(루프롤라이드 아세트산염), 루프론 데포-페드(루프롤라이드 아세트산염), 루프론 데포-3개월(루프롤라이드 아세트산염), 루프론 데포-4개월(루프롤라이드 아세트산염), 린파자(올라파립), 마키보(빈크리스틴 황산염 리포좀), 마추란(프로카바진 염화수소산염), 메클로레타민 염화수소산염, 메가스(메게스트롤 아세트산염), 메게스트롤 아세트산염, 메키니스트(트라베티닙), 머캅토퓨린, 메스나, 메스넥스(메스나), 메타졸라스톤(테모졸로미드), 메토트렉세이트, 메토트렉세이트 LPF(메토트렉세이트), 멕세이트(Maxate)(메토트렉세이트), 멕세이트-AQ, 미토마이신 C, 미토잔트론 염화수소산염, 미토자이트렉스(미토마이신 C), MOPP, 모조빌(플레릭사포), 머스타젠(메클로레타민 염화수소산염), 뮤타마이신(미토마이신 C), 마일레란(부설판), 마이로사르(아바시티딘), 마이로타그(겜투주맙 오조가마이신), 나노입자 파클리탁셀(파클리탁셀 알부민 안정화 나노입자 제제), 나벨빈(비노렐빈 주석산염), 넬라라빈, 네오사르(사이클로포스파미드), 네투피탄트 및 팔로노세트론 염화수소산염, 뉴포젠(필그라스팀), 넥사바(소라페닙 토실산염), 닐로티닙, 니볼루맙, 놀바덱스(타목시펜 시트르산염), 엔플레이트(Nplate)(로미플로스팀), 오비누투주맙, OEPA, 오파투무맙, OFF, 올라파립, 오마세탁신 메페숙신산염, 온카스파(페가스파가제), 온탁(데니루틴 디프티톡스), 옵디보(니볼루맙), OPPA, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, 파클리탁셀 알부민 안정화 나노입자 제제, PAD, 팔보시클립, 팔리페르민, 팔로노세트론 염화소소산염, 파미드로네이트 2나트륨, 파니투무맙, 파노비노스탓, 파라플랫(Paraplat)(카보플라틴), 파라플라틴(카보플라틴), 파조파닙 염화소소산염, 페가스파르가제, 페그인터페론 알파-2b, PEG-인트론(페그린터페론 알파-2b), 펨브롤리주맙, 페메트렉시드 2나트륨, 퍼제타(퍼투주맙), 퍼투주맙, 플라티놀(시스플라틴), 플라티놀-AQ(시스플라틴), 플레릭사포, 포말리도마이드, 포말리스트(포말리도미드), 포나티닙 염화수소산염, 프랄라트렉세이트, 프레드니손, 프로카바진 염화소소산염, 프로류킨(알데스류킨), 프롤리아(데노수맙), 프로맥타(엘트롬보팍 올라민), 프로벤지(Provenge)(시푸루셀-T), 퓨리네톨(머캅토퓨린), 퓨릭산(머캅토퓨린), 223번 라듐 이염화물, 랄록시펜 염화소소산염, 라무시루맙, 라스부리카제, R-CHOP, R-CVP, 재조합 인유두종바이러스(HPV) 2가 백신, 재조합 인유두종바이러스(HPV) 9가 백신, 재조합 인유두종바이러스(HPV) 4가 백신, 재조합 인터페론 알파-2b, 레고라페닙, R-EPOCH, 레블리미드(레날리도마이드), 류마트렉스(메토트렉세이트), 리툭산(리툭시맙), 리툭시맙, 로미뎁신, 로미플로스팀, 루비도마이신(도노루비신 염화소소산염), 룩솔리티닙 인산염, 스클레로졸 흉막내 에어로졸(활석), 실툭시맙, 시플루셀-T, 소마툴린 데포(란레오티드 아세트산염), 소라페닙 토실산염, 스프라이셀(다사티닙), 스탠포드(STANFORD) V, 멸균 활석 분말(활석), 스테리탈크(활석), 스티바가(레고라페닙), 수니티닙 말산염, 수텐트(수니티닙 말산염), 실라트론(페그인터페론 알파-2b), 실반트(실툭시맙), 시노비르(탈리도미드), 신리보(오마세탁신 메페숙신산염), TAC, 타핀라(다브라페닙), 활석, 타목시펜 시트르산염, 타라빈 PFS(시타라빈), 타세바(엘로티닙 염화소소산염), 타그레틴(벡사로텐), 타시그나(닐로티닙), 탁솔(파클리탁셀), 탁소텔(도세탁셀), 테모달(테모졸로미드), 테모졸로미드, 템시롤리무스, 탈리도미드, 탈로미드(탈리도미드), 티오테파, 토포사(에토포시드), 토포테칸 염화소소산염, 토레미펜, 토리셀(템시롤리무스), 토시투모맙 및 I131 요오드 토시투모맙, 토텍트(덱스라족산 염화소소산염), TPF, 트라메티닙, 트라스투주맙, 트린다(벤다무스틴 염화소소산염), 트리세녹스(삼산화비소), 타이커브(라파티닙 2토실산염), 유니툭신(디누툭시맙), 반데타닙, VAMP, 벡티빅스(파니투무맙), VeIP, 벨반(빈블라스틴 황산염), 벨케이드(보르테조밉), 벨사(빈블라스틴 황산염), 베무라페닙, 베페시드(에토포시드), 비아두르(루프롤라이드 아세트산염), 비다자(아자시티딘), 빈블라스틴 황산염, 빈카사르 PFS(빈크리스틴 황산염), 빈크리스틴 황산염, 빈크리스틴 황산염 리포좀, 비노렐빈 주석산염, VIP, 비스모데깁, 보락세이즈(글루카르피다아제), 보리노스타트, 보트리엔트(파조파닙 염화소소산염), 웰코보린(류코보린 칼슘), 잴코리(크리조티닙), 젤로다(카페시타빈), XELIRI, XELOX, X지바(데노수맙), 조피고(223번 라듐 이염화물), X탄디(엔잘루타미드), 여보이(이필리무맙), 잘트랩(지브-아플리버셉트), 젤보라프(베무라페닙), 제발린(이브리투모맙 티우세탄), 진카드(Zinecard)(덱스라족산 염화소소산염), 지브-아필버셉트, 졸라덱스(고세렐린 아세트산염), 졸레드론산, 졸린자(보리노스타트), 조메타(졸레드론산), 자이델릭(이델라리십), 자이카디아(세리티닙), 자이티가(아비라테론 아세트산염) 또는 이의 조합이다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 항원 결합 단편, 또는 본원에 기술된 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 종양 세포를 억제 또는 감소시키기 위한 방법에 관한 것이다. 방법에 관한 몇몇 구현예에서, 종양 세포의 수는 대조값(control value) 또는 기준값(reference value)에 비하여 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 100%까지 감소한다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 본원에 기술된 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD3을 발현하는 세포에 의해 사이토카인의 생산을 증가시키는 방법에 관한 것이다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 본원에 기술된 약학 조성물과 T 세포를 접촉시키는 단계를 포함하는, T 세포내 IL-2, CD69 및/또는 IFN-γ의 생산 또는 농도를 증가시키는 방법에 관한 것이다. 몇몇 구현예에서, IFN-γ의 생산은 대조값 또는 기준값에 비하여 적어도 약 100%, 적어도 약 200%, 적어도 약 300%, 적어도 약 400%, 적어도 약 500%, 적어도 약 600%, 적어도 약 700%, 적어도 약 800%, 적어도 약 900% 또는 적어도 약 1000%까지 증가한다. 몇몇 구현예에서, IFN-γ의 농도는 대조값 또는 기준값에 비하여 적어도 약 1000 pg/ml, 적어도 약 2000 pg/ml, 적어도 약 3000 pg/ml, 적어도 약 4000 pg/ml, 적어도 약 5000 pg/ml, 적어도 약 6000 pg/ml, 적어도 약 7000 pg/ml, 적어도 약 8000 pg/ml, 적어도 약 9000 pg/ml 또는 적어도 약 10000 pg/ml까지 증가한다. 몇몇 구현예에서, CD69의 생산은 대조값 또는 기준값에 비하여 적어도 약 1%, 적어도 약 2%, 적어도 약 3%, 적어도 약 4%, 적어도 약 5%, 적어도 약 6%, 적어도 약 7%, 적어도 약 8%, 적어도 약 9%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25% 또는 적어도 약 30%까지 증가한다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 본원에 기술된 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 면역 반응을 자극하는 방법에 관한 것이다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 본원에 기술된 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암 세포에 대한 T 세포 매개 세포독성 면역 반응을 자극하는 방법에 관한 것이다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 본원에 기술된 약학 조성물과 T 세포를 접촉시키는 단계를 포함하는, T 세포 증식을 증가시키는 방법에 관한 것이다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 본원에 기술된 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체의 종양내 T 조절 세포의 수를 감소시키거나 격감(depleting)시키는 방법에 관한 것이다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 사용하여 대상체 시료중 MOSPD2의 발현 수준을 확정하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암이나 암의 전이를 예측, 진단 또는 예후하기 위한 방법에 관한 것이다. 몇몇 구현예에서, 본 방법은 (i) 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 사용하여 대상체 시료중 MOSPD2의 발현 수준을 확정 또는 정량하는 단계와, (ii) 단계 (i)에서 구하여진 발현 수준을 대조값 또는 기준값과 비교하는 단계를 포함하는데, 여기서 MOSPD2의 발현 수준이 대조값 또는 기준값에 비해 증가하였음은 암, 암으로 발전할 위험 증가 또는 좋지 않은 암 예후를 말해주는 것이다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 사용하여 대상체의 시료중 MOSPD2의 발현 수준을 확정하는 단계를 포함하는, 대상체에서 종양의 진행 또는 종양의 침윤을 예측, 진단 또는 예후하기 위한 방법에 관한 것이다. 몇몇 구현예에서, 본 방법은 (i) 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 사용하여 대상체 시료중 MOSPD2의 발현 수준을 확정 또는 정량하는 단계와, (ii) 단계 (i)에서 구하여진 발현 수준을 대조값 또는 기준값과 비교하는 단계를 포함하는데, 여기서 MOSPD2의 발현 수준이 대조값 또는 기준값에 비해 증가하였음은 좋지 않은 종양 진행 또는 종양 침윤 예후를 말해주는 것이다.
몇몇 구현예에서, 예측, 진단 또는 예후하기 위한 본 방법은 하기 단계들, 즉
시료중 MOSPD2의 발현 수준을 정량하도록 실험실에 지시하는 단계;
실험실로부터 시료중 MOSPD2의 발현 수준에 관한 보고서를 얻는 단계; 및/또는
MOSPD2의 억제제(예컨대 항 MOSPD2 항체) 치료적 유효량만큼을 대상체에 투여하는 단계
중 1개 이상을 추가로 포함한다.
몇몇 구현예에서, 예측, 진단 또는 예후를 위한 방법에서의 시료는 대상체로부터 유래하는 조직 생검편, 종양 생검편 또는 혈액 시료이다.
몇몇 구현예에서, 예측, 진단 또는 예후를 위한 방법에서의 대조값 또는 기준값은 정상 조직이나 정상 인접 조직(NAT)에서의 MOSPD2의 발현 수준이다. 몇몇 구현예에서, 예측, 진단 또는 예후를 위한 방법에서의 대조값 또는 기준값은 검출 불가능한 MOSPD2 발현 또는 유의미하지 않은 MOSPD2 발현이다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 본원에 기술된 약학 조성물을, MOSPD2 발현 종양을 치료 또는 예방하는데 유효한 양만큼 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 MOSPD2 발현 종양을 치료 또는 예방하기 위한 방법에 관한 것이다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 본원에 기술된 약학 조성물을, MOSPD2 발현 종양 연관 대식세포를 가지는 종양을 치료 또는 예방하는데 유효한 양만큼 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 MOSPD2 발현 종양 연관 대식세포를 가지는 종양을 치료 또는 예방하기 위한 방법에 관한 것이다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 (i) 본원에 기술된 핵산 또는 본원에 기술된 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포를 배양하는 단계와, (ii) 발현된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 수집 및 정제하는 단계를 포함하는, 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제조하기 위한 방법에 관한 것이다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 (i) 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 본원에 기술된 약학 조성물과, (ii) 사용 지침을 포함하는 키트에 관한 것이다.
본 발명의 몇몇 구현예가 첨부된 도면들을 참조로 단지 예시로서 본원에 기술되어 있다. 이하 도면들을 구체적이고도 상세히 참조하여, 여기에 보인 세부 사항들은 예를 들기 위한 것이자, 본 발명의 구현예에 관한 예시적 논의를 위한 것임을 강조하고자 한다.
도 1은 MOSPD2가 전이성 유방암 및 흑색종 세포의 이동을 촉진함을 보여준다. MDA-231 유방암 및 A2058 흑색종 세포에서의 MOSPD2 발현은, sh-MOSPD2 렌티 바이러스 입자를 세포에 형질도입함으로써 침묵되었다. 도 1의 웨스턴 블럿(Western blot)은, sh-MOSPD2가 형질도입된 세포에서 MOSPD2 단백질 발현이 감소하였음을 보여준다. 도 1은 또한 웰간 이동 검정(trans-well migration assay)에서 sh-대조군 또는 sh-MOSPD2 렌티 바이러스 입자가 형질도입된 세포의, 10% 소태아혈청(FCS) 및 EGF(200 ng/ml)를 향한 이동 시험의 결과를 보여준다.
도 2는 MOSPD2의 침묵이 MDA-231 세포의 세포 생존능 또는 증식에 영향을 미치지 않음을 보여준다. sh-대조군 또는 sh-MOSPD2 렌티 바이러스 입자가 형질도입된 MDA-231 세포는 접종된 다음, 3연속일 동안 24시간 마다 수집되어 계수되었다. 세포 증식률이 측정되었으며, 3회 측정값의 평균 ± 표준편차로서 도 2에 표시되었다.
도 3a ~ 3c는 MOSPD2 침묵이 되었거나 되지 않은 MDA-231 세포의 전이에 대한 생체내 시험 결과를 보여준다. 도 3a에서, sh-대조군 또는 sh-MOSPD2 렌티 바이러스 입자가 형질도입된 MDA-231 세포(106개)가 SCID 마우스 꼬리 정맥에 주입되었다(n = 군당 10마리). 28일차에 마우스를 죽이고, H&E 염색을 위해 마우스 폐가 수집되었으며, 종양 면적이 확정되었다. 도 3a에 보인 결과는 측정된 전이 크기의 평균 ± 표준 오차로서 표시되었다(* p<0.05).
도 3b 및 3c에서, sh-대조군 또는 sh-MOSPD2 렌티 바이러스 입자가 형질도입된 MDA-231 세포(5x106개)가 SCID 마우스의 유방 지방층에 주입되었다(단 n은 각각 13 및 8). 56일차에 마우스를 죽였다. 동측성 서혜부 림프절이 절제되었으며(도 3b), H&E 염색을 위해 마우스 폐가 수집되었고, 종양 면적이 확정되었다(도 3c). 도 3c에 보인 결과는 측정된 전이 크기의 평균 ± 표준 오차로서 표시되었다. sh-대조군 형질도입 세포의 종양 면적은 1376.9 ± 752.6(n = 13개)이었던 반면에, sh-MOSPD2 형질도입 세포의 종양 면적은 550.0 ± 326.2(n = 8개)였다.
도 3a ~ 3c는 MOSPD2가 생체내에서 MDA-231 유방암 세포의 전이를 촉진함을 보여준다.
도 4a ~ 4e는 다양한 인간 암 조직내 MOSPD2 발현 수준을, 각각의 대응 정상 조직내 MOSPD2 발현 수준과 비교한 결과를 보여준다. 다양한 정상 및 암 인간 조직을 함유하는 슬라이드는 대조군 또는 항 MOSPD2 항체로 염색되었다. MOSPD2에 대해 양성으로 염색된 암 조직이 제시되어 있다. 도 4a ~ 4e는, MOSPD2가 다양한 인간 암 조직내에서 발현됨을 보여준다.
도 5a 및 도 5b는 대조군 또는 MOSPD2 CRISPR-CAS9 렌티 바이러스 입자가 형질도입된 암 세포의, 웰간 이동 검정에서의 시험 결과를 보여준다. 세포는 위 구획에 접종되었으며, 10% FCS 및 EGF(200 ng/ml)가 보충된 배지가 사용되었을 때 아래 구획으로 유인되었다. 도 5a에 보인 그래프는 형광 활성화 세포 분류법(Fluorescence-Activated Cell Sorting; FACS)에 의해 확정되었는데, 이때 결과는 3회 측정값의 평균 ± 표준 편차로서 표시되었다. 도 5b에 보인 영상은 광학 기록의 것이다. 도 5a 및 도 5b에서, MDA-231 세포는 대조군 또는 MOSPD2 CRISPR-CAS9 시스템을 함유하는 플라스미드와 렌티 바이러스 입자가 형질도입되었다. 웨스턴 블럿은, MOSPD2 CRISPR-CAS9 시스템이 형질도입된 세포내 MOSPD2 단백질 발현이 감소하였음을 보여준다(삽도 참조). 도 5a 및 도 5b는 CRISPR-CAS9에 의해 주도된 MOSPD2 유전자 편집이 유방암 세포의 이동을 억제함을 보여준다.
도 5c는 세포 이동과 연관된 인산화 현상에 대한 MOSPD2 침묵의 효과를 보여준다. 대조군 또는 MOSPD2 CRISPR-CAS9 렌티 바이러스 입자가 형질도입된 MDA-231은 10분 동안 10% FCS 및 EGF(400 ng/ml)와 함께 항온처리되었다. ERK, AKT 및 FAK의 인산화는 웨스턴 블럿이 사용되어 확정되었다. HSP90은 로딩 대조군(loading control)으로서 사용되었다. 도 5c는 CRISPR-CAS9 주도성 유전자 편집에 의한 MOSPD2 침묵이 세포 이동과 연관된 인산화 현상을 억제함을 보여준다.
도 5d는 대조군 또는 MOSPD2 CRISPR-CAS9 렌티바이러스 입자로 형질도입된 MDA-231 유방암 세포의 전이에 관한 생체내 시험 결과를 보여준다. 도 5d에서, 대조군 또는 MOSPD2 CRISPR-CAS9 렌티바이러스가 형질도입된 MDA-231 세포 106개가 8주령 암컷 SCID 마우스의 꼬리 정맥에 주입되었다(C.B-17/IcrHsd-Prkdcscid, Harlan Israel), 3주 후 마우스를 죽인 다음, 조직병리학적 검사를 위해 마우스 폐가 절제되었다. 도 5d는 CRISPR-CAS9 시스템에 의한 MOSPD2의 침묵이 폐내 전이성 유방암 세포의 존재를 95%(전이 면적) 초과하여 유의미하게 억제함을 보여준다. P=0.002.
도 6a 및 도 6b는 항 MOSPD2 F(ab')2 mAb가 A2058 흑색종 및 HepG2 간암 세포주상에 존재하는 MOSPD2에 결합함을 보여준다.
도 7은 항 MOSPD2 F(ab')2 mAb가 MDA-231 세포의 EGF 유도성 웰간 이동을 유의미하게 억제하였음을 보여준다.
도 8a ~ 8f는 상이한 병기 또는 종양에 인접한 정상 조직(정상 인접 조직(NAT))으로부터 유래된 인간 유방암 시료의 조직학적 영상을 보여준다. 시료는 슬라이드상에 적재된 채 항 MOSPD2 항체로 염색되었다. 도 8a ~ 8f는 MOSPD2 발현은, 유방암 세포의 국소적으로 제한된 종양으로부터 침윤성 및 전이성 종양에 이르기까지의 전이와 연관되었음을 보여준다.
도 9는 상이한 병기의 유방암 또는 정상 인접 조직(NAT)으로부터 유래한 시료들 중 MOSPD2 발현 강도에 대하여 0부터 3까지의 범위에서 점수를 매긴 결과를 보여주는 것으로서, 이때 "0"은 발현되지 않았음을 나타내고, "3"은 매우 높은 강도로 발현되었음을 나타낸다(* p<0.001).
도 10a ~ 10d는 결장(도 10a 및 도 10b) 또는 간(도 10c 및 도 10d)으로부터 수집된 다양한 정상 인간 조직과 암 인간 조직내 MOSPD2 발현 수준을 비교한 영상을 보여준다, MOSPD2는 결장 선암종 시료의 67%에서 발현되었고, 간세포 암 시료의 45%에서 발현되었던 반면에, 정상 결장 조직 및 간 조직에서는 발현이 확인되지 않았다.
도 11a ~ 11e는 인간의 간으로부터 수집된 정상 조직, NAT 및 암 조직(상이한 등급)내 MOSPD2 발현 수준을 비교한 결과를 보여준다. 시료는 슬라이드상에 적재되었으며, 항 MOSPD2 항체로 염색되었다. 도 11c ~ 도 11e는 MOSPD2 염색의 진하기가 간세포 암의 종양 등급이 증가한 것과 같이 증가하였음을 보여준다.
도 12a 및 도 12b는 간세포 암으로부터 수집된 시료중 MOSPD2 발현 강도를 보여준다. 시료는 슬라이드에 적재되었으며, 항 MOSPD2 항체로 염색되었다. 도 12a는 악성 간세포 암으로부터 수집된 시료중 MOSPD2 발현이 정상 및 NAT 시료중 MOSPD2 발현에 비하여 유의미하게 증가(p≤0.001)하였음을 보여준다. 도 12b는 MOSPD2 염색의 진하기가 간세포 암의 진행과 상관되어 유의미하게 증가하였음을 보여준다.
도 13a는 항 MOSPD2/항 CD3 2중 특이적 항체(BiTE)가 그 농도를 늘리면서 투여되면, 용량 의존적으로 고형 종양 유래 세포주 생존 감소 및 T 세포 활성화 증가가 초래됨을 보여준다. * P<0.01. 도 13b 및 도 13c는 BiTE가 그 농도를 늘리면서 투여되면, HELA 배양액 및 A2058 배양액 각각에 첨가된 CD8 효과기 T 세포로부터의 IFN-γ 방출량의 용량 의존적 증가가 또한 초래됨을 보여준다. N.D = 검출 불가.
도 14a는 항 MOSPD2/항 CD3 2중 특이적 항체(BiTE)의 투여는 단핵구 세포주 생존률 감소와 T 세포 활성화 증가를 초래함을 보여준다. ** = P<0.001. 도 14b는 THP-1 배양액 및 U937 배양액에 첨가된 T 세포의 CD3 및 CD69에 대한 염색 결과를 보여준다. 도 14c는 BiTE의 투여가 THP-1 배양액 및 U937 배양액에 첨가된 T 세포로부터의 IFN-γ 방출량 증가를 또한 초래함을 보여준다. N.D = 검출 불가.
도 15는 항 MOSPD2/항 CD3 2중 특이적 항체의 투여가 MDA-231 유방암 세포 생존률의 유의미한 감소를 초래함을 보여준다. 예비 활성화된 CD8+ T 세포는 MDA-231 세포와 공동 항온처리되었고(비율은 각각 5:1), 대조군 항체(IgG) 또는 항 MOSPD2/항 CD3 2중 특이적 항체(2중 특이적 Ab1-2중 특이적 Ab4)와 공동 항온처리되었다. 24시간 동안 항온처리된 후, 세포는 수집된 다음, FACScalibur가 사용되어 계수되었다. 보인 결과는 3개의 웰에 대한 각각의 처리시 평균 세포수 ± 표준 오차이다. ** p<0.005; *** p<0.001.
본 발명의 구현예들을 상세히 설명하기 앞서서, 본 발명은 자체의 적용이 이하 예들에 의해 기술 또는 예시된 바에 제시된 세부사항에 한정되는 것은 아님이 이해되어야 한다. 본 발명은 다른 구현예일 수 있으며, 다양한 방법으로 실시 또는 수행될 수 있다. 뿐 아니라, 본원에 사용된 어법 및 용어는 설명을 위한 것이지 제한적인 것으로 간주되어서는 안될 것임이 이해되어야 한다.
일반적 정의
"~를 포함하다(comprises)", "~를 포함하는(comprising)", "~를 포함하다(includes)", "~를 포함하는(including)", "~를 가지는(having)"과 같은 용어 및 이의 변형어는 "~를 포함하되 이에 한정되는 것은 아닌"을 의미한다.
"~로 이루어진"이란 용어는 "~를 포함하되 이에 한정되는 것은 아닌"을 의미한다.
"본질적으로 ~으로 이루어진"이란 용어는, 어떤 조성물 중 특정 물질, 또는 어떤 방법의 특정 단계, 그리고 추가적 물질이나 단계가 해당 물질이나 방법의 기본적 특징에 실질적으로 영향을 미치지 않음을 의미한다.
"예시적"이란 단어는 "예, 경우 또는 예시로서 사용됨"을 의미하도록 본원에 사용된다. "예시적"이라 기술된 임의의 구현예는 반드시 다른 구현예보다 바람직하거나 유리한 것으로 해석되는 것은 아니고/아니거나 다른 구현예의 특징들을 통합함을 반드시 배제하는 것도 아니다.
"선택적으로"란 단어는 "몇몇 구현예에는 제공되지만, 다른 구현예에는 제공되지 않음"을 의미하도록 본원에 사용된다. 본 발명의 임의의 특정 구현예는 여러 가지 "선택적" 특징들이 상충되지 않는 한 이러한 특징들을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이 단수 형태를 나타내는 "하나의", "한" 및 "본"은 문맥중 명백히 달리 명시되지 않는 한 복수의 대상을 포함한다. 예를 들어 "하나의 화합물" 또는 "적어도 1개의 화합물"은 화합물들의 혼합물을 비롯한 복수의 화합물을 포함할 수 있다.
본원에 사용된 바와 같이 본 발명과 관련된 양을 수식하는 "약"이란 용어는, 예를 들어 일상적인 시험과 취급; 이러한 시험과 취급에 있어서의 부주의한 실수; 본 발명에 사용된 성분들의 제조, 공급원 또는 순도에서의 차이 등으로부터 발생할 수 있는 수치적 양의 변차를 지칭한다. "약"이란 용어에 의해 수식되는지 수식되지 않는지에 따라서 청구항들은 나열된 양에 대한 균등범위를 포함한다. 일 구현예에서, "약"이란 용어는, 보고된 수치값의 10% 이내를 의미한다. 다른 구현예에서, "약"이란 용어는, 보고된 수치값의 5% 이내를 의미한다.
본 출원 전반에 걸쳐 본 발명의 다양한 구현예가 범위의 형태로 제시될 수 있다. 범위의 형태로서의 기술은 단지 편의와 간결함을 위한 것으로 이해되어야 할 것이지, 본 발명의 범위에 대한 융통성 없는 한정으로 해석되어서는 안 될것이다. 그러므로 범위에 대한 기술은 해당 범위내에 속할 수 있는 종속 범위들 모두뿐 아니라, 그 범위에 속하는 각각의 수치값이 구체적으로 개시되는 것으로 고려되어야 할 것이다. 예를 들어 범위, 예컨대 1 내지 6에 대한 기술은 종속 범위들, 예컨대 1 내지 3, 1 내지 4, 1 내지 5, 2 내지 4, 2 내지 6, 3 내지 6 등뿐 아니라, 해당 범위에 속하는 개별적 수치들, 예컨대 1, 2, 3, 4, 5 및 6이 구체적으로 개시되는 것으로 고려되어야 할 것이다. 이는, 범위의 폭에 상관없이 적용된다.
본원에 사용된 바와 같은 "방법"이란 용어는, 주어진 과제를 달성하기 위한 방식, 수단, 기법 및 절차로서, 예컨대 화학, 약리학, 생물학, 생화학 및 의학 분야 실무자들에게 공지되었거나, 화학, 약리학, 생물학 생화학 및 의학 분야 실무자들에 의해 공지의 방식, 수단, 기법 및 절차로부터 용이하게 개발된 방식, 수단, 기법 및 절차(이에 한정되는 것은 아님)를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같은 "치료하는 것"이란 용어는, 병태의 진행을 무력화시키거나, 실질적으로 억제하거나, 늦추거나 또는 역전시키는 것, 병태의 임상적 또는 심미적 증상(aesthetical symptom)을 실질적으로 경감시키는 것, 또는 병태의 임상적 또는 심미적 증상 출현을 실질적으로 예방하는 것을 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 "MOSPD2"란, 운동성 정자 도메인 함유 단백질 2로 분류되거나 이와 동일한 기능을 가지는 임의의 폴리펩티드를 지칭한다. MOSPD2의 예로서는 서열 번호 1 ~ 4 중 임의의 하나의 폴리펩티드 또는 (예컨대 서열 번호 1 ~ 4 중 임의의 하나와 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 서열을 가지는) 이의 기능성 변이체를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. MOSPD2의 다른 예로서는 서열 번호 5 ~ 8중 임의의 하나의 폴리뉴클레오티드 또는 이의 기능성 변이체(예컨대 서열 번호 5 ~ 8중 임의의 하나와 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 폴리뉴클레오티드)에 의해 암호화되는 폴리펩티드를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. MOSPD2의 다른 예로서는 본원에 전체로서 참조로 첨부된 미국 특허출원공보 제2004/0171009호에 개시된 지질 연관 분자("LIPAM")를 포함한다. LIPAM-5는 482번 아미노산 잔기가 아르기닌이 아닌 세린이라는 점을 제외하고 서열 번호 1과 100% 동일하다. MOSPD2의 다른 예는 당업자에게 널리 공지된 바와 같은 공공 데이터베이스(예컨대 BLAST)를 검색하여 동정될 수 있다.
본원에 기술된 구현예들 중 임의의 것에서, MOSPD2는 암 세포, 예컨대 인간의 암 세포에 의해 발현된 MOSPD2일 수 있다. 또한 본원에 기술된 구현예들 중 임의의 것에서 MOSPD2는 포유류의 MOSPD2 또는 인간의 MOSPD2일 수 있다.
"항체" 또는 항체의 "항원 결합 단편"은 폴리클로날, 모노클로날, 마우스, 인간, 인간화 또는 키메라 항체, 단일 사슬 항체, 에피토프 결합 단편, 예컨대 Fab, Fab' 및 F(ab')2, Fd, Fvs, 단일 사슬 Fv(scFv), 단일 사슬 항체 이황화 결합 Fv(sdFv), 경쇄 가변 영역(VL) 또는 중쇄 가변 영역(VH) 도메인, VL 도메인 또는 VH 도메인 중 어느 하나를 포함하는 단편, 그리고 Fab 발현 라이브러리에 의해 생성된 단편을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다. 항체 또는 항체의 항원 결합 단편은 면역글로불린 분자의 임의의 유형의 것(예컨대 IgG, IgE, IgM, IgD, IgA 및 IgY), 임의의 군의 것(예컨대 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2) 또는 하위 군의 것일 수 있다. 항체의 항원 결합 단편을 제조하기 위한 방법은 공지되어 있으며, 예를 들어 항체의 화학적 분해 또는 프로테아제에 의한 분해를 포함한다.
본원에 사용된 바와 같은 "항원 결합 도메인"은 항원에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 단편의 폴리펩티드 영역이다. 항원 결합 도메인의 예로서는 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv, sdFv 단편들, 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역, 상보성 결정 영역(CDR), 중쇄 CDR1, 중쇄 CDR2, 중쇄 CDR3, 경쇄 CDR1, 경쇄 CDR2 또는 경쇄 CDR3을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
본원에 사용된 바와 같은 "T 세포 또는 NK 세포 특이적 수용체 분자"란, T 세포 특이적 수용체 또는 NK 세포 특이적 수용체에 특이적으로 결합하거나, 또는 다른 분자, 화합물 또는 펩티드가 T 세포 특이적 수용체 또는 NK 세포 특이적 수용체에 특이적으로 결합하도록 유도하는 임의의 분자, 화합물 또는 펩티드를 지칭한다. 그 예로서는 CD3, T 세포 수용체(TCR), CD28, CD16, NKG2D, Ox40, 4-1BB, CD2, CD5 및 CD95를 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
"특이적으로 결합하다"란, 일반적으로 항체 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체가 자체의 항원 결합 도메인에 의해 에피토프에 결합함, 그리고 결합은 항원 결합 도메인과 에피토프 사이에 약간의 상보성을 수반함을 의미한다. 이 정의에 따르면, 항체 또는 이의 단편, 변이체 또는 유도체는, 이것이 무작위의 무관한 에피토프에 결합할 때에 비해 자체의 항원 결합 도메인을 통해 에피토프와 더욱 용이하게 결합할 때, 해당 에피토프에 "특이적으로 결합"한다고 일컬어진다.
본원에 사용된 바와 같은 "에피토프"란, 항체가 특이적으로 결합할 수 있는 항원의 국소화 영역을 지칭한다. 에피토프는, 예를 들어 폴리펩티드의 인접 아미노산일 수 있거나(선형 또는 인접 에피토프), 또는 에피토프는, 예컨대 하나의 폴리펩티드 또는 폴리펩티드들의 비 인접 영역 2개 이상이 합쳐진 것일 수 있다(형태적, 비선형, 불연속 또는 비 인접 에피토프). 임의의 구현예에서, 항체가 결합하는 에피토프는 문헌 및 본원에 기술된 방법, 예컨대 NMR 분광분석법, X선 회절 결정학 연구, ELISA 검정, 질량 분광분석법과 통합된 수소/중수소 교환(예컨대 MALDI 질량 분광분석법), 어레이 기반 올리고펩티드 스캐닝 검정, 및/또는 돌연변이유발 맵핑(mutagenesis mapping)(예컨대 부위 유도성 돌연변이유발 맵핑)에 의해 확정될 수 있다.
"동일성%"란 용어는, 당 분야에 공지된 바와 같이 서열들의 비교에 의해 확정되는, 2개 이상의 폴리펩티드 서열 또는 2개 이상의 폴리뉴클레오티드 서열간 관계이다. 당 분야에서 "동일성" 및 "서열 동일성"은 또한 경우에 따라, 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드 서열들의 문자열들간 매칭에 의해 확정되는 바와 같은, 이러한 서열들간 서열 관련성 정도를 의미하기도 한다. "동일성" 및 "유사성"은 공지된 방법 및 공공이 이용 가능한 자원, 예컨대 문헌[(1) Computational Molecular Biology (Lesk, A. M., Ed.) Oxford University: NY (1988); (2) Biocomputing: Informatics and Genome Projects (Smith, D. W., Ed.) Academic: NY (1993); (3) Computer Analysis of Sequence Data, Part I (Griffin, A. M., and Griffin, H. G., Eds.) Humania: NJ (1994); (4) Sequence Analysis in Molecular Biology (von Heinje, G., Ed.) Academic (1987); 및 (5) Sequence Analysis Primer (Gribskov, M. and Devereux, J., Eds.) Stockton: NY (1991)]에 기술된 것들(이에 한정되는 것은 아님)에 의해 용이하게 산정될 수 있다.
명료함을 도모하기 위해 별도의 구현예의 문맥에 기술된 본 발명의 임의의 특징들은 또한 하나의 구현예에서 조합하여 제공될 수도 있다. 역으로, 간결함을 도모하기 위해 하나의 구현예의 문맥에 기술된 본 발명의 다양한 특징들은 또한 별도로 제공될 수 있거나, 또는 임의의 적합한 종속 조합(subcombination)을 이루며 제공될 수 있거나, 또는 본 발명에 기술된 기타 임의의 구현예에 적합한 것으로서 제공될 수도 있다. 다양한 구현예의 문맥에 기술된 임의의 특징들은, 구현예가 그러한 요소들 없이도 유효한 한, 이러한 구현예의 본질적 특징인 것으로 고려되지 않을 것이다.
2중 특이적 항체 및 이의 항원 결합 단편
몇몇 구현예에서, 본 발명은 MOSPD2와, T 세포 또는 NK 세포 특이적 수용체 분자에 특이적으로 결합하는 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편에 관한 것이다. 몇몇 구현예에서, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 (i) MOSPD2에 대한 항원 결합 단편 1개 이상과, (ii) T 세포 또는 NK 세포 특이적 수용체 분자에 대한 항원 결합 도메인 1개 이상을 포함한다.
몇몇 구현예에서, MOSPD2는 서열 번호 1 ~ 4 중 임의의 하나의 폴리펩티드 또는 (예컨대 서열 번호 1 ~ 4 중 임의의 하나와 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98% 또는 적어도 99% 동일한 서열을 가지는) 이의 기능성 변이체이다. 다른 구현예에서, MOSPD2는 서열 번호 5 ~ 8 중 임의의 하나의 폴리뉴클레오티드 또는 이의 기능성 변이체(예컨대 서열 번호 5 ~ 8 중 임의의 하나와 적어도 75%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99% 동일한 서열을 가지는 폴리뉴클레오티드)에 의해 암호화되는 폴리펩티드이다. 다른 구현예에서, MOSPD2는 본원에 전체로서 참조로 첨부된 미국 특허출원공보 제2004/0171009호에 개시된 지질 연관 분자("LIPAM")이다. LIPAM-5는 482번 아미노산 잔기가 아르기닌이 아닌 세린이라는 점을 제외하고 서열 번호 1과 100% 동일하다. 다른 예시적 MOSPD2는 당업자에게 널리 공지된 바와 같은 공공 데이터베이스(예컨대 BLAST)를 검색하여 동정될 수 있다.
몇몇 구현예에서, T 세포 또는 NK 세포 특이적 수용체 분자는 CD3, T 세포 수용체(TCR), CD28, CD16, NKG2D, Ox40, 4-1BB, CD2, CD5, 또는 CD95이다. 기타 예시적 T 세포 또는 NK 세포 특이적 수용체 분자는 당업자에게 널리 공지된 공공 데이터베이스(예컨대 BLAST)를 검색하여 동정될 수 있다.
몇몇 구현예에서, MOSPD2 및/또는 T 세포 또는 NK 세포 특이적 수용체 분자에 대한 항원 결합 도메인은 항체의 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv, sdFv 단편들, 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역, 상보성 결정 영역(CDR), 중쇄 CDR1, 중쇄 CDR2, 중쇄 CDR3, 경쇄 CDR1, 경쇄 CDR2 또는 경쇄 CDR3이다.
몇몇 구현예에서, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 이하 항원 결합 도메인들, 즉
(i) 항 MOSPD2 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 중쇄 가변 영역; 및
(ii) 항 MOSPD2 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 경쇄 가변 영역;
중 1개 이상을 포함한다.
몇몇 구현예에서, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 이하 항원 결합 도메인들, 즉
(i) T 세포 또는 NK 세포 특이적 수용체 분자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예컨대 항 CD3 항체 또는 이의 항원 결합 단편)의 중쇄 가변 영역; 및
(ii) T 세포 또는 NK 세포 특이적 수용체 분자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예컨대 항 CD3 항체 또는 이의 항원 결합 단편)의 경쇄 가변 영역
중 1개 이상을 포함한다.
몇몇 구현예에서, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 이하 항원 결합 도메인들, 즉
(i) 항 MOSPD2 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 중쇄 가변 영역;
(ii) 항 MOSPD2 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 경쇄 가변 영역;
(iii) T 세포 또는 NK 세포 특이적 수용체 분자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예컨대 항 CD3 항체 또는 이의 항원 결합 단편)의 중쇄 가변 영역; 및
(iv) T 세포 또는 NK 세포 특이적 수용체 분자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예컨대 항 CD3 항체 또는 이의 항원 결합 단편)의 경쇄 가변 영역
을 포함한다.
몇몇 구현예에서, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 이하 항원 결합 도메인들, 즉
(i) 항 MOSPD2 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 중쇄 가변 영역;
(ii) 항 MOSPD2 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 경쇄 가변 영역;
(iii) T 세포 또는 NK 세포 특이적 수용체 분자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예컨대 항 CD3 항체 또는 이의 항원 결합 단편)의 중쇄 가변 영역; 및
(iv) T 세포 또는 NK 세포 특이적 수용체 분자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예컨대 항 CD3 항체 또는 이의 항원 결합 단편)의 경쇄 가변 영역
을 N 말단에서 C 말단의 순서로 포함한다.
몇몇 구현예에서, 2중 특이적 항체 또는 항원 결합 단편은 이하 항원 결합 도메인들, 즉
(i) T 세포 또는 NK 세포 특이적 수용체 분자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예컨대 항 CD3 항체 또는 이의 항원 결합 단편)의 중쇄 가변 영역; 및
(ii) T 세포 또는 NK 세포 특이적 수용체 분자에 특이적으로 결합하는 항체 또는 이의 항원 결합 단편(예컨대 항 CD3 항체 또는 이의 항원 결합 단편)의 경쇄 가변 영역
(iii) 항 MOSPD2 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 중쇄 가변 영역;
(iv) 항 MOSPD2 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 경쇄 가변 영역;
을 N 말단에서 C 말단의 순서로 포함한다.
몇몇 구현예에서, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 항원 결합 도메인들 중 1개 이상은 펩티드 링커에 의해 연결되어 있다. 몇몇 구현예에서, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 항원 결합 도메인들 모두는 펩티드 링커에 의해 연결되어 있다. 몇몇 구현예에서, 펩티드 링커는 그 길이가 약 5개 아미노산 내지 약 50개 아미노산(예컨대 그 길이가 약 5개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 5개 아미노산 내지 약 10개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 10개 아미노산 내지 약 20개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 40개 아미노산, 약 20개 아미노산 내지 약 30개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 50개 아미노산, 약 30개 아미노산 내지 약 40개 아미노산 또는 약 40개 아미노산 내지 약 50개 아미노산)이다. 몇몇 구현예에서, 펩티드 링커는 그 길이가 약 5개 아미노산, 약 10개 아미노산, 약 20개 아미노산, 약 30개 아미노산, 약 40개 아미노산 또는 약 50개 아미노산이다. 몇몇 구현예에서, 펩티드 링커는 세린(S) 및 글리신(G) 잔기 또는 알라닌(A) 및 글리신 잔기로 구성되어 있다. 몇몇 구현예에서, 펩티드 링커는 (GGGGS)n, (SGGGG)n 또는 (GGGGGGGG)n인데, 여기서 n은 약 1 내지 약 10 사이의 정수이다.
몇몇 구현예에서, 2중 특이적 항체 또는 항원 결합 단편의 항원 결합 도메인 적어도 1개는 인간의 것이거나 인간화된 것이다.
몇몇 구현예에서, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 단일 사슬 폴리펩티드이다.
몇몇 구현예에서, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 분자량은 약 60,000 달톤 이하이다.
몇몇 구현예에서, 2중 특이적 항체는 나노바디, 다이아바디, 크로스맙, 듀오바디, 2가 항체, 2중 특이적 T 세포 결합체(BiTE), 2중 친화성 재표적화(DART), 3중체, 미니항체, TriBi 미니바디, 인트라바디 또는 쿼드로마이다.
몇몇 구현예에서, MOSPD2에 대한 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 항원 결합 도메인 1개 이상은 서열 번호 1 ~ 4 또는 이의 기능성 변이체중 1개 이상에 특이적으로 결합하거나, 또는 서열 번호 5 ~ 8 또는 이의 기능성 변이체중 1개 이상에 의해 암호화되는 폴리펩티드에 특이적으로 결합한다.
몇몇 구현예에서, MOSPD2에 대한 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 항원 결합 도메인 1개 이상은 평형 해리 상수(KD) 약 10-6 M 내지 약10- 12 M로 MOSPD2에 특이적으로 결합한다. 몇몇 구현예에서, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 약 10-6 M 내지 약 10-12 M의 KD로 T 세포 또는 NK 세포 특이적 수용체 분자(예컨대 CD3) 및/또는 CD3에 특이적으로 결합한다.
몇몇 구현예에서, MOSPD2에 대한 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 항원 결합 도메인 1개 이상은 약 10-6 M 내지 약 10-12 M의 KD, 또는 이에 속하는 임의의 범위의 KD(예컨대 약 10-7 M 내지 약 10-12 M, 약 10-8 M 내지 약 10-12 M, 약 10-9 M 내지 약 10-12 M, 약 10-10 M 내지 약 10-12 M, 약 10-11 M 내지 약 10-12 M, 약 10-6 M 내지 약 10-11 M, 약 10-7 M 내지 약 10-11 M, 약 10-8 M 내지 약 10-11 M, 약 10-9 M 내지 약 10-11 M, 약 10-10 M 내지 약 10-11 M, 약 10-6 M 내지 약 10-10 M, 약 10-7 M 내지 약 10-10 M, 약 10-8 M 내지 약 10-10 M, 약 10-9 M 내지 약 10-10 M, 약 10-6 M 내지 약 10-9 M, 약 10-7 M 내지 약 10-9 M, 약 10-8 M 내지 약 10-9 M, 약 10-6 M 내지 약 10-8 M, 또는 약 10-7 M 내지 약 10-8 M)로 MOSPD2에 특이적으로 결합한다.
몇몇 구현예에서, MOSPD2에 대한 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 항원 결합 도메인 1개 이상은 약 10-6 M, 약 10-7 M, 약 10-8 M, 약 10-9 M, 약 10-10 M, 약 10-11 M 또는 약 10-12 M의 KD로 MOSPD2에 특이적으로 결합한다.
몇몇 구현예에서, MOSPD2에 대한 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 항원 결합 도메인 1개 이상은 MOSPD2상 에피토프 1개 이상에 특이적으로 결합한다. 몇몇 구현예에서, KD는 스캐처드 분석(Scatchard analysis), 표면 플라스몬 공명법에 의해, 몇몇 경우에는 37℃에서 확정된다.
몇몇 구현예에서, MOSPD2에 대한 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 항원 결합 도메인 1개 이상은 약 103 l/Ms 내지 약 106 l/Ms의 Kon으로, 또는 이에 속하는 임의의 범위(예컨대 약 103 l/Ms 내지 약 105 l/Ms, 약 104 l/Ms 내지 약 105 l/Ms, 약 104 l/Ms 내지 약 106 l/Ms, 약 105 l/Ms 내지 약 106 l/Ms, 또는 약 103 l/Ms 내지 약 104 l/Ms)의 Kon으로 MOSPD2에 특이적으로 결합한다. 다른 구현예에서, MOSPD2에 대한 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 항원 결합 도메인 1개 이상의 Kon은 약 103 l/Ms, 약 104 l/Ms, 약 105 l/Ms 또는 약 106 l/Ms이다.
몇몇 구현예에서, MOSPD2에 대한 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 항원 결합 도메인 1개 이상은 약 10-3 l/s 내지 약 10-6 l/s의 Koff로, 또는 이에 속하는 임의의 범위(예컨대 약 10-3 l/s 내지 약 10-5 l/s, 약 10-4 l/s 내지 약 10-5 l/s, 약 10-4 l/s 내지 약 10-6 l/s, 약 10-5 l/s 내지 약 10-6 l/s, 또는 약 10-3 l/s 내지 약 10-4 l/s)의 Koff로 MOSPD2에 특이적으로 결합한다. 다른 구현예에서, MOSPD2에 대한 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 항원 결합 도메인 1개 이상의 Koff는 약 10-3 l/s, 약 10-4 l/s, 약 10-5 l/s 또는 약 10-6 l/s이다.
몇몇 구현예에서, MOSPD2에 대한 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 항원 결합 도메인 1개 이상은 이하와 같은 MOSPD2의 아미노산 영역들, 즉 약 505번 내지 약 515번, 약 500번 내지 약 515번, 약 230번 내지 약 240번, 약 510번 내지 약 520번, 약 210번 내지 약 220번, 약 15번 내지 약 25번, 약 505번 내지 약 520번, 약 505번 내지 약 515번, 약 90번 내지 약 100번, 약 505번 내지 약 525번, 약 230번 내지 약 245번, 약 505번 내지 약 510번, 약 130번 내지 약 140번, 약 220번 내지 약 230번, 약 15번 내지 약 30번, 약 80번 내지 약 95번, 약 40번 내지 약 50번, 약 460번 내지 약 475번, 약 340번 내지 약 350번, 약 500번 내지 약 515번, 약 460번 내지 약 470번, 약 325번 내지 약 335번, 약 20번 내지 약 35번, 약 215번 내지 약 225번, 약 510번 내지 약 520번, 약 175번 내지 약 190번, 약 500번 내지 약 510번, 약 505번 내지 약 530번, 약 60번 내지 약 75번, 약 500번 내지 약 520번, 약 145번 내지 약 160번, 약 502번 내지 약 515번, 약 85번 내지 약 100번, 약 205번 내지 약 220번, 약 175번 내지 약 190번, 약 500번 내지 약 505번, 약 500번 내지 약 525번, 약 495번 내지 약 505번, 약 495번 내지 약 510번, 약 190번 내지 약 200번, 약 190번 내지 약 198번, 약 502번 내지 약 515번, 약 1번 내지 약 60번, 약 80번 내지 약 240번, 약 90번 내지 약 235번, 약 330번 내지 약 445번, 약 330번 내지 약 430번, 약 495번 내지 약 515번, 약 145번 내지 약 240번, 약 145번 내지 약 220번, 약 145번 내지 약 200번, 약 160번 내지 약 240번, 약 160번 내지 약 220번, 약 160번 내지 약 200번, 약 175번 내지 약 240번, 약 175번 내지 약 220번, 약 175번 내지 약 200번, 약 170번 내지 약 190번, 약 178번 내지 약 185번, 약 85번 내지 약 140번, 약 85번 내지 약 130번, 약 90번 내지 약 140번, 약 90번 내지 약 130번, 약 95번 내지 약 140번, 약 95번 내지 약 130번, 약 100번 내지 약 130번, 약 100번 내지 약 140번, 약 110번 내지 약 130, 또는 약 115번 내지 약 127번(이상, 서열 번호 1에 따라 번호가 메겨짐) 중 1개 이상에 특이적으로 결합한다.
몇몇 구현예에서, MOSPD2에 대한 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 항원 결합 도메인 1개 이상은 이하와 같은 MOSPD2의 아미노산 영역들, 즉 약 508번 내지 약 517번, 약 501번 내지 약 514번, 약 233번 내지 약 241번, 약 509번 내지 약 517번, 약 212번 내지 약 221번, 약 13번 내지 약 24번, 약 505번 내지 약 517번, 약 505번 내지 약 514번, 약 89번 내지 약 100번, 약 506번 내지 약 517번, 약 233번 내지 약 245번, 약 504번 내지 약 514번, 약 128번 내지 약 136번, 약 218번 내지 약 226번, 약 15번 내지 약 24번, 약 83번 내지 약 96번, 약 42번 내지 약 50번, 약 462번 내지 약 474번, 약 340번 내지 약 351번, 약 504번 내지 약 517번, 약 462번 내지 약 470번, 약 327번 내지 약 337번, 약 21번 내지 약 32번, 약 217번 내지 약 226번, 약 510번 내지 약 517번, 약 178번 내지 약 190번, 약 497번 내지 약 509번, 약 504번 내지 약 516번, 약 64번 내지 약 77번, 약 504번 내지 약 515번, 약 147번 내지 약 159번, 약 503번 내지 약 515번, 약 88번 내지 약 97번, 약 208번 내지 약 218번, 약 178번 내지 약 191번, 약 502번 내지 약 515번, 약 503번 내지 약 516번, 약 497번 내지 약 505번, 약 500번 내지 약 509번, 약 189번 내지 약 202번, 약 189번 내지 약 197번, 약 505번 내지 약 516번, 약 1번 내지 약 63번, 약 82번 내지 약 239번, 약 93번 내지 약 234번, 약 327번 내지 약 445번, 약 327번 내지 약 431, 및 약 497번 내지 약 517번(이상, 서열 번호 1에 따라 번호가 메겨짐) 중 1개 이상에 특이적으로 결합한다.
본 발명의 2중 특이적 항체에 사용될 수 있는 MOSPD2에 특이적으로 결합하는 항체는 문헌, 예를 들어 국제특허출원공개공보 WO 2017/021855 및 국제특허출원공개공보 WO 2017/021857(이 문헌들은 전체로서 본원에 참조로 첨부됨)에 기술되어 있다.
본 발명의 2중 특이적 항체에 사용될 수 있는 T 세포 또는 NK 세포 특이적 수용체 분자(예컨대 CD3)에 특이적으로 결합하는 항체는 문헌, 예를 들어 미국 특허 제7,112,324호; 동 제7,262,276호; 동 제7,635,472호; 동 제9,249,217호; 및 동 제9,676,858호(이 문헌들은 전체로서 본원에 참조로 첨부됨)에 기술되어 있다.
뿐만 아니라, MOSPD2에 특이적으로 결합하는 항체 및 항원 결합 도메인과, T 세포 또는 NK 세포 특이적 수용체 분자에 특이적으로 결합하는 항체 및 항원 결합 도메인을 사용하여 본 발명의 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 수득하기 위한 방법 또한 문헌, 예를 들어 미국 특허 제7,112,324호; 동 제7,262,276호; 동 제7,635,472호; 동 제9,249,217호; 및 동 제9,676,858호(이 문헌들은 전체로서 본원에 참조로 첨부됨)에 기술되어 있다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 암호화하는 핵산에 관한 것이다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 암호화하는 핵산을 포함하는 발현 벡터에 관한 것이다.
약학 조성물 및 키트
본 발명의 기타 구현예는 MOSPD2와, T 세포 또는 NK 세포 특이적 수용체 분자에 특이적으로 결합하는 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다.
몇몇 구현예에서, 본 약학 조성물은 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편과, 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함한다. "약학적으로 허용 가능한 담체"란 용어는 부형제, 윤활제, 완충제, 항균제, 증량제(bulking agent)(예컨대 만니톨), 항산화제(예컨대 아스코르브산 또는 중아황산나트륨), 희석제, 보조제 및 비이클 등을 포함하나, 이에 한정되는 것은 아니다.
몇몇 구현예에서, 본 약학 조성물은 전신, 국소, 비강, 경구, 복막내, 종양내, 비경구, 경점막, 직장, 협측, 흡입, 정맥내, 근육내 또는 피하 투여에 적합하다.
몇몇 구현예에서, 본 약학 조성물은 MOSPD2와, T 세포 또는 NK 세포 특이적 수용체 분자에 특이적으로 결합하는 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 치료적 유효량만큼, 예를 들어 약 1 μg/ml 내지 약 10 μg/ml, 또는 이에 속하는 임의의 수치 범위(예컨대 약 2 μg/ml 내지 약 10 μg/ml, 약 3 μg/ml 내지 약 10 μg/ml, 약 4 μg/ml 내지 약 10 μg/ml, 약 5 μg/ml 내지 약 10 μg/ml, 약 6 μg/ml 내지 약 10 μg/ml, 약 7 μg/ml 내지 약 10 μg/ml, 약 8 μg/ml 내지 약 10 μg/ml, 약 9 μg/ml 내지 약 10 μg/ml, 약 1 μg/ml 내지 약 9 μg/ml, 약 2 μg/ml 내지 약 9 μg/ml, 약 3 μg/ml 내지 약 9 μg/ml, 약 4 μg/ml 내지 약 9 μg/ml, 약 5 μg/ml 내지 약 9 μg/ml, 약 6 μg/ml 내지 약 9 μg/ml, 약 7 μg/ml 내지 약 9 μg/ml, 약 8 μg/ml 내지 약 9 μg/ml, 약 1 μg/ml 내지 약 8 μg/ml, 약 2 μg/ml 내지 약 8 μg/ml, 약 3 μg/ml 내지 약 8 μg/ml, 약 4 μg/ml 내지 약 8 μg/ml, 약 5 μg/ml 내지 약 8 μg/ml, 약 6 μg/ml 내지 약 8 μg/ml, 약 7 μg/ml 내지 약 8 μg/ml, 약 1 μg/ml 내지 약 7 μg/ml, 약 2 μg/ml 내지 약 7 μg/ml, 약 3 μg/ml 내지 약 7 μg/ml, 약 4 μg/ml 내지 약 7 μg/ml, 약 5 μg/ml 내지 약 7 μg/ml, 약 6 μg/ml 내지 약 7 μg/ml, 약 1 μg/ml 내지 약 6 μg/ml, 약 2 μg/ml 내지 약 6 μg/ml, 약 3 μg/ml 내지 약 6 μg/ml, 약 4 μg/ml 내지 약 6 μg/ml, 약 5 μg/ml 내지 약 6 μg/ml, 약 1 μg/ml 내지 약 5 μg/ml, 약 2 μg/ml 내지 약 5 μg/ml, 약 3 μg/ml 내지 약 5 μg/ml, 약 4 μg/ml 내지 약 5 μg/ml, 약 1 μg/ml 내지 약 4 μg/ml, 약 2 μg/ml 내지 약 4 μg/ml, 약 3 μg/ml 내지 약 4 μg/ml, 약 1 μg/ml 내지 약 3 μg/ml, 약 2 μg/ml 내지 약 3 μg/ml, 또는 약 1 μg/ml 내지 약 2 μg/ml)만큼 함유한다.
몇몇 구현예에서, 치료적 유효량은 약 1 μg/ml, 약 2 μg/ml, 약 3 μg/ml, 약 4 μg/ml, 약 5 μg/ml, 약 6 μg/ml, 약 7 μg/ml, 약 8 μg/ml, 약 9 μg/ml 또는 약 10 μg/ml이다.
몇몇 구현예에서, 치료적 유효량은 약 10 mg/kg 내지 약 40 mg/kg, 또는 이에 속하는 임의의 수치 범위(예컨대 약 15 mg/kg 내지 약 40 mg/kg, 약 20 mg/kg 내지 약 40 mg/kg, 약 25 mg/kg 내지 약 40 mg/kg, 약 30 mg/kg 내지 약 40 mg/kg, 약 35 mg/kg 내지 약 40 mg/kg, 약 10 mg/kg 내지 약 35 mg/kg, 약 15 mg/kg 내지 약 35 mg/kg, 약 20 mg/kg 내지 약 35 mg/kg, 약 25 mg/kg 내지 약 35 mg/kg, 약 30 mg/kg 내지 약 35 mg/kg, 약 10 mg/kg 내지 약 30 mg/kg, 약 15 mg/kg 내지 약 30 mg/kg, 약 20 mg/kg 내지 약 30 mg/kg, 약 25 mg/kg 내지 약 30 mg/kg, 약 10 mg/kg 내지 약 25 mg/kg, 약 15 mg/kg 내지 약 25 mg/kg, 약 20 mg/kg 내지 약 25 mg/kg, 약 10 mg/kg 내지 약 20 mg/kg, 약 15 mg/kg 내지 약 20 mg/kg, 또는 약 10 mg/kg 내지 약 15 mg/kg)이다.
몇몇 구현예에서, 치료적 유효량은 약 10 mg/kg, 약 15 mg/kg, 약 20 mg/kg, 약 25 mg/kg, 약 30 mg/kg, 약 35 mg/kg 또는 약 40 mg/kg이다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 (i) 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 본원에 기술된 약학 조성물과, (ii) 사용 지침을 포함하는 키트에 관한 것이다. 몇몇 구현예에서, 지침에 기재된 용도는 본원에 기술된 사용 방법 중 1가지 이상이다.
사용 방법 및 제조 방법
몇몇 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 본원에 기술된 약학 조성물을, 암을 치료 또는 예방하는데 유효한 양만큼 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이다. 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 유효량은 본원의 어딘가에 기술되어 있다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 본원에 기술된 약학 조성물을, 암의 전이를 치료 또는 예방하는데 유효한 양으로 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암 전이를 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이다.
몇몇 구현예에서, 본원에 기술된 방법들 중 임의의 것의 대상 암은 방광암, 뇌암, 유방암, 결장암, 직장암, 신장암, 간암, 폐암, 식도암, 담낭암, 난소암, 췌장암, 위암, 자궁경부암, 갑상선암, 전립선암, 피부암, 조혈암, 설암, 간엽 기원 암, 중추신경계 또는 말초신경계 암, 자궁내막암, 두경부암, 교모세포종 또는 악성 복수이다.
몇몇 구현예에서, 폐암은 소세포 폐암 또는 비소세포 폐암이다.
몇몇 구현예에서, 피부암은 편평세포 암, 기저 세포 암, 흑색종, 융기피부섬유육종, 메르켈(Merkel) 세포 암, 카포시(Kaposi) 육종, 각질극세포종, 방추세포 종양, 피지샘 암, 미세방광부속기 암, 유방의 파젯병(Paget's disease), 비정형 섬유황색종, 평활근육종 또는 혈관육종이다.
몇몇 구현예에서, 조혈암은 림프 계통의 조혈암이다. 몇몇 구현예에서, 림프 계통의 조혈암은 백혈병, 급성 림프구성 백혈병, 만성 림프구성 백혈병, 급성 림프아구성 백혈병, B 세포 림프종, T 세포 림프종, 호지킨(Hodgkin) 림프종, 비호지킨 림프종, 모양 세포 림프종 또는 버킷(Burkitt) 림프종이다. 몇몇 구현예에서, 조혈암은 골수 계통의 조혈암이다. 몇몇 구현예에서, 골수 계통의 조혈암은 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 골수형성이상증후군 또는 전골수구 백혈병이다.
몇몇 구현예에서, 간엽 기원 암은 섬유육종, 횡문근육종, 연조직 육종 또는 골육종이다.
몇몇 구현예에서, 중추신경계 또는 말초신경계 암은 성상세포종, 신경아세포종, 신경교종 또는 신경초종이다.
몇몇 구현예에서, 암은 항문암, 골암, 위장관 문합부암, 임신융모질환, 호지킨 림프종, 카포시 육종, 각질극세포종, 악성 중피종, 다중심성 캐슬맨병, 다발성 골수종 및 기타 형질세포 신생물형성, 골수증식성 신생물형성, 신경아세포종, 비호지킨 림프종, 골육종, 난소암, 나팔관암 또는 원발성 복막암, 음경암, 망막아세포종, 횡문근육종, 정상피종, 연조직 육종, 위장(위)암, 고환암, 기형암, 갑상선 여포암, 질암, 외음부암, 빌름 종양 및 기타 유년기 신장암, 또는 색소성건피증이다.
몇몇 구현예에서, 암 또는 암의 전이를 치료 또는 예방하는 방법은 항암 약물 유효량만큼을 대상체에 투여하는 단계를 추가로 포함한다. 몇몇 구현예에서, 항암 약물은 아비라테론 아세트산염, 아비트렉세이트(메토트렉세이트), 아브락산(파클리탁셀 알부민 안정화 나노입자 제제), ABVD, ABVE, ABVE-PC, AC, AC-T, 애드세트리스(브렌툭시맙 베도틴), ADE, 아도-트라스투주맙 엠탄신, 아드리아마이신(독소루비신 염화수소산염), 아드루실(플루오로우라실), 아파티닙 디말레이트, 아피니토(에버롤리무스), 아킨지오(네투피탄트 및 팔로노세트론 염화수소산염), 알다라(이미퀴모드), 알데스류킨, 알렘투주맙, 알림타(페메트렉시드 2나트륨), 알록시(팔로노세트론 염화수소산염), 암보클로린(클로람부실), 암보클로린(클로람부실), 아미노레불린산, 아나스트로졸, 아프레피탄트, 아레디아(파미드로네이트 2나트륨), 아리미덱스(아나스트로졸), 아로마신(엑세메스탄), 어래논(넬라라빈), 삼산화비소, 아르제라(오파투무맙), 아스파라기나아제 어위니아 크리산테미, 아바스틴(베바시주맙), 엑시티닙, 아자시티딘, BEACOPP, 베세넘(카무스틴), 벨레오닥(벨리노스타트), 벨리노스타트, 벤다무스틴 염화수소산염, BEP, 베바시주맙, 벡사로텐, 벡사(토시투모맙 및 I131 요오드 토시투모맙), 비칼루타미드, BiCNU(카무스틴), 블레오마이신, 블리나투모맙, 블린사이토(블리나투모맙), 보르테조밉, 보술리프(보수티닙), 보수티닙, 브렌툭시맙 베도틴, 부설판, 부설펙스(부설판), 카바지탁셀, 카보잔티닙-S-말레이트, CAF, 캄파트(알렘투주맙), 캄프토사르(이리노테칸 염화수소산염), 카페시타빈, CAPOX, 카보플라틴, 카보플라틴-탁솔, 카필조밉, 카무브리스(카무스틴), 카무스틴, 카무스틴 임플란트, 카소덱스(비칼루타미드), CeeNU(로무스틴), 세리티닙, 세루비딘(도노루비신 염화수소산염), 서바릭스(재조합 HPV 2가 백신), 세툭시맙, 클로람부실, 클로람부실-프레드니손, CHOP, 시스플라틴, 클라펜(사이클로포스파미드), 클로파라빈, CMF, 코메트리크(카보잔티닙-S-말레이트), COPP, COPP-ABV, 코스메겐(닥티노마이신), 크리조티닙, CVP, 사이클로포스파미드, 사이포스(Cyfos)(이포스파미드), 사이람자(라무시루맙), 시타라빈, 시타라빈, 리포조말, 싸이토사-U(시타라빈), 싸이톡산(사이클로포스파미드), 다브라페닙, 다카바진, 다코젠(데시타빈), 닥티노마이신, 다사티닙, 도노루비신 염화수소산염, 데시타빈, 데가렐릭스, 데니루킨 디프티톡스, 데노수맙, 데포Cyt(리포좀 시타라빈), 데포폼(리포좀 시타라빈), 덱스라족산 염화수소산염, 디누툭시맙, 도세탁셀, 독실(독소루비신 염화수소산염 리포좀), 독소루비신 염화수소산염, 독소루비신 염화수소산염 리포좀, 독스-SL(독소루비신 염화수소산염 리포좀), DTIC-돔(다카바진), 에퓨덱스(플루오로우라실), 엘리텍(라스부리카제), 엘렌스(에피루비신 염화수소산염), 엘록사틴(옥살리플라틴), 엘트롬보팍 올라민, 에멘드(아프레피탄트), 엔잘루타미드, 에피루비신 염화수소산염, EPOCH, 얼비툭스(세툭시맙), 에리불린 메실산염, 에리벳지(비스모데집), 엘로티닙 염화수소산염, 에르위나제(아스파라기나아제 어위니아 크리산테미), 에토포포스(에토포시드 인산염), 에토포시드, 에토포시드 인산염, 에바세트(독소루비신 염화수소산염 리포좀), 에버롤리무스, 에비스타(랄록시펜 염화수소산염), 엑세메스탄, 파레스톤(토레미펜), 파리닥(파노비노스탓), 파슬로덱스(풀베스트란트), FEC, 페마라(레트로졸), 필그라스팀, 플루다라(플루다라빈 인산염), 플루다라빈 인산염, 플루오로플렉스(플루오로우라실), 플루오로우라실, 폴렉스(메토트렉세이트), 폴렉스 PFS(메토트렉세이트), 폴피리, 폴피리-베바시주맙, 폴피리-세툭시맙, 폴피리녹스, 폴플록스, 폴로틴(프랄라트렉세이트), FU-LV, 풀베스트란트, 가다실(재조합 HPV 4가 백신), 가다실 9(재조합 HPV 9가 백신), 가싸이바(오비누투주맙), 게피티닙, 겜시타빈 염화수소산염, 겜시타빈-시스플라틴, 겜시타빈-옥살리플라핀, 겜투주맙 오조가미신, 겜자(겜시타빈 염화수소산염), 길로트리프(아파티닙 디말리에이트), 글리벡(이마티닙 메실산염), 글리아델(카무스틴 임플란트), 글리아델 웨이퍼(카무스틴 임플란트), 글루카피다제, 고세렐린 아세트산염, 할라벤(에리불린 에실산염), 허셉틴(트라스투주맙), HPV 2가 백신(재조합체), HPV 9가 백신(재조합체), HPV 4가 백신(재조합체), 하이캄틴(토?j칸 염화수소산염), 하이퍼-CVAD, 입랜스(팔보시클립), 이브리투모맙 티우세탄, 이브루티닙, ICE, 아이클루시그(포나티닙 염화수소산염), 이다마이신(이다루비신 염화수소산염), 이다루비신 염화수소산염, 이델라리십, 이펙스(이포스파미드), 이포스파미드, 이포스파미드(이포스파미드), 이마티닙 메실산염, 임브루비카(이브루티닙), 이미퀴모드, 인리타(엑시티닙), 인트론 A(재조합 인터페론 알파-2b), 131번 요오드 토시투모맙 및 토시투모맙, 이필리무맙, 이레사(게피티닙), 이리노테칸 염화수소산염, 이스토닥스(로미뎁신), 익사베필론, 익셈프라(익사베필론), 자카피(룩솔리티닙 인산염), 제브타나(카바지탁셀), 캐싸일라(아도-트라스투주맙 엠탄신), 케옥시펜(랄록시펜 염화수소산염), 케피반스(팔리페르민), 키트루다(펨브롤리주맙), 키프롤리스(카필조밉), 란레오티드 아세트산염, 라파티닙 디토실산염, 레날리도마이드, 렌바티닙 메실산염, 렌비마(렌바티닙 메실산염), 레트로졸, 류코보린 칼슘, 류케란(클로람부실), 루프롤라이드 아세트산염, 레불란(아미노레불린산), 린폴리진(클로람부실), 리포독스(독소루비신 염화수소산염 리포좀), 리포좀 시타라빈, 로무스틴, 루프론(루프롤라이드 아세트산염), 루프론 데포(루프롤라이드 아세트산염), 루프론 데포-페드(루프롤라이드 아세트산염), 루프론 데포-3개월(루프롤라이드 아세트산염), 루프론 데포-4개월(루프롤라이드 아세트산염), 린파자(올라파립), 마키보(빈크리스틴 황산염 리포좀), 마추란(프로카바진 염화수소산염), 메클로레타민 염화수소산염, 메가스(메게스트롤 아세트산염), 메게스트롤 아세트산염, 메키니스트(트라베티닙), 머캅토퓨린, 메스나, 메스넥스(메스나), 메타졸라스톤(테모졸로미드), 메토트렉세이트, 메토트렉세이트 LPF(메토트렉세이트), 멕세이트(메토트렉세이트), 멕세이트-AQ, 미토마이신 C, 미토잔트론 염화수소산염, 미토자이트렉스(미토마이신 C), MOPP, 모조빌(플레릭사포), 머스타젠(메클로레타민 염화수소산염), 뮤타마이신(미토마이신 C), 마일레란(부설판), 마이로사르(아바시티딘), 마이로타그(겜투주맙 오조가마이신), 나노입자 파클리탁셀(파클리탁셀 알부민 안정화 나노입자 제제), 나벨빈(비노렐빈 주석산염), 넬라라빈, 네오사르(사이클로포스파미드), 네투피탄트 및 팔로노세트론 염화수소산염, 뉴포젠(필그라스팀), 넥사바(소라페닙 토실산염), 닐로티닙, 니볼루맙, 놀바덱스(타목시펜 시트르산염), 엔플레이트(로미플로스팀), 오비누투주맙, OEPA, 오파투무맙, OFF, 올라파립, 오마세탁신 메페숙신산염, 온카스파(페가스파가제), 온탁(데니루틴 디프티톡스), 옵디보(니볼루맙), OPPA, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, 파클리탁셀 알부민 안정화 나노입자 제제, PAD, 팔보시클립, 팔리페르민, 팔로노세트론 염화소소산염, 파미드로네이트 2나트륨, 파니투무맙, 파노비노스탓, 파라플랫(카보플라틴), 파라플라틴(카보플라틴), 파조파닙 염화소소산염, 페가스파르가제, 페그인터페론 알파-2b, PEG-인트론(페그린터페론 알파-2b), 펨브롤리주맙, 페메트렉시드 2나트륨, 퍼제타(퍼투주맙), 퍼투주맙, 플라티놀(시스플라틴), 플라티놀-AQ(시스플라틴), 플레릭사포, 포말리도마이드, 포말리스트(포말리도미드), 포나티닙 염화수소산염, 프랄라트렉세이트, 프레드니손, 프로카바진 염화소소산염, 프로류킨(알데스류킨), 프롤리아(데노수맙), 프로맥타(엘트롬보팍 올라민), 프로벤지(시푸루셀-T), 퓨리네톨(머캅토퓨린), 퓨릭산(머캅토퓨린), 223번 라듐 이염화물, 랄록시펜 염화소소산염, 라무시루맙, 라스부리카제, R-CHOP, R-CVP, 재조합 인유두종바이러스(HPV) 2가 백신, 재조합 인유두종바이러스(HPV) 9가 백신, 재조합 인유두종바이러스(HPV) 4가 백신, 재조합 인터페론 알파-2b, 레고라페닙, R-EPOCH, 레블리미드(레날리도마이드), 류마트렉스(메토트렉세이트), 리툭산(리툭시맙), 리툭시맙, 로미뎁신, 로미플로스팀, 루비도마이신(도노루비신 염화소소산염), 룩솔리티닙 인산염, 스클레로졸 흉막내 에어로졸(활석), 실툭시맙, 시플루셀-T, 소마툴린 데포(란레오티드 아세트산염), 소라페닙 토실산염, 스프라이셀(다사티닙), 스탠포드 V, 멸균 활석 분말(활석), 스테리탈크(활석), 스티바가(레고라페닙), 수니티닙 말산염, 수텐트(수니티닙 말산염), 실라트론(페그인터페론 알파-2b), 실반트(실툭시맙), 시노비르(탈리도미드), 신리보(오마세탁신 메페숙신산염), TAC, 타핀라(다브라페닙), 활석, 타목시펜 시트르산염, 타라빈 PFS(시타라빈), 타세바(엘로티닙 염화소소산염), 타그레틴(벡사로텐), 타시그나(닐로티닙), 탁솔(파클리탁셀), 탁소텔(도세탁셀), 테모달(테모졸로미드), 테모졸로미드, 템시롤리무스, 탈리도미드, 탈로미드(탈리도미드), 티오테파, 토포사(에토포시드), 토포테칸 염화소소산염, 토레미펜, 토리셀(템시롤리무스), 토시투모맙 및 I131 요오드 토시투모맙, 토텍트(덱스라족산 염화소소산염), TPF, 트라메티닙, 트라스투주맙, 트린다(벤다무스틴 염화소소산염), 트리세녹스(삼산화비소), 타이커브(라파티닙 2토실산염), 유니툭신(디누툭시맙), 반데타닙, VAMP, 벡티빅스(파니투무맙), VeIP, 벨반(빈블라스틴 황산염), 벨케이드(보르테조밉), 벨사(빈블라스틴 황산염), 베무라페닙, 베페시드(에토포시드), 비아두르(루프롤라이드 아세트산염), 비다자(아자시티딘), 빈블라스틴 황산염, 빈카사르 PFS(빈크리스틴 황산염), 빈크리스틴 황산염, 빈크리스틴 황산염 리포좀, 비노렐빈 주석산염, VIP, 비스모데깁, 보락세이즈(글루카르피다아제), 보리노스타트, 보트리엔트(파조파닙 염화소소산염), 웰코보린(류코보린 칼슘), 잴코리(크리조티닙), 젤로다(카페시타빈), XELIRI, XELOX, X지바(데노수맙), 조피고(223번 라듐 이염화물), X탄디(엔잘루타미드), 여보이(이필리무맙), 잘트랩(지브-아플리버셉트), 젤보라프(베무라페닙), 제발린(이브리투모맙 티우세탄), 진카드(덱스라족산 염화소소산염), 지브-아필버셉트, 졸라덱스(고세렐린 아세트산염), 졸레드론산, 졸린자(보리노스타트), 조메타(졸레드론산), 자이델릭(이델라리십), 자이카디아(세리티닙), 자이티가(아비라테론 아세트산염) 또는 이의 조합이다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 본원에 기술된 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 종양 세포를 억제 또는 감소시키기 위한 방법에 관한 것이다. 몇몇 구현예에서, 종양 세포의 수는 대조값 또는 기준값에 비해 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 100%까지 감소한다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 본원에 기술된 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, CD3을 발현하는 세포에 의해 대상체에서 사이토카인의 생산을 증가시키는 방법에 관한 것이다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 본원에 기술된 약학 조성물을 T 세포와 접촉시키는 단계를 포함하는, T 세포에서 IL-2, CD69 및/또는 IFN-γ의 생산 또는 농도를 증가시키는 방법에 관한 것이다. 몇몇 구현예에서, IFN-γ 생산은 대조값 또는 기준값에 비해 적어도 약 100%, 적어도 약 200%, 적어도 약 300%, 적어도 약 400%, 적어도 약 500%, 적어도 약 600%, 적어도 약 700%, 적어도 약 800%, 적어도 약 900% 또는 적어도 약 1000%까지 증가한다. 몇몇 구현예에서, IFN-γ 농도는 대조값 또는 기준값에 비해 적어도 약 1000 pg/ml, 적어도 약 2000 pg/ml, 적어도 약 3000 pg/ml, 적어도 약 4000 pg/ml, 적어도 약 5000 pg/ml, 적어도 약 6000 pg/ml, 적어도 약 7000 pg/ml, 적어도 약 8000 pg/ml, 적어도 약 9000 pg/ml 또는 적어도 약 10000 pg/ml까지 증가한다. 몇몇 구현예에서, CD69 생산은 대조값 또는 기준값에 비해 적어도 약 1%, 적어도 약 2%, 적어도 약 3%, 적어도 약 4%, 적어도 약 5%, 적어도 약 6%, 적어도 약 7%, 적어도 약 8%, 적어도 약 9%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25% 또는 적어도 약 30%까지 증가한다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 본원에 기술된 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 면역 반응을 자극하는 방법에 관한 것이다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 본원에 기술된 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암 세포에 대한 T 세포 매개 세포독성 면역 반응을 자극하는 방법에 관한 것이다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 본원에 기술된 약학 조성물을 T 세포와 접촉시키는 단계를 포함하는, T 세포 증식을 증가시키는 방법에 관한 것이다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 본원에 기술된 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체의 종양내 T 조절 세포의 수를 감소시키거나 격감시키는 방법에 관한 것이다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 사용하여 대상체 시료중 MOSPD2 발현 수준을 확정하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암 또는 암의 전이를 예측, 진단 또는 예후하기 위한 방법에 관한 것이다. 몇몇 구현예에서, 본 방법은 (i) 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 사용하여 대상체 시료중 MOSPD2의 발현 수준을 확정 또는 정량하는 단계와, (ii) 단계 (i)에서 구하여진 발현 수준을 대조값 또는 기준값과 비교하는 단계를 포함하는데, 여기서 MOSPD2의 발현 수준이 대조값 또는 기준값에 비해 증가하였음은 암, 암으로 발전할 위험 증가 또는 좋지 않은 암 예후를 말해주는 것이다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 사용하여 대상체 시료중 MOSPD2의 발현 수준을 확정하는 단계를 포함하는, 대상체내 종양의 진행 또는 종양의 침윤을 예측, 진단 또는 예후하기 위한 방법에 관한 것이다. 몇몇 구현예에서, 본 방법은 (i) 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 사용하여 대상체 시료중 MOSPD2의 발현 수준을 확정 또는 정량하는 단계와, (ii) 단계 (i)에서 구하여진 발현 수준을 대조값 또는 기준값과 비교하는 단계를 포함하는데, 여기서 MOSPD2의 발현 수준이 대조값 또는 기준값에 비해 증가하였음은 좋지 않은 종양 진행 또는 종양 침윤 예후를 말해주는 것이다.
몇몇 구현예에서, 예측, 진단 또는 예후하기 위한 방법은 하기 단계들, 즉
시료중 MOSPD2의 발현 수준을 정량하도록 실험실에 지시하는 단계;
실험실로부터 시료중 MOSPD2의 발현 수준에 관한 보고서를 얻는 단계; 및/또는
MOSPD2의 억제제 치료적 유효량만큼을 대상체에 투여하는 단계
중 1개 이상을 추가로 포함한다.
예측, 진단 또는 예후하기 위한 방법에 관한 몇몇 구현예에서, 시료는 대상체로부터 유래하는 조직 생검편, 종양 생검편 또는 혈액 시료이다.
예측, 진단 또는 예후하기 위한 방법에 관한 몇몇 구현예에서, 대조값 또는 기준값은 정상 조직 또는 정상 인접 조직(NAT)내 MOSPD2의 발현 수준이다.
예측, 진단 또는 예후하기 위한 방법에 관한 몇몇 구현예에서, 대조값 또는 기준값은 검출 불가능한 MOSPD2 발현 또는 유의미하지 않은 MOSPD2 발현이다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 본원에 기술된 약학 조성물을, MOSPD2 발현 종양을 치료 또는 예방하는데 유효한 양만큼 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 MOSPD2 발현 종양을 치료 또는 예방하기 위한 방법에 관한 것이다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 본원에 기술된 약학 조성물을, MOSPD2 발현 종양 연관 대식세포를 가지는 종양을 치료 또는 예방하는데 유효한 양만큼 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 MOSPD2 발현 종양 연관 대식세포를 가지는 종양을 치료 또는 예방하기 위한 방법에 관한 것이다.
몇몇 구현예에서, 본원에 기술된 방법들 중 임의의 방법의 대상체는 포유류이다. 몇몇 구현예에서, 본원에 기술된 방법들 중 임의의 방법의 대상체는 인간이다. 몇몇 구현예에서, 본원에 기술된 방법들 중 임의의 방법의 대상체는 수의학적 동물(예컨대 개, 고양이, 말, 양, 소 또는 염소)이다.
몇몇 구현예에서, 본 발명은 본원에 기술된 핵산 또는 발현 벡터로 형질전환된 숙주 세포를 배양하는 단계와, 발현된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 수집 및 정제하는 단계를 포함하는, 본원에 기술된 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 제조하기 위한 방법에 관한 것이다.
실시예
지금부터 이하 실시예들이 참조되는데, 이 실시예는 상기 기술된 바와 함께 비제한적 방식으로 본 발명의 몇몇 구현예를 예시한다.
재료 및 방법
MOSPD2 침묵
인간 유방암 세포주 MDA-MB-231(이하, MDA-231이라 칭함)(HTB-26) 및 인간 악성 흑색종 세포주 A2058(CRL-11147)을 미국 모식균배양수집소(ATCC)로부터 구입하였다. 세포(2x106개, 2 ml)를 15 ml들이 튜브에 넣었다. 대조 단(short) 헤어핀 RNA(sh-RNA) 발현 렌티 바이러스 입자(2x105개 바이러스 입자) 또는 인간 MOSPD2 sh-RNA 발현 렌티 바이러스 입자(2x106개 바이러스 입자)를 세포에 적용한 후, 이 세포를 실온에서 8 μg/ml 폴리브렌(Sigma, Israel)의 존재하에 60분 동안 2000 rpm으로 회전(spinning)시켰다. 그 다음, 세포를 6웰 평판에 접종하였다. 72시간 후, 형질도입한 세포를 선택하기 위해 새로 공급된 퓨로마이신(4 μg/ml; Sigma, Israel) 함유 배지를 첨가하였다. CRISPR-CAS9 매개 침묵을 위하여 MDA-231 세포에 전술된 바와 같이 CRISPR-CAS9 비표적 대조군 또는 CRISPR-CAS9 인간 MOSPD2 렌티바이러스 입자를 형질도입하였다. 형질도입한 세포를 대상으로 단일 세포 클로닝을 수행하여, MOSPD2 단백질 발현이 침묵되었고 이동능이 상실된 세포를 단리하였다.
웨스턴 블럿
sh-대조군 또는 sh-MOSPD2 렌티 바이러스를 형질도입한 A2058 또는 MDA-231 세포, 또는 대조군 또는 MOSPD2 CRISPR-CAS9 렌티 바이러스 입자를 형질도입한 MDA-231 세포(106개)를 세척한 다음, 1:100 디티오트레이톨(DTT), 포스파타아제 및 프로테아제 억제제 함유 용해 완충제(Thermo Scientific)중에 재현탁하였다. 시료를 예비 성형 Criterion TGX 겔(Bio-Rad, Hemel Hempstead, UK)에 로딩(loading)한 다음, 니트로셀룰로스막으로 옮겼다. 블럿들을, 트리스 완충 식염수 및 Tween 20(TBST)중 5% 밀크 또는 소 혈청 알부민(BSA)으로 1시간 동안 차단시킨 다음, 1차 항체 및 2차 항체와 함께 항온처리하였다. ECL 키트(Thermo Scientific)를 사용하여 막을 전개시켰다. 이하 항체들을 면역블럿팅에 사용하였다:
1차 항체: Vascular Biogenics Ltd에 의해 생산된 토끼 항 MOSPD2(1:5000). 포스포-세포외 조절 키나아제(p-ERK1/2)(Thr 183 및 Tyr 185, 1:4000)를 Sigma(Israel)로부터 구입하였다. 포스포-AKT(Ser 473, 1:1000)는 Cell Signaling으로부터 구입하였다. 포스포-FAK(1:2000)는 Abcam(Cambridge, UK)으로부터 구입하였다. 열 충격 단백질(HSP) 90(1:1000)은 Santa Cruz Biotechnology(Dallas, TX)로부터 구입하였다.
2차 항체: 겨자무 과산화효소(HRP) 당나귀 항 토끼(1:5000) 및 HRP 염소 항 마우스(1:5000) 항체는 Jackson ImmunoResearch(West Grove, PA)로부터 구입하였다.
Q- PCR
침묵 효능을 확정하기 위해, RNeasy 미니 키트(Qiagen, ValenVBa, CA)를 사용하여 sh-대조군 및 sh-MOSPD2 렌티 바이러스를 형질도입한 MDA-231 세포로부터 RNA를 추출하였다. cDNA를 제조하기 위해, RNA 2 μg을 qScript 반응 믹스 및 qScript 역전사효소(Quanta Bioscience, Gaithersburg, MD)와 합하였다. 반응물을 온도 순환기(thermal cycler)(BioRad, Hercules, CA)에 넣은 후, 제조자의 지침에 따라 운영 프로그램을 설정하였다. Applied Biosystems 7300 실시간 PCR 시스템(Grand Island, NY)에서 인간 MOSPD2용 프라이머 세트들, RNA 수준을 정규화하기 위한 28S(BIOSEARCH TECHNOLOGIES, Petaluma, CA) 및 SYBR Green PCR 마스터 믹스(Applied Biosystems, Warrington, UK)를 사용하여 실시간 PCR 반응을 진행하였다.
면역조직화학적 염색
암 조직내 MOSPD2의 발현 수준을 평가하기 위해, 유방암용, 간암용, 그리고 다발성 장기 종양용 Biomax 어레이(US Biomax Rockville, MD)(각각 T088B 및 BR2028a, BC03116a 및 MC6163)를 토끼 항 MOSPD2 항체 또는 대조군 토끼 IgG(R&D Systems Cat# AB-105-C)로 염색한 다음, 항 토끼 HRP(Cat #0399 DAKO, Denmark)와 함께 항온처리하였다.
실시예 1
MOSPD2와 전이성 세포주의 이동
암 세포의 이동에서 MOSPD2의 역할을 평가하기 위해, 국제특허출원 제2017/021857호에 기술된 바와 같이 sh-대조군 또는 sh-MOSPD2 렌티 바이러스 입자를 사용하여 전이성 세포주 2개, 즉 A2058 흑색종 및 MDA-231 유방암에서의 MOSPD2 발현을 침묵시켰다.
구체적으로, 사전에 3시간 동안 0.5% FBS/RPMI-1640중에서 굶긴(starved) sh-대조군 또는 sh-MOSPD2 형질도입 A2058 세포 또는 MDA-231 세포(3x105개)를, QCM 24웰(공극 5 μm) 이동 검정 평판(Corning-Costar, Corning, NY)의 상부 챔버에 접종한 다음, 하부 챔버에서 10% FBS/RPMI-1640 및 EGF(200 ng/ml, Peprotech Israel)의 존재하에 24시간 동안 항온처리하였다. 그 다음, 하부 구획으로 이동한 세포를 크리스탈 바이올렛으로 염색하고 나서, 영상을 촬영하였다.
도 1은, sh-MOSPD2 렌티 바이러스 입자가 단백질 발현을 극심하게 감소시켰으며, 암 세포의 시험관내 이동도 많이 억제하였음을 보여준다.
실시예 2
MOSPD2와 세포 증식
MOSPD2 침묵후 세포 이동에 대한 억제 효과가 근본적인 세포 기능(예컨대 증식)에 부차적인지를 확정하기 위해, 국제특허출원 제2017/021857호에 기술된 바와 같이 3일의 기간에 걸쳐 sh-대조군 또는 sh-MOSPD2 렌티 바이러스 입자를 형질도입한 MDA-231 유방암 세포를 대상으로 증식에 대해 시험하였다.
구체적으로, sh-대조군 또는 sh-MOSPD2 렌티 바이러스를 형질도입한 MDA-231 세포를 6웰 평판에 접종하였다(웰당 104개). 3 연속일 동안 24시간 마다 세포를 FACS에 의해 총 3회 계수하였다.
도 2에 보인 데이터는 MOSPD2가 이러한 세포의 증식에 필수적이지 않음을 나타내는데, 이 점은 특히 이동에 있어 MOSPD2의 조절 역할을 암시한다.
실시예 3
MOSPD2와 세포 전이
원래의 암 부위를 떠나 다른 장기로 전파된 암 세포에서 MOSPD2의 역할을 평가하기 위해, sh-대조군 또는 sh-MOSPD2 렌티 바이러스 입자를 형질도입한 MDA-231 유방암 세포에서의 폐 전이 구역을 면역결핍 마우스에 양자 이입하였다(국제특허출원 제2017/021857호 참조). 발암 부위가 유방인 다른 모델에서는 면역결핍 마우스의 유방 지방층에 sh-대조군 또는 sh-MOSPD2 렌티 바이러스 입자를 형질도입한 MDA-231 유방암 세포를 접종하였다.
병리학적 관찰: 조직학적 슬라이드를 헤마톡실린/에오신(H&E)으로 염색하였다. 포르말린으로 고정한 조직을 탈수시킨 다음, 파라핀에 매립하고 나서, 두께 4 μm로 저몄다. Leica 염색 모듈에서 H&E 염색에 눈금을 매겼다. 슬라이드를 7분 동안 90℃로 승온시키고 나서, 전자동화 프로토콜에 따라 처리하였다. 절편에서 파라핀을 제거하고 재수화한 후, 슬라이드를 7분 동안 Gill 헤마톡실린 No.3(Surgipath)중에서 염색한 다음, 세척하고 나서, 산성 알코올에 침지하였으며, 이후 다시 세척하였다. 슬라이드를 70% 에탄올 및 96% 에탄올에 잠깐씩 침지한 후, 4분 동안 에오신(Sigma)중에서 염색하였으며, 96% 에탄올중에서 탈수시키고 나서, 100% 에탄올중에서 1분씩 2회 탈수시켰다. 자동화 염색기에서의 염색이 종료된 후, 절편을 자일렌중에서 10초 동안 깨끗이 씻은 후 Entellan과 함께 적재하였다. 평균 종양 면적은 각각의 마우스에 대해 측정된 폐 종양 최대 면적을 포함한다.
전신성: sh-대조군 또는 sh-MOSPD2 렌티 바이러스를 형질도입한 MDA-231 세포 106개를 8주령 암컷 SCID 마우스(C.B-17/IcrHsd-Prkdcscid, Harlan Israel)의 꼬리 정맥에 주입하였다. 4주 후 마우스를 죽였다. 조직병리학적 관찰을 위해 폐를 절제하였다. 도 3a의 결과는, MOSPD2 발현의 침묵은 폐내 전이성 유방암 세포가 존재하게 되는 것을 유의미하게(p=0.023), 즉 50%(전이 면적) 초과하여 억제함을 보여준다.
동소성 : sh-대조군 또는 sh-MOSPD2 렌티 바이러스를 형질도입한 MDA-231 세포 5x106개를 8주령 암컷 SCID 마우스(C.B-17/IcrHsd-Prkdcscid, Harlan Israel)의 유방 지방층에 주입하였다. 10주 후 마우스를 죽였다. 관찰을 위해 동측 서혜부 림프절과 폐를 절제하였다. 거시적 관찰은, sh-대조군 세포를 이식한 마우스로부터 절제된 림프절 대다수가, sh-MOSPD2 처리 세포를 이식한 마우스로부터 절제된 림프절보다 압도적으로 더 컸음을 보여주었다(도 3b). 더욱이, sh-MOSPD2 처리 세포를 이식한 마우스의 폐에서 측정한 전이 평균 면적은 대조군의 경우에 비해 50%를 초과하여 감소하였다(도 3c).
sh-MOSPD2 주입 세포내 MOSPD2 mRNA 침묵의 비율은 "재료 및 방법"에 기술된 바와 같은 Q-PCR에 의해 확정된 바와 같이 약 80%였다.
이러한 결과는, MOSPD2가 유방암 전이에 있어 주된 역할을 담당함을 입증하는 것이다.
실시예 4
다양한 유형의 암에서의 MOSPD2 발현
MOSPD2 발현이 정상 세포에서 암 세포에 이르기까지의 변형과 연관이 있는지를 확정하기 위해, 항 MOSPD2 항체를 사용하여 정상 조직 및 암 조직을 함유하는 슬라이드들을 스크리닝(screening)하였다("재료 및 방법" 섹션 및 국제특허출원 제2017/021857호 참조).
도 4a는 정상 및 유방암 조직의 대표적 염색 결과를 보여준다. 정상 및 유방암 조직은 대조군 IgG 항체로 염색이 되지 않았던 반면에, 항 MOSPD2 항체는 암 조직만을 분명히 염색시켰다. 이와 유사하게, MOSPD2는 정상 방광, 뇌, 결장, 식도, 혀, 신장 및 간 조직에서는 발현되지 않았지만, 이 조직이 암 조직으로 변하였을 때에는 상향조절되었다(도 4b ~ 4e). 이러한 결과는, 다양한 조직에 있어 MOSPD2 발현은 정상 조직에서 암 조직으로의 변형과 연관되어 있음을 암시하는 것이다.
실시예 5
MOSPD2 유전자 녹다운(Gene Knockdown) 및 암 세포 이동
시험관내 : MOSPD2의 지속적인 녹다운을 달성하기 위해, MDA-231 유방암 세포에, CRISPR-CAS9 유전자 편집 시스템을 함유하는 렌티 바이러스 입자를 형질도입하였다("재료 및 방법" 섹션 및 국제특허출원 제2017/021857호 참조). 대조군 또는 MOSPD2 CRISPR-CAS9 렌티 바이러스 입자를 형질도입한 MDA-231 세포를 대상으로 전술된 방법에 의해 이동에 대해 시험하였다. 대조군 또는 MOSPD2 CRISPR-CAS9 렌티 바이러스 입자를 형질도입한 MDA-231 세포(3x105개)를 상부 챔버에 접종한 다음, 이를 2시간 ~ 4시간 동안 항온처리하였다. 그 다음, 하부 구획으로 이동한 세포의 수를 FACS에 의해 확정하였다.
도 5a 및 도 5b는, MDA-231 암 세포에 MOSPD2용 CRISPR-CAS9 시스템이 도입되면, 단백질 발현이 완전히 억제되었고, 그 결과 웰간 검정에서 세포의 이동도 완전히 억제되었음을 보여준다.
CRISPR-CAS9에 의한 MOSPD2의 침묵이 케모카인 수용체 주도 신호전달 현상에 미치는 효과를 시험하기 위해, ERK, AKT 및 FAK의 인산화 수준을 연구하였다("재료 및 방법" 참조). 이동 검정 결과에 따르면, EGF에 노출된 세포에서 CRISPR-CAS9 시스템에 의한 MOSPD2 침묵은 대조군의 경우에 비해 AKT 인산화를 완전히 막았고, ERK 및 FAK의 인산화를 뚜렷이 억제하였다(도 5c의 웨스턴 블럿 결과 참조).
생체내 : CRISPR-대조군 또는 CRISPR-MOSPD2 렌티 바이러스를 형질도입한 MDA-231 세포(106개)를 8주령 암컷 SCID 마우스(C.B-17/IcrHsd-Prkdcscid, Harlan Israel)의 꼬리 정맥에 주입하였다. 그 다음, 3주후에 마우스를 죽였다. 조직병리학적 관찰을 위해 폐를 절제하였다. 도 5d는 CRISPR-CAS9 시스템에 의한 MOSPD2의 침묵이, 폐내 전이성 유방암 세포가 존재하게 되는 것을 95%(전이 면적) 초과하여 유의미하게 억제하였음을 보여준다.
실시예 6
항 MOSPD2 F(ab')2 mAb는 인간 유방암 세포상 내인성 MOSPD2에 특이적으로 결합한다
국제특허출원 제2017/021857호에 기술된 바와 같이, 항 MOSPD2 F(ab')2 mAb를 제조한 다음, A2058 흑색종 및 HepG2 간암 세포주 표면에 발현되는 내인성 MOSPD2와 결합하는지에 대해 시험하였다. 세포를 항 MOSPD2 F(ab')2 mAb로 염색하고 나서, MOSPD2와의 결합에 대해 시험하였다. 도 6a 및 도 6b는 항 MOSPD2 F(ab')2 mAb가 흑색종 및 간암 세포상 내인성 MOSPD2에 특이적으로 결합함을 보여준다.
실시예 7
항 MOSPD2 F(ab')2 mAb는 MDA -231 암 세포의 EGF 유도성 이동을 억제한다
국제특허출원 제2017/021857호에 설명된 바와 같이 웰간 이동으로 MDA-231 암 세포의 EGF 유도성 이동에 대한 항 MOSPD2 F(ab')2 mAb의 효과를 분석하였다. MDA-231 유방암 세포(3x105개)를, 0.5% FCS 함유 RPMI 배지중에서 4시간 ~ 5시간 동안 굶긴 다음, 항 MOSPD2 F(ab')2 mAb와 함께 1시간 동안 항온처리하였다. EGF를 용해하고 나서, QCM 24웰 이동 검정 평판(공극 8 μm)(Corning-Costar, Corning, NY)의 하부 챔버(400 ng/ml)에 넣었는데, 여기에는 10% FCS를 포함하는 RPMI 배지가 담겨있었다. 세포를 상부 챔버에 접종하고 나서, 밤새도록 항온처리한 다음, 하부 챔버로 이동한 세포의 수를 FACS에 의해 확정하였다.
도 7에 보인 바와 같이, 항 MOSPD2 F(ab')2 mAb는 MDA-231 유방암 세포의 EGF 유도성 웰간 이동을 유의미하게 억제하였다.
실시예 8
항 MOSPD2 항체의 에피토프 맵핑
항 MOSPD2 항체가 특이적으로 결합할 수 있는 인간 MOSPD2상 에피토프(들)를 확정하기 위해, 본원에 기술된 바와 같이 N 말단을 바이오틴화한 MOSPD2 단편을, SA 칩 상에 예비 부동화한 스트렙타비딘(SA)을 통해 포착하여, MOSPD2 표면(BIAcore®3000TM 표면 플라스몬 공명(SPR) 시스템, Biacore, Inc., Piscataway NJ)상 적정된 항 MOSPD2 항체의 결합 속도를 측정함으로써, 다양한 인간 MOSPD2 단편에 대한 결합 친화성을 측정하였다. HBS-EP 전개 완충제(10 mM HEPES pH 7.4, 150 mM NaCl, 3 mM EDTA, 0.005% v/v 폴리솔베이트 P20)중에서 BIAcore 검정을 수행하였다. N-바이오틴화 MOSPD2를 0.001 mg/mL 미만의 농도로 HBS-EP 완충제에 희석하고, 가변적 접촉 시간을 적용하여 이를 SA 센서칩 상에 주입함으로써 MOSPD2 표면을 준비하였다. 포착 수준 50 반응 단위(Response Units; RU) 미만에 대응하는 저용량 표면은 고해상도 역학 연구용으로 사용하였던 반면에, 고용량(포착된 MOSPD2 약 800 RU) 표면은 농도 연구, 스크리닝 및 용액 친화성 확정용으로 사용하였다.
항체 G1 Fab를 2배 또는 3배 증분으로 연속 희석하여 1 μM ~ 0.1 nM에 걸친 농도(추산 KD의 0.1배 ~ 10배 목표)로 만듦으로써 역학 데이터를 수득하였다. 시료는 통상 1분 동안 100 μL/분으로 주입하였으며, 해리 시간은 적어도 10분으로 허용하였다. 매 결합 주기 후에는 25% v/v 에탄올중 25 mM NaOH(수 백회의 주기에 걸쳐 관용됨)로 표면을 재생하였다. BIAevaluation 프로그램이 사용되었을 때, 일련의 적정 전체(통상적으로 2회차씩 진행)는 전반적으로 1:1 랑뮈르 결합 모델(1:1 Langmuir binding model)에 부합하였다. 이는 각각의 결합 상호작용에 대해서 결합 및 해리 운동 속도 상수들(각각 Kon 및 Koff)의 고유한 쌍을 되돌려 놓았는데, 이 결합 및 해리 운동 속도 상수들의 비율은 평형 해리 상수를 이룬다(KD = Koff/Kon).
항 MOSPD2 항체는 인간 MOSPD2의 하기 아미노산 영역들(1번 ~ 518번 아미노산 잔기들), 즉 508번 ~ 517번, 501번 ~ 514번, 233번 ~ 241번, 509번 ~ 517번, 212번 ~ 221번, 13번 ~ 24번, 505번 ~ 517번, 505번 ~ 514번, 89번 ~ 100번, 506번 ~ 517번, 233번 ~ 245번, 504번 ~ 514번, 128번 ~ 136번, 218번 ~ 226번, 15번 ~ 24번, 83번 ~ 96번, 42번 ~ 50번, 462번 ~ 474번, 340번 ~ 351번, 504번 ~ 517번, 462번 ~ 470번, 327번 ~ 337번, 21번 ~ 32번, 217번 ~ 226번, 510번 ~ 517번, 178번 ~ 190번, 497번 ~ 509번, 504번 ~ 516번, 64번 ~ 77번, 504번 ~ 515번, 147번 ~ 159번, 503번 ~ 315번, 88번 ~ 97번, 208번 ~ 218번, 178번 ~ 191번, 502번 ~ 515번, 503번 ~ 516번, 497번 ~ 505번, 500번 ~ 509번, 189번 ~ 202번, 189번 ~ 197번, 505번 ~ 516번, 1번 ~ 63번, 82번 ~ 239번, 93번 ~ 234번, 327번 ~ 445번, 327번 ~ 431번, 497번 ~ 517번, 145번 ~ 240번, 145번 ~ 220번, 145번 ~ 200번, 160번 ~ 240번, 160번 ~ 220번, 160번 ~ 200번, 175번 ~ 240번, 175번 ~ 220번, 175번 ~ 200번, 170번 ~ 190번, 178번 ~ 185번, 85번 ~ 140번, 85번 ~ 130번, 90번 ~ 140번, 90번 ~ 130번, 95번 ~ 140번, 95번 ~ 130번, 100번 ~ 130번, 100번 ~ 140번, 110번 ~ 130번, 또는 115번 ~ 127번(이상, 서열 번호 1에 따라 번호를 매김) 중 1개 이상에 특이적으로 결합할 수 있다.
실시예 9
추가적 항 MOSPD2 항체
본원 또는 국제특허출원 제2017/021857호에 기술된 방법에 따라 MOSPD2 에피토프 1개 이상을 인지하는 추가적 항 MOSPD2 항체를 만들었다.
요약하면, 본원 또는 국제특허출원 제2017/021857호에서 MOSPD2 에피토프인 것으로 동정된 MOSPD2의 일부분들을 인간 Fc에 융합한 다음, 고체 지지체상에 부동화하였다. 파아지 입자상에 제시한 HuCAL® 라이브러리(HuCAL PLATINUM® 플랫폼; Bio-Rad AbD Serotec, GmnH)를, 부동화한 항원과 함께 항온처리하였다. 광범위한 세척에 의해 비특이적 항체를 제거하였으며, 환원제를 첨가하여 특이적 항체 파아지를 용리하였다. 항체 DNA를 풀(pool)로서 단리하여, 이.콜라이(E. coli) 발현 벡터에 서브클로닝함으로써, 2가 F(ab')2 mAb를 만들었다. 콜로니를 골라내어 미세역가 평판에서 생육하였다. 배양액을 용해하여, 항체 분자를 방출시킨 다음, 특이적 항원 결합에 대해 ELISA 및 FACS로 스크리닝하였다. 고유한 항체를 발현시킨 후, 1단계 친화성 크로마토그래피로 정제하고 나서, 특이성에 대해 ELISA 및 FACS로 다시 시험하였다.
실시예 10
MOSPD2 발현은 다양한 유형의 암에서 종양 등급과 상관되어 증가한다.
MOSPD2 발현이 종양 진행과 연관되어 있는지를 확정하기 위해, 국제특허출원 제2017/021857호에 기술된 바와 같이 항 MOSPD2 항체를 사용하여 상이한 종양 등급의 암 조직과 정상 조직을 운반하는 슬라이드들을 스크리닝하였다. 염색 진하기에 따라서 MOSPD2의 증량에 대해 점수를 매겼다(점수 범위: 0 ~ 3). 하나의 코어 내에 내부 비균질 염색이 관찰되는 경우, 최고 적용범위를 보이는 영역의 점수를 할당하였다.
도 8a ~ 8f는 유방암과 대조군 조직에서의 대표적 MOSPD2 염색 결과를 보여준다. 정상 인접 조직(NAT)은 음성 대조군으로 사용하였고, 종양 병기로서는, 점점 고조되는 순서로 소엽성상피내암(LCIS), 내관성상피내암(IDIS), 침윤성유관암(IDC), 침윤성소엽암(ILC) 및 전이성침윤유관암(MIDC)을 포함하였다. 대표적 NAT, LCIS 및 IDIS 염색은 MOSPD2에 대해 음성이었던 반면에(염색되지 않았던 반면에), 대표적 IDC, ILC 및 MIDC 염색은 진한 양성 MOSPD2 염색이 달성되었음을 보여주었다.
도 9는 침윤성 및 전이성 유방암에서 MOSPD2 염색 진하기가 증가하였음을 보여준다. NAT내에서는 시료들 중 단지 18%(11개중 2개)만이 염색 진하기 1점을 보였던 반면에, 제자리암 시료(IDIS+LCIS)의 21%(19개중 4개)는 1점 또는 2점으로 점수가 매겨졌다. 그러나 침윤성 및 전이성 조직을 분석한 결과, 이 침윤성 및 전이성 조직은 NAT 및 제자리 암(IDIS+LCIS)에 비하여 점수 2점이 더 자주 보였고, 염색 진하기는 3점까지 증가하였음을 보여주었다. 따라서 ILC, IDC 및 MIDC에 대하여 합한 점수들(2점 및 3점)의 %는 각각 63%(19개중 12개), 77%(65개중 50개) 및 81%(31개중 25개)였다.
결장뿐 아니라 간 조직에 있어서 MOSPD2 발현은 정상 세포에서 암 세포로의 세포 변형과 상관되어 있었다. 도 10a ~ 10d는, 시험한 결장암 시료 67%에서, 그리고 시험한 간세포 암 시료 45%에서 양성 MOSPD2 염색이 달성되었음을 보여준다. 시험한 정상 결장 또는 간 조직에서는 MOSPD2 염색이 검출되지 않았다(0%).
MOSPD2 발현은 또한 악성과 상관되었다. 도 11a ~ 11e는, 종양 등급이 고조됨에 따라 간세포 암에서 MOSPD2 염색은 더 진하게 되었던 반면에, 정상 및 NAT 시료에서 MOSPD2 염색은 음성이었음을 보여준다.
도 12a 및 도 12b는, 악성 간 조직 또는 대조군에서의 MOSPD2 염색의 진하기를 요약한 것이다. 악성 시료에서의 MOSPD2 염색 진하기는, 정상 및 NAT에서와 비교하였을 때 각각 3.2배 또는 4배까지 유의미하게 증가하였다(p≤0.001). 도 12b는 간세포 암의 병기가 달라짐에 따라 MOSPD2 염색의 진하기도 증가함을 보여준다.
실시예 11
항 MOSPD2 /항 CD3 2중 특이적 항체는 고형 종양 유래 세포를 사멸하고, T 세포를 활성화한다.
흑색종의 암 세포주(A2058) 및 자궁경부암의 암 세포주(Hela)를 밤새도록, 10% 소태아혈청(FCS), 페니실린 및 스트렙토마이신 함유 RPMI-1640 배지중 48웰 평판에 접종하였다(4x104개 세포/웰). 1일 후, 인간 T 세포 활성화/증식 키트(Miltenyi Biotec, GmbH Cat. No. 130-091-441)로 점화(priming)한 CD8 효과기 T 세포를, 72시간 동안 도 13a에 명시된 농도만큼의 항 MOSPD2/항 CD3 2중 특이적 항체(BiTE)의 존재하 또는 부재하에 10:1(효과기 세포:T 세포)의 비율로 평판에 첨가하였다. 그 다음, 상청액과 세포를 수집하고 나서, 1,500 rpm으로 5분 동안 회전시킨 후, 시험시까지 동결시켜 두었다.
Duoset 인간 IFN-감마 ELISA 키트(R&D Systems Cat. No. DY-285)를 사용하여 효소 연계 면역흡착 검정법(ELISA)으로 IFN-γ 분비에 대해 상청액을 시험하였다. 트립신-EDTA(0.25%)로 암 세포를 떼어낸 다음, 10% FCS 함유 PBS로 세척하고 나서, FACS 완충제(PBS+2%FCS+0.02% 아지드화나트륨)중에 재현탁하였다. FACS에 의해 각각의 시료를 2분 동안 전개시켜, 생세포 수를 평가하였다. 시료들을 3회씩 전개시켰다.
도 13a는 항 MOSPD2/항 CD3 2중 특이적 항체(BiTE)를 그 농도를 증가시키면서 투여하게 되면, 고형 종양 유래 세포주 생존률의 용량 의존적 감소가 초래됨을 보여준다. 결과를 평균 ± 표준 편차(SD)로 보였다. * P<0.01.
상청액을 대상으로 T 세포에 의해 IFN-γ가 분비되었는지에 대해서도 또한 분석하였다. 시료를 2회씩 전개시켰다.
도 13b 및 도 13c는 BiTE를 그 농도를 증가시키면서 투여하게 되면, HELA 및 A2058 배양액 각각에 첨가하였던 CD8 효과기 T 세포로부터 IFN-γ 방출량의 용량 의존적 증가가 초래됨을 보여준다. N.D = 검출 불가. 결과는 3개의 시료의 평균 ± SD로 보였다.
따라서 BiTE가 존재하면, T 세포는 활성화되었고(IFN-γ 분비에 의해 입증), 이때의 T 세포는 종양 세포의 사멸을 용량 의존적 방식으로 매개하였다.
실시예 12
항 MOSPD2 /항 CD3 2중 특이적 항체는 골수 유래 암 세포를 사멸하고, T 세포를 활성화한다
THP-1 및 U937 골수 유래 암 세포주를, 10% 소태아혈청(FCS), 페니실린 및 스트렙토마이신 함유 RPMI-1640 배지중 48웰 평판에 접종하였다(4x104개 세포/웰). 새로이 채혈한 혈액 시료로부터 인간 범 T 세포 단리 키트(Miltenyi Biotec, GmbH Cat. No. 130-096-535)를 사용하여 T 세포를 단리하였다. T 세포를, 48시간 동안 10 μg/ml의 항 MOSPD2/항 CD3 2중 특이적 항체 (BiTE)의 존재하 또는 부재하에 10:1(효과기 세포:T 세포)의 비율로 평판에 첨가하였다. 그 다음, 상청액과 세포를 수집하고 나서, 1,500 rpm으로 5분 동안 회전시킨 후, 시험시까지 동결시켜 두었다.
Duoset 인간 IFN-감마 ELISA 키트(R&D Systems Cat. No. DY-285)를 사용하여 IFN-γ 분비 여부에 대해 ELISA로 상청액을 시험하였다. 세포를, FACS 완충제중 항 인간 CD3-PE(Thermo Fisher Cat. No. 12-0038) 및 항 인간 CD69-APC(Thermo Fisher Cat. No. 17-0699)로 30분 동안 염색하였다. FACS에 의해 각각의 시료를 2분 동안 전개시켜, 생 암 세포의 수와 활성화된 T 세포의 비율을 평가하였다.
Duoset 인간 IFN-감마 ELISA 키트(R&D Systems Cat. No. DY-285)를 사용하여 효소 연계 면역흡착 검정법(ELISA)으로 IFN-γ 분비 여부에 대해 상청액을 시험하였다. 트립신-EDTA(0.25%)로 암 세포를 떼어낸 다음, 10% FCS 함유 PBS로 세척하고 나서, FACS 완충제(PBS+2%FCS+0.02% 아지드화나트륨)중에 재현탁하였다. 세포를 FACS 완충제중 항 인간 CD3-PE(Thermo fisher cat#12-0038) 및 항 인간 CD69-APC(Thermo fisher cat#17-0699)로 30분 동안 염색하였다. FACS에 의해 각각의 시료중 세포를 2분 동안 전개시켜, 생 암 세포의 수와 활성화된 T 세포의 비율을 평가하였다. FACS에 의해 각각의 시료를 2분 동안 전개시켜, 생 세포의 수를 평가하였다. 시료를 2회씩 전개시켰다.
도 14a는 항 MOSPD2/항 CD3 2중 특이적 항체(BiTE)의 투여는 단핵구 세포주의 생존률 감소를 초래함을 보여준다. ** = P<0.001. 도 14b는 THP-1 및 U937 배양액에 첨가된 T 세포의 CD3 및 CD69에 대한 염색 결과를 보여준다. 도 14c는 BiTE의 투여도 또한 THP-1 및 U937 배양액에 첨가된 T 세포로부터의 IFN-γ 방출량 증가를 초래함을 보여준다. N.D = 검출 불가.
그러므로 BiTE가 존재할 때 T 세포는 활성화되었고(CD3 및 CD69에 대한 염색이 달성되었고, IFN-γ가 분비되었음에 의해 입증), 이때의 T 세포는 종양 세포 사멸을 매개하였다.
실시예 13
항 MOSPD2/항 CD3 2중 특이적 항체는 MDA-231 유방암 세포를 사멸한다.
예비 활성화한 CD8+ T 세포를 웰당 2x105개 세포의 농도로 48웰 평판에 접종한 다음, 1μg/ml 대조군 IgG 항체 또는 항 MOSPD2/항 CD3 2중 특이적 항체의 존재하에 웰당 4x104개 세포 농도만큼의 MDA-231 유방암 세포와 공동 항온처리하였다. 24시간 동안 항온처리한 후, 세포를 세척하여 트립신으로 처리하였다. 그 다음, 세포를 수집하고 나서, FACScalibur를 사용하여 계수하였다. 얻어진 세포 개수를 도 15에 평균 세포 개수 ± 표준 오차(웰 3개를 기반)로서 보였다. ** p<0.005; *** p<0.001. 도 15는 항 MOSPD2/항 CD3 2중 특이적 항체의 투여가 유방암 세포 생존률의 유의미한 감소를 초래하였음을 보여준다.
이 출원에서 언급된 모든 출판물, 특허, 특허출원은 각각의 출판물, 특허 또는 특허출원이 구체적이고 개별적으로 참조에 의해 본 명세서에 포함됨을 나타내는 것과 같은 정도로, 참조에 의해 전체가 본 명세서에 포함된다. 나아가 본 출원에 있어서의 임의의 참고문헌의 인용 또는 특정은 그러한 참고문헌이 본 발명의 선행기술로서 이용 가능하다는 것을 자인하는 것으로서 해석되어서는 안 된다. 식별 표제가 사용되고 있는 한, 그것들은 반드시 한정적이라고 해석되어서는 안 된다.
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Thr 15940 15945 15950 Gly Gly Ala Thr Ala Thr Ala Gly Thr Thr Gly Thr Gly Thr Cys Thr 15955 15960 15965 Cys Cys Cys Cys Ala Thr Gly Gly Gly Gly Gly Thr Thr Thr Ala Ala 15970 15975 15980 Cys Ala Gly Thr Cys Thr Cys Thr Gly Cys Cys Cys Ala Ala Gly Ala 15985 15990 15995 16000 Cys Cys Gly Thr Thr Thr Thr Cys Thr Gly Ala Thr Ala Ala Thr Gly 16005 16010 16015 Gly Cys Thr Gly Cys Ala Gly Ala Ala Ala Thr Gly Gly Ala Ala Cys 16020 16025 16030 Ala Gly Thr Cys Ala Thr Cys Thr Gly Gly Cys Ala Cys Ala Gly Gly 16035 16040 16045 Cys Cys Cys Ala Gly Cys Ala Gly Ala Ala Thr Thr Ala Ala Cys Thr 16050 16055 16060 Cys Ala Gly Thr Thr Thr Thr Gly Gly Ala Ala Ala Gly Ala Ala Gly 16065 16070 16075 16080 Thr Thr Cys Cys Cys Ala Gly Ala Ala Ala Cys Ala Ala Ala Gly Thr 16085 16090 16095 Gly Ala Thr Gly Gly Ala Ala Cys Ala Thr Ala Gly Gly Thr Thr Ala 16100 16105 16110 Ala Gly Ala Thr Gly Cys Cys Ala Thr Ala Cys Thr Gly Thr Thr Gly 16115 16120 16125 Ala Ala Ala Gly Cys Ala Gly Thr Ala Ala Ala Cys Cys Ala Ala Ala 16130 16135 16140 Cys Ala Cys Thr Cys Thr Thr Ala Cys Gly Thr Thr Ala Ala Ala Ala 16145 16150 16155 16160 Gly Ala Cys Ala Ala Thr Gly Cys Thr Thr Thr Cys Ala Ala Thr Ala 16165 16170 16175 Thr Gly Thr Cys Ala Gly Ala Thr Ala Ala Ala Ala Cys Cys Ala Gly 16180 16185 16190 Thr Gly Ala Ala Gly Ala Thr Ala Thr Ala Thr Gly Thr Cys Thr Ala 16195 16200 16205 Cys Ala Ala Thr Ala Cys Ala Gly Thr Thr Ala Ala Ala Gly Ala Ala 16210 16215 16220 Gly Thr Gly Gly Thr Gly Cys Cys Gly Gly Gly Thr Ala Gly Gly Ala 16225 16230 16235 16240 Ala Cys Cys Ala Cys Gly Gly Thr Thr Cys Cys Thr Thr Cys Gly Thr 16245 16250 16255 Cys Cys Ala Thr Thr Ala Gly Thr Thr Gly Gly Ala Ala Ala Ala Ala 16260 16265 16270 Gly Thr Ala Ala Cys Ala Gly Ala Cys Cys Thr Ala Ala Ala Ala Cys 16275 16280 16285 Thr Cys Thr Ala Cys Cys Ala Ala Gly Cys Thr Ala Cys Thr Ala Ala 16290 16295 16300 Ala Ala Ala Cys Ala Thr Thr Gly Cys Ala Cys Ala Thr Cys Thr Gly 16305 16310 16315 16320 Thr Gly Cys Thr Thr Cys Cys Thr Ala Ala Ala Ala Gly Gly Ala Ala 16325 16330 16335 Ala Thr Ala Thr Gly Cys Ala Gly Cys Ala Cys Gly Thr Gly Gly Ala 16340 16345 16350 Gly Gly Gly Gly Ala Ala Cys Ala Cys Ala Thr Ala Cys Ala Thr Gly 16355 16360 16365 Thr Cys Thr Thr Gly Ala Ala Ala Ala Thr Ala Ala Ala Cys Thr Gly 16370 16375 16380 Cys Thr Ala Gly Ala Ala Thr Ala Ala Ala Gly Ala Ala Ala Thr Gly 16385 16390 16395 16400 Cys Thr Gly Gly Ala Gly Ala Ala Ala Thr Thr Gly Ala Thr Thr Ala 16405 16410 16415 Thr Ala Ala Gly Ala Gly Ala Cys Thr Ala Thr Ala Gly Cys Thr Ala 16420 16425 16430 Thr Thr Thr Ala Gly Thr Ala Ala Ala Gly Thr Ala Ala Gly Thr Ala 16435 16440 16445 Ala Ala Gly Gly Cys Ala Thr Ala Thr Cys Cys Ala Thr Thr Gly Thr 16450 16455 16460 Gly Thr Ala Ala Ala Thr Thr Ala Ala Thr Ala Gly Thr Thr Thr Ala 16465 16470 16475 16480 Ala Ala Thr Ala Thr Ala Ala Thr Thr Thr Ala Thr Thr Thr Thr Thr 16485 16490 16495 Thr Cys Cys Thr Thr Thr Thr Gly Ala Thr Cys Thr Gly Ala Ala Thr 16500 16505 16510 Ala Cys Thr Thr Thr Thr Ala Ala Ala Gly Cys Thr Thr Ala Ala Gly 16515 16520 16525 Thr Thr Thr Thr Ala Thr Cys Gly Thr Gly Thr Ala Ala Ala Thr Ala 16530 16535 16540 Cys Ala Thr Thr Ala Gly Cys Thr Ala Ala Ala Cys Thr Gly Ala Ala 16545 16550 16555 16560 Ala Ala Gly Thr Ala Thr Ala Ala Gly Thr Ala Ala Cys Ala Thr Gly 16565 16570 16575 Cys Thr Thr Thr Gly Thr Thr Gly Cys Ala Gly Cys Cys Ala Ala Ala 16580 16585 16590 Ala Ala Ala Thr Gly Thr Ala Ala Thr Cys Thr Gly Cys Thr Thr Thr 16595 16600 16605 Thr Thr Thr Ala Thr Gly Ala Cys Ala Gly Ala Ala Thr Thr Ala Thr 16610 16615 16620 Thr Ala Thr Ala Gly Cys Thr Gly Ala Gly Cys Thr Gly Ala Cys Thr 16625 16630 16635 16640 Thr Ala Cys Thr Ala Gly Cys Thr Thr Thr Thr Cys Thr Ala Thr Ala 16645 16650 16655 Cys Thr Ala Thr Gly Thr Ala Thr Ala Thr Ala Gly Ala Ala Gly Ala 16660 16665 16670 Ala Cys Ala Thr Gly Thr Ala Thr Ala Thr Thr Gly Ala Gly Ala Ala 16675 16680 16685 Ala Gly Ala Ala Ala Ala Cys Ala Thr Ala Cys Thr Thr Ala Thr Ala 16690 16695 16700 Thr Ala Gly Ala Gly Gly Ala Ala Thr Thr Thr Ala Thr Gly Thr Ala 16705 16710 16715 16720 Ala Cys Cys Ala Thr Gly Ala Cys Thr Thr Thr Gly Thr Ala Ala Thr 16725 16730 16735 Thr Thr Thr Gly Ala Gly Ala Ala Thr Thr Cys Cys Thr Cys Cys Cys 16740 16745 16750 Ala Gly Thr Gly Ala Thr Gly Gly Thr Cys Ala Gly Thr Ala Thr Thr 16755 16760 16765 Cys Thr Thr Thr Thr Gly Gly Ala Ala Thr Gly Thr Ala Ala Ala Cys 16770 16775 16780 Cys Gly Ala Thr Thr Thr Ala Ala Thr Gly Cys Cys Ala Ala Ala Cys 16785 16790 16795 16800 Cys Ala Cys Cys Thr Thr Ala Ala Cys Cys Thr Thr Thr Gly Thr Thr 16805 16810 16815 Thr Cys Thr Cys Ala Gly Thr Gly Thr Thr Cys Cys Thr Thr Ala Ala 16820 16825 16830 Cys Ala Gly Cys Cys Thr Gly Cys Cys Thr Thr Thr Thr Ala Thr Thr 16835 16840 16845 Ala Ala Thr Cys Thr Cys Ala Gly Gly Cys Thr Thr Thr Thr Thr Thr 16850 16855 16860 Ala Thr Gly Ala Ala Cys Ala Cys Thr Cys Thr Cys Ala Thr Thr Thr 16865 16870 16875 16880 Cys Ala Gly Thr Ala Gly Ala Ala Thr Thr Thr Gly Gly Ala Ala Ala 16885 16890 16895 Ala Cys Thr Ala Ala Gly Cys Gly Thr Gly Gly Thr Thr Gly Gly Ala 16900 16905 16910 Ala Thr Thr Thr Cys Thr Thr Thr Gly Ala Ala Thr Thr Cys Thr Gly 16915 16920 16925 Thr Thr Ala Gly Thr Ala Ala Thr Gly Cys Cys Cys Ala Ala Ala Ala 16930 16935 16940 Gly Ala Ala Ala Ala Gly Thr Cys Thr Cys Ala Ala Gly Cys Ala Gly 16945 16950 16955 16960 Thr Cys Cys Cys Cys Cys Thr Ala Thr Cys Cys Ala Gly Thr Cys Ala 16965 16970 16975 Thr Thr Thr Thr Thr Ala Thr Gly Gly Ala Gly Thr Thr Thr Cys Ala 16980 16985 16990 Thr Gly Thr Thr Gly Thr Cys Cys Ala Cys Thr Ala Thr Ala Gly Cys 16995 17000 17005 Thr Gly Gly Ala Cys Ala Cys Thr Gly Ala Ala Cys Cys Thr Thr Thr 17010 17015 17020 Thr Gly Cys Cys Thr Ala Ala Thr Thr Thr Ala Thr Thr Ala Thr Ala 17025 17030 17035 17040 Ala Ala Gly Gly Cys Cys Thr Gly Ala Cys Cys Cys Thr Cys Thr Ala 17045 17050 17055 Thr Thr Gly Thr Cys Cys Cys Ala Thr Cys Thr Thr Cys Ala Cys Cys 17060 17065 17070 Cys Cys Cys Ala Thr Thr Cys Cys Ala Gly Ala Gly Cys Ala Gly Ala 17075 17080 17085 Gly Gly Ala Gly Thr Cys Thr Cys Thr Gly Thr Gly Gly Ala Cys Cys 17090 17095 17100 Ala Thr Gly Ala Ala Thr Thr Gly Cys Ala Cys Thr Gly Thr Cys Thr 17105 17110 17115 17120 Cys Cys Cys Thr Cys Cys Thr Cys Ala Thr Thr Thr Cys Thr Ala Ala 17125 17130 17135 Ala Thr Gly Ala Ala Ala Gly Gly Thr Ala Thr Thr Ala Gly Ala Thr 17140 17145 17150 Ala Thr Ala Ala Ala Thr Thr Thr Thr Thr Thr Thr Gly Ala Ala Ala 17155 17160 17165 Gly Gly Thr Thr Ala Gly Thr Thr Gly Thr Thr Thr Gly Ala Gly Ala 17170 17175 17180 Thr Gly Cys Thr Ala Ala Gly Cys Ala Gly Gly Ala Thr Ala Ala Thr 17185 17190 17195 17200 Ala Ala Ala Thr Thr Thr Ala Gly Ala Thr Thr Thr Thr Ala Ala Ala 17205 17210 17215 Ala Thr Gly Thr Thr Cys Cys Cys Thr Gly Thr Ala Ala Ala Ala Gly 17220 17225 17230 Thr Cys Ala Gly Cys Cys Cys Ala Thr Gly Ala Cys Ala Ala Gly Gly 17235 17240 17245 Ala Ala Ala Thr Thr Thr Ala Cys Ala Ala Ala Ala Thr Ala Cys Thr 17250 17255 17260 Ala Gly Ala Gly Thr Ala Thr Cys Thr Ala Gly Ala Ala Gly Gly Gly 17265 17270 17275 17280 Thr Gly Ala Ala Ala Ala Cys Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala Ala 17285 17290 17295 Thr Ala Ala Ala Ala Ala Gly Ala Ala Ala Cys Ala Cys Ala Gly Ala 17300 17305 17310 Cys Gly Cys Cys Cys Ala Gly Gly Thr Gly Thr Cys Ala Gly Cys Thr 17315 17320 17325 Cys Thr Cys Cys Gly Thr Thr Thr Ala Ala Ala Gly Ala Ala Thr Gly 17330 17335 17340 Ala Ala Ala Ala Ala Thr Gly Thr Ala Ala Cys Thr Cys Ala Thr Gly 17345 17350 17355 17360 Ala Thr Gly Ala Thr Cys Thr Gly Thr Gly Ala Ala Ala Cys Cys Thr 17365 17370 17375 Thr Cys Ala Ala Ala Cys Thr Ala Gly Gly Ala Cys Cys Ala Ala Thr 17380 17385 17390 Thr Gly Ala Cys Thr Thr Ala Cys Thr Thr Gly Ala Thr Ala Thr Thr 17395 17400 17405 Cys Thr Gly Cys Cys Thr Thr Thr Gly Ala Thr Ala Thr Gly Gly Thr 17410 17415 17420 Ala Gly Thr Ala Cys Cys Cys Ala Cys Cys Cys Gly Gly Thr Ala Thr 17425 17430 17435 17440 Thr Cys Cys Thr Ala Ala Ala Ala Thr Cys Cys Thr Ala Ala Ala Ala 17445 17450 17455 Ala Gly Ala Thr Ala Cys Ala Cys Cys Thr Thr Gly Cys Ala Gly Thr 17460 17465 17470 Ala Gly Cys Ala Gly Ala Gly Gly Cys Ala Ala Thr Gly Ala Cys Ala 17475 17480 17485 Thr Gly Ala Gly Thr Thr Thr Gly Thr Thr Thr Thr Cys Thr Cys Ala 17490 17495 17500 Thr Thr Ala Ala Thr Ala Thr Gly Ala Cys Cys Ala Gly Thr Thr Thr 17505 17510 17515 17520 Gly Gly Gly Thr Cys Thr Ala Thr Gly Thr Thr Gly Gly Thr Thr Cys 17525 17530 17535 Ala Cys Ala Thr Gly Thr Ala Cys Ala Thr Cys Thr Ala Cys Thr Thr 17540 17545 17550 Thr Ala Thr Ala Thr Gly Ala Ala Ala Gly Ala Ala Ala Ala Ala Ala 17555 17560 17565 Cys Ala Gly Thr Thr Gly Thr Cys Thr Gly Cys Cys Thr Gly Thr Ala 17570 17575 17580 Ala Ala Ala Thr Gly Thr Thr Gly Ala Gly Thr Thr Thr Cys Gly Ala 17585 17590 17595 17600 Thr Thr Gly Ala Gly Cys Cys Ala Thr Gly Thr Thr Thr Gly Gly Ala 17605 17610 17615 Gly Ala Thr Thr Thr Thr Ala Thr Thr Ala Cys Thr Ala Thr Thr Cys 17620 17625 17630 Thr Gly Ala Ala Gly Gly Gly Thr Ala Gly Thr Gly Thr Thr Gly Thr 17635 17640 17645 Thr Gly Gly Thr Thr Thr Thr Cys Ala Thr Cys Thr Thr Cys Ala Ala 17650 17655 17660 Gly Ala Ala Gly Thr Thr Gly Ala Thr Thr Cys Cys Ala Ala Ala Ala 17665 17670 17675 17680 Cys Thr Gly Ala Gly Thr Thr Ala Thr Gly Ala Ala Gly Ala Ala Thr 17685 17690 17695 Gly Ala Thr Ala Thr Ala Ala Cys Ala Gly Thr Thr Cys Cys Thr Thr 17700 17705 17710 Cys Ala Ala Ala Ala Thr Thr Gly Gly Cys Cys Thr Ala Gly Gly Ala 17715 17720 17725 Ala Ala Thr Ala Ala Ala Ala Cys Cys Thr Thr Ala Ala Ala Ala Gly 17730 17735 17740 Gly Ala Cys Ala Cys Thr Gly Gly Thr Gly Thr Gly Cys Thr Ala Cys 17745 17750 17755 17760 Thr Thr Thr Gly Thr Cys Thr Thr Ala Ala Thr Thr Thr Gly Gly Gly 17765 17770 17775 Cys Thr Thr Thr Thr Cys Thr Gly Thr Thr Thr Cys Ala Gly Thr Thr 17780 17785 17790 Thr Gly Cys Cys Ala Cys Cys Thr Cys Cys Ala Gly Cys Thr Gly Thr 17795 17800 17805 Gly Ala Ala Ala Thr Gly Gly Ala Cys Thr Gly Cys Ala Gly Thr Cys 17810 17815 17820 Cys Ala Cys Cys Cys Thr Ala Ala Gly Thr Ala Cys Thr Gly Thr Gly 17825 17830 17835 17840 Cys Ala Cys Ala Gly Thr Ala Thr Cys Thr Cys Cys Cys Thr Gly Thr 17845 17850 17855 Gly Thr Gly Thr Gly Thr Gly Cys Ala Cys Ala Gly Thr Gly Gly Cys 17860 17865 17870 Thr Thr Cys Cys Cys Cys Thr Thr Ala Cys Ala Thr Gly Gly Thr Ala 17875 17880 17885 Gly Ala Thr Thr Thr Thr Thr Gly Gly Cys Cys Thr Thr Ala Ala Thr 17890 17895 17900 Ala Thr Ala Ala Thr Cys Thr Ala Ala Thr Cys Cys Cys Ala Ala Ala 17905 17910 17915 17920 Gly Thr Ala Gly Thr Thr Gly Thr Gly Thr Ala Thr Gly Thr Thr Thr 17925 17930 17935 Thr Cys Thr Gly Thr Thr Cys Cys Thr Thr Gly Gly Cys Ala Ala Ala 17940 17945 17950 Thr Ala Ala Ala Thr Gly Ala Ala Gly Ala Ala Ala Thr Ala Ala Thr 17955 17960 17965 Thr Ala Gly Cys Cys Ala Ala Gly Ala Thr Thr Gly Ala Ala Ala Ala 17970 17975 17980 Thr Gly Thr Ala Thr Thr Gly Thr Cys Cys Thr Ala Ala Cys Gly Gly 17985 17990 17995 18000 Thr Gly Thr Cys Cys Cys Thr Thr Thr Ala Ala Thr Gly Thr Thr Thr 18005 18010 18015 Cys Ala Thr Ala Thr Gly Ala Ala Ala Ala Ala Thr Thr Ala Thr Gly 18020 18025 18030 Thr Thr Gly Ala Cys Cys Cys Ala Cys Thr Ala Ala Ala Ala Thr Ala 18035 18040 18045 Thr Cys Cys Thr Thr Gly Cys Thr Cys Ala Ala Thr Gly Thr Cys Thr 18050 18055 18060 Gly Gly Thr Cys Ala Gly Thr Thr Gly Ala Ala Thr Thr Thr Ala Ala 18065 18070 18075 18080 Thr Ala Ala Cys Ala Thr Ala Thr Cys Thr Thr Gly Thr Thr Ala Ala 18085 18090 18095 Thr Gly Thr Thr Thr Gly Thr Gly Thr Gly Thr Cys Thr Ala Thr Thr 18100 18105 18110 Ala Ala Ala Thr Gly Thr Gly Ala Cys Thr Ala Ala Gly Cys Ala Gly 18115 18120 18125 Gly Ala Thr Thr Ala Cys Thr Gly Ala Ala Ala Ala Thr Thr Cys Ala 18130 18135 18140 Cys Thr Ala Thr Ala Ala Ala Ala Thr Cys Ala Ala Ala Gly Gly Cys 18145 18150 18155 18160 Ala Thr Cys Thr Ala Ala Ala Cys Gly Thr Thr Thr Gly Thr Ala Cys 18165 18170 18175 Thr Thr Gly Thr Cys Thr Thr Gly Ala Thr Thr Ala Ala Thr Cys Ala 18180 18185 18190 Thr Ala Thr Ala Thr Thr Thr Ala Cys Ala Cys Thr Thr Gly Ala Thr 18195 18200 18205 Thr Thr Thr Thr Thr Thr Cys Thr Gly Thr Cys Thr Thr Cys Ala Thr 18210 18215 18220 Thr Thr Gly Thr Thr Thr Thr Thr Ala Thr Thr Thr Ala Ala Thr Cys 18225 18230 18235 18240 Ala Thr Ala Ala Thr Thr Gly Cys Ala Thr Gly Ala Thr Thr Thr Thr 18245 18250 18255 Thr Thr Thr Gly Gly Thr Ala Cys Thr Cys Thr Ala Ala Thr Cys Ala 18260 18265 18270 Gly Thr Ala Ala Thr Thr Thr Thr Ala Thr Thr Thr Thr Thr Ala Ala 18275 18280 18285 Thr Cys Ala Thr Gly Thr Cys Ala Thr Thr Ala Cys Cys Thr Ala Thr 18290 18295 18300 Thr Cys Ala Thr Gly Ala Cys Cys Ala Ala Ala Thr Thr Ala Cys Cys 18305 18310 18315 18320 Ala Ala Gly Gly Ala Ala Cys Cys Ala Ala Cys Ala Thr Thr Thr Ala 18325 18330 18335 Gly Ala Thr Thr Thr Ala Gly Ala Thr Ala Thr Thr Thr Gly Thr Thr 18340 18345 18350 Thr Thr Cys Ala Cys Thr Thr Ala Gly Gly Ala Ala Thr Gly Gly Ala 18355 18360 18365 Ala Ala Thr Thr Ala Ala Thr Ala Gly Ala Thr Thr Thr Thr Cys Cys 18370 18375 18380 Ala Thr Gly Ala Ala Ala Gly Cys Ala Thr Thr Ala Gly Thr Gly Ala 18385 18390 18395 18400 Ala Ala Thr Ala Thr Cys Ala Thr Thr Ala Cys Cys Thr Thr Gly Ala 18405 18410 18415 Thr Cys Thr Gly Cys Ala Ala Gly Thr Ala Gly Cys Cys Thr Ala Ala 18420 18425 18430 Ala Ala Ala Thr Gly Cys Gly Ala Thr Thr Gly Cys Thr Gly Gly Thr 18435 18440 18445 Ala Ala Ala Cys Cys Thr Gly Gly Cys Cys Thr Cys Ala Ala Ala Thr 18450 18455 18460 Thr Thr Cys Ala Thr Ala Cys Thr Ala Cys Cys Ala Thr Ala Ala Cys 18465 18470 18475 18480 Thr Gly Thr Thr Thr Thr Thr Ala Thr Ala Thr Ala Thr Thr Gly Cys 18485 18490 18495 Cys Ala Cys Thr Ala Ala Thr Thr Thr Thr Gly Ala Cys Thr Gly Gly 18500 18505 18510 Ala Thr Thr Thr Ala Ala Thr Ala Gly Cys Ala Cys Thr Thr Thr Ala 18515 18520 18525 Thr Thr Gly Thr Ala Cys Ala Ala Cys Thr Ala Cys Ala Ala Ala Ala 18530 18535 18540 Ala Ala Ala Ala Ala Thr Ala Thr Ala Thr Thr Cys Cys Thr Ala Gly 18545 18550 18555 18560 Ala Ala Thr Thr Gly Thr Thr Gly Cys Cys Ala Gly Thr Gly Thr Ala 18565 18570 18575 Ala

Claims (53)

  1. (i) MOSPD2에 대한 항원 결합 도메인 1개 이상과, (ii) T 세포 또는 NK 세포 특이적 수용체 분자에 대한 항원 결합 도메인 1개 이상을 포함하는, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  2. 제1 항에 있어서, 상기 T 세포 또는 NK 세포 특이적 수용체 분자는 CD3, T 세포 수용체(TCR), CD28, CD16, NKG2D, Ox40, 4-1BB, CD2, CD5 또는 CD95인, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  3. 제1 항 또는 제2 항에 있어서, 상기 MOSPD2에 대한 항원 결합 도메인 1개 이상은 항 MOSPD2 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv, sdFv 단편들, 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역, 상보성 결정 영역(CDR), 중쇄 CDR1, 중쇄 CDR2, 중쇄 CDR3, 경쇄 CDR1, 경쇄 CDR2 또는 경쇄 CDR3인, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  4. 제1 항 또는 제3 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 T 세포 또는 NK 세포 특이적 수용체 분자는 CD3이고, 상기 CD3에 대한 항원 결합 도메인 1개 이상은 항 CD3 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv, sdFv 단편들, 중쇄 가변 영역, 경쇄 가변 영역, CDR, 중쇄 CDR1, 중쇄 CDR2, 중쇄 CDR3, 경쇄 CDR1, 경쇄 CDR2 또는 경쇄 CDR3인, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  5. 제1 항 내지 제4 항 중 어느 한 항에 있어서, 이하의 항원 결합 도메인들, 즉
    (i) 항 MOSPD2 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 중쇄 가변 영역; 및
    (ii) 항 MOSPD2 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 경쇄 가변 영역
    중 1개 이상을 포함하는, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  6. 제1 항 내지 제5 항 중 어느 한 항에 있어서, 이하의 항원 결합 도메인들, 즉
    (i) 항 CD3 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 중쇄 가변 영역; 및
    (ii) 항 CD3 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 경쇄 가변 영역
    중 1개 이상을 포함하는, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  7. 제1 항 내지 제6 항 중 어느 한 항에 있어서, 이하의 항원 결합 도메인들, 즉
    (i) 항 MOSPD2 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 중쇄 가변 영역;
    (ii) 항 MOSPD2 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 경쇄 가변 영역;
    (iii) 항 CD3 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 중쇄 가변 영역; 및
    (iv) 항 CD3 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 경쇄 가변 영역
    을 포함하는, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  8. 제1 항 내지 제7 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항원 결합 도메인들 중 1개 이상은 펩티드 링커에 의해 연결되어 있는, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  9. 제1 항 내지 제8 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항원 결합 도메인 적어도 1개는 인간의 것인, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  10. 제1 항 내지 제8 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항원 결합 도메인 적어도 1개는 인간화된 것인, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  11. 제1 항 내지 제10 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 단일 사슬 폴리펩티드인, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  12. 제1 항 내지 제11 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편의 분자량은 약 60,000 달톤 이하인, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  13. 제1 항 내지 제12 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 2중 특이적 항체는 나노바디, 다이아바디, 듀오바디, 크로스맙, 2가 항체, 2중 특이적 T 세포 결합체(BiTE), 2중 친화성 재표적화(DART), 3중체, 미니항체, TriBi 미니바디, 인트라바디 또는 쿼드로마인, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  14. 제1 항 내지 제13 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편은 평형 해리 상수(KD) 약 10-6 M 내지 약 10-12 M로 MOSPD2 및/또는 CD3에 특이적으로 결합하는, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  15. 제1 항 내지 제14 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 MOSPD2에 대한 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 항원 결합 도메인 1개 이상은 서열 번호 1 ~ 4 또는 이의 기능성 변이체중 1개 이상에 특이적으로 결합하는, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  16. 제1 항 내지 제15 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 MOSPD2에 대한 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 항원 결합 도메인 1개 이상은 서열 번호 5 ~ 8 또는 이의 기능성 변이체중 1개 이상에 의해 암호화되는 폴리펩티드에 특이적으로 결합하는, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  17. 제1 항 내지 제16 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 MOSPD2에 대한 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 항원 결합 도메인 1개 이상은 약 10-6 M 내지 약 10-12 M의 KD로 MOSPD2에 특이적으로 결합하는, 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편.
  18. 제1 항 내지 제17 항 중 어느 한 항에 의한 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편과, 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약학 조성물.
  19. 제18 항에 있어서, 전신 투여에 적합한 약학 조성물.
  20. 제18 항에 있어서, 국소 투여에 적합한 약학 조성물.
  21. 제18 항에 있어서, 경구 투여에 적합한 약학 조성물.
  22. 제18 항에 있어서, 비강 투여에 적합한 약학 조성물.
  23. 제18 항에 있어서, 복막내 투여에 적합한 약학 조성물.
  24. 제18 항에 있어서, 종양내 투여에 적합한 약학 조성물.
  25. 제18 항에 있어서, 정맥내 투여에 적합한 약학 조성물.
  26. 제18 항에 있어서, 근육내 투여에 적합한 약학 조성물.
  27. 제18 항에 있어서, 피하 투여에 적합한 약학 조성물.
  28. 제1 항 내지 제17 항 중 어느 한 항에 의한 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 제18 항 내지 제27 항 중 어느 한 항에 의한 약학 조성물을, 암을 치료 또는 예방하는데 유효한 양으로 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암을 치료 또는 예방하는 방법.
  29. 제1 항 내지 제17 항 중 어느 한 항에 의한 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 제18 항 내지 제27 항 중 어느 한 항에 의한 약학 조성물을, 암의 전이를 치료 또는 예방하는데 유효한 양으로 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암의 전이를 치료 또는 예방하는 방법.
  30. 제28 항 또는 제29 항에 있어서, 항암 약물 유효량만큼을 대상체에 투여하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  31. 제30 항에 있어서, 상기 항암 약물은 아비라테론 아세트산염, 아비트렉세이트(메토트렉세이트), 아브락산(파클리탁셀 알부민 안정화 나노입자 제제), ABVD, ABVE, ABVE-PC, AC, AC-T, 애드세트리스(브렌툭시맙 베도틴), ADE, 아도-트라스투주맙 엠탄신, 아드리아마이신(독소루비신 염화수소산염), 아드루실(플루오로우라실), 아파티닙 디말레이트, 아피니토(에버롤리무스), 아킨지오(네투피탄트 및 팔로노세트론 염화수소산염), 알다라(이미퀴모드), 알데스류킨, 알렘투주맙, 알림타(페메트렉시드 2나트륨), 알록시(팔로노세트론 염화수소산염), 암보클로린(클로람부실), 암보클로린(클로람부실), 아미노레불린산, 아나스트로졸, 아프레피탄트, 아레디아(파미드로네이트 2나트륨), 아리미덱스(아나스트로졸), 아로마신(엑세메스탄), 어래논(넬라라빈), 삼산화비소, 아르제라(오파투무맙), 아스파라기나아제 어위니아 크리산테미, 아바스틴(베바시주맙), 엑시티닙, 아자시티딘, BEACOPP, 베세넘(카무스틴), 벨레오닥(벨리노스타트), 벨리노스타트, 벤다무스틴 염화수소산염, BEP, 베바시주맙, 벡사로텐, 벡사(토시투모맙 및 I131 요오드 토시투모맙), 비칼루타미드, BiCNU(카무스틴), 블레오마이신, 블리나투모맙, 블린사이토(블리나투모맙), 보르테조밉, 보술리프(보수티닙), 보수티닙, 브렌툭시맙 베도틴, 부설판, 부설펙스(부설판), 카바지탁셀, 카보잔티닙-S-말레이트, CAF, 캄파트(알렘투주맙), 캄프토사르(이리노테칸 염화수소산염), 카페시타빈, CAPOX, 카보플라틴, 카보플라틴-탁솔, 카필조밉, 카무브리스(카무스틴), 카무스틴, 카무스틴 임플란트, 카소덱스(비칼루타미드), CeeNU(로무스틴), 세리티닙, 세루비딘(도노루비신 염화수소산염), 서바릭스(재조합 HPV 2가 백신), 세툭시맙, 클로람부실, 클로람부실-프레드니손, CHOP, 시스플라틴, 클라펜(사이클로포스파미드), 클로파라빈, CMF, 코메트리크(카보잔티닙-S-말레이트), COPP, COPP-ABV, 코스메겐(닥티노마이신), 크리조티닙, CVP, 사이클로포스파미드, 사이포스(Cyfos)(이포스파미드), 사이람자(라무시루맙), 시타라빈, 시타라빈, 리포조말, 싸이토사-U(시타라빈), 싸이톡산(사이클로포스파미드), 다브라페닙, 다카바진, 다코젠(데시타빈), 닥티노마이신, 다사티닙, 도노루비신 염화수소산염, 데시타빈, 데가렐릭스, 데니루킨 디프티톡스, 데노수맙, 데포Cyt(리포좀 시타라빈), 데포폼(리포좀 시타라빈), 덱스라족산 염화수소산염, 디누툭시맙, 도세탁셀, 독실(독소루비신 염화수소산염 리포좀), 독소루비신 염화수소산염, 독소루비신 염화수소산염 리포좀, 독스-SL(독소루비신 염화수소산염 리포좀), DTIC-돔(다카바진), 에퓨덱스(플루오로우라실), 엘리텍(라스부리카제), 엘렌스(에피루비신 염화수소산염), 엘록사틴(옥살리플라틴), 엘트롬보팍 올라민, 에멘드(아프레피탄트), 엔잘루타미드, 에피루비신 염화수소산염, EPOCH, 얼비툭스(세툭시맙), 에리불린 메실산염, 에리벳지(비스모데집), 엘로티닙 염화수소산염, 에르위나제(아스파라기나아제 어위니아 크리산테미), 에토포포스(에토포시드 인산염), 에토포시드, 에토포시드 인산염, 에바세트(독소루비신 염화수소산염 리포좀), 에버롤리무스, 에비스타(랄록시펜 염화수소산염), 엑세메스탄, 파레스톤(토레미펜), 파리닥(파노비노스탓), 파슬로덱스(풀베스트란트), FEC, 페마라(레트로졸), 필그라스팀, 플루다라(플루다라빈 인산염), 플루다라빈 인산염, 플루오로플렉스(플루오로우라실), 플루오로우라실, 폴렉스(메토트렉세이트), 폴렉스 PFS(메토트렉세이트), 폴피리, 폴피리-베바시주맙, 폴피리-세툭시맙, 폴피리녹스, 폴플록스, 폴로틴(프랄라트렉세이트), FU-LV, 풀베스트란트, 가다실(재조합 HPV 4가 백신), 가다실 9(재조합 HPV 9가 백신), 가싸이바(오비누투주맙), 게피티닙, 겜시타빈 염화수소산염, 겜시타빈-시스플라틴, 겜시타빈-옥살리플라핀, 겜투주맙 오조가미신, 겜자(겜시타빈 염화수소산염), 길로트리프(아파티닙 디말리에이트), 글리벡(이마티닙 메실산염), 글리아델(카무스틴 임플란트), 글리아델 웨이퍼(카무스틴 임플란트), 글루카피다제, 고세렐린 아세트산염, 할라벤(에리불린 에실산염), 허셉틴(트라스투주맙), HPV 2가 백신(재조합체), HPV 9가 백신(재조합체), HPV 4가 백신(재조합체), 하이캄틴(토?j칸 염화수소산염), 하이퍼-CVAD, 입랜스(팔보시클립), 이브리투모맙 티우세탄, 이브루티닙, ICE, 아이클루시그(포나티닙 염화수소산염), 이다마이신(이다루비신 염화수소산염), 이다루비신 염화수소산염, 이델라리십, 이펙스(이포스파미드), 이포스파미드, 이포스파미드(이포스파미드), 이마티닙 메실산염, 임브루비카(이브루티닙), 이미퀴모드, 인리타(엑시티닙), 인트론 A(재조합 인터페론 알파-2b), 131번 요오드 토시투모맙 및 토시투모맙, 이필리무맙, 이레사(게피티닙), 이리노테칸 염화수소산염, 이스토닥스(로미뎁신), 익사베필론, 익셈프라(익사베필론), 자카피(룩솔리티닙 인산염), 제브타나(카바지탁셀), 캐싸일라(아도-트라스투주맙 엠탄신), 케옥시펜(랄록시펜 염화수소산염), 케피반스(팔리페르민), 키트루다(펨브롤리주맙), 키프롤리스(카필조밉), 란레오티드 아세트산염, 라파티닙 디토실산염, 레날리도마이드, 렌바티닙 메실산염, 렌비마(렌바티닙 메실산염), 레트로졸, 류코보린 칼슘, 류케란(클로람부실), 루프롤라이드 아세트산염, 레불란(아미노레불린산), 린폴리진(클로람부실), 리포독스(독소루비신 염화수소산염 리포좀), 리포좀 시타라빈, 로무스틴, 루프론(루프롤라이드 아세트산염), 루프론 데포(루프롤라이드 아세트산염), 루프론 데포-페드(루프롤라이드 아세트산염), 루프론 데포-3개월(루프롤라이드 아세트산염), 루프론 데포-4개월(루프롤라이드 아세트산염), 린파자(올라파립), 마키보(빈크리스틴 황산염 리포좀), 마추란(프로카바진 염화수소산염), 메클로레타민 염화수소산염, 메가스(메게스트롤 아세트산염), 메게스트롤 아세트산염, 메키니스트(트라베티닙), 머캅토퓨린, 메스나, 메스넥스(메스나), 메타졸라스톤(테모졸로미드), 메토트렉세이트, 메토트렉세이트 LPF(메토트렉세이트), 멕세이트(메토트렉세이트), 멕세이트-AQ, 미토마이신 C, 미토잔트론 염화수소산염, 미토자이트렉스(미토마이신 C), MOPP, 모조빌(플레릭사포), 머스타젠(메클로레타민 염화수소산염), 뮤타마이신(미토마이신 C), 마일레란(부설판), 마이로사르(아바시티딘), 마이로타그(겜투주맙 오조가마이신), 나노입자 파클리탁셀(파클리탁셀 알부민 안정화 나노입자 제제), 나벨빈(비노렐빈 주석산염), 넬라라빈, 네오사르(사이클로포스파미드), 네투피탄트 및 팔로노세트론 염화수소산염, 뉴포젠(필그라스팀), 넥사바(소라페닙 토실산염), 닐로티닙, 니볼루맙, 놀바덱스(타목시펜 시트르산염), 엔플레이트(로미플로스팀), 오비누투주맙, OEPA, 오파투무맙, OFF, 올라파립, 오마세탁신 메페숙신산염, 온카스파(페가스파가제), 온탁(데니루틴 디프티톡스), 옵디보(니볼루맙), OPPA, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, 파클리탁셀 알부민 안정화 나노입자 제제, PAD, 팔보시클립, 팔리페르민, 팔로노세트론 염화소소산염, 파미드로네이트 2나트륨, 파니투무맙, 파노비노스탓, 파라플랫(카보플라틴), 파라플라틴(카보플라틴), 파조파닙 염화소소산염, 페가스파르가제, 페그인터페론 알파-2b, PEG-인트론(페그린터페론 알파-2b), 펨브롤리주맙, 페메트렉시드 2나트륨, 퍼제타(퍼투주맙), 퍼투주맙, 플라티놀(시스플라틴), 플라티놀-AQ(시스플라틴), 플레릭사포, 포말리도마이드, 포말리스트(포말리도미드), 포나티닙 염화수소산염, 프랄라트렉세이트, 프레드니손, 프로카바진 염화소소산염, 프로류킨(알데스류킨), 프롤리아(데노수맙), 프로맥타(엘트롬보팍 올라민), 프로벤지(시푸루셀-T), 퓨리네톨(머캅토퓨린), 퓨릭산(머캅토퓨린), 223번 라듐 이염화물, 랄록시펜 염화소소산염, 라무시루맙, 라스부리카제, R-CHOP, R-CVP, 재조합 인유두종바이러스(HPV) 2가 백신, 재조합 인유두종바이러스(HPV) 9가 백신, 재조합 인유두종바이러스(HPV) 4가 백신, 재조합 인터페론 알파-2b, 레고라페닙, R-EPOCH, 레블리미드(레날리도마이드), 류마트렉스(메토트렉세이트), 리툭산(리툭시맙), 리툭시맙, 로미뎁신, 로미플로스팀, 루비도마이신(도노루비신 염화소소산염), 룩솔리티닙 인산염, 스클레로졸 흉막내 에어로졸(활석), 실툭시맙, 시플루셀-T, 소마툴린 데포(란레오티드 아세트산염), 소라페닙 토실산염, 스프라이셀(다사티닙), 스탠포드 V, 멸균 활석 분말(활석), 스테리탈크(활석), 스티바가(레고라페닙), 수니티닙 말산염, 수텐트(수니티닙 말산염), 실라트론(페그인터페론 알파-2b), 실반트(실툭시맙), 시노비르(탈리도미드), 신리보(오마세탁신 메페숙신산염), TAC, 타핀라(다브라페닙), 활석, 타목시펜 시트르산염, 타라빈 PFS(시타라빈), 타세바(엘로티닙 염화소소산염), 타그레틴(벡사로텐), 타시그나(닐로티닙), 탁솔(파클리탁셀), 탁소텔(도세탁셀), 테모달(테모졸로미드), 테모졸로미드, 템시롤리무스, 탈리도미드, 탈로미드(탈리도미드), 티오테파, 토포사(에토포시드), 토포테칸 염화소소산염, 토레미펜, 토리셀(템시롤리무스), 토시투모맙 및 I131 요오드 토시투모맙, 토텍트(덱스라족산 염화소소산염), TPF, 트라메티닙, 트라스투주맙, 트린다(벤다무스틴 염화소소산염), 트리세녹스(삼산화비소), 타이커브(라파티닙 2토실산염), 유니툭신(디누툭시맙), 반데타닙, VAMP, 벡티빅스(파니투무맙), VeIP, 벨반(빈블라스틴 황산염), 벨케이드(보르테조밉), 벨사(빈블라스틴 황산염), 베무라페닙, 베페시드(에토포시드), 비아두르(루프롤라이드 아세트산염), 비다자(아자시티딘), 빈블라스틴 황산염, 빈카사르 PFS(빈크리스틴 황산염), 빈크리스틴 황산염, 빈크리스틴 황산염 리포좀, 비노렐빈 주석산염, VIP, 비스모데깁, 보락세이즈(글루카르피다아제), 보리노스타트, 보트리엔트(파조파닙 염화소소산염), 웰코보린(류코보린 칼슘), 잴코리(크리조티닙), 젤로다(카페시타빈), XELIRI, XELOX, X지바(데노수맙), 조피고(223번 라듐 이염화물), X탄디(엔잘루타미드), 여보이(이필리무맙), 잘트랩(지브-아플리버셉트), 젤보라프(베무라페닙), 제발린(이브리투모맙 티우세탄), 진카드(덱스라족산 염화소소산염), 지브-아필버셉트, 졸라덱스(고세렐린 아세트산염), 졸레드론산, 졸린자(보리노스타트), 조메타(졸레드론산), 자이델릭(이델라리십), 자이카디아(세리티닙) 또는 자이티가(아비라테론 아세트산염)인 방법.
  32. 제1 항 내지 제17 항 중 어느 한 항에 의한 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 제18 항 내지 제27 항 중 어느 한 항에 의한 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 종양 세포를 억제 또는 감소시키기 위한 방법.
  33. 제32 항에 있어서, 종양 세포의 수는 대조값 또는 기준값에 비하여 적어도 약 10%, 적어도 약 20%, 적어도 약 30%, 적어도 약 40%, 적어도 약 50%, 적어도 약 60%, 적어도 약 70%, 적어도 약 80%, 적어도 약 90% 또는 적어도 약 100%까지 감소하는 방법.
  34. 제1 항 내지 제17 항 중 어느 한 항에 의한 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 제18 항 내지 제27 항 중 어느 한 항에 의한 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 CD3을 발현하는 세포에 의해 사이토카인의 생산을 증가시키는 방법.
  35. 제1 항 내지 제17 항 중 어느 한 항에 의한 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 제18 항 내지 제27 항 중 어느 한 항에 의한 약학 조성물과 T 세포를 접촉시키는 단계를 포함하는, T 세포내 IL-2, CD69 및/또는 IFN-γ의 생산 또는 농도를 증가시키는 방법.
  36. 제35 항에 있어서, 상기 IFN-γ의 생산은 대조값 또는 기준값에 비하여 적어도 약 100%, 적어도 약 200%, 적어도 약 300%, 적어도 약 400%, 적어도 약 500%, 적어도 약 600%, 적어도 약 700%, 적어도 약 800%, 적어도 약 900% 또는 적어도 약 1000%까지 증가하는 방법.
  37. 제35 항에 있어서, 상기 IFN-γ의 농도는 대조값 또는 기준값에 비하여 적어도 약 1000 pg/ml, 적어도 약 2000 pg/ml, 적어도 약 3000 pg/ml, 적어도 약 4000 pg/ml, 적어도 약 5000 pg/ml, 적어도 약 6000 pg/ml, 적어도 약 7000 pg/ml, 적어도 약 8000 pg/ml, 적어도 약 9000 pg/ml 또는 적어도 약 10000 pg/ml까지 증가하는 방법.
  38. 제35 항에 있어서, 상기 CD69의 생산은 대조값 또는 기준값에 비하여 적어도 약 1%, 적어도 약 2%, 적어도 약 3%, 적어도 약 4%, 적어도 약 5%, 적어도 약 6%, 적어도 약 7%, 적어도 약 8%, 적어도 약 9%, 적어도 약 10%, 적어도 약 15%, 적어도 약 20%, 적어도 약 25% 또는 적어도 약 30%까지 증가하는 방법.
  39. 제1 항 내지 제17 항 중 어느 한 항에 의한 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 제18 항 내지 제27 항 중 어느 한 항에 의한 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 면역 반응을 자극하는 방법.
  40. 제1 항 내지 제17 항 중 어느 한 항에 의한 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 제18 항 내지 제27 항 중 어느 한 항에 의한 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암 세포에 대한 T 세포 매개 세포독성 면역 반응을 자극하는 방법.
  41. 제1 항 내지 제17 항 중 어느 한 항에 의한 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 제18 항 내지 제27 항 중 어느 한 항에 의한 약학 조성물과 T 세포를 접촉시키는 단계를 포함하는, T 세포 증식을 증가시키는 방법.
  42. 제1 항 내지 제17 항 중 어느 한 항에 의한 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 제18 항 내지 제27 항 중 어느 한 항에 의한 약학 조성물을 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체의 종양내 T 조절 세포의 수를 감소시키거나 격감시키는 방법.
  43. 제1 항 내지 제17 항 중 어느 한 항에 의한 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 사용하여 대상체 시료중 MOSPD2의 발현 수준을 확정하는 단계를 포함하는, 대상체에서 암이나 암의 전이를 예측, 진단 또는 예후하기 위한 방법.
  44. 제43 항에 있어서 (i) 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 의한 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 사용하여 대상체 시료중 MOSPD2의 발현 수준을 확정 또는 정량하는 단계와, (ii) 단계 (i)에서 구하여진 발현 수준을 대조값 또는 기준값과 비교하는 단계를 포함하되, MOSPD2의 발현 수준이 대조값 또는 기준값에 비해 증가하였음은 암, 암으로 발전할 위험 증가 또는 좋지 않은 암 예후를 말해주는 것인 방법.
  45. 제1 항 내지 제17 항 중 어느 한 항에 의한 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 사용하여 대상체의 시료중 MOSPD2의 발현 수준을 확정하는 단계를 포함하는, 대상체에서 종양의 진행 또는 종양의 침윤을 예측, 진단 또는 예후하기 위한 방법.
  46. 제45 항에 있어서, (i) 제1항 내지 제17항 중 어느 한 항에 의한 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 사용하여 대상체 시료중 MOSPD2의 발현 수준을 확정 또는 정량하는 단계와, (ii) 단계 (i)에서 구하여진 발현 수준을 대조값 또는 기준값과 비교하는 단계를 포함하되, MOSPD2의 발현 수준이 대조값 또는 기준값에 비해 증가하였음은 좋지 않은 종양 진행 또는 종양 침윤 예후를 말해주는 것인 방법.
  47. 제43 항 내지 제46 항 중 어느 한 항에 있어서, 하기 단계들, 즉
    시료중 MOSPD2의 발현 수준을 정량하도록 실험실에 지시하는 단계;
    실험실로부터 시료중 MOSPD2의 발현 수준에 관한 보고서를 얻는 단계; 및/또는
    MOSPD2의 억제제 치료적 유효량만큼을 대상체에 투여하는 단계
    중 1개 이상을 추가로 포함하는 방법.
  48. 제43 항 내지 제47 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 시료는 대상체의 조직 생검편, 종양 생검편 또는 혈액 시료인 방법.
  49. 제43 항 내지 제48 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대조값 또는 기준값은 정상 조직이나 정상 인접 조직(NAT)에서의 MOSPD2의 발현 수준인 방법.
  50. 제43 항 내지 제48 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대조값 또는 기준값은 검출 불가능한 MOSPD2 발현 또는 유의미하지 않은 MOSPD2 발현인 방법.
  51. 제1 항 내지 제17 항 중 어느 한 항에 의한 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 제18 항 내지 제27 항 중 어느 한 항에 의한 약학 조성물을, MOSPD2 발현 종양을 치료 또는 예방하는데 유효한 양만큼 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 MOSPD2 발현 종양을 치료 또는 예방하기 위한 방법.
  52. 제1 항 내지 제17 항 중 어느 한 항에 의한 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 제18 항 내지 제27 항 중 어느 한 항에 의한 약학 조성물을, MOSPD2 발현 종양 연관 대식세포를 가지는 종양을 치료 또는 예방하는데 유효한 양만큼 대상체에 투여하는 단계를 포함하는, 대상체에서 MOSPD2 발현 종양 연관 대식세포를 가지는 종양을 치료 또는 예방하기 위한 방법.
  53. (i) 제1 항 내지 제17 항 중 어느 한 항에 의한 2중 특이적 항체 또는 이의 항원 결합 단편, 또는 제18 항 내지 제27 항 중 어느 한 항에 의한 약학 조성물과, (ii) 사용 지침을 포함하는 키트.
KR1020207029245A 2018-03-13 2019-03-13 Mospd2와, t 세포 또는 nk 세포 특이적 분자에 대한 2중 특이적 항체 KR20200143385A (ko)

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