KR20200125972A - 성분 - Google Patents

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KR20200125972A
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polysaccharide
acid
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protein
viscosity
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마이클 트리스트럼
브렌다 모셀
피터 스카슈스키
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트리스코 아이씨에이피 피티와이 리미티드
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Abstract

단백질 가수분해 단계를 거친 폴리사카라이드계 원료 물질을 포함하는 식품 증점 조성물의 제조에 사용하기 위한 폴리사카라이드계 성분 뿐만 아니라 그 제조 방법이 제공된다. 하나 또는 복수의 증점제 및 단백질 가수분해 단계를 거친 폴리사카라이드계 성분을 포함하는, 식용품의 점도를 증가시킬 수 있는 안정한 액체 조성물, 및 그 제조 방법이 또한 제공된다.

Description

성분
본 발명은 성분에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 식품 증점 조성물의 제조에 사용하기 위한 폴리사카라이드계 성분 및 그 제조 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 액체 또는 반-액체 식용품의 점도를 증가시키기 위한 폴리사카라이드계 성분 및 증점제를 함유하는 안정한 액체 조성물 및 그 사용 방법에 관한 것이다.
노인 및 요양 시장에서는 특히 점성의 증점 액체를 제공하는 것이 종종 바람직하다. 이러한 시장에 적용하기 위해, 증점된 액체는 특정의, 알려진 반복가능한 점도를 가질 필요가 있다.
연하곤란 환자의 삼킴을 '느리게' 하여 흡인성 폐렴과 같은, 장애의 통상적인 동반이환을 예방하는 데 임상적으로 중요한 이점을 가질 수 있는 소정의 액체 점도가 여러 규제 기관에 의해 개발되었다. 다양한 삼킴 장애의 중증도에 비추어, 주로 다음의 전문적인 지침이 임상적으로 시행되고 있다: 부드럽게 농후함(과즙 농도); 중간정도로 농후함(꿀 농도); 및 농후함(푸딩 농도). 이러한 지침은 전형적으로 각각 150, 400 및 900 mPa.s에 해당된다.
보호시설 및 가정에서 연하곤란을 관리하기 위한 증점 음료는 전형적으로 응집과 같은 물리적 변형을 통해 "인스턴트화"된, 분말 증점제를 사용하여 얻게된다. 그러나, 이러한 분말은 식용품에 필요한 정확한 체적 용량을 전달할 수 없고 적절한 분산을 보장하기 위한 충분한 전단력을 얻기 위해 특수한 혼합 장비가 요구되는 등의, 한계를 가질 수 있다. 또한, 분말 증점제가 점도를 발현하는 데 걸리는 시간은 전형적으로 즉각적(즉, <30초)이지 않고, 식용품을 최대의 또는 원하는 점도로 만드는 데 최대 몇 분이 걸릴 수 있다. 농축 용액에서 증점제의 점도를 발현하고 원하는 농도로 다시 희석함으로써 기능하는 상업적으로 이용가능한 액체 증점제는, 이들의 점도를 분산시키고 발현하는 데 필요한 전단의 양에 의해 유사하게 제한된다. 이러한 액체 증점제는 또한 실온에서 저장될 때 충분한 기간 동안 안정하지 않을 수 있으며, 그 결과 하나 이상의 구성요소가 분리될 수 있다.
따라서, 예를 들어, 연하곤란과 같은 저작 및/또는 연하 장애로 고통 받는 대상체에게 제공하기 위해 사용될 수 있고, 상업적으로 이용가능한 액체 및/또는 분말 증점제 조성물의 고유한 한계 중 하나 이상을 극복하는 안정한 액체 증점제 조성물에 대한 필요가 남아있다.
제1 구현예에서, 본 발명은 다음을 포함하는 식품 증점 조성물의 제조에 사용하기 위한 폴리사카라이드계 성분을 제공하고:
라릭스 옥시덴탈리스(Larix occidentalis) 폴리사카라이드 추출물, 라릭스 라리시나(Larix laricina) 폴리사카라이드 추출물, 아카시아 나무 폴리사카라이드 추출물, 라릭스 데시두아(Larix decidua) 폴리사카라이드 추출물, 라릭스 시비리카(Larix sibirica) 폴리사카라이드 추출물 및 이의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리사카라이드계 원료 물질;
상기 폴리사카라이드계 원료 물질은 단백질 가수분해 단계를 거친 것이다.
일부 실시양태에서, 상기 단백질 가수분해 단계는 폴리사카라이드계 원료 물질의 초기 단백질 수준을 제2 단백질 수준으로 낮춘다.
일 실시양태에서, 상기 폴리사카라이드계 원료 물질은 단백질 추출 단계를 추가로 거친 것이다.
제2 구현예에서, 본 발명은 다음 단계를 포함하고, 이로써 폴리사카라이드계 성분을 제조하는, 식품 증점 조성물의 제조에 사용하기 위한 폴리사카라이드계 성분을 제조하는 방법을 제공한다:
(i) 라릭스 옥시덴탈리스 폴리사카라이드 추출물, 라릭스 라리시나 폴리사카라이드 추출물, 아카시아 나무 폴리사카라이드 추출물, 라릭스 데시두아 폴리사카라이드 추출물, 라릭스 시비리카 폴리사카라이드 추출물 및 이의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리사카라이드계 원료 물질을 제공하는 단계; 및
(ii) 폴리사카라이드계 원료 물질의 단백질의 일부를 가수분해하는 단계.
일부 실시양태에서, 상기 단계 (ii)는 폴리사카라이드계 원료 물질의 초기 단백질 수준을 제2 단백질 수준으로 낮춘다.
일 실시양태에서, 본 구현예의 방법은 (ii)의 폴리사카라이드계 원료 물질로부터 가수분해된 단백질의 일부를 추출하는 단계를 추가로 포함한다.
상술한 구현예와 관련하여, 단백질 가수분해 단계는 적절하게는 열처리, 프로테아제 처리, 산 처리, 알칼리 처리, 마이크로파 방사선 처리, 및 금속 아쿠아이온 처리 중 하나 이상을 포함한다. 더 바람직하게는, 단백질 가수분해 단계는 열처리 및/또는 산 처리를 포함한다.
제1 및 제2 구현예의 특정 실시양태에서, 산 처리는 폴리사카라이드계 원료 물질을 젖산, 인산, 구연산, 말산, 아스코르브산, 포름산, 푸마르산, 숙신산, 타르타르산, 글루콘산 및 이의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 식품 등급(food grade) 산과 접촉시키는 단계를 포함한다. 바람직하게는, 상기 식품 등급 산은 적어도 부분적으로 글루코노 델타-락톤으로부터 유래된 것과 같은, 글루콘산이거나 이를 포함한다.
상기 구현예와 관련하여, 산 처리는 약 3 내지 약 5의 pH에서 적절히 수행된다. 바람직하게는, 산 처리는 약 4.0 내지 4.5의 pH에서, 더 바람직하게는 약 4.2 내지 4.4의 pH에서 수행된다.
제1 및 제2 구현예의 특정 실시양태에서, 열처리는 약 55℃ 내지 약 90℃의 온도에서 수행된다. 더 바람직하게는, 열처리는 약 65℃ 내지 약 85℃, 더욱 더 바람직하게는 약 70℃ 내지 약 80℃의 온도에서 수행된다.
적절하게는, 제1 및 제2 구현예의 단백질 추출 단계는 중력 분리, 원심분리, 크기 배제 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 자유 흐름 전기영동, 금속 결합, 면역친화성 크로마토그래피 및 면역침전 중 하나 이상을 포함한다.
제1 및 제2 구현예와 관련하여, 단백질 가수분해 단계는 바람직하게는 약 15분 시간 내지 약 30시간, 더 바람직하게는 약 8시간 내지 약 20시간, 더욱 더 바람직하게는 약 30분 내지 약 2시간의 기간 동안 수행된다.
제3 구현예에서, 본 발명은 제2 구현예의 방법에 의해 제조되는 폴리사카라이드계 성분을 제공한다.
제4 구현예에서, 본 발명은 다음을 포함하는 4000 cP 미만의 점도를 갖는 안정한 액체 조성물을 제공하고:
(i) 하나 또는 복수의 증점제; 및
(ii) 제1 및 제3 구현예에 따른 폴리사카라이드계 성분;
상기 조성물을 수성 액체 또는 수성 액체-고체 혼합물 식용품에 첨가하면 상기 식용품의 점도가 증가한다.
적절하게는, 상기 증점제는 한천, 알긴산, 카라기난, 구아 검, 트라가칸스 검, 가티 검, 미세결정질 셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필셀룰로오스, 메틸에틸셀룰로오스, 카라야 검, 크산탄 검, 로커스트 콩검, 타라 검, 사일리움 씨드 검, 퀸스 씨드 검, 펙틴, 푸르셀라란, 젤란 검, 곤약, 알긴산 나트륨 및 이의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 실시양태에서, 상기 조성물은 2000 cP 미만의 점도를 갖는다.
특정 실시양태에서, 상기 조성물은 95% 초과의 수분 활성도를 갖는다.
하나의 바람직한 실시양태에서, 상기 조성물은 실온에서 적어도 6개월 동안 안정적이다.
적절하게는, 상기 조성물은 식용품에 첨가될 때 식용품의 임피던스 수준에 실질적으로 변화를 생성하지 않도록 구성된다. 이와 관련하여, 식용품은 바람직하게는 연하곤란의 진단 및/또는 예후를 결정하는 데 사용하기 위한 매체(medium)이거나 이를 포함한다.
제5 구현예에서, 본 발명은 수성 액체 또는 수성 액체 고체 혼합물 식용품의 점도를 증가시키는 방법을 제공하고, 상기 방법은 다음 단계를 포함한다:
(a) 제4 구현예의 안정한 액체 조성물을 식용품에 첨가하는 단계; 및
(b) 식용품 및 조성물을 혼합하여 조성물에 의해 상기 식용품의 점도의 증가를 촉진하는 단계.
적절하게는, 상기 혼합 단계는 저-전단 혼합을 적용하는 단계를 포함한다. 이를 위해, 상기 저-전단 혼합이 바람직하게는 약 30초 이하 동안 적용되어 식용품의 최대 점도를 달성한다. 더 바람직하게는, 상기 저-전단 혼합이 약 10초 내지 약 30초 동안 적용되어 식용품의 최대 점도를 달성한다. 특정 실시양태에서, 상기 저-전단 혼합은 약 10 rpm 내지 약 40 rpm의 속도로 상기 조성물을 교반하는 단계를 포함한다.
특정 실시양태에서, 식용품의 점도는 95 cP 초과로 적절히 증가된다.
상기 구현예과 관련하여, 점도가 증가된 식용품은 저작 및/또는 연하 질환, 장애 또는 증상으로 고통 받는 대상체에게 적절히 제공하기 위한 것이다. 바람직하게는, 저작 및/또는 연하 질환, 장애 또는 증상은 연하곤란이거나 이를 포함한다.
제6 구현예에서, 본 발명은 다음 단계를 포함하는, 안정한 액체 조성물의 생성 방법을 제공한다:
(i) 제1 또는 제3 구현예에 따른 폴리사카라이드계 성분을 제공하는 단계;
(ii) 상기 폴리사카라이드계 성분에 하나 또는 복수의 증점제를 첨가하는 단계; 및
(iii) 상기 단계 (ii)의 혼합물을 혼합하여 안정한 액체 조성물을 생성하는 단계.
적절하게는, 상기 안정한 액체 조성물은 제4 구현예의 것이다.
문맥상 달리 요구되는 경우를 제외하고, 본 명세서에서 사용된 바와 같은, 용어 "포함하다" 및 "포함하는", "포함하고" 및 "포함되는"과 같은 용어의 변형은 추가적인 요소, 구성요소, 정수 또는 단계를 배제하려는 의도는 아니며, 하나 이상의 언급되지 않은 추가적인 요소, 구성요소, 정수 또는 단계를 포함할 수 있다.
부정 관사 "한(a)" 및 "하나(an)"는 단수의 부정 관사로서 또는 부정 관사가 지칭하는 단일 대상 이외의 하나 이상 이외의 것을 제외하는 것으로서 해석되어서는 안된다는 것이 인식될 것이다. 예를 들어, 폴리사카라이드는 하나의 폴리사카라이드, 하나 이상의 폴리사카라이드 및 복수의 폴리사카라이드를 포함한다.
본 발명의 이해를 돕고 본 기술분야의 통상의 기술자가 본 발명으로 실질적인 효과를 낼 수 있도록 하기 위해, 본 발명의 바람직한 실시양태는 첨부된 도면을 참조하여 단지 예로서 서술될 것이다.
도 1은 식품 증점 조성물을 제조하기 위한 공정의 일 실시양태를 제공한다;
도 2는 도 1의 식품 증점 조성물에 대한 제조 공정의 각 단계에서 농축물(retentate)의 감소 비율을 제공한다;
도 3은 본 발명의 일 실시양태의 폴리사카라이드계 성분을 함유하는 액체 조성물이 다양한 농도로 증점된, 4개의 농도(증점되지 않음, 수준 150, 수준 400 및 수준 900으로 증점됨)에 걸친 10 ㎖의 진단 볼루스(bolus) 매체를 입증한다;
도 4는 공정 중에 채취한 샘플의 SDS PAGE를 제공하고; PM은 SeeBlue Plus2 사전-염색된 단백질 래더를 함유하는 레인을 나타낸다. 레인 1: 제1 추출물 (TSC 1), 레인 2: 제2 추출물 (TSC 2), 레인 3: 벌크 농축물 2 (TSC 3), 레인 4: 제3 추출물 (TSC 4), 레인 5: 벌크 농축물 3 (TSC 5), 레인 6: 벌크 농축물 4 (TSC 6), 레인 7: FG-상업용 제품 (TSC 7) 및 레인 8: 벌크 농축물 1 (TSC 8). 빨간색 화살표는 LC-MS 분석에 사용된 (위에서 아래로) 60, 40 및 20 kDa의 단백질 밴드를 나타낸다;
도 5는 풍부하지만 정합되지 않은 펩타이드 피크에 대한 m/z 값을 보여주는 샘플 TSC2-3의 기본 피크 크로마토그램을 도시한다. 트립신 자체로부터의 자가융해성 펩타이드를 T로 표시한다.
도 6은 초기 하이드로콜로이드(벌크 농축물 1, 도 5a) 및 최종 생성물(벌크 농축물 5, 도 5b)에서 7개의 풍부하고, 정합되지 않은 펩타이드에 대한 추출된 이온 크로마토그램을 입증한다;
도 7은 샘플 TSC 1로부터의 겔 밴드에 대한 추출된 이온 크로마토그램을 도시하고; 60kDa (TSC1-1), 40kDa (TSC1-2) 및 20kDa (TSC1-3)에서의 밴드에 대한 펩타이드를 각각 도 7a, 7b 및 7c에 나타낸다;
도 8은 샘플 TSC 2로부터의 겔 밴드에 대한 추출된 이온 크로마토그램을 도시하고; 60 kDa (TSC2-1), 40 kDa (TSC2-2) 및 20 kDa (TSC2-3)에서의 밴드에 대한 펩타이드를 각각 도 8a, 8b 및 8c에 나타낸다;
도 9는 샘플 TSC 3으로부터의 겔 밴드에 대한 추출된 이온 크로마토그램을 입증하고; 60kDa (TSC3-1), 40kDa (TSC3-2) 및 20kDa (TSC3-3)에서의 밴드에 대한 펩타이드를 각각 도 9a, 9b 및 9c에 나타낸다;
도 10은 샘플 TSC 5로부터의 겔 밴드에 대한 추출된 이온 크로마토그램을 입증하고; 40 kDa (TSC5-1) 및 20 kDa (TSC5-2)에서의 밴드에 대한 펩타이드를 각각 도 10a 및 10b에 나타낸다;
도 11은 샘플 TSC 5로부터의 겔 밴드에 대한 추출된 이온 크로마토그램을 도시하고; 40 kDa (TSC8-2) 및 20 kDa (TSC8-3)에서의 밴드에 대한 펩타이드를 각각 도 11a 및 11b에 나타낸다.
본 발명은 유리하게는 (예를 들어, 실온에서 최대 6개월 동안) 안정적이고 액체 또는 반-액체 식용품에 분산될 때 방출 및 발현되는 점도가 제어될 수 있는 액체 식품 증점 조성물을 제조하는 데 사용하기 위한 폴리사카라이드계 성분을 제공한다. 전해질 용액과 같은, 이러한 액체 식품 증점 조성물에 의해 증점된 식용품은, 식용품에 첨가될 때 식용품의 임피던스 수준에 변화를 거의 또는 전혀 생성하지 않는 조성물의 능력으로 인해 진단 및/또는 예후의 설정(setting)에서 유용성을 입증할 수도 있다. 폴리사카라이드계 성분을 포함하는 액체 식품 증점 조성물은 또한 식용품에 첨가될 때 그 안에서 빠르게 점도를 발현하기 위해(예를 들어, <30초) 저 전단 혼합력(예를 들어, 숟가락으로 부드럽게 혼합)의 사용만을 필요로 한다.
일 구현예에서, 본 발명은 다음을 포함하는 식품 증점 조성물의 제조에 사용하기 위한 폴리사카라이드계 성분을 제공한다:
라릭스 옥시덴탈리스 폴리사카라이드 추출물, 라릭스 라리시나 폴리사카라이드 추출물, 아카시아 나무 폴리사카라이드 추출물, 라릭스 데시두아 폴리사카라이드 추출물, 라릭스 시비리카 폴리사카라이드 추출물 및 이의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리사카라이드계 원료 물질;
상기 폴리사카라이드계 원료 물질은 단백질 가수분해 단계를 거친 것이다.
일부 실시양태에서, 상기 단백질 가수분해 단계는 폴리사카라이드계 원료 물질의 초기 단백질 수준을 제2 단백질 수준으로 낮춘다.
일 실시양태에서, 상기 폴리사카라이드계 원료 물질은 단백질 추출 단계를 추가로 거친 것이다.
관련된 구현예에서, 본 발명은 다음 단계를 포함하고, 이로써 폴리사카라이드계 성분을 제조하는, 식품 증점 조성물의 제조에 사용하기 위한 폴리사카라이드계 성분을 제조하는 방법을 제공한다:
(i) 라릭스 옥시덴탈리스 폴리사카라이드 추출물, 라릭스 라리시나 폴리사카라이드 추출물, 아카시아 나무 폴리사카라이드 추출물, 라릭스 데시두아 폴리사카라이드 추출물, 라릭스 시비리카 폴리사카라이드 추출물 및 이의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리사카라이드계 원료 물질을 제공하는 단계; 및
(ii) 폴리사카라이드계 원료 물질의 단백질의 일부를 가수분해하는 단계.
일부 실시양태에서, 단계 (ii)는 폴리사카라이드계 원료 물질의 초기 단백질 수준을 제2 단백질 수준으로 낮춘다.
일 실시양태에서, 본 구현예의 방법은 (ii)의 폴리사카라이드계 원료 물질로부터 가수분해된 단백질의 일부를 추출하는 단계를 추가로 포함한다.
따라서, 폴리사카라이드계 성분은 가수분해를 거쳐 단백질 부분 및, 적합하게 또는 선택적으로, 이의 폴리사카라이드 부분을 분해하는, 식물 검과 같은, 변형된 폴리사카라이드계 원료 물질을 지칭한다.
본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "폴리사카라이드"는 일반적으로 헤미아세탈 또는 글리코시드 결합에 의해 서로 연결되는 약 10 내지 100,000개 이상의 사카라이드 단위로 형성된 중합체를 지칭한다. 폴리사카라이드는 직쇄, 단일 분지, 또는 다중 분지된 것 중 어느 하나일 수 있으며, 여기서 각각의 분지는 추가적인 2차 분지를 가질 수 있으며, 단당류는 피라노스(6-원 고리) 또는 푸라노스(5-원 고리) 형태의 표준 D- 또는 L-고리형 당, 예컨대 각각 D-프럭토오스 및 D-갈락토오스일 수 있다. 추가적으로, 이들은 고리형 당 유도체, 데옥시(deoxy) 당, 당, 당산(sugar acid), 또는 다중-유도체화(multi-derivatized) 당일 수 있다. 통상의 기술자에 의해 이해되는 바와 같이, 폴리사카라이드 제제(preparation), 특히 자연으로부터 분리된 제제는 전형적으로 분자량이 불균질한 분자를 포함한다.
용어 "폴리사카라이드계 원료 물질"은 하나 또는 복수의 폴리사카라이드를 이의 주요 구성요소로서 함유하는 물질을 지칭한다 (예를 들어, 폴리사카라이드계 원료 물질은 폴리사카라이드계 원료 물질의 중량으로 적어도 약 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% 또는 그 안의 임의의 범위의 폴리사카라이드를 포함한다). 따라서, 폴리사카라이드계 원료 물질은 이의 미량의(minor) 구성요소로서 단백질, 지질 등과 같은 다른 구성요소를 포함할 수 있다.
본 명세서에 서술된 바와 같이, 본 명세서에 서술된 식물 추출물 또는 검과 같은 폴리사카라이드계 원료 물질은 또한 이의 미량의 구성요소로서 단백질 부분을 함유한다. 특정 실시양태에서, 폴리사카라이드계 원료 물질은 폴리사카라이드계 원료 물질의 총 중량을 기준으로 약 20 중량% 정도 또는 미만(예를 들어, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, 0.5 중량% 및 그 안의 임의의 범위), 바람직하게는 약 10 중량% 미만, 더 바람직하게는 약 6 중량% 미만의 초기 단백질 함량 또는 수준을 갖는다. 이와 같이, 일부 실시양태에서, 상기 단계 (ii)에서 폴리사카라이드계 원료 물질의 처리 후에 생성되는 제2 단백질 함량 또는 수준은 약 20 중량% 미만(예를 들어, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, 0.5 중량% 및 그 안의 임의의 범위)이다.
"단백질"은 아미노산 중합체를 의미한다. 아미노산은 본 기술분야에서 잘 이해되는 바와 같이 천연 또는 비-천연 아미노산, D- 또는 L-아미노산일 수 있다. 용어 "단백질"은 "펩타이드"를 포함하고 포괄하며, 펩타이드는 전형적으로 50개 이하의 아미노산을 갖는 단백질을 설명하는 데 사용되고 "폴리펩타이드"는 전형적으로 50개 초과의 아미노산을 갖는 단백질을 설명하는 데 사용된다.
"단백질 가수분해" 또는 "단백질을 가수분해하는 것"은 전형적으로 원래(즉, 가수분해되지 않은) 상태의 단백질보다 감소된 분자량을 갖는 더 작은 펩타이드 또는 단백질 단편으로 단백질이 가수분해되거나 분해되도록, 단백질 물질을 함께 보유하는 화학적 결합을 절단 또는 파괴하는 공정을 의미한다. 일 실시양태에서, 본 발명의 방법은 리그노셀룰로오스 물질을 부분적으로 가수분해한다. 본 명세서에서 사용된 바와 같은 "부분적 가수분해" 또는 "부분적으로 가수분해하는" 및 이의 임의의 문법적 변형은, 단백질을 함께 보유하는 화학적 결합의 100% 미만을 절단하거나 파괴하는 가수분해 반응을 지칭한다. 예로서, 단백질은 열처리, 산, 염기, 하나 이상의 효소, 또는 이들 중 임의의 조합을 사용하여 가수분해될 수 있다.
따라서, 특정 실시양태에서, 단백질 가수분해 단계는 열처리, 프로테아제 처리, 산 처리, 알칼리 처리, 마이크로파 방사선 처리 및 금속 아쿠아이온 처리 중 하나 이상을 포함한다. 하나의 바람직한 실시양태에서, 단백질 가수분해 단계는 열처리 및/또는 산 처리를 포함한다. 이와 관련하여, 단백질 가수분해 단계는 다음을 포함할 수 있다: (a) 산 처리 단독; (b) 열처리 단독; (c) 순차적으로 산 처리 후 열처리; 또는 (d) 순차적으로 열처리 후 산 처리.
본 명세서에서 사용된 바와 같은, "처리하는 것" 또는 "처리"는 예를 들어 접촉, 담금(soaking), 증기 함침, 분무, 현탁, 잠수(immersing), 포화, 디핑(dipping), 습윤, 헹굼, 세척, 침지(submerging) 및/또는 이의 임의의 변형 및/또는 조합을 지칭할 수 있다.
용어 "프로테아제"는 본 명세서에서 펩타이드 결합을 가수분해하는 효소로서 정의된다. 용어 "프로테아제"는 EC 3.4 효소 그룹(이의 각각의 13개의 하위분류를 포함)에 속하는 임의의 효소를 포함할 수 있다. EC 번호는 NC-IUBMB (아카데믹 출판사, 샌디에이고, 캘리포니아)의 효소명명법 1992를 참조한다. 인식되는 바와 같이, 프로테아제는 이들의 촉매 메커니즘에 따라 다음 군으로 분류된다: 세린 프로테아제(S), 시스테인 프로테아제(C), 아스파르트산 프로테아제(A), 메탈로 프로테아제(M), 및 알려지지 않은, 또는 아직 분류되지 않은, 프로테아제(U). (예를 들어, 단백질분해 효소의 안내서, A.J.Barrett, N.D.Rawlings, J.F.Woessner (eds), 아카데믹 출판사 (1998) 참조).
본 명세서에서 사용되는 프로테아제는 예를 들어 과일, 동물 기원, 박테리아 또는 진균으로부터 유래될 수 있다. 프로테아제는 엔도-활성 및/또는 엑소-활성 또는 이의 임의의 조합을 가질 수 있다. 본 발명의 방법에 사용하기에 적절한 프로테아제는 노보자임스(Novozymes), 제넨코(Genencor), AB-엔자임(AB-Enzymes) 및 디에스엠 푸드 스페셜티스 아마노(DSM Food Specialties Amano)와 같은 상업적 공급업체로부터 입수가능하지만, 이에 제한되지 않음이 이해될 것이다. 예시적인 프로테아제는 바실러스 리체니포르미스(Bacillus licheniformes) 또는 아스퍼질러스 오리제(Aspergillus oryzae)와 같은, 박테리아 또는 진균 기원의 것이다.
통상의 기술자는 본 명세서에 사용된 바와 같은, 용어 "산"이 알칼리와 반응하여 염을 형성할 수 있는 7 미만의 pH를 갖는 다양한 수용성 화합물을 지칭한다는 것을 쉽게 이해할 것이다. 산의 예는 단양성자성 또는 다양성자성일 수 있고 1, 2, 3, 또는 그 이상의 산 작용기를 포함할 수 있다. 산의 예는 비제한적으로 광산, 루이스 산, 산성 금속염, 유기산, 고체 산, 무기산, 또는 이의 임의의 조합을 포함한다. 바람직하게는, 산 처리는 폴리사카라이드계 원료 물질을 젖산, 인산, 구연산, 말산, 아스코르브산, 포름산, 푸마르산, 숙신산, 타르타르산, 글루콘산 및 이의 임의의 조합과 같은, 식품 등급 산과 접촉시키는 단계를 포함한다. 바람직하게는, 식품 등급 산과 같은 산은 약 0.1 내지 5M, 더 바람직하게는 약 0.5 내지 약 2M의 농도를 갖는다.
하나의 특정 실시양태에서, 식품 등급 산은 적어도 부분적으로 글루코노 델타-락톤으로부터 유래된 것과 같은, 글루콘산이거나 이를 포함한다. 이와 관련하여, 글루코노 델타-락톤은 전형적으로 수용액에서 가수분해되어 글루콘산을 생성하는 것이 인식될 것이다.
단백질 가수분해 단계와 관련하여, 산 처리는 약 2.0 내지 약 6.0, 바람직하게는 약 3.0 내지 4.0 또는 그 안의 임의의 범위의 pH에서 적절히 수행된다. 특정 실시양태에서, 산 처리는 약 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9, 3.0, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0 및 그 안의 임의의 범위의 pH에서 수행된다. 특정 바람직한 실시양태에서, 산 처리는 약 4.2 내지 4.4의 pH에서 수행된다.
통상의 기술자에 의해 쉽게 이해되는 바와 같이, 본 명세서에서 사용되는 "알칼리"는 산과 반응하여 염을 형성할 수 있는 7 초과의 pH를 갖는 다양한 수용성 화합물을 지칭한다. 예로서, 알칼리는 비제한적으로 수산화 나트륨, 수산화 칼륨, 수산화 암모늄, 수산화 마그네슘 및 알칼리 금속 염, 예컨대 비제한적으로 탄산 나트륨 및 탄산 칼륨을 포함한다.
특정 실시양태에서, 폴리사카라이드계 원료 물질은 단백질 가수분해 단계와 관련하여 하나 이상의 산 및/또는 알칼리로 처리될 수 있다. 예를 들어, 폴리사카라이드계 원료 물질은 1, 2, 3, 4, 5, 또는 그 이상의 산 및/또는 알칼리로 처리될 수 있다.
단백질 가수분해 단계에 대하여, 산 및/또는 알칼리는 폴리사카라이드계 원료 물질의 중량으로 약 0.1% 내지 15% 또는 그 안의 임의의 범위, 예컨대 비제한적으로 약 0.3% 내지 약 13%, 또는 약 1% 내지 약 10%의 함량으로 존재할 수 있다. 본 발명의 특정 실시양태에서, 산 및/또는 알칼리는 폴리사카라이드계 원료 물질의 중량으로, 약 0.1%, 0.2%, 0.3%, 0.4%, 0.5%, 0.6%, 0.7%, 0.8%, 0.9%, 1%, 1.1%, 1.2%, 1.3%, 1.4%, 1.5%, 1.75%, 2%, 2.25%, 2.5%, 2.75%, 3%, 3.25%, 3.5%, 3.75%, 4%, 4.25%, 4.5%, 4.75%, 5%, 5.25%, 5.5%, 5.75%, 6%, 6.25%, 6.5%, 6.75%, 7%, 7.25%, 7.5%, 7.75%, 8%, 8.25%, 8.5%, 8.75%, 9%, 9.25%, 9.5%, 9.75%, 10%, 10.25%, 10.5%, 10.75%, 11%, 11.25%, 11.5%, 11.75%, 12%, 12.25%, 12.5%, 12.75%, 13%, 13.25%, 13.5%, 13.75%, 14%, 14.25%, 14.5%, 14.75%, 15% 또는 그 안의 임의의 범위의 함량으로 단백질 가수분해 단계에 존재한다. 본 발명의 특정 실시양태에서, 산 및/또는 알칼리는 폴리사카라이드계 원료 물질의 중량으로 약 1% 내지 약 2%의 함량으로 단백질 가수분해 단계에 존재한다.
단백질 가수분해 단계와 관련하여, 열처리는 적절하게는 약 40℃ 내지 99℃, 바람직하게는 약 55℃ 내지 약 90℃ 또는 그 안의 임의의 범위, 예컨대 비제한적으로 약 65℃ 내지 약 85℃ 또는 약 45℃ 내지 약 80℃의 온도에서 수행된다. 특정 실시양태에서, 열처리는 약 40℃, 41℃, 42℃, 43℃, 44℃, 45℃, 46℃, 47℃, 48℃, 49℃, 50℃, 51℃, 52℃, 53℃, 54℃, 55℃, 56℃, 57℃, 58℃, 59℃, 60℃, 61℃, 62℃, 63℃, 64℃, 65℃, 66℃, 67℃, 68℃, 69℃, 70℃, 71℃, 72℃, 73℃, 74℃, 75℃, 76℃, 77℃, 78℃, 79℃, 80℃, 81℃, 82℃, 83℃, 84℃, 85℃, 86℃, 87℃, 88℃, 89℃, 90℃, 91℃, 92℃, 93℃, 94℃, 95℃, 96℃, 97℃, 98℃, 99℃ 및 그 안의 임의의 범위의 온도에서 수행된다. 특정 바람직한 실시양태에서, 열처리는 약 70℃ 내지 약 80℃의 온도에서 수행된다.
상술한 구현예과 관련하여, 단백질 가수분해 단계는 적절하게는 약 15분 내지 약 48시간, 바람직하게는 약 20분 내지 약 12시간, 더 바람직하게는 약 30분 내지 약 2시간 및 그 안의 임의의 범위의 기간 동안 수행된다. 특정 실시양태에서, 단백질 가수분해 단계는 약 15분, 20분, 30분, 40분, 50분, 1시간, 1.25시간, 1.5시간, 1.75시간, 2시간, 3시간, 4시간, 5시간, 6시간, 7시간, 8시간, 9시간, 10시간, 11시간, 12시간, 13시간, 14시간, 15시간, 16시간, 17시간, 18시간, 19시간, 20시간, 21시간, 22시간, 23시간, 24시간, 25시간, 26시간, 27시간, 28시간, 29시간, 30시간, 31시간, 32시간, 33시간, 34시간, 35시간, 36시간, 37시간, 38시간, 39시간, 40시간, 41시간, 42시간, 43시간, 44시간, 45시간, 46시간, 47시간, 48시간 및 그 안의 임의의 범위의 기간 동안 수행된다.
본 명세서에서 일반적으로 사용되는 바와 같은, 용어 "단백질 추출"은 단백질 및 더 특히, 적어도 부분적으로, 폴리사카라이드계 원료 물질로부터의 가수분해된 단백질의 분리, 제거 및/또는 단리(isolation)를 지칭하고, 이는 본 기술분야에 공지된 임의의 방법 또는 수단에 의해 수행될 수 있다. 단백질 추출의 예시적인 방법은 중력 분리, 원심분리, 크기 배제 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 자유 흐름 전기영동, 금속 결합, 면역친화성 크로마토그래피 및 면역침전을 포함한다.
일부 실시양태에서, 단백질 추출 단계는 폴리사카라이드계 출발 물질의 초기 단백질 수준의 경우보다 적어도 약 50%, 40%, 30%, 20%, 15%, 10%, 또는 5% 낮은 제2 단백질 수준을 생성한다. 특정 실시양태에서, 단백질 추출 단계는 상기 초기 단백질 수준보다 낮은 적어도 약 1%, 2%, 3%, 4%, 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50% 및 그 안의 임의의 범위인 제2 단백질 수준을 생성한다.
상기와 관련하여, 단백질 가수분해의 정도는 본 기술분야의 통상의 기술자에게 공지된 임의의 방식에 의해 결정될 수 있다(예를 들어, Petersen 외., OPA 반응을 기반으로 한 가수분해도(DH)의 측정, ED-9512723 노보 노디스크(Novo Nordisk) A/S, Dec. 1995; Frister 외., 티올 구성요소로서 N,N-디메틸-2-머캅토에틸암모늄 클로라이드의 사용에 의해 변형된 OPA 방법, Fresenius J. Anal. Chem. 330 (1988) 631 참조).
추가의 구현예에서, 본 발명은 상술한 구현예의 방법에 의해 제조되는 폴리사카라이드계 성분을 제공한다.
상술한 구현예과 관련하여, 폴리사카라이드계 성분은 바람직하게는 후술되는 것과 같이, 증점제의 물 결합력을 조절 및/또는 제어할 수 있거나 조절 및/또는 제어하도록 적용된다. 이를 위해, 폴리사카라이드계 성분은 바람직하게는 폴리사카라이드계 성분 및 증점제를 포함하는, 본 명세서에 제공된 것과 같은, 액체 조성물의 특정 정도의 점도 억제를 생성할 수 있다. 추가로, 폴리사카라이드계 성분은 액체 조성물의 희석시 점도 억제가 방출 및/또는 역전되는 속도 및 정도를 추가로 제어할 수 있다.
따라서, 다른 구현예에서, 본 발명은 다음을 포함하는 4000 cP 미만의 점도를 갖는 안정한 액체 조성물을 제공하고:
(i) 하나 또는 복수의 증점제; 및
(ii) 상술된 폴리사카라이드계 성분;
상기 조성물을 수성 액체 또는 수성 액체 고체 혼합물 식용품에 첨가하면 상기 식용품의 점도가 증가한다.
본 명세서에서 사용된 바와 같은 용어 "증점제"는 액체 혼합물 및/또는 용액의 점도를 증가시키기 위해 사용되는 본 명세서에 제공되는 화합물, 특히 식용 검(edible gums), 식물성 검(vegetable gum) 및 식품-등급 폴리사카라이드를 포함하여, 식품 애플리케이션에 사용하기 위한 화합물을 지칭한다. 증점제의 비제한적인 예는 한천, 알긴산, 카라기난, 구아 검, 트라가칸스 검, 가티 검, 미세결정질 셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필셀룰로오스, 메틸에틸셀룰로오스, 카라야 검, 크산탄 검, 로커스트 콩검, 타라 검, 사일리움 씨드 검, 퀸스 씨드 검, 펙틴, 푸르셀라란, 젤란 검, 곤약, 알긴산 나트륨 및 이의 임의의 조합을 포함한다.
식용품의 점도를 증점 또는 증가시키기 위한 액체 조성물은 본 기술분야에 공지되어 있다. 예로서, US2004/0197456(이하 "Holahan"이라고 함)은 삼킴 장애가 있는 사람을 대상으로 한 액체 증점제를 서술한다. 그러나, Holahan에 개시된 발명은 그 의도된 사용 수준의 수배로 농축된 증점제를 갖는 액체 조성물을 서술한다. 본 명세서에 서술된 방출-제어 기술과 달리, Holahan의 액체 증점제는 점도가 이미 완전히 발현된 증점제를 그 안에 포함하고, 이는 식용품에 첨가하기 전에 벌써 완전히 수화되며, 그 후, Holahan의 액체 증점제는 희석된 액체 증점제가 식용품에서 원하는 점도를 발현하도록 하는 부피로 단순히 첨가된다.
특정 실시양태에서, 상기 조성물은 95% 초과의 수분 활성도를 갖는다. 수분 활성도 또는 aw는 동일 온도에서 물의 표준 상태 부분 증기압에 대한 물질 내 물의 부분 증기압의 비율로 정의된다는 것은 쉽게 이해될 것이다. 또한, 물은 일반적으로 수분 활성도가 높은 영역에서 수분 활성도가 낮은 영역으로 이동한다. 예를 들어, 본 명세서에서 제공되는 액체 조성물은 95% 초과(예를 들어, 약 95.5%, 96%, 96.5%, 97%, 97.5%, 98%, 98.5%, 99%, 99.5% 및 그 안의 임의의 범위 또는 그 초과)의 수분 활성도를 가지며, 이는 전형적으로 액체 조성물이 본 기술분야에 공지된 바와 같이 펌프 디스펜서 또는 다른 밀봉된 전달 시스템에 의한 것과 같은, 전달 또는 분배 전 그리고 저장 동안 건조되는 것을 방지하기 위해, 95% 미만의 상대 습도를 갖는 대기 또는 환경으로부터의 보호를 필요로 한다.
상기 구현예의 액체 조성물은 본 기술분야에 공지된 임의의 수단에 의해 저장 및/또는 전달될 수 있다. 특정 실시양태에서, 액체 조성물은 본 기술분야에 공지된 바와 같이, 용기 및 펌프 디스펜서 배열에 의해 저장 및/또는 전달된다(예를 들어, 본 명세서에 참조로 포함되는 PCT/AU2017/050966 참조). 대안적인 실시양태에서, 액체 조성물은 본 명세서에 제공된 것과 같은, 사쉐(sachet) 등에 의해 저장 및/또는 전달된다.
적절하게는, 수성 액체 또는 수성 액체 고체 혼합물 식용품에 바람직한 함량으로 첨가될 때 본 명세서에 서술된 액체 조성물은 식용품의 원래의 풍미 및/또는 색상과 같은, 특정 바람직한 속성을 변경하지 않고, 이는 소비자에게 매력적일 수 있다. 이와 관련하여, 액체 조성물은 바람직하게는 식용품에 바람직한 함량으로 첨가될 때 상기 식용품에 풍미 및/또는 색상 기여를 거의 또는 전혀 하지 않는다. 또한, 바람직한 점도를 달성하기 위해 식용품에 첨가되는 액체 조성물의 함량은 식용품의 풍미 및/또는 색상 특성이 희석되는 것을 방지하기 위해 가능한한 적은 것이 바람직하다.
본 발명과 관련하여, 본 명세서에 서술된 액체 조성물은 적절히 유동성이다. 이를 위해, 본 발명의 액체 조성물은 적절하게는 4000 cP 미만, 더 바람직하게는 약 2000 cP 내지 약 4000 cP의 점도를 갖는다. 유리하게는, 이러한 점도의 액체 조성물은 펌프 디스펜서 또는 사쉐와 같은 것으로부터 쉽게 분배될 수 있을 뿐만 아니라, 수성 액체 또는 수성 액체 고체 혼합물 식용품에 원하는 함량으로 첨가될 때 전혀 또는 거의 교반하지 않고(즉, 낮은 전단 혼합력) 분산될 수 있다. 또한, 본 발명의 액체 조성물은 바람직하게는 농축되며 조성물의 유동성 특성을 잃지 않으면 서 비교적 높은 비율의 증점제를 수용할 수 있다. 이는 또한 선택한 식용품에 액체 조성물을 쉽고 정확하게 분배하는 것을 가능하게 한다.
상술한 구현예의 특정 실시양태에서, 액체 조성물은 약 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050, 1100, 1150, 1200, 1250, 1300, 1350, 1400, 1450, 1500, 1550, 1600, 1650, 1700, 1750, 1800, 1850, 1900, 1950, 2000, 2100, 2200, 2300, 2400, 2500, 2600, 2700, 2800, 2900, 3000, 3100, 3200, 3300, 3400, 3500, 3600, 3700, 3800, 3900, 4000 cP, 또는 그 안의 임의의 범위의 점도를 갖는다. 바람직하게는, 액체 조성물은 약 500 cP 내지 약 1500 cP의 점도를 갖는다. 더 바람직하게는, 액체 조성물은 약 750 cP 내지 약 1250 cP의 점도를 갖는다.
액체 조성물의 점도는 본 기술분야에 공지된 임의의 수단에 의해 측정될 수 있다. 예로서, 점도는 보스트윅(Bostwick) 컨시스토미터, 브룩필드(Brookfield) 점도계, 레오미터 또는 유사한 장치를 사용하여 측정될 수 있다. 바람직하게는, 점도는 점도계에 의해 측정된 바와 같은 상대 센티포아즈 대신, 레오미터에 의해 제공된 바와 같은 절대 센티포아즈로 측정된다. 레오미터 측정이 식용품 점도를 결정하기 위한 최상의 그리고 따라서 표준의 방법을 나타냄이 통상의 기술자에 의해 인식될 것이다.
적절하게는, 본 명세서에 서술된 액체 조성물은 수성 액체 또는 수성 액체 고체 혼합물 식용품의 점도를 95 cP 초과로 증가시킨다. 증점제에 의한 점도의 발현이 폴리사카라이드계 성분으로 인해 억제되는 것이 액체 또는 액체 고체 식용품에 액체 조성물을 부드럽게 혼합함으로써 효과적으로 증가되는 것이 본 접근법의 이점이다. 이는 증점제에 대한 폴리사카라이드계 성분의 점도 억제 효과의 제어된 방출로 인해, 증점제가 점도를 신속하게 발현할 수 있게 하고, 따라서 식용품에의 쉽고 빠른 혼입을 돕는다. 이는, Holahan에 서술된 것과 같이, 식용품에 첨가되기 전에 실질적으로 완전히 수화되므로, 순조롭고 시간 효율적인 방식으로 식용품에 혼입되기 어려울 수 있는 증점제에 비해 이로운 점이다. 또한, 완전히 수화된 증점제에 의한 완전한 점도의 발현은 그 자체가, 액체 또는 액체 고체 식용품으로 희석될 때, 증가된 점도의 쉽고 빠른 전개에 장애물이 된다.
따라서, 상술한 임의의 구현예에서, 조성물 내 증점제는 바람직하게는 식용품에 첨가되기 전에 완전히 수화되지 않음이 명백할 것이다.
특정 실시양태에서, 액체 조성물의 첨가시, 상기 식용품의 점도는 적어도 95, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 175, 200, 250, 300, 350,400, 450, 500, 550, 600, 650, 700, 750, 800, 850, 900, 950, 1000, 1050, 1100, 1150, 1200, 1250, 1300, 1350, 1400, 1450, 1500, 1550, 1600, 1650, 1700, 1750, 1800, 1850, 1900, 1950, 2000, 2050, 2100, 2150, 2200, 2250, 2300, 2350, 2400, 2450, 2500, 2550, 2600, 2650, 2700, 2750, 2800, 2850, 2900, 2950, 3000 cP, 또는 그 안의 임의의 범위로 증가된다.
본 발명의 목적을 위해, 증점제는 액체 조성물의 중량으로 약 3% 내지 약 30% 또는 그 안의 임의의 범위 예컨대, 비제한적으로, 약 5% 내지 약 15%, 또는 약 7% 내지 약 12%의 함량으로 존재할 수 있다. 본 발명의 특정 실시양태에서, 증점제는 액체 조성물의 중량으로, 약 3.0%, 3.5%, 4.0%, 4.5%, 5.0%, 5.5%, 6.0%, 6.5%, 7.0%, 7.5%, 8.0%, 8.5%, 9.0%, 9.5%, 10.0%, 10.5%, 11.0%, 11.5%, 12.0%, 12.5%, 13.0%, 13.5%, 14.0%, 14.5%, 15.0%, 15.5%, 16.0%, 16.5%, 17.0%, 17.5%, 18.0%, 18.5%, 19.0%, 19.5%, 20.0%, 20.5%, 21.0%, 21.5%, 22.0%, 22.5%, 23.0%, 23.5%, 24.0%, 24.5%, 25.0%, 25.5%, 26.0%, 26.5%, 27.0%, 27.5%, 28.0%, 28.5%, 29.0%, 29.5%, 30.0%, 30.5%, 31.0%, 31.5%, 32.0%, 32.5%, 33.0%, 33.5%, 34.0%, 34.5%, 35.0%, 35.5%, 36.0%, 36.5%, 37.0%, 37.5%, 38.0%, 38.5%, 39.0%, 39.5%, 40.0% 또는 그 안의 임의의 범위의 함량으로 존재한다. 본 발명의 특정 실시양태에서, 증점제는 액체 조성물의 중량으로 약 3% 내지 약 20%의 함량으로 존재한다.
본 발명에서, 폴리사카라이드계 성분은 액체 조성물의 점도에 크게 기여하지 않는 충분히 높은 농도로 적절히 존재한다. 이를 위해, 본 명세서에 서술된 폴리사카라이드계 성분은 액체 조성물의 중량으로 약 3% 내지 약 30% 또는 그 안의 임의의 범위 예컨대, 비제한적으로, 약 5% 내지 약 20%, 또는 약 7.5% 내지 약 17.5%의 함량으로 존재할 수 있다.
본 발명의 특정 실시양태에서, 본 명세서에 서술된 폴리사카라이드계 성분은 액체 조성물의 중량으로, 약 3.0%, 3.5%, 4.0%, 4.5%, 5.0%, 5.5%, 6.0%, 6.5%, 7.0%, 7.5%, 8.0%, 8.5%, 9.0%, 9.5%, 10.0%, 10.5%, 11.0%, 11.5%, 12.0%, 12.5%, 13.0%, 13.5%, 14.0%, 14.5%, 15.0%, 15.5%, 16.0%, 16.5%, 17.0%, 17.5%, 18.0%, 18.5%, 19.0%, 19.5%, 20.0%, 20.5%, 21.0%, 21.5%, 22.0%, 22.5%, 23.0%, 23.5%, 24.0%, 24.5%, 25.0%, 25.5%, 26.0%, 26.5%, 27.0%, 27.5%, 28.0%, 28.5%, 29.0%, 29.5%, 30.0%, 30.5%, 31.0%, 31.5%, 32.0%, 32.5%, 33.0%, 33.5%, 34.0%, 34.5%, 35.0%, 35.5%, 36.0%, 36.5%, 37.0%, 37.5%, 38.0%, 38.5%, 39.0%, 39.5%, 40.0% 또는 그 안의 임의의 범위의 함량으로 존재한다. 본 발명의 특정 실시양태에서, 본 명세서에 서술된 폴리사카라이드계 성분은 액체 조성물의 중량으로 약 3% 내지 약 20%의 함량으로 존재한다. 폴리사카라이드계 성분의 농도가 이 범위 미만이면, 액체 조성물은 전형적으로 점성 용액을 형성하고 증점제가 첨가될 때 유동성을 잃는다.
바람직하게는, 폴리사카라이드계 성분은 안정한 액체 조성물이 증점제와 함께 물 또는 다른 적절한 수용액만을 포함하는 액체 조성물이 가졌던 점도보다 낮은 점도를 갖도록 하는 함량으로 포함된다. 더 바람직하게는, 폴리사카라이드계 성분은 안정한 액체 조성물의 점도를 증점제와 함께 물 또는 다른 적절한 수용액만을 포함하는 액체 조성물이 가졌던 점도의 적어도 1/3로 감소시킨다. 특정 실시양태에서, 폴리사카라이드계 성분은 안정한 액체 조성물의 점도를 증점제와 함께 물 또는 다른 적절한 수용액만을 포함하는 액체 조성물이 가졌던 점도의, 적어도 약 5%, 6%, 7%, 8%, 9%, 10%, 11%, 12%, 13%, 14%, 15%, 16%, 17%, 18%, 19%, 20%, 21%, 22%, 23%, 24%, 25%, 26%, 27%, 28%, 29%, 30%, 31%, 32%, 33%, 34%, 35%, 36%, 37%, 38%, 39%, 40%, 41%, 42%, 43%, 44%, 45%, 46%, 47%, 48%, 49%, 50%, 51%, 52%, 53%, 54%, 55%, 56%, 57%, 58%, 59%, 60% 또는 그 안의 임의의 범위로 감소시킨다.
적절하게는, 본 명세서에서 언급된 조성물은 실온에서 적어도 6개월 그리고 최대 적어도 2년 동안 안정적이다. 이와 관련하여 본 발명자는 폴리사카라이드계 성분을 포함하는 본 발명의 액체 조성물이 실온에서 6개월 이상 동안 저장한 후 그의 구성요소 물질(예를 들어, 폴리사카라이드계 성분 및 증점제) 사이에 분리가 거의 또는 전혀 없음을 입증함을 보여주었다. 이는 본 기술분야에 알려진 액체 증점제와 대조적이다. 예로서, 미국 특허 제6,455,090호(이하 "Uzahashi"라고 함)는 액체에 첨가될 때 증점할 수 있고 점성 용액 또는 겔의 형성이 처음에 억제되는, 액체 증점 제형을 생성하는 방법을 서술한다. 발명자는 상기 발명이 저작 및 연하 곤란을 겪는 환자를 위한 액체 또는 반-액체 식용품에 적절히 첨가될 수 있다고 주장한다.
그럼에도 불구하고, Uzahashi에 개시된 발명은 여기에 서술된 증점제가 미생물상의 또는 물리적 안정성을 나타내지 않고, 오히려 빠르게 분리되어 층을 생성하는 점에서 제한적이다. 또한, Uzahashi의 증점제는 액체 식품에 첨가될 때 액체 식품을 일관되고 균일하게 증점하지 못한다. 이와 같이, Uzahashi의 액체 증점제는 증상의 통상적인 동반이환을 예방하거나 제한하기 위해 삼킴 장애(연하곤란)를 관리하는 데 실질적인 유용성이 없다. 이런 유용성 부족은 두 가지이다. 첫 번째, 물리적 안정성이 부족하고 그에 따라 용매와 겔화제가 분리되므로 Uzahashi의 액체 증점제를 정확하게 투여할 수 없다. 이와 같이 개시된 발명은 생성된 증점된 식품의 소정의 점도와 관련하여 요구되는 수준을 충족시키는 것을 일관되게 보장할 수 없다. 두 번째, 여기에 서술된 것과 같은 환자는 전형적으로 취약한 집단이다. 실제로, Uzahashi의 액체 증점제 조성물은 미생물학적으로 안정하지 않으므로 서술된 바와 같이 의도된 집단에 임상적으로 투여되어서는 안된다. 반면, 본 명세서에 서술된 폴리사카라이드계 성분을 포함하는 액체 조성물은 분리되어 층을 생성하지 않고 따라서 수성 액체 또는 수성 액체 고체 혼합물 식용품에 첨가될 때 수성 액체 또는 수성 액체 고체 혼합물 식용품에 정확한 소정의 점도를 일관되게 부여함으로써(예를 들어, 표 3 참조), 종래기술의 이런 한계를 성공적으로 극복한다.
본 발명의 조성물은 증점제의 성능을 크게 저하시키지 않고 안정하기 때문에, 상업적으로 합리적인 기간 동안 점도가 일정하게 유지된다. 따라서, 계량된 펌프 디스펜서 또는 사쉐 내에서와 같은, 포장된 제품 그 자체로서, 최종 사용자에게 제형이 제공될 수 있다. 이 때문에, 최종 사용자는 식품 또는 음료의 원하는 최종 점도를 달성하기 위해 여기에 첨가할 본 발명의 액체 조성물의 함량을 신뢰성 있게 계산할 수 있다. 이후, 본 발명의 액체 조성물은 쉽게 분배되고 식용품에 쉽게 혼합되어 원하는 최종 제품을 제공한다.
앞서 서술한 바와 같이, 이런 방식으로 액체 조성물을 포장하고 사용하는 능력은 증점제 및 폴리사카라이드계 성분의 조합된 존재의 결과이고, 이는 저 전단 혼합의 적용을 통해 방출될 때까지 증점제의 점도의 발현을 억제하고, 정밀 팩 크기가 적합하지 않은 경우 정확히 측정하기 어렵고 액체 식용품에 혼입하기 어려운 것으로 악명이 높은 분말 또는 겔-유사 증점제의 전형적인 사쉐에 비해 사용시 뚜렷한 이점을 제공한다.
시간에 따른 본 발명의 액체 조성물의 안정성은 액체 조성물의 색상(존재하는 경우), 풍미(존재하는 경우), 분리(존재하는 경우), 미생물학적 부패(존재하는 경우), 점도 및/또는 투명도의 보유(retention)에 의해 표시될 수 있다. 추가적으로 또는 대안적으로, 액체 조성물의 안정성은 식용품에 첨가될 때 소정의 수준으로 일관되게 반복적으로 점도를 부여하는 조성물의 능력에 의해 결정될 수 있다. 액체 조성물의 안정성은 미생물학적 부패의 정도 및 속도를 측정하는 미생물학적 시험; 분리 및/또는 침전과 같은 물리적 변화에 대한 육안 검사; 색상, 풍미 및/또는 선명도 변화를 결정하는 감각 평가; 및 보스트윅 컨시스토미터, 브룩필드 점도계, 레오미터 또는 유사한 장치를 사용한 점도 측정을 포함하여, 식품 과학 분야의 통상의 기술자가 이용가능한 임의의 기술을 사용하여 결정될 수 있다.
안정성과 관련하여, 본 발명의 액체 조성물은 본 기술분야에 잘 알려진 바와 같이, 식품-등급 보존제를 추가로 포함할 수 있다. 적절한 식품 등급 보존제는 비제한적으로 젤란 검, 비타민 E, 소르브산 칼륨, 벤조산 나트륨, 메타중아황산 나트륨, 메틸 파라벤, EDTA, 이산화황, 니신 및 프로피온산을 포함한다. 하나의 바람직한 실시양태에서, 식품-등급 보존제는 젤란 검이거나 이를 포함한다. 액체 조성물 중 보존제의 함량은 액체 조성물의 총 중량의 중량으로 약 0.001 내지 약 0.1% 범위일 수 있다.
다시, 안정성과 관련하여, 본 명세서에 서술된 액체 조성물은 적절하게는 약 3.0 내지 약 7.5 사이(예를 들어, 3.1, 3.2, 3.3, 3.4, 3.5, 3.6, 3.7, 3.8, 3.9, 4.0, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 5.0, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6.0, 6.1, 6.2, 6.3, 6.4, 6.5, 6.6, 6.7, 6.8, 6.9, 7.0, 7.1, 7.2, 7.3, 7.4, 7.5 및 그 안의 임의의 범위)의 pH의 것이다. 바람직하게는, 액체 조성물의 pH는 약 4 내지 4.4이다. 이를 위해, 액체 조성물의 산성 pH는 상술된 것과 같은 본 기술분야에 공지된 임의의 수단에 의해 달성될 수 있다.
적절하게는, 본 명세서에 서술된 액체 조성물은 저작 및/또는 연하 질환, 장애 또는 증상으로 고통 받는 대상체에게 제공하기 위한 수성 액체 또는 수성 액체 고체 혼합물 식용품에 첨가된다. 바람직하게는, 저작 및/또는 연하 질환, 장애 또는 증상은 연하곤란이거나 이를 포함한다. 이와 같이, 이런 사용을 위해 액체 조성물은 사쉐와 같은 적합한 개별 부분으로 분리되거나, 펌프로 분배가능한 것이 바람직하다.
연하곤란은 삼키는 과정이 손상된 상태라는 것은 쉽게 이해될 수 있다. 이는, 식사하는 동안, 액체 또는 고체 식품이 기도로 들어가는 것으로 이어질 수 있고 이후 환자의 폐가 잠재적으로 흡인성 폐렴으로 이어질 수 있다. 연하곤란은 모든 연령대에서 발생할 수 있지만, 노인에서 가장 흔하며, 뇌졸중을 겪었거나 치매가 있는 경우 특히 그러하다. 연하곤란 환자를 위한 하나의 관리 전략은 삼킴 반사를 늦추고 식품이 통과하기 전에 기관이 닫힐 시간을 허용하며, 이로써 식품의 흡입을 방지하는 질감이 변형된 식품(즉, 증점된 식품 및 음료)을 섭취하는 것이다.
적절하게는, 조성물은 식용품에 첨가될 때 식용품의 임피던스 수준에 실질적으로 변화를 생성하지 않도록 구성된다. 이에 따라, 식용품에 첨가될 때, 고해상도 임피던스 마노메트리(HRIM)와 같은, 진단 및/또는 예후의 설정에 적용하기에 적절할 수 있는, 알려진 전기 임피던스의 매체가 만들어진다. 따라서, 특정 실시양태에서, 식용품은 저작 및/또는 연하 질환, 장애 또는 증상, 예컨대 연하곤란으로 고통 받는 대상체의 진단 및/또는 예후를 결정하는 데 사용하기 위한 매체이거나 이를 포함한다.
전형적으로 연하곤란 증상은 인두 및 식도를 통한 조영제의 통과를 시각화하기 위해 환자로 하여금 X선 기계 앞에서 조영제를 삼키게 하고 삼키는 것을 영상화한다(비디오-형광투시법). 이 절차는 환자가 삼키는 방법에 대한 '스냅 샷'만 제공하므로 제한적이다. 또한, X선 평가는 정성적이고 비디오-형광투시법은 인두 및 식도 내 근육의 수축 또는 이완의 강도뿐 아니라 이것이 어떻게 삼킨 내용물의 움직임과 관련될 수 있는지를 평가할 수 없다. 그러나, 근육의 수축 상태는 마노메트리로 알려진 기술을 사용하여 측정될 수 있다. 최근 들어, 압력 및 그에 따른 내용물의 흐름(임피던스)을 "고해상도"(즉, HRIM)로 측정할 수 있는 중요한 발전이 있었다. 임피던스 전극과 결합된 많은 밀접하게-배치된 압력 센서를 통합한 카테터를 활용하면, 수축성 압력과 그에 따른 흐름이 공간 및 시간 그리고 연하곤란을 겪는 환자를 위한 생체역학적 기반의 삼킴 평가 수단을 제공하도록 구성된 흐름 맵(flow map)에 매끄럽게 '맵핑'될 수 있다. 그러나, 이 진단 능력에는 압력(마노메트리) 및 흐름(임피던스) 모두의 정확한 측정 및 분석을 가능하게 하는 일관되고 반복가능한 소정의 수준으로 증점되면서, 중요하게는 진단 볼루스 매체의 임피던스 수준에는 인식가능한 영향을 미치지 않는 특수한 볼루스 매체가 필요하다.
HRIM과 같은 임피던스 연구에 사용하기 위한 진단 매체는 일반적으로 전해질 용액을 포함한다. 이러한 진단 매체의 전기 임피던스는 주로 고정된 전하 밀도 및 따라서 그 안의 하전된 입자의 농도에 의해 결정될 수 있음이 인식될 것이다. 이러한 진단 매체를 증점하는 데 실질적인 유용성을 갖는 액체 조성물은 일반적으로, 임상적 효능을 갖는 것으로 알려진 점도 또는 농후함(thickness)의 범위(예를 들어, 150-900 cP)에 걸쳐, 알려진 임피던스 범위(예를 들어, 150-200 Ohm) 내에서 임피던스 수준을 유지하도록 구성되어야 한다.
어떠한 이론에 얽매이지 않고, 폴리사카라이드계 성분으로부터의 단백질성 분획을 제거하면 액체 조성물의 하전된 단백질의 농도를 제거, 감소 또는 제어하는 것으로 확신된다. 따라서, 전해질 수용액과 같은 진단 매체에 첨가될 때, 그 안의 하전된 입자의 수준이 거의 또는 전혀 증가하지 않으므로, 생성된 진단 매체의 임피던스는 임피던스 변화가 거의 또는 전혀 나타나지 않음을 입증한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 수성 액체 또는 수성 액체 고체 혼합물 식용품의 점도를 증가시키는 방법을 제공하며, 상기 방법은 다음 단계를 포함한다:
(a) 본 명세서에 서술된 안정한 액체 조성물을 식용품에 첨가하는 단계; 및
(b) 식용품 및 조성물을 혼합하여 조성물에 의해 상기 식용품의 점도의 증가를 촉진하는 단계.
적절하게는, 상기 방법은 조성물에 의해 상기 식용품의 점도 증가를 촉진하기 위해 식용품 및 조성물에 저-전단 혼합을 적용하는 단계를 추가로 포함한다.
본 명세서에서 일반적으로 사용되는 바와 같이, 용어 "저 전단 혼합"은 숟가락 등을 사용한 부드러운 혼합 또는 교반과 같은, 비-난류성(non-turbulent) 또는 최소한의 난류성(turbulent) 혼합을 지칭한다. 저-전단 혼합은 전단 속도의 측면에서 정의될 수 있고 전형적으로 혼합 용기 배열 및 혼합 장치 속도와 같은, 여러 변수의 함수라는 것이 이해될 것이다.
저-전단 혼합은 적절하게는 상기 증점제가 관련있는 액체 또는 반-액체의 식용품의 점도의 증가라는 원하는 효과를 발휘하도록 하기 위해, 하나 또는 복수의 증점제 상의 억제적 상호작용 위치로부터 폴리사카라이드계 성분의 물리적 제거를 촉진하기에 충분한 값임이 인식될 것이다. 따라서, 특정 실시양태에서, 저-전단 혼합은 약 10rpm 내지 약 40rpm(예를 들어, 약 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40 rpm 또는 그 안의 임의의 범위)의 속도로 교반하는 단계를 포함한다.
적절하게는, 저-전단 혼합은 약 60초 이하 동안 적용되어 식용품의 점도에서 최대 또는 거의-최대의 증가를 달성한다. 바람직하게는, 저-전단 혼합은 약 10초 내지 약 40초(예를 들어, 약 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40초 또는 그 안의 임의의 범위) 동안 적용되어 식용품의 최대 또는 거의 최대의 점도를 달성한다.
특정 실시양태에서, 식용품의 점도는 95 cP 초과로 적절히 증가된다.
상기 구현예과 관련하여, 점도가 증가된 식용품은 적절하게는 저작 및/또는 연하 질환, 장애 또는 증상으로 고통 받는 대상체에게 제공하기 위한 것이다. 바람직하게는, 저작 및/또는 연하 질환, 장애 또는 증상은 연하곤란이거나 이를 포함한다.
또 다른 구현예에서, 본 발명은 다음 단계를 포함하는 안정한 액체 조성물의 제조 방법을 제공한다:
(i) 상술한 내용에 따른 폴리사카라이드계 성분을 제공하는 단계;
(ii) 상기 폴리사카라이드계 성분에 하나 또는 복수의 증점제를 첨가하는 단계; 및
(iii) 단계 (ii)의 혼합물을 혼합하여 안정한 액체 조성물을 생성하는 단계.
적합하게는, 안정한 액체 조성물은 상술한 것이다.
본 발명의 안정한 액체 조성물의 제조는, 예를 들어 수성 담체와 같은 적절한 액체 담체 내에 존재할 때, 폴리사카라이드계 성분 및/또는 하나 또는 복수의 증점제를 가열하는 단계를 포함할 수 있다. 이후, 가열된 조성물은 핫-필(hot-fill) 포장되거나, 또는 포장 전 냉각될 수 있다.
본 방법은 폴리사카라이드계 성분의 수용액 또는 현탁액을 제조하는 단계를 포함할 수 있다. 이와 관련하여, 수용액은 현탁액의 수용액의 총 함량을 기준으로, 약 0.1 내지 약 60 중량%의 폴리사카라이드계 성분의 건조 질량 함량을 가질 수 있다.
유사하게, 본 방법은 증점제의 수용액 또는 현탁액을 제조하는 단계를 포함할 수 있다. 이와 관련하여, 수용액은 현탁액의 수용액의 총 함량을 기준으로, 약 0.1 내지 약 60 중량%의 증점제의 건조 질량 함량을 가질 수 있다.
최근 구현예의 방법은 안정한 액체 조성물에 하나 이상의 부형제 또는 첨가제, 예컨대 색상, 풍미, 단백질(동물 및 식물), 식이섬유, 비타민 및 미네랄, 보습제, 예를 들어 글리세롤 및 소르비톨, 지방 및 오일, 유화제, 산도 조절제, 항산화제, 저칼로리 증량제, 퍼밍제(firming agent), 풍미 증진제, 발포제, 겔화제, 보존제, 분리제(sequestrant) 및 안정화제를 첨가하는 단계를 선택적으로 포함할 수 있다.
명세서 전체에서 목적은 본 발명을 임의의 하나의 실시양태 또는 특정 특징의 집합으로 제한하지 않고 본 발명의 바람직한 실시양태를 설명하는 것이었다. 따라서, 본 개시 내용에 비추어, 본 발명의 범위를 벗어나지 않고 예시된 특정 실시양태에서 다양한 변형 및 변경이 이루어질 수 있음이 본 기술분야의 기술자에 의해 인식될 것이다.
본 명세서에서 언급된 모든 컴퓨터 프로그램, 알고리즘, 특허 및 과학 문헌은 본 명세서에 참조로 포함된다.
이 명세서에 인용된 출판물에 대한 임의의 언급은 그 개시가 오스트레일리아에서 통상의 일반적인 지식을 구성한다고 인정하는 것은 아니다.
본 발명이 더 쉽게 이해되고 실행될 수 있도록, 이제 하나 이상의 바람직한 실시양태가 단지 예로서, 설명될 것이다.
실시예 1: 폴리사카라이드계 성분의 제조 방법
본 실시예의 목적은 단백질 함량 및 구성 뿐만 아니라 그로부터 제거된 단백질성 분획과 관련하여 본 발명의 폴리사카라이드계 성분의 실시양태를 분석하는 것이었다.
방법
도 1에 상세히 설명된 바와 같이 식품 증점 조성물의 제조 공정의 다양한 단계에서 8개의 샘플을 분석하였다. 각 샘플의 부분표본(15-20g)을 각각 8개의 용기에 넣고, 뒤마법(Dumas method) (Kjeldahl 방법의 업데이트 버전) (Leco, AOAC 968.06)에 의해 결정되는 총 질소 정량화를 위해 매시(Massey) 대학교의 영양 실험실로 배송하였다.
결과
질량 균형
도 1에 설명된 공정 동안 시스템에 들어오고 나가는 투입량(input) 및 산출량(output)의 질량 균형이 표 1에 요약되어 있다. 산 열 가수분해의 결과로서 총 43.9 ㎏이 제거되었다.
식품 증점 조성물의 제조 공정 동안 시스템에 들어오고 나가는 투입량 및 산출량의 질량 균형
KG
단계 투입량 산출량 1
(추출물)		 산출량 2 누적
(농축물)
1 9843.30 8.70 9834.60
2 1327.60 15.20 224.00 10923.00
3 527.50 20.00 168.00 11262.50
총 질소 분석
농축물 샘플의 단백질 함량은 분석적으로 수득한 총 질소에 존스(Jones) 전환 계수, 6.25(Jones, 1931)를 곱하여 근사값을 구하였다(표 2). 각 단계에서 농축물의 단백질 함량 내 감소 비율을 도 2에 나타낸다. 샘플 전체의 단백질 함량은 0.0031 g/g 내지 0.0063 g/g 범위였고 여기서 샘플 4 (2차 수집 추출물)는 가장 높은 단백질 함량을 함유하였고 샘플 5 (2차 수집 농축물)는 가장 낮은 단백질 함량을 함유하였다. 대부분의 단백질은 산 및 열 가수분해의 초기 2시간 단계 후에 폴리사카라이드계 성분 (및/또는 이의 중간생성물)으로부터 추출되었다. 상당한 양의 단백질 제거는 식품 증점 조성물의 후속 적용을 용이하게 하는 기술을 뒷받침한다. 구체적으로: 수화된 점도가 억제된 크산탄 용액의 안정한 위치 특이적 억제; 및 서술된 바와 같이 진단 애플리케이션을 용이하게 하는 변경된 전기 임피던스.
농축물 샘플의 단백질 함량은 분석적으로 수득된 총 질소를 곱하여 근사값을 구하였다.
도 1로부터의
샘플링 포인트 		샘플 CI 명칭 N % 단백질 %
(g/100g)
1 벌크 농축물 CI-TSC-8 0.06 0.38
3 제1 농축물 CI-TSC-3 0.05 0.31
5 제2 농축물 CI-TSC-5 0.07 0.44
7 제3 농축물 CI-TSC-6 0.08 0.50
9 제4 농축물 CI-TSC-7 0.08 0.50
참고 문헌
AOAC 968.06-1969, Protein (Crude) in animal feed. Dumas method.
Jones, D. B. (1931). Factors for converting percentages of nitrogen in foods and fees into percentages of proteins. Circular No. 183. US Department of Agriculture, Washington, DC.
실시예 2: 본 발명에 의해 증점된 진단 매체의 임피던스의 평가
본 실시예의 목적은 본 발명의 일 실시양태의 폴리사카라이드계 성분을 갖는 액체 조성물의 첨가가 진단 매체의 전기 임피던스에 미치는 영향을 평가하는 것이었다. 도 3에서 관찰할 수 있듯이, 본 연구는 폴리사카라이드계 성분을 사용하여 생성된 액체 조성물이 다양한 농도로 증점된, 4개의 농도(증점되지 않음, 수준 150, 수준 400 및 수준 900으로 증점됨)에 걸친 10 ㎖의 진단 볼루스 매체를 비교하였다. 임피던스 수준에 의해 영향을 받는 매개변수(예를 들어, UES 개방, 볼루스 존재 시간)가 상이한 농도에서 매우 안정적이다.
언어 병리학 직업 지침에 따라 세 가지 농도 수준에 대해, 개시된 발명에 의해 증점된 액체의 점도에 대한 목표 범위(밀리 파스칼 초 (mPa.s))
분류 수준 설명 목표 점도 범위* 최근 발명으로 달성된
정밀도의 수준
부드럽게 농후함 150 과즙 농도 110-190 mPa.s 130-170 mPa.s
중간정도로 농후함 400 꿀 농도 300-500 mPa.s 350-450 mPa.s
매우 농후함 900 푸딩 농도 750-1000 mPa.s 825-975 mPa.s
실시예 3: 폴리사카라이드 계 성분으로부터 추출된 단백질의 단백질 분석 데이터
본 실시예에서, 성분을 생성하는 공정에서 채취한 샘플, 뿐만 아니라 초기 하이드로콜로이드 및 최종 생성물을, 단백질/펩타이드 함량 및 프로파일에 관하여, 겔로부터 회수된 밴드의 SDS-PAGE 및 LC-MS 분석을 사용하여 분석하였다. 개별 샘플에 대해 수득한 결과를 출발 물질과 비교하여 공정 중에 어떠한 변경이 발생했는지 확인하였다.
재료 및 방법
SDS-PAGE 프로토콜
실시예 1에 서술된 식품 증점 제품의 제조 공정의 다양한 단계로부터 8개의 샘플을 선택하였다. 각각의 샘플의 부분표본(대략 200 ㎎)을 칭량하여 에펜도르프(Eppendorf) 튜브에 넣고, 물로 희석하여 최종 중량 1000 ㎎을 제공하였다. 앞서 수행한 총 단백질 측정을 기초로 하면, 샘플의 단백질 농도는 0.6 내지 1 ㎎/㎖가 되어야 한다(표 1 참조).
SDS PAGE 전에, 5 ㎕ 샘플을 5 ㎕ LDS 샘플 버퍼, 2 ㎕ β-머캅토에탄올 및 8 ㎕ 물과 혼합하여 최종 부피 20 ㎕를 제공하였다. 이들 용액을 70℃에서 10분 동안 가열하였다. 이들 샘플을 냉각시킨 후, 각 샘플의 15 ㎕를 프리-캐스트 NuPAGE 겔(NuPAGE, 비스-트리스, 4-12%, 1.0 ㎜)의 웰에 적용하였다. 전기영동은 실온에서 35분 동안 수행하였다(시작 전압: 200V, 시작 전류: 90mA). 전력은 파머시아(Pharmacia) 생명공학 전기영동 전원 팩(EPS 600)에 의해 공급되었다. 겔은 쿠마시 블루로 염색되었다. 분자량 표준으로서, SeeBlue Plus2 사전-염색된 단백질 래더(인비트로젠(Invitrogen))를 첨가하였다.
겔 밴드 및 용액 내 펩타이드의 LC/MS 분석
샘플 준비
겔 밴드를 절단하고 아세토니트릴:50mM 중탄산 암모늄(1:1)으로 탈색한 후, 아세토니트릴로 탈수하고, 10mM 디티오트레이톨에 침지시켰다. 두 용액 샘플의 5 ㎕ 부분표본을 45 ㎕의 50mM 중탄산 암모늄으로 희석하고 DTT를 최종 농도 10mM까지 첨가하였다. 모든 샘플을 56℃에서 15분 동안 가열하였다. 겔 밴드 상청액을 50mM 요오드아세트아마이드로 대체하는 한편, 용액 샘플에 요오드아세트아마이드를 최종 농도 50mM까지 첨가하였다. 모든 샘플을 암실에서 실온에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 겔 조각을 아세토니트릴로 탈수하고, 건조하고 12.5 ng/㎕ 시퀀싱-등급 변형 돼지 트립신(프로메가(Promega))으로 재-팽윤시키는 한편, 용액 샘플에 1㎍의 시퀀싱-등급 변형 돼지 트립신을 첨가하였다. 모든 샘플을 60분 동안 15W의 전력을 사용하여 45℃에서 칠링된 마이크로파(CEM 디스커버(CEM Discover))에서 분해하였다. 분해물을 1 ㎕의 50% 포름산으로 산성화하였다.
두 용액 분해물을 탈염하고 10 ㎎ 오아시스 HLB SPE 카트리지에서 세척하고, 300 ㎕의 50% 아세토니트릴로 용리하였다. 추출물을 진공 원심분리기에서 ~20 ㎕로 건조시켰다. LC-MS/MS 분석을 위해 겔 밴드 분해물은 0.1% 포름산으로 3배 희석하고, 용액 추출물은 20배 희석하였다.
LC-MS/MS 분석
각각의 희석된 샘플의 2 ㎕ 부분표본을, 300 nl/분으로 물 중 0.1% 포름산 및 아세토니트릴 중 0.1% 포름산의 30분 구배를 사용하는 3 ㎛ 레프로실(Reprosil) C18 미디어로 인-하우스 포장된 0.075×150 ㎜ 피코프릿(picofrit) 컬럼(뉴 오브젝티브(New Objective))에서 분리하기 전에 탈염을 위해 3 ㎛ 레프로실 C18 미디어(닥터 마이슈(Dr Maisch))로 포장된 0.3×10 ㎜ 트랩 컬럼에 주입하였다.
피코프릿 스프레이는 350-1600 m/z에서 200 ms 동안 스캔하는 TripleTOF 6600 사중극-비행-시간(Quadrupole-Time-of-Flight) 질량 분석계(사이엑스(Sciex), 프레이밍햄, MA, USA)로 보내지고, 이후, 12초의 동적 배제 시간을 갖는 35개의 가장 풍부한 다중-하전된 펩타이드(m/z 100-1600)에 대해 50ms MS/MS 스캔하였다. 질량 분석계와 HPLC 시스템은 Analyst TF 1.7 소프트웨어 패키지(사이엑스)의 제어 하에 있었다. 각 풀로부터 생성된 데이터에 대해 다음의 매개변수로 프로틴파일럿(ProteinPilot) 버전 5.0(사이엑스)을 사용하여 앞서 언급된 단백질 서열 데이터베이스를 검색하였다: 샘플 유형, 식별; 검색 노력, 철저한; 시스 알킬화, 요오드아세트아마이드; 소화, 트립신; ID 포커스, 생물학적 변형 및 아미노산 치환(펩타이드 서열당 최대 2개의 아미노산이 치환될 수 있음). 상기 정합되지 않은 7개의 고강도 MS/MS 스펙트럼에 대해 수동 드 노보(de novo) 시퀀싱을 수행하였다. 이들 펩타이드에 대한 추출된 이온 크로마토그램(+/- 0.015Da)은 피크뷰(PeakView) 2.2(AB 사이엑스)를 사용하여 생성하였다.
도 7 내지 11은, 도 4에 따라 SDS PAGE로부터 추출된 밴드에 대해 생성된, 추출된 이온 크로마토그램을 요약한다.
하이드로콜로이드 내 단백질/펩타이드 프로파일의 결정
SDS-PAGE를 사용한 단백질/펩타이드 프로파일의 결정
공정의 다양한 단계에서 8개의 샘플을 연구하였다(표 4 참조). 처음에, 샘플 1 중 총 질소 함량을 결정하고 이 값에 존스 전환 계수(JF = 6.25)2를 곱하여 샘플의 총 단백질 함량의 근사값을 구하였다. 표 4에 요약된 결과는 샘플이 3.1 내지 6.3 ㎎ 단백질/g 샘플을 함유하고 있음을 보여준다.
단백질 함량은 매시 대학교 영양 실험실에서 뒤마법에 따라 결정된 총 질소 함량을 기준으로 계산하였다.
하이드로콜로이드 샘플 내 단백질 함량
샘플 번호* 샘플 설명 CI 샘플 번호 단백질(㎎/g)
1 벌크 농축물 1
(초기 하이드로콜로이드)		 TSC 8 3.80
2 벌크 농축물 2 TSC 3 3.10
3 제1 추출물 TSC 1 3.80
4 벌크 농축물 3 TSC 5 4.40
5 제2 추출물 TSC 2 6.30
6 벌크 농축물 4 TSC 6 5.00
7 제3 추출물 TSC 4 5.60
8 벌크 농축물 5
(상업용 제품)		 TSC 7 5.00
* 도 1에 개략적으로 설명된 공정 순서에 따름
공정 동안, 총 단백질 함량은 동일한 공정 단계에서 채취한 농축물과 비교할 때 더 높은 함량을 갖는 추출물에서 약간 증가하는 것이 관찰되었다(예를 들어, 벌크 농축물 2 및 제1 추출물, 표 4 참조).
이와 관련하여, 처리 공정에 검(예를 들어, 크산탄 검)을 첨가하기 전 초기 미처리 하이드로콜로이드부터 제1 추출물까지 단백질의 감소가 강조된다. 또한, 제3 및 제4 농축물(즉, 샘플 6 및 8)의 단백질 수준은 크산탄 검의 첨가 및 그에 따른 처리 공정에의 추가적인 단백질로 인해 증가함에 유의한다.
SDS PAGE 분석을 위해, 각 샘플에 대해 물 중 대략 200 ㎎/g의 용액을 제조하였다. 앞서 수행된 총 단백질 측정을 기초로 하면, 샘플의 단백질 농도가 0.6 내지 1 ㎎/㎖가 되어야 한다. 샘플 CI-TSC 4, 6 및 7은 투명한 용액을 제공하지 않았고, 다만 고체의 불균질 겔을 형성하여 피펫팅 및 샘플의 추가적인 처리를 어렵게 만들었다. Laemmli에 따라 샘플을 처리하고 SDS PAGE를 수행하였다. 생성된 겔을 도 4에 나타낸다.
출발 물질(레인 8, TSC 8), 맨 처음의 두 추출물(레인 1, TSC1 및 2, TSC 2) 및 벌크 농축물 2에서, 20 kDa에서 하나의 강한 밴드 및 40 및 60kDa에서 두 개의 희미한 밴드가 보인다. 대조적으로, 벌크 농축물 3 (레인 5, TSC 5)에서는 매우 희미한 염색만 관찰되었고 제3 추출물 (레인 4, TSC 4), 벌크 농축물 4 (레인 6, TSC 6) 및 상업용 제품 (레인 7, TSC 7)에서는 단백질이 검출되지 않았다. 이와 관련하여, 초기 열처리 및 단백질 추출 단계 후의 제3 농축물에서 60 kDa 단백질의 손실이 강조된다. 이 더 큰 분자량 단백질 분획의 제거가 본 발명의 폴리사카라이드계 성분의 안정성에 긍정적인 영향을 미친다고 가정된다.
초기 결과에 따르면, 이들 후자의 샘플은 0.44 내지 0.56%의 단백질을 함유하며(표 4 참조) 사용된 전기영동 조건 하에서 겔에 검출될 수 있는 충분한 단백질을 제공해야 한다. 그러나 위에서 언급한 바와 같이, 이들 샘플은 물과 혼합될 때 매우 점성이 있는 겔을 형성하였다. 이는 샘플의 처리 및 겔로의 이동을 어렵게 만들었고, 겔에 충분한 단백질이 로딩되지 않았을 수 있다.
단백질/펩타이드의 LC/MS 분석
단백질/펩타이드의 LC/MS 분석은 뉴질랜드 오클랜드 대학교의 생물 과학 대학의 유전체학 및 단백질체학 센터에서 수행되었다. 각 풀에 대해 생성된 데이터는 프로틴파일럿을 사용하여 단백질 서열 데이터베이스에 대해 검색되었다(위의 재료 및 방법 섹션 참조).
분석을 위해, 염색 후 SDS PAGE 겔에 보이는 밴드(도 4의 빨간색 화살표 참조)를 외과용 칼을 사용하여 조심스럽게 잘라내고 라벨이 붙은 에펜도르프 바이알에 개별적으로 넣었다. 전체적으로, 표 5에 개략적으로 설명한대로 13개의 샘플을 채취하였다.
샘플은 위에서 자세히 설명한대로 표준 프로토콜에 따라 처리 및 분석하였다. 생성된 펩타이드를, 샘플에 잠재적으로 존재하는 종의 서열에 대한 항목 및 가능한 오염물질(예를 들어, 인간 케라틴)에 대한 항목과, 단백질 서열 데이터베이스로, 비교하였다.
LC/MS 분석을 위해 SDS PAGE 겔에서 추출된 겔 밴드
샘플 번호 샘플 설명 CI 샘플 번호 밴드 번호 분자량(kDa) 밴드 ID
1 벌크 농축물 1 TSC 8 1
2
3		 60
40
20		 TSC8-1
TSC8-2
TSC8-3
2 벌크 농축물 2 TSC 3 1
2
3		 60
40
20		 TSC3-1
TSC3-2
TSC3-3
3 제1 추출물 TSC 1 1
2
3		 60
40
20		 TSC1-1
TSC1-2
TSC1-3
4 벌크 농축물 3 TSC 5 1
2		 40
20		 TSC5-1
TSC5-2
5 제2 추출물 TSC 2 1
2
3		 60
40
20		 TSC2-1
TSC2-2
TSC2-3
데이터베이스 검색은 인간 케라틴, (샘플 처리에 사용된) 돼지 트립신 및 일부 식물 유래 단백질과 많은 정합을 생성하였다(표 6). 그러나, 더 강렬한 펩타이드가 자동적으로 확인되지는 않음을 관찰하였다(표 6 참조). 다른 식물(350만 항목을 함유)을 포함하는 더 광범위한 데이터베이스의 검색에서도 정합이 생성되지 않았다.
겔 밴드 샘플 TSC2-3에 대해 프로틴파일럿에 의해 확인된 단백질의 목록.
단백질 명칭
(또는 최상의 BLAST 정합 명칭)		 종 미사용 점수* 펩타이드
Conf>95%
케라틴 1 호모 사피엔스 71.6 45
케라틴 10 호모 사피엔스 32.0 19
베타 트립신 돼지
(Sus scrofa)		 23.9 37
케라틴, 타입 II 세포골격 6C 호모 사피엔스 23.1 17
퍼옥시다아제 대두 11.8 9
단백질 P21 대두 7.8 4
액틴-유사 대두 6.3 3
산성 엔도키티나아제-유사 대두 2.0 2
류신-풍부 반복 익스텐신-유사 대두 2.0 1
14 kDa 프롤린-풍부 단백질 대두 2.0 1
베타-갈락토시다아제 대장균 2.0 1
* 미사용 점수는 각 단백질에 대한 고유한 펩타이드 증거의 척도이다. Β-갈락토시다아제는 질량 분석계를 보정하는 데 사용된다.
7개의 더 강렬한 펩타이드의 수동 시퀀싱은 표 7에 요약된 제안된 펩타이드 서열을 생성하였다. 이들을 사용하여 모든 식물 종에 대해 데이터베이스를 검색하였다. 일부 부분적 정합이 생성되었지만, 모든 이들 펩타이드의 공급원이 되는 특정 식물 단백질의 명백한 암시는 없었고, 이는 단백질 서열이 현재 공적으로 사용가능한 것과 매우 다름을 제시한다.
이에 더하여, 상술된 처리 공정은 폴리사카라이드계 성분이 새로운 단백질 분획임을 입증하는 결과가 되었다. 또한, 최종 농축물 (및 제3 농축물 이후로부터의 것)에서 원래의 60kDa 단백질 분획을 제거하면 제품 안정성, 특히 분리와 관련하여 개선되는 결과가 있다고 가정된다.
풍부하고 정합되지 않은 펩타이드에 대해 제안되는 수동적으로 유래된 드 노보 서열.
m/z z RT (분) 제안된 드 노보 서열 ppm 오차
680.6341 3 12.1 (AS 또는 SA)SGANTPSGPYTHD...* n/a
507.7728 2 15.3 NPEWLVTR 1.6
399.2250 3 13.2 명료한 결과가 없음 n/a
441.7236 2 12.4 LVFCSEK 1.1
415.7782 2 12.5 VKPLVFK -0.2
466.7511 2 11.2 LLVTDDEK 1.5
705.3631 2 15.9 NGGNYYLVSVPAR 1.2
* 단편 이온 스펙트럼의 낮은 질량 부분 앰비귀티 I로 인해 완전히 시퀀싱되지 않음
겔 밴드 샘플 TSC8 OR에 대해 프로틴파일럿에 의해 확인된 단백질의 목록.
단백질 명칭
(또는 최상의 BLAST 정합 명칭)		 종 미사용
점수*		 펩타이드
Conf>95%
퍼옥시다아제 대두 22.7 14
퍼옥시다아제 대두 21.2 17
단백질 P21-유사 대두 17.1 14
베타 트립신 돼지
(Sus scrofa)		 15.8 34
베타-자일로시다아제/알파-L-아라비노푸라노시다아제 1 대두 6.6 5
갈락토오스 옥시다아제-유사 대두 6.1 7
퍼옥시다아제 대두 5.5 5
류신-풍부 반복 패밀리 단백질/익스텐신 대두 4.3 4
베타-자일로시다아제/알파-L-아라비노푸라노시다아제 2 대두 4.0 5
케라틴 1 호모 사피엔스 4.0 2
글루칸 엔도-1,3-베타-글루코시다아제-유사 단백질 대두 4.0 2
신장 인자 Tu 스핀고모나스
(Sphingomonas)		 3.5 2
불특성화 단백질 대두 3.2 1
시스테인 프로테이나아제 억제제 대두 2.9 3
레티큘린 옥시다아제-유사 단백질 대두 2.8 1
레티큘린 옥시다아제-유사 단백질 대두 2.3 2
불특성화 단백질 대두 2.1 2
퍼옥시다아제 대두 2.1 2
아스파르트산 프로테아제 대두 2.0 1
퍼옥시다아제 대두 2.0 2
산성 엔도키티나아제-유사 대두 2.0 1
레티큘린 옥시다아제-유사 단백질 대두 2.0 1
퍼옥시다아제 대두 2.0 14
류신-풍부 반복 익스텐신-유사 단백질 6 대두 2.0 2
포르민-유사 단백질 대두 2.0 1
14 kDa 프롤린-풍부 단백질 대두 2.0 1
베이직 엔도키티나아제-유사 대두 2.0 2
추정 지질-전달 단백질 대두 2.0 1
지버렐린-조절 단백질 13-유사 대두 2.0 1
* 미사용 점수는 각 단백질에 대한 고유한 펩타이드 증거의 척도이다. Β-갈락토시다아제는 질량 분석계를 보정하는 데 사용된다.
전반적으로, 7개의 주요 펩타이드의 상대적인 풍부함 및 모든 샘플에 걸쳐 이들 펩타이드가 일반적으로 일치하는 모습에서 이들 샘플에 존재하는 주요 (미확인) 단백질이 13개 제제 모두에서 발견된다는 것을 확인했지만, 낮은 단백질 분자량 겔 밴드 중 하나의 펩타이드의 풍부함에서 현저한 감소가 관찰되었고 이는 예상되는대로 모 단백질의 특정 영역의 손실과 일치한다(도 7 내지 11의 이온 크로마토그램 참조). 위에서 언급한 바와 같이, 이 특정 단백질 분획의 제거가 애플리케이션에 안정성을 부여한다고 가정된다.
결론
처리 중에 채취한 샘플의 LC/MS 분석은 7개의 주요 펩타이드를 함유하는 프로파일을 생성하였다. 공지된 식물 단백질 데이터베이스를 광범위하게 검색해도 이들 펩타이드와 정합하는 결과가 없었다.
실시예 4: Uzuhashi 실시양태 대비 본 발명의 안정성 비교
본 실시예는 미국 특허 제6,455,090호(이하 "Uzuhashi")의 바람직한 실시양태의 상세한 설명(컬럼 4, 라인 26)에 서술된 제2 방법에 관한 것이며, 이를 본 발명에 의해 제공되는 바와 같은 점도 억제 폴리사카라이드 및 증점제의 산성화 및 보존된 용액인 상기 실시예 1의 제형과 비교한다.
Uzahashi는 액체에 첨가될 때 증점할 수 있고 점성 용액 또는 겔의 형성이 처음에 억제되는 액체 증점제를 생성하는 방법을 서술한다. 발명자는 상기 발명이 저작 및 연하 곤란을 겪는 환자를 위한 액체 또는 반-액체 식용품에 적절히 첨가될 수 있다고 주장한다.
미생물 안정성
표 1. 미생물학적 성장의 증거를 발달시키는 데 걸리는 시간(주수)
Figure pct00001
* 미생물학적 성장의 발달은 생성되는 가스(예를 들어, CO2)의 출현 및 용액에서 "꺼짐(off)" 냄새의 발생에 의해 입증되는 바와 같은 미생물 발효의 존재에 의해 먼저 감지된다.
물리적 안정성
점도 억제 폴리사카라이드로부터 증점제(들)를 분리함으로써 각 제형의 물리적 안정성이 입증되었다. 이를 위해, 액체 증점제의 샘플 20g의 점도(흐름 30초 후 보스트윅 컨시스토미터로 측정)를 용기 바닥에서 구하고 100 ㎖의 물에 혼합하였다(참고: 보스트윅 판독 값의 증가는 점도의 감소(묽어짐)를 나타낸다).
표 2. 시간에 따른 물리적 안정성.
Figure pct00002
* 묽은 유체에 대한 보스트윅 컨시스토미터의 판독 한계는 24 ㎝이다.
4주 후, Uzuhashi 실시양태는 보스트윅 판독 값에 변화가 없음에도 불구하고 계속해서 더 묽은 점도를 생성하였다. 8주 후, Uzuhashi 실시양태의 바닥에 있는 분리 층은 점도 억제 폴리사카라이드의 투명한 층만을 함유하고 증점제는 함유하지 않은 반면, 실시예 1의 제형은 52주 이상 동안 물리적으로 안정하게 유지된다.
따라서, Uzahashi에 개시된 발명은 여기에 서술된 증점제가 미생물학적 또는 물리적 안정성을 나타내지 않는 점에서 제한적이다. 이와 같이, Uzahashi의 액체 증점제는 증상의 통상적인 동반이환을 예방하거나 제한하기 위해 삼킴 장애(연하곤란)를 관리하는 데 실질적인 유용성이 없다. 이런 유용성 부족은 두 가지이다. 첫 번째, 물리적 안정성이 부족하고 그에 따라 용매와 겔화제가 분리되므로 Uzahashi의 액체 증점제를 정확히 투여할 수 없다. 이에 더하여, Uzahashi의 액체 증점제는 실시예 1의 액체 증점제와 비교할 때 액체 또는 액체-고체 식용품을 일관되고 균일하게 증점하는 데 감소된 능력을 추가로 입증한다.
위와 같은 점을 감안할 때, Uzahashi에 개시된 발명은 생성된 증점된 식품의 소정의 점도와 관련하여 요구되는 수준을 충족시키는 것을 일관되게 보장할 수 없다. 두 번째, 여기에 서술된 것과 같은 환자는 전형적으로 취약한 집단이다. 따라서, 이들은 NSW 식품청 - 취약한 사람들에게 식품을 제공하기 위한 지침과 같은 입법 문서에 의해 관리된다. Uzahashi의 액체 증점제 조성물은 미생물학적으로 안정하지 않으므로 서술된 바와 같이 의도된 집단에 임상적으로 투여될 수 없다.

Claims (34)

  1. 라릭스 옥시덴탈리스 폴리사카라이드 추출물, 라릭스 라리시나 폴리사카라이드 추출물, 아카시아 나무 폴리사카라이드 추출물, 라릭스 데시두아 폴리사카라이드 추출물, 라릭스 시비리카 폴리사카라이드 추출물 및 이의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리사카라이드계 원료 물질;을 포함하는 식품 증점 조성물의 제조에 사용하기 위한 폴리사카라이드계 성분으로서,
    상기 폴리사카라이드계 원료 물질은 단백질 가수분해 단계를 거친 것인 폴리사카라이드계 성분.
  2. 청구항 1에 있어서,
    상기 폴리사카라이드계 원료 물질은 단백질 추출 단계를 추가로 거친 것인 폴리사카라이드계 성분.
  3. (i) 라릭스 옥시덴탈리스 폴리사카라이드 추출물, 라릭스 라리시나 폴리사카라이드 추출물, 아카시아 나무 폴리사카라이드 추출물, 라릭스 데시두아 폴리사카라이드 추출물, 라릭스 시비리카 폴리사카라이드 추출물 및 이의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 폴리사카라이드계 원료 물질을 제공하는 단계; 및
    (ii) 상기 폴리사카라이드계 원료 물질의 단백질의 일부를 가수분해하는 단계;를 포함하고, 이로써 폴리사카라이드계 성분을 제조하는, 식품 증점 조성물의 제조에 사용하기 위한 폴리사카라이드계 성분의 제조 방법.
  4. 청구항 3에 있어서,
    (ii)의 폴리사카라이드계 원료 물질로부터 가수분해된 단백질의 일부를 추출하는 단계를 추가로 포함하는 방법.
  5. 청구항 1 또는 청구항 2 또는 청구항 3 또는 청구항 4에 있어서,
    상기 단백질 가수분해 단계는 열처리, 프로테아제 처리, 산 처리, 알칼리 처리, 마이크로파 방사선 처리, 및 금속 아쿠아이온 처리 중 하나 이상을 포함하는 폴리사카라이드계 성분 또는 방법.
  6. 청구항 5에 있어서,
    상기 단백질 가수분해 단계는 열처리 및/또는 산 처리를 포함하는 폴리사카라이드계 성분 또는 방법.
  7. 청구항 5 또는 청구항 6에 있어서,
    산 처리는 상기 폴리사카라이드계 원료 물질을 젖산, 인산, 구연산, 말산, 아스코르브산, 포름산, 푸마르산, 숙신산, 타르타르산, 글루콘산 및 이의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 식품 등급 산과 접촉시키는 단계를 포함하는 폴리사카라이드계 성분 또는 방법.
  8. 청구항 7에 있어서,
    상기 식품 등급 산은 글루콘산이거나 이를 포함하는 폴리사카라이드계 성분 또는 방법.
  9. 청구항 8에 있어서,
    상기 글루콘산은 적어도 부분적으로 글루코노 델타-락톤으로부터 유래되는 폴리사카라이드계 성분 또는 방법.
  10. 청구항 5 내지 9 중 어느 한 항에 있어서,
    산 처리는 약 3 내지 약 5의 pH에서 수행되는 폴리사카라이드계 성분 또는 방법.
  11. 청구항 10에 있어서,
    산 처리는 약 4.2 내지 4.4의 pH에서 수행되는 폴리사카라이드계 성분 또는 방법.
  12. 청구항 5 내지 11 중 어느 한 항에 있어서,
    열처리는 약 55℃ 내지 약 90℃의 온도에서 수행되는 폴리사카라이드계 성분 또는 방법.
  13. 청구항 12에 있어서,
    열처리는 약 70℃ 내지 약 80℃의 온도에서 수행되는 폴리사카라이드계 성분 또는 방법.
  14. 청구항 3 및 5 내지 13 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단백질 추출 단계는 중력 분리, 원심분리, 크기 배제 크로마토그래피, 소수성 상호작용 크로마토그래피, 이온 교환 크로마토그래피, 자유 흐름 전기영동, 금속 결합, 면역친화성 크로마토그래피 및 면역침전 중 하나 이상을 포함하는 폴리사카라이드계 성분 또는 방법.
  15. 청구항 1 내지 14 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 단백질 가수분해 단계는 약 15분 내지 약 30시간의 기간 동안 수행되는 폴리사카라이드계 성분 또는 방법.
  16. 청구항 15에 있어서,
    상기 단백질 가수분해 단계는 약 30분 내지 약 2시간의 기간 동안 수행되는 폴리사카라이드계 성분 또는 방법.
  17. 청구항 3 내지 16 중 어느 한 항의 방법에 의해 제조되는 폴리사카라이드계 성분.
  18. (i) 하나 또는 복수의 증점제; 및
    (ii) 청구항 1, 2 및 5 내지 17 중 어느 한 항에 따른 폴리사카라이드계 성분;을 포함하는 4000 cP 미만의 점도를 갖는 안정한 액체 조성물로서,
    상기 조성물을 수성 액체 또는 수성 액체 고체 혼합물 식용품에 첨가하면 상기 식용품의 점도가 증가하는 안정한 액체 조성물.
  19. 청구항 18에 있어서,
    상기 증점제는 한천, 알긴산, 카라기난, 구아 검, 트라가칸스 검, 가티 검, 미세결정질 셀룰로오스, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스, 메틸 셀룰로오스, 하이드록시프로필메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필셀룰로오스, 메틸에틸셀룰로오스, 카라야 검, 크산탄 검, 로커스트 콩검, 타라 검, 사일리움 씨드 검, 퀸스 씨드 검, 펙틴, 푸르셀라란, 젤란 검, 곤약, 알긴산 나트륨 및 이의 임의의 조합으로 이루어진 군으로부터 선택되는 안정한 액체 조성물.
  20. 청구항 18 또는 청구항 19에 있어서,
    상기 조성물은 2000 cP 미만의 점도를 갖는 안정한 액체 조성물.
  21. 청구항 18 내지 20 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 95% 초과의 수분 활성도를 갖는 안정한 액체 조성물.
  22. 청구항 18 내지 21 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 실온에서 적어도 6개월 동안 안정적인 안정한 액체 조성물.
  23. 청구항 18 내지 22 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 조성물은 식용품에 첨가될 때 식용품의 임피던스 수준에 실질적으로 변화를 생성하지 않도록 구성된 안정한 액체 조성물.
  24. 청구항 23에 있어서,
    상기 식용품은 연하곤란의 진단 및/또는 예후를 결정하는 데 사용하기 위한 매체이거나 이를 포함하는 안정한 액체 조성물.
  25. (a) 청구항 18 내지 24 중 어느 한 항의 안정한 액체 조성물을 식용품에 첨가하는 단계; 및
    (b) 상기 식용품 및 상기 조성물을 혼합하여 조성물에 의해 상기 식용품의 점도의 증가를 촉진하는 단계;를 포함하는 수성 액체 또는 수성 액체 고체 혼합물 식용품의 점도를 증가시키는 방법.
  26. 청구항 25에 있어서,
    상기 혼합 단계는 저-전단 혼합을 적용하는 단계를 포함하는 방법.
  27. 청구항 26에 있어서,
    상기 저-전단 혼합이 약 30초 이하 동안 적용되어 식용품의 최대 점도를 달성하는 방법.
  28. 청구항 27에 있어서,
    상기 저-전단 혼합이 약 10초 내지 약 30초 동안 적용되어 식용품의 최대 점도를 달성하는 방법.
  29. 청구항 26 내지 28 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 저-전단 혼합은 약 10 rpm 내지 약 40 rpm의 속도로 상기 조성물을 교반하는 단계를 포함하는 방법.
  30. 청구항 25 내지 29 중 어느 한 항에 있어서,
    상기 식용품의 점도가 95 cP 초과로 증가되는 방법.
  31. 청구항 25 내지 30 중 어느 한 항에 있어서,
    점도가 증가된 식용품은 저작 및/또는 연하 질환, 장애 또는 증상으로 고통 받는 대상체에게 제공하기 위한 것인 방법.
  32. 청구항 31에 있어서,
    상기 저작 및/또는 연하 질환, 장애 또는 증상은 연하곤란이거나 이를 포함하는 방법.
  33. (i) 청구항 1, 2 및 5 내지 17 중 어느 한 항에 따른 폴리사카라이드계 성분을 제공하는 단계;
    (ii) 상기 폴리사카라이드계 성분에 하나 또는 복수의 증점제를 첨가하는 단계; 및
    (iii) 상기 단계 (ii)의 혼합물을 혼합하여 안정한 액체 조성물을 생성하는 단계;를 포함하는 안정한 액체 조성물의 생성 방법.
  34. 청구항 33에 있어서,
    상기 안정한 액체 조성물은 청구항 18 내지 24 중 어느 한 항의 조성물인 방법.
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