KR20200124255A - 돼지 트립신의 변이체 - Google Patents

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KR20200124255A
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토마스 슈틸거
세바스티안 리솜
클라우디아 펠러
안드레아스 포겔
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사노피-아벤티스 도이칠란트 게엠베하
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Abstract

본 발명은 돼지 트립신의 폴리펩티드 변이체, 이러한 변이체를 암호화하는 핵산 분자, 및 이러한 핵산 분자를 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다. 본 발명은 또한 인슐린 생산 방법에 있어서 이러한 변이체의 용도에 관한 것이다. 나아가, 본 발명은 의약, 식품 성분, 또는 사료 성분으로서의 이러한 변이체의 용도 및 식품 성분 또는 사료 성분 제조 과정 내에서의 이러한 변이체의 용도에 관한 것이다.

Description

돼지 트립신의 변이체
본 발명은 돼지 트립신의 폴리펩티드 변이체, 이러한 변이체를 암호화하는 핵산 분자, 및 이러한 핵산 분자를 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다. 본 발명은 또한 인슐린 생산 방법에 있어서 이러한 변이체의 용도에 관한 것이다. 나아가, 본 발명은 의약, 식품 성분, 또는 사료 성분으로서의 이러한 변이체의 용도 및 식품 성분 또는 사료 성분 제조 과정 내에서의 이러한 변이체의 용도에 관한 것이다.
엔도펩티다제 트립신은 인간 인슐린, 인슐린 유사체의 제조 및 인슐린 유도체에도 사용된다. 인간 인슐린, 인슐린 유사체, 또는 인슐린 유도체는 트립신을 이용한 효소적 가수분해에 의해 프레프로 인슐린(pre-pro insulin, PPI)으로부터 생성되며, 이때, 프레-서열과 C 펩티드가 각각의 생성물을 제공하기 위하여 절단된다(도 1 참조). 트립신은 폴리펩티드 사슬 내의 Arg 및 Lys 잔기의 C 말단 쪽에서의 절단에 특이적이다. 프레프로 인간 인슐린 및 프레프로 인슐린 글라진 폴리펩티드 내에는 B 사슬과 C 펩티드의 접합부의 B29Lys, B31Arg, 및 B32Arg를 포함한 몇몇 Arg 및 Lys 잔기가 존재한다. 따라서, 프레프로 인간 인슐린 및 프레프로 인슐린 글라진은 B29Lys, 및 B31Arg 및 B32Arg의 C 말단 쪽을 포함한, Arg 및 Lys 잔기의 C 말단 쪽에서 트립신에 의해 절단된다. 인슐린 글라진 제조의 경우, B32Arg 다음의 트립신 절단은 최종 인슐린 글라진을 제공한다. B29Lys 및 B31Arg 다음의 트립신 절단은 부산물인 desB30-Thr("des-Thr")-인슐린 글라진 및 desB32Arg-인슐린 글라진("des-Arg"로도 지칭됨)을 생성한다. 따라서, 인슐린 글라진의 제조 과정에서 부산물을 제거하는 것이 요구된다.
인간 인슐린 제조의 경우, B31Arg 다음의 트립신 절단은 B31Arg-인간 인슐린("mono-Arg"로도 지칭됨)을 생성하고, B32Arg 이후의 트립신 절단은 B31Arg-B32Arg-인간 인슐린("di-Arg"로도 지칭됨)을 생성한다. 둘은 모두 상기 제조 과정의 중간체이다. 후속 제조 과정에서, 이들 두 중간체는 모두 최종 인간 인슐린으로 전환된다. B29Lys 다음의 트립신 절단은 부산물인 desB30-Thr("des-Thr")-인간 인슐린을 생성한다. 따라서, 인간 인슐린의 제조 과정에서 부산물을 제거하는 것이 요구된다.
인간 인슐린 및 인슐린 글라진 제조의 경우, B32Arg 다음의 트립신 절단은 최종 인슐린 글라진을 생성하며, 인간 인슐린의 경우, 후속 공정 단계에서 최종 인간 인슐린으로 전환되는 중간체를 생성한다.
원치 않는 desB30-Thr-중간체의 형성을 해결하기 위하여, 과거의 개발은 Lys과 비교하여 Arg의 C 말단 쪽에 대한 선택성의 증가를 통해 이러한 잘못된 절단을 감소시키는 돼지 트립신 변이체 S172A를 생성하였다. 돼지 트립신 변이체 S172A는 국제 특허 출원 제WO　2007/031187　A1호에 기술되어 있으며, 이는 전문이 참조로서 본원에 포함된다.
그런데, 본 발명자들이 트립신 S172A 촉매 반응의 동역학을 주의 깊게 관찰했을 때, 놀랍게도 트립신이 문헌에서 기술된 바와 같이 엔도프로테아제로서 작용하여 PPI를 1차적으로 잘못 절단할 뿐만 아니라, 돼지 트립신에 고유한 부활성(side-activity)에 의해서도, 또한, 이의 변이체 S172A가 엑소펩티다제로서 작용하여 잘못 절단된 부산물이 형성된다는 점을 발견하였다. 또한, 엑소펩티다제 활성은 des-Arg 및 des-Thr의 형성 하에서 인슐린 글라진의 분해를 초래한다.
따라서, 감소된 부활성, 특히 감소된 엑소펩티다제 활성이 있는 신규한 트립신 변이체의 필요성이 선행 기술에 있었다. 이러한 신규한 트립신 변이체는 PPI의 절단의 부산물의 양을 감소시킬 것이고, PPI로부터 인슐린(또는 인슐린 유도체)를 생산할 때 더 높은 수율의 인슐린 및 인슐린 유도체를 초래할 것이다.
본 발명자들은 감소된 엑소펩티다제 활성이 있고/있거나 PPI 절단 반응에서 감소된 부산물 형성을 나타내는 신규한 돼지 트립신 변이체를 제조하였다.
위의 개요가 반드시 본 발명에 의해 해결된 모든 문제를 기술하는 것은 아니다.
제1 양태에서, 본 발명은 서열번호 1과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 돼지 트립신의 변이체에 관한 것으로, 이때, 상기 아미노산 서열은 적어도 서열번호 1에 따른 천연 돼지 트립신의 F24, S44, D56, G78, Y131, S172 및 W193에 해당하는 하나 이상의 위치에서 하나 이상의 아미노산의 치환에 의해 서열번호 1과 상이하며,
단, 상기 아미노산 서열은 서열번호 1에 따른 천연 돼지 트립신이 아니고;
상기 아미노산 서열은 서열번호 2에 따른 돼지 변이체 트립신 S172A가 아니다.
제2 양태에서, 본 발명은 제1 양태에 따른 돼지 트립신의 변이체를 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다.
제3 양태에서, 본 발명은 제2 양태에 따른 핵산 분자를 함유하는 숙주 세포에 관한 것이다.
제4 양태에서, 본 발명은 제1 양태에 따른 돼지 트립신의 변이체의 생산 방법에 관한 것으로, 방법은 제3 양태에 따른 숙주 세포를 배양하는 단계 및 배양 배지 또는 숙주 세포로부터 돼지 트립신의 변이체를 단리하는 단계를 포함한다.
제5 양태에서, 본 발명은 의약으로서 사용하기 위한, 식품 성분으로서 사용하기 위한, 사료 성분으로서 사용하기 위한, 또는 식품 성분 또는 사료 성분 제조 과정 내에서 사용하기 위한, 제1 양태에 따른 돼지 트립신의 변이체 또는 제2 양태에 따른 핵산 분자 또는 제3 양태에 따른 숙주 세포에 관한 것이다.
제6 양태에서, 본 발명은 인간 인슐린, 인슐린 유사체 또는 인슐린의 유도체의 생산 방법에서 제1 양태에 따른 돼지 트립신의 변이체의 용도에 관한 것이다.
제7 양태에서, 본 발명은 일반식 A-Lys-Thr-Arg-Arg-B의 단백질 또는 펩티드를 절단하기 위한 제1 양태에 따른 돼지 트립신의 변이체의 용도에 관한 것으로, A는 하나 이상의 아미노산으로 구성된 아미노산 서열이고; B는 하나 이상의 아미노산으로 구성된 아미노산 서열이다.
제8 양태에서, 본 발명은 제1 양태에 따른 돼지 트립신의 변이체 또는 제2 양태에 따른 핵산 분자 또는 제3 양태에 따른 숙주 세포를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
도 1은 인간 인슐린 및 인슐린 글라진의 프로프로-인슐린에 대한 주요한 트립신 절단 부위의 개략도를 보여준다. 색이 칠해진 삼각형은 생성물(들)을 생성하는 절단 부위를 나타내고, 칠하지 않은 삼각형은 부산물을 생성하는 절단 부위를 나타낸다. 프레프레-인슐린의 이황화 결합은 표시되지 않았다.
도 2는 트립신 변이체 S172A(서열번호 2)를 이용한 프레프로-인슐린 글라진의 절단을 보여준다. 이 도면은 인슐린 글라진 형성 및 가장 두드러진 절단 부산물인 B31Arg-인슐린 글라진(인슐린 글라진 B 사슬에서 위치 31 다음의 절단, 도면에서 "des-Arg"로 축약됨) 및 desB30Thr 인슐린 글라진(인슐린 글라진 B 사슬에서 위치 29 다음의 절단, 도면에서 "des-Thr"로 축약됨)의 형성의 시간 의존적인 경과를 보여준다.
도 3은 트립신 변이체 S172A의 엑소펩티다제 활성에 대한 예로서 트립신 변이체 S172A(서열번호 2)를 이용한 인슐린 글라진의 절단을 보여준다. 이 도면은 인슐린 글라진의 시간 의존적인 감소 및 주요 생성물인 B32-desArg-인슐린 글라진(인슐린 글라진 B 사슬에서 위치 31 다음의 절단, 도면에서 "des-Arg"로 축약됨) 및 소량의 부산물 B30-desThr 인슐린 글라진(인슐린 글라진 B 사슬에서 위치 29 다음의 절단, 도면에서 "des-Thr"로 축약됨)의 형성을 보여준다.
도 4는 최적화된 트립신 변이체를 이용한 절단의 예로서 트립신 변이체 번호 105(서열번호 105)를 이용한 프레프로-인슐린 글라진의 절단을 보여준다. 이 도면은 인슐린 글라진 형성 및 가장 두드러진 절단 부산물인 B31Arg-인슐린 글라진(인슐린 글라진 B 사슬에서 위치 31 다음의 절단, 도면에서 "des-Arg"로 축약됨) 및 desB30Thr 인슐린 글라진(인슐린 글라진 B 사슬에서 위치 29 다음의 절단, 도면에서 "des-Thr"로 축약됨)의 감소된 형성의 시간 의존적인 경과를 보여준다.
정의
본 발명은 하기에 상세히 기술되어 있지만, 본원에 기술된 특정 방법, 프로토콜 및 시약이 달라질 수 있기 때문에, 본 발명이 이들에 제한되지 않음이 이해되어야 한다. 또한, 본원에서 사용된 용어는 특정 구현예를 기술하기 위한 목적만을 위한 것이며, 본 발명의 범위를 제한하고자 하는 것이 아니고, 본 발명의 범위는 첨부된 청구범위에 의해서만 제한될 것임이 이해되어야 한다. 달리 정의되지 않는 한, 본원에서 사용된 모든 기술 용어 및 과학 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 당업자가 통상적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 나타낸다.
본 발명의 실행에서는, 달리 표시되지 않는 한, 당해 분야의 문헌에 설명되어 있는 화학, 생화학, 세포 생물학, 면역학의 통상적인 방법, 및 재조합 DNA 기술을 이용할 것이다.
맥락상 달리 요구되지 않는 한, 본 명세서 및 하기의 청구범위 전체에 걸쳐 용어 "포함하다" 및 변이형, 예컨대 "포함한다" 및 "포함하는"은 진술된 구성원, 정수 또는 단계, 또는 구성원, 정수 또는 단계의 군의 포함을 암시하며, 일부 구현예에서 임의의 다른 구성원, 정수 또는 단계, 또는 구성원, 정수 또는 단계의 군이 배제될 수도 있지만 그러한 다른 구성원, 정수 또는 단계, 또는 구성원, 정수 또는 단계의 군의 배제를 암시하는 것은 아니며, 즉, 요지는 언급된 구성원, 정수 또는 단계, 또는 구성원, 정수 또는 단계의 군을 포함하는 것에 있음이 이해될 것이다. 본 발명을 기술하는 맥락에서(특히, 하기 청구범위의 맥락에서) 단수형 용어 및 유사한 언급(reference)은 본원에서 달리 표시되지 않거나 맥락에 의해 명확하게 반박되지 않는 한, 단수형 및 복수형 둘 다를 포함하는 것으로 해석되어야 한다. 본원에서 값들의 범위들의 나열은 그 범위 내에 있는 각각의 별개의 값을 개별적으로 언급하는 속기법으로서의 역할을 하는 것으로 의도된다. 본원에서 달리 표시되지 않는 한, 각각의 개별 값은 마치 이것이 본원에 개별적으로 나열되는 것처럼 본 명세서 내에 포함된다. 본원에 개시된 모든 방법은, 본원에서 달리 표시되지 않거나 맥락에 의해 달리 명확하게 반박되지 않는 한 임의의 적합한 순서로 수행될 수 있다. 본원에 제공된, 모든 예, 또는 예시적인 언어(예를 들어, "~와 같은)의 사용은 단지 본 발명을 더 잘 예시하고자 하는 것이며, 청구된 본 발명의 범위에 대한 제한을 제기하는 것이 아니다. 본 명세서에서의 언어는 본 발명의 실행에 필수적인 임의의 청구되지 않은 요소를 나타내는 것으로 해석되어서는 안 된다.
본 명세서 본문 전반에 걸쳐 몇몇 문서(예를 들어, 특허, 특허 출원, 과학 출판물, 제조업자의 사양서, 설명서, GenBank 수탁번호 서열 제출서 등)가 인용되어 있다. 본원에서 아무것도, 종래 발명에 의한 상기 개시 내용보다 본 발명이 선행할 자격이 없음을 인정하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 본원에서 인용된 문서 일부는 "참조로서 포함"됨 또는 "이의 전문이 참조로서 포함"됨을 특징으로 한다. 그렇게 포함된 참조의 정의 또는 교시와 본 명세서에서 인용된 정의 또는 교시 사이에 충돌이 있을 경우, 본 명세서의 본문이 우선한다.
서열: 본원에 인용된 모든 서열은 첨부된 서열 목록에 개시되며, 이는 서열 목록 전체 내용 및 개시 내용과 함께, 본 명세서의 일부분이다.
생물학적 물질, 예컨대 핵산 분자, (폴리-)펩티드, 숙주 세포 등과 관련하여 사용될 때 용어 "천연 발생"은 자연에서 발견되며 사람에 의해 조작된 것이 아닌 물질을 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "아미노산" 또는 "아미노산 잔기"는 천연 발생 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 천연 발생 아미노산, 비천연 아미노산, 아미노산 유사체 및 아미노산 모방체(이들의 구조가 D 및 L 입체 이성질체 형태를 허용할 경우 이들 전부 그의 D 및 L 이성질체로 있음)를 나타낸다. 아미노산은 본원에서 그의 명칭, 그의 일반적으로 공지된 3문자 기호로 또는 IUPAC-IUB 생화학 명명 위원회(Biochemical Nomenclatue Commission)에 의해 권고되는 1문자 기호로 언급된다.
아미노산과 관련하여 사용될 때, 용어 "천연 발생"은 20가지의 통상적인 아미노산(즉, 알라닌(A), 시스테인(C), 아스파르트산(D), 글루탐산(E), 페닐알라닌(F), 글리신(G), 히스티딘(H), 이소류신(I), 리신(K), 류신(L), 메티오닌(M), 아스파라긴(N), 프롤린(P), 글루타민(Q), 아르기닌(R), 세린(S), 트레오닌(T), 발린(V), 트립토판(W), 및 티로신(Y))과, 셀레노시스테인, 피롤리신(PYL), 및 피롤린-카르복시리신(PCL)을 나타낸다. 용어 "천연 발생 아미노산" 및 "암호화 가능한 아미노산"은 본원에서 상호교환적으로 사용된다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "비천연 아미노산"은 임의의 유기체의 유전자 코드에서 천연적으로 암호화되지 않거나 발견되지 않는 아미노산을 나타냄을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "아미노산 유사체"는 천연 발생 아미노산과 동일한 기본 화학 구조를 갖는 화합물을 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "아미노산 모방체"는 아미노산의 일반 화학 구조와는 상이하지만 천연 발생 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 구조를 갖는 화합물을 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "펩티드"는 예를 들어 펩티드 결합에 의해 공유적으로 연결된 2개 이상, 또는 3개 이상, 또는 4개 이상, 또는 6개 이상, 또는 8개 이상, 또는 9개 이상, 또는 10개 이상, 또는 13개 이상, 또는 16개 이상, 또는 21개 이상의 아미노산을 포함하는 임의의 길이의 아미노산의 중합체 형태를 나타낸다. 용어 "폴리펩티드"는 큰 펩티드, 특히 100개 초과의 아미노산 잔기를 갖는 펩티드를 나타낸다. 용어 "폴리펩티드" 및 "단백질"은 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 본 출원은 본원에 개시된 몇몇 펩티드 및 폴리펩티드에 대한 아미노산 서열 정보를 제공한다. 아미노산 서열은 본원에서 펩티드 또는 폴리펩티드의 (왼쪽의) 아미노 말단에서 (오른쪽의) 카르복시 말단으로 제시된다.
본원에서 사용되는 (폴리)펩티드의 "변이체"는 아미노산 서열의 하나 이상의 아미노산 변형에 의해 상응하는 기준 (폴리)펩티드와 상이한 (폴리)펩티드를 나타낸다. 일 구현예에서, "변이체"는 기준 (폴리)펩티드의 하나 이상의 생물학적 활성을 보존한다. 기준 (폴리)펩티드는 야생형 (폴리)펩티드 또는 천연적으로 존재하지 않는 (폴리)펩티드일 수 있다. 용어 "변이체" 및 "돌연변이체"는 본원에서 상호교환적으로 사용된다.
본원에서 사용되는 용어 "돼지 트립신의 변이체"는 아미노산 서열의 하나 이상의 아미노산 변형에 의해 서열번호 1에 제시된 바와 같은 야생형 돼지 트립신과 상이한 폴리펩티드를 나타낸다. 용어 "돼지 트립신의 변이체"는 특히 하나 이상의 아미노산 교환에 의해 서열번호 1에 제시된 바와 같은 야생형 돼지 트립신과 상이한 폴리펩티드를 나타낸다. 본 발명에 따르면, "돼지 트립신의 변이체"는 기준 트립신(예를 들어, 서열번호 1에 따른 야생형 돼지 트립신 또는 서열번호 2에 따른 트립신 변이체 S172A)의 엔도단백질가수분해 활성과 비슷한 엔도단백질가수분해 활성을 나타내지만, "돼지 트립신의 변이체"와 기준 트립신의 엔도단백질가수분해 활성은 특정 절단 부위에 대한 이의 선택성이 상이할 수 있다.
용어 "아미노산 변형"은 아미노산 교환, 아미노산 결실, 및 아미노산 부가를 포괄한다. 용어 "아미노산 교환" 및 "아미노산 치환"은 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 용어 "아미노산 결실"은 N 말단 절단, 내부 결실, 및 C 말단 절단을 포괄한다. 용어 "아미노산 부가"는 N 말단 부가, 아미노산 삽입, 및 C 말단 부가를 포괄한다.
표현 "Xaa24"(및 유사한 표현, 예컨대 Xaa44, Xaa56, Xaa78 등)은 주어진 아미노산 서열의 위치 24(또는 각각 44, 56, 78 등)의 가변 아미노산을 나타낸다. 본 출원에서 제공되는 서열 목록은 가변 아미노산 위치의 하나의 단백질 서열, 즉 서열번호 3을 함유한다. 서열번호 3에 따른 단백질 서열 내의 가변 아미노산 위치는 아미노산 Xaa(3문자 코드 형식)로 표시된다. 이 예에서 숫자 24는 이 가변 위치가 서열번호 3에 따른 단백질 서열의 24번째 아미노산임을 나타낸다. 마찬가지로, 표현 Xaa44는 서열번호 3의 44번째 위치가 가변 아미노산 위치임을 나타내고, 다른 숫자들도 마찬가지이다.
본원에서 사용되는 "인간 인슐린"이라는 용어는 그 구조 및 특성이 잘 알려진 인간 호르몬을 말한다. 인간 인슐린은 시스테인 잔기 사이의 이황화 가교에 의해 연결된 두 개의 펩티드 사슬(사슬 A 및 B), 즉 A 사슬 및 B 사슬을 갖는다. A 사슬은 21개 아미노산의 펩티드이고 B 사슬은 30개 아미노산의 펩티드로, 두 개의 사슬은 다음과 같은 사이의 3개의 이황화 가교에 의해 연결된다: 하나는 A 사슬의 위치 6 및 11의 시스테인 사이; 두 번째는 A 사슬의 위치 7의 시스테인과 B 사슬의 위치 7의 시스테인 사이; 그리고 세 번째는 A 사슬의 위치 20의 시스테인과 B 사슬의 위치 19의 시스테인.
본원에서 사용되는 "인슐린의 유도체" 및 "인슐린 유도체"라는 용어는 천연적으로 존재하는 인슐린, 예를 들어 인간 인슐린의 구조로부터 공식적으로 유도될 수 있는, 하나 이상의 유기 치환체(예를 들어, 지방산)가 하나 이상의 아미노산에 결합한 분자 구조를 갖는 펩티드를 말한다. 선택적으로, 천연적으로 존재하는 인슐린에 존재하는 하나 이상의 아미노산이 결실되고/되거나, 암호화 불가능한 아미노산을 포함하는 다른 아미노산으로 교체되거나, 암호화 불가능한 아미노산을 포함하는 아미노산이 천연적으로 존재하는 인슐린에 부가되었을 수 있다. 인슐린의 유도체의 예는 다음을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다:
(i). 위치 B30에서 C 말단 트레오닌이 제거되고 지방산 잔기(미리스트산 잔기)가 위치 B29에서 리신의 엡실론-아미노 관능기에 부착된다는 점에서 인간 인슐린과 상이한 '인슐린 디터머'.
(ii). B 사슬에서 마지막 아미노산이 결실되고 B29Lys로부터 헥사데칸디오산으로 글루타밀 링크의 부가에 의해 인간 인슐린과 상이한 '인슐린 디글루덱'.
본원에서 사용되는 "인슐린의 유사체" 및 "인슐린 유사체"라는 용어는 천연적으로 존재하는 인슐린, 예를 들어 인간 인슐린의 구조로부터, 천연적으로 존재하는 인슐린에 존재하는 적어도 하나의 아미노산 잔기를 결실 및/또는 교환하고/하거나 적어도 하나의 아미노산 잔기를 부가하는 것에 의해, 공식적으로 유도될 수 있는 분자 구조를 갖는 펩티드를 말한다. 부가 및/또는 교환된 아미노산 잔기는 암호화 가능한 아미노산 잔기이거나 또 다른 천연적으로 존재하는 잔기 또는 순수한 합성 아미노산 잔기일 수 있다. 인슐린의 유사체의 예는 다음을 포함하지만, 이에 한정되지 않는다:
(i). '인슐린 아스파르트'는 인간 인슐린에서 프롤린인 아미노산 B28(즉, 인간 인슐린의 B 사슬에서 28번 아미노산)이 아스파르트산으로 교체되도록 재조합 DNA 기술을 통해 생성된다;
(ii). '인슐린 리스프로'는 인간 인슐린의 B 사슬의 C 말단의 끝에서 두 번째의 리신과 프롤린 잔기가 뒤바뀌도록 재조합 DNA 기술을 통해 생성된다(인간 인슐린: B28Pro-B29Lys; 인슐린 리스프로: B28Lys-B29Pro);
(iii). '인슐린 글루리신'은 위치 B3에서 아미노산 아스파라긴이 리신으로 교체되고 위치 B29에서 리신이 글루탐산으로 교체된다는 점에서 인간 인슐린과 다르다;
(iv). '인슐린 글라진'은 위치 A21에서 아스파라긴이 글리신으로 교체되고 B 사슬이 카르복시 말단에서 2개의 아르기닌이 연장된다는 점에서 인간 인슐린과 다르다.
본원에서 사용되는 "수율"이라는 용어는 트립신 절단 후에 수득된 생성물(즉, 인슐린 또는 인슐린 유도체 또는 인슐린 유사체) 및 트립신 절단 전의 프레프로 인슐린(또는 프레프로-인슐린 유도체 또는 프레프로-인슐린 유사체)의 비율을 나타낸다. 수율은 원하는 절단 부위에서 절단하는 트립신 변이체의 선택성 및 이의 엑소뉴클레아제 활성에 따라 달라진다. 원하는 절단 부위에서만 절단하는 트립신 변이체의 선택성이 높을수록, 그리고 이의 엑소뉴클레아제 활성이 낮을수록, 수율이 높아진다.
예를 들어, "인슐린 글라진의 수율" 또는 "B31Arg-B32Arg-인간 인슐린의 수율"은 트립신 절단 후에 수득된 인슐린 글라진 또는 B31Arg-B32Arg-인간 인슐린 및 트립신 절단 전의 각각의 프레프로 인슐린 글라진 또는 인간 프레프로-인슐린의 비율을 나타낸다. "인슐린 글라진의 수율" 및 "B31Arg-B32Arg-인간 인슐린의 수율"은 B32Arg 다음만 절단하는 트립신 변이체의 선택성 및 이의 엑소뉴클레아제 활성에 따라 달라진다. B32Arg 다음만 절단하는 트립신 변이체의 선택성이 높을수록, 그리고 이의 엑소뉴클레아제 활성이 낮을수록, 수율이 높아진다.
본원에서 사용되는 "증가된 선택성"이라는 용어는 기준 트립신과 비교하여 원치 않는 절단 부위에서는 더 적은 정도로, 원하는 절단 부위에서는 더 높은 정도로 절단하는 트립신 변이체의 성질을 나타낸다. 증가된 선택성은 원치 않는 부산물의 감소된 형성을 초래한다. 기준 트립신은 예를 들어, 서열번호 1에 다른 야생형 돼지 트립신 또는 서열번호 2에 따른 트립신 변이체 S172A일 수 있다.
두 아미노산 서열 사이의 "서열 동일성"은 서열들 사이에 동일한 아미노산의 백분율을 나타낸다. 비교를 위한 서열들의 최적 정렬은 수동으로 생성되는 것 외에, 문헌[Smith and Waterman, 1981, Adv. App. Math. 2, 482-489](본원에 참조로 포함됨)의 국부적 상동성 알고리즘에 의해, 문헌[Needleman and Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48, 443-453](본원에 참조로 포함됨)의 국부적 상동성 알고리즘에 의해, 문헌[Pearson and Lipman, 1988, Proc. Natl Acad. Sci. USA 85, 2444-2448](본원에 참조로 포함됨)의 유사성 검색 방법에 의해, 또는 이러한 알고리즘을 이용하는 컴퓨터 프로그램(위스콘신 제네틱스 소프트웨어 패키지(Wisconsin Genetics Software Package) 내의 GAP, BESTFIT, FASTA, BLAST P, BLAST N 및 TFASTA, 미국 위스콘신 주 매디슨 사이언스 드라이브 575 소재의 제네틱스 컴퓨터 그룹(Genetics Computer Group))에 의해 생성될 수 있다.
본 발명의 맥락에서, 변형된 서열 및 그것이 유래된 서열 사이의 서열 동일성의 정도는 달리 명시적으로 언급되지 않았다면 일반적으로 변형되지 않은 서열의 전체 길이에 대하여 계산된다. 구현예들에서, 어떠한 서열도 변형된 서열이 아닌 경우, 서열 동일성의 정도는 달리 언급되지 않는 한 기준 서열로서 정의된 서열의 전체 길이에 대하여 계산된다. 구현예들에서, 어떠한 서열도 기준 서열로 간주될 수 없는 경우, 서열 동일성의 정도는 달리 언급되지 않는 한 두 서열 중 더 긴 서열에 대하여 계산된다.
본 발명의 일부 구현예에 따른 "핵산 분자"는 데옥시리보핵산(DNA) 또는 리보핵산(RNA)이다. 본 발명에 따른 핵산 분자는 단일 가닥 또는 이중 가닥인 분자의 형태일 수 있고; 선형이거나 공유적으로 폐쇄되어 원을 형성할 수 있다.
용어 "DNA"는 데옥시리보뉴클레오티드 잔기를 포함하며 전적으로 또는 실질적으로 데옥시리보뉴클레오티드 잔기로 구성될 수 있는 분자와 관련된다. "데옥시리보뉴클레오티드"는 베타-D-리보푸라노실 기의 2'-위치에 히드록실 기가 결여된 뉴클레오티드와 관련된다. 용어 "DNA"는 단리된 DNA, 예컨대 부분적으로 또는 완전히 정제된 DNA, 본질적으로 순수한 DNA, 합성 DNA, 및 재조합적으로 생성된 DNA를 포함하며, 하나 이상의 뉴클레오티드의 부가, 결실, 치환 및/또는 변경에 의해 천연 발생 DNA와는 다른 변형 DNA를 포함한다. 그러한 변경은 DNA의 말단(들)에 또는 내부에, 예를 들어 DNA의 하나 이상의 뉴클레오티드에서의 부가와 같은 비 뉴클레오티드 물질의 부가를 포함할 수 있다. DNA 분자에서의 뉴클레오티드는 또한 비 표준 뉴클레오티드, 예컨대 비 천연 발생 뉴클레오티드 또는 화학적 합성 뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 이러한 변경된 DNA는 유사체 또는 천연 발생 DNA의 유사체로 칭해질 수 있다. 뉴클레오티드와 관련하여 사용될 때, 용어 "천연 발생"은 염기인 아데닌(A), 시토신(C), 구아닌(G), 티민(T), 및 우라실(U)을 나타낸다.
용어 "RNA"는 리보뉴클레오티드 잔기를 포함하며 전적으로 또는 실질적으로 리보뉴클레오티드 잔기로 구성될 수 있는 분자와 관련된다. "리보뉴클레오티드"는 베타-D-리보푸라노실 기의 2'-위치에 히드록실 기를 갖는 뉴클레오티드와 관련된다. 용어 "RNA"는 단리된 RNA, 예컨대 부분적으로 또는 완전히 정제된 RNA, 본질적으로 순수한 RNA, 합성 RNA, 및 재조합적으로 생성된 RNA를 포함하며, 하나 이상의 뉴클레오티드의 부가, 결실, 치환 및/또는 변경에 의해 천연 발생 RNA와는 다른 변형 RNA를 포함한다. 그러한 변경은 RNA의 말단(들)에 또는 내부에, 예를 들어 RNA의 하나 이상의 뉴클레오티드에서의 부가와 같은 비 뉴클레오티드 물질의 부가를 포함할 수 있다. RNA 분자에서의 뉴클레오티드는 또한 비 표준 뉴클레오티드, 예컨대 비 천연 발생 뉴클레오티드 또는 화학적 합성 뉴클레오티드 또는 데옥시뉴클레오티드를 포함할 수 있다. 이러한 변경된 RNA는 유사체 또는 천연 발생 RNA의 유사체로 칭해질 수 있다. 본 발명에 따르면, "RNA"는 단일 가닥 RNA 또는 이중 가닥 RNA를 나타낸다. 일 구현예에서, RNA는 mRNA, 예를 들어, 시험관 내에서 전사된 RNA(IVT RNA) 또는 합성 RNA이다. 또한 RNA는 예를 들어 RNA의 안정성(예를 들어, 반감기)을 증가시키는 하나 이상의 변형에 의해 변형될 수 있다. 그러한 변형은 당업자에게 공지되어 있으며, 예를 들어 5'-캡(cap) 또는 5'캡 유사체를 포함한다.
본 발명에 따른 핵산 분자는 벡터 내에 함유/포함될 수 있다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "벡터"는 당업자에게 공지된 모든 벡터를 포함하며, 이는 플라스미드 벡터, 코스미드 벡터, 파지 벡터, 예컨대 람다 파지, 바이러스 벡터, 예컨대 아데노바이러스 또는 바큘로바이러스 벡터, 또는 인공 염색체 벡터, 예컨대 박테리아 인공 염색체(bacterial artificial chromosome; BAC), 효모 인공 염색체(yeast artificial chromosome; YAC), 또는 P1 인공 염색체(PAC)를 포함한다. 상기 벡터는 발현 벡터와 클로닝 벡터를 포함한다. 발현 벡터는 플라스미드와 바이러스 벡터를 포함하며, 일반적으로, 원하는 암호화 서열 및 특정 숙주 유기체(예를 들어, 박테리아, 효모, 식물, 곤충류, 또는 포유류)에서 또는 시험관 내 발현 시스템에서 작동 가능하게 연결된 암호화 서열의 발현에 필요한 적절한 DNA 서열을 함유한다. 일반적으로 클로닝 벡터는 특정한 원하는 DNA 단편의 엔지니어링 및 증폭에 사용되며, 원하는 DNA 단편의 발현에 필요한 기능성 서열이 결여될 수 있다.
대안적으로, 본 발명에 따른 핵산 분자는 게놈, 예를 들어 숙주 세포의 게놈 내로 통합될 수 있다. 특정 핵산 분자를 게놈 내로 통합시키는 수단 및 방법은 당업자에게 공지되어 있다.
용어 "세포" 또는 "숙주 세포"는 일반적으로 온전한 세포, 즉, 효소, 소기관, 또는 유전 물질과 같은 보통의 세포 내 성분을 방출하지 않은 온전한 막을 갖는 세포와 관련된다. 온전한 세포는 일반적으로 생존가능 세포, 즉, 그의 정상적인 대사 기능을 수행할 수 있는 살아 있는 세포이다. 본원에서 사용되는 상기 용어는 외인성 핵산으로 트랜스펙션되거나 형질전환될 수 있는 임의의 세포와 관련된다. 일부 구현예에서, 외인성 핵산으로 트랜스펙션되거나 형질전환되어 수용자에게 이전되는 세포는 그 수용자에서 상기 핵산을 발현시킬 수 있다. 용어 "세포"는 원핵 세포, 예컨대 박테리아 세포, 및 진핵 세포, 예컨대 효모 세포, 진균류 세포 또는 포유류 세포를 포함한다. 박테리아 세포는 그람 음성 박테리아 주, 예컨대 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli), 프로테우스(Proteus), 및 슈도모나스(Pseudomonas)의 주, 및 그람 양성 박테리아 주, 예컨대 바실루스(Bacillus), 스트렙토마이세스(Streptomyces), 스타필로코커스(Staphylococcus), 및 락토코커스(Lactococcus)의 주로부터의 세포를 포함한다. 진균류 세포는 트리코데르마(Trichoderma), 뉴로스포라(Neurospora) 및 아스페르길루스(Aspergillus)의 종으로부터의 세포를 포함한다. 효모 세포는 사카로마이세스(Saccharomyces) 종(예를 들어, 사카로마이세스 세레비지애(Saccharomyces cerevisiae)), 쉬조사카로마이세스(Schizosaccharomyces) 종(예를 들어, 쉬조사카로마이세스 폼베(Schizosaccharomyces pombe)), 피키아(Pichia) 종(예를 들어, 피키아 파스토리스(Pichia pastoris), 피키아 메타놀리카(Pichia methanolica)), 코마가탤라(Komagataella) 종(예를 들어, 코마가탤라 파스토리스(Komagataella pastoris) 및 코마가탤라 파피(Komagataella phaffii)) 및 한세눌라(Hansenula) 종으로부터의 세포를 포함한다. 포유류 세포는 예를 들어 CHO 세포, BHK 세포, HeLa 세포, COS 세포, HEK293 등을 포함한다. 양서류 세포, 곤충 세포, 식물 세포, 및 이종성 단백질의 발현을 위하여 당해 분야에서 사용되는 임의의 다른 세포가 또한 사용될 수 있다. 포유류 세포, 예컨대 인간, 마우스, 햄스터, 돼지, 염소 및 영장류로부터의 세포는 입양 이전에 특히 적합하다. 세포는 다수의 조직 유형으로부터 유래될 수 있으며, 일차 세포 및 세포주, 예컨대 면역계의 세포, 특히 항원-제시 세포, 예컨대 수지상 세포 및 T 세포, 줄기 세포, 예컨대 조혈 줄기 세포 및 중간엽 줄기 세포 및 기타 세포 유형을 포함할 수 있다. 항원-제시 세포는 주조직적합성 복합체의 맥락에서 항원을 표면 상에 보여주는 세포이다. T 세포는 이 복합체를 그의 T 세포 수용체(TCR)를 이용하여 인식할 수 있다. "세포" 또는 "숙주 세포"는 단리되거나, 조직 또는 유기체, 특히 "비 인간 유기체"의 일부일 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "비 인간 유기체"는 비 인간 영장류 또는 기타 동물, 특히 포유류, 예컨대 소, 말, 돼지, 양, 염소, 개, 고양이, 토끼 또는 설치류, 예컨대 마우스, 래트, 기니피그 및 햄스터를 포함함을 의미한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "의약"은 치료법에서, 즉, 질환 또는 장애의 치료에서 사용되는 물질/조성물을 나타낸다.
본 발명에 따르면, 용어 "질환 또는 장애"는 임의의 병적 또는 건강하지 않은 상태를 나타낸다.
"치료하다"는 질환 또는 장애를 예방하거나 없애고/없애거나; 대상체에서 질환 또는 장애를 저지하거나 늦추고/늦추거나; 대상체에서 새로운 질환 또는 장애의 발병을 억제하거나 늦추고/늦추거나; 현재 질환 또는 장애를 갖고 있거나 이전에 질환 또는 장애를 갖고 있었던 대상체에서 증상의 빈도 또는 중증도 및/또는 재발을 감소시키고/시키거나; 대상체의 수명을 연장시키기 위하여, 즉, 증가시키기 위하여 대상체에게 화합물 또는 조성물 또는 화합물들 또는 조성물들의 조합물을 투여하는 것을 의미한다.
특히, 용어 "질환 또는 장애의 치료"는 질환 또는 장애 또는 이의 증상의 치유, 지속 기간의 단축, 개선, 예방, 진행 또는 악화의 늦춤 또는 억제, 또는 이의 발병의 예방 또는 지연을 포함한다.
용어 "대상체"는 본 발명에 따르면, 치료를 위한 대상체, 특히 질환에 걸린 대상체("환자"로도 칭해짐)를 의미하며, 이는 인간, 비 인간 영장류 또는 기타 동물, 특히 포유류, 예컨대 소, 말, 돼지, 양, 염소, 개, 고양이, 토끼 또는 설치류, 예컨대 마우스, 래트, 기니피그 및 햄스터를 포함한다. 일 구현예에서, 대상체/환자는 인간이다.
본 발명에 따른 "조성물"은 유효량의 본 발명의 돼지 트립신의 변이체(또한 본원에서 "활성제"로도 지칭됨)를 함유한다. 본 발명에 따른 조성물은 (a) 제조 과정, 특히 펩티드를 제조하는 제조 과정, 특히 인간 인슐린, 인슐린 유도체 및/또는 인슐린 유사체를 제조하는 제조 과정에서; (b) 식품 성분으로서; (c) 사료 성분으로서, (d) 또는 식품 성분 또는 사료 성분을 제조하는 과정 내에서 사용하기 위하여 사용될 수 있다. 본 발명에 따른 조성물은 또한 질환 또는 장애의 치료에 사용될 수 있으며, 따라서 제약 조성물일 수 있다.
본 발명에 따른 "제약 조성물"은 치료적 유효량의, 본 발명의 돼지 트립신의 변이체, 핵산 분자 또는 숙주 세포(또한 본원에서 "활성제"로도 지칭됨)를 함유하여 원하는 반응 또는 원하는 효과를 생성한다. 본 발명에 따른 제약 조성물은 적어도 하나의 다른 활성제(들)을 추가로 포함할 수 있다.
일 구현예에서, 조성물은 균일 투여 형태로 제공되며, 그 자체가 공지된 방식으로 제조될 수 있다. 조성물은 예를 들어 용액 또는 현탁액의 형태로 존재할 수 있다.
조성물 또는 제약 조성물은 하나 이상의 부형제를 추가로 포함할 수 있다. 제약 조성물의 일 구현예에서, 하나 이상의 부형제는 모두 제약상 허용 가능하다. 본원에서 사용되는 "제약상 허용 가능한"은 포유류 또는 인간에 의해 생리적으로 잘 용인되는 것을 말한다. 특히, 이는 동물, 더 구체적으로는 인간에서 사용하기 위해 미국 연방 정부 또는 주 정부의 관리 기관에 의해 승인되거나 미국 약전, 또는 다른 일반적으로 인지되어 있는 약전에 열거된 것을 의미한다.
본 발명에 따른 조성물 또는 제약 조성물은 상이한 활성제 및 부형제(예를 들어, 희석제 및/또는 담체)가 서로 혼합된 조성물의 형태로 존재할 수 있거나, 활성제가 부분적으로 또는 전적으로 구별되는 형태로 존재하는 조합 제제의 형태를 취할 수 있다. 이러한 조합물 또는 조합 제제의 예는 부분들의 키트(kit-of-parts)이다.
맥락상 달리 언급되지 않는 한, "활성제" 또는 "활성 성분"이라는 용어는 본 발명의 돼지 트립신의 변이체, 본 발명의 핵산 분자 및 본 발명의 숙주 세포를 나타낸다. 용어 "활성제" 및 "활성 성분"은 본원에서 상호교환적으로 사용된다.
용어 "담체"는 활성제가 적용을 용이하게 하거나, 증강시키거나 가능하게 하기 위하여 조합되는 천연 또는 합성 성질의 유기 또는 무기 성분을 나타낸다. 본 발명에 따르면, 용어 "담체"는 또한 하나 이상의 상용성 고체 또는 액체 충전제, 희석제, 보조제, 부형제, 비히클, 또는 캡슐화 물질을 포함한다. 이러한 담체는 땅콩유, 대두유, 광유, 참깨유 등과 같은 석유, 동물, 식물 또는 합성 기원의 것을 포함하는 오일 및 물 중 식염수 용액과 같은 멸균 액체일 수 있다. 식염수 용액과 수성 덱스트로스 및 글리세롤 용액 또한 액체 담체로서 이용될 수 있다. 적합한 부형제는 전분, 글루코스, 락토스, 수크로스, 젤라틴, 맥아, 쌀, 밀가루, 초크, 실리카 겔, 소듐 스테아레이트, 글리세롤 모노스테아레이트, 탤크, 염화나트륨, 건조 탈지유, 글리세롤, 프로필렌, 글리콜, 물, 에탄올 등을 포함한다. 조성물 또는 제약 조성물은 원하는 경우, 소량의 습윤제 또는 유화제, 또는 pH 완충제를 또한 함유할 수 있다. 이들 조성물은 용액, 현탁액, 에멀젼, 정제, 환제, 캡슐, 산제, 지속-방출 제형 등의 형태를 취할 수 있다. 조성물 또는 제약 조성물은 전통적인 결합제 및 트리글리세리드와 같은 담체와 함께 좌제로서 제형화될 수 있다. 본 발명의 화합물은 중성 또는 염 형태로 제형화될 수 있다. 제약상 허용 가능한 염은 유리 아미노 기와 형성된 염, 예컨대 염산, 인산, 아세트산, 옥살산, 타르타르산 등으로부터 유래된 염, 및 유리 카르복실 기와 형성된 염, 예컨대 나트륨, 칼륨, 암모늄, 칼슘, 수산화제2철, 이소프로필아민, 트리에틸아민, 2-에틸아미노 에탄올, 히스티딘, 프로카인 등으로부터 유래된 염을 포함한다. 이러한 조성물은 적합한 양의 담체와 함께, 일부 구현예에서는 정제된 형태의, 유효량의 화합물을 함유할 것이다. 제형은 투여 방식에 적합해야 한다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "부형제"는 조성물 또는 제약 조성물에 존재할 수 있고 활성제가 아닌 모든 물질, 예컨대 염, 결합제(예를 들어, 락토스, 덱스트로스, 수크로스, 트레할로스, 소르비톨, 만니톨), 담체, 활택제, 증점제, 표면 활성제, 보존제(예를 들어, 항산화제, 시트르산, 시트르산나트륨, 염화벤잘코늄, 클로로부탄올, 시스테인, 메티오닌, 파라벤, 티메로살), 유화제, 완충 물질, 착향제, 또는 착색제를 포함하고자 한다.
염은 본 발명에 포함되며, 또한 제약상 허용 가능한 염일 수 있다. 이러한 종류의 염 또는 제약상 허용 가능한 염은 다음의 산으로부터 제조된 것들을 비 제한적인 방식으로 포함한다: 염산, 브롬화수소산, 황산, 질산, 인산, 말레산, 아세트산, 살리실산, 시트르산, 포름산, 말론산, 숙신산 등. 염 및 제약상 허용 가능한 염은 또한 알칼리 금속염 또는 알칼리 토금속염, 예컨대 나트륨염, 칼륨염 또는 칼슘염으로 제조될 수 있다. 염은 이온 강도 또는 장성을 조정하기 위하여 첨가될 수 있다.
본 발명에 따른 조성물 또는 제약 조성물에서 사용하기에 적합한 완충 물질은 염 형태의 아세트산, 염 형태의 시트르산, 염 형태의 붕산 및 염 형태의 인산을 포함한다.
또한, 조성물 또는 제약 조성물은 상기에 정의된 바와 같은 하나 이상의 부형제를 선택적으로 포함하는, 적절한 희석제로 재구성되는 안정적인 동결건조 생성물로 제형화될 수 있다.
본원에 기술된 활성제 및 제약 조성물은 치료적 유효량으로 투여될 수 있다. "치료적 유효량"은 일 구현예에서 허용할 수 없는 부작용을 야기하지 않으면서, 단독으로 또는 추가 용량과 함께 원하는 치료적 반응 또는 원하는 치료적 효과를 달성하는 양을 나타낸다. 특정 질환 또는 특정 병태의 치료의 경우, 원하는 반응은 그 질환의 경과의 억제와 관련될 수 있다. 이것은 질환의 진행을 늦추는 것, 특히 질환의 진행을 방해하거나 역전시키는 것을 포함한다. 질환 또는 병태의 치료에서의 원하는 반응은 또한 상기 질환 또는 상기 병태의 발병 지연 또는 발병 예방일 수 있다. 본원에 기술된 작용제 또는 조성물의 유효량은 치료될 병태, 질환의 중증도, 대상체의 개별 파라미터(연령, 생리적 상태, 크기 및 체중 포함), 치료 지속 기간, (존재할 경우) 수반되는 치료법의 유형, 특정 투여 경로 및 유사 요인에 따라 달라질 것이다. 따라서, 본원에 기술된 작용제의 투여 용량은 그러한 몇몇 파라미터에 따라 달라질 수 있다. 대상체에서의 반응이 처음 용량으로 불충분한 경우, 더 높은 용량(또는 상이한, 더 국소화된 투여 경로에 의해 달성되는 효과적으로 더 높은 용량)이 사용될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "부분들의 키트(짧게, 키트)"는 하나 이상의 용기 및 선택적으로 데이터 캐리어를 포함하는 제조 물품을 나타낸다. 상기 하나 이상의 용기는 위에서 언급된 작용제들(시약들) 중 하나 이상으로 충전될 수 있다. 예를 들어 희석제, 완충제 및 추가 시약을 포함하는 추가 용기가 키트에 포함될 수 있다. 상기 데이터 캐리어는 비 전자적 데이터 캐리어, 예를 들어, 그래픽 데이터 캐리어, 예컨대 정보 전단, 정보 시트, 바코드 또는 접속 코드, 또는 전자적 데이터 캐리어, 예컨대 콤팩트 디스크(CD), 디지털 다목적 디스크(DVD), 마이크로칩 또는 또 다른 반도체-기반 전자적 데이터 캐리어일 수 있다. 접속 코드는 데이터베이스, 예를 들어 인터넷 데이터베이스, 중앙 집중식 또는 분산 데이터베이스에의 접속을 허용할 수 있다. 상기 데이터 캐리어는 본 발명의 활성제의 사용 설명서를 포함할 수 있다. 예를 들어, 데이터 캐리어는 (a) 제조 과정, 특히 펩티드를 제조하는 제조 과정, 특히 인간 인슐린, 인슐린 유도체 및/또는 인슐린 유사체를 제조하는 제조 과정에서; (b) 식품 성분으로서; (c) 사료 성분으로서, (d) 또는 식품 성분 또는 사료 성분을 제조하는 과정 내에서 사용하기 위하여 활성제의 사용 설명서를 포함할 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같이, 용어 "프레프로 인슐린" 또는 축약형 "PPI"는 프레-서열의 N 말단 부분에서 시작하여 B 사슬, C 펩티드 및 A 사슬로 이어지는 단일 사슬 인슐린 전구체를 나타낸다(도 1 참조).
본 발명의 구현예
다음의 단락에서, 본 발명의 특정 요소가 기술된다. 이러한 요소들은 특정 구현예들과 함께 열거될 수 있지만, 이들은 임의의 방식으로, 그리고 임의의 수로 조합되어서 추가의 구현예들을 생성할 수 있음이 이해되어야 한다. 다양하게 기술된 실시예 및 구현예는 본 발명을 단지 명백하게 기술된 구현예에 한정하는 것으로 해석되어서는 안 된다. 이러한 설명은 명백하게 기술된 구현예들을 임의의 수의 개시된 요소들과 조합시킨 구현예들을 뒷받침하고 포함하는 것으로 이해되어야 한다. 더욱이, 본 출원에서 모든 기술된 요소들의 임의의 순열 및 조합은 맥락상 달리 표시되지 않는 한 본 출원의 설명에 의해 개시되는 것으로 간주되어야 한다.
제1 양태에서, 본 발명은 서열번호 1과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 돼지 트립신의 변이체에 관한 것으로, 이때, 상기 아미노산 서열은 적어도 서열번호 1에 따른 천연 돼지 트립신의 F24, S44, D56, G78, Y131, S172 및 W193에 해당하는 하나 이상의 위치에서 하나 이상의 아미노산의 치환에 의해 서열번호 1과 상이하며,
단, 상기 아미노산 서열은 서열번호 1에 따른 천연 돼지 트립신이 아니고;
상기 아미노산 서열은 서열번호 2에 따른 돼지 변이체 트립신 S172A가 아니다.
제1 양태의 일 구현예에서,
F24에 해당하는 위치의 아미노산은 Asp, Glu, 또는 Gly로 치환되지 않고/않거나;
S44에 해당하는 위치의 아미노산은 Tyr로 치환되지 않고/않거나;
Y131에 해당하는 위치의 아미노산은 Lys 또는 Pro로 치환되지 않고/않거나;
W193에 해당하는 위치의 아미노산은 Asn 또는 Cys로 치환되지 않는다.
제1 양태의 일 구현예에서,
F24에 해당하는 위치의 아미노산은 Ala, Asn, Arg, Gln, Ile, Leu, Lys, Met, Ser, Thr, 및 Val로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산으로 치환되고/치환되거나;
S44에 해당하는 위치의 아미노산은 Leu 및 Pro로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산으로 치환되고/치환되거나;
D56에 해당하는 위치의 아미노산은 Ala, Asn, His, 및 Trp으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산으로 치환되고/치환되거나;
G78에 해당하는 위치의 아미노산은 Ala, Glu; Pro, Ser, 및 Tyr로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산으로 치환되고/치환되거나;
Y131에 해당하는 위치의 아미노산은 Ala, Asn, Asp, Cys, Gln; Glu, Gly, His, Ile, Leu, Met, Ser, Thr, Trp, 및 Val로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산으로 치환되고/치환되거나;
S172에 해당하는 위치의 아미노산은 Ala, Cys, 및 Thr로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산으로 치환되고/치환되거나;
W193에 해당하는 위치의 아미노산은 Phe, Ser, Thr, 및 Tyr로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산으로 치환된다.
제1 양태의 추가 구현예에서,
F24에 해당하는 위치의 아미노산은 Arg로 치환되고/치환되거나;
S44에 해당하는 위치의 아미노산은 Pro로 치환되고/치환되거나;
D56에 해당하는 위치의 아미노산은 His로 치환되고/치환되거나;
G78에 해당하는 위치의 아미노산은 Pro로 치환되고/치환되거나;
Y131에 해당하는 위치의 아미노산은 Met로 치환되고/치환되거나;
S172에 해당하는 위치의 아미노산은 Ala로 치환되고/치환되거나;
W193에 해당하는 위치의 아미노산은 Ser로 치환된다.
제1 양태의 일 구현예에서, 상기 아미노산 서열은 추가로 적어도 서열번호 1에 따른 천연 돼지 트립신의 R99, R107, K125, 및 K170에 해당하는 하나 이상의 위치에서 하나 이상의 아미노산 치환에 의해 서열번호 1과 상이하다.
제1 양태의 일 구현예에서,
R107에 해당하는 위치의 아미노산은 Pro로 치환되지 않고/않거나;
K170에 해당하는 위치의 아미노산은 Ile 또는 Phe로 치환되지 않는다.
제1 양태의 추가 구현예에서,
R99에 해당하는 위치의 아미노산은 Ala, Asn, Asp, Glu, Gly, His, Leu, Phe, Thr, Trp, 및 Tyr로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산으로 치환되고/치환되거나;
R107에 해당하는 위치의 아미노산은 Asp, Gly, Pro, Ser, 및 Thr로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산으로 치환되고/치환되거나;
K125에 해당하는 위치의 아미노산은 Ala, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Ser, 및 Tyr로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산으로 치환되고/치환되거나;
K170에 해당하는 위치의 아미노산은 Ala, Asn, Gly, 및 Tyr로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산으로 치환된다.
제1 양태의 추가 구현예에서,
R99에 해당하는 위치의 아미노산은 Ala, His, 및 Asn으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산으로 치환되고/치환되거나;
R107에 해당하는 위치의 아미노산은 Thr로 치환되고/치환되거나;
K125에 해당하는 위치의 아미노산은 Ala, Cys, 및 Ser로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산으로 치환되고/치환되거나;
K170에 해당하는 위치의 아미노산은 Ala로 치환된다.
제1 양태의 일 구현예에서, 상기 아미노산 서열은 서열번호 1에 따른 돼지 야생형 트립신과 적어도 91% 또는 적어도 92% 또는 적어도 93% 또는 적어도 94% 또는 적어도 95% 또는 적어도 96% 또는 적어도 97% 또는 적어도 98% 또는 적어도 99%의 서열 동일성을 갖는다.
제1 양태의 일 구현예에서, 상기 아미노산 서열은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 또는 23개의 아미노산 교환에 의해 서열번호 1에 따른 돼지 야생형 트립신과 상이하다.
제1 양태의 일 구현예에서, 상기 아미노산 서열은 서열번호 3이며, 이때,
Xaa24는 Ala, Asn, Arg, Gln, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Ser, Thr, 및 Val로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이고/이거나;
Xaa44는 Leu, Pro, 및 Ser로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이고/이거나;
Xaa56은 Ala, Asn, Asp, His, 및 Trp으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이고/이거나;
Xaa78은 Ala, Glu, Gly, Pro, Ser, 및 Tyr로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이고/이거나;
Xaa99는 Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gly, His, Leu, Phe, Thr, Trp, 및 Tyr로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이고/이거나;
Xaa107은 Arg, Asp, Gly, Pro, Ser, 및 Thr로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이고/이거나;
Xaa125는 Ala, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Ser, 및 Tyr로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이고/이거나;
Xaa131은 Ala, Asn, Asp, Cys, Gln; Glu, Gly, His, Ile, Leu, Met, Ser, Thr, Trp, Tyr, 및 Val로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이고/이거나;
Xaa170은 Ala, Asn, Gly, Lys, 및 Tyr로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이고/이거나;
Xaa172는 Ala, Cys, Ser, 및 Thr로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이고/이거나;
Xaa193은 Phe, Ser, Thr, Trp, 및 Tyr로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이며;
단, 서열번호 3은 서열번호 1에 따른 돼지 야생형 트립신이 아니고;
서열번호 3은 서열번호 2에 따른 돼지 변이체 트립신 S172A가 아니다.
제1 양태의 추가 구현예에서, 상기 아미노산 서열은 서열번호 3이며, 이때,
Xaa24는 Phe 및 Arg로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이고/이거나;
Xaa44는 Ser 및 Pro로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이고/이거나;
Xaa56은 Asp 및 His로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이고/이거나;
Xaa78은 Gly 및 Pro로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이고/이거나;
Xaa99는 Ala, Arg, His 및 Asn으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이고/이거나;
Xaa107은 Arg 및 Thr로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이고/이거나;
Xaa125는 Ala, Cys, Lys 및 Ser로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이고/이거나;
Xaa131은 Met 및 Tyr로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이고/이거나;
Xaa170은 Ala 및 Lys로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이고/이거나;
Xaa172는 Ala 및 Ser로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이고/이거나;
Xaa193는 Ser 및 Trp으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이며;
단, 서열번호 3은 서열번호 1에 따른 돼지 야생형 트립신이 아니고;
서열번호 3은 서열번호 2에 따른 돼지 변이체 트립신 S172A가 아니다.
제1 양태의 일 구현예에서, 상기 아미노산 서열은 서열번호 4 내지 119로 구성된 군으로부터 선택된다. 일 구현예에서, 상기 아미노산 서열은 서열번호 89, 서열번호 90, 서열번호 91, 서열번호 92, 서열번호 93, 서열번호 94, 서열번호 95, 서열번호 96, 서열번호 97, 및 서열번호 98로 구성된 군으로부터 선택된다.
제1 양태의 일 구현예에서, 상기 변이체는 일반식 A-Lys-Thr-Arg-Arg-B의 펩티드를 절단하여 적어도 80%(예를 들어, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%)의 수율로 일반식 A-Lys-Thr-Arg-Arg의 절단 생성물을 생성할 수 있고, 이때, A는 하나 이상의 아미노산으로 구성된 아미노산 서열이고; B는 하나 이상의 아미노산으로 구성된 아미노산 서열이다.
제1 양태의 추가 구현예에서, A는 1 내지 105개의 아미노산(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 또는 105개의 아미노산)으로 구성된 아미노산 서열이고, B는 1 내지 105개의 아미노산(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 또는 105개의 아미노산)으로 구성된 아미노산 서열이다.
제1 양태의 일 구현예에서, 변이체는 서열번호 2에 다른 돼지 변이체 트립신 S172A와 비교하여 위치 B32-Arg에 대해 C 말단의 위치에서 프레프로-인간 인슐린, 프레프로-인슐린 글라진, 프레프로-인슐린 리스프로, 프레프로-인슐린 아스파르트, 또는 프레프로-인슐린 글루리신의 절단에 대해 증가된 선택성을 나타낸다.
본 발명의 제1 양태의 일부 구현예에서, 돼지 트립신의 변이체는 동결건조된다.
제2 양태에서, 본 발명은
- 본 발명의 제1 양태에서 정의된 바와 같은 돼지 트립신의 변이체; 또는
- 본 발명의 제1 양태에서 정의된 바와 같은 돼지 트립신의 변이체의 트립시노겐 전구체 분자
를 암호화하는 핵산 분자에 관한 것이다.
제2 양태의 일 구현예에서, 상기 핵산 분자는 벡터에 함유되거나 게놈으로 통합된다.
제3 양태에서, 본 발명은 제2 양태에서 정의된 바와 같은 핵산 분자를 함유하는 숙주 세포에 관한 것이다. 일 구현예에서, 숙주 세포는 재조합 숙주 세포이다.
제4 양태에서, 본 발명은 본 발명의 돼지 트립신의 변이체의 생산 방법에 관한 것으로, 방법은
제3 양태에 따른 숙주 세포를 배양하는 단계; 및
배양 배지 또는 숙주 세포로부터 돼지 트립신의 변이체의 트립시노겐 전구체 분자를 단리하는 단계를 포함한다.
제4 양태의 일 구현예에서, 방법은 트립시노겐 전구체 분자를 활성화시켜, 상기 돼지 트립신의 변이체를 수득하는 추가의 단계를 함유한다.
트립시노겐 전구체 분자의 활성화는 화학적으로 또는 효소적으로 달성될 수 있다. 예를 들어, pH가 자가 활성화가 일어나도록 조정될 수 있다. 또 다른 예에서, 트립시노겐을 효소적으로 활성화시키기 위해 프로테아제(예를 들어, 엔테로키나제)가 첨가될 수 있다.
제5 양태에서, 본 발명은 의약으로서 사용하기 위한, 식품 성분으로서 사용하기 위한, 사료 성분으로서 사용하기 위한, 또는 식품 성분 또는 사료 성분 제조 과정 내에서 사용하기 위한, 본 발명의 돼지 트립신의 변이체 또는 본 발명의 핵산 분자 또는 본 발명의 숙주 세포에 관한 것이다.
제5 양태의 일 구현예는 식품 성분으로서 사용하기 위한, 사료 성분으로서 사용하기 위한, 또는 식품 성분 또는 사료 성분 제조 과정 내에서 사용하기 위한, 본 발명의 돼지 트립신의 변이체에 관한 것이다.
제5 양태의 일 구현예에서, 의약은 부기(특히 외상으로 인한 부기), 염증(특히 외상으로 인한 염증), 혈전정맥염, 활성화된 관절증, (예를 들어, 췌장 부전으로 인한) 소화 효소 결핍증, 및/또는 소화 장애의 치료에 사용하기 위한 것이다.
환언하면, 본 발명은 부기(특히 외상으로 인한 부기), 염증(특히 외상으로 인한 염증), 혈전정맥염, 활성화된 관절증, (예를 들어, 췌장 부전으로 인한) 소화 효소 결핍증, 및/또는 소화 장애의 치료에 사용하기 위한 본 발명의 돼지 트립신의 변이체 또는 본 발명의 핵산 분자 또는 본 발명의 숙주 세포에 관한 것이다.
식품 성분으로서, 사료 성분으로서, 또는 제조 과정 내에서의 사용과 관련하여, 제5 양태는 대안적으로 다음과 같이 표현될 수 있다:
식품 성분으로서의 본 발명의 돼지 트립신의 변이체의 용도.
사료 성분으로서의 본 발명의 돼지 트립신의 변이체의 용도.
식품 성분 또는 사료 성분의 제조 과정에서 본 발명의 돼지 트립신의 변이체의 용도.
제6 양태에서, 본 발명은 인간 인슐린, 인슐린 유사체 또는 인슐린의 유도체의 생산 방법에서 본 발명의 돼지 트립신의 변이체의 용도에 관한 것이다.
제6 양태는 인간 인슐린, 인슐린 유사체 또는 인슐린의 유도체의 시험관 내 및 생체 내 생산 방법 둘 모두에서 본 발명의 돼지 트립신의 변이체의 용도를 포괄한다.
생체 내 방법에서의 사용과 관련하여, 제6 양태는 대안적으로 다음과 같이 표현될 수 있다:
인간 인슐린, 인슐린 유사체 또는 인슐린의 유도체의 생체 내 생산에 사용하기 위한 제1 양태에 따른 돼지 트립신의 변이체.
제6 양태의 일 구현예에서, 인슐린 유사체는 인슐린 아스파르트, 인슐린 리스프로, 인슐린 글루리신, 및 인슐린 글라진으로 구성된 군으로부터 선택된다.
제7 양태에서, 본 발명은 일반식 A-Lys-Thr-Arg-Arg-B의 단백질 또는 펩티드를 절단하기 위한 본 발명의 돼지 트립신의 변이체의 용도에 관한 것으로, A는 하나 이상의 아미노산으로 구성된 아미노산 서열이고; B는 하나 이상의 아미노산으로 구성된 아미노산 서열이다.
제7 양태의 추가 구현예에서, A는 1 내지 105개의 아미노산(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 또는 105개의 아미노산)으로 구성된 아미노산 서열이고, B는 1 내지 105개의 아미노산(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, 또는 105개의 아미노산)으로 구성된 아미노산 서열이다.
제7 양태의 일 구현예에서, 절단은 절단 생성물 A-Lys-Thr-Arg-Arg을 생성한다. 제7 양태의 추가 구현예에서, 절단은 적어도 80%(예를 들어, 적어도 81%, 적어도 82%, 적어도 83%, 적어도 84%, 적어도 85%, 적어도 86%, 적어도 87%, 적어도 88%, 적어도 89%, 적어도 90%, 적어도 91%, 적어도 92%, 적어도 93%, 적어도 94%, 적어도 95%, 적어도 96%, 적어도 97%, 적어도 98%, 또는 적어도 99%)의 수율로 절단 생성물 A-Lys-Thr-Arg-Arg을 생성한다.
제8 양태에서, 본 발명은 본 발명의 돼지 트립신의 변이체 또는 본 발명의 핵산 분자 또는 본 발명의 숙주 세포를 포함하는 조성물에 관한 것이다.
제8 양태의 일 구현예에서, 조성물은 부형제 및/또는 적어도 하나의 다른 활성제를 더 포함한다.
제8 양태의 일부 구현예에서, 조성물은 제약 조성물이다.
제8 양태의 일부 구현예에서 조성물 또는 제약 조성물은 동결건조된다.
본 발명은 또한 적어도 하나의 다른 활성 제약 성분과 본 발명의 돼지 트립신의 변이체(또는 본 발명의 핵산 분자 또는 본 발명의 숙주 세포)의 조합물을 제공한다. 일 구현예에서, 본 발명의 돼지 트립신의 변이체와 적어도 하나의 다른 활성 제약 성분의 조합물은 활성 제약 성분을 환자에게 별개로 투여함으로써 적용되거나 복수의 활성 제약 성분이 하나의 제약 조성물에 존재하는 병용 제품의 형태로 적용될 수 있다. 별개로 투여될 때, 투여는 임의의 순서로, 동시에 또는 순차적으로 일어날 수 있다. 원하는 조합된 치료적 효과의 달성을 위하여 본 발명의 활성제 및 다른 활성 제약 성분(들)의 양 및 상대적인 투여 타이밍이 선택될 것이다. 조합물의 투여는 부수적으로 하기 형태로 투여하는 것일 수 있다: (1) 모든 활성 제약 성분을 포함하는 일원화 제약 조성물; 또는 (2) 활성 제약 성분 중 적어도 하나를 각각이 포함하는 별개의 제약 조성물들. 대안적으로, 조합물은 하나의 치료제가 먼저 투여되고, 나머지가 두 번째로 투여되거나 그 역으로 투여되는 순차적인 방식으로 별개로 투여될 수 있다. 그러한 순차적 투여는 시간상으로 가깝거나 시간상으로 멀 수 있다.
실시예
다음의 실시예는 당업자에게 본 발명의 화합물, 조성물, 및 방법을 어떻게 만들고 사용하는지에 대한 완전한 개시 및 설명을 제공하기 위해 작성되었고, 어떠한 방식으로든 첨부된 청구범위에 의해 지시되는 바와 같은 본 발명의 범위를 제한하려는 것은 아니다. 사용되는 숫자(예를 들어, 양, 온도 등)에 대해서 정확성을 보장하기 위해 노력하였지만, 일부 실험적 오차 및 편차를 고려해야 한다. 달리 표시되지 않는다면, 부는 중량부이고, 분자량은 평균 분자량이고, 온도는 섭씨이고, 압력은 대기압 또는 대기압 근처이다.
실시예 1: 돼지 트립신을 암호화하는 합성 뉴클레오티드 서열의 돌연변이 유발 및 클로닝
효소의 개선은 효소 공학에 의해 달성될 수 있다. 이 기술은 개선된 특성의 출발 효소의 변이체의 개발을 수반한다. 효소 변이체를 제공하기 위하여, 먼저 일반적인 분자생물학적 방법에 의해 돼지 췌장 트립신을 암호화하는 합성 뉴클레오티드 서열에 유전자 수준에서 돌연변이를 도입하였다. 효소 변이체의 유전자들을 발현 벡터 pLE1A17(pRSF-1b의 유도체, Novagen)에 클로닝하였다. 생성된 플라스미드를 대장균 BL21(DE3) 세포의 형질전환에 사용하였다.
실시예 2: 변이체 돼지 트립시노겐의 발현
30℃에서 카나마이신(50 mg/L)이 보충된 배지 ZYM-5052를 이용하여 F.W. Studier(F.W. Studier (2005) Prot. Exp. Pur. 41:207-234)에 따라 자가 유도에 의해 대장균에서 돼지 트립시노겐의 재조합 발현을 수행하였다. 배양물 중 글루코스가 대사되면, 존재하는 락토스가 발현을 유도한다. 글리세롤을 C 공급원으로 사용하였다. 마이크로플레이트와 진탕 플라스크 규모로 발현을 수행하였다.
진탕 플라스크 실험의 경우, 50 μL의 글리세롤(36%)과 함께 카나마이신(50 mg/L)이 보충된 20 mL의 배지 ZYM-505의 사전 배양물을 30℃ 및 200 rpm에서 24시간 동안 인큐베이션하였다. 12.5 내지 14의 OD600이 달성되었다. 주요 배양물의 경우, 500 μL의 사전 배양물을 이용하여 카나마이신(50 mg/L)이 보충된 100 mL의 배지 ZYM-5052에 접종하였다. 30℃ 및 200 rpm에서 24시간 인큐베이션한 후, 6.5 내지 7.5의 OD600이 달성되었다. 원심분리 후, 세포 펠릿을 -20℃에 보관하였다.
실시예 3: 세포 파괴 및 트립시노겐 활성화
주변세포질 트립시노겐을 삼투압 충격에 의해 유리시켰다. (실시예 2에서 수득된) 3.6 g의 세포를 균질한 현탁액이 수득될 때까지 10 mL의 용해 완충액(10 mM의 트리스-HCl, pH = 8, 25 mM의 MgCl2, 200 mM의 NaCl)에 재현탁시켰다. 현탁액을 5℃ 및 180 rpm에서 24시간 동안 교반하였다. 원심분리 후, 상청액을 활성화시켰다.
트립시노겐의 활성화를 위하여, 돼지 장의 엔테로키나제를 사용하였다(Sigma, 제품 번호 E0885; 40단위; 단위 정의: 1단위의 엔테로키나제는 25℃에서 pH 5.6에서 분당 트립시노겐으로부터 1.0 나노몰의 트립신을 생성한다).
엔테로키나제를 17 mU/mL의 최종 농도로 무세포 추출물에 첨가하였다. 반응물을 30℃에서 16 내지 24시간 동안 인큐베이션하였다. 생성된 트립신 용액을 -20℃에 보관하였다.
실시예 4: 정제된 변이체 재조합 돼지 트립신의 트립신 활성을 결정하는 분석법
트립신의 활성을 25℃에서 100 mM의 트리스 pH 8.0, 20 mM의 CaCl2 중 Chromozym TRY(Roche Diagnostics GmbH)를 이용하여 결정하였다. Chromozym TRY는 아르기닌의 카르복실 쪽의 펩티드를 가수분해하는 프로테아제(트립신, 엔도프로테이나제 Arg-C 및 기타) 활성의 신뢰할만한 광도 측정식 결정을 위한 기질(카르보벤즈옥시-L-발릴-L-글리실-L-아르기닌-4-니트라닐리드 아세테이트)이다. 광도 측정은 405 nm에서 수행되었다.
실시예 5: 프레프로 인간 인슐린을 이용한 스크리닝 결과.
모든 트립신 변이체의 초기 스크리닝을 모델 시스템으로서 프레프로-인간 인슐린(PPI)을 이용하여 수행하였다. PPI를 0.75 g/L의 농도까지 완충 용액(pH = 8.3)에 용해시켰다. 실시예 3에 따라 트립신 변이체 용액을 제조하고, 추가 처리 없이 반응 혼합물에 첨가하였다. 샘플을 주기적으로 취하고, 1 N의 HCl로 산성화하고, HPLC로 분석하였다(실시예 7).
두 가지 측면을 고려하였다: (1) 트립신 변이체가 임의의 PPI 절단 활성을 나타내는지(결과는 표 1의 A열에 도시됨); (2) 트립신 절단 선택성이 서열번호 2와 비교하여 개선된 경우, 트립신 변이체가 PPI 절단 활성을 나타내는지(결과는 표 1의 B열에 도시됨). 트립신 변이체의 di-Arg 선택성을 평가하기 위하여, B31Arg-B32Arg-인간 인슐린의 형성을 HPLC로 모니터링하고(실시예 7 참조), 서열번호 2와 비교하였다. 선택성을 다음에 따라 계산하였다:
Figure pct00001
이때,
[diArg] = B31Arg-B32Arg-인간 인슐린의 농도
[monoArg] = desB32Arg-인간 인슐린의 농도
[desThr] = desB30Thr-인간 인슐린의 농도
[UI] = 미지의 절단 중간체의 농도
[표 1]
프레프로 인간 인슐린을 이용한 스크리닝 결과
Figure pct00002
Figure pct00003
Figure pct00004
Figure pct00005
실시예 6: 재조합 서열번호 2(트립신 변이체 S172A) 및 이의 최적화된 변이체를 이용한 프레프로-인슐린 글라진의 절단
이러한 실험을 20℃ 및 8.3의 pH 값(완충 용액)에서 수행하였고, 1000 mL의 규모까지 수행하였다.
프레프로-인슐린 글라진 용액을 적합한 온도 조절된 반응 용기에 채우고, 돼지 트립신의 변이체의 용액을 첨가하여 반응을 개시하였다. 정해진 시간 간격 후에 샘플을 취하였다. 1 N 또는 2 N의 HCl 용액을 이용하여 샘플 용액을 산성화하여 효소 반응을 즉시 중지시켰다. 샘플을 HPLC로 분석하였다(실시예 7 참조).
도 2는 서열번호 2의 반응 동역학을 보여준다. 이 도면은 인슐린 글라진 형성 및 가장 두드러진 절단 부산물인 B31Arg-인슐린 글라진(인슐린 글라진 B 사슬에서 위치 31 다음의 절단, "des-Arg"로 지칭됨) 및 desB30Thr 인슐린 글라진(인슐린 글라진 B 사슬에서 위치 29 다음의 절단, "des-Thr"로 지칭됨)의 형성의 시간 의존적인 경과를 보여준다.
선택된 변이체에 프레프로-인슐린 글라진의 절단을 수행하였다. 결과를 표 2에 도시하였다. 인슐린 글라진, desB32Arg-인슐린 글라진 및 desB29Thr-인슐린 글라진의 함량을 절단 종료 시의 분석적 HPLC 크로마토그램의 피크 면적의 형태로 제공하였고, 인슐린 글라진 및 부산물의 비율을 나타내었다. 나아가, 몰 절단 수율을 다음에 따라 제공하였다:
Figure pct00006
이때,
n(인슐린 글라진) = 형성된 인슐린 글라진의 몰
n(프레프로-인슐린 글라진) = 사용된 프레프로-인슐린 글라진의 몰
도 4는 최적화된 트립신 변이체에 대한 예로서 돼지 트립신 변이체 번호 105(서열번호 105)의 반응 동역학을 보여준다.
[표 2]
프레프로-인슐린 글라진을 이용한 절단 결과 비교
Figure pct00007
Figure pct00008
Figure pct00009
표 2에서 명백히 볼 수 있듯이, 최적화된 트립신 변이체는 B31Arg-인슐린 글라진(desArg) 및 desB30Thr-인슐린 글라진(desThr)을 고려할 때 프레프로-인슐린 글라진에 대한 증진된 절단 선택성을 보여주어, 감소된 불순물 프로파일을 수반한 현저히 증가된 수율을 가져왔다. 표 1 및 표 2의 비교는 프레프로-인간 인슐린 및 프레프로-인슐린 글라진으로 수득된 절단 결과의 매우 높은 비교가능성을 보여준다.
실험예 7: HPLC 방법
방법 고성능 액체 크로마토그래피
컬럼 제조사: Macherey & Nagel
브랜드: Nucleosil 120-5 C18
규격: 250 x 4 mm
이동상 A: 45 mM 인산나트륨 완충액(pH 2.5) 315 mM NaCl. 25%(v/v) 아세토니트릴
이동상 B 45 mM 인산나트륨 완충액(pH 2.5) 55 mM NaCl. 65 %(v/v) 아세토니트릴
구배 시간 / 분 이동상 A 이동상 B
0분 94% 6%
30분 선형 90% 10%
주입 부피: 5 μL
검출: UV(215 nm)
실시예 8: 엑소펩티다제 활성
이러한 실험을 8℃ 및 8.3의 pH 값(완충 용액)에서 수행하였다.
인슐린 글라진 용액(0.5 g/L)을 적합한 온도 조절된 반응 용기에 채우고, 서열번호 2의 용액(100 U/g인슐린)을 첨가하여 반응을 개시하였다. 정해진 시간 간격 후에 샘플을 취하고, 1 N의 HCl 용액을 이용하여 샘플 용액을 산성화하여 효소 반응을 즉시 중지시켰다. 샘플을 HPLC로 분석하였다(실시예 7 참조). 반응 동역학을 도 3에 도시하였다.
도 3에서 명백히 볼 수 있듯이, 인슐린 글라진의 농도는 시간이 경과함에 따라 감소된다. 소량의 B30-desThr-인슐린 글라진의 형성 외에, 이 반응에서 형성된 주요 생성물은 B32-desArg-인슐린 글라진이며, 이는 트립신 서열번호 2가 엑소펩티다제 활성에 의해 위치 B32에서 단일 아르기닌을 절단할 수 있음을 나타낸다.
[표 3]
트립신 변이체 목록
Figure pct00010
Figure pct00011
Figure pct00012
Figure pct00013
야생형 돼지 트립신 및 선택된 트립신 변이체의 전장 서열:
야생형 돼지 트립신, 서열번호 1:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHFCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSRV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS YPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DSCQGDSGGP VVCNGQLQGI VSWGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
변이체 S172A, 서열번호 2:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHFCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSRV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS YPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSWGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
아미노산 위치 24, 44, 56, 78, 99, 107, 125, 131, 170, 172 및 193에 가변 위치가 있는 돼지 트립신의 일반 서열; 서열번호 3:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHXCGGSLI NSQWVVSAAH CYKXRIQVRL GEHNIXVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNXNT LDNDIMLIKL SSPATLNSXV ATVSLPXSCA AAGTECLISG WGNTXSSGSS XPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGX DXCQGDSGGP VVCNGQLQGI VSXGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 4:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHRCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSAV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS YPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 5:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHRCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSLV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS YPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 6:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHRCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSFV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS YPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 7:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHRCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSWV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS YPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 8:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHRCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSGV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS YPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 9:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHRCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSYV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS YPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 10:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHRCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSTV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS YPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 11:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHRCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSNV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS YPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 12:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHRCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSDV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS YPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 13:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHRCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSEV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS YPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 14:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHRCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSHV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS YPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 15:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHRCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSRV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTASSGSS YPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 16:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHRCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSRV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTGSSGSS YPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 17:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHRCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSRV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTYSSGSS YPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 18:
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서열번호 19:
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서열번호 20:
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서열번호 21:
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서열번호 22:
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서열번호 23:
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서열번호 24:
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서열번호 26:
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서열번호 27:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHRCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSRV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS YPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGN DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 28:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHVCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSRV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS YPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 29:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHLCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSRV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS YPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 30:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHSCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSRV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS YPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 31:
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서열번호 32:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHRCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSRV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS YPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 33:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHRCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSRV ATVSLPTSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS YPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 34:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHRCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSRV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS APSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 35:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHRCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSRV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS LPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 36:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHRCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSRV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS MPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 37:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHRCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSRV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS TPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 38:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHRCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSRV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS CPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 39:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHRCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSRV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS NPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 40:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHRCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSRV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS EPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 41:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHRCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSRV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS HPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 42:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHRCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSRV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS YPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 43:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHRCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSRV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS YPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DTCQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 44:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHRCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSRV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS YPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DSCQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 45:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHRCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSRV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS YPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DCCQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 46:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHACGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSRV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS YPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 47:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHICGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSRV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS YPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 48:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHMCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSRV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS YPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 49:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHTCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSRV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS YPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
서열번호 50:
IVGGYTCAAN SIPYQVSLNS GSHNCGGSLI NSQWVVSAAH CYKSRIQVRL GEHNIDVLEG NEQFINAAKI ITHPNFNGNT LDNDIMLIKL SSPATLNSRV ATVSLPRSCA AAGTECLISG WGNTKSSGSS YPSLLQCLKA PVLSDSSCKS SYPGQITGNM ICVGFLEGGK DACQGDSGGP VVCNGQLQGI VSSGYGCAQK NKPGVYTKVC NYVNWIQQTI AAN
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서열번호 53:
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서열번호 54:
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SEQUENCE LISTING <110> SANOFI <120> VARIANTS OF PORCINE TRYPSIN <130> 589-276 PCT <150> EP18158034.1 <151> 2018-02-22 <160> 130 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 223 <212> PRT <213> Sus scrofa <400> 1 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Phe Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ser Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Trp Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 2 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant S172A <400> 2 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Phe Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Trp Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 3 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Generic sequence of porcine trypsin with variable positions at amino acid positions 24, 44, 56, 78, 99, 107, 125, 131, 170, 172 and 193 <220> <221> MISC_FEATURE <222> (24)..(24) <223> Xaa is selected from the group consisting of Ala, Asn, Arg, Gln, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Ser, Thr, and Val <220> <221> MISC_FEATURE <222> (44)..(44) <223> Xaa is selected from the group consisting of Leu, Pro, and Ser <220> <221> MISC_FEATURE <222> (56)..(56) <223> Xaa is selected from the group consisting of Ala, Asn, Asp, His, and Trp <220> <221> MISC_FEATURE <222> (78)..(78) <223> Xaa is selected from the group consisting of Ala, Glu, Gly, Pro, Ser, and Tyr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (99)..(99) <223> Xaa is selected from the group consisting of Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gly, His, Leu, Phe, Thr, Trp, and Tyr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (107)..(107) <223> Xaa is selected from the group consisting of Arg, Asp, Gly, Pro, Ser, and Thr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (125)..(125) <223> Xaa is selected from the group consisting of Ala, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Ser, and Tyr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (131)..(131) <223> Xaa is selected from the group consisting of Ala, Asn, Asp, Cys, Gln; Glu, Gly, His, Ile, Leu, Met, Ser, Thr, Trp, Tyr, and Val <220> <221> MISC_FEATURE <222> (170)..(170) <223> Xaa is selected from the group consisting of Ala, Asn, Gly, Lys, and Tyr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (172)..(172) <223> Xaa is selected from the group consisting of Ala, Cys, Ser, and Thr <220> <221> MISC_FEATURE <222> (193)..(193) <223> Xaa is selected from the group consisting of Phe, Ser, Thr, Trp, and Tyr <400> 3 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Xaa Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Xaa Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Xaa Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Xaa Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Xaa Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Xaa Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Xaa Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Xaa Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Xaa Asp Xaa Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Xaa Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 4 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 4 <400> 4 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Ala Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 5 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 5 <400> 5 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Leu Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 6 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 6 <400> 6 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Phe Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 7 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 7 <400> 7 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Trp Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 8 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 8 <400> 8 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Gly Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 9 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 9 <400> 9 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Tyr Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 10 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 10 <400> 10 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Thr Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 11 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 11 <400> 11 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Asn Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 12 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 12 <400> 12 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Asp Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 13 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 13 <400> 13 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Glu Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 14 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 14 <400> 14 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser His Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 15 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 15 <400> 15 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Ala Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 16 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 16 <400> 16 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Gly Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 17 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 17 <400> 17 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Tyr Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 18 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 18 <400> 18 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Ser Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 19 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 19 <400> 19 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Cys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 20 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 20 <400> 20 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Glu Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 21 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 21 <400> 21 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr His Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 22 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 22 <400> 22 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Leu Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 23 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 23 <400> 23 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Gln Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 24 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 24 <400> 24 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Tyr Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 25 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 25 <400> 25 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Ala Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 26 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 26 <400> 26 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Gly Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 27 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 27 <400> 27 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Asn Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 28 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 28 <400> 28 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Val Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 29 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 29 <400> 29 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Leu Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 30 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 30 <400> 30 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Ser Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 31 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 31 <400> 31 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Gln Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 32 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 32 <400> 32 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 33 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 33 <400> 33 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 34 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 34 <400> 34 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Ala Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 35 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 35 <400> 35 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Leu Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 36 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 36 <400> 36 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 37 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 37 <400> 37 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Thr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 38 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 38 <400> 38 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Cys Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 39 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 39 <400> 39 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Asn Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 40 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 40 <400> 40 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Glu Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 41 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 41 <400> 41 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser His Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 42 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 42 <400> 42 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 43 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 43 <400> 43 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Thr Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 44 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 44 <400> 44 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ser Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 45 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 45 <400> 45 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Cys Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 46 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 46 <400> 46 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Ala Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 47 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 47 <400> 47 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Ile Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 48 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 48 <400> 48 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Met Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 49 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 49 <400> 49 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Thr Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 50 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 50 <400> 50 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Asn Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 51 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 51 <400> 51 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Lys Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 52 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 52 <400> 52 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Leu Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 53 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 53 <400> 53 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 54 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 54 <400> 54 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Ala Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 55 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 55 <400> 55 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Trp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 56 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 56 <400> 56 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asn Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 57 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 57 <400> 57 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 58 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 58 <400> 58 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Pro Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 59 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 59 <400> 59 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Gly Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 60 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 60 <400> 60 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Ser Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 61 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 61 <400> 61 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Asp Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 62 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 62 <400> 62 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Val Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 63 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 63 <400> 63 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Ile Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 64 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 64 <400> 64 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Trp Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 65 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 65 <400> 65 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Gly Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 66 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 66 <400> 66 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Ser Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 67 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 67 <400> 67 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Gln Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 68 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 68 <400> 68 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Asp Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 69 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 69 <400> 69 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Phe Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 70 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 70 <400> 70 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Tyr Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 71 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 71 <400> 71 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Thr Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 72 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 72 <400> 72 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Ser Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 73 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 73 <400> 73 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Ala Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 74 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 74 <400> 74 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 75 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 75 <400> 75 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Tyr Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 76 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 76 <400> 76 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Glu Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 77 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 77 <400> 77 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser His Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Cys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 78 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 78 <400> 78 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser His Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Cys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 79 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 79 <400> 79 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser His Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Ala Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 80 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 80 <400> 80 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser His Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Ser Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 81 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 81 <400> 81 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser His Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Ala Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 82 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 82 <400> 82 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser His Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Cys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 83 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 83 <400> 83 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Asn Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Ser Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 84 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 84 <400> 84 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Asn Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Ser Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ser Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 85 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 85 <400> 85 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser His Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Cys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 86 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 86 <400> 86 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Ala Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Ser Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 87 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 87 <400> 87 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser His Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Ser Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 88 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 88 <400> 88 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser His Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Ser Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ser Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 89 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 89 <400> 89 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser His Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Ala Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 90 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 90 <400> 90 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser His Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Ala Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ser Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 91 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 91 <400> 91 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Ala Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Ser Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 92 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 92 <400> 92 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Ala Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Cys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 93 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 93 <400> 93 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Asn Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Cys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Ala Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 94 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 94 <400> 94 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Asn Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Cys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Ala Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 95 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 95 <400> 95 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser His Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Ser Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Ala Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 96 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 96 <400> 96 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser His Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Ser Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Ala Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 97 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 97 <400> 97 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Ala Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Ala Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Ala Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 98 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 98 <400> 98 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Ala Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Ala Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Ala Asp Ser Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 99 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 99 <400> 99 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Asn Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Ser Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Ala Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 100 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 100 <400> 100 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser His Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Cys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Ala Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 101 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 101 <400> 101 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Asn Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Ser Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Ala Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 102 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 102 <400> 102 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser His Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Ser Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Ala Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 103 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 103 <400> 103 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser His Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Ser Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Ala Asp Ser Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 104 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 104 <400> 104 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Asn Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Cys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Ala Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 105 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 105 <400> 105 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Asn Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Ala Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Ala Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 106 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 106 <400> 106 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Ala Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Cys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Ala Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 107 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 107 <400> 107 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser His Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Cys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Ala Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 108 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 108 <400> 108 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Ala Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Cys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Ala Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 109 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 109 <400> 109 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Asn Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Cys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Ala Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 110 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 110 <400> 110 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser His Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Cys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Ala Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 111 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 111 <400> 111 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser His Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Ser Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Ala Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 112 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 112 <400> 112 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Pro Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser His Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Ser Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Ala Asp Ser Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 113 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 113 <400> 113 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Ala Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Ala Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Ala Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 114 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 114 <400> 114 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Ala Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Ala Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Ala Asp Ser Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 115 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 115 <400> 115 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Asn Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Ser Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 116 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 116 <400> 116 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Asn Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Ser Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Ala Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 117 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 117 <400> 117 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Asn Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Ala Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 118 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 118 <400> 118 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser His Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Ala Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Ala Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 119 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 119 <400> 119 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Pro Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile His Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Ala Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Thr Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Ala Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Met Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 120 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 120 <400> 120 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Pro Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 121 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 121 <400> 121 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Ile Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 122 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 122 <400> 122 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Phe Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 123 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 123 <400> 123 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Gly Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 124 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 124 <400> 124 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Lys Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 125 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 125 <400> 125 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Asp Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 126 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 126 <400> 126 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Glu Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 127 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 127 <400> 127 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Tyr Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 128 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 128 <400> 128 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Pro Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Ser Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 129 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 129 <400> 129 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Asn Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220 <210> 130 <211> 223 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Porcine trypsin variant no. 130 <400> 130 Ile Val Gly Gly Tyr Thr Cys Ala Ala Asn Ser Ile Pro Tyr Gln Val 1 5 10 15 Ser Leu Asn Ser Gly Ser His Arg Cys Gly Gly Ser Leu Ile Asn Ser 20 25 30 Gln Trp Val Val Ser Ala Ala His Cys Tyr Lys Ser Arg Ile Gln Val 35 40 45 Arg Leu Gly Glu His Asn Ile Asp Val Leu Glu Gly Asn Glu Gln Phe 50 55 60 Ile Asn Ala Ala Lys Ile Ile Thr His Pro Asn Phe Asn Gly Asn Thr 65 70 75 80 Leu Asp Asn Asp Ile Met Leu Ile Lys Leu Ser Ser Pro Ala Thr Leu 85 90 95 Asn Ser Arg Val Ala Thr Val Ser Leu Pro Arg Ser Cys Ala Ala Ala 100 105 110 Gly Thr Glu Cys Leu Ile Ser Gly Trp Gly Asn Thr Lys Ser Ser Gly 115 120 125 Ser Ser Tyr Pro Ser Leu Leu Gln Cys Leu Lys Ala Pro Val Leu Ser 130 135 140 Asp Ser Ser Cys Lys Ser Ser Tyr Pro Gly Gln Ile Thr Gly Asn Met 145 150 155 160 Ile Cys Val Gly Phe Leu Glu Gly Gly Lys Asp Ala Cys Gln Gly Asp 165 170 175 Ser Gly Gly Pro Val Val Cys Asn Gly Gln Leu Gln Gly Ile Val Ser 180 185 190 Cys Gly Tyr Gly Cys Ala Gln Lys Asn Lys Pro Gly Val Tyr Thr Lys 195 200 205 Val Cys Asn Tyr Val Asn Trp Ile Gln Gln Thr Ile Ala Ala Asn 210 215 220

Claims (16)

  1. 서열번호 1과 적어도 90%의 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 이로 구성된 돼지 트립신의 변이체로서,
    상기 아미노산 서열은 적어도 서열번호 1에 따른 천연 돼지 트립신의 F24, S44, D56, G78, Y131, S172 및 W193에 해당하는 하나 이상의 위치에서 하나 이상의 아미노산 치환에 의해 서열번호 1과 상이하며,
    단, 상기 아미노산 서열은 서열번호 1에 따른 천연 돼지 트립신이 아니고;
    상기 아미노산 서열은 서열번호 2에 따른 돼지 변이체 트립신 S172A가 아닌 것인, 돼지 트립신의 변이체.
  2. 제1항에 있어서,
    F24에 해당하는 위치의 아미노산은 Ala, Asn, Arg, Gln, Ile, Leu, Lys, Met, Ser, Thr, 및 Val로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산으로 치환되고/치환되거나;
    S44에 해당하는 위치의 아미노산은 Leu 및 Pro로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산으로 치환되고/치환되거나;
    D56에 해당하는 위치의 아미노산은 Ala, Asn, His, 및 Trp으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산으로 치환되고/치환되거나;
    G78에 해당하는 위치의 아미노산은 Ala, Glu; Pro, Ser, 및 Tyr로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산으로 치환되고/치환되거나;
    Y131에 해당하는 위치의 아미노산은 Ala, Asn, Asp, Cys, Gln; Glu, Gly, His, Ile, Leu, Met, Ser, Thr, Trp, Val로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산으로 치환되고/치환되거나;
    S172에 해당하는 위치의 아미노산은 Ala, Cys, 및 Thr로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산으로 치환되고/치환되거나;
    W193에 해당하는 위치의 아미노산은 Phe, Ser, Thr, 및 Tyr로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산으로 치환되는 것인, 돼지 트립신의 변이체.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 아미노산 서열은 추가로 적어도 서열번호 1에 따른 천연 돼지 트립신의 R99, R107, K125, 및 K170에 해당하는 하나 이상의 위치에서 하나 이상의 아미노산 치환에 의해 서열번호 1과 상이한 것인, 돼지 트립신의 변이체.
  4. 제3항에 있어서,
    R99에 해당하는 위치의 아미노산은 Ala, Asn, Asp, Glu, Gly, His, Leu, Phe, Thr, Trp, 및 Tyr로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산으로 치환되고/치환되거나;
    R107에 해당하는 위치의 아미노산은 Asp, Gly, Pro, Ser, 및 Thr로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산으로 치환되고/치환되거나;
    K125에 해당하는 위치의 아미노산은 Ala, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Ser, 및 Tyr로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산으로 치환되고/치환되거나;
    K170에 해당하는 위치의 아미노산은 Ala, Asn, Gly, 및 Tyr로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산으로 치환되는 것인, 돼지 트립신의 변이체.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 아미노산 서열은 서열번호 3이고, 이때,
    - Xaa24는 Ala, Asn, Arg, Gln, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Ser, Thr, 및 Val로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이고/이거나;
    - Xaa44는 Leu, Pro, 및 Ser로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이고/이거나;
    - Xaa56은 Ala, Asn, Asp, His, 및 Trp으로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이고/이거나;
    - Xaa78은 Ala, Glu, Gly, Pro, Ser, 및 Tyr로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이고/이거나;
    - Xaa99는 Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gly, His, Leu, Phe, Thr, Trp, 및 Tyr로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이고/이거나;
    - Xaa107은 Arg, Asp, Gly, Pro, Ser, 및 Thr로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이고/이거나;
    - Xaa125는 Ala, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Ser, 및 Tyr로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이고/이거나;
    - Xaa131은 Ala, Asn, Asp, Cys, Gln; Glu, Gly, His, Ile, Leu, Met, Ser, Thr, Trp, Tyr, 및 Val로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이고/이거나;
    - Xaa170은 Ala, Asn, Gly, Lys, 및 Tyr로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이고/이거나;
    - Xaa172는 Ala, Cys, Ser, 및 Thr로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이고/이거나;
    - Xaa193은 Phe, Ser, Thr, Trp, 및 Tyr로 구성된 군으로부터 선택된 아미노산이며;
    단, 서열번호 3은 서열번호 1에 따른 돼지 야생형 트립신이 아니고;
    서열번호 3은 서열번호 2에 따른 돼지 변이체 트립신 S172A가 아닌 것인, 돼지 트립신의 변이체.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 아미노산 서열은 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11, 서열번호 12, 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 17, 서열번호 18, 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 23, 서열번호 24, 서열번호 25, 서열번호 26, 서열번호 27, 서열번호 28, 서열번호 29, 서열번호 30, 서열번호 31, 서열번호 32, 서열번호 33, 서열번호 34, 서열번호 35, 서열번호 36, 서열번호 37, 서열번호 38, 서열번호 39, 서열번호 40, 서열번호 41, 서열번호 42, 서열번호 43, 서열번호 44, 서열번호 45, 서열번호 46, 서열번호 47, 서열번호 48, 서열번호 49, 서열번호 50, 서열번호 51, 서열번호 52, 서열번호 53, 서열번호 54, 서열번호 55, 서열번호 56, 서열번호 57, 서열번호 58, 서열번호 59, 서열번호 60, 서열번호 61, 서열번호 62, 서열번호 63, 서열번호 64, 서열번호 65, 서열번호 66, 서열번호 67, 서열번호 68, 서열번호 69, 서열번호 70, 서열번호 71, 서열번호 72, 서열번호 73, 서열번호 74, 서열번호 75, 서열번호 76, 서열번호 77, 서열번호 78, 서열번호 79, 서열번호 80, 서열번호 81, 서열번호 82, 서열번호 83, 서열번호 84, 서열번호 85, 서열번호 86, 서열번호 87, 서열번호 88, 서열번호 89, 서열번호 90, 서열번호 91, 서열번호 92, 서열번호 93, 서열번호 94, 서열번호 95, 서열번호 96, 서열번호 97, 서열번호 98, 서열번호 99, 서열번호 100, 서열번호 101, 서열번호 102, 서열번호 103, 서열번호 104, 서열번호 105, 서열번호 106, 서열번호 107, 서열번호 108, 서열번호 109, 서열번호 110, 서열번호 111, 서열번호 112, 서열번호 113, 서열번호 114, 서열번호 115, 서열번호 116, 서열번호 117, 서열번호 118, 및 서열번호 119로 구성된 군으로부터 선택되는 것인, 돼지 트립신의 변이체.
  7. 제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서,
    (i) 상기 변이체는 일반식 A-Lys-Thr-Arg-Arg-B의 펩티드를 절단하여 적어도 80%의 수율로 일반식 A-Lys-Thr-Arg-Arg의 절단 생성물을 생성할 수 있고/있거나(이때, A는 하나 이상의 아미노산으로 구성된 아미노산 서열이고; B는 하나 이상의 아미노산으로 구성된 아미노산 서열임)
    (ii) 변이체는 서열번호 2에 다른 돼지 변이체 트립신 S172A와 비교하여 위치 B32-Arg에 대해 C 말단의 위치에서 프레프로-인간 인슐린, 프레프로-인슐린 글라진, 프레프로-인슐린 리스프로, 프레프로-인슐린 아스파르트, 또는 프레프로-인슐린 글루리신의 절단에 대해 증가된 선택성을 나타내는 것인, 돼지 트립신의 변이체.
  8. - 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 돼지 트립신의 변이체, 또는
    - 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에서 정의된 바와 같은 돼지 트립신의 변이체의 트립시노겐 전구체 분자
    를 암호화하는 핵산 분자로서,
    상기 핵산 분자는 선택적으로 벡터에 함유되거나 선택적으로 게놈으로 통합되는 것인, 핵산 분자.
  9. 제8항에 따른 핵산 분자를 함유하는 숙주 세포.
  10. 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 돼지 트립신의 변이체의 생산 방법으로서,
    제9항에 따른 숙주 세포를 배양하는 단계; 및
    배양 배지 또는 숙주 세포로부터 돼지 트립신의 변이체의 트립시노겐 전구체 분자를 단리하는 단계; 및
    선택적으로 트립시노겐 전구체 분자를 활성화시켜, 상기 돼지 트립신의 변이체를 수득하는 단계를 포함하는 것인, 방법.
  11. 식품 성분 또는 사료 성분의 제조 과정 내에서 사용하기 위한 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 돼지 트립신의 변이체 또는 제8항에 따른 핵산 분자 또는 제9항에 따른 숙주 세포.
  12. 인간 인슐린, 인슐린 유사체 또는 인슐린의 유도체의 생산 방법에서 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 돼지 트립신의 변이체의 용도.
  13. 제12항에 있어서, 인슐린 유사체는 인슐린 아스파르트, 인슐린 리스프로, 인슐린 글루리신, 및 인슐린 글라진으로 구성된 군으로부터 선택되는 것인, 용도.
  14. 일반식 A-Lys-Thr-Arg-Arg-B의 단백질 또는 펩티드를 절단하기 위한 제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 따른 돼지 트립신의 변이체의 용도로서,
    A는 하나 이상의 아미노산으로 구성된 아미노산 서열이고;
    B는 하나 이상의 아미노산으로 구성된 아미노산 서열인 것인, 용도.
  15. 제14항에 있어서, 절단은 절단 생성물 A-Lys-Thr-Arg-Arg을 생성하는 것인, 용도.
  16. 제15항에 있어서, 절단은 적어도 80의 수율로 절단 생성물 A-Lys-Thr-Arg-Arg을 생성하는 것인, 용도.
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