RU2020130880A - Варианты свиного трипсина - Google Patents
Варианты свиного трипсина Download PDFInfo
- Publication number
- RU2020130880A RU2020130880A RU2020130880A RU2020130880A RU2020130880A RU 2020130880 A RU2020130880 A RU 2020130880A RU 2020130880 A RU2020130880 A RU 2020130880A RU 2020130880 A RU2020130880 A RU 2020130880A RU 2020130880 A RU2020130880 A RU 2020130880A
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- seq
- amino acid
- group
- variant
- thr
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/48—Hydrolases (3) acting on peptide bonds (3.4)
- C12N9/50—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25)
- C12N9/64—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue
- C12N9/6421—Proteinases, e.g. Endopeptidases (3.4.21-3.4.25) derived from animal tissue from mammals
- C12N9/6424—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12N9/6427—Chymotrypsins (3.4.21.1; 3.4.21.2); Trypsin (3.4.21.4)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/575—Hormones
- C07K14/62—Insulins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y304/00—Hydrolases acting on peptide bonds, i.e. peptidases (3.4)
- C12Y304/21—Serine endopeptidases (3.4.21)
- C12Y304/21004—Trypsin (3.4.21.4)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Meat, Egg Or Seafood Products (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Fodder In General (AREA)
- Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
Claims (57)
1. Вариант свиного трипсина, содержащий или состоящий из аминокислотной последовательности, которая характеризуется по меньшей мере 90% идентичностью последовательности с SEQ ID NO: 1,
где указанная аминокислотная последовательность отличается от SEQ ID NO: 1 по меньшей мере одной или несколькими аминокислотными заменами в одном или нескольких положениях, соответствующих F24, S44, D56, G78, Y131, S172 и W193 нативного свиного трипсина в соответствии с SEQ ID NO: 1,
при условии, что указанная аминокислотная последовательность не представляет собой нативный свиной трипсин в соответствии с SEQ ID NO: 1; и
при условии, что указанная аминокислотная последовательность не представляет собой вариант свиного трипсина S172A в соответствии с SEQ ID NO: 2.
2. Вариант свиного трипсина по п. 1,
где аминокислота в положении, соответствующем F24, заменена аминокислотой, выбранной из группы, состоящей из Ala, Asn, Arg, Gln, Ile, Leu, Lys, Met, Ser, Thr и Val;
где аминокислота в положении, соответствующем S44, заменена аминокислотой, выбранной из группы, состоящей из Leu и Pro;
где аминокислота в положении, соответствующем D56, заменена аминокислотой, выбранной из группы, состоящей из Ala, Asn, His и Trp;
где аминокислота в положении, соответствующем G78, заменена аминокислотой, выбранной из группы, состоящей из Ala, Glu; Pro, Ser и Tyr;
где аминокислота в положении, соответствующем Y131, заменена аминокислотой, выбранной из группы, состоящей из Ala, Asn, Asp, Cys, Gln; Glu, Gly, His, Ile, Leu, Met, Ser, Thr, Trp, Val;
где аминокислота в положении, соответствующем S172, заменена аминокислотой, выбранной из группы, состоящей из Ala, Cys и Thr; и/или
где аминокислота в положении, соответствующем W193, заменена аминокислотой, выбранной из группы, состоящей из Phe, Ser, Thr и Tyr.
3. Вариант свиного трипсина по любому из пп. 1, 2, где указанная аминокислотная последовательность дополнительно отличается от SEQ ID NO: 1 по меньшей мере одной или несколькими аминокислотными заменами в одном или нескольких положениях, соответствующих R99, R107, K125 и K170 нативного свиного трипсина в соответствии с SEQ ID NO: 1.
4. Вариант свиного трипсина по п. 3,
где аминокислота в положении, соответствующем R99, заменена аминокислотой, выбранной из группы, состоящей из Ala, Asn, Asp, Glu, Gly, His, Leu, Phe, Thr, Trp и Tyr;
где аминокислота в положении, соответствующем R107, заменена аминокислотой, выбранной из группы, состоящей из Asp, Gly, Pro, Ser и Thr;
где аминокислота в положении, соответствующем K125, заменена аминокислотой, выбранной из группы, состоящей из Ala, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Ser и Tyr; и/или
где аминокислота в положении, соответствующем K170, заменена аминокислотой, выбранной из группы, состоящей из Ala, Asn, Gly и Tyr.
5. Вариант свиного трипсина по любому из пп. 1-4, где указанная аминокислотная последовательность представляет собой SEQ ID NO: 3,
где
- Xaa24 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из Ala, Asn, Arg, Gln, Ile, Leu, Lys, Met, Phe, Ser, Thr и Val;
- Xaa44 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из Leu, Pro и Ser;
- Xaa56 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из Ala, Asn, Asp, His и Trp;
- Xaa78 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из Ala, Glu, Gly, Pro, Ser и Tyr;
- Xaa99 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из Ala, Arg, Asn, Asp, Glu, Gly, His, Leu, Phe, Thr, Trp и Tyr;
- Xaa107 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из Arg, Asp, Gly, Pro, Ser и Thr;
- Xaa125 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из Ala, Cys, Gln, Glu, Gly, His, Leu, Lys, Ser и Tyr;
- Xaa131 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из Ala, Asn, Asp, Cys, Gln; Glu, Gly, His, Ile, Leu, Met, Ser, Thr, Trp, Tyr и Val;
- Xaa170 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из Ala, Asn, Gly, Lys и Tyr;
- Xaa172 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из Ala, Cys, Ser и Thr; и/или
- Xaa193 представляет собой аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из Phe, Ser, Thr, Trp и Tyr;
при условии, что SEQ ID NO: 3 не представляет собой свиной трипсин дикого типа в соответствии с SEQ ID NO: 1; и
при условии, что SEQ ID NO: 3 не представляет собой вариант свиного трипсина S172A в соответствии с SEQ ID NO: 2.
6. Вариант свиного трипсина по любому из пп. 1-5, где указанная аминокислотная последовательность выбрана из группы, состоящей из SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO: 19, SEQ ID NO: 20, SEQ ID NO: 21, SEQ ID NO: 22, SEQ ID NO: 23, SEQ ID NO: 24, SEQ ID NO: 25, SEQ ID NO: 26, SEQ ID NO: 27, SEQ ID NO: 28, SEQ ID NO: 29, SEQ ID NO: 30, SEQ ID NO: 31, SEQ ID NO: 32, SEQ ID NO: 33, SEQ ID NO: 34, SEQ ID NO: 35, SEQ ID NO: 36, SEQ ID NO: 37, SEQ ID NO: 38, SEQ ID NO: 39, SEQ ID NO: 40, SEQ ID NO: 41, SEQ ID NO: 42, SEQ ID NO: 43, SEQ ID NO: 44, SEQ ID NO: 45, SEQ ID NO: 46, SEQ ID NO: 47, SEQ ID NO: 48, SEQ ID NO: 49, SEQ ID NO: 50, SEQ ID NO: 51, SEQ ID NO: 52, SEQ ID NO: 53, SEQ ID NO: 54, SEQ ID NO: 55, SEQ ID NO: 56, SEQ ID NO: 57, SEQ ID NO: 58, SEQ ID NO: 59, SEQ ID NO:, 60, SEQ ID NO: 61, SEQ ID NO: 62, SEQ ID NO: 63, SEQ ID NO: 64, SEQ ID NO: 65, SEQ ID NO: 66, SEQ ID NO: 67, SEQ ID NO: 68, SEQ ID NO: 69, SEQ ID NO: 70, SEQ ID NO: 71, SEQ ID NO: 72, SEQ ID NO: 73, SEQ ID NO: 74, SEQ ID NO: 75, SEQ ID NO: 76, SEQ ID NO: 77, SEQ ID NO: 78, SEQ ID NO: 79, SEQ ID NO: 80, SEQ ID NO: 81, SEQ ID NO: 82, SEQ ID NO: 83, SEQ ID NO: 84, SEQ ID NO: 85, SEQ ID NO: 86, SEQ ID NO: 87, SEQ ID NO: 88, SEQ ID NO: 89, SEQ ID NO: 90, SEQ ID NO: 91, SEQ ID NO: 92, SEQ ID NO: 93, SEQ ID NO: 94, SEQ ID NO: 95, SEQ ID NO: 96, SEQ ID NO: 97, SEQ ID NO: 98, SEQ ID NO: 99, SEQ ID NO: 100, SEQ ID NO: 101, SEQ ID NO: 102, SEQ ID NO: 103, SEQ ID NO: 104, SEQ ID NO: 105, SEQ ID NO: 106, SEQ ID NO: 107, SEQ ID NO: 108, SEQ ID NO: 109, SEQ ID NO: 110, SEQ ID NO: 111, SEQ ID NO: 112, SEQ ID NO: 113, SEQ ID NO: 114, SEQ ID NO: 115, SEQ ID NO: 116, SEQ ID NO: 117, SEQ ID NO: 118 и SEQ ID NO: 119.
7. Вариант свиного трипсина по любому из пп. 1-6, где
(i) указанный вариант способен к расщеплению пептида с общей формулой A-Lys-Thr-Arg-Arg-B с получением продукта расщепления с общей формулой A-Lys-Thr-Arg-Arg с выходом, составляющим по меньшей мере 80%,
где A представляет собой аминокислотную последовательность, состоящую из одной или нескольких аминокислот; и
где B представляет собой аминокислотную последовательность, состоящую из одной или нескольких аминокислот;
и/или
(ii) вариант проявляет повышенную селективность в отношении расщепления человеческого препроинсулина, препроинсулина гларгина, препроинсулина лизпро, препроинсулина аспарта или препроинсулина глулизина в C-концевом положении относительно положения B32-Arg по сравнению с вариантом свиного трипсина S172A в соответствии с SEQ ID NO: 2.
8. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая
- вариант свиного трипсина по любому из пп. 1-7 или
- молекулу-предшественника, представляющую собой трипсиноген, варианта свиного трипсина по любому из пп. 1-7,
где указанная молекула нуклеиновой кислоты необязательно содержится в векторе или необязательно интегрирована в геном.
9. Клетка-хозяин, содержащая молекулу нуклеиновой кислоты по п. 8.
10. Способ получения варианта свиного трипсина по любому из пп. 1-7, включающий стадии:
культивирования клетки-хозяина по п. 9 и
выделения молекулы-предшественника, представляющей собой трипсиноген, варианта свиного трипсина из культуральной среды или из клетки-хозяина; и
необязательно активации молекулы-предшественника, представляющей собой трипсиноген, с получением таким образом указанного варианта свиного трипсина.
11. Вариант свиного трипсина по любому из пп. 1-7, или молекула нуклеиновой кислоты по п. 8, или клетка-хозяин по п. 9 для применения в способе изготовления пищевого ингредиента или кормового ингредиента.
12. Применение варианта свиного трипсина по любому из пп. 1-7 в способе получения человеческого инсулина, аналога инсулина или производного инсулина.
13. Применение по п. 12, где аналог инсулина выбран из группы, состоящей из инсулина аспарта, инсулина лизпро, инсулина глулизина и инсулина гларгина.
14. Применение варианта свиного трипсина по любому из пп. 1-7 для расщепления белка или пептида с общей формулой A-Lys-Thr-Arg-Arg-B,
где A представляет собой аминокислотную последовательность, состоящую из одной или нескольких аминокислот; и
где B представляет собой аминокислотную последовательность, состоящую из одной или нескольких аминокислот.
15. Применение по п. 14, где расщепление приводит к получению продукта расщепления A-Lys-Thr-Arg-Arg.
16. Применение по п. 15, где расщепление приводит к получению продукта расщепления A-Lys-Thr-Arg-Arg с выходом, составляющим по меньшей мере 80.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| EP18158034.1 | 2018-02-22 | ||
| EP18158034 | 2018-02-22 | ||
| PCT/EP2019/054400 WO2019162423A1 (en) | 2018-02-22 | 2019-02-22 | Variants of porcine trypsin |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2020130880A3 RU2020130880A3 (ru) | 2022-03-22 |
| RU2020130880A true RU2020130880A (ru) | 2022-03-22 |
| RU2783315C2 RU2783315C2 (ru) | 2022-11-11 |
Family
ID=
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US11952602B2 (en) | 2024-04-09 |
| JP7432516B2 (ja) | 2024-02-16 |
| CN111989401A (zh) | 2020-11-24 |
| RU2020130880A3 (ru) | 2022-03-22 |
| IL276799A (en) | 2020-10-29 |
| US11518988B2 (en) | 2022-12-06 |
| JP2024038140A (ja) | 2024-03-19 |
| AU2019225972A1 (en) | 2020-10-15 |
| US20200377873A1 (en) | 2020-12-03 |
| CA3091943A1 (en) | 2019-08-29 |
| US20230303994A1 (en) | 2023-09-28 |
| MX2020008766A (es) | 2020-12-07 |
| KR20200124255A (ko) | 2020-11-02 |
| WO2019162423A1 (en) | 2019-08-29 |
| EP3755794A1 (en) | 2020-12-30 |
| JP2021514194A (ja) | 2021-06-10 |
| SG11202008026WA (en) | 2020-09-29 |
| BR112020016954A2 (pt) | 2020-12-29 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101432296B (zh) | 聚乙二醇化的突变的肉毒梭菌毒素 | |
| EP3319634B1 (en) | Stabilized soluble pre-fusion rsv f polypeptides | |
| George-Nascimento et al. | Characterization of recombinant human epidermal growth factor produced in yeast | |
| EP3821906A1 (en) | Vaccine against rsv comprising modified f polypeptide | |
| IL184112A0 (en) | A method for producing polypeptides or proteins in a disulfide-bridged two-chain form | |
| KR890003802A (ko) | 재조합 dna 기술에 의해 제조된 소의 췌장 트립신 억제제, 그 제조 방법, 발현 벡터 및 재조합 숙주 및 그의 제약적 용도 | |
| US11759514B2 (en) | Stabilized pre-fusion RSV F proteins | |
| IL278014B1 (en) | Anti-myostatin antibodies, polypeptides containing variable fc regions and methods of use | |
| RU2011153239A (ru) | Улучшенные аминокислотные последовательности, направленные против респираторно-синцитиального вируса человека (hrsv), и полипептиды, включающие такие последовательности, для профилактики и/или лечения инфекций дыхательных путей | |
| CN102083855A (zh) | 活性延长的新胰岛素类似物 | |
| CN102816785A (zh) | 一种甘精胰岛素及其类似物的制备方法 | |
| WO2017207477A1 (en) | Stabilized pre-fusion rsv f proteins | |
| JP2024038140A (ja) | ブタトリプシンの変異体 | |
| JPH05508775A (ja) | プロテアーゼ耐性ｐｄｇｆ及び使用法 | |
| Canova-Davis et al. | Transpeptidation during the analytical proteolysis of proteins | |
| RU2020128190A (ru) | Кодон-оптимизированный ген предшественника и ген сигнального пептида аналога человеческого инсулина | |
| CN109400695A (zh) | 一种多肽的修饰方法及应用 | |
| Chunxiao et al. | Study on preparation and activity of a novel recombinant human parathyroid hormone (1–34) analog with N-terminal Pro–Pro extension | |
| KR20090009839A (ko) | 면역조절 올리고펩티드 | |
| CN101671390A (zh) | 人干扰素α衍生物及其聚乙二醇化修饰物的制备和用途 | |
| CN104558148A (zh) | 睫状神经营养因子突变体及其修饰型突变体和用途 | |
| CN108084247B (zh) | 一种合成多肽及其合成方法和应用 | |
| US11261228B2 (en) | Insulin derivatives with a terminal LPXT motif | |
| CA2947255A1 (en) | Variants of dr3 and use thereof | |
| CN1532289A (zh) | 用重组大肠杆菌制备N-末端乙酰化修饰的胸腺素α的方法 |