KR20200104283A - 적응 요법을 위한 항원-특이적 t 세포를 포함하는 세포 조성물 - Google Patents

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KR20200104283A
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크리스티 존스
소정 김
로렌 수아레즈
켄 카터
스콧 카메르
댄 베드나릭
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Abstract

본 발명은 입양 면역요법에 적합한 단리된 세포 조성물, 뿐만 아니라 상기 세포 조성물의 제조 방법 및 상기 세포 조성물을 사용한 치료 방법을 제공한다. 상기 조성물은, 약제학적으로 허용되는 담체에, 표적 펩티드 항원(들)에 특이적인 적어도 약 106개의 CD8+ T 세포를 포함한다. 다양한 구현예에서, 상기 조성물은 주로 CD8+ T 세포이고, 상기 조성물 중 T 세포의 적어도 약 20%는 중심 또는 이펙터 기억 표현형을 나타내어, 자연 선택을 거친 천연 T 세포 레퍼토리로부터 견고하고 오래 지속되는 입양 요법을 제공한다.

Description

적응 요법을 위한 항원-특이적 T 세포를 포함하는 세포 조성물
우선권
본 출원은 2017년 9월 20일자로 출원된, 미국 가출원 번호 62/561,044의 이익 및 2018년 4월 12일자로 출원된, 미국 가출원 번호 62/656,679의 이익을 주장하며, 이들 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
배경
공여자 림프구 주입과 같은 입양 면역요법은 이식편 대 백혈병 (graft versus leukemia; GVL) 효과를 향상시키기 위해 조혈 줄기세포 이식 (HSCT) 후 백혈병 재발의 치료에 사용된다. 이러한 접근법은 종종 효과가 나타나는 데 몇 개월이 걸리며; 매우 많은 양의 세포를 필요로 하며, 이는 이식편 대 숙주 질환 (GVHD)의 실질적인 위험을 초래한다. McLaughlin L, et al., Adoptive T-cell therapies for refractory / relapsed leukemia and lymphoma; current strategies and recent advances. Ther. Adv. Hematol. 2015 Vol. 6(6) 295-307를 참고한다.
현재의 치료 옵션으로, 예를 들어, HSCT 후에 재발하는 백혈병 환자에 대한 결과는 절망적이다. 입양 세포 요법은 일부 이점을 제공할 수 있지만, 제공될 수 있는 표적-특이적 세포의 수는 종종 불충분하고 매우 가변적이며, 특히 건강한 개인의 말초 혈액에서 종종 매우 낮고 심지어 검출할 수 없는 암-특이적 CTL 전구체와 관련하여, 공여자 림프구로부터의 나이브 T 세포 집단을 생체외에서 활성화하고 확장시키는 것은 어렵다. Quintarelli C, et al., Cytotoxic T lymphocytes directed to the preferentially expressed antigens of melanoma ( PRAME ) target chronic myeloid leukemia. Blood 2008; 112: 1876-1885. 또한, 키메라 항원 수용체 (CAR) T 세포 및 자연 살해 세포 요법과 같은 세포 요법은 생체내에서 충분히 견고하지 못하고/못하거나 지속성이 제한되고, 표적 오프-조직 독성(target off-tissue toxicity)에 나타날 수 있는 소진된 세포 표현형을 유도하는 경향이 있다. Cruz and Bollard, T-cell and natural killer cell therapies for hematological malignancies after hematopoietic stem cell transplantation; enhancing the graft-versus-leukemia effect. Haematologica 2015; 100(6) 709-719를 참고한다. 또한, 이러한 요법은 일반적으로 조작된 단일 표적으로 인해 유연성이 제한적이다.
백혈병 또는 림프종 (급성 또는 만성 백혈병 포함)을 앓고 있는 환자뿐만 아니라 입양 면역요법으로부터 혜택을 받을 수 있는 다른 환자를 포함하여, 보다 효과적이고 안전한 입양 면역요법 옵션을 제공하기 위해 세포 조성물이 필요하다. 다양한 측면 및 구현예에서, 본 발명은 이러한 요구를 해결한다.
발명의 요약
다양한 측면 및 구현예에서, 본 발명은 입양 면역요법에 적합한 단리된 세포 조성물, 뿐만 아니라 상기 세포 조성물을 제조하는 방법 및 상기 세포 조성물을 사용한 치료 방법을 제공한다. 상기 조성물은, 약제학적으로 허용되는 담체에서, 표적 펩티드 항원(들)에 특이적인 적어도 약 106개의 CD8+ T 세포를 포함한다. 다양한 구현예에서, 상기 조성물은 주로 CD8+ T 세포이고, 조성물 중 T 세포의 적어도 약 20%는 중심 또는 이펙터 기억 표현형을 나타내어, 자연 선택을 거친 천연 T 세포 레퍼토리로부터 견고하고 오래 지속되는 입양 요법을 제공한다. 상기 세포 조성물은 키메라 항원 수용체 또는 재조합 TCR을 발현시키는 T 세포를 포함하지 않으므로, 다양한 구현예에서, 종종 보다 소진된 T 세포 표현형 및 덜 오래 지속되는 반응 및 더 큰 독성을 초래하는 이러한 기술에 대한 대안을 제공한다.
다양한 구현예에서, 상기 세포 조성물은 표적 세포의 강력한 파괴 및 생체내에서 오랜 지속성을 제공하기 위해 표적 펩티드 항원에 특이적인 적어도 약 107개의 CD8+ T 세포, 또는 표적 펩티드 항원에 특이적인 적어도 약 108개, 적어도 약 109개 또는 적어도 약 1010개의 CD8+ T 세포를 포함한다. 예를 들어, 급성 골수성 백혈병 (AML) 또는 골수이형성 증후군의 치료를 위해, 상기 세포 조성물은 WT1, PRAME, 서바이빈(Survivin) 및 사이클린 A1 펩티드 항원에 특이적인 T 세포를 포함할 수 있다.
다양한 구현예에서, 상기 조성물 중의 T 세포 (및/또는 표적 항원에 특이적인 T 세포)는 적어도 약 50%의 중심 또는 이펙터 기억 T 세포이거나, 또는 일부 구현예에서 적어도 약 70%의 중심 또는 이펙터 기억 세포이거나, 또는 적어도 약 80%의 중심 또는 이펙터 기억 T 세포이다. 일부 구현예에서, 상기 기억 세포는 약 25:75 내지 약 75:25 중심 대 이펙터 기억 세포이다. 상기 세포 조성물은 약 20% 미만의 말단 분화된 기억 T 세포 (예를 들어, Temra 세포) 및 약 20% 이하의 나이브 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 세포 조성물은 약 5 내지 약 25%의 T 기억 줄기세포 (TSCM)를 포함한다. 이 세포 표현형은 상자성 인공 항원 제시 세포 (aAPC) 및 재조합 T 세포 성장 인자 칵테일을 이용한 농축(enrichment) 및 팽창 과정을 사용하여 생성 및/또는 제어될 수 있다.
다양한 구현예에서, 상기 세포 조성물은 적어도 90%의 CD8+ T 세포 (예를 들어, CD3+ CD8+ 세포)이다. 예를 들어, 단리된 세포 조성물은 약 10% 미만 또는 약 5% 미만의 CD4+ T 세포를 갖는 것을 특징으로 할 수 있다. 생체외에서 CD8+ T 세포를 팽창시킬 때, CD4+ 세포는 CD8+ 세포를 과성장시키고 성장 신호에 대해 경쟁하는 경향이 있으며, 견고하고 오래 지속되는 생체내 반응이 필요하지 않다.
다양한 구현예에서, 항원-특이적 T 세포는 활성화될 때 다작용성 표현형을 나타낸다. 예를 들어, 활성화될 때 상기 T 세포는 다음 중 2가지 이상에 대해 양성이다: IL-2에 대한 세포내 염색, IFN-γ 생성, TNF-α의 생성, 및 CD107A. 다양한 구현예에서, 상기 항원-특이적 T 세포의 적어도 50%, 또는 적어도 70%는 이들 마커 중 적어도 2가지를 나타낸다. 다양한 구현예에서, 상기 항원-특이적 T 세포의 적어도 50% 또는 적어도 70%는 이들 마커 중 적어도 3가지, 또는 일부 구현예에서 이들 마커 중 4가지 모두를 나타낸다.
다양한 구현예에 따른 세포 조성물은 농축 및 팽창 공정에 의해 제조될 수 있다. 일부 구현예에서, 표적 항원(들) (예를 들어, 종양 관련 항원 또는 바이러스-관련 항원)에 특이적인 CD8+ 세포가 농축될 수 있다. 이러한 세포 집단은, 공급원 림프구에서 주로 나이브 세포일지라도, 배양으로 빠르게 팽창되어 본원에 기재된 세포 조성물에 도달할 수 있다. 세포 집단을 양성적으로 선택하기 위해 상자성 비드를 사용하여 농축을 수행할 수 있고, 이는 T 세포 표면 수용체의 강력한 자기 클러스터링으로 인해 나이브 세포를 활성화시키는 추가 이점을 가질 수 있다. 예를 들어, 상자성 비드 또는 나노입자는, CD28에 대한 작용제 (예를 들어, CD28의 항체 작용제)와 같이, 동일하거나 상이한 입자에 대한 동시-자극 신호와 함께, 펩티드 항원을 제시하는 단량체 또는 다량체 (예를 들어, 이량체) HLA 리간드를 함유할 수 있다. 일부 구현예에서, CD28+ 세포가 또한 농축되며, 이는 항원-특이적 농축과 동시에 일어날 수 있다.
다양한 구현예에서, 상기 표적 펩티드 항원은 종양-유래, 종양-특이적 항원, 및 신생항원을 포함하는, 종양 또는 암 관련 항원이다. 종양 관련 항원에 특이적인 T 세포는 종종 건강한 개인의 말초 혈액에서 매우 드물고, 많은 경우에 검출할 수 없다. 이것은 종종 바이러스-특이적 및 종양 항원 특이적 T 세포 사이에서 관찰되는 구별이다.
일부 구현예에서, 상기 표적 펩티드 항원은 바이러스, 박테리아, 진균 또는 기생충 병원체와 같은 병원체와 관련되거나 이로부터 유래된 적어도 하나를 포함한다. 예를 들어, 적어도 1가지의 펩티드 항원은 HIV, 간염 (예를 들어, B형, C형 또는 D형) CMV, 엡스타인-바 바이러스 (Epstein-Barr virus; EBV), 인플루엔자, 헤르페스 바이러스 (예를 들어, HSV 1 또는 2, 또는 수두대상포진), 및 아데노바이러스와 관련될 수 있다. 예를 들어, CMV는 장기 이식 환자에서 발견되는 가장 흔한 바이러스 병원체이며, 골수 또는 말초 혈액 줄기세포 이식을 받는 환자에서 이환과 사망의 주요 원인이다. 바이러스 활성화는 암 생물학과 관련이 있는 것으로 알려져 있다.
또 다른 구현예에서, 상기 세포 조성물은 종양 관련 항원에 특이적인 T 세포를 포함하며, 병원체-관련 T 세포는 방관자 세포로서 제공된다. 구체적으로, HLA-펩티드 및 항-CD28 둘 다의 선택에 기초하여 CD8+ T 세포를 농축함으로써, 방관자 세포는 특히 항원-특이적 활성화 없이 이들 세포의 일부 비특이적 팽창을 유도할 수 있는 T 세포 성장 인자 칵테일을 사용할 때, 농축되고 팽창될 것이다. 이들 구현예에서, 조성물의 많은 부분이 표적 펩티드에 특이적인 T 세포 (예를 들어, 5% 내지 75%)인 반면, 나머지 T 세포 (약 0.25% 내지 약 25%)는 이식 후 특히 유익하거나 바이러스 병인이 있는 암에 유익한, 통상적인 병원체에 대한 면역계의 일부 재구성을 제공한다.
일부 구현예는 팽창 동안 T 세포 성장 인자를 사용하며, 이는 T 세포의 증식 및/또는 분화에 영향을 미친다. 특히 유용한 사이토카인은 MIP-1β, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-10, IL-12, IL-15, IL-21, IFN-γ를 포함한다. 이들 또는 다른 구현예에서, 상기 세포는 MIP-1β, IL-1β 및 IL-6으로부터 선택된 1개, 2개 또는 3개의 사이토카인의 존재하에 배양으로 팽창된다. 일부 구현예에서, 상기 사이토카인은 IL-10을 추가로 포함한다. 세포는 1주 내지 4주, 예컨대 약 10일 내지 약 21일 배양으로 팽창될 수 있다.
다른 측면에서, 본 발명은 본원에 기재된 바와 같은 aAPC로의 농축 및 팽창을 포함하는, 세포 조성물의 제조 방법을 제공한다. 구체적으로, 공급원 림프구 (예를 들어, 건강한 공여자)로부터 CD4+ 세포가 고갈된 후, 항원-특이적 CD8+ T 세포는 일부 구현예에서 CD28+ 세포뿐만 아니라 표적 펩티드 항원에 특이적인 T 세포에 대해 농축된다. 세포 표면 수용체의 자기장 유도 클러스터링에 의해 생체외에서 T 세포를 활성화시키는 상자성 입자와 같은 나노입자 또는 미세입자 aAPC를 사용하여 표적 세포를 농축시킬 수 있다. 라텍스 또는 다른 폴리머-기반 입자를 포함하는 다른 재료가 또한 (자기-유도 클러스터링 없이) 세포 표면 수용체를 클러스터링하는데 사용될 수 있다. 이후 농축된 T 세포는 재구성된 T 세포 성장 인자 (예를 들어, MIP-1β, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-10, IL-12, IL-15, IL-21, IFN-γ로부터 선택된 인자를 포함함)의 사용을 포함하여, 생체외에서 빠르게 팽창될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 세포는 MIP-1β, IL-1β 및 IL-6, 및 선택적으로 IL-10으로부터 선택된 1개, 2개 또는 3개의 사이토카인의 존재하에 배양으로 팽창된다. 일부 구현예에서, 상기 성장 인자는 IL-2, IL-4, IL-6, INF-γ 및 IL-1β를 포함하거나 또는 이들로 본질적으로 구성된다.
다른 측면에서, 본 발명은 (세포 요법의 투여 전) 림프-결실 요법, 세포-감퇴 요법, 면역조절 요법의 존재 또는 부재 하에 암 환자 및/또는 동종이계 줄기세포 이식을 받은 환자를 치료하는 방법을 포함하는, 입양 세포 요법을 위한 방법을 제공한다. 세포 요법은 치료 후 사이토카인 지지(cytokine support)가 있거나 없이 추가로 제공될 수 있다. 일부 구현예에서, 환자는 혈액암을 가지며, 이는 일부 구현예에서 동종이계 줄기세포 이식 후 재발되었다. 일부 구현예에서, 환자는 급성 골수성 백혈병 (AML) 또는 골수이형성 증후군을 갖는다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 세포 조성물은 WT1, PRAME, 서바이빈 및 사이클린 A 펩티드 항원에 특이적인 T 세포를 포함한다. 그러나, 다른 구현예에서, 암은 암종, 육종 및 림프종을 포함하는 다양한 유형의 고형 종양을 포함한다. 예시적인 표적 펩티드 항원이 본원에 기재되어 있다.
일부 구현예에서, 환자는 감염성 질환에 걸렸거나 감염성 질환에 걸릴 위험이 있다. 예를 들어, HSCT를 받은 환자는 면역손상 상태를 고려할 때 특히 감염성 질환에 걸릴 위험이 있다. 치료되거나 예방될 수 있는 감염성 질환에는 박테리아, 바이러스, 프리온, 진균, 기생충, 연충류 등에 의해 유발된 것이 포함된다. 그러한 질환에는 AIDS, B/C형 간염, CMV 감염, 엡스타인-바 바이러스 (EBV) 감염, 인플루엔자, 헤르페스 바이러스 감염 (대상포진 포함) 및 아데노바이러스 감염이 포함된다.
다른 측면 및 양태는 하기 상세한 설명으로부터 명백해질 것이다.
도면의 설명
도 1은 공여자 림프구로부터 생체외에서 농축되고 팽창된 MART-1 특이적 T 세포가 IL-2 (증식 및 기억), IFN-γ (다른 T 세포의 활성화, 기억, MHC의 상향조절), TNF-α (전-염증성) 및 CD107A (그랜자임 방출, 세포독성 활성)에 대한 세포내 염색을 포함하는 다작용성 표현형을 나타냄을 보여준다. T 세포의 대부분은 적어도 3가지 기능성 표현형을 나타낸다.
도 2는 상자성 aAPC를 사용하여 공여자 림프구로부터 생체외에서 농축되고 팽창된 MART-1 및 AML 특이적 T 세포가 주로 중심 기억 (Tcm) 또는 이펙터 기억 (Tem) 표현형임을 보여준다.
도 3은 항원-특이적 T 세포가 배치(batch)로 농축되고 팽창될 수 있음을 보여준다. 상기 도면은 또한 Prame100 RHAMM, WT1, 및 서바이빈 항원 펩티드에 특이적인 T 세포의 배치 농축 및 팽창을 보여준다.
도 4는 개별 자극 및 팽창을 겪은 조성물이 일관된 수준의 AML 항원-특이적 T 세포를 가짐을 보여준다. 개별 자극 및 팽창 과정은 ~15% 항원-특이적 T 세포를 일관되게 생성한다.
도 5는 동시 자극/팽창 과정이 개별 자극/팽창에 필적하는 AML-특이적 T 세포 빈도를 생성한다는 것을 보여준다. 배치 자극/팽창에 의해 제조된, 나타낸 조성물은 ~47% 항원-특이적 T 세포를 갖는다.
도 6은 생성된 T 세포가 AML 종양 세포 (THP-1 세포주)의 항원-특이적 사멸을 나타낸다는 것을 보여준다. AML 특이적 T 세포는 WT-1, PRAME 및 서바이빈으로부터의 5개의 에피토프를 겨냥한다.
도 7은 생체외 팽창에 사용된 사이토카인 칵테일이 생성된 세포의 수 및 표현형에 영향을 준다는 것을 보여준다. 재구성된 T 세포 성장 인자 (TF)는 IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-21, IFN-γ 및 MIP1β를 포함한다.
도 8은 MART-1-특이적 농축 및 팽창 후 7일째에 바이러스-특이적 방관자 T 세포의 존재를 보여준다.
도 9는 MART-1-특이적 농축 및 팽창 후 14일째에 바이러스-특이적 방관자 T 세포의 존재를 보여준다.
도 10은 AML-특이적 농축 및 팽창 후 14일째에 바이러스-특이적 방관자 T 세포의 존재를 보여준다. 이들 세포는 주로 기억 표현형이었다.
도 11은 MART-1 특이적 농축 및 팽창 과정 동안 CMV-특이적 방관자 T 세포의 검출을 보여준다. 바이러스-특이적 방관자 세포의 백분율은 14일까지 일정하게 유지되는 반면, MART-1 특이적 T 세포의 수 및 백분율은 급격히 증가한다.
도 12는 이들 방관자 세포의 팽창을 향상시키는, 재조합 T 세포 성장 인자 칵테일 (IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-21, IFN-γ 및 MIP1-β)을 사용하여 MART-1-특이적 농축 및 팽창 후 14일째에 바이러스 특이적 방관자 세포의 검출을 보여준다.
도 13은 재조합 T 세포 성장 인자 칵테일 (IL-2, IL-4, IL-6, IFN-γ 및 IL1-β)을 사용하여 농축 및 팽창 과정에 의해 생성된 Mart-1 특이적 T 세포의 특이성 및 표현형을 보여주는 2개의 패널 (도 13a 및 도 13b)을 갖는다. Mart-1 특이적 T 세포 (도 13a, 우측 패널)는 배양물의 약 35%를 구성하였고, 중심 기억 (~89%) 및 이펙터 기억 (~9%) 표현형을 보여주었다. 총 배양물은 ~66% 중심 기억 및 ~32% 이펙터 기억의 표현형을 보여주었다.
발명의 상세한 설명
다양한 측면 및 구현예에서, 본 발명은 입양 면역요법에 적합한 단리된 세포 조성물, 뿐만 아니라 세포 조성물의 제조 방법 및 세포 조성물로의 치료 방법을 제공한다. 상기 조성물은, 약제학적으로 허용되는 담체에서, 표적 펩티드 항원(들)에 특이적인 적어도 약 106개의 CD8+ T 세포를 포함한다. 다양한 구현예에서, 상기 조성물 중 T 세포의 적어도 약 20%는 중심 또는 이펙터 기억 표현형을 나타내어 견고하고 오래 지속되는 입양 요법을 제공한다. 상기 세포 조성물은 키메라 항원 수용체 또는 재조합 TCR을 발현시키는 T 세포를 포함하지 않으므로, 다양한 구현예에서, 종종 보다 소진된 T 세포 표현형 및 덜 지속되는 반응을 초래하는 이들 기술에 대한 대안을 제공한다.
본원에 사용된 용어 "표적 펩티드 항원(들)" 또는 "표적 항원"은, 예를 들어, 인공 항원 제시 세포 (aAPC) 또는 전문적 항원 제시 세포 (pAPC) 플랫폼 (예를 들어, 수지상 세포)와 관련하여 원하는 CD8+ 세포 집단을 농축 및/또는 확장시키기 위해 생체외에서 사용되는 펩티드 항원을 지칭한다. aAPC 또는 pAPC는 공여자 또는 환자 림프구로부터 CTL을 활성화 및 팽창시키는 데 사용된다. 일부 구현예에서, 표적 펩티드 항원은 특이적 CD8+ T 세포의 생체외 농축 및 팽창을 위해 aAPC 상에 로딩된 펩티드 에피토프이다. 따라서, "표적 펩티드 항원에 특이적인"이라는 용어는 T 세포가 표적 항원에 대해 경험된 항원임을 의미한다.
다양한 구현예에서, 상기 세포 조성물은 표적 세포의 강력한 파괴를 제공하기 위해 표적 펩티드 항원에 특이적인 적어도 약 107개의 CD8+ T 세포, 또는 표적 펩티드 항원에 특이적인 적어도 약 108개, 적어도 약 109개, 또는 적어도 약 1010개의 CD8+ T 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 세포 조성물은 표적 항원에 특이적인 1 x 107 내지 1 x 109개의 CD8+ T 세포, 또는 일부 구현예에서 표적 항원에 특이적인 5 x 107 내지 5 x 108개의 CD8+ T 세포를 함유한다. 예를 들어, 상기 조성물은 50 내지 200 ml의 용적에서 ml당 약 5 x 105 내지 약 5 x 106개의 세포를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 상기 조성물의 용적은 100 ml 이하 (예를 들어, 50 내지 100 ml)이다. 다양한 구현예에서 상기 조성물의 세포는 생존력이 적어도 70%이며, 동결방지 배지 (예를 들어, 10% DMSO)일 수 있는 멸균 배지에 제공된다.
주로 CD8+ 세포독성 림프구 (CTL)인 상기 조성물의 세포는 또한 실질적으로 중심 또는 이펙터 기억 표현형이다. CTL은 일반적으로 다음의 표현형 집단을 포함한다: 나이브, T 기억 줄기세포 (Tscm), 중심 기억, 이펙터 기억 및 말단 분화된 기억 세포. 본 발명의 구현예에 따르면, 표적 항원에 특이적인 T 세포는 실질적으로 중심 기억 및 이펙터 기억 표현형으로 구성된다. 일부 구현예에서, 표적 항원에 특이적인 T 세포는 T 기억 줄기세포 (Tscm)를 추가로 포함한다. 이에 의해 세포 조성물은 적어도 약 1개월, 또는 적어도 약 3개월, 또는 적어도 약 6개월, 또는 적어도 약 12개월, 또는 적어도 약 18개월, 또는 일부 구현예에서 적어도 약 2년 동안 항원-특이적 T 세포의 생체내 지속성을 포함하여, 오래 지속되는 반응을 제공한다.
나이브 T 세포는 골수에서 분화되었으며, 흉선에서 중심 선택의 양성 및 음성 과정을 성공적으로 겪었다. 나이브 T 세포는 성숙한 것으로 간주되며, 활성화 또는 기억 T 세포와는 달리, 이의 동족 항원과 마주치지 않았다. 나이브 T 세포는 L-셀렉틴 (CD62L)의 표면 발현 및 활성화 마커의 부재를 특징으로 할 수 있다. 나이브 상태에서, T 세포는 일반적으로 휴지기이고, 비-분화 상태이다. 본 개시내용에 따르면, 나이브 T 세포는 CD62L+ 및 CD45RA+로 정의된다.
기억 T 세포는 T 기억 줄기세포 (Tscm), 중심 기억 및 이펙터 기억 T 세포를 포함한다. 기억 T 세포는 이전에 이의 동족 항원에 반응했다. 동족 항원과의 두 번째 접촉에서, 기억 T 세포는 더 빠르고 강력한 면역 반응을 시작하도록 재현될 수 있다. 기억 T 세포는 적어도 이펙터 및 중심 기억 아형을 포함한다. 기억 T 세포 아형은 오래 지속되며, 이의 동족 항원에 재노출될 때 다수의 이펙터 T 세포로 빠르게 팽창될 수 있다.
T 기억 줄기세포 (Tscm)는 본원에서 CD45RA+로서 정의되고, CXCR3+, CD95+, CD11a+ 및 CD58+로부터 선택된 적어도 2개의 마커 (또는 일부 구현예에서 적어도 3개 또는 4개의 모든 마커)를 갖는 것으로 정의된다. 이러한 기억 부분모집단은 자가-재생을 위한 줄기세포-유사 능력뿐만 아니라 기억 및 이펙터 T 세포 부분모집단을 재구성하는 다분화능을 갖는다. Tscm 세포는 소량의 순환 T 림프구 (예를 들어, 5% 초과)를 나타낼 수 있고, 항원 재노출에 반응하여 빠르게 증식하고 염증성 사이토카인을 방출하는 능력을 가질 수 있다. 따라서, Tscm 세포는 기억 T 세포 부분모집단의 서브셋이다. Tscm 세포 표현형은, 본원에 개시된 바와 같이, 상자성 인공 항원 제시 세포 (aAPC) 및 재조합 T 세포 성장 인자 칵테일을 이용한 농축 및 팽창 과정을 사용하여 생성 및/또는 제어될 수 있다.
본 개시내용에 따르면, 중심 기억 T 세포 (Tcm 세포)는 CD62L+ 및 CD45RA-로 정의된다. 이러한 기억 부분모집단은 림프절과 말초 순환에서 흔히 발견된다. 이펙터 기억 T 세포 (Tem 세포)는 CD62L- 및 CD45RA-로 정의된다. 이들 기억 T 세포는 림프절-호밍(homing) 수용체가 결여되어 있으며, 따라서 말초 순환 및 조직에서 발견된다. TEMRA는 CD45RA를 재발현시키는 말단 분화된 이펙터 기억 세포를 나타낸다. 이들 세포는 분열하는 능력이 없으며, CD62L- 및 CD45RA+이다.
Tcm 세포는 자가-재생 능력을 나타내고, 본 발명의 구현예에 따르면, 오래 지속되는 효과를 얻는 데 중요하다. Tem 세포는 또한, 약간의 자가-재생 능력이 있으며, 세포독성 기능에 필수적인 유전자를 강하게 발현시킨다. Temra 세포는 또한, 강력한 세포독성 기능을 제공하지만, 자가-재생 능력을 나타내지는 않는다.
다양한 구현예에서 상기 조성물은 Tscm, Tcm 및 Tem 세포로 실질적으로 구성된 CTL을 포함하여, 효과의 지속시간 대 악성 또는 다른 표적 세포의 강력한 파괴 사이에 균형을 유지한다.
다양한 구현예에서, 상기 조성물 중 T 세포는 적어도 약 30%의 중심 및 이펙터 기억 세포, 또는 적어도 약 40%의 중심 또는 이펙터 기억 세포, 또는 적어도 약 50%의 중심 또는 이펙터 기억 T 세포이거나, 일부 구현예에서 적어도 약 70%의 중심 또는 이펙터 기억 세포, 또는 적어도 약 80%의 중심 또는 이펙터 기억 T 세포이다. 일부 구현예에서, 상기 기억 세포는 약 10:90 내지 약 90:10 중심 대 이펙터 기억 세포이다. 일부 구현예에서, 상기 조성물 중 T 세포는 약 25:75 내지 약 75:25 중심 대 이펙터 기억 세포이다. 일부 구현예에서, 상기 기억 T 세포는 약 40:60 내지 약 60:40 중심 대 이펙터 기억 세포이다. 상기 세포 조성물은 일부 구현예에서 약 20% 미만의 말단 분화된 기억 T 세포 (예를 들어, Temra 세포), 또는 약 10% 미만 또는 약 5% 미만 또는 약 4% 미만의 말단 분화된 기억 T 세포를 포함한다. 다양한 구현예에서, 상기 CD8+ T 세포는 약 20% 이하의 나이브 세포, 또는 일부 구현예에서, 약 15% 이하의 나이브 세포, 또는 약 10% 이하의 나이브 세포, 또는 약 5% 이하의 나이브 세포, 또는 약 4% 이하의 나이브 세포, 또는 약 3% 이하의 나이브 세포, 또는 약 2% 이하의 나이브 세포, 또는 약 1.5% 이하 또는 약 1% 이하의 나이브 세포를 함유한다. 다양한 구현예에서, 상기 CD8+ T 세포는 약 5% 내지 약 25%의 Tscm 세포, 또는 일부 구현예에서, 약 5% 내지 약 20%의 Tscm 세포, 또는 약 5% 내지 약 15%의 Tscm 세포를 함유한다.
다양한 구현예에서, 표적 항원에 특이적인 T 세포는 적어도 약 30%의 중심 및 이펙터 기억 세포, 또는 적어도 약 40%의 중심 또는 이펙터 기억 세포, 또는 적어도 약 50%의 중심 또는 이펙터 기억 T 세포이거나, 일부 구현예에서 적어도 약 70%의 중심 또는 이펙터 기억 세포, 또는 적어도 약 80%의 중심 또는 이펙터 기억 T 세포이다. 일부 구현예에서, 이들 기억 세포는 약 10:90 내지 약 90:10 중심 대 이펙터 기억 세포이다. 일부 구현예에서, 이들 T 세포는 약 25:75 내지 약 75:25 중심 대 이펙터 기억 세포이다. 일부 구현예에서, 상기 기억 T 세포는 약 40:60 내지 약 60:40 중심 대 이펙터 기억 T 세포이다. 상기 표적 항원(들)에 특이적인 T 세포는 약 20% 미만의 말단 분화된 기억 T 세포 (예를 들어, TEMRA 세포), 또는 약 10% 미만 또는 약 5% 미만 또는 약 4% 미만의 말단 분화된 기억 T 세포이다. 다양한 구현예에서, 표적 항원에 특이적인 T 세포는 약 20% 이하의 나이브 세포, 또는 일부 구현예에서, 약 15% 이하의 나이브 세포, 또는 약 10% 이하의 나이브 세포, 또는 약 5% 이하의 나이브 세포, 또는 약 2% 이하, 또는 1.5% 이하 또는 1% 이하의 나이브 세포를 함유한다. 다양한 구현예에서, 상기 표적 항원에 특이적인 T 세포는 약 5% 내지 약 25%의 Tscm 세포, 또는 일부 구현예에서, 약 5% 내지 약 20%의 Tscm 세포, 또는 약 5% 내지 약 15%의 Tscm 세포를 함유한다. 이 표현형은 상자성 인공 항원 제시 세포 (aAPC)를 이용한 농축 및 팽창 과정에 의해 생성될 수 있다.
다양한 구현예에서, 상기 세포 조성물은 적어도 90%의 T 세포, 또는 적어도 95%의 T 세포, 또는 적어도 98%, 또는 적어도 99%의 T 세포이다. 본 개시의 목적상, T 세포는 CD3+ 세포를 특징으로 한다. 상기 T 세포는 일반적으로 CD8+이다. 예를 들어, 단리된 세포 조성물은 CD4+ T 세포가 약 10% 미만 또는 약 5% 미만, 또는 일부 구현예에서, CD4+ T 세포가 약 2% 미만, 약 1.5% 미만 또는 약 1% 미만임을 특징으로 할 수 있다. 생체외에서 CD8+ T 세포를 팽창시킬 때, CD4+ 세포는 상기 CD8+ 세포를 과성장시키고 성장 신호에 대해 경쟁하는 경향이 있으며, 견고하고 오래 지속되는 반응이 필요하지 않다.
다작용성 CD4+ 및 CD8+ T 세포의 존재는 펩티드 신생항원으로의 암 백신 요법에 대한 반응과 관련이 있는 것으로 설명되었다. Ott PA, et al., An immunogenic personal neoantigen vaccine for patients with melanoma, Nature 547(7662):217-221 (2017). CD4+ 및 CD8+ T 세포는 추가로 종양 세포 파괴를 매개하는 데 중요한 것으로 기재되어 있다. Tran E, Cancer immunotherapy based on mutation-specific CD4+ T cells in a patient with epithelial cancer. Science 344, 641-645 (2014); Sahin U, et al., Personalized RNA mutanome vaccines mobilize poly -specific therapeutic immunity against cancer, Nature 547(7662):222-226 (2017)를 참고한다. 본 개시와 관련하여, 입양 세포 조성물은 견고하고 오래 지속되는 반응을 위해, 특히 항원-특이적 CD8+ T 세포가 충분한 수로 제공되고 실질적으로 중심 및 이펙터 기억 표현형인 경우에 상당한 수의 항원-특이적 CD8+ T 세포를 제공하기만 하면 되는 것으로 여겨진다. 다양한 구현예에서, 상기 항원-특이적 CD8+ T 세포는 T 기억 줄기세포를 추가로 포함한다.
다양한 구현예에서, 상기 세포 조성물은 실질적으로 CD28+이다.
다양한 구현예에서, 상기 항원-특이적 T 세포는 활성화될 때 다작용성 표현형을 나타낸다. 예를 들어, 활성화될 때 상기 T 세포는 다음 중 2가지 이상에 대해 양성이다: 증식 및 기억에 대한 마커인, IL-2에 대한 세포내 염색; 다른 T 세포를 활성화시키고, 기억 및 MHC의 상향조절을 유도하는, IFN-γ의 생성); 염증 유발 마커인, TNF-α의 생성; 및 그랜자임 방출 및 세포독성 활성에 대한 마커인, CD107A. 다양한 구현예에서, 항원-특이적 T 세포의 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70% 또는 적어도 80%는 이들 마커 중 적어도 3가지를 나타낸다. 다양한 구현예에서, 상기 항원-특이적 T 세포의 적어도 30%, 적어도 40%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70% 또는 적어도 80%는 이들 마커의 4가지 모두를 나타낸다. 일부 구현예에서, 다작용성은 MHC와의 복합체로 펩티드 항원을 제시하는 표적 세포를 용해시키는 CD8+ 세포독성 T 세포의 능력을 평가하는, 표적 사멸 분석을 사용하여 평가 또는 정량화된다.
다양한 구현예에 따른 세포 조성물은 표적 항원(들) (예를 들어, 종양 관련 항원 또는 바이러스-관련 항원)에 특이적인 CD8+ 세포의 농축에 의해 제조될 수 있다. 이 세포 집단은, 공급원 림프구에서 주로 나이브 세포일지라도, 배양으로 빠르게 팽창되어 본원에 기재된 세포 조성물에 도달할 수 있다. CD4+ 세포는 CD4+ 세포 고갈 마이크로비드를 사용하여 림프구로부터 고갈될 수 있다 (항원-특이적 농축 전 또는 후). CD8+ 세포의 항원 특이적 농축은 세포 집단을 양성적으로 선택하기 위해 상자성 비드를 사용하여 발생할 수 있고, 이는 T 세포 표면 수용체의 강력한 자기 클러스터링으로 인해 나이브 세포를 활성화시키는 추가 이점을 가질 수 있다. 예를 들어, 상자성 비드 또는 나노입자는, 일부 구현예에서, CD28에 대한 작용제 (예를 들어, CD28의 항체 작용제)와 같이, 보조자극 신호와 함께, 펩티드 항원을 제시하는 단량체 또는 다량체 (예를 들어, 이량체) HLA 리간드를 함유할 수 있다. 이들 구현예에 따른 예시적인 방법은 WO 2016/044530 및 PCT/US2017/22663에 기재되어 있으며, 이들은 그 전문이 본원에 참조로 포함되어 있다.
일부 구현예에서, CD28+ 세포가 또한 농축될 수 있고, 이는 항원-특이적 농축과 동시에 일어날 수 있다. CD28은 T 세포 상에서 발현되며, T 세포 활성화 및 생존에 필요한 보조자극 신호이다. CD28은 나이브 T 세포 상에서 구성적으로 발현된 유일한 B7 수용체이다. CD28 보조자극 없이 MHC-항원 복합체와 나이브 T 세포의 TCR의 회합은 무력성(anergic) T 세포를 유발할 수 있다. 일부 구현예에서, CD28+ 세포는 농축되지 않지만, CD28 작용제는 농축 과정 동안 가용성 형태로 첨가되거나 비-상자성 비드에 접합된 것으로 첨가된다. 일부 구현예에서, 팽창 단계 동안 세포를 활성화시키기 위해, CD28 (접합된 형태 또는 접합되지 않은 형태)을 항원-특이적 농축 후 세포에 첨가한다.
다양한 구현예에서, 표적 항원에 특이적인 T 세포 (예를 들어, aAPC 또는 pAPC로 표시되는 펩티드로 인해)는 1 내지 약 100가지의 표적 항원, 또는 1 내지 약 75가지의 표적 항원, 또는 1 내지 약 50가지의 표적 항원, 또는 1 내지 약 25가지의 표적 항원, 또는 1 내지 약 20가지의 표적 항원, 또는 1 내지 약 15가지의 표적 항원, 또는 1 내지 10가지의 표적 항원, 또는 1 내지 5가지의 표적 항원에 특이적이다. 다양한 구현예에서, 적어도 3가지, 또는 적어도 4가지, 또는 적어도 5가지의 표적 항원이 존재한다. 별개의 표적 항원은 일부 구현예에서 중첩 펩티드 에피토프를 포함할 수 있다. 이들 펩티드 항원에 특이적인 T 세포는 배치로 농축되고 팽창될 수 있으며, 이는 세포 조성물의 신속한 병행 생산을 가능하게 한다. 일부 구현예에서, 상기 조성물은 5 내지 15가지 또는 5 내지 10가지의 펩티드 항원에 특이적인 T 세포를 함유한다. 상기 조성물에서 표적 펩티드 항원에 대한 T 세포 특이성은 당 업계에 잘 알려진 바와 같이 MHC 다량체 염색 (예를 들어, 이량체 또는 사량체 염색)에 의해 정의된다.
예를 들어, 각각 상이한 별개의 표적 항원을 제시하는 aAPC인, 나노-aAPC의 칵테일을 사용하여 다수의 항원에 대해 T 세포를 동시에 농축시킬 수 있다. 예를 들어, 2 내지 10가지의 항원에 특이적인 T 세포는 림프구 공급원으로부터 동시에 농축될 수 있다. 이 구현예에서, 각각 상이한 MHC-펩티드를 갖는 다수의 상이한 나노-aAPC 배치가 조합되어 각각의 관심 항원에 대해 T 세포를 동시에 농축시키는 데 사용될 것이다. 생성된 T 세포 풀은 이들 항원 각각에 대해 활성화되고 배양으로 함께 팽창될 것이다. 이들 항원은 단일 치료적 개입과 관련될 수 있으며; 예를 들어, 다중 항원이 단일 종양 또는 악성 세포에 제시된다.
상기 표적 펩티드 항원은 일반적으로 HLA-A, B 또는 C 분자 복합체, 및 일부 구현예에서 HLA-A2 분자 복합체에 의한 제시에 적합하다.
다양한 구현예에서, 상기 표적 펩티드 항원은 종양-유래 또는 종양-특이적 항원을 포함하는 종양 또는 암 관련 항원이다. 종양 관련 항원에 특이적인 T 세포는 종종 건강한 개인의 말초 혈액에서 매우 드물고, 많은 경우에 검출할 수 없다. 또한, 특히 공여자 T 림프구를 사용할 때, 세포는 종종 나이브 표현형이다. Quintarelli et al., Cytotoxic T lymphocytes directed to the preferentially expressed antigens of melanoma (PRAME) target chronic myeloid leukemia. Blood 2008; 112: 1876-1885를 참고한다. 이는 종종 바이러스-특이적 및 종양 항원 특이적 T 세포 사이에서 관찰되는 구별이다.
"종양-관련 항원" 또는 "암 특이적 항원"은 이들이 유래된 종양 또는 악성 세포에 의해 배타적으로 발현되는 독특한 종양 또는 암 항원, 다수의 종양에서 발현되지만 정상 성인 조직에서는 발현되지 않는 공유 종양 항원 (종양태아성 항원), 및 종양이 발생한 정상 조직에 의해 또한 발현된 조직-특이적 항원을 포함한다. 종양 관련 항원은, 예를 들어, 태아 항원, 번역 후 변형이 비정상적인 항원, 분화 항원, 돌연변이된 종양유전자 또는 종양 억제제의 산물, 융합 단백질, 또는 종양바이러스 단백질일 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 표적 펩티드 항원은 백혈병, 림프종 또는 골수종과 같은 혈액암과 관련되거나 이로부터 유래된 하나 이상을 포함한다. 예를 들어, 혈액학적 악성 종양은 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 소아기 급성 백혈병, 비-호지킨 림프종, 급성 림프성 백혈병, 만성 림프성 백혈병, 골수이형성 증후군, 악성 피부 T-세포, 균상식육종(mycosis fungoids), 비-MF 피부 T-세포 림프종, 림프종양 구진증, 및 T-세포 풍부 피부 림프 과다형성일 수 있다. 다른 구현예에서, 상기 표적 펩티드 항원은 흑색종, 결장암, 십이지장암, 전립선암, 유방암, 난소암, 관암(ductal cancer), 간암, 췌장암, 신장암, 자궁내막암, 고환암, 위암, 형성이상 구강 점막, 폴립증, 두경부암, 침습성 구강암, 비-소세포 폐암종, 소세포 폐암, 악성중피종, 이행 및 편평 세포 비뇨기 암종, 뇌암, 신경아세포종, 및 신경교종을 포함하는 고형 종양과 관련되거나 이로부터 유래된 하나 이상을 포함한다.
다양한 종양-관련 항원이 당 업계에 공지되어 있다. 종양태아성 및 태아 항원은 암성태아성 항원 및 알파-태아단백 (일반적으로 배아 발생에서만 고도로 발현되지만 각각 간과 결장의 종양에 의해 흔히 고도로 발현됨), MAGE-1 및 MAGE-3 (흑색종, 유방암 및 신경교종에서 발현됨), 태반 알칼리 포스파타제 시알릴-루이스 X (선암종에서 발현됨), CA-125 및 CA-19 (위장관, 간 및 부인과 종양에서 발현됨), TAG-72 (결장직장 종양에서 발현됨), 상피 당단백질 2 (많은 암종에서 발현됨), 췌장 종양태아성 항원, 5T4 (위암종에서 발현됨), 알파태아단백 수용체 (여러 종양 유형, 특히 유선 종양에서 발현됨), 및 M2A (생식 세포 신생물에서 발현됨)를 포함한다.
종양-관련 분화 항원은 티로시나제 (흑색종에서 발현됨) 및 특정 표면 면역글로불린 (림프종에서 발현됨)을 포함한다.
돌연변이된 종양유전자 또는 종양-억제 유전자 산물은 둘 다 많은 종양 유형에서 발현되는 Ras 및 p53, Her-2/neu (유방암 및 부인과 암에서 발현됨), EGF-R, 에스트로겐 수용체, 프로게스테론 수용체, 망막모세포종 유전자 산물, myc (폐암과 관련됨), ras, p53, 유방 종양과 관련된 비돌연변이체, MAGE-1, 및 MAGE-3 (흑색종, 폐 및 기타 암과 관련됨)을 포함한다. 융합 단백질은 크로믹 골수성 백혈병(chromic myeloid leukemia)에서 발현되는 BCR-ABL을 포함한다. 종양바이러스 단백질은 자궁경부 암종에서 발견되는, HPV 유형 16, E6 및 E7을 포함한다.
조직-특이적 항원은 멜라노트랜스페린(melanotransferrin) 및 MUC1 (췌장암 및 유방암에서 발현됨); CD10 (이전에는 공통 급성 림프아구성 백혈병 항원, 또는 CALLA로 공지됨) 또는 표면 면역글로불린 (B 세포 백혈병 및 림프종에서 발현됨); IL-2 수용체, T 세포 수용체, CD45R, CD4+/CD8+의 α 사슬 (T 세포 백혈병 및 림프종에서 발현됨); 전립선 특이적 항원 및 전립선 산-포스파타제 (전립선 암종에서 발현됨); GP 100, MelanA/Mart-1, 티로시나제, gp75/brown, BAGE, 및 S-100 (흑색종에서 발현됨); 시토케라틴 (다양한 암종에서 발현됨); 및 CD19, CD20, 및 CD37 (림프종에서 발현됨)을 포함한다.
종양-관련 항원은 또한, 변형된 당지질 및 당단백질 항원, 예컨대 뉴라민산-함유 글리코스핑고리피드 (예를 들어, 흑색종 및 일부 뇌종양에서 발현되는 GM2 및 GD2); 암종에서 비정상적으로 발현될 수 있는, 혈액군 항원, 특히 T 및 시알릴화 Tn 항원; 및 CA-125 및 CA-19-9 (난소 암종에서 발현됨) 또는 언더글리코실화(underglycosylated) MUC-1 (유방 및 췌장 암종에서 발현됨)과 같은 뮤신을 포함한다.
예를 들어, 일부 구현예에서, 1가지 이상의 표적 항원은 NY-ESO-1, MAGE-A10 및 MUC-1 항원 중 1가지 이상과 같이, 방광암과 관련된다. 일부 구현예에서, 1가지 이상의 표적 항원은 뇌암과 관련되며, NY-ESO-1, 서바이빈 및 CMV 항원 중 1가지 이상을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 1가지 이상의 표적 항원은 유방암과 관련되며, MUC-1, 서리빈(Surivin), WT-1, HER-2 및 CEA 항원 중 1가지 이상을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 1가지 이상의 표적 항원은 자궁경부암과 관련되며, HPV 항원을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 1가지 이상의 표적 항원은 결장직장암과 관련되며, NY-ESO-1, 서바이빈, WT-1, MUC-1 및 CEA 항원 중 1가지 이상을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 1가지 이상의 표적 항원은 식도암과 관련되며, NY-ESO-1 항원을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 1가지 이상의 표적 항원은 두경부암과 관련될 수 있으며, HPV 항원을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 표적 항원은 신장암 또는 간암과 관련되며, NY-ESO-1 항원을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 표적 항원은 폐암과 관련되며, NY-ESO-1, 서바이빈, WT-1, MAGE-A10 및 MUC-1 항원 중 1가지 이상을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 1가지 이상의 표적 항원은 흑색종과 관련되며, NY-ESO-1, 서바이빈, MAGE-A10, MART-1 및 GP-100 중 1가지 이상을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 1가지 이상의 펩티드 항원은 난소암과 관련되며, NY-ESO-1, WT-1 및 메소텔린(Mesothelin) 항원 중 1가지 이상을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 1가지 이상의 표적 항원은 전립선암과 관련되며, 서바이빈, hTERT, PSA, PAP 및 PSMA 항원 중 1가지 이상을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 표적 항원은 육종과 관련되며, NY-ESO-1 항원을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 1가지 이상의 표적 항원은 림프종과 관련되며, EBV 항원을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 1가지 이상의 표적 항원은 다발성 골수종과 관련되며, NY-ESO-1, WT-1 및 SOX2 항원 중 1가지 이상을 포함할 수 있다.
일부 구현예에서, 1가지 이상의 표적 항원은 급성 골수성 백혈병 또는 골수이형성 증후군과 관련되며, 서바이빈, WT-1, PRAME, RHAMM, PR3 및 사이클린 A1 항원 중 1가지 이상 (1, 2, 3, 4 또는 5가지 포함)을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 표적 항원은 하기 표 1로부터 적어도 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10가지의 또는 모든 표적 항원을 포함한다.
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일부 구현예에서, 1가지 이상의 표적 펩티드 항원은 신생항원이다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 환자에 특이적인 신생항원이 식별되고, aAPC를 로딩하기 위해 합성된다. 일부 구현예에서, 3 내지 10가지의 신생항원은 환자의 악성 종양의 유전자 분석 (예를 들어, 악성 세포의 핵산 시퀀싱에 의해)에 이어서 예측적 생물 정보학(predictive bioinformatics)을 통해 식별된다. 일부 구현예에서, 상기 항원은 천연의 비-돌연변이 암 항원이며, 그 중 다수가 알려져 있다.
다양한 구현예에서, 상기 표적 펩티드 항원 중 적어도 하나는 저빈도(low frequency) 전구체 T 세포에 의해 인식된다. 이들 구현예에 따르면, 본 발명은 입양 요법을 위해 이들 세포의 신속한 활성화 및 팽창을 가능하게 한다.
일부 구현예에서, 상기 표적 펩티드 항원은 병원체, 예컨대 바이러스, 박테리아, 진균 또는 기생 병원체와 관련되거나 이들로부터 유래된 적어도 하나를 포함한다. 예를 들어, 적어도 1가지의 펩티드 항원은 HIV, 간염 (예를 들어, A형, B형, C형 또는 D형) CMV, 엡스타인-바 바이러스 (EBV), 인플루엔자, 헤르페스 바이러스 (예를 들어, HSV 1 또는 2, 또는 수두대상포진), 및 아데노바이러스와 관련될 수 있다. 예를 들어, CMV는 장기 이식 환자에서 발견되는 가장 흔한 바이러스 병원체이며, 골수 또는 말초 혈액 줄기세포 이식을 받는 환자에서 이환과 사망의 주요 원인이다. 이것은 이들 환자의 면역손상 상태에 기인하며, 이는 혈청 반응 양성 환자에서 잠복 바이러스의 재활성화 또는 혈청 반응 음성 개인에서 기회감염을 가능하게 한다. 이들 구현예에서, 상기 환자는 병원체 항원에 특이적인 T 세포를 포함하는 입양 면역요법을 받을 수 있다. 상기 방법은 이식 절차를 시작하기 전에 상기 환자 또는 적절한 공여자로부터 유래된 바이러스-특이적 CTL의 생성을 수반할 수 있다.
일부 구현예에서, 적어도 1가지의 표적 항원은 원생동물, 박테리아, 진균 (단세포 및 다세포 둘 모두), 바이러스, 프리온, 세포내 기생충, 연충류, 및 기타 감염원과 관련된 항원을 포함하는 병원체-관련 항원이다.
박테리아 항원은 그램-양성 구균(gram-positive cocci), 그램 양성 바실러스, 그램-음성 박테리아, 혐기성 박테리아, 예컨대 악티노마이세타세아에(Actinomycetaceae), 바실라세아에(Bacillaceae), 바르토넬라세아에(Bartonellaceae), 보르데텔라에(Bordetellae), 캅토파가세아에(Captophagaceae), 코리네박테리아세아에(Corynebacteriaceae), 엔테로박테리아세아에(Enterobacteriaceae), 레지오넬라세아에(Legionellaceae), 미크로코카세아에(Micrococcaceae), 마이코박테리아세아에(Mycobacteriaceae), 노카르디아세아에(Nocardiaceae), 파스퇴렐라세아에(Pasteurellaceae), 슈도모나다세아에(Pseudomonadaceae), 스피로헤타세아에(Spirochaetaceae), 비브리오나세아에(Vibrionaceae) 과의 유기체 및 아시네토박터(Acinetobacter), 브루셀라(Brucella), 캄필로박터(Campylobacter), 에리시펠로트릭스(Erysipelothrix), 유잉겔라(Ewingella), 프란시셀라(Francisella), 가드네렐라(Gardnerella), 헬리코박터(Helicobacter), 레비네아(Levinea), 리스테리아(Listeria), 스트렙토바실러스(Streptobacillus) 및 트로페리마(Tropheryma) 속의 유기체의 항원을 포함한다.
원생동물 감염원의 항원은 말라리아 원충(malarial plasmodia), 리슈마니아(Leishmania) 종, 트리파노소마(Trypanosoma) 종 및 주혈흡충(Schistosoma) 종의 항원을 포함한다.
진균 항원은 아스퍼길러스(Aspergillus), 블라스토마이세스(Blastomyces), 칸디다(Candida), 코시디오이데스(Coccidioides), 크립토코커스(Cryptococcus), 히스토플라스마(Histoplasma), 파라코시시오이데스(Paracoccicioides), 스포로트릭스(Sporothrix), 털곰팡이목(Mucorales)의 유기체, 초로마이코시스(choromycosis) 및 진균종을 유도하는 유기체 및 트리코피톤(Trichophyton), 미크로스포룸(Microsporum), 에피더모피톤(Epidermophyton) 및 말라세지아(Malassezia) 속의 유기체의 항원을 포함한다.
바이러스 펩티드 항원은, 비제한적으로, 아데노바이러스, 단순 포진 바이러스, 유두종 바이러스, 호흡기 세포융합 바이러스, 폭스바이러스, HIV, 인플루엔자 바이러스, EBV, 간염, 및 CMV의 항원을 포함한다. 특히 유용한 바이러스 펩티드 항원은 HIV 단백질 예컨대 HIV gag 단백질 (비제한적으로, 막 고정 (MA) 단백질, 코어 캡시드 (CA) 단백질 및 뉴클레오캡시드 (NC) 단백질을 포함함), HIV 폴리머라제, 인플루엔자 바이러스 매트릭스 (M1) 단백질 및 인플루엔자 바이러스 뉴클레오캡시드 (NP) 단백질, B형 간염 표면 항원 (HBsAg), B형 간염 코어 단백질 (HBcAg), e형 간염 단백질 (HBeAg), B형 간염 DNA 폴리머라제, C형 간염 항원 등을 포함한다.
일부 구현예에서, 상기 표적 펩티드 항원은 HSCT 후 회복을 복잡하게 하는 통상적인 병원체로부터 보호하면서 항종양 반응을 제공하기 위해 하나 이상의 종양 관련 항원 및 하나 이상의 바이러스-관련 항원 (예컨대 CMV, EBV, 인플루엔자 또는 아데노바이러스)을 포함한다.
HSCT를 받은 환자는 면역손상 상태를 고려할 때 특히 감염성 질환에 걸릴 위험이 있다. 이들 환자의 면역손상 상태는 혈청 반응 양성 환자에서 잠복 바이러스의 재활성화 또는 혈청 반응 음성 개인에서 기회감염을 가능하게 한다. 예를 들어, 이식 후 림프증식성 질환 (PTLD)은 이식 환자의 상당수에서 발생하며, 엡스타인-바 바이러스 (EBV) 감염의 결과이다. EBV 감염은 미국 성인 인구의 약 90%에 존재하는 것으로 생각된다. 활성 바이러스 복제 및 감염은 면역계에 의해 억제되지만, CMV의 경우와 같이, 이식 요법에 의해 면역손상된 개인은 T 세포 집단 제어력을 상실하여 바이러스 재활성화를 허용한다. 이것은 이식 프로토콜에 심각한 장애가 된다. EBV는 또한, 다양한 혈액암 및 비-혈액암에서 종양 촉진에 관여할 수 있다.
또 다른 구현예에서, 상기 세포 조성물은 종양 관련 항원에 특이적인 T 세포를 포함하고, 병원체-관련 T 세포는 방관자 세포로서 제공된다. 구체적으로, HLA-펩티드 복합체 및 항-CD28 둘 다에 의한 선택에 기초하여 CD8+ T 세포를 농축시킴으로써, 방관자 세포는 특히 항원-특이적 활성화 없이 이들 세포의 일부 비특이적 팽창을 유도할 수 있는 T 세포 성장 인자 칵테일을 사용할 때, 농축되고 팽창될 것이다. 이들 구현예에서, 상기 조성물의 많은 부분이 표적 펩티드에 특이적인 T 세포 (예를 들어, 5% 내지 75%, 또는 10% 내지 50%)인 반면, 나머지 T 세포는 이식 후 특히 유익한, 통상적인 병원체에 대항하는 면역계의 일부 재구성을 제공한다. 예를 들어, 상기 조성물은 CMV, EBV, 인플루엔자 및 아데노바이러스에 특이적인 T 세포를 포함할 수 있다. 각각의 경우에, 병원체-특이적 T 세포는 상기 조성물의 0.1% 내지 약 4%로 존재할 수 있다.
다양한 구현예에서 본 발명은 항원-특이적 CD8+ T 세포의 농축 및 팽창에 의해 제조된 조성물을 포함한다. 전구체 T 세포는 환자 또는 적합한 HLA-매칭된 공여자로부터 얻어질 수 있다. 공급원 T 세포는 신선한 샘플 또는 동결 샘플일 수 있다. 전구체 T 세포는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC), 골수, 림프절 조직, 비장 조직, 백혈구연층 부분 및 종양을 포함하여, WBC를 포함하는 다수의 공급원으로부터 얻어질 수 있다. 일부 구현예에서, 전구체 T 세포는 당 업계의 숙련가에게 공지된 임의의 수의 기술을 사용하여 대상체로부터 수집된 혈액 단위로부터 얻어진다. 예를 들어, 개체의 순환 혈액으로부터의 전구체 T 세포는 분리반출법(apheresis) 또는 백혈구성분채집술(leukapheresis)에 의해 얻어질 수 있다. 분리반출 산물은 전형적으로 T 세포 및 전구체 T 세포, 단핵구, 과립구, B 세포, 다른 핵형성 백혈구, 적혈구 및 혈소판을 포함하는 림프구를 함유한다. 백혈구성분채집술은 혈액 샘플에서 백혈구를 분리하는 실험실 절차이다.
분리반출법에 의해 수집된 세포는 세정하여 혈장 분획을 제거하고 세포를 후속 처리 단계에 적합한 완충액 또는 매질에 넣을 수 있다. 세정 단계는 반자동 "플로우-스루(flow-through)" 원심분리기를 사용하는 것과 같이 당업자에게 알려진 방법에 의해 달성될 수 있다. 세정 후, 세포를 다양한 생체 적합성 완충액, 예를 들어, Ca가 없는(Ca-free), Mg가 없는(Mg-free) PBS에 재현탁시킬 수 있다. 대안적으로, 분리반출 샘플의 바람직하지 않은 성분이 제거될 수 있고 상기 세포는 배양 배지에 직접 재현탁될 수 있다.
원하는 경우, 전구체 T 세포는 적혈구를 용해시키고, 예를 들어 PERCOLL™ 구배를 통한 원심분리에 의해 단핵구를 고갈시킴으로써 말초 혈액 림프구로부터 단리될 수 있다.
특정 구현예에서, 백혈구는 백혈구성분채집술에 의해 수집되며, 이어서 CD8+ T 세포에 대해, 예를 들어, CD4+ 세포의 샘플을 고갈시키고/시키거나 CD8+ 세포를 양성적으로 농축시킴으로써 농축될 수 있다. 일부 구현예에서, NK 세포와 같은 다른 세포 유형이 고갈된다. 이후 CD8-농축된 세포는 항원-특이적 T 세포에 대해 추가로 농축될 수 있다.
다양한 구현예에서, 면역 세포 (예를 들어, CD8+ T 세포)를 포함하는 샘플은 자기 특성을 갖는 인공 항원 제시 세포 (aAPC)와 접촉된다. 상자성 물질은 자기장에 작은 양성 자화율(susceptibility)을 가지고 있다. 이들 물질은 자기장에 의해 끌리며, 상기 물질은 외부 필드가 제거될 때 자기 특성을 유지하지 않는다. 예시적인 상자성 물질은, 비제한적으로, 산화마그네슘, 산화몰리브덴, 산화리튬, 산화탄탈럼 및 산화철을 포함한다. 자기 농축에 적합한 상자성 비드는 상업적으로 입수 가능하다 (DYNABEADS™, MACS MICROBEADS™, Miltenyi Biotec). 일부 구현예에서, aAPC 입자는 철 덱스트란 비드 (예를 들어, 덱스트란-코팅된 산화철 비드)이다.
항원 제시 복합체는 항원 결합 클레프트(cleft)를 포함하고, 일반적으로 MHC 클래스 I이며, 이는 이량체 또는 다량체 MHC를 제공하기 위해 연결되거나 또는 테더링될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 MHC는 단량체이지만, 나노-입자에 대한 이들의 밀접한 회합은 결합활성 및 활성화에 충분하다. 일부 구현예에서, 상기 MHC는 이량체이다. 이량체 MHC 클래스 I 리간드는 면역글로불린 중쇄 서열과의 융합에 의해 구축될 수 있으며, 이는 이어서 (관련된 경쇄의 유무에 관계없이) 하나 이상의 이황화 결합을 통해 회합된다. MHC 다량체는 펩티드 또는 화학적 링커를 통한 직접적인 테더링에 의해 생성될 수 있거나, 비오틴 모이어티를 통한 스트렙타비딘과의 회합을 통한 다량체일 수 있다. 일부 구현예에서, 항원 제시 복합체는 면역글로불린 서열과의 융합을 포함하는 MHC 클래스 I 복합체이다.
면역글로불린 서열을 갖는 MHC 클래스 I 분자 복합체는, 그 전문이 본원에 참조로 포함된, 미국 특허 6,268,411에 기재되어 있다. 이들 MHC 클래스 I 분자 복합체는 면역글로불린 중쇄의 말단에서 형태적으로 온전한 방식으로 형성될 수 있다. 항원 펩티드가 결합된 MHC 클래스 I 분자 복합체는 항원-특이적 림프구 수용체 (예를 들어, T 세포 수용체)에 안정적으로 결합할 수 있다. 다양한 구현예에서, 면역글로불린 중쇄 서열은 전장이 아니지만, Ig 힌지 영역, 및 CH1, CH2, 및/또는 CH3 도메인 중 하나 이상을 포함한다. Ig 서열은 가변 영역을 포함하거나 포함하지 않을 수 있지만, 가변 영역 서열이 존재하는 경우, 상기 가변 영역은 전체 또는 부분일 수 있다. 상기 복합체는 면역글로불린 경쇄를 추가로 포함할 수 있다. 가변 사슬 서열이 없는 (그리고 임의의 경쇄가 없는) MHC 클래스 I 리간드 (예를 들어, HLA-Ig)가, 그 전문이 본원에 참조로 포함된, WO 2016/105542에 기재된 바와 같이, 입자에 대한 부위-지향적 컨주게이션과 함께 사용될 수 있다.
예시적인 MHC 클래스 I 분자 복합체는 적어도 2가지의 융합 단백질을 포함한다. 제1 융합 단백질은 제1 MHC 클래스 I α 사슬 및 제1 면역글로불린 중쇄 (또는 힌지 영역을 포함하는 이의 일부)를 포함하고, 제2 융합 단백질은 제2 MHC 클래스 I α 쇄 및 제2 면역글로불린 중쇄 (또는 힌지 영역을 포함하는 이의 일부)를 포함한다. 제1 및 제2 면역글로불린 중쇄는 2개의 MHC 클래스 I 펩티드-결합 클레프트를 포함하는, MHC 클래스 I 분자 복합체를 형성하도록 회합된다. 면역글로불린 중쇄는 IgM, IgD, IgG1, IgG3, IgG2β, IgG2α, IgG4, IgE 또는 IgA의 중쇄일 수 있다. 일부 구현예에서, IgG 중쇄는 MHC 클래스 I 분자 복합체를 형성하는 데 사용된다. 다가 MHC 클래스 I 분자 복합체가 요구되는 경우, IgM 또는 IgA 중쇄가 각각 5가 또는 4가 분자를 제공하는 데 사용될 수 있다.
예시적인 클래스 I 분자는 HLA-A, HLA-B, HLA-C, HLA-E를 포함하고, 이들은 개별적으로 또는 임의의 조합으로 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 항원 제시 복합체는 HLA-A2 리간드이다. 본원에 사용된 용어 MHC는 각각의 경우에 HLA로 대체될 수 있다.
일부 구현예에서 면역글로불린 서열은 인간화된 모노클로날 항체 서열이다.
aAPC는 항-CD28 리간드와 같은 "신호 2"를 함유할 수 있다. 신호 2는 일반적으로 T 세포 영향 분자(T cell affecting molecule), 즉, 전구체 T 세포 또는 항원-특이적 T 세포에 대해 생물학적 효과를 갖는 분자이다. 특정 구현예에서, 신호 2는 T 세포 보조자극(costimulatory) 분자이다. T 세포 보조자극 분자는 항원-특이적 T 세포의 활성화에 기여한다. 이러한 분자는, 비제한적으로, CD28 (항체 포함), CD80 (B7-1), CD86 (B7-2), B7-H3, 4-1BB, 4-1BBL, CD27, CD30, CD134 (OX-40L), B7h (B7RP-1), CD40, LIGHT에 특이적으로 결합하는 분자, HVEM에 특이적으로 결합하는 항체, CD40L에 특이적으로 결합하는 항체, 및 OX40에 특이적으로 결합하는 항체를 포함한다. 일부 구현예에서, 보조자극 분자 (신호 2)는 항체 (예를 들어, 모노클로날 항체) 또는 이의 일부, 예컨대 F(ab')2, Fab, scFv, 또는 단쇄 항체, 또는 다른 항원 결합 단편이다. 일부 구현예에서, 상기 항체는 항원-결합 활성을 갖는 인간화된 모노클로날 항체 또는 이의 일부이거나, 또는 항원-결합 활성을 갖는 완전한 인간 항체 또는 이의 일부이다.
(동일하거나 별도의 나노입자에) 사용될 수 있는 보조-자극 리간드의 조합은 항-CD28/항-CD27 및 항-CD28/항-41BB를 포함한다. 이들 보조-자극 리간드의 비는 팽창을 달성하기 위해 변할 수 있다.
예시적인 신호 1 및 신호 2 리간드는, 불변 영역이 적절한 화학적 작용성을 갖는 나노입자 지지체에 결합될 수 있도록 유리 설프하이드릴 (예를 들어, 쌍을 이루지 않은 시스테인)을 갖는 리간드를 기술하는 WO 2014/209868에 기재되어 있다.
나노-aAPC에 유용한 접착 분자는 나노-aAPC의 T 세포 또는 T 세포 전구체에 대한 접착을 매개하는 데 사용될 수 있다. 유용한 접착 분자는, 예를 들어, ICAM-1 및 LFA-3을 포함한다.
일부 구현예에서, 신호 1은 펩티드-HLA-A2 복합체에 의해 제공되고, 신호 2는 B7.1-Ig 또는 항-CD28에 의해 제공된다. 예시적인 항-CD28 모노클로날 항체는 특정 구현예에서 인간화될 수 있고/있거나 완전히 온전한 항체 또는 이의 항원-결합 단편으로서 비드에 접합될 수 있는 9.3 mAb이다 (Tan et al., J. Exp. Med. 1993 177:165).
자기 활성화는 2분 내지 5시간, 또는 5분 내지 2시간 동안 발생할 수 있으며, 이어서 일부 구현예에서 적어도 5일, 및 최대 2주 또는 최대 3주 동안 배양으로 팽창될 수 있다. 일부 구현예에서, 자기 활성화는 적어도 2분 동안, 그러나 30분 미만 (예를 들어, 약 5분 또는 10분) 동안 발생한다. 생성된 CD8+ T 세포는 T 기억 줄기세포 (Tscm)의 존재, 뿐만 아니라 높은 중심 및 이펙터 기억 표현형을 확인하기 위해 표현형적으로 특성화될 수 있다.
일부 구현예는 팽창 동안 T 세포 성장 인자를 사용하며, 이는 T 세포의 증식 및/또는 분화에 영향을 미친다. T 세포 성장 인자의 예는 사이토카인 (예를 들어, 인터류킨, 인터페론) 및 초항원(superantigen)을 포함한다. 원하는 경우, 사이토카인은 융합 단백질을 포함하는 분자 복합체에 존재할 수 있거나, aAPC에 의해 캡슐화되거나 가용성 형태로 제공될 수 있다. 특히 유용한 사이토카인은 MIP-1β, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-10, IL-12, IL-15, IL-21, IFN-γ, 및 CXCL10을 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 성장 인자는 MIP-1β, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-15, IL-21, 및 INF-γ로부터의 3, 4, 5 또는 6가지를 포함한다. 이들 또는 다른 구현예에서, 상기 세포는 MIP-1β, IL-1β 및 IL-6, 및 선택적으로 IL-10으로부터 선택된 1, 2, 3가지의 사이토카인의 존재하에 배양으로 팽창된다. 일부 구현예에서, 상기 세포는 IL-7 및/또는 IL-21 및/또는 IL-15의 존재하에 배양되지 않는다. 세포는 1주 내지 4주, 예컨대 약 2주 (약 14일) 또는 약 3주 배양으로 팽창될 수 있다.
일부 구현예에서, 상기 세포는 T 세포 팽창 (항원-특이적 T 세포 팽창 포함), 활성화, 및 기억 표현형 간의 균형을 달성하기 위해 4 내지 8가지의 사이토카인의 존재하에 배양으로 팽창된다. 일부 구현예에서, 상기 세포는 IL-4의 존재하에 팽창된다. 일부 구현예에서, 상기 세포는 IL-4 및 IL-6의 존재하에 팽창된다. 일부 구현예에서, 상기 세포는 IL-4 및 IL-1β의 존재하에 팽창된다. 일부 구현예에서, 상기 세포는 IL-4, IL-6 및 IL-1β의 존재하에 팽창된다. 일부 구현예에서, 상기 세포는 IL-2, IL-4 및 IL-6의 존재하에 팽창된다. 일부 구현예에서, 상기 세포는 IL-2, IL-4, IL-6, INF-γ 및 IL-1β의 존재하에 배양으로 팽창된다. 일부 구현예에서, 상기 세포는 IL-10의 존재하에 추가로 팽창된다.
일부 구현예에서, 상기 성장 인자는 IL-2, IL-4, IL-6, INF-γ 및 IL-1β, 및 선택적으로 IL-10으로 구성되거나 본질적으로 구성된다.
일부 구현예에서, IL-2는 배양 시작시 약 20 내지 약 100 IU/ml, 또는 약 20 내지 약 60 IU/ml와 같이, ml당 10 내지 200 국제 단위 (International Unit; IU)로 존재한다. 일부 구현예에서, IL-2는 배양 시작시 약 30 내지 약 50 IU/ml (예를 들어, 약 40 IU/ml)로 존재한다. IL-2 IU (86/500 NIBSC)는, 예를 들어, Gearing and Bird (1987) in Lymphokines and Interferons , A Practical Approach. Clemens, MJ et al. (eds): IRL Press. 295에 기재된 바와 같이, 증식 분석 (예를 들어, CTLL-2 세포주를 사용함)을 사용하여 결정될 수 있다. 일부 구현예에서, IL-2는 배양 시작시 약 2 내지 약 25 ng/ml, 예컨대 약 5 내지 약 15 ng/ml로 존재한다.
이들 또는 독립적인 구현예에서, IL-4는 배양 시작시 ml당 0.2 내지 25 국제 단위 (IU), 예컨대 약 0.5 내지 약 10 IU/ml, 또는 약 0.5 내지 약 5 IU/ml로 존재한다. 일부 구현예에서, IL-4는 배양 시작시 약 1 IU/ml로 존재한다. IL-4 IU (88/656 NIBSC)는, 예를 들어, Kitamura T. et al., (1991) IL-1 up-regulates the expression of cytokine receptors on a factor-dependent human hemopoietic cell line, TF -1. Int . Immunol . 3:571-577에 기재된 바와 같이, 증식 분석 (예를 들어, TF-1 세포주를 사용함)을 사용하여 정의될 수 있다. 일부 구현예에서, IL-4는 배양 시작시 약 0.2 내지 약 2 ng/ml, 예컨대 약 0.2 내지 약 1 ng/ml (예를 들어, 약 0.5 ng/ml)로 존재한다.
이들 또는 독립적인 구현예에서, IL-6은 배양 시작시 ml당 10 내지 200 국제 단위 (IU), 예컨대 약 25 내지 약 100 IU/ml, 예컨대 25 내지 75 IU/ml로 존재할 수 있다. 일부 구현예에서, IL-6은 배양 시작시 약 40 내지 약 60 IU/ml (예를 들어, 약 50 IU/ml)로 존재한다. IL-6 IU (89/548 NIBSC)는 예를 들어 Gaines-Das RE and Poole S. (1993) The international standard for interleukin-6. Evaluation in an international collaborative study. J. Immunol. Methods 160:147-153에 기재된 바와 같이, 증식 분석 (예를 들어, B9 세포주를 사용함)을 사용하여 정의될 수 있다. 일부 구현예에서, IL-6은 배양 시작시 약 0.2 내지 약 10 ng/ml, 예컨대 약 0.2 내지 약 5 ng/ml (예를 들어, 약 0.5 내지 2 ng/ml)로 존재한다.
이들 또는 독립적인 구현예에서, 인터페론 감마 (INF-γ)는 배양 시작시 ml당 10 내지 200 국제 단위 (IU), 예컨대 약 20 내지 약 100 IU/ml, 예컨대 20 내지 60 IU/ml로 존재할 수 있다. 일부 구현예에서, INF-γ는 배양 시작시 약 30 내지 약 50 IU/ml (예를 들어, 약 40 IU/ml)로 존재한다. INF-γ IU (87/586 NIBSC)는 예를 들어 Meager A. (1987) in Lymphokines and interferons , a Practical Approach. Clemens, MJ, et al. (eds): IRL Press. 129에 기재된 바와 같이, 항바이러스 분석 (예를 들어, EMC로 감염된 헬라 세포(Hela cell)를 사용함)을 사용하여 정의될 수 있다. 일부 구현예에서, INF-γ는 배양 시작시 약 0.5 내지 약 20 ng/ml, 예컨대 약 1 내지 약 10 ng/ml (예를 들어, 1 내지 5 ng/ml)로 존재한다.
IL-1β는 배양 시작시 ml당 5 내지 100 국제 단위 (IU), 예컨대 약 10 내지 약 50 IU/ml, 예컨대 약 10 내지 약 30 IU/ml로 존재할 수 있다. 일부 구현예에서, IL-1β는 배양 시작시 약 10 내지 약 20 IU/ml (예를 들어, 약 15 IU/ml)로 존재한다. IL-1β IU (86/680 NIBSC)는 예를 들어 Poole, S. and Gaines-Das, RE (1991) The international standards for interleukin -1 alpha and interleukin -1 beta. Evaluation in an international collaborative study. J. Immunol. Methods 142:1-13에 기재된 바와 같이, 증식 분석 (예를 들어, D.10.G4.1 세포를 사용함)을 사용하여 정의될 수 있다. 일부 구현예에서, IL-1β는 배양 시작시 약 0.2 내지 약 5 ng/ml, 예컨대 약 0.2 내지 약 2 ng/ml, 또는 약 0.2 내지 약 1 ng/ml로 존재한다.
다양한 구현예에서, 상기 세포는 IL-2, IL-4, IL-6, INF-γ 및 IL-1β를 포함하거나 또는 이들로 구성된 성장 인자 칵테일의 존재하에 배양된다. 일부 구현예에서, IL-2 및 INF-γ의 상대 활성 (각각의 IU로 정의됨)은 약 0.5:1 내지 약 1:0.5 (예를 들어, 약 1:1)이다. 이들 또는 독립적인 구현예에서, IL-2 및 IL-6의 상대 활성 (각각의 IU로 정의됨)은 약 0.5:1 내지 1:0.5이다. 이들 또는 독립적인 구현예에서, IL-2, IL-6 및/또는 IFN-γ에 대한 IL-1β의 상대 활성 (각각의 IU로 정의됨)은 1:4 내지 1:2 (예를 들어, 약 1:3)이다. 이들 또는 독립적인 구현예에서, IL-2, IL-6 및/또는 IFN-γ에 대한 IL-4의 상대 활성 (각각의 IU로 정의됨)은 1:30 내지 1:60이다. 이들 또는 독립적인 구현예에서, IL-1β에 대한 IL-4의 상대 활성 (각각의 IU로 정의됨)은 약 1:5 내지 약 1:25, 예컨대 약 1:10 내지 약 1:20이다.
일부 구현예에서, 배양 시작시 각각의 성장 인자 (IL-2, IL-4, IL-6, INF-γ 및 IL-1β)의 고유 활성(specific activity) (IU 단위)은 배양물 중의 모든 성장 인자의 전체 IU가 100%로 간주될 때의 백분율로 나타낼 수 있다. 예를 들어, 일부 구현예에서, 배양물 중의 각각의 성장 인자의 백분율은 하기와 같을 수 있다:
20% 내지 40% IL-2 (예를 들어, 20 내지 30% IL-2);
0.5% 내지 5% IL-4 (예를 들어, 1 내지 3% IL-4);
25% 내지 50% IL-6 (예를 들어, 30 내지 40% IL-6);
20% 내지 40% IFN-γ (예를 들어, 20 내지 30% IFN-γ); 및
5% 내지 20% IL-1β (예를 들어, 5 내지 15% IL-1β).
aAPC 나노입자는 임의의 물질로 제조될 수 있고, 물질은 원하는 자기 특성에 따라 적절히 선택될 수 있으며, 예를 들어, 금속 예컨대 철, 니켈, 코발트, 또는 희토류 금속의 합금을 포함할 수 있다. 상자성 물질은 또한 마그네슘, 몰리브덴, 리튬, 탄탈럼 및 철 산화물을 포함한다. 물질 (세포 포함)의 농축에 적합한 상자성 비드는 상업적으로 입수 가능하며, 덱스트란-코팅된 산화철 비드와 같은 철 덱스트란 비드를 포함한다. 자기 특성이 요구되지 않는 본 발명의 측면에서, 나노입자는 또한 셀룰로오스, 세라믹, 유리, 나일론, 폴리스티렌, 고무, 플라스틱 또는 라텍스와 같은 비금속 또는 유기 (예를 들어, 폴리머) 물질로 제조될 수 있다. 나노입자의 제조를 위한 예시적인 물질에는 폴리(락트-코-글리콜산) (PLGA) 또는 PLA 및 이들의 공중합체가 있으며, 이는 이들 구현예와 관련하여 사용될 수 있다. 사용될 수 있는 폴리머 및 공중합체를 포함하는 기타 물질은 그 전문이 본원에 참조로 포함된, PCT/US2014/25889에 기재된 것들을 포함한다.
다양한 구현예에서, 상기 입자의 크기 (예를 들어, 평균 직경)는 약 10 내지 약 500 nm 이내 또는 약 40 내지 약 400 nm 이내 또는 약 100 nm 내지 400 nm 이내이다. 자기 클러스터링을 위해, 일부 구현예에서 상기 나노입자는 10 내지 250 nm, 또는 20 내지 100 nm 범위의 크기를 갖는 것이 바람직하다. 세포-나노입자 계면에서의 수용체-리간드 상호작용은 잘 알려져 있지 않다. 그러나, 나노입자 결합 및 세포 활성화는 T 세포 활성화 동안 특히 중요한 막 공간 조직에 민감하고, 자기장은 활성화를 향상시키기 위해 클러스터-결합된 나노입자를 조작하는 데 사용될 수 있다. 예를 들어, T 세포 활성화는 지속적으로 증대된 나노규모 TCR 클러스터링의 상태를 유도하고, 나노입자는 더 큰 입자가 아닌 방식으로 이 클러스터링에 민감하다.
또한, TCR 클러스터와의 나노입자 상호작용은 수용체 트리거링(triggering)을 향상시키기 위해 이용될 수 있다. T 세포 활성화는, 처음에 T 세포-APC 접촉 부위의 주변에서 형성되고 내부로 이동하는, 수백 나노 미터에 걸쳐 "시그널링 클러스터"를 갖는, 시그널링 단백질의 응집에 의해 매개된다. 본원에 기재된 바와 같이, 외부 자기장을 사용하여 항원-특이적 T 세포 (드문 나이브 세포 포함)를 농축시키고, TCR에 결합된 자기 나노-aAPC의 응집을 유도할 수 있으며, 이는 TCR 클러스터의 응집을 야기하고, 나이브 T 세포의 활성화를 향상시킬 수 있다. 자기장은 상자성 입자에 적절히 강한 힘을 가할 수 있지만, 달리 생물학적으로 비활성이므로 입자 거동을 제어하는 강력한 도구가 된다. 상자성 나노-aAPC에 결합된 T 세포는 외부에 적용된 자기장의 존재하에 활성화된다. 나노-aAPC는 자체 자기화되고, 필드 공급원과 필드의 근처에 있는 나노입자 모두에 끌리며, 이는 비드 및 따라서 TCR 응집을 유도하여 aAPC-매개된 활성화를 촉진한다.
활성화 화학은 나노입자의 표면에 분자의 특이적이고 안정적인 부착을 가능하게 하기 위해 사용될 수 있다. 단백질을 작용기에 부착시키는 데 사용될 수 있는 수많은 방법이 있다. 예를 들어, 통상적인 가교제 글루타르알데히드는 2-단계 공정으로 단백질 아민기를 아미노화 나노입자 표면에 부착시키는 데 사용될 수 있다. 생성된 연결은 가수분해적으로 안정적이다. 다른 방법은 단백질 상의 아민과 반응하는 n-하이드로석신이미도 (NHS) 에스테르를 함유하는 가교제, 아민-, 설프하이드릴-, 또는 히스티딘-함유 단백질과 반응하는 활성 할로겐을 함유하는 가교제, 아민 또는 설프하이드릴 그룹과 반응하는 에폭사이드를 함유하는 가교제, 말레이미드 그룹과 설프하이드릴 그룹 간의 접합, 및 펜던트 당 모이어티의 과요오드산염 산화에 의한 단백질 알데히드 기의 형성에 이어서 환원적 아미노화의 사용을 포함한다.
동일하거나 상이한 입자상에 동시에 사용될 때 특정 리간드의 비는 항원 또는 보조자극 리간드 제시에서 나노입자의 효과를 증가시키기 위해 변할 수 있다. 예를 들어, 나노입자는 HLA-A2-Ig 및 항-CD28 (또는 다른 신호 2 리간드)과, 약 30:1, 약 25:1, 약 20:1, 약 15:1, 약 10:1, 약 5:1, 약 3:1, 약 2:1, 약 1:1, 약 0.5:1, 약 0.3:1; 약 0.2:1, 약 0.1:1, 또는 약 0.03:1과 같은 다양한 비로 결합될 수 있다. 일부 구현예에서, 상기 비는 2:1 내지 1:2이다. 지지체에 결합된 단백질의 총량은, 예를 들어, 약 250 mg/ml, 약 200 mg/ml, 약 150 mg/ml, 약 100 mg/ml, 또는 약 50 mg/ml의 입자일 수 있다. 사이토카인 방출 및 성장과 같은 이펙터 기능은 T 세포 활성화 및 분화와 신호 1 대 신호 2에 대한 요건이 상이할 수 있기 때문에, 이들 기능은 개별적으로 결정될 수 있다.
특정 구현예에서, aAPC는 50 내지 150 nm 범위의 상자성 입자이며, PDI (크기 분포)는 0.2 미만, 또는 일부 구현예에서 0.1 미만이다. aAPC는 0 내지 -10 mV, 예컨대 약 -2 내지 -6 mV의 표면 전하를 가질 수 있다. aAPC는 입자당 10 내지 120개의 리간드, 예컨대 입자당 약 25 내지 약 100개의 리간드를 가질 수 있으며, 리간드는 면역글로불린 서열의 Fc 영역에 도입된 유리 시스테인을 통해 상기 입자에 접합된다. 상기 입자는 약 1:1 비의 HLA 이량체:항-CD28을 함유할 수 있으며, 이는 입자의 동일하거나 상이한 집단에 존재할 수 있다. 상기 나노입자는 펩티드 항원의 수동적 로딩으로도 비-동족 TCR의 자극을 나타내지 않으면서 동족 T 세포의 강력한 팽창을 제공한다. 입자는 적어도 2년 또는 3년 동안 동결건조된 형태로 안정적이다.
농축 및 팽창 후, 샘플의 항원-특이적 T 세포 성분은 적어도 약 5%, 또는 적어도 약 10%, 또는 적어도 약 15%, 또는 적어도 약 20%, 또는 적어도 약 25%의 항원 특이적 T 세포일 것이다. 또한, 이들 T 세포는 일반적으로 기억 표현형 (중심 및 이펙터 기억, 뿐만 아니라 T 기억 줄기세포 모두 포함)을 나타낸다. 환자로부터 단리된 최초의 샘플로부터, 다양한 구현예에서 항원-특이적 T 세포는 (약 7일 내에) 약 100배 내지 약 10,000배, 예컨대 적어도 약 100배, 또는 적어도 약 200배 팽창된다. 2주 후, 다양한 구현예에서 항원-특이적 T 세포는 적어도 1000배, 또는 적어도 약 2000배, 적어도 약 3,000배, 적어도 약 4,000배, 또는 적어도 약 5,000배 팽창된다. 일부 구현예에서, 항원-특이적 T 세포는 2주 후 5000배 초과 또는 10,000배 초과로 팽창된다. 1주 또는 2주 팽창 후, 적어도 약 106개, 또는 적어도 약 107개, 또는 적어도 약 108개, 또는 적어도 약 109개의 항원-특이적 T 세포가 얻어진다.
적합한 인큐베이션 조건 (배양 배지, 온도 등)은 T 세포 또는 T 세포 전구체를 배양하기 위해 사용되는 조건, 뿐만 아니라 DC 또는 인공 항원 제시 세포를 사용하여 항원-특이적 T 세포의 형성을 유도하기 위해 당 업계에 공지된 조건을 포함한다.
상기 세포 조성물은 정맥내 주입, 동맥내 투여, 림프내 투여, 및 종양내 투여를 포함하는 임의의 적절한 경로에 의해 환자에게 투여될 수 있다.
일부 구현예에서, 환자는 입양 전달에 의해 상기 세포 조성물을 투여받기 전에 (또는 선택적으로 후에) 하나 이상의 체크포인트 억제제를 사용한 면역요법을 받는다. 다양한 구현예에서, 체크포인트 억제제(들)는 CTLA-4 또는 PD-1/PD-L1 중 하나 이상을 표적화하며, 이는 그러한 표적에 대한 항체, 예컨대 모노클로날 항체 또는 이의 일부, 또는 이의 인간화된 또는 완전 인간 버전을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 체크포인트 억제제 요법은 이필리무맙 또는 키트루다(펨브로리주맙)를 포함한다.
일부 구현예에서, 환자는 약 1 내지 5 라운드의 입양 면역요법 (예를 들어, 1, 2, 3, 4 또는 5 라운드)을 받는다. 일부 구현예에서, 입양 면역요법의 각 투여는 한 라운드의 체크포인트 억제제 요법과 동시에 또는 그 후에 (예를 들어, 약 1일 내지 약 1주 후) 수행된다. 일부 구현예에서, 입양 면역요법은 체크포인트 억제제 용량 후 약 1일, 약 2일, 약 3일, 약 4일, 약 5일, 약 6일, 또는 약 1주 후에 제공된다. 일부 구현예에서, 환자는 세포 조성물의 단일 투여만을 받는다.
일부 측면에서, 본 발명은 개인 맞춤형(personalized) 암 면역요법을 위한 방법을 제공한다. 상기 방법은 aAPC를 사용하여 환자가 반응할 항원을 식별한 후, 환자에게 적절한 펩티드-로딩된 aAPC를 투여하거나, 생체외에서 항원 특이적 T 세포를 농축 및 확장시켜 달성된다.
게놈 전체 시퀀싱은 암 생물학에 대한 우리의 이해를 극적으로 변화시켰다. 암의 시퀀싱은 많은 인간 암의 발달과 관련된 분자 과정에 관한 중요한 데이터를 산출했다. 3가지 주요 세포 과정인, (1) 세포 운명, (2) 세포 생존 및 (3) 게놈 유지를 조절하는 경로에 관여하는 주요 유전자에서 구동하는 돌연변이가 식별되었다. Vogelstein et al., Science 339, 1546-58 (2013).
게놈 전체 시퀀싱은 또한, 암 면역요법에 대한 우리의 접근법을 혁신할 가능성이 있다. 시퀀싱 데이터는 암 면역요법의 공유 및 개인화된 표적 모두에 관한 정보를 제공할 수 있다. 원칙적으로, 돌연변이 단백질은 면역계에 이질적이며, 추정적 종양-특이적 항원이다. 실제로, 시퀀싱 노력은 수천 개까지는 아니라 하더라도 수백 개의 잠재적으로 관련된 면역 표적을 정의했다. 제한된 연구에 따르면, 이러한 네오-에피토프(neo-epitope)에 대한 T 세포 반응은 암 환자에서 발견되거나 암 백신에 의해 유도될 수 있음을 보여주었다. 그러나, 특정 암에 대한 그러한 반응의 빈도 및 그러한 반응이 환자들 간에 공유되는 정도는 잘 알려져 있지 않다. 종양-특이적 면역 반응에 대한 우리의 제한된 이해의 주된 이유 중 하나는 잠재적인 면역학적으로 관련된 표적을 검증하기 위한 현재의 접근법이 번거롭고 시간 소모적이라는 점이다.
중추성 면역내성(central tolerance)은 자체 단백질에 대한 T 세포 반응을 제거하지만, 발암성 돌연변이는 T 세포 반응이 형성될 수 있는 네오-에피토프를 유도한다. 전체 엑솜(exome) 시퀀싱으로부터 유래된 돌연변이 카탈로그는 그러한 네오-에피토프를 식별하기 위한 출발점을 제공한다. HLA 결합 예측 알고리즘 (Srivastava, PLoS One 4, e6094 (2009)을 사용하여, 각각의 암은 7-10개의 네오-에피토프를 가질 수 있는 것으로 예측되었다. 비슷한 접근법으로 수백 종의 종양 네오-에피토프가 추정되었다. 그러나, 그러한 알고리즘은 T 세포 반응 예측에서 정확도가 낮을 수 있으며, 예측된 HLA-결합 에피토프의 10%만이 HLA와 관련하여 결합할 것으로 예상된다 (Lundegaard C, Immunology 130, 309-18 (2010)). 따라서, 예측된 에피토프는 이러한 잠재적인 네오-에피토프에 대한 T 세포 반응의 존재에 대해 검증되어야 한다.
특정 구현예에서, 나노-aAPC 시스템은 다양한 암 또는 특정 환자의 암에서 T 세포 반응을 유도하는 네오-에피토프를 스크리닝하는 데 사용된다. 암은, 예를 들어, 전체 엑솜-시퀀싱에 의해 유전자 분석될 수 있다.
후보 펩티드의 목록은 돌연변이된 단백질에서 9개의 아미노산 윈도우(amino acid window)를 중첩시킴으로써 생성될 수 있다. 돌연변이된 아미노산을 함유하는 모든 9개-AA 윈도우, 및 각각의 단백질로부터의 2개의 비-돌연변이된 "대조군"이 선택될 것이다. 이들 후보 펩티드는 Net MHC 및 안정화된 매트릭스 방법 (SMM)을 포함하는 MHC 결합 예측 알고리즘의 일치(consensus)를 사용하여 MHC 결합에 대해 컴퓨터로 평가될 것이다. 나노-aAPC 및 MHC 결합 알고리즘은 주로 HLA-A2 대립유전자에 대해 개발되었다. 일치 예측의 민감도 컷오프는 다루기 쉬운 수의 돌연변이 함유 펩티드 (~500) 및 비-돌연변이 대조군 펩티드 (~50)가 식별될 때까지 조정될 수 있다.
예시적인 구현예에서, 상기 세포 조성물은, 약제학적으로 허용되는 담체에, 적어도 90%의 CD8+ T 세포 및 5% 미만의 CD4+ T 세포; 1 내지 10가지의 종양-관련 표적 펩티드 항원에 특이적인 적어도 106개의 CD8+ T 세포, 및 박테리아, 바이러스 및/또는 진균 병원체에 특이적인 CD8+ T 세포를 포함하며, 여기서 CD8+ T 세포의 적어도 30%는 25:75 내지 75:25 비의 중심 기억 및 이펙터 기억 T 세포이며, CD8+ T 세포의 10% 미만은 말단 분화된 T 세포이다. 일부 구현예에서, 종양-관련 표적 펩티드 항원에 특이적인 CD8+ T 세포의 적어도 50%는 25:75 내지 75:25 비의 중심 기억 및 이펙터 기억 T 세포이며, CD8+ T 세포의 10% 미만은 말단 분화된 T 세포이다. 일부 구현예에서, 상기 세포 조성물은 약 5%부터 약 20%에서 T 기억 줄기세포 (Tscm), 또는 약 5% 내지 약 15%의 T 기억 줄기세포를 추가로 포함한다.
상기 세포 조성물은 정맥내 주입에 적합하고, 동결방지제로서 적합할 수 있는 약제학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함한다. 예시적인 담체에는 DMSO (예를 들어, 약 10%)가 있다. 세포 조성물은 단위 바이알 또는 백으로 제공될 수 있으며, 사용시까지 동결 보관될 수 있다. 단위 용량은 50 내지 200 ml의 용적에서 ml당 약 5 x 105 내지 약 5 x 106개의 세포를 포함할 수 있다. 특정 구현예에서, 상기 조성물의 용적은 100 ml 이하 (예를 들어, 50 내지 100 ml)이다.
일부 측면에서, 본 발명은 필요한 환자에게 본원에 기재된 세포 조성물을 투여하는 단계를 포함하는, 암 환자를 치료하는 방법을 제공한다.
일부 구현예에서, 환자는 혈액암을 가지며, 일부 구현예에서 동종이계 줄기세포 이식 후 재발하였다. 일부 구현예에서, 환자는 급성 골수성 백혈병 (AML) 또는 골수이형성 증후군을 갖는다.
본 개시내용에 따라 치료될 수 있는 다른 암은 역사적으로 인정되지 않는 불량한 면역 반응을 나타내거나 또는 높은 재발률을 갖는 암을 포함한다. 예시적인 암은 암종, 육종, 및 림프종을 포함하는 다양한 유형의 고형 종양을 포함한다. 다양한 구현예에서 암은 흑색종 (전이성 흑색종 포함), 결장암, 십이지장암, 전립선암, 유방암, 난소암, 관암, 간암, 췌장암, 신장암, 자궁내막암, 고환암, 위암, 형성이상 구강 점막, 폴립증, 두경부암, 침습성 구강암, 비-소세포 폐암종, 소세포 폐암, 악성중피종, 이행 및 편평 세포 비뇨기 암종, 뇌암, 신경아세포종, 및 신경교종이다. 다양한 구현예에서, 암은 I기, II기, III기 또는 IV기이다. 일부 구현예에서, 암은 전이성 및/또는 재발성이고/이거나 절제할 수 없다.
일부 구현예에서, 환자는 화학요법 및/또는 체크포인트 억제제 요법에 불응성이다.
일부 구현예에서, 환자는 저용량 사이토카인 요법을 추가로 받으며, 이는 지속성 및 생체내 반응을 개선시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 암은 백혈병, 림프종 또는 골수종을 포함하는 혈액학적 악성 종양이다. 예를 들어, 혈액학적 악성 종양은 급성 골수성 백혈병, 만성 골수성 백혈병, 소아기 급성 백혈병, 비-호지킨 림프종, 급성 림프성 백혈병, 만성 림프성 백혈병, 골수이형성 증후군, 악성 피부 T-세포, 균상식육종, 비-MF 피부 T-세포 림프종, 림프종양 구진증, 및 T-세포 풍부 피부 림프 과다형성일 수 있다. 예시적인 구현예에서, 환자는 혈액암 예컨대 급성 골수성 백혈병 (AML) 또는 골수이형성 증후군을 가지며, 일부 구현예에서 환자는 동종이계 줄기세포 이식 후 재발하였다. 일부 구현예에서, 상기 요법은 GVHD를 유발하지 않는다.
일부 구현예에서, 동종이계 줄기세포 이식 외에도, 환자는 또한, (세포 요법의 투여 전) 림프-결실 요법, 세포-감퇴 요법 또는 면역조절 요법을 받는다. 일부 구현예에서, 세포 요법은 치료 후 사이토카인 지지가 있거나 없이 추가로 제공될 수 있다.
일부 구현예에서, 환자는 감염성 질환에 걸렸거나 감염성 질환에 걸릴 위험이 있다. 예를 들어, HSCT를 받은 환자는 면역손상 상태를 고려할 때 특히 감염성 질환에 걸릴 위험이 있다. 치료되거나 예방될 수 있는 감염성 질환에는 박테리아, 바이러스, 프리온, 진균, 기생충, 연충류 등에 의해 유발된 것이 포함된다. 그러한 질환에는 AIDS, B/C형 간염, CMV 감염, 엡스타인-바 바이러스 (EBV) 감염, 인플루엔자, 헤르페스 바이러스 감염 (대상포진 포함) 및 아데노바이러스 감염이 포함된다. 예를 들어, CMV는 장기 이식 환자에서 발견되는 가장 흔한 바이러스 병원체이며, 골수 또는 말초 혈액 줄기세포 이식을 받는 환자에서 이환과 사망의 주요 원인이다. 이는 이들 환자의 면역손상 상태에 기인하며, 이는 혈청 반응 양성 환자에서 잠복 바이러스의 재활성화 또는 혈청 반응 음성 개인에서 기회감염을 가능하게 한다. 이들 구현예에서, 환자는 병원체 항원에 특이적인 T 세포를 포함하는 입양 면역요법을 받을 수 있다. 상기 방법은 이식 절차를 시작하기 전에 환자 또는 적절한 공여자로부터 유래된 바이러스-특이적 CTL의 생성을 수반할 수 있다.
PTLD는 이식 환자의 상당수에서 발생하며, 엡스타인-바 바이러스 (EBV) 감염의 결과이다. EBV 감염은 미국 성인 인구의 약 90%에 존재하는 것으로 생각된다. 활성 바이러스 복제 및 감염은 면역계에 의해 억제되지만, CMV의 경우와 같이, 이식 요법에 의해 면역손상된 개인은 T 세포 집단 제어력을 상실하여 바이러스 재활성화를 허용한다. 이것은 이식 프로토콜에 심각한 장애가 된다. EBV는 또한, 다양한 혈액암 및 비-혈액암에서 종양 촉진에 관여할 수 있다.
본 발명의 다른 측면 및 구현예는 숙련가에게 명백할 것이다.
실시예
백혈구성분채집술에 의해 단리된 공여자 세포로부터 항원-특이적 T 세포를 농축 및 팽창시켰다. CD4 마이크로비드에 의한 음성 선택에 의해 세포에서 CD4+ 세포가 고갈되었다. 생성된 세포를 상자성 나노입자 (덱스트란-코팅된 산화철 나노입자, 약 80-200 nm의 직경)와 인큐베이션함으로써 항원-특이적 T 세포에 대해 농축시켰다. 상기 나노입자는 작용제 항-CD28 모노클로날 항체뿐만 아니라 표면에 접합된 이량체 HLA 리간드 (표적 펩티드 항원을 제시함)를 갖는다. 이량체 HLA 리간드는 펩티드 결합 클레프트를 포함하는, 2개의 HLA-A2 도메인을 함유하며, 각각 Ig 힌지 영역의 아암에 융합된다. 이량체 HLA-Ig는 β2 마이크로글로불린과 공-발현된다. 리간드 및 aAPC 작제물은 그 전문이 본원에 참조로 포함된, WO 2016/044530 및 WO 2016/105542에 개시되어 있다.
세포를 상자성 aAPC의 존재하에, 이어서 자기장의 존재하에 약 5분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 입자와 회합된 세포를 회수하고, 다양한 시간 동안 (일반적으로 1-2주 동안) 생체외에서 팽창시켰다. 성장 인자의 존재하에 팽창을 수행하였다. 2주의 배양 기간 동안, 1일 및 7일에 성장 인자를 첨가하였다. 세포는 7일에 aAPC로 재자극되었다.
항원-특이적 T 세포는 또한, 배치로 농축 및 팽창되었다. 예를 들어, 도 3은 AML-특이적 펩티드 Prame100 RHAMM, WT1, 및 서바이빈의 배치 농축 및 팽창을 보여준다. 7일째에, 상기 세포는 Prame에 대해 1.4% 특이성, RHAMM에 대해 1.8% 특이성, WT1에 대해 7.0% 특이성, 및 서바이빈에 대해 2.3% 특이성을 함유한다. 이 구현예에서 총 항원-특이적 T 세포 성분은 12.5%이다. T 세포는 사량체 염색에 의해 특성화되었다.
도 4는 2주 동안 개별 자극 및 팽창을 겪은 조성물이 일관된 수준의 AML 항원-특이적 T 세포를 가짐을 보여준다. 개별 자극 및 팽창 과정은 ~15% 항원-특이적 T 세포를 일관되게 생성한다.
도 5는 동시 자극/팽창 과정이 개별 자극/팽창에 필적하는 AML-특이적 T 세포 빈도를 생성한다는 것을 보여준다. 배치 자극/팽창에 의해 제조된 나타낸 조성물은 ~47% 항원-특이적 T 세포를 갖는다.
도 6은 생성된 T 세포가 AML 종양 세포 (THP-1 세포주)의 항원-특이적 사멸을 나타낸다는 것을 보여준다. AML 특이적 T 세포는 WT-1, PRAME 및 서바이빈으로부터의 5개의 에피토프를 겨냥한다. 1 대 100 (표적 대 이펙터 비)에서, 표적 세포의 ~40%가 사멸되었다.
도 7에 도시된 바와 같이, 생체외 팽창에 사용된 사이토카인 칵테일은 생성된 세포의 수 및 표현형에 영향을 줄 수 있다.
세포는 이들의 표현형, 나이브 (CD62L+, CD45RA+), 중심 기억 (CD62L+, CD45RA-), 이펙터 기억 (CD62L-, CD45RA-), 및 말단 분화된 기억 (CD62L-, CD45RA+)에 대해 추가로 특성화되었다. 공여자 림프구로부터 생체외에서 농축되고 확장된 MART-1 및 AML 특이적 T 세포는 주로 중심 기억 및 이펙터 기억 표현형이다. 도 2를 참고한다. 특히 AML 펩티드의 경우, 3개의 대표적인 실험에서, 나이브 세포는 3.82%, 14.2% 및 14.8%로 존재하였다. 말단 분화된 기억 세포는 3.82%, 3%, 및 6.7%로 존재하였다. 한편, 항원-특이적 세포의 중심 및 이펙터 기억 성분은 92.3%, 82.8% 및 78.52%였다.
세포는 활성화 표현형, 즉, IL-2 (증식 및 기억), IFN-γ (다른 T 세포의 활성화, 기억, MHC의 상향조절), TNF-α (전-염증성) 및 CD107A (그랜자임 방출, 세포독성 활성)에 대한 염색에 의해 특성화되었다. 도 1을 참고한다. 도시된 바와 같이, 대부분의 세포는 3개 또는 심지어 4개의 기능을 갖는다. 예를 들어, 32.5%의 세포는 활성화될 때 IL-2 및 IFN-γ 둘 모두를 생산하며, 94.2%의 세포는 활성화될 때 TNF-α 및 CD107a를 생산한다.
바이러스 항원에 특이적인 방관자 세포는 사량체 염색에 의해 추가로 정량화되었다. 도 8은 MART-1-특이적 농축 및 팽창 후 7일째에 바이러스-특이적 방관자 T 세포의 존재를 보여준다. 도 9는 MART-1-특이적 농축 및 팽창 후 14일째에 바이러스-특이적 방관자 T 세포의 존재를 보여준다. 이들 세포는 또한 주로 중심 및 이펙터 기억 표현형이다. 도 10은 AML-특이적 농축 및 팽창 후 14일째에 바이러스-특이적 방관자 T 세포의 존재를 보여준다. 도 11은 MART-1 특이적 농축 및 팽창 과정 동안 CMV-특이적 방관자 T 세포의 검출을 보여준다. 바이러스-특이적 방관자 세포의 백분율은 14일까지 일정하게 (0.5 내지 1%) 유지되는 반면, MART-1 특이적 T 세포의 수 및 백분율은 급격히 증가한다.
도 12는 재조합 T 세포 성장 인자 칵테일 (IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-21, IFN-γ 및 MIP1-β)을 사용하여 MART-1-특이적 농축 및 팽창 후 14일째에 바이러스 특이적 방관자 세포의 검출을 보여주며, 아데노(Adeno), CMV, EBV 및 인플루엔자를 가로질러 다수의 에피토프를 겨냥한 바이러스 특이적 T 세포의 유지 및 방관자 팽창을 입증한다.
도 13a 및 도 13b에 도시된 바와 같이, Mart-1 특이적 T 세포는 팽창 동안 하기 사이토카인의 존재하에 농축 및 팽창 과정에 의해 생성되었다: IL-2, IL-4, IL-6, IFN-γ, 및 IL1-β. 이 사이토카인 칵테일의 조성은 표 1에 나타나 있다.
Figure pct00002
이 실험에서, 건강한 공여자로부터의 6.74 x 109개의 CD8+ 림프구를 상기 기재된 바와 같이 농축시켰다. 농축 후, 2.81 x 108개의 총 세포가 존재하였다. 팽창 14일째에, 총 세포의 1.88배 팽창을 나타내는, 5.28 x 108개의 총 세포가 존재하였다. 14일째에 이들 팽창된 세포는 MART-1에 대해 ~35% 특이적이며, 생존력이 약 94%였다 (도 13b). 105개의 전구체 세포 중 약 1개가 MART-1 특이적이라고 가정하면, MART-1 특이적 세포는 약 2776배 팽창되었다.
총 배양을 평가할 때, T 세포는 약 66% 중심 기억 및 약 32% 이펙터 기억의 표현형을 가졌다. 2% 미만의 세포는 나이브였고, TEMRA 세포의 양은 무시할만한 수준이었다. 또한, MART-1 특이적 세포는 약 89% 중심 기억 및 약 9% 이펙터 기억이었고, 2% 미만은 나이브이고, TEMRA 세포는 무시할 만한 수였다.
SEQUENCE LISTING <110> NEXIMMUNE, INC. <120> CELL COMPOSITIONS COMPRISING ANTIGEN-SPECIFIC T CELLS FOR ADOPTIVE THERAPY <130> NEX-010 <150> 62/561,044 <151> 2017-09-20 <150> 62/656,679 <151> 2018-04-12 <160> 13 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 1 Arg Met Phe Pro Asn Ala Pro Tyr Leu 1 5 <210> 2 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 2 Cys Met Thr Trp Asn Gln Met Asn Leu 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 3 Val Leu Asp Phe Ala Pro Pro Gly Ala 1 5 <210> 4 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 4 Ser Leu Gly Glu Gln Gln Tyr Ser Val 1 5 <210> 5 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 5 Val Leu Asp Gly Leu Asp Val Leu Leu 1 5 <210> 6 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 6 Asn Leu Thr His Val Leu Tyr Pro Val 1 5 <210> 7 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 7 Ser Leu Tyr Ser Phe Pro Glu Pro Glu Ala 1 5 10 <210> 8 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 8 Ala Leu Tyr Val Asp Ser Leu Phe Phe Leu 1 5 10 <210> 9 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 9 Ser Leu Leu Gln His Leu Ile Gly Leu 1 5 <210> 10 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 10 Glu Leu Thr Leu Gly Glu Phe Leu Lys Leu 1 5 10 <210> 11 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 11 Leu Asp Arg Glu Arg Ala Lys Asn Lys Ile 1 5 10 <210> 12 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 12 Phe Leu Asp Arg Phe Leu Ser Cys Met 1 5 <210> 13 <211> 11 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Synthetic Polypeptide <400> 13 Ser Leu Ile Ala Ala Ala Ala Phe Cys Leu Ala 1 5 10

Claims (83)

  1. 입양 면역요법에 적합한 단리된 세포 조성물로서, 상기 조성물은 약제학적으로 허용되는 담체에, 1가지 이상의 표적 펩티드 항원에 특이적인 적어도 106개의 CD8+ T 세포를 포함하며, 상기 조성물 중 T 세포의 적어도 20%는 중심 기억 또는 이펙터 기억 표현형을 나타내는, 단리된 세포 조성물.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 CD8+ T 세포는 1 내지 100개의 표적 펩티드 항원에 특이적인, 단리된 세포 조성물.
  3. 청구항 1에 있어서, 상기 조성물에서 표적 펩티드 항원을 향한 T 세포 특이성은 MHC 다량체(multimer) 염색에 의해 정의되는, 단리된 세포 조성물.
  4. 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 펩티드 항원은 종양 관련 항원인, 단리된 세포 조성물.
  5. 청구항 1 내지 4 중 어느 한 항에 있어서, 1가지 이상의 표적 펩티드 항원은 종양 유래 또는 종양 특이적 신생항원인, 단리된 세포 조성물.
  6. 청구항 1 내지 3 중 어느 한 항에 있어서, 1가지 이상의 표적 펩티드 항원은 박테리아, 바이러스, 진균 또는 기생충 항원인, 단리된 세포 조성물.
  7. 청구항 1 내지 6 중 어느 한 항에 있어서, 적어도 1, 2, 3, 4 또는 5가지의 표적 펩티드 항원에 특이적인 CD8+ T 세포를 포함하는, 단리된 세포 조성물.
  8. 청구항 7에 있어서, 상기 표적 펩티드 항원 중 적어도 1가지는 저빈도(low frequency) 전구체 T 세포에 의해 인식되는, 단리된 세포 조성물.
  9. 청구항 1 내지 8 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포 조성물은 적어도 90%의 T 세포인, 단리된 세포 조성물.
  10. 청구항 9에 있어서, 상기 세포 조성물은 적어도 98%의 T 세포인, 단리된 세포 조성물.
  11. 청구항 1 내지 9 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포 조성물은 상기 표적 펩티드 항원에 특이적인 적어도 5%의 CD8+ T 세포인, 단리된 세포 조성물.
  12. 청구항 11에 있어서, 상기 세포 조성물은 상기 표적 펩티드 항원에 특이적인 적어도 10%의 CD8+ T 세포인, 단리된 세포 조성물.
  13. 청구항 12에 있어서, 상기 세포 조성물은 상기 표적 펩티드 항원에 특이적인 적어도 15%의 CD8+ T 세포인, 단리된 세포 조성물.
  14. 청구항 4 또는 5에 있어서, 상기 세포 조성물은 박테리아, 바이러스 및/또는 진균 병원체에 특이적인 CD8+ T 세포를 추가로 포함하는, 단리된 세포 조성물.
  15. 청구항 14에 있어서, 박테리아, 바이러스 또는 진균 병원체에 특이적인 CD8+ T 세포는 인플루엔자, CMV, EBV, 및/또는 아데노바이러스의 항원에 특이적인 T 세포를 포함하는, 단리된 세포 조성물.
  16. 청구항 1 내지 15 중 어느 한 항에 있어서, 상기 T 세포는 적어도 30%의 중심 및 이펙터 기억 T 세포인, 단리된 세포 조성물.
  17. 청구항 16에 있어서, 상기 T 세포는 적어도 50%의 중심 및 이펙터 기억 T 세포인, 단리된 세포 조성물.
  18. 청구항 16에 있어서, 상기 T 세포는 적어도 70%의 중심 및 이펙터 기억 T 세포인, 단리된 세포 조성물.
  19. 청구항 16에 있어서, 상기 T 세포는 적어도 80%의 중심 및 이펙터 기억 T 세포인, 단리된 세포 조성물.
  20. 청구항 16 내지 19 중 어느 한 항에 있어서, 상기 1가지 이상의 표적 항원에 특이적인 T 세포는 적어도 50%의 중심 및 이펙터 기억 T 세포인, 단리된 세포 조성물.
  21. 청구항 20에 있어서, 상기 1가지 이상의 표적 항원에 특이적인 T 세포는 적어도 60%의 중심 및 이펙터 기억 T 세포인, 단리된 세포 조성물.
  22. 청구항 20에 있어서, 상기 1가지 이상의 표적 항원에 특이적인 T 세포는 적어도 70%의 중심 및 이펙터 기억 T 세포인, 단리된 세포 조성물.
  23. 청구항 20에 있어서, 상기 1가지 이상의 표적 항원에 특이적인 T 세포는 적어도 80%의 중심 및 이펙터 기억 T 세포인, 단리된 세포 조성물.
  24. 청구항 1 내지 23 중 어느 한 항에 있어서, 상기 중심 및 이펙터 기억 T 세포는 10:90 내지 90:10의 중심 대 이펙터 기억 세포인, 단리된 세포 조성물.
  25. 청구항 24에 있어서, 상기 중심 및 이펙터 기억 T 세포는 25:75 내지 75:25의 중심 대 이펙터 기억 세포인, 단리된 세포 조성물.
  26. 청구항 24에 있어서, 상기 중심 및 이펙터 기억 세포는 40:60 내지 60:40의 중심 대 이펙터 기억 T 세포인, 단리된 세포 조성물.
  27. 청구항 1 내지 26 중 어느 한 항에 있어서, 상기 T 세포는 20% 미만의 말단 분화된, 단리된 세포 조성물.
  28. 청구항 27에 있어서, 상기 T 세포는 10% 미만의 말단 분화된, 단리된 세포 조성물.
  29. 청구항 27에 있어서, 상기 T 세포는 10% 미만의 말단 분화된, 단리된 세포 조성물.
  30. 청구항 1 내지 29 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 20% 미만의 나이브 세포(naive cell)를 포함하는, 단리된 세포 조성물.
  31. 청구항 30에 있어서, 상기 조성물은 10% 미만의 나이브 세포를 포함하는, 단리된 조성물.
  32. 청구항 30에 있어서, 상기 조성물은 5% 미만의 나이브 세포를 포함하는, 단리된 조성물.
  33. 청구항 30에 있어서, 상기 조성물은 1.5% 미만의 나이브 세포를 포함하는, 단리된 조성물.
  34. 청구항 1 내지 33 중 어느 한 항에 있어서, T 기억 줄기세포를 추가로 포함하는, 단리된 조성물.
  35. 청구항 34에 있어서, 약 5% 내지 약 25%의 T 기억 줄기세포를 포함하는, 단리된 조성물.
  36. 청구항 1 내지 35 중 어느 한 항에 있어서, 상기 CD8+ T 세포는 활성화될 때 다작용성 표현형을 나타내는, 단리된 세포 조성물.
  37. 청구항 1 내지 36 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포 조성물은 10% 미만의 CD4+ T 세포인, 단리된 세포 조성물.
  38. 청구항 37에 있어서, 상기 세포 조성물은 5% 미만의 CD4+ T 세포인, 단리된 세포 조성물.
  39. 청구항 37에 있어서, 상기 세포 조성물은 2% 미만의 CD4+ T 세포인, 단리된 세포 조성물.
  40. 청구항 37에 있어서, 상기 세포 조성물은 1.5% 미만의 CD4+ T 세포인, 단리된 세포 조성물.
  41. 청구항 37에 있어서, 상기 세포 조성물은 1% 미만의 CD4+ T 세포인, 단리된 세포 조성물.
  42. 청구항 1 내지 41 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 키메라 항원 수용체 또는 재조합 TCR을 발현시키는 T 세포를 포함하지 않는, 세포 조성물.
  43. 청구항 1 내지 42 중 어느 한 항에 있어서, 상기 조성물은 공급원 세포로부터의 표적 펩티드 항원에 특이적인 CD8+ T 세포의 농축(enrichment); 및/또는 공급원 세포로부터의 표적 펩티드 항원에 특이적인 CD8+ T 세포의 팽창(expansion)에 의해 생성되는, 세포 조성물.
  44. 청구항 43에 있어서, 공급원 세포는 환자 또는 HLA-매칭된 공여자에서 유래하는, 세포 조성물.
  45. 청구항 43에 있어서, 공여자 세포는 백혈구성분채집술(leukapheresis)에 의해 단리되는, 세포 조성물.
  46. 청구항 43에 있어서, 상기 공급원 세포는 환자의 종양으로부터 단리되는, 세포 조성물.
  47. 청구항 43에 있어서, 상기 공급원 세포는 백혈구연층(buffy coat) 부분인, 세포 조성물.
  48. 청구항 43 내지 47 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포 공급원은 농축 전 또는 팽창 전에 CD4+ T 세포가 고갈되는, 단리된 세포 조성물.
  49. 청구항 43 내지 48 중 어느 한 항에 있어서, 상기 공급원 세포는 CD8+ 농축되는, 단리된 세포 조성물.
  50. 청구항 43 내지 49 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포 공급원은 NK 세포 고갈되는, 단리된 세포 조성물.
  51. 청구항 43 내지 50 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항원-특이적 T 세포는 MHC 클래스 I 리간드 및 선택적으로 보조자극 리간드를 갖는 aAPC에 의해 농축되는, 단리된 세포 조성물.
  52. 청구항 51에 있어서, 상기 aAPC는 CD28에 결합하는 리간드인 보조자극 리간드를 포함하는, 단리된 세포 조성물.
  53. 청구항 52에 있어서, 상기 보조자극 리간드는 CD28에 대한 작용제인 모노클로날 항체, 또는 이의 일부인, 단리된 세포 조성물.
  54. 청구항 1 내지 53 중 어느 한 항에 있어서, 상기 농축은 상자성 aAPC를 사용한 자기 농축(magnetic enrichment)이고, 상기 세포 및 aAPC는 적어도 1분 동안 자기장의 존재하에 선택적으로 인큐베이션되는, 단리된 세포 조성물.
  55. 청구항 1 내지 53 중 어느 한 항에 있어서, 상기 농축은 상자성 aAPC를 사용한 자기 농축이고, 상기 세포 및 aAPC는 적어도 5시간 또는 배양 기간 동안 자기장의 존재하에 선택적으로 인큐베이션되는, 단리된 세포 조성물.
  56. 청구항 1 내지 55 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포 및 aAPC는 약 5시간 이하 동안 자기장의 존재하에 인큐베이션되는, 단리된 세포 조성물.
  57. 청구항 1 내지 53 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항원-특이적 T 세포는 자기장을 사용하지 않고 농축 및/또는 팽창되는, 단리된 세포 조성물.
  58. 청구항 43 내지 53 중 어느 한 항에 있어서, 상기 농축된 세포는 1주 내지 4주 동안 배양으로 팽창되는, 단리된 세포 조성물.
  59. 청구항 58에 있어서, 상기 세포는 MIP-1β, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-15, IL-21, 및 INF-γ, 및 선택적으로 IL-10 중 1가지 이상의 존재하에 배양으로 팽창되는, 단리된 세포 조성물.
  60. 청구항 58에 있어서, 상기 세포는 MIP-1β, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-7, IL-15, IL-21, 및 INF-γ, 및 선택적으로 IL-10 중 2가지 또는 3가지의 존재하에 배양으로 팽창되는, 단리된 세포 조성물.
  61. 청구항 60에 있어서, 상기 세포는 MIP-1β, IL-1β, IL-2, IL-4, IL-6, IL-21, 및 INF-γ, 및 선택적으로 IL-10 중 1, 2, 3, 4 또는 5가지의 존재하에 배양으로 팽창되는, 단리된 세포 조성물.
  62. 청구항 60에 있어서, 상기 세포는 MIP-1β, IL-1β, 및 IL-6, 및 선택적으로 IL-10으로부터 선택된 적어도 1가지의 사이토카인의 존재하에 배양으로 팽창되는, 단리된 세포 조성물.
  63. 청구항 60에 있어서, 상기 세포는 IL-4의 존재하에 팽창되는, 단리된 세포 조성물.
  64. 청구항 60에 있어서, 상기 세포는 IL-4 및 IL-6의 존재하에 팽창되는, 단리된 세포 조성물.
  65. 청구항 60에 있어서, 상기 세포는 IL-4 및 IL-1β의 존재하에 팽창되는, 단리된 세포 조성물.
  66. 청구항 60에 있어서, 상기 세포는 IL-4, IL-6, 및 IL-1β의 존재하에 팽창되는, 단리된 세포 조성물.
  67. 청구항 60에 있어서, 상기 세포는 IL-2, IL-4, 및 IL-6의 존재하에 팽창되는, 단리된 세포 조성물.
  68. 청구항 60에 있어서, 상기 세포는 IL-2, IL-4, IL-6, INF-γ, 및 IL-1β, 및 선택적으로 IL-10의 존재하에 배양으로 팽창되는, 단리된 세포 조성물.
  69. 청구항 1 내지 68 중 어느 한 항에 있어서, 기능성 aAPC는 상기 조성물에서 검출될 수 없거나, 또는 상기 조성물은 1% 미만의 상기 aAPC 물질을 포함하는, 단리된 세포 조성물.
  70. 청구항 1 내지 69 중 어느 한 항에 있어서, 1가지 이상의 표적 펩티드 항원은 서바이빈, WT-1, PRAME, 사이클린 A1, 및 PR3의 펩티드 에피토프로부터 선택되는, 단리된 세포 조성물.
  71. 입양 면역요법에 적합한 단리된 세포 조성물로서, 상기 조성물은, 약제학적으로 허용되는 담체에,
    적어도 90%의 CD8+ T 세포 및 5% 미만의 CD4+ T 세포;
    1 내지 10가지의 표적 펩티드 항원에 특이적인 적어도 106개의 CD8+ T 세포, 및 박테리아, 바이러스, 진균 및/또는 기생충 병원체에 특이적인 CD8+ T 세포를 포함하는 CD8+ 세포를 포함하고,
    상기 CD8+ T 세포의 적어도 30%는 25:75 내지 75:25 비의 중심 기억 및 이펙터 기억 T 세포이고, 상기 CD8+ T 세포의 10% 미만은 말단 분화된 T 세포이고, 상기 CD8+ 세포의 10% 미만은 나이브 세포이고; 그리고
    상기 표적 펩티드 항원에 특이적인 CD8+ T 세포의 적어도 50%는 25:75 내지 75:25 비의 중심 기억 및 이펙터 기억 T 세포이고, 10% 미만의 말단 분화된 T 세포이고, 10% 미만의 나이브 세포인, 단리된 세포 조성물.
  72. 청구항 71에 있어서, 적어도 95%의 CD8+ T 세포 및 2% 미만의 CD4+ T 세포를 포함하는, 단리된 세포 조성물.
  73. 청구항 71 또는 72에 있어서, 상기 표적 펩티드 항원에 특이적인 적어도 107개 또는 108개의 CD8+ T 세포를 포함하는, 단리된 세포 조성물.
  74. 청구항 71 내지 73 중 어느 한 항에 있어서, 5% 미만의 말단 분화된 T 세포, 및/또는 5% 미만의 나이브 세포를 포함하는, 단리된 세포 조성물.
  75. 청구항 71 내지 73 중 어느 한 항에 있어서, 5% 내지 약 20%의 T 기억 줄기세포를 추가로 포함하는, 단리된 세포 조성물.
  76. 청구항 71 내지 75 중 어느 한 항에 있어서, 상기 표적 펩티드 항원은 종양 관련 항원이고, 혈액 악성 종양과 선택적으로 관련되는, 단리된 세포 조성물.
  77. 청구항 71 내지 76 중 어느 한 항에 있어서, 1가지 이상의 표적 펩티드 항원은 서바이빈, WT-1, PRAME, 사이클린 A1, 및 PR3의 펩티드 에피토프로부터 선택되는, 단리된 세포 조성물.
  78. 청구항 1 내지 77 중 어느 한 항의 상기 세포 조성물을, 필요한 환자에게 투여하는 단계를 포함하는, 암 환자를 치료하는 방법.
  79. 청구항 78에 있어서, 상기 환자는 혈액암을 갖는, 방법.
  80. 청구항 79에 있어서, 상기 혈액암은 동종이계 줄기세포 이식 후 재발된, 방법.
  81. 청구항 79 또는 80에 있어서, 상기 환자는 급성 골수성 백혈병 (AML) 또는 골수이형성 증후군을 갖는, 방법.
  82. 청구항 78 내지 81 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환자는 또한 상기 세포 요법의 투여 전에 림프-결실 요법, 또는 세포-감퇴 요법, 또는 면역조절 요법을 받는, 방법.
  83. 청구항 78 내지 82 중 어느 한 항에 있어서, 상기 세포 요법은 치료 후 사이토카인 지지(cytokine support)가 있거나 또는 없이 추가로 제공될 수 있는, 방법.
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Families Citing this family (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2587136A1 (en) 2004-11-24 2006-06-22 Fred Hutchinson Cancer Research Center Methods of using il-21 for adoptive immunotherapy and identification of tumor antigens
AU2019375997A1 (en) * 2018-11-08 2021-06-03 Neximmune, Inc. T cell compositions with improved phenotypic properties
TWI777160B (zh) * 2019-05-08 2022-09-11 美商百歐恩泰美國公司 T細胞製備組合物及方法
BR112023022765A2 (pt) 2021-05-05 2024-01-02 Immatics Biotechnologies Gmbh Proteínas de ligação ao antígeno que ligam especificamente o prame
EP4321613A1 (en) * 2021-05-07 2024-02-14 Yasuhito Tokumoto Method for producing memory t cells
CN113945715B (zh) * 2021-08-30 2023-04-21 四川大学华西医院 供者特异性IL-21和IFN-γ的检测方法及应用

Family Cites Families (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20050169898A1 (en) * 1997-04-15 2005-08-04 Jianlin Gong Cell fusions and methods of making and using the same
AU2012305931B2 (en) 2011-09-08 2017-09-07 Yeda Research And Development Co. Ltd Anti third party central memory T cells, methods of producing same and use of same in transplantation and disease treatment
US10316289B2 (en) 2012-09-06 2019-06-11 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Methods of producing T memory stem cell populations
KR20170078619A (ko) * 2014-09-17 2017-07-07 더 존스 홉킨스 유니버시티 항원-특이적 t 세포 식별, 농축, 및/또는 증식을 위한 시약 및 방법
EP3034092A1 (en) 2014-12-17 2016-06-22 Université de Lausanne Adoptive immunotherapy for treating cancer
SG11201705064XA (en) 2014-12-24 2017-07-28 Neximmune Inc Nanoparticle compositions and methods for immunotherapy
MA44314A (fr) * 2015-11-05 2018-09-12 Juno Therapeutics Inc Récepteurs chimériques contenant des domaines induisant traf, et compositions et méthodes associées
TW201621210A (zh) * 2016-02-26 2016-06-16 Liquidleds Lighting Corp 發光二極體光源及燈具
CN109475620A (zh) * 2016-03-16 2019-03-15 耐克西缪恩有限公司 抗原特异性t细胞的生产

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