KR20200098959A - 병원성 세균에 의한 질병의 예방 및 치료용 수의학적 조성물 - Google Patents

Abstract

병원성 세균에 의하여 발생하는 질병을 예방 및 치료함으로써 가축의 생산성 저하를 막을 수 있는 수의학적 조성물이 개시된다. 본 발명은 플로르페니콜(Florfenicol) 및 아세틸살리실산(Acetylsalicylic Acid)을 유효성분으로 포함하는 병원성 세균에 의한 질병의 예방 및 치료용 수의학적 조성물을 제공한다.

Description

병원성 세균에 의한 질병의 예방 및 치료용 수의학적 조성물{A veterinary composition for the prevention and treatment of diseases caused by pathogenic bacteria}

본 발명은 수의학적 조성물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 병원성 세균에 의한 질병의 예방 및 치료용 수의학적 조성물에 관한 것이다.

돼지 호흡기 복합감염증(PRDC, porcine respiratory disease complex)은 주로 육돈 및 비육돈에 발생하며, 발육부진, 사료효율 저하, 무기력, 식욕부진, 발열, 기침, 호흡장애를 특징으로 한다.

돼지 호흡기 복합감염증은 액티노바실러스 플루로뉴모니애(Actinobacilus pleurpneumoniae), 보르데텔라 브론키셉티카(Bordetella bronchiseptica), 파스투렐라 멀토시다(Pasteurella Multocida) 등의 혼합 감염에 의해 발생한다.

액티노바실러스 플루로뉴모니애(Actinobacilus pleurpneumoniae)는 급성 및 만성 경과를 취하는 돼지흉막 폐렴의 원인균으로 섬유소성 흉막염, 출혈성 괴사성 병변을 동반한다. 이 균에 의한 호흡기전염병은 환경이 불량하거나 밀집 사육 상태에서 흔히 발병되며, 이 병에 감염된 돼지는 폐사를 비롯한 발육지연과 사료효율의 저하를 가져와 양돈업에 많은 경제적 손실을 주는 질병이다.

파스투렐라 멀토시다(Pasteurella Multocida)는 돼지에서 호흡기내의 상재균인 동시에 호흡기 질환을 유발하는 병원체로서, 그람음성균으로 협막의 혈청형에 따라 A, B, D, E 및 F 형으로 분류된다. 145kDa의 독성 단백질을 암호화하는 toxA 유전자의 존재에 따라 독성이 결정이 되며 주로 A형이나 D형에서 나타나는 경향이 있다. A형은 돼지, 소 및 닭에서 기관지 폐렴을, D형은 돼지에서 위축성비염(atropicrhinitis; AR)을 일으키는 것으로 알려져 있다.

보르데텔라 브론키셉티카(Bordetella bronchiseptica)는 돼지 비점막의 상재균으로서 돼지 위축성 비염(Atropicrhinitis, AR)을 발생시키는 균으로, 돼지 위축성 비염에 걸릴 경우 재채기, 콧물의 양이 증가하고, 코막힘, 호흡곤란 및 성장 부진의 증상이 나타난다. 염증성 콧물이 나온 후 비출혈도 관찰된다.

등록특허 제1776274호는 플로르페니콜을 이용한 동물용 항생제에 관한 것으로서 주사제로 이용 가능한 항생제에 대하여 기재하고 있으나, 플로르페니콜을 이용한 세균성 질병의 예방 및 치료에 대하여는 기재하고 있지 않다.

따라서, 본 발명은 상기 문제점을 해결하고자 안출된 것으로, 병원성 세균에 의하여 발생하는 질병을 예방 및 치료함으로써 가축의 생산성 저하를 막을 수 있는 수의학적 조성물을 제공하고자 한다.

상기 과제를 해결하기 위하여 본 발명은, 플로르페니콜(Florfenicol) 및 아세틸살리실산(Acetylsalicylic Acid)을 유효성분으로 포함하는 병원성 세균에 의한 질병의 예방 및 치료용 수의학적 조성물을 제공한다.

또한, 상기 폴로르페니콜 및 아세틸살리실산의 함량 비는 1:2~1:10인 것을 특징으로 하는 수의학적 조성물을 제공한다.

또한, 상기 병원성 세균은 액티토바실러스 플루로뉴모니애(Actinobacillus pleuropneumoniae), 파스튜렐라 멀토시다 (Pasteurella Multocida) A형, 파스튜렐라 멀토시다(Pasteurella Multocida) D형 또는 보르데텔라 브론키셉티카 (Bordetella bronchiseptica)인 것을 특징으로 하는 수의학적 조성물을 제공한다.

또한, 상기 수의학적 조성물은 비타민 C(Ascorbic Aicd) 및 황산제1철 7수화물(FeSO4ㆍ7H2O)을 포함하는 것을 특징으로 하는 수의학적 조성물을 제공한다.

또한, 상기 수의학적 조성물은 가축용 사료 전체 조성물 함량 대비 0.005~2중량%인 것을 특징으로 하는 세균성 질병의 예방 및 치료용 수의학적 조성물을 제공한다.

본 발명은 수의학적 조성물에 있어 특정 화합물을 혼합함으로써 병원성 세균에 의한 질병을 예방 및 치료하고, 가축의 생산성 저하를 방지할 수 있는 수의학적 조성물을 제공할 수 있다.

도 1은 공격 접종 후 임상증상 변화를 측정한 결과를 나타낸 그래프.
도 2는 공격 접종 후 14일 까지의 평균일당 증체량을 측정한 결과를 나타낸 그래프,
도 3은 조직 별 파스튜렐라 멀토시다 균의 세균수를 측정한 결과를 나타낸 그래프,
도 4는 조직 별 보르데텔라 브론키셉티카 균의 세균수를 측정한 결과를 나타낸 그래프,
도 5는 병리학적 검사를 위하여 대조군의 폐를 촬영한 사진,
도 6은 병리학적 검사를 위하여 유행성 폐렴 증상을 보이는 대조군의 폐를 촬영한 사진,
도 7은 병리학적 검사를 위하여 처치군의 폐를 촬영한 사진,
도 8은 공격 접종 후 대조군 및 처치군의 페렴지수를 측정한 결과를 나타낸 그래프,
도 9는 대조군 및 처치군의 비중격과 비갑개의 소실 정도를 측정하기 위하여 촬영한 사진,
도 10은 대조군 및 처치군의 위축성 비염지수를 측정한 결과를 나타낸 그래프이다.

이하에서는 본 발명의 바람직한 실시예를 상세하게 설명한다. 본 발명을 설명함에 있어서 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 흐리게 할 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명을 생략하기로 한다. 명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한, 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성요소를 더 포함할 수 있음을 의미한다.

본 발명자들은 병원성 세균에 의한 질병의 예방 및 치료용 수의학적 조성물에 있어서, 액티노바실러스 플루로뉴모니애(Actinobacilus pleurpneumoniae), 보르데텔라 브론키셉티카(Bordetella bronchiseptica), 파스투렐라 멀토시다(Pasteurella Multocida)에 의한 호흡기 질환이 가축의 상품가치를 크게 저하시키고, 생산성 저하를 일으켜 출하 지연을 발생시켜 축산 농가에 막대한 경제적 손실을 발생시키고 있다는 사실에 직시하고, 이러한 문제점을 해결하기 위하여 예의 연구를 거듭한 결과, 플로르페니콜에 특정 물질을 혼합하여 수의학적 조성물을 제조하는 경우, 병원성 세균에 의해 발생하는 호흡기 질환을 예방하고 치료할 수 있음을 발견하고 본 발명에 이르게 되었다.

따라서, 본 발명은 플로르페니콜(Florfenicol) 및 아세틸살리실산(Acetylsalicylic Acid)을 유효성분으로 포함하는 병원성 세균에 의한 질병의 예방 및 치료용 수의학적 조성물을 개시한다.

상기 플로르페니콜(florfenicol)[2,2-디클로로-N-{1-(플루오로메틸)-2-히드록시-2-[4-(메틸설파닐)페닐]에틸}아세트아미드]은 백색 또는 엷은 황백색의 결정 또는 결정성 가루이며, 물에 녹기 어렵고 메탄올에는 잘 녹는다.

또한, 상기 플로르페니콜(Florfenicol)은 클로람페니콜(Chloramphenicol)계 항생제인 치암페니콜(D-d-트레오-2-디클로르아세트아미드-1-(4-메틸설포닐)페닐-1,33-프로판디올)의 3번 탄소의 히드록실기 대신에 불소로 치환한 유도체로서 클로람페니콜과 치암페니콜에 저항성을 나타내는 엔테로박터, 시겔라, 살모넬라 및 대장균과 같은 장내세균을 포함한 병원성 세균에 넓은 항균 스펙트럼을 갖고 있어 수의학적으로 많이 사용되고 있다. 또한, 상기 플로르페니콜은 클로람페니콜보다 분자생물학적으로 개선된 것으로서, 인체 및 동물에 대해 안전성이 더욱 우수하다. 또한, 플로르페니콜은 미생물의 리보솜(ribosome)에 직접 결합하여 단백질합성을 저해함으로써 항균활성을 나타낸다.

또한, 본 발명에서 상기 아세틸살리실산은 화학식 C₉H₈O_{4 ,} 녹는점은 135℃이며, 냄새가 없는 흰색 결정으로, 물에는 잘 녹지 않으나 알코올·에테르·클로로포름 등 유기용매(有機溶媒)에는 잘 녹는다. 또한, 상기 아세틸살리실산은 해열·진통·소염 작용이 있으며, 진통제나 류머티즘성 질환의 치료제로서 유효하나, 복용량이 지나치면 위(胃)에 장애를 일으킨다. 이 화합물의 칼슘염은 물에 잘 녹으므로 가용성 아스피린이라 하며, 의약품으로 널리 사용된다.

상기 플로르페니콜 및 아세틸살리실산이 혼합됨으로써 상기 플로르페니콜 및 아세틸살리실산을 각각 사용하는 경우보다 후술하는 병원성 세균에 의한 질병에 대하여 우수한 예방 및 치료효과를 나타낼 수 있다.

또한, 본 발명에서 상기 폴로르페니콜 및 아세틸살리실산의 함량 비는 1:2~1:10일 수 있고, 바람직하게는 1:4~1:9일 수 있고, 더욱 바람직하게는 1:6~1:8일 수 있다.

본 발명에서 상기 병원성 세균은 상기 병원성 세균은 액티토바실러스 플루로뉴모니애(Actinobacillus pleuropneumoniae), 파스튜렐라 멀토시다(Pasteurella Multocida) A형, 파스튜렐라 멀토시다(Pasteurella Multocida) D형 및 보르데텔라 브론키셉티카(Bordetella bronchiseptica)로 이루어진 군에서 선택된 1종 이상일 수 있다.

상기 액티노바실러스 플루로뉴모니애(Actinobacilus pleurpneumoniae)는 급성 및 만성 경과를 취하는 돼지흉막 폐렴의 원인균으로 섬유소성 흉막염, 출혈성 괴사성 병변을 동반한다. 이 균에 의한 호흡기전염병은 환경이 불량하거나 밀집 사육 상태에서 흔히 발병되며, 이 병에 감염된 돼지는 폐사를 비롯한 발육지연과 사료효율의 저하를 가져와 양돈업에 많은 경제적 손실을 주는 질병이다.

또한, 상기 파스투렐라 멀토시다(Pasteurella Multocida)는 돼지에서 호흡기내의 상재균인 동시에 호흡기 질환을 유발하는 병원체로서, 그람음성균으로 협막의 혈청형에 따라 A, B, D, E 및 F 형으로 분류되며, 145kDa의 독성 단백질을 암호화하는 toxA 유전자의 존재에 따라 독성이 결정이 되며 주로 A형이나 D형에서 나타나는 경향이 있다.

상기 파스투렐라 멀토시다(Pasteurella Multocida) A형은 돼지, 소 및 닭에서 기관지 폐렴을, 파스투렐라 멀토시다(Pasteurella Multocida) D형은 돼지에서 위축성비염(atropicrhinitis; AR)을 일으키는 것으로 알려져 있다.

또한, 상기 보르데텔라 브론키셉티카(Bordetella bronchiseptica)는 돼지 비점막의 상재균으로서 돼지 위축성 비염(Atropicrhinitis, AR)을 발생시키는 균으로, 돼지 위축성 비염에 걸릴 경우 재채기, 콧물의 양이 증가하고, 코막힘, 호흡곤란 및 성장 부진의 증상이 나타난다. 염증성 콧물이 나온 후 비출혈도 관찰된다.

이와 같이, 상기 병원성 세균에 의해 발생한 질병은 호흡기 질환일 수 있으며, 상기 호흡기 질환은 돼지 호흡기 복합감염증, 흉막 폐렴, 패혈증 등 일 수 있다.

본 발명에 따른 플로르페니콜 및 아세틸살리실산을 유효성분으로 함유하는 수의학적 조성물은 상기 병원성 세균에 의한 질병을 예방하고 또한 치료할 수 있다.

본 발명에서 상기 수의학적 조성물은 비타민 C(Ascorbic Aicd) 및 황산제1철 7수화물(FeSO4ㆍ7H2O)을 더 포함할 수 있다.

상기 수의학적 조성물은 비타민 C 및 황산제1철 7수화물(FeSO4ㆍ7H2O)을 추가로 더 포함함으로써 상기 병원성 세균에 의해 발생한 질병에 대한 상기 수의학적 조성물의 예방 및 치료효과를 향상시킬 수 있으며, 구체적으로 상기 병원성 세균에 의한 질병이 발생한 가축의 식욕 감퇴와 성장률 둔화 현상이 나타나지 않도록 하거나 이의 극복 시점을 앞당길 수 있다.

본 발명에서 상기 수의학적 조성물 100중량%에 대하여 상기 플로르페니콜은 1~10중량%일 수 있고, 바람직하게는 2~6중량%일 수 있으며, 상기 아세틸 살리실산은 10~50중량%일 수 있고, 바람직하게는 20~40중량%일 수 있으며, 상기 비타민 C는 1~10중량%일 수 있고, 바람직하게는 3~7중량%일 수 있으며, 상기 황산제1철 7수화물(FeSO4ㆍ7H2O)은 0.5~10중량%일 수 있으며, 바람직하게는 1~5중량%일 수 있고, 추가로 후술하는 부형제를 적량 포함할 수 있으며, 상기 부형제는 말분 및 석회석 분말을 사용할 수 있다.

또한, 본 발명에서 상기 "예방"은 본 발명의 조성물의 투여로 인하여 동물의 면역력을 향상시켜 상기 병원성 세균에 의한 질병이 발생하지 않거나 발생 정도를 완하시키는 행위를 의미하며, 상기 "치료"는 본 발명의 조성물의 투여로 인하여 동물에게 발생된 상기 병원성 세균에 의한 질병이 호전 또는 이롭게 변경하는 행위를 의미하며, 임상적 증상을 없애거나 발생 정도를 완화하는 행위를 의미한다. 예를 들어, 상기 "치료"는 부작용 또는 스트레스 증상들 중에서 하나 이상의 증상 또는 상태의 완화 또는 개선, 증상 범위의 축소, 증상의 안정화 비확산, 증상 발생의 억제, 증상진행의 지연 또는 늦춤, 증상 상태의 개선 또는 경감, 및 부분적 또는 전체적인 증상 발생의 감퇴를 포함할 수 있다.

또한, 상기 수의학적 조성물은 상기 수의학적 조성물이 약학적 조성물의 형태로 제공이 되는 경우에는, 본 발명의 상기 혼합물 이외에 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체 또는 희석제를 추가로 함유할 수 있다.

또한, 상기에서 "약학적으로 허용되는"이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 활성성분의 작용을 저해하지 않으며 통상적으로 위장 장애, 현기증과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 비독성의 조성물을 말한다.

약학적으로 허용되는 담체로는 예컨대, 경구 투여용 담체 또는 비경구 투여용 담체를 추가로 포함할 수 있다. 경구 투여용 담체는 락토스, 전분, 셀룰로스 유도체, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 등을 포함할 수 있다. 아울러, 펩티드 제제에 대한 경구투여용으로 사용되는 다양한 약물전달물질을 포함할 수 있다. 또한, 비경구 투여용 담체는 물, 적합한 오일, 식염수, 수성 글루코오스 및 글리콜 등을 포함할 수 있으며, 안정화제 및 보존제를 추가로 포함할 수 있다. 적합한 안정화제로는 아황산수소나트륨, 아황산나트륨 또는 아스코르브산과 같은 항산화제가 있다. 적합한 보존제로는 벤즈알코늄 클로라이드, 메틸- 또는 프로필-파라벤 및 클로로부탄올이 있다. 본 발명의 약학적 조성물은 상기 성분들 이외에 윤활제, 습윤제, 감미제, 향미제, 유화제, 현택제 등을 추가로 포함할 수 있다. 그 밖의 약학적으로 허용되는 담체 및 제제는 다음의 문헌에 기재되어 있는 것을 참고로 할 수 있다(Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995).

본 발명의 조성물이 포유동물에게 투여 시, 경구 또는 비경구적으로 투여할 수 있다. 비경구적인 투여방법으로는 이에 한정되지는 않으나, 정맥내, 근육내, 동맥내, 골수내, 경막내, 심장내, 경피, 피하, 복강내, 비강내, 장관, 국소, 설하 또는 직장내 투여일 수 있다.

또한, 본 발명에 따른 상기 수의학적 조성물은 사료에 혼합되어 가축에게 제공될 수 있으며, 상기 수의학적 조성물은 가축용 사료 전체 조성물의 함량 대비 0.005~2중량%일 수 있고, 바람직하게는 0.01~1.5중량%일 수 있고, 더욱 바람직하게는 0.05~1중량%일 수 있다.

상기 수의학적 조성물 함량이 가축용 사료 전체 조성물의 함량 대비 0.005중량% 미만이면, 호흡기 질병에 대한 예방 및 치료효과가 저하될 수 있고, 2중량%를 초과하면, 첨가량 대비 호흡기 질병에 대한 예방 치료 효능이 향상되지 않아 경제적이지 못하고, 가축이 사료 섭취 시 과도한 약물을 섭취하여 스트레스가 증가할 수 있다.

또한, 상기 수의학적 조성물은 영양 보충제, 소화 및 흡수 향상제, 성장 촉진제 등을 더 포함할 수 있으며, 상기 사료는 곡물(예를 들면. 분쇄 또는 파쇄된 밀, 귀리, 보리, 옥수수, 쌀), 식물성 단백질 사료(예를 들면, 평지, 콩, 및 해바라기를 주성분으로 하는 사료), 동물성 단백질 사료(예를 들면, 혈분, 육분, 골분 및 생선분), 당분 및 유제품(예를 들면 각종 분유 및 유장 분말로 이루어지는 건조 성분 등)을 더 포함할 수 있으며 동물에게 단독으로 투여하거나 식용 담체 중에서 다른 사료와 조합하여 투여할 수도 있고, 또한, 상기 사료는 탑 드레싱으로서 또는 이들을 동물 사료에 직접 혼합하거나 또는 사료와 별도의 경구 제형으로 용이하게 동물에게 투여할 수 있다.

또한, 상기 수의학적 조성물을 동물 사료와 별도로 투여할 경우, 당해 기술분야에 잘 알려진 바와 같이 약제학적으로 허용 가능한 식용 담체와 조합하여, 즉시 방출 또는 서방성 제형으로 제조할 수 있다. 이러한 식용 담체는 고체 또는 액체, 예를 들어 옥수수 전분, 락토오스, 수크로오스, 콩 플레이크, 땅콩유, 올리브유, 참깨유 및 프로필렌 글리콜일 수 있고, 고체 담체가 사용될 경우, 사료는 정제, 캡슐제, 산제, 트로키제 또는 함당정제 또는 미분산성 형태의 탑 드레싱일 수 있으며, 액체 담체가 사용될 경우, 사료는 젤라틴 연질 캡슐제, 또는 시럽제나 현탁액, 에멀젼제, 또는 용액제의 제형일 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.

이하, 본 발명에 따른 구체적인 실시예를 들어 설명한다.

실시예 1

플로르페니콜(ZHEJIANG KANGMU PHARMACEUTICAL. CO., LTD) 40g, 아세틸 살리실산(JQC(HUAYN)PHARMACEUTICAL. CO.,LTD) 300g, 비타민 C(DSM KOREA) 50g, 황산제1철 7수화물(덕산) 25g, 말분(대한제분) 234g 및 석회석 분말(뉴시나브로) 351g을 혼합하여 조성물을 제조하였으며, 상기 제조는 동물약품공정서 제제총칙 중 산제 제법에 준하여 제조하였다.

실시예 2

플로르페니콜(ZHEJIANG KANGMU PHARMACEUTICAL. CO., LTD) 40g, 아세틸 살리실산(JQC(HUAYN)PHARMACEUTICAL. CO.,LTD) 300g, 말분(대한제분) 264g 및 석회석 분말(뉴시나브로) 396g을 혼합하여 조성물을 제조하였으며, 상기 제조는 동물약품공정서 제제총칙 중 산제 제법에 준하여 제조하였다.

제조예 1

상기 실시예 1에서 제조된 조성물을 사료(2호, 아이피드) 1톤당 1kg을 첨가하여 사료를 제조하였다.

제조예 2

상기 실시예 2에서 제조된 조성물을 사료(2호, 아이피드) 1톤당 1kg을 첨가하여 사료를 제조하였다.

실험예

1. 재료 및 방법

실험 디자인 :

실험실 내 공격 시험을 위하여 2개 그룹으로 나누어 상기 제조예 1에서 제조된 사료를 급여한 군(처치군)과 상기 제조예 2에서 제조한 사료를 급여한 군(대조군)으로 나누어 실험 디자인을 설정하였다.

사료를 급여하기 전 3일간 절식을 실시한 후 파스튜렐라 멀토시다(Pasteurella multocida) A형, D형 및 보르데텔라 브론키셉티카(Bordetella bronchiseptica)를 혼합하여 비강으로 접종하고 사료 급여를 시작하였다. 공격접종 이후 2주간 임상 모니터링을 실시하고 매주 채혈 및 체중을 측정하였으며, 실험 디자인과 처치 일정을 하기 표 1 및 2에 나타내었다.

공시돈 선정 및 사양관리 :

PRRS(Porcine Reproductive and Respiratory Syndrome virus) 및 주요 병원체 음성이 확인된 4주령 자돈 6두(도원농장, 전북정읍소재)를 공시한 후 3두는 처치군, 3두는 대조군으로 구분하였다.

각 그룹의 자돈들은 온도 25℃와 습도 60%로 유지되는 항온항습 자돈용 인큐베이터 2대에 입식하고 제조예 1 및 제조예 2에서 제조된 사료를 급여하기 전 3일간 절식을 실시한 후, 사료를 급여하였으며, 사육 기간동안 급수는 무제한으로 공급하였다.

공격 접종 :

급성 및 만성 호흡곤란, 기침 및 위축성 비염을 일으키는 주요 호흡기 세균인 파스튜렐라 멀토시다(Pasteurella multocida) A형, D형 및 보르데텔라 브론키셉티카(Bordetella bronchiseptica)를 전북대학교 동물질병진단센터에 의뢰된 호흡기 증상의 자돈에서 채취하였다.

처치군 및 대조군의 자돈들에게 아자페론(StressGuard) 0.5ml를 근육접종하여 근육이완과 진정 상태를 유도한 후 파스튜렐라 멀토시다(Pasteurella multocida) A형, D형 및 보르데텔라 브론키셉티카(Bordetella bronchiseptica)를 각각 1x10⁹CFU(Colony Forming Unit)/ml의 역가로 배양하여 혼합한 접종액을 양쪽 비강에 1ml씩 총 2ml을 나살스프레이(nasal sprayer)를 이용하여 접종하였다.

2. 시료 채취, 조사 항목 및 방법

혈액 및 비강 스왑 채취 :

28일령(공격 접종 전), 31일령(공격접종 일), 38일령 (공격 접종 1주 후), 45일령(공격 접종 2주 후)에 채혈 및 혈청 분리를 실시하고 비강스왑을 채취하여 실험시점까지 -80℃에 보관하였다.

임상 증상 관찰 :

공시돈의 임상 증상은 하기 표 3의 임상 점수 기준에 따라 그룹별로 28일령(공격 접종 전), 31일령(공격접종 일), 38일령 (공격 접종 1주 후), 45일령(공격 접종 2주 후)에 공시돈의 체온, 보행, 피모상태 및 폐사율 등을 측정하여 비교하여 그 결과를 도 1에 나타내었다.

그룹별 임상증상 점수의 통계분석은 Mann-whitney 방법을 이용하여 유의성 여부를 확인하였다.

생산성 관련 일당 증체량 분석 :

28일령(공격 접종 전), 31일령(공격접종 일), 38일령 (공격 접종 1주 후), 45일령(공격 접종 2주 후)에 공시돈의 체중을 측정하여, 일당증체량을 분석하였고, 그 결과를 도 2에 나타내었다.

그룹별 일당증체량의 통계 분석은 Mann-whitney 방법을 이용하여 유의성 여부를 확인하였다.

비강 및 조직 내 세균 수 측정 :

대조군 및 처리군의 자돈의 비강 및 조직 스왑을 실시하였다. 스왑 샘플은 채취 후 즉시 배지가 든 용기에 넣어 연구실로 동시에 운송하였다. 스왑 샘플은 -80℃에 보관하였다. 선별된 샘플은 인산완충식염수(PBS, Phosphate buffer saline)에 단계 희석하여 5%의 면양의 혈액(Sheep blood)이 포함된 혈액 배지(5%의 면양 적혈구가 포함된 Tryptic Soy Agar, Sigma-Aldrich)에 200㎕씩 도말하고 37℃에서 하루 동안 배양하여 형성된 집락 중 특이적인 파스튜렐라 멀토시다 (Pasteurella Multocida ) A형, 파스튜렐라 멀토시다( Pasteurella Multocida ) D형 또는 보르데텔라 브론키셉티카(Bordetella bronchiseptica)의 집락 수를 측정하여 산출하였고 ,그 결과를 도 3 및 도 4에 나타내었다.

그룹별 검출 세균 수는 Mann-whitney 방법을 이용하여 유의성 여부를 확인하였다.

병리조직학적 검사

1) 병리조직 샘플

공격 접종 2주가 경과된 시점인 45일령에 부검을 실시하여 각 장기의 육안적 소견(부검결과)을 기록하고, 실질장기의 조직표본 제작을 위해 폐, 편도, 폐문림프절, 장간막림프절 및 악하림프절 등 주요 장기를 10% 포르말린에 고정하였다.

2) 병리조직학적 관찰 및 분석 방법

포르말린에 고정한 조직은 포매 과정을 거쳐 헤마톡실린&이오신(Hematoxylin & Eosin)염색을 실시한다. H&E 염색이 된 장기는 각각 현미경으로 관찰하여 병변을 폐병변지수는 하기 측정 방법에 따라 측정하고, 그 결과를 도 5 내지 10에 나타내었다.

(1) 폐렴지수(pneumonia score)은 육안 및 촉진검사를 실시 후 각 폐엽의 병변은 Pointonet al(1999)의 추정 용적비에 따라 좌·우첨엽(apical lobes), 좌·우심장 엽(cardiac lobes), 중간엽(intermediate lobes)은 각각 10%의 비중을 두고, 좌·우 횡격막엽(diaphramatic lobes)은 각각 25%로 폐 전체에 대한 유행성폐렴의 특징적인 적자색 부위를 percent로 환산하여 폐 전체에 대한 폐렴지수로 기록한다.

- 0 : 0%

- 1 : 1∼10%

- 2 : 11∼20%

- 3 : 21∼30%

- 4 : 31∼40%

- 5 : 41% 이상

(2) 위축성비염(Atrophic rhnitis)는 1번과 2번 전구치 사이를 절단하여 관찰할 수 있는 비중격과 비갑개의 소실 정도를 하기 표 4의 기준에 따라 판단하여 0-5의 지수로 평가하였다.

통계 분석 :

연속변수인 경우 그룹별 평균의 차이를 통한 귀무가설의 기각 혹은 채택을 위해서는 repeated measure of ANOVA를 이용하거나 시간별 비교는 Student's T test를 실시한다. SPF 자돈을 사용해야 하는 실험의 특성상 많은 동물 수를 사용할 수 없어 모집단의 정규 분포를 규정할 수 없다고 판단될 경우 Mann-Whitney U test 나 Wilcoxon signed-rank test를 실시한다. 연속변수가 아닌 경우 두 그룹 간의 비교에는 카이스퀘어 검정을 실시한다.

3. 실험결과

1) 임상 증상

도 1을 참조하면, 처치군의 일부 자돈의 피모가 약간 거칠어지는 것 외에 눈에 띄는 임상증상은 보이지 않았으나 대조군은 공격 접종 이후 7일부터 무기력 및 호흡기 증상 등의 임상증상이 관찰되었다.

2) 증체량 분석결과

도 2를 참조하면, 처치군의 평균일당증체량은 0.16kg으로 대조군의 평균일당증체량(0.32)보다 낮았으나 통계적인 유의성은 관찰되지 않았다.

3) 비강 및 조직 내 세균 수 측정 결과

도 3을 참조하면, 공격 접종 7일의 대조군과 처치군의 비강 내 파스튜렐라 멀토시다 균의 평균 집락 수는 1.51×10⁴CFU/ml와 9.67×10³CFU/ml이었고, 공격 접종 14일의 대조군과 처치군의 기도 내 파스튜렐라 멀토시다 균의 평균 집락 수는 7.50×10¹CFU/ml과 1.67×10¹CFU/ml 이었다. 또한 공격 접종 14일의 폐 조직 내 파스튜렐라 멀토사다 균의 집락 수는 대조군에서만(4.17×10¹CFU/ml) 관찰되었다.

모든 시기에서 대조군이 처치군보다 각 조직 별 파스튜렐라 멀토시다 균의 집락 수가 유의성 있게 높았다.

도 4를 참조하면, 보르데텔라 브론키셉티카 균의 집락 수는 공격 접종 7일의 대조군과 처치군의 비강 내에서만 검출되었으며, 공격 접종 14일의 조직에서 관찰되지 않았다. 또한, 대조군의 비강 내 보르데텔라 브론키셉티카 균의 평균 집락 수는 1.00×10³CFU/ml로 처치군보다(5.00×10²CFU/ml) 높았고, 그룹 간 유의성은 없었다.

4) 병리조직학적 검사 결과

도 5 및 도 6을 참조하면, 대조군의 각 폐엽의 모서리에서 적자색 부위가 관찰되었고, 폐가 부풀어 있음을 알 수 있고, 특히 대조군의 한 자돈의 좌 횡격막엽 및 심장엽의 모서리가 세균 감염에 의해 적자색으로 변화된 것을 알 수 있다.

반면, 도 7을 참조하면, 처치군은 폐가 전체적으로 핑크빛을 띄며 정상적인 부검소견을 보였으며, 도 8을 참조하면, 폐렴 지수도 부검 소견과 동일하게 대조군(26.67%)이 처치군(1.67%)보다 유의성 있게 높은 수준이었다.

또한, 도 9를 참조하면, 비중격과 비갑개를 관찰한 결과, 처치군은 정상돼지와 비슷하게 병변이 없는 것으로 확인되었으며 대조군은 비갑개의 불규칙한 모양이 관찰되었고, 일부 비갑개 조직이 손상되어 비강의 구조가 넓어져 보였으며, 도 10을 참조하면, 위축성 비염 지수는 대조군(평균 지수 : 2)이 처치군(평균 지수 : 1.3)보다 높은 것을 알 수 있다.

상기 실험예의 결과를 참조하면, 처치군은 대조군과 비교하여 통계적으로 유의성 있게 낮은 수준의 임상증상과 병리학적 병변(폐렴 및 위축성 비염)이 관찰되었다.

또한 처치군의 비강과 조직 내에서 대조군보다 낮은 수준의 파스튜렐라 멀토시다 및 보르데텔라 브론키셉티카 균의 집락 수를 보여 본 발명에 따른 수의학적 조성물이 대조 약제와 비교할 때 보다 높은 항균 및 항염증 효과가 있는 것을 알 수 있다.

또한 본 발명에 따른 수의학적 조성물을 처치한 그룹에서 대조 약제 급여군과 비교하여 특이한 부작용이 관찰되지 않아 안전성에도 문제가 없는 것을 알 수 있다.

이와 같이, 본 발명에 따른 수의학적 조성물의 경우, 플로르페니콜 및 아세틸 살리실산을 혼합함으로써 병원성 세균에 의한 질병의 예방 및 치료를 할 수 있어 가축의 생산량 저하를 방지할 수 있는 수의학적 조성물을 제공할 수 있게 된다.

Claims (5)

1. 플로르페니콜(Florfenicol) 및 아세틸살리실산(Acetylsalicylic Acid)을 유효성분으로 포함하는 병원성 세균에 의한 질병의 예방 및 치료용 수의학적 조성물.
2. 제1항에 있어서,
   상기 폴로르페니콜 및 아세틸살리실산의 함량 비는 1:2~1:10인 것을 특징으로 하는 수의학적 조성물.
3. 제1항에 있어서,
   상기 병원성 세균은 액티토바실러스 플루로뉴모니애(Actinobacillus pleuropneumoniae), 파스튜렐라 멀토시다 (Pasteurella Multocida) A형, 파스튜렐라 멀토시다(Pasteurella Multocida) D형 또는 보르데텔라 브론키셉티카 (Bordetella bronchiseptica)인 것을 특징으로 하는 수의학적 조성물.
4. 제1항에 있어서,
   상기 수의학적 조성물은 비타민 C(Ascorbic Aicd) 및 황산제1철 7수화물(FeSO4ㆍ7H2O)을 포함하는 것을 특징으로 하는 수의학적 조성물.
5. 제1항에 있어서,
   상기 수의학적 조성물은 가축용 사료 전체 조성물 함량 대비 0.005~2중량%인 것을 특징으로 하는 세균성 질병의 예방 및 치료용 수의학적 조성물.
   
   
   
   
   
   

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