KR20200097765A - 항-trem2 항체 및 관련 방법 - Google Patents

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KR20200097765A
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벤카타라만 스리람
아리트라 팔
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파이오니어 임뮤노테라퓨틱스, 인코퍼레이티드
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Abstract

항-TREM2 항체 및 항-TREM2 항체를 제조 및 사용하는 관련 방법이 본원에 제공된다. 또한, 항-TREM2 항체 또는 이의 항원 결합 단편을 사용하여 비-자극성 골수 세포를 사멸, 무력화 또는 고갈시키는 단계를 포함하는, 개체에서 면역 반응을 향상시키고/시키거나 면역-관련 병태, 예를 들어, 암을 치료하기 위한 방법 및 조성물이 제공된다.

Description

항-TREM2 항체 및 관련 방법
관련 출원에 대한 교차 참조
본원은 2017년 12월 12일자로 출원된 미국 가특허출원 62/597,827, 및 2018년 3월 26일자 출원된 미국 가특허출원 62/648,089의 이익을 주장하며, 이들 각각은 그 전문이 모든 목적을 위해 본원에 참조로 포함되어 있다.
서열 목록
본원은 그 전체가 본원에 참조로 포함된, EFS-Web을 통해 제출된 서열 목록을 포함한다. 20XX년 XX월에 작성된 상기 ASCII 사본의 명칭은 XXXXXUS_sequencelisting.txt이며, 크기는 X,XXX,XXX 바이트이다.
배경
면역은 종양 증식을 방지하는데 있어서 일정 역할을 한다. 복잡한 미세환경이 병변 내에서 발달할 수 있으며, T-세포의 동원에도 불구하고, 종종 덩어리(mass)의 발달을 효과적으로 제어하지 못한다. 종양 제거와 종양 도피 사이의 균형의 이해는 종양 미세환경에서 골수 세포가 작용하는 차별적인 역할의 이해에 의존할 수 있다.
종양 미세환경의 골수 집단은 단핵구 및 호중구 (때때로 골수-유래 억제 세포로 대략적으로 그룹화됨), 대식세포 및 수지상 세포를 현저하게 포함한다. 종양내 골수성 집단이 전체적으로 비-자극성 또는 억제성으로 간주되어 왔지만, 모든 종양-침윤성 골수 세포가 동일하게 만들어지는 것은 아니라는 것이 더욱 최근에 인식되었다.
정상 조직에서, 이들 골수 세포의 다수는 선천성 및 적응성 면역 둘 다의 적절한 기능 및 특히 상처 복구에 필수적이다. 그러나, 암 환경에서는, 현저한 과량의 대식세포 및 이들 및 다른 세포 유형의 기능이상 또는 편향된 집단이 일반적으로 기술된다. CD68 또는 CD163과 같은 단일 마커에 의해 정의된 응집체 집단으로 간주될 때, "대식세포" 침윤은 다수의 종양 유형에 걸쳐 대상체에서 더 나쁜 결과와 상관관계가 있다 ((de Visser, Cancer Immunol Immunother, 2008;57:1531-9); (Hanada et al., Int J Urol 2000;7:263-9); (Yao et al. Clin Cancer Res, 520, 2001;7:4021-6); (Ruffell et al., PNAS, 523 2012;109:2796-801)). 그러나, 종양 미세환경으로부터 대식세포의 표현형 및 기능적 하위-설정은 대식세포 및 수지상 세포의 유사성으로 인해 복잡하고, 종양 생물학에서 문제가 된다. 형태학적 기준이 종종 이 문제에 적용되어 왔으며; 수지상 세포를 대식세포로부터 구별하는 한 가지 접근법은 수지상 세포의 경우 더 뾰족하거나 수지상 형태이고 대식세포의 경우에는 더 불분명하거나 구상인 형태에 기초하였다 (Bell et al., J Exp Med 555, 1999;190:1417-26). 다른 그룹은 유전적 및 세포-표면 마커를 기준으로 차별화를 시도하고 있다.
종양 내의 항원-제시 구획에는 다양성이 있으며, T-세포는 항원-제시 세포 (APC)의 특징을 구별할 수 있다. T 세포는 종양 면역의 주요 동인이므로, 동족 APC의 정확한 특징을 이해하는 것이 중요할 것이다. 골수 세포는 T-세포에 종양-유래 항원을 제시하여 이를 활성화 상태로 유지할 수 있는 세포 중에서 현저하다. 항원 제시는 종양 자체에서 발생하며 종양 세포독성 T-림프구 (CTL)의 기능에 영향을 줄 수 있다. 항원 제시 세포 (APC)에 의한 T-세포 활성화는 항원-특이적 면역 반응 및 종양 세포 사멸에서 중요한 요소이다. 이러한 골수성 집단은 들어오는 종양-반응성 세포독성 T 림프구에 대한 주요 T-세포-상호작용 파트너 및 항원-제시 세포를 나타내므로, 이들의 구별을 이해하면 치료 방안을 이끌 수 있다.
관련 특허 출원은 2015년 9월 28일자로 출원된 PCT/US2015/052682; 및 2016년 9월 28일자로 출원된 PCT/US2016/054104을 포함하며; 이들 각각은 그 전문이 모든 목적을 위해 본원에 참조로 포함된다.
본원에 인용된 모든 특허, 특허 출원, 공보, 문서 및 논문은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다.
요약
인간 TREM2 (서열 번호:15)에 결합하고 마우스 TREM2 (서열 번호:17)와의 결합에 대해 37017 항체 (서열 번호: 31 및 32)와 경쟁하는 단리된 항체가 본원에 기재된다.
일부 구현예에서, 항체는 서열 번호: 9에 기재된 서열을 포함하는 CDR-H1, 서열 번호:10에 기재된 서열을 포함하는 CDR-H2, 서열번호:11에 기재된 서열을 포함하는 CDR-H3, 서열번호: 12에 기재된 서열을 포함하는 CDR-L1, 서열 번호: 13에 기재된 서열을 포함하는 CDR-L2, 및 서열 번호: 14에 기재된 서열을 포함하는 CDR-L3을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 탈푸코실화되고(afucosylated), 서열 번호: 1로 나타낸 VH 서열; 서열 번호: 2로 나타낸 VL 서열; 및 활성 인간 IgG1 Fc 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 서열 번호:7로 나타낸 서열의 모든 3개의 중쇄 CDR 및 서열 번호:8로 나타낸 서열의 모든 3개의 경쇄 CDR을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 서열 번호:7로 나타낸 서열의 97번 위치에 A에서 T 치환; 및 서열 번호:7로 나타낸 서열의 98번 위치에서 K에서 R 치환을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 서열 번호: 1, 3, 또는 5로 나타낸 VH 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 서열 번호: 1, 3 또는 5로 나타낸 VH 서열 및 서열 번호: 2, 4 또는 6으로 나타낸 VL 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 서열 번호: 1로 나타낸 VH 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 서열 번호: 1로 나타낸 VH 서열 및 서열 번호: 2로 나타낸 VL 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 37012 항체이다.
일부 구현예에서, 항체는 서열 번호: 25로 나타낸 중쇄 서열 및 서열 번호: 26으로 나타낸 경쇄 서열을 포함한다.
또 다른 측면에서, 인간 TREM2 (서열 번호:15)에 결합하는 n 단리된 항체가 본원에 기재되며, 여기서 항체는 마우스 TREM2 (서열 번호:17)와의 결합에 대해 37017 항체 (서열 번호: 31 및 32)와 경쟁하고; 활성 인간 Fc 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 인간, 인간화된 또는 키메라 항체이다.
일부 구현예에서, 항체는 인간화된 항체이다.
일부 구현예에서, 항체는 표면 플라즈몬 공명 (SPR) 분석법에 의해 측정될 때, 약 1, 2, 3, 4, 또는 5x10-9보다 적거나 이와 같은 KD로 인간 TREM2에 결합한다.
일부 구현예에서, 항체는 TREM2+ 골수 세포; 선택적으로 비-자극성 골수 세포를 특이적으로 사멸, 고갈 또는 무력화(disabling)시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 항체는 항체-의존 세포-매개 세포독성 (antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity; ADCC) 활성을 갖는다. 일부 구현예에서, 항체는 항체-매개 세포 식균작용 (antibody-mediated cellular phagocytosis; ADCP) 활성을 갖는다. 일부 구현예에서, 항체는 보체-의존 세포독성 (CDC) 활성을 갖는다.
일부 구현예에서, 항체는 항체-의존 세포-매개 세포독성 (ADCC), 항체-매개 세포 식균작용 (ADCP) 활성, 또는 보체-의존 세포독성 (CDC)을 통해 골수 세포를 사멸, 무력화 또는 고갈시킨다.
일부 구현예에서, 항체는 단클론 항체, 중성 항체(neutral antibody), 길항 항체(antagonistic antibody), 작용 항체(agonist antibody), 다클론 항체, IgG1 항체, IgG3 항체, 탈푸코실화된 항체, 이중특이적 항체, 인간 항체, 인간화된 항체, 키메라 항체, 전장 항체, 및 이의 항원 결합 단편 중 적어도 하나이다.
일부 구현예에서, 항체는 단클론 항체이다.
일부 구현예에서, 항체는 다중특이적 항체이다.
일부 구현예에서, 항체는 탈푸코실화된 항체이다.
일부 구현예에서, 항체는 이의 항원-결합 단편, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv, (scFv)2, 단쇄 항체 분자, 이중 가변 도메인 항체, 단일 가변 도메인 항체, 선형 항체, 또는 V 도메인 항체이다.
일부 구현예에서, 항체는 스캐폴드를 포함하고, 선택적으로 스캐폴드는 Fc, 선택적으로 인간 Fc이다.
일부 구현예에서, 항체는 IgG, IgA, IgD, IgE, 및 IgM으로부터 선택된 부류의 중쇄 불변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 부류 IgG, 및 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4로부터 선택된 하위 부류의 중쇄 불변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 IgG1의 중쇄 불변 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, Fc는 하나 이상의 변형을 포함하며, 여기서 하나 이상의 변형은 하나 이상의 변형이 없는 Fc와 비교하여 반감기 증가, ADCC 활성 증가, ADCP 활성 증가, 또는 CDC 활성 증가를 초래한다.
일부 구현예에서, Fc는 FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb, FcγRIIc, FcγRIIIa, 및 FcγRIIIb로 구성된 군으로부터 선택된 Fcγ 수용체에 결합한다.
또 다른 측면에서, 암의 치료에 사용하기 위한 단리된 항체가 본원에 기재되며, 여기서 암은 고형 종양 및 혈액 종양으로부터 선택된다.
또 다른 측면에서, 인간 TREM2와의 결합에 대해 본원에 기재된 항체와 경쟁하는 단리된 항체가 본원에 기재된다.
또 다른 측면에서, 본원에 기재된 항체에 의해 결합된 인간 TREM2 에피토프에 결합하는 단리된 항체가 본원에 기재된다.
또 다른 측면에서, 본원에 기재된 항체, 이의 VH, 이의 VL, 이의 경쇄, 이의 중쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하는 단리된 폴리뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드 세트; 선택적으로 cDNA가 본원에 기재된다.
또 다른 측면에서, 본원에 기재된 바와 같은 폴리뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드 세트를 포함하는 벡터 또는 벡터 세트가 본원에 기재된다.
또 다른 측면에서, 본원에 기재된 바와 같은 폴리뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드 세트 또는 본원에 기재된 벡터 또는 벡터 세트를 포함하는 숙주 세포가 본원에 기재된다.
또 다른 측면에서, 본원에 기재된 숙주 세포로 항체를 발현시키고 발현된 항체를 단리하는 것을 포함하는 항체의 제조 방법이 본원에 기재된다.
또 다른 측면에서, 본원에 기재된 항체 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물이 본원에 기재된다.
또 다른 측면에서, 유효량의 본원에 기재된 항체 또는 약제학적 조성물을 대상체에게 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 질환 또는 병태를 치료 또는 예방하는 방법이 본원에 기재된다.
일부 구현예에서, 질환 또는 병태는 암이다.
일부 구현예에서, 항체는 TREM2+ 골수 세포 상의 TREM2의 세포외 도메인에 결합하고, 선택적으로 여기서 상기 골수 세포는 종양내에 있다. 일 구현예에서, 항체는 골수 세포 상의 TREM2의 세포외 도메인에 결합하고, 여기서 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD11c+, CD14+, 및 BDCA3-인 비-자극성 골수 세포이고, 여기서 항체는 ADCC, CDC, 및/또는 ADCP를 통해 비-자극성 골수 세포를 항체와 접촉시키기 전에 암에 존재하는 비-자극성 골수 세포의 수준보다 낮은 수준으로 비-자극성 골수 세포를 사멸, 무력화 또는 고갈시키고, 여기서 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14-, CD11c+, BDCA1-, 및 BDCA3+인 자극성 골수 세포 및 비-자극성 골수 세포를 포함하는 면역 세포 집단에 존재하고, 여기서 비-자극성 골수 세포를 사멸, 무력화 또는 고갈시켜 암을 치료한다.
일부 구현예에서, 항체는 항체-의존 세포-매개 세포독성 (ADCC), 항체-매개 세포 식균작용 (ADCP) 활성 또는 보체-의존 세포독성 (CDC)을 통해 골수 세포를 사멸, 무력화 또는 고갈시킨다. 일부 구현예에서, 항체는 수용체-리간드 차단, 아고니즘(agonism) 또는 길항작용 활성을 갖는다.
일부 구현예에서, 대상체는 인간이다. 일부 구현예에서, 암은 고형암이다. 일부 구현예에서, 암은 액상 암(liquid cancer)이다. 일부 구현예에서, 암은 흑색종, 신장, 간담즙, 두경부 편평세포 암종 (HNSC), 췌장, 결장, 방광, 교모세포종, 전립선, 폐, 유방, 난소, 위, 신장, 방광, 식도, 콩팥, 흑색종, 및 중피종으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 암은 결장암 또는 유방암이다.
일부 구현예에서, 접촉은 대상체에서 면역 반응을 향상시킨다. 일부 구현예에서, 향상된 면역 반응은 적응 면역 반응이다. 일부 구현예에서, 향상된 면역 반응은 선천성 면역 반응이다.
일부 구현예에서, 대상체는 면역요법을 이전에 받았거나 동시에 받고 있거나 차후에 받을 것이다. 일부 구현예에서, 면역요법은 다음 중 적어도 하나이다: 체크포인트 억제제; T 세포의 체크포인트 억제제; 항-PD1 항체; 항-PDL1 항체; 항-CTLA4 항체; 입양 T 세포 요법; CAR-T 세포 요법; 수지상 세포 백신; 단핵구 백신; T 세포 및 항원 제시 세포 둘 다에 결합하는 항원 결합 단백질; BiTE 이중 항원 결합 단백질; 톨-유사 수용체 리간드; 사이토카인; 세포독성 요법; 화학요법; 방사선요법; 소분자 억제제; 소분자 작용제; 면역조절제; 및 후성 조절제. 일부 구현예에서, 면역요법은 항-PD1 항체이다.
또 다른 측면에서, 골수 세포를 본원에 기재된 항-TREM2 항체 또는 본원에 기재된 약제학적 조성물과 접촉시키는 것을 포함하는, 암을 갖는 대상체의 TREM2+ 골수 세포를 사멸, 무력화 또는 고갈시키는 방법이 본원에 기재되며, 선택적으로 여기서 골수 세포는 종양내에 있다.
일부 구현예에서, 항체는 TREM2의 세포외 도메인에 결합하고, 여기서 TREM2+ 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD11c+, CD14+ 및 BDCA3-인 비-자극성 골수 세포이고, 여기서 항체는 ADCC, CDC 및/또는 ADCP를 통해 비-자극성 골수 세포를 항체와 접촉시키기 전에 암에 존재하는 비-자극성 골수 세포의 수준보다 적은 수준으로 비-자극성 골수 세포를 사멸, 무력화 또는 고갈시키며, 여기서 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14-, CD11c+, BDCA1- 및 BDCA3+인 자극성 골수 세포 및 비-자극성 골수 세포를 포함하는 면역 세포 집단에 존재하고, 여기서 접촉은 암의 외부에 존재하는 골수 세포 및/또는 암에 존재하는 자극성 골수 세포를 실질적으로 사멸, 무력화 또는 고갈시키지 못하고, 비-자극성 골수 세포의 사멸, 무력화 또는 고갈은 암에 대한 면역 반응을 향상시킴으로써 암을 치료한다.
일부 구현예에서, 항체는 ADCC, CDC 및 ADCP 중 적어도 하나에 의해 골수 세포를 사멸시킨다. 일부 구현예에서, 항체는 ADCC, CDC 및 ADCP 중 적어도 하나에 의해 골수 세포를 무력화시킨다. 일부 구현예에서, 항체는 ADCC, CDC 및 ADCP 중 적어도 하나에 의해 골수 세포를 고갈시킨다. 일부 구현예에서, 항체는 항체-의존 세포-매개 세포독성 (ADCC) 활성을 갖는다. 일부 구현예에서, 항체는 보체-의존 세포독성 (CDC) 활성을 갖는다. 일부 구현예에서, 항체는 항체-매개된 식균작용 (ADCP) 활성을 갖는다. 일부 구현예에서, 항체는 수용체-리간드 차단, 아고니즘 또는 길항작용 활성을 갖는다.
일부 구현예에서, 골수 세포는 자극성 골수 세포이다. 일부 구현예에서, 골수 세포는 비-자극성 골수 세포이다. 일부 구현예에서, 골수 세포는 수지상 세포, 종양-관련 대식세포 (TAM), 호중구, 또는 단핵구 중 적어도 하나를 포함한다. 일부 구현예에서, 골수 세포는 호중구이다. 일부 구현예에서, 골수 세포는 종양-관련 대식세포이다. 일부 구현예에서, 골수 세포는 종양내에 있다. 일부 구현예에서, 골수 세포는 자극성 골수 세포 및 비-자극성 골수 세포를 포함하는 면역 세포 집단에 있다.
일부 구현예에서, 대상체는 인간이다. 일부 구현예에서, 암은 고형암이다. 일부 구현예에서, 암은 액상 암이다. 일부 구현예에서, 암은 흑색종, 신장, 간담즙, 두경부 편평세포 암종 (HNSC), 췌장, 결장, 방광, 교모세포종, 전립선, 폐, 유방, 난소, 위, 신장, 방광, 식도, 콩팥, 흑색종, 및 중피종으로 구성된 군으로부터 선택된다. 일부 구현예에서, 암은 결장암 또는 유방암이다.
일부 구현예에서, 접촉은 대상체에서 면역 반응을 향상시킨다. 일부 구현예에서, 향상된 면역 반응은 적응 면역 반응이다. 일부 구현예에서, 향상된 면역 반응은 선천성 면역 반응이다.
일부 구현예에서, 대상체는 면역요법을 이전에 받았거나 동시에 받고 있거나 차후에 받을 것이다. 일부 구현예에서, 면역요법은 다음 중 적어도 하나이다: 체크포인트 억제제; T 세포의 체크포인트 억제제; 항-PD1 항체; 항-PDL1 항체; 항-CTLA4 항체; 입양 T 세포 요법; CAR-T 세포 요법; 수지상 세포 백신; 단핵구 백신; T 세포 및 항원 제시 세포 둘 다에 결합하는 항원 결합 단백질; BiTE 이중 항원 결합 단백질; 톨-유사 수용체 리간드; 사이토카인; 세포독성 요법; 화학요법; 방사선요법; 소분자 억제제; 소분자 작용제; 면역조절제; 및 후성 조절제. 일부 구현예에서, 면역요법은 항-PD1 항체이다.
또 다른 측면에서, 질환 또는 병태를 갖거나 질환 또는 병태를 갖는 것으로 의심되는 대상체에서 TREM2를 검출하는 방법이 본원에 기재되며, 상기 방법은 (a) 대상체로부터 샘플을 받는 단계; 및 (b) 샘플을 본원에 기재된 항체와 접촉시킴으로써 샘플 내 TF의 존재 또는 수준을 검출하는 단계를 포함한다.
일부 구현예에서, 질환 또는 병태는 암이다.
일부 구현예에서 본원에 기재된 방법은 체크포인트 억제제를 투여하는 단계를 포함하며, 선택적으로 여기서 체크포인트 억제제는 PD1:PDL1 축의 억제제이고, 선택적으로 여기서 억제제는 항체이고, 선택적으로 항체는 항-PD1 항체 또는 항-PDL1 항체이다.
또 다른 측면에서, 본원에 개시된 항체 또는 약제학적 조성물 및 사용 설명서를 포함하는 키트가 본원에 기재된다.
도면의 간단한 설명
도 1a-c. CT-26 동계(syngeneic) 마우스 종양 모델에서 항-PD-1과 조합된 항-TREM2 PI-7012-매개된 항-종양 활성. (a) PI-7012의 탈푸코실화는 항-PD-1과 함께 항-종양 활성을 개선시킨다. 평균 종양 용적 (10마리 마우스/그룹)이 도시되어 있다. (b) PI-7012에 대한 개별 종양 용적 및 (c) 탈푸코실화된-PI-7012 (afuc-PI-7012)가 도시되어 있다.
도 2 병용 치료로 인한 현저한 체중 감소 없음. 각각의 그룹 내 10마리의 마우스는 지시된 항체로 처리되었고, 체중은 빈번하게 기록되었다. 각각의 그룹의 평균 체중은 연구일에 대해 플롯팅되었다.
도 3. H&E 염색 외에도, 항-CD68을 사용하여 조직을 또한 대식세포에 대해 염색하였다. 세포내 마커 CD68은 염증이 생긴 조직 및 종양에서 단핵구/대식세포를 면역염색하기 위한 신뢰할 수 있는 세포화학 마커로서 문헌에 널리 사용되어 왔다. 폐 (패널 E) 뿐만 아니라 분석된 다른 조직에서, 대조군과 비교하여 임의의 치료 그룹에서 CD68+ 대식세포 수의 식별 가능한 변화가 관찰되지 않았으며, 이는 항-TREM2-매개 고갈이 TME에서 특이적으로 발생했음을 나타낸다.
도 4a-b. (a) 지시된 처리 그룹으로부터 FFPE 폐 조직의 항-CD68 염색. (b) 각각의 섹션의 8 내지 9개의 필드를 광학 현미경에 의한 정량에 사용하였다.
도 5. 선택된 조직의 세포에서 TREM2 발현이 없거나 매우 낮았다. 음영 히스토그램(shaded histogram)은 TREM2KO로부터 기인하며, 개방 히스토그램(open histogram)은 야생형 마우스로부터 기인한다. 항-TREM2 염색에 사용된 항체는 R&D Systems의 클론 237920이었다.
도 6. TREM2 (개방 히스토그램)의 세포 표면 발현은 MC38 및 CT26 종양 둘 모두 내의 과립구 또는 단핵구 MDSC와 비교하여 TAM에서 상당히 더 높았다. 림프구는 TREM2를 발현시키지 않는다. 이소형 대조 염색은 회색으로 채워진 히스토그램으로 표시된다.
도 7. TREM2 (개방 히스토그램)의 세포 표면 발현은 임의의 PBMC 서브셋과 비교하여 CD14-유래 대식세포에서 상당히 더 높았다. 인간 PBMC 또는 대식세포를 TREM2 (개방 히스토그램) 또는 이소형 대조군 (회색 히스토그램)에 대해 표면 염색하였다. PBMC 서브셋은 사전 검증된 다색 FACS 패널을 사용하여 호중구, 단핵구 또는 T 세포로 구별되었다.
도 8. TREM2 (개방 히스토그램)의 세포 표면 발현은 다른 침윤물 또는 비-CD45 양성 세포와 비교하여 TAM에서 상당히 더 높았다. 인간 종양 조직으로부터의 단일 세포 현탁액을 TREM2 (개방 히스토그램) 또는 이소형 대조군 (회색 히스토그램)에 대해 표면 염색하였다. 면역 및 비-면역 서브셋은 사전 검증된 다색 FACS 패널을 사용하는 것으로 구별되었다.
도 9a-f. 항-PD-1 mAb와 조합된 항-TREM2 mAb afuc-PI7012는 Panc-02 췌장 종양 모델에서 상당한 항-종양 활성을 나타낸다. (a) Panc-02 종양 세포가 이식된 암컷 C57BL/6J 마우스에서 종양 용적을 시간에 따라 추적하고 지시된 mAb로 처리하였다. Y 축은 각 그룹에서 10마리 마우스의 평균 종양 용적의 평균 +/- 표준 편차를 나타낸다. (b) 이소형 대조군 mAb로 처리된 개별 동물로부터의 종양 용적. (c) 항-TREM2 mAb afuc-PI7012로 처리된 개별 동물로부터의 종양 용적. (d) 항-PD-1로 처리된 개별 동물로부터의 종양 용적. (e) 항-TREM2 mAb afuc-PI7012 및 항-PD-1로 처리된 개별 동물로부터의 종양 용적. (f) 각각의 치료 그룹에 대한 이식 후 32일째의 그룹 평균 종양 용적의 통계적 분석.
도 10. 항-TREM2 mAb와 항-PD-1 mAb 처리 후 종양이 없는 BALB/c 마우스는 3개월 후 CT26 종양 세포로 재시험감염되었다(re-challenged) (사각형 기호). 연령-일치된 나이브 마우스 (원형 기호)는 동등한 수의 CT26 세포를 투여받고 연구 기간 동안 종양 성장을 추적하였다. 연구 기간 동안에 마우스에 추가 처리를 제공하지 않았다.
상세한 설명
정의
본 명세서를 해석하기 위해, 다음의 정의가 적용되며, 적절한 경우, 단수로 사용되는 용어는 복수를 또한 포함하며 그 반대도 마찬가지이다. 하기에 기재된 임의의 정의가 본 명세서에 참조로 포함된 임의의 문서와 상충되는 경우, 기재된 정의가 우선할 것이다.
본 명세서에 기재된 본 발명의 측면 및 구현예는 측면 및 구현예를 "포함하는", 이로 "구성되는" 및 "본질적으로 구성되는" 것을 포함하는 것으로 이해된다.
본원에 기재된 모든 조성물, 본원에 기재된 조성물을 사용하는 모든 방법에 대해, 조성물은 열거된 성분 또는 단계를 포함할 수 있거나 열거된 성분 또는 단계로 "본질적으로 구성될" 수 있다. 조성물이 열거된 성분으로 "본질적으로 구성되는" 것으로 기재되는 경우, 조성물은 열거된 성분을 함유하고, 치료되는 병태에 실질적으로 영향을 미치지 않지만, 명백하게 열거된 성분 이외에 치료되는 병태에 실질적으로 영향을 미치는 임의의 다른 성분을 함유하지 않는 다른 성분을 함유할 수 있거나; 또는 조성물이 치료되는 병태에 실질적으로 영향을 미치는 열거된 것들 이외의 추가 성분을 함유한다면, 조성물은 치료되는 병태에 실질적으로 영향을 미치기에 충분한 농도 또는 양의 추가 성분을 함유하지 않는다. 방법이 열거된 단계로 "본질적으로 구성되는" 것으로 기재되는 경우, 상기 방법은 열거된 단계를 함유하며, 치료되는 병태에 실질적으로 영향을 미치지 않는 다른 단계를 함유할 수 있지만, 상기 방법은 명백하게 열거된 단계 이외에 치료되는 병태에 실질적으로 영향을 미치는 임의의 다른 단계를 함유하지 않는다. 비제한적인 구체예로서, 조성물이 성분으로 '본질적으로 구성되는' 것으로 기재되는 경우, 조성물은 임의의 양의 약제학적으로 허용되는 담체, 비히클 또는 희석제 및 치료되는 병태에 실질적으로 영향을 미치지 않는 다른 그와 같은 성분을 추가로 함유할 수 있다.
용어 "선택적으로"는, 순차적으로 사용될 때, 열거된 조합 중 하나부터 모든 조합까지 포함하고 모든 하위 조합을 고려하는 것을 의미한다.
본원에 사용된 "유효량" 또는 "치료적 유효량"은 단독으로 또는 또 다른 치료 양식과 함께 원하는 치료 효과를 가져오거나 이에 기여하기에 효과적인, 단일 용량 또는 일련의 용량의 일부로서 개체에게 투여되는, 치료 화합물, 예컨대 항-TREM2 항원 결합제 또는 항-TREM2 항체의 양을 지칭한다. 원하는 치료 효과의 예로는 면역 반응 향상, 종양 발달 지체 또는 지연; 질환의 안정화; 하나 이상의 증상의 개선이 있다. 유효량은 하나 이상의 투여량으로 제공될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "치료하는"은 암과 같은 병태의 진행을 지연 또는 역전하는 것을 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "치료"는 암과 같은 병태를 치료하는 행위를 지칭한다.
본원에 사용된 바와 같이 "개체" 또는 "대상체"는 인간, 가축 및 농장 동물, 동물원, 스포츠 또는 애완 동물, 예컨대 개, 말, 토끼, 소, 돼지, 햄스터, 모래쥐(gerbil), 마우스, 페럿(ferret), 랫트, 고양이 등을 비롯하여 포유동물로 분류된 임의의 동물을 지칭한다. 일부 구현예에서, 개체는 인간이다. 일부 구현예에서, 개체는 마우스이다.
용어 "조절하다" 및 "조절"은 언급된 변수의 감소 또는 억제, 또는 대안적으로 활성화 또는 증가를 지칭한다.
용어 "증가하다" 및 "활성화시키다"는 언급된 변수에서 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 100%, 2배, 3배, 4배, 5배, 10배, 20배, 50배, 100배 이상의 증가를 지칭한다.
용어 "감소하다" 및 "억제하다"는 언급된 변수에서 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 2배, 3배, 4배, 5배, 10배, 20배, 50배, 100배 이상의 감소를 지칭한다.
용어 "작용화하다(agonize)"는 수용체의 활성화와 관련된 생물학적 반응을 유도하기 위한 수용체 신호 전달의 활성화를 지칭한다. "작용제"는 수용체에 결합하고 이를 작용화시키는 실재물이다.
용어 "길항하다"는 수용체의 활성화와 관련된 생물학적 반응을 억제하기 위한 수용체 신호 전달의 억제를 지칭한다. "길항제"는 수용체에 결합하고 이를 길항하는 실재물이다.
본원에 사용된 용어 "약"은 본 기술 분야의 숙련가에게 용이하게 알려진 각각의 값에 대한 일반적인 오차 범위를 지칭한다. 예시적인 오차 범위는 플러스 또는 마이너스 5%이다. 본원에서 값 또는 파라미터 앞에 "약"에 대한 언급은 그 값 또는 파라미터 자체에 관한 구현예를 포함한다 (그리고 설명한다).
명세서 및 첨부된 청구범위에 사용된 바와 같이, 단수 형태 "a", "an" 및 "the"는 문맥상 명백하게 다르게 지시되지 않는 한 복수의 지시대상을 포함한다는 점에 유의해야 한다.
본원에 기재된 임의의 구조적 및 기능적 특성에 대해, 이들 특성을 결정하는 방법은 당 업계에 공지되어 있다.
항체
구조
본 출원은 비-자극성 골수 세포를 무력화시키는 항체를 포함하여 TREM2 단백질에 결합하는 항체를 포함하는 항체 및 조성물을 제공한다.
용어 "항체"는 본원에서 가장 넓은 의미로 사용되며, 항원 또는 에피토프에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 항원-결합 도메인을 포함하는 특정 유형의 면역글로불린 분자를 포함한다. 항체는 구체적으로 온전한 항체 (예를 들어, 온전한 면역글로불린), 항체 단편 및 다중-특이적 항체를 포함한다.
인식된 면역글로불린 유전자는 카파, 람다, 알파, 감마, 델타, 엡실론 및 뮤 불변 영역 유전자뿐만 아니라 무수한 면역글로불린 가변 영역 유전자를 포함한다. 경쇄는 카파 또는 람다로 분류된다. 항체 또는 면역글로불린의 "부류"는 이의 중쇄에 보유된 불변 도메인 또는 불변 영역의 유형을 지칭한다. 5가지 주요 부류의 항체: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM이 있으며, 이들 중 몇몇은 하위 부류 (이소형), 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2로 추가로 나뉠 수 있다. 상이한 부류의 면역글로불린에 상응하는 중쇄 불변 도메인을 각각 α, δ, ε, γ 및 μ라고 한다.
예시적인 면역글로불린 (항체) 구조 단위는 2쌍의 폴리펩티드 쇄로 구성되며, 각각의 쌍은 하나의 "경" (약 25 kD) 및 하나의 "중" 쇄 (약 50-70 kD)를 갖는다. 각각의 쇄의 N-말단 도메인은 주로 항원 인식을 담당하는 약 100 내지 110개 이상의 아미노산의 가변 영역을 정의한다. 가변 경쇄 (VL) 및 가변 중쇄 (VH)라는 용어는 각각 이들 경쇄 및 중쇄 도메인을 지칭한다. IgG1 중쇄는 N에서 C-말단으로 각각 VH, CH1, CH2 및 CH3 도메인으로 구성된다. 경쇄는 N에서 C-말단으로 VL 및 CL 도메인으로 구성된다. IgG1 중쇄는 CH1 및 CH2 도메인 사이에 힌지를 포함한다. 특정 구현예에서, 면역글로불린 작제물은 치료적 폴리펩타이드에 연결된 IgG, IgM, IgA, IgD 또는 IgE로부터 적어도 하나의 면역글로불린 도메인을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체에서 발견되는 면역글로불린 도메인은 면역글로불린 기반 작제물 예컨대 디아바디 또는 나노바디로부터 기인하거나 이로부터 유래된다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 면역글로불린 작제물은 낙타과(camelid) 항체와 같은 중쇄 항체로부터의 적어도 하나의 면역글로불린 도메인을 포함한다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 면역글로불린 작제물은 포유동물 항체 예컨대 소 항체, 인간 항체, 낙타과 항체, 마우스 항체 또는 임의의 키메라 항체로부터의 적어도 하나의 면역글로불린 도메인을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 중쇄를 포함한다. 일 구현예에서, 중쇄는 IgA이다. 일 구현예에서, 중쇄는 IgD이다. 일 구현예에서, 중쇄는 IgE이다. 일 구현예에서, 중쇄는 IgG이다. 일 구현예에서, 중쇄는 IgM이다. 일 구현예에서, 중쇄는 IgG1이다. 일 구현예에서, 중쇄는 IgG2이다. 일 구현예에서, 중쇄는 IgG3이다. 일 구현예에서, 중쇄는 IgG4이다. 일 구현예에서, 중쇄는 IgA1이다. 일 구현예에서, 중쇄는 IgA2이다.
본원에 사용된 용어 "초가변 영역" 또는 "HVR"은 서열이 초가변성이고/이거나 구조적으로 정의된 루프 ("초가변 루프")를 형성하는 항체 가변 도메인의 각 영역을 지칭한다. 일반적으로, 천연 4-쇄 항체는 6개의 HVR; VH에 3개 (H1, H2, H3), VL에 3개 (L1, L2, L3)를 포함한다. HVR은 일반적으로 초가변 루프 및/또는 상보성 결정 영역 (CDR)으로부터의 아미노산 잔기를 포함하며, 후자는 서열 가변성이 가장 높고/높거나 항원 인식에 관여한다. VH 내의 CDR1을 제외하고, CDR은 일반적으로 초가변 루프를 형성하는 아미노산 잔기를 포함한다. 초가변 영역 (HVR)은 "상보성 결정 영역" (CDR)으로도 지칭되며, 이들 용어는 본원에서 항원-결합 영역을 형성하는 가변 영역의 부분과 관련하여 상호교환적으로 사용된다. 이 특정 영역은 Kabat et al., U.S. Dept. of Health and Human Services, Sequences of Proteins of Immunological Interest (1983) 및 Chothia et al., J Mol Biol 196:901-917 (1987)에 기재되었으며, 여기서 상기 정의는 서로 비교될 때 아미노산 잔기의 중첩 또는 서브셋을 포함한다. 그럼에도 불구하고, 항체의 CDR 또는 이의 변이체를 지칭하기 위한 정의의 적용은 본원에 정의되고 사용된 용어의 범위 내에 있는 것으로 의도된다. 특정 CDR을 포함하는 정확한 잔기 수는 CDR의 서열 및 크기에 따라 달라질 것이다. 당업자는 항체의 가변 영역 아미노산 서열이 주어지면 어떤 잔기가 특정 CDR을 포함하는지를 일상적으로 결정할 수 있다.
CDR의 아미노산 서열 경계는 하기에 기재된 것을 비롯하여 다수의 공지된 넘버링 방식 중 임의의 것을 사용하여 당업자에 의해 결정될 수 있다: 상기 Kabat et al. ("카밧(Kabat)" 넘버링 방식); Al-Lazikani et al., 1997, J. Mol . Biol ., 273:927-948 ("초티아(Chothia)" 넘버링 방식); MacCallum et al., 1996, J. Mol . Biol. 262:732-745 ("컨택트(Contact)" 넘버링 방식); Lefranc et al., Dev . Comp. Immunol., 2003, 27:55-77 ("IMGT" 넘버링 방식); 및 Honegge and
Figure pct00001
, J. Mol . Biol., 2001, 309:657-70 ("AHo" 넘버링 방식); 이들 각각은 그 전문이 참고로 포함된다.
표 A는 카밧 및 초티아 방식에 의해 확인된 CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2, 및 CDR-H3의 위치를 제공한다. CDR-H1의 경우, 카밧 및 초티아 넘버링 방식 둘 다를 사용하는 잔기 넘버링이 제공된다.
CDR은, 예를 들어, www.bioinf.org.uk/abs/abnum/에서 이용가능하고 Abhinandan and Martin, Immunology, 2008, 45:3832-3839에 기재된 Abnum과 같은 항체 넘버링 소프트웨어를 사용하여 배정될 수 있으며, 상기 문헌은 그 전문이 참고로 포함된다.
표 A. 카밧 및 초티아 넘버링 방식에 따른 CDR 내의 잔기 .
Figure pct00002
* CDR-H1의 C-말단은, 카밧 넘버링 관례를 사용하여 넘버링될 때, CDR의 길이에 따라 H32와 H34 사이에서 가변적이다.
"EU 넘버링 방식"은 일반적으로 항체 중쇄 불변 영역에서 잔기를 언급할 때 (예를 들어, 상기 문헌 Kabat 등에 보고된 바와 같이) 사용된다. 달리 언급되지 않는 한, EU 넘버링 방식은 본원에 기재된 항체 중쇄 불변 영역 내 잔기를 지칭하는데 사용된다.
본원에 사용된 용어 "단쇄"는 펩티드 결합에 의해 선형으로 연결된 아미노산 단량체를 포함하는 분자를 지칭한다. 그와 같은 특정 구현예에서, Fab 경쇄의 C-말단은 단쇄 Fab 분자에서 Fab 중쇄의 N-말단에 연결된다. 본원에 보다 상세하게 기재된 바와 같이, scFv는 폴리펩티드 사슬에 의해 중쇄의 가변 도메인 (VH)의 C-말단으로부터 N-말단으로 연결된 경쇄의 가변 도메인 (VL)을 갖는다. 대안적으로, scFv는 VH의 C-말단에서 폴리펩티드 사슬에 의해 VL의 N-말단에 연결된 폴리펩티드 사슬로 구성된다.
"Fab 단편" (또한 단편 항원-결합으로도 지칭됨)은 각각 경쇄 및 중쇄 상의 가변 도메인 VL 및 VH와 함께 경쇄의 불변 도메인 (CL) 및 중쇄의 제1 불변 도메인 (CH1)을 함유한다. 가변 도메인은 항원-결합에 관여하는 상보성 결정 루프 (CDR, 초가변 영역으로도 지칭됨)를 포함한다. Fab' 단편은 항체 힌지 영역으로부터의 하나 이상의 시스테인을 포함하여 중쇄 CH1 도메인의 카복시 말단에 약간의 잔기를 추가함으로써 Fab 단편과 상이하다.
"F(ab')2" 단편은 힌지 영역 근처에서 이황화 결합에 의해 연결된 2개의 Fab' 단편을 함유한다. F(ab')2 단편은, 예를 들어, 재조합 방법에 의해 또는 온전한 항체의 펩신 분해에 의해 생성될 수 있다. F(ab') 단편은, 예를 들어, ß-머캅토에탄올을 사용한 처리에 의해 분리될 수 있다.
"Fv" 단편은 하나의 중쇄 가변 도메인 및 하나의 경쇄 가변 도메인의 비-공유-결합 이량체를 포함한다.
"단쇄 Fv" 또는 "scFv"는 항체의 VH 및 VL 도메인을 포함하며, 여기서 이들 도메인은 단일 폴리펩티드 사슬에 존재한다. 일 구현예에서, Fv 폴리펩티드는 VH와 VL 도메인 사이에 폴리펩티드 링커를 추가로 포함하며, 이는 scFv가 항원-결합에 바람직한 구조를 형성할 수 있게 한다. scFv에 대한 검토는 하기를 참고한다: Pluckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies, vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994). HER2 항체 scFv 단편은 WO93/16185; 미국 특허 번호 5,571,894; 및 미국 특허 번호 5,587,458에 기재되어 있다.
"scFv-Fc" 단편은 Fc 도메인에 부착된 scFv를 포함한다. 예를 들어, Fc 도메인은 scFv의 C-말단에 부착될 수 있다. Fc 도메인은 scFv에서 가변 도메인의 배향에 따라 VH 또는 VL을 뒤따를 수 있다(즉, VH-VL 또는 VL-VH). 당 업계에 공지되거나 본원에 기재된 임의의 적합한 Fc 도메인이 사용될 수 있다. 일부 경우에, Fc 도메인은 IgG4 Fc 도메인을 포함한다.
용어 "단일 도메인 항체" 또는 "sdAb"는 항체의 하나의 가변 도메인이 다른 가변 도메인의 존재 없이 항원에 특이적으로 결합하는 분자를 지칭한다. 단일 도메인 항체, 및 이의 단편은 하기에 기재되어 있다: Arabi Ghahroudi et al., FEBS Letters, 1998, 414:521-526 및 Muyldermans et al., Trends in Biochem . Sci ., 2001, 26:230-245, 이들 각각은 그 전문이 참고로 포함된다. 단일 도메인 항체는 sdAb 또는 나노바디로도 알려져 있다. Sdab는 상당히 안정적이고 항체의 Fc 사슬과의 융합 파트너로서 발현시키기 쉽다 (Harmsen MM, De Haard HJ (2007). "Properties, production, and applications of camelid single-domain antibody fragments". Appl. Microbiol Biotechnol. 77(1): 13-22).
용어 "전장 항체", "온전한 항체" 및 "전체 항체"는 자연 발생 항체 구조와 상당히 유사한 구조를 갖고 Fc 영역을 포함하는 중쇄를 갖는 항체를 지칭하기 위해 상호교환적으로 본원에 사용된다. 예를 들어, IgG 분자를 지칭하는데 사용될 때, "전장 항체"는 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하는 항체이다.
용어 "에피토프"는 항체에 특이적으로 결합하는 항원의 일부를 의미한다. 에피토프는 종종 표면-접근가능한 아미노산 잔기 및/또는 당 측쇄로 구성되며, 특정한 3차원 구조적 특성뿐만 아니라 특정한 전하 특성을 가질 수 있다. 구조적 및 비-구조적 에피토프는 변성 용매의 존재하에 전자에 대한 결합이 상실될 수 있지만 후자에 대한 결합은 상실되지 않을 수 있다는 점에서 구별된다. 에피토프는 결합에 직접 관여하는 아미노산 잔기, 및 결합에 직접적으로 관여하지 않는 다른 아미노산 잔기를 포함할 수 있다. 항체가 결합하는 에피토프는, 예를 들어, 상이한 점-돌연변이를 갖는 TREM2 변이체 또는 키메라 TREM2 변이체에 대한 항체 결합을 시험하는 것과 같은 에피토프 결정을 위한 공지된 기술을 사용하여 결정될 수 있다.
"다중특이적 항체"는 둘 이상의 상이한 에피토프에 일괄적으로 특이적으로 결합하는 2개 이상의 상이한 항원-결합 도메인을 포함하는 항체이다. 2개 이상의 상이한 에피토프는 동일한 항원 (예를 들어, 세포에 의해 발현된 단일 TREM2 분자) 또는 상이한 항원 (예를 들어, 동일한 세포에 의해 발현된 상이한 TREM2 분자, 또는 TREM2 분자 및 비-TREM2 분자) 상의 에피토프일 수 있다. 일부 측면에서, 다중-특이적 항체는 2개의 상이한 에피토프에 결합한다 (즉, "이중특이적 항체"). 일부 측면에서, 다중-특이적 항체는 3개의 상이한 에피토프에 결합한다 (즉, "삼중특이적 항체").
"단일특이적 항체"는 단일 에피토프에 특이적으로 결합하는 하나 이상의 결합 부위를 포함하는 항체이다. 단일특이적 항체의 예로는 2가 (즉, 2개의 항원-결합 도메인을 가짐)이면서 2개의 항원-결합 도메인 각각에서 동일한 에피토프를 인식하는 자연 발생 IgG 분자가 있다. 결합 특이성은 임의의 적합한 원자가로 존재할 수 있다.
용어 "단클론 항체"는 실질적으로 균질한 항체 집단으로부터의 항체를 지칭한다. 실질적으로 균질한 항체의 집단은 단클론 항체의 생산 동안 정상적으로 발생할 수 있는 변이체를 제외하고는, 실질적으로 유사하고, 동일한 에피토프(들)에 결합하는 항체를 포함한다. 그와 같은 변이체는 일반적으로 소량만 존재한다. 단클론 항체는 전형적으로 복수의 항체로부터 단일 항체의 선택을 포함하는 과정에 의해 수득된다. 예를 들어, 선택 과정은 복수의 클론, 예컨대 하이브리도마 클론, 파지 클론, 효모 클론, 박테리아 클론 또는 다른 재조합 DNA 클론의 풀로부터 고유한 클론의 선택일 수 있다. 선택된 항체는, 예를 들어, 표적에 대한 친화도를 개선시키고 ("친화도 성숙"), 항체를 인간화하고, 세포 배양에서 이의 생산을 개선시키고/시키거나 대상체에서 면역원성을 감소시키기 위해 추가로 변경될 수 있다.
"효과기 기능"은 항체의 Fc 영역에 의해 매개되는 생물학적 활성을 지칭하며, 이러한 활성은 항체 이소형에 따라 달라질 수 있다. 항체 효과기 기능의 예는 보체 의존적 세포독성 (CDC)을 활성화시키기 위한 C1q 결합, 항체-의존적 세포의 세포독성 (ADCC)을 활성화시키기 위한 Fc 수용체 결합, 및 항체 의존적 세포 식균작용 (ADCP), 수용체 리간드 차단, 아고니즘 또는 길항작용을 포함한다.
항-TREM2 항체는 표에 기재된 클론과 같은 본원에 기재된 것을 포함할 수 있다. 일부 구현예에서, 항체는 대안적인 스캐폴드를 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 대안적인 스캐폴드로 구성된다. 일부 구현예에서, 항체는 대안적인 스캐폴드로 본질적으로 구성된다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 단편으로 구성된다. 일부 구현예에서, 항체는 항체 단편으로 본질적으로 구성된다. "TREM2 항체", "항-TREM2 항체" 또는 "TREM2-특이적 항체"는 항원 TREM2에 특이적으로 결합하는 본원에 제공된 항체이다. 일부 구현예에서, 항체는 TREM2의 세포외 도메인에 결합한다. 특정 구현예에서, 본원에 제공된 TREM2 항체는 상이한 종으로부터의 TREM2 단백질 사이에서 보존되는 TREM2의 에피토프에 결합한다.
용어 "키메라 항체"는 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 공급원 또는 종으로부터 유래되는 반면, 상기 중쇄 및/또는 경쇄의 나머지는 상이한 공급원 또는 종으로부터 유래된 항체를 지칭한다.
비인간 항체의 "인간화된" 형태는 비인간 항체로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 인간화된 항체는 일반적으로 하나 이상의 CDR로부터의 잔기가 비인간 항체 (공여자 항체)의 하나 이상의 CDR로부터의 잔기로 대체되는 인간 항체 (수용체 항체)이다. 공여자 항체는 원하는 특이성, 친화도 또는 생물학적 효과를 갖는 마우스, 랫트, 토끼, 닭 또는 비인간 영장류 항체와 같은 임의의 적합한 비인간 항체일 수 있다. 인간화된 항체는 인간 대상체에게 투여될 때 비인간 종 항체와 비교하여 면역 반응을 유도할 가능성이 적고/적거나 덜 심각한 면역 반응을 유도한다. 일부 경우에, 수용자 항체의 선택된 프레임워크 영역 잔기는 공여자 항체로부터의 상응하는 프레임워크 영역 잔기로 대체된다. 인간화된 항체는 또한 수용자 항체 또는 공여자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 그와 같은 변형은 항체 기능을 추가로 개선하기 위해 이루어질 수 있다. 인간화된 항체를 제조하는 방법의 예는 미국 특허 번호 6,054,297, 5,886,152 및 5,877,293에서 확인할 수 있으며, 이들 각각은 그 전문이 참고로 포함되어 있다. 더 상세한 내용을 위해서는 Jones et al., Nature, 1986, 321:522-525; Riechmann et al., Nature, 1988, 332:323-329; 및 Presta, Curr . Op. Struct . Biol ., 1992, 2:593-596를 참고하고, 이들 각각은 그 전문이 참고로 포함되어 있다.
일 구현예에서, 인간 항체의 불변 도메인(들)은 비인간 종의 가변 도메인(들)에 융합된다. 또 다른 구현예에서, 비인간 항체의 하나 이상의 CDR 서열 내의 하나 이상의 아미노산 잔기는 인간 대상체에게 투여될 때 비인간 항체의 가능성 있는 면역원성을 감소시키기 위해 변경되며, 여기서 변경된 아미노산 잔기는 항체의 이의 항원에 대한 면역특이적 결합에 중요하지 않거나, 또는 만들어진 아미노산 서열의 변경이 보존적 변화이므로, 인간화된 항체의 항원에 대한 결합이 비인간 항체의 항원에 대한 결합보다 현저히 나쁘지 않다.
"인간 항체"는 인간 또는 인간 세포에 의해 생성되거나, 또는 인간 항체 레퍼토리 또는 인간 항체-인코딩 서열 (예를 들어, 인간 공급원으로부터 얻거나 새로 설계됨)을 이용하는 비인간 공급원으로부터 유래된 항체의 아미노산 서열에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 것이다. 인간 항체는 구체적으로 인간화된 항체를 제외한다. 일 구현예에서, 모든 가변 및 불변 도메인은 인간 면역글로불린 서열 (완전한 인간 항체)로부터 유래된다. 이들 항체는 인간 중쇄 및/또는 경쇄-인코딩 유전자로부터 유래된 항체를 발현시키도록 유전자 변형된 마우스의 관심 항원으로의 면역화를 포함하여 다양한 방식으로 제조될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 항체 단편을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 항체 단편으로 구성된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 항체 단편으로 본질적으로 구성된다. 일부 구현예에서, 항체 단편은 Fv 단편이다. 일부 구현예에서, 항체 단편은 Fab 단편이다. 일부 구현예에서, 항체 단편은 F(ab')2 단편이다. 일부 구현예에서, 항체 단편은 Fab' 단편이다. 일부 구현예에서, 항체 단편은 scFv (sFv) 단편이다. 일부 구현예에서, 항체 단편은 scFv-Fc 단편이다. 일부 구현예에서, 항체 단편은 단일 도메인 항체의 단편이다.
TREM2 항체의 서열
V H 도메인
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호: 1, 3, 5 및 7로부터 선택된 VH 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호:1의 VH 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호:3의 VH 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호:5의 VH 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호:7의 VH 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호: 1, 3, 5 및 7에 제공된 예시적인 VH 서열과 적어도 약 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖는 VH 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24 또는 25개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호: 1, 3, 5 및 7에 제공된 VH 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, 이 단락에 기재된 항체는 본원에서 "변이체"로 지칭된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 변이체는, 예를 들어, 친화도 성숙, 부위 지정 돌연변이유발, 무작위 돌연변이유발, 또는 당 업계에 공지되거나 본원에 기재된 임의의 다른 방법에 의해 본원에 제공된 서열로부터 유도된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 변이체는 본원에 제공된 서열로부터 유도되지 않으며, 예를 들어, 항체를 수득하기 위해 본원에 제공된 방법에 따라 새로 단리될 수 있다.
V L 도메인
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호: 2, 4, 6 및 8로부터 선택된 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호:2의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호:4의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호:6의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호:8의 VL 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호: 2, 4, 6 및 8에 제공된 예시적인 VL 서열과 적어도 약 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95% 또는 99% 동일성을 갖는 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호: 2, 4, 6 및 8에 제공된 VL 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, 이 단락에 기재된 항체는 본원에서 "변이체"로 지칭된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 변이체는, 예를 들어, 친화도 성숙, 부위 지정 돌연변이유발, 무작위 돌연변이유발, 또는 당 업계에 공지되거나 본원에 기재된 임의의 다른 방법에 의해 본원에 제공된 서열로부터 유도된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 변이체는 본원에 제공된 서열로부터 유도되지 않으며, 예를 들어, 항체를 수득하기 위해 본원에 제공된 방법에 따라 새로 단리될 수 있다.
V H - V L 조합
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호: 1, 3, 5 및 7로부터 선택된 VH 서열; 및 서열 번호: 2, 4, 6 및 8로부터 선택된 VL 서열을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호:1의 VH 서열 및 서열 번호:2의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호:3의 VH 서열 및 서열 번호:4의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호:5의 VH 서열 및 서열 번호:6의 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호:7의 VH 서열 및 서열 번호:8의 VL 서열을 포함한다. 특정 측면에서, 서열 번호: 1, 3, 5 및 7 중 임의의 것이 서열 번호: 2, 4, 6 및 8 중 임의의 것과 조합될 수 있다. 예를 들어, 서열번호: 1이 서열 번호: 2, 4, 6 및 8 중 임의의 것과 조합될 수 있다. 또 다른 예로써, 서열 번호:2는 서열 번호: 1, 3, 5 또는 7 중 임의의 것과 조합될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호: 1, 3, 5 및 7에 제공된 예시적인 VH 서열과 적어도 약 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 99% 동일성을 갖는 VH 서열; 및 서열 번호: 2, 4, 6 및 8에 제공된 예시적인 VL 서열과 적어도 약 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 또는 99% 동일성을 갖는 VL 서열을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호: 1, 3, 5 및 7에 제공된 VH 서열, 및 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 또는 25개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호: 2, 4, 6 및 8에 제공된 VL 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, 이 단락에 기재된 항체는 본원에서 "변이체"로 지칭된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 변이체는, 예를 들어, 친화도 성숙, 부위 지정 돌연변이유발, 무작위 돌연변이유발, 또는 당 업계에 공지되거나 본원에 기재된 임의의 다른 방법에 의해 본원에 제공된 서열로부터 유도된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 변이체는 본원에 제공된 서열로부터 유도되지 않으며, 예를 들어, 항체를 수득하기 위해 본원에 제공된 방법에 따라 새로 단리될 수 있다.
CDR
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호: 1, 3, 5 및 7로부터 선택된 VH 도메인의 1개 내지 3개의 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호: 1, 3, 5 및 7로부터 선택된 VH 도메인의 2개 내지 3개의 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호: 1, 3, 5 및 7로부터 선택된 VH 도메인의 3개의 CDR을 포함한다. 일부 측면에서, CDR은 예시적인 CDR이다. 일부 측면에서, CDR은 카밧 CDR이다. 일부 측면에서, CDR은 초티아 CDR이다. 일부 측면에서, CDR은 AbM CDR이다. 일부 측면에서, CDR은 컨택트 CDR이다. 일부 측면에서, CDR은 IMGT CDR이다.
일부 구현예에서, CDR은 서열 번호: 1, 3, 5 및 7의 CDR-H1, CDR-H2, 또는 CDR-H3과 적어도 약 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 동일성을 갖는 CDR이다. 일부 구현예에서, CDR-H1은 최대 1, 2, 3, 4, 또는 5개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호: 1, 3, 5 및 7로부터 선택된 VH 도메인의 CDR-H1이다. 일부 구현예에서, CDR-H2는 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호: 1, 3, 5 및 7로부터 선택된 VH 도메인의 CDR-H2이다. 일부 구현예에서, CDR-H3은 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 또는 8개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호: 1, 3, 5 및 7로부터 선택된 VH 도메인의 CDR-H3이다. 일부 측면에서, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, 이 단락에 기재된 항체는 본원에서 "변이체"로 지칭된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 변이체는, 예를 들어, 친화도 성숙, 부위 지정 돌연변이유발, 무작위 돌연변이유발, 또는 당 업계에 공지되거나 본원에 기재된 임의의 다른 방법에 의해 본원에 제공된 서열로부터 유도된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 변이체는 본원에 제공된 서열로부터 유도되지 않으며, 예를 들어, 항체를 수득하기 위해 본원에 제공된 방법에 따라 새로 단리될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호: 2, 4, 6 및 8로부터 선택된 VL 도메인의 1개 내지 3개의 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호: 2, 4, 6 및 8로부터 선택된 VL 도메인의 2개 내지 3개의 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호: 2, 4, 6 및 8로부터 선택된 VL 도메인의 3개의 CDR을 포함한다. 일부 측면에서, CDR은 예시적인 CDR이다. 일부 측면에서, CDR은 카밧 CDR이다. 일부 측면에서, CDR은 초티아 CDR이다. 일부 측면에서, CDR은 AbM CDR이다. 일부 측면에서, CDR은 컨택트 CDR이다. 일부 측면에서, CDR은 IMGT CDR이다.
일부 구현예에서, CDR은 서열 번호: 2, 4, 6 및 8의 CDR-L1, CDR-L2 또는 CDR-L3과 적어도 약 50%, 75%, 80%, 85%, 90%, 또는 95% 동일성을 갖는 CDR이다. 일부 구현예에서, CDR-L1은 최대 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호: 2, 4, 6 및 8로부터 선택된 VL 도메인의 CDR-L1이다. 일부 구현예에서, CDR-L2는 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호: 2, 4, 6 및 8로부터 선택된 VL 도메인의 CDR-L2이다. 일부 구현예에서, CDR-L3은 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호: 2, 4, 6 및 8로부터 선택된 VL 도메인의 CDR-L3이다. 일부 측면에서, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, 이 단락에 기재된 항체는 본원에서 "변이체"로 지칭된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 변이체는, 예를 들어, 친화도 성숙, 부위 지정 돌연변이유발, 무작위 돌연변이유발, 또는 당 업계에 공지되거나 본원에 기재된 임의의 다른 방법에 의해 본원에 제공된 서열로부터 유도된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 변이체는 본원에 제공된 서열로부터 유도되지 않으며, 예를 들어, 항체를 수득하기 위해 본원에 제공된 방법에 따라 새로 단리될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호: 1, 3, 5 및 7로부터 선택된 VH 도메인의 1개 내지 3개의 CDR 및 서열 번호: 2, 4, 6 및 8로부터 선택된 VL 도메인의 1개 내지 3개의 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호: 1, 3, 5 및 7로부터 선택된 VH 도메인의 2개 내지 3개의 CDR 및 서열 번호: 2, 4, 6 및 8로부터 선택된 VL 도메인의 2개 내지 3개의 CDR을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호: 1, 3, 5 및 7로부터 선택된 VH 도메인의 3개의 CDR 및 서열 번호: 2, 4, 6 및 8로부터 선택된 VL 도메인의 3개의 CDR을 포함한다. 일부 측면에서, CDR은 예시적인 CDR이다. 일부 측면에서, CDR은 카밧 CDR이다. 일부 측면에서, CDR은 초티아 CDR이다. 일부 측면에서, CDR은 AbM CDR이다. 일부 측면에서, CDR은 컨택트 CDR이다. 일부 측면에서, CDR은 IMGT CDR이다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호: 11의 선택된 CDR-H3을 포함한다. 일부 측면에서, CDR-H3은 서열 번호: 11의 CDR-H3과 적어도 약 50%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일성을 갖는다. 일부 구현예에서, CDR-H3은 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호: 11의 선택된 CDR-H3이다. 일부 측면에서, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, 이 단락에 기재된 항체는 본원에서 "변이체"로 지칭된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 변이체는, 예를 들어, 친화도 성숙, 부위 지정 돌연변이유발, 무작위 돌연변이유발, 또는 당 업계에 공지되거나 본원에 기재된 임의의 다른 방법에 의해 본원에 제공된 서열로부터 유도된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 변이체는 본원에 제공된 서열로부터 유도되지 않으며, 예를 들어, 항체를 수득하기 위해 본원에 제공된 방법에 따라 새로 단리될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호: 10의 CDR-H2를 포함한다. 일부 측면에서, CDR-H2는 서열 번호: 10의 CDR-H2와 적어도 약 50%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일성을 갖는다. 일부 구현예에서, CDR-H2는 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호: 10의 CDR-H2이다. 일부 측면에서, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, 이 단락에 기재된 항체는 본원에서 "변이체"로 지칭된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 변이체는, 예를 들어, 친화도 성숙, 부위 지정 돌연변이유발, 무작위 돌연변이유발, 또는 당 업계에 공지되거나 본원에 기재된 임의의 다른 방법에 의해 본원에 제공된 서열로부터 유도된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 변이체는 본원에 제공된 서열로부터 유도되지 않으며, 예를 들어, 항체를 수득하기 위해 본원에 제공된 방법에 따라 새로 단리될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호: 9의 CDR-H1을 포함한다. 일부 측면에서, CDR-H1은 서열 번호: 9의 CDR-H1과 적어도 약 50%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일성을 갖는다. 일부 구현예에서, CDR-H1은 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호: 9의 CDR-H1이다. 일부 측면에서, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, 이 단락에 기재된 항체는 본원에서 "변이체"로 지칭된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 변이체는, 예를 들어, 친화도 성숙, 부위 지정 돌연변이유발, 무작위 돌연변이유발, 또는 당 업계에 공지되거나 본원에 기재된 임의의 다른 방법에 의해 본원에 제공된 서열로부터 유도된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 변이체는 본원에 제공된 서열로부터 유도되지 않으며, 예를 들어, 항체를 수득하기 위해 본원에 제공된 방법에 따라 새로 단리될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호: 11의 CDR-H3 및 서열 번호:10의 CDR-H2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호: 11의 CDR-H3, 서열 번호: 10의 CDR-H2, 및 서열 번호: 9의 CDR-H1을 포함한다. 일부 구현예에서, CDR-H3은 서열 번호: 11의 CDR-H3과 적어도 약 50%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일성을 가지며, CDR-H2는 서열 번호: 10의 CDR-H2와 적어도 약 50%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일성을 가지며, CDR-H1은 서열 번호: 9의 CDR-H1과 적어도 약 50%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일성을 갖는다. 일부 구현예에서, CDR-H3은 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호: 11의 CDR-H3이고; CDR-H2는 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호: 10의 CDR-H2이고; CDR-H1은 최대 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호: 9의 CDR-H1이다. 일부 측면에서, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, 이 단락에 기재된 항체는 본원에서 "변이체"로 지칭된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 변이체는, 예를 들어, 친화도 성숙, 부위 지정 돌연변이유발, 무작위 돌연변이유발, 또는 당 업계에 공지되거나 본원에 기재된 임의의 다른 방법에 의해 본원에 제공된 서열로부터 유도된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 변이체는 본원에 제공된 서열로부터 유도되지 않으며, 예를 들어, 항체를 수득하기 위해 본원에 제공된 방법에 따라 새로 단리될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호: 14의 CDR-L3을 포함한다. 일부 측면에서, CDR-L3은 서열 번호: 14의 CDR-L3과 적어도 약 50%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일성을 갖는다. 일부 구현예에서, CDR-L3은 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호: 14의 CDR-L3이다. 일부 측면에서, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, 이 단락에 기재된 항체는 본원에서 "변이체"로 지칭된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 변이체는, 예를 들어, 친화도 성숙, 부위 지정 돌연변이유발, 무작위 돌연변이유발, 또는 당 업계에 공지되거나 본원에 기재된 임의의 다른 방법에 의해 본원에 제공된 서열로부터 유도된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 변이체는 본원에 제공된 서열로부터 유도되지 않으며, 예를 들어, 항체를 수득하기 위해 본원에 제공된 방법에 따라 새로 단리될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호: 13의 CDR-L2를 포함한다. 일부 측면에서, CDR-L2는 서열 번호: 13의 CDR-L2와 적어도 약 50%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일성을 갖는다. 일부 구현예에서, CDR-L2는 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호: 13의 CDR-L2이다. 일부 측면에서, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, 이 단락에 기재된 항체는 본원에서 "변이체"로 지칭된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 변이체는, 예를 들어, 친화도 성숙, 부위 지정 돌연변이유발, 무작위 돌연변이유발, 또는 당 업계에 공지되거나 본원에 기재된 임의의 다른 방법에 의해 본원에 제공된 서열로부터 유도된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 변이체는 본원에 제공된 서열로부터 유도되지 않으며, 예를 들어, 항체를 수득하기 위해 본원에 제공된 방법에 따라 새로 단리될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호: 12의 CDR-L1을 포함한다. 일부 측면에서, CDR-L1은 서열 번호: 12의 CDR-L1과 적어도 약 50%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일성을 갖는다. 일부 구현예에서, CDR-L1은 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호: 12의 CDR-L1이다. 일부 측면에서, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, 이 단락에 기재된 항체는 본원에서 "변이체"로 지칭된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 변이체는, 예를 들어, 친화도 성숙, 부위 지정 돌연변이유발, 무작위 돌연변이유발, 또는 당 업계에 공지되거나 본원에 기재된 임의의 다른 방법에 의해 본원에 제공된 서열로부터 유도된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 변이체는 본원에 제공된 서열로부터 유도되지 않으며, 예를 들어, 항체를 수득하기 위해 본원에 제공된 방법에 따라 새로 단리될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호: 14의 CDR-L3 및 서열 번호: 13의 CDR-L2를 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호: 14의 CDR-L3, 서열 번호: 13의 CDR-L2 및 서열 번호: 12의 CDR-L1을 포함한다. 일부 구현예에서, CDR-L3은 서열 번호: 14의 CDR-L3과 적어도 약 50%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일성을 가지며, CDR-L2는 서열 번호: 13의 CDR-L2와 적어도 약 50%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일성을 가지며, CDR-L1은 서열 번호: 12의 CDR-L1과 적어도 약 50%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일성을 갖는다. 일부 구현예에서, CDR-L3은 최대 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호: 14의 CDR-L3이고; CDR-L2는 최대 1, 2, 3 또는 4개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호: 13의 CDR-L2이고; CDR-L1은 최대 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호: 12의 CDR-L1이다. 일부 측면에서, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, 이 단락에 기재된 항체는 본원에서 "변이체"로 지칭된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 변이체는, 예를 들어, 친화도 성숙, 부위 지정 돌연변이유발, 무작위 돌연변이유발, 또는 당 업계에 공지되거나 본원에 기재된 임의의 다른 방법에 의해 본원에 제공된 서열로부터 유도된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 변이체는 본원에 제공된 서열로부터 유도되지 않으며, 예를 들어, 항체를 수득하기 위해 본원에 제공된 방법에 따라 새로 단리될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호: 11의 CDR-H3, 서열 번호: 10의 CDR-H2, 서열 번호: 9의 CDR-H1, 서열 번호: 14의 CDR-L3, 서열 번호: 13의 CDR-L2, 및 서열 번호: 12의 CDR-L1을 포함한다. 일부 구현예에서, CDR-H3은 서열 번호: 11의 CDR-H3과 적어도 약 50%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일성을 가지며, CDR-H2는 서열 번호: 10의 CDR-H2와 적어도 약 50%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일성을 가지며, CDR-H1은 서열 번호: 9의 CDR-H1과 적어도 약 50%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일성을 가지며, CDR-L3은 서열 번호: 14의 CDR-L3과 적어도 약 50%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일성을 가지며, CDR-L2는 서열 번호: 13의 CDR-L2와 적어도 약 50%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일성을 가지며, CDR-L1은 서열 번호: 12의 CDR-L1과 적어도 약 50%, 75%, 80%, 85%, 90% 또는 95% 동일성을 갖는다. 일부 구현예에서, CDR-H3은 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호: 11의 CDR-H3이고; CDR-H2는 최대 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호: 10의 CDR-H2이고; CDR-H1은 최대 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호: 9의 CDR-H1이고; CDR-L3은 최대 1, 2, 3, 4 또는 5개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호: 14의 CDR-L3이고; CDR-L2는 최대 1, 2, 3 또는 4개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호: 13의 CDR-L2이고; CDR-L1은 최대 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 아미노산 치환을 갖는 서열 번호: 12의 CDR-L1이다. 일부 측면에서, 아미노산 치환은 보존적 아미노산 치환이다. 일부 구현예에서, 이 단락에 기재된 항체는 본원에서 "변이체"로 지칭된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 변이체는, 예를 들어, 친화도 성숙, 부위 지정 돌연변이유발, 무작위 돌연변이유발, 또는 당 업계에 공지되거나 본원에 기재된 임의의 다른 방법에 의해 본원에 제공된 서열로부터 유도된다. 일부 구현예에서, 그와 같은 변이체는 본원에 제공된 서열로부터 유도되지 않으며, 예를 들어, 항체를 수득하기 위해 본원에 제공된 방법에 따라 새로 단리될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 서열 번호:9의 CDR-H1, 서열 번호:10의 CDR-H2, 서열 번호:11의 CDR-H3, 서열 번호:12의 CDR-L1, 서열 번호:13의 CDR-L2, 및 서열 번호:14의 CDR-L1을 포함한다.
Fc 영역
본원에서 용어 "Fc 도메인" 또는 "Fc 영역"은 불변 영역의 적어도 일부를 함유하는 면역글로불린 중쇄의 C-말단 영역을 정의하는데 사용된다. 상기 용어는 고유 서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 포함한다. 본원에서 달리 명시되지 않는 한, Fc 영역 또는 불변 영역 내 아미노산 잔기의 넘버링은 하기에 기재된 바와 같이, EU 인덱스라고도 하는 EU 넘버링 시스템을 따른다: Kabat et al, Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991. 본원에 사용된 이량체 Fc의 "Fc 폴리펩티드"는 이량체 Fc 도메인을 형성하는 2개의 폴리펩티드 중 하나, 즉 면역글로불린 중쇄의 C-말단 불변 영역을 포함하고, 안정적인 자가-회합 가능한 폴리펩티드를 지칭한다. 예를 들어, 이량체 IgG Fc의 Fc 폴리펩티드는 IgG CH2 및 IgG CH3 불변 도메인 서열을 포함한다. Fc는 부류 IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM의 것일 수 있으며, 이들 중 몇몇은 하위 부류 (이소형), 예를 들어, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2로 더 나뉠 수 있다.
용어 "Fc 수용체" 및 "FcR"은 항체의 Fc 영역에 결합하는 수용체를 설명하기 위해 사용된다. 예를 들어, FcR은 천연 서열 인간 FcR일 수 있다. 일반적으로, FcR은 IgG 항체 (감마 수용체)에 결합하고, 대립 유전자 변이체 및 대안적으로 스플라이싱된 형태의 이들 수용체를 포함하는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII 하위 부류의 수용체를 포함하는 것이다. FcγRII 수용체는 FcγRIIA ("활성화 수용체") 및 FcγRIIB ("억제 수용체")를 포함하는데, 이들은 주로 세포질 도메인이 상이한 유사한 아미노산 서열을 갖는다. 다른 이소형의 면역글로불린은 또한 특정 FcR에 의해 결합될 수 있다 (예를 들어, Janeway et al., Immuno Biology: the immune system in health and disease, (Elsevier Science Ltd., NY) (4th ed., 1999) 참고). 활성화 수용체 FcγRIIA는 이의 세포질 도메인에서 면역수용체 티로신-기반 활성화 모티프 (ITAM)를 함유한다. 억제 수용체 FcγRIIB는 이의 세포질 도메인에서 면역수용체 티로신-기반 억제 모티프 (ITIM)를 함유한다 (
Figure pct00003
, Annu. Rev. Immunol. 15:203-234 (1997)에서 검토됨). FcR은 하기에서 검토된다: Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92 (1991); Capel et al., Immunomethods 4:25-34 (1994); 및 de Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126:330-41 (1995). 미래에 확인될 것을 비롯한 다른 FcR은 본원에서 용어 "FcR"에 포함된다. 상기 용어는 또한 모체 IgG를 태아로 옮기는 역할을 하는 신생아 수용체인 FcRn을 포함한다 (Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976); 및 Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)).
일부 구현예에서, 항체는 IgG1 항체이다.
일부 구현예에서, 항체는 IgG3 항체이다.
일부 구현예에서, 항체는 IgG2 항체이다.
일부 구현예에서, 항체는 IgG4 항체이다.
CH2 도메인 내 변형은 Fc에 대한 FcR의 결합에 영향을 줄 수 있다. 상이한 Fc-감마 (Fcγ) 수용체에 대한 Fc의 친화도를 선택적으로 변경시키기 위해 Fc 영역 내 수많은 아미노산 변형이 당 업계에 공지되어 있다. 일 구현예에서, Fc는 Fc-감마 수용체의 선택적인 결합을 촉진시키기 위한 하나 이상의 변형을 포함한다.
Fc에 대한 FcR의 결합을 변경시키는 예시적인 돌연변이는 하기 열거되어 있다:
S298A/E333A/K334A,　S298A/E333A/K334A/K326A (Lu Y, Vernes JM, Chiang N, et al. 　J Immunol Methods. 2011 Feb 28;365(1-2):132-41);
F243L/R292P/Y300L/V305I/P396L,　F243L/R292P/Y300L/L235V/P396L (Stavenhagen JB, Gorlatov S, Tuaillon N, et al. Cancer Res. 2007 Sep 15;67(18):8882-90;　Nordstrom JL, Gorlatov S, Zhang W, et al. Breast Cancer Res. 2011 Nov 30;13(6):R123);
F243L (Stewart R, Thom G, Levens M, et al. Protein Eng Des Sel. 2011 Sep;24(9):671-8.),　S298A/E333A/K334A (Shields RL, Namenuk AK, Hong K, et al. J Biol Chem. 2001 Mar 2;276(9):6591-604);
S239D/I332E/A330L,　S239D/I332E (Lazar GA, Dang W, Karki S, et al. Proc Natl Acad Sci U S A. 2006 Mar 14;103(11):4005-10);
S239D/S267E,　S267E/L328F (Chu SY, Vostiar I, Karki S, et al. Mol Immunol. 2008 Sep;45(15):3926-33);
S239D/D265S/S298A/I332E,　S239E/S298A/K326A/A327H,　G237F/S298A/A330L/I332E,　S239D/I332E/S298A,　S239D/K326E/A330L/I332E/S298A,　G236A/S239D/D270L/I332E,　S239E/S267E/H268D,　L234F/S267E/N325L,　G237F/V266L/S267D 및 본원에 참고로 포함된 WO2011/120134 및 WO2011/120135에 열거된 다른 돌연변이. 치료 항체 조작 (Therapeutic Antibody Engineering)　(William R. Strohl and Lila M. Strohl 저, Woodhead Publishing series in Biomedicine No 11, ISBN 1 907568 37 9, Oct 2012)에서는 페이지 283에서 돌연변이가 열거되어 있다.
일부 구현예에서 본원에 기재된 항체는 효과기 기능을 매개하는 이의 능력을 개선시키기 위한 변형을 포함한다. 그와 같은 변형은 당 업계에 공지되어 있으며, 활성화 수용체, 주로 ADCC의 경우 FCGR3a, CDC의 경우 C1q에 대한 Fc의 친화도의 탈푸코실화 또는 조작을 포함한다. 하기 표 B는 효과기 기능 조작에 대해 문헌에 보고된 다양한 디자인을 요약하고 있다.
특정 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 Fc 영역의 298, 333 및 334번 위치 중 하나 이상에서의 치환과 같이, ADCC를 개선시키는 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 그 전문이 참고로 포함된 Lazar et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 2006,103:4005-4010에 기재된 바와 같이, 239, 332 및 330번 위치에서 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 Fc 영역을 포함한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 C1q 결합 및/또는 CDC를 개선 또는 감소시키는 하나 이상의 변형을 포함한다. 미국 특허 번호 6,194,551; WO 99/51642; 및 Idusogie et al., J. Immunol ., 2000, 164:4178-4184를 참고하며; 이들 각각은 그 전문이 참고로 포함되어 있다.
따라서, 일 구현예에서, 본원에 기재된 항체는 개선된 효과기 기능을 제공하는 표 B에 언급된 하나 이상의 아미노산 변형을 포함하는 이량체 Fc를 포함할 수 있다. 또 다른 구현예에서, 항체는 효과기 기능을 개선시키기 위해 탈푸코실화될 수 있다.
표 B: CH2 도메인 및 효과기 기능 조작
Figure pct00004
FcγR 및/또는 보체 결합 및/또는 효과기 기능을 감소시키는 Fc 변형이 당 업계에 공지되어 있다. 최근 간행물은 효과기 활성이 감소되거나 침묵된 항체를 조작하는데 사용된 전략을 설명한다 (Strohl, WR (2009), Curr Opin Biotech 20:685-691, and Strohl, WR and Strohl LM, "Antibody Fc engineering for optimal antibody performance" In Therapeutic Antibody Engineering, Cambridge: Woodhead Publishing (2012), pp 225-249 참고). 이들 전략은 글리코실화의 변형, IgG2/IgG4 스캐폴드의 사용, 또는 Fc의 힌지 또는 CH2 영역에 돌연변이의 도입을 통한 효과기 기능의 감소를 포함한다. 예를 들어, 미국 특허 공보 번호 2011/0212087 (Strohl), 국제 특허 공보 번호 WO 2006/105338 (Xencor), 미국 특허 공보 번호 2012/0225058 (Xencor), 미국 특허 공보 번호 2012/0251531 (Genentech), 및 Strop 등 ((2012) J. Mol. Biol. 420: 204-219)은 Fc에 대한 FcγR 또는 보체 결합을 감소시키기 위한 특정 변형을 기술한다.
Fc에 대한 FcγR 또는 보체 결합을 감소시키기 위해 공지된 아미노산 변형의 구체적인 비제한적인 예는 하기 표 C에서 식별된 것들을 포함한다:
표 C: Fc에 대한 FcγR 또는 보체 결합을 감소시키는 변형
Figure pct00005
아미노산 서열을 변경하지 않고 Fc 글리코실화 부위 (Asn 297 EU 넘버링)에서 푸코스가 거의 또는 전혀 없는 항체를 생산하는 방법이 당 업계에 잘 알려져 있다. GlymaxX®　기술 (ProBioGen AG)은 푸코스 생합성의 세포 경로를 항체 생산에 사용되는 세포로 편향시키는 효소 유전자의 도입을 기반으로 한다. 이는 항체-생산 세포에 의해 당 "푸코스"가 N-연결된 항체 탄수화물 부분에 추가되는 것을 방지한다. (von Horsten et al. (2010) Glycobiology.　2010 Dec; 20 (12):1607-18.) 탈푸코실화된 항체를 생산할 수 있는 세포주의 예는 박테리아 산화 환원 효소 GDP-6-데옥시-D-릭소-4-헥실로스 환원 효소 (RMD)를 안정적으로 과발현시키는 CHO-DG44 (Henning von Horsten et al., Glycobiol 2010, 20:1607-1618 참고) 또는 단백질 푸코실화가 결핍된 Lec13 CHO 세포 (Ripka et al., Arch. Biochem . Biophys ., 1986, 249:533-545; 미국 특허 공보 번호 2003/0157108; WO 2004/056312 참고; 이들 각각은 그 전문이 참고로 포함됨), 및 녹아웃 세포주, 예컨대 알파-1,6-푸코실트랜스퍼라제 유전자 또는 FUT8 녹아웃 CHO 세포 (Yamane-Ohnuki et al., Biotech. Bioeng., 2004, 87: 614-622; Kanda et al., Biotechnol . Bioeng ., 2006, 94:680-688; 및 WO 2003/085107 참고; 이들 각각은 그 전문이 참고로 포함됨)를 포함한다. 보다 낮은 수준의 푸코실화를 갖는 항체를 수득하기 위한 또 다른 접근법은 미국 특허 8,409,572에서 확인할 수 있으며, 이는 항체 상에서 더 낮은 푸코실화 수준을 생성하는 능력에 대한 항체 생산용 세포주 선택을 교시한다
항체는 완전히 탈푸코실화될 수 있거나 (검출 불가능한 푸코스를 함유함을 의미함) 또는 부분적으로 탈푸코실화될 수 있으며, 이는 단리된 항체가 포유동물 발현 시스템에 의해 생성된 유사한 항체에 대해 정상적으로 검출된 푸코스 양의 95% 미만, 85% 미만, 75% 미만, 65% 미만, 55% 미만, 45% 미만, 35% 미만, 25% 미만, 15% 미만 또는 5% 미만을 함유함을 의미한다.
일부 측면에서, 본원에 제공된 항체는 자연 발생 IgG1 도메인과 비교하여 Asn 297번 위치에서 감소된 푸코스 함량을 갖는 IgG1 도메인을 포함한다. 그와 같은 Fc 도메인은 ADCC를 개선시키는 것으로 알려져 있다. 그 전문이 참고로 포함된 Shields et al., J. Biol . Chem ., 2002, 277:26733-26740을 참고한다. 일부 측면에서, 그와 같은 항체는 Asn 297번 위치에서 어떠한 푸코스도 포함하지 않는다. 푸코스의 양은, 예를 들어, 그 전문이 참고로 포함된, WO 2008/077546에 기재된 바와 같이, 임의의 적합한 방법을 사용하여 결정될 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 이등분된(bisected) 올리고당, 예컨대 GlcNAc에 의해 이등분된 항체의 Fc 영역에 부착된 바이안테너리(biantennary) 올리고당을 포함한다. 그와 같은 항체 변이체는 감소된 푸코실화 및/또는 개선된 ADCC 기능을 가질 수 있다. 그와 같은 항체 변이체의 예는, 예를 들어, 하기에 기재되어 있다: WO 2003/011878; 미국 특허 번호 6,602,684; 및 미국 특허 출원 번호 2005/0123546; 이들 각각은 그 전문이 참고로 포함되어 있다.
본원에 제공된 항체에 포함될 수 있는 다른 예시적인 글리코실화 변이체는 예를 들어 미국 특허 출원 번호 2003/0157108, 2004/0093621, 2003/0157108, 2003/0115614, 2002/0164328, 2004/0093621, 2004/0132140, 2004/0110704, 2004/0110282, 2004/0109865; 국제 특허 출원 번호 2000/61739, 2001/29246, 2003/085119, 2003/084570, 2005/035586, 2005/035778; 2005/053742, 2002/031140; Okazaki et al., J. Mol . Biol ., 2004, 336:1239-1249; 및 Yamane-Ohnuki et al., Biotech. Bioeng ., 2004, 87: 614-622에 기재되어 있고; 이들 각각은 그 전문이 참고로 포함되어 있다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 Fc 영역에 부착된 올리고당에서 적어도 하나의 갈락토스 잔기를 갖는 Fc 영역을 포함한다. 그와 같은 항체 변이체는 개선된 CDC 기능을 가질 수 있다. 그와 같은 항체 변이체의 예는 예를 들어 WO 1997/30087; WO 1998/58964; 및 WO 1999/22764에 기재되어 있고; 이들 각각은 그 전문이 참고로 포함되어 있다.
탈푸코실화된 항체를 생산할 수 있는 세포주의 예는 박테리아 산화 환원 효소 GDP-6-데옥시-D-릭소-4-헥실로스 환원 효소 (RMD)를 안정적으로 과발현시키는 CHO-DG44 (Henning von Horsten et al., Glycobiol 2010, 20:1607-1618 참고) 또는 단백질 푸코실화가 결핍된 Lec13 CHO 세포 (Ripka et al., Arch. Biochem. Biophys., 1986, 249:533-545; 미국 특허 공보 번호 2003/0157108; WO 2004/056312 참고; 이들 각각은 그 전문이 참고로 포함됨), 및 녹아웃 세포주, 예컨대 알파-1,6-푸코실트랜스퍼라제 유전자 또는 FUT8 녹아웃 CHO 세포 (Yamane-Ohnuki et al., Biotech. Bioeng ., 2004, 87: 614-622; Kanda et al., Biotechnol . Bioeng ., 2006, 94:680-688; 및 WO 2003/085107 참고; 이들 각각은 그 전문이 참고로 포함됨)를 포함한다.
일부 구현예에서, 항체는 항체-의존적 세포 식균작용 (ADCP) 활성을 갖는다. ADCP는 항체가 병원성 또는 종양형성 표적-세포의 표면에서 항원에 결합할 때 발생할 수 있다. 단핵구 및 대식세포를 포함하여 세포 표면에 Fc 수용체를 보유하는 식세포는 표적-세포에 결합된 항체의 Fc 영역을 인식하고 이에 결합한다. Fc 수용체가 항체-결합 표적 세포에 결합되면, 표적 세포의 식균작용이 개시될 수 있다. ADCP는 ADCC의 한 형태인 것으로 간주될 수 있다.
일부 구현예에서, 항체는 면역 복합체를 형성할 수 있다. 예를 들어, 면역 복합체는 항체로 덮힌 종양 세포일 수 있다.
일부 측면에서, 항-TREM2 항체는 암 조직의 외부에 존재하는 골수 세포에 실질적으로 결합하지 않는다. 일부 측면에서, 항-TREM2 항체는 암 조직에 존재하는 자극성 골수 세포에 실질적으로 결합하지 않는다.
일부 구현예에서 항체는 단클론 항체이다.
일부 구현예에서 항체는 다클론 항체이다.
일부 구현예에서 항체는 하이브리도마에 의해 생성된다. 다른 구현예에서, 항체는 원하는 가변 및 불변 도메인을 발현시키도록 조작된 재조합 세포에 의해 생성된다.
일부 구현예에서 항체는 단쇄 항체, 또는 항원 특이성 및 하부 힌지 영역 또는 이의 변이체를 보유하는 다른 항체 유도체일 수 있다.
일부 구현예에서 항체는 다작용성 항체, 재조합 항체, 인간 항체, 인간화된 항체, 이의 단편 또는 변이체일 수 있다. 특정 구현예에서, 항체 단편 또는 이의 유도체는 Fab 단편, Fab'2 단편, CDR 및 ScFv로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 항체는 TREM2 단백질과 같은 표면 항원에 특이적이다. 일부 구현예에서, 치료 항체는 종양 항원 (예를 들어, 종양 세포에 의해 특이적으로 발현된 분자)에 특이적이다. 특정 구현예에서, 치료 항체는 인간 또는 비인간 영장류 IgG1 또는 IgG3 Fc 부분을 가질 수 있다.
결합
표적 분자에 대한 항체의 결합과 관련하여, 특정 항원 (예를 들어, 폴리펩티드 표적) 또는 특정 항원 상의 에피토프에 "결합하다", "특이적 결합", "특이적으로 결합하다", "특이적인", "선택적으로 결합하다" 및 "선택적인"이라는 용어는 비-특이적 또는 비-선택적 상호작용 (예를 들어, 비-표적 분자와의)과는 분명히 다른 결합을 의미한다. 특이적 결합은, 예를 들어, 표적 분자와의 결합을 측정하고 이를 비-표적 분자와의 결합과 비교함으로써 측정될 수 있다. 특이적 결합은 또한 표적 분자에서 인식되는 에피토프를 모방하는 대조군 분자와의 경쟁에 의해 결정될 수 있다. 그 경우, 표적 분자에 대한 항체의 결합이 대조 분자에 의해 경쟁적으로 억제된다면 특이적 결합이 지시된다.
"친화도"는 분자의 단일 결합 부위 (예를 들어, 항체)와 이의 결합 파트너 (예를 들어, 항원 또는 에피토프) 사이의 비공유 상호작용의 총합의 강도를 지칭한다. 달리 지시되지 않는 한, 본원에 사용된 "친화도"는 결합 쌍의 구성원 (예를 들어, 항체 및 항원 또는 에피토프) 사이의 1:1 상호작용을 반영하는 고유 결합 친화도를 지칭한다. 분자 X의 이의 파트너 Y에 대한 친화도는 해리 평형 상수 (KD)로 나타낼 수 있다. 해리 평형 상수에 기여하는 동역학 성분은 하기에 더 자세히 설명되어 있다. 친화도는 표면 플라즈몬 공명 (SPR) 기술 (예를 들어, BIACORE®) 또는 생물층 간섭계법 (예를 들어, FORTEBIO®)과 같은 본원에 기재된 것을 포함하여, 당 업계에 공지된 통상적인 방법에 의해 측정될 수 있다.
본원에 사용된 용어 "kd" (sec- 1)는 특정 항체-항원 상호작용의 해리 속도 상수를 지칭한다. 이 값은 koff 값이라고도 한다.
본원에 사용된 용어 "ka" (M-1×sec- 1)는 특정 항체-항원 상호작용의 결합 속도 상수를 지칭한다. 이 값은 또한 kon 값이라고도 한다.
본원에 사용된 용어 "KD" (M)는 특정 항체-항원 상호작용의 해리 평형 상수를 지칭한다. KD = kd/ka. 일부 구현예에서, 항체의 친화도는 이러한 항체와 이의 항원 사이의 상호작용에 대한 KD로 기재된다. 명확성을 위해, 당 업계에 공지된 바와 같이, 더 작은 KD 값은 더 높은 친화력 상호작용을 나타내는 반면, 더 큰 KD 값은 더 낮은 친화력 상호작용을 나타낸다.
본원에 사용된 용어 "KA" (M- 1)는 특정 항체-항원 상호작용의 결합 평형 상수를 지칭한다. KA = ka/kd.
본원에서 2개 이상의 항체와 관련하여 사용될 때, 용어 "와 경쟁하다" 또는 "와 교차-경쟁하다"는 2개 이상의 항체가 항원 (예를 들어, TREM2)과의 결합에 대해 경쟁한다는 것을 나타낸다. 하나의 예시적인 분석에서, TREM2를 표면에 코팅하고 제1 TREM2 항체와 접촉시킨 후 제2 TREM2 항체를 첨가한다. 또 다른 예시적인 분석에서, 제1 TREM2 항체를 표면에 코팅하고 TREM2와 접촉시킨 다음 제2 TREM2 항체를 첨가한다. 제1 TREM2 항체의 존재가 제2 TREM2 항체의 결합을 감소시킨다면, 어느 분석에서든, 항체는 서로 경쟁한다. 용어 "와 경쟁하다"는 또한 하나의 항체가 또 다른 항체의 결합을 감소시키지만, 항체가 역순으로 첨가될 때 경쟁이 관찰되지 않는 항체의 조합을 포함한다. 그러나, 일부 구현예에서, 제1 및 제2 항체는 이들이 첨가되는 순서와 상관없이 서로 결합을 억제한다. 일부 구현예에서, 하나의 항체는 이의 항원에 대한 또 다른 항체의 결합을 적어도 25%, 적어도 50%, 적어도 60%, 적어도 70%, 적어도 80%, 적어도 85%, 적어도 90% 또는 적어도 95% 감소시킨다. 숙련가는 TREM2에 대한 항체의 친화도 및 항체의 원자가에 기초하여 경쟁 분석에 사용되는 항체의 농도를 선택할 수 있다. 이 정의에 기술된 분석은 예시적이며, 숙련가는 항체가 서로 경쟁하는지를 결정하기 위해 임의의 적합한 분석을 이용할 수 있다. 적합한 분석은, 예를 들어, Cox et al., "Immunoassay Methods," in Assay Guidance Manual [Internet], Updated December 24, 2014 (www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK92434/; accessed September 29, 2015); Silman et al., Cytometry, 2001, 44:30-37; 및 Finco et al., J. Pharm . Biomed . Anal., 2011, 54:351-358에 기재되어 있고; 이들 각각은 그 전문이 참고로 포함된다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 Biacore 분석법으로 측정될 때, 약 0.001, 0.01, 0.02, 0.03, 0.04, 0.05, 0.06, 0.07, 0.08, 0.09, 0.1, 0.2, 0.3, 0.4, 0.5, 0.6, 0.7, 0.8, 0.9, 1, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 1.95, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10x10-9 M 이하의 KD로 인간 TREM2에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체의 KD는 Biacore 분석법으로 측정될 때, 약 0.001-0.01, 0.01-0.1, 0.01-0.05, 0.05-0.1, 0.1-0.5, 0.5-1, 0.25-0.75, 0.25-0.5, 0.5-0.75, 0.75-1, 0.75-2, 1.1-1.2, 1.2-1.3, 1.3-1.4, 1.4-1.5, 1.5-1.6, 1.6-1.7, 1.7-1.8, 1.8-1.9, 1.9-2, 1-2, 1-5, 2-7, 3-8, 3-5, 4-6, 5-7, 6-8, 7-9, 7-10, 또는 5-10x10-9 M이다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 Biacore 분석법으로 측정될 때, 약 2, 1.98, 1.95, 1.9, 1.85, 1.8, 1.75, 1.7, 1.65, 1.6, 1.55, 1.50, 1.45, 또는 1.4 x10-9 M 이하의 Kd로 인간 TREM2에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 Biacore 분석법으로 측정될 때, 1.9-1.8, 1.8-1.7, 1.7-1.6, 1.6-1.5, 또는 1.9-1.5x10-9 M의 KD로 인간 TREM2에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 Biacore 분석법으로 측정될 때, 약 10, 9.56, 9.5, 9.0, 8.88, 8.84, 8.5, 8, 7.5, 7.32, 7, 6.5, 6, 5.5, 5, 4.5, 4, 3.5, 3, 2.5, 2, 1.5, 또는 1x10-4 (1/s) 이하의 Kd로 인간 TREM2에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 Biacore 분석법으로 측정될 때, 7-10, 7-8, 8-9, 9-10, 7-7.5, 7.5-8, 8.-8.5, 8.5-9, 9-9,5, 또는 9.5-10x10-4 (1/s)의 Kd로 인간 TREM2에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 Biacore 분석법으로 측정될 때, 약 4, 4.1, 4.2, 4.3, 4.4, 4.5, 4.6, 4.7, 4.8, 4.9, 45, 5.1, 5.2, 5.3, 5.4, 5.5, 5.6, 5.7, 5.8, 5.9, 6, 7, 8, 9, 또는 10x105 (1/Ms) 이상의 Ka로 인간 TREM2에 결합한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 Biacore 분석법으로 측정될 때, 4-7, 4-4.5, 4.5-5, 5-5.5, 5.5-6, 6-6.5, 또는 6.5-7, 7-8, 8-9, 또는 9-10x105 (1/Ms)의 Ka로 인간 TREM2에 결합한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 유세포 분석법으로 측정될 때 2, 1.9, 1.8, 1.7, 1.6, 1.5, 1.4, 1.3, 1.2, 1.1, 0.9, 0.8, 0.7, 0.6, 0.5, 0.4, 0.3, 0.2, 또는 0.1 nM 이하의 EC50으로 인간 TREM2에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 유세포 분석법으로 측정될 때 0.6-1.4 nM의 EC50으로 인간 TREM2에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 유세포 분석법으로 측정될 때 약 0.5, 0.6, 0.9, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 또는 1.5 nM의 EC50으로 인간 TREM2에 결합한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 유세포 분석법으로 측정될 때 2, 1.9, 1.8, 1.7, 1.6, 1.5, 1.4, 1.3, 1.2, 1.1, 0.9, 0.8, 0.7, 0.6, 0.5, 0.4, 0.3, 0.2, 또는 0.1 nM 이하의 EC50으로 마우스 TREM2에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 유세포 분석법으로 측정될 때 0.6-1.4 nM의 EC50으로 마우스 TREM2에 결합한다. 일부 구현예에서, 항체는 유세포 분석법으로 측정될 때 약 0.5, 0.6, 0.9, 1.1, 1.2, 1.3, 1.4, 또는 1.5 nM의 EC50으로 마우스 TREM2에 결합한다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 유세포 분석법으로 측정될 때 20 nM 이상의 EC50으로 인간 TREM2에 결합하지 않는다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 유세포 분석법으로 측정될 때 3 nM 이상의 EC50으로 마우스 TREM2에 결합하지 않는다.
관심 항체 (예를 들어, TREM2)에 의해 결합된 표적 항원 상의 에피토프에 결합하는 항체를 스크리닝하기 위해, Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Ed Harlow and David Lane (1988)에 기재된 것과 같은 일상적인 교차-차단 분석을 수행할 수 있다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 에피토프 맵핑(epitope mapping)은 당 업계에 공지된 방법에 의해 수행될 수 있다.
항체 간의 경쟁은 시험 중인 항체가 공통 항원에 대한 기준 항체의 특이적 결합을 억제 또는 차단하는 분석에 의해 결정될 수 있다 (예를 들어, Junghans et al., Cancer Res. 50:1495, 1990; Fendly et al. Cancer Research 50: 1550-1558; US 6,949,245 참고).　과량의 시험 항체 (예를 들어, 적어도 2x, 5x, 10x, 20x, 또는 100x)가 경쟁 결합 분석에서 측정될 때 기준 항체의 결합을, 예를 들어, 적어도 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 99% 억제 또는 차단한다면 시험 항체는 기준 항체와 경쟁한다. 경쟁 분석에 의해 동정된 항체 (경쟁 항체)는 기준 항체와 동일한 에피토프에 결합하는 항체, 및 입체 장애가 발생하도록 기준 항체에 의해 결합된 에피토프에 충분히 근접한 인접 에피토프에 결합하는 항체를 포함한다. 예를 들어, TREM2에 대한 결합에 대해 본원에 기재된 제1 항체와 경쟁하는 제2의 경쟁 항체가 동정될 수 있다. 특정 예에서, 제2 항체는 경쟁 결합 분석에서 측정될 때 제1 항체의 결합을, 예를 들어, 적어도 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 99% 차단 또는 억제할 수 있다. 특정 예에서, 제2 항체는 제1 항체를 50%, 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 또는 99% 초과만큼 대체할 수 있다.
기능
일부 구현예에서, 항체는 항체-의존적 세포의 세포독성 (ADCC) 활성을 갖는다. ADCC는 항체가 병원성 또는 종양형성 표적-세포의 표면에서 항원에 결합할 때 발생할 수 있다. 세포독성 T-세포, 자연 살해 (NK) 세포, 대식세포, 호중구, 호산구, 수지상 세포 또는 단핵구를 포함하여 세포 표면에 Fc 감마 수용체 (FcγR 또는 FCGR)를 갖는 효과기 세포는 표적-세포에 결합된 항체의 Fc 영역을 인식하고 이에 결합한다. 그와 같은 결합은 세포 사멸로 이어지는 세포내 신호 전달 경로의 활성화를 유발할 수 있다. 특정 구현예에서, 항체의 면역글로불린 Fc 영역 아형 (이소형)은 인간 IgG1 및 IgG3을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, ADCC는 Fc 수용체 (FcR)를 발현시키는 비특이적 세포독성 세포 (예를 들어, 자연 살해 (NK) 세포, 호중구 및 대식세포)가 표적 세포 상에 결합된 항체를 인식하고 이어서 표적 세포의 용해를 유발하는 세포-매개 반응을 지칭한다. ADCC를 매개하기 위한 1차 세포인 NK 세포는 FcγRIII만을 발현시키는 반면, 단핵구는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII을 발현시킨다. 조혈 세포에서의 FcR 발현은 Ravetch and Kinet, Annu . Rev. Immunol 9:457-92 (1991)의 페이지 464의 표 3에 요약되어 있다. 관심 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위해, 미국 특허 번호 5,500,362 또는 5,821,337에 기재된 것과 같은 시험관내 ADCC 분석이 수행될 수 있다. 그와 같은 분석에 유용한 효과기 세포는 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 및 자연 살해 (NK) 세포를 포함한다. 대안적으로 또는 추가적으로, 관심 분자의 ADCC 활성은 Clynes et al., Proc . Natl . Acad . Sci. (USA) 95:652-656 (1998)에 개시된 것과 같이 생체내, 예를 들어, 동물 모델에서 평가될 수 있다.
일부 구현예에서, 항체는 보체-의존 세포독성 (CDC) 활성을 갖는다. 항체-유도된 CDC는 고전적 보체 캐스케이드의 단백질을 통해 매개되고, 보체 단백질 Clq가 항체에 결합함으로써 유발된다. Clq에 대한 항체 Fc 영역 결합은 보체 캐스케이드의 활성화를 유도할 수 있다. 특정 구현예에서, 항체의 면역글로불린 Fc 영역 아형 (이소형)은 인간 IgG1 및 IgG3을 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, CDC는 보체의 존재 하에서 표적을 용해시키는 분자의 능력을 지칭한다. 보체 활성화 경로는 보체 시스템 (C1q)의 제1 성분이 동족 항원과 복합체를 형성한 분자 (예를 들어, 폴리펩티드 (예를 들어, 항체))에 결합함으로써 개시된다. 보체 활성화를 평가하기 위해, 예를 들어, Gazzano-Santoro et al., J. Immunol . Methods 202:163 (1996)에 기재된 바와 같은 CDC 분석을 수행할 수 있다.
일부 구현예에서, 항체는 작용 항체(agonistic antibody)이다. 작용 항체는 항체가 세포 상에 발현된 TREM2 단백질에 결합한 후 NSM의 하나 이상의 활성 또는 기능을 유도 (예를 들어, 증가)할 수 있다. 작용 항체는 NSM에 결합하여 이를 활성화시켜 세포의 증식을 변화시키거나 항원 제시 능력을 변형시킬 수 있다. 작용 항체는 NSM에 결합하여 이를 활성화시켜 변형된 세포 성장 또는 아폽토시스를 초래하는 세포내 신호 전달 경로를 촉발시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 항체는 길항 항체이다. 길항 항체는 항체가 세포 상에 발현된 TREM2 단백질에 결합한 후 NSM의 하나 이상의 활성 또는 기능을 차단 (예를 들어, 감소)할 수 있다. 예를 들어, 길항 항체는 하나 이상의 NSM 단백질에 결합하는 리간드에 결합하고 이를 차단하여 세포의 분화 및 증식을 방지하거나 항원 제시 능력을 변형시킬 수 있다. 길항 항체는 이의 리간드에 의해 TREM2 단백질에 결합하고 이의 활성화를 방지하여 세포 성장 및 생존에 기여하는 세포내 신호 전달 경로를 변형시킬 수 있다.
일부 구현예에서 항체는 고갈 항체이다. 고갈 항체는 항체가 분자의 다른 면역 세포와의 상호 작용을 통해 접촉할 때 비-자극성 골수 세포를 사멸시킬 수 있는 항체이다. 예를 들어, 항체는, TREM2 단백질을 보유하는 세포에 결합될 때, 보체 단백질과 결합하여 보체-의존적 세포 용해를 유도할 수 있다. 항체는, TREM2 단백질을 보유하는 세포에 결합될 때, 또한, 항체-의존적 세포의 세포독성 (ADCC)에 의해 이를 사멸시키도록 Fc 수용체를 보유하는 인접 세포를 촉발시킬 수 있다.
일부 구현예에서, 항체는 중화 항체이고, 항체는 NSM의 하나 이상의 생물학적 활성을 중화시킨다. 일부 구현예에서, TREM2 단백질은 비-자극성 골수 세포의 표면에서 발현되고 항체는 TREM2 단백질의 세포외 도메인을 인식한다.
일부 구현예에서 항체는 NSM에 대해 선택적이다 (바람직하게는 TREM2에 결합한다). 특정 구현예에서, NSM에 선택적으로 결합하는 항체는 0.0001nM 내지 1μM 범위의 해리 상수 (Kd)를 갖는다. 특정 구현예에서, 항체는 다른 종의 단백질 중에서 보존된 TREM2 단백질 상의 에피토프에 특이적으로 결합한다. 또 다른 구현예에서, 선택적 결합은 배타적 결합을 포함하지만, 이를 요구하지는 않는다.
일 구현예에서 이의 표적에 결합된 항-TREM2 항체는 그것이 결합된 비-자극성 골수 세포의 생체내 고갈을 유발하는 역할을 한다. 일부 구현예에서, 클러스터된 항체에 의해 유도된 효과기 단백질은 염증성 사이토카인의 방출, 항원 생산 조절, 세포내이입 또는 세포 사멸을 포함하여, 다양한 반응을 유발할 수 있다. 일 구현예에서 항체는 생체내에서 보체를 동원하고 활성화시키거나 생체내에서 항체-의존적 세포의 세포독성 (ADCC)을 매개하거나 생체내에서 Fc 수용체에 결합함으로써 식균작용을 매개할 수 있다. 항체는 또한, 결합시 비-자극성 골수 세포의 아폽토시스 또는 괴사를 유도함으로써 비-자극성 골수 세포를 고갈시킬 수 있다.
일부 구현예에서 비-자극성 골수 세포의 무력화는 시험관내이며, a) 비-자극성 골수 세포의 사멸; b) 비-자극성 골수 세포의 자기 비드 고갈; 또는 c) 비-자극성 골수 세포의 형광-활성화된 세포 분류 (FACS) 분류에 의해 달성된다.
일부 구현예에서, 항체는 효과기 분자에 결합하거나 이에 접합된다. 특정 구현예에서, 항체는 방사성 핵종, 세포독소, 화학요법제, 약물, 전구 약물, 독소, 효소, 면역조절제, 항신생혈관제, 아폽토시스 촉진제(pro-apoptotic agent), 사이토카인, 호르몬, 올리고뉴클레오티드, 안티센스 분자, siRNA, 제2 항체 및 제2 항체 단편으로 구성된 군으로부터 선택된 적어도 하나의 치료제에 접합된다.
특정 구현예에서 항체는 약물, 예를 들어, 독소, 화학요법제, 면역 조절제 또는 방사성동위원소에 접합된다. ADC (항체 약물 접합체)를 제조하는 몇몇 방법이 당 업계에 알려져 있으며, 예를 들어, 미국 특허 8,624,003 (포트 방법(pot method)), 8,163,888 (한 단계), 및 5,208,020 (두 단계 방법)에 기재되어 있다. 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 방사성 핵종, 세포독소, 화학요법제, 약물, 전구 약물, 독소, 효소, 면역조절제, 항신생혈관제, 아폽토시스 촉진제, 사이토카인, 호르몬, 올리고뉴클레오티드, 안티센스 분자, siRNA, 제2 항체, 및 항원에 결합하는 제2 항체 단편을 포함하는 적어도 하나의 제제에 접합될 수 있다.
비-자극성 골수 세포 ( NSM )
항-TREM2 항체의 사용을 포함하는 비-자극성 골수 세포 (NSM)를 무력화 및/또는 검출하기 위한 방법 및 조성물이 본원에 제공된다. 또한, NSM 단백질을 발현시키는 비-자극성 골수 세포를 표적화 및/또는 검출하기 위한 방법 및 조성물이 본원에 제공된다.
또한, 비인간 개체에서 인간 NSM 단백질의 비인간 상동체로 향하는 항체의 사용을 포함하는 비-자극성 골수 세포를 무력화 및/또는 검출하기 위한 방법 및 조성물이 본원에 제공된다.
본원에 기재된 바와 같이, 비-자극성 골수 세포는 면역 반응을 자극하는데 충분히 효과적이지 않은 (예를 들어 자극성 골수 세포와 비교하여 종양 미세환경에서 항-종양 반응을 자극하는데 효과적이지 않은 ) 골수 세포이다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 항원 (예를 들어, 종양 항원)을 T-세포에 제시하는데 효과적이지 않거나 자극성 골수 세포와 비교하여 종양 특이적 T-세포 반응을 자극하는데 효과적이지 않다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 자극성 골수 세포와 비교하여 T 세포에 종양-관련 항원을 흡수, 처리 및/또는 제시하는 능력이 감소될 수 있다. 비-자극성 골수 세포는 세포독성 T 림프구를 다시 프라이밍하는 능력이 감소되거나 없을 수 있거나 일부 경우에 효과적인 종양-세포 사멸을 자극할 수 없다. 비-자극성 골수 세포는 자극성 골수 세포와 비교하여, 제한 없이, CD80, CD86, MHCI 및 MHCII를 포함하는 항원 처리, 항원 제시 및/또는 항원 공동-자극에 관여하는 유전자 및 세포-표면 마커의 더 낮은 발현을 나타낼 수 있다.
비-자극성 골수 세포는, 자극성 골수 세포와 비교할 때, TAP1, TAP2, PSMB8, PSMB9, TAPBP, PSME2, CD24a, CD274, BTLA, CD40, CD244, ICOSL, ICAM1, TIM3, PDL2, RANK, FLT3, CSF2RB, CSF2RB2, CSF2RA, IL12b, XCR1, CCR7, CCR2, CCL22, CXCL9, 및 CCL5 중 어느 하나 이상을 비제한적으로 포함하는, 교차-제시, 공동-자극 및/또는 자극성 사이토카인과 관련된 유전자의 보다 낮은 발현, 및 항염증성 사이토카인 IL-10의 발현 증가를 나타낼 수 있다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 분화 및 생존을 위해 전사 인자 IRF4 및 사이토카인 GM-CSF 또는 CSF-1에 의존적이다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 혈관 내피 성장 인자 (VEGF) 및 산화질소 합성효소 (NOS)를 분비함으로써 종양 혈관신생에 기여할 수 있고 표피 성장 인자 (EGF)를 분비함으로써 종양 성장을 뒷받침할 수 있다.
일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 종양-관련 대식세포 (TAM), 호중구, 단핵구, 또는 수지상 세포 (DC)이다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 수지상 세포 (DC)가 아니다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 호중구이다.
일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 종양-관련 대식세포 (TAMs)이다. TAM은 암성 종양 근처 또는 암성 종양 내에 존재하는 대식세포이며, 순환하는 단핵구 또는 상주 조직 대식세포로부터 유래한다.
일부 구현예에서 비-자극성 골수 세포 및 자극성 골수 세포는 이들을 발현시키는 마커, 또는 이들을 선택적으로 발현시키는 마커에 기초하여 구별된다. 세포 표면 마커의 발현은 '+' 또는 '양성'으로 기재될 수 있다. 세포 표면 마커의 부재는 '-' 또는 '음성'으로 기재될 수 있다. 세포 표면 마커의 발현은 세포 표면상의 각 마커의 상대적인 발현을 나타내는, '높음' (높은 수준의 마커를 발현시키는 세포) 또는 '낮음' (낮은 수준의 마커를 발현시키는 세포)으로 추가로 기재될 수 있다. 마커의 수준은 당 업계에 공지된 다양한 방법, 예를 들어 면역-염색 및 FACS 분석, 또는 겔 전기영동 및 웨스턴 블롯팅에 의해 결정될 수 있다.
일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 수지상 세포 (DC)이다. 일부 구현예에서, 수지상 세포는 뾰족하거나 수지상 형태에 의해 구별될 수 있다. 일 구현예에서, 비-자극성 수지상 세포는 적어도 CD45+, HLA-DR+, CD14-, CD11c+ 및 BDCA1+ (DC1 세포로도 지칭됨)이다. 일 구현예에서, 비-자극성 수지상 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14-, CD11c+ 및 BDCA3+ (DC2 세포로도 지칭됨)가 아니다. 일 구현예에서, CD45+, HLA-DR+, CD14-, CD11c+ 및 BDCA3+인 수지상 세포는 자극성-골수 세포이다.
일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 종양 관련 대식세포이다. 일부 구현예에서, 예를 들어 인간에서, 비-자극성 종양 관련 대식세포는 적어도 CD45+, HLA-DR+, CD14+이다. 일부 구현예에서 비-자극성 종양 관련 대식세포는 적어도 CD45+, HLA-DR+, CD14+, CD11b+이다. 일부 구현예에서 비-자극성 종양 관련 대식세포는 적어도 CD45+, HLA-DR+, CD14+, CD11c+이다. 일부 구현예에서 비-자극성 종양 관련 대식세포는 적어도 CD45+, HLA-DR+, CD14+, BDCA3-이다. 일부 구현예에서 비-자극성 종양 관련 대식세포는 적어도 CD45+, HLA-DR+, CD14+, BDCA3-, CD11b+이다. 일부 구현예에서 비-자극성 종양 관련 대식세포는 적어도 CD45+, HLA-DR+, CD14+, BDCA3-, CD11c+이다. 일부 구현예에서 비-자극성 종양 관련 대식세포는 적어도 CD45+, HLA-DR+, CD14+, CD11b+, 및 CD11c+이다. 일부 구현예에서 비-자극성 종양 관련 대식세포는 적어도 CD45+, HLA-DR+, CD14+, BDCA3-, CD11b+, 및 CD11c+이다.
일부 구현예에서 본 발명의 방법 및 조성물은 다른 포유동물, 예를 들어 마우스에서 TAM 및 DC를 표적화하는데 유용하다. 그와 같은 구현예에서, 마우스 TAM 및 DC는 TREM2 항체와 접촉된다. 일 구현예에서, 예를 들어 마우스에서, 종양-관련 대식세포는 적어도 CD45+, HLA-DR+, CD14+, CD11bhigh, 및 CD11clow (TAM1로도 지칭됨)이다. 일 구현예에서, 예를 들어 마우스에서, 종양-관련 대식세포는 적어도 CD45+, HLA-DR+, CD14+, CD11blow, 및 CD11chigh (TAM2로도 지칭됨)이다. 본원에 사용된 용어 "CD11bhigh 대식세포"는 높은 수준의 CD11b를 발현시키는 대식세포에 관한 것이다. 본원에 사용된 용어 "CD11blow 대식세포"는 이의 표면에서 CD11bhigh 대식세포의 수준보다 실질적으로 낮은 CD11b의 수준을 발현시키는 대식세포에 관한 것이다. 본원에 사용된 용어 "CD11chigh"는 높은 수준의 CD11c를 발현시키는 대식세포에 관한 것이다. 본원에 사용된 용어 "CD11clow 대식세포"는 이의 표면에서 Cd11chigh 대식세포의 수준보다 실질적으로 낮은 CD11c 수준을 발현시키는 대식세포에 관한 것이다.
일부 구현예에서, 본 발명의 비-자극성 골수 세포는 TAM 및 DC1 세포 중 하나 이상을 포함한다.
일부 구현예에서, 예를 들어 마우스에서, 본 발명의 비-자극성 골수 세포는 TAM1, TAM2, 및 DC1 세포 중 하나 이상을 포함한다. 그와 같은 구현예에서 본 발명의 비-자극성 골수 세포는 TREM2 항체와 접촉된다.
일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 골수 세포이고 종양내이다.
일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 종양 병변의 가장자리 또는 형질전환된 종양 도관(duct)에 위치하며, 여기서 이들은 동족 T-세포와 접촉한다. 일 구현예에서, 비-자극성 골수 세포의 국재화가 변형되어, 세포가 더 이상 종양 가장자리에서 국재화되지 않거나 더 이상 T-세포와 접촉하지 않게 한다.
일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 자극성 골수 세포 및 비-자극성 골수 세포를 포함하는 면역 세포 집단에 있다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 비-자극성 골수 세포만을 포함하는 면역 세포 집단에 있다. 본 발명의 면역 세포 집단은 순수하고, 균질하고, 불균질하고, 다양한 공급원 (예를 들어, 병든 조직, 종양 조직, 건강한 조직, 세포 은행)으로부터 유래되고, 일차 세포 배양에서 유지되고, 불멸화된 배양에서 유지되고, 및/또는 생체외 배양에서 유지될 수 있다.
일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 종양-관련 대식세포이다.
일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 수지상 세포이다.
일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14-, CD11c+ 및 BDCA1+이다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14-, CD11c+ 및 BDCA1+인 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14-, CD11c+ 및 BDCA1+인 세포로 구성된다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14-, CD11c+ 및 BDCA1+인 세포로 본질적으로 구성된다.
일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, BDCA3-이다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, BDCA3-인 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, BDCA3-인 세포로 구성된다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, BDCA3-인 세포로 본질적으로 구성된다.
일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, CD11b+이다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, CD11b+인 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, CD11b+인 세포로 구성된다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, CD11b+인 세포로 본질적으로 구성된다.
일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, CD11c+이다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, CD11c+인 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, CD11c+인 세포로 구성된다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, CD11c+인 세포로 본질적으로 구성된다.
일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, BDCA3- 및 CD11c+이다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, BDCA3- 및 CD11c+인 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, BDCA3- 및 CD11c+인 세포로 구성된다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, BDCA3- 및 CD11c+인 세포로 본질적으로 구성된다.
일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, BDCA3-, CD11b+이다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, BDCA3-, CD11b+인 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, BDCA3-, CD11b+인 세포로 구성된다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, BDCA3-, CD11b+인 세포로 본질적으로 구성된다.
일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, CD11b+ 및 CD11c+이다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, CD11b+ 및 CD11c+인 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, CD11b+ 및 CD11c+인 세포로 구성된다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, CD11b+ 및 CD11c+인 세포로 본질적으로 구성된다.
일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, BDCA3-, CD11b+ 및 CD11c+이다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, BDCA3-, CD11b+ 및 CD11c+인 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, BDCA3-, CD11b+ 및 CD11c+인 세포로 구성된다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, BDCA3-, CD11b+ 및 CD11c+인 세포로 본질적으로 구성된다.
일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14-, CD11c+ 및 BDCA3+가 아니다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14-, CD11c+ 및 BDCA3+가 아닌 세포를 포함한다.
일부 구현예에서, 예를 들어 마우스에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, CD11bhigh, 및 CD11clow이다. 일부 구현예에서, 예를 들어 마우스에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, CD11bhigh, 및 CD11clow인 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 예를 들어 마우스에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, CD11bhigh, 및 CD11clow인 세포로 구성된다. 일부 구현예에서, 예를 들어 마우스에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, CD11bhigh, 및 CD11clow인 세포로 본질적으로 구성된다. 그와 같은 구현예에서 비-자극성 마우스 골수 세포는 TREM2 항체와 접촉된다.
일부 구현예에서, 예를 들어 마우스에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14 +, CD11blow, 및 CD11chigh이다. 일부 구현예에서, 예를 들어 마우스에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, CD11blow, 및 CD11chigh인 세포를 포함한다. 일부 구현예에서, 예를 들어 마우스에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, CD11blow, 및 CD11chigh인 세포로 구성된다. 일부 구현예에서, 예를 들어 마우스에서, 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14+, CD11blow, 및 CD11chigh인 세포로 본질적으로 구성된다. 그와 같은 구현예에서 비-자극성 마우스 골수 세포는 TREM2 항체와 접촉된다.
일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 암 조직에 있다.
일부 구현예에서, 면역 세포 집단은 암 조직에 있다.
일부 구현예에서, 비-자극성 세포 및 자극성 골수 세포는 암 조직에 있다.
일부 구현예에서, 생물학적 샘플은 비-자극성 골수 세포 및 자극성 골수 세포를 포함하는 면역 세포 집단을 포함한다.
NSM 세포는 종양 조직에 존재하고 NSM 세포 마커의 발현에 의해 다른 세포 유형과 구별될 수 있는 DC1, TAM1 및 TAM2 세포를 통틀어 지칭할 수 있다. 예를 들어, SDC보다 NSM 세포에서 더 풍부하게 발현되거나 번역된 유전자 및 관련 단백질이 NSM 마커로서 작용할 수 있다. 예시적인 NSM 마커는 CD11b이다. 추가의 예시적인 NSM 마커가 표 A에 열거되어 있다. NSM 세포는 이의 세포 표면에서 TREM2, MS4A7, C5AR1, LYVE1, ABCC3, LILRB4, MRC1/CD206, SIGLEC1, STAB1, TMEM37, MERTK 및 TMEM119를 발현시킬 수 있다. 일부 측면에서, NSM 세포는 KIT, CCR7, BATF3, FLT3, ZBTB46, IRF8, BTLA, MYCL1, CLEC9A, BDCA3 및 XCR1 중 적어도 하나를 발현시키지 않는다.
일 구현예에서, NSM 세포는 표 A에 열거된 NSM 마커 유전자 중 하나 이상을 발현시킨다. 또 다른 구현예에서, NSM 세포는 표 D에 열거된 NSM 마커 중 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18개 이상을 발현시킨다. 또 다른 구현예에서, NSM 세포는 표 D에 열거된 NSM 마커의 대부분 또는 모두를 발현시킨다. 또 다른 구현예에서, NSM 세포는 MRC1, MS4A7, C1QC, APOE, C1QB, C1QA 및 C5AR1을 발현시키는 것으로 확인된다.
표 D
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자극성 골수 세포
본원에 사용된 바와 같이, 자극성 골수 세포 (특정 측면에서 SDC라고도 함)는 면역 반응을 자극하는데 효과적인 (예를 들어 비-자극성 골수 세포와 비교하여 종양 미세환경에서 항-종양 반응을 자극하는데 보다 효과적인) 골수 세포이다. 일부 구현예에서, 자극성 골수 세포는 T-세포에 항원 (예를 들어 종양 항원)을 제시하는데 효과적이거나 비-자극성 골수 세포와 비교하여 종양 특이적 T-세포 반응을 자극하는데 효과적이다. 일부 구현예에서, 자극성 골수 세포는 비-자극성 골수 세포와 비교하여 T 세포에 종양-관련 항원을 흡수, 처리 및/또는 제시하는 능력이 증가될 수 있다. 자극성 골수 세포는 세포독성 T 림프구를 다시 프라이밍하는 능력이 증가되거나 일부 경우에 비-자극성 골수 세포에 비해 효과적인 종양-세포 사멸을 자극할 수 있다. 자극성 골수 세포는 비-자극성 골수 세포와 비교하여 CD80, CD86, MHCI, 및 MHCII를 비제한적으로 포함하는 항원 처리, 항원 제시 및/또는 항원 공동-자극에 관련된 유전자 및 세포-표면 마커의 발현을 높일 수 있다.
예시적인 자극성 골수 세포 마커는 표 A에 열거되어 있다. 예를 들어, 인간 SDC에서, Xcr1, Clec9a, 및 BDCA3 (CD141)의 발현은 SDC 동일성의 마커이다. 마우스에서, CD103은 인간 SDC에서 발현되지 않지만 SDC 동일성의 강력한 마커로서 또한 사용될 수 있음에 주목할 것이다.
일 구현예에서, SDC는 수지상 세포 동일성을 가지며 또한 표 A에 열거된 SDC 마커 중 하나 이상을 발현시키는 종양 침윤성 골수 세포이다. 또 다른 구현예에서, SDC는 수지상 세포 동일성을 가지며 또한 표 A에 열거된 SDC 마커 중 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개 또는 모두를 발현시키는 종양 침윤성 골수 세포이다. 또 다른 구현예에서, SDC는 BDCA3, KIT, CCR7, BATF3, FLT3, ZBTB46, IRF8, BTLA, MYCL1, XCR1 및 CLEC9A를 발현시키는 종양 침윤성 골수 수지상 세포로 확인된다. SDC 세포는 KIT, CCR7, BATF3, FLT3, ZBTB46, IRF8, BTLA, MYCL1, CLEC9A, BDCA3, 및 XCR1 중 적어도 하나를 발현시킬 수 있다. 일부 구현예에서, SDC는 이의 세포 표면에서 TREM2, MS4A7, C5AR1, LYVE1, ABCC3, LILRB4, MRC1/CD206, SIGLEC1, STAB1, TMEM37, MERTK, 및/또는 TMEM119를 실질적으로 발현시키지 않는다. 일부 구현예에서, SDC는 C5AR1, LYVE1, ABCC3, MRC1, SIGLEC1, STAB1, C1QB, C1QA, TMEM37, MERTK, C1QC, TMEM119, MS4A7, APOE, CYP4F18, TREM2, TLR7, 및/또는 LILRB4를 실질적으로 발현시키지 않는다. 다른 당 업계에서 인정된 분석법 중에서 유세포 분석법 및 PCR이 본원에 개시된 마커의 발현을 평가하는데 사용될 수 있다.
자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14-, CD11c+, 및 BDCA3+일 수 있다. 자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, 및 BDCA3+일 수 있다. 자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14-, 및 BDCA3+일 수 있다. 자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD11c+, 및 BDCA3+일 수 있다.
단백질, 뉴클레오티드 및 상동체
NSM 단백질을 발현시키는 비-자극성 인간 골수 세포를 무력화 및/또는 검출하기 위한 방법 및 조성물이 본원에 제공된다. 일부 구현예에서, 본 발명은 NSM 단백질 상동체를 발현시키는 비인간 포유동물 세포로부터의 비-자극성 골수 세포를 무력화 및/또는 검출하는 것에 관한 것이다. 예를 들어, 마우스의 NSM 단백질은 이의 인간 상동체와 유사한 제한된 발현 패턴을 나타낼 수 있다. 따라서 일 구현예에서, NSM 단백질을 발현시키는 비-자극성 마우스 골수 세포를 무력화 및/또는 검출하기 위한 방법 및 조성물이 본원에 제공된다. 또한, 유사한 발현 패턴을 갖는 NSM 단백질의 상동체를 발현시키는 임의의 개체로부터의 비-자극성 세포를 무력화 및/또는 검출하기 위한 유사한 방법 및 조성물이 본원에 제공되며, 상기 세포는 NSM 단백질의 패턴과 유사한 발현 패턴을 나타낸다.
NSM 단백질 또는 뉴클레오티드는 C5AR1, LYVE1, ABCC3, MRC1, SIGLEC1, STAB1, C1QB, C1QA, TMEM37, MERTK, C1QC, TMEM119, MS4A7, APOE, CYP4F18, TREM2, TLR7, 및 LILRB4, 및 이의 상동체 중 적어도 하나 이상을 포함할 수 있다. SDC 단백질 또는 뉴클레오티드는 KIT, CCR7, BATF3, FLT3, ZBTB46, IRF8, BTLA, MYCL1, CLEC9A, BDCA3, 및 XCR1, 및 이의 상동체 중 적어도 하나 이상을 포함할 수 있다. 세포 표면 NSM 단백질은 TREM2, MS4A7, C5AR1, LYVE1, ABCC3, LILRB4, MRC1/CD206, SIGLEC1, STAB1, TMEM37, MERTK, 및 TMEM119 중 적어도 하나 이상을 포함할 수 있다. 세포 표면 NSM 단백질은 하나 이상의 항-TREM2 항체에 의해 단독으로 또는 조합하여 표적화될 수 있다. 일반적으로 NSM은 NSM 단백질 또는 뉴클레오티드에 대해 양성이고 SDC 단백질 또는 뉴클레오티드에 대해 음성이며; 역으로 SDC는 일반적으로 SDC 단백질 또는 뉴클레오티드에 대해 양성이고 NSM 단백질 또는 뉴클레오티드에 대해 음성이다.
본원에 기재된 항체는 적어도 하나의 폴리펩티드를 포함하지만, 이들은 전형적으로 HC/LC의 이량체, 즉 4개의 폴리펩티드를 포함한다. 본원에 기재된 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드가 또한 기재되어 있다. 항체는 전형적으로 단리된다.
본원에 사용된 바와 같이 "단리된"은 천연 세포 배양 환경의 성분으로부터 동정 및 분리 및/또는 회수된 작용제 (예를 들어, 폴리펩티드 또는 폴리뉴클레오티드)를 의미한다. 천연 환경의 오염 성분은 항체의 진단 또는 치료 용도를 방해하는 물질이며, 효소, 호르몬 및 기타 단백질성 또는 비-단백질성 용질을 포함할 수 있다. 단리된은 또한, 예를 들어, 인간의 개입을 통해 합성적으로 생성된 작용제를 지칭한다.
용어 "폴리펩티드", "펩티드" 및 "단백질"은 아미노산 잔기의 폴리머를 지칭하기 위해 본원에서 상호교환적으로 사용된다. 즉, 폴리펩티드에 관한 설명은 펩티드의 설명 및 단백질의 설명에 동일하게 적용되며, 그 반대의 경우도 마찬가지이다. 상기 용어는 자연 발생 아미노산 폴리머, 및 하나 이상의 아미노산 잔기가 비-자연적으로 인코딩된 아미노산인 아미노산 폴리머에 적용된다. 본원에 사용된 용어는 전장 단백질을 포함하는 임의의 길이의 아미노산 쇄를 포함하며, 여기서 아미노산 잔기는 공유 펩티드 결합에 의해 연결된다.
용어 "아미노산"은 자연 발생 및 비-자연 발생 아미노산, 및 자연 발생 아미노산과 유사한 방식으로 기능하는 아미노산 유사체 및 아미노산 모방체를 지칭한다. 자연적으로 인코딩된 아미노산은 20개의 공통 아미노산 (알라닌, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파르트산, 시스테인, 글루타민, 글루탐산, 글리신, 히스티딘, 이소류신, 류신, 리신, 메티오닌, 페닐알라닌, 프랄린, 세린, 트레오닌, 트립토판, 티로신 및 발린) 및 피롤리신 및 셀레노시스테인이다. 아미노산 유사체는 자연 발생 아미노산과 동일한 기본 화학 구조를 갖는 화합물, 즉, 수소, 카복실기, 아미노기 및 R기에 결합된 탄소, 예컨대 호모세린, 노르류신, 메티오닌, 설폭시드, 메티오닌 메틸 설포늄을 지칭한다. 그와 같은 유사체는 변형된 R기 (예를 들어, 노르류신) 또는 변형된 펩티드 골격을 갖지만, 자연 발생 아미노산과 동일한 기본 화학 구조를 유지한다. 아미노산에 대한 언급은, 예를 들어, 자연 발생 단백질생성(proteogenic) L-아미노산; D-아미노산, 화학적으로 변형된 아미노산 예컨대 아미노산 변이체 및 유도체; 자연 발생 비-단백질생성 아미노산 예컨대 β-알라닌, 오르니틴 등; 및 아미노산의 특징인 것으로 당 업계에 공지된 특성을 갖는 화학적으로 합성된 화합물을 포함한다. 비-자연 발생 아미노산의 예는, 비제한적으로, α-메틸 아미노산 (예를 들어, α-메틸 알라닌), D-아미노산, 히스티딘-유사 아미노산 (예를 들어, 2-아미노-히스티딘, β-하이드록시-히스티딘, 호모히스티딘), 측쇄에 가외의 메틸렌을 갖는 아미노산 ("호모" 아미노산), 및 측쇄 내의 카복실산 작용기가 설폰산기 (예를 들어, 시스테인산)로 대체된 아미노산을 포함한다. 합성 비-천연 아미노산, 치환된 아미노산, 또는 하나 이상의 D-아미노산을 포함하는 비-천연 아미노산을 본 발명의 단백질에 포함시키는 것은 많은 다른 방식으로 유리할 수 있다. D-아미노산-함유 펩티드 등은 L-아미노산-함유 대응물과 비교하여 시험관내 또는 생체내에서 증가된 안정성을 나타낸다. 따라서, D-아미노산을 포함하는 펩티드 등의 구성은 보다 큰 세포내 안정성이 요구되거나 필요할 때 특히 유용할 수 있다. 보다 구체적으로, D-펩티드 등은 내인성 펩티다제 및 프로테아제에 내성이 있어, 분자의 개선된 생체 이용률 및 그러한 특성이 바람직할 때 생체내 연장된 수명을 제공한다. 또한, D-펩티드 등은 T 헬퍼 세포에 대한 주요 조직 적합성 복합 클래스 II- 제한된 제시를 위해 효율적으로 처리될 수 없으므로, 전체 유기체에서 체액성 면역 반응을 유발할 가능성이 적다.
아미노산은 통상적으로 공지된 3개의 문자 기호 또는 IUPAC-IUB 생화학적 명명법 위원회에 의해 권장되는 1-문자 기호에 의해 본원에서 지칭될 수 있다. 마찬가지로, 뉴클레오티드는 일반적으로 허용되는 단일-문자 코드로 지칭될 수 있다.
또한, 항체의 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드도 본 발명에 포함된다. 용어 "폴리뉴클레오티드" 또는 "뉴클레오티드 서열"은 2개 이상의 뉴클레오티드 분자의 연속적인 연장을 나타내는 것으로 의도된다. 뉴클레오티드 서열은 게놈, cDNA, RNA, 반합성 또는 합성 기원, 또는 이들의 임의의 조합일 수 있다.
용어 "핵산"은 단일 가닥 또는 이중 가닥 형태의 데옥시리보뉴클레오티드, 데옥시리보뉴클레오시드, 리보뉴클레오시드, 또는 리보뉴클레오티드 및 이들의 폴리머를 지칭한다. 구체적으로 제한되지 않는 한, 상기 용어는 기준 핵산과 유사한 결합 특성을 갖고 천연 발생 뉴클레오티드와 유사한 방식으로 대사되는 공지된 천연 뉴클레오티드 유사체를 함유하는 핵산을 포함한다. 달리 구체적으로 한정되지 않는 한, 상기 용어는 또한 안티센스 기술에 사용되는 DNA의 유사체 (포스포로티오에이트, 포스포로아미데이트 등)인 PNA (펩티도핵산)를 포함하는 올리고뉴클레오티드 유사체를 지칭한다. 달리 지시되지 않는 한, 특정 핵산 서열은 또한 이의 보존적으로 변형된 변이체 (축퇴성 코돈 치환을 포함하지만, 이에 제한되지 않음) 및 상보적 서열뿐만 아니라 명시적으로 지시된 서열을 암시적으로 포함한다. 구체적으로, 축퇴성 코돈 치환은 하나 이상의 선택된 (또는 모든) 코돈의 제3 위치가 혼합-염기 및/또는 데옥시이노신 잔기로 치환된 서열을 생성함으로써 달성될 수 있다 (Batzer et al., Nucleic Acid Res. 19:5081 (1991); Ohtsuka et al., J. Biol. Chem. 260:2605-2608 (1985); Rossolini et al., Mol. Cell. Probes 8:91-98 (1994)).
"보존적으로 변형된 변이체"는 아미노산 및 핵산 서열 모두에 적용된다. 특정 핵산 서열과 관련하여, "보존적으로 변형된 변이체"는 동일하거나 본질적으로 동일한 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산, 또는 핵산이 아미노산 서열을 인코딩하지 않는 경우, 본질적으로 동일한 서열을 지칭한다. 유전자 코드의 축퇴성으로 인해, 기능적으로 동일한 다수의 핵산이 임의의 주어진 단백질을 인코딩한다. 예를 들어, 코돈 GCA, GCC, GCG 및 GCU는 모두 아미노산 알라닌을 인코딩한다. 따라서, 알라닌이 코돈에 의해 특정되는 모든 위치에서, 코돈은 인코딩된 폴리펩티드를 변경하지 않고 기재된 임의의 상응하는 코돈으로 변경될 수 있다. 그와 같은 핵산 변이는 "침묵 변이"이며, 이는 보존적으로 변형된 변이의 한 종이다. 폴리펩티드를 인코딩하는 본원의 모든 핵산 서열은 또한 핵산의 모든 가능한 침묵 변이를 기술한다. 당업자는 핵산 내의 각 코돈 (일반적으로 메티오닌의 유일한 코돈인 AUG, 및 일반적으로 트립토판의 유일한 코돈인 TGG 제외)이 기능적으로 동일한 분자를 생성하도록 변형될 수 있음을 인식할 것이다. 따라서, 폴리펩티드를 인코딩하는 핵산의 각각의 침묵 변이는 각각의 기재된 서열에 내재되어 있다.
아미노산 서열에 관해, 당업자는 인코딩된 서열에서 단일 아미노산 또는 소수의 아미노산을 변경, 첨가 또는 결실시키는 핵산, 펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질 서열에 대한 개별 치환, 결실 또는 첨가가 "보존적으로 변형된 변이체임을 인식할 것이며, 여기서 변경은 아미노산의 결실, 아미노산의 첨가 또는 화학적으로 유사한 아미노산으로의 아미노산 치환을 초래한다. 기능적으로 유사한 아미노산을 제공하는 보존적 치환 표는 당업자에게 공지되어 있다. 그와 같은 보존적으로 변형된 변이체는 본원에 기재된 다형성 변이체, 종간 상동체, 및 대립 유전자에 추가되고 이들을 배제하지 않는다.
기능적으로 유사한 아미노산을 제공하는 보존적 치환 표가 당업자에게 공지되어 있다. 다음 8개 그룹은 각각 서로 보존적 치환인 아미노산을 함유한다: 1) 알라닌 (A), 글리신 (G); 2) 아스파르트산 (D), 글루탐산 (E); 3) 아스파라긴 (N), 글루타민 (Q); 4) 아르기닌 (R), 리신 (K); 5) 이소류신 (I), 류신 (L), 메티오닌 (M), 발린 (V); 6) 페닐알라닌 (F), 티로신 (Y), 트립토판 (W); 7) 세린 (S), 트레오닌 (T); 및 8) 시스테인 (C), 메티오닌 (M) (예를 들어, Creighton, Proteins: Structures and Molecular Properties (W H Freeman & Co.; 2nd edition (December 1993) 참고
둘 이상의 핵산 또는 폴리펩티드 서열과 관련하여 용어 "동일한" 또는 퍼센트 "동일성"은 동일한 둘 이상의 서열 또는 부분 서열(subsequence)을 지칭한다. 서열은, 다음의 서열 비교 알고리즘 (또는 당업자에게 이용가능한 다른 알고리즘) 중 하나를 사용하여 또는 수동 정렬 및 육안 검사에 의해 측정되는 바와 같이 비교 윈도우(comparison window) 또는 지정된 영역에 대한 최대 대응성을 위해 비교 및 정렬될 때 이들이 동일한 (즉, 특정된 영역에 대해 약 60% 동일성, 약 65%, 약 70%, 약 75%, 약 80%, 약 85%, 약 90%, 또는 약 95% 동일성) 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드의 백분율을 갖는다면 "실질적으로 동일"하다. 퍼센트 아미노산 서열 동일성을 결정하기 위한 정렬은, 예를 들어, 공개적으로 이용가능한 컴퓨터 소프트웨어 예컨대 BLAST, BLAST-2, ALIGN, MEGALIGN (DNASTAR), CLUSTALW, CLUSTAL OMEGA, 또는 MUSCLE 소프트웨어를 사용하여 당 업계의 기술 내에 있는 다양한 방법으로 달성될 수 있다. 이 정의는 또한 시험 서열의 보완을 나타낸다. 동일성은 적어도 약 50개의 아미노산 또는 뉴클레오티드 길이의 영역, 또는 75 내지 100개의 아미노산 또는 뉴클레오티드 길이의 영역, 또는 특정되지 않은 경우, 폴리뉴클레오티드 또는 폴리펩티드의 전체 서열에 걸쳐 존재할 수 있다. 인간 이외의 종으로부터의 상동체를 포함하여, 본 발명의 폴리펩티드를 인코딩하는 폴리뉴클레오티드는 본원에 기재된 폴리뉴클레오티드 서열 또는 이의 단편을 갖는 표지된 프로브를 사용하여 엄격한 혼성화 조건하에서 라이브러리를 스크리닝하는 단계, 및 상기 폴리뉴클레오티드 서열을 함유하는 전장 cDNA 및 게놈 클론을 단리하는 단계를 포함하는 과정에 의해 수득될 수 있다. 그와 같은 혼성화 기술은 숙련가에게 잘 알려져 있다.
서열 비교를 위해, 전형적으로 하나의 서열은 시험 서열과 비교되는 기준 서열의 역할을 한다. 서열 비교 알고리즘을 사용하는 경우, 시험 및 기준 서열이 컴퓨터에 입력되고, 필요한 경우 부분 서열 좌표가 지정되며, 서열 알고리즘 프로그램 파라미터가 지정된다. 디폴트 프로그램 파라미터를 사용할 수 있거나 대체 파라미터를 지정할 수 있다. 이어서, 서열 비교 알고리즘은 프로그램 파라미터에 기초하여 기준 서열에 대한 시험 서열의 퍼센트 서열 동일성을 계산한다.
본원에 사용된 바와 같이, "비교 윈도우"는 2개의 서열이 최적으로 정렬된 후 서열이 동일한 수의 인접 위치의 기준 서열과 비교될 수 있는 20 내지 600, 일반적으로 약 50 내지 약 200, 더 일반적으로 약 100 내지 약 150으로 구성된 군으로부터 선택된 인접 위치의 수 중 어느 하나의 세그먼트에 대한 언급을 포함한다. 비교를 위한 서열 정렬 방법은 당업자에게 공지되어 있다. 비교를 위한 서열의 최적 정렬은, 비제한적으로, Smith and Waterman (1970) Adv. Appl. Math. 2:482c의 국부 상동성 알고리즘(local homology algorithm), Needleman and Wunsch (1970) J. Mol. Biol. 48:443의 상동성 정렬 알고리즘(homology alignment algorithm), Pearson and Lipman (1988) Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 85:2444의 유사성 방법에 대한 탐색(the search for similarity method), 이들 알고리즘의 컴퓨터 구현 (GAP, BESTFIT, FASTA, and TFASTA in the Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, Wis.), 또는 수동 정렬 및 육안 검사 (예를 들어, Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology (1995 supplement) 참고)에 의한 것을 포함하는 정렬에 의해 수행될 수 있다.
퍼센트 서열 동일성 및 서열 유사성을 결정하는데 적합한 알고리즘의 일례는 각각 Altschul et al. (1997) Nuc. Acids Res. 25:3389-3402, 및 Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215:403-410에 기재된 BLAST 및 BLAST 2.0 알고리즘이다. BLAST 분석을 수행하기 위한 소프트웨어는 ncbi.nlm.nih.gov의 월드 와이드 웹에서 이용가능한 미국 국립생물공학정보센터(National Center for Biotechnology Information)를 통해 공개적으로 이용할 수 있다. BLAST 알고리즘 파라미터 W, T 및 X는 정렬의 감도와 속도를 결정한다. BLASTN 프로그램 (뉴클레오티드 서열의 경우)은 디폴트로서 11의 단어 길이 (W), 10 또는 기대값 (E), M=5, N=-4 및 양쪽 가닥의 비교를 사용한다. 아미노산 서열의 경우, BLASTP 프로그램은 디폴트로서 3의 단어 길이 (W), 10의 기대값 (E), 및 50의 BLOSUM62 스코어링 매트릭스 (Henikoff and Henikoff (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915 참고) 정렬 (B), 10의 기대값 (E), M=5, N=-4, 및 양쪽 가닥의 비교를 사용한다. BLAST 알고리즘은 전형적으로 "낮은 복잡도" 필터를 끈 상태에서 수행된다.
BLAST 알고리즘은 또한 두 서열 간의 유사성의 통계적 분석을 수행한다 (예를 들어, Karlin and Altschul (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5787 참고). BLAST 알고리즘에 의해 제공되는 유사성의 하나의 척도는 가장 작은 합 확률 (P(N))이며, 이는 두 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열 간의 일치가 우연히 발생할 확률의 표시를 제공한다. 예를 들어, 시험 핵산과 기준 핵산의 비교에서 가장 작은 합 확률이 약 0.2 미만, 또는 약 0.01 미만, 또는 약 0.001 미만인 경우, 핵산은 기준 서열과 유사한 것으로 간주된다.
"선택적으로 (또는 특이적으로) 혼성화하다"라는 문구는 서열이 복합 혼합물 (비제한적으로, 전체 세포 또는 라이브러리 DNA 또는 RNA를 포함함)에 존재하는 경우 엄격한 혼성화 조건하에서 특정 뉴클레오티드 서열로만 분자가 결합, 이중화 또는 혼성화하는 것을 지칭한다.
"엄격한 혼성화 조건"이라는 문구는 당 업계에 공지된 낮은 이온 강도 및 고온 조건하에서 DNA, RNA, 또는 다른 핵산의 서열, 또는 이들의 조합의 혼성화를 지칭한다. 전형적으로, 엄격한 조건하에 프로브는 핵산의 복합 혼합물 (비제한적으로, 전체 세포 또는 라이브러리 DNA 또는 RNA를 포함함)에서 이의 표적 부분 서열에 혼성화할 것이지만 복합 혼합물 내의 다른 서열에는 혼성화되지 않는다. 엄격한 조건은 서열-의존적이고 상황에 따라 다를 것이다. 더 긴 서열은 더 높은 온도에서 특이적으로 혼성화된다. 핵산의 혼성화에 관한 광범위한 가이드는 Tijssen, Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology--Hybridization with Nucleic Probes, "Overview of principles of hybridization and the strategy of nucleic acid assays" (1993)에서 확인할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "조작하다, 조작된, 조작하는"은 펩티드 골격의 임의의 조작 또는 자연 발생 또는 재조합 폴리펩티드 또는 이의 단편의 번역 후 변형을 포함하는 것으로 간주된다. 조작은 아미노산 서열, 글리코실화 패턴, 또는 개별 아미노산의 측쇄 그룹의 변형뿐만 아니라 이들 접근법의 조합을 포함한다. 조작된 단백질은 표준 분자 생물학 기술에 의해 발현되고 생산된다.
"단리된 핵산 분자 또는 폴리뉴클레오티드"는 이의 고유 환경으로부터 제거된 핵산 분자, DNA 또는 RNA를 의도한다. 예를 들어, 벡터에 함유된 폴리펩티드를 인코딩하는 재조합 폴리뉴클레오티드는 단리된 것으로 간주된다. 단리된 폴리뉴클레오티드의 추가의 예는 이종 숙주 세포에서 유지된 재조합 폴리뉴클레오티드 또는 용액 중의 정제된 (부분적으로 또는 상당히) 폴리뉴클레오티드를 포함한다. 단리된 폴리뉴클레오티드는 일반적으로 폴리뉴클레오티드 분자를 함유하는 세포에 함유된 폴리뉴클레오티드 분자를 포함하지만, 폴리뉴클레오티드 분자는 염색체외 또는 이의 천연 염색체 위치와 다른 염색체 위치에 존재한다. 단리된 RNA 분자는 생체내 또는 시험관내 RNA 전사체, 뿐만 아니라 양성 및 음성 가닥 형태 및 이중 가닥 형태를 포함한다. 본원에 기재된 단리된 폴리뉴클레오티드 또는 핵산은 합성적으로, 예를 들어, PCR 또는 화학적 합성을 통해 생산된 그와 같은 분자를 추가로 포함한다. 또한, 폴리뉴클레오티드 또는 핵산은, 특정 구현예에서, 조절 요소 예컨대 프로모터, 리보솜 결합 부위, 또는 전사 종결자를 포함한다.
용어 "중합효소 연쇄 반응" 또는 "PCR"은 일반적으로, 예를 들어, 미국 특허 번호 4,683,195에 기재된 바와 같이, 원하는 뉴클레오티드 서열의 시험관내 증폭 방법을 지칭한다. 일반적으로, PCR 방법은 주형 핵산에 우선적으로 혼성화할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프라이머를 사용하여 프라이머 연장 합성의 반복된 사이클을 포함한다.
본 발명의 기준 뉴클레오티드 서열과 적어도, 예를 들어, 95% "동일한" 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 또는 폴리뉴클레오티드는, 폴리뉴클레오티드의 뉴클레오티드 서열이 기준 서열과 동일하지만, 단 폴리뉴클레오티드 서열은 기준 뉴클레오티드 서열의 100개의 뉴클레오티드마다 최대 5개의 점 돌연변이를 포함할 수 있다는 것을 의도한다. 다시 말해서, 기준 뉴클레오티드 서열과 적어도 95% 동일한 뉴클레오티드 서열을 갖는 폴리뉴클레오티드를 수득하기 위해, 기준 서열 내의 뉴클레오티드의 최대 5%가 결실되거나 또 다른 뉴클레오티드로 치환되거나, 또는 기준 서열 내의 총 뉴클레오티드의 최대 5%의 뉴클레오티드 수가 기준 서열에 삽입될 수 있다. 기준 서열의 이러한 변경은 기준 뉴클레오티드 서열의 5' 또는 3' 말단 위치에서 또는 기준 서열 내의 잔기 사이에 개별적으로 또는 기준 서열 내의 하나 이상의 연속 그룹에 산재되어 있는 말단 위치 사이의 임의의 위치에서 일어날 수 있다. 현실적으로, 임의의 특정 폴리뉴클레오티드 서열이 본 발명의 뉴클레오티드 서열과 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일한지 여부는 통상적으로 폴리펩티드에 대해 상기 논의된 것과 같은 공지된 컴퓨터 프로그램 (예를 들어, ALIGN-2)을 사용하여 결정될 수 있다.
폴리펩티드의 유도체 또는 변이체의 아미노산 서열이 원래의 펩티드로부터의 100개의 아미노산 서열과 적어도 50% 동일성을 갖는 경우, 폴리펩티드의 유도체 또는 변이체는 펩티드와 "상동성"을 공유하거나 "상동성"인 것으로 언급된다. 특정 구현예에서, 유도체 또는 변이체는 유도체와 동일한 수의 아미노산 잔기를 갖는 펩티드 또는 펩티드의 단편과 적어도 75% 동일하다. 특정 구현예에서, 유도체 또는 변이체는 유도체와 동일한 수의 아미노산 잔기를 갖는 펩티드 또는 펩티드의 단편과 적어도 85% 동일하다. 특정 구현예에서, 유도체의 아미노산 서열은 유도체와 동일한 수의 아미노산 잔기를 갖는 펩티드 또는 펩티드의 단편과 적어도 90% 동일하다. 일부 구현예에서, 유도체의 아미노산 서열은 유도체와 동일한 수의 아미노산 잔기를 갖는 펩티드 또는 펩티드의 단편과 적어도 95% 동일하다. 특정 구현예에서, 유도체 또는 변이체는 유도체와 동일한 수의 아미노산 잔기를 갖는 펩티드 또는 펩티드의 단편과 적어도 99% 동일하다.
본원에 사용된 용어 "변형된"은 제공된 폴리펩티드에 만들어진 임의의 변화, 예컨대 폴리펩티드 길이, 아미노산 서열, 화학적 구조, 폴리펩티드의 동시-번역 변형, 또는 번역 후 변형의 변화를 지칭한다. 형태 "(변형된)"이라는 용어는 논의중인 폴리펩티드가 선택적으로 변형됨, 즉, 논의중인 폴리펩티드가 변형되거나 변형되지 않을 수 있음을 의미한다.
일부 측면에서, 폴리펩티드는 본원에 개시된 표(들) 또는 수탁 번호(들)에 기재된 관련 (예를 들어, 폴리펩티드 및/또는 항체) 아미노산 서열 또는 이의 단편과 적어도 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 본원에 개시된 단리된 항체 또는 단백질은 본원에 개시된 표(들) 또는 수탁 번호(들)에 기재된 관련 뉴클레오티드 서열 또는 이의 단편과 적어도 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 폴리뉴클레오티드에 의해 인코딩된 아미노산 서열을 포함한다. 일부 측면에서, 뉴클레오티드 서열은 본원에 개시된 표(들) 또는 수탁 번호(들)에 기재된 것과 같은 본원에 개시된 뉴클레오티드 서열과 적어도 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 또는 100% 동일한 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
약제학적 조성물
본 출원은 본원에 기재된 항체 중 임의의 하나 이상을 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제와 함께 포함하는 약제학적 조성물을 포함하여 항체를 포함하는 조성물을 제공한다. 일부 구현예에서 상기 조성물은 멸균된다. 약제학적 조성물은 일반적으로 유효량의 항체를 포함한다.
이들 조성물은, 본원에 개시된 하나 이상의 항체 이외에, 약제학적으로 허용되는 부형제, 담체, 완충액, 안정화제 또는 당업자에게 잘 알려진 다른 물질을 포함할 수 있다. 그와 같은 물질은 무독성이어야 하고 활성 성분의 효능을 방해하지 않아야 한다. 담체 또는 다른 물질의 정확한 성질은 투여 경로, 예를 들어, 경구, 정맥내, 피부 또는 피하, 코, 근육내, 복강내 경로에 따라 달라질 수 있다.
경구 투여용 약제학적 조성물은 정제, 캡슐, 분말 또는 액체 형태일 수 있다. 정제는 고체 담체 예컨대 젤라틴 또는 보조제를 포함할 수 있다. 액체 약제학적 조성물은 일반적으로 액체 담체 예컨대 물, 석유, 동물성 또는 식물성 오일, 미네랄 오일 또는 합성 오일을 포함한다. 생리 식염수, 덱스트로스 또는 다른 당류 용액 또는 글리콜 예컨대 에틸렌 글리콜, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜이 포함될 수 있다.
정맥, 피부 또는 피하 주사, 또는 고통 부위에서의 주사의 경우, 활성 성분은 발열원이 없고, 적절한 pH, 등장성 및 안정성을 갖는 비경구적으로 허용되는 수용액 형태일 것이다. 당업자는, 예를 들어, 염화나트륨 주사제(Sodium Chloride Injection), 링거 주사제(Ringer's Injection), 락테이트 링거 주사제(Lactated Ringer's Injection)와 같은 등장성 비히클을 사용하여 적합한 용액을 잘 제조할 수 있다. 필요에 따라, 보존제, 안정제, 완충액, 산화방지제 및/또는 다른 첨가제가 포함될 수 있다.
그것이 개체에게 제공되는 폴리펩티드, 항체 (예를 들어, 항-TREM2 항체), 핵산, 소분자 또는 다른 약제학적으로 유용한 화합물이든 아니든, 투여는 바람직하게는 "치료적 유효량" 또는 "예방적 유효량" (경우에 따라, 예방이 치료로 간주될 수 있더라도)으로의 투여이며, 상기 양은 개체에게 이점을 보여주기에 충분하다. 실제 투여량, 및 투여 속도 및 시간 경과(time-course)는 치료되는 단백질 응집 질환의 성질 및 중증도에 따라 달라질 것이다. 치료 처방, 예를 들어, 복용량 결정 등은 일반의 및 다른 의사의 책임하에 있으며, 전형적으로 치료할 장애, 개별 대상체의 상태, 전달 부위, 투여 방법 및 의사에게 알려진 기타 요인을 고려한다. 상기 언급된 기술 및 프로토콜의 예는 Remington's Pharmaceutical Sciences, 16th edition, Osol, A. (ed), 1980에서 확인할 수 있다.
조성물은 단독으로 또는 다른 치료제와 함께, 치료될 병태에 따라 동시에 또는 순차적으로 투여될 수 있다.
방법
제조 방법
본원에 기재된 항체는, 예를 들어, 미국 특허 번호 4,816,567에 기재된 바와 같이 재조합 방법 및 조성물을 사용하여 생성될 수 있다.
일 구현예에서, 본원에 기재된 항체를 인코딩하는 단리된 핵산이 제공된다. 그와 같은 핵산은 항체 (예를 들어, 항체의 경쇄 및/또는 중쇄)의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및/또는 VH를 포함하는 아미노산 서열 또는 단일 도메인 항체의 VHH를 포함하는 아미노산 서열을 인코딩할 수 있다. 추가의 구현예에서, 그와 같은 핵산을 포함하는 하나 이상의 벡터 (예를 들어, 발현 벡터)가 제공된다. 일 구현예에서, 핵산은 다중시스트론(multicistronic) 벡터로 제공된다. 추가의 구현예에서, 그와 같은 핵산을 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 하나의 그와 같은 구현예에서, 숙주 세포는 (1) 항체의 VL을 포함하는 아미노산 서열 및 항원-결합 폴리펩티드 작제물의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산을 포함하는 벡터, 또는 (2) 항원-결합 폴리펩티드 작제물의 VL을 포함하는 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산을 포함하는 제1 벡터 및 항원-결합 폴리펩티드 작제물의 VH를 포함하는 아미노산 서열을 인코딩하는 핵산을 포함하는 제2 벡터를 포함한다 (예를 들어, 이들로 형질전환되었다). 일 구현예에서, 숙주 세포는 진핵 세포, 예를 들어 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포, 또는 인간 배아 신장 (HEK) 세포, 또는 림프계 세포 (예를 들어, Y0, NS0, Sp20 세포)이다. 일 구현예에서, 항체의 제조 방법이 제공되며, 여기서 상기 방법은 상기 제공된 항체를 인코딩하는 핵산을 포함하는 숙주 세포를 항체의 발현에 적합한 조건하에 배양하고, 선택적으로 숙주 세포 (또는 숙주 세포 배양 배지)로부터 항체를 회수하는 단계를 포함한다.
항체의 재조합 생산을 위해, 예를 들어, 상기 기재된 바와 같은 항체를 인코딩하는 핵산을 단리하고 숙주 세포에서의 추가 클로닝 및/또는 발현을 위해 하나 이상의 벡터에 삽입한다. 그와 같은 핵산은 종래의 절차를 사용하여 (예를 들어, 항체의 중쇄 및 경쇄를 인코딩하는 유전자에 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용하여) 용이하게 단리 및 시퀀싱될 수 있다.
용어 "실질적으로 정제된"은 이의 자연 발생 환경에서 발견되는 단백질과 정상적으로 동반되거나 상호작용하는 성분이 실질적으로 또는 본질적으로 없을 수 있는 본원에 기재된 작제물, 또는 이의 변이체를 지칭하며, 즉 천연 세포, 또는 특정 구현예에서, 실질적으로 세포 물질이 없는 재조합적으로 생산된 이종다량체(heteromultimer)의 경우에 숙주 세포는 약 30% 미만, 약 25% 미만, 약 20% 미만, 약 15% 미만, 약 10% 미만, 약 5% 미만, 약 4% 미만, 약 3% 미만, 약 2% 미만 또는 약 1% 미만 (건조 중량으로)의 오염 단백질을 갖는 단백질 제제를 포함한다. 이종다량체 또는 이의 변이체가 숙주 세포에 의해 재조합적으로 생산되는 경우, 특정 구현예에서 단백질은 세포의 건조 중량의 약 30%, 약 25%, 약 20%, 약 15%, 약 10%, 약 5%, 약 4%, 약 3%, 약 2% 또는 약 1% 이하로 존재한다. 이종다량체 또는 이의 변이체가 숙주 세포에 의해 재조합적으로 생산되는 경우, 특정 구현예에서 단백질은 세포의 건조 중량의 약 5 g/L, 약 4 g/L, 약 3 g/L, 약 2 g/L, 약 1 g/L, 약 750 mg/L, 약 500 mg/L, 약 250 mg/L, 약 100 mg/L, 약 50 mg/L, 약 10 mg/L 또는 약 1 mg/L 이하로 배양 배지에 존재한다. 특정 구현예에서, 본원에 기재된 방법에 의해 생산된 "실질적으로 정제된" 이종다량체는 SDS/PAGE 분석, RP-HPLC, SEC, 및 모세관 전기영동법과 같은 적절한 방법에 의해 결정될 때 적어도 약 30%, 적어도 약 35%, 적어도 약 40%, 적어도 약 45%, 적어도 약 50%, 적어도 약 55%, 적어도 약 60%, 적어도 약 65%, 적어도 약 70%의 순도 수준, 구체적으로 적어도 약 75%, 80%, 85%의 순도 수준, 더 구체적으로 적어도 약 90%의 순도 수준, 적어도 약 95%의 순도 수준, 적어도 약 99%의 순도 수준 이상을 갖는다.
항체-인코딩 벡터의 클로닝 또는 발현에 적합한 숙주 세포는 본원에 기재된 원핵 또는 진핵 세포를 포함한다.
"재조합 숙주 세포" 또는 "숙주 세포"는 삽입에 사용된 방법, 예를 들어, 직접 흡수, 형질도입, f-메이팅(mating) 또는 재조합 숙주 세포를 생성하기 위해 당 업계에 공지된 다른 방법에 관계없이, 외인성 폴리뉴클레오티드를 포함하는 세포를 지칭한다. 외인성 폴리뉴클레오티드는 비통합 벡터, 예를 들어 플라스미드로 유지될 수 있거나, 대안적으로 숙주 게놈 내로 통합될 수 있다. 숙주 세포는 CHO, CHO의 유도체, NS0, Sp2O, CV-1, VERO-76, HeLa, HepG2, Per.C6, 또는 BHK를 포함할 수 있다.
본원에 사용된 용어 "진핵생물"은 계통발생 도메인 진핵생물계(Eucarya)에 속하는 유기체, 예컨대 동물 (비제한적으로, 포유동물, 곤충, 파충류, 새 등을 포함함), 섬모류, 식물 (비제한적으로, 외떡잎식물, 쌍떡잎식물, 조류 등을 포함함), 진균, 효모, 편모충류, 미포자충류, 원생생물 등을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "원핵생물"은 원핵 생물을 지칭한다. 예를 들어, 비-진핵 생물은 진정세균 (비제한적으로, 에스케리키아 콜라이(Escherichia coli), 써머스 써모필러스(Thermus thermophilus), 바실러스 스테아로써모필러스(Bacillus stearothermophilus), 슈도모나스 플루오레센스(Pseudomonas fluorescens), 슈도모나스 아에루기노사(Pseudomonas aeruginosa), 슈도모나스 푸티다(Pseudomonas putida) 등을 포함함) 계통발생 도메인, 또는 고세균 (비제한적으로, 메타노코커스 자나스키(Methanococcus jannaschii), 메타노박테리움 써모오토트로피컴(Methanobacterium thermoautotrophicum), 할로박테리움 예컨대 할로페락스 볼카니(Haloferax volcanii) 및 할로박테리움 종 NRC-1, 아카에오글로버스 풀기더스(Archaeoglobus fulgidus), 피로코커스 푸리오서스(Pyrococcus furiosus), 피로코커스 호리코시(Pyrococcus horikoshii), 아에우로피럼 페르닉스(Aeuropyrum pernix) 등을 포함함) 계통발생 도메인에 속할 수 있다.
예를 들어, 항체는, 특히 글리코실화 및 Fc 효과기 기능이 필요하지 않은 경우 박테리아에서 생성될 수 있다. 박테리아 내 항체 단편 및 폴리펩티드의 발현에 대해서는, 예를 들어, 하기를 참고한다: 미국 특허 번호 5,648,237, 5,789,199, 및 5,840,523. (또한, 이. 콜라이에서 항체 단편의 발현을 설명하는, Charlton,　Methods in Molecular Biology, Vol.　248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, N.J., 2003), pp. 245-254 참고) 발현 후, 항체는 박테리아 세포 페이스트로부터 가용성 분획으로 단리될 수 있고 추가로 정제될 수 있다.
원핵생물에 더하여, 필라멘트 진균 또는 효모와 같은 진핵생물 미생물은 글리코실화 경로가 "인간화"되어 부분적으로 또는 완전히 인간 글리코실화 패턴을 갖는 항체를 생산하는 진균 및 효모 균주를 포함하는, 항체-인코딩 벡터에 적합한 클로닝 또는 발현 숙주이다. Gerngross,　Nat. Biotech. 　22:1409-1414 (2004), 및 Li et al.,　Nat. Biotech. 　24:210-215 (2006)를 참고한다.
글리코실화된 항체의 발현에 적합한 숙주 세포는 또한 다세포 유기체 (무척추동물 및 척추동물)로부터 유래된다. 무척추동물 세포의 예는 식물 및 곤충 세포를 포함한다. 곤충 세포와 함께, 특히 스포돕테라 프루기페르다(Spodoptera frugiperda) 세포의 형질감염에 사용될 수 있는 다수의 바쿨로바이러스 균주가 확인되었다.
식물 세포 배양물이 또한 숙주로서 사용될 수 있다. 예를 들면, 미국 특허 번호 5,959,177, 6,040,498, 6,420,548, 7,125,978, 및 6,417,429 (형질전환 식물에서 항체를 생산하기 위한 PLANTIBODIES™ 기술을 설명함)를 참고한다.
척추동물 세포가 또한 숙주로서 사용될 수 있다. 예를 들어, 현탁액에서 성장하도록 적응된 포유동물 세포주가 유용할 수 있다. 유용한 포유동물 숙주 세포주의 다른 예는 SV40 (COS-7)에 의해 형질전환된 원숭이 신장 CV1 계통; 인간 배아 신장 계통 (예를 들어, Graham et al.,　J. Gen Virol .　36:59 (1977)에 기재된 바와 같은 293 또는 293 세포); 아기 햄스터 신장 세포 (BHK); 마우스 세르톨리 세포 (예를 들어, Mather,　Biol . Reprod .　23:243-251 (1980)에 기재된 바와 같은 TM4 세포); 원숭이 신장 세포 (CV1); 아프리카 그린 원숭이 신장 세포 (VERO-76); 인간 자궁경부 암종 세포 (HELA); 개 신장 세포 (MDCK; 버팔로 랫트 간 세포 (BRL 3A); 인간 폐 세포 (W138); 인간 간 세포 (Hep G2); 마우스 유선 종양 (MMT 060562); 예를 들어, Mather et al.,　Annals N.Y . Acad . Sci .　383:44-68 (1982)에 기재된 바와 같은 TRI 세포; MRC 5 세포; 및 FS4 세포이다. 다른 유용한 포유동물 숙주 세포주로는 DHFR-　CHO 세포를 포함하는 중국 햄스터 난소 (CHO) 세포 (Urlaub et al.,　Proc. Natl . Acad . Sci . USA　77:4216 (1980)); 및 골수종 세포주 예컨대 Y0, NS0 및 Sp2/0이 포함된다. 항체 생산에 적합한 특정 포유동물 숙주 세포주의 검토에 대해서는, 예를 들어, Yazaki and Wu,　Methods in Molecular Biology, Vol. 248 (B.K.C. Lo, ed., Humana Press, Totowa, N.J.), pp. 255-268 (2003)를 참고한다.
일 구현예에서, 본원에 기재된 항체는 적어도 하나의 안정적인 포유동물 세포를 소정의 비로 항체를 인코딩하는 핵산으로 형질감염시키는 단계; 및 적어도 하나의 포유동물 세포에서 상기 핵산을 발현시키는 단계를 포함하는 방법에 의해 안정적인 포유동물 세포에서 생산된다. 일부 구현예에서, 소정의 비의 핵산은 발현된 생성물에서 가장 높은 백분율의 항체를 초래하는 입력 핵산의 상대적인 비율을 결정하기 위해 일시적 형질감염 실험에서 결정된다.
일부 구현예에서 본원에 기재된 바와 같이 안정적인 포유동물 세포에서 항체를 생산하는 방법이며, 여기서 적어도 하나의 안정적인 포유동물 세포의 발현 산물은 모노머 중쇄 또는 경쇄 폴리펩티드, 또는 다른 항체와 비교하여 더 큰 비율의 목적하는 글리코실화된 항체를 포함한다.
일부 구현예에서 본원에 기재된 안정적인 포유동물 세포에서 글리코실화된 항체를 생산하는 방법이며, 상기 방법은 목적하는 글리코실화된 항체를 식별하고 정제하는 단계를 포함한다. 일부 구현예에서, 상기 식별은 액체 크로마토그래피 및 질량 분석법 중 하나 또는 둘 다에 의한 것이다.
필요한 경우, 발현 후 항체를 정제 또는 단리할 수 있다. 단백질은 당업자에게 공지된 다양한 방식으로 단리 또는 정제될 수 있다. 표준 정제 방법에는 FPLC 및 HPLC와 같은 시스템을 사용하여 대기압 또는 고압에서 수행되는, 이온 교환, 소수성 상호작용, 친화성, 사이징 또는 겔 여과 및 역상을 포함한 크로마토그래피 기술이 포함된다. 정제 방법은 또한 전기영동, 면역학적, 침전, 투석 및 크로마토포커싱 기술을 포함한다. 단백질 농축과 함께 한외여과 및 정용여과 기술도 유용하다. 당 업계에 잘 알려진 바와 같이, 다양한 천연 단백질이 Fc 및 항체에 결합하고, 이들 단백질은 항체의 정제를 위해 본 발명에서 사용될 수 있다. 예를 들어, 박테리아 단백질 A 및 G는 Fc 영역에 결합한다. 마찬가지로, 박테리아 단백질 L은 일부 항체의 Fab 영역에 결합한다. 정제는 종종 특정 융합 파트너에 의해 가능할 수 있다. 예를 들어, 항체는 GST 융합이 사용되는 경우 글루타티온 수지, His-태그가 사용되는 경우 Ni+2 친화성 크로마토그래피, 또는 플래그-태그가 사용되는 경우 고정된 항-플래그 항체를 사용하여 정제될 수 있다. 적합한 정제 기술에 대한 일반적인 지침에 대해서는, 예를 들어, 전체가 참고로 포함된, Protein Purification: Principles and Practice, 3rd　Ed., Scopes, Springer-Verlag, NY, 1994에 의해 전체가 포함된 것을 참고한다. 필요한 정제 정도는 항체의 사용에 따라 달라질 것이다. 일부 경우에는 정제가 필요하지 않다.
특정 구현예에서 항체는, 비제한적으로, Q-세파로오스, DEAE 세파로오스, 포로스(poros) HQ, 포로스 DEAF, 토요펄(Toyopearl) Q, 토요펄 QAE, 토요펄 DEAE, 리소스/소스 Q 및 DEAE, 프랙토겔(Fractogel) Q 및 DEAE 컬럼 상의 크로마토그래피를 포함하는 음이온 교환 크로마토그래피를 사용하여 정제된다.
특정 구현예에서 본원에 기재된 단백질은, 비제한적으로, SP-세파로오스, CM 세파로오스, 포로스 HS, 포로스 CM, 토요펄 SP, 토요펄 CM, 리소스/소스 S 및 CM, 프랙토겔 S 및 CM 컬럼 및 이들의 동등물 및 비교물을 포함하는 양이온 교환 크로마토그래피를 사용하여 정제된다.
또한, 본원에 기재된 항체는 당 업계에 공지된 기술을 사용하여 화학적으로 합성될 수 있다 (예를 들어, Creighton, 1983, Proteins: Structures and Molecular Principles, W. H. Freeman & Co., N.Y and Hunkapiller et al., Nature, 310:105-111 (1984) 참고). 예를 들어, 폴리펩티드의 단편에 상응하는 폴리펩티드는 펩티드 합성기를 사용하여 합성될 수 있다. 또한, 원한다면, 비고전 아미노산 또는 화학적 아미노산 유사체가 폴리펩티드 서열로의 치환 또는 첨가로서 도입될 수 있다. 비-고전 아미노산은, 비제한적으로, 일반적으로 공통 아미노산의 D-이성질체, 2,4디아미노부티르산, 알파-아미노 이소부티르산, 4아미노부티르산, Abu, 2-아미노 부티르산, g-Abu, e-Ahx, 6아미노 헥산산, Aib, 2-아미노 이소부티르산, 3-아미노 프로피온산, 오르니틴, 노르류신, 노르발린, 하이드록시프롤린, 사르코신, 시트룰린, 호모시트룰린, 시스테인산, t-부틸글리신, t-부틸알라닌, 페닐글리신, 사이클로헥실알라닌, 알라닌, 플루오로-아미노산, 디자이너 아미노산 예컨대 메틸 아미노산, C-메틸 아미노산, N-메틸 아미노산, 및 아미노산 유사체를 포함한다. 또한, 아미노산은 D (우선성) 또는 L (좌선성)일 수 있다.
사용 방법
일 측면에서, 본 출원은 비-자극성 골수 세포를 인간 항체와 같은 항-TREM2 항체와 접촉시켜 비-자극성 골수 세포를 무력화시키는 방법을 제공한다.
또 다른 측면에서, 본 출원은 비-자극성 골수 세포를 항-TREM2 마우스 항체와 접촉시켜 비-자극성 골수 세포를 무력화시키는 방법을 제공한다.
일부 구현예에서 비-자극성 세포는 DC1 세포 및 TAM 세포 중 하나 이상이다.
일부 구현예에서, 본 출원은 비-자극성 골수 세포를 TREM2 항체와 접촉시켜 비-자극성 골수 세포를 사멸시키는 단계를 포함하는, 비-자극성 골수 세포를 무력화하는 방법을 제공한다. 무력화는 세포를 부분적으로 또는 완전히 작동하지 않는 것으로 만드는 것을 나타낸다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포의 무력화는 세포에서 성장 정지를 유도한다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포의 무력화는 세포에서 아폽토시스를 유도한다. 일부 구현예에서, 비-자극성 세포의 무력화는 예를 들어 보체 의존적 세포독성 (CDC) 또는 항체-의존적 세포 세포독성 (ADCC)에 의한 세포의 용해를 유도한다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포의 무력화는 세포에서 괴사를 유도한다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포의 무력화는 세포에서 성장 정지를 유도한다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포의 무력화는 세포를 불활성화시킨다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포의 무력화는 세포 내 TREM2 단백질의 활성을 중화시킨다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포의 무력화는 세포의 증식을 감소시킨다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포의 무력화는 세포의 분화를 유도한다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포의 무력화는 억제성 항원 제시 세포로 작용하는 세포의 능력을 감소시키거나 활성화 항원-제시 세포로 작용하는 세포의 능력을 증가시킨다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포의 무력화는 종양 조직 또는 종양 미세환경 (TME) 내에서 세포의 잘못된 국재화(mislocalization)를 유도한다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포의 무력화는 종양 조직 또는 종양 미세환경 내에서 세포의 공간 구조를 변화시킨다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포의 무력화는 종양 조직 또는 TME 내에서 세포의 일시적 발현을 변화시킨다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 비-자극성 골수 세포를 제거하는 단계를 추가로 포함한다.
본원에 기재된 바와 같이 비-자극성 골수 세포를 무력화시키는 임의의 및 모든 측면에서, 특성(들) 또는 기능(들)의 측면의 임의의 증가 또는 감소 또는 변경은 항-TREM2 항체와 접촉되지 않은 세포와 비교된다.
또 다른 측면에서, 본 출원은 비-자극성 골수 세포를 항-TREM2 항체와 접촉시켜 비-자극성 골수 세포의 기능을 조절하는 방법을 제공한다. 조절은 하기 중 임의의 하나 이상일 수 있다. 일부 구현예에서 비-자극성 세포는 DC1 세포, TAM1 세포, 및 TAM2 세포 중 하나 이상이다. 일부 구현예에서, 기능 조절은 비-자극성 골수 세포를 무력화시킨다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포의 기능 조절은, 예를 들어, 비-자극성 세포가 나이브 CD8+ T-세포에 MHCI 분자 상의 종양 항원을 교차-제시하는 능력을 증가시킴으로써 천연 및 활성화된 CD8+ T-세포 둘 다를 자극하는 세포의 능력을 증가시킨다. 일부 구현예에서, 조절은, 예를 들어, T-세포 수용체 (TCR) 신호 전달, T-세포 증식, 또는 T-세포 사이토카인 생산을 유발하는 세포의 능력을 포함하여, 비-자극성 골수 세포의 T-세포 자극 기능을 증가시킨다. 일 구현예에서, 비-자극성 세포의 생존이 감소되거나 비-자극성 세포의 증식이 감소된다. 일 구현예에서, 자극성 골수 세포 대 비-자극성 골수 세포의 비가 증가된다.
본원에 기재된 바와 같이 비-자극성 골수 세포의 기능을 감소시키는 임의의 및 모든 측면에서, 특성(들) 또는 기능(들)의 측면의 임의의 증가 또는 감소 또는 변경은 항-TREM2 항체와 접촉되지 않은 세포와 비교된다.
일부 구현예에서, 본 출원은 비-자극성 골수 세포를 항-TREM2 항체와 접촉시켜 비-자극성 골수 세포를 사멸시키는 단계를 포함하는, 비-자극성 골수 세포를 사멸시키는 (세포 사멸을 유도하는 것으로도 지칭됨) 방법을 제공한다. 일부 구현예에서 상기 사멸은 항-TREM2 항체와 접촉되지 않은 비-자극성 골수 세포에 비해 증가된다. 일부 구현예에서, 상기 접촉은 비-자극성 골수 세포에서 아폽토시스를 유도한다. 일부 구현예에서, 상기 접촉은 비-자극성 골수 세포에서 아폽토시스를 유도한다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 비-자극성 골수 세포 및 자극성 골수 세포를 포함하는 면역 세포 집단에 있다. 일부 구현예에서, 상기 방법은 비-자극성 골수 세포를 제거하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서, 세포의 10%-80%가 사멸된다. 일부 구현예에서, 세포의 적어도 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 또는 80%가 사멸된다.
일부 구현예에서, 본 출원은 면역 세포 집단을 항-TREM2 항체와 접촉시키는 단계를 포함하는, 자극성 골수 세포 및 비-자극성 골수 세포를 포함하는 면역 세포 집단에서 자극성 골수 세포 대 비-자극성 골수 세포의 비를 증가시키는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서 상기 비는 항-TREM2 항체와 접촉되지 않은 세포 집단에 비해 증가된다. 일부 구현예에서 DC2 세포 대 DC1 세포의 비는 증가된다. 일부 구현예에서 DC2 세포 대 TAM1 세포의 비는 증가된다. 일부 구현예에서 DC2 세포 대 TAM2 세포의 비는 증가된다. 일부 구현예에서 DC2 세포 대 TAM1 + TAM2 세포의 비는 증가된다. 일부 구현예에서 DC2 세포 대 TAM1 + DC1 세포의 비는 증가된다. 일부 구현예에서 DC2 세포 대 DC1 + TAM2 세포의 비는 증가된다. 일부 구현예에서 DC2 세포 대 DC1 + TAM1 + TAM2 세포의 비는 증가된다. 일부 구현예에서, 적어도 상기 비는 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 또는 100% 증가된다.
일부 구현예에서 접촉 전 자극성 골수 세포 대 비-자극성 골수 세포의 비는 0.001:1 내지 0.1:1의 범위이다. 일부 구현예에서 접촉 후 자극성 골수 세포 대 비-자극성 골수 세포의 비는 0.1:1 내지 100:1의 범위이다.
일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 수가 감소한다. 일부 구현예에서 자극성 골수 세포는 DC2 세포이다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는, 예를 들어 괴사 또는 아폽토시스에 의해 사멸된다. 일부 구현예에서, 비-자극성 골수 세포는 성장 정지를 겪도록 유도된다. 일부 구현예에서 비-자극성 골수 세포는 더 이상 증식하지 않는다. 일부 구현예에서 비-자극성 골수 세포의 공간 국재화가 변경되고, 상기 비는 TME의 특정 영역에서 증가된다. 일부 구현예에서 비-자극성 골수 세포의 일시적 발현이 변경되고, 상기 비는 종양 발달 중 특정 시간 동안 증가된다.
일부 구현예에서, 접촉은 시험관내 접촉이다. 일부 구현예에서, 접촉은 생체 내 접촉이다. 일부 특정 구현예에서, 접촉은 인간에서 생체내 접촉이다. 일부 구현예에서, 접촉은 항-TREM2 항체를 투여함으로써 수행된다. 일부 구현예에서, 항체를 투여받은 개체 (예컨대 인간)는 암이 있다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 항-TREM2 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하여 개체에서 면역-관련 상태 (예를 들어, 암)를 치료하는 방법을 제공한다. 또 다른 측면에서, 본 발명은 항-TREM2 항체를 포함하는 조성물의 유효량을 개체에게 투여하는 것을 포함하여 개체에서 면역 반응을 향상시키는 방법을 제공한다. 일부 구현예에서 이들 방법은 다른 공동-요법 예컨대 PDL 차단 요법, 항-PD-1 항체, 항-PD-L1 항체, 항-PD-L2 항체, CTLA4 차단 요법, 항-CTLA-4 항체, T 세포 상의 억제 분자가 차단되는 전신 체크포인트 차단 요법, 입양 T-세포 요법, CAR T-세포 요법, 수지상 세포 또는 다른 세포 요법, 뿐만 아니라 종래의 화학요법과 함께 추가로 제공된다.
일부 구현예에서, 상기 방법은 개체로부터의 생물학적 샘플에서 TREM2 단백질의 발현 수준을 결정하는 단계를 추가로 포함한다. 일부 구현예에서 생물학적 샘플은, 비제한적으로, 체액, 조직 샘플, 장기 샘플, 소변, 대변, 혈액, 타액, CSF 및 이들의 임의의 조합을 포함한다. 일부 구현예에서 생물학적 샘플은 종양 조직에서 유래한다. 일부 구현예에서, 발현 수준은 TREM2 단백질을 인코딩하는 mRNA의 mRNA 발현 수준을 포함한다. 일부 구현예에서, TREM2 단백질의 발현 수준은 NSM의 단백질 발현 수준을 포함한다. 일부 구현예에서 TREM2 단백질의 발현 수준은 FACS, 웨스턴 블랏, ELISA, 면역침전법, 면역조직화학, 면역형광법, 방사면역측정법, 점 블랏팅, 면역검출 방법, HPLC, 표면 플라즈몬 공명, 광 분광법, 질량 분석법, HPLC, qPCR, RT-qPCR, 멀티플렉스 qPCR 또는 RT-qPCR, RNA-seq, 마이크로어레이 분석, SAGE, MassARRAY 기술, 및 FISH, 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 방법을 사용하여 샘플에서 검출된다.
또 다른 측면에서, 본 출원은 비-자극성 골수 세포를 포함하는 세포 집단을 항-TREM2 항체와 접촉시키는 단계; 및 비-자극성 골수 세포의 수를 정량화하는 단계를 포함하는, 일반적으로 비-자극성 골수 세포의 존재 또는 부재를 결정하거나, 또는 특정 비-자극성 골수 세포 (예를 들어 DC1 세포, TAM1세포 및/또는 TAM2 세포)의 존재 또는 부재를 결정하는 방법을 제공한다. 또 다른 측면에서, 본 출원은 비-자극성 골수 세포 및 자극성 골수 세포를 포함하는 면역 세포 집단을 항-TREM2 항체와 접촉시키는 단계; 세포에 대한 항체의 결합을 나타내는 복합체 또는 모이어티를 검출하는 단계 및 선택적으로 집단 내 비-자극성 골수 세포의 수를 정량화하는 단계를 포함하는 비-자극성 골수 세포의 존재 또는 부재를 결정하는 방법을 제공한다. 또 다른 측면에서, 비-자극성 골수 세포 및 자극성 골수 세포를 포함하는 면역 세포 집단을 항-TREM2 항체와 접촉시키는 단계; 자극성 골수 세포 및 비-자극성 골수 세포의 수를 정량화하는 단계; 및 비-자극성 골수 세포 대 자극성 골수 세포의 상대 비를 결정하는 단계를 포함하는, 비-자극성 골수 세포 대 자극성 골수 세포의 상대 비를 결정하는 방법이 제공된다.
검출 및/또는 정량화를 위한 본원에 기재된 구현예에서, 항-TREM2 항체는 TREM2 단백질에 결합하지만, 생물학적 반응에 영향을 미칠 수 있더라도 ADCC와 같은 생물학적 반응에 반드시 영향을 미칠 필요는 없다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 개체로부터의 생물학적 샘플에서 TREM2 단백질의 발현 수준을 검출하는 단계; 및 TREM2 단백질의 발현 수준에 기초하여 개체가 면역요법에 반응할 수 있는지를 결정하는 단계를 포함하는, 면역-관련 상태 (예를 들어, 암)의 치료를 위해 면역 요법에 (예를 들어, 항-TREM2 항체로) 반응할 수 있는 개체를 식별하는 방법을 제공하며, 여기서 건강한 개체의 수준에 비해 상승된 개체의 TREM2 단백질 수준은 개체가 면역요법에 반응할 수 있음을 나타낸다. 일부 구현예에서, 이들 방법은 또한 개체에서 면역-관련 상태 (예를 들어, 암)를 진단하는데 사용될 수 있으며 TREM2 단백질의 발현 수준에 기초하며, 여기서 건강한 개체의 수준에 비해 상승된 개체의 TREM2 단백질 수준은 개체가 암으로 고통받고 있음을 나타낸다. 일부 구현예에서, 발현 수준은 TREM2단백질을 인코딩하는 mRNA의 mRNA 발현 수준을 포함한다. 다른 구현예에서, TREM2 단백질의 발현 수준은 TREM2 단백질의 단백질 발현 수준을 포함한다. 일부 구현예에서 TREM2 단백질의 발현 수준은 FACS, 웨스턴 블랏, ELISA, 면역침전법, 면역조직화학, 면역형광법, 방사면역측정법, 점 블랏팅, 면역검출 방법, HPLC, 표면 플라즈몬 공명, 광 분광법, 질량 분석법, HPLC, qPCR, RT-qPCR, 멀티플렉스 qPCR 또는 RT-qPCR, RNA-seq, 마이크로어레이 분석, SAGE, MassARRAY 기술, 및 FISH, 및 이들의 조합으로 구성된 군으로부터 선택된 방법을 사용하여 샘플에서 검출된다. 이들 구현예에서, 항-TREM2 항체는 TREM2 단백질에 결합하지만, ADCC와 같은 생물학적 반응에 반드시 영향을 미칠 필요는 없다. 일부 구현예에서 생물학적 샘플은 종양 조직에서 유래된다. 일부 구현예에서 생물학적 샘플은, 비제한적으로, 체액, 조직 샘플, 장기 샘플, 소변, 대변, 혈액, 타액, CSF 및 이들의 임의의 조합을 포함한다.
또한, 종양에 대한 대상체 면역 반응을 향상시키거나 면역요법 치료의 효능을 향상시키는 방법 본원에 개시된다. 일반적으로, SDC의 존재비를 증가시키는 치료는 재발 없는 생존 시간과 같은 대상체 결과를 개선시킬 것이고, 암 면역요법 치료의 효능을 향상시킬 것이다. 치료는 대상체의 종양에서 SDC 세포의 상대적 또는 절대적 존재비를 증가시킬 수 있다. 치료는 대상체의 종양에서 NSM 세포의 상대적 또는 절대적 존재비를 감소시킬 수 있다.
일반적인 치료 전략의 예시적인 방법은 Flt3L의 전신 도입에 의해 SDC의 수를 증가시키는 것을 포함한다. 또 다른 방법은 CSF1을 동시에 차단하면서 Flt3L로 대상체의 자가 골수 또는 혈액 세포를 치료하는 것이다. 예를 들어 레트로바이러스에 의해 골수 또는 혈액 전구 집단에서 IRF8, Mycl1 또는 BATF3 또는 ZBTB46과 같은 SDC 전사 인자의 발현이 또한 SDC 발달을 유도하는데 사용될 수 있다. 또 다른 치료 전략은 SDC를 선택적으로 절약하면서 NSM 세포의 체계적인 제거를 포함한다. 이것은 이러한 집단의 비의 전반적인 유리한 변화를 초래할 수 있다. NSM 세포의 제거는 TREM2 표면 단백질에 대한 항체의 투여 (전신 또는 종양에 국재화된 투여)를 포함하여, 임의의 수단에 의해 달성될 수 있다.
일부 구현예에서, SDC-향상 치료는 대상체의 자연 면역계가 암을 더 잘 제어 또는 근절할 수 있도록 하는 치료적 처치로서 적용된다. 또 다른 구현예에서, 본 발명의 SDC-향상 치료는 면역요법 치료와 같은 치료적 처치와 함께 적용되며 (그와 같은 적용은 면역요법 치료 전, 동시 또는 후에 발생함) 여기서 SDC-향상 치료는 치료적 처치의 효능을 증가시키기 위한 부수 또는 보조 치료의 역할을 한다.
투여 방법
일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법은 개체에서 면역-관련 상태의 치료에 유용하다. 일 구현예에서, 개체는 인간이고 항체는 TREM2 항체이다. 또 다른 구현예에서, 개체는 마우스이고 항체는 TREM2 항체이다.
일부 구현예에서, 본원에 기재된 항-TREM2 항체의 생체내 투여를 위해, 정상적인 투여량은, 투여 경로에 따라, 하루에 개체의 체중 1kg당 약 10 ng에서 최대 약 100 mg 이상, 바람직하게는 약 1 mg/kg/일 내지 10 mg/kg/일로 변할 수 있다. 치료될 질환 또는 장애의 중증도에 따라, 수 일 또는 그 이상에 걸친 반복 투여의 경우, 원하는 증상 억제가 달성될 때까지 치료가 지속된다. 예시적인 투여 요법은 약 2 mg/kg의 항-TREM2 항체의 초기 용량을 투여한 후 격주마다 약 1 mg/kg의 주간 유지 용량을 투여하는 것을 포함한다. 의사가 달성하고자 하는 약동학적 붕괴 패턴에 따라 다른 투여 요법이 유용할 수 있다. 예를 들어, 일주일에 1회 내지 21회 개체에게 투여하는 것이 본원에서 고려된다. 특정 구현예에서, 약 3 μg/kg 내지 약 2 mg/kg 범위의 투여 (예컨대 약 3 μg/kg, 약 10 μg/kg, 약 30 μg/kg, 약 100 μg/kg, 약 300 μg/kg, 약 1 mg/kg, 및 약 2/mg/kg)가 사용될 수 있다. 특정 구현예에서, 투여 빈도는 1일 3회, 1일 2회, 1일 1회, 격일에 1회, 주 1회, 격주에 1회, 4주에 1회, 5주에 1회, 6주에 1회, 7주에 1회, 8주에 1회, 9주에 1회, 10주에 1회, 또는 1개월에 1회, 2개월에 1회, 3개월에 1회 또는 그 이상이다. 요법의 진행은 종래의 기술 및 분석에 의해 쉽게 모니터링된다. 투여되는 항-TREM2 항체를 포함하여, 투여 요법은 사용되는 용량과 관계없이, 시간이 지남에 따라 달라질 수 있다.
일부 구현예에서, 본원에 제공된 방법 (예컨대 비-자극성 골수 세포의 면역 반응을 향상시거나 이의 무력화를 달성하는 방법)은 암의 치료에 유용하며, 따라서 항-TREM2 항체 또는 항-TREM2 항체를 받는 개체는 암을 갖는다.
임의의 적합한 암은 본원에 제공된 항체로 치료될 수 있다. 암은 임의의 암종, 선암종, 연조직, 육종, 기형종, 흑색종, 백혈병, 호지킨 림프종, 비-호지킨 림프종, 또는 의료 분야에 알려진 뇌암일 수 있다. 일부 구현예에서, 암은 고형암이다. 일부 구현예에서, 암은 액상 암이다. 일부 구현예에서, 암은 면역기피성(immunoevasive)이다. 일부 구현예에서, 암은 면역응답성(immunoresponsive)이다. 일부 구현예에서, 암은 흑색종, 신장, 간담즙, 두경부 편평세포 암종 (HNSC), 췌장, 결장, 방광, 교모세포종, 전립선, 폐, 유방(breast) (유방(mammary)), 난소, 위, 신장, 방광, 식도, 콩팥, 흑색종, 백혈병, 림프종, 또는 중피종이다. 일부 구현예에서, 암은 결장암, 췌장암, 또는 유방암이다.
일부 구현예에서 면역-관련 상태는 (인간에서) 비-자극성 골수 세포 상의 TREM2 단백질의 발현 또는 비-인간 종에서 TREM2 단백질의 상동체의 발현과 관련된 면역-관련 상태이다. 일부 구현예에서 면역-관련 상태는 자극성 골수-세포와 비교하여 비-자극성 골수 세포 상의 TREM2 단백질의 과발현과 관련된 면역-관련 상태이다. 일부 구현예에서 TREM2 mRNA 또는 TREM2 단백질의 과발현은 자극성 골수 세포와 비교하여 대략 적어도 2배, 5배, 10배, 25배, 50배 또는 100배 더 높다.
일부 구현예에서, 치료는 대상체에서 면역 반응을 향상시킨다. 일부 구현예에서, 향상된 면역 반응은 적응 면역 반응이다. 일부 구현예에서, 향상된 면역 반응은 선천성 면역 반응이다.
일부 구현예에서, 항체는 정맥내, 근육내, 피하, 국소, 경구, 경피, 복강내, 안와내, 이식에 의해, 흡입에 의해, 경막내, 뇌실내, 또는 비강내로 투여된다. 유효량의 항-TREM2 항체는 암의 치료를 위해 투여될 수 있다. 항-TREM2 항체의 적절한 투여량은 치료될 암의 유형, 항-TREM2 항체의 유형, 암의 중증도 및 경과, 개체의 임상적 상태, 개체의 병력 및 치료에 대한 반응, 및 주치의의 재량에 기반하여 결정될 수 있다.
병용 요법
일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체는 적어도 하나의 추가 치료제와 함께 투여된다. 임의의 적합한 추가 치료제는 본원에 제공된 항체와 함께 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 면역요법은 체크포인트 억제제; T 세포의 체크포인트 억제제; 항-PD1 항체; 항-PDL1 항체; 항-CTLA4 항체; 입양 T 세포 요법; CAR-T 세포 요법; 수지상 세포 백신; 단핵구 백신; T 세포 및 항원 제시 세포 둘 다에 결합하는 항원 결합 단백질; BiTE 이중 항원 결합 단백질; 톨-유사 수용체 리간드; 사이토카인; 세포독성 요법; 화학요법; 세포정지제; 방사선요법; 소분자 억제제; 소분자 작용제; 면역조절제; 및 후성 조절제, 이들의 조합으로부터 선택된다.
일부 구현예에서, 추가 치료제는 항체이다. 일부 구현예에서, 추가 치료제는 종양 세포 표면 상의 단백질 또는 단백질들에 결합하는 항체이다.
암 치료를 위해, 항-TREM2 항체는 면역 체크포인트 단백질을 억제하는 하나 이상의 항체와 조합될 수 있다. 종양 세포의 표면에 표시된 면역 체크포인트 단백질이 특히 관심 대상이다. 임상 암 면역요법, 세포독성 T-림프구-관련 항원 4 (CTLA4; CD152로도 공지됨) 및 프로그램된 세포 사멸 단백질 1 (PD1; CD279로도 공지됨)의 맥락에서 가장 적극적으로 연구된 면역-체크포인트 수용체는 둘 다 억제 수용체이다. 이들 수용체 중 어느 하나를 차단하는 항체의 임상 활성은 항종양 면역이 여러 수준에서 향상될 수 있고, 조합 전략이 기계론적 고려 및 전임상 모델에 의해 가이드되어 지능적으로 설계될 수 있음을 의미한다.
PD-1에 대한 2개의 리간드는 PD-1 리간드 1 (PD-L1; B7-H1 및 CD274로도 공지됨) 및 PD-L2 (B7-DC 및 CD273로도 공지됨)이다. PD-L1은 암 세포 상에서 발현되고, T 세포 상의 이의 수용체 PD-1과의 결합을 통해 T 세포 활성화/기능을 억제한다. PD-1과 암 세포 상의 이의 동족 리간드, PD-L1 및 PD-L2와의 상호작용을 차단하는 억제제는 T 세포 활성화 및 기능을 둘 다 증가시킬 수 있으며, 암 세포가 면역계를 피하는 것을 방지한다.
일부 구현예에서, 면역요법은 PD-1과 PD-L1 또는 PD-L2의 결합을 방해하는 제제이다. 일부 구현예에서, 면역요법은 항-PD1 항체이다. 일부 구현예에서, 면역요법은 항-PD-L1 항체이다. 일부 구현예에서, 면역요법은 항-PD-L2 항체이다.
다양한 PD-1, PD-L1, 및 PD-L2 항체가 당 업계에 공지되어 있다. 일부 구현예에서, 추가 치료제는 아테졸리주맙 (PD-L1), 아벨루맙 (PD-L1), 더발루맙 (PD-L1), 니볼루맙 (PD-1), 펨브로리주맙 (PD-1), 세미플리맙 (PD-1), 이필리무맙 (CTLA-4), 트레멜리무맙 (CTLA-4), 또는 이들의 임의의 조합 중 적어도 하나이다.
추가 치료제는 임의의 적합한 수단에 의해 투여될 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 및 추가 치료제는 동일한 약제학적 조성물에 포함된다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 및 추가 치료제는 상이한 약제학적 조성물에 포함된다.
본원에 제공된 항체 및 추가 치료제가 상이한 약제학적 조성물에 포함되는 구현예에서, 항체의 투여는 추가 치료제의 투여 전, 동시 및/또는 후에 발생할 수 있다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 및 추가 치료제의 투여는 서로 약 1개월 이내에 발생한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 및 추가 치료제의 투여는 서로 약 1주일 이내에 발생한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 및 추가 치료제의 투여는 서로 약 1일 이내에 발생한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 및 추가 치료제의 투여는 서로 약 12시간 이내에 발생한다. 일부 구현예에서, 본원에 제공된 항체 및 추가 치료제의 투여는 서로 약 1시간 이내에 발생한다.
키트 및 제조 물품
본 출원은 본원에 기재된 항체 조성물 중 임의의 하나 이상을 포함하는 키트를 제공한다. 일부 구현예에서, 키트는 임의의 2차 항체, 면역조직화학 분석용 시약, 약제학적으로 허용되는 부형제 및 사용 설명서 및 이들의 임의의 조합으로부터 선택된 구성요소를 추가로 함유한다. 하나의 구체적인 구현예에서, 키트는 본원에 기재된 항체 조성물 중 임의의 하나 이상을, 하나 이상의 약제학적으로 허용되는 부형제와 함께 포함하는 약제학적 조성물을 포함한다.
본 출원은 또한 본원에 기재된 항체 조성물 또는 키트 중 어느 하나를 포함하는 제조 물품을 제공한다. 제조 물품의 예로는 바이알 (밀봉된 바이알 포함)을 포함한다.
실시예
하기는 본 발명을 수행하기 위한 특정 구현예의 예이다. 실시예는 단지 예시의 목적으로 제공되며, 본 발명의 범위를 어떠한 방식으로도 제한하려는 것은 아니다. 사용된 수 (예를 들어, 양, 온도 등)와 관련하여 정확성을 보장하기 위해 노력했지만, 물론 일부 실험 오차 및 편차가 허용되어야 한다.
달리 지시되지 않는 한, 본 발명의 실시는 당 업계의 기술 내에서 통상적인 단백질 화학, 생화학, 재조합 DNA 기술 및 약리학 방법을 사용할 것이다. 그와 같은 기술은 문헌에 충분히 설명되어 있다. 예를 들어, 하기를 참고한다: T.E. Creighton, Proteins: Structures and Molecular Properties (W.H. Freeman and Company, 1993); A.L. Lehninger, Biochemistry (Worth Publishers, Inc., current addition); Sambrook, et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd Edition, 1989); Methods In Enzymology (S. Colowick and N. Kaplan eds., Academic Press, Inc.); Remington's Pharmaceutical Sciences, 18th Edition (Easton, Pennsylvania: Mack Publishing Company, 1990); Carey and Sundberg Advanced Organic Chemistry 3 rd Ed. (Plenum Press) Vols A 및 B(1992).
실시예 1: 항- TREM2 항체의 인간화.
클론 # 237920의 인간화
마우스 및 인간 TREM2에 특이적인 단클론 랫트 IgG2B　클론 # 237920 (R&D Systems Cat # MAB17291)을 서열 결정 및 인간화에 사용하였다. 간단히 말하면, 항체의 디설파이드 결합을 디티오트레이톨 (DTT)로 환원하고 유리 설프하이드릴 기를 요오도아세트아미드로 알킬화하였다. 알킬화된 항체를 시퀀싱-등급 엔도프로테이나 제로 분해하고, 스핀 컬럼을 사용하여 정제하고, LC-MS/MS 분석에 의해 서열을 결정하였다. 서열은 하기에서 보여준다.
Figure pct00007
VH 및 VL 서열을 NCBI 웹사이트 (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/igblast/; Ye, J. et al. Nucleic Acids Research 41:W34-W40 (2013))에서 공지된 인간 생식 계열 서열의 라이브러리와 비교하였다. 사용된 데이터베이스는 IMGT 인간 VH 유전자 (F+ORF, 273 생식 계열 서열) 및 IMGT 인간 VL카파 유전자 (F+ORF, 74 생식 계열 서열)였다.
237920 VH의 경우, 인간 생식 계열 IGHV3-23(대립 유전자 1)을 수용체 서열로 선택하였고, 인간 중쇄 IGHJ4(대립 유전자 1) 결합 영역 (J 유전자)은 IMGT® the international ImMunoGeneTics information system® www.imgt.org (설립자 겸 디렉터 : Marie-Paule Lefranc,Montpellier, France)에서 컴파일된 인간 결합 영역 서열로부터 선택되었다.
237920 VL의 경우, 인간 생식 계열 IGKV1-39(대립 유전자 1)를 수용체 서열로서 선택하였고, 인간 경쇄 IGKJ2(대립 유전자 1) 결합 영역 (J 유전자)은 IMGT® the international ImMunoGeneTics information system® www.imgt.org (설립자 겸 디렉터: Marie-Paule Lefranc, Montpellier, France)에서 컴파일된 인간 결합 영역 서열로부터 선택되었다.
CDR은 AbM 정의에 따라 정의되었다 (CDR 정의를 비교한 표는 Dr. Andrew C. R. Martin의 웹사이트 www.bioinf.org.uk/abs/를 참고한다). 상응하는 모계 뮤린 서열에 대한 인간 생식 계열 프레임워크 (즉, VH 및 VL의 비-CDR 잔기) 위치의 변경을 사용하여, 예를 들어, 인간화된 항체의 결합을 최적화하였다.
표 1A는 생성된 mAb 237920의 인간화된 버전의 VL, VH, 및 전장 중쇄 및 경쇄 서열을 보여준다. 37017은 다른 인간화된 버전이 추가 돌연변이를 통해 생성된 모계 인간화된 클론이다. 표 1B는 CDR 서열을 보여준다.
Figure pct00008
Figure pct00009
표 1B-인간화된 항체의 CDR
Figure pct00010
인간화된 항체의 프레임워크 정렬
Figure pct00011
VL 도메인에서, CDR에서, Asn28, Asn31, Asn32 및 Asn53은 서열 및 형태에 따른 탈아미드화 가능성이 낮다. Asn93은 탈아미드화 가능성이 낮거나 중간 정도이며, 번역 후 변형의 수준이 낮을 수 있다. VH 도메인에서, Asn31은 서열 및 형태에 따른 탈아미드화 가능성이 낮다. CDR-H2에서 Asn53은 탈아미드화 가능성이 중간 정도이며; 번역 후 변형을 방지하기 위해, Asn53은 Gln, Ser 또는 Ala로 변경될 수 있고 결합의 유지는 실험적으로 결정되었다. CDR-H3에서 Trp100은 용매에 노출될 수 있으며, 특히 응력 조건하에서 산화 가능성이 있다.
용액내 엔도프로테이나아제 분해
단클론 항체 (mAb)의 용액내 엔도프로테이나아제 분해는 mAb 시퀀싱 분석을 위해 수행되었다. 항체 50 μg을 DTT로 환원하고, 요오도아세트아미드를 사용하여 알킬화하고, 아세톤 침전하고, 1μg/μL의 농도로 물에 재구성하였다. 항체 샘플의 용액내 분해는 제조자의 지침에 따라 Asp-N, 키모트립신, 엘라스타아제, 트립신 및 펩신의 5가지 개별 효소 분해를 사용하여 수행되었다. 이어서 샘플을 동결 건조시키고, 0.1% TFA에 재현탁시키고 C18 Zip-Tip을 사용하여 정제하였다. 이어서 샘플을 진공 원심분리에 의해 건조시키고 질량 분석법 분석시까지 동결 상태로 유지하였다.
질량 분석법
온전한 질량 측정
mAb 샘플을 변성, 환원 및 산성화하였다. 이어서 단백질을 Waters QToF Ultima Global 질량 분석계 (LC-ESI-TOF MS)에 연결된 Agilent 1100 HPLC를 사용하여 분석하였다. 적절한 LC-MS 스펙트럼은 Waters MassLynx 4.1 소프트웨어를 사용하여 처리 (조합, 감산, 평활화 및 디콘볼루션)되었다.
LC-MS/MS 분석
정제된 펩티드를 0.1% 포름산에 재현탁시키고, 각 분해물의 절반을 나노스프레이 소스 및 EASY-nLC 1000 시스템 (Thermo Fisher Scientific)이 갖춰진 Orbitrap 분석기 (Q-Exactive, Thermo Fisher Scientific)에서 분석하였다. 펩티드를 800 바의 압력에서 PepMap®RSLC 2μm C18 수지 (Thermo Fisher Scientific)로 패킹된 50 cm (75 μm 내부 직경) EASY-Spray 컬럼 상에 로딩하였다. 펩티드를 60분 동안 0.1% 포름산 중 0%-30% 아세토니트릴로 설정된 구배를 사용하여 250nl/분의 속도로 용리하였다. 펩티드를 나노-전기분무 이온 공급원에 의해 Q-Exactive 질량 분석계 (Thermo Fisher Scientific)에 도입하였다. 기기 방법은 1E6의 자동 이득 제어 (AGC) 목표, 120 ms의 최대 이온 주입 시간 및 70 000의 해상도로 Orbitrap 질량 분석기에서 1회 MS 전체 스캔 (400-1600 m/z)에 이어서 17 500의 해상도, 5E5의 AGC 목표, 100ms의 최대 이온 시간으로 10회의 데이터-독립적 MS/MS 스캔 및 1회의 마이크로스캔으로 구성된다. MS/MS 스캔을 유발하기 위한 강도 임계값은 1.0%의 언더필 비율(underfill ratio)로 설정되었다. 정규화된 충돌 에너지가 30으로 설정된 HCD 충돌 셀에서 단편화가 발생하였다. 동적 배제(dynamic exclusion)는 8초 설정을 사용하여 적용되었다.
표 2는 인간화된 클론의 생물물리학적 특성을 요약한다. 분자량 및 흡광 계수는 4차 구조에서 기여하는 단백질 사슬의 합에 대해 추정된다. 기본적으로 계산은 각각의 사슬로부터 동등하고 모노머 기여를 추정한다. 흡광 계수는 M-1cm-1 단위의 몰 단백질당 280nm에서의 예측된 흡광도이다. 글리코실화, 인산화 및 단백질분해와 같은 번역 후 변형 가능성은 분자량 또는 흡광 계수 추정치에서 고려되지 않는다.
Figure pct00012
실시예 2: 항- TREM2 항체의 생산 및 특성화
항체 생산 및 특성화
표준 단백질 발현 벡터를 표준 방법을 사용하여 HEK293에 형질감염시킨 후, 세포를 7일 동안 성장시키고 수거하였다. HEK293 이외에, CRISPR/Cas9 편집 (Alexander Weiss, University of Toronto)에 의해 포유동물 a1,6-푸코실트랜스퍼라아제 (FUT8)가 결핍된 293 세포에서 항체가 또한 생산되었다. 상청액 pH를 1M Hepes pH 7.4로 조정하고, 아지드화나트륨을 첨가하여 미생물 성장을 방지하였다. KanCap A 수지를 사용하여 단백질을 포획하고, PBS 및 1M 염화나트륨을 함유하는 PBS로 세척한 후 50mM 시트레이트 pH 3.5, 100mM NaCL로 항체를 용리시켰다. 용리 직후에, 용액을 0.5M 아르기닌을 함유하는 1M 트리스 (pH 8)로 중화시켰다. 생물물리학적 특성화는 표준 기술을 사용하여 PBS로 완충액 교환된 단백질에 대해 수행되었다. 단백질을 OD280으로 정량하고, 계산된 흡광 계수를 사용하여 양 및 농도를 결정하였다. 환원된 및 비-환원된 SDS-PAGE (Biorad 기준 트리스/글리신/SDS, 4-20%) 또는 Perkin Elmer GXII 모세관 전기영동 시스템을 사용하여 순도 및 근사 분자 질량을 결정하였다. Sepax Zenix-C SEC-300, 3um, 300Å, 4.6*150mm 크기 배제 컬럼 및 PBS 실행 완충액을 사용하여 280nm에서 검출되는 HPLC에 의해 응집 상태를 결정하였다.
표면 플라즈몬 공명 (SPR)을 사용한 항체 친화도 측정
결합 동력학은 인간 TREM2 His (Sino Biological, Beijing, P.R.China) 또는 항-His 캡처를 통해 시리즈 S CM5 칩에 포획된 인간 또는 아민 커플링에 의해 칩에 직접적으로 고정된 TREM2 인간 IgG1 Fc 융합 단백질 (95% 초과의 순도로 정제된 인하우스 SEC)과 함께 Biacore T200 (GE Healthcare, UK)을 사용하여 표면 플라즈몬 공명에 의해 결정되었다. 지시된 항체의 연속 희석액을 2분 동안 30 ul/분으로 주사하였다. 이어서, PBS 또는 시스템 완충액을 400초 동안 30 ul/분으로 주입하여 분리를 관측하였다. 블랭크 흐름 세포 상에서 반응의 감산에 의해 결합 반응을 보정하였다. 동역학적 분석을 위해, kon 및 koff 값의 전체적 피팅의 1:1 Langmuir 모델이 사용되었다. Kd 값은 kon 및 koff의 비로부터 결정되었다.
표 3은 SPR에 의해 측정된 인간 TREM2-His에 대한 항체 결합 친화도를 나타낸다.
Figure pct00013
표 4는 SPR에 의해 측정된 인간 TREM2-Fc에 대한 항체 결합 친화도를 나타낸다.
Figure pct00014
낮은 리간드 밀도 (RL=500 RU)에서, 인간 TREM2-Fc에 대한 PI37017 결합 동역학은 잘 피트(fit)되지 않았다. 이 데이터는 서열 번호:31 (클론 37017)의 서열의 97번 위치에 존재하는 A 및 98번 위치에 존재하는 K가 랫트 IgG2B 클론 # 237920의 인간화시 인간 TREM2 결합의 실질적인 손실을 야기할 가능성이 있음을 나타낸다. 이들 프레임워크 잔기 (A97T 및 K98R)의 돌연변이는 인간화된 클론에 의해 증가된 인간 TREM2 결합을 초래한다. 예를 들어, 클론 37012를 참고한다.
실시예 3: 항- TREM2 항체의 세포 결합
세포 결합 (EC50 측정):
인간 또는 마우스 TREM2를 과발현시키는 Expi 293 모계 세포 또는 Expi 293 세포 100,000 내지 500,000개를 96 웰 플레이트에 플레이팅하고, 죽은 세포를 Zombie Near Infrared (Biolegend)로 염색하였다. 지시된 비접합 항체의 적정액을 8-10 포인트에 걸쳐 1:3 희석 범위에서 0 ug/ml 내지 10 ug/ml의 범위 내에서 이들 세포와 인큐베이션하였다. 이들의 이소형 (hIgG1 또는 mIgG2a)에 따라, 이들 1차 비접합 항체는 Alexa Fluor 647 접합된 항-인간 Fc 또는 항-마우스 Fc 2차 항체 (Jackson Immunoresearch)로 검출되었다. Alexa Fluor 647 신호는 유세포 분석법 (BD Fortessa X-14, BD Biosciences)에 의해 측정되었다. EC50 값은 Graphpad Prism (Graphpad Software)에서 HEK293 모계 세포로부터 생성된 배경 형광에 대해 과발현 세포에 결합하는 항체로부터 생성된 곡선 피팅 신호에 의해 계산되었다.
이 데이터는 서열 번호:31 (클론 37017)의 서열의 97번 위치에 존재하는 A 및 98번 위치에 존재하는 K가 랫트 IgG2B 클론 # 237920의 인간화시 인간 TREM2 결합의 실질적인 손실을 야기할 가능성이 있음을 나타낸다. 이들 프레임워크 잔기 (A97T 및 K98R)의 돌연변이는 인간화된 클론에 의해 증가된 인간 TREM2 결합을 초래한다. 예를 들어, 클론 37012를 참고한다.
표 5는 세포 표면 TREM2에 대한 항-TREM2 항체의 반최대(half-maximal) 포화 결합을 나타낸다.
Figure pct00015
실시예 4: PI-7012는 항-PD-1과 함께 항-종양 활성을 개선한다
재료 및 방법
CT26.WT (CRL-2638) 세포는 American Type Culture Collection (ATCC)에서 구입하였다. 생체내 사용을 위한 항체를 모두 내독소에 대해 시험하였고, 0.2 EU/mg 단백질 이하에서 사용하였다. 클론 RMP1-14 (Absolute Antibody Inc. Cat # Ab00813-7.1)로부터의 항-마우스 PD-1 항체의 아미노산 서열을 질량 분석법 (LC-MS/MS)으로 결정하였다. 문헌 (Nimmerjahn and Ravetch 2005 Science 310: 1510-15121)에 기재된 바와 같이 FcgR에 대한 결합을 제거하기 위해 RMP1-14 항체의 마우스 IgG1 버전의 Fc 영역에 단일 점 돌연변이 [D265A]를 도입하였다. 마우스 IgG1 [클론 MOPC-21], 및 마우스 IgG2a [클론 C1.18.4] 이소형 대조군은 BioXCell에서 구입하였다. PI-7012 및 Afuc-PI-7012 (PI37012의 CDR 서열을 갖고 마우스 IgG2a 포맷으로 뮤린화됨(murinized))를 마우스 IgG2a 포맷으로 각각 Expi293 세포 (Thermo Fisher Scientific) 또는 293/FUT8 녹아웃 세포 (University of Toronto)에서 생산하고 MabSelect Protein A 수지 (GE Life Sciences)를 사용하여 정제하였다. 항체를 0.1M 시트레이트 완충액 (pH 3.0)으로 용리하고 사용 전에 완충액 교환하였다.
살아있는 동물과 관련된 모든 실험 절차는 Murigenics의 기관 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인되었다. 6-8주령 암컷 BALB/c 마우스를 Taconic에서 구입하여 동물 시설에 1주일 적응시킨 후에 사용하였다. 액체 질소 스톡으로부터 해동 후 CT26 세포를 3 내지 7회 계대 배양 내에서 수거한 다음 생체내 실험에 사용하였다. 암컷 Balb/C 마우스의 오른쪽 복외측 부위를 면도하고 하루 전에 주사를 위해 준비하였다. 종양 접종 당일, 세포를 수거하여 30분 이내에 사용하였다. 피하 종양을 확립하기 위해, 1x106 CT26 세포를 이식한 다음 마우스의 종양 성장을 모니터링하였다. 종양 용적은 식 (L　Х　W2)/2를 사용하여 종양 치수의 캘리퍼 측정으로부터 계산되었고, 상기 식에서 L은 더 긴 측정값이다. 종양의 평균 크기가 80-100 입방 mm에 도달하면, 마우스를 표 6에 나타낸 바와 같이 처리 그룹에 무작위화하였다:
Figure pct00016
종양 용적 및 체중을 주 2회 모니터링하고 일원 ANOVA에 의한 그룹 비교 분석을 그래프로 나타내었다. 종양 용적이 약 2000 입방 mm에 도달했을 때, 연구 동안 체중이 15% 이상 감소할 때, 또는 다른 건강 관련 문제로 인해 마우스를 안락사시켰다.
결과
본 발명자들은 글리코엔지니어링(glycoengineering)을 통해 (즉, 항-TREM2 mAb의 탈푸코실화된 버전을 생성함으로써) 특정 FcgR에 대한 mAb 결합의 친화력이 항-종양 활성을 증가시킬 수 있는지를 결정하였다. PI-7012 및 afuc-PI-7012를 CT26 종양 모델에서 항-PD-1과 함께 시험하였다. PI-7012 및 afuc-PI-7012는 유사한 종양 성장 억제 수준을 나타냈다 (79% 대 88% TGI). afuc-PI-7012로 처리한 결과 30%의 치유율이 나타났다. 도 1a에 도시된 바와 같이, afuc-PI-7012는 PI-7012보다 항-PD-1과 조합될 때 항-종양 활성을 증가시켰다. 항-종양 활성에 미치는 PI-7012의 탈푸코실화의 영향은 개별 마우스 종양 용적의 분석에서 보다 명확하게 관찰되었다 (도 1b 및 1c). 이는 항-TREM2 항체의 탈푸코실화가 코어-푸코실화된 항체에 비해 상당한 치료적 이점을 제공한다는 것을 입증한다.
연구 과정 동안, 임의의 치료 그룹에서 체중 감소는 유의하지 않았다 (도 2). 체중 감소는 전형적으로 치료와 관련된 독성에 대한 대체 척도로 사용된다. 이 데이터는 단일 제제로서 또는 항-PD-1과 조합된 항-TREM2로의 단기 또는 장기 치료가 잘 허용되며, 어떠한 유의한 독성도 관찰되지 않았음을 나타낸다.
실시예 5: 항-TREM2 요법과 관련된 명시적(overt) 독성없음
재료 및 방법
상기 실시예에서 처리된 마우스로부터의 조직 (폐, 간, 뇌, 신장 및 심장)을 적어도 24시간 동안 10% 중성 완충 포르말린에 보존하고, 조직학을 위해 일상적으로 처리하고, 5-6 μm로 절단하고, 절편을 헤마톡실린 및 에오신으로 염색하였다. 저전력 (40-100x) 광학 현미경을 사용하여 염색된 슬라이드를 검사하고, HistoWiz를 통해 이미지를 얻었다. CD68-양성 세포를 항-CD68 항체 (AbD Serotec)를 사용하여 검출하고 40x 절편의 8-9 필드를 광학 현미경을 사용하여 정량화하였다.
결과
처리 후 마우스 조직 (폐, 간, 심장, 신장 및 뇌)의 H&E 염색에 의한 총 형태학적 분석은 이소형 대조군 처리된 마우스와 비교하여 PI-7012, afuc-PI-7012 및 항-PD-1 조합 처리된 마우스에서 어떠한 형태학적 변화도 나타내지 않았다 (도 3은 폐 조직의 염색을 나타냄).
H&E 염색 이외에, 조직을 또한 항-CD68을 사용하여 대식세포에 대해 염색하였다. 세포내 마커 CD68은 염증 조직 및 종양에서 단핵구/대식세포를 면역염색시키기 위한 신뢰할 수 있는 세포화학적 마커로서 문헌에서 널리 사용되어 왔다. 폐 (도 4a), 뿐만 아니라 분석된 다른 조직에서는, 대조군과 비교하여 임의의 치료 그룹에서 CD68+ 대식세포 수의 식별 가능한 변화가 관찰되지 않았으며 (도 4b), 이는 항-TREM2-매개된 고갈이 TME에서 특이적으로 발생했음을 나타낸다.
실시예 6: 건강한 마우스 조직에서 제한된 TREM2 발현
재료 및 방법
모든 동물 연구는 Murigenics 동물 연구 위원회에 의해 승인되었다. C57BL/6J-Trem2 em2Adiuj /J (이하 TREM2KO로 지칭됨) 및 대조군 C57BL/6J 마우스는 Jackson Laboratory에서 입수하였다. 유세포 분석을 위해 전체 폐, 비장 및 뼈를 수집하고 즉시 처리하였다. 심장 천자에 의해 혈액을 동시에 수집하였다. Miltenyi MACS 조직 분리 키트를 사용하여 조직을 단일 세포 현탁액으로 처리하였다. 1x 적혈구 용해 완충액 (Biolegend)을 사용하여 적혈구를 용해시켰다. 세포 표면 염색을 위해 처리하기 전에 세포를 고정성 생존 염료(Fixable Viability Dye) (ThermoFisher Scientific)로 염색하였다. 항-마우스 면역표현형 항체를 Fc 블럭과 함께 FACS 완충액 (2% FBS, 2mM EDTA, 1× PBS)에 희석시키고 얼음 위에서 30분 동안 염색하였다. 염색 후, 세포를 FACS 완충액으로 2회 세척한 다음 PBS 중의 2% 파라포름알데히드에서 15분 동안 고정시켰다. 모든 데이터를 LSR Fortessa 유세포 분석기 (BD) 또는 Attune 유세포 분석기 (Thermo Fisher)에서 수집하고 FlowJo 소프트웨어를 사용하여 분석하였다. TREM2KO 세포 염색은 음영 플롯으로 표시되고, 야생형 세포 염색은 개방 플롯으로 표시된다.
결과
TREM2는 활성화된 대식세포, 미성숙 수지상 세포, 파골세포 및 미세아교세포에서 발현된다2 ,3. 높은 수준의 TREM2를 발현시키는 세포는 면역감시, 세포-세포 상호작용, 조직 잔해 제거 및 잠재적 염증 반응의 해결에 참여하는 것으로 생각된다4.　유전자 녹다운 또는 녹아웃에 의한 이들 세포에서의 TREM2 발현의 부재는 세포 잔해를 식균 작용하는 능력을 손상시키고 또한 조절 사이토카인의 생산을 증가시킨다5. 생리학적 환경에서, FACS 플롯에 나타난 바와 같이 말초 혈액, 비장, 간 또는 폐에서 TREM2의 검출가능한 발현이 매우 낮거나 없다 (도 5). 그러나, 폐 또는 간-상주 대식세포가 순수한 세포 집단으로서 단리되고 TREM2에 대해 염색되면, TREM2 발현이 검출될 수 있게 된다.
실시예 7: TREM2는 마우스 TAM에서 주로 발현된다
재료 및 방법
표준 방법에 의해 단일 세포 현탁액을 단리하기 위해 종양 조직을 처리하였다. 간략하게, 종양을 면도날로 잘게 다지고 Miltenyi MACS 분리 키트로부터의 효소를 함유하는 RPMI-1640 배지에서 분해하였다. 종양을 제조사 권장 사항에 따라 GentleMAC에서 처리하고 37℃에서 대략 40분 동안 인큐베이션하였다. 소화 혼합물을 2 mM EDTA 및 2% 소태아혈청을 함유하는 PBS로 켄칭하였다. 이어서 단일 세포 현탁액을 70 um 필터에 통과시킨 후 세포를 FACS 완충액으로 헹구었다. 원심분리 후, 세포 펠렛을 FACS 완충액에 재현탁시키고 항체 칵테일로 염색하여 종양-관련 대식세포 및 다른 면역 세포 집단을 식별하였다6. TREM2KO 세포 염색은 음영 플롯으로 표시되고, 야생형 세포 염색은 개방 플롯으로 표시된다.
결과
T 세포, B 세포, NK 세포 및 다른 비-골수 세포 집단뿐만 아니라 CD45-음성 세포는 세포 표면에서 검출 가능한 TREM2 발현을 나타내지 않는다. 그러나, 종양-관련 대식세포 (TAM) 및 골수 유래 억제 세포 (MDSC)를 포함하는 골수 세포 서브셋은 TREM2를 세포 표면에서 다양한 정도로 발현시킨다. 종양 미세환경에서 TREM2에 대해 양성인 세포 유형 중에서, TAM에서의 수용체 발현 밀도는 종양 기원 (도 6에 도시된 CT26 및 MC38)에 관계없이 다른 세포 유형보다 유의하게 더 높았다.
실시예 8: 인간 말초 혈액 백혈구에서의 제한된 TREM2 발현
재료 및 방법
정상 인간 지원자로부터 얻은 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 및 음성으로 분류된 CD14+ 단핵구는 AllCells Inc.에 의해 제공되었다. CD14+ 단핵구를 표준 프로토콜5을 사용하여 시험관내에서 분화시켰다5. CD14+　단핵구를 2 mM L-글루타민, 100 μg/ml 스트렙토마이신, 100 U/ml 페니실린 및 10% 열-불활성화 FBS가 보충된 RPMI-1640 배지로 구성된 완전한 배양 배지에서 배양하였다. 대식세포로의 분화를 유발하기 위해, 50 ng/mL M-CSF를 배지에 첨가하였다. 배지는 2-3일마다 보충되었다. 7일 후, 피펫팅으로 대식세포를 수거하고 후속 트립신 처리에 의해 부착 세포를 수집하였다. 이어서 세포를 원심분리하고, 항생제, 2% FBS 및 재조합 인간 IFN-g 및 100 ng/mL LPS가 보충된 RPMI-1640에 재현탁시켰다. 이들 대식세포를 표준 골수 칵테일을 사용하여 PBMC와 동시에 표면 염색하여 세포 서브셋에서 TREM2의 세포 표면 염색을 평가하였다. 대조 mAb로 염색된 세포는 음영 플롯으로 표시된다. 항-TREM2 mAb로 염색된 세포는 개방 플롯으로 표시된다.
결과
도 7에 도시된 바와 같이, 생체외 분화된 대식세포는 평가된 임의의 PBMC-기반 세포 유형과 비교하여 TREM2의 세포 표면 수용체 밀도가 유의하게 더 높다. 문헌에 보고된 관측과 유사하게, 단핵구 및 일부 호중구는 더 낮은 수준의 TREM2를 발현시킨다.
실시예 9: TREM2는 인간 TAM에서 주로 발현된다
재료 및 방법
인간 종양 조직은 Cooperative Human Tissue Network (CHTN)에서 입수하였다. 새로운 인간 종양 조직을 Miltenyi MACS 분리 키트 및 gentleMACS 프로토콜을 사용하여 단일 세포 현탁액으로 분리하였다. 인간 종양 조직의 단일 세포 현탁액을 예비-유효성(pre-validate) 다색 FACS 패널을 사용하여 표면 염색하였다. 모든 데이터를 LSR Fortessa 유세포 분석기 (BD) 또는 Attune 유세포 분석기 (Thermo Fisher)에서 수집하고 FlowJo 소프트웨어를 사용하여 분석하였다. 숫자는 항-TREM2 염색 - 이소형 대조군 염색으로 정의된, 각 집단에 대한 염색 지수를 나타낸다.
결과
종양 미세환경 내에서, TREM2 발현은 다른 세포와 비교하여 TAM에서 높은 수준으로 차등적으로 발현되어 (도 8), TAM에 대해 번역적으로 관련된 마커가 된다. 점액성 선암종의 다양한 세포 집단에서 TREM2 항체 (개방) 또는 이소형 대조군 (음영) 염색의 대표적인 히스토그램이 도시되어 있다. 종합적으로, 이 데이터는 TREM2 표적화제가 말초 세포 또는 다른 조직-상주 면역 서브셋에 비교적 적은 부수적인 영향을 미치거나 부수적인 영향을 미치지 않고 특정 TAM 고갈을 도울 것이라는 가설을 뒷받침한다.
실시예 10: 다수의 동계 종양 모델에서 항 PD-1과 조합된 항- TREM2 항체의 항-종양 효능
재료 및 방법
CT26.WT (CRL-2638), Py8119 (CRL-3278), 4T1 (CRL-2539), 및 EMT6 (CTL-2755) 세포는 American Type Culture Collection (ATCC)에서 구입하였다. Panc-02 세포는 AJES Life Sciences (Stony Brook, NY)에서 사용되었다. 생체내 사용을 위한 항체는 모두 0.2 EU/mg 이하의 단백질이었다. 클론 RMP1-14로부터의 항-마우스 PD-1 항체의 아미노산 서열은 질량 분석법 (LC-MS/MS)으로 결정되었다. 단일 점 돌연변이, D265A를 RMP1-14 항체의 Fc 영역으로 도입하여 FcgR과의 결합을 제거하였다. 마우스 IgG1, 클론 MOPC-21, 및 마우스 IgG2a, 클론 C1.18.4, 이소형 대조군은 BioXCell에서 구입하였다. 둘 다 마우스 IgG2a로서 PI-7012 및 afuc-PI-7012는 각각 Expi293 세포 (Thermo Fisher Scientific) 또는 293/FUT8 녹아웃 세포에서 생산된 다음 MabSelect Protein A 수지 (GE Life Sciences)를 사용하여 정제하였다. mAb를 0.1M 시트레이트 완충액 (pH 3.0)으로 용리하고 사용 전에 완충액 교환하였다.
살아있는 동물과 관련된 모든 실험 절차는 Murigenics의 기관 동물 관리 및 사용 위원회에 의해 승인되었다. 암컷 BALB/c 또는 C57BL/6 마우스(6 내지 8주령)를 Taconic 또는 The Jackson Laboratory에서 구입하여 동물 시설에 1주일 적응시킨 후에 사용하였다. 액체 질소 스톡으로부터 해동 후 종양 세포를 3 내지 7회 계대 배양 내에서 수거한 다음 생체내 실험에 사용하였다. 암컷 마우스의 오른쪽 복외측 부위를 면도하고 종양 세포 접종 하루 전에 주사를 위해 준비하였다. 종양 접종 당일, 세포를 수거하여 30분 이내에 사용하였다. 피하 종양을 확립하기 위해, 1x106 CT26, EMT6 또는 Panc-02 세포, 또는 1x105 4T1 세포를 적절한 마우스 균주에 이식한 다음 동물의 종양 성장을 모니터링하였다. Py8119 세포의 동일한 용적의 단일 세포 현탁액을 마우스당 2×106 세포를 이식하기 전에 Matrigel (Corning Cat # 354248 또는 354263)과 혼합하였다.
종양 용적은 식 (L　×　W2)/2를 사용하여 종양 치수의 캘리퍼 측정을 사용하여 계산되었고, 상기 식에서 L은 더 긴 측정값이다. 종양의 평균 크기가 80-100 입방 mm에 도달하면, 마우스를 표 7에 나타낸 바와 같이 처리 그룹에 무작위화하였다.
종양 용적 및 체중을 주 2회 모니터링하고 일원 ANOVA에 의한 그룹 비교 분석을 그래프로 나타내었다. 종양 용적이 약 2000 입방 mm에 도달했을 때, 또는 연구 동안 체중이 15% 이상 감소할 때 마우스를 안락사시켰다.
Figure pct00017
결과
결과는 표 8에 요약되어 있다. 투약 기간 (t) 종료시 종양 성장 억제 (%TGI)는 하기 식에 의해 결정되었다: %TGI = (1-{Tt/T0 / Ct/C0} / 1-{C0/Ct}) X 100 여기서 Tt = 시간 t에서 조합-처리된 중앙 종양 용적, T0 = 시간 0에서 조합-처리된 중앙 종양 용적, Ct = 시간 t에서 이소형 대조군의 중앙 종양 용적 및 C0 = 시간 0에서 이소형-처리된 중앙 종양 용적 (처리 개시 전).
Figure pct00018
도 9a-f는 다수의 동계 마우스 종양 모델에서 항-PD-1과 조합된 항-TREM2 PI-7012 또는 afuc-PI7012의 항-종양 활성을 도시한다. 항-PD-1 mAb와 결합된 항-TREM2 mAb afuc-PI7012는 Panc-02 췌장 종양 모델에서 유의한 항-종양 활성을 초래한다. 도 9a는 각 그룹에서 10마리 마우스의 평균 종양 용적의 평균 +/- 표준 편차를 도시한다. 도 9b, 9c, 9d 및 9e는 시간 경과에 따른 각 처리 그룹 내 개별 동물로부터의 종양 용적을 도시한다. 도 9f는 이식 후 32일째에 그룹 평균 종양 용적의 통계적 분석을 나타낸다. 그룹들 간의 종양 용적의 차이는 Graph Pad Prism 소프트웨어에서 이용 가능한 통계적 분석을 사용하여 평가되었다. 연구 데이터에 대해 일원 ANOVA에 이어 Sidak의 다중 비교 시험이 수행되었다.
도 9a 및 9d에 도시된 바와 같이, 피하 Panc-02 종양은 항 PD-1 mAb 단일 제제 면역 체크포인트 차단 요법, 또는 항-TREM2 mAb afuc-PI-7012 요법 단독에 반응하지 않는다. 그러나, Panc-02 종양 보유 동물의 항-TREM2 mAb afuc-PI-7012 및 항-PD-1 mAb와의 조합 처리는 유의한 종양 성장 억제를 초래하였다.
CD8 T-세포 고갈의 면역 체크포인트-매개 역전과 함께 골수-조정의 조합 치료 전략을 다수의 동계 종양 모델에서 시험하였다. 표 8에 나타낸 바와 같이, 항-TREM2와 항-PD-1 mAb의 조합은 유의한 종양 성장 억제, 및 시험된 몇몇 종양 모델에서 완전한 퇴행을 초래하였다. 이들 동계 모델은 이들 균주에서 생체내 성장한 종양 내의 면역 침윤물의 조성과 유의한 차이가 있는 것으로 알려진 2개의 상이한 마우스 균주 배경 (원형 Th-1 C57BL/6 및 Th-2 BALB/c 균주)에서 성장하였다는 점에 주목하는 것이 중요하다.
실시예 11: 항- TREM2 mAb와 항 PD-1 mAb 조합 처리에 반응하는 마우스에서 장기간의 항-종양 면역 기억이 유도된다
재료 및 방법
실시예 9에 기재된 항-TREM2 mAb와 항-PD-1 mAb의 처리 후 이전 연구로부터 종양이 없는 BALB/c 마우스는 3개월 후에 1x106 CT26 종양 세포로 재시험감염되었다. 이식 후 25일 동안 종양 용적을 측정하였다. 연령-일치된 처리 나이브 마우스는 동등한 수의 CT26 세포를 투여받고 연구 기간 동안 종양 성장을 추적하였다. 연구 기간 동안 마우스에 추가 처리가 제공되지 않았다.
결과
항-TREM2 mAb afuc-PI-7012 및 항-PD-1 mAb의 조합으로 처리한 후 이들의 CT26 종양을 치료한 마우스는 효과적인 항-종양 기억 반응이 확립되었다 (도 10). 치료된 마우스는 추가 요법이 없는 경우에도 어떠한 새로운 종양 성장을 거부할 수 있었고, 이는 최초 이식된 종양에 대한 장기 면역 기억을 나타낸다. 이러한 형태의 장기 면역 기억은 활발한 CD8+ 효과기 기억 반응의 유지를 이용한다.
참고문헌
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본 발명이 바람직한 구현예 및 다양한 대안적인 구현예를 참조하여 상세하게 도시되고 설명되었지만, 관련 기술 분야의 숙련가라면 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않으면서 형태 및 세부 사항의 다양한 변경이 이루어질 수 있음을 이해할 것이다.
본 명세서의 본문 내에 인용된 모든 참고문헌, 발행된 특허 및 특허 출원은 모든 목적을 위해 그 전문이 본원에 참고로 포함된다.
서열
Figure pct00019
Figure pct00020
Figure pct00021
<110> PIONYR IMMUNOTHERAPEUTICS, INC. <120> ANTI-TREM2 ANTIBODIES AND RELATED METHODS <130> 32594-41951/WO <140> PCT/US2018/065026 <141> 2018-12-11 <150> 62/648,089 <151> 2018-03-26 <150> 62/597,827 <151> 2017-12-12 <160> 34 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 119 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 1 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Leu Thr Asn Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Glu Trp Ala Gly Ser Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 115 <210> 2 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 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Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 23 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Met Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Asn Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Leu 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Asn Arg Phe Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Ile Tyr Asn Ser Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys 100 105 <210> 24 <211> 106 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 24 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Ser Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Thr Pro Pro 85 90 95 Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys 100 105 <210> 25 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 25 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Leu Thr Asn Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Glu Trp Ala Gly Ser Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Lys <210> 26 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 26 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Asn Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Asn Arg Phe Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Ile 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Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Glu Trp Ala Gly Ser Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu 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Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Met Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Asn Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Leu 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Asn Arg Phe Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Ile Tyr Asn Ser Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Leu Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 29 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 29 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Leu Thr Asn Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Glu Trp Ala Gly Ser Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Lys <210> 30 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 30 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Asn Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Asn Arg Phe Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Ile Tyr Asn Ser Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 31 <211> 449 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 31 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Leu Thr Asn Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Glu Trp Ala Gly Ser Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser 180 185 190 Ser Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr Ile Cys Asn Val Asn His Lys Pro 195 200 205 Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys 210 215 220 Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro 225 230 235 240 Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser 245 250 255 Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp 260 265 270 Pro Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn 275 280 285 Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val 290 295 300 Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu 305 310 315 320 Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys 325 330 335 Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr 340 345 350 Leu Pro Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr 355 360 365 Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu 370 375 380 Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu 385 390 395 400 Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys 405 410 415 Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu 420 425 430 Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 445 Lys <210> 32 <211> 214 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 32 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asn Val Gly Asn Asn 20 25 30 Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Tyr Thr Ser Asn Arg Phe Thr Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Arg Ile Tyr Asn Ser Pro Trp 85 90 95 Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala 100 105 110 Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly 115 120 125 Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala 130 135 140 Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln 145 150 155 160 Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr 180 185 190 Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 <210> 33 <211> 451 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: Synthetic polypeptide <400> 33 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg 1 5 10 15 Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asn Tyr 20 25 30 Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Thr Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ala Ser Leu Thr Asn Ser Gly Gly Ser Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Leu Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Thr Arg Glu Trp Ala Gly Ser Gly Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly 100 105 110 Val Met Val Thr Val Ser Ser Ala Gln Thr Thr Ala Pro Ser Val Tyr 115 120 125 Pro Leu Ala Pro Gly Cys Gly Asp Thr Thr Ser Ser Thr Val Thr Leu 130 135 140 Gly Cys Leu Val Lys Gly Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Thr Trp 145 150 155 160 Asn Ser Gly Ala Leu Ser Ser Asp Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 165 170 175 Gln Ser Gly Leu Tyr Thr Leu Thr Ser Ser Val Thr Ser Ser Thr Trp 180 185 190 Pro Ser Gln Thr Val Thr Cys Asn Val Ala His Pro Ala Ser Ser Thr 195 200 205 Lys Val Asp Lys Lys Val Glu Arg Arg Asp Gly Gly Ile Gly His Lys 210 215 220 Cys Pro Thr Cys Pro Thr Cys His Lys Cys Pro Val Pro Glu Leu Leu 225 230 235 240 Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Ile Leu 245 250 255 Leu Leu Ser Gln Asn Ala Lys Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser 260 265 270 Glu Glu Glu Pro Asp Val Gln Phe Ser Trp Phe Val Asn Asn Val Glu 275 280 285 Val His Thr Ala Gln Thr Gln Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr 290 295 300 Phe Arg Val Val Ser Ala Leu Pro Leu Gln His Gln Asp Trp Met Ser 305 310 315 320 Gly Lys Glu Phe Lys Cys Lys Val Asn Asn Lys Ala Leu Pro Ser Pro 325 330 335 Ile Glu Lys Thr Leu Ser Lys Pro Lys Gly Leu Val Arg Lys Pro Gln 340 345 350 Val Tyr Val Met Gly Pro Pro Thr Glu Gln Leu Thr Glu Gln Thr Val 355 360 365 Ser Leu Thr Cys Leu Thr Ser Gly Phe Leu Pro Asn Asp Ile Gly Val 370 375 380 Glu Trp Thr Ser Asn Gly His Ile Glu Lys Asn Tyr Lys Asn Thr Glu 385 390 395 400 Pro Val Met Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Met Tyr Ser Lys Leu Asn 405 410 415 Val Glu Arg Ser Arg Trp Asp Ser Arg Ala Pro Phe Val Cys Ser Val 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Thr Asp Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Met Ser 165 170 175 Ser Thr Leu Ser Leu Thr Lys Ala Asp Tyr Glu Ser His Asn Leu Tyr 180 185 190 Thr Cys Glu Val Val His Lys Thr Ser Ser Ser Pro Val Val Lys Ser 195 200 205 Phe Asn Arg Asn Glu Cys 210

Claims (95)

  1. 단리된 인간화된 항체로서, 인간 TREM2 (서열 번호:15)에 결합하고 마우스 TREM2 (서열 번호:17)와의 결합에 대해 37017 항체 (서열 번호: 31 및 32)와 경쟁하는 단리된 인간화된 항체.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 항체는
    a. 서열 번호: 9에 기재된 서열을 포함하는 CDR-H1,
    b. 서열 번호:10에 기재된 서열을 포함하는 CDR-H2,
    c. 서열 번호:11에 기재된 서열을 포함하는 CDR-H3,
    d. 서열 번호: 12에 기재된 서열을 포함하는 CDR-L1,
    e. 서열 번호: 13에 기재된 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
    f. 서열 번호: 14에 기재된 서열을 포함하는 CDR-L3
    을 포함하는, 단리된 인간화된 항체.
  3. 청구항 2에 있어서, 상기 항체는 탈푸코실화되고 서열 번호: 1로 나타낸 VH 서열; 서열 번호: 2로 나타낸 VL 서열; 및 활성 인간 IgG1 Fc 영역을 포함하는, 단리된 항체.
  4. 청구항 2에 있어서, 상기 항체는 서열 번호:7로 나타낸 서열의 97번 위치에서 A에서 T로의 치환; 및 서열 번호:7로 나타낸 서열의 98번 위치에서 K에서 R로의 치환을 포함하는 VH 서열을 포함하는, 단리된 항체.
  5. 청구항 3에 있어서, 상기 항체는 서열 번호: 1, 3 또는 5로 나타낸 VH 서열을 포함하는, 단리된 항체.
  6. 청구항 5에 있어서, 상기 항체는 서열 번호: 1, 3 또는 5로 나타낸 VH 서열 및 서열 번호: 2, 4 또는 6으로 나타낸 VL 서열을 포함하는, 단리된 항체.
  7. 청구항 3에 있어서, 상기 항체는 서열 번호: 1로 나타낸 VH 서열을 포함하는, 단리된 항체.
  8. 청구항 7에 있어서, 상기 항체는 서열 번호: 1로 나타낸 VH 서열 및 서열 번호: 2로 나타낸 VL 서열을 포함하는, 단리된 항체.
  9. 청구항 8에 있어서, 상기 항체는 37012 항체인, 단리된 항체.
  10. 청구항 1에 있어서, 상기 항체는 서열 번호: 25로 나타낸 중쇄 서열 및 서열 번호: 26으로 나타낸 경쇄 서열을 포함하는, 단리된 항체.
  11. 인간 TREM2 (서열 번호:15)에 결합하는 단리된 항체로서, 상기 항체는
    i) 마우스 TREM2 (서열 번호:17)와의 결합에 대해 37017 항체 (서열 번호: 31 및 32)와 경쟁하고; 그리고
    ii) 활성 인간 Fc 영역을 포함하는, 단리된 항체.
  12. 단리된 인간화된 항체로서, 상기 항체는
    a. 서열 번호: 9에 기재된 서열을 포함하는 CDR-H1,
    b. 서열 번호:10에 기재된 서열을 포함하는 CDR-H2,
    c. 서열 번호:11에 기재된 서열을 포함하는 CDR-H3,
    d. 서열 번호: 12에 기재된 서열을 포함하는 CDR-L1,
    e. 서열 번호: 13에 기재된 서열을 포함하는 CDR-L2, 및
    f. 서열 번호: 14에 기재된 서열을 포함하는 CDR-L3
    을 포함하는, 단리된 인간화된 항체.
  13. 청구항 12에 있어서, 상기 항체는 서열 번호:7로 나타낸 서열의 97번 위치에서 A에서 T로의 치환; 및 서열 번호:7로 나타낸 서열의 98번 위치에서 K에서 R로의 치환을 포함하는 VH 서열을 포함하는, 단리된 항체.
  14. 청구항 13에 있어서, 상기 항체는 서열 번호: 1, 3 또는 5로 나타낸 VH 서열을 포함하는, 단리된 항체.
  15. 청구항 14에 있어서, 상기 항체는 서열 번호: 1, 3 또는 5로 나타낸 VH 서열 및 서열 번호: 2, 4 또는 6으로 나타낸 VL 서열을 포함하는, 단리된 항체.
  16. 청구항 15에 있어서, 상기 항체는 서열 번호: 1로 나타낸 VH 서열을 포함하는, 단리된 항체.
  17. 청구항 16에 있어서, 상기 항체는 서열 번호: 1로 나타낸 VH 서열 및 서열 번호: 2로 나타낸 VL 서열을 포함하는, 단리된 항체.
  18. 청구항 17에 있어서, 상기 항체는 37012 항체인, 단리된 항체.
  19. 청구항 12에 있어서, 상기 항체는 서열 번호: 25로 나타낸 중쇄 서열 및 서열 번호: 26으로 나타낸 경쇄 서열을 포함하는, 단리된 항체.
  20. 청구항 1 내지 19 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 표면 플라즈몬 공명 (SPR) 분석법에 의해 측정될 때, 약 1, 2, 3, 4, 또는 5x10-9 M 이하의 KD로 인간 TREM2에 결합하는, 단리된 항체.
  21. 청구항 1 내지 20 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 TREM2+ 골수 세포; 선택적으로 비-자극성 골수 세포; 선택적으로 종양내 골수 세포를 특이적으로 사멸, 고갈 또는 무력화(disabling)시킬 수 있는, 단리된 항체.
  22. 청구항 1 내지 21 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 항체-의존 세포-매개 세포독성 (ADCC) 활성을 갖는, 단리된 항체.
  23. 청구항 1 내지 22 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 항체-매개 세포 식균작용 (ADCP) 활성을 갖는, 단리된 항체.
  24. 청구항 1 내지 23 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 보체-의존 세포독성 (CDC) 활성을 갖는, 단리된 항체.
  25. 청구항 1 내지 24 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 단클론 항체, 중성 항체(neutral antibody), 길항 항체(antagonistic antibody), 작용 항체(agonist antibody), 다클론 항체, IgG1 항체, IgG3 항체, 탈푸코실화된 항체, 이중특이적 항체(bispecific antibody), 인간 항체, 키메라 항체, 전장 항체, 및 이의 항원 결합 단편 중 적어도 하나인, 단리된 항체.
  26. 청구항 1 내지 25 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 단클론 항체인, 단리된 항체.
  27. 청구항 1 내지 26 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 다중특이적 항체인, 단리된 항체.
  28. 청구항 1 내지 27 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 탈푸코실화되는, 단리된 항체.
  29. 청구항 1 내지 28 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 이의 항원-결합 단편, Fab, Fab', F(ab')2, Fv, scFv, (scFv)2, 단쇄 항체 분자, 이중 가변 도메인 항체(dual variable domain antibody), 단일 가변 도메인 항체, 선형 항체, 또는 V 도메인 항체인, 단리된 항체.
  30. 청구항 1 내지 29 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 스캐폴드를 포함하고, 선택적으로 상기 스캐폴드는 Fc, 선택적으로 인간 Fc인, 단리된 항체.
  31. 청구항 1 내지 30 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 IgG, IgA, IgD, IgE, 및 IgM으로부터 선택된 부류의 중쇄 불변 영역을 포함하는, 단리된 항체.
  32. 청구항 1 내지 31 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 상기 부류 IgG, 및 IgG1, IgG2, IgG3, 및 IgG4로부터 선택된 하위 부류의 중쇄 불변 영역을 포함하는, 단리된 항체.
  33. 청구항 1 내지 32 중 어느 한 항에 있어서, 상기 항체는 IgG1의 중쇄 불변 영역을 포함하는, 단리된 항체.
  34. 청구항 1 내지 33 중 어느 한 항에 있어서, Fc는 하나 이상의 변형을 포함하며, 상기 하나 이상의 변형은 상기 하나 이상의 변형을 갖지 않는 Fc와 비교하여 반감기 증가, ADCC 활성 증가, ADCP 활성 증가, 또는 CDC 활성 증가를 초래하는, 단리된 항체.
  35. 청구항 1 내지 34 중 어느 한 항에 있어서, 상기 Fc는 FcγRI, FcγRIIa, FcγRIIb, FcγRIIc, FcγRIIIa, 및 FcγRIIIb로 구성된 군으로부터 선택된 Fcγ 수용체에 결합하는, 단리된 항체.
  36. 청구항 1 내지 35 중 어느 한 항에 있어서, 암의 치료에서의 용도를 위한 단리된 항체로서, 상기 암은 고형 종양 및 혈액 종양으로부터 선택되는, 단리된 항체.
  37. 인간 TREM2와의 결합에 대해 청구항 1 내지 36 중 어느 한 항의 항체와 경쟁하는 단리된 항체.
  38. 청구항 1 내지 37 중 어느 한 항의 항체에 의해 결합된 인간 TREM2 에피토프에 결합하는 단리된 항체.
  39. 단리된 폴리뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드 세트로서, 청구항 1 내지 38 중 어느 한 항의 항체, 이의 VH, 이의 VL, 이의 경쇄, 이의 중쇄 또는 이의 항원-결합 부분을 인코딩하고; 선택적으로 상기 폴리뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드 세트가 cDNA인, 단리된 폴리뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드 세트.
  40. 청구항 39의 폴리뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드 세트를 포함하는 벡터 또는 벡터 세트.
  41. 청구항 39의 폴리뉴클레오티드 또는 폴리뉴클레오티드 세트 또는 청구항 40의 벡터 또는 벡터 세트를 포함하는 숙주 세포.
  42. 청구항 41의 숙주 세포로 항체를 발현시키는 단계와 상기 발현된 항체를 단리하는 단계를 포함하는 항체의 제조 방법.
  43. 청구항 1 내지 38 중 어느 한 항의 항체 및 약제학적으로 허용되는 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  44. 질환 또는 병태의 치료 또는 예방이 필요한 대상체에서 질환 또는 병태를 치료 또는 예방하는 방법으로서, 청구항 1 내지 38 중 어느 한 항의 항체 또는 청구항 43의 약제학적 조성물을 유효량으로 상기 대상체에게 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  45. 청구항 44에 있어서, 상기 질환 또는 병태가 암인, 방법.
  46. 청구항 44에 있어서, 상기 항체가 TREM2+ 골수 세포 상의 TREM2의 세포외 도메인에 결합하고, 선택적으로 상기 골수 세포가 종양내에 있는, 방법.
  47. 청구항 44에 있어서, 상기 항체는 골수 세포 상의 TREM2의 세포외 도메인에 결합하고, 상기 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD11c+, CD14+, 및 BDCA3-인 비-자극성 골수 세포이고, 상기 항체는 상기 비-자극성 골수 세포와 상기 항체의 접촉 이전에 암에 존재하는 비-자극성 골수 세포의 수준 미만인 수준으로 ADCC, CDC, 및/또는 ADCP를 통해 상기 비-자극성 골수 세포를 사멸, 무력화 또는 고갈시키고, 여기서 상기 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14-, CD11c+, BDCA1-, 및 BDCA3+인 자극성 골수 세포 및 상기 비-자극성 골수 세포를 포함하는 면역 세포 집단에 존재하고, 상기 비-자극성 골수 세포의 사멸, 무력화 또는 고갈이 암을 치료하는, 방법.
  48. 청구항 44에 있어서, 상기 항체는 항체-의존 세포-매개 세포독성 (ADCC) 활성을 갖는, 방법.
  49. 청구항 44에 있어서, 상기 항체는 보체-의존 세포독성 (CDC) 활성을 갖는, 방법.
  50. 청구항 44에 있어서, 상기 항체는 항체-매개 식균작용 (ADCP) 활성을 갖는, 방법.
  51. 청구항 44에 있어서, 상기 항체는 수용체-리간드 차단, 아고니즘(agonism) 또는 길항작용 활성을 갖는, 방법.
  52. 청구항 44 내지 51 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 인간인, 방법.
  53. 청구항 44 내지 52 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 고형암인, 방법.
  54. 청구항 44 내지 52 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 액상 암(liquid cancer)인, 방법.
  55. 청구항 44 내지 52 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 흑색종, 신장, 간담즙, 두경부 편평세포 암종 (HNSC), 췌장, 결장, 방광, 교모세포종, 전립선, 폐, 유방, 난소, 위, 신장, 방광, 식도, 콩팥, 흑색종, 및 중피종으로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
  56. 청구항 55에 있어서, 상기 암은 결장암 또는 유방암인, 방법.
  57. 청구항 44 내지 56 중 어느 한 항에 있어서, 상기 접촉은 상기 대상체에서 면역 반응을 향상시키는, 방법.
  58. 청구항 57에 있어서, 상기 향상된 면역 반응은 적응 면역 반응인, 방법.
  59. 청구항 57에 있어서, 상기 향상된 면역 반응은 선천성 면역 반응인, 방법.
  60. 청구항 44 내지 59 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 면역요법을 이전에 받았거나 동시에 받고 있거나 또는 차후에 받을 것인, 방법.
  61. 청구항 60에 있어서, 상기 면역요법은 체크포인트 억제제; T 세포의 체크포인트 억제제; 항-PD1 항체; 항-PDL1 항체; 항-CTLA4 항체; 입양 T 세포 요법; CAR-T 세포 요법; 수지상 세포 백신; 단핵구 백신; T 세포 및 항원 제시 세포 둘 다에 결합하는 항원 결합 단백질; BiTE 이중 항원 결합 단백질; 톨-유사 수용체 리간드; 사이토카인; 세포독성 요법; 화학요법; 방사선요법; 소분자 억제제; 소분자 작용제; 면역조절제; 및 후성 조절제 중 적어도 하나인, 방법.
  62. 청구항 61에 있어서, 상기 면역요법은 항-PD1 항체인, 방법.
  63. 암을 갖는 대상체의 TREM2+ 골수 세포를 사멸, 무력화 또는 고갈시키는 방법으로서, 상기 골수 세포를 청구항 1 내지 38 중 어느 한 항의 항체 또는 청구항 43의 약제학적 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하고, 선택적으로 상기 골수 세포는 종양내에 있는, 방법.
  64. 청구항 63에 있어서, 상기 항체는 TREM2의 세포외 도메인에 결합하고, 상기 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD11c+, CD14+, 및 BDCA3-인 비-자극성 골수 세포이고, 상기 항체는 상기 비-자극성 골수 세포와 상기 항체의 접촉 이전에 암에 존재하는 비-자극성 골수 세포의 수준 미만인 수준으로 ADCC, CDC, 및/또는 ADCP를 통해 상기 비-자극성 골수 세포를 사멸, 무력화 또는 고갈시키고, 여기서 상기 비-자극성 골수 세포는 CD45+, HLA-DR+, CD14-, CD11c+, BDCA1-, 및 BDCA3+인 자극성 골수 세포 및 비-자극성 골수 세포를 포함하는 면역 세포 집단에 존재하고, 상기 접촉은 암의 외부에 존재하는 골수 세포 및/또는 암에 존재하는 자극성 골수 세포를 실질적으로 사멸, 무력화 또는 고갈시키지 않고, 상기 비-자극성 골수 세포의 사멸, 무력화 또는 고갈은 암에 대한 면역 반응을 향상시킴으로써 암을 치료하는, 방법.
  65. 청구항 63에 있어서, 상기 항체는 ADCC, CDC 및 ADCP 중 적어도 하나에 의해 상기 골수 세포를 사멸시키는, 방법.
  66. 청구항 63에 있어서, 상기 항체는 ADCC, CDC 및 ADCP 중 적어도 하나에 의해 상기 골수 세포를 무력화시키는, 방법.
  67. 청구항 63에 있어서, 상기 항체는 ADCC, CDC 및 ADCP 중 적어도 하나에 의해 상기 골수 세포를 고갈시키는, 방법.
  68. 청구항 63에 있어서, 상기 항체는 항체-의존 세포-매개 세포독성 (ADCC) 활성을 갖는, 방법.
  69. 청구항 63에 있어서, 상기 항체는 보체-의존 세포독성 (CDC) 활성을 갖는, 방법.
  70. 청구항 63에 있어서, 상기 항체는 항체-매개 식균작용 (ADCP) 활성을 갖는, 방법.
  71. 청구항 63에 있어서, 상기 항체는 수용체-리간드 차단, 아고니즘 또는 길항작용 활성을 갖는, 방법.
  72. 청구항 63 내지 71 중 어느 한 항에 있어서, 상기 골수 세포는 자극성 골수 세포인, 방법.
  73. 청구항 63 내지 71 중 어느 한 항에 있어서, 상기 골수 세포는 비-자극성 골수 세포인, 방법.
  74. 청구항 63 내지 73 중 어느 한 항에 있어서, 상기 골수 세포는 수지상 세포, 종양-관련 대식세포 (TAM), 호중구 또는 단핵구 중 적어도 하나를 포함하는, 방법.
  75. 청구항 74에 있어서, 상기 골수 세포는 호중구인, 방법.
  76. 청구항 74에 있어서, 상기 골수 세포는 종양-관련 대식세포인, 방법.
  77. 청구항 63 내지 76 중 어느 한 항에 있어서, 상기 골수 세포는 종양내에 있는, 방법.
  78. 청구항 63 내지 77 중 어느 한 항에 있어서, 상기 골수 세포는 자극성 골수 세포 및 비-자극성 골수 세포를 포함하는 면역 세포 집단에 있는, 방법.
  79. 청구항 63 내지 78 중 어느 한 항에 있어서, 상기 접촉은 시험관내 또는 생체내인, 방법.
  80. 청구항 63 내지 79 중 어느 한 항에 있어서, 상기 접촉은 이를 필요로 하는 대상체에서 생체내 발생하고, 선택적으로 상기 대상체는 암을 갖는, 방법.
  81. 청구항 31 내지 80 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 인간인, 방법.
  82. 청구항 63 내지 81 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 고형암인, 방법.
  83. 청구항 63 내지 81 중 어느 한 항에 있어서, 상기 암은 액상 암인, 방법.
  84. 청구항 80에 있어서, 상기 암은 흑색종, 신장, 간담즙, 두경부 편평세포 암종 (HNSC), 췌장, 결장, 방광, 교모세포종, 전립선, 폐, 유방, 난소, 위, 신장, 방광, 식도, 콩팥, 흑색종, 및 중피종으로 구성된 군으로부터 선택되는, 방법.
  85. 청구항 84에 있어서, 상기 암은 결장암 또는 유방암인, 방법.
  86. 청구항 80에 있어서, 상기 접촉은 상기 대상체에서 면역 반응을 향상시키는, 방법.
  87. 청구항 80에 있어서, 상기 향상된 면역 반응은 적응 면역 반응인, 방법.
  88. 청구항 80에 있어서, 상기 향상된 면역 반응은 선천성 면역 반응인, 방법.
  89. 청구항 80 내지 88 중 어느 한 항에 있어서, 상기 대상체는 면역요법을 이전에 받았거나 동시에 받고 있거나 또는 차후에 받을 것인, 방법.
  90. 청구항 89에 있어서, 상기 면역요법은 체크포인트 억제제; T 세포의 체크포인트 억제제; 항-PD1 항체; 항-PDL1 항체; 항-CTLA4 항체; 입양 T 세포 요법; CAR-T 세포 요법; 수지상 세포 백신; 단핵구 백신; T 세포 및 항원 제시 세포 둘 다에 결합하는 항원 결합 단백질; BiTE 이중 항원 결합 단백질; 톨-유사 수용체 리간드; 사이토카인; 세포독성 요법; 화학요법; 방사선요법; 소분자 억제제; 소분자 작용제; 면역조절제; 및 후성 조절제 중 적어도 하나인, 방법.
  91. 청구항 90에 있어서, 상기 면역요법은 항-PD1 항체인, 방법.
  92. 질환 또는 병태를 갖는 또는 질환 또는 병태를 갖는 것으로 의심되는 대상체에서 TREM2를 검출하는 방법으로서, (a) 상기 대상체로부터 샘플을 받는 단계; 및 (b) 상기 샘플을 청구항 1 내지 38 중 어느 한 항의 항체와 접촉시킴으로써 상기 샘플 내 TREM2의 존재 또는 수준을 검출하는 단계를 포함하는, 방법.
  93. 청구항 92에 있어서, 상기 질환 또는 병태는 암인, 방법.
  94. 청구항 92 또는 93에 있어서, 체크포인트 억제제를 투여하는 단계를 추가로 포함하고, 선택적으로 상기 체크포인트 억제제는 PD1:PDL1 축의 억제제이고, 선택적으로 상기 억제제는 항체이고, 선택적으로 상기 항체는 항-PD1 항체 또는 항-PDL1 항체인, 방법.
  95. 청구항 1 내지 38 중 어느 한 항의 항체 또는 청구항 43의 약제학적 조성물 및 사용 설명서를 포함하는 키트.
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