JP2023550148A - がん免疫治療に用いられる武装二重ｃａｒ－ｔ組成物及び方法 - Google Patents
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Abstract
本発明は、第１のＴＡＡに結合できる単特異性若しくは二重特異性ＣＡＲ、又はＣＤ３及び第２のＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー、又はその組み合わせをコードする配列を含むポリヌクレオチド及びベクターを開示する。本発明は、１つ又は複数の上記ポリヌクレオチド又はベクターを含むＴリンパ球、１種又は複数種の上記Ｔリンパ球を含む組成物（例えば医薬組成物）及び試薬キット、哺乳動物個体（例えばヒト）のがんを治療する方法、並びにＴ細胞媒介性がん細胞（例えば固形腫瘍細胞）を溶解する方法を更に開示する。
Description
本発明は、２０２０年１１月２０日に提出された米国仮出願Ｎｏ．６３／１１６，４０２、及び２０２１年９月１３日に提出された米国仮出願Ｎｏ．６３／２４３，４８６の先行出願の優先権を主張する。上記の先行出願の全文は、参照により本発明に組み込まれる。
参照によりＡＳＣＩＩテキストファイルに組み込まれる資料
参照によりＡＳＣＩＩテキストファイルに組み込まれる資料
本願が参照により本願と同時に提出された以下のＡＳＣＩＩテキストファイルに含まれる配列表に組み込まれる：
ファイル名は５８０１１０００００３ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔであり、２０２１年１１月１９日に作成され、サイズは１，２０８，８８５Ｂｙｔｅｓである。
ファイル名は５８０１１０００００３ＳｅｑｕｅｎｃｅＬｉｓｔｉｎｇ．ｔｘｔであり、２０２１年１１月１９日に作成され、サイズは１，２０８，８８５Ｂｙｔｅｓである。
免疫系への関与によって腫瘍を攻撃する療法は既に、ますます多くのがんと戦うために効果的に使用されている。しかし、幾つかのがんの種類、特に膠芽腫（ＧＢＭ）などの固形腫瘍では、抗原エスケープ変異体は、単一の腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に再指向するキメラ抗原受容体（ＣＡＲ）Ｔ細胞を用いて治療した後の腫瘍の再発を引き起こす可能性がある。異質性と潜在的に動的な抗原環境に直面して、限られたＴ細胞特異的スペクトルは、固形腫瘍のＣＡＲ Ｔ細胞の治療に依然として主な課題である。
Ｔ細胞機能を増加させ、抗原エスケープを減少させるがん治療方法を開発することは急務となっている。
本発明の部分は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）（例えば、ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲ）並びにＣＤ３及びＴＡＡ（例えば、膠芽腫の腫瘍抗原などの腫瘍抗原）に結合できるＴ細胞エンゲージャーを同時に発現するように操作されたＴリンパ球が幾つかの種類のがん（例えば腫瘍）の治療において強化された効果を示すという発見に基づいている。従って、本発明は一般的に、１つ又は複数のＣＡＲ、１つ又は複数のＴ細胞エンゲージャー又はその組み合わせをコードする配列を含むポリヌクレオチド、ベクター（例えば発現ベクター）、融合タンパク質、宿主細胞、Ｔリンパ球、組成物（例えば医薬組成物）及び上記ポリヌクレオチドを含む試薬キット、並びに上記ポリヌクレオチド、ベクター、融合タンパク質、宿主細胞、Ｔリンパ球、組成物及び試薬キットを使用して対象のがんを治療する方法に関する。
一態様において、本発明は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）及びＴ細胞エンゲージャーをコードする配列を含むポリヌクレオチドであって、上記ＣＡＲは１つ又は複数の腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に結合することができ、上記Ｔ細胞エンゲージャーはＴ細胞及び第２のＴＡＡに結合することができる、ポリヌクレオチドを提供する。
他の態様において、本発明は、Ｔ細胞、第１のＴＡＡエピトープ、及び第２のＴＡＡエピトープに結合できるＴ細胞エンゲージャーを提供する。他の態様において、上記Ｔ細胞エンゲージャーは、ＣＡＲ Ｔ－細胞がＣＡＲと第１のＴＡＡとの間の相互作用によってｉｎ ｓｉｔｕで生成される。
他の態様において、本発明は、Ｔ細胞、第１のＴＡＡエピトープ、及び第２のＴＡＡエピトープに結合できるＴ細胞エンゲージャーをコードする配列を含む、ポリヌクレオチド提供する。
他の態様において、本発明は、配列番号２～４、配列番号１１～１３及び５２、配列番号１５～１７、配列番号２１～２３及び１０９～１１１、配列番号４９及び５０、配列番号５３～７０、配列番号７２～８２、配列番号８３～１０４、配列番号１２０～１３７、配列番号１３９～１４９、配列番号１５０～１７１、配列番号１８８～１９１、配列番号２０４及び２０６～２１４、配列番号２１５～２２１、又は配列番号２４２～２９１に示されるアミノ酸配列から独立的に選ばれる少なくとも１つ、又はその組み合わせと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ポリヌクレオチドを提供する。
更なる態様において、本発明は、１つ又は複数の本明細書に記載のポリヌクレオチドを含む、ベクターを提供する。
他の態様において、本発明は、本明細書に記載の何れか１つのポリヌクレオチド又はベクターによってコードされる融合タンパク質を提供する。
他の態様において、本発明は、本明細書に記載の１つ又は複数のポリヌクレオチド、ベクター又は融合タンパク質を含む宿主細胞を提供する。
他の態様において、本発明は、本明細書に記載の１つ又は複数のポリヌクレオチド、ベクター又は融合タンパク質を含むＴリンパ球を提供する。
更なる態様において、本発明は、本明細書に記載の１つ又は複数のポリヌクレオチド、ベクター、融合タンパク質、宿主細胞、又はＴリンパ球を含む組成物を提供する。
他の態様において、本発明は、本明細書に記載の１つ又は複数のポリヌクレオチド、ベクター、融合タンパク質、宿主細胞又はＴリンパ球、及び薬学的に許容されるベクターを含む医薬組成物を提供する。
他の態様において、本発明は、本明細書に記載の１種又は複数種の組成物（例えば医薬組成物）を含むコンテナ及び任意選択的な使用説明書を含む試薬キットを提供する。
他の態様において、本発明は、必要とする対象のがんを治療する薬物の調製における、本明細書に記載の１つ又は複数のポリヌクレオチド、ベクター、融合タンパク質、宿主細胞、Ｔリンパ球、組成物（例えば医薬組成物）、又は試薬キットの用途を提供する。
他の態様において、本発明は、必要とする対象のがんを治療するための、本明細書に記載の１つ又は複数のポリヌクレオチド、ベクター、融合タンパク質、宿主細胞、Ｔリンパ球、組成物（例えば医薬組成物）、又は試薬キットを提供する。幾つかの実施形態において、本発明は、必要とする対象のがんを治療するための、本明細書に記載の１種又は複数種のＴリンパ球、組成物、医薬組成物を提供する。特定の実施形態において、本発明は、必要とする対象のがんを治療するための、本明細書に記載の１種又は複数種のＴリンパ球を提供する。
他の態様において、本発明は、必要とする対象のがんを治療する方法であって、有効用量の本明細書に記載の１種又は複数種のＴリンパ球又は組成物（例えば医薬組成物）を上記対象に投与することを含む、方法を提供する。
他の態様において、本発明は、Ｔ細胞、第１のＴＡＡエピトープ、及び第２のＴＡＡエピトープに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）であって、上記Ｔ細胞エンゲージャーはＣＡＲ Ｔ－細胞がＣＡＲと第１のＴＡＡとの間の相互作用によってｉｎ ｓｉｔｕで生成される（例えば、ＣＡＲ Ｔ－細胞によって放出又は分泌される）、Ｔ細胞エンゲージャーを提供する。
他の態様において、本発明は、配列番号２～４、１５～１７及び２４２～２９１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを提供する。
他の態様において、本発明は、グルカゴン－３（ＧＰＣ３）に特異的に結合できるポリペプチドであって、配列番号２８４、配列番号２８６又は配列番号２８９に示される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）を含む、ポリペプチドを提供する。
いかなる理論または仮説に縛られるものではないが、他のポリヌクレオチド、ベクター、融合タンパク質、宿主細胞、Ｔリンパ球又は組成物（例えば医薬組成物）と比べ、本発明に記載の１つ又は複数のポリヌクレオチド、ベクター、融合タンパク質、宿主細胞、Ｔリンパ球又は組成物（例えば医薬組成物）は、がん細胞を死滅させたり、他の方法でがん細胞の効力を減弱させたりする点で優れた（予想外の場合がある）結果を提供する。同様に、いかなる理論または仮説に縛られるものではないが、本発明に記載のポリヌクレオチド、ベクター、融合タンパク質、宿主細胞、Ｔリンパ球又は組成物（例えば医薬組成物）の１種又は複数種は、がんに対する効果的な治療、特に副作用の減少に用いることができる。
本特許又は特許出願には、少なくとも１つのカラー図面が含まれる。カラー図面が添付された本特許又は特許出願により開示されたコピーは、必要な料金を要求して支払った後に、オフィスによって提供される。
以下、本発明に対する詳細な説明及び図面を通じて、本発明の前述した態様及び他の態様を明らかに説明する。図面において、同じ図面符号は、異なる図において同じ部分を示す。図面は、実施例を強調して説明するものであり、必ずしも縮尺通りに描かれるわけではない。
詳細な説明
実施例に対する説明は以下の通りである。
実施例に対する説明は以下の通りである。
本発明に記載のポリヌクレオチド
ＣＡＲ及びＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードするポリヌクレオチド
一態様において、本発明は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）及びＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含むポリヌクレオチドであって、上記ＣＡＲは１種又は複数種の第１のＴＡＡに結合することができ、且つ上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）はＴ細胞及び第２のＴＡＡに結合することができる、ポリヌクレオチドを提供する。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャーはＣＤ２、ＣＤ３、ＶＬＡ－１、ＣＤ８、ＣＤ４、ＣＣＲ６、ＣＸＣＲ５、ＣＤ２５、ＣＤ３１、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ１９７、ＣＤ１２７、ＣＤ３８、ＣＤ２７、ＣＤ１９６、ＣＤ２７７又はＣＸＣＲ３に結合することができる。ある実施形態において、Ｔ細胞エンゲージャーは、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ３１又はＣＤ２７７に結合することができる。特定の実施形態において、Ｔ細胞エンゲージャーはＣＤ３に結合することができる。
ＣＡＲ及びＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードするポリヌクレオチド
一態様において、本発明は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）及びＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含むポリヌクレオチドであって、上記ＣＡＲは１種又は複数種の第１のＴＡＡに結合することができ、且つ上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）はＴ細胞及び第２のＴＡＡに結合することができる、ポリヌクレオチドを提供する。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャーはＣＤ２、ＣＤ３、ＶＬＡ－１、ＣＤ８、ＣＤ４、ＣＣＲ６、ＣＸＣＲ５、ＣＤ２５、ＣＤ３１、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ１９７、ＣＤ１２７、ＣＤ３８、ＣＤ２７、ＣＤ１９６、ＣＤ２７７又はＣＸＣＲ３に結合することができる。ある実施形態において、Ｔ細胞エンゲージャーは、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ３１又はＣＤ２７７に結合することができる。特定の実施形態において、Ｔ細胞エンゲージャーはＣＤ３に結合することができる。
幾つかの実施形態において、上記ポリヌクレオチドはデオキシリボ核酸を含む。ある実施形態において、上記ポリヌクレオチドはリボ核酸を含む。ポリヌクレオチドの非限定的な例は、単鎖、二本鎖若しくは多本鎖のＤＮＡ又はＲＮＡ、ＤＮＡ－ＲＮＡハイブリッド、或いはプリン塩基及びピリミジン塩基を含むポリマー、或いは他の天然の、化学的若しくは生化学的に修飾された、非天然若しくは誘導されたヌクレオチド塩基を含む。上記ポリヌクレオチドの主鎖は、糖及びリン酸基、修飾又は置換された糖又はリン酸基、ホスホルアミデートなどの合成サブユニットのポリマー、又はその組み合わせを含んでもよい。
幾つかの実施形態において、上記ポリヌクレオチドは単離される（例えば、合成されるか、又は分子クローニングによって産生される）ものである。幾つかの実施形態において、上記ポリヌクレオチドは宿主細胞（例えば、Ｔリンパ球）のゲノムＤＮＡに組み込まれる。幾つかの実施形態において、上記ポリヌクレオチドは宿主細胞内で染色体外（例えば、プラスミド上、ウイルスベクター上）にある。幾つかの実施形態において、上記ポリヌクレオチドはＤＮＡである。幾つかの実施形態において、上記ポリヌクレオチドはＲＮＡである。上記ポリヌクレオチドは、プラスミド又はウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター）などのベクターに挿入することができる。また、上記ポリヌクレオチドは１つ又は複数の修飾されたヌクレオチド（例えば、１つ又は複数の化学的修飾されたヌクレオチド）を含んでもよい。
幾つかの実施形態において、上記ＣＡＲは単特異性である。別の幾つかの実施形態において、上記ＣＡＲは二重特異性である。ある実施形態において、上記ＣＡＲは第１のＴＡＡの２つのエピトープに結合することができる。特定の実施形態において、上記ＣＡＲは２つの第１のＴＡＡに結合することができる。
幾つかの実施形態において、上記１種又は複数種の第１のＴＡＡｓ及び上記第２のＴＡＡは、血液がん（例えば白血病、リンパ腫、骨髄腫）細胞にそれぞれ独立的に発現する。本明細書に記載の方法によって治療できる血液がんは、白血病（例えば急性白血病、慢性白血病）、リンパ腫（例えばＢ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫）及び多発性骨髄腫を含む。従って、幾つかの実施形態において、上記１種又は複数種の第１のＴＡＡ、上記第２のＴＡＡ又は両方は、何れも白血病（例えば急性白血病、慢性白血病）、リンパ腫（例えばＢ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫）及び多発性骨髄腫の細胞から選ばれる血液がん細胞に発現する。
幾つかの実施形態において、上記１種又は複数種の第１のＴＡＡ及び上記第２のＴＡＡは、固形腫瘍（例えば、乳房、肺、前立腺、結腸、膀胱、卵巣、腎臓、胃、結腸、直腸、精巣、頭部及び／又は頸部、膵臓、脳、皮膚の腫瘍）細胞にそれぞれ独立的に発現する。従って、幾つかの実施形態において、１種又は複数種の第１のＴＡＡ及び第２のＴＡＡは、乳房、肺、前立腺、結腸、膀胱、卵巣、腎臓、胃、直腸、結腸直腸、精巣、頭頸部、膵臓、脳及び皮膚がん細胞から選ばれる固形腫瘍細胞にそれぞれ独立的に発現する。
幾つかの実施形態において、上記固形腫瘍は、脳腫瘍、乳がん、肺がん又は肝臓がんである。幾つかの実施形態において、上記脳腫瘍は膠芽腫（ＧＢＭ）である。ある実施形態において、上記ＧＢＭは原発性多形膠芽腫である。特定の実施形態において、上記ＧＢＭは再発性多形膠芽腫である。幾つかの実施形態において、上記脳腫瘍は転移性脳腫瘍である。ある実施形態において、上記転移性脳腫瘍は、非小細胞肺がん脳転移（ＮＳＣＬＣＢＭ）、小細胞肺がん脳転移（ＳＣＬＣＢＭ）、ＨＥＲ２－陽性転移性乳がん又はトリプルネガティブ転移性乳がん脳転移（ＴＮＢＣＢＭ）である。幾つかの実施形態において、上記肝臓がんは肝細胞がん（ＨＣＣ）である。
幾つかの実施形態において、上記１種又は複数種の第１のＴＡＡは、結腸がん抗原１９．９、胃がんムチン、抗原４．２、糖タンパク質Ａ３３（ｇｐＡ３３）、ＡＤＡＭ－９、胃がん抗原ＡＨ６、ＡＬＣＡＭ、悪性ヒトリンパ腫抗原ＡＰＯ－１、がん抗原Ｂ１、Ｂ７Ｈ３、β－カテニン、血液型ＡＬｅｂ／Ｌｅｙ、バーキットリンパ腫抗原－３８．１３、結腸腺がん抗原Ｃ１４、卵巣がん抗原ＣＡ１２５、カルボキシペプチダーゼＭ、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３６、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ７９ａ／ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１０３、ＣＤ３１７、ＣＤＫ４、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＥＡＣＡＭ６、Ｃ０１７－ｉＡ、ＣＯ－４３（Ｌｅｂ血液型）、ＣＯ－５１４（Ｌｅａ血液型）、ＣＴＡ－１、ＣＴＬＡ４、サイトケラチン８、抗原Ｄ１．１、抗原Ｄ１５６－２２、ＤＲ５、Ｅｉシリーズ（Ｂ血液型）、ＥＧＦＲ（上皮成長因子受容体）、アドレナリン受容体Ａ２（ＥｐｈＡ２）、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＧＤ２／ＧＤ３／ＧＭ２、肺腺がん抗原Ｆ３、抗原ＦＣ１０．２、Ｇ４９、ガングリオシドＧＤ２、ガングリオシドＧＤ３、ガングリオシドＧＭ２、ガングリオシドＧＭ３、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＩＣＡ１９－９、ＧＭ２、ｇｐＯＯ、グルカゴン－３（ＧＰＣ３）、ヒト白血病Ｔ細胞抗原Ｇｐ３７、黒色腫抗原ｇｐ７５、ｇｐＡ３３、ＨＥＲ２抗原（例えば、ｐｉ８５ ＨＥＲ２）、ヒト乳脂肪球（ＨＭＦＧ）、ヒトパピローマウイルスＥ６／ヒトパピローマウイルス－Ｅ７、高分子量黒色腫抗原（ＨＭＷＭＡＡ）、Ｉ抗原（分化抗原）Ｉ（Ｍａ）、インテグリンα－Ｖ－β－６インテグリンＰ６（ＩＴＧＢ６）、インターロイキン－１３受容体ａ２（ＩＬ１３Ｒα２）、ＪＡＭ－３、ＫＩＤ３、ＫＩＤ３１、ＫＳ １／４汎がん抗原、ヒト肺がん抗原Ｌ６とＬ２０、ＬＥＡ、ＬＵＣＡ－２、Ｍｉ：２２：２５：８、Ｍ１８、Ｍ３９、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＭＡＲＴ、ＭＵＣ－１、ＭＵＭ－１、Ｍｙｌ、Ｎ－アセチルグルコサミン転移酵素、ネオ糖タンパク質、ＮＳ－１０、ＯＦＡ－１、ＯＦＡ－２、オンコスタチンＭ、ｐ１５、黒色腫関連抗原Ｐ９７、多結晶形上皮ムチン（ＰＥＭ）、多結晶形上皮ムチン抗原（ＰＥＭＡ）、ＰＩＰＡ、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、前立腺酸性ホスフェート、Ｒ２４、ＲＯＲｉ、スフィンゴ脂質、ＳＳＥＡ－１、ＳＳＥＡ－３、ＳＳＥＡ－４、ｓＴｎ、Ｔ細胞受容体由来ペプチド、Ｔ５Ａ７、ＴＡＧ－７２、ＴＬ５（血液型Ａ）、ＴＮＦ－ａ受容体、ＴＮＦ－Ｂ受容体、ＴＮＦ－ｙ受容体、ＴＲＡ－１－８５（血液型Ｈ）、トランスフェリン受容体、腫瘍特異的移植抗原（ＴＳＴＡ）、がん胎児抗原－α－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＶＥＰ８、ＶＥＰ９、ＶＩＭ－Ｄ５、及びＹハプテン、Ｌｅｙからそれぞれ独立的に選ばれる。
幾つかの実施形態において、上記１種又は複数種の第１のＴＡＡは、インターロイキン－１３受容体α２（ＩＬ１３Ｒα２）、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）、上皮成長因子受容体２（ＥＧＦＲ）、ＥＧＦＲ変異体ＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、グルカゴン－３（ＧＰＣ３）又はその組み合わせからそれぞれ独立的に選ばれる。
幾つかの実施形態において、上記ＣＡＲは、変異タンパク質、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ナノ抗体、又はその組み合わせを含む。ある実施形態において、上記ＣＡＲは、変異タンパク質及びｓｃＦｖ、２つのナノ抗体、変異タンパク質及び２つのナノ抗体、又はｓｃＦｖ及びナノ抗体を含む。
幾つかの実施形態において、上記ＣＡＲは、
ＩＬ１３変異タンパク質、
ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖ、
ＩＬ１３変異タンパク質及びＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖ、
ＨＥＲ２－結合ナノ抗体、
２つのＨＥＲ２－結合ナノ抗体、
ＩＬ１３変異タンパク質及び２つのＨＥＲ２－結合ナノ抗体、
ＥＧＦＲ－結合ｓｃＦｖ、
ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ｓｃＦｖ、
ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体、
ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体、
２つのＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体、
ＧＰＣ３－結合ナノ抗体、又は
ＧＰＣ３－結合ナノ抗体及びＧＰＣ３－結合ｓｃＦｖを含む。
ＩＬ１３変異タンパク質、
ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖ、
ＩＬ１３変異タンパク質及びＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖ、
ＨＥＲ２－結合ナノ抗体、
２つのＨＥＲ２－結合ナノ抗体、
ＩＬ１３変異タンパク質及び２つのＨＥＲ２－結合ナノ抗体、
ＥＧＦＲ－結合ｓｃＦｖ、
ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ｓｃＦｖ、
ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体、
ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体、
２つのＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体、
ＧＰＣ３－結合ナノ抗体、又は
ＧＰＣ３－結合ナノ抗体及びＧＰＣ３－結合ｓｃＦｖを含む。
ある実施形態において、上記ＣＡＲは、
配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む上記ＩＬ１３変異タンパク質、
配列番号２～４に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖ、
配列番号２４２～２５９に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む上記ＨＥＲ２－結合ナノ抗体、
配列番号１５～１７及び２６０～２８１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体、
配列番号１５～１７及び２６０～２８１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体、又は
配列番号２８２～２９１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む上記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体、
又はその組み合わせを含む。
配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む上記ＩＬ１３変異タンパク質、
配列番号２～４に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖ、
配列番号２４２～２５９に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む上記ＨＥＲ２－結合ナノ抗体、
配列番号１５～１７及び２６０～２８１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体、
配列番号１５～１７及び２６０～２８１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体、又は
配列番号２８２～２９１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む上記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体、
又はその組み合わせを含む。
例えば、配列同一性は、少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％であってもよい。幾つかの実施形態において、配列同一性は、約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、配列同一性は、約６０～９９％、６５～９９％、６５～９５％、７０～９９％、７０～９８％、７０～９５％、７０～９０％、７５～９８％、７５～９７％、７５～９０％、７５～８５％、８０～９７％、８０～９６％、８０～８５％、８５～９６％、８５～９５％又は９０～９５％である。
特定の実施形態において、
上記ＩＬ１３変異タンパク質は、配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは、配列番号２～４に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
上記ＨＥＲ２－結合ナノ抗体は、配列番号２４２～２５９に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５～１７及び２６０～２８１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５～１７及び２６０～２８１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は
上記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体は、配列番号２８２～２９１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
又はその組み合わせである。
上記ＩＬ１３変異タンパク質は、配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは、配列番号２～４に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
上記ＨＥＲ２－結合ナノ抗体は、配列番号２４２～２５９に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５～１７及び２６０～２８１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５～１７及び２６０～２８１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は
上記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体は、配列番号２８２～２９１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
又はその組み合わせである。
幾つかの実施形態において、
上記ＩＬ１３変異タンパク質は、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含み、
上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは、配列番号２～４に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含み、
上記ＨＥＲ２－結合ナノ抗体は、配列番号２４２～２５９に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含み、
上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５～１７及び２６０～２８１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含み、
上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５～１７及び２６０～２８１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含み、又は
上記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体は、配列番号２８２～２９１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含み、
又はその組み合わせである。
上記ＩＬ１３変異タンパク質は、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含み、
上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは、配列番号２～４に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含み、
上記ＨＥＲ２－結合ナノ抗体は、配列番号２４２～２５９に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含み、
上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５～１７及び２６０～２８１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含み、
上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５～１７及び２６０～２８１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含み、又は
上記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体は、配列番号２８２～２９１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含み、
又はその組み合わせである。
本発明のＣＡＲ又はＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）に記載されるアミノ酸置換は、典型的なアミノ酸又は非典型的なアミノ酸による置換であってもよい。非典型的なアミノ酸は、典型的なＬ－アミノ酸のＤ型などのＤ－アミノ酸を含むが、これに限定されない。
幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの保存的置換を含む。
幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの高度保存的置換を含む。
幾つかの実施形態において、上記少なくとも１つのアミノ酸置換は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４又は４５個のアミノ酸置換である。幾つかの実施形態において、上記少なくとも１つのアミノ酸置換は、約１～４５個のアミノ酸置換、例えば、約１～４０、２～４５、２～４０、３～４０、３～３５、４～３５、４～３０、５～３０、５～２５、６～２５、６～２０、７～２０、７～１５、８～１５、８～１４、９～１４、９～１２又は１０～１２個のアミノ酸置換である。ある実施形態において、上記少なくとも１つのアミノ酸置換は、約１～２５個のアミノ酸置換、例えば、約１～２２、２～２２、２～２０、３～２０、３～１８、４～１８、４～１６、５～１６、５～１４、６～１４、６～１２、７～１２、７～１０又は８～１０個のアミノ酸置換である。特定の実施形態において、上記少なくとも１つのアミノ酸置換は、約１～１２個のアミノ酸置換、例えば、約１～１１、２～１１、２～１０、３～１０、３～９、４～９、４～８、５～８、５～７又は６～７個のアミノ酸置換である。
ある実施形態において、
上記ＩＬ１３変異タンパク質は、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して、約１～１２個のアミノ酸置換を含み、
上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは、配列番号２～４に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、約１～２５個のアミノ酸置換を含み、
上記ＨＥＲ２－結合ナノ抗体は、配列番号２４２～２５９に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、約１～１２個のアミノ酸置換を含み、
上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５～１７及び２６０～２８１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、約１～１２個のアミノ酸置換を含み、
上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５～１７及び２６０～２８１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、約１～１２個のアミノ酸置換を含み、又は
上記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体は、配列番号２８２～２９１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、約１～１２個のアミノ酸置換を含み、
又はその組み合わせである。
上記ＩＬ１３変異タンパク質は、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して、約１～１２個のアミノ酸置換を含み、
上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは、配列番号２～４に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、約１～２５個のアミノ酸置換を含み、
上記ＨＥＲ２－結合ナノ抗体は、配列番号２４２～２５９に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、約１～１２個のアミノ酸置換を含み、
上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５～１７及び２６０～２８１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、約１～１２個のアミノ酸置換を含み、
上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５～１７及び２６０～２８１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、約１～１２個のアミノ酸置換を含み、又は
上記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体は、配列番号２８２～２９１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、約１～１２個のアミノ酸置換を含み、
又はその組み合わせである。
特定の実施形態において、
上記ＩＬ１３変異タンパク質は、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、
上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは、配列番号２～４の何れか１つに示されるアミノ酸配列を含み、
上記ＨＥＲ２－結合ナノ抗体は、配列番号２４２～２５９の何れか１つに示されるアミノ酸配列を含み、
上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５～１７及び２６０～２８１の何れか１つに示されるアミノ酸配列を含み、
上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５～１７及び２６０～２８１の何れか１つに示されるアミノ酸配列を含み、又は
上記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体は、配列番号２８２～２９１の何れか１つに示されるアミノ酸配列を含み、
上記ＩＬ１３変異タンパク質は、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含み、
上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは、配列番号２～４の何れか１つに示されるアミノ酸配列を含み、
上記ＨＥＲ２－結合ナノ抗体は、配列番号２４２～２５９の何れか１つに示されるアミノ酸配列を含み、
上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５～１７及び２６０～２８１の何れか１つに示されるアミノ酸配列を含み、
上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５～１７及び２６０～２８１の何れか１つに示されるアミノ酸配列を含み、又は
上記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体は、配列番号２８２～２９１の何れか１つに示されるアミノ酸配列を含み、
又はその組み合わせである。
幾つかの実施形態において、上記ＣＡＲ（例えば、二重特異性ＣＡＲ）は、リンカー、ＣＤ８αシグナルペプチド、ＣＤ８αヒンジ、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、又はＣＤ３ζシグナルドメイン、又はその組み合わせを更に含む。幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは、ＣＤ８αシグナルペプチド、ＣＤ８αヒンジ、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン及びＣＤ３ζシグナルドメインを更に含む。
幾つかの実施形態において、上記ＣＡＲ（例えば、二重特異性ＣＡＲ）は、リンカー、ＣＤ８αシグナルペプチド、ＣＤ８αヒンジ、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン、又はＣＤ３ζシグナルドメイン、又はその組み合わせを更に含む。幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは、ＣＤ８αシグナルペプチド、ＣＤ８αヒンジ、ＣＤ２８膜貫通ドメイン、４－１ＢＢ共刺激ドメイン及びＣＤ３ζシグナルドメインを更に含む。
幾つかの実施形態において、上記リンカーは、配列番号５に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ８αヒンジは、配列番号７に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号８に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ３ζシグナルドメインは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
ある実施形態において、上記リンカーは、配列番号５に示されるアミノ酸配列に対して、１又は２個のアミノ酸置換を含む。ある実施形態において、上記ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に示されるアミノ酸配列に対して、１又は２個のアミノ酸置換を含む。ある実施形態において、上記ＣＤ８αヒンジは、配列番号７に示されるアミノ酸配列に対して、約１～５個のアミノ酸置換を含む。ある実施形態において、上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号８に示されるアミノ酸配列に対して、約１～３個のアミノ酸置換を含む。ある実施形態において、上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号９に示されるアミノ酸配列に対して、約１～５個のアミノ酸置換を含む。ある実施形態において、上記ＣＤ３ζシグナルドメインは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列に対して、約１～１２個のアミノ酸置換を含む。
特定の実施形態において、上記リンカーは、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態において、上記ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態において、上記ＣＤ８αヒンジは、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態において、上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態において、上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号９に示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態において、上記ＣＤ３ζシグナルドメインは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記第２のＴＡＡは、ＩＬ１３Ｒα２、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、又はＧＰＣ３である。
ある実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、ｓｃＦｖ、ナノ抗体、又はその組み合わせを含む。
特定の実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、ＣＤ３－結合ｓｃＦｖを含む。特定の実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）－結合ｓｃＦｖを含む。特定の実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体を含む。特定の実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、２つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体を含む。特定の実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、２つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体を含む。特定の実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、２つのグルカゴン－３（ＧＰＣ３）－結合ナノ抗体を含む。
幾つかの実施形態において、上記ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５～１７及び２６０～２８１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体は、配列番号２８２～２９１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
例示的には、上記配列同一性は、少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％であってもよい。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０～９９％、６５～９９％、６５～９５％、７０～９９％、７０～９８％、７０～９５％、７０～９０％、７５～９８％、７５～９７％、７５～９０％、７５～８５％、８０～９７％、８０～９６％、８０～８５％、８５～９６％、８５～９５％又は９０～９５％である。
特定の実施形態において、上記ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５～１７及び２６０～２８１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体は、配列番号２８２～２９１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５～１７及び２６０～２８１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５～１７及び２６０～２８１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体は、配列番号２８２～２９１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。
幾つかの実施形態において、上記少なくとも１つのアミノ酸置換は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４又は４５個のアミノ酸置換である。幾つかの実施形態において、上記少なくとも１つのアミノ酸置換は、約１～４５個のアミノ酸置換、例えば、約１～４０、２～４５、２～４０、３～４０、３～３５、４～３５、４～３０、５～３０、５～２５、６～２５、６～２０、７～２０、７～１５、８～１５、８～１４、９～１４、９～１２又は１０～１２個のアミノ酸置換である。ある実施形態において、上記少なくとも１つのアミノ酸置換は、約１～２５個のアミノ酸置換、例えば、約１～２２、２～２２、２～２０、３～２０、３～１８、４～１８、４～１６、５～１６、５～１４、６～１４、６～１２、７～１２、７～１０又は８～１０個のアミノ酸置換である。特定の実施形態において、上記少なくとも１つのアミノ酸置換は、約１～１２個のアミノ酸置換、例えば、約１～１１、２～１１、２～１０、３～１０、３～９、４～９、４～８、５～８、５～７又は６～７個のアミノ酸置換である。
ある実施形態において、上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５～１７及び２６０～２８１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、約１～１２個のアミノ酸置換を含む。ある実施形態において、上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５～１７及び２６０～２８１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、約１～１２個のアミノ酸置換を含む。ある実施形態において、上記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体は、配列番号２８２～２９１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、約１～１２個のアミノ酸置換を含む。
特定の実施形態において、上記ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５～１７及び２６０～２８１の何れか１つに示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態において、上記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体は、配列番号２８２～２９１の何れか１つに示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）はシグナルペプチドを含む。ある実施形態において、上記シグナルペプチドは配列番号１９に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２１～２７、１０９～１１１、１７６～１７８及び２９２に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。例示的には、上記配列同一性は、少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％であってもよい。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０～９９％、６５～９９％、６５～９５％、７０～９９％、７０～９８％、７０～９５％、７０～９０％、７５～９８％、７５～９７％、７５～９０％、７５～８５％、８０～９７％、８０～９６％、８０～８５％、８５～９６％、８５～９５％又は９０～９５％である。特定の実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２１～２７、１０９～１１１、１７６～１７８及び２９２に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２１～２３、１０９～１１１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記少なくとも１つのアミノ酸置換は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４又は４５個のアミノ酸置換である。幾つかの実施形態において、上記少なくとも１つのアミノ酸置換は、約１～４５個のアミノ酸置換、例えば、約１～４０、２～４５、２～４０、３～４０、３～３５、４～３５、４～３０、５～３０、５～２５、６～２５、６～２０、７～２０、７～１５、８～１５、８～１４、９～１４、９～１２又は１０～１２個のアミノ酸置換である。ある実施形態において、上記少なくとも１つのアミノ酸置換は、約１～２５個のアミノ酸置換、例えば、約１～２２、２～２２、２～２０、３～２０、３～１８、４～１８、４～１６、５～１６、５～１４、６～１４、６～１２、７～１２、７～１０又は８～１０個のアミノ酸置換である。特定の実施形態において、上記少なくとも１つのアミノ酸置換は、約１～１２個のアミノ酸置換、例えば、約１～１１、２～１１、２～１０、３～１０、３～９、４～９、４～８、５～８、５～７又は６～７個のアミノ酸置換である。ある実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２１～２３、１０９～１１１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、約１～４０個のアミノ酸置換を含む。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２４～２７、１７６～１７８及び２９２に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。ある実施形態において、上記少なくとも１つのアミノ酸置換は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、５０、５５、６０、６５又は７０個のアミノ酸置換である。幾つかの実施形態において、上記少なくとも１つのアミノ酸置換は、約１～７０個のアミノ酸置換、例えば、約１～６５、１～６０、１～５５、５～５５、５～５０、１０～５０、１０～４５、１５～４５、１５～４０、２０～４０、２０～３５、２５～３５又は２５～３０個のアミノ酸置換である。ある実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２４～２７、１７６～１７８及び２９２に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、約１～５５個のアミノ酸置換を含む。特定の実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、１０９、１１０、１１１、１７６、１７７、１７８又は２９２の何れか１つに示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号３１～３８、配列番号１０６～１０８、配列番号１１２～１１９、配列番号１７３～１７５、配列番号１７９～１８６、配列番号１９２～２０３、配列番号２２２～２３７又は配列番号２３９～２４１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つ、又はその組み合わせと少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。例示的には、上記配列同一性は、少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％であってもよい。ある実施形態において、上記配列同一性は、約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。特定の実施形態において、上記配列同一性は、約６０～９９％、６５～９９％、６５～９５％、７０～９９％、７０～９８％、７０～９５％、７０～９０％、７５～９８％、７５～９７％、７５～９０％、７５～８５％、８０～９７％、８０～９６％、８０～８５％、８５～９６％、８５～９５％又は９０～９５％である。
幾つかの実施形態において、上記アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号３１～３８、配列番号１０６～１０８、配列番号１１２～１１９、配列番号１７３～１７５、配列番号１７９～１８６、配列番号１９２～２０３、配列番号２２２～２３７又は配列番号２３９～２４１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つ、又はその組み合わせと少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
ある実施形態において、上記アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号３１～３８、配列番号１０６～１０８、配列番号１１２～１１９、配列番号１７３～１７５、配列番号１７９～１８６、配列番号１９２～２０３、配列番号２２２～２３７又は配列番号２３９～２４１に示されるアミノ酸配列からそれぞれ独立的に選ばれる少なくとも１つ、又はその組み合わせに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記少なくとも１つのアミノ酸置換は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、５０、５５又は６０個のアミノ酸置換である。幾つかの実施形態において、上記少なくとも１つのアミノ酸置換は、約１～６０個のアミノ酸置換、例えば、約１～５５、１～５０、１～４５、２～４５、２～４０、３～４０、３～３５、４～３５、４～３０、５～３０、５～２５、６～２５、６～２０、７～２０、７～１５、８～１５、８～１４、９～１４、９～１２又は１０～１２個のアミノ酸置換である。ある実施形態において、上記アミノ酸配列をコードするポリヌクレオチド配列は、配列番号３１～３８、配列番号１０６～１０８、配列番号１１２～１１９、配列番号１７３～１７５、配列番号１７９～１８６、配列番号１９２～２０３、配列番号２２２～２３７又は配列番号２３９～２４１に示されるアミノ酸配列からそれぞれ独立的に選ばれる少なくとも１つに対して、約１～５０個のアミノ酸置換を含む。
特定の実施形態において、上記ポリヌクレオチド配列は、配列番号３１～３８、配列番号１０６～１０８、配列番号１１２～１１９、配列番号１７３～１７５、配列番号１７９～１８６、配列番号１９２～２０３、配列番号２２２～２３７又は配列番号２３９～２４１に示されるアミノ酸配列をコードする。
一態様において、本発明は、キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする配列を含む第１のポリヌクレオチド及びＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）を含む第２のポリヌクレオチドであって、上記ＣＡＲが１種又は複数種の第１のＴＡＡに結合でき、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）がＴ細胞及び第２のＴＡＡに結合できる第１のポリヌクレオチド及び第２のポリヌクレオチドを提供する。幾つかの実施形態において、上記第１のポリヌクレオチドは、本明細書で定義されたポリヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態において、上記第２のポリヌクレオチドは、本明細書で定義されたポリヌクレオチドを含む。
他の態様において、本発明は、ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチドであって、上記二重特異性ＣＡＲがリンカー配列を介してＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖに連結するＩＬ１３変異タンパク質を含む、ポリヌクレオチドを提供する。
１．ＩＬ１３変異タンパク質
１．ＩＬ１３変異タンパク質
幾つかの実施形態において、上記ＩＬ１３変異タンパク質は、配列番号１に示されるアミノ酸配列（表１）を含む。
幾つかの実施形態において、上記ＩＬ１３変異タンパク質は、配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又は配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列から本質的になるか、又はそれからなる。例示的には、配列番号１との上記配列同一性は、少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０～９９％、６５～９９％、６５～９５％、７０～９９％、７０～９８％、７０～９５％、７０～９０％、７５～９８％、７５～９７％、７５～９０％、７５～８５％、８０～９７％、８０～９６％、８０～８５％、８５～９６％、８５～９５％又は９０～９５％である。幾つかの実施形態において、上記ＩＬ１３変異タンパク質は、配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記ＩＬ１３変異タンパク質は、配列番号１に対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＩＬ１３変異タンパク質は、配列番号１に対して、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４又は４５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＩＬ１３変異タンパク質は、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して、約１～４５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＩＬ１３変異タンパク質は、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して、約１～４０、２～４５、２～４０、３～４０、３～３５、４～３５、４～３０、５～３０、５～２５、６～２５、６～２０、７～２０、７～１５、８～１５、８～１４、９～１４、９～１２又は１０～１２個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＩＬ１３変異タンパク質は、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して、約１～１２個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＩＬ１３変異タンパク質は、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して、約１～１１、２～１２、２～１１、３～１１、３～１０、４～１０、４～９、５～９、５～８、６～８又は６～７個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＩＬ１３変異タンパク質は、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して、約４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、６又は５個のアミノ酸置換を含む。
２．ＨＥＲ２－結合ＳｃＦｖ
２．ＨＥＲ２－結合ＳｃＦｖ
幾つかの実施形態において、上記ＨＥＲ２－結合ＳｃＦｖは、配列番号２、３又は４に示されるアミノ酸配列を含むか、又は配列番号２、３又は４に示されるアミノ酸配列から本質的になるか、又はそれからなる（表１）。幾つかの実施形態において、上記ＨＥＲ２－結合ＳｃＦｖは、配列番号４に示されるアミノ酸配列を含むか、又は配列番号４に示されるアミノ酸配列から本質的になるか、又はそれからなる。
幾つかの実施形態において、上記ＨＥＲ２－結合ＳｃＦｖは、配列番号２、３又は４に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又は配列番号２、３又は４に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列から本質的になるか、又はそれからなる。例示的には、配列番号２、３又は４、又はその組み合わせとの上記配列同一性は、少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０～９９％、６５～９９％、６５～９５％、７０～９９％、７０～９８％、７０～９５％、７０～９０％、７５～９８％、７５～９７％、７５～９０％、７５～８５％、８０～９７％、８０～９６％、８０～８５％、８５～９６％、８５～９５％又は９０～９５％である。幾つかの実施形態において、上記ＨＥＲ２－結合ＳｃＦｖは、配列番号２、３又は４に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記ＨＥＲ２－結合ＳｃＦｖは、配列番号４に示されるアミノ酸配列と少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むか、又は配列番号４に示されるアミノ酸配列と少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列から本質的になるか、又はそれからなる。例示的には、配列番号４との上記配列同一性は、少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０～９９％、６５～９９％、６５～９５％、７０～９９％、７０～９８％、７０～９５％、７０～９０％、７５～９８％、７５～９７％、７５～９０％、７５～８５％、８０～９７％、８０～９６％、８０～８５％、８５～９６％、８５～９５％又は９０～９５％である。幾つかの実施形態において、上記ＨＥＲ２－結合ＳｃＦｖは、配列番号４に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記ＨＥＲ２－結合ＳｃＦｖは、配列番号２、３又は４、又はその組み合わせに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＨＥＲ２－結合ＳｃＦｖは、配列番号２、３又は４、又はその組み合わせに対して、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０又は９５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＨＥＲ２－結合ＳｃＦｖは、配列番号２、３又は４に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～９５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＨＥＲ２－結合ＳｃＦｖは、配列番号２、３又は４に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～９０、２～９５、２～９０、４～９０、４～８５、６～８５、６～８０、８～８０、８～７５、１０～７５、１０～７０、１５～７０、１５～６５、２０～６５、２０～６０、２５～６０、２５～５０、３０～５０又は３０～４０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＨＥＲ２－結合ＳｃＦｖは、配列番号２、３又は４に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～２５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＨＥＲ２－結合ＳｃＦｖは、配列番号２、３又は４に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～２４、２～２５、２～２４、３～２４、３～２２、４～２２、４～２０、５～２０、５～１８、６～１８、６～１６、７～１６、７～１４、８～１４、８～１２又は１０～１２個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＨＥＲ２－結合ＳｃＦｖは、配列番号２、３又は４に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、最大約９５、９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、６又は５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの保存的置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの高度保存的置換を含む。
幾つかの実施形態において、上記ＨＥＲ２－結合ＳｃＦｖは、配列番号４に対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＨＥＲ２－結合ＳｃＦｖは、配列番号４に対して、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０又は９５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＨＥＲ２－結合ＳｃＦｖは、配列番号４に示されるアミノ酸配列に対して、約１～９５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＨＥＲ２－結合ＳｃＦｖは、配列番号４に示されるアミノ酸配列に対して、約１～９０、２～９５、２～９０、４～９０、４～８５、６～８５、６～８０、８～８０、８～７５、１０～７５、１０～７０、１５～７０、１５～６５、２０～６５、２０～６０、２５～６０、２５～５０、３０～５０又は３０～４０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＨＥＲ２－結合ＳｃＦｖは、配列番号４に示されるアミノ酸配列に対して、約１～２５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＨＥＲ２－結合ＳｃＦｖは、配列番号４に示されるアミノ酸配列に対して、約１～２４、２～２５、２～２４、３～２４、３～２２、４～２２、４～２０、５～２０、５～１８、６～１８、６～１６、７～１６、７～１４、８～１４、８～１２又は１０～１２個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＨＥＲ２－結合ＳｃＦｖは、配列番号４に示されるアミノ酸配列に対して、最大約９５、９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、６又は５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの保存的置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの高度保存的置換を含む。
３．リンカー
３．リンカー
幾つかの実施形態において、上記リンカーは、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む（表１）。幾つかの実施形態において、上記リンカーは、配列番号５に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記リンカーは、配列番号５に対して、少なくとも１つのアミノ酸置換（例えば、１、２又は３個のアミノ酸置換）を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの保存的置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの高度保存的置換を含む。
４．ＣＤ８αシグナルペプチド
４．ＣＤ８αシグナルペプチド
幾つかの実施形態において、上記ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に示されるアミノ酸配列を含む（表１）。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に対して、少なくとも１つのアミノ酸置換（例えば、１、２又は３個のアミノ酸置換）を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの保存的置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの高度保存的置換を含む。
５．ＣＤ８αヒンジ
５．ＣＤ８αヒンジ
幾つかの実施形態において、上記ＣＤ８αヒンジは、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含む（表１）。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ８αヒンジは、配列番号７に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％（例えば、８１％、８２％、８３％、８４％、８５％、８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ８αヒンジは、配列番号７に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ８αヒンジは、配列番号７に対して、少なくとも１つのアミノ酸置換（例えば、１、２、３、４又は５個のアミノ酸置換）を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの保存的置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの高度保存的置換を含む。
６．ＣＤ２８膜貫通ドメイン
６．ＣＤ２８膜貫通ドメイン
幾つかの実施形態において、上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含む（表１）。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号８に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号８に対して、少なくとも１つのアミノ酸置換（例えば、１、２又は３個のアミノ酸置換）を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの保存的置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの高度保存的置換を含む。
７．４－１ＢＢ共刺激ドメイン
７．４－１ＢＢ共刺激ドメイン
幾つかの実施形態において、上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号９に示されるアミノ酸配列を含む（表１）。幾つかの実施形態において、上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号９に対して、少なくとも１つのアミノ酸置換（例えば、１、２、３又は４個のアミノ酸置換）を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの保存的置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの高度保存的置換を含む。
８．ＣＤ３ζシグナルドメイン
８．ＣＤ３ζシグナルドメイン
幾つかの実施形態において、上記ＣＤ３ζシグナルドメインは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含む（表１）。
幾つかの実施形態において、上記ＣＤ３ζシグナルドメインは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列と少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。例示的には、配列番号１との上記配列同一性は、少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０～９９％、６５～９９％、６５～９５％、７０～９９％、７０～９８％、７０～９５％、７０～９０％、７５～９８％、７５～９７％、７５～９０％、７５～８５％、８０～９７％、８０～９６％、８０～８５％、８５～９６％、８５～９５％又は９０～９５％である。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ３ζシグナルドメインは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記ＣＤ３ζシグナルドメインは、配列番号１０に対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ３ζシグナルドメインは、配列番号１０に対して、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４又は４５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ３ζシグナルドメインは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列に対して、約１～４５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ３ζシグナルドメインは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列に対して、約１～４０、２～４５、２～４０、３～４０、３～３５、４～３５、４～３０、５～３０、５～２５、６～２５、６～２０、７～２０、７～１５、８～１５、８～１４、９～１４、９～１２又は１０～１２個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ３ζシグナルドメインは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列に対して、約１～１２個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ３ζシグナルドメインは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列に対して、約１～１１、２～１２、２～１１、３～１１、３～１０、４～１０、４～９、５～９、５～８、６～８又は６～７個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ３ζシグナルドメインは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列に対して、約４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、６又は５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの保存的置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの高度保存的置換を含む。
幾つかの実施形態において、
上記ＩＬ１３変異タンパク質は、配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列をそれぞれ独立的に含み、
上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは、配列番号２、３又は４に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列をそれぞれ独立的に含み、
上記ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
上記ＣＤ８αヒンジは、配列番号７に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号８に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は
上記ＣＤ３ζシグナルドメインは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
又はその組み合わせである。
上記ＩＬ１３変異タンパク質は、配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列をそれぞれ独立的に含み、
上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは、配列番号２、３又は４に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列をそれぞれ独立的に含み、
上記ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
上記ＣＤ８αヒンジは、配列番号７に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号８に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は
上記ＣＤ３ζシグナルドメインは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
又はその組み合わせである。
幾つかの実施形態において、
上記ＩＬ１３変異タンパク質は、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して、約１～１２個のアミノ酸置換を含み、
上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは、配列番号２、３又は４に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～２５個のアミノ酸置換を含み、
上記ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に示されるアミノ酸配列に対して、１又は２個のアミノ酸置換を含み、
上記リンカーは、配列番号３に示されるアミノ酸配列に対して、１又は２個のアミノ酸置換を含み、
上記ＣＤ８αヒンジは、配列番号７に示されるアミノ酸配列に対して、約１～５個のアミノ酸置換を含み、
上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号８に示されるアミノ酸配列に対して、約１～３個のアミノ酸置換を含み、
上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号９に示されるアミノ酸配列に対して、約１～５個のアミノ酸置換を含み、又は
上記ＣＤ３ζシグナルドメインは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列に対して、約１～１２個のアミノ酸置換を含み、
又はその組み合わせである。
上記ＩＬ１３変異タンパク質は、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して、約１～１２個のアミノ酸置換を含み、
上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは、配列番号２、３又は４に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～２５個のアミノ酸置換を含み、
上記ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に示されるアミノ酸配列に対して、１又は２個のアミノ酸置換を含み、
上記リンカーは、配列番号３に示されるアミノ酸配列に対して、１又は２個のアミノ酸置換を含み、
上記ＣＤ８αヒンジは、配列番号７に示されるアミノ酸配列に対して、約１～５個のアミノ酸置換を含み、
上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号８に示されるアミノ酸配列に対して、約１～３個のアミノ酸置換を含み、
上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号９に示されるアミノ酸配列に対して、約１～５個のアミノ酸置換を含み、又は
上記ＣＤ３ζシグナルドメインは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列に対して、約１～１２個のアミノ酸置換を含み、
又はその組み合わせである。
幾つかの実施形態において、上記ＣＤ８αシグナルペプチドはＩＬ１３変異タンパク質のＮ末端に位置し、上記ＩＬ１３変異タンパク質は上記リンカーのＮ末端に位置し、上記リンカーは上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは上記ＣＤ８αヒンジのＮ末端に位置し、上記ＣＤ８αヒンジは上記ＣＤ２８膜貫通ドメインのＮ末端に位置し、上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは上記４－１ＢＢ共刺激ドメインのＮ末端に位置し、上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは上記ＣＤ３ζシグナルドメインのＮ末端に位置する（図１）。
幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは、配列番号１１、１２又は１３に示されるアミノ酸配列を含む（表１）。
幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは、配列番号１１、１２又は１３に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。例示的には、配列番号１１、１２又は１３、又はその組み合わせとの上記配列同一性は、少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０～９９％、６５～９９％、６５～９５％、７０～９９％、７０～９８％、７０～９５％、７０～９０％、７５～９８％、７５～９７％、７５～９０％、７５～８５％、８０～９７％、８０～９６％、８０～８５％、８５～９６％、８５～９５％又は９０～９５％である。幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは、配列番号１１、１２又は１３に示されるアミノ酸配列と少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは、配列番号１１、１２又は１３、又はその組み合わせに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは、配列番号１１、１２又は１３、又はその組み合わせに対して、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０又は１２０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは、配列番号１１、１２又は１３に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～１２０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは、配列番号１１、１２又は１３に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～１１０、２～１１０、２～１００、４～１００、４～９０、６～９０、６～８０、８～８０、８～７０、１０～７０、１０～６０、１５～６０、１５～５０、２０～５０、２０～４０、２５～４０又は２５～３０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは、配列番号１１、１２又は１３に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～６０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは、配列番号１１、１２又は１３に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～２５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは、配列番号１１、１２又は１３に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～２４、２～２５、２～２４、３～２４、３～２２、４～２２、４～２０、５～２０、５～１８、６～１８、６～１６、７～１６、７～１４、８～１４、８～１２又は１０～１２個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは、配列番号１１、１２又は１３に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、最大約９５、９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、６又は５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの保存的置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの高度保存的置換を含む。
Ｂ．Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥｓ又はＢｉＴＥｓ）をコードするポリヌクレオチド
Ｂ．Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥｓ又はＢｉＴＥｓ）をコードするポリヌクレオチド
他の態様において、本発明は、Ｔ細胞、第１のＴＡＡエピトープ及び第２のＴＡＡエピトープに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含むポリヌクレオチドを提供する。幾つかの実施形態において、上記第１のＴＡＡエピトープ及び上記第２のＴＡＡエピトープは第２のＴＡＡにある。幾つかの実施形態において、上記第１のＴＡＡエピトープ及び上記第２のＴＡＡエピトープは２つの第２のＴＡＡにある。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＶＬＡ－１、ＣＤ８、ＣＤ４、ＣＣＲ６、ＣＸＣＲ５、ＣＤ２５、ＣＤ３１、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ１９７、ＣＤ１２７、ＣＤ３８、ＣＤ２７、ＣＤ１９６、ＣＤ２７７、又はＣＸＣＲ３に結合することができる。ある実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ３１、又はＣＤ２７７に結合することができる。特定の実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）はＣＤ３に結合することができる。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は第１の結合部分及び第２の結合部分を含む。ある実施形態において、上記第１の結合部分はＴ細胞表面抗原に結合することができる。ある実施形態において、上記第２の結合部分は第１のＴＡＡに結合することができる。ある実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、第２のＴＡＡに結合できる第３の結合部分を含む。幾つかの実施形態において、上記第１のＴＡＡは第２のＴＡＡと同じである。ある実施形態において、上記第１の結合部分及び第２の結合部分は、２つの異なるエピトープに結合することができる。幾つかの実施形態において、上記第１のＴＡＡは第２のＴＡＡと異なる。
幾つかの実施形態において、上記ＴＡＡは、ＣＥＡ、ＧＰＣ３、ＭＵＣ－１、ＥｐＣＡＭ、ＨＥＲ受容体、ＰＥＭ、Ａ３３、Ｇ２５０、炭水化合物抗原Ｌｅｙ、Ｌｅｘ、Ｌｅｂ、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ－７２、ＳＴＥＡＰ１、ＣＤ１６６、ＣＤ２４、ＣＤ４４、Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ、ＳＰＡＲＣ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＷＴ１、ＭＵＣ１、ＬＭＰ２、ｉｄｉｏｔｙｐｅ、ＨＰＶＥ６＆Ｅ７、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ、ＭＡＧＥＡ３、ｐ５３非突然変異体、ｐ５３突然変異体、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＧＤ２、ＰＳＭＡ、ＰＣＳＡ、ＰＳＡ、ＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ１、Ｒａｓ突然変異体、プロテアーゼ３（ＰＲ１）、ｂｃｒ－ａｂｌ、チロシナーゼ、ｓｕｒｖｉｖｉｎ、ＰＳＡ、又はｈＴＥＲＴである。幾つかの実施形態において、上記ＴＡＡは膠芽腫腫瘍抗原である。ある実施形態において、上記ＴＡＡは、ＨＥＲ２、ＧＰＣ３、ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩである。特定の実施形態において、上記ＴＡＡはＨＥＲ２である。特定の実施形態において、上記ＴＡＡはＧＰＣ３である。特定の実施形態において、上記ＴＡＡはＥＦＧＲである。特定の実施形態において、上記ＴＡＡはＥＧＦＲｖＩＩＩである。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）はＣＤ３－結合ｓｃＦｖを含む。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は少なくとも１つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は少なくとも１つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は少なくとも１つのＧＰＣ３－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は２つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は２つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は２つのＧＰＣ３－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は１つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体及び１つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は１つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体及び１つのＧＰＣ３－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は１つのＧＰＣ３－結合ナノ抗体及び１つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体を含む。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）はリンカー、シグナルペプチド又はペプチドタグ、又はその組み合わせを含む。
幾つかの実施形態において、上記ポリヌクレオチドは単離される（例えば、合成又は分子クローニングによって産生される）ものである。幾つかの実施形態において、上記ポリヌクレオチドは宿主細胞（例えば、Ｔリンパ球）のゲノムＤＮＡに組み込まれる。幾つかの実施形態において、上記ポリヌクレオチドは宿主細胞内で染色体外（例えば、プラスミド上、ウイルスベクター上）にある。幾つかの実施形態において、上記ポリヌクレオチドはＤＮＡである。幾つかの実施形態において、上記ポリヌクレオチドはＲＮＡである。上記ポリヌクレオチドは、プラスミド又はウイルスベクター（例えば、レンチウイルスベクター）などのベクターに挿入することができる。また、上記ポリヌクレオチドは１つ又は複数の修飾されたヌクレオチド（例えば、１つ又は複数の化学的修飾されたヌクレオチド）を含んでもよい。
幾つかの実施形態において、第１のナノ抗体及び第２のナノ抗体は、配列番号２４～２７、１７６～１７８及び２９２に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列をそれぞれ独立的に含む。例示的には、上記配列同一性は、少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％であってもよい。ある実施形態において、上記配列同一性は、約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。ある実施形態において、上記第１のナノ抗体／第２のナノ抗体、又は両方は何れも、配列番号２４～２７、１７６～１７８及び２９２に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記第１のナノ抗体及び上記第２のナノ抗体は、配列番号２４～２７、１７６～１７８及び２９２に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を有するアミノ酸配列をそれぞれ独立的に含む。幾つかの実施形態において、上記少なくとも１つのアミノ酸置換は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、５０、５５又は６０個のアミノ酸置換である。幾つかの実施形態において、上記少なくとも１つのアミノ酸置換は、約１～６０個のアミノ酸置換、例示的には、約１～５５、１～５０、１～４５、２～４５、２～４０、３～４０、３～３５、４～３５、４～３０、５～３０、５～２５、６～２５、６～２０、７～２０、７～１５、８～１５、８～１４、９～１４、９～１２又は１０～１２個のアミノ酸置換である。ある実施形態において、上記第１のナノ抗体、上記第２のナノ抗体、又は両方は何れも、配列番号２４～２７、１７６～１７８及び２９２に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、少なくとも約１～５０個のアミノ酸置換を有するアミノ酸配列を含む。
特定の実施形態において、上記第１のナノ抗体、上記第２のナノ抗体は、配列番号２４～２７、１７６～１７８及び２９２に示されるアミノ酸配列をそれぞれ独立的に含む。
１．ＣＤ３－結合ＳｃＦｖ
１．ＣＤ３－結合ＳｃＦｖ
幾つかの実施形態において、上記ＣＤ３－結合ＳｃＦｖは、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含む（表２）。
幾つかの実施形態において、上記ＣＤ３－結合ＳｃＦｖは、配列番号１４に示されるアミノ酸配列と少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。例示的には、配列番号１４との上記配列同一性は、少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０～９９％、６５～９９％、６５～９５％、７０～９９％、７０～９８％、７０～９５％、７０～９０％、７５～９８％、７５～９７％、７５～９０％、７５～８５％、８０～９７％、８０～９６％、８０～８５％、８５～９６％、８５～９５％又は９０～９５％である。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ３－結合ＳｃＦｖは、配列番号１４に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記ＣＤ３－結合ＳｃＦｖは、配列番号１４に対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ３－結合ＳｃＦｖは、配列番号１に対して、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０又は９５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ３－結合ＳｃＦｖは、配列番号１４に示されるアミノ酸配列に対して、約１～９５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ３－結合ＳｃＦｖは、配列番号１４に示されるアミノ酸配列に対して、約１～９０、２～９５、２～９０、４～９０、４～８５、６～８５、６～８０、８～８０、８～７５、１０～７５、１０～７０、１５～７０、１５～６５、２０～６５、２０～６０、２５～６０、２５～５０、３０～５０又は３０～４０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ３－結合ＳｃＦｖは、配列番号１４に示されるアミノ酸配列に対して、約１～２５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ３－結合ＳｃＦｖは、配列番号１４に示されるアミノ酸配列に対して、約１～２４、２～２５、２～２４、３～２４、３～２２、４～２２、４～２０、５～２０、５～１８、６～１８、６～１６、７～１６、７～１４、８～１４、８～１２又は１０～１２個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ３－結合ＳｃＦｖは、配列番号１４に示されるアミノ酸配列に対して、最大約９５、９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、６又は５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの保存的置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの高度保存的置換を含む。
２．腫瘍特異抗原（ＴＡＡ）
２．腫瘍特異抗原（ＴＡＡ）
幾つかの実施形態において、上記ＴＡＡは膠芽腫腫瘍抗原である。
幾つかの実施形態において、上記膠芽腫腫瘍抗原はＥＧＦＲである。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は少なくとも１つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体を含む。
幾つかの実施形態において、上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列を含む（表２）。
幾つかの実施形態において、上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。例示的には、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせとの上記配列同一性は、少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０～９９％、６５～９９％、６５～９５％、７０～９９％、７０～９８％、７０～９５％、７０～９０％、７５～９８％、７５～９７％、７５～９０％、７５～８５％、８０～９７％、８０～９６％、８０～８５％、８５～９６％、８５～９５％又は９０～９５％である。幾つかの実施形態において、上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４又は４５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～４５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～４０、２～４５、２～４０、３～４０、３～３５、４～３５、４～３０、５～３０、５～２５、６～２５、６～２０、７～２０、７～１５、８～１５、８～１４、９～１４、９～１２又は１０～１２個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～１２個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～１１、２～１２、２～１１、３～１１、３～１０、４～１０、４～９、５～９、５～８、６～８又は６～７個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、最大約４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、６又は５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの保存的置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの高度保存的置換を含む。
幾つかの実施形態において、上記膠芽腫腫瘍抗原はＥＧＦＲｖＩＩＩである。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は少なくとも１つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体を含む。
幾つかの実施形態において、上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列を含む（表２）。
幾つかの実施形態において、上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。例示的には、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせとの上記配列同一性は、少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０～９９％、６５～９９％、６５～９５％、７０～９９％、７０～９８％、７０～９５％、７０～９０％、７５～９８％、７５～９７％、７５～９０％、７５～８５％、８０～９７％、８０～９６％、８０～８５％、８５～９６％、８５～９５％又は９０～９５％である。幾つかの実施形態において、上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４又は４５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～４５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～４０、２～４５、２～４０、３～４０、３～３５、４～３５、４～３０、５～３０、５～２５、６～２５、６～２０、７～２０、７～１５、８～１５、８～１４、９～１４、９～１２又は１０～１２個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～１２個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～１１、２～１２、２～１１、３～１１、３～１０、４～１０、４～９、５～９、５～８、６～８又は６～７個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、最大約４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、６又は５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの保存的置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの高度保存的置換を含む。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は少なくとも１つのＧＰＣ３－結合ナノ抗体を含む。
幾つかの実施形態において、上記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体は、配列番号２８２～２９１の何れか１つに示されるアミノ酸配列を含む。特定の実施形態において、上記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体は、配列番号２８４、２８６又は２８９に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体は、配列番号２８２～２９１の何れか１つに示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。例示的には、配列番号２８２～２９１の何れか１つに示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせとの上記配列同一性は、少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０～９９％、６５～９９％、６５～９５％、７０～９９％、７０～９８％、７０～９５％、７０～９０％、７５～９８％、７５～９７％、７５～９０％、７５～８５％、８０～９７％、８０～９６％、８０～８５％、８５～９６％、８５～９５％又は９０～９５％である。幾つかの実施形態において、上記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体は、配列番号２８２～２９１の何れか１つに示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体は、配列番号２８２～２９１の何れか１つに示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体は、配列番号２８２～２９１の何れか１つに示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４又は４５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体は、配列番号２８２～２９１の何れか１つに示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～４５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体は、配列番号２８２～２９１の何れか１つに示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～４０、２～４５、２～４０、３～４０、３～３５、４～３５、４～３０、５～３０、５～２５、６～２５、６～２０、７～２０、７～１５、８～１５、８～１４、９～１４、９～１２又は１０～１２個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体は、配列番号２８２～２９１の何れか１つに示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～１２個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体は、配列番号２８２～２９１の何れか１つに示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～１１、２～１２、２～１１、３～１１、３～１０、４～１０、４～９、５～９、５～８、６～８又は６～７個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体は、配列番号２８２～２９１の何れか１つに示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、最大約４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、６又は５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの保存的置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの高度保存的置換を含む。
３．リンカー
３．リンカー
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、少なくとも１つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体又はＥＧＦＲ－結合ｓｃＦｖを含み、それはリンカー配列を介してＣＤ３－結合ｓｃＦｖに連結される。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、少なくとも１つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体又はＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ｓｃＦｖを含み、それはリンカー配列を介してＣＤ３－結合ｓｃＦｖに連結される。幾つかの実施形態において、上記リンカー配列はＧＧＧＧＳ（配列番号１８）を含む（表２）。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、少なくとも１つのＧＰＣ３－結合ナノ抗体又はＧＰＣ３－結合ｓｃＦｖを含み、それはリンカー配列を介してＣＤ３－結合ｓｃＦｖに連結される。
４．シグナルペプチド
４．シグナルペプチド
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）はシグナルペプチドを含む。幾つかの実施形態において、上記シグナルペプチドは、配列番号１９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む（表２）。
幾つかの実施形態において、上記シグナルペプチドは、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、示されるシグナルペプチドは、配列番号１９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記シグナルペプチドは、配列番号１９に示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも１つのアミノ酸置換（例えば、１、２又は３個のアミノ酸置換）を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの保存的置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの高度保存的置換を含む。
５．ペプチドタグ
５．ペプチドタグ
幾つかの実施形態において、上記ペプチドタグは、ポリヒスチジン配列、例えば、６×Ｈｉｓ（配列番号２０）を含む（表２）。
６．構造
６．構造
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）はＥＧＦＲ－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記シグナルペプチドは上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体のＮ末端に位置し、上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は上記リンカーのＮ末端に位置し、上記リンカーは上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置する（図６、上の図）。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）はＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記シグナルペプチドは上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体のＮ末端に位置し、上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は上記リンカーのＮ末端に位置し、上記リンカーは上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置する（図６、上の図）。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）はＧＰＣ３－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記シグナルペプチドは上記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体のＮ末端に位置し、上記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体は上記リンカーのＮ末端に位置し、上記リンカーは上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置する（図６、上の図）。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２１、２２、２３（表２）、１０９、１１０又は１１１に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２１、２２、２３、１０９、１１０又は１１１に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。例示的には、配列番号２１、２２、２３、１０９、１１０又は１１１に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせとの上記配列同一性は、少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０～９９％、６５～９９％、６５～９５％、７０～９９％、７０～９８％、７０～９５％、７０～９０％、７５～９８％、７５～９７％、７５～９０％、７５～８５％、８０～９７％、８０～９６％、８０～８５％、８５～９６％、８５～９５％又は９０～９５％である。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２１、２２、２３、１０９、１１０又は１１１に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２１、２２、２３、１０９、１１０又は１１１、又はその組み合わせに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２１、２２、２３、１０９、１１０又は１１１、又はその組み合わせに対して、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０又は１６０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２１、２２、２３、１０９、１１０又は１１１、又はその組み合わせに対して、約１～１６０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２１、２２、２３、１０９、１１０又は１１１、又はその組み合わせに対して、約１～１４０、２～１６０、２～１４０、４～１４０、４～１２０、６～１２０、６～１００、８～１００、８～８０、１０～８０、１０～６０、１５～６０、１５～５０、２０～５０、２０～４０、２５～４０又は２５～３０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２１、２２、２３、１０９、１１０又は１１１、又はその組み合わせに対して、約１～６０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２１、２２、２３、１０９、１１０又は１１１、又はその組み合わせに対して、約１～２５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２１、２２、２３、１０９、１１０又は１１１、又はその組み合わせに対して、約１～２４、２～２５、２～２４、３～２４、３～２２、４～２２、４～２０、５～２０、５～１８、６～１８、６～１６、７～１６、７～１４、８～１４、８～１２又は１０～１２個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２１、２２、２３、１０９、１１０又は１１１、又はその組み合わせに対して、最大約１６０、１５０、１４０、１３０、１２０、１１０、１００、９５、９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、６又は５個のアミノ酸置換。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの保存的置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの高度保存的置換を含む。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）はＥＧＦＲ－結合ｓｃＦｖを含む。幾つかの実施形態において、上記シグナルペプチドは上記ＥＧＦＲ－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＥＧＦＲ－結合ｓｃＦｖは上記リンカーのＮ末端に位置し、上記リンカーは上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置する（図６、上の図）。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は少なくとも２つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は２つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記シグナルペプチドは第１のＥＧＦＲ－結合ナノ抗体のＮ末端に位置し、上記第１のＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は第１のリンカーのＮ末端に位置し、上記第１のリンカーは第２のＥＧＦＲ－結合ナノ抗体のＮ末端に位置し、上記第２のＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は第２のリンカーのＮ末端に位置し、上記第２のリンカーはＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置する（図６、中央の図）。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）はＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ｓｃＦｖを含む。幾つかの実施形態において、上記シグナルペプチドは上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ｓｃＦｖは上記リンカーのＮ末端に位置し、上記リンカーは上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置する（図６、上の図）。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は少なくとも２つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は２つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記シグナルペプチドは第１のＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体のＮ末端に位置し、上記第１のＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は第１のリンカーのＮ末端に位置し、上記第１のリンカーは第２のＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体のＮ末端に位置し、上記第２のＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は第２のリンカーのＮ末端に位置し、上記第２のリンカーはＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置する（図６、中央の図）。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、少なくとも１つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体及び少なくとも１つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記シグナルペプチドは上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体のＮ末端に位置し、上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は第１のリンカーのＮ末端に位置し、上記第１のリンカーは上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体のＮ末端に位置し、上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は第２のリンカーのＮ末端に位置し、上記第２のリンカー位于ＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置する。幾つかの実施形態において、上記シグナルペプチドは上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体のＮ末端に位置し、上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は第１のリンカーのＮ末端に位置し、上記第１のリンカーは上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体のＮ末端に位置し、上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は第２のリンカーのＮ末端に位置し、上記第２のリンカー位于ＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置する。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）はＧＰＣ３－結合ｓｃＦｖを含む。幾つかの実施形態において、上記シグナルペプチドは上記ＧＰＣ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＧＰＣ３－結合ｓｃＦｖは上記リンカーのＮ末端に位置し、上記リンカーは上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置する（図６、上の図）。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は少なくとも２つのＧＰＣ３－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は２つのＧＰＣ３－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記シグナルペプチドは第１のＧＰＣ３－結合ナノ抗体のＮ末端に位置し、上記第１のＧＰＣ３－結合ナノ抗体は第１のリンカーのＮ末端に位置し、上記第１のリンカーは第２のＧＰＣ３－結合ナノ抗体のＮ末端に位置し、上記第２のＧＰＣ３－結合ナノ抗体は第２のリンカーのＮ末端に位置し、上記第２のリンカーはＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置する（図６、中央の図）。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２４、２５（表２）、１７６又は１７７に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２４、２５、１７６又は１７７、又はその組み合わせと少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。例示的には、配列番号２４、２５、１７６又は１７７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせとの上記配列同一性は、少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０～９９％、６５～９９％、６５～９５％、７０～９９％、７０～９８％、７０～９５％、７０～９０％、７５～９８％、７５～９７％、７５～９０％、７５～８５％、８０～９７％、８０～９６％、８０～８５％、８５～９６％、８５～９５％又は９０～９５％である。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２４、２５、１７６又は１７７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２４、２５、１７６又は１７７、又はその組み合わせに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２４、２５、１７６又は１７７、又はその組み合わせに対して、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００又は２１０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２４、２５、１７６又は１７７、又はその組み合わせに対して、約１～２１０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２４、２５、１７６又は１７７、又はその組み合わせに対して、約１～２００、２～２１０、２～２００、４～２００、４～１８０、６～１８０、６～１６０、８～１６０、８～１４０、１０～１４０、１０～１２０、１５～１２０、１５～１００、２０～１００、２０～８０、２５～８０、２５～６０、３０～６０又は３０～４０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２４、２５、１７６又は１７７、又はその組み合わせに対して、約１～６０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２４、２５、１７６又は１７７、又はその組み合わせに対して、約１～２５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２４、２５、１７６又は１７７、又はその組み合わせに対して、約１～２４、２～２５、２～２４、３～２４、３～２２、４～２２、４～２０、５～２０、５～１８、６～１８、６～１６、７～１６、７～１４、８～１４、８～１２又は１０～１２個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２４、２５、１７６又は１７７、又はその組み合わせに対して、最大約１６０、１５０、１４０、１３０、１２０、１１０、１００、９５、９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、６又は５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの保存的置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの高度保存的置換を含む。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は少なくとも２つのＥＧＦＲ－結合ｓｃＦｖを含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は２つのＥＧＦＲ－結合ｓｃＦｖを含む。幾つかの実施形態において、上記シグナルペプチドは第１のＥＧＦＲ－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記第１のＥＧＦＲ－結合ｓｃＦｖは第１のリンカーのＮ末端に位置し、上記第１のリンカーは第２のＥＧＦＲ－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記第２のＥＧＦＲ－結合ｓｃＦｖは第２のリンカーのＮ末端に位置し、上記第２のリンカーはＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置する。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は少なくとも２つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ｓｃＦｖを含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は２つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ｓｃＦｖを含む。幾つかの実施形態において、上記シグナルペプチドは第１のＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記第１のＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ｓｃＦｖは第１のリンカーのＮ末端に位置し、上記第１のリンカーは第２のＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記第２のＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ｓｃＦｖは第２のリンカーのＮ末端に位置し、上記第２のリンカーはＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置する。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、少なくとも１つのＥＧＦＲ－結合ｓｃＦｖ及び少なくとも１つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ｓｃＦｖを含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、１つのＥＧＦＲ－結合ｓｃＦｖ及び１つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ｓｃＦｖを含む。幾つかの実施形態において、上記シグナルペプチドは上記ＥＧＦＲ－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＥＧＦＲ－結合ｓｃＦｖは第１のリンカーのＮ末端に位置し、上記第１のリンカーは上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ｓｃＦｖは第２のリンカーのＮ末端に位置し、上記第２のリンカーはＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置する。幾つかの実施形態において、上記シグナルペプチドは上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ｓｃＦｖは第１のリンカーのＮ末端に位置し、上記第１のリンカーは上記ＥＧＦＲ－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＥＧＦＲ－結合ｓｃＦｖは第２のリンカーのＮ末端に位置し、上記第２のリンカーはＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置する。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は少なくとも２つのＧＰＣ３－結合ｓｃＦｖを含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は２つのＧＰＣ３－結合ｓｃＦｖを含む。幾つかの実施形態において、上記シグナルペプチドは第１のＧＰＣ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記第１のＧＰＣ３－結合ｓｃＦｖは第１のリンカーのＮ末端に位置し、上記第１のリンカーは第２のＧＰＣ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記第２のＧＰＣ３－結合ｓｃＦｖは第２のリンカーのＮ末端に位置し、上記第２のリンカーはＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置する。
幾つかの実施形態において、上記シグナルペプチドは第１のＥＧＦＲ－結合ナノ抗体のＮ末端に位置し、上記第１のＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は第１のリンカーのＮ末端に位置し、上記第１のリンカーは上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖは第２のリンカーのＮ末端に位置し、上記第２のリンカーは第２のＥＧＦＲ－結合ナノ抗体のＮ末端に位置する（図６、下の図）。
幾つかの実施形態において、上記シグナルペプチドは第１のＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体のＮ末端に位置し、上記第１のＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は第１のリンカーのＮ末端に位置し、上記第１のリンカーは上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖは第２のリンカーのＮ末端に位置し、上記第２のリンカーは第２のＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体のＮ末端に位置する（図６、下の図）。
幾つかの実施形態において、上記シグナルペプチドは第１のＧＰＣ３－結合ナノ抗体のＮ末端に位置し、上記第１のＧＰＣ３－結合ナノ抗体は第１のリンカーのＮ末端に位置し、上記第１のリンカーは上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖは第２のリンカーのＮ末端に位置し、上記第２のリンカーは第２のＧＰＣ３－結合ナノ抗体のＮ末端に位置する。
幾つかの実施形態において、上記シグナルペプチドはＥＧＦＲ－結合ナノ抗体のＮ末端に位置し、上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は第１のリンカーのＮ末端に位置し、上記第１のリンカーは上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖは第２のリンカーのＮ末端に位置し、上記第２のリンカーはＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体のＮ末端に位置する。
幾つかの実施形態において、上記シグナルペプチドはＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体のＮ末端に位置し、上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は第１のリンカーのＮ末端に位置し、上記第１のリンカーは上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖは第２のリンカーのＮ末端に位置し、上記第２のリンカーはＥＧＦＲ－結合ナノ抗体のＮ末端に位置する。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２６、２７（表２）、又は１７８又は２９２に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２６、２７、１７８又は２９２、又はその組み合わせと少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。例示的には、配列番号２６、２７、１７８又は２９２に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせとの上記配列同一性は、少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０～９９％、６５～９９％、６５～９５％、７０～９９％、７０～９８％、７０～９５％、７０～９０％、７５～９８％、７５～９７％、７５～９０％、７５～８５％、８０～９７％、８０～９６％、８０～８５％、８５～９６％、８５～９５％又は９０～９５％である。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２６、２７、１７８又は２９２に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２６、２７、１７８又は２９２、又はその組み合わせに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２６、２７、１７８又は２９２、又はその組み合わせに対して、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、１６０、１７０、１８０、１９０、２００又は２１０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２６、２７、１７８又は２９２、又はその組み合わせに対して、約１～２１０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２６、２７、１７８又は２９２、又はその組み合わせに対して、約１～２００、２～２１０、２～２００、４～２００、４～１８０、６～１８０、６～１６０、８～１６０、８～１４０、１０～１４０、１０～１２０、１５～１２０、１５～１００、２０～１００、２０～８０、２５～８０、２５～６０、３０～６０又は３０～４０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２６、２７、１７８又は２９２、又はその組み合わせに対して、約１～６０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２６、２７、１７８又は２９２、又はその組み合わせに対して、約１～２５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２６、２７、１７８又は２９２、又はその組み合わせに対して、約１～２４、２～２５、２～２４、３～２４、３～２２、４～２２、４～２０、５～２０、５～１８、６～１８、６～１６、７～１６、７～１４、８～１４、８～１２又は１０～１２個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２６、２７、１７８又は２９２、又はその組み合わせに対して、最大約１６０、１５０、１４０、１３０、１２０、１１０、１００、９５、９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、６又は５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの保存的置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの高度保存的置換を含む。
幾つかの実施形態において、上記シグナルペプチドは第１のＥＧＦＲ－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記第１のＥＧＦＲ－結合ｓｃＦｖは第１のリンカーのＮ末端に位置し、上記第１のリンカーは上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖは第２のリンカーのＮ末端に位置し、上記第２のリンカーは第２のＥＧＦＲ－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置する。
幾つかの実施形態において、上記シグナルペプチドは第１のＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記第１のＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ｓｃＦｖは第１のリンカーのＮ末端に位置し、上記第１のリンカーは上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖは第２のリンカーのＮ末端に位置し、上記第２のリンカーは第２のＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置する。
幾つかの実施形態において、上記シグナルペプチドは第１のＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記第１のＧＰＣ３－結合ｓｃＦｖは第１のリンカーのＮ末端に位置し、上記第１のリンカーは上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖは第２のリンカーのＮ末端に位置し、上記第２のリンカーは第２のＧＰＣ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置する。
幾つかの実施形態において、上記シグナルペプチドは第１のＥＧＦＲ－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記第１のＥＧＦＲ－結合ｓｃＦｖは第１のリンカーのＮ末端に位置し、上記第１のリンカーは上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖは第２のリンカーのＮ末端に位置し、上記第２のリンカーは第２のＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置する。
幾つかの実施形態において、上記シグナルペプチドは第１のＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記第１のＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ｓｃＦｖは第１のリンカーのＮ末端に位置し、上記第１のリンカーは上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖは第２のリンカーのＮ末端に位置し、上記第２のリンカーは第２のＥＧＦＲ－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置する。
Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）
他の態様において、本発明は、Ｔ細胞、第１のＴＡＡエピトープ及び第２のＴＡＡエピトープに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）を提供する。ここで、上記Ｔ細胞エンゲージャーは、ＣＡＲ Ｔ－細胞によってｉｎ ｓｉｔｕで生成され、ＣＡＲ Ｔ－細胞がＣＡＲと第１のＴＡＡとの相互作用によって分泌又は放出されるか、或いはその両方である。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、本明細書に記載の何れか１つのＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）として定義される。
他の態様において、本発明は、Ｔ細胞、第１のＴＡＡエピトープ及び第２のＴＡＡエピトープに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）を提供する。ここで、上記Ｔ細胞エンゲージャーは、ＣＡＲ Ｔ－細胞によってｉｎ ｓｉｔｕで生成され、ＣＡＲ Ｔ－細胞がＣＡＲと第１のＴＡＡとの相互作用によって分泌又は放出されるか、或いはその両方である。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、本明細書に記載の何れか１つのＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）として定義される。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、上記ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチドにコードされる。幾つかの実施形態において、上記ＣＡＲ Ｔ－細胞は、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＡＲ Ｔ－細胞は、上記ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む。ある実施形態において、上記ＣＡＲ Ｔ－細胞は、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列及び上記ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む。ある実施形態において、上記ＣＡＲ Ｔ－細胞は、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第１のポリヌクレオチド及び上記ＣＡＲをコードする配列を含む第２のポリヌクレオチドを含む。
幾つかの実施形態において、上記ＣＡＲは第１のＴＡＡに結合することができる。ある実施形態において、上記第１のＴＡＡは、ＣＥＡ、ＧＰＣ３、ＭＵＣ－１、ＥｐＣＡＭ、ＨＥＲ受容体、ＰＥＭ、Ｃａｌｕｄｉ ６、Ｃｌｕａｄｉ－１８．２、メソテリン、Ａ３３、Ｇ２５０、炭水化合物抗原Ｌｅｙ、Ｌｅｘ、Ｌｅｂ、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ－７２、ＳＴＥＡＰ１、ＣＤ１６６、ＣＤ２４、ＣＤ４４、Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ、ＳＰＡＲＣ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＭＵＣ１、ＬＭＰ２、ｉｄｉｏｔｙｐｅ、ＨＰＶ Ｅ６＆Ｅ７、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ、ＭＡＧＥ Ａ３、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＧＤ２、ＰＳＭＡ、ＰＣＳＡ、ＰＳＡ、ＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ５、ＣＤ７０又はＢＣＭＡである。特定の実施形態において、上記第１のＴＡＡは、ＨＥＲ２、ＧＰＣ３、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ又はＧＰＣ３である。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＶＬＡ－１、ＣＤ８、ＣＤ４、ＣＣＲ６、ＣＸＣＲ５、ＣＤ２５、ＣＤ３１、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ１９７、ＣＤ１２７、ＣＤ３８、ＣＤ２７、ＣＤ１９６、ＣＤ２７７、又はＣＸＣＲ３に結合することができる。ある実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ３１、又はＣＤ２７７に結合することができる。特定の実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）はＣＤ３に結合することができる。
幾つかの実施形態において、上記第１のＴＡＡエピトープ及び上記第２のＴＡＡエピトープは第２のＴＡＡにある。幾つかの実施形態において、上記第１のＴＡＡエピトープ及び上記第２のＴＡＡエピトープは２つの第２のＴＡＡにある。
ある実施形態において、上記第２のＴＡＡは、ＣＥＡ、ＧＰＣ３、ＭＵＣ－１、ＥｐＣＡＭ、ＨＥＲ受容体、ＰＥＭ、Ｃａｌｕｄｉ ６、Ｃｌｕａｄｉ－１８．２、メソテリン、Ａ３３、Ｇ２５０、炭水化合物抗原Ｌｅｙ、Ｌｅｘ、Ｌｅｂ、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ－７２、ＳＴＥＡＰ１、ＣＤ１６６、ＣＤ２４、ＣＤ４４、Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ、ＳＰＡＲＣ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＭＵＣ１、ＬＭＰ２、ｉｄｉｏｔｙｐｅ、ＨＰＶ Ｅ６＆Ｅ７、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ、ＭＡＧＥ Ａ３、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＧＤ２、ＰＳＭＡ、ＰＣＳＡ、ＰＳＡ、ＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ５、ＣＤ７０又はＢＣＭＡである。特定の実施形態において、上記第２のＴＡＡは、ＨＥＲ２、ＧＰＣ３、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ又はＧＰＣ３である。ある実施形態において、上記第２のＴＡＡは、それぞれ独立的にＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ又はＧＰＣ３である。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ナノ抗体、又はその組み合わせを含む。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、ＣＡＲ Ｔ細胞によってｉｎ ｓｉｔｕで生成される。ある実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、ＣＡＲ Ｔ細胞の付近で製造される。ある実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、ＣＡＲ Ｔ細胞及び腫瘍細胞の付近で産生される。ある実施形態において、上記ＣＡＲ Ｔ細胞はＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）を分泌する。
ある実施形態において、上記ＣＡＲ Ｔ細胞は活性化される。ある実施形態において、上記ＣＡＲ Ｔ細胞は、上記ＣＡＲ Ｔ細胞が位置する環境中の分子によって活性化される。ある実施形態において、上記ＣＡＲ Ｔ細胞は、上記ＣＡＲ Ｔ細胞が位置する腫瘍微環境中の分子によって活性化される。ある実施形態において、上記ＣＡＲ Ｔ細胞は抗原によって活性化される。特定の実施形態において、上記ＣＡＲ Ｔ細胞はＴＡＡによって活性化される。特定の実施形態において、上記ＣＡＲ Ｔ細胞は、上記ＣＡＲ Ｔ細胞の表面受容体とＴＡＡの間の相互作用によって活性化される。例えば、上記ＣＡＲ Ｔ細胞の表面受容体はＣＡＲであってもよい。
幾つかの実施形態において、上記ＣＡＲ Ｔ細胞は免疫シナプスによって活性化される。ある実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、Ｔ細胞の活性化後にＣＡＲとＴＡＡとの相互作用により、ＣＡＲ Ｔ細胞によって免疫シナプスを介して産生される。
Ｃ．二重ＣＡＲとＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド
Ｃ．二重ＣＡＲとＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードするポリヌクレオチド
他の態様において、本発明は、本明細書に記載の何れか１つの二重ＣＡＲと本明細書に記載の何れか１つのＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含むポリヌクレオチドを開示する。
幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲは、ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２を標的とし、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）はＣＤ３及びＴＡＡ（例えば、膠芽腫腫瘍抗原）に結合することができる。
幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは、本明細書に記載の何れか１つのＩＬ１３変異タンパク質を含み、本明細書に記載の何れか１つのリンカー配列を介して本明細書に記載の何れか１つのＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖｓに連結される。
幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは、本明細書に記載の何れか１つのＣＤ８αシグナルペプチド、本明細書に記載の何れか１つのＣＤ８αヒンジ、本明細書に記載の何れか１つのＣＤ２８膜貫通ドメイン、本明細書に記載の何れか１つの４－１ＢＢ共刺激ドメイン、本明細書に記載の何れか１つのＣＤ３ζドメイン、又はその組み合わせを更に含む。幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは、本明細書に記載の何れか１つのＣＤ８αシグナルペプチド、本明細書に記載の何れか１つのＣＤ８αヒンジ、本明細書に記載の何れか１つのＣＤ２８膜貫通ドメイン、本明細書に記載の何れか１つの４－１ＢＢ共刺激ドメイン及び本明細書に記載の何れか１つのＣＤ３ζドメインを更に含む。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、本明細書に記載の何れか１つのＣＤ３－結合ｓｃＦｖｓを含む。
幾つかの実施形態において、上記ＴＡＡ（例えば、膠芽腫腫瘍抗原）はＥＧＦＲである。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は本明細書に記載の少なくとも１つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は本明細書に記載の少なくとも２つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は本明細書に記載の何れか１つのａｎｔｉ－ＥＧＦＲ抗体を含む。
幾つかの実施形態において、上記ＴＡＡ（例えば、膠芽腫腫瘍抗原）はＥＧＦＲｖＩＩＩである。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は本明細書に記載の少なくとも１つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は本明細書に記載の少なくとも２つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は本明細書に記載の何れか１つのａｎｔｉ－ＥＧＦＲ抗体を含む。
幾つかの実施形態において、上記ＴＡＡ（例えば、膠芽腫腫瘍抗原）はＧＰＣ３である。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は本明細書に記載の少なくとも１つのＧＰＣ３－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は本明細書に記載の少なくとも２つのＧＰＣ３－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は本明細書に記載の何れか１つのａｎｔｉ－ＧＰＣ３抗体を含む。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、本明細書に記載の何れか１つのリンカー、本明細書に記載の何れか１つのシグナルペプチド、本明細書に記載の何れか１つのペプチドタグ、又はその組み合わせを更に含む。
１．自己切断ペプチド
１．自己切断ペプチド
幾つかの実施形態において、二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は自己切断ペプチドを更に含む。幾つかの実施形態において、上記自己切断ペプチドは自己切断Ｔ２Ａペプチドである。
幾つかの実施形態において、上記自己切断Ｔ２Ａペプチドは、配列番号２８に示されるアミノ酸配列を含む（表３）。幾つかの実施形態において、上記自己切断Ｔ２Ａペプチドは、配列番号２８に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記シグナルペプチドは、配列番号２８に示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも１つのアミノ酸置換（例えば、１、２又は３個のアミノ酸置換）を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの保存的置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの高度保存的置換を含む。
２．構造
２．構造
ａ．ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ｓｃＦｖ
幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質はａｎｔｉ－ＥＧＦＲ抗体又は抗原結合断片を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ８αシグナルペプチドはＩＬ１３変異タンパク質のＮ末端に位置し、上記ＩＬ１３変異タンパク質は（ＧＧＧＧＳ）３リンカーのＮ末端に位置し、上記（ＧＧＧＧＳ）３リンカーはＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは上記ＣＤ８αヒンジのＮ末端に位置し、上記ＣＤ８αヒンジは上記ＣＤ２８膜貫通ドメインのＮ末端に位置し、上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは上記４－１ＢＢ共刺激ドメインのＮ末端に位置し、上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは上記ＣＤ３ζドメインのＮ末端に位置し、上記ＣＤ３ζドメインは上記自己切断Ｔ２ＡペプチドのＮ末端に位置し、上記自己切断Ｔ２Ａペプチドは上記シグナルペプチドのＮ末端に位置し、上記シグナルペプチドは上記ａｎｔｉ－ＥＧＦＲ抗体のＮ末端に位置し、上記ａｎｔｉ－ＥＧＦＲ抗体は上記リンカーのＮ末端に位置し、上記リンカーは上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置する（図１０、上の図）。
幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質はａｎｔｉ－ＥＧＦＲ抗体又は抗原結合断片を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ８αシグナルペプチドはＩＬ１３変異タンパク質のＮ末端に位置し、上記ＩＬ１３変異タンパク質は（ＧＧＧＧＳ）３リンカーのＮ末端に位置し、上記（ＧＧＧＧＳ）３リンカーはＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは上記ＣＤ８αヒンジのＮ末端に位置し、上記ＣＤ８αヒンジは上記ＣＤ２８膜貫通ドメインのＮ末端に位置し、上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは上記４－１ＢＢ共刺激ドメインのＮ末端に位置し、上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは上記ＣＤ３ζドメインのＮ末端に位置し、上記ＣＤ３ζドメインは上記自己切断Ｔ２ＡペプチドのＮ末端に位置し、上記自己切断Ｔ２Ａペプチドは上記シグナルペプチドのＮ末端に位置し、上記シグナルペプチドは上記ａｎｔｉ－ＥＧＦＲ抗体のＮ末端に位置し、上記ａｎｔｉ－ＥＧＦＲ抗体は上記リンカーのＮ末端に位置し、上記リンカーは上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置する（図１０、上の図）。
幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質はａｎｔｉ－ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体又は抗原結合断片を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ８αシグナルペプチドはＩＬ１３変異タンパク質のＮ末端に位置し、上記ＩＬ１３変異タンパク質は（ＧＧＧＧＳ）３リンカーのＮ末端に位置し、上記（ＧＧＧＧＳ）３リンカーはＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは上記ＣＤ８αヒンジのＮ末端に位置し、上記ＣＤ８αヒンジは上記ＣＤ２８膜貫通ドメインのＮ末端に位置し、上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは上記４－１ＢＢ共刺激ドメインのＮ末端に位置し、上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは上記ＣＤ３ζドメインのＮ末端に位置し、上記ＣＤ３ζドメインは上記自己切断Ｔ２ＡペプチドのＮ末端に位置し、上記自己切断Ｔ２Ａペプチドは上記シグナルペプチドのＮ末端に位置し、上記シグナルペプチドは上記ａｎｔｉ－ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体のＮ末端に位置し、上記ａｎｔｉ－ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体は上記リンカーのＮ末端に位置し、上記リンカーは上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置する（図１０、上の図）。
ＧＰＣ３－結合ｓｃＦｖ
幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は抗ＧＰＣ３抗体又は抗原結合断片を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ８αシグナルペプチドはＩＬ１３変異タンパク質のＮ末端に位置し、上記ＩＬ１３変異タンパク質は（ＧＧＧＧＳ）３リンカーのＮ末端に位置し、上記（ＧＧＧＧＳ）３リンカーはＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは上記ＣＤ８αヒンジのＮ末端に位置し、上記ＣＤ８αヒンジは上記ＣＤ２８膜貫通ドメインのＮ末端に位置し、上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは上記４－１ＢＢ共刺激ドメインのＮ末端に位置し、上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは上記ＣＤ３ζドメインのＮ末端に位置し、上記ＣＤ３ζドメインは上記自己切断Ｔ２ＡペプチドのＮ末端に位置し、上記自己切断Ｔ２Ａペプチドは上記シグナルペプチドのＮ末端に位置し、上記シグナルペプチドは上記抗ＧＰＣ３抗体のＮ末端に位置し、上記抗ＧＰＣ３抗体は上記リンカーのＮ末端に位置し、上記リンカーは上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置する。
幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は抗ＧＰＣ３抗体又は抗原結合断片を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ８αシグナルペプチドはＩＬ１３変異タンパク質のＮ末端に位置し、上記ＩＬ１３変異タンパク質は（ＧＧＧＧＳ）３リンカーのＮ末端に位置し、上記（ＧＧＧＧＳ）３リンカーはＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは上記ＣＤ８αヒンジのＮ末端に位置し、上記ＣＤ８αヒンジは上記ＣＤ２８膜貫通ドメインのＮ末端に位置し、上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは上記４－１ＢＢ共刺激ドメインのＮ末端に位置し、上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは上記ＣＤ３ζドメインのＮ末端に位置し、上記ＣＤ３ζドメインは上記自己切断Ｔ２ＡペプチドのＮ末端に位置し、上記自己切断Ｔ２Ａペプチドは上記シグナルペプチドのＮ末端に位置し、上記シグナルペプチドは上記抗ＧＰＣ３抗体のＮ末端に位置し、上記抗ＧＰＣ３抗体は上記リンカーのＮ末端に位置し、上記リンカーは上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置する。
幾つかの実施形態において、上記ａｎｔｉ－ＥＧＦＲ抗体はセツキシマブである。幾つかの実施形態において、上記抗原結合断片はセツキシマブのｓｃＦｖである。
幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３１又は３５に示されるアミノ酸配列を含む（表３）。
幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３１又は３５、又はその組み合わせと少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。例示的には、配列番号３１又は３５に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせとの上記配列同一性は、少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０～９９％、６５～９９％、６５～９５％、７０～９９％、７０～９８％、７０～９５％、７０～９０％、７５～９８％、７５～９７％、７５～９０％、７５～８５％、８０～９７％、８０～９６％、８０～８５％、８５～９６％、８５～９５％又は９０～９５％である。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３１又は３５に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３１又は３５、又はその組み合わせに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３１又は３５、又はその組み合わせに対して、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０又は４００個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３１又は３５、又はその組み合わせに対して、約１～４００個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３１又は３５、又はその組み合わせに対して、約１～４００、２～３５０、２～３００、４～３００、４～２５０、６～２５０、６～２００、８～２００、８～１５０、１０～１５０、１０～１００、１５～１００、１５～８０、２０～８０、２０～６０、２５～６０又は２５～４０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３１又は３５、又はその組み合わせに対して、約１～１２０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３１又は３５、又はその組み合わせに対して、約１～１１０、２～１１０、２～１００、４～１００、４～９０、６～９０、６～８０、８～８０、８～７０、１０～７０、１０～６０、１５～６０、１５～５０、２０～５０、２０～４０、２５～４０又は２５～３０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３１又は３５、又はその組み合わせに対して、約１～６０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３１又は３５、又はその組み合わせに対して、約１～２５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３１又は３５、又はその組み合わせに対して、約１～２４、２～２５、２～２４、３～２４、３～２２、４～２２、４～２０、５～２０、５～１８、６～１８、６～１６、７～１６、７～１４、８～１４、８～１２又は１０～１２個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３１又は３５、又はその組み合わせに対して、最大約４００、３５０、３００、２５０、２００、１５０、１００、９５、９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、６又は５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの保存的置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの高度保存的置換を含む。
ｂ．ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体
ｂ．ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体
幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質はＥＧＦＲ－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ８αシグナルペプチドはＩＬ１３変異タンパク質のＮ末端に位置し、上記ＩＬ１３変異タンパク質は（ＧＧＧＧＳ）３リンカーのＮ末端に位置し、上記（ＧＧＧＧＳ）３リンカーはＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは上記ＣＤ８αヒンジのＮ末端に位置し、上記ＣＤ８αヒンジは上記ＣＤ２８膜貫通ドメインのＮ末端に位置し、上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは上記４－１ＢＢ共刺激ドメインのＮ末端に位置し、上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは上記ＣＤ３ζドメインのＮ末端に位置し、上記ＣＤ３ζドメインは上記自己切断Ｔ２ＡペプチドのＮ末端に位置し、上記自己切断Ｔ２Ａペプチドは上記シグナルペプチドのＮ末端に位置し、上記シグナルペプチドは上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体のＮ末端に位置し、上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は上記リンカーのＮ末端に位置し、上記リンカーは上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置する（図１０、上の図）。
幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質はＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ８αシグナルペプチドはＩＬ１３変異タンパク質のＮ末端に位置し、上記ＩＬ１３変異タンパク質は（ＧＧＧＧＳ）３リンカーのＮ末端に位置し、上記（ＧＧＧＧＳ）３リンカーはＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは上記ＣＤ８αヒンジのＮ末端に位置し、上記ＣＤ８αヒンジは上記ＣＤ２８膜貫通ドメインのＮ末端に位置し、上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは上記４－１ＢＢ共刺激ドメインのＮ末端に位置し、上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは上記ＣＤ３ζドメインのＮ末端に位置し、上記ＣＤ３ζドメインは上記自己切断Ｔ２ＡペプチドのＮ末端に位置し、上記自己切断Ｔ２Ａペプチドは上記シグナルペプチドのＮ末端に位置し、上記シグナルペプチドは上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体のＮ末端に位置し、上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は上記リンカーのＮ末端に位置し、上記リンカーは上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置する（図１０、上の図）。
幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３２又は３６に示されるアミノ酸配列を含む（表３）。
幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３２又は３６、又はその組み合わせと少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。例示的には、配列番号３２又は３６に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせとの上記配列同一性は、少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０～９９％、６５～９９％、６５～９５％、７０～９９％、７０～９８％、７０～９５％、７０～９０％、７５～９８％、７５～９７％、７５～９０％、７５～８５％、８０～９７％、８０～９６％、８０～８５％、８５～９６％、８５～９５％又は９０～９５％である。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３２又は３６に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３２又は３６、又はその組み合わせに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３２又は３６、又はその組み合わせに対して、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０又は４００個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３２又は３６、又はその組み合わせに対して、約１～４００個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３２又は３６、又はその組み合わせに対して、約１～４００、２～３５０、２～３００、４～３００、４～２５０、６～２５０、６～２００、８～２００、８～１５０、１０～１５０、１０～１００、１５～１００、１５～８０、２０～８０、２０～６０、２５～６０又は２５～４０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３２又は３６、又はその組み合わせに対して、約１～１２０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３２又は３６、又はその組み合わせに対して、約１～１１０、２～１１０、２～１００、４～１００、４～９０、６～９０、６～８０、８～８０、８～７０、１０～７０、１０～６０、１５～６０、１５～５０、２０～５０、２０～４０、２５～４０又は２５～３０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３２又は３６、又はその組み合わせに対して、約１～６０アミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３２又は３６、又はその組み合わせに対して、約１～２５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３２又は３６、又はその組み合わせに対して、約１～２４、２～２５、２～２４、３～２４、３～２２、４～２２、４～２０、５～２０、５～１８、６～１８、６～１６、７～１６、７～１４、８～１４、８～１２又は１０～１２個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３２又は３６、又はその組み合わせに対して、約４００、３５０、３００、２５０、２００、１５０、１００、９５、９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、６又は５個に多く達するアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの保存的置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの高度保存的置換を含む。
ｃ．２つのＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体
ｃ．２つのＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体
幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は少なくとも２つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は２つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ８αシグナルペプチドはＩＬ１３変異タンパク質のＮ末端に位置し、上記ＩＬ１３変異タンパク質は（ＧＧＧＧＳ）３リンカーのＮ末端に位置し、上記（ＧＧＧＧＳ）３リンカーはＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは上記ＣＤ８αヒンジのＮ末端に位置し、上記ＣＤ８αヒンジは上記ＣＤ２８膜貫通ドメインのＮ末端に位置し、上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは上記４－１ＢＢ共刺激ドメインのＮ末端に位置し、上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは上記ＣＤ３ζドメインのＮ末端に位置し、上記ＣＤ３ζドメインは上記自己切断Ｔ２ＡペプチドのＮ末端に位置し、上記自己切断Ｔ２Ａペプチドは上記シグナルペプチドのＮ末端に位置し、上記シグナルペプチドは第１のＥＧＦＲ－結合ナノ抗体のＮ末端に位置し、上記第１のＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は上記リンカーのＮ末端に位置し、上記リンカーは上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖは上記リンカーのＮ末端に位置し、上記リンカーは第２のＥＧＦＲ－結合ナノ抗体のＮ末端に位置する（図１０、下の図）。
幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は少なくとも２つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は２つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ８αシグナルペプチドはＩＬ１３変異タンパク質のＮ末端に位置し、上記ＩＬ１３変異タンパク質は（ＧＧＧＧＳ）３リンカーのＮ末端に位置し、上記（ＧＧＧＧＳ）３リンカーはＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは上記ＣＤ８αヒンジのＮ末端に位置し、上記ＣＤ８αヒンジは上記ＣＤ２８膜貫通ドメインのＮ末端に位置し、上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは上記４－１ＢＢ共刺激ドメインのＮ末端に位置し、上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは上記ＣＤ３ζドメインのＮ末端に位置し、上記ＣＤ３ζドメインは上記自己切断Ｔ２ＡペプチドのＮ末端に位置し、上記自己切断Ｔ２Ａペプチドは上記シグナルペプチドのＮ末端に位置し、上記シグナルペプチドは第１のＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体のＮ末端に位置し、上記第１のＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は上記リンカーのＮ末端に位置し、上記リンカーは上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖは上記リンカーのＮ末端に位置し、上記リンカーは第２のＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体のＮ末端に位置する（図１０、下の図）。
幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、少なくとも１つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体及び少なくとも１つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、１つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体及び１つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体。
幾つかの実施形態において、上記ＣＤ８αシグナルペプチドはＩＬ１３変異タンパク質のＮ末端に位置し、上記ＩＬ１３変異タンパク質は（ＧＧＧＧＳ）３リンカーのＮ末端に位置し、上記（ＧＧＧＧＳ）３リンカーはＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは上記ＣＤ８αヒンジのＮ末端に位置し、上記ＣＤ８αヒンジは上記ＣＤ２８膜貫通ドメインのＮ末端に位置し、上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは上記４－１ＢＢ共刺激ドメインのＮ末端に位置し、上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは上記ＣＤ３ζドメインのＮ末端に位置し、上記ＣＤ３ζドメインは上記自己切断Ｔ２ＡペプチドのＮ末端に位置し、上記自己切断Ｔ２Ａペプチドは上記シグナルペプチドのＮ末端に位置し、上記シグナルペプチドは上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体のＮ末端に位置し、上記第１のＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は上記リンカーのＮ末端に位置し、上記リンカーは上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖは上記リンカーのＮ末端に位置し、上記リンカーは上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体のＮ末端に位置する。
幾つかの実施形態において、上記ＣＤ８αシグナルペプチドはＩＬ１３変異タンパク質のＮ末端に位置し、上記ＩＬ１３変異タンパク質は（ＧＧＧＧＳ）３リンカーのＮ末端に位置し、上記（ＧＧＧＧＳ）３リンカーはＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは上記ＣＤ８αヒンジのＮ末端に位置し、上記ＣＤ８αヒンジは上記ＣＤ２８膜貫通ドメインのＮ末端に位置し、上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは上記４－１ＢＢ共刺激ドメインのＮ末端に位置し、上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは上記ＣＤ３ζドメインのＮ末端に位置し、上記ＣＤ３ζドメインは上記自己切断Ｔ２ＡペプチドのＮ末端に位置し、上記自己切断Ｔ２Ａペプチドは上記シグナルペプチドのＮ末端に位置し、上記シグナルペプチドは上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体のＮ末端に位置し、上記第１のＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は上記リンカーのＮ末端に位置し、上記リンカーは上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖは上記リンカーのＮ末端に位置し、上記リンカーは上記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体のＮ末端に位置する。
２つのＧＰＣ３－結合ナノ抗体
幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は少なくとも２つのＧＰＣ３－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は２つのＧＰＣ３－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ８αシグナルペプチドはＩＬ１３変異タンパク質のＮ末端に位置し、上記ＩＬ１３変異タンパク質は（ＧＧＧＧＳ）３リンカーのＮ末端に位置し、上記（ＧＧＧＧＳ）３リンカーはＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは上記ＣＤ８αヒンジのＮ末端に位置し、上記ＣＤ８αヒンジは上記ＣＤ２８膜貫通ドメインのＮ末端に位置し、上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは上記４－１ＢＢ共刺激ドメインのＮ末端に位置し、上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは上記ＣＤ３ζドメインのＮ末端に位置し、上記ＣＤ３ζドメインは上記自己切断Ｔ２ＡペプチドのＮ末端に位置し、上記自己切断Ｔ２Ａペプチドは上記シグナルペプチドのＮ末端に位置し、上記シグナルペプチドは第１のＧＰＣ３－結合ナノ抗体のＮ末端に位置し、上記第１のＧＰＣ３－結合ナノ抗体は上記リンカーのＮ末端に位置し、上記リンカーは上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖは上記リンカーのＮ末端に位置し、上記リンカーは第２のＧＰＣ３－結合ナノ抗体のＮ末端に位置する。
幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は少なくとも２つのＧＰＣ３－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は２つのＧＰＣ３－結合ナノ抗体を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ８αシグナルペプチドはＩＬ１３変異タンパク質のＮ末端に位置し、上記ＩＬ１３変異タンパク質は（ＧＧＧＧＳ）３リンカーのＮ末端に位置し、上記（ＧＧＧＧＳ）３リンカーはＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは上記ＣＤ８αヒンジのＮ末端に位置し、上記ＣＤ８αヒンジは上記ＣＤ２８膜貫通ドメインのＮ末端に位置し、上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは上記４－１ＢＢ共刺激ドメインのＮ末端に位置し、上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは上記ＣＤ３ζドメインのＮ末端に位置し、上記ＣＤ３ζドメインは上記自己切断Ｔ２ＡペプチドのＮ末端に位置し、上記自己切断Ｔ２Ａペプチドは上記シグナルペプチドのＮ末端に位置し、上記シグナルペプチドは第１のＧＰＣ３－結合ナノ抗体のＮ末端に位置し、上記第１のＧＰＣ３－結合ナノ抗体は上記リンカーのＮ末端に位置し、上記リンカーは上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖのＮ末端に位置し、上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖは上記リンカーのＮ末端に位置し、上記リンカーは第２のＧＰＣ３－結合ナノ抗体のＮ末端に位置する。
幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３３又は３７に示されるアミノ酸配列を含む（表３）。
幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３３又は３７、又はその組み合わせと少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。例示的には、配列番号３３又は３７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせとの上記配列同一性は、少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０～９９％、６５～９９％、６５～９５％、７０～９９％、７０～９８％、７０～９５％、７０～９０％、７５～９８％、７５～９７％、７５～９０％、７５～８５％、８０～９７％、８０～９６％、８０～８５％、８５～９６％、８５～９５％又は９０～９５％である。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３３又は３７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９８％、又は９９％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３３又は３７、又はその組み合わせに対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３３又は３７、又はその組み合わせに対して、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７、３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００又は４５０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３３又は３７、又はその組み合わせに対して、約１～４５０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３３又は３７、又はその組み合わせに対して、約１～４００、２～４５０、２～４００、４～４００、４～３５０、６～３５０、６～３００、８～３００、８～２５０、１０～２５０、１０～２００、１５～２００、１５～１５０、２０～１５０、２０～１００、２５～８０、２５～６０、３０～６０又は３０～４０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３３又は３７、又はその組み合わせに対して、約１～１２０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３３又は３７、又はその組み合わせに対して、約１～１１０、２～１１０、２～１００、４～１００、４～９０、６～９０、６～８０、８～８０、８～７０、１０～７０、１０～６０、１５～６０、１５～５０、２０～５０、２０～４０、２５～４０又は２５～３０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３３又は３７、又はその組み合わせに対して、約１～６０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３３又は３７、又はその組み合わせに対して、約１～２５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３３又は３７、又はその組み合わせに対して、約１～２４、２～２５、２～２４、３～２４、３～２２、４～２２、４～２０、５～２０、５～１８、６～１８、６～１６、７～１６、７～１４、８～１４、８～１２又は１０～１２個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号３３又は３７、又はその組み合わせに対して、最大約４００、３５０、３００、２５０、２００、１５０、１００、９５、９０、８５、８０、７５、７０、６５、６０、５５、５０、４５、４０、３５、３０、２５、２０、１５、１０、６又は５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの保存的置換を含む。幾つかの実施形態において、上記アミノ酸置換は少なくとも１つの高度保存的置換を含む。
幾つかの実施形態において、上記ポリヌクレオチドは、哺乳動物（例えば、ヒト）細胞に対してコドンを最適化するヌクレオチド配列を含む。
他の態様において、本発明は、アミノ酸配列をコードする配列を含むポリヌクレオチドであって、上記アミノ酸配列は、配列番号２～４、配列番号１１～１３及び５２、配列番号１５～１７、配列番号２１～２３、配列番号４９及び５０、配列番号５３～７０、配列番号７２～８２、配列番号８３～１０４、配列番号１２０～１３７、配列番号１３９～１４９、配列番号１５０～１７１、配列番号１８８～１９１、配列番号２０４及び２０６～２１４、配列番号２１５～２２１、又は配列番号２４２～２９１に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、ポリヌクレオチドを提供する。例示的には、上記配列同一性は、少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０～９９％、６５～９９％、６５～９５％、７０～９９％、７０～９８％、７０～９５％、７０～９０％、７５～９８％、７５～９７％、７５～９０％、７５～８５％、８０～９７％、８０～９６％、８０～８５％、８５～９６％、８５～９５％又は９０～９５％である。幾つかの実施形態において、上記二重ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ融合タンパク質は、配列番号２～４、配列番号１１～１３及び５２、配列番号１５～１７、配列番号２１～２３、配列番号４９及び５０、配列番号５３～７０、配列番号７２～８２、配列番号８３～１０４、配列番号１２０～１３７、配列番号１３９～１４９、配列番号１５０～１７１、配列番号１８８～１９１、配列番号２０４及び２０６～２１４、配列番号２１５～２２１、又は配列番号２４２～２９１に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の同一性を有するアミノ酸配列を含む。特定の実施形態において、上記アミノ酸配列は、配列番号２～４、１１～１３、１５～１７、２１～２３、４９、５０、５２～７０、７２～１０４、１０９～１１１、１２０～１３７、１３９～１７１、１８８～１９１、２０４、２０６～２２１、及び２４２～２９１に示されるアミノ酸配列と同じである。
ベクター
ベクター
他の態様において、本発明は、本明細書に記載の何れか１つ又は複数のポリヌクレオチドを含むベクターを提供する。
幾つかの実施形態において、上記ベクターは非ウイルスベクターである。非ウイルスベクターの非限定的な例は、プラスミド、細菌人工染色体（ＢＡＣ）、コスミド、線状人工染色体を含む。
幾つかの実施形態において、上記ベクターはウイルスベクターである。ウイルスベクターの非限定的な例は、アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）ベクター、アデノウイルスベクター、リングウイルスベクター、コロナウイルスベクター、ヘルペスウイルスベクター、レンチウイルスベクター、ポリオーウイルスベクター、狂犬病ウイルスベクター、組換えシミアンウイルス４０ベクター、レオウイルスベクター、レトロウイルスベクター、ライノウイルスベクター、シンドビスウイルスベクター、ワクシニアウイルスベクター、水疱性口内炎ウイルスベクター、セムリキ森林ウイルスベクター及び黄熱ウイルスベクターを含む。ある実施形態において、ウイルスベクターは、モロニーマウス肉腫ウイルス（ＭｏＭＳＶ）、ハーベイマウス肉腫ウイルス（ＨａＭｕＳＶ）、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭｕＭＴＶ）、テナガザル白血病ウイルス（ＧａＬＶ）、ネコ白血病ウイルス（ＦＬＶ）、フォーミーウイルス、Ｆｒｉｅｎｄマウス白血病ウイルス、マウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）及びラウス肉種ウイルス（ＲＳＶ）及びレンチウイルスである。レンチウイルスの非限定的な例は、ヒト免疫不全ウイルス（例えば、１型ＨＩＶ及び２型ＨＩＶ）、ビスナ・マエディウイルス（ＶＭＶ）、ヤギ関節炎脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）、ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）又はサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）ベクターを含む。
ある実施形態において、上記ベクター（例えば、ウイルスベクター）は遺伝子治療用ベクターである。
幾つかの実施形態において、上記ベクターは発現ベクターである。
幾つかの実施形態において、上記ベクター（例えば、発現ベクター）は、ポリヌクレオチドに操作可能に連結された発現制御ポリヌクレオチド配列、選択標識をコードするポリヌクレオチド配列又はその両方を更に含む。幾つかの実施形態において、上記発現制御ポリヌクレオチド配列は、プロモーター配列、エンハンサー配列又はその両方を含む。幾つかの実施形態において、上記発現制御ポリヌクレオチド配列は、誘導型プロモーター配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記発現制御ポリヌクレオチド配列は、ＥＦ１αコアプロモーター配列、ＭＮＤＵ３プロモーター配列、又はその組み合わせを含む。幾つかの実施形態において、上記発現制御ポリヌクレオチド配列は、ＥＦ１αコアプロモーター配列を含む。幾つかの実施形態において、上記発現制御ポリヌクレオチド配列は、ＭＮＤＵ３プロモーター配列を含む。
ＥＦ１αコアプロモーター配列（配列番号３９）
ＧＧＧＣＡＧＡＧＣＧＣＡＣＡＴＣＧＣＣＣＡＣＡＧＴＣＣＣＣＧＡＧＡＡＧＴＴＧＧＧＧＧＧＡＧＧＧＧＴＣＧＧＣＡＡＴＴＧＡＡＣＣＧＧＴＧＣＣＴＡＧＡＧＡＡＧＧＴＧＧＣＧＣＧＧＧＧＴＡＡＡＣＴＧＧＧＡＡＡＧＴＧＡＴＧＴＣＧＴＧＴＡＣＴＧＧＣＴＣＣＧＣＣＴＴＴＴＴＣＣＣＧＡＧＧＧＴＧＧＧＧＧＡＧＡＡＣＣＧＴＡＴＡＴＡＡＧＴＧＣＡＧＴＡＧＴＣＧＣＣＧＴＧＡＡＣＧＴＴＣＴＴＴＴＴＣＧＣＡＡＣＧＧＧＴＴＴＧＣＣＧＣＣＡＧＡＡＣＡＣＡＧ
ＭＮＤＵ３プロモーター配列（配列番号４０）
ＴＣＧＡＴＴＡＧＴＣＣＡＡＴＴＴＧＴＴＡＡＡＧＡＣＡＧＧＡＴＡＴＣＡＧＴＧＧＴＣＣＡＧＧＣＴＣＴＡＧＴＴＴＴＧＡＣＴＣＡＡＣＡＡＴＡＴＣＡＣＣＡＧＣＴＧＡＡＧＣＣＴＡＴＡＧＡＧＴＡＣＧＡＧＣＣＡＴＡＧＡＴＡＧＡＡＴＡＡＡＡＧＡＴＴＴＴＡＴＴＴＡＧＴＣＴＣＣＡＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＡＴＧＡＡＡＧＡＣＣＣＣＡＣＣＴＧＴＡＧＧＴＴＴＧＧＣＡＡＧＣＴＡＧＧＡＴＣＡＡＧＧＴＴＡＧＧＡＡＣＡＧＡＧＡＧＡＣＡＧＣＡＧＡＡＴＡＴＧＧＧＣＣＡＡＡＣＡＧＧＡＴＡＴＣＴＧＴＧＧＴＡＡＧＣＡＧＴＴＣＣＴＧＣＣＣＣＧＧＣＴＣＡＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＧＴＴＧＧＡＡＣＡＧＣＡＧＡＡＴＡＴＧＧＧＣＣＡＡＡＣＡＧＧＡＴＡＴＣＴＧＴＧＧＴＡＡＧＣＡＧＴＴＣＣＴＧＣＣＣＣＧＧＣＴＣＡＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＧＡＴＧＧＴＣＣＣＣＡＧＡＴＧＣＧＧＴＣＣＣＧＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＴＴＴＣＴＡＧＡＧＡＡＣＣＡＴＣＡＧＡＴＧＴＴＴＣＣＡＧＧＧＴＧＣＣＣＣＡＡＧＧＡＣＣＴＧＡＡＡＴＧＡＣＣＣＴＧＴＧＣＣＴＴＡＴＴＴＧＡＡＣＴＡＡＣＣＡＡＴＣＡＧＴＴＣＧＣＴＴＣＴＣＧＣＴＴＣＴＧＴＴＣＧＣＧＣＧＣＴＴＣＴＧＣＴＣＣＣＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＡＡＡＡＧＡＧＣＣＣＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣＡＣＴＣＧＧＣＧＣＧＡＴＣ
融合タンパク質
他の態様において、本発明は、本明細書に記載の何れか１つのポリヌクレオチド又はベクター（例えば、発現ベクター）によってコードされる融合タンパク質を提供する。
ＧＧＧＣＡＧＡＧＣＧＣＡＣＡＴＣＧＣＣＣＡＣＡＧＴＣＣＣＣＧＡＧＡＡＧＴＴＧＧＧＧＧＧＡＧＧＧＧＴＣＧＧＣＡＡＴＴＧＡＡＣＣＧＧＴＧＣＣＴＡＧＡＧＡＡＧＧＴＧＧＣＧＣＧＧＧＧＴＡＡＡＣＴＧＧＧＡＡＡＧＴＧＡＴＧＴＣＧＴＧＴＡＣＴＧＧＣＴＣＣＧＣＣＴＴＴＴＴＣＣＣＧＡＧＧＧＴＧＧＧＧＧＡＧＡＡＣＣＧＴＡＴＡＴＡＡＧＴＧＣＡＧＴＡＧＴＣＧＣＣＧＴＧＡＡＣＧＴＴＣＴＴＴＴＴＣＧＣＡＡＣＧＧＧＴＴＴＧＣＣＧＣＣＡＧＡＡＣＡＣＡＧ
ＭＮＤＵ３プロモーター配列（配列番号４０）
ＴＣＧＡＴＴＡＧＴＣＣＡＡＴＴＴＧＴＴＡＡＡＧＡＣＡＧＧＡＴＡＴＣＡＧＴＧＧＴＣＣＡＧＧＣＴＣＴＡＧＴＴＴＴＧＡＣＴＣＡＡＣＡＡＴＡＴＣＡＣＣＡＧＣＴＧＡＡＧＣＣＴＡＴＡＧＡＧＴＡＣＧＡＧＣＣＡＴＡＧＡＴＡＧＡＡＴＡＡＡＡＧＡＴＴＴＴＡＴＴＴＡＧＴＣＴＣＣＡＧＡＡＡＡＡＧＧＧＧＧＧＡＡＴＧＡＡＡＧＡＣＣＣＣＡＣＣＴＧＴＡＧＧＴＴＴＧＧＣＡＡＧＣＴＡＧＧＡＴＣＡＡＧＧＴＴＡＧＧＡＡＣＡＧＡＧＡＧＡＣＡＧＣＡＧＡＡＴＡＴＧＧＧＣＣＡＡＡＣＡＧＧＡＴＡＴＣＴＧＴＧＧＴＡＡＧＣＡＧＴＴＣＣＴＧＣＣＣＣＧＧＣＴＣＡＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＧＴＴＧＧＡＡＣＡＧＣＡＧＡＡＴＡＴＧＧＧＣＣＡＡＡＣＡＧＧＡＴＡＴＣＴＧＴＧＧＴＡＡＧＣＡＧＴＴＣＣＴＧＣＣＣＣＧＧＣＴＣＡＧＧＧＣＣＡＡＧＡＡＣＡＧＡＴＧＧＴＣＣＣＣＡＧＡＴＧＣＧＧＴＣＣＣＧＣＣＣＴＣＡＧＣＡＧＴＴＴＣＴＡＧＡＧＡＡＣＣＡＴＣＡＧＡＴＧＴＴＴＣＣＡＧＧＧＴＧＣＣＣＣＡＡＧＧＡＣＣＴＧＡＡＡＴＧＡＣＣＣＴＧＴＧＣＣＴＴＡＴＴＴＧＡＡＣＴＡＡＣＣＡＡＴＣＡＧＴＴＣＧＣＴＴＣＴＣＧＣＴＴＣＴＧＴＴＣＧＣＧＣＧＣＴＴＣＴＧＣＴＣＣＣＣＧＡＧＣＴＣＡＡＴＡＡＡＡＧＡＧＣＣＣＡＣＡＡＣＣＣＣＴＣＡＣＴＣＧＧＣＧＣＧＡＴＣ
融合タンパク質
他の態様において、本発明は、本明細書に記載の何れか１つのポリヌクレオチド又はベクター（例えば、発現ベクター）によってコードされる融合タンパク質を提供する。
他の態様において、本発明は、がん細胞表面に発現する２つの異なる抗原に結合できる二重特異性ＣＡＲと、Ｔ細胞（例えば、ＣＤ３）及びＴＡＡ（例えば、膠芽腫腫瘍抗原などの腫瘍抗原）に結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）とを含む、融合タンパク質を提供する。
本発明に記載の融合タンパク質は、当該分野で周知の従来の方法及び試薬を使用して組換え又は合成によって産生することができる。例示的には、本発明に記載の融合タンパク質は、当該分野で既知の方法を使用して適切な宿主細胞（例えば、細菌）内で組換えによって産生することができる。例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｓｅｃｏｎｄ Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ． ｅｄｓ．、Ｊｏｈｎ Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、１９９２、及びＭｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ： ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｍａｎｕａｌ、２ｎｄ ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｓａｍｂｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．、１９８９、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓを参照する。例示的には、本明細書に記載の融合タンパク質をコードするヌクレオチド配列を含む核酸分子を適切な宿主細胞（例えば、大腸菌）に導入して発現することができ、また従来の方法及び既存の試薬を使用して宿主細胞から発現した融合タンパク質（例えば、封入体）を単離／精製することができる。例示的には、異なるタンパク質配列のＤＮＡ断片（例えば、光応答性ドメイン、異種ペプチド成分）をコードするＤＮＡ断片は、従来の技術に従ってインフレームで連結することができる。別の実施形態において、融合遺伝子は、自動ＤＮＡ合成装置の使用を含む従来の技術によって合成することができる。選択可能に、核酸断片のＰＣＲ増幅は、アンカープライマーを使用して実行することができ、アンカープライマーは２つの連続的な核酸断片の間で相補的な突出を産生した後、アニール・再増幅してキメラ核酸配列を産生することができる（Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、１９９２を参照）。
幾つかの実施形態において、上記融合タンパク質は自己切断ペプチドを更に含む。ある実施形態において、上記自己切断ペプチドはＴ２Ａペプチド（配列番号２８）である。
宿主細胞
宿主細胞
他の態様において、本発明は、本明細書に記載の何れか１つ又は複数のポリヌクレオチド或いは発現ベクターを含む宿主細胞を提供する。
幾つかの実施形態において、上記宿主細胞は、ベクターの受け取り、維持、複製及び／又は増幅に使用することができる。
発現宿主細胞の非限定的な例は、免疫細胞（例えば、Ｔリンパ球、Ｂリンパ球、ＮＫ細胞）、ハイブリドーマ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＣＯＳ細胞、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）などの哺乳動物細胞、Ｐｉｃｈｉａ ｐａｓｔｏｒｉｓ細胞などの酵母細胞、又はＤＨ５αなどの細菌細胞などを含む。
Ｔリンパ球
Ｔリンパ球
他の態様において、本発明は、本明細書に記載の何れか１つ又は複数のポリヌクレオチド、発現ベクター或いは融合タンパク質を含むＴリンパ球を提供する。
他の態様において、本発明は、１種又は複数種の第１のＴＡＡに結合できるＣＡＲをコードする配列を含む第１のポリヌクレオチド、Ｔ細胞に結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列及び第２のＴＡＡを含む第２のポリヌクレオチド、又は、
１種又は複数種の第１のＴＡＡに結合できるＣＡＲとＴ細胞及び第２のＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む、Ｔリンパ球を提供する。
１種又は複数種の第１のＴＡＡに結合できるＣＡＲとＴ細胞及び第２のＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む、Ｔリンパ球を提供する。
他の態様において、本発明は、Ｔ細胞に結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列及び第２のＴＡＡエピトープの第１のポリヌクレオチドを含む、Ｔリンパ球を提供する。幾つかの実施形態において、上記Ｔリンパ球は、１種又は複数種の第１のＴＡＡに結合できるＣＡＲをコードする配列を含む第２のポリヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態において、上記第１及び第２のポリヌクレオチドは、本明細書でそれぞれ独立的に提供される。幾つかの実施形態において、上記第１及び第２のポリヌクレオチドは連結されている。幾つかの実施形態において、上記第１及び第２のポリヌクレオチドは単離されている。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャーは、ＣＤ２、ＣＤ３、ＶＬＡ－１、ＣＤ８、ＣＤ４、ＣＣＲ６、ＣＸＣＲ５、ＣＤ２５、ＣＤ３１、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ１９７、ＣＤ１２７、ＣＤ３８、ＣＤ２７、ＣＤ１９６、ＣＤ２７７、又はＣＸＣＲ３に結合することができる。ある実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャーは、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ３１、ＣＤ２７７に結合することができる。特定の実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャーはＣＤ３に結合することができる。
幾つかの実施形態において、上記１種又は複数種の第１のＴＡＡ及び上記第２のＴＡＡは、血液がん（例えば、白血病、リンパ腫、骨髄腫）細胞にそれぞれ独立的に発現する。本明細書に記載の方法によって治療できる血液がんは、白血病（例えば、急性白血病、慢性白血病）、リンパ腫（例えば、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫）及び多発性骨髄腫を含む。従って、幾つかの実施形態において、上記１種又は複数種の第１のＴＡＡ、上記第２のＴＡＡ又はその両方は、白血病（例えば、急性白血病、慢性白血病）、リンパ腫（例えば、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ－細胞リンパ腫）及び多発性骨髄腫から選ばれる血液がん細胞に発現する。
幾つかの実施形態において、上記１種又は複数種の第１のＴＡＡ及び上記第２のＴＡＡは、固形腫瘍（例えば、乳腺、肺、前立腺、結腸、膀胱、卵巣、腎臓、胃、結腸、直腸、精巣、頭部及び／又は頸部、膵臓、脳、皮膚の腫瘍）細胞にそれぞれ独立的に発現する。従って、幾つかの実施形態において、上記１種又は複数種の第１のＴＡＡ及び上記第２のＴＡＡは、乳房、肺、前立腺、結腸、膀胱、卵巣、腎臓、胃、直腸、結腸直腸、精巣、頭頸部、膵臓、脳及び皮膚がん細胞から選択される固形腫瘍細胞にそれぞれ独立的に発現する。
幾つかの実施形態において、上記１種又は複数種の第１のＴＡＡは、結腸がん抗原１９．９、胃がんムチン、抗原４．２、糖タンパク質Ａ３３（ｇｐＡ３３）、ＡＤＡＭ－９、胃がん抗原ＡＨ６、ＡＬＣＡＭ、悪性ヒトリンパ球抗原ＡＰＯ－１、がん抗原Ｂ１、Ｂ７Ｈ３、β－カテニン、ＡＬＥＢ／ＬＥＹ血液型、バーキットリンパ腫抗原－３８．１３、結腸腺がん抗原Ｃ１４、卵巣がん抗原ＣＡ１２５、カルボキシペプチダーゼＭ、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３６、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ７９ａ／ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１０３、ＣＤ３１７、ＣＤＫ４、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＥＡＣＡＭ６、Ｃ０１７－ｉＡ、ＣＯ－４３（ＬＥＢ血液型）、ＣＯ－５１４（ＬＥＡ血液型）、ＣＴＡ－１、ＣＴＬＡ４、サイトケラチン８、抗原Ｄ１．１、抗原Ｄ１５６－２２、ＤＲ５、Ｅｉシリーズ（Ｂ血液型）、ＥＧＦＲ（上皮成長因子受容体）、アドレナリン受容体Ａ２（ＥｐｈＡ２）、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＧＤ２／ＧＤ３／ＧＭ２、肺腺がん抗原Ｆ３、抗原ＦＣ１０．２、Ｇ４９、ガングリオシドＧＤ２、ガングリオシドＧＤ３、ガングリオシドＧＭ２、ガングリオシドＧＭ３、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＩＣＡ１９－９、ＧＭ２、ｇｐＯＯ、グルカゴン－３（ＧＰＣ３）、ヒト白血病Ｔ細胞抗原Ｇｐ３７、黒色腫抗原ｇｐ７５、ＧＰＡ３３、ＨＥＲ２抗原（例えば、ｐｉ８５ＨＥＲ２）、ヒト乳脂肪球（ＨＭＦＧ）、ヒトパピローマウイルスＥ６／ヒトパピローマウイルス－Ｅ７、高分子量黒色腫抗原（ＨＭＷＭＡＡ）、Ｉ抗原（分化抗原）Ｉ（Ｍａ）、インテグリンα－Ｖ－β－６インテグリンＰ６（ＩＴＧＢ６）、インターロイキン－１３受容体ａ２（ＩＬ１３Ｒα２）、ＪＡＭ－３、ＫＩＤ３、ＫＩＤ３１、ＫＳ１／４汎がん抗原、ヒト肺がん抗原Ｌ６とＬ２０、ＬＥＡ、ＬＵＣＡ－２、Ｍｉ：２２：２５：８、Ｍ１８、Ｍ３９、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＭＡＲＴ、ＭＵＣ－１、ＭＵＭ－１、Ｍｙｌ、Ｎ－アセチルグルコサミン転移酵素、ネオ糖タンパク質、ＮＳ－１０、ＯＦＡ－１、ＯＦＡ－２、オンコスタチンＭ、Ｐ１５、黒色腫関連抗原Ｐ９７、多結晶形上皮ムチン（ＰＥＭ）、多結晶形上皮ムチン抗原（ＰＥＭＡ）、ＰＩＰＡ、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、前立腺酸性ホスフェート、Ｒ２４、ＲＯＲｉ、スフィンゴ脂質、ＳＳＥＡ－１、ＳＳＥＡ－３、ＳＳＥＡ－４、ｓＴｎ、Ｔ細胞受容体由来ペプチド、Ｔ５Ａ７、ＴＡＧ－７２、ＴＬ５（血液型Ａ）、ＴＮＦ－α受容体、ＴＮＦ－Ｂ受容体、ＴＮＦ－ｙ受容体、ＴＲＡ－１－８５（血液型Ｈ）、トランスフェリン受容体、腫瘍特異的移植抗原（ＴＳＴＡ）、がん胎児抗原－α－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＶＥＰ８、ＶＥＰ９、ＶＩＭ－Ｄ５、及びＹハプテン、Ｌｅｙからそれぞれ独立的に選ばれる。
幾つかの実施形態において、上記１種又は複数種の第１のＴＡＡは、インターロイキン－１３受容体サブユニット－２（ＩＬ１３Ｒα２）、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＥＧＦＲ変異体ＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、グルカゴン－３（ＧＰＣ３）及びその組み合わせからそれぞれ独立的に選ばれる。
幾つかの実施形態において、上記第２のＴＡＡは、ＩＬ１３Ｒα２、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ又はＧＰＣ３である。
幾つかの実施形態において、本発明は、
ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡ（例えば、膠芽腫腫瘍抗原）に結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第２のポリヌクレオチド、又は
ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡ（例えば、膠芽腫腫瘍抗原）に結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む、Ｔリンパ球を提供する。
ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡ（例えば、膠芽腫腫瘍抗原）に結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第２のポリヌクレオチド、又は
ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡ（例えば、膠芽腫腫瘍抗原）に結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む、Ｔリンパ球を提供する。
幾つかの実施形態において、上記Ｔリンパ球は、ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡ（例えば、膠芽腫腫瘍抗原）に結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第２のポリヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態において、上記ポリヌクレオチドは、本明細書に記載のＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２を標的とする二重特異性ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドの何れか１つである。幾つかの実施形態において、上記第２のポリヌクレオチドは、ＣＤ３及びＴＡＡ（例えば、膠芽腫腫瘍抗原）に結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードするポリヌクレオチドの何れか１つである。
幾つかの実施形態において、Ｔリンパ球は、ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡ（例えば、膠芽腫腫瘍抗原）に結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）の融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態において、上記第３のポリヌクレオチドは、本明細書に記載の二重ＣＡＲとＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドの何れか１つである。
幾つかの実施形態において、上記Ｔリンパ球は、ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲを発現（例えば、分泌）する。
幾つかの実施形態において、本発明は、
ＨＥＲ２に結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第２のポリヌクレオチド、又は
ＨＥＲ２に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む、Ｔリンパ球を提供する。
ＨＥＲ２に結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第２のポリヌクレオチド、又は
ＨＥＲ２に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む、Ｔリンパ球を提供する。
幾つかの実施形態において、上記Ｔリンパ球は、ＨＥＲ２に結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡ（例えば、膠芽腫腫瘍抗原）に結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第２のポリヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態において、上記ポリヌクレオチドは、本明細書に記載のＨＥＲ２を標的とする二重特異性ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドの何れか１つである。幾つかの実施形態において、上記第２のポリヌクレオチドは、ＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードするポリヌクレオチドの何れか１つである。
幾つかの実施形態において、Ｔリンパ球は、ＨＥＲ２に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）の融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態において、上記第３のポリヌクレオチドは、本明細書に記載の二重ＣＡＲとＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドの何れか１つである。
幾つかの実施形態において、上記Ｔリンパ球は、ＨＥＲ２に結合できる二重特異性ＣＡＲを発現（例えば、分泌）する。
幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは１つのＨＥＲ２の２つのエピトープに結合することができる。幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは２つのＨＥＲ２に結合することができる。
幾つかの実施形態において、本発明は、
ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩに結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第２のポリヌクレオチド、又は
ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩに結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む、Ｔリンパ球を提供する。
ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩに結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第２のポリヌクレオチド、又は
ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩに結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む、Ｔリンパ球を提供する。
幾つかの実施形態において、上記Ｔリンパ球は、ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩに結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第２のポリヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態において、上記ポリヌクレオチドは、本明細書に記載のＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩを標的とする二重特異性ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドの何れか１つである。幾つかの実施形態において、上記第２のポリヌクレオチドは、ＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードするポリヌクレオチドの何れか１つである。
幾つかの実施形態において、Ｔリンパ球は、ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩに結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態において、上記第３のポリヌクレオチドは、本明細書に記載の二重ＣＡＲとＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドの何れか１つである。
幾つかの実施形態において、上記Ｔリンパ球は、ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩに結合できる二重特異性ＣＡＲを発現（例えば、分泌）する。
幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは１つのＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩの２つのエピトープに結合することができる。幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは２つのＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩに結合することができる。
幾つかの実施形態において、本発明は、
ＧＰＣ３に結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第２のポリヌクレオチド、又は
ＧＰＣ３に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む、Ｔリンパ球を提供する。
ＧＰＣ３に結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第２のポリヌクレオチド、又は
ＧＰＣ３に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む、Ｔリンパ球を提供する。
幾つかの実施形態において、上記Ｔリンパ球は、ＧＰＣ３に結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第２のポリヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態において、上記ポリヌクレオチドは、本明細書に記載のＧＰＣ３を標的とする二重特異性ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドの何れか１つである。幾つかの実施形態において、上記第２のポリヌクレオチドは、ＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードするポリヌクレオチドの何れか１つである。
幾つかの実施形態において、Ｔリンパ球は、ＧＰＣ３に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）の融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態において、上記第３のポリヌクレオチドは、本明細書に記載の二重ＣＡＲとＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドの何れか１つである。
幾つかの実施形態において、上記Ｔリンパ球は、ＧＰＣ３に結合できる二重特異性ＣＡＲを発現（例えば、分泌）する。
幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは１つのＧＰＣ３の２つのエピトープに結合することができる。幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは２つのＧＰＣ３に結合することができる。
本発明に記載のＴ細胞は、例えば、初代Ｔ細胞などの培養Ｔ細胞、又は培養Ｔ細胞株からのＴ細胞、又は哺乳動物からのＴ細胞などの任意のＴ細胞であってもよい。哺乳動物から得られる場合、Ｔ細胞は、血液、骨髓、リンパ節、胸腺又は他の組織若しくは体液を含むが、これらに限定されない多くの供給源から得ることができる。Ｔ細胞は富化又は精製されてもよい。Ｔ細胞は、好ましくはヒトＴ細胞（例えば、ヒトから単離されるもの）である。Ｔ細胞は、ＣＤ４＋／ＣＤ８＋二重陽性Ｔ細胞、ＴｈとＴｈ２細胞などのＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞、ＣＤ８＋細胞（例えば、細胞毒性Ｔ細胞）、腫瘍浸潤細胞、メモリーＴ細胞、ナイーブＴ細胞などを含むが、これらに限定されない任意の発育段階のものであってもよい。幾つかの実施形態において、Ｔ細胞はＣＤ８＋Ｔ細胞又はＣＤ４＋Ｔ細胞である。Ｔ細胞株は、例えば、アメリカンタイプカルチャーコレクション（ＡＴＣＣ、バージニア州マナッサス）、ドイツ微生物細胞培養コレクション（ＤＳＭＺ）から入手可能であり、例えば、Ｊｕｒｋａｔ細胞（ＡＴＣＣ ＴＩＢ－１５２）、Ｓｕｐ－Ｔ１細胞（ＡＴＣＣ ＣＲＬ－１９４２）、ＲＰＭＩ ８４０２細胞（ＤＳＭＺ ＡＣＣ－２９０）、Ｋａｒｐａｓ ４５細胞（ＤＳＭＺ ＡＣＣ－５４５）及びその誘導体を含む。
上記Ｔリンパ球は、自己細胞、相同細胞又は同種異系細胞であってもよい。
本発明に記載の１つ又は複数のポリヌクレオチドは、トランスフェクション、形質転換又は形質導入などの物理的又は化学的方法を使用して細胞に導入することができる。例えば、リン酸カルシウムＤＮＡ共沈殿を含む多くのトランスフェクション技術は従来技術で知られている（例えば、Ｍｕｒｒａｙ Ｅ．Ｊ．（ｅｄ．）、Ｍｅｔｈｏｄｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌ．７、Ｇｅｎｅ ＴｒａｎｓｆｅｒａｎｄＥｘｐｒｅｓｓｉｏｎ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、Ｈｕｍａｎａ Ｐｒｅｓｓ（１９９１））、ＤＥＡＥ－デキストラン、エレクトロポレーション、カチオン性リポソーム媒介トランスフェクション、タングステン粒子によって促進される微粒子衝突（Ｊｏｈｎｓｔｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ、３４６：７７６－７７（１９９０））、及びリン酸ストロンチウムＤＮＡ共沈殿（Ｂｒａｓｈ ｅｔ ａｌ．、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ Ｂｉｏｌ．、７：２０３１－３４（１９８７）を参照）。感染性粒子を適切なパッケージング細胞内で増殖させた後、ファージ又はウイルスベクターを宿主細胞に導入することができ、ここで、多くのパッケージング細胞は市販されている。
幾つかの実施形態において、レトロウイルスは、上記二重特異性ＣＡＲ、Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）又はその両方をコードするポリヌクレオチドを本発明に記載のＴリンパ球に送達するために使用される。レトロウイルスは、遺伝子を送達するための一般的なツールである（Ｍｉｌｌｅｒ、２０００、Ｎａｔｕｒｅ ３５７：４５５－６０）。特定の実施形態に適したレトロウイルスの非限定的な例は、モロニーマウス白血病ウイルス（Ｍ－ＭＵＬＶ）、モロニーマウス肉腫ウイルス（ＭｏＭＳＶ）、ハーベイマウス肉腫ウイルス（ＨａＭＵＳＶ）、マウス乳腺腫瘍ウイルス（ＭｕＭＴＶ）、テナガザル白血病ウイルス（ＧａＬＶ）、ネコ白血病ウイルス（ＦＬＶ）、フォーミーウイルス、Ｆｒｉｅｎｄマウス白血病ウイルス、マウス幹細胞ウイルス（ＭＳＣＶ）及びラウス肉腫ウイルス（ＲＳＶ）及びレンチウイルスを含む。レンチウイルスの非限定的な例は、ヒト免疫不全ウイルス（例えば、ＨＩＶ １型及びＨＩＶ ２型）、ビスナ・マエディウイルス（ＶＭＶ）、ヤギ関節炎－脳炎ウイルス（ＣＡＥＶ）、ウマ伝染性貧血ウイルス（ＥＩＡＶ）、ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）、ウシ免疫不全ウイルス（ＢＩＶ）及びサル免疫不全ウイルス（ＳＩＶ）を含む。
本発明に記載のＴリンパ球は、ＩＬ－２、ＩＬ－４、ＩＬ－７、ＩＬ－９、ＩＬ－１５及びＩＬ－２１などのサイトカインを使用することによって維持することができる。
本発明に記載のＴリンパ球は、エクスビボ、インビボ又はインビトロでがん細胞集団（例えば、ＧＢＭ細胞）と接触することができる。例えば、本明細書に記載のＴリンパ球は、二重特異性ＣＡＲ及びＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）を発現する条件でエクスビボで培養した後、がん（例えば、ＧＢＭなどの固形腫瘍）の影響を受けた対象（例えば、ヒトなどの哺乳動物）に直接移植することができる。このような細胞移植方法は、当該分野で「養子細胞移植（ＡＣＴ）」と呼ばれ、ここで、免疫由来細胞は、ドナー免疫由来細胞の機能を新しい宿主に移植するために、新しいレシピエント宿主に受動的に移植される。
様々な種類のがんを治療するための養子細胞移植法は、何れも当該分野で知られており、従来技術により開示されている。例えば、Ｇａｔｔｉｎｏｎｉ ｅｔ ａｌ．、Ｎａｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ、６（５）：３８３－９３（２００６）、Ｊｕｎｅ、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．、１１７（６）：１４６６－７６（２００７）、Ｒａｐｏｐｏｒｔ ｅｔ ａｌ．、Ｂｌｏｏｄ、１１７（３）：７８８－９７（２０１１）；ａｎｄＢａｒｂｅｒ ｅｔ ａｌ．、Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒａｐｙ、１８：５０９－１６（２０１１）である。
本発明に記載のＴリンパ球は、当業者に知られている様々な技術及び試薬を使用してヒトなどの哺乳動物に導入することができる。幾つかの実施形態において、Ｔリンパ球は、腫瘍部位に導入される。幾つかの実施形態において、Ｔリンパ球は、がんに適応するために修飾される。使用される細胞の数は、導入の目的、Ｔリンパ球の寿命、投与回数などの具体的な状況に依存する。
組成物、医薬組成物、及び試薬キット
組成物、医薬組成物、及び試薬キット
他の態様において、本発明は、本明細書に記載のポリヌクレオチド、ベクター、融合タンパク質、宿主細胞又はＴリンパ球の何れか１種又は複数種を含む組成物を提供する。幾つかの実施形態において、上記組成物は、本明細書に記載の何れか１種又は複数種のＴリンパ球を含む。
他の態様において、本発明は、本明細書に記載の何れか１種又は複数種の組成物及び薬学的に許容されるベクター、賦形剤、安定剤、希釈剤又は増強剤を含む医薬組成物を提供する。
ある実施形態において、上記組成物又は薬物は、約２％、約５％又は約１０％のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含むが、実質的に血清を含まない凍結保存媒体を更に含む。
幾つかの実施形態において、上記組成物又は医薬組成物はバイアルに保存される。
他の態様において、本発明は、Ｔリンパ球を含む組成物であって、少なくとも一部のＴリンパ球が、１種又は複数種の第１のＴＡＡに結合できるＣＡＲをコードする配列を含む第１のポリヌクレオチド、及びＴ細胞に結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）及び第２のＴＡＡをコードする配列を含む第２のポリヌクレオチド、
又は、１種又は複数種の第１のＴＡＡに結合できるＣＡＲとＴ細胞及び第２のＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む、組成物を提供する。
又は、１種又は複数種の第１のＴＡＡに結合できるＣＡＲとＴ細胞及び第２のＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む、組成物を提供する。
他の態様において、本発明は、Ｔ細胞に結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列及び第２のＴＡＡエピトープを含む第１のポリヌクレオチドを含む、Ｔリンパ球を提供する。幾つかの実施形態において、上記Ｔリンパ球は、１種又は複数種の第１のＴＡＡに結合できるＣＡＲをコードする配列を含む第２のポリヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態において、上記第１及び第２のポリヌクレオチドは、本明細書でそれぞれ独立的に提供される。幾つかの実施形態において、上記第１及び第２のポリヌクレオチドは連結されている。幾つかの実施形態において、上記第１及び第２のポリヌクレオチドは単離されている。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＶＬＡ－１、ＣＤ８、ＣＤ４、ＣＣＲ６、ＣＸＣＲ５、ＣＤ２５、ＣＤ３１、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ１９７、ＣＤ１２７、ＣＤ３８、ＣＤ２７、ＣＤ１９６、ＣＤ２７７、又はＣＸＣＲ３に結合することができる。ある実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ３１、又はＣＤ２７７に結合することができる。特定の実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）はＣＤ３に結合することができる。
幾つかの実施形態において、上記１種又は複数種の第１のＴＡＡ及び上記第２のＴＡＡは、血液がん（例えば、白血病、リンパ腫、骨髄腫）細胞にそれぞれ独立的に発現する。本明細書に記載の方法によって治療できる血液がんは、白血病（例えば、急性白血病、慢性白血病）、リンパ腫（例えば、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫）及び多発性骨髄腫を含む。従って、幾つかの実施形態において、上記１種又は複数種の第１のＴＡＡ、上記第２のＴＡＡ又はその両方は、白血病（例えば、急性白血病、慢性白血病）、リンパ腫（例えば、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ－細胞リンパ腫）及び多発性骨髄腫から選ばれる血液がん細胞に発現する。
幾つかの実施形態において、上記１種又は複数種の第１のＴＡＡ及び上記第２のＴＡＡは、固形腫瘍（例えば、乳腺、肺、前立腺、結腸、膀胱、卵巣、腎臓、胃、結腸、直腸、精巣、頭部及び／又は頸部、膵臓、脳、皮膚の腫瘍）細胞にそれぞれ独立的に発現する。従って、幾つかの実施形態において、上記１種又は複数種の第１のＴＡＡ及び上記第２のＴＡＡは、乳房、肺、前立腺、結腸、膀胱、卵巣、腎臓、胃、直腸、結腸直腸、精巣、頭頸部、膵臓、脳及び皮膚がん細胞から選択される固形腫瘍細胞にそれぞれ独立的に発現する。
幾つかの実施形態において、上記１種又は複数種の第１のＴＡＡは、結腸がん抗原１９．９、胃がんムチン、抗原４．２、糖タンパク質Ａ３３（ｇｐＡ３３）、ＡＤＡＭ－９、胃がん抗原ＡＨ６、ＡＬＣＡＭ、悪性ヒトリンパ球抗原ＡＰＯ－１、がん抗原Ｂ１、Ｂ７Ｈ３、β－カテニン、ＡＬＥＢ／ＬＥＹ血液型、バーキットリンパ腫抗原－３８．１３、結腸腺がん抗原Ｃ１４、卵巣がん抗原ＣＡ１２５、カルボキシペプチダーゼＭ、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３６、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ７９ａ／ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１０３、ＣＤ３１７、ＣＤＫ４、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＥＡＣＡＭ６、Ｃ０１７－ｉＡ、ＣＯ－４３（ＬＥＢ血液型）、ＣＯ－５１４（ＬＥＡ血液型）、ＣＴＡ－１、ＣＴＬＡ４、サイトケラチン８、抗原Ｄ１．１、抗原Ｄ１５６－２２、ＤＲ５、Ｅｉシリーズ（Ｂ血液型）、ＥＧＦＲ（上皮成長因子受容体）、アドレナリン受容体Ａ２（ＥｐｈＡ２）、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＧＤ２／ＧＤ３／ＧＭ２、肺腺がん抗原Ｆ３、抗原ＦＣ１０．２、Ｇ４９、ガングリオシドＧＤ２、ガングリオシドＧＤ３、ガングリオシドＧＭ２、ガングリオシドＧＭ３、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＩＣＡ１９－９、ＧＭ２、ｇｐＯＯ、グルカゴン－３（ＧＰＣ３）、ヒト白血病Ｔ細胞抗原Ｇｐ３７、黒色腫抗原ｇｐ７５、ＧＰＡ３３、ＨＥＲ２抗原（例えば、ｐｉ８５ＨＥＲ２）、ヒト乳脂肪球（ＨＭＦＧ）、ヒトパピローマウイルスＥ６／ヒトパピローマウイルス－Ｅ７、高分子量黒色腫抗原（ＨＭＷＭＡＡ）、Ｉ抗原（分化抗原）Ｉ（Ｍａ）、インテグリンα－Ｖ－β－６インテグリンＰ６（ＩＴＧＢ６）、インターロイキン－１３受容体ａ２（ＩＬ１３Ｒα２）、ＪＡＭ－３、ＫＩＤ３、ＫＩＤ３１、ＫＳ１／４汎がん抗原、ヒト肺がん抗原Ｌ６とＬ２０、ＬＥＡ、ＬＵＣＡ－２、Ｍｉ：２２：２５：８、Ｍ１８、Ｍ３９、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＭＡＲＴ、ＭＵＣ－１、ＭＵＭ－１、Ｍｙｌ、Ｎ－アセチルグルコサミン転移酵素、ネオ糖タンパク質、ＮＳ－１０、ＯＦＡ－１、ＯＦＡ－２、オンコスタチンＭ、Ｐ１５、黒色腫関連抗原Ｐ９７、多結晶形上皮ムチン（ＰＥＭ）、多結晶形上皮ムチン抗原（ＰＥＭＡ）、ＰＩＰＡ、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、前立腺酸性ホスフェート、Ｒ２４、ＲＯＲｉ、スフィンゴ脂質、ＳＳＥＡ－１、ＳＳＥＡ－３、ＳＳＥＡ－４、ｓＴｎ、Ｔ細胞受容体由来ペプチド、Ｔ５Ａ７、ＴＡＧ－７２、ＴＬ５（血液型Ａ）、ＴＮＦ－α受容体、ＴＮＦ－Ｂ受容体、ＴＮＦ－ｙ受容体、ＴＲＡ－１－８５（血液型Ｈ）、トランスフェリン受容体、腫瘍特異的移植抗原（ＴＳＴＡ）、がん胎児抗原－α－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＶＥＰ８、ＶＥＰ９、ＶＩＭ－Ｄ５、及びＹハプテン、Ｌｅｙからそれぞれ独立的に選ばれる。
幾つかの実施形態において、上記１種又は複数種の第１のＴＡＡは、インターロイキン－１３受容体サブユニット－２（ＩＬ１３Ｒα２）、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＥＧＦＲ変異体ＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、グルカゴン－３（ＧＰＣ３）及びその組み合わせからそれぞれ独立的に選ばれる。
幾つかの実施形態において、上記第２のＴＡＡは、ＩＬ１３Ｒα２、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ又はＧＰＣ３である。
他の態様において、本発明は、Ｔリンパ球を含む組成物であって、少なくとも一部のＴリンパ球が、ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第２のポリヌクレオチド、
ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列、又はその組み合わせを含む第３のポリヌクレオチドを含む、組成物を提供する。
ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列、又はその組み合わせを含む第３のポリヌクレオチドを含む、組成物を提供する。
幾つかの実施形態において、上記ＴＡＡは膠芽腫腫瘍抗原である。
幾つかの実施形態において、上記第１のポリヌクレオチドは、本明細書に記載の、ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２を標的とする二重特異性ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドの何れか１つである。幾つかの実施形態において、上記第２のポリヌクレオチドは、ＣＤ３及びＴＡＡ（例えば膠芽腫腫瘍抗原）に結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードするポリヌクレオチドの何れか１つである。幾つかの実施形態において、上記第３のポリヌクレオチドは、本明細書に記載の二重ＣＡＲとＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドの何れか１つである。
他の態様において、本発明は、Ｔリンパ球を含む組成物であって、少なくとも一部のＴリンパ球が、ＨＥＲ２に結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第２のポリヌクレオチド、又は
ＨＥＲ２に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列、又はその組み合わせを含む第３のポリヌクレオチドを含む、組成物を提供する。
ＨＥＲ２に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列、又はその組み合わせを含む第３のポリヌクレオチドを含む、組成物を提供する。
幾つかの実施形態において、上記Ｔリンパ球は、ＨＥＲ２に結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第２のポリヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態において、上記ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の、ＨＥＲ２を標的とする二重特異性ＣＡＲをコードする何れか１つのポリヌクレオチドである。幾つかの実施形態において、上記第２のポリヌクレオチドは、本明細書に記載の、ＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードするポリヌクレオチドの何れか１つである。
幾つかの実施形態において、上記Ｔリンパ球は、ＨＥＲ２に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）の融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態において、第３のポリヌクレオチドは、本明細書に記載の、二重ＣＡＲとＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドの何れか１つである。
幾つかの実施形態において、上記Ｔリンパ球は、ＨＥＲ２に結合できる二重特異性ＣＡＲを発現（例えば、分泌）する。
幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは１つのＨＥＲ２の２つのエピトープに結合することができる。幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは２つのＨＥＲ２に結合することができる。
他の態様において、本発明は、Ｔリンパ球を含む組成物であって、少なくとも一部のＴリンパ球が、ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩに結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第２のポリヌクレオチド、又は
ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩに結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列、又はその組み合わせを含む第３のポリヌクレオチドを含む、組成物を提供する。
ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩに結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列、又はその組み合わせを含む第３のポリヌクレオチドを含む、組成物を提供する。
幾つかの実施形態において、上記Ｔリンパ球は、ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩに結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第２のポリヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態において、上記ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の、ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩを標的とする二重特異性ＣＡＲをコードする何れか１つのポリヌクレオチドである。幾つかの実施形態において、上記第２のポリヌクレオチドは、本明細書に記載の、ＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードするポリヌクレオチドの何れか１つである。
幾つかの実施形態において、上記Ｔリンパ球は、ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩに結合できる二重特異性ＣＡＲ、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）の融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態において、第３のポリヌクレオチドは、本明細書に記載の、二重ＣＡＲとＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドの何れか１つである。
幾つかの実施形態において、上記Ｔリンパ球は、ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩに結合できる二重特異性ＣＡＲを発現（例えば、分泌）する。
幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは１つのＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩの２つのエピトープに結合することができる。幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは２つのＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩに結合することができる。
他の態様において、本発明は、Ｔリンパ球を含む組成物であって、少なくとも一部のＴリンパ球が、ＧＰＣ３に結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第２のポリヌクレオチド、又は
ＧＰＣ３に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列、又はその組み合わせを含む第３のポリヌクレオチドを含む、組成物を提供する。
ＧＰＣ３に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列、又はその組み合わせを含む第３のポリヌクレオチドを含む、組成物を提供する。
幾つかの実施形態において、上記Ｔリンパ球は、ＧＰＣ３に結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第２のポリヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態において、上記ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の、ＧＰＣ３を標的とする二重特異性ＣＡＲをコードする何れか１つのポリヌクレオチドである。幾つかの実施形態において、上記第２のポリヌクレオチドは、本明細書に記載の、ＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードするポリヌクレオチドの何れか１つである。
幾つかの実施形態において、上記Ｔリンパ球は、ＧＰＣ３に結合できる二重特異性ＣＡＲ、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）の融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態において、第３のポリヌクレオチドは、本明細書に記載の、二重ＣＡＲとＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドの何れか１つである。
幾つかの実施形態において、上記Ｔリンパ球は、ＧＰＣ３に結合できる二重特異性ＣＡＲを発現（例えば、分泌）する。
幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは１つのＧＰＣ３の２つのエピトープに結合することができる。幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは２つのＧＰＣ３に結合することができる。
適切な薬学的に許容されるベクター、賦形剤又は安定剤は、使用される用量及び濃度ではレシピエントに対して無毒である（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ １６ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｏｓｏｌ、Ａ．Ｅｄ．（１９８０））。薬学的に許容されるベクター、賦形剤、安定剤、希釈剤又は増強剤の非限定的な例は、緩衝液（例えば、リン酸塩、クエン酸塩、ヒスチジン）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸又はメチオニン）、防腐剤、タンパク質（例えば、血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン）、親水性ポリマー、アミノ酸、炭水化合物（例えば、単糖類、二糖類、グルコース、マンノース又はデキストリン）、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ）、糖類（例えば、スクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトール）、塩形成対イオン（例えば、ナトリウム）、金属錯体（例えば、亜鉛－タンパク質錯体）、非イオン性界面活性剤（例えば、トゥイーン）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、及びポリエチレングリコール（ＰＥＧ）を含む。
幾つかの実施形態において、本発明に記載の組成物（例えば、医薬組成物）は、適切な投与計画及び経路に用いるように調製される。投与経路の非限定的な例は、経口、直腸、粘膜、静脈内、筋肉内、皮下及び局所などを含む。幾つかの実施形態において、本発明に記載の組成物（例えば、医薬組成物）は、水溶液又は乾燥製剤（例えば、凍結乾燥）の形態で保存される。
幾つかの実施形態において、上記組成物（例えば、医薬組成物）は、注入（例えば、頭蓋内脳室注射、頭蓋内注入又は静脈内注入）によって投与するように調製される。
幾つかの実施形態において、上記組成物（例えば、医薬組成物）は、第２治療剤と合わせて併用投与するように調製される。
他の態様において、本発明は、本明細書に記載の何れか１種又は複数種の組成物又は医薬組成物を含むコンテナ及び選択可能な使用説明書を含む試薬キットを提供する。
使用方法
使用方法
他の態様において、本発明は、必要とする対象のがんを治療するための薬物の調製における、本明細書に記載のポリヌクレオチド、ベクター、融合タンパク質、宿主細胞、Ｔリンパ球、組成物（例えば、医薬組成物）又は試薬キットの何れか１種又は複数種の用途を提供する。
他の態様において、本発明は、必要とする対象のがんを治療するための薬物の調製における、本明細書に記載の何れか１種又は複数種のＴリンパ球、組成物（例えば、医薬組成物）又は試薬キットの用途を提供する。
他の態様において、本発明は、必要とする対象のがんを治療するための、本明細書に記載のポリヌクレオチド、ベクター、融合タンパク質、宿主細胞、Ｔリンパ球、組成物（例えば、医薬組成物）又は試薬キットの何れか１種又は複数種を提供する。
他の態様において、本発明は、必要とする対象のがんを治療するための、本明細書に記載の何れか１種又は複数種のＴリンパ球、組成物（例えば、医薬組成物）又は試薬キットを提供する。
他の態様において、本発明は、有効用量の本明細書に記載の何れか１種又は複数種のＴリンパ球、組成物又は医薬組成物を対象に投与することを含む、必要とする対象のがんを治療する方法を提供する。
幾つかの実施形態において、上記がんは、乳がん、肺がん、前立腺がん、結腸がん、膀胱がん、卵巣がん、腎臓がん、胃がん、結腸がん、直腸がん、精巣がん、頭がん及び／又は頸がん、膵臓がん、脳がん又は皮膚がんなどの固形腫瘍である。従って、幾つかの実施形態において、上記がんは、乳がん、肺がん、前立腺がん、結腸がん、膀胱がん、卵巣がん、腎臓がん、胃がん、直腸がん、結腸直腸がん、精巣がん、頭頸がん、膵臓がん、脳がん及び皮膚がんから選ばれる固形腫瘍細胞である。
幾つかの実施形態において、上記がんは、白血病、リンパ腫又は骨髄腫などの血液がんである。本明細書に記載の方法によって治療できる血液がんは、白血病（例えば、急性白血病、慢性白血病）、リンパ腫（例えば、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫）及び多発性骨髄腫を含む。従って、幾つかの実施形態において、上記がんは、白血病（例えば、急性白血病、慢性白血病）、リンパ腫（例えば、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫）及び多発性骨髄腫から選ばれる血液がん細胞である。
ある実施形態において、固形腫瘍は、脳腫瘍、乳がん、肺がん又は肝臓がんである。幾つかの実施形態において、上記脳腫瘍は膠芽腫（ＧＢＭ）である。ある実施形態において、上記ＧＢＭは原発性多形膠芽腫である。特定の実施形態において、上記ＧＢＭは再発性多形膠芽腫である。幾つかの実施形態において、上記脳腫瘍は転移性脳腫瘍である。ある実施形態において、上記転移性脳腫瘍は、非小細胞肺がん脳転移（ＮＳＣＬＣＢＭ）、小細胞肺がん脳転移（ＳＣＬＣＢＭ）、ＨＥＲ２－陽性転移性乳がん又はトリプルネガティブ乳がん脳転移（ＴＮＢＣＢＭ）である。幾つかの実施形態において、上記肝臓がんは肝細胞がん（ＨＣＣ）である。
他の態様において、本発明は、必要とする対象の腫瘍（例えば、膠芽腫などの固形腫瘍）を治療するための薬物の調製における、本明細書に記載の何れか１つの組成物（例えば、ポリヌクレオチド、Ｔリンパ球）又は医薬組成物の用途を提供する。
他の態様において、本発明は、必要とする対象を治療する方法であって、有効用量のＴリンパ球を対象に投与することを含み、ここで少なくとも一部のＴリンパ球が、
１種又は複数種の第１のＴＡＡｓに結合できるＣＡＲをコードする配列を含む第１のポリヌクレオチド、並びにＴ細胞に結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）及び第２のＴＡＡをコードする配列を含む第２のポリヌクレオチド、又は
１種又は複数種の第１のＴＡＡに結合できるＣＡＲとＴ細胞及び第２のＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む、方法を提供する。
１種又は複数種の第１のＴＡＡｓに結合できるＣＡＲをコードする配列を含む第１のポリヌクレオチド、並びにＴ細胞に結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）及び第２のＴＡＡをコードする配列を含む第２のポリヌクレオチド、又は
１種又は複数種の第１のＴＡＡに結合できるＣＡＲとＴ細胞及び第２のＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む、方法を提供する。
他の態様において、本発明は、Ｔ細胞に結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列及び第２のＴＡＡエピトープを含む第１のポリヌクレオチドを含む、Ｔリンパ球を提供する。幾つかの実施形態において、上記Ｔリンパ球は、１つ又は複数の上記第１のＴＡＡに結合できるＣＡＲをコードする配列を含む第２のポリヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態において、上記第１及び第２のポリヌクレオチドは、本明細書でそれぞれ独立的に提供される。幾つかの実施形態において、上記第１及び第２のポリヌクレオチドは連結されている。幾つかの実施形態において、上記第１及び第２のポリヌクレオチドは単離されている。
特定の実施形態において、本発明は、必要とする対象を治療する方法であって、有効用量のＴリンパ球を対象に投与することを含み、ここで少なくとも一部のＴリンパ球が、１種又は複数種の第１のＴＡＡｓに結合できるＣＡＲをコードする配列、並びにＴ細胞及び第２のＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む、方法を提供する。特定の実施形態において、本発明は、必要とする対象を治療する方法であって、有効用量のＴリンパ球を対象に投与することを含み、ここで少なくとも一部のＴリンパ球が、１種又は複数種の第１のＴＡＡｓに結合できるＣＡＲをコードする配列を含む第１のポリヌクレオチド、並びに、Ｔ細胞に結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）及び第２のＴＡＡをコードする配列を含む第２のポリヌクレオチドを含み、ここで上記第１及び第２のポリヌクレオチドが単離されている、方法を提供する。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャーは、ＣＤ２、ＣＤ３、ＶＬＡ－１、ＣＤ８、ＣＤ４、ＣＣＲ６、ＣＸＣＲ５、ＣＤ２５、ＣＤ３１、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ１９７、ＣＤ１２７、ＣＤ３８、ＣＤ２７、ＣＤ１９６、ＣＤ２７７、又はＣＸＣＲ３に結合することができる。ある実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャーは、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ３１、又はＣＤ２７７に結合することができる。特定の実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャーはＣＤ３に結合することができる。
幾つかの実施形態において、上記１種又は複数種の第１のＴＡＡ及び上記第２のＴＡＡは、血液がん（例えば、白血病、リンパ腫、骨髄腫）細胞にそれぞれ独立的に発現する。本明細書に記載の方法によって治療できる血液がんは、白血病（例えば、急性白血病、慢性白血病）、リンパ腫（例えば、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫）及び多発性骨髄腫を含む。従って、幾つかの実施形態において、上記１種又は複数種の第１のＴＡＡ、上記第２のＴＡＡ又はその両方は、白血病（例えば、急性白血病、慢性白血病）、リンパ腫（例えば、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ－細胞リンパ腫）及び多発性骨髄腫から選ばれる血液がん細胞に発現する。
幾つかの実施形態において、上記１種又は複数種の第１のＴＡＡ及び上記第２のＴＡＡは、固形腫瘍（例えば、乳腺、肺、前立腺、結腸、膀胱、卵巣、腎臓、胃、結腸、直腸、精巣、頭部及び／又は頸部、膵臓、脳、皮膚の腫瘍）細胞にそれぞれ独立的に発現する。従って、幾つかの実施形態において、上記１種又は複数種の第１のＴＡＡ及び上記第２のＴＡＡは、乳房、肺、前立腺、結腸、膀胱、卵巣、腎臓、胃、直腸、結腸直腸、精巣、頭頸部、膵臓、脳及び皮膚がん細胞から選択される固形腫瘍細胞にそれぞれ独立的に発現する。
幾つかの実施形態において、上記１種又は複数種の第１のＴＡＡは、結腸がん抗原１９．９、胃がんムチン、抗原４．２、糖タンパク質Ａ３３（ｇｐＡ３３）、ＡＤＡＭ－９、胃がん抗原ＡＨ６、ＡＬＣＡＭ、悪性ヒトリンパ球抗原ＡＰＯ－１、がん抗原Ｂ１、Ｂ７Ｈ３、β－カテニン、ＡＬＥＢ／ＬＥＹ血液型、バーキットリンパ腫抗原－３８．１３、結腸腺がん抗原Ｃ１４、卵巣がん抗原ＣＡ１２５、カルボキシペプチダーゼＭ、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３６、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ７９ａ／ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１０３、ＣＤ３１７、ＣＤＫ４、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＥＡＣＡＭ６、Ｃ０１７－ｉＡ、ＣＯ－４３（ＬＥＢ血液型）、ＣＯ－５１４（ＬＥＡ血液型）、ＣＴＡ－１、ＣＴＬＡ４、サイトケラチン８、抗原Ｄ１．１、抗原Ｄ１５６－２２、ＤＲ５、Ｅｉシリーズ（Ｂ血液型）、ＥＧＦＲ（上皮成長因子受容体）、アドレナリン受容体Ａ２（ＥｐｈＡ２）、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＧＤ２／ＧＤ３／ＧＭ２、肺腺がん抗原Ｆ３、抗原ＦＣ１０．２、Ｇ４９、ガングリオシドＧＤ２、ガングリオシドＧＤ３、ガングリオシドＧＭ２、ガングリオシドＧＭ３、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＩＣＡ１９－９、ＧＭ２、ｇｐＯＯ、グルカゴン－３（ＧＰＣ３）、ヒト白血病Ｔ細胞抗原Ｇｐ３７、黒色腫抗原ｇｐ７５、ＧＰＡ３３、ＨＥＲ２抗原（例えば、ｐｉ８５ＨＥＲ２）、ヒト乳脂肪球（ＨＭＦＧ）、ヒトパピローマウイルスＥ６／ヒトパピローマウイルス－Ｅ７、高分子量黒色腫抗原（ＨＭＷＭＡＡ）、Ｉ抗原（分化抗原）Ｉ（Ｍａ）、インテグリンα－Ｖ－β－６インテグリンＰ６（ＩＴＧＢ６）、インターロイキン－１３受容体ａ２（ＩＬ１３Ｒα２）、ＪＡＭ－３、ＫＩＤ３、ＫＩＤ３１、ＫＳ１／４汎がん抗原、ヒト肺がん抗原Ｌ６とＬ２０、ＬＥＡ、ＬＵＣＡ－２、Ｍｉ：２２：２５：８、Ｍ１８、Ｍ３９、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＭＡＲＴ、ＭＵＣ－１、ＭＵＭ－１、Ｍｙｌ、Ｎ－アセチルグルコサミン転移酵素、ネオ糖タンパク質、ＮＳ－１０、ＯＦＡ－１、ＯＦＡ－２、オンコスタチンＭ、Ｐ１５、黒色腫関連抗原Ｐ９７、多結晶形上皮ムチン（ＰＥＭ）、多結晶形上皮ムチン抗原（ＰＥＭＡ）、ＰＩＰＡ、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、前立腺酸性ホスフェート、Ｒ２４、ＲＯＲｉ、スフィンゴ脂質、ＳＳＥＡ－１、ＳＳＥＡ－３、ＳＳＥＡ－４、ｓＴｎ、Ｔ細胞受容体由来ペプチド、Ｔ５Ａ７、ＴＡＧ－７２、ＴＬ５（血液型Ａ）、ＴＮＦ－α受容体、ＴＮＦ－Ｂ受容体、ＴＮＦ－ｙ受容体、ＴＲＡ－１－８５（血液型Ｈ）、トランスフェリン受容体、腫瘍特異的移植抗原（ＴＳＴＡ）、がん胎児抗原－α－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＶＥＰ８、ＶＥＰ９、ＶＩＭ－Ｄ５、及びＹハプテン、Ｌｅｙからそれぞれ独立的に選ばれる。
幾つかの実施形態において、上記１種又は複数種の第１のＴＡＡは、インターロイキン－１３受容体サブユニット－２（ＩＬ１３Ｒα２）、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＥＧＦＲ変異体ＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、グルカゴン－３（ＧＰＣ３）及びその組み合わせからそれぞれ独立的に選ばれる。
幾つかの実施形態において、上記第２のＴＡＡは、ＩＬ１３Ｒα２、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ又はＧＰＣ３である。
他の態様において、他の態様において、本発明は、必要とする対象を治療する方法であって、有効用量のＴリンパ球を対象に投与することを含み、ここで少なくとも一部のＴリンパ球が、
ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含むポリヌクレオチド、又は
ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲ融合タンパク質とＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む、方法を提供する。
ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含むポリヌクレオチド、又は
ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲ融合タンパク質とＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む、方法を提供する。
他の態様において、他の態様において、本発明は、必要とする対象を治療する方法であって、有効用量のＴリンパ球を対象に投与することを含み、ここで少なくとも一部のＴリンパ球が、ＨＥＲ２に結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第２のポリヌクレオチド、又は
ＨＥＲ２に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む、方法を提供する。
ＨＥＲ２に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む、方法を提供する。
幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは１つのＨＥＲ２の２つのエピトープに結合することができる。幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは２つのＨＥＲ２に結合することができる。
他の態様において、本発明は、必要とする対象を治療する方法であって、有効用量のＴリンパ球を対象に投与することを含み、ここで少なくとも一部のＴリンパ球が、ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩに結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第２のポリヌクレオチド、又は
ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩに結合できる二重特異性ＣＡＲ融合タンパク質とＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む、方法を提供する。
ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩに結合できる二重特異性ＣＡＲ融合タンパク質とＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む、方法を提供する。
幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは１つのＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩの２つのエピトープに結合することができる。幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは２つのＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩに結合することができる。
他の態様において、本発明は、必要とする対象を治療する方法であって、有効用量のＴリンパ球を対象に投与することを含み、ここで少なくとも一部のＴリンパ球が、ＧＰＣ３に結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第２のポリヌクレオチド、又は
ＧＰＣ３に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む、方法を提供する。
ＧＰＣ３に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む、方法を提供する。
幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは１つのＧＰＣ３の２つのエピトープに結合することができる。幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは２つのＧＰＣ３に結合することができる。
幾つかの実施形態において、上記ＴＡＡは膠芽腫腫瘍抗原である。
幾つかの実施形態において、上記Ｔリンパ球は同種異性体又は同種異系Ｔリンパ球である。
幾つかの実施形態において、上記Ｔリンパ球は自己Ｔリンパ球である。
幾つかの実施形態において、ヒト対象は乳児（１歳未満）である。幾つかの実施形態において、上記ヒト対象の年齢は１１歳未満である。幾つかの実施形態において、上記ヒト対象は１１歳以上である。幾つかの実施形態において、上記ヒト対象は１２歳以上である。幾つかの実施形態において、上記ヒト対象は１２～１７歳である。幾つかの実施形態において、上記ヒト対象の年齢は１８歳未満である。幾つかの実施形態において、上記ヒト対象は成人（１８歳以上）である。幾つかの実施形態において、上記ヒト対象は４０歳以上、例えば少なくとも、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０歳である。幾つかの実施形態において、上記ヒト対象は高齢者（６５歳以上）である。幾つかの実施形態において、上記ヒト対象は１８歳以上である。
本明細書に記載の方法に従って治療される対象は、特定の病状と診断された対象、又はそのような病状を発症するリスクのある対象であってもよい。診断は、当該分野で既知の任意の方法又は技術によって実行することができる。当業者であれば、本開示の治療される対象は、標準検査を受けているか、又は疾患又は病状に関連する１つ又は複数の危険因子が存在するため、検査を必要とせずに危険にあるものと同定されている可能性があると理解されたい。
幾つかの実施形態において、哺乳動物対象はがんに罹患している。
幾つかの実施形態において、上記がんは血液がんである。幾つかの実施形態において、上記がんは血液がんであり、且つ上記二重特異性ＣＡＲは、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＢＣＭＡ又はその組み合わせに結合する（例えば、標的とする）ことができる。
幾つかの実施形態において、上記血液がんは白血病である。
幾つかの実施形態において、上記白血病は、急性リンパ球性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、有毛細胞白血病（ＨＣＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）及びその組み合わせから選ばれる。
幾つかの実施形態において、上記血液がんはリンパ腫を含む。
幾つかの実施形態において、上記リンパ腫はホジキンリンパ腫を含む。
幾つかの実施形態において、上記ホジキンリンパ腫は、結節性硬化型ホジキンリンパ腫（ＮＳＣＨＬ）、混合細胞性ホジキンリンパ腫（ＭＣＣＨＬ）、リンパ球豊富型ホジキン病（ＬＲＣＨＬ）、リンパ球減少型ホジキン病（ＬＤＨＬ）及びその組み合わせから選ばれる。
幾つかの実施形態において、上記リンパ腫は非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）を含む。
幾つかの実施形態において、上記非ホジキンリンパ腫はＢ細胞リンパ腫を含む。
幾つかの実施形態において、上記Ｂ細胞リンパ腫は、びまん性大細胞型Ｂ細胞リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、原発性縦隔Ｂ細胞リンパ腫（ＰＭＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、小リンパ球性リンパ腫（ＳＬＬ）、辺縁帯リンパ腫（ＭＺＬ）、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、ワルデンストロームマクログロブリン血症（ＷＭＧ）、バーキットリンパ腫（ＢＬ）及びその組み合わせから選ばれる。
幾つかの実施形態において、上記非ホジキンリンパ腫はＴ細胞リンパ腫を含む。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞リンパ腫は、末梢性Ｔ細胞リンパ腫（ＰＴＣＬ）、未分化大細胞リンパ腫（ＡＬＣＬ）、血管免疫芽球性Ｔ細胞リンパ腫（ＡＩＴＬ）、皮膚Ｔ細胞リンパ腫及びその組み合わせから選ばれる。
幾つかの実施形態において、上記血液がんは多発性骨髄腫を含む。
幾つかの実施形態において、上記多発性骨髄腫は、軽鎖多発性骨髄腫（ＬＣＭＭ）、非分泌性多発性骨髄腫（ＮＳＭＭ）、孤立性形質細胞腫（ＳＰ）、髄外性形質細胞腫（ＥＭＰ）、意義不明の単クローン性免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）、くすぶり型多発性骨髄腫（ＳＭＭ）、免疫グロブリンＤ多発性骨髄腫（ＩＧＤＭＭ）、免疫グロブリンＥ（ＩＧＥ）多発性骨髄腫及びその組み合わせから選ばれる。
幾つかの実施形態において、上記がんは固形腫瘍である。
幾つかの実施形態において、上記固形腫瘍は、乳房、肺、前立腺、結腸、膀胱、卵巣、腎臓、胃、結腸、直腸、精巣、頭部及び／又は頸部、膵臓、脳、皮膚又はその組み合わせの腫瘍である。
幾つかの実施形態において、上記固形腫瘍は、膀胱がん、脳がん、乳がん、子宮頸がん、結腸がん、結腸直腸がん、卵管がん、胃がん、泌尿生殖管がん、頭頸部がん、肝臓がん、肺がん、黒色腫、鼻咽頭がん（ＮＰＣ）、膵臓がん、前立腺がん、卵巣がん、直腸がん、腎臓がん、皮膚がん、胃がん、精巣がん、甲状腺がん、尿道がん及びその組み合わせから選ばれる。
幾つかの実施形態において、上記固形腫瘍は、乳がん、扁平上皮非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、非扁平上皮ＮＳＣＬＣ、肺腺がん、中皮腫、腎明細胞がん、腎乳頭細胞がん、肝細胞がん（ＨＣＣ）、去勢抵抗性前立腺がん、頭頸部扁平上皮細胞がん、食道がん、消化器がん、子宮内膜症及びその組み合わせから選ばれる。ある実施形態において、上記固形腫瘍は、乳がん、扁平上皮非小細胞肺がん（ＮＳＣＬＣ）、非扁平上皮ＮＳＣＬＣ、肺腺がん、肝細胞がん（ＨＣＣ）及びその組み合わせから選ばれる。特定の実施形態において、上記固形腫瘍は乳がんである。特定の実施形態において、上記固形腫瘍はＮＳＣＬＣである。特定の実施形態において、上記固形腫瘍は肺腺がんである。特定の実施形態において、上記固形腫瘍は中皮腫である。特定の実施形態において、上記固形腫瘍はＨＣＣである。
幾つかの実施形態において、上記固形腫瘍はがんの転移性病変である。
幾つかの実施形態において、上記がんは膠芽腫（ＧＢＭ）、乳がん又は肺がんである。幾つかの実施形態において、上記がんはＧＢＭである。幾つかの実施形態において、対象は新たに膠芽腫と診断される。幾つかの実施形態において、対象は、以前の膠芽腫治療から再発したか、又は治療に耐性である。幾つかの実施形態において、上記がんは乳がんである。幾つかの実施形態において、上記乳がんはＨＥＲ２－陽性乳がんである。幾つかの実施形態において、上記がんは肺がんである。幾つかの実施形態において、上記肺がんは脳転性移肺がんである。
幾つかの実施形態において、対象に投与されるＴリンパ球の少なくとも約１０％は、二重特異性ＣＡＲ及びＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）を発現する。例えば、対象に投与されるＴリンパ球の少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％又は少なくとも７５％は、二重特異性ＣＡＲ及びＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）を発現する。幾つかの実施形態において、約１０～８０％のＴリンパ球は、二重特異性ＣＡＲ及びＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）を発現する。例えば、約１０～７５％、１５～７５％、１５～７０％、２０～７０％、２０～６５％、２５～６５％、２５～６０％、３０～６０％、３０～５５％、３５～５５％、３５～５０％又は４０～５０％のＴリンパ球は、二重特異性ＣＡＲ及びＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）を発現する。
幾つかの実施形態において、少なくとも１０％のＴリンパ球は、二重特異性ＣＡＲを発現する。例えば、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも２５％、少なくとも３０％、少なくとも３５％、少なくとも４０％、少なくとも４５％、少なくとも５０％、少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも６５％、少なくとも７０％又は少なくとも７５％のＴリンパ球は、二重特異性ＣＡＲを発現する。幾つかの実施形態において、約１０～８０％のＴリンパ球は、二重特異性ＣＡＲを発現する。例えば、約１０～７５％、１５～７５％、１５～７０％、２０～７０％、２０～６５％、２５～６５％、２５～６０％、３０～６０％、３０～５５％、３５～５５％、３５～５０％又は４０～５０％のＴリンパ球は、二重特異性ＣＡＲを発現する。
幾つかの実施形態において、上記Ｔリンパ球は、各Ｔリンパ球内の二重特異性ＣＡＲ及びＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）のぞれぞれをコードするポリヌクレオチドの１～４個のコピーを含む。例えば、上記Ｔリンパ球は、上記二重特異性ＣＡＲ及びＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）のそれぞれを含むポリヌクレオチドの約０、１、２、３若しくは４、又は１～４、１～３、１～２、２～４又は２～３個のコピーを含むことができる。
幾つかの実施形態において、上記方法は予防的治療に使用される。幾つかの実施形態において、上記方法は第１の選択療法として使用される。幾つかの実施形態において、上記方法は第２の選択療法として使用される。幾つかの実施形態において、上記方法は第３の選択療法として使用される。
幾つかの実施形態において、上記方法はがんの治療に使用される。
本明細書に記載の治療薬は、例えば、経口、飲食、局所、経皮、直腸、非経口（例えば、動脈内、静脈内、筋肉内、皮下注射、皮内注射）、静脈内注入及び吸入（例えば、気管支内、鼻腔内又は経口吸入、鼻腔点滴）の投与経路など、様々な投与経路によって投与することができ、これは、当該化合物及び治療される特定の疾患によって決定される。示されているように、投与は、局所的又は全身的であってもよい。好ましい投与方法は、選択される特定の化合物に応じて変化することができる。
幾つかの実施形態において、上記Ｔリンパ球は、単回注入（例えば、単回頭蓋内脳室、頭蓋内又は静脈内注入）として投与される。幾つかの実施形態において、Ｔリンパ球は、２回又は複数回の注入（例えば、頭蓋内脳室、頭蓋内又は静脈内注入、或いはその組み合わせ）として投与される。
幾つかの実施形態において、上記方法は、治療有効量の第２の治療薬を対象に投与することを更に含む。
幾つかの実施形態において、上記方法は、Ｔリンパ球又はその組み合わせの投与前、投与中又は投与後に対象に治療（例えば、化学療法）を施すことを更に含む。例えば、ＣＡＲ－Ｔ治療の前に、有効性を向上させるために短期間の化学療法を行うことができる。
幾つかの実施形態において、上記方法は、Ｔリンパ球の投与中又は投与後に、ＣＡＲ－Ｔ治療に関連するＣＲＳ及び神経毒性を管理することを更に含む。
２種又は複数の治療薬の投与は、基本的に同時に、例えば薬物を組み合わせることで治療薬を併用投与することを含む。選択可能的に、このような投与は、複数のコンテナで、又は各治療薬の別個のコンテナ（例えば、カプセル、粉末及び液体）での同時投与を含む。このような投与は、各タイプの治療薬を順次に、ほぼ同じ時点又は異なる時点で使用することを更に含む。本明細書に記載の組成物及び第２の治療薬は、同じ投与経路によって、又は異なる投与経路によって投与することができる。
他の態様において、本発明は、Ｔ細胞媒介性腫瘍細胞の溶解を誘導する方法であって、膠芽腫細胞を有効用量のＴリンパ球と接触させることを含み、ここで少なくとも一部のＴリンパ球が、１種又は複数種の第１のＴＡＡに結合できるＣＡＲをコードする配列を含む第１のポリヌクレオチド、並びにＴ細胞に結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）及び第２のＴＡＡをコードする配列を含む第２のポリヌクレオチド、又は
１種又は複数種の第１のＴＡＡに結合できるＣＡＲとＴ細胞及び第２のＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む、方法を提供する。
１種又は複数種の第１のＴＡＡに結合できるＣＡＲとＴ細胞及び第２のＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む、方法を提供する。
他の態様において、本発明は、Ｔ細胞及び第２のＴＡＡエピトープに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第１のポリヌクレオチドを含む、Ｔリンパ球を提供する。幾つかの実施形態において、上記Ｔリンパ球は、１種又は複数種の第１のＴＡＡに結合できるＣＡＲをコードする配列を含む第２のポリヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態において、本明細書は、第１及び第２のポリヌクレオチドのそれぞれを独立的に提供する。幾つかの実施形態において、上記第１及び第２のポリヌクレオチドは連結されている。幾つかの実施形態において、上記第１及び第２のポリヌクレオチドは単離されている。
特定の実施形態において、本発明は、Ｔ細胞媒介性腫瘍細胞の溶解を誘導する方法であって、膠芽腫細胞を有効用量のＴリンパ球と接触させることを含み、ここで少なくとも一部のＴリンパ球が、１種又は複数種の第１のＴＡＡに結合できるＣＡＲをコードする配列を含む第１のポリヌクレオチド、並びにＴ細胞に結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）及び第２のＴＡＡをコードする配列を含む第２のポリヌクレオチドを含む、方法を提供する。特定の実施形態において、本発明は、必要とする対象を治療する方法であって、有効用量のＴリンパ球を対象に投与することを含み、ここで少なくとも一部のＴリンパ球が、１種又は複数種の第１のＴＡＡに結合できるＣＡＲをコードする配列を含む第１のポリヌクレオチド、並びに、Ｔ細胞に結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）及び第２のＴＡＡをコードする配列を含む第２のポリヌクレオチドを含み、ここで上記第１及び第２のポリヌクレオチドが単離されている、方法を提供する。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャーはＣＤ２、ＣＤ３、ＶＬＡ－１、ＣＤ８、ＣＤ４、ＣＣＲ６、ＣＸＣＲ５、ＣＤ２５、ＣＤ３１、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ１９７、ＣＤ１２７、ＣＤ３８、ＣＤ２７、ＣＤ１９６、ＣＤ２７７又はＣＸＣＲ３に結合することができる。ある実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャーは、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ３１又はＣＤ２７７に結合することができる。特定の実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャーはＣＤ３に結合することができる。
幾つかの実施形態において、上記１種又は複数種の第１のＴＡＡ及び上記第２のＴＡＡは、血液がん（例えば、白血病、リンパ腫、骨髄腫）細胞にそれぞれ独立的に発現する。本明細書に記載の方法によって治療できる血液がんは、白血病（例えば、急性白血病、慢性白血病）、リンパ腫（例えば、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫）及び多発性骨髄腫を含む。従って、幾つかの実施形態において、上記１種又は複数種の第１のＴＡＡ、上記第２のＴＡＡ又はその両方は、白血病（例えば、急性白血病、慢性白血病）、リンパ腫（例えば、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ－細胞リンパ腫）及び多発性骨髄腫から選ばれる血液がん細胞に発現する。
幾つかの実施形態において、上記１種又は複数種の第１のＴＡＡ及び上記第２のＴＡＡは、固形腫瘍（例えば、乳腺、肺、前立腺、結腸、膀胱、卵巣、腎臓、胃、結腸、直腸、精巣、頭部及び／又は頸部、膵臓、脳、皮膚の腫瘍）細胞にそれぞれ独立的に発現する。従って、幾つかの実施形態において、上記１種又は複数種の第１のＴＡＡ及び上記第２のＴＡＡは、乳房、肺、前立腺、結腸、膀胱、卵巣、腎臓、胃、直腸、結腸直腸、精巣、頭頸部、膵臓、脳及び皮膚がん細胞から選択される固形腫瘍細胞にそれぞれ独立的に発現する。
幾つかの実施形態において、上記１種又は複数種の第１のＴＡＡは、結腸がん抗原１９．９、胃がんムチン、抗原４．２、糖タンパク質Ａ３３（ｇｐＡ３３）、ＡＤＡＭ－９、胃がん抗原ＡＨ６、ＡＬＣＡＭ、悪性ヒトリンパ球抗原ＡＰＯ－１、がん抗原Ｂ１、Ｂ７Ｈ３、β－カテニン、ＡＬＥＢ／ＬＥＹ血液型、バーキットリンパ腫抗原－３８．１３、結腸腺がん抗原Ｃ１４、卵巣がん抗原ＣＡ１２５、カルボキシペプチダーゼＭ、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３６、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ７９ａ／ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１０３、ＣＤ３１７、ＣＤＫ４、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＥＡＣＡＭ６、Ｃ０１７－ｉＡ、ＣＯ－４３（ＬＥＢ血液型）、ＣＯ－５１４（ＬＥＡ血液型）、ＣＴＡ－１、ＣＴＬＡ４、サイトケラチン８、抗原Ｄ１．１、抗原Ｄ１５６－２２、ＤＲ５、Ｅｉシリーズ（Ｂ血液型）、ＥＧＦＲ（上皮成長因子受容体）、アドレナリン受容体Ａ２（ＥｐｈＡ２）、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＧＤ２／ＧＤ３／ＧＭ２、肺腺がん抗原Ｆ３、抗原ＦＣ１０．２、Ｇ４９、ガングリオシドＧＤ２、ガングリオシドＧＤ３、ガングリオシドＧＭ２、ガングリオシドＧＭ３、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＩＣＡ１９－９、ＧＭ２、ｇｐＯＯ、グルカゴン－３（ＧＰＣ３）、ヒト白血病Ｔ細胞抗原Ｇｐ３７、黒色腫抗原ｇｐ７５、ＧＰＡ３３、ＨＥＲ２抗原（例えば、ｐｉ８５ＨＥＲ２）、ヒト乳脂肪球（ＨＭＦＧ）、ヒトパピローマウイルスＥ６／ヒトパピローマウイルス－Ｅ７、高分子量黒色腫抗原（ＨＭＷＭＡＡ）、Ｉ抗原（分化抗原）Ｉ（Ｍａ）、インテグリンα－Ｖ－β－６インテグリンＰ６（ＩＴＧＢ６）、インターロイキン－１３受容体ａ２（ＩＬ１３Ｒα２）、ＪＡＭ－３、ＫＩＤ３、ＫＩＤ３１、ＫＳ１／４汎がん抗原、ヒト肺がん抗原Ｌ６とＬ２０、ＬＥＡ、ＬＵＣＡ－２、Ｍｉ：２２：２５：８、Ｍ１８、Ｍ３９、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＭＡＲＴ、ＭＵＣ－１、ＭＵＭ－１、Ｍｙｌ、Ｎ－アセチルグルコサミン転移酵素、ネオ糖タンパク質、ＮＳ－１０、ＯＦＡ－１、ＯＦＡ－２、オンコスタチンＭ、Ｐ１５、黒色腫関連抗原Ｐ９７、多結晶形上皮ムチン（ＰＥＭ）、多結晶形上皮ムチン抗原（ＰＥＭＡ）、ＰＩＰＡ、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、前立腺酸性ホスフェート、Ｒ２４、ＲＯＲｉ、スフィンゴ脂質、ＳＳＥＡ－１、ＳＳＥＡ－３、ＳＳＥＡ－４、ｓＴｎ、Ｔ細胞受容体由来ペプチド、Ｔ５Ａ７、ＴＡＧ－７２、ＴＬ５（血液型Ａ）、ＴＮＦ－α受容体、ＴＮＦ－Ｂ受容体、ＴＮＦ－ｙ受容体、ＴＲＡ－１－８５（血液型Ｈ）、トランスフェリン受容体、腫瘍特異的移植抗原（ＴＳＴＡ）、がん胎児抗原－α－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＶＥＰ８、ＶＥＰ９、ＶＩＭ－Ｄ５、及びＹハプテン、Ｌｅｙからそれぞれ独立的に選ばれる。
幾つかの実施形態において、上記１種又は複数種の第１のＴＡＡは、インターロイキン－１３受容体サブユニット－２（ＩＬ１３Ｒα２）、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＥＧＦＲ変異体ＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、グルカゴン－３（ＧＰＣ３）及びその組み合わせからそれぞれ独立的に選ばれる。
幾つかの実施形態において、上記第２のＴＡＡは、ＩＬ１３Ｒα２、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ又はＧＰＣ３である。
他の態様において、本発明は、Ｔ細胞媒介性腫瘍細胞の溶解を誘導する方法であって、膠芽腫細胞を有効用量のＴリンパ球と接触させることを含み、ここで少なくとも一部のＴリンパ球が、
ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含むポリヌクレオチド、又は
ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む、方法を提供する。
ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含むポリヌクレオチド、又は
ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む、方法を提供する。
幾つかの実施形態において、上記ＴＡＡは膠芽腫腫瘍抗原である。
幾つかの実施形態において、上記第１のポリヌクレオチドは、本明細書に記載の、ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２を標的とする二重特異性ＣＡＲをコードするポリヌクレオチドの何れか１つである。幾つかの実施形態において、上記第２のポリヌクレオチドは、本明細書に記載の、ＣＤ３及び膠芽腫腫瘍抗原に結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードするポリヌクレオチドの何れか１つである。幾つかの実施形態において、上記第３のポリヌクレオチドは、本明細書に記載の、二重ＣＡＲとＴ細胞結合物（ＴＥ又はＢＩＴ）との融合タンパク質をコードするポリヌクレオチドの何れか１つである。
他の態様において、本発明は、Ｔ細胞媒介性腫瘍細胞の溶解を誘導する方法であって、膠芽腫細胞を有効用量のＴリンパ球と接触させることを含み、ここで少なくとも一部のＴリンパ球が、
ＨＥＲ２に結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含む第１のポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第２のポリヌクレオチド、又は
ＨＥＲ２に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む、方法を提供する。
ＨＥＲ２に結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含む第１のポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第２のポリヌクレオチド、又は
ＨＥＲ２に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む、方法を提供する。
幾つかの実施形態において、上記Ｔリンパ球は、ＨＥＲ２に結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第２のポリヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態において、上記ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の、ＨＥＲ２を標的とする二重特異性ＣＡＲをコードする何れか１つのポリヌクレオチドである。幾つかの実施形態において、上記第２のポリヌクレオチドは、本明細書に記載の、ＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードするポリヌクレオチドの何れか１つである。
幾つかの実施形態において、上記Ｔリンパ球は、ＨＥＲ２に結合できる二重特異性ＣＡＲを発現（例えば、分泌）する。
幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは１つのＨＥＲ２の２つのエピトープに結合することができる。幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは２つのＨＥＲ２に結合することができる。
他の態様において、本発明は、Ｔ細胞媒介性腫瘍細胞の溶解を誘導する方法であって、膠芽腫細胞を有効用量のＴリンパ球と接触させることを含み、ここで少なくとも一部のＴリンパ球が、
ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩに結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含む第１のポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第２のポリヌクレオチド、又は
ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩに結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む、方法を提供する。
ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩに結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含む第１のポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第２のポリヌクレオチド、又は
ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩに結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む、方法を提供する。
幾つかの実施形態において、上記Ｔリンパ球は、ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩに結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第２のポリヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態において、上記ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の、ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩを標的とする二重特異性ＣＡＲをコードする何れか１つのポリヌクレオチドである。幾つかの実施形態において、上記第２のポリヌクレオチドは、本明細書に記載の、ＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードするポリヌクレオチドの何れか１つである。
幾つかの実施形態において、上記Ｔリンパ球は、ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩに結合できる二重特異性ＣＡＲを発現（例えば、分泌）する。
幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは１つのＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩの２つのエピトープに結合することができる。幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは２つのＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩに結合することができる。
他の態様において、本発明は、Ｔ細胞媒介性腫瘍細胞の溶解を誘導する方法であって、膠芽腫細胞を有効用量のＴリンパ球と接触させることを含み、ここで少なくとも一部のＴリンパ球が、
ＧＰＣ３に結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含む第１のポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第２のポリヌクレオチド、又は
ＧＰＣ３に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む、方法を提供する。
ＧＰＣ３に結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含む第１のポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第２のポリヌクレオチド、又は
ＧＰＣ３に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含む第３のポリヌクレオチドを含む、方法を提供する。
幾つかの実施形態において、上記Ｔリンパ球は、ＧＰＣ３に結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含む第２のポリヌクレオチドを含む。幾つかの実施形態において、上記ポリヌクレオチドは、本明細書に記載の、ＧＰＣ３を標的とする二重特異性ＣＡＲをコードする何れか１つのポリヌクレオチドである。幾つかの実施形態において、上記第２のポリヌクレオチドは、本明細書に記載の、ＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードするポリヌクレオチドの何れか１つである。
幾つかの実施形態において、上記Ｔリンパ球は、ＧＰＣ３に結合できる二重特異性ＣＡＲを発現（例えば、分泌）する。
幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは１つのＧＰＣ３の２つのエピトープに結合することができる。幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは２つのＧＰＣ３に結合することができる。
幾つかの実施形態において、上記腫瘍細胞は固形腫瘍細胞である。幾つかの実施形態において、上記腫瘍細胞は膠芽腫細胞、乳がん細胞又は肺がん細胞である。幾つかの実施形態において、上記腫瘍細胞は膠芽腫細胞である。幾つかの実施形態において、上記腫瘍細胞は乳がん細胞である。幾つかの実施形態において、上記乳がん細胞はＨＥＲ２－陽性乳がん細胞である。幾つかの実施形態において、上記腫瘍細胞は肺がん細胞である。幾つかの実施形態において、上記肺がん細胞は脳転移性肺がん細胞である。
幾つかの実施形態において、上記膠芽腫細胞は、本明細書に記載の任意の対象に存在し、有効用量のＴリンパ球を対象に投与することによって、膠芽腫細胞を有効用量のＴリンパ球と接触させる。
二重ＣＡＲ＿デュアルアームＢｉＴＥの操作されたＴ細胞
二重ＣＡＲ＿デュアルアームＢｉＴＥの操作されたＴ細胞
他の態様において、本発明は、２種のＴＡＡ（例えば、細胞表面で発現する２種の異なる抗原）に結合できると共にＴ細胞（例えば、ＣＤ３）及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）の二重特異性ＣＡＲの融合タンパク質をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む、Ｔリンパ球を提供する。
他の態様において、本発明は、本明細書に記載の融合タンパク質をコードする配列を含むポリヌクレオチドを提供する。
他の態様において、本発明は、本明細書に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクターを提供する。
他の態様において、本発明は、本明細書に記載のポリヌクレオチド又は発現ベクターを含む宿主細胞を提供する。
他の態様において、本発明は、リンパ球を含む組成物であって、ここで、少なくとも一部の上記リンパ球が、二重特異性ＣＡＲとＴ細胞（例えば、ＣＤ３）及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む、組成物を提供する。
他の態様において、本発明は、本明細書に記載の組成物及び薬学的に許容されるベクターを含む医薬組成物を提供する。
他の態様において、本発明は、本明細書に記載の医薬組成物を含むコンテナ及び選択可能な使用説明書を含む試薬キットを提供する。
他の態様において、本発明は、本明細書に記載の必要とする対象の本明細書に記載の腫瘍を治療するための薬物の調製における、本明細書に記載の組成物又は医薬組成物の用途を提供する。
他の態様において、本発明は、本明細書に記載の必要とする対象の本明細書に記載の腫瘍を治療する方法であって、有効用量のＴリンパ球を対象に投与することを含み、ここで少なくとも一部のＴリンパ球が、二重特異性ＣＡＲとＴ細胞（例えば、ＣＤ３）及びＴＡＡ（例えば、膠芽腫抗原などの腫瘍抗原）に結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む、方法を提供する。
他の態様において、本発明は、Ｔ細胞媒介性腫瘍細胞の溶解を誘導する方法であって、腫瘍細胞を有効用量のＴリンパ球と接触させることを含み、ここで少なくとも一部のＴリンパ球が、二重特異性ＣＡＲとＴ細胞（例えば、ＣＤ３）及びＴＡＡ（例えば、膠芽腫抗原などの腫瘍抗原）に結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）との融合タンパク質をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む、方法を提供する。
幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは、リンカー配列を介してＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖに連結するＩＬ１３変異タンパク質を含む。
幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは、リンカー配列を介してＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖに連結するＩＬ１３変異タンパク質を含む。幾つかの実施形態において、上記ＩＬ１３変異タンパク質は、配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記ＩＬ１３変異タンパク質は、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して、約１～１２個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＩＬ１３変異タンパク質は、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは、配列番号２、３又は４に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは、配列番号４に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは、配列番号２、３又は４に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～２５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは、配列番号４に示されるアミノ酸配列に対して、約１～２５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは、配列番号２、３又は４に示されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは、配列番号４に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記二重特異性ＣＡＲは、
ＣＤ８αシグナルペプチド、
ＣＤ８αヒンジ、
ＣＤ２８膜貫通ドメイン、
４－１ＢＢ共刺激ドメイン、
ＣＤ３ζシグナルドメイン、
又はその組み合わせを更に含む。
ＣＤ８αシグナルペプチド、
ＣＤ８αヒンジ、
ＣＤ２８膜貫通ドメイン、
４－１ＢＢ共刺激ドメイン、
ＣＤ３ζシグナルドメイン、
又はその組み合わせを更に含む。
幾つかの実施形態において、
上記リンカーは、配列番号５に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
上記ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
上記ＣＤ８αヒンジは、配列番号７に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号８に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は
上記ＣＤ３ζシグナルドメインは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
又はその組み合わせである。
上記リンカーは、配列番号５に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
上記ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
上記ＣＤ８αヒンジは、配列番号７に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号８に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は
上記ＣＤ３ζシグナルドメインは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
又はその組み合わせである。
幾つかの実施形態において、
上記リンカーは、配列番号５に示されるアミノ酸配列に対して、１又は２個のアミノ酸置換を含み、
上記ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に示されるアミノ酸配列に対して、１又は２個のアミノ酸置換を含み、
上記ＣＤ８αヒンジは、配列番号７に示されるアミノ酸配列に対して、約１～５個のアミノ酸置換を含み、
上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号８に示されるアミノ酸配列に対して、約１～３個のアミノ酸置換を含み、
上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号９に示されるアミノ酸配列に対して、約１～５個のアミノ酸置換を含み、又は
上記ＣＤ３ζシグナルドメインは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列に対して、約１～１２個のアミノ酸置換を含み、
又はその組み合わせである。
上記リンカーは、配列番号５に示されるアミノ酸配列に対して、１又は２個のアミノ酸置換を含み、
上記ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に示されるアミノ酸配列に対して、１又は２個のアミノ酸置換を含み、
上記ＣＤ８αヒンジは、配列番号７に示されるアミノ酸配列に対して、約１～５個のアミノ酸置換を含み、
上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号８に示されるアミノ酸配列に対して、約１～３個のアミノ酸置換を含み、
上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号９に示されるアミノ酸配列に対して、約１～５個のアミノ酸置換を含み、又は
上記ＣＤ３ζシグナルドメインは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列に対して、約１～１２個のアミノ酸置換を含み、
又はその組み合わせである。
幾つかの実施形態において、
上記リンカーは、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含み、
上記ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に示されるアミノ酸配列を含み、
上記ＣＤ８αヒンジは、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含み、
上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含み、
上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号９に示されるアミノ酸配列を含み、又は
上記ＣＤ３ζシグナルドメインは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含み、
又はその組み合わせである。
上記リンカーは、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含み、
上記ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に示されるアミノ酸配列を含み、
上記ＣＤ８αヒンジは、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含み、
上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含み、
上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号９に示されるアミノ酸配列を含み、又は
上記ＣＤ３ζシグナルドメインは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含み、
又はその組み合わせである。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）はＣＤ３－結合ｓｃＦｖを含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖは、配列番号１４に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖは、配列番号１４に示されるアミノ酸配列に対して、約１～２５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖは、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記ＴＡＡはＥＧＦＲ抗原である。幾つかの実施形態において、上記ＴＡＡはＥＧＦＲｖＩＩＩ抗原である。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、
ＧＧＧＧＳ（配列番号１８）を含むリンカー配列を介してＣＤ３－結合ｓｃＦｖに連結する少なくとも１つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体、又は
ＧＧＧＧＳ（配列番号１８）を含むリンカー配列を介してＣＤ３－結合ｓｃＦｖに連結する少なくとも１つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体を含む。
ＧＧＧＧＳ（配列番号１８）を含むリンカー配列を介してＣＤ３－結合ｓｃＦｖに連結する少なくとも１つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体、又は
ＧＧＧＧＳ（配列番号１８）を含むリンカー配列を介してＣＤ３－結合ｓｃＦｖに連結する少なくとも１つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体を含む。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、
少なくとも２つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体、
少なくとも２つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体、又は
少なくとも１つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体及び少なくとも１つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体を含む。
少なくとも２つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体、
少なくとも２つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体、又は
少なくとも１つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体及び少なくとも１つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体を含む。
幾つかの実施形態において、
上記少なくとも１つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は
上記少なくとも１つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
上記少なくとも１つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は
上記少なくとも１つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、シグナルペプチド及び６×Ｈｉｓタグ配列（配列番号２０）を更に含む。幾つかの実施形態において、上記シグナルペプチドは、配列番号１９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記シグナルペプチドは、配列番号１９に示されるアミノ酸配列に対して、約１又は２個のアミノ酸置換を含む。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、１０９、１１０、１１１、１７６、１７７、１７８又は２９２に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、１０９、１１０又は１１１に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～４０個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２４、２５、２６、２７、１７６、１７７、１７８又は２９２に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～５５個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、配列番号２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、１７６、１７７、１７８又は２９２に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）は、
ＧＧＧＧＳ（配列番号１６）を含むリンカー配列を介してＣＤ３－結合ｓｃＦｖに連結するＥＧＦＲ抗体、又は
ＧＧＧＧＳ（配列番号１６）を含むリンカー配列を介してＣＤ３－結合ｓｃＦｖに連結するＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体を含む。
ＧＧＧＧＳ（配列番号１６）を含むリンカー配列を介してＣＤ３－結合ｓｃＦｖに連結するＥＧＦＲ抗体、又は
ＧＧＧＧＳ（配列番号１６）を含むリンカー配列を介してＣＤ３－結合ｓｃＦｖに連結するＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体を含む。
幾つかの実施形態において、
上記ＥＧＦＲ抗体は、配列番号２９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は
上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体は、配列番号２９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
上記ＥＧＦＲ抗体は、配列番号２９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は
上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体は、配列番号２９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、
上記ＥＧＦＲ抗体は、配列番号２９に示されるアミノ酸配列に対して、約１～２５個のアミノ酸置換を含み、又は
上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体は、配列番号２９に示されるアミノ酸配列に対して、約１～２５個のアミノ酸置換を含む。
上記ＥＧＦＲ抗体は、配列番号２９に示されるアミノ酸配列に対して、約１～２５個のアミノ酸置換を含み、又は
上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体は、配列番号２９に示されるアミノ酸配列に対して、約１～２５個のアミノ酸置換を含む。
幾つかの実施形態において、
上記ＥＧＦＲ抗体は、配列番号２９に示されるアミノ酸配列を含み、又は
上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体は、配列番号２９に示されるアミノ酸配列を含む。
上記ＥＧＦＲ抗体は、配列番号２９に示されるアミノ酸配列を含み、又は
上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体は、配列番号２９に示されるアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記融合タンパク質は自己切断Ｔ２Ａペプチド（配列番号２８）を更に含む。
幾つかの実施形態において、上記融合タンパク質は、配列番号３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７又は３８に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
幾つかの実施形態において、上記融合タンパク質は、配列番号３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７又は３８に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～１００個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記融合タンパク質は、配列番号３７に示されるアミノ酸配列に対して、約１～１００個のアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記融合タンパク質は、配列番号３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７又は３８に示されるアミノ酸配列を含む。幾つかの実施形態において、上記融合タンパク質は、配列番号３７に示されるアミノ酸配列を含む。
他の態様において、本発明は、配列番号２～４、１５～１７及び２４２～２９１に示されるアミノ酸配列と少なくとも６０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むポリペプチドを提供する。例示的には、上記配列同一性は、少なくとも約６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、約６０～９９％、６５～９９％、６５～９５％、７０～９９％、７０～９８％、７０～９５％、７０～９０％、７５～９８％、７５～９７％、７５～９０％、７５～８５％、８０～９７％、８０～９６％、８０～８５％、８５～９６％、８５～９５％又は９０～９５％である。特定の実施形態において、上記配列同一性は、少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）である。
幾つかの実施形態において、上記ポリペプチドは、配列番号２～４、１５～１７及び２４２～２９１に示されるアミノ酸配列に対して、少なくとも１つのアミノ酸置換を含む。幾つかの実施形態において、上記少なくとも１つのアミノ酸置換は、少なくとも２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１又は１２個のアミノ酸置換である。ある実施形態において、上記少なくとも１つのアミノ酸置換は、約１～１２個のアミノ酸置換、例示的には、約１～１１、２～１１、２～１０、３～１０、３～９、４～９、４～８、５～８、５～７又は６～７個のアミノ酸置換である。
特定の実施形態において、上記ポリペプチドは、配列番号２～４、１５～１７及び２４２～２９１に示されるアミノ酸配列を含む。
特に定義されていない限り、本明細書で使用される全ての技術用語、符号及び他の科学用語又は用語は、当業者に一般的に理解される意味を持つことを目的とする。幾つかの場合では、明らかにする及び／又は参照しやすくするために、本明細書は、一般的に理解される意味を持つ用語を定義し、本明細書に含まれるこのような定義は、当該分野に一般的に理解される内容と実質的な違いがあると解釈されるわけではない。一般的な辞書で定義されているこれらの用語は、関連する分野の文脈での意味及び／又は本明細書で別途定義されている意味と同じ意味を持つと解釈すべきであることが更に理解されたい。
別の態様において、本発明は、ＧＰＣ３に特異的に結合するポリペプチドであって、上記ポリペプチドが配列番号２８４、配列番号２８６又は配列番号２８９に示される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）を含む、ポリペプチドを提供する。幾つかの実施形態において、上記配列同一性は、少なくとも９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％である。幾つかの実施形態において、上記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３は、配列番号２８４、配列番号２８６又は配列番号２８９に示されるＶＨアミノ酸配列のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３とそれぞれ同じである。
ある実施形態において、上記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３はそれぞれ、
配列番号３０３、配列番号３０４及び配列番号３０５、
配列番号３０６、配列番号３０７及び配列番号３０８、
配列番号３０９、配列番号３１０及び配列番号３０８、
配列番号３１１、配列番号３１２及び配列番号３１３、
配列番号３１４、配列番号３１５及び配列番号３１６、
配列番号３１７、配列番号３１８及び配列番号３１６、
配列番号３１９、配列番号３２０及び配列番号３２１、
配列番号３２２、配列番号３２３及び配列番号３２４、又は
配列番号３２５、配列番号３２６及び配列番号３２４というアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の同一性を有する。
配列番号３０３、配列番号３０４及び配列番号３０５、
配列番号３０６、配列番号３０７及び配列番号３０８、
配列番号３０９、配列番号３１０及び配列番号３０８、
配列番号３１１、配列番号３１２及び配列番号３１３、
配列番号３１４、配列番号３１５及び配列番号３１６、
配列番号３１７、配列番号３１８及び配列番号３１６、
配列番号３１９、配列番号３２０及び配列番号３２１、
配列番号３２２、配列番号３２３及び配列番号３２４、又は
配列番号３２５、配列番号３２６及び配列番号３２４というアミノ酸配列と少なくとも９０％（例えば、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の同一性を有する。
幾つかの実施形態において、上記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３はそれぞれ、
配列番号３０３、配列番号３０４及び配列番号３０５、
配列番号３０６、配列番号３０７及び配列番号３０８、
配列番号３０９、配列番号３１０及び配列番号３０８、
配列番号３１１、配列番号３１２及び配列番号３１３、
配列番号３１４、配列番号３１５及び配列番号３１６、
配列番号３１７、配列番号３１８及び配列番号３１６、
配列番号３１９、配列番号３２０及び配列番号３２１、
配列番号３２２、配列番号３２３及び配列番号３２４、又は
配列番号３２５、配列番号３２６及び配列番号３２４というアミノ酸配列と同じである。
配列番号３０３、配列番号３０４及び配列番号３０５、
配列番号３０６、配列番号３０７及び配列番号３０８、
配列番号３０９、配列番号３１０及び配列番号３０８、
配列番号３１１、配列番号３１２及び配列番号３１３、
配列番号３１４、配列番号３１５及び配列番号３１６、
配列番号３１７、配列番号３１８及び配列番号３１６、
配列番号３１９、配列番号３２０及び配列番号３２１、
配列番号３２２、配列番号３２３及び配列番号３２４、又は
配列番号３２５、配列番号３２６及び配列番号３２４というアミノ酸配列と同じである。
ある実施形態において、上記ポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号２８４、配列番号２８６又は配列番号２８９に示されるアミノ酸配列と少なくとも８５％（例えば少なくとも８６％、８７％、８８％、８９％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％）の同一性を有する。特定の実施形態において、上記ポリペプチドのアミノ酸配列は、配列番号２８４、配列番号２８６又は配列番号２８９に示されるアミノ酸配列と同じである。
幾つかの実施形態において、示されるポリペプチドはナノ抗体である。
用語
用語
本明細書で使用される幾つかの用語は、特定の実施例を説明する目的にのみ使用され、限定されるものではない。
本明細書の「１種」又は「このような」という用語は、文脈で別途明確に示されていない限り、複数形を含むと理解されるべきである。
文脈で別途要求されていない限り、本明細書の「含む」及び「含む」の変形などの用語は、例えば指定された全体若しくはステップ又は全体若しくはステップの組み合わせを含むが、任意の他の全体若しくはステップ又は全体若しくはステップの組み合わせを排除するものではないことを意味する。本明細書の「含む」という用語は、「含有」又は「含まれる」という用語で代替することができる。
本明細書の「……からなる」という用語は、特許請求の範囲の要素で指定されていない任意の要素、ステップ又は成分を除外する。本明細書の「から本質的になる」という用語は、特許請求の範囲の基本的及び新規な特徴に実質的に影響を与えない要素又はステップを除外しない。「含む」、「含有」、「含まれる」及び「有する」という任意の用語は、いつでも本発明の一態様又は実施例の文脈で使用される場合、幾つかの実施例では、本発明の範囲を変更するために、「……からなる」又は「主に……で構成される」に置き換えることができる。
本明細書で使用される多くの参照要素間の接続詞「及び／又は」は、別個及び組み合わせを含むオプションとして理解される。例えば、２つの要素が「及び／又は」によって接続される場合、第１のオプションは、第１の要素に第２の要素の適用範囲がないことを指す。第２のオプションは、第１の要素がない場合における第２の要素の適用範囲を指す。第３のオプションは、第１及び第２の要素の両方が有する適用範囲を指す。これらのオプションの何れか１つでも、この意味に含まれると理解されているため、本明細書で使用される「及び／又は」という用語の要件を満たす。複数のオプションの同時適用性もこの意味に含まれると理解されているため、「及び／又は」という用語の要件を満たす。
１つのリストでは、特に説明されていない限り、当該リストの各個別の要素及び当該リストの各組み合わせは何れも、個別の実施例であると理解されるべきである。例えば、「Ａ、Ｂ又はＣ」として示される実施例のリストは、実施例「Ａ」、「Ｂ」、「Ｃ」、「Ａ又はＢ」、「Ａ又はＣ」、「Ｂ又はＣ」或いは「Ａ、Ｂ又はＣ」を含むと解釈されるべきである。
本明細書で使用される「抗原」という用語は、抗体、Ｂ細胞又はＴ細胞によって認識できる物質である。本明細書の「腫瘍関連抗原」又は「ＴＡＡ」という用語は、がん細胞（例えば、腫瘍細胞）によって発現されるタンパク質又はポリペプチド抗原を指す。例えば、ＴＡＡは、がん細胞（例えば、腫瘍細胞）の１種又は複数種の表面タンパク質又はポリペプチド、核タンパク質又は糖タンパク質又はその断片であってもよい。例示的なＴＡＡｓは、結腸がん抗原１９．９、胃がんムチン、抗原４．２、糖タンパク質Ａ３３（ｇｐＡ３３）、ＡＤＡＭ－９、胃がん抗原ＡＨ６、ＡＬＣＡＭ、悪性ヒトリンパ球抗原ＡＰＯ－１、がん抗原Ｂ１、Ｂ７Ｈ３、β－カテニン、ＡＬＥＢ／ＬＥＹ血液型、バーキットリンパ腫抗原－３８．１３、結腸腺がん抗原Ｃ１４、卵巣がん抗原ＣＡ１２５、カルボキシペプチダーゼＭ、ＣＤ５、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２５、ＣＤ２７、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ３６、ＣＤ４５、ＣＤ４６、ＣＤ５２、ＣＤ７９ａ／ＣＤ７９ｂ、ＣＤ１０３、ＣＤ３１７、ＣＤＫ４、がん胎児性抗原（ＣＥＡ）、ＣＥＡＣＡＭ５、ＣＥＡＣＡＭ６、Ｃ０１７－ｉＡ、ＣＯ－４３（ＬＥＢ血液型）、ＣＯ－５１４（ＬＥＡ血液型）、ＣＴＡ－１、ＣＴＬＡ４、サイトケラチン８、抗原Ｄ１．１、抗原Ｄ１５６－２２、ＤＲ５、Ｅｉシリーズ（Ｂ血液型）、ＥＧＦＲ（上皮成長因子受容体）、アドレナリン受容体Ａ２（ＥｐｈＡ２）、ＥｒｂＢ１、ＥｒｂＢ３、ＥｒｂＢ４、ＧＡＧＥ－１、ＧＡＧＥ－２、ＧＤ２／ＧＤ３／ＧＭ２、肺腺がん抗原Ｆ３、抗原ＦＣ１０．２、Ｇ４９、ガングリオシドＧＤ２、ガングリオシドＧＤ３、ガングリオシドＧＭ２、ガングリオシドＧＭ３、ＧＤ２、ＧＤ３、ＧＩＣＡ１９－９、ＧＭ２、ｇｐＯＯ、グルカゴン－３（ＧＰＣ３）、ヒト白血病Ｔ細胞抗原Ｇｐ３７、黒色腫抗原ｇｐ７５、ＧＰＡ３３、ＨＥＲ２抗原（例えば、ｐｉ８５ＨＥＲ２）、ヒト乳脂肪球（ＨＭＦＧ）、ヒトパピローマウイルスＥ６／ヒトパピローマウイルス－Ｅ７、高分子量黒色腫抗原（ＨＭＷＭＡＡ）、Ｉ抗原（分化抗原）Ｉ（Ｍａ）、インテグリンα－Ｖ－β－６インテグリンＰ６（ＩＴＧＢ６）、インターロイキン－１３受容体ａ２（ＩＬ１３Ｒα２）、ＪＡＭ－３、ＫＩＤ３、ＫＩＤ３１、ＫＳ１／４汎がん抗原、ヒト肺がん抗原Ｌ６とＬ２０、ＬＥＡ、ＬＵＣＡ－２、Ｍｉ：２２：２５：８、Ｍ１８、Ｍ３９、ＭＡＧＥ－１、ＭＡＧＥ－３、ＭＡＲＴ、ＭＵＣ－１、ＭＵＭ－１、Ｍｙｌ、Ｎ－アセチルグルコサミン転移酵素、ネオ糖タンパク質、ＮＳ－１０、ＯＦＡ－１、ＯＦＡ－２、オンコスタチンＭ、Ｐ１５、黒色腫関連抗原Ｐ９７、多結晶形上皮ムチン（ＰＥＭ）、多結晶形上皮ムチン抗原（ＰＥＭＡ）、ＰＩＰＡ、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）、前立腺酸性ホスフェート、Ｒ２４、ＲＯＲｉ、スフィンゴ脂質、ＳＳＥＡ－１、ＳＳＥＡ－３、ＳＳＥＡ－４、ｓＴｎ、Ｔ細胞受容体由来ペプチド、Ｔ５Ａ７、ＴＡＧ－７２、ＴＬ５（血液型Ａ）、ＴＮＦ－α受容体、ＴＮＦ－Ｂ受容体、ＴＮＦ－ｙ受容体、ＴＲＡ－１－８５（血液型Ｈ）、トランスフェリン受容体、腫瘍特異的移植抗原（ＴＳＴＡ）、がん胎児抗原－α－フェトプロテイン（ＡＦＰ）、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦＲ、ＶＥＰ８、ＶＥＰ９、ＶＩＭ－Ｄ５、及びＹハプテン、Ｌｅｙを含むが、これらに限定されない。幾つかの実施形態において、ＴＡＡは、ＣＥＡ、ＧＰＣ３、ＭＵＣ－１、ＥｐＣＡＭ、ＨＥＲ受容体、ＰＥＭ、Ｃａｌｕｄｉ６、Ｃｌｕａｄｉ－１８．２、メソテリン、Ａ３３、Ｇ２５０、炭水化合物抗原Ｌｅｙ、Ｌｅｘ、Ｌｅｂ、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ－７２、ＳＴＥＡＰ１、ＣＤ１６６、ＣＤ２４、ＣＤ４４、Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ、ＳＰＡＲＣ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＭＵＣ１、ＬＭＰ２、ｉｄｉｏｔｙｐｅ、ＨＰＶＥ６＆Ｅ７、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ、ＭＡＧＥＡ３、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＧＤ２、ＰＳＭＡ、ＰＣＳＡ、ＰＳＡ、ＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ５、ＣＤ７０、又はＢＣＭＡである。幾つかの実施形態において、上記ＴＡＡは非腫瘍がん細胞にある。他の実施形態において、上記ＴＡＡは腫瘍細胞にある。
タンパク質、ペプチド及びポリペプチドの定義は、当該分野で周知である。本明細書で使用される「タンパク質」という用語は、「ペプチド」又は「ポリペプチド」という用語と同じ意味を有し、線状に配列されると共に、隣接するアミノ酸残基のカルボキシ基とアミノ基の間のペプチド結合によって連結されたアミノ酸鎖を指すと理解されている。従って、ポリペプチドという用語は、タンパク質の全長アミノ酸配列、又はその断片を指してもよい。
本明細書で使用される「Ｔ細胞エンゲージャー」又は「ＴＥ」という用語は、１つ、２つ又はそれ以上のエピトープなどのエピトープに結合できる分子（例えば、抗体）を指す。多くの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャーは、Ｔ細胞上の表面抗原及びＴＡＡに結合することができる。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャーは、Ｔ細胞上の表面抗原及び少なくとも２つのＴＡＡエピトープに結合することができる。ある実施形態において、上記少なくとも２つのエピトープはＴＡＡにある。幾つかの実施形態において、上記Ｔ細胞エンゲージャーは、Ｔ細胞上の表面抗原及び少なくとも２つのＴＡＡｓに結合することができる。以下に限定されず、例示的なＴ細胞上の表面抗原は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＶＬＡ－１、ＣＤ８、ＣＤ４、ＣＣＲ６、ＣＸＣＲ５、ＣＤ２５、ＣＤ３１、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ１９７、ＣＤ１２７、ＣＤ３８、ＣＤ２７、ＣＤ１９６、ＣＤ２７７又はＣＸＣＲ３を含むことができる。多くの場合では、「ＢｉＴＥ」、「Ｔ細胞エンゲージャー」及び「ＴＥ」という用語は、互換可能に使用される。
本明細書で使用される「保存的アミノ酸置換」又は「保存的置換」という用語は、ＢＬＯＳＵＭ６２において０以上の値を有するアミノ酸置換を指す。
本明細書で使用される「高度保存的アミノ酸置換」又は「高度保存的置換」という用語は、ＢＬＯＳＵＭ６２において少なくとも１（例えば、少なくとも２）の値を有するアミノ酸置換を指す。
本明細書で使用される「発現ベクター」という用語は、複製可能な核酸に関し、発現ベクターが適切な発現宿主細胞に形質転換される場合、上記核酸から１種又は複数種のタンパク質を発現することができる。本明細書で使用される「プロモーター」という用語は、ＲＮＡポリメラーゼが結合して遺伝子の転写を開始するＤＮＡ領域を指す。本明細書で使用される「操作可能に連結される」という用語は、核酸が、それに連結された要素（例えば、プロモーター）の制御下で核酸を発現するような方法でベクターなどの組換えポリヌクレオチド内に位置付けることを意味する。本明細書で使用される「選択可能な標識要素」という用語は、手動による選択に適した特性を与える要素である。選択可能な標識要素は、陰性又は陽性の選択標識であってもよい。
本明細書で使用される「エクスビボ」という用語は、自然条件への変化が最小限である、生体外の人工環境において細胞又は組織内或いは細胞又は組織上で行われる方法を指す。本明細書で使用される「インビボ」という用語は、正常、完全な状態の生体で行われる方法を指す。本明細書で使用される「インビトロ」という用語は、通常の生物学的環境から単離された生体成分を使用して行われる方法を指す。
本明細書で使用される「融合タンパク質」という用語は、合成、半合成又は組換えの単一タンパク質分子を指す。融合タンパク質は、共有結合（例えば、ペプチド結合）を介して連結する２種又はそれ以上の異なるタンパク質及び／又はポリペプチドの全て又は一部を含むことができる。
本明細書で使用される「配列同一性」という用語は、２つのヌクレオチド配列又は２つのアミノ酸配列が、最大同一性レベルに達するために配列アライメントを行う時、同じ位置で同じ残基を有する程度を百分率で表したものを指す。配列のアライメント及び比較では、通常、１つの配列を参照配列として指定し、テスト配列を当該参照配列と比較する。参照配列とテスト配列の間の配列同一性は、参照配列の全長にわたる位置の百分率として表され、ここで、参照配列とテスト配列は、参照配列とテスト配列に対するアライメントを行う時、最大レベルの配列同一性を得るために、同じヌクレオチド又はアミノ酸を共有する。例えば、アライメントが最大同一性レベルに達する場合、テスト配列が参照配列の全長にわたって同じ位置の７０％で同じヌクレオチド又はアミノ酸残基を有する時、２つの配列が７０％の配列同一性を有すると見なされる。
当業者は、最大限の同一性を得るために、適切なアライメント方法又はアルゴリズムを使用して容易に配列アライメントを行うことができる。幾つかの場合では、アライメントは、最大限の同一性を提供するために、導入されたギャップを含むことができる。例には、Ｓｍｉｔｈ＆Ｗａｔｅｒｍａｎ、Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１）の局所相同性アルゴリズム、Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ＆Ｗｕｎｓｃｈ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０）の相同性アライメントアルゴリズム、Ｐｅａｒｓｏｎ＆Ｌｉｐｍａｎ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８５：２４４４（１９８８）の類似性検索方法、これらのアルゴリズムのコンピュータ化された実装（ＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、ａｎｄ ＴＦＡＳＴＡ ｉｎ ｔｈｅ Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｓｏｆｔｗａｒｅ Ｐａｃｋａｇｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ Ｃｏｍｐｕｔｅｒ Ｇｒｏｕｐ、５７５ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｄｒ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓ．）、及び目視検査（一般に、Ａｕｓｕｂｅｌ ｅｔ ａｌ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｂｉｏｌｏｇｙを参照）が含まれる。
配列比較アルゴリズムを使用する場合、テスト配列と参照配列はコンピューターに入力され、必要に応じて後続の座標を指定すると共に、アルゴリズムプログラムのパラメータを指定する。配列比較アルゴリズムは、指定されたプログラムパラメータに基づいて、参照配列に対するテスト配列の配列同一性の百分率を計算する。配列同一性百分率を決定するための一般的なツールは、米国国立衛生研究所の国立生物技術情報センターの国立医学ライブラリから得られたタンパク質の基本的なローカルアラインメント検索ツール（ＢＬＡＳＴＰ）である。（Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．、１９９０）
本明細書で使用される「対象」又は「患者」という用語は、哺乳動物（例えば、ヒト）を指す。幾つかの実施形態において、上記対象は哺乳動物である。幾つかの実施形態において、上記対象は、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウマ、ブタ、ヒツジ、ウシ、クロウマ、マカク、カニクイザル及びヒトから選ばれる哺乳動物である。幾つかの実施形態において、上記対象は霊長類動物である。幾つかの実施形態において、上記対象はヒトである。
本明細書で使用される「対象」又は「患者」という用語は、哺乳動物（例えば、ヒト）を指す。幾つかの実施形態において、上記対象は哺乳動物である。幾つかの実施形態において、上記対象は、イヌ、ネコ、マウス、ラット、ハムスター、モルモット、ウマ、ブタ、ヒツジ、ウシ、クロウマ、マカク、カニクイザル及びヒトから選ばれる哺乳動物である。幾つかの実施形態において、上記対象は霊長類動物である。幾つかの実施形態において、上記対象はヒトである。
本明細書で使用される「治療有効量」、「有効量」又は「有効用量」という用語は、所望の治療効果（例えば、生理反応又は病状などの治療、治癒、抑制又は改善）を達成するために必要な用量及び時間の有効量を指す。１回の投与量で必ずしも完全な治療効果を得るわけではなく、一連の投与後にのみ完全な治療効果を得ることができる。従って、治療有効量を１回又は複数回投与することができる。治療有効量は、哺乳動物の病態、年齢、性別及び体重、投与方法、並びに個体において所望の反応を誘発する治療薬又は治療薬の組み合わせの能力などの要因に応じて変化することができる。
当業者は、本明細書により提供されるガイダンス及び当該分野で知られている他の方法を使用して、投与される薬剤の有効量を決定することができる。関連する要因は、所定の試薬、薬物製剤、投与経路、疾患又は病状の種類、治療を受ける対象の身元（例えば、年齢、性別、体重）又は宿主などを含む。例えば、適切な用量は、１回の治療において、約０．００１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ～約１ｍｇ／ｋｇ体重であってもよい。特定の試薬の用量、対象及び疾患の決定は、完全に当業者の能力の範囲内である。好ましくは、上記用量は、副作用を引き起こさないか、又はそれを最小限に抑える。
所望の反応又は所望の結果は、細胞レベル、組織レベル又は臨床結果の影響を含む。従って、「治療有効量」又はその同義語は、それが適用される文脈に依存する。例えば、幾つかの実施形態において、当該組成物を投与せずに得られる反応と比較して、当該組成物の量は、治療による反応を得るのに十分である。他の実施形態において、対照群と比較して、これは対象において有益な又は望ましい結果を引き起こす量である。本明細書で定義されるように、本開示の組成物の治療有効量は、当業者が当該分野で知られている従来の方法によって容易に決定することができる。投与計画及び投与経路は、最適な治療反応を提供するために調整することができる。
本明細書で使用される「治療」という用語は、本明細書に列挙される特定の適応症などの疾患、病理学的状態又は病状の改善、寛解、安定化（即ち、悪化せず）、予防又は治療を目的とする患者に対する医学的管理を指す。当該用語は、積極療法（疾患、病理学的状態又は障害の改善を目的とする治療）、原因療法（関連する疾患、病理学的状態又は病状の原因を目的とする治療）、寛解療法（症状を寛解するために設計される治療）、予防的療法（関連する疾患、病理学的状態又は病状の進行を最小限に抑えるか、又は部分若しくは完全に抑えることを目的とする治療）、及び支持療法（別の治療を補完するための治療）を含む。治療は、検出可能であるかどうかにかかわらず、疾患又は病状の程度の軽減、疾患又は病状の伝播の防止、疾患又は病状の進行の遅延又は遅らせ、疾患又は病状の改善又は寛解、及び寛解（部分寛解又は完全寛解にかかわらず）を更に含む。「治療」は、治療を受けなかった予想される生存期間と比較して生存期間を延長することを指す場合もある。治療を必要とする者は、病状を患っている者、及び病状を患いやすい者或いは病状の予防を必要とする者を含む。
本明細書で使用される疾患又は病状の「改善」又は「緩和」という用語は、治療無しの程度又は治療経過と比較して、上記疾患、病状又は病状の程度及び／又は望ましくない臨床症状の軽減及び／又は進行期間の遅らせ又は遅延を指す。
本明細書で使用される「ベクター」という用語は、インビトロ、エクスビボ又はインビボで核酸配列又は遺伝子を細胞に導入するために使用できる核酸分子を指す。
本発明は、以下の実施形態を更に提供する。
実施形態１はＴリンパ球であり、
ａ）ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＢｉＴＥをコードする配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｂ）ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＢｉＴＥとの融合タンパク質をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む。
ａ）ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＢｉＴＥをコードする配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｂ）ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＢｉＴＥとの融合タンパク質をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む。
実施形態２は実施形態１に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記Ｔリンパ球は、上記二重特異性ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びに上記ＢｉＴＥをコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む。
実施形態３は実施形態１に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記Ｔリンパ球は、上記二重特異性ＣＡＲと上記ＢｉＴＥとの融合タンパク質をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む。
実施形態４は実施形態１～３の何れか一項に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記二重特異性ＣＡＲは、リンカー配列を介してＨＥＲ２－結合単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）に連結するＩＬ１３変異タンパク質を含む。
実施形態５は実施形態４に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記ＩＬ１３変異タンパク質は、配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
実施形態６は実施形態４に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記ＩＬ１３変異タンパク質は、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して、約１～１２個のアミノ酸置換を含む。
実施形態７は実施形態４に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記ＩＬ１３変異タンパク質は、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む。
実施形態８は実施形態１～７の何れか一項に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは、配列番号２、３又は４に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
実施形態９は実施形態８に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは、配列番号４に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
実施形態１０は実施形態１～７の何れか一項に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは、配列番号２、３又は４に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～２５個のアミノ酸置換を含む。
実施形態１１は実施形態１０に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは、配列番号４に示されるアミノ酸配列に対して、約１～２５個のアミノ酸置換を含む。
実施形態１２は実施形態１～７の何れか一項に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは、配列番号２、３又は４に示されるアミノ酸配列を含む。
実施形態１３は実施形態１２に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは、配列番号４に示されるアミノ酸配列を含む。
実施形態１４は実施形態６、１０又は１１に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記アミノ酸置換は保存的置換である。
実施形態１５は実施形態６、１０又は１１に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記アミノ酸置換は高度保存的置換である。
実施形態１６は実施形態１～１５の何れか一項に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記二重特異性ＣＡＲは、
ａ）ＣＤ８αシグナルペプチド、
ｂ）ＣＤ８αヒンジ、
ｃ）ＣＤ２８膜貫通ドメイン、
ｄ）４－１ＢＢ共刺激ドメイン、
ｅ）ＣＤ３ζシグナルドメイン、
又はその組み合わせを更に含む。
ａ）ＣＤ８αシグナルペプチド、
ｂ）ＣＤ８αヒンジ、
ｃ）ＣＤ２８膜貫通ドメイン、
ｄ）４－１ＢＢ共刺激ドメイン、
ｅ）ＣＤ３ζシグナルドメイン、
又はその組み合わせを更に含む。
実施形態１７は実施形態１６に記載のＴリンパ球であり、ここで、
ａ）上記リンカーは、配列番号５に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
ｂ）上記ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
ｃ）上記ＣＤ８αヒンジは、配列番号７に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
ｄ）上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号８に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
ｅ）上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は
ｆ）上記ＣＤ３ζシグナルドメインは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
又はその組み合わせである。
ａ）上記リンカーは、配列番号５に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
ｂ）上記ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
ｃ）上記ＣＤ８αヒンジは、配列番号７に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
ｄ）上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号８に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
ｅ）上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は
ｆ）上記ＣＤ３ζシグナルドメインは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
又はその組み合わせである。
実施形態１８は実施形態１６に記載のＴリンパ球であり、ここで、
ａ）上記リンカーは、配列番号５に示されるアミノ酸配列に対して、１又は２個のアミノ酸置換を含み、
ｂ）上記ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に示されるアミノ酸配列に対して、１又は２個のアミノ酸置換を含み、
ｃ）上記ＣＤ８αヒンジは、配列番号７に示されるアミノ酸配列に対して、約１～５個のアミノ酸置換を含み、
ｄ）上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号８に示されるアミノ酸配列に対して、約１～３個のアミノ酸置換を含み、
ｅ）上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号９に示されるアミノ酸配列に対して、約１～５個のアミノ酸置換を含み、又は
ｆ）上記ＣＤ３ζシグナルドメインは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列に対して、約１～１２個のアミノ酸置換を含み、
又はその組み合わせである。
ａ）上記リンカーは、配列番号５に示されるアミノ酸配列に対して、１又は２個のアミノ酸置換を含み、
ｂ）上記ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に示されるアミノ酸配列に対して、１又は２個のアミノ酸置換を含み、
ｃ）上記ＣＤ８αヒンジは、配列番号７に示されるアミノ酸配列に対して、約１～５個のアミノ酸置換を含み、
ｄ）上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号８に示されるアミノ酸配列に対して、約１～３個のアミノ酸置換を含み、
ｅ）上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号９に示されるアミノ酸配列に対して、約１～５個のアミノ酸置換を含み、又は
ｆ）上記ＣＤ３ζシグナルドメインは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列に対して、約１～１２個のアミノ酸置換を含み、
又はその組み合わせである。
実施形態１９は実施形態１６に記載のＴリンパ球であり、ここで、
ａ）上記リンカーは、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含み、
ｂ）上記ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に示されるアミノ酸配列を含み、
ｃ）上記ＣＤ８αヒンジは、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含み、
ｄ）上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含み、
ｅ）上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号９に示されるアミノ酸配列を含み、又は
ｆ）上記ＣＤ３ζシグナルドメインは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含み、
又はその組み合わせである。
ａ）上記リンカーは、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含み、
ｂ）上記ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に示されるアミノ酸配列を含み、
ｃ）上記ＣＤ８αヒンジは、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含み、
ｄ）上記ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含み、
ｅ）上記４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号９に示されるアミノ酸配列を含み、又は
ｆ）上記ＣＤ３ζシグナルドメインは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含み、
又はその組み合わせである。
実施形態２０は実施形態１～１９の何れか一項に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記二重特異性ＣＡＲは、配列番号１１、１２又は１３に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
実施形態２１は実施形態１～１９の何れか一項に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記二重特異性ＣＡＲは、配列番号１１、１２又は１３に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～６０個のアミノ酸置換を含む。
実施形態２２は実施形態１～１９の何れか一項に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記二重特異性ＣＡＲは、配列番号１１、１２又は１３に示されるアミノ酸配列を含む。
実施形態２３は実施形態１～２２の何れか一項に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記Ｔリンパ球は上記二重特異性ＣＡＲを発現する。
実施形態２４は実施形態１～２３の何れか一項に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記ＢｉＴＥはＣＤ３－結合単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）を含む。
実施形態２５は実施形態２４に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖは、配列番号１４に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
実施形態２６は実施形態２４に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖは、配列番号１４に示されるアミノ酸配列に対して、約１～２５個のアミノ酸置換を含む。
実施形態２７は実施形態２４に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記ＣＤ３－結合ｓｃＦｖは、配列番号１４に示されるアミノ酸配列を含む。
実施形態２８は実施形態１～２７の何れか一項に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記ＴＡＡは上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）抗原である。
実施形態２９は実施形態１～２７の何れか一項に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記ＴＡＡはＥＧＦＲｖＩＩＩ抗原である。
実施形態３０は実施形態２８又は２９に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記ＢｉＴＥは、
ａ）ＧＧＧＧＳ（配列番号１８）を含むリンカー配列を介してＣＤ３－結合ｓｃＦｖに連結する少なくとも１つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体、又は
ｂ）ＧＧＧＧＳ（配列番号１８）を含むリンカー配列を介してＣＤ３－結合ｓｃＦｖに連結する少なくとも１つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体を含む。
ａ）ＧＧＧＧＳ（配列番号１８）を含むリンカー配列を介してＣＤ３－結合ｓｃＦｖに連結する少なくとも１つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体、又は
ｂ）ＧＧＧＧＳ（配列番号１８）を含むリンカー配列を介してＣＤ３－結合ｓｃＦｖに連結する少なくとも１つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体を含む。
実施形態３１は実施形態３０に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記ＢｉＴＥは、
ａ）少なくとも２つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体、
ｂ）少なくとも２つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体、又は
ｃ）少なくとも１つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体及び少なくとも１つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体を含む。
ａ）少なくとも２つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体、
ｂ）少なくとも２つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体、又は
ｃ）少なくとも１つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体及び少なくとも１つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体を含む。
実施形態３２は実施形態３０又は３１に記載のＴリンパ球であり、ここで、
ａ）上記少なくとも１つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は
ｂ）上記少なくとも１つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
ａ）上記少なくとも１つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は
ｂ）上記少なくとも１つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
実施形態３３は実施形態３０又は３１に記載のＴリンパ球であり、ここで、
ａ）上記少なくとも１つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～１２個のアミノ酸置換のアミノ酸配列を含み、又は
ｂ）上記少なくとも１つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～１２個のアミノ酸置換のアミノ酸配列を含む。
ａ）上記少なくとも１つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～１２個のアミノ酸置換のアミノ酸配列を含み、又は
ｂ）上記少なくとも１つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～１２個のアミノ酸置換のアミノ酸配列を含む。
実施形態３４は実施形態３０又は３１に記載のＴリンパ球であり、ここで、
ａ）上記少なくとも１つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列を含み、又は
ｂ）上記少なくとも１つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列を含む。
ａ）上記少なくとも１つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列を含み、又は
ｂ）上記少なくとも１つのＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５、１６又は１７に示されるアミノ酸配列を含む。
実施形態３５は実施形態２９～３４の何れか一項に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記ＢｉＴＥはシグナルペプチド及び６×Ｈｉｓタグ配列（配列番号２０）を更に含む。
実施形態３６は実施形態３５に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記シグナルペプチドは、配列番号１９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
実施形態３７は実施形態３５に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記シグナルペプチドは、配列番号１９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
実施形態３８は実施形態３５に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記シグナルペプチドは、配列番号１９に示されるアミノ酸配列に対して、約１又は２個のアミノ酸置換を含む。
実施形態３９は実施形態３５に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記シグナルペプチドは、配列番号１９に示されるアミノ酸配列を含む。
実施形態４０は実施形態２９～３９の何れか一項に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記ＢｉＴＥは、配列番号２１、２２、２３、２４、２５、２６又は２７に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
実施形態４１は実施形態２９～３９の何れか一項に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記ＢｉＴＥは、配列番号２１、２２又は２３に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～４０個のアミノ酸置換を含む。
実施形態４２は実施形態２９～３９の何れか一項に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記ＢｉＴＥは、配列番号２４、２５、２６又は２７に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～５５個のアミノ酸置換を含む。
実施形態４３は実施形態２９～３９の何れか一項に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記ＢｉＴＥは、配列番号２１、２２、２３、２４、２５、２６又は２７に示されるアミノ酸配列を含む。
実施形態４４は実施形態２９に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記ＢｉＴＥは、
ａ）ＧＧＧＧＳ（配列番号１６）を含むリンカー配列を介してＣＤ３－結合ｓｃＦｖに連結するＥＧＦＲ抗体、又は
ｂ）ＧＧＧＧＳ（配列番号１６）を含むリンカー配列を介してＣＤ３－結合ｓｃＦｖに連結するＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体を含む。
ａ）ＧＧＧＧＳ（配列番号１６）を含むリンカー配列を介してＣＤ３－結合ｓｃＦｖに連結するＥＧＦＲ抗体、又は
ｂ）ＧＧＧＧＳ（配列番号１６）を含むリンカー配列を介してＣＤ３－結合ｓｃＦｖに連結するＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体を含む。
実施形態４５は実施形態４４に記載のＴリンパ球であり、ここで、
ａ）上記ＥＧＦＲ抗体は、配列番号２９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は
ｂ）上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体は、配列番号２９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
ａ）上記ＥＧＦＲ抗体は、配列番号２９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は
ｂ）上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体は、配列番号２９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
実施形態４６は実施形態４４に記載のＴリンパ球であり、ここで、
ａ）上記ＥＧＦＲ抗体は、配列番号２９に示されるアミノ酸配列に対して、約１～２５個のアミノ酸置換を含み、又は
ｂ）上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体は、配列番号２９に示されるアミノ酸配列に対して、約１～２５個のアミノ酸置換を含む。
ａ）上記ＥＧＦＲ抗体は、配列番号２９に示されるアミノ酸配列に対して、約１～２５個のアミノ酸置換を含み、又は
ｂ）上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体は、配列番号２９に示されるアミノ酸配列に対して、約１～２５個のアミノ酸置換を含む。
実施形態４７は実施形態４４に記載のＴリンパ球であり、ここで、
ａ）上記ＥＧＦＲ抗体は、配列番号２９に示されるアミノ酸配列を含み、又は
ｂ）上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体は、配列番号２９に示されるアミノ酸配列を含む。
ａ）上記ＥＧＦＲ抗体は、配列番号２９に示されるアミノ酸配列を含み、又は
ｂ）上記ＥＧＦＲｖＩＩＩ抗体は、配列番号２９に示されるアミノ酸配列を含む。
実施形態４８は実施形態１～４７の何れか一項に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記Ｔリンパ球は上記ＢｉＴＥを分泌する。
実施形態４９は実施形態３～４８の何れか一項に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記融合タンパク質は自己切断Ｔ２Ａペプチド（配列番号２８）を更に含む。
実施形態５０は実施形態３～４９の何れか一項に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記融合タンパク質は、配列番号３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７又は３８に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む。
実施形態５１は実施形態３～４９の何れか一項に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記融合タンパク質は、配列番号３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７又は３８に示されるアミノ酸配列、又はその組み合わせに対して、約１～１００個のアミノ酸置換を含む。
実施形態５２は実施形態５１に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記融合タンパク質は、配列番号３７に示されるアミノ酸配列に対して、約１～１００個のアミノ酸置換を含む。
実施形態５３は実施形態３～４９の何れか一項に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記融合タンパク質は、配列番号３１、３２、３３、３４、３５、３６、３７又は３８に示されるアミノ酸配列を含む。
実施形態５４は実施形態５３に記載のＴリンパ球であり、ここで、上記融合タンパク質は、配列番号３７に示されるアミノ酸配列を含む。
実施形態５５は、ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）とＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＢｉＴＥとの融合タンパク質である。
実施形態５６は、実施形態５５に記載の融合タンパク質をコードする配列を含むポリヌクレオチドである。
実施形態５７は、実施形態５６に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクターである。
実施形態５８は、実施形態５１に記載のポリヌクレオチド又は実施形態５７に記載の発現ベクターを含む宿主細胞である。
実施形態５９はＴリンパ球を含む組成物であり、ここで、少なくとも一部のリンパ球は、
ａ）ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＢｉＴＥをコードする配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｂ）ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＢｉＴＥとの融合タンパク質をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む。
ａ）ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＢｉＴＥをコードする配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｂ）ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＢｉＴＥとの融合タンパク質をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む。
実施形態６０は実施形態５９に記載の組成物であり、約２％、約５％又は約１０％のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含み、且つ実質的に血清を含まない凍結保存媒体を更に含む。
実施形態６１は、保存用バイアルにおける実施形態５９又は６０に記載の組成物である。
実施形態６２は、実施形態５９又は６０に記載の組成物及び薬学的に許容されるベクターを含む医薬組成物である。
実施形態６３は、実施形態６２に記載の医薬組成物を含むコンテナ及び任意選択的な使用説明書を含む試薬キットである。
実施形態６４は、必要とする対象の膠芽腫を治療するための薬物の調製における、実施形態５９又は６０に記載の組成物又は実施形態５７に記載の医薬組成物の用途である。
実施形態６５は必要とする対象のがんを治療する方法であり、有効用量のＴリンパ球を対象に投与することを含み、ここで少なくとも一部の上記Ｔリンパ球は、
ａ）ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＢｉＴＥをコードする配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｂ）ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＢｉＴＥとの融合タンパク質をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む。
ａ）ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＢｉＴＥをコードする配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｂ）ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＢｉＴＥとの融合タンパク質をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む。
実施形態６６は必要とする対象の膠芽腫を治療する方法であり、有効用量のＴリンパ球を対象に投与することを含み、ここで少なくとも一部の上記Ｔリンパ球は、
ａ）ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＢｉＴＥをコードする配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｂ）ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＢｉＴＥとの融合タンパク質をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む。
ａ）ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＢｉＴＥをコードする配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｂ）ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＢｉＴＥとの融合タンパク質をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む。
実施形態６７は実施形態６５又は６６に記載の方法であり、ここで、上記Ｔリンパ球は同種異系Ｔリンパ球である。
実施形態６８は実施形態６５～６７の何れか一項に記載の方法であり、ここで、少なくとも１０％の上記Ｔリンパ球は上記二重特異性ＣＡＲ及び上記ＢｉＴＥを発現する。
実施形態６９は実施形態６８に記載の方法であり、ここで、約１５～７５％の上記Ｔリンパ球は上記二重特異性ＣＡＲ及び上記ＢｉＴＥを発現する。
実施形態７０は実施形態６５～６９の何れか一項に記載の方法であり、ここで、上記Ｔリンパ球は単回静脈内注入によって投与される。
実施形態７１は実施形態６５～６９の何れか一項に記載の方法であり、ここで、上記Ｔリンパ球は２回又は複数回の静脈内注入によって投与される。
実施形態７２は実施形態６５～７１の何れか一項に記載の方法であり、Ｔリンパ球の投与前に対象に対して化学療法を行うことを更に含む。
実施形態７３は実施形態６５～７２の何れか一項に記載の方法であり、ここで、上記対象は１８歳以上である。
実施形態７４は実施形態６５～７３の何れか一項に記載の方法であり、ここで、上記対象は新たに膠芽腫と診断される。
実施形態７５は実施形態６５～７３の何れか一項に記載の方法であり、ここで、上記対象は、以前の膠芽腫治療から再発したか、又は治療に耐性である。
実施形態７６は実施形態６５～７５の何れか一項に記載の方法であり、ここで、上記対象はヒト患者である。
実施形態７７は、Ｔ細胞媒介性がん細胞の溶解を誘導する方法であり、上記がん細胞を有効用量のＴリンパ球と接触させることを含み、ここで少なくとも一部の上記Ｔリンパ球は、
ａ）ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｂ）ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＢｉＴＥとの融合タンパク質をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む。
ａ）ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｂ）ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＢｉＴＥとの融合タンパク質をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む。
実施形態７８は、Ｔ細胞媒介性膠芽腫細胞の溶解を誘導する方法であり、上記膠芽腫を有効用量のＴリンパ球と接触させることを含み、ここで少なくとも一部の上記Ｔリンパ球は、
ａ）ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｂ）ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＢｉＴＥとの融合タンパク質をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む。
ａ）ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）をコードする配列を含むポリヌクレオチド、並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＴ細胞エンゲージャー（ＴＥ又はＢｉＴＥ）をコードする配列を含むポリヌクレオチド、又は
ｂ）ＨＥＲ２及びＩＬ１３Ｒα２に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＢｉＴＥとの融合タンパク質をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む。
実施形態７９は実施形態７８に記載の方法であり、ここで膠芽腫細胞は対象内にあり、上記膠芽腫細胞を有効用量のＴ細胞と接触させることは、有効用量のＴリンパ球を対象に投与することによって実施される。
実施形態８０は、がん細胞表面に発現する２つの異なる抗原に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＢｉＴＥとの融合タンパク質をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含むＴリンパ球である。
実施形態８１は、がん細胞表面に発現する２つの異なる抗原に結合できる二重特異性キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）並びにＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＢｉＴＥを含む融合タンパク質である。
実施形態８２は、実施形態８１に記載の融合タンパク質をコードする配列を含むポリヌクレオチドである。
実施形態８３は、実施形態８２に記載のポリヌクレオチドを含む発現ベクターである。
実施形態８４は、実施形態８２に記載のポリヌクレオチド又は実施形態８３に記載の発現ベクターを含む宿主細胞である。
実施形態８５は、Ｔリンパ球を含む組成物であり、ここで少なくとも一部の上記Ｔリンパ球は、がん細胞表面に発現する２つの異なる抗原に結合できる二重特異性キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）とＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＢｉＴＥとの融合タンパク質をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む。
実施形態８６は、実施形態８５に記載の組成物及び薬学的に許容されるベクターを含む医薬組成物である。
実施形態８７は、実施形態８６に記載の医薬組成物を含むコンテナ及び任意選択的な使用説明書を含む試薬キットである。
実施形態８８は、必要とする対象の腫瘍を治療するための薬物の調製における、実施形態８５に記載の組成物又は実施形態８６に記載の医薬組成物の用途である。
実施形態８９は、必要とする対象の腫瘍を治療する方法であり、有効用量のＴリンパ球を対象に投与することを含み、ここで少なくとも一部の上記Ｔリンパ球は、がん細胞表面に発現する２つの異なる抗原に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＢｉＴＥとの融合タンパク質をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む。
実施形態９０は、Ｔ細胞媒介性腫瘍細胞の溶解を誘導する方法であり、上記腫瘍細胞を有効用量のＴリンパ球と接触させることを含み、ここで少なくとも一部の上記Ｔリンパ球は、がん細胞表面に発現する２つの異なる抗原に結合できる二重特異性ＣＡＲとＣＤ３及びＴＡＡに結合できるＢｉＴＥとの融合タンパク質をコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む。
実施形態９１は、実施形態８０に記載のＴリンパ球、実施形態８１に記載の融合タンパク質、実施形態８２に記載のポリヌクレオチド、実施形態８３に記載の発現ベクター、実施形態８４に記載の宿主細胞、実施形態８５に記載の組成物、実施形態８６に記載の医薬組成物、実施形態８７に記載の試薬キット、実施形態８８に記載の用途、又は実施形態８９又は９０に記載の方法であり、ここで上記腫瘍は血液腫瘍である。
実施形態９２は、実施形態９１に記載のＴリンパ球、融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクター、宿主細胞、組成物、医薬組成物、試薬キット、用途又は方法であり、ここで、上記二重特異性ＣＡＲは、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ１２３、ＣＤ１３８、ＢＣＭＡ又はその組み合わせを標的とする。
実施形態９３は、実施形態８０に記載のＴリンパ球、実施形態８１に記載の融合タンパク質、実施形態８２に記載のポリヌクレオチド、実施形態８３に記載の発現ベクター、実施形態８４に記載の宿主細胞、実施形態８５に記載の組成物、実施形態８６に記載の医薬組成物、実施形態８７に記載の試薬キット、実施形態８８に記載の用途、又は実施形態８９又は９０に記載の方法であり、ここで上記腫瘍は固形腫瘍である。
実施形態９４は、実施形態９３に記載のＴリンパ球、融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクター、宿主細胞、組成物、医薬組成物、試薬キット、用途又は方法であり、ここで、上記腫瘍は膠芽腫、乳がん又は肺がんである。
実施形態９５は、実施形態９４に記載のＴリンパ球、融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクター、宿主細胞、組成物、医薬組成物、試薬キット、用途又は方法であり、ここで、上記乳がんはＨＥＲ２－陽性乳がんである。
実施形態９６は、実施形態９４に記載のＴリンパ球、融合タンパク質、ポリヌクレオチド、発現ベクター、宿主細胞、組成物、医薬組成物、試薬キット、用途又は方法であり、ここで、上記肺がんは脳転移性肺がんである。
実施例
実施例１．材料及び方法
実施例
実施例１．材料及び方法
実施例で使用される材料は表５にまとめた。
ウイルスの製造
ＭＮＤＵ３プロモーター並びにウイルスＴ２Ａ配列から単離されたＣＡＲ及びＢｉＴＥ配列を含むポリヌクレオチドは、ＧＥＮＥＷＩＺ、Ｉｎｃ．（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）によって合成される。完全なポリヌクレオチド配列をレンチウイルスベクターＳＢＩＬＶＴＶ（ＧＥＮＥＷＩＺ、Ｉｎｃ．Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡによって合成された第３世代の自社レンチウイルス転移ベクター）にクローニングした。操作マニュアルに従ってＴｒａｎｓＩＴ－ＶｉｒｕｓＧＥＮ（登録商標）トランスフェクション試薬（Ｍｉｒｕｓ Ｂｉｏ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ、Ｃａｔ＃ＭＩＲ ６７００）を使用して、ＣＡＲベクター、包装ベクター、ＳＢＩＬＶＰＫ１、ＳＢＩＬＶＰＫ２及びＳＢＩＬＶＰＫ３（ＧＥＮＥＷＩＺ、Ｉｎｃ．Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡによって合成された第３世代の自社レンチウイルス転移ベクター）をＨＥＫ２９３Ｔ細胞に同時トランスフェクションし、複製不活性レンチウイルスを生成した。トランスフェクションの４８時間後にウイルス上清を収集し、０．４５μｍのフィルター（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ、Ｃａｔ＃ＳＥ１Ｍ００３Ｍ００）でろ過し、４℃、１０，０００×ｇで４時間遠心分離することによって濃縮した。ウイルス粒子を１．０ｍＬの１×リン酸塩緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に再懸濁し、分注して－８０℃で保存した。
ウイルスの製造
ＭＮＤＵ３プロモーター並びにウイルスＴ２Ａ配列から単離されたＣＡＲ及びＢｉＴＥ配列を含むポリヌクレオチドは、ＧＥＮＥＷＩＺ、Ｉｎｃ．（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）によって合成される。完全なポリヌクレオチド配列をレンチウイルスベクターＳＢＩＬＶＴＶ（ＧＥＮＥＷＩＺ、Ｉｎｃ．Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡによって合成された第３世代の自社レンチウイルス転移ベクター）にクローニングした。操作マニュアルに従ってＴｒａｎｓＩＴ－ＶｉｒｕｓＧＥＮ（登録商標）トランスフェクション試薬（Ｍｉｒｕｓ Ｂｉｏ、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ、Ｃａｔ＃ＭＩＲ ６７００）を使用して、ＣＡＲベクター、包装ベクター、ＳＢＩＬＶＰＫ１、ＳＢＩＬＶＰＫ２及びＳＢＩＬＶＰＫ３（ＧＥＮＥＷＩＺ、Ｉｎｃ．Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡによって合成された第３世代の自社レンチウイルス転移ベクター）をＨＥＫ２９３Ｔ細胞に同時トランスフェクションし、複製不活性レンチウイルスを生成した。トランスフェクションの４８時間後にウイルス上清を収集し、０．４５μｍのフィルター（ＥＭＤ Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ、ＭＡ、Ｃａｔ＃ＳＥ１Ｍ００３Ｍ００）でろ過し、４℃、１０，０００×ｇで４時間遠心分離することによって濃縮した。ウイルス粒子を１．０ｍＬの１×リン酸塩緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）に再懸濁し、分注して－８０℃で保存した。
ＣＡＲ－Ｔ細胞の製造
ＥａｓｙＳｅｐヒトＴ細胞単離試薬キット（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、ＢＣ、Ｃａｎａｄａ、Ｃａｔ＃１７９５１）を使用して、陰性スクリーニングによって同意した健康な献血者（ＨｅｍａＣａｒｅ、Ｌｏｓ Ａｎｇｅｌｅｓ、ＣＡ）から得られた新鮮な末梢血白血球からヒトＰａｎ Ｔ細胞を単離した。Ｐａｎ Ｔ細胞を抗ＣＤ３／ＣＤ２８磁気ビーズで、１：１の比率で（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ、Ｇｉｂｃｏ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、Ｃａｔ＃１１１３２Ｄ）１２ウェルプレートにおいて３００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ、Ｉｎｃ．、Ｒｏｃｋｙ Ｈｉｌｌ、ＮＪ、Ｃａｔ＃２００－０２）で活性化した。活性化の２４時間後、レンチウイルスでＴ細胞を形質導入した。３００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２を補充した新鮮なＸ－ＶＩＶＯ（商標）１５培地（Ｌｏｎｚａ Ｇｒｏｕｐ、Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ、Ｃａｔ＃ＢＥ０２－０５３Ｑ）において、Ｇ－Ｒｅｘプレートを使用してＣＡＲ Ｔ細胞培養物を８日増殖させた。Ｇ－ＲＥＸプレートを使用して３００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２を８日間補充した１５培地（Ｌｏｎｚａグループ、Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ、Ｃａｔ＃ＢＥ０２－０５３Ｑ）。形質導入後の８日目に、フローサイトメトリーでＣＡＲ発現を分析し、ＣＡＲ－Ｔ細胞を収集して凍結保存培地（ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標） ＣＳ１０、ＳＴＥＭＣＥＬＬ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、ＢＣ、Ｃａｎａｄａ、Ｃａｔ＃７９３０）に再懸濁し、分注して液体窒素に保存した。
ＥａｓｙＳｅｐヒトＴ細胞単離試薬キット（ＳＴＥＭＣＥＬＬ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、ＢＣ、Ｃａｎａｄａ、Ｃａｔ＃１７９５１）を使用して、陰性スクリーニングによって同意した健康な献血者（ＨｅｍａＣａｒｅ、Ｌｏｓ Ａｎｇｅｌｅｓ、ＣＡ）から得られた新鮮な末梢血白血球からヒトＰａｎ Ｔ細胞を単離した。Ｐａｎ Ｔ細胞を抗ＣＤ３／ＣＤ２８磁気ビーズで、１：１の比率で（Ｄｙｎａｂｅａｄｓ、Ｇｉｂｃｏ、Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、Ｃａｔ＃１１１３２Ｄ）１２ウェルプレートにおいて３００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ、Ｉｎｃ．、Ｒｏｃｋｙ Ｈｉｌｌ、ＮＪ、Ｃａｔ＃２００－０２）で活性化した。活性化の２４時間後、レンチウイルスでＴ細胞を形質導入した。３００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２を補充した新鮮なＸ－ＶＩＶＯ（商標）１５培地（Ｌｏｎｚａ Ｇｒｏｕｐ、Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ、Ｃａｔ＃ＢＥ０２－０５３Ｑ）において、Ｇ－Ｒｅｘプレートを使用してＣＡＲ Ｔ細胞培養物を８日増殖させた。Ｇ－ＲＥＸプレートを使用して３００Ｕ／ｍＬのＩＬ－２を８日間補充した１５培地（Ｌｏｎｚａグループ、Ｂａｓｅｌ、Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ、Ｃａｔ＃ＢＥ０２－０５３Ｑ）。形質導入後の８日目に、フローサイトメトリーでＣＡＲ発現を分析し、ＣＡＲ－Ｔ細胞を収集して凍結保存培地（ＣｒｙｏＳｔｏｒ（登録商標） ＣＳ１０、ＳＴＥＭＣＥＬＬ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ、ＢＣ、Ｃａｎａｄａ、Ｃａｔ＃７９３０）に再懸濁し、分注して液体窒素に保存した。
細胞毒性試験
９６ウェルプレートに２０，０００細胞／ウェルの濃度でルシフェラーゼを発現するＧＢＭ細胞を接種した。翌日、エフェクターとターゲット（Ｅ：Ｔ）との比が１：１、０．５：１、０．２５：１又は０．１２５：１の比率でエフェクターＣＡＲ－Ｔ細胞を加え、又はＣＡＲ－Ｔ細胞の上清から収集したＢｉＴＥと形質導入されていないＴ細胞（ＵＮ）を１：１又は０．５：１のＥ：Ｔ比で同時に加えた。プレートを３７℃で２４時間インキュベートした。続いて、Ｄ－ホタルルシフェリンカリウム塩（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、Ｃａｔ＃１２２７９９）をウェルに加え、マイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ ＬＬＣ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ、ＣＡ）で蛍光を測定した。エフェクター細胞又はＢｉＴＥがない場合でインキュベートした標的細胞を使用し、自然死を測定すると共に、アッセイのベースラインを設定した。
９６ウェルプレートに２０，０００細胞／ウェルの濃度でルシフェラーゼを発現するＧＢＭ細胞を接種した。翌日、エフェクターとターゲット（Ｅ：Ｔ）との比が１：１、０．５：１、０．２５：１又は０．１２５：１の比率でエフェクターＣＡＲ－Ｔ細胞を加え、又はＣＡＲ－Ｔ細胞の上清から収集したＢｉＴＥと形質導入されていないＴ細胞（ＵＮ）を１：１又は０．５：１のＥ：Ｔ比で同時に加えた。プレートを３７℃で２４時間インキュベートした。続いて、Ｄ－ホタルルシフェリンカリウム塩（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｉｎｃ．、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ、Ｃａｔ＃１２２７９９）をウェルに加え、マイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ ＬＬＣ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ、ＣＡ）で蛍光を測定した。エフェクター細胞又はＢｉＴＥがない場合でインキュベートした標的細胞を使用し、自然死を測定すると共に、アッセイのベースラインを設定した。
リアルタイム細胞毒性試験では、ＲＴＣＡプレート（ＡＣＥＡ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、Ｃａｔ＃６４７２４５１００１）に２０，０００細胞／ウェルの濃度でＧＢＭ細胞を接種した。ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ ＲＴＣＡ ＳＰ機器（ＡＣＥＡ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を使用して細胞指数を細胞インピーダンスの尺度として記録した。翌日、１：１、０．５：１、０．２５：１又は０．１２５：１のＥ：Ｔ比でエフェクターＣＡＲ－Ｔ細胞を加え、又は１：１又は０．５：１のＥ：Ｔ比でＣＡＲ－Ｔ細胞の上清から収集したＢｉＴＥ及びＵＮ Ｔ細胞を加えた。プレートをＲＴＣＡ機器に取り付けて３７℃で１～５日インキュベートした。
Ｔ細胞の活性化及び機能試験
９６ウェルプレートに２０，０００細胞／ウェルの濃度でルシフェラーゼを発現するＧＢＭ細胞を接種した。翌日、１：１又は０．５：１のＥ：Ｔ比でＪｕｒｋａｔ（ＮＦＡＴ－ルシフェラーゼ）レポーター細胞（ＢＰＳ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、Ｃａｔ＃６０６２１）及びＣＡＲ－Ｔ細胞の上清から収集したＢｉＴＥを加えた。２４時間後、ＯＮＥ－Ｓｔｅｐ（商標）ルシフェラーゼ測定システム（ＢＰＳ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、Ｃａｔ＃６０６９０－１）を使用してルシフェラーゼ活性を測定し、マイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ ＬＬＣ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ、ＣＡ）で蛍光を測定した。
９６ウェルプレートに２０，０００細胞／ウェルの濃度でルシフェラーゼを発現するＧＢＭ細胞を接種した。翌日、１：１又は０．５：１のＥ：Ｔ比でＪｕｒｋａｔ（ＮＦＡＴ－ルシフェラーゼ）レポーター細胞（ＢＰＳ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、Ｃａｔ＃６０６２１）及びＣＡＲ－Ｔ細胞の上清から収集したＢｉＴＥを加えた。２４時間後、ＯＮＥ－Ｓｔｅｐ（商標）ルシフェラーゼ測定システム（ＢＰＳ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、Ｉｎｃ．、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、Ｃａｔ＃６０６９０－１）を使用してルシフェラーゼ活性を測定し、マイクロプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｅｖｉｃｅｓ ＬＬＣ、Ｓａｎ Ｊｏｓｅ、ＣＡ）で蛍光を測定した。
サイトカイン放出分析では、操作マニュアルに従ってＧＢＭ細胞株と共培養したエフェクター細胞又はＢｉＴＥ／ＵＮ Ｔ細胞からの上清におけるＩＬ２サイトカイン発現（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ、Ｃａｔ＃Ｄ２０５０）又はＩＦＮ－γ（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ、Ｃａｔ＃ＤＩＦ５０）を分析した。
フローサイトメトリー分析
ＧＢＭ細胞株における標的関連抗原（ＴＡＡ）の細胞表面発現を評価するために、ａｎｔｉ－ＥＧＦＲ（ＢＶ７１１ａｎｔｉ－ヒトＥＧＦＲ、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、Ｃａｔ＃３５２９１９）、ａｎｔｉ－Ｈｅｒ２（ＢＶ４２１ａｎｔｉ－ヒトＣＤ３４０、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、Ｃａｔ＃３２４４２０）、ａｎｔｉ－ＩＬ１３Ｒ２ａ（ＡＰＣａｎｔｉ－ヒトＣＤ２１３ａ２、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、Ｃａｔ＃３５４４０５）という抗体クローンを使用した。Ｔ細胞の場合、ＢＶ４２１ａｎｔｉ－ヒトＣＤ３抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、Ｃａｔ＃３１７３４４）、ＡＰＣａｎｔｉ－ヒトＣＤ８抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、Ｃａｔ＃３４４７２２）、ＰＥａｎｔｉ－ヒトＣＤ４抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、Ｃａｔ＃３５７４０４）という抗体を使用した。Ｔ細胞における細胞表面ＣＡＲ発現を評価するために、ＦＩＴＣにより標識されたヒトＩＬ－１３Ｒα２タンパク質及びＨｉｓタグ（ＡＣＲＯＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｎｅｗａｒｋ、ＤＥ、Ｃａｔ＃ＩＬ２－ＨＦ２Ｈ３－２５ｕｇ－２９０）という抗原を使用した。簡単に言えば、１％のＦＢＳ（Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｓｔａｉｎｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ（ＦＡＣＳ Ｂｕｆｆｅｒ））を補充した１×ＰＢＳで細胞を洗浄し、室温で暗所で３０分間染色し、次に分析前にＦＡＣＳ緩衝液において洗浄した。
ＧＢＭ細胞株における標的関連抗原（ＴＡＡ）の細胞表面発現を評価するために、ａｎｔｉ－ＥＧＦＲ（ＢＶ７１１ａｎｔｉ－ヒトＥＧＦＲ、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、Ｃａｔ＃３５２９１９）、ａｎｔｉ－Ｈｅｒ２（ＢＶ４２１ａｎｔｉ－ヒトＣＤ３４０、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、Ｃａｔ＃３２４４２０）、ａｎｔｉ－ＩＬ１３Ｒ２ａ（ＡＰＣａｎｔｉ－ヒトＣＤ２１３ａ２、ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、Ｃａｔ＃３５４４０５）という抗体クローンを使用した。Ｔ細胞の場合、ＢＶ４２１ａｎｔｉ－ヒトＣＤ３抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、Ｃａｔ＃３１７３４４）、ＡＰＣａｎｔｉ－ヒトＣＤ８抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、Ｃａｔ＃３４４７２２）、ＰＥａｎｔｉ－ヒトＣＤ４抗体（ＢｉｏＬｅｇｅｎｄ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、Ｃａｔ＃３５７４０４）という抗体を使用した。Ｔ細胞における細胞表面ＣＡＲ発現を評価するために、ＦＩＴＣにより標識されたヒトＩＬ－１３Ｒα２タンパク質及びＨｉｓタグ（ＡＣＲＯＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、Ｎｅｗａｒｋ、ＤＥ、Ｃａｔ＃ＩＬ２－ＨＦ２Ｈ３－２５ｕｇ－２９０）という抗原を使用した。簡単に言えば、１％のＦＢＳ（Ｆｌｏｗ Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ Ｓｔａｉｎｉｎｇ Ｂｕｆｆｅｒ（ＦＡＣＳ Ｂｕｆｆｅｒ））を補充した１×ＰＢＳで細胞を洗浄し、室温で暗所で３０分間染色し、次に分析前にＦＡＣＳ緩衝液において洗浄した。
細胞毒性試験
リアルタイム細胞毒性試験では、ＲＴＣＡプレート（ＡＣＥＡ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、Ｃａｔ＃６４７２４５１００１）に２０，０００細胞／ウェルの濃度でがん細胞株を接種した。ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ ＲＴＣＡ ＳＰ機器（ＡＣＥＡ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を使用して細胞指数を細胞インピーダンスの尺度として記録した。翌日、１：１、１：２、１：４、１：８、１：１６、１：３２又は１：６４のＥ：Ｔ比でエフェクターＣＡＲ－Ｔ細胞を加え、又は１：１又は１：２のＥ：Ｔ比でＣＡＲ－Ｔ細胞の上清から収集したＢｉＴＥ又は対照（ＵＮ）Ｔ細胞を加えた。プレートをＲＴＣＡ機器に取り付けて３７℃で１～５日インキュベートした。
リアルタイム細胞毒性試験では、ＲＴＣＡプレート（ＡＣＥＡ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、Ｃａｔ＃６４７２４５１００１）に２０，０００細胞／ウェルの濃度でがん細胞株を接種した。ｘＣＥＬＬｉｇｅｎｃｅ ＲＴＣＡ ＳＰ機器（ＡＣＥＡ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）を使用して細胞指数を細胞インピーダンスの尺度として記録した。翌日、１：１、１：２、１：４、１：８、１：１６、１：３２又は１：６４のＥ：Ｔ比でエフェクターＣＡＲ－Ｔ細胞を加え、又は１：１又は１：２のＥ：Ｔ比でＣＡＲ－Ｔ細胞の上清から収集したＢｉＴＥ又は対照（ＵＮ）Ｔ細胞を加えた。プレートをＲＴＣＡ機器に取り付けて３７℃で１～５日インキュベートした。
頭蓋内（ＩＣ）腫瘍異種移植物の注射及び腫瘍内（ＩＮＴ）ＣＡＲ－Ｔ細胞の注入
ＩＡＣＵＣの方法に従って、インビボでの薬理学的有効性及び毒性学研究において、ＧＢＭ腫瘍異種移植物を以下のように操作した。（１）１０，０００個のルシフェラーゼで標識されたＵ８７細胞を、２μＬで右前脳に頭蓋内注射し、（２）注射座標はＭＬ（２．０ｍｍ）、ＡＰ（０．５ｍｍ）及びＤＶ（２．５ｍｍ＿１μＬ、２．２５ｍｍ＿１μＬ）であり、（３）注射速度は１μＬ／分間であった。
ＩＡＣＵＣの方法に従って、インビボでの薬理学的有効性及び毒性学研究において、ＧＢＭ腫瘍異種移植物を以下のように操作した。（１）１０，０００個のルシフェラーゼで標識されたＵ８７細胞を、２μＬで右前脳に頭蓋内注射し、（２）注射座標はＭＬ（２．０ｍｍ）、ＡＰ（０．５ｍｍ）及びＤＶ（２．５ｍｍ＿１μＬ、２．２５ｍｍ＿１μＬ）であり、（３）注射速度は１μＬ／分間であった。
ＩＡＣＵＣの方法に従って、インビボでの薬理学的有効性、ＰＫ／生体内分布及び毒性学研究において、２００，０００個のＣＡＲ＋ＳＲ２６ ＣＡＲ－Ｔ細胞を、３μＬでＩＣ又はＩＮＴによって注入した。注入座標はＭＬ（２．０ｍｍ）、ＡＰ（０．５ｍｍ）及びＤＶ（２．５ｍｍ＿１．５μＬ、２．２５ｍｍ＿１．５μＬ）であった。注射速度は１．５μＬ／分間であった。
ＰＫ研究
マウス臓器のサンプル収集
ＮＳＧマウスの心臓、肝臓、脾臓、肺、腎臓、骨髓、脊髓、血液及び脳を１×ＰＢＳ溶液に収集した。各サンプルは３匹の異なるマウスから得られた。
マウス臓器のサンプル収集
ＮＳＧマウスの心臓、肝臓、脾臓、肺、腎臓、骨髓、脊髓、血液及び脳を１×ＰＢＳ溶液に収集した。各サンプルは３匹の異なるマウスから得られた。
ゲノムＤＮＡ抽出
ＰｕｒｅＬｉｎｋ（商標） Ｐｒｏ ９６ゲノムＤＮＡ抽出試薬キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃Ｋ１８２１０４Ａ）を使用してゲノムＤＮＡを抽出した。簡単に言えば、重さが約２５ｍｇの３つの小さな組織片を各臓器からランダムに切り取った。次に、操作マニュアルに従って、各組織片を処理した。最終的に得られたゲノムＤＮＡをｎａｎｏｄｒｏｐにより定量した。
ＰｕｒｅＬｉｎｋ（商標） Ｐｒｏ ９６ゲノムＤＮＡ抽出試薬キット（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、＃Ｋ１８２１０４Ａ）を使用してゲノムＤＮＡを抽出した。簡単に言えば、重さが約２５ｍｇの３つの小さな組織片を各臓器からランダムに切り取った。次に、操作マニュアルに従って、各組織片を処理した。最終的に得られたゲノムＤＮＡをｎａｎｏｄｒｏｐにより定量した。
プライマーの設計
ＩＤＴ ＰｒｉｍｅｒＱｕｅｓｔツールを使用し、ＣＡＲ及びＢｉＴＥの遺伝子配列は、プライマー及び二重標識プローブ（５’６－ＦＡＭ／ＺＥＮ／３’ＩＢＦＱ）の設計に使用された。全てのプライマーのプローブの融解温度は何れも６２℃～６８℃であり、アンプリコン長さの範囲は１０８～１４６ｂｐであった。全ての他のパラメータは何れも、デフォルト設定に維持された。この研究で使用した全てのプライマーは表６に挙げられた。
ＩＤＴ ＰｒｉｍｅｒＱｕｅｓｔツールを使用し、ＣＡＲ及びＢｉＴＥの遺伝子配列は、プライマー及び二重標識プローブ（５’６－ＦＡＭ／ＺＥＮ／３’ＩＢＦＱ）の設計に使用された。全てのプライマーのプローブの融解温度は何れも６２℃～６８℃であり、アンプリコン長さの範囲は１０８～１４６ｂｐであった。全ての他のパラメータは何れも、デフォルト設定に維持された。この研究で使用した全てのプライマーは表６に挙げられた。
リアルタイム定量ＰＣＲ
ＱｕａｎｔｓｔｕｏＴＭ ７ Ｐｒｏ Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、＃Ａ４３１８３）をリアルタイム定量ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）試験に使用した。２０μＬの反応において増幅した。上記反応は、５μＬのゲノムＤＮＡ（１００ｎｇ）、１０μＬの２×ＰｒｉｍｅｒＴｉｍｅ遺伝子発現予備混合溶液（ＩＤＴ、＃１０５５７７２）、２μＬのフォワードプライマー（１０μＭ）、２μＬのリバースプライマー（１０μＭ）、０．５μＬのプローブ（１０μＭ）及び０．５μＬの水を含んだ（表７）。ＰＣＲ反応は、（１）９５℃で３分間、（２）９５℃で１５秒、及び６０℃で６０秒、４５サイクルを含んだ（表８）。ＣＡＲ領域を検出するための１セットのプライマー及びＢｉＴＥ領域を検出するための別のセットのプライマーを使用して、３回に分けて各サンプルを分析することによって再現性を検証した。精製した「ＣＡＲ／ＢｉＴＥ」プラスミドを使用して標準曲線の傾きからＰＣＲ効率（Ｅ）値を計算した。参照遺伝子（Ａｃｔｂ、マウスハウスキーピング遺伝子、ＩＤＴ＃Ｍｍ．ＰＴ．３９ａ．２２２１４８４３．ｇ）を各サンプルと一緒に評価し、全ての他のプライマーセットと共に同じプレートで実行した。
ＱｕａｎｔｓｔｕｏＴＭ ７ Ｐｒｏ Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ、＃Ａ４３１８３）をリアルタイム定量ＰＣＲ（ｑＰＣＲ）試験に使用した。２０μＬの反応において増幅した。上記反応は、５μＬのゲノムＤＮＡ（１００ｎｇ）、１０μＬの２×ＰｒｉｍｅｒＴｉｍｅ遺伝子発現予備混合溶液（ＩＤＴ、＃１０５５７７２）、２μＬのフォワードプライマー（１０μＭ）、２μＬのリバースプライマー（１０μＭ）、０．５μＬのプローブ（１０μＭ）及び０．５μＬの水を含んだ（表７）。ＰＣＲ反応は、（１）９５℃で３分間、（２）９５℃で１５秒、及び６０℃で６０秒、４５サイクルを含んだ（表８）。ＣＡＲ領域を検出するための１セットのプライマー及びＢｉＴＥ領域を検出するための別のセットのプライマーを使用して、３回に分けて各サンプルを分析することによって再現性を検証した。精製した「ＣＡＲ／ＢｉＴＥ」プラスミドを使用して標準曲線の傾きからＰＣＲ効率（Ｅ）値を計算した。参照遺伝子（Ａｃｔｂ、マウスハウスキーピング遺伝子、ＩＤＴ＃Ｍｍ．ＰＴ．３９ａ．２２２１４８４３．ｇ）を各サンプルと一緒に評価し、全ての他のプライマーセットと共に同じプレートで実行した。
生物蛍光イメージング（ＢＬＩ）
ＩＡＣＵＣの方法に従って、０．５リットル／分間の酸素と共に吸入された３％のイソフルランでマウスを麻酔した。麻酔後、マウスに３０ｍｇ／ｍＬのルシフェリンＩＰを０．１５ｍＬ注射した。１０分間待った後、背面ビューをキャプチャするためにＳｐｅｃｔｒａｌ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｍａｇｉｎｇ Ａｍｉを使用してイメージングを行った。イメージング後、動物の体重を測定し、麻酔からの回復を監視した。
ＩＡＣＵＣの方法に従って、０．５リットル／分間の酸素と共に吸入された３％のイソフルランでマウスを麻酔した。麻酔後、マウスに３０ｍｇ／ｍＬのルシフェリンＩＰを０．１５ｍＬ注射した。１０分間待った後、背面ビューをキャプチャするためにＳｐｅｃｔｒａｌ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ Ｉｍａｇｉｎｇ Ａｍｉを使用してイメージングを行った。イメージング後、動物の体重を測定し、麻酔からの回復を監視した。
臓器摘出
ＩＡＣＵＣの方法に従って、まず、マウスを２．６リットルのチャンバー内で３０～７０％のチャンバー体積／分間のＣＯ２流量で安楽死させた。次に、終末心臓穿刺によりＥＤＴＡチューブに最大血液量を採取した。心臓を摘出した後、分析のために肺、脳、脾臓、脊髓、肝臓、骨髓及び腎臓を摘出した。
実施例２．ＩＬ１３Ｒα２－ＨＥＲ２二重ＣＡＲリードクローンＳＲ７、ＳＲ８及びＳＲ９の同定
ＩＡＣＵＣの方法に従って、まず、マウスを２．６リットルのチャンバー内で３０～７０％のチャンバー体積／分間のＣＯ２流量で安楽死させた。次に、終末心臓穿刺によりＥＤＴＡチューブに最大血液量を採取した。心臓を摘出した後、分析のために肺、脳、脾臓、脊髓、肝臓、骨髓及び腎臓を摘出した。
実施例２．ＩＬ１３Ｒα２－ＨＥＲ２二重ＣＡＲリードクローンＳＲ７、ＳＲ８及びＳＲ９の同定
二重ＣＡＲを構築する前、ＩＬ１３Ｒα２及びＨＥＲ２に結合できる単一ＣＡＲを構築し、ＣＡＲ－Ｔ細胞溶解試験を使用してスクリーニングした。単一ＣＡＲのリードクローンを同定した後、図１に示すように二重ＣＡＲを構築した。ルシフェラーゼに基づいた殺傷試験及びＲＴＣＡ（リアルタイム細胞溶解試験）に基づいた試験によってＳＲ７～９のリードクローンを同定した（図３～５）。関連する殺傷活性スケールは表９に示された（正規化ルシフェラーゼ測定又はＲＴＣＡ測定に基づいて、本発明の各ＣＡＲ、ＢｉＴＥ又はＣＡＲ＿ＢｉＴＥ殺傷活性スケール値をそれぞれ与えた）。二重ＣＡＲリードクローンを同定するための細胞株の詳細は図２に示された。
実施例３．ＥＧＦＲ－ＢｉＴＥリードクローンＳＲ１０～１２及びＳＲ１５～１８の同定
実施例３．ＥＧＦＲ－ＢｉＴＥリードクローンＳＲ１０～１２及びＳＲ１５～１８の同定
二重ドメイン及びデュアルアームＢｉＴＥを構築する前、シングルアームＢｉＴＥを構築し、ルシフェラーゼに基づいた細胞溶解試験を使用してスクリーニングした（図６）。シングルアームＢｉＴＥのリードクローンを同定した後（図７）、二重ドメイン及びデュアルアームＢｉＴＥを構築した（図６）。ルシフェラーゼに基づいた殺傷試験及びＮＦＡＴに基づいたＢｉＴＥ媒介性Ｔ細胞活性化試験によって二重ドメイン及びデュアルアームＢｉＴＥのリードクローンを同定した（図８及び９）。関連する殺傷活性スケールは表９に示された。
実施例４．ＩＬ１３Ｒα２－ＨＥＲ２ ｄｕａｌ ＣＡＲ＿ ＥＧＦＲ－ＢｉＴＥリードクローンＳＲ２０～２２及びＳＲ２４～２６の同定
実施例４．ＩＬ１３Ｒα２－ＨＥＲ２ ｄｕａｌ ＣＡＲ＿ ＥＧＦＲ－ＢｉＴＥリードクローンＳＲ２０～２２及びＳＲ２４～２６の同定
二重ＣＡＲ及びＢｉＴＥのリードクローンを同定した後、図１０に示すように「ＩＬ１３Ｒα２－ＨＥＲ２ ｄｕａｌ ＣＡＲ＿ＥＧＦＲ－ＢｉＴＥ」の複合構築物を構築した。機能性ＢｉＴＥを産生する「ｄｕａｌ－ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ」構築物の能力を検証し、より優れた細胞溶解活性を有するＢｉＴＥを更に同定するために、ＨＥＫ２９３Ｔ細胞（図１１～１４）及び初代ヒトＴ細胞（図１６）によって産生されたＢｉＴＥは、細胞溶解能力試験に使用された。ＨＥＫ２９３Ｔ細胞（図１５）又は初代Ｔ細胞（図１７）によって産生されたＢｉＴＥがＴ細胞活性化を刺激する能力は、ＮＦＡＴに基づいたルシフェラーゼ試験を使用して測定された。
ＢｉＴＥの細胞溶解活性を確認した後、ルシフェラーゼに基づいた殺傷試験（図１８と１９）及びＲＴＣＡに基づいた細胞溶解試験を使用して、「ｄｕａｌ－ＣＡＲ＿ＢｉＴＥ」クローンの相乗的細胞溶解活性を分析した。
ＢｉＴＥ ａｒｍｅｄ ｄｕａｌ ＣＡＲ－Ｔリードクローンを更に評価するために、ＥＬＩＳＡ試験によってＣＡＲ－Ｔ細胞から放出したサイトカインを評価した。ＩＬ－２及びＩＦＮγ（図２３と２４）を検出した。これらの一連の試験によって、ＢｉＴＥ ａｒｍｅｄ ｄｕａｌ ＣＡＲ－ＴのリードクローンＳＲ２６を決定した。関連する殺傷活性スケールは表９に示された。
実施例５．リードクローンの１つであるＳＲ２６の連続殺傷活性の測定
実施例５．リードクローンの１つであるＳＲ２６の連続殺傷活性の測定
ＣＡＲ－Ｔ細胞及びがん細胞の連続的なインキュベートを使用して、リードクローンＳＲ２６ ＣＡＲ－Ｔ細胞の、標的がん細胞への連続的な死滅（連続殺傷）及び標的陽性がん細胞の刺激による増殖の能力を試験した。リードクローンＳＲ２６が強力な連続殺傷活性を有し且つ増殖が良好であることを発見した（図２５と２６）。
実施例６．デュアルアームＢｉＴＥ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、様々な種類のがん細胞に対する細胞溶解活性を示した
実施例６．デュアルアームＢｉＴＥ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、様々な種類のがん細胞に対する細胞溶解活性を示した
デュアルアームＢｉＴＥ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、ＧＢＭがん細胞に対して、シングルアームリバースＢｉＴＥ ＣＡＲ－Ｔ細胞よりも強い細胞溶解活性を示した（例えば、図２０、２１及び２７～３１Ｂを参照）。続いて、デュアルアームＢｉＴＥ ＣＡＲ－Ｔ細胞のより強い細胞溶解活性が他の種類のがんに適用するかどうかを研究した。リアルタイム細胞溶解試験の結果は、デュアルアームＢｉＴＥ ＣＡＲ－Ｔ細胞が、ＨＥＲ２陽性乳がん、肺がん及び脳転移を伴う肺がんを含む他の種類のがんにおいても、シングルアームＢｉＴＥ ＣＡＲ－Ｔ細胞よりも強い細胞溶解活性を有することを示した（図３２～３９）。様々な種類のがんに細胞溶解活性を与えることによって、デュアルアームＢｉＴＥ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、様々ながんの治療に広く適用することができた。
実施例７．デュアルアームＢｉＴＥ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、高侵襲性ＧＢＭモデルＵ８７において治療有効性を示した
実施例７．デュアルアームＢｉＴＥ ＣＡＲ－Ｔ細胞は、高侵襲性ＧＢＭモデルＵ８７において治療有効性を示した
デュアルアームＢｉＴＥ ＣＡＲ－Ｔ細胞リードクローンＳＲ２６のインビボでの薬理学的有効性を評価するために、最も悪性のＧＢＭ頭蓋内ＧＢＭモデルの１つであるＵ８７を使用した。腫瘍の根絶率及び生存率の結果は図４０Ａ～４０Ｃに示された。治療薬の用量以下の実際のＵ８７ ＧＢＭモデルにおける治療有効性レベルを初めて実証した。ＳＲ２６は、ＧＢＭに対して前例のない前臨床治療効果をもたらした。
実施例８．ＳＲ２６のＰＫ／生体内分布及び毒性研究
実施例８．ＳＲ２６のＰＫ／生体内分布及び毒性研究
ＳＲ２６のインビボでの薬物動態／生体内分布を評価するために、ＰＫ研究を行った。ＣＡＲ遺伝子及びＢｉＴＥ遺伝子の両方とも、脳でのみ検出された。心臓、肝臓、脾臓、肺、腎臓、骨髓、脊髓又は血液のゲノムＤＮＡにおいて何れも検出されなかった。データは、注入したＣＡＲ－Ｔ細胞が脳にのみ限定されることを示唆した。ＣＡＲ－Ｔ細胞は、脳組織に浸潤することができ、浸潤したＣＡＲ－Ｔ細胞は、関連する腫瘍抗原の刺激が欠如しているため、ＧＢＭ損傷マウスの体内で徐々に活力を失うか、又は再び静止状態に戻った（図４１と４２）。
続いて、ＳＲ２６の潜在的なインビボ毒性を評価するために、毒性学研究を行った。結果から分かるように、ＳＲ２６は、ＧＢＭ腫瘍を効果的に根絶でき、急性（２日目）及び慢性（１４日目）の条件で、ＳＲ２６で処理したマウスには何れも異常効果が観察されなかった（図４３～４５）。
実施例９．ＧＢＭに対する第２世代ＢｉＴＥ ａｒｍｅｄ ＣＡＲ－Ｔ療法
実施例９．ＧＢＭに対する第２世代ＢｉＴＥ ａｒｍｅｄ ＣＡＲ－Ｔ療法
デュアルアームＥＧＦＲ ＢｉＴＥ ａｒｍｅｄ Ｄｕａｌ Ｔａｎｄｅｍ ＩＬ１３Ｒα２－ＨＥＲ２ ＣＡＲ－Ｔ療法が、様々ながん細胞（ＧＢＭ、乳がん及び肺がん細胞など）に対して、前例のない殺傷活性を有することを発見した後、このＢｉＴＥ及びＣＡＲの組成物のより幅広い適用プラットフォームを検討した。ＧＢＭに使用される新世代（第２世代）ＢｉＴＥ及びＣＡＲの組成物のＣＡＲ－Ｔ療法を開発するために、ＢｉＴＥ及びＣＡＲの組合せポリシーの概念を使用し（図４７）、社内で生成されたトップナノ抗体クローンプールをスクリーニングすることによって、ナノ抗体に基づいたＨＥＲ２ ＣＡＲ（図４６と４９～６２）及びＥＧＦＲ ＢｉＴＥ（図４７と６３～７１）のリードクローンを同定した。これらのＢｉＴＥ及びＣＡＲリードクローンを同定した後、図４８におけるポリシーを使用して最適なＢｉＴＥ及びＣＡＲの組合せクローン（ＳＲ１５７－ＳＲ１６４）を開発した。関連する殺傷活性スケールは表９に示された。
実施例１０．ＨＥＲ２－陽性乳がん脳転移に対するＢｉＴＥ ａｒｍｅｄ ＣＡＲ－Ｔ療法
実施例１０．ＨＥＲ２－陽性乳がん脳転移に対するＢｉＴＥ ａｒｍｅｄ ＣＡＲ－Ｔ療法
ＢｉＴＥ及びＣＡＲの組合せプラットフォームの幅広い適用を更に検証するために、ＨＥＲ２＋乳がん脳転移に対してＥＧＦＲ＿ＢｉＴＥ ａｒｍｅｄ ｄｕａｌ ｔａｎｄｅｍ ＨＥＲ２ ＣＡＲ－Ｔ療法を開発した。ＥＧＦＲ＿ＢｉＴＥ及びＨＥＲ２ ＣＡＲに基づいたナノ抗体のリードクローンは、ＧＢＭに使用される第２世代ＢｉＴＥ ａｒｍｅｄ ＣＡＲ－Ｔ法の開発において同定するものと同じであった（図４６、４９～６２、４７及び６３～７１）。図７２のポリシーを使用し、最適なＢｉＴＥ ａｒｍｅｄ ＣＡＲ組合せクローン（ＳＲ１６５～ＳＲ１７０）を開発した。関連する殺傷活性スケールは表９に示された。
実施例１１．肺がん脳転移に対するＢｉＴＥ ａｒｍｅｄ ＣＡＲ－Ｔ療法
実施例１１．肺がん脳転移に対するＢｉＴＥ ａｒｍｅｄ ＣＡＲ－Ｔ療法
ＢｉＴＥ及びＣＡＲの組合せプラットフォームの適用を普及するために、肺がん脳転移に使用されるＥＧＦＲ＿ＢｉＴＥ ａｒｍｅｄ ｄｕａｌ ｔａｎｄｅｍ ＥＧＦＲ ＣＡＲ－Ｔ療法を開発した。ＥＧＦＲ＿ＢｉＴＥに基づいたナノ抗体のリードクローンは、ＧＢＭに使用される第２世代ＢｉＴＥ ａｒｍｅｄ ＣＡＲ－Ｔ療法の開発において同定するものと同じであった（図４７及び６３～７１）。図７３におけるポリシー及び図７５～７８における実験方法を使用してナノ抗体に基づいたＥＧＦＲ＿ＣＡＲのリードクローンを同定した。図７４におけるポリシー及び詳細な実験スクリーニング分析（図７９～８３）を使用し、デュアルアームＥＧＦＲ ＢｉＴＥ ａｒｍｅｄ ＥＧＦＲ ＶＨＨ ｔａｎｄｅｍ ＣＡＲ－ＴのリードクローンＳＲ１２９を同定した。リードＢｉＴＥ及びＣＡＲを組み合わせたこのようなＣＡＲ－Ｔ細胞は、肺がん脳転移のがん細胞に対して、前例のない殺傷活性をもたらした。関連する殺傷活性スケールは表９に示された。
実施例１２．ＨＣＣに対するＧＰＣ３＿ＶＨＨ ＢｉＴＥ ａｒｍｅｄ ＣＡＲ－Ｔ療法
実施例１２．ＨＣＣに対するＧＰＣ３＿ＶＨＨ ＢｉＴＥ ａｒｍｅｄ ＣＡＲ－Ｔ療法
ＢｉＴＥ及びＣＡＲの組合せプラットフォームの適用を更に普及するために、肝細胞がんに対して、ＧＰＣ－３＿ＢｉＴＥ ａｒｍｅｄ ｄｕａｌ ｔａｎｄｅｍ ＧＰＣ－３ ＣＡＲ－Ｔ療法を開発した。まず、社内で開発した最適なａｎｔｉ－ＧＰＣ－３ナノ抗体クローンからナノ抗体に基づいたＧＰＣ－３ ＣＡＲのリードクローンを同定した（図８４、８６～８８及び９６）。ＢｉＴＥ及びＣＡＲの組合せポリシー（図８５）によって、ナノ抗体に基づいたＧＰＣ－３デュアルアームＢｉＴＥのリードクローンを同定し（図９１と９２）、Ｔ細胞活性化を誘導するその能力はＮＦＡＴ試験によって確認された（図９３～９５）。同じポリシー（図８５）によって、デュアルアームＧＰＣ－３ ＢｉＴＥ ａｒｍｅｄ ＧＰＣ－３ ＶＨＨ ｔａｎｄｅｍ ＣＡＲ－Ｔのリードクローンを更に同定した（図８９と９０）。このようなＧＰＣ－３ ＢｉＴＥ ａｒｍｅｄのＧＰＣ－３ ＣＡＲ－Ｔリードクローンは、ＨＣＣがん細胞に対して、より強い殺傷活性をもたらした。関連する殺傷活性スケールは表９に示された。これは、ＢｉＴＥ及びＣＡＲの組合せプラットフォームが、効果的なＣＡＲ－Ｔがん療法の開発において非常に幅広い適用があることを示した。
本明細書で引用される全ての特許、公開出願及び参照文献の教示は何れも、その全体が参照により組み込まれる。
例示的な実施例を具体的に示して説明したが、添付される特許請求の範囲に含まれる実施例の範囲から逸脱することなく、形態及び詳細に様々な変更を行うことができることが当業者に理解されたい。
Claims (122)
- キメラ抗原受容体（ＣＡＲ）及びＴ細胞エンゲージャーをコードする配列を含むポリヌクレオチドであって、
前記ＣＡＲは１種又は複数種の第１の腫瘍関連抗原（ＴＡＡ）に結合することができ、前記Ｔ細胞エンゲージャーはＴ細胞及び第２のＴＡＡに結合することができる、
ことを特徴とするポリヌクレオチド。
- 前記ＣＡＲは単特異性である、
ことを特徴とする請求項１に記載のポリヌクレオチド。
- 前記ＣＡＲは二重特異性である、
ことを特徴とする請求項１に記載のポリヌクレオチド。
- 前記ＣＡＲは第１のＴＡＡの２つのエピトープに結合することができる、
ことを特徴とする請求項３に記載のポリヌクレオチド。
- 前記ＣＡＲは２つの第１のＴＡＡに結合することができる、
ことを特徴とする請求項３に記載のポリヌクレオチド。
- 前記１種又は複数種の第１のＴＡＡ及び第２のＴＡＡは、それぞれ独立的に血液がん細胞に発現する、
ことを特徴とする請求項１～５の何れか一項に記載のポリヌクレオチド。
- 前記１種又は複数種の第１のＴＡＡ及び第２のＴＡＡは、それぞれ独立的に固形腫瘍細胞に発現する、
ことを特徴とする請求項１～５の何れか一項に記載のポリヌクレオチド。
- 前記固形腫瘍は、脳腫瘍、乳がん、肺がん又は肝臓がんである、
ことを特徴とする請求項７に記載のポリヌクレオチド。
- 前記脳腫瘍は膠芽腫（ＧＢＭ）であり、任意選択的に、前記ＧＢＭは再発性又は原発性の多形膠芽腫である、
ことを特徴とする請求項８に記載のポリヌクレオチド。
- 前記脳腫瘍は転移性脳腫瘍であり、任意選択的に、前記転移性脳腫瘍は非小細胞肺がん脳転移（ＮＳＣＬＣＢＭ）、小細胞肺がん脳転移（ＳＣＬＣＢＭ）、ＨＥＲ２－陽性転移性乳がん又はトリプルネガティブ乳がん脳転移（ＴＮＢＣＢＭ）である、
ことを特徴とする請求項８に記載のポリヌクレオチド。
- 前記肝臓がんは肝細胞がん（ＨＣＣ）である、
ことを特徴とする請求項８に記載のポリヌクレオチド。
- 前記１種又は複数種の第１のＴＡＡは、それぞれ独立的にインターロイキン－１３受容体サブユニットα－２（ＩＬ１３Ｒα２）、ヒト上皮成長因子受容体２（ＨＥＲ２）、上皮成長因子受容体（ＥＧＦＲ）、ＥＧＦＲ変異体ＩＩＩ（ＥＧＦＲｖＩＩＩ）、グルカゴン－３（ＧＰＣ３）又はその組み合わせから選ばれる、
ことを特徴とする請求項１～１１の何れか一項に記載のポリヌクレオチド。
- 前記ＣＡＲは、変異タンパク質、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ナノ抗体、又はその組み合わせを含む、
ことを特徴とする請求項１～１２の何れか一項に記載のポリヌクレオチド。
- 前記ＣＡＲは、変異タンパク質及び単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、２つのナノ抗体、変異タンパク質及び２つのナノ抗体、又はｓｃＦｖ及びナノ抗体を含む、
ことを特徴とする請求項１３に記載のポリヌクレオチド。
- 前記ＣＡＲは、
インターロイキン－１３（ＩＬ１３）変異タンパク質、
ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖ、
ＩＬ１３変異タンパク質及びＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖ、
ＨＥＲ２－結合ナノ抗体、
２つのＨＥＲ２－結合ナノ抗体、
ＩＬ１３変異タンパク質及び２つのＨＥＲ２－結合ナノ抗体、
ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ｓｃＦｖ、
ＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体、
２つのＥＧＦＲ又はＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体、
ＧＰＣ３－結合ナノ抗体、又は
ＧＰＣ３－結合ナノ抗体及びＧＰＣ３－結合ｓｃＦｖを含む、ことを特徴とする請求項１３に記載のポリヌクレオチド。
- 前記ＩＬ１３変異タンパク質は、配列番号１に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列をそれぞれ独立的に含み、
前記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは、配列番号２～４に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列をそれぞれ独立的に含み、
前記ＨＥＲ２－結合ナノ抗体は、配列番号２４２～２５９に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列をそれぞれ独立的に含み、
前記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５～１７及び２６０～２８１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列をそれぞれ独立的に含み、
前記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５～１７及び２６０～２８１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列をそれぞれ独立的に含み、又は
前記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体は、配列番号２８２～２９１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列をそれぞれ独立的に含み、
又はその組み合わせである、
ことを特徴とする請求項１５に記載のポリヌクレオチド。
- 前記ＩＬ１３変異タンパク質は、配列番号１に示されるアミノ酸配列に対して、約１～１２個のアミノ酸置換をそれぞれ独立的に含み、
前記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは、配列番号２～４に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、約１～２５個のアミノ酸置換をそれぞれ独立的に含み、
前記ＨＥＲ２－結合ナノ抗体は、配列番号２４２～２５９に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、約１～１２個のアミノ酸置換をそれぞれ独立的に含み、
前記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５～１７及び２６０～２８１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、約１～１２個のアミノ酸置換をそれぞれ独立的に含み、
前記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５～１７及び２６０～２８１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、約１～１２個のアミノ酸置換をそれぞれ独立的に含み、又は
前記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体は、配列番号２８２～２９１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、約１～１２個のアミノ酸置換をそれぞれ独立的に含み、
又はその組み合わせである、
ことを特徴とする請求項１５に記載のポリヌクレオチド。
- 前記アミノ酸置換は保存的置換である、
ことを特徴とする請求項１７に記載のポリヌクレオチド。
- 前記アミノ酸置換は高度保存的置換である、
ことを特徴とする請求項１８に記載のポリヌクレオチド。
- 前記ＩＬ１３変異タンパク質は、配列番号１に示されるアミノ酸配列をそれぞれ独立的に含み、
前記ＨＥＲ２－結合ｓｃＦｖは、配列番号２～４の何れか１つに示されるアミノ酸配列をそれぞれ独立的に含み、
前記ＨＥＲ２－結合ナノ抗体は、配列番号２４２～２５９の何れか１つに示されるアミノ酸配列をそれぞれ独立的に含み、
前記ＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５～１７及び２６０～２８１の何れか１つに示されるアミノ酸配列をそれぞれ独立的に含み、
前記ＥＧＦＲｖＩＩＩ－結合ナノ抗体は、配列番号１５～１７及び２６０～２８１の何れか１つに示されるアミノ酸配列をそれぞれ独立的に含み、又は
前記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体は、配列番号２８２～２９１の何れか１つに示されるアミノ酸配列をそれぞれ独立的に含み、
又はその組み合わせである、
ことを特徴とする請求項１５に記載のポリヌクレオチド。
- 前記ＣＡＲは、
リンカー、
ＣＤ８αシグナルペプチド、
ＣＤ８αヒンジ、
ＣＤ２８膜貫通ドメイン、
４－１ＢＢ共刺激ドメイン、
ＣＤ３ζシグナルドメイン、
又はその組み合わせを含む、
ことを特徴とする請求項１～２０の何れか一項に記載のポリヌクレオチド。
- 前記リンカーは、配列番号５に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤ８αヒンジは、配列番号７に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号８に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
前記４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号９に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、又は
前記ＣＤ３ζシグナルドメインは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含み、
又はその組み合わせである、
ことを特徴とする請求項２１に記載のポリヌクレオチド。
- 前記リンカーは、配列番号５に示されるアミノ酸配列に対して、１又は２個のアミノ酸置換を含み、
前記ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に示されるアミノ酸配列に対して、１又は２個のアミノ酸置換を含み、
前記ＣＤ８αヒンジは、配列番号７に示されるアミノ酸配列に対して、約１～５個のアミノ酸置換を含み、
前記ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号８に示されるアミノ酸配列に対して、約１～３個のアミノ酸置換を含み、
前記４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号９に示されるアミノ酸配列に対して、約１～５個のアミノ酸置換を含み、又は
前記ＣＤ３ζシグナルドメインは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列に対して、約１～１２個のアミノ酸置換を含み、
又はその組み合わせである、
ことを特徴とする請求項２１に記載のポリヌクレオチド。
- 前記リンカーは、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤ８αシグナルペプチドは、配列番号６に示されるアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤ８αヒンジは、配列番号７に示されるアミノ酸配列を含み、
前記ＣＤ２８膜貫通ドメインは、配列番号８に示されるアミノ酸配列を含み、
前記４－１ＢＢ共刺激ドメインは、配列番号９に示されるアミノ酸配列を含み、又は
前記ＣＤ３ζシグナルドメインは、配列番号１０に示されるアミノ酸配列を含み、
又はその組み合わせである、
ことを特徴とする請求項２１に記載のポリヌクレオチド。
- 前記Ｔ細胞エンゲージャーは２つのＴＡＡエピトープに結合することができる、
ことを特徴とする請求項１～２４の何れか一項に記載のポリヌクレオチド。
- 前記Ｔ細胞エンゲージャーは第２のＴＡＡの２つのＴＡＡエピトープに結合することができる、
ことを特徴とする請求項２５に記載のポリヌクレオチド。
- 前記Ｔ細胞エンゲージャーは２つの第２のＴＡＡに結合することができる、
ことを特徴とする請求項２５に記載のポリヌクレオチド。
- 前記第２のＴＡＡは、それぞれ独立的にインターロイキン－１３受容体サブユニットα－２（ＩＬ１３Ｒα２）、ＨＥＲ２、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、又はＧＰＣ３である、
ことを特徴とする請求項１～２７の何れか一項に記載のポリヌクレオチド。
- 前記Ｔ細胞エンゲージャーは、単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ナノ抗体、又はその組み合わせを含む、
ことを特徴とする請求項１～２８の何れか一項に記載のポリヌクレオチド。
- 前記Ｔ細胞エンゲージャーはＣＤ３－結合ｓｃＦｖ及びＥＧＦＲ－結合ｓｃＦｖを含む、
ことを特徴とする請求項２９に記載のポリヌクレオチド。
- 前記Ｔ細胞エンゲージャーはＣＤ３－結合ｓｃＦｖ及びＥＧＦＲ－結合ナノ抗体を含む、
ことを特徴とする請求項２９に記載のポリヌクレオチド。
- 前記Ｔ細胞エンゲージャーはＣＤ３－結合ｓｃＦｖ及び２つのＥＧＦＲ－結合ナノ抗体を含む、
ことを特徴とする請求項２９に記載のポリヌクレオチド。
- 前記Ｔ細胞エンゲージャーはＣＤ３－結合ｓｃＦｖ及び２つのＧＰＣ３－結合ナノ抗体を含む、
ことを特徴とする請求項２９に記載のポリヌクレオチド。
- 前記ＥＧＦＲ－結合ｓｃＦｖ及びＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５～１７及び２６０～２８１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列をそれぞれ独立的に含む、
ことを特徴とする請求項３０～３２の何れか一項に記載のポリヌクレオチド。
- 前記ＥＧＦＲ－結合ｓｃＦｖ及びＥＧＦＲ－結合ナノ抗体は、配列番号１５～１７及び２６０～２８１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、約１～１２個のアミノ酸置換をそれぞれ独立的に含む、
ことを特徴とする請求項３０～３２、３４の何れか一項に記載のポリヌクレオチド。
- 前記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体は、配列番号２８２～２９１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、
ことを特徴とする請求項３３に記載のポリヌクレオチド。
- 前記ＧＰＣ３－結合ナノ抗体は、配列番号２８２～２９１に示されるアミノ酸配列の少なくとも１つに対して、約１～１２個のアミノ酸置換をそれぞれ独立的に含む、
ことを特徴とする請求項３３又は３６に記載のポリヌクレオチド。
- 前記Ｔ細胞エンゲージャーはシグナルペプチドを含む、
ことを特徴とする請求項１～３７の何れか一項に記載のポリヌクレオチド。
- 前記シグナルペプチドは配列番号１９に示されるアミノ酸配列を含む、
ことを特徴とする請求項３８に記載のポリヌクレオチド。
- 前記Ｔ細胞エンゲージャーは、配列番号２０～２４、１０９～１１１及び１７６に示されるアミノ酸配列から独立的に選ばれる少なくとも１つと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、
ことを特徴とする請求項１～３９の何れか一項に記載のポリヌクレオチド。
- 前記Ｔ細胞エンゲージャーは、配列番号２１～２３、１０９～１１１に示されるアミノ酸配列から独立的に選ばれる少なくとも１つに対して、約１～４０個のアミノ酸置換を含む、
ことを特徴とする請求項１～４０の何れか一項に記載のポリヌクレオチド。
- 前記Ｔ細胞エンゲージャーは、配列番号２４～２７、１７６～１７８及び２９２に示されるアミノ酸配列から独立的に選ばれる少なくとも１つに対して、約１～５５個のアミノ酸置換を含む、
ことを特徴とする請求項１～４０の何れか一項に記載のポリヌクレオチド。
- 前記Ｔ細胞エンゲージャーは、配列番号２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、１０９、１１０、１１１、１７６、１７７、１７８又は２９２に示されるアミノ酸配列を含む、
ことを特徴とする請求項１～４０の何れか一項に記載のポリヌクレオチド。
- 前記ポリヌクレオチドによってコードされるアミノ酸配列は、配列番号３１～３８、配列番号１０６～１０８、配列番号１１２～１１９、配列番号１７３～１７５、配列番号１７９～１８６、配列番号１９２～２０３、配列番号２２２～２３７又は配列番号２３９～２４１に示されるアミノ酸配列から独立的に選ばれる少なくとも１つ、又はその組み合わせと少なくとも９０％の同一性を有する、
ことを特徴とする請求項１に記載のポリヌクレオチド。
- 前記ポリヌクレオチドによってコードされるアミノ酸配列は、配列番号３１～３８、配列番号１０６～１０８、配列番号１１２～１１９、配列番号１７３～１７５、配列番号１７９～１８６、配列番号１９２～２０３、配列番号２２２～２３７又は配列番号２３９～２４１に示されるアミノ酸配列から独立的に選ばれる少なくとも１つ、又はその組み合わせに対して、約１～５０個のアミノ酸置換を含む、
ことを特徴とする請求項１に記載のポリヌクレオチド。
- 前記ポリヌクレオチドによってコードされるアミノ酸配列は、配列番号３１～３８、配列番号１０６～１０８、配列番号１１２～１１９、配列番号１７３～１７５、配列番号１７９～１８６、配列番号１９２～２０３、配列番号２２２～２３７又は配列番号２３９～２４１に示されるアミノ酸配列からそれぞれ独立的に選ばれる、
ことを特徴とする請求項１に記載のポリヌクレオチド。
- Ｔ細胞エンゲージャーコード配列を含むポリヌクレオチドであって、
前記Ｔ細胞エンゲージャーは、Ｔ細胞、第１のＴＡＡエピトープ、及び第２のＴＡＡエピトープに結合することができる、
ことを特徴とするポリヌクレオチド。
- 前記Ｔ細胞エンゲージャーはＣＤ３に結合することができる、
ことを特徴とする請求項４７に記載のポリヌクレオチド。
- 前記第１のＴＡＡエピトープ及び前記第２のＴＡＡエピトープは第２のＴＡＡにある、
ことを特徴とする請求項４７又は４８に記載のポリヌクレオチド。
- 前記第１のＴＡＡエピトープ及び前記第２のＴＡＡエピトープは２つの第２のＴＡＡにある、
ことを特徴とする請求項４７又は４８に記載のポリヌクレオチド。
- 前記第２のＴＡＡは、それぞれ独立的にＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、又はＧＰＣ３である、
ことを特徴とする請求項４９又は５０に記載のポリヌクレオチド。
- 前記Ｔ細胞エンゲージャーは単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ナノ抗体、又はその組み合わせを含む、
ことを特徴とする請求項４７～５１の何れか一項に記載のポリヌクレオチド。
- アミノ酸配列コード配列を含むポリヌクレオチドであって、
前記アミノ酸配列は、配列番号２～４、配列番号１１～１３及び５２、配列番号１５～１７、配列番号２１～２３、配列番号１０９～１１１、配列番号４９及び５０、配列番号５３～７０、配列番号７２～８２、配列番号８３～１０４、配列番号１２０～１３７、配列番号１３９～１４９、配列番号１５０～１７１、配列番号１８８～１９１、配列番号２０４及び２０６～２１４、配列番号２１５～２２１、又は配列番号２４２～２９１に示されるアミノ酸配列から独立的に選ばれる少なくとも１つ、又はその組み合わせと少なくとも９０％の同一性を有する、
ことを特徴とするポリヌクレオチド。
- 前記アミノ酸配列は、配列番号２～４、１１～１３、１５～１７、２１～２３、４９、５０、５２～７０、７２～１０４、１０９～１１１、１２０～１３７、１３９～１７１、１８８～１９１、２０４、２０６～２２１及び２４２～２９１から独立的に選ばれる少なくとも１つのアミノ酸配列と同じである、
ことを特徴とする請求項５３に記載のポリヌクレオチド。
- 請求項１～５４の何れか一項に記載のポリヌクレオチドを含む、
ベクター。
- 請求項１～５４の何れか一項に記載のポリヌクレオチド又は請求項５５に記載のベクターによってコードされる、
融合タンパク質。
- 前記融合タンパク質は自己切断ペプチドを含み、選択可能的に、前記自己切断ペプチドはＴ２Ａペプチド（配列番号２８）である、
ことを特徴とする請求項５６に記載の融合タンパク質。
- 請求項１～５４の何れか一項に記載のポリヌクレオチド、又は請求項５５に記載のベクター、又は請求項５６若しくは５７に記載の融合タンパク質を含む、
ことを特徴とする宿主細胞。
- 請求項１～５４の何れか一項に記載のポリヌクレオチド、請求項５５に記載のベクター、又は請求項４６若しくは４７に記載の融合タンパク質、又はその組み合わせを含む、
ことを特徴とするＴリンパ球。
- 請求項４７～５２の何れか一項に記載のポリヌクレオチド及びＣＡＲコード配列を含むポリヌクレオチドを含み、前記ＣＡＲは第１のＴＡＡに結合することができる、
ことを特徴とするＴリンパ球。
- 前記ＣＡＲは単特異性である、
ことを特徴とする請求項６０に記載のＴリンパ球。
- 前記ＣＡＲは二重特異性である、
ことを特徴とする請求項６０に記載のＴリンパ球。
- 前記ＣＡＲは第１のＴＡＡの２つのエピトープに結合することができる、
ことを特徴とする請求項６０に記載のＴリンパ球。
- 前記ＣＡＲは２つの第１のＴＡＡに結合することができる、
ことを特徴とする請求項６０に記載のＴリンパ球。
- 請求項５９～６４の何れか一項に記載のＴリンパ球を含む、
ことを特徴とする組成物。
- 約２％、約５％、又は約１０％のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を含む凍結保存媒体を更に含み、前記凍結保存媒体は基本的に血清を含まない、
ことを特徴とする請求項６５に記載の組成物。
- 保存用バイアルにある、
ことを特徴とする請求項６５又は６６に記載の組成物。
- 請求項６５又は６６に記載の組成物、及び薬学的に許容されるベクターを含む、
ことを特徴とする医薬組成物。
- 請求項６８に記載の医薬組成物を含むコンテナ及び任意選択的な使用説明書を含む、
ことを特徴とする試薬キット。
- 請求項１～５４の何れか一項に記載のポリヌクレオチド、請求項５９～６４の何れか一項に記載のＴリンパ球、請求項６５～６７の何れか一項に記載の組成物、又は請求項６８に記載の医薬組成物の用途であって、
必要とする対象のがんを治療する薬物の調製に用いられる、
ことを特徴とする用途。
- 必要とする対象のがんの治療における、請求項５９～６４の何れか一項に記載のＴリンパ球、請求項６５～６７の何れか一項に記載の組成物、又は請求項６８に記載の医薬組成物の、
用途。
- 必要とする対象のがんを治療する方法であって、
有効量の請求項５９～６４の何れか一項に記載のＴリンパ球、請求項６５～６７の何れか一項に記載の組成物、又は請求項６８に記載の医薬組成物を対象に投与することを含む、
ことを特徴とする方法。
- 前記がんは血液がんである、
ことを特徴とする請求項７２に記載の方法。
- 前記がんは固形腫瘍である、
ことを特徴とする請求項７２に記載の方法。
- 前記固形腫瘍は、脳腫瘍、乳がん、肺がん又は肝臓がんである、
ことを特徴とする請求項７４に記載の方法。
- 前記脳腫瘍は膠芽腫（ＧＢＭ）であり、任意選択的に、前記ＧＢＭは再発性又は原発性の多形膠芽腫である、
ことを特徴とする請求項７５に記載の方法。
- 前記脳腫瘍は転移性脳腫瘍であり、任意選択的に、前記転移性脳腫瘍は、非小細胞肺がん脳転移（ＮＳＣＬＣＢＭ）、小細胞肺がん脳転移（ＳＣＬＣＢＭ）、ＨＥＲ２－陽性転移性乳がん又はトリプルネガティブ乳がん脳転移（ＴＮＢＣＢＭ）である、
ことを特徴とする請求項７５に記載の方法。
- 前記肝臓がんは肝細胞がん（ＨＣＣ）である、
ことを特徴とする請求項７５に記載の方法。
- 前記対象は１８歳以上である、
ことを特徴とする請求項７２～７８の何れか一項に記載の方法。
- 前記対象は新たにがんと診断される、
ことを特徴とする請求項７２～７９の何れか一項に記載の方法。
- 前記対象は以前のがん治療から再発したか、又は以前のがん治療に耐性がある、
ことを特徴とする請求項７２～７９の何れか一項に記載の方法。
- 前記対象はヒト患者である、
ことを特徴とする請求項７２～８１の何れか一項に記載の方法。
- 前記Ｔリンパ球は同種異性体又は同系Ｔリンパ球である、
ことを特徴とする請求項７２～８２の何れか一項に記載の方法。
- 前記Ｔリンパ球は自己Ｔリンパ球である、
ことを特徴とする請求項７２～８３の何れか一項に記載の方法。
- 少なくとも１０％の前記Ｔリンパ球はＣＡＲ及びＴ細胞エンゲージャーをそれぞれ発現する、
ことを特徴とする請求項７２～８４の何れか一項に記載の方法。
- 約１５～７５％の前記Ｔリンパ球は二重特異性ＣＡＲ及びＴ細胞エンゲージャーをそれぞれ発現する、
ことを特徴とする請求項８５に記載の方法。
- 前記Ｔリンパ球は単回静脈内注入により投与される、
ことを特徴とする請求項７２～８６の何れか一項に記載の方法。
- 前記Ｔリンパ球は２回又は複数回の静脈内注入により投与される、
ことを特徴とする請求項７２～８６の何れか一項に記載の方法。
- 前記Ｔリンパ球を投与する前に、対象に化学療法を実施する、
ことを特徴とする請求項７２～８８の何れか一項に記載の方法。
- Ｔ細胞媒介性がん細胞溶解を誘導する方法であって、
がん細胞を有効量の請求項５９～６４の何れか一項に記載のＴリンパ球と接触させることを含む、
ことを特徴とする方法。
- 前記がん細胞は血液がん由来の細胞である、
ことを特徴とする請求項９０に記載の方法。
- 前記がん細胞は固形腫瘍由来の細胞である、
ことを特徴とする請求項９０に記載の方法。
- 前記固形腫瘍は、脳腫瘍、乳がん、肺がん又は肝臓がんである、
ことを特徴とする請求項９２に記載の方法。
- 前記脳腫瘍は膠芽腫（ＧＢＭ）である、
ことを特徴とする請求項９３に記載の方法。
- 前記ＧＢＭは再発性又は原発性の多形膠芽腫である、
ことを特徴とする請求項９４に記載の方法。
- 前記脳腫瘍は転移性脳腫瘍である、
ことを特徴とする請求項９３に記載の方法。
- 前記転移性脳腫瘍は、非小細胞肺がん脳転移（ＮＳＣＬＣＢＭ）、小細胞肺がん脳転移（ＳＣＬＣＢＭ）、ＨＥＲ２－陽性転移性乳がん又はトリプルネガティブ乳がん脳転移（ＴＮＢＣＢＭ）である、
ことを特徴とする請求項９６に記載の方法。
- 前記肝臓がんは肝細胞がん（ＨＣＣ）である、
ことを特徴とする請求項９３に記載の方法。
- 配列番号２～４、１５～１７、又は２４２～２９１に示されるアミノ酸配列から独立的に選ばれる少なくとも１つと少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、
ことを特徴とするポリペプチド。
- 配列番号２～４、１５～１７、又は２４２～２９１に示されるアミノ酸配列から独立的に選ばれる少なくとも１つと同じであるアミノ酸配列を含む、
ことを特徴とする請求項９９に記載のポリペプチド。
- Ｔ細胞、第１のＴＡＡエピトープ、及び第２のＴＡＡエピトープに結合できるＴ細胞エンゲージャーであって、
前記Ｔ細胞エンゲージャーは、ＣＡＲ Ｔ－細胞がＣＡＲと第１のＴＡＡとの間の相互作用によってｉｎ ｓｉｔｕで生成される、
ことを特徴とするＴ細胞エンゲージャー。
- 前記Ｔ細胞エンゲージャーは、ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチドにコードされている、
ことを特徴とする請求項１０１に記載のＴ細胞エンゲージャー。
- 前記ＣＡＲ Ｔ－細胞はポリヌクレオチドを含み、前記ポリヌクレオチドは前記Ｔ細胞エンゲージャーをコードする配列を含む、
ことを特徴とする請求項１０１に記載のＴ細胞エンゲージャー。
- 前記ＣＡＲ Ｔ－細胞は、前記ＣＡＲをコードする配列を含むポリヌクレオチドを含む、
ことを特徴とする請求項１０３に記載のＴ細胞エンゲージャー。
- 前記ＣＡＲは第１のＴＡＡに結合することができる、
ことを特徴とする請求項１０１～１０４の何れか一項に記載のＴ細胞エンゲージャー。
- 前記第１のＴＡＡは、ＣＥＡ、ＧＰＣ３、ＭＵＣ－１、ＥｐＣＡＭ、ＨＥＲ受容体、ＰＥＭ、Ｃａｌｕｄｉ６、Ｃｌｕａｄｉ－１８．２、メソテリン、Ａ３３、Ｇ２５０、炭水化合物抗原Ｌｅｙ、Ｌｅｘ、Ｌｅｂ、ＰＳＭＡ、ＴＡＧ－７２、ＳＴＥＡＰ１、ＣＤ１６６、ＣＤ２４、ＣＤ４４、Ｅ－ｃａｄｈｅｒｉｎ、ＳＰＡＲＣ、ＥｒｂＢ２、ＥｒｂＢ３、ＭＵＣ１、ＬＭＰ２、ｉｄｉｏｔｙｐｅ、ＨＰＶ Ｅ６＆Ｅ７、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、ＨＥＲ－２／ｎｅｕ、ＭＡＧＥ Ａ３、ＮＹ－ＥＳＯ－１、ＧＤ２、ＰＳＭＡ、ＰＣＳＡ、ＰＳＡ、ＭｅｌａｎＡ／ＭＡＲＴ１、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２２、ＣＤ３３、ＣＤ５、ＣＤ７０、ｏｒ ＢＣＭＡである、
ことを特徴とする請求項１０５に記載のＴ細胞エンゲージャー。
- 前記第１のＴＡＡは、ＨＥＲ２、ＧＰＣ３、ＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、又はＧＰＣ３である、
ことを特徴とする請求項１０５に記載のＴ細胞エンゲージャー。
- 前記Ｔ細胞エンゲージャーは、ＣＤ２、ＣＤ３、ＶＬＡ－１、ＣＤ８、ＣＤ４、ＣＣＲ６、ＣＸＣＲ５、ＣＤ２５、ＣＤ３１、ＣＤ４５ＲＯ、ＣＤ１９７、ＣＤ１２７、ＣＤ３８、ＣＤ２７、ＣＤ１９６、ＣＤ２７７、又はＣＸＣＲ３に結合することができる、
ことを特徴とする請求項１０１～１０７の何れか一項に記載のＴ細胞エンゲージャー。
- 前記Ｔ細胞エンゲージャーは、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ３１、又はＣＤ２７７に結合することができる、
ことを特徴とする請求項１０１～１０８の何れか一項に記載のＴ細胞エンゲージャー。
- 前記Ｔ細胞エンゲージャーはＣＤ３に結合することができる、
ことを特徴とする請求項１０１～１０９の何れか一項に記載のＴ細胞エンゲージャー。
- 前記第１のＴＡＡエピトープ及び第２のＴＡＡエピトープは第２のＴＡＡにある、
ことを特徴とする請求項１０１～１１０の何れか一項に記載のＴ細胞エンゲージャー。
- 前記第１のＴＡＡエピトープ及び第２のＴＡＡエピトープは２つの第２のＴＡＡにある、
ことを特徴とする請求項１０１～１１０の何れか一項に記載のＴ細胞エンゲージャー。
- 前記第２のＴＡＡは、それぞれ独立的にＥＧＦＲ、ＥＧＦＲｖＩＩＩ、又はＧＰＣ－３である、
ことを特徴とする請求項１１１又は１１２に記載のＴ細胞エンゲージャー。
- 単鎖可変断片（ｓｃＦｖ）、ナノ抗体、又はその組み合わせを含む、
ことを特徴とする請求項１０１～１１３の何れか一項に記載のＴ細胞エンゲージャー。
- 前記相互作用は免疫シナプスである、
ことを特徴とする請求項１０１～１１４の何れか一項に記載のＴ細胞エンゲージャー。
- グルカゴン－３（ＧＰＣ３）に特異的に結合できるポリペプチドであって、
配列番号２８４、配列番号２８６又は配列番号２８９に示される重鎖可変領域（ＶＨ）アミノ酸配列のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３のアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有するアミノ酸配列をそれぞれ含む重鎖相補性決定領域１（ＨＣＤＲ１）、重鎖相補性決定領域２（ＨＣＤＲ２）及び重鎖相補性決定領域３（ＨＣＤＲ３）を含む、
ことを特徴とするポリペプチド。
- 前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３はそれぞれ、配列番号２８４、配列番号２８６又は配列番号２８９に示されるＶＨアミノ酸配列のＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３と同じである、
ことを特徴とする請求項１１６に記載のポリペプチド。
- 前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３はそれぞれ、
配列番号３０３、配列番号３０４及び配列番号３０５、
配列番号３０６、配列番号３０７及び配列番号３０８、
配列番号３０９、配列番号３１０及び配列番号３０８、
配列番号３１１、配列番号３１２及び配列番号３１３、
配列番号３１４、配列番号３１５及び配列番号３１６、
配列番号３１７、配列番号３１８及び配列番号３１６、
配列番号３１９、配列番号３２０及び配列番号３２１、
配列番号３２２、配列番号３２３及び配列番号３２４、又は
配列番号３２５、配列番号３２６及び配列番号３２４というアミノ酸配列と少なくとも９０％の同一性を有する、
ことを特徴とする請求項１１６に記載のポリペプチド。
- 前記ＨＣＤＲ１、ＨＣＤＲ２及びＨＣＤＲ３はそれぞれ、
配列番号３０３、配列番号３０４及び配列番号３０５、
配列番号３０６、配列番号３０７及び配列番号３０８、
配列番号３０９、配列番号３１０及び配列番号３０８、
配列番号３１１、配列番号３１２及び配列番号３１３、
配列番号３１４、配列番号３１５及び配列番号３１６、
配列番号３１７、配列番号３１８及び配列番号３１６、
配列番号３１９、配列番号３２０及び配列番号３２１、
配列番号３２２、配列番号３２３及び配列番号３２４、又は
配列番号３２５、配列番号３２６及び配列番号３２４というアミノ酸配列と同じである、
ことを特徴とする請求項１１６に記載のポリペプチド。
- 配列番号２８４、配列番号２８６又は配列番号２８９に示されるアミノ酸配列と少なくとも８５％の同一性を有するアミノ酸配列を含む、
ことを特徴とする請求項１１６に記載のポリペプチド。
- 前記アミノ酸配列は、配列番号２８４、配列番号２８６又は配列番号２８９に示される、
ことを特徴とする請求項１２０に記載のポリペプチド。
- 前記ポリペプチドはナノ抗体である、
ことを特徴とする請求項１１６～１２１の何れか一項に記載のポリペプチド。
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| BRPI0415457A (pt) | 2003-10-16 | 2006-12-05 | Micromet Ag | constructo de ligação especìfico de cd3 citotoxicamente ativo, seu processo de produção, composição compreendendo o mesmo, seqüência de ácido nucléico, vetor, hospedeiro, seus usos na preparação de uma composição farmacêutica e kit compreendendo os mesmo |
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| CN101321784A (zh) | 2005-10-11 | 2008-12-10 | 埃博灵克斯股份有限公司 | 针对egfr和igf－ir的纳米抗体tm和多肽 |
| US20090252681A1 (en) | 2005-10-11 | 2009-10-08 | Ablynx N.V. | Nanobodies and Polypeptides Against EGFR and IGF-IR |
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| US20070264687A1 (en) | 2005-12-15 | 2007-11-15 | Min-Yuan Chou | Recombinant triplex scaffold-based polypeptides |
| BRPI0809594A2 (pt) | 2007-04-03 | 2019-08-27 | Micromet Ag | polipeptídeo, seqüência de ácido nucléico, vetor, hospedeiro, processo para a produção de um polipeptídeo, composição farmacêutica, uso de um polipeptídeo, método para prevenção, tratamento ou melhora de uma doença, em um indivíduo com necessidade do mesmo, kit, método para a identificação de um polipeptídeo(s) |
| JP6035009B2 (ja) | 2007-08-22 | 2016-11-30 | ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ カリフォルニア | 活性化可能な結合ポリペプチドおよびその同定方法ならびに使用 |
| EP2331566B1 (en) | 2008-08-26 | 2015-10-07 | City of Hope | Method and compositions for enhanced anti-tumor effector functioning of t cells |
| PT3012268T (pt) | 2010-09-08 | 2018-01-31 | Chemotherapeutisches Forschungsinstitut Georg Speyer Haus | Recetores de antigénio quimérico com uma região de charneira otimizada |
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| US20130280220A1 (en) | 2012-04-20 | 2013-10-24 | Nabil Ahmed | Chimeric antigen receptor for bispecific activation and targeting of t lymphocytes |
| EP2872526B1 (en) | 2012-07-13 | 2020-04-01 | The Trustees of the University of Pennsylvania | Enhancing activity of car t cells by co-introducing a bispecific antibody |
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| KR20210090298A (ko) | 2012-10-30 | 2021-07-19 | 에스퍼란스 파마슈티컬스, 인코포레이티드 | 항체/약물 컨쥬게이트 및 이의 사용 방법 |
| US9562110B2 (en) | 2012-11-21 | 2017-02-07 | Wuhan Yzy Biopharma Co., Ltd. | Bispecific antibody |
| EP3626741A1 (en) | 2013-02-20 | 2020-03-25 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Treatment of cancer using humanized anti-egfrviii chimeric antigen receptor |
| EP3811954A1 (en) | 2013-02-26 | 2021-04-28 | Memorial Sloan Kettering Cancer Center | Compositions and methods for immunotherapy |
| EP2968552B1 (en) | 2013-03-14 | 2020-03-11 | The Scripps Research Institute | Targeting agent antibody conjugates and uses thereof |
| US10584158B2 (en) | 2013-04-17 | 2020-03-10 | Baylor College Of Medicine | Immunosuppressive TGF-β signal converter |
| EP3008173B1 (en) | 2013-06-10 | 2021-09-15 | Dana-Farber Cancer Institute, Inc. | Methods and compositions for reducing immunosupression by tumor cells |
| EP2930188A1 (en) | 2014-04-13 | 2015-10-14 | Affimed Therapeutics AG | Trifunctional antigen-binding molecule |
| EP3139955B1 (en) | 2014-04-30 | 2024-03-20 | President and Fellows of Harvard College | Fusion proteins for treating cancer and related methods |
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| CN112546231A (zh) | 2014-07-09 | 2021-03-26 | 博笛生物科技有限公司 | 用于治疗癌症的联合治疗组合物和联合治疗方法 |
| MA40510A (fr) | 2014-08-04 | 2017-06-14 | Hoffmann La Roche | Molécules bispécifiques de liaison à l'antigène activant les lymphocytes t |
| KR102659538B1 (ko) | 2014-09-28 | 2024-04-22 | 더 리전트 오브 더 유니버시티 오브 캘리포니아 | 자극성 및 비자극성 골수성 세포의 조절 |
| US10668165B2 (en) | 2015-01-16 | 2020-06-02 | Immunwork Inc. | Molecular constructs for treating tumors |
| MA41433A (fr) * | 2015-01-26 | 2017-12-05 | Baylor College Medicine | Cellules immunitaires universelles pour l'immunothérapie anticancéreuse |
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| BR112017018111A2 (pt) | 2015-03-17 | 2018-04-10 | Tilt Biotherapeutics Oy | adenovírus oncolítico codificando para anticorpos bi-específicos e métodos e usos relacionados ao mesmo |
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| CN104829730A (zh) | 2015-04-14 | 2015-08-12 | 苏静 | 一种能联合免疫细胞增强肿瘤杀伤能力的双特异性抗体及其制备方法和应用 |
| EP3288981A1 (en) | 2015-05-01 | 2018-03-07 | Genentech, Inc. | Masked anti-cd3 antibodies and methods of use |
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| MX2018010824A (es) | 2016-03-08 | 2019-05-15 | Maverick Therapeutics Inc | Proteinas de union inducibles y metodos de uso. |
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| MA45996A (fr) | 2016-08-16 | 2021-06-02 | Bluebird Bio Inc | Variants d'endonucléase de homing du récepteur alpha de l'il-10, compositions et méthodes d'utilisation associées |
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| WO2018102606A1 (en) | 2016-11-30 | 2018-06-07 | Intrexon Corporation | Steroid administration and immunotherapy |
| CA3049652A1 (en) | 2017-01-10 | 2018-07-19 | Intrexon Corporation | Modulating expression of polypeptides via new gene switch expression systems |
| JOP20190189A1 (ar) | 2017-02-02 | 2019-08-01 | Amgen Res Munich Gmbh | تركيبة صيدلانية ذات درجة حموضة منخفضة تتضمن بنيات جسم مضاد يستهدف الخلية t |
| US20200113940A1 (en) * | 2017-04-14 | 2020-04-16 | The General Hospital Corporation | Chimeric antigen receptor t cells targeting the tumor microenvironment |
| EA201992143A1 (ru) | 2017-04-24 | 2020-03-13 | Икнос Сайенсиз Са | Биспецифические антитела, перенаправляющие т-клетки, для лечения egfr-положительных раковых заболеваний |
| MA48763A (fr) | 2017-05-05 | 2020-04-08 | Amgen Inc | Composition pharmaceutique comprenant des constructions d'anticorps bispécifiques pour un stockage et une administration améliorés |
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| WO2019075405A1 (en) | 2017-10-14 | 2019-04-18 | Cytomx Therapeutics, Inc. | ANTIBODIES, ACTIVISTIC ANTIBODIES, BISPECIFIC ANTIBODIES, AND BISPECIFICALLY ACTIVATED ANTIBODIES AND METHODS OF USE THEREOF |
| BR112020011833A2 (pt) | 2017-12-12 | 2020-11-24 | Pionyr Immunotherapeutics, Inc. | anticorpos anti-trem2 e métodos relacionados |
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