KR20200042937A - 항-lag-3 항체 및 이의 용도 - Google Patents

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밍한 왕
휘 저우
하이춘 지아
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Abstract

항-LAG-3 항체 및 이의 항원-결합 단편이 기재되어 있다. 또한 항체를 인코딩하는 핵산, 항체를 포함하는 조성물, 및 항체를 생산하는 방법 및 암, 염증성 질환, 자가면역 질환, 제 1 형 당뇨병 및/또는 감염성 질환과 같은 질환을 치료 또는 예방하기 위해 항체를 사용하는 방법이 기재되어 있다.

Description

항-LAG-3 항체 및 이의 용도
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2017 년 8 월 30 일에 출원한 미국 가출원 제 62/551,927 호; 2017 년 11 월 20 일에 출원한 미국 가출원 제 62/588,475 호; 및 2018 년 2 월 5 일에 출원한 미국 가출원 제 62/626,310 호를 우선권으로 주장한다. 각각의 개시물은 그 전체가 본원에 참조로 포함된다.
기술 분야
본 발명은 단일클론 항-LAG-3 항체, 항체를 인코딩하는 핵산 및 발현 벡터, 벡터를 함유하는 재조합 세포, 및 항체를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 항체의 제조 방법, 및 암, 염증성 질환, 자가면역 질환, 감염성 질환, 제 1 형 당뇨병 및/또는 관련된 합병증을 포함하는 질환을 치료하기 위해 항체를 사용하는 방법이 또한 제공된다.
전자적으로 제출된 서열 목록에 대한 참조
본 출원은 파일명이 "689204.4WO Sequence Listing" 이고 생성일이 2018 년 8 월 7 일이며 크기가 89 kb 인 ASCII 포맷된 서열 목록으로서 EFS-Web 을 통해 전자적으로 제출되는 서열 목록을 포함한다. EFS-Web 을 통해 제출된 서열 목록은 명세서의 일부이며 본원에 그 전체가 참조로 포함된다.
배경 기술
면역 억제는 오랫동안 암의 중요한 원인 중 하나로 인식되어 왔다. 최근에, 암 세포에 대한 면역 반응의 자극은 암 치료에서 내구성있는 효능을 나타냈다. 이것은 PD-1, PD-L1 및 CTLA-4 와 같은 면역 체크포인트 단백질을 표적으로 하는 치료제의 엄청난 성공으로 강조된다. 그러나, 오직 소수의 환자 만이 이러한 면역 체크포인트 요법에 반응한다. 암 세포에 대한 면역 반응이 추가적인 메커니즘에 의해 억제되는지, 그리고 이러한 억제 메커니즘의 차단이 더 많은 환자를 치료할 수 있는지에 대한 의문을 제기한다 (검토를 위해, Hahn et al., Immunotherapy 2017; 9:681-692 참조).
PD-1, PD-L1 및 CTLA-4 이외에, T 이펙터 세포는 다수의 공동-억제 체크포인트 단백질, 예컨대 B7-H3, BTLA, LAG-3 (림프구 활성화 유전자 3; CD223), TIM-3 및 TIGIT 에 의해 음성으로 조절된다. 그중에서도 LAG-3 은 활성화된 T 세포의 표면에서 발현되고 (Triebel, et al., J. Exp. Med. 1990; 171:1393-1405), 독특한 공동-억제 활성을 나타낸다. LAG-3 및 CD4 T 세포 공동-수용체 둘 다는 동일한 부위에서 주요 조직적합성 복합체 (MHC) 클래스 II 분자에 결합하지만, LAG-3 결합은 CD4 의 것보다 훨씬 높은 친화력을 갖는다 (Huard, et al., Immunogenetics 1994; 39:213-217). 따라서, T 세포 상의 LAG-3 의 발현은 항원 제시 세포 (APC) 상의 MHC 클래스 II 분자에 대한 CD4 의 결합을 방지하고, MHC 클래스 II 분자의 공동-자극 활성을 억제하며, T 세포 활동의 유지를 음성으로 조절한다.
LAG-3 에 대한 MHC 클래스 II 분자의 결합에 의해 촉발된 사전-활성화된 LAG-3 + 세포로의 억제 신호에 더하여, T 조절 (Treg) 세포의 표면 상의 LAG-3 은 또한 MHC 클래스 II 분자에 대한 결합을 통해 수지상 세포 (DC) 의 활성을 억제한다고 보고되었다 (Huang, et al., Immunity 2004; 21:503-513; Liang, et al., J Immunol 2008; 180:5916-5926). 이러한 후방 신호 전달은 DC 의 활성을 하향조절함으로써, 그리고 나이브 T 세포 및 그 활성화 및/또는 활성이 DC 에 의존하는 다른 LAG-3 음성 면역 세포의 활성화를 하향조절함으로써 면역 반응을 추가로 억제할 가능성이 있다.
LAG-3 은 또한 자연 살해 세포 (Baixeras, et al., J. Exp. Med 1992; 176:327-337), B 세포 (Kisielow, et al., Eur. J. Immunol. 2005; 35:2081-2088) 및 형질세포양 수지상 세포 (Workman, et al., J Immunol 2009; 182:1885-1891) 의 표면에서도 발현된다. T 세포에 대한 억제 활성과 비교하여, 다른 면역 세포에서의 그의 기능은 잘 이해되지 않는다. MHC 클래스 II 분자에 대한 결합에 더하여, LAG-3 은 또한, 수지상 세포의 표면 상의 수지상 세포-특이적 세포간 접착 분자-3-그래빙 (grabbing) 비-인테그린 (DC-SIGN) 패밀리 렉틴인, LSECtin 에 결합하는 것으로 보고되었고 (Xu, et al., Cancer Res 2014; 74:3418-3428), 결합은 T 세포 증식을 음성으로 조절하는 것으로 제안된다. LAG-3 의 이러한 기능을 차단하는 치료용 단일클론 항체 (mAb) 는 부가적인 치료적 가치를 제공할 수 있다.
MHC 클래스 II 분자의 T 세포 수용체 (TCR) 에 대한 결합 및 후속 T 세포 활성화에는 항원이 필요하다. 따라서, LAG-3 은 다른 억제성 체크포인트 메커니즘과는 독특하게, 항원-활성화 T 세포를 특이적으로 억제한다. 종합하면, LAG-3/MHC 클래스 II 축은 선천 면역과 적응 면역을 연결하는 데 중요한 역할을 한다. LAG-3/MHC 클래스 II 결합을 차단하는 치료용 단일클론 항체는 단독요법으로서 그 자체로 또는 항-PD1, 항-PD-L1, 항-CTLA-4, 항-TIM-3 및 항-CD47 항체와 같은 다른 면역-종양 치료제와 조합으로 암에 대한 면역 반응을 재활성화시킬 가능성이 있다.
LAG-3 은 Treg 증식 및 기능을 제한하고, 제 1 형 당뇨병과 같은 자가면역 질환에서 Treg 불충분에 기여할 수 있다 (Zhang et al., Sci Immunol.　2017; 31:2(9)). Treg 활성을 개선시키는 항-LAG-3 mAb 는 제 1 형 당뇨병을 치료할 수 있는 치료 가능성을 갖는다.
발명의 요약
한 일반적 양태에서, 본 발명은 LAG-3 에 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다.
하기 폴리펩티드 서열을 갖는, 중쇄 상보성 결정 부위 1 (HCDR1), HCDR2, HCDR3, 경쇄 상보성 결정 부위 1 (LCDR1), LCDR2 및 LCDR3 을 포함하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 제공되며:
a. SEQ ID NO:35, 36, 37, 86, 87, 및 88, 각각;
b. SEQ ID NO:38, 39, 40, 89, 90, 및 91, 각각;
c. SEQ ID NO:41, 42, 137, 138, 93, 및 94, 각각;
d. SEQ ID NO:139, 140, 141, 142, 99, 및 143, 각각;
e. SEQ ID NO:144, 145, 146, 147, 148, 및 149, 각각;
f. SEQ ID NO:65, 66, 67, 116, 117, 및 118, 각각;
g. SEQ ID NO:68, 69, 70, 119, 120, 및 121, 각각;
h. SEQ ID NO:71, 72, 73, 122, 123, 및 124, 각각;
i. SEQ ID NO:74, 75, 76, 125, 126, 및 127, 각각;
j. SEQ ID NO:77, 78, 79, 128, 129, 및 130, 각각; 또는
k. SEQ ID NO:80, 150, 151, 131, 132, 및 133, 각각;
항체 또는 이의 항원-결합 단편은 LAG-3, 바람직하게는 인간 LAG-3 에 특이적으로 결합한다.
SEQ ID NO:137 은 아미노산 서열 ARGGYX1DYVWFPY 로 표시되며, 여기서 X1 은 Y 및 F 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이다.
SEQ ID NO:138 은 아미노산 서열 QSIX1YSNGYTY 로 표시되며, 여기서 X1 은 L 및 V 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이다.
SEQ ID NO:139 는 아미노산 서열 GYTX1X2X3YY 로 표시되며, 여기서 X1 은 F 및 L 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X2 는 T 및 S 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X3 은 G 및 N 으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이다.
SEQ ID NO:140 은 아미노산 서열 INPYNGDT X1 로 표시되며, 여기서 X1 은 T 및 I 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이다.
SEQ ID NO:141 은 아미노산 서열 X1RDDGYX2VX3X4FDX5 로 표시되며, 여기서 X1 은 V 및 A 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X2 는 H 및 Y 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X3 은 R 및 Y 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X4 는 F 및 Y 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X5 는 V, Y 및 C 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이다.
SEQ ID NO:142 는 아미노산 서열 QDIX1X2X3 로 표시되며, 여기서 X1 은 S 및 G 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X2 는 D 및 G 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X3 은 Y, S, 및 R 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이다.
SEQ ID NO:143 은 아미노산 서열 LX1X2X3SPPT 로 표시되며, 여기서 X1 은 Y, C, 및 N 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X2 는 V 및 A 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X3 은 S 및 N 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이다.
SEQ ID NO:144 는 아미노산 서열 GYSFX1DYN 으로 표시되며, 여기서 X1 은 S 및 T 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이다.
SEQ ID NO:145 는 아미노산 서열 IX1LDX2X3X4T 로 표시되며, 여기서 X1 은 N 및 T 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X2 는 S 및 Y 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X3 은 A 및 G 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X4 는 A 및 T 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이다.
SEQ ID NO:146 는 아미노산 서열 AX1YDY 로 표시되며, 여기서 X1 은 S 및 C 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이다.
SEQ ID NO:147 은 아미노산 서열 QDISX1Y 로 표시되며, 여기서 X1 은 H 및 N 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이다.
SEQ ID NO:148 은 아미노산 서열 X1TS 로 표시되며, 여기서 X1 은 E 및 A 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이다.
SEQ ID NO:149 는 아미노산 서열 LQYAX1YPLT 로 표시되며, 여기서 X1 은 T 및 S 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이다.
SEQ ID NO:150 은 아미노산 서열 IYPGRGX1P 로 표시되며, 여기서 X1 은 D 및 N 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이다.
SEQ ID NO:151 은 아미노산 서열 EIYYGNYX1DY 로 표시되며, 여기서 X1 은 I 및 L 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이다.
특정 구현예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 또는 33 과 적어도 95% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 또는 SEQ ID NO:2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 또는 34 와 적어도 95% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다.
특정 구현예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함한다:
(a) SEQ ID NO:1 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:2 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
(b) SEQ ID NO:3 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:4 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
(c) SEQ ID NO:5 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:6 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
(d) SEQ ID NO:7 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:8 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
(e) SEQ ID NO:9 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:10 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
(f) SEQ ID NO:11 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:12 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
(g) SEQ ID NO:13 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:14 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
(h) SEQ ID NO:15 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:16 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
(i) SEQ ID NO:17 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:18 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
(j) SEQ ID NO:19 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:20 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
(k) SEQ ID NO:21 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:22 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
(l) SEQ ID NO:23 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:24 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
(m) SEQ ID NO:25 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:26 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
(n) SEQ ID NO:27 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:28 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
(o) SEQ ID NO:29 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:30 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
(p) SEQ ID NO:31 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:32 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부; 또는
(q) SEQ ID NO:33 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:34 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부.
또한 SEQ ID NO:192 의 아미노산 서열을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 LAG-3 에 대한 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 제공된다. 또한 SEQ ID NO:193 의 아미노산 서열을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 LAG-3 에 대한 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 제공된다. 또한 SEQ ID NO:158 의 아미노산 서열을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 LAG-3 에 대한 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 제공된다. 또한 SEQ ID NO:180 의 아미노산 서열을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 LAG-3 에 대한 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 제공된다. 또한 SEQ ID NO:194 의 아미노산 서열을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 LAG-3 에 대한 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 제공된다. 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 예를 들어 LAG-3 활성을 억제할 수 있다.
특정 구현예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 LAG-3 의 MHC 클래스 II 분자에 대한 결합을 차단할 수 있다.
특정 구현예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 LAG-3 의 LSECtin 에 대한 결합을 차단할 수 있다.
특정 구현예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 키메라이다.
특정 구현예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 인간 또는 인간화된다. 특정 구현예에서, 인간화된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 하기를 포함한다:
a. SEQ ID NO:195 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:208 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부
b. SEQ ID NO:196 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:206 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
c. SEQ ID NO:197 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:205 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
d. SEQ ID NO:197 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:206 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
e. SEQ ID NO:197 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:207 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
f. SEQ ID NO:198 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:205 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
g. SEQ ID NO:199 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:209 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
h. SEQ ID NO:200 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:209 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
i. SEQ ID NO:201 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:209 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
j. SEQ ID NO:202 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:209 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
k. SEQ ID NO:203 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:209 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
l. SEQ ID NO:204 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:209 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
m. SEQ ID NO:199 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:210 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
n. SEQ ID NO:200 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:210 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
o. SEQ ID NO:201 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:210 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
p. SEQ ID NO:202 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:210 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
q. SEQ ID NO:203 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:210 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부; 또는
r. SEQ ID NO:204 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:210 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부.
본원에 개시된 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산이 또한 제공된다.
본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산을 포함하는 벡터가 또한 제공된다.
본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산을 포함하는 벡터를 포함하는 숙주 세포가 또한 제공된다.
특정 구현예에서, 본 발명의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학 조성물이 제공된다.
본 발명의 약학 조성물을 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상에서의 LAG-3 의 MHC 클래스 II 분자에 대한 결합을 차단하는 방법이 또한 제공된다.
본 발명의 약학 조성물을 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상에서의 LAG-3 의 LSECtin 에 대한 결합을 차단하는 방법이 또한 제공된다.
본 발명의 약학 조성물을 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상에서의 암을 치료하는 방법이 또한 제공된다. 암은 임의의 액형 또는 고형 암일 수 있으며, 이는 예를 들어 폐암, 위암, 결장암, 간세포 암종, 신장 세포 암종, 방광 요로상피세포 암종, 전이성 흑색종, 유방암, 난소암, 자궁경부암, 두경부암, 췌장암, 신경교종, 교모세포종, 및 기타 고형 종양, 및 비-호지킨 림프종 (NHL), 급성 림프구성 백혈병 (ALL), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 다발성 골수종 (MM), 급성 골수성 백혈병 (AML), 및 기타 액형 종양에서 선택될 수 있으나 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 약학 조성물을 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상에서의 감염성 질환을 치료하는 방법이 또한 제공된다.
본 발명의 약학 조성물을 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상에서의 염증성 질환을 치료하는 방법이 또한 제공된다.
본 발명의 약학 조성물을 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상에서의 자가면역 질환을 치료하는 방법이 또한 제공된다.
본 발명의 약학 조성물을 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상에서의 제 1 형 당뇨병을 치료하는 방법이 또한 제공된다.
단일클론 항체 또는 항원-결합 단편을 생산하기 위한 조건 하에 단일클론 항체 또는 항원-결합 단편을 인코딩하는 핵산을 포함하는 세포를 배양하고, 세포 또는 배양물로부터 항체 또는 항원-결합 단편을 회수하는 것을 포함하는, 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생산하는 방법이 또한 제공된다.
단일클론 항체 또는 항원-결합 단편을 약학적으로 허용가능한 담체와 조합하여 약학 조성물을 수득하는 것을 포함하는, 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약학 조성물을 생산하는 방법이 또한 제공된다.
대상에서의 LAG-3 의 수준을 결정하는 방법이 또한 제공된다. 방법은 (a) 대상으로부터 샘플을 수득하는 단계; (b) 샘플을 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계; 및 (c) 대상에서의 LAG-3 의 수준을 결정하는 단계를 포함한다. 특정 구현예에서, 샘플은 조직 샘플이다. 조직 샘플은 예를 들어 암 조직 샘플일 수 있다. 특정 구현예에서, 샘플은 혈액 샘플이다.
본 출원의 전술한 발명의 개요 뿐만 아니라 하기 바람직한 구현예의 상세한 설명은, 첨부된 도면과 함께 판독시 보다 잘 이해될 것이다. 그러나, 본 출원이 도면에서 나타낸 정확한 구현예에 제한되지 않는다는 것이 이해되어야 한다.
도 1A-1B 는 FACS 분석에 의해 전장 인간 LAG-3 으로 안정적으로 트랜스펙션된 CHO-S 세포에 대한 정제된 마우스 항-LAG-3 mAb 의 결합을 보여준다.
도 2 는 FACS 분석에 의해 전장 인간 LAG-3 으로 안정적으로 트랜스펙션된 CHO-S 세포에 대한 정제된 마우스 항-LAG-3 mAb (BG27, BG29, 및 BG33) 의 결합을 보여준다 (B7 은 대조군으로서 사용되었다).
도 3A-3B 는 FACS 분석에 의해 항-LAG-3 키메라 mAb (각각, 인간 IgG1 중쇄 및 카파 경쇄의 불변부에 융합된 마우스 mAb 의 VH 및 VL 부위) 의 전장 인간 LAG-3 으로 안정적으로 트랜스펙션된 CHO-S 세포에 대한 결합을 나타낸다. mAb 및 대조군을 동일한 실험에서 시험하고 명확성을 위해 2 개의 개별 도면 (도 3A 및 3B) 으로 나타내었다. B1C, 마우스 mAb B1 의 키메라 버전; B2C, 마우스 mAb B2 의 키메라 버전; B3C, 마우스 mAb B3 의 키메라 버전; B4C, 마우스 mAb B4 의 키메라 버전; B5C, 마우스 mAb B5 의 키메라 버전; B7C, 마우스 mAb B7 의 키메라 버전; B9C, 마우스 mAb B9 의 키메라 버전; B10C, 마우스 mAb B10 의 키메라 버전; B11C, 마우스 mAb B11 의 키메라 버전. Neg, 1 차 mAb, PI (프로피디움 요오다이드) 또는 PE-접합된 항-인간 IgG 로 처리되지 않음; PI, PI 로 처리되었으나 1 차 mAb 또는 PE-접합된 항-인간 IgG 로는 처리되지 않음; "Anti-Hu" 및 "Anti-Mu"그룹은 1 차 항체로 처리되지 않았지만 PE-접합된 항-인간 IgG 및 항-마우스 IgG 2 차 Ab 로 각각 처리되었다.
도 4A-4D 는 선택 항-LAG-3 mAb 에 의한 MHC 클래스 II 분자에 대한 인간 LAG-3 결합의 억제를 보여준다. 인간 MHC 클래스 II 분자를 발현하는 재조합 LAG-3(ECD)-mFc 및 Daudi 세포를 사용하여 시험관 내 결합 어세이를 수행하였다. LAG-3 은 별도의 실험에서 MHC 클래스 II 분자를 발현하지 않는 상이한 세포주에 결합하지 않았다. 항-LAG-3 mAb 또는 대조군 mAb 의 존재 하에서 LAG-3(ECD)-mFc 의 Daudi 세포에 대한 결합이 FACS 에 의해 분석되었다. 도 4A 는 항-LAG-3 키메라 항체 B2C, B7C 및 B10C 에 의한 Daudi 세포에 대한 인간 LAG-3 결합 억제의 그래프를 보여준다. 도 4B 는 항-LAG-3 키메라 항체 B1C, B3C, B4C, B5C, B9C, 및 B11C 에 의한 Daudi 세포에 대한 인간 LAG-3 결합 억제의 그래프를 보여준다. 도 4C 는 항-LAG-3 마우스 항체 B6, B12 및 B15 에 의한 Daudi 세포에 대한 인간 LAG-3 결합 억제의 그래프를 보여준다. 도 4D 는 항-LAG-3 mAb BG29 (인간 IgG4 중쇄 및 카파 경쇄 키메라) 에 의한 Daudi 세포에 대한 인간 LAG-3 결합 억제의 그래프를 보여준다.
도 5A-5D 는 항-LAG-3 mAb 에 대한 LAG-3 결합에 대한 경쟁 펩티드의 효과를 보여준다. 도 5A 는 ELISA 에 의해 측정된 항-LAG-3 mAb B5 (인간 IgG4 중쇄 및 카파 경쇄 키메라; B5/IgG4) 에 대한 인간 LAG-3 결합에 대한 경쟁 펩티드 (표 6 참조) 의 효과를 보여준다. B5/IgG4 를 경쟁 펩티드와 함께 30 분 동안 예비인큐베이션하였다. 이어서, 마우스 Fc 에 융합된 인간 LAG-3 세포외 도메인 (ECD) (hLAG3-mFc) 을 첨가하고 (최종 펩티드 농도는 hLAG3-mFc 의 600 배였음), 혼합물을 60 분 동안 인큐베이션한 후 항-인간 IgG 로 코팅된 ELISA 플레이트에 첨가하였다. 인큐베이션을 4℃ 에서 밤새 수행하였다. 세척 후, ELISA 플레이트 상의 고정화된 B5/IgG4 에 결합된 hLAG3-mFc 는 호스래디쉬 퍼옥시다제 (HRP) 에 접합된 항-마우스 IgG 를 첨가하고 60 분 동안 인큐베이션함으로써 검출되었다. 그 다음, 세척 후, ELISA 를 One-step Detection Solution 을 사용하여 현상하여, 450 nm 에서의 흡광도로서 측정하였다. 도 5B 는 도 5A 의 동일한 조건 하에서 B5/IgG4 의 펩티드 용량-반응 그래프를 보여준다. 도 5C 는 도 5A 에 기재된 조건 하에 B6 (인간 IgG4 중쇄 및 카파 경쇄 키메라; B6/IgG4) 에 대한 인간 LAG-3 결합에 대한 경쟁 펩티드의 효과를 보여준다. 도 5D 는 도 5A 에 기재된 동일한 조건 하에서 B6/IgG4 에 대한 펩티드 용량-반응 그래프를 보여준다.
도 6 은 도 5A 에 기재된 바와 같이 ELISA 에 의해 측정된 항-LAG-3 mAb B7 (인간 IgG4 중쇄 및 카파 경쇄 키메라; B7/IgG4) 에 대한 인간 LAG-3 결합에 대한 경쟁 펩티드의 효과를 보여준다. 어세이 조건은, ELISA 플레이트 상에서 mAb, 경쟁 펩티드 및 hLAG3-mFc 의 최종 인큐베이션을 4℃ 에서 밤새 인큐베이션 대신 60 분 동안 실온에서 수행한 것을 제외하고는 도 5A 에서와 동일하다.
도 7 은 도 5A 에 기재된 바와 같이 ELISA 에 의해 측정된 항-LAG-3 mAb B12 (인간 IgG1 중쇄 및 카파 경쇄 키메라) 에 대한 인간 LAG-3 결합에 대한 경쟁 펩티드의 효과를 보여준다.
도 8 은 도 5A 에 기재된 바와 같이, 단, 인큐베이션 시 최종 펩티드 농도는 hLAG3-mFc 의 200 배였던, ELISA 에 의해 측정된 항-LAG-3 mAb BG29 (인간 IgG4 중쇄 및 카파 경쇄 키메라) 에 대한 인간 LAG-3 결합에 대한 경쟁 펩티드의 효과를 보여준다.
도 9A-9B 는 항-LAG-3 mAb 에 대한 LAG-3 결합에 대한 경쟁 펩티드의 효과를 보여준다. 도 9A 는 도 5A 에 기재된 바와 같이, 단, 최종 펩티드 농도는 그래프에 제시된 바와 같은, ELISA 에 의해 측정된 항-LAG-3 mAb B3 (인간 IgG1 중쇄 및 카파 경쇄 키메라) 에 대한 인간 LAG-3 결합에 대한 경쟁 펩티드의 효과를 보여준다. 도 9B 는 도 9A 의 조건 하에 항-LAG-3 mAb B4 (인간 IgG1 중쇄 및 카파 경쇄 키메라) 에 대한 인간 LAG-3 결합에 대한 경쟁 펩티드의 효과를 보여준다.
도 10A-10C 는 항-LAG-3 mAb 에 의한 세포 상의 MHC 클래스 II 분자에 대한 LAG-3 의 결합의 억제를 보여준다. 도 10A 는 Daudi 세포 상의 MHC 클래스 II 분자에 대한 LAG-3 결합 억제에 있어서 B5(H1L4) 에 대한 IC50 곡선을 보여준다. 도 10B 는 Daudi 세포 상의 MHC 클래스 II 분자에 대한 LAG-3 결합 억제에 있어서 B7(H1L5) 에 대한 IC50 곡선을 보여준다. 도 10C 는 Daudi 세포 상의 MHC 클래스 II 분자에 대한 LAG-3 결합 억제에 있어서 B7(H1L8) 에 대한 IC50 곡선을 보여준다.
발명의 상세한 설명
다양한 발행물, 논문 및 특허가 배경 및 명세서 전반에 걸쳐 인용되거나 기재되며; 이들 참고문헌 각각은 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 본 명세서에 포함된 문헌, 행위, 재료, 장치, 물품 등의 논의는 본 발명의 맥락을 제공하기 위한 것이다. 이러한 논의는 이들 사안 중 임의의 것 또는 전부가 개시되거나 청구된 임의의 발명과 관련하여 종래 기술의 일부를 형성한다는 것을 인정하는 것은 아니다.
달리 정의하지 않는 한, 본원에서 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어는, 본 발명이 적용되는 기술 분야의 당업자에게 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다. 다르게는, 본원에서 사용되는 특정 용어는 본 명세서에서 나타내는 바와 같은 의미를 갖는다.
본원 및 첨부된 청구범위에서 사용되는 바와 같이, 단수 형태의 "부정 관사" 및 "정관사" 는, 문맥이 달리 명확하게 지시하지 않는 한, 복수의 대상을 포함한다는 것에 유의해야 한다.
달리 언급되지 않는 한, 본원에 기재된 농도 또는 농도 범위와 같은 임의의 수치는 용어 "약" 에 의해 모든 경우에 변형되는 것으로서 이해되어야한다. 따라서, 수치는 전형적으로 인용된 값의 ±10% 를 포함한다. 예를 들어, 1 mg/mL 의 농도는 0.9 mg/mL 내지 1.1 mg/mL 를 포함한다. 마찬가지로, 1% 내지 10% (w/v) 의 농도 범위는 0.9% (w/v) 내지 11% (w/v) 를 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같이, 수치 범위의 사용은 맥락상 명백하게 달리 나타내지 않는 한, 모든 가능한 하위범위, 그러한 범위 내의 정수 및 값의 분수를 포함하는 그 범위 내의 모든 개별 수치를 명시적으로 포함한다.
달리 나타내지 않는 한, 일련의 요소에 선행하는 용어 "적어도" 는 일련의 모든 요소를 지칭하는 것으로 이해되어야한다. 당업자는 본원에 기재된 본 발명의 특정 구현예에 대한 많은 등가물을, 단지 일상적인 실험을 사용하여 인식하거나, 확인할 수 있을 것이다. 이러한 등가물은 본 발명에 포함되는 것으로 의도된다.
본원에서 사용되는 바와 같은, 용어 "망라하다", "망라하는", "포함하다", "포함하는", "갖다", "갖는", "함유하다" 또는 "함유하는" 또는 이의 임의의 다른 변형은, 언급된 정수 또는 정수의 군을 포함하나 임의의 다른 정수 또는 정수의 군을 배제하지는 않는 것으로 이해될 것이며, 비-배타적이거나 개방형인 것으로 의도된다. 예를 들어, 요소의 목록을 포함하는 조성물, 혼합물, 공정, 방법, 물품 또는 장치는 반드시 이들 요소에만 한정되는 것이 아니라, 이러한 조성물, 혼합물, 공정, 방법, 물품 또는 장치에 고유하지 않거나 명백하게 열거되지 않은 다른 요소를 포함할 수 있다. 또한, 반대로 명시적으로 언급되지 않는 한, "또는" 은 포괄적인 것을 나타내거나 배타적이지 않은 것을 나타낸다. 예를 들어, 조건 A 또는 B 는 하기 중 어느 하나에 의해 충족된다: A 가 참 (또는 존재함) 이고 B 가 거짓 (또는 존재하지 않음), A 가 거짓 (또는 존재하지 않음) 이고 B 가 참 (또는 존재함), 그리고 A 와 B 둘 모두가 참 (또는 존재함).
본원에서 사용되는 바와 같은, 다수의 인용된 요소 사이의 결합 용어 "및/또는" 은 개별 및 조합된 옵션 둘 모두를 포함하는 것으로서 이해된다. 예를 들어, 두 요소가 "및/또는" 으로 결합되는 경우, 첫 번째 옵션은, 두 번째 요소가 없는 첫 번째 요소의 적용 가능성을 나타낸다. 두 번째 옵션은, 첫 번째 요소가 없는 두 번째 요소의 적용 가능성을 나타낸다. 세 번째 옵션은, 첫 번째 요소와 두 번째 요소 함께의 적용 가능성을 나타낸다. 이들 옵션 중 임의의 하나는 그 의미에 포함되는 것으로서 이해되며, 따라서 본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "및/또는" 의 요건을 충족시킨다. 하나 이상의 옵션의 동시 적용 가능성 또한 그 의미에 속하는 것으로서 이해되며, 따라서 용어 "및/또는" 의 요건을 총족시킨다.
본원에서 사용되는 바와 같은, 명세서 및 청구범위 전반에 걸쳐 사용된 용어 "이루어지다", 또는 "~로 이루어지다" 또는 "~로 이루어지는" 과 같은 변형은 임의의 언급된 정수 또는 정수의 군을 포함하나, 추가 정수 또는 정수의 군은 명시된 방법, 구조 또는 조성물에 추가될 수 없다는 것을 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같은, 명세서 및 청구범위 전반에 걸쳐 사용된 용어 "본질적으로 이루어지다", 또는 "~로 본질적으로 이루어지다" 또는 "~로 본질적으로 이루어지는" 과 같은 변형은 임의의 언급된 정수 또는 정수의 군을 포함하고, 명시된 방법, 구조 또는 조성물의 기본 또는 신규 특성을 실질적으로 변화시키지 않는 임의의 언급된 정수 또는 정수의 군을 선택적으로 포함한다는 것을 나타낸다. M.P.E.P. § 2111.03 을 참조한다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "대상" 은 임의의 동물, 바람직하게는 포유동물, 가장 바람직하게는 인간을 의미한다. 본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "포유동물" 은 임의의 포유동물을 포함한다. 포유동물의 예는 소, 말, 양, 돼지, 고양이, 개, 마우스, 래트, 토끼, 기니피그, 원숭이, 인간 등, 보다 바람직하게는 인간을 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.
단어 "우측", "좌측", "하측" 및 "상측" 은 참조하는 도면에서의 방향을 지정한다.
또한, 바람직한 발명의 성분의 치수 또는 특징을 나타낼 때 본원에서 사용되는 용어 "약", "대략", "일반적으로", "실질적으로" 및 유사한 용어는, 기재한 치수/특징이 엄격한 경계 또는 매개변수가 아니며 당업자에게 이해되는 바와 같이 기능적으로 동일하거나 유사한 작은 변형을 그로부터 배제하지 않는다는 것을 나타낸다. 최소한, 수치 매개변수를 포함하는 이러한 참조는 당업계에서 허용되는 수학적 및 산업적 원리 (예를 들어, 반올림, 측정 또는 다른 계통 오차, 제작 공차 등) 를 사용하여. 최하위 숫자를 변화시키지 않는 변형을 포함할 것이다.
둘 이상의 핵산 또는 폴리펩티드 서열 (예를 들어, 항-LAG-3 항체, LAG-3 폴리펩티드 및 이를 인코딩하는 LAG-3 폴리뉴클레오티드) 의 맥락에서, 용어 "동일한" 또는 "동일성" % 는, 하기의 서열 비교 알고리즘 중 하나를 사용하거나 육안 검사에 의해 측정되는, 최대 상응성에 대해 비교되고 정렬될 때 동일한 아미노산 잔기 또는 뉴클레오티드의 명시된 % 를 갖거나 동일한, 둘 이상의 서열 또는 하위서열을 나타낸다.
서열 비교를 위해, 전형적으로 하나의 서열은 시험 서열을 그에 대해 비교하는 참조 서열로서 역할한다. 서열 비교 알고리즘을 사용하는 경우, 시험 및 참조 서열이 컴퓨터에 입력되고, 필요하다면 하위서열 좌표가 지정되며, 서열 알고리즘 프로그램 매개변수가 지정된다. 이후, 서열 비교 알고리즘은 지정된 프로그램 매개변수를 기반으로 하여, 참조 서열에 대한 시험 서열(들) 의 서열 동일성 % 를 계산한다.
비교를 위한 서열의 최적 정렬은 예를 들어, Smith & Waterman, Adv. Appl. Math. 2:482 (1981) 의 국부적 상동성 알고리즘에 의해, Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol. 48:443 (1970) 의 상동성 정렬 알고리즘에 의해, Pearson & Lipman, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 85:2444 (1988) 의 유사성 방법에 대한 검색에 의해, 이들 알고리즘의 컴퓨터화된 실행 (Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI 에서의 GAP, BESTFIT, FASTA 및 TFASTA) 에 의해, 또는 육안 검사에 의해 (일반적으로, Current Protocols in Molecular Biology, F.M. Ausubel et al., eds., Current Protocols, a joint venture between Greene Publishing Associates, Inc. and John Wiley & Sons, Inc., (1995 Supplement) (Ausubel) 참조) 실시할 수 있다.
서열 동일성 % 및 서열 유사성을 결정하기에 적합한 알고리즘의 예는 각각 [Altschul et al. (1990) J. Mol. Biol. 215: 403-410] 및 [Altschul et al. (1997) Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402] 에 기재되는 BLAST 및 BLAST 2.0 알고리즘이다. BLAST 분석을 수행하기 위한 소프트웨어는 국립생물정보센터를 통해 공개적으로 입수가능하다. 이 알고리즘은, 첫 번째로, 데이터베이스 서열 중 동일한 길이의 워드 (word) 와 정렬될 때 매칭되거나 일부 양의 값인 역치 스코어 T 를 충족시키는, 질의 서열 내 길이 W 의 짧은 워드를 확인함으로써 고 스코어 서열 쌍 (HSP) 을 확인하는 것을 수반한다. T 는, 인접 워드 스코어 역치로서 지칭된다 (상기 Altschul et al.). 이와 같이 처음에 출현하는 인접 워드 히트 (word hit) 는, 이를 포함하는 더 긴 HSP 를 찾기 위한 검색을 개시하는 시드 (seed) 로서 역할한다. 워드 히트는, 누적 정렬 스코어가 증가할 수 있는 한, 각각의 서열을 따라서 양 방향으로 연장된다.
누적 스코어는, 뉴클레오티드 서열에 대해, 매개변수 M (매칭 잔기 쌍에 대한 보상 스코어; 항상 > 0) 및 N (미스매칭 잔기에 대한 패널티 스코어; 항상 < 0) 을 사용하여 계산된다. 아미노산 서열에 대해, 스코어링 매트릭스가 누적 스코어를 계산하기 위해 사용된다. 각 방향에서 단어 히트의 연장은 누적 정렬 스코어가 이의 최대 획득 값으로부터 X 분량만큼 떨어질 때; 하나 이상의 음-스코어 잔기 정렬의 축적으로 인해 누적 스코어가 0 이하가 될 때; 또는 어느 하나의 서열의 말단에 도달될 때 중단된다. BLAST 알고리즘 매개변수 W, T 및 X 는 정렬의 감도와 속도를 결정한다. (뉴클레오티드 서열용) BLASTN 프로그램은 워드 길이 (W) 11, 예상치 (E) 10, M = 5, N = -4 를 디폴트 값으로 사용하며, 두 가닥 모두를 비교한다. 아미노산 서열에 대해, BLASTP 프로그램은 워드 길이 (W) 3, 예상치 (E) 10 및 BLOSUM62 스코어링 매트릭스 (Henikoff & Henikoff, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915 (1989) 참조) 를 디폴트 값으로서 사용한다.
서열 동일성 % 를 계산하는 것에 추가로, BLAST 알고리즘은 또한 2 개 서열 사이의 유사성의 통계적 분석을 수행한다 (예를 들어, Karlin & Altschul, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 90:5873-5787 (1993) 참조). BLAST 알고리즘에 의해 제공되는 유사성에 관한 한 척도는 최소 확률 합 (P(N)) 이며, 이는 2 개 뉴클레오티드 또는 아미노산 서열 사이의 매칭이 우연히 일어날 확률의 표시를 제공한다. 예를 들어, 만약 기준 핵산에 대한 시험 핵산 비교시 최소 확률 합이 약 0.1 미만, 보다 바람직하게는 약 0.01 미만, 가장 바람직하게는 약 0.001 미만이라면, 해당 핵산은 기준 서열과 유사한 것으로 간주된다.
2 개의 핵산 서열 또는 폴리펩티드가 실질적으로 동일하다는 추가의 표시는, 하기 기재된 바와 같이, 제 1 핵산에 의해 인코딩된 폴리펩티드가 제 2 핵산에 의해 인코딩된 폴리펩티드와 면역학적으로 교차 반응성이라는 것이다. 따라서, 폴리펩티드는 전형적으로 예를 들어 2 개의 펩티드가 보존적 치환에 의해서만 상이한 제 2 폴리펩티드와 실질적으로 동일하다. 2 개의 핵산 서열이 실질적으로 동일하다는 또 다른 표시는, 2 개의 분자가 엄격한 조건 하에 서로 하이브리드화한다는 것이다.
본원에서 사용되는 바와 같은, 용어 "억제하다", "억제하는" 및 "억제" 는 활성, 반응, 병상, 질환 또는 기타 생물학적 매개변수를 감소시키는 것을 의미한다. 이는 활성, 반응, 병상 또는 질환의 완전한 제거를 포함할 수 있으나 이에 제한되는 것은 아니다. 이는 또한 예를 들어, 선천적 또는 대조군 수준과 비교하여 활성, 반응, 병상 또는 질환의 10% 감소를 포함할 수 있다. 따라서, 감소는 선천적 또는 대조군 수준과 비교하여 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100%, 또는 그 사이의 임의의 감소량일 수 있다. 비제한적인 예로서, 본 발명의 항체는 LAG-3 단백질의 활성을 억제할 수 있다. LAG-3 단백질의 활성은 선천적 LAG-3 단백질 활성에 비해 감소되거나 제거될 수 있다. 비제한적인 예로서, 본 발명의 항체는 LAG-3 단백질의 MHC 클래스 II 분자 및/또는 LSECtin 에 대한 결합을 억제할 수 있다. LAG-3 의 MHC 클래스 II 분자 및/또는 LSECtin 에 대한 결합은 MHC 클래스 II 분자 및/또는 LSECtin 에 대한 고유의 LAG-3 결합에 비해 감소되거나 제거될 수 있다.
항체
본 발명은 일반적으로, 단리된 항-LAG-3 항체, 항체를 인코딩하는 핵산 및 발현 벡터, 벡터를 함유하는 재조합 세포, 및 항체를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 항체의 제조 방법, 및 암, 염증성 질환, 자가면역 질환, 제 1 형 당뇨병, 및/또는 감염성 질환을 포함하는 질환을 치료하기 위해 항체를 사용하는 방법이 또한 제공된다. 본 발명의 항체는, LAG-3 에 대한 고친화성 결합, LAG-3 에 대한 고특이성, LAG-3 의 MHC 클래스 II 분자 및/또는 LSECtin 에 대한 결합을 차단하는 능력, 사이토카인, 예컨대 제한 없이 IL-2 및 IFN-γ 의 생성을 자극시키는 능력, 및 단독으로 또는 다른 항암 치료요법과 조합으로 투여시 동물 모델 및 대상에서의 종양 성장을 억제하는 능력을 포함하나 이에 제한되지 않는 하나 이상의 바람직한 기능적 특성을 갖는다.
한 일반적인 양태에서, 본 발명은 LAG-3 에 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다.
본원에서 사용되는 바와 같은, 용어 "항체" 는 넓은 의미로 사용되며 인간, 인간화, 복합 및 키메라 항체, 및 항체 단편 (단일클론 또는 폴리클론) 을 포함하는 면역글로불린 및 항체 분자를 포함한다. 일반적으로, 항체는 특정 항원에 대한 결합 특이성을 나타내는 단백질 또는 펩티드 사슬이다. 항체 구조는 널리 공지되어 있다. 면역글로불린은 중쇄 불변 도메인 아미노산 서열에 따라 5 개 주요 부류 (즉, IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM) 로 배정될 수 있다. IgA 및 IgG 는 이소타입 IgA1, IgA2, IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 로서 추가로 하위분류된다. 따라서, 본 발명의 항체는 5 개의 주요 부류 중 어느 하나 또는 상응하는 하위부류의 것일 수 있다. 바람직하게는, 본 발명의 항체는 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 이다. 척추동물 종의 항체 경쇄는 그의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기반한, 2 개의 명확히 구별되는 유형, 즉 카파 및 람다 중 하나에 배정될 수 있다. 따라서, 본 발명의 항체는 카파 또는 람다 경쇄 불변 도메인을 함유할 수 있다. 특정 구현예에 따르면, 본 발명의 항체는 래트 또는 인간 항체로부터의 중쇄 및/또는 경쇄 불변부를 포함한다. 중쇄 및 경쇄 불변 도메인에 추가로, 항체는 경쇄 가변부 및 중쇄 가변부로 구성되는 항원-결합 부위를 함유하며, 이의 각각은 3 개의 도메인을 포함한다 (즉, 상보성 결정 부위 1-3; CDR1, CDR2 및 CDR3). 경쇄 가변부 도메인은 대안적으로 LCDR1, LCDR2 및 LCRD3 으로 지칭되며, 중쇄 가변부 도메인은 대안적으로 HCDR1, HCRD2 및 HCDR3 으로 지칭된다.
본원에서 사용되는 바와 같은, 용어 "단리된 항체" 는 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체가 실질적으로 없는 항체를 나타낸다 (예를 들어, LAG-3 에 특이적으로 결합하는 단리된 항체에는 LAG-3 에 결합하지 않는 항체가 실질적으로 없음). 또한, 단리된 항체에는 다른 세포 물질 및/또는 화학 물질이 실질적으로 없다.
본원에서 사용되는 바와 같은, 용어 "단일클론 항체" 는 실질적으로 균질한 항체의 모집단으로부터 수득되는 항체를 나타내며, 즉, 모집단을 포함하는 개별 항체는 소량으로 존재할 수 있는, 자연적으로 발생할 수 있는 돌연변이를 제외하고는, 동일하다. 본 발명의 단일클론 항체는 하이브리도마 방법, 파지 디스플레이 기술, 단일 림프구 유전자 클로닝 기술 또는 재조합 DNA 방법에 의해 생성될 수 있다. 예를 들어, 단일클론 항체는 인간 중쇄 이식 유전자 및 경쇄 이식 유전자를 포함하는 게놈을 갖는 트랜스제닉 마우스 또는 래트와 같은 트랜스제닉 비인간 동물로부터 수득한 B 세포를 포함하는 하이브리도마에 의해 생산될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같은, 용어 "항원-결합 단편" 은 항체 단편, 예를 들어, 디아바디, Fab, Fab', F(ab')2, Fv 단편, 디술피드 안정화 Fv 단편 (dsFv), (dsFv)2, 이중특이적 dsFv (dsFv-dsFv'), 디술피드 안정화 디아바디 (ds 디아바디), 단일 사슬 항체 분자 (scFv), 단일 도메인 항체 (sdab) scFv 이량체 (2가 디아바디), 하나 이상의 CDR 을 포함하는 항체의 일부로부터 형성된 다중특이적 항체, 카멜화 (camelized) 단일 도메인 항체, 나노바디, 도메인 항체, 2가 도메인 항체, 또는 항원에 결합하나 전체 항체 구조를 포함하지 않는 임의의 다른 항체 단편을 나타낸다. 항원-결합 단편은 모 항체 또는 모 항체 단편이 결합하는 동일한 항원에 결합할 수 있다. 특정 구현예에 따르면, 항원-결합 단편은 경쇄 가변부, 경쇄 불변부 및 중쇄의 Fd 세그먼트를 포함한다. 다른 특정 구현예에 따르면, 항원-결합 단편은 Fab 및 F(ab') 를 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같은, 용어 "단일 사슬 항체" 는 약 15 내지 약 20 개 아미노산의 짧은 펩티드에 의해 연결된 중쇄 가변부 및 경쇄 가변부를 포함하는, 당해 분야에서의 종래의 단일 사슬 항체를 나타낸다. 본원에서 사용되는 바와 같은, 용어 "단일 도메인 항체" 는 중쇄 가변부 및 중쇄 불변부를 포함하거나 중쇄 가변부만을 포함하는 당해 분야에서의 종래의 단일 도메인 항체를 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같은, 용어 "인간 항체" 는 당업계에 공지된 임의의 기술을 사용하여 만들어진 인간에 의해 생성된 항체에 상응하는 아미노산 서열을 갖는 항체 또는 인간에 의해 생성된 항체를 나타낸다. 인간 항체의 이러한 정의는 온전한 또는 전장 항체, 이의 단편, 및/또는 적어도 하나의 인간 중쇄 및/또는 경쇄 폴리펩티드를 포함하는 항체를 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같은, 용어 "인간화 항체" 는 항체의 항원-결합 특성이 유지되나 인체 내 그의 항원성이 감소되도록, 인간 항체에 대한 서열 상동성을 증가시키기 위해 변형되는 비인간 항체를 나타낸다.
본원에서 사용되는 바와 같은, 용어 "키메라 항체" 는 면역글로불린 분자의 아미노산 서열이 둘 이상의 종으로부터 유래되는 항체를 나타낸다. 경쇄 및 중쇄 둘 모두의 가변부는 종종, 원하는 특이성, 친화성 및 능력을 갖는 한 종의 포유동물 (예를 들어, 마우스, 래트, 토끼 등) 로부터 유래된 항체의 가변부에 상응하는 한편, 불변부는 또 다른 종의 포유동물 (예를 들어, 인간) 로부터 유래된 항체의 서열에 상응하여, 그 종에서 면역 반응을 유발하는 것을 방지한다.
본원에서 사용되는 바와 같은, 용어 "다중특이적 항체" 는 복수의 면역글로불린 가변 도메인 서열을 포함하는 항체를 나타내며, 여기서 복수의 제 1 면역글로불린 가변 도메인 서열은 제 1 에피토프에 대한 결합 특이성을 가지고, 복수의 제 2 면역글로불린 가변 도메인 서열은 제 2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는다. 한 구현예에서, 제 1 및 제 2 에피토프는 동일한 항원, 예를 들어 동일한 단백질 (또는 다량체성 단백질의 하위단위) 상에 있다. 한 구현예에서, 제 1 및 제 2 에피토프는 중첩되거나 실질적으로 중첩된다. 한 구현예에서, 제 1 및 제 2 에피토프는 중첩되지 않거나 실질적으로 중첩되지 않는다. 한 구현예에서, 제 1 및 제 2 에피토프는 상이한 항원, 예를 들어 상이한 단백질 (또는 상이한 다량체성 단백질의 하위단위) 상에 있다. 한 구현예에서, 다중특이적 항체는 제 3, 제 4 또는 제 5 면역글로불린 가변 도메인을 포함한다. 한 구현예에서, 다중특이적 항체는 이중특이적 항체 분자, 삼중특이적 항체 분자, 또는 사중특이적 항체 분자이다.
본원에서 사용된 바와 같은, 용어 "이중특이적 항체" 는 2 개 이하의 에피토프 또는 2 개의 항원에 결합하는 다중특이적 항체를 나타낸다. 이중특이적 항체는 제 1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 제 1 면역글로불린 가변 도메인 서열 및 제 2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 제 2 면역글로불린 가변 도메인 서열을 특징으로 한다. 한 구현예에서, 제 1 및 제 2 에피토프는 동일한 항원, 예를 들어 동일한 단백질 (또는 다량체성 단백질의 하위단위) 상에 있다. 한 구현예에서, 제 1 및 제 2 에피토프는 중첩되거나 실질적으로 중첩된다. 한 구현예에서, 제 1 및 제 2 에피토프는 상이한 항원, 예를 들어 상이한 단백질 (또는 상이한 다량체성 단백질의 하위단위) 상에 있다. 한 구현예에서, 이중특이적 항체는 제 1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 중쇄 가변 도메인 서열 및 경쇄 가변 도메인 서열, 및 제 2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 중쇄 가변 도메인 서열 및 경쇄 가변 도메인 서열을 포함한다. 한 구현예에서, 이중특이적 항체는 제 1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 반-항체 (half antibody) 또는 이의 단편, 및 제 2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 반-항체 또는 이의 단편을 포함한다. 한 구현예에서, 이중특이적 항체는 제 1 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 scFv 또는 이의 단편, 및 제 2 에피토프에 대한 결합 특이성을 갖는 scFv 또는 이의 단편을 포함한다. 한 구현예에서, 제 1 에피토프는 LAG-3 상에 위치하며, 제 2 에피토프는 PD-1, PD-L1, TIM-3, CTLA-4, EGFR, HER-2, CD19, CD20, CD33, DLL-3, CD73, 아펠린, CD3, CD47, TIP-1, CLDN18.2, FOLR1 및/또는 다른 종양 관련 면역 억제제 또는 표면 항원 상에 위치한다.
본원에서 사용되는 바와 같은, 용어 "LAG-3" 은 Ig 슈퍼패밀리에 속하며 4 개의 세포외 Ig-유사 도메인을 함유하는 림프구 활성화 유전자 3 (CD223 으로도 알려져 있음) 을 지칭한다. LAG-3 은 활성화된 T 세포의 표면에서 발현되고 (Triebel, et al., J. Exp. Med. 1990; 171:1393-1405), T 세포 상에서 독특한 억제 활성을 나타낸다. LAG-3 은 MHC 클래스 II 분자에 결합할 수 있다. LAG-3 및 CD4 T 세포 공동-수용체 둘 다는 동일한 부위에서 MHC 클래스 II 분자에 결합하지만, LAG-3 결합은 CD4 의 것보다 훨씬 높은 친화력을 갖는다 (Huard, et al., Immunogenetics 1994; 39:213-217). 따라서, T 세포 상의 LAG-3 의 발현은 항원 제시 세포 (APC) 상의 MHC 클래스 II 분자에 대한 CD4 의 결합을 방지하고, MHC 클래스 II 분자의 공동-자극 활성을 억제하며, T 세포 활동의 유지를 음성으로 조절한다. MHC 클래스 II 분자 및 LAG-3 의 결합이 특이적 항체로 차단될 때, 더 많은 MHC 클래스 II 분자가 CD4 에 결합하여 T 세포 활성화를 유도할 수 있다 (Sierro et al., Expert Opin Ther Targets.　2011;15(1):91-101). T 조절 (Treg) 세포 표면 상의 LAG-3 은 또한 MHC 클래스 II 분자에 대한 결합을 통해 수지상 세포 (DC) 의 활성을 억제한다 (Huang, et al., Immunity 2004; 21:503-513; Liang, et al., J Immunol 2008; 180:5916-5926). 이러한 후방 신호 전달은 DC 의 활성을 하향조절함으로써, 그리고 나이브 T 세포 및 그 활성화 및/또는 활성이 DC 에 의존하는 다른 LAG-3 음성 면역 세포의 활성화를 하향조절함으로써 면역 반응을 추가로 억제할 가능성이 있다. LAG-3 은 또한 자연 살해 세포 (Baixeras, et al., J. Exp. Med 1992; 176:327-337), B 세포 (Kisielow, et al., Eur. J. Immunol. 2005; 35:2081-2088) 및 형질세포양 수지상 세포 (Workman, et al., J Immunol 2009; 182:1885-1891) 의 표면에서도 발현된다. 용어 "인간 LAG-3" 은 인간에서 기원하는 LAG-3 을 나타낸다. 인간 LAG-3 의 예시적인 아미노산은 GenBank 등록 번호 NP_002277.4 (SEQ ID NO:152) 로 표시된다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "LAG-3 에 특이적으로 결합하는" 항체는 1×10-7 M 이하, 바람직하게는 1×10-8 M 이하, 보다 바람직하게는 5×10-9 M 이하, 1×10-9 M 이하, 5×10-10 M 이하, 또는 1×10-10 M 이하의 KD 로 LAG-3, 바람직하게는 인간 LAG-3 에 결합하는 항체를 나타낸다. 용어 "KD" 는 해리 상수를 나타내고, 이는 Kd 대 Ka 의 비 (즉, Kd/Ka) 로부터 수득되며 몰 농도 (M) 로 표시된다. 항체에 대한 KD 값은 본 개시물을 고려하여 당업계의 방법을 사용하여 결정될 수 있다. 예를 들어, 항체의 KD 는 표면 플라스몬 공명, 예컨대 바이오센서 시스템, 예를 들어 Biacore® 시스템을 사용하거나, 생체층 간섭계 기술, 예컨대 Octet RED96 시스템을 사용하여 결정될 수 있다.
항체의 KD 값이 작을수록, 항체가 표적 항원에 결합하는 친화성이 높아진다.
특정 양태에 따르면, 본 발명은 하기 폴리펩티드 서열을 갖는, 중쇄 상보성 결정 부위 1 (HCDR1), HCDR2, HCDR3, 경쇄 상보성 결정 부위 1 (LCDR1), LCDR2 및 LCDR3 을 포함하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이며:
a. SEQ ID NO:35, 36, 37, 86, 87, 및 88, 각각;
b. SEQ ID NO:38, 39, 40, 89, 90, 및 91, 각각;
c. SEQ ID NO:41, 42, 137, 138, 93, 및 94, 각각;
d. SEQ ID NO:139, 140, 141, 142, 99, 및 143, 각각;
e. SEQ ID NO:144, 145, 146, 147, 148, 및 149, 각각;
f. SEQ ID NO:65, 66, 67, 116, 117, 및 118, 각각;
g. SEQ ID NO:68, 69, 70, 119, 120, 및 121, 각각;
h. SEQ ID NO:71, 72, 73, 122, 123, 및 124, 각각;
i. SEQ ID NO:74, 75, 76, 125, 126, 및 127, 각각;
j. SEQ ID NO:77, 78, 79, 128, 129, 및 130, 각각; 또는
k. SEQ ID NO:80, 150, 151, 131, 132, 및 133, 각각;
항체 또는 이의 항원-결합 단편은 LAG-3, 바람직하게는 인간 LAG-3 에 특이적으로 결합한다.
SEQ ID NO:137 은 아미노산 서열 ARGGYX1DYVWFPY 로 표시되며, 여기서 X1 은 Y 및 F 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이다.
SEQ ID NO:138 은 아미노산 서열 QSIX1YSNGYTY 로 표시되며, 여기서 X1 은 L 및 V 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이다.
SEQ ID NO:139 는 아미노산 서열 GYTX1X2X3YY 로 표시되며, 여기서 X1 은 F 및 L 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X2 는 T 및 S 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X3 은 G 및 N 으로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이다.
SEQ ID NO:140 은 아미노산 서열 INPYNGDT X1 로 표시되며, 여기서 X1 은 T 및 I 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이다.
SEQ ID NO:141 은 아미노산 서열 X1RDDGYX2VX3X4FDX5 로 표시되며, 여기서 X1 은 V 및 A 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X2 는 H 및 Y 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X3 은 R 및 Y 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X4 는 F 및 Y 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X5 는 V, Y 및 C 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이다.
SEQ ID NO:142 는 아미노산 서열 QDIX1X2X3 로 표시되며, 여기서 X1 은 S 및 G 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X2 는 D 및 G 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X3 은 Y, S, 및 R 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이다.
SEQ ID NO:143 은 아미노산 서열 LX1X2X3SPPT 로 표시되며, 여기서 X1 은 Y, C, 및 N 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X2 는 V 및 A 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X3 은 S 및 N 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이다.
SEQ ID NO:144 는 아미노산 서열 GYSFX1DYN 으로 표시되며, 여기서 X1 은 S 및 T 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이다.
SEQ ID NO:145 는 아미노산 서열 IX1LDX2X3X4T 로 표시되며, 여기서 X1 은 N 및 T 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X2 는 S 및 Y 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X3 은 A 및 G 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이고; X4 는 A 및 T 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이다.
SEQ ID NO:146 는 아미노산 서열 AX1YDY 로 표시되며, 여기서 X1 은 S 및 C 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이다.
SEQ ID NO:147 은 아미노산 서열 QDISX1Y 로 표시되며, 여기서 X1 은 H 및 N 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이다.
SEQ ID NO:148 은 아미노산 서열 X1TS 로 표시되며, 여기서 X1 은 E 및 A 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이다.
SEQ ID NO:149 는 아미노산 서열 LQYAX1YPLT 로 표시되며, 여기서 X1 은 T 및 S 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이다.
SEQ ID NO:150 은 아미노산 서열 IYPGRGX1P 로 표시되며, 여기서 X1 은 D 및 N 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이다.
SEQ ID NO:151 은 아미노산 서열 EIYYGNYX1DY 로 표시되며, 여기서 X1 은 I 및 L 로 이루어진 군으로부터 선택되는 아미노산이다.
또 다른 특정 양태에 따르면, 본 발명은 SEQ ID NO:1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 또는 33 중 하나와 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 또는 SEQ ID NO:2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 또는 34 중 하나와 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 한 바람직한 구현예에 따르면, 본 발명의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 각각, SEQ ID NO:1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 또는 33 과 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 또는 34 와 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다.
또 다른 특정 양태에 따르면, 본 발명은 하기를 포함하는, 본 발명의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다:
a. SEQ ID NO:1 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:2 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
b. SEQ ID NO:3 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:4 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
c. SEQ ID NO:5 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:6 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
d. SEQ ID NO:7 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:8 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
e. SEQ ID NO:9 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:10 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
f. SEQ ID NO:11 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:12 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
g. SEQ ID NO:13 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:14 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
h. SEQ ID NO:15 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:16 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
i. SEQ ID NO:17 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:18 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
j. SEQ ID NO:19 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:20 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
k. SEQ ID NO:21 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:22 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
l. SEQ ID NO:23 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:24 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
m. SEQ ID NO:25 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:26 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
n. SEQ ID NO:27 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:28 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
o. SEQ ID NO:29 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:30 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
p. SEQ ID NO:31 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:32 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부; 또는
q. SEQ ID NO:33 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:34 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부.
한 구현예에서, 본 발명은 각각 SEQ ID NO:35, 36, 37, 86, 87 및 88 의 폴리펩티드 서열을 갖는, HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구현예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:1 과 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:2 와 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:1 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부; 및 SEQ ID NO:2 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다.
한 구현예에서, 본 발명은 각각 SEQ ID NO:38, 39, 40, 89, 90 및 91 의 폴리펩티드 서열을 갖는, HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구현예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:3 과 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:4 와 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:3 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부; 및 SEQ ID NO:4 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다.
한 구현예에서, 본 발명은 각각 SEQ ID NO:41, 42, 43, 92, 93 및 94 의 폴리펩티드 서열을 갖는, HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구현예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:5 와 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:6 과 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:5 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부; 및 SEQ ID NO:6 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다.
한 구현예에서, 본 발명은 각각 SEQ ID NO:44, 45, 46, 95, 96 및 97 의 폴리펩티드 서열을 갖는, HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구현예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:7 과 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:8 과 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:7 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부; 및 SEQ ID NO:8 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다.
한 구현예에서, 본 발명은 각각 SEQ ID NO:47, 48, 49, 98, 99 및 100 의 폴리펩티드 서열을 갖는, HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구현예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:9 와 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:10 과 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:9 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부; 및 SEQ ID NO:10 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다.
한 구현예에서, 본 발명은 각각 SEQ ID NO:50, 51, 52, 101, 102 및 103 의 폴리펩티드 서열을 갖는, HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구현예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:11 과 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:12 와 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:11 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부; 및 SEQ ID NO:12 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다.
한 구현예에서, 본 발명은 각각 SEQ ID NO:53, 54, 55, 104, 105 및 106 의 폴리펩티드 서열을 갖는, HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구현예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:13 과 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:14 와 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:13 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부; 및 SEQ ID NO:14 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다.
한 구현예에서, 본 발명은 각각 SEQ ID NO:56, 57, 58, 107, 108 및 109 의 폴리펩티드 서열을 갖는, HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구현예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:15 와 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:16 과 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:15 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부; 및 SEQ ID NO:16 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다.
한 구현예에서, 본 발명은 각각 SEQ ID NO:59, 60, 61, 110, 111 및 112 의 폴리펩티드 서열을 갖는, HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구현예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:17 과 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:18 과 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:17 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부; 및 SEQ ID NO:18 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다.
한 구현예에서, 본 발명은 각각 SEQ ID NO:62, 63, 64, 113, 114 및 115 의 폴리펩티드 서열을 갖는, HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구현예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:19 와 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:20 와 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:19 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부; 및 SEQ ID NO:20 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다.
한 구현예에서, 본 발명은 각각 SEQ ID NO:65, 66, 67, 116, 117 및 118 의 폴리펩티드 서열을 갖는, HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구현예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:21 과 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:22 와 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:21 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부; 및 SEQ ID NO:22 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다.
한 구현예에서, 본 발명은 각각 SEQ ID NO:68, 69, 70, 119, 120 및 121 의 폴리펩티드 서열을 갖는, HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구현예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:23 과 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:24 와 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:23 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부; 및 SEQ ID NO:24 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다.
한 구현예에서, 본 발명은 각각 SEQ ID NO:71, 72, 73, 122, 123 및 124 의 폴리펩티드 서열을 갖는, HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구현예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:25 와 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:26 과 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:25 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부; 및 SEQ ID NO:26 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다.
한 구현예에서, 본 발명은 각각 SEQ ID NO:74, 75, 76, 125, 126 및 127 의 폴리펩티드 서열을 갖는, HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구현예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:27 과 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:28 과 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:27 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부; 및 SEQ ID NO:28 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다.
한 구현예에서, 본 발명은 각각 SEQ ID NO:77, 78, 79, 128, 129 및 130 의 폴리펩티드 서열을 갖는, HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구현예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:29 와 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:30 와 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:29 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부; 및 SEQ ID NO:30 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다.
한 구현예에서, 본 발명은 각각 SEQ ID NO:80, 81, 82, 131, 132 및 133 의 폴리펩티드 서열을 갖는, HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구현예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:31 과 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:32 와 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:31 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부; 및 SEQ ID NO:32 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다.
한 구현예에서, 본 발명은 각각 SEQ ID NO:83, 84, 85, 134, 135 및 136 의 폴리펩티드 서열을 갖는, HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3 을 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 구현예에서, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:33 과 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:34 와 적어도 85%, 바람직하게는 90%, 보다 바람직하게는 95% 이상, 예컨대 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다. 바람직하게는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 SEQ ID NO:33 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부; 및 SEQ ID NO:34 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함한다.
또 다른 특정 양태에 따르면, 본 발명은 SEQ ID NO:192 의 아미노산 서열을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 LAG-3 에 대한 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 특정 양태에 따르면, 본 발명은 SEQ ID NO:193 의 아미노산 서열을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 LAG-3 에 대한 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 특정 양태에 따르면, 본 발명은 SEQ ID NO:158 의 아미노산 서열을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 LAG-3 에 대한 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 특정 양태에 따르면, 본 발명은 SEQ ID NO:180 의 아미노산 서열을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 LAG-3 에 대한 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 또 다른 특정 양태에 따르면, 본 발명은 SEQ ID NO:194 의 아미노산 서열을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 LAG-3 에 대한 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다. 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 예를 들어 LAG-3 활성을 억제할 수 있다.
또 다른 특정 양태에 따르면, 본 발명은 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 LAG-3 의 MHC 클래스 II 분자에 대한 결합을 차단할 수 있는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다.
또 다른 특정 양태에 따르면, 본 발명은 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 LAG-3 의 LSECtin 에 대한 결합을 차단할 수 있는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다.
또 다른 특정 양태에 따르면, 본 발명은 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 키메라인, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다.
또 다른 특정 양태에 따르면, 본 발명은 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 인간 또는 인간화된, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다.
또 다른 특정 양태에 따르면, 본 발명은 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 하기를 포함하는, 단리된 인간화 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편에 관한 것이다:
a. SEQ ID NO:195 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:208 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부
b. SEQ ID NO:196 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:206 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
c. SEQ ID NO:197 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:205 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
d. SEQ ID NO:197 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:206 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
e. SEQ ID NO:197 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:207 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
f. SEQ ID NO:198 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:205 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
g. SEQ ID NO:199 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:209 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
h. SEQ ID NO:200 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:209 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
i. SEQ ID NO:201 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:209 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
j. SEQ ID NO:202 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:209 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
k. SEQ ID NO:203 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:209 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
l. SEQ ID NO:204 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:209 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
m. SEQ ID NO:199 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:210 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
n. SEQ ID NO:200 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:210 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
o. SEQ ID NO:201 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:210 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
p. SEQ ID NO:202 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:210 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
q. SEQ ID NO:203 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:210 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부; 또는
r. SEQ ID NO:204 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:210 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부.
또 다른 일반적인 양태에서, 본 발명은 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산에 관한 것이다. 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않고 단백질의 코딩 서열이 변화 (예를 들어, 대체, 결실, 삽입 등) 될 수 있다는 것이 당업자에 의해 이해될 것이다. 따라서, 당업자는 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 핵산 서열이 단백질의 아미노산 서열을 변화시키지 않고 변경될 수 있음을 이해할 것이다.
또 다른 일반적인 양태에서, 본 발명은 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산을 포함하는 벡터에 관한 것이다. 플라스미드, 코스미드, 파지 벡터 또는 바이러스 벡터와 같은, 본 개시물을 고려하여 당업자에게 공지된 임의의 벡터가 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 벡터는 플라스미드와 같은 재조합 발현 벡터이다. 벡터는 발현 벡터의 종래의 기능을 확립하기 위한 임의의 요소, 예를 들어 프로모터, 리보솜 결합 요소, 터미네이터, 인핸서, 선택 마커 및 복제 원점을 포함할 수 있다. 프로모터는 구성적, 유도성 또는 억제성 프로모터일 수 있다. 핵산을 세포에 전달할 수 있는 다수의 발현 벡터는 당업계에 공지되어 있으며, 세포에서 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 생산을 위해 본원에서 사용될 수 있다. 종래의 클로닝 기법 또는 인공 유전자 합성을 사용하여 본 발명의 구현예에 따른 재조합 발현 벡터를 생성할 수 있다.
또 다른 일반적인 양태에서, 본 발명은 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산을 포함하는 숙주 세포에 관한 것이다. 본 개시물을 고려하여 당업자에게 공지된 임의의 숙주 세포가 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 재조합 발현에 사용될 수 있다. 일부 구현예에서, 숙주 세포는 대장균 (E. coli) TG1 또는 BL21 세포 (예를 들어, scFv 또는 Fab 항체의 발현을 위함), CHO-DG44 또는 CHO-K1 세포 또는 HEK293 세포 (예를 들어, 전장 IgG 항체의 발현을 위함) 이다. 특정 구현예에 따르면, 재조합 발현 벡터는 화학적 트랜스펙션 (transfection), 열 충격 또는 전기천공법과 같은 종래의 방법에 의해 숙주 세포에 형질전환되는데, 재조합 핵산이 효과적으로 발현되도록 숙주 세포 게놈에 안정적으로 통합된다.
또 다른 일반적인 양태에서, 본 발명은 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생산하기 위한 조건 하에 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 핵산을 포함하는 세포를 배양하고, 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 세포 또는 세포 배양물 (예를 들어, 상청액) 로부터 회수하는 것을 포함하는, 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 생산 방법에 관한 것이다. 발현된 항체 또는 이의 항원-결합 단편은 당업계에 공지된 종래의 기법에 따라 및 본원에 기재된 바와 같이 세포로부터 수확 및 정제될 수 있다.
약학 조성물
또 다른 일반적인 양태에서, 본 발명은 본 발명의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학 조성물에 관한 것이다. 본원에서 사용되는 바와 같은 용어 "약학 조성물" 은 약학적으로 허용가능한 담체와 함께 본 발명의 항체를 포함하는 생성물을 의미한다. 본 발명의 항체 및 이를 포함하는 조성물은 또한 본원에 언급된 치료 적용을 위한 약제의 제조에 유용하다.
본원에서 사용되는 바와 같은, 용어 "담체" 는 임의의 부형제, 희석제, 충전제, 염, 완충제, 안정화제, 가용화제, 오일, 지질, 지질 함유 소포, 미소구체, 리포솜 피포, 또는 약학 제형에서의 사용을 위해 당업계에 널리 공지된 다른 물질을 나타낸다. 담체, 부형제 또는 희석제의 특징이 특정 적용을 위한 투여 경로에 의존적일 것임이 이해될 것이다. 본원에서 사용되는 바와 같은, 용어 "약학적으로 허용가능한 담체" 는 본 발명에 따른 조성물의 효과 또는 본 발명에 따른 조성물의 생물학적 활성을 방해하지 않는 비-독성 물질을 나타낸다. 특정 구현예에 따르면, 본 개시물을 고려하여, 항체 약학 조성물에서 사용하기에 적합한 임의의 약학적으로 허용가능한 담체가 본 발명에서 사용될 수 있다.
약학적으로 허용가능한 담체를 갖는 약학적 활성 성분의 제형은 예를 들어 [Remington: The Science and Practice of Pharmacy] (예를 들어 21 판 (2005), 및 임의의 이후 판) 에서와 같이, 당업계에 공지되어있다. 추가적 성분의 비-제한적 예는 완충제, 희석제, 용매, 등장성 조절제, 보존제, 안정화제 및 킬레이트제를 포함한다. 하나 이상의 약학적으로 허용가능한 담체가 본 발명의 약학 조성물을 제형화하는데 사용될 수 있다.
본 발명의 한 구현예에서, 약학 조성물은 액체 제형이다. 액체 제형의 바람직한 예는 수성 제형, 즉 물을 포함하는 제형이다. 액체 제형은 용액, 현탁액, 에멀젼, 마이크로에멀젼, 겔 등을 포함할 수 있다. 수성 제형은 전형적으로 적어도 50% w/w 의 물, 또는 적어도 60%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90% w/w 또는 적어도 95% w/w 의 물을 포함한다.
한 구현예에서, 약학 조성물은 예를 들어 주사 장치 (예를 들어, 주사기 또는 주입 펌프) 를 통해 주사될 수 있는, 주사가능물질로서 제형화될 수 있다. 주사는 예를 들어 피하, 근육내, 복강내, 유리체강내 또는 정맥내로 전달될 수 있다.
또 다른 구현예에서, 약학 조성물은 고체 제형, 예를 들어, 동결 건조 또는 분무 건조된 조성물이며, 그대로 사용되거나, 의사 또는 환자가 사용 전에 이에 용매 및/또는 희석제를 첨가하여 사용될 수 있다. 고체 투약 형태는 정제, 예컨대 압축 정제 및/또는 코팅 정제, 및 캡슐 (예를 들어, 경질 또는 연질 젤라틴 캡슐) 을 포함할 수 있다. 약학 조성물은 또한 예를 들어 향낭, 드라제, 분말, 과립, 로젠지, 또는 재구성용 분말의 형태일 수 있다.
투약 형태는 수용성 또는 수분산성 담체를 포함할 수 있는 경우인 즉시 방출형일 수 있거나, 위장관 또는 피부 아래에서의 투약 형태의 용해 속도를 조절하는 수불용성 중합체를 포함할 수 있는 경우인 지연 방출, 지속 방출 또는 개량 방출일 수 있다.
다른 구현예에서, 약학 조성물은 비강내, 협내 또는 설하로 전달될 수 있다.
수성 제형 중의 pH 는 pH 3 내지 pH 10 일 수 있다. 본 발명의 한 구현예에서, 제형의 pH 는 약 7.0 내지 약 9.5 이다. 본 발명의 또 다른 구현예에서, 제형의 pH 는 약 3.0 내지 약 7.0 이다.
본 발명의 또 다른 구현예에서, 약학 조성물은 완충제를 포함한다. 완충제의 비제한적 예는 아르기닌, 아스파르트산, 비신, 시트레이트, 디소듐 히드로겐 포스페이트, 푸마르산, 글리신, 글리실글리신, 히스티딘, 리신, 말레산, 말산, 소듐 아세테이트, 소듐 카르보네이트, 소듐 디히드로겐 포스페이트, 소듐 포스페이트, 숙시네이트, 타르타르산, 트리신 및 트리스(히드록시메틸)-아미노메탄, 및 이의 혼합물을 포함한다. 완충제는 개별적으로 또는 합하여, 약 0.01 mg/ml 내지 약 50 mg/ml, 예를 들어 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml 의 농도로 존재할 수 있다. 이러한 특정 완충제 중 각각을 포함하는 약학 조성물은 본 발명의 대안적인 구현예를 구성한다.
본 발명의 또 다른 구현예에서, 약학 조성물은 보존제를 포함한다. 보존제의 비제한적 예는 벤즈에토늄 클로라이드, 벤조산, 벤질 알코올, 브로노폴, 부틸 4-히드록시벤조에이트, 클로로부탄올, 클로로크레졸, 클로로헥시딘, 클로르페네신, o-크레졸, m-크레졸, p-크레졸, 에틸 4-히드록시벤조에이트, 이미드우레아, 메틸 4-히드록시벤조에이트, 페놀, 2-페녹시에탄올, 2-페닐에탄올, 프로필 4-히드록시벤조에이트, 소듐 데히드로아세테이트, 티오메로살, 및 이의 혼합물을 포함한다. 보존제는 개별적으로 또는 합하여, 약 0.01 mg/ml 내지 약 50 mg/ml, 예를 들어 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml 의 농도로 존재할 수 있다. 이러한 특정 보존제 중 각각을 포함하는 약학 조성물은 본 발명의 대안적인 구현예를 구성한다.
본 발명의 또 다른 구현예에서, 약학 조성물은 등장화제를 포함한다. 등장화제의 비제한적 예는 염 (예컨대 소듐 클로라이드), 아미노산 (예컨대 글리신, 히스티딘, 아르기닌, 리신, 이소류신, 아스파르트산, 트립토판 및 트레오닌), 알디톨 (예컨대 글리세롤, 1,2-프로판디올 프로필렌글리콜), 1,3-프로판디올 및 1,3-부탄디올), 폴리에틸렌글리콜 (예를 들어 PEG400), 및 이의 혼합물을 포함한다. 등장화제의 또 다른 예는 당을 포함한다. 당의 비제한적 예는 단당류, 이당류 또는 다당류, 또는 수용성 글루칸, 예를 들어 프룩토오스, 글루코오스, 만노오스, 소르보오스, 자일로오스, 말토오스, 락토오스, 수크로스, 트레할로오스, 덱스트란, 풀루란, 덱스트린, 시클로덱스트린, 알파 및 베타-HPCD, 가용성 전분, 히드록시에틸 전분 및 나트륨 카르복시메틸셀룰로오스일 수 있다. 등장화제의 또 다른 예는 당 알코올이며, 여기서 용어 "당 알코올" 은 적어도 하나의 -OH 기를 갖는 C(4-8) 탄화수소로서 정의된다. 당 알코올의 비제한적 예는 만니톨, 소르비톨, 이노시톨, 갈락티톨, 둘시톨, 자일리톨 및 아라비톨을 포함한다. 이 단락에 열거된 각각의 등장화제를 포함하는 약학 조성물은 본 발명의 대안적인 구현예를 구성한다. 등장화제는 개별적으로 또는 합하여, 약 0.01 mg/ml 내지 약 50 mg/ml, 예를 들어 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml 의 농도로 존재할 수 있다. 이러한 특정 등장화제 중 각각을 포함하는 약학 조성물은 본 발명의 대안적인 구현예를 구성한다.
본 발명의 또 다른 구현예에서, 약학 조성물은 킬레이트제를 포함한다. 킬레이트제의 비제한적 예는 시트르산, 아스파르트산, 에틸렌디아민테트라아세트산 (EDTA) 의 염, 및 이의 혼합물을 포함한다. 킬레이트제는 개별적으로 또는 합하여, 약 0.01 mg/ml 내지 약 50 mg/ml, 예를 들어 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml 의 농도로 존재할 수 있다. 이러한 특정 킬레이트제 중 각각을 포함하는 약학 조성물은 본 발명의 대안적인 구현예를 구성한다.
본 발명의 또 다른 구현예에서, 약학 조성물은 안정화제를 포함한다. 안정화제의 비제한적 예는 하나 이상의 응집 억제제, 하나 이상의 산화 억제제, 하나 이상의 계면활성제 및/또는 하나 이상의 프로테아제 억제제를 포함한다.
본 발명의 또 다른 구현예에서, 약학 조성물은 안정화제를 포함하는데, 여기서 상기 안정화제는 카르복시-/히드록시셀룰로오스 및 이의 유도체 (예컨대 HPC, HPC-SL, HPC-L 및 HPMC), 시클로덱스트린, 2-메틸티오에탄올, 폴리에틸렌 글리콜 (예컨대 PEG 3350), 폴리비닐 알코올 (PVA), 폴리비닐 피롤리돈, 염 (예컨대 소듐 클로라이드), 황-함유 물질 예컨대 모노티오글리세롤, 또는 티오글리콜산이다. 안정화제는 개별적으로 또는 합하여, 약 0.01 mg/ml 내지 약 50 mg/ml, 예를 들어 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml 의 농도로 존재할 수 있다. 이러한 특정 안정화제 중 각각을 포함하는 약학 조성물은 본 발명의 대안적인 구현예를 구성한다.
본 발명의 추가 구현예에서, 약학 조성물은 하나 이상의 계면활성제, 바람직하게는 계면활성제, 적어도 하나의 계면활성제, 또는 2 개의 상이한 계면활성제를 포함한다. 용어 "계면활성제" 는 수용성 (친수성) 부분 및 지용성 (친유성) 부분으로 구성되는 임의의 분자 또는 이온을 나타낸다. 계면활성제는 예를 들어, 음이온성 계면활성제, 양이온성 계면활성제, 비이온성 계면활성제 및/또는 양쪽이온성 계면활성제로 이루어지는 군에서 선택될 수 있다. 계면활성제는 개별적으로 또는 합하여, 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml 의 농도로 존재할 수 있다. 이러한 특정 계면활성제 중 각각을 포함하는 약학 조성물은 본 발명의 대안적인 구현예를 구성한다.
본 발명의 추가 구현예에서, 약학 조성물은 하나 이상의 프로테아제 억제제, 예를 들어, EDTA, 및/또는 벤자미딘 염산 (HCl) 을 포함한다. 프로테아제 억제제는 개별적으로 또는 합하여, 약 0.1 mg/ml 내지 약 20 mg/ml 의 농도로 존재할 수 있다. 이러한 특정 프로테아제 억제제 중 각각을 포함하는 약학 조성물은 본 발명의 대안적인 구현예를 구성한다.
또 다른 일반적인 양태에서, 본 발명은 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 약학적으로 허용가능한 담체를 조합하여 약학 조성물을 수득하는 것을 포함하는, 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 포함하는 약학 조성물을 생산하는 방법에 관한 것이다.
사용 방법
또 다른 일반적인 양태에서, 본 발명은 대상체에게 LAG-3 에 특이적으로 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 본 발명의 약학 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 LAG-3 의 MHC 클래스 II 분자에 대한 결합을 차단하는 방법에 관한 것이다.
또 다른 일반적인 양태에서, 본 발명은 대상체에게 LAG-3 에 특이적으로 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 본 발명의 약학 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 LAG-3 의 LSECtin 에 대한 결합을 차단하는 방법에 관한 것이다.
LAG-3 에 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편의 기능적 활성은 당업계에 공지된 방법에 의해 및 본원에 기재된 바와 같이 특징분석될 수 있다. LAG-3 에 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편을 특성화하는 방법은 Biacore, ELISA, 및 OctetRed 분석을 포함하는 친화도 및 특이성 분석; FACS 에 의해 Daudi 세포 상의 MHC 클래스 II 분자에 대한 LAG-3 의 결합 차단을 검출하기 위한 수용체 리간드 결합 어세이; LSECtin 과 LAG-3 사이의 상호작용을 결정하기 위한 표면 플라즈몬 공명 (SPR) 어세이 (Xu, et al., Cancer Res 2014; 74:3418-3428), 및 항-LAG-3 mAb 에 의한 차단 효과 (항-LAG-3 mAb 의 기능적 활성은 또한 혼합 림프구 반응 (MLR) 어세이에서 평가될 수 있으며, 여기서 상이한 공여자로부터의 수지상 세포 및 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC) 는 mAb 의 존재 하에 혼합되고 사이토카인 분비의 자극이 측정됨) 를 포함하나 이에 제한되지 않는다. 특정 구현예에 따르면, LAG-3 에 결합하는 항체 및 이의 항원-결합 단편을 특징분석하는 방법은 하기 기재된 것들을 포함한다.
또 다른 일반적인 양태에서, 본 발명은 대상체에게 LAG-3 에 특이적으로 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 본 발명의 약학 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 암을 치료하는 방법에 관한 것이다. 암은 예를 들어, 폐암, 위암, 결장암, 간세포 암종, 신장 세포 암종, 방광 요로상피세포 암종, 전이성 흑색종, 유방암, 난소암, 자궁경부암, 두경부암, 췌장암, 신경교종, 교모세포종, 및 기타 고형 종양, 및 비-호지킨 림프종 (NHL), 급성 림프구성 백혈병 (ALL), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 다발성 골수종 (MM), 급성 골수성 백혈병 (AML), 및 기타 액형 종양에서 비제한적으로 선택될 수 있다.
또 다른 일반적인 양태에서, 본 발명은 대상체에게 LAG-3 에 특이적으로 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 본 발명의 약학 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 감염성 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다.
또 다른 일반적인 양태에서, 본 발명은 대상체에게 LAG-3 에 특이적으로 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 본 발명의 약학 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 염증성 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다.
또 다른 일반적인 양태에서, 본 발명은 대상체에게 LAG-3 에 특이적으로 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 본 발명의 약학 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 자가면역 질환을 치료하는 방법에 관한 것이다.
또 다른 일반적인 양태에서, 본 발명은 대상체에게 LAG-3 에 특이적으로 결합하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원 결합 단편 또는 본 발명의 약학 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상체에서 제 1 형 당뇨병을 치료하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 구현예에 따르면, 약학 조성물은 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 치료적 유효량을 포함한다. 본원에서 사용되는 바와 같은, 용어 "치료적 유효량" 은 대상에서의 원하는 생물학적 또는 의학적 반응을 이끌어내는 활성 성분 또는 성분의 양을 나타낸다. 치료적 유효량은 언급된 목적과 관련하여 경험적으로, 및 정례적 방식으로 결정될 수 있다.
항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 관련하여 본원에서 사용되는 바와 같이, 치료적 유효량은 이를 필요로 하는 대상에서의 면역 반응을 조절하는 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 양을 의미한다. 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 관련하여 본원에서 또한 사용되는 바와 같이, 치료적 유효량은 질환, 장애 또는 병상의 치료를 초래하고; 질환, 장애 또는 병상의 진행을 방지하거나 늦추거나; 질환, 장애 또는 병상과 연관된 증상을 감소시키거나 완전히 경감시키는 항-LAG-3 항체 또는 이의 항원-결합 단편의 양을 의미한다.
특정 구현예에 따르면, 치료할 질환, 장애 또는 병상은 암, 바람직하게는 폐암, 위암, 결장암, 간세포 암종, 신장 세포 암종, 방광 요로상피세포 암종, 전이성 흑색종, 유방암, 난소암, 자궁경부암, 두경부암, 췌장암, 신경교종, 교모세포종, 및 기타 고형 종양, 및 비-호지킨 림프종 (NHL), 급성 림프구성 백혈병 (ALL), 만성 림프구성 백혈병 (CLL), 만성 골수성 백혈병 (CML), 다발성 골수종 (MM), 급성 골수성 백혈병 (AML), 및 기타 액형 종양으로 이루어지는 군에서 선택되는 암이다. 다른 특정 구현예에 따르면, 치료할 질환, 장애 또는 병상은 감염성 질환, 염증성 질환, 면역 질환, 자가면역 질환, 및/또는 제 1 형 당뇨병이다.
특정 구현예에 따르면, 치료적 유효량은 하기 효과 중 1 개, 2 개, 3 개, 4 개 또는 그 이상을 달성하기에 충분한 치료요법의 양을 나타낸다: (i) 치료할 질환, 장애 또는 병상, 또는 이와 연관된 증상의 중증도를 감소시키거나 완화시킴; (ii) 치료할 질환, 장애 또는 병상, 또는 이와 연관된 증상의 지속기간을 감소시킴; (iii) 치료할 질환, 장애 또는 병상, 또는 이와 연관된 증상의 진행을 방지함; (iv) 치료할 질환, 장애 또는 병상, 또는 이와 연관된 증상의 퇴행을 유발함; (v) 치료할 질환, 장애 또는 병상, 또는 이와 연관된 증상의 발전 또는 발병을 방지함; (vi) 치료할 질환, 장애 또는 병상, 또는 이와 연관된 증상의 재발을 방지함; (vii) 치료할 질환, 장애 또는 병상, 또는 이와 연관된 증상을 갖는 대상의 입원을 감소시킴; (viii) 치료할 질환, 장애 또는 병상, 또는 이와 연관된 증상을 갖는 대상의 입원 길이를 감소시킴; (ix) 치료할 질환, 장애 또는 병상, 또는 이와 연관된 증상을 갖는 대상의 생존을 증가시킴; (xi) 치료할 질환, 장애 또는 병상, 또는 이와 연관된 증상을 억제 또는 감소시킴; 및/또는 (xii) 또 다른 치료요법의 예방 또는 치료 효과(들) 를 향상 또는 개선시킴.
치료적 유효량 또는 투약량은 치료할 질환, 장애 또는 병상, 투여 수단, 표적 부위, 대상의 생리학적 상태 (예를 들어, 연령, 체중, 건강 포함), 대상이 인간 또는 동물인지 여부, 투여되는 다른 약물, 및 치료가 예방 또는 치료인지 여부와 같은 다양한 인자에 따라 가변적일 수 있다. 안전성 및 효능을 최적화하기 위해 치료 투약량을 최적으로 적정한다.
특정 구현예에 따르면, 본원에 기재된 조성물은 대상에 대해 의도된 투여 경로에 적합한 것으로 제형화된다. 예를 들어, 본원에 기재된 조성물은 정맥내, 피하 또는 근육내 투여에 적합한 것으로 제형화될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같은, 용어 "치료하다", "치료하는" 및 "치료" 는 모두, 대상에서 반드시 식별가능한 것은 아니나 대상에서 식별가능할 수 있는, 암, 감염성 질환, 장애 또는 병상, 면역 질환, 장애 또는 병상, 자가면역 질환, 장애 또는 병상, 염증성 질환, 장애 또는 병상, 및/또는 제 1 형 당뇨병, 장애 또는 병상과 관련된 적어도 하나의 측정가능한 물리적 매개변수의 개선 또는 반전을 나타내는 것으로 의도된다. 용어 "치료하다", "치료하는" 및 "치료" 는 또한, 퇴행을 일으키거나, 진행을 예방하거나, 적어도 질환, 장애 또는 병상의 진행을 늦추는 것을 나타낼 수 있다. 특정 구현예에서, "치료", "치료하는" 및 "치료" 는 종양 또는 보다 바람직하게는 암과 같은 질환, 장애 또는 병상과 연관된 하나 이상의 증상의 경감, 발전 또는 발병의 예방, 또는 지속기간의 감소를 나타낸다. 특정 구현예에서, "치료하다", "치료하는" 및 "치료" 는 질환, 장애 또는 병상의 재발의 예방을 나타낸다. 특정 구현예에서, "치료하다", "치료하는" 및 "치료" 는 질환, 장애 또는 병상을 갖는 대상의 생존 증가를 나타낸다. 특정 구현예에서, "치료하다", "치료하는" 및 "치료" 는 대상에서의 질환, 장애 또는 병상의 제거를 나타낸다.
특정 구현예에 따르면, 암, 감염성 질환, 장애 또는 병상, 면역 질환, 장애 또는 병상, 자가면역 질환, 장애 또는 병상, 제 1 형 당뇨병, 장애 또는 병상, 및/또는 염증성 질환, 장애 또는 병상의 치료에 사용되는 조성물. 암 치료요법을 위해, 이것은 화학요법, 항-CD20 mAb, 항-TIM-3 mAb, 항-CTLA-4 항체, 항-EGFR mAb, 항-HER-2 mAb, 항-CD19 mAb, 항-CD33 mAb, 항-CD73 mAb, 항-CD47 mAb, 항-DLL-3 mAb, 항-아펠린 mAb, 항-TIP-1 mAb, 항-CLDN18.2 mAb, 항-FOLR1 mAb, 항-PD-L1 항체, 항-PD-1 항체, PD-1/PD-L1 치료요법, 다른 면역항암 약물, 항혈관신생제, 방사선 치료요법, 항체-약물 접합체 (ADC), 표적 치료요법, 또는 기타 항암 약물을 비제한적으로 포함하는 또 다른 치료와 조합으로 사용될 수 있다. 항-LAG-3 항체는 LAG-3 및 특이적 종양 연관 항원 둘 모두를 발현하는 암/종양을 치료하기 위해 PD-1, PD-L1, CD47, TIM-3, CTLA-4, EGFR, HER-2, CD19, CD20, CD33, CD73, 아펠린, DLL-3, claudin18.2, TIP-1, CD3, 폴레이트 수용체 알파 (FOLR1) 및/또는 다른 종양 표면 항원에 대한 파트너 mAb 와 이중특이적 항체를 구축하는데 사용될 수 있다.
본원에서 사용되는 바와 같은, 대상에게 둘 이상의 치료요법을 투여하는 맥락에서 용어 "조합으로" 는 하나 초과의 치료요법의 사용을 나타낸다. 용어 "조합으로" 의 사용은 치료요법이 대상에게 투여되는 순서를 제한하지 않는다. 예를 들어, 제 1 치료요법 (예를 들어, 본원에 기재된 조성물) 은 제 2 치료요법을 대상에게 투여하기 전 (예를 들어, 5 분, 15 분, 30 분, 45 분, 1 시간, 2 시간, 4 시간, 6 시간, 12 시간, 16 시간, 24 시간, 48 시간, 72 시간, 96 시간, 1 주, 2 주, 3 주, 4 주, 5 주, 6 주, 8 주 또는 12 주 전), 제 2 치료요법을 대상에게 투여하는 것과 동시에, 또는 제 2 치료요법을 대상에게 투여한 후 (예를 들어, 5 분, 15 분, 30 분, 45 분, 1 시간, 2 시간, 4 시간, 6 시간, 12 시간, 16 시간, 24 시간, 48 시간, 72 시간, 96 시간, 1 주, 2 주, 3 주, 4 주, 5 주, 6 주, 8 주 또는 12 주 후) 에 투여될 수 있다.
또 다른 일반적인 양태에서, 본 발명은 대상에서의 LAG-3 의 수준을 결정하는 방법에 관한 것이다. 방법은 (a) 대상으로부터 샘플을 수득하는 단계; (b) 샘플을 본 발명의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계; 및 (c) 대상에서의 LAG-3 의 수준을 결정하는 단계를 포함한다.
본원에서 사용되는 바와 같은, "샘플" 은 대상으로부터 단리된 생물학적 샘플을 나타내며, 전혈, 혈청, 혈장, 혈구, 내피 세포, 조직 생검 (예를 들어, 암 조직), 림프액, 복수액, 간질액, 골수, 뇌척수액, 타액, 점액, 가래, 땀, 소변, 또는 임의의 기타 분비물, 배설물, 또는 기타 체액을 포함할 수 있으나 이에 제한되지는 않는다. "혈액 샘플" 은 혈구, 혈청 및 혈장을 포함하는, 전혈 또는 이의 임의의 분획물을 나타낸다. "혈액 샘플" 은 예를 들어, 암 세포를 포함할 수 있다.
특정 구현예에서, 대상에서의 LAG-3 의 수준은 웨스턴 블롯 어세이, ELISA 어세이, FACS 어세이, 및/또는 방사면역어세이 (RIA) 에서 비제한적으로 선택되는 어세이를 이용하여 결정될 수 있다. 상대 단백질 수준은 웨스턴 블롯 분석, FACS 어세이 및 면역조직화학 (IHC) 을 이용하여 결정될 수 있으며, 절대 단백질 수준은 ELISA 어세이를 이용하여 결정될 수 있다. LAG-3 의 상대 수준을 결정할 때, LAG-3 의 수준은 적어도 2 개의 샘플 사이, 예를 들어, 상이한 시점에서 동일한 대상으로부터의 샘플 사이, 동일한 대상에서의 상이한 조직으로부터의 샘플 사이, 및/또는 상이한 대상으로부터의 샘플 사이에서 결정될 수 있다. 대안적으로, 예컨대 ELISA 어세이에 의해 LAG-3 의 절대 수준을 측정할 때, 샘플 중 LAG-3 의 절대 수준은 샘플을 시험하기 전에 ELISA 어세이에 대한 표준을 생성시킴으로써 결정될 수 있다. 당업자는 본 발명의 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 이용하여 대상으로부터의 샘플 중 LAG-3 의 수준을 결정하기 위해 어떤 분석 기법을 이용할지를 이해할 것이다.
대상으로부터의 샘플 중 LAG-3 의 수준을 결정하는 방법을 이용하는 것은, 질환에서의 비정상적 (상승한, 감소한, 또는 불충분한) LAG-3 수준의 진단을 초래하고 적절한 치료 결정을 내리게 할 수 있다. 이러한 질환은 암, 감염성 질환, 염증성 질환, 자가면역 질환 및/또는 제 1 형 당뇨병 중에서 선택될 수 있지만, 이에 제한되지는 않는다. 또한, 대상체에서 LAG-3 의 수준을 모니터링함으로써, 상기 나타낸 바와 같은 질환의 발병 위험은 특정 질환에서 및/또는 특정 질환의 진행 동안 LAG-3 의 수준에 대한 지식에 기초하여 결정될 수 있다.
구현예
본 발명은 또한 하기 비제한적 구현예를 제공한다.
구현예 1 은 하기의 폴리펩티드 서열을 갖는, 중쇄 상보성 결정 부위 1 (HCDR1), HCDR2, HCDR3, 경쇄 상보성 결정 부위 1 (LCDR1), LCDR2 및 LCDR3 을 포함하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이며:
a. SEQ ID NO:35, 36, 37, 86, 87, 및 88, 각각;
b. SEQ ID NO:38, 39, 40, 89, 90, 및 91, 각각;
c. SEQ ID NO:41, 42, 137, 138, 93, 및 94, 각각;
d. SEQ ID NO:139, 140, 141, 142, 99, 및 143, 각각;
e. SEQ ID NO:144, 145, 146, 147, 148, 및 149, 각각;
f. SEQ ID NO:65, 66, 67, 116, 117, 및 118, 각각;
g. SEQ ID NO:68, 69, 70, 119, 120, 및 121, 각각;
h. SEQ ID NO:71, 72, 73, 122, 123, 및 124, 각각;
i. SEQ ID NO:74, 75, 76, 125, 126, 및 127, 각각;
j. SEQ ID NO:77, 78, 79, 128, 129, 및 130, 각각; 또는
k. SEQ ID NO:80, 150, 151, 131, 132, 및 133, 각각;
항체 또는 이의 항원-결합 단편은 LAG-3 에 특이적으로 결합하고, 바람직하게는 인간 LAG-3 에 특이적으로 결합한다.
구현예 2 는 SEQ ID NO:1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 또는 33 과 적어도 95% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 또는 SEQ ID NO:2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 또는 34 와 적어도 95% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함하는, 구현예 1 의 단리된 단일클론 항체 또는 항원-결합 단편이다.
구현예 3 은 하기를 포함하는, 구현예 1 또는 2 의 단리된 단일클론 항체 또는 항원-결합 단편이다:
(a) SEQ ID NO:1 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:2 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
(b) SEQ ID NO:3 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:4 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
(c) SEQ ID NO:5 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:6 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
(d) SEQ ID NO:7 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:8 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
(e) SEQ ID NO:9 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:10 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
(f) SEQ ID NO:11 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:12 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
(g) SEQ ID NO:13 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:14 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
(h) SEQ ID NO:15 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:16 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
(i) SEQ ID NO:17 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:18 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
(j) SEQ ID NO:19 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:20 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
(k) SEQ ID NO:21 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:22 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
(l) SEQ ID NO:23 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:24 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
(m) SEQ ID NO:25 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:26 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
(n) SEQ ID NO:27 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:28 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
(o) SEQ ID NO:29 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:30 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
(p) SEQ ID NO:31 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:32 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부; 또는
(q) SEQ ID NO:33 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:34 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부.
구현예 4 는 또한 SEQ ID NO:192 의 아미노산 서열을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 LAG-3 에 대한 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
구현예 5 는 또한 SEQ ID NO:193 의 아미노산 서열을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 LAG-3 에 대한 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
구현예 6 은 또한 SEQ ID NO:158 의 아미노산 서열을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 LAG-3 에 대한 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
구현예 7 은 또한 SEQ ID NO:180 의 아미노산 서열을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 LAG-3 에 대한 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
구현예 8 은 또한 SEQ ID NO:194 의 아미노산 서열을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 LAG-3 에 대한 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
구현예 9 는 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 LAG-3 활성을 억제하는, 구현예 1-8 중 어느 하나의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
구현예 10 은 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 LAG-3 의 MHC 클래스 II 분자에 대한 결합을 차단할 수 있는, 구현예 1-8 중 어느 하나의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
구현예 11 은 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 LAG-3 의 LSECtin 에 대한 결합을 차단할 수 있는, 구현예 1-8 중 어느 하나의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다.
구현예 12 는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 키메라인, 구현예 1-11 중 어느 하나의 단리된 단일클론 항체 또는 항원-결합 단편이다.
구현예 13 은 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 인간 또는 인간화되는 것인, 구현예 1-11 중 어느 하나의 단리된 단일클론 항체 또는 항원-결합 단편이다.
구현예 14 는 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 하기를 포함하는, 구현예 13 의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이다:
a. SEQ ID NO:195 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:208 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
b. SEQ ID NO:196 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:206 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
c. SEQ ID NO:197 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:205 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
d. SEQ ID NO:197 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:206 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
e. SEQ ID NO:197 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:207 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
f. SEQ ID NO:198 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:205 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
g. SEQ ID NO:199 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:209 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
h. SEQ ID NO:200 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:209 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
i. SEQ ID NO:201 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:209 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
j. SEQ ID NO:202 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:209 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
k. SEQ ID NO:203 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:209 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
l. SEQ ID NO:204 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:209 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
m. SEQ ID NO:199 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:210 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
n. SEQ ID NO:200 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:210 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
o. SEQ ID NO:201 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:210 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
p. SEQ ID NO:202 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:210 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
q. SEQ ID NO:203 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:210 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부; 또는
r. SEQ ID NO:204 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:210 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부.
구현예 15 는 구현예 1-14 중 어느 하나의 단일클론 항체 또는 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산이다.
구현예 16 는 구현예 15 의 단리된 핵산을 포함하는 벡터이다.
구현예 17 은 구현예 16 의 벡터를 포함하는 숙주 세포이다.
구현예 18 은 구현예 1-14 중 어느 하나의 단리된 단일클론 항체 또는 항원-결합 단편, 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학 조성물이다.
구현예 19 는 구현예 18 의 약학 조성물을 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상에서의 LAG-3 의 MHC 클래스 II 분자에 대한 결합을 차단하는 방법이다.
구현예 20 은 제 18 항의 약학 조성물을 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상에서의 LAG-3 의 LSECtin 에 대한 결합을 차단하는 방법이다.
구현예 21 은 구현예 18 의 약학 조성물을 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상에서의 암을 치료하는 방법이다.
구현예 22 는 구현예 18 의 약학 조성물을 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상에서의 감염성 질환을 치료하는 방법이다.
구현예 23 은 구현예 18 의 약학 조성물을 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상에서의 염증성 질환을 치료하는 방법이다.
구현예 24 는 구현예 18 의 약학 조성물을 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상에서의 자가면역 질환을 치료하는 방법이다.
구현예 25 는 구현예 18 의 약학 조성물을 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상에서의 제 1 형 당뇨병을 치료하는 방법이다.
구현예 26 은 단일클론 항체 또는 항원-결합 단편을 생산하기 위한 조건 하에 단일클론 항체 또는 항원-결합 단편을 인코딩하는 핵산을 포함하는 세포를 배양하고, 세포 또는 배양물로부터 항체 또는 항원-결합 단편을 회수하는 것을 포함하는, 구현예 1-14 중 어느 하나의 단일클론 항체 또는 항원-결합 단편을 생산하는 방법이다.
구현예 27 은 단일클론 항체 또는 항원-결합 단편과 약학적으로 허용가능한 담체를 조합하여 약학 조성물을 수득하는 것을 포함하는, 구현예 1-14 중 어느 하나의 단일클론 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하는 약학 조성물을 생산하는 방법이다.
구현예 28 은 하기 단계를 포함하는, 대상체에서 LAG-3 의 수준을 검출하는 방법이다:
a. 대상체로부터 샘플을 수득하는 단계;
b. 샘플을 구현예 1-14 중 어느 하나의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계; 및
c. 대상체에서 LAG-3 의 수준을 결정하는 단계.
구현예 29 는 샘플이 조직 샘플인, 구현예 28 의 방법이다.
구현예 30 은 조직 샘플이 암 조직 샘플인, 구현예 29 의 방법이다.
구현예 31 은 샘플이 혈액 샘플인, 구현예 28 의 방법이다.
실시예
실시예 1: 항-LAG-3 단일클론 항체의 확인
C-말단에 인간 LAG-3 의 세포외 도메인 (ECD) 및 인간 Fc (huFc) 를 함유하는 융합 단백질인 Fc-태그된 인간 LAG-3 (ECD)-huFc 로 마우스를 면역화시켰다. 혈장 역가를 ELISA 에 의해 결정하였고, 형광-활성화 세포 분류 (FACS) 에 의해 확인하였다. 안락사 후, 비장 및 림프절을 수집하여 하이브리도마를 생성시켰다. 하이브리도마를 96-웰 조직 배양 플레이트에서 성장시키고, 개별 웰로부터의 상청액을 LAG-3(ECD)-huFc 을 사용하는 ELISA 에 의해 스크리닝하였다. 인간 LAG-3 을 발현하는 CHO 세포를 사용하여 FACS 에 의해 양성 클론을 추가로 분석하였다. 최상의 양성 클론을 단리하고 서열분석하였다.
항-LAG-3 단일클론 항체에 대한 중쇄 및 경쇄 가변부의 서열을 표 1 및 2 에 제공하며, 항-LAG-3 단일클론 항체에 대한 CDR 부위를 표 3 및 4 에 제공한다.
표 1: 항-LAG-3 mAb 에 대한 중쇄 가변부의 서열
Figure pct00001
표 2: 항-LAG-3 mAb 에 대한 경쇄 가변부의 서열
Figure pct00002
표 3: 항-LAG-3 mAb 에 대한 중쇄의 CDR 부위 1-3
Figure pct00003
HC: 중쇄; CDR: 상보성 결정 부위
항-LAG-3 mAb 에 대한 HC CDR 은 IMGT 방법을 사용하여 결정되었다 (Lefranc, M.-P. et al.,　Nucleic Acids Res. 1999; 27:209-212).
표 4: 항-LAG-3 mAb 에 대한 경쇄의 CDR 부위 1-3
Figure pct00004
LC: 경쇄; CDR: 상보성 결정 부위
항-LAG-3 mAb 에 대한 LC CDR 은 IMGT 방법을 사용하여 결정되었다 (Lefranc, M.-P. et al.,　Nucleic Acids Res. 1999; 27:209-212).
실시예 2: 트랜스펙션된 HEK293 세포로부터의 하이브리도마 상청액 및 배양 배지로부터의 mAb 의 생산 및 정제
마우스 항-LAG-3 mAb 를 단백질 A 친화성 크로마토그래피를 사용하여 하이브리도마 배지/상청액으로부터 정제하였다. 재조합 항-LAG-3 키메라 mAb 를 수득하기 위해, 각각, 인간 IgG1 중쇄 및 카파 경쇄의 불변부에 융합된 마우스 가변부 (VH 및 VL) 를 함유하는 발현 벡터를 HEK293 세포에 일시적으로 트랜스펙션시켰다. HEK293 세포의 현탁액에서 생성된 재조합 항체를 단백질 A 친화성 크로마토그래피를 사용하여 정제하였다. 특정 mAb 의 생산을 위해, 각각, 인간 IgG4 중쇄 및 카파 경쇄의 불변부에 융합된 마우스 가변부 (VH 및 VL) 을 함유하는 발현 벡터, 또는 인간화된 mAb 에 대한 발현 벡터를 293E 세포로 일시적으로 트랜스펙션하고 mAb 를 단백질 A 친화성 크로마토그래피를 사용하여 정제하였다.
실시예 3: 정제된 항체의 FACS 결합 분석
전장 인간 LAG-3 으로 안정적으로 트랜스펙션된 CHO-S 세포를 96-웰 플레이트로 옮겼다. 대략 200,000 개의 세포를 정제된 키메라성 항-LAG-3 mAb (각각, 인간 IgG1 중쇄 및 카파 경쇄의 불변부에 융합된 마우스 mAb 의 가변부) 또는 하이브리도마 상청액으로부터의 정제된 마우스 항-LAG-3 mAb 와 함께 4℃ 에서 15 분 동안 다양한 농도로 인큐베이션하였다. 이후, 세포를 1,000 rpm 에서 5 분 동안 원심분리하고, FACS 완충제 (5% BSA 가 보충된 PBS) 로 3 회 세척하였다. 키메라 항체로 처리된 세포의 경우, 세포를 이어서 PE-접합된 염소 항-인간 IgG 폴리클론 항체와 함께 인큐베이션하고 또다시 15 분 동안 얼음에서 인큐베이션하였고; 마우스 mAb 로 처리된 세포의 경우, 세포를 PE-접합된 염소 항-마우스 IgG 폴리클론 항체와 함께 인큐베이션하고 또다시 15 분 동안 얼음에서 인큐베이션하였다. 이어서, 세포를 FACS 완충액으로 3 회 세척한 다음, 생/사멸 세포 게이팅을 위해 0.1 ㎍/ml PI (프로피디움 요오다이드) 를 함유하는 FACS 완충액에 재현탁시켰다. 이후, 세포를 FACS Caliber 기기를 통해 실행시키고 데이터를 Flowjo 소프트웨어에 의해 분석하였다. 마우스 항-LAG-3 mAb (B1, B2, B3, B4, B5, B6, B7, B8, B9, B10, B11, B12, 및 B13) 의 FACS 결합 분석 결과는 도 1A-1B 에 제공된다. 마우스 항-LAG-3 mAb (BG27, BG29, 및 BG33) 의 FACS 결합 분석 결과는 도 2 에 제공된다. 키메라 항-LAG-3 mAb 의 FACS 결합 분석 결과는 도 3A-3B 에 제공된다.
실시예 4: Biacore 를 사용한 항-LAG-3 mAb 의 친화성 분석
항-마우스 IgG 항체를 CM5 칩 표면 상의 아민 커플링을 통해 고정시켰다. 하이브리도마 상청액 중의 항-LAG-3 mAb 를 칩 표면에 포획하고 일련의 농도 (50-400 nM) 의 인간 LAG-3(ECD)-huFc 단백질을 주입하고 포획된 표면을 통과시켰다. 항체-항원 결합에 대한 온 및 오프 속도를 측정하고, 곡선에 맞추고 계산하였다. 선택 항-LAG-3 mAb 의 KD 값을 표 5 에 제시한다.
표 5: Biacore 분석으로부터의 항-LAG-3 mAb 에 대한 KD 값
Figure pct00005
실시예 5: LAG-3/MHC 클래스 II 결합에 대한 항-LAG-3 mAb 의 차단 효과를 평가하기 위한 세포-기반 어세이
인간 Daudi 세포를 RPMI+10% FBS 에서 배양하였다. 1 ㎍/ml 최종 농도에서 인간 LAG-3(ECD)-mFc 단백질 (마우스 Fc 에 융합된 인간 LAG-3 ECD) 을 15 분 동안 4℃ 에서 다양한 농도로 정제된 마우스, 인간화된 또는 키메라 항-LAG-3 mAb 와 함께 인큐베이션하였다. 이어서, 혼합물을 96-웰 둥근 바닥 플레이트 중의 100,000 개의 인간 Daudi 세포에 첨가하고, 혼합하고 얼음에서 15 분 동안 인큐베이션하였다. 이후, 세포를 1,000 rpm 에서 5 분 동안 원심분리하고, FACS 완충제 (5% BSA 가 보충된 PBS) 로 3 회 세척하였다. 이어서, 세포를 얼음 상에서 PE-접합된 염소 항-마우스 Fc 폴리클론 항체와 함께 15 분 동안 인큐베이션하고, FACS 완충제로 3 회 세척한 다음, 생/사멸 세포 게이팅을 위해 0.1 ㎍/ml PI (프로피딘 요오드) 를 함유하는 FACS 완충액에 재현탁시켰다. 이후, 세포를 FACS Caliber 기기를 통해 실행시키고 데이터를 Flowjo 소프트웨어에 의해 분석하였다. 키메라 mAb B2C, B7C 및 B10C 에 의한 Daudi 세포에 대한 LAG-3 의 결합 억제 결과는 도 4A 에 제시되어 있다. 키메라 mAb B1C, B3C, B4C, B5C, B9C, 및 B11C 에 의한 Daudi 세포에 대한 LAG-3 의 결합 억제 결과는 도 4B 에 제시되어 있다. 마우스 mAb B6, B12 및 B15 에 의한 Daudi 세포에 대한 LAG-3 의 결합 억제 결과는 도 4C 에 제시되어 있다. 마우스 BG29 에 의한 Daudi 세포에 대한 LAG-3 의 결합 억제 결과는 도 4D 에 제시되어 있다.
실시예 6: 항-LAG-3 mAb 에 대한 에피토프 맵핑
항-LAG-3 mAb 에 의한 인간 LAG-3 (hLAG3) 내의 결합 부위를 ELISA-기반 펩티드 경쟁 어세이를 사용하여 맵핑하였다. LAG-3 의 세포외 도메인 (ECD) 은 4 개의 면역글로불린 (Ig)-유사 도메인 (D1-D4) 으로 구성된다 (Huard et al., Proc Natl Acad Sci USA. 94:5744-9 (1997)). 제 1 Ig-유사 도메인 (D1) 은 다음 30 개 아미노산 서열을 함유하는 노출된 여분의 루프 영역을 함유한다: GPPAAAPGHPLAPGPHPAAPSSWGPRPRRY (표 6 의 펩티드 1-30; SEQ ID NO: 153). 항-LAG-3 mAb 를 조사하여 각 mAb 가 이 영역 및/또는 인접 서열에 결합할 수 있는 지를 결정하였다. 또한, 각 mAb 에 의한 결합을 위한 에피토프를 맵핑하였다. 이 영역의 서열에 기초한 경쟁 펩티드를 에피토프 맵핑을 위해 설계하였다 (표 6, 7, 8, 9 및 10). 또한, 이 영역의 바로 업스트림에 있는 아미노산 서열도 펩티드 설계에 포함시켰다 (표 6).
표 6: B5 및 B6 과의 경쟁 어세이에 사용되는 펩티드
Figure pct00006
표 7: B7 과의 경쟁 어세이에 사용되는 펩티드
Figure pct00007
표 8: B12 과의 경쟁 어세이에 사용되는 펩티드
Figure pct00008
표 9: BG29 와의 경쟁 어세이에 사용되는 펩티드
Figure pct00009
표 10: B3 및 B4 과의 경쟁 어세이에 사용되는 펩티드
Figure pct00010
카보네이트 코팅 완충액 중의 항-인간 IgG 를 4℃ 에서 (50 ㎕/웰, 1 ㎍/mL) 밤새 ELISA 플레이트에 코팅하였다. 별도의 플레이트의 각 웰에서, 주어진 항-LAG-3 mAb 의 키메라 버전 (50 ㎕/웰, 1.4 nM) 및 경쟁 펩티드 (50 ㎕/웰, 도면에 나타낸 바와 같은 다양한 농도) 을 혼합하고 30 분 동안 실온에서 인큐베이션하였다. 이어서 마우스 Fc 에 융합된 인간 LAG-3 세포외 도메인 (ECD) (hLAG3-mFc) 을 각 웰에 첨가하고 (50 ㎕/웰, 2 nM), 최종 혼합물을 60 분 동안 실온에서 인큐베이션한 후 ELISA 플레이트 (50 ㎕/웰) 에 또다시 60 분 인큐베이션 동안 첨가하였다. 혼합물을 ELISA 플레이트에 첨가한 후 최종 인큐베이션은 또한 일부 어세이에서 4℃ 에서 밤새 수행하였다. 플레이트를 세척하고, 고정화된 항-LAG-3 mAb 에 대한 hLAG3-mFc 의 결합을, 호스래디쉬 퍼옥시다아제에 접합된 항-마우스 IgG (hIgG-HRP) (ThermoFisher Scientific, Cat#: A16084; Waltham, MA) 를 첨가하고 60 분 동안 인큐베이션함으로써 검출하였다. 이후 세척 후, ELISA 를 One-step Detection Solution (ThermoFisher Scientific, Cat #: 34028) 을 사용하여 현상하고, 450 nm 에서의 흡광도로서 측정하였다. 억제 신호는 용액 중의 mAb 에 결합하고 용액 중의 mAb 에 대한 hLAG3-mFc 의 결합을 억제하는 경쟁 펩티드의 능력을 반영한다.
경쟁 펩티드에 의한 B5 에 대한 hLAG3-mFc 결합의 억제는 도 5A 및 5B 에 도시되어 있다; 경쟁 펩티드에 의한 B6 에 대한 hLAG3-mFc 결합의 억제는 도 5C 및 5D 에 도시되어 있다; 경쟁 펩티드에 의한 B7 에 대한 hLAG3-mFc 결합의 억제는 도 6 에 도시되어 있다; 경쟁 펩티드에 의한 B12 에 대한 hLAG3-mFc 결합의 억제는 도 7 에 도시되어 있다; 경쟁 펩티드에 의한 BG29 에 대한 hLAG3-mFc 결합의 억제는 도 8 에 도시되어 있다; 경쟁 펩티드에 의한 B3 및 B4 에 대한 hLAG3-mFc 결합의 억제는 도 9A 및 9B 에 도시되어 있다.
도 5 의 펩티드 경쟁 어세이에 기초하여, B5 가 서열 SGPPAAAPGHPLA (SEQ ID:192) 에 결합하고, 따라서 이 서열은 B5 의 에피토프인 것으로 결정되었다. 도 5C 및 5D 의 데이터에 기초하여, SGPPAAAPGHPLA (SEQ ID NO:192) 는 또한 B6 의 에피토프인 것으로 결정되었다. 도 6 의 맵핑 데이터는 B7 에 대한 에피토프가 PAAPSSWGPRP (SEQ ID:193) 임을 나타냈다. 도 7 의 맵핑 데이터는 B12 에 대한 에피토프가 GPPAAAPGHPLA (SEQ ID:158) 임을 나타냈다. 도 8 의 맵핑 데이터는 BG29 에 대한 에피토프가 AAAPGHPLAPG (SEQ ID NO:180) 임을 나타냈다. 도 9A 및 9B 의 맵핑 데이터는 B3 및 B4 에 대한 에피토프가 APGPHPAAPSSW (SEQ ID NO:194) 임을 나타냈다.
실시예 7: 항-LAG-3 mAb 의 인간화
마우스 항-hLAG-3 mAb B5 및 B7 를 인간화하여, 인간 환자에서 사용시 면역원성의 가능성을 감소시켰다. 마우스 mAb 의 중쇄 및 경쇄 둘 모두에서의 CDR 을, 항원 결합에 필요한 적절한 구조를 유지할 가능성이 가장 높은 인간 골격에 그래프팅하였다. 필요시, 인간 잔기로부터 마우스 잔기로의 역돌연변이 (Backmutation) 를 설계하였다. 인간화 VH 및 VL 부위의 서열을 각각 표 11 및 표 12 에 나타낸다. 인간화 VH 및 VL 부위는 각각 인간 IgG4 중쇄 및 카파 경쇄의 불변부에 융합되어, 인간화 mAb 를 생성하였다. mAb 서열에 상응하는 구축물을 293E 세포에서 일시적 트랜스펙션에 사용하였다. 정제된 mAb 를 Daudi 세포 상의 MHC 클래스 II 분자에 대한 hLAG-3 결합을 억제하는 능력에 대해 분석하였다. 인간화된 mAb 에 대한 IC50 값은 표 13 에 제시되어 있으며; 여러 대표적인 IC50 곡선은 도 10A, 10B, 및 10C 에 제시되어 있다.
표 11: 인간화된 B5 및 B7 의 중쇄 가변부의 서열
Figure pct00011
VH: 중쇄 가변부
표 12: 인간화된 B5 및 B7 의 경쇄 가변부의 서열
Figure pct00012
표 13: LAG-3/Daudi 세포 결합 어세이에서 항-LAG-3 mAb 에 대한 IC50 값
Figure pct00013
B5 (HIL4) 는 B5/H1 중쇄 및 B5/L4 경쇄를 갖는 mAb 를 지칭하고; 표의 다른 모든 인간화된 mAb 는 동일한 명명 규칙을 채택한다.
당업계의 숙련자는 본 발명의 광범위한 개념을 벗어나지 않고 상기 기재한 구현예를 변경할 수 있다는 것을 이해할 것이다. 따라서, 본 발명이 개시된 특정 구현예에 제한되는 것이 아니라, 상세한 설명에 의해 정의되는 바와 같이 본 발명의 취지 및 범주 내의 변형을 포함하는 것으로 의도된다는 것이 이해된다.
<110> Phanes Therapeutics, Inc. <120> ANTI-LAG-3 ANTIBODIES AND USES THEREOF <130> 689204-4WO <150> US 62/551,927 <151> 2017-08-30 <150> US 62/588,475 <151> 2017-11-20 <150> US 62/626,310 <151> 2018-02-05 <160> 210 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 120 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> B1 Heavy Chain Variable Region <400> 1 Asp Val Gln Leu Gln Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Lys Pro Ser Gln 1 5 10 15 Ser Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Thr Gly Tyr Ser Ile Thr Ser Asp 20 25 30 Tyr Ala Trp Asn Trp Ile Arg Gln Phe Pro Gly Asn Lys Leu Glu Trp 35 40 45 Met Gly Tyr Ile Asp Tyr Ser Gly Ile Thr Ser Tyr Asn Pro Ser Leu 50 55 60 Lys Ser Arg Ile Ser Ile Thr Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Phe Phe 65 70 75 80 Leu Gln Leu Asn Ser Val Thr Thr Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Arg Glu Asp His Tyr Asp Leu Ala Trp Phe Ala Tyr Trp Gly Gln 100 105 110 Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala 115 120 <210> 2 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> B1 Light Chain Variable 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Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Asp Ile Ser Asp Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Leu Gln Gln Lys Pro Gly Gly Ala Pro Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ser Ser Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 206 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> B5/L2 VL <400> 206 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Asp Ile Ser Asp Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Leu Gln Gln Lys Pro Gly Gly Ala Ile Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ser Ser Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 207 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> B5/L3 VL <400> 207 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Asp Ile Ser Asp Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Leu Gln Gln Lys Pro Gly Gly Ala Ile Lys Ser Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ser Ser Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 208 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> B5/L4 VL <400> 208 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ser Ser Gln Asp Ile Ser Asp Tyr 20 25 30 Leu Ser Trp Leu Gln Gln Lys Pro Gly Gly Ala Ile Lys Arg Leu Ile 35 40 45 Tyr Ser Thr Ser Thr Leu Asp Ser Gly Val Pro Lys Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Arg Ser Gly Ser Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Ser Ser Pro Pro 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 209 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> B7/L5 VL <400> 209 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser His Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile 35 40 45 Tyr Glu Thr Ser Thr Leu Asp Phe Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Thr Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105 <210> 210 <211> 107 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> B7/L8 VL <400> 210 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val Gly 1 5 10 15 Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Asp Ile Ser His Tyr 20 25 30 Leu Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Arg Leu Ile 35 40 45 Tyr Glu Thr Ser Thr Leu Asp Phe Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly 50 55 60 Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Phe Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro 65 70 75 80 Glu Asp Ile Ala Thr Tyr Tyr Cys Leu Gln Tyr Ala Thr Tyr Pro Leu 85 90 95 Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys 100 105

Claims (31)

  1. 하기의 폴리펩티드 서열을 갖는, 중쇄 상보성 결정 부위 1 (HCDR1), HCDR2, HCDR3, 경쇄 상보성 결정 부위 1 (LCDR1), LCDR2 및 LCDR3 을 포함하는 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편:
    a. SEQ ID NO:35, 36, 37, 86, 87, 및 88, 각각;
    b. SEQ ID NO:38, 39, 40, 89, 90, 및 91, 각각;
    c. SEQ ID NO:41, 42, 137, 138, 93, 및 94, 각각;
    d. SEQ ID NO:139, 140, 141, 142, 99, 및 143, 각각;
    e. SEQ ID NO:144, 145, 146, 147, 148, 및 149, 각각;
    f. SEQ ID NO:65, 66, 67, 116, 117, 및 118, 각각;
    g. SEQ ID NO:68, 69, 70, 119, 120, 및 121, 각각;
    h. SEQ ID NO:71, 72, 73, 122, 123, 및 124, 각각;
    i. SEQ ID NO:74, 75, 76, 125, 126, 및 127, 각각;
    j. SEQ ID NO:77, 78, 79, 128, 129, 및 130, 각각; 또는
    k. SEQ ID NO:80, 150, 151, 131, 132, 및 133, 각각;
    항체 또는 이의 항원-결합 단편은 LAG-3, 바람직하게는 인간 LAG-3 에 특이적으로 결합한다.
  2. 제 1 항에 있어서, SEQ ID NO:1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15, 17, 19, 21, 23, 25, 27, 29, 31, 또는 33 과 적어도 95% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 또는 SEQ ID NO:2, 4, 6, 8, 10, 12, 14, 16, 18, 20, 22, 24, 26, 28, 30, 32, 또는 34 와 적어도 95% 동일한 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부를 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, 하기를 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편:
    a. SEQ ID NO:1 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:2 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
    b. SEQ ID NO:3 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:4 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
    c. SEQ ID NO:5 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:6 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
    d. SEQ ID NO:7 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:8 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
    e. SEQ ID NO:9 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:10 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
    f. SEQ ID NO:11 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:12 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
    g. SEQ ID NO:13 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:14 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
    h. SEQ ID NO:15 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:16 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
    i. SEQ ID NO:17 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:18 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
    j. SEQ ID NO:19 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:20 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
    k. SEQ ID NO:21 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:22 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
    l. SEQ ID NO:23 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:24 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
    m. SEQ ID NO:25 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:26 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
    n. SEQ ID NO:27 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:28 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
    o. SEQ ID NO:29 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:30 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
    p. SEQ ID NO:31 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:32 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부; 또는
    q. SEQ ID NO:33 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:34 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부.
  4. SEQ ID NO:192 의 아미노산 서열을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 LAG-3 에 대한 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  5. SEQ ID NO:193 의 아미노산 서열을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 LAG-3 에 대한 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  6. SEQ ID NO:158 의 아미노산 서열을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 LAG-3 에 대한 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  7. SEQ ID NO:180 의 아미노산 서열을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 LAG-3 에 대한 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  8. SEQ ID NO:194 의 아미노산 서열을 포함하는 에피토프에 특이적으로 결합하는 LAG-3 에 대한 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  9. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 LAG-3 활성을 억제하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  10. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 LAG-3 의 MHC 클래스 II 분자에 대한 결합을 차단할 수 있는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  11. 제 1 항 내지 제 8 항 중 어느 한 항에 있어서, 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 LAG-3 의 LSECtin 에 대한 결합을 차단할 수 있는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  12. 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 키메라인, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  13. 제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 인간 또는 인간화되는 것인, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편.
  14. 제 13 항에 있어서, 항체 또는 이의 항원-결합 단편이 하기를 포함하는, 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편:
    (a) SEQ ID NO:195 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:208 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부
    (b) SEQ ID NO:196 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:206 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
    (c) SEQ ID NO:197 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:205 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
    (d) SEQ ID NO:197 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:206 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
    (e) SEQ ID NO:197 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:207 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
    (f) SEQ ID NO:198 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:205 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
    (g) SEQ ID NO:199 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:209 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
    (h) SEQ ID NO:200 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:209 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
    (i) SEQ ID NO:201 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:209 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
    (j) SEQ ID NO:202 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:209 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
    (k) SEQ ID NO:203 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:209 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
    (l) SEQ ID NO:204 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:209 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
    (m) SEQ ID NO:199 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:210 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
    (n) SEQ ID NO:200 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:210 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
    (o) SEQ ID NO:201 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:210 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
    (p) SEQ ID NO:202 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:210 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부;
    (q) SEQ ID NO:203 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:210 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부; 또는
    (r) SEQ ID NO:204 의 폴리펩티드 서열을 갖는 중쇄 가변부, 및 SEQ ID NO:210 의 폴리펩티드 서열을 갖는 경쇄 가변부.
  15. 제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 인코딩하는 단리된 핵산.
  16. 제 15 항의 단리된 핵산을 포함하는 벡터.
  17. 제 16 항의 벡터를 포함하는 숙주 세포.
  18. 제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편, 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 약학 조성물.
  19. 제 18 항의 약학 조성물을 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상에서의 LAG-3 의 MHC 클래스 II 분자에 대한 결합을 차단하는 방법.
  20. 제 18 항의 약학 조성물을 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상에서의 LAG-3 의 LSECtin 에 대한 결합을 차단하는 방법.
  21. 제 18 항의 약학 조성물을 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상에서의 암을 치료하는 방법.
  22. 제 18 항의 약학 조성물을 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상에서의 감염성 질환을 치료하는 방법.
  23. 제 18 항의 약학 조성물을 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상에서의 염증성 질환을 치료하는 방법.
  24. 제 18 항의 약학 조성물을 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상에서의 자가면역 질환을 치료하는 방법.
  25. 제 18 항의 약학 조성물을 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 이를 필요로 하는 대상에서의 제 1 형 당뇨병을 치료하는 방법.
  26. 단일클론 항체 또는 항원-결합 단편을 생산하기 위한 조건 하에 단일클론 항체 또는 항원-결합 단편을 인코딩하는 핵산을 포함하는 세포를 배양하고, 세포 또는 배양물로부터 항체 또는 항원-결합 단편을 회수하는 것을 포함하는, 제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항의 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편을 생산하는 방법.
  27. 단일클론 항체 또는 항원-결합 단편과 약학적으로 허용가능한 담체를 조합하여 약학 조성물을 수득하는 것을 포함하는, 제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항의 단일클론 항체 또는 항원-결합 단편을 포함하는 약학 조성물을 생산하는 방법.
  28. 하기 단계를 포함하는, 대상체에서 LAG-3 의 수준을 검출하는 방법:
    a. 대상체로부터 샘플을 수득하는 단계;
    b. 샘플을 제 1 항 내지 제 14 항 중 어느 한 항의 단리된 단일클론 항체 또는 이의 항원-결합 단편과 접촉시키는 단계; 및
    c. 대상체에서 LAG-3 의 수준을 결정하는 단계.
  29. 제 28 항에 있어서, 샘플이 조직 샘플인 방법.
  30. 제 29 항에 있어서, 조직 샘플이 암 조직 샘플인 방법.
  31. 제 28 항에 있어서, 샘플이 혈액 샘플인 방법.
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