KR20200022920A - 천연 리포좀, 그 제조방법 및 이를 포함하는 식품 조성물 - Google Patents

천연 리포좀, 그 제조방법 및 이를 포함하는 식품 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 1종 이상의 천연 유화제, 천연 유래 용매, 천연 코팅제, 천연 방부제를 함유하는 리포좀 구성 물질로서, 스핑고지질, 스테롤, 당단백질로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 1종 이상을 추가로 함유하는 리포좀 구성 물질; 및 포집 물질로서 가바, 총명탕, 또는 이들의 혼합물을 포함하며, 상기 천연 유화제, 상기 천연 유래 용매 및 상기 가바, 총명탕, 또는 이들의 혼합물을 초음파 처리하여 혼합함으로써 형성되는 천연 리포좀에 관한 것이다.
또한, 본 발명은 상기 천연 리포좀의 제조방법 및 이를 포함하는 식품 조성물에 관한 것이다.

Description

천연 리포좀, 그 제조방법 및 이를 포함하는 식품 조성물{NATURAL LIPOSOME COMPRISING RED YEAST RICE, PROCESS FOR THE PREPARATION THEREOF, AND FOOD COMPOSITION COMPRISING THE SAME}
본 발명은 천연 리포좀, 그 제조방법 및 이를 포함하는 식품 조성물에 관한 것이다.
가바(red yeast rice: gamma-aminobutyric acid)는 쌀을 쪄서 가바균(Monascus sp.)을 접종한 후 발효시킨 것으로, 발효 과정에서 생성된 유익한 여러 대사산물을 포함한다. 가바에 함유된 성분 중 모나콜린 K(monacolin K)는 간에서 콜레스테롤이 생합성 되는 것을 억제하고, 저밀도(LDL) 콜레스테롤 수치를 낮추면서 고밀도(HDL) 콜레스테롤 수치를 높이는 작용을 하는 것으로 알려져 있다. 또한, 가바는 감마 아미노산(gamma aminobutyric acid)을 함유하고 있어, 혈관에 콜레스테롤과 중성지방이 축적되는 것을 억제하여 혈액이 원활하게 흐를 수 있게 도와주면서 혈압을 저하시키는 효과가 있다.
이와 같이 가바의 여러가지 효능을 활용하고자 가바를 이용한 식품, 건강보조식품, 의약품 등이 활발히 개발되고 있다. 한국공개특허 제2014-0037294호에는 감에 가바균을 접종하여 발효시킨 감칩이 개시되어 있고, 한국공개특허 제2013-0029890호에는 가바균에서 추출된 모나신(monascin)을 함유하는 조성물 및 그의 제조방법이 개시되어 있다.
또한 총명탕은 뇌 기능 향상과 관련된 한방 소재로 알려져 있다. 총명탕은 복신, 원지, 석창포를 주성분으로 하는 한약 재료이다.
그러나 가바 또는 총명탕을 함유하는 제품을 섭취할 경우 가바나 총명탕에 의한 효과를 기대할 수 있으나, 개인마다 체내 흡수율이 달라 효과 또한 상이하게 나타날 수 있다. 이에 따라, 가바 함유 제품이나 총명탕 함유 제품을 섭취할 때 우수한 효과를 발휘할 수 있도록 가바, 총명탕의 체내 흡수를 높이는 기술 개발이 요구되고 있다.
한국공개특허 제2014-0037294호 한국공개특허 제2013-0029890호
본 발명은 인체에 무해하면서 생체에 용이하게 투입될 수 있으며 우수한 기억력 증진 및 학습 개선 효과를 나타내는 천연 리포좀, 그 제조방법 및 이를 포함하는 식품 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.
본 발명의 일 예는 1종 이상의 천연 유화제, 천연 유래 용매, 천연 코팅제, 천연 방부제를 함유하는 리포좀 구성 물질로서, 스핑고지질, 스테롤, 당단백질로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 1종 이상을 추가로 함유하는 리포좀 구성 물질; 및 포집 물질로서 가바, 총명탕, 또는 이들의 혼합물을 포함하며, 상기 천연 유화제, 상기 천연 유래 용매 및 상기 가바, 총명탕, 또는 이들의 혼합물을 초음파 처리하여 혼합함으로써 형성되는 천연 리포좀을 제공한다.
본 발명의 다른 일 예는 (a) 천연 유래 용매를 35 내지 80 ℃에서 1종 이상의 천연 유화제와 혼합하고 초음파 처리하는 제1단계; (b) 상기 제1단계의 혼합물에 스핑고지질, 스테롤, 당단백질로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 1종 이상을 혼합하고 초음파 처리하는 제2단계; (c) 상기 제2단계의 혼합물에 가바, 총명탕, 또는 이들의 혼합물을 첨가하고 초음파 처리하여 혼합하는 제3단계; (d) 상기 제3단계의 혼합물을 35 내지 80 ℃에서 천연 코팅제와 혼합하고 초음파 처리하는 제4단계; 및 (e) 상기 제4단계의 혼합물에 천연 유래 용매와 천연 방부제를 첨가하고 초음파 처리하는 제5단계를 포함하는 상기 천연 리포좀의 제조방법을 제공한다.
본 발명의 또 다른 일 예는 상기 천연 리포좀을 포함하는 식품 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 천연 리포좀은 포집 물질인 가바 추출물 또는 총명탕의 체내 흡수율을 증가시켜 가바, 총명탕에 의한 기억력 향상, 건망증 개선, 뇌의 대사 촉진, 신경 억제, 피로 회복 등의 효과를 제공할 수 있다.
도 1은 실시예 1과 비교예 1, 대조군의 흡수율을 비교한 그래프이다.
도 2a, 도 2b는 각각 실시예 2와 비교예 2, 대조군의 흡수율을 비교한 그래프이다.
도 3a, 도 3b는 각각 실시예 3과 대조군의 흡수율을 비교한 그래프이다.
도 4a, 도 4b는 각각 실시예 4와 대조군의 흡수율을 비교한 그래프이다.
도 5는 실험예 3-1에 따른 농도별 흡광도 측정 결과 그래프이다.
도 6은 각 샘플에 따른 세포보호효과 측정 결과 그래프이다.
도 7, 8은 각 샘플에 따른 western blot method에 의한 신경세포의 가바 수용체, 세로토닌 수용체 활성 확인 결과를 나타낸다.
도 9는 각 샘플에 따른 세포보호효과 측정 결과 그래프이다.
이하, 첨부된 도면을 참조하여 본 발명에 따른 천연 리포좀, 그의 제조방법 및 이를 포함하는 식품 조성물을 보다 상세하게 설명한다. 그러나, 이러한 설명은 본 발명의 이해를 돕기 위하여 예시적으로 제시된 것일 뿐, 본 발명의 범위가 이러한 예시적인 설명에 의하여 제한되는 것은 아니다.
<천연 리포좀>
본 발명의 일 예에 따른 리포좀은 1종 이상의 천연 유화제, 천연 유래 용매, 천연 코팅제, 천연 방부제를 함유하는 리포좀 구성 물질로서, 스핑고지질, 스테롤, 당단백질로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 1종 이상을 추가로 함유하는 리포좀 구성 물질; 및 포집 물질로서 가바, 총명탕, 또는 이들의 혼합물을 포함하며, 상기 천연 유화제, 상기 천연 유래 용매 및 상기 가바, 총명탕, 또는 이들의 혼합물을 초음파 처리하여 혼합함으로써 형성되는 천연 리포좀을 제공한다. 상기 천연 리포좀은 합성 성분을 포함하고 있지 않다는 점에서 종래의 합성 리포좀과 구별된다.
본 발명에서 '천연 리포좀'은 포집물질을 제외한 모든 성분이 천연 성분으로만 이루어진 리포좀을 의미한다. 천연 리포좀에 포함되는 포집물질의 경우 합성성분으로 이루어질 수도 있으나, 포집물질의 경우에도 천연성분으로 이루어지는 것이 바람직하다.
1. 리포좀 구성 물질
본 발명의 리포좀은 천연 유화제, 천연 유래 용매, 천연 코팅제 및 천연 방부제를 포함하는 천연 리포좀이다. 이러한 천연 물질로 이루어진 천연 리포좀은 인체에 독성이 없어 무해하며, 섭취 가능하다. 또한, 상기 리포좀은 안정한 인지질 이중층을 형성함으로써, 세포에 포집 물질을 효과적으로 전달할 수 있다.
[천연 유화제]
천연 유화제는 천연 물질에서 유래된 유화제로서 지질 이중층을 구성하는 물질이다. 상기 천연 유화제는 인지질과 지방산을 포함한다. 천연 유화제에 포함된 인지질은 천연에서 유래한 인지질이며, 지방산 또한 천연에서 유래한 천연 지방산이다.
인지질은 난황, 대두 등에 많이 함유되어 있어, 이들로부터 추출 및 분리 정제하여 얻을 수 있다. 상기 인지질로는 포스파티딜 콜린(phosphatidyl choline, 레시틴), 리소포스파티딜 콜린(lysophosphatidyl choline), 포스파티딜 에탄올아민(phosphatidyl ethanolamine), 포스파티딘산(phosphatidic acid), 포스파티딜 세린(phosphatidyl serine), 포스파티딜 글리세롤(phosphatidyl glycerol), 포스파티딜 이노시톨(phosphatidyl inositol) 및 이들의 수소첨가 생성물(예를 들면, 하이드로지네이티드 포스파티딜콜린(hydrogenated phosphatidyl choline - 콩 유래)로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 천연 인지질이 사용될 수 있다. 바람직하게는 산화안정성이 우수한 포스타티딜 콜린, 리소포스파티딜 콜린 또는 하이드로지네이티드 포스파티딜콜린이 사용될 수 있다.
상기 지방산은 호두, 피칸, 아몬드, 잣 등 견과류나 올리브, 옥수수, 아마, 목화, 유채꽃, 달맞이꽃 등의 종자에 많이 함유되어 있어, 이들로부터 추출 및 분리 정제하여 얻을 수 있다. 상기 지방산으로는 팔미트산(palmitic acid), 스테아르산(stearic acid), 올레산(oleic acid), 리놀레산(linoleic acid) 및 리놀렌산(linolenic acid)으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 지방산이 사용될 수 있다.
상기 천연 유화제는 천연 인지질과 천연 지방산의 합계 함량 100 중량%를 기준으로 천연 인지질 70 내지 90 중량% 및 천연 지방산 10 내지 30 중량%를 포함할 수 있다. 상기 천연 유화제는 기타 용매를 잔량 포함할 수 있다. 용매로는 천연 유래 용매를 사용하는 것이 바람직하고, 증류수를 사용하는 것이 더 바람직하다.
상기 천연 유화제는 2종 이상을 혼합하여 사용할 수 있다. 일례로는 2종의 천연 유화제를 혼합하여 사용할 경우, 예를 들면, 제1 천연 유화제로는 포스파티딜 콜린(phosphatidyl choline), 리소포스파티딜 콜린(lysophosphatidyl choline), 포스파티딜 에탄올아민(phosphatidyl ethanolamine), 팔미트산(palmitic acid), 스테아르산(stearic acid), 올레산(oleic acid), 리놀레산(linoleic acid), 리놀렌산(linolenic acid - 콩유래)이 사용될 수 있고, 제2 천연 유화제로는 하이드로지네이티드 포스파티딜 콜린(hydrogenated phosphatidyl choline)이 사용될 수 있다. 또한, 3종의 천연 유화제를 혼합하여 사용할 경우, 예를 들면, 상기 제1 천연 유화제, 상기 제2 천연 유화제 외에, 제3 천연 유화제로서 세테아릴 올리베이트(cetearyl olivate) 및 소르비탄 올리베이트(sorbitan olivate)가 사용될 수 있다.
또한, 상기 천연 유화제는 천연 지방산을 더 포함할 수 있다. 상기 천연 지방산으로는 달맞이꽃 오일을 사용할 수 있다. 상기 천연 지방산의 함량은 전체 천연 유화제의 중량을 기준으로 0.1 내지 5 중량%일 수 있다.
천연 유화제의 함량은 전체 천연 리포좀의 중량을 기준으로 0.1 내지 10 중량%인 것이 바람직하다.
[천연 유래 용매]
천연 유래 용매는 상기 천연 유화제의 지질 이중층이 포집 물질을 둘러싼 캡슐 형태가 되도록 한다.
상기 용매로는 천연 유래 용매, 예를 들면, 증류수, 천연 유래의 글리세린, 천연 에탄올, 천연 프로판디올, 천연 글리세린 및 발효주정으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상이 사용될 수 있다. 바람직하게는 증류수, 천연 유래의 글리세린, 천연 에탄올이 사용될 수 있고, 더 바람직하게는 증류수가 사용될 수 있다.
이러한 용매의 함량은 전체 천연 리포좀의 중량을 기준으로 천연 유화제, 천연 코팅제, 천연 방부제, 포집 물질, 스핑고지질, 스테롤, 당단백질을 제외한 잔량인 것이 바람직하다.
[천연 방부제]
천연 방부제는 리포좀 구성 물질(천연 유화제, 천연 유래 용매, 천연 코팅제)과 리포좀 내에 존재하는 포집 물질의 부패를 방지하여 최종 천연 리포좀의 안정을 유지하는 물질이다.
상기 천연 방부제로는 식품 또는 의약품에 첨가할 수 있는 천연 방부제라면 제한 없이 사용될 수 있다. 예를 들면 천연 추출물이 사용될 수 있다. 감귤 추출물, 유자 추출물, 유칼립투스 추출물, 고삼 추출물, 정향 추출물 및 자몽 추출물로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상이 사용될 수 있다. 바람직하게는 감귤 추출물, 자몽 추출물이 사용될 수 있다. 상기 방부제는 천연 방부제라는 점에서 통상적으로 식품 보존료로 사용되는 데히드로초산(dehydroacetic acid), 소르빈산(sorbic acid), 안식향산(Benzoic acid), 파라옥시안식향산 메틸(methyl ρ-hydroxybenzoate), 프로피온산(propanoic acid) 및 이들의 염류 등의 화학 방부제와는 구별되며, 독성이 없어 인체에 무해하다.
이러한 천연 방부제의 함량은 천연 리포좀의 전체의 중량을 기준으로 0.001 내지 3 중량%인 것이 바람직하고, 0.01 내지 0.3 중량%인 것이 더 바람직하다.
[기타 리포좀 구성 물질]
상기 성분들 외에 포집 물질을 둘러싸는 리포좀 구성 물질로서 스핑고지질(spingolipid), 스테롤(sterols), 당단백질로 이루어지는 그룹으부터 선택되는 1 이상의 물질을 포함한다.
종래의 천연 리포좀은 포집물질을 피부와 유사한 물질인 천연 유화제, 즉, 인지질로 감싸고 있는 구조로 되어 있는 것과 달리 본 발명의 일 예에서는 천연 유화제 외에 생체막 구성성분과 유사한 물질인 스핑고지질, 스테롤, 당단백질로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 1 이상의 물질이 추가로 포집물질을 감싸는 구조로 되어 있다. 따라서 포집물질이 소장의 점막에 더 잘 흡수될 수 있다.
스핑고지질로는 예를 들면 스핑고미엘린을 들 수 있고, 스테롤로는 예를 들면, 식물성 스테롤인 피토스테롤, 캠퍼스테롤, 베가 퓨어를 들 수 있다.
스핑고미엘린(spingomyelin)은 스핑고지질의 일종으로, 스핑고신의 -OH부분에 포스포콜린(phosphocholine)이 붙어있는 모습을 갖는다. 스핑고미엘린은 포스파티딜콜린과 비슷한 구조를 가지고 있기 때문에 포스파티딜콜린과 함께 이중막을 형성할 수 있다. 스핑고미엘린은 세포막의 구성성분으로 플라즈마 막을 유지하는 기능에 중요하며 다양한 세포 대사를 조절할 수 있는 기능도 가지고 있다. 스핑고미엘린으로는 예를 들면 밀크 세라마이드를 들 수 있다.
사용되는 스핑고지질의 함량에는 특별한 제한이 없으나 흡수율을 고려할 때 천연리포좀의 총 중량을 기준으로 0.5~5 중량%가 바람직하며, 1~3 중량%가 더 바람직하다.
스테롤(sterol)은 동식물계에 널리 분포하는 스테로이드 골격을 갖는 알콜을 말한다. 스테린(sterin)이라고도 한다. 대표적인 동물 스테롤로 콜레스테롤, 코스프로스탄올을, 식물 스테롤로서 피토스테롤, 베가퓨어를, 균류 스테롤로서 에르고스테롤을 들 수 있다. 기타 주요한 천연 스테롤로 치모스테롤, 에피코프로스탄올, 24-데히드로콜레스테롤, 7-데히드로콜레스테롤, 세레브로스테롤, 아스코스테롤, 페코스테롤, 캠퍼스테롤 등이 있다. 스테롤은 기본적으로 4개의 고리를 가지며, 이소프렌 구조를 가진(isoprenoid-based) 탄화수소이다. 콜레스테롤은 -OH 기가 많기 때문에 양친매성이고, 인산 구조가 없기 때문에 인지질에 속하지 않는다. 콜레스테롤과 다른 스테롤들은 매우 소수성이기 때문에 그들만으로 세포막을 이루는 것은 불가능하고, 대신 인지질 막 사이에 들어가 인지질이 너무 뭉치는 것을 막아 그 유동성(fluidity)을 유지하고, 동시에 물리적 강도(rigidity)도 보강하는 역할을 한다. 콜레스테롤은 세포막에 쓰이기도 하지만 지방을 소화시킬 때 지방을 유화(emulsify)시킨다거나(쓸개즙에서) 스테로이드 호르몬, 피부나 신장에서 합성된 비타민 D에도 사용된다. 그 밖에도 콜레스테롤은 Hedgehog 단백질에 공유결합을 해서 배(embryonic)의 분화에 중요한 역할을 하는 신호 전달 분자로서 사용된다.
사용되는 스테롤의 함량에는 특별한 제한이 없으나 흡수율을 고려할 때 천연리포좀의 총 중량을 기준으로 0.01~2 중량%가 바람직하며, 0.05~1.5 중량%가 더 바람직하며, 0.08~0.8 중량%가 가장 바람직하다.
당단백질은 소장 점막의 투과를 도와주는 역할을 하며 예를 들면 캐롯 콜라겐을 들 수 있다. 당단백질을 포함함으로써 소장 점막 투과율을 높일 수 있다.
사용되는 당단백질의 함량에는 특별한 제한이 없으나 흡수율을 고려할 때 천연리포좀의 총 중량을 기준으로 2 중량% 이상이 바람직하며, 2.5 중량% 이상이 더 바람직하며, 5 중량% 이상이 가장 바람직하다.
유화제와 스핑고지질, 스테롤, 당단백질의 비율은 본 발명의 목적 범위 내에서 적절하게 조절될 수 있다. 바람직하게는 천연 리포좀 전체 중량을 기준으로 상기 스핑고지질, 스테롤, 당단백질은 합계 1.0~10 중량% 포함한다.
또한 3 성분을 모두 포함할 경우, 바람직하게는 스핑고지질: 스테롤: 당단백질의 비율은 중량을 기준으로 2: 0.1~0.5:1~5이고, 더 바람직하게는 2:0.2~0.4:2~4이다.
2. 포집 물질
본 발명에 따른 포집 물질은 상기 천연 유화제, 천연 유래 용매, 천연 코팅제 및 천연 방부제를 함유하는 리포좀의 지질 이중층 내부에 포집되는 물질이다. 상기 포집 물질로는 가바를 이용할 수 있다.
가바는 가바균에 의한 발효 과정 중 생성된 유익한 대사산물들을 포함하며, 특히 모나콜린 K에 의한 혈중 지질 조성 개선, 혈행 개선 등의 효과가 알려져 있다. 이러한 가바는 섭취가 용이하도록 분말 또는 액상 형태로 가공되며, 체내 흡수율을 높이기 위해 리포좀의 포집 물질로 이용된다. 바람직하게는 가바 분말을 포집 물질로 사용할 수 있다. 이때, 가바 추출물의 기능 성분이 파괴되는 것을 방지하면서 체내 흡수율을 높이기 위해, 초음파 처리하여 분자크기를 줄일 수 있다. 이러한 가바 추출물은 리포좀 구성 물질과 용이하게 혼합될 수 있도록 천연 물질에서 유래된 부틸렌글리콜, 프로판디올, 글리세린, 발효주정 등에 충분히 용해되어 사용될 수 있다.
가바는 혈압 강하에 도움을 주며 뇌 대사 항진과 치매 예방 효과가 있고 기억력 증진에 도움을 준다. 가바는 정신 안정 작용이 있어 불면증에 도움이 되며 자율신경 장해에 효과가 있다. 간 기능 활성 및 알코올 대사를 촉진시켜 숙취 제거에 효과가 있으며 신장, 간 기능 개선과 비만 예방 효과가 있다. 이와 같이 가바는 신경억제작용과 정신안정기능을 가지며 뇌의 대사촉진 작용 등의 효과를 가져 기능성 식품 소재로 주목받고 있다.
총명탕 또한 포집물질로 사용될 수 있다. 총명탕은 뇌 기능 향상과 관련된 한방 소재로 알려져 있다. 총명탕은 복신, 원지, 석창포를 주성분으로 하는 한약 재료이다.
총명탕은 백복신, 원지를 감초 물에 담근 다음 심은 제거한 후 생각즙에 법제하고 석창포를 썰어소 끓여 얻어진다. 또는 원지, 백복신, 천마, 감초, 대추, 통생강을 재료로 하여 여기에 물을 넣고 1단계 온도, 예를 들면, 섭씨 75도~85도에서 일정시간, 예를 들면 2시간~4시간 추출한 다음, 2단계 온도, 예를 들면, 섭씨 85도에서 95도에서 일정시간, 예를 들면 4시간~6시간 추출하고 필터하는 등의 방법으로 제조된다.
총명탕은 기억력 감퇴와 건망증 등의 병증을 치료하는데 활용된다. 총명탕은 뇌 세포 대사기능 촉진에 도움을 주고 또한 기억력을 회복시키며 신경전달물질을 분해하는 효소의 활성을 저해함으로써 장기 기억 활성을 촉진한다. 스트레스 축적을 억제하고 피로 회복에 효과적이다. 또한 총명탕은 뇌 혈류량을 증가시키며 뇌 신경 세포를 보호하는 효과가 있다.
이러한 가바 추출물, 총명탕, 또는 이들의 혼합물의 함량은 천연 리포좀의 전체 중량을 기준으로 0.1 내지 30 중량%인 것이 바람직하다.
3. 기타
기타 포집물질을 코팅하기 위한 성분으로 코팅제가 추가로 포함될 수 있다. 코팅제로는 천연 코팅제가 바람직하게 사용된다. 코팅제로는 식이섬유, 전분, 다당체 등이 사용될 수 있으며, 예를 들면, 말토덱스트린, 타피오카, 구아검, 옥수수 전분, 등이 사용될 수 있다. 포집물질이 잘 흡수되도록 안정성이 높다는 면에서 말토덱스트린을 사용하는 것이 바람직하다.
이와 같이, 본 발명의 천연 리포좀은 입자 크기가 작은 가바 추출물 또는 총명탕을 지질 이중층이 둘러싼 캡슐 형태로서, 가바 추출물 또는 총명탕을 세포내로 용이하게 전달할 수 있다. 상기 천연 리포좀이 세포에 전달될 경우에는 리포좀의 지질 이중층과 세포막이 용이하게 결합하면서 가바 추출물 또는 총명탕의 세포 흡수율이 높아지므로, 가바 또는 총명탕에 의한 기억력 향상, 건망증 개선, 뇌의 대사 촉진, 신경 억제, 피로 회복 등의 효과를 제공할 수 있다.
<천연 리포좀의 제조방법>
본 발명은 포집 물질과 리포좀 구성 물질이 균일하게 혼합되도록 초음파를 처리하여 천연 리포좀을 제조하는 방법을 제공한다. 그러나, 이러한 제조방법에 의해서만 한정되는 것은 아니며, 필요에 따라 각 공정의 단계가 변형되거나 또는 선택적으로 혼용되어 수행될 수 있다.
본 발명의 일 예에 따른 바람직한 천연 리포좀의 제조방법은 (a) 천연 유래 용매를 35 내지 80 ℃에서 1종 이상의 천연 유화제와 혼합하고 초음파 처리하는 제1단계; (b) 상기 제1단계의 혼합물에 스핑코미엘린, 스테롤, 당단백질을 혼합하고 초음파 처리하는 제2단계; (c) 상기 제2단계의 혼합물에 가바, 총명탕, 또는 이들의 혼합물을 첨가하고 초음파 처리하여 혼합하는 제3단계; (d) 상기 제3단계의 혼합물을 35 내지 80 ℃에서 천연 코팅제와 혼합하고 초음파 처리하는 제4단계; 및 (e) 상기 제4단계의 혼합물에 천연 유래 용매와 천연 방부제를 첨가하고 초음파 처리하는 제5단계를 포함할 수 있다. 상기 제5단계 이후, 온도를 서서히 낮추면서 반복적인 초음파 처리하는 제6단계를 더 포함할 수 있다.
이하, 상기 제조방법을 각 공정 단계별로 나누어 설명하면 다음과 같다.
(a) 제1단계
이 단계는 천연 유래 용매를 35 내지 80 ℃에서 1종 이상의 천연 유화제와 혼합하고 초음파 처리하는 단계이다.
상기 천연 유래 용매로는 증류수를 사용하거나 천연 물질에서 유래된 천연 에탄올, 천연 프로판디올, 천연 글리세린, 발효주정 등을 사용할 수 있다.
상기 천연 유화제로는 천연 물질에서 유래된 인지질과 지방산을 포함하는 1종 이상의 천연 유화제를 사용할 수 있다.
상기 초음파 처리는 천연 유래 용매와 천연 유화제가 혼합된 혼합물을 균질화하기 위한 작업으로, 초음파 파쇄기(Ultrasonic Liquid processor)를 이용할 수 있다.
이러한 천연 유래 용매와 천연 유화제는 35 내지 80 ℃, 바람직하게는 50 내지 75 ℃, 더 바람직하게는 60 내지 70 ℃로 가온한 후 초음파 처리함으로써, 천연 유래 용매 내에 천연 유화제의 인지질과 지방산을 균질화할 수 있다. 상기 온도 범위는 유화제가 리포좀을 안정적으로 형성하기에 유리한 온도 범위이다.
(b) 제2단계
이 단계는 상기 제1단계의 혼합물에 스핑고지질, 스테롤, 당단백질로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 1종 이상을 혼합하고 초음파 처리하는 단계이다.
먼저 증류수에 스핑고지질을 용해시킨 다음 제1단계의 혼합물에 투입한다. 초음파 분해기를 이용하여 분산, 균질화시켰다.
그런 다음 증류수에 스테롤을 용해시킨 다음 스핑고지질이 용해된 제1단계 혼합물에 투입한다. 초음파 분해기를 이용하여 분산, 균질화하였다.
그런 다음 증류수에 당단백질을 용해시킨 다음 스테롤, 스핑고지질이 용해된 제1단계 혼합물에 투입한다. 초음파를 이용하여 분산, 균질화하였다.
(c) 제3단계
이 단계는 상기 제2단계의 혼합물에 가바, 총명탕, 또는 이들의 혼합물을 첨가하고 초음파 처리하여 혼합하는 단계이다.
상기 가바 추출물 또는 총명탕은 기능 성분이 파괴되지 않는 온도, 압력 및 습도 조건에서 가바 또는 총명탕을 분쇄하거나 액상으로 추출한 후 건조하여 얻을 수 있다. 이때, 가바를 분쇄하는 방법은 당업계에 공지된 통상적인 분쇄 방법을 제한 없이 사용할 수 있다. 또한, 가바, 총명탕을 액상으로 추출하는 방법은 당업계에 공지된 통상적인 추출 방법을 제한 없이 사용할 수 있다. 일례로는 냉침 추출, 초음파 추출, 환류 냉각 추출, 열수 추출 등의 추출 방법을 사용하여 액상 또는 분말 형태의 추출물을 얻을 수 있다. 상기 가바 추출물, 총명탕은 상기 제1단계의 혼합물과 균일하게 혼합되도록 천연 물질에서 유래된 부틸렌글리콜, 프로판디올, 글리세린, 발효주정 등에 용해한 형태로 사용될 수 있다. 상기 가바 추출물, 총명탕을 발효주정에 용해할 경우, 가바 추출물과 발효주정의 혼합비율은 중량비 기준으로 가바 추출물(또는 총명탕) : 발효주정 = 0.1 ~ 1 : 1이고, 바람직하게는 0.3 : 1이다.
제3단계를 통하여 각 성분을 균질하게 혼합할 수 있으며 입자 크기가 작은 리포좀을 형성할 수 있다. 초음파 처리는, 예를 들면, 제2단계의 혼합물에 가바 추출물을 첨가하고 35 내지 80 ℃로 가온하여 혼합한 후 수행될 수 있다. 하지만 상기 제2단계의 혼합물이 상기 온도 범위를 유지하고 있는 경우에는 별도의 가온 공정 없이 초음파 처리를 할 수 있다.
(d) 제4단계
이 단계는 상기 제3단계의 혼합물을 35 내지 80 ℃에서 천연 코팅제와 혼합하고 초음파 처리하는 단계이다. 초음파 처리는, 예를 들면, 제3단계의 혼합물에 천연 코팅제를 첨가하고 35 내지 80 ℃로 가온하여 혼합한 후 수행될 수 있다. 하지만 상기 제3단계의 혼합물이 상기 온도 범위를 유지하고 있는 경우에는 별도의 가온 공정 없이 초음파 처리를 할 수 있다.
상기 천연 코팅제는 최종 제조되는 천연 리포좀의 체내 흡수를 도와준다.
(e) 제5단계
이 단계는 상기 제4단계의 혼합물에 천연 유래 용매와 천연 방부제를 첨가하고 초음파 처리하는 단계이다. 천연 유래 용매와 천연 방부제를 특정 온도로 미리 가온한 다음 초음파를 수행할 수도 있다.
상기 천연 유래 용매로는 상기 제1단계에서 사용된 용매와 동일한 것을 사용할 수 있다.
상기 천연 방부제는 리포좀 구성 물질(천연 유화제, 천연 유래 용매, 천연 코팅제)과 리포좀 내에 존재하는 포집 물질의 부패를 방지하여 천연 리포좀의 안정을 유지한다. 또한, 상기 천연 방부제는 천연 물질에서 유래되어 독성이 없어 인체에 무해하며, 천연 리포좀을 손상시키지 않는다.
(b) 제2단계, (c) 제3단계, (d) 제4단계. (e) 제5단계에서 초음파 처리는 35 내지 80 ℃에서 수행되며, 바람직하게는 60 내지 70 ℃에서 수행된다.
(f) 제6단계
이 단계는 상기 제5단계 이후에 온도를 서서히 낮추면서 반복적으로 초음파 처리하는 단계이다. 이 단계는 임의로 포함할 수 있다.
상기 제조방법으로 제조된 천연 리포좀은 온도를 서서히 낮추면서, 바람직하게는 35 내지 70 ℃에서 최종적으로 1 내지 10분, 바람직하게는 3 내지 8분 동안 초음파 처리함으로써, 상기 제5단계에서 형성된 입자를 보다 작고 균일한 최종 천연 리포좀을 제조한다.
상기 초음파 처리는 원하는 입자 크기의 천연 리포좀을 제조하기 위해 반복적으로 실시할 수 있으며, 바람직하게는 1 내지 3회로 실시할 수 있다.
이와 같이, 본 발명의 천연 리포좀의 제조방법은 천연 물질로 리포좀을 형성하여 인체에 무해하며, 입자 크기가 작은 가바 추출물, 총명탕을 함유하는 천연 리포좀을 형성하여 세포에 대한 가바, 총명탕의 흡수율을 높일 수 있다.
<천연 리포좀을 포함하는 식품 조성물>
본 발명의 일 예는 유효성분으로서 상기 천연 리포좀을 포함하는 식품 조성물을 제공한다.
본 발명의 일 예에 의한 천연 리포좀은 세포막과 결합하여 가바 추출물 또는 총명탕의 세포 흡수율을 높임으로써, 가바, 총명탕의 성분이 인체 내에서 효과적으로 작용할 수 있도록 한다. 상기 천연 리포좀을 섭취할 경우에는 장에서 흡수된 가바, 총명탕에 의한 효과가 나타날 수 있으므로, 천연 리포좀을 유효성분으로 함유하는 식품 조성물로 이용될 수 있다.
이러한 식품 조성물은 전체 중량을 기준으로. 상기 천연 유화제 0.1 내지 10 중량%, 상기 천연 코팅제 0.001 내지 3 중량%, 상기 천연 방부제 0.001 내지 3 중량%, 상기 가바, 총명탕, 또는 이들의 혼합물 0.1 내지 30 중량%, 상기 스핑고지질, 스테롤, 당단백질의 합계 1.0~10 중량% 및 상기 천연 유래 용매 잔량을 포함할 수 있다.
본 발명의 식품 조성물은 식품의 종류에 제한 없이 사용할 수 있으며, 일반 식품에 첨가물로 사용되거나 건강보조식품으로 사용될 수 있다.
이와 같은 천연 리포좀을 유효성분으로 함유하는 식품 조성물은 기억 개선 및 학습 개선 효과에 도움을 준다.
이하, 본 발명을 실시예를 통해 구체적으로 설명하나, 하기 실시예는 본 발명의 한 형태를 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 범위가 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다.
1. 합성 가바를 이용한 리포좀의 흡수력 테스트
[실시예 1] 가바 99% 함유 천연 리포좀의 제조
하기 표 1의 조성에 따라 천연 리포좀을 제조하였다.
구분 순서 원료명 함량 (중량%)
A 1 증류수 30.0
2 DS-Soya PC60 IP 2.5
B 3 밀크 세라마이드 2.0
4 증류수 2.5
C 5 피토스테롤 0.3
6 증류수 2.5
D 7 캐롯콜라겐 3.0
8 증류수 2.5
E 9 합성 GABA
(99% GABA 함유 분말)		 5.0
10 증류수 2.5
F 11 말토덱스트린 1.0
G 12 증류수 46.15
H 13 자몽 추출물 0.05
A단계: 먼저, 증류수를 칭량하여 65℃까지 가열한 다음 증류수에 천연 유화제로서 DS-Soya PC60 IP를 투입하였다. 초음파 분해기(sonicator)를 이용하여 10초간 분해하고 3초간 정지하여 총 30초 동안 균질화하였다.
B단계: 증류수에 밀크 세라마이드를 완전히 용해시킨 다음, 완전히 용해된 상기 A 단계 결과물에 천천히 투입하였다. 초음파 분해기(sonicator)를 이용하여 10초간 분해하고 3초간 정지하여 총 30초 동안 분산시켜 균질화하였다.
C단계: 증류수에 피토스테롤을 완전히 용해시킨 다음, 완전히 용해된 상기B 단계 결과물에 천천히 투입하였다. 초음파 분해기(sonicator)를 이용하여 10초간 분해하고 3초간 정지하여 총 30초 동안 분산시켜 균질화하였다.
D단계: 증류수에 캐롯콜라겐을 완전히 용해시킨 다음, 완전히 용해된 상기C 단계 결과물에 천천히 투입하였다. 초음파 분해기(sonicator)를 이용하여 10초간 분해하고 3초간 정지하여 총 30초 동안 분산시켜 균질화하였다.
E단계: 증류수에, GABA sigma 99% 분말을 완전히 용해시킨 다음 완전히 용해된 D 단계 결과물에 천천히 투입하였다. 초음파 분해기(sonicator)를 이용하여 10초간 분해하고 3초간 정지하여 총 30초 동안 분산시켜 균질화하였다.
F단계: 말토덱스트린을, 완전히 용해된 E 단계 결과물에 투입하여 혼합하고 섭씨 65℃까지 가열하였다. 초음파 분해기(sonicator)를 이용하여 10초간 분해하고 3초간 정지하여 총 30초 동안 분산시켜 균질화하였다.
G단계: 증류수를, 완전히 용해된 F 단계 결과물에 투입하였다. 초음파 분해기(sonicator)를 이용하여 10초간 분해하고 3초간 정지하여 총 30초 동안 분산시켜 균질화하였다.
초음파 분해기(sonicator)를 이용하여 10초간 분해하고 3초간 정지하여 총 30초 동안 분산시켜 균질화하는 과정을 1회 더 반복하였다.
H단계: 자몽종자추출물을, 완전히 용해된 G 단계 결과물에 투입하였다.
[비교예 1] 가바 99% 함유 천연 리포좀의 제조
B, C, D 단계를 생략하였다는 점, 마지막 단계에서 증류수를 58.95 중량% 사용하였다는 점을 제외하고는 실시예 1과 동일한 방식으로 하기 표 2에서의 조성에 따라 천연 리포좀을 제조하였다.
구분 순서 원료명 함량 (중량%)
A 1 증류수 30.0
2 DS-Soya PC60 IP 2.5
E 3 합성 GABA
(99% GABA 분말)		 5.0
4 증류수 2.5
F 5 말토덱스트린 1.0
G 6 증류수 58.95
H 7 자몽 추출물 0.05
[실험예 1] 특성 실험 - 피부 흡수율 실험
돼지 소장 점막을 이용한 프란츠 디퓨전 셀(Franz diffusion cell, Permegear, V3A-02, USA)을 이용하여 피부 흡수율을 확인하였다.
먼저 Donor 와 Receptor phase 사이에 돼지 피부 조직을 고정하였다. 준비된 프란츠 디퓨전 셀의 donor에 실시예 1, 비교예 1, 대조군의 시료를 투여하고 항온 수조를 이용하여 온도를 약 36.5℃로 유지하였다. 6시간 간격으로 receptor phase 0.25 ml를 채취하여 흡광도를 측정하였다. 그 결과를 도 1에 나타내었다.
[실험 결과]
도 1에 도시된 바와 같이, 실시예 1의 천연 리포좀이 대조군인 가바 분말, 통상의 천연 리포좀(비교예 1)에 비해 흡수율이 높은 것으로 나타났다.
2. 천연 가바를 이용한 리포좀의 특성 테스트
[실시예 2] 가바 90% 함유 천연 리포좀의 제조
GABA sigma 99% 분말 5 중량%, G 단계에서 증류수 46.15 중량%를 사용하는 대신 각각 천연유래 GABA(발효보리추출분말 GABA 90% 분말 5.7 중량%, G 단계에서 증류수 45.45 중량%를 사용하였다는 점을 제외하고는 표 1과 동일한 함량으로, 실시예 1과 동일한 방식으로 천연 리포좀을 제조하였다.
[실시예 3] 총명탕 20% 함유 천연 리포좀의 제조
GABA sigma 99% 분말 5 중량%, G 단계에서 증류수 46.15 중량%를 사용하는 대신 각각 총명탕 20 중량%, G 단계에서 증류수 31.15 중량%를 사용하였다는 점을 제외하고는 표 1과 동일한 함량으로, 실시예 1과 동일한 방식으로 천연 리포좀을 제조하였다.
[실시예 4] 총명탕 10% 함유 천연 리포좀의 제조
GABA sigma 99% 분말 5 중량%, G 단계에서 증류수 46.15 중량%를 사용하는 대신 각각 총명탕 10 중량%, G 단계에서 증류수 41.15 중량%를 사용하였다는 점을 제외하고는 표 1과 동일한 함량으로, 실시예 1과 동일한 방식으로 천연 리포좀을 제조하였다.
[비교예 2] 가바 90% 함유 천연 리포좀의 제조
B, C, D 단계를 생략하였다는 점, 마지막 단계에서 증류수를 58.95 중량% 사용하였다는 점을 제외하고는 실시예 2와 동일한 방식으로 하기 표 3에서의 조성에 따라 천연 리포좀을 제조하였다.
구분 순서 원료명 함량 (중량%)
A 1 증류수 30.0
2 DS-Soya PC60 IP 2.5
E 3 천연 유래 GABA
(발효보리추출물분말, GABA 90%)		 5.7
4 증류수 2.5
F 5 말토덱스트린 1.0
G 6 증류수 58.95
H 7 자몽 추출물 0.05
[비교예 3] 총명탕 20% 함유 천연 리포좀의 제조
B, C, D 단계를 생략하였다는 점, 마지막 단계에서 증류수를 43.95 중량% 사용하였다는 점을 제외하고는 실시예 4와 동일한 방식으로 하기 표 4에서의 조성에 따라 천연 리포좀을 제조하였다.

구분 순서 원료명 함량 (중량%)
A 1 증류수 30.0
2 DS-Soya PC60 IP 2.5
E 3 총명탕 20.0
4 증류수 2.5
F 5 말토덱스트린 1.0
G 6 증류수 43.95
H 7 자몽 추출물 0.05
[실험예 2] 특성 분석
(1) 입자 크기 분석
전자주사현미경(Scanning Electron Microscope S-1700)을 이용하여 GABA, 총명탕, 실시예 2, 3, 비교예 2, 3의 천연리포좀의 입자형태와 크기를 분석하였다. 샘플을 섭씨 영하 60도에서 동결건조한 다음 얇게 펴서 PdPt 혼합촉매로 1회 코팅한 후 측정을 실시하였다.
레이저 입도분석기(Electrophoretic Light Scattering Spectrophotometer ELS-8000, Otsuka)를 이용하여 상기 샘플의 입자 크기를 측정하고 입도 분포를 분석하였다.
그 결과를 아래 표 5, 표 6에 나타내었다.
항목 입도 (nm)
GABA 183.7
비교예 2 71.3
실시예 2 137.4
항목 입도 (nm)
총명탕 374.8
비교예 3 66.5
실시예 3 213.1
표 5, 6에서 보듯이, 본 발명의 일 예에 따른 천연 리포좀(실시예 2, 3)은 통상의 천연 리포좀(비교예 2, 3)에 비해서는 입자 크기가 크지만 가바 분말, 총명탕에 비해서는 입자 크기가 작은 것으로 나타났다.
(2) 피부 흡수율 실험
돼지 소장 점막을 이용한 프란츠 디퓨전 셀(Franz diffusion cell, Permegear, V3A-02, USA)을 이용하여 피부 흡수율을 확인하였다.
먼저 Donor 와 Receptor phase 사이에 돼지 피부 조직을 고정하였다. 준비된 프란츠 디퓨전 셀의 donor에 실시예 2~4, 비교예 2, 대조군의 시료를 투여하고 항온 수조를 이용하여 온도를 약 36.5℃로 유지하였다. 6시간 간격으로 receptor phase 0.25 ml를 채취하여 흡광도를 측정하였다. 그 결과를 도 2a, 3a, 4a에 나타내었다.
[실험 결과]
도 2a에 도시된 바와 같이, 실시예 2의 천연 리포좀이 대조군인 가바 분말, 통상의 천연 리포좀(비교예 2)에 비해 흡수율이 높은 것으로 나타났다.
또한 6시간 경과한 후의 장막 흡수에 따른 농도를 측정하여 비교한 결과, 실시예 2의 천연 리포좀은 82.4mg/ml로, 대조군인 가바 분말과 통상의 천연 리포좀(비교예 2)이 각각 60.0mg/ml, 61.3mg/ml인 것에 비해 높게 나타났다(도 2b).
도 3a에 도시된 바와 같이, 실시예 3의 천연 리포좀이 대조군인 가바 분말(20%)에 비해 흡수율이 높은 것으로 나타났다.
또한 6시간 동안의 장막 흡수율 변화량을 비교한 결과, 실시예 3의 천연 리포좀은 1.26 증가한 것으로 나타나, 대조군인 총명탕 20%가 0.80 증가한 것에 비하여 약 58% 더 증가한 것으로 나타났다(도 3b).
도 4a에 도시된 바와 같이, 실시예 4의 천연 리포좀이 대조군인 총명탕 10%에 비해 흡수율이 높은 것으로 나타났다.
또한 6시간 동안의 장막 흡수율 변화량을 비교한 결과, 실시예 4의 천연 리포좀은 0.23(0h)에서 1.4(6h)로 1.17 증가한 것으로 나타나, 대조군인 총명탕 10%가 0.28(0h)에서 1.26(6h)으로 0.97 증가한 것에 비하여 21% 더 증가한 것으로 나타났다(도 4b).
[실험예 3] MTT Assay 방법
[실험예 3-1] 농도에 따른 흡광도 측정
신경세포 SH-SY5Y 셀을 1 X 105/mL로 96 웰(well) 플레이트(plate)에 seeding한 다음 24시간 경과한 후 DMEM 배지(Dulbecco's modified eagle's medium, 10% FBS)에 섭씨 37도, 5% CO2 조건에서 24시간 배양하였다.
배양후 H2O2를 0~200uM까지 농도별로 6시간 처리한 후 MTT (1mg/ml) 용액에서 4시간동안 유지하였다. 이후 0.04N HCl/이소프로판올을 이용하여 용해시킨 후 분광 광도계를 이용하여 570nm에서 흡광도를 측정하였다. 실험 결과를 도 5에 나타내었다.
[실험예 3-2] 각 샘플에 따른 세포보호효과 측정
신경세포 SH-SY5Y 셀을 5 X 105/mL로 48 웰(well) 플레이트(plate)에 seeding한 다음 24시간 경과한 후 DMEM 배지(Dulbecco's modified eagle's medium, 10% FBS)에 각각의 샘플 0.1%를 처리하고 H2O2를 25uM로 섭씨 37도, 5% CO2 조건에서 24시간 배양하였다.
배양 후 H2O2를 0~500uM까지 농도별로 6시간 동안 처리한 후 MTT (1mg/ml) 용액에서 4시간동안 유지하였다. 이후 0.04N HCl/이소프로판올을 이용하여 용해시킨 후 분광 광도계를 이용하여 570nm에서 흡광도를 측정하였다. 실험 결과를 도 6에 나타내었다.
[실험 결과]
뇌 신경 세포에서 산화적 스트레스에 대한 보리발효유래 GABA의 세포 보호효과를 확인한 결과, 도 6에서 보듯이 모든 샘플이 H2O2 만 처리한 Control 그룹보다 높은 세포 생존율을 나타내었다.
미처리된 상태인 Normal을 100%로 하였을 때 합성 GABA(Sigma GABA)를 샘플로 사용한 경우, 발효 보리 추출 분말 90%(보리 추출물 65%, 보리 누룩 35%)를 탈이온수에 5.7% 녹인 것을 샘플로 사용한 경우(보리발효유래 GABA), 발효 보리 추출분말 90%(보리 추출물 65%, 보리 누룩 35%)를 5.7% 포함하는 천연 리포좀을 샘플로 사용한 경우(보리발효유래 GABA 천연리포좀)는 cell viability가 각각 89.14%, 82.90%, 78.45%로 나타났다.
이와 같이 보리발효유래 GABA를 단순히 천연리포좀화한 경우(보리발효유래 GABA 천연리포좀) 합성 GABA(Sigma GABA)보다 세포 보호효과가 낮았으나 실시예 2에서와 같이 천연리포좀화처리한 경우 단순히 천연리포좀화한 경우는 물론 합성 GABA보다 세포 보호효과가 더 높은 것으로 나타났다.
[실험예 3-3] 각 샘플에 따른 Western Blot Method - 신경세포의 Gaba 수용체, 세로토닌 수용체 활성 확인
신경세포 SH-SY5Y 셀을 1 X 105/mL로 6 웰(well) 플레이트(plate)에 seeding한 다음 24시간 경과한 후 DMEM 배지(Dulbecco's modified eagle's medium, 10% FBS)에 Sigma GABA, 발효보리 GABA, 발효보리 GABA 천연리포좀, 실시예 2의 샘플 0.1%를 각각 처리하고 3일 후 배지를 갈아주고 다시 샘플을 처리하면서 6일간 섭씨 37도, 5% CO2 조건으로 배양하여 분화시켰다.
배양 완료 후 GANA receptor 발현 정도를 확인하기 위해 Western blot를 수행하였다. 배지를 제거한 다음 PBS로 세척한 후 300uL의 lysis buffer를 처리하여 세포 추출물을 준비하여 10% SDS-Page 겔에 진행하였으며, 5% 스킴 밀크를 사용하여 1시간 동안 블록킹시켜 주었다. 그 후 GABA Receptor 단백질의 1차 항체를 1000배 희석하여 밤새 방치한 다음 goat anti-rabbit horseradish peroxidase(2차 항체)를 5000배 희석하여 상온에서 3시간 동안 반응시켰다.
니트로셀룰로스 막에 발현된 세로토닌 수용체와 Gaba 수용체 단백질을 X-ray 필름을 통하여 촬영하였고 그 결과를 도 7, 8에 나타내었다.
[실험예 4] 각 샘플에 따른 세포보호효과 측정
신경세포 SH-SY5Y 셀을 5 X 105/mL로 48 웰(well) 플레이트(plate)에 seeding한 다음 24시간 경과한 후 DMEM 배지(Dulbecco's modified eagle's medium, 10% FBS)에 Normal, Control, Donepezil, 합성 GABA, 총명탕, 총명탕 천연리포좀, 실시예 3의 샘플 0.5%를 각각%를 처리하고 H2O2를 25uM로 섭씨 37도, 5% CO2 조건에서 24시간 배양하였다.
배양 후 MTT (1mg/ml) 용액에서 4시간동안 유지하였다. 이후 0.04N HCl/이소프로판올을 이용하여 용해시킨 후 분광 광도계를 이용하여 570nm에서 흡광도를 측정하였다. 실험 결과를 도 9에 나타내었다.
뇌 신경 세포에서 산화적 스트레스에 대한 총명탕 천연리포좀의 세포 보호효과를 확인한 결과, 도 9에서 보듯이 모든 그룹이 H2O2 만 처리한 Control 그룹보다 높은 세포 생존율을 나타내었다. 특히 총명탕을 천연리포좀화 하기 전에는 합성 GABA(SIGMA GABA)보다 세포 보호효과가 낮았으나 천연리포좀화 처리 후에는 합성 GABA보다도 세포 보호효과가 더 높은 것으로 나타났다. 실시예 3과 같이 처리된 총명탕 천연 리포좀은 산화스트레스에 대한 세포 보호효과가 특히 뛰어난 것으로 나타났다.

Claims (18)

1종 이상의 천연 유화제, 천연 유래 용매, 천연 코팅제, 천연 방부제를 함유하는 리포좀 구성 물질로서, 스핑고지질, 스테롤, 당단백질로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 1종 이상을 추가로 함유하는 리포좀 구성 물질; 및
포집 물질로서 가바, 총명탕, 또는 이들의 혼합물
을 포함하며,
상기 천연 유화제, 상기 천연 유래 용매 및 상기 가바, 총명탕, 또는 이들의 혼합물을 초음파 처리하여 혼합함으로써 형성되는 천연 리포좀.
제1항에 있어서,
상기 천연 리포좀의 전체 중량을 기준으로. 상기 천연 유화제 0.1 내지 10 중량%, 상기 천연 코팅제 0.001 내지 3 중량%, 상기 천연 방부제 0.001 내지 3 중량%, 상기 가바, 총명탕, 또는 이들의 혼합물 0.1 내지 30 중량%, 상기 스핑고지질, 스테롤, 당단백질의 합계 1.0~10 중량% 및 상기 천연 유래 용매 잔량을 포함하는 천연 리포좀.
제1항에 있어서,
상기 천연 유화제는 레시틴, 포스파티딜 콜린, 리소포스파티딜 콜린, 포스파티딜 에탄올아민, 하이드로지네이티드 포스파티딜 콜린, 포스파티딘산, 포스파티딜 세린, 포스파티딜 글리세롤, 포스파티딜 이노시톨 및 이들의 수소첨가 생성물로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 인지질을 포함하는 것인 천연 리포좀.
제1항에 있어서,
상기 천연 유화제는 팔미트산, 스테아르산, 올레산, 리놀레산 및 리놀렌산으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 지방산을 포함하는 것인 천연 리포좀.
제1항에 있어서,
상기 천연 유래 용매는 증류수, 천연 유래의 글리세린, 천연 에탄올, 천연 프로판디올, 천연 글리세린 및 발효주정으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상인 천연 리포좀.
제1항에 있어서,
상기 천연 코팅제는 말토덱스트린, 타피오카, 구아검, 옥수수 전분으로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상인 천연 리포좀.
제1항에 있어서,
상기 천연 방부제는 감귤 추출물, 유자 추출물, 유칼립투스 추출물, 고삼 추출물, 정향 추출물, 자몽 추출물로 이루어진 군에서 선택되는 1종 이상의 천연 추출물인 천연 리포좀.
제1항에 있어서,
상기 스핑고지질은 스핑고미엘린을 포함하는 천연 리포좀.
제8항에 있어서,
상기 스핑고미엘린은 밀크 세라마이드를 포함하는 천연 리포좀.
제1항에 있어서,
상기 스테롤은 피토스테롤, 캠퍼스테롤, 베가 퓨어로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 1종 이상의 스테롤을 포함하는 천연 리포좀.
제1항에 있어서,
상기 당 단백질은 캐럿 콜라겐을 포함하는 천연 리포좀.
제1항에 있어서,
상기 당 단백질은 캐럿 콜라겐을 포함하는 천연 리포좀.
제1항에 있어서,
천연 리포좀의 총 중량을 기준으로,
상기 스핑고지질의 함량은 0.5~5 중량%이고,
상기 스테롤의 함량은 0.01~2 중량%이고,
상기 당단백질의 함량은 2 중량% 이상인 천연리포좀.
제1항에 있어서,
천연 리포좀의 총 중량을 기준으로,
상기 스핑고지질의 함량은 1~3 중량%이고,
상기 스테롤의 함량은 0.05~1.5 중량%이고,
상기 당단백질의 함량은 2.5 중량% 이상인 천연 리포좀.
제1항에 있어서,
상기 스핑고지질: 상기 스테롤: 상기 당단백질의 함량비율은 중량을 기준으로 2:0.1~0.5:1~5인 천연 리포좀.
(a) 천연 유래 용매를 35 내지 80 ℃에서 1종 이상의 천연 유화제와 혼합하고 초음파 처리하는 제1단계;
(b) 상기 제1단계의 혼합물에 스핑고지질, 스테롤, 당단백질로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 1종 이상을 혼합하고 초음파 처리하는 제2단계;
(c) 상기 제2단계의 혼합물에 가바, 총명탕, 또는 이들의 혼합물을 첨가하고 초음파 처리하여 혼합하는 제3단계;
(d) 상기 제3단계의 혼합물을 35 내지 80 ℃에서 천연 코팅제와 혼합하고 초음파 처리하는 제4단계; 및
(e) 상기 제4단계의 혼합물에 천연 유래 용매와 천연 방부제를 첨가하고 초음파 처리하는 제5단계
를 포함하는 제1항의 천연 리포좀의 제조방법.
제1항의 천연 리포좀을 유효성분으로 포함하는 식품 조성물.
제1항의 천연 리포좀을 유효성분으로 포함하는 학습 증진 및 기억 개선용 식품 조성물.
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