KR20200019122A - Glp-1 작용제와 조합하여 위 저해 펩타이드 수용체(gipr)에 대한 결합 단백질을 이용하여 대사 장애를 치료하거나 또는 개선시키는 방법 - Google Patents

Glp-1 작용제와 조합하여 위 저해 펩타이드 수용체(gipr)에 대한 결합 단백질을 이용하여 대사 장애를 치료하거나 또는 개선시키는 방법 Download PDF

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Abstract

GIPR 폴리펩타이드에 특이적인 항원 결합 단백질을 이용하여 대사 질환 및 장애를 치료하는 방법이 제공된다. 다양한 실시형태에서, 대사 질환 또는 장애는 2형 당뇨병, 비만, 이상지질혈증, 상승된 글루코스 수준, 상승된 인슐린 수준 및 당뇨병성 신경병증이다. 특정 실시형태에서, 항원 결합 단백질은 GLP-1 수용체 작용제와 조합하여 투여된다.

Description

GLP-1 작용제와 조합하여 위 저해 펩타이드 수용체(GIPR)에 대한 결합 단백질을 이용하여 대사 장애를 치료하거나 또는 개선시키는 방법
본 개시내용은 위 저해 펩타이드 수용체(GIPR)에 특이적인 항원 결합 단백질을 이용하는 대사 장애, 예컨대 2형 당뇨병, 상승된 글루코스 수준, 상승된 인슐린 수준, 비만, 비알코올성 지방간 질환, 또는 심혈관계 질환의 치료 또는 개선에 관한 것이다.
글루코스-의존적 인슐린 분비성 폴리펩타이드(GIP)는 소장(duodenum and jejunum) 내 K-세포로부터 분비된 단일 42-아미노산 펩타이드이다. 인간 GIP는 염색체 17q에 대해 국소화된 유전자에 의해 암호화된 153-아미노산 전구체인 프로GIP의 가공으로부터 유래된다(Inagaki et al., Mol Endocrinol 1989; 3:1014-1021; Fehmann et al. Endocr Rev. 1995; 16:390-410). GIP는 이전에 위 저해 폴리펩타이드로 불렸다.
GIP 분비는 음식 섭취에 의해 유도된다. GIP는 지방세포에서 지방 저장의 촉진 및 췌장섬 β-세포 기능 및 글루코스-의존적 인슐린 분비의 촉진을 포함하는 조직에서 다수의 생리적 효과를 가진다. GIP 및 글루카곤 유사 폴리펩타이드-1(GLP-1)은 공지된 인슐린 분비성 인자("인크레틴")이다. 무손상 GIP는 DPPIV에 의해 비활성 형태로 빠르게 분해된다. GIP의 인슐린 분비성 효과는 2형 당뇨병 환자에서 상실되지만, GLP-1의 인크레틴 효과는 무손상으로 남아있다(Nauck et al. J. Clinc. Invest. 1993; 91:301-307).
GIP 수용체(GIPR)는 세포외 N-말단, 7개의 막관통 도메인 및 세포내 C-말단을 갖는 G-단백질 결합 수용체(GPCR)의 세크레틴-글루카곤 패밀리의 구성원이다. 수용체의 이 패밀리의 N-말단 세포외 도메인은 보통 글리코실화되고, 수용체의 인식 및 결합 도메인을 형성한다. GIPR는 췌장, 장, 지방조직, 심장, 뇌하수체, 부신겉질 및 뇌를 포함하는 다수의 조직에서 고도로 발현된다(Usdin et al., Endocrinology. 1993, 133:2861-2870). 인간 GIPR은 466개의 아미노산을 포함하고, 염색체 19q13.3 상에 위치된 유전자에 의해 암호화된다(Gremlich et al., Diabetes. 1995; 44:1202-8; Volz et al., FEBS Lett. 1995, 373:23-29). 연구는 대안의 mRNA 스플라이싱이 인간, 래트 및 마우스에서 상이한 길이의 GIP 수용체 변이체의 생성을 야기한다는 것을 시사하였다.
GIPR 넉아웃 마우스(Gipr -/-)는 고지방식-유도 체중 증가에 대해 내성이 있고, 개선된 인슐린 민감성 및 지질 프로파일을 가진다. (Yamada et al., Diabetes. 2006, 55:S86; Miyawaki et al. Nature Med. 2002, 8:738-742). 추가로, 신규한 소분자 GIPR 길항제 SKL-14959는 비만 및 인슐린 내성을 방지한다. (Diabetologia 2008, 51:S373, 44th EASD Annual meeting poster).
글루카곤-유사 펩타이드-1("GLP-1")는 프로글루카곤 유전자로부터 유래된 31-아미노산 펩타이드이다. 이는 장의 L-세포에 의해 분비되고 음식 섭취에 반응하여 방출되어 췌장 β-세포로부터의 인슐린 분비를 유도한다(Diabetes 2004, 53:S3, 205-214). 인크레틴 효과에 추가로, GLP-1는 또한 글루카곤 분비를 감소시키며, 위 배출을 지연시키고, 열량 흡수를 감소시킨다(Diabetes Care, 2003, 26(10): 2929-2940). GLP-1은 클래스 B G-단백질-결합 수용체에 속하는 GLP-1 수용체의 활성화에 의해 그의 효과를 발휘한다(Endocrinology. 1993, 133(4):1907-10). GLP-1의 기능은 DPP-IV 효소에 의한 빠른 흡수에 의해 제한되어, 대략 2분의 반감기를 초래한다. 최근에, 장기 지속적 GLP-1 수용체 작용제, 예컨대 엑세나타이드, 리라글루타이드, 둘라글루타이드가 개발되었고, 현재 2형 당뇨병을 갖는 환자에서 혈당 조절을 개선시키기 위해 임상적으로 사용 중에 있다. 더 나아가, GLP-1 수용체 작용제는 또한 환자에서 체중 감소뿐만 아니라 혈압 및 혈장 콜레스테롤 수준의 감소를 촉진시킨다(Bioorg. Med. Chem.Lett 2013, 23:4011-4018).
총괄적으로, 이는 비만과 관련되며, 인슐린 내성은 GIPR 저해가 단일요법으로서 그리고 GLP-1과 조합하여 치료적 개입에 대해 유용한 접근이라는 것을 나타낸다.
일 양상에서, 본 개시내용은 대사 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법을 제공하되, 상기 방법은 대상체에게 GIPR의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 단백질에 특이적으로 결합하는 치료적 유효량의 항원 결합 단백질을 투여하는 단계를 포함한다. 일 양상에서, 본 발명은 대사 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이되, 상기 방법은 GIPR의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 단백질에 특이적으로 결합하는 치료적 유효량의 GLP-1 수용체 작용제 및 치료적 유효량의 GIPR 길항제를 투여하는 단계를 포함한다. 일 실시형태에서, 대사 장애는 글루코스 대사 장애이다. 다른 실시형태에서, 글루코스 대사 장애는 고혈당증을 포함하고, 항원 결합 단백질을 투여하는 것은 혈장 글루코스를 감소시킨다. 다른 실시형태에서, 글루코스 대사 장애는 고인슐린혈증을 포함하고, 항원 결합 단백질을 투여하는 것은 혈장 인슐린을 감소시킨다. 다른 실시형태에서, 글루코스 대사 장애는 당불내성을 포함하고, 항원 결합 단백질을 투여하는 것은 내당능 증가를 감소시킨다. 다른 실시형태에서, 글루코스 대사 장애는 인슐린 내성을 포함하고, 항원 결합 단백질을 투여하는 것은 인슐린 내성을 감소시킨다. 다른 실시형태에서, 글루코스 대사 장애는 진성 당뇨병을 포함한다. 다른 실시형태에서, 대상체는 비만이다. 다른 실시형태에서, 항원 결합 단백질을 투여하는 것은 비만 대상체에서 체중을 감소시킨다. 다른 실시형태에서, 항원 결합 단백질을 투여하는 것은 비만 대상체에서 체중 증가를 감소시킨다. 다른 실시형태에서, 항원 결합 단백질을 투여하는 것은 비만 대상체에서 지방량을 감소시킨다. 다른 실시형태에서, 글루코스 대사 장애는 인슐린 내성을 포함하고, 비만 대상체에서 항원 결합 단백질을 투여하는 것은 인슐린 내성을 감소시킨다. 다른 실시형태에서, 항원 결합 단백질을 투여하는 것은 간 지방증이 증가된 비만 대상체에서 간 지방증을 감소시킨다. 다른 실시형태에서, 항원 결합 단백질을 투여하는 것은 증가된 간 지방 함량을 갖는 비만 대상체에서 간 지방 함량을 감소시킨다.
일 양상에서, 본 발명은 대사 장애 증상을 갖는 대상체에게 투여 시 지속적인 유리한 효과를 제공하는 적어도 1종의 GIPR 길항제의 투여와 조합하여 치료적 유효량의 적어도 1종의 GLP-1 수용체 작용제를 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법에 관한 것이다.
일 실시형태에서, 적어도 1종의 GIPR 길항제의 투여와 조합한 적어도 1종의 GLP-1 수용체 작용제의 투여는 대사 장애의 적어도 하나의 증상의 지속적인 유리한 효과를 제공한다.
일 실시형태에서, 치료적 유효량의 GLP-1 수용체 작용제 및 GIPR 길항제는 대상체에 대한 투여 전에 조합된다.
일 실시형태에서, 치료적 유효량의 GLP-1 수용체 작용제 및 GIPR 길항제는 순차적으로 대상체에게 투여된다.
일 실시형태에서, 치료적 유효량의 GLP-1 수용체 작용제 및 GIPR 길항제는 상승적으로 유효한 양이다.
일 실시형태에서, GLP-1 수용체 작용제 대 GIPR 길항제의 몰비는 약 1:1 내지 1:110, 1:1 내지 1:100, 1:1 내지 1:75, 1:1 내지 1:50, 1:1 내지 1:25, 1:1 내지 1:10, 1:1 내지 1:5 및 1:1이다. 일 실시형태에서, GIPR 길항제 대 GLP-1 수용체 작용제의 몰비는 약 1:1 내지 1:110, 1:1 내지 1:100, 1:1 내지 1:75, 1:1 내지 1:50, 1:1 내지 1:25, 1:1 내지 1:10, 및 1:1 내지 1:5이다.
일 실시형태에서, GLP-1 수용체 작용제는 약 1:1.5 내지 1:150, 바람직하게는 1:2 내지 1:50의 치료적으로 유효한 몰비로 길항제와 조합하여 사용된다.
일 실시형태에서, GLP-1 수용체 작용제 및 GIPR 길항제는 병태 및/또는 질환을 치료하기 위해 요구되는 각각의 화합물보다 적어도 약 1.1 내지 1.4, 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10배 더 낮은 용량으로 존재한다.
일 실시형태에서, GLP-1 수용체 작용제는 GLP-1(7-37) 또는 GLP-1(7-37) 유사체이다.
일 실시형태에서, GLP-1 수용체 작용제는 엑세나타이드, 리라글루타이드, 릭시세나타이드, 알비글루타이드, 둘라글루타이드, 세마글루타이드, 및 타스포글루타이드로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 실시형태에서, GLP-1 수용체 작용제는 GLP-1(7-37)(서열번호 1244); GLP-1(7-36)-NH2　(서열번호 1245); 리라글루타이드; 알비글루타이드; 타스포글루타이드; 둘라글루타이드, 세마글루타이드; LY2428757; 데스아미노-His7,Arg26,Lys34(Nε-(γ-Glu(N-α-헥사데칸오일)))-GLP-1(7-37)(서열번호 1282에 개시된 바와 같은 코어 펩타이드); 데스아미노-His7,Arg26,Lys34(Nε-옥탄오일)-GLP-1(7-37)(서열번호 1283); Arg26,34,Lys38(Nε-(ω-카복시펜타데칸오일))-GLP-1(7-38)(서열번호 1284); Arg26,34,Lys36(Nε-(γ-Glu(N-α-헥사데칸오일)))-GLP-1(7-36)(서열번호 1285에 개시된 바와 같은 코어 펩타이드); Aib8 , 35,Arg26 , 34,Phe31-GLP-1(7-36))(서열번호 1246); HXaa8EGTFTSDVSSYLEXaa22Xaa23AAKEFIXaa30WLXaa33Xaa34G Xaa36Xaa37(여기서, Xaa3은 A, V 또는 G이고; Xaa22는 G, K 또는 E이며; Xaa23은 Q 또는 K이고; Xaa30은 A 또는 E이며; Xaa33은 V 또는 K이고; Xaa34 　는 K, N 또는 R이고; Xaa36은 R 또는 G이며; 그리고 Xaa37은 G, H, P이거나 또는 없음)(서열번호 1247); Arg34-GLP-1(7-37)(서열번호 1248); Glu30-GLP-1(7-37)(서열번호 1249); Lys22-GLP-1(7-37)(서열번호 1250); Gly8,36,Glu22-GLP-1(7-37)(서열번호 1251); Val8,Glu22,Gly36-GLP-1(7-37)(서열번호 1252); Gly8 , 36,Glu22,Lys33,Asn34-GLP-1(7-37)(서열번호 1253); Val8,Glu22,Lys33,Asn34,Gly36-GLP-1(7-37)(서열번호 1254); Gly8 , 36,Glu22,Pro37-GLP-1(7-37)(서열번호 1255); Val8,Glu22,Gly36Pro37-GLP-1(7-37)(서열번호 1256); Gly8,36,Glu22,Lys33, Asn34,Pro37-GLP-1(7-37)(서열번호 1257); Val8,Glu22,Lys33,Asn34,Gly36,Pro37-GLP-1(7-37)(서열번호 1258); Gly8 , 36,Glu22-GLP-1(7-36)(서열번호 1259); Val8,Glu22,Gly36-GLP-1(7-36)(서열번호 1260); Val8,Glu22,Asn34,Gly36-GLP-1(7-36)(서열번호 1261); 및 Gly8 , 36,Glu22,Asn34-GLP-1(7-36)(서열번호 1262)으로 이루어진 군으로부터 선택된다.
다른 실시형태에서, 대상체는 포유류이다. 다른 실시형태에서, 대상체는 인간이다. 다른 실시형태에서, GIPR은 인간 GIPR이다. 다른 실시형태에서, 투여하는 것은 비경구 주사에 의한다. 다른 실시형태에서, 투여하는 것은 피하 주사에 의한다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 인간 GIPR 폴리펩타이드에 특이적으로 결합하고 GIP 리간드에 의해 GIPR의 활성화를 저해하는 항원 결합 단백질을 제공한다. 일 실시형태에서, 항원 결합 단백질은 GIPR에 대한 GIP 리간드 결합을 저해한다. 다른 실시형태에서, 항원 결합 단백질은 인간 항원 결합 단백질이다. 다른 실시형태에서, 항원 결합 단백질은 인간 항체이다. 다른 실시형태에서, 항원 결합 단백질은 단클론성 항체이다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 앞서 언급한 실시형태 중 임의의 하나에 따른 적어도 하나의 항원 결합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 앞서 언급한 실시형태 중 임의의 하나에 따른 항원 결합 단백질을 암호화하는 핵산 분자를 제공한다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 앞서 언급한 실시형태 중 임의의 하나에 따른 항원 결합 단백질을 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 벡터를 제공한다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 앞서 언급한 실시형태 중 임의의 하나에 따른 항원 결합 단백질을 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 숙주 세포 또는 앞서 언급한 실시형태 중 임의의 하나에 따른 항원 결합 단백질을 암호화하는 핵산 분자를 포함하는 벡터를 제공한다. 다른 양상에서, 본 개시내용은 벡터에 의해 발현되는 인간 GIPR 폴리펩타이드에 특이적으로 결합하는 항원 결합 단백질을 제공한다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 앞서 언급한 실시형태 중 임의의 하나에 따른 항원 결합 단백질의 제조 방법을 제공하되, 상기 방법은 항원 결합 단백질을 분비하는 숙주 세포에서 항원 결합 단백질을 발현시키는 단계, 및, 이어서, 세포 배양 배지로부터 항원 결합 단백질을 정제하는 단계를 포함한다. 다른 양상에서 본 개시내용은 숙주 세포로부터 정제된 인간 GIPR 폴리펩타이드에 특이적으로 결합하는 항원 결합 단백질을 제공한다.
다른 양상에서, 본 개시내용은 앞서 언급한 실시형태 중 임의의 하나의 항원 결합 단백질 또는 요법에서 사용하기 위한 앞서 언급한 실시형태 중 임의의 하나의 약제학적 조성물을 제공한다.
본 개시내용은 GIP의 생물학적 활성을 차단 또는 방해함으로써 대사 장애, 예컨대 글루코스 대사의 장애(예를 들어, 2형 당뇨병, 상승된 글루코스 수준, 상승된 인슐린 수준, 이상지질혈증, 대사 증후군(X 증후군 또는 인슐린 내성 증후군), 포도당뇨증, 대사성산증, 1형 당뇨병, 비만 및 비만에 의해 악화되는 병태)를 치료하는 방법을 제공한다. 일 실시형태에서, 치료적 유효량의 단리된 인간 GIPR 결합 단백질은 이러한 치료가 필요한 대상체에게 투여된다. 투여 및 전달 방법이 또한 제공된다.
실시예를 포함하는 본 명세서에서 사용되는 재조합 폴리펩타이드 및 핵산은 일반적으로 문헌[Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989) 또는 Current Protocols in Molecular Biology (Ausubel et al., eds., Green Publishers Inc. 및 Wiley and Sons 1994)]에 제시된 것이며, 이들 둘 다 본 명세서에 임의의 목적을 위하여 참고로 포함된다.
본 명세서에서 사용되는 표제 부문은 단지 조직화 목적을 위한 것이며, 기재된 대상으로 제한하는 것으로 해석되어서는 안 된다.
본 명세서에서 달리 정의되지 않는 한, 본 출원과 관련하여 사용되는 과학적 및 기술적 용어는 당업자에 의해 통상적으로 이해되는 의미를 가질 것이다. 추가로, 문맥에 의해 달리 요구되지 않는 한, 단수 용어는 복수를 포함할 것이며, 복수 용어는 단수를 포함할 것이다.
일반적으로, 본 명세서에 기재된 세포 및 조직 배양, 분자 생물학, 면역학, 미생물학, 유전학 및 단백질 및 핵산 화학 및 혼성화와 관련되어 사용되는 명명법 및 기법은 당업계에 잘 공지되고 통상적으로 사용되는 것이다. 본 출원의 방법 및 기법은 일반적으로 당업계에 잘 공지된 통상적인 방법에 따라 그리고 달리 표시되지 않는 한, 본 명세서 전체적으로 인용 및 논의되는 다양한 일반적이고 더 구체적인 참고문헌에 기재된 바와 같이 수행된다. 예를 들어, 본 명세서에 참고로 포함된 문헌[Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (2001), Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates (1992), 및 Harlow and Lane Antibodies: A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1990)] 참조. 효소적 정제 기법은 당업계에서 통상적으로 수행되거나 또는 본 명세서에 기재된 제조업자의 명세서에 따라 수행된다. 본 명세서에 기재된 분석 화학, 합성 유기 화학 및 의학 및 약제 화학과 관련하여 사용되는 용어, 및 이의 실험 절차 및 기법은 당업계에 잘 공지되어 있고 통상적으로 사용되는 것이다. 표준 기법은 화학적 합성, 화학적 분석, 약제학적 제제, 제형 및 전달 및 환자의 치료를 위해 사용된다.
본 발명은 본 명세서에 기재된 특정 방법, 프로토콜 및 시약 등으로 제한되지 않으며, 이들은 변할 수 있다는 것이 이해되어야 한다. 본 명세서에서 사용되는 용어는 특정 실시형태만을 기재하는 목적을 위한 것이며, 청구범위에 의해서만 정해지는 개시된 범주를 제한하는 것으로 의도되지 않는다.
작업 실시예 이외의 또는 달리 표시된 경우에, 본 명세서에서 사용되는 성분 또는 반응 조건의 양을 표현하는 모든 숫자는 용어 "약"에 의해 모든 예에서 변형되는 바와 같이 이해되어야 한다. 백분율과 관련하여 사용될 때 용어 "약"은 ±1%를 의미한다.
관례에 따라 본 명세서에서 사용되는 단수의 용어는 달리 구체적으로 표시되지 않는 한 하나 이상의 의미한다.
본 명세서에서 사용되는 용어 "아미노산" 및 "잔기"는 상호 호환 가능하며, 펩타이드 또는 폴리펩타이드와 관련하여 사용될 때, 천연 유래와 합성 아미노산뿐만 아니라 아미노산 유사체, 아미노산 모방체 및 천연 유래 아미노산과 화학적으로 유사한 비-천연 유래 아미노산를 모두 지칭한다.
"천연 유래 아미노산"은 유전자 암호에 의해 암호화된 아미노산뿐만 아니라 합성 후 변형된 유전자 암호에 의해 암호화된 해당 아미노산, 예를 들어, 하이드록시프롤린, γ-카복시글루타메이트, 및 O-포스포세린이다. 아미노산 유사체는 천연 유래 아미노산과 동일한 기본 구조를 갖는 화합물, 즉, 수소, 카복실기, 아미노기 및 R기에 결합된 α 탄소, 예를 들어, 호모세린, 노르류신, 메티오닌 설폭사이드, 메티오닌 메틸 설포늄이다. 이러한 유사체는 변형된 R기(예를 들어, 노르류신) 또는 변형된 펩타이드 골격을 가질 수 있지만, 천연 유래 아미노산과 동일한 기본적 화학 구조를 보유할 것이다.
"아미노산 모방체"는 아미노산의 일반적인 화학적 구조와 상이한 구조를 갖지만, 천연 유래 아미노산과 유사한 방식으로 작용하는 화학적 화합물이다. 예는 아마이드, β-, γ-, δ-아미노산의 메타크릴로일 또는 아크릴로일 유도체(예컨대, 피페리딘-4-카복실산) 등을 포함한다.
"비-천연 유래 아미노산"은 천연 유래 아미노산과 동일한 기본적 화학 구조를 갖지만, 번역 복합체에 의해 늘어나는 폴리펩타이드 쇄 내로 혼입되지 않는 화합물이다. "비-천연 유래 아미노산"은 또한 천연으로 암호화된 아미노산(20가지 공통 아미노산을 포함하지만, 이들로 제한되지 않음)의 변형(예를 들어, 번역후 변형)에 의해 생기지만, 번역 복합체에 의해 늘어나는 폴리펩타이드 쇄 내로 그 자체가 자연적으로 혼입되지 않는 아미노산을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 폴리펩타이드 서열 내로 삽입된 또는 폴리펩타이드 서열 내 야생형 잔기로 치환될 수 있는 비천연 유래 아미노산 예의 비제한적 목록은 β-아미노산, 동종아미노산, 환식 아미노산 및 유도체화된 측쇄를 갖는 아미노산을 포함한다. 예는 (L-형태 또는 D-형태로; 삽입 어구에서와 같이 약칭): 시트룰린(Cit), 호모시트룰린(hCit), Nα-메틸시트룰린(NMeCit), Nα-메틸호모시트룰린(Nα-MeHoCit), 오르니틴(Orn), Nα-메틸오르니틴(Nα-MeOrn 또는 NMeOrn), 사르코신(Sar), 호모라이신(hLys 또는 hK), 호모알기닌(hArg 또는 hR), 호모글루타민(hQ), Nα-메틸알기닌(NMeR), Nα-메틸류신(Nα-MeL 또는 NMeL), N-메틸호모라이신(NMeHoK), Nα-메틸글루타민(NMeQ), 노르류신(Nle), 노르발린(Nva), 1,2,3,4-테트라하이드로아이소퀴놀린(Tic), 옥타하이드로인돌-2-카복실산(Oic), 3-(1-나프틸)알라닌(1-Nal), 3-(2-나프틸)알라닌(2-Nal), 1,2,3,4-테트라하이드로아이소퀴놀린(Tic), 2-인단일글리신(IgI), 파라-아이오도페닐알라닌(pI-Phe), 파라-아미노페닐알라닌(4AmP 또는 4-아미노-Phe), 4-구아니디노 페닐알라닌(Guf), 글리실라이신("K(Nε-글리실)"또는 "K(글리실)"또는 "K(gly)"로 약칭), 나이트로페닐알라닌(나이트로phe), 아미노페닐알라닌(아미노phe 또는 아미노-Phe), 벤질페닐알라닌(벤질phe), γ-카복시글루탐산(γ-카복시glu), 하이드록시프롤린(하이드록시pro), p-카복실-페닐알라닌(Cpa), α-아미노아디프산(Aad), Nα-메틸 발린(NMeVal), N-α-메틸 류신(NMeLeu), Nα-메틸노르류신(NMeNle), 사이클로펜틸글리신(Cpg), 사이클로헥실글리신(Chg), 아세틸알기닌(아세틸arg), α,β-다이아미노프로피온산(Dpr), α,γ-다이아미노뷰티르산(Dab), 다이아미노프로피온산(Dap), 사이클로헥실알라닌(Cha), 4-메틸-페닐알라닌(MePhe), β,β-다이페닐-알라닌(BiPhA), 아미노뷰티르산(Abu), 4-페닐-페닐알라닌(또는 바이페닐알라닌; 4Bip), α-아미노-아이소뷰티르산(Aib), 베타-알라닌, 베타-아미노프로피온산, 피페리딘산, 아미노카프로산, 아미노헵탄산, 아미노피멜산, 데모신, 다이아미노피멜산, N-에틸글리신, N-에틸아스파라긴, 하이드록시라이신, 알로-하이드록시라이신, 아이소데모신, 알로-아이소류신, N-메틸글리신, N-메틸아이소류신, N-메틸발린, 4-하이드록시프롤린(Hyp), γ-카복시글루타메이트, ε-N,N,N-트라이메틸라이신, ε-N-아세틸라이신, O-포스포세린, N-아세틸세린, N-폼일메티오닌, 3-메틸히스티딘, 5-하이드록시라이신, ω-메틸알기닌, 4-아미노-O-프탈산(4APA), 및 다른 유사한 아미노산, 및 임의의 구체적으로 열거된 것의 유도체화된 형태를 포함한다.
용어 "단리된 핵산 분자"는 총 핵산이 공급원 세포로부터 단리될 때 핵산과 함께 자연적으로 발견된 폴리펩타이드, 펩타이드, 지질, 탄수화물, 폴리뉴클레오타이드 또는 다른 물질의 적어도 약 50%로부터 단리된 5'으로부터 3' 말단으로 데옥시리보뉴클레오타이드 또는 리보뉴클레오타이드 염기의 단일 또는 이중-가닥 중합체(예를 들어, 본 명세서에 제공된 GIPR 핵산 서열), 또는 이의 유사체를 지칭한다. 바람직하게는, 단리된 핵산 분자는 임의의 다른 오염 핵산 분자가, 또는 폴리펩타이드 생산 또는 그의 치료적, 진단적, 예방적 또는 연구 용도에서 그의 용도를 방해하는 핵산의 천연 환경에서 발견되는 다른 분자가 실질적으로 없다.
용어 "단리된 폴리펩타이드"는 공급원 세포로부터 단리될 때 폴리펩타이드와 함께 자연적으로 발견되는 폴리펩타이드, 펩타이드, 지질, 탄수화물, 폴리뉴클레오타이드 또는 다른 물질의 적어도 약 50%로부터 분리된 폴리펩타이드(예를 들어, 본 명세서에 제공된 GIPR 폴리펩타이드 서열 또는 본 발명의 항원 결합 단백질)를 지칭한다. 바람직하게는, 단리된 폴리펩타이드는 임의의 다른 오염 폴리펩타이드가 또는 그의 치료적, 진단적, 예방적 또는 연구 용도를 방해하는 그의 천연 환경에서 발견된 다른 오염물질이 실질적으로 없다.
용어 "암호화하는"은 1종 이상의 아미노산을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드 서열을 지칭한다. 상기 용어는 시작 또는 중단 코돈을 필요로 하지 않는다.
2 이상의 핵산 또는 폴리펩타이드 서열과 관련하여 용어 "동일한" 및 "동일성" 백분율은 동일한 2 이상의 서열 또는 하위 서열을 지칭한다. "동일성 백분율"은 비교 분자에서 아미노산 또는 뉴클레오타이드 사이에서 동일한 잔기의 백분율을 의미하며, 비교 중인 분자 중 가장 작은 것의 크기에 기반하여 계산된다. 이들 계산을 위해, 정렬에서 갭은 (만약에 있다면) 수학적 모델 또는 컴퓨터 프로그램(즉, "알고리즘")에 의해 처리될 수 있다. 정렬된 핵산 또는 폴리펩타이드의 동일성을 계산하기 위해 사용될 수 있는 방법은 문헌[Computational Molecular Biology, (Lesk, A. M., ed.), (1988) New York: Oxford University Press; Biocomputing Informatics and Genome Projects, (Smith, D. W., ed.), 1993, New York: Academic Press; Computer Analysis of Sequence Data, Part I, (Griffin, A. M., and Griffin, H. G., eds.), 1994, New Jersey: Humana Press; von Heinje, G., (1987) Sequence Analysis in Molecular Biology, New York: Academic Press; Sequence Analysis Primer, (Gribskov, M. and Devereux, J., eds.), 1991, New York: M. Stockton Press; 및 Carillo et al., (1988) SIAM J. Applied Math. 48:1073]에 기재된 것을 포함한다.
동일성 백분율을 계산함에 있어서, 계산 중인 서열은 서열 간의 가장 큰 매치를 제공하는 방법으로 정렬된다. 동일성 백분율을 결정하기 위해 사용되는 컴퓨터 프로그램은 GCG 프로그램 패키지인데, 이는 GAP을 포함한다(Devereux et al., (1984) Nucl. Acid Res. 12:387; 위스콘신주 메디슨에 소재한 위스콘신 유니버시티의 제네틱스 컴퓨터 그룹(Genetics Computer Group)). 컴퓨터 알고리즘 GAP는 서열 동일성 백분율이 결정되는 2개의 폴리펩타이드 또는 폴리뉴클레오타이드를 정렬하기 위해 사용된다. 서열은 그들의 각각의 아미노산 또는 뉴클레오타이드에 대한 최적의 매칭(알고리즘에 의해 결정된 바와 같은 "매칭된 너비")을 위해 정렬된다. 갭 오프닝 페널티(3x 평균 대각선으로서 계산하되, "평균 대각선"은 사용 중인 비교 매트릭스의 대각선의 평균이고; "대각선"은 특정 비교 매트릭스에 의해 각각의 완전한 아미노산 매치로 부여된 스코어 또는 수임) 및 갭 익스텐션 페널티(보통 갭 오프닝 페널티의 1/10배)뿐만 아니라 비교 매트릭스, 예컨대 PAM 250 또는 BLOSUM 62는 알고리즘과 함께 사용된다. 특정 실시형태에서, 표준 비교 매트릭스(PAM 250 비교 매트릭스에 대해 문헌[Dayhoff et al., (1978) Atlas of Protein Sequence and Structure 5:345-352]; BLOSUM 62 비교 매트릭스에 대해 문헌[Henikoff et al.,　(1992) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 89:10915-10919] 참조)가 또한 알고리즘에 의해 사용된다.
GAP 프로그램을 이용하여 폴리펩타이드 또는 뉴클레오타이드 서열에 대해 동일성 백분율을 결정하기 위한 권장된 매개변수는 다음과 같다:
알고리즘: 문헌[Needleman et al., 1970, J. Mol. Biol. 48:443-453];
비교 매트릭스: 문헌[Henikoff et al., 1992, 상기 참조]으로부터의 BLOSUM 62;
갭 페널티: 12(그러나 말단 갭에 대해 페널티가 없음)
갭 길이 페널티: 4
유사성에 대한 역치: 0
두 아미노산 서열을 정렬하기 위한 특정 정렬 계획은 두 서열의 짧은 영역만의 매칭을 초래할 수 있고, 이 작은 정렬 영역은 2개의 전장 서열 사이에 상당한 관계가 없다고 해도 매우 높은 서열 동일성을 가질 수 있다. 따라서, 표적 폴리펩타이드의 적어도 50개의 인접한 아미노산에 걸쳐 있는 정렬을 초래하는 것이 요망된다면 선택된 정렬 방법(예를 들어, GAP 프로그램)은 조정될 수 있다.
용어 "GIPR 폴리펩타이드" 및 "GIPR 단백질"은 상호 호환적으로 사용되고, 포유류, 예컨대 인간 또는 마우스에서 발현된 천연 유래 야생형 폴리펩타이드를 의미하고, 천연 유래 대립유전자(예를 들어, 인간 GIPR 단백질의 천연 유래 대립유전자 형태)를 포함한다. 본 개시내용의 목적을 위해, 용어 "GIPR 폴리펩타이드"는 466개의 아미노산 잔기로 이루어지고 뉴클레오타이드 서열 서열번호 1202, 또는 서열번호 1203에 의해 암호화되고, 430개의 아미노산 잔기로 이루어지고 핵산 서열 서열번호 1204, 또는 서열번호 1205에 의해 암호화되며, 493개의 아미노산 잔기로 이루어지고 서열번호 1206, 또는 서열번호 1207의 핵산 서열에 의해 암호화되며, 460개의 아미노산 잔기로 이루어지고 서열번호 1208, 또는 서열번호 1209의 핵산 서열에 의해 암호화되며, 230개의 아미노산 잔기로 이루어지고 서열번호 1210의 핵산 서열에 의해 암호화되는, 임의의 전장 GIPR 폴리펩타이드, 예를 들어, 서열번호 1201을 지칭하기 위해 상호 호환적으로 사용될 수 있다.
용어 "GIPR 폴리펩타이드"는 또한 천연 유래 GIPR 폴리펩타이드 서열(예를 들어, 서열번호 1201, 1203 또는 1205)이 변형된 GIPR 폴리펩타이드를 포함한다. 이러한 변형은 비-천연 유래 아미노산, 비천연 유래 아미노산 유사체 및 아미노산 모방체에 의한 치환을 포함하는 하나 이상의 아미노산 치환을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
다양한 실시형태에서, GIPR 폴리펩타이드는 천연 유래 GIPR 폴리펩타이드에 대해 적어도 약 85% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 1201, 1203 또는 1205)을 포함한다. 다른 실시형태에서, GIPR 폴리펩타이드는 천연 유래 GIPR 폴리펩타이드 아미노산 서열에 대해 적어도 약 90%, 또는 약 95, 96, 97, 98 또는 99% 동일한 아미노산 서열(예를 들어, 서열번호 1201, 1203 또는 1205)을 포함한다. 이러한 GIPR 폴리펩타이드는 바람직하게는, 필요하지는 않지만, 야생형 GIPR 폴리펩타이드의 적어도 하나의 활성, 예컨대 GIP에 결합하는 능력을 가진다. 본 발명은 또한 이러한 GIPR 폴리펩타이드 서열을 암호화하는 핵산 분자를 포함한다.
용어 "GIPR 활성 분석"(또한 "GIPR 기능성 분석"으로서 지칭됨)은 세포 환경에서 GIP 또는 GIP 결합 단백질 활성을 측정하기 위해 사용될 수 있는 분석을 의미한다. 일 실시형태에서, "활성"(또는 "기능성") 분석"은 GIPR 발현 세포에서의 cAMP 분석일 수 있고, 이때 GIP는 cAMP 신호를 유도하며, GIP/GIPR 결합 단백질의 활성은 GIP 리간드의 존재/부재 하에 측정될 수 있고, 이때 IC50/EC50 및 저해/활성화 정도가 얻어질 수 있다(Biochemical and Biophysical Research Communications (2002) 290:1420-1426). 다른 실시형태에서, "활성"(또는 "기능성") 분석은 췌장 베타 세포에서의 인슐린 분비 분석일 수 있으며, 이때 GIP는 글루코스-의존적 인슐린 분비를 유도할 수 있고, GIP/GIPR 결합 단백질의 활성은 GIP 리간드의 존재/부재 하에 측정될 수 있으며, 이때 IC50/EC50 및 저해/활성화 정도가 얻어질 수 있다(Biochemical and Biophysical Research Communications (2002) 290:1420-1426).
용어 "GIPR 결합 분석"은 GIPR에 대한 GIP의 결합을 측정하기 위해 사용될 수 있는 분석을 의미한다. 일 실시형태에서, "GIPR 결합 분석"은 GIPR 발현 세포에 대해 형광-표지 GIP 결합을 측정하는 FMAT 또는 FACS를 이용하는 분석일 수 있고, GIP/GIPR 결합 단백질의 활성은 GIPR 발현 세포에 대한 형광-표지 GIP 결합을 대신하여 측정될 수 있다. 다른 실시형태에서, "GIPR 결합 분석"은 GIPR 발현 세포에 대한 방사성 표지 GIP 결합을 측정하는 분석일 수 있고, GIP/GIPR 결합 단백질의 활성은 GIPR 발현 세포에 대한 방사성 표지 GIP 결합을 대신하여 측정될 수 있다(Biochimica et Biophysica Acta (2001) 1547:143-155).
용어 "GIP", "위 저해 폴리펩타이드", "글루코스-의존적 인슐린 분비성 펩타이드" 및 "GIP 리간드"는 상호 호환적으로 사용되고, 포유류, 예컨대 인간 또는 마우스에서 발현된 천연 유래 야생형 폴리펩타이드를 의미하고, 천연 유래 대립유전자(예를 들어, 인간 GIP 단백질의 천연 유래 대립유전자 형태)를 포함한다. 본 개시내용의 목적을 위해, 용어 "GIP"는 임의의 성숙 GIP 폴리펩타이드를 지칭하기 위해 상호 호환적으로 사용될 수 있다.
성숙 인간 GIP의 42개의 아미노산 서열은 다음과 같고:
YAEGTFISDY SIAMDKIHQQ DFVNWLLAQK GKKNDWKHNI TQ (서열번호 1211)
다음의 DNA 서열에 의해 암호화된다:
tatgcggaag gcacctttat tagcgattat agcattgcga tggataaaat tcatcagcag gattttgtga actggctgct ggcgcagaaa ggcaaaaaaa acgattggaa acataacatt acccag (서열번호 1212).
성숙 뮤린 GIP의 42개의 아미노산 서열은 다음과 같고:
YAEGTFISDY SIAMDKIRQQ DFVNWLLAQR GKKSDWKHNI TQ (서열번호 1213)
다음의 DNA 서열에 의해 암호화된다:
tatgcggaag gcacctttat tagcgattat agcattgcga tggataaaat tcgccagcag gattttgtga actggctgct ggcgcagcgc ggcaaaaaaa gcgattggaa acataacatt acccag (서열번호 1214).
성숙 래트 GIP의 42개의 아미노산 서열은 다음과 같고:
YAEGTFISDY SIAMDKIRQQ DFVNWLLAQK GKKNDWKHNL TQ (서열번호 1215)
다음의 DNA 서열에 의해 암호화된다:
tatgcggaag gcacctttat tagcgattat agcattgcga tggataaaat tcgccagcag gattttgtga actggctgctg gcgcagaaag gcaaaaaaaa cgattggaaa cataacctga cccag (서열번호 1216).
본 명세서에서 사용되는 "항원 결합 단백질"은 구체화된 표적 항원, 예컨대 GIPR 폴리펩타이드(예를 들어, 서열번호 1201, 1203 또는 1205에서 제공된 바와 같은 인간 GIPR 폴리펩타이드)에 특이적으로 결합하는 임의의 단백질을 의미한다. 상기 용어는 적어도 2개의 전장 중쇄 및 2개의 전장 경쇄뿐만 아니라 이의 유도체, 변이체, 단편 및 돌연변이를 포함하는 무손상 항체를 포함한다. 항체 단편의 예는 Fab, Fab', F(ab')2 및 Fv 단편을 포함한다. 항원 결합 단백질은 또한 도메인 항체, 예컨대 이하에 추가로 기재하는 바와 같은 나노바디 및 scFv를 포함한다.
일반적으로, 항원 결합 단백질이 비-GIPR 분자에 대해 본질적으로 배경 결합을 나타낼 때, GIPR 항원 결합 단백질은 그의 표적 항원 GIPR에 "특이적으로 결합하는 것"으로 언급된다. 그러나, GIPR에 특이적으로 결합하는 항원 결합 단백질은 상이한 종으로부터의 GIPR 폴리펩타이드와 교차 반응할 수 있다. 전형적으로, 해리 상수(KD)가 표면 플라즈몬 공명 기법(예를 들어, 비아코어(BIACore), 스웨덴 웁살라에 소재한 GE-헬스케어(GE- Healthcare)) 또는 역학 배제 분석(Kinetic Exclusion Assay)(KinExA, 아이다호주 보이시에 소재한 사피다인(Sapidyne))을 통해 측정하여 10-7M 이하일 때, GIPR 항원 결합 단백질은 인간 GIPR에 특이적으로 결합한다. GIPR 항원 결합 단백질은 기재한 방법을 이용하여 측정하여 KD가 5x 10-9M 이하일 때 "고친화도"로, 그리고 KD가 5x 10-10M 이하일 때 "매우 고친화도"로 인간 GIPR에 특이적으로 결합한다.
"항원 결합 영역"은 구체화된 항원에 특이적으로 결합하는 단백질, 또는 단백질의 일부를 의미한다. 예를 들어, 항원과 상호작용 하고 항원 결합 단백질 상에 그의 특이성 및 친화도를 부여하는 아미노산 잔기를 포함하는 항원 결합 단백질의 부분은 "항원 결합 영역"으로서 지칭된다. 항원 결합 영역은 전형적으로 면역글로불린, 단일쇄 면역글로불린, 또는 낙타 항원의 하나 이상의 "상보성 결합 영역"("CDR")을 포함한다. 특정 항원 결합 영역은 또한 하나 이상의 "프레임워크" 영역을 포함한다. "CDR"은 항원 결합 특이성 및 친화도에 기여하는 아미노산 서열이다. "프레임워크" 영역은 항원 결합 영역과 항원 사이의 결합을 촉진시키기 위해 CDR의 적절한 입체배좌를 유지하는 데 도움을 줄 수 있다.
재조합 GIPR 항원 결합 단백질을 포함하는 "재조합 단백질"은 재조합 기법을 이용하여, 즉, 본 명세서에 기재된 바와 같은 재조합 핵산의 발현을 통해 생성된 단백질이다. 재조합 단백질의 생성을 위한 방법 및 기법은 당업계에 잘 공지되어 있다.
용어 "항체"는 표적 항원에 대한 특정 결합을 위해 무손상 항체와 경쟁할 수 있는 임의의 아이소타입의 무손상 면역글로불린 또는 이의 단편을 지칭하며, 예를 들어, 키메라, 인간화된, 전체 인간, 및 이중 특이성 항체를 포함한다. 이와 같은 "항체"는 항원 결합 단백질의 종이다. 무손상 항체는 일반적으로 적어도 2개의 전장 중쇄 및 2개의 전장 경쇄를 포함할 것이다. 항체는 단일 공급원으로부터만 유래될 수 있거나, 또는 "키메라"일 수 있으며, 즉, 항체의 상이한 부분이 이하에 추가로 기재되는 바와 같은 2개의 상이한 항체로부터 유래될 수 있다. 항원 결합 단백질, 항체 또는 결합 단편은 재조합 DNA 기법에 의해, 또는 무손상 항체의 효소적 또는 화학적 절단에 의해 하이브리도마에서 생성될 수 있다.
항체 또는 이의 단편에 대해 사용되는 용어 "경쇄"는 결합 특이성을 부여하기 위해 충분한 가변 영역 서열을 갖는 전장 경쇄 및 이의 단편을 포함한다. 전장 경쇄는 가변 영역 도메인인 VL, 및 불변 영역 도메인인 CL을 포함한다. 경쇄의 가변 영역 도메인은 폴리펩타이드의 아미노-말단에 있다. 경쇄는 카파쇄 및 람다쇄를 포함한다.
항체 또는 이의 단편에 대해 사용되는 용어 "중쇄"는 결합 특이성을 부여하기 위해 충분한 가변 영역 서열을 갖는 전장 중쇄 및 이의 단편을 포함한다. 전장 중쇄는 가변 영역 도메인인 VH, 및 3개의 불변 영역 도메인인 CH1, CH2 및 CH3을 포함한다. VH 도메인은 폴리펩타이드의 아미노-말단에 있고, CH 도메인은 카복실-말단에 있으며, CH3은 폴리펩타이드의 카복시-말단에 가장 가깝다. 중쇄는 IgG(IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4 서브타입을 포함), IgA(IgA1 및 IgA2 서브타입을 포함), IgM 및 IgE를 포함하는 임의의 아이소타입을 가질 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 항체 또는 면역글로불린쇄(중쇄 또는 경쇄)의 "면역학적으로 기능성인 단편"(또는 단순히 "단편")이라는 용어는 (해당 부분이 얻어지거나 또는 합성되는 방법과 상관없이) 전장쇄에 존재하는 적어도 일부의 아미노산이 없지만, 항원에 특이적으로 결합할 수 있는 항체의 부분을 포함하는 항원 결합 단백질이다. 이러한 단편은 그들이 표적 항원에 특이적으로 결합하고 주어진 에피토프에 대한 특이적 결합을 위해 무손상 항체를 포함하는 다른 항원 결합 단백질와 경쟁할 수 있다는 점에서 생물학적으로 활성이다.
이들 생물학적으로 활성인 단편은 재조합 DNA 기법에 의해 생성될 수 있거나, 또는 무손상 항체를 포함하는 항원 결합 단백질의 효소적 또는 화학적 절단에 의해 생성될 수 있다. 면역학적으로 기능성인 면역글로불린 단편은 Fab, Fab', 및 F(ab')2 단편을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
다른 실시형태에서, Fv, 도메인 항체 및 scFv는 본 발명의 항체로부터 유래될 수 있다.
본 명세서에 개시된 항원 결합 단백질의 기능성 부분, 예를 들어, 하나 이상의 CDR은 신체 내 특정 표적으로 향하는 치료제를 생성하도록 제2 단백질에 또는 소분자에 공유결합되어, 2작용성 치료적 특성을 갖거나, 또는 연장된 혈청 반감기를 가질 수 있다는 것이 추가로 상정된다.
"Fab 단편"은 하나의 경쇄 및 CH1 및 하나의 중쇄의 가변 영역을 포함한다. Fab 분자의 중쇄는 다른 중쇄 분자와의 이황화 결합을 형성할 수 없다.
"Fc" 영역은 항체의 CH2 및 CH3 도메인을 포함하는 2개의 중쇄 단편을 포함한다. 2개의 중쇄 단편은 2개 이상의 이황화 결합에 의해 그리고 CH3 도메인의 소수성 상호작용에 의해 함께 보유된다.
특정 실시형태에서, 하나 이상의 아미노산 변형은 본 명세서에 제공된 항체의 Fc 영역에 도입되어 Fc 영역 변이체를 생성시킬 수 있다. Fc 영역 변이체는 하나 이상의 아미노산 위치에서 아미노산 변형(예를 들어, 치환)을 포함하는 인간 Fc 영역 서열(예를 들어, 인간 IgG1, IgG2, IgG3 또는 IgG4 Fc 영역)을 포함할 수 있다.
특정 실시형태에서, 본 발명에는 생체내에서 항체의 반감기가 중요한 적용에서 바람직한 후보자가 되게 하는 효과기 기능을 전부가 아니라 일부 갖지만 추가 특정 효과기 기능(예컨대, 보체 및 ADCC)이 불필요하거나 유해한 항체 변이체가 상정된다. 시험관내 및/또는 생체내에서, 세포독성 분석은 CDC 및/또는 ADCC 활성의 감소/결실을 확인하기 위해 수행될 수 있다. 예를 들어, Fc 수용체(FcR) 결합 분석은 항체에 Fc.감마.R 결합이 결여되지만(이에 따라 ADCC 활성이 결여될 가능성이 있음) FcRn 결합 능력을 계속 갖는 것을 보장하기 위해 수행될 수 있다. ADCC, NK 세포를 매개하는 일차 세포는 Fc(RIII만을 발현하는 반면, 단핵구는 Fc(RI, Fc(RII 및 Fc(RIII를 발현한다. 조혈 세포 상의 FcR 발현은 문헌[Ravetch and Kinet, Annu. Rev. Immunol. 9:457-492 (1991)]의 464쪽에서 표 3에 요약되어 있다. 관심 대상의 분자의 ADCC 활성을 평가하는 시험관내 분석에서의 비-제한적 예는 미국 특허 제5,500,362호(예를 들어, 문헌[Hellstrom, I. et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 83:7059-7063 (1986) 및 Hellstrom, I et al., Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 82:1499-1502 (1985)] 참조); 제5,821,337호(문헌[Bruggemann, M. et al., J. Exp. Med. 166:1351-1361 (1987)] 참조)에 기재되어 있다. 대안적으로, 비-방사성 분석 방법이 이용될 수 있다(예를 들어, ACTI.TM. 유세포 분석기를 위한 비-방사성 세포독성 분석(CellTechnology, Inc.(마운틴 뷰, 캘리포니아)); 및 CytoTox 96.RTM. 비-방사성 세포독성 분석(Promega(매디슨, 위스콘신)) 참조). 그러한 분석에 유용한 효과기 세포는 말초 혈액 단핵 세포(PBMC) 및 자연 살해(NK) 세포를 포함한다. 대안적으로, 또는 추가적으로, 관심 대상의 분자의 ADCC 활성은 생체내에서, 예를 들어, 문헌[Clynes et al. Proc. Nat'l Acad. Sci. USA 95:652-656 (1998)]에 개시된 것과 같은 동물 모델에서 평가될 수 있다. C1q 결합 분석은 항체가 C1q를 결합할 수 없고, 이에 따라 CDC 활성이 결여된 것을 확인하기 위해 수행될 수 있다. 예를 들어, WO 2006/029879 및 WO 2005/100402에서의 C1q 및 C3c 결합 ELISA 참조. 보체 활성화를 평가하기 위해, CDC 분석이 수행될 수 있다(예를 들어, 문헌[Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202:163 (1996); Cragg, M. S. et al., Blood 101:1045-1052 (2003); 및 Cragg, M. S. and M. J. Glennie, Blood 103:2738-2743 (2004)] 참조). FcRn 결합 및 생체내 클리어런스/반감기 측정이 또한 당업계에 공지된 방법을 이용하여 수행될 수 있다(예를 들어, 문헌[Petkova, S. B. et al., Int'l. Immunol. 18(12):1759-1769 (2006)] 참조).
일부 실시형태에서, 하나 이상의 아미노산 변형은 신생아 Fc 수용체에 대한 IgG을 증가시키기 위해 본 명세서에 제공된 항체의 Fc 부분에 도입될 수 있다. 특정 실시형태에서, 항체는 EU 넘버링에 따라 다음 세 개의 돌연변이를 포함한다: M252Y, S254T, 및 T256E("YTE 돌연변이")(미국 특허 제8,697,650호; 또한 문헌[Dall'Acqua et al., Journal of Biological Chemistry 281(33):23514-23524 (2006)] 참조). 특정 실시형태에서, YTE 돌연변이는 이의 동족 항원에 결합하는 항체의 능력에 영향을 미치지 않는다. 특정 실시형태에서, YTE 돌연변이는 본래의(즉, 비-YTE 돌연변이체) 항체에 비해 항체의 혈청 반감기를 증가시킨다. 일부 실시형태에서, YTE 돌연변이는 본래의(즉, 비-YTE 돌연변이체) 항체에 비해 항체의 혈청 반감기를 3배 증가시킨다. 일부 실시형태에서, YTE 돌연변이는 본래의(즉, 비-YTE 돌연변이체) 항체에 비해 항체의 혈청 반감기를 2배 증가시킨다. 일부 실시형태에서, YTE 돌연변이는 본래의(즉, 비-YTE 돌연변이체) 항체에 비해 항체의 혈청 반감기를 4배 증가시킨다. 일부 실시형태에서, YTE 돌연변이는 본래의(즉, 비-YTE 돌연변이체) 항체에 비해 항체의 혈청 반감기를 적어도 5배 증가시킨다. 일부 실시형태에서, YTE 돌연변이는 본래의(즉, 비-YTE 돌연변이체) 항체에 비해 항체의 혈청 반감기를 적어도 10배 증가시킨다. 예를 들어, 미국 특허 제8,697,650호 참조; 또한 문헌[Dall'Acqua et al., Journal of Biological Chemistry 281(33):23514-23524 (2006)] 참조.
특정 실시형태에서, YTE 돌연변이체는 항체의 항체-의존성 세포-매개된 세포독성(ADCC) 활성을 조정하기 위한 수단을 제공한다. 특정 실시형태에서, YTEO 돌연변이체는 인간 항원에 대해 유도된 인간화 IgG 항체의 ADCC 활성을 조정하기 위한 수단을 제공한다. 예를 들어, 미국 특허 제8,697,650호 참조; 또한 문헌[Dall'Acqua et al., Journal of Biological Chemistry 281(33):23514-23524 (2006)] 참조. 특정 실시형태에서, YTE 돌연변이체는 혈청 반감기, 조직 분포, 및 항체 활성(예를 들어, IgG 항체의 ADCC 활성)의 동시 조정을 가능하게 한다. 예를 들어, 미국 특허 제8,697,650호 참조; 또한 문헌[Dall'Acqua et al., Journal of Biological Chemistry 281(33):23514-23524 (2006)] 참조.
감소된 효과기 기능을 갖는 항체는 EU 넘버링에 따라 Fc 영역 잔기 238, 265, 269, 270, 297, 327 및 329 중 하나 이상의 치환을 갖는 것들을 포함한다(미국 특허 제6,737,056호). 그러한 Fc 돌연변이체는, EU 넘버링에 따라 알라닌으로 잔기 265 및 297의 치환(즉, EU 넘버링에 따라 D265A 및 N297A)을 갖는 소위 "DANA" Fc 돌연변이체를 포함하여, EU 넘버링에 따라 아미노산 위치 265, 269, 270, 297 및 327 중 둘 이상에서 치환을 갖는 Fc 돌연변이체를 포함한다(미국 특허 제7,332,581호). 특정 실시형태에서, Fc 돌연변이체는 다음 두 개의 아미노산 치환을 포함한다: D265A 및 N297A. 특정 실시형태에서, Fc 돌연변이체는 다음 두 개의 아미노산 치환으로 이루어진다: D265A 및 N297A.
특정 실시형태에서, 야생형 인간 Fc 영역의 위치 329에서의 프롤린(EU 넘버링)(P329)은 글리신 또는 아르기닌, 또는 Fc의 P329와 FcgRIII의 트립토판 잔기 W87 및 W110 사이에서 형성된 Fc/Fc.감마. 수용체 계면 내에서 프롤린 샌드위치를 파괴하기에 충분히 큰 아미노산 잔기로 치환된다(Sondermann et al.: Nature 406, 267-273 (20 Jul. 2000)). 추가의 실시형태에서, Fc 변이체에서 적어도 하나의 추가 아미노산 치환은 S228P, E233P, L234A, L235A, L235E, N297A, N297D, 또는 P331S이고, 추가로 다른 실시형태에서, 상기 적어도 하나의 추가 아미노산 치환은 모두 EU 넘버링에 따라 인간 IgG1 Fc 영역의 L234A 및 L235A 또는 인간 IgG4 Fc 영역의 S228P 및 L235E이다(본 명세서에 그의 전문이 참조로 포함되는 미국 특허 제8,969,526호).
특정 실시형태에서, 폴리펩타이드는 야생형 인간 IgG Fc 영역의 Fc 변이체를 포함하고, 여기서 폴리펩타이드는 글리신으로 치환된 인간 IgG Fc 영역의 P329를 갖고, Fc 변이체는 인간 IgG1 Fc 영역의 L234A 및 L235A에서 또는 인간 IgG4 Fc 영역의 S228P 및 L235E에서 적어도 두 개의 추가 아미노산 치환을 포함하고, 잔기는 EU 넘버링에 따라 넘버링된다(본 명세서에 그의 전문이 참조로 포함되는 미국 특허 제8,969,526호). 특정 실시형태에서, P329G, L234A 및 L235A(EU 넘버링) 치환을 포함하는 폴리펩타이드는, 야생형 인간 IgG Fc 영역을 포함하는 폴리펩타이드에 의해 유도된 ADCC의 적어도 20%로의 ADCC의 하향-조정, 및/또는 ADCP의 하향-조정으로, 인간 Fc.감마.RIIIA 및 Fc.감마.RIIA에 대해 감소된 친화도를 나타낸다(본 명세서에 그의 전문이 참조로 포함되는 미국 특허 제8,969,526호).
특정 실시형태에서, 야생형 인간 Fc 폴리펩타이드의 Fc 변이체를 포함하는 폴리펩타이드는 삼중 돌연변이를 포함한다: EU 넘버링에 따라 위치 Pro329, L234A 및 L235A 돌연변이에서의 아미노산 치환(P329/LALA)(본 명세서에 그의 전문이 참조로 포함되는 미국 특허 제8,969,526호). 특정 실시형태에서, 폴리펩타이드는 다음 아미노산 치환을 포함한다: EU 넘버링에 따라 P329G, L234A, 및 L235A.
FcRs에 대한 결합이 향상되거나 줄어든 특정 항체 변이체는 기재되어 있다(예를 들어, 미국 특허 제6,737,056호; WO 2004/056312, 및 문헌[Shields et al., J. Biol. Chem. 9(2): 6591-6604 (2001)] 참조).
특정 실시형태에서, 항체 변이체는 ADCC를 향상시키는 하나 이상의 아미노산 치환을 갖는 Fc 영역, 예를 들어, Fc 영역의 위치 298, 333, 및/또는 334에서의 치환(EU 넘버링)을 포함한다.
일부 실시형태에서, 예를 들어, 미국 특허 제6,194,551호, WO 99/51642, 및 문헌[Idusogie et al. J Immunol. 164: 4178-4184 (2000)]에 기재된 바와 같이, 변경된(즉, 향상되거나 줄어든) C1q 결합 및/또는 보체 의존성 세포독성(CDC)을 야기하는 변화가 Fc 영역에서 일어난다.
태아에 대한 모체 IgG의 전이를 담당하는(Guyer et al., J. Immunol. 117:587 (1976) 및 Kim et al., J. Immunol. 24:249 (1994)) 신생아 Fc 수용체(FcRn)에 대한 향상된 결합 및 증가된 반감기를 갖는 항체는 US2005/0014934A1호(Hinton 등)에 기재되어 있다.
그러한 항체는 FcRn에 대한 Fc 영역의 결합을 향상시키는 하나 이상의 치환을 그 안에 갖는 Fc 영역을 포함한다. 그러한 Fc 변이체는 EU 넘버링에 따라 Fc 영역 잔기 238, 256, 265, 272, 286, 303, 305, 307, 311, 312, 317, 340, 356, 360, 362, 376, 378, 380, 382, 413, 424 또는 434 중 하나 이상에서 치환, 예를 들어, Fc 영역 잔기 434의 치환(미국 특허 제7,371,826호)을 갖는 것들을 포함한다. 또한, Fc 영역 변이체의 다른 예에 관하여 문헌[Duncan & Winter, Nature 322:738-40 (1988)]; 미국 특허 제5,648,260호; 미국 특허 제5,624,821호; 및 WO 94/29351 참조.
쇄간 이황과 결합이 2개의 Fab' 단편의 2개의 중쇄 사이에 형성되어 F(ab')2 분자를 형성할 수 있도록, "Fab' 단편"은 VH 도메인 및 CH1 도메인 및 또한 CH1과 CH2 도메인 사이의 영역을 포함하는 하나의 경쇄 및 하나의 중쇄의 일부를 포함한다.
"F(ab')2 단편"은 2개의 경쇄와 2개의 중쇄를 포함하는데, 이는 쇄간 이황화 결합이 2개의 중쇄 사이에 형성되도록, CH1과 CH2 도메인 사이에 불변 영역의 일부를 포함한다. 따라서 F(ab')2 단편은 두 중쇄 사이의 이황화 결합에 의해 함께 보유되는 2개의 Fab' 단편으로 구성된다.
"Fv 영역"은 불변 영역이 없는 중쇄와 경쇄 둘 다로부터 형성된 가변 영역을 포함한다.
"단일쇄 항체" 또는 "scFv"는 중쇄 및 경쇄 가변 영역이 가요성 링커에 의해 연결되어 항원-결합 영역을 형성하는 단일 폴리펩타이드쇄를 형성하는 Fv 분자이다. scFv는 국제 특허 출원 공개 WO 88/01649 및 미국 특허 제4,946,778호 및 제5,260,203호에서 상세하게 논의되며, 이의 개시내용은 참고로 포함된다.
"도메인 항체" 또는 "단일쇄 면역글로불린"은 중쇄의 가변 영역 또는 경쇄의 가변 영역만을 포함하는 중쇄의 가변 영역 또는 경쇄의 가변 영역만을 포함하는 면역적으로 기능성인 면역글로불린 단편이다. 도메인 항체의 예는 나노바디(Nanobodies)(등록상표)를 포함한다. 일부 예에서, 2 이상의 VH 영역은 2가 도메인 항체를 생성하기 위해 펩타이드 링커와 공유 결합된다. 2가 도메인 항체의 2개의 VH 영역은 동일 또는 상이한 항원을 표적화할 수 있다.
"2가 항원 결합 단백질" 또는 "2가 항체"는 2개의 항원 결합 영역을 포함한다. 일부 예에서, 2개의 결합 영역은 동일한 항원 특이성을 가진다. 2가 항원 결합 단백질 및 2가 항체는 이중 특이성일 수 있다, 이하 참조.
다중 특이성 항원 결합 단백질" 또는 "다중 특이성 항체"는 하나 초과의 항원 또는 에피토프를 표적화하는 것이다.
"이중 특이성", "이중-특이성" 또는 "작용성" 항원 결합 단백질 또는 항체는 2개의 상이한 항원 결합 부위를 갖는 각각 혼성 항원 결합 단백질 또는 항체이다. 이중 특이성 항원 결합 단백질은 다중특이성 항원 결합 단백질 또는 다중특이성 항체의 종이고, 하이브리도마의 융합 또는 Fab' 단편의 연결을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 다양한 방법에 의해 생성될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Songsivilai and Lachmann, 1990, Clin. Exp. Immunol. 79:315-321; Kostelny et al., 1992, J. Immunol. 148:1547-1553] 참조. 이중 특이성 항원 결합 단백질 또는 항체의 2개 결합 부위는 동일 또는 상이한 단백질 표적 상에 존재할 수 있는 2개의 상이한 에피토프에 결합할 것이다.
항원 결합 단백질(예를 들어, 항체)와 관련하여 사용될 때 용어 "경쟁하다"는 항원 결합 단백질 사이의 경쟁이 시험 하의 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체 또는 이의 면역학적으로 기능성인 단편)이 통상적인 항원(예를 들어, GIPR 또는 이의 단편)에 대한 기준 항원 결합 단백질의 특이적 결합을 방지하거나 또는 저해하는 분석에 의해 결정된다는 것을 의미한다. 수많은 유형의 경쟁적 결합 분석, 예를 들어: 고체상 직접 또는 간접 방사성면역분석(RIA), 고체상 직접 또는 간접 효소 면역분석(EIA), 샌드위치 경쟁 분석(예를 들어, 문헌[Stahli et al., 1983, Methods in Enzymology 9:242-253] 참조); 고체상 직접 바이오틴-아비딘 EIA(예를 들어, 문헌[Kirkland et al., 1986, J. Immunol. 137:3614-3619] 참조) 고체상 직접 표지 분석, 고체상 직접 표지 샌드위치 분석(예를 들어, 문헌[Harlow and Lane, 1988, Antibodies, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Press] 참조); I-125 표지를 이용하는 고체상 직접 표지 RIA(예를 들어, 문헌[Morel et al., 1988, Molec. Immunol. 25:7-15] 참조); 고체상 직접 바이오틴-아비딘 EIA(예를 들어, 문헌[Cheung, et al., 1990, Virology 176:546-552] 참조); 및 직접 표지 RIA(Moldenhauer et al., 1990, Scand. J. Immunol. 32:77-82)가 사용될 수 있다. 전형적으로, 이러한 분석은 이들, 즉, 비결합 시험 항원 결합 단백질 및 표지된 기준 항원 결합 단백질 중 하나를 보유하는 고체 표면 또는 세포에 결합된 정제된 항원의 사용을 수반한다. 경쟁적 저해는 시험 항원 결합 단백질의 존재 하에 고체 표면 또는 세포에 결합된 표지의 양을 결정함으로써 측정된다. 보통, 시험 항원 결합 단백질은 과량으로 존재한다. 경쟁적 결합을 결정하기 위한 방법에 관한 추가적인 상세한 설명은 본 명세서의 예에 제공된다. 보통, 경쟁하는 항원 결합 단백질이 과량으로 존재할 때, 이는 통상적인 항원에 대한 기준 항원 결합 단백질의 특이적 결합을 적어도 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70% 또는 75%만큼 저해할 것이다. 일부 예에서, 결합은 적어도 80%, 85%, 90%, 95% 또는 97% 이상만큼 저해된다.
용어 "항원"은 선택적인 결합제, 예컨대 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체를 포함)에 의해 결합될 수 있고, 추가적으로 해당 항원에 결합할 수 있는 항체를 생성하기 위해 동물에서 사용될 수 있는 분자 또는 분자의 일부를 지칭한다. 항원은 상이한 항원 결합 단백질, 예를 들어, 항체와 상호작용 할 수 있는 하나 이상의 에피토프를 가질 수 있다.
용어 "에피토프"는 항원 결합 단백질(예를 들어, 항체)에 의해 결합되는 분자의 일부이다. 상기 용어는 항원 결합 단백질, 예컨대 항체에 특이적으로 결합할 수 있는 임의의 결정소를 포함한다. 에피토프는 인접 또는 비인접(불연속적)(예를 들어, 폴리펩타이드에서, 폴리펩타이드 서열 내에서 서로 인접하지 않지만, 분자와 관련하여 항원 결합 단백질에 의해 결합되는 아미노산 잔기)일 수 있다. 입체배좌 에피토프는 활성 단백질의 입체배좌 내에 존재하지만, 변성 단백질에 존재하지 않는 에피토프이다. 특정 실시형태에서, 에피토프는 그들이 항원 결합 단백질을 생성하기 위해 사용되는 에피토프와 유사한 3차원 구조를 포함하고, 아직 항원 결합 단백질을 생성하기 위해 사용된 해당 에피토프에서 발견되는 아미노산 잔기를 포함하지 않거나 또는 단지 일부만을 포함한다는 점에서 모방체일 수 있다. 가장 종종, 에피토프는 단백질 상에 존재하지만, 일부 예에서 핵산과 같은 다른 종류의 분자 상에 존재할 수 있다. 에피토프 결정소는 아미노산, 당 측쇄, 포스포릴 또는 설폰일기와 같은 분자의 화학적으로 활성인 표면 그룹화를 포함할 수 있고, 특정 3차원 구조적 특징 및/또는 특정 하전 특징을 가질 수 있다. 일반적으로, 특정 표적 항원에 특이적인 항원 결합 단백질은 단백질 및/또는 거대분자의 복잡한 혼합물에서 표적 항원 상의 에피토프를 우선적으로 인식할 것이다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은, "실질적으로 순수한"은 존재하는 우세한 종이며, 즉, 몰 기준으로 기재된 분자 종이 동일한 혼합물 내 임의의 다른 개개 종보다 흔하다는 것을 의미한다. 특정 실시형태에서, 실질적으로 순수한 분자는 대상 종이 존재하는 모든 거대분자 종의 (몰 기준으로) 적어도 50%를 포함하는 조성물이다. 다른 실시형태에서, 실질적으로 순수한 조성물은 조성물 중에 존재하는 모든 거대분자 종의 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99%를 포함할 것이다. 다른 실시형태에서, 대상 종은 본질적 동질성에 대해 정제되되, 오염 종은 통상적인 검출 방법에 의해 조성물에서 검출될 수 없고, 따라서 조성물은 단일의 검출 가능한 거대분자 종으로 이루어진다.
용어 "치료하는"은 임의의 주관적 또는 객관적 매개변수, 예컨대 경감; 관해; 환자에 대해 더 용인 가능한 증상 또는 손상 생성, 병리 또는 병태의 감소; 퇴보 또는 쇠퇴 속도의 늦춤; 덜 쇠약하게 하는 최종 퇴보 지점의 생성; 환자의 신체적 또는 정신적 웰빙의 개선을 포함하는 손상, 병리 또는 병태의 치료 또는 개선에서의 임의의 성공 징후를 지칭한다. 증상의 치료 또는 개선은 신체 검사, 신경정신병학적 검사 및/또는 정신 의학적 평가를 포함하는 객관적 또는 주관적 매개변수에 기반할 수 있다. 예를 들어, 본 명세서에 제시된 특정 방법은 심혈관계 질환, 예컨대 심혈관계 질환의 유병률을 감소시킴으로써, 심혈관계 질환의 관해를 야기함으로써 그리고/또는 심혈관계 질환과 관련된 증상을 개선시킴으로써 죽상동맥경화증과 같은 심혈관계 질환을 성공적으로 치료한다.
"유효량"은 일반적으로 증상의 중증도 및/또는 빈도를 감소시키고/시키거나, 증상 및/또는 근본적인 원인을 제거하고/하거나 증상의 발생 및/또는 그들의 근본적인 원인을 예방하고/하거나, 질환 상태(예를 들어, 당뇨병, 비만, 이상지질혈증, 상승된 글루코스 수준, 상승된 인슐린 수준 또는 당뇨병성 신경병증)로부터 초래되거나 또는 이와 관련된 손상을 개선시키거나 또는 교정하는 데 충분한 양이다. 일부 실시형태에서, 유효량은 치료적 유효량 또는 예방적 유효량이다. "치료적 유효량"은 질환 상태(예를 들어, 죽상동맥경화증) 또는 증상, 특히 질환 상태와 관련된 상태 또는 증상을 교정하거나, 또는 질환 상태 또는 어떠한 방법으로든 질환과 관련된 임의의 다른 바람직하지 않은 증상의 진행을 달리 예방하거나, 방해하거나, 지연시키거나 또는 반전시키는 데 충분한 양이다. "예방적 유효량"은 대상체에게 투여될 때, 의도된 예방적 효과, 예를 들어, 질환 상태 개시의 예방 또는 지연, 또는 질환 상태 또는 관련 증상의 개시(또는 재발) 가능성 감소를 갖는 약제학적 조성물의 양이다. 전체 치료적 또는 예방적 효과는 반드시 1회 용량의 투여에 의해 생기지 않으며, 일련의 용량의 투여 후에만 생길 수 있다. 따라서, 치료적 또는 예방적 유효량은 1회 이상의 투여로 투여될 수 있다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "치료적 유효 용량" 및 "치료적 유효량"은 치료 중인 질환 또는 장애 증상의 경감 또는 개선을 포함하는, 연구자, 의사 또는 다른 임상의에 의해 추구되는 조직계, 동물 또는 인간에서의 생물학적 또는 의학적 반응을 유발하는 GIPR 결합 단백질의 양, 즉, 하나 이상의 목적으로 하는 생물학적 또는 의학적 반응의 관찰 가능한 수준, 예를 들어 혈당, 인슐린, 트라이글리세라이드 또는 콜레스테롤 수준의 저하; 체중 감소; 또는 내당능, 에너지 소비량 또는 인슐린 민감성의 개선을 뒷받침하는 GIPR 결합 단백질의 양을 의미한다.
용어 "폴리뉴클레오타이드" 또는 "핵산"이 단일 가닥과 이중 가닥 뉴클레오타이드 중합체를 둘 다 포함한다. 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 뉴클레오타이드는 리보뉴클레오타이드 또는 데옥시리보뉴클레오타이드 또는 뉴클레오타이드 유형 중 하나의 변형된 형태일 수 있다. 변형은 염기 변형, 예컨대 브로모유리딘 및 이노신 유도체, 리보스 변형, 예컨대 2',3'-다이데옥시리보스, 및 뉴클레오타이드간 결합 변형, 예컨대 포스포로티오에이트, 포스포로다이티오에이트, 포스포로셀레노에이트, 포스포로다이셀레노에이트, 포스포로아닐로티오에이트, 포스포르아닐라데이트 및 포스포로아미데이트를 포함한다.
용어 "올리고뉴클레오타이드"는 200개 이하의 뉴클레오타이드를 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 의미한다. 일부 실시형태에서, 올리고뉴클레오타이드는 길이가 10 내지 60개의 염기이다. 다른 실시형태에서, 올리고뉴클레오타이드는 길이가 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 또는 20 내지 40개의 뉴클레오타이드이다. 올리고뉴클레오타이드, 예를 들어 돌연변이체 유전자의 구성에서 사용하기 위해 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있다. 올리고뉴클레오타이드는 센스 또는 안티센스 올리고뉴클레오타이드일 수 있다. 올리고뉴클레오타이드는 검출 분석을 위해 방사성 표지, 형광 표지, 합텐 또는 항원 표지를 포함하는 표지를 포함할 수 있다. 올리고뉴클레오타이드는, 예를 들어, PCR 프라이머, 클로닝 프라이머 또는 혼성화 프로브로서 사용될 수 있다.
"단리된 핵산 분자"는 폴리뉴클레오타이드의 일부 또는 모두와 관련되지 않은 게놈의 DNA 또는 RNA, mRNA, cDNA, 또는 합성 유래 또는 이들의 일부 조합물을 의미하며, 이때 단리된 폴리뉴클레오타이드는 천연에서 발견되거나, 또는 그것이 천연에서 연결되지 않은 폴리뉴클레오타이드에 연결된다. 본 개시내용의 목적을 위해, 특정 뉴클레오타이드 서열"을 포함하는 핵산 분자"는 무손상 염색체를 포함하지 않는 것으로 이해되어야 한다. 구체화된 핵산 서열"을 포함하는" 단리된 핵산 분자는 구체화된 서열에 추가로, 10개까지의 또는 심지어 20개까지의 다른 단백질 또는 이의 일부에 대한 암호 서열을 포함할 수 있거나, 또는 인용된 핵산 서열의 암호 영역의 발현을 제어하는 작동 가능하게 연결된 조절 서열을 포함할 수 있고/있거나 벡터 서열을 포함할 수 있다.
달리 구체화되지 않는 한, 본 명세서에 논의되는 임의의 단일-가닥 폴리뉴클레오타이드 서열의 좌선성 말단은 5' 말단이고; 이중 가닥 폴리뉴클레오타이드 서열의 좌선성 방향은 5' 방향으로서 지칭된다. 발생기 RNA 전사체의 5'에서 3' 첨가 방향은 전사 방향으로서 언급되며; RNA 전사체의 5' 말단에 대해 5'인 RNA 전사체와 동일한 서열을 갖는 DNA 가닥 상의 서열 영역은 "상류 서열"로서 지칭되고; RNA 전사체의 3' 말단에 대해 3'인 RNA 전사체와 동일한 서열을 갖는 DNA 가닥 상의 서열 영역은 "하류 서열"로서 지칭된다.
용어 "제어 서열"은 그것이 결찰된 암호 서열의 발현 및 가공에 영향을 미칠 수 있는 폴리뉴클레오타이드 서열을 지칭한다. 이러한 제어 서열의 특성은 숙주 유기체에 의존할 수 있다. 특정 실시형태에서, 원핵생물에 대한 제어 서열은 프로모터, 리보솜 결합 부위, 및 전사 종결 서열을 포함할 수 있다. 예를 들어, 진핵생물에 대한 제어 서열은 전사 인자, 전사 인핸서 서열 및 전사 종결 서열에 대한 하나 또는 복수의 인식 부위를 포함하는 프로모터를 포함할 수 있다. "제어 서열"은 리더 서열 및/또는 융합 상대 서열을 포함할 수 있다.
용어 "벡터"는 숙주 세포 내로 단백질 암호 정보를 전달하기 위해 사용되는 임의의 분자 또는 독립체(예를 들어, 핵산, 플라스미드, 박테리오파지 또는 바이러스)를 의미한다.
용어 "발현 벡터" 또는 "발현 작제물"은 숙주 세포의 형질전환에 적합하고 이와 작동 가능하게 연결된 하나 이상의 이종성 암호 영역의 발현을(숙주 세포와 함께) 지시하고/하거나 제어하는 핵산 서열을 포함하는 벡터를 지칭한다. 발현 작제물은 전사, 번역에 영향을 미치거나 또는 제어하고, 그리고, 인트론이 존재한다면, 그에 작동 가능하게 연결된 암호 영역의 RNA 스플라이싱에 영향을 미치는 서열을 포함할 수 있지만, 이들로 제한되지 않는다.
본 명세서에서 사용되는 바와 같은, "작동 가능하게 연결된"은 용어가 적용되는 구성성분이 적합한 조건 하에 그들의 고유한 기능을 수행하도록 허용하는 관계에 있음을 의미한다. 예를 들어, 단백질 암호 서열의 발현이 제어 서열의 전사 활성과 양립 가능한 조건 하에 달성되도록 단백질 암호 서열에 "작동 가능하게 연결된" 벡터 내 제어 서열이 그에 대해 결찰된다.
용어 "숙주 세포"는 핵산 서열에 의해 형질전환되고, 관심 대상의 유전자를 발현시키는 세포를 의미한다. 상기 용어는, 관심 대상의 유전자가 존재한다면, 자손이 본래 모 세포에 대한 형태와 또는 유전적 구성과 동일하든 아니든 모 세포의 자손을 포함한다.
용어 "폴리펩타이드" 또는 "단백질"은 아미노산 잔기의 중합체를 지칭하기 위해 본 명세서에서 상호 호환적으로 사용된다. 상기 용어는 또한 하나 이상의 아미노산 잔기가 대응하는 천연 유래 아미노산의 유사체 또는 모방체인 아미노산 중합체뿐만 아니라 천연 유래 아미노산 중합체에 적용될 수 있다. 상기 용어는 또한, 예를 들어, 당단백질을 형성하기 위해 탄수화물 잔기의 첨가에 의해 변형되거나, 또는 인산화된 아미노산 중합체를 포함할 수 있다. 폴리펩타이드 및 단백질은 천연-유래 및 비-재조합 세포에 의해 생성될 수 있거나; 또는 그것이 유전자 조작된 또는 재조합 세포에 의해 생성되고, 천연 단백질의 아미노산 서열을 갖는 분자, 또는 천연 서열의 하나 이상의 아미노산으로부터의 결실, 이에 대한 첨가 및/또는 치환을 갖는 분자를 포함한다. 용어 "폴리펩타이드" 및 "단백질"은 구체적으로는 항원-결합 단백질로부터의 결실, 이에 대한 첨가 및/또는 치환을 갖는 GIPR 항원 결합 단백질, 항체 또는 서열을 포함한다. 용어 "폴리펩타이드 단편"은 전장 단백질에 비해 아미노-말단 결실, 카복실-말단 결실 및/또는 내부 결실을 갖는 폴리펩타이드를 지칭한다. 이러한 단편은 또한 전장 단백질에 비해 변형된 아미노산을 포함할 수 있다. 특정 실시형태에서, 단편은 약 5 내지 500개의 아미노산 길이이다. 예를 들어, 단편은 적어도 5, 6, 8, 10, 14, 20, 50, 70, 100, 110, 150, 200, 250, 300, 350, 400 또는 450개의 아미노산 길이일 수 있다. 유용한 폴리펩타이드 단편은 결합 도메인을 포함하는 항체의 면역학적으로 기능성인 단편을 포함한다.
용어 "단리된 단백질"은 대상 단백질은 (1) 그것과 함께 정상적으로 발견되는 적어도 일부의 다른 단백질이 없거나, (2) 동일한 공급원으로부터의, 예를 들어 동일한 종으로부터의 다른 단백질이 본질적으로 없거나, (3) 상이한 종으로부터의 세포에 의해 발현되거나, (4) 천연에서 그와 결합된 폴리뉴클레오타이드, 지질, 탄수화물 또는 다른 물질의 적어도 50%로부터 분리되었거나, (5) 그것이 천연에서 결합되지 않은 폴리펩타이드와 작동 가능하게 (공유 또는 비공유 상호작용에 의해) 결합되거나, 또는 (6) 천연에서 생기지 않는다는 것을 의미한다. 전형적으로, "단리된 단백질"은 주어지니 샘플의 적어도 약 5%, 적어도 약 10%, 적어도 약 25%, 또는 적어도 약 50%를 구성한다. 합성 유래 또는 이들의 임의의 조합의 게놈 DNA, cDNA, mRNA 또는 다른 RNA는 이러한 단리된 단백질을 암호화할 수 있다. 바람직하게는, 단리된 단백질은 그의 치료적, 진단적, 예방적, 연구 또는 다른 용도를 방해하는 그의 천연 환경에서 발견되는 단백질 또는 폴리펩타이드 또는 다른 오염물질이 실질적으로 없다.
폴리펩타이드(예를 들어, 항원 결합 단백질, 예컨대 항체)의 "변이체"는 아미노산 서열을 포함하되, 하나 이상의 아미노산 잔기가 다른 폴리펩타이드 서열에 대해 아미노산 서열 내로 삽입되고/되거나 이로부터 결실되고/되거나 치환된다. 변이체는 융합 단백질을 포함한다.
폴리펩타이드의 "유도체"는, 예를 들어 다른 화학적 모이어티에 대한 접합을 통해 삽입, 결실 또는 치환 변이체와 별개인 일부 방식에서 화학적으로 변형된 폴리펩타이드(예를 들어, 항원 결합 단백질, 예컨대 항체)이다.
생물학적 물질, 예컨대 폴리펩타이드, 핵산, 숙주 세포 등과 관련하여 본 명세서 전체적으로 사용되는 용어 "천연 유래"는 천연에서 발견되는 물질을 지칭한다.
본 명세서에서 사용되는 "대상체" 또는 "환자"는 임의의 포유류일 수 있다. 전형적인 실시형태에서, 대상체 또는 환자는 인간이다.
본 명세서에 개시되는 바와 같이, 본 개시내용에 의해 기재된 GIPR 폴리펩타이드는 표준 분자 생물학 방법을 이용하여 조작되고/되거나 생성될 수 있다. 다양한 예에서, 서열번호 1203, 1203 또는 1205의 모두 또는 일부를 포함할 수 있는 GIPR을 암호화하는 핵산 서열은 적절한 올리고뉴클레오타이드 프라이머를 이용하여 게놈 DNA 또는 cDNA로부터 단리되고/되거나 증폭될 수 있다. 프라이머는 표준(RT)-PCR 증폭 기법에 따라 본 명세서에 제공된 핵산 및 아미노산 서열에 기반하여 설계될 수 있다. 이어서, 증폭된 GIPR 핵산은 적합한 벡터로 클로닝될 수 있고, DNA 서열 분석에 의해 특성규명될 수 있다.
본 명세서에 제공된 GIPR 서열의 모두 또는 일부를 단리시키거나 또는 증폭시킴에 있어서 프로브로서 사용하기 위한 올리고뉴클레오타이드는 표준 합성 기법, 예를 들어, 자동화된 DNA 합성 장치를 이용하여 설계 및 생성될 수 있거나, 또는 더 긴 DNA 서열로부터 단리될 수 있다.
인간 GIPR의 466개의 아미노산 서열은 다음과 같고(Volz et al., FEBS Lett. 373:23-29(1995); NCBI 기준 서열: NP_0001555):
Figure pct00001
그리고 DNA 서열(NCBI 기준 서열: NM_000164)에 의해 암호화된다:
Figure pct00002
Figure pct00003
자동화된 컴퓨터 분석에 의해 예측되는 인간 GIPR의 430 아미노산 아이소폼(아이소폼 X1)은 하기 서열을 가지고(NCBI 기준 서열 XP_005258790):
Figure pct00004
Figure pct00005
다음의 DNA 서열에 의해 암호화된다:
Figure pct00006
대안의 스플라이싱에 의해 생성되는 인간 GIPR의 493개의 아미노산 아이소폼은 하기 서열을 가지고(Gremlich et al., Diabetes 44:1202-8 (1995); UniProtKB Sequence Identifier: P48546-2):
Figure pct00007
그리고 하기 DNA 서열에 의해 암호화된다:
Figure pct00008
Figure pct00009
뮤린 GIPR의 460개의 아미노산 서열은 하기와 같다(NCBI 기준 서열: NP_001074284; 유니프롯KB/스위스 프롯(Swiss-Prot) Q0P543-1); 문헌[Vassilatis et al., PNAS USA 2003, 100:4903-4908] 참조.
Figure pct00010
그리고 하기 DNA 서열(NCBI 기준 서열: NM_001080815)에 의해 암호화된다:
Figure pct00011
Figure pct00012
대안의 스플라이싱에 의해 생성된 뮤린 GIPR의 230개의 아미노산 아이소폼은 하기의 서열을 가지고(Gerhard et al., Genome Res, 14:2121-2127 (2004); NCBI 기준 서열: AAI20674):
Figure pct00013
그리고 하기 DNA 서열에 의해 암호화된다:
Figure pct00014
Figure pct00015
본 명세서에 언급되는 용어 "GIPR 폴리펩타이드"는 천연 유래 GIPR 폴리펩타이드 서열, 예를 들어, 인간 아미노산 서열 서열번호 1201, 1203 또는 1205를 포함한다. 그러나 용어 "GIPR 폴리펩타이드"는 또한 서열이 서열번호 1201, 1203 또는 1205에 대해 적어도 85% 동일하도록 하나 이상의 아미노산만큼 천연 유래 GIPR 폴리펩타이드 서열, 예를 들어, 서열번호 1201, 1203 또는 1205와 상이한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 포함한다. GIPR 폴리펩타이드는 GIPR 폴리펩타이드의 특정 위치에서 보존적 또는 비보존적으로 하나 이상의 아미노산 치환을 도입함으로써 그리고 천연 유래 또는 비천연 유래 아미노산을 이용함으로써 생성될 수 있다.
"보존적 아미노산 치환"은 해당 위치에서 아미노산 잔기의 극성 또는 전하에 대한 효과가 거의 또는 전혀 없도록 아미노산 잔기(즉, 야생형 GIPR 폴리펩타이드 서열의 주어진 위치에서 발견되는 잔기)의 비천연 잔기(즉, 야생형 GIPR 폴리펩타이드 서열의 주어진 위치에서 발견되지 않는 잔기)로의 치환을 수반할 수 있다. 보존적 아미노산 치환은 또한 생물학적 시스템에서의 합성에 의하기보다는 전형적으로 화학적 펩타이드 합성에 의해 혼입되는 비천연 유래 아미노산 잔기를 포함한다. 이들은 펩타이드모방체, 및 다른 반전된 또는 반대 형태의 아미노산 모방체를 포함한다.
천연 유래 잔기는 통상적인 측쇄 특성에 기반한 분류로 나누어질 수 있다:
(1) 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
(2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr;
(3) 산성: Asp, Glu;
(4) 염기성: Asn, Gln, His, Lys, Arg;
(5) 쇄 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro; 및
(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.
아미노산의 추가적인 기는 또한, 예를 들어, 문헌[Creighton (1984) PROTEINS: STRUCTURE AND MOLECULAR PROPERTIES (2d Ed. 1993), W.H. Freeman and Company]에 기재된 원칙을 이용하여 제형화될 수 있다. 일부 예에서 이러한 특징 중 2 이상에 기반한 치환을 추가로 특성 규명하는 데 유용할 수 있다(예를 들어, "작은 극성" 잔기, 예컨대 Thr 잔기로의 치환은 적절한 문맥에서 고도로 보존적인 치환을 나타낼 수 있다).
보존적 치환은 이들 부류 중 하나의 구성원의 동일한 부류의 다른 구성원으로의 교환을 수반할 수 있다. 비보존적 치환은 이들 부류 중 하나의 구성원의 다른 부류로부터의 구성원으로의 교환을 수반할 수 있다.
상기 기재한 그룹화의 아미노산 잔기와 유사한 생화학적 특성을 갖는 합성, 희귀 또는 변형된 아미노산 잔기는 서열에서 특정 아미노산 잔기로의 "보존적" 치환체로서 사용될 수 있다. 예를 들어, D-Arg 잔기는 전형적인 L-Arg 잔기로의 치환체로서 작용할 수 있다. 또한 이는 특정 치환이 상기 기재한 부류 중 2 이상에 관해 기재될 수 있는 경우일 수 있다(예를 들어, 작은 그리고 소수성 잔기로의 치환은 하나의 아미노산을 정의를 둘 다 충족시키는 이러한 잔기와 유사한 생화학적 특성을 갖는 것으로 당업계에 공지된 상기 기재한 부류 또는 다른 합성, 희귀 또는 변형 잔기의 둘 다에서 발견되는 잔기(들)로 치환하는 것을 의미한다).
상기를 포함하는 본 명세서에 제공된 GIPR 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 서열은 서열번호 1201, 1203 또는 1205로 축퇴되고, 그리고 서열번호 1201, 1203 또는 1205의 폴리펩타이드 변이체를 암호화하는 것은 본 개시내용의 다른 양상을 형성한다.
본 명세서에 제공된 GIPR 핵산 서열을 발현시키기 위해, 적절한 암호 서열, 예를 들어, 서열번호 1201, 1203 또는 1205는 적합한 벡터 내로 클로닝될 수 있고, 적합한 숙주에 도입 후에, 서열은 당업계에 공지된 표준 클로닝 및 발현 기법에 따라 암호화된 폴리펩타이드를 생성하도록 발현될 수 있다(예를 들어, 문헌[Sambrook, J., Fritsh, E. F., and Maniatis, T. Molecular Cloning: A Laboratory Manual 2nd, ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1989]에 기재된 바와 같음). 본 발명은 또한 본 발명에 따른 핵산 서열을 포함하는 이러한 벡터에 관한 것이다.
"벡터"는 (a) 폴리펩타이드-암호화 핵산 서열의 발현을 촉진시키고/시키거나; (b) 그로부터의 폴리펩타이드의 생성을 촉진시키고/시키거나; (c) 그에 의해 표적 세포의 형질감염/형질전환을 촉진시키고/시키거나; (d) 핵산 서열의 복제를 촉진시키고/시키거나; (e) 핵산의 안정성을 촉진시키고/시키거나; (f) 핵산 및/또는 형질전환/형질감염 세포의 검출을 촉진시키고/시키거나; 그리고/또는 (g) 다르게는 폴리펩타이드-암호화 핵산에 대해 유리한 생물학적 및/또는 생화학적 기능을 부여하는 전달 비히클에 관한 것이다. 벡터는 염색체, 비염색체 및 합성 핵산 벡터(발현 제어 요소의 적합한 세트를 포함하는 핵산 서열)를 포함하는 임의의 적합한 벡터일 수 있다. 이러한 벡터의 예는 SV40의 유도체, 박테리아 플라스미드, 파지 DNA, 바큘로바이러스, 효모 플라스미드, 플라스미드 및 파지 DNA의 조합으로부터 유래된 벡터, 및 바이러스 핵산(RNA 또는 DNA) 벡터를 포함한다.
재조합 발현 벡터는 원핵(예를 들어, 이콜라이(E. coli)) 또는 진핵 세포(예를 들어, 바큘로바이러스 발현 벡터를 이용하는 곤충 세포, 효모 세포 또는 포유류 세포)에서 GIPR 단백질의 발현을 위해 설계될 수 있다. 일 실시형태에서, 숙주 세포는 포유류, 비-인간 숙주 세포이다. 대표적인 숙주 세포는 에스케리키아 콜라이 균주 TOP10F′, TOP10, DH10B, DH5a, HB101, W3110, BL21(DE3) 및 BL21 (DE3)pLysS, BLUESCRIPT(스트라타겐(Stratagene)), 포유류 세포주 CHO, CHO-K1, HEK293, 293-EBNA pIN 벡터(Van Heeke & Schuster, J. Biol. Chem. 264: 5503-5509 (1989); pET 벡터(위스콘신주 메디슨에 소재한 노바겐(Novagen))를 포함하는, 클로닝 및 발현을 위해 전형적으로 사용되는 해당 숙주를 포함한다. 대안적으로, 재조합 발현 벡터는, 예를 들어 T7 프로모터 조절 서열 및 T7 중합효소 및 시험관내 번역 시스템을 이용하여 시험관내에서 전사되고 번역될 수 있다. 바람직하게는, 벡터는 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 클로닝 부위의 상류의 프로모터를 포함한다. 온(on) 및 오프(off)로 전환될 수 있는 프로모터의 예는 lac 프로모터, T7 프로모터, trc 프로모터, tac 프로모터 및 trp 프로모터를 포함한다.
따라서, 본 명세서에서 재조합 GIPR의 발현을 용이하게 하는 GIPR을 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 벡터가 제공된다. 다양한 실시형태에서, 벡터는 GIPR의 발현을 조절하는 작동 가능하게 연결된 뉴클레오타이드 서열을 포함한다. 벡터는 임의의 적합한 프로모터, 인핸서 및 다른 발현을 용이하게 하는 구성요소를 포함하거나 또는 이와 관련될 수 있다. 이러한 구성요소의 예는 강한 발현 프로모터(예를 들어, 인간 CMV IE 프로모터/인핸서, RSV 프로모터, SV40 프로모터, SL3-3 프로모터, MMTV 프로모터, 또는 HIV LTR 프로모터, EF1알파 프로모터, CAG 프로모터), 유효한 폴리 (A) 종결 서열, 이콜라이에서 플라스미드 산물에 대한 복제기점, 선택 가능한 마커로서 항생제 내성 유전자, 및/또는 편리한 클로닝 부위(예를 들어, 폴리링커)를 포함한다. 벡터는 또한 구성적 프로모터, 예컨대 CMV IE와 반대인 유도성 프로모터를 포함할 수 있다. 일 양상에서, 대사적으로 적절한 조직, 예컨대 간 또는 췌장 조직에서 서열의 발현을 촉진시키는 조직 특이적 프로모터에 작동 가능하게 연결된 GIPR 폴리펩타이드를 암호화하는 서열을 포함하는 핵산이 제공된다.
본 개시내용의 다른 양상에서, 본 명세서에 개시된 GIPR 핵산 및 벡터를 포함하는 숙주 세포가 제공된다. 다양한 실시형태에서, 벡터 또는 핵산은 숙주 세포 게놈 내로 통합되는데, 다른 실시형태에서 벡터 또는 핵산은 염색체 밖이다.
이러한 핵산, 벡터 또는 이들 중 하나 또는 둘 다의 조합을 포함하는 재조합 세포, 예컨대 효모, 박테리아(예를 들어, 이콜라이), 및 포유류 세포(예를 들어, 불멸 포유류 세포)가 제공된다. 다양한 실시형태에서, GIPR 폴리펩타이드의 발현을 위한 서열 암호를 포함하는 비-통합 핵산, 예컨대 플라스미드, 코스미드, 파지미드 또는 선형 발현 구성요소를 포함하는 세포가 제공된다.
본 명세서에 제공된 GIPR 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 서열을 포함하는 벡터는 형질전환에 의해 또는 형질감염에 의해 숙주 세포 내로 도입될 수 있다. 발현 벡터를 이용하여 세포를 형질전환하는 방법은 잘 공지되어 있다.
GIPR-암호화 핵산은 바이러스 벡터를 통해 숙주 세포 또는 숙주 동물에 위치되고/되거나 전달될 수 있다. 임의의 적합한 바이러스 벡터는 이 수용력에서 사용될 수 있다. 바이러스 벡터는 단독으로 또는 요망되는 숙주 세포에서 본 발명의 핵산의 전달, 복제 및/또는 발현을 용이하게 하는 1종 이상의 바이러스 단백질과 조합하여, 다수의 바이러스 폴리뉴클레오타이드를 포함할 수 있다. 바이러스 벡터는 바이러스 게놈, 바이러스 단백질/핵산 접합체, 바이러스-유사 입자(VLP), 또는 바이러스 핵산 및 GIPR 폴리펩타이드-암호화 핵산을 포함하는 무손상 바이러스 입자의 모두 또는 일부를 포함하는 폴리뉴클레오타이드일 수 있다. 바이러스 입자 바이러스 벡터는 야생형 바이러스 입자 또는 변형된 바이러스 입자를 포함할 수 있다. 바이러스 벡터는 복제 및/또는 발현을 위한 다른 벡터 또는 야생형 바이러스의 존재를 필요로 하는 벡터, 예컨대, 아데노바이러스 벡터 앰플리콘일 수 있다(예를 들어, 바이러스 벡터는 헬퍼-의존적 바이러스일 수 있다). 전형적으로, 이러한 바이러스 벡터는 그의 단백질에서 변형된 야생형 바이러스 입자, 또는 바이러스 입자 및/또는 이식유전자 능력을 증가를 증가시키기 위한 핵산 함량으로 이루어지거나 또는 핵산의 형질감염 및/또는 발현을 보조한다(이러한 벡터의 예는 헤르페스 바이러스/AAV 앰플리콘을 포함한다). 전형적으로, 바이러스 벡터는 인간을 정상적으로 감염시키는 바이러스와 유사하고/하거나 이로부터 유래된다. 이에 대해 적합한 바이러스 벡터 입체는, 예를 들어, 아데노바이러스 벡터 입자(아데노비리대의 또는 이로부터 유래된 임의의 바이러스를 포함), 아데노-관련 바이러스 벡터 입자(AAV 벡터 입자) 또는 기타 파보바이러스 및 파보바이러스 벡터 입자, 유두종바이러스 벡터 입자, 플라비바이러스 벡터, 알파바이러스 벡터, 헤르페스 바이러스 벡터, 폭스 바이러스 벡터, 레트로바이러스 벡터(렌티바이러스 벡터를 포함)를 포함한다.
본 명세서에 기재된 GIPR 폴리펩타이드는 표준 단백질 정제 방법을 이용하여 단리될 수 있다. GIPR 폴리펩타이드는 세포는 그것이 자연적으로 발현되거나 또는 GIPR을 발현시키도록 조작된 세포, 예를 들어, GIPR을 자연적으로 발현시키지 않는 세포로부터 단리될 수 있다.
GIPR 폴리펩타이드뿐만 아니라 관련된 물질 및 시약을 단리시키기 위해 사용될 수 있는 단백질 정제 방법이 당업계에 공지되어 있다. GIPR 폴리펩타이드를 단리시키는 데 유용할 수 있는 추가적인 정제 방법은 문헌[Bootcov MR, 1997, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94:11514-9, Fairlie WD, 2000, Gene 254: 67-76]과 같은 참고문헌에서 발견할 수 있다.
인간 GIPR(hGIPR)을 포함하는 GIPR에 결합하는 길항제 항원 결합 단백질은 본 명세서에 제공된다. 일 실시형태에서, 인간 GIPR은 서열번호 1201에 제시된 바와 같은 서열을 가진다. 다른 실시형태에서, 인간 GIPR은 서열번호 1203에 제시된 바와 같은 서열을 가진다. 다른 실시형태에서, 인간 GIPR은 서열번호 1205에 제시된 바와 같은 서열을 가진다.
제공된 항원 결합 단백질은 본 명세서에 기재된 바와 같은 하나 이상의 상보성 결합 영역(CDR) 내로 함입 및/또는 결합되는 폴리펩타이드를 제공한다. 일부 항원 결합 단백질에서, CDR은 "프레임워크" 영역 내로 함입되는데, 이는 CDR(들)의 적절한 항원 결합 특성이 달성되도록 CDR(들)을 배향시킨다. 본 명세서에 기재된 특정 항원 결합 단백질은 항체이거나 또는 항체로부터 유래된다. 다른 항원 결합 단백질에서, CDR 서열은 상이한 유형의 단백질 스캐폴드에 함입된다. 다양한 구조는 추가로 이하에 기재된다.
본 명세서에 개시된 항원 결합 단백질은 다양한 효용을 가진다. 항원 결합 단백질은, 예를 들어, 특정 결합 분석, GIPR의 친화도 정제에서, 그리고 GIPR 활성의 다른 길항제를 동정하기 위한 선별 분석에서 유용하다. 항원 결합 단백질에 대한 다른 용도는, 예를 들어, GIPR-관련 질환 또는 병태의 진단 및 GIPR의 존재 또는 부재를 결정하기 위한 선별 분석을 포함한다. 제공된 항원 결합 단백질이 길항제라는 것을 고려하여, GIPR 항원 결합 단백질은 음식 섭취를 유지 또는 증가시고, 지방량%를 증가시키고, 제지방량을 증가시키며, 내당능을 개선시키고, 인슐린 수준을 감소시키며, 콜레스테롤 및 트라이글리세라이드 수준을 감소시키지만, 체중 증가를 감소시키는 데 유용한 치료 방법에서 가치있다. 따라서, 항원 결합 단백질은 당뇨병, 예를 들어, 2형 당뇨병, 비만, 이상지질혈증, 상승된 글루코스 수준 또는 상승된 인슐린 수준의 치료 및 예방에서 효용을 가진다.
GIPR의 활성을 조절하는 데 유용한 다양한 선택적 결합제가 제공된다. 이들 제제는, 예를 들어, 항원 결합 도메인(예를 들어, 항원 결합 영역 내의 scFv, 도메인 항체 및 폴리펩타이드)을 포함하고 GIPR 폴리펩타이드, 특히 인간 GIPR에 특이적으로 결합하는 항원 결합 단백질을 포함한다. 일부 제제는, 예를 들어, GIPR의 활성을 향상시키는 데 유용하고, GIPR과 관련된 한 가지 이상의 활성을 활성화시킬 수 있다.
일반적으로, 제공된 항원 결합 단백질은 전형적으로 본 명세서에 기재된 바와 같은 하나 이상의 CDR(예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5 또는 6)을 포함한다. 일부 예에서, 항원 결합 단백질은 (a) 폴리펩타이드 구조 및 (b) 폴리펩타이드 구조 내로 삽입되고/되거나 결합된 하나 이상의 CDR을 포함한다. 폴리펩타이드 구조는 다양한 상이한 형태를 취할 수 있다. 예를 들어, 이는 천연 유래 항체, 또는 이의 단편 또는 변이체의 프레임워크일 수 있거나 포함할 수 있거나, 또는 천연에서 완전히 합성일 수 있다. 다양한 폴리펩타이드 구조의 예는 이하에 추가로 기재된다.
특정 실시형태에서, 항원 결합 단백질의 폴리펩타이드 구조는 항체이거나 또는 항체로부터 유래된다. 따라서, 제공된 특정 항원 결합 단백질의 예는 단클론성 항체, 이중 특이성 항체, 미니바디, 도메인 항체, 예컨대 나노바디(Nanobodies)(등록상표), 합성 항체(때때로 본 명세서에서 "항체 모방체"로서 지칭됨), 키메라 항체, 인간화된 항체, 인간 항체, 항체 융합 및 각각의 부분 또는 단편을 각각 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 일부 예에서, 항원 결합 단백질은 완전한 항체의 면역학적 단편(예를 들어, Fab, Fab', F(ab')2)이다. 다른 예에서, 항원 결합 단백질은 본 발명의 항체로부터의 CDR을 사용하는 scFv이다.
본 명세서에서 제공되는 항원 결합 단백질은 인간 GIPR에 특이적으로 결합한다. 구체적 실시형태에서, 항원 결합 단백질은 서열번호 1201의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진 인간 GIPR에 특이적으로 결합한다. 구체적 실시형태에서, 항원 결합 단백질은 서열번호 1203의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진 인간 GIPR에 특이적으로 결합한다. 구체적 실시형태에서, 항원 결합 단백질은 서열번호 1205의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이것으로 이루어진 인간 GIPR에 특이적으로 결합한다.
제공된 항원 결합 단백질은 길항제이고, 전형적으로 다음의 특징 중 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 모두 8개를 가진다:
(a) GIP의 GIPR에 대한 결합을 방지하거나 또는 감소시키는 능력, 여기서 수준은, 예를 들어, 방사성- 또는 형광-표지 리간드 결합 연구와 같은 방법에 의해, 또는 본 명세서에 기재된 방법(예를 들어, cAMP 분석 또는 다른 기능성 분석)에 의해 측정될 수 있음. 감소는 비슷한 조건 하의 서열번호 1201, 1203 또는 1205의 전처리 수준에 비해 적어도 10, 25, 50, 100% 이상일 수 있다.
(b) 혈당을 감소시키는 능력;
(c) 내당능을 증가시키는 능력;
(d) 인슐린 민감성을 증가시키는 능력;
(e) 체중을 감소시키거나 또는 체중 증가를 감소시키는 능력;
(f) 지방량을 감소시키거나 또는 지방 조직 내 염증을 감소시키는 능력;
(g) 공복 인슐린 수준을 감소시키는 능력;
(h) 순환 콜레스테롤 수준을 감소시키는 능력;
(i) 순환 트라이글리세라이드 수준을 감소시키는 능력;
(j) 간 지방증을 감소시키거나 또는 간 내의 트라이글리세라이드 수준을 감소시키는 능력;
(k) AST, ALT 및/또는 ALP 수준을 감소시키는 능력.
일 실시형태에서, GIPR 항원 결합 단백질은 다음의 활성은 다음의 활성 중 하나 이상을 가진다:
(a) 예를 들어, 표면 플라즈마 공명 또는 역학 배제 분석 기법을 통해 측정하여 KD가 200 nM 이하, 150 nM 이하, 100 nM 이하, 50 nM 이하, 10 nM 이하, 5 nM 이하, 2 nM 이하, 또는 1 nM 이하가 되도록 인간 GIPR에 결합한다.
(b) 적어도 3일의 인간 혈청 반감기를 가진다;
제공되는 일부 항원 결합 단백질은, 예를 들어, 이하에 기재되는 바와 같이 측정하여 적어도 104/M x 초, 적어도 105/M x 초, 또는 적어도 106/M x 초의 GIPR에 대한 온-속도(ka)를 가진다. 제공되는 특정 항원 결합 단백질은 느린 해리 속도 또는 오프 속도를 가진다. 일부 항원 결합 단백질은, 예를 들어, 1x 10-2 s- 1 , 또는 1x 10-3 s- 1 , 또는 1x 10-4 s- 1 , 또는 1x 10-5 s-1의 kd(오프-속도)를 가진다. 특정 실시형태에서, 항원 결합 단백질은 25 pM, 50 pM, 100 pM, 500 pM, 1 nM, 5 nM, 10 nM, 25 nM 또는 50 nM 미만의 KD(평형상태 결합 친화도)를 가진다.
분석에 따라서는, 항원 결합 단백질의 이의 표적에 대한 결합은 또한 EC50으로서 측정될 수 있다(표적에 결합될 때 반-최대 반응을 제공하는 항원 결합 단백질의 농도). 본 발명의 항-GIPR 항원 결합 단백질에 대한 EC50은 GIPR을 발현하는 세포와 상이한 농도의 항원 결합 단백질을 인큐베이션함으로써 측정될 수 있다. 본 발명의 항-GIPR 항원 결합 단백질은 200 nM, 150 nM, 125 nM, 100 nM, 90 nM, 80 nM, 70 nM, 60 nM, 50 nM, 40 nM, 또는 30 nM 미만의 EC50을 가질 수 있다.
IC50(반수 최대 억제 농도: 특정 생물학적 또는 생화학적 기능을 억제하는 데 있어서 항원 결합 단백질의 효과의 척도)은 또한 항-GIPR 항원 결합 단백질의 활성을 측정하기 위해 이용될 수 있다. IC 50은 기능성 분석을 이용하여 측정될 수 있다. 예를 들어, 그러한 분석은 인간 GIPR 또는 사이노몰거스 원숭이 GIPR을 발현하는 HEK 293T 세포에서 cAMP의 정량 측정을 위해 이용될 수 있다. GIP 결합은 GIPR 입체배좌 변화를 초래하는데, 이는 알데닐레이트 시클라제를 활성화하도록 G 단백질을 자극하여 ATP로부터 cAMP 생산을 야기한다. GIPR에 대한 항체 결합은 GIPR에 대한 GIP 결합을 막고, 그 결과 cAMP가 더 적어진다. 이는 cAMP 분석에 의해 측정 가능하다. 본 발명의 항-GIPR 항원 결합 단백질은 200 nM, 150nM, 125 nM, 100 nM, 90 nM, 80 nM, 70 nM, 60 nM, 50 nM, 40 nM, 30 nM, 29 nM, 28 nM, 27 nM, 26 nM, 25 nM, 24 nM, 23 nM, 22 nM, 21 mM, 20 nM, 19 nM, 18 nM, 17 nM, 16 nM, 15 nM, 14 nM, 13 nM, 12 nM, 11 mM, 10 nM, 9 nM, 8 nM, 7 nM, 6 nM, 5 nM, 4 nM, 3 nM, 2 nM, 또는 1 nM 미만의 IC50을 가질 수 있다.
다른 양상에서, 시험관내 또는 생체내에서(예를 들어, 인간 대상체에게 투여될 때) 적어도 1일의 반감기를 갖는 항원-결합 단백질이 제공된다. 일 실시형태에서, 항원 결합 단백질은 적어도 3일의 반감기를 가진다. 다양한 다른 실시형태에서, 항원 결합 단백질은 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50 또는 60일 또는 더 긴 반감기를 가진다. 다른 실시형태에서, 항원 결합 단백질은 비유도체화 또는 비변형 항체에 비해 더 긴 반감기를 갖도록 유도체화 또는 변형된다. 다른 실시형태에서, 항원 결합 단백질은 혈청 반감기를 증가시키기 위해 점 돌연변이를 포함한다. 이러한 돌연변이체 및 유도체화된 형태에 관한 추가적인 상세한 설명을 이하에 제공한다.
제공되는 일부 항원 결합 단백질은 전형적으로 천연 유래 항체와 관련된 구조를 가진다. 이들 항체의 구조적 단위는 전형적으로 일부 포유류 종이 또한 단일 중쇄만을 갖는 항체를 생성하지만, 각각 폴리펩타이드 쇄의 2개의 동일한 이중선으로 구성된 하나 이상의 사량체를 포함한다. 전형적인 항체에서, 각각의 쌍 또는 이중선은 하나의 전장 "경"쇄(특정 실시형태에서, 약 25 kDa) 및 하나의 전장 "중"쇄(특정 실시형태에서, 약 50 내지 70 kDa)를 포함한다. 각각의 개개 면역글로불린 쇄는 각각 대략 90 내지 110개의 아미노산으로 이루어지고 특징적 폴딩 패턴을 발현시키는 몇몇 "면역글로불린 도메인"으로 구성된다. 이들 도메인은 항체 폴리펩타이드가 구성된 기본 단위이다. 각각의 쇄의 아미노 말단 부분은 전형적으로 항원 인식을 초래하는 가변 도메인을 포함한다. 카복시-말단 부분은 쇄의 다른 말단보다 진화적으로 더 보존되어 있고, "불변 영역" 또는 "C 영역"으로서 지칭된다. 인간 경쇄는 일반적으로 카파 및 람다 경쇄로서 분류되고, 이들 각각은 하나의 가변 도메인 및 하나의 불변 도메인을 포함한다. 중쇄는 전형적으로 뮤, 델타, 감마, 알파, 또는 엡실론 쇄로 분류되고, 이들은 항체의 아이소타입을 각각 IgM, IgD, IgG, IgA 및 IgE로 정한다. IgG는 IgG1, IgG2, IgG3 및 IgG4(이들로 제한되지는 않음)를 포함하는 몇몇 서브타입을 가진다. IgM 서브타입은 IgM 및 IgM2를 포함한다. IgA 서브타입은 IgA1 및 IgA2를 포함한다. 인간에서, IgA 및 IgD 아이소타입은 4개의 중쇄 및 4개의 경쇄를 포함하고; IgG 및 IgE 아이소타입은 2개의 중쇄 및 2개의 경쇄를 포함하며; IgM 아이소타입은 5개의 중쇄 및 5개의 경쇄를 포함한다. 중쇄 C 영역은 전형적으로 효과기 기능을 초래할 수 있는 하나 이상의 도메인을 포함한다. 중쇄 불변 영역 도메인의 수는 아이소타입에 의존할 것이다. IgG 중쇄는, 예를 들어, 각각 CH1, CH2 및 CH3으로서 알려진 3개의 C 영역 도메인을 포함한다. 제공되는 항체는 임의의 이들 아이소타입 및 서브타입을 가질 수 있다. 특정 실시형태에서, GIPR 항체는 IgG1, IgG2 또는 IgG4 서브타입을 가진다. 용어 "GIPR 항체" 및 "항-GIPR 항체"는 본 출원 및 도면 전체적으로 상호 호환적으로 사용된다. 용어는 둘 다 GIPR에 결합하는 항체를 지칭한다.
전장 경쇄 및 중쇄 내에, 가변 및 불변 구역은 약 12개 이상의 아미노산의 J 구역에 의해 연결되고, 중쇄는 또한 약 10개의 아미노산의 D 구역을 포함한다. 예를 들어, 문헌[Fundamental Immunology, 2nd ed., Ch. 7 (Paul, W., ed.) 1989, New York: Raven Press] 참조(본 명세서에 모든 목적을 위하여 그의 전문이 참고로 포함됨). 각각의 경쇄/중쇄쌍의 가변 영역은 전형적으로 항원 결합 부위를 형성한다.
본 명세서에 제공된 항체에 대해, 면역글로불린 쇄의 가변 영역은 일반적으로 3개의 초가변 영역에 의해 결합되고, 더 흔하게는 "상보성 결정 영역" 또는 CDR로 불리는 상대적으로 보존된 프레임워크 영역(FR)을 포함하는 동일한 전반적 구조를 나타낸다. 상기 언급된 각각의 중쇄/경쇄쌍의 2개의 쇄로부터의 CDR은 전형적으로 GIPR 상의 특정 에피토프에 특이적으로 결합하는 구조를 형성하기 위해 프레임워크 영역에 의해 정렬된다. N-말단으로부터 C-말단까지, 천연-유래 경쇄 및 중쇄 가변 영역은 둘 다 전형적으로 이들 구성요소의 다음의 순서에 따른다: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 및 FR4. 넘버링 시스템은 각각의 이들 도메인 내 위치를 점유하는 아미노산에 번호를 부여하도록 고안되었다. 이 넘버링 시스템은 문헌[Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest (1987 and 1991, NIH, Bethesda, Md.), 또는 Chothia & Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917; Chothia et al.,1989, Nature342:878-883]에 정의되어 있다.
이하의 실시예에서 설명하는 바와 같이 제조되고 동정된 특정 항체에 대한 서열 정보를 표 1에 요약한다. 따라서, 실시형태에서, 항원 결합 단백질은 표 1의 행 중 하나에서 구체화하는 바와 같은 CDR, 가변 도메인 및 경쇄 및 중쇄 서열을 갖는 항체이다.
서열번호는 본 발명의 항체 및 이의 단편의 가변 경쇄, 가변 중쇄, 경쇄, 중쇄, CDRL1, CDRL2, CDRL3, CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 서열에 부여되었고, 표 1에 나타낸다. 서열번호는 또한 본 발명의 항체 및 이의 단편의 가변 경쇄, 가변 중쇄, 경쇄, 중쇄, CDRL1, CDRL2, CDRL3, CDRH1, CDRH2 및 CDRH3 서열을 암호화하는 폴리펩타이드에 부여되었고, 표 2에 나타낸다. 본 발명의 항원 결합 단백질은 서열번호에 의해 동정되지만, 또한 작제물 명칭(예를 들어, 2C2.005) 또는 식별자 번호(예를 들어, iPS:336175)에 의해 동정될 수 있다. 이하의 표 1 내지 5에서 동정되는 항원 결합 단백질은 작제물 명칭에 기반하여 패밀리로 그룹화될 수 있다. 예를 들어, "4B1패밀리"는 작제물 4B1, 4B1.010, 4B1.011, 4B1.012, 4B1.013, 4B1.014, 4B1.015 및 4B1.016을 포함한다.
본 명세서에 제공된 다양한 경쇄 및 중쇄 가변 영역을 표 3에 도시된다. 각각의 이들 가변 영역은 완전한 항체 중쇄 및 경쇄를 각각 형성하기 위해 중쇄 또는 경쇄 불변 영역에 부착될 수 있다. 더 나아가, 각각의 이렇게 생성된 중쇄 및 경쇄 서열은 완전한 항체 구조를 형성하도록 조합될 수 있다.
[표 1]
아미노산 서열번호
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[표 2]
핵산 서열번호
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[표 3]
예시적인 가변 경쇄 및 가변 중쇄 영역: 핵산("NA") 및 아미노산("AA") 서열
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[표 4]
예시적인 CDRL1, CDRL2, CDRL3, CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3 핵산("NA") 및 아미노산("AA") 서열
[표 4A]
예시적인 CDRL1, CDRL2, 및 CDRL3 핵산("NA") 및 아미노산("AA") 서열
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[표 4B]
예시적인 CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3 뉴클레오타이드 및 아미노산 서열
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[표 5]
예시적인 경쇄 및 중쇄 핵산("NA") 및 아미노산("AA") 서열
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일 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 723, 727, 731, 735, 739, 743, 747, 751, 755, 759, 763, 767, 771, 775, 779, 783, 787, 791, 795, 799, 803, 807, 811, 815, 819, 823, 827, 831, 835, 839, 843, 847, 851, 855, 859, 863, 867, 871, 875, 879, 883, 887, 891, 895, 899, 903, 907, 911, 915, 919, 923, 927, 931, 935, 939, 943, 947, 951, 955, 959, 1286, 1296, 1306, 1316, 1326, 1336, 1346, 및 1356으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 724, 728, 732, 736, 740, 744, 748, 752, 756, 760, 764, 768, 772, 776, 780, 784, 788, 792, 796, 800, 804, 808, 812, 816, 820, 824, 828, 832, 836, 840, 844, 848, 852, 856, 860, 864, 868, 872, 876, 880, 884, 888, 892, 896, 900, 904, 908, 912, 916, 920, 924, 928, 932, 936, 940, 944, 948, 952, 956, 960, 1287, 1297, 1307, 1317, 1327, 1337, 1347, 및 1357로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 723, 727, 731, 735, 739, 743, 747, 751, 755, 759, 763, 767, 771, 775, 779, 783, 787, 791, 795, 799, 803, 807, 811, 815, 819, 823, 827, 831, 835, 839, 843, 847, 851, 855, 859, 863, 867, 871, 875, 879, 883, 887, 891, 895, 899, 903, 907, 911, 915, 919, 923, 927, 931, 935, 939, 943, 947, 951, 955, 959, 1286, 1296, 1306, 1316, 1326, 1336, 1346, 및 1356으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 724, 728, 732, 736, 740, 744, 748, 752, 756, 760, 764, 768, 772, 776, 780, 784, 788, 792, 796, 800, 804, 808, 812, 816, 820, 824, 828, 832, 836, 840, 844, 848, 852, 856, 860, 864, 868, 872, 876, 880, 884, 888, 892, 896, 900, 904, 908, 912, 916, 920, 924, 928, 932, 936, 940, 944, 948, 952, 956, 960, 1287, 1297, 1307, 1317, 1327, 1337, 1347, 및 1357로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함한다.
일 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 723을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 724를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 727를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 728를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 731을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 732을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 735를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 736을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 739를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 740를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 743을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 744를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 747을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 748를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 751을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 752를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 755를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 756을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 759을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 760을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 763을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 764를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 767를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 768를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 771을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 772을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 775를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 776을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 779를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 780를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 783을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 784를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 787을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 788를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 791을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 792를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 795를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 796을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 799을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 800을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 803을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 804를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 807를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 808를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 811을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 812을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 815를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 816을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 819를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 820를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 823을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 824를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 827을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 828를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 831을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 832를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 835를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 836을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 839을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 840을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 843을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 844를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 847를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 848를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 851을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 852을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 855를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 856을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 859를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 860를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 863을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 864를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 867을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 868를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 871을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 872를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 875를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 876을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 879을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 880을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 883을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 884를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 887를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 888를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 891을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 892을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 895를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 896을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 899를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 900를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 903을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 904를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 907을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 908를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 911을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 912를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 915를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 916을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 919을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 920을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 923을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 924를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 927를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 928를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 931을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 932을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 935를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 936을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 939를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 940를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 943을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 944를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 947을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 948를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 951을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 952를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 955를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 956을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 959을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 960을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 1286을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 1287을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 1296을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 1297를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 1306을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 1307을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 1316을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 1317을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 1326을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 1327를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 1336을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 1337을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 1346을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 1347를 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 1356을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 1357을 포함하는 중쇄 가변 영역으로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역의 조합을 포함한다.
일 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 721, 725, 729, 733, 737, 741, 745, 749, 753, 757, 761, 765, 769, 773, 777, 781, 785, 789, 793, 797, 801, 805, 809, 813, 817, 821, 825, 829, 833, 837, 841, 845, 849, 853, 857, 861, 865, 869, 873, 877, 881, 885, 889, 893, 897, 901, 905, 909, 913, 917, 921, 925, 929, 933, 937, 941, 945, 949, 953, 955, 1377, 1379, 1381, 1383, 1385, 1387, 1389, 및 1391로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역을 포함한다. 일 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 722, 726, 730, 734, 738, 742, 746, 750, 754, 758, 762, 766, 770, 774, 778, 782, 786, 790, 794, 798, 802, 806, 810, 814, 818, 822, 826, 830, 834, 838, 842, 846, 850, 854, 858, 862, 866, 870, 874, 878, 882, 886, 890, 894, 898, 902, 906, 910, 914, 918, 922, 926, 930, 934, 938, 942, 946, 950, 954, 958, 1378, 1380, 1382, 1384, 1386, 1388, 1390, 및 1392로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 721, 725, 729, 733, 737, 741, 745, 749, 753, 757, 761, 765, 769, 773, 777, 781, 785, 789, 793, 797, 801, 805, 809, 813, 817, 821, 825, 829, 833, 837, 841, 845, 849, 853, 857, 861, 865, 869, 873, 877, 881, 885, 889, 893, 897, 901, 905, 909, 913, 917, 921, 925, 929, 933, 937, 941, 945, 949, 953, 955, 1377, 1379, 1381, 1383, 1385, 1387, 1389, 및 1391로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 722, 726, 730, 734, 738, 742, 746, 750, 754, 758, 762, 766, 770, 774, 778, 782, 786, 790, 794, 798, 802, 806, 810, 814, 818, 822, 826, 830, 834, 838, 842, 846, 850, 854, 858, 862, 866, 870, 874, 878, 882, 886, 890, 894, 898, 902, 906, 910, 914, 918, 922, 926, 930, 934, 938, 942, 946, 950, 954, 958, 1378, 1380, 1382, 1384, 1386, 1388, 1390, 및 1392로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역을 포함한다. 일 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 721을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 722을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 725를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 726을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 729을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 730을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 733을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 734를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 737를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 738를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 741을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 742을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 745를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 746을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 749을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 750를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 753을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 754를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 757을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 758을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 761을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 762을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 765를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 766을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 769을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 770을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 773을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 774를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 777를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 778를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 781을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 782을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 785를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 786을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 789을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 790를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 793을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 794를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 797을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 798을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 801을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 802을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 805를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 806을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 809을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 810을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 813을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 814를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 817를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 818를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 821을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 822을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 825를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 826을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 829을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 830를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 833을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 834를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 837을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 838을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 841을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 842을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 845를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 846을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 849을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 850을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 853을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 854를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 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서열번호 901을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 902을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 905를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 906을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 909을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 910를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 913을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 914를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 917을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 918을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 921을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 922을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 925를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 926을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 929을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 930을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 933을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 934를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 937를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 938를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 941을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 942을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 945를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 946을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 949을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 950를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 953을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 954를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 957을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 958을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 1377을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 1378을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 1379를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 1380를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 1381을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 1382을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 1383을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 1384를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 1385를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 1386을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 1387을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 1388을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 서열번호 1389을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 1390를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 1391을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 가변 영역 및 서열번호 1392를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄 가변 영역으로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역의 조합을 포함한다.
일부 항원 결합 단백질은 표 3에 열거된 항체 중 하나에 대해 행 중 하나에 열거된 바와 같은 가변 경쇄 도메인 및 가변 중쇄 도메인을 포함한다. 일부 예에서, 항원 결합 단백질은 표 3에 열거된 항체 중 하나로부터의 2개의 동일한 가변 경쇄 도메인 및 2개의 동일한 가변 중쇄 도메인을 포함한다. 제공된 일부 항원 결합 단백질은 도메인 중 하나 또는 둘 다 단지 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15개의 아미노산 잔기에서 표에 특정된 서열과 상이하다는 것을 제외하고, 표 3에 열거된 항체 중 하나에 대해 행 중 하나에 열거된 바와 같은 가변 경쇄 도메인 및 가변 중쇄 도메인을 포함하되, 각각의 이러한 서열 차이는 단일 아미노산 결실, 삽입 또는 치환과 독립적이며, 결실, 삽입 및/또는 치환은 표 3에 구체화된 가변 도메인 서열에 대해 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15개 이하의 아미노산 변화를 초래한다. 일 실시형태에서, 항원 결합 단백질은 N-말단 메티오닌이 결실되는 것을 제외하고 표 3으로부터의 가변 영역 서열을 포함한다. 표 3에 구체화된 바와 같은 중쇄 가변 도메인 또는 경쇄 가변 도메인의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이들로 이루어진다는 점에서 중쇄 가변 도메인 및/또는 경쇄 가변 도메인이 표에 구체화된 서열과 상이하다는 것을 제외하고, 다른 항원 결합 단백질은 또한 표 3에 열거된 항체 중 하나에 대해 행 중 하나에 열거된 바와 같은 가변 경쇄 도메인 및 가변 중쇄 도메인을 포함한다.
다른 양상에서, 항원 결합 단백질은 표 3에 열거된 항체로부터의 가변 경쇄 및 가변 중쇄 도메인만으로 이루어진다. 또 다른 양상에서, 항원 결합 단백질은 표 3에 열거된 것과 동일한 가변 중쇄 도메인 중 2 이상 또는 표 3에 열거된 것과 동일한 가변 경쇄 도메인 중 2 이상을 포함한다. 이러한 도메인 항체는 이하에 더 상세하게 기재하는 바와 같은 링커를 통해 함께 융합되거나 또는 결합될 수 있다. 도메인 항체는 반감기(예를 들어, PEG 또는 알부민)을 연장시키기 위해 하나 이상의 분자에 융합되거나 또는 연결될 수 있다.
특정 실시형태에서, 항원 결합 단백질은 감소된 점도를 갖는 항체인 것이 바람직하다. 그러한 항원 결합 단백질은 높은 점도와 관련된 것으로 밝혀진 프레임워크 영역 및/또는 Fc 도메인에서 서열을 변형시킴으로써 생성될 수 있다.
그러한 감소된-점도 항원 결합 단백질은 항체를 포함하였고, 여기서
VH1|1-18 생식계열 서브패밀리 서열은 82R, 94S, 및 95R로부터 선택된 하나 이상의 치환을 포함하고;
VH3|3-33 생식계열 서브패밀리 서열은 치환 1E, 17G, 및 85A 중 하나 이상을 포함하고;
VK3|L16 생식계열 서브패밀리 서열은 4L, 13L, 76D, 95R, 97E, 및 98P로부터 선택된 하나 이상의 치환을 포함하고;
VK3|L6 생식계열 서브패밀리 서열은 76D 및 95R로부터 선택된 하나 이상의 치환을 포함하고;
Fc 도메인 서열은 253A, 440K, 및 439E로부터 선택된 하나 이상의 치환을 포함하고;
Fc 도메인 C-말단은 KP, KKP, KKKP, 및 E로부터 선택된 서열을 포함한다.
가변 영역에서의 상기 바람직한 점도-감소 아미노산 치환 모두는 Aho 넘버링 시스템에 의해 확인된다. Fc를 포함하는 보존 영역에서 점도-감소 잔기 모두는 EU 넘버링 시스템에 의해 확인된다.
제공된 다른 항원 결합 단백질은 표 3에 나타낸 중쇄 및 경쇄의 조합에 의해 형성된 항체의 변이체이고, 이들 쇄의 아미노산 서열에 대해 각각 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 동일성을 갖는 경쇄 및/또는 중쇄를 포함한다. 일부 예에서, 이러한 항체는 적어도 1개의 중쇄 및 1개의 경쇄를 포함하는 반면, 일부 다른 예에서, 변이체 형태는 2개의 동일한 경쇄 및 2개의 동일한 중쇄를 포함한다.
중쇄 가변 영역의 다양한 조합은 경쇄 가변 영역의 임의의 다양한 조합과 조합될 수 있다.
추가 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 단리된 항원 결합 단백질은 표 3에 제시된 바와 같은 서열을 포함하는 인간 항체이고, IgG1-, IgG2- IgG3- 또는 IgG4-형을 가진다.
본 명세서에 개시된 항원 결합 단백질은 하나 이상의 CDR이 접합되고/되거나 삽입되고/되거나 결합되는 폴리펩타이드이다. 항원 결합 단백질은 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 CDR을 가질 수 있다. 따라서 항원 결합 단백질은, 예를 들어, 1개의 중쇄 CDR1("CDRH1"), 및/또는 1개의 중쇄 CDR2("CDRH2"), 및/또는 1개의 중쇄CDR3("CDRH3"), 및/또는 1개의 경쇄CDR1("CDRL1"), 및/또는 1개의 경쇄CDR2("CDRL2"), 및/또는 1개의 경쇄CDR3("CDRL3")을 가질 수 있다. 일부 항원 결합 단백질은 CDRH3과 CDRL3을 둘 다 포함한다. 특정 경쇄 및 중쇄 CDR은 각각 표 4A 및 표 4B에서 동정된다.
주어진 항체의 상보성 결정 영역(CDR) 및 프레임워크 영역(FR)은 카바트(Kabat) 등에 의해 문헌[Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed., US Dept. of Health and Human Services, PHS, NIH, NIH Publication no. 91-3242, 1991]에 의해 기재된 시스템을 이용하여 동정될 수 있다. 본 명세서에 개시된 특정 항체는 동일한 하나 이상의 아미노산 서열을 포함하거나 또는 표 4A 및 표 4B에 제시된 CDR 중 하나 이상의 아미노산 서열에 대해 실질적인 서열 동일성을 가진다. 이들 CDR은 상기 언급한 바와 같이 카바트 등에 의해 기재된 시스템을 사용한다.
천연 유래 항체 내의 CDR의 구조 및 특성이 기재되었다, 상기 참조. 간단히 말하면, 전통적인 항체에서, CDR은 중쇄 및 경쇄 가변 구역에서 프레임워크 내에 임베딩되고, 여기서 이들은 항원 결합 및 인식을 담당하는 구역을 구성한다. 가변 구역은 프레임워크 구역(상기 카밧 등의 문헌(1991)에 의해 지정된 프레임워크 구역 1-4, FR1, FR2, FR3 및 FR4; 또한 상기 문헌[Chothia and Lesk, 1987] 참조) 내에 적어도 3개의 중쇄 또는 경쇄 CDR을 포함한다(Kabat et al., 1991, Sequences of Proteins of Immunological Interest, Public Health Service N.I.H., Bethesda, MD; 또한 문헌[Chothia and Lesk, 1987, J. Mol. Biol. 196:901-917; Chothia et al., 1989, Nature 342: 877-883] 참조). 그러나, 본 명세서에 의해 제공된 CDR은 전통적인 항체 구조의 항원 결합 도메인을 한정하기 위해 사용될 수 있을 뿐만 아니라, 본 명세서에 기재된 바와 같은 다양한 다른 폴리펩타이드 구조에 함입될 수 있다.
일 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 CDRL1, CDRL2, CDRL3, CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함한다. 일 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 4, 10, 16, 22, 28, 34, 40, 46, 52, 58, 64, 70, 76, 82, 88, 94, 100, 106, 112, 118, 124, 130, 136, 142, 148, 154, 160, 166, 172, 178, 184, 190, 196, 202, 208, 214, 220, 226, 232, 238, 244, 250, 256, 262, 268, 274, 280, 286, 292, 298, 304, 310, 316, 322, 328, 334, 340, 346, 352, 358, 1290, 1300, 1310, 1320, 1330, 1340, 및 1350으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 CDRL1을 포함한다. 일 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 5, 11, 17, 23, 29, 35, 41, 47, 53, 59, 65, 71, 77, 83, 89, 95, 101, 107, 113, 119, 125, 131, 137, 143, 149, 155, 161, 167, 173, 179, 185, 191, 197, 203, 209, 215, 221, 227, 233, 239, 245, 251, 257, 263, 269, 275, 281, 287, 293, 299, 305, 311, 317, 323, 329, 335, 341, 347, 353, 359, 1291, 1301, 1311, 1321, 1331, 1341, 및 1351로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 CDRL2를 포함한다. 일 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 6, 12, 18, 24, 30, 36, 42, 48, 54, 60, 66, 72, 78, 84, 90, 96, 102, 108, 114, 120, 126, 132, 138, 144, 150, 156, 162, 168, 174, 180, 186, 192, 198, 204, 210, 216, 222, 228, 234, 240, 246, 252, 258, 264, 270, 276, 282, 288, 294, 300, 306, 312, 318, 324, 330, 336, 342, 348, 354, 360, 1292, 1302, 1312, 1322, 1332, 1342, 및 1352로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 CDRL3을 포함한다. 일 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 364, 370, 376, 382, 388, 394, 400, 406, 412, 418, 424, 430, 436, 442, 448, 454, 460, 466, 472, 478, 484, 490, 496, 502, 508, 514, 520, 526, 532, 538, 544, 550, 556, 562, 568, 574, 580, 586, 592, 598, 604, 610, 616, 622, 628, 634, 640, 646, 652, 658, 664, 670, 676, 682, 688, 694, 700, 706, 712, 718, 1293, 1303, 1313, 1323, 1333, 1343, 및 1353으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 CDRH1을 포함한다. 일 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 365, 371, 377, 383, 389, 395, 401, 407, 413, 419, 425, 431, 437, 443, 449, 455, 461, 467, 473, 479, 485, 491, 497, 503, 509, 515, 521, 527, 533, 539, 545, 551, 557, 563, 569, 575, 581, 587, 593, 599, 605, 611, 617, 623, 629, 635, 641, 647, 653, 659, 665, 671, 677, 683, 689, 695, 701, 707, 713, 719, 1294, 1304, 1314, 1324, 1334, 1344, 및 1354로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 CDRH2를 포함한다. 일 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 366, 372, 378, 384, 390, 396, 402, 408, 414, 420, 426, 432, 438, 444, 450, 456, 462, 468, 474, 480, 486, 492, 498, 504, 510, 516, 522, 528, 534, 540, 546, 552, 558, 564, 570, 576, 582, 588, 594, 600, 606, 612, 618, 624, 630, 636, 642, 648, 654, 660, 666, 672, 678, 684, 690, 696, 702, 708, 714, 720, 1295, 1305, 1315, 1325, 1335, 1345, 및 1355로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 CDRH3을 포함한다. 일 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 CDRL1, CDRL2, CDRL3, CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3을 포함하고, 여기서 각각의 CDRL1, CDRL2, CDRL3, CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3 각각은 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 364, 서열번호 365, 및 서열번호 366; 서열번호 10, 서열번호 11, 서열번호 12, 서열번호 370, 서열번호 371, 및 서열번호 372; 서열번호 16, 서열번호 17, 서열번호 18, 서열번호 376, 서열번호 377, 및 서열번호 378; 서열번호 22, 서열번호 23, 서열번호 24, 서열번호 382, 서열번호 383, 및 서열번호 384; 서열번호 28, 서열번호 29, 서열번호 30, 서열번호 388, 서열번호 389, 및 서열번호 390; 서열번호 34, 서열번호 35, 서열번호 36, 서열번호 394, 서열번호 395, 및 서열번호 396; 서열번호 40, 서열번호 41, 서열번호 42, 서열번호 400, 서열번호 401, 및 서열번호 402; 서열번호 46, 서열번호 47, 서열번호 48, 서열번호 406, 서열번호 407, 및 서열번호 408; 서열번호 52, 서열번호 53, 서열번호 54, 서열번호 412, 서열번호 413, 및 서열번호 414; 서열번호 58, 서열번호 59, 서열번호 60, 서열번호 418, 서열번호 419, 및 서열번호 420; 서열번호 64, 서열번호 65, 서열번호 66, 서열번호 424, 서열번호 425, 및 서열번호 426; 서열번호 70, 서열번호 71, 서열번호 72, 서열번호 430, 서열번호 431, 및 서열번호 432; 서열번호 76, 서열번호 77, 서열번호 78, 서열번호 436, 서열번호 437, 및 서열번호 438; 서열번호 82, 서열번호 83, 서열번호 84, 서열번호 442, 서열번호 443, 및 서열번호 444; 서열번호 88, 서열번호 89, 서열번호 90, 서열번호 448, 서열번호 449, 및 서열번호 450; 서열번호 94, 서열번호 95, 서열번호 96, 서열번호 454, 서열번호 455, 및 서열번호 456; 서열번호 100, 서열번호 101, 서열번호 102, 서열번호 460, 서열번호 461, 및 서열번호 462; 서열번호 106, 서열번호 107, 서열번호 108, 서열번호 466, 서열번호 467, 및 서열번호 468; 서열번호 112, 서열번호 113, 서열번호 114, 서열번호 472, 서열번호 473, 및 서열번호 474; 서열번호 118, 서열번호 119, 서열번호 120, 서열번호 478, 서열번호 479, 및 서열번호 480; 서열번호 124, 서열번호 125, 서열번호 126, 서열번호 484, 서열번호 485, 및 서열번호 486; 서열번호 130, 서열번호 131, 서열번호 132, 서열번호 490, 서열번호 491, 및 서열번호 492; 서열번호 136, 서열번호 137, 서열번호 138, 서열번호 496, 서열번호 497, 및 서열번호 498; 서열번호 142, 서열번호 143, 서열번호 144, 서열번호 502, 서열번호 503, 및 서열번호 504; 서열번호 148, 서열번호 149, 서열번호 150, 서열번호 508, 서열번호 509, 및 서열번호 510; 서열번호 154, 서열번호 155, 서열번호 156, 서열번호 514, 서열번호 515, 및 서열번호 516; 서열번호 160, 서열번호 161, 서열번호 162, 서열번호 520, 서열번호 521, 및 서열번호 522; 서열번호 166, 서열번호 167, 서열번호 168, 서열번호 526, 서열번호 527, 및 서열번호 528; 서열번호 172, 서열번호 173, 서열번호 174, 서열번호 532, 서열번호 533, 및 서열번호 534; 서열번호 178, 서열번호 179, 서열번호 180, 서열번호 538, 서열번호 539, 및 서열번호 540; 서열번호 184, 서열번호 185, 서열번호 186, 서열번호 544, 서열번호 545, 및 서열번호 546; 서열번호 190, 서열번호 191, 서열번호 192, 서열번호 550, 서열번호 551, 및 서열번호 552; 서열번호 196, 서열번호 197, 서열번호 198, 서열번호 556, 서열번호 557, 및 서열번호 558; 서열번호 202, 서열번호 203, 서열번호 204, 서열번호 562, 서열번호 563, 및 서열번호 564; 서열번호 208, 서열번호 209, 서열번호 210, 서열번호 568, 서열번호 569, 및 서열번호 570; 서열번호 214, 서열번호 215, 서열번호 216, 서열번호 574, 서열번호 575, 및 서열번호 576; 서열번호 220, 서열번호 221, 서열번호 222, 서열번호 580, 서열번호 581, 및 서열번호 582; 서열번호 226, 서열번호 227, 서열번호 228, 서열번호 586, 서열번호 587, 및 서열번호 588; 서열번호 232, 서열번호 233, 서열번호 234, 서열번호 592, 서열번호 593, 및 서열번호 594; 서열번호 238, 서열번호 239, 서열번호 240, 서열번호 598, 서열번호 599, 및 서열번호 600; 서열번호 244, 서열번호 245, 서열번호 246, 서열번호 604, 서열번호 605, 및 서열번호 606; 서열번호 250, 서열번호 251, 서열번호 252, 서열번호 610, 서열번호 611, 및 서열번호 612; 서열번호 256, 서열번호 257, 서열번호 258, 서열번호 616, 서열번호 617, 및 서열번호 618; 서열번호 262, 서열번호 263, 서열번호 264, 서열번호 622, 서열번호 623, 및 서열번호 624; 서열번호 268, 서열번호 269, 서열번호 270, 서열번호 628, 서열번호 629, 및 서열번호 630; 서열번호 274, 서열번호 275, 서열번호 276, 서열번호 634, 서열번호 635, 및 서열번호 636; 서열번호 280, 서열번호 281, 서열번호 282, 서열번호 640, 서열번호 641, 및 서열번호 642; 서열번호 286, 서열번호 287, 서열번호 288, 서열번호 646, 서열번호 647, 및 서열번호 648; 서열번호 292, 서열번호 293, 서열번호 294, 서열번호 652, 서열번호 653, 및 서열번호 654; 서열번호 298, 서열번호 299, 서열번호 300, 서열번호 658, 서열번호 659, 및 서열번호 660; 서열번호 304, 서열번호 305, 서열번호 306, 서열번호 664, 서열번호 665, 및 서열번호 666; 서열번호 310, 서열번호 311, 서열번호 312, 서열번호 670, 서열번호 671, 및 서열번호 672; 서열번호 316, 서열번호 317, 서열번호 318, 서열번호 676, 서열번호 677, 및 서열번호 678; 서열번호 322, 서열번호 323, 서열번호 324, 서열번호 682, 서열번호 683, 및 서열번호 684; 서열번호 328, 서열번호 329, 서열번호 330, 서열번호 688, 서열번호 689, 및 서열번호 690; 서열번호 334, 서열번호 335, 서열번호 336, 서열번호 694, 서열번호 695, 및 서열번호 696; 서열번호 340, 서열번호 341, 서열번호 342, 서열번호 700, 서열번호 701, 및 서열번호 702; 서열번호 346, 서열번호 347, 서열번호 348, 서열번호 706, 서열번호 707, 및 서열번호 708; 서열번호 352, 서열번호 353, 서열번호 354, 서열번호 712, 서열번호 713, 및 서열번호 714; 서열번호 358, 서열번호 359, 서열번호 360, 서열번호 718, 서열번호 719, 및 서열번호 720; 서열번호 1290, 서열번호 1291, 서열번호 1292, 서열번호 1293, 서열번호 1294, 및 서열번호 1295; 서열번호 1300, 서열번호 1301, 서열번호 1302, 서열번호 1303, 서열번호 1304, 및 서열번호 1305; 서열번호 1310, 서열번호 1311, 서열번호 1312, 서열번호 1313, 서열번호 1314, 및 서열번호 1315; 서열번호 1320, 서열번호 1321, 서열번호 1322, 서열번호 1323, 서열번호 1324, 및 서열번호 1325; 서열번호 1330, 서열번호 1331, 서열번호 1332, 서열번호 1333, 서열번호 1334, 및 서열번호 1335; 서열번호 1340, 서열번호 1341, 서열번호 1342, 서열번호 1343, 서열번호 1344, 및 서열번호 1345; 서열번호 1350, 서열번호 1351, 서열번호 1352, 서열번호 1353, 서열번호 1354, 및 서열번호 1355; 및 서열번호 1360, 서열번호 1361, 서열번호 1362, 서열번호 1363, 서열번호 1364, 및 서열번호 1365로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함한다.
다른 양상에서, 항원 결합 단백질은 표 4A 및 표 4B에 열거된 CDR의 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 변이체 형태를 포함하며, 각각은 표 4A 및 표 4B에 열거된 CDR 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 가진다. 일부 항원 결합 단백질은 표 4A 및 표 4B에 열거된 CDR 중 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개를 포함하며, 이 표에 열거된 CDR로부터의 1, 2, 3, 4 또는 5개 이하의 아미노산만큼 각각 또는 종합적으로 상이하다.
다양한 다른 실시형태에서, 항원 결합 단백질은 이러한 항체로부터 유래된다. 예를 들어, 일 양상에서, 항원 결합 단백질은 표 4A 및 표 4B에 열거된 임의의 특정 항체에 대해 행 중 하나에 열거된 CDR 중 1, 2, 3, 4, 5 또는 모두 6을 포함한다. 다른 양상에서, 항원 결합 단백질은 표 4A 및 표 4B의 항체에 대해 행 중 하나에 열거된 CDR의 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개의 변이체를 포함하며, 각각의 CDR은 표 4A 및 표 4B에 열거된 CDR 서열에 대해 적어도 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 가진다. 일부 항원 결합 단백질은 표 4A 및 표 4B의 행 중 하나에 열거된 CDR의 1, 2, 3, 4, 5 또는 6개를 포함하며, 각각 이들 표에 열거된 CDR과 1, 2, 3, 4 또는 5개 이하의 아미노산만큼 상이하다. 다른 양상에서, 항원 결합 단백질은 표 4A 및 표 4B의 행에 열거된 모두 6개의 CDR을 포함하며, CDR에 대한 아미노산 변화의 총 수는 총괄적으로 1, 2, 3, 4 또는 5개 이하의 아미노산이다.
일 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 963, 967, 971, 975, 979, 983, 987, 991, 995, 999, 1003, 1007, 1011, 1015, 1019, 1023, 1027, 1031, 1035, 1039, 1043, 1047, 1051, 1055, 1059, 1063, 1067, 1071, 1075, 1079, 1083, 1087, 1091, 1095, 1099, 1103, 1107, 1111, 1115, 1119, 1123, 1127, 1131, 1135, 1139, 1143, 1147, 1151, 1155, 1159, 1163, 1167, 1171, 1175, 1179, 1183, 1187, 1191, 1195, 1199, 1288, 1298, 1308, 1318, 1328, 1338, 1348, 및 1358로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 경쇄를 포함한다. 일 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 964, 968, 972, 976, 980, 984, 988, 992, 996, 1000, 1004, 1008, 1012, 1016, 1020, 1024, 1028, 1032, 1036, 1040, 1044, 1048, 1052, 1056, 1060, 1064, 1068, 1072, 1076, 1080, 1084, 1088, 1092, 1096, 1100, 1104, 1108, 1112, 1116, 1120, 1124, 1128, 1132, 1136, 1140, 1144, 1148, 1152, 1156, 1160, 1164, 1168, 1172, 1176, 1180, 1184, 1188, 1192, 1196, 1200, 1289, 1299, 1309, 1319, 1329, 1339, 1349, 및 1359로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 963, 967, 971, 975, 979, 983, 987, 991, 995, 999, 1003, 1007, 1011, 1015, 1019, 1023, 1027, 1031, 1035, 1039, 1043, 1047, 1051, 1055, 1059, 1063, 1067, 1071, 1075, 1079, 1083, 1087, 1091, 1095, 1099, 1103, 1107, 1111, 1115, 1119, 1123, 1127, 1131, 1135, 1139, 1143, 1147, 1151, 1155, 1159, 1163, 1167, 1171, 1175, 1179, 1183, 1187, 1191, 1195, 1199, 1288, 1298, 1308, 1318, 1328, 1338, 1348, 및 1358로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 964, 968, 972, 976, 980, 984, 988, 992, 996, 1000, 1004, 1008, 1012, 1016, 1020, 1024, 1028, 1032, 1036, 1040, 1044, 1048, 1052, 1056, 1060, 1064, 1068, 1072, 1076, 1080, 1084, 1088, 1092, 1096, 1100, 1104, 1108, 1112, 1116, 1120, 1124, 1128, 1132, 1136, 1140, 1144, 1148, 1152, 1156, 1160, 1164, 1168, 1172, 1176, 1180, 1184, 1188, 1192, 1196, 1200, 1289, 1299, 1309, 1319, 1329, 1339, 1349, 및 1359로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 중쇄를 포함한다. 일 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 일 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 963을 포함하는 경쇄 및 서열번호 964를 포함하는 중쇄; 서열번호 967을 포함하는 경쇄 및 서열번호 968을 포함하는 중쇄; 서열번호 971을 포함하는 경쇄 및 서열번호 972를 포함하는 중쇄; 서열번호 975를 포함하는 경쇄 및 서열번호 976을 포함하는 중쇄; 서열번호 979를 포함하는 경쇄 및 서열번호 980을 포함하는 중쇄; 서열번호 983을 포함하는 경쇄 및 서열번호 984를 포함하는 중쇄; 서열번호 987을 포함하는 경쇄 및 서열번호 988을 포함하는 중쇄; 서열번호 991을 포함하는 경쇄 및 서열번호 992를 포함하는 중쇄; 서열번호 995를 포함하는 경쇄 및 서열번호 996을 포함하는 중쇄; 서열번호 999를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1000을 포함하는 중쇄; 서열번호 1003을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1004를 포함하는 중쇄; 서열번호 1007을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1008을 포함하는 중쇄; 서열번호 1011을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1012를 포함하는 중쇄; 서열번호 1015를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1016을 포함하는 중쇄; 서열번호 1019를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1020을 포함하는 중쇄; 서열번호 1023을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1024를 포함하는 중쇄; 서열번호 1027을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1028을 포함하는 중쇄; 서열번호 1031을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1032를 포함하는 중쇄; 서열번호 1035를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1036을 포함하는 중쇄; 서열번호 1039를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1040을 포함하는 중쇄; 서열번호 1043을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1044를 포함하는 중쇄; 서열번호 1047을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1048을 포함하는 중쇄; 서열번호 1051을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1052를 포함하는 중쇄; 서열번호 1055를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1056을 포함하는 중쇄; 서열번호 1059를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1060을 포함하는 중쇄; 서열번호 1063을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1064를 포함하는 중쇄; 서열번호 1067을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1068을 포함하는 중쇄; 서열번호 1071을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1072를 포함하는 중쇄; 서열번호 1075를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1076을 포함하는 중쇄; 서열번호 1079를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1080을 포함하는 중쇄; 서열번호 1083을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1084를 포함하는 중쇄; 서열번호 1087을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1088을 포함하는 중쇄; 서열번호 1091을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1092를 포함하는 중쇄; 서열번호 1095를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1096을 포함하는 중쇄; 서열번호 1099를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1100을 포함하는 중쇄; 서열번호 1103을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1104를 포함하는 중쇄; 서열번호 1107을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1108을 포함하는 중쇄; 서열번호 1111을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1112를 포함하는 중쇄; 서열번호 1115를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1116을 포함하는 중쇄; 서열번호 1119를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1120을 포함하는 중쇄; 서열번호 1123을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1124를 포함하는 중쇄; 서열번호 1127을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1128을 포함하는 중쇄; 서열번호 1131을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1132를 포함하는 중쇄; 서열번호 1135를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1136을 포함하는 중쇄; 서열번호 1139를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1140을 포함하는 중쇄; 서열번호 1143을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1144를 포함하는 중쇄; 서열번호 1147을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1148을 포함하는 중쇄; 서열번호 1151을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1152를 포함하는 중쇄; 서열번호 1155를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1156을 포함하는 중쇄; 서열번호 1159를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1160을 포함하는 중쇄; 서열번호 1163을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1164를 포함하는 중쇄; 서열번호 1167을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1168을 포함하는 중쇄; 서열번호 1171을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1172를 포함하는 중쇄; 서열번호 1175를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1176을 포함하는 중쇄; 서열번호 1179를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1180을 포함하는 중쇄; 서열번호 1183을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1184를 포함하는 중쇄; 서열번호 1187을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1188을 포함하는 중쇄; 서열번호 1191을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1192를 포함하는 중쇄; 서열번호 1195를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1196을 포함하는 중쇄; 서열번호 1199를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1200을 포함하는 중쇄; 서열번호 1288를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1289를 포함하는 중쇄; 서열번호 1298을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1299을 포함하는 중쇄; 서열번호 1308을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1309를 포함하는 중쇄; 서열번호 1318을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1319를 포함하는 중쇄; 서열번호 1328를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1329을 포함하는 중쇄; 서열번호 1338을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1339을 포함하는 중쇄; 서열번호 1348을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1349을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 1358를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1359를 포함하는 중쇄로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 및 중쇄의 조합을 포함한다.
일 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 961, 965, 969, 973, 977, 981, 985, 989, 993, 997, 1001, 1005, 1009, 1013, 1017, 1021, 1025, 1029, 1033, 1037, 1041, 1045, 1049, 1053, 1057, 1061, 1065, 1069, 1073, 1077, 1081, 1085, 1089, 1093, 1097, 1101, 1105, 1109, 1113, 1117, 1121, 1125, 1129, 1133, 1137, 1141, 1145, 1149, 1153, 1157, 1161, 1165, 1169, 1173, 1177, 1181, 1185, 1189, 1193, 1197, 1361, 1363, 1365, 1367, 1369, 1371, 1373, 및 1375로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄를 포함한다. 일 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 962, 966, 970, 974, 978, 982, 986, 990, 994, 998, 1002, 1006, 1010, 1014, 1018, 1022, 1026, 1030, 1034, 1038, 1042, 1046, 1050, 1054, 1058, 1062, 1066, 1070, 1074, 1078, 1082, 1086, 1090, 1094, 1098, 1102, 1106, 1110, 1114, 1118, 1122, 1126, 1130, 1134, 1138, 1142, 1146, 1150, 1154, 1158, 1162, 1166, 1170, 1174, 1178, 1182, 1186, 1190, 1194, 1198, 1362, 1364, 1366, 1368, 1370, 1372, 1374, 및 1376으로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄를 포함한다. 일 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 961, 965, 969, 973, 977, 981, 985, 989, 993, 997, 1001, 1005, 1009, 1013, 1017, 1021, 1025, 1029, 1033, 1037, 1041, 1045, 1049, 1053, 1057, 1061, 1065, 1069, 1073, 1077, 1081, 1085, 1089, 1093, 1097, 1101, 1105, 1109, 1113, 1117, 1121, 1125, 1129, 1133, 1137, 1141, 1145, 1149, 1153, 1157, 1161, 1165, 1169, 1173, 1177, 1181, 1185, 1189, 1193, 1197, 1361, 1363, 1365, 1367, 1369, 1371, 1373, 및 1375로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 962, 966, 970, 974, 978, 982, 986, 990, 994, 998, 1002, 1006, 1010, 1014, 1018, 1022, 1026, 1030, 1034, 1038, 1042, 1046, 1050, 1054, 1058, 1062, 1066, 1070, 1074, 1078, 1082, 1086, 1090, 1094, 1098, 1102, 1106, 1110, 1114, 1118, 1122, 1126, 1130, 1134, 1138, 1142, 1146, 1150, 1154, 1158, 1162, 1166, 1170, 1174, 1178, 1182, 1186, 1190, 1194, 1198, 1362, 1364, 1366, 1368, 1370, 1372, 1374, 및 1376으로 이루어진 군으로부터 선택된 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄를 포함한다. 일 실시형태에서, 항체 또는 이의 단편은 서열번호 961을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 962를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 965를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 966을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 969을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 970를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 973을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 974를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 977를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 978을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 981을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 982을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 985를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 986을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 989를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 990를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 993을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 994를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 997를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 998을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 1001을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1002를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 1005를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1006을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 1009을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1010를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 1013을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1014를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 1017를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1018을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 1021을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1022을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 1025를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1026을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 1029를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1030를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 1033을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1034를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 1037를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1038을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 1041을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1042를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 1045를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1046을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 1049을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1050를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 1053을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1054를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 1057를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1058을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 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서열번호 1157를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1158을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 1161을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1162를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 1165를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1166을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 1169을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1170를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 1173을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1174를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 1177를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1178을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 1181을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1182을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 1185를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1186을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 1189를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1190를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 1193을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1194를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 1197를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1198을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 1361을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1362를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 1363을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1364를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 1365를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1366을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 1367을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1368를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 1369를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1370을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 1371을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1372을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 서열번호 1373을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1374를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄; 및 서열번호 1375를 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 경쇄 및 서열번호 1376을 포함하는 폴리뉴클레오타이드 서열에 의해 암호화된 중쇄로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역의 조합을 포함한다.
일부 양상에서, 본 발명은 GIPR에 결합하는 항체를 포함하고, 여기서 항체는 GIPR에 결합하고, GIPR이 GIP에 결합하는 가능성을 감소시킨다.
다른 양상에서, 항원 결합 단백질은 표 5에 열거된 항체 중 하나에 대한 행 중 하나에 열거된 바와 같은 전장 경쇄 및 전장 중쇄를 포함한다. 제공된 일부 항원 결합 단백질은 쇄 중 하나 또는 둘 다 단지 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15개의 아미노산 잔기에서 표에 특정된 서열과 상이하다는 것을 제외하고, 표 5에 열거된 항체 중 하나에 대해 행 중 하나에 열거된 바와 같은 전장 경쇄 및 전장 중쇄를 포함하되, 각각의 이러한 서열 차이는 단일 아미노산 결실, 삽입 또는 치환과 독립적이며, 결실, 삽입 및/또는 치환은 표 5에 구체화된 전장 서열에 대해 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 또는 15개 이하의 아미노산 변화를 초래한다. 일 실시형태에서 항원 결합 단백질은 N-말단 메티오닌이 결실된 표 5로부터의 전장 경쇄 및/또는 전장 중쇄를 포함한다. 일 실시형태에서 항원 결합 단백질은 C-말단 라이신이 결실된 표 5로부터의 전장 경쇄 및/또는 전장 중쇄를 포함한다. 경쇄 및/또는 중쇄가 표 5에서 구체화된 바와 같은 경쇄 또는 중쇄 서열의 아미노산 서열에 대해 적어도 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98% 또는 99% 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 포함하거나 또는 이루어진다는 점에서 쇄 중 하나 또는 둘 다 표에서 구체화된 서열과 상이하다는 것을 제외하고, 다른 항원 결합 단백질은 또한 표 5에 열거된 항체 중 하나에 대한 항 중 하나에 열거된 바와 같은 전장 경쇄 및 전장 중쇄를 포함한다.
다른 실시형태에서, 항원 결합 단백질은 표 5에 제시된 바와 같은 경쇄 또는 중쇄 폴리펩타이드만으로 이루어진다.
또 다른 양상에서, 표 3, 표 4A, 표 4B 및 표 5에 열거된 CDR, 가변 도메인 및/또는 전장 서열을 포함하는 항원-결합 단백질은 단클론성 항체, 키메라 항체, 인간화된 항체, 인간 항체, 다중 특이성 항체, 또는 앞서 언급한 것의 항체 단편이다. 다른 실시형태에서, 본 명세서에 제공된 단리된 항원-결합 단백질의 항체 단편은 표 5에 열거된 바와 같은 서열을 갖는 항체에 기반한 Fab 단편, Fab' 단편, F(ab')2 단편, Fv 단편, 다이어바디, 또는 scFv이다.
또 다른 양상에서, 표 5에 제공된 단리된 항원-결합 단백질은 표지기에 결합될 수 있고, GIPR에 대한 결합에 대해 본 명세서에 제공된 단리된 항원-결합 단백질 중 하나의 항원 결합 단백질과 경쟁할 수 있다.
다른 실시형태에서, 인간 GIPR에 대한 특정 결합을 위해 상기 기재된 예시된 항체 또는 기능성 단편(예를 들어, 서열번호 1201) 중 하나와 경쟁하는 항원 결합 단백질이 제공된다. 이러한 항원 결합 단백질은 본 명세서에 기재된 항원 결합 단백질 중 하나와 동일한 에피토프에, 또는 중복 에피토프에 결합할 수 있다. 예시된 항원 결합 단백질과 경쟁하는 항원 결합 단백질 및 단편은 유사한 기능성 특성을 나타내는 것으로 예상된다. 예시된 항원 결합 단백질 및 단편은 표 3, 표 4A, 표 4B 및 표 5에 포함된 중쇄 및 경쇄, 가변 영역 도메인 및 CDR을 갖는 것을 포함하는, 상기 기재된 것을 포함한다. 따라서, 구체적 예로서, 제공된 항원 결합 단백질은 하기를 갖는 항체와 경쟁하는 것을 포함한다:
표 4A 및 표 4B에 열거된 임의의 항체에 대해 열거된 CDR의 모두 6;
표 3에 열거된 임의의 항체에 대해 열거된 VH 및 VL; 또는
표 5에 열거된 임의의 항체에 대해 구체화된 2개의 경쇄 및 2개의 중쇄.
제공된 항원 결합 단백질은 GIPR에 결합하는 단클론성 항체를 포함한다. 단클론성 항체는 당업계에 공지된 임의의 기법을 이용하여, 예를 들어, 면역화 스케줄의 완료 후 유전자이식 동물로부터 채취된 비장 세포를 불멸화함으로써 생성될 수 있다. 비장 세포는 당업계에 공지된 임의의 기법을 이용하여, 예를 들어 하이브리도마를 생성하기 위해 그들을 골수종 세포와 융합시킴으로써 불멸화될 수 있다. 하이브리도마-생성 융합 절차에서 사용하기 위한 골수종 세포는 바람직하게는 비-항체-생성이며, 목적으로 하는 융합 세포(하이브리도마)만의 성장을 지지하는 특정 선택적 배지에서 그들이 성장할 수 없도록 하는 높은 융합 효율 및 효소 결핍을 가진다. 마우스 융합에서 사용하는 데 적합한 세포주의 예는 Sp-20, P3-X63/Ag8, P3-X63-Ag8.653, NS1/1.Ag 4 1, Sp210-Ag14, FO, NSO/U, MPC-11, MPC11-X45-GTG 1.7 및 S194/5XXO Bul을 포함하고; 래트 융합에서 사용되는 세포주의 예는 R210.RCY3, Y3-Ag 1.2.3, IR983F 및 4B210을 포함한다. 세포 융합에 유용한 다른 세포주는 U-266, GM1500-GRG2, LICR-LON-HMy2 및 UC729-6이다.
일부 예에서, 하이브리도마 세포주는 GIPR 면역원을 이용하여 동물(예를 들어, 인간 면역글로불린 서열을 갖는 유전자이식 동물)을 면역화시키고; 면역화된 동물로부터 비장 세포를 채취하며; 골수종 세포주에 채취된 비장 세포를 융합시킴으로써, 하이브리도마 세포를 생성하고; 하이브리도마 세포로부터 하이브리도마 세포주를 확립하며, 그리고 GIPR 폴리펩타이드에 결합하는 항체를 생성하는 하이브리도마 세포주를 동정함으로써 생성된다. 이러한 하이브리도마 세포주, 및 그들에 의해 생성된 항-GIPR 단클론성 항체는 본 출원의 양상이다.
하이브리도마 세포주에 의해 분비된 단클론성 항체는 당업계에 공지된 임의의 기법을 이용하여 정제될 수 있다. 하이브리도마 또는 mAb는 특정 특성을 갖는 mAb, 예컨대 GIPR 활성을 증가시키는 능력을 동정하기 위해 추가로 선별될 수 있다.
앞서 언급한 서열에 기반하여 키메라 및 인간화된 항체가 또한 제공된다. 치료제로서 사용하기 위한 단클론성 항체는 사용 전에 다양한 방법으로 변형될 수 있다. 일 예는 기능성 면역글로불린 경쇄 또는 중쇄 또는 이의 면역학적으로 기능성인 부분을 생성하기 위해 공유 결합된 상이한 항체로부터의 단백질 세그먼트로 구성된 항체인 키메라 항체이다. 일반적으로, 중쇄 및/또는 경쇄의 일부가 특정 종으로부터 유래되거나 또는 특정 항체 분류 또는 하위분류에 속하는 항체에서의 대응하는 서열과 동일하거나 또는 이에 대해 상동성인 한편, 그들이 목적으로 하는 생물학적 활성을 나타낸다면, 쇄(들)의 나머지는 다른 종으로부터 유래되거나 또는 다른 항체 분류 또는 하위분류에 속하는 항체에서의 대응하는 서열과 동일하거나 상동성이다. 키메라 항체에 관한 방법에 대해, 예를 들어, 본 명세서에 참고로 포함되는 미국 특허 제4,816,567호; 및 문헌[Morrison et al., 1985, Proc . Natl . Acad. Sci . USA 81:6851-6855] 참조. CDR 접합은, 예를 들어, 미국 특허 제6,180,370호, 제5,693,762호, 제5,693,761호, 제5,585,089호 및 제5,530,101호에 기재되어 있다.
일반적으로, 키메라 항체의 제조 목적은 의도된 환자 종으로부터의 아미노산 수가 최대화되는 키메라를 생성하는 것이다. 일 예는 "CDR-접합" 항체이며, 이때 항체는 특정 종으로부터의 또는 특정 항체 분류 또는 하위분류에 속하는 하나 이상의 상보성 결정 영역(CDR)을 포함하는 한편, 항체 쇄(들)의 나머지는 다른 종으로부터 유래되거나 또는 다른 항체 분류 또는 하위분류에 속하는 항체 내 대응하는 서열과 동일하거나 또는 상동성이다. 인간에서 사용하기 위해, 설치류 항체로부터의 가변 영역 또는 선택된 CDR은 종종 인간 항체로 접합되어, 인간 항체의 천연-유래 가변 영역 또는 CDR을 대체한다.
키메라 항체의 하나의 유용한 유형은 "인간화된" 항체이다. 일반적으로, 인간화된 항체는 비인간 동물에서 초기에 상승된 단클론성 항체로부터 생성된다. 본 단클론성 항체에서, 전형적으로 항체의 비-항원 인식 부분으로부터의 특정 아미노산 잔기는 대응하는 아이소타입의 인간 항체에서 대응하는 잔기에 대해 상동성이 되도록 변형된다. 인간화는, 예를 들어, 설치류 가변 영역의 적어도 일부를 인간 항체의 대응하는 영역으로 치환함으로써 다양한 방법을 이용하여 수행될 수 있다(예를 들어, 미국 특허 제5,585,089호 및 제5,693,762호; 문헌[Jones et al., 1986, Nature 321:522-525; Riechmann et al., 1988, Nature　332:323-27; Verhoeyen et al., 1988, Science 239:1534-1536] 참조).
일 양상에서, 본 명세서에 제공된 항체의 경쇄 및 중쇄 가변 영역의 CDR은 동일 또는 상이한, 계통 발생론적 종으로부터의 항체로부터의 프레임워크 영역(FR)에 접합된다. 예를 들어, 중쇄 및 경쇄 가변 영역 VH1, VH2, VH3, VH4, VH5, VH6, VH7, VH8, VH9, VH10, VH11, VH12 및/또는 VL1 및 VL2의 CDR은 공통 인간 FR에 접합될 수 있다. 공통 인간 FR을 생성하기 위해, 몇몇 인간 중쇄 또는 경쇄 아미노산 서열로부터의 FR은 공통 아미노산 서열을 동정하도록 정렬될 수 있다. 다른 실시형태에서, 본 명세서에 개시된 중쇄 또는 경쇄의 FR은 상이한 중쇄 또는 경쇄로부터의 FR로 대체된다. 일 양상에서, GIPR 항체의 중쇄 및 경쇄의 FR에서 희귀 아미노산은 대체되지 않는 반면, FR 아미노산의 나머지는 대체된다. "희귀 아미노산"은 이 특정 아미노산이 FR에서 보통 발견되지 않는 위치에 있는 특정 아미노산이다. 대안적으로, 하나의 중쇄 또는 경쇄로부터의 접합된 가변 영역은 본 명세서에 개시된 바와 같은 해당되는 특정 중쇄 또는 경쇄의 불변 영역과 상이한 불변 영역과 함께 사용될 수 있다. 다른 실시형태에서, 접합된 가변 영역은 단일쇄 Fv 항체의 부분이다.
특정 실시형태에서, 인간 이외의 종으로부터의 불변 영역은 혼성 항체를 생성하기 위해 인간 가변 영역(들)과 함께 사용될 수 있다.
완전 인간 GIPR 항체가 또한 제공된다. 인간을 항원("완전 인간 항체")에 노출시키는 일 없이 주어진 항원에 특이적인 완전 인간 항체를 제조하는 방법을 이용 가능하다. 완전 인간 항체의 생성을 실행하기 위해 제공되는 하나의 구체적 수단은 마우스 체액성 면역계의 "인간화"이다. 내인성 Ig 유전자가 비활성화된 마우스 내로의 인간 면역글로불린(Ig)의 유도는 임의의 바람직한 항원에 의해 면역화될 수 있는 동물인 마우스에서 완전 인간 단클론성 항체(mAb)를 생성하는 하나의 수단이다. 완전 인간 항체를 이용하는 것은 치료제로서 마우스 또는 마우스-유래 mAb를 인간에게 투여함으로써 때때로 야기될 수 있는 면역원성 및 알레르기 반응을 최소화할 수 있다.
완전 인간 항체는 내인성 면역글로불린 생성의 부재 하에 인간 항체의 레퍼토리를 생성할 수 있는 유전자이식 동물(보통 마우스)을 면역화시킴으로써 생성될 수 있다. 이 목적을 위한 항원은 전형적으로 6개 이상의 인접한 아미노산을 가지며, 선택적으로 합텐과 같은 담체에 접합된다. 예를 들어, 문헌[Jakobovits et al., 1993, Proc . Natl . Acad . Sci . USA 90:2551-2555; Jakobovits et al.,　1993, Nature 362:255-258; 및 Bruggermann et al., 1993, Year in Immunol . 7:33] 참조. 이러한 방법의 일 예에서, 유전자이식 동물은 그 안에 마우스 중쇄 및 경쇄 면역글로불린을 암호화하는 내인성 마우스 면역글로불린 좌위를 무능화시킴으로써, 그리고 인간 중쇄 및 경쇄 단백질을 암호화하는 인간 게놈 DNA 포함 좌위의 마우스 게놈 거대 단편 내로 삽입함으로써 생산된다. 인간 면역글로불린 좌위의 완전한 상보체보다 더 적은 부분적으로 변형된 동물은, 이어서, 목적으로 하는 면역계 변형을 모두 갖는 동물을 얻도록 교배된다. 면역원을 투여할 때, 이들 유전자이식 동물은 면역원에 대해 면역특이적이지만, 가변 영역을 포함하는 뮤린 아미노산 서열보다는 인간 아미노산 서열을 갖는 항체를 생산한다. 이러한 방법의 추가적인 상세한 설명을 위해, 예를 들어, WO96/33735 및 WO94/02602 참조. 인간 항체의 생산을 위한 유전자이식 마우스에 관한 추가적인 방법은 미국 특허 제5,545,807호; 제6,713,610호; 제6,673,986호; 제6,162,963호; 제5,545,807호; 제6,300,129호; 제6,255,458호; 제5,877,397호; 제5,874,299호 및 제5,545,806호에; 국제 특허 공개 WO91/10741, WO90/04036에, 그리고 유럽 특허 제546073B1호 및 유럽 특허 제546073A1호에 기재되어 있다.
본 명세서에서 "HuMab" 마우스로서 지칭되는 상기 기재한 유전자이식 마우스는 내인성[뮤] 및 [카파] 쇄 좌위를 비활성화시키는 표적화된 돌연변이와 함께 비배열 인간 중쇄([뮤] 및 [감마]) 및 [카파] 경쇄 면역글로불린 서열을 암호화하는 인간 면역글로불린 유전자 미니좌위를 포함한다(Lonberg et al., 1994, Nature 368:856-859). 따라서, 마우스는 마우스 IgM 또는 [카파]의 감소된 발현을 나타내고, 면역화에 반응하여, 도입된 인간 중쇄 및 경쇄 이식유전자는 고친화도 인간 IgG[카파] 단클론성 항체를 생성하기 위한 분류 전환 및 체세포 돌연변이를 겪는다(Lonberg et al., 상기 참조; Lonberg and Huszar, 1995, Intern. Rev. Immunol . 13: 65-93; Harding and Lonberg, 1995, Ann. N.Y Acad . Sci. 764:536-546). HuMab 마우스의 제조는 문헌[Taylor et al., 1992, Nucleic Acids Research 20:6287-6295; Chen et al., 1993, International Immunology 5:647-656; Tuaillon et al., 1994, J. Immunol . 152:2912-2920; Lonberg et al., 1994, Nature 368:856-859; Lonberg, 1994, Handbook of Exp . Pharmacology 113:49-101; Taylor et al., 1994, International Immunology 6:579-591; Lonberg and Huszar, 1995, Intern. Rev. Immunol. 13:65-93; Harding and Lonberg, 1995, Ann. N.Y Acad . Sci . 764:536-546; Fishwild et al., 1996, Nature Biotechnology 14:845-851]에 상세하게 기재되어 있으며; 앞서 언급한 참고문헌은 그들의 전문이 모든 목적을 위하여 참고로 포함된다. 추가로 미국 특허 제5,545,806호; 제5,569,825; 제5,625,126호; 제5,633,425; 제5,789,650호; 제5,877,397호; 제5,661,016호; 제5,814,318호; 제5,874,299호; 및 제5,770,429호뿐만 아니라 미국 특허 제5,545,807호; 국제 특허 공개 WO 93/1227; WO 92/22646; 및 WO 92/03918을 참조하며, 이들 모두의 개시내용은 그들의 전문이 모든 목적을 위하여 본 명세서에 참고로 포함된다. 이들 유전자이식 마우스에서 인간 항체를 생성하기 위해 이용되는 기법은 또한 WO 98/24893에, 그리고 문헌[Mendez et al.,　1997, Nature Genetics 15:146-156]에 개시되어 있으며, 이들은 본 명세서에 참고로 포함된다. 예를 들어, HCo7 및 HCo12 유전자이식 마우스 균주는 GIPR에 대한 인간 단클론성 항체를 생성하기 위해 사용될 수 있다. 유전자이식 마우스를 이용하는 인간 항체에 관한 추가적인 상세한 설명은 이하에 제공된다.
하이브리도마 기법을 이용하여, 목적으로 하는 특이성을 갖는 항원-특이적 인간 mAb가 생성되고, 상기 기재한 것과 같은 유전자이식 마우스로부터 선택될 수 있다. 이러한 항체는 적합한 벡터를 이용하여 클로닝 및 발현될 수 있거나, 또는 항체는 배양된 하이브리도마 세포로부터 채취될 수 있다.
완전 인간 항체는 또한 파지-디스플레이 라이브러리로부터 유래될 수 있다(문헌[Hoogenboom et al., 1991, J. Mol . Biol . 227:381; 및 Marks et al., 1991, J. Mol . Biol . 222:581]에 개시된 바와 같음). 파지 디스플레이 기법은 섬유성 박테리오파지 표면 상의 항체 레퍼토리의 디스플레이를 통한 면역 선택, 및 선택 항원에 대한 파지의 결합에 의한 파지의 후속적 선택을 모방한다. 하나의 이러한 기법은 국제 특허 출원 공개 WO 99/10494(본 명세서에 참고로 포함됨)에 기재되어 있다.
GIPR 결합 단백질은 또한 GIPR 항원 결합 단백질의 구조에 기반하여 변이체, 모방체, 유도체 또는 올리고머일 수 있고, 상기 기재한 바와 같은 CDR, 가변 영역 및/또는 전장 쇄를 가진다.
일 실시형태에서, 예를 들어, 항원 결합 단백질은 상기 개시된 항원 결합 단백질 형태의 변이체이다. 예를 들어, 일부 항원 결합 단백질은 중쇄 또는 경쇄, 가변 영역 또는 CDR 중 하나 이상에서 하나 이상의 보존적 아미노산 치환을 가진다.
천연-유래 아미노산은 통상적인 측쇄 특성에 기반한 분류로 나누어질 수 있다:
1) 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;
2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;
3) 산성: Asp, Glu;
4) 염기성: His, Lys, Arg;
5) 쇄 배향에 영향을 미치는 잔기: Gly, Pro; 및
6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.
보존적 아미노산 치환은 이들 부류 중 하나의 구성원의 동일한 부류의 다른 구성원으로의 교환을 수반할 수 있다. 보존적 아미노산 치환은 생물학적 시스템에서의 합성에 의하기보다는 전형적으로 화학적 펩타이드 합성에 의해 혼입되는 비천연 유래 아미노산 잔기를 포함한다. 이들은 펩타이드모방체, 및 다른 반전된 또는 반대 형태의 아미노산 모방체를 포함한다.
비보존적 치환은 상기 부류 중 하나의 구성원의 다른 부류로부터의 구성원으로의 교환을 수반할 수 있다. 이러한 치환된 잔기는 인간 항체와 상동성인 항체의 영역 내로, 또는 분자의 비상동성 영역 내로 도입될 수 있다.
이러한 변화를 생성함에 있어서, 특정 실시형태에 따르면, 아미노산의 소수성 지표가 고려될 수 있다. 단백질의 소수성 프로파일은 각각의 아미노산에 수치적 값("소수성 지표")을 부여하고, 이어서 펩타이드 쇄를 반복적으로 평균화함으로써 계산된다. 각각의 아미노산은 그의 소수성 및 전하 특징에 기반하여 소수성 지표가 부여되었다. 그들은 아이소류신(+4.5); 발린(+4.2); 류신(+3.8); 페닐알라닌(+2.8); 시스테인/시스틴(+2.5); 메티오닌(+1.9); 알라닌(+1.8); 글리신(-0.4); 트레오닌(-0.7); 세린(-0.8); 트립토판(-0.9); 타이로신(-1.3); 프롤린 (-1.6); 히스티딘 (-3.2); 글루타메이트 (-3.5); 글루타민(-3.5); 아스파르테이트(-3.5); 아스파라긴(-3.5); 라이신(-3.9); 및 알기닌(-4.5)이다.
단백질에 대해 상호작용 생물학적 기능을 부여함에 있어서 소수성 프로파일의 중요성은 당업계에서 이해된다(예를 들어, 문헌[Kyte et al., 1982, J. Mol . Biol. 157:105-131] 참조). 특정 아미노산은 유사한 소수성 지표 또는 스코어를 갖는 다른 아미노산으로 치환될 수 있고, 여전히 유사한 생물학적 활성을 보유한다는 것이 알려져 있다. 소수성 지표에 기반하여 변화를 만드는 것에 있어서, 특정 실시형태에서, 소수성 지표가 ±2 내인 아미노산의 치환이 포함된다. 일부 양상에서, ±1 내인 것이 포함되며, ±0.5 내인 것이 포함된다.
또한 유사한 아미노산의 치환은 친수성에 기반하여 효과적으로 이루어질 수 있고, 특히 이에 의해 생성된 생물학적으로 기능성인 단백질 또는 펩타이드는 본 경우에서와 같이 면역학적 실시형태에서 사용을 위한 것으로 의도된다는 것이 이해된다. 특정 실시형태에서, 단백질의 가장 큰 국소 평균 친수성은 그의 인접한 아미노산의 친수성에 의해 지배되기 때문에, 그의 면역원성 및 항원-결합 또는 면역원성, 즉, 단백질의 생물학적 특성과 상관관계가 있다.
다음의 친수성 값은 이들 아미노산 잔기에 부여되었다: 알기닌(+3.0); 라이신(+3.0); 아스파르테이트(+3.0±1); 글루타메이트(+3.0±1); 세린(+0.3); 아스파라긴(+0.2); 글루타민(+0.2); 글리신(0); 트레오닌(-0.4); 프롤린(-0.5±1); 알라닌(-0.5); 히스티딘 (-0.5); 시스테인(-1.0); 메티오닌(-1.3); 발린(-1.5); 류신(-1.8); 아이소류신(-1.8); 타이로신(-2.3); 페닐알라닌(-2.5) 및 트립토판(-3.4). 유사한 친수성 값에 기반한 변화를 생성함에 있어서, 특정 실시형태에서, 친수성 값이 ±2 내인 아미노산 치환이 포함되며, 다른 실시형태에서, ±1 내인 아미노산 치환이 포함되며, 또 다른 실시형태에서, ±0.5 내인 것이 포함된다. 일부 예에서, 또한 친수성에 기반하여 1차 아미노산 서열로부터의 에피토프를 동정할 수 있다. 이들 영역은 또한 "에피토프 코어 영역"으로서 지칭된다.
예시적인 보존적 아미노산 치환은 표 6에 제시된다.
[표 8]
보존적 아미노산 치환
Figure pct00167
당업자는 잘 공지된 기법을 이용하여 본 명세서에 제시된 바와 같은 폴리펩타이드의 적합한 변이체를 결정할 것이다. 당업자는 활성에 중요한 것으로 여겨지지 않는 표적화 영역에 의해 활성을 파괴하는 일 없이 변화될 수 있는 분자의 적합한 면적을 동정할 수 있다. 당업자는 또한 유사한 폴리펩타이드 중에서 보존된 분자의 잔기 및 부분을 동정할 것이다. 추가 실시형태에서, 생물학적 활성에 또는 구조에 중요할 수 있는 균일한 면적은 생물학적 활성을 파괴하는 일 없이 또는 폴리펩타이드 구조에 유해하게 영향을 미치는 일 없이 보존적 아미노산 치환이 실시될 수 있다.
추가적으로, 당업자는 활성 또는 구조에 중요한 유사한 폴리펩타이드에서 잔기를 동정하는 구조-기능 연구를 검토할 수 있다. 이러한 비교를 고려하여, 유사한 단백질 내 활성 또는 구조에 중요한 아미노산 잔기에 대응하는 단백질 내 아미노산 잔기의 중요성을 예측할 수 있다. 당업자는 이러한 예측된 중요한 아미노산 잔기로의 화학적으로 유사한 아미노산 치환에 대해 선택할 수 있다.
당업자는 또한 유사한 폴리펩타이드에서 해당 구조에 대해 3차원 구조 및 아미노산 서열을 분석할 수 있다. 이러한 정보에 대해, 당업자는 항체의 3차원 구조에 대해 항체의 아미노산 잔기의 배열을 예측할 수 있다. 당업자는 단백질 표면 상에 있을 것으로 예측되는 아미노산 잔기에 대한 근본적인 변화를 만들지 않도록 선택될 수 있는데, 이러한 잔기는 다른 분자와의 중요한 상호작용에 연루될 수 있기 때문이다. 게다가, 당업자는 각각의 목적으로 하는 아미노산 잔기에서 단일 아미노산 치환을 포함하는 시험 변이체를 생성할 수 있다. 이어서, 이들 변이체는 GIPR 활성에 대한 분석을 이용하여 선별될 수 있고, 따라서, 아미노산이 변화될 수 있고 변화되어서는 안 되는 정보를 얻을 수 있다. 다시 말해서, 이러한 일상적인 실험으로부터 모은 정보에 기반하여, 당업자는 추가적인 치환이 단독으로 또는 다른 돌연변이와 조합하여 회피되어야하는 아미노산 위치를 용이하게 결정할 수 있다.
다수의 과학적 간행물은 2차 구조의 예측에 전념하였다. 문헌[Moult, 1996, Curr. Op. in Biotech. 7:422-427; Chou et al., 1974, Biochem .　 13:222-245; Chou et al., 1974, Biochemistry 113:211-222; Chou et al., 1978, Adv . Enzymol . Relat. Areas Mol . Biol . 47:45-148; Chou et al., 1979, Ann. Rev. Biochem . 47:251-276; 및 Chou et al., 1979, Biophys . J. 26:367-384] 참조. 게다가, 컴퓨터 프로그램은 예측하는 2차 구조를 보조하기 위해 현재 이용 가능하다. 예측하는 2차 구조의 한 가지 방법은 상동성 모델링에 기반한다. 예를 들어, 30% 초과의 서열 동일성, 또는 40% 초과의 유사성을 갖는 2개의 폴리펩타이드 또는 단백질은 유사한 구조적 위상 기하학을 가질 수 있다. 단백질 구조 데이터베이스(PDB)의 최근의 성장은 폴리펩타이드 또는 단백질 구조 내의 잠재적 폴딩 수를 포함하는 2차 구조의 향상된 예측성을 제공하였다. 문헌[Holm et al., 1999, Nucl . Acid. Res. 27:244-247] 참조. 주어진 폴리펩타이드 또는 단백질에서 제한된 수의 폴딩이 있다는 점과 일단 임계적 수의 구조가 풀어진다면, 구조적 예측은 극적으로 더 정확하게 될 것이라는 점이 시사되었다(Brenner et al., 1997, Curr . Op. Struct . Biol.　 7:369-376).
2차 구조를 예측하는 추가적인 방법은 "스레딩(threading)"　1997, Curr . Opin. Struct . Biol . 7:377-387; Sippl et al., 1996, Structure 4:15-19), "프로파일 분석"(Bowie et al., 1991, Science 253:164-170; Gribskov et al., 1990, Meth. Enzym . 183:146-159; Gribskov et al., 1987, Proc . Nat. Acad . Sci . 84:4355-4358) 및 "진화적 연결"(문헌[Holm, 1999, 상기 참조; 및 Brenner, 1997, 상기 참조])을 포함한다.
일부 실시형태에서, 아미노산 치환은 하기와 같이 이루어진다: (1) 단백질 분해에 대한 민감성을 감소시키고/시키거나, (2) 산화에 대한 민감성을 감소시키고/시키거나, (3) 단백질 복합체를 형성하기 위한 결합 친화도를 변경시키고/시키거나, (4) 리간드 또는 항원 결합 친화도를 변경시키고/시키거나, (4) 이러한 폴리펩타이드에 대한 다른 물리화학적 또는 기능성 특성을 부여하거나 또는 변형한다. 예를 들어, 단일 또는 다중 아미노산 치환(특정 실시형태에서, 보존적 아미노산 치환)은 천연-유래 서열에서 이루어질 수 있다. 치환은 분자간 접촉을 형성하는 도메인(들) 밖에 놓인 항체의 해당 부분에서 이루어질 수 있다. 이러한 실시형태에서, 모 서열의 구조적 특징을 실질적으로 변화시키지 않는 보존적 아미노산 치환(예를 들어, 모 또는 천연 항원 결합 단백질을 특성 규명하는 2차 구조를 파괴하지 않는 하나 이상의 대체 아미노산)이 사용될 수 있다. 당업계에 인식된 폴리펩타이드 2차 및 3차 구조의 예는 문헌[Proteins, Structures and Molecular Principles (Creighton, Ed.),　1984, W. H. New York: Freeman and Company; Introduction to Protein Structure (Branden and Tooze, eds.), 1991, New York: Garland Publishing; 및 Thornton et al.,　1991, Nature 354:105]에 기재되어 있으며, 이들 각각은 본 명세서에 참고로 포함된다.
추가적인 바람직한 항체 변이체는 시스테인 변이체를 포함하되, 모 또는 천연 아미노산 서열 내 하나 이상의 시스테인 잔기는 다른 아미노산(예를 들어, 세린)으로부터 결실되거나 또는 치환된다. 시스테인 변이체는, 특히 항체가 생물학적으로 활성인 입체배좌 내로 재폴딩되어야 할 때 유용하다. 시스테인 변이체는 천연 항체보다 더 적은 시스테인 잔기를 가질 수 있고, 전형적으로 짝지어지지 않은 시스테인으로부터 초래된 상호작용을 최소화하기 위해 짝수를 가진다.
개시되는 중쇄 및 경쇄, 가변 영역 도메인 및 CDR은 GIPR에 특이적으로 결합할 수 있는 항원 결합 영역을 포함하는 폴리펩타이드를 제조하기 위해 사용될 수 있다. 예를 들어, 하나 이상의 CDR은 면역접착을 생성하기 위해 공유로 또는 비공유로 분자(예를 들어, 폴리펩타이드) 내로 혼입될 수 있다. 면역접착은 더 큰 폴리펩타이드 쇄의 부분으로서 CDR(들)을 혼입시킬 수 있거나, 다른 폴리펩타이드 쇄에 CDR(들)을 공유 결합시킬 수 있거나, 또는 CDR(들)을 비공유적으로 혼입시킬 수 있다. CDR(들)은 관심 대상의 특정 항원(예를 들어, GIPR 폴리펩타이드 또는 이의 에피토프)에 특이적으로 결합하도록 면역접착을 가능하게 한다.
본 명세서에 기재된 가변 영역 도메인 및 CDR에 기반한 모방체(예를 들어, "펩타이드 모방체" 또는 "펩티도 모방체")가 또한 제공된다. 이들 유사체는 펩타이드, 비-펩타이드 또는 펩타이드와 비펩타이드 영역의 조합일 수 있다. 임의의 목적을 위해 본 명세서에 포함된 문헌[Fauchere,　1986, Adv . Drug Res. 15:29; Veber and Freidinger, 1985, TINS p. 392; 및 Evans et al.,　1987, J. Med . Chem . 30:1229]. 치료적으로 유용한 펩타이드와 구조적으로 유사한 펩타이드 모방체는 유사한 치료적 또는 예방적 효과를 생성하기 위해 사용될 수 있다. 이러한 화합물은 종종 컴퓨터화된 분자 모델링에 의해 개발된다. 일반적으로, 펩티도 모방체는 목적으로 하는 생물학적 활성, 예컨대 본 명세서에서 GIPR에 특이적으로 결합하는 능력을 나타내는 항체와 구조적으로 유사하지만, 당업계에 잘 공지된 방법에 의해 -CH2NH-, -CH2S-, -CH2-CH2-, -CH-CH-(시스 및 트랜스), -COCH2-, -CH(OH)CH2- 및 -CH2SO-로부터 선택된 결합에 의해 선택적으로 대체된 하나 이상의 펩타이드 결합을 갖는 단백질이다. 공통 서열의 하나 이상의 아미노산의 동일한 유형의 D-아미노산으로의 조직적 치환(예를 들어, L-라이신 대신 D-라이신)이 더 안정한 단백질을 생성하기 위해 특정 실시형태에서 사용될 수 있다. 추가로, 공통 서열 또는 실질적으로 동일한 서열 변형을 포함하는 제한된 펩타이드는, 예를 들어, 펩타이드를 고리화하는 분자내 이황화 브릿지를 형성할 수 있는 내부 시스테인 잔기를 첨가함으로써 당업계에 공지된 방법에 의해 생성될 수 있다(문헌[Rizo and Gierasch, 1992, Ann. Rev. Biochem.　61:387], 본 명세서에 참고로 포함됨).
본 명세서에 기재된 항원 결합 단백질의 유도체가 또한 제공된다. 유도체화된 항원 결합 단백질은 항체 또는 단편에 대해 목적으로 하는 특성, 예컨대 특정 용도에서의 증가된 반감기를 부여하는 임의의 분자 또는 물질을 포함할 수 있다. 유도체화된 항원 결합 단백질은, 예를 들어, 검출 가능한(또는 표지) 모이어티(예를 들어, 방사성, 표색, 항원 또는 효소 분자, 검출 가능한 비드(예컨대 자기 또는 전자고밀도(예를 들어, 금) 비드), 또는 다른 분자(예를 들어, 바이오틴 또는 스트렙타비딘)에 결합하는 분자), 치료적 또는 진단적 모이어티(예를 들어, 방사성, 세포독성 또는 약제학적 활성 모이어티), 또는 특정 용도(예를 들어, 대상체에 대한 투여, 예컨대 인간 대상체, 또는 다른 생체내 또는 시험관내 용도)를 위한 항원 결합 단백질의 적합성을 증가시키는 분자를 포함할 수 있다. 항원 결합 단백질을 유도체화하기 위해 사용될 수 있는 분자의 예는 알부민(예를 들어, 인간 혈청 알부민) 및 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함한다. 항원 결합 단백질의 알부민-연결 및 페길화된 유도체는 당업계에 잘 공지된 기법을 이용하여 제조될 수 있다. 특정 항원 결합 단백질은 본 명세서에 기재된 바와 같은 페길화된 단일쇄 폴리펩타이드를 포함한다. 일 실시형태에서, 항원 결합 단백질은 트랜스타이레틴(TTR) 또는 TTR 변이체에 접합되거나 또는 달리 연결된다. TTR 또는 TTR 변이체는, 예를 들어, 덱스트란, 폴리(n-비닐 피롤리돈), 폴리에틸렌 글리콜, 프로프로필렌 글리콜 동종중합체, 폴리프로필렌 옥사이드/에틸렌 옥사이드 공중합체, 폴리옥시에틸화된 폴리올 및 폴리비닐 알코올로 이루어진 군으로부터 선택된 화학물질에 의해 화학적으로 변형될 수 있다.
다른 유도체는 GIPR 항원 결합 단백질의 다른 단백질 또는 폴리펩타이드와의, 예컨대 GIPR 항원 결합 단백질의 N-말단 또는 C-말단에 융합된 이종성 폴리펩타이드를 포함하는 재조합 융합 단백질의 발현에 의한 공유적 또는 응집적 접합체를 포함한다. 예를 들어, 접합된 펩타이드는 이종성 신호(또는 리더) 폴리펩타이드, 예를 들어, 효모 알파-인자 리더 또는 펩타이드, 예컨대 에피토프 태그일 수 있다. GIPR 항원 결합 단백질-함유 융합 단백질은 GIPR 항원 결합 단백질(예를 들어, 폴리-His)의 정제 또는 동정을 용이하게 하기 위해 첨가된 펩타이드를 포함할 수 있다. GIPR 항원 결합 단백질은 또한 문헌[Hopp et al., 1988, Bio/Technology 6:1204]; 및 미국 특허 제5,011,912호에 기재된 바와 같은 FLAG 펩타이드에 연결될 수 있다. FLAG 펩타이드는 고도로 항원성이며, 특정 단클론성 항체(mAb)에 의해 가역적으로 결합된 에피토프를 제공하여, 빠른 분석 및 발현된 재조합 단백질의 수월한 정제를 가능하게 한다. FLAG 펩타이드가 주어진 폴리펩타이드에 융합된 융합 단백질을 제조하는 데 유용한 시약은 상업적으로 입수 가능하다(미주리주 세인트 루이스에 소재한 시그마(Sigma)).
일부 실시형태에서, 항원 결합 단백질은 하나 이상의 표지를 포함한다. 용어 "표지기" 또는 "표지"는 임의의 검출 가능한 표지를 의미한다. 적합한 표지기의 예는 다음을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다: 방사성동위원소 또는 방사성핵종(예를 들어, 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I), 형광기(예를 들어, FITC, 로다민, 란탄족 인광체), 효소기(예를 들어, 겨자무과산화효소, β-갈락토시다제, 루시퍼라제, 알칼리성 포스파타제), 화학발광기, 바이오틴일기, 또는 2차 리포터(예를 들어, 류신 지퍼쌍 서열, 2차 항체에 대한 결합 부위, 금속 결합 도메인, 에피토프 태그)에 의해 인식되는 사전결정된 폴리펩타이드 에피토프. 일부 실시형태에서, 표지기는 잠재적 입체 장애를 감소시키기 위한 다양한 길이의 스페이서 아암을 통해 항원 결합 단백질에 결합된다. 단백질을 표지하기 위한 다양한 방법은 당업계에 공지되어 있고, 적합한 것으로 보인다면 사용될 수 있다.
용어 "효과기기"는 세포독성제로서 작용하는 항원 결합 단백질에 결합된 임의의 기를 의미한다. 적합하나 효과기기의 예는 방사성동위원소 또는 방사성핵종(예를 들어, 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I)이다. 다른 적합한 기는 독소, 치료기 또는 화학치료기를 포함한다. 적합한 기의 예는 칼리케아마이신, 아우리스타틴, 겔다나마이신 및 메이탄신을 포함한다. 일부 실시형태에서, 효과기기는 잠재적 입체 장애를 감소시키기 위한 다양한 길이의 스페이서 아암을 통해 항원 결합 단백질에 결합된다.
일반적으로, 표지가 검출될 분석에 따라서 표지는 다양한 부류에 속한다: a) 방사성 또는 중 동위원소일 수 있는 동위원소 표지; b) 자기 표지(예를 들어, 자기 입자); c) 산화환원 활성 모이어티; d) 광학 염료; 효소적 기(예를 들어, 겨자무과산화효소, β-갈락토시다제, 루시퍼라제, 알칼리성 포스파타제); e) 바이오틴일화된 기; 및 f) 2차 리포터(예를 들어, 류신 지퍼 쌍 서열, 2차 항체에 대한 결합 부위, 금속 결합 도메인, 에피토프 태그 등)에 의해 인식되는 사전결정된 폴리펩타이드 에피토프. 일부 실시형태에서, 표지기는 잠재적 입체 장애를 감소시키기 위한 다양한 길이의 스페이서 아암을 통해 항원 결합 단백질에 결합된다. 단백질을 표지하기 위한 다양한 방법은 당업계에 공지되어 있다.
특정 표지는 발색단, 인광체 및 형광체를 포함하는 광학 염료를 포함하며, 후자는 다수의 예에서 특이적이다. 형광단은 "소분자" 형광체, 또는 단백질성 형광체 중 하나일 수 있다.
"형광 표지"는 고유 형광 특성을 통해 검출될 수 있는 임의의 분자를 의미한다. 적합한 형광 표지는 플루오레세인, 로다민, 테트라메틸로다민, 에오신, 에리트로신, 쿠머린, 메틸-쿠머린, 파이렌, 말라사이트 그린, 스틸벤, 루시퍼 옐로, 캐스케이드 블루J, 텍사스 레드, IAEDANS, EDANS, BODIPY FL, LC Red 640, Cy 5, Cy 5.5, LC 레드 705, 오리건 그린, 알렉사-플루오르(Alexa-Fluor) 염료(알렉사 플루오르 350, 알렉사 플루오르 430, 알렉사 플루오르 488, 알렉사 플루오르 546, 알렉사 플루오르 568, 알렉사 플루오르 594, 알렉사 플루오르 633, 알렉사 플루오르 660, 알렉사 플루오르 680), 캐스케이드 블루, 캐스케이드 옐로 및 R-피코에리트린(PE)(오리건주 유진에 소재한 몰레큘러 프로브즈(Molecular Probes)), FITC, 로다민 및 텍사스 레드(일리노이주 락포드에 소재한 피어스(Pierce)), Cy5, Cy5.5, Cy7(펜실베니아주 피츠버그에 소재한 아머샴 라이프 사이언스(Amersham Life Science))를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 형광단을 포함하는 적합한 광학 염료는 본 명세서에 명확하게 참고로 포함된 문헌[Molecular Probes Handbook by Richard P. Haugland]에 기재되어 있다.
적합한 단백질성 형광 표지는 또한 레닐라(Renilla), 프틸로사르쿠스(Ptilosarcus) 또는 GFP의 에쿼리아 종(Aequorea species)을 포함하는 녹색 형광 단백질(Chalfie et al., 1994, Science 263:802-805), EGFP(클론테크 랩스 인코포레이티드(Clontech Labs., Inc.), 젠뱅크 수탁번호 U55762), 청색 형광 단백질(BFP, 캐나다 퀘벡주에 소재한 퀀텀 바이오테크놀로지즈 인코포레이티드(Quantum Biotechnologies, Inc.); Stauber,　1998, Biotechniques 24:462-471; Heim et al., 1996, Curr . Biol . 6:178-182), 향상된 황색 형광 단백질(EYFP, 클론테크 랩스 인코포레이티드), 루시퍼라제(Ichiki et al.,　1993, J. Immunol . 150:5408-5417), β갈락토시다제(Nolan et al., 1988, Proc . Natl . Acad . Sci . U.S.A . 85:2603-2607) 및 레닐라(WO92/15673,WO95/07463,WO98/14605,WO98/26277,WO99/49019, 미국 특허 제5292658호, 제5418155호, 제5683888호, 제5741668호, 제5777079호, 제5804387호, 제5874304호, 제5876995호, 제5925558호)를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
항체, 또는 단편의 쇄 중 하나 또는 둘 다를 암호화하는 핵산, 유도체, 뮤테인 또는 이들의 변이체, 중쇄 가변 영역 또는 CDR만을 암호화하는 폴리뉴클레오타이드, 혼성화 프로브로서 사용하는 데 충분한 폴리뉴클레오타이드, PCR 프라이머 또는 폴리펩타이드를 암호화하는 폴리뉴클레오타이드를 동정, 분석, 돌연변이 또는 증폭시키기 위한 서열분석 프라이머, 폴리뉴클레오타이드의 발현을 저해하기 위한 안티센스 핵산, 및 앞서 언급한 것의 상보성 서열을 포함하는, 본 명세서에 기재된 항원 결합 단백질을 암호화하는 핵산, 또는 이의 일부가 또한 제공된다. 핵산은 임의의 길이일 수 있다. 그들은, 예를 들어, 길이가 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 75, 100, 125, 150, 175, 200, 250, 300, 350, 400, 450, 500, 750, 1,000, 1,500, 3,000, 5,000개 이상의 뉴클레오타이드일 수 있고/있거나 하나 이상의 추가적인 서열, 예를 들어, 조절 서열을 포함하고/하거나 더 큰 핵산, 예를 들어 벡터의 부분일 수 있다. 핵산은 단일-가닥 또는 이중 가닥일 수 있고, RNA 및/또는 DNA 뉴클레오타이드, 및 이의 인공 변이체(예를 들어, 펩타이드 핵산)를 포함할 수 있다. 본 명세서에 제공된 임의의 가변 영역은 완전한 중쇄 및 경쇄 서열을 형성하기 위해 이들 불변 영역에 부착될 수 있다. 그러나, 이들 불변 영역 서열이 구체적 예로서만 제공된다는 것이 이해되어야 한다. 일부 실시형태에서, 가변 영역 서열은 당업계에 공지된 다른 불변 영역 서열에 결합된다.
특정 항원 결합 단백질, 또는 이의 일부(예를 들어, 전장 항체, 중쇄 또는 경쇄, 가변 도메인, 또는 CDRH1, CDRH2, CDRH3, CDRL1, CDRL2 또는 CDRL3)를 암호화하는 핵산은 GIPR 또는 이의 면역원성 단편에 의해 면역화된 마우스의 B-세포로부터 단리될 수 있다. 핵산은 중합 효소 연쇄 반응(PCR)과 같은 통상적인 절차에 의해 단리될 수 있다. 파지 디스플레이는 공지된 기법의 다른 예이고, 이에 의해 항체의 유도체 및 다른 항원 결합 단백질이 제조될 수 있다. 일 접근에서, 관심 대상의 항원 결합 단백질의 성분인 폴리펩타이드는 임의의 적합한 재조합 발현 시스템에서 발현되고, 발현된 폴리펩타이드는 항원 결합 단백질을 형성하기 위해 조립하도록 허용된다.
양상은 추가로 특정 혼성화 조건 하에서 다른 핵산에 혼성화되는 핵산을 제공한다. 핵산을 혼성화하기 위한 방법은 당업계에 잘 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌[Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6] 참조. 본 명세서에 정의되는 바와 같은, 보통으로 엄격한 혼성화 조건은 5x 염화나트륨/시트르산나트륨(SSC)을 함유하는 사전세척 용액, 0.5% SDS, 1.0 mM EDTA(pH　8.0), 약 50% 폼아마이드의 혼성화 완충제, 6x SSC, 및 55℃의 혼성화 온도(또는 다른 유사한 혼성화 용액, 예컨대 약 50%의 폼아마이드를 함유하는 것, 혼성화 용액의 온도는 42℃), 및 0.5x SSC, 0.1% SDS 중의 60℃ 세척 조건을 사용한다. 엄격한 혼성화 조건은 6x SSC에서 45℃에서 혼성화되고, 이어서, 68℃에서 0.1x SSC, 0.2% SDS에서 1회 이상 세척된다. 더 나아가, 당업자는 서로에 대해 적어도 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98% 또는 99% 동일한 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산이 서로에 대해 전형적으로 혼성화된 채로 남아있도록 혼성화의 엄격도를 증가 또는 감소시키는 혼성화 및/또는 세척 조건을 조작할 수 있다.
적합한 조건을 고안하기 위한 혼성화 조건 및 가이드의 선택에 영향을 미치는 기본적 매개변수는, 예를 들어, 문헌[Sambrook, Fritsch, and Maniatis (2001, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 상기 참조]; 및 문헌[ Current Protocols in Molecular Biology, 1995, Ausubel et al., eds., John Wiley & Sons, Inc., 부문 2.10 및 6.3-6.4)]에 의해 제시되고, 예를 들어, 핵산의 길이 및/또는 염기 조성물에 기반하여 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
돌연변이에 의해 핵산 내로 변화가 도입될 수 있고, 이에 의해 그것이 암호화하는 폴리펩타이드의 아미노산 서열 변화(예를 들어, 항체 또는 항체 유도체)를 야기한다. 돌연변이는 당업계에 공지된 임의의 기법을 이용하여 도입될 수 있다. 일 실시형태에서, 하나 이상의 특정 아미노산 잔기는, 예를 들어, 부위 지정 돌연변이 유발 프로토콜을 이용하여 변화된다. 다른 실시형태에서, 하나 이상의 무작위로 선택된 잔기는, 예를 들어, 무작위 돌연변이유발 프로토콜을 이용하여 변화된다. 그러나, 그것이 생성되며, 돌연변이체 폴리펩타이드는 발현되고 목적으로 하는 특성을 위해 선별될 수 있다.
돌연변이는 핵산이 암호화하는 폴리펩타이드의 생물학적 활성은 변경시키는 일 없이 핵산 내로 도입될 수 있다. 예를 들어, 비필수 아미노산 잔기에서 아미노산 치환을 야기하는 뉴클레오타이드 치환을 생성할 수 있다. 대안적으로, 하나 이상의 돌연변이는 핵산이 암호화하는 폴리펩타이드의 생물학적 활성을 선택적으로 변화시키는 핵산 내로 도입될 수 있다. 예를 들어, 돌연변이는 생물학적 활성을 정량적으로 또는 정성적으로 변화시킬 수 있다. 정량적 변화의 예는 활성을 증가, 감소 또는 제거하는 것을 포함한다. 정량적 변화의 예는 항체의 항원 특이성의 변화를 포함한다. 일 실시형태에서, 본 명세서에 기재된 임의의 항원 결합 단백질을 암호화하는 핵산은 당업계에 잘 확립된 분자 생물학 기법을 이용하여 아미노산 서열을 변경하도록 돌연변이될 수 있다.
다른 양상은 핵산 서열의 검출을 위한 프라이머 또는 혼성화 프로브에 적합한 핵산 분자를 제공한다. 핵산 분자는 전장 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 서열의 단지 일부, 예를 들어, 폴리펩타이드의 활성 부분을 암호화하는 프로브 또는 프라이머 또는 단편으로서 사용될 수 있는 단편을 포함할 수 있다.
핵산의 서열에 기반한 프로브는 핵산 또는 유사한 핵산, 예를 들어, 폴리펩타이드를 암호화하는 전사체를 검출하기 위해 사용될 수 있다. 프로브는 표지기, 예를 들어, 방사성동위원소, 형광 화합물, 효소 또는 효소 보조 인자를 포함할 수 있다. 이러한 프로브는 폴리펩타이드를 발현시키는 세포를 동정하기 위해 사용될 수 있다.
다른 양상은 폴리펩타이드 또는 이의 일부(예를 들어, 하나 이상의 CDR 또는 하나 이상의 가변 영역 도메인을 포함하는 단편)를 암호화하는 핵산을 포함하는 벡터를 제공한다. 벡터의 예는 플라스미드, 바이러스 벡터, 비-에피솜 포유류 벡터 및 발현 벡터, 예를 들어, 재조합 발현 벡터를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 재조합 발현 벡터는 숙주 세포에서의 핵산 발현에 적합한 형태로 핵산을 포함할 수 있다. 재조합 발현 벡터는 발현될 핵산 서열에 작동 가능하게 연결되는, 발현을 위해 사용될 숙주 세포에 기반하여 선택되는 하나 이상의 조절 서열을 포함한다. 조절 서열은 다양한 유형의 숙주 세포에서 뉴클레오타이드 서열의 구성적 발현을 지시하는 것(예를 들어, SV40 초기 유전자 인핸서, 라우스 육종 바이러스 프로모터 및 사이토메갈로바이러스 프로모터), 특정 숙주 세포에서 뉴클레오타이드 서열만의 발현을 지시하는 것(예를 들어, 조직-특이적 조절 서열, 문헌[Voss et al.,　1986, Trends Biochem . Sci .　 11:287, Maniatis et al.,　1987, Science 236:1237], 본 명세서에 전문이 참고로 포함됨), 및 특정 치료 또는 병태에 반응하는 뉴클레오타이드 서열의 유도성 발현을 지시하는 것(예를 들어, 포유류 세포 내 메탈로티오닌 프로모터 및 원핵과 진핵 시스템에서 tet-반응성 및/또는 스트렙토마이신 반응성 프로모터(이하 참조)를 포함한다. 발현 벡터의 설계는 형질전환될 숙주 세포의 선택, 목적으로 하는 단백질의 발현 수준 등으로서 이러한 인자에 의존할 수 있다는 것이 당업자에 의해 인식될 것이다. 발현 벡터는 숙주 세포 내로 도입됨으로써 본 명세서에 기재된 핵산에 의해 암호화된 융합 단백질 또는 펩타이드를 포함하는 단백질 또는 펩타이드를 생성할 수 있다.
다른 양상은 재조합 발현 벡터가 도입되는 숙주 세포를 제공한다. 숙주 세포는 임의의 원핵 세포(예를 들어, 이콜라이(E. coli)) 또는 진핵 세포(예를 들어, 효모, 곤충 또는 포유류 세포(예를 들어, CHO 세포))일 수 있다. 벡터 DNA는 통상적인 형질전환 또는 형질감염 기법을 통해 원핵 또는 진핵 세포 내로 도입될 수 있다. 포유류 세포의 안정한 형질감염을 위해, 사용되는 발현 벡터 및 형질감염 기법에 따라서, 작은 세포 분획만이 그들의 게놈 내로 외래 DNA를 통합할 수 있다는 것이 공지되어 있다. 이들 통합체를 동정하고 선택하기 위해, (예를 들어, 항생제에 대한 내성에 대해) 선택 가능한 마커를 암호화하는 유전자가 관심 대상의 유전자와 함께 숙주 세포 내로 일반적으로 도입된다. 바람직한 선택 가능한 마커는 약물, 예컨대 G418, 하이그로마이신 및 메토트렉세이트에 대한 내성을 부여하는 것을 포함한다. 도입된 핵산에 의해 안정하게 형질감염된 세포는 방법 중에서도 약물 선택(예를 들어, 선택 가능한 마커 유전자가 혼입된 세포는 살아있는 반면, 다른 세포는 사멸됨)에 의해 동정될 수 있다.
상기 기재한 바와 같은 적어도 하나의 폴리펩타이드를 포함하는 플라스미드, 발현 벡터, 전사 또는 발현 카세트의 형태로 발현 시스템 및 작제물이 또한 본 명세서에 제공되고, 마찬가지로 이러한 발현 시스템 또는 작제물을 포함하는 숙주 세포가 제공된다.
본 명세서에 제공된 항원 결합 단백질은 다수의 통상적인 기법에 의해 제조될 수 있다. 예를 들어, GIPR 항원 결합 단백질은 당업계에 공지된 임의의 기법을 이용하여 재조합 발현 시스템에 의해 생성될 수 있다. 예를 들어, 문헌[Monoclonal Antibodies, Hybridomas: A New Dimension in Biological Analyses, Kennet et al. (eds.) Plenum Press, New York (1980); 및 Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow and Lane (eds.), Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1988)] 참조.
항원 결합 단백질은 하이브리도마 세포주에서(예를 들어, 특히 항체는 하이브리도마에서 발현될 수 있음) 또는 하이브리도마 이외의 세포주에서 발현될 수 있다. 항체를 암호화하는 발현 작제물은 포유류, 곤충 또는 미생물 숙주 세포를 형절전환시키기 위해 사용될 수 있다. 형질전환은 미국 특허 제4,399,216호; 제4,912,040호; 제4,740,461호; 제4,959,455호에 의해 예시된 바와 같이, 예를 들어 바이러스 또는 박테리오파지에서 폴리뉴클레오타이드의 패키징 및 당업계에 공지된 형질감염 절차에 의해 작제물을 이용하여 숙주 세포를 형질도입하는 것을 포함하는, 숙주 세포 내로 폴리뉴클레오타이드를 도입하기 위한 임의의 공지된 방법을 이용하여 수행될 수 있다. 사용되는 최적의 형질전환 절차는 형질전환되는 숙주 세포 유형에 의존할 것이다. 포유류 세포 내로 이종성 폴리뉴클레오타이드의 도입을 위한 방법은 당업계에 잘 공지되어 있고, 덱스트란-매개 형질감염, 인산칼슘 침전, 폴리브렌 매개 형질감염, 원형질체 융합, 전기천공법, 리포좀 내 폴리뉴클레오타이드(들)의 캡슐화, 양으로 하전된 지질과 핵산의 혼합 및 핵 내로 DNA의 직접적인 미량주사를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
재조합 발현 작제물은 전형적으로 다음 중 하나 이상을 포함하는 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산 분자를 포함한다: 본 명세서에 제공된 하나 이상의 CDR; 경쇄 불변 영역; 경쇄 가변 영역; 중쇄 불변 영역(예를 들어, CH1, CH2 및/또는 CH3); 및/또는 GIPR 항원 결합 단백질의 다른 스캐폴드 부분. 이들 핵산 서열은 표준 결찰 기법을 이용하여 적절한 발현 벡터 내로 삽입된다. 일 실시형태에서, 중쇄 또는 경쇄 불변 영역은 항-GIPR 특이적 중쇄 또는 경쇄 가변 영역의 C-말단에 현수되고, 발현 벡터 내로 결찰된다. 벡터는 전형적으로 사용되는 특정 숙주 세포에서 기능성이 되도록 선택된다(즉, 벡터는 숙주 세포 기작에 적합하여, 유전자의 증폭 및/또는 발현이 일어날 수 있게 허용한다). 일부 실시형태에서, 단백질 리포터, 예컨대 다이하이드로엽산 환원효소를 이용하여 단백질-단편 상보성 분석을 사용하는 벡터가 이용된다(예를 들어, 본 명세서에 참고로 포함된 미국 특허 제6,270,964호). 적합한 발현 벡터는, 예를 들어, 인비트로젠 라이프 테크놀로지즈(Invitrogen Life Technologies) 또는 BD 바이오사이언시즈(BD Biosciences)(이전에 "클론테크")로부터 구입할 수 있다. 항체 및 단편을 클로닝 및 발현시키기 위한 다른 유용한 벡터는 본 명세서에 참고로 포함된 문헌[Bianchi and McGrew, 2003, Biotech. Biotechnol. Bioeng. 84:439-44]에 기재된 것을 포함한다. 추가적인 적합한 발현 벡터는, 예를 들어, 문헌[Methods Enzymol., vol.　185 (D. V. Goeddel, ed.), 1990, New York: Academic Press.]에서 논의된다.
전형적으로, 임의의 숙주 세포에서 사용되는 발현 벡터는 플라스미드 유지를 위한 그리고 외인성 뉴클레오타이드 서열의 클로닝 및 발현을 위한 서열을 포함할 것이다. 총괄적으로 "측접 서열"로서 지칭되는 이러한 서열은 특정 실시형태에서 전형적으로 다음의 뉴클레오타이드 서열 중 하나 이상을 포함한다: 프로모터, 하나 이상의 인핸서 서열, 복제 기점, 전사 종결 서열, 공여자 및 수용자 스플라이스 부위를 포함하는 완전한 인트론 서열, 폴리펩타이드 분비를 위한 리더 서열을 암호화하는 서열, 리보솜 결합 부위, 폴리아데닐화 서열, 발현될 폴리펩타이드를 암호화하는 핵산을 삽입하기 위한 폴리링커 영역, 및 선택 가능한 마커 구성요소. 각각의 이들 서열은 이하에 논의된다.
선택적으로, 벡터는 "태그"-암호화 서열, 즉, GIPR 항원 결합 단백질 암호 서열의 5' 또는 3' 말단에 위치된 올리고뉴클레오타이드 분자를 포함할 수 있고; 올리고뉴클레오타이드 서열은 상업적으로 입수 가능한 항체에 대해 존재하는 폴리His(예컨대 헥사His), 또는 다른 "태그", 예컨대 FLAG(등록상표), HA(혈구응집소 인플루엔자 바이러스), 또는 myc를 암호화한다. 이 태그는 전형적으로 폴리펩타이드의 발현 시 폴리펩타이드에 융합되고, 숙주 세포로부터의 GIPR 항원 결합 단백질의 친화도 정제 또는 검출을 위한 수단으로서 작용할 수 있다. 친화도 정제는 친화도 기질로서 태그에 대한 항체를 이용하는 칼럼 크로마토그래피에 의해 수행될 수 있다. 선택적으로, 태그는 후속적으로 절단을 위해 특정 펩티다제를 이용하는 것과 같은 다양한 수단에 의해 정제된 GIPR 항원 결합 단백질로부터 제거될 수 있다.
측접 서열은 상동성(즉, 동일한 종 및/또는 숙주 세포로서 균주로부터 유래), 이종성(즉, 숙주 세포 종 또는 균주 이외의 종으로부터 유래), 혼성체(즉, 하나 초과의 공급원으로부터의 측접 서열의 조합), 합성 또는 천연일 수 있다. 이렇게 해서, 측접 서열의 공급원은 임의의 원핵 또는 진핵 유기체, 임의의 척추동물 또는 무척추동물 유기체, 또는 임의의 식물일 수 있고, 단, 측접 서열은 숙주 세포 기작에서 기능성이고 숙주 세포 기작에 의해 활성화될 수 있다.
벡터에서 유용한 측접 서열은 당업계에 잘 공지된 임의의 몇몇 방법에 의해 얻을 수 있다. 전형적으로, 본 명세서에서 유용한 측접 서열은 맵핑에 의해 그리고/또는 제한 엔도뉴클레아제 분해에 의해 사전에 동정될 것이고, 따라서 적절한 제한 엔도뉴클레아제를 이용하여 적절한 조직 공급원으로부터 단리될 수 있다. 일부 경우에, 측접 서열의 완전 뉴클레오타이드 서열은 공지될 수 있다. 본 명세서에서, 측접 서열은 핵산 합성 또는 클로닝을 위해 본 명세서에 기재된 방법을 이용하여 합성될 수 있다.
측접 서열의 모두가 알려져 있든 단지 일부가 알려져 있든, 중합효소 연쇄 반응(PCR)을 이용하여 그리고/또는 동일 또는 다른 종으로부터의 적합한 프로브, 예컨대 올리고뉴클레오타이드 및/또는 측접 서열 단편을 이용하여 게놈 라이브러리를 선별함으로써 얻을 수 있다. 측접 서열이 알려져 있지 않은 경우, 측접 서열을 포함하는 DNA의 단편은, 예를 들어, 암호 서열 또는 심지어 다른 유전자 또는 유전자들을 포함하는 더 큰 조각의 DNA로부터 단리될 수 있다. 단리는 적절한 DNA 단편을 생성하기 위한 제한 엔도뉴클레아제 분해 다음에 아가로스 겔 정제, 퀴아젠(Qiagen)(등록상표) 칼럼 크로마토그래피(캘리포니아주 채츠워스에 소재), 또는 당업계에 공지된 다른 방법을 이용하는 단리에 의해 수행될 수 있다. 이 목적을 수행하기 위한 적합한 효소의 선택은 당업자에게 용이하게 명확할 것이다.
복제기점은 전형적으로 상업적으로 구입한 해당 원핵생물 발현 벡터의 부분이고, 기점은 숙주 세포 내 벡터의 증폭을 돕는다. 선택 벡터가 복제 기점 부위를 포함하지 않는다면, 공지된 서열에 기반하여 화학적으로 합성되고, 벡터 내로 결찰될 수 있다. 예를 들어, 플라스미드 pBR322(매사추세츠주 비버리에 소재한 뉴 잉글랜드 바이오랩스(New England Biolabs))로부터의 복제기점은 대부분의 그램 음성 박테리아에 적합하며, 다양한 바이러스 기점(예를 들어, SV40, 폴리오마, 아데노바이러스, 수포성 구내염 바이러스(VSV), 또는 유두종바이러스, 예컨대 HPV 또는 BPV)은 포유류 세포에서 벡터를 클로닝시키는 데 유용하다. 일반적으로, 복제기점 성분은 포유류 발현 벡터에 필요하지 않다(예를 들어, SV40 기점은 단지 그것이 또한 바이러스 초기 프로모터를 포함하기 때문에 종종 사용된다).
전사 종결 서열은 전형적으로 폴리펩타이드 암호 영역 말단의 3'에 위치되고, 전사를 종결시키는 작용을 한다. 보통, 원핵 세포 내 전사 종결 서열은 G-C 풍부 단편 다음에 폴리-T 서열이다. 서열은 라이브러리로부터 용이하게 클로닝되거나 또는 심지어 벡터의 일환으로 상업적으로 구입될 수 있고, 본 명세서에 기재된 것과 같은 핵산 합성을 위한 방법을 이용하여 용이하게 합성될 수도 있다.
선택 가능한 마커 유전자는 선택 배양 배지에서 성장된 숙주 세포의 생존 및 성장에 필수적인 단백질을 암호화한다. 전형적인 선택 마커 유전자는 (a) 항생제 또는 다른 독소, 예를 들어, 원핵생물 숙주 세포에 대해 암피실린, 테트라사이클린, 또는 카나마이신에 대한 내성을 부여하거나; (b) 세포의 영양 요구성 결핍을 보완하거나; 또는 (c) 복합체 또는 한정 배지로부터 이용 가능하지 않은 중요한 영양소를 공급하는 단백질을 암호화한다. 구체적 선택 가능한 마커는 카나마이신 내성 유전자, 암피실린 내성 유전자, 및 테트라사이클린 내성 유전자이다. 유리하게는, 네오마이신 내성 유전자는 또한 원핵 숙주 세포와 진핵 숙주 세포 둘 다에서 선택을 위해 사용될 수 있다.
다른 선택 가능한 유전자는 발현될 유전자를 증폭시키기 위해 사용될 수 있다. 증폭은 성장 또는 세포 생존에 중요한 단백질의 생성에 필요한 유전자가 재조합 세포의 연속적 생성의 염색체 내에서 동시에 반복되는 과정이다. 포유류 세포에 대한 적합한 선택 가능한 마커의 예는 다이하이드로엽산 환원효소(DHFR) 및 무프로모터 티미딘 키나제 유전자를 포함한다. 포유류 세포 형질전환체는 형질전환체만이 벡터 내에 존재하는 선택 가능한 유전자 때문에 생존하기에 독특하게 적합화된 선택 압력 하에 위치된다. 배지 내 선택 제제의 농도가 성공적으로 증가되는 조건 하에 형질전환된 세포를 배양시킴으로써 선택 압력이 부과되고, 이에 의해 선택 가능한 유전자와 다른 유전자, 예컨대 GIPR 폴리펩타이드에 결합하는 항원 결합 단백질을 암호화하는 DNA 둘 다의 증폭을 야기한다. 그 결과, 증가된 양의 폴리펩타이드, 예컨대 항원 결합 단백질은 증폭된 DNA로부터 합성된다.
리보솜-결합 부위는 보통 mRNA의 번역 개시에 필요하며, 샤인-달가르노(Shine-Dalgarno) 서열(원핵생물) 또는 코작(Kozak) 서열(진핵생물)에 의해 특성 규명된다. 구성요소는 전형적으로 발현될 폴리펩타이드의 프로모터에 대해 3'에 그리고 암호 서열에 대해 5'에 위치된다.
일부 경우에, 예컨대 글리코실화가 진핵생물 숙주 세포 발현 시스템에서 요망되는 경우, 글리코실화 또는 수율을 개선시키기 위해 다양한 프레- 또는 프로-서열을 조작할 수 있다. 예를 들어, 특정 신호 펩타이드의 펩티다제 절단 부위를 변경시키거나, 또는 또한 글리코실화에 영향을 미칠 수 있는 프로서열을 첨가할 수 있다. 최종 단백질 산물은 -1 위치에서(성숙 단백질의 제1 아미노산에 대해), 전체적으로 제거되지 않을 수도 있는 발현에 대해 하나 이상의 추가적인 아미노산 사건을 가질 수 있다. 예를 들어, 최종 단백질 산물은 아미노-말단에 부착된 펩티다제 절단 부위에서 발견되는 1 또는 2개의 아미노산 잔기를 가질 수 있다. 대안적으로, 효소가 성숙 폴리펩타이드 내의 이러한 면적에서 절단한다면, 일부 효소 절단 부위의 사용은 목적으로 하는 폴리펩타이드의 약간 절단된 형태를 초래할 수 있다.
발현 및 클로닝은 전형적으로 숙주 유기체에 의해 인식되고 GIPR 항원 결합 단백질을 암호화하는 분자에 작동 가능하게 연결된 프로모터를 포함할 것이다. 프로모터는 (일반적으로 약 100 내지 1000bp 내에서) 구조적 유전자의 전사를 제어하는 구조적 유전자의 시작 코돈에 대해 상류에(즉, 5') 위치된 비전사 서열이다. 프로모터는 통상적으로 2개의 분류(유도성 프로모터 및 구성적 프로모터) 중 하나로 그룹화된다. 유도성 프로모터는 배양 조건의 일부 변화, 예컨대 영양소의 존재 또는 부재 또는 온도의 변화에 반응하여 그들의 제어 하에 DNA로부터 증가된 전사 수준을 개시한다. 반면에, 구성적 프로모터는 그들이 작동 가능하게 연결된, 즉, 유전자 발현에 대한 제어가 거의 없거나 전혀 없는 유전자를 균일하게 전사시킨다. 다양한 잠재적 숙주 세포에 의해 인식되는 매우 다수의 프로모터는 잘 공지되어 있다. 적합한 프로모터는 제한 효소 분해에 의해 공급원 DNA로부터 프로모터를 제거함으로써 그리고 목적으로 하는 프로모터 서열을 벡터 내로 삽입함으로써 GIPR 항원 결합 단백질을 포함하는 중쇄 또는 경쇄를 암호화하는 DNA에 작동 가능하게 연결된다.
효모 숙주와 함께 사용하기 위한 적합한 프로모터는 또한 당업계에 잘 공지되어 있다. 효모 인핸서는 유리하게는 효모 프로모터와 함께 사용된다. 포유류 숙주 세포와 함께 사용하기 위한 적합한 프로모터는 잘 공지되어 있고, 바이러스, 예컨대 폴리오마 바이러스, 계두 바이러스, 아데노바이러스(예컨대 아데노바이러스 2), 소 유두종 바이러스, 조류 육종 바이러스, 거대세포 바이러스, 레트로바이러스, B형 간염 바이러스 및 시미안 바이러스 40(SV40)의 게놈으로부터 얻은 것을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 다른 적합한 포유류 프로모터는 이종성 포유류 프로모터, 예를 들어, 열충격 프로모터 및 액틴 프로모터를 포함한다.
인핸서 서열은 더 고차의 진핵생물에 의해 GIPR 항원 결합 단백질을 포함하는 경쇄 또는 중쇄를 암호화하는 DNA의 전사를 증가시키기 위해 벡터 내로 삽입될 수 있다. 인핸서는 전사를 증가시키기 위해 프로모터 상에서 작용하는 길이가 보통 약 10 내지 300bp인 DNA의 시스-작용성 구성요소이다. 전사 단위에 대해 5'과 3' 위치 둘 다에서 발견되는 인핸서는 상대적으로 배향 및 위치 독립적이다. 포유류 유전자로부터 입수 가능한 몇몇 인핸서 서열(예를 들어, 글로빈, 엘라스타제, 알부민, 알파-태아-단백질 및 인슐린)은 공지되어 있다. 그러나, 전형적으로, 바이러스로부터의 인핸서가 사용된다. 당업계에 공지된 SV40 인핸서, 사이토메갈로바이러스 초기 프로모터 인핸서, 폴리오마 인핸서 및 아데노바이러스 인핸서는 진핵생물 프로모터의 활성화를 위한 예시적인 향상 구성요소이다. 인핸서는 암호 서열에 대해 벡터에서 5' 또는 3' 중 하나에 위치될 수 있지만, 전형적으로 프로모터로부터의 5' 부위에 위치된다. 적절한 천연 또는 이종성 신호 서열을 암호화하는 서열(리더 서열 또는 신호 펩타이드)은 항체의 세포외 분비를 촉진시키기 위해 발현 벡터 내로 혼입될 수 있다. 신호 펩타이드 또는 리더의 선택은 항체가 도입될 숙주 세포 유형에 의존하며, 이존성 신호 서열은 천연 신호 서열을 대체할 수 있다. 포유류 숙주 세포에서 기능성인 신호 펩타이드의 예는: 미국 특허 제4,965,195호에 기재된 인터류킨-7(IL-7)에 대한 신호 서열; 문헌[Cosman et al.,1984, Nature 312:768]에 기재된 인터류킨-2 수용체에 대한 신호 서열; 유럽 특허 제0367　566호에 기재된 인터류킨-4 수용체 신호 펩타이드; 미국 특허 제4,968,607호에 기재된 I형 인터류킨-1 수용체 신호 펩타이드; 유럽 특허 제0　460　846호에 기재된 II형 인터류킨-1 수용체 신호 펩타이드를 포함한다.
일 실시형태에서, 리더 서열은 서열번호 1218(atggacatga gagtgcctgc acagctgctg ggcctgctgc tgctgtggct gagaggcgcc agatgc)에 의해 암호화된 서열번호 1217(MDMRVPAQLL GLLLLWLRGA RC)을 포함한다. 다른 실시형태에서, 리더 서열은 서열번호 1220(atggcctggg ctctgctgct cctcaccctc ctcactcagg gcacagggtc ctgggcc)에 의해 암호화된 서열번호 1219(MAWALLLLTL LTQGTGSWA)를 포함한다.
제공되는 발현 벡터는 시작 벡터, 예컨대 상업적으로 입수 가능한 벡터로부터 구성될 수 있다. 이러한 벡터는 모든 목적으로 하는 측접 서열을 포함할 수도 있고 또는 포함하지 않을 수도 있다. 본 명세서에 기재된 측접 서열 중 하나 이상이 벡터에 이미 존재하지 않는 경우, 그들은 개개로 얻어지고 벡터 내로 결찰될 수 있다. 각각의 측접 서열을 얻기 위해 사용되는 방법은 당업계에 잘 공지되어 있다.
벡터가 구성되고 GIPR 항원 결합 서열을 포함하는 경쇄, 중쇄, 또는 경쇄와 중쇄를 암호화하는 핵산 분자가 벡터의 적절한 부위 내로 삽입된 후에, 완료된 벡터는 증폭 및/또는 폴리펩타이드 발현을 위한 적합한 숙주 세포 내로 삽입될 수 있다. 선택된 숙주 세포 내로 항원-결합 단백질에 대한 발현 벡터의 형질전환은 형질감염, 감염, 인산칼슘 공동침전, 전기천공법, 미량주사법, 리포펙션, DEAE-덱스트란 매개 형질감염, 또는 다른 공지된 기법을 포함하는 잘 공지된 방법에 의해 달성될 수 있다. 선택된 방법은 부분적으로 사용될 숙주 세포 유형의 기능일 것이다. 이들 방법 및 다른 적합한 방법은 당업자에게 잘 공지되어 있으며, 예를 들어, 문헌[Sambrook et al.,　2001, 상기 참조]에 제시되어 있다.
적절한 조건 하에 배양될 때 숙주 세포는 후속적으로 배양 배지로부터(숙주 세포가 그것을 배지 내로 분비한다면) 또는 그것을 생성하는 숙주 세포로부터 직접적으로(그것이 분비되지 않는다면) 수집될 수 있는 항원 결합 단백질을 합성한다. 적절한 숙주 세포의 선택은 다양한 인자, 예컨대 목적으로 하는 발현 수준, 활성에 바람직하거나 또는 필수적인 폴리펩타이드 변형(예컨대 글리코실화 또는 인산화) 및 생물학적으로 활성인 분자로의 폴딩의 용이함에 의존할 것이다.
발현을 위한 숙주로서 입수 가능한 포유류 세포주는 당업계에 잘 공지되어 있고, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포, HeLa 세포, 새끼 햄스터 신장(BHK) 세포, 원숭이 신장 세포(COS), 인간 간세포암종 세포(예를 들어, Hep G2), 및 다수의 다른 세포주를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는 미국 미생물 보존센터(American Type Culture Collection: ATCC)로부터 입수 가능한 불멸 세포주를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 특정 실시형태에서, 세포주는 세포주가 고발현 수준을 갖고 GIPR 결합 특성을 갖는 항원 결합 단백질을 구성적으로 생성하는지의 결정을 통해 선택될 수 있다. 다른 실시형태에서, 그 자체의 항체를 생성하지는 않지만, 이종성 항체를 생성하고 분비하는 능력을 갖는 B 세포로부터의 세포주가 분비될 수 있다.
일 실시형태에서, 본 발명은 표 2, 표 3, 표 4 및 표 5에서 동정된 폴리뉴클레오타이드 중 하나 이상을 발현시키는 세포에 의해 생성된 항원 결합 단백질에 관한 것이다.
일 양상에서, GIPR 결합 단백질은 만성 치료를 위해 투여된다. 다른 양상에서, 결합 단백질은 급성 치료를 위해 투여된다.
GIPR 항원 결합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물이 또한 제공되며, 본 명세서에 개시된 임의의 예방 및 치료 방법으로 이용될 수 있다. 실시형태에서, 치료적 유효량의 하나 또는 복수의 항원 결합 단백질 및 약제학적으로 허용 가능한 희석제, 담체, 가용화제, 유화제, 보존제 및/또는 보조제가 또한 제공된다. 허용 가능한 제형 물질은 사용되는 투약량 및 농도에서 수용자에게 비독성이다.
특정 실시형태에서, 약제학적 조성물은, 예를 들어, pH, 삼투압, 점성도, 명확성, 색상, 등장성, 냄새, 멸균, 안정성, 용해 또는 방출 속도, 조성물의 흡수 또는 침투를 변형시키거나, 유지하거나 또는 보존하기 위한 제형 물질을 함유할 수 있다. 이러한 실시형태에서, 적합한 제형 물질은 아미노산(예컨대, 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 알기닌 또는 라이신); 항균제; 항산화제(예컨대, 아스코르브산, 아황산나트륨 또는 아황산수소나트륨); 완충제(예컨대, 붕산염, 중탄산염, 트리스-HCl, 시트르산염, 인산염 또는 다른 유기산); 증량제(예컨대, 만니톨 또는 글리신); 킬레이트제(예컨대, 에틸렌다이아민 테트라아세트산(EDTA)); 착화제(예컨대, 카페인, 폴리비닐피롤리돈, 베타-사이클로덱스트린 또는 하이드록시프로필-베타-사이클로덱스트린); 충전제; 단당류; 이당류; 및 기타 탄수화물(예컨대, 글루코스, 만노스 또는 덱스트린); 단백질(예컨대, 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린); 착화제, 향미제 및 희석제; 유화제; 친수성 중합체(예컨대, 폴리비닐피롤리돈); 저분자량 폴리펩타이드; 염 형성 반대이온(예컨대 나트륨); 보존제(예컨대 염화벤즈알코늄, 벤조산, 살리실산, 티메로살, 펜에틸 알코올, 메틸파라벤, 프로필파라벤, 클로르헥시딘, 솔브산 또는 과산화수소); 용매(예컨대, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜); 당 알코올(예컨대, 만니톨 또는 솔비톨); 현탁제; 계면활성제 또는 습윤제(예컨대 플루로닉스(pluronics), PEG, 솔비탄 에스터, 폴리솔베이트, 예컨대 폴리솔베이트 20, 폴리솔베이트, 트리톤, 트로메타민, 레시틴, 콜레스테롤, 틸록사팔); 안정성 향상제(예컨대, 수크로스 또는 솔비톨); 등장성 향상제(예컨대, 알칼리 금속 할로겐화물, 바람직하게는 염화나트륨 또는 염화칼륨, 만니톨 솔비톨); 전달 비히클; 희석제; 부형제 및/또는 약제학적 보조제를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다. 문헌[REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 18"Edition, (A.R. Genrmo, ed.), 1990, Mack Publishing Company]은 약제학적 조성물 내로 혼입될 수 있는 적합한 제제에 대한 추가적인 상세한 설명 및 선택사항을 제공한다.
특정 실시형태에서, 최적의 약제학적 조성물은, 예를 들어, 의도된 투여 경로, 전달 형식 및 목적으로 하는 투약량에 따라서 당업자에 의해 결정될 것이다. 예를 들어, 문헌[REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 상기 참조]. 특정 실시형태에서, 이러한 조성물은 개시된 항원 결합 단백질의 물리적 상태, 안정성, 생체내 방출 속도 및 생체내 클리어런스에 영향을 미칠 수 있다. 특정 실시형태에서, 약제학적 조성물 중의 1차 비히클 또는 담체는 천연에서 수성 또는 비수성일 수 있다. 예를 들어, 적합한 비히클 또는 담체는 주사용수 또는 생리 식염수 용액일 수 있다. 특정 실시형태에서, GIPR 항원 결합 단백질 조성물은 동결건조 케이크 또는 수용액의 형태로 목적으로 하는 순도를 갖는 선택된 조성물을 선택적 제형화제와 혼합함으로써 저장을 위해 제조될 수 있다(REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCES, 상기 참조). 추가로, 특정 실시형태에서, GIPR 항원 결합 단백질은 수크로스와 같은 적절한 부형제를 이용하여 동결건조물로서 제형화될 수 있다.
약제학적 조성물은 비경구 전달을 위해 선택될 수 있다. 대안적으로, 조성물은 흡입을 위해 또는 경구와 같이 소화관을 통한 전달을 위해 선택될 수 있다. 이러한 약제학적으로 허용 가능한 조성물의 제제는 당업계의 기술 내이다.
제형 성분은 바람직하게는 투여 부위에 대해 허용 가능한 농도로 존재한다. 특정 실시형태에서, 완충제는 생리적 pH에서 또는 약간 더 낮은 pH에서, 전형적으로 약 5 내지 약 8의 pH 내에서 조성을 유지하기 위해 사용된다.
비경구 투여가 상정될 때, 치료 조성물은 약제학적으로 허용 가능한 비히클 중에 목적으로 하는 인간 GIPR 항원 결합 단백질을 포함하는 무 발열원, 비경구로 허용 가능한 수용액의 형태로 제공될 수 있다. 비경구 주사에 특히 적합한 비히클은 GIPR 항원 결합 단백질이 적절하게 보존된 멸균, 등장 용액으로서 제형화된 멸균 증류수이다. 특정 실시형태에서, 상기 제제는 데포 주사를 통해 전달될 수 있는 생성물의 제어 또는 지속 방출을 제공할 수 있는 제제, 예컨대 주사용 미소구체, 생부식성 입자, 중합체 화합물(예컨대, 폴리락트산 또는 폴리글리콜산), 비드 또는 리포좀에 의한 목적으로 하는 분자의 제형화를 수반할 수 있다. 특정 실시형태에서, 순환에서 지속된 지속기간을 촉진시키는 효과를 갖는 하이알루론산이 또한 사용될 수 있다. 특정 실시형태에서, 이식 가능한 약물 전달 장치는 목적으로 하는 항원 결합 단백질을 도입하기 위해 사용될 수 있다.
특정 약제학적 조성물은 흡입을 위해 제형화된다. 일부 실시형태에서, GIPR 항원 결합 단백질은 건조, 흡입 가능한 분말로서 제형화된다. 구체적 실시형태에서, GIPR 항원 결합 단백질 흡입 용액은 또한 에어로졸 전달을 위한 추진제와 함께 제형화될 수 있다. 특정 실시형태에서, 용액은 분무될 수 있다. 따라서 폐 투여 및 제형화 방법은 참고로 포함되고, 화학적으로 변형된 단백질의 폐 전달을 기재하는 국제 특허 출원 PCT/US94/001875에 추가로 기재되어 있다. 일부 제형은 경구로 투여될 수 있다. 이 방식으로 투여되는 GIPR 항원 결합 단백질은 정제 및 캡슐과 같은 고체 투약 형태의 조제에서 관례적으로 사용되는 담체와 함께 또는 담체 없이 제형화될 수 있다. 특정 실시형태에서, 캡슐은 생체 이용 가능성이 최대화되고 사전-침투성 분해가 최소화될 때, 위장관 내 지점에서 제형의 활성 부분을 방출시키도록 설계될 수 있다. 추가적인 제제는 GIPR 항원 결합 단백질의 흡수를 용이하게 하기 위해 포함될 수 있다. 희석제, 향미제, 저융점 왁스, 식물성 오일, 윤활제, 현탁제, 정제 붕괴제 및 결합제가 또한 사용될 수 있다.
일부 약제학적 조성물은 정제의 제조에 적합한 비독성 부형제와 혼합물로 유효량의 하나 또는 복수의 GIPR 항원 결합 단백질을 포함한다. 멸균 수 또는 다른 적절한 비히클 중에 정제를 용해시킴으로써, 용액은 단위 용량 형태로 제조될 수 있다. 적합한 부형제는 비활성 희석제, 예컨대 탄산칼슘, 탄산나트륨 또는 중탄산염, 락토스, 또는 인산칼슘; 또는 결합제, 예컨대 전분, 젤라틴 또는 아카시아; 또는 윤활제, 예컨대 스테아르산마그네슘, 스테아르산 또는 탈크를 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다.
지속 또는 제어 전달 제형에서 GIPR 결합 단백질을 수반하는 제형을 포함하는 추가적인 약제학적 조성물은 당업자에게 명백할 것이다. 다양한 다른 지속- 또는 제어-전달 수단, 예컨대 리포좀 담체, 생부식성 마이크로입자 또는 다공성 비드 및 데포 주사를 제형화하기 위한 기법이 또한 당업자에게 공지되어 있다. 예를 들어, 약제학적 조성물의 전달을 위한 다공성 중합체 마이크로입자의 제어 방출을 기재하는 참고로 포함된 국제 특허 출원 PCT/US93/00829 참조. 지속 방출 제제는 성형 물품, 예를 들어, 필름 또는 마이크로캡슐의 형태로 반투과성 중합체 기질을 포함할 수 있다. 지속 방출 기질은 폴리에스터, 하이드로겔, 폴리락타이드(미국 특허 제3,773,919호 및 유럽 특허 출원 공개 제058481호에 개시된 것, 이들 각각은 참고로 포함됨), L-글루탐산과 감마 에틸-L-글루타메이트의 공중합체(Sidman et al., 1983, Biopolymers 2:547-556), 폴리(2-하이드록시에틸-메타크릴레이트)(Langer et al., 1981, J. Biomed. Mater. Res. 15:167-277 및 Langer, 1982, Chem. Tech. 12:98-105), 에틸렌 비닐 아세테이트(Langer et al., 1981, 상기 참조) 또는 폴리-D(-)-3-하이드록시뷰티르산(유럽 특허 출원 공개 제133,988호)을 포함할 수 있다. 지속 방출 조성물은 또한 당업계에 공지된 임의의 몇몇 방법에 의해 제조될 수 있는 리포좀을 포함할 수 있다. 예를 들어, 참고로 포함된 문헌[Eppstein et al., 1985, Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 82:3688-3692]; 유럽 특허 출원 공개 제036,676호; 유럽 특허 제088,046호 및 유럽 특허 제143,949호 참조.
생체내 투여를 위해 사용되는 약제학적 조성물은 전형적으로 멸균 제제로서 제공된다. 멸균은 멸균 여과막을 통한 여과에 의해 달성될 수 있다. 조성물이 동결건조될 때, 이 방법을 이용하는 멸균은 동결건조 및 재구성 전에 또는 후에 수행될 수 있다. 비경구 투여를 위한 조성물은 동결건조 형태로 또는 용액 중에 저장될 수 있다. 비경구 조성물은 일반적으로 피하 주사 바늘에 의해 뚫을 수 있는 마개를 갖는 멸균 접근 포트를 갖는 용기, 예를 들어, 정맥내 용액 백 또는 바이알에 넣는다.
특정 제형에서, 항원 결합 단백질은 농도가 적어도 10 ㎎/㎖, 20 ㎎/㎖, 30 ㎎/㎖, 40 ㎎/㎖, 50 ㎎/㎖, 60 ㎎/㎖, 70 ㎎/㎖, 80 ㎎/㎖, 90 ㎎/㎖, 100 ㎎/㎖ 또는 150 ㎎/㎖이다. 일 실시형태에서, 약제학적 조성물은 항원 결합 단백질, 완충제 및 폴리솔베이트를 포함한다. 다른 실시형태에서, 약제학적 조성물은 항원 결합 단백질, 완충제, 수크로스 및 폴리솔베이트를 포함한다. 약제학적 조성물의 예는 50 내지 100 ㎎/㎖의 항원 결합 단백질, 5 내지 20 mM 아세트산나트륨, 5 내지 10% w/v 수크로스 및 0.002 내지 0.008% w/v 폴리솔베이트를 함유하는 것이다. 특정 조성물은, 예를 들어, 9 내지 11 mM 아세트산나트륨 완충제, 8 내지 10% w/v 수크로스 및 0.005 내지 0.006% w/v 폴리솔베이트 중에 65 내지 75 ㎎/㎖의 항원 결합 단백질을 함유한다. 특정 이러한 제형의 pH는 4.5 내지 6의 범위이다. 다른 제형은 pH 5.0 내지 5.5(예를 들어, pH 5.0, 5.2 또는 5.4)를 가진다.
일단 약제학적 조성물이 제형화된다면, 용액, 현탁액, 겔, 에멀션, 고체, 결정으로서 또는 탈수 또는 동결건조 분말로서 멸균 바이알 중에 저장될 수 있다. 이러한 제형은 바로 사용 가능한 형태로 또는 투여 전에 재구성되는(예를 들어, 동결건조된) 형태로 저장될 수 있다. 단일 용량 투여 단위를 생산하기 위한 키트가 또한 제공된다. 특정 키트는 건조된 단백질을 갖는 제1 용기 및 수성 제형을 갖는 제2 용기를 포함한다. 특정 실시형태에서, 단일 및 다중 챔버의 사전 충전된 주사기(예를 들어, 액체 주사기 및 동결건조주사기)를 수용하는 키트가 제공된다. 사용될 치료적 유효량의 GIPR 항원 결합 단백질-함유 약제학적 조성물은, 예를 들어, 치료적 내용 및 목적에 의존할 것이다. 당업자는 치료를 위한 적절한 투약량 수준이, 부분적으로, 전달되는 분자, GIPR 항원 결합 단백질이 사용되는 적응증, 투여 경로, 및 환자의 크기(체중, 신체 표면 또는 기관 크기) 및/또는 병태(연령 및 일반적 건강상태)에 따라 다를 것임을 인식할 것이다. 특정 실시형태에서, 임상의는 투약량을 적정할 수 있고, 최적의 치료 효과를 얻기 위해 투여 경로를 변경시킬 수 있다.
투약 빈도는 사용되는 제형에서 특정 GIPR 항원 결합 단백질의 약동학적 매개변수에 의존할 것이다. 전형적으로, 임상의는 목적으로 하는 효과 달성에 투약량이 도달할 때까지 조성물을 투여한다. 따라서 조성물은 시간을 두고 (동일한 양의 목적으로 하는 분자를 포함할 수도 있고 또는 포함하지 않을 수도 있는) 단일 용량으로서 또는 2회 이상의 용량으로서, 또는 이식 장치 또는 카테터를 통한 연속 주입으로서 투여될 수 있다. 적절한 투약량은 적절한 용량-반응 데이터의 사용을 통해 확인될 수 있다. 특정 실시형태에서, 항원 결합 단백질은 장기간의 시간에 걸쳐 환자에게 투여될 수 있다. 특정 실시형태에서, 항원 결합 단백질은 2주마다, 2개월마다, 3개월마다, 4개월마다, 5개월마다 또는 6개월마다 투약된다.
약제학적 조성물의 투여 경로는 공지된 방법에 따라, 예를 들어, 경구로, 정맥내, 복강내, 뇌내(뇌실내), 두개내, 근육내, 안내, 동맥내, 간문맥내, 또는 병변내 경로에 의한 주사를 통해; 지속 방출 시스템에 의해 또는 이식 장치에 의한다. 특정 실시형태에서, 조성물은 볼루스 주사에 의해 또는 연속적으로 주입에 의해 또는 이식 장치에 의해 투여될 수 있다.
조성물은 또한 목적으로 하는 분자가 흡수되거나 또는 캡슐화되는 막, 스펀지 또는 다른 적절한 물질의 이식을 통해 국소로 투여될 수 있다. 특정 실시형태에서, 이식 장치가 사용되는 경우, 장치는 임의의 적합한 조직 또는 기관 내로 이식될 수 있고, 목적으로 하는 분자의 전달은 확산, 시간 방출 볼루스 또는 지속적 투여를 통할 수 있다.
또한 개시된 생체밖에 따르는 GIPR 항원 결합 단백질 약제학적 조성물을 사용하는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 예에서, 세포, 조직 및/또는 기관이 후속적으로 환자에게 다시 이식된 후에 환자로부터 제거된 세포, 조직 또는 기관은 GIPR 항원 결합 단백질 약제학적 조성물에 노출된다.
의사는 특정 환자의 개개 프로파일에 따라서 적절한 치료 적응증 및 표적 지질 수준을 선택할 수 있을 것이다. 고지혈증 치료를 안내하기 위한 한 가지의 잘 허용되는 표준은 문헌[Third Report of the National Cholesterol Education Program (NCEP) Expert Panel on Detection, Evaluation, and Treatment of the High Blood Cholesterol in Adults (Adult Treatment Panel III) Final Report, National Institutes of Health, NIH Publication No. 02-5215 (2002)]이며, 이의 인쇄된 간행물은 그의 전문이 본 명세서에 참고로 포함된다.
특정 용량의 효능은 특정 생리적 매개변수에서 바이오마커 또는 개선을 참고로 하여 평가될 수 있다. 적합한 바이오마커의 예는 유리 콜레스테롤 대 혈장 지질, 유리 콜레스테롤 대 막 단백질, 포스파티딜콜린 대 스핑고마이엘린 또는 HDL-C 수준의 비를 포함한다.
또한 본 명세서에서 GIPR 항원 결합 단백질 및 하나 이상의 추가적인 치료제를 포함하는 조성물뿐만 아니라 본 명세서에 개시된 예방적 및 치료적 방법에서 사용하기 위해 이러한 제제가 GIPR 항원 결합 단백질과 동시에 또는 후속적으로 투여되는 방법. 하나 이상의 추가적인 제제는 GIPR 항원 결합 단백질과 함께 공동 제형화될 수 있거나 또는 GIPR 항원 결합 단백질과 함께 공동 투여될 수 있다. 일반적으로, 치료 방법, 조성물 및 화합물은 또한 다양한 질환 상태의 치료에서 다른 치료제와 조합하여 사용될 수 있고, 추가적인 제제는 동시에 투여된다.
일 양상에서, 본 발명은 대사 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법에 관한 것이되, 상기 방법은 GIPR의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 단백질에 특이적으로 결합하는 치료적 유효량의 GLP-1 수용체 작용제 및 치료적 유효량의 GIPR 길항제를 투여하는 단계를 포함한다.
"GLP-1 수용체 작용제"는 GLP-1 수용체 활성을 갖는 화합물을 지칭한다. 이러한 예시적인 화합물은 엑센딘, 엑센딘 유사체, 엑센딘 작용제, GLP-1(7-37), GLP-1(7-37) 유사체, GLP-1(7-37) 작용제 등을 포함한다. GLP-1 수용체 작용제 화합물은 선택적으로 아마이드화될 수 있다. 용어 "GLP-1 수용체 작용제" 및 "GLP-1 수용체 작용제 화합물"은 동일한 의미를 가진다.
용어 "엑센딘"은 길라 몬스터(Gila monster)의 타액 분비물에서 발견되는 천연 유래(또는 천연 유래의 합성 형태) 엑센딘 펩타이드를 포함한다. 특정 관심 대상의 엑센딘은 엑센딘-3 및 엑센딘-4를 포함한다. 본 명세서에 기재된 방법에서 사용하기 위한 엑센딘, 엑센딘 유사체 및 엑센딘 작용제는 선택적으로 아마이드화될 수 있고, 또한 산 형태, 약제학적으로 허용 가능한 염 형태, 또는 임의의 다른 생리적으로 활성인 분자 형태일 수 있다.
일 실시형태에서, GLP-1 수용체 작용제 대 GIPR 길항제의 몰비는 약 1:1 내지 1:110, 1:1 내지 1:100, 1:1 내지 1:75, 1:1 내지 1:50, 1:1 내지 1:25, 1:1 내지 1:10, 1:1 내지 1:5 및 1:1이다. 일 실시형태에서, GIPR 길항제 대 GLP-1 수용체 작용제의 몰비는 약 1:1 내지 1:110, 1:1 내지 1:100, 1:1 내지 1:75, 1:1 내지 1:50, 1:1 내지 1:25, 1:1 내지 1:10, 및 1:1 내지 1:5이다.
일 실시형태에서, GLP-1 수용체 작용제는 약 1:1.5 내지 1:150, 바람직하게는 1:2 내지 1:50의 치료적으로 유효한 몰비로 길항제와 조합하여 사용된다.
일 실시형태에서, GLP-1 수용체 작용제 및 GIPR 길항제는 병태 및/또는 질환을 치료하기 위해 요구되는 각각의 화합물보다 적어도 약 1.1 내지 1.4, 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10배 더 낮은 용량으로 존재한다.
일 실시형태에서, GLP-1 수용체 작용제는 GLP-1(7-37) 또는 GLP-1(7-37) 유사체이다.
일 실시형태에서, GLP-1 수용체 작용제는 엑세나타이드, 리라글루타이드, 릭시세나타이드, 알비글루타이드, 둘라글루타이드, 세마글루타이드, 및 타스포글루타이드로 이루어진 군으로부터 선택된다.
일 양상에서, 본 발명은 대사 장애 증상을 갖는 대상체에게 투여 시 지속적인 유리한 효과를 제공하는 적어도 1종의 GIPR 길항제의 투여와 조합하여 치료적 유효량의 적어도 1종의 GLP-1 수용체 작용제를 투여하는 단계를 포함하는 치료 방법에 관한 것이다.
일 실시형태에서, 적어도 1종의 GIPR 길항제의 투여와 조합한 적어도 1종의 GLP-1 수용체 작용제의 투여는 대사 장애의 적어도 하나의 증상의 지속적인 유리한 효과를 제공한다.
일 실시형태에서, 치료적 유효량의 GLP-1 수용체 작용제 및 GIPR 길항제는 대상체에 대한 투여 전에 조합된다.
일 실시형태에서, 치료적 유효량의 GLP-1 수용체 작용제 및 GIPR 길항제는 순차적으로 대상체에게 투여된다.
일 실시형태에서, 치료적 유효량의 GLP-1 수용체 작용제 및 GIPR 길항제는 상승적으로 유효한 양이다.
엑센딘-4(HGEGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2(서열번호 1223))는 길라 몬스터, 아메리카 독 도마뱀(Heloderma suspectum)의 타액에서 발견되는 펩타이드이고; 및 엑센딘-3(HSDGTFTSDLSKQMEEEAVRLFIEWLKNGGPSSGAPPPS-NH2(서열번호 1224))은 멕시코 독 도마뱀(beaded lizard), 멕시코 구슬 도마뱀(Heloderma horridum)의 타액에서 발견되는 펩타이드이다. 엑센딘은 글루카곤-유사 펩타이드(GLP) 패밀리의 일부 구성원에 대해 일부 아미노산 서열 유사성을 가진다. 예를 들어, 엑센딘-4는 글루카곤-유사 펩타이드-1(GLP-1)(7-37)(HAEGTFTSDVSSYLEGQAAKEFIAWLVKGRG (서열번호 1244))과 약 53% 서열 동일성을 가진다. 그러나, 엑센딘-4는 GLP-1이 발현되는 포유류 프로글루카곤 유전자의 길라 몬스터 상동체가 아닌 별개의 유전자로부터 전사된다. 추가적으로, 합성 엑센딘-4 펩타이드의 구조는 GLP-1의 구조의 순차적 변형에 의해 생성되지 않기 때문에, 엑센딘-4는 GLP-1(7-37)의 유사체가 아니다. 문헌[Nielsen et al.,　Current Opinion in Investigational Drugs,　4(4):401-405 (2003)].
엑세나타이드로서도 알려진 합성 엑센딘-4는 BYETTA(등록상표)(아밀린 파마슈티칼스 인코포레이티드(Amylin Pharmaceuticals, Inc.) 및 엘리 릴리 앤드 컴퍼니(Eli Lilly and Company))로서 상업적으로 입수 가능하다. 엑세나타이드의 1주 1회 제형은 WO 2005/102293에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본 명세서에 참고로 포함된다.
"엑센딘 유사체"는 엑센딘 기준 펩타이드의 생물학적 활성을 유발하고, 바람직하게는 엑센딘 기준 펩타이드(예를 들어, 엑센딘-4)와 동일하거나 또는 더 양호한 효능을 갖거나, 또는, 예를 들어, 개시내용이 본 명세서에 참고로 포함된 문헌[Hargrove et al.,　Regulatory Peptides,　141:113-119 (2007)]에 기재된 바와 같은, 당업계에 공지된 측정, 예컨대 수용체 결합 및/또는 경쟁 연구에 의해 평가할 때 엑센딘 기준 펩타이드에 비해 105 만큼의 효능 내인 펩타이드를 지칭한다. 바람직하게는, 엑센딘 유사체는 1 μM 미만의 친화도, 및 더 바람직하게는 3 nM 미만, 1 nM 미만, 또는 0.1 nM 미만의 친화도로 이러한 분석에서 결합할 것이다. 용어 "엑센딘 유사체"는 또한 "엑센딘 작용제"로서 지칭될 수 있다. 바람직한 실시형태에서, 엑센딘 유사체는 엑센딘-4 유사체이다.
엑센딘 유사체는 또한 화학적으로 유도체화된 또는 변경된 본 명세서에 기재된 펩타이드, 예를 들어, 비천연 아미노산 잔기(예를 들어, 타우린, β-아미노산 잔기, γ-아미노산 잔기, 및 D-아미노산 잔기), C-말단 작용기 변형, 예컨대, 아마이드, 에스터 및 C-말단 케톤 변형 및 N-말단 작용기 변형, 예컨대 아실화된 아민, 쉬프 염기 또는 예를 들어, 아미노산 파이로글루탐산에서 발견되는 바와 같은 고리화를 갖는 펩타이드를 포함한다. 엑센딘 유사체는 또한 다른 화학적 모이어티, 예컨대 펩타이드 모방체를 포함할 수 있다.
예시적인 엑센딘 및 엑센딘 유사체 엑센딘-4(서열번호 1223); 엑센딘-3 (서열번호 1224); Leu14-엑센딘-4(서열번호 1225); Leu14,Phe25-엑센딘-4(서열번호 1226); Leu14,Ala19,Phe25-엑센딘-4(서열번호 1227); 엑센딘-4(1-30)(서열번호 1228); Leu14-엑센딘-4(1-30)(서열번호 1229); Leu14,Phe25-엑센딘-4(1-30)(서열번호 1230); Leu14,Ala19,Phe25-엑센딘-4(1-30)(서열번호 1231); 엑센딘-4(1-28)(서열번호 1232); Leu14-엑센딘-4(1-28)(서열번호 1233); Leu14,Phe25-엑센딘-4(1-28)(서열번호 1234); Leu14,Ala19,Phe25-엑센딘-4(1-28)(서열번호 1235); Leu14,Lys17,20,Ala19,Glu21,Phe25,Gln28-엑센딘-4(서열번호 1236); Leu14,Lys17,20,Ala19,Glu21,Gln28-엑센딘-4(서열번호 1237); 옥틸Gly14,Gln28-엑센딘-4(서열번호 1238); Leu14,Gln28,옥틸Gly34-엑센딘-4(서열번호 1239); Phe4,Leu14,Gln28,Lys33,Glu34, Ile35 , 36,Ser37-엑센딘-4(1-37)(서열번호 1240); Phe4,Leu14,Lys17,20,Ala19,Glu21,Gln28-엑센딘-4(서열번호 1241); Val11,Ile13,Leu14,Ala16,Lys21,Phe25-엑센딘-4(서열번호 1242); 엑센딘-4-Lys40 　(서열번호 1243); 릭시세나타이드(사노피-아벤티스(Sanofi-Aventis)/질란드 파마(Zealand Pharma)); CJC-1134 (컨쥬켐, 인코포레이티드(ConjuChem, Inc.)); [Ne-(17-카복시헵타데칸산)Lys20]엑센딘-4-NH2　(서열번호 1268); [Ne-(17-카복시헵타-데칸오일)Lys32]엑센딘-4-NH2　(서열번호 1269); [데스아미노-His1,Ne-(17-카복시헵타데칸오일)Lys20]엑센딘-4-NH2　(서열번호 1270); [Arg12 , 27,NLe14,Ne-(17-카복시-헵타데칸오일)Lys32]엑센딘-4-NH2　(서열번호 1271); [Ne-(19-카복시-노나데칸오일아미노)Lys20]-엑센딘-4-NH2　(서열번호 1272); [Ne-(15-카복시펜타데칸오일아미노)Lys20]-엑센딘-4-NH2(서열번호 1273); [Ne-(13-카복시트라이데칸오일아미노)Lys20]엑센딘-4-NH2　(서열번호 1274); [Ne-(11-카복시-운데칸오일-아미노)Lys20]엑센딘-4-NH2　(서열번호 1275); 엑센딘-4-Lys40(e-MPA)-NH2　(서열번호 1276); 엑센딘-4-Lys40(e-AEEA-AEEA-MPA)-NH2　(서열번호 1277); 엑센딘-4-Lys40(e-AEEA-MPA)-NH2　(서열번호 1278); 엑센딘-4-Lys40(e-MPA)-알부민(서열번호 1279); 엑센딘-4-Lys40(e-AEEA-AEEA-MPA)-알부민(서열번호 1280); 엑센딘-4-Lys40(e-AEEA-MPA)-알부민(서열번호 1281); 등. AEEA는 [2-(2-아미노)에톡시)]아세트산을 지칭한다. EDA는 에틸렌다이아민을 지칭한다. MPA는 말레이미도프로피온산을 지칭한다. 엑센딘 및 엑센딘 유사체는 선택적으로 아마이드화될 수 있다.
일 실시형태에서, GLP-1 수용체 작용제 화합물은 엑센딘-4(서열번호 1223)에 대해 적어도 80% 서열 동일성; 엑센딘-4(서열번호 1223)에 대해 적어도 85% 서열 동일성; 엑센딘-4(서열번호 1223)에 대해 적어도 90% 서열 동일성; 또는 엑센딘-4(서열번호 1223)에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 엑센딘-4-유사체이다.
본 명세서에 기재된 방법에서 유용한 다른 엑센딘 및 엑센딘 유사체는 WO 98/05351; WO 99/07404; WO 99/25727; WO 99/25728; WO 99/40788; WO 00/41546; WO 00/41548; WO 00/73331; WO 01/51078; WO 03/099314; 미국 특허 제6,956,026호; 미국 특허 제6,506,724호; 미국 특허 제6,703,359호; 미국 특허 제6,858,576호; 미국 특허 제6,872,700호; 미국 특허 제6,902,744호; 미국 특허 제7,157,555호; 미국 특허 제7,223,725호; 미국 특허 제 7,220,721호; 미국 특허 공개 제2003/0036504호; 및 미국 특허 공개 제2006/0094652호에 기재된 것을 포함하며, 이의 개시내용은 본 명세서에 그들의 전문이 참고로 포함된다.
"GLP-1(7-37) 유사체"는 당업계에 공지된 측정, 예컨대 수용체 결합 분석 또는, 예를 들어, 개시내용이 본 명세서에 참고로 포함된 문헌[Hargrove et al.,Regulatory Peptides,　141:113-119 (2007)]에 의해 기재된 생체내 혈당 분석에 의해 평가될 때, GLP-1(7-37)와 유사한 생물학적 활성을 유발하는 펩타이드를 지칭한다. 일 실시형태에서, 용어 "GLP-1(7-37) 유사체"는 GLP-1(7-37)의 아미노산 서열에 비교할 때, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 또는 8개의 아미노산 치환, 삽입, 결실, 또는 이들의 2 이상의 조합을 갖는 아미노산 서열을 갖는 펩타이드를 지칭한다. 일 실시형태에서, GLP-1(7-37) 유사체는 GLP-1(7-36)-NH2이다. GLP-1(7-37) 유사체는 아마이드화된 형태, 산 형태, 약제학적으로 허용 가능한 염 형태 및 분자의 임의의 다른 생리적으로 활성인 형태를 포함한다.
예시적인 GLP-1(7-37) 및 GLP-1(7-37) 유사체는 GLP-1(7-37)(서열번호 1244); GLP-1(7-36)-NH2(서열번호 1245); 리라글루타이드(노보 노르디스트(Novo Nordisk)로부터의 빅토자(VICTOZA)(등록상표)); 알비글루타이드(글락소스미스클라인(GlaxoSmithKline)으로부터의 신크리아(SYNCRIA)(등록상표)); 타스포글루타이드(호프만 라-로슈(Hoffman La-Roche)); 둘라글루타이드(또한 LY2189265로 알려짐; 엘리 릴리 앤드 컴퍼니); LY2428757(엘리 릴리 앤드 컴퍼니); 데스아미노-His7,Arg26,Lys34(Nε-(γ-Glu(N-α-헥사데칸오일)))-GLP-1(7-37)(서열번호 1282로서 개시된 코어 펩타이드); 데스아미노-His7,Arg26,Lys34(Nε-옥탄오일)-GLP-1(7-37)(서열번호 1283); Arg26 , 34,Lys38(Nε-(ω-카복시펜타데칸오일))-GLP-1(7-38)(서열번호 1284); Arg26 , 34,Lys36(Nε-(γ-Glu(N-α-헥사데칸오일)))-GLP-1(7-36)(서열번호 1285에 개시된 바와 같은 코어 펩타이드); Aib8 , 35,Arg26 , 34,Phe31-GLP-1(7-36))(서열번호 1246); HXaa8EGTFTSDVSSYLEXaa22Xaa23AAKEFIXaa30WLXaa33Xaa34G Xaa36Xaa37; (여기서, Xaa3은 A, V 또는 G이고; Xaa22는 G, K 또는 E이며; Xaa23은 Q 또는 K이고; Xaa30은 A 또는 E이며; Xaa33은 V 또는 K이고; Xaa34는 K, N 또는 R이고; Xaa36은 R 또는 G이며; 그리고 Xaa37은 G, H, P이거나 또는 없음)(서열번호 1247); Arg34-GLP-1(7-37)(서열번호 1248); Glu30-GLP-1(7-37)(서열번호 1249); Lys22-GLP-1(7-37)(서열번호 1250); Gly8,36,Glu22-GLP-1(7-37)(서열번호 1251); Val8,Glu22,Gly36-GLP-1(7-37)(서열번호 1252); Gly8 , 36,Glu22,Lys33,Asn34-GLP-1(7-37)(서열번호 1253); Val8,Glu22,Lys33,Asn34,Gly36-GLP-1(7-37)(서열번호 1254); Gly8 , 36,Glu22,Pro37-GLP-1(7-37)(서열번호 1255); Val8,Glu22,Gly36Pro37-GLP-1(7-37)(서열번호 1256); Gly8,36,Glu22,Lys33, Asn34,Pro37-GLP-1(7-37)(서열번호 1257); Val8,Glu22,Lys33,Asn34,Gly36,Pro37-GLP-1(7-37)(서열번호 1258); Gly8 , 36,Glu22-GLP-1(7-36)(서열번호 1259); Val8,Glu22,Gly36-GLP-1(7-36)(서열번호 1260); Val8,Glu22,Asn34,Gly36-GLP-1(7-36)(서열번호 1261); Gly8 , 36,Glu22,Asn34-GLP-1(7-36)(서열번호 1262)을 포함한다. 각각의 GLP-1(7-37) 및 GLP-1(7-37) 유사체는 선택적으로 아마이드화될 수 있다.
일 실시형태에서, GLP-1(7-37) 또는 GLP-1(7-37) 유사체는 면역글로불린(예를 들어, IgG, IgE, IgG 등)의 Fc 부분에 (직접적으로 또는 연결기에 의해) 공유 결합된다. 예를 들어, 서열번호25 내지 40 중 임의의 하나는 하기의 서열을 포함하는 면역글로불린의 Fc 부분에 공유 결합될 수 있다: AESKYGPPCPPCPAPXaa16Xaa17Xaa18GGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFXaa80STYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSRLTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLGXaa230; 여기서, Xaa16은 P 또는 E이고; Xaa17은 F, V 또는 A이며; Xaa18은 L, E 또는 A이고; Xaa80은 N 또는 A이며; 그리고 Xaa230은 K 또는 없다(서열번호 1263). 연결기는 임의의 화학적 모이어티(예를 들어, 아미노산 및/또는 화학기)일 수 있다. 일 실시형태에서, 연결기는 (-GGGGS-)x(서열번호 1264)이며, 여기서 x는 1, 2, 3, 4, 5 또는 6; 바람직하게는 2, 3 또는 4; 더 바람직하게는 3이다. 일 실시형태에서, 면역글로불린의 Fc 부분에 공유 결합된 GLP-1(7-37) 유사체는 하기의 아미노산 서열을 포함한다: HGEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLVKGGGGGGGSGGGGSGGGGSAESKYGPPCPPCPAPEAAGGPSVFLFPPKPKDTLMISRTPEVTCVVVDVSQEDPEVQFNWYVDGVEVHNAKTKPREEQFNSTYRVVSVLTVLHQDWLNGKEYKCKVSNKGLPSSIEKTISKAKGQPREPQVYTLPPSQEEMTKNQVSLTCLVKGFYPSDIAVEWESNGQPENNYKTTPPVLDSDGSFFLYSR LTVDKSRWQEGNVFSCSVMHEALHNHYTQKSLSLSLG (서열번호 1265).
다른 실시형태에서, GLP-1(7-37) 또는 GLP-1(7-37) 유사체는 1 또는 2개의 폴리에틸렌 글리콜 분사에 (직접적으로 또는 연결기를 통해) 공유 결합될 수 있다. 예를 들어, GLP-1(7-37) 유사체는 하기 아미노산 서열을 포함할 수 있다: HXaa8EGTFTSDVS SYLEXaa22QAAKEFIAWLXaa33KGGPSSGAPPPC45C46-Z, 여기서, Xaa8은: D-Ala, G, V, L, I, S 또는 T이고; Xaa22는 G, E, D 또는 K이며; Xaa33은: V 또는 I이고; Z는 OH 또는 NH2(서열번호 1266)이며, 그리고 선택적으로, 여기서 (i) 하나의 폴리에틸렌 글리콜 모이어티는 C45에 공유 부착되거나　(ii) 하나의 폴리에틸렌 글리콜 모이어티는 C46에 공유 부착되거나, 또는 (iii) 하나의 폴리에틸렌 글리콜 모이어티는 C45　에 부착되고, 하나의 폴리에틸렌 글리콜 모이어티는 C46에 부착된다. 일 실시형태에서, GLP-1(7-37) 유사체는 HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFI AWLIKGGPSSGAPPPC45C46-NH2　(서열번호 1267)이고, 선택적으로, 여기서 (i) 하나의 폴리에틸렌 글리콜 모이어티는 C4에 공유 부착되거나　(ii) 하나의 폴리에틸렌 글리콜 모이어티는 C46에 공유 부착되거나, 또는 (iii) 하나의 폴리에틸렌 글리콜 모이어티는 C45　에 부착되고, 하나의 폴리에틸렌 글리콜 모이어티는 C46에 부착된다.
일 실시형태에서, GLP-1 수용체 작용제 화합물은 GLP-1(7-37)(서열번호 1244)에 대해 적어도 80% 서열 동일성; GLP-1(7-37)(서열번호 1244)에 대해 적어도 85% 서열 동일성; GLP-1(7-37)(서열번호 1244)에 대해 적어도 90% 서열 동일성; 또는 GLP-1(7-37)(서열번호 1244)에 대해 적어도 95% 서열 동일성을 갖는 펩타이드이다.
GLP-1 수용체 작용제 화합물은 당업계에 잘 공지된 과정, 예를 들어, 문헌[Eng et al.,　J. Biol . Chem.,　265:20259-62 (1990)]에 기재된 바와 같은 펩타이드 정제; 문헌[Raufman et al.,　J. Biol . Chem.,　267:21432-37 (1992)]에 기재된 바와 같은 표준 고체상 펩타이드 합성; 문헌[Sambrook et al.,　Molecular Cloning: A Laboratory Manual,　2d Ed., Cold Spring Harbor (1989)]에 기재된 바와 같은 재조합 DNA 기법; 등에 의해 제조될 수 있다.
[표 7]
GLP-1 작용제 서열의 예
Figure pct00168
Figure pct00169
Figure pct00170
Figure pct00171
Figure pct00172
AEEA는 [2-(2-아미노)에톡시)]아세트산을 지칭한다.
EDA는 에틸렌다이아민을 지칭한다.
MPA는 말레이미도프로피온산을 지칭한다.
본 개시내용은 또한 본 명세서에 기재된 GLP-1 수용체 작용제 화합물 및 약제학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 약제학적 조성물을 제공한다. GLP-1 수용체 작용제 화합물은 치료적 유효량으로 약제학적 조성물 중에 존재할 수 있고, 치료적 효능에 필요한 GLP-1 수용체 작용제 화합물의 최소 혈액 혈장 수준을 제공하는 양으로 존재할 수 있다. 이러한 약제학적 조성물은 당업계에 공지되어 있으며, 예를 들어, 미국 특허 제7,521,423호; 미국 특허 제7,456,254호; WO 2000/037098; WO 2005/021022; WO 2005/102293; WO 2006/068910; WO 2006/125763; WO 2009/068910; 미국 특허 공개 제2004/0106547호; 등에 기재되어 있고, 이의 개시내용은 본 명세서에 참고로 포함된다.
본 명세서에 기재된 GLP-1 수용체 작용제 화합물을 함유하는 약제학적 조성물은 말초 투여, 예컨대 비경구(예를 들어, 피하, 정맥내, 근육내), 연속 주입(예를 들어, 정맥내 점적, 정맥내 볼루스, 정맥내 주입), 국소, 비강 또는 경구 투여를 위해 제공될 수 있다. 적합한 약제학적으로 허용 가능한 담체 및 그들의 제형은 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences by Martin; 및 Wang et al.,　Journal of Parenteral Science and Technology, Technical Report No. 10, Supp. 42:2S(1988)]과 같은 표준 제형 협약에 기재되어 있다. 본 명세서에 기재된 GLP-1 수용체 작용제 화합물은 주사 또는 주입을 위한 비경구 조성물로 제공될 수 있다. 그들은, 예를 들어, 수 중에서; 비활성 오일, 예컨대 식물성 오일(예를 들어, 참깨 오일, 피넛 오일, 올리브유 등); 또는 다른 약제학적으로 허용 가능한 담체 중에서 현탁될 수 있다. 일 실시형태에서, 화합물은 수성 담체 중에서, 예를 들어, 등장성 완충제 용액 중에서 약 3.0 내지 8.0, 또는 약 3.0 내지 5.0의 pH로 현탁된다. 조성물은 통상적인 멸균 기법에 의해 멸균될 수 있거나 또는 멸균 여과될 수 있다. 조성물은 생리적 조건, 예컨대 pH 완충제에 근접하는 데 필요한 약제학적으로 허용 가능한 보조 물질을 함유할 수 있다.
유용한 완충제는, 예를 들어, 아세트산 완충제를 포함한다. 저장소 또는 "데포" 서방출 제제의 형태는 치료적 유효량의 제제가 피하 주사, 경피 주사 또는 다른 전달 방법 후 다수의 시간 또는 며칠에 걸쳐 혈류 내로 전달되도록 사용될 수 있다. 목적으로 하는 등장성은 염화나트륨 또는 다른 약제학적으로 허용 가능한 제제, 예컨대 덱스트로스, 붕산, 타르타르산나트륨, 프로필렌 글리콜, 폴리올(예컨대 만니톨 및 솔비톨), 또는 다른 무기 또는 유기 용질을 이용하여 달성될 수 있다. 정맥내 주입을 위한 일 실시형태에서, 제형은 (i) GLP-1 수용체 작용제 화합물, (2) 멸균수, 및 선택적으로 (3) 염화나트륨, 덱스트로스 또는 이들의 조합물을 포함할 수 있다.
담체 또는 부형제는 또한 GLP-1 수용체 작용제 화합물의 투여를 용이하게 하기 위해 사용될 수 있다. 담체 및 부형제의 예는 탄산칼슘, 인산칼슘, 다양한 당, 예컨대 락토스, 글루코스 또는 수크로스, 또는 전분의 유형, 셀룰로스 유도체, 젤라틴, 식물성 오일, 폴리에틸렌 글리콜 및 생리적으로 적합한 용매를 포함한다.
GLP-1 수용체 작용제 화합물은 또한 약제학적으로 허용 가능한 염(예를 들어, 산 부가 염) 및/또는 이들의 복합체로서 제형화될 수 있다. 약제학적으로 허용 가능한 염은 그들이 투여되는 농도에서 비독성 염이다. 약제학적으로 허용 가능한 염은 산 부가 염, 예컨대 황산염, 염산, 인산염, 설팜산염, 아세트산염, 시트르산염, 락트산염, 타르타르산염, 메탄설폰산염, 에탄설폰산염, 벤젠설폰산염, p-톨루엔설폰산염, 사이클로헥실설팜산염 및 퀸산염을 함유하는 것을 포함한다. 약제학적으로 허용 가능한 염은 염산, 황산, 인산, 설팜산, 아세트산, 시트르산, 락트산, 타르타르산, 말론산, 메탄설폰산, 에탄설폰산, 벤젠설폰산, p-톨루엔설폰산, 사이클로헥실설팜산 및 퀸산과 같은 산으로부터 얻을 수 있다. 이러한 염은, 예를 들어, 염이 불용성인 용매 또는 배지에서 또는 물과 같은 용매에서 유리산 또는 염기 형태의 생성물을 1당량 이상의 적절한 염기 또는 산과 반응시키고, 이어서, 이후에 진공에서 제거함으로써 또는 냉동 건조시킴으로써 또는 존재하는 염을 적합한 이온 교환 수지 상에서 교환함으로써 제조될 수 있다.
GLP-1 수용체 작용제 화합물의 예시적인 약제학적 제형은 미국 특허 제7,521,423호, 미국 특허 제7,456,254호; 미국 특허 공개 제2004/0106547호, WO 2006/068910, WO 2006/125763 등에 기재되어 있으며, 이의 개시내용은 본 명세서에 참고로 포함된다.
본 명세서에 기재된 방법에서 사용하기 위한 치료적 유효량의 본 명세서에 기재된 GLP-1 수용체 작용제 화합물은 전형적으로 약 0.01 ㎍ 내지 약 5 ㎎; 약 0.1 ㎍ 내지 약 2.5 ㎎; 약 1 ㎍ 내지 약 1 ㎎; 약 1 ㎍ 내지 약 50 ㎍; 또는 약 1 ㎍ 내지 약 25 ㎍일 것이다. 대안적으로, 치료적 유효량의 GLP-1 수용체 작용제 화합물은 70㎏ 환자의 체중을 기준으로 약 0.001 ㎍ 내지 약 100 ㎍; 또는 70㎏ 환자의 체중을 기준으로 약 0.01 ㎍ 내지 약 50 ㎍일 수 있다. 이들 치료적 유효 용량은 제형에 따라서 1일/일, 2회/일, 3회/일, 1회/주, 2주마다 또는 1회/개월로 투여될 수 있다. 투여될 정확한 용량은, 예를 들어, 제형, 예컨대 즉시 방출 제형 또는 장기간 방출 제형에 의해 결정된다. 경피, 비강 또는 경구 투약 형태에 대해, 투약량은 약 5배 내지 약 10배로 증가될 수 있다.
특정 실시형태에서 GLP-1 수용체 작용제는 GIPR 항원 결합 단백질과 동시에 투여될 것이다. 일 실시형태에서 GLP-1 수용체 작용제는 GIPR 항원 결합 단백질 후에 투여될 것이다. 일 실시형태에서 GLP-1 수용체 작용제는 GIPR 항원 결합 단백질 전에 투여될 것이다. 특정 실시형태에서, 대상체 또는 환자는 GIPR 항원 결합 단백질에 의한 추가적인 치료를 실시하기 전에 GLP-1 수용체 작용제로 이미 치료 중일 것이다.
본 명세서에 제공된 GIPR 항원 결합 단백질은 생물학적 샘플에서 GIPR을 검출하는 데 유용하다. 예를 들어, GIPR 항원 결합 단백질은 진단 분석, 예를 들어, 혈청에서 발현된 GIPR을 검출하고/하거나 정량화하기 위한 결합 분석에서 사용될 수 있다.
기재된 항원 결합 단백질은 GIPR과 관련된 질환 및/또는 병태를 검출하거나, 진단하거나 또는 모니터링하기 위한 진단 목적을 위해 사용될 수 있다. 개시된 항원 결합 단백질은 당업자에게 공지된 고전적인 면역조직학적 방법을 이용하여 샘플 중의 GIPR의 존재의 검출을 위한 수단을 제공한다(예를 들어, 문헌[Tijssen, 1993, Practice and Theory of Enzyme Immunoassays, Vol 15 (Eds R.H. Burdon and P.H. van Knippenberg, Elsevier, Amsterdam); Zola, 1987, Monoclonal Antibodies: A Manual of Techniques, pp. 147-158 (CRC Press, Inc.); Jalkanen et al., 1985, J. Cell. Biol . 101:976-985; Jalkanen et al., 1987, J. Cell Biol . 105:3087-3096]). GIPR의 검출은 생체내 또는 시험관내에서 수행될 수 있다.
본 명세서에 제공된 진단적 용도는 GIPR의 발현을 검출하기 위한 항원 결합 단백질의 사용을 포함한다. GIPR 존재의 검출에서 유용한 방법의 예는 면역분석, 예컨대 효소 결합 면역 흡착 측정법(ELISA) 및 방사면역측정법(RIA)을 포함한다.
진단 용도를 위해, 항원 결합 단백질은 전형적으로 검출 가능한 표지기로 표지될 것이다. 적합한 표지기는 다음을 포함하지만, 이들로 제한되지 않는다: 방사성동위원소 또는 방사성핵종(예를 들어, 3H, 14C, 15N, 35S, 90Y, 99Tc, 111In, 125I, 131I), 형광기(예를 들어, FITC, 로다민, 란탄족 인광체), 효소기(예를 들어, 겨자무과산화효소, β-갈락토시다제, 루시퍼라제, 알칼리성 포스파타제), 화학발광기, 바이오틴일기, 또는 2차 리포터(예를 들어, 류신 지퍼쌍 서열, 2차 항체에 대한 결합 부위, 금속 결합 도메인, 에피토프 태그)에 의해 인식되는 사전결정된 폴리펩타이드 에피토프. 일부 실시형태에서, 표지기는 잠재적 입체 장애를 감소시키기 위한 다양한 길이의 스페이서 아암을 통해 항원 결합 단백질에 결합된다. 단백질을 표지하기 위한 다양한 방법은 당업계에 공지되어 있고, 사용될 수 있다.
일부 실시형태에서, GIPR 항원 결합 단백질은 단리되고, 당업계에 공지된 기법을 이용하여 측정된다. 예를 들어, 문헌[Harlow and Lane, 1988, Antibodies: A Laboratory Manual, New York: Cold Spring Harbor (ed. 1991 and periodic supplements); John E. Coligan, ed., 1993, Current Protocols In Immunology New York: John Wiley & Sons] 참조.
개시된 다른 양상은 GIPR 대한 결합에 대해 제공된 항원 결합 단백질과 경쟁하는 시험 분자의 존재를 검출하는 것을 제공한다. 한 가지 이러한 분석의 예는 시험 분자의 존재 또는 부재 하에 GIPR의 양을 함유하는 용액 중의 유리 항원 결합 단백질의 양을 검출하는 단계를 수반한다. 유리 항원 결합 단백질(즉, GIPR에 결합되지 않는 항원 결합 단백질) 양의 증가는 시험 분자가 GIPR 결합에 대해 항원 결합 단백질과 경쟁할 수 있다는 것을 나타낼 것이다. 일 실시형태에서, 항원 결합 단백질은 표지기로 표지된다. 대안적으로, 시험 분자는 표지되면, 유리 시험 분자의 양은 항원 결합 단백질의 존재 및 부재 하에 모니터링된다.
GIPR 결합 단백질은 대사적 병태 또는 장애를 치료하거나, 진단하거나 또는 개선하기 위해 사용될 수 있다. 일 실시형태에서, 치료될 대사 장애는 당뇨병, 예를 들어, 2형 당뇨병이다. 다른 실시형태에서, 대사 병태 또는 장애는 비만이다. 다른 실시형태에서, 대사 병태 또는 장애는 이상지질혈증, 상승된 글루코스 수준, 상승된 인슐린 수준 또는 당뇨병성 신경병증이다. 예를 들어, GIPR 결합 펩타이드를 이용하여 치료되거나 또는 개선될 수 있는 대사적 병태 또는 장애는 인간 대상체가 125 ㎎/㎗ 이상, 예를 들어 130, 135, 140, 145, 150, 155, 160, 165, 170, 175, 180, 185, 190, 195, 200 또는 200 ㎎/㎗ 초과의 공복 혈당 수준을 갖는 상태를 포함한다. 혈당 수준은 섭식 또는 공복 상태에서 또는 무작위에서 결정될 수 있다. 대사적 병태 또는 장애는 또한 대상체가 대사적 병태가 발생할 증가된 위험에 있는 병태를 포함할 수 있다. 인간 대상체에 대해, 이러한 병태는 100 ㎎/㎗의 공복 혈당 수준을 포함한다. GIPR 결합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물을 이용하여 치료될 수 있는 조건은 또한 본 명세서에 참고로 포함된 문헌[American Diabetes Association Standards of Medical Care in Diabetes Care-2011, American Diabetes Association, Diabetes Care Vol. 34, No. Supplement 1, S11-S61, 2010]에서 찾을 수 있다.
적용에서, 대사 장애 또는 병태, 예컨대 2형 당뇨병, 상승된 글루코스 수준, 상승된 인슐린 수준, 이상지질혈증, 비만 또는 당뇨병성 신경병증은 치료가 필요한 환자에게 치료적 유효 용량의 GIPR 결합 단백질을 투여함으로써 치료될 수 있다. 투여는 본 명세서에 기재된 바와 같이, 예컨대 IV 주사, 복강내(IP) 주사, 피하 주사, 근육내 주사에 의해 또는 정제 또는 액체 제형의 형태로 경구로 수행될 수 있다. 일부 상황에서, 치료적으로 유효한 또는 바람직한 용량의 GIPR 결합 단백질은 임상의에 의해 결정될 수 있다. 치료적 유효 용량의 GIPR 결합 단백질은 특히, 투여 스케줄, 투여되는 제제의 단위 용량, GIPR 결합 단백질이 다른 치료제와 조합하여 투여되는지의 여부, 면역 상태 및 수용자의 건강 상태에 의존할 것이다. 본 명세서에서 사용되는 바와 같은 용어 "치료적 유효 용량"은 치료 중인 질환 또는 장애 증상의 경감 또는 개선을 포함하는, 연구자, 의사 또는 다른 임상의에 의해 추구되는 조직계, 동물 또는 인간에서의 생물학적 또는 의학적 반응을 유발하는 GIPR 결합 단백질의 양, 즉, 하나 이상의 목적으로 하는 생물학적 또는 의학적 반응의 관찰 가능한 수준, 예를 들어 혈당, 인슐린, 트라이글리세라이드 또는 콜레스테롤 수준의 저하; 체중 감소; 또는 내당능, 에너지 소비량 또는 인슐린 민감성의 개선을 뒷받침하는 GIPR 결합 단백질의 양을 의미한다.
치료적 유효 용량의 GIPR 결합 단백질은 또한 목적으로 하는 결과에 따라 다를 수 있다는 것을 주목한다. 따라서, 예를 들어, 더 낮은 수준의 혈당 수준이 나타나는 상황에서, GIPR 결합 단백질의 용량은 비교적 더 낮은 수준의 혈당이 요망되는 용량보다 대응적으로 더 높을 것이다. 대조적으로, 예를 들어, 더 높은 수준의 혈당 수준이 나타나는 상황에서, GIPR 결합 단백질의 용량은 비교적 더 높은 수준의 혈당이 요망되는 용량보다 대응적으로 더 낮을 것이다.
다양한 실시형태에서, 대상체는 100 ㎎/㎗ 이상의 혈당 수준을 갖는 인간이며 GIPR 결합 단백질로 치료될 수 있다.
일 실시형태에서, 본 개시내용의 방법은 대상체에서 하나 이상의 대사적으로 적절한 화합물, 예컨대 글루코스, 인슐린, 콜레스테롤, 지질의 기준 수준을 처음 측정하는 단계를 포함한다. 이어서, GIPR 결합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물은 대상체에게 투여된다. 요망되는 시간 기간 후에, 대상체에서 하나 이상의 대사적으로 적절한 화합물(예를 들어, 혈당, 인슐린, 콜레스테롤, 지질)의 수준이 다시 측정된다. 이어서, 두 수준은 대상체에서 대사적으로 적절한 화합물에서의 상대적 변화를 결정하기 위해 비교될 수 있다. 해당 비교 결과에 따라서, GIPR 결합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물의 다른 용량은 하나 이상의 대사적으로 적절한 화합물의 목적으로 하는 수준을 달성하도록 투여될 수 있다.
GIPR 결합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물은 다른 화합물과 함께 공동 투여될 수 있다는 것이 언급된다. GIPR 결합 단백질과 함께 공동투여되는 화합물의 동일성 및 특성은 치료되거나 또는 개선될 병태의 특성에 의존할 것이다. GIPR 결합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물과 조합하여 투여될 수 있는 화합물 예의 비제한적 목록은 로지글리티존, 피올글리티존, 레파글리나이드, 나테글리티나이드, 메트포민, 엑세나타이드, 스티아글립틴, 프람린타이드, 글리피자이드, 글리메프리리데아카르보스 및 미글리톨을 포함한다.
또한 개시된 방법을 실행하기 위한 키트가 제공된다. 이러한 키트는 본 명세서에 제공된 펩타이드 또는 단백질을 암호화하는 핵산, 이러한 핵산을 포함하는 벡터 및 세포, 및 이러한 핵산-함유 화합물을 포함하는 약제학적 조성물을 포함하는 본 명세서에 기재된 것과 같은 약제학적 조성물을 포함할 수 있으며, 이는 멸균 용기에 제공될 수 있다. 선택적으로, 대사 장애의 치료에서 제공되는 약제학적 조성물을 사용하는 방법에 대한 설명서가 또한 포함될 수 있거나 또는 환자 또는 의학적 서비스 제공자에게 이용 가능하게 제조될 수 있다.
일 양상에서, 키트는 (a) 치료적 유효량의 GIPR 결합 단백질을 포함하는 약제학적 조성물; 및 (b) 약제학적 조성물에 대한 하나 이상의 용기를 포함한다. 이러한 키트는 또한 이의 사용을 위한 설명서를 포함할 수 있고; 설명서는 치료 중인 정확한 대사장애에 맞춤될 수 있다. 설명서는 키트에 제공되는 물질의 용도 및 특성을 기재할 수 있다. 특정 실시형태에서, 키트는 환자가 대사 장애, 예컨대 상승된 글루코스 수준, 상승된 인슐린 수준, 비만, 2형 당뇨병, 이상지질혈증 또는 당뇨병성 신경병증을 치료하기 위한 투여를 수행하기 위한 설명서를 포함한다.
설명서는 기재, 예컨대 종이 또는 플라스틱 등 상에 인쇄될 수 있고, 키트 용기 또는 이의 구성성분(예를 들어, 포장과 관련됨)의 라벨링 등에서 포장 삽입물로서 키트 내에 제공될 수 있다. 다른 실시형태에서, 설명서는 적합한 컴퓨터 판독 가능 저장 매체, 예를 들어, CD-ROM, 디스켓 등에 제공되는 전자적 저장 데이터 파일로서 제공된다. 또 다른 실시형태에서, 실제 설명서는 키트에 제공되지 않지만, 예컨대 인터넷을 거쳐서 원거리 공급원으로부터 설명서를 얻기 위한 수단이 제공된다. 본 실시형태의 예는 설명서를 볼 수 있고/있거나 설명서를 다운로드할 수 있는 웹 주소를 포함하는 키트이다.
종종 키트의 일부 또는 모든 구성성분은 멸균성을 유지하기 위한 적합한 패키징으로 포장되는 것이 바람직할 것이다. 예를 들어, 키트 구성성분의 일부 또는 모두의 멸균성을 추가로 보존하기 위해 키트 봉쇄 요소, 예를 들어, 박스 또는 유사한 구조가 기밀 용기일 수도 있고 또는 기밀 용기가 아닐 수도 있는 경우, 키트의 구성성분은 단일의, 용이하게 조절되는 단위를 생성하기 위한 키트 봉쇄 요소에 포장될 수 있다.
실시예 1
재료 및 방법--효모 발현
효모 발현된 분자 및 라이브러리의 작제에 gBlock 및 변성 코돈 프라이머(IDT DNA)를 사용하였다. 표준 PCR 및 오버랩 어셈블리 PCR을 Q5 HotStart 중합효소(NEB)를 사용하여 수행하였다. 효모 균주 BJ5464(ATCC)로의 전기천공에 의한 형질전환을 PCR 정제 키트(Qiagen)를 통해 미리 정제된 분해 벡터와 삽입물의 상동 재조합을 이용하여 수행하였다. 간략하게, BJ5464 세포를 YPD 한천 평판으로부터 채취하고, 30℃로 YPD 배지에서 밤새 성장시켰다. 세포를 이후 0.2의 출발 OD로 팽창시키고, 30℃에서 6 시간 동안 성장시켰다. 실온에서 펠릿화 및 재현탁 후, 10 mM 트리스, 100 mM LiOAc, 0.6 M 소르비톨, 10 mM DTT를 첨가하고, 이어서 220 rpm에서 약한 진탕과 함께 RT에서 30 분 동안 인큐베이션하였다. 세포를 펠릿화시키고, 차가운 1 M 소르비톨, 1 mM CaCl2에서 세척하고, 2×1010 개 세포/㎖에서 재현탁시켰다. 다음 설정을 이용하여 120 ㎕의 세포로 5 ㎕ 부피/큐벳에서 0.5 ㎍의 DNA를 전기천공하였다: 540 V; 25 uF; ∞ ohm. 세포를 2 ㎖의 YPD, 0.5 M 소르비톨, 0.5 mM CaCl2로 신속하게 구조하였다. 30℃에서 1 시간 회수 후, 세포를 류신 또는 우라실이 없는 SCD 덱스트로스 배지로 옮기고, 30℃에서 2 일 동안 계대시켰다. 발현된 Fab 분자의 유도를 SCD 갈락토스 배지로의 배지 변화를 통해 수행하여 Gal10 프로모터의 활성화를 가능하게 하였다. 세포를 20℃에서 48 시간 동안 유도하였다. 발현된 분자의 양을 측정하기 위해 Alexafluor 647 접합 항-huFab 항체를 이용하여 표면 발현된 분자를 평가하였다. 스트렙타비딘 PE 분자와 함께 바이오틴 접합 GIPR ECD 단편 21-129aa로 항원 결합을 측정하였다. BD Canto를 이용하여 형광을 측정하거나 AriaII FACS를 이용하여 분류하였다. 효모를 분류한 후, SCD-leu-ura 한천 평판 상에서 성장시켰다. 30℃에서 2 일 내지 3 일의 성장 후, 클론을 채취하고, SCD-leu-ura 배지에서 성장시켰다. Phire Plant Direct PCR(ThermoFisher)을 이용하여 효모 배양으로부터 PCR을 수행하였다. PCR 샘플을 이후 Genewiz에 의해 시퀀싱하였다.
분자 생물학/골든 게이트 어셈블리
시퀀싱을 위해 사용된 PCR 샘플을 또한 분자 클로닝을 위한 템플레이트로서 사용하였다. 상용성 클로닝 단부를 부가하기 위해 게이트 어셈블리(GGA) 전략에 PCR을 이용하였다. 간략하게, GGA는 다중 DNA 단편을 절단하고 매끄럽게 함께 결찰시키기 위해 II형 제한 효소에 의존적이다. 이 실시예에서, 다중 DNA 단편은 합성 핵산 서열(gBlock, Integrated DNA Technologies(코럴빌, IA)), 암호화 신호, 다른 gBlock 암호화 항-GIPR 가변 도메인; 파트 벡터로부터 방출된 항체 불변 도메인 단편; 및 발현 벡터 골격으로 이루어졌다. 표 9는 이러한 대표적인 단편을 나타낸 것이다.
[표 9]
GLP1-GIPR 융합 작제물을 형성하기 위해 어셈블링된 단편
Figure pct00173
GGA 반응은 10 ng의 파트1, 10 ng의 PCR 산물, 10 ng의 파트2, 10 ng의 발현 벡터, 1 ㎕의 10x 고속 분해 반응 완충액 + 0.5 mM ATP(Thermo Fisher(월섬, MA)), 0.5 ㎕의 고속분해 Esp3I(Thermo Fisher(월섬, MA)), 1 ㎕의 T4 DNA 리가제(5U/㎕, Thermo Fisher(월섬, MA)) 및 10 ㎕까지의 물로 구성되었다. 반응을 37℃에서 2분의 분해 단계 및 16℃에서 3분의 결찰 단계로 이루어진 15 회의 사이클에 걸쳐 수행하였다. 15 회 사이클에 이어서 최종 5분 37℃ 분해 반응 및 80℃에서의 5분 효소 불활성화 단계를 수행하였다. DNA 증폭을 화학적 적격 Top10 세포(Invitrogen)를 사용하여 수행하였다. 콜로니를 채취하고, 37℃에서 밤새 2XYT 배지에서 성장시킨 후, DNA를 추출하고, 터보 키트 QiaRobot(Qiagen)를 사용하여 정제하였다. DNA를 포유류 발현 전에 서열 확인하였다.
포유류 발현
단클론성 항체를 상응하는 cDNA로 현탁에 적합한 CHO-K1 세포에서 안정하게 발현시켰다. 제조업자의 프로토콜에 따라 리포펙타민 LTX(Thermo Fisher)를 사용하여 형질감염을 수행하였다. 간략하게, 총 2 ㎍의 포유류 발현 플라스미드 DNA를 1:1 중쇄/경쇄 비로 사용하였다. 각각, 플라스미드 DNA를 0.5 ㎖의 OPTI-MEM(Thermo Fisher)에 첨가하고, 혼합하였다. 별개의 튜브에서, 10 ㎕의 리포펙타민 LTX를 0.5 ㎖의 OPTI-MEM에 첨가하였다. 용액을 실온에서 5분 동안 인큐베이션하였다. 형질감염 복합체를 형성시키기 위해, 각각 DNA와 리포펙타민 LTX 혼합물을 합하고, 실온에서 추가 10분 동안 인큐베이션하였다.
대수기 CHO-K1 세포를 원심분리(5분 동안 1200 RPM 내지 1500 RPM)에 의해 펠릿화시키고, 1X PBS(Thermo Fisher)로 1회 세척하고, OPTI-MEM에서 1.5 내지 2 e6 생균/㎖에 재현탁시켰다. 각각의 형질감염을 위하여, 1 ㎖의 세척된 세포를 24 딥 웰 블록에서 형질감염 복합체에 첨가하였다. 플레이트를 36℃, 5% CO2에서 인큐베이션하고, 225 RPM에서 6 시간 동안 진탕시켰다. 형질감염을 중지시키기 위해, 2 ㎖의 성장 배지를 각 플라스크에 첨가하고, 48 시간 동안 인큐베이션하였다.
선별을 시작하기 위해, 48 시간의 형질감염 후 세포를 원심분리(5분 동안 1200 RPM 내지 1500 RPM)에 의해 펠릿화시키고, 배지를 4 ㎖의 항생제 보충 성장 배지(퓨로마이신 10 ㎎/ℓ/히그로마이신 600 ㎎/ℓ)로 교체하였다. 필요 시 배양액이 확실히 과성장하지 않도록(< 5 내지 6 e6 vc/㎖) 배양액을 희석하면서 세포 생존율 및 밀도가 회복될 때까지 선별 배지를 주 2 회 내지 3 회 바꿨다.
36℃의 진탕 플라스크에서 생성(100 ㎖)을 행하였다. 산물을 생성 배지에서 2 e6 vc/㎖로 시딩하였다. 컨디셔닝된 배지를 원심분리 및 이어서 여과(0.45 μm)에 의해 7 일째에 채취하였다.
정제
제1 컬럼으로서 1 ㎖ MabSelect SuRe(MSS) HiTrap(GE Healthcare Life Sciences) 및 제2 컬럼으로서 5 ㎖ 탈염 HiTrap(GE Healthcare Life Sciences)으로 AKTA 정제기(GE Healthcare Life Sciences(리틀 챌폰트, 버킹엄셔, UK)) 탠덤 액체 크로마토그래피 시스템을 사용하여 세포 배양 배지로부터 분자를 정제하였다. 배지를 MSS 컬럼 상에 바로 로딩한 후, 25 mM 트리스-HCl, 100 mM NaCl, pH 7.4의 8 컬럼 부피(CV)로 세척하고, 100 mM 아세트산의 2 CV로 용리시켰다. MSS 컬럼 용리액을 탈염 컬럼으로 자동 채널링하고, 여기서 단백질을 10 mM Na-아세테이트, 150 mM NaCl, pH 5.2의 4 CV에 걸쳐 등용매로 용리시켰다. 샘플을 3.0 ㎛ 유리 섬유/0.2 ㎛ Supor 멤브레인(Pall Corporation(포트 워싱턴, 뉴욕, USA))을 통해 멸균 여과하였다.
단백질 농도 측정
각각의 정제된 분자의 단백질 농도를 Multiskan GO 마이크로플레이트 분광광도계(Thermo Fisher Scientific(록퍼드, 일리노이, USA))를 사용하여 280 ㎚에서 UV 흡광도에 의해 측정하였다.
크기 배제 크로마토그래피 분석
ACQUITY UPLC 단백질 BEH SEC 컬럼, 200Å, 1.7 μm, 4.6 × 300 mm(Waters Corporation(밀퍼드, 매사추세츠, USA))을 사용하고 0.4 ㎖/분으로 100 mM NaH2PO4, 50 mM NaCl, 7.5% 에탄올, pH 6.9에서 작동시키고 Waters ACQUITY UPLC 시스템(Waters Corporation) 상에서 280 ㎚에서의 흡광도를 관찰하여 크기 배제 크로마토그래피에 의해 샘플을 분석하였다.
LCMS 방법
환원 LCMS 분석을 위하여, 20 ㎍의 물질을 8M 구아니딘 HCl/트리스 pH 8.0(Teknova(홀리스터, CA))에서 변성시키고, 50℃에서 20분 동안 10 mM DTT(EMD Millipore(다름슈타트, 독일))로 환원시켰다. 샘플을 트리플루오로아세트산으로 산성화시키고, 3 ㎍을 Waters Acquity HPLC(Waters Corporation(밀퍼드, MA))를 사용하여 Waters BEH 역상 C4 컬럼 상에 주입하였다. 컬럼 용리액을 Xevo QTOF 질량 분광계(Waters Corporation(밀퍼드, MA))의 전기분무 소스에 도입하고, 질량 스펙트럼을 수집하였다. 관련 스펙트럼을 Waters MassLynx 소프트웨어 패키지 내 MaxEnt 알고리즘을 이용하여 디콘볼팅하였다. LC 및 HC에 대하여 생성된 질량 스펙트럼을 각 쇄에 대하여 이론적으로 계산된 질량과 비교하고, 통과/실패로 나타냈다.
Tagg 방법:
Avacta, Optim-1000에서 단계식 열 풀림 및 응고 연구(Stepped Thermal Unfolding and Aggregation Study)를 수행함으로써 열 응고 개시 온도를 측정하였다. Optim 분석 소프트웨어(Igor 버전 6.31)를 사용하여 데이터 분석 및 Tagg 측정을 수행하였다. 1 ㎎/㎖ 초과의 농도를 갖는 샘플을 Tagg 분석 전에 제형 완충액에서 1.0 ㎎/㎖로 표준화시켰다. 20℃의 출발 온도 및 90℃의 정지 온도로 단계식 열 증감을 적용하였다. 온도 단계는 1℃이고, 온도 유지 시간은 30초였다. 380 ㎚의 중심 파장 및 250 ㎛의 슬릿으로 노출 시간은 500 ms였다.
cAMP 방법
방법
이 방법은 인간 GIPR 또는 사이노몰거스 원숭이 GIPR을 발현하는 HEK 293T 세포에서 cAMP의 정량 측정을 위해 의도된 것이다. GIP 결합은 GIPR 입체배좌 변화를 초래하는데, 이는 알데닐레이트 시클라제를 활성화하도록 G 단백질을 자극하여 ATP로부터 cAMP 생산을 야기한다. GIPR에 대한 항체 결합은 GIPR에 대한 GIP 결합을 막는다. 이는 cAMP 분석에 의해 측정 가능하다.
cAMP 분석은 GPCR에 의한 아데닐일 시클라제 활성의 조정 시 생산되는 cAMP를 측정하고자 고안된 HTRF 면역분석이다. 이 분석은 Eu3+-크립테이트로 표지된 cAMP-특이적 단클론성 항체 상의 결합 부위에 대한 세포에 의해 생산된 본래의 cAMP와 염료 d2로 표지된 cAMP 사이의 경쟁을 기초로 한다. Eu3+-크립테이트 접합 항체가 cAMP-d2 추적자에 결합되는 경우, 337 ㎚에서의 광 펄스는 Eu3+-크립테이트를 여기시킨다. 여기된 Eu3+ 크립테이트에 의해 방출된 에너지는 FRET에 의해 cAMP 추적자 상의 d2 분자로 전달되고, 이는 이후 665 ㎚에서 광을 방출한다. Eu3+-크립테이트로부터의 잔류 에너지는 620 ㎚에서 광을 생성시킬 것이다. 유리 cAMP의 부재에서, 최대 HTRF 신호가 달성된다. 자극된 세포에 의해 생산된 유리 cAMP는 항-cAMP Eu3+-크립테이트에 대한 결합에 대하여 cAMP-d2 추적자와 경쟁하여 HTRF 신호의 감소를 초래한다. 특정 신호(즉, 에너지 전달)는 샘플에서 cAMP의 농도에 반비례한다.
실험 설계
DMEM, 10% FBS, 1×소듐 피루베이트, 1×페니실린-스트렙토마이신-글루타민, 2 ㎍/㎖ 내지 5 ㎍/㎖의 퓨로마이신에서 세포를 유지시켰다. 실험 전, 세포를 DBPS로 세척하고, DPBS 중 0.5 mM EDTA로 해리시켰다.
GIP 반응을 확립하기 위해, GIP의 용액(H2O 중)을 제조하고, 3배 연속 희석하고(0.1% BSA를 갖는 햄스(Ham's) F-12), 96 웰 흑색 둥근 바닥 플레이트에서 30,000 개의 재조합 세포에 첨가하였다. 세포를 5% CO2, 37℃로 30분 동안 0.5 mM IBMX의 존재 하에서 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 25 ㎕의 d2-cAMP, 및 25 ㎕의 Eu3+-크립테이트-cAMP 항체를 첨가하고, 이어서 실온에서 1 시간 동안 인큐베이션하였다. 665 ㎚ 및 620 ㎚에서의 파장을 EnVision 멀티라벨 리더를 이용하여 측정하고, 665/620 비율을 계산하였다.
시험 품목 반응을 확립하기 위해, 항체 용액(10 mM 아세트산나트륨, 9% 수크로스, pH 5.2)을 제조하고, 3배 연속 희석하고(0.1% BSA를 갖는 햄스(Ham's) F-12), 96 웰 흑색 둥근 바닥 플레이트에서 30,000 개의 재조합 세포에 첨가하고, 세포를 5% CO2, 37℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. GIP를 50 pM의 최종 농도로 첨가하였다. 세포를 5% CO2, 37℃에서 30분 동안 0.5 mM IBMX의 존재 하에서 인큐베이션하였다. 인큐베이션 후, 25 ㎕의 d2-cAMP, 및 25 ㎕의 Eu3+-크립테이트-cAMP 항체를 첨가하고, 이어서 실온에서 1 시간 동안 인큐베이션하였다. 665 ㎚ 및 620 ㎚에서의 파장을 EnVision 멀티라벨 리더를 이용하여 측정하고, 665/620 비율을 계산하였다.
cAMP 수준(665/620 비율)에 대한 2개의 반복 값의 평균에 대해 가로 좌표에 GIP의 농도 및 항체를 플롯팅함으로써 그래프를 생성시켰다. 데이터 점을 이후 반응에 대한 로그(작용제) - 가변 기울기 GraphPad Prism으로 피팅하여 위, 아래, 경사 기울기 및 EC50과 IC50 둘 모두에 대한 피트 값을 제공하였다(표 10).
비아코어를 이용한 2G10 친화도 성숙 히트의 변이체에 대한 GIPR 결합 확인
센서 칩 표면의 장비, 시약 및 제조:
비아코어 T200, 비아코어 시리즈 S-CM5 센서 칩, 아민 커플링 키트, 계면활성제 P-20, 10 mM 아세트산나트륨, pH 4.0, 및 10 mM 글리신 pH 1.5는 GE(피츠버그, PA)로부터의 것이었다. 인산염-완충 식염수(PBS, 1X, 염화칼슘 부재, 염화 마그네슘 부재)는 Thermo Fisher Scientific(월섬, MA)으로부터의 것이었다. 소 혈청 알부민(BSA, 분획 V, IgG 유리)는 Sigma-Aldrich Corp.(세인트 루이스, MO)으로부터의 것이었다. 염소-항-huFc 항체는 Jackson ImmunoResearch Inc.(웨스트 그로브, PA)로부터의 것이었다.
센서 칩 표면의 제조
제조업자의 설명서에 따라 S-CM5 센서 칩 표면에 대한 염소-항-huFc 항체의 고정화를 수행하였다. 비아코어 기기 실행 완충제는 0.005% P20/PBS 1X, pH 7.4, 염화칼슘 부재, 염화마그네슘 부재였다. 간략하게, 0.2 M N-에틸-N'-(디메틸아미노프로필) 카보다이이미드(EDC) 및 0.05 M N-하이드록시숙신이미드(NHS)를 함유하는 60 ㎕의 혼합물을 주사함으로써 센서 칩 표면 상의 카복실기를 활성화시켰다. 염소-항-huFc 항체를 20 ㎍/㎖로 10 mM 아세트산나트륨, pH 4.0에서 희석시키고, 30 ㎕/분으로 6분 동안 활성화된 칩 표면 위로 주사하였다. 60㎕의 1 M 에탄올아민을 주사함으로써 표면 상의 과량의 반응기를 비활성화시켰다. 최종 고정 수준은 대략 8000 공명 단위(RU)였다.
비아코어 T200에 의해 고정된 염소 항-huFc 항체 표면 상에서 결합 분석을 수행하였다. 25℃에서 실험을 수행하였다. 기기 실행 완충제는 0.005% P20/PBS였다. 유세포 통로 1-4에 대한 표준 아민 커플링을 통해 센서 칩 표면에 염소 항-huFc 포획 항체를 공유 부착하였다. 항-huGIPR 항체를 샘플 완충제(0.1 ㎎/㎖ BSA, 0.005% P20, PBS) 중에서 대략 10 nM로 희석시키고, 이후 유세포 통로 2, 3, 4에 포획하였다. 유세포 통로 1은 항-huGIPR 항체의 주사 없이 블랭크 기준 표면이었다. 포획된 항체 반응 범위는 대략 250 RU였다. 그 후에, 3분 동안 유속 50 ㎕/분으로 염소 항-huFc 항체 포획 항-huGIPR 항체 위에 200 nM huGIPR ECD를 주사하였다. 10분 해리 후에, 각각의 표면을 10 mM 글리신, pH 1.5를 30 초 동안 2회 주사함으로써 재생시켰다. 비아코어 T200 평가 소프트웨어(v. 2.0)를 사용하여 센소그램을 분석하였다. 각각의 항체에 대한 ks(1/s)는 표 10에 나타나 있다.
[표 10]
친화도-성숙 항-GIPR 항체의 성질
Figure pct00174
Figure pct00175
Figure pct00176
항체 2G10.248을 추가로 친화도 성숙시켜 항체 iPS:529381, iPS:529382, iPS:529397, iPS:529399, iPS:529400, iPS:529403, iPS:529404, 및 iPS:529405를 생성시켰다. 이러한 항체들 모두는 중쇄의 위치 M252(M252Y), S254(S254T), 및 T256(T256E)에서 반감기 연장 YTE 돌연변이를 함유한다. 또한, 항체 iPS:529397, iPS:529399, iPS:529400, iPS:529403, iPS:529404, 및 iPS:529405 모두는 또한 경쇄에서 점도 감소 돌연변이 M4L, V13L, A76D, S95S, Q97E, S98P를 함유한다.
Figure pct00177

Claims (66)

  1. 대사 장애를 갖는 대상체를 치료하는 방법으로서, 대상체에게 GIPR의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 단백질에 특이적으로 결합하는 치료적 유효량의 항원 결합 단백질을 투여하는 단계를 포함하는, 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 대사 장애는 글루코스 대사의 장애인, 방법.
  3. 제2항에 있어서, 상기 글루코스 대사 장애는 고혈당증을 포함하고, 상기 투여는 상기 대상체에서 혈장 글루코스를 감소시키는, 방법.
  4. 제2항에 있어서, 상기 글루코스 대사 장애는 고인슐린혈증을 포함하고, 상기 투여는 상기 대상체에서 혈장 인슐린을 감소시키는, 방법.
  5. 제2항에 있어서, 상기 글루코스 대사 장애는 당불내성을 포함하고, 상기 투여는 상기 대상체에서 내당능을 증가시키는, 방법.
  6. 제2항에 있어서, 상기 글루코스 대사 장애는 인슐린 내성을 포함하고, 상기 투여는 상기 대상체에서 인슐린 내성을 감소시키는, 방법.
  7. 제2항에 있어서, 상기 글루코스 대사 장애는 진성 당뇨병을 포함하는, 방법.
  8. 제2항에 있어서, 상기 대상체는 비만인, 방법.
  9. 제8항에 있어서, 상기 투여는 상기 대상체에서 체중을 감소시키는, 방법.
  10. 제8항에 있어서, 상기 투여는 상기 대상체에서 체중 증가를 감소시키는, 방법.
  11. 제8항에 있어서, 상기 투여는 상기 대상체에서 지방량을 감소시키는, 방법.
  12. 제8항에 있어서, 상기 글루코스 대사 장애는 인슐린 내성을 포함하고, 상기 투여는 상기 대상체에서 인슐린 내성을 감소시키는, 방법.
  13. 제8항에 있어서, 상기 대상체는 간 지방증이 증가되었고, 그리고 상기 투여는 상기 대상체에서 간 지방증을 감소시키는, 방법.
  14. 제8항에 있어서, 상기 대상체는 간 지방 함량이 증가되었고, 그리고 상기 투여는 상기 대상체에서 간 지방 함량을 감소시키는, 방법.
  15. 제1항에 있어서, 상기 대상체는 포유류인, 방법.
  16. 제1항에 있어서, 상기 대상체는 인간인, 방법.
  17. 제1항에 있어서, 상기 투여는 비경구 주사에 의하는, 방법.
  18. 제1항에 있어서, 상기 투여는 피하 주사에 의하는, 방법.
  19. 인간 위 저해 펩타이드 수용체(GIPR) 폴리펩타이드에 특이적으로 결합하는 단리된 항원 결합 단백질.
  20. 제19항에 있어서, 상기 인간 GIPR은 서열번호 1201, 서열번호 1203 및 서열번호 1205로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 서열을 갖는, 단리된 항원 결합 단백질.
  21. 제20항에 있어서, 상기 항원 결합 단백질은 단클론성 항체, 다클론성 항체, 재조합 항체, 인간 항체, 인간화된 항체, 키메라 항체, 다중 특이성 항체, 또는 이들의 항체 단편인, 단리된 항원 결합 단백질.
  22. 제21항에 있어서, 상기 항체 단편은 Fab 단편, Fab' 단편, 또는 F(ab')2 단편인, 단리된 항원 결합 단백질.
  23. 제21항에 있어서, 상기 항원 결합 단백질은 인간 항체인, 단리된 항원 결합 단백질.
  24. 제21항에 있어서, 상기 항원 결합 단백질은 단클론성 항체인, 단리된 항원 결합 단백질.
  25. 제21항에 있어서, 상기 항원 결합 단백질은 IgG1-, IgG2- IgG3- 또는 IgG4-형인, 단리된 항원 결합 단백질.
  26. 제25항에 있어서, 상기 항원 결합 단백질은 IgG1- 또는 IgG2-형인, 단리된 항원 결합 단백질.
  27. 제21항에 있어서, 상기 항원 결합 단백질은 표지기에 결합된, 단리된 항원 결합 단백질.
  28. 제21항에 있어서, 상기 항원 결합 단백질은 인간 GIPR의 세포외 부분에 대한 GIP의 결합을 저해하는, 단리된 항원 결합 단백질.
  29. 제21항에 있어서, 상기 항원 결합 단백질은 항체 또는 이의 단편이고, 그리고 상기 항체는 CDRL1, CDRL2, CDRL3, CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하며, 상기 CDRL1은 서열번호 4, 10, 16, 22, 28, 34, 40, 46, 52, 58, 64, 70, 76, 82, 88, 94, 100, 106, 112, 118, 124, 130, 136, 142, 148, 154, 160, 166, 172, 178, 184, 190, 196, 202, 208, 214, 220, 226, 232, 238, 244, 250, 256, 262, 268, 274, 280, 286, 292, 298, 304, 310, 316, 322, 328, 334, 340, 346, 352, 358, 1290, 1300, 1310, 1320, 1330, 1340, 및 1350으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하고; 상기 CDRL2는 서열번호 5, 11, 17, 23, 29, 35, 41, 47, 53, 59, 65, 71, 77, 83, 89, 95, 101, 107, 113, 119, 125, 131, 137, 143, 149, 155, 161, 167, 173, 179, 185, 191, 197, 203, 209, 215, 221, 227, 233, 239, 245, 251, 257, 263, 269, 275, 281, 287, 293, 299, 305, 311, 317, 323, 329, 335, 341, 347, 353, 359, 1291, 1301, 1311, 1321, 1331, 1341, 및 1351로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하며; 상기 CDRL3은 서열번호 6, 12, 18, 24, 30, 36, 42, 48, 54, 60, 66, 72, 78, 84, 90, 96, 102, 108, 114, 120, 126, 132, 138, 144, 150, 156, 162, 168, 174, 180, 186, 192, 198, 204, 210, 216, 222, 228, 234, 240, 246, 252, 258, 264, 270, 276, 282, 288, 294, 300, 306, 312, 318, 324, 330, 336, 342, 348, 354, 360, 1292, 1302, 1312, 1322, 1332, 1342, 및 1352로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하고; 상기 CDRH1은 서열번호 364, 370, 376, 382, 388, 394, 400, 406, 412, 418, 424, 430, 436, 442, 448, 454, 460, 466, 472, 478, 484, 490, 496, 502, 508, 514, 520, 526, 532, 538, 544, 550, 556, 562, 568, 574, 580, 586, 592, 598, 604, 610, 616, 622, 628, 634, 640, 646, 652, 658, 664, 670, 676, 682, 688, 694, 700, 706, 712, 718, 1293, 1303, 1313, 1323, 1333, 1343, 및 1353으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하며; 상기 CDRH2는 서열번호 365, 371, 377, 383, 389, 395, 401, 407, 413, 419, 425, 431, 437, 443, 449, 455, 461, 467, 473, 479, 485, 491, 497, 503, 509, 515, 521, 527, 533, 539, 545, 551, 557, 563, 569, 575, 581, 587, 593, 599, 605, 611, 617, 623, 629, 635, 641, 647, 653, 659, 665, 671, 677, 683, 689, 695, 701, 707, 713, 719, 1294, 1304, 1314, 1324, 1334, 1344, 및 1354로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하고; 그리고 상기 CDRH3은 서열번호 366, 372, 378, 384, 390, 396, 402, 408, 414, 420, 426, 432, 438, 444, 450, 456, 462, 468, 474, 480, 486, 492, 498, 504, 510, 516, 522, 528, 534, 540, 546, 552, 558, 564, 570, 576, 582, 588, 594, 600, 606, 612, 618, 624, 630, 636, 642, 648, 654, 660, 666, 672, 678, 684, 690, 696, 702, 708, 714, 720, 1295, 1305, 1315, 1325, 1335, 1345, 및 1355로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하는, 단리된 항원 결합 단백질.
  30. 제21항에 있어서, 상기 항원 결합 단백질은 항체 또는 이의 단편이고, 그리고 상기 항체는 CDRL1, CDRL2, CDRL3, CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3을 포함하고, 각각의 CDRL1, CDRL2, CDRL3, CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3은 각각 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 364, 서열번호 365, 및 서열번호 366; 서열번호 10, 서열번호 11, 서열번호 12, 서열번호 370, 서열번호 371, 및 서열번호 372; 서열번호 16, 서열번호 17, 서열번호 18, 서열번호 376, 서열번호 377, 및 서열번호 378; 서열번호 22, 서열번호 23, 서열번호 24, 서열번호 382, 서열번호 383, 및 서열번호 384; 서열번호 28, 서열번호 29, 서열번호 30, 서열번호 388, 서열번호 389, 및 서열번호 390; 서열번호 34, 서열번호 35, 서열번호 36, 서열번호 394, 서열번호 395, 및 서열번호 396; 서열번호 40, 서열번호 41, 서열번호 42, 서열번호 400, 서열번호 401, 및 서열번호 402; 서열번호 46, 서열번호 47, 서열번호 48, 서열번호 406, 서열번호 407, 및 서열번호 408; 서열번호 52, 서열번호 53, 서열번호 54, 서열번호 412, 서열번호 413, 및 서열번호 414; 서열번호 58, 서열번호 59, 서열번호 60, 서열번호 418, 서열번호 419, 및 서열번호 420; 서열번호 64, 서열번호 65, 서열번호 66, 서열번호 424, 서열번호 425, 및 서열번호 426; 서열번호 70, 서열번호 71, 서열번호 72, 서열번호 430, 서열번호 431, 및 서열번호 432; 서열번호 76, 서열번호 77, 서열번호 78, 서열번호 436, 서열번호 437, 및 서열번호 438; 서열번호 82, 서열번호 83, 서열번호 84, 서열번호 442, 서열번호 443, 및 서열번호 444; 서열번호 88, 서열번호 89, 서열번호 90, 서열번호 448, 서열번호 449, 및 서열번호 450; 서열번호 94, 서열번호 95, 서열번호 96, 서열번호 454, 서열번호 455, 및 서열번호 456; 서열번호 100, 서열번호 101, 서열번호 102, 서열번호 460, 서열번호 461, 및 서열번호 462; 서열번호 106, 서열번호 107, 서열번호 108, 서열번호 466, 서열번호 467, 및 서열번호 468; 서열번호 112, 서열번호 113, 서열번호 114, 서열번호 472, 서열번호 473, 및 서열번호 474; 서열번호 118, 서열번호 119, 서열번호 120, 서열번호 478, 서열번호 479, 및 서열번호 480; 서열번호 124, 서열번호 125, 서열번호 126, 서열번호 484, 서열번호 485, 및 서열번호 486; 서열번호 130, 서열번호 131, 서열번호 132, 서열번호 490, 서열번호 491, 및 서열번호 492; 서열번호 136, 서열번호 137, 서열번호 138, 서열번호 496, 서열번호 497, 및 서열번호 498; 서열번호 142, 서열번호 143, 서열번호 144, 서열번호 502, 서열번호 503, 및 서열번호 504; 서열번호 148, 서열번호 149, 서열번호 150, 서열번호 508, 서열번호 509, 및 서열번호 510; 서열번호 154, 서열번호 155, 서열번호 156, 서열번호 514, 서열번호 515, 및 서열번호 516; 서열번호 160, 서열번호 161, 서열번호 162, 서열번호 520, 서열번호 521, 및 서열번호 522; 서열번호 166, 서열번호 167, 서열번호 168, 서열번호 526, 서열번호 527, 및 서열번호 528; 서열번호 172, 서열번호 173, 서열번호 174, 서열번호 532, 서열번호 533, 및 서열번호 534; 서열번호 178, 서열번호 179, 서열번호 180, 서열번호 538, 서열번호 539, 및 서열번호 540; 서열번호 184, 서열번호 185, 서열번호 186, 서열번호 544, 서열번호 545, 및 서열번호 546; 서열번호 190, 서열번호 191, 서열번호 192, 서열번호 550, 서열번호 551, 및 서열번호 552; 서열번호 196, 서열번호 197, 서열번호 198, 서열번호 556, 서열번호 557, 및 서열번호 558; 서열번호 202, 서열번호 203, 서열번호 204, 서열번호 562, 서열번호 563, 및 서열번호 564; 서열번호 208, 서열번호 209, 서열번호 210, 서열번호 568, 서열번호 569, 및 서열번호 570; 서열번호 214, 서열번호 215, 서열번호 216, 서열번호 574, 서열번호 575, 및 서열번호 576; 서열번호 220, 서열번호 221, 서열번호 222, 서열번호 580, 서열번호 581, 및 서열번호 582; 서열번호 226, 서열번호 227, 서열번호 228, 서열번호 586, 서열번호 587, 및 서열번호 588; 서열번호 232, 서열번호 233, 서열번호 234, 서열번호 592, 서열번호 593, 및 서열번호 594; 서열번호 238, 서열번호 239, 서열번호 240, 서열번호 598, 서열번호 599, 및 서열번호 600; 서열번호 244, 서열번호 245, 서열번호 246, 서열번호 604, 서열번호 605, 및 서열번호 606; 서열번호 250, 서열번호 251, 서열번호 252, 서열번호 610, 서열번호 611, 및 서열번호 612; 서열번호 256, 서열번호 257, 서열번호 258, 서열번호 616, 서열번호 617, 및 서열번호 618; 서열번호 262, 서열번호 263, 서열번호 264, 서열번호 622, 서열번호 623, 및 서열번호 624; 서열번호 268, 서열번호 269, 서열번호 270, 서열번호 628, 서열번호 629, 및 서열번호 630; 서열번호 274, 서열번호 275, 서열번호 276, 서열번호 634, 서열번호 635, 및 서열번호 636; 서열번호 280, 서열번호 281, 서열번호 282, 서열번호 640, 서열번호 641, 및 서열번호 642; 서열번호 286, 서열번호 287, 서열번호 288, 서열번호 646, 서열번호 647, 및 서열번호 648; 서열번호 292, 서열번호 293, 서열번호 294, 서열번호 652, 서열번호 653, 및 서열번호 654; 서열번호 298, 서열번호 299, 서열번호 300, 서열번호 658, 서열번호 659, 및 서열번호 660; 서열번호 304, 서열번호 305, 서열번호 306, 서열번호 664, 서열번호 665, 및 서열번호 666; 서열번호 310, 서열번호 311, 서열번호 312, 서열번호 670, 서열번호 671, 및 서열번호 672; 서열번호 316, 서열번호 317, 서열번호 318, 서열번호 676, 서열번호 677, 및 서열번호 678; 서열번호 322, 서열번호 323, 서열번호 324, 서열번호 682, 서열번호 683, 및 서열번호 684; 서열번호 328, 서열번호 329, 서열번호 330, 서열번호 688, 서열번호 689, 및 서열번호 690; 서열번호 334, 서열번호 335, 서열번호 336, 서열번호 694, 서열번호 695, 및 서열번호 696; 서열번호 340, 서열번호 341, 서열번호 342, 서열번호 700, 서열번호 701, 및 서열번호 702; 서열번호 346, 서열번호 347, 서열번호 348, 서열번호 706, 서열번호 707, 및 서열번호 708; 서열번호 352, 서열번호 353, 서열번호 354, 서열번호 712, 서열번호 713, 및 서열번호 714; 서열번호 358, 서열번호 359, 서열번호 360, 서열번호 718, 서열번호 719, 및 서열번호 720; 서열번호 1290, 서열번호 1291, 서열번호 1292, 서열번호 1293, 서열번호 1294, 및 서열번호 1295; 서열번호 1300, 서열번호 1301, 서열번호 1302, 서열번호 1303, 서열번호 1304, 및 서열번호 1305; 서열번호 1310, 서열번호 1311, 서열번호 1312, 서열번호 1313, 서열번호 1314, 및 서열번호 1315; 서열번호 1320, 서열번호 1321, 서열번호 1322, 서열번호 1323, 서열번호 1324, 및 서열번호 1325; 서열번호 1330, 서열번호 1331, 서열번호 1332, 서열번호 1333, 서열번호 1334, 및 서열번호 1335; 서열번호 1340, 서열번호 1341, 서열번호 1342, 서열번호 1343, 서열번호 1344, 및 서열번호 1345; 서열번호 1350, 서열번호 1351, 서열번호 1352, 서열번호 1353, 서열번호 1354, 및 서열번호 1355; 및 서열번호 1360, 서열번호 1361, 서열번호 1362, 서열번호 1363, 서열번호 1364, 및 서열번호 1365로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하는, 단리된 항원 결합 단백질.
  31. 제21항에 있어서, 상기 항원 결합 단백질은 항체 또는 이의 단편이고, 그리고 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 723, 727, 731, 735, 739, 743, 747, 751, 755, 759, 763, 767, 771, 775, 779, 783, 787, 791, 795, 799, 803, 807, 811, 815, 819, 823, 827, 831, 835, 839, 843, 847, 851, 855, 859, 863, 867, 871, 875, 879, 883, 887, 891, 895, 899, 903, 907, 911, 915, 919, 923, 927, 931, 935, 939, 943, 947, 951, 955, 959, 1286, 1296, 1306, 1316, 1326, 1336, 1346, 및 1356으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 724, 728, 732, 736, 740, 744, 748, 752, 756, 760, 764, 768, 772, 776, 780, 784, 788, 792, 796, 800, 804, 808, 812, 816, 820, 824, 828, 832, 836, 840, 844, 848, 852, 856, 860, 864, 868, 872, 876, 880, 884, 888, 892, 896, 900, 904, 908, 912, 916, 920, 924, 928, 932, 936, 940, 944, 948, 952, 956, 960, 1287, 1297, 1307, 1317, 1327, 1337, 1347, 및 1357로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 단리된 항원 결합 단백질.
  32. 제21항에 있어서, 상기 항원 결합 단백질은 항체 또는 이의 단편이고, 그리고 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 723을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 724를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 727를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 728를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 731을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 732을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 735를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 736을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 739를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 740를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 743을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 744를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 747을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 748를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 751을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 752를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 755를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 756을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 759을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 760을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 763을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 764를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 767를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 768를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 771을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 772을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 775를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 776을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 779를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 780를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 783을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 784를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 787을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 788를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 791을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 792를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 795를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 796을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 799을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 800을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 803을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 804를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 807를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 808를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 811을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 812을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 815를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 816을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 819를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 820를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 823을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 824를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 827을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 828를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 831을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 832를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 835를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 836을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 839을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 840을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 843을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 844를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 847를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 848를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 851을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 852을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 855를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 856을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 859를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 860를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 863을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 864를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 867을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 868를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 871을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 872를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 875를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 876을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 879을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 880을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 883을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 884를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 887를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 888를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 891을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 892을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 895를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 896을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 899를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 900를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 903을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 904를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 907을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 908를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 911을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 912를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 915를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 916을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 919을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 920을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 923을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 924를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 927를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 928를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 931을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 932을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 935를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 936을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 939를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 940를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 943을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 944를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 947을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 948를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 951을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 952를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 955를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 956을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 959을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 960을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 1286을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 1287을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 1296을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 1297를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 1306을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 1307을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 1316을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 1317을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 1326을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 1327를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 1336을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 1337을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 1346을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 1347를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 1356을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 1357를 포함하는 중쇄 가변 영역으로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역의 조합을 포함하는, 단리된 항원 결합 단백질.
  33. 제21항에 있어서, 상기 항원 결합 단백질은 항체이며, 그리고 상기 항체는 서열번호 963, 967, 971, 975, 979, 983, 987, 991, 995, 999, 1003, 1007, 1011, 1015, 1019, 1023, 1027, 1031, 1035, 1039, 1043, 1047, 1051, 1055, 1059, 1063, 1067, 1071, 1075, 1079, 1083, 1087, 1091, 1095, 1099, 1103, 1107, 111로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 964, 968, 972, 976, 980, 984, 988, 992, 996, 1000, 1004, 1008, 1012, 1016, 1020, 1024, 1028, 1032, 1036, 1040, 1044, 1048, 1052, 1056, 1060, 1064, 1068, 1072, 1076, 1080, 1084, 1088, 1092, 1096, 1100, 1104, 1108, 1112, 1116, 1120, 1124, 1128, 1132, 1136, 1140, 1144, 1148, 1152, 1156, 1160, 1164, 1168, 1172, 1176, 1180, 1184, 1188, 1192, 1196, 1200, 1289, 1299, 1309, 1319, 1329, 1339, 1349, 및 1359로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는, 단리된 항원 결합 단백질.
  34. 제21항에 있어서, 상기 항원 결합 단백질은 항체이고, 그리고 상기 항체는 서열번호 963을 포함하는 경쇄 및 서열번호 964를 포함하는 중쇄; 서열번호 967을 포함하는 경쇄 및 서열번호 968을 포함하는 중쇄; 서열번호 971을 포함하는 경쇄 및 서열번호 972를 포함하는 중쇄; 서열번호 975를 포함하는 경쇄 및 서열번호 976을 포함하는 중쇄; 서열번호 979를 포함하는 경쇄 및 서열번호 980을 포함하는 중쇄; 서열번호 983을 포함하는 경쇄 및 서열번호 984를 포함하는 중쇄; 서열번호 987을 포함하는 경쇄 및 서열번호 988을 포함하는 중쇄; 서열번호 991을 포함하는 경쇄 및 서열번호 992를 포함하는 중쇄; 서열번호 995를 포함하는 경쇄 및 서열번호 996을 포함하는 중쇄; 서열번호 999를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1000을 포함하는 중쇄; 서열번호 1003을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1004를 포함하는 중쇄; 서열번호 1007을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1008을 포함하는 중쇄; 서열번호 1011을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1012를 포함하는 중쇄; 서열번호 1015를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1016을 포함하는 중쇄; 서열번호 1019를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1020을 포함하는 중쇄; 서열번호 1023을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1024를 포함하는 중쇄; 서열번호 1027을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1028을 포함하는 중쇄; 서열번호 1031을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1032를 포함하는 중쇄; 서열번호 1035를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1036을 포함하는 중쇄; 서열번호 1039를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1040을 포함하는 중쇄; 서열번호 1043을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1044를 포함하는 중쇄; 서열번호 1047을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1048을 포함하는 중쇄; 서열번호 1051을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1052를 포함하는 중쇄; 서열번호 1055를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1056을 포함하는 중쇄; 서열번호 1059를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1060을 포함하는 중쇄; 서열번호 1063을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1064를 포함하는 중쇄; 서열번호 1067을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1068을 포함하는 중쇄; 서열번호 1071을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1072를 포함하는 중쇄; 서열번호 1075를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1076을 포함하는 중쇄; 서열번호 1079를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1080을 포함하는 중쇄; 서열번호 1083을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1084를 포함하는 중쇄; 서열번호 1087을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1088을 포함하는 중쇄; 서열번호 1091을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1092를 포함하는 중쇄; 서열번호 1095를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1096을 포함하는 중쇄; 서열번호 1099를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1100을 포함하는 중쇄; 서열번호 1103을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1104를 포함하는 중쇄; 서열번호 1107을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1108을 포함하는 중쇄; 서열번호 1111을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1112를 포함하는 중쇄; 서열번호 1115를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1116을 포함하는 중쇄; 서열번호 1119를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1120을 포함하는 중쇄; 서열번호 1123을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1124를 포함하는 중쇄; 서열번호 1127을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1128을 포함하는 중쇄; 서열번호 1131을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1132를 포함하는 중쇄; 서열번호 1135를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1136을 포함하는 중쇄; 서열번호 1139를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1140을 포함하는 중쇄; 서열번호 1143을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1144를 포함하는 중쇄; 서열번호 1147을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1148을 포함하는 중쇄; 서열번호 1151을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1152를 포함하는 중쇄; 서열번호 1155를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1156을 포함하는 중쇄; 서열번호 1159를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1160을 포함하는 중쇄; 서열번호 1163을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1164를 포함하는 중쇄; 서열번호 1167을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1168을 포함하는 중쇄; 서열번호 1171을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1172를 포함하는 중쇄; 서열번호 1175를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1176을 포함하는 중쇄; 서열번호 1179를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1180을 포함하는 중쇄; 서열번호 1183을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1184를 포함하는 중쇄; 서열번호 1187을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1188을 포함하는 중쇄; 서열번호 1191을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1192를 포함하는 중쇄; 서열번호 1195를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1196을 포함하는 중쇄; 서열번호 1199를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1200을 포함하는 중쇄; 서열번호 1288를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1289를 포함하는 중쇄; 서열번호 1298을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1299을 포함하는 중쇄; 서열번호 1308을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1309를 포함하는 중쇄; 서열번호 1318을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1319를 포함하는 중쇄; 서열번호 1328를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1329을 포함하는 중쇄; 서열번호 1338을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1339을 포함하는 중쇄; 서열번호 1348을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1349을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 1358를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1359를 포함하는 중쇄로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 및 중쇄의 조합을 포함하는, 단리된 항원 결합 단백질.
  35. 제29항 내지 제34항 중 어느 한 항에 따른 항체 또는 이의 단편을 암호화하는 핵산 분자.
  36. 제35항에 있어서, 상기 핵산 분자는 제어 서열에 작동 가능하게 연결된, 핵산 분자.
  37. 제36항에 따른 핵산 분자를 포함하는 벡터.
  38. 제37항에 따른 핵산 분자를 포함하는 숙주 세포.
  39. 제38항의 숙주 세포에 의해 생성된 항체 또는 이의 단편.
  40. 제29항 내지 제34항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 단편의 제조 방법으로서, 상기 항체를 분비하는 숙주 세포로부터 상기 항체 또는 이의 단편을 제조하는 단계를 포함하는, 방법.
  41. 제29항 내지 제34항 중 어느 한 항의 적어도 하나의 항체 또는 이의 단편, 및 약제학적으로 허용 가능한 부형제를 포함하는 약제학적 조성물.
  42. 세포외 부분에 대한 결합에 대해 제29항 내지 제34항 중 어느 한 항의 항체 또는 이의 단편과 경쟁하는 단리된 항원 결합 단백질.
  43. GIPR의 아미노산 서열에 대해 적어도 90%의 아미노산 서열 동일성을 갖는 아미노산 서열을 갖는 단백질에 특이적으로 결합하는 치료적 유효량의 GLP-1 수용체 작용제 및 치료적 유효량의 GIPR 길항제를 포함하는 조성물.
  44. 제43항에 있어서, GLP-1 수용체 작용제 대 GIPR 길항제의 몰비는 약 1:1 내지 1:110, 1:1 내지 1:100, 1:1 내지 1:75, 1:1 내지 1:50, 1:1 내지 1:25, 1:1 내지 1:10, 1:1 내지 1:5, 및 1:1인, 조성물.
  45. 제43항에 있어서, GIPR 길항제 대 GLP-1 수용체 작용제의 몰비는 약 1:1 내지 1:110, 1:1 내지 1:100, 1:1 내지 1:75, 1:1 내지 1:50, 1:1 내지 1:25, 1:1 내지 1:10, 및 1:1 내지 1:5인, 조성물.
  46. 제43항에 있어서, 상기 GLP-1 수용체 작용제는 약 1:1.5 내지 1:150, 바람직하게는 1:2 내지 1:50의 치료적으로 유효한 몰비에서 GIPR 길항제와 조합하여 사용되는, 조성물.
  47. 제43항에 있어서, 상기 GLP-1 수용체 작용제 및 상기 GIPR 길항제는 병태 및/또는 질환을 치료하기 위해 필요한 각각의 화합물 단독의 용량보다 적어도 약 1.1 내지 1.4, 1.5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 또는 10배 더 낮은 용량으로 존재하는, 조성물.
  48. 제43항에 있어서, 상기 GLP-1 수용체 작용제는 GLP-1(7-37) 또는 GLP-1(7-37) 유사체인, 조성물.
  49. 제48항에 있어서, 상기 GLP-1 수용체 작용제는 엑세나타이드, 리라글루타이드, 릭시세나타이드, 알비글루타이드, 둘라글루타이드, 세마글루타이드 및 타스포글루타이드로 이루어진 군으로부터 선택된, 조성물.
  50. 제43항에 있어서, 상기 GLP-1 수용체 작용제는 GLP-1(7-37)(서열번호 1244); GLP-1(7-36)-NH2　(서열번호 1245); 리라글루타이드; 알비글루타이드; 타스포글루타이드; 둘라글루타이드, 세마글루타이드; LY2428757; 데스아미노-His7,Arg26,Lys34(Nε-(γ-Glu(N-α-헥사데칸오일)))-GLP-1(7-37)(서열번호 1282로서 개시된 코어 펩타이드); 데스아미노-His7,Arg26,Lys34(Nε-옥탄오일)-GLP-1(7-37)(서열번호 1283); Arg26,34,Lys38(Nε-(ω-카복시펜타데칸오일))-GLP-1(7-38)(서열번호 1284); Arg26,34,Lys36(Nε-(γ-Glu(N-α-헥사데칸오일)))-GLP-1(7-36)(서열번호 1285에 개시된 바와 같은 코어 펩타이드); Aib8 , 35,Arg26 , 34,Phe31-GLP-1(7-36))(서열번호 1246); HXaa8EGTFTSDVSSYLEXaa22Xaa23AAKEFIXaa30WLXaa33Xaa34G Xaa36Xaa37; (Xaa8은 A, V 또는 G이고; Xaa22는 G, K, 또는 E이며; Xaa23 　은 Q 또는 K이고; Xaa30은 A 또는 E이며; Xaa33은 V 또는 K이고; Xaa34 　는 K, N, 또는 R이며; Xaa36은 R 또는 G이고; 그리고 Xaa37은 G, H, P 또는 없음)(서열번호 1247); Arg34-GLP-1(7-37)(서열번호 1248); Glu30-GLP-1(7-37)(서열번호 1249); Lys22-GLP-1(7-37)(서열번호 1250); Gly8,36,Glu22-GLP-1(7-37)(서열번호 1251); Val8,Glu22,Gly36-GLP-1(7-37)(서열번호 1252); Gly8 , 36,Glu22,Lys33,Asn34-GLP-1(7-37)(서열번호 1253); Val8,Glu22,Lys33,Asn34,Gly36-GLP-1(7-37)(서열번호 1254); Gly8 , 36,Glu22,Pro37-GLP-1(7-37)(서열번호 1255); Val8,Glu22,Gly36Pro37-GLP-1(7-37)(서열번호 1256); Gly8,36,Glu22,Lys33,Asn34,Pro37-GLP-1(7-37)(서열번호 1257); Val8,Glu22,Lys33,Asn34,Gly36,Pro37-GLP-1(7-37)(서열번호 1258); Gly8 , 36,Glu22-GLP-1(7-36)(서열번호 1259); Val8,Glu22,Gly36-GLP-1(7-36)(서열번호 1260); Val8,Glu22,Asn34,Gly36-GLP-1(7-36)(서열번호 1261); 및 Gly8 , 36,Glu22,Asn34-GLP-1(7-36)(서열번호 1262)로 이루어진 군으로부터 선택되는, 조성물.
  51. 제43항에 있어서, 인간 GIPR은 서열번호 1201, 서열번호 1203 및 서열번호 1205로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 서열을 갖는, 조성물.
  52. 제43항에 있어서, 상기 GIPR 길항제는 항원 결합 단백질인, 조성물.
  53. 제52항에 있어서, 상기 항원 결합 단백질은 단클론성 항체, 다클론성 항체, 재조합 항체, 인간 항체, 인간화된 항체, 키메라 항체, 다중 특이성 항체, 또는 이들의 항체 단편인, 조성물.
  54. 제53항에 있어서, 상기 항체 단편은 Fab 단편, Fab' 단편 또는 F(ab')2 단편인, 조성물.
  55. 제53항에 있어서, 상기 항원 결합 단백질은 인간 항체인, 조성물.
  56. 제53항에 있어서, 상기 항원 결합 단백질은 단클론성 항체인, 조성물.
  57. 제53항에 있어서, 상기 항원 결합 단백질은 상기 IgG1-, IgG2- IgG3- 또는 IgG4-형을 갖는, 조성물.
  58. 제57항에 있어서, 상기 항원 결합 단백질은 상기 IgG1- 또는 상기 IgG2-형을 갖는, 조성물.
  59. 제53항에 있어서, 상기 항원 결합 단백질은 표지기에 결합된, 조성물.
  60. 제53항에 있어서, 상기 항원 결합 단백질은 인간 GIPR의 상기 세포외 부분에 대한 GIP의 결합을 저해하는, 조성물.
  61. 제53항에 있어서, 상기 항원 결합 단백질은 항체 또는 이의 단편이고, 그리고 상기 항체는 CDRL1, CDRL2, CDRL3, CDRH1, CDRH2 및 CDRH3을 포함하되, 상기 CDRL1은 서열번호 4, 10, 16, 22, 28, 34, 40, 46, 52, 58, 64, 70, 76, 82, 88, 94, 100, 106, 112, 118, 124, 130, 136, 142, 148, 154, 160, 166, 172, 178, 184, 190, 196, 202, 208, 214, 220, 226, 232, 238, 244, 250, 256, 262, 268, 274, 280, 286, 292, 298, 304, 310, 316, 322, 328, 334, 340, 346, 352, 358, 1290, 1300, 1310, 1320, 1330, 1340, 및 1350으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하고; 상기 CDRL2는 서열번호 5, 11, 17, 23, 29, 35, 41, 47, 53, 59, 65, 71, 77, 83, 89, 95, 101, 107, 113, 119, 125, 131, 137, 143, 149, 155, 161, 167, 173, 179, 185, 191, 197, 203, 209, 215, 221, 227, 233, 239, 245, 251, 257, 263, 269, 275, 281, 287, 293, 299, 305, 311, 317, 323, 329, 335, 341, 347, 353, 359, 1291, 1301, 1311, 1321, 1331, 1341, 및 1351로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하며; 상기 CDRL3은 서열번호 6, 12, 18, 24, 30, 36, 42, 48, 54, 60, 66, 72, 78, 84, 90, 96, 102, 108, 114, 120, 126, 132, 138, 144, 150, 156, 162, 168, 174, 180, 186, 192, 198, 204, 210, 216, 222, 228, 234, 240, 246, 252, 258, 264, 270, 276, 282, 288, 294, 300, 306, 312, 318, 324, 330, 336, 342, 348, 354, 360, 1292, 1302, 1312, 1322, 1332, 1342, 및 1352로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하고; 상기 CDRH1은 서열번호 364, 370, 376, 382, 388, 394, 400, 406, 412, 418, 424, 430, 436, 442, 448, 454, 460, 466, 472, 478, 484, 490, 496, 502, 508, 514, 520, 526, 532, 538, 544, 550, 556, 562, 568, 574, 580, 586, 592, 598, 604, 610, 616, 622, 628, 634, 640, 646, 652, 658, 664, 670, 676, 682, 688, 694, 700, 706, 712, 718, 1293, 1303, 1313, 1323, 1333, 1343, 및 1353으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하며; 상기 CDRH2는 서열번호 365, 371, 377, 383, 389, 395, 401, 407, 413, 419, 425, 431, 437, 443, 449, 455, 461, 467, 473, 479, 485, 491, 497, 503, 509, 515, 521, 527, 533, 539, 545, 551, 557, 563, 569, 575, 581, 587, 593, 599, 605, 611, 617, 623, 629, 635, 641, 647, 653, 659, 665, 671, 677, 683, 689, 695, 701, 707, 713, 719, 1294, 1304, 1314, 1324, 1334, 1344, 및 1354로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하고; 그리고 상기 CDRH3은 서열번호 366, 372, 378, 384, 390, 396, 402, 408, 414, 420, 426, 432, 438, 444, 450, 456, 462, 468, 474, 480, 486, 492, 498, 504, 510, 516, 522, 528, 534, 540, 546, 552, 558, 564, 570, 576, 582, 588, 594, 600, 606, 612, 618, 624, 630, 636, 642, 648, 654, 660, 666, 672, 678, 684, 690, 696, 702, 708, 714, 720, 1295, 1305, 1315, 1325, 1335, 1345, 및 1355로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하는, 조성물.
  62. 제53항에 있어서, 항원 결합 단백질은 항체 또는 이의 단편이고, 그리고 상기 항체는 CDRL1, CDRL2, CDRL3, CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3을 포함하고, 각각의 CDRL1, CDRL2, CDRL3, CDRH1, CDRH2, 및 CDRH3는 각각 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 364, 서열번호 365, 및 서열번호 366; 서열번호 10, 서열번호 11, 서열번호 12, 서열번호 370, 서열번호 371, 및 서열번호 372; 서열번호 16, 서열번호 17, 서열번호 18, 서열번호 376, 서열번호 377, 및 서열번호 378; 서열번호 22, 서열번호 23, 서열번호 24, 서열번호 382, 서열번호 383, 및 서열번호 384; 서열번호 28, 서열번호 29, 서열번호 30, 서열번호 388, 서열번호 389, 및 서열번호 390; 서열번호 34, 서열번호 35, 서열번호 36, 서열번호 394, 서열번호 395, 및 서열번호 396; 서열번호 40, 서열번호 41, 서열번호 42, 서열번호 400, 서열번호 401, 및 서열번호 402; 서열번호 46, 서열번호 47, 서열번호 48, 서열번호 406, 서열번호 407, 및 서열번호 408; 서열번호 52, 서열번호 53, 서열번호 54, 서열번호 412, 서열번호 413, 및 서열번호 414; 서열번호 58, 서열번호 59, 서열번호 60, 서열번호 418, 서열번호 419, 및 서열번호 420; 서열번호 64, 서열번호 65, 서열번호 66, 서열번호 424, 서열번호 425, 및 서열번호 426; 서열번호 70, 서열번호 71, 서열번호 72, 서열번호 430, 서열번호 431, 및 서열번호 432; 서열번호 76, 서열번호 77, 서열번호 78, 서열번호 436, 서열번호 437, 및 서열번호 438; 서열번호 82, 서열번호 83, 서열번호 84, 서열번호 442, 서열번호 443, 및 서열번호 444; 서열번호 88, 서열번호 89, 서열번호 90, 서열번호 448, 서열번호 449, 및 서열번호 450; 서열번호 94, 서열번호 95, 서열번호 96, 서열번호 454, 서열번호 455, 및 서열번호 456; 서열번호 100, 서열번호 101, 서열번호 102, 서열번호 460, 서열번호 461, 및 서열번호 462; 서열번호 106, 서열번호 107, 서열번호 108, 서열번호 466, 서열번호 467, 및 서열번호 468; 서열번호 112, 서열번호 113, 서열번호 114, 서열번호 472, 서열번호 473, 및 서열번호 474; 서열번호 118, 서열번호 119, 서열번호 120, 서열번호 478, 서열번호 479, 및 서열번호 480; 서열번호 124, 서열번호 125, 서열번호 126, 서열번호 484, 서열번호 485, 및 서열번호 486; 서열번호 130, 서열번호 131, 서열번호 132, 서열번호 490, 서열번호 491, 및 서열번호 492; 서열번호 136, 서열번호 137, 서열번호 138, 서열번호 496, 서열번호 497, 및 서열번호 498; 서열번호 142, 서열번호 143, 서열번호 144, 서열번호 502, 서열번호 503, 및 서열번호 504; 서열번호 148, 서열번호 149, 서열번호 150, 서열번호 508, 서열번호 509, 및 서열번호 510; 서열번호 154, 서열번호 155, 서열번호 156, 서열번호 514, 서열번호 515, 및 서열번호 516; 서열번호 160, 서열번호 161, 서열번호 162, 서열번호 520, 서열번호 521, 및 서열번호 522; 서열번호 166, 서열번호 167, 서열번호 168, 서열번호 526, 서열번호 527, 및 서열번호 528; 서열번호 172, 서열번호 173, 서열번호 174, 서열번호 532, 서열번호 533, 및 서열번호 534; 서열번호 178, 서열번호 179, 서열번호 180, 서열번호 538, 서열번호 539, 및 서열번호 540; 서열번호 184, 서열번호 185, 서열번호 186, 서열번호 544, 서열번호 545, 및 서열번호 546; 서열번호 190, 서열번호 191, 서열번호 192, 서열번호 550, 서열번호 551, 및 서열번호 552; 서열번호 196, 서열번호 197, 서열번호 198, 서열번호 556, 서열번호 557, 및 서열번호 558; 서열번호 202, 서열번호 203, 서열번호 204, 서열번호 562, 서열번호 563, 및 서열번호 564; 서열번호 208, 서열번호 209, 서열번호 210, 서열번호 568, 서열번호 569, 및 서열번호 570; 서열번호 214, 서열번호 215, 서열번호 216, 서열번호 574, 서열번호 575, 및 서열번호 576; 서열번호 220, 서열번호 221, 서열번호 222, 서열번호 580, 서열번호 581, 및 서열번호 582; 서열번호 226, 서열번호 227, 서열번호 228, 서열번호 586, 서열번호 587, 및 서열번호 588; 서열번호 232, 서열번호 233, 서열번호 234, 서열번호 592, 서열번호 593, 및 서열번호 594; 서열번호 238, 서열번호 239, 서열번호 240, 서열번호 598, 서열번호 599, 및 서열번호 600; 서열번호 244, 서열번호 245, 서열번호 246, 서열번호 604, 서열번호 605, 및 서열번호 606; 서열번호 250, 서열번호 251, 서열번호 252, 서열번호 610, 서열번호 611, 및 서열번호 612; 서열번호 256, 서열번호 257, 서열번호 258, 서열번호 616, 서열번호 617, 및 서열번호 618; 서열번호 262, 서열번호 263, 서열번호 264, 서열번호 622, 서열번호 623, 및 서열번호 624; 서열번호 268, 서열번호 269, 서열번호 270, 서열번호 628, 서열번호 629, 및 서열번호 630; 서열번호 274, 서열번호 275, 서열번호 276, 서열번호 634, 서열번호 635, 및 서열번호 636; 서열번호 280, 서열번호 281, 서열번호 282, 서열번호 640, 서열번호 641, 및 서열번호 642; 서열번호 286, 서열번호 287, 서열번호 288, 서열번호 646, 서열번호 647, 및 서열번호 648; 서열번호 292, 서열번호 293, 서열번호 294, 서열번호 652, 서열번호 653, 및 서열번호 654; 서열번호 298, 서열번호 299, 서열번호 300, 서열번호 658, 서열번호 659, 및 서열번호 660; 서열번호 304, 서열번호 305, 서열번호 306, 서열번호 664, 서열번호 665, 및 서열번호 666; 서열번호 310, 서열번호 311, 서열번호 312, 서열번호 670, 서열번호 671, 및 서열번호 672; 서열번호 316, 서열번호 317, 서열번호 318, 서열번호 676, 서열번호 677, 및 서열번호 678; 서열번호 322, 서열번호 323, 서열번호 324, 서열번호 682, 서열번호 683, 및 서열번호 684; 서열번호 328, 서열번호 329, 서열번호 330, 서열번호 688, 서열번호 689, 및 서열번호 690; 서열번호 334, 서열번호 335, 서열번호 336, 서열번호 694, 서열번호 695, 및 서열번호 696; 서열번호 340, 서열번호 341, 서열번호 342, 서열번호 700, 서열번호 701, 및 서열번호 702; 서열번호 346, 서열번호 347, 서열번호 348, 서열번호 706, 서열번호 707, 및 서열번호 708; 서열번호 352, 서열번호 353, 서열번호 354, 서열번호 712, 서열번호 713, 및 서열번호 714; 서열번호 358, 서열번호 359, 서열번호 360, 서열번호 718, 서열번호 719, 및 서열번호 720; 서열번호 1290, 서열번호 1291, 서열번호 1292, 서열번호 1293, 서열번호 1294, 및 서열번호 1295; 서열번호 1300, 서열번호 1301, 서열번호 1302, 서열번호 1303, 서열번호 1304, 및 서열번호 1305; 서열번호 1310, 서열번호 1311, 서열번호 1312, 서열번호 1313, 서열번호 1314, 및 서열번호 1315; 서열번호 1320, 서열번호 1321, 서열번호 1322, 서열번호 1323, 서열번호 1324, 및 서열번호 1325; 서열번호 1330, 서열번호 1331, 서열번호 1332, 서열번호 1333, 서열번호 1334, 및 서열번호 1335; 서열번호 1340, 서열번호 1341, 서열번호 1342, 서열번호 1343, 서열번호 1344, 및 서열번호 1345; 서열번호 1350, 서열번호 1351, 서열번호 1352, 서열번호 1353, 서열번호 1354, 및 서열번호 1355; 및 서열번호 1360, 서열번호 1361, 서열번호 1362, 서열번호 1363, 서열번호 1364, 및 서열번호 1365로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하는, 조성물.
  63. 제53항에 있어서, 상기 항원 결합 단백질은 항체 또는 이의 단편이고, 그리고 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 723, 727, 731, 735, 739, 743, 747, 751, 755, 759, 763, 767, 771, 775, 779, 783, 787, 791, 795, 799, 803, 807, 811, 815, 819, 823, 827, 831, 835, 839, 843, 847, 851, 855, 859, 863, 867, 871, 875, 879, 883, 887, 891, 895, 899, 903, 907, 911, 915, 919, 923, 927, 931, 935, 939, 943, 947, 951, 955, 959, 1286, 1296, 1306, 1316, 1326, 1336, 1346, 및 1356으로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 724, 728, 732, 736, 740, 744, 748, 752, 756, 760, 764, 768, 772, 776, 780, 784, 788, 792, 796, 800, 804, 808, 812, 816, 820, 824, 828, 832, 836, 840, 844, 848, 852, 856, 860, 864, 868, 872, 876, 880, 884, 888, 892, 896, 900, 904, 908, 912, 916, 920, 924, 928, 932, 936, 940, 944, 948, 952, 956, 960, 1287, 1297, 1307, 1317, 1327, 1337, 1347, 및 1357로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 중쇄 가변 영역을 포함하는, 조성물.
  64. 제53항에 있어서, 상기 항원 결합 단백질은 항체 또는 이의 단편이고, 그리고 상기 항체 또는 이의 단편은 서열번호 723을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 724를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 727를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 728를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 731을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 732을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 735를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 736을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 739를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 740를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 743을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 744를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 747을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 748를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 751을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 752를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 755를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 756을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 759을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 760을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 763을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 764를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 767를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 768를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 771을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 772을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 775를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 776을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 779를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 780를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 783을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 784를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 787을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 788를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 791을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 792를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 795를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 796을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 799을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 800을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 803을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 804를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 807를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 808를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 811을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 812을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 815를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 816을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 819를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 820를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 823을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 824를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 827을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 828를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 831을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 832를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 835를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 836을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 839을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 840을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 843을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 844를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 847를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 848를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 851을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 852을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 855를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 856을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 859를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 860를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 863을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 864를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 867을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 868를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 871을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 872를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 875를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 876을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 879을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 880을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 883을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 884를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 887를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 888를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 891을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 892을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 895를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 896을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 899를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 900를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 903을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 904를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 907을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 908를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 911을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 912를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 915를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 916을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 919을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 920을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 923을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 924를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 927를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 928를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 931을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 932을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 935를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 936을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 939를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 940를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 943을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 944를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 947을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 948를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 951을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 952를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 955를 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 956을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 959을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 960을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 1286을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 1287을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 1296을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 1297를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 1306을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 1307을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 1316을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 1317을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 1326을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 1327를 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 1336을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 1337을 포함하는 중쇄 가변 영역; 서열번호 1346을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 1347를 포함하는 중쇄 가변 영역; 및 서열번호 1356을 포함하는 경쇄 가변 영역 및 서열번호 1357를 포함하는 중쇄 가변 영역으로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 가변 영역 및 중쇄 가변 영역의 조합을 포함하는, 조성물.
  65. 제53항에 있어서, 상기 항원 결합 단백질은 항체이고, 그리고 상기 항체는 서열번호 963, 967, 971, 975, 979, 983, 987, 991, 995, 999, 1003, 1007, 1011, 1015, 1019, 1023, 1027, 1031, 1035, 1039, 1043, 1047, 1051, 1055, 1059, 1063, 1067, 1071, 1075, 1079, 1083, 1087, 1091, 1095, 1099, 1103, 1107, 111로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 경쇄 및 서열번호 964, 968, 972, 976, 980, 984, 988, 992, 996, 1000, 1004, 1008, 1012, 1016, 1020, 1024, 1028, 1032, 1036, 1040, 1044, 1048, 1052, 1056, 1060, 1064, 1068, 1072, 1076, 1080, 1084, 1088, 1092, 1096, 1100, 1104, 1108, 1112, 1116, 1120, 1124, 1128, 1132, 1136, 1140, 1144, 1148, 1152, 1156, 1160, 1164, 1168, 1172, 1176, 1180, 1184, 1188, 1192, 1196, 1200, 1289, 1299, 1309, 1319, 1329, 1339, 1349, 및 1359로 이루어진 군으로부터 선택된 서열을 포함하는 중쇄를 포함하는, 조성물.
  66. 제53항에 있어서, 상기 항원 결합 단백질은 항체이고, 상기 항체는 서열번호 963을 포함하는 경쇄 및 서열번호 964를 포함하는 중쇄; 서열번호 967을 포함하는 경쇄 및 서열번호 968을 포함하는 중쇄; 서열번호 971을 포함하는 경쇄 및 서열번호 972를 포함하는 중쇄; 서열번호 975를 포함하는 경쇄 및 서열번호 976을 포함하는 중쇄; 서열번호 979를 포함하는 경쇄 및 서열번호 980을 포함하는 중쇄; 서열번호 983을 포함하는 경쇄 및 서열번호 984를 포함하는 중쇄; 서열번호 987을 포함하는 경쇄 및 서열번호 988을 포함하는 중쇄; 서열번호 991을 포함하는 경쇄 및 서열번호 992를 포함하는 중쇄; 서열번호 995를 포함하는 경쇄 및 서열번호 996을 포함하는 중쇄; 서열번호 999를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1000을 포함하는 중쇄; 서열번호 1003을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1004를 포함하는 중쇄; 서열번호 1007을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1008을 포함하는 중쇄; 서열번호 1011을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1012를 포함하는 중쇄; 서열번호 1015를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1016을 포함하는 중쇄; 서열번호 1019를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1020을 포함하는 중쇄; 서열번호 1023을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1024를 포함하는 중쇄; 서열번호 1027을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1028을 포함하는 중쇄; 서열번호 1031을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1032를 포함하는 중쇄; 서열번호 1035를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1036을 포함하는 중쇄; 서열번호 1039를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1040을 포함하는 중쇄; 서열번호 1043을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1044를 포함하는 중쇄; 서열번호 1047을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1048을 포함하는 중쇄; 서열번호 1051을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1052를 포함하는 중쇄; 서열번호 1055를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1056을 포함하는 중쇄; 서열번호 1059를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1060을 포함하는 중쇄; 서열번호 1063을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1064를 포함하는 중쇄; 서열번호 1067을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1068을 포함하는 중쇄; 서열번호 1071을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1072를 포함하는 중쇄; 서열번호 1075를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1076을 포함하는 중쇄; 서열번호 1079를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1080을 포함하는 중쇄; 서열번호 1083을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1084를 포함하는 중쇄; 서열번호 1087을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1088을 포함하는 중쇄; 서열번호 1091을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1092를 포함하는 중쇄; 서열번호 1095를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1096을 포함하는 중쇄; 서열번호 1099를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1100을 포함하는 중쇄; 서열번호 1103을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1104를 포함하는 중쇄; 서열번호 1107을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1108을 포함하는 중쇄; 서열번호 1111을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1112를 포함하는 중쇄; 서열번호 1115를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1116을 포함하는 중쇄; 서열번호 1119를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1120을 포함하는 중쇄; 서열번호 1123을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1124를 포함하는 중쇄; 서열번호 1127을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1128을 포함하는 중쇄; 서열번호 1131을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1132를 포함하는 중쇄; 서열번호 1135를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1136을 포함하는 중쇄; 서열번호 1139를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1140을 포함하는 중쇄; 서열번호 1143을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1144를 포함하는 중쇄; 서열번호 1147을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1148을 포함하는 중쇄; 서열번호 1151을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1152를 포함하는 중쇄; 서열번호 1155를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1156을 포함하는 중쇄; 서열번호 1159를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1160을 포함하는 중쇄; 서열번호 1163을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1164를 포함하는 중쇄; 서열번호 1167을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1168을 포함하는 중쇄; 서열번호 1171을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1172를 포함하는 중쇄; 서열번호 1175를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1176을 포함하는 중쇄; 서열번호 1179를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1180을 포함하는 중쇄; 서열번호 1183을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1184를 포함하는 중쇄; 서열번호 1187을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1188을 포함하는 중쇄; 서열번호 1191을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1192를 포함하는 중쇄; 서열번호 1195를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1196을 포함하는 중쇄; 서열번호 1199를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1200을 포함하는 중쇄; 서열번호 1288를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1289를 포함하는 중쇄; 서열번호 1298을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1299을 포함하는 중쇄; 서열번호 1308을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1309를 포함하는 중쇄; 서열번호 1318을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1319를 포함하는 중쇄; 서열번호 1328를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1329을 포함하는 중쇄; 서열번호 1338을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1339을 포함하는 중쇄; 서열번호 1348을 포함하는 경쇄 및 서열번호 1349을 포함하는 중쇄; 및 서열번호 1358를 포함하는 경쇄 및 서열번호 1359를 포함하는 중쇄로 이루어진 군으로부터 선택된 경쇄 및 중쇄의 조합을 포함하는, 조성물.
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