KR20200010790A - 더덕 추출물을 유효성분으로 함유하는 항천식용 조성물 - Google Patents

더덕 추출물을 유효성분으로 함유하는 항천식용 조성물 Download PDF

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Abstract

본 발명은 더덕 추출물을 유효성분으로 함유하는 항천식용 조성물에 관한 것으로, 상기 더덕 추출물, 특히 더덕 에탄올 추출물이 천식이 유도된 마우스의 폐 기관지 세척액(bronchoalveolar lavage fluid, BALF) 중 총 백혈구 수, 중성백혈구 수 및 IgE의 발현을 감소시키고, 천식이 유도된 폐 조직에서 PSA 염색(periodic-acid-Schiff stain) 결과 점액(mucus)을 감소시키며, 면역관련 인자인 IFN-γ, IL-4, IL-5, IL-13, TNF-α 및 IL-6의 발현을 감소시키는 효과가 우수하므로, 더덕 추출물을 유효성분으로 함유하는 본 발명의 조성물은 항천식용 건강기능식품 또는 천식의 치료제로 유용하게 사용될 수 있다.

Description

더덕 추출물을 유효성분으로 함유하는 항천식용 조성물{Composition for anti-asthma comprising Condonopsis lanceolata extract as effective component}
본 발명은 더덕 추출물을 유효성분으로 함유하는 천식의 예방, 개선 또는 치료용 조성물에 관한 것이다.
천식이란 폐 속에 있는 기관지가 아주 예민해진 상태로, 때때로 기관지가 좁아져서 숨이 차고 가랑가랑하는 숨소리가 들리면서 기침을 심하게 하는 증상을 나타내는 병을 말하는데, 기관지의 알레르기 염증 반응 때문에 발생하는 알레르기 질환이다. 이런 증상들은 반복적으로, 발작적으로 나타나며 유전적 요인과 환경적 요인이 합쳐져서 나타난다. 공기가 흐르는 길인 기관지의 염증으로 기관지 점막이 부어 오르고 기관지 근육이 경련을 일으키면서 기관지가 막혀서 숨이 차게 된다.
유전적 요인과 환경적 요인이 합쳐져서 생기는 대표적인 알레르기 질환인 천식은 부모로부터 물려받은 알레르기 체질과 주위의 천식유발 인자들이 상호 작용을 일으켜 면역체계에 혼란이 생기면서 발생하게 된다. 알레르기란 정상에서 벗어난 과민반응을 의미하는 것으로, 정상인에게는 증상이 유발되지 않지만 알레르기 환자에게는 과민반응으로 여러 증상이 나타나게 된다.
천식을 유발하는 원인 물질을 알레르겐(allergen)이라고 하는데, 대표적인 알레르겐은 집먼지 진드기, 꽃가루, 동물 털이나 비듬, 바퀴벌레, 식품, 약물 등이다. 천식을 유발하는 대표적인 악화 요인에는 감기, 담배연기와 실내오염, 대기오염, 식품첨가제, 운동 등 신체적 활동, 기후 변화, 황사, 스트레스 등이 있다.
유전적 요인 못지않게 성장하면서 접하게 되는 환경적 요인도 중요하므로 알레르기 병력을 가진 부모들은 자녀에게 천식이 생기지 않도록 환경 관리에도 노력하여야 한다.
호흡기계와 관련된 난치성 면역질환으로 알려져 있는 천식은 그 치료를 위한 다양한 방법과 치료제 개발이 진행되고 있으나 각 치료제의 장단점에 따라 사용이 제한되어 있는 실정이다. 따라서 오랜 기간 호흡계 질환의 치료에 사용되었던 다양한 천연물질에 대한 효능의 검색을 통해 천식치료 후보물질을 개발하는 동시에 천식에 대한 발병기전과 억제 기전에 대한 연구가 필요하다.
한편, 더덕(Condonopsis lanceolata)은 사삼(沙蔘)이라고도 불리우며, 초롱꽃과(Campanulaccae)에 속하는 다년생 초본으로 우리나라를 비롯한 일본, 중국대륙에 분포한다. 줄기는 약 150~200㎝ 정도까지 자라고 비대해진 뿌리는 약용 또는 식용으로 널리 이용되는데, 한방에서는 거담, 강장, 해독작용 등의 효능이 있는 것으로 알려져 있다.
한편, 한국등록특허 제0743959호에는 항천식 활성을 가지는 해바라기 씨 추출물이 개시되어 있고, 한국공개특허 제2017-0093526호에는 천년초 추출물을 포함하는 항천식 및 면역조절용 조성물이 개시되어 있으나, 본 발명의 더덕 추출물을 유효성분으로 함유하는 항천식용 조성물에 관해 개시된 바 없다.
본 발명은 상기와 같은 요구에 의해 도출된 것으로, 더덕 추출물을 유효성분으로 함유하는 천식의 예방, 개선 또는 치료용 조성물을 제공하고, 상기 조성물이 천식이 유도된 마우스의 폐 기관지 세척액(bronchoalveolar lavage fluid, BALF) 중 총 백혈구 수, 중성백혈구 수 및 IgE의 발현을 감소시키고, 천식이 유도된 폐 조직에서 점액(mucus) 및 면역관련 인자의 발현을 감소시키는 것을 확인함으로써, 본 발명을 완성하였다.
상기 과제를 해결하기 위하여, 본 발명은 더덕 추출물을 유효성분으로 함유하는 천식의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물을 제공한다.
또한, 본 발명은 더덕 추출물을 유효성분으로 함유하는 천식의 예방 또는 치료용 약학 조성물을 제공한다.
본 발명은 더덕 추출물을 유효성분으로 함유하는 항천식용 조성물에 관한 것으로, 상기 더덕 추출물, 특히 더덕 에탄올 추출물이 천식이 유도된 마우스의 폐 기관지 세척액(bronchoalveolar lavage fluid, BALF) 중 총 백혈구 수, 중성백혈구 수 및 IgE의 발현을 감소시키고, 천식이 유도된 폐 조직에서 PSA 염색(periodic-acid-Schiff stain) 결과 점액(mucus)을 감소시키며, 면역관련 인자인 IFN-γ, IL-4, IL-5, IL-13, TNF-α 및 IL-6의 발현을 감소시키는 효과가 우수하므로, 더덕 추출물을 유효성분으로 함유하는 본 발명의 조성물은 천식의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물 또는 천식의 예방 또는 치료용 약학 조성물로 사용될 수 있다.
도 1은 더덕 추출물 섭취에 따른 마우스의 체중(A) 및 사료 섭취량(B) 변화를 확인한 결과이다. CON은 음성대조군이고, OVA는 난백 알부민(ovalbumin)을 투여한 군이고, DEX는 OVA와 덱사메타손(dexamethasone)을 투여한 양성대조군이고, 50mg/kg, 250mg/kg 및 500mg/kg은 OVA와 더덕 에탄올 추출물을 각각의 농도별로 투여한 군이다.
도 2는 마우스의 폐 기관지 세척액(bronchoalveolar lavage fluid, BALF) 중 총 백혈구 수(WBC)(A), 중성백혈구 수(NE)(B) 및 호산구(eosinophil)(C)의 수를 확인한 결과이다. CON은 음성대조군이고, OVA는 난백 알부민(ovalbumin)을 투여한 군이고, DEX는 OVA와 덱사메타손(dexamethasone)을 투여한 양성대조군이고, C. lanceolata 50mg/kg, 250mg/kg 및 500mg/kg은 OVA와 더덕 에탄올 추출물을 각각의 농도별로 투여한 군이다. **은 CON 대비 총 백혈구 수 또는 중성백혈구 수가 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, p<0.01이다. $, $$는 OVA 대비 총 백혈구 수 또는 중성백혈구 수가 유의미하게 감소하였다는 것을 의미하며, $은 p<0.05, $$은 p<0.01이다.
도 3은 마우스의 폐 기관지 세척액(bronchoalveolar lavage fluid, BALF) 중 IgE의 발현을 확인한 결과이다. CON은 음성대조군이고, OVA는 난백 알부민(ovalbumin)을 투여한 군이고, DEX는 OVA와 덱사메타손(dexamethasone)을 투여한 양성대조군이고, C. lanceolata 50mg/kg, 250mg/kg 및 500mg/kg은 OVA와 더덕 에탄올 추출물을 각각의 농도별로 투여한 군이다. **은 CON 대비 IgE 발현이 유의미하게 증가하였다는 것을 의미하며, p<0.01이다. $, $$는 OVA 대비 IgE 발현이 유의미하게 감소하였다는 것을 의미하며, $은 p<0.05, $$은 p<0.01이다.
도 4는 폐 조직의 H&E 염색 결과이다. CON은 음성대조군이고, OVA는 난백 알부민(ovalbumin)을 투여한 군이고, DEX는 OVA와 덱사메타손(dexamethasone)을 투여한 양성대조군이고, C. lanceolata 50mg/kg, 250mg/kg 및 500mg/kg은 OVA와 더덕 에탄올 추출물을 각각의 농도별로 투여한 군이다. Br(bronchiole)은 세기관지이다.
도 5는 폐 조직의 PAS 염색 결과이다. CON은 음성대조군이고, OVA는 난백 알부민(ovalbumin)을 투여한 군이고, DEX는 OVA와 덱사메타손(dexamethasone)을 투여한 양성대조군이고, C. lanceolata 50mg/kg, 250mg/kg 및 500mg/kg은 OVA와 더덕 에탄올 추출물을 각각의 농도별로 투여한 군이다. Br(bronchiole)은 세기관지이다.
도 6은 폐 조직에서 면역관련 인자인 IFN-γ 및 IL-4의 발현을 면역화학염색법(immunohistochemistry)으로 확인한 결과이다. CON은 음성대조군이고, OVA는 난백 알부민(ovalbumin)을 투여한 군이고, DEX는 OVA와 덱사메타손(dexamethasone)을 투여한 양성대조군이고, C. lanceolata 50mg/kg, 250mg/kg 및 500mg/kg은 OVA와 더덕 에탄올 추출물을 각각의 농도별로 투여한 군이다. Br(bronchiole)은 세기관지이다.
도 7은 폐 조직에서 면역관련 인자인 IL-5 및 IL-13의 발현을 면역화학염색법(immunohistochemistry)으로 확인한 결과이다. CON은 음성대조군이고, OVA는 난백 알부민(ovalbumin)을 투여한 군이고, DEX는 OVA와 덱사메타손(dexamethasone)을 투여한 양성대조군이고, C. lanceolata 50mg/kg, 250mg/kg 및 500mg/kg은 OVA와 더덕 에탄올 추출물을 각각의 농도별로 투여한 군이다. Br(bronchiole)은 세기관지이다.
도 8은 폐 조직에서 면역관련 인자인 TNF-α 및 IL-6의 발현을 면역화학염색법(immunohistochemistry)으로 확인한 결과이다. CON은 음성대조군이고, OVA는 난백 알부민(ovalbumin)을 투여한 군이고, DEX는 OVA와 덱사메타손(dexamethasone)을 투여한 양성대조군이고, C. lanceolata 50mg/kg, 250mg/kg 및 500mg/kg은 OVA와 더덕 에탄올 추출물을 각각의 농도별로 투여한 군이다. Br(bronchiole)은 세기관지이다.
본 발명은 더덕 추출물을 유효성분으로 함유하는 천식의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물에 관한 것이다.
상기 더덕 추출물의 용매는 물, C1~C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물인 것이 바람직하고, 보다 바람직하게는 에탄올을 용매로 사용하는 것이지만, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 일 구현 예에서, 상기 더덕 추출물은 백혈구(white blood cell, WBC), 중성백혈구(neutrophil) 수를 감소시키고, IgE의 발현을 감소시키는 특징이 있다.
본 발명의 일 구현 예에서, 상기 건강기능식품 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 또는 음료의 제형으로 제조되는 것이 바람직하지만, 이에 제한되지 않는다.
본 발명의 건강기능식품 조성물을 식품첨가물로 사용하는 경우, 상기 더덕 추출물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 그의 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 발명의 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하, 바람직하게는 10 중량부 이하의 양으로 첨가된다. 그러나 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취인 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.
상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 추출물 또는 이의 분획물을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소시지, 빵, 초콜릿, 캔디류, 스낵류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 수프, 음료수, 차, 드링크제, 알코올음료 및 비타민 복합체 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강기능식품을 모두 포함한다.
본 발명의 조성물을 건강 음료로 사용할 경우, 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 텍스트린, 사이클로텐스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100g당 일반적으로 약 0.01~0.04g, 바람직하게는 약 0.02~0.03g이다. 상기 외에 본 발명의 조성물은 여러 가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 중점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알코올, 탄산음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그 밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물은 100 중량부 당 0.01~0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.
또한, 본 발명은 더덕 추출물을 유효성분으로 함유하는 천식의 예방 또는 치료용 약학 조성물에 관한 것이다.
본 발명의 조성물은 상기 유효성분 이외에 약학적으로 허용 가능한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있으며, 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형 제제에는 캡슐제, 산제, 과립제, 정제, 환제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한, 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁액, 에멀전, 시럽, 에어로졸 등이 해당되는데, 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성 용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성 용제 및 현탁 용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로 젤라틴 등이 사용될 수 있다. 비경구 투여 시 피부 외용 또는 복강 내, 직장, 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내 주사 방식을 선택하는 것이 바람직하다.
본 발명에 따른 약학 조성물은 약제학적으로 유효한 양으로 투여한다. 본 발명에 있어서, "약제학적으로 유효한 양"은 의학적 치료에 적용 가능한 합리적인 수혜/위험 비율로 질환을 치료하기에 충분한 양을 의미하며, 유효량의 수준은 환자의 질환의 종류, 중증도, 약물의 활성, 약물에 대한 민감도, 투여 시간, 투여 경로 및 배출 비율, 치료기간, 동시 사용되는 약물을 포함한 요소 및 기타 의학분야에 잘 알려진 요소에 따라 결정될 수 있다. 본 발명의 조성물은 개별 치료제로 투여하거나 다른 치료제와 병용하여 투여될 수 있고 종래의 치료제와는 순차적 또는 동시에 투여될 수 있으며, 단일 또는 다중 투여될 수 있다. 상기한 요소들을 모두 고려하여 부작용 없이 최소한의 양으로 최대 효과를 얻을 수 있는 양을 투여하는 것이 중요하며, 이는 당업자에 의해 용이하게 결정될 수 있다.
본 발명의 조성물은 단독으로 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.
이하, 제조예 및 실시예를 이용하여 본 발명을 더욱 상세하게 설명하고자 한다. 이들 제조예 및 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로 본 발명의 범위가 이들에 의해 제한되지 않는다는 것은 당해 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어 자명한 것이다.
시약 및 실험방법
1. 시약
천식유발물질은 난백 알부민(Ovalbumin, OVA, cat. A5503, Sigma Aldrich, Louis, MO, USA)을 사용하였고, 냉장보관하였다.
면역 보조물질은 수산화알루미늄(Aluminum hydroxide, Alum, cat. 77161, Thermo Fisher Scientific lnc, Waltham, MA, USA)을 사용하였고, 냉장보관하였다.
양성대조물질은 덱사메타손(Dexamethasone, DEX, 제조번호 13099, SAMNAM Pharm, 충남, 대한민국)을 사용하였고, 실온보관하였다.
투여물질로 사용한 멸균생리식염수(N/S, Lot No. 12062, JW Pharmaceutical, 서울특별시, 대한민국), 더덕 30%(v/v) 에탄올 추출물은 실온보관하였다.
2. 시험계 및 사육환경
(1) 시험계
- 동물정보
본 발명의 실험에 사용한 동물정보는 하기 표 1에 나타난 바와 같다.
종 및 계통 특정병원체 부재(SPF) 마우스, BALB/c mouse
공 급 원 Samtako Korea
선정사유 본 시험에 사용하는 마우스는 천식시험에 널리 사용되며 풍부한 시험기초 자료가 축적되어 있어 시험결과의 해석 및 평가에 참고할 수 있으며, 관련문헌에 근거하여 선택하였다.
성별 암컷
주령 입수 시 5
투여 시 6
- 검역 및 순화
입수 후 6일 동안 시험을 실시할 동물실 내에서 순화시키고, 매일 1회 이상 관찰하였다.
- 식별
동물은 순화기간에는 적색 유성 매직으로, 투여 및 관찰기간에는 흑색 유성 매직을 이용한 미부표식법을 사용하여 식별하였다. 사육상자에는 개체식별카드를 부착하였다.
(2) 사육환경
- 환경조건 및 측정
동물은 온도 23±3℃, 상대습도 55±15%, 환기횟수 10-20회/hr, 조명시간 12시간 및 조도 150-300Lux로 유지되는 사육구역에서 사육하였다.
- 사육상자 및 사육밀도
동물은 적량의 깔개를 담은 폴리카보네이트 사육상자에서 순화시키고, 투여기간 동안에 4마리 이하/사육상자로 사육하였다.
- 군 분리
순화기간 중 건강한 것으로 판정한 동물의 체중을 측정하여 순위화하고, 각 군의 평균체중이 균일하게 분포하도록 무작위 분배하였다.
3. 시험군 구성, 투여량 설정 및 투여
(1) 시험군 구성
하기 표 2와 같이 시험군을 구성하였다.
군 성 별 동물수 동물번호 OVA 투여량(mg/kg) 투여액량
(㎕/g)
감작량
(㎍/head) 		야기량
(%) 		DEX 더덕
G1 F 8 1 - 8 20 0 0 0 28
G2 F 8 9 - 16 20 5 0 0 28
G3 F 8 17 - 24 20 5 1 0 28
G4 F 8 25 - 32 20 5 0 50 28
G5 F 8 33 - 40 20 5 0 250 28
G6 F 8 41 - 48 20 5 0 500 28
(2) 투여물질의 조제
- 복강주사 투여물질의 조제
마리당 OVA 20㎍+Alum 1mg+N/S 500㎕로 투여하였다. 투여해야할 동물 마리수 총 50마리 기준으로 OVA 1000㎍+Alum 50mg+N/S 25㎖로 환산하여 조제하였다.
- 5%(w/v) OVA 용액 흡입제(inhalation)의 조제
OVA 1g+N/S 20㎖(5%(w.v) OVA Sol.)로 만들어 와류(vortexing) 시킨 후 투여하였다.
- 양성대조물질 조제
덱사메타손(DEX)은 정량의 물질을 생리식염수에 넣고 와류시켜 용해한 후 최종 투여 액량에 맞게 조제하였다. 단, 완전용해가 되지 않으니 투여시 한 번 더 와류시켰다.
- 더덕의 조제
고농도(500mg/kg 투여)는 100mg의 30%(v/v) 에탄올 더덕 추출물의 건조물을 칭량하여 5.6㎖의 생리식염수에 용해시켜 사용하였다. 중농도(250mg/kg 투여)는 50mg의 30%(v/v) 에탄올 더덕 추출물의 건조물을 칭량해 5.6㎖의 생리식염수에 용해시키고, 저농도(50mg/kg 투여)는 30%(v/v) 에탄올 더덕 추출물의 건조물 10mg을 칭량해 5.6㎖의 생리식염수에 용해시켜 사용하였다.
- 조제빈도
투여물질들은 투여 당일 조제하였다.
(3) 투여
OVA 복강주사 및 흡입을 통해 천식을 유도하였으며, 복강투여는 주 1회로 2주간 감작을 하고, 감작 15일 후부터 5일간 흡입(inhalation) 야기 및 더덕과 양성대조물질의 투여를 진행하였다. 단, 더덕과 양성대조물질의 투여는 오전에 진행하고, 흡입(inhalation)은 오후에 진행하였다. OVA 무야기군(G1) 및 OVA 단독 처리군(G2)은 생리식염수를 투여하였다.
또한, 투여액량은 계획된 일자에 측정한 체중을 기준으로 정해진 투여액량에 맞게 산출하였다. 단, 감작은 체중과 상관없이 마리당 일정량을 투여하였다.
복강주사 시 1㎖ 주사기를 이용하여 조제한 투여물질을 투여하였으며, 흡입(inhalation)시 분무기(nebulizer, NE-U17, OMRON, Minato-ku, Tokyo, Japan)를 사용하여 투여하였다.
4. 관찰 및 검사항목
(1) 일반증상 관찰
모든 시험군의 동물에 대하여 입수일부터 부검일까지 매일 1회 이상 증상관찰을 실시하였다.
(2) 체중 및 사료량
체중은 시험시작 6일 전(P6), 시험시작 후 3, 6, 10, 13, 17 및 20일째(D3, D6, D10, D13, D17, D20)에 측정하였고, 사료 섭취량은 일주일 단위로 시험시작 1일~7일(D1~D7), 시험시작 8일~14일(D8~D14), 시험시작 15일~20일(D15~D20)로 나누어 측정하였다.
(3) 부검
최종 부검일 날(D20) 모든 마우스를 부검하였다. 표 2에 나타낸 각 군의 앞번호 4마리는 BALF 및 비장을 채취하고 나머지는 폐 및 비장을 채취하였다. 혈청(serum)은 모든 마우스에서 채취하였다.
(4) 조직 및 장기의 보존
- 비장 및 폐
부검 시 1/2은 액체질소에 넣어 급속동결한 후 초저온냉동고에 보관하여 PCR 및 웨스턴 블랏(Western blot)용으로 활용하고, 1/2은 10%(v/v) 포르말린 용액에 보관하여 조직병리 및 면역화학염색법(immunohistochemistry)용으로 활용하였다.
- 폐 기관지 세척액 (bronchoalveolar lavage fluid, BALF)
마취가 된 실험동물을 핀셋으로 조직을 벌려 기관을 확보 후 수술실을 밑으로 넣어주어 느슨히 묶어주고 가위로 기관을 살짝자른 후 니들을 제거한 주사기에 PBS 0.2㎖을 넣고 존데에 꽂은 후 주입하였다. 주입 후 다시 PBS를 빨아들이면서 BALF를 채취하였다. 같은 방법으로 0.2㎖ 씩 3번 BALF를 채취하였다.
첫 번째 채취한 BALF는 1번 튜브, 두 번째, 세 번째 채취한 BALF는 2번 튜브에 같이 넣었다. 1번 튜브는 5분간 3000rpm에서 원심분리 후 상층액을 3번으로 옮긴 후 남은 펠렛(pellet)과 PBS 20㎕를 넣어 섞어주었다. 2번 튜브는 5분간 3000rpm에서 원심분리 후 상층액을 버리고 펠렛과 PBS 60㎕를 넣어 섞어준 후 1번의 20㎕와 혼합하여 1 마리당 총 80㎕의 BALF를 획득한 후 혈구분석을 실시하였다.
(5) 채혈
채혈은 심장 채혈을 실시하였다.
실시예 1. 체중 및 사료 섭취량 측정
실험기간 중 물질투여에 의한 특별한 증상은 관찰되지 않았으며, 도 1에 나타난 바와 같이 그룹간 체중 및 식이 섭취량의 차이는 없었다.
실시예 2. 폐 기관지 세척액 ( bronchoalveolar lavage fluid , BALF ) 중 분화세포수 (differential cell count)
OVA 처리에 의해 증가되었던 총 백혈구(WBC), 중성백혈구(neutrophil), 호산구(eosinophil)의 수는 도 2에 개시된 바와 같이 더덕 추출물 투여에 의해 농도의존적으로 감소하였다. 더덕 추출물을 500mg/kg 투여한 그룹은 OVA 단독 처리군에 비해 총 백혈구(WBC) 및 중성백혈구(neutrophil)의 수가 현저히 감소하였다.
실시예 3. 폐 기관지 세척액 ( bronchoalveolar lavage fluid , BALF )에서의 IgE 측정
OVA 처리에 의해 증가되었던 IgE의 발현양은 도 3에 개시된 바와 같이 더덕 추출물 투여에 의해 농도의존적으로 감소하였다. 더덕 추출물을 250 또는 500mg/kg 투여한 그룹은 OVA 단독 처리군에 비해 IgE 발현량이 현저히 감소하였다.
실시예 4. 폐의 조직병리학적 분석
폐 조직의 H&E 염색(hematoxylin-eosin stain) 결과, 도 4에 나타낸 바와 같이 OVA 단독 투여군은 CON과 비교하여 호산구(eosinophil), 점액(mucus) 및 상피 과증식(epithelial hyperplasia)이 증가하였고, 더덕 추출물 투여군에서는 농도 의존적으로 호산구(eosinophil), 점액(mucus) 및 상피 과증식(epithelial hyperplasia)이 감소하였다.
실시예 5. PAS 염색
폐 조직에서 점액의 변화를 확인하기 위해 PAS 염색을 실시하였다. 그 결과, 도 5에 나타낸 바와 같이 OVA 단독 투여군은 CON과 비교하여 점액이 증가하였고, 더덕 추출물 투여군에서는 농도 의존적으로 점액이 감소하였다.
실시예 6. 면역조직화학법을 통한 면역관련 인자 발현량 확인
폐 조직에서 면역관련 인자인 IFN-γ, IL-4, IL-5, IL-13, TNF-α 및 IL-6의 발현을 면역조직화학법을 통해 확인한 결과, 도 6 내지 8에 개시된 바와 같이 OVA 단독 투여군은 CON과 비교하여 갈색으로 나타나는 IFN-γ, IL-4, IL-5, IL-13, TNF-α 및 IL-6의 발현이 증가하였고, 더덕 추출물 투여군에서는 농도 의존적으로 감소하는 것을 확인할 수 있었다.
상기 결과를 토대로 더덕 추출물은 항천식 효능이 있다는 것을 확인할 수 있었다.

Claims (6)

  1. 더덕 추출물을 유효성분으로 함유하는 천식의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  2. 제1항에 있어서, 상기 더덕 추출물의 용매는 물, C1~C4의 저급 알코올 또는 이들의 혼합물인 것을 특징으로 하는 천식의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  3. 제1항에 있어서, 상기 더덕 추출물은 백혈구(white blood cell, WBC) 및 중성백혈구(neutrophil) 수를 감소시키는 것을 특징으로 하는 천식의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  4. 제1항에 있어서, 상기 더덕 추출물은 IgE의 발현을 감소시키는 것을 특징으로 하는 천식의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  5. 제1항에 있어서, 상기 조성물은 분말, 과립, 환, 정제, 캡슐, 캔디, 시럽 및 음료 중에서 선택된 어느 하나의 제형으로 제조되는 것을 특징으로 하는 천식의 예방 또는 개선용 건강기능식품 조성물.
  6. 더덕 추출물을 유효성분으로 함유하는 천식의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
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